WO2009102008A1 - 免疫賦活作用および抗腫瘍作用を有するマイタケ由来の低分子物質 - Google Patents

免疫賦活作用および抗腫瘍作用を有するマイタケ由来の低分子物質 Download PDF

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Noriko Kodama
Hiroaki Nanba
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Yukiguni Maitake Co., Ltd.
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Definitions

  • the present invention relates to a substance composed of a low molecular weight protein-sugar complex, which has a high immunostimulatory action and antitumor action, extracted and fractionated from maitake mycelium or fruiting bodies.
  • Patent Document 3 Japanese Patent Publication No. 43-16047 (Patent Document 3)).
  • Patent Document 1 Japanese Patent Document 2 and Patent Document 3 are high molecular sugar-protein complexes having a molecular weight of around 1 million.
  • the molecular weight is large, and the structure serving as the active center cannot be specified.
  • administration into blood is considered impossible.
  • the present inventors have previously conducted research to find an active substance such as an immunostimulatory action and an antitumor action with a low molecular weight from a maitake hot-water extract. As a result, a sugar-protein complex having a molecular weight of 10,000 to 150,000 has been studied. (Japanese Patent Laid-Open No. 2007-31665 (Patent Document 4)).
  • the object of the present invention is to develop a low-molecular weight substance derived from maitake that is excellent in immunostimulatory activity and antitumor activity, which is preferable as a material from pharmaceuticals to foods and drinks and feed.
  • the present inventor has newly obtained a protein-sugar complex having a molecular weight of 5000 or less newly from a maitake hot water extract and structurally different from a conventionally known sugar-protein complex (sugar is larger in proportion).
  • Substances consisting of (protein is relatively large) are fractionated, and these substances promote the growth and proliferation of human spleen cells of type 1 helper T in mouse in vitro. I found it to have. Therefore, purification of a substance composed of a low molecular weight protein-sugar complex having an immunostimulatory action clearly different in molecular weight and protein content from those described in Patent Document 1, Patent Document 2, Patent Document 3 and Patent Document 4 was achieved. It was.
  • the present invention (1) 1) hot water extraction of maitake mycelium or fruit body with water, 2) Add alcohol to the extracted water-soluble fraction so that the final volume concentration is 10 to 80%, leave it at a temperature of 1 to 40 ° C, float on the liquid surface or in the liquid, or on the wall of the container.
  • a substance having an immunostimulatory action and an antitumor action comprising a protein-sugar complex positive for anthrone reaction and ninhydrin reaction produced by a step of collecting the adsorbed fraction by molecular sieving to obtain a fraction having a molecular weight of 5000 or less.
  • the present invention relates to pet food or livestock feed or an additive to pet food or livestock feed containing a substance comprising the protein-sugar complex according to any of (1), (2) or (3) above.
  • the present invention is described in detail below.
  • the protein-sugar complex in the present invention means a substance consisting of protein and sugar, and the ratio of protein to sugar described in (2) above is a ratio such as 99.5: 0.5, Substances whose main component is protein are also included.
  • maitake may be any of maitake ( Grifola frondosa) , white maitake ( Grifola albicans lmaz. ), Choreimaitake ( Dendropolyporus umbellatus ), etc. Although it is used in a state, it can be used as it is, even if it is dried, as it is, appropriately cut or pulverized.
  • the hot water extraction is performed at 50 to 135 ° C. for 15 minutes to 3 hours, and when performed in a short time, the pressure is 100 ° C. or higher under pressure, for example, 1 to 2 atm. It is also possible to perform extraction in the range of minutes to 60 minutes.
  • distilled water distilled water, purified water, ion exchange water, tap water, etc. are used. Use about 2 to 50 times the volume of dry maitake. When using raw maitake, use 2 to 20 times the capacity of 1 weight.
  • Alcohol added to the extraction solution after hot water extraction can be methanol, ethanol, propyl alcohol, etc., but it is added so that the final volume concentration is 10 to 80% with respect to the extract. Alcohol having a water content of 0 to 50% can also be used. After the addition, a substance floating or adhering to the wall surface of the container appears on the liquid surface or in the liquid after standing for 1 to 25 hours, and is removed by filtration, pipette, centrifugation, or a net-like material.
  • Resins used for anion exchange chromatography are generally used as anion exchange resins such as strong basic ion exchange resins and weak basic ion exchange resins. It is preferable to use one that is stable and has a large exchange capacity.
  • the adsorbed fraction is eluted by a conventional method, and a low molecular fraction having a molecular weight of 5000 or less is collected by molecular sieve.
  • molecular sieve gel filtration chromatography, ultrafiltration, dialysis and the like can be used.
  • gel filter generally used ones such as dextran, agarose, cellulose, and acrylamide can be used.
  • Various devices are also commercially available for ultrafiltration, dialysis, etc., and they can be used as appropriate.
  • the upper and lower positions are allowed up to 20%, and the intended purpose can be achieved. Further, the lower limit is preferably 500 or more.
  • Colorless to yellowish liquid solubility Water, alcoholic water, alkaline solution, acidic solution, liquid solution of aqueous solution in dimethyl sulfoxide: Neutral or slightly acidic color reaction: Anthrone reaction and ninhydrin reaction are positive Molecular weight: 5000 or less
  • the ratio of protein to sugar of the substance having immunostimulatory action and antitumor action obtained by the present invention when purified by column chromatography is in the range of 85:15 to 99.5: 0.5. Depending on the quality of the maitake mushrooms and the conditions of extraction and purification, it will vary accordingly.
  • the protein-sugar complex of the present invention is a substance having an immunostimulatory action or an antitumor action, it is used as an immunostimulatory agent or antitumor agent, or in combination with a chemotherapeutic agent such as an antitumor agent or antibiotic, that is, Chemotherapy adjuvants may be administered to humans or animals. Moreover, this substance can also be added and used for food-drinks, pet food, livestock feed, etc.
  • the substance of the present invention When used as a pharmaceutical or veterinary drug, it is a low molecule and is soluble in water and alcohol. Therefore, a wide range of dosage forms such as solutions for oral administration, syrups, tablets, granules, powders, capsules, As pills, etc., it can be made into a wide range of dosage forms such as injections, drops, suppositories, external preparations, nasal drops, eye drops, etc. It is extremely advantageous for development as a pharmaceutical product.
  • the substance of the present invention is derived from maitake, which has been eaten as a food for a long time, and is highly safe and can be used as a food or drink or in a food or drink.
  • the foods and drinks in the present invention are not limited to drinks such as milk and juice and processed foods that are eaten daily, but from what are said to be general foods and drinks including so-called health foods, foods for nutritional function and special health use This includes all functional foods including foods, supplementary foods for medical use, special purpose foods including foods for the elderly and the sick.
  • a protein-sugar complex having a molecular weight of 5000 or less newly fractionated from the maitake hot water extract obtained by the present invention exhibits an immunostimulatory action and an antitumor action, and an immunostimulatory agent, an antitumor agent, or It can be used as an adjuvant for chemotherapy with antibiotics or antitumor agents.
  • the cell proliferation activity rate was determined by the following formula.
  • Cell proliferation activity rate (%) absorbance value of the treated group (Abs. 450 nm / Abs. 650 nm) / absorbance value of the control group (Abs. 450 nm / Abs. 650 nm) ⁇ 100
  • Extraction method 150 g of dried maitake fruit bodies are extracted with 1.5 L of purified water at 110 to 125 ° C. for 15 to 60 minutes, and ethanol is added to 500 mL of the obtained soluble fraction to a final volume concentration of 10 to 80%. Add as follows. When the solution is allowed to stand at 1 to 40 ° C. for about 12 hours, a soot-like or brownish substance is formed which floats in the liquid surface or in the liquid or adheres to the wall surface of the container. After removing this substance with a pipette or the like, an alcohol-containing water-soluble fraction obtained by further removing the precipitated substance by a centrifugation step is recovered.
  • the adsorbed fraction is recovered from the water-soluble fraction obtained by removing alcohol from this solution by anion exchange chromatography (DEAE-Sephadex).
  • a fraction having THP-1 cell proliferation activity is obtained by subjecting the solution to gel filtration chromatography (Sephadex or cellolofine). The substance was positive for anthrone reaction and ninhydrin reaction, and purified by column chromatography, the ratio of protein-sugar complex was 85:15 to 99.5: 0.5.
  • the molecular weight was examined by gel filtration chromatography and found to be 5000 or less.
  • the substance obtained by the present invention had absorption in the ultraviolet part and no absorption in the visible part.
  • the tumor growth inhibition rate was determined by the following formula.
  • Tumor growth inhibition rate (%) ⁇ 1 ⁇ (average tumor weight in treated group (g) / average tumor weight in control group (g)) ⁇ ⁇ 100
  • the substance administration group obtained in (1) showed a stronger tumor growth inhibitory effect than the control group.
  • spleen cells were cultured for 24 hours at 37 ° C. under 5% CO 2 . Shown in From the results of the cell proliferation activity test of (2) and the antitumor test of (3), it was confirmed that the substance obtained by the present invention has a strong immunostimulatory action and antitumor action.

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Abstract

　本発明は、従来知られている糖-タンパク複合体に比較して低分子で、しかも構造的にも異なる、高度に免疫賦活作用ならびに抗腫瘍作用を有するマイタケ由来の物質を開発することを課題とする。 　１）マイタケの菌糸体もしくは子実体を水で熱水抽出する工程と、２）得られた抽出水溶性画分にアルコールを１０～８０％の最終容量濃度になる様に添加し、１～４０°Cの温度で放置し、液面もしくは液中に浮遊または容器の壁面に付着する物質および析出した沈殿物を除去する工程と、３）上記工程で得られたアルコール含有水溶性画分からアルコールを除去し、得られた水溶性画分から陰イオン交換クロマトグラフィーにより吸着画分を回収する工程と、４）該吸着画分を分子ふるいにより分子量５０００以下の画分を採取する工程とにより、マイタケ由来の低分子物質を製造する。

Description

免疫賦活作用および抗腫瘍作用を有するマイタケ由来の低分子物質
　本発明は、マイタケ菌糸体あるいは子実体から抽出、分画した高度に免疫賦活化作用および抗腫瘍作用を有する、低分子のタンパク―糖複合体からなる物質に関する。
　マイタケの菌糸体もしくは子実体から抽出したβ―１，６結合を主鎖とし、１，３の分枝鎖を持つ多糖体またはβ―１，３結合を主鎖とし、１，６の分枝鎖を持つグルカンである多糖体が免疫賦活化作用を有することが知られている（特開昭５９―２１０９０１号公報(特許文献１)、特開平９―２３８６９７号公報(特許文献２)）。
　また、マイタケ、トンビマイまたはマスタケのいずれかを熱水にて抽出し、これを減圧にて濃縮した後、有機溶媒による沈殿工程、透析工程による低分子物質の除去および脂溶性有機溶媒による不純物の抽出除去工程を組み合わせて行うことを特徴とする制癌物質の製造法も公知である（特公昭４３―１６０４７号公報(特許文献３)）。
　上記従来技術において、特許文献１、特許文献２および特許文献３に記載のものは、分子量１００万前後の高分子糖―タンパク複合体である。これらの免疫賦活化作用における細胞レベルでの詳細なメカニズムを調べるためには、分子量が大きく、活性中心となる構造が特定できない。また、高分子であるがゆえに血中への投与も不可であると考えられる。
　本発明者らは、先にマイタケ熱水抽出物から低分子で免疫賦活作用、抗腫瘍作用等の活性ある物質を見出すため研究を進めた結果、分子量１万～１５万の糖-タンパク複合体を得ることに成功した（特開２００７―３１６６５号公報(特許文献４)）。
　しかしながら、分子量がいまだ１万から１５万とかなり大きい糖-タンパク複合体であるために、取扱に不便であった。
特開昭５９―２１０９０１号公報 特開平９―２３８６９７号公報 特公昭４３―１６０４７号公報 特開２００７―３１６６５号公報
　本発明は、医薬品から飲食品さらには飼料にいたる素材として好ましい、マイタケ由来の低分子で免疫賦活作用、抗腫瘍作用の優れた物質を開発することを課題とする。
　本発明者はマイタケ熱水抽出物から新たに分子量５０００以下で、しかも従来知られている糖-タンパク複合体(糖の方が比率的に大きい)とは構造的にも異なるタンパク―糖複合体(タンパクの方が比率的に大きい)からなる物質を分画し、これらの物質がin vitroにおいて１型ヘルパーTのヒト細胞樹立株（THP-1）、マウス脾臓細胞の生育および増殖促進作用をもつことを見出した。よって特許文献１、特許文献２、特許文献３および特許文献４に記載のものと明らかに分子量およびタンパク質含量の異なる免疫賦活化作用を有する低分子のタンパク―糖複合体からなる物質の精製を成し遂げた。
　すなわち本発明は、
（１）１）マイタケの菌糸体もしくは子実体を水で熱水抽出する工程、
　２）得られた抽出水溶性画分にアルコールを１０～８０％の最終容量濃度になる様に添加し、１～４０℃の温度で放置し、液面もしくは液中に浮遊または容器の壁面に付着する物質および析出した沈殿物を除去する工程、
　３）上記２）の工程の後、得られたアルコール含有水溶性画分からアルコールを除去し、得られた水溶性画分から陰イオン交換クロマトグラフィーにより吸着画分を回収する工程、
　４）該吸着画分を分子ふるいにより分子量５０００以下の画分を採取する工程等によって製造されたアンスロン反応およびニンヒドリン反応に陽性のタンパク―糖複合体からなる免疫賦活作用および抗腫瘍作用を有する物質、
（２）タンパクと糖の比率が８５：１５～９９．５：０．５の割合である上記（１）に記載のタンパク―糖複合体からなる免疫賦活作用および／または抗腫瘍作用を有する物質、
（３）マイタケがマイタケ（Grifola frondosa）、白マイタケ（Grifola albicans lmaz.）、チョレイマイタケ（Dendropolyporus umbellatus）である上記（１）または（２）に記載のタンパク―糖複合体からなる免疫賦活作用および／または抗腫瘍作用を有する物質、
（４）上記（１）、（２）又は（３）のいずれかに記載のタンパク―糖複合体からなる物質を有効成分として含有する免疫賦活化剤または抗腫瘍剤、
（５）上記（１）、（２）又は（３）のいずれかに記載のタンパク―糖複合体からなる物質を有効成分として含有する化学療法補助剤、
（６）上記（１）、（２）又は（３）のいずれかに記載のタンパク―糖複合体からなる物質を含有する飲食品、
（７）上記（１）、（２）又は（３）のいずれかに記載のタンパク―糖複合体からなる物質を含有するペットフードもしくは家畜飼料またはペットフードもしくは家畜飼料への添加剤
に関する。　
　以下本発明について詳述する。
　本発明におけるタンパク―糖複合体とは、タンパクと糖からなる物質を意味し、上記（２）にも記載されているタンパクと糖の比率が９９．５：０．５のような割合の、主たる成分がタンパクである物質も包含される。
　本発明において、マイタケはマイタケ（Grifola frondosa）、白マイタケ（Grifola albicans lmaz.）、チョレイマイタケ（Dendropolyporus umbellatus）等のいずれも用いることができ、使用形態としては生のものはそのままもしくは適宜カットした状態で用いられるが、乾燥したものでも同様そのまま、適宜カットした状態、もしくは粉末化した状態で使用することができる。
　熱水抽出は５０～１３５℃で１５分～３時間処理であり、短時間で行う場合は、圧力下１００℃以上、例えば圧力釜を用いて１～２気圧下１１０～１２５℃前後で、１５分～６０分の範囲で抽出を行うことも可能である。
　水としては、蒸留水、精製水、イオン交換水、水道水等を使用する。乾燥マイタケ１重量に対して２～５０倍容量程度を使用する。生マイタケを使用する場合は、１重量に対して２～２０倍容量程度使用する。
　熱水抽出後抽出溶液に加えるアルコールとしてはメタノール、エタノール、プロピルアルコール等使用しうるが、抽出液に対して最終容量濃度１０～８０％になるように添加する。水分含量０～５０％アルコールも使用可能である。添加後、１～２５時間の放置により液面もしくは液中に浮遊および容器の壁面に付着する物質が現れるので、ろ過、ピペット、遠心分離あるいは網状のもので除去する。
　上記工程の後、得られたアルコール含有水溶性画分からアルコールを除去し、得られた水溶性画分から陰イオン交換クロマトグラフィーにより吸着画分を回収する。陰イオン交換クロマトグラフィーに使用される樹脂は強塩基性イオン交換樹脂、弱塩基性イオン交換樹脂等一般に陰イオン交換樹脂として使用されているものが用いられるが、浸透性が高く、化学的、物理的に安定で、交換容量の大きいものを用いるのが好ましい。
　吸着画分は、常法により溶出し分子ふるいにより分子量５０００以下の低分子画分を採取する。分子ふるいとしては、ゲルろ過クロマトグラフィー、限外ろ過、透析等が用いうる。ゲルろ過材としてはデキストラン系、アガロース系、セルロース系、アクリルアミド系のもの等一般に汎用されているものが用い得る。限外ろ過、透析等についても各種装置が市販されており、それらを適宜使用しうる。
　本発明者らが見いだした分画分子量５０００以下を選択することが望ましいが、装置の都合によっては、上下２０％まで位は許容され、所期目的は達成できる。また、下限については５００以上が好ましい。
　以上得られた本発明の目的物の性質について記載する。
外観：無色から黄色系色調の液体
溶解性：水、アルコール水、アルカリ性溶液、酸性溶液、ジメチルスルフォキシドに溶解
水溶液の液性：中性ないし弱酸性
呈色反応：アンスロン反応およびニンヒドリン反応が陽性
分子量：５０００以下
　カラムクロマト法で精製したところ本発明によって得られる免疫賦活化作用、抗腫瘍作用を有する物質のタンパク質と糖の比率は８５：１５～９９．５：０．５の範囲で、原料のマイタケの品質、抽出精製の条件により適宜変動する。
　本発明のタンパク―糖複合体は、免疫賦活作用や抗腫瘍作用を有する物質であるので、免疫賦活剤や抗腫瘍剤として、または抗腫瘍剤や抗生物質等の化学療法剤との併用、すなわち化学療法補助剤としてヒトまたは動物に投与してもよい。また、この物質を飲食品、ペットフード、家畜飼料等に添加して用いることもできる。
　本発明の物質を医薬品、あるいは動物薬として用いる場合、低分子であり水やアルコールに溶けるので、広範囲の剤形、例えば経口投与のための液剤、シロップ剤、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル、丸剤等として、さらに経口のみならず、非経口投与のための注射剤、点滴剤、さらに座剤、外用剤、点鼻剤、点眼剤等の広範囲な剤形とすることが可能であり、医薬品としての開発に当たってきわめて有利である。
　本発明の物質は、古くから食品として食されてきたマイタケ由来のもので、安全性が高く飲食品として、もしくは飲食品に配合して使用することができる。本発明における飲食品とは、牛乳、ジュース等の飲料や日常食する加工食品に限定されるものではなく、いわゆる健康食品を含めた一般飲食品と言われるものから、栄養機能食品や特定保健用食品等を含めた保健機能食品、医療用の補助食品、高齢者や病者用の食品を含めた特別用途食品等すべて含まれる。
　本発明によって得られた、マイタケ熱水抽出物から新たに分画された分子量５０００以下のタンパク―糖複合体は、免疫賦活化作用や抗腫瘍作用を示し、免疫賦活剤や抗腫瘍剤、または抗生剤や抗腫瘍剤等による化学療法の補助剤として用いることができる。
　また食経験豊富なマイタケ由来の安全性の高い物質で、医薬品、動物薬に限られることなく、飲食品、飼料、ペットフードとして、あるいはそれらに配合して用いることができる。
　本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願2008-032935号の明細書および／または図面に記載される内容を包含する。
細胞増殖活性試験の結果を示す図。細胞増殖活性率は次の式により求めた。細胞増殖活性率（％）＝処置群の吸光度の値（Ａｂｓ．４５０ｎｍ／Ａｂｓ．６５０ｎｍ）／対照群の吸光度の値（Ａｂｓ．４５０ｎｍ／Ａｂｓ．６５０ｎｍ）×１００ ＩＬ－１２およびＩＦＮ－γの生産量を示す図。
　以下に実施例を示し、本発明を具体的に説明する。
（１）抽出方法
　乾燥マイタケ子実体１５０ｇを精製水１．５Ｌで１１０～１２５℃、１５～６０分間熱水抽出を行い、得られた可溶性画分５００ｍLにエタノールを最終容量濃度１０～８０％になるように添加する。該溶液を１～４０℃で１２時間前後静置すると液面もしくは液中に浮遊または容器の壁面に付着する飴状、茶褐色の物質が生成する。この物質をピペット等により除去した後、さらに析出物質を遠心工程によって除去することによって得られたアルコール含有水溶性画分を回収する。この溶液からアルコールを除去して得られた水溶性画分から陰イオン交換クロマトグラフィー(DEAE-Sephadex)により吸着画分を回収する。該溶液をゲルろ過クロマトグラフィー(Sephadexまたはcellolofine) によってTHP-1細胞増殖活性を有する画分が得られる。該物質はアンスロン反応およびニンヒドリン反応陽性であり、カラムクロマト法で精製したところ、タンパク―糖複合体の比率は８５：１５～９９．５：０．５であった。
　分子量をゲルろ過クロマトグラフィーにより検討した結果、５０００以下であった。本発明によって得られた物質は紫外部に吸収をもち、可視部には吸収をもたなかった。
（２）細胞増殖活性試験（in vitro）
マウス脾臓細胞を該物質で１８時間、３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養した結果、細胞増殖活性率（％）を図１に示す。前記（１）で得た物質投与群が対照群に比べ強いマウス脾臓細胞増殖促進効果を示した。
（３）抗腫瘍試験
　前記（１）で得た物質と対照として生理食塩水をｃｏｌｏｎ２６カルシノマを移植したＢａｌｂ／ｃＡマウスに体重あたり溶液容量として２５０μＬ／ｋｇ７回腹腔投与し，腫瘍の増殖に及ぼす作用を検討し表１の結果を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
 （１群６匹）
腫瘍増殖抑制率は下記の式により求めた。
腫瘍増殖抑制率（％）＝｛１－（処置群の平均腫瘍重量（ｇ）／対照群の平均腫瘍重量（ｇ））｝×１００
　表１から分かるように、前記（１）で得た物質投与群が対照群に比べ強い腫瘍増殖抑制効果を示した。また、担癌マウスでの免疫担当細胞の活性化を調べるため、脾臓細胞を２４時間、３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養した結果、ＩＬ－１２およびＩＦＮ－γの生産量を図２に示す。以上（２）の細胞増殖活性試験および（３）の抗腫瘍試験の結果から、本発明によって得られる物質には強い免疫賦活化作用並びに抗腫瘍作用のあることが確認された。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。

Claims (7)

  1. 　（１）マイタケの菌糸体もしくは子実体を水で熱水抽出する工程、
    　（２）得られた抽出水溶性画分にアルコールを１０～８０％の最終容量濃度になる様に添加し、１～４０℃の温度で放置し、液面もしくは液中に浮遊または容器の壁面に付着する物質および析出した沈殿物を除去する工程、
    　（３）（２）の工程の後、得られたアルコール含有水溶性画分からアルコールを除去し、得られた水溶性画分から陰イオン交換クロマトグラフィーにより吸着画分を回収する工程、
    　（４）該吸着画分を分子ふるいにより分子量５０００以下の画分を採取する工程、
    によって製造された、アンスロン反応およびニンヒドリン反応に陽性のタンパク―糖複合体からなる免疫賦活作用および抗腫瘍作用を有する物質。
  2. 　タンパクと糖の比率が８５：１５～９９．５：０．５の割合である請求項１記載のタンパク―糖複合体からなる免疫賦活作用および／または抗腫瘍作用を有する物質。
  3. 　マイタケがマイタケ（Grifola frondosa）、白マイタケ（Grifola albicans lmaz.）、チョレイマイタケ（Dendropolyporus umbellatus）、である請求項１または２に記載のタンパク―糖複合体からなる免疫賦活作用および／または抗腫瘍作用を有する物質。
  4. 　請求項１、２又は３のいずれかに記載のタンパク―糖複合体からなる物質を有効成分として含有する免疫賦活化剤または抗腫瘍剤。
  5. 　請求項１、２又は３のいずれかに記載のタンパク―糖複合体からなる物質を有効成分として含有する化学療法補助剤。
  6. 　請求項１、２又は３のいずれかに記載のタンパク―糖複合体からなる物質を含有する飲食品。
  7. 　請求項１、２又は３のいずれかに記載のタンパク―糖複合体からなる物質を含有するペットフードもしくは家畜飼料またはペットフードもしくは家畜飼料への添加剤。
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