JP2008214246A - Age生成阻害剤およびその製造方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 食品分野、医薬品分野等で利用可能な、AGE生成阻害剤が開示されている。本発明のAGE生成阻害剤は、褐藻類コンブ目コンブ科のマコンブ、アラメ、サガラメ、ツルアラメ、クロメ、カジメ、褐藻類コンブ目チガイソ科のワカメ、アオワカメ、ヒロメ、アイヌワカメ、およびチガイソ;褐藻類ヒバマタ目ホンダワラ科のホンダワラ、ヒジキ、およびアカモク;褐藻類ナガマツモ目モズク科のモズクおよびオキナワモズク;および、紅藻類スギノリ目スギノリ科に属する海藻;からなる群より選択される少なくとも1種の海藻由来の抽出物を有効成分として含有する。
【選択図】 なし
Description
乾燥クロメ粉末250gを量り、5Lの蒸留水を添加し、100℃にて10分間加熱して抽出の後、抽出残渣を濾過にて取除いて熱水粗抽出物(1.5L)を得、これにエタノールを添加して70(v/v)%エタノール溶液(5L)を調製した。
実施例1で得られた海藻抽出粉末100mgを正確に量りとり、当該画分の総フロロタンニン量を、フロログルシノールを標準物質として用いるFolin−Denis法(日本食品科学工学会誌,2002年,第49巻,pp.507−511)により測定した。得られた総フロロタンニン量は、91%であった。このことから、上記実施例1で得られた海藻抽出粉末が高濃度のフロロタンニンを含有していることを見出した。
実施例1で得られた海藻抽出粉末をメタノールで調製して25mg/mlのサンプル液を作製し、このサンプル液4μlを0.2M リン酸緩衝液(pH7.4) 96μlに添加し、16mg/mlのBSA(ウシ血清アルブミン) 50μl、800mMのグルコース溶液 50μlを加えて、37℃で7日間反応させた。反応終了後、反応液を0.05M炭酸緩衝液(pH9.7)で1000倍にまで希釈し、この希釈液100μlを96ウェルのプレートに分注し、室温で1時間静置した後、0.05% Tween 20含有PBS溶液(pH7.4)で洗浄した。この洗浄したウェルに0.5(w/v)%ゼラチン含有0.05M炭酸緩衝液(pH9.7)200μlを添加し、室温で1時間静置した後、0.05% Tween 20含有PBS溶液(pH7.4)で洗浄した。このウェルに抗AGE抗体を加え、室温で1時間静置の後、0.05% Tween 20含有PBS溶液(pH7.4)で洗浄を行った。この後、HRP標識2次抗体を添加して、室温で1時間静置、0.05% Tween 20含有PBS溶液(pH7.4)で洗浄した。ここに1,2−フェニレンジアミンジヒドロクロリド含有基質緩衝液を加え、室温で20分間静置後、1M硫酸溶液を添加して反応を停止させ、波長492nmの吸光度を測定し、阻害率を下式により算出した。なお、このときの溶液における実施例1で得られた海藻抽出粉末の最終濃度は、0.5mg/mlであった。
39日間の予備飼育を行い糖尿病態を示したKK−Ayマウス(オス、9.5週齢、日本クレア(株)製)14匹について予備飼育最終日に血糖値および体重を測定し、測定した血糖値の結果を基準にしてこれらを2群(サンプル群7匹とコントロール群7匹)に分けた。
次いで、サンプル群には、餌以外として水道水に溶解した0.1重量%の海藻抽出粉末(実施例1で得られた抽出物)を自由摂取させ、そしてコントロール群には、餌以外として水道水を自由摂取させた。餌は、通常食(オリエンタル酵母工業(株)製CE−2)を4週間にわたって自由摂取させた。なお、当該期間を通してサンプル群のマウスの行動、体毛、糞便などには、コントロールのものと比較して差異が認められなかった。
具体的には、湿標本(10%中性緩衝ホルマリン液に浸漬した臓器)よりパラフィンブロック標本を作製し、腎臓についてはPAS染色後標本について鏡検を行い、各例100個の糸球体についてメサンギウム基質の増加が見られるかを判定した。膵臓についてはヘマトキシリン・エオジン(HE)染色を実施し、標本において各例20個のランゲルハンス氏島の大きさを測定した。各結果を表3および表4に示す。
上記実施例1で得られた海藻抽出粉末を用いて、以下の表5に示す組成を有する食品組成物を調製した。
Claims (10)
- 褐藻類コンブ目コンブ科のマコンブ(Laminaria japonica)、アラメ(Eisenia bicyclis)、サガラメ(Eisenia arborea)、ツルアラメ(Ecklonia stlonifera)、クロメ(Ecklonia kurome)、カジメ(Ecklonia cava)、褐藻類コンブ目チガイソ科のワカメ(Undaria pinnatifida)、アオワカメ(Undaria peterseniana)、ヒロメ(Undaria undarioides)、アイヌワカメ(Alaria praelomga)、およびチガイソ(Alaria crassifolia);褐藻類ヒバマタ目ホンダワラ科のホンダワラ(Sargassum fuluvellum)、ヒジキ(Hizikia fusiforme)、およびアカモク(Sargassum horneri);褐藻類ナガマツモ目モズク科のモズク(Nemacystus decipieus)およびオキナワモズク(Cladosiphon okamuranus);および、紅藻類スギノリ目スギノリ科に属する海藻;からなる群より選択される少なくとも1種の海藻由来の抽出物を有効成分として含有する、AGE生成阻害剤。
- 前記抽出物が、前記海藻由来の熱水粗抽出物を含有する50(v/v)%以上のC1〜C3アルコール液の上清から得られた抽出物である、請求項1に記載のAGE生成阻害剤。
- 前記抽出物が、前記上清を濃縮し、かつ40(v/v)%から90(v/v)%のC1〜C3アルコール水溶液を用いるカラムクロマトグラフィーにかけることにより得られた画分由来の抽出物である、請求項2に記載のAGE生成阻害剤。
- 前記カラムクロマトグラフィーに用いる吸着剤がスチレン−ジビニルベンゼン系吸着剤である、請求項3に記載のAGE生成阻害剤。
- 海藻由来の抽出物を有効成分として含有するAGE生成阻害剤であって、該抽出物が該抽出物に含まれる固形分の重量を基準としてフロロタンニンを15重量%以上の割合で含有するAGE生成阻害剤。
- フロロタンニンを有効成分として含有する、AGE生成阻害剤。
- 前記フロロタンニンが海藻由来である、請求項6に記載のAGE生成阻害剤。
- AGE生成阻害剤の製造方法であって、
褐藻類コンブ目コンブ科のマコンブ(Laminaria japonica)、アラメ(Eisenia bicyclis)、サガラメ(Eisenia arborea)、ツルアラメ(Ecklonia stlonifera)、クロメ(Ecklonia kurome)、カジメ(Ecklonia cava)、褐藻類コンブ目チガイソ科のワカメ(Undaria pinnatifida)、アオワカメ(Undaria peterseniana)、ヒロメ(Undaria undarioides)、アイヌワカメ(Alaria praelomga)、およびチガイソ(Alaria crassifolia);褐藻類ヒバマタ目ホンダワラ科のホンダワラ(Sargassum fuluvellum)、ヒジキ(Hizikia fusiforme)、およびアカモク(Sargassum horneri);褐藻類ナガマツモ目モズク科のモズク(Nemacystus decipieus)およびオキナワモズク(Cladosiphon okamuranus);および、紅藻類スギノリ目スギノリ科に属する海藻;からなる群より選択される少なくとも1種の海藻を、60℃から100℃の熱水中で抽出して熱水粗抽出物を得る工程;
該熱水粗抽出物に、C1〜C3アルコールまたはC1〜C3アルコール水溶液と合わせて、50(v/v)%以上の該アルコールを含有するC1〜C3アルコール液を得る工程;ならびに
該C1〜C3アルコール液の上清を分取する工程;
を包含する、方法。 - さらに、前記上清を濃縮して、該上清の濃縮物を得る工程;および該上清の濃縮物を、40(v/v)%から90(v/v)%のC1〜C3アルコール水溶液を用いるカラムに通す工程;を包含する、請求項8に記載の方法。
- 前記カラムがスチレン−ジビニルベンゼン系吸着剤を含有する、請求項9に記載の方法。
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