JP2002212095A - α−グルコシダーゼ阻害物質 - Google Patents
α−グルコシダーゼ阻害物質Info
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- JP2002212095A JP2002212095A JP2001045778A JP2001045778A JP2002212095A JP 2002212095 A JP2002212095 A JP 2002212095A JP 2001045778 A JP2001045778 A JP 2001045778A JP 2001045778 A JP2001045778 A JP 2001045778A JP 2002212095 A JP2002212095 A JP 2002212095A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 α−グルコシダーゼを阻害することにより、
血糖上昇を抑制し、しかも食品として安全に摂取可能な
α−グルコシダーゼ阻害物質を提供する。 【解決手段】 海藻のエゾイシゲおよびヒバマタの双方
もしくはどちらか一方、あるいはこれら海藻の水および
有機溶剤抽出物の双方もしくはどちらかに含まれる重合
度２５〜２００のフロロタンニン類がラットに対する糖
負荷試験でも有意に血中グルコース濃度の上昇抑制を確
認し、食品として毒性のないことを確認した。以上によ
り、上記課題を解決した。
血糖上昇を抑制し、しかも食品として安全に摂取可能な
α−グルコシダーゼ阻害物質を提供する。 【解決手段】 海藻のエゾイシゲおよびヒバマタの双方
もしくはどちらか一方、あるいはこれら海藻の水および
有機溶剤抽出物の双方もしくはどちらかに含まれる重合
度２５〜２００のフロロタンニン類がラットに対する糖
負荷試験でも有意に血中グルコース濃度の上昇抑制を確
認し、食品として毒性のないことを確認した。以上によ
り、上記課題を解決した。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、医薬品、食品、健
康食品、特定保健用食品などに使用することができるエ
ゾイシゲおよびヒバマタ、もしくはそれらの水あるいは
有機溶剤の抽出物を有効成分としてなるα−グルコシダ
ーゼ阻害物質に関するものである。
康食品、特定保健用食品などに使用することができるエ
ゾイシゲおよびヒバマタ、もしくはそれらの水あるいは
有機溶剤の抽出物を有効成分としてなるα−グルコシダ
ーゼ阻害物質に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】α−グルコシダーゼ阻害物質は、小腸上
皮上に局在する二糖類分解酵素であるα−グルコシダー
ゼを特異的に阻害し、糖質の分解・吸収を遅延すること
により食後の血糖値の急上昇及びそれに続くインスリン
値の上昇を抑制することが明らかにされている。したが
って、α−グルコシダーゼ阻害物質は過血糖症状に由来
する糖尿病や肥満などの疾患の改善に有用である。ま
た、α−グルコシダーゼ阻害物質を添加した食品はこれ
ら疾病の症状を改善することから関連する代謝異常の患
者に有用であり、さらに日常の食生活に取り入れること
によって糖尿病や肥満の予防食として健常者にも適して
いる。
皮上に局在する二糖類分解酵素であるα−グルコシダー
ゼを特異的に阻害し、糖質の分解・吸収を遅延すること
により食後の血糖値の急上昇及びそれに続くインスリン
値の上昇を抑制することが明らかにされている。したが
って、α−グルコシダーゼ阻害物質は過血糖症状に由来
する糖尿病や肥満などの疾患の改善に有用である。ま
た、α−グルコシダーゼ阻害物質を添加した食品はこれ
ら疾病の症状を改善することから関連する代謝異常の患
者に有用であり、さらに日常の食生活に取り入れること
によって糖尿病や肥満の予防食として健常者にも適して
いる。
【０００３】これまでに開発されたα−グルコシダーゼ
阻害物質であるアカルボースやボグリボースはインスリ
ン非依存型糖尿病の有効な治療薬として臨床に用いられ
ているが、医師の厳密な処方が必要であり、また、腹部
膨張、放屁の増加、軟便、下痢などの副作用も有り食品
や食品素材として利用するのは困難である。したがっ
て、食品や食品素材として利用可能な安全性が高く、容
易に摂取できるα−グルコシダーゼ阻害物質が求められ
る。
阻害物質であるアカルボースやボグリボースはインスリ
ン非依存型糖尿病の有効な治療薬として臨床に用いられ
ているが、医師の厳密な処方が必要であり、また、腹部
膨張、放屁の増加、軟便、下痢などの副作用も有り食品
や食品素材として利用するのは困難である。したがっ
て、食品や食品素材として利用可能な安全性が高く、容
易に摂取できるα−グルコシダーゼ阻害物質が求められ
る。
【０００４】食品に由来するα−グルコシダーゼ阻害物
質としては、例えば、特開平１０−２９２０００号公報
には、動物性または植物性蛋白質の加水分解物由来のペ
プチドおよびその混合物が開示されている。さらに、特
開平１２−０７２６８２号公報にはクローブ由来のα−
グルコシダーゼ阻害物質が開示され、特開平１２−２３
９１６４号公報にはハイビスカス酸類を有効成分とした
α−グルコシダーゼ阻害剤が開示されている。
質としては、例えば、特開平１０−２９２０００号公報
には、動物性または植物性蛋白質の加水分解物由来のペ
プチドおよびその混合物が開示されている。さらに、特
開平１２−０７２６８２号公報にはクローブ由来のα−
グルコシダーゼ阻害物質が開示され、特開平１２−２３
９１６４号公報にはハイビスカス酸類を有効成分とした
α−グルコシダーゼ阻害剤が開示されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記特
開平１０−２９２０００号公報に記載のα−グルコシダ
ーゼ阻害物質およびその混合物は、ペプチドおよびその
混合物が胃内および小腸で容易に分解される可能性があ
るが、実際の生体内においてはα−グルコシダーゼ阻害
活性を示すか否かが検討されていない。また、特開平１
２−０７２６８２号公報に記載のα−グルコシダーゼ阻
害物質はクローブ由来のオイゲニインおよびその誘導体
であり、試験管内でのα−グルコシダーゼ阻害活性は認
められるものの生体内での血糖上昇抑制効果が示されて
おらず、その生理的有効性は不明確である。前記と同様
に特開平１２−２３９１６４号公報に記載のハイビスカ
ス酸類を有効成分としたα−グルコシダーゼ阻害剤につ
いても生理効果が示されていない。
開平１０−２９２０００号公報に記載のα−グルコシダ
ーゼ阻害物質およびその混合物は、ペプチドおよびその
混合物が胃内および小腸で容易に分解される可能性があ
るが、実際の生体内においてはα−グルコシダーゼ阻害
活性を示すか否かが検討されていない。また、特開平１
２−０７２６８２号公報に記載のα−グルコシダーゼ阻
害物質はクローブ由来のオイゲニインおよびその誘導体
であり、試験管内でのα−グルコシダーゼ阻害活性は認
められるものの生体内での血糖上昇抑制効果が示されて
おらず、その生理的有効性は不明確である。前記と同様
に特開平１２−２３９１６４号公報に記載のハイビスカ
ス酸類を有効成分としたα−グルコシダーゼ阻害剤につ
いても生理効果が示されていない。
【０００６】本発明は、強いα−グルコシダーゼ阻害活
性を示し、かつ安全性が高く容易に摂取が可能で実際に
生体内で血糖上昇抑制作用を有するα−グルコシダーゼ
阻害物質を提供することを目的とするものである。
性を示し、かつ安全性が高く容易に摂取が可能で実際に
生体内で血糖上昇抑制作用を有するα−グルコシダーゼ
阻害物質を提供することを目的とするものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記した
課題を解決するために鋭意検討した結果、ヒバマタ科の
ヒバマタ及びエゾイシゲ抽出物が強いα−グルコシダー
ゼ阻害活性を示すこと、その阻害物質がフロログルシノ
ールの重合物であるフロロタンニン類であることを初め
て明らかにした。これらの化合物を有効成分として含有
させれば、その顕著なα−グルコシダーゼ阻害作用によ
り、血糖上昇を抑制して糖尿病や肥満の予防・改善に有
効であることなどを見出し、これら知見に基づき本発明
を完成するに至った。
課題を解決するために鋭意検討した結果、ヒバマタ科の
ヒバマタ及びエゾイシゲ抽出物が強いα−グルコシダー
ゼ阻害活性を示すこと、その阻害物質がフロログルシノ
ールの重合物であるフロロタンニン類であることを初め
て明らかにした。これらの化合物を有効成分として含有
させれば、その顕著なα−グルコシダーゼ阻害作用によ
り、血糖上昇を抑制して糖尿病や肥満の予防・改善に有
効であることなどを見出し、これら知見に基づき本発明
を完成するに至った。
【０００８】本発明のヒバマタ（Ｆｕｃｕｓ ｅｖａｎ
ｅｓｃｅｎｓ Ｃ．Ａｇａｒｄｈ）及びエゾイシゲ（Ｐ
ｅｌｖｅｔｉａ ｂａｂｉｎｇｔｏｎｉｉ ｄｅ Ｔｏ
ｎｉ）は食用の褐藻類であり、葉部及び茎部、又は全て
の部位を用いてもよい。
ｅｓｃｅｎｓ Ｃ．Ａｇａｒｄｈ）及びエゾイシゲ（Ｐ
ｅｌｖｅｔｉａ ｂａｂｉｎｇｔｏｎｉｉ ｄｅ Ｔｏ
ｎｉ）は食用の褐藻類であり、葉部及び茎部、又は全て
の部位を用いてもよい。
【０００９】ヒバマタ及びエゾイシゲは乾燥させて粉末
化したもの、もしくはそのものを水あるいは有機溶剤等
の溶媒で抽出したものが該当する。抽出に用いる有機溶
媒としてはメタノール、エタノール等のアルコール、酢
酸エチル、アセトン等が該当するが、中でも強いα−グ
ルコシダーゼ阻害活性が得られる１０〜９０重量％アル
コール水溶液が好ましい。該アルコールとしては、メタ
ノール、エタノールが好ましい。抽出法としては浸漬に
よる抽出、加熱抽出、連続抽出、超臨界抽出等のいずれ
の方法を用いてもよい。前記の溶媒を用いて抽出物を得
るには、公知の方法に従えばよく、例えばヒバマタ及び
エゾイシゲを原料とし、これを適当に破砕した後、それ
らの粉砕物を前記した溶媒で公知の方法を用いて抽出す
る。具体的には、原料の１〜１００倍（重量比）、好ま
しくは３〜３０倍（重量比）の溶媒で、室温で１〜７日
間放置、もしくは４０〜６０℃で２〜１６時間加熱還流
しながら抽出する。
化したもの、もしくはそのものを水あるいは有機溶剤等
の溶媒で抽出したものが該当する。抽出に用いる有機溶
媒としてはメタノール、エタノール等のアルコール、酢
酸エチル、アセトン等が該当するが、中でも強いα−グ
ルコシダーゼ阻害活性が得られる１０〜９０重量％アル
コール水溶液が好ましい。該アルコールとしては、メタ
ノール、エタノールが好ましい。抽出法としては浸漬に
よる抽出、加熱抽出、連続抽出、超臨界抽出等のいずれ
の方法を用いてもよい。前記の溶媒を用いて抽出物を得
るには、公知の方法に従えばよく、例えばヒバマタ及び
エゾイシゲを原料とし、これを適当に破砕した後、それ
らの粉砕物を前記した溶媒で公知の方法を用いて抽出す
る。具体的には、原料の１〜１００倍（重量比）、好ま
しくは３〜３０倍（重量比）の溶媒で、室温で１〜７日
間放置、もしくは４０〜６０℃で２〜１６時間加熱還流
しながら抽出する。
【００１０】上記のごとくして得られる該抽出物をその
まま本発明に用いてもよいが、好ましくは抽出に使用し
た水、有機溶媒を留去するのがよい。更に、より強いα
−グルコシダーゼ阻害活性を有する有効成分を得るため
には該抽出物を水、メタノール、エタノール、プロパノ
ール、クロロホルム、酢酸エチル、アセトンなどの溶媒
を用いた溶媒分画操作によって有効成分を濃縮し、更に
シリカゲルカラムクロマトグラフィー、セルロースカラ
ムクロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、
高速液体クロマトグラフィーなどの方法で、分離精製す
ることができる。
まま本発明に用いてもよいが、好ましくは抽出に使用し
た水、有機溶媒を留去するのがよい。更に、より強いα
−グルコシダーゼ阻害活性を有する有効成分を得るため
には該抽出物を水、メタノール、エタノール、プロパノ
ール、クロロホルム、酢酸エチル、アセトンなどの溶媒
を用いた溶媒分画操作によって有効成分を濃縮し、更に
シリカゲルカラムクロマトグラフィー、セルロースカラ
ムクロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、
高速液体クロマトグラフィーなどの方法で、分離精製す
ることができる。
【００１１】上記精製法により、
【化１】（１）で示されるフロログルシノールを構成単
位とし、
位とし、
【化２】（２）で示される直鎖構造及び
【化３】（３）で示される分岐構造を部分構造として持
つ重合度２５〜２００のフロロタンニン類が単離され、
これらの単離化合物をα−グルコシダーゼ阻害物質とし
て用いることも可能である。
つ重合度２５〜２００のフロロタンニン類が単離され、
これらの単離化合物をα−グルコシダーゼ阻害物質とし
て用いることも可能である。
【００１２】
【化１】 枠０１
【００１３】
【化２】 枠０２
【００１４】
【化３】 枠０３
【００１５】
【実施例】 以下本発明について具体的に説明する。た
だし、本発明は、以下の実施例に限定されるものではな
い。
だし、本発明は、以下の実施例に限定されるものではな
い。
【００１６】
【実施例１】α−グルコシダーゼ阻害活性成分の分離精
製および構造解析
製および構造解析
【００１７】採取したエゾイシゲを水洗後に乾燥して
（乾燥物１２．９５ｋｇ）細切し、メタノール：水＝
７：３（容量比）の抽出液を５倍量（重量比）加え、室
温で７日間抽出した。抽出液（１次抽出液）を除いた残
渣に新たにメタノール水＝７：３（容量比）の混液を加
えて、室温で７日間抽出して、２次抽出液を得た。それ
ぞれの抽出液を別々に濃縮して、それぞれ１次抽出物
（３３８ｇ）と２次抽出物（２９８ｇ）を得た。両抽出
物をそれぞれ酢酸エチルと水で溶剤分画を行い、１次抽
出物酢酸エチル可溶部、１次抽出物水可溶部、２次抽出
物酢酸エチル可溶部及び２次抽出物水可溶部を得た。こ
のうち１次抽出物酢酸エチル可溶部及び２次抽出物酢酸
エチル可溶部にα−グルコシダーゼ阻害活性が確認され
た。両抽出物ともにα−グルコシダーゼ阻害活性が認め
られ、シリカゲル薄層クロマトグラフィー（以下、ＴＬ
Ｃ）で同様な成分が含まれるのを確認した。ここではさ
らに２次抽出物酢酸エチル可溶部のみ（２３．６２ｇ）
を分画した。当該可溶部濃縮物にクロロホルムを加え、
溶解性により分画してクロロホルム不溶画分（２０．１
０ｇ）を得た。
（乾燥物１２．９５ｋｇ）細切し、メタノール：水＝
７：３（容量比）の抽出液を５倍量（重量比）加え、室
温で７日間抽出した。抽出液（１次抽出液）を除いた残
渣に新たにメタノール水＝７：３（容量比）の混液を加
えて、室温で７日間抽出して、２次抽出液を得た。それ
ぞれの抽出液を別々に濃縮して、それぞれ１次抽出物
（３３８ｇ）と２次抽出物（２９８ｇ）を得た。両抽出
物をそれぞれ酢酸エチルと水で溶剤分画を行い、１次抽
出物酢酸エチル可溶部、１次抽出物水可溶部、２次抽出
物酢酸エチル可溶部及び２次抽出物水可溶部を得た。こ
のうち１次抽出物酢酸エチル可溶部及び２次抽出物酢酸
エチル可溶部にα−グルコシダーゼ阻害活性が確認され
た。両抽出物ともにα−グルコシダーゼ阻害活性が認め
られ、シリカゲル薄層クロマトグラフィー（以下、ＴＬ
Ｃ）で同様な成分が含まれるのを確認した。ここではさ
らに２次抽出物酢酸エチル可溶部のみ（２３．６２ｇ）
を分画した。当該可溶部濃縮物にクロロホルムを加え、
溶解性により分画してクロロホルム不溶画分（２０．１
０ｇ）を得た。
【００１８】クロロホルム不溶画分のうち、２．６２ｇ
を用いてセルロースカラムクロマトグラフィー（メルク
社製）を行った。溶出溶剤は酢酸エチル、酢酸エチル：
アセトン＝１：１（容量比）、アセトン、メタノール及
び水で順次溶出した。溶出した画分の中で水溶出画分
（１．３７ｇ）に強いα−グルコシダーゼ阻害活性が見
られた。さらにこの水溶出画分を酢酸エチルと水に対す
る分配で分画し、水分配画分（１．２８ｇ）に強い阻害
活性が見られた。
を用いてセルロースカラムクロマトグラフィー（メルク
社製）を行った。溶出溶剤は酢酸エチル、酢酸エチル：
アセトン＝１：１（容量比）、アセトン、メタノール及
び水で順次溶出した。溶出した画分の中で水溶出画分
（１．３７ｇ）に強いα−グルコシダーゼ阻害活性が見
られた。さらにこの水溶出画分を酢酸エチルと水に対す
る分配で分画し、水分配画分（１．２８ｇ）に強い阻害
活性が見られた。
【００１９】得られた水分配画分をシリカゲルＴＬＣに
供した。展開溶媒はｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：
１：２（容量比）を用いて、検出は２，４−ジメトキシ
ベンズアルデヒド（ＤＭＢＡ）試薬を用いた。本画分を
展開した結果、原点からＲｆ値０．３までに複数のスポ
ットとテーリングがみられたが、すべてＤＭＢＡ試薬に
対して同様の呈色を示した。よって本画分は１，３−ジ
ヒドロキシベンゼン構造を有する化合物の同族体の混合
物と結論した。
供した。展開溶媒はｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：
１：２（容量比）を用いて、検出は２，４−ジメトキシ
ベンズアルデヒド（ＤＭＢＡ）試薬を用いた。本画分を
展開した結果、原点からＲｆ値０．３までに複数のスポ
ットとテーリングがみられたが、すべてＤＭＢＡ試薬に
対して同様の呈色を示した。よって本画分は１，３−ジ
ヒドロキシベンゼン構造を有する化合物の同族体の混合
物と結論した。
【００２０】水分配画分の１Ｈ ＮＭＲ及び１３Ｃ Ｎ
ＭＲスペクトルを測定した。測定溶媒として重メタノー
ル及び内部標準としてテトラメチルシランを用いて、Ｊ
ＥＯＬ ＪＮＭ−ＦＸ９０Ｑ（日本電子株式会社）によ
り測定した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルでは、５．９１〜
６．３１ｐｐｍに複数のシグナルが重なっているブロー
ドなシグナルのみが観察された。これは両側のオルト位
に酸素置換基がある芳香族プロトンと帰属した。１３Ｃ
ＮＭＲスペクトルでは、１５２．２〜１５８．２ｐｐ
ｍ、１２６．１〜１２６．２ｐｐｍ及び９５．９〜９
６．８ｐｐｍにそれぞれ複数のシグナルが重なりあって
いるシグナルが観察された。これら３つのシグナルのグ
ループの積分強度比は約３：１：２であった。これら３
つのシグナルのグループのシグナルはそれぞれ酸素置換
基の根元の芳香族カーボン、１，２，３−三酸素置換ベ
ンゼン構造の２位芳香族カーボン及び１，３−二酸素置
換ベンゼン構造の２位芳香族カーボンと帰属した。これ
らの３つのグループのシグナルはフロロタンニンに特有
なシグナルである。１，３−ヒドロキシベンゼン構造に
特異的に呈色するＤＭＢＡ試薬に陽性なことからも本発
明がフロロタンニンであることが支持される。フロロタ
ンニンの部分構造は以下のように決定した。これまでに
知られているフロロタンニンの部分構造として、１，
２，３，４，５−五酸素置換ベンゼン構造や２つのベン
ゼン環の直接結合がある。１，２，３，４，５−五酸素
置換ベンゼン構造の１位、３位及び５位の１３Ｃ ＮＭ
Ｒスペクトルでのケミカルシフトの計算値は１３９．５
〜１４６．０ｐｐｍである。２つのベンゼン環の直接結
合したときの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルでのケミカルシ
フトの計算値は１３９．５〜１４６．０ｐｐｍである。
本発明のフロロタンニンの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルで
はそれらに対応するシグナルが観察されなかったため、
１，２，３，４，５−五酸素置換ベンゼン構造や２つの
ベンゼン環の直接結合はないと結論した。よって、本発
明のフロロタンニンは、
ＭＲスペクトルを測定した。測定溶媒として重メタノー
ル及び内部標準としてテトラメチルシランを用いて、Ｊ
ＥＯＬ ＪＮＭ−ＦＸ９０Ｑ（日本電子株式会社）によ
り測定した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルでは、５．９１〜
６．３１ｐｐｍに複数のシグナルが重なっているブロー
ドなシグナルのみが観察された。これは両側のオルト位
に酸素置換基がある芳香族プロトンと帰属した。１３Ｃ
ＮＭＲスペクトルでは、１５２．２〜１５８．２ｐｐ
ｍ、１２６．１〜１２６．２ｐｐｍ及び９５．９〜９
６．８ｐｐｍにそれぞれ複数のシグナルが重なりあって
いるシグナルが観察された。これら３つのシグナルのグ
ループの積分強度比は約３：１：２であった。これら３
つのシグナルのグループのシグナルはそれぞれ酸素置換
基の根元の芳香族カーボン、１，２，３−三酸素置換ベ
ンゼン構造の２位芳香族カーボン及び１，３−二酸素置
換ベンゼン構造の２位芳香族カーボンと帰属した。これ
らの３つのグループのシグナルはフロロタンニンに特有
なシグナルである。１，３−ヒドロキシベンゼン構造に
特異的に呈色するＤＭＢＡ試薬に陽性なことからも本発
明がフロロタンニンであることが支持される。フロロタ
ンニンの部分構造は以下のように決定した。これまでに
知られているフロロタンニンの部分構造として、１，
２，３，４，５−五酸素置換ベンゼン構造や２つのベン
ゼン環の直接結合がある。１，２，３，４，５−五酸素
置換ベンゼン構造の１位、３位及び５位の１３Ｃ ＮＭ
Ｒスペクトルでのケミカルシフトの計算値は１３９．５
〜１４６．０ｐｐｍである。２つのベンゼン環の直接結
合したときの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルでのケミカルシ
フトの計算値は１３９．５〜１４６．０ｐｐｍである。
本発明のフロロタンニンの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルで
はそれらに対応するシグナルが観察されなかったため、
１，２，３，４，５−五酸素置換ベンゼン構造や２つの
ベンゼン環の直接結合はないと結論した。よって、本発
明のフロロタンニンは、
【化１】（１）で示されるフロログルシノールを構成単
位とし、
位とし、
【化２】（２）で示される直鎖構造及び
【化３】（３）で示される分岐構造を部分構造として持
つ重合体であると決定した。
つ重合体であると決定した。
【００２１】さらに本発明のフロロタンニンの分子量を
ゲル浸透高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法で
測定した。
ゲル浸透高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法で
測定した。
【００２２】フロロタンニンに無水酢酸とピリジンを加
え、６０℃で６時間保ち、フェノール性ヒドロキシル基
のアセチル化を行った。このアセチル化物をゲル浸透Ｈ
ＰＬＣに供した。ＨＰＬＣの条件は以下のとおりであ
る。カラム：ＴＳＫ−ＧＥＬＧ５０００Ｈ６（東ソー株
式会社）、カラムサイズ：直径７．５ｍｍ×長さ３０ｃ
ｍ、クロマトグラフ：島津ＬＣ−１０ＡＴＶＰ、検出
器：島津ＳＰＤ−１０ＡＶＰ、検出：ＵＶ（２５４ｎ
ｍ）、移動相：テトラヒドロフラン、サンプル濃度及び
注入量：０．２ｍｇ／ｍｌ、０．０２ｍｌ、流速：１．
０ｍｌ／分、温度：室温。分子量は標準ポリスチレンキ
ット（東ソー株式会社）を用い、その保持時間から決定
した。
え、６０℃で６時間保ち、フェノール性ヒドロキシル基
のアセチル化を行った。このアセチル化物をゲル浸透Ｈ
ＰＬＣに供した。ＨＰＬＣの条件は以下のとおりであ
る。カラム：ＴＳＫ−ＧＥＬＧ５０００Ｈ６（東ソー株
式会社）、カラムサイズ：直径７．５ｍｍ×長さ３０ｃ
ｍ、クロマトグラフ：島津ＬＣ−１０ＡＴＶＰ、検出
器：島津ＳＰＤ−１０ＡＶＰ、検出：ＵＶ（２５４ｎ
ｍ）、移動相：テトラヒドロフラン、サンプル濃度及び
注入量：０．２ｍｇ／ｍｌ、０．０２ｍｌ、流速：１．
０ｍｌ／分、温度：室温。分子量は標準ポリスチレンキ
ット（東ソー株式会社）を用い、その保持時間から決定
した。
【００２３】フロロタンニンのアセチル化物をＨＰＬＣ
に供したところ、保持時間１１．５分を極大とする１
０．５〜１２．０分までの幅広のピークが得られた。保
持時間から分子量１４０００を極大として分子量５２０
０〜４００００に相当することが明らかとなった。アセ
チル化物の値から遊離フロロタンニンの分子量を計算す
ると、本発明のフロロタンニンの分子量分布は８３００
を極大とする３１００〜２４０００と結論した。したが
って、前記精製法で得られるフロロタンニンは、
に供したところ、保持時間１１．５分を極大とする１
０．５〜１２．０分までの幅広のピークが得られた。保
持時間から分子量１４０００を極大として分子量５２０
０〜４００００に相当することが明らかとなった。アセ
チル化物の値から遊離フロロタンニンの分子量を計算す
ると、本発明のフロロタンニンの分子量分布は８３００
を極大とする３１００〜２４０００と結論した。したが
って、前記精製法で得られるフロロタンニンは、
【化１】（１）で示されるフロログルシノールを構成単
位とし、
位とし、
【化２】（２）で示される直鎖構造及び
【化３】（３）で示される分岐構造を部分構造として持
つ重合度２５〜２００の重合物と同定された。
つ重合度２５〜２００の重合物と同定された。
【００２４】
【実施例２】 試験管内ラット小腸α−グルコシダーゼ
活性試験
活性試験
【００２５】ラット小腸粉末より調製した粗α−グルコ
シダーゼ溶液を用いて、α−グルコシダーゼ阻害試験を
行った。ラット小腸アセトン粉末（シグマ社製）１０ｇ
に対して０．１Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）１０
０ｍｌを加えて超音波処理をしたあとに、３０００ｒｐ
ｍ、３０分間遠心分離を行った。得られた上清を粗α−
グルコシダーゼ溶液とした。スクロースを基質としてス
クラーゼ活性を測定するときは原液をそのまま利用し、
マルトースを基質としてマルターゼ活性を測定するとき
は緩衝液で４倍（容量比）に希釈したものを用いた。ス
クロース及びマルトース基質溶液は５００ｍＭとなるよ
うに０．１Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）に溶解し
た。基質溶液０．１ｍｌ、被験溶液又は０．１Ｍマレイ
ン酸緩衝液（ｐＨ６．０）０．１ｍｌ及び緩衝液０．１
Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）０．７ｍｌを加えて
混合し、粗酵素溶液０．１ｍｌを添加することで酵素反
応を開始した。酵素反応を３７℃、６０分間行ない、
２．０Ｍマレイン酸−トリス−水酸化ナトリウム緩衝液
（ｐＨ７．４）を加えて酵素反応を停止した。酵素反応
液０．０２ｍｌを試験管にとり、グルコース定量発色液
（グルコースオキシダーゼ−ペルオキシダーゼ法、グル
コースＢ−テストワコー、和光純薬工業株式会社）３．
０ｍｌを加えて３７℃、３０分間発色させ、５０５ｎｍ
の吸光度を測定して次式によりα−グルコシダーゼ阻害
率を求めた。
シダーゼ溶液を用いて、α−グルコシダーゼ阻害試験を
行った。ラット小腸アセトン粉末（シグマ社製）１０ｇ
に対して０．１Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）１０
０ｍｌを加えて超音波処理をしたあとに、３０００ｒｐ
ｍ、３０分間遠心分離を行った。得られた上清を粗α−
グルコシダーゼ溶液とした。スクロースを基質としてス
クラーゼ活性を測定するときは原液をそのまま利用し、
マルトースを基質としてマルターゼ活性を測定するとき
は緩衝液で４倍（容量比）に希釈したものを用いた。ス
クロース及びマルトース基質溶液は５００ｍＭとなるよ
うに０．１Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）に溶解し
た。基質溶液０．１ｍｌ、被験溶液又は０．１Ｍマレイ
ン酸緩衝液（ｐＨ６．０）０．１ｍｌ及び緩衝液０．１
Ｍマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）０．７ｍｌを加えて
混合し、粗酵素溶液０．１ｍｌを添加することで酵素反
応を開始した。酵素反応を３７℃、６０分間行ない、
２．０Ｍマレイン酸−トリス−水酸化ナトリウム緩衝液
（ｐＨ７．４）を加えて酵素反応を停止した。酵素反応
液０．０２ｍｌを試験管にとり、グルコース定量発色液
（グルコースオキシダーゼ−ペルオキシダーゼ法、グル
コースＢ−テストワコー、和光純薬工業株式会社）３．
０ｍｌを加えて３７℃、３０分間発色させ、５０５ｎｍ
の吸光度を測定して次式によりα−グルコシダーゼ阻害
率を求めた。
【００２６】
【数１】 枠０４
【００２７】本発明で得られた水分配画分フロロタンニ
ンのラット小腸マルターゼ及びスクラーゼに対する阻害
活性を検討した結果、マルターゼ活性及びスクラーゼ活
性に対する５０％阻害濃度（ＩＣ５０）はそれぞれ０．
４８及び１．６５ｍｇ／ｍｌだった。
ンのラット小腸マルターゼ及びスクラーゼに対する阻害
活性を検討した結果、マルターゼ活性及びスクラーゼ活
性に対する５０％阻害濃度（ＩＣ５０）はそれぞれ０．
４８及び１．６５ｍｇ／ｍｌだった。
【００２８】
【実施例３】 ラット糖負荷試験
【００２９】本発明で得られたフロロタンニン（水分配
画分）のラット糖負荷試験における血糖値変化に対する
影響を検討した。２４時間絶食した８週齢のＷｉｓｔａ
ｒ系ラットを対照群及びフロロタンニン投与群（以下投
与群）それぞれ１２匹ずつ用いた。ラットをエーテル軽
麻酔をかけ、頚静脈からヘパリン入り採血管に約０．５
ｍｌ採血した。採血後に対照群にはスクロース水溶液を
５００ｍｇ／体重ｋｇを、投与群にはスクロース水溶液
５００ｍｇ／体重ｋｇ及びフロロタンニン水溶液３００
ｍｇ／体重ｋｇをそれぞれゾンデを用いて経口投与し
た。投与後、１０、３０、６０及び１２０分後に約０．
５ｍｌ採血を行った。採血した血は遠心分離によって血
漿画分に分画して、供試するまで−８０℃で保存した。
血漿中グルコース量はグルコースオキシダーゼ法による
測定キット（グルコースＢ−テストワコー、和光純薬工
業株式会社）で測定した。血漿中グルコースの経時変化
を表１に示す。その結果、本発明品は投与後１０分で対
照群と比較して有意に血漿中のグルコース量の上昇を抑
制させることが明らかとなった。したがって、本発明の
フロロタンニンは血糖上昇抑制作用を有し、糖尿病・肥
満の発症防止及び改善に有効である。
画分）のラット糖負荷試験における血糖値変化に対する
影響を検討した。２４時間絶食した８週齢のＷｉｓｔａ
ｒ系ラットを対照群及びフロロタンニン投与群（以下投
与群）それぞれ１２匹ずつ用いた。ラットをエーテル軽
麻酔をかけ、頚静脈からヘパリン入り採血管に約０．５
ｍｌ採血した。採血後に対照群にはスクロース水溶液を
５００ｍｇ／体重ｋｇを、投与群にはスクロース水溶液
５００ｍｇ／体重ｋｇ及びフロロタンニン水溶液３００
ｍｇ／体重ｋｇをそれぞれゾンデを用いて経口投与し
た。投与後、１０、３０、６０及び１２０分後に約０．
５ｍｌ採血を行った。採血した血は遠心分離によって血
漿画分に分画して、供試するまで−８０℃で保存した。
血漿中グルコース量はグルコースオキシダーゼ法による
測定キット（グルコースＢ−テストワコー、和光純薬工
業株式会社）で測定した。血漿中グルコースの経時変化
を表１に示す。その結果、本発明品は投与後１０分で対
照群と比較して有意に血漿中のグルコース量の上昇を抑
制させることが明らかとなった。したがって、本発明の
フロロタンニンは血糖上昇抑制作用を有し、糖尿病・肥
満の発症防止及び改善に有効である。
【００３０】
【表１】 枠０５
【００３１】
【発明の効果】以上のように、本発明のエゾイシゲおよ
びヒバマタの双方もしくはどちらか一方、あるいはこれ
ら海藻の水および有機溶剤抽出物の双方もしくはどちら
かを使用することにより、これらに含まれる有効成分
（フロログルシノールの重合物であるフロロタンニン）
が有するα−グルコシダーゼ阻害活性により、血糖上昇
抑制作用を示すことから糖尿病及び肥満の発症防止や改
善が可能となる。
びヒバマタの双方もしくはどちらか一方、あるいはこれ
ら海藻の水および有機溶剤抽出物の双方もしくはどちら
かを使用することにより、これらに含まれる有効成分
（フロログルシノールの重合物であるフロロタンニン）
が有するα−グルコシダーゼ阻害活性により、血糖上昇
抑制作用を示すことから糖尿病及び肥満の発症防止や改
善が可能となる。
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｎ 9/99 (72)発明者 佐々木 茂文 北海道江別市文京台緑町589番地４ 北海 道立食品加工研究センター内 (72)発明者 太田 智樹 北海道江別市文京台緑町589番地４ 北海 道立食品加工研究センター内 (72)発明者 大堀 忠志 北海道江別市文京台緑町589番地４ 北海 道立食品加工研究センター内 (72)発明者 吉川 修司 北海道江別市文京台緑町589番地４ 北海 道立食品加工研究センター内 Ｆターム(参考） 4B018 MD48 ME01 ME03 4C088 AA13 AC01 AC05 BA07 BA08 ZA70 ZC20 ZC35
Claims (3)
- 【請求項１】エゾイシゲおよびヒバマタの双方もしくは
どちらか一方を有効成分として含有することを特徴とす
るα−グルコシダーゼ阻害物質。 - 【請求項２】エゾイシゲおよびヒバマタの双方もしくは
どちらか一方の水および有機溶剤の双方もしくはどちら
か一方の抽出物を有効成分とすることを特徴とするα−
グルコシダーゼ阻害物質。 - 【請求項３】有効成分中に、フロログルシノールの重合
物で、重合度が２５〜２００であるフロロタンニン類を
含有することを特徴とする請求項１あるいは請求項２記
載のα−グルコシダーゼ阻害物質。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001045778A JP3543175B2 (ja) | 2001-01-16 | 2001-01-16 | α−グルコシダーゼ阻害物質 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001045778A JP3543175B2 (ja) | 2001-01-16 | 2001-01-16 | α−グルコシダーゼ阻害物質 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002212095A true JP2002212095A (ja) | 2002-07-31 |
| JP3543175B2 JP3543175B2 (ja) | 2004-07-14 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001045778A Expired - Fee Related JP3543175B2 (ja) | 2001-01-16 | 2001-01-16 | α−グルコシダーゼ阻害物質 |
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Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005082546A (ja) * | 2003-09-10 | 2005-03-31 | Kanebo Cosmetics Inc | α−グルコシダーゼ阻害剤 |
| WO2005056035A1 (ja) * | 2003-12-10 | 2005-06-23 | Riken Vitamin Co., Ltd. | 海藻抽出物およびそれを含む糖質加水分解酵素阻害剤 |
| JP2006045188A (ja) * | 2004-02-23 | 2006-02-16 | Nagase & Co Ltd | β−グルクロニダーゼ阻害剤 |
| JP2008214245A (ja) * | 2007-03-02 | 2008-09-18 | Nagase & Co Ltd | アルドース還元酵素阻害剤およびその製造方法 |
| JP2008214246A (ja) * | 2007-03-02 | 2008-09-18 | Nagase & Co Ltd | Ａｇｅ生成阻害剤およびその製造方法 |
| JP2010180133A (ja) * | 2009-02-03 | 2010-08-19 | Aomori Univ Of Health & Welfare | α−グルコシダーゼ阻害剤 |
| JP2012136445A (ja) * | 2010-12-24 | 2012-07-19 | Ishikawa Prefectural Public Univ Corp | ヤツマタモク由来新規化合物及び該化合物の糖分解酵素阻害剤としての用途 |
| JP2014505683A (ja) * | 2011-01-03 | 2014-03-06 | コリア フード リサーチ インスティチュート | フロログルシノール、フロロタンニンまたは褐藻類抽出物を含むギャバａ型−ベンゾジアゼピン受容体活性用組成物、及び抗不安、抗痙攣、鎮静作用、及び睡眠誘導及び改善用組成物 |
| WO2018208107A1 (ko) * | 2017-05-11 | 2018-11-15 | 한국식품연구원 | 플로로글루시놀을 유효성분으로 하는 수면 장애 개선, 예방 또는 치료용 조성물, 또는 gaba-a 수용체 벤조다이아제핀 결합 위치 효능제의 내성 억제 또는 부작용 경감용 조성물 |
| KR20220117712A (ko) * | 2021-02-17 | 2022-08-24 | 동의대학교 산학협력단 | 뜸부기 추출물을 유효성분을 포함하는 당뇨병의 예방 및 개선용 조성물 및 이의 제조방법 |
| GB2579600B (en) * | 2018-12-05 | 2023-07-05 | Byotrol Plc | Anti-viral composition |
-
2001
- 2001-01-16 JP JP2001045778A patent/JP3543175B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| US11439603B2 (en) | 2017-05-11 | 2022-09-13 | Korea Food Research Institute | Compositions for ameliorating, preventing or treating somnipathy including phloroglucinol as active ingredient and compositions for suppressing intolerance to or alleviating side effects of agonist at benzodiazepine binding site of GABA-A receptor including phloroglucinol as active ingredient |
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