CN102145024B - 一种具有增强免疫功能的真菌组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有增强免疫功能的真菌组合物及其制备方法，属于保健品领域，本发明以灵芝、茯苓、香菇、猴头菇、银耳为有效成分，活性成分配方为：灵芝提取物5-8份，猴头菇提取物5-8份，茯苓提取物3-6份，香菇提取物3-6份，银耳提取物3-6份。灵芝、茯苓、香菇、猴头菇、银耳五种真菌原料采用超声波全程低温提取干燥工艺分别生产，本发明所述的组合物增强免疫力的效果明显，而且本发明工艺先进，原料加工过程中损失小，本品配方科学、工艺稳定，可以工业化规模生产，具有科学性、可靠性，能丰富通过食品原料增强免疫力的亚健康产品市场保健食品品种。

Description

一种具有增强免疫功能的真菌组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种具有增强免疫功能的真菌组合物及其制备方法，属于保健品领域。

背景技术

随着生活节奏的加快和各种环境污染，使得很多人都处于免疫力降低的亚健康状态。亚健康常以易患感冒(免疫力低下)、易疲劳、胸闷、气喘、失眠、胃口差、情绪不稳定等为主症。根据对2.3万的人群调查，18～40岁的人随着年龄增长，心身轻度失调呈缓慢上升趋势；而到了40岁以上，潜临床状态的比例陡然攀高；55岁前后进入前临床状态的明显增多；65岁以上的人即使没有明确的病变存在，大多数人也处于生理性衰老状态，后者也可看作为亚健康的一类特殊表现类型：这告诉我们，亚健康状态在中年以后变得明朗化，滑向疾病的步伐迅速加快。

亚健康的发病多因七情内伤，加之劳倦、饮食、生活不节等导致体内阴阳平衡失调，升降失常，气血津液、脏腑经络功能紊乱，出现心脾气血两亏、脾虚湿盛、肝郁气滞、气滞血瘀、肝肾阴亏等；如不加调整进一步发展，引起脏腑气血功能失调，将会导致气滞、血瘀、痰湿、郁久化热进而出现热、毒、瘀、虚的一系列病理变化。中医学认为，中药治疗亚健康状态，主要应通过药物协调阴阳，调理脏腑，补气健脾等，来施治亚健康状态。亚健康主流人群都是中年以后居多，此类人大多数脏腑虚弱，气血亏少阴阳偏颇，故养生保健用药，当以平调中和为主，重在调和气血阴阳，调养脾胃益肾。

对亚健康状态的治疗可运用保健食品的有效方法，可通过益气安神、养胃强身达到目的。灵芝功能补气安神，止咳平喘；猴头菇益气养血，利五脏、助消化、补亏虚，用于神经衰弱、消化不良；茯苓健脾宁心；银耳功能滋阴生津，润肺养胃；香菇能益胃助食；本方重用灵芝、猴头菇补气血，辅以茯苓宁心安神，银耳、香菇益胃助食，诸药共奏益气安神、养胃强身功效。

食用菌多糖是目前被认为临床效果较为确切的一类低毒而免疫活性强的物质。食用菌包含能够食用的真菌，常见的有蘑菇、香菇、平菇、金针菇、草菇、口蘑、银耳、木耳、大刺猴头、灵芝、云芝、茯苓、猪苓等。食药用菌多糖作为具有提高免疫能力的生物活性物质。受到各国研究人员的重视，已成为许多学科研究的热点。食(药)用菌多糖主要有杂多糖、甘露聚糖、葡聚糖、糖蛋白和多糖肽，具有活性的食(药)用菌多糖免疫增强作用机制是从免疫器官、免疫细胞和免疫分子各层次上刺激巨噬细胞、淋巴细胞、T细胞、B细胞、NK细胞、LAK细胞和红细胞，增加这些细胞的数量，增强其细胞活性，促使其发挥作用。由于不同食用菌多糖作用靶点不同，食用菌多糖常常复合食用。

灵芝为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体，性味甘，平。归心、肺、肝、肾经。功能补气安神，止咳平喘。用于眩晕不眠，心悸气短，虚劳咳喘。茯苓为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核。性味甘、淡，平。归心、肺、脾、肾经。功能利水渗湿，健脾宁心。用于水肿尿少，痰饮眩悸，脾虚食少，便溏泄泻，心神不安，惊悸失眠。银耳系银耳科植物银耳的干燥子实体。性味甘淡，平。功能滋阴，润肺，养胃，生津。治虚劳咳嗽，痰中带血，虚热口渴。猴头菇，猴头菇学名又称猴头蘑、刺猬菌、菜心菌等。功效：猴头菇性平味甘无毒，入肝、胃二经，可利五脏、助消化、补亏虚，用于神经衰弱、消化不良、脘腹胀痛、胃十二指肠溃疡等。香菇为侧耳科植物香蕈的子实体。性味甘，平。功能益胃气。《本草求真》：″香蕈，食中佳品，凡菇禀土热毒，惟香蕈味甘性平，大能益胃助食，及理小便不禁。然此性极滞濡，中虚服之有益，中寒与滞，食之不无滋害。取冬产肉厚，细如钱大者良。

目前市场上出现的保健品多为单一的有效成分，而且通过常规方法得到，这样就造成了有效成分单一，保健效果不明显；而且在加工过程中造成了有效成分的丢失，产出率不高。本发明以灵芝、茯苓、香菇、猴头菇、银耳为有效成分，增强免疫力的效果明显，而且本发明工艺先进，原料加工过程中损失小，本品配方科学、工艺稳定，可以工业化规模生产。具有科学性、可靠性，能丰富通过食品原料增强免疫力的亚健康产品市场保健食品品种。

发明内容

一、产品配方

本发明组合物的活性成分配方为：灵芝提取物5-8份，猴头菇提取物5-8份，茯苓提取物3-6份，香菇提取物3-6份，银耳提取物3-6份。

二、灵芝提取物、茯苓提取物、香菇提取物、猴头菇提取物、银耳提取物生产工艺

灵芝、茯苓、香菇、猴头菇、银耳五种真菌原料采用超声波全程低温提取干燥工艺分别生产，生产工艺如下：

包括：原料→粉碎→投料→超声波水提→膜过滤→醇沉→微波干燥→包装→检验

1.粉碎：将原料用粉碎机粉碎至10-30目备用；

2.投料：将粗粉粒投入提取管料桶内；

3.超声波水提：原料加8-10倍纯化水进行超声波连续逆流提取，超声波频率为2-3万赫兹，提取温度为50-60℃，200目过滤获取含水量85-90％的提取液；

4.膜过滤：经超滤膜过滤，去掉小分子物质和水，获取含水量30-60％的浓缩物；

5.醇沉：浓缩物边搅拌边加入4倍量95度食用酒精，静置24h，去上清液，离心甩干获取含酒精量5-15％的浸膏；

6.微波干燥：浸膏装入微波料盘，抽真空干燥，温度40℃--50℃，时间60-80分钟，干燥物含水率≤6％；

7.包装：干燥物80目粉碎过筛，包装；

8.检验：检验各项指标，全部合格进库；

9.本工艺为1∶20提取比例。

三、组合物的制作过程

1.将香菇提取物、茯苓提取物、银耳提取物进行前段混合10--20分钟；

2.将灵芝提取物、猴头菇提取物和上述的混合物进行中段混合10--20分钟；

3.根据不同的剂型需要，添加不同的辅剂和上述五种真菌提取物的混合物进行后段混合10-20分钟；

4.将混合物按照不同机型进行分装；

5.再对产品进行外包装和成品检验，最后入库。

四、对人体安全性

众所周知，保健食品与药品最主要不同就是要求安全性更高，本品特色为全部组成原料为食用菌原料，安全可靠。食用菌保健食品在我国发展有着得天独厚的优势：完善的传统保健理论和丰富的养生经验，原料品种多，资源丰富，食用安全。食用菌资源无论是在我国传统保健方面，还是在临床治病方面，都具有应用历史悠久、食用安全性高、生物活性强、功能明确的特点。

附图说明

附图为本发明的组合物的胶囊剂型的制备工艺图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明，不应理解为对本发明的限制，事实上，含有本发明所述的活性成分的组合物与药学上可以接受的载体和赋形剂得到的任何剂型都在本发明的保护范围之内。

一、以本发明组合物为有效成分的胶囊剂型为例来说明本发明的实施。

(一)灵芝、猴头菇、茯苓、香菇、银耳五种真菌原料采用以下工艺分别生产，生产工艺如下：

包括：原料→粉碎→投料→超声波水提→膜过滤→醇沉→微波干燥→包装→检验

a)粉碎：将原料用粉碎机粉碎至10-30目备用；

b)投料：将粗粉粒投入提取管料桶内；

c)超声波水提：原料加8-10倍纯化水进行超声波连续逆流提取，超声波频率为2-3万赫兹，提取温度为50-60℃，200目过滤获取含水量85-90％的提取液；

d)膜过滤：经超滤膜过滤，去掉小分子物质和水，获取含水量30-60％的浓缩物；

e)醇沉：浓缩物边搅拌边加入4倍量95度食用酒精，静置24h，去上清液，离心甩干获取含酒精量5-15％的浸膏；

f)微波干燥：浸膏装入微波料盘，抽真空干燥，温度40℃--50℃，时间60-80分钟，干燥物含水率≤6％；

g)包装：干燥物80目粉碎过筛，包装；

h)检验：检验各项指标，全部合格进库；

i)本工艺为1∶20提取比例。

(二)取灵芝提取物70克，猴头菇提取物70克，茯苓提取物40克，香菇提取物40克，银耳提取物40克为原料，配置含该组合物的胶囊剂型：

1.将香菇提取物、茯苓提取物、银耳提取物进行前段混合10-20分钟；

2.将灵芝提取物、猴头菇提取物和上述的混合物进行中段混合10-20分钟；

3.上述五种中药提取物的混合物进行后段混合10-20分钟；

4.将混合物按照300毫克/粒进行装胶囊；

5.然后进行磨光、半成品检验和按照60粒每瓶进行分装，上述步骤均是在30万级清洁区域完成的；

6.再对产品进行外包装和成品检验，最后入库。

二、下面以本发明组合物为有效成分的胶囊剂型——五种真菌提取混合物为例来说明本发明组合物的效果。

1.材料和方法

1.1样品：五种真菌提取混合物由深圳市汇康生物科技有限公司提供，为胶囊，内含棕黄色粉末，规格为300毫克/粒，置阴凉干燥处保存，取胶囊内容物备用。

1.2实验动物与分组：长沙市开福区东创实验动物科技服务部(实验动物生产许可证号为SCXK(湘)2006-0001)提供的清洁级昆明种雌性小鼠200只，体重18g-22g。饲料由同一单位提供，每40只小鼠为一大组，共五大组。每大组40只小鼠按体重随机分为4小组，即对照组和低、中、高剂量组。

1.3实验条件：为屏障环境，实验期间环境温度22-24℃，湿度52％-58％，

实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2003-0002。

1.4剂量选择及样品处理：据人体口服推荐量，设五种真菌提取混合物低、中、高剂量分别为0.1g/kg.bw、0.2g/kg.bw、0.6g/kg.bw(分别相当于人体推荐量的5、10、30倍)，受试液配制时分别取五种真菌提取混合物胶囊内容物1.00g、2.00g、6.00g加蒸馏水至200ml，按0.2ml/10g.bw体积给小鼠灌胃，每天一次，连续30天，对照组灌胃予以等体积的蒸馏水。

1.5主要仪器与试剂：分析天平、洁净工作台、二氧化碳培养箱、722分光光度计等。

绵羊红细胞(SRBC)、小牛血清、ConA、YAC-1细胞、印度墨汁、鸡红细胞等。

1.6实验方法：将选取和分组实验动物，按人体口服推荐量，设五种真菌提取混合物低、中、高剂量分别为0.1g/kg.bw、0.2g/kg.bw、0.6g/kg.bw(分别相当于人体推荐量的5、10、30倍)，按0.2ml/10g.bw体积给小鼠灌胃，每天一次，连续30天。对照组灌胃予以等体积的蒸馏水。末次灌胃1h后参照《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)的方法，对小鼠进行免疫功能的测定，检测指标包括(1)脏器/体重比值测定(2)迟发型变态反应(DTH)(足跖增厚法)(3)ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(MTT法)(4)抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)(5)半数溶血值(HC50)的测定(6)小鼠碳廓清实验(7)小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)(8)NK细胞活性的测定(乳酸脱氢酶测定法)。

1.7实验数据统计：用Excel 2003、Spssl1.0软件进行数据转化和统计分析。

2结果

2.1五种真菌提取混合物对小鼠体重的影响

见表1-5。经方差齐性检验，各组小鼠实验初、中、末体重及实验期间小鼠体重增长方差齐，采用单因素方差分析，结果显示，各组之间上述指标总体比较无显著性差异(P＞0.05)。

表1 免疫I组小鼠

表2 免疫II组小鼠体重

表3 免疫III组小鼠体重

表4 免疫IV组小鼠体重

表5 免疫V组小鼠体重

2.2五种真菌提取混合物对小鼠免疫器官脏器/体重的影响

见表6。经方差齐性检验，各组小鼠胸腺/体重、脾脏/体重方差齐，采用单因素方差分析，结果显示，胸腺/体重比值总体比较无显著性差异(P＞0.05)。脾脏/体重比值总体比较有显著性差异(P＝0.0320)。进一步用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较，结果显示高剂量组小鼠脾脏/体重比值显著高于对照组(P＜0.05)。

表6 五种真菌提取混合物对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响

2.3五种真菌提取混合物对小鼠细胞免疫功能的影响

2.3.1五种真菌提取混合物对小鼠迟发型变态反应(DHT)的影响

见表7。经方差齐性检验，各组小鼠足跖肿胀度方差齐，单因素方差分析显示，各组之间总体比较有显著性差异(P＝0.002)。进一步用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较，结果显示中、高剂量组小鼠足跖肿胀度均显著高于对照组(P＜0.05、P＜0.01)。提示样品可提高小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响。

表7 五种真菌提取混合物对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响

2.3.2五种真菌提取混合物对小鼠ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力的影响

见表8。经方差齐性检验，各组小鼠淋巴细胞活增殖能力方差不齐，秩和检验显示，各组之间总体比较有较显著性差异(P＝0.032)。进一步用Tamhane’sT2检验进行两两比较，发现中、高剂量组小鼠淋巴细胞转化能力显著高于对照组(P＜0.05)。提示样品可显著提高小鼠淋巴细胞转化能力。

表8 五种真菌提取混合物对小鼠淋巴细胞转化能力实验的影响

2.4五种真菌提取混合物对体液免疫的影响

2.4.1五种真菌提取混合物对小鼠抗体生成细胞的影响

见表9。经方差齐性检验，各组小鼠溶血空斑数方差齐，单因素方差分析显示，各组之间总体比较有显著性差异(P＝0.0321)。进一步用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较，结果显示中、高剂量组小鼠溶血空斑数显著高于对照组(P＜0.05)。提示样品可显著提高小鼠的抗体生成能力。

表9 五种真菌提取混合物对小鼠抗体生成细胞数的影响

2.4.2五种真菌提取混合物对小鼠半数溶血值(HC50)的影响

见表10。经方差齐检验，各组小鼠溶血空斑数方差齐，单因素方差分析显示，各组之间总体比较无显著性差异(P＞0.05)。

表10 五种真菌提取混合物对小鼠半数溶血值(HC50)的影响

2.5五种真菌提取混合物对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响

2.5.1五种真菌提取混合物对小鼠单核—巨噬细胞碳廓清的影响

经方差齐检验，各组小鼠吞噬指数方查差齐，单因素方差分析显示，各组之间总体比较无显著性差异(P＞0.05，见表11)。提示样品对小鼠碳廓清能力无显著影响。

表11 五种真菌提取混合物对小鼠单核—巨噬细胞碳廓清的影响

2.5.2五种真菌提取混合物对小鼠巨噬细胞鸡红细胞能力的影响

见表12-1，12-2。经方差齐性检验，各组小鼠巨噬率平方根反正弦转换值、吞噬指数方差齐，单因素方差分析显示，各组之间上述两项指标总体比较无显著性差异(P＞0.05)。提示样品对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力无明显影响。

表12-1 五种真菌提取混合物对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率的影响

表12-2 五种真菌提取混合物对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数的影响

2.6五种真菌提取混合物对小鼠NK细胞活性的影响

见表13。经方差齐性检验，各组小鼠NK细胞活性平方根反正弦转换值方差齐，单因素方差分析显示，各组之间总体比较有较显著性差异(P＝0.032)。进一步用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较，结果显示高剂量组小鼠NK细胞活性显著高于对照组(P＜0.05)。提示样品可显著提高小鼠的NK细胞活性。

表13 五种真菌提取混合物对小鼠NK细胞活性的影响

3.结论

经口给小鼠0.1g/kg.bw、0.2g/kg.bw、0.6g/kg.bw剂量的五种真菌提取混合物胶囊内容物30天，0.2g/kg.bw、0.6g/kg.bw剂量能显著提高小鼠的迟发型变态反应、抗体生成细胞数及ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力，0.6g/kg.bw剂量能显著提高小鼠脾脏/体重比值、NK细胞活性。各剂量对小鼠体重增长、胸腺/体重比值、半数溶血值、小鼠碳廓清能力、巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力无显著影响。由此可见，本发明的药物组合物具有增强免疫力作用。

Claims (4)

1.一种能增强免疫力的组合物，其特征在于：该组合物的有效成分为灵芝、猴头菇、茯苓、香菇和银耳的提取物，其中灵芝提取物5-8份、猴头菇提取物5-8份、茯苓提取物3-6份、香菇提取物3-6份和银耳提取物3-6份，其中，灵芝、猴头菇、茯苓、香菇和银耳的提取物的制备方法相同，分别采用以下步骤：

a)粉碎：将原料用粉碎机粉碎至10-30目备用；

b)投料：将粗粉粒投入提取管料桶内；

c)超声波水提：原料加8-10倍纯化水进行超声波连续逆流提取，超声波频率为2-3万赫兹，提取温度为50-60℃，200目过滤获取含水量85-90％的提取液；

d)膜过滤：经超滤膜过滤，去掉小分子物质和水，获取含水量30-60％的浓缩物；

e)醇沉：浓缩物边搅拌边加入4倍量95度食用酒精，静置24h，去上清液，离心甩干获取含酒精量5-15％的浸膏；

f)微波干燥：浸膏装入微波料盘，抽真空干燥，温度40℃-50℃，时间60-80分钟，干燥物含水率≤6％；

g)包装：干燥物80目粉碎过筛，包装；

h)检验：检验各项指标，全部合格进库。

2.根据权利要求1所述的组合物的制备方法，其特征在于：

a)将香菇提取物、茯苓提取物、银耳提取物进行前段混合10-20分钟；

b)将灵芝提取物、猴头菇提取物和上述的混合物进行中段混合10-20分钟；

c)根据不同的剂型需要，添加不同的辅剂和上述五种真菌提取物的混合物进行后段混合10-20分钟；

d)将混合物按照不同剂型进行分装；

e)再对产品进行外包装和成品检验，最后入库。

3.根据权利要求1所述的组合物为有效成分配以药学上可以接受的各种载体和赋形剂制成的各种剂型，包括：胶囊、片剂、颗粒剂和粉针剂。

4.根据权利要求1所述的组合物在制备增强免疫力的保健药品中的应用。