CN114365844B - 一种调节肠道菌群、提高肠道免疫的竹荪复方保健食品及其制备方法 - Google Patents
一种调节肠道菌群、提高肠道免疫的竹荪复方保健食品及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种调节肠道菌群、提高肠道免疫的竹荪复方保健食品及其制备方法，主要原料按重量份数计包括：竹荪10份，香菇10份，茯苓10份，枸杞10份，甘草5份。经动物实验验证，这种含竹荪活性提取物的复方浓缩液能够显著改善环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠的肠道免疫功能，并通过调节肠道菌群起到增强肠道免疫力的效果，特别地，其能够显著提高肠道杯状细胞数量、免疫球蛋白SIga含量和降低髓过氧化物酶活力，以及调节小鼠的肠道菌群结构及丰度，增加肠道微生物的多样性，维持肠道稳态。
Description
技术领域
本发明属于保健食品技术领域，具体涉及一种调节肠道菌群、提高肠道免疫的竹荪复方保健食品及其制备方法。
背景技术
肠道微生物系统是人体最大、最复杂的微生态系统，肠道菌群作为人体微生物组最重要的组成部分与人体健康的关系重要而复杂。据估计，在正常生理状态下，人体肠道内有1000~1150种约100万亿数量的细菌，平均细菌数量与人体细胞数目的比值约为1:1，其中90%以上的物种属于拟杆菌门（Bacteroidetes）和厚壁菌门（Firmicutes）。这些微生物与宿主有着密不可分的共生关系，它们与免疫、感觉、神经及肠内分泌系统一同调节肠道屏障的物理和化学元素组成，保护宿主免受病原体侵袭，维持机体的动态平衡。然而，由于饮食变化、抗生素的使用、年龄或感染等原因，肠道菌群会发生紊乱，这种“共生生态系统”就会失衡导致一系列炎症和疾病，如炎症性肠病、结直肠癌、代谢综合征和过敏性疾病等。目前已经提出了几种策略来调节肠道菌群的组成和功能，包括粪菌移植、益生菌和其他活的微生物干预，以及使用机体不可消化的食物，如益生元膳食干预等方式。在与人体健康相关的多种宿主―内源性和宿主―外源性因素中，饮食是肠道微生物群落结构和功能的关键因素，饮食成分如膳食纤维、脂肪、动物蛋白、植物活性物质通过直接或间接作用影响肠道菌群的组成和功能，与此同时，肠道微生物反过来影响机体对营养物质的摄取和吸收、新陈代谢和储存，对宿主生理有潜在的深远影响。
人体免疫功能的稳定是维持机体内环境稳定的关键，对于机体各项功能的正常发挥有着非常重要的生理意义，而其中的黏膜免疫在机体的免疫功能中发挥着重要作用。在病理调节方面，90%以上的病原体，都是通过黏膜系统感染人体的，其中，病毒包括我们所熟知的呼吸道病毒——新冠病毒、流感病毒等，还有肠道病毒。细菌感染也是同样如此，结核分枝杆菌和沙门氏菌都是通过黏膜进入人体。黏膜免疫与炎症和肿瘤存在着密切的关系。胃肠道是人体内最大的免疫器官，主要由肠上皮细胞、肠上皮内淋巴细胞、固有层淋巴细胞、Peyer结、肠系膜相关淋巴结等组织构成，肠黏膜免疫系统最主要的功能是抵御病原体入侵。而长期以来肠黏膜免疫系统与人体肠道菌群共同进化、相互影响。在对抗病原体入侵方面肠黏膜免疫与肠道菌群协同作用，共同抵御病原体侵袭以维持肠道内环境稳态，从而促进人类健康。因此维持肠道菌群稳态有益于肠黏膜免疫系统的建立。
食药用菌是21世纪的优质营养食品，是具备全新药理的天然“药物”。研究证明，大部分食药用菌活性成分具有增强免疫力、抑制肿瘤、抗病毒、稳定血压、降低血糖血脂、改善脂肪代谢、抗艾滋病病毒及缓解肝炎症状等多种保健作用和功能。食药用菌是开发潜力巨大的功能食品宝库，以其高蛋白、低脂肪、风味独特、营养丰富、医疗保健功效好等特点，备受关注，因此，充分认识食药用菌的“绿色价值”，对开发出具有营养保健功效的功能性食品具有重要意义。竹荪（Dictyophora indusiate），又名竹笙、网纱菌、竹姑娘等。竹荪营养丰富，是“色、味、香、形”四绝的“草八珍”之一，为菌中四珍（竹荪、猴头、香菇、银耳）之首，自古素有“山珍之王”、“菌中皇后”之称。竹荪营养丰富，香甜味浓，风味独特。根据中医理论，竹荪性温、味甘，有活血益气、健脾胃、助消化之功效，竹荪中含有丰富的多糖、黄酮、凝集素等生物活性物质，具有抗肿瘤、抗氧化、抗菌、降血脂、增强免疫力等功效，具有良好的营养和药用价值，被国际社会公认为是“十分好的蛋白质来源”食品，享有“现代保健食品”、“人类植物性食品的顶峰”等美誉。香菇属担子菌纲、伞菌目、口蘑科、香菇属，学名Lentinan，是家喻户晓的美味食用菌。香菇因其香味独特，口味鲜美，被人们广为食用和喜爱。除了用作食材之外，香菇也拥有很高的药用价值，一直被视为“菌中之秀”、“抗癌新兵”。传统中医认为香菇具有祛邪扶正调和阴阳、益味助食、化痰理气、调理小便不禁等功效。香菇多糖对机体的免疫系统有刺激作用，能恢复和提高免疫功能，从而起到抗癌、防癌的作用。香菇多糖是目前研究最多的菇类多糖之一，它是香菇子实体和菌丝体细胞壁中的主要成分，主链为β-1,3-D-葡聚糖，含5个主链葡萄糖残基，带有2个β-1,6-葡萄糖侧基，具有一定的水溶性和热稳定性。香菇多糖在水中呈三螺旋构象，对它的生物和药理活性起重要作用。近年来香菇多糖在全球范围内大规模用于辅助药物和膳食补充剂，香菇多糖的生物活性的重要基础之一就是免疫调节活性，此外还有抗癌、保肝等作用。
传统中医理论认为疾病的发生、发展和转归取决于正邪的消长，与机体的免疫系统功能密切相关，“扶正祛邪”理论是中医的主要治病原则。中药作为中医的重要组成部分，在调节机体平衡，增强抗病能力等方面具有特定疗效。相对于西药单一靶点的特点，中药于机体的调节具有多靶点、多成分、多环节、多途径、多层次的整体性作用。近年来具有扶正祛邪功效的单味中药如人参、黄芪、枸杞、金银花、甘草等以及复方制剂如四君子汤、四物汤、玉屏风散等的免疫学研究取得了很大的进展。从中药中寻找安全高效的免疫调节剂是目前免疫药理学的研究热点，并且研究趋势已逐渐从单味药转向复方制剂的研究。茯苓是国家卫生部、国家中药管理局最早颁布的“既是食品又是药品的品种名单”中的一种。茯苓也是我国传统的保健滋养食品，在各大药膳和食疗中具有悠久的使用历史。在我国《中国药典》中记载：茯苓，性味甘、淡、平，归心、肺、脾、肾经；具有利水渗湿、健脾、宁心等功效。现代药理研究指出茯苓具有调节血脂、利尿、增强机体对病原微生物的抵抗力，抑制胃溃疡，保护胃肠道黏膜的作用。枸杞（Lycium barbarum）是我国传统药食兼用药材，属茄科落叶灌木。传统中医学认为，枸杞药性较平和、微微涩苦但无毒，有益精明目、滋阴补肺和强身健体等功能。枸杞中的化学成分较为复杂，包括多糖类、蛋白类、生物碱、类胡萝素、黄酮、微量元素、氨基酸、维生素等。其中枸杞多糖是主要活性成分，占干果的3~8%。枸杞多糖属于糖缀化合物，具有木糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖和核糖等单糖成分。枸杞多糖具有很强的生物活性，包括抗肿瘤、免疫调节、降血脂、降血糖、视网膜保护、保肝等功能。甘草属（Glyeyrrhiza L）植物属于豆科蝶形花亚科草本植物，共有29种6变种。甘草最初记载于东汉时期的《神农本草经》中，是我国常用传统中药之一。甘草的药性温和、味甘，归脾、胃、心、肺经，主要有补脾益气，清热解毒，润肺止咳，调和诸药等功效。主要用于治疗炎症、氧化衰老、肿瘤和心脑血管疾病。研究发现，甘草的活性成分主要含有甘草多糖类、三萜皂苷类和黄酮类，甘草多糖是从甘草中提取的活性多糖，具有抑菌、增强免疫、抗肿瘤、抗病毒等作用，且具有对细胞毒副作用小等特点。
本发明以竹荪、香菇、茯苓、枸杞、甘草等具有多种营养功能特性的天然食材和药食同源材料为原料，依据传统中医与现代营养均衡理论，进行组方复配，制备了一种竹荪复方型调节肠道菌群、提高肠道免疫的保健食品，该产品在调节肠道菌群、提高肠道免疫方面拥有较好的保健价值，在市场上具有广阔的开发前景。
发明内容
本发明的目的主要是提供一种配比简单，组方搭配合理，具有显著调节肠道菌群、提高肠道免疫等功效的竹荪复方保健食品。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种调节肠道菌群、提高肠道免疫的竹荪复方保健食品及其制备方法，首先利用超声辅助醇提、热水浸提、蛋白酶解依次从竹荪中获得醇溶性、水溶性活性物质和蛋白类活性物质，根据一定配比混合后得到竹荪全活性提取物；再根据中医的“君臣佐使”和现代营养学理论，将香菇、茯苓、枸杞、甘草原料采用磨粉、热水浸提、过滤得到香菇、茯苓、枸杞和甘草的复合提取液，再与竹荪全活性提取物按比例混合，经减压浓缩制备复方浓缩液，该复方浓缩液可以用于制备具有调节肠道菌群、提高肠道免疫功能的竹荪复方保健食品。其主要原料配方按重量份数计包括：竹荪10份，香菇10份，茯苓10份，枸杞10份，甘草5份。
一种调节肠道菌群、提高肠道免疫的竹荪复方保健食品的制备方法，具体包括如下步骤：
（1）竹荪全活性提取物的制备：
A．将竹荪子实体于50℃鼓风干燥箱干燥，后磨成细粉，过40目筛备用；
B．取步骤A得到的竹荪粉100 g，按重量体积比1:10 g/mL加入体积分数95%乙醇溶液，于45℃超声提取罐中提取1 h，功率300 W，频率45 Hz，经过滤得竹荪95%醇提取液和滤渣；滤渣收集后于50℃鼓风干燥箱烘干，竹荪95%醇提取液于真空减压浓缩罐60℃进行减压浓缩，浓缩物经真空干燥后得竹荪95%醇提物；
C．取步骤B干燥后的滤渣，按重量体积比1:10 g/mL加入体积分数55%乙醇溶液，再于45℃超声提取罐中提取1 h，经过滤得竹荪55%醇提取液和滤渣；滤渣收集后于50℃鼓风干燥箱烘干，竹荪55%醇提取液于60℃进行减压浓缩，浓缩物经真空干燥后得竹荪55%醇提物，将竹荪95%醇提物和竹荪55%醇提物混合得到竹荪醇提物；
D．再取步骤C烘干后的滤渣，按重量体积比1:35 g/mL加入蒸馏水，于90℃提取罐中提取2 h，经过滤得竹荪水提取液和滤渣；滤渣收集后于50℃烘干，竹荪水提取液于60℃进行减压浓缩，浓缩物经真空干燥后得竹荪水提物；
E．再取步骤D烘干后的滤渣，按重量体积比1:30 g/mL加入蒸馏水，以滤渣为基准，按14000 U/g酶活加入复合蛋白酶，调节pH=8.0，于55℃提取罐中提取4 h后90℃灭酶10min，冷却后过滤分离滤液与滤渣，滤液于60℃进行减压浓缩，浓缩物经真空干燥后得竹荪酶解提取物；
F．将竹荪醇提物、竹荪水提物和竹荪酶解提取物按质量比例15.57﹕10.95﹕4.72混合得到竹荪全活性提取物；
（2）复方浓缩液的制备：
A．将香菇子实体、茯苓、甘草原料于60℃鼓风干燥箱烘干，磨粉，备用；
B．取香菇粉100 g、茯苓粉100 g、甘草粉50 g和枸杞100 g于提取罐中，按重量体积比1:30 g/ml加入蒸馏水，90℃浸提1 h，过滤分离滤液和滤渣，滤渣按重量体积比1:20g/mL加蒸馏水进行二次复提，过滤，将两次提取的滤液合并，弃滤渣，将合并的滤液与（1）步获得的竹荪全活性提取物混合，后于60℃进行减压浓缩，浓缩至相对密度为1.09，得到复方浓缩液；（3）竹荪复方保健食品的制备
将复方浓缩液用于制备口服液，胶囊，片剂，冲剂，固体饮料，得到竹荪复方保健食品。
（4）进一步的，步骤（1）E中，复合蛋白酶是由蛋白酶、纤维素酶与果胶酶组成，三者的质量比例为1:1:1。
对本发明的组方原理作用的详细说明：
竹荪（Dictyophora indusiate），又名竹笙、网纱菌、竹姑娘等。竹荪营养丰富，是“色、味、香、形”四绝的“草八珍”之一，为菌中四珍（竹荪、猴头、香菇、银耳）之首，自古素有“山珍之王”、“菌中皇后”之称。竹荪营养丰富，香甜味浓，风味独特。根据中医理论，竹荪性温、味甘，有活血益气、健脾胃、助消化之功效，竹荪中含有丰富的多糖、黄酮、凝集素等生物活性物质，具有抗肿瘤、抗氧化、抗菌、降血脂、增强免疫力等功效，具有良好的营养和药用价值，被国际社会公认为是“十分好的蛋白质来源”食品，享有“现代保健食品”、“人类植物性食品的顶峰”等美誉。
香菇属担子菌纲、伞菌目、口蘑科、香菇属，学名Lentinan，是家喻户晓的美味食用菌。香菇因其香味独特，口味鲜美，被人们广为食用和喜爱。除了用作食材之外，香菇也拥有很高的药用价值，一直被视为“菌中之秀”、“抗癌新兵”。传统中医认为香菇具有祛邪扶正调和阴阳，益味助食，化痰理气，理小便不禁等功效。香菇中的多糖是目前研究最多的菇类多糖之一。它是香菇子实体和菌丝体细胞壁中的主要成分，主链为β-1,3-D-葡聚糖，含5个主链葡萄糖残基带2个β-1,6-葡萄糖侧基，具有一定的水溶性和热稳定性。香菇多糖在水中呈三螺旋构象，对它的生物和药理活性起重要作用。近年来香菇多糖在全球范围内大规模用于辅助药物和膳食补充剂，香菇多糖的生物活性的重要基础之一就是免疫调节活性，此外还有抗癌、保肝等作用。《中国药典》2015版推荐香菇的用量为10-15颗，取常用量的1/2-1/3。
茯苓是国家卫生部、国家中药管理局最早颁布的“既是食品又是药品的品种名单”中的一种。茯苓也是我国传统的保健滋养食品，在各大药膳和食疗中具有悠久的使用历史。在我国《中国药典》中记载：茯苓，性味甘、淡、平，归心、肺、脾、肾经；具有利水渗湿、健脾、宁心等功效。现代药理研究指出茯苓具有调节血脂、利尿、增强机体对病原微生物的抵抗力，抑制胃溃疡，保护胃肠道黏膜的作用。《中国药典》2015版推荐茯苓的用量为10-15 g，取常用量的1/2-1/3。
枸杞（Lycium barbarum）是我国传统药食兼用药材，属茄科落叶灌木。传统中医学认为，枸杞药性较平和、微微涩苦但无毒，有益精明目、滋阴补肺和强身健体等功能。枸杞中的化学成分较为复杂，包括多糖类、蛋白类、生物碱、类胡萝素、黄酮、微量元素、氨基酸、维生素等。其中枸杞多糖是主要活性成分，占干果的3~8%。枸杞多糖属于糖缀化合物，主要由木糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖和核糖等单糖组成。枸杞多糖具有很强的生物活性，包括抗肿瘤、免疫调节、降血脂、降血糖、视网膜保护、保肝等功能。《中国药典》2015版推荐枸杞的用量为6-12 g，取常用量的1/2-1/3。
甘草属（Glyeyrrhiza L）植物属于豆科蝶形花亚科草本植物，共有29种6变种。甘草最初记载于东汉时期的《神农本草经》中，甘草是我国常用传统中药之一。甘草应用广泛，通常以甘草的根及根茎为用药部位。甘草的药性温和、味甘，归脾、胃、心、肺经，主要有补脾益气，清热解毒，润肺止咳，调和诸药等功效。主要用于治疗炎症、氧化衰老、肿瘤和心脑血管疾病。研究发现，甘草的活性成分主要含有甘草多糖类、三萜皂苷类和黄酮类，甘草多糖是从甘草中提取的活性多糖，具有抑菌、增强免疫、抗肿瘤、抗病毒等作用，且对细胞毒副作用小等特点。《中国药典》2015版推荐甘草的用量为2-10 g，取常用量的1/2-1/3。
本发明的有益之处：
1.本发明全部采用天然产物为原料，搭配药食两用材料，对调节肠道菌群、提高肠道免疫有显著作用。
2.本发明按照《中国药典》2015版上推荐剂量换算成临床常用量进行原料配伍，安全可靠，具有一定科学依据，适于工业化生产。
3.本发明为一种调节肠道菌群、提高肠道免疫的竹荪复方保健品，该产品在调节肠道菌群、提高肠道免疫方面拥有较好的保健价值，在市场上具有广阔的开发前景。
附图说明
图1-1为竹荪复方保健食品对环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠肠道杯状细胞数量的影响；
图1-2为竹荪复方保健食品对环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠肠道髓过氧化物酶活力的影响；
图1-3为竹荪复方保健食品对环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠肠道免疫球蛋白SIga含量的影响；
图2为竹荪复方保健食品对环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠肠道组织损伤的影响
（注：其中，A、B、C、D、E依次代表正常组、模型组、竹荪复方低剂量组、竹荪复方高剂量组和阳性药物对照组；大写字母表示放大倍数为200倍，小写字母表示放大倍数为400倍）
图3-1为竹荪复方保健食品对环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠的肠道菌群中厚壁菌（Firmicutes）/拟杆菌（Bacteroidetes）比值的影响；
图3-2为竹荪复方保健食品对环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠肠道菌群在属水平下的菌群组成的影响；
图3-3为竹荪复方保健食品对环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠的肠道菌群α多样性的影响。
具体实施方式
为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
实施案例:
一种调节肠道菌群、提高肠道免疫的竹荪复方保健口服液的制备方法的步骤为：
（1）竹荪全活性提取物的制备：
A．将竹荪子实体于50℃鼓风干燥箱干燥，后磨成细粉，过40目筛备用；
B．取步骤A得到的竹荪粉100 g，按重量体积比1:10 g/mL加入体积分数95%乙醇溶液，于45℃超声提取罐中提取1 h，功率300 W，频率45 Hz，经过滤得竹荪95%醇提取液和滤渣；滤渣收集后于50℃鼓风干燥箱烘干，竹荪95%醇提取液于真空减压浓缩罐60℃进行减压浓缩，浓缩物经真空干燥后得竹荪95%醇提物；
C．取步骤B干燥后的滤渣，按重量体积比1:10 g/mL加入体积分数55%乙醇溶液，再于45℃超声提取罐中提取1 h，经过滤得竹荪55%醇提取液和滤渣；滤渣收集后于50℃鼓风干燥箱烘干，竹荪55%醇提取液于60℃进行减压浓缩，浓缩物经真空干燥后得竹荪55%醇提物，将竹荪95%醇提物和竹荪55%醇提物混合得到竹荪醇提物；
D．再取步骤C烘干后的滤渣，按重量体积比1:35 g/mL加入蒸馏水，于90℃提取罐中提取2 h，经过滤得竹荪水提取液和滤渣；滤渣收集后于50℃鼓风干燥箱烘干，竹荪水提取液于60℃进行减压浓缩，浓缩物经真空干燥后得竹荪水提物；
E．再取步骤D烘干后的滤渣，按重量体积比1:30 g/mL加入蒸馏水，以14000 U/g酶活加入复合蛋白酶，调节pH=8.0，于55℃提取罐中酶解4 h后90℃灭酶10 min，冷却后过滤分离滤液与滤渣，滤液于60℃进行减压浓缩，浓缩物经真空干燥后得竹荪酶解提取物；
F．将竹荪醇提物、竹荪水提物和竹荪酶解提取物按质量比例15.57﹕10.95﹕4.72混合得到竹荪全活性提取物；
（2）复方浓缩液的制备：
A．将香菇子实体、茯苓、甘草原料于60℃鼓风干燥箱烘干，磨粉，备用；
B．取香菇粉100 g、茯苓粉100 g、甘草粉50 g和枸杞100 g于提取罐中，按重量体积比1:30 g/mL加入蒸馏水，90℃浸提1 h，过滤分离滤液和滤渣，滤渣按重量体积比1:20g/mL加蒸馏水进行二次复提，过滤，将两次提取的滤液合并，弃滤渣，将合并的滤液与（1）步获得的竹荪全活性提取物混合，后于60℃进行减压浓缩，浓缩至相对密度为1.09，得到复方浓缩液；
（3）竹荪复方保健食品的制备
将复方浓缩液用于制备口服液，胶囊，片剂，冲剂，固体饮料，得到竹荪复方保健食品。
进一步的，步骤（1）E中，复合蛋白酶是由蛋白酶、纤维素酶与果胶酶组成，三者的质量比例为1:1:1。
动物实验
实验方法：
从防“病”于未然，改变食物营养结构的角度出发，采用小鼠模型探究竹荪复方对环磷酰胺导致的免疫力低下小鼠肠道菌群及肠道免疫功能的影响。选取雌性ICR小鼠，实验设5组，包括正常对照组（N）、模型组（CY）、阳性对照组（LM）和竹荪复方高剂量组（CM-H）、竹荪复方低剂量组（CM-L），采用预防给药相结合的方式，开展为期30天的动物实验，将动物分组后，前三周分别按照分组灌胃，其中正常对照组和模型组自由饮水饮食，在第四周开始连续三天采用注射环磷酰胺（80 mg/kg小鼠体重）的方式进行免疫低下小鼠造模，期间灌胃同步，在第31天时，在将小鼠禁食不禁水12小时后，在洁净工作台中，眼球取血后通过解剖，对小鼠的肠道组织及肠道内容物进行摘取和分离、收集并及时冻存，小肠组织经石蜡切片、HE染色分析其组织病理变化，经PAS染色分析肠道杯状细胞数量；盲肠内容物通过16S高通量测序分析得到菌群组成结构和相对丰度。
实验结果如表1、图1-1、图1-2、图1-3、图2、图3-1、图3-2、图3-3所示，经竹荪复方保健食品干预的免疫低下模型小鼠的肠道组织损伤与模型组相比，明显得到恢复，肠道组织中的杯状细胞数量、肠道免疫球蛋白（SIga）、髓过氧化物酶（MPO）活力含量与空白组模型组均有变化，结果表明经竹荪复方干预后的小鼠的肠道免疫功能得到明显改善；且从肠道菌群的结果可以看出，竹荪复方干预后使肠道菌群的结构和组成发生了很大改变，具体表现在，其增加了肠道菌群的物种多样性（α多样性）、使厚壁菌门（Firmicutes）数量降低，拟杆菌门（Bacteroidetes）数量升高，改变F/B值，调节肠道稳态。
注：“N”指的是空白组，在动物实验周期内灌胃生理盐水，喂正常饲料；
“CY”指的是模型组，在动物实验前三周内灌胃生理盐水；喂正常饲料，在第四周开始的连续三天腹腔注射环磷酰胺（80 mg/kg体重/天），同时给与正常饮水饮食；
“LM”是指阳性对照组，灌胃盐酸左旋咪唑（20 mg/kg体重/天），喂正常饲料；
“CM-L” 是指竹荪复方低剂量实验组，其中竹荪10份（竹荪全活性提取物按生药量计）、香菇10份、茯苓10份、枸杞10份、甘草5份，在整个实验周期灌胃生药量2.5 g生药/kg小鼠体重，给与正常饮食饮水，在第四周开始的连续三天腹腔注射环磷酰胺（80 mg/kg体重/天）；
“CM-H” 是指竹荪复方低剂量实验组，其中竹荪10份（竹荪全活性提取物按生药量计）、香菇10份、茯苓10份、枸杞10份、甘草5份，在整个实验周期灌胃生药量7.5 g生药/kg小鼠体重，给与正常饮食饮水，在第四周开始的连续三天腹腔注射环磷酰胺（80 mg/kg体重/天）。
表1竹荪复方保健食品对环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠肠道菌群在门水平下的菌群组成的影响
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
Claims (1)
1.一种调节肠道菌群、提高肠道免疫的竹荪复方保健食品的制备方法，其特征在于：具体制备方法如下：
（1）竹荪全活性提取物的制备：
A．将竹荪子实体于50℃鼓风干燥箱干燥，后磨成细粉，过40目筛备用；
B．取步骤A得到的竹荪粉100 g，按重量体积比1:10 g/mL加入体积分数95%乙醇溶液，于45℃超声提取罐中提取1 h，功率300 W，频率45 Hz，经过滤得竹荪95%醇提取液和滤渣；滤渣收集后于50℃鼓风干燥箱烘干，竹荪95%醇提取液于真空减压浓缩罐60℃进行减压浓缩，浓缩物经真空干燥后得竹荪95%醇提物；
C．取步骤B烘干后的滤渣，按重量体积比1:10 g/mL加入体积分数55%乙醇溶液，再于45℃超声提取罐中提取1 h，经过滤得竹荪55%醇提取液和滤渣；滤渣收集后于50℃鼓风干燥箱烘干，竹荪55%醇提取液于60℃进行减压浓缩，浓缩物经真空干燥后得竹荪55%醇提物，将竹荪95%醇提物和竹荪55%醇提物混合得到竹荪醇提物；
D．再取步骤C烘干后的滤渣，按重量体积比1:35 g/mL加入蒸馏水，于90℃提取罐中提取2 h，经过滤得竹荪水提取液和滤渣；滤渣收集后于50℃鼓风干燥箱烘干，竹荪水提取液于60℃进行减压浓缩，浓缩物经真空干燥后得竹荪水提物；
E．再取步骤D烘干后的滤渣，按重量体积比1:30 g/mL加入蒸馏水，以14000 U/g酶活加入复合蛋白酶，调节pH=8.0，于55℃提取罐中酶解4 h后90℃灭酶10 min，冷却后过滤分离滤液与滤渣，滤液于60℃进行减压浓缩，浓缩物经真空干燥后得竹荪酶解提取物；
F．将竹荪醇提物、竹荪水提物和竹荪酶解提取物按质量比例15.57﹕10.95﹕4.72混合得到竹荪全活性提取物；
（2）复方浓缩液的制备：
A．将香菇子实体、茯苓、甘草原料于60℃鼓风干燥箱烘干，磨粉，备用；
B．取香菇粉100 g、茯苓粉100 g、甘草粉50 g和枸杞100 g于提取罐中，按重量体积比1:30 g/mL加入蒸馏水，90℃浸提1 h，过滤分离滤液和滤渣，滤渣按重量体积比1:20 g/mL加蒸馏水进行二次复提，过滤，将两次提取的滤液合并，弃滤渣，将合并的滤液与（1）步获得的竹荪全活性提取物混合，后于60℃进行减压浓缩，浓缩至相对密度为1.09，得到复方浓缩液；
（3）竹荪复方保健食品的制备
将复方浓缩液用于制备口服液，胶囊，片剂，冲剂，固体饮料，得到竹荪复方保健食品；
步骤（1）E中，复合蛋白酶是由蛋白酶、纤维素酶与果胶酶组成，三者的质量比例为1:1:1。
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