KR20210051637A - 식물 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 식물 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명의 제조방법으로 제조된 인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피를 포함하는 식물 혼합 추출물은 면역력이 저하된 실험군에서 식물 혼합 추출물을 처리하지 않은 대조군에 비해 흉선과 비장 조직의 중량을 증가시키고, 면역 저하에 의해 감소된 혈중 임파구 수치를 증가시키고, 면역 저하에 의해 증가된 과립구 수치를 감소시키고, 혈중 사이토카인(IL-2, TNF-α 및 INF-γ)의 함량을 대조군 대비 증가시키는 효과가 현저하였으며, 면역력이 저하된 대조군에서 관찰되는 백색수질의 붕괴현상을 개선하는 효과가 우수하므로, 본 발명의 제조방법으로 제조된 면역증진용 식물 혼합 추출물은 면역증진용 건강기능식품 또는 면역력 저하에 의한 질환의 치료제로 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 식물 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
면역은 인체가 자기 성분 이외의 물질이 생체의 항상성을 깨뜨리거나 자기를 위협하는 것을 배제하기 위해 일어나는 일련의 자기 보호기작으로, 크게 선천적 면역(innate immunosurveillance)과 획득 면역(adaptive immunosurveillance)으로 구분된다.
자연 면역이라고도 하는 선천적 면역은 대식 세포, 자연살해 세포 등을 포함하는 백혈구, TNF-α 등의 다양한 사이토카인, 점액조직, 혈액에 존재하는 보체(complement) 등으로 구성되어 있어 획득 면역이 발생하기 전에 미생물, 바이러스 침입 등의 감염성 병원체뿐만 아니라 노화된 정상세포와 암세포 등에 대해 대식작용(phagocytosis)을 일으켜 1차적인 방어 면역 역할을 담당한다. 선천 면역을 보강하는 역할을 하는 획득 면역은 적응 면역이라고도 하는데, 항원 제시 세포가 포식하여 제시한 항원을 T 세포가 인식하면서 이루어지며, T 세포가 관여하는 세포성 면역과 B 세포가 생산하는 항체에 의한 체액성 면역반응으로 이루어진다. 이처럼 인체는 외부 항원과 같은 외래 물질의 침입 혹은 감염에 대하여 선천적 면역 및 획득 면역이 적절하게 대항하여 항상성을 유지하도록 설계되어 있다.
비장은 림프구와 대식 세포, 자연살해 세포 등 다양한 면역 세포를 형성하는 중요한 면역기관이다. 비장은 혈액에서 유래된 항원에 대해 면역반응을 하며, 노화된 세포 및 손상된 세포를 제거하는 역할도 수행한다.
선천 면역에서 비장 등에 존재하는 대식 세포가 가장 중요한 역할을 담당하는데, 대식 세포는 외부물질 침입을 가장 먼저 인지하여 체액성 면역과 세포성 면역에 관여하며, 활성화되면 증식과 확산능력의 향상, 대식 능력 증강뿐만 아니라 NO(nitric oxide), TNF-α, IL-1β, IL-6 등의 사이토카인을 분비하여 각종 미생물, 바이러스 등 감염성 병원체의 증식을 억제하고 암세포 등에 대해서도 독성을 나타내는 것으로 알려져 있다.
한편, 면역력의 저하는 본래 우리 몸이 가지고 있는 자연치유기능을 점차 약화시켜 다양한 질환 또는 증상을 유발한다. 이를 해결하기 위해서는 근본적으로 면역력 증진이 요구되지만, 면역력은 개인별로 차이가 있어, 장기적인 관점에서 접근할 필요가 있다. 현재까지 면역증진을 목적으로 한 다양한 치료제 또는 보조제가 개발되어 시판되고 있으나, 장기간 복용에 따른 부작용을 이유로 치료제보다는 상대적으로 안전한 보조제, 특히 천연보조제의 사용이 바람직한 방안으로 지목되고 있으며, 이에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다.
천연물의 면역증진 효과와 관련된 선행기술로는 한국등록특허 제2010654호에 괭생이모자반 효소 처리물을 이용한 면역증진용 조성물이 개시되어 있고, 한국공개특허 제2018-0104885호에 쥐눈이콩 발효물을 유효성분으로 하는 면역증진 또는 갱년기 증상완화를 위한 조성물이 개시되어 있지만, 본 발명의 식물 혼합 추출물, 상세하게는 인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물 및 이의 제조방법에 관해 개시된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물 및 이의 제조방법을 제공하고, 상기 인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피 혼합 추출물의 면역증진효과를 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 인삼(Ginseng Radix), 백출(Atractylodis Rhizoma), 복령(Poria Sclerotium), 진피(Citri Unshius), 감초(Glycyrrhizae Radix), 소엽(Perillae Folium) 및 계피(Cinnamomum japonicum) 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역력 저하에 의한 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은
1) 인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피를 세척한 후 혼합한 다음 혼합물 1 중량부에 대하여 5~15 중량부의 물을 첨가하고, 80~100℃에서 10~20시간 동안 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 추출물을 여과한 후, 50~70mmHg의 압력으로 55~70℃에서 농축한 후 여과하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)의 농축 여과물을 살균하는 단계;를 포함하는 면역증진용 식물 혼합 추출물의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 면역증진용 식물 혼합 추출물을 제공한다.
본 발명은 식물 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명의 제조방법으로 제조된 인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피를 포함하는 식물 혼합 추출물은 면역력이 저하된 실험군에서 식물 혼합 추출물을 처리하지 않은 대조군에 비해 흉선과 비장 조직의 중량을 증가시키고, 면역 저하에 의해 감소된 혈중 임파구 수치를 증가시키고, 면역 저하에 의해 증가된 과립구 수치를 감소시키고, 혈중 사이토카인(IL-2, TNF-α 및 INF-γ)의 함량을 대조군 대비 증가시키는 효과가 현저하였으며, 면역력이 저하된 대조군에서 관찰되는 백색수질의 붕괴현상을 개선하는 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 식물 혼합 추출물 투여에 의한 체중(A), 식이 섭취량(B) 및 음용수 섭취량(C)을 확인한 결과이다. Normal은 정상 대조군이고, Control은 식물 혼합 추출물을 투여하지 않은 면역력 저하 동물모델 대조군이며, 식물 혼합 추출물은 식물 혼합 추출물을 투여한 면역력 저하 동물모델 실험군이다.
도 2는 본 발명의 식물 혼합 추출물 투여에 의한 비장(A) 및 흉선(B) 조직의 무게를 측정한 결과이다. Normal은 정상 대조군이고, Control은 식물 혼합 추출물을 투여하지 않은 면역력 저하 동물모델 대조군이며, 식물 혼합 추출물은 식물 혼합 추출물을 투여한 면역력 저하 동물모델 실험군이다.
도 3은 본 발명의 식물 혼합 추출물 투여에 의한 혈중 임파구 수(A) 및 혈중 과립구 수(B)의 변화를 확인한 결과이다. Normal은 정상 대조군이고, Control은 식물 혼합 추출물을 투여하지 않은 면역력 저하 동물모델 대조군이며, 식물 혼합 추출물은 식물 혼합 추출물을 투여한 면역력 저하 동물모델 실험군이다. 도면 내 문자 a~c는 서로 통계적으로 유의미한 차이가 있다는 것을 의미하며, p<0.05이다.
도 4는 본 발명의 식물 혼합 추출물 투여에 의한 혈청 사이토카인(A: TNF-α, B: IL-2, C: INF-γ)의 함량을 확인한 결과이다. Normal은 정상 대조군이고, Control은 식물 혼합 추출물을 투여하지 않은 면역력 저하 동물모델 대조군이며, 식물 혼합 추출물은 식물 혼합 추출물을 투여한 면역력 저하 동물모델 실험군이다. 도면 내 문자 a~b는 서로 통계적으로 유의미한 차이가 있다는 것을 의미하며, p<0.05이다.
도 5는 본 발명의 식물 혼합 추출물 투여에 의한 비장 조직의 백색수질 붕괴 개선효과를 확인한 결과이다.
도 2는 본 발명의 식물 혼합 추출물 투여에 의한 비장(A) 및 흉선(B) 조직의 무게를 측정한 결과이다. Normal은 정상 대조군이고, Control은 식물 혼합 추출물을 투여하지 않은 면역력 저하 동물모델 대조군이며, 식물 혼합 추출물은 식물 혼합 추출물을 투여한 면역력 저하 동물모델 실험군이다.
도 3은 본 발명의 식물 혼합 추출물 투여에 의한 혈중 임파구 수(A) 및 혈중 과립구 수(B)의 변화를 확인한 결과이다. Normal은 정상 대조군이고, Control은 식물 혼합 추출물을 투여하지 않은 면역력 저하 동물모델 대조군이며, 식물 혼합 추출물은 식물 혼합 추출물을 투여한 면역력 저하 동물모델 실험군이다. 도면 내 문자 a~c는 서로 통계적으로 유의미한 차이가 있다는 것을 의미하며, p<0.05이다.
도 4는 본 발명의 식물 혼합 추출물 투여에 의한 혈청 사이토카인(A: TNF-α, B: IL-2, C: INF-γ)의 함량을 확인한 결과이다. Normal은 정상 대조군이고, Control은 식물 혼합 추출물을 투여하지 않은 면역력 저하 동물모델 대조군이며, 식물 혼합 추출물은 식물 혼합 추출물을 투여한 면역력 저하 동물모델 실험군이다. 도면 내 문자 a~b는 서로 통계적으로 유의미한 차이가 있다는 것을 의미하며, p<0.05이다.
도 5는 본 발명의 식물 혼합 추출물 투여에 의한 비장 조직의 백색수질 붕괴 개선효과를 확인한 결과이다.
본 발명은 인삼(Ginseng Radix), 백출(Atractylodis Rhizoma), 복령(Poria Sclerotium), 진피(Citri Unshius), 감초(Glycyrrhizae Radix), 소엽(Perillae Folium) 및 계피(Cinnamomum japonicum) 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
상기 인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피의 혼합은 인삼 100 중량부에 대하여 백출 80~120 중량부, 복령 80~120 중량부, 진피 60~100 중량부, 감초 80~120 중량부, 소엽 20~60 중량부 및 계피 10~40 중량부로 혼합될 수 있고, 바람직하게는 인삼 100 중량부에 대하여 백출 90~110 중량부, 복령 90~110 중량부, 진피 70~90 중량부, 감초 90~110 중량부, 소엽 30~50 중량부 및 계피 15~25 중량부로 혼합될 수 있으며, 더 바람직하게는 인삼 100 중량부에 대하여 백출 100 중량부, 복령 100 중량부, 진피 80~85 중량부, 감초 95~100 중량부, 소엽 40~45 중량부 및 계피 20~25 중량부로 혼합하는 것이지만, 이에 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현 예에서, 상기 인삼은 어느 부위라도 사용 가능하지만, 바람직하게는 인삼근과 인삼미가 6~8:2~4 중량비로 혼합되어 있는 것이고, 더 바람직하게는 인삼근과 인삼미가 7:3 중량비로 혼합된 것이지만, 이에 한정하는 것은 아니다. 본 발명의 용어 인삼근은 잔뿌리를 제외한 굵은 뿌리를 의미하며, 인삼미는 인삼의 잔뿌리를 의미한다.
상기 혼합 추출물의 추출 용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물일 수 있고, 바람직하게는 물인 것이지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현 예에서 상기 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 또는 음료의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 장기간 섭취하는 경우 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은 인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역력 저하에 의한 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
상기 면역력 저하에 의한 질환은 감기, 천식, 부비동염, 폐렴, 패혈증, 골수염, 수막염, 단순포진, 대상포진, 구내염 또는 건선일 수 있지만, 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 약학 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한 다양한 화합물 혹은 혼합물을 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 식물 혼합 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 식물 혼합 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 식물 혼합 추출물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여될 수 있다.
또한, 본 발명은
1) 인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피를 세척한 후 혼합한 다음 혼합물 1 중량부에 대하여 5~15 중량부의 물을 첨가하고, 80~100℃에서 10~20시간 동안 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 추출물을 여과한 후, 50~70mmHg의 압력으로 55~70℃에서 농축한 후 여과하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)의 농축 여과물을 살균하는 단계;를 포함하는 면역증진용 식물 혼합 추출물의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 일 구현 예에서, 면역증진용 식물 혼합 추출물은 바람직하게는
1) 인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피를 세척한 후 인삼 100 중량부에 대하여 백출 80~120 중량부, 복령 80~120 중량부, 진피 60~100 중량부, 감초 80~120 중량부, 소엽 20~60 중량부 및 계피 10~40 중량부를 혼합한 후, 혼합물 1 중량부에 대하여 5~15 중량부의 물을 첨가하고, 80~100℃에서 10~20시간 동안 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 추출물을 여과한 후, 50~70mmHg의 압력으로 55~70℃에서 농축한 후 여과하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)의 농축 여과물을 살균하는 단계;를 포함하여 제조될 수 있고,
더 바람직하게는
1) 인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피를 세척한 후 인삼 100 중량부에 대하여 백출 90~110 중량부, 복령 90~110 중량부, 진피 70~90 중량부, 감초 90~110 중량부, 소엽 30~50 중량부 및 계피 15~25 중량부를 혼합한 후, 혼합물 1 중량부에 대하여 5~15 중량부의 물을 첨가하고, 85~95℃에서 13~17시간 동안 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 추출물을 여과한 후, 60~65mmHg의 압력으로 60~65℃에서 농축한 후 여과하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)의 농축 여과물을 살균하는 단계;를 포함하여 제조될 수 있고,
더욱더 바람직하게는
1) 인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피를 세척한 후 인삼 100 중량부에 대하여 백출 100 중량부, 복령 100 중량부, 진피 80~85 중량부, 감초 95~100 중량부, 소엽 40~45 중량부 및 계피 20~25 중량부를 혼합한 후, 혼합물 1 중량부에 대하여 5~15 중량부의 물을 첨가하고, 85~95℃에서 13~17시간 동안 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 추출물을 여과한 후, 60~65mmHg의 압력으로 60~65℃에서 농축한 후 여과하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)의 농축 여과물을 살균하는 단계;를 포함하여 제조될 수 있으며,
가장 바람직하게는
1) 인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피를 세척한 후 인삼 100 중량부에 대하여 백출 100 중량부, 복령 100 중량부, 진피 81 중량부, 감초 97 중량부, 소엽 40 중량부 및 계피 21 중량부를 혼합한 후, 혼합물 1 중량부에 대하여 9~10 중량부의 물을 첨가하고, 90℃에서 15시간 동안 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 추출물을 여과한 후, 64mmHg의 압력으로 62℃에서 농축한 후 여과하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)의 농축 여과물을 살균하는 단계;를 포함하여 제조될 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 면역증진용 식물 혼합 추출물에 관한 것이다.
상기 면역증진용 식물 혼합 추출물은 면역 저하에 의해 감소된 혈중 임파구 수치를 증가시키고, 면역 저하에 의해 증가된 과립구 수치를 감소시키며, 혈중 사이토카인(IL-2, TNF-α 및 INF-γ)의 함량을 증가시키는 효과가 있다.
이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
제조예 1. 식물 혼합 추출물의 제조
인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피를 깨끗하게 세척한 후, 인삼 1.85g, 백출 1.85g, 복령 1.85g, 진피 1.51g, 감초 1.80g, 소엽 0.75g 및 계피 0.38g을 혼합한 후, 90ml의 정제수를 첨가한 다음 90℃에서 15시간 동안 가열하며 추출하였다. 인삼은 인삼근과 인삼미를 7:3 중량비로 혼합하여 사용하였다.
그 후, 추출물은 10㎛ 필터를 통해 여과한 다음 62℃의 온도 및 64mmHg의 압력하에 농축을 진행하였다. 그 뒤 10㎛ 필터를 통해 여과한 다음 살균(온도:90±5℃, 시간: 30±5 시간)하여 실험의 시료로 사용하였다.
실시예 1. 식물 혼합 추출물의 면역증진 효과 확인
상기 제조예 1의 식물 혼합 추출물의 면역증진 효과를 확인하기 위해 기능성 평가 연구소에 의뢰하여 실험을 진행하였다(면역증진 기능성 시험 번호: IV-RB-17-1903-08).
실험동물은 샘타코 바이오코리아(오산, 한국)에서 5주령의 쥐(Wister rat)를 분양받아 실험에 사용하였다. 사육기간 중 식이는 일반 고형사료(샘타코, 경기, 한국)를 급여하였고, 순화기간 중 음수는 여과된 음용수를 매일 갈아주며 자유롭게 섭취하도록 하였다. 사육기간 중 온도는 23±1℃, 습도 50±5%, 소음 60 phone 이하, 조명시간 08:00~20:00(1일 12시간), 조도 150~300 Lux, 환기는 시간당 10회~12회의 환경을 유지하였다. 본 실험은 원광대학교의 동물실험윤리규정을 준수하여 수행하였다.
순화기간이 끝난 후, 실험동물은 체중을 기준으로 난괴법을 이용하여 군간 평균값이 균일하도록 정상 대조군(Normal), 면역 저하 유도 대조군(Control), 면역 저하를 유도하며 식물 혼합 추출물을 투여한 실험군(식물 혼합 추출물)으로 각 군당 10마리씩 나누었다.
면역 저하를 유도하기 위해, 면역 저하 물질로 알려진 시클로포스파미드(cyclophosphamide, Cy)를 시그마 알드리치(Sigma-Aldrich, St. Louis, USA)사에서 구입하여 5mg/kg의 농도로 실험동물에 투여하였다. 본 실험에서 면역 저하 물질인 Cy는 시험물질과 동시에 투여하였으며, Cy의 경우 체중 대비 개체당 동일량을 공급하기 위하여 증류수에 용해한 후, 5mg/kg의 용량이 되도록 강제 경구 투여하였다. 제조예 1의 식물 혼합 추출물의 투여 방법은 제조예 1의 식물 혼합 추출물이 300mg/kg 혼합된 조제 사료를 공급하여 실험동물이 자유롭게 섭취할 수 있도록 하였다.
주간 체중변화는 주 1회 일정시간에 모든 실험군의 개체별 체중을 측정하였고, 식이 섭취량은 급여 후 익일 잔량을 측정하여 주 2회 간격으로 측정하였다. 실험 종료 후, 부검은 에테르(ether)로 마취 후 복대 정맥에서 채혈하여 혈액 분석에 사용하였으며 흉선 및 비장 조직은 적출하여 중량을 측정하였고, 비장 조직만 포르말린(formalin)에 고정하였다.
혈액은 복대 정맥에서 채혈하여 EDTA 튜브와 코니칼 튜브(conical tube)에 나눠 분석에 사용하였다. 일반 혈액학적 검사는 혈액을 EDTA 튜브(DB Caribe, Ltd., USA)에 담아 롤 믹서(Roll mixer)에 30분 동안 회전시킨 후 혈액분석기(Hemavet 950Fs, Drew scientific inc, TX, USA)를 이용하여 백혈구(white blood cell), 임파구(lymphocyte), 호중구(Neutrophill) 등을 측정하였다.
반면 코니칼 튜브의 혈액은 사이토카인 분석을 위해 상온에서 30분 동안 응고시킨 후 원심분리기에서 3000rpm으로 10분 동안 분리하여 혈청을 회수하였다. 분리한 혈청은 R&D system (Minneapolis, MN, USA)에서 구입한 ELISA kit를 이용하여 TNF-α(tumor necrosis factor-α), IFN-γ(Interferon-γ), IL-2(interleukin-2)를 분석하였다.
적출한 비장 조직은 10%(v/v) 포르말린(formalin) 용액에서 고정시킨 검체를 절취하여(trimming) 재고정시킨 후 파라핀에 포매하여 4μm의 두께로 절편/세절하였다. 헤마톡실린-에오신(Hematoxylin-eosin) 염색은 자일렌(xylene)에서 파리핀을 제거하고 탈수 과정을 거친 후 헤마톡실린(hematoxylin)에 4분, 에오신(eosin)에 2분 동안 염색하였다. 이후 봉입하여 염색된 조직 프레파라트는 광학 현미경(Olympus BX50 F4, Olympus, Japan)을 이용하여 관찰 및 촬영하였다.
모든 실험결과는 통계 프로그램(SPSS ver.12.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA)을 이용하여 평균 ± 표준오차(Mean ± S.E.)로 계산하였다. 각 실험군 간의 통계적 유의성 검정에 따른 통계분석은 ANOVA(one-way analysis of variance test)를 실시한 후 유의성이 있는 경우, p<0.05 미만일 때 Ducan's multiple range test로 사후 검정하였다.
그 결과, 도 1에 개시된 바와 같이 각 실험 그룹 간의 체중 및 식이 섭취량은 차이가 없었고, 음용수 섭취량에서 식물 혼합 추출물 투여군의 섭취량이 소폭 감소하였으나, 통계적 유의성은 나타나지 않았다.
또한, 도 2에 개시된 바와 같이 면역 반응과 관련된 조직인 비장 및 흉선의 무게를 측정한 결과, 면역 저하 유도에 의해 큰 폭으로 감소되었던 비장 및 흉선의 무게가 소폭 증가하였다.
혈중 임파구 수 및 혈중 과립구 수를 확인한 결과, 도 3에 개시된 바와 같이 면역 저하에 의해 감소된 혈중 임파구 수가 식물 혼합 추출물 투여에 의해 현저히 증가되었고, 면역 저하에 의해 증가된 혈중 과립구 수가 식물 혼합 추출물 투여에 의해 현저히 감소하였다.
혈청 사이토카인 변화를 확인한 결과, 도 4에 개시된 바와 같이 면역 저하에 의해 감소되었던 TNF-α, IL-2 및 INF-γ의 함량이 식물 혼합 추출물 투여에 의해 증가되는 것을 확인할 수 있었다.
또한, 비장 조직을 관찰한 결과, 면역저하에 의해 관찰되었던 백색수질 붕괴현상이 식물 혼합 추출물 투여시 관찰되지 않아 양호한 수준을 보였다.
이를 통해 본 발명의 제조예 1의 식물 혼합 추출물은 면역증진 효과가 우수하다는 것을 확인할 수 있었다.
Claims (7)
- 인삼(Ginseng Radix), 백출(Atractylodis Rhizoma), 복령(Poria Sclerotium), 진피(Citri Unshius), 감초(Glycyrrhizae Radix), 소엽(Perillae Folium) 및 계피(Cinnamomum japonicum) 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 건강기능식품 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피의 혼합은 인삼 100 중량부에 대하여 백출 80~120 중량부, 복령 80~120 중량부, 진피 60~100 중량부, 감초 80~120 중량부, 소엽 20~60 중량부 및 계피 10~40 중량부 혼합되는 것을 특징으로 하는 면역증진용 건강기능식품 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 인삼은 인삼근과 인삼미가 6~8:2~4 중량비로 혼합된 것을 특징으로 하는 면역증진용 건강기능식품 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 혼합 추출물의 추출 용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 면역증진용 건강기능식품 조성물.
- 인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역력 저하에 의한 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 1) 인삼, 백출, 복령, 진피, 감초, 소엽 및 계피를 세척한 후 혼합한 다음 혼합물 1 중량부에 대하여 5~15 중량부의 물을 첨가하고, 80~100℃에서 10~20시간 동안 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 추출물을 여과한 후, 50~70mmHg의 압력으로 55~70℃에서 농축한 후 여과하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)의 농축 여과물을 살균하는 단계;를 포함하는 면역증진용 식물 혼합 추출물의 제조방법. - 제6항의 제조방법으로 제조된 면역증진용 식물 혼합 추출물.
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|---|---|---|---|---|
| CN114365844A (zh) * | 2022-01-28 | 2022-04-19 | 福建农林大学 | 一种调节肠道菌群、提高肠道免疫的竹荪复方保健食品及其制备方法 |
| KR20230025207A (ko) | 2021-08-13 | 2023-02-21 | (주) 팜젠사이언스 | 식물 혼합 추출물을 함유하는 면역증진용 조성물 및 이의 용도 |
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2019
- 2019-10-31 KR KR1020190137145A patent/KR20210051637A/ko not_active Application Discontinuation
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| CN114365844B (zh) * | 2022-01-28 | 2024-05-28 | 福建农林大学 | 一种调节肠道菌群、提高肠道免疫的竹荪复方保健食品及其制备方法 |
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