BRPI0707209A2 - composições detergentes - Google Patents

Abstract

COMPOSIçõES DETERGENTES. A presente invenção refere-se a composições compreendendo determinadas variantes de lipase e um agente de matiz para tecidos, bem como processos para a produção e o uso de tais composições. Isso inclui o uso dessas composições para limpar e/ou tratar um local.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSIÇÕES DETERGENTES".

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se a composições compreendendolipases e agentes de matiz para tecidos, bem como a processos para a pro-dução e o uso desses produtos.

Antecedentes da Invenção

O aparecimento das enzimas Iipase adequadas a aplicaçõesdetergentes ofereceu ao formulador uma nova abordagem para otimizar aremoção de graxas. Essas enzimas catalisam a hidrólise de triglicerídeos,que consistem em um componente principal de muitas sujeiras gordurosascomumente encontradas, como sebo, gorduras de origem animal (por exem-plo banha, manteiga líquida, manteiga) e óleos vegetais (por exemplo óleode oliva, óleo de girassol, óleo de amendoim). No entanto, essas enzimastipicamente demonstravam um desempenho fraco no primeiro ciclo de lava-gem e, tipicamente, traziam consigo um odor desagradável oriundo, acredi-ta-se, da hidrólise de gorduras presentes em sujeiras lácteas como leite,creme, manteiga e iogurte. Sem se ater à teoria, acredita-se que essas sujei-ras sejam propensas à geração de odor desagradável induzida por lipase, jáque contêm triglicerídeos funcionalizados com unidades acila graxa de ca-deia curta (por exemplo C4), que liberam ácidos graxos voláteis malcheiro-sos após a lipólise. Mesmo quando o desempenho dessas enzimas foi apri-morado, o problema de odor desagradável permaneceu. Portanto, o usodessa tecnologia estava gravemente limitado.

Descobriu-se que a combinação de um agente de matiz paratecidos com determinadas variantes de lipase dá origem a benefício de de-sempenho de limpeza otimizado, ao mesmo tempo em que minimiza o odordesagradável inaceitável. Sem se ater à teoria, acredita-se que os seguintesmecanismos dêem origem a tais benefícios: as variantes de lipase selecio-nadas aumentam o nível de remoção de graxas, causando assim uma me-lhor acessibilidade do agente de matiz para tecidos à superfície do tecido e,conseqüentemente, uma deposição otimizada. A combinação resultante daremoção otimizada de sujeiras oleosas e da deposição de um colorantetonalizante leva a um aprimoramento na aparência do tecido e, mesmonos casos em que a sujeira oleosa não é adequadamente removida, ahidrólise das gorduras em ácidos graxos, mono e diglicerídeos, que sãomais hidrofílicos, leva a uma deposição otimizada do colorante tonalizantee, conseqüentemente, a uma percepção de limpeza, sendo que a presen-ça das moléculas de corante depositadas na sujeira oleosa presente nostecidos pode inibir a atividade enzimática que dá origem a odores desa-gradáveis.

Sumário da Invenção

A presente invenção refere-se a composições compreendendoum agente de matiz para tecidos e uma variante de Iipase com potencialreduzido para geração de odores e um bom desempenho relativo, sem aligação de uma extensão C-terminal. A variante de Iipase é obtida mediantea introdução de mutações em uma ou mais regiões identificadas na Iipaseoriginal. A variante assim obtida precisa ter uma atividade de Iipase que nãoseja menor que 80% da atividade da Iipase original, expressa como Desem-penho Relativo.

LISTAGEM DE SEQÜÊNCIAS

(Alinhamento das seqüências de lipase).

A SEQ. ID n9 1 mostra a seqüência de DNA codificando Iipasea partir de Thermomyces lanoginosus.

A SEQ. ID nõ 2 mostra a seqüência de aminoácidos de uma Ii-pase obtida de Thermomyces lanoginosus.

A SEQ. ID n9 3 mostra a seqüência de aminoácidos de uma Ii-pase obtida de Absidia reflexa.

A SEQ. ID n9 4 mostra a seqüência de aminoácidos de uma Ii-pase obtida de Absidia corymbifera.

A SEQ. ID n9 5 mostra a seqüência de aminoácidos de uma Ii-pase obtida de Rhizomucor miehei.

A SEQ. ID n9 6 mostra a seqüência de aminoácidos de uma Ii-pase obtida de Rhizopus oryzae.A SEQ. ID nQ 7 mostra a seqüência de aminoácidos de uma Ii-pase obtida de Aspergillus niger.

A SEQ. ID nQ 8 mostra a seqüência de aminoácidos de uma Ii-pase obtida de Aspergillus tubingensis.

A SEQ. ID ne 9 mostra a seqüência de aminoácidos de uma Ii-pase obtida de Fusarium oxysporrum.

A SEQ. ID n9 10 mostra a seqüência de aminoácidos de umaIipase obtida de Fusarium heterosporum.

A SEQ. ID ne 11 mostra a seqüência de aminoácidos de umalipase obtida de Aspergillus oryzae.

A SEQ. ID ne 12 mostra a seqüência de aminoácidos de umalipase obtida de Penicillium camemberti.

A SEQ. ID ns 13 mostra a seqüência de aminoácidos de umalipase obtida de Aspergillus foetidus.

A SEQ. ID ne 14 mostra a seqüência de aminoácidos de umalipase obtida de Aspergillus niger.

A SEQ. ID ri2 15 mostra a seqüência de aminoácidos de umalipase obtida de Aspergillus oryzae.

A SEQ. ID ns 16 mostra a seqüência de aminoácidos de umalipase obtida de Landerina penisapora.

Descrição Detalhada da Invenção

Definições

Para uso na presente invenção, o termo "composição de limpe-za" inclui, exceto onde indicado de outro modo: agentes de lavagem paramúltiplas finalidades ou para "tarefas pesadas", sob a forma de grânulos oupó, especialmente detergentes para lavagem de roupas, agentes de lava-gem para múltiplas finalidades, sob a forma de líquido, gel ou pasta, especi-almente aqueles do tipo líquido para tarefas pesadas, detergentes líquidospara tecidos finos, agentes para lavagem de pratos à mão ou agentes paralavagem de pratos do tipo para tarefas leves, especialmente aqueles do tipocom alta formação de espuma, agentes para lavagem de pratos à máquina,inclusive os diversos tipos sob a forma de tabletes, grânulos, líquidos e deauxílio ao enxágüe, para uso doméstico e institucional, agentes líquidos paralimpeza e desinfecção, inclusive dos tipos como bactericida para lavagemdas mãos, sabão em barra para lavanderia, enxaguatórios bucais, limpado-res de dentadura, xampus para limpeza de carros ou tapetes, limpadorespara banheiros, xampus e condicionadores para cabelo, géis de banho ebanhos de espuma, e limpadores para metal, bem como produtos auxiliaresde limpeza como aditivos para alvejamento e produtos do tipo "bastão remo-vedor de manchas" ou produtos de pré-tratamento.

Para uso na presente invenção, o termo 'agente de matiz paratecidos' significa corantes ou pigmentos que, quando formulados em compo-sições detergentes, podem depositar-se sobre um tecido quando o mesmo écolocado em contato com um líquido de lavagem compreendendo as ditascomposições detergentes, alterando assim o tom do dito tecido. Para ospropósitos do presente pedido de patente, os clareadores ópticos fluorescen-tes não são considerados agentes de matiz para tecidos.

Para uso na presente invenção, a expressão "é independente-mente selecionado do grupo consistindo em..." significa que as porções ouelementos que são selecionados do grupo de Markush mencionado podemser iguais, podem ser diferentes, ou podem consistir em qualquer mistura deelementos.

Os métodos de teste apresentados na seção de Métodos deTeste do presente pedido de patente precisam ser usados para determinaros valores respectivos dos parâmetros das invenções das requerentes.

Exceto onde especificado de outro modo, todos os teores decomponentes ou da composição referem-se ao teor ativo do componente ouda composição, e excluem impurezas como, por exemplo, solventes residu-ais ou subprodutos que possam estar presentes nas fontes disponíveis co-mercialmente.

Todas as porcentagens e razões são calculadas em peso, exce-to onde indicado de outro modo. Todas as porcentagens e razões são calcu-ladas com base no total da composição, exceto onde indicado de outro modo.

Deve-se compreender que cada limite numérico máximo men-cionado neste relatório descritivo inclui todos os limites numéricos inferiores,como se tais limites numéricos inferiores estivessem expressamente registra-dos no presente documento. Cada limite numérico mínimo mencionado nesterelatório descritivo inclui cada um dos limites numéricos superiores, como setais limites numéricos superiores estivessem expressamente registrados nopresente documento. Cada intervalo numérico mencionado neste relatóriodescritivo inclui cada intervalo numérico mais restrito que esteja situado dentrodesse intervalo numérico mais amplo, como se tais intervalos numéricos maisrestritos estivessem expressamente registrados no presente documento.

Todos os documentos citados são, em suas partes relevantes,aqui incorporados por referência, sendo que a menção a qualquer documen-to não deve ser interpretada como admissão de que este represente técnicaanterior com relação à presente invenção.Composições

As composições da presente invenção podem conter de cercade 0,00003% a cerca de 0,1%, de cerca de 0,00008% a cerca de 0,05%, oumesmo de cerca de 0,0001% a cerca de 0,04% de agente de matiz para te-cidos, e de cerca de 0,0005% a cerca de 0,1%, de cerca de 0,001% a cercade 0,05%, ou mesmo de cerca de 0,002% a cerca de 0,03% de lipase.

Essas composições pode assumir qualquer forma, por exem-plo, a forma de uma composição para limpeza e/ou de uma composição detratamento.

O equilíbrio restante de quaisquer aspectos das composiçõesde limpeza anteriormente mencionadas é formado por um ou mais materiaisauxiliares.

Variantes de Lipase Adequadas

A lipase da composição da presente invenção consiste em umavariante de lipase sem extensão C-terminal, porém com mutações introduzi-das em determinadas regiões de uma lipase original, de modo que a tendên-cia a gerar odores fica reduzida.

Lipase Original

A lipase original pode ser uma lipase fúngica com uma seqüên-cia de aminoácidos tendo pelo menos 50% de homologia, conforme definidona seção "Homologia e alinhamento", com a seqüência da Iipase de T. Ianu-ginosus mostrada na SEQ. ID n° 2.

A Iipase original pode ser um polipeptídeo de levedura comoum polipeptídeo de Candida, Kluyveromyces, Pichia, Saccharomycesl Sehi-zosaeeharomyees ou Yarrowia ou, com mais preferência, um polipeptídeo defungo filamentoso, como um polipeptídeo de Aeremonium, Aspergiilus, Aure-obasidium, Cryptoeoceus, Fiiobasidium, Fusarium, Humieola, Magnaporthe,Mueor, Myeeliophthora, Neoeallimastix, Neurospora, Paeeilomyees, Penieilli-um, Piromyees, Sehizophyllum, Talaromyees, Thermoaseus, Thielavia, Toly-poeladium ou Polipeptídeo Triehoderma.

Em um aspecto preferencial, a Iipase original é um polipeptídeocom atividade de lipase, proveniente de Saccharomyees earlsbergensis,Saccharomyces eerevisiae, Saccharomyees diastatieus, Saccharomyeesdouglasii, Saccharomyees kluyveri, Saccharomyees norbensis ou Saeeha-romyees oviformis.

Em um outro aspecto preferencial, a lipase original é um poli-peptídeo de Aspergiilus aeuleatus, Aspergiilus awamori, Aspergiilus fumiga-tus, Aspergiilus foetidus, Aspergiilus japonieus, Aspergiilus nidulans, Asper-gillus niger, Aspergiilus oryzae, Aspergiilus turbigensis, Fusarium baetridioi-des, Fusarium eerealis, Fusarium erookwellense, Fusarium eulmorum, Fusa-rium graminearum, Fusarium graminum, Fusarium heterosporum, Fusariumnegundi, Fusarium oxysporum, Fusarium retieulatum, Fusarium roseum, Fu-sarium sambueinum, Fusarium sareoehroum, Fusarium sporotriehioides, Fu-sarium sulphureum, Fusarium torulosum, Fusarium triehotheeioides, Fusari-um venenatum, Humieola insolens, Thermomyees Ianoginosus (sinônimo:Humieola lanuginosa), Mueor miehei, Myeeliophthora thermophila, Neurospo-ra crassa, Penieillium purpurogenum, Triehoderma harzianum, Triehodermakoningii, Triehoderma longibraehiatum, Triehoderma reesei ou PolipeptídeoTriehoderma viride.

Em um outro aspecto preferencial, a lipase original é uma lipa-se de Thermomyees.Em um aspecto mais preferencial, a Iipase original é uma Iipasede Thermomyces lanuginosus. Em uma modalidade ainda mais preferencial,a iipase original é a Iipase de SEQ. ID ne 2.

Identificação de Regiões e Substituições.

As posições mencionadas nas Regiões de I a IV, abaixo, sãoposições dos resíduos de aminoácido na SEQ. ID ne 2. Para encontrar asposições correspondentes (ou homólogas) em uma Iipase diferente, é usadoo procedimento descrito em "Homologia e alinhamento".

Substituições na Região I

A Região I consiste em resíduos de aminoácido circundando oresíduo N-terminal E1. Nessa região, é preferencial substituir um aminoácidoda iipase original com um aminoácido mais positivo. Os resíduos de aminoá-cido correspondentes às seguintes posições são compreendidos pela RegiãoI: de 1 a 11 e de 223 a 239. As seguintes posições são de particular interesse:1, 2, 4, 8, 11, 223, 227, 229, 231, 233, 234 e 236. Em particular, foram identifi-cadas as seguintes substituições: Χ1N/*, X4V, X227G, X231R e X233R.

Em uma modalidade preferencial, a Iipase original tem pelomenos 80%, como 85% ou 90%, como pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou99% de identidade com SEQ. ID n9 2. Em uma modalidade da máxima prefe-rência, a Iipase original é idêntica à SEQ. ID ns 2.

Substituições na Região Il

A Região Il consiste em resíduos de aminoácido em contatocom o substrato em um lado da cadeia de acila e um lado da parte de álcool.

Nessa região, é preferencial substituir um aminoácido da Iipase original comum aminoácido mais positivo ou com um aminoácido menos hidrofóbico. Osresíduos de aminoácido correspondentes às seguintes posições são com-preendidos pela Região II: de 202 a 211 e de 249 a 269. As seguintes posi-ções são de particular interesse: 202, 210, 211, 253, 254, 255, 256 e 259.

Em particular, foram identificadas as seguintes substituições: X202G,X210K/W/A, X255Y/V/A, X256K/R e X259G/M/Q/V.

Em uma modalidade preferencial, a Iipase original tem pelomenos 80%, como 85% ou 90%, como pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou99% de identidade com SEQ. ID n92. Em uma modalidade da máxima prefe-rência, a Iipase original é idêntica à SEQ. ID n9 2.

Substituições na Região III

A Região III consiste em resíduos de aminoácido que formamuma estrutura flexível permitindo, assim, que o substrato entre no sítio ativo.Nessa região, é preferencial substituir um aminoácido da lipase original comum aminoácido mais positivo ou com um aminoácido menos hidrofóbico. Osresíduos de aminoácido correspondentes às seguintes posições são com-preendidos pela Região III: de 82 a 102. As seguintes posições são de parti-cular interesse: 83, 86, 87, 90, 91, 95, 96 e 99. Em particular, foram identifi-cadas as seguintes substituições: X83T, X86V e X90A/R.

Em uma modalidade preferencial, a lipase original tem pelomenos 80%, como 85% ou 90%, como pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou99% de identidade com SEQ. ID n92. Em uma modalidade da máxima prefe-rência, a Iipase original é idêntica à SEQ. ID ne 2.

Substituições na Região IV

A Região IV consiste em resíduos de aminoácido que se ligameletrostaticamente a uma superfície. Nessa região, é preferencial substituirum aminoácido da Iipase original com um aminoácido mais positivo. Os resí-duos de aminoácido correspondentes às seguintes posições são compreen-didos pela Região IV: 27 e 54 a 62. As seguintes posições são de particularinteresse: 27, 56, 57, 58 e 60. Em particular, foram identificadas as seguintessubstituições: X27R, X58N/AG/T/P e X60V/S/G/N/R/K/A/L.

Em uma modalidade preferencial, a lipase original tem pelomenos 80%, como 85% ou 90%, como pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou99% de identidade com SEQ. ID n92. Em uma modalidade da máxima prefe-rência, a Iipase original é idêntica à SEQ. ID n9 2.Aminoácidos em outras posições

A lipase original pode, opcionalmente, compreender substitui-ções de outros aminoácidos, especificamente menos que 10 ou menos que 5dessas substituições. Os exemplos são substituições correspondentes a umaou mais das posições 24, 37, 38, 46, 74, 81, 83, 115, 127, 131, 137, 143, 147,150, 199, 200, 203, 206, 211, 263, 264, 265, 267 e 269 da Iipase original. Emuma modalidade específica, há uma substituição em pelo menos uma dasposições correspondentes a 81, 143, 147, 150 e 249. Em uma modalidadepreferencial, pelo menos uma substituição é selecionada do grupo consistindoem X81 Q/E, X143S/C/N/D/A, Χ147M/Y, X150G/K e X249R/I/L.

A variante pode compreender substituições fora das Regiõesde I a IV definidas, sendo que o número dessas substituições é, de preferên-cia, menor que seis, ou menor que cinco, ou menor que quatro, ou menor,que três, ou menor que duas, como cinco, ou quatro, ou três, ou duas ouuma. Alternativamente, a variante não compreende qualquer substituiçãofora das Regiões de I a IV definidas.

Além disso as substituições podem, por exemplo, ser feitas deacordo com os princípios conhecidos na técnica, por exemplo substituiçõesdescritas em WO 92/05249, WO 94/25577, WO 95/22615, WO 97/04079 eWO 97/07202.

Variantes da Lipase Original

Em um aspecto a dita variante, quando comparada à dita Iipaseoriginal, compreende um total de pelo menos três substituições, as quais sãoselecionadas de um ou mais dos seguintes grupos de substituições:

a) pelo menos duas, ou pelo menos três, ou pelo menos qua-tro, ou pelo menos cinco, ou pelo menos seis, como duas, três, quatro, cincoou seis substituições na Região I,

b) pelo menos uma, pelo menos duas, ou pelo menos três, oupelo menos quatro, ou pelo menos cinco, ou pelo menos seis, como uma,duas, três, quatro, cinco ou seis substituições na Região II,

c) pelo menos uma, pelo menos duas, ou pelo menos três, oupelo menos quatro, ou pelo menos cinco, ou pelo menos seis, como uma,duas, três, quatro, cinco ou seis substituições na Região III,

d) e/ou pelo menos uma, pelo menos duas, ou pelo menos três,ou pelo menos quatro, ou pelo menos cinco, ou pelo menos seis, como uma,duas, três, quatro, cinco ou seis substituições na Região IV,

A variante pode compreender substituições, em comparação àIipase original da variante, correspondentes àquelas listadas abaixo na Ta-bela l.

<table>table see original document page 11</column></row><table>

Tabela 1: algumas variantes específicas.

Em uma outra modalidade específica, a Iipase original é idênti-ca à SEQ. ID n8 2, e as variantes da Tabela 1 serão, portanto:

<table>table see original document page 11</column></row><table>Tabela 2: algumas variantes específicas de SEQ. ID n9 2Nomenclatura para modificações de aminoácido

Na descrição das variantes de Iipase de acordo com a presenteinvenção, é usada a seguinte nomenclatura, para facilidade de referência:aminoácidos originais: posições: aminoácidos substituídos

De acordo com essa nomenclatura, por exemplo, a substituiçãodo ácido glutâmico por glicina na posição 195 é mostrada como G195E. Adeleção da glicina na mesma posição é.mostrada como G195*, e a inserçãode um resíduo de aminoácido adicional, como lisina, é mostrada comoG195GK. Nos casos em que uma Iipase específica contém uma "deleção"em comparação com outras Iipases e uma inserção é feita nessa posição,isso é indicado como *36D para a inserção de um ácido aspártico na posição36. Mutações múltiplas são separadas por sinais de soma, isto é,R170Y+G195E, representando mutações nas posições 170 e 195, substitu-indo tirosina e ácido glutâmico por arginina e glicina, respectivamente.

X231 indica o aminoácido em um polipeptídeo original corres-pondente à posição 231, quando se aplica o procedimento de alinhamentodescrito. X231R indica que o aminoácido é substituído por R. Para SEQ. IDn9 2, X é T, e X231R indica, portanto, uma substituição de T na posição 231por R. Nos casos em que o aminoácido em uma posição (por exemplo 231)pode ser substituído por outro aminoácido selecionado de um grupo de ami-noácidos, por exemplo o grupo consistindo em R, P e Y, isso será indicadopor X231 R/P/Y.

Em todos os casos, é empregada a abreviação IUPAC para a-minoácidos, de letra única ou tripla, comumente aceita.

Agrupamento de aminoácidos

Neste relatório descritivo, os aminoácidos são classificadoscomo negativamente carregados, positivamente carregados ou eletricamenteneutros, de acordo com sua carga elétrica em pH 10. Portanto, os aminoáci-dos negativos são E, D, C (cisteína) e Y, particularmente E e D. Os aminoá-cidos positivos são R, K e H, particularmente R e K. Os aminoácidos neutrossão G, A, V, L, P, F1 W, S, T Μ, N, Q e C, quando formando parte de umaponte dissulfeto. A substituição por outro aminoácido no mesmo grupo (ne-gativo, positivo ou neutro) é chamada de substituição conservativa.

Os aminoácidos neutros podem ser divididos em hidrofóbicosou não-polares (G, A, V, L, I, P, F, W e C como parte de uma ponte de dissul-feto) e hidrofílicos ou polares (S, T Μ, N, Q).

Neste relatório descritivo, os aminoácidos são classificadoscomo negativamente carregados, positivamente carregados ou eletricamenteneutros, de acordo com sua carga elétrica em pH 10. Portanto, os aminoáci-dos negativos são E, D, C (cisteína) e Y, particularmente E e D. Os aminoá-cidos positivos são R, K e H, particularmente R e K. Os aminoácidos neutrossão G, A, V, L, P, F, W, S, T Μ, N, Q e C, quando formando parte de umaponte dissulfeto. A substituição por outro aminoácido no mesmo grupo (ne-gativo, positivo ou neutro) é chamada de substituição conservativa.

Os aminoácidos neutros podem ser divididos em hidrofóbicosou não-polares (G, A, V, L, I, P, F, W e C como parte de uma ponte de dissul-feto) e hidrofílicos ou polares (S, T Μ, N, Q).

Identidade de aminoácidos

O nível de relacionamento entre duas seqüências de aminoáci-do ou entre duas seqüências de nucleotídeo é descrito pelo parâmetro "identidade".

Para os propósitos da presente invenção, o alinhamento deduas seqüências de aminoácido é determinado mediante o uso do programaNeedle, do pacote de software EMBOSS (http://emboss.org), Versão 2.8.0.

O programa Needle implementa o algoritmo de alinhamento global descritoem Needleman, S. B. e Wunsch, C. D. (1970) J. Mol. Biol. 48, 443-453. Amatriz de substituição usada é BLOSUM62, a penalidade por abertura deintervalo é de 10, e a penalidade por ampliação de intervalo é de 0,5.

O grau de identidade entre uma seqüência de aminoácidos dapresente invenção ("seqüência da invenção", por exemplo aminoácidos de 1a 269 da SEQ. ID ne 2) e uma seqüência de aminoácidos diferente ("se-qüência estranha") é calculado como o número de igualdades exatas em umalinhamento das duas seqüências, dividido pelo comprimento da "seqüênciada invenção" ou o comprimento da "seqüência estranha", aquela que formais curta. O resultado é expresso em porcentagem de identidade.

Uma igualdade exata ocorre quando a "seqüência da invenção"e a "seqüência estranha" têm resíduos de aminoácido idênticos nas mesmasposições da sobreposição. O comprimento de uma seqüência é o número deresíduos de aminoácido presentes na mesma (por exemplo, o comprimentoda SEQ. ID n9 2 é 269).

A Iipase original tem uma identidade de aminoácidos de pelomenos 50% com a Iipase de T. Ianuginosus (SEQ. ID nQ 2), particularmentepelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 75%, pelo menos 85%, pelomenos 90%, mais de 95% ou mais de 98%. Em uma modalidade específica,a Iipase original é idêntica à Iipase de T. Ianuginosus (SEQ. ID n° 2).

O procedimento acima pode ser usado para cálculo de identi-dade, bem como para homologia e alinhamento. No contexto da presenteinvenção, a homologia e o alinhamento foram calculados conforme descritomais adiante neste documento.

Homologia e alinhamento

Para os propósitos da presente invenção, o grau de homologiapode ser adequadamente determinado por meio de programas de computa-dor conhecidos na técnica, como o GAP, fornecido no pacote de programasGGC (Program Manual for the Wisconsin Package, Versão 8, agosto de1994, Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wisconsin,USA 53711) (Needleman, S.B. e Wunsch, C.D., (1970), Journal of MolecularBiology, 48, 443-45), usando-se o dito GAP com as seguintes configuraçõespara comparação de seqüências de polipeptídeos: penalidade de 3,0 paraabertura de intervalo e penalidade de 0,1 para ampliação de intervalo.

Na presente invenção, as posições correspondentes (ou homó-logas) nas seqüências de Iipase de Absidia reflexa, Absidia corymbefera,Rhizmucor miehei, Rhizopus delemar, Aspergillus niger, Aspergillus tubigen-sis, Fusarium oxysporum, Fusarium heterosporum, Aspergillus oryzea, Peni-cilium camembertii, Aspergillus foetidus, Aspergillus niger, Thermomyces Ia-noginosus (sinônimo: Humicola lanuginosa) e Landerina penisapora são de-tinidas pelo alinhamento mostrado na Figura 1.

Para encontrar as posições homólogas nas seqüências de Iipa-se não mostradas no alinhamento, a seqüência de interesse é alinhada àsseqüências mostradas na Figura 1. A nova seqüência é alinhada ao presentealinhamento na Figura 1, mediante o uso de alinhamento GAP com a se-qüência mais homóloga encontrada pelo programa GAP. O programa GAP éfornecido no pacote de programas GGC (Program Manual for the WisconsinPackage, Versão 8, agosto 1994, Genetics Computer Group, 575 ScienceDrive, Madison, Wisconsin, USA 53711) (Needleman, S.B. e Wunsch, C.D.,(1970), Journal of Molecular Biology, 48, 443-45). São usadas as seguintesconfigurações para a comparação de seqüências de polipeptídeos: penali-dade de 3,0 para abertura de intervalo e penalidade de 0,1 para ampliaçãode intervalo.

A Iipase original tem uma homologia de pelo menos 50% com alipase de T. Ianuginosus (SEQ. ID ns 2), particularmente pelo menos 55%,pelo menos 60%, pelo menos 75%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, maisde 95% ou mais de 98%. Em uma modalidade específica, a Iipase original éidêntica à Iipase de T. Ianuginosus (SEQ. ID ne 2).

Hibridização

A presente invenção refere-se, também, a polipeptídeos isola-

dos com atividade de lipase, os quais são codificados por polinucleotídeosque se hibridizam sob condições de muito baixa estringência, de preferênciasob condições de baixa estringência, com mais preferência sob condiçõesde média estringência, com mais preferência sob condições de média-altaestringência, com mais preferência ainda sob condições de alta estringênciae, com a máxima preferência, sob condições de muito alta estringência com(i) nucleotídeos de 178 a 660 da SEQ. ID n9 1, (ii) a seqüência de cDNA con-tida em nucleotídeos de 178 a 660 da SEQ. ID ne 1, (iii) uma subseqüênciade (i) ou (ii), ou (iv) um filamento complementar de (i), (ii) ou (iii) (J. Sambro-ok, E.F. Fritsch, e T. Maniatus, 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manu-al, 2a. Edição, Cold Spring Harbor, New York, USA). Uma subseqüência daSEQ. ID ne 1 contém pelo menos 100 nucleotídeos contíguos ou, de prefe-rência, pelo menos 200 nucleotídeos contíguos. Além disso, a subseqüênciapode codificar um fragmento de polipeptídeo que tem atividade de lipase.

Para pontas longas de pelo menos 100 nucleotídeos em com-primento, as condições de estringência de muito baixas a muito altas sãodefinidas como pré-hibridização e hibridização a 42°C em 5X SSPE, 0,3%SDS1 200 pg/mL de DNA de esperma de salmão submetido ao cisalhamentoe desnaturado, e ou 25% de formamida para estringências muito baixas ebaixas, 35% de formamida para estringências médias e médias-altas, ou50% de formamida para estringências altas e muito altas, seguindo os pa-drões de procedimentos para blotting Southern para 12 a 24 horas, otima-mente.

Para pontas longas de pelo menos 100 nucleotídeos de com-primento, o material carreador é finalmente lavado três vezes cada um du-rante 15 minutos, mediante o uso de 2X SSC, 0,2% SDS, de preferência pe-lo menos a 45°C (muito baixa estringência), com mais preferência pelo me-nos a 50°C (baixa estringência), com mais preferência pelo menos a 55°C(média estringência), com mais preferência pelo menos a 60°C (média-altaestringência), com mais preferência ainda pelo menos a 65°C (alta estrin-gência) e, com a máxima preferência, pelo menos a 70°C (muito alta estrin-gência).

Seqüência de DNA, vetor de expressão, célula hospedeira, produção de li-pase

A invenção apresenta uma seqüência de DNA que codifica a li-pase da invenção, um vetor de expressão que abriga a seqüência de DNA, euma célula hospedeira transformada que contém a seqüência de DNA ou ovetor de expressão. Esses itens podem ser obtidos por métodos conhecidosna técnica.

A invenção apresenta, também, um método para produção delipase mediante a cultura da célula hospedeira transformada sob condiçõesapropriadas à produção da lipase, seguida da recuperação da dita lipase apartir do caldo resultante. O método pode ser praticado de acordo com osprincípios conhecidos na técnica.Atividade de Iipase

- Atividade de Iipase em tributirina sob pH neutro (LU)

Um substrato para a Iipase é preparado mediante a emulsifica-ção de tributirina (tributirato de glicerina), usando-se goma arábica comoemulsificante. A hidrólise de tributirina a 30°C e a um pH de 7 ou 9 é seguidaem um experimento de titulação pH-stat. Uma unidade de atividade de Iipase(1 LU) é igual à quantidade de enzima capaz de liberar 1 micro mol de ácidobutírico/min sob pH 7.

- Relação risco/benefício

O fator risco/benefício descrevendo o desempenho em compa-ração ao risco reduzido para ocorrência de odores é definido como: BR =RPavg / R. As variantes de Iipase aqui descritas podem ter RBs maiores que1, maiores que 1,1, ou mesmo maiores que 1 até cerca de 1.000.

- Desempenho relativo médio

O procedimento para cálculo do desempenho relativo médio(RPavg) é encontrado no Exemplo 5 do presente relatório descritivo. As va-riantes de Iipase aqui descritas podem ter um (RPavg) de pelo menos 0,8,pelo menos 1,1, pelo menos 1,5, ou mesmo de pelo menos 2 a cerca de1.000.

Agentes de matiz para tecido adequados

Os clareadores ópticos fluorescentes emitem pelo menos al-guma luz visível. Em contraste, os agentes de matiz para tecidos podem al-terar o tom de uma superfície, já que absorvem pelo menos uma porção doespectro de luz visível. Os agentes de matiz para tecidos adequados incluemcorantes, conjugados corante-argila e pigmentos que satisfazem os requisi-tos do Método de teste 1, na seção "Método de teste" do presente relatóriodescritivo. Os corantes adequados incluem corantes de moléculas pequenase corantes poliméricos. Os corantes de moléculas pequenas adequados in-cluem aqueles selecionados do grupo consistindo em:

(1) Corantes azuis diretos à base de trisazo, com a fórmula:<formula>formula see original document page 18</formula>

em que pelo menos dois dos anéis A, B e C de naftila são substituídos porum grupo sulfonato, o anel C pode ser substituído na posição 5 por um gru-po NH2 ou NHPh, X é um anel de benzila ou naftila substituído com até 2grupos sulfonato e pode ser substituído na posição 2 com um grupo OH po-dendo, também, ser substituído com um grupo NH2 ou NHPh.

(2) Corantes violeta diretos à base de bisazo, com a fórmula:

<formula>formula see original document page 18</formula>

em que Z é H ou fenila, o anel A é, de preferência/substituído com um grupometila e metóxi nas posições indicadas pelas setas, sendo que o anel A po-de, também, ser um anel de naftila, e o grupo Y é um anel de benzila ou naf-tila que é substituído por um grupo sulfato, podendo ser mono ou dissubstitu-ído por grupos metila.

(3) Corantes ácidos azuis ou vermelhos, com a fórmula:

<formula>formula see original document page 18</formula>em que pelo menos um dentre X e Y precisa ser um grupo aromático. Emum aspecto, ambos os grupos aromáticos podem ser um grupo benzila ounaftila substituído, o qual pode ser substituído por grupos não-solubilizantesem água, como grupos alquila, alquilóxi ou arilóxi, e X e Y podem não sersubstituídos com grupos solubilizantes em água, como sulfonatos ou carbo-xilatos. Em outro aspecto, X é um grupo benzila nitrossubstituído, e Y é umgrupo benzila

(4) Corantes ácidos vermelhos com a estrutura:

<formula>formula see original document page 19</formula>

em que B é um grupo naftila ou benzila que pode ser substituído por gruposnão-solubilizantes em água, como grupos alquila, alquilóxi ou arilóxi, e B po-de não ser substituído com grupos solubilizantes em água, como sulfonatosou carboxilatos.

(5) Corantes disazo com a estrutura:

em que X e Y, são, independentemente um do outro, hidrogênio, alquila C1-C4 ou alcóxi C1-C4, Ra é hidrogênio ou arila, Z é alquila C1-C4, alcóxi C1-C4,halogênio, hidroxila ou carboxila, η é 1 ou 2, e m é O, 1 ou 2, bem como saiscorrespondentes e misturas dos mesmos.

(6) Corantes à base de trifenilmetano com as seguintes estrutu-ras:

<formula>formula see original document page 20</formula><formula>formula see original document page 21</formula>

e misturas dos mesmos. Em outro aspecto, os corantes de moléculas pe-quenas adequados incluem aqueles selecionados do grupo consistindo nosnúmeros I.C. (índice de cor da Society of Dyers and Colourists, de Bradford,Reino Unido) Violeta Direto 9, Violeta Direto 35, Violeta Direto 48, VioletaDireto 51, Violeta Direto 66, Azul Direto 1, Azul Direto 71, Azul Direto 80,Azul Direto 279, Vermelho Ácido 17, Vermelho Ácido 88, Vermelho Ácido150, Violeta Ácido 15, Violeta Ácido 17, Violeta Ácido 24, Violeta Ácido 49,Azul Ácido 15, Azul Ácido 17, Azul Ácido 29, Azul Ácido 40, Azul Ácido 75,Azul Ácido 80, Azul Ácido 83, Azul Ácido 90 e Azul Ácido 113, Violeta Básico1, Violeta Básico 3, Violeta Básico 4, Violeta Básico 10, Violeta Básico 35,Azul Básico 3, Azul Básico 16, Azul Básico 22, Azul Básico 47, Azul Básico66, Azul Básico 75, Azul Básico 159 e misturas dos mesmos.

Os corantes poliméricos adequados incluem aqueles selecio-nados do grupo consistindo em polímeros contendo cromogênios conjuga-dos (conjugados corante-polímero) e polímeros com cromogênios copolime-rizados na cadeia principal do polímero, bem como misturas dos mesmos.Em outro aspecto, os corantes poliméricos adequados incluemaqueles selecionados do grupo consistindo em colorantes aderentes a tecidodisponíveis comercialmente sob o nome de Liquitint® (Milliken, Spartanburg1South Carolina, USA), conjugados corante-polímero formados a partir depelo menos um corante reativo e um polímero selecionado do grupo consis-tindo em polímeros compreendendo uma porção selecionada do grupo con-sistindo em uma porção hidroxila, uma porção amina primária, uma porçãoamina secundária, uma porção tiol e misturas dos mesmos. Em mais umoutro aspecto, os corantes poliméricos adequados incluem aqueles selecio-nados do grupo consistindo em Liquitint® (Milliken, Spartanburg, South Caro-lina, USA) Violeta CT, carbóxi metil celulose (CMC) conjugada com um co-rante azul reativo, violeta reativo ou vermelho reativo, como CMC conjugadocom I.C. Azul Reativo 19, disponível comercialmente junto à Megazyme, deWicklow, Irlanda, sob o nome de produto AZO-CM-CELLULOSE, código S-ACMC, e misturas dos mesmos.

Os conjugados corante-argila adequados incluem aqueles se-lecionados do grupo consistindo em pelo menos um corante catiônico/básicoe uma argila esmectita, bem como misturas dos mesmos. Em outro aspecto,os conjugados corante-argila adequados incluem aqueles selecionados dogrupo consistindo em um corante catiônico/básico selecionado do grupoconsistindo em I.C. Amarelo Básico de 1 a 108, I.C. Laranja Básico de 1 a69, I.C. Vermelho Básico de 1 a 118, I.C. Violeta Básico de 1 a 51, I.C. AzulBásico de 1 a 164, I.C. Verde Básico de 1 a 14, I.C. Marrom Básico de 1 a23, I.C. Preto Básico de 1 a 11, e uma argila selecionada do grupo consistin-do em argila montmorilonita, argila hectorita, e argila saponita, bem comomisturas dos mesmos. Em mais um outro aspecto, os conjugados corante-argila adequados incluem aqueles selecionados do grupo consistindo nosconjugados montmorilonita e Azul Básico B7 I.C. 42595, montmorilonita eAzul Básico B9 I.C. 52015, montmorilonita e Violeta Básico V3 I.C. 42555,montmorilonita e Verde Básico G1 I.C. 42040, montmorilonita e VermelhoBásico R1 I.C. 45160, montmorilonita e I.C. Preto Básico 2, hectorita e AzulBásico B7 I.C. 42595, hectorita e Azul Básico B9 I.C. 52015, hectorita e Vio-leta Básico V3 I.C. 42555, hectorita e Verde Básico G1 I.C. 42040, hectoritae Vermelho Básico R1 I.C. 45160, hectorita e I.C. Preto Básico 2, saponita eAzul Básico B7 I.C. 42595, saponita e Azul Básico B9 I.C. 52015, saponita eVioleta Básico V3 I.C. 42555, saponita e Verde Básico G1 I.C. 42040, sapo-nita e Vermelho Básico R1 I.C. 45160, saponita e I.C. Preto Básico 2, e mis-turas dos mesmos.

Os pigmentos adequados incluem aqueles selecionados dogrupo consistindo em flavantrona, indantrona, indantrona clorada contendode 1 a 4 átomos de cloro, pirantrona, dicloropirantrona, monobromodicloropi-rantrona, dibromodicloropirantrona, tetrabromopirantrona, diimida de ácidoperileno-3,4,9,10-tetracarboxílico, sendo que os grupos imida podem sernão-substituídos ou substituídos com alquila C1-C3 ou uma fenila ou radicalheterocíclico, e sendo que a fenila e os radicais heterocíclicos podem, adi-cionalmente, transportar substituintes que não conferem solubilidade em á-gua, amidas de ácido antrapirimidino carboxílico, violantrona, isoviolantrona,pigmentos à base de dioxazina, ftalocianina de cobre que pode conter até 2átomos de cloro por molécula, ftalocianina de policloro-cobre ou ftalocianinade polibromocloro-cobre contendo até 14 átomos de bromo por molécula,bem como misturas dos mesmos.

Em outro aspecto, os pigmentos adequados incluem aquelesselecionados do grupo consistindo em Azul Ultramarino (I.C. Pigmento Azul29), Violeta Ultramarino (I.C. Pigmento Violeta 15) e misturas dos mesmos.

Os agentes de matiz para tecidos anteriormente mencionadospodem ser usados em combinação (qualquer mistura de agentes de matizpara tecidos pode ser usada). Os agentes de matiz para tecidos adequadospodem ser obtidos junto a Aldrich de Milwaukee, Wisconsin, USA, Ciba Spe-cialty Chemicals de Basel, Suíça, BASF de Ludwigshafen, Alemanha, DaygloColor Corporation de Mumbai, índia, Organic Dyestuffs Corp. de East Provi-dence, Rhode Island, USA, Dystar de Frankfurt, Alemanha, Lanxess de Le-verkusen, Alemanha, Megazyme de Wicklow, Irlanda, Clariant de Muttenz,Suíça, e Avecia de Manchester, Reino Unido, e/ou produzidos de acordocom os exemplos aqui contidos.Materiais auxiliares

Embora não essencial para os propósitos da presente inven-ção, a lista não-limitadora de compostos auxiliares mostrada mais adianteneste documento é adequada ao uso nas composições instantâneas e podeser desejavelmente incorporada em certas modalidades da invenção, porexemplo para auxiliar ou melhorar o desempenho da limpeza, para tratamen-to do substrato a ser limpo ou para modificar a estética da composição delimpeza, como no caso de perfumes, corantes ou similares. A natur.eza exatadesses componentes adicionais, bem como seus níveis de incorporação,dependerá da forma física da composição e da natureza da operação delimpeza em que será utilizada. Os materiais auxiliares adequados incluem,mas não se limitam a, tensoativos, builders, agentes quelantes, agentes ini-bidores de transferência de corantes, dispersantes, enzimas adicionais eestabilizantes de enzimas, materiais catalíticos, ativadores de alvejamento,peróxido de hidrogênio, fontes de peróxido de hidrogênio, perácido pré-formado, agentes poliméricos dispersantes, remoção de sujeira à base deargila/agentes anti-redeposição, alvejantes, supressores de espuma, coran-tes, perfumes, agentes elastificantes de estrutura, amaciantes de tecidos,veículos, hidrótropos, elementos auxiliares ao processamento, solventese/ou pigmentos. Além da descrição abaixo, exemplos adequados dessesoutros compostos auxiliares, bem como seus níveis de uso, são encontradosnas patentes U.S. N0 5.576.282, N0 6.306.812 B1 e N° 6.326.348 B1, queestão aqui incorporadas, por referência.

Conforme consta, os ingredientes auxiliares não são essenciaisàs composições das requerentes. Portanto, determinadas modalidades dascomposições das requerentes não contêm um ou mais dos seguintes mate-riais auxiliares: tensoativos, builders, agentes quelantes, agentes inibidoresde transferência de pigmentos, dispersantes, enzimas adicionais e estabili-zantes de enzimas, materiais catalíticos, ativadores dé alvejamento, peróxi-do de hidrogênio, fontes de peróxido de hidrogênio, perácidos pré-formados,agentes poliméricos dispersantes, agentes de remoção de sujeira/anti-redeposição à base de argila, clareadores, supressores de espuma, coran-tes, perfumes, agentes elasticizantes de estrutura, amaciantes de tecido,veículos, hidrótrúpos, elementos auxiliares ao processamento, solventese/ou pigmentos. No entanto, quando estão presentes um ou mais compostosauxiliares, estes podem estar presentes conforme detalhado abaixo:

Agentes de alvejamento - As composições de limpeza da pre-sente invenção podem compreender um ou mais agentes de alvejamento.Os agentes de alvejamento adequados, outros que não os catalisadores dealvejamento, incluem alvejantes fotoativados, ativadores de alvejamento,peróxido de hidrogênio, fontes de peróxido de hidrogênio, perácidos pré-formados e combinações dos mesmos. Em geral, quando é usado um agen-te de alvejamento, as composições da presente invenção podem compreen-der de cerca de 0,1% a cerca de 50%, ou mesmo de cerca de 0,1% a cercade 25% de agente de alvejamento, em peso da presente composição paralimpeza. Exemplos de agentes de alvejamento adequados incluem:

(1) alvejantes fotoativados, por exemplo ftalocianina de zincosulfonatada;

(2) perácidos pré-formados: Os perácidos pré-formados ade-quados incluem, mas não se limitam a, compostos selecionados do grupoconsistindo em ácidos e sais percarboxílicos, ácidos e sais percarbônicos,ácidos e sais perimídicos, ácidos e sais peroximonossulfúricos, por exemploOxzone ®, e combinações dos mesmos. Os ácidos percarboxílicos adequa-dos incluem perácidos hidrofóbicos e hidrofílicos tendo a fórmula R-(C=O)O-O-M, em que R é um grupo alquila, opcionalmente ramificado tendo, quandoo perácido é hidrofóbico, de 6 a 14 átomos de carbono, ou de 8 a 12 átomosde carbono e, quando o perácido é hidrofílico, menos de 6 átomos de carbo-no, ou mesmo menos de 4 átomos de carbono, sendo que M é um contraíon,por exemplo sódio, potássio ou hidrogênio;

(3) fontes de peróxido de hidrogênio, por exemplo, sais de pe-ridrato inorgânicos, inclusive sais de metais alcalinos como sais sódicos deperborato (geralmente mono ou tetraidrato), sais de percarbonato, persulfa-to, perfosfato e persilicato, e combinações dos mesmos. Em um aspecto dainvenção, os sais de peridrato inorgânicos são selecionados a partir do gru-po consistindo em sais sódicos de perborato, de percarbonato, e combina-ções dos mesmos. Quando utilizados, os sais de peridrato inorgânicos es-tão, tipicamente, presentes em quantidades de 0,05% a 40%, ou de 1% a30%, em peso do total da composição, e são, tipicamente, incorporadosnessas composições sob a forma de um sólido cristalino que pode ser reves-tido. Os revestimentos adequados incluem sais inorgânicos como metal alca-Iino silicato, carbonato ou sais de borato ou misturas dos mesmos, ou mate-riais orgânicos como água-solúvel ou polímeros dispersíveis, ceras, óleos ousabões graxos; e

(4) ativadores de alvejamento tendo R-(C=O)-L em que R é umgrupo alquila, opcionalmente ramificado tendo, quando o ativador de alveja-mento é hidrofóbico, de 6 a 14 átomos de carbono, ou de 8 a 12 átomos decarbono e, quando o ativador de alvejamento é hidrofílico, menos de 6 áto-mos de carbono ou mesmo menos de 4 átomos de carbono, sendo que L éum grupo de saída. Exemplos de grupos de saída adequados são ácidobenzóico e derivados do mesmo, especialmente benzenossulfonato. Os ati-vadores de alvejamento adequados incluem oxibenzenossulfonato de dode-canoíla, oxibenzenossulfonato de decanoíla, ácido decanoil oxibenzóico ouseus sais, 3,5,5-trimetil oxibenzenossulfonato de hexanoíla, tetraacetil etile-no diamina (TAED) e oxibenzenossulfonato de nonanoíla (NOBS). Os ativa-dores de alvejamento adequados são, também, apresentados em WO98/17767. Embora qualquer ativador de alvejamento adequado possa serutilizado, em um aspecto da invenção a presente composição para limpezapode compreender NOBS, TAED ou misturas dos mesmos.

Quando presente, o perácido e/ou ativador de alvejamento estágeralmente presente na composição em uma quantidade de cerca de 0,1% acerca de 60%, de cerca de 0,5% a cerca de 40%, ou mesmo de cerca de0,6% a cerca de 10%, em peso, com base na composição. Um ou mais pe-rácidos hidrofóbicos ou precursores dos mesmos podem ser usados emcombinação com um ou mais perácidos hidrofílicos ou precursores dosmesmos.

As quantidades da fonte de peróxido de hidrogênio e de perá-cido ou ativador de alvejamento podem ser selecionadas de modo que a ra-zão molar entre o oxigênio disponível (da fonte de peróxido) e o perácidoseja de 1:1 a 35:1 ou mesmo 2:1 a 10:1.

Tensoativos - As composições de limpeza de acordo com apresente invenção podem compreender um tensoativo ou um sisAMSA ten-soativo no qual o tensoativo pode ser selecionado de tensoativos não-iônicos, tensoativos aniônicos, tensoativos catiônicos, tensoativos anfolíticos,tensoativos zwitteriônicos, tensoativos não-iônicos semipolares e combina-ções dos mesmos. Quando utilizado, o tensoativo está tipicamente presentea um teor de cerca de 0,1% a cerca de 60%, de cerca de 1% a cerca de50%, ou mesmo de cerca de 5% a cerca de 40%, em peso da presentecomposição.

Builders - As composições de limpeza da presente invençãopodem compreender um ou mais builders detergentes ou sisAMSAs de buil-der. Quando um builder for usado, a presente composição compreenderá,tipicamente, ao menos cerca de 1%, de cerca de 5% a cerca de 60%, oumesmo de cerca de 10% a cerca de 40% de builder, em peso da presentecomposição. Os builders incluem, mas não se limitam a, sais de polifosfatosde metal alcalino, amônio e alcanol amônio, silicatos de metal alcalino, alca-lino-terroso e carbonatos de metal alcalino, builders de aluminossilicato,compostos de policarboxilato, éter hidróxi policarboxilatos, copolímeros deanidrido maléico com etileno ou vinil metil éter, ácido 1, 3, 5-triidróxi benze-no-2, 4, 6-trissulfônico e ácido carbóxi metil óxi succínico, os diversos saisde metal alcalino, amônio e amônio substituído de ácidos poliacéticos comoácido etilenodiamino tetraacético e ácido nitrilotriacético, bem como policar-boxilatos como ácido melítico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido oxidissuc-cínico, ácido polimaléico, ácido benzeno 1,3,5-tricarboxílico, ácido carbóximetil óxi succínico, e seus sais solúveis.

Agentes quelantes - As composições de limpeza da presenteinvenção podem conter um agente quelante. Os agentes quelantes adequa-dos incluem agentes quelantes de cobre, ferro e/ou manganês, e combina-ções dos mesmos. Quando um agente quelante é usado, a presente compo-sição pode compreender de cerca de 0,005% a cerca de 15%, ou mesmo decerca de 3,0% a cerca de 10% de agente quelante, em peso da presentecomposição.

Agentes inibidores de transferência de pigmentos - As compo-sições de limpeza da presente invenção podem conter também um ou maisagentes inibidores de transferência de pigmentos. Agentes poliméricos inibi-dores de transferência de corantes adequados incluem, mas não se limitama, polímeros de polivinil pirrolidona, polímeros de poliamina N-óxido, copolí-meros de N-vinil pirrolidona e N-vinil imidazol, polivinil oxazolidonas e polivi-nil imidazóis, ou misturas desses itens. Quando presentes em uma composi-ção da presente invenção, os agentes inibidores de transferência de pigmen-tos podem estar presentes em teores na faixa de cerca de 0,0001% a cercade 10%, de cerca de 0,01% a cerca de 5%, ou mesmo de cerca de 0,1% acerca de 3%, em peso da composição.

Clareadores - As composições de limpeza da presente inven-ção podem, também, conter componentes adicionais que podem tonalizar osartigos sendo limpos, como clareadores fluorescentes. Os teores adequadosde clareador fluorescente incluem desde teores mais baixos, de cerca de0,01, de cerca de 0,05, de cerca de 0,1 ou mesmo de cerca de 0,2%, empeso, até teores mais altos de 0,5 ou mesmo 0,75%, em peso.

Dispersantes - As composições da presente invenção podem,também, conter dispersantes. Os materiais orgânicos solúveis em água ade-quados incluem os ácidos homo ou copoliméricos, ou seus sais, em que oácido policarboxílico contenha ao menos dois radicais carboxila separadosum do outro por não mais de dois átomos de carbono.

Enzimas adicionais - As composições de limpeza podem conteruma ou mais enzimas, as quais proporcionam desempenho da limpeza e/oubenefícios de tratamento de tecidos. Exemplos de enzimas adequadas in-cluem, mas não se limitam a, hemicelulases, peroxidases, proteases, celula-ses, xilanases, lipases, fosfolipases, esterases, cutinases, pectinases, ma-nanases, pectato liases, queratinases, redutases, oxidases, fenoloxidases,lipoxigenases, ligninases, pululanases, tanases, pentosanases, malanases,β-glucanases, arabinosidases, hialuronidase, condroitinase, lacase e amila-ses, ou misturas dos mesmos. Uma combinação típica é um coquetel de en-zimas que pode compreender, por exemplo, uma protease e uma lipase emconjunto com amilase. Quando presentes em uma composição para limpeza,as enzimas adicionais anteriormente mencionadas podem estar presentesem teores na faixa de cerca de 0,00001% a cerca de 2%, de cerca de0,0001% a cerca de 1% ou mesmo de cerca de 0,001% a cerca de 0,5%, empeso da composição, de proteína de enzima.

Estabilizantes de enzimas - As enzimas para uso em detergen-tes podem ser estabilizadas por meio de várias técnicas. As enzimas empre-gadas neste caso podem ser estabilizadas pela presença de fontes solúveisde água de íons de cálcio e/ou magnésio nas composições finais que forne-cem tais íons às enzimas. No caso de composições aquosas compreenden-do protease, um inibidor reversível de protease, como um composto de boro,pode ser adicionado para otimizar ainda mais a estabilidade.

Complexos de metal catalíticos - As composições de limpezadas requerentes podem incluir complexos de metal catalíticos. Um tipo decatalisador de alvejante contendo metal é um sisAMSA catalisador que con-tém um cátion de metal de transição com atividade catalítica definida para al-vejante, como cátions de cobre, ferro, titânio, rutênio, tungstênio, molibdênioou manganês, um cátion de metal auxiliar com pouca ou nenhuma atividadecatalítica para alvejante, como cátions de zinco ou alumínio, e um seqüestra-do que tem constantes de estabilidade definidas para os cátions de metal ca-talíticos e auxiliares, particularmente ácido etilenodiamino tetraacético, etilenodiamino tetra(ácido metileno fosfônico), e sais solúveis em água dessas subs-tâncias. Esses catalisadores são apresentados em U.S. 4.430.243.

Se for desejado, as composições da presente invenção podemser catalisadas por meio de um composto de manganês. Esses compostos eteores de uso são bem-conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, oscatalisadores baseados em manganês apresentados em U.S. 5.576.282.

Os catalisadores alvejantes de cobalto aqui utilizáveis são co-nhecidos e são descritos, por exemplo, nas patentes US 5.597.936 e US5.595.967. Esses catalisadores baseados em cobalto são prontamente pre-parados por meio de procedimentos conhecidos, como ensinado, por exem-plo, em U.S. N0 5.597.936 e U.S. N0° 5.595.967.

As composições da presente invenção podem, também, ade-quadamente incluir um complexo de metais de transição de ligandos, comobispidonas (WO 05/042532 A1) e/ou ligandos macropolicíclicos rígidos, a-breviados como "LMRs". Por uma questão de prática, mas sem que istoconstitua uma limitação, as composições e processos da presente invençãopodem ser ajustadas para fornecer da ordem de ao menos uma parte porcem milhões da espécie ativa de LMR no meio aquoso para lavagem, e tipi-camente fornece de cerca de 0,005 ppm a cerca de 25 ppm, de cerca de0,05 ppm a cerca de 10 ppm, ou mesmo de cerca de 0,1 ppm a cerca de 5ppm de LMR no líquido de lavagem.

Os metais de transição adequados no presente catalisadorbranqueador à base de metal de transição incluem, por exemplo, manganês,ferro e cromo. Os LMRs adequados incluem 5,12-dietil-1,5,8,12-tetraazabiciclo[6.6.2]hexadecano.

Os LMRs de metal de transição adequados são prontamentepreparados por meio de procedimentos conhecidos, como ensinado, por e-xemplo, em WO 00/32601 e em U.S. N0 6.225.464.

Solventes - Os solventes adequados incluem água e outrossolventes, como fluidos lipofílicos. Exemplos de fluidos lipofílicos adequadosincluem siloxanos, outros silicones, hidrocarbonetos, éteres de glicol, deriva-dos de glicerina como éteres de glicerina, aminas perfluoradas, solventesperfluorados e à base de éter hidrofluorado, solventes orgânicos não-fluorados de baixa volatilidade, solventes à base de diol, outros solventesambientalmente compatíveis e misturas desses itens.

Processos para produção de composições

As composições da presente invenção podem ser formuladasem qualquer forma adequada, e preparadas por meio de qualquer processoescolhido pelo formulador, sendo alguns exemplos não-limitadores dasmesmas descritos nos exemplos das requerentes e em U.S. 4.990.280, U.S.20030087791Α1, U.S. 20030087790A1, U.S. 20050003983A1, U.S.20040048764A1, U.S. 4.762.636, U.S. 6.291.412, U.S. 20050227891A1, EP1070115A2, U.S. 5.879.584, U.S. 5.691.297, U.S. 5.574.005, U.S.5.569.645, U.S. 5.565.422, U.S. 5.516.448, U.S. 5.489.392 e U.S. 5.486.303,estando todos esses documentos aqui incorporados, a título de referência.Método de Uso

A presente invenção inclui um método para limpeza e/ou trata-mento de um local entre outros uma superfície ou um tecido. Esse métodoinclui as etapas de colocar uma modalidade da composição de limpeza dasrequerentes, em sua forma pura ou diluída em um líquido de lavagem, emcontato com pelo menos uma porção de uma superfície ou tecido e então,opcionalmente, enxaguar essa superfície ou esse tecido. Pode-se submetera superfície ou o tecido a uma etapa de lavagem antes da etapa de enxágüemencionada acima. Para as finalidades da presente invenção, a lavagem in-clui, porém não se limita a, esfregamento e agitação mecânica. Como seráapreciado por um elemento versado na técnica, as composições de limpezada presente invenção são idealmente adequadas para uso em aplicações delavagem de roupas. Conseqüentemente, a presente invenção inclui um méto-do de lavagem de um tecido. O método inclui as etapas de colocar um tecidoa ser lavado em contato com a dita solução de limpeza para lavanderia con-tendo ao menos uma modalidade das requerentes para composição de limpe-za, aditivo de limpeza ou uma mistura desses itens. O tecido pode conter pra-ticamente qualquer tecido que possa ser lavado em condições de uso normaispelo consumidor. A solução tem, de preferência, um pH na faixa de cerca de 8a cerca de 10,5. As composições podem ser usadas em concentrações decerca de 500 ppm a cerca de 15.000 ppm em solução. As temperaturas daágua situam-se, tipicamente, na faixa de cerca de 5°C a cerca de 90°C. A ra-zão entre a água e o tecido é, tipicamente, de cerca de 1:1 a cerca de 30:1.

Método de teste 1

É fornecido aqui um protocolo para definir se um material co-rante ou pigmento é um agente de matiz para tecidos, para o propósito dainvenção:I) Preencher dois potes de tergotômetro com 800 mL de águada rede pública de Newcastle upon Tyne, Reino Unido (dureza total de -0,21g/L (12 grãos por US galão), disponível junto à Northumbrian Water, Pity Me1Durham, Co. Durham, Reino Unido).

2) Inserir os potes no tergotômetro, com temperatura da águacontrolada a 30°C e agitação ajustada para 40 rpm por toda a duração doexperimento.

3) Adicionar a cada pote 4,8 g de detergente IEC-B (IEC 60456Washing Machine Reference Base Detergent Type B), disponível junto à wfk,Brüggen-Bracht, Alemanha.

4) Após dois minutos, adicionar 2,0 mg de ativo colorante aoprimeiro pote.

5) Após um minuto, adicionar a cada pote 50 g de tecido sim-ples de algodão (disponível junto à Warwick Equest, Consett, County Du-rham, Reino Unido), recortado em amostras de 5 cm χ 5 cm.

6) Após 10 minutos, drenar os potes e reabastecer com águafria da rede pública de Newcastle upon Tyne (16°C).

7) Após 2 minutos de enxágüe, remover os tecidos.

8) Repetir as etapas de 3 a 7 durante outros três ciclos, usandoos mesmos tratamentos.

9) Coletar os tecidos e secá-los em varal, em ambiente interno,durante 12 horas

10) Analisar as amostras mediante o uso de um espectrômetroHunter Miniscan equipado com iluminante D65 e filtro de corte de UVA, paraobter os valores Hunter a (eixo vermelho-verde) e Hunter b (eixo amarelo-azul).

II) Calcular a média dos valores Hunter a e Hunter b para ca-da conjunto de tecidos. Se os tecidos tratados com o colorante sob avaliaçãoapresentarem uma diferença média de matiz superior a 0,2 unidades no eixogeométrico a ou no eixo geométrico b, o dito colorante é considerado umagente de matiz para tecidos, para o propósito da invenção.Exemplos

Exemplos de variantes de lipase

Os produtos químicos usados como tampões e substratos sãoprodutos comercialmente disponíveis pelo menos com grau de reagente.

- Meios e soluções: LAS (Surfac PS®) e Zeolite A (WessalithP®). Outros ingredientes usados são reagentes para laboratório convencio-nais.

- Materiais: EMPA221, disponível junto à EMPA St. Gallen1 Ler-chfeldstrasse 5, CH-9014 St. Gallen1 Suíça

Exemplo 1: Produção de enzima

Um plasmídio contendo o gene que codifica a lipase é constru-ído e transformado em uma célula hospedeira adequada, mediante o uso demétodos-padrão da técnica.

A fermentação é realizada sob a forma de fermentação por lotealimentado, mediante o uso de um meio com temperatura constante de34°C, e um volume inicial de 1,2 litros. O pH inicial do meio é ajustado para6,5. Uma vez que o pH tenha aumentado para 7,0, esse valor é mantido me-diante a adição de H3P04 a 10%. O nível de oxigênio dissolvido no meio écontrolado mediante à variação da taxa de agitação, usando-se uma taxa deaeração fixa de 1,0 litro de ar por litro de meio, por minuto. A taxa de adiçãode alimento é mantida a um teor constante durante toda a fase de lote ali-mentado. O meio do lote continha xarope de maltose como fonte de carbo-no, uréia e extrato de levedura como fonte de nitrogênio, e uma mistura deoligoelementos metálicos e sais. O alimento adicionado de maneira contínuadurante a fase de lote alimentado contém xarope de maltose como fonte decarbono, enquanto extrato de levedura e uréia são adicionados para assegu-rar um suprimento suficiente de nitrogênio.

A purificação da lipase pode ser feita mediante o uso de méto-dos-padrão conhecidos na técnica, por exemplo mediante à filtração do so-brenadante da fermentação, e a subseqüente cromatografia hidrofóbica etroca de ânions, por exemplo conforme descrito em EP 0 851 913, Exemplo 3.Exemplo 2: AMSA (Teste de Esforço Mecânico Automatizado) para cálculodo Desempenho Relativo (RP).

As variantes de enzima do presente pedido são testadas medi-ante o uso de Teste de Esforço Mecânico Automatizado (AMSA). Com o tes-te AMSA, pode-se examinar o desempenho de lavagem de uma grandequantidade de soluções enzimáticas detergentes em pequenos volumes. Aplaca de AMSA tem um certo número de fendas para soluções de teste, euma tampa que comprime firmemente a amostra de produto têxtil a ser lava-da contra as aberturas em fenda. Durante o tempo de lavagem, a placa, assoluções de teste, o produto têxtil e a tampa são vigorosamente agitadospara colocar a solução de teste em contato com o produto têxtil, e para apli-car esforço mecânico. Para uma descrição mais detalhada, vide WO02/42740, especialmente o parágrafo "Special method embodiments", naspáginas 23 a 24. Os recipientes, que contêm a solução de teste do detergen-te, consistem em orifícios cilíndricos (6 mm de diâmetro, 10 mm de profundi-dade) em uma placa de metal. O tecido manchado (material de teste) fica notopo da placa de metal e é usado como tampa e lacre nos recipientes. Umaoutra placa de metal fica no topo do tecido manchado para evitar qualquerderramamento de cada um dos recipientes. As duas placas de metal, juntascom o tecido manchado, são vibradas para cima e para baixo a uma fre-qüência de 30 Hz, com uma amplitude de 2 mm.

O ensaio é conduzido sob as condições experimentais abaixoespecificadas:<table>table see original document page 35</column></row><table>

Tabela 3

Amostras com creme turmérico são preparadas mediante amisturação de 5 g de turmérico (Santa Maria, Dinamarca) com 100 g decreme (38% de gordura, Arla, Dinamarca) a 50°C, sendo que a mistura édeixada a essa temperatura durante cerca de 20 minutos e filtrada (50°C)para remover quaisquer partículas não-dissolvidas. A mistura é resfriada até20°C, e amostras de tecido de algodão, EMPA221, são imersas na misturade creme turmérico, sendo então deixadas secar à temperatura ambiente deum dia para outro e congeladas até o uso. A preparação das amostras decreme turmérico são apresentadas no Pedido de Patente PA 2005 00775,depositado em 27 de maio de 2005.

O desempenho da variante de enzima é medido como o brilhoda cor das amostras de produto têxtil lavadas com aquela variante de enzi-ma específica. O brilho pode, também, ser expresso como a intensidade deluz refletida a partir da amostra de produto têxtil quando iluminada com luzbranca. Quando o produto têxtil está manchado, a intensidade da luz refleti-da é mais baixa que aquela de um produto têxtil limpo. Portanto, a intensida-de da luz refletida pode ser usada para medir o desempenho de lavagem deuma variante de enzima.

As medições de cor são feitas em uma scanner de base planade uso profissional (PFU DLpro), a qual é usada para capturar uma imagemdas amostras de produto têxtil lavadas. As digitalizações são feitas com umaresolução de 200 dpi e com uma profundidade de cor na saída de 24 bits.Para a obtenção de resultados acurados, a scanner é calibrada freqüente-mente com um alvo reflexivo Kodak IT8.

Para extrair um valor da intensidade de luz das imagens digita-lizadas, é usado um aplicativo de software especialmente projetado (No-vozymes Color Vector Analyzer). O programa recupera os valores de pixelem 24 bits da imagem, e os converte em valores para vermelho, verde e azul(RGB, ou Red, Green, Blue). O valor da intensidade (Int) é calculado medi-ante a adição dos valores RGB como vetores e, então, tomando-se o com-primento do vetor resultante:

Int=-Jr2 + g2 +b2

O desempenho de lavagem (P) das variantes é calculado deacordo com a seguinte fórmula:<table>table see original document page 37</column></row><table>

lnt(v) é o valor de intensidade de luz da superfície do produtotêxtil lavada com a enzima testada, enquanto lnt(r) é o valor de intensidadede luz da superfície do produto têxtil lavada sem a enzima testada.

É dada uma pontuação de desempenho relativo como resulta-do da lavagem AMSA1 de acordo com a definição: as pontuações de De-sempenho Relativo (RP) são o somatório dos desempenhos (P) das varian-.tes de enzima testadas contra a enzima de referência: RP = P(enzima deteste) / P(enzima de referência).

O RPavg indica o desempenho relativo médio em comparaçãoao da enzima de referência em todas as quatro concentrações de erizimas(0,125,0,25,0,5, 1,0 mg ep/l)

RPavg = média(RP(0,125), RP(0,25), RP(O1S)1-RP(I1O))

Considera-se que a variante exibe desempenho de lavagem o-timizado se tiver um desempenho melhor que o da referência. No contextoda presente invenção, a enzima de referência é a Iipase da SEQ. ID n9 2,com as substituições T231R + N233R.

Exemplo 3: GC (cromatoqrafia qasosa) para cálculo do fator de risco.

A liberação de ácido butírico a partir das amostras lavadas comlipase é medida por meio de cromatografia a gás por microextração em fasesólida (SPME-GC), utilizando-se o método exposto a seguir. Quatro peçasde produto têxtil (com 5 mm de diâmetro), lavadas na solução especificadana Tabela 3, contendo 1 mg/ L de lipase, são transferidas para um frasco decromatografia gasosa (GC). As amostras são analisadas em um cromatógra-fo gasoso Varian 3800 GC equipado com uma coluna de proteção Stabilwax-DA w/Integra (30 m, 0,32 mm ID e 0,25 micro-m df) e uma fibra CarboxenPDMS para MEFS (75 micro-m). Cada amostra é pré-incubada durante 10min a 40°C, seguido de 20 min de amostragem com a fibra para MEFS noespaço livre sobre as peças de produto têxtil. A amostra é, subseqüente-mente, injetada na coluna (temperatura do injetor = 250°C). Fluxo da coluna= 2 mL de hélio/min. Gradiente de temperatura do forno de coluna: 0 min =40°C, 2 min = 40°C, 22 min = 240°C, 32 min = 240°C. O ácido butírico é de-tectado por meio de detecção Fl D, e a quantidade de ácido butírico é calcu-Iada com base em uma curva-padrão para ácido butírico.

O desempenho de risco para odor, R, de uma variante de Iipa-se é a razão entre a quantidade de ácido butírico liberado pela amostra la-vada com a variante de Iipase e a quantidade de ácido butírico liberado poruma amostra lavada com a Iipase da SEQ. ID ne 2 com as substituiçõesT231R + N233R (enzima de referência), depois de ambos os valores teremsido corrigidos para a quantidade de ácido butírico liberado por uma amostralavada sem lipase. O risco (R) das variantes é calculado de acordo com afórmula abaixo:

Odor = medido em micro g de ácido butírico desenvolvido a 1 mg de proteí-na de enzima /1 corrigido para a amostra de controle

Clenzima de teste = Odor enzima de teste " amOStra de ControleQenzima de referência = OdOT enzima de referência " amostra de ControleR = Qenzima de teste / Qenzima de referência

Considera-se que a variante exibe odor reduzido, em compara-ção à referência, se o fator R for menor que 1.

Exemplo 4: atividade (LU) em relação à absorbância a 280 nm

A atividade de uma lipase em relação à absorbância a 280 nmé determinada por meio do ensaio LU/A280. apresentado a seguir:

A atividade da lipase é determinada conforme descrito acimana seção "Atividade da lipase". A absorbância da lipase a 280 nm é medida(A280), e a razão LU/A280 é calculada. A LU/A280 relativa é calculada comoa LU/A280 da variante dividida pela LU/A280 de uma enzima de referência.No contexto da presente invenção, a enzima de referência é a Iipase daSEQ. ID ne 2, com as substituições T231R + N233R.Exemplo 5: BR - relação risco/benefício

O fator risco/benefício descrevendo o desempenho em compa-ração ao risco reduzido para ocorrência de odores é, portanto, definidocomo: BR = RPavg / R

Considera-se que a variante exibe desempenho de lavagemotimizado e odor reduzido, se o fator BR for mais alto que 1.

Mediante à aplicação dos métodos acima descritos, são obtidosos seguites resultados:

<table>table see original document page 39</column></row><table>

Tabela 4

A lipase de referência e as variantes 7 e 8 na Tabela 4 sãodescritas em WO 2000/060063.Exemplo 6

BR - Relação risco/benefício

A relação risco/benefício foi medida para as variantes relacio-nadas na Tabela 5. O fator risco/benefício foi medido da mesma forma des-crita no Exemplo 5, e descobriu-se que o mesmo estava acima de 1 paratodas as variantes relacionadas.

<table>table see original document page 40</column></row><table><table>table see original document page 41</column></row><table><table>table see original document page 42</column></row><table>Tabela 5

A Iipase de referência é descrita em WO 2000/060063.

Exemplos de composição

Exceto onde indicado de outro modo, os materiais podem serobtidos junto à Aldrich, P.O. Box 2060, Milwaukee, Wl, 53201, USA.

Exemplos de 1 a 6

<table>table see original document page 43</column></row><table>Qualquer das composições acima é usada para a lavagem detecidos a uma concentração na faixa de 600 ppm a 10.000 ppm, em água,com condições médias típicas de 2.500 ppm, 25°C e uma razão água:panode 25:1.

Exemplos de 7 a 10

Composições detergentes granulares para lavagem de roupas,criado para máquinas de lavar automáticas com carregamento frontal.

<table>table see original document page 44</column></row><table><table>table see original document page 45</column></row><table>

Qualquer das composições acima é usada para lavagem de te-cidos a uma concentração de 10.000 ppm em água, a uma temperatura dea 90°C e a uma razão água:tecido de 5:1. O pH típico é de cerca de 10.

Exemplos de 11 a 16

Composições detergentes líquidas para lavagem de roupas para tarefas pe-sadas

<table>table see original document page 45</column></row><table><table>table see original document page 46</column></row><table>

Matérias-primas e observações para os exemplos de composição de 1 a 16

Sulfonato de alquilbenzeno linear com uma média de compri-mento de cadeia de carbono aliíático C11-C12, disponível junto à Stepan, deNorthfield, Illinois, USA

Cloreto de dimetil hidróxi etilamônio C12-14, disponível junto àClariant GmbH, Sulzbach, Alemanha

AE3S é sulfato de alquila C12-15 etoxilado (3), disponível junto àStepan, Northfield, Illinois, USA

AE7 é álcool C-12-15 etoxilato, com um grau médio de etoxilaçãode 7, disponível junto à Huntsman, Salt Lake City, Utah, USA

Tripolifosfato de sódio, disponível junto à Rhodia, Paris, FrançaZeólito A, disponível junto à Industrial Zeolite (Reino Unido) Ltd,Grays, Essex, Reino Unido

1.6R Silicato, disponível junto à Koma, Nestemica, RepúblicaChecaCarbonato de sódio, disponível junto à Solvay, Houston, Texas,USA

Poliacrilato com PM 4.500, disponível junto à BASF, Ludwig-shafen, Alemanha

A carbóxi metil celulose é Finnfix® BDA, disponível junto à CP-Kelco, Arnhem, Holanda

Savinase®, Natalase®, Termamyl® e Mannaway®, disponíveisjunto à Novozymes, Bagsvaerd, Dinamarca

Variantes de Iipase de 1 a 5, descritas no Exemplo 5, Tabela 4,e combinações das mesmas.

O clareador fluorescente 1 é Tinopal® AMS, o clareador fluo-rescente 2 é Tinopal® CBS-X, ftalocianina de zinco sulfonada e Violeta Direto9 é Pergasol® Violet BN-Z, todos disponíveis junto à Ciba Specialty Chemi-cals de Basel, Suíça

Ácido dietileno triamina pentacético, disponível junto à DowChemical, Midland, Michigan, USA

tivo 19, disponível comercialmente junto à Megazyme de Wicklow, Irlanda,sob o nome de produto AZO-CM-CELLULOSE, código S-ACMC.

O Azul Ultramarino está disponível junto à Holliday Pigments deKingston upon Hull, Reino Unido

O agente de liberação de sujeira é Repel-o-tex® PF1 disponíveljunto à Rhodia, Paris, França

O copolímero de ácido acrílico/ácido maléico tem peso molecu-lar 70.000 e uma razão acrilato: maleato de 70:30, e está disponível junto àBASF, Ludwigshafen, Alemanha

A protease é FN3, disponível junto à Genencor International,Palo Alto, Califórnia, USASal sódico de ácido etilenodiamino-N,N'-dissuccínico, (S,S) i-

sômero (EDDS), disponível junto à Octel, Ellesmere Port, Reino Unido

Difosfonato de hidróxi etano (HEDP), disponível junto à DowChemical, Midland, Michigan, USA

Aglomerado de supressor de espuma, disponível junto à DowCorning, Midland, Michigan, USA

HSAS é um sulfato de alquila com ramificação média, conformeapresentado em US 6.020.303 e US 6.060.443

Óxido de dimetilamina C12-14, disponível junto à Procter &Gamble Chemicals, Cincinnati, Ohio, USA

O não-iônico é, de preferência, um etoxilato C12-C13, de prefe-rência com um grau médio de etoxilação de 9.

A protease está disponível junto à Genencor International, PaloAito, Califórnia, USA

Liquitint® Violet CT está disponível junto à Milliken, Spartan-burg, South Carolina, USA

* Números dados em mg de enzima/100 g

1 conforme descrito em US 4.597.898.

2 disponível sob o nome comercial LUTENSIT® junto à BASF, econforme aqueles descritos em WO 01/05874

+ Lipase descrita no presente relatório descritivo.

Embora modalidades particulares da presente invenção te-nham sido ilustradas e descritas, deve ficar evidente aos versados na técni-ca que várias outras alterações e modificações podem ser feitas sem que sedesvie do espírito e âmbito da invenção. Portanto, pretende-se cobrir nasreivindicações anexas todas essas alterações e modificações que se enqua-dram no escopo da presente invenção.Listagem de Seqüência

<110> Procter & Gamble Company

<120> Composições detergentes

<130> 10281M

<160> 16

<170> Patentln version 3.3

<210> 1

<211> 807

<212> DNA

<213> Thermomyces lanuginosus

<220> <221> CDS <222> Cl)·· C807) - <220> <221> mat_peptideo <222> (I)--C) <400> 1 gag gtç tcg Glu Val Ser 1 cag Gln gat Asp 5 «g Leu ttt Phe aac Asn cag Gln ttc Phe 10 aat Asn ctc Leu ttt Phe gça Ala cag tat Gln Tyr 15 48tct gca gcc ser Ala Ala gca Ala 20 tac Tyr tgc cys gga Gly aaa Lys aac Asn 25 aat Asn gat AS ρ gçc Ala cca Pro gçt Ala 30 ggt GTy aca Thr 96aac att acg Asn Ile Thr 35 tgc Cys acg Thr 99a GTy aat Asn gçc Ala 40 tgc cys CCC Pro gag Glu gta Val gag Glu 45 aag Lys gcg gat Ala Asp 144gca acg ttt Ala Thr Phe 50 ctc Leu tac Tyr tcg Ser ttt Phe 55 gaa GlU gac Asp tct ser gga GTy ϊΐΐ 60 ggc gat GTy Asp gtç Val acc Thr 192ggc ttc ctt Gly Phe Leu 65 gçt Ala CtC Leu gac ASp 70 aac Asn acg Thr aac Asn aaa Lys ttg Leu 75 ate Ile gtç Val ctc Leu tct Ser ttc Phe 80 240cgt ggc tct Arg Gly Ser cgt Arg tcc ser 85 ata He gag Glu aac Asn tgg Trp ate Ile 90 ggg GTy aat Asn Ctt Leu aac Asn ttc Phe 95 gac AS ρ 288ttg aaa gaa Leu Lys Glu ata Ile 100 aat Asn gac Asp att Ile tgc Cys tcc Ser 105 ggc GTy tgc Cys agg Arg gga GTy cat His 110 gac Asp ggc GTy 336ttc act tcg Phe Thr Ser 115 tcc tgg agg Ser Trp Arg tct Ser gta Val 120 gcc gat acg Ala Asp Thr tta Leu agg Sf cag Gln aag Lys &Ϊ 384gag gat gct Glu Asp Ala 130 gtg vai agg Arg gag Glu cat His 135 CCC Pro gac Asp tat Tyr cgc Arg 140 gtg vaT ttt Phe acc gga Thr Gly 432cat age ttg His ser Leu 145 99* Gly ggt GTy gca Ala 150 ttg Leu gca Ala act Thr gtt vai gçc Ala 155 gga GTy gca Ala gac Asp ctg Leu cgt Arg 160 480gga aat ggg tat gat ate gac gtg ttt tca tat ggc gcc CCC cga gtc 528Gly Asn Gly Tyr Asp Ile Asp vai Phe ser Tyr Gly Ala Pro Arg Val165 170 175

gga aac agg gct Ttt gca gaa ttc ctg acc gta cag acc ggc gga acaGly Asn Arg Ala Phe Ala Glu Phe Leu Thr Val Gln Thr Gly Gly Thr180 185 190

cgc gaa ttc ggt tac age cat tet age cca gag tac tgg ate aaa tetArg Glu Phe Gly Tyr ser His ser Ser Pro Glu Tyr Trp Il e Lys ser210 215 220

gga acc ctt gtc ccc gtc acc cga aac gat ate gtg aag ata gaa ggcGly Thr Leu vai Pro vai Thr Arg Asn Asp Ile Val Lys Ile Glu Gly225 230 235 240

576

etc tac cgc att acc cac acc aat gat att gtc cct aga ctc ccg ccg 624

Leu Tyr Arg ile Thr His Thr Asn Asp Ile Val Pro Arg Leu Pro Pro195 200 205

672

720

ate gat gcc acc ggc ggc aat aac cag cct aac att ccg gat ate cct 768

Ile Asp Ala Thr Gly Giy Asn Asn Gln Pro Asn Ile Pro Asp Ile Pro245 250 255

gcg cac cta tgg tac ttc ggg tta att gag aca tgt ctt 807

Ala His Leu Trp Tyr Phe Gly Leu Ile Gly Thr cys Leu260 265

<210> 2<211> 269<212> PRT

<213> Thermomyces lanuginosus<400> 2

Glu vai Ser Gln Asp Leu Phe Asn Gln Phe Asn Leu Phe Ala Gln Tyr15 10 15

ser Ala Ala Ala Tyr Cys Gly Lys Asn Asn Asp Ala Pro Ala Gly Thr20 25 30

Asn Ile Thr Cys Thr Gly Asn Ala Cys Pro Glu vai Glu Lys Ala Asp3 5 40 45

Ala Thr Phe Leu Tyr Ser Phe Glu Asp ser Gly Val Gly Asp Val Thr50 55 60

Gly Phe Leu Ala Leu Asp Asn Thr Asn Lys Leu Ile Val Leu Ser Phe65 70 75 80

Arg Gly ser Arg Ser Ile Glu Asn Trp Ile Gly Asn Leu Asn Phe Asp85 90 95

Leu Lys Glu Ile Asn Asp Ile cys Ser Gly Cys Arg Gly His Asp Gly100 105 110

Phe Thr ser Ser Trp Arg Ser vai Ala Asp Thr Leu Arg Gln Lys vai115 120 125

Glu Asp Ala vai Arg Glu His Pro Asp Tyr Arg vai Val Phe Thr Gly130 135 140His Ser Leu Gly Gly Ala Leu Ala Thr Val Ala Gly Ala Asp Leu Arg145 150 155 160

Gly Asn Gly Tyr Asp Ile Asp vai Phe ser Tyr Gly Ala Pro Arg vai165 170 175

Gly Asn Arg Ala Phe Ala Glu Phe Leu Thr vai Gln Thr Gly Gly Thr180 185 190

Leu Tyr Arg lie Thr His Thr Asn Asp Ile Val Pro Arg Leu Pro Pro195 200 205

Arg Glu Phe Gly Tyr Ser His ser Ser Pro Glu Tyr Trp Ile Lys Ser210 215 220

Gly Thr Leu Val Pro Val Thr Arg Asn Asp Ile vai Lys Ile Glu Gly225 230 235 240

lie Asp Ala Thr Gly Gly Asn Asn Gln Pro Asn lie Pro Asp lie Pro245 250 255

Ala His Leu Trp Tyr Phe Gly Leu Ile Gly Ttir cys Leu260 265

<210> 3<211> 265<212> PRT

<213> Absidia reflexa<400> 3

Ser Ser ser ser Thr Gln Asp Tyr Arg lie Ala ser Glu Ala Glu lie15 10 15

Lys Ala His Thr Phe Tyr Thr Ala Leu ser Ala Asn Ala Tyr Cys Arg20 25 30

Thr Val Ile Pro Gly Gly Arg Trp ser Cys Pro His Cys Gly Val Ala35 40 45

Ser Asn Leu Gln Ile Thr Lys Thr Phe Ser Thr Leu lie Thr Asp Thr50 55 60

Asn Val Leu Val Ala vai Gly Glu Lys Glu Lys Thr He Tyr Val vai65 70 75 80

Phe Arg Gly Thr Ser ser lie Arg Asn Ala Ile Ala Asp Ile vai Phe85 90 95

vai Pro vai Asn Tyr Pro Pro vai Asn Gly Ala Lys vai His Lys Gly100 105 110Phe Leu Asp Ser Tyr Asn Glu vai Gln Asp Lys Leu ValAla Glu vai115 120 125

Lys Ala Gln Leu Asp Arg His Pro Gly Tyr Lys Ile Val Val Thr Gly130 135 140

His Ser Leu Gly Gly Ala Thr Ala Val Leu Ser Ala Leu Asd Leu Tyr145 150 155 160

His His Gly His Ala Asn xle Glu Ile Tyr Thr Gln Gly Gln Pro Arg165 170 175

Ile Gly Thr Pro Ala Phe Ala Asn Tyr Val Ile Gly Thr Lys Il e Pro180 185 190

Tyr Gln Arg Leu Val His Glu Arg Asp Ile Val Pro His Leu Pro Pro195 200 205

Gly Ala Phe Gly Phe Leu His Ala Gly Glu Glu Phe Trp Ile Met Lys210 215 220

Asp Ser Ser Leu Arg Val Cys Pro Asn Gly Ile Glu Thr Asp Asn CysZZS 230 235 240

ser Asn Ser Ile vai Pro Phe Thr ser vai Ile Asp His Leu ser Tyr245 250 255

Leu Asp Met Asn Thr Gly Leu Cys Leu260 265

<210> 4<211> 264<2±2> PRT

<213> Absidia corymbifera<400> 4

ser ser ser Thr Gln Asp Tyr Arg lie Ala ser Glu Ala Glu Ile Lys1 5 10 15

Ala His Thr Phe Tyr Thr Ala Leu Ser Ala Asn Ala Tyr Cys Arg Thr20 25 30

vai lie Pro Gly Gly Gln Trp Ser cys Pro His Cys Asp vai Ala Pro35 40 45

Asn Leu Asn Ile Thr Lys Thr Phe Thr Thr Leu Ile Thr Asp Thr Asn50 55 60

vai Leu Val Ala Val Gly Glu Asn Glu Lys Thr Ile Tyr vai Val Phe65 70 75 80Arg Gly Thr Ser Ser Ile Arg Asn Ala Ile Ala Asp Ile Val Phe Val85 90 95

Pro Val Asn Tyr Pro Pro Val Asn Gly Ala Lys vai His Lys Gly Phe100 105 110

Leu Asp Ser Tyr Asn Glu Val Gln Asp Lys Leu vai Ala Glu Val Lys115 120 125

Ala Gln Leu Asp Arg His Pro Gly Tyr Lys Ile vai vai Thr Gly His130 135 140

Ser Leu Gly Gly Ala Thr Ala vai Leu Ser Ala Leu Asp Leu Tyr His145 150 155 160

His Gly His Asp Asn lie Glu Ile Tyr Thr Gln Gly Gln Pro Arg Ile165 170 175

Gly Thr Pro Glu Phe Ala Asn Tyr vai Ile Gly Thr Lys Ile Pro Tyr180 185 190

Gln Arg Leu vai Asn Glu Arg Asp lie Val Pro His Leu Pro Pro Gly195 200 205

Ala Phe Gly Phe Leu His Ala Gly Glu Glu Phe Trp ile Met Lys Asp210 215 220

Ser ser Leu Arg vai Cys Pro Asn Gly Ile Glu Thr Asp Asn Cys ser225 230 235 240

Asn Ser Ile Val Pro Phe Thr Ser Val Ile Asp His Leu Ser Tyr Leu245 250 255

Asp Met Asn Thr Gly Leu Cys Leu260

<210> 5<211> 269<212> PRT

<213> Rhizomucor miehei<400> 5

Ser Ile Asp Gly Gly Ile Arg Ala Ala Thr ser Gln Glu Ile Asn Glu1 5 10 15 *

Leu Thr Tyr Tyr Thr Thr Leu Ser Ala Asn Ser Tyr Cys Arg Thr Val20 25 30

Ile Pro Gly Ala Thr Trp Asp Cys Ile His Cys Asp Ala Thr Glu Asp35 40 45Leu Lys Xle Ile Lys Thr Trp ser Thr Leu Ile Tyr Asp Thr Asn Ala50 55 60

Met vai Ala Arg Gly Asp ser Glu Lys Thr Ile Tyr Ile vai Phe Arq65 70 75 80

Gly ser Ser Ser lie Arg Asn Trp lie Ala Asp Leu Thr Phe Val Pro85 90 95

Val Ser Tyr Pro Pro Val ser Gly Thr Lys Val His Lys Gly Phe Leu100 105 110

Asp Ser Tyr Gly Glu vai Gln Asn Glu Leu Val Ala Thr vai Leu Asp115 120 125

Gln Phe Lys Gln Tyr Pro Ser Tyr Lys Val Ala Val Thr Gly His ser130 135 140

Leu Gly Gly Ala Thr Ala Leu Leu Cys Ala Leu Asp Leu Tyr Gln Ar145 150 155 1&

Glu Glu Gly Leu Ser Ser ser Asn Leu Phe Leu Tyr Thr Gln Gly Gln165 170 175

Pro Arg Val Gly Aspi Pro Ala Phe Ala Asn Tyr vai vai ser Thr Gly180 185 190

Ile Pro Tyr Arg Arg Thr Val Asn Glu Arg Asp Ile Val Pro His Leu195 200 205

Pro Pro Ala Ala Phe Gly Phe Leu His Ala Gly Glu Glu Tyr Trp Ile210 215 220

Thr Asp Asn ser pro Glu Thr vai Gln vai Cys Thr ser Asp Leu Glu225 230 235 240

Thr Ser Asp cys ser Asn Ser lie vai Pro Phe Thr ser vai Leu Asp245 250 255

His Leu Ser Tyr Phe Gly Ile Asn Thr Gly Leu cys Thr260 265

<210> 6<211> 271<212> PRT

<213> Rhizopus oryzae<400> 6

ser Ala Ser Asp Gly Gly Lys vai vai Ala Ala Thr Thr Ala Gln lie1 5 10 15

Gln Glu Phe Thr Lys Tyr Ala Gly Ile Ala Ala Thr Ala Tyr Cys Arg

20 25 30ser vai vai Pro Gly Asn Lys Trp Asp Cys vai Gln cys Gln Lys Trp35 40 45

vai Pro Asp Gly Lys Ile Ile Thr Thr Phe Thr ser Leu Leu ser Asp50 55 60

Thr Asn Gly Tyr Val Leu Arg Ser Asp Lys Gln Lys Thr lie Tyr Leu65 70 75 80

Val Phe Arg Gly Thr Asn Ser Phe Arg Ser Ala Ile Thr Asp lie vai85 90 95

Phe Asn Phe Ser Asp Tyr Lys Pro Val Lys Gly Ala Lys Val His Ala100 105 110

Gly Phe Leu Ser Ser Tyr Glu Gln Val vai Asn Asp Tyr Phe Pro Val115 120 125

vai Gln Glu Gln Leu Thr Ala His Pro Thr Tyr Lys vai Ile Val Thr130 135 140

Gly His Ser Leu Gly Gly Ala Gln Ala Leu Leu Ala Gly Met Asp Leu145 150 155 160

Tyr Gln Arg Glu Pro Arg Leu ser Pro Lys Asn Leu ser lie Phe Thr165 170 175

vai Gly Gly Pro Arg vai Gly Asn Pro Thr Phe Ala Tyr Tyr Val Glu180 185 190

Ser Thr Gly Ile Pro Phe Gln Arg Thr vai His Lys Arg Asp Ile Val195 200 205

Pro His vai Pro Pro Gln Ser Phe Gly Phe Leu His Pro Gly Val Glu210 215 220

Ser Trp lie Lys Ser Gly Thr Ser Asn vai Gln Ile Cys Thr Ser Glu225 230 235 240

lie Glu Thr Lys Asp Cys Ser Asn ser Ile vai Pro Phe Thr Ser Ile245 250 255

Leu Asp His Leu Ser Tyr Phe Asp lie Asn Glu Gly ser Cys Leu260 265 270

<210> 7<211> 267<212> PRT

<213> Aspergi11us niger<400> 7

Thr Ala Gly His Ala Leu Ala Ala ser Thr Gln Gly tle ser Glu asd1 5 10 15

Leu Tyr ser Arg Leu vai Glu Met Ala Thr Ile ser Gln Ala Ala Tvr20 25 BO

Ala Asp Leu Cys Asn lie Pro Ser Thr Ile He Lys Gly Glu Lys Ile35 40 45

Tyr Asn Ser Gln Thr Asp lie Asn Gly Trp Ile Leu Arg Asp Asp Ser50 55 60

Ser Lys Glu Ile Ile Thr Val Phe Arg Gly Thr Gly ser Asp Thr Asn65 70 75 80

Leu Gln Leu Asp Thr Asn Tyr Thr Leu Thr Pro Phe Asp Thr Leu Pro85 90 95

Gln Cys Asn Gly Cys Glu vai His Gly Gly Tyr Tyr Ile Gly Trp vai100 105 110

ser Val Gln Asp Gln vai Glu ser Leu Val Lys Gln Gln vai ser Gln115 120 125

Tyr Pro Asp Tyr Ala Leu Thr vai Thr Gly His ser Leu Gly Ala Ser130 135 140

Leu Ala Ala Leu Thr Ala Ala Gln Leu ser Ala Thr Tyr Asp Asn Ile145 150 155 160

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Ser Tyr Met Asn Asp Ala Phe Gln Ala Ser Ser Pro Asp Thr Thr Gln180 185 190

Tyr Phe Arg vai Thr His Ala Asn Asp Gly Ile Pro Asn Leu Pro Pro195 200 205

Val Glu Gln Gly Tyr Ala His Gly Gly vai Glu Tyr Trp ser Val Asp210 215 220

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cys cys Glu Ala Gln Gly Gly Gln Gly vai Asn Asn Ala His Thr Thr245 250 255

Tyr Phe Gly Met Thr ser Gly Ala Cys Thr Trp260 265<210> 8

<211> 266

<212> PRT

<213> AspergiHus tubingensis

<400> 8

Thr Ala Gly His Ala Leu Ala Ala Ser Thr Gln Gly Ile Ser Glu Asp1 5 10 15

Leu Tyr Ser Arg Leu Val Glu Met Ala Thr Ile Ser Gln Ala Ala Tyr20 25 30

Ala Asp Leu cys Asn Ile Pro Ser Thr Ile Ile Lys Gly Glu Lys Ile35 40 45

Tyr Asn Ser Gln Thr Asp Ile Asn Gly Trp Ile Leu Arg Asp Asp Ser50 55 60

Ser Lys Glu Ile Ile Thr vai Phe Arg Gly Thr Gly Ser Asp Thr Asn65 70 75 80

Leu Gln Leu Asp Thr Asn Tyr Thr Leu Thr Pro Phe Asp Thr Leu Pro85 90 95

Gln Cys Asn Ser Cys Glu vai His Gly Gly Tyr Tyr Ile Gly Trp Ile100 105 110

Ser vai Gln Asp Gln vai Glu ser Leu vai Gln Gln Gln Val Ser Gln115 120 125

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Leu Ala Ala Leu Thr Ala Ala Gln Leu Ser Ala Thr Tyr Asp Asn Ile145 150 155 160

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Asp Glu Gly Tyr Ala His Gly vai vai Glu Tyr Trp Ser vai Asp Pro210 215 220

Tyr Ser Ala Gln Asn Thr Phe Val Cys Thr Gly Asp Glu vai Gln Cys225 230 235 240cys Glu Ala Gln Gly Gly Gln Gly Val Asn Asn Ala His Thr Thr Tyr245 250 255

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<210> 9<211* 276<212> PRT

<213> Fusarium oxysporum<400> 9

Ala Val Gly vai Thr Thr Thr Asp Phe Ser Asn Phe Lys Phe Tyr Ile1 5 10 15

Gln His Gly Ala Ala Ala Tyr Cys Asn Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ser20 25 30

Lys Ile Thr Cys ser Asn Asn Gly Cys Pro Thr Val Gln Gly Asn Gly35 40 45

Ala Thr Ile Val Thr Ser Phe Val Gly ser Lys Thr Gly Ile Gly Gly50 55 60

Tyr vai Ala Thr Asp Ser Ala Arg Lys Glu Ile Val Val Ser Phe Arg65 70 75 80

Gly ser Ile Asn Ile Arg Asn Trp Leu Thr Asn Leu Asp Phe Gly Gln85 90 95

Glu Asp Cys Ser Leu Val Ser Gly cys Gly vai His Ser Gly Phe Gln100 105 lio

Arg Ala Trp Asn Glu lie ser Ser Gln Ala Thr Ala Ala Val Ala Ser115 120 125

Ala Arg Lys Ala Asn Pro Ser Phe Asn Val Ile Ser Thr Gly His Ser130 135 140

Leu Gly Gly Ala Val Ala Val Leu Ala Ala Ala Asn Leu Arq Val Gly145 150 155 160

Gly Thr Pro Val Asp lie Tyr Thr Tyr Gly Ser Pro Arg Val Gly Asn165 170 175

Ala Gln Leu Ser Ala Phe Val ser Asn Gln Ala Gly Gly Glu Tvr Arq180 185 190

Val Thr His Ala Asp Asp pro vai Pro Arg Leu Pro Pro Leu Ile Phe195 200 205Gly Tyr Arg His Thr Thr Pro Glu Phe Trp Leu Ser Gly Gly Glv Glv210 215 220

Asp Lys Val Asp Tyr Thr Ile Ser Asp Val Lys Val Cys Glu Gly Ala225 230 235 240

Ala Asn Leu Gly Cys Asn Gly Gly Thr Leu Gly Leu Asp Ile Ala Ala245 250 255

His Leu His Tyr Phe Gln Ala Thr Asp Ala Cys Asn Ala Gly Gly Phe260 265 270

ser Trp Arg Arg275

<210> 10

<211> 273

<212> PRT

<213> Fusarium heterosporum

<400> 10

Thr Val Thr Thr Gln Asp Leu ser Asn Phe Arg Phe Tyr Leu Gln His1 5 10 15

Ala Asp Ala Ala Tyr cys Asn Phe Asn Thr Ala vai Gly Lys Pro vai20 25 30

His Cys Ser Ala Gly Asn Cys Pro Asp Ile Glu Lys Asp Ala Ala Ile35 40 45

vai vai Gly ser vai vai Gly Thr Lys Thr Gly lie Gly Ala Tyr Val50 55 60

Ala Thr Asp Asn Ala Arg Lys Glu Ile Val vai ser Val Arg Gly Ser65 70 75 80

Ile Asn vai Arg Asn Trp Ile Thr Asn Phe Asn Phe Gly Gln Lys Thr85 90 95

Cys Asp Leu Val Ala Gly Cys Gly Val His Thr Gly Phe Leu Asp Ala100 105 110

Trp Glu Glu Val Ala Ala Asn vai Lys Ala Ala vai Ser Ala Ala Lys115 120 125

Thr Ala Asn Pro Thr Phe Lys Phe Val vai Thr Gly His Ser Leu Gly130 135 140

Gly Ala vai Ala Thr Ile Ala Ala Ala Tyr Leu Arg Lys Asp Gly Phe145 150 155 160

Pro Phe Asp Leu Tyr Thr Tyr Gly Ser Pro Arg vai Gly Asn Asp Phe165 170 175Phe Ala Asn Phe vai Thr Gln Gln Thr Gly Ala Glu Tyr Arq vai Thr180 185 190

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Tyr Phe Gln ser Met Ala Thr Cys Ala Pro Ile Ala Ile Pro Trp Lys260 265 270

Arg

<210> 11

<211> 278

<212> PRT

<213> Aspergillus oryzae

<400> 11

Asp Ile Pro Thr Thr Gln Leu Glu Asp Phe Lys Phe Trp Val Gln Tyr1 5 10 15

Ala Ala Ala Thr Tyr Cys Pro Asn Asn Tyr vai Ala Lys Asp Gly Glu20 25 30

Lys Leu Asn Cys Ser vai Gly Asn Cys Pro Asp Val Glu Ala Ala Gly35 40 45

Ser Thr vai Lys Leu Ser Phe Ser Asp Asp Thr Ile Thr Asp Thr Ala50 55 60

Gly Phe vai Ala vai Asp Asn Thr Asn Lys Ala Ile vai Val Ala Phe65 70 75 80

Arg Gly ser Tyr Ser lie Arg Asn Trp Val Thr Asp Ala Thr Phe Pro85 90 95

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Trp Thr Ala Trp Lys vai Val Arg Asp Arg Ile Ile Lys Thr Leu Asp115 120 125Glu Leu Lys Pro Glu His ser Asp Tyr Lys Ile vai vai vai Glv His130 135 140

ser Leu Gly Ala Ala Ile Ala Ser Leu Ala Ala Ala asd Leu Ara Thr145 150 155 · 160

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Phe His ser His vai Trp Tyr Phe lie His Ala Asp Ala cys Lys Gly260 265 270

Pro Gly Leu Pro Leu Arg275

<210> 12

<211> 278

<212> PRT

<213> Penicillium camemberti

<400> 12

Asp Val Ser Thr ser Glu Leu Asp Gln Phe Glu Phe Trp Val Gln Tyr1 5 10 15

Ala Ala Ala ser Tyr Tyr Glu Ala Asp Tyr Thr Ala Gln vai Gly Asp20 25 30

Lys Leu Ser Cys Ser Lys Gly Asn Cys Pro Glu Val Glu Ala Thr Gly35 40 45

Ala Thr vai Ser Tyr Asp Phe Ser Asp Ser Thr lie Thr Asp Thr Ala50 55 60

Gly Tyr lie Ala vai Asp His Thr Asn ser Ala Val Val Leu Ala Phe65 70 75 80Arg Gly ser Tyr ser vai Arg Asn Trp vai Ala Asp Ala Thr Phe vai85 90 95

His Thr Asn Pro Gly Leu Cys Asp Gly Cys Leu Ala Glu Leu Gly Phe100 105 110

Trp ser ser Trp Lys Leu vai Arg Asp Asp lie lie Lys Glu Leu Lys115 120 125

Glu vai vai Ala Gln Asn Pro Asn Tyr Glu Leu vai Val vai Glv His130 135 140

Ser Leu Gly Ala Ala Val Ala Thr Leu Ala Ala Thr Asp Leu Arg Gly145 150 155 160

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Gly Asn Ala Ala Leu Ala Lys Tyr ile Thr Ala Gln Gly Asn Asn Phe180 185 190

Arg Phe Thr His Thr Asn Asp Pro Val Pro Lys Leu Pro Leu Leu ser195 200 205

Met Gly Tyr vai His vai ser Pro Glu Tyr Trp He Thr ser Pro Asn210 215 220

Asn Ala Thr Val Ser Thr Ser Asp He Lys vai Ile Asp Gly Asp vai225 230 235 240

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Glu Ala His xle Trp Tyr Phe vai Gln vai Asp Ala Gly Lys Gly Pro260 265 270

Gly Leu Pro Phe Lys Arg275

<210> 13

<211> 270

<212> PRT

<213> Aspergillus foetidus

<400> 13

Ser vai ser Thr ser Thr Leu Asp Glu Leu Gln Leu Phe Ala Gln Trp1 5 10 15

ser Ala Ala Ala Tyr cys ser Asn Asn Xle Asp ser Lys Asp ser Asn20 25 30Leu Thr cys Thr ATa Asn Ala Cys Pro Ser vai Glu Glu Ala Ser Thr35 40 45

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Gly Phe Leu Ala Ala Asp Asn Thr Asn Lys Arg Leu vai Val Ala Phe65 70 75 80

Arg Gly Ser Ser Thr Ile Glu Asn Trp Ile Ala Asn Leu Asp Phe Ile85 90 95

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Met Asp Phe Gly Phe ser Gln Pro Ser Pro Glu Tyr Trp lie Thr Ser210 215 220

Gly Asn Gly Ala Ser Val Thr Ala ser Asp lie Glu vai Ile Glu Gly225 230 235 240

Ile Asn Ser Thr Ala Gly Asn Ala Gly Glu Ala Thr Val Ser Val Leu245 250 255

Ala His Leu Trp Tyr Phe Phe Ala Ile Ser Glu cys Leu Leu260 265 270

<210> 14<211> 270<212> PRT

<213> Aspergillus niger<400> 14

Ser Val Ser Thr Ser Thr Leu Asp Glu Leu Gln Leu Phe Ser Gln Trp1 5 10 I5ser Ala Ala Ala Tyr cys ser Asn Asn He Asp Ser Asp Asp Ser Asn20 25 30

vai Thr cys Thr Ala Asp Ala Cys Pro Ser vai Glu Glu Ala Ser Thr35 40 45

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Gly Phe Leu Ala Ala Asp Asn Thr Asn Lys Arg Leu Val vai Ala Phe65 70 75 80

Arg Gly Ser Ser Thr Ile Lys Asn Trp Ile Ala Asp Leu Asp Phe Ile85 90 95

Leu Gln Asp Asn Asp Asp Leu cys Thr Gly Cys Lys Val His Thr Gly100 105 110

Phe Trp Lys Ala Trp Glu Ala Ala Ala Asp Asn Leu Thr ser Lys lie115 120 125

Lys ser Ãla Met Ser Thr Tyr Ser Gly Tyr Thr Leu Tyr Phe Thr Gly130 135 140

His Ser Leu Gly Gly Ala Leu Ala Thr Leu Gly Ala Thr vai Leu Arg145 150 155 160

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Met Asp Phe Gly Phe Ser Gln Pro Ser Pro Glu Tyr Trp Ile Thr Ser210 215 220

Gly Thr Gly Ala Ser Val Thr Ala Ser Asp Ile Glu Leu Ile Glu Gly225 230 235 240

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Ala His Leu Trp Tyr Phe Phe Ala Ile Ser Glu cys Leu Leu260 265 270

<210> 15<211> 269<212> PRT

<213> Aspergillus oryzae<400> 15

Asp vai Ser Ser Ser Leu Leu Asn Asn Leu Asp Leu Phe Ala Gln Tyr1 5 10 15

Ser Ala Ala Ala Tyr Cys Asp Glu Asn Leu Asn Ser Thr Gly Thr Lys20 25 30

Leu Thr Cys Ser Val Gly Asn Cys Pro Leu vai Glu Ala Ala Ser Thr35 40 45

Gln Ser Leu Asp Glu Phe Asn Glu Ser Ser Ser Tyr Gly Asn Pro Ala50 55 60

Gly Tyr Leu Ala Ala Asp Glu Thr Asn Lys Leu Leu vai Leu Ser Phe65 70 75 80

Arg Gly Ser Ala Asp Leu Ala Asn Trp Val Ala Asn Leu Asn Phe Gly85 90 95

Leu Glu Asp Ala Ser Asp Leu Cys Ser Gly Cys Glu vai His Ser Gly100 105 110

Phe Trp Lys Ala Trp ser Glu Ile Ala Asp Thr Ile Thr ser Lys vai115 120 125

Glu ser Ala Leu Ser Asp His ser Asp Tyr Ser Leu Val Leu Thr Gly130 135 140

His Ser Tyr Gly Ala Ala Leu Ala Ala Leu Ala Ala Thr Ala Leu Arg145 150 155 160

Asn Ser Gly His Ser Val Glu Leu Tyr Asn Tyr Gly Gln Pro Arg Leu165 170 175

Gly Asn Glu Ala Leu Ala Thr Tyr Ile Thr Asp Gln Asn Lys Gly Gly180 185 190

Asn Tyr Arg Val Thr His Thr Asn Asp Ile Val Pro Lys Leu Pro Pro195 200 205

Thr Leu Leu Gly Tyr His His Phe ser Pro Glu Tyr Tyr Ile ser ser210 215 220

Ala Asp Glu Ala Thr vai Thr Thr Thr Asp Val Thr Glu Val Thr Gly225 230 235 240

Ile Asp Ala Thr Gly Gly Asn Asp Gly Thr Asp Gly Thr ser Ile Asp245 250 255Ala His Arg Trp Tyr Phe Ile Tyr lie ser Glu Cys Ser260 265

<210> 16<211> 251<212> PRT

<213> Landerina penisapora<400> 16

Pro Gln Asp Ala Tyr Thr Ala Ser His Ala Asp Leu vai Lys Tyr Ala1 5 10 15

Thr Tyr Ala Gly Leu Ala Tyr Gln Thr Thr Asp Ala Trp Pro Ala Ser20 25 30

Arg Thr vai Pro Lys Asp Thr Thr Leu Ile ser ser Phe Asp His Thr35 40 45

Leu Lys Gly ser ser Gly Tyr lie Ala Phe Asn Glu Pro Cys Lys Glu50 55 60

Ile lie Vãl Ala Tyr Arg Gly Thr Asp Ser Leu Ile Asp Trp Leu Thr65 70 75 80

Asn Leu Asn Phe Asp Lys Thr Ala Trp Pro Ala Asn Ile Ser Asn Ser85 90 95

Leu vai His Glu Gly Phe Leu Asn Ala Tyr Leu Val Ser Met Gln Gln100 105 110

Val Gln Glu Ala Val Asp Ser Leu Leu Ala Lys Cys Pro Asp Ala Thr115 120 125

Ile ser Phe Thr Gly His Ser Leu Gly Gly Ala Leu Ala Cys lie Ser130 135 140

Met Val Asp Thr Ala Gln Arg His Arg Gly Ile Lys Met Gln Met Phe145 150 155 160

Thr Tyr Gly Gln Pro Arg Thr Gly Asn Gln Ala Phe Ala Glu Tyr vai165 170 175

Glu Asn Leu Gly His Pro Val Phe Arg Val Val Tyr Arg His Asp Ile180 185 190

vai Pro Arg Met Pro Pro Met Asp Leu Gly Phe Gln His His Gly Gln195 200 205

Glu vai Trp Tyr Glu Gly Asp Glu Asn Ile Lys Phe Cys Lys Gly Glu210 215 220

Gly Glu Asn Leu Thr Cys Glu Leu Gly vai Pro Phe Ser Glu Leu Asn225 230 235 240

Ala Lys Asp His Ser Glu Tyr Pro Gly Met His245 250Alinhamento das Seqüêcias de Lipase

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ID NO Bi GL DILAHITYF QSMAT CAPIAXPWK

ID NO 9: GGLPDLLAFHSHVWYF IHADACKGPGLPLR

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ID NO 11; TV SVLAHLWYF FAISE CLL

ID NO 12: TV DVLAHLWYF FAISE CLL

ID NO 13 J GT SXDAKRWYF IYISB CS

ID NO 14: IP DIPAHLWYF GLIGT CL

ID NO 15 : FSEL NAKDHSEYP GKBi

RRID Ng:_Microorganismo__SEQ ID N-:

1. Absidia reflexa 3

2. Absfdia corymblfera 4

3. Rhizmucor miehei 5

4. Rhizopus detemar (oryzea) 6

5. Aspergftfus niger 7

6. AspergiHustubingensis β

7. Fusarfum oxysporum 9

8. Fusarfumheterosporum 10

9. Asperglllus oryzae 11

10. Penicflium camembertU 12

11. AspergJtiusfoetidus 13

12 Aspergitiusniger . 14

13. AspergHfus oryzea 15

14. Thermomyces lanuginosus 2

15. Landerina penisapora -jg

Claims (29)

1. Composição, compreendendo um agente de matiz para teci-dos e uma variante de uma Iipase original, a dita variante, quando compara-da à dita Iipase original, compreende um total de pelo menos três substitui-ções, as quais são selecionadas de um ou mais dos seguintes grupos desubstituições:a) pelo menos duas substituições na Região I,b) pelo menos uma substituição na Região II,c) pelo menos uma substituição na Região III, e/oud) pelo menos uma substituição na Região IV.

2. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 1,em que pelo menos duas substituições na Região I da Iipase original com-preendem substituições nas posições correspondentes a 231 e 233.

3. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 2,em que os aminoácidos da Iipase original nas posições correspondentes a 231 e 233 são substituídos por um R.

4. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 2,em que a dita variante compreende uma substituição na posição correspon-dente a 4 da SEQ. ID ne 2.

5. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 4,em que a dita substituição na posição correspondente a 4 da SEQ. ID n9 2 é V.

6. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 2,em que a dita variante compreende uma substituição na posição correspon-dente a 227 da SEQ. ID n9 2.

7. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 6,em que a dita substituição na posição correspondente a 227 da SEQ. ID n9 2éG.

8. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 1,em que pelo menos uma substituição na Região II da Iipase original compre-ende substituições selecionadas do grupo consistindo em substituições nasposições correspondentes a 202, 211, 255 e 256.

9. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 8,em que pelo menos uma substituição na Iipase original é selecionada dogrupo consistindo em X202G, X211L, X255Y/V e X256K.

10. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 1,em que a dita pelo menos uma substituição na Região Il compreende umasubstituição na posição correspondente a 210.

11. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 10,em que a posição correspondente a 210 compreende X210K.

12. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 1,em que pelo menos uma substituição na Região Ill da Iipase original com-preende substituições selecionadas do grupo consistindo em substituiçõesnas posições correspondentes a 86 e 90.

13. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 12,em que pelo menos uma substituição na Iipase original é selecionada dogrupo consistindo em X86V e X90A/R.

14. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 1,em que a dita pelo menos uma substituição na Região Ill compreende umasubstituição da posição correspondente a 83.

15. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 14,em que a posição correspondente a 83 compreende X83T.

16. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 1,em que pelo menos uma substituição na Região IV da Iipase original com-preende substituições selecionadas do grupo consistindo em substituiçõesnas posições correspondentes a 27, 58 e 60.

17. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 16,em que pelo menos uma substituição na Iipase original é selecionada dogrupo consistindo em X27R, X58N/A/G/P/T e X60S/V/G/N/R/K/A/L.

18. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 1,em que a Iipase original compreende, ainda, pelo menos uma substituiçãofora das Regiões de I a IV definidas.

19. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 18,em que pelo menos uma substituição na Iipase original é selecionada dogrupo consistindo em substituições nas posições correspondentes a 81, 147,-150 e 249.

20. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 18,em que pelo menos uma substituição na Iipase original é selecionada dogrupo consistindo em X81 Q/E, X1 AlUIY, X150G e X249R/I/L.

21. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 2,em que a Iipase original é pelo menos 90% idêntica à SEQ. ID ne 2.

22. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 1,em que a Iipase original é idêntica à SEQ. ID nQ 2, sendo que a dita variantecompreende um dos seguintes grupos de substituições:a) T231R + N233R + I255Yb) I202G + T231R + N233Rc) I86V + L227G + T231R + N233R + P256Kd) Q4V + S58N + V60S + T231R + N233Re) S58N + V60S + I90R + T231R + N233Rf) I90A + T231R + N233R + I255Vg) S58N + V60S + I86V + A150G + L227G + T231R + N233R + P256Kh) S58N + V60S + L147M + F211L + T231R + N233Ri) Q4V + S58A + V60S + S83T + I86V + A150G + E210K +L227G + T231R + N233R + P256Kj) S58N + V60S + I86V + A150G + L227G + T231R + N233R +P256K.

23. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 1,em que a Iipase original é idêntica à SEQ. ID n9 2, em que a dita variantecompreende um dos seguintes grupos de substituições:a) Q4V + S58A + V60S + S83T + I86V + A150G + E210K +L227G + T231R + N233R + P256Kb) S58N + V60S + I86V + A150G + L227G + T231R + N233R +P256K.

24. Composição detergente, de acordo com a reivindicação 1,em que a variante de Iipase apresenta uma relação risco/benefício, quandomedida conforme apresentado no relatório descritivo, maior que 1.

25. Composição detergente, que compreende um agente dematiz para tecidos e um polipeptídeo com atividade de lipase, tendo aindaum desempenho relativo médio de pelo menos 0,8 e uma relação ris-co/benefício de pelo menos 1,1 sob as condições de teste apresentadas norelatório descritivo.

26. Composição, de acordo com a reivindicação 1, que com-preende de 0,1 a 40% de tensoativo aniônico.

27. Composição, de acordo com a reivindicação 26, em que adita composição é uma composição de limpeza e/ou tratamento.

28. Processo para limpeza e/ou tratamento de uma superfícieou tecido, que compreende as etapas de, opcionalmente, lavar e/ou enxa-guar a dita superfície ou o dito tecido, colocar a dita superfície ou o dito teci-do em contato com a composição como definida na reivindicação 1 e, então,opcionalmente lavar e/ou enxaguar a dita superfície ou o dito tecido.

29. Composição, de acordo com a reivindicação 1, em que a di-ta variante de lipase é uma variante da SEQ. ID n9 2 compreendendo pelomenos uma das mutações Q4V, S58N/A/G/P/T, I90R ou Q249I/L.