BR112020008737A2

BR112020008737A2 - polipeptídeos e composições que compreendam tais polipeptídeos

Info

Publication number: BR112020008737A2
Application number: BR112020008737-8A
Authority: BR
Inventors: Rebecca Munk Vejborg; Dorotea Raventos Segura; Jesper Salomon; Johanne M Jensen; Rune Nygaard Monrad; Anne Vindum Due; Martin Gudmand
Original assignee: Novozymes A/S
Priority date: 2017-11-01
Filing date: 2018-10-31
Publication date: 2020-10-13
Also published as: US11767492B2; WO2019086530A1; US20200308511A1; US20240010955A1; CN111527190A; EP3704219B1; EP3704219C0; EP3704219A1

Abstract

A presente invenção se relaciona com composições tais como composições de limpeza compreendendo enzimas. A invenção se relaciona adicionalmente uso de composições compreendendo tais enzimas em processos de limpeza.

Description

“POLIPEPTÍDEOS E COMPOSIÇÕES QUE COMPREENDAM TAIS POLIPEPTÍDEOS” Referência a uma Listagem de Sequências

[0001] Este pedido contém uma Listagem de sequências em formato legível por computador, que é incorporada aqui por referência. Antecedentes da Invenção

[0002] A presente invenção se refere a composições, tais como composições de limpeza compreendendo enzimas possuindo atividade de hexosaminidase, tais como dispersinas, obtidas a partir de Lactobacillus ou Streptococcus. A invenção se refere ainda a métodos e uso de composições compreendendo essas enzimas em processos de limpeza, por exemplo, para remoção de manchas. Descrição da Técnica Relacionada

[0003] As enzimas têm sido usadas em detergentes durante décadas. Usualmente, um cocktail de várias enzimas é adicionado a composições detergentes. O cocktail de enzimas compreende frequentemente várias enzimas, em que cada enzima tem como alvo um substrato específico, por exemplo, as amilases são ativas na direção de manchas de amido, as proteases em manchas de proteína e assim por diante. A superfície têxtil e as superfícies duras, tal como loiça ou o espaço interno de uma máquina de lavar roupa que suporta vários ciclos de lavagem, ficam sujas com muitos tipos diferentes de sujidade que podem compor proteínas, gorduras, amido etc. Um tipo de mancha pode compor matéria orgânica, tais como detritos celulares, biofilme, EPS, etc. Os polipeptídeos com atividade de hexosaminidase incluem Dispersinas, tais como Dispersina B (DspB), que são descritas como β-N-acetilglucosaminidases pertencentes à família de Glicosídeo Hidrolases 20. WO04061117 A2 (Kane Biotech INC) descreve o uso de composições que compreendem DspB para reduzir e impedir o biofilme causado por bactérias produtoras de poli-N-

acetilglucosamina, e Kane et al. descrevem o uso de composições que compreendem dispersinas para reduzir o biofilme em dispositivos médicos e para cuidado de ferimentos. O pedido WO9850512 (Procter e Gamble) revela produtos para lavagem de roupa e limpeza que compreendem uma ou mais enzimas hexosaminidase. A presente invenção fornece enzimas adequadas para uso em detergentes e para limpeza profunda de itens durante o processo de lavagem de roupa e limpeza. Sumário da Invenção

[0004] Um primeiro aspecto da invenção se refere a uma composição compreendendo uma hexosaminidase de Lactobacillus ou Streptococcus, em que a composição compreende ainda; (a) i. um ou mais polióis, de preferência, selecionados dentre glicerol, (mono, di ou tri) propilenoglicol, etilenoglicol, polietilenoglicol, álcoois de açúcar, sorbitol, manitol, eritritol, dulcitol, inositol, xilitol e adonitol, ii. opcionalmente, uma ou mais enzimas, de preferência, selecionadas dentre proteases, amilases ou lipases, iii. opcionalmente, um ou mais tensoativos, de preferência, selecionados dentre tensoativos aniônicos e não iônicos, iv. opcionalmente um ou mais polímeros; ou (b) um grânulo que compreende i. um núcleo compreendendo uma hexosaminidase de Lactobacillus ou Streptococcus e, opcionalmente, ii. um revestimento que consiste em uma ou mais camadas que circundam o núcleo.

[0005] A hexosaminidase possui preferencialmente atividade de N-acetilglucosaminidase, preferencialmente atividade de β-1,6 N-acetilglucosaminidase

[0006] A presente invenção se refere a uma composição de limpeza compreendendo pelo menos 0,01 mg de hexosaminidase de Lactobacillus e um componente de limpeza, em que o componente de limpeza é (a) pelo menos um tensoativo; (b) pelo menos um formador, ou (c) pelo menos um polímero.

[0007] A invenção se relaciona adicionalmente com o uso de uma composição, de acordo com a invenção para limpeza de um item, em que o item é um têxtil ou uma superfície.

[0008] A invenção se refere ainda ao uso de uma composição de acordo com a invenção, de preferência uma composição de limpeza, tal como uma composição detergente compreendendo uma hexosaminidase de Lactobacillus, a) para prevenir, reduzir ou remover a pegajosidade do item; b) para pré-tratar manchas no item; c) para prevenir, reduzir ou remover a redeposição de sujidade durante um ciclo de lavagem; d) para prevenir, reduzir ou remover a aderência de sujidade ao item; e) para manter ou melhorar a brancura do item; f) para prevenir, reduzir ou remover o mau odor do produto, em que o item é um têxtil.

[0009] A invenção se relaciona adicionalmente com um método de formulação de uma composição de limpeza compreendendo adição de uma hexosaminidase de Lactobacillus e pelo menos um componente de limpeza.

[0010] A invenção se refere a um kit destinado para a limpeza, em que o kit compreende uma solução de uma mistura de enzima compreendendo hexosaminidase de Lactobacillus, e uma enzima adicional selecionada a partir de proteases, amilases, celulases e lipases.

[0011] A invenção se refere ainda a um método de tratamento de um tecido compreendendo; (a) entrar em contato com o tecido com uma solução aquosa de hexosaminidase de Lactobacillus; (b) e opcionalmente enxaguando e secando o tecido.

[0012] A invenção se refere a um método para limpar ou lavar um item que compreende as etapas de: (a) expor um item a um licor de lavagem compreendendo uma hexosaminidase de Lactobacillus da invenção ou uma composição detergente compreendendo uma hexosaminidase de Lactobacillus; (b) completar pelo menos um ciclo de lavagem; e (c) enxaguar opcionalmente o item, em que o item é um tecido. Breve Descrição das Figuras

[0013] Figura 1. Em um aspecto, os polipeptídeos da invenção, por exemplo, pertencem todos ao clado Lactobacillus, que é ilustrado como uma árvore filogenética na Figura 1. O clado Lactobacillus ou clado de Lactobacillus é um grupo de enzimas que são todas relacionadas ao mesmo ancestral e compartilham propriedades comuns da ordem taxonômica Lactobacillales. Os polipeptídeos que formam um grupo dentro do clado (um subclado) da árvore filogenética podem também compartilhar propriedades comuns e estão mais proximamente relacionados do que outros polipeptídeos no clado. Figura 2 Um alinhamento dos polipeptídeos de Lactobacillus da invenção. Visão geral das sequências do clado Lactobacillus

[0014] SEQ ID NO 1 é o DNA que codifica o polipeptídeo de comprimento total de Lactobacillus paraplantarum DSM 10667

[0015] SEQ ID NO 2 é o polipeptídeo derivado da SEQ ID NO 1

[0016] SEQ ID NO 3 é o polipeptídeo maduro da SEQ ID NO 2

[0017] SEQ ID NO 4 é o DNA que codifica o polipeptídeo de comprimento total de Lactobacillus apinorum

[0018] SEQ ID NO 5 é o polipeptídeo derivado da SEQ ID NO 4

[0019] SEQ ID NO 6 é o polipeptídeo maduro da SEQ ID NO 5

[0020] SEQ ID NO 7 é o DNA que codifica o polipeptídeo de comprimento total de Lactobacillus paraplantarum

[0021] SEQ ID NO 8 é o polipeptídeo derivado da SEQ ID NO 7

[0022] SEQ ID NO 9 é o polipeptídeo maduro da SEQ ID NO 8

[0023] SEQ ID NO 10 é o sinal de secreção de Bacillus clausii

[0024] SEQ ID NO 11 é uma sequência de etiqueta His

[0025] SEQ ID NO 12 é o motivo de polipeptídeo GXDE

[0026] SEQ ID NO 13 é o motivo de polipeptídeo [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN]

[0027] SEQ ID NO 14 é o motivo de polipeptídeo [VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]

[0028] SEQ ID NO 15 é o motivo de polipeptídeo [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L

[0029] SEQ ID NO 16 é o DNA que codifica o polipeptídeo de comprimento total de Streptococcus merionis

[0030] SEQ ID NO 17 é o polipeptídeo derivado da SEQ ID NO 16

[0031] SEQ ID NO 18 é o polipeptídeo maduro da SEQ ID NO 17 Descrição Detalhada da Invenção

[0032] Várias enzimas são aplicadas em processos de limpeza visando cada uma tipos específicos de sujidade, tais como sujidade de proteína, amido e gordura. As enzimas são ingredientes padrão em detergentes para lavagem de roupa e lavagem de louça. A eficácia destas enzimas comerciais proporciona detergentes que removem muita da sujidade. No entanto, manchas orgânicas tais como EPS (substância polimérica extracelular) compreendida em grande parte do biofilme constituem um tipo desafiador de sujidade devido à natureza complexa de tais matérias orgânicas. A EPS é maioritariamente composta por polissacarídeos (exopolissacarídeos), por exemplo, PNAG (poli-N- acetilglucosamina) e proteínas, mas inclui outras macromoléculas tais como eDNA, lipídeos e outras substâncias orgânicas. As manchas orgânicas, como biofilme ou seus componentes, tais como PNAG podem ser pegajosas ou coladoras, que, quando presentes em têxteis, pode dar origem a redeposição ou contracoloração de sujidade resultando em um acinzentamento do têxtil. Adicionalmente, quando itens de roupa sujos são lavados em conjunto com itens de roupa menos sujos, a sujidade presente no licor de lavagem tende a aderir às manchas orgânicas, por exemplo, biofilme ou componentes de biofilme como um resultado, assim o item de roupa fica mais “sujo” após a lavagem do que antes da lavagem. Este efeito pode ser também denominado redeposição. Outra desvantagem das manchas orgânicas é o mau cheiro, pois várias moléculas relacionadas ao mau cheiro são frequentemente associadas a manchas orgânicas, tal como o biofilme.

[0033] A presente invenção se refere a polipeptídeos, o uso, os métodos e a composição compreendendo hexosaminidases, de preferência, obtidos a partir da ordem taxonômica de Lactobacillales, de preferência do gênero Lactobacillus. Os termos "hexosaminidase de Lactobacillus" e " hexosaminidase obtida a partir de Lactobacillus” podem ser aqui utilizados de forma intercambiável. A presente invenção se refere ainda a polipeptídeos, o uso, os métodos e composição compreendendo hexosaminidases obtidas a partir da ordem taxonômica de Streptococcus. Os termos “hexosaminidase de Streptococcus" e "hexosaminidase obtida a partir de Streptococcus" podem ser aqui utilizados de forma intercambiável.

[0034] As hexosaminidases são preferencialmente dispersinas e compreendem a atividade de N-acetilglucosaminidase e/ou β- 1,6-N-acetilglucosamininidase. Polipeptídeos tendo atividade de hexosaminidase

[0035] Hexosaminidase: O termo "hexosaminidases" significa um polipeptídeo que tem atividade de hexosaminidase (hexosaminidases) e inclui EC 3.2.1., por exemplo, que catalisa a hidrólise de polímeros de N-acetil-D-hexosamina ou N-acetil-glucosamina encontrados, por exemplo, em biofilme. O termo inclui dispersinas e inclui polipeptídeos que têm atividade de N-acetilglucosaminidase e atividade de β-1,6 N-acetilglucosaminidase. O termo "polipeptídeo que tem atividade de hexosaminidase" pode ser usado de forma intercambiável com o termo hexosaminidases e, similarmente, o termo "polipeptídeo que tem atividade de beta-1,6-N-acetilglucosaminidase" pode ser usado de forma intercambiável com o termo beta-1,6-N-acetilglucosamininidases. Para os fins da presente invenção, a atividade de hexosaminidase pode ser determinada acordo com o procedimento descrito no Ensaio I ou tal como descrito no Exemplo 11.

[0036] Dispersina: O termo "dispersina" e as abreviaturas "Dsp" ou "Disp” significam um polipeptídeo que tem atividade de hexosaminidase, EC 3.2.1.- que catalisa a hidrólise de ligações β-1,6- glicosídicas de polímeros de N-acetil-glucosamina (poli-N-acetilglucosamina, PNAG) encontrados, por exemplo, em biofilme. Assim, dispersinas é uma enzima que possui atividade beta-1,6 N-acetilglucosaminidase.

[0037] Em um aspecto preferido, o polipeptídeo da invenção está compreendido em um clado específico de hexosaminidases. Este clado é no presente contexto denominado Lactobacillus, uma vez que as hexosaminidases do clado são obtidas a partir de bactérias da ordem taxonômica de Lactobacillales, preferencialmente do gênero Lactobacillus. O termo hexosaminidase de Lactobacillus significa hexosaminidases obtidas da ordem taxonômica de Lactobacillales, de preferência do gênero Lactobacillus. Para propósitos da presente invenção, o termo “obtido a partir de”, como usado no presente documento em conexão com uma dada fonte, significará que o polipeptídeo codificado por um polinucleotídeo é produzido pela fonte ou por uma estirpe na qual o polinucleotídeo da fonte foi inserido. Em um aspecto, o polipeptídeo obtido a partir de uma dada fonte é secretado extracelularmente. A árvore filogenética do clado Lactobacillus é mostrada na Figura 1. Os polipeptídeos da invenção são preferencialmente obtidos de Lactobacillus paraplantarum ou Lactobacillus apinorum.

[0038] Em outro aspecto, um polipeptídeo da invenção é obtido a partir de Streptococcus, de preferência Streptococcus merionis. O termo hexosaminidase de Streptococcus significa hexosaminidases obtidas do gênero Streptococcus.

[0039] Os polipeptídeos, por exemplo, aqueles compreendidos no clado Lactobacillus encontram utilização em processos de limpeza e composições de acordo com a invenção, são listados na tabela a seguir. As hexosaminidases da Tabela 1 têm atividade beta-1,6-N-

acetilglucosaminidase e são, portanto, dispersinas.

Verificou-se que as dispersinas deste grupo são particularmente úteis na limpeza de manchas orgânicas, por exemplo, PNAG de têxteis.

Em particular, dispersinas da Tabela 1 podem ser formuladas em composições, por exemplo composições de limpeza, compreendendo um dispersina obtida a partir de Lactobacillus e um detergente adjunto.

Os polipeptídeos e composições da invenção são úteis em processos de limpeza, tais como lavagem de roupa e/ou são úteis para redução, remoção ou prevenção de biofilme e/ou remoção de manchas de PNAG, por exemplo, de tecidos e superfícies duras.

Tabela 1 Polipeptídeos de hexosaminidase com atividade beta-1,6N- acetilglucosaminidase compreendida no clado Lactobacillus SEQ ID NO 3 Lactobacillus paraplantarum DSM 10667 SEQ ID NO 6 Lactobacillus apinorum SEQ ID NO 9 Lactobacillus paraplantarum UniProtKB/TrEMBL Dispersinas adicionais J0WBI2 Weissella koreensis KCTC 3621 A0A0P7K1K0 Lactobacillus kunkeei A0A0P7K6J6 Lactobacillus kunkeei U2W2U5 Lactobacillus plantarum AY01 A0A1L8CGI0 Lactobacillus kunkeei A0A0P7K6Q2 Lactobacillus kunkeei A0A098R6U2 Lactobacillus paraplantarum A0A0P7LTY5 Lactobacillus kunkeei A0A0M9D336 Lactobacillus kunkeei A0A0R1JY61 Lactobacillus namurensis DSM 19117 A0A0C3AIW4 Lactobacillus kunkeei A0A0M9DBA3 Lactobacillus kunkeei

A0A0N0CT29 Lactobacillus kunkeei A0A0M9D5K5 Lactobacillus kunkeei A0A0R2DG13 Lactobacillus senmaizukei DSM 21775 A0A0R1R2Q4 Lactobacillus spicheri DSM 15429 A0A0C3AFN0 Lactobacillus kunkeei A0A0P7K1E6 Lactobacillus kunkeei A0A0M9D3N9 Lactobacillus apinorum A0A0R1LK94 Lactobacillus acidifarinae DSM 19394 A0A0H4QX26 Lactobacillus koreensis A0A0R1FXP4 Lactobacillus kunkeei DSM 12361 A0A179CPD2 Lactobacillus aviarius A0A063B938 Lactobacillus kunkeei EFB6 F8I121 Weissella koreensis A0A0R1LJ27 Lactobacillus koreensis JCM 16448 A0A1I4IHB3 Lactococcus garvieae A0A0P7JVB0 Lactobacillus kunkeei A0A1L8CFQ3 Lactobacillus kunkeei A0A0R1FZT1 Lactobacillus kunkeei DSM 12361 A0A179CK20 Lactobacillus aviarius A0A0F3RXX7 Lactobacillus spicheri A0A0R2M4L4 Lactobacillus xiangfangensis A0A0R1MNG9 Lactobacillus zymae DSM 19395 A0A0M9DB36 Lactobacillus kunkeei A0A0R1ZKJ9 Lactobacillus aviarius subsp. araffinosus DSM 20653 A0A0P7JT37 Lactobacillus kunkeei

A0A0R2LE82 Lactobacillus paucivorans A0A087EP61 Lactobacillus kunkeei A0A0M9DF88 Lactobacillus kunkeei A0A0R2AM78 Lactobacillus ozensis DSM 23829 A0A199QF96 Lactobacillus plantarum A0A0M9DF94 Lactobacillus kunkeei A0A179C4R7 Lactobacillus aviarius A0A0R1R622 Lactobacillus paraplantarum DSM 10667 A0A1Y6JTN4 Lactobacillus zymae A0A0R1YHA3 Lactobacillus aviarius subsp. aviarius DSM 20655

[0040] As hexosaminidases da invenção podem ser divididas em grupos de clados ou domínios caracterizados por os seus motivos. Um aspecto da invenção se refere a hexosaminidases, por exemplo dispersina compreendida no clado FQS. Este clado não foi descrito anteriormente. O clado é chamado de FQS e os polipeptídeos desse domínio compreendem os polipeptídeos de domínio Glyco_hydro_20, de origem bacteriana e são, adicionalmente a terem atividade de PNAG, caracterizados por compreenderem determinados motivos. Os polipeptídeos do clado compreendem o motivo: [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID NO 13), correspondente a EHLCFQS na posição 48 a 54 de SEQ ID NO 3.

[0041] Um aspecto da invenção se refere a hexosaminidases, por exemplo dispersinas compreendidas no clado GADE. Este clado não foi descrito anteriormente. Os polipeptídeos deste clado compreendem os polipeptídeos de domínio Glyco_hydro_20, de origem bacteriana e são, adicionalmente a terem atividade de PNAG, caracterizados por compreenderem determinados motivos. Os polipeptídeos do clado compreendem o exemplo de motivo [VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (SEQ ID NO 14), que corresponde à posição 151 a 158 da SEQ ID NO 3, em que G e DE (que corresponde às posições 153 e 155-156 da SEQ ID NO 3) são completamente conservados em clado GADE e parte do sítio ativo. Os resíduos D e E são os resíduos catalíticos chave de enzimas Glyco_hydro_20 (posição 155 a 156 na SEQ ID NO 3).

[0042] Um aspecto da invenção se refere a hexosaminidases, por exemplo dispersinas compreendidas no clado GAIL. Este clado não foi descrito anteriormente. Os polipeptídeos deste clado compreendem os polipeptídeos de domínio Glyco_hydro_20, de origem bacteriana e são, adicionalmente a terem atividade de PNAG, caracterizados por compreenderem determinados motivos. Os polipeptídeos do clado compreendem o motivo [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L (SEQ ID NO 15), que corresponde à pos 96 a 102 da SEQ ID NO 3, onde A e L (correspondendo às posições 97 e 102 da SEQ ID NO 3) são completamente conservados em clado GAIL e parte do sítio ativo.

[0043] Em um aspecto da invenção, a hexosaminidase, por exemplo, dispersinas, compreende um ou mais dos seguintes motivos GXDE (SEQ ID NO 12), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID NO 13), [VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (SEQ ID NO 14), ou [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L (SEQ ID NO 15). Em um aspecto, as hexosaminidases compreendem o motivo GXDE. Num aspecto, as hexosaminidases compreendem o motivo [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN]. Num aspecto, as hexosaminidases compreendem o motivo [VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]. Num aspecto, as hexosaminidases compreendem o motivo [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L.

[0044] Em um aspecto, a hexosaminidase compreende todos os quatro motivos GXDE (SEQ ID NO 12),

[EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID NO 13), [VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (SEQ ID NO 14), ou [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L (SEQ ID NO 15).

[0045] Em um aspecto, a hexosaminidase compreende os dois motivos GXDE (SEQ ID NO 12) e [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID NO 13).

[0046] Em um aspecto, a hexosaminidase compreende os três motivos GXDE (SEQ ID NO 12), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID NO 13) e [VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (SEQ ID NO 14). Em um aspecto, a hexosaminidase compreende os três motivos GXDE (SEQ ID NO 12), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID NO 13) e [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L (SEQ ID NO 15).

[0047] Um alinhamento dos polipeptídeos da invenção é mostrado na Figura 2. Uma árvore filogenética dos polipeptídeos da invenção é mostrada na Figura 1.

[0048] Um polipeptídeo da presente invenção possui preferencialmente uma identidade de sequência com a sequência polipeptídica madura mostrada na SEQ ID NO: 3 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80 %, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100%, em que o polipeptídeo possui hexosaminidase, preferencialmente atividade beta-1,6- N-acetilglucosaminidase. Em um aspecto, o polipeptídeo difere por até 10 aminoácidos, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, a partir do polipeptídeo apresentado na SEQ ID NO: 3.

[0049] Um polipeptídeo da presente invenção possui preferencialmente uma identidade de sequência com a sequência polipeptídica madura mostrada na SEQ ID NO: 6 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80 %, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100%, em que o polipeptídeo possui hexosaminidase, preferencialmente atividade beta-1,6- N-acetilglucosaminidase. Em um aspecto, o polipeptídeo difere por até 10 aminoácidos, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, a partir do polipeptídeo apresentado na SEQ ID NO: 6.

[0050] Um polipeptídeo da presente invenção possui preferencialmente uma identidade de sequência com a sequência polipeptídica madura mostrada na SEQ ID NO: 9 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80 %, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100%, em que o polipeptídeo possui hexosaminidase, preferencialmente atividade beta-1,6- N-acetilglucosaminidase. Em um aspecto, o polipeptídeo difere por até 10 aminoácidos, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, a partir do polipeptídeo apresentado na SEQ ID NO: 9.

[0051] Um polipeptídeo da presente invenção possui preferencialmente uma identidade de sequência com a sequência polipeptídica madura mostrada na SEQ ID NO: 18 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80 %, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100%, em que o polipeptídeo possui hexosaminidase, preferencialmente atividade beta-1,6- N-acetilglucosaminidase. Em um aspecto, o polipeptídeo difere por até 10 aminoácidos, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, a partir do polipeptídeo apresentado na SEQ ID NO: 18.

[0052] Em uma modalidade, a presente invenção se refere a um polipeptídeo com uma identidade de sequências com o polipeptídeo maduro da SEQ ID NO: 9 de pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100%, em que o polipeptídeo tem atividade de hexosaminidase, preferencialmente de beta-1,6N-acetilglucosaminidase. Em um aspecto, os polipeptídeos diferem em até 10 aminoácidos, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, do polipeptídeo maduro da SEQ ID NO: 9. Em uma modalidade, o polipeptídeo foi isolado. Um polipeptídeo da presente invenção preferencialmente compreende a ou consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 9 ou uma sua variante alélica; ou é um seu fragmento tendo hexosaminidase, preferencialmente atividade beta-1,6-N- acetilglucosaminidase. Em outro aspecto, o polipeptídeo compreende o ou consiste no polipeptídeo maduro da SEQ ID NO: 8. Em outro aspecto, o polipeptídeo compreende os ou consiste nos aminoácidos 1 a 331 da SEQ ID NO: 8. Em outra modalidade, a presente invenção se refere a um polipeptídeo tendo atividade de beta-1,6 N-acetilglucosaminidase codificado por um polinucleotídeo tendo uma identidade de sequência com a sequência codificadora do polipeptídeo maduro da SEQ ID NO: 7 de pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100%. Em uma modalidade adicional, o polipeptídeo foi isolado.

[0053] Em uma modalidade, a presente invenção se refere a um polipeptídeo com uma identidade de sequências com o polipeptídeo maduro da SEQ ID NO: 18 de pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97% pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100%, em que o polipeptídeo tem atividade de hexosaminidase, preferencialmente de beta-1,6 N-acetilglucosaminidase.

Em um aspecto, os polipeptídeos diferem em até 10 aminoácidos, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, do polipeptídeo maduro da SEQ ID NO: 18. Em uma modalidade, o polipeptídeo foi isolado. Um polipeptídeo da presente invenção preferencialmente compreende a ou consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 18 ou uma sua variante alélica; ou é um seu fragmento tendo hexosaminidase, preferencialmente atividade beta-1,6-N-acetilglucosaminidase. Em outro aspecto, o polipeptídeo compreende o ou consiste no polipeptídeo maduro da SEQ ID NO: 17. Em outro aspecto, o polipeptídeo compreende os ou consiste nos aminoácidos 1 a 482 da SEQ ID NO: 17. Em outra modalidade, a presente invenção se refere a um polipeptídeo tendo atividade de beta-1,6 N-acetilglucosaminidase codificado por um polinucleotídeo tendo uma identidade de sequência com a sequência codificadora do polipeptídeo maduro da SEQ ID NO: 16 de pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100%. Em uma modalidade adicional, o polipeptídeo foi isolado.

[0054] A relação entre duas sequências de aminoácidos ou entre duas sequências de nucleotídeos é descrita pelo parâmetro "identidade de sequência".

[0055] Para propósitos da presente invenção, a identidade de sequências entre duas sequências de aminoácidos é determinada com o uso do algoritmo de Needleman-Wunsch (Needleman e Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443-453) como implementado no programa Needle do pacote EMBOSS (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, Trends Genet. 16: 276-277), de preferência a versão 5.0.0 ou posterior. Os parâmetros usados são penalidade de abertura de lacunas de 10, penalidade de extensão de lacunas de 0,5 e a matriz de substituição

EBLOSUM62 (versão EMBOSS de BLOSUM62). O resultado de Needle identificado como “identidade mais longa” (obtido usando a opção –nobrief) é usado como a identidade percentual e é calculado da seguinte forma: (Resíduos Idênticos x 100)/(Comprimento do Alinhamento – Número Total de Intervalos no Alinhamento).

[0056] Os aminoácidos essenciais em um polipeptídeo podem ser identificados de acordo com procedimentos conhecidos na técnica, tais como mutagênese sítio-dirigida ou mutagênese de varredura por alanina (Cunningham e Wells, 1989, Science 244: 1081-1085). Nesta última técnica, mutações de alanina simples são introduzidas em todos os resíduos da molécula, e as moléculas resultantes são testadas quanto à atividade de hexosaminidase para identificar resíduos de aminoácidos que são críticos para a atividade da molécula. Ver também, Hilton et al., 1996, J. Biol. Chem. 271: 4699-4708. O sítio ativo da enzima ou outra interação biológica pode também ser determinado por análise física da estrutura, como determinado por técnicas como ressonância magnética nuclear, cristalografia, difração de elétrons ou marcação por fotoafinidade, em conjunto com mutação de aminoácidos putativos do sítio de contato. Ver, por exemplo, de Vos et al., 1992, Science 255: 306-312; Smith et al., 1992, J. Mol. Biol. 224: 899-904; Wlodaver et al., 1992, FEBS Lett. 309: 59-64. A identidade de aminoácidos essenciais pode ser também inferida a partir de um alinhamento com um polipeptídeo relacionado. Composições

[0057] A invenção se refere ao uso, métodos e composições de detergente compreendendo hexosaminidases de Lactobacillus, preferencialmente dispersinas. Formulações líquidas

[0058] Em um aspecto, a composição de limpeza é uma composição líquida. A hexosaminidase da invenção pode ser formulada como uma formulação enzimática líquida, que geralmente é uma composição derramável, embora também possa ter uma elevada viscosidade. A aparência física e as propriedades de uma formulação de enzima líquida podem variar muito - por exemplo, elas podem ter viscosidades diferentes (de gel a semelhante a água), ser coloridas, não coloridas, claras, nebulosas e até mesmo com partículas sólidas, como em pastas e suspensões. Os ingredientes mínimos são a(s) enzima(s) e um sistema de solvente para torná-la líquida.

[0059] O sistema solvente pode compreender água, polióis (tal como glicerol, (mono, di ou tri) propilenoglicol, álcool açucarado (por exemplo, sorbitol), polipropilenoglicol e/ou polietilenoglicol), etanol, açúcares e sais. Normalmente, o sistema solvente também inclui um agente de conservação e/ou outros estabilizadores.

[0060] Uma formulação líquida de enzima pode ser preparada misturando um sistema de solvente e um concentrado de enzima com um grau de pureza desejado (ou partículas de enzima para obter uma pasta/suspensão).

[0061] Em uma modalidade, a composição líquida de enzima compreende (a) pelo menos 0,01% p/p de proteína enzimática ativa, (b) pelo menos 0,5% (p/p) de poliol, (c) água e (d) opcionalmente um agente de conservação.

[0062] As hexosaminidases, por exemplo, dispersinas na composição líquida da invenção, podem ser estabilizadas usando agentes estabilizadores convencionais, por exemplo, um poliol como propilenoglicol ou glicerol, etilenoglicol, polietilenoglicol, alcoóis de açúcar, sorbitol, manitol, eritritol, dulcitol, inositol, xilitol e adonitol.

[0063] Uma modalidade da invenção se refere a uma composição compreendendo uma hexosaminidase de Lactobacillus, em que a composição compreende ainda; (a) i. um ou mais polióis, de preferência, selecionados dentre glicerol, (mono, di ou tri) propilenoglicol, etilenoglicol, polietilenoglicol, alcoóis de açúcar, sorbitol, manitol, eritritol, dulcitol, inositol, xilitol e adonitol, ii. opcionalmente, uma ou mais enzimas, de preferência, selecionadas dentre proteases, amilases ou lipases, iii. opcionalmente, um ou mais tensoativos, de preferência, selecionados dentre tensoativos aniônicos e não iônicos, ou iv. opcionalmente um ou mais polímeros;

[0064] Outra modalidade preferida se refere a uma composição compreendendo uma hexosaminidase de Lactobacillus, em que a composição compreende ainda; (a) i. um ou mais polióis, de preferência, selecionados dentre glicerol, (mono, di ou tri) propilenoglicol, etilenoglicol, polietilenoglicol, alcoóis de açúcar, sorbitol, manitol, eritritol, dulcitol, inositol, xilitol e adonitol, ii. opcionalmente, uma ou mais enzimas, de preferência, selecionadas dentre proteases, amilases ou lipases, iii. opcionalmente, um ou mais tensoativos, de preferência, selecionados dentre tensoativos aniônicos e não iônicos, ou iv. opcionalmente um ou mais polímeros; em que a hexosaminidase tem atividade de N-acetilglucosaminidase, preferencialmente atividade de β-1,6 N-acetilglucosaminidase.

[0065] Um aspecto preferido se refere a uma composição compreendendo uma dispersina, selecionada a partir do grupo que consiste em polipeptídeos mostrados nas SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 9,

SEQ ID NO 18 ou polipeptídeos com pelo menos 60%, pelo menos 70 %, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou tal como pelo menos 99% de identidade de sequência e em que a composição compreende ainda; i. um ou mais polióis, de preferência, selecionados dentre glicerol, (mono, di ou tri) propilenoglicol, etilenoglicol, polietilenoglicol, álcoois de açúcar, sorbitol, manitol, eritritol, dulcitol, inositol, xilitol e adonitol, ii. opcionalmente, uma ou mais enzimas, de preferência, selecionadas dentre proteases, amilases ou lipases, iii. opcionalmente, um ou mais tensoativos, de preferência, selecionados dentre tensoativos aniônicos e não iônicos, ou iv. opcionalmente um ou mais polímeros;

[0066] Um aspecto preferido se refere a uma composição compreendendo um polipeptídeo mostrado na SEQ ID NO 3 ou um polipeptídeo com pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou tal como pelo menos 99% de identidade de sequência, em que a composição compreende ainda; i. um ou mais polióis, de preferência, selecionados dentre glicerol, (mono, di ou tri) propilenoglicol, etilenoglicol, polietilenoglicol, álcoois de açúcar, sorbitol, manitol, eritritol, dulcitol, inositol, xilitol e adonitol, ii. opcionalmente, uma ou mais enzimas, de preferência, selecionadas dentre proteases, amilases ou lipases, iii. opcionalmente, um ou mais tensoativos, de preferência, selecionados dentre tensoativos aniônicos e não iônicos, ou iv. opcionalmente um ou mais polímeros; e em que a hexosaminidase tem atividade de N-acetilglucosaminidase, preferencialmente atividade de β-1,6 N-acetilglucosaminidase.

[0067] Um aspecto preferido se refere a uma composição compreendendo um polipeptídeo mostrado na SEQ ID NO 6 ou um polipeptídeo com pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou tal como pelo menos 99% de identidade de sequência, em que a composição compreende ainda; i. um ou mais polióis, de preferência, selecionados dentre glicerol, (mono, di ou tri) propilenoglicol, etilenoglicol, polietilenoglicol, álcoois de açúcar, sorbitol, manitol, eritritol, dulcitol, inositol, xilitol e adonitol, ii. opcionalmente, uma ou mais enzimas, de preferência, selecionadas dentre proteases, amilases ou lipases, iii. opcionalmente, um ou mais tensoativos, de preferência, selecionados dentre tensoativos aniônicos e não iônicos, ou iv. opcionalmente um ou mais polímeros; e em que a hexosaminidase tem atividade de N-acetilglucosaminidase, preferencialmente atividade de β-1,6 N-acetilglucosaminidase.

[0068] Um aspecto preferido se refere a uma composição compreendendo um polipeptídeo mostrado na SEQ ID NO 9 ou um polipeptídeo com pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou tal como pelo menos 99% de identidade de sequência, em que a composição compreende ainda; i. um ou mais polióis, de preferência, selecionados dentre glicerol, (mono, di ou tri) propilenoglicol, etilenoglicol, polietilenoglicol, álcoois de açúcar, sorbitol, manitol, eritritol, dulcitol, inositol, xilitol e adonitol, ii. opcionalmente, uma ou mais enzimas, de preferência, selecionadas dentre proteases, amilases ou lipases, iii. opcionalmente, um ou mais tensoativos, de preferência, selecionados dentre tensoativos aniônicos e não iônicos, ou iv. opcionalmente um ou mais polímeros; e em que a hexosaminidase tem atividade de N-acetilglucosaminidase, preferencialmente atividade de β-1,6 N-acetilglucosaminidase.

[0069] Um aspecto preferido se refere a uma composição compreendendo um polipeptídeo mostrado na SEQ ID NO 18 ou um polipeptídeo com pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou tal como pelo menos 99% de identidade de sequência, em que a composição compreende ainda; i. um ou mais polióis, de preferência, selecionados dentre glicerol, (mono, di ou tri) propilenoglicol, etilenoglicol, polietilenoglicol, álcoois de açúcar, sorbitol, manitol, eritritol, dulcitol, inositol, xilitol e adonitol, ii. opcionalmente, uma ou mais enzimas, de preferência, selecionadas dentre proteases, amilases ou lipases, iii. opcionalmente, um ou mais tensoativos, de preferência, selecionados dentre tensoativos aniônicos e não iônicos, ou iv. opcionalmente um ou mais polímeros; e em que a hexosaminidase tem atividade de N-acetilglucosaminidase, preferencialmente atividade de β-1,6 N-acetilglucosaminidase.

[0070] Um aspecto preferido se refere a uma composição compreendendo uma hexosaminidase de Lactobacillus selecionada a partir do grupo mostrado na Tabela 1, em que a composição compreende ainda; v. um ou mais polióis, de preferência, selecionados dentre glicerol, (mono, di ou tri) propilenoglicol, etilenoglicol, polietilenoglicol, alcoóis de açúcar, sorbitol, manitol, eritritol, dulcitol, inositol, xilitol e adonitol, vi. opcionalmente, uma ou mais enzimas, de preferência, selecionadas dentre proteases, amilases ou lipases, vii. opcionalmente, um ou mais tensoativos, de preferência, selecionados dentre tensoativos aniônicos e não iônicos, ou viii. opcionalmente um ou mais polímeros; e em que a hexosaminidase tem atividade de N-acetilglucosaminidase, preferencialmente atividade de β-1,6 N-acetilglucosaminidase. Formulações granulares

[0071] Podem ser produzidos granulados sem pulverização, por exemplo, como divulgado em US 4,106,991 e 4,661,452 e podem ser opcionalmente revestidos por métodos conhecidos na técnica. Exemplos de materiais de revestimento cerosos são produtos de poli(óxido de etileno) (polietilenoglicol, PEG) com pesos molares médios de 1.000 a

20.000; nonilfenóis etoxilados que têm de 16 a 50 unidades de óxido de etileno; alcoóis graxos etoxilados nos quais o álcool contém de 12 a 20 átomos de carbono e nos quais existem 15 a 80 unidades de óxido de etileno; alcoóis graxos; ácidos graxos; e mono- e di- e triglicerídeos de ácidos graxos. Exemplos de materiais de revestimento formadores de filme adequados para aplicação por técnicas de leito fluidizado são dados em GB 1483591

[0072] A hexosaminidase, por exemplo, hexosaminidase de Lactobacillus, pode ser formulada como um grânulo, por exemplo, como um cogrânulo que combina uma ou mais enzimas ou agentes benéficos, tal como MnTACN. Cada enzima estará então presente em mais grânulos assegurando uma distribuição mais uniforme das enzimas no detergente. Isto também reduz a segregação física das diferentes enzimas devido a diferentes tamanhos de partículas. Métodos para produção de cogranulado com múltiplas enzimas para a indústria dos detergentes são divulgados na divulgação IP.com IPCOM000200739D.

[0073] Outro exemplo de formulação de enzimas pelo uso de cogranulados é divulgado em WO 2013/188331, que se relaciona com uma composição detergente compreendendo (a) um cogrânulo com múltiplas enzimas; (b) menos do que 10 em peso de zeólito (base anidra); e (c) menos do que 10 em peso de sal de fosfato (base anidra), em que o referido cogrânulo de enzimas compreende de 10 a 98% em peso de componentes dissipadores da umidade e a composição compreende adicionalmente de 20 a 80% em peso de componentes detergentes dissipadores da umidade. WO 2013/188331 refere-se também a um método para tratar e/ou limpar uma superfície, de preferência uma superfície de tecido que compreende as etapas de (i) colocar a referida superfície em contato com a composição detergente como reivindicado e descrito aqui em um licor aquoso de lavagem, (ii) enxaguar e/ou secar a superfície.

[0074] Uma modalidade da invenção se refere a um grânulo/partícula de enzima compreendendo uma hexosaminidase da invenção. O grânulo é composto por um núcleo e, opcionalmente, um ou mais revestimentos (camadas externas) rodeando o núcleo. Tipicamente, o tamanho do grânulo/partícula, medido como diâmetro esférico equivalente (tamanho médio das partículas baseado em volume), do grânulo é 20-2000 µm, particularmente 50-1500 µm, 100-1500 µm ou 250-1200 µm. O núcleo pode incluir materiais adicionais tais como enchimentos, materiais de fibra (celulose ou fibras sintéticas), agentes estabilizantes, agentes solubilizantes, agentes de suspensão, agentes reguladores da viscosidade, esferas leves, plastificantes, sais, lubrificantes e fragrâncias. O núcleo pode incluir aglutinantes, tal como polímero sintético, cera, gordura ou carboidrato. O núcleo pode compreender um sal de um cátion multivalente, um agente redutor, um antioxidante, um catalisador da decomposição de peróxidos e/ou um componente de tampão ácido, tipicamente como uma combinação homogênea. O núcleo pode consistir em uma partícula inerte com a enzima absorvida na mesma ou aplicada na superfície, por exemplo, por revestimento em leito fluidizado. O núcleo pode ter um diâmetro de 20-2000 µm, particularmente, 50-1500 µm, 100-1500 µm ou 250-1200 µm. O núcleo pode ser preparado por granulação de uma mescla dos ingredientes, por exemplo, por um método que compreende técnicas de granulação como cristalização, precipitação, pan-revestimento, revestimento de leito fluido, aglomeração de leito fluido, atomização giratória, extrusão, compressão, esferonização, métodos de redução de tamanho, granulação de tambor e/ou granulação de alto cisalhamento. Métodos para preparação do núcleo podem ser encontrados em Handbook of Powder Technology; Particle size enlargement by C. E. Capes; Volume 1; 1980; Elsevier. O núcleo do grânulo/partícula de enzimas pode estar rodeado por pelo menos um revestimento, por exemplo, para melhorar a estabilidade no armazenamento, para reduzir a formação de poeira durante o manuseamento ou para colorir o grânulo. O(s) revestimento(s) opcional(ais) pode(m) incluir um revestimento de sal ou outros materiais de revestimento adequados, tais como polietilenoglicol (PEG), celulose de hidróxi-propilmetila (MHPC) e álcool de polivinila(PVA). Exemplos de grânulos de enzimas com múltiplos revestimentos são mostrados em WO 93/07263 e WO 97/23606.

[0075] O revestimento pode ser aplicado em uma quantidade de pelo menos 0,1% em peso do núcleo, por exemplo, pelo menos 0,5%, 1% ou 5%. A quantidade pode ser no máximo 100%, 70%, 50%, 40% ou 30%.

[0076] O revestimento tem preferencialmente pelo menos 0,1 µm de espessura, particularmente pelo menos 0,5 µm, pelo menos 1 µm ou pelo menos 5 µm. Em uma modalidade particular, a espessura do revestimento está abaixo de 100 µm. Em uma modalidade mais particular, a espessura do revestimento está abaixo de 60 µm. Em uma modalidade ainda mais particular, a espessura total do revestimento está abaixo de 40 µm. O revestimento deve encapsular a unidade de núcleo por formação de uma camada substancialmente contínua. Uma camada substancialmente contínua é para ser entendida como um revestimento tendo poucos ou nenhuns orifícios, tal que a unidade nuclear que está encapsulando/rodeando tenha poucas ou nenhumas áreas não revestidas. A camada ou revestimento deve ser preferencialmente homogêneo em espessura. O revestimento pode conter adicionalmente outros materiais como conhecido na especialidade, por exemplo, cargas, agentes antiaderentes, pigmentos, corantes, plastificantes e/ou aglutinantes, como dióxido de titânio, caulim, carbonato de cálcio ou talco. Um revestimento de sal pode compreender pelo menos 60% em peso p/p de um sal, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou pelo menos 99% em peso p/p. O sal pode ser adicionado a partir de uma solução de sal onde o sal está completamente dissolvido ou a partir de uma suspensão de sal onde as partículas finas são menores do que 50 µm, tal como menores do que 10 µm ou menores do que 5 μm. O revestimento de sal pode compreender um único sal ou uma mistura de dois ou mais sais. O sal pode ser solúvel em água, preferencialmente tendo uma solubilidade pelo menos 0,1 gramas em 100 g de água a 20 °C, preferencialmente pelo menos 0,5 g por 100 g de água, por exemplo, pelo menos 1 g por 100 g de água, por exemplo, pelo menos 5 g por 100 g de água.

[0077] O sal pode ser um sal inorgânico, por exemplo, sais de sulfato, sulfito, fosfato, fosfonato, nitrato, cloreto ou carbonato ou sais de ácidos orgânicos simples (menos do que 10 átomos de carbono, por exemplo, 6 ou menos átomos de carbono), como citrato, malonato ou acetato. Exemplos de cátions em estes sais são íons de metais alcalinos ou metais alcalinoterrosos, o íon de amônio ou íons de metais da primeira série de transição, tais como sódio, potássio, magnésio, cálcio, zinco ou alumínio. Exemplos de ânions incluem cloreto, brometo, iodeto, sulfato, sulfito, bissulfito, tiossulfato, fosfato, fosfato monobásico, fosfato dibásico, hipofosfito, pirofosfato de di-hidrogênio, tetraborato, borato, carbonato, bicarbonato, metassilicato, citrato, malato, maleato, malonato, succinato, lactato, formato, acetato, butirato, propionato, benzoato, tartarato, ascorbato ou gliconato. Preferencialmente, podem ser usados sais de metais alcalinos ou metais alcalinoterrosos de sulfato, sulfito, fosfato, fosfonato, nitrato, cloreto ou carbonato ou sais de ácidos orgânicos simples tais como citrato, malonato ou acetato.

[0078] O sal no revestimento pode ter uma umidade constante a 20 °C acima de 60%, particularmente acima de 70%, acima de 80% ou acima de 85%, ou pode ser outra forma de hidrato de tal sal (por exemplo, anidrato). O revestimento de sal pode ser como descrito em WO 00/01793 ou WO 2006/034710.

[0079] Os exemplos específicos de sais adequados são NaCl (CH20°C=76%), Na2CO3 (CH20°C=92%), NaNO3 (CH20°C=73%), Na2HPO4 (CH20°C=95%), Na3PO4 (CH25°C=92%), NH4Cl (CH20°C =

79.5%), (NH4)2HPO4 (CH20°C = 93,0%), NH4H2PO4 (CH20°C = 93.1%), (NH4)2SO4 (CH20°C=81.1%), KCl (CH20°C=85%), K2HPO4 (CH20°C=92%), KH2PO4 (CH20°C=96.5%), KNO3 (CH20°C=93.5%), Na2SO4 (CH20°C=93%), K2SO4 (CH20°C=98%), KHSO4 (CH20°C=86%), MgSO4 (CH20°C=90%), ZnSO4 (CH20°C=90%) e citrato de sódio (CH25°C=86%). Outros exemplos incluem NaH2PO4, (NH4)H2PO4, CuSO4, Mg(NO3)2 e acetato de magnésio.

[0080] O sal pode estar em forma anidra ou pode ser um sal hidratado, isto é, um hidrato de sal cristalino com água (ou águas) ligada de cristalização, tal como descrito nem WO 99/32595. Exemplos específicos incluem sulfato de sódio anidro (Na2SO4), sulfato de magnésio anidro (MgSO4), sulfato de magnésio hepta-hidratado (MgSO4.7H2O), zinco sulfato hepta-hidratado (ZnSO4.7H2O), fosfato de sódio dibásico hepta-hidratado (Na2HPO4.7H2O), nitrato de magnésio hexa-hidratado (Mg(NO3)2(6H2O)), citrato de sódio di-hidratado e acetato de magnésio tetra-hidratado. Preferencialmente, o sal é aplicado como uma solução do sal, por exemplo, com o uso de um leito fluidizado.

[0081] Em um aspecto, a presente invenção proporciona um grânulo, que compreende: (a) um núcleo compreendendo uma hexosaminidase de Lactobacillus, por exemplo, dispersina de acordo com a invenção, e (b) opcionalmente um revestimento consistindo em uma ou mais camada(s) rodeando o núcleo.

[0082] Um aspecto da invenção se relaciona com um grânulo, que compreende: (a) um núcleo compreendendo uma hexosaminidase de Lactobacillus, por exemplo, dispersina, em que a hexosaminidase de Lactobacillus é selecionada a partir do grupo que consiste em polipeptídeos mostrados nas SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 9 ou polipeptídeos com pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou tal como pelo menos 99% de identidade de sequência do presente documento, e (b) opcionalmente um revestimento consistindo em uma ou mais camada(s) rodeando o núcleo.

[0083] Um aspecto da invenção se relaciona com um grânulo, que compreende: (a) um núcleo compreendendo um polipeptídeo selecionado a partir do grupo que consiste em polipeptídeos mostrados nas SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 9, SEQ ID NO 18 ou polipeptídeos com pelo menos 60%, pelo menos 70 %, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou tal como pelo menos 99% de identidade de sequência, e (b) opcionalmente um revestimento consistindo em uma ou mais camada(s) rodeando o núcleo.

[0084] Um aspecto da invenção se relaciona com um grânulo, que compreende:

(a) um núcleo compreendendo uma hexosaminidase selecionada do grupo mostrado na Tabela 1, e (b) opcionalmente um revestimento consistindo em uma ou mais camada(s) rodeando o núcleo.

[0085] Outro aspecto se refere a um grânulo em camadas compreendendo (a) um núcleo (não enzimático); (b) um revestimento em torno do núcleo, em que o revestimento compreende hexosaminidase de Lactobacillus, por exemplo, dispersina; e (c) opcionalmente, um revestimento protetor de sal ao redor do revestimento contendo enzima.

[0086] Outro aspecto se refere a um grânulo em camadas compreendendo (a) um núcleo (não enzimático); (b) um revestimento ao redor do núcleo, em que o revestimento compreende uma hexosaminidase de Lactobacillus, por exemplo, dispersina, em que a hexosaminidase de Lactobacillus é selecionada a partir do grupo que consiste em polipeptídeos mostrados nas SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 9 ou polipeptídeos com pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou tal como pelo menos 99% de identidade de sequência do presente documento; e (c) opcionalmente, um revestimento protetor de sal ao redor do revestimento contendo enzima.

[0087] Outro aspecto se refere a um grânulo em camadas compreendendo (a) um núcleo (não enzimático);

(b) um revestimento ao redor do núcleo, em que o revestimento compreende uma hexosaminidase selecionada do grupo mostrado na Tabela 1; e (c) opcionalmente, um revestimento protetor de sal ao redor do revestimento contendo enzima. Composição de limpeza

[0088] Uma composição da invenção é preferencialmente uma composição de limpeza compreendendo uma hexosaminidase de Lactobacillus em combinação com um ou mais componentes adicionais da composição de limpeza. A escolha de componentes adicionais pode ser feita por uma pessoa versada e inclui ingredientes convencionais, incluindo os componentes não limitantes exemplificados apresentados abaixo.

[0089] Um aspecto da invenção se refere a uma composição que compreende; a) pelo menos 0,01 mg/mL de pelo menos uma hexosaminidase de Lactobacillus; b) pelo menos um componente da composição de limpeza, preferencialmente selecionado de tensoativos, formadores, componentes branqueadores, polímeros, agentes dispersantes e enzimas adicionais.

[0090] Um aspecto da invenção se refere a uma composição que compreende; a) pelo menos 0,01 mg/mL de pelo menos uma hexosaminidase de Lactobacillus, em que a hexosaminidase de Lactobacillus é selecionada do grupo mostrado na Tabela 1. b) pelo menos um componente da composição de limpeza, preferencialmente selecionado de tensoativos, formadores, componentes branqueadores, polímeros, agentes dispersantes e enzimas adicionais.

[0091] Um aspecto da invenção se refere a uma composição que compreende;

pelo menos 0,01 mg/mL de pelo menos uma hexosaminidase de Lactobacillus, em que a hexosaminidase de Lactobacillus é selecionada a partir de polipeptídeos com pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, a pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97% pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade de sequência dos polipeptídeos mostrados na SEQ ID NO 3, 6 e 9; b) pelo menos um componente da composição de limpeza, preferencialmente selecionado de tensoativos, formadores, componentes branqueadores, polímeros, agentes dispersantes e enzimas adicionais.

[0092] Um aspecto da invenção se refere a uma composição que compreende; pelo menos 0,01 mg/mL de pelo menos uma hexosaminidase, em que a hexosaminidase tem pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, a pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97% pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade de sequência dos polipeptídeos mostrados na SEQ ID NO 18; b) pelo menos um componente da composição de limpeza, preferencialmente selecionado de tensoativos, formadores, componentes branqueadores, polímeros, agentes dispersantes e enzimas adicionais.

[0093] A hexosaminidase de Lactobacillus ou Streptococcus pode ser incluída na limpeza, por exemplo, composição detergente da presente invenção em um nível de pelo menos 0,0001 a pelo menos 100, pelo menos 0,001 a pelo menos 100, pelo menos 0,01 a pelo menos 100, pelo menos 0,02 a pelo menos 100, pelo menos 0,01 a pelo menos 100, pelo menos 0,1 a pelo menos 100, pelo menos 0,2 a pelo menos 100, pelo menos 0,5 a pelo menos 100 mg/mL, preferencialmente, a concentração da enzima hexosaminidase na composição de limpeza, por exemplo, o detergente está na gama de 0,01 a 100 mg/mL, 0,1 a 50 mg/mL ou 0,01 a 10 mg/mL. Assim, a composição detergente pode compreender pelo menos 0,00008% em peso, de preferência pelo menos 0,002% em peso, 0,003% em peso, 0,004% em peso, 0,005% em peso, 0,006% em peso, 0,008% em peso, 0,01% em peso, 0,02% em peso, 0,03% em peso, 0,05% em peso, 0,1% em peso, 0,2% em peso, 0,3% em peso, 0,4% em peso, 0,6% em peso, 0,7% em peso, 0,8% em peso, 0,9% em peso ou 1,0 % em peso de hexosaminidase, em que a % em peso é a percentagem em peso, que é a fração de massa multiplicada por 100. A fração de massa é a razão de uma substância com massa msub à massa da mistura total mt,(mfrac = msub/mtot).

[0094] A escolha de componentes de limpeza pode incluir, para cuidado de têxteis, a consideração do tipo de têxtil a ser limpo, do tipo e/ou grau de sujidade, da temperatura à qual a limpeza é para ter lugar e da formulação do produto detergente. Embora os componentes mencionados em baixo estejam categorizados por cabeçalho geral de acordo com uma funcionalidade particular, isto não é para ser interpretado como uma limitação, pois um componente pode compreender funcionalidades adicionais como será apreciado pelo perito. Tensoativos

[0095] A composição de limpeza pode compreender um ou mais tensoativos, que podem ser aniônicos e/ou catiônicos e/ou não iônicos e/ou semipolares e/ou zwitteriônicos ou uma sua mistura. Em uma modalidade particular, a composição detergente inclui uma mistura de um ou mais tensoativos não iônicos e um ou mais tensoativos aniônicos. O tensoativo (ou tensoativos) está tipicamente presente a um nível de cerca de 0,1% a cerca de 60% em peso, tal como cerca de 1% a cerca de 40%, ou cerca de 3% a cerca de 20%, ou cerca de 3% a cerca de 10%. O(s) tensoativo(s) é(são) escolhido(s) com base na aplicação de limpeza desejada e pode(m) incluir qualquer(quaisquer) tensoativo(s) convencional(ais) conhecido(s) na técnica.

[0096] Quando incluído aí, o detergente conterá usualmente de cerca de 1% a cerca de 40% em peso de um tensoativo aniônico, tal como de cerca de 5% a cerca de 30%, incluindo de cerca de 5% a cerca de 15% ou de cerca de 15% a cerca de 20% ou de cerca de 20% a cerca de 25% de um tensoativo aniônico. Exemplos não limitantes de tensoativos aniônicos incluem sulfatos e sulfonatos, em particular, alquilbenzenossulfonatos lineares (LAS), isômeros de LAS, alquilbenzenossulfonatos ramificados (BABS), fenilalcanossulfonatos, alfa- olefinossulfonatos (AOS), sulfonatos de olefina, sulfonatos de alqueno, alcano-2,3-di-ilbis(sulfatos), hidroxialcanossulfonatos e dissulfonatos, sulfatos de alquila (AS) tais como dodecil sulfato de sódio (SDS), sulfatos de álcool graxo (FAS), sulfatos de álcool primário (PAS), éter sulfatos de álcool (AES ou AEOS ou FES, também conhecidos como etoxissulfatos de álcool ou éter sulfatos de álcool graxo), alcanossulfonatos secundários (SAS), sulfonatos de parafina (PS), éster sulfonatos, glicerol ésteres de ácidos graxos sulfonados, ésteres de metila de ácidos graxo salfa-sulfo (alfa-SFMe ou SES) incluindo éster sulfonato de metila (MES), ácido alquil- ou alquenilsuccínico, ácido succínico de dodecenila/tetradecenila (DTSA), derivados de ácidos graxos de aminoácidos, diésteres e monoésteres de ácido sulfo-succínico ou sais de ácidos graxos (sabão) e suas combinações.

[0097] Quando incluído aí, o detergente conterá usualmente de cerca de 1% a cerca de 40% em peso de um tensoativo catiônico, por exemplo de cerca de 0,5% a cerca de 30%, em particular de cerca de 1% a cerca de 20%, de cerca de 3% a cerca de 10%, tal como de cerca de 3% a cerca de 5%, de cerca de 8% a cerca de 12% ou de cerca de 10% a cerca de 12%. Exemplos não limitantes de tensoativos catiônicos incluem alquildimetiletanolamina quaternária (ADMEAQ), brometo de cetiltrimetilamônio (CTAB), cloreto de dimetildistearilamônio (DSDMAC) e alquilbenzildimetilamônio, compostos de amônio quaternário de alquila, compostos de amônio quaternário alcoxilado (AQA), ésteres quaternários e suas combinações.

[0098] Quando incluído aí, o detergente conterá usualmente de cerca de 0,2% a cerca de 40% em peso de um tensoativo não iônico, por exemplo de cerca de 0,5% a cerca de 30%, em particular de cerca de 1% a cerca de 20%, de cerca de 3% a cerca de 10%, tal como de cerca de 3% a cerca de 5%, de cerca de 8% a cerca de 12% ou de cerca de 10% a cerca de 12%. Exemplos não limitantes de tensoativos não iônicos incluem etoxilatos de álcool (AE ou AEO), propoxilatos de álcool, álcoois graxos propoxilados (PFA), ésteres de alquila de ácido graxo alcoxilados, tais como ésteres de alquila de ácido graxo etoxilados e/ou propoxilados, etoxilatos de alquilfenol (APE), etoxilatos de nonilfenol (NPE), alquilpoliglicosídeos (APG), aminas alcoxiladas, monoetanolamidas de ácido graxo (FAM), dietanolamidas de ácidos graxos (FADA), monoetanolamidas de ácidos graxos etoxiladas (EFAM), monoetanolamida de ácidos graxos propoxilada (PFAM), amidas de poli-hidroxialquila de ácidos graxos, ou derivados de glucosamina de N-acila e N-alquila (glucamidas, GA, ou glucamidas de ácidos graxos, FAGA), bem como produtos disponíveis sob os nomes registrados SPAN e TWEEN e suas combinações.

[0099] Quando incluído aí, o detergente conter usualmente de cerca de 0,01 a cerca de 10% em peso de um tensoativo semipolar. Exemplos não limitantes de tensoativos semipolares incluem óxidos de amina (AO) tais como óxido de alquildimetilamina, óxido de N- (coco alquila)-N,N-dimetilamina e óxido de amina N-(sebo-alquila)-N,N-bis(2- hidroxietila) e suas combinações.

[0100] Quando incluído aí, o detergente conterá usualmente de cerca de 0,01% a cerca de 10% em peso de um tensoativo zwitteriônico. Exemplos não limitantes de tensoativos zwitteriônicos incluem betaínas tais como alquildimetilbetaínas, sulfobetaínas e suas combinações. Formadores e Coformadores

[0101] A composição detergente pode conter cerca de 0- 65% em peso, tal como cerca de 5% a cerca de 50% de um formador ou coformador de detergente, ou uma sua mistura. Em um detergente de lavagem de loiça, o nível de formador é tipicamente na gama de 40-65%, particularmente na gama de 50-65%. O formador e/ou coformador podem ser particularmente um agente quelante que forma complexos solúveis em água com Ca e Mg. Pode ser utilizado qualquer formador e/ou coformador conhecido na técnica para uso em detergentes de limpeza. Exemplos não limitantes de formadores incluem zeólitos, difosfatos (pirofosfatos), trifosfatos tais como trifosfato de sódio (STP ou STPP), carbonatos tais como carbonato de sódio, silicatos solúveis tais como metassilicato de sódio, silicatos em camadas (por exemplo, SKS-6 a partir da Hoechst), etanolaminas tais como 2-aminoetan-1-ol (MEA), dietanolamina (DEA, também conhecido como 2,2'- iminodietan-1-ol), trietanolamina (TEA, também conhecida como 2,2',2"- nitrilotrietan-1-ol) e inulina de carboximetila (CMI) e suas combinações.

[0102] A composição detergente pode conter também cerca de 0-50% em peso, tal como cerca de 5% a cerca de 30%, de um coformador de detergente. A composição detergente pode incluir um coformador sozinho ou em combinação com um formador, por exemplo um formador de zeólito. Exemplos não limitativos de coformadores incluem homopolímeros de poliacrilatos ou seus copolímeros, tal como poli(ácido acrílico) (PAA) ou copoli(ácido acrílico/ácido maleico) (PAA/PMA). Outros exemplos não limitantes incluem citrato, quelantes, como aminocarboxilatos, aminopolicarboxilatos e fosfonatos e ácido alquil- ou alquenilsuccínico. Exemplos específicos adicionais incluem ácido 2,2’,2”-nitrilotriacético (NTA), ácido etilenodiaminotetra-acético (EDTA), ácido dietilenotriaminopenta-

acético (DTPA), ácido iminodissuccínico (IDS), ácido etilenodiamina-N,N’- dissuccínico (EDDS), ácido metilglicinodiacético (MGDA), ácido glutâmico- ácido N,N-diacético (GLDA), ácido 1-hidroxietano-1,1-difosfônico (HEDP), etilenodiaminotetra(ácido metilenofosfônico) (EDTMPA), dietilenotriaminapentaquis(ácido metilenofosfônico) (DTMPA ou DTPMPA), ácido N-(2-hidroxietil)iminodiacético (EDG), ácido aspártico-ácido N- monoacético (ASMA), ácido aspártico-ácido N,N-diacético (ASDA), ácido aspártico-ácido N-monopropiônico (ASMP), ácido iminodissuccínico (IDA), ácido N-(2-sulfometil)aspártico (SMAS), ácido N-(2-sulfoetil)aspártico (SEAS), ácido N-(2- sulfometil)glutâmico (SMGL), ácido N- (2- sulfoetil) glutâmico (SEGL), ácido N-metiliminodiacético (MIDA), ácido α- alanina-N,N- diacético (α -ALDA), ácido serina-N,N-diacético (SEDA), ácido isosserina- N,N-diacético (ISDA), ácido fenilalanina-N,N-diacético (PHDA), ácido antranílico-ácido N,N-diacético (ANDA), ácido sulfanílico-ácido N,N-diacético (SLDA), ácido taurina-N,N-diacético (TUDA) e ácido sulfometil-N,N-diacético (SMDA), ácido N-(2-hidroxietila)-etilidenodiamina-N,N',N''-triacético (HEDTA), dietanolglicina (DEG), dietilenotriaminapenta(ácido metilenofosfônico) (DTPMP), aminotris(ácido metilenofosfônico) (ATMP) e suas combinações e sais. Formadores e/ou coformadores exemplificativos adicionais são descritos, por exemplo, em WO 09/102854, US 5977053. Sistemas de Branqueamento

[0103] A composição de limpeza pode conter 0-50% em peso, tal como 1-40%, tal como 1-30%, tal como cerca de 1% a cerca de 20%, de um sistema de branqueamento. Pode ser utilizado qualquer sistema de branqueamento conhecido na técnica para uso em detergentes de limpeza. Componentes de sistema de branqueamento adequados incluem fontes de peróxido de hidrogênio; fontes de perácidos; e catalisadores e reforçadores do branqueamento.

[0104] Fontes de peróxido de hidrogênio:

Fontes de peróxido de hidrogênio adequadas são persais inorgânicos, incluindo sais de metais alcalinos tais como percarbonato de sódio e perboratos de sódio (usualmente mono- ou tetra-hidratados) e peróxido de hidrogênio―ureia (1/1).

[0105] Fontes de perácidos: Os perácidos podem ser (a) incorporados diretamente como perácidos pré- formados ou (b) formados in situ no licor de lavagem a partir de peróxido de hidrogênio e um ativador do branqueamento (per-hidrólise) ou (c) formados in situ no licor de lavagem a partir de peróxido de hidrogênio e uma per- hidrolase e um substrato adequado para esta última, por exemplo, um éster. a) Perácidos pré-formados adequados incluem, mas não estão limitados a, ácidos peroxicarboxílicos tais como ácido peroxibenzoico e seus derivados substituídos em anel, ácido peróxi-α-naftoico, ácido peroxiftálico, ácido peroxiláurico, ácido peroxiesteárico, ácido ε-ftalimidoperoxicaproico [ácido ftalimidoperóxi-hexanoico (PAP)] e ácido o- carboxibenzamidoperoxicaproico; ácidos diperoxidicarboxílicos alifáticos e aromáticos tais como ácido diperoxidodecanodioico, ácido diperoxiazelaico, ácido diperoxissebácico, ácido diperoxibrassílico, ácido 2- decildiperoxibutanodioico e ácidos diperoxiftálico, -isoftálico e -tereftálico; ácidos perimídicos; ácido peroximonossulfúrico; ácido peroxidissulfúrico; ácido peroxifosfórico; ácido peroxissilícico; e misturas dos referidos compostos. É entendido que os perácidos mencionados podem em alguns casos ser mais bem adicionados como sais adequados, tais como sais de metais alcalinos (por exemplo, Oxone®) ou sais de metais alcalinoterrosos. b) Ativadores do branqueamento adequados incluem aqueles pertencendo à classe de ésteres, amidas, imidas, nitrilas ou anidridos e, onde aplicável, seus sais. Exemplos adequados são tetra-acetiletilenodiamina (TAED), 4- [(3,5,5-trimetil-hexanoíl)oxi]benzeno-1-sulfonato de sódio (ISONOBS), 4- (dodecanoíloxi)benzeno-1-sulfonato de sódio (LOBS), 4-

(decanoíloxi)benzeno-1-sulfonato de sódio, ácido 4-(decanoíloxi)benzoico (DOBA), 4-(nonanoíloxi)benzeno-1-sulfonato de sódio (NOBS) e/ou aqueles divulgados em WO98/17767. Uma família particular de ativadores do branqueamento de interesse foi divulgada em EP624154, e é particularmente preferencial em essa família citrato de acetiltrietila (ATC). O ATC ou um triglicérido de cadeia curta como triacetina tem a vantagem de ser amigo do ambiente. Além do mais, citrato de acetiltrietila e triacetina têm boa estabilidade hidrolítica no produto após armazenamento e são ativadores do branqueamento eficientes. Finalmente, o ATC é multifuncional, pois o citrato liberado na reação de per-hidrólise pode funcionar como um formador. Catalisadores e reforçadores do branqueamento

[0106] O sistema de branqueamento pode também incluir um catalisador ou reforçador do branqueamento. Alguns exemplos não limitantes de catalisadores do branqueamento que podem ser usados nas composições da presente invenção incluem oxalato de manganês, acetato de manganês, manganês-colágeno, catalisadores de cobalto-amina e catalisadores de triazaciclononano de manganês (MnTACN); são particularmente preferenciais complexos de manganês com 1,4,7-trimetil-1,4,7-triazaciclononano (Me3-TACN) ou 1,2,4,7-tetrametil-1,4,7- triazaciclononano (Me4-TACN), em particular Me3-TACN, tal como o complexo de manganês dinuclear [(Me3-TACN)Mn(O)3Mn(Me3- TACN)](PF6)2, e [2,2',2''-nitrilotris(etano-1,2-di-ilazanillideno-κN- metanililideno)trifenolato-κ3O]manganês (III). Os catalisadores do branqueamento podem ser também outros compostos de metal; tais como complexos de ferro ou cobalto.

[0107] Em algumas modalidades, onde uma fonte de um perácido está incluída, pode ser usado um catalisador ou reforçador do branqueamento tendo uma das seguintes fórmulas:

(iii) e suas misturas; em que cada R1 é independentemente um grupo alquila ramificado contendo de 9 a 24 carbonos ou grupo alquila linear contendo de 11 a 24 carbonos, preferencialmente cada R1 é independentemente um grupo alquila ramificado contendo de 9 a 18 carbonos ou grupo alquila linear contendo de 11 a 18 carbonos, mais preferencialmente cada R 1 é independentemente selecionado do grupo consistindo em 2-propil-heptila, 2- butiloctila, 2-pentilnonila, 2-hexildecila, dodecila, tetradecila, hexadecila, octadecila, isononila, isodecila, isotridecila e isopentadecila.

[0108] Outros sistemas de branqueamento exemplificativos são descritos, por exemplo, em WO2007/087258, WO2007/087244, WO2007/087259, EP1867708 (Vitamina K) e WO2007/087242. Fotobranqueadores adequados podem por exemplo ser ftalocianinas de zinco ou alumínio sulfonatadas. Agentes de cuidados de metal

[0109] Os agentes de cuidados de metal podem prevenir ou reduzir o embaciamento, corrosão ou oxidação de metais, incluindo alumínio, aço inoxidável e metais não ferrosos, tais como prata e cobre. Exemplos adequados incluem um ou mais dos seguintes: (a) benzatriazóis, incluindo benzotriazol ou bis-benzotriazol e seus derivados substituídos. Os derivados de benzotriazol são aqueles compostos nos quais os locais de substituição disponíveis no anel aromático estão parcialmente ou completamente substituídos. Substituintes adequados incluem grupos alquila- Ci-C20 de cadeia linear ou ramificada (por exemplo, grupos alquila- C1-C20) e hidroxila, tio, fenila ou halogênio tal como flúor, cloro, bromo e iodo.

(b) sais e complexos de metais escolhidos do grupo consistindo em sais e/ou complexos de zinco, manganês, titânio, zircônio, háfnio, vanádio, cobalto, gálio e cério, estando os metais em um dos estados de oxidação II, III, IV, V ou VI. Em um aspecto, os sais de metais e/ou complexos de metais adequados podem ser escolhidos do grupo consistindo em sulfato de Mn (II), citrato de Mn (II), estearato de Mn (II), acetilacetonato de Mn (II), K^TiF6 (por exemplo, K2TiF6), K^ZrF6 (por exemplo, K2ZrF6), CoSO4, Co(NOs)2 e Ce(NOs)3, sais de zinco, por exemplo sulfato de zinco, hidrozincita ou acetato de zinco. (c) silicatos, incluindo silicato de sódio ou potássio, dissilicato de sódio, metassilicato de sódio, filossilicato cristalino e suas misturas.

[0110] Substâncias ativas em redox orgânicas e inorgânicas adequadas adicionais que atuam como inibidores da corrosão de prata/cobre são divulgadas em WO 94/26860 e WO 94/26859. Preferencialmente, a composição da invenção compreende de 0,1 a 5% em peso da composição de um agente de cuidados de metal, preferencialmente o agente de cuidados de metal é um sal de zinco. Hidrótopos

[0111] A composição de limpeza pode conter 0-10% em peso, por exemplo, 0-5% em peso, tal como cerca de 0,5 a cerca de 5% ou cerca de 3% a cerca de 5%, de um hidrótropo. Pode ser utilizado qualquer hidrótopo conhecido na técnica para uso em detergentes. Exemplos não limitantes de hidrótopos incluem benzenossulfonato de sódio, p- toluenossulfonato de sódio (STS), xilenossulfonato de sódio (SXS), cumenossulfonato de sódio (SCS), cimenossulfonato de sódio, óxidos de amina, alcoóis e poliglicoléteres, hidroxinaftoato de sódio, hidroxinaftalenossulfonato de sódio, etil-hexilssulfato de sódio, e suas combinações.

Polímeros

[0112] A composição de limpeza pode conter 0-10% em peso, tal como 0,5-5%, 2-5%, 0,5-2% ou 0,2-1% de um polímero. Pode ser utilizado qualquer polímero conhecido na técnica para uso em detergentes. O polímero pode funcionar como um coformador como mencionado acima ou pode proporcionar propriedades de antirredeposição, proteção das fibras, liberação de sujidade, inibição da transferência de corantes, limpeza de gorduras e/ou antiespumantes. Alguns polímeros podem ter mais do que uma das propriedades acima mencionadas e/ou mais do que um dos motivos mencionados em baixo. Polímeros exemplificativos incluem (carboximetil)celulose (CMC), poli(álcool de vinila) (PVA), poli(vinilpirrolidona) (PVP), poli(etilenoglicol) ou poli(óxido de etileno) (PEG), poli(etilenoimina) etoxilada, inulina de carboximetila (CMI) e policarboxilatos tais como PAA, PAA/PMA, ácido poli-aspártico e copolímeros de metacrilato de laurila/ácido acrílico, CMC hidrofobicamente modificadas (HM-CMC) e silicones, copolímeros de ácido tereftálico e glicóis oligoméricos, copolímeros de poli(tereftalato de etileno) e poli(tereftalato de oxieteno) (PET-POET), PVP, poli(vinilimidazol) (PVI), poli(vinilpiridina-N-óxido) (PVPO ou PVPNO) e polivinilpirrolidona-vinilimidazol (PVPVI). Exemplos adequados incluem PVP- K15, PVP-K30, ChromaBond S-400, ChromaBond S- 403E e Chromabond S-100 a partir da Ashland Aqualon e Sokalan® HP 165, Sokalan® HP 50 (Agente dispersante), Sokalan® HP 53 (Agente dispersante), Sokalan® HP 59 (Agente dispersante), Sokalan® HP 56 (inibidor da transferência de corantes), Sokalan® HP 66 K (inibidor da transferência de corantes) a partir da BASF. Polímeros exemplificativos adicionais incluem policarboxilatos sulfonados, óxido de polietileno e óxido de polipropileno (PEO-PPO) e etóxi sulfato diquaternário. Outros polímeros exemplificativos são divulgados em, por exemplo, WO 2006/130575. Sais dos polímeros acima mencionados estão também contemplados. Polímero particularmente preferencial é homopolímero etoxilado Sokalan® HP 20 a partir da BASF, que ajuda a impedir a redeposição de sujidade no licor de lavagem Agentes de matização de tecidos

[0113] A composição de limpeza da presente invenção pode também incluir agentes de matização de tecidos tais como corantes ou pigmentos, que, quando formulados em composições detergentes, podem se depositar em um tecido quando o referido tecido é contatado com um licor de lavagem compreendendo as referidas composições detergentes e alterando assim o tom do referido tecido através de absorção/reflexão de luz visível. Os agentes branqueadores fluorescentes emitem pelo menos alguma luz visível. Em contraste, os agentes de matização de tecidos alteram o tom de uma superfície pois absorvem pelo menos uma porção do espectro de luz visível. Agentes de matização de tecidos adequados incluem corantes e conjugados de corante-argila e podem também incluir pigmentos. Corantes adequados incluem corantes de molécula pequena e corantes poliméricos. Corantes de molécula pequena adequados incluem corantes de molécula pequena selecionados do grupo consistindo em corantes residindo dentro das classificações de Índice de Cor (C.I.) de Azul Direto, Vermelho Direto, Violeta Direto, Azul Ácido, Vermelho Ácido, Violeta Ácido, Azul Básico, Violeta Básico e Vermelho Básico ou suas misturas, por exemplo como descrito em WO2005/03274, WO2005/03275, WO2005/03276 e EP1876226 (aqui incorporados por referência). A composição detergente compreende preferencialmente de cerca de 0,00003% em peso a cerca de 0,2% em peso, de cerca de 0,00008% em peso a cerca de 0,05% em peso, ou mesmo de cerca de 0,0001% em peso a cerca de 0,04%, em peso de agente de matização de tecidos. A composição pode compreender de 0,0001% em peso a 0,2% em peso de agente de matização de tecidos, isto pode ser especialmente preferencial quando a composição está na forma de uma bolsa de dose unitária. Agentes de matização adequados são também divulgados em, por exemplo, WO 2007/087257 e WO2007/087243. Enzimas

[0114] A composição de limpeza pode compreender uma ou mais enzimas adicionais tais como uma ou mais lipases, cutinase, uma amilase, carbo-hidrase, celulase, pectinase, mananase, arabinase, galactanase, xilanase, oxidase, por exemplo, uma lacase e/ou peroxidase.

[0115] Em geral, as propriedades da(s) enzima(s) selecionada(s) devem ser compatíveis com o detergente selecionado (isto é, pH ótimo, compatibilidade com outros ingredientes enzimáticos e não enzimáticos, etc.), e a(s) enzima(s) deve(m) estar presente(s) em quantidades eficazes. Proteases

[0116] Proteases adequadas para as composições da invenção incluem aquelas de origem bacteriana, fúngica, vegetal, viral ou animal, por exemplo, origem vegetal ou microbiana. A origem microbiana é preferencial. São incluídos mutantes quimicamente modificados ou geneticamente modificados por proteínas. Pode ser uma protease alcalina, tal como uma serina protease ou uma metaloprotease. Uma serina protease pode por exemplo ser da família S1, tal como tripsina, ou da família S8 tal como subtilisina. Uma protease das metaloproteases pode por exemplo ser uma termolisina da, por exemplo, família M4 ou outra metaloprotease tal como aquelas das famílias M5, M7 ou M8.

[0117] Exemplos de subtilases são aquelas derivadas de Bacillus tais como Bacillus lentus, Bacillus alkalophilus, Bacillus subtilis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus pumilus e Bacillus gibsonii descritas em; US7262042 e WO09/021867. Subtilisin lentus, Subtilisin Novo, subtilisin Carlsberg, Bacillus licheniformis, subtilisin BPN', subtilisin 309, subtilisin 147 e subtilisin 168 e, por exemplo, protease PD138 descrita em (WO93/18140).

Outras proteases úteis podem ser aquelas descritas em WO01/016285 e WO02/016547. Exemplos de proteases tipo tripsina são tripsina (por exemplo, de origem porcina ou bovina) e a protease de Fusarium descrita em WO94/25583 e WO05/040372 e as quimiotripsina proteases derivadas de Cellumonas descritas em WO05/052161 e WO05/052146.

[0118] Uma protease adicional preferencial é a alcalina protease de Bacillus lentus DSM 5483, como descrito por exemplo em WO95/23221 e suas variantes que são descritas em WO92/21760, WO95/23221, EP1921147 e EP1921148.

[0119] Exemplos de metaloproteases são a metaloprotease neutra como descrito em WO07/044993 (Proctor & Gamble/Genencor Int.) tal como aquelas derivadas a partir de Bacillus amyloliquefaciens.

[0120] Exemplos de proteases úteis são as variantes descritas nos documentos: WO89/06279, WO92/19729, WO96/034946, WO98/20115, WO98/20116, WO99/011768, WO01/44452, WO03/006602, WO04/03186, WO04/041979, WO07/006305, WO11/036263, WO11/036264, especialmente as variantes com substituições em uma ou mais das seguintes posições: 3, 4, 9, 15, 24, 27, 42, 55, 59, 60, 66, 74, 85, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 104, 116, 118, 121, 126, 127, 128, 154, 156, 157, 158, 161, 164, 176, 179, 182, 185, 188, 189, 193, 198, 199, 200, 203, 206, 211, 212, 216, 218, 226, 229, 230, 239, 246, 255, 256, 268 e 269, em que as posições correspondem às posições da protease de Bacillus lentus mostrada na SEQ ID NO 1 em WO 2016/001449. Mais preferidas, as variantes de protease podem compreender uma ou mais das mutações selecionadas do grupo que consiste em: S3T, V4I, S9R, S9E, A15T, S24G, S24R, K27R, N42R, S55P, G59E, G59D, N60D, N60E, V66A, N74D, S85R, A96S, S97G, S97D, S97A, S97SD, S99E, S99D, S99G, S99M, S99N, S99R, S99H, S101A, V102I, V102Y, V102N, S104A, G116V, G116R, H118D,

H118N, A120S, S126L, P127Q, S128A, S154D, A156E, G157D, G157P, S158E, Y161A, R164S, Q176E, N179E, S182E, Q185N, A188P, G189E, V193M, N198D, V199I, Y203W, S206G, L211Q, L211D, N212D, N212S, M216S, A226V, K229L, Q230H, Q239R, N246K, N255W, N255D, N255E, L256E, L256D T268A e R269H. As variantes de protease são, de preferência, variantes da protease de Bacillus lentus (Savinase®) mostradas na SEQ ID NO 1 de WO 2016/001449, a protease de Bacillus amylolichenifaciens (BPN’) mostrada na SEQ ID NO 2 de WO2016/001449. As variantes de protease têm, de preferência, pelo menos 80% de identidade de sequência com a SEQ ID NO 1 ou a SEQ ID NO 2 de WO 2016/001449.

[0121] Uma variante de protease compreendendo uma substituição em uma ou mais posições correspondendo às posições 171, 173, 175, 179 ou 180 de SEQ ID NO: 1 de WO2004/067737, em que a referida variante de protease tem uma identidade de sequências de pelo menos 75%, mas menos do que 100% com SEQ ID NO: 1 de WO2004/067737.

[0122] Enzimas protease comercialmente disponíveis adequadas incluem aquelas vendidas sob os nomes registrados Alcalase ®, DuralaseTm, DurazymTm, Relase®, Relase® Ultra, Savinase®, Savinase® Ultra, Primase®, Polarzyme®, Kannase®, Liquanase®, Liquanase® Ultra, Ovozyme®, Coronase®, Coronase® Ultra, Blaze®, Blaze Evity® 100T, Blaze Evity® 125T, Blaze Evity® 150T, Neutrase®, Everlase® e Esperase® (Novozymes A/S), aquelas vendidas sob o nome registrado Maxatase®, Maxacal®, Maxapem®, Purafect Ox®, Purafect OxP®, Puramax®, FN2®, FN3®, FN4®, Excellase®, Excellenz P1000TM, Excellenz P1250TM, Eraser®, Preferenz P100TM, Purafect Prime®, Preferenz P110TM, Effectenz P1000TM, Purafect®TM, Effectenz P1050TM, Purafect Ox®TM, Effectenz P2000TM, Purafast®, Properase®, Opticlean® e Optimase® (Danisco/DuPont), AxapemTM (Gist-Brocases N.V.),

BLAP (sequência mostrada na Figura 29 de US5352604) e suas variantes (Henkel AG) e KAP (subtilisina de Bacillus alkalophilus) a partir da Kao. Estabilizadores/inibidores de enzimas

[0123] A protease, como descrito acima, pode ser estabilizada usando agentes estabilizadores convencionais, por exemplo, um poliol tal como glicerol, (mono, di ou tri) propilenoglicol, álcool açucarado, polipropilenoglicol e/ou polietilenoglicol, preferencialmente polietilenoglicol ou polipropilenoglicol com um peso molecular na gama de 200-1000; ou compostos que atuam reduzindo temporariamente a atividade das proteases (inibidores reversíveis).

[0124] Assim, a composição da invenção também pode incluir um inibidor/estabilizador de protease, que é um inibidor reversível da atividade da protease, por exemplo, atividade da serina protease. De preferência, o inibidor de protease é um inibidor de protease de subtilisina (reversível). Em particular, o inibidor de protease pode ser um aldeído peptídico, ácido bórico ou um ácido borônico; ou um derivado de qualquer um deles.

[0125] O inibidor de protease pode ter uma constante de inibição para uma serina protease, Ki (mol/L) de 1E-12 a 1E-03; mais preferido de 1E-11 a 1E-04; ainda mais preferido de 1E-10 a 1E-05; ainda mais preferido de 1E-10 a 1E-06; e o mais preferido de 1E-09 a 1E-07. Ácidos borônicos

[0126] O inibidor de protease pode ser um ácido borônico ou um seu derivado; de preferência, um ácido fenilborônico ou um seu derivado. Em uma modalidade da invenção, o derivado do ácido fenilborônico é da seguinte fórmula: em que R é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxi, C1-

C6 alquila, C1-C6 alquila substituída, C1-C6 alquenila e C1-C6 alquenila substituída. Preferencialmente, R é hidrogênio, CH3, CH3CH2 ou CH3CH2CH2.

[0127] Em uma modalidade preferida, o inibidor de protease (derivado do ácido fenilborônico) é o ácido 4-formil-fenilborônico (4- FPBA).

[0128] Em outra modalidade particular, o inibidor de protease é selecionado a partir do grupo que consiste em ácido tiofeno-2 borônico, ácido tiofeno-3 borônico, ácido acetamidofenil borônico, ácido benzofuran-2 borônico, ácido naftaleno-1 borônico, ácido naftaleno-2 borônico, 2-FPBA, 3-FBPA, 4-FPBA, ácido 1-tiantreno borônico, ácido 4- dibenzofuran borônico, ácido 5-metiltiofeno-2 borônico, ácido tionafreno borônico, ácido furan-2 borônico, ácido furan-3 borônico, ácido 4,4 bifenil- diborínico, 6-hidroxi-2-naftaleno, ácido 4-(metiltio)fenil borônico, ácido 4(trimetilsilil)fenil borônico, ácido 3-bromotiofeno borônico, ácido 4- metiltiofeno borônico, ácido 2-naftil borônico, ácido 5-bromotifeno borônico, ácido 5-clorotiofeno borônico, ácido dimetiltiofeno borônico, ácido 2- bromofenil borônico, ácido 3-clorofenil borônico, 3-metóxi-2-tiofeno, ácido p- metil-feniletil borônico, ácido 2-tiantreno borônico, ácido di-benzotiofeno borônico, ácido 4-carboxifenil borônico, ácido 9-antril borônico, ácido 3,5 diclorofenil borônico, anidrido do ácido difenil borônico, ácido o-clorofenil borônico, ácido p-clorofenil borônico, ácido m-bromofenil borônico, ácido p- bromofenil borônico, ácido p-fluorofenil borônico, ácido p-tolil borônico, ácido o-tolil borônico, ácido octil borórico, ácido 1,3,5 trimetilfenil borônico, ácido 3- cloro-4-flourofenil borônico, ácido 3-aminofenil borônico, ácido 3,5-bis- (trifluorometil)fenil borônico, ácido 2,4 diclorofenil borônico e ácido 4- metoxifenil borônico.

[0129] Outros derivados de ácido borônico adequados como inibidores de protease na composição detergente são descritos em US

4,963,655, US 5,159,060, WO 95/12655, WO 95/29223, WO 92/19707, WO 94/04653, WO 94/04654, US 5442100, US 5488157 e US 5472628. Aldeído ou cetona peptídico

[0130] O estabilizador de protease pode ter a fórmula: P- (A)y-L-(B)x-B0-R* em que: R* é H (hidrogênio), CH3, CX3, CHX2, ou CH2X, em que X é um átomo de halogênio, particularmente F (flúor); de preferência, R*=H (de modo que o estabilizador é um aldeído peptídico com a fórmula P-(A)y-L-(B)x-B0-H); B0 é um resíduo de aminoácido único com configuração L ou D da fórmula – NH-CH(R)-C(=O)-; (B)x é independentemente um único resíduo de aminoácido, cada um conectado ao próximo B ou B0 através do seu terminal C; L está ausente ou independentemente um grupo ligante da fórmula -C(=O)-, -C(=O)-C(=O)-, - C(=S)-, -C(=S)-C(=S)- ou -C(=S)-C(=O)-; x é 1, 2 ou 3; A está ausente se L estiver ausente ou é independentemente um resíduo de aminoácido único conectado a L através do terminal N do aminoácido; P é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio ou, se L estiver ausente, um grupo de proteção terminal N; y é 0, 1, ou 2, R é independentemente selecionado do grupo consistindo em C1-6 alquila, C6-10 arila ou C7-10 arilaquila opcionalmente substituída por um ou mais substituintes R’, idênticos ou diferentes; R’ é independentemente selecionado do grupo consistindo em halogênio, - OH, -OR'', -SH, -SR'', -NH2, -NHR'', -NR''2, -CO2H, -CONH2, -CONHR'', - CONR''2, -NHC(=N)NH2; e R’’ é um grupo C1-6 alquila.

[0131] x pode ser 1, 2 ou 3 e, portanto, B pode ter 1, 2 ou 3 resíduos de aminoácidos, respectivamente. Assim, B pode representar B1, B2-B1 ou B3-B2-B1, onde B3, B2 e B1 representam cada um um resíduo de aminoácido. y pode ser 0, 1 ou 2 e portanto A pode estar ausente, ou ter 1 ou 2 resíduos de aminoácidos, tendo respectivamente a fórmula A1 ou A2- A1 em que A2 e A1 representam cada um um resíduo de aminoácido.

[0132] B0 pode ser um único resíduo de aminoácido com configuração L ou D, que é conectado a H através do terminal C do aminoácido. B0 tem a fórmula –NH-CH(R)-C(=O)-, em que R é uma cadeia lateral C1-6 alquila, C6-10 arila ou C7-10 arilalquila, tal como metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, fenila ou benzila, e em que R pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes R' idênticos ou diferentes. Exemplos particulares de B0 são a forma D ou L de arginina (Arg), 3,4-diidroxifenilalanina, isoleucina (Ile), leucina (Leu), metionina (Met), norleucina (Nle), norvalina (Nva), fenilalanina (Phe), m-tirosina, p-tirosina (Tyr) e valina (Val). Uma modalidade particular é quando B0 é leucina, metionina, fenilalanina, p-tirosina e valina.

[0133] B1, que está conectado a B0 através do terminal C do aminoácido, pode ser um aminoácido alifático, hidrofóbico e/ou neutro. Exemplos de B1 são alanina (Ala), cisteína (Cys), glicina (GIy), isoleucina (Ile), leucina (Leu), norleucina (Nle), norvalina (Nva), prolina (Pro), serina (Ser), treonina (Thr) e valina (VaI). Exemplos particulares de B1 são alanina, glicina, isoleucina, leucina e valina. Uma modalidade particular é quando B1 é alanina, glicina ou valina.

[0134] Se presente, B2, que está conectado a B1 através do terminal C do aminoácido, pode ser um aminoácido alifático, hidrofóbico, neutro e/ou polar. Exemplos de B2 são alanina (Ala), arginina (Arg), capreomicidina (Cpd), cisteína (Cys), glicina (GIy), isoleucina (Ile), leucina (Leu), norleucina (Nle), norvalina (Nva), fenilalanina (Phe), prolina (Pro), serina (Ser), treonina (Thr), e valina (VaI). Exemplos particulares de B2 são alanina, arginina, capreomicidina, glicina, isoleucina, leucina, fenilalanina e valina. Uma modalidade particular é quando B2 é arginina, glicina, leucina, fenilalanina ou valina.

[0135] B3, que quando presente está conectado a B2 através do terminal C do aminoácido, pode ser um grande aminoácido alifático, aromático, hidrofóbico e/ou neutro. Exemplos de B3 são isoleucina (Ile), leucina (Leu), norleucina (Nle), norvalina (Nva), fenilalanina (Phe), fenilglicina, tirosina (Tyr), triptofano (Trp) e valina (VaI). Exemplos particulares de B3 são leucina, fenilalanina, tirosina e triptofano.

[0136] O grupo ligante L pode estar ausente ou ser selecionado do grupo consistindo em -C(=O)-, -C(=O)-C(=O)-, -C(=S)-, - C(=S)-C(=S)- ou -C(=S)-C(=O)-. Modalidades particulares da invenção são quando L está ausente ou L é um grupo carbonila -C(=O)-.

[0137] A1, que se presente está conectado a L através do terminal N do aminoácido, pode ser um aminoácido alifático, aromático, hidrofóbico, neutro e/ou polar. Exemplos de A1 são alanina (Ala), arginina (Arg), capreomicidina (Cpd), glicina (GIy), isoleucina (Ile), leucina (Leu), norleucina (Nle), norvalina (Nva), fenilalamima (Phe), treonina (Thr), tirosina (Tyr), triptofano (Trp) e valina (VaI). Exemplos particulares de A1 são alanina, arginina, glicina, leucina, fenilalanina, tirosina, triptofano e valina. Uma modalidade particular é quando B2 é leucina, fenilalanina, tirosina ou triptofano.

[0138] O resíduo A2, que quando presente está conectado a A1 através do terminal N do aminoácido, pode ser um grande aminoácido alifático, aromático, hidrofóbico e/ou neutro. Exemplos de A2 são arginina (Arg), isoleucina (Ile), leucina (Leu), norleucina (Nle), norvalina (Nva), fenilalanina (Phe), fenilglicina, Tirosina (Tyr), triptofano (Trp) e valina (VaI). Exemplos particulares de A2 são fenilalanina e tirosina.

[0139] O grupo de proteção P no terminal N (se presente) pode ser selecionado de formila, acetila (Ac), benzoíla (Bz), trifluoroacetila,

metoxissuccinila, grupos de proteção de uretano aromáticos e alifáticos tais como fluorenilmetiloxicarbonila (Fmoc), metoxicarbonila (Moc), (fluorometóxi)carbonila, benziloxicarbonila (Cbz), t-butiloxicarbonila (Boc) e adamantiloxicarbonila; p-metoxibenzil carbonila, benzila (Bn), p- metoxibenzila (PMB), p-metoxifenila (PMP), metoxiacetila, metilamino carbonila, metilsulfonila, etilsulfonila, benzilsulfonila, metilfosforamidila (MeOP(OH)(=O)) e benzilfosforamidila (PhCH2OP(OH)(=O)).

[0140] No caso de um aldeído de tripeptídeo com um grupo de proteção (isto é, x=2, L está ausente e A está ausente), P é preferencialmente acetila, metoxicarbonila, benziloxicarbonila, metilamino carbonila, metilsulfonila, benzilsulfonila e benzilfosforamidila. No caso de um aldeído de tetrapeptídeo com um grupo de proteção (isto é, x=3, L está ausente e A está ausente), P é preferencialmente acetila, metoxicarbonila, metilsulfonila, etilsulfonila e metilfosforamidila.

[0141] Aldeídos de peptídeo adequados são descritos em WO94/04651, WO95/25791, WO98/13458, WO98/13459, WO98/13460, WO98/13461, WO98/13462, WO07/141736, WO07/145963, WO09/118375, WO10/055052 e WO11/036153. Mais particularmente, o peptídeo aldeído pode ser Cbz-Arg-Ala-Tyr-H, Ac-Gly-Ala-Tyr-H, Cbz-Gly-Ala-Tyr-H, Cbz-Gly- Ala-Tyr-CF3, Cbz-Gly-Ala-Leu-H, Cbz-Val-Ala-Leu-H, Cbz-Val-Ala-Leu-CF3, Moc-Val-Ala-Leu-CF3, Cbz-Gly-Ala-Phe-H, Cbz-Gly-Ala-Phe-CF3, Cbz-Gly- Ala-Val-H, Cbz-Gly-Gly-Tyr-H, Cbz-Gly-Gly-Phe-H, Cbz-Arg-Val-Tyr-H, Cbz- Leu-Val-Tyr-H, Ac-Leu-Gly-Ala-Tyr-H, Ac-Phe-Gly-Ala-Tyr-H, Ac-Tyr-Gly- Ala-Tyr-H, Ac-Phe-Gly-Ala-Leu-H, Ac-Phe-Gly-Ala-Phe-H, Ac-Phe-Gly-Val- Tyr-H, Ac-Phe-Gly-Ala-Met-H, Ac-Trp-Leu-Val-Tyr-H, MeO-CO-Val-Ala-Leu- H, MeNCO-Val-Ala-Leu-H, MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Leu-H, MeO-CO-Phe-Gly- Ala-Phe-H, MeSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H, MeSO2-Val-Ala-Leu-H, PhCH2O- P(OH)(O)-Val-Ala-Leu-H, EtSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H, PhCH2SO2-Val-Ala- Leu-H, PhCH2O-P(OH)(O)-Leu-Ala-Leu-H, PhCH2O-P(OH)(O)-Phe-Ala-Leu-

H, ou MeO-P(OH)(O)-Leu-Gly-Ala-Leu-H. Um estabilizador preferido para utilização na composição líquida da invenção é Cbz-Gly-Ala-Tyr-H, ou um seu aducto hidrosulfito, em que Cbz é benziloxicarbonila.

[0142] Outros exemplos de tais aldeídos peptídicos incluem α-MAPI, β-MAPI, Phe-C(=O)-Arg-Val-Tyr-H, Phe-C(=O)-Gly-Gly- Tyr-H, Phe-C(=O)-Gly-Ala-Phe-H, Phe-C(=O)-Gly-Ala-Tyr-H, Phe-C(=O)- Gly-Ala-L-H, Phe-C(=O)-Gly-Ala-Nva-H, Phe-C(=O)-Gly-Ala-Nle-H, Tyr- C(=O)-Arg-Val-Tyr-H, Tyr-C(=O)-Gly-Ala-Tyr-H, Phe-C(=S)-Arg-Val-Phe-H, Phe-C(=S)-Arg-Val-Tyr-H, Phe-C(=S)-Gly-Ala-Tyr-H, Antipaína, GE20372A, GE20372B, Quimostatina A, Quimostatina B, e Quimostatina C.

[0143] O estabilizador de protease pode ser um aducto de hidrossulfito do aldeído peptídico descrito acima, por exemplo, como descrito em WO 2013/004636. O aducto pode ter a fórmula P-(A)y-L-(B)x-N(H)-CHR- CH(OH)-SO3M, em que P, A, y, L, B, x e R são definidos como anteriormente, e M é H ou um metal alcalino, de preferência Na ou K.

[0144] Uma solução aquosa do produto de adição de hidrossulfito pode ser preparado por reação do aldeído peptídico correspondente com uma solução aquosa de bissulfito de sódio (hidrogenossulfito de sódio, NaHSO3); bissulfito de potássio (KHSO3) através de métodos conhecidos, por exemplo, como descritos em WO 98/47523; US 6,500,802; US 5,436,229; J. Am. Chem. Soc. (1978) 100, 1228; Org. Synth., Coll. vol. 7: 361.

[0145] Estabilizadores de protease de aldeído peptídico particularmente preferidos tem a fórmula P-B3-B2-B1-B0-H, ou um aducto de hidrossulfito tendo a fórmula P-B3-B2-B1-N(H)-CHR-CHOH-SO3M, em que i) H é hidrogênio; ii) B0 é um resíduo de aminoácido único com configuração L ou D da fórmula –NH-CH(R)-C(=O)-; iii) B1 e B2 são independentemente resíduos de aminoácidos únicos;

iv) B3 é um único resíduo de aminoácido ou está ausente; v) R é independentemente selecionado do grupo consistindo em C1-6 alquila, C6-10 arila ou C7-10 arilaquila opcionalmente substituída por um ou mais substituintes R’, idênticos ou diferentes; vi) R’ é independentemente selecionado do grupo consistindo em halogênio, -OH, -OR'', -SH, -SR'', -NH2, -NHR'', -NR''2, -CO2H, -CONH2, - CONHR'', -CONR''2, -NHC(=N)NH2; vii) R’’ é um grupo C1-6 alquila. viii) P é um grupo de proteção do terminal N, preferencialmente metoxicarbonil (Moc) ou benziloxicarbonil (Cbz); e ix) M é H ou um metal alcalino, de preferência Na ou K.

[0146] Em uma modalidade ainda mais preferida, o estabilizador de protease de aldeído peptídico tem a fórmula P-B2-B1-B0-H ou um aducto com a fórmulaP-B2-B1-N(H)-CHR-CHOH-SO3M, em que i) H é hidrogênio; ii) B0 é um resíduo de aminoácido único com configuração L ou D da fórmula –NH-CH(R)-C(=O)-; iii) B1 e B2 são independentemente resíduos de aminoácidos únicos; iv) R é independentemente selecionado do grupo consistindo em C1-6 alquila, C6-10 arila ou C7-10 arilaquila opcionalmente substituída por um ou mais substituintes R’, idênticos ou diferentes; v) R’ é independentemente selecionado do grupo consistindo em halogênio, -OH, -OR'', -SH, -SR'', -NH2, -NHR'', -NR''2, -CO2H, -CONH2, - CONHR'', -CONR''2, -NHC(=N)NH2; vi) R’’ é um grupo C1-6 alquila. vii) P é um grupo de proteção do terminal N, preferencialmente metoxicarbonil (Moc) ou benziloxicarbonil (Cbz); e viii) M é H ou um metal alcalino, de preferência Na ou K.

[0147] As modalidades preferidas de B0, B1, B2, B3 e P são como descritas acima.

[0148] A razão molar dos aldeídos peptídicos acima mencionados (ou aductos de hidrossulfito) para a protease pode ser de pelo menos 1:1 ou 1,5:1 e pode ser menor que 1000:1, sendo mais preferido menor que 500:1, ainda mais preferida de 100:1 a 2:1 ou de 20:1 a 2:1, ou mais preferido, a razão molar é de 10:1 a 2:1.

[0149] Sais de formato (por exemplo, formato de sódio) e ácido fórmico também mostraram bons efeitos como inibidores da atividade da protease. O formato pode ser usado em sinergia com os inibidores de protease acima mencionados, como mostrado no documento WO 2013/004635. Os sais de formato podem estar presentes na composição de suspensão em uma quantidade de pelo menos 0,1% em peso ou 0,5% em peso, por exemplo, pelo menos 1,0%, pelo menos 1,2% ou pelo menos 1,5%. A quantidade é tipicamente abaixo de 5% p/p, abaixo de 4% ou abaixo de 3%.

[0150] Em uma modalidade, a protease é uma metaloprotease e o inibidor é um inibidor de metaloprotease, por exemplo, um inibidor à base de hidrolisado de proteínas (por exemplo, como descrito em WO 2008/134343). Celulases

[0151] Celulases adequadas incluem aquelas de origem bacteriana ou fúngica. São incluídos mutantes quimicamente modificados ou geneticamente modificados por proteínas. Celulases adequadas incluem celulases dos gêneros Bacillus, Pseudomonas, Humicola, Fusarium, Thielavia, Acremonium, por exemplo, as celulases fúngicas produzidas a partir de Humicola insolens, Myceliophthora thermophila e Fusarium oxysporum divulgadas em US 4,435,307, US 5,648,263, US 5,691,178, US 5,776,757 e WO 89/09259.

[0152] Celulases especialmente adequadas são as celulases alcalinas ou neutras tendo benefícios de cuidados da cor. Exemplos de tais celulases são celulases descritas em EP 0 495 257, EP 0 531 372, WO 96/11262, WO 96/29397, WO 98/08940. Outros exemplos são variantes de celulases tais como aquelas descritas em WO 94/07998, EP 0 531 315, US 5,457,046, US 5,686,593, US 5,763,254, WO 95/24471, WO 98/12307 e WO99/001544.

[0153] Outras celulases são a enzima endo-beta-1,4- glucanase que tem uma sequência de pelo menos 97% de identidade com a sequência de aminoácidos da posição 1 a posição 773 da SEQ ID NO:2 de WO 2002/099091 ou uma xiloglucanase da família 44, sendo que uma enzima xiloglucanase tem uma sequência de pelo menos 60% de identidade com as posições 40 a 559 da SEQ ID NO: 2 de WO 2001/062903.

[0154] Celulases comercialmente disponíveis incluem Celluzyme™ e Carezyme™ (Novozymes A/S) Carezyme Premium™ (Novozymes A/S), Celluclean™ (Novozymes A/S), Celluclean Classic™ (Novozymes A/S), Cellusoft™ (Novozymes A/S), Whitezyme™ (Novozymes A/S), Clazinase™ e Puradax HA™ (Genencor International Inc.) e KAC- 500(B)™ (Kao Corporation). Mananases

[0155] Mananases adequadas incluem as de origem bacteriana ou fúngica. São incluídos mutantes química ou geneticamente modificados. A mananase pode ser uma mananase alcalina da Família 5 ou

26. Pode ser um tipo selvagem de Bacillus ou Humicola, particularmente B. agaradhaerens, B. licheniformis, B. halodurans, B. clausii, ou H. insolens. Mananases adequadas são descritas em WO1999/064619. Uma mananase comercialmente disponível é Mannaway (Novozymes A/S). Peroxidases/Oxidases

[0156] As peroxidases/oxidases adequadas incluem aquelas de origem vegetal, bacteriana ou fúngica. São incluídos mutantes quimicamente modificados ou geneticamente modificados por proteínas. Os exemplos de peroxidases úteis incluem peroxidases de Coprinus, por exemplo, de C. cinereus, e suas variantes como aquelas descritas em WO 93/24618, WO 95/10602 e WO 98/15257. Peroxidases comercialmente disponíveis incluem Guardzyme™ (Novozymes A/S). Lipases e Cutinases:

[0157] Lipases e cutinases adequadas incluem aquelas de origem bacteriana ou fúngica. São incluídos mutantes quimicamente modificados ou geneticamente modificados por proteínas. Exemplos incluem lipase de Thermomyces, por exemplo, de T. lanuginosus (previamente chamada Humicola lanuginosa) como descrito em EP258068 e EP305216, cutinase de Humicola, por exemplo, H. insolens (WO96/13580), lipase de estirpes de Pseudomonas (algumas destas agora renomeadas Burkholderia), por exemplo, P. alcaligenes ou P. pseudoalcaligenes (EP218272), P. cepacia (EP331376), estirpe de P. sp. SD705 (WO95/06720 & WO96/27002), P. wisconsinensis (WO96/12012), lipases tipo GDSL de Streptomyces (WO10/065455), cutinase de Magnaporthe grisea (WO10/107560), cutinase de Pseudomonas mendocina (US5,389,536), lipase de Thermobifida fusca (WO11/084412), lipase de Geobacillus stearothermophilus (WO11/084417), lipase de Bacillus subtilis (WO11/084599) e lipase de Streptomyces griseus (WO11/150157) e S. pristinaespiralis (WO12/137147).

[0158] Outros exemplos são variantes de lipase tais como aquelas descritas em EP407225, WO92/05249, WO94/01541, WO94/25578, WO95/14783, WO95/30744, WO95/35381, WO95/22615, WO96/00292, WO97/04079, WO97/07202, WO00/34450, WO00/60063, WO01/92502, WO07/87508 e WO09/109500.

[0159] Produtos de lipase comerciais preferenciais incluem LipolaseTM, Lipex™; LipolexTM e LipocleanTM (Novozymes A/S), Lumafast (originalmente a partir da Genencor) e Lipomax (originalmente a partir da Gist-Brocades).

[0160] Outros exemplos ainda são lipases por vezes referidas como aciltransferases ou per-hidrolases, por exemplo, aciltransferases com homologia com lipase A de Candida antarctica (WO10/111143), aciltransferase de Mycobacterium smegmatis (WO05/56782), per-hidrolases da família CE 7 (WO09/67279) e variantes da per-hidrolase de M. smegmatis, em particular a variante S54V usada no produto comercial Gentle Power Bleach da Huntsman Textile Effects Pte Ltd (WO10/100028). Amilases

[0161] Amilases adequadas incluem alfa-amilases e/ou uma glucoamilase e podem ser de origem bacteriana ou fúngica. São incluídos mutantes quimicamente modificados ou geneticamente modificados por proteínas. As amilases incluem, por exemplo, alfa-amilases obtidas a partir de Bacillus, por exemplo, uma estirpe especial de Bacillus licheniformis, descrita em mais detalhe em GB 1,296,839.

[0162] Amilases adequadas incluem amilases tendo SEQ ID NO: 2 em WO 95/10603 ou suas variantes tendo 90% de identidade de sequências com SEQ ID NO: 3. Variantes preferenciais são descritas em WO 94/02597, WO 94/18314, WO 97/43424 e SEQ ID NO: 4 de WO 99/019467, tais como variantes com substituições em uma ou mais das seguintes posições: 15, 23, 105, 106, 124, 128, 133, 154, 156, 178, 179, 181, 188, 190, 197, 201, 202, 207, 208, 209, 211, 243, 264, 304, 305, 391, 408, e 444.

[0163] Diferentes amilases adequadas incluem amilases tendo SEQ ID NO: 6 em WO 02/010355 ou suas variantes tendo 90% de identidade de sequências com SEQ ID NO: 6. Variantes preferidas de SEQ

ID NO: 6 são aquelas tendo uma deleção nas posições 181 e 182 e uma substituição na posição 193.

[0164] Outras amilases que são adequadas são alfa- amilase híbrida compreendendo os resíduos 1-33 da alfa-amilase derivada a partir de B. amyloliquefaciens mostrada em SEQ ID NO: 6 de WO 2006/066594 e os resíduos 36-483 da alfa-amilase de B. licheniformis mostrada em SEQ ID NO: 4 de WO 2006/066594 ou suas variantes tendo 90% de identidade de sequências. Variantes preferenciais desta alfa-amilase híbrida são aquelas tendo uma substituição, uma deleção ou uma inserção em uma ou mais das seguintes posições: G48, T49, G107, H156, A181, N190, M197, I201, A209 e Q264. Variantes mais preferenciais da alfa- amilase híbrida compreendendo os resíduos 1-33 da alfa-amilase derivada de B. amyloliquefaciens mostrada em SEQ ID NO: 6 de WO 2006/066594 e os resíduos 36-483 de SEQ ID NO: 4 são aquelas tendo as substituições: M197T; H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S; ou G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S.

[0165] Amilases adicionais que são adequadas são amilases tendo SEQ ID NO: 6 em WO 99/019467 ou suas variantes tendo 90% de identidade de sequências com SEQ ID NO: 6. Variantes preferidas de SEQ ID NO: 6 são aquelas que têm uma substituição, uma deleção ou uma inserção em uma ou mais das seguintes posições: R181, G182, H183, G184, N195, I206, E212, E216 e K269. Amilases particularmente preferenciais são aquelas que têm deleção nas posições R181 e G182 ou nas posições H183 e G184.

[0166] Amilases adicionais que podem ser usadas são aquelas tendo SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 7 de WO 96/023873 ou suas variantes tendo 90% de identidade de sequências com SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID

NO: 7. Variantes preferidas de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 7 são aquelas tendo uma substituição, uma deleção ou uma inserção em uma ou mais das seguintes posições: 140, 181, 182, 183, 184, 195, 206, 212, 243, 260, 269, 304 e 476, com o uso da SEQ ID 2 de WO 96/023873 para numeração. Variantes mais preferenciais são aquelas que têm uma deleção em duas posições selecionadas de 181, 182, 183 e 184, tais como 181 e 182, 182 e 183 ou posições 183 e 184. Variantes de amilase o mais preferenciais de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 7 são aquelas tendo uma deleção nas posições 183 e 184 e uma substituição em uma ou mais das posições 140, 195, 206, 243, 260, 304 e 476.

[0167] Outras amilases que podem ser usadas são amilases tendo SEQ ID NO: 2 de WO 08/153815, SEQ ID NO: 10 em WO 01/66712 ou suas variantes tendo 90% de identidade de sequências com SEQ ID NO: 2 de WO 08/153815 ou 90% de identidade de sequências com SEQ ID NO: 10 em WO 01/66712. Variantes preferenciais de SEQ ID NO: 10 no documento no WO 01/66712 são aquelas que têm uma substituição, uma deleção ou uma inserção em uma ou mais das seguintes posições: 176, 177, 178, 179, 190, 201, 207, 211 e 264.

[0168] Amilases adequadas adicionais são amilases que têm a SEQ ID NO: 2 de WO 09/061380 ou variantes que tenham 90% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 2. Variantes preferenciais de SEQ ID NO: 2 são aquelas tendo uma truncação do terminal C e/ou uma substituição, uma deleção ou uma inserção em uma ou mais das seguintes posições: Q87, Q98, S125, N128, T131, T165, K178, R180, S181, T182, G183, M201, F202, N225, S243, N272, N282, Y305, R309, D319, Q320, Q359, K444 e G475. Variantes mais preferenciais de SEQ ID NO: 2 são aquelas tendo uma substituição em uma ou mais das seguintes posições: Q87E,R, Q98R, S125A, N128C, T131I, T165I, K178L, T182G, M201L, F202Y, N225E,R, N272E,R, S243Q,A,E,D, Y305R, R309A, Q320R, Q359E,

K444E e G475K e/ou deleção na posição R180 e/ou S181 ou T182 e/ou G183. Variantes de amilase o mais preferenciais de SEQ ID NO: 2 são aquelas tendo as substituições: N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K; N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K; S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K; ou S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K, em que as variantes são truncadas na terminação C e, opcionalmente, compreendem adicionalmente uma substituição na posição 243 e/ou uma deleção na posição 180 e/ou na posição 181.

[0169] Amilases adequadas adicionais são amilases que têm a SEQ ID NO: 1 de WO13184577 ou suas variantes que têm 90% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1. Variantes preferenciais de SEQ ID NO: 1 são aquelas que têm uma substituição, uma deleção ou uma inserção em uma ou mais das seguintes posições: K176, R178, G179, T180, G181, E187, N192, M199, I203, S241, R458, T459, D460, G476 e G477. Variantes mais preferenciais de SEQ ID NO: 1 são aquelas tendo uma substituição em uma ou mais das seguintes posições: K176L, E187P, N192FYH, M199L, I203YF, S241QADN, R458N, T459S, D460T, G476K e G477K e/ou deleção na posição R178 e/ou S179 ou de T180 e/ou G181. Variantes de amilase o mais preferenciais de SEQ ID NO: 1 são aquelas tendo as substituições: E187P+I203Y+G476K E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K em que as variantes compreendem opcionalmente adicionalmente uma substituição na posição 241 e/ou uma deleção na posição 178 e/ou posição

179.

[0170] Amilases adequadas adicionais são amilases que têm a SEQ ID NO: 1 de WO10104675 ou suas variantes que têm 90% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1. Variantes preferenciais de SEQ ID NO: 1 são aquelas que têm uma substituição, uma deleção ou uma inserção em uma ou mais das seguintes posições: N21, D97, V128 K177, R179, S180, I181, G182, M200, L204, E242, G477 e G478. Variantes mais preferenciais de SEQ ID NO: 1 são aquelas tendo uma substituição em uma ou mais das seguintes posições: N21D, D97N, V128I K177L, M200L, L204YF, E242QA, G477K e G478K e/ou deleção na posição R179 e/ou S180 ou de I181 e/ou G182. As variantes de amilase da máxima preferência de SEQ ID NO: 1 são aquelas tendo as substituições: N21D+D97N+V128I em que as variantes compreendem opcionalmente adicionalmente uma substituição na posição 200 e/ou uma deleção na posição 180 e/ou posição

181.

[0171] Outras amilases adequadas são a alfa-amilase tendo SEQ ID NO: 12 em WO01/66712 ou uma variante tendo pelo menos 90 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 12. Variantes de amilase preferenciais são aquelas tendo uma substituição, uma deleção ou uma inserção em uma ou mais das seguintes posições de SEQ ID NO: 12 em WO01/66712: R28, R118, N174; R181, G182, D183, G184, G186, W189, N195, M202, Y298, N299, K302, S303, N306, R310, N314; R320, H324, E345, Y396, R400, W439, R444, N445, K446, Q449, R458, N471, N484. Amilases preferenciais particulares incluem variantes tendo uma deleção de D183 e G184 e tendo as substituições R118K, N195F, R320K e R458K, e uma variante tendo adicionalmente substituições em uma ou mais posições selecionadas do grupo: M9, G149, G182, G186, M202, T257, Y295, N299, M323, E345 e A339, mais preferencialmente, uma variante que tem, adicionalmente, substituições em todas essas posições.

[0172] Outros exemplos são variantes de amilase, tais como aquelas descritas em WO2011/098531, WO2013/001078 e WO2013/001087.

[0173] Amilases comercialmente disponíveis são DuramylTM, TermamylTM, FungamylTM, StainzimaTM, Stainzima PlusTM, NatalaseTM, Liquozyme X e BANTM (a partir da Novozymes A/S) e RapidaseTM, PurastarTM/EffectenzTM, Powerase, Preferenz S1000, Preferenz S100 e Preferenz S110 (a partir da Genencor International Inc./DuPont). Peroxidases/Oxidases

[0174] As peroxidases adequadas são compreendidas pela classificação de enzima EC 1.11.1.7, conforme apresentado pelo Comitê de Nomenclatura da União Interacional de Bioquímica e Biologia Molecular (IUBMB) ou qualquer fragmento derivado da mesma, que exibe atividade de peroxidase.

[0175] Peroxidases adequadas incluem aquelas de origem vegetal, bacteriana ou fúngica. São incluídos mutantes quimicamente modificados ou com manipulação de proteínas. Exemplos de peroxidases úteis utilizadas peroxidases de Coprinopsis, por exemplo, C. cinerea (EP

179.486) e suas variantes como descritas em WO 93/24618, WO 95/10602 e WO 98/15257.

[0176] Uma peroxidase adequada inclui uma enzima haloperoxidase, tal como cloroperoxidase, bromoperoxidase e compostos exibindo atividade de cloroperoxidase ou bromoperoxidase. As haloperoxidases são classificadas de acordo com a sua especificidade por íons de haleto. As cloroperoxidases (E.C. 1.11.1.10) catalisam a formação de hipoclorito a partir de íons de cloreto. Preferencialmente, uma haloperoxidase é um vanádio haloperoxidase, isto é, uma haloperoxidase contendo vanadato. Haloperoxidases foram isoladas a partir de muitos fungos diferentes, em particular a partir do grupo de fungos hifomicetos dematiáceos, tais como Caldariomyces, por exemplo, C. fumago, Alternaria, Curvularia, por exemplo, C. verruculosa e C. inaequalis, Drechslera, Ulocladium e Botrytis.

[0177] Haloperoxidases foram também isoladas a partir de bactérias tais como Pseudomonas, por exemplo, P. pyrrocinia e Streptomyces, por exemplo, S. aureofaciens.

[0178] Uma oxidase adequada inclui, em particular, qualquer enzima lacase compreendida pela classificação de enzimas EC

1.10.3.2 ou qualquer seu fragmento derivado a partir dela exibindo atividade de lacase, ou um composto exibindo uma atividade similar, tal como uma catecol oxidase /EC 1.10.3.1), uma o-aminofenol oxidase (EC 1.10.3.4) ou uma bilirrubina oxidase (EC 1.3.3.5). Enzimas lacase preferenciais são enzimas de origem microbiana. As enzimas podem ser derivadas de plantas, bactérias ou fungos (incluindo fungos filamentosos e leveduras). Exemplos adequados de fungos incluem uma lacase derivável a partir de uma estirpe de Aspergillus, Neurospora, por exemplo, N. crassa, Podospora, Botrytis, Collybia, Fomes, Lentinus, Pleurotus, Trametes, por exemplo, T. villosa e T. versicolor, Rhizoctonia, por exemplo, R. solani, Coprinopsis, por exemplo, C. cinerea, C. comatus, C. friesii e C. plicatilis, Psathyrella, por exemplo, P. condelleana, Panaeolus, por exemplo, P. papilionaceus, Myceliophthora, por exemplo, M. thermophila, Schytalidium, por exemplo, S. thermophilum, Polyporus, por exemplo, P. pinsitus, Phlebia, por exemplo, P. radiata (WO 92/01046) ou Coriolus, por exemplo, C. hirsutus (JP 2238885). Exemplos adequados de bactérias incluem uma lacase derivável a partir de uma estirpe de Bacillus. Uma lacase derivada a partir de Coprinopsis ou Myceliophthora é preferencial; em particular, uma lacase derivada a partir de Coprinopsis cinerea, como divulgada em WO 97/08325; ou a partir de Myceliophthora thermophila, como divulgada em WO 95/33836.

Dispersantes

[0179] A composição de limpeza da presente invenção pode também conter dispersantes. Em particular, os detergentes em pó podem compreender dispersantes. Materiais orgânicos solúveis em água adequados incluem os ácidos homo- ou co-poliméricos ou seus sais, nos quais o ácido policarboxílico compreende pelo menos dois radicais carboxila separados um do outro por não mais do que dois átomos de carbono. Dispersantes adequados são por exemplo descritos em Powdered Detergents, Surfactant science series volume 71, Marcel Dekker, Inc. Agentes Inibidores da Transferência de Corantes

[0180] A composição de limpeza da presente invenção pode também incluir um ou mais agentes inibidores da transferência de corantes. Agentes de inibição da transferência de corante polimérico adequados incluem, mas não estão limitados a, polímeros de polivinilpirrolidona, polímeros de N-óxido de poliamina, copolímeros de N- vinilpirrolidona e N-vinilimidazol, poliviniloxazolidonas e polivinilimidazois ou suas misturas. Quando presentes em uma composição em questão, os agentes inibidores da transferência de corantes podem estar presentes a níveis de cerca de 0,0001% a cerca de 10%, de cerca de 0,01% a cerca de 5% ou mesmo de cerca de 0,1% a cerca de 3% em peso da composição. Agente branqueador fluorescente

[0181] A composição de limpeza da presente invenção conterá também preferencialmente componentes adicionais que podem tingir artigos sendo limpos, tais como agentes branqueadores fluorescentes ou abrilhantadores ópticos. Onde presente, o abrilhantador está preferencialmente a um nível de cerca de 0,01% a cerca de 0,5%. Pode ser usado qualquer agente branqueador fluorescente adequado para uso em uma composição detergente de lavagem de roupa na composição da presente invenção. Os agentes branqueadores fluorescentes o mais comumente usados são aqueles pertencendo às classes de derivados de ácido diaminoestilbenossulfônico, derivados de diarilpirazolina e derivados de bisfenil-diestirila. Exemplos do tipo derivado de ácido diaminoestilbeno- sulfônico de agentes branqueadores fluorescente incluem os sais de sódio de: 4,4'-bis-(2-dietanolamino-4-anilino-s-triazin-6-ilamino)estilbeno-2,2'- dissulfonato, 4,4'-bis-(2,4-dianilino-s-triazin-6-ilamino)estilbeno-2,2'- dissulfonato, 4,4'-bis-(2-anilino-4-(N-metil-N-2-hidróxi-etilamino)-s-triazin-6- ilamino)estilbeno-2,2'-dissulfonato, 4,4'-bis-(4-fenil-1,2,3-triazol-2- il)estilbeno-2,2'-dissulfonato e 5-(2H-nafto[1,2-d][1,2,3]triazol-2-il)-2-[(E)-2- fenilvinil]benzenossulfonato de sódio. Agentes branqueadores fluorescentes preferenciais são Tinopal DMS e Tinopal CBS disponíveis a partir da Ciba- Geigy AG, Basileia, Suíça. Tinopal DMS é o sal dissódico de 4,4'-bis-(2- morfolino-4 anilino-s-triazin-6-ilamino)estilbeno-2,2´-dissulfonato. Tinopal CBS é o sal dissódico de 2,2'-bis-(fenil-estiril)-dissulfonato. Agentes branqueadores fluorescentes são também preferenciais é o Parawhite KX comercialmente disponível, fornecidos pela Paramount Minerals and Chemicals, Mumbai, Índia. Outros produtos fluorescentes adequados para uso na invenção incluem as pirazolinas de 1-3-diarila e as 7- alquilaminocoumarinas. Níveis de abrilhantador fluorescente adequados incluem níveis mais baixos de cerca de 0,01, de 0,05, de cerca de 0,1 ou mesmo de cerca de 0,2% em peso a níveis mais elevados de 0,5 ou mesmo 0,75% em peso. Polímeros de liberação da sujidade

[0182] A composição de limpeza da presente invenção pode incluir também um ou mais polímeros de liberação da sujidade que auxiliam na remoção de sujidades a partir de tecidos tais como tecidos à base de algodão e poliéster, em particular na remoção de sujidades hidrofóbicas a partir de tecidos à base de poliéster. Os polímeros de liberação da sujidade podem por exemplo ser polímeros à base de tereftalato não iônicos ou aniônicos, caprolactama de polivinila e copolímeros relacionados, copolímeros de enxerto de vinila, poliamidas de poliéster, ver por exemplo Capítulo 7 em Powdered Detergents, Surfactant science series volume 71, Marcel Dekker, Inc.

Outro tipo de polímeros de liberação da sujidade é polímeros de limpeza de gordura alcoxilados anfifílicos compreendendo uma estrutura nuclear e uma pluralidade de grupos alcoxilato anexados a essa estrutura nuclear.

A estrutura nuclear pode compreender uma estrutura de polialquilenimina ou uma estrutura de polialcanolamina como descrita em detalhe em WO 2009/087523 (deste modo incorporada por referência). Além do mais, copolímeros de enxerto aleatório são polímeros de liberação da sujidade adequados.

Copolímeros de enxerto adequados são descritos em mais detalhe em WO 2007/138054, WO 2006/108856 e WO 2006/113314 (deste modo incorporadas por referência). Polímeros de polietilenoglicol adequados incluem copolímeros de enxerto aleatório compreendendo: (i) esqueleto hidrofílico compreendendo polietilenoglicol; e (ii) cadeia(s) lateral(ais) selecionada(s) do grupo consistindo em: grupo alquila C4-C25, polipropileno, polibutileno, éster de vinila de um ácido monocarboxílico C1- C6 saturado, éster de alquila C1-C6 de ácido acrílico ou metacrílico e suas misturas.

Polímeros de polietilenoglicol adequados têm um esqueleto de polietilenoglicol com cadeias laterais de acetato de polivinila aleatoriamente enxertadas.

O peso molecular médio do esqueleto de polietilenoglicol pode estar na gama de 2.000 Da a 20.000 Da ou de 4.000 Da a 8.000 Da.

A razão de pesos moleculares entre o esqueleto de polietilenoglicol e as cadeias laterais de acetato de polivinila pode estar na gama de 1: 1 a 1:5 ou de 1: 1,2 a 1:2. O número médio de sítios de enxerto por unidades de óxido de etileno pode ser menor do que 1 ou menor do que 0,8, o número médio de locais de enxerto por unidades de óxido de etileno pode estar na gama de 0,5 a 0,9 ou o número médio de locais de enxerto por unidades de óxido de etileno pode estar na gama de 0,1 a 0,5 ou de 0,2 a 0,4. Um polímero de polietilenoglicol adequado é Sokalan HP22. Outros polímeros de liberação da sujidade são estruturas de polissacarídeos substituídas, especialmente estruturas celulósicas substituídas tais como derivados de celulose tais como aqueles descritos em EP 1867808 ou WO 2003/040279 (ambas são deste modo incorporadas por referência). Polímeros celulósicos adequados incluem celulose, éteres de celulose, ésteres de celulose, amidas de celulose e suas misturas. Polímeros celulósicos adequados incluem celulose anionicamente modificada, celulose não ionicamente modificada, celulose cationicamente modificada, celulose zwitterionicamente modificada e suas misturas. Polímeros celulósicos adequados incluem celulose de metila, celulose de carboximetila, celulose de etila, celulose de hidroxietila, celulose de hidroxipropilmetila, celulose de carboximetila de éster e suas misturas. Agentes antirredeposição

[0183] A composição de limpeza da presente invenção pode também incluir um ou mais agentes antirredeposição tais como carboximetilcelulose (CMC), álcool de polivinila (PVA), polivinilpirrolidona (PVP), polioxietileno e/ou polietilenoglicol (PEG), homopolímeros de ácido acrílico, copolímeros de ácido acrílico e ácido maleico e polietilenoiminas etoxiladas. Os polímeros à base de celulose descritos sob polímeros de liberação da sujidade acima podem também funcionar como agentes antirredeposição. Modificadores da Reologia

[0184] A composição de limpeza da presente invenção pode também incluir um ou mais modificadores da reologia, estruturantes ou espessantes, como distintos de agentes redutores da viscosidade. Os modificadores da reologia são selecionados do grupo consistindo em cristalinos não poliméricos, materiais funcionais em hidróxi, modificadores da reologia poliméricos que conferem características pseudoplásticas à matriz líquida aquosa de uma composição detergente líquida. A reologia e a viscosidade do detergente podem ser modificadas e ajustadas por métodos conhecidos na técnica, por exemplo como mostrado em EP 2169040.

[0185] Outros componentes de composições de limpeza adequados incluem, mas não estão limitados a, agentes antiencolhimento, agentes antipregueamento, bactericidas, aglutinantes, transportadores, corantes, estabilizantes de enzimas, amaciadores de tecidos, enchimentos, reguladores da espuma, hidrótopos, perfumes, pigmentos, supressores da solução saponífera, solventes e estruturantes para detergentes líquidos e/ou agentes de elastização da estrutura. Formulação de produtos detergentes

[0186] A composição de limpeza da invenção pode estar em qualquer forma conveniente, por exemplo, uma barra, um comprimido homogêneo, um comprimido tendo duas ou mais camadas, uma bolsa tendo um ou mais compartimentos, um pó regular ou compacto, um grânulo, uma pasta, um gel ou um líquido regular, compacto ou concentrado.

[0187] As bolsas podem ser configuradas como compartimentos únicos ou múltiplos. Podem ter qualquer forma, formato e material que sejam adequados para conter a composição, por exemplo, sem permitir a liberação da composição a partir da bolsa antes do contato com a água. A bolsa é feita a partir de filme solúvel em água que encerra um volume interno. O referido volume interior pode ser dividido em compartimentos da bolsa. Filmes preferenciais são materiais poliméricos, preferencialmente polímeros que são formados em um filme ou folha. Polímeros, copolímeros ou seus derivados preferenciais são poliacrilatos selecionados, e copolímeros de acrilato solúveis em água, celulose de metila, celulose de carboxi e metila, dextrina de sódio, celulose de etila, celulose de hidroxietila, celulose de hidropropila e metila, maltodextrina, polimetacrilatos, o mais preferencialmente copolímeros de álcool de polivinila, e celulose de hidroxipropila e metila (HPMC). Preferencialmente, o nível de polímeros no filme, por exemplo PVA, é pelo menos cerca de 60 %. O peso molecular médio preferencial será tipicamente cerca de 20.000 a cerca de 150.000. Os filmes podem ser também de composições combinadas compreendendo combinações de polímeros hidroliticamente degradáveis e solúveis em água tais como polilactídeo e álcool de polivinila (conhecido sob a Referência comercial M8630 como vendido pela MonoSol LLC, Indiana, EUA) mais plastificantes como glicerol, etileno glicerol, propileno glicol, sorbitol e suas misturas. As bolsas podem compreender uma composição sólida de limpeza de roupa ou componentes parciais e/ou uma composição líquida de limpeza ou componentes parciais separados pelo filme solúvel em água. O compartimento para componentes líquidos pode ser diferente na composição de compartimentos contendo sólidos: US2009/0011970 A1.

[0188] Os ingredientes de detergentes podem estar separados fisicamente uns dos outros por compartimentos em bolsas dissolvíveis em água ou em diferentes camadas de comprimidos. Deste modo pode ser evitada interação de armazenamento negativa entre componentes. Diferentes perfis de dissolução de cada um dos compartimentos podem também dar origem a dissolução retardada de componentes selecionados na solução de lavagem.

[0189] Um detergente líquido ou em gel, que não seja doseado à unidade, pode ser aquoso, contendo tipicamente pelo menos 20% em peso e até 95% de água, tal como até cerca de 70% de água, até cerca de 65% de água, até cerca de 55% de água, até cerca de 45% de água, até cerca de 35% de água. Outros tipos de líquidos, incluindo, sem limitação, alcanóis, aminas, dióis, éteres e polióis, podem ser incluídos em um líquido ou gel aquoso. Um detergente líquido ou em gel aquoso pode conter de 0- 30% de solvente orgânico. Um detergente líquido ou em gel pode ser não aquoso.

Usos

[0190] A presente invenção também é dirigida a métodos para a utilização de uma hexosaminidase por exemplo, uma hexosaminidase de Lactobacillus ou Streptococcus da invenção e suas composições. Uma hexosaminidase da invenção é útil em processos de limpeza tipicamente em lavanderia/têxteis/tecidos (lavagem de roupas de uso doméstico, lavagem de roupas industriais) ou limpeza de superfícies duras (ADW, lavagem de carros, superfície industrial)

[0191] Um aspecto da invenção se refere ao uso de uma hexosaminidase, por exemplo, hexosaminidase de Lactobacillus para limpeza de um item, em que o item é um têxtil ou uma superfície.

[0192] Um aspecto da invenção se refere ao uso de uma hexosaminidase de Lactobacillus ou Streptococcus para limpeza de um item, em que o item é um têxtil ou uma superfície, em que a hexosaminidase é selecionada do grupo que consiste em polipeptídeos mostrados na SEQ ID NOs 3, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 9, SEQ ID NO 18 e polipeptídeos com pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95 %, pelo menos 98% ou tal como pelo menos 99% de identidade de sequência deste documento.

[0193] Um aspecto da invenção se refere ao uso de uma hexosaminidase de Lactobacillus da invenção, a) para prevenir, reduzir ou remover a pegajosidade do item; b) para pré-tratar manchas no item; c) para prevenir, reduzir ou remover a redeposição de sujidade durante um ciclo de lavagem; d) para prevenir, reduzir ou remover a aderência de sujidade ao item; e) para manter ou melhorar a brancura do item; f) para impedir, reduzir ou remover mau odor do item, em que o item é um produto têxtil.

[0194] Um aspecto da invenção se refere ao uso de uma hexosaminidase de Streptococcus da invenção, a) para prevenir, reduzir ou remover a pegajosidade do item; b) para pré-tratar manchas no item; c) para prevenir, reduzir ou remover a redeposição de sujidade durante um ciclo de lavagem; d) para prevenir, reduzir ou remover a aderência de sujidade ao item; e) para manter ou melhorar a brancura do item; f) para impedir, reduzir ou remover mau odor do item, em que o item é um produto têxtil.

[0195] Um aspecto da invenção se refere ao uso de uma hexosaminidase, por exemplo, dispersina, em que a hexosaminidase é selecionada do grupo que consiste em polipeptídeos mostrados nas SEQ ID NOs 3, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 9, SEQ ID NO 18 e polipeptídeos com pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou com pelo menos 99% de identidade de sequência deste documento, a) para prevenir, reduzir ou remover a pegajosidade do item; b) para pré-tratar manchas no item; c) para prevenir, reduzir ou remover a redeposição de sujidade durante um ciclo de lavagem; d) para prevenir, reduzir ou remover a aderência de sujidade ao item; e) para manter ou melhorar a brancura do item; f) para impedir, reduzir ou remover mau odor do item, em que o item é um produto têxtil. Uso da composição de limpeza

[0196] A composição detergente da presente invenção pode ser formulada, por exemplo, como uma composição detergente para lavagem de roupa manual ou à máquina, incluindo uma composição aditiva de lavagem de roupa adequada para pré-tratamento de tecidos enodoados e uma composição amaciadora de tecidos adicionada para enxaguamento, ou ser formulada como uma composição detergente para uso em operações domésticas gerais de limpeza de superfícies duras, ou ser formulada para operações de lavagem de louça manual ou à máquina. Em um aspecto específico, a presente invenção proporciona um aditivo detergente compreendendo uma ou mais enzimas como descrito aqui.

[0197] Um aspecto da invenção se refere ao uso de uma composição, preferencialmente uma composição de limpeza, tal como uma composição detergente compreendendo uma hexosaminidase, por exemplo, obtida de Lactobacillus ou Streptococcus para limpeza de um item, em que o item é um têxtil ou uma superfície.

[0198] Um aspecto da invenção se refere ao uso de uma composição, preferencialmente uma composição de limpeza, tal como uma composição detergente compreendendo uma hexosaminidase, por exemplo, obtida de Lactobacillus ou Streptococcus para limpeza de um item, em que o item é um têxtil ou uma superfície, em que a hexosaminidase por exemplo, obtida de Lactobacillus ou Streptococcus é selecionada a partir do grupo que consiste em polipeptídeos mostrados nas SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 9, SEQ ID NO 18 e polipeptídeos com pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou tal como pelo menos 99% de identidade de sequência deste documento.

[0199] Um aspecto da invenção se refere ao uso de uma composição, preferencialmente uma composição de limpeza, tal como uma composição detergente compreendendo uma hexosaminidase, por exemplo, obtida de Lactobacillus ou Streptococcus da invenção, a) para prevenir, reduzir ou remover a pegajosidade do item; b) para pré-tratar manchas no item;

c) para prevenir, reduzir ou remover a redeposição de sujidade durante um ciclo de lavagem; d) para prevenir, reduzir ou remover a aderência de sujidade ao item; e) para manter ou melhorar a brancura do item; f) para impedir, reduzir ou remover mau odor do item, em que o item é um produto têxtil.

[0200] Um aspecto da invenção se refere ao uso de uma composição, preferencialmente uma composição de limpeza, tal como uma composição detergente compreendendo uma hexosaminidase, por exemplo, obtida de Lactobacillus ou Streptococcus, em que a hexosaminidase é selecionada do grupo que consiste em polipeptídeos mostrados na SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 9, SEQ ID NO 18 e polipeptídeos com pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95 %, pelo menos 98% ou, pelo menos, 99% de identidade de sequência deste documento, a) para prevenir, reduzir ou remover a pegajosidade do item; b) para pré-tratar manchas no item; c) para prevenir, reduzir ou remover a redeposição de sujidade durante um ciclo de lavagem; d) para prevenir, reduzir ou remover a aderência de sujidade ao item; e) para manter ou melhorar a brancura do item; f) para impedir, reduzir ou remover mau odor do item, em que o item é um produto têxtil. Métodos

[0201] A invenção se refere ainda a um método de tratamento de um método de tratamento de um tecido compreendendo; (a) contatar o tecido com uma solução aquosa de hexosaminidase, por exemplo, obtida de Lactobacillus ou Streptococcus; (b) e opcionalmente enxaguando e secando o tecido.

[0202] Um aspecto se refere a um método de tratamento de um tecido compreendendo; (a) contatar o tecido com uma solução aquosa de hexosaminidase, por exemplo, obtida de Lactobacillus ou Streptococcus, é selecionada a partir do grupo que consiste em polipeptídeos mostrados nas SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 9, SEQ ID NO 18 e polipeptídeos tendo pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou tal como pelo menos 99% de identidade de sequência deste documento; (b) e opcionalmente enxaguando e secando o tecido.

[0203] A invenção também se refere a um método para limpar ou lavar um item que compreende as etapas de: a. expor um item de um licor de lavagem que compreende uma hexosaminidase por exemplo obtida a partir de Lactobacillus ou Streptococcus da invenção ou uma composição de detergente compreendendo uma hexosaminidase; b. completar pelo menos um ciclo de lavagem; e c. opcionalmente, enxaguamento do item, em que o item é um tecido.

[0204] A invenção também se refere a um método para limpar ou lavar um item que compreende as etapas de: a. expor um item a um licor de lavagem compreendendo uma hexosaminidase, por exemplo, obtida de Lactobacillus ou Streptococcus da invenção ou uma composição detergente compreendendo uma hexosaminidase, em que a hexosaminidase é selecionada do grupo que consiste em polipeptídeos mostrados na SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 9, SEQ ID NO 18 e polipeptídeos com pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98 % ou tal como pelo menos 99% de identidade de sequência deste documento; b. completar pelo menos um ciclo de lavagem; e c. enxaguar opcionalmente o item, em que o item é um tecido.

[0205] Uma modalidade se refere a um método, em que a hexosaminidase de Lactobacillus compreende um ou mais dos seguintes motivos GXDE (SEQ ID NO 12), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID NO 13), [VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (SEQ ID NO 14), ou [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L (SEQ ID NO 15).

[0206] Uma modalidade se refere a um método, em que a hexosaminidase de Lactobacillus compreende os motivos GXDE (SEQ ID NO 12) e [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID NO 13).

[0207] Uma modalidade se refere a um método, em que a hexosaminidase de Lactobacillus compreende os motivos [VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (SEQ ID NO 14) e/ou [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L (SEQ ID NO 15).

[0208] O pH da solução líquida está na gama de 1 a 11, tal como na gama de 5,5 a 11, tal como na gama de 7 a 9, na gama de 7 a 8 ou na gama de 7 a 8,5.

[0209] O licor de lavagem pode ter uma temperatura na gama de 5 ºC a 95 ºC ou na gama de 10 ºC a 80 ºC, na gama de 10 ºC a 70 ºC, na gama de 10 ºC a 60 ºC, na gama de 10 ºC a 50 ºC, na gama de 15 ºC a 40 ºC ou na gama de 20 ºC a 30 ºC. Em um aspecto, a temperatura do licor de lavagem é 30 ºC.

[0210] A concentração da hexosaminidase no licor de lavagem está tipicamente na gama de pelo menos 0,00001 ppm a pelo menos 10 ppm, pelo menos 0,00002 ppm a pelo menos 10 ppm, pelo menos 0,0001 ppm a pelo menos 10 ppm, pelo menos 0,0002 ppm a pelo menos 10 ppm, pelo menos 0,001 ppm a pelo menos 10 ppm¸ pelo menos 0,002 ppm a pelo menos 10 ppm, pelo menos 0,01 ppm a pelo menos 10 ppm, pelo menos 0,02 ppm a pelo menos 10 ppm, pelo menos 0,1 ppm a pelo menos 10 ppm, pelo menos 0,2 ppm a pelo menos 10 ppm, pelo menos 0,5 ppm a pelo menos 5 ppm. Definições

[0211] O biofilme é produzido por qualquer grupo de microrganismos nos quais células aderem umas às outras ou aderem a uma superfície, tal como um têxtil, louça ou superfície dura ou outro tipo de superfície. Estas células aderentes estão frequentemente embebidas dentro de uma matriz autoproduzida de substância polimérica extracelular (EPS). A EPS de biofilme é um conglomerado polimérico geralmente composto por DNA extracelular, proteínas e polissacarídeos. Os biofilmes podem se formar em superfícies vivas ou não vivas. As células microbianas crescendo em um biofilme são fisiologicamente distintas de células planctônicas do mesmo organismo, que, em contraste, são células individuais que podem flutuar ou nadar em um meio líquido. As bactérias vivendo em um biofilme têm usualmente propriedades significativamente diferentes de bactérias planctônicas da mesma espécie, pois o ambiente denso e protegido do filme permite que as mesmas cooperem e interajam de vários modos. Um benefício deste ambiente para os microrganismos é resistência aumentada a detergentes e antibióticos, pois a matriz extracelular densa e a camada exterior das células protegem o interior da comunidade. Na lavagem de roupa, as bactérias produtoras de biofilme podem ser encontradas entre as seguintes espécies: Acinetobacter sp., Aeromicrobium sp., Brevundimonas sp., Microbacterium sp., Micrococcus luteus, Pseudomonas sp., Staphylococcus epidermidis e Stenotrophomonas sp. Em superfícies duras, as bactérias produzindo biofilme podem ser encontradas entre as seguintes espécies: Acinetobacter sp., Aeromicrobium sp., Brevundimonas sp., Microbacterium sp., Micrococcus luteus, Pseudomonas sp., Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus eStenotrophomonas sp. Em um aspecto, o biofilme produzindo estirpe é Brevundimonas sp. Em um aspecto, a estirpe produtora de biofilme é Pseudomonas, por exemplo, Pseudomonas alcaliphila ou Pseudomonas fluorescens. Em um aspecto, a estirpe produzindo biofilme é Staphylococcus aureus.

[0212] Pelo termo “limpeza profunda” se entende desagregação ou remoção de componentes de matéria orgânica, por exemplo, biofilme, tais como polissacarídeos, por exemplo, PNAG, proteínas, DNA, sujidade ou outros componentes presentes na matéria orgânica.

[0213] Componente de limpeza: O componente de limpeza é diferente da hexosaminidase. A natureza precisa destes componentes adicionais, (por exemplo, adjuntos), e seus níveis de incorporação, dependerá da forma física da composição e da natureza da operação para a qual são para serem usados. Materiais de componentes de limpeza adequados, incluem, mas não estão limitados aos, componentes descritos em baixo tais como tensoativos, formadores, auxiliar da floculação, agentes quelantes, inibidores da transferência de corantes, enzimas, estabilizantes de enzimas, inibidores de enzimas, materiais catalíticos, ativadores do branqueamento, peróxido de hidrogênio, fontes de peróxido de hidrogênio, perácidos pré-formados, agentes poliméricos, agentes de remoção/antirredeposição de sujidades de argila, abrilhantadores, supressores da solução saponífera, corantes, perfumes, agentes de elastização da estrutura, amaciadores de tecidos, transportadores, hidrótopos, formadores e coformadores, agentes de matização de tecidos, agentes antiespumantes, dispersantes, auxiliar do processamento e/ou pigmentos.

[0214] Composição de Limpeza: O termo “composição de limpeza ou detergente” se refere a composições que encontram uso na remoção de compostos indesejados a partir de itens a serem limpos, tais como têxteis. A composição de limpeza pode ser usada para, por exemplo, limpar têxteis tanto para limpeza doméstica como para limpeza industrial. Os termos englobam quaisquer materiais/compostos selecionados para o tipo específico de composição de limpeza desejado e a forma do produto (por exemplo, líquido, gel, pó, granulado, pasta ou composições para pulverização) e inclui, porém sem limitação, composições detergentes (por exemplo, detergentes de lavagem de roupas líquidos e/ou sólidos e detergentes de panos finos; purificadores de pano; amaciadores de pano; e pré-removedor de manchas/pré-tratamento de artigos têxteis e roupas para lavar). Além de conter a enzima da invenção, a formulação detergente pode conter uma ou mais enzimas adicionais (tais como proteases, amilases, lipases, cutinases, celulases, endoglucanases, xiloglucanases, pectinases, pectina liases, xantanases, peroxidases, haloperoxigenases, catalases e mananases, ou qualquer mistura destas), e/ou ingredientes detergentes adjuntos, tais como tensoativos, formadores, queladores ou agentes quelantes, sistema de branqueamento ou componentes de branqueamento, polímeros, amaciadores de tecidos, impulsionadores de espuma, supressores de espuma, corantes, perfumes, inibidores de acastanhamento, branqueadores ópticos, bactericidas, fungicidas, agentes de suspensão da sujidade, agentes anticorrosão, inibidores ou estabilizantes de enzimas, ativadores de enzimas, transferase(s), enzimas hidrolíticas, óxido redutases, agentes de anilação e corantes fluorescentes, antioxidantes, e solubilizadores.

[0215] O termo “limpeza de superfícies duras” é definido aqui como limpeza de superfícies duras em que as superfícies duras podem incluir pisos, mesas, paredes, tetos, etc., bem como superfícies de objetos duros tais como carros (lavagem de carros) e louça (lavagem de louça). Lavagem de louça inclui, mas não está limitada a limpeza de pratos, taças,

copos, tigelas, talheres tais como colheres, facas, garfos, utensílios de cozinha, cerâmicas, plásticos, metais, porcelana, vidro e acrílicos.

[0216] O termo “desempenho de lavagem” é usado como a capacidade de uma enzima de remover manchas ou sujidade presentes no objeto a ser limpo durante, por exemplo, lavagem ou limpeza de superfícies duras.

[0217] O termo "brancura" é aqui definido como a qualidade ou estado de um têxtil de ser branco. A perda de brancura pode ser devida à remoção de branqueadores ópticos/agentes de coloração e resultar em um acinzentamento e amarelecimento dos tecidos. O acinzentamento e amarelecimento podem ser devidos à redeposição de sujidade, sujidades corporais, coloração de, por exemplo, íons de ferro e cobre ou transferência de corantes. A brancura pode incluir uma ou mais questões da lista em baixo: efeitos do corante ou tintura; remoção de manchas incompleta (por exemplo, sujidades corporais, sebo, etc.); redeposição (acinzentamento, amarelecimento ou outras descolorações do objeto) (as sujidades removidas se reassociam a outras partes do têxtil, sujo ou não sujo); mudanças químicas no têxtil durante a aplicação; e clarificação ou abrilhantamento das cores.

[0218] O termo “lavagem de roupa” se relaciona tanto com lavagem doméstica como lavagem industrial e significa o processo de tratamento de têxteis com uma solução contendo uma composição de limpeza ou detergente da presente invenção. O processo de lavagem de roupa pode por exemplo ser levado a cabo usando, por exemplo, uma máquina de lavagem doméstica ou industrial ou pode ser levado a cabo à mão.

[0219] Pelo termo “mau odor” se entende um odor que não é desejado em itens limpos. O item limpo deve ter um odor refrescante e limpo sem maus odores aderidos ao item. Um exemplo de mau odor são compostos com um cheiro desagradável, que podem ser produzidos por microrganismos. Outro exemplo de odor desagradável pode ser suor ou odor corporal aderido a um item que tem estado em contato com humanos ou animais. Outro exemplo de mau odor pode ser o odor de especiarias, que adere a itens, por exemplo, caril ou outras especiarias exóticas com odor forte, tabaco, cheiro de cozinhados (óleo frito, peixe etc.), aromas de perfume, tal como desodorante e água de colônia.

[0220] O termo "polipeptídeo maduro" significa um polipeptídeo em sua forma final após tradução e quaisquer modificações pós- traducionais, tal como processamento N-terminal, truncamento C-terminal, glicosilação, fosforilação, etc.

[0221] O termo “têxtil” significa qualquer material têxtil incluindo fios, intermediários de fios, fibras, materiais não urdidos, materiais naturais, materiais sintéticos, e qualquer outro material têxtil, tecidos feitos destes materiais e produtos feitos a partir de tecidos (por exemplo, peças de vestuário e outros artigos). O têxtil ou tecido pode estar na forma de malhas, tecidos, sarjas, não tecidos, feltros, fios e turco. O têxtil pode ser à base de celulose tais como celulósicos naturais, incluindo algodão, linho, juta, rami, sisal ou cairo ou celulósicos feitos pelo homem (por exemplo, tendo origem em polpa de madeira) incluindo viscose/raiom, rami, fibras de acetato de celulose (Tricell), liocel ou suas combinações. O têxtil ou tecido pode ser também não à base de celulose, tal como poliamidas naturais incluindo lã, camelo, caxemira, mohair, coelho e seda ou polímeros sintéticos tais como náilon, aramida, poliéster, acrílico, polipropileno e spandex/elastano ou suas combinações bem como combinações de fibras à base de celulose e não à base de celulose. Exemplos de combinações são combinações de algodão e/ou raiom/viscose com um ou mais materiais de companhia tais como lã, fibra sintética (por exemplo, fibra de poliamida, fibra de acrílico, fibra de poliéster, fibra de cloreto de polivinila, fibra de poliuretano, fibra de poliureia,

fibra de aramida) e/ou fibra contendo celulose (por exemplo, raiom/viscose, rami, linho, juta, fibra de acetato de celulose, liocel). O tecido pode ser roupa lavável convencional, por exemplo roupa de uso doméstico manchada. Quando o termo tecido ou peça de vestuário é usado, destina-se a incluir também o termo produtos têxteis mais amplo.

[0222] O termo “variante” significa um polipeptídeo tendo a atividade do polipeptídeo genitor ou precursor e compreendendo uma alteração, isto é, uma substituição, inserção e/ou deleção, em uma ou mais (por exemplo, várias) posições em comparação com o polipeptídeo precursor ou genitor. Uma substituição designa o reposicionamento do aminoácido ocupando uma posição com um aminoácido diferente; uma deleção designa a remoção do aminoácido ocupando uma posição; e uma inserção designa a adição de um aminoácido adjacente ao e imediatamente após o aminoácido ocupando uma posição.

[0223] Identidade de sequência: A relação entre duas sequências de aminoácidos ou entre duas sequências de nucleotídeos é descrita pelo parâmetro "identidade de sequência". Para os propósitos da presente invenção, a identidade de sequências entre duas sequências de aminoácidos é determinada usando o algoritmo de Needleman-Wunsch (Needleman e Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443-453) como implementado no programa Needle do pacote EMBOSS (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, Trends Genet. 16: 276-277), de preferência a versão 6.6.0 ou posterior. Os parâmetros usados são uma penalidade de abertura de lacunas de 10, uma penalidade de extensão de lacunas de 0,5 e a matriz de substituição EBLOSUM62 (versão EMBOSS de BLOSUM62). O resultado de Needle identificado “identidade mais longa” (obtido usando a opção –nobrief) é usado como a percentagem de identidade e é calculado como se segue:

(Resíduos Idênticos x 100)/(Comprimento do Alinhamento – Número Total de Intervalos no Alinhamento).

[0224] Clado: um grupo de polipeptídeos aglomerados juntos com base em características homólogas identificadas até um ancestral comum. Os clados de polipeptídeo podem ser visualizados como árvores filogenéticas e um clado é um grupo de polipeptídeos que consiste em um ancestral comum e todos seus descendentes lineares. Nomenclatura

[0225] Para os propósitos da presente invenção, a nomenclatura [IV] ou [I/V] significa que o aminoácido em esta posição pode ser isoleucina (Ile, I) ou valina (Val, V). Do mesmo modo, a nomenclatura [LVI] e [L/V/I] significa que o aminoácido em esta posição pode ser uma leucina (Leu, L), valina (Val, V) ou isoleucina (Ile, I) e assim por diante para outras combinações como descrito aqui. A não ser que de outro modo limitado adicionalmente, o aminoácido X é definido tal que possa ser qualquer um dos 20 aminoácidos naturais.

[0226] Salvo indicação em contrário, ou se for aparente no contexto que outra coisa é pretendido, todas as percentagens são percentagens em peso (% p/p) ou (% em peso).

[0227] A invenção é ainda descrita nos seguintes parágrafos não limitativos:

1. Uma composição de limpeza compreendendo pelo menos 0,01 mg de hexosaminidase de Lactobacillus e um componente de limpeza, em que o componente de limpeza é (a) pelo menos um tensoativo; (b) pelo menos um formador, ou (c) pelo menos um polímero.

2. A composição de acordo com o parágrafo 1, em que a composição compreende de cerca de 1% a cerca de 40% em peso de um tensoativo aniônico, tal como de cerca de 5% a cerca de 30%, incluindo de cerca de 5% a cerca de 15%, ou de cerca de 15% a cerca de 20%, ou de cerca de 20% a cerca de 25% de tensoativo aniônico, selecionado dentre alquilbenzenossulfonatos lineares (LAS), isômeros de LAS, alquilbenzenossulfonatos ramificados (BABS), fenilalcanossulfonatos, alfa- olefinossulfonatos (AOS), sulfonatos de olefina, sulfonatos de alqueno, alcano-2,3-di-ilbis(sulfatos), hidroxialcanossulfonatos e dissulfonatos, sulfatos de alquila (AS) tais como dodecil sulfato de sódio (SDS), sulfatos de álcool graxo (FAS), sulfatos de álcool primário (PAS), étersulfatos de álcool (AES ou AEOS ou FES), alcanossulfonatos secundários (SAS), sulfonatos de parafina (PS), sulfonatos de éster, glicerol ésteres de ácido graxo sulfonados, ésteres metílicos de ácido graxo alfa-sulfo (alfa-SFMe ou SES) incluindo sulfonato éster metílico (MES), ácido alquil- ou alquenilsuccínico, ácido succínico de dodecenila/tetradecenila (DTSA), derivados de ácido graxo de aminoácidos, diésteres e monoésteres de ácido sulfo-succínico ou sal de ácidos graxos (sabão) e suas combinações.

3. A composição de acordo com o parágrafo 1 ou 2 compreendendo de cerca de 0,2% a cerca de 40% em peso de um tensoativo não iônico, por exemplo, de cerca de 0,5% a cerca de 30%, em particular de cerca de 1% a cerca de 20%, de cerca de 3% a cerca de 10%, como de cerca de 3% a cerca de 5%, de cerca de 8% a cerca de 12% ou de cerca de 10% a cerca de 12% de pelo menos um tensoativo não iônico, de preferência selecionado dentre etoxilatos de álcool (AE ou AEO), propoxilatos de álcool, alcoóis graxos propoxilados (PFA), ésteres alquílicos de ácido graxo alcoxilados, tais como ésteres alquílicos de ácido graxo etoxilados e/ou propoxilados, etoxilatos de alquilfenol (APE), etoxilatos de nonilfenol (NPE), alquilpoliglicosídeos (APG), aminas alcoxiladas, monoetanolamidas de ácido graxo (FAM), dietanolamidas de ácido graxo (FADA), monoetanolamidas de ácido graxo etoxiladas (EFAM), monoetanolamida de ácido graxo propoxilada (PFAM), amidas de poli-idroxialquila de ácido graxo, ou derivados de glucosamina de N-acila e N-alquila (glucamidas, GA, ou glucamidas de ácido graxo, FAGA) e combinações dos mesmos.

4. A composição de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 3, em que a composição compreende de cerca de 1% em peso a cerca de 60% em peso, de cerca de 5% em peso a cerca de 50% em peso, de cerca de 10% em peso a cerca de 40% em peso de pelo menos um formador, de preferência selecionado dentre ácido cítrico, ácido metilglicina-N,N- diacético (MGDA) e/ou ácido glutâmico-ácido N,N-diacético (GLDA) e misturas dos mesmos.

5. A composição de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 4, em que a composição 0-50% em peso, tal como 1-40%, tal como 1- 30%, tal como cerca de 1% a cerca de 20% de pelo menos um componente de branqueamento de preferência selecionado a partir de peróxido, de preferência, percabonato e um catalisador, de preferência, um catalisador de branqueamento contendo metal, tal como 1,4,7-trimetil-1,4,7- triazaciclononano ou acetato de manganês (II) tetraidratado (MnTACN).

6. A composição, de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a hexosaminidase de Lactobacillus compreende um ou mais dos motivos GXDE (SEQ ID NO 12), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID NO 13), [VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (SEQ ID NO 14), ou [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L (SEQ ID NO 15).

7. A composição de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a hexosaminidase de Lactobacillus compreende os motivos GXDE (SEQ ID NO 12) e [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID NO 13).

8. A composição de acordo com o parágrafo 7, em que a hexosaminidase de Lactobacillus compreende os motivos

[VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (SEQ ID NO 14) e/ou [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L (SEQ ID NO 15).

9. A composição de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a hexosaminidase de Lactobacillus é selecionada do grupo que consiste em polipeptídeos com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 9 e polipeptídeos com pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou tal como pelo menos 99% de identidade de sequência deste documento.

10. A composição de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o polipeptídeo que tem atividade de hexosaminidase compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO 3 ou polipeptídeos que têm pelo menos 60%, por exemplo, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 99% de identidade de sequência deste documento.

11. A composição de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o polipeptídeo que tem atividade de hexosaminidase compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO 6 ou polipeptídeos que têm pelo menos 60%, por exemplo, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 99% de identidade de sequência deste documento.

12. A composição de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o polipeptídeo que tem atividade de hexosaminidase compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO 9 ou polipeptídeos que têm pelo menos 60%, por exemplo, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 99% de identidade de sequência deste documento.

13. A composição de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a composição compreende adicionalmente uma ou mais enzimas selecionadas dentre o grupo que consiste em proteases, lipases, cutinases, amilases, carboidrases, celulases, pectinases, mananases, arabinases, galactanases, xilanases e oxidases.

14. Uso de uma composição de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, para limpeza de um item, em que o item é um têxtil ou uma superfície.

15. Uso de uma composição de acordo com o parágrafo 14, de preferência uma composição de limpeza, tal como uma composição detergente compreendendo uma hexosaminidase de Lactobacillus, a) para prevenir, reduzir ou remover a pegajosidade do item; b) para pré-tratar manchas no item; c) para prevenir, reduzir ou remover a redeposição de sujidade durante um ciclo de lavagem; d) para prevenir, reduzir ou remover a aderência de sujidade ao item; e) para manter ou melhorar a brancura do item; f) para impedir, reduzir ou remover mau odor do item, em que o item é um produto têxtil.

16. Uso de acordo com os parágrafos 14 ou 15, em que a hexosaminidase de Lactobacillus compreende um ou mais dos seguintes motivos GXDE (SEQ ID NO 12), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID NO 13), [VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (SEQ ID NO 14), ou [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L (SEQ ID NO 15).

17. Uso de acordo com qualquer um dos parágrafos 14 a 16, em que a hexosaminidase de Lactobacillus compreende os motivos GXDE ((SEQ ID NO 12) e [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID NO 13).

18. Uso de acordo com os parágrafos 14 a 16, em que a hexosaminidase de Lactobacillus compreende os motivos [VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (SEQ ID NO 14) e/ou [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L (SEQ ID NO 15).

19. Uso de uma composição de acordo com qualquer um dos parágrafos 14 a 18, em que a hexosaminidase de Lactobacillus é selecionada a partir do grupo que consiste em polipeptídeos mostrados nas SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 9 ou polipeptídeos com pelo menos 60 %, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou tal como pelo menos 99% de identidade de sequência deste documento.

20. Um método de formulação de uma composição de limpeza compreendendo adição de uma hexosaminidase de Lactobacillus e pelo menos um componente de limpeza.

21. Um kit destinado para a limpeza, em que o kit compreende uma solução de uma mistura de enzima compreendendo hexosaminidase de Lactobacillus, e uma enzima adicional selecionada a partir de proteases, amilases, celulases e lipases.

22. Um método de tratamento de um tecido compreendendo; (a) entrar em contato com o tecido com uma solução aquosa de hexosaminidase de Lactobacillus; (b) e opcionalmente enxaguando e secando o tecido.

23. Um método para limpar ou lavar um item que compreende as etapas de: (a) expor um item a um licor de lavagem compreendendo uma hexosaminidase de Lactobacillus da invenção ou uma composição detergente compreendendo uma hexosaminidase de Lactobacillus; (b) completar pelo menos um ciclo de lavagem; e (c) enxaguar opcionalmente o item, em que o item é um tecido.

24. O método de acordo com os parágrafos 22 ou 23, em que a hexosaminidase de Lactobacillus compreende um ou mais dos seguintes motivos GXDE (SEQ ID NO 12), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID NO 13),

[VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (SEQ ID NO 14), ou [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L (SEQ ID NO 15).

25. O método de acordo com qualquer um dos parágrafos 22 a 24, em que a hexosaminidase de Lactobacillus compreende os motivos GXDE (SEQ ID NO 12) e [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID NO 13).

26. O método de acordo com o parágrafo 25, em que a hexosaminidase de Lactobacillus compreende os motivos [VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (SEQ ID NO 14) e/ou [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L (SEQ ID NO 15).

27. O método de de acordo com os parágrafos 22 a 26, em que a hexosaminidase de Lactobacillus é selecionada a partir do grupo que consiste em polipeptídeos mostrados nas SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 9 ou polipeptídeos com pelo menos 60 %, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou tal como pelo menos 99% de identidade de sequência deste documento.

EXEMPLOS Ensaios Ensaio de lavagem Sistema Modelo de Lavagem Mini Launder-O-Meter (MiniLOM)

[0228] MiniLOM é um minissistema de lavagem em que as lavagens são realizadas em tubos de ensaio de 50 ml colocados em um rotador Stuart. Cada tubo simula uma pequena máquina de lavagem e durante uma experiência, cada um irá conter uma solução de um sistema detergente/enzima específico a ser testado juntamente com os tecidos sujos e não sujos sobre o qual é testado. O estresse mecânico é alcançado por meio de rotação (tipicamente 20 rpm), e a temperatura é controlada pela colocação do rotador em um gabinete/ambiente de aquecimento.

Ensaio I: teste da atividade de hexosaminidase

[0229] A atividade de hexosaminidase dos polipeptídeos listados na tabela abaixo foi determinada com o uso de 4-Metilumbeliferil N- acetil-β-D-glucosaminida (Sigma-Aldrich) como substrato. A reação enzimática foi realizada em triplicata em uma placa de microtitulação de poliestireno de fundo plano de 96 cavidades (Thermo Scientific) com as seguintes condições: 20 mM de ácido 3-(N-morfolino)propanossulfônico, tampão pH 7, 5 mM de 4-Metilumbeliferil N-acetil-β-D-glucosaminida, 0,01 vol% (% p/p) Brij 35 (éter polioxietileno laurílico, CAS 9002-92-0) e amostra de enzima purificada 50 nM em um volume total de reação de 200 µL. Amostras em branco sem polipeptídeo foram executadas em paralelo. As reações foram realizadas à temperatura ambiente utilizando um leitor de microplacas SpectraMax M2e da Molecular Devices. O comprimento de onda de excitação foi ajustado para 368 nm e o comprimento de onda de emissão para 448 nm. O sinal fluorescente foi seguido por 15 min no Modo Cinético. A taxa inicial de reação foi avaliada em unidades de RFU/min calculando o aumento inicial máximo do sinal fluorescente ao longo do tempo, à medida que o 4-metilumbeliferil foi liberado do substrato 4-metilumbeliferil N-acetil-β- D-glucosaminida devido à reação enzimática. Composição de detergente modelo A (líquido)

[0230] Ingredientes: LAS a 12%, AEO Biosoft N25-7 (NI) a 11%, AEOS (SLES) a 5%, MPG (monopropilenoglicol) a 6%, etanol a 3%, TEA a 3%, sabão de coco a 2,75%, sabão de soja a 2,75%, glicerol a 2%, hidróxido de sódio a 2%, citrato de sódio a 2%, formiato de sódio a 1%, DTMPA a 0,2% e PCA a 0,2% (todas as porcentagens estão em p/p). Composição de detergente Modelo T (pó)

[0231] Ingredientes: LAS a 11%, AS/AEOS a 2%, sabão a 2%, AEO a 3%, carbonato de sódio a 15,15%, silicato de sódio a 3%, zeólito a 18,75%, quelante a 0,15%, citrato de sódio a 2%, copolímero AA/MA a 1,65%, CMC a 2,5% e SRP a 0,5% (todas as percentagens são em p/p). Detergente Modelo Não-Iônico Triple-20 foi preparado dissolvendo 3,33 g/L de detergente não iônico contendo NaOH a 0,87%, MPG (Monopropilenglicol) a 6%, Glicerol a 2%, Sabão-soja a 2,75%, Sabão-coco a 2,75%, PCA (Sokalon CP-5) a 0,2%, AEO Biosoft N25-7(NI) 16%, Formiado de sódio a 1%, Citrato de sódio a 2%, DTMPA a 0,2%, Etanol (96%) a 3%, ajuste do pH com NaOH ou Ácido cítrico e água para 100% (todas as percentagens são em p/p (volume peso) em água com dureza 15 dH. Composição de Persil Universal Gel

[0232] Ingredientes: 15-30% de tensoativos aniônicos, 5- 15% de tensoativo não iônico, <5% de Fosfonato, sabão, perfume, abrilhantador óptico e enzimas. Exemplo 1: Estirpe e DNA

[0233] A sequência do gene que codifica os polipeptídeos de hexosaminidase a partir das estirpes de Lactobacillus paraplantarum DSM 10667 e Lactobacillus apinorum respectivamente foram encontrados na base de dados pública (Número de Acesso SWISSPROT: A0A0R1R622 e EMBLWGS: AZEO01000001 para a SEQ ID 1 e SWISSPROT: A0A0M9D3N9 e EMBLWGS: JXCT01000010 para a SEQ ID 4).

[0234] O DNA que codifica a hexosaminidase possuindo o polipeptídeo compreendido na SEQ ID 8 foi isolado de uma estirpe bacteriana de Lactobacillus paraplantarum, isolada de uma amostra ambiental coletada na Alemanha. O DNA cromossômico da estirpe Lactobacillus paraplantarum foi isolado pelo QIAamp DNA Blood Mini Kit (Qiagen, Hilden, Alemanha) e sujeito a sequenciamento completo do genoma usando a tecnologia Illumina. A sequência de genoma foi analisada quanto a sequências de proteínas que têm domínios de glicosil hidrolase (GH20,

www.cazy.org). Um gene com a sequência SEQ ID 7 correspondente foi subsequentemente identificado.

[0235] O DNA sintético otimizado por códon que codifica as sequências peptídicas maduras de duas hexosaminidases com SEQ ID 3 e 6 foi encomendado à empresa Geneart. Tabela 2: SEQ ID doador país de origem SEQ ID 3 Lactobacillus França paraplantarum DSM 10667 SEQ ID 6 Lactobacillus apinorum Suécia SEQ ID 9 Lactobacillus Alemanha paraplantarum SEQ ID NO Streptococcus merionis Alemanha 18* * A dispersina compreendendo a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO 18 foi expressa e purificada como descrito no exemplo 1 ou 2 para o Lactobacillus. Exemplo 2: Clonagem e expressão de hexosaminidases glicol_hidro_20

[0236] Os genes sintéticos do códon otimizado que codificam as sequências peptídicas maduras da hexosaminidase com SEQ ID 3 e 6 foram inseridos em um vetor de expressão Bacillus como descrito em WO12/025577. Em resumo, o DNA que codifica o peptídeo maduro do gene de hexosaminidase glicol_hidro_20 foi clonado em quadro a um sinal de secreção de Bacillus clausii (BcSP; com a seguinte sequência de aminoácidos: MKKPLGKIVASTALLISVAFSSSIASA (SEQ ID NO: 10). BcSP substituiu o sinal de secreção nativo no gene. A jusante à sequência de BcSP, uma sequência de etiqueta de afinidade foi introduzida para facilitar o processo de purificação (etiqueta His; com a seguinte sequência de aminoácidos: HHHHHHPR (SEQ ID NO: 11). O gene que foi expresso compreendeu, portanto, a sequência de BcSP seguida pela sequência marcadora de His seguida pela sequência de glicol_hidro_20 de tipo selvagem madura. O DNA que codifica o peptídeo maduro do gene de glicol_hidro_20 beta-hexosaminidase SEQ ID 9 foi amplificado a partir do DNA genômico de Lactobacillus paraplantarum por técnicas padrão de PCR usando iniciadores específicos contendo uma saliência para o vector de clonagem. O gene foi clonado consecutivamente em quadro a um sinal de secreção de Bacillus clausii tal como acima descrito. O plasmídeo de expressão final (BcSP-marcador-His-glicol_hidro_20) foi transformado em um hospedeiro de expressão de Bacillus subtilis. O gene de fusão de glicol_hidro_20 e BcSP foi integrado por recombinação homóloga no genoma da célula hospedeira de Bacillus subtilis mediante a transformação. O construto de gene foi expresso sob o controle de um sistema promotor triplo (como descrito em WO99/43835). O gene que codifica cloranfenicol acetiltransferase foi usado como produtor (conforme descrito em (Diderichsen et al., 1993, Plasmid 30: 312 a 315)). Os transformantes foram selecionados em ágar de meio LB suplementado com 6 microgramas de cloranfenicol por mL. Um clone de Bacillus subtilis recombinante contendo o construto de expressão de glicol_hidro_20 foi selecionado e foi cultivado em uma mesa de agitação giratória em frascos com defletores de 500 mL, cada um contendo 100 mL de meio à base de extrato de levedura. Após o tempo de cultivo de 3 a 5 dias a 30 °C a 37 °C, o sobrenadante contendo enzima foi coletado por centrifugação e a enzima foi purificada por purificação de etiqueta His. Exemplo 3: Método de purificação de etiqueta His

[0237] As enzimas glicol_hidro_20 hexosaminidase etiquetadas com His foram purificadas por cromatografia de metal imobilizado (IMAC) com o uso de Ni2+ como o íon metálico em colunas

HisTrap Excel de 5 mL (GE Healthcare Life Sciences). A purificação teve lugar a pH 7 e a proteína ligada foi eluída com imidazol. A pureza das enzimas purificadas foi verificada por SDS-PAGE e a concentração da enzima determinada por Absorbância 280 nm após uma troca de tampão em HEPES 50 mM, NaCl 100 mM pH 7,0. SEQ ID NO 10: MKKPLGKIVASTALLISVAFSSSIASA SEQ ID NO 11: HHHHHHPR Exemplo 4: Ensaio de crescimento e desprendimento de biofilme

[0238] Staphylococcus aureus 15981 foi gentilmente fornecido por Iñigo Lasa (Valle et al., Mol Microbiol. Maio de 2003; 48 (4):1.075 a 1.087). A estirpe foi cultivada em ágar tríptico de soja (TSA) a 37 °C de um dia para o outro. No dia seguinte, uma única colônia foi transferida para 15 mL de caldo de ágar tríptico de soja de (TSB) e incubada 5 horas a 37 °C sob agitação. A cultura foi diluída 1:100 em TSB + glicose a 1% e 100 µL da suspensão bacteriana foram transferidos para cada poço de placas de microtitulação de 96 poços (Thermo Scientific, Nunclon Delta Surface, cat # 167008) e incubados 24 horas a 37 °C sem agitação e 100 µL da suspensão bacteriana foram transferidos para cada poço de placas de microtitulação de 96 poços (Thermo Scientific, Nunclon Delta Surface, cat # 167008) e incubados 24 horas a 37 °C sem agitação. O sobrenadante foi aspirado e os poços foram lavados com 100 µL de cloreto de sódio a 0,9% e preenchidos com 100 µL de água dura ou detergente não iônico de 3,3 g/L ou detergente modelo A de 3,3 g/L (composição de água dura e não iônica e modelo A) contendo 0 (controle) ou 20, 10, 5, 2,5, 1,25, 0,62, 0,31, 0,16, 0,08, 0,04, 0,02 e 0,01 µg/mL de enzima SEQ ID 3, 6 e 9. Após a incubação a 37 °C por 1 hora, as cavidades foram lavadas com água e manchadas por 15 min com 100 µL de 0,095% de solução violeta cristal (SIGMA V5265). As cavidades foram, então, enxaguadas duas vezes com 100 µL de água, secas e as placas foram varridas.

[0239] Foi determinada a menor concentração de cada enzima que poderia remover a formação visível do biofilme de S. aureus 15981 após 1 hora de incubação, na presença e na ausência de detergente (consulte a Tabela 3). Todas as enzimas foram analisadas por duplicado em três ensaios independentes. A média da concentração mínima de enzima que removeu a formação visível de S. aureus 15981 dos três ensaios está listada na Tabela 3. Tabela 3. Concentração mínima de enzima que pode remover a formação visível de S. aureus 15981 após 1 hora de incubação em água dura ou detergente modelo A Tabela 3 SEQ ID Concentração Concentração mínima Concentração mínima para para remoção de mínima para remoção remoção de biofilme em de biofilme em biofilme em água detergente não-iônico detergente modelo A dura µg/ml µg/ml µg/ml 3 0,04 0,16 0,16 6 0,62 2,08 3,75 9 13,33 13,33 >20 Exemplo 5: Propriedades de limpeza dos detergentes modelo em pó

[0240] Um extrato de EPS bruto (substâncias poliméricas extracelulares) foi preparado a partir de Pseudomonas fluorescens (isolado da Islândia) como se segue: P.fluorescens foi reaplicada por esfregaço em TSA e incubada por 1 dia a 20 °C. A estirpe foi inoculada em TSB e incubada durante a noite a 20 ºC. Após a propagação, a cultura foi diluída (1:100) em meio suplementado com M63 ((NH4)2SO4 15 mM, KH2PO4 100 mM, FeSO4 1,8 μM, MgSO4.7H2O 1 mM, 0,4% (em p/v) de glicerol, 0,2% (em p/v) de

Casaminoácidos e 0,0001% (em p/v) de Tiamina), adicionada a um Frasco de Cultura de Células de Gargalo Angulado de 225 cm² Corning® CellBIND® com Tampa de Abertura (400 mL por frasco) e incubada estatisticamente por 3 dias a 20 °C. A cultura de biofilme foi subsequentemente peletizada por centrifugação (10 min, 8.000 g, 25 °C), e as células foram ressuspensas em NaCl 3 M (4 mL por frasco) e incubadas por 30 min a 30 °C para extrair a EPS associada à superfície O sobrenadante contendo EPS obtido após a centrifugação (10 min, 5000 g, 25 °C) foi armazenado a -20 °C até o uso adicional.

[0241] Para o teste de desempenho de lavagem, alíquotas de 50 uL do extrato de EPS em bruto foram colocadas em pontos em amostras têxteis estéreis (WFK20A) e incubadas durante 15 min à temperatura do meio ambiente. As amostras (estéreis ou com EPS) foram colocadas em tubos de ensaio de 50 mL e 10 mL de licor de lavagem (água de 15°dH com 0,2 g/Ll de nanopó de óxido de ferro(III) (544884; Sigma- Aldrich) com 5,3 g/L de detergente em pós modelo T) e enzima foram adicionados a cada tubo. Lavagens sem enzima foram incluídas como controles. Os tubos de ensaio foram colocados em um rotador Stuart e incubados durante 1 hora a 37 °C em 20 rpm. O licor de lavagem foi, então, removido, e as amostras foram enxaguadas duas vezes com água de 15 °dH e deixadas a secar em filtro de papel durante a noite. Os valores de remissão (REM460 nm ) foram medidos com o uso de um Macbeth Color-Eye 7000 (CE7000) e são exibidos na tabela 4. Os valores delta (REM460 nm (lavadas com enzima) – REM460 nm (lavadas sem enzima)) também são indicados. Tabela 4. Efeitos de limpeza da hexosaminidase (SEQ ID NO 3) no detergente em pó modelo T Amostr Enzima Concentração de REM médio ΔREM(46 a enzima (μg/mL) (460nm) 0nm) wfk20A Sem 0 61,4 enzima wfk20, Sem EPS enzima 0 52,8 wfk20, SEQ ID EPS NO 3 0,2 60,5 7,6 wfk20, SEQ ID EPS NO 3 2 67,5 14,6 Exemplo 6. Propriedades de limpeza das hexosaminidases em detergentes modelo líquidos

[0242] O extrato bruto de substâncias poliméricas extracelulares de biofilme (EPS) foi preparado a partir de Staphylococcus aureus 15981 (presente atencioso da Iñigo Lasa (Valle, J., A. Toledo-Arana, C. Berasain, J. M. Ghigo, B. Amorena, J. R. Penades, e I. Lasa. 2003, Mol. Microbiol. 48:1075-1087) como se segue: 500 mL de TSB + glicose a 1% (24563; Roquette Freres) foram inoculados, divididos em alíquotas em tubos de centrífuga cônica de 50 mL (339652; Thermo Scientific Nunc) e incubados por 24 horas a 37 °C sob condições de agitação (200 rpm). A seguir à incubação, as células foram peletizadas por centrifugação (10 min, 6.000 g, 25 °C), agrupadas e ressuspensas em 4 mL de NaCl 3 M. A suspensão foi submetida a vórtice vigoroso e incubada por 15 min à temperatura ambiente para extrair a EPS associada à superfície. As células foram, então, peletizadas novamente (10 min, 5000 g, 25 °C), e o sobrenadante contendo EPS foi recuperado. Foi adicionada água Milli-Q (6 mL) e a solução foi filtrada esterilizada duas vezes (0,45 µm seguida por 0,2 µm). O extrato em bruto foi armazenado a -20 ºC até uso adicional. Para o teste de desempenho de lavagem, alíquotas de 50 uL do extrato de EPS em bruto foram colocadas em pontos em amostras têxteis estéreis (WFK20A) e incubadas durante 15 min à temperatura do meio ambiente. As amostras (estéreis ou com EPS) foram colocadas em tubos de ensaio de 50 mL e 10 mL de licor de lavagem

(água de 15°dH com 0,2 g/Ll de nanopó de óxido de ferro(III) (544884; Sigma- Aldrich) com 3,33 g/L de detergente líquido modelo A ou 3,33 g/L de detergente modelo não-iônico) e enzima foram adicionados a cada tubo. Lavagens sem enzima foram incluídas como controles. Os tubos de ensaio foram colocados em um rotador Stuart e incubados durante 1 hora a 37 °C em 20 rpm. O licor de lavagem foi, então, removido, e as amostras foram enxaguadas duas vezes com água de 15 °dH e deixadas a secar em filtro de papel durante a noite. Os valores de remissão (REM460 nm) foram medidos com o uso de um Macbeth Color-Eye 7000 (CE7000), e são exibidos na Tabela 5 e 6. Os valores delta (REM460 nm (lavadas com enzima) – REM460 nm (lavadas sem enzima)) também são indicados. Tabela 5. Efeitos de limpeza no detergente líquido modelo A Amostr Concentração de enzima REM(460 ΔRE a Enzima (μg/mL) nm) M Sem wfk20A enzima 0,0 58,5 Sem EPS enzima 0,0 30,1

SEQ ID NO EPS 3 2,0 65,5 35,4

SEQ ID NO EPS 3 0,2 58,2 28,1

SEQ ID NO EPS 9 2,0 38,6 8,5

SEQ ID NO EPS 9 0,2 32,1 2,0 Tabela 6. efeitos de limpeza em detergente líquido modelo não-iônico Amost Enzima Concentração de enzima REM(460 ΔRE ra (μg/mL) nm) M wfk20A Sem 0,0 59,7 enzima EPS Sem 0,0 30,4 enzima EPS SEQ ID NO 20,0 63,2 32,8 3 EPS SEQ ID NO 2,0 61,3 30,8 3 EPS SEQ ID NO 0,2 60,9 30,4 3 EPS SEQ ID NO 20,0 46,1 15,6 6 EPS SEQ ID NO 2,0 33,6 3,1 6 EPS SEQ ID NO 0,2 31,3 0,9 6 EPS SEQ ID NO 20,0 63,9 33,4 9 EPS SEQ ID NO 2,0 45,4 15,0 9 EPS SEQ ID NO 0,2 34,4 4,0 9 Exemplo 7: Construção de clados e árvores filogenéticas

[0243] O domínio Glyco_hydro_20 inclui os polipeptídeos da invenção que têm atividade de hexosaminidase, por exemplo, atividade de PNAG, e compreende os clados FQS, GADE e/ou GAIL.

[0244] Uma árvore filogenética foi construída, de sequência de polipeptídeos contendo um domínio Glyco_hydro_20, conforme definido em PFAM (PF00728, Pfam versão 31.0 Finn (2016).

Nucleic Acids Research, Database Issue 44:D279-D285). A árvore filogenética foi construída a partir de alinhamento múltiplo de sequências de polipeptídeos maduros contendo pelo menos um domínio Glyco_hydro_20. As sequências foram alinhadas com o uso do algoritmo MUSCLE versão

3.8.31 (Edgar, 2004. Nucleic Acids Research 32(5): 1792-1797), e as árvores foram construídas com o uso de FastTree versão 2.1.8 (Price et al., 2010, PloS one 5(3)) e visualizadas com o uso de iTOL (Letunic & Bork, 2007. Bioinformatics 23(1): 127-128). As sequências de polipeptídeos que contêm um domínio Glyco_hydro_20 compreendem vários motivos; um exemplo é GXDE (SEQ ID NO 12), situado em posições 153 a 156 em Lactobacillus paraplantarum (SEQ ID NO 3). Os resíduos D e E são os resíduos catalíticos chave de enzimas Glyco_hydro_20 (posição 155 a 156 na SEQ ID NO 3).

[0245] Os polipeptídeos em Glyco_hydro_20 podem ser separados em múltiplas subaglomerações distintas, ou clados conforme listados abaixo. Os distintos motivos para cada clado são descritos em detalhes abaixo. Geração de clado FQS

[0246] Um clado, de preferência, compartilhado pelos polipeptídeos da invenção, foi identificado. Este clado não foi descrito anteriormente. O clado é chamado de FQS e os polipeptídeos desse clado compreendem os polipeptídeos de domínio Glyco_hydro_20, de origem bacteriana e são, adicionalmente a terem atividade de PNAG, caracterizados por compreenderem determinado motivo. Os polipeptídeos do clado compreendem o exemplo de motivo [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID NO 13), que corresponde a EHLCFQS na posição 48 a 54 da SEQ ID NO 3. Geração de clado GADE

[0247] Um clado, de preferência, compartilhado pelos polipeptídeos da invenção, foi identificado. Este clado não foi descrito anteriormente. O clado é designado de GADE e os polipeptídeos desse clado compreendem os polipeptídeos de domínio Glyco_hydro_20, de origem bacteriana e são, adicionalmente terem atividade de PNAG, caracterizados por compreenderem determinados motivos. Os polipeptídeos do clado compreendem o exemplo de motivo [VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (SEQ ID NO 14), que corresponde à posição 151 a 158 da SEQ ID NO 3, em que G e DE (que corresponde às posições 153 e 155-156 da SEQ ID NO 3) são completamente conservados em clado GADE e parte do sítio ativo. Os resíduos D e E são os resíduos catalíticos chave de enzimas Glyco_hydro_20 (posição 155 a 156 na SEQ ID NO 3). Geração de clado GAIL

[0248] O clado GAIL compreende polipeptídeos de domínio GADE de origem bacteriana, que tem atividade de hexosaminidase, por exemplo, atividade de PNAG. Este clado não foi descrito anteriormente e define um cluster dentro dos polipeptídeos da invenção. O clado é designado de GAIL e os polipeptídeos desse clado compreendem os polipeptídeos de domínio Glyco_hydro_20, de origem bacteriana e são, adicionalmente terem atividade de PNAG, caracterizados por compreenderem determinados motivos polipeptídicos. Os polipeptídeos do domínio compreendem o motivo exemplo [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L (SEQ ID NO 15), que corresponde à posição 96 a 102 da SEQ ID NO 3, onde A e L (correspondendo às posições 97 e 102 da SEQ ID NO 3) são completamente conservados no clado GAIL. Exemplos de polipeptídeos da invenção incluídos no clado são SEQ ID NO 3 e SEQ ID NO 9.

[0249] Um alinhamento dos polipeptídeos da invenção é mostrado na Figura 2. Uma árvore filogenética dos polipeptídeos da invenção é mostrada na Figura 1.

Exemplo 8 limpeza na máquina de lavar em grande escala

[0250] Para os testes de desempenho de lavagem em máquinas de lavar de grande escala, os extratos EPS de P. fluorescens e S. aureus anteriormente mencionados foram manchados em amostras de têxtil de 5x5 cm esterilizadas (WFK20A, aliquotas 250 µL) e deixadas embeber durante 15 minutos à temperatura ambiente. As amostras foram então fixadas a toalhas de chá de balastro e lavadas em Máquinas de Lavar Roupa Miele (Miele Softtronic, W2245) com e sem enzima, em detergente líquido ou em pó. As lavagens foram realizadas em água corrente com nano-pó de óxido de ferro (III) a 0,08 g/L (544884; Sigma-Aldrich) em detergente líquido 4,6 g/L (gel Persil Universal) ou com sujidade de pigmento WFK 09V 0,7g/L (Wfk-Testgewebe GmbH, #00500) em 5,3 g/L de detergente em pó modelo T, respectivamente. O programa de cor a 30 °C foi usado para estes testes (tempo de execução 1 h, 26 min). Após a lavagem, os itens foram secos em linha à temperatura ambiente durante a noite. Os valores de remissão (REM460 nm ) foram medidos com o uso de um Macbeth Color-Eye 7000 (CE7000), e são exibidos na Tabela 7 e 8. Desempenho de lavagem (∆REM(460nm) = REM460 nm (lavadas com enzima) – REM460 nm (lavadas sem enzima)) também é indicado. Tabela 7. Limpeza de SEQ ID NO 3 na máquina de lavar em grande escala em detergente líquido EPS colocada em Desempenho de Valores de Rem pontos sobre a Enzima lavagem 460nm médios camiseta (∆Rem460nm) P.fluorescens EPS, Sem wfk20A enzima 47,4 0,2 µg/mL P.fluorescens EPS,

SEQ ID NO wfk20A 3 72,2 24,8

S.aureus EPS, Sem wfk20A enzima 41,2 0,2 µg/mL S.aureus EPS,

SEQ ID NO wfk20A 3 66,5 25,3 Tabela 8. Limpeza de SEQ ID NO 3 na máquina de lavar em grande escala em detergente em pó modelo T EPS colocada em Desempenho de Valores de Rem pontos sobre a Enzima lavagem 460nm médios camiseta (∆Rem460nm) P.fluorescens EPS, Sem wfk20A enzima 58,6 0,2 µg/mL P.fluorescens EPS, SEQ ID NO wfk20A 3 64,0 5,4 S.aureus EPS, Sem wfk20A enzima 60,2 0,2 µg/mL S.aureus EPS, SEQ ID NO wfk20A 3 63,3 3,1 Exemplo 9 Propriedades de limpeza da Hexosaminidase em detergente modelo líquido em EPS de diferentes micro-organismos

[0251] Extratos em bruto de substâncias poliméricas extracelulares (EPS) de biofilme foram preparados a partir de S.aureus e P.fluorescens como descrito acima Para o teste de desempenho de lavagem, alíquotas de 50 uL dos extratos de EPS em bruto foram colocadas em pontos em amostras têxteis estéreis (WFK20A) e incubadas durante 15 min à temperatura do meio ambiente. As amostras (estéreis ou com EPS) foram colocadas em tubos de ensaio de 50 ml e 10 ml de licor de lavagem

(água de 15°dH com 0,2 g/L de nanopó de óxido de ferro(III) (544884; Sigma- Aldrich) com 3,33 g/L de detergente líquido modelo A) e enzima foram adicionados a cada tubo.

Lavagens sem enzima foram incluídas como controles.

Os tubos de ensaio foram colocados em um rotador Stuart e incubados durante 1 hora a 37 °C em 20 rpm.

O licor de lavagem foi, então, removido, e as amostras foram enxaguadas duas vezes com água de 15 °dH e deixadas a secar em filtro de papel durante a noite.

Os valores de remissão (REM460 nm ) foram medidos com o uso de um Macbeth Color-Eye 7000 (CE7000) e são exibidos na tabela 9. Desempenho de lavagem (∆REM(460nm) = REM460 nm (lavadas com enzima) – REM460 nm (lavadas sem enzima))

também é indicado.

Tabela 9. Efeitos de limpeza da hexosaminidase com a SEQ ID NO 18 em detergente de modelo líquido em EPS de diferentes micro- organismos Desempenho Valores de de lavagem Concentração de Rem(460 nm) (∆REM(460n Enzima enzima (μg/mL) médios m) Têxtil limpo (wfk20A), sem EPS 0 59,3 P. fluorescens EPS (wfk20A) 0 35,0 P. fluorescens SEQ ID EPS (wfk20A) NO 18 0,002 39,3 4,3 P. fluorescens SEQ ID EPS (wfk20A) NO 18 0,02 51,4 16,4 P. fluorescens SEQ ID EPS (wfk20A) NO 18 0,2 56,4 21,4

S.aureus EPS (wfk20A) 0 34,7 S.aureus EPS SEQ ID (wfk20A) NO 18 0,002 45,5 10,5 S.aureus EPS SEQ ID (wfk20A) NO 18 0,02 54,0 19,0 S.aureus EPS SEQ ID (wfk20A) NO 18 0,2 56,7 21,7 Exemplo 10 Ensaio de crescimento e desprendimento de biofilme

[0252] Staphylococcus aureus 15981 foi gentilmente fornecido por Iñigo Lasa (Valle et al., Mol Microbiol. Maio de 2003; 48 (4):1.075 a 1.087). A estirpe foi cultivada em ágar tríptico de soja (TSA) a 37 °C de um dia para o outro. No dia seguinte, uma única colônia foi transferida para 15 ml de caldo de ágar tríptico de soja de (TSB) e incubada 5 horas a 37 °C sob agitação. A cultura foi diluída 1:100 em TSB + glicose a 1% e 100 µL da suspensão bacteriana foram transferidos para cada poço de placas de microtitulação de 96 poços (Thermo Scientific, Nunclon Delta Surface, cat # 167008) e incubados 24 horas a 37 °C sem agitação e 100 µL da suspensão bacteriana foram transferidos para cada poço de placas de microtitulação de 96 poços (Thermo Scientific, Nunclon Delta Surface, cat # 167008) e incubados 24 horas a 37 °C sem agitação. O sobrenadante foi aspirado e os poços foram lavados com 100 µL de cloreto de sódio a 0,9% e preenchidos com 100 µL de água dura ou detergente não iônico de 3,3 g/L ou detergente modelo A de 3,3 g/L (composição de água dura e não iônica e modelo A) contendo 0 (controle) ou 20, 10, 5, 2,5, 1,25, 0,62, 0,31, 0,16, 0,08, 0,04, 0,02 e 0,01 µg/mL de dispersina SEQ ID 18. Após a incubação a 37 °C por 1 hora, as cavidades foram lavadas com água e manchadas por 15 min com 100 µl de 0,095% de solução violeta cristal (SIGMA V5265). As cavidades foram,

então, enxaguadas duas vezes com 100 µl de água, secas e as placas foram varridas.

[0253] Foi determinada a menor concentração de cada enzima que poderia remover a formação visível do biofilme do organismo S. aureus 15981 após 1 hora de incubação, na presença e na ausência de detergente (consulte a Tabela 10). Todas as enzimas foram avaliadas por duplicata. A média da concentração mínima de enzima que removeu a formação visível de S. aureus 15981 dos três ensaios está listada na Tabela

10. Tabela 10. Concentração mínima de enzima que pode remover a formação visível de S. aureus 15981 após 1 hora de incubação em água dura ou detergente modelo A Enzima Concentração Concentração mínima Concentração mínima para para remoção de biofilme mínima para remoção de em detergente não- remoção de biofilme em iônico biofilme em água dura µg/ml detergente µg/ml modelo A µg/ml SEQ ID NO 18 0,04 0,04 0,08 Exemplo 11 caracterização de dispersinas Atividade de dispersão em função do pH

[0254] Ensaio de atividade: A atividade da dispersina com a SEQ ID NO: 3 foi medida com 4-Nitrofenil N-acetil-β-D-glucosaminida (4- NAG, número CAS 3459-18-5, CHE00244) como substrato em função de pH (4-10 em incrementos de 1 unidade). As concentrações de substrato e dispersina com SEQ ID NO: 3 foram 5 mM e 10,0 μM, respectivamente, em todas as medições. Os tampões de diluição compreendem: MES 50 mM

(número CAS: 4432-31-9), glicina 50 mM (número CAS: 56-40-6), ácido acético 50 mM (número CAS: 64-19-7) ajustado ao pH 4-10. A solução de substrato (10 mM) foi preparada dissolvendo 34,23 mg de 4-NAG em 10,0 mL de água. A dissolução exigia mistura rigorosa de vórtice e aquecimento suave. A concentração da enzima foi determinada por UV-Vis (ε280 =57890 M-1cm-1). As amostras de enzimas foram incubadas nos diferentes valores de pH em volumes de 200 μL em um termomisturador (em MTP) por 10 min e 500 rpm a 30 °C. Após 10 min, o MTP foi incubado a 95 °C e 500 rpm por 10 min em termomisturador para finalizar a reação. Em seguida, as amostras foram transferidas para banho de gelo e resfriadas por 2 min. As amostras foram adicionadas 20 μL de NaOH 4 M para desprotonar o pNP (induzir a cor amarela). A absorvância a 405 nm foi medida por 2 min em intervalos de 10 segundos. Todas as medições foram produzidas em triplicado e amostras de referência foram produzidas para todas as condições (tampão em vez de enzima).

[0255] Resultados: A tabela a seguir mostra a absorvância média (atividade) subtraída a absorbância média das amostras de referência medidas após 10 min de incubação em diferentes valores de pH. Nesse caso, a maior atividade é obtida em pH 4. Atividade de dispersão em função do pH pH 4 5 6 7 8 9 10 A405 0,50 0,43 0,31 0,29 0,30 0,32 0,37 Estabilidade de dispersão em função do pH a NaCl

[0256] Ensaio de estabilidade - fluorimetria de varredura diferencial: A estabilidade térmica da dispersina com a SEQ ID NO: 3 foi medida em função do pH (4, 6, 7, 8, 10) e da concentração de NaCl (100, 200 e 300 mM). O desdobramento térmico foi monitorado usando fluorescência intrínseca utilizando um Prometheus NT.48. As concentrações da dispersina com a SEQ ID NO: 3 foi de 0,2 mg/mL em todas as medições. A concentração da enzima foi determinada por UV-Vis (ε280 =57890 M-1cm-1). Os tampões de diluição compreendem: MES 50 mM (número CAS: 4432-31- 9), glicina 50 mM (número CAS: 56-40-6), ácido acético 50 mM (número CAS: 64-19-7) ajustado ao pH pH 4, 6, 7, 8, ou 10.

[0257] As amostras de enzimas foram preparadas misturando um estoque de NaCl 5 M, tampão, água (MQ) e enzima para obter as concentrações desejadas. O volume total de cada mistura foi de 100 mL. As amostras foram carregadas no instrumento em duplicado e medidas de 20 a 95 °C com aumento de temperatura de 2,0 °C/min.

[0258] Resultados: As temperaturas de fusão (valores Tm) foram derivadas dos termogramas usando o software PR.ThermControl v.2.0.4. A tabela a seguir exibe os valores médios de Tm obtidos nas diferentes condições: pH 4 6 7 8 10 0 52,1 52,9 51,1 50,0 29,2 [NaCl] 100 50,0 52,3 50,1 48,5 N/A mM 200 49,1 51,9 49,6 47,8 N/A 300 48,3 51,4 48,8 46,9 N/A Atividade de dispersão em função da temperatura

[0259] Ensaio de atividade: A atividade da dispersina com a SEQ ID NO: 3 foi medida com 4-Nitrofenil N-acetil-β-D-glucosaminida (4- NAG, número CAS 3459-18-5, CHE00244) como substrato a pH 7. As concentrações de substrato e dispersina com SEQ ID NO: 3 foram 1 mM e 5 μM, respectivamente, em todas as medições. O tampão de diluição compreende: MES 50 mM (número CAS: 4432-31-9), glicina 50 mM (número CAS: 56-40-6), ácido acético 50 mM (número CAS: 64-19-7), pH 7.

[0260] A solução de substrato (10 mM) foi preparada dissolvendo 35,9 mg de 4-NAG em 10,482 mL de água. A dissolução exigia mistura rigorosa de vórtice e aquecimento suave. A concentração da enzima foi determinada por UV-Vis (ε280 =57890 M-1cm-1). A mistura reacional compreendeu 23,7 μL de enzima (42,3 μM), 20 μL de substrato e 156,3 μL de tampão.

[0261] As amostras de enzimas foram incubadas em volumes de 200 μL em um termomisturador por 10 min e 500 rpm a 20, 30, 40, 45, 50, 55, 60 ou 70 °C. Após 10 minutos, as amostras foram transferidas para banho de gelo e resfriadas por 2 minutos. As amostras foram adicionadas 10 μL de NaOH 4 M para desprotonar pNP (induzir a cor amarela). 180 μL da mistura reacional foi transferida para uma placa MT e a absorbância a 405 nm foi medida por 1 min em intervalos de 10 segundos. Todas as medições foram produzidas em duplicado e amostras de referência foram produzidas para todas as condições (tampão em vez de enzima).

[0262] Resultados: A tabela a seguir mostra a absorvância média (atividade) subtraída a absorbância média das amostras de referência medidas após 10 min de incubação em diferentes temperaturas. Os resultados demonstram que a atividade aumenta com o aumento da temperatura até 50 °C. Daqui por diante, a atividade diminui rapidamente com a temperatura. Atividade de dispersão em função da temperatura 20 °C 30 °C 40 °C 45 °C 50 °C 55 °C 60 °C 70 °C A405 0,00 0,02 0,02 0,03 0,03 0,01 0,01 0,00

Claims

Reivindicações

1. Composição compreendendo uma hexosaminidase de Lactobacillus ou Streptococcus, em que a composição compreende ainda; (a) i. um ou mais polióis, de preferência, selecionados dentre glicerol, (mono, di ou tri) propilenoglicol, etilenoglicol, polietilenoglicol, álcoois de açúcar, sorbitol, manitol, eritritol, dulcitol, inositol, xilitol e adonitol, ii. opcionalmente uma ou mais enzimas, de preferência, selecionadas dentre proteases, amilases ou lipases, iii. opcionalmente um ou mais tensoativos, de preferência, selecionados dentre tensoativos aniônicos e não iônicos, iv. opcionalmente um ou mais polímeros; ou (b) um grânulo que compreende iii. um núcleo compreendendo uma hexosaminidase de Lactobacillus ou Streptococcus e, opcionalmente, iv. um revestimento que consiste em uma ou mais camadas que circundam o núcleo.

2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, em que a hexosaminidase tem atividade de N-acetilglucosaminidase, preferencialmente atividade de β-1,6 N-acetilglucosaminidase, preferencialmente quando a atividade é determinada conforme descrito no Ensaio I ou no Exemplo 11.

3. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, em que a hexosaminidase compreende um ou mais dos motivos GXDE (SEQ ID NO 12), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID NO 13), [VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (SEQ ID NO 14) ou [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L

(SEQ ID NO 15).

4. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2 ou 3, em que a hexosaminidase compreende os motivos GXDE (SEQ ID NO 12) e [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID NO 13).

5. Composição, de acordo com a reivindicação 3, em que a hexosaminidase compreende os motivos [VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (SEQ ID NO 14) e/ou [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L (SEQ ID NO 15).

6. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4 ou 5, em que a hexosaminidase é selecionada a partir do grupo que consiste em polipeptídeos tendo a sequência de aminoácidos de: SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 9 e polipeptídeos tendo pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou tal como pelo menos 99% de identidade de sequência deste documento.

7. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, em que o polipeptídeo com atividade da hexosaminidase compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO 3 ou polipeptídeos com pelo menos 60%, por exemplo, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 99% de identidade de sequência deste documento.

8. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7, em que o polipeptídeo com atividade da hexosaminidase compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO 3 ou polipeptídeos com pelo menos 60%, por exemplo, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 99% de identidade de sequência deste documento.

9. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8, em que o polipeptídeo com atividade da hexosaminidase compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO 3 ou polipeptídeos com pelo menos 60%, por exemplo, 80%, 85%, 90%, 95%,

98% ou 99% de identidade de sequência deste documento.

10. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou 9, em que o polipeptídeo com atividade da hexosaminidase compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO 3 ou polipeptídeos com pelo menos 60%, por exemplo, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 99% de identidade de sequência deste documento.

11. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, em que a composição compreende adicionalmente uma ou mais enzimas selecionadas dentre o grupo que consiste em proteases, lipases, cutinases, amilases, carboidrases, celulases, pectinases, mananases, arabinases, galactanases, xilanases e oxidases.

12. Uso de uma composição, conforme definida nas reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou 11, de preferência uma composição de limpeza, tal como uma composição detergente compreendendo uma hexosaminidase tendo atividade de N- acetilglucosaminidase, preferencialmente atividade de β-1,6 N- acetilglucosaminidase, a) para prevenir, reduzir ou remover a pegajosidade do item; b) para pré-tratar manchas no item; c) para prevenir, reduzir ou remover a redeposição de sujidade durante um ciclo de lavagem; d) para prevenir, reduzir ou remover a aderência de sujidade ao item; e) para manter ou melhorar a brancura do item; f) para impedir, reduzir ou remover mau odor do item, em que o item é um produto têxtil.

13. Uso, de acordo com a reivindicação 12, em que a hexosaminidase compreende um ou mais dos seguintes motivos GXDE (SEQ ID NO 12), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (SEQ ID

NO 13), [VLIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (SEQ ID NO 14) ou [GK]A[IL][IL][KSR][LQ]L (SEQ ID NO 15).

14. Uso de uma composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 ou 13, em que a hexosaminidase é selecionada a partir do grupo que consiste em polipeptídeos mostrados nas SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 9, SEQ ID NO 18 ou polipeptídeos tendo pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou tal como pelo menos 99% de identidade de sequência deste documento.

15. Kit destinado para a limpeza, em que o kit compreende uma solução de uma mistura de enzima compreendendo hexosaminidase de Lactobacillus ou Streptococcus, e uma enzima adicional selecionada a partir de proteases, amilases, celulases e lipases.