WO2010029973A1 - 美白剤及び抗老化剤、並びに皮膚化粧料 - Google Patents

美白剤及び抗老化剤、並びに皮膚化粧料 Download PDF

Info

Publication number
WO2010029973A1
WO2010029973A1 PCT/JP2009/065848 JP2009065848W WO2010029973A1 WO 2010029973 A1 WO2010029973 A1 WO 2010029973A1 JP 2009065848 W JP2009065848 W JP 2009065848W WO 2010029973 A1 WO2010029973 A1 WO 2010029973A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
extract
action
promoting action
mrna expression
added
Prior art date
Application number
PCT/JP2009/065848
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
圭子 土肥
弘恭 岩橋
Original Assignee
丸善製薬株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 丸善製薬株式会社 filed Critical 丸善製薬株式会社
Priority to CN2009801364182A priority Critical patent/CN102149366A/zh
Priority to EP09813119.6A priority patent/EP2335685A4/en
Publication of WO2010029973A1 publication Critical patent/WO2010029973A1/ja
Priority to US13/044,691 priority patent/US20110212041A1/en

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789Magnoliopsida [dicotyledons]
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/23Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/45Ericaceae or Vacciniaceae (Heath or Blueberry family), e.g. blueberry, cranberry or bilberry
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/67Piperaceae (Pepper family), e.g. Jamaican pepper or kava
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/73Rosaceae (Rose family), e.g. strawberry, chokeberry, blackberry, pear or firethorn
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/85Verbenaceae (Verbena family)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88Liliopsida (monocotyledons)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9755Gymnosperms [Coniferophyta]
    • A61K8/9767Pinaceae [Pine family], e.g. pine or cedar
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9794Liliopsida [monocotyledons]
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00Preparations for care of the skin
    • A61Q19/02Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08Anti-ageing preparations
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof

Definitions

  • the present invention relates to a whitening agent and an anti-aging agent, and a skin cosmetic containing at least one of the whitening agent and the anti-aging agent.
  • the epidermis and dermis of the skin are composed of epidermal cells, dermal fibroblasts, and extracellular matrices such as collagen and elastin that are outside these cells and support the skin structure.
  • extracellular matrices such as collagen and elastin that are outside these cells and support the skin structure.
  • the interaction between these skin tissues is kept constant, so that moisture retention, flexibility, elasticity, etc. are secured, and the skin is maintained in a fresh state with its tension and gloss.
  • external factors such as irradiation with ultraviolet rays (UVA, UVB), significant drying of air, excessive skin washing, contact with hydrogen peroxide, etc., or when aging progresses, collagen, elastin, etc.
  • UVA, UVB ultraviolet rays
  • the production amount of the extracellular matrix decreases, and the elasticity decreases due to crosslinking.
  • the skin's moisturizing function and elasticity are lowered, and the horny layer begins to exfoliate abnormally, so that the skin lose
  • MMPs matrix metalloproteases
  • the MMPs have different (1) collagenase group (MMP-1, MMP-8 and MMP-13), (2) gelatinase group (MMP-2 and MMP-9), 3) Stromelysin group (MMP-3 and MMP-10), (4) Membrane-bound matrix metalloprotease group (MMP-14, MMP-15, MMP-16, and MMP-17), (5) Others ( MMP-7, MMP-11, and MMP-12) (see Patent Document 1).
  • MMP-1 and MMP-14 are known as enzymes that degrade type I collagen, type II collagen, and type III collagen, which are the main components of the dermal matrix of the skin.
  • the expression is greatly increased by the irradiation of ultraviolet rays, which contributes to decrease or denaturation of collagen by ultraviolet rays, and is considered to be a major factor such as the formation of wrinkles on the skin.
  • the stratum corneum is formed from keratinocytes formed by terminal differentiation of epidermal keratinocytes and intercellular lipids filling the cells.
  • Intercellular lipids composed mainly of ceramide have a stratum corneum barrier function by forming a lamellar structure.
  • keratinocytes are composed mainly of keratin fibers and covered with a hydrophobic and strong cell membrane-like structure called a cornified envelope (keratin thickened membrane, hereinafter referred to as “CE”) that is a membrane lining protein. .
  • CE cornified envelope
  • CE is formed by cross-linking and insolubilizing a plurality of CE precursor proteins such as involucrin and loricrin produced in the cells according to the differentiation of epidermal keratinocytes, and this CE is a barrier function of the skin. Intimately involved. Furthermore, ceramide and the like are covalently bonded to a part of them, and the base of the lamellar structure of intercellular lipids is supplied by taking a hydrophobic structure, and the basis of the stratum corneum barrier function and the moisture retention function of the skin is formed. .
  • an anti-aging agent having an action such as an accelerating action and a recovery action from UVB damage can effectively prevent or improve skin aging symptoms such as skin elasticity reduction, roughening, and wrinkles.
  • melanin also plays a role in protecting the living body from ultraviolet rays in the skin, but overproduction and uneven accumulation cause darkening of the skin and spots.
  • melanin is changed from tyrosine to dopa and from dopa to dopaquinone by the action of an enzyme tyrosinase biosynthesized in pigment cells, and then formed through an intermediate such as 5,6-dihydroxyindophenol. Therefore, in order to prevent or improve skin darkness (skin pigmentation), that is, for whitening, it is effective to inhibit the melanin production process or to lightly bleach already produced melanin. It is done.
  • As herbal medicines having such a tyrosinase activity inhibitory action for example, Fuji tea extract (see Patent Document 2), Yanagita extract (see Patent Document 3) and the like have been reported.
  • the present invention firstly has at least one of an excellent tyrosinase activity inhibitory action, melanin production inhibitory action, SCF mRNA expression inhibitory action, endothelin-1 mRNA expression inhibitory action, bFGF mRNA expression inhibitory action, and POMC mRNA expression inhibitory action,
  • An object of the present invention is to provide a natural whitening agent that is highly safe and easy to obtain raw materials.
  • the present invention secondly has an excellent elastase activity inhibiting action, MMP-1 activity inhibiting action, type I collagen production promoting action, type IV collagen production promoting action, damage inhibiting action against hydrogen peroxide, laminin-5 production Promoting action, Transglutaminase-1 production promoting action, UVB damage recovery action, epidermal keratinocyte proliferation promoting action, skin fibroblast proliferation promoting action, involucrin production promoting action, ATP production promoting action, filaggrin production promoting action, hyaluron
  • HAS3 acid synthase 3
  • AQP3 aquaporin 3
  • a third object of the present invention is to provide a skin cosmetic containing at least one of the whitening agent and the anti-aging agent of the present invention as an active ingredient.
  • the present inventor is a natural product that is easy to obtain, inexpensive, and highly safe, and does not adversely affect the quality of the object to be added in terms of odor, feeling of use, etc.
  • whitening agents and anti-aging agents that can be widely used in skin cosmetics, biberry extract, blue flag extract, sweet potato extract, western primrose extract, lemon verbena extract
  • At least one of the following products (1) excellent tyrosinase activity inhibitory action, melanin production inhibitory action, Less SCF mRNA expression inhibitory action, endothelin-1 mRNA expression inhibitory action, bFGF mRNA expression inhibitory action, and POMC mRNA expression inhibitory action
  • the present invention is based on the above findings of the present inventors, and means for solving the above problems are as follows. That is, ⁇ 1> Biberry extract, Blue flag extract, Prunus extract, Western primrose extract, Lemon verbena extract, Buttercup extract, Blueberry extract, Celery extract, Red willow extract , And at least one kind of passion fruit extract. ⁇ 2> The whitening agent according to ⁇ 1>, which has at least one of tyrosinase activity inhibitory action, melanin production inhibitory action, SCF mRNA expression inhibitory action, endothelin-1 mRNA expression inhibitory action, bFGF mRNA expression inhibitory action, and POMC mRNA expression inhibitory action It is.
  • the anti-aging agent according to ⁇ 3> which has at least one of a promoting action and an aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promoting action.
  • AQP3 aquaporin 3
  • the present invention firstly, it has at least one of an excellent tyrosinase activity inhibitory action, melanin production inhibitory action, SCF mRNA expression inhibitory action, endothelin-1 mRNA expression inhibitory action, bFGF mRNA expression inhibitory action, and POMC mRNA expression inhibitory action. Therefore, it is possible to provide a natural whitening agent that is highly safe and easy to obtain raw materials.
  • a natural anti-aging agent that has at least one of hyaluronic acid synthase 3 (HAS3) mRNA expression promoting action and aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promoting action and is highly safe and easy to obtain raw materials. be able to.
  • HAS3 hyaluronic acid synthase 3
  • AQP3 aquaporin 3
  • the whitening agent and anti-aging agent of the present invention include a biberry extract, a blue flag extract, a pea pod extract, a western primrose extract, a lemon verbena extract, a hornworm extract, a blueberry extract, a celery And at least one kind of extract of passionfruit and passion fruit, and further contains other components as required.
  • the whitening agent has an excellent whitening action based on at least one of a tyrosinase activity inhibitory action, a melanin production inhibitory action, an SCF mRNA expression inhibitory action, an endothelin-1 mRNA expression inhibitory action, a bFGF mRNA expression inhibitory action, and a POMC mRNA expression inhibitory action. Is.
  • the anti-aging agent of the present invention comprises an elastase activity inhibiting action, an MMP-1 activity inhibiting action, a type I collagen production promoting action, a type IV collagen production promoting action, a hydrogen peroxide damage inhibiting action, a laminin-5 production promoting action, a trans Glutaminase-1 production promoting action, UVB damage recovery action, epidermal keratinocyte proliferation promoting action, skin fibroblast proliferation promoting action, involucrin production promoting action, ATP production promoting action, filaggrin production promoting action, hyaluronic acid synthase 3 (HAS3) It has an excellent anti-aging effect based on at least one of mRNA expression promoting action and aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promoting action.
  • AQP3 aquaporin 3
  • the biberry (scientific name: Myrica cerifera ) is a plant of the genus Dioscorea which is also called a white peach.
  • the portion of the biberry used as an extraction raw material is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the intended purpose.For example, flowers, persimmons, fruits, pericarps, seeds, seed coats, stems, leaves, branches, branches and leaves, Examples thereof include a trunk, bark, root, rhizome, root bark, or a mixture thereof. Among these, the root bark is particularly preferable.
  • the above-mentioned Futsukazura (scientific name: Piper kadzuura ) is a plant belonging to the genus Pepperaceae, and is distributed from Honshu ( southwest of Kanto) to Okinawa, and is easily available from these regions.
  • flowers, persimmons, fruits, pericarps, seeds, seed coats, stems, leaves, branches, branches and leaves Examples thereof include a trunk, bark, root, rhizome, root bark, or a mixture thereof.
  • a stem is particularly preferable.
  • the Kimizuki (scientific name: Agrimonia pilosa ) is a perennial plant belonging to the genus Rosaceae, and is easily available because it inhabits the forest edge, wilderness, and roadsides of Honshu, Shikoku, Kyushu and others.
  • flowers, persimmons, fruits, pericarp, seeds, seed coats, stems, leaves, branches, branches and leaves Examples thereof include a trunk, bark, root, rhizome, root bark, or a mixture thereof. Among these, whole grass is particularly preferable.
  • the blueberry (scientific name: Vaccinium spp .) Is a general term for deciduous shrub fruit trees native to North America that are classified into the genus Vaccinium .
  • the part of the blueberry used as an extraction raw material is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose. For example, flowers, persimmons, fruits, pericarps, seeds, seed coats, stems, leaves, branches, branches and leaves, Examples thereof include a trunk, bark, root, rhizome, root bark, or a mixture thereof. Among these, leaves are particularly preferable.
  • the blue flag (scientific name: Iris vesicoror ) is a plant of the Iridaceae family.
  • the part of the blue flag used as an extraction raw material is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the intended purpose. For example, flowers, persimmons, fruits, pericarps, seeds, seed coats, stems, leaves, branches, branches and leaves , Trunk, bark, root, rhizome, root bark, or a mixture thereof. Among these, the root is particularly preferable.
  • the Western primrose (scientific name: Primula veris ) is a plant of the primrose family. There is no restriction
  • the lemon verbena (scientific name: Aloysia triphylla ) is a deciduous shrub belonging to the genus Euphorbia, and grows to a height of 1 to 3 m, and leaves have a strong lemon scent.
  • the portion of the lemon verbena used as an extraction raw material is not particularly limited and can be appropriately selected according to the purpose. For example, flowers, persimmons, fruits, pericarps, seeds, seed coats, stems, leaves, branches, Examples thereof include branches, leaves, stems, bark, roots, rhizomes, root barks, or a mixture thereof. Among these, leaves are particularly preferable.
  • the celery (scientific name: Apium graveolens ) is a plant belonging to the family of celery family and is also called Dutch honey bee or Kiyomasa ginseng. Almost all parts of leaves, stems, roots and seeds can be edible. There is a unique strong scent.
  • the portion of the celery used as an extraction raw material is not particularly limited and can be appropriately selected according to the purpose. For example, flowers, persimmons, fruits, pericarps, seeds, seed coats, stems, leaves, branches, branches and leaves, Examples thereof include a trunk, bark, root, rhizome, root bark, or a mixture thereof. Among these, seeds are particularly preferable.
  • the red willow (scientific name: Tamarix tenuissima ) is a plant belonging to the family Goryuaceae.
  • the site of the red willow used as an extraction raw material is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose.
  • flowers, persimmons, fruits, pericarps, seeds, seed coats, stems, leaves, branches, branches and leaves Examples thereof include a trunk, bark, root, rhizome, root bark, or a mixture thereof. Among these, flowers are particularly preferable.
  • the passion fruit (scientific name: Passiflora edulis ) is a member of the family Passifloraceae .
  • the portion of the passion fruit used as the extraction raw material is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the intended purpose.For example, flowers, persimmons, fruits, pericarps, seeds, seed coats, stems, leaves, branches, Examples thereof include branches, leaves, stems, bark, roots, rhizomes, root barks, or a mixture thereof. Among these, leaves are particularly preferable.
  • Each plant as an extraction raw material can be subjected to solvent extraction, for example, after being dried, in a state as it is or after being pulverized using a crusher or the like.
  • the extraction raw material is preferably dried and pulverized immediately after collection. The drying may be performed, for example, in the sun or using a commonly used dryer.
  • pretreatments such as degreasing
  • nonpolar solvents such as hexane and benzene.
  • the extract of each plant can be easily obtained by using a method generally used for extraction of plants. Moreover, you may use a commercial item as said plant extract.
  • the extract of each plant includes the extract of each plant, the diluted or concentrated solution of the extract, the dried product of the extract, or any of these roughly purified products or purified products. It is.
  • a solvent used for the said extraction there is no restriction
  • action or anti-aging effect contained in each said plant can be easily extracted by the extraction process which uses a polar solvent as an extraction solvent.
  • the water that can be used as the extraction solvent is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose. For example, pure water, tap water, well water, mineral water, mineral water, hot spring water, spring water, fresh water, etc. In addition, those subjected to various treatments are included. Examples of the treatment applied to water include purification, heating, sterilization, filtration, ion exchange, adjustment of osmotic pressure, buffering, and the like. Therefore, the water that can be used as the extraction solvent includes purified water, hot water, ion exchange water, physiological saline, phosphate buffer, phosphate buffered saline, and the like.
  • the hydrophilic organic solvent that can be used as the extraction solvent is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the intended purpose. Examples thereof include lower ones having 1 to 5 carbon atoms such as methanol, ethanol, propyl alcohol, and isopropyl alcohol. Alcohols: lower aliphatic ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; polyhydric alcohols having 2 to 5 carbon atoms such as 1,3-butylene glycol, propylene glycol, glycerin, etc., and a mixed solvent of the hydrophilic organic solvent and water Etc. can also be used.
  • a mixed solvent of the water and the hydrophilic organic solvent 1 to 90 parts by mass with respect to 10 parts by mass of water in the case of a lower alcohol, and 10% of water in the case of a lower aliphatic ketone. It is preferable to use a mixture of 1 to 40 parts by mass with respect to parts by mass. In the case of a polyhydric alcohol, it is preferable to use a mixture of 1 part by mass to 90 parts by mass with respect to 10 parts by mass of water.
  • each of the extraction raw materials is put into a treatment tank filled with an extraction solvent, and is further allowed to stand for 30 minutes to 4 hours with occasional stirring to elute soluble components, followed by filtration. Then, the solid matter is removed, the extraction solvent is distilled off from the obtained extract, and the extract can be obtained by drying.
  • the amount of extraction solvent is usually 5 to 15 times (mass ratio) of the extraction raw material.
  • the extraction conditions are usually about 1 to 4 hours at 50 to 95 ° C. when water is used as the extraction solvent.
  • the extraction solvent When a mixed solvent of water and ethanol is used as the extraction solvent, it is usually about 30 minutes to 4 hours at 40 ° C. to 80 ° C.
  • the extract obtained by extracting with a solvent can be used as it is as an active ingredient of the whitening agent or anti-aging agent of the present invention as long as the extraction solvent is highly safe.
  • the extract of each plant obtained by extraction is diluted, concentrated and dried according to a conventional method in order to obtain a diluted or concentrated solution of the extract, a dried product of the extract, or a crude purified product or purified product thereof. Further, treatment such as purification may be performed.
  • the extract of each said plant obtained can be used as an active ingredient of a whitening agent or an anti-aging agent as it is, the concentrate or the thing dried as it is easier to use.
  • a conventional method can be used, and carriers such as dextrin and cyclodextrin may be added to improve hygroscopicity.
  • each plant as an extraction raw material may have a specific odor and taste.
  • the extract of each plant is decolorized and deodorized within a range not causing a decrease in physiological activity.
  • purification can be performed by activated carbon treatment, adsorption resin treatment, ion exchange resin treatment, or the like.
  • the plant extracts obtained as described above have tyrosinase activity inhibitory action, melanin production inhibitory action, SCF mRNA expression inhibitory action, endothelin-1 mRNA expression inhibitory action, bFGF mRNA expression inhibitory action, POMC mRNA expression inhibitory action, elastase activity inhibitory action.
  • the said whitening agent or anti-aging agent may be the said plant extract itself.
  • the said whitening agent or anti-aging agent only 1 type may be contained in the extract of each said plant, and 2 or more types may be contained.
  • the whitening agent or anti-aging agent are not particularly limited as long as the effects of the present invention are not impaired.
  • a physiological saline solution for diluting the extract of each plant to a desired concentration can be used.
  • the said whitening agent or anti-aging agent can be made into arbitrary dosage forms, such as a powder form, a granule form, and a tablet form, by formulating as needed.
  • the whitening agent or anti-aging agent of the present invention has an excellent whitening action or anti-aging action, and is excellent in use feeling and safety, and thus is particularly suitable for use in the skin cosmetic of the present invention described later. .
  • the skin cosmetic of the present invention contains at least one of the whitening agent and the anti-aging agent of the present invention as an active ingredient, and further contains other components appropriately selected as necessary.
  • the use of the skin cosmetic is not particularly limited and can be appropriately selected from various uses.
  • ointment cream, emulsion, lotion, pack, jelly, lip balm, lipstick, bath additive, astringent , Etc.
  • the blending amount of the whitening agent or the anti-aging agent with respect to the whole skin cosmetic can be adjusted as appropriate depending on the type of skin cosmetic, physiological activity of the extract, etc., but it is 0 in terms of each plant extract. It is preferably 0.0001% by mass to 10% by mass, and more preferably 0.001% by mass to 1% by mass.
  • the skin cosmetics can be added with various main ingredients and auxiliaries usually used in the production of the skin cosmetics and other components as long as they do not impair the objects and effects of the present invention.
  • the other components are not particularly limited as long as they do not hinder the whitening action and anti-aging action of the present invention, and include ingredients appropriately selected according to the purpose. Examples include astringents, bactericides, and antibacterial agents. UV absorbers, humectants, cell activators, fats and oils, waxes, hydrocarbons, fatty acids, alcohols, esters, surfactants, fragrances, and the like.
  • the skin cosmetic of the present invention has high safety when used on the skin, and has excellent tyrosinase activity inhibitory action, melanin production inhibitory action, SCF mRNA expression inhibitory action, endothelin-1 mRNA expression inhibitory action, bFGF mRNA expression inhibitory action, POMC mRNA expression inhibitory action, elastase activity inhibitory action, MMP-1 activity inhibitory action, ATP production promoting action, laminin-5 production promoting action, filaggrin production promoting action, transglutaminase-1 production promoting action, hyaluronic acid synthase 3 (HAS3) mRNA expression promoting action, aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promoting action, type I collagen production promoting action, type IV collagen production promoting action, skin fibroblast proliferation promoting action, UVB damage recovery action, epidermal keratinocyte proliferation promoting Action, involucrin Promoting action, and it is capable of exhibiting at least one of the damage suppressing effect on hydrogen per
  • the whitening agent, anti-aging agent, and skin cosmetic of the present invention are preferably applied to humans, but may be applied to animals other than humans as long as their respective effects are exhibited. You can also
  • Example 1 Tyrosinase activity inhibition test- Each extract of Table 4 below was used as a sample, and the tyrosinase activity inhibitory action was tested as follows. First, 0.2 mL of McIlvaine buffer (pH 6.8), 0.06 mL of 0.3 mg / mL tyrosine solution, and 0.18 mL of 25% by mass DMSO solution of the test sample were added to a 48-well plate, and the plate was allowed to stand at 37 ° C. for 10 minutes. I put it. To this, 0.02 mL of 800 units / mL tyrosinase solution was added, followed by reaction at 37 ° C. for 15 minutes.
  • McIlvaine buffer pH 6.8
  • 0.06 mL of 0.3 mg / mL tyrosine solution 0.18 mL of 25% by mass DMSO solution of the test sample were added to a 48-well plate, and the plate was allowed to stand at 37 ° C. for 10 minutes. I
  • Tyrosinase activity inhibition rate (%) ⁇ 1 ⁇ (St ⁇ Sb) / (Ct ⁇ Cb) ⁇ ⁇ 100
  • St the absorbance at 475 nm of the test sample solution
  • Sb the absorbance at 475 nm of the test sample solution blank
  • Ct the absorbance at 475 nm of the control solution
  • Cb the absorbance at 475 nm of the control solution blank.
  • Results are expressed in Table 4 as sample concentrations of 100 ⁇ g / mL, 400 ⁇ g / mL, or 50% inhibition sample concentration.
  • Example 2 Test for inhibiting melanin production- Each extract shown in Table 5 below was used as a sample, and the melanin production inhibitory action was tested as follows. First, B16 melanoma cells were cultured using Dulbecco MEM containing 10% by mass FBS, and then cells were collected by trypsin treatment. The collected cells were diluted with Dulbecco MEM containing 10% by mass FBS and 1 mmol / L theophylline to a concentration of 24.0 ⁇ 10 4 cells / mL, then seeded on a 48-well plate at 300 ⁇ L per well and cultured for 6 hours.
  • Results are expressed in Table 5 as sample concentrations of 25 ⁇ g / mL, 100 ⁇ g / mL, 200 ⁇ g / mL, 400 ⁇ g / mL, or 50% inhibition sample concentration.
  • Example 3 Endothelin-1 (ET-1) mRNA expression inhibitory effect test- Each extract shown in Table 6 below was used as a sample and tested for its inhibitory effect on the increase in endothelin-1 mRNA expression as follows. First, normal human epidermis keratinocyte (NHEK) was cultured in human normal neonatal epidermal keratinocyte long-term culture medium (EpiLife-KG2) in an 80 cm 2 flask at 37 ° C. under 5% CO 2. And cells were collected by trypsinization.
  • NHEK normal human epidermis keratinocyte
  • EpiLife-KG2 human normal neonatal epidermal keratinocyte long-term culture medium
  • RNA was prepared. Using this total RNA as a template, the expression levels of endothelin-1 (ET-1) and the internal standard GAPDH mRNA were measured. Detection Real time PCR system (Smart Cycler (R), manufactured by Cepheid Inc.) was used to perform the real-time RT-PCR reactions by Takara SYBR ExScript RT-PCR Kit ( Perfect Real Time).
  • the expression level of ET-1 is a total RNA preparation prepared from cells cultured in “no UV irradiation, no sample solution added”, “UV irradiation, no sample solution added” and “UV irradiation, no sample solution added”, respectively.
  • the correction value is obtained with the value of GAPDH, and when the correction value of “no UV irradiation, no sample solution added” is 100, “UV irradiation, no sample solution added” and “UV irradiation, sample The correction value for “solution addition” was calculated. From the obtained results, the ET-1 mRNA expression suppression rate was calculated by the following formula 1.
  • Table 6 shows the inhibition rate of ET-1 mRNA expression at a sample concentration of 10 ⁇ g / mL or a sample concentration of 1 ⁇ g / mL.
  • E-1 mRNA expression inhibition rate (%) ⁇ (AB)-(AC) ⁇ / (AB) ⁇ 100
  • A is a correction value when no ultraviolet light is irradiated and the sample solution is not added
  • B is a correction value when the ultraviolet light is irradiated and the sample solution is not added
  • C is a correction value when the ultraviolet light is irradiated and the sample solution is added.
  • Example 4 SCF mRNA expression inhibitory action test- Each extract shown in Table 7 below was used as a sample, and the SCF mRNA expression inhibitory action was tested as follows.
  • normal human epidermis keratinocyte NHEK
  • human normal neonatal epidermal keratinocyte long-term culture medium EpiLife-KG2
  • EpiLife-KG2 human normal neonatal epidermal keratinocyte long-term culture medium
  • 40 ⁇ 10 4 cells / 2 mL / petre were seeded in 35 mm dishes (manufactured by FALCON) using EpiLife-KG2 and cultured overnight at 37 ° C. under 5% CO 2 .
  • the expression level of SCF and the internal standard GAPDH mRNA was measured.
  • Detection Real time PCR system Smart Cycler (R), manufactured by Cepheid Inc.
  • the expression level of SCF is based on a total RNA preparation prepared from cells cultured in “no UV irradiation, no sample solution added”, “UV irradiation, no sample solution added”, and “UV irradiation, no sample solution added”, respectively.
  • the correction value is obtained from the value of GAPDH, and “UV irradiation, no sample solution added” and “UV irradiation, sample solution added” when the correction value of “UV non-irradiation, no sample solution added” is set to 100. ”Was calculated.
  • the SCF mRNA expression suppression rate was computed by following Numerical formula 2. Table 7 shows the SCF mRNA expression inhibition rate at a sample concentration of 10 ⁇ g / mL or a sample concentration of 1 ⁇ g / mL.
  • Example 5 -BFGF mRNA expression promoting effect test-
  • Each extract shown in Table 8 below was used as a sample, and the bFGF mRNA expression promoting effect was tested as follows.
  • normal human neonatal skin epidermal keratinocytes NHEK
  • human normal neonatal epidermal keratinocyte long-term culture medium EpiLife-KG2
  • EpiLife-KG2 was used to seed 40 ⁇ 10 4 cells / 2 mL / dish in 35 mm dishes (manufactured by FALCON) and cultured overnight at 37 ° C.
  • Example 6 -POMC mRNA expression promoting effect test- Each extract shown in Table 9 below was used as a sample, and the POMC mRNA expression promoting effect was tested as follows.
  • NHEK normal human neonatal skin epidermal keratinocytes
  • EpiLife-KG2 human normal neonatal epidermal keratinocyte long-term culture medium
  • EpiLife-KG2 was used to seed 40 ⁇ 10 4 cells / 2 mL / dish in 35 mm dishes (manufactured by FALCON) and cultured overnight at 37 ° C.
  • the expression level of POMC and the internal standard GAPDH mRNA was measured. Detection was performed by real-time 2 Step RT-PCR reaction using TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time, code No. RR063A) using a real-time PCR device Smart Cycler (Cepheid). POMC mRNA expression level was corrected with GAPDH values based on total RNA preparations prepared from cells that were cultured without UV irradiation / sample addition, UV irradiation / sample addition and UV irradiation / sample addition, respectively.
  • Example 7 Elastase activity inhibition test- Each extract shown in Table 10 below was used as a sample, and the elastase activity inhibitory action was tested as follows. First, 50 ⁇ L of each sample solution prepared with 0.2 mol / L Tris-HCL buffer (pH 8.0) and 50 ⁇ L of 20 ⁇ g / mL elastase type III solution were mixed in a 96-well microplate. Thereafter, 100 ⁇ L of 0.4514 mg / mL N-SUCCINYL-ALA-ALA-ALA-p-NITROANILIDE prepared in the above buffer solution was added and reacted at 25 ° C. for 15 minutes.
  • Example 8 -Matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) activity inhibition test- Each extract shown in Table 11 below was used as a sample, and the matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) activity inhibitory action was tested as follows.
  • This test method is a partial modification of the Wunsch and Heidrich method. First, 50 ⁇ L of each sample solution dissolved in 0.1 mol / L Tris-HCl buffer (pH 7.1) containing 20 mmol / mL calcium chloride, 50 ⁇ L of MMP-1 solution, and Pz-peptide in a test tube with a lid. After 400 ⁇ L of the solution was mixed and reacted at 37 ° C.
  • A is the absorbance at a wavelength of 320 nm when the sample solution is not added and the enzyme is added
  • B is the absorbance at a wavelength of 320 nm when the sample solution is not added and the enzyme is not added
  • C is the sample solution when the sample solution is added and the enzyme is added.
  • D represents the absorbance at a wavelength of 320 nm with and without the sample solution added.
  • Example 9 Test for promoting type I collagen production-
  • N1RGB normal human neonatal skin fibroblasts
  • Dulbecco MEM medium 10% by mass of FBS-containing Dulbecco MEM medium
  • the collected cells were diluted with Dulbecco's MEM medium to a cell density of 1.6 ⁇ 10 5 cells / mL, then seeded at 100 ⁇ L per well in a 96-well microplate, and cultured overnight.
  • sample concentration 100 ⁇ g / mL
  • FBS-containing Dulbecco MEM medium 150 ⁇ L of each sample solution (sample concentration: 100 ⁇ g / mL) dissolved in 0.25% by mass of FBS-containing Dulbecco MEM medium was added to each well, and cultured for 3 days. Thereafter, the amount of type I collagen in the medium in each well was measured by ELISA.
  • the type I collagen production promotion rate was calculated with the amount of type I collagen when no sample was added as 100%.
  • the calculation formula of the type I collagen production promotion rate is as follows.
  • Type I collagen production promotion rate (%) A / B ⁇ 100
  • A represents the amount of type I collagen when the test sample is added
  • B represents the amount of type I collagen when no test sample is added.
  • Example 10 Using a 50% by weight ethanol extract of Japanese quail as a sample, type IV collagen production promoting action was tested as follows. First, normal human neonatal skin fibroblasts (NB1RGB) were cultured using 10% by mass of FBS-containing Dulbecco MEM medium, and then cells were collected by trypsin treatment. The collected cells were diluted with Dulbecco's MEM medium to a cell density of 1.6 ⁇ 10 5 cells / mL, then seeded at 100 ⁇ L per well in a 96-well microplate, and cultured overnight.
  • N1RGB normal human neonatal skin fibroblasts
  • Example concentration 100 ⁇ g / mL
  • FBS-containing Dulbecco MEM medium 150 ⁇ L of each sample solution (sample concentration: 100 ⁇ g / mL) dissolved in 0.25% by mass of FBS-containing Dulbecco MEM medium was added to each well, and cultured for 3 days.
  • the amount of type IV collagen in the medium in each well was measured by ELISA.
  • the IV type collagen production promotion rate (%) was computed by following Numerical formula 5.
  • Table 13 shows the results of the type IV collagen production promotion rate at a sample concentration of 100 ⁇ g / mL.
  • Type IV collagen production promotion rate (%) (A / B) ⁇ 100
  • A represents the amount of type IV collagen when the sample solution was added
  • B the amount of type IV collagen when no sample solution was added.
  • Example 11 -Damage suppression test for hydrogen peroxide- Each extract shown in Table 14 below was used as a sample, and the damage suppressing action against hydrogen peroxide was tested as follows. First, normal human neonatal dermal fibroblasts (NB1RGB) were cultured in ⁇ -MEM medium (GIBCO BLR, pH 7.2), and then cells were collected by trypsin treatment. The collected cells were diluted with ⁇ -MEM medium to a concentration of 2.5 ⁇ 10 5 cells / mL, seeded in a 48-well plate, seeded at 200 ⁇ L per well, and cultured overnight.
  • ⁇ -MEM medium GIBCO BLR, pH 7.2
  • the medium was removed, 200 ⁇ L of a test sample dissolved in ⁇ -MEM containing 1% by mass FBS was added to each well, and cultured for 24 hours. After completion of the culture, the medium was removed and washed with 400 ⁇ L of PBS ( ⁇ ). After washing, 200 ⁇ L of hydrogen peroxide (1 mmol / L) dissolved in Hanks buffer or Hanks buffer alone was added to each well and incubated for 2 hours. After incubation, the plate was washed with 400 ⁇ L of PBS ( ⁇ ), and 200 ⁇ L of neutral red dissolved in ⁇ -MEM containing 1 mass% FBS at a final concentration of 0.05 mg / mL was added to each well.
  • Example 12 Laminin-5 production promoting action test- Each extract shown in Table 15 below was used as a sample, and the laminin-5 production promoting effect was tested as follows. First, normal human neonatal skin epidermal keratinocytes (NHEK) were cultured in a medium for long-term culture of human normal neonatal epidermal keratinocytes (EpiLife-KG2) in an 80 cm 2 flask at 37 ° C. under 5% CO 2 . Cells were harvested by trypsinization.
  • NHEK normal human neonatal skin epidermal keratinocytes
  • EpiLife-KG2 human normal neonatal epidermal keratinocytes
  • the recovered cells are diluted with EpiLife-KG2 to a cell density of 1.0 ⁇ 10 5 cells / mL, and then seeded at 200 ⁇ L per well in a 24-well plate, and are then incubated at 37 ° C. under 5% CO 2. Cultured overnight. After completion of the culture, the medium was removed, and 500 ⁇ L of a sample solution dissolved in EpiLife-KG2 was added to each well, followed by culturing at 37 ° C. and 5% CO 2 for 48 hours.
  • the solution was discarded, washed with phosphate physiological buffer (PBS-T) containing 0.05% by mass Tween-20, and reacted with biotin-labeled antibody mouse IgG (Amersham Biosciences). Discard the solution, wash with phosphate physiological buffer (PBS-T) containing 0.05% by weight Tween-20, react with the avidin-biotinylated peroxidase complex, and then perform the same washing procedure. The color reaction was performed. The laminin-5 production promotion rate was calculated with the absorbance when no sample was added as 100%. Table 15 shows the laminin-5 production promotion rate (%) of each sample.
  • Example 13 Transglutaminase-1 production promoting action test- Each extract shown in Table 16 below was used as a sample, and the transglutaminase-1 production promoting effect was tested as follows. First, normal human newborn skin epidermal keratinocytes (NHEK) were cultured using medium for long-term culture of human normal neonatal epidermal keratinocytes (EpiLife-KG2), and then cells were collected by trypsin treatment. The collected cells were diluted with EpiLife-KG2 to a concentration of 1 ⁇ 10 5 cells / mL, seeded at 100 ⁇ L per well in a 96-well plate, and cultured for 2 days.
  • NHEK normal human newborn skin epidermal keratinocytes
  • EpiLife-KG2 medium for long-term culture of human normal neonatal epidermal keratinocytes
  • Transglutaminase-1 production promotion rate (%) A / B ⁇ 100
  • A represents the absorbance at a wavelength of 405 nm when the test sample was added
  • B represents the absorbance at a wavelength of 405 nm when no test sample was added (control).
  • Example 14 Test for recovery from UVB damage-
  • Each extract shown in Table 17 below was used as a sample, and the recovery action from UVB damage was tested as follows.
  • normal human newborn skin fibroblasts N1RGB
  • ⁇ -MEM containing 10% by mass FBS
  • the collected cells were diluted to a concentration of 2.0 ⁇ 10 5 cells / mL using ⁇ -MEM, and then seeded on a 48-well plate at 200 ⁇ L per well. After culturing for 24 hours, the medium was replaced with 100 ⁇ L of PBS ( ⁇ ) and irradiated with 1.0 J / cm 2 of UVB.
  • the absorbance at a wavelength of 650 nm was measured as turbidity, and the difference between the two was used as the amount of blue formazan produced.
  • cells that were not irradiated with UVB, and cells that were irradiated with UVB after cell seeding and were not added with the test sample were also measured in the same manner, and were set as a non-irradiated group and an irradiated group, respectively.
  • the formula for the recovery action from UVB damage is as follows. The results are shown in Table 17.
  • Nt is the absorbance in cells not irradiated with UVB
  • C is the absorbance in cells irradiated with UVB and no test sample is added
  • Sa is the absorbance in cells irradiated with UVB and added with the test sample.
  • Example 15 -Skin keratinocyte proliferation promoting effect test- Using a 50% by mass ethanol extract of Western primrose as a sample, the epidermal keratinocyte proliferation promoting effect was tested as follows. First, normal human newborn skin epidermal keratinocytes (NHEK) were cultured using medium for long-term culture of human normal neonatal epidermal keratinocytes (EpiLife-KG2), and then cells were collected by trypsin treatment. The collected cells were diluted with EpiLife-KG2 to a concentration of 2.0 ⁇ 10 4 cells / mL, then seeded at 100 ⁇ L per well in a collagen-coated 96-well microplate, and cultured overnight.
  • NHEK normal human newborn skin epidermal keratinocytes
  • EpiLife-KG2 medium for long-term culture of human normal neonatal epidermal keratinocytes
  • the absorbance at a wavelength of 570 nm was measured.
  • the absorbance at a wavelength of 650 nm was measured as turbidity, and the difference between the two was used as the amount of blue formazan produced.
  • a blank test was performed and corrected in the same manner.
  • the epidermal keratinocyte proliferation promotion rate was computed by the following numerical formula 7. Table 18 shows the keratinocyte proliferation promotion rate at a sample concentration of 3.13 ⁇ g / mL.
  • Epidermal keratinocyte proliferation promotion rate (%) (St / Ct) ⁇ 100
  • St represents the absorbance in the cells to which the sample solution was added
  • Ct represents the absorbance in the cells to which the sample solution was not added.
  • Example 16 Skin fibroblast proliferation promoting effect test- Using a 50% by weight ethanol extract of Japanese quail as a sample, the dermal fibroblast proliferation promoting action was tested as follows. First, normal human neonatal skin fibroblasts (NB1RGB) were cultured using ⁇ -MEM containing 10% by mass of FBS and then collected by trypsin treatment. The collected cells were diluted with ⁇ -MEM containing 5% by mass of FBS to a concentration of 7.0 ⁇ 10 4 cells / mL, then seeded at 100 ⁇ L per well in a 96-well microplate, and cultured overnight.
  • N1RGB normal human neonatal skin fibroblasts
  • a sample solution (concentration: 400 ⁇ g / mL) dissolved in ⁇ -MEM containing 5 mass% FBS was added to each well, and cultured for 3 days.
  • the dermal fibroblast proliferation promoting action was measured using the MTT assay. Specifically, 100 ⁇ L of medium was removed from each well, and MTT [3- (4,5-Dimethyl-2-thiazolyl) -2,5-diphenyl-2H dissolved in PBS ( ⁇ ) at a final concentration of 5 mg / mL. -tetrazolium Bromide] was added to each hole in an amount of 20 ⁇ L.
  • Example 17 -Test for promoting involucrin production- Using a 50% by mass ethanol extract of Western primrose as a sample, the involucrin production promoting effect was tested as follows. First, normal human newborn skin epidermal keratinocytes (NHEK) were cultured in a medium for long-term culture of human normal neonatal epidermal keratinocytes (EpiLife-KG2) in an 80 cm 2 flask at 37 ° C. under 5% CO 2. Cells were collected by treatment.
  • NHEK normal human newborn skin epidermal keratinocytes
  • EpiLife-KG2 human normal neonatal epidermal keratinocytes
  • the collected cells are diluted with EpiLife-KG2 to a cell density of 1.0 ⁇ 10 5 cells / mL, and then seeded at 200 ⁇ L per well in a 48-well plate, and the cells are incubated at 37 ° C. under 5% CO 2. Cultured overnight. After completion of the culture, the medium was removed, and 200 ⁇ L of a sample solution dissolved in EpiLife-KG2 was added to each well, followed by culturing at 37 ° C. and 5% CO 2 for 48 hours. After completion of the culture, the medium was removed, the cells were fixed on a plate, and the amount of involucrin expressed on the cell surface was measured by ELISA using a monoclonal anti-human involucrin antibody.
  • A represents the absorbance at a wavelength of 405 nm when the sample was added
  • B represents the absorbance at a wavelength of 405 nm when no sample was added.
  • ATP production promoting action test Each extract shown in Table 21 below was used as a sample, and ATP production promoting action was tested as follows. First, normal human newborn skin epidermal keratinocytes (NHEK) were cultured using medium for long-term culture of human normal neonatal epidermal keratinocytes (EpiLife-KG2), and then cells were collected by trypsin treatment. The collected cells were diluted with EpiLife-KG2 to a concentration of 2.0 ⁇ 10 5 cells / mL and then seeded at 100 ⁇ L per well on a collagen-coated 96-well plate and cultured overnight.
  • NHEK normal human newborn skin epidermal keratinocytes
  • EpiLife-KG2 medium for long-term culture of human normal neonatal epidermal keratinocytes
  • Example 19 Profile-Profilaggrin / filaggrin production promoting action test- Each extract of Table 22 below was used as a sample, and the filaggrin production promoting effect was tested as follows.
  • NHEK normal human newborn skin epidermal keratinocytes
  • EpiLife-KG2 medium for long-term culture of human normal neonatal epidermal keratinocytes
  • the collected cells were adjusted to a cell density of 1.5 ⁇ 10 5 cells / mL in the same medium, seeded on a 6-well collagen-coated plate by 2 mL, and incubated at 37 ° C., 5% CO 2 -95% air. Cultured under conditions for 3 days.
  • the profilaggrin production promoting effect of the sample was evaluated using the value obtained by adding the net intensity (band intensity) of profilagrin and filaggrin in 10 ⁇ g of the protein prepared from each of the cells cultured with and without the sample added.
  • the profilaggrin production promotion rate (%) was calculated based on the following formula. The results are shown in Table 22.
  • Profilaggrin / filagrin production promotion rate (%) A / B ⁇ 100
  • A represents “Net intensity at the time of sample addition (total value of profilagrin and filaggrin)”
  • B represents “Net intensity at the time of no sample addition (control)”.
  • HAS3 Hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoting action test-
  • HES3 hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoting action was tested as follows.
  • NHEK normal human epidermal keratinocytes
  • EpiLife-KG2 human normal neonatal epidermal keratinocytes
  • the collected cells were seeded in a 35 mm petri dish (manufactured by FALCON) at 40 ⁇ 10 4 cells / 2 mL, and cultured overnight at 37 ° C. under the conditions of 5% CO 2 -95% air using EpiLife-KG2. . After 24 hours, the culture solution was discarded, and 2 mL of a sample solution dissolved in EpiLife-KG2 (see Table 23 for the sample concentration) was added to each petri dish, and the mixture was added under conditions of 37 ° C., 5% CO 2 -95% air. Incubate for hours. After culturing, the culture solution is discarded, total RNA is extracted with ISOGEN (Nippon Gene, Cat. No.
  • RNA was prepared. Using this total RNA as a template, the expression levels of HAS3 (Hyaluronan Synthase 3) and the internal standard GAPDH mRNA were measured. Detection was performed by real-time 2 Step RT-PCR reaction using TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit (Perfect Real Time, code No. RR063A) using a real-time PCR device Smart cycler (Cepheid).
  • HAS3 Hyaluronan Synthase 3
  • GAPDH GAPDH
  • HAS3 mRNA expression promotion rate (%) A / B ⁇ 100 In the above formula, A represents “correction value when sample is added”, and B represents “correction value when sample is not added”.
  • Example 21 Aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promoting test-
  • NHEK normal human epidermis keratinocytes
  • EpiLife-KG2 human normal neonatal epidermal keratinocyte long-term culture medium
  • EpiLife-KG2 was used to seed 40 ⁇ 10 4 cells / 2 mL / dish in a 35 mm petri dish (manufactured by FALCON) and cultured overnight at 37 ° C. under 5% CO 2 . After 24 hours, the culture solution was discarded, and 2 mL of a test sample dissolved in EpiLife-KG2 to the required concentration was added to each dish, and cultured at 37 ° C., 5% CO 2 for 24 hours. After culturing, the culture solution is discarded, total RNA is extracted with ISOGEN (NIPPON GENE; Cat. No. 311-02501), the amount of each RNA is measured with a spectrophotometer, and the total RNA is adjusted to 200 ng / ⁇ L.
  • ISOGEN NIPPON GENE; Cat. No. 311-02501
  • RNA was prepared. Using this total RNA as a template, the expression levels of AQP3 and GAPDH as an internal standard were measured. Detection is carried out using a real-time PCR device Smart Cycler (registered trademark) (Cepheid), TaKaRa SYBR (registered trademark) PrimeScript TM RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (code No. RR063A) with real-time 2 Step RT-PCR. went. The expression level of AQP3 is determined based on the total RNA preparation prepared from the cells cultured without addition of the test sample and with the addition of the test sample, and a correction value is obtained from the GAPDH value. The correction value for the test sample addition was calculated. The results are shown in Table 24.
  • AQP3 mRNA expression promotion rate (%) A / B ⁇ 100
  • A represents a correction value when a test sample is added
  • B represents a correction value when no test sample is added.
  • the whitening agent or anti-aging agent of the present invention has an excellent tyrosinase activity inhibitory action, melanin production inhibitory action, SCF mRNA expression inhibitory action, endothelin-1 mRNA expression inhibitory action, bFGF mRNA expression inhibitory action, POMC mRNA expression inhibitory action, elastase activity inhibitory action, MMP-1 activity inhibitory action, ATP production promoting action, laminin-5 production promoting action, filaggrin production promoting action, transglutaminase-1 production promoting action, hyaluronic acid synthase 3 (HAS3) mRNA expression promoting action, aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promoting action, type I collagen production promoting action, type IV collagen production promoting action, dermal fibroblast proliferation promoting action, recovery action from UVB damage, epidermal keratinocyte proliferation promoting action, involucrin production promoting action, and peroxidation Vs.
  • hydrogen That has at least one of the damage suppress

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

 バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも1種を含有する美白剤、又は抗老化剤を提供する。

Description

美白剤及び抗老化剤、並びに皮膚化粧料
 本発明は、美白剤及び抗老化剤、並びに該美白剤及び抗老化剤の少なくともいずれかを含む皮膚化粧料に関する。
 皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、皮膚線維芽細胞、及び、これらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲンやエラスチン等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては、これら皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより、水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
 ところが、紫外線(UVA、UVB)の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄、過酸化水素との接触等の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、コラーゲンやエラスチン等の細胞外マトリックスの産生量が減少すると共に、架橋による弾力低下を起こす。その結果、皮膚は保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始めるため、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。
 このように皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲンやエラスチン等の真皮マトリックス成分の減少乃至変性が関与していることが知られている。
 コラーゲンの中でもI型コラーゲンは、最も多く体内に含まれるコラーゲンであり、皮膚の真皮にも多く含まれ、皮膚の強さを生み出す役割を果たしていることが知られている。
 また、エラスターゼは皮膚の真皮に存在するエラスチンの加水分解酵素であるが、エラスターゼは、紫外線暴露や老化により過剰発現することがあり、エラスターゼによりエラスチンが変性・破壊されると、皮膚の弾力性が低下すると考えられている。
 また、近年、真皮マトリックス成分の減少乃至変性を誘導する因子として、マトリックスメタロプロテアーゼ類(以下、「MMPs」と称することもある)と呼ばれるタンパク質分解酵素群が挙げられる。
 前記MMPsは、その一次構造と基質特異性の違いから、(1)コラゲナーゼ群(MMP-1、MMP-8及びMMP-13)、(2)ゼラチナーゼ群(MMP-2及びMMP-9)、(3)ストロメライシン群(MMP-3及びMMP-10)、(4)膜結合型マトリックスメタロプロテアーゼ群(MMP-14、MMP-15、MMP-16、及びMMP-17)、(5)その他(MMP-7、MMP-11、及びMMP-12)の5つのグループに分類されている(特許文献1参照)。
 前記MMPsの中でも、MMP-1及びMMP-14は、皮膚の真皮マトリックスの主な構成成分であるI型コラーゲン、II型コラーゲン、III型コラーゲンを分解する酵素として知られている。また、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少乃至変性の一因となり、皮膚のシワ形成等の大きな要因であると考えられる。
 また、角層は、表皮角化細胞が終末分化して形成された角質細胞と、細胞間を埋める細胞間脂質から形成される。セラミドを主成分とする細胞間脂質は、ラメラ構造を形成することにより、角層バリア機能を担っている。一方、角質細胞は、ケラチン線維を主成分とし、膜の裏打ち蛋白であるコーニファイドエンベロープ(角質肥厚膜、以下「CE」と略す。)という疎水的で強靭な細胞膜様構造物に覆われている。CEは、表皮角化細胞の分化に従って細胞内で産生されるインボルクリン、ロリクリンなど複数のCE前駆体蛋白質が、酵素トランスグルタミナーゼ-1により架橋され、不溶化して形成され、このCEが皮膚のバリア機能に密接に関与している。更に、その一部にはセラミド等が共有結合し、疎水的な構造をとることで細胞間脂質のラメラ構造の土台を供給し、角層バリア機能及び皮膚の水分保持機能の基礎が形成される。
 しかしながら、加齢、乾燥、紫外線(UVA、UVB)などの影響によりターンオーバー速度に異常が生じると、ラメラ構造の乱れやCEが不完全な状態で形成された、いわゆる不全角化が誘発され、角質細胞や細胞間脂質の構造に異常が生じ、角層の水分保持機能及びバリア機能は低下する。このことが肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状につながると考えられる。また、乾癬やアトピー性皮膚炎の患者では、バリア機能が低下した皮疹部で未熟なCEが高頻度に観察され、CEが正しく形成されることが皮膚のバリア機能に非常に重要であると考えられている(非特許文献1参照)。
 このようなことから、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、MMP-1活性阻害作用、エストロゲン様作用、I型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、UVBダメージからの回復作用等の各作用を有する抗老化剤は、皮膚の弾力性低下、荒れ、シワ等の皮膚の老化症状を、効果的に予防乃至改善することができると考えられる。
 一方、皮膚においてメラニンは紫外線から生体を保護する役目も果たしているが、過剰生成や不均一な蓄積は、皮膚の黒化やシミの原因となる。一般に、メラニンは色素細胞の中で生合成される酵素チロシナーゼの働きによって、チロシンからドーパ、ドーパからドーパキノンに変化し、次いで、5,6-ジヒドロキシインドフェノール等の中間体を経て形成される。したがって、皮膚の色黒(皮膚色素沈着症)を予防乃至改善するため、即ち美白のためには、メラニン産生過程を阻害すること、或いは既に産生したメラニンを淡色漂白することが有効であると考えられる。
 このようなチロシナーゼ活性阻害作用を有する生薬としては、例えば、藤茶抽出物(特許文献2参照)、ヤナギタデ抽出物(特許文献3参照)などが報告されている。
 これまでの美白剤開発は、メラニン生成の律速酵素であるチロシナーゼに注力して進められてきた。ところが、最近、紫外線UVB照射後に表皮ケラチノサイトからの産生が上昇し、色素細胞(メラノサイト)を活性化するサイトカインとしてα-メラノサイト刺激ホルモン(α-MSH)、エンドセリン-1(ET-1)、一酸化窒素(NO)、塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)、顆粒球・マクロファージ・コロニー刺激因子(GM-CSF)、幹細胞因子(SCF)等が報告されており、これらが関与する情報伝達系を遮断することによりメラニン産生を抑制して美白効果を導く物質の開発が盛んに行われるようになってきている。このようなエンドセリン-1(ET-1)の色素細胞(メラノサイト)への作用を阻害する生薬の抽出物として、例えばカミツレ抽出物、アルテア抽出物などが報告されている(非特許文献2参照)。
 しかしながら、現在までのところ、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、皮膚化粧料に広く使用可能な美白剤及び抗老化剤は未だ提供されておらず、その速やかな提供が強く求められているのが現状である。
特開2000-344672号公報 特開2002-370962号公報 特開2004-083488号公報
Experimental Dermatology 12:591-601(2003) 「フレグランスジャーナル」,Vol.28,No.9,p65~71,2000年発行
 本発明は、第1に、優れたチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、SCFmRNA発現抑制作用、エンドセリン-1mRNA発現抑制作用、bFGFmRNA発現抑制作用、及びPOMCmRNA発現抑制作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系美白剤を提供することを目的とする。
 また、本発明は、第2に、優れたエラスターゼ活性阻害作用、MMP-1活性阻害作用、I型コラーゲン産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン-5産生促進作用、トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用、UVBダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ATP産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素3(HAS3)mRNA発現促進作用、及びアクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗老化剤を提供することを目的とする。
 また、本発明は、第3に、本発明の前記美白剤、及び前記抗老化剤の少なくともいずれかを有効成分として配合した皮膚化粧料を提供することを目的とする。
 前記課題を解決するため本発明者が、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、皮膚化粧料に広く使用可能な美白剤、及び抗老化剤について鋭意検討を重ねた結果、バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳花の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも1種が、(1)優れたチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、SCFmRNA発現抑制作用、エンドセリン-1mRNA発現抑制作用、bFGFmRNA発現抑制作用、及びPOMCmRNA発現抑制作用の少なくともいずれかを有し、美白剤として有用であること、及び(2)優れたエラスターゼ活性阻害作用、MMP-1活性阻害作用、I型コラーゲン産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン-5産生促進作用、トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用、UVBダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ATP産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素3(HAS3)mRNA発現促進作用、及びアクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用の少なくともいずれかを有し、抗老化剤として有用であることを、それぞれ知見した。
 本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
 <1> バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも1種を含有することを特徴とする美白剤である。
 <2> チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、SCFmRNA発現抑制作用、エンドセリン-1mRNA発現抑制作用、bFGFmRNA発現抑制作用、及びPOMCmRNA発現抑制作用の少なくともいずれかを有する前記<1>に記載の美白剤である。
 <3> バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも1種を含有することを特徴とする抗老化剤である。
 <4> エラスターゼ活性阻害作用、MMP-1活性阻害作用、I型コラーゲン産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン-5産生促進作用、トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用、UVBダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ATP産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素3(HAS3)mRNA発現促進作用、及びアクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用の少なくともいずれかを有する前記<3>に記載の抗老化剤である。
 <5> 前記<1>から<2>のいずれかに記載の美白剤、及び前記<3>から<4>のいずれかに記載の抗老化剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする皮膚化粧料である。
 本発明によると、第1に、優れたチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、SCFmRNA発現抑制作用、エンドセリン-1mRNA発現抑制作用、bFGFmRNA発現抑制作用、及びPOMCmRNA発現抑制作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系美白剤を提供することができる。
 また、本発明によると、第2に、優れたエラスターゼ活性阻害作用、MMP-1活性阻害作用、I型コラーゲン産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン-5産生促進作用、トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用、UVBダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ATP産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素3(HAS3)mRNA発現促進作用、及びアクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗老化剤を提供することができる。
 また、本発明によると、第3に、本発明の前記美白剤、及び前記抗老化剤の少なくともいずれかを有効成分として配合した皮膚化粧料を提供することができる。
(美白剤及び抗老化剤)
 本発明の美白剤及び抗老化剤は、バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも1種を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
 前記美白剤は、チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、SCFmRNA発現抑制作用、エンドセリン-1mRNA発現抑制作用、bFGFmRNA発現抑制作用、及びPOMCmRNA発現抑制作用の少なくともいずれかに基づく、優れた美白作用を有するものである。
 前記バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の各抽出物が含有する、美白作用を発揮する物質の詳細については不明であるが、前記各植物抽出物がこのような優れた作用を有し、美白剤として有用であることは、従来は全く知られておらず、このことは本発明者らによる新たな知見である。
 本発明の抗老化剤は、エラスターゼ活性阻害作用、MMP-1活性阻害作用、I型コラーゲン産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン-5産生促進作用、トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用、UVBダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ATP産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素3(HAS3)mRNA発現促進作用、及びアクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用の少なくともいずれかに基づく、優れた抗老化作用を有するものである。
 前記バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の各抽出物が含有する、抗老化作用を発揮する物質の詳細については不明であるが、前記各植物抽出物がこのような優れた作用を有し、抗老化剤として有用であることは、従来は全く知られておらず、このことは本発明者らによる新たな知見である。
 前記バイベリー(学名:Myrica cerifera)は、シロヤマモモとも呼ばれるヤマモモ科ヤマモモ属の植物である。
 抽出原料として使用する前記バイベリーの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、又はこれらの混合物などが挙げられる。これらの中でも、根皮が特に好ましい。
 前記フウトウカズラ(学名:Piper kadzura)は、コショウ科コショウ属の植物であり、本州(関東南部以西)~沖縄に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
 抽出原料として使用する前記フウトウカズラの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、又はこれらの混合物などが挙げられる。これらの中でも、茎が特に好ましい。
 前記キンミズヒキ(学名:Agrimonia pilosa)は、バラ科キンミズヒキ属の多年草であり、本州、四国、九州などの林の縁、原野、路傍に生息しており、容易に入手可能である。
 抽出原料として使用する前記キンミズヒキの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、又はこれらの混合物などが挙げられる。これらの中でも、全草が特に好ましい。
 前記ブルーベリー(学名:Vaccinium spp.)は、ツツジ科スノキ属に分類される北アメリカ原産の落葉低木果樹の総称である。
 抽出原料として使用する前記ブルーベリーの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、又はこれらの混合物などが挙げられる。これらの中でも、葉が特に好ましい。
 前記ブルーフラッグ(学名:Iris vesicolor)は、アヤメ科の植物である。
 抽出原料として使用する前記ブルーフラッグの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、又はこれらの混合物などが挙げられる。これらの中でも、根が特に好ましい。
 前記西洋サクラソウ(学名:Primula veris)は、サクラソウ科の植物である。
 抽出原料として使用する前記西洋サクラソウの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、又はこれらの混合物などが挙げられる。これらの中でも、葉が特に好ましい。
 前記レモンバーベナ(学名:Aloysia triphylla)は、クマツズラ科イワダレソウ属の落葉低木である、高さ1~3mに成長し、葉は強いレモンの香りを放つ。
 抽出原料として使用する前記レモンバーベナの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、又はこれらの混合物などが挙げられる。これらの中でも、葉が特に好ましい。
 前記セロリ(学名:Apium graveolens)は、セリ科の植物であり、オランダミツバ、清正人参(きよまさにんじん)とも呼ばれる。葉、茎、根、種子のほぼ全ての部分を食用にできる。独特の強い香りがある。
 抽出原料として使用する前記セロリの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、又はこれらの混合物などが挙げられる。これらの中でも、種子が特に好ましい。
 前記紅柳(学名:Tamarix tenuissima)は、ギョウリュウ科の植物である。
 抽出原料として使用する前記紅柳の部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、又はこれらの混合物などが挙げられる。これらの中でも、花が特に好ましい。
 前記パッションフルーツ(学名:Passiflora edulis)は、トケイソウ科の植物である。
 抽出原料として使用する前記パッションフルーツの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、又はこれらの混合物などが挙げられる。これらの中でも、葉が特に好ましい。
 抽出原料である前記各植物は、例えば、乾燥した後に、そのままの状態で又は粗砕機等を用いて粉砕した状態で、溶媒抽出に供することができる。中でも、前記抽出原料としては、採取後ただちに乾燥し、粉砕したものが好ましい。前記乾燥は、例えば、天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。なお、前記各植物は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、前記各植物の極性溶媒による抽出処理を、効率よく行うことができる。
 前記各植物の抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法を利用することによって、容易に得ることができる。また、前記各植物の抽出物としては、市販品を使用してもよい。なお、前記各植物の抽出物には、前記各植物の抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又は、これらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
 前記抽出に用いる溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性有機溶媒、又は、これらの混合溶媒を、室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。前記各植物に含まれる美白作用又は抗老化作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって、容易に抽出することができる。
 前記抽出溶媒として使用し得る水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。したがって、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
 前記抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数1~5の低級アルコール;アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン;1,3-ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数2~5の多価アルコールなどが挙げられ、該親水性有機溶媒と水との混合溶媒なども用いることができる。なお、前記水と前記親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する際には、低級アルコールの場合は水10質量部に対して1質量部~90質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水10質量部に対して1質量部~40質量部を混合したものを使用することが好ましい。また、多価アルコールの場合は水10質量部に対して1質量部~90質量部を混合したものを使用することが好ましい。
 抽出原料である前記各植物から、各抽出物を抽出するにあたって、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。
 具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、前記各抽出原料を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、30分~4時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物を得ることができる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の5~15倍量(質量比)である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常50℃~95℃にて1~4時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常40℃~80℃にて30分間~4時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明の美白剤又は抗老化剤の有効成分として用いることができる。
 抽出により得られる前記各植物の抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。なお、得られる前記各植物の抽出液は、そのままでも美白剤又は抗老化剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、常法を利用することができ、また、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、抽出原料である前記各植物は特有の匂いと味を有している場合があり、そのため、前記各植物の抽出物に対しては、生理活性の低下を招かない範囲で、脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、例えば皮膚化粧料に添加する場合などには大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製は、具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
 以上のようにして得られる前記各植物の抽出物は、チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、SCFmRNA発現抑制作用、エンドセリン-1mRNA発現抑制作用、bFGFmRNA発現抑制作用、POMCmRNA発現抑制作用、エラスターゼ活性阻害作用、MMP-1活性阻害作用、ATP産生促進作用、ラミニン-5産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素3(HAS3)mRNA発現促進作用、アクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用、I型コラーゲン産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、UVBダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、及び過酸化水素に対するダメージ抑制作用の少なくともいずれかを有し、これらの作用に基づき、本発明の美白剤又は抗老化剤の有効成分として好適に利用可能なものである。
 前記美白剤又は抗老化剤における前記各植物の抽出物の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。また、前記美白剤又は抗老化剤は、前記各植物の抽出物そのものであってもよい。
 また、前記美白剤又は抗老化剤中、前記各植物の抽出物は、いずれか1種のみが含まれていてもよいし、2種以上が含まれていてもよい。前記美白剤又は抗老化剤中に2種以上の植物抽出物が含まれる場合の、各々の含有量比としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
 また、前記美白剤又は抗老化剤中に含まれ得る、前記各植物の抽出物以外のその他の成分としても、本発明の効果を損なわない範囲内であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記各植物の抽出物を所望の濃度に希釈等するための、生理食塩液などが挙げられる。また、前記美白剤又は抗老化剤中の前記その他の成分の含有量にも、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
 また、前記美白剤又は抗老化剤は、必要に応じて製剤化することにより、粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。
 本発明の美白剤又は抗老化剤は、優れた美白作用又は抗老化作用を有すると共に、使用感及び安全性に優れるため、例えば、後述する本発明の皮膚化粧料への利用に特に好適である。
(皮膚化粧料)
 本発明の皮膚化粧料は、本発明の前記美白剤及び前記抗老化剤の少なくともいずれかを有効成分として含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
 ここで、前記皮膚化粧料の用途としては、特に制限はなく、各種用途から適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント、などが挙げられる。
 前記美白剤又は前記抗老化剤の前記皮膚化粧料全体に対する配合量は、皮膚化粧料の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、前記各植物抽出物に換算して0.0001質量%~10質量%が好ましく、0.001質量%~1質量%がより好ましい。
 前記皮膚化粧料は、更に必要に応じて本発明の目的及び作用効果を損なわない範囲で、その皮膚化粧料の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他の成分を添加することができる。
 前記その他の成分としては、本発明の前記美白作用及び抗老化作用の妨げにならない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択した成分が挙げられ、例えば、収斂剤、殺菌剤、抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料、などが挙げられる。
 本発明の皮膚化粧料は、皮膚に使用した場合に高い安全性を有し、優れたチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、SCFmRNA発現抑制作用、エンドセリン-1mRNA発現抑制作用、bFGFmRNA発現抑制作用、POMCmRNA発現抑制作用、エラスターゼ活性阻害作用、MMP-1活性阻害作用、ATP産生促進作用、ラミニン-5産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素3(HAS3)mRNA発現促進作用、アクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用、I型コラーゲン産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、UVBダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、及び過酸化水素に対するダメージ抑制作用の少なくともいずれかを発揮し得るものである。
 なお、本発明の美白剤、抗老化剤、及び皮膚化粧料は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
 以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
(製造例1)
-各植物の水抽出物の製造-
 下記表1に示す各植物の粉砕物に、質量比で10倍量の水を加え、80℃で2時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の水を加え、80℃で2時間加熱し、ろ過した。得られたろ液を濃縮し、凍結乾燥して、各植物の水抽出物(凍結乾燥品)を得た。
 得られた各植物の水抽出物の「抽出率」を表1に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
(製造例2)
-各植物の50質量%エタノール抽出物の製造-
 下記表2に示す各植物の粉砕物に、質量比で10倍量の50質量%エタノールを加え、80℃で2時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の50質量%エタノールを加え、80℃で2時間加熱し、ろ過した。得られたろ液を濃縮し、凍結乾燥して、各植物の50質量%エタノール抽出物(凍結乾燥品)を得た。
 得られた各植物の50質量%エタノール抽出物の「抽出率」を表2に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
(製造例3)
-各植物の80質量%エタノール抽出物の製造-
 下記表3に示す各植物の粉砕物に、質量比で10倍量(質量比)の80質量%エタノールを加え、80℃で2時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の80質量%エタノールを加え、80℃で2時間加熱し、ろ過した。得られたろ液を濃縮し、凍結乾燥して、各植物の80質量%エタノール抽出物(凍結乾燥品)を得た。
 得られた各植物の80質量%エタノール抽出物の「抽出率」を表3に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
(実施例1)
-チロシナーゼ活性阻害作用試験-
 下記表4の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、チロシナーゼ活性阻害作用を試験した。
 まず、48wellプレートに、McIlvaine緩衝液(pH6.8)0.2mL、0.3mg/mLのチロシン溶液0.06mL、被験試料の25質量%DMSO溶液0.18mLを加え、37℃で10分間静置した。これに、800units/mLのチロシナーゼ溶液0.02mLを加え、引き続き、37℃で15分間反応した。反応終了後、波長475nmにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
 チロシナーゼ活性阻害作用の計算式は、以下のとおりである。
 チロシナーゼ活性阻害率(%)={1-(St-Sb)/(Ct-Cb)}×100
 ただし、前記式中、Stは被験試料溶液の波長475nmにおける吸光度、Sbは被験試料溶液ブランクの波長475nmにおける吸光度、Ctはコントロール溶液の波長475nmにおける吸光度、Cbはコントロール溶液ブランクの波長475nmにおける吸光度を表す。
 結果は、試料濃度100μg/mL、400μg/mL、又は50%阻害試料濃度で表し、表4に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
 表4の結果から、バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、及び紅柳の抽出物が、チロシナーゼ活性阻害作用を有することが確認できた。
(実施例2)
-メラニン産生抑制作用試験-
 下記表5の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、メラニン産生抑制作用を試験した。
 まず、B16メラノーマ細胞を、10質量%FBS含有ダルベッコMEMを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を10質量%FBS及び1mmol/Lのテオフィリン含有ダルベッコMEMで24.0×10cells/mLの濃度に希釈した後、48wellプレートに1well当たり300μLずつ播種し、6時間培養した。培養終了後、10質量%FBS及び1mmol/Lのテオフィリン含有ダルベッコMEMで溶解した被験試料を各wellに300μL添加し、4日間培養した。培養終了後、各wellから培地を取り除き、1mol/LのNaOH溶液200μLを添加して超音波破砕器により細胞を破壊し、波長475nmにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長540nmにおける吸光度を測定し、両者の差をもってメラニン産生量とした。
 空試験として、1mmol/Lのテオフィリン含有ダルベッコMEMのみで培養した細胞を同様の方法で試験した。
 メラニン産生抑制作用の計算式は、以下のとおりである。
  メラニン産生抑制率(%)={1-(B/D)/(A/C)}×100
 ただし、前記式中、Aは被験試料無添加での475nmにおける吸光度、Bは被験試料添加での475nmにおける吸光度、Cは被験試料無添加での540nmにおける吸光度、Dは被験試料添加での540nmにおける吸光度を表す。
 結果は、試料濃度25μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、又は50%阻害試料濃度で表し、表5に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
 表5の結果から、ブルーフラッグの抽出物、バイベリーの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、パッションフルーツの抽出物、及びセロリの抽出物が、メラニン産生抑制作用を有することが確認できた。
(実施例3)
-エンドセリン-1(ET-1)mRNA発現抑制作用試験-
 下記表6の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、エンドセリン-1mRNA発現上昇抑制作用を試験した。
 まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞(normal human epidermis keratinocyte;NHEK)を、80cmフラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地(EpiLife-KG2)において、37℃、5%CO下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
 次に、EpiLife-KG2を用いて35mmシャーレ(FALCON社製)に40×10cells/2mL/シャーレずつ播き、37℃、5%CO下で一晩培養した。24時間後に培養液を捨て、HEPES緩衝液1mLを加え、UVB照射(50mJ/cm)を行い、その後、EpiLife-KG2で必要濃度に溶解した試料溶液(試料濃度は表6参照)を各シャーレに2mLずつ添加し、37℃、5%CO下で24時間培養した。培養後、培養液を捨て、ISOGEN(Wako社製;Cat.No.311-02501)にてtotal RNAを抽出し、それぞれのRNA量を分光光度計にて測定し、200ng/μLになるようにtotal RNAを調整した。
 このtotal RNAを鋳型とし、エンドセリン-1(ET-1)、及び内部標準であるGAPDHのmRNAの発現量を測定した。検出はリアルタイムPCR装置(Smart Cycler(R)、Cepheid社製)を用いて、Takara SYBR ExScript RT-PCR Kit(Perfect Real Time)によるリアルタイム RT-PCR反応により行った。
 ET-1の発現量は、「紫外線未照射、試料溶液無添加」、「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総RNA標品を基にして、GAPDHの値で補正値を求め、更に「紫外線未照射、試料溶液無添加」の補正値を100とした時の「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」の補正値を算出した。
 そして、得られた結果から、下記数式1によりET-1mRNA発現抑制率を算出した。試料濃度10μg/mL又は試料濃度1μg/mLでのET-1mRNA発現抑制率を表6に示す。
<数式1>
 エンドセリン-1(ET-1)mRNA発現抑制率(%)
          ={(A-B)-(A-C)}/(A-B)×100
 ただし、前記数式1中、Aは紫外線未照射、試料溶液無添加時の補正値、Bは紫外線照射、試料溶液無添加時の補正値、Cは紫外線照射、試料溶液添加時の補正値をそれぞれ表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
 表6の結果から、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、及びセロリの抽出物が、エンドセリン-1(ET-1)mRNA発現抑制作用を有することが確認できた。
(実施例4)
-SCFmRNA発現抑制作用試験-
 下記表7の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、SCFmRNA発現抑制作用を試験した。
 まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞(normal human epidermis keratinocyte;NHEK)を、80cmフラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地(EpiLife-KG2)において、37℃、5%CO下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
 次に、EpiLife-KG2を用いて35mmシャーレ(FALCON社製)に40×10cells/2mL/シャーレずつ播き、37℃、5%CO下で一晩培養した。24時間後に培養液を捨て、HEPES緩衝液1mLを加え、UVB照射(50mJ/cm)を行い、その後、EpiLife-KG2で必要濃度に溶解した試料溶液(試料濃度は表7参照)を各シャーレに2mLずつ添加し、37℃、5%CO下で24時間培養した。培養後、培養液を捨て、ISOGEN(Wako社製;Cat.No.311-02501)にてtotal RNAを抽出し、それぞれのRNA量を分光光度計にて測定し、200ng/μLになるようにtotal RNAを調整した。
 このtotal RNAを鋳型とし、SCF、及び内部標準であるGAPDHのmRNAの発現量を測定した。検出はリアルタイムPCR装置(Smart Cycler(R)、Cepheid社製)によるリアルタイムRT-PCR反応により行った。
 SCFの発現量は、「紫外線未照射、試料溶液無添加」、「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総RNA標品を基にして、GAPDHの値で補正値を求め、更に「紫外線未照射、試料溶液無添加」の補正値を100とした時の「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」の補正値を算出した。
 そして、得られた結果から、下記数式2によりSCFmRNA発現抑制率を算出した。試料濃度10μg/mL又は試料濃度1μg/mLでのSCFmRNA発現抑制率を表7に示す。
<数式2>
  SCFmRNA発現抑制率(%)
          ={(A-B)-(A-C)}/(A-B)×100
 ただし、前記数式2中、Aは紫外線未照射、試料溶液無添加時の補正値、Bは紫外線照射、試料溶液無添加時の補正値、Cは紫外線照射、試料溶液添加時の補正値をそれぞれ表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
 表7の結果から、バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、及びセロリの抽出物が、SCFmRNA発現抑制作用を有することが確認できた。
(実施例5)
-bFGFmRNA発現促進作用試験-
 下記表8の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、bFGFmRNA発現促進作用を試験した。
 まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞(NHEK)を、80cmフラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地(EpiLife-KG2)において、37℃、5%CO-95%airの条件下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
 EpiLife-KG2を用いて35mmシャーレ(FALCON社製)に40×10cells/2mL/シャーレずつ播き、37℃、5%CO-95%airの条件下で一晩培養した。24時間後に培養液を捨て、HEPES緩衝液1mLを加えてUVB照射(50mJ/cm)を行い、その後EpiLife-KG2で必要濃度に溶解した試験試料(試料濃度は表8参照)を各シャーレに2mLずつ添加し、37℃、5%CO-95%airの条件下で24時間培養した。培養後、培養液を捨て、ISOGEN(ニッポンジーン社製、Cat.no.311-02501)にてtotal RNAを抽出し、それぞれのRNA量を分光光度計にて測定し、200ng/μLになるようにtotal RNAを調製した。
 このtotal RNAを鋳型とし、bFGF及び内部標準であるGAPDHのmRNAの発現量を測定した。検出はリアルタイムPCR装置Smart Cycler(Cepheid社)を用いて、TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit(Perfect Real Time,codeNo.RR063A,タカラバイオ社製)によるリアルタイム2Step RT-PCR反応により行った。
 bFGFのmRNAの発現量は、紫外線未照射・試料無添加、紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製したtotal RNA標品を基にして、GAPDHの値で補正値を求め、更に紫外線未照射・試料無添加の補正値を100とした時の紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加の補正値を算出した。得られた結果から、下記数式によりbFGFmRNA発現上昇抑制率(%)を算出した。結果を表8に示す。
 bFGFmRNA発現上昇抑制率(%)
            ={(A-B)-(A-C)}/(A-B)×100
 ただし、前記式中、Aは「紫外線未照射・試料無添加時の補正値」を表し、Bは「紫外線照射・試料無添加時の補正値」を表し、Cは「紫外線照射・試料添加時の補正値」を表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
 表8の結果から、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、及びブルーベリーの抽出物が、bFGFmRNA発現促進作用を有することが確認できた。
(実施例6)
-POMCmRNA発現促進作用試験-
 下記表9の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、POMCmRNA発現促進作用を試験した。
 まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞(NHEK)を、80cmフラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地(EpiLife-KG2)において、37℃、5%CO-95%airの条件下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
 EpiLife-KG2を用いて35mmシャーレ(FALCON社製)に40×10cells/2mL/シャーレずつ播き、37℃、5%CO-95%airの条件下で一晩培養した。24時間後に培養液を捨て、HEPES緩衝液1mLを加えてUV-B照射(50mJ/cm)を行い、その後EpiLife-KG2で必要濃度に溶解した試験試料(試料濃度は表9参照)を各シャーレに2mLずつ添加し、37℃、5%CO-95%airの条件下で24時間培養した。培養後、培養液を捨て、ISOGEN(ニッポンジーン社製,Cat.no.311-02501)にてtotal RNAを抽出し、それぞれのRNA量を分光光度計にて測定し、200ng/μLになるようにtotal RNAを調製した。
 このtotal RNAを鋳型とし、POMC及び内部標準であるGAPDHのmRNAの発現量を測定した。検出はリアルタイムPCR装置Smart Cycler(Cepheid社)を用いて、TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit(Perfect Real Time,codeNo.RR063A)によるリアルタイム2Step RT-PCR反応により行った。 POMCのmRNAの発現量は、紫外線未照射・試料無添加、紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製したtotal RNA標品を基にして、GAPDHの値で補正値を求め、更に紫外線未照射・試料無添加の補正値を100とした時の紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加の補正値を算出した。得られた結果から、下記数式によりPOMCmRNA発現上昇抑制率(%)を算出した。結果を表9に示す。 
 POMmRNA発現上昇抑制率(%)
       ={(A-B)-(A-C)}/(A-B)×100
 ただし、前記式中、Aは「紫外線未照射・試料無添加時の補正値」を表し、Bは「紫外線照射・試料無添加時の補正値」を表し、Cは「紫外線照射・試料添加時の補正値」を表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
 表9の結果から、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、及びセロリの抽出物が、POMCmRNA発現促進作用を有することが確認できた。
(実施例7)
-エラスターゼ活性阻害作用試験-
 下記表10の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、エラスターゼ活性阻害作用を試験した。
 まず、96穴マイクロプレートにて、0.2mol/LのTris-HCL緩衝液(pH8.0)で調製した各試料溶液50μL、及び20μg/mLのエラスターゼ・タイプIII溶液50μLを混合した。その後、上記緩衝液にて調製した0.4514mg/mLのN-SUCCINYL-ALA-ALA-ALA-p-NITROANILIDEを100μL添加して、25℃にて15分間反応させた。反応終了後、波長415nmにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
 そして、これらの結果から、下記数式3によりエラスターゼ活性阻害率を算出した。
<数式3>
  エラスターゼ活性阻害率(%)=[1-(C-D)/(A-B)]×100
 ただし、前記数式3中、Aは、試料溶液無添加、酵素添加での波長415nmにおける吸光度を表す。Bは、試料溶液無添加、酵素無添加での波長415nmにおける吸光度を表す。Cは、試料溶液添加、酵素添加での波長415nmにおける吸光度を表す。Dは、試料溶液添加、酵素無添加での波長415nmにおける吸光度を表す。
 次に、各試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記エラスターゼ活性阻害率を測定し、阻害率が50%になる濃度IC50(μg/mL)を近似曲線により求めた(このIC50値が小さいほどエラスターゼ活性阻害作用が強い)。結果を表10に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
 表10の結果から、バイベリーの抽出物、及びフウトウカズラの抽出物が、エラスターゼ活性阻害作用を有することが確認できた。
(実施例8)
-マトリックスメタロプロテアーゼ-1(MMP-1)活性阻害作用試験-
 下記表11の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、マトリックスメタロプロテアーゼ-1(MMP-1)活性阻害作用を試験した。この試験方法は、Wunsch and Heidrich法を一部改変したものである。
 まず、蓋付試験管にて、20mmol/mLの塩化カルシウム含有0.1mol/LのTris-HCl緩衝液(pH7.1)に溶解した各試料溶液50μL、MMP-1溶液50μL、及びPz-peptide溶液400μLを混合し、37℃にて30分間反応させた後、25mmol/Lのクエン酸溶液1mLを加え反応を停止した。その後、酢酸エチル5mLを加え、激しく振とうした。これを遠心(1,600×g、10分)し、酢酸エチル層の波長320nmにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
 なお、MMP-1としては、COLLAGENASE Type IV from Clostridium histolyticum(シグマ社製)を使用した。
 Pz-peptideとしては、Pz-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg-OH(BACHEM Fenichemikalien AG社製)を使用した。
 そして、得られた結果から、下記数式4によりMMP-1活性阻害率を算出した。
<数式4>
  MMP-1活性阻害率(%)={1-(C-D)/(A-B)}×100
 ただし、前記数式4中、Aは試料溶液無添加、酵素添加での波長320nmにおける吸光度、Bは試料溶液無添加、酵素無添加での波長320nmにおける吸光度、Cは試料溶液添加、酵素添加での波長320nmにおける吸光度、Dは試料溶液添加、酵素無添加での波長320nmにおける吸光度を表す。
 次に、各試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記MMP-1活性阻害率を測定し、阻害率が50%になる濃度IC50(μg/mL)を近似曲線により求めた(このIC50値が小さいほどMMP-1活性阻害作用が強い)。結果を表11に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
 表11の結果から、バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、キンミズヒキの抽出物、及びブルーベリーの抽出物が、MMP-1活性阻害作用を有することが確認できた。
(実施例9)
-I型コラーゲン産生促進作用試験-
 下記表12の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、I型コラーゲン産生促進作用を試験した。
 まず、正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞(NB1RGB)を、10質量%のFBS含有ダルベッコMEM培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を1.6×10cells/mLの細胞密度になるようにダルベッコMEM培地を用いて希釈した後、96穴マイクロプレートに1穴あたり100μLずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、0.25質量%のFBS含有ダルベッコMEM培地に溶解した各試料溶液(試料濃度:100μg/mL)を各穴に150μLずつ添加し、3日間培養した。その後、各穴の培地中のI型コラーゲン量をELISA法により測定した。
 I型コラーゲン産生促進率は、試料無添加時のI型コラーゲン量を100%として算出した。I型コラーゲン産生促進率の計算式は、以下のとおりである。
  I型コラーゲン産生促進率(%)=A/B×100
 ただし、前記式中、Aは被験試料添加時のI型コラーゲン量、Bは被験試料無添加時のI型コラーゲン量を表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
 表12の結果から、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、パッションフルールの抽出物、及び紅柳の抽出物が、I型コラーゲン産生促進作用を有することが確認できた。
(実施例10)
-IV型コラーゲン産生促進作用試験-
 フウトウカズラの50質量%エタノール抽出物を試料として用い、以下のようにしてIV型コラーゲン産生促進作用を試験した。
 まず、正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞(NB1RGB)を、10質量%のFBS含有ダルベッコMEM培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を1.6×10cells/mLの細胞密度になるようにダルベッコMEM培地を用いて希釈した後、96穴マイクロプレートに1穴あたり100μLずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、0.25質量%のFBS含有ダルベッコMEM培地に溶解した各試料溶液(試料濃度:100μg/mL)を各穴に150μLずつ添加し、3日間培養した。培養終了後、各穴の培地中のIV型コラーゲン量をELISA法により測定した。
 そして、得られた測定結果から、下記数式5によりIV型コラーゲン産生促進率(%)を算出した。試料濃度100μg/mLでのIV型コラーゲン産生促進率の結果を表13に示す。
<数式5>
  IV型コラーゲン産生促進率(%)=(A/B)×100
 ただし、前記数式5中、Aは試料溶液添加時のIV型コラーゲン量を表し、Bは試料溶液無添加時のIV型コラーゲン量を表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
 表13の結果から、フウトウカズラの抽出物が、IV型コラーゲン産生促進作用を有することが確認できた。
(実施例11)
-過酸化水素に対するダメージ抑制作用試験-
 下記表14の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、過酸化水素に対するダメージ抑制作用を試験した。
 まず、正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞(NB1RGB)をα-MEM培地(GIBCO BLR社製品,pH7.2)を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を2.5×10cells/mLの濃度になるようにα-MEM培地を用いて希釈した後、48穴プレートに播種し1穴当たり200μLずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、1質量%FBS含有α-MEMで溶解した被験試料を各穴に200μL添加し、24時間培養した。培養終了後、培地を抜き、400μLのPBS(-)で洗浄した。洗浄後、ハンクス緩衝液に溶解した過酸化水素(1mmol/L)、あるいは、ハンクス緩衝液のみを各穴に200μL添加し、2時間培養した。培養後、400μLのPBS(-)で洗浄し、終濃度0.05mg/mLで1質量%FBS含有α-MEMに溶解したニュートラルレッドを各穴に200μL添加した。2.5時間培養した後、ニュートラルレッド溶液を捨て、エタノール・酢酸溶液(エタノール:酢酸:水=50:1:49)を各穴に200μL添加し、色素を抽出した。抽出後、波長540nmにおける吸光度を測定した。得られた測定結果から、下記数式6により、過酸化水素に対するダメージ抑制率を求めた。結果を表14に示す。
<数式6>
  過酸化水素に対するダメージ抑制率(%)
           ={1-(C-A)/(C-B)}×100
 ただし、前記数式6中、Aは過酸化水素処理・被験試料処理の吸光度、Bは過酸化水素処理・被験試料無処理の吸光度、Cは過酸化水素無処理・被験試料無処理の吸光度、を表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
 表14の結果から、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びブルーベリーの抽出物が、高い過酸化水素に対するダメージ抑制作用を有することが認められた。
(実施例12)
-ラミニン-5産生促進作用試験-
 下記表15の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ラミニン-5産生促進作用を試験した。
 まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞(NHEK)を、80cmのフラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地(EpiLife-KG2)にて37℃、5%CO下で培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を1.0×10個/mLの細胞密度となるようにEpiLife-KG2で希釈した後、24穴プレートに1穴あたり200μLずつ播種し、5%CO下、37℃で一晩培養した。
 培養終了後、培地を抜き、EpiLife-KG2で溶解した試料溶液を各穴に500μLずつ添加し、37℃、5%CO下で48時間培養した。培養終了後、上清100μLをエライザプレートに移し換え一晩4℃でプレートに吸着させたのち、溶液を捨て、0.05質量%トゥイーン-20を含むリン酸生理緩衝液(PBS-T)にて、洗浄を行った。その後、1質量%ウシ血清アルブミンを含むリン酸生理緩衝液で、ブロッキング操作を行った。溶液を捨て、0.05質量%トゥイーン-20を含むリン酸生理緩衝液(PBS-T)にて、洗浄を行い、抗ヒトラミニン-5抗体(マウスIgG、ケミコン社製)を反応させた。溶液を捨て、0.05質量%トゥイーン-20を含むリン酸生理緩衝液(PBS-T)にて、洗浄を行い、ビオチン標識抗体マウスIgG(アマシャムバイオサイエンス社製)を反応させた。溶液を捨て、0.05質量%トゥイーン-20を含むリン酸生理緩衝液(PBS-T)にて、洗浄を行い、アビジン-ビオチン化ペルオキシダーゼ複合体と反応させたのち、同様の洗浄操作を行い、発色反応を行った。
 ラミニン-5産生促進率は、試料無添加時における吸光度を100%として算出した。各試料のラミニン-5産生促進率(%)を表15に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
 表15の結果から、ブルーフラッグの抽出物、パッションフルーツの抽出物、及びセロリの抽出物が、角化細胞のラミニン-5産生を促進する作用を有することが確認できた。
(実施例13)
-トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用試験-
 下記表16の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用を試験した。
 まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞(NHEK)を、ヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地(EpiLife-KG2)を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を1×10cells/mLの濃度になるようにEpiLife-KG2で希釈した後、96wellプレートに1well当たり100μLずつ播種し、2日間培養した。培養終了後、EpiLife-KG2で溶解した被験試料を各wellに100μL添加し、24時間培養した。培養終了後、培地を抜き、細胞をプレートに固定させ、細胞表面に発現したトランスグルタミナーゼ-1の量を、モノクローナル抗ヒトトランスグルタミナーゼ-1抗体を用いたELISA法により測定した。結果を表16に示す。
 トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用の計算式は、以下のとおりである。
  トランスグルタミナーゼ-1産生促進率(%)=A/B×100
 ただし、前記式中、Aは被験試料添加時の波長405nmにおける吸光度、Bは被験試料無添加時(コントロール)の波長405nmにおける吸光度を表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000016
 表16の結果から、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、セロリの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、及びブルーベリーの抽出物が、トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用を有することが確認できた。
(実施例14)
-UVBダメージからの回復作用試験-
 下記表17の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、UVBダメージからの回復作用を試験した。
 まず、正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞(NB1RGB)を10質量%FBS含有α-MEMを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞をα-MEMを用いて2.0×10cells/mLの濃度に希釈した後、48wellプレートに1wellあたり200μLずつ播種した。24時間培養後、培地を100μLのPBS(-)へ交換し、1.0J/cmのUVBを照射した。照射後、直ちに、PBS(-)を抜き、10質量%FBS含有D-MEMに溶解した被験試料を各wellに400μL添加し、24時間培養した。紫外線UVBダメージからの回復効果は、MTTアッセイを用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度0.4mg/mLで溶解したMTTを各wellに200μLずつ添加した。2時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを2-プロパノール200μLで抽出した。抽出後、波長570nmにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長650nmにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様に細胞播種した後、UVBを照射しない細胞、及び細胞播種後UVBを照射し被験試料を添加しない細胞についても同様に測定し、それぞれ非照射群と照射群とした。
 UVBダメージからの回復作用の計算式は、以下のとおりである。結果を表17に示す。
  UVBダメージからの回復率(%)
     ={(Nt-C)-(Nt-Sa)}/(Nt-C)×100
 ただし、前記式中、NtはUVBを照射しない細胞での吸光度、CはUVBを照射し被験試料を添加しない細胞での吸光度、SaはUVBを照射し被験試料を添加した細胞での吸光度を表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000017
 表17の結果から、フウトウカズラの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、及びセロリの抽出物が、UVBダメージからの回復作用を有することが確認できた。
(実施例15)
-表皮角化細胞増殖促進作用試験-
 西洋サクラソウの50質量%エタノール抽出物を試料として用い、以下のようにして、表皮角化細胞増殖促進作用を試験した。
 まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞(NHEK)を、ヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地(EpiLife-KG2)を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を2.0×10cells/mLの濃度にEpiLife-KG2で希釈した後、コラーゲンコートした96穴マイクロプレートに1穴当たり100μLずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、EpiLife-KG2で溶解した試料溶液を各穴に100μL添加し、3日間培養した。
 次に、表皮角化細胞増殖促進作用は、MTTアッセイ法を用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度0.4mg/mLでPBS(-)に溶解したMTT〔3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium Bromide〕を各穴に100μLずつ添加した。2時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを2-プロパノール100μLで抽出した。抽出後、波長570nmにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長650nmにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
 そして、得られた測定結果から、下記数式7により表皮角化細胞増殖促進率を算出した。試料濃度3.13μg/mLでの表皮角化細胞増殖促進率を表18に示す。
<数式7>
  表皮角化細胞増殖促進率(%)=(St/Ct)×100
 ただし、前記数式7中、Stは試料溶液を添加した細胞での吸光度、Ctは試料溶液を添加しない細胞での吸光度を表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000018
 表18の結果から、西洋サクラソウの抽出物が、表皮角化細胞増殖促進作用を有することが確認できた。
(実施例16)
-皮膚線維芽細胞増殖促進作用試験-
 フウトウカズラの50質量%エタノール抽出物を試料として用い、以下のようにして、皮膚線維芽細胞増殖促進作用を試験した。
 まず、正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞(NB1RGB)を、10質量%のFBS含有α-MEMを用いて培養した後、トリプシン処理により回収した。回収した細胞を5質量%のFBS含有α-MEMで7.0×10cells/mLの濃度に希釈した後、96穴マイクロプレートに1穴当たり100μL播種し、一晩培養した。
 培養終了後、5質量%FBS含有α-MEMに溶解した試料溶液(濃度:400μg/mL)を各穴に100μL添加し、3日間培養した。
 次いで、皮膚線維芽細胞増殖促進作用は、MTTアッセイ法を用いて測定した。具体的には、各穴から100μLずつ培地を抜き、終濃度5mg/mLでPBS(-)に溶解したMTT〔3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium Bromide〕を各穴に20μLずつ添加した。4.5時間培養した後、10質量%のSDSを溶解した0.01mol/Lの塩酸溶液を各穴に100μL添加し、一晩培養した後、波長570nmにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長650nmにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
 そして、得られた測定結果から、下記数式8により試料濃度200μg/mLの皮膚線維芽細胞増殖促進率を算出した。結果を表19に示す。
<数式8>
 皮膚線維芽細胞増殖促進率(%)=(St-Sb)/(Ct-Cb)×100
 ただし、前記数式8中、Stは試料溶液を添加した細胞での吸光度、Sbは試料溶液を添加した空試験の吸光度、Ctは試料溶液を添加しない細胞での吸光度、Cbは試料溶液を添加しない空試験の吸光度、をそれぞれ表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000019
 表19の結果から、フウトウカズラの抽出物が、皮膚線維芽細胞増殖促進作用を有することが確認できた。
(実施例17)
-インボルクリン産生促進作用試験-
 西洋サクラソウの50質量%エタノール抽出物を試料として用い、以下のようにして、インボルクリン産生促進作用を試験した。
 まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞(NHEK)を80cmのフラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地(EpiLife-KG2)にて37℃、5%CO下で培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を1.0×10個/mLの細胞密度となるようにEpiLife-KG2で希釈した後、48穴プレートに1穴あたり200μLずつ播種し、5%CO下、37℃で一晩培養した。
 培養終了後、培地を抜き、EpiLife-KG2で溶解した試料溶液を各穴に200μLずつ添加し、37℃、5%CO下で48時間培養した。培養終了後、培地を抜き、細胞をプレートに固定させ細胞表面に発現したインボルクリンの量をモノクローナル抗ヒトインボルクリン抗体を用いたELISA法により測定した。得られた測定結果から、下記数式9によりインボルクリン産生促進率(%)を算出した。結果を表20に示す。
<数式9>
  インボルクリン産生促進率(%)=A/B×100
 ただし、前記数式9中、Aは試料添加時の波長405nmにおける吸光度、Bは試料無添加時の波長405nmにおける吸光度を表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000020
 表20の結果から、西洋サクラソウの抽出物が、高いインボルクリン産生促進作用を有することが認められた。
(実施例18)
-アデノシン三リン酸(ATP)産生促進作用試験-
 下記表21の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ATP産生促進作用を試験した。
 まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞(NHEK)を、ヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地(EpiLife-KG2)を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を2.0×10cells/mLの濃度にEpiLife-KG2で希釈した後、コラーゲンコートした96wellプレートに1well当たり100μLずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、EpiLife-KG2で溶解した被験試料を各wellに100μL添加し、2時間培養した。ATP産生促進作用は、ホタルルシフェラーゼ発光法を用いて細胞内のATP量を測定した。即ち、培養終了後、『「細胞の」ATP測定試薬』(東洋ビーネット社製)を各wellに100μLずつ添加した。反応後、化学発光量を測定した。結果を表21に示す。
 ATP産生促進率の計算式は、以下のとおりである。
  ATP産生促進率(%)=A/B×100
 ただし、前記式中、Aは被験試料を添加した細胞での化学発光量、Bは被験試料を添加しない細胞での化学発光量を表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000021
 表21の結果から、バイベリーの抽出物、及びレモンバーベナの抽出物が、ATP産生促進作用を有することが確認できた。
(実施例19)
-プロフィラグリン・フィラグリン産生促進作用試験-
 下記表22の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、フィラグリン産生促進作用を試験した。
 まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞(NHEK)を、ヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地(EpiLife-KG2)を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を同培地にて1.5×10個/mLの細胞密度になるように調整し、2mLずつ6穴コラーゲンコートプレートに播種して37℃、5%CO-95%airの条件下で3日間培養した。培養後、培地を0.5質量%DMSOに溶解した試料(試料濃度は表22を参照)を含むEpiLife-KG2 2mLに交換し、37℃、5%CO-95%airの条件下で5日間培養した。培養終了後、常法により総タンパクの調整を行った。 
<ウエスタンブロッティング>
 10μg/列に調整したサンプルをSDS-PAGEにより展開し、PVDF膜に転写した。5%スキムミルクを含むPBS(-)でブロッキングを行った後、抗ヒトフィラグリンモノクローナル抗体(Harbor Bio-Products社製)、ビオチン標識抗マウスIg(Whole Ab,Amersham Biosciences社製)及びストレプトアビジンーペルオキシダーゼ複合体(CALBIOCHEM社製)を、0.1%Tween20、0.3%スキムミルクを含むPBS(-)で1000倍に希釈して順次反応させ、ECL Western blotting detection reagents and analysis system(Amersham Biosciences社製)の発光によりプロフィラグリン及びフィラグリンを検出した。検出したバンドをKODAK 1D Image Analysis Software EDAS290 Version3.5にて定量的に測定した。
 結果は、試料添加及び無添加で培養した細胞のそれぞれから調製したタンパク10μg中のプロフィラグリン及びフィラグリンのNet intensity(バンド強度)を合算した値を用いて、試料のプロフィラグリン産生促進作用を評価し、プロフィラグリン産生促進率(%)を下記数式に基づいて算出した。結果を表22に示す。
  プロフィラグリン・フィラグリン産生促進率(%)=A/B×100
 ただし、前記式中、Aは「試料添加時のNet intensity(プロフィラグリン及びフィラグリンの合計値)」を、Bは「試料無添加時(コントロール)のNet intensity」を表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000022
 表22の結果から、ブルーフラッグの抽出物、及びパッションフルーツの抽出物が、フィラグリン産生促進作用を有することが確認できた。
(実施例20)
-ヒアルロン酸合成酵素3(HAS3)mRNA発現促進作用試験-
 下記表23の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ヒアルロン酸合成酵素3(HAS3)mRNA発現促進作用を試験した。
 まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞(normal human epidermal keratinocyte;NHEK)を80cmフラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地(EpiLife-KG2)において、37℃、5%CO-95%airの条件下にて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。 回収した細胞を35mmのシャーレ(FALCON社製)に40×10cells/2mLずつ播種し、37℃、5%CO-95%airの条件下で、EpiLife-KG2を用いて一晩培養した。24時間後に培養液を捨て、EpiLife-KG2で溶解した試料溶液(試料濃度は表23参照)を各シャーレに2mLずつ添加し、37℃、5%CO-95%airの条件下にて24時間培養した。培養後、培養液を捨て、ISOGEN(ニッポンジーン社製,Cat.No.311-02501)にてtotal RNAを抽出し、それぞれのRNA量を分光光度計にて測定し、200μg/mLになるようにtotal RNAを調製した。
 このtotal RNAを鋳型とし、HAS3(Hyaluronan Synthase 3)及び内部標準であるGAPDHのmRNAの発現量を測定した。検出はリアルタイムPCR装置Smart cycler(Cepheid社製)を用いて、TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit(Perfect Real Time,codeNo.RR063A)によるリアルタイム2Step RT-PCR反応により行った。HAS3の発現量は、「試料無添加」で及び「試料添加」でそれぞれ培養した細胞から調製したtotal RNA標品を基にして、GAPDHの値で補正値を求め、更に「試料無添加」の補正値を100としたときの「試料添加」の補正値を算出した。得られた結果から、下記数式によりHAS3mRNA発現促進率(%)を算出した。結果を表23に示す。
  HAS3mRNA発現促進率(%)=A/B×100
 ただし、前記式中、Aは「試料添加時の補正値」を表し、Bは「試料無添加時の補正値」を表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000023
 表23の結果から、フウトウカズラの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、セロリの抽出物、及びレモンバーベナの抽出物が、ヒアルロン酸合成酵素3(HAS3)mRNA発現促進作用を有することが確認できた。
(実施例21)
-アクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用試験-
 下記表24の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、アクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用を試験した。
 まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞(normal human epidermis keratinocyte;NHEK)を80cmフラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地(EpiLife-KG2)において、37℃、5%CO下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。 EpiLife-KG2を用いて35mmのシャーレ(FALCON社製)に40×10cells/2mL/シャーレずつ播き、37℃、5%CO下で一晩培養した。24時間後に培養液を捨て、EpiLife-KG2で必要濃度に溶解した被験試料を各シャーレに2mLずつ添加し、37℃、5%CO下で24時間培養した。培養後、培養液を捨て、ISOGEN(NIPPON GENE;Cat.no.311-02501)にてtotal RNAを抽出し、それぞれのRNA量を分光光度計にて測定し、200ng/μLになるようにtotal RNAを調製した。
 このtotalRNAを鋳型とし、AQP3及び内部標準であるGAPDHのmRNAの発現量を測定した。検出はリアルタイムPCR装置Smart Cycler(登録商標)(Cepheid社)を用いて、TaKaRa SYBR(登録商標)PrimeScriptTM RT-PCR Kit(Perfect Real Time)(code No.RR063A)によるリアルタイム2Step RT-PCR反応により行った。AQP3の発現量は、被験試料無添加、被験試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製したtotal RNA標品を基にして、GAPDHの値で補正値を求め、更に被験試料無添加の補正値を100とした時の被験試料添加の補正値を算出した。結果を表24に示す。
 AQP3mRNA発現促進作用の計算式は、以下の通りである。
  AQP3mRNA発現促進率(%)=A/B×100
 ただし、前記式中、Aは被験試料添加時の補正値、Bは被験試料無添加時の補正値を表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000024
 表24の結果から、ブルーフラッグの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、及びセロリの抽出物が、アクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用を有することが確認できた。
(配合実施例1)
-乳液-
 下記組成の乳液を、常法により製造した。
 ・ホホバオイル・・・4.0g
 ・プラセンタエキス・・・0.1g
 ・オリーブオイル・・・2.0g
 ・スクワラン・・・2.0g
 ・セタノール・・・2.0g
 ・モノステアリン酸グリセリル・・・2.0g
 ・ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O)・・・2.5g
 ・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O)・・・2.0g
 ・1,3-ブチレングリコール・・・3.0g
 ・ヒノキチオール・・・0.15g
 ・香料・・・0.05g
 ・バイベリーの50質量%エタノール抽出物(製造例2)・・・0.01g
 ・精製水・・・残部(全量を100gとする)
(配合実施例2)
-乳液-
 下記組成の乳液を、常法により製造した。
 ・ホホバオイル・・・4.0g
 ・プラセンタエキス・・・0.1g
 ・オリーブオイル・・・2.0g
 ・スクワラン・・・2.0g
 ・セタノール・・・2.0g
 ・モノステアリン酸グリセリル・・・2.0g
 ・ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O)・・・2.5g
 ・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O)・・・2.0g
 ・1,3-ブチレングリコール・・・3.0g
 ・ヒノキチオール・・・0.15g
 ・香料・・・0.05g
 ・ブルーフラッグの50質量%エタノール抽出物(製造例2)・・・0.01g
 ・精製水・・・残部(全量を100gとする)
(配合実施例3)
-乳液-
 下記組成の乳液を、常法により製造した。
 ・ホホバオイル・・・4.0g
 ・プラセンタエキス・・・0.1g
 ・オリーブオイル・・・2.0g
 ・スクワラン・・・2.0g
 ・セタノール・・・2.0g
 ・モノステアリン酸グリセリル・・・2.0g
 ・ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O)・・・2.5g
 ・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O)・・・2.0g
 ・1,3-ブチレングリコール・・・3.0g
 ・ヒノキチオール・・・0.15g
 ・香料・・・0.05g
 ・フウトウカズラの50質量%エタノール抽出物(製造例2)・・・0.01g
 ・精製水・・・残部(全量を100gとする)
(配合実施例4)
-乳液-
 下記組成の乳液を、常法により製造した。
 ・ホホバオイル・・・4.0g
 ・プラセンタエキス・・・0.1g
 ・オリーブオイル・・・2.0g
 ・スクワラン・・・2.0g
 ・セタノール・・・2.0g
 ・モノステアリン酸グリセリル・・・2.0g
 ・ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O)・・・2.5g
 ・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O)・・・2.0g
 ・1,3-ブチレングリコール・・・3.0g
 ・ヒノキチオール・・・0.15g
 ・香料・・・0.05g
 ・西洋サクラソウの50質量%エタノール抽出物(製造例2)・・・0.01g
 ・精製水・・・残部(全量を100gとする)
(配合実施例5)
-乳液-
 下記組成の乳液を、常法により製造した。
 ・ホホバオイル・・・4.0g
 ・プラセンタエキス・・・0.1g
 ・オリーブオイル・・・2.0g
 ・スクワラン・・・2.0g
 ・セタノール・・・2.0g
 ・モノステアリン酸グリセリル・・・2.0g
 ・ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O)・・・2.5g
 ・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O)・・・2.0g
 ・1,3-ブチレングリコール・・・3.0g
 ・ヒノキチオール・・・0.15g
 ・香料・・・0.05g
 ・レモンバーベナの50質量%エタノール抽出物(製造例2)・・・0.01g
 ・精製水・・・残部(全量を100gとする)
(配合実施例6)
-乳液-
 下記組成の乳液を、常法により製造した。
 ・ホホバオイル・・・4.0g
 ・プラセンタエキス・・・0.1g
 ・オリーブオイル・・・2.0g
 ・スクワラン・・・2.0g
 ・セタノール・・・2.0g
 ・モノステアリン酸グリセリル・・・2.0g
 ・ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O)・・・2.5g
 ・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O)・・・2.0g
 ・1,3-ブチレングリコール・・・3.0g
 ・ヒノキチオール・・・0.15g
 ・香料・・・0.05g
 ・キンミズヒキの50質量%エタノール抽出物(製造例2)・・・0.01g
 ・精製水・・・残部(全量を100gとする)
(配合実施例7)
-乳液-
 下記組成の乳液を、常法により製造した。
 ・ホホバオイル・・・4.0g
 ・プラセンタエキス・・・0.1g
 ・オリーブオイル・・・2.0g
 ・スクワラン・・・2.0g
 ・セタノール・・・2.0g
 ・モノステアリン酸グリセリル・・・2.0g
 ・ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O)・・・2.5g
 ・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O)・・・2.0g
 ・1,3-ブチレングリコール・・・3.0g
 ・ヒノキチオール・・・0.15g
 ・香料・・・0.05g
 ・ブルーベリーの50質量%エタノール抽出物(製造例2)・・・0.01g
 ・精製水・・・残部(全量を100gとする)
(配合実施例8)
-乳液-
 下記組成の乳液を、常法により製造した。
 ・ホホバオイル・・・4.0g
 ・プラセンタエキス・・・0.1g
 ・オリーブオイル・・・2.0g
 ・スクワラン・・・2.0g
 ・セタノール・・・2.0g
 ・モノステアリン酸グリセリル・・・2.0g
 ・ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O)・・・2.5g
 ・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O)・・・2.0g
 ・1,3-ブチレングリコール・・・3.0g
 ・ヒノキチオール・・・0.15g
 ・香料・・・0.05g
 ・セロリの50質量%エタノール抽出物(製造例2)・・・0.01g
 ・精製水・・・残部(全量を100gとする)
(配合実施例9)
-乳液-
 下記組成の乳液を、常法により製造した。
 ・ホホバオイル・・・4.0g
 ・プラセンタエキス・・・0.1g
 ・オリーブオイル・・・2.0g
 ・スクワラン・・・2.0g
 ・セタノール・・・2.0g
 ・モノステアリン酸グリセリル・・・2.0g
 ・ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O)・・・2.5g
 ・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O)・・・2.0g
 ・1,3-ブチレングリコール・・・3.0g
 ・ヒノキチオール・・・0.15g
 ・香料・・・0.05g
 ・紅柳の50質量%エタノール抽出物(製造例2)・・・0.01g
 ・精製水・・・残部(全量を100gとする)
(配合実施例10)
-乳液-
 下記組成の乳液を、常法により製造した。
 ・ホホバオイル・・・4.0g
 ・プラセンタエキス・・・0.1g
 ・オリーブオイル・・・2.0g
 ・スクワラン・・・2.0g
 ・セタノール・・・2.0g
 ・モノステアリン酸グリセリル・・・2.0g
 ・ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O)・・・2.5g
 ・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O)・・・2.0g
 ・1,3-ブチレングリコール・・・3.0g
 ・ヒノキチオール・・・0.15g
 ・香料・・・0.05g
 ・パッションフルーツの50質量%エタノール抽出物(製造例2)・・・0.01g
 ・精製水・・・残部(全量を100gとする)
(配合実施例11)
-クリーム-
 下記組成のクリームを、常法により製造した。
 ・流動パラフィン・・・5.0g
 ・サラシミツロウ・・・4.0g
 ・セタノール・・・3.0g
 ・スクワラン・・・10.0g
 ・ラノリン・・・2.0g
 ・ステアリン酸・・・1.0g
 ・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O)・・・1.5g
 ・モノステアリン酸グリセリル・・・3.0g
 ・1,3-ブチレングリコール・・・6.0g
 ・パラオキシ安息香酸メチル・・・1.5g
 ・香料・・・0.1g
 ・ブルーフラッグの80質量%エタノール抽出物(製造例3)・・・0.1g
 ・精製水・・・残部(全量を100gとする)
(配合実施例12)
-パック-
 下記組成のパックを、常法により製造した。
 ・ポリビニルアルコール・・・15g
 ・ポリエチレングリコール・・・3g
 ・プロピレングリコール・・・7g
 ・エタノール・・・10g
 ・パラオキシ安息香酸エチル・・・0.05g
 ・香料・・・0.05g
 ・フウトウカズラの水抽出物(製造例1)・・・0.05g
 ・精製水・・・残部(全量を100gとする)
 本発明の美白剤又は抗老化剤は、優れたチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、SCFmRNA発現抑制作用、エンドセリン-1mRNA発現抑制作用、bFGFmRNA発現抑制作用、POMCmRNA発現抑制作用、エラスターゼ活性阻害作用、MMP-1活性阻害作用、ATP産生促進作用、ラミニン-5産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素3(HAS3)mRNA発現促進作用、アクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用、I型コラーゲン産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、UVBダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、及び過酸化水素に対するダメージ抑制作用の少なくともいずれかを有しており、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント等の皮膚化粧料に幅広く用いられる。

Claims (5)

  1.  バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも1種を含有することを特徴とする美白剤。
  2.  チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、SCFmRNA発現抑制作用、エンドセリン-1mRNA発現抑制作用、bFGFmRNA発現抑制作用、及びPOMCmRNA発現抑制作用の少なくともいずれかを有する請求項1に記載の美白剤。
  3.  バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも1種を含有することを特徴とする抗老化剤。
  4.  エラスターゼ活性阻害作用、MMP-1活性阻害作用、I型コラーゲン産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン-5産生促進作用、トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用、UVBダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ATP産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素3(HAS3)mRNA発現促進作用、及びアクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用の少なくともいずれかを有する請求項3に記載の抗老化剤。
  5.  請求項1から2のいずれかに記載の美白剤、及び請求項3から4のいずれかに記載の抗老化剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする皮膚化粧料。
PCT/JP2009/065848 2008-09-12 2009-09-10 美白剤及び抗老化剤、並びに皮膚化粧料 WO2010029973A1 (ja)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2009801364182A CN102149366A (zh) 2008-09-12 2009-09-10 美白剂、抗老化剂以及皮肤化妆品
EP09813119.6A EP2335685A4 (en) 2008-09-12 2009-09-10 SKIN WHITENING AGENT, ANTI-AGING AND COSMETIC AGENT FOR THE SKIN
US13/044,691 US20110212041A1 (en) 2008-09-12 2011-03-10 Skin-Whitening Agent, Anti-Aging Agent and Skin-Care Cosmetic Agent

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2008235415A JP5970148B2 (ja) 2008-09-12 2008-09-12 チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤、及びSCFmRNA発現抑制剤
JP2008-235415 2008-09-12

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US13/044,691 Continuation US20110212041A1 (en) 2008-09-12 2011-03-10 Skin-Whitening Agent, Anti-Aging Agent and Skin-Care Cosmetic Agent

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2010029973A1 true WO2010029973A1 (ja) 2010-03-18

Family

ID=42005223

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2009/065848 WO2010029973A1 (ja) 2008-09-12 2009-09-10 美白剤及び抗老化剤、並びに皮膚化粧料

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20110212041A1 (ja)
EP (1) EP2335685A4 (ja)
JP (1) JP5970148B2 (ja)
KR (1) KR20110054022A (ja)
CN (1) CN102149366A (ja)
WO (1) WO2010029973A1 (ja)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101218699B1 (ko) * 2010-09-30 2013-01-04 주식회사 케이엠포유 산화 억제능 또는 피부 미백능이 증진된 선학초 추출물의 제조방법
JP2014040398A (ja) * 2012-08-23 2014-03-06 Mikimoto Pharmaceut Co Ltd フィラグリン産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、ロリクリン産生促進剤、コルネオデスモシン産生促進剤他
WO2016076310A1 (ja) * 2014-11-10 2016-05-19 昭和電工株式会社 保湿剤
CN114259444A (zh) * 2022-01-18 2022-04-01 湖南环境生物职业技术学院 一种具有美白作用的黑老虎果提取物及其制备方法与在制备具有美白作用的沐浴露中的应用

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101917201B1 (ko) * 2011-10-07 2018-11-09 (주)아모레퍼시픽 고보습 세정제 조성물
JP2013151457A (ja) * 2012-01-25 2013-08-08 Morinaga & Co Ltd マトリックスメタロプロテアーゼ−1阻害剤
KR101395213B1 (ko) * 2012-02-02 2014-05-16 (주)모아캠 레몬버베나 유래 루테오닌­7­디글루쿠로니드 함유 추출물 및 이를 포함하는 기능성 화장료 조성물
CN104780927B (zh) * 2012-08-29 2019-06-11 花王株式会社 转谷氨酰胺酶活化剂
KR101289432B1 (ko) * 2012-08-30 2013-07-24 (주)모아캠 레몬버베나 유래 폴리사카라이드 함유 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물
BR112015007102A2 (pt) * 2012-10-01 2017-07-04 Natura Cosmeticos Sa composição de lipídios vegetais para a modulação de funções de matérias queratínicas, método para modulação das referidas funções e uso dos referidos lipídios vegetais
CN103100023B (zh) * 2012-11-13 2014-04-02 陈键 治疗皮肤病的外用药酒及其制备方法
JP6320833B2 (ja) * 2014-04-21 2018-05-09 日本メナード化粧品株式会社 美白成分のスクリーニング方法
JP6609401B2 (ja) * 2014-06-16 2019-11-20 株式会社ファンケル カリクレイン7産生促進剤
TWI748944B (zh) * 2015-03-06 2021-12-11 日商三得利控股股份有限公司 基質金屬蛋白酶產生抑制劑
WO2016164477A1 (en) * 2015-04-06 2016-10-13 Meso Scale Technologies, Llc. High throughput system for performing assays using electrochemiluminescence including a consumable shaking apparatus
KR101677466B1 (ko) * 2015-10-06 2016-11-18 한국콜마주식회사 용과 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름개선용 화장료 조성물
JP6909569B2 (ja) * 2016-09-16 2021-07-28 オリザ油化株式会社 肌質改善剤
WO2019098352A1 (ja) * 2017-11-17 2019-05-23 ロート製薬株式会社 美容組成物、スクリーニング方法及び美容方法
FR3077202B1 (fr) * 2018-02-01 2020-01-10 Sederma Utilisation de cyclopeptides en cosmetique
JP7116589B2 (ja) * 2018-05-16 2022-08-10 株式会社ファンケル Discoidin Domain Receptor2(DDR2)産生促進用組成物
CN108635264A (zh) * 2018-06-17 2018-10-12 佛山文森特知识产权服务有限公司 舒敏护肤组合物及其应用
KR102101951B1 (ko) 2018-08-20 2020-04-28 주식회사 코씨드바이오팜 카우스립 추출물을 포함하는 두피 개선용 화장료 조성물
FR3087657B1 (fr) * 2018-10-29 2022-01-21 Greenpharma Sas Compositions cosmetiques ou nutraceutiques, contenant un extrait de primeveres
EP3903885A4 (en) * 2018-12-27 2022-10-12 Suntory Holdings Limited MEANS FOR INHIBITING THE DEGRADATION OF DENATURED ELASTIN, MEANS FOR PRESERVING NORMAL ELASTIN FIBERS, MEANS FOR INHIBITING THE FORMATION OF AN ELASTIN-ELAFIN COMPOSITE AND SCREENING METHODS FOR SUBSTANCE HAVING AN ELASTIN-ELAFIN COMPOSITE FORMATION INHIBITING ACTIVITY
JP7269067B2 (ja) * 2019-03-29 2023-05-08 森永製菓株式会社 遺伝子発現増強剤
KR102350617B1 (ko) * 2019-06-20 2022-01-13 조자용 패션 후르츠 추출물을 포함하는 화장료 또는 식품첨가 조성물 및 이의 제조방법
KR102107748B1 (ko) * 2019-08-30 2020-05-08 주식회사 아제라바이오텍 불로화, 오미자, 시호의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 가려움증 완화 및 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물
KR102359378B1 (ko) 2020-05-28 2022-02-07 대경대학교 산학협력단 곤충추출물과 열대과일추출물을 함유하는 피부 창상 치유 외용제 조성물
CN116251049B (zh) * 2023-05-06 2023-07-25 北京一品堂医药科技有限公司 一种具有美白功效的白晶番茄籽油冻干粉及其制备方法

Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0597648A (ja) * 1991-07-12 1993-04-20 Tsuneo Nanba 化粧料
JPH0977636A (ja) * 1995-09-14 1997-03-25 Mikimoto Pharmaceut Co Ltd 美白化粧品
JPH11269081A (ja) * 1998-03-18 1999-10-05 Pola Chem Ind Inc P関連遺伝子発現抑制剤及びこれを含有する化粧料
JP2001316221A (ja) * 2000-05-10 2001-11-13 Naris Cosmetics Co Ltd 抗老化剤および化粧料
JP2003192605A (ja) * 2001-12-27 2003-07-09 Fancl Corp リパーゼ阻害剤
WO2003084302A2 (fr) * 2002-06-25 2003-10-16 Shiseido Co Ltd Agent anti-vieillissement
JP2005060334A (ja) * 2003-08-19 2005-03-10 Okinawa Pref Gov リパーゼ阻害活性且つ抗酸化性を有する抗肥満剤
JP2005132823A (ja) * 2003-08-22 2005-05-26 L'oreal Sa 自然な日光暴露なる条件下で誘発される膠原繊維の分解を防止する及び/又はこれに抗するための組成物
JP2005306850A (ja) * 2004-03-24 2005-11-04 Kose Corp 抗皮膚障害剤、及びこれを含有する皮膚外用剤
JP2005343884A (ja) * 2004-06-04 2005-12-15 Coletica 不活性型潜在型TGFbの活性型TGFbへの変換を誘導できる有効成分
JP2005350391A (ja) * 2004-06-10 2005-12-22 Noevir Co Ltd アルツハイマー病予防・治療剤
JP2005350483A (ja) * 1998-04-24 2005-12-22 Sunstar Inc 歯周病の予防又は治療用の食品組成物、口腔用組成物及び医薬組成物
JP2006008566A (ja) * 2004-06-24 2006-01-12 Ichimaru Pharcos Co Ltd 果汁の乳酸菌醗酵物を有効成分とする美容剤とその応用
JP2006075084A (ja) * 2004-09-09 2006-03-23 Toyo Shinyaku:Kk セロリから得られる発酵物
JP2007261996A (ja) * 2006-03-28 2007-10-11 Naris Cosmetics Co Ltd アクロレイン付加体形成阻害剤、及びそれを含有する皮膚外用剤及び飲食品
JP2009040753A (ja) * 2007-08-10 2009-02-26 Advangen Inc 皮膚補修組成物及びそれのスクリーニング方法
JP2009102298A (ja) * 2007-10-04 2009-05-14 Morinaga & Co Ltd メラニン生成抑制剤及び化粧料並びにメラニン生成抑制のための経口用組成物

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4321262A (en) * 1976-12-29 1982-03-23 Burnett Harvey L Medicament for arthritic conditions
JPS5753407A (en) * 1980-09-17 1982-03-30 Kao Corp External preparation for skin containing extract of japanese toothache tree berry
FR2782919B1 (fr) * 1998-09-04 2001-05-25 Roc Sa Composition contre le vieillissement et son utilisation
EP1361853A1 (de) * 2001-02-16 2003-11-19 Pentapharm AG Kosmetisch wirksame zusammensetzung enthaltend extrakte aus malva sylvestris und mentha piperita
JP2003342123A (ja) * 2002-05-31 2003-12-03 Ichimaru Pharcos Co Ltd コラゲナーゼ活性阻害剤、エラスターゼ活性阻害剤及び化粧料組成物
KR100513082B1 (ko) * 2002-11-27 2005-09-07 나드리화장품주식회사 세라마이드 및 식물복합추출액을 포함하는 세라리포좀함유 화장료 조성물
JP2004182711A (ja) * 2002-12-04 2004-07-02 Koei Kogyo Kk 皮膚外用剤
US20060078633A1 (en) * 2002-12-27 2006-04-13 Na Min K Extract of cercis chinensis having anti-oxidant activity and anti-aging activity, and cosmetical composition containing the extract for anti-oxidation, skin-aging protection and wrinkle improvement
US20040166069A1 (en) * 2003-02-21 2004-08-26 Gupta Shyam K. Boosting Tyrosinase Inhibiting Activity of Skin Whitening and Sunscreen Compositions
JP2008520588A (ja) * 2004-11-18 2008-06-19 ビオファーマコペ デジン アンテルナショナル インク. 植物抽出物およびその皮膚科使用法
JP4647991B2 (ja) * 2004-12-22 2011-03-09 花王株式会社 Scf発現阻害剤
EP1841404A4 (en) * 2005-01-11 2009-12-23 Se Young Chung COMPOSITION FOR IMPROVING SKIN CONDITIONING WITH A VACCINIUM ULIGINOSUM EXTRACT AND METHOD OF MANUFACTURING THEREOF
DE102005012832A1 (de) * 2005-03-17 2006-09-28 Schrezenmeier, Jürgen, Prof. Dr. Arzneimittel aus Pflanzenextrakten als Lipaseinhibitor
IE20050411A1 (en) * 2005-06-17 2007-01-10 Oriflame Global Technical Ct L Cosmetic compositions containing lingonberry (vaccinium vitis idea) extracts

Patent Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0597648A (ja) * 1991-07-12 1993-04-20 Tsuneo Nanba 化粧料
JPH0977636A (ja) * 1995-09-14 1997-03-25 Mikimoto Pharmaceut Co Ltd 美白化粧品
JPH11269081A (ja) * 1998-03-18 1999-10-05 Pola Chem Ind Inc P関連遺伝子発現抑制剤及びこれを含有する化粧料
JP2005350483A (ja) * 1998-04-24 2005-12-22 Sunstar Inc 歯周病の予防又は治療用の食品組成物、口腔用組成物及び医薬組成物
JP2001316221A (ja) * 2000-05-10 2001-11-13 Naris Cosmetics Co Ltd 抗老化剤および化粧料
JP2003192605A (ja) * 2001-12-27 2003-07-09 Fancl Corp リパーゼ阻害剤
WO2003084302A2 (fr) * 2002-06-25 2003-10-16 Shiseido Co Ltd Agent anti-vieillissement
JP2005060334A (ja) * 2003-08-19 2005-03-10 Okinawa Pref Gov リパーゼ阻害活性且つ抗酸化性を有する抗肥満剤
JP2005132823A (ja) * 2003-08-22 2005-05-26 L'oreal Sa 自然な日光暴露なる条件下で誘発される膠原繊維の分解を防止する及び/又はこれに抗するための組成物
JP2005306850A (ja) * 2004-03-24 2005-11-04 Kose Corp 抗皮膚障害剤、及びこれを含有する皮膚外用剤
JP2005343884A (ja) * 2004-06-04 2005-12-15 Coletica 不活性型潜在型TGFbの活性型TGFbへの変換を誘導できる有効成分
JP2005350391A (ja) * 2004-06-10 2005-12-22 Noevir Co Ltd アルツハイマー病予防・治療剤
JP2006008566A (ja) * 2004-06-24 2006-01-12 Ichimaru Pharcos Co Ltd 果汁の乳酸菌醗酵物を有効成分とする美容剤とその応用
JP2006075084A (ja) * 2004-09-09 2006-03-23 Toyo Shinyaku:Kk セロリから得られる発酵物
JP2007261996A (ja) * 2006-03-28 2007-10-11 Naris Cosmetics Co Ltd アクロレイン付加体形成阻害剤、及びそれを含有する皮膚外用剤及び飲食品
JP2009040753A (ja) * 2007-08-10 2009-02-26 Advangen Inc 皮膚補修組成物及びそれのスクリーニング方法
JP2009102298A (ja) * 2007-10-04 2009-05-14 Morinaga & Co Ltd メラニン生成抑制剤及び化粧料並びにメラニン生成抑制のための経口用組成物

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JUNJI TANAKA ET AL.: "Cistanche Tubulosa Extract no Aratana Kenko Kino 6 Biyo Oyobi Ikumo Sayo", FOOD STYLE 21, vol. 12, no. 6, 1 June 2008 (2008-06-01), pages 29 - 32, XP008138578 *
See also references of EP2335685A4 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101218699B1 (ko) * 2010-09-30 2013-01-04 주식회사 케이엠포유 산화 억제능 또는 피부 미백능이 증진된 선학초 추출물의 제조방법
JP2014040398A (ja) * 2012-08-23 2014-03-06 Mikimoto Pharmaceut Co Ltd フィラグリン産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、ロリクリン産生促進剤、コルネオデスモシン産生促進剤他
WO2016076310A1 (ja) * 2014-11-10 2016-05-19 昭和電工株式会社 保湿剤
CN114259444A (zh) * 2022-01-18 2022-04-01 湖南环境生物职业技术学院 一种具有美白作用的黑老虎果提取物及其制备方法与在制备具有美白作用的沐浴露中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
JP2010065009A (ja) 2010-03-25
JP5970148B2 (ja) 2016-08-17
KR20110054022A (ko) 2011-05-24
EP2335685A4 (en) 2013-12-04
US20110212041A1 (en) 2011-09-01
CN102149366A (zh) 2011-08-10
EP2335685A1 (en) 2011-06-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5970148B2 (ja) チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤、及びSCFmRNA発現抑制剤
KR101729209B1 (ko) 미선나무 추출물의 항산화 효과를 활용한 스킨케어 제품 조성물
JP5860579B2 (ja) フィラグリン産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、及びトランスグルタミナーゼ−1産生促進剤
KR101825803B1 (ko) 마가목추출물의 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부노화방지 및 피부주름개선용 화장료 조성물
EP3407867A1 (fr) Compositions cosmetiques, dermatologiques comprenant un extrait de vitex negundo enrichi en polyphenols
JP5889546B2 (ja) ヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤、幹細胞増殖因子mRNA発現上昇抑制剤、過酸化水素細胞障害の予防・改善剤及びグルタチオン産生促進剤
JP2023171950A (ja) 抗老化剤、抗酸化剤、抗炎症剤、及び美白剤、並びに、化粧料
JP4934324B2 (ja) エストロゲン様作用剤、ヒアルロン酸産生促進剤、表皮角化細胞増殖剤、及びスリミング剤
KR102261149B1 (ko) 천마추출물을 포함하는 조성물
JP5566733B2 (ja) エンドセリン−1mRNA発現、幹細胞増殖因子(SCF)mRNA発現抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)mRNA発現抑制剤、グルタチオン産生促進剤、及びフィラグリン産生促進剤
KR20150136857A (ko) 알레르기성이 감소된 수용성 로열젤리를 포함하는 피부 미백 및 노화방지용 화장료 조성물
FR2928549A1 (fr) Utilisation d'un extrait de l'orchidee brassocattleya marcella koss en tant qu'actif pour prevenir ou retarder l'apparition des signes du vieillissement cutane
KR102646545B1 (ko) 비비추 추출물을 포함하는 피부 미백 또는 피부장벽 개선용 화장료 조성물
JP2012162487A (ja) 美白剤、抗老化剤及び皮膚化粧料
KR102337346B1 (ko) 리기다 소나무 수피 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항노화용 조성물
JP5566597B2 (ja) I型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)mRNA発現抑制剤、及び肌の透明感向上剤
KR102168533B1 (ko) 한약재 추출물을 포함하는 미백 또는 안색 개선용 화장료 조성물
KR101176525B1 (ko) 벌나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물
KR102613802B1 (ko) 락토바실러스 루테리 배양물 및 벌사상자 추출물을 포함하는 피부 미백용 조성물
KR102525091B1 (ko) 천연 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 모공 수축용 화장료 조성물
KR101278071B1 (ko) 거제수 나무 추출물을 함유하는 화장료 조성물
KR20170061802A (ko) 생달나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물
KR20240107264A (ko) 식물 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 및 탄력 개선, 항염, 미백, 보습, 피부 장벽 강화, 피부 재생, 모공수축 및 항산화용 조성물
JP5357520B2 (ja) エンドセリン−1mRNA発現抑制剤、幹細胞増殖因子(SCF)mRNA発現抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)mRNA発現抑制剤、及びプロオピオメラノコルチン(POMC)mRNA発現抑制剤
KR101497501B1 (ko) 들메나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200980136418.2

Country of ref document: CN

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 09813119

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20117006566

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

REEP Request for entry into the european phase

Ref document number: 2009813119

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2009813119

Country of ref document: EP