CN116251049B - 一种具有美白功效的白晶番茄籽油冻干粉及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种具有美白功效的白晶番茄籽油冻干粉及其制备方法。所述白晶番茄籽油冻干粉具有显著的美白功效，与柠檬马鞭草提取物冻干粉合同且用量为3:1时，其美白作用具有协同效果，是一种可用于制备美白药品、化妆品的理想原料。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种具有美白功效的白晶番茄籽油冻干粉及其制备方法。
背景技术
爱美之心人皆有之，随着社会的快速发展，人们越来越青睐白皮肤，对于药品或化妆品美白功效的要求也逐渐提高。目前，越来越多的科学研究者倾向于从天然植物中寻找安全高效的美白活性物质。
白番茄（学名：Solanum lycopersicum），是茄科、番茄属的一种一年生或多年生草本植物，种子偏黄色，花果期秋冬季。为无限生长型番茄，单果重量150g~200g，成熟后成为黄金色，外观艳丽，品质好，果实硬度高，耐储存。它味甘酸、性微寒。白番茄含有多种维生素，同时还独含有其它番茄品类所不具备的多氢番茄红素（番茄红素、六氢番茄红素、八氢番茄红素）。其对皮肤具有滋养作用，还能平衡自由基的产生，促进胶原蛋白的生成，是一种对皮肤具有保护、滋润、维护等作用的天然原料。
柠檬马鞭草，英（外）文名：Lemon Verbena，拉丁学名：Aloysia citrodora，原产南美的一种植物，中国引种。常用于食品调味，在法国泡茶饮用，叶药用。具有治疗心悸，焦虑，失眠，哮喘，感冒等功效。
然而现有技术中尚未见报道白晶番茄籽油冻干粉和柠檬马鞭草提取物冻干粉可用于美白的报道。因此，有必要开发一种新的具有美白功效的白晶番茄籽油冻干粉及其组合物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有突出的美白效果的白晶番茄籽油冻干粉及其制备方法。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种具有美白功效的白晶番茄籽油冻干粉，所述白晶番茄籽油冻干粉中八氢番茄红素含量为25-40%，六氢番茄红素含量为8-12%。
作为优选，所述八氢番茄红素含量为29-35%，六氢番茄红素含量为10-11%。
更优选地，所述八氢番茄红素含量为33.6%，六氢番茄红素含量为10.2%。
作为优选，还包括柠檬马鞭草提取物冻干粉，所述柠檬马鞭草提取物冻干粉与白晶番茄籽油冻干粉用量比为1:1-1:5份。
更优选地，所述柠檬马鞭草提取物冻干粉与白晶番茄籽油冻干粉用量比为1:3。
第二方面，本发明还提供一种白晶番茄籽油冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
S1.取白番茄，清洗干净，自然晾干后，压碎后挑选出白番茄籽；
S2.将上述得到的白番茄籽粉碎至20-80目，利用超临界二氧化碳萃取技术对上述粉碎后的白番茄籽进行萃取，分离得到白番茄籽油，其中，萃取温度为40-60℃，萃取时间1-5h，萃取压力20-50 MPa；
S3.用羟丙基环糊精对上述白番茄籽油进行包合得到白番茄籽油包合物，利用真空冷冻干燥技术将其制备为冻干粉，即得白晶番茄籽油冻干粉。
作为优选，萃取温度为45℃，萃取时间2.5h，萃取压力40MPa。
本发明还提供一种柠檬马鞭草提取物冻干粉的制备方法，包括以下步骤：柠檬马鞭草提取物冻干粉的制备方法为：取柠檬马鞭草，粉碎烘干后，加入3倍量的80%乙醇溶液，加热提取0.5-2h，过滤后浓缩，经冷冻冻干，即得柠檬马鞭草提取物冻干粉。
第三方面，本发明提供一种具有美白功效的药品或化妆品，其活性成分本发明所述的白晶番茄籽油冻干粉加入药学上常用的载体制成。
第四方面，本发明提供一种白晶番茄籽油冻干粉在制备具有美白功效的药品或化妆品中的应用。
本发明的有益效果是：
（1）本发明提取得到的白晶番茄籽油冻干粉单独使用时，对小鼠B16黑色素瘤细胞无毒性作用，且对小鼠B16黑色素瘤细胞内黑色素合成和细胞内酪氨酸酶活性以及体外蘑菇酪氨酸酶活性均具有明显抑制作用，说明本发明提取得到的白晶番茄籽油冻干粉具有显著的美白作用。
（2）在本发明提取得到的白晶番茄籽油冻干粉中加入柠檬马鞭草提取物冻干粉，与之组合在一起使用，柠檬马鞭草提取物冻干粉能明显提高白晶番茄籽油冻干粉对小鼠B16黑色素瘤细胞内黑色素合成和细胞内酪氨酸酶活性以及体外蘑菇酪氨酸酶活性均具有明显抑制作用，且白晶番茄籽油冻干粉与柠檬马鞭草提取物冻干粉用量比为3:1时，两者合用后具有协同增效的美白作用。
附图说明
图1为组合物对小鼠B16黑色素瘤细胞内黑色素合成抑制的Fa-CI图；
图2为组合物对小鼠B16黑色素瘤细胞内酪氨酸酶活性抑制的Fa-CI图；
图3为组合物对体外蘑菇酪氨酸酶活性抑制的Fa-CI图。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。
实施例1：制备白晶番茄籽油冻干粉
S1.取白番茄，清洗干净，自然晾干后，压碎后挑选出白番茄籽；
S2.将上述得到的白番茄籽粉碎至20目，利用超临界二氧化碳萃取技术对上述粉碎后的白番茄籽进行萃取，分离得到白番茄籽油，其中，萃取温度为50℃，萃取时间4h，萃取压力25MPa；
S3.用羟丙基环糊精对上述白番茄籽油进行包合得到白番茄籽油包合物，利用真空冷冻干燥技术将其制备为冻干粉，即得白晶番茄籽油冻干粉。
经测定，制备得到的白晶番茄籽油冻干粉中，八氢番茄红素含量为27.3%，六氢番茄红素含量为8.1%。
实施例2：制备白晶番茄籽油冻干粉
S1.取白番茄，清洗干净，自然晾干后，压碎后挑选出白番茄籽；
S2.将上述得到的白番茄籽粉碎至40目，利用超临界二氧化碳萃取技术对上述粉碎后的白番茄籽进行萃取，分离得到白番茄籽油，其中，萃取温度为60℃，萃取时间5h，萃取压力20MPa；
S3.用羟丙基环糊精对上述白番茄籽油进行包合得到白番茄籽油包合物，利用真空冷冻干燥技术将其制备为冻干粉，即得白晶番茄籽油冻干粉。
经测定，制备得到的白晶番茄籽油冻干粉中，八氢番茄红素含量为30.2%，六氢番茄红素含量为8.7%。
实施例3：制备白晶番茄籽油冻干粉
S1.取白番茄，清洗干净，自然晾干后，压碎后挑选出白番茄籽；
S2.将上述得到的白番茄籽粉碎至60目，利用超临界二氧化碳萃取技术对上述粉碎后的白番茄籽进行萃取，分离得到白番茄籽油，其中，萃取温度为45℃，萃取时间2.5h，萃取压力40MPa；
S3.用羟丙基环糊精对上述白番茄籽油进行包合得到白番茄籽油包合物，利用真空冷冻干燥技术将其制备为冻干粉，即得白晶番茄籽油冻干粉。
经测定，制备得到的白晶番茄籽油冻干粉中，八氢番茄红素含量为33.6%，六氢番茄红素含量为10.2%。
实施例4：制备加入柠檬马鞭草提取物冻干粉的白晶番茄籽油冻干粉
原料为：实施例3中制备的白晶番茄籽油冻干粉3份、柠檬马鞭草提取物冻干粉1份。其中，柠檬马鞭草提取物冻干粉的制备方法为：取柠檬马鞭草，粉碎烘干后，加入3倍量的80%乙醇溶液，加热提取0.5-2h，过滤后浓缩至100ml，经冷冻冻干，即得。
为了更好地说明本发明的技术效果，进行以下实验。
实验例1：MTT法检测B16细胞的抑制
样品制备：取实施例3中制备得到白晶番茄籽油冻干粉5、10、20、40、80 mg，分别用1640完全培养基1000ml溶解，制备成梯度浓度为5、10、20、40、80 mg/L的样品溶液（以下简称M1组）；取实施例4中制备得到的柠檬马鞭草提取物冻干粉1、2、4、8、16 mg，分别用1640完全培养基1000ml溶解，制备成梯度浓度为1、2、4、8、16 mg/L的样品溶液（以下简称N1组）；另再取实施例3和4中制备得到白晶番茄籽油冻干粉和柠檬马鞭草提取物冻干粉，以质量比为3:1进行配比，即分别取白晶番茄籽油冻干粉+柠檬马鞭草提取物冻干粉1.5+0.5、3+1、6+2、12+4、24+8 mg，分别用1640完全培养基1000ml溶解，制备成梯度浓度为1.5+0.5、3+1、6+2、12+4、24+8 mg/L的加入柠檬马鞭草提取物冻干粉的白晶番茄籽油冻干粉样品溶液（以下简称M1+N1组）。所有样品均用0. 22 μm的无菌滤头过滤后备用。
选择对数生长期的小鼠B16黑色素瘤细胞，用质量分数为0. 25%的胰蛋白酶溶液消化后，以1640完全培养基配成密度为1×10^5个/mL的细胞悬液，接种于96孔培养板，每孔100 μL，于37 ℃，5% CO2培养箱内培养。贴壁24 h后，分为3组，分别加入上述含不同质量浓度样品的PBS样品溶液，对照组加等体积的细胞悬液，并设空白组加等体积的1640完全培养基，每孔100 μL。每一质量浓度设3个复孔，于37 ℃，5% CO2培养箱内培养72 h 后，MTT 法于酶标仪570 nm处测定吸光度。按下列公式计算细胞相对增殖率：细胞相对增殖率=(A-C)/(B-C)×100% 。式中A为样品组的平均吸光度，B为对照组的平均吸光度，C为空白组的平均吸光度。结果见表1。
表1 对B16细胞活力的影响
注：数据表示为平均数±标准差。下同。
可见，当白晶番茄籽油冻干粉溶液和柠檬马鞭草提取物冻干粉质量浓度最高在80mg/L和16 mg/L以及联合使用时，其对B16细胞的抑制率均在5%以下，细胞形态正常，说明白晶番茄籽油冻干粉和柠檬马鞭草提取物冻干粉对细胞并无毒性作用。
实验例2：B16细胞内黑色素含量的测定
样品制备同实验例1。将培养的第3代B16细胞以密度1 × 10^4个/mL 接孔于6孔板，24 h后换液。添加含有不同质量上述浓度样品的培养基，每一质量浓度设3个复孔。对照组以1640完全培养基代替样品溶液。37 ℃，5% CO2条件下孵育 72 h 后，弃去上清液。每孔加入质量浓度2. 5g/L的胰蛋白酶消化液1 mL于室温下消化5 min。加入4 mL 1640完全培养基中止消化，并吹打成单细胞悬液。取0. 5 mL 作细胞计数，其余细胞悬液离心10 min，弃上清液，加入 1 mL 1 mol/L的NaOH溶液，并在90 ℃水浴中孵育2 h 后，在酶标仪490 nm处测其吸光度。按下列公式计算样品对黑色素合成的抑制率：抑制率=(1-(样品孔吸光度/样品孔细胞密度)÷ (对照孔吸光度/对照孔细胞密度) × 100% )，结果见表2。利用CompuSyn软件计算白晶番茄籽油冻干粉和柠檬马鞭草提取物冻干粉合用后的协同指数（Combination index，即CI值），结果见图1。
表2 对B16细胞内黑色素合成的影响
可以看出，用白晶番茄籽油冻干粉溶液处理B16细胞后，对B16细胞内黑色素合成的抑制率最高达到( 66.9±2.4) %，其表现出显著的黑色素合成抑制能力，且呈质量浓度依赖性；添加柠檬马鞭草提取物冻干粉后，可以提高白晶番茄籽油冻干粉溶液对黑色素合成的抑制能力，结合图1在白晶番茄籽油冻干粉和柠檬马鞭草提取物冻干粉合用后的抑制率达到20%及以上后，CI值＜1，说明白晶番茄籽油冻干粉和柠檬马鞭草提取物冻干粉合用，且用量比为3:1时，对B16细胞内黑色素合成的抑制具有协同增效作用。
实验例3：B16细胞内酪氨酸酶活性的测定
样品制备同上实验例1。96 孔板培养，加入B16单细胞悬液(7~8)×10^3个/孔，待贴壁24 h后，添加含有不同质量上述浓度样品的培养基，每一质量浓度设3个复孔。对照组以1640完全培养基代替样品溶液。37 ℃，5% CO2条件下孵育72 h后，弃去上清液。用 pH =7. 4 的 PBS 洗涤 2 次，每孔加质量分数为 1% 的辛基酚聚氧乙烯醚( TritonX-100) 溶液 50μL，迅速置于-80 ℃冻存30 min，随后室温融化使细胞完全破裂，37℃预温5 min 后加入质量分数为 1% 的L-DOPA 溶液 10μL，37℃反应2 h，在酶标仪490 nm处测其吸光度。按下列公式计算酪氨酸酶活性抑制率：抑制率 = (1-样品组平均吸光度/对照组平均吸光度)×100%，结果见表3。同上，利用CompuSyn软件计算协同指数，结果见图2。
表3 对B16细胞内酪氨酸酶活性的影响
可以看出，用白晶番茄籽油冻干粉溶液处理B16细胞后，对B16细胞内酪氨酸酶活性的抑制率最高达到(59.9 ± 2.2) %，其表现出显著的对细胞内酪氨酸酶活性的抑制作用，且呈质量浓度依赖性；添加柠檬马鞭草提取物冻干粉后，可以提高白晶番茄籽油冻干粉溶液对细胞内酪氨酸酶活性的抑制作用，结合图2在白晶番茄籽油冻干粉和柠檬马鞭草提取物冻干粉合用后的CI值均＜1，说明白晶番茄籽油冻干粉和柠檬马鞭草提取物冻干粉合用，且用量比为3:1时，对B16细胞内酪氨酸酶活性的抑制具有协同增效作用。
实验例4：体外蘑菇酪氨酸酶活性的测定
样品制备：取实施例3中制备得到白晶番茄籽油冻干粉5、10、20、40、80 mg，分别用PBS溶液1000ml溶解，制备成梯度浓度为5、10、20、40、80 mg/L的样品溶液（以下简称M组）；取实施例4中制备得到的柠檬马鞭草提取物冻干粉1、2、4、8、16 mg，分别用PBS溶液1000ml溶解，制备成梯度浓度为1、2、4、8、16 mg/L的样品溶液（以下简称N组）；另再取实施例3和4中制备得到白晶番茄籽油冻干粉和柠檬马鞭草提取物冻干粉，以质量比为3:1进行配比，即分别取白晶番茄籽油冻干粉+柠檬马鞭草提取物冻干粉1.5+0.5、3+1、6+2、12+4、24+8 mg，分别用PBS溶液1000ml溶解，制备成梯度浓度为1.5+0.5、3+1、6+2、12+4、24+8 mg/L的加入柠檬马鞭草提取物冻干粉的白晶番茄籽油冻干粉样品溶液（以下简称M+N组）。所有样品均用0. 22 μm的无菌滤头过滤后备用。
根据文献（马晶波. 红景天甙对黑素细胞生物学作用的研究及美白中草药筛选过程中一些问题的探讨[D]. 复旦大学, 2003.）中的体外酪氨酸酶抑制实验方法，并进行改进：取2 mL上述含不同质量浓度样品的PBS样品溶液，对照组以 PBS溶液代替，分别与酪氨酸酶( 100 U) 的混合液，37℃孵育10 min，加入0. 003 mol/L多巴反应液1 mL，继续在37℃孵育2 min，立即在475 nm处测吸光度。酪氨酸酶活性抑制率按下列公式计算：抑制率 =(( A-B)-( C- D))/(A -B) × 100%。式中A为未加样品加酪氨酸酶的混合液在475 nm 处测得的吸光度; B为未加样品和酪氨酸酶的混合液在475 nm处测得的吸光度; C为加样品和酪氨酸酶的混合液在475 nm处测得的吸光度; D为加样品而未加酪氨酸酶的混合液在475 nm处测得的吸光度，结果见表4。同上，利用CompuSyn软件计算协同指数，结果见图3。
表4 对细胞外酪氨酸酶活性的影响
可以看出，用白晶番茄籽油冻干粉溶液处理后，对体外酪氨酸酶活性的抑制率最高达到(71.4 ± 1.1) %，其表现出显著的对体外酪氨酸酶活性的抑制作用，且呈质量浓度依赖性；添加柠檬马鞭草提取物冻干粉后，可以提高白晶番茄籽油冻干粉溶液对体外酪氨酸酶活性的抑制作用，结合图3在白晶番茄籽油冻干粉和柠檬马鞭草提取物冻干粉合用后得抑制率达到50%及以上后，CI值＜1，说明白晶番茄籽油冻干粉和柠檬马鞭草提取物冻干粉合用，且用量比为3:1时，对体外酪氨酸酶活性的抑制具有协同增效作用。
综上，根据本发明的实验结果，可以得到，白晶番茄籽油冻干粉在单独使用时，对细胞无毒性作用，具有抑制小鼠B16细胞内的黑色素生成、以及酪氨酸酶活性以及抑制体外酪氨酸酶活性的作用，说明白晶番茄籽油冻干粉具有显著的美白效果，并且与柠檬马鞭草提取物冻干粉合用时，可以提高美白效果，两者具有协同增效作用。因此，本发明所述的白晶番茄籽油冻干粉可作为一种新的用于美白的药品或化妆品。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种具有美白功效的白晶番茄籽油冻干粉及其制备方法，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
Claims (4)
1.一种具有美白功效的白晶番茄籽油冻干粉，其特征在于，由以下原料组成：白晶番茄籽油冻干粉、柠檬马鞭草提取物冻干粉；所述柠檬马鞭草提取物冻干粉与白晶番茄籽油冻干粉用量比为1:3份，所述白晶番茄籽油冻干粉中八氢番茄红素含量为33.6%，六氢番茄红素含量为10.2%；
其中，白晶番茄籽油冻干粉的制备方法包括以下步骤：
S1.取白番茄，清洗干净，自然晾干后，压碎后挑选出白番茄籽；
S2.将上述得到的白番茄籽粉碎至20-80目，利用超临界二氧化碳萃取技术对上述粉碎后的白番茄籽进行萃取，分离得到白番茄籽油，其中，萃取温度为40-60℃，萃取时间1-5h，萃取压力20-50 MPa；
S3.用羟丙基环糊精对上述白番茄籽油进行包合得到白番茄籽油包合物，利用真空冷冻干燥技术将其制备为冻干粉，即得白晶番茄籽油冻干粉；
其中，所述柠檬马鞭草提取物冻干粉的制备方法为：取柠檬马鞭草，粉碎烘干后，加入3倍量的80%乙醇溶液，加热提取0.5-2h，过滤后浓缩，经冷冻冻干，即得柠檬马鞭草提取物冻干粉。
2.一种具有美白功效的药品，其特征在于，由权利要求1中所述的白晶番茄籽油冻干粉，加入药学上常用的载体制成。
3.一种具有美白功效的护肤品，其特征在于，由权利要求1中所述的白晶番茄籽油冻干粉，加入溶剂、柔润剂、渗透剂、稳定剂、保湿剂中的一种或多种制成。
4.一种如权利要求1中所述的白晶番茄籽油冻干粉在制备具有美白功效的药品或化妆品中的应用。
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