JP2004182711A - 皮膚外用剤 - Google Patents
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Abstract
【課題】優れたコラゲナーゼ活性阻害作用、エラスターゼ活性阻害作用を有し、皮膚の老化を防止・予防・改善することができ、日焼け後の色素沈着・しみ・そばかす・肝斑等の予防及び改善に有効なチロシナーゼ活性阻害作用を有して皮膚の美白に優れた効果を有する皮膚外用剤を提供する。
【解決手段】ミリカ・ナギ（Ｍｙｒｉｃａ ｎａｇｉ Ｈｏｏｋ．ｆ．ｎｏｎＴｈｕｎｂ．）、ムユウジュ（Ｓａｒａｃａ ａｓｏｃａ Ｄｅ Ｗｉｌｄｅ）、ヘミデスムス・インディカス（Ｈｅｍｉｄｅｓｍｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ（Ｌ．）Ｒ．Ｂｒ．）、オノスマ・ブラクテアツム（Ｏｎｏｓｍａ ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ Ｗａｌｌ．）よりなる群の１種又は２種以上の溶媒抽出物物を配合する。
【選択図】 なし
【解決手段】ミリカ・ナギ（Ｍｙｒｉｃａ ｎａｇｉ Ｈｏｏｋ．ｆ．ｎｏｎＴｈｕｎｂ．）、ムユウジュ（Ｓａｒａｃａ ａｓｏｃａ Ｄｅ Ｗｉｌｄｅ）、ヘミデスムス・インディカス（Ｈｅｍｉｄｅｓｍｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ（Ｌ．）Ｒ．Ｂｒ．）、オノスマ・ブラクテアツム（Ｏｎｏｓｍａ ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ Ｗａｌｌ．）よりなる群の１種又は２種以上の溶媒抽出物物を配合する。
【選択図】 なし
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、皮膚老化防止用外用剤、美白用外用剤または肌荒れ防止用として用い得る、特定の植物抽出物を有効成分とする皮膚外用剤に関する発明である。
【０００２】
【従来の技術】
老化皮膚では、線維芽細胞の活性低下に伴い、真皮マトリックス成分であるコラーゲン線維、エラスチン線維、酸性ムコ多糖の質的、量的な変化が起こる。コラーゲン線維は異常な老化架橋が形成されるため硬直化し、本来の弾力性に富む張りが失われる。エラスチン線維は変性崩壊し、変わってアミノ酸組成の異なるエラスチンが代償性に生産されて機能障害が進行する。その結果皮膚は柔軟性を失って、シワやたるみが発生する。これら生理的老化皮膚では、増殖能の低下、生理的機能低下が観察されるのに対して、光老化皮膚では、線維芽細胞が増大増殖し、コラーゲン産生能も亢進しているという。この著しい対照を最もよく表す特徴の一つは皮膚の厚さで、光老化した顔面皮膚は強く肥厚するが、前腕内側の生理的老化皮膚は、徐々に薄くなるのが常である。ヒト皮膚の老化を考えるときこれら相反した現象に対応した防御法を用いなければならない。これら老化の一因であるエラスチンの変性、破壊は、エラスチン分解酵素であるエラスターゼの過剰発現によって起こり、従ってエラスターゼの活性を抑制することは、皮膚に弾力性やハリを与え、皮膚の老化防止に重要である。現在まで、これら皮膚老化を予防する目的でいくつかのエラスターゼ阻害剤が開発されてきた（特開平９−８７１３６、特開平９−８７１３７、特開平９−９５４２０、特開平９５４３６、特開平１０−１７４６０、特開平１０−２９９２５、特開平１０−２９９２６、特開平１０−３６２８１、特開平１０−４５５５５、特開平１０−１８２４１４、特開平１１−９２３５４、特開平１１−１４７８３２、特開平１１−１４７８３４、特開平１１−１７１７５８、特開平１１−１９９５０４、特開平１１−２４６３３７、特開平１１−２４６３３８、特開平１１−２４６３８５、特開平１１−２４６３８６、特開平１１−２４６３８７、特開平１１−２４６３８８、特開平１１−２６３７２０、特開平１１−３１５００８、特開平１１−３３５２２９、特開平１１−３３５２３０、特開２０００−５３５７８、特開２０００−７２６４９、特開２０００−１１９１８９、特開２０００−２１２０５８、特開２０００−２４７８３０、特開２０００−２５６１７６、特開２０００−３１９１８９、特開２００１−３９８２２、特開２００１−５８９２０）。
【０００３】
同様に、コラーゲンの変性、減少は、コラーゲン分解酵素であるコラゲナーゼの過剰発現によって起こり、従ってコラゲナーゼの活性を抑制することは、皮膚に弾力性やハリを与え、皮膚の老化防止に重要である。現在まで、これら皮膚老化を予防する目的でいくつかのコラゲナーゼ阻害剤が開発されてきた（特開平９−４０５５２、特開平１０−１９４９８２、特開平１１−７１２９４、特開１１−７９９７０、特開平１１−１４７８３３、特開平１１−３１５００８、特開平２０００−１５４１３１、特開平２０００−１５９６３１、特開平２０００−１９１５１２、特開平２０００−２１２０５８、特開平２０００−２５６１７６、特開平１１−７９９７１、特開平２０００−１９１４８７、特開平２０００−２５６１２２、特開平２０００−３１９１５５、特開平２００１−１３９４６６、特開平２００１−１９２３１６、特開平２００１−１９２３１７）。
【０００４】
一方、皮膚のしみの発生機序については、日光からの紫外線の刺激やホルモンの異常が原因となってメラニン色素が形成され皮膚内に異常沈着するものと考えられている。メラニン色素は、メラノサイト内のメラノソームにおいて産生される。メラノサイト内では、必須アミノ酸であるチロシンがチロシナーゼの作用によりドーパキノンとなり、これが酵素的又は非酵素的酸化作用により赤色色素及び無色色素を経て黒色のメラニンへ変化する。従って、第１段階であるチロシナーゼの活性を抑制することがメラニン生成抑制に重要なことである。チロシナーゼ活性を抑制する化合物としてはハイドロキノンがあるが、感作性があるため一般に使用できない。高級脂肪酸のモノエステルやアルキルエーテルなどの誘導体も検討されてきたが安全性上十分とはいえない。天然物由来のものとして、コウジ酸、エラグ酸、アルブチンなどが検討されてきたが、安全性、有効性、コスト性から充分に満足されるものは得られていない。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、以上のような現状に鑑み、広く種々の物質についてエラスターゼ阻害能、コラゲナーゼ阻害能、チロシナーゼ活性阻害能、メラニン生成抑制能を調べた結果、ミリカ・ナギ（Ｍｙｒｉｃａｎａｇｉ Ｈｏｏｋ．ｆ．ｎｏｎ Ｔｈｕｎｂ．）、ムユウジュ（Ｓａｒａｃａ ａｓｏｃａ Ｄｅ Ｗｉｌｄｅ）、ヘミデスムス・インディカス（Ｈｅｍｉｄｅｓｍｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ（Ｌ．）Ｒ．Ｂｒ．）、オノスマ・ブラクテアツム（Ｏｎｏｓｍａ ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ Ｗａｌｌ．）に優れたエラスターゼ阻害作用、コラゲナーゼ阻害作用、メラニン産生抑制作用を有していることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
本発明は、ミリカ・ナギ（Ｍｙｒｉｃａ ｎａｇｉ Ｈｏｏｋ．ｆ．ｎｏｎ Ｔｈｕｎｂ．）、ムユウジュ（Ｓａｒａｃａ ａｓｏｃａ Ｄｅ Ｗｉｌｄｅ）、ヘミデスムス・インディカス（Ｈｅｍｉｄｅｓｍｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ（Ｌ．）Ｒ．Ｂｒ．）、オノスマ・ブラクテアツム（Ｏｎｏｓｍａ ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ Ｗａｌｌ．）よりなる群の１種又は２種以上の溶媒抽出物を有効成分とすることを特徴とする皮膚外用剤である。本発明の皮膚外用剤は、エラスターゼ阻害剤、コラゲナーゼ阻害剤、抗老化剤、チロシナーゼ阻害剤、メラニン産生抑制剤であることを好適とする。
【０００７】
以下、本発明の構成について詳述する。本発明で使用されるミリカ・ナギ（Ｍｙｒｉｃａ ｎａｇｉ Ｈｏｏｋ．ｆ．ｎｏｎ Ｔｈｕｎｂ．）とは、ヤマモモ科ヤマモモ属の植物で、ヒマラヤ低地域から中国南部に分布する。民間薬として消炎、収斂、下痢止め、止血、鎮痛などに用いられてきた。本発明において使用する部位は、ミリカ・ナギ（Ｍｙｒｉｃａ ｎａｇｉ Ｈｏｏｋ．ｆ．ｎｏｎ Ｔｈｕｎｂ．）の樹皮である。エラスターゼ阻害作用、コラゲナーゼ阻害作用、メラニン産生抑制作用については、これまで知られていない。
【０００８】
本発明で用いられるムユウジュ（Ｓａｒａｃａ ａｓｏｃａ Ｄｅ Ｗｉｌｄｅ）とは、マメ科ムユウジュ属の植物で、インド、スリランカに野生する。アショーカノキの別名があり、ヒンドゥー教の聖木とされる。民間療法では、消化不良、血液の病気、胆汁異常、潰瘍などに用いられてきた。本発明において使用する部位は、ムユウジュ（Ｓａｒａｃａ ａｓｏｃａ Ｄｅ Ｗｉｌｄｅ）の樹皮である。エラスターゼ阻害作用、コラゲナーゼ阻害作用、メラニン産生抑制作用については、これまで知られていない。
【０００９】
本発明で用いられるヘミデスムス・インディカス（Ｈｅｍｉｄｅｓｍｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ（Ｌ．）Ｒ．Ｂｒ．）とは、ガガイモ科ヘミデスムス属の植物で、インド、スリランカに分布する。民間療法では、腸の病気、象皮病、発熱、麻痺、吐き気、梅毒、嘔吐などに用いられてきた。本発明において使用する部位は、ヘミデスムス・インディカス（Ｈｅｍｉｄｅｓｍｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ（Ｌ．）Ｒ．Ｂｒ．）の根である。エラスターゼ阻害作用、コラゲナーゼ阻害作用、メラニン産生抑制作用については、これまで知られていない。
【００１０】
本発明で用いられるオノスマ・ブラクテアツム（Ｏｎｏｓｍａ ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ Ｗａｌｌ．）とは、ムラサキ科オノスマ属の植物で、西アジアからインドに分布する。民間療法では、強壮、利尿、緩和剤として用いられる。本発明における使用部位は、オノスマ・ブラクテアツム（Ｏｎｏｓｍａ ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ Ｗａｌｌ．）の葉及び花である。エラスターゼ阻害作用、コラゲナーゼ阻害作用、メラニン産生抑制作用については、これまで知られていない。
【００１１】
本発明で用いられる抽出物の調製方法は特に限定されないが、生又は乾燥した生薬を種々の溶媒を用い、低温から加温下において抽出する方法があげられる。
【００１２】
具体的に抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール等の低級一価アルコール、グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール、酢酸エチル等の低級アルキルエステルが例示され、これらの一種又は二種以上の混合溶媒を用いることができる。
【００１３】
本発明で使用する抽出物は、そのまま用いてもよいが、必要に応じてろ過、濃縮してもよい。また、抽出物をカラムクロマト法、向流分配法等により、分画、精製して用いることもできる。
【００１４】
更に、上記のものを減圧乾燥又は凍結乾燥した後、粉末又はペースト状に調製し、適宜製剤化して用いることもできる。
【００１５】
（抽出物製造例１）
ミリカ・ナギの樹皮２０ｇに５０ｖｏｌ％エタノール溶液３００ｇを加え、５０℃にて８時間抽出し、冷後、ろ過して抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、２．２４％であった。
【００１６】
（抽出物製造例２）
ムユウジュの樹皮２０ｇに７０ｖｏｌ％エタノール３００ｇを加え、室温で５日間抽出する。これをろ過し、濃縮乾固する。５０重量％（以下、単に「％」とする）１，３−ブチレングリコール溶液３００ｇに加温溶解し、抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１．５６％であった。
【００１７】
（抽出物製造例３）
ヘミデスムス・インディカスの根に５０ｖｏｌ％エタノール溶液３００ｇを加え、５０℃にて８時間抽出し、冷後、ろ過して抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、２．０５％であった。
【００１８】
（抽出製造例４）
オノスマ・ブラクテアツム葉及び花２００ｇにエタノール３０００ｇを加え、室温にて５日間攪拌抽出を行い、冷後ろ過した後、濃縮乾固した。乾固物を３０ｖｏｌ％エタノール溶液５００ｇに溶解し、不溶物を除去する。さらに濃縮乾固し、７０ｖｏｌ％エタノール溶液５００ｇに溶解し抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、２．３８％であった。
【００１９】
（抽出物製造例５）
ミリカ・ナギの樹皮、ムユウジュの樹皮、ヘミデスムス・インディカス及びオノスマ・ブラクテアツム各２００ｇに、それぞれ５０ｖｏｌ％エタノール溶液３０００ｇを加え、５０℃にて８時間抽出し、冷後、ろ過した後、それぞれ濃縮、凍結乾燥しエキス末２５．３ｇ、２２．５ｇ、３１．２ｇ、３４．１ｇを製する。
【００２０】
本発明の抽出物の配合量は、配合する製品の種類、性状、品質、期待する効果の程度により異なるが、乾燥固形物に換算して好ましくは、０．０００１〜１０．０％、特に０．００１〜５．０％が効果の面から好ましい。
【００２１】
本発明の皮膚外用剤は、上記成分に加えて、さらに必要により、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常化粧品、医薬部外品、医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば界面活性剤、油分、保湿剤、増粘剤、酸化防止剤、紫外線防御剤、アルコール類、粉末成分、色剤、香料、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００２２】
さらに、金属イオン封鎖剤、防腐抗菌剤、細胞賦活剤、皮脂分泌調整剤、消炎剤、収斂剤、美白剤、活性酸素抑制剤、抗アレルギー剤、老化防止剤等、さらに生理活性作用を有する植物抽出物及びこれらの抽出分画、精製物等も適宜配合することができる。
【００２３】
本発明の活性酸素消去剤及びこれを配合してなる皮膚外用剤は、一般皮膚化粧料に限定されるものではなく、医薬品、医薬部外品、薬用化粧料等を包含するものである。本発明の皮膚外用剤の剤型は、可溶化系、乳化系、粉末分散系等何れでもよく、用途も、化粧水、乳液、クリーム、パック等の基礎化粧料、ファンデーション等のメークアップ化粧料、シャンプー、リンス、石けん、ボディーシャンプーなどのトイレタリー製品、浴用剤等を問わない。
【００２４】
次に実施例をあげて説明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるものではない。
【００２５】
（試験例１）エラスターゼ阻害活性の評価
本発明者らは、ヒト白血球由来エラスターゼ（Ｅｌｅａｓｔｉｎ Ｐｒｏｄｕｃｔ社製）及びエラスターゼ合成基質としてＭｅｔｈｏｘｙ−ｓｕｃｃｉｎｙｌ−ａｌａｎｙｌ−ａｌａｎｙｌ−ｐｒｏｌｙｌ−ｖａｌｉｎｅ−ｐ−ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｄｅ（Ｂａｃｈｅｍ社製）を用いて評価した。試験試料は、抽出物製造例５を精製水にて溶解し、抽出物固形分濃度を１０μｇ／ｍＬとして用いた。また、反応緩衝液として、０．１Ｍ ＨＥＰＥＳ、０．５Ｍ ＮａＣｌ（ｐＨ７．４）を用いた。
【００２６】
（試験方法）
合成基質をＤＭＳＯにて溶解し８０ｍＭとし、２０μＬずつマイクロチューブに分注し凍結保存した。使用時に反応緩衝液を用いて希釈し８ｍＭとした。エラスターゼは、２００μｇ／ｍＬになるよう反応緩衝液に溶解し、２０μＬずつ分注して冷凍保存した。測定時には、反応緩衝液にて１２μｇ／ｍＬ（１９２Ｕ／ｍＬ）に希釈し使用した。９６穴プレートに、それぞれ８ｍＭの合成基質２５μＬ、試験試料５０μＬを加えた。次に氷上で、エラスターゼ２５μＬを加え、直ちに３７℃にて２０分間インキュベーションした。その後、プレートリーダーで４０５ｎｍにて吸光度を測定した。
【００２７】
測定結果より次式によりエラスターゼ阻害率を算出した。
エラスターゼ阻害率（％）＝〔１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）〕×１００
Ａ：試料溶液添加、エラスターゼ添加時の吸光度
Ｂ：試料溶液添加、エラスターゼ無添加時の吸光度
Ｃ：試料無添加、エラスターゼ添加時の吸光度
Ｄ：試料無添加、エラスターゼ無添加時の吸光度
ただし、各無添加のときには、それぞれ精製水、緩衝液を代わりに用いた。各阻害率を表１に示す。
【００２８】
【表１】
【００２９】
（試験例２）コラゲナーゼ阻害活性の評価
Ｗｕｎｓｃｈ−Ｈｅｉｄｒｉｃｈ法を一部変更した方法（薬学雑誌１１８，４２３−４２９，１９９８）により測定した。コラゲナーゼは、Ｓｉｇｍａ社製ＴｙｐｅＩＶを５ｍｇ／ｍＬとし１００μＬずつ分注し凍結保存する。使用時に５０倍希釈し０．１ｍｇ／ｍＬとして使用した。コラゲナーゼ合成基質は、ＰＺ−ペプチド（ＰＺ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＨ，Ｂａｃｈｅｍ社製）０．５ｍｇに調製した。希釈液は、ともに０．１Ｍトリス緩衝液（ｐＨ７．１，２０ｍＭ ＣａＣｌ２を含有）を使用した。試験溶液は、抽出物製造例５を精製水にて溶解し、抽出物固形分濃度を１ｍｇ／ｍＬとたものを使用した。
【００３０】
（試験方法）
合成基質４００μＬ、コラゲナーゼ５０μＬ、試験試料５０μＬを加え、３７℃にて３０分間反応させた後、２５ｍＭクエン酸溶液１ｍＬを加えて反応を停止させた。酢酸エチル５ｍＬを加えて激しく振とうさせた後、２５００ｒｐｍにて遠心分離した。酢酸エチル層をとり、３２０ｎｍで吸光度を測定した。
【００３１】
測定結果より次式によりコラゲナーゼ阻害率を算出した。
コラゲナーゼ阻害率（％）＝〔１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）〕×１００
Ａ：試料溶液添加、コラゲナーゼ添加時の吸光度
Ｂ：試料溶液添加、コラゲナーゼ無添加時の吸光度
Ｃ：試料無添加、コラゲナーゼ添加時の吸光度
Ｄ：試料無添加、コラゲナーゼ無添加時の吸光度
ただし、各無添加のときには、それぞれの水を代わりに用いた。各阻害率を表２に示す。
【００３２】
【表２】
【００３３】
（試験例３）チロシナーゼ活性阻害
試験試料は、抽出物製造例５を用い、精製水にて希釈し、０．０５ｍｇ／ｍＬの濃度とした。５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地を用い、マウス由来Ｂ１６メラノーマ培養細胞を９６穴プレートに３×１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で播種し、３７℃、５％ＣＯ２にて２４時間培養した後、試験試料の各濃度を添加し、３７℃、５％ＣＯ２にてさらに２４時間培養した。チロシナーゼ活性の測定前にｗｅｌｌ中の培地は除去し、ＰＢＳ（−）１００μＬで２回洗浄した。各ｗｅｌｌ中に４５μＬ１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含むＰＢＳを加え、１分間プレートを振動させ、細胞膜を破壊し、その後、基質として１０ｍＭのＬ−ＤＯＰＡ溶液１００μＬを加えて、３７℃にて３時間反応させ、マイクロプレートリーダーにて波長４７５ｎｍにおける吸光度を測定し、生成したメラニン量を定量した。また同時にＬｏｗｒｙ法にて細胞の蛋白量を測定し、単位蛋白量あたりのメラニン量を算出した。対照として試料溶液を添加しない細胞を用い、式１にてチロシナーゼ活性抑制率とした。その結果を表２に記す。
【式１】
チロシナーゼ活性抑制率（％）＝（Ａ−Ｂ）／Ａ ×１００
その結果を表３に記す。
【００３４】
【表３】
【００３５】
（試験例４）メラニン生成抑制効果試験
マウス由来Ｂ１６メラノーマ細胞を５％ＦＢＳ及びテオフィリン（０．５ｍＭ）を含むＤＭＥＭ培地を用いて、３５ｍｍのシャーレに５×１０４ｃｅｌｌｓずつ播種し、５％ＣＯ２にて３７℃２４時間培養した。その後、０．５ｍＭテオフィリン含有５％ＦＢＳ−ＤＭＥＭ２ｍＬと各濃度に溶解した試験試料（製造例５のエキス末をＤＭＳＯに１０％溶解し、さらにＰＢＳ（−）にて希釈して０．０５ｍｇ／ｍＬとした）２０μＬ加え、さらに３７℃にて３日間培養した。培地を除去し、ＰＢＳ（−）で２回洗浄後、トリプシン−ＥＤＴＡを用いて細胞を剥離し、１．５ｍＬチューブに入れ、２５℃、１２０００回転、１０分間遠心操作し、細胞ペレットを作成した。コントロールには、２０μＬのＰＢＳ（−）を用いた。又、比較例としてチロシナーゼ活性阻害が高いことが知られているソウハクヒ抽出物（製造例５と同様に製造）ついても上記と同様の試験を行った。評価は、下記の評価基準にて行なった。
【００３６】
＜評価基準＞
細胞ペレットの色調
０−コントロールと同様な黒色
１−コントロールに比べわずかに薄い黒色
２−コントロールに比べて明瞭に薄い黒色
３−灰色に近い黒色
４−灰色
５−白色
細胞ペレットの量
１−コントロールに比べ明瞭に少ない
２−コントロールに比べわずかに少ない
３−コントロールと同量
試験結果を表４に示す。
【００３７】
【表４】
【００３８】
表４に示したように、抽出物にはメラニン生成抑制効果が見られ、細胞毒性も少なかったのに対して、ソウハクヒ抽出物には、メラニン生成抑制効果は認められず、細胞毒性も大きい結果であった。
【００３９】
（試験例５）皮膚の抗老化試験
皮膚の抗老化効果を調べるために、下記実施例１、比較例１に示す組成の化粧料を用いて、以下の方法により、しわに対する改善効果と、肌のはり、たるみに対する改善効果について評価試験を行った。
【００４０】
無作為に抽出した年齢４０〜５０歳の健常な女性３０名を被験者とし、実施例及び比較例化粧料を顔面皮膚に連日２ケ月使用した後、しわに対する改善効果と肌のはり、たるみに対する改善効果について調べた。
【００４１】
（実施例１）クリーム
下記成分（１）〜（１０）、別に下記成分（１１）〜（１６）を７５℃に加温溶解しそれぞれＡ液及びＢ液とする。Ａ液にＢ液を加えて乳化し、攪拌しながら５０℃まで冷却し、成分（１７）を加え、クリームを調製した。
【００４２】
（比較例１）
クリーム実施例１において、製造例５の抽出物０．３％を精製水に代えた以外は、実施例１と同様にしてクリームを調製した。
【００４３】
「しわに対する改善効果」
目尻のしわの状態を視覚評価した。
（判定基準）
有効 ：しわがかなり目立たなくなった
やや有効：しわが以前より目立たなくなった
効果なし：変化なし
「肌のはり、たるみに対する改善効果」
肌のはり、たるみを視覚評価した。
（判定基準）
有効 ：使用前に比べ肌にはりがあり、たるみがない
やや有効：使用前に比べ肌にややはりがあり、たるみが減少した
効果なし：変化なし
【００４４】
【表５】
【００４５】
表５から明らかなように、実施例１のクリームを用いた場合には、比較例１のクリームを用いた場合よりも、目尻のしわ及び肌のはり、たるみの点で改善されていることが認められた。これにより、本発明抽出物を配合した化粧料には、抗老化作用のあることが確認された。
【００４６】
以下にさらに、本発明の処方例を示す。
【００４７】
（実施例２）化粧水
下記成分（５）〜（８）を混合溶解させＡ液とし、これとは別に下記成分（１）〜（４）及び（９）を混合溶解させてＢ液とし、Ａ液とＢ液を均等に混合し、化粧水を調製した。
【００４８】
（実施例３）乳液
下記成分（１）〜（１０）、別に（１１）〜（１４）及び（１６）を７５℃で加熱溶解させてそれぞれＡ液及びＢ液とし、Ａ液にＢ液を加えて乳化し、攪拌しながら５０℃まで冷却し、成分（１５）を加え、乳液を調製した。
【００４９】
（実施例４）石けん
石けん製造の定法により下記成分を混合し製した。
【００５０】
（実施例５）クレンジングジェル
下記成分（１）〜（３）、別に（４）〜（６）及び（８）を７０℃に加熱溶解させてそれぞれＡ液及びＢ液とし、Ａ液にＢ液を加えて均一になるまで攪拌する。攪拌しながら５０℃まで冷却し、成分（７）を加えてクレンジングジェルを製した。
【００５１】
（実施例６）パック剤
Ａ相、Ｂ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ａ相にＢ相を加えて可溶化し、次いでＣ相を加えて均一に溶解し、製する。
【００５２】
（実施例７）乳化型ファンデーション
下記成分（１）〜（６）を充分に混合粉砕した粉末部をＡとし、（７）（８）をＢ液、（９）〜（１２）及び（１４）をＣ液とする。Ｃ液を加熱攪拌後、Ａを添加しホモミキサー処理し、さらに過熱混合したＢ液を加えてホモミキサー処理する。攪拌しながら５０℃まで冷却し、（１３）を加え、さらに室温まで冷却して製する。
【００５３】
（実施例８）固形ファンデーション
下記成分（１）〜（７）をブレンダーで均一に混合し、これに（８）〜（１４）を加え、よく混練して製する。
【００５４】
（実施例９）ヘアートニック
下記成分（５）に（１）〜（４）及び（７）を加え、攪拌溶解した後、（６）及び（８）を加えてさらに攪拌して製する。
【００５３】
【発明の効果】
以上に説明したように、本発明のミリカ・ナギ（Ｍｙｒｉｃａ ｎａｇｉ Ｈｏｏｋ．ｆ．ｎｏｎ Ｔｈｕｎｂ．）、ムユウジュ（Ｓａｒａｃａ ａｓｏｃａＤｅ Ｗｉｌｄｅ）、ヘミデスムス・インディカス（Ｈｅｍｉｄｅｓｍｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ（Ｌ．）Ｒ．Ｂｒ．）、オノスマ・ブラクテアツム（Ｏｎｏｓｍａ ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ Ｗａｌｌ．）よりなる群の１種又は２種以上の溶媒抽出物を有効成分とする皮膚外用剤は、皮膚の老化防止に有効な優れたエラスターゼ活性阻害作用、コラゲナーゼ阻害活性作用を有し、皮膚老化防止外用剤として有効である。また、日焼け後の色素沈着・しみ・そばかす・肝斑等の予防および改善に有効なチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用を有し、美白用外用剤として有効である。
【発明の属する技術分野】
本発明は、皮膚老化防止用外用剤、美白用外用剤または肌荒れ防止用として用い得る、特定の植物抽出物を有効成分とする皮膚外用剤に関する発明である。
【０００２】
【従来の技術】
老化皮膚では、線維芽細胞の活性低下に伴い、真皮マトリックス成分であるコラーゲン線維、エラスチン線維、酸性ムコ多糖の質的、量的な変化が起こる。コラーゲン線維は異常な老化架橋が形成されるため硬直化し、本来の弾力性に富む張りが失われる。エラスチン線維は変性崩壊し、変わってアミノ酸組成の異なるエラスチンが代償性に生産されて機能障害が進行する。その結果皮膚は柔軟性を失って、シワやたるみが発生する。これら生理的老化皮膚では、増殖能の低下、生理的機能低下が観察されるのに対して、光老化皮膚では、線維芽細胞が増大増殖し、コラーゲン産生能も亢進しているという。この著しい対照を最もよく表す特徴の一つは皮膚の厚さで、光老化した顔面皮膚は強く肥厚するが、前腕内側の生理的老化皮膚は、徐々に薄くなるのが常である。ヒト皮膚の老化を考えるときこれら相反した現象に対応した防御法を用いなければならない。これら老化の一因であるエラスチンの変性、破壊は、エラスチン分解酵素であるエラスターゼの過剰発現によって起こり、従ってエラスターゼの活性を抑制することは、皮膚に弾力性やハリを与え、皮膚の老化防止に重要である。現在まで、これら皮膚老化を予防する目的でいくつかのエラスターゼ阻害剤が開発されてきた（特開平９−８７１３６、特開平９−８７１３７、特開平９−９５４２０、特開平９５４３６、特開平１０−１７４６０、特開平１０−２９９２５、特開平１０−２９９２６、特開平１０−３６２８１、特開平１０−４５５５５、特開平１０−１８２４１４、特開平１１−９２３５４、特開平１１−１４７８３２、特開平１１−１４７８３４、特開平１１−１７１７５８、特開平１１−１９９５０４、特開平１１−２４６３３７、特開平１１−２４６３３８、特開平１１−２４６３８５、特開平１１−２４６３８６、特開平１１−２４６３８７、特開平１１−２４６３８８、特開平１１−２６３７２０、特開平１１−３１５００８、特開平１１−３３５２２９、特開平１１−３３５２３０、特開２０００−５３５７８、特開２０００−７２６４９、特開２０００−１１９１８９、特開２０００−２１２０５８、特開２０００−２４７８３０、特開２０００−２５６１７６、特開２０００−３１９１８９、特開２００１−３９８２２、特開２００１−５８９２０）。
【０００３】
同様に、コラーゲンの変性、減少は、コラーゲン分解酵素であるコラゲナーゼの過剰発現によって起こり、従ってコラゲナーゼの活性を抑制することは、皮膚に弾力性やハリを与え、皮膚の老化防止に重要である。現在まで、これら皮膚老化を予防する目的でいくつかのコラゲナーゼ阻害剤が開発されてきた（特開平９−４０５５２、特開平１０−１９４９８２、特開平１１−７１２９４、特開１１−７９９７０、特開平１１−１４７８３３、特開平１１−３１５００８、特開平２０００−１５４１３１、特開平２０００−１５９６３１、特開平２０００−１９１５１２、特開平２０００−２１２０５８、特開平２０００−２５６１７６、特開平１１−７９９７１、特開平２０００−１９１４８７、特開平２０００−２５６１２２、特開平２０００−３１９１５５、特開平２００１−１３９４６６、特開平２００１−１９２３１６、特開平２００１−１９２３１７）。
【０００４】
一方、皮膚のしみの発生機序については、日光からの紫外線の刺激やホルモンの異常が原因となってメラニン色素が形成され皮膚内に異常沈着するものと考えられている。メラニン色素は、メラノサイト内のメラノソームにおいて産生される。メラノサイト内では、必須アミノ酸であるチロシンがチロシナーゼの作用によりドーパキノンとなり、これが酵素的又は非酵素的酸化作用により赤色色素及び無色色素を経て黒色のメラニンへ変化する。従って、第１段階であるチロシナーゼの活性を抑制することがメラニン生成抑制に重要なことである。チロシナーゼ活性を抑制する化合物としてはハイドロキノンがあるが、感作性があるため一般に使用できない。高級脂肪酸のモノエステルやアルキルエーテルなどの誘導体も検討されてきたが安全性上十分とはいえない。天然物由来のものとして、コウジ酸、エラグ酸、アルブチンなどが検討されてきたが、安全性、有効性、コスト性から充分に満足されるものは得られていない。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、以上のような現状に鑑み、広く種々の物質についてエラスターゼ阻害能、コラゲナーゼ阻害能、チロシナーゼ活性阻害能、メラニン生成抑制能を調べた結果、ミリカ・ナギ（Ｍｙｒｉｃａｎａｇｉ Ｈｏｏｋ．ｆ．ｎｏｎ Ｔｈｕｎｂ．）、ムユウジュ（Ｓａｒａｃａ ａｓｏｃａ Ｄｅ Ｗｉｌｄｅ）、ヘミデスムス・インディカス（Ｈｅｍｉｄｅｓｍｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ（Ｌ．）Ｒ．Ｂｒ．）、オノスマ・ブラクテアツム（Ｏｎｏｓｍａ ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ Ｗａｌｌ．）に優れたエラスターゼ阻害作用、コラゲナーゼ阻害作用、メラニン産生抑制作用を有していることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
本発明は、ミリカ・ナギ（Ｍｙｒｉｃａ ｎａｇｉ Ｈｏｏｋ．ｆ．ｎｏｎ Ｔｈｕｎｂ．）、ムユウジュ（Ｓａｒａｃａ ａｓｏｃａ Ｄｅ Ｗｉｌｄｅ）、ヘミデスムス・インディカス（Ｈｅｍｉｄｅｓｍｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ（Ｌ．）Ｒ．Ｂｒ．）、オノスマ・ブラクテアツム（Ｏｎｏｓｍａ ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ Ｗａｌｌ．）よりなる群の１種又は２種以上の溶媒抽出物を有効成分とすることを特徴とする皮膚外用剤である。本発明の皮膚外用剤は、エラスターゼ阻害剤、コラゲナーゼ阻害剤、抗老化剤、チロシナーゼ阻害剤、メラニン産生抑制剤であることを好適とする。
【０００７】
以下、本発明の構成について詳述する。本発明で使用されるミリカ・ナギ（Ｍｙｒｉｃａ ｎａｇｉ Ｈｏｏｋ．ｆ．ｎｏｎ Ｔｈｕｎｂ．）とは、ヤマモモ科ヤマモモ属の植物で、ヒマラヤ低地域から中国南部に分布する。民間薬として消炎、収斂、下痢止め、止血、鎮痛などに用いられてきた。本発明において使用する部位は、ミリカ・ナギ（Ｍｙｒｉｃａ ｎａｇｉ Ｈｏｏｋ．ｆ．ｎｏｎ Ｔｈｕｎｂ．）の樹皮である。エラスターゼ阻害作用、コラゲナーゼ阻害作用、メラニン産生抑制作用については、これまで知られていない。
【０００８】
本発明で用いられるムユウジュ（Ｓａｒａｃａ ａｓｏｃａ Ｄｅ Ｗｉｌｄｅ）とは、マメ科ムユウジュ属の植物で、インド、スリランカに野生する。アショーカノキの別名があり、ヒンドゥー教の聖木とされる。民間療法では、消化不良、血液の病気、胆汁異常、潰瘍などに用いられてきた。本発明において使用する部位は、ムユウジュ（Ｓａｒａｃａ ａｓｏｃａ Ｄｅ Ｗｉｌｄｅ）の樹皮である。エラスターゼ阻害作用、コラゲナーゼ阻害作用、メラニン産生抑制作用については、これまで知られていない。
【０００９】
本発明で用いられるヘミデスムス・インディカス（Ｈｅｍｉｄｅｓｍｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ（Ｌ．）Ｒ．Ｂｒ．）とは、ガガイモ科ヘミデスムス属の植物で、インド、スリランカに分布する。民間療法では、腸の病気、象皮病、発熱、麻痺、吐き気、梅毒、嘔吐などに用いられてきた。本発明において使用する部位は、ヘミデスムス・インディカス（Ｈｅｍｉｄｅｓｍｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ（Ｌ．）Ｒ．Ｂｒ．）の根である。エラスターゼ阻害作用、コラゲナーゼ阻害作用、メラニン産生抑制作用については、これまで知られていない。
【００１０】
本発明で用いられるオノスマ・ブラクテアツム（Ｏｎｏｓｍａ ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ Ｗａｌｌ．）とは、ムラサキ科オノスマ属の植物で、西アジアからインドに分布する。民間療法では、強壮、利尿、緩和剤として用いられる。本発明における使用部位は、オノスマ・ブラクテアツム（Ｏｎｏｓｍａ ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ Ｗａｌｌ．）の葉及び花である。エラスターゼ阻害作用、コラゲナーゼ阻害作用、メラニン産生抑制作用については、これまで知られていない。
【００１１】
本発明で用いられる抽出物の調製方法は特に限定されないが、生又は乾燥した生薬を種々の溶媒を用い、低温から加温下において抽出する方法があげられる。
【００１２】
具体的に抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール等の低級一価アルコール、グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール、酢酸エチル等の低級アルキルエステルが例示され、これらの一種又は二種以上の混合溶媒を用いることができる。
【００１３】
本発明で使用する抽出物は、そのまま用いてもよいが、必要に応じてろ過、濃縮してもよい。また、抽出物をカラムクロマト法、向流分配法等により、分画、精製して用いることもできる。
【００１４】
更に、上記のものを減圧乾燥又は凍結乾燥した後、粉末又はペースト状に調製し、適宜製剤化して用いることもできる。
【００１５】
（抽出物製造例１）
ミリカ・ナギの樹皮２０ｇに５０ｖｏｌ％エタノール溶液３００ｇを加え、５０℃にて８時間抽出し、冷後、ろ過して抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、２．２４％であった。
【００１６】
（抽出物製造例２）
ムユウジュの樹皮２０ｇに７０ｖｏｌ％エタノール３００ｇを加え、室温で５日間抽出する。これをろ過し、濃縮乾固する。５０重量％（以下、単に「％」とする）１，３−ブチレングリコール溶液３００ｇに加温溶解し、抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１．５６％であった。
【００１７】
（抽出物製造例３）
ヘミデスムス・インディカスの根に５０ｖｏｌ％エタノール溶液３００ｇを加え、５０℃にて８時間抽出し、冷後、ろ過して抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、２．０５％であった。
【００１８】
（抽出製造例４）
オノスマ・ブラクテアツム葉及び花２００ｇにエタノール３０００ｇを加え、室温にて５日間攪拌抽出を行い、冷後ろ過した後、濃縮乾固した。乾固物を３０ｖｏｌ％エタノール溶液５００ｇに溶解し、不溶物を除去する。さらに濃縮乾固し、７０ｖｏｌ％エタノール溶液５００ｇに溶解し抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、２．３８％であった。
【００１９】
（抽出物製造例５）
ミリカ・ナギの樹皮、ムユウジュの樹皮、ヘミデスムス・インディカス及びオノスマ・ブラクテアツム各２００ｇに、それぞれ５０ｖｏｌ％エタノール溶液３０００ｇを加え、５０℃にて８時間抽出し、冷後、ろ過した後、それぞれ濃縮、凍結乾燥しエキス末２５．３ｇ、２２．５ｇ、３１．２ｇ、３４．１ｇを製する。
【００２０】
本発明の抽出物の配合量は、配合する製品の種類、性状、品質、期待する効果の程度により異なるが、乾燥固形物に換算して好ましくは、０．０００１〜１０．０％、特に０．００１〜５．０％が効果の面から好ましい。
【００２１】
本発明の皮膚外用剤は、上記成分に加えて、さらに必要により、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常化粧品、医薬部外品、医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば界面活性剤、油分、保湿剤、増粘剤、酸化防止剤、紫外線防御剤、アルコール類、粉末成分、色剤、香料、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００２２】
さらに、金属イオン封鎖剤、防腐抗菌剤、細胞賦活剤、皮脂分泌調整剤、消炎剤、収斂剤、美白剤、活性酸素抑制剤、抗アレルギー剤、老化防止剤等、さらに生理活性作用を有する植物抽出物及びこれらの抽出分画、精製物等も適宜配合することができる。
【００２３】
本発明の活性酸素消去剤及びこれを配合してなる皮膚外用剤は、一般皮膚化粧料に限定されるものではなく、医薬品、医薬部外品、薬用化粧料等を包含するものである。本発明の皮膚外用剤の剤型は、可溶化系、乳化系、粉末分散系等何れでもよく、用途も、化粧水、乳液、クリーム、パック等の基礎化粧料、ファンデーション等のメークアップ化粧料、シャンプー、リンス、石けん、ボディーシャンプーなどのトイレタリー製品、浴用剤等を問わない。
【００２４】
次に実施例をあげて説明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるものではない。
【００２５】
（試験例１）エラスターゼ阻害活性の評価
本発明者らは、ヒト白血球由来エラスターゼ（Ｅｌｅａｓｔｉｎ Ｐｒｏｄｕｃｔ社製）及びエラスターゼ合成基質としてＭｅｔｈｏｘｙ−ｓｕｃｃｉｎｙｌ−ａｌａｎｙｌ−ａｌａｎｙｌ−ｐｒｏｌｙｌ−ｖａｌｉｎｅ−ｐ−ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｄｅ（Ｂａｃｈｅｍ社製）を用いて評価した。試験試料は、抽出物製造例５を精製水にて溶解し、抽出物固形分濃度を１０μｇ／ｍＬとして用いた。また、反応緩衝液として、０．１Ｍ ＨＥＰＥＳ、０．５Ｍ ＮａＣｌ（ｐＨ７．４）を用いた。
【００２６】
（試験方法）
合成基質をＤＭＳＯにて溶解し８０ｍＭとし、２０μＬずつマイクロチューブに分注し凍結保存した。使用時に反応緩衝液を用いて希釈し８ｍＭとした。エラスターゼは、２００μｇ／ｍＬになるよう反応緩衝液に溶解し、２０μＬずつ分注して冷凍保存した。測定時には、反応緩衝液にて１２μｇ／ｍＬ（１９２Ｕ／ｍＬ）に希釈し使用した。９６穴プレートに、それぞれ８ｍＭの合成基質２５μＬ、試験試料５０μＬを加えた。次に氷上で、エラスターゼ２５μＬを加え、直ちに３７℃にて２０分間インキュベーションした。その後、プレートリーダーで４０５ｎｍにて吸光度を測定した。
【００２７】
測定結果より次式によりエラスターゼ阻害率を算出した。
エラスターゼ阻害率（％）＝〔１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）〕×１００
Ａ：試料溶液添加、エラスターゼ添加時の吸光度
Ｂ：試料溶液添加、エラスターゼ無添加時の吸光度
Ｃ：試料無添加、エラスターゼ添加時の吸光度
Ｄ：試料無添加、エラスターゼ無添加時の吸光度
ただし、各無添加のときには、それぞれ精製水、緩衝液を代わりに用いた。各阻害率を表１に示す。
【００２８】
【表１】
（試験例２）コラゲナーゼ阻害活性の評価
Ｗｕｎｓｃｈ−Ｈｅｉｄｒｉｃｈ法を一部変更した方法（薬学雑誌１１８，４２３−４２９，１９９８）により測定した。コラゲナーゼは、Ｓｉｇｍａ社製ＴｙｐｅＩＶを５ｍｇ／ｍＬとし１００μＬずつ分注し凍結保存する。使用時に５０倍希釈し０．１ｍｇ／ｍＬとして使用した。コラゲナーゼ合成基質は、ＰＺ−ペプチド（ＰＺ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＨ，Ｂａｃｈｅｍ社製）０．５ｍｇに調製した。希釈液は、ともに０．１Ｍトリス緩衝液（ｐＨ７．１，２０ｍＭ ＣａＣｌ２を含有）を使用した。試験溶液は、抽出物製造例５を精製水にて溶解し、抽出物固形分濃度を１ｍｇ／ｍＬとたものを使用した。
【００３０】
（試験方法）
合成基質４００μＬ、コラゲナーゼ５０μＬ、試験試料５０μＬを加え、３７℃にて３０分間反応させた後、２５ｍＭクエン酸溶液１ｍＬを加えて反応を停止させた。酢酸エチル５ｍＬを加えて激しく振とうさせた後、２５００ｒｐｍにて遠心分離した。酢酸エチル層をとり、３２０ｎｍで吸光度を測定した。
【００３１】
測定結果より次式によりコラゲナーゼ阻害率を算出した。
コラゲナーゼ阻害率（％）＝〔１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）〕×１００
Ａ：試料溶液添加、コラゲナーゼ添加時の吸光度
Ｂ：試料溶液添加、コラゲナーゼ無添加時の吸光度
Ｃ：試料無添加、コラゲナーゼ添加時の吸光度
Ｄ：試料無添加、コラゲナーゼ無添加時の吸光度
ただし、各無添加のときには、それぞれの水を代わりに用いた。各阻害率を表２に示す。
【００３２】
【表２】
（試験例３）チロシナーゼ活性阻害
試験試料は、抽出物製造例５を用い、精製水にて希釈し、０．０５ｍｇ／ｍＬの濃度とした。５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地を用い、マウス由来Ｂ１６メラノーマ培養細胞を９６穴プレートに３×１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で播種し、３７℃、５％ＣＯ２にて２４時間培養した後、試験試料の各濃度を添加し、３７℃、５％ＣＯ２にてさらに２４時間培養した。チロシナーゼ活性の測定前にｗｅｌｌ中の培地は除去し、ＰＢＳ（−）１００μＬで２回洗浄した。各ｗｅｌｌ中に４５μＬ１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含むＰＢＳを加え、１分間プレートを振動させ、細胞膜を破壊し、その後、基質として１０ｍＭのＬ−ＤＯＰＡ溶液１００μＬを加えて、３７℃にて３時間反応させ、マイクロプレートリーダーにて波長４７５ｎｍにおける吸光度を測定し、生成したメラニン量を定量した。また同時にＬｏｗｒｙ法にて細胞の蛋白量を測定し、単位蛋白量あたりのメラニン量を算出した。対照として試料溶液を添加しない細胞を用い、式１にてチロシナーゼ活性抑制率とした。その結果を表２に記す。
【式１】
チロシナーゼ活性抑制率（％）＝（Ａ−Ｂ）／Ａ ×１００
その結果を表３に記す。
【００３４】
【表３】
（試験例４）メラニン生成抑制効果試験
マウス由来Ｂ１６メラノーマ細胞を５％ＦＢＳ及びテオフィリン（０．５ｍＭ）を含むＤＭＥＭ培地を用いて、３５ｍｍのシャーレに５×１０４ｃｅｌｌｓずつ播種し、５％ＣＯ２にて３７℃２４時間培養した。その後、０．５ｍＭテオフィリン含有５％ＦＢＳ−ＤＭＥＭ２ｍＬと各濃度に溶解した試験試料（製造例５のエキス末をＤＭＳＯに１０％溶解し、さらにＰＢＳ（−）にて希釈して０．０５ｍｇ／ｍＬとした）２０μＬ加え、さらに３７℃にて３日間培養した。培地を除去し、ＰＢＳ（−）で２回洗浄後、トリプシン−ＥＤＴＡを用いて細胞を剥離し、１．５ｍＬチューブに入れ、２５℃、１２０００回転、１０分間遠心操作し、細胞ペレットを作成した。コントロールには、２０μＬのＰＢＳ（−）を用いた。又、比較例としてチロシナーゼ活性阻害が高いことが知られているソウハクヒ抽出物（製造例５と同様に製造）ついても上記と同様の試験を行った。評価は、下記の評価基準にて行なった。
【００３６】
＜評価基準＞
細胞ペレットの色調
０−コントロールと同様な黒色
１−コントロールに比べわずかに薄い黒色
２−コントロールに比べて明瞭に薄い黒色
３−灰色に近い黒色
４−灰色
５−白色
細胞ペレットの量
１−コントロールに比べ明瞭に少ない
２−コントロールに比べわずかに少ない
３−コントロールと同量
試験結果を表４に示す。
【００３７】
【表４】
表４に示したように、抽出物にはメラニン生成抑制効果が見られ、細胞毒性も少なかったのに対して、ソウハクヒ抽出物には、メラニン生成抑制効果は認められず、細胞毒性も大きい結果であった。
【００３９】
（試験例５）皮膚の抗老化試験
皮膚の抗老化効果を調べるために、下記実施例１、比較例１に示す組成の化粧料を用いて、以下の方法により、しわに対する改善効果と、肌のはり、たるみに対する改善効果について評価試験を行った。
【００４０】
無作為に抽出した年齢４０〜５０歳の健常な女性３０名を被験者とし、実施例及び比較例化粧料を顔面皮膚に連日２ケ月使用した後、しわに対する改善効果と肌のはり、たるみに対する改善効果について調べた。
【００４１】
（実施例１）クリーム
下記成分（１）〜（１０）、別に下記成分（１１）〜（１６）を７５℃に加温溶解しそれぞれＡ液及びＢ液とする。Ａ液にＢ液を加えて乳化し、攪拌しながら５０℃まで冷却し、成分（１７）を加え、クリームを調製した。
（比較例１）
クリーム実施例１において、製造例５の抽出物０．３％を精製水に代えた以外は、実施例１と同様にしてクリームを調製した。
【００４３】
「しわに対する改善効果」
目尻のしわの状態を視覚評価した。
（判定基準）
有効 ：しわがかなり目立たなくなった
やや有効：しわが以前より目立たなくなった
効果なし：変化なし
「肌のはり、たるみに対する改善効果」
肌のはり、たるみを視覚評価した。
（判定基準）
有効 ：使用前に比べ肌にはりがあり、たるみがない
やや有効：使用前に比べ肌にややはりがあり、たるみが減少した
効果なし：変化なし
【００４４】
【表５】
表５から明らかなように、実施例１のクリームを用いた場合には、比較例１のクリームを用いた場合よりも、目尻のしわ及び肌のはり、たるみの点で改善されていることが認められた。これにより、本発明抽出物を配合した化粧料には、抗老化作用のあることが確認された。
【００４６】
以下にさらに、本発明の処方例を示す。
【００４７】
（実施例２）化粧水
下記成分（５）〜（８）を混合溶解させＡ液とし、これとは別に下記成分（１）〜（４）及び（９）を混合溶解させてＢ液とし、Ａ液とＢ液を均等に混合し、化粧水を調製した。
（実施例３）乳液
下記成分（１）〜（１０）、別に（１１）〜（１４）及び（１６）を７５℃で加熱溶解させてそれぞれＡ液及びＢ液とし、Ａ液にＢ液を加えて乳化し、攪拌しながら５０℃まで冷却し、成分（１５）を加え、乳液を調製した。
（実施例４）石けん
石けん製造の定法により下記成分を混合し製した。
（実施例５）クレンジングジェル
下記成分（１）〜（３）、別に（４）〜（６）及び（８）を７０℃に加熱溶解させてそれぞれＡ液及びＢ液とし、Ａ液にＢ液を加えて均一になるまで攪拌する。攪拌しながら５０℃まで冷却し、成分（７）を加えてクレンジングジェルを製した。
（実施例６）パック剤
Ａ相、Ｂ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ａ相にＢ相を加えて可溶化し、次いでＣ相を加えて均一に溶解し、製する。
（実施例７）乳化型ファンデーション
下記成分（１）〜（６）を充分に混合粉砕した粉末部をＡとし、（７）（８）をＢ液、（９）〜（１２）及び（１４）をＣ液とする。Ｃ液を加熱攪拌後、Ａを添加しホモミキサー処理し、さらに過熱混合したＢ液を加えてホモミキサー処理する。攪拌しながら５０℃まで冷却し、（１３）を加え、さらに室温まで冷却して製する。
（実施例８）固形ファンデーション
下記成分（１）〜（７）をブレンダーで均一に混合し、これに（８）〜（１４）を加え、よく混練して製する。
（実施例９）ヘアートニック
下記成分（５）に（１）〜（４）及び（７）を加え、攪拌溶解した後、（６）及び（８）を加えてさらに攪拌して製する。
【発明の効果】
以上に説明したように、本発明のミリカ・ナギ（Ｍｙｒｉｃａ ｎａｇｉ Ｈｏｏｋ．ｆ．ｎｏｎ Ｔｈｕｎｂ．）、ムユウジュ（Ｓａｒａｃａ ａｓｏｃａＤｅ Ｗｉｌｄｅ）、ヘミデスムス・インディカス（Ｈｅｍｉｄｅｓｍｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ（Ｌ．）Ｒ．Ｂｒ．）、オノスマ・ブラクテアツム（Ｏｎｏｓｍａ ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ Ｗａｌｌ．）よりなる群の１種又は２種以上の溶媒抽出物を有効成分とする皮膚外用剤は、皮膚の老化防止に有効な優れたエラスターゼ活性阻害作用、コラゲナーゼ阻害活性作用を有し、皮膚老化防止外用剤として有効である。また、日焼け後の色素沈着・しみ・そばかす・肝斑等の予防および改善に有効なチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用を有し、美白用外用剤として有効である。
Claims (4)
- ミリカ・ナギ（Ｍｙｒｉｃａ ｎａｇｉ Ｈｏｏｋ．ｆ．ｎｏｎ Ｔｈｕｎｂ．）、ムユウジュ（Ｓａｒａｃａ ａｓｏｃａ Ｄｅ Ｗｉｌｄｅ）、ヘミデスムス・インディカス（Ｈｅｍｉｄｅｓｍｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ（Ｌ．）Ｒ．Ｂｒ．）、オノスマ・ブラクテアツム（Ｏｎｏｓｍａ ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ Ｗａｌｌ．）よりなる群の１種又は２種以上の溶媒抽出物を有効成分とする皮膚外用剤。
- 皮膚老化防止外用剤である請求項１記載の皮膚外用剤。
- 美白外用剤である請求項１記載の皮膚外用剤。
- １種又は２種以上の抽出物の配合量が乾燥重量として剤の０．０００１〜１０．０重量％である、請求項１〜３のいずれかに記載の皮膚外用剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002382915A JP2004182711A (ja) | 2002-12-04 | 2002-12-04 | 皮膚外用剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006064974A1 (ja) * | 2004-12-17 | 2006-06-22 | Shiseido Company, Ltd. | 美白用皮膚外用剤、美白剤、美白方法および美白用皮膚外用剤の製造方法 |
| JP2008184440A (ja) * | 2007-01-30 | 2008-08-14 | B & C Laboratories Inc | 紫外線細胞障害改善用皮膚外用剤 |
| KR100872454B1 (ko) * | 2007-02-24 | 2008-12-05 | 제주대학교 산학협력단 | 식물에서 기능성 화장품 성분 추출 방법 |
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-
2002
- 2002-12-04 JP JP2002382915A patent/JP2004182711A/ja active Pending
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