EP3407867A1 - Compositions cosmetiques, dermatologiques comprenant un extrait de vitex negundo enrichi en polyphenols - Google Patents

Compositions cosmetiques, dermatologiques comprenant un extrait de vitex negundo enrichi en polyphenols

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Publication number
EP3407867A1
EP3407867A1 EP17701539.3A EP17701539A EP3407867A1 EP 3407867 A1 EP3407867 A1 EP 3407867A1 EP 17701539 A EP17701539 A EP 17701539A EP 3407867 A1 EP3407867 A1 EP 3407867A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
extract
vitex negundo
skin
composition
polyphenols
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP17701539.3A
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German (de)
English (en)
Inventor
Sophie Leclere-Bienfait
Philippe Msika
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Laboratoires Expanscience SA
Original Assignee
Laboratoires Expanscience SA
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Filing date
Publication date
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Definitions

  • the present invention relates to a cosmetic or dermatological composition
  • a cosmetic or dermatological composition comprising a Vitex Negundo extract enriched in polyphenols.
  • the composition according to the invention is advantageously useful in the prevention or treatment of disorders or pathologies of the skin, mucous membranes or integuments, and in the prevention or treatment of vascular disorders.
  • Vitex Negundo has the common name Blue Lily or Chinese Troon, and is called Nôti in Reunion, Chinduravam Notchi in Tamil, or Huang Ping in Chinese for example.
  • Vitex Negundo is a shrub native to India belonging to the Verbenaceae or Lamiaceae family, up to one to two meters tall, with small blue to violet flowers of three to five millimeters. The leaves, which are the most used in traditional medicine, break down into three or five leaflets of lanceolate form. This plant is widely distributed throughout the world and is found in Afghanistan, Pakistan, Sri Lanka, East Africa, Madagascar and is widely grown in Asia, Europe, North America. The phytochemistry of Vitex Negundo has been described by Vishal R. Tandon (Natural Product Radiance 2005, 4 (3), 162-165) and Vishwanathan et al (EJBS 2010, 3 (1), 30-42), and is summarized in the table below.
  • Delta-guaiene essential oil guaiai-3, 7-dienecaryophyllene epoxide, fresh ethyls, flowers and hexadecenoate, alpha-selinene, germacrene-4-ol, caryophyllene dry fruits epoxide, nerilidol, betaselinene, alpha-cedrene, germacrene D, hexadecanoic acid, p-cymene, valencene
  • Extracts of various parts of the plant Vitex negundo grown or obtained in its natural environment have multiple pharmacological properties. The following have been identified:
  • analgesic and analgesic properties in particular leaf and root extract administered in the peritoneum;
  • anti-inflammatory properties and especially anti-arthritic and anti-arthritic properties, leaves, roots and seeds;
  • Vitex Negundo is used in Réunion for the treatment of chikungunya seizures (S. SAVRIAMA - Ethnopharmacologia, No. 52, 2014).
  • Vitex Negundo is often used in decoction, mainly leaves, and more rarely roots.
  • Vitex Negundo In Ayurvedic rites, the plant Vitex Negundo is used for its deworming and antihelminthic properties.
  • the "traditional" extracts of Vitex Negundo exhibit a phytochemical composition, that is to say a concentration of active principles, and especially polyphenols, which is not optimal for cosmetic or dermatological applications.
  • extracts of Vitex Negundo with a high content of flavonoids have been described in CN 104586700 (flavone content greater than or equal to 82.5%), and by Huang et al (Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2015, 108, 11 -20).
  • the extracts of the invention have in fact a content of at least 5% by weight of polyphenols, expressed in gallic acid equivalent, relative to the total weight of the dry extract, higher than extracts of Vitex Negundo obtained from cultivated plants. in earth. Nevertheless, the extracts of the invention have a low or no content in flavonoids.
  • Vitex negundo grown in these particular aeroponic conditions, with in particular a suitable nutrient solution and a suitable elicitor, does not produce the molecules usually described in the prior art for this plant, in particular flavonoids. Extremely described that are the vitexin and its derivatives, unlike the mother-plants cultivated under usual conditions in earth.
  • Vitex Negundo extracts enriched in polyphenols have anti-inflammatory, antioxidant and anti-pollution properties.
  • inflammatory phenomena, radical attacks, phenomena amplified by pollution and UV exposures are at the origin of chronological and actinic aging phenomena. Extracts of Vitex Negundo enriched polyphenols and cosmetic and dermatological compositions comprising them are therefore useful for example as anti-aging care, especially against chronological and actinic aging of the skin, mucous membranes or integuments.
  • the present invention thus relates to a cosmetic or dermatological composition
  • a cosmetic or dermatological composition comprising an extract of Vitex Negundo enriched in polyphenols as active ingredient, and optionally a suitable excipient.
  • the present invention also relates to a cosmetic or dermatological composition
  • a cosmetic or dermatological composition comprising an extract of Vitex Negundo enriched in polyphenols, for use in the prevention or treatment of disorders or pathologies of the skin, mucous membranes or integuments, and in the prevention or control of treatment of vascular disorders.
  • the present invention also relates to a method for the cosmetic care of the skin, superficial body growths or mucous membranes, with a view to improving their state or appearance, comprising or consisting in the administration of a composition of the invention.
  • Vitex Negundo extract rich in polyphenols or "Vitex Negundo extract enriched in polyphenols” means an extract of Vitex Negundo comprising at least 5% by weight, for example between 5% and 10% by weight. of polyphenols, expressed in gallic acid equivalent, relative to the total weight of the dry extract. These percentages are in particular obtained by a Folin-Ciocalteu assay.
  • a Folin-Ciocalteu assay all the phenolic compounds are oxidized by the Folin-Ciocalteu reagent (commercially available).
  • the latter comprises a mixture of phosphotungstic acid (H3PW12O40) and phosphomolybdic acid (H3PM012O40) which is reduced, during the oxidation of the phenolic substances, to a mixture of blue oxides of tungsten (W 8 0 2 3) and of molybdenum (Mo 8 0 23 ).
  • the blue color produced has a maximum absorption around 750-760 nm. It is proportional to the amount of oxidized phenolic compounds.
  • the reference phenol used in this method is gallic acid. The results obtained by this assay are therefore expressed in "% by weight of polyphenols, expressed in gallic acid equivalent, relative to the total weight of the dry extract".
  • Flavonoids are a subclass of polyphenols, having an optionally substituted carbene backbone, said 15-carbon backbone comprising a first bicycle composed of a phenyl ring fused to a 6-membered (oxygenated) heterocycle substituted with a phenyl ring. .
  • the content of flavonoids is expressed in% by weight relative to the total weight of the dry extract, and is measured by methods well known to those skilled in the art, such as the chromatographic methods described in particular by Mai (J. Sci.
  • “Vitex Negundo extract rich in polyphenols” or “Vitex Negundo extract enriched in polyphenols” is enriched in dicafeoylquinic acid derivatives (DCQ), especially 3,5-Di-Caffoyl-Quinic acids ( 3,5-DCQ) and 4,5-Di-Caffoyl-Quinic (4,5-DCQ).
  • DCQ dicafeoylquinic acid derivatives
  • 3,5-DCQ 3,5-Di-Caffoyl-Quinic acids
  • 4,5-DCQ 4,5-Di-Caffoyl-Quinic
  • Dicaffeoylquinic acid (which can be abbreviated as “DCQ” in the present description) is meant a diester composed of a quinic acid molecule of which two of the four alcohol functions have been esterified with caffeic acid. Dicaffeoylquinic acids are therefore acids of general formula (I):
  • any two of the radicals R 2 , R 3, R 4 and R 5 represent a caffeine group, the other two representing a hydrogen atom.
  • caffeyl group is meant a radical of general formula (II), derived from caffeic acid:
  • the different isomers of DCQ are thus acids of general formula (I), with R 2 , R 3, R 4 and R 5 as defined in the table below.
  • the term "part” of a plant any constituent part of a plant such as roots, stem, leaves, fruit, skin, seeds or the nucleus.
  • Root exudation means the recovery of metabolites contained in the roots of plants by means of a liquid brought into contact by percolation, spraying or immersion with the roots, still attached to the living plant or freshly cut (for less than 24 hours, and preferably as soon as possible after cutting, ideally just after cutting).
  • the root exudation can be carried out by means of a step of maceration of the plants roots, freshly cut and / or attached to the living plant, in a suitable solvent and for a suitable duration.
  • the term "cosmetically acceptable” is understood to mean that which is useful in the preparation of a cosmetic composition which is generally safe, non-toxic and neither biologically nor otherwise undesirable and which is acceptable for a cosmetic use, in particular human use. .
  • the term "dermatologically acceptable” is intended to mean that which is useful in the preparation of a dermatological composition which is generally safe, non-toxic and neither biologically nor otherwise undesirable and which is acceptable for dermatological use, in particular human use. . detailed description
  • the present invention relates in the first place to a cosmetic or dermatological composition
  • a cosmetic or dermatological composition comprising a Vitex Negundo extract rich in polyphenols as active principle, and where appropriate a suitable excipient, in particular dermatologically or cosmetically acceptable.
  • the Vitex Negundo extract rich in polyphenols of the compositions of the invention is preferably in liquid form.
  • the contents of the various constituents (in particular the polyphenols, and more particularly the DCQ) of the extract are expressed relative to the weight of the "dry” extract.
  • This "dry” extract is typically obtained by evaporation of the solvent in an oven at 105 ° C, until a constant weight extract is obtained.
  • the "dry” extract thus obtained is therefore essentially devoid of volatile substances, in particular solvents and in particular water.
  • the Vitex Negundo extract enriched in polyphenols is advantageously obtained by a process involving the planting plant technology ® Plant Advanced Technologies (technology described in particular in the international application WO 01/33942) which allows for successive extractions to from the roots of the plant (milking) without destroying it.
  • the plants are cultivated aeroponie and are fed by root spraying a solution of essential nutrients (Nitrogen - N, Phosphorus - P, Potassium - K), precisely developed in terms of proportions and concentration. , in order to obtain a maximum root development, without altering the survival of the plant.
  • the plant is punctually stressed and / or elicited by appropriate substances, allowing a better production of the molecules identified as of interest, here polyphenols, including DCQ, including 4,5-DCQ.
  • Vitex Negundo extracts rich in polyphenols of the compositions of the invention are obtained according to a process comprising the following successive stages:
  • the skilled person with the help of his general knowledge, knows how to adapt the proportions and concentrations of different mineral salts to optimize the root development and concentration of the molecules of interest.
  • the mineral salt concentrations of the nutrient solutions are advantageously in a range of electroconductivity ranging from 0.2 to 1.6 mS.
  • Step a) is advantageously carried out for a period of between 1 week and eight weeks.
  • the stimulation step b) makes it possible to significantly increase the content of the metabolites in the roots and thus promote the flow comprising the metabolites leaving the roots to the chosen solvent for the maceration and without any loss of the viability of the plant so that it can be reused.
  • the stimulation step of the plant makes it possible to promote the content and the secretion of the molecules of interest.
  • the stimulation step b) is carried out by spraying the plant with a solution of elicitors chosen from jasmonic acid derivatives, ethylene generators, chitin, chitosan and their mixtures.
  • step b) is advantageously carried out for a period of between 1 day and two weeks.
  • Step b) can be performed simultaneously or after step a).
  • the stimulation solution can be introduced into the nutrient solution.
  • step c) extraction by root exudation under conditions determined in terms of extraction solvent, pH and extraction time, in order to obtain an extract rich in molecules of interest, that is to say polyphenols, especially dicaféoylquiniques acids.
  • This step c) allows the recovery of metabolites (DCQ) released by plant roots by means of a liquid contacted by percolation or immersion with the roots.
  • the root excretion step c) is carried out by maceration of the roots for a period of between 30 minutes to 96 hours, in particular between 12 hours and 72 hours, more particularly between 24 hours and 48 hours.
  • the duration of root exudation is chosen so as to favor the extraction of a high content of compounds of interest while not altering the survival of the plant and without leading to the depletion of resources.
  • the extraction is advantageously carried out at acidic pH.
  • the isomerization step d) is carried out according to techniques known to those skilled in the art, in particular by successive readjustment of the pH of the extract (extraction at acidic pH, readjustment at basic pH with a strong base solution and final readjustment). at acidic pH by the addition of a strong acid).
  • Stage d) makes it possible to obtain an extract of Vitex Negundo, characterized in that the majority of the dicafeoylquinic acids which it comprises are in the form of the 4,5-butadioquinyl isomer.
  • the extract obtained after step d) is subjected to a final step e) of purification and concentration by successive filtrations, in particular by nanofiltration and / or sterilizing filtration. This stage makes it possible to obtain the final extract of Vitex Negundo rich in polyphenols, in particular in DCQ.
  • the extract thus obtained may be in liquid or solid form.
  • the extract in solid form is advantageously obtained by drying the liquid extract, according to the methods known to those skilled in the art, such as atomization or lyophilization for example with or without a carrier such as maltodextrin.
  • the Vitex Negundo extract rich in polyphenols of the compositions of the invention advantageously comprise at least 5%, for example between 5% and 10%, in particular at least 6%, more particularly at least 7%, by weight of polyphenols, expressed in gallic acid equivalent, relative to the total weight of the dry extract.
  • the Vitex Negundo extract rich in polyphenols of the present invention advantageously comprises at least 7% by weight of polyphenols, the percentages being expressed relative to the total weight of the dry extract of said extract (before any addition of a drying medium) or 1.3 mg of polyphenols per mL of liquid extract and more specifically at least 5% by weight of total DCQ, ie 1.1 mg of DCQ per mL of liquid extract.
  • DCQs are particularly interesting.
  • the extract according to the invention can be characterized by its content of DCQ, and more particularly a mixture of its different isomers, mainly comprising 4, 5 -DCQ.
  • the Vitex Negundo extract enriched in polyphenols thus advantageously comprises at least 1.5%, in particular at least 2.5%, more particularly at least 4%, in particular at least 5%, preferably at least 6%, by weight of the dicaffeoylquinic acids, relative to the total weight of the dry extract.
  • Said dicaffeoylquinic acids are in particular the isomers of 3,4-dicaféoylquinique acid (3,4-DCQ), 3,5-dicaféoylquinique (3,5-DCQ) and 4,5-dicaféoylquinique (4,5-DCQ).
  • At least 40% by weight of the dicaféoylquiniques acids are in the form of the 4,5-dicaféoylquinique isomer, relative to the total weight of dicaféoylquiniques acids.
  • the Vitex Negundo extract enriched in polyphenols obtained by the above process has the particularity of containing a very small amount of flavonoids, usually present in large quantities in the Vitex Negundo extracts of the prior art.
  • the plant Vitex Negundo grown under the conditions outlined above synthesizes and secretes a very small amount of flavonoids such as vitexin and its derivatives.
  • the Vitex Negundo extract enriched in polyphenols comprises less than 0.5% by weight, preferably less than 0.2%, in particular less than 0.1%, more particularly less than 0.05%, in particular less than 0.01%, by weight of flavonoids, relative to the total weight of the dry extract.
  • the cosmetic or dermatological composition contains 0.001 to 10%, typically 0.01 to 5%, by weight of Vitex Negundo extract rich in polyphenols relative to the total weight of the composition.
  • the Vitex Negundo extract rich in polyphenols is preferably in liquid form.
  • composition and / or the active compounds according to the invention may further comprise at least one dermatologically acceptable excipient, or a cosmetically acceptable excipient.
  • an excipient suitable for external topical administration is used, in particular on the skin, superficial body growths and / or mucous membranes, in particular skin, dander and / or mucous membranes that are sensitive or attacked by the environment. for example by UV or pollution.
  • composition will advantageously be in the form of a preparation adapted for topical administration, in particular including creams, emulsions, milks, ointments, lotions, oils, aqueous or hydro-alcoholic or glycolic solutions, powders, patches, sprays, shampoos, varnishes or any other product for external application.
  • composition according to the present invention may further comprise at least one dermatological or cosmetic adjuvant known to those skilled in the art, chosen for example from thickeners, preservatives, perfumes, dyes, chemical or mineral filters, moisturizing agents. , thermal waters, etc.
  • dermatological or cosmetic adjuvant known to those skilled in the art, chosen for example from thickeners, preservatives, perfumes, dyes, chemical or mineral filters, moisturizing agents. , thermal waters, etc.
  • composition may further comprise at least one other active compound in addition to Vitex Negundo extract rich in polyphenols.
  • the invention also relates to a composition according to the invention for use in preventing and / or treating:
  • composition according to the invention is intended for the prevention and / or treatment of inflammatory reactions, oxidation reactions, disorders related to radical attacks related or not to pollution, barrier disorders or homeostasis of immature, normal, or mature / aged skin, integument (hair and nails) and / or mucous membranes (gingiva, periodontal, genital mucosa).
  • compositions of the invention are useful as an anti-aging care, especially against the chronological and actinic aging of the skin, mucous membranes or superficial body growths.
  • composition according to the invention can be used for the prevention and / or treatment of reactions, disorders or pathologies:
  • skin especially rosacea or erythrocouperosis, sensitive skin, reactive skin, dry skin (xerosis), dehydrated skin, skin with redness, erythema, aged or photoaged skin, photosensitized skin, pigmented skin (melasma, post-inflammatory pigmentation ...), loose skin;
  • - mucous membranes such as gums and periodontitis that may present with gingivitis (sensitive gums of newborns, hygiene problems, due to smoking or other), periodontal disease, or genital mucosa that may present irritations of the male or female genital spheres external or internal, and / or
  • the composition according to the invention is also particularly useful in the prevention and / or treatment of vascular disorders, in particular for the protection of the blood vessels and / or to act on the blood circulation, in particular the blood microcirculation.
  • the vascular disorder is typically selected from: rosacea, skin rashes, rosacea, pruritus, skin and / or reactive mucosa, with redness, particularly due to dilation of the subcutaneous capillaries.
  • the composition according to the invention is useful in the prevention and / or treatment of redness and rosacea, as well as in the prevention and / or treatment of cutaneous aging linked to intrinsic or extrinsic causes.
  • composition according to the invention is therefore advantageously used in the prevention and / or treatment of the (chronic) dilation of the subcutaneous capillaries which can occur in conditions such as rosacea, skin rashes, rosacea, pruritus, skin and / or reactive mucosa, with redness, especially due to dilation of the subcutaneous capillaries.
  • composition according to the invention is also advantageously used as a chronological or photoinduced anti-aging product, in particular in the prevention of aging, and photoinduced aging.
  • composition according to the invention is also advantageously used as a healing product, in the prevention and / or treatment of disorders related to cicatrization and cutaneous organization.
  • disorders related to cicatrization and cutaneous organization disorders resulting from healing processes and cutaneous organization of the skin such as loose skin, stretch marks, scabs, cracks, crevices in particular at the level of the breasts.
  • composition according to the invention is used (e) as a moisturizing product, involved in the prevention and / or treatment of disorders of the barrier or homeostasis of the skin, superficial body growths (hair and nails) and / or mucous membranes (gingiva, periodontitis, genital mucosa) immature, normal or mature / aged.
  • disturbances of the skin barrier superficial body growths and / or mucous membranes are meant disorders occurring at the level of the outer layer of the epidermis.
  • homeostasis disorders of the skin, superficial body growths and / or mucous membranes is understood to mean the disorders resulting from cell renewal and equilibrium processes such as psoriasis, dermatitis of the seat, atopic dermatitis, dry skin ( xerosis), dehydrated skin and photosensitized skin.
  • composition according to the invention is also advantageously used in the treatment and / or prevention of inflammations due to rays of all kinds, in particular sunburn.
  • composition according to the invention is also advantageously used as a depigmenting or brightening product, especially in the treatment of pigmented skin (melasma, post-inflammatory pigmentation, etc.), or for reducing age spots, for example.
  • the invention also relates to a method for the cosmetic care of the skin and / or integuments and / or mucous membranes, with a view to improving their state and / or their appearance, comprising or consisting of the administration, preferably topically, of a composition according to the present invention.
  • the invention relates to a method for the cosmetic care of the skin, with a view to preventing aging, comprising or consisting of applying to the skin a composition according to the present invention.
  • the composition of the invention is used as a chronological or photoinduced anti-aging product, or as a moisturizing product.
  • the composition of the invention is used as a depigmenting or lightening product, especially in the treatment of pigmented skin (melasma, post-inflammatory pigmentation ...), or to reduce old age tasks for example.
  • the modes of administration, the dosages and the optimal dosage forms of the compounds and compositions according to the invention can be determined according to the criteria generally taken into account in the establishment of a dermatological and / or cosmetic treatment adapted to a patient, such as for example the age or body weight of the patient, the severity of his general condition, the tolerance to treatment, the side effects noted, the type of skin.
  • a polyphenolic extract of Vitex negundo enriched in polyphenols, in particular in DCQ, is obtained according to the following process:
  • the extract is purified (removal of salts by nanofiltration) and concentrated by successive filtrations including nanofiltration and sterilizing filtration.
  • the Vitex negundo extract enriched in liquid polyphenols thus obtained has the following characteristics (% on dry extract, obtained by evaporation of the solvent in a ventilated oven at 105 ° C. until an extract with a constant weight):
  • non PAT extract An extract of dry roots and dry leaves from a plant of Vitex negundo grown in soil according to conventional techniques (called “non PAT extract”), but in the same environment (greenhouse), is obtained according to the following modalities:
  • the assay values obtained by HPLC are as follows (%, concentration of the molecules of interest / dry extract of the total extract obtained):
  • the PAT extract does not contain flavonoids. But specifically, it contains a much higher concentration of polyphenols, including hydroxycinnamic derivatives. II. Biological Activities
  • a Vitex Negundo liquid extract of the invention obtained according to the process of Example 1 (process comprising step d) of isomerization ) is used. This one is possibly tested for different dilutions.
  • the Vitex Negundo extracts of the invention are then characterized by their concentration relative to the concentration of the initial extract, the concentration being expressed in% of corresponding dry extract introduced.
  • Vitex negundo extract enriched in polyphenols were investigated by a gene expression modulation test on melanized reconstructed dermal and epidermal fibroblasts.
  • the expression of 95 genes of major interest in cutaneous and cosmetic physiology was studied by PC-array on melanized reconstructed fibroblasts and epidermis.
  • the extract of Vitex negundo enriched in polyphenols (0.01%, dry matter) was added to the culture medium of fibroblasts or melanized human epidermis reconstituted for 6h and 24h.
  • the expression of the selected markers was evaluated by quantitative RT-PCR (microfluidic map).
  • the expression variation of the markers studied with respect to the control was expressed in relative expression (RQ, RQ> 1: increase, RQ ⁇ 1: decrease).
  • Urokinase plasminogen activator type plays a role in the migration of keratinocytes during the process of re-epithelialization during cutaneous cicatrization;
  • DPT Dermatopontine
  • CYR61 Protein plays a role in the remodeling of the dermal matrix by reducing the production of dermal matrix component, activating metalloproteinases and activating the expression of pro-inflammatory cytokines.
  • Anti-microbial, anti-oxidant and anti-inflammatory defenses are important because of:
  • HMOX1 Heme oxygenase 1
  • Lactotransferrin exhibits anti-microbial activity by its ability to bind to iron, stimulates re-epithelialization, proliferation of keratinocytes and fibroblasts and activates the synthesis of extracellular matrix components;
  • Prostaglandin G / H synthase 2 (PTGS2): an enzyme that catalyzes the synthesis of prostaglandin, a marker involved in the activation of inflammation.
  • the dermal-epidermal junction The dermal-epidermal junction:
  • Collagen 7 alpha 1 (COL7A1): component of the dermal-epidermal junction, form of fibrils allowing the attachment of the basal lamina to the dermis.
  • LAMB3 Laminin subunit (“subunit”) beta-3 (LAMB3): constituent of the basal lamina which allows the attachment of the basal lamina to the epidermis.
  • Kallikrein 5 (KLK5): involved in the maturation of the stratum corneum.
  • Vitex negundo extract enriched in polyphenols In order to study the potential of Vitex negundo extract enriched in polyphenols on the dermal matrix and its aging, its effect on the level of gene expression of extracellular matrix markers (ECM) was evaluated. The study was performed on normal dermal fibroblasts. The effect of Vitex negundo extract enriched in polyphenols was also evaluated on fibroblasts as a function of age using cells from a 28-year-old donor, a 54-year-old donor, and fibroblasts. from the 28-year-old donor, made senescent in vitro by successive replications.
  • ECM extracellular matrix markers
  • Normal human fibroblasts were treated for 24 h and 48 h with Vitex negundo extract enriched in 0.005% and 0.01% polyphenols.
  • a control was performed by treating fibroblasts with monopropylene glycol (extraction solvent).
  • the gene expression of the selected markers was analyzed by quantitative T-PC in real time.
  • the level of gene expression was expressed as a relative amount (RQ) and the effect of treatment versus control cells as a percentage increase.
  • Vitex Negundo extract enriched in polyphenols significantly increased the gene expression of elastin, fibrillin, decorin and collagen VII. All these proteins are structural proteins of the dermal matrix. Elastin and fibrillin are markers involved in the elasticity of the dermis. Decorin controls the proper assembly of the collagen network. Collagen VII is a marker present in the dermal-epidermal junction and allows good anchoring of the matrix to the epidermis. By increasing these markers, the extract of Vitex Negundo enriched with polyphenols thus seems to contribute to the maintenance of a good structure of the dermis.
  • Vitex Negundo extract enriched with polyphenols significantly increased the gene expression of collagen III, decorin, dermatopontin, collagen IV and significantly decreased the MMP1 marker. All these proteins participate in the development of the dermal matrix.
  • decorin controls the proper assembly of the collagen network and collagen IV as collagen VII is a marker present in the dermal-epidermal junction which allows the proper anchoring of the matrix to the epidermis.
  • the MMPl as for it, is an enzyme that catalyzes the breakdown of collagens. By inhibiting MMP1 and increasing the other markers, the Vitex Negundo extract enriched in polyphenols thus seems to promote the synthesis and good structure of the dermal matrix.
  • the fibroblasts were aged in vitro by successive replications.
  • the senescence was verified by the evaluation of senescence markers (increase of the beta-galactosidase marker, increase of the p21 gene marker (+ 145%)).
  • the results presented below correspond to a treatment duration of 24 hours.
  • Extract of Vitex Negundo enriched with polyphenols increased the gene expression of decorin, collagen VII and sirtuin 1.
  • the first two markers are involved in the structure of the dermal matrix and its good attachment to the basal lamina.
  • Sirtuin 1 is a marker of longevity that delays cellular senescence. By increasing these markers, Vitex Negundo extract enriched in polyphenols thus seems to contribute to maintain a good structure of the dermal matrix and to slow cell senescence.
  • Vitex Negundo extract enriched in polyphenols on the dermal matrix has been demonstrated on "young", “aged” and “senescent” fibroblasts. Extract Vitex Negundo seems to contribute to the maintenance of a good structure of the dermal matrix and thus help protect the skin from skin aging.
  • the cells are then treated in the presence of 0.5 mM DCFH-DA.
  • Oxidation is induced by adding H 2 0 2 at ⁇ for 20min.
  • a second treatment with the tested products is carried out simultaneously with H 2 O 2 stress (at the same concentrations as the pre-treatment).
  • DFU fluorescence density
  • ROS reactive oxygen species
  • ROS reactive oxygen species
  • Vitamin C 500 ⁇ 11940 872 -91 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *
  • the extract of Vitex Negundo enriched in polyphenols has demonstrated a strong antioxidant effect against a stress induced by H 2 0 2 .
  • the inflammatory response is the normal, immediate and transient response of the body to any aggression of the environment. However, under certain pathological or physiological conditions, this inflammatory reaction can be exacerbated and, poorly controlled, can lead to tissue damage.
  • the keratinocyte is one of the first cells involved in the initiation of the inflammatory reaction in response to an attack on the environment.
  • ILla Primary cytokines
  • IL8 secondary cytokines
  • PGE Prostaglandins
  • Vitex Negundo extract enriched in polyphenols was evaluated on a model of inflammation induced on keratinocytes by treatment with PMA (Phorbol 12-Myristate 13-Acetate).
  • PMA Phorbol 12-Myristate 13-Acetate
  • the release of Interleukin-1 beta ( ⁇ ) and Prostaglandin E2 (PGE2) cytokines was analyzed.
  • Inflammation was then induced by adding PMA at 10 ⁇ g / mL overnight.
  • the number of biologically active cells was determined by a Neutral Red test.
  • the amount of cytokine assayed for each condition was normalized to the number of living cells determined by the neutral red test.
  • the Vitex Negundo extract enriched in polyphenols pretreated 24h at both concentrations, significantly decreased the release of ⁇ and therefore showed an anti-inflammatory action against the PMA.
  • Vitex Negundo extract enriched in polyphenols pretreated 24h at both concentrations, significantly decreased the release of PGE2 and therefore showed an anti-inflammatory action against the PMA.
  • Vitex Negundo extract enriched in polyphenols was demonstrated by its action on the release of interleukin-1 beta and prostaglandin E2 in inflammatory conditions. 11.4. Anti-aging effect on skin explant
  • Vitex Negundo extract liquid was used in a cream composition comprising 0.08% or 2% by weight of said extract relative to the total weight of the cream.
  • Quantitation of the fluorescence was performed using the Image J software. On average, ten images per explant were taken.
  • Elastin is a key component of the extracellular dermal matrix. This protein contributes to a large extent to the elasticity of the dermis. Collagen VII, for its part, is a marker of the dermal-epidermal junction. The latter serves to anchor the dermis to the epidermis and thus allows the maintenance of the general structure of the skin.
  • Klotho protein is a protein involved in the aging process and would be related to longevity. Its increase would go in favor of an induction of longevity and thus delay skin aging.
  • Vitex Negundo extract enriched with polyphenols has thus demonstrated an anti-aging effect on the explant model.
  • Normal human fibroblasts were treated for 48h with Vitex Negundo extract at 0.001% and 0.01% (w / v).
  • an extraction solvent control was performed by treating fibroblasts with monopropylene glycol (control cells). The study was performed on normal human fibroblasts. After 48 hours of treatment, the cells are trypsinized and frozen.
  • nuclear extracts are prepared and a protein assay is performed.
  • the extracts are then deposited on a chip functionalized with plasmids comprising series of specific DNA lesions:
  • the DNA repair enzymes contained in the extracts excise the lesions (or the DNA fragment surrounding the lesions) and incorporate a marker (dNTP-biotin) at the same time. DNA resynthesis.
  • the incorporated biotin is revealed by Streptavidin coupled to a fluorochrome, Cy-5.
  • the fluorescent signal is quantified using a scanner. It is proportional to the Excision / Resynthesis capacities of each extract vis-à-vis each of the lesions. This test is used to characterize Basic Excision Repair (BER), Nucleotide Excision Repair (NER), and Inter-Strand Adduct Repair (ICLR) systems.
  • Vitex Negundo extract enriched with polyphenols promotes DNA repair pathways of 8-oxo-2'-deoxyguanosine (p8oxoG), abasic sites (pAbas), benzo [a] pyrene adducts (pBPDE) and alkylated bases (pEtheno). It seems to help reduce the premature aging of the skin caused by unrepaired DNA damage.
  • the epidermis consists of numerous free nerve endings from sensory neurons from the spinal ganglia along the spinal cord. These neurons have axons that transmit information such as touch, heat, pain for example.
  • the density of innervation varies during aging. Thus, the innervation of a given area is less important in an elderly person than in a young adult. This phenomenon leads to a decrease in the individual's ability to apprehend his environment.
  • One of the properties of sensory neurons is their ability to re-innervate areas of the skin that have partially lost this density of free endings. Keratinocytes release growth factors allowing neurons to emit free endings to the outermost layers of the epidermis. The aim of this study was to evaluate the potential of the Vitex Negundo extract on the tropism of sensory neurons and on their ability to emit prolongations in the presence of aged keratinocytes.
  • Sensory neurons are derived from hiPS cells obtained from human fibroblasts.
  • the hiPS were seeded in co-culture with keratinocytes from a 33-year-old donor and a 59-year-old donor.
  • Co-cultures were treated with Vitex Negundo extract at different concentrations (0.003% / 0.001% / 0.0005% / 0.0001% / 0.00005% / 0.00001%, (w / v)) by 0.1% monopropylene glycol (extraction solvent control) and 50ng / mL Nerve Growth Factor (NGF) as a positive reference for dendrite elongation.
  • NGF Nerve Growth Factor
  • the cells were fixed with a 2% paraformaldehyde solution and then labeled with an anti-tubulin antibody.
  • the labeling was observed using a fluorescence microscope and 20 images were acquired by co-culture.
  • the length of sensory neuron prolongations was measured and normalized by the number of labeled cell bodies. All the statistics were made using the t-test and the ANOVA test (* p ⁇ 0.05; ** p ⁇ 0.01; *** p ⁇ 0.001).
  • NGF at 50 ng / mL significantly increased total neurite length as well as neurite length per cell. This result validates the model.
  • Vitex Negundo extract enriched in polyphenols significantly induced the increase in the total length of the neurites as well as the length of the neurites per cell in co-cultures of human sensory neurons / aged keratinocytes.
  • the extract of Vitex Negundo enriched in polyphenols thus seems to help prevent the decline of the network of sensory neurons in the skin observed during skin aging and thus seems to protect the skin from a loss of sensation appearing with age.
  • compositions of the invention comprising an extract of Vitex Negundo was evaluated against placebo during a clinical test.
  • the placebo is a cream containing no cosmetic active ingredients (only cosmetic excipients), and the composition according to the invention is a cream of the same composition as the placebo, further comprising 1% by weight of extract. of Vitex Negundo of the invention.
  • the test is performed on a panel of 2 groups of 25 subjects: Caucasian women of phototypes I to I, healthy, aged between 40 and 60 years old. Inclusion was decided according to different clinical scales.
  • J0 is the starting point of the study (before the application of the cream comprising the composition of the invention or placebo).
  • Group I applied the composition of the invention to the face and hands, while Group I applied a placebo to the face and hands. Both groups I and I I respectively applied the composition of the invention or placebo 2 times daily for 56 days.
  • the effect of the composition of the invention was evaluated by colorimetric measurements on the forehead, the cheek and a spot on the hands. The measured parameters are the brightness L * (expressed in arbitrary unit u.a.) and the angle ITA.
  • the measurements were carried out with a spectro-colorimeter (Minolta) which has a 3 mm head.
  • the L * parameter of the L * a * b * space gives information on the brightness of the measured skin color.
  • L * corresponds to clarity or brightness
  • a * represents the hue and saturation of the color on a green-red axis
  • b * represents the hue and saturation of the color on a blue-yellow axis.
  • the angle ITA gives information on the complexion of the skin. A high angle translates to lighter skin.
  • Measuring area skin discoloration is measured on the cheek, forehead or hand on a previously defined area identified by a tracking mask.
  • the cream to be tested the cream comprising the composition of the invention or the placebo is applied to the whole hand or face as a usual cream.
  • the asset makes it possible to increase the brightness and to lighten the skin significantly more important compared to the placebo at the level of a spot: AL * (composition): + 6%
  • the active allows to increase the brightness and lighten the skin significantly more important compared to the placebo at the forehead:
  • the asset makes it possible to increase the brightness and to lighten the skin significantly more important compared to the placebo at the level of the cheek:
  • compositions of the invention have a significant depigmenting and brightening effect compared to a placebo both at the level of a stain on the hand, on the forehead or on the cheeks.
  • Example 1 The PAT extract of Vitex negundo (VN) of Example 1 can be incorporated into various cosmetic products, such as cleaning waters, oil-in-water emulsions, water-in-oil emulsions, oils, milks, lotions. , shampoos, foaming products and sprays, the compositions of which are given below by way of examples.
  • various cosmetic products such as cleaning waters, oil-in-water emulsions, water-in-oil emulsions, oils, milks, lotions. , shampoos, foaming products and sprays, the compositions of which are given below by way of examples.
  • BIOTINE From 0 to 5% j
  • VITAMIN B9 0 to 5% j

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Abstract

L'invention se rapporte à une composition cosmétique ou dermatologique comprenant un extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols, typiquement un extrait racinaire obtenu selon un procédé Plante à Traire®. L'invention concerne également une telle composition pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des troubles ou pathologies de la peau, des muqueuses ou des phanères, pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des troubles vasculaires, ou encore pour son utilisation dans la prévention ou le traitement du vieillissement cutanée qu'il soit d'origine extrinsèque ou intrinsèque. L'invention concerne enfin un procédé de soin cosmétique de la peau, des phanères ou des muqueuses, en vue d'améliorer leur état ou leur aspect, consistant à administrer une telle composition ou un tel extrait.

Description

COMPOSITIONS COSMETIQUES, DERMATOLOGIQUES COMPRENANT UN EXTRAIT DE VITEX
NEGUNDO ENRICHI EN POLYPHENOLS
La présente invention a trait à une composition cosmétique ou dermatologique comprenant un extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols. La composition selon l'invention est utile avantageusement dans la prévention ou le traitement des troubles ou pathologies de la peau, des muqueuses ou des phanères, et dans la prévention ou le traitement des troubles vasculaires.
Vitex Negundo a pour nom commun Muguet bleu ou Troène de Chine, et est appelé nôti à la Réunion, Chinduravam Notchi en tamoul, ou Huang Ping en chinois par exemple. Vitex Negundo est un arbuste originaire d'Inde appartenant à la famille des Verbénacées ou Lamiacées, pouvant atteindre un à deux mètres de haut, présentant de petites fleurs bleues à violettes de trois à cinq millimètres. Les feuilles, qui sont les plus utilisées en médecine traditionnelle, se décomposent en trois ou cinq folioles de forme lancéolée. Cette plante est largement distribuée à travers le monde et on la retrouve en Afghanistan, Pakistan, Sri Lanka, Afrique de l'Est, Madagascar et est cultivée largement en Asie, Europe, Amérique du Nord. La phytochimie de Vitex Negundo a été décrite par Vishal R. Tandon (Natural Product Radiance 2005, 4(3), 162-165) et Vishwanathan et al (EJBS 2010, 3(1), 30-42), et est résumée dans le tableau ci-dessous.
Partie de la plante Constituants Phytochimiques
Feuilles Hydroxy-3,6,7,3',4'-pentamethoxyflavone, 6'-p-hydroxybenzoyl mussaenosidic acid ; 2'-p-hydroxybenzoyl mussaenosidic acid ; Flavonoides (lutéoline, vitexine) ; vividiflorol, b-caryophyllène, caryophyllène oxyde, sabinène, 4-terpineol, acide betulinique, acide ursolique, acide procatéchique, vitamine C, nishindine, p- hydroxybenzoique acide, béta-sitostérol
Graines Vitedoine-A, vitedoine B, hydroxybenzoique acide, béta- sitostérol, n-nonacosane
Racines Vitexine, iso-vitexine, negundines A et B, sitostérol
Huile essentielle de Delta-guaiene, guaiai-3, 7-dienecaryophyllène epoxide, ethyl- feuilles fraîches, fleurs et hexadecenoate, alpha-selinene, germacrène-4-ol, caryophyllène fruits secs epoxyde, nerilidol, bétasélinène, alpha-cédrène, germacrène D, hexadecanoic acide, p-cymène, valencène
Des extraits de diverses parties de la plante de Vitex negundo cultivée ou obtenue dans son milieu naturel présentent de multiples propriétés pharmacologiques. Ont été notamment recensés :
- des propriétés antalgiques et analgésiques, notamment de l'extrait de feuilles et de racines administré dans le péritoine ;
- des propriétés anti-inflammatoires, et notamment anti-arthritiques et anti- arthrosiques, des feuilles, racines et graines ;
- des effets anti-fongiques d'un extrait éthanolique de feuilles constitué de flavonoïdes (Sathiamoorthy et al, Bioorg Med. Chem. Lett 2007, 17(1), 239-242) ;
- des effets anti-bactériens sur certaines souches bactériennes, de l'huile essentielle et d'extraits éthanoliques ou acétate d'éthyle.
En outre, le Vitex Negundo est utilisé à la Réunion dans le traitement des crises de chikungunya (S. SAVRIAMA - Ethnopharmacologia, n°52, 2014).
Traditionnellement, Vitex Negundo est souvent utilisé en décoction, de feuilles principalement, et plus rarement de racines.
Dans les rites ayurvédiques, la plante de Vitex Negundo est utilisée pour ses propriétés vermifuges et antihelminthiques.
Toutefois, toutes ces utilisations impliquent la destruction de tout ou partie de la plante. Or, de nouveaux règlements visent à contrôler l'accès à la biodiversité et le partage des bénéfices qui en sont issus. En particulier, le Protocole de Nagoya et la norme internationale (ISO 26000) fournissent des lignes directrices considérées comme la référence en matière de développement durable et de responsabilité sociale.
Par ailleurs, les extraits « traditionnels » de Vitex Negundo présentent une composition phytochimique, c'est-à-dire une concentration en principes actifs, et notamment en polyphénols, non optimale pour des applications cosmétiques ou dermatologiques. En particulier, des extraits de Vitex Negundo avec une forte teneur en flavonoïdes ont été décrits dans CN 104586700 (teneur en flavones supérieure ou égale à 82.5%), et par Huang et al (Journal of Pharmaceutical and Biomédical Analysis, 2015, 108, 11-20).
Il existe donc un besoin pour de nouvelles compositions cosmétiques et/ou dermatologiques comprenant un extrait de Vitex Negundo optimisé en termes cosmétiques et/ou dermatologiques, qui soit en outre respectueux des principes de développement durable en termes sociaux et environnementaux.
La Demanderesse a découvert que des extraits de Vitex Negundo enrichis en polyphénols, obtenus notamment par culture en aéroponie selon une variante de la technologie Plante à Traire® de la société Plant Advanced Technologies (technologie décrite notamment dans la demande internationale WO 01/33942), présentent une composition phytochimique ainsi que des propriétés cosmétiques et dermatologiques jamais décrites jusqu'à présent. En particulier, c'est la première fois que de tels extraits de Vitex negundo sont utilisés en tant que tels, pour leurs propriétés spécifiques.
Ils présentent en effet une teneur d'au moins 5% en poids de polyphénols, exprimé en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids total de l'extrait sec, plus élevée que des extraits de Vitex Negundo obtenus à partir de plantes cultivées en terre. Néanmoins, les extraits de l'invention présentent une teneur faible, voire nulle, en flavonoïdes.
Par ailleurs, il a été démontré que Vitex negundo, cultivée dans ces conditions particulières d'aéroponie, avec notamment une solution nutritive adaptée et un éliciteur adapté, ne produit pas les molécules habituellement décrites dans l'art antérieur pour cette plante, notamment les flavonoïdes extrêmement décrits que sont la vitexine et ses dérivés, contrairement aux pieds-mères cultivés dans des conditions habituelles en terre.
La Demanderesse a par ailleurs découvert que ces extraits de Vitex Negundo enrichis en polyphénols présentent des propriétés anti-inflammatoires, antioxydantes et anti-pollution. Or, les phénomènes inflammatoires, les attaques radicalaires, les phénomènes amplifiés par la pollution et les expositions UV sont à l'origine des phénomènes de vieillissement chronologiques et actiniques. Les extraits de Vitex Negundo enrichis en polyphénols et les compositions cosmétiques et dermatologiques les comprenant sont donc utiles par exemple en tant que soin anti-âge, notamment contre le vieillissement chronologique et actinique de la peau, des muqueuses ou des phanères.
La présente invention a ainsi pour objet une composition cosmétique ou dermatologique comprenant un extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols en tant que principe actif, et le cas échéant un excipient approprié.
La présente invention a également pour objet une composition cosmétique ou dermatologique comprenant un extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols, pour utilisation dans la prévention ou le traitement des troubles ou pathologies de la peau, des muqueuses ou des phanères, et dans la prévention ou le traitement des troubles vasculaires. La présente invention a également pour objet un procédé de soin cosmétique de la peau, des phanères ou des muqueuses, en vue d'améliorer leur état ou leur aspect, comprenant ou consistant en l'administration d'une composition de l'invention.
Définitions
Par « extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols » ou « extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols », on entend au sens de la présente invention un extrait de Vitex Negundo comprenant au moins 5 % en poids, par exemple entre 5% et 10%, de polyphénols, exprimé en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids total de l'extrait sec. Ces pourcentages sont notamment obtenus par un dosage de Folin-Ciocalteu.
Dans un dosage de Folin-Ciocalteu, l'ensemble des composés phénoliques est oxydé par le réactif de Folin-Ciocalteu (disponible dans le commerce). Ce dernier comprend un mélange d'acide phosphotungstique (H3PW12O40) et d'acide phosphomolybdique (H3PM012O40) qui est réduit, lors de l'oxydation des substances phénoliques, en un mélange d'oxydes bleus de tungstène (W8023) et de molybdène (Mo8023). La coloration bleue produite possède une absorption maximale aux environs de 750-760 nm. Elle est proportionnelle à la quantité de composés phénoliques oxydés. Le phénol de référence utilisé dans cette méthode est l'acide gallique. Les résultats obtenus par ce dosage sont donc exprimés en « % en poids de polyphénols, exprimé en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids total de l'extrait sec ».
Néanmoins, l'« extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols » ou l'« extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols » présente une teneur faible, voire nulle, de flavonoïdes. Les flavonoïdes sont une sous-classe des polyphénols, présentant un squelette à 15 carbones éventuellement substitué, ledit squelette à 15 carbones comprenant un premier bicycle composé d'un noyau phényle fusionné à un hétérocycle (oxygéné) à 6 chaînons, substitué par un noyau phényle. La teneur en flavonoïdes est exprimée en % en poids par rapport au poids total de l'extrait sec, et est mesurée par des méthodes bien connues de l'homme du métier, telles que les méthodes chromatographiques décrites notamment par Mai (J. Sci. 2010 ; 37(3) : 489-497, voir plus précisément section 2.5 page 491) et par Singh et al (International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, vol 7, Issue 2, 2015, pp 144-147, voir plus précisément section « Total flavonoid content » page 145). De préférence, Γ« extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols » ou l'« extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols » est enrichi en dérivés d'acide dicaféoylquinique (DCQ), notamment les acides 3,5- Di-Caffoyl-Quinique (3,5-DCQ) et 4,5- Di-Caffoyl-Quinique (4,5- DCQ).
Par "acide dicaféoylquinique" (pouvant être abrégé en « DCQ » dans la présente description), on entend un diester composé d'une molécule d'acide quinique dont deux des quatre fonctions alcools ont été estérifiées par l'acide caféique. Les acides dicaféoylquiniques sont donc des acides de formule générale (I) :
dans laquelle deux quelconques des radicaux R2, R3, R4 et R5 représentent un groupement caféyl, les deux autres représentant un atome d'hydrogène.
Par « groupement caféyl », on entend un radical de formule générale (II), issu de l'acide caféique :
Les différents isomères de DCQ sont donc des acides de formule générale (I), avec R2, R3, R4 et R5 tels que définis dans le tableau ci-dessous.
Acides dicaféylquiniques (DCQ) 2 R3 4 R5
1,3-dicaféoylquinique (1,3-DCQ) Caféyl Caféyl H H
1,4-dicaféoylquinique (1,4-DCQ) Caféyl H Caféyl H
1,5-dicaféoylquinique (1,5-DCQ) Caféyl H H Caféyl
3,4-dicaféoylquinique (3,4-DCQ)
H Caféyl Caféyl H également appelé acide isochlorogénique B
3,5-dicaféoylquinique (3,5-DCQ) H Caféyl H Caféyl également appelé acide isochlorogénique A
4,5-dicaféoylquinique (4,5-DCQ)
H H Caféyl Caféyl également appelé acide isochlorogénique C
Dans la présente invention, on entend par « partie » d'une plante toute partie constitutive d'une plante telle que les racines, la tige, les feuilles, le fruit, la peau, les graines ou le noyau. Dans le cadre de l'invention, on entend par « culture des plantes en aéroponie », un mode de culture hors sol pour lequel les racines des plantes ne sont en contact ni avec un milieu solide, ni même avec un milieu liquide : elles sont alimentées par un brouillard nutritif obtenu par brumisation (via un brumisateur) de la solution nutritive dans un milieu fermé, tel que décrit par exemple dans la demande internationale WO 01/33942.
Par « exsudation racinaire », on entend la récupération des métabolites contenus dans les racines des plantes au moyen d'un liquide mis en contact par percolation, aspersion ou immersion avec les racines, encore accrochées à la plante vivante ou fraîchement coupées (depuis moins de 24 heures, et de préférence le plus tôt possible après coupage, idéalement juste après coupage). En particulier, l'exsudation racinaire peut être effectuée grâce à une étape de macération des racines des plantes, fraîchement coupées et/ou encore accrochées à la plante vivante, dans un solvant approprié et pendant une durée appropriée.
Dans la présente invention, on entend désigner par « cosmétiquement acceptable » ce qui est utile dans la préparation d'une composition cosmétique qui est généralement sûr, non toxique et ni biologiquement ni autrement non souhaitable et qui est acceptable pour une utilisation cosmétique, notamment humaine.
Dans la présente invention, on entend désigner par « dermatologiquement acceptable » ce qui est utile dans la préparation d'une composition dermatologique qui est généralement sûr, non toxique et ni biologiquement ni autrement non souhaitable et qui est acceptable pour une utilisation dermatologique, notamment humaine. Description détaillée
La présente invention concerne en premier lieu une composition cosmétique ou dermatologique comprenant un extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols en tant que principe actif, et le cas échéant un excipient approprié, notamment dermatologiquement ou cosmétiquement acceptable. L'extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols des compositions de l'invention se présente de préférence sous forme liquide. Toutefois, les teneurs des divers constituants (notamment les polyphénols, et plus particulièrement les DCQ) de l'extrait sont exprimées par rapport au poids de l'extrait « sec ». Cet extrait « sec » est typiquement obtenu par évaporation du solvant à l'étuve à 105°C, jusqu'à obtention d'un extrait à poids constant. L'extrait « sec » ainsi obtenu est donc essentiellement dépourvu de substances volatiles, notamment les solvants et en particulier l'eau.
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols est avantageusement obtenu par un procédé faisant intervenir la technologie Plante à Traire® de la société Plant Advanced Technologies (technologie décrite notamment dans la demande internationale WO 01/33942) qui permet de réaliser des extractions successives à partir des racines de la plante (traite) sans la détruire. Dans ce cadre, les plantes sont cultivées en aéroponie et sont alimentées par pulvérisation racinaire d'une solution de sels essentiels, nutritifs (Azote - N, Phosphore - P, Potassium - K), précisément mise au point en termes de proportions et de concentration, afin d'obtenir un développement racinaire maximum, sans altérer la survie de la plante. La plante est ponctuellement stressée et/ou élicitée par des substances appropriées, permettant une meilleure production des molécules identifiées comme d'intérêt, ici les polyphénols, et notamment les DCQ, notamment le 4,5-DCQ.
Les extraits de Vitex Negundo riches en polyphénols des compositions de l'invention sont obtenus selon un procédé comprenant les étapes successives suivantes :
a) culture de Vitex negundo en aéroponie ;
b) de préférence, stimulation des racines des plantes ;
c) extraction par exsudation racinaire des plantes ;
d) isomérisation des acides dicaféoylquinique obtenus en acide 4,5-dicaféoylquinique, et
e) purification et concentration de l'extrait ainsi obtenu par filtrations successives, en particulier par nanofiltration et/ou filtration stérilisante.
L'homme du métier, à l'aide de ses connaissances générales, sait comment adapter les proportions et concentrations des différents sels minéraux pour optimiser le développement racinaire et la concentration des molécules d'intérêt. Les concentrations en sels minéraux des solutions nutritives sont avantageusement comprises dans une gamme d'électroconductivité allant de 0,2 à l,6mS. L'étape a) est avantageusement effectuée pendant une durée comprise entre 1 semaine et huit semaines.
L'étape b) de stimulation permet d'augmenter de manière significative la teneur des métabolites dans les racines et ainsi favoriser le flux comprenant les métabolites sortant des racines vers le solvant choisi pour la macération et ce, sans perte totale de la viabilité de la plante afin qu'elle puisse être réutilisée. En d'autres termes, l'étape de stimulation de la plante permet de favoriser la teneur et la sécrétion des molécules d'intérêt.
Avantageusement, l'étape b) de stimulation est réalisée par pulvérisation de la plante avec une solution d'éliciteurs choisie parmi les dérivés d'acide jasmonique, les générateurs d'éthylène, les chitines, les chitosanes et leurs mélanges. En outre, l'étape b) est avantageusement effectuée pendant une durée comprise entre 1 jour et deux semaines.
L'étape b) peut être effectuée de manière simultanée ou après l'étape a). Dans le cas où l'étape b) est effectuée de manière simultanée à l'étape a) (dans ce cas, de préférence à la fin de l'étape a), plus longue), la solution de stimulation peut être introduite dans la solution nutritive.
Les plantes ainsi cultivées sont ensuite soumises à une étape c) d'extraction par exsudation racinaire dans des conditions déterminées en termes de solvant d'extraction, pH et durée d'extraction, afin d'obtenir un extrait riche en molécules d'intérêts, c'est-à-dire en polyphénols, notamment en acides dicaféoylquiniques. Cette étape c) permet la récupération des métabolites (DCQ) libérés par les racines des plantes au moyen d'un liquide mis en contact par percolation ou immersion avec les racines.
Avantageusement, l'étape c) d'exsudation racinaire est effectuée par macération des racines pendant une durée comprise entre 30 minutes à 96 heures, notamment entre 12 heures et 72 heures, plus particulièrement entre 24 heures et 48 heures. La durée d'exsudation racinaire est choisie de manière à favoriser l'extraction d'une forte teneur en composés d'intérêt tout en altérant pas la survie de la plante et sans mener à l'épuisement des ressources. L'extraction est avantageusement réalisée à pH acide.
L'étape d) d'isomérisation est réalisée selon des techniques connues de l'homme du métier, notamment par réajustement successifs de pH de l'extrait (extraction à pH acide, réajustement à pH basique par une solution de base forte et réajustement final à pH acide par l'ajout d'un acide fort). L'étape d) permet d'obtenir un extrait de Vitex Negundo caractérisé en ce que la majorité des acides dicaféoylquiniques qu'il comprend sont sous la forme de l'isomère 4,5-0- dicaféylquinique. Enfin, l'extrait obtenu à la suite de l'étape d) est soumis à une dernière étape e) de purification et concentration par filtrations successives, en particulier par nanofiltration et/ou filtration stérilisante. Cette étape permet d'obtenir l'extrait final de Vitex Negundo riche en polyphénols, notamment en DCQ.
L'extrait ainsi obtenu pourra se présenter sous forme liquide ou solide. L'extrait sous forme solide est avantageusement obtenu par séchage de l'extrait liquide, selon les méthodes connues de l'Homme de l'art, telles l'atomisation ou la lyophilisation par exemple avec, ou sans support telle la maltodextrine.
L'extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols des compositions de l'invention comprennent avantageusement au moins 5%, par exemple entre 5% et 10%, en particulier au moins 6 %, plus particulièrement au moins 7 %, en poids de polyphénols, exprimé en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids total de l'extrait sec.
Autrement dit, l'extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols de la présente invention comprend avantageusement au moins 7% en poids de polyphénols, les pourcentages étant exprimés par rapport au poids total de l'extrait sec dudit extrait (avant ajout éventuel d'un support de séchage) ou 1.3 mg de polyphénols par mL d'extrait liquide et plus spécifiquement au moins 5% en poids de DCQ totaux soit 1.1 mg de DCQ par mL d'extrait liquide.
Parmi les polyphénols présents dans cet extrait, les DCQ sont particulièrement intéressants.
Ainsi, dans une variante avantageuse de l'invention, l'extrait selon l'invention peut se caractériser par sa teneur en DCQ, et plus particulièrement un mélange de ses différents isomères, comprenant majoritairement le 4, 5 -DCQ.
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols comprend ainsi avantageusement au moins 1,5 % en particulier au moins 2,5 %, plus particulièrement au moins 4 %, notamment au moins 5%, de préférence au moins 6 %, en poids des acides dicaféoylquiniques, par rapport au poids total de l'extrait sec. Lesdits acides dicaféoylquiniques sont notamment les isomères d'acide 3,4-dicaféoylquinique (3,4-DCQ), 3,5-dicaféoylquinique (3,5-DCQ) et 4,5-dicaféoylquinique (4,5-DCQ). De préférence, dans l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols, au moins 40 % en poids des acides dicaféoylquiniques sont sous la forme de l'isomère 4,5- dicaféoylquinique, par rapport au poids total d'acides dicaféoylquiniques.
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols obtenu par le procédé ci-dessus présente la particularité de contenir une très faible quantité de flavonoïdes, usuellement présents en grande quantité dans les extraits de Vitex Negundo de l'art antérieur. Notamment, la plante Vitex Negundo cultivée dans les conditions énoncées ci-dessus synthétise et sécrète une très faible quantité des flavonoïdes tels que la vitexine et ses dérivés.
Ainsi, l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols comprend moins de 0,5% en poids, de préférence moins de 0,2 % en particulier moins de 0,1 %, plus particulièrement moins de 0,05 %, notamment moins de 0,01 %, en poids de flavonoïdes, par rapport au poids total de l'extrait sec.
Selon une variante avantageuse de l'invention, la composition cosmétique ou dermatologique contient 0,001 à 10 %, typiquement 0,01 à 5 %, en poids d'extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols par rapport au poids total de la composition. Dans ces compositions, l'extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols est de préférence sous forme liquide.
En fonction du type d'administration souhaitée, la composition et/ou les composés actifs selon l'invention peuvent en outre comprendre au moins un excipient dermatologiquement acceptable, ou un excipient cosmétiquement acceptable. Selon la première variante, on utilise un excipient adapté pour une administration par voie topique externe, notamment sur la peau, les phanères et/ou les muqueuses, en particulier les peaux, les phanères et/ou les muqueuses sensibles ou agressées par l'environnement, par exemple par les UV ou la pollution.
La composition sera avantageusement sous la forme d'une préparation adaptée à une administration topique, incluant notamment les crèmes, les émulsions, les laits, les pommades, les lotions, les huiles, les solutions aqueuses ou hydro-alcooliques ou glycoliques, les poudres, les patchs, les sprays, les shampooings, les vernis ou tout autre produit pour application externe.
La composition selon la présente invention peut en outre comprendre au moins un adjuvant dermatologique ou cosmétique connu de l'homme du métier, choisi par exemple parmi les épaississants, les conservateurs, les parfums, les colorants, des filtres chimiques ou minéraux, les agents hydratants, les eaux thermales, etc.
La composition peut en outre comprendre au moins un autre composé actif en plus de l'extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols. L'invention a également trait à une composition selon l'invention pour utilisation pour prévenir et/ou traiter :
- des troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères,
- des troubles vasculaires, et/ou - les troubles liés à l'âge.
En particulier, la composition selon l'invention est destinée à la prévention et/ou au traitement des réactions inflammatoires, des réactions d'oxydation, des désordres liés à des attaques radicalaires liées ou non à la pollution, des troubles de la barrière ou de l'homéostasie de la peau, des phanères (cheveux et ongles) et/ou des muqueuses (gencives, parodontes, muqueuses génitales) immature(s), normale(s) ou mature(s)/âgée(s).
En particulier, les compositions de l'invention sont utiles en tant que soin anti-âge, notamment contre le vieillissement chronologique et actinique de la peau, des muqueuses ou des phanères.
Avantageusement, la composition selon l'invention peut être utilisé(e) pour la prévention et/ou le traitement des réactions, troubles ou pathologies :
- de la peau, notamment la rosacée ou érythrocouperose, la peau sensible, la peau réactive, la peau sèche (xérose), la peau déshydratée, la peau avec rougeur, l'érythème cutané, la peau âgée ou photoâgée, la peau photosensibilisée, la peau pigmentée (mélasma, pigmentation post-inflammatoire...), la peau relâchée ;
- des muqueuses, telles que les gencives et parodontes pouvant présenter des gingivites (gencives sensibles des nouveaux nés, problèmes d'hygiène, dus au tabagisme ou autres), des parodontopathies, ou des muqueuses génitales pouvant présenter des irritations des sphères génitales mâles ou femelles externes ou internes, et/ou
- troubles liés à des réactions inflammatoires et radicalaires provoqués par des expositions aux UV, et/ou à des polluants ou réactions intrinsèques et engendrant ainsi un vieillissement accéléré, des troubles de la barrière, vasculaires, des rougeurs ....
La composition selon l'invention est également particulièrement utile dans la prévention et/ou le traitement des troubles vasculaires, en particulier pour la protection des vaisseaux sanguins et/ou pour agir sur la circulation sanguine, notamment la microcirculation sanguine. Le trouble vasculaire est typiquement choisi parmi: la couperose, les érythèmes cutanés, la rosacée, le prurit, la peau et/ou les muqueuses réactives, avec des rougeurs, en particulier dues à une dilatation des capillaires sous-cutanés. Notamment, la composition selon l'invention est utile dans la prévention et/ou le traitement des rougeurs et des couperoses, ainsi que dans la prévention et/ou le traitement du vieillissement cutané lié à des causes intrinsèques ou extrinsèques.
La composition selon l'invention est donc avantageusement utilisée dans la prévention et/ou le traitement de la dilatation (chronique) des capillaires sous-cutanés qui peut se produire dans les conditions telles que la couperose, les érythèmes cutanés, la rosacée, le prurit, la peau et/ou les muqueuses réactives, avec des rougeurs, en particulier dues à une dilatation des capillaires sous-cutanés.
La composition selon l'invention est également avantageusement utilisée en tant que produit anti-âge chronologique ou photo-induit, en particulier dans la prévention du vieillissement, et du vieillissement photo-induit.
La composition selon l'invention est également avantageusement utilisée en tant que produit cicatrisant, dans la prévention et/ou le traitement des troubles liés à la cicatrisation et à l'organisation cutanée.
On entend par troubles liés à la cicatrisation et à l'organisation cutanée, les troubles résultant des processus de cicatrisation et d'organisation cutanée de la peau telles qu'une peau relâchée, des vergetures, des dartres, des gerçures, des crevasses en particulier au niveau des seins.
En particulier, la composition selon l'invention est utilisé(e) en tant que produit hydratant, intervenant dans la prévention et/ou le traitement des troubles de la barrière ou de l'homéostasie de la peau, des phanères (cheveux et ongles) et/ou des muqueuses (gencives, parodontes, muqueuses génitales) immature(s), normale(s) ou mature(s)/âgée(s).
On entend par troubles de la barrière de la peau, des phanères et/ou des muqueuses les troubles intervenant au niveau de la couche extérieure de l'épiderme.
On entend par troubles de l'homéostasie de la peau, des phanères et/ou des muqueuses les troubles résultant des processus de renouvellement et d'équilibre des cellules telles que le psoriasis, la dermite du siège, la dermatite atopique, la peau sèche (xérose), la peau déshydratée et la peau photosensibilisée.
La composition selon l'invention est également avantageusement utilisée dans le traitement et/ou la prévention des inflammations dues aux rayons de toutes sortes, en particulier des coups de soleil.
La composition selon l'invention est également avantageusement utilisée en tant que produit dépigmentant ou éclaircissant, notamment dans le traitement de la peau pigmentée (mélasma, pigmentation post-inflammatoire...), ou pour réduire les tâches de vieillesse par exemple.
L'invention concerne également un procédé de soin cosmétique de la peau et/ou des phanères et/ou des muqueuses, en vue d'améliorer leur état et/ou leur aspect, comprenant ou consistant en l'administration, de préférence par voie topique, d'une composition selon la présente invention.
En particulier, l'invention concerne un procédé de soin cosmétique de la peau, en vue d'en prévenir le vieillissement, comprenant ou consistant en l'application sur la peau d'une composition selon la présente invention.
Avantageusement, dans le procédé de soin cosmétique de l'invention, la composition de l'invention est utilisée en tant que produit anti-âge chronologique ou photo-induit, ou encore en tant que produit hydratant. En particulier, dans le procédé de soin cosmétique de l'invention, la composition de l'invention est utilisée en tant que produit dépigmentant ou éclaircissant, notamment dans le traitement de la peau pigmentée (mélasma, pigmentation post-inflammatoire...), ou pour réduire les tâches de vieillesse par exemple.
Les modes d'administration, les posologies et les formes galéniques optimales des composés et compositions selon l'invention peuvent être déterminés selon les critères généralement pris en compte dans l'établissement d'un traitement dermatologique et/ou cosmétique adapté à un patient, comme par exemple l'âge ou le poids corporel du patient, la gravité de son état général, la tolérance au traitement, les effets secondaires constatés, le type de peau.
Les exemples qui suivent sont donnés à titre purement illustratif, et ne sauraient en aucun cas limiter la portée de la présente invention.
EXEMPLES
I. Préparation d'un extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols de l'invention
Un extrait polyphénolique de Vitex negundo enrichi en polyphénols, notamment en DCQ, est obtenu selon le procédé suivant :
a) Culture de Vitex Negundo en aéroponie selon le procédé breveté PAT avec une solution nutritive définie (de composition N/P/K 15/10/30 à une électroconductivité comprise entre 0,2 et l,6mS) ;
b) Stimulation de la plante pendant une durée d'une semaine avec un éliciteur tel que décrit ci-dessus ;
c) Extraction des molécules d'intérêt par macération des racines de la plante dans un mélange Propylène glycol/eau 70/30, pendant une durée de deux fois 48 heures à température ambiante et à un pH de 1,6 ; à la fin de l'extraction, la concentration en propylène glycol est ré-ajustée à 60% ; d) La solution obtenue subit des étapes d'ajustements successifs du pH pour aboutir à un pH final de 3,5 ;
e) L'extrait est purifié (élimination des sels par nanofiltration) et concentré par filtrations successives dont nanofiltration et filtration stérilisante.
L'extrait de Vitex negundo enrichi en polyphénols liquide ainsi obtenu présente les caractéristiques suivantes (% sur Extrait Sec, obtenu par évaporation du solvant à l'étuve ventilée à 105°C jusqu'à obtention d'un extrait à poids constant):
• Extrait sec : 1.8% (m/m)
• Teneur en polyphénols totaux (équivalent acide gallique) : 9.5% / ES
· Teneur en dérivés Di-Cafféoyl Quinique totaux (HPLC) : 6.5% /ES
• Teneur en 4, 5- DCQ (HPLC) : 3.3% /ES
• Teneur en cendres : 14.5%.
Comparaison avec un extrait de Vitex negundo « classique »
Un extrait de racines sèches et de feuilles sèches issues d'un plant de Vitex negundo cultivé en terre selon les techniques classiques (appelé « extrait non PAT »), mais dans le même environnement (serre), est obtenu selon les modalités suivantes :
a) Les racines ou les feuilles sèches de Vitex negundo sont broyées
b) Les matières premières obtenues sont extraites séparément à température ambiante dans un mélange glycérol/eau 70/30 à pH 1.6,
c) L'extrait est purifié par filtrations.
Cet extrait est comparé à un extrait de Vitex negundo (appelé « extrait PAT ») obtenu selon le procédé ci-dessus comprenant les étapes a, b, c et e, mais ne comprenant pas l'étape (d) d'isomérisation.
Les valeurs de dosages obtenues par HPLC sont les suivantes (%, concentration des molécules d'intérêt /extrait sec de l'extrait total obtenu) :
On constate que l'extrait PAT ne contient pas de flavonoïdes. Mais de manière spécifique, il contient une concentration beaucoup plus importante de polyphénols, notamment de dérivés hydroxycinnamiques. II. Activités Biologiques
Dans les tests qui suivent (sauf concernant les tests sur Explant de peau au point 11.4), un extrait liquide de Vitex Negundo de l'invention, obtenu selon le procédé de l'Exemple 1 (procédé comprenant l'étape d) d'isomérisation) est utilisé. Celui-ci est éventuellement testé pour différentes dilutions. Les extraits de Vitex Negundo de l'invention sont alors caractérisés par leur concentration par rapport à la concentration de l'extrait initial, la concentration étant exprimée en % d'extrait sec correspondant introduit.
11.1. Screeninq préliminaire d'activité sur fibroblastes dermiques et épidermes reconstruits mélqnisés
Les activités biologiques potentielles de l'extrait de Vitex negundo enrichi en polyphénols ont été recherchées par un test de modulation d'expression de gènes sur fibroblastes dermiques et épidermes reconstruits mélanisés. Ainsi, l'expression de 95 gènes d'intérêts majeurs en physiologie cutanée et cosmétique a été étudiée par PC -array sur des fibroblastes et des épidermes reconstruits mélanisés.
q. Mqtériel et Méthodes :
L'extrait de Vitex negundo enrichi en polyphénols (0,01%, matière sèche) a été ajouté dans le milieu de culture des fibroblastes ou des épidermes humains mélanisés reconstitués pendant 6h et 24h.
L'expression des marqueurs sélectionnés a été évaluée par RT-PCR quantitative (carte microfluidique). La variation d'expression des marqueurs étudiés par rapport au témoin a été exprimée en expression relative (RQ, RQ>1 : augmentation, RQ<1 : diminution).
b. Résultqts
Les résultats les plus significatifs sont présentés dans le tableau ci-dessous et tendent à montrer que l'extrait de Vitex negundo enrichi en polyphénols, en faisant varier l'expression génique de certains marqueurs, semblent avoir un intérêt particulier dans les activités suivantes :
La cicatrisation et le renforcement de la matrice dermique :
71 Urokinase type activateur de plasminogène (« plasminogen activator ») (PLAU) : joue un rôle dans la migration des kératinocytes durant le processus de ré-épithélialisation lors de la cicatrisation cutanée ;
71 Dermatopontine (DPT) : constituant de la matrice dermique, joue un rôle dans l'adhésion des fibroblastes et active la fibrillogenèse des collagènes ; Protéine CYR61 : joue un rôle dans le remodelage de la matrice dermique en réduisant la production de composant de la matrice dermique, en activant les métalloprotéinases et en activant l'expression de cytokines pro-inflammatoires.
Les défenses anti-microbiennes, anti-oxydantes et anti-inflammatoires :
71 Hème oxygénase 1 (HMOX1) : impliquée dans la dégradation de Thème, rôle protecteur contre le stress oxydant ;
71 Lactotransferrine (LTF) : présente une activité anti-microbienne de par sa capacité à se lier au fer, stimule la ré-épithélialisation, la prolifération des kératinocytes et fibroblastes et active la synthèse de composants de la matrice extracellulaire ;
^1 Prostaglandine G/H synthase 2 (PTGS2) : enzyme qui catalyse la synthèse de la prostaglandine, marqueur impliqué dans l'activation de l'inflammation.
La jonction dermo-épidermique :
71 Collagène 7 alpha 1 (COL7A1) : composant de la jonction dermo-épidermique, forme des fibrilles permettant l'accrochage de la lame basale au derme.
71 Laminine sous-unité (« subunit ») beta-3 (LAMB3) : constituant de la lame basale qui permet l'accrochage de la lame basale à l'épiderme.
Le processus de desquamation :
71 Kallikréine 5 (KLK5) : impliquée dans la maturation de la couche cornée.
Variations de l'expression de gènes d'intérêt dans des fibroblastes et épidermes reconstruits.
Extrait de Vitex Negundo enrichi en
Fibroblastes dermiques Epidermes reconstruits polyphénols à 0,01%
Expression relative (RQ)
Urokinase type « plasminogen activator » 2.00
(PLAU) (Augmentation > +100%)
0,61
Protéine CYR61
(Diminution > +20%)
1.47
Dermatopontine
(Augmentation > +20%)
1.63
Hème Oxygénase (decycling) 1
(Augmentation > +20%)
1.68
Lactotransferrine
(Augmentation > +20%)
0.22
Prostaglandine G/H synthase 2
(Diminution > +50%)
1.40
Kallikréine 5
(Augmentation > +20%)
1.26
Collagène 7 alpha 1
(Augmentation > +20%) 1.74
Laminine sous-unité beta-3
(Augmentation > +20%)
11.2. Matrice dermique
a. Introduction
Afin d'étudier le potentiel de l'extrait de Vitex negundo enrichi en polyphénols sur la matrice dermique et son vieillissement, son effet sur le niveau d'expression génique de marqueurs de la matrice extracellulaire (MEC) a été évalué. L'étude a été réalisée sur des fibroblastes dermiques normaux. L' effet de l'extrait de Vitex negundo enrichi en polyphénols a aussi été évalué sur des fibroblastes en fonction de l'âge en utilisant des cellules issus d'un donneur de 28 ans, d'un donneur de 54 ans et sur des fibroblastes issus du donneur de 28 ans, rendus sénescents in vitro par réplications successives.
b. Matériels et méthodes
Des fibroblastes humains normaux ont été traités pendant 24h et 48h par l'extrait de Vitex negundo enrichi en polyphénols à 0,005% et 0,01%. En parallèle, un témoin (cellules contrôles) a été réalisé en traitant des fibroblastes par du monopropylène glycol (solvant d'extraction). L'expression génique des marqueurs sélectionnés a été analysée par T-PC quantitative en temps réel.
Les résultats ont été analysés statistiquement par un test de Student :
ns p>0,05 : non significatif, * 0,01< p<0,05 : significatif, ** 0,001< p<0,01 : très significatif, ***p<0,001 : hautement significatif.
Le niveau d'expression génique a été exprimé en quantité relative (QR) et l'effet du traitement par rapport aux cellules contrôles en pourcentage d'augmentation.
c. Résultats
cl. Fibroblastes « jeunes »
L'étude a été réalisée sur des fibroblastes dermiques normaux humains issus d'un donneur de 28 ans utilisés aux points 11.4 et 11.5. Les résultats présentés ci-dessous correspondent à une durée de traitement de 48h.
Expression génique de marqueurs de \q mqtrice dermique pqr des fibroblqstes « jeunes »
Résultqts exprimés en quqntité relqtive
Extrait de Vitex
Extrait de Vitex
Cellules contrôles Negundo à
Negundo à 0,005%
0,01%
Elastine 1,00 1,72 (+72% *) Fibrilline 1,00 1,57 (+57% *)
Décorine 1,00 1,55 (+55% *)
Collagène VII 1,00 1,51 (+51% *)
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a augmenté significativement l'expression génique de l'élastine, la fibrilline, la décorine et le collagène VII. Toutes ces protéines sont des protéines structurelles de la matrice dermique. L'élastine et la fibrilline sont des marqueurs impliqués dans l'élasticité du derme. La décorine contrôle le bon assemblage du réseau de collagène. Le collagène VII est un marqueur présent dans la jonction dermo-épidermique et permet le bon ancrage de la matrice à l'épiderme. En augmentant ces marqueurs, l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols semble ainsi contribuer au maintien d'une bonne structure du derme.
c.2. Fibroblastes « âgés »
L'étude a été réalisée sur des fibroblastes dermiques normaux humains issus d'un donneur de 54 ans utilisés aux points 11.4 et 11.5. Les résultats présentés ci-dessous correspondent à une durée de traitement de 24h.
Expression génique de marqueurs de la matrice dermique par des fibroblastes « âgés »
Résultats exprimés en quantité relative
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a augmenté significativement l'expression génique du collagène III, décorine, dermatopontine, collagène IV et a diminué significativement le marqueur MMPl. Toutes ces protéines participent à l'élaboration de la matrice dermique. Comme décrit ci-dessus, la décorine contrôle le bon assemblage du réseau de collagène et le collagène IV comme le collagène VII est un marqueur présent dans la jonction dermo-épidermique qui permet le bon ancrage de la matrice à l'épiderme. La MMPl, quant à elle, est une enzyme qui catalyse la dégradation des collagènes. En inhibant la MMP1 et en augmentant les autres marqueurs, l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols semble ainsi favoriser la synthèse et la bonne structure de la matrice dermique.
c.3. Fibroblastes « sénescents »
L'étude a été réalisée sur des fibroblastes dermiques normaux humains issus d'un donneur âgé de 28 ans. Les fibroblastes ont été vieillis in vitro par réplications successives. La sénescence a été vérifiée par l'évaluation de marqueurs de sénescence (augmentation du marqueur Beta- galactosidase, augmentation du marqueur génique p21 (+145%)). Les résultats présentés ci- dessous correspondent à une durée de traitement de 24h.
Expression génique de marqueurs de la matrice dermique par des fibroblastes « sénescents »
Résultats exprimés en quantité relative
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a augmenté l'expression génique de la décorine, du collagène VII et de la sirtuine 1. Les deux premiers marqueurs sont impliqués dans la structure de la matrice dermique et son bon accrochage à la lame basale. La sirtuine 1 est un marqueur de longévité qui retarde la sénescence cellulaire. En augmentant ces marqueurs, l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols semble ainsi contribuer à maintenir une bonne structure de la matrice dermique et à ralentir la sénescence cellulaire.
d. Conclusions
Un effet positif de l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols sur la matrice dermique a été mis en évidence sur des fibroblastes « jeunes », « âgés » et « sénescents ». L'extrait de Vitex Negundo semble ainsi contribuer au maintien d'une bonne structure de la matrice dermique et ainsi contribuer à protéger la peau du vieillissement cutané.
11.3. Action antioxydante et anti-inflammatoire
a. Evaluation de l'effet anti-oxydant de l'extrait de Vitex Negundo
L'évaluation de l'effet anti-oxydant de l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols se fait grâce à l'incorporation de DCFH-DA (2',7'-Dichlorofluorescin diacetate) dans des kératinocytes en culture. Cette molécule est un marqueur non fluorescent à l'état non oxydé. En condition oxydante (ici stress induit par le peroxyde d'hydrogène, H202), le DCFH-DA va être dégradé en DCF, molécule qui va émettre de la fluorescence. La fluorescence ainsi mesurée sera proportionnelle à la quantité d'espèces réactives de l'oxygène (E O) produites par la cellule en présence de H202 et/ou actif.
a.l. Matériels et méthode
Des kératinocytes humains normaux ont été pré-incubés pendant 24 heures en présence de l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols aux concentrations de 0,0005% ; 0,001% et 0,005% (p/v), et de monopropylène glycol à 0,016%, 0,03% et 0,16% (témoins correspondants aux concentrations en solvant contenues dans les concentrations en extrait de Vitex Negundo étudiées), de Quercétine à 10μΜ ou de Vitamine C à 500μΜ (ces deux dernières molécules servant de référence anti-oxydante).
Les cellules sont ensuite traitées lh en présence de DCFH-DA à 0,5mM.
L'oxydation est induite par ajout de H202 à ΙΟΟμΜ pendant 20min. Un deuxième traitement par les produits testés est effectué simultanément au stress H202 (aux mêmes concentrations que le pré-traitement).
Enfin, une mesure de la densité de fluorescence (DFU) correspondant à la quantité d'ERO est réalisée à l'aide d'un lecteur microplaque.
Parallèlement, le nombre de cellules biologiquement actives a été déterminé par un test au Rouge Neutre. La quantité d'ERO (espèces réactives de l'oxygène) mesurée pour chaque condition a été normalisée par rapport au nombre de cellules vivantes déterminé par le test au rouge neutre.
Le caractère significatif des résultats a été vérifié par une analyse de variance à un facteur suivie d'un test de Tuckey (logiciel GraphPad Prism version 5.02, GraphPad Software, San Diego California USA).
a.2. Résultats
Production d'espèces réactives de l'oxygène (ERO) dans des kératinocytes traités par le peroxyde d'hydrogène (H202)
*** p<0,001 ; ns = non significatif - ANOVA à un facteur suivie d'un test de Tukey
ERO (unité de fluorescence)
Moyenne Ecart-type Augmentation (%) Tukey
Cellules contrôles 18850 2978
H202 à ΙΟΟμΜ 139299 20667 639 * * * Quercétine à 10μιτιοΙ/Ι 24411 785 -82 * * *
Vitamine C 500μΜ 11940 872 -91 * * *
Vitex Negundo à 0,0005% 68328 8791 -51 * * *
Vitex Negundo à 0,001% 57668 6048 -59 * * *
Vitex Negundo à 0,005% 37036 2217 -73 * * *
MP glycol à 0,016% 142134 12100 2 ns
MP glycol à 0,03% 142005 15991 2 ns
MP glycol à 0,16% 149469 14798 7 ns
Une augmentation de la production des E O a été observée après traitement par ΓΗ202 validant ainsi le modèle. La Quercétine et la Vitamine C ont significativement diminué la production des ERO suite au traitement par H202. L'effet anti-oxydant de ces deux références a bien été validé sur le modèle.
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols aux trois concentrations a significativement diminué la production des ERO induits par un stress H202.
a.3. Conclusion
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a démontré un fort effet anti-oxydant face un stress induit par H202.
b. Evaluation de l'effet anti-inflammatoire de l'extrait de Vitex Negundo
La réponse inflammatoire est la réponse normale, immédiate et transitoire de l'organisme vis à vis de toute agression de l'environnement. Cependant, dans certaines conditions pathologiques ou physiologiques, cette réaction inflammatoire peut être exacerbée et, mal contrôlée, peut conduire à des dommages tissulaires. Au niveau de la peau, le kératinocyte est l'une des premières cellules participant à l'initiation de la réaction inflammatoire en réponse à une agression de l'environnement.
Le kératinocyte « agressé » va alors relarguer :
- des cytokines primaires (ILla, Ιίΐβ ou TNFa) ou secondaire (IL8) qui vont induire une cascade de réactions impliquant le système immunitaire.
- des prostaglandines (PGE), qui font partie de la famille des prostanoïds. La voie de synthèse des prostaglandines qui aboutit à la synthèse de la PGE2 et d'autres PGEs est induite par des stimuli inflammatoires.
L'activité anti-inflammatoire de l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a été évaluée sur un modèle d'inflammation induite sur kératinocytes par un traitement au PMA (Phorbol 12-Myristate 13-Acetate). Le relargage des cytokines lnterleukin-1 beta (Ιίΐβ) et Prostaglandine E2 (PGE2) a été analysé.
b.l. Matériels et méthode
Des kératinocytes humaines normaux ont été pré-traités pendant 24h par l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols aux concentrations de 0,0005% et 0,001%, de monopropylène glycol à 0,015% et 0,03% (témoin solvant), de dexaméthasone à Ο,ΙμΜ et d'indométacine à Ο,ΙμΜ (ces deux dernières références servant de référence anti-inflammatoire pour les cytokines et prostaglandines respectivement).
L'inflammation a ensuite été induite par ajout de PMA à 10μg/mL pendant une nuit.
Un dosage de Ιίΐβ et PGE2 a ensuite été réalisé dans les surnageants de culture cellulaire.
Parallèlement, le nombre de cellules biologiquement actives a été déterminé par un test au Rouge Neutre. La quantité de cytokine dosée pour chaque condition a été normalisée par rapport au nombre de cellules vivantes déterminé par le test au rouge neutre.
Le caractère significatif des résultats a été vérifié par une analyse de variance à un facteur suivie d'un test de Tuckey (logiciel GraphPad Prism version 5.02, GraphPad Software, San Diego California USA).
b.2. Résultats
Dosage de ILlfidans des kératinocytes traités par du PMA à ΙΟμς/πιΙ
* p<0,05; **p<0,01 ; ***p<0,001 et ns = non significatif - ANOVA à un facteur suivie d'un test de Tukey
Le PMA à 10μg/ml a significativement augmenté le relargage de Ιίΐβ dans les surnageants de kératinocytes donc le PMA a bien induit une inflammation. La Dexaméthasone à Ο,ΙμΜ, en prétraitement 24h, a diminué le relargage de PGE2. L'effet anti-inflammatoire de cette référence a donc bien été validé.
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols, en prétraitement 24h aux deux concentrations, a diminué significativement le relargage de Ιίΐβ et donc a montré une action anti-inflammatoire face au PMA.
Dosage de PGE2 dans des kératinocytes traités par du PMA à 10μς/ιηΙ
* p<0,05; **p<0,01 ; ***p<0,001 et ns = non significatif - ANOVA à un facteur suivie d'un test de Tukey
Le PMA à 10μg/ml a significativement augmenté le relargage de la PGE2 dans les surnageants de kératinocytes donc le PMA a bien induit une inflammation. L'Indométacyne et la Dexaméthasone à Ο,ΙμΜ, en prétraitement 24h, ont significativement diminué le relargage de PGE2. L'effet anti-inflammatoire de ces deux références a donc bien été validé.
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols, en prétraitement 24h aux deux concentrations, a diminué significativement le relargage de PGE2 et donc a montré une action anti-inflammatoire face au PMA.
b.3. Conclusion
L'effet anti-inflammatoire de l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a été mis en évidence grâce à son action sur le relargage de l'interleukin-1 beta et de la prostaglandine E2 en condition inflammatoire. 11.4. Effet anti-âge sur explant de peau
Lors du vieillissement cutané, une altération du derme est couramment décrite. Suite aux résultats de l'étude de l'expression génique de la matrice dermique dans des fibroblastes (augmentation de l'élastine, fibrilline, collagène VII et décorine en autres), le potentiel effet anti-âge de l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a été évalué sur un modèle d'expiant de peau.
a. Formulation de l'extrait de Vitex Negundo
Pour ce test, l'extrait de Vitex Negundo (liquide) a été utilisé dans une composition de crème comprenant 0.08% ou 2% en poids dudit extrait par rapport au poids total de la crème. b. Matériels et méthode
Des explants de peau issus d'un donneur âgé de 46 ans ont été traités en topique ou non (NT : explant contrôle) par les crèmes comprenant 0.8% et 2% d'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols . Une application par jour pendant 5 jours a été réalisée. Les explants ont ensuite été fixés et inclus en paraffine pour une analyse par immunofluorescence.
La quantification de la fluorescence a été réalisée à l'aide du logiciel Image J. En moyenne, dix images par explant ont été prises.
c. Résultats
Expression protéique de marqueurs de la matrice dermique et du marqueur Klotho dans des explants traités par Vitex Negundo (* p<0.05; ** p<0.01; *** p<0.001 ; ns = non significatif)
d. Conclusions
La formulation à 2% d'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a significativement augmenté l'expression de l'élastine, du collagène VII et de Klotho.
L'élastine est un composant primordial de la matrice extracellulaire dermique. Cette protéine contribue en grande partie à l'élasticité du derme. Le collagène VII, quant à lui, est un marqueur de la jonction dermo-épidermique. Cette dernière sert d'ancrage du derme à l'épiderme et permet ainsi le maintien de la structure générale de la peau. La protéine Klotho est une protéine impliquée dans le processus de vieillissement et serait en lien avec la longévité. Son augmentation irait en faveur d'une induction de la longévité et donc retarderait le vieillissement cutané.
En stimulant ces différents marqueurs, l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a donc démontré un effet anti-âge sur le modèle d'expiant.
11.5. Protection contre les dommages ADN
De nombreux facteurs intrinsèques et extrinsèques comme les espèces réactives de l'oxygène (E O) ou les ultraviolets (UV) induisent des dommages de l'ADN pouvant aboutir à des dégâts cellulaires importants, accélérant ainsi le vieillissement cutané. Il existe des mécanismes capables de réparer ces dommages induits sur l'ADN. Cependant, au cours du vieillissement, une diminution des mécanismes de réparation de l'ADN a été observée. La capacité de l'extrait de Vitex Negundo à induire l'activation de ces mécanismes a été étudiée sur des fibroblastes normaux humains.
a. Matériels et méthodes
Des fibroblastes humains normaux ont été traités pendant 48h par l'extrait de Vitex Negundo à 0,001% et 0,01% (p/v). En parallèle, un témoin solvant d'extraction a été réalisé en traitant des fibroblastes par du monopropylène glycol (cellules contrôles). L'étude a été réalisée sur des fibroblastes humains normaux. Après 48h de traitement, les cellules sont trypsinées et congelées.
A partir de ces culots cellulaires, des extraits nucléaires sont préparés et un dosage des protéines est effectué.
Les extraits sont ensuite déposés sur une puce fonctionnalisée par des plasmides comportant des séries de lésions de l'ADN spécifiques :
- 8oxoG (p8oxoG)
- bases alkylées (pEtheno)
- glycols (pGlycols)
- sites abasiques (pAbas)
- photoproduits (dimères de pyrimidine et photoproduits 6-4) (pCPD-64)
- adduits du Cisplatine (pCisP)
- adduits du benzo[a]pyrène (pBPDE)
Les enzymes de réparation de l'ADN, contenues dans les extraits, excisent les lésions (ou le fragment d'ADN entourant les lésions) et incorporent un marqueur (dNTP-biotine) lors de la resynthèse d'ADN. La biotine incorporée est révélée par de la Streptavidine couplée à un fluorochrome, le Cy-5. Le signal fluorescent est quantifié à l'aide d'un scanner. Il est proportionnel aux capacités d'Excision/Resynthèse de chaque extrait vis-à-vis de chacune des lésions. Ce test permet de caractériser les systèmes de Réparation par Excision de Bases (BER), de Réparation par Excision de Nucléotides (NER), et de réparation des adduits inter-brins (ICLR).
b. Résultats
Evaluation des voies de la réparation dans des fibroblastes traités par Vitex Negundo
c. Conclusion
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols favorise les voies de réparation de l'ADN de la 8-oxo-2'-désoxyguanosine (p8oxoG), des sites abasiques (pAbas), des adduits de benzo[a]pyrène (pBPDE) et des bases alkylées (pEtheno). Il semble ainsi contribuer à diminuer le vieillissement prématuré de la peau induit par les dommages ADN non réparés.
11.6. Activation de l'innervation dans des co-cultures kératinoytes âgés / neurones
L'épiderme est constitué de nombreuses terminaisons nerveuses libres provenant de neurones sensitifs issus des ganglions rachidiens situés le long de la moelle épinière. Ces neurones possèdent des axones qui transmettent des informations telles que le toucher, la chaleur, la douleur par exemple. La densité d'innervation varie au cours du vieillissement. Ainsi, l'innervation d'une zone donnée est moins importante chez une personne âgée que pour un jeune adulte. Ce phénomène entraine une diminution de la capacité de l'individu à appréhender son environnement. Une des propriétés des neurones sensitifs est leur capacité à pouvoir ré-innerver des zones de la peau qui auraient perdu partiellement cette densité de terminaisons libres. Les kératinocytes libèrent des facteurs de croissance permettant aux neurones d'émettre des terminaisons libres jusqu'aux couches les plus externes de l'épiderme. Le but de cette étude a été d'évaluer le potentiel de l'extrait de Vitex Negundo sur le tropisme des neurones sensitifs et sur leur capacité à émettre des prolongements en présence de kératinocytes âgés.
a. Matériels et méthodes
Les neurones sensitifs sont dérivés de cellules hiPS obtenues à partir de fibroblastes humains. Les hiPS ont été ensemencées en co-culture avec des kératinocytes issus d'un donneur de 33 ans et d'un donneur de 59 ans. Les co-cultures ont été traitées par l'extrait de Vitex Negundo à différentes concentrations (0,003% / 0,001% / 0,0005% / 0,0001% / 0,00005% / 0,00001%, (p/v)), par du monopropylène glycol à 0,1% (témoin solvant d'extraction) et du Nerve Growth Factor (NGF) à 50ng/mL servant de référence positive pour l'élongation des dendrites.
Après 6 jours de co-culture, les cellules ont été fixées par une solution de paraformaldéhyde à 2% puis marquées par un anticorps anti- -tubuline. Le marquage a été observé à l'aide d'un microscope à fluorescence et 20 images ont été acquises par co-culture. La longueur des prolongements des neurones sensitifs a été mesurée et normalisée par le nombre de corps cellulaires marqués. L'ensemble des statistiques ont été faites à l'aide du test t et du test ANOVA (* p<0.05; ** p<0.01; *** p<0.001).
h. Résultats
Evaluation de la longueur des neurites de neurones sensitifs dans des co-cultures de neurones/kératinocytes traitées par Vitex Negundo enrichi en polyphénols (* p<0.05; ** p<0.01; *** p<0.001 ; ns = non significatif), Comparaison du donneur de 33 ans versus donneur de 59 ans
significativement diminuées dans les co-cultures avec les kératinocytes âgés de 59 ans en comparaison aux kératinocytes âgés de 33 ans.
Evaluation de la longueur des dendrites dans des co-cultures neurones/kératinocytes âgés de 59 ans suite au traitement par l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols Longueur totale des neurites Longueur des neurites par cellule
(unité arbitraire) (unité arbitraire)
Cellules contrôles
6865 ± 633 143 ± 16
(59 ans)
NGF
10393 ± 1849 (* *) 212 ± 23 (*)
50ng/mL
Vitex Negundo
10152 ± 1351 (* *) 195 ± 21 (*)
0,0005%
Vitex Negundo
7434 ± 970 (ns) 178 ± 21 (ns)
0,001%
Vitex Negundo
10436 ± 2548 (* *) 224 ± 40 (** *)
0,003%
Le NGF à 50 ng/mL a augmenté significativement la longueur totale des neurites ainsi que la longueur des neurites par cellule. Ce résultat valide le modèle.
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a induit significativement l'augmentation de la longueur totale des neurites ainsi que la longueur des neurites par cellule dans des co- cultures de neurones sensitifs humains/kératinocytes âgés.
c. Conclusion
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols semble ainsi contribuer à empêcher le déclin du réseau de neurones sensitifs dans la peau observé au cours du vieillissement cutané et semble ainsi protéger la peau d'une perte de sensations apparaissant avec l'âge.
11.7. Effet dépigmentant
L'effet dépigmentant des compositions de l'invention comprenant un extrait de Vitex Negundo a été évaluée contre placébo lors d'un test clinique.
Dasn ces tests, le placébo est une crème ne comrpenant pas d'actifs cosmétiques (uniquement des excipients cosmétiques), et la composition selon l'invention est une crème de même composition que le placébo, comprenant en outre 1% en poids d'extrait de Vitex Negundo de l'invention.
DISODIUM EDTA 0, 100
100,000000
a. Protocole
Le test est réalisé sur un panel de 2 groupes de 25 sujets : des femmes Caucasiennes de phototypes I à I I I, saines, âgées de 40 à 60 ans. L'inclusion a été décidée suivant différentes échelles cliniques.
On note J0 le point de départ de l'étude (avant l'application de la crème comprenant la composition de l'invention ou le placébo).
Le groupe I a appliqué la composition de l'invention sur le visage et les mains, tandis que le groupe I I a appliqué sur le visage et les mains un placébo. Les deux groupes I et I I ont appliqué respectivement la composition de l'invention ou le placébo 2 fois par jour pendant 56 jours. L'effet de la composition de l'invention a été évalué par des mesures colorimétriques sur le front, la joue, ainsi qu'une tache au niveau des mains. Les paramètres mesurés sont la luminosité L* (exprimée en unité arbitraire u.a.) et l'angle ITA.
Les mesures ont été réalisées avec un spectro-colorimètre (Minolta) qui possède une tête de 3 mm.
Le paramètre L* de l'espace L*a* b* donne une information sur la luminosité de la couleur de la peau mesurée.
L* : correspond à la clarté ou à la luminosité ;
a* : représente la teinte et la saturation de la couleur sur un axe de couleur vert-rouge ;
b* : représente la teinte et la saturation de la couleur sur un axe de couleur bleu-jaune.
Plus la valeur de L* est élevée, plus la peau renvoie une couleur lumineuse et claire.
L'angle ITA donne une information sur la carnation de la peau. Un angle élevé traduit une peau plus claire.
• Zone de mesure : la coloration cutanée est mesurée au niveau de la joue, du front ou de la main sur une zone préalablement délimitée et repérée à l'aide d'un masque de repérage. · Application de la crème à tester : la crème comprenant la composition de l'invention ou le placébo est appliquée sur toute la main ou le visage comme une crème habituelle.
b. Résulats
Les résultats de mesure de L* et de l'angle ITA à J0 et J = 56 (AL et ΔΙΤΑ) sont comparés pour permettre de déterminer l'efficacité des compositions de l'invention pour chacune des zones testées.
Au niveau de la main : L'actif permet d'augmenter la luminosité et d'éclaircir la peau de manière significativement plus importante par rapport au placebo au niveau d'une tache : AL*(composition) : +6%
AL*(placébo) = +3%
La différence entre les deux mesures est significative en faveur de la composition de l'invention.
AITA(composition) : +48 %
AITA(placébo) = +23%
La différence entre les deux mesures est significative en faveur de la composition de l'invention.
Au niveau du front : L'actif permet d'augmenter la luminosité et d'éclaircir la peau de manière significativement plus importante par rapport au placebo au niveau du front :
AL*(composition) : +3%
AL*(placébo) = +0.7%
La différence entre les deux mesures est significative en faveur de la composition de l'invention.
AITA(composition) : +11 %
AITA(placébo) = +1.2%
La différence entre les deux mesures est significative en faveur de la composition de l'invention.
Au niveau de la joue : L'actif permet d'augmenter la luminosité et d'éclaircir la peau de manière significativement plus importante par rapport au placebo au niveau de la joue :
AL*(composition) : +3%
AL*(placébo) = +1.5%
La différence entre les deux mesures est significative en faveur de la composition de l'invention.
AITA(composition) : +15 %
AITA(placébo) = +7%
La différence entre les deux mesures est significative en faveur de la composition de l'invention.
c. Conclusion
Les compositions de l'invention ont un effet dépigmentant et éclaircissant significatif par rapport à un placébo aussi bien au niveau d'une tache sur la main, que sur le front ou sur les joues. III. Compositions cosmétiques et dermatologiques pour application par voie topique
Plusieurs compositions pour application par voie topique sont présentées ci-dessous. L'extrait PAT de Vitex negundo (VN) de l'exemple 1, peut être incorporé à divers produits cosmétiques, tels que des eaux nettoyantes, des émulsions huile dans eau, des émulsions eau dans huile, des huiles, des laits, des lotions, des shampooings, des produits moussants et sprays, dont les compositions sont présentées ci-dessous à titre d'exemples.
EMULSION ANTI-AGE
LOTION CAPILLAIRE FORTIFIANTE
Matière première / Nom commercial ou Nom INCI % j
EAU PURIFIEE QSP 100 %
METHYL PROPANEDIOL De 5 à 20% |
CONSERVATEUR De 0 à 2 % 1
AJUSTEUR pH De 0 à 1 % 1
PARFUM De 0 à 1 % 1
BIOTINE De 0 à 5 % j
VITAMINE B9 De 0 à 5 % j
Extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols selon la partie /[De 0,01 à 10 %
BETA-SITOSTEROL De 0 à 1 % 1
ETHYLHEXYL COCOATE De 0 à 5% 1
PEG-40 CASTOR OIL De 0 à 5% 1 STICK PHOTOPROTECTEUR - ANTI-AGE
Matière première / Nom commercial ou Nom INCI % 1
HUILE DE RICIN QSP 100% I
ALCOOL OLEIQUE De 10 à 20% 1
HUILE PALMISTE De 10 à 20% j
POLYGLYCERIN-3-BEEWAX De 10 à 20% |
CIRE DE CANDELILLA De 10 à 20% j
HECTORITE De 10 à 20% !
TITANIUM DIOXYDE De 0 à 5% j
Extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols selon la partie /|De 0,01 à 10 %
BEURRE DE KARITE De 0 à 5% 1
VITAMINE E De 0 à 1% J

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition cosmétique ou dermatologique comprenant :
- en tant que principe actif un extrait de Vitex Negundo, ledit extrait comprenant au moins 5% en poids de polyphénols, exprimé en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids total de l'extrait sec, et ledit extrait comprenant moins de 0,5 % en poids de flavonoïdes par rapport au poids total de l'extrait sec, et
- le cas échéant un excipient approprié, notamment dermatologiquement ou cosmétiquement acceptable.
2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'extrait de Vitex Negundo comprend au moins 1,5 % en poids des acides dicaféoylquiniques, par rapport au poids total de l'extrait sec.
3. Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que, dans l'extrait de Vitex Negundo, au moins 40 % en poids des acides dicaféoylquiniques sont sous la forme de l'isomère 4,5-dicaféoylquinique, par rapport au poids total d'acides dicaféoylquiniques.
4. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que l'extrait de Vitex Negundo comprend moins de 0,05 % en poids de flavonoïdes, par rapport au poids total de l'extrait sec.
5. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant 0,001 à 10% en poids, avantageusement 0,01 à 5% en poids, dudit extrait de Vitex Negundo, de préférence sous forme liquide, par rapport au poids total de la composition.
6. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme d'une préparation adaptée à une administration topique, incluant notamment les crèmes, les émulsions, les laits, les pommades, les lotions, les huiles, les solutions aqueuses ou hydro-alcooliques ou glycoliques, les poudres, les patchs, les sprays, les shampooings, les vernis ou tout autre produit pour application externe.
7. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour utilisation pour prévenir et/ou traiter :
- des troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères,
- les peaux sensibles, et/ou
- le vieillissement cutané d'origine intrinsèque ou extrinsèque.
8. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour utilisation dans la prévention et/ou le traitement des troubles vasculaires.
9. Composition pour utilisation selon la revendication 8, caractérisé en ce que le trouble vasculaire est choisi parmi: la couperose, les érythèmes cutanés, la rosacée, le prurit, la peau et/ou les muqueuses réactives, avec des rougeurs, en particulier dues à une dilatation des capillaires sous-cutanés.
10. Procédé de soin cosmétique de la peau et/ou des phanères et/ou des muqueuses, en vue d'améliorer leur état et/ou leur aspect, comprenant l'administration, de préférence topique, d'une composition cosmétique telle que définie selon l'une quelconque des revendications 1 à 6.
11. Procédé de soin cosmétique selon la revendication 10, caractérisé en ce que la composition est utilisée en tant que produit anti-âge chronologique ou photo-induit.
12. Procédé de soin cosmétique selon la revendication 10, caractérisé en ce que la composition est utilisée en tant que produit dépigmentant ou éclaircissant, notamment dans le traitement de la peau pigmentée ou pour réduire les tâches de vieillesse.
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