UA120696C2 - Спосіб одержання кон'югатів - Google Patents

Спосіб одержання кон'югатів Download PDF

Info

Publication number
UA120696C2
UA120696C2 UAA201310945A UAA201310945A UA120696C2 UA 120696 C2 UA120696 C2 UA 120696C2 UA A201310945 A UAA201310945 A UA A201310945A UA A201310945 A UAA201310945 A UA A201310945A UA 120696 C2 UA120696 C2 UA 120696C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
group
carbon atoms
optionally substituted
branched
linear
Prior art date
Application number
UAA201310945A
Other languages
English (en)
Inventor
Нейтан Фішкін
Нэйтан Фишкин
Майкл Міллер
Майкл Миллер
Вей Лі
Вэй Ли
Раджива Сінгх
Раджива Сингх
Original Assignee
Імуноген, Інк.
Имуноген, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=45755579&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA120696(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Імуноген, Інк., Имуноген, Инк. filed Critical Імуноген, Інк.
Publication of UA120696C2 publication Critical patent/UA120696C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A61K31/5517—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine condensed with five-membered rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. imidazobenzodiazepines, triazolam
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6867—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of a blood cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)

Abstract

Даний винахід спрямований на способи одержання кон'югату агента, який зв'язується із клітинами, і лікарської речовини (наприклад цитотоксичної сполуки). Зазначені способи включають використання сполуки, здатної взаємодіяти з імінами, з метою забезпечення ефективного кон'югування цитотоксичних сполук з агентами, які зв'язуються з клітинами.

Description

ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ
ІО1| Дана заявка, згідно з 35 О5С 5 119 (є), претендує на пріоритет дати подачі попередньої заявки США Мо 61/443062, поданої 15 лютого 2011 р., попередньої заявки США Мо 61/483499, поданої 6 травня 2011 р., і попередньої заявки США Мо 61/443092, поданої 15 лютого 2011 р., повний зміст яких, включаючи всі креслення, формули, описи та формули винаходу, включені сюди за допомогою посилання.
ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ
ІО2| Даний винахід описує використання реагентів, здатних взаємодіяти з імінами, для одержання кон'югатів агентів, які зв'язуються із клітинами, із ДНК-зв'язуючими цитотокКсичними лікарськими речовинами, які містять одну або більше імінових функціональних груп.
РІВЕНЬ ТЕХНІКИ ВИНАХОДУ
ІЇО3| У якості терапевтичних засобів проти раку все частіше тестуються моноклональні антитіла. Декілька моноклональних антитіл проти антигенів поверхні ракових кліток уже схвалено для лікування раку, наприклад, ритуксимаб - для неходжкінскої лімфоми, трастузумаб - для раку молочної залози, цетуксимаб - для раку голови та шиї і раку товстої кишки, цетуксимаб, панітимумаб і бевацизумаб - для раку товстої кишки, і алемтузумаб - для хронічного лімфолейкозу (Зіготе, 5. Е., заизміПе, Е. А., апа Мапп, 0., 2007, Те Опсоїодіві, 12, 1084-1095). Проте, цитотоксична активність "оголеного" антитіла може бути обмежена механізмами інгібування рецепторної функції, комплемент-залежною цитотоксичністю (СОС) та антитіло-залежною клітинноопосередкованою цитотоксичністю (АОС).
І04| Підхід до посилення цитотоксичної активності антитіл до ракових клітин-мішеней полягає у зв'язуванні антитіла із цитотоксичними ефекторами (А. 0. Кісагі, апа А. УМ. ТоїІспег, 2007, Маї. Сііп. Ргасі. Опсої. 4, 245-255; І атреп, 9У., 2010, Ого ої Ше Ешиге 35, 471-480).
Кон'югат антитіло/цитотоксична лікарська речовина (АЦК) специфічно зв'язується з раковими клітинами, потім відбувається інтерналізація і руйнування кон'югату, що приводить до внутрішньоклітинного вивільнення токсичної лікарської речовини і, зрештою, до загибелі ракових клітин. Цитотоксичні лікарські речовини, використовувані у з'єднанні з антитілами, включають антитубулінові лікарські речовини, наприклад, майтанзиноїди та ауристатини, ДНК- зв'язуючі лікарські речовини, наприклад, каліхеаміцин, який викликає сайт-специфічне
Зо розщеплювання дволанцюгової ДНК. Ще один клас ДНК-зв'язуючих цитотоксичних лікарських речовин включає імін-вмісні піролбензодіазепіни (РВО), наприклад, М-2-імідазолілалкіл- заміщений 1,2,5-бензотіадіазепін-1,І-диоксид, патент США /Моб156746), бензо-піридо- або - дипіридотіадіазепін (М/О 2004/069843), піролі/1,2-81(11,2,5|бензотіадіазепіни та похідні піролі1,2-
Б11,2,5|бензодіазепіну (М О2007/015280), похідні томайміцину (наприклад, піролі1,4|бензодіазепіни), наприклад, описані в М/О 00/12508, М/О2005/085260, УХО2007/085930,
ЕР 2019104 і патенті США Моб156746). Інші ДНК-з'єднуючі бензодіазепінові лікарські речовини описані в патентній публікації США Мо 2010/0203007А1. Зазначені бензодіазепінові лікарські речовини, які містять імінові зв'язки, зв'язуються з малою борозенкою ДНК і вносять перешкоди у функціонування ДНК, що призводить до загибелі клітин.
ІО5) Існує потреба в нових способах одержання кон'югатів агента, який зв'язує клітини, і цитотоксичних лікарських речовин, які несуть імінову групу.
СУТНІСТЬ ВИНАХОДУ
ІО6Ї Даний винахід описує використання реагентів, здатних взаємодіяти з імінами, для обробки імін-вмісної лікарської речовини, яка приводить до несподіваного поліпшення реакції її кон'югування з агентами, які зв'язуються із клітинами (СВА), наприклад, антитілами. Зазначені реагенти є такими, що не послаблюється властивість лікарських речовин знищувати клітини і повністю зберігається цілісність СВА (антитіла).
ІО7| В одному варіанті втілення даний винахід стосується способу одержання кон'югату, який включає агент, який зв'язується із клітинами (СВА), коньюгированний із цитотоксичною сполукою за допомогою зв'язуючої групи, причому зазначений спосіб включає взаємодію цитотоксичної сполуки з модифікованим СВА за рН приблизно від 4 до 9, причому: а) модифікований СВА включає залишок біфункціонального зшиваючого агента, пов'язаного з СВА, а зазначений залишок включає зв'язуючу групу і групу, здатну взаємодіяти з тіолом; і б) цитотоксична сполука включає тіолову групу і групу, представлену формулою:
Мн
Х-ї че м де:
У являє собою групу, яка відходить, і являє собою сульфіт (НБО»з, Н5бО» або сіль НбОз,
5Оз2 або Н5О», утворену катіоном), метабісульфіт (Н252О5 або сіль 52052, утворену катіоном), моно-, ди-, три- і тетратіофосфат (РОз5Нз, РОгб2Н», РОззНег, РБаН»г або сіль РОз5У, РОг52У,
РОБ»з3- або РБбаЗ, утворену катіоном), складний ефір тіофосфату (В'Є)2РБ(ОВІ), В/5-, ВІ5О,
ВІБО», ВО», тіосульфат (Н5гОз або сіль 52Оз7, утворену катіоном), дитіоніт (Нбг2Ох4 або сіль 82042, утворену катіоном), фосфородитіоат (Р(-5ХОВЮ(5ЗХОН) або його сіль, утворену катіоном), гідроксамову кислоту (ВС(-О)МОН або сіль, утворену катіоном), формальдегідсульфоксилат (НОСН»ВО: або сіль НОСНоБО:", утворену катіоном, наприклад,
НОСНоБбБО» Ма") або їх суміш, де В! являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, і заміщений щонайменше одним замінником, вибраним із -М(В/)2, -СО2Н, -БОзЗН і -РОЗзН; Ві, необов'язково, може бути додатково заміщений замінником для алкілу, описаним тут; Ві являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; Вк "'являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, гетероцикліл або гетероарил.
ІО8) У деяких варіантах втілення цитотоксичну сполуку одержують взаємодією імін-вмісної цитотоксичної сполуки, яка несе тіолову групу, з реагентом, здатним взаємодіяти з імінами.
І09| У ще одному варіанті втілення даний винахід стосується способу одержання кон'югату, який включає агент, який зв'язується із клітинами (СВА), кон'юЮгований із цитотоксичною сполукою за допомогою зв'язуючої групи, способу, який включає взаємодію СВА з імін-вмісною цитотоксичною сполукою, реагентом, здатним взаємодіяти з імінами, і біфункціональним зшиваючимагентом, який включає зв'язуючу групу, з утворенням кон'югату.
ПО) У ще одному варіанті втілення даний винахід стосується способу одержання кон'югату, який включає агент, який зв'язується із клітинами (СВА), кон'юЮгований із цитотоксичною сполукою за допомогою зв'язуючої групи, способу, який включає: а) взаємодію цитотоксичної сполуки із біфункціональним зшиваючим агентом, який включає зв'язуючу групу, групу, яка реагує з СВА (наприклад, тіолову групу, малеїімідну групу, галоацетамідну групу або аміногрупу), і групу, яка реагує із цитотоксичною сполукою, з утворенням модифікованої цитотоксичної сполуки, ковалентно зв'язаного із залишком біфункціонального зшиваючого агента, причому зазначений залишок включає зв'язуючу групу і групу, яка реагує з СВА;
Зо причому цитотоксична сполука представлена однієї з наступних формул або її фармацевтично прийнятною сіллю:
У ху т
Ве 2. МА А-0-і-0-А м- 2: В.
АХ, «І в
Ву Ву (г) Ваовз ге. у ху фе ще Ко 50 ді М-,
Ву | й 77 що з і , Вз
Ви му Кв Ре мя Ва ат) і де:
У являє собою групу, яка відходить, і являє собою сульфіт (НбО»з, НБбО:» або сіль Н5Оз, 5Оз2 або Н5О», утворену катіоном), метабісульфіт (Н2520О5 або сіль 52052, утворену катіоном), моно-, ди-, три- і тетратіофосфат (РОзЗНз, РО»баН»е, РОзЗзНе, РоаНео або сіль РОз5У, РОг527,
РОБ» або РБАЗ-, утворену катіоном), складний ефір тіофосфату (В'Ю2РБ(ОВІ), В/5-, ВІБО,
ВО», ВО», тіосульфат (Н5гОз або сіль 52032, утворену катіоном), дитіоніт (Н52Ох або сіль 82042, утворену катіоном), фосфородитіоат. (Р(І-ЗХОВЮ(ЗХОН) або його сіль, утворену катіоном), гідроксамову кислоту (ВКС(-О)МОН або сіль, утворену катіоном), формальдегідсульфоксилат (НОСН»ВО: або сіль НОСНоБО:, утворену катіоном, наприклад,
НОСНоБбБО» Ма") або їх суміш, де В! являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, і заміщений щонайменше одним замінником, вибраним із -М(В/)2, -СО2Н, -БОзЗН і -РОЗзН; Ві, необов'язково, може бути додатково заміщений замінником для алкілу, описаним тут; ВІ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; Вк "'являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, гетероцикліл або гетероарил;
Х "вибраний із -Н, амін-блокуючої групи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНгСНгО)-В-, необов'язково заміщеного арилу, який має від 6 до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, і необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до б гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, Мі Р;
М "вибраний із -Н, оксогрупи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 6-18--ленного арилу, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, необов'язково заміщеного 3-18-ч-ленного гетероциклічного кільця, який має від 71 до 6 гетероатомів;
В: являє собою -Н або заміщений або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; кожна із Ві, В», Вз, Ва, Ві, В», Вз ії Ви, незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -ОСНегСНг)-Не-, галогену, гуанідинію / (-МН(С-МН)ІМН»ІЇ, -ОВ, -МА'Я"З, -МО», -МСО, -МВ'ЄОВ", -58, сульфоксиду, представленого -«ЗХОВ, сульфону, представленого -5028", сульфонату -5Оз3 "Ме, сульфату -
Оо5Ох М", сульфонаміду, представленого -5О2МВ В", ціаногрупи, азидної групи, -«СОВ'", -ОСОВ,, -ОСОМВ'В";
В, в кожному випадку незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, амін-блокуючої групи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -("СНаСНгО)-Ве, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, або необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, Мі Р;
Ко) кожна із В і В", незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -ОВ, -МНА, -МАг, -СОВ, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНаСНгО)-Не ї необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, який має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із
О,5,МіР; п являє собою ціле число від 1 до 24;
М/ вибрана із С-О, С-5, СНе, ВН, 50 і 505;
Ве являє собою -Н, -В, -ОВ, -58, -МВ'В", -МО:» або галоген; 7 і 7, незалежно, вибрані із -«"СНег)п-, -«"СНг)и-СА7Ав-(СНег) па-, ««"СНг)и-МА»-(СНег) па-, -««(СНег)п-О- (СНг)па-- і ««СНг)-5-(СНег) па-; п'їпа 'є однаковими або різними і вибрані із 0, 1, 2 і З;
В; і Вг є однаковими або різними, і кожна із них, незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -5Н, -СООН, -МНВ", мономера поліетиленгліколю -"ОСНеСнНг)п-, амінокислоти, пептидної одиниці, яка несе від 2 до б амінокислот, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
В», незалежно, вибрана із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера полієтиленгліколю - (ОСНеСН 5) п-;
А і А" є однаковими або різними і незалежно вибрані із -О-, оксо (-С(-0)-), -СВВ'О-, -СВВ -, - 5-,-СВВА' 5-, -М(В5)- і-СВВ'М(В5)-,
БО В5, в кожному випадку незалежно, являє собою -Н або, необов'язково, заміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; рі р" є однаковими або різними і незалежно відсутні або вибрані із групи, яка складається із необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, амінокислоти, пептиду, який несе від 2 до 6 амінокислот, і мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСНг) п-;
Ї відсутня або, якщо присутня, включає тіолову групу, або являє собою мономер поліетиленгліколю (-ОСНеСНе»)-, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл або алкеніл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенільну групу, 3-18-ч-ленне гетероциклічне кільце або 5-18-
членне гетероарильне кільце, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, М і
Р, де алкіл, алкеніл, феніл або гетероциклічне або гетероарильне кільце є необов'язково заміщеним; і б) взаємодію модифікованої цитотоксичної сполуки з СВА за допомогою групи, яка реагує з
СВА, за рН від приблизно 4 до приблизно 9, з утворенням кон'югату. 1) У кожному з вищеописаних варіантів втілення імін-вмісна цитотоксична сполука може бути представлена будь-якою з наступних формул або її фармацевтично прийнятною сіллю:
НЯ ви ут А-0-І-0-А; м- 2: Ви «ДИ, «ЛА я з Ви () ВВ
Ре. кг ху Ка Ку Ко «у маляти з де 2» ве но К, ве и Я (п) де:
Х "вибрана із -Н, амін-блокуючої групи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНаСНегО)и-Не, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, і необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, Мі Р;
М "вибрана із -Н, оксогрупи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 6-18--ленного арилу, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів;
В: являє собою -Н або заміщений або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; кожна із Ві, В», Вз, Ва, Ві, В», Вз ії Ви, незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -ОСНегСНг)-Не-, галогену, гуанідинію / (-МН(С-МН)ІМН»ІЇ, -ОВ, -МА'Я"З, -МО», -МСО, -МВ'ЄОВ", -58, сульфоксиду, представленого -«ЗХОВ, сульфону, представленого -5028", сульфонату -5Оз3 "Ме, сульфату -
Оо5Ох М", сульфонаміду, представленого -5О2МВ В", ціаногрупи, азидної групи, -«СОВ'", -ОСОВ,, -ОСОМВ' В "їі зв'язуючої групи;
В, в кожному випадку незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, амін-блокуючої групи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -("СНаСНгО)-Ве, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, або необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних ізо, 5, Мі Р; кожна із В і В", незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -ОВ, -МНА, -МАг, -СОВ, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНаСНгО)-Н8е ї необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із
О,5,МіР; п являє собою ціле число від 1 до 24;
М/ вибрана із С-О, С-5, СНе, ВН, 50 і 505;
Ве являє собою -Н, -В, -ОВ, -58, -МВ'В", -МО:» або галоген;
7 і 7, незалежно, вибрані із -«"СНег)п-, -«"СНг)и-СА7Ав-(СНег) па-, ««"СНг)и-МА»-(СНег) па-, -««(СНег)п-О- (СНг)па- і -(СНг)н-5-(СН?г)па-; п'їпа 'є однаковими або різними і вибрані із 0, 1, 2 і З;
В; і Вг є однаковими або різними, і кожна із них, незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -5Н, -СООН, -МНВ", мономера поліетиленгліколю -"ОСНеСнНг)п-, амінокислоти, пептидної одиниці, яка несе від 2 до б амінокислот, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
В», незалежно, вибрана із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера полієтиленгліколю - (ОСНеСН г) п-;
А і А" є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із -О-, оксо (-С(-0)-), -СВВ'О-, -СВВ -, -5-, -СВВ'5-, -М(В5)- і-СВВ'М(В5)-,
В5, в кожному випадку незалежно, являє собою -Н або необов'язково заміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; рі р' є однаковими або різними і, незалежно, відсутні або вибрані із групи, яка складається із необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, амінокислоти, пептиду, який несе від 2 до 6 амінокислот, і мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСНг)п-;
Ї відсутня або, якщо присутня, включає тіолову групу і являє собою мономер поліетиленгліколю (-ОСНеСНе»)-, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл або алкеніл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенільну групу, 3-18-ч-ленне гетероциклічне кільце або 5-18- членне гетероарильне кільце, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, М і
Р, де алкіл, алкеніл, феніл або гетероциклічне або гетероарильне кільце є необов'язково заміщеним. 121) У ще одному варіанті втілення даний винахід стосується способу одержання кон'югату, який включає агент, який зв'язується із клітинами (СВА), кон'юЮгований із цитотоксичною сполукою за допомогою зв'язуючої групи, причому зазначений спосіб включає взаємодію модифікованої цитотоксичної сполуки з СВА за рН приблизно від 4 до 9, причому модифікована цитотоксична сполука включає:
Зо а) залишок біфункціонального зшиваючого агента, який зв'язаний із цитотоксичною сполукою і включає зв'язуючу групу і реакційноздатну групу, вибрану із реакційноздатного складного ефіру, і групи, яка реагує з тіолами, і б) групу, представлену:
Мн
Х- чок де:
У являє собою групу, яка відходить, і являє собою сульфіт (НбО»з, НБбО:» або сіль Н5Оз, 5Оз2 або Н5О», утворену катіоном), метабісульфіт (Н252О5 або сіль 52052, утворену катіоном), моно-, ди-, три- і тетратіофосфат (РОз5Нз, РОоб2Н»е, РОЗзНег, РОН» або сіль РОз5У, РО2527,
РОБ»з3- або РБбаЗ, утворену катіоном), складний ефір тіофосфату (В'Є)2РБ(ОВІ), В/5-, ВІ5О,
ВіБО», ВІБО», тіосульфат (НбгОз або сіль 52037, утворену катіоном), дитіоніт (НОгОх або сіль 52022, утворену катіоном), фосфородитіоат (Р(-5ХОВО(5ХОН) або його сіль, утворену катіоном), гідроксамову кислоту (ВС(-О)МОН або сіль, утворену катіоном), формальдегідсульфоксилат (НОСН»ВО: або сіль НОСНоБО:", утворену катіоном, наприклад,
НОСНоБбБО» Ма") або їх суміш, де В! являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, і заміщений щонайменше одним замінником, вибраним із -М(В/)2, -СО2Н, -БОзЗН і -РОзН; ВІ, необов'язково, може бути додатково заміщена замінником для алкілу, описаним тут; Ві являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; Вк "'являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, гетероцикліл або гетероарил. (13) У деяких варіантах втілення модифіковану цитотоксичну сполуку одержують шляхом взаємодії реагенту, здатного взаємодіяти з імінами, з імін-вмісною цитотоксичною сполукою, яка несе зв'язуючу групу і реакційноздатну групу.
П14| У кожному з вищеописаних варіантів втілення модифікована цитотоксична сполука представлена будь-якою з наступних формул:
Х хм ве ку МА А-0-І1-0-А м- 2 Ви коси,
В Ви (а) Ваовв, в. ку х т Іще Ко 50 ро
ВУ вано Вз ве му Кв ве м Ва (Па) або її фармацевтично прийнятною сіллю, де:
У являє собою сульфіт (НбОз, Н5ОО» або сіль НбОз, 5037 або Н5О», утворену катіоном), метабісульфіт (Нг520О5 або сіль 52057, утворену катіоном), моно-, ди-, три- і тетратіофосфат (РОзб5Нз, РОг52Н»е, РОН», РбаН» або сіль РОз5У, РО2527, РОБ» або РБАУ, утворену катіоном), складний ефір тіофосфату (В'О22РБ(ОВІ), ВІі5-, ВІБО, ВІБО», ВІ5О», тіосульфат (Н5гОз або сіль 52037, утворену катіоном), дитіоніт (НбгОх або сіль 52047, утворену катіоном), фосфородитіоат (РІ-ЗХОВО(5ХОН) або його сіль, утворену катіоном), гідроксамову кислоту (ВКС(-О)МОН або сіль, утворену катіоном), формальдегідсульфоксилат (НОСН»бО» або сіль НОСНоБбО», утворену катіоном, наприклад, НОСН2гбО» Ма") або їх суміш, де Ві являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, і заміщений щонайменше одним замінником, вибраним із -М(В/)2, -СО2Н, -503Н і -РОЗН; В, необов'язково, може бути додатково заміщений замінником для алкілу, описаним тут; ВІ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; Вк "'являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, гетероцикліл або гетероарил;
Х "вибрана із -Н, амін-блокуючої групи, зв'язуючої групи з приєднаною до неї реакційноздатною групою, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -СН»СНгО)н-Не, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, і необов'язково заміщеного 3-18- членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із 0,
З, Мі;
М "вибрана із -Н, оксогрупи, зв'язуючої групи з приєднаною до неї реакційноздатною групою, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 6-18-членного арилу, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше
Зо гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, необов'язково заміщеного 3-18- членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів;
В: являє собою -Н або заміщений або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю, або зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою; кожна із Ві, В», Вз, Ва, Ві, В», Вз ії Ви, незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -ОСНегСНг)-Н-, галогену, гуанідинію / (-МН(С-МН)ІМН»ІЇ, -ОВ, -МА'Я"З, -МО», -МСО, -МВ'ЄОВ", -58, сульфоксиду, представленого -«ЗХОВ, сульфону, представленого -5028", сульфонату -5Оз'М", сульфату -
О5О3 М», сульфонаміду, представленого -«5ХО2МВ В", ціаногрупи, азидної групи, -СОВ", -ОСОВ,, -ОСОМВ' В "їі зв'язуючої групи з приєднаною до неї реакційноздатною групою;
В, в кожному випадку незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, амін-блокуючої групи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -("СНаСНгО)-Ве, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, або необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, Мі Р; кожна із В і В", незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -ОВ, -МНА, -МАг, -СОВ, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНаСНгО)-Н8е ї необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із
О,5,МіР; п являє собою ціле число від 1 до 24;
М/ вибрана із С-О, С-5, СНе, ВН, 50 і 505;
Ве являє собою -Н, -В, -ОВ, -58, -МВ'В", -МО», галоген або зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою; 7 і 7, незалежно, вибрані із -«"СНег)п-, -«"СНг)и-СА7Ав-(СНег) па-, ««"СНг)и-МА»-(СНег) па-, -««(СНег)п-О- (СНег)па-- і -«"СНг)-5-(СНе) па-; п'їпа 'є однаковими або різними і вибрані із 0, 1, 2 і З;
В; і Вг є однаковими або різними, і кожна із них, незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -5Н, -СООН, -МНВ", мономера поліетиленгліколю -"ОСНеСнНг)п-, амінокислоти, пептидної одиниці, яка несе від 2 до б амінокислот, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
В», незалежно, вибрана із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера полієтиленгліколю - (ОСНеСН 5) п-;
А і А" є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із -О-, оксо (-С(-0)-), -СВВ'О-, -СВВ -, -5-, - СВ 5-, -МВ5 і -СВВ'М(В5)-;
В5, в кожному випадку незалежно, являє собою -Н або необов'язково заміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; рі р' є однаковими або різними і, незалежно, відсутні або вибрані із групи, яка складається із необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, амінокислоти, пептиду, який несе від 2 до 6 амінокислот, і мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСН») п;
Ї відсутня, являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою, мономер поліетиленгліколю (-ОСНеСНг)-, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл або алкеніл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенільну групу, 3-18-членне гетероциклічне кільце
Зо або 5-18-членне гетероарильне кільце, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із
О, 5, М і Р, де алкіл або алкеніл, необов'язково, заміщені зв'язуючою групою з приєднаною до неї реакційноздатною групою; феніл або гетероциклічне або гетероарильне кільце можуть бути, необов'язково, заміщені, причому замінник може являти собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою. (15) У кожному з вищеописаних варіантів втілення цитотоксична сполука і зв'язуюча група кон'югату представлені будь-якою з наступних формул:
У. но Ма оч ду А-0-1-0-А М- - Ві ох воза ву Ви (ТБ) Ві ВЗ
Ко. гу ху М о Ко
Й А-0-І-0-А. М і я дя (ШЬ) або її фармацевтично прийнятною сіллю, де:
У являє собою групу, яка відходить, і являє собою сульфіт (НбО»з, НБбО:» або сіль Н5Оз, 5Оз2 або Н5О», утворену катіоном), метабісульфіт (Н252О5 або сіль 52052, утворену катіоном), моно-, ди-, три- і тетратіофосфат (РОз5Нз, РОоб2Н»е, РОЗзНег, РОН» або сіль РОз5У, РО2527,
РОБ»з3- або РБбаЗ, утворену катіоном), складний ефір тіофосфату (В'Є)2РБ(ОВІ), В/5-, ВІ5О,
ВІБО», ВО», тіосульфат (Н5гОз або сіль 52Оз7, утворену катіоном), дитіоніт (Нбг2Ох4 або сіль 52042, утворену катіоном), фосфородитіоат (Р(-5ХОВО(5ХОН) або його сіль, утворену катіоном), гідроксамову кислоту (ВС(-О)МОН або сіль, утворену катіоном), формальдегідсульфоксилат (НОСН»ВО: або сіль НОСНоБО:", утворену катіоном, наприклад,
НОСНоБО» Ма") або їх суміш, де В! являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, і заміщений щонайменше одним замінником, вибраним із -М(В/)2, -СО2Н, -БОзЗН і РОЗН; Ві, необов'язково, може бути додатково заміщений замінником для алкілу, описаним тут; ВІ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; Вк "'являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, гетероцикліл або гетероарил;
Х "вибрана із -Н, амін-блокуючої групи, зв'язуючої групи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНгСНгО)-Не, необов'язково заміщеного арилу, який має від 6 до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, і необов'язково заміщеного 3-18-ч-ленного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, Мі Р;
М "вибрана із -Н, оксогрупи, зв'язуючої групи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 6-18--ленного арилу, необов'язково заміщеного 5-18- членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів;
Ве являє собою -Н або заміщений або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю, або зв'язуючу групу; кожна із Ві, В», Вз, Ва, Ві, В», Вз ії Ви, незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -ОСНегСНг)-Не-, галогену, гуанідинію |(-МН(С-МН)ІМН»Ї, -ОВ, -МВА'ЯВ", -МО», -МСО, -МВ'ЄОВ", -58, сульфоксиду, представленого -«ЗХОВ, сульфону, представленого -5028", сульфонату -5Оз3 "Ме, сульфату -
Оо5Ох М", сульфонаміду, представленого -5О2МВ В", ціаногрупи, азидної групи, -«СОВ'", -ОСОВ,, -ОСОМВ' В "їі зв'язуючої групи;
М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон, наприклад, Ма»;
Е, в кожному випадку незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, амін-блокуючої групи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНаСНгО)-Ве, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, або необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, Мі Р; кожна із Кі К", незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -ОВ, -МНЕА, -МЕА», -СОК, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНаСНгО)-Не ї необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із
О,5,МіР; п являє собою ціле число від 1 до 24;
М/ вибрана із С-О, С-5, СНе, ВН, 50 і 505;
Ве являє собою -Н, -В, -ОВ, -58, -МА В", -МО», галоген або зв'язуючу групу; 7 і 2, незалежно, вибрані із -««СНг)п-, -«СНг)и-СВ7Ав-(СНег) па, ««(СНг)а-МА»-(СНг)па-, -««СНг)т-О- (СНг)па-- і ««СНг)-5-(СНег) па-; п'їпа 'є однаковими або різними і вибрані із 0, 1, 2 і З;
В; і Вг є однаковими або різними, і кожна із них, незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -5Н, -СООН, -МНВ", мономера поліетиленгліколю -"ОСНеСнНг)п-, амінокислоти, пептидної одиниці, яка несе від 2 до б амінокислот, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
В», незалежно, вибрана із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера полієтиленгліколю - (ОСНеСН г) п-;
А і А" є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із -О-, оксо (-С(-0)-), -СВВ'О-, -СВВ -, -5-, -СВВ'5-, -М(В5)- і-СВВ'М(В5)-,
В5, в кожному випадку незалежно, являє собою -Н або необов'язково заміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; рі р' є однаковими або різними і, незалежно, відсутні або вибрані із групи, яка складається із необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, амінокислоти, пептиду, який несе від 2 до 6 амінокислот, і мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСН») п;
Ї відсутня, являє собою зв'язуючу групу, мономер поліетиленгліколю (-ОСНеСНг)п-, необов'язково заміщений лінійний, розгалужений або циклічний алкіл або алкеніл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенільну групу, 3-18-членне гетероциклічне кільце або 5-18-членне гетероарильне кільце, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із 0, 5, М і Р, де алкіл або алкеніл, необов'язково, заміщені зв'язуючою групою, феніл або гетероциклічне або гетероарильне кільце можуть бути, необов'язково, заміщені, причому замінник може включати зв'язуючу групу.
І16Ї Деякі кращі кон'югати, які можна одержати відповідно до кожного зі способів згідно з винаходом, включають: ян
С : ; я М СВА - тат нави х о
Є Ген я СК й В. Ш я се о ОМе в
Ії 5 о ща й
СВА-агент, що зв'язується З є клітннами Хх-Н або ЗСьЬ мя а па вовна ан свА 4 : У кою. оленя і ве ве
ІЇ о о р х ;
СВА -агент., шо зв'язується з Е клітннами Й о о М свя ж чат дуитих зтаєтитр Я і ет що - Ї маю. Йов. ДОМ ою. ло
Мк "Сме Маєх А де г
Ка н масив. М Ще ФІ я М-, фі в,
А Ме ма" КА фі ще " Е 4 с пиття нти ЄВА з Н
М лою. о. лу си МК Ме мес Ма (2 9 6 г де СВА є агентом, який зв'язується із клітинами, наприклад, антитілом, а г є цілим числом між 1-20, переважно - між 1-10 або 1-5.
Ї17| Як використовується тут, стосовно групи (наприклад, Ве, І, Х і т.д.), "являє собою/бути" (або "не являє собою") зв'язуючу групу або зв'язуючу групу із приєднаною до неї реакційноздатною групою означає, що група "включає" (або "не включає") зв'язуючу групу або зв'язуючу групу із приєднаною до неї реакційноздатною групою.
КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ
18) На Фіг. 1 показані мас-спектри деглікозильованих кон'югатів пимМу9-6-2, виготовлених без та з використанням бісульфіту, які включають 1,4 БАК (А) і 3,1 БАК (Б), відповідно. ОАЕ: співвідношення лікарська речовина - антитіло. 19) На Фіг. 2 показана аналогічна цитотоксичність іп міго кон'югатів пиМу9-б/лікарська речовина 2, отриманих без і з використанням бісульфіту натрію, проти клітин НІ 60, які експресують антиген СОЗ33. (20| На Фіг. З показана аналогічна цитотоксичність іп мійго кон'югатів антитіло проти сОр22/лікарська речовина 2, отриманих без і з використанням бісульфіту натрію, проти клітин
ВОАВ, які експресують антиген СО22. (211 На Фіг. 4 показаний обернено-фазовий ВЕРХ-аналіз лікарської речовини 2 і лікарської речовини 2, обробленої бісульфітом натрію. (221) На Фіг. 5 показаний МС-аналіз деглікозильованої пимМу9-6-5РОВ - лікарської речовини 1, отриманої з і без використання бісульфіту натрію, з використанням 7 молярних еквівалентів 1 на антитіло. А) Кон'югат одержували без використання бісульфіту натрію із середнім співвідношенням лікарська речовина 1/антитіло, яке дорівнює 1,4, і з різновидами антитіла з до трьох приєднаних молекул лікарської речовини 1 на антитіло. Б) Кон'югат одержували з використанням бісульфіту натрію із середнім співвідношенням лікарська речовина 1/антитіло, яке дорівнює 2,5, і різновидами антитіла із вмістом до семи приєднаних молекул лікарської речовини 1 на антитіло. (23) На Фіг. б показано, що додавання бісульфіту натрію до реакційної суміші під час кон'югування лікарської речовини 1 не призводить до фрагментації антитіла невидновним ДСН-
ПААГ, аналіз гелю на чіпі. (24) На Фіг. 7-11 показані типові способи згідно з даним винаходом для одержання кон'югату агент, який зв'язується із клітинами /лікарська речовина. (25) На Фіг. 12 показаний мас-спектрометричний (МС) аналіз деглікозильованого МУ9-6-
ЗРОВ-1, отриманого шляхом кон'югування сполуки 1, яка містить МНЗ-ефір (одноетапний реагентний спосіб), безпосередньо із залишками лізину антитіла, або кон'югування сполуки 14 з антитілом, модифікованим дитіопіридином (двоетапний спосіб). (26) На Фіг. 13 показані дані МС для МУ9-6-сульфо-5РОВ-1, отриманого при використанні двоетапного способу за різних рН. Підвищений час реакції, очевидно, корелює з підвищеною
СОЗ3З-антиген-незалежною цитотоксичністю іп мійго, виміряною на клітинах НІ 60-ОС, попередньо оброблених 1 мкМ некон'югованого пимМу9-6. Антиген-залежна цитотоксичність для всіх кон'югатів була так само висока (ІСво 4 пМ ). Короткий час реакції (1-3 ч) є кращим для мінімізації фрагментації антитіла і неспецифічного знищення клітин для МуЗ9-6-сульфо-5РОВ-1 іп міїго. (27| На Фіг. 14 показані дані МС для сиКТІ-сульфо-5РОВ-1, отриманого при використанні двоетапного способу з різними співвідношеннями сполука Та/лінкер. (28) На Фіг. 15 показане використання ковалентних імінових реагентів для поліпшення характеристик кон'югату антитіло/лікарська речовина (9о мономера і лікарського навантаження).
І29| На Фіг. 16 показана схема двоетапного синтезу типових кон'югатів антитіло/лікарська речовина.
ІЗОЇ На Фіг. 17 показана цитотоксичність і специфічність іп міго кон'югатів пимМуЗ-6-5Р 08-11 проти різних клітинних ліній. Слід зазначити, що до реакційного середовища для виготовлення
Зо кон'югату додавали бісульфіт натрію.
ІЗ1Ї На Фіг. 18 показано, що кон'югування димера не знижує спорідненості зв'язування антитіла. Слід зазначити, що до реакційного середовища для виготовлення кон'югату додавали бісульфіт натрію.
ІЗ2І На Фіг. 19 показана антипухлинна активність іп мімо кон'югату пиМу9-6. Слід зазначити, що до реакційного середовища для виготовлення кон'югату додавали бісульфіт натрію.
ІЗЗІ) На Фіг. 20 показана цитотоксичність іп міго кон'югату пимМуЗ-6-5РОВ-1Е проти антиген- позитивних клітин. Слід зазначити, що до реакційного середовища для виготовлення кон'югату додавали бісульфіт натрію.
ЇЗ4| На Фіг. 21 показана цитотоксичність іп мйго для ПиМу9-6-5РОВ-1ї (А), пимМмуЗз-6- сульфобРОВ-ТЇ (Б) ії пиМуЗ-6-ВМР5-1Ї (В) проти клітин НІ 60/00 (Ад') з і без блокування антиген-зв'язуючих сайтів. Слід зазначити, що у всіх трьох експериментах (34А, 34Б і 34В) до реакційного середовища для виготовлення кон'югату додавали бісульфіт натрію.
ЇЗ5)Ї На Фіг. 22 показана цитотоксичність іп мйго для сиВ38.1-5Р08-17 (А) ії сипВ38.1- сульфо5РОВ-ЇТІ (Б) проти клітин СОЇ 0205 (Ай). Слід зазначити, що в обох експериментах до реакційного середовища для виготовлення кон'югату додавали бісульфіт натрію.
ІЗЄЇ На Фіг. 23 показана ефективність іп мімо пиМмуЗ-6-5РОВ-1ї у мишей, які несуть НІ 60/0С.
Слід зазначити, що до реакційного середовища для кон'югування додавали бісульфіт натрію.
ІЗ7| На Фіг. 24 показана антипроліферативна активність шляхом порівняння (А) пимМу9-6-
ЗРОВ-Ї, (Б) пимМуЗз-6-сульфозРОВ-ТІ ї (В) пиМуЗ-6-ВМР5Б-ЇЇ проти клітин ОСІ-АМІ З (Ад"). зі без блокування антиген-зв'язуючих сайтів. Слід зазначити, що у всіх трьох експериментах до реакційного середовища для виготовлення кон'югату додавали бісульфіт натрію.
ІЗВІ На Фіг. 25 показана ефективність іп мімо пимМмуЗ-6-ВМР5-1ї у мишей, які несуть пухлину
МОЇ М-13. Слід зазначити, що до реакційного середовища для виготовлення кон'югату додавали бісульфіт натрію.
ІЗ9Ї На Фіг. 26 показана типова схема синтезу кон'югату сульфований фолат/цитотоксична сполука. Слід зазначити, що до реакційного середовища для виготовлення кон'югату додавали бісульфіт натрію.
І4ОЇ На Фіг. 27 показана ефективність іп мімо пимМу9-6-лікарська речовина 2 у мишей, які несуть пухлину МОЇ М-13. Слід зазначити, що до реакційного середовища для виготовлення бо кон'югату додавали бісульфіт натрію.
ІД1) На Фіг. 28 показане одержання пиМуЗ-6-сульфо-5РОВ-1а з використанням лінкера 4- нітроРу-сульфо-5РОВ , який володіє високою реакційною здатністю.
ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
(42| У даному розділі наведений докладний опис із посиланнями на конкретні варіанти втілення винаходу, приклади яких знайшли відображення в доданих структурах і формулах.
Хоча даний винахід описаний стосовно конкретних наведених варіантів втілення, слід розуміти, що даний винахід не обмежений зазначеними варіантами втілення. Навпаки, мається на увазі, що винахід охоплює всі альтернативи, модифікації та еквіваленти, які можуть бути включені в об'єм даного винаходу, як визначено формулою винаходу. Для фахівця в даній галузі техніки очевидні численні способи і матеріали, аналогічні або еквівалентні описаним тут, які можна використовувати для здійснення даного винаходу.
І43Ї Слід розуміти, що будь-який з описаних тут варіантів втілення, включаючи варіанти, описані в різних аспектах даного винаходу (наприклад, сполуки, молекули сполука-лінкер, кон'югати, композиції, способи їх одержання та застосування), і різні частини опису (включаючи варіанти втілення, описані тільки в Прикладах) можна поєднувати з одним або більше інших варіантів втілення винаходу, якщо вони не заперечуються або не є невідповідними явно.
Комбінація варіантів втілення винаходу не обмежується зазначеними специфічними комбінаціями, заявленими в декількох залежних пунктах формули винаходу.
Визначення
І44) "Лінійний або розгалужений алкіл", як використовується тут, стосується насиченого лінійного або розгалуженого одновалентного вуглеводневого радикалу із від одного до двадцяти атомів вуглецю. Приклади алкілів включають метил, етил, 1-пропіл, 2-пропіл, 1-бутил, 2-метил-1-пропіл, -«СНаСН(СНЗ)г), 2-бутил, 2-метил-2-пропіл, 1-пентил, 2-пентил, З-пентил, 2- метил-2-бутил, 3-метил-2-бутил, З-метил-1-бутил, 2-метил-1-бутил, 1-гексил, 2-гексил, 3-гексил, 2-метил-2-пентил, 3З-метил-2-пентил, 4-метил-2-пентил, 3З-метил-З-пентил, 2-метил-З-пентил, 2,3-диметил-2-бутил, 3,3-диметил-2-бутил, 1-гептил, 1-октил і т.п., але не обмежуються ними.
Переважно алкіл має від одного до десяти атомів вуглецю. Більш переважно алкіл має від одного до чотирьох атомів вуглецю.
І45| "Лінійний або розгалужений алкеніл" стосується лінійного або розгалуженого одновалентного вуглеводневого радикалу із від двох до двадцяти атомів вуглецю із щонайменше одним ненасиченим сайтом, тобто подвійним зв'язком вуглець-вуглець, причому алкеніл-радикал включає радикали з "цис-" і "трансо-" орієнтацією або, як альтернатива, в орієнтаціях "Е" ії "7". Приклади включають етиленіл або вініл (-СН-СН»), аліл (-СНЕСН-СН») і т.п., але не обмежуються ними. Переважно алкеніл має від двох до десяти атомів вуглецю.
Більш переважно алкеніл містить від двох до чотирьох атомів вуглецю.
І46Ї "Лінійний або розгалужений алкініл" стосується лінійного або розгалуженого одновалентного вуглеводневого радикалу із від двох до двадцяти атомів вуглецю із щонайменше одним ненасиченим сайтом, тобто потрійним зв'язком вуглець-вуглець. Приклади включають етиніл, пропініл, 1-бутиніл, 2-бутиніл, 1-пентиніл, 2-пентиніл, З-пентиніл, гексиніл. і т.п., але не обмежуються ними. Переважно алкініл має від двох до десяти атомів вуглецю.
Більш переважно алкініл має від двох до чотирьох атомів вуглецю.
І47| Терміни "карбоцикл", "карбоцикліл" і "карбоциклічне кільце" стосуються одновалентного неароматичного, насиченого або частково ненасиченого кільця, яке має від З до 12 атомів вуглецю - у випадку моноциклічного кільця, або від 7 до 12 атомів вуглецю - у випадку бициклічного кільця. Біциклічні карбоцикли, які мають від 7 до 12 атомів, можуть бути організовані, наприклад, у вигляді біцикло (4,51, (5,51, (5,6) або (6,6), а біциклічні карбоцикли, які мають 9 або 10 атомів у кільці, можуть бути організовані у вигляді системи біцикло (5,6) або
Іб6,бІ, або у вигляді місткових систем, наприклад, біцикло|2.2.1|гептану, біцикло|2.2.2|октану та біциклоЇ3.2.2|Інонану. Приклади моноциклічних карбоциклів включають циклопропіл, циклобутил, циклопентил, 1-циклопент-1і-еніл, 1-циклопент-2-еніл, 1-циклопент-3-еніл, циклогексил, 1-циклогексо-1-еніл, 1-циклогексо-2-еніл, 1-циклогексо-З-еніл, циклогексадієніл, циклогептил, циклооктил, циклононіл, циклодецил, циклоундецил, циклододецил і т.п., але не обмежуються ними. (48) Терміни "циклічний алкіл" і "циклоалкіл" можна використовувати на рівних підставах.
Вони стосуються одновалентного насиченого карбоциклічного кільцевого радикалу. Переважно циклічний алкіл є 3-7-ч-ленним моноциклічним кільцевим радикалом. Більш переважно циклічний алкіл є циклогексилом.
І49| Термін "циклічний алкеніл" стосується карбоциклічного кільцевого радикалу, який має щонайменше один подвійний зв'язок у складі кільцевої структури. бо БОЇ Термін "циклічний алкініл" стосується карбоциклічного кільцевого радикалу, який має щонайменше один потрійний зв'язок у складі кільцевої структури.
І51| "Арил" означає одновалентний ароматичний вуглеводневий радикал із 6-18 атомів вуглецю, отриманий видаленням одного атома водню від одного атома вуглецю вихідної ароматичної кільцевої системи. Деякі арильні групи представлені в типових структурах як "Аг".
Арил включає біциклічні радикали, які включають ароматичне кільце, конденсовані з насиченим, частково ненасиченим кільцем або ароматичним карбоциклічним або гетероциклічним кільцем.
Типові арильні групи включають радикали, які походять від бензолу (феніл), заміщені бензоли, нафталін, антрацен, інденіл, інданіл, 1,2-дигідронафталін, 1,2,3,4-тетрагідронафтил |і т.п., але не обмежуються ними. Переважно арил є фенільною групою. 52) Терміни "гетероцикл", "гетероцикліл" і "гетероциклічне кільце" використовуються тут на рівних підставах і стосуються насиченого або частково ненасиченого (тобто який має одну або більше подвійних і/або потрійних зв'язків у складі кільця) карбоциклічного радикалу із від З до 18 атомів у складі кільця, причому щонайменше один атом у складі кільця є гетероатомом, вибраним з азоту, кисню, фосфору та сірки, а інші атоми у складі кільця є атомами С, де один або більше атомів у складі кільця, необов'язково, незалежно, заміщені одним або більше замінниками, описаними нижче. Гетероцикл може бути моноциклічною структурою, яка має від З до 7 членів кільця (2-6 атомів вуглецю і 1-4 гетероатоми, вибраних з М, 0, Р і 5), або бициклічною структурою, яка має від 7 до 10 членів кільця (4-9 атомів вуглецю і 1-6 гетероатомів, вибраних з М, О, Р і 5), наприклад: системою біцикло І|4,51, (5,51, (5,6) або (6,61.
Гетероцикли описані в Радиейе, І о А.; "Ріїіпсіріеєє ої Модегп Неїегосусіїс Спетівіну "(М/. А.
Вепіатіп, Мем/ Моїк, 1968), зокрема, в розділах 1, 3, 4, 6, 7 і 9; "Тне Спетівігу ої Неїегосусіїс
Сотроипав, А зегпез ої Моподгари5 "(Чопп Умієу 5 боп5, Мем/ Моїк, с 1950 до нашого часу), зокрема, томах 13, 14, 16, 19 ї 28; і У. Ат. Спет. бос. (1960) 82:5566. "Гетероцикліл" також включає радикали, де гетероциклічні радикали конденсовані з насиченим, частково ненасиченим кільцем або ароматичним карбоциклічним або гетероциклічним кільцем. Приклади гетероциклічних кілець включають піролідиніл, тетрагідрофураніл, дигідрофураніл, тетрагідротієніл, тетрагідропіраніл, дигідропіраніл, тетрагідротіопіраніл, піперидино, морфоліно, тіоморфоліно, тіоксаніл, піперазиніл, гомопіперазиніл, азетидиніл, оксетаніл, тієтаніл, гомопіперидиніл, оксепаніл, тієпаніл, оксазепініл, діазепініл, тіазепініл, 2-піролініл, З-піролініл, індолініл, 2Н-піраніл, 4Н-піраніл, диоксаніл, 1,3-диоксоланіл, піразолініл, дитіаніл, дитіоланіл, дигідропіраніл, дигідротієніл, дигідрофураніл, піразолідиніл, імідазолініл, імідазолідиніл, 3- азабіциклоїЇ3.1.О|гексаніл, З-азабіциклоЇ4.1.0|гептаніл і азабіцикло|2.2.2|гексаніл, але не обмежуються ними. У рамки даного визначення також входять спірогрупи. Прикладами гетероциклічних груп, де кільцеві атоми заміщені оксогрупами (5-0), є піримідиноніл і 1,1- диоксотіоморфолініл.
ІЗЗ| Термін "гетероарил" стосується одновалентного ароматичного радикалу з 5- або 6- членних кілець і включає системи конденсованих кілець (щонайменше одне з яких є ароматичним) з 5-18 атомів, які містять один або більше гетероатомів, незалежно вибраних з азоту, кисню та сірки. Прикладами гетероарильних груп є піридиніл (включаючи, наприклад, 2- гідроксипіридиніл), імідазоліл, імідазопіридиніл, піримідиніл (включаючи, наприклад, 4- гідроксипіримідиніл), піразоліл, триазоліл, піразиніл, тетразоліл, фурил, тієніл, ізоксазоліл, тіазоліл, оксазоліл, ізотіазоліл, піроліл, хінолініл, ізохінолініл, індоліл, бензимідазоліл, бензофураніл, цинолініл, індазоліл, індолізиніл, фталазиніл, піридазиніл, триазиніл, ізоіндоліл, птеридиніл, пуриніл, оксадіазоліл, триазоліл, тіадіазоліл, фуразаніл, бензофуразаніл, бензотіофеніл, бензотіазоліл, бензоксазоліл, хіназолініл, хіноксалініл, нафтиридиніл і фуропіридиніл. 54) Гетероциклічна або гетероарильна групи можуть, за можливості, приєднуватися через атом вуглецю (вуглець-зв'язана група) або азоту (азот-зв'язана група). У якості необмежуючого прикладу, гетероцикли або гетероарили, приєднані через атом вуглецю, приєднані за положенням 2, 3, 4, 5 або 6 піридину, положенням 3, 4, 5 або 6 піридазину, положенням 2, 4, 5 або 6 піримідину, положенням 2, 3, 5 або 6 піразину, положенням 2, 3, 4 або 5 фурану, тетрагідрофурану, тіофурану, тіофену, піролу або тетрагідропіролу, положенням 2, 4 або 5 оксазолу, імідазолу або тіазолу, положенням 3, 4 або 5 ізоксазолу, піразолу або ізотіазолу, положенням 2 або З азиридину, положенням 2, З або 4 азетидину, положенням 2, 3, 4, 5,6, 7 або 8 хіноліну або положенням 1, 3, 4, 5, 6, 7 або 8 ізохіноліну.
ІБ5) У якості необмежуючого прикладу, гетероцикли або гетероарили, приєднані через атом азоту, приєднані за положенням 1 азиридину, азетидину, піролу, піролідину, 2-піроліну, 3- піроліну, імідазолу, імідазолідину, 2-імідазоліну, З-імідазоліну, піразолу, піразоліну, 2-піразоліну,
З-піразоліну, піперидину, піперазину, індолу, індоліну, 1 Н-індазолу, положенням 2 ізоіндолу або 60 ізоїндоліну, положенням 4 морфоліну і положенням 9 карбазолу або О-карболіну.
І56Ї Гетероатоми, присутні у складі гетероарилу або гетероциклілу, включають окиснені форми, наприклад, МО, 50 і 50».
ІБ7| Термін "гало" або "галоген" стосується Е, СІ, Вг або І.
І58| Алкіл, алкеніл, алкініл, циклічний алкіл, циклічний алкеніл, циклічний алкініл, карбоцикліл, арил, гетероцикліл і гетероарил, описані вище, можуть бути, необов'язково, заміщені одним або більше (наприклад, 2, 3, 4, 5, 6 або більше) замінників.
І59| Якщо замінник описаний як "заміщений", то замість атома водню біля атома вуглецю, кисню, сірки або азоту у складі замінника присутній замінник, який не є атомом водню. Так, наприклад, заміщений алкільний замінник є алкільним замінником, де щонайменше один замінник, який не є атомом водню, є присутнім замість атома водню у складі зазначеного алкільного замінника. З метою ілюстрації монофторалкіл є алкілом, заміщеним фтор- замінником, а дифторалкіл є алкілом, заміщеним двома фторами-замінниками. Слід розуміти, що якщо у складі замінника присутня більше однієї заміни, кожен замінник, який не є атомом водню, може бути однаковим або відмінним (якщо не зазначене інше).
ІБО)Ї Якщо замінник описаний як "необов'язково заміщений", зазначений замінник може бути або (1) незаміщений, або (2) заміщений. Якщо атом вуглецю замінника описаний як необов'язково заміщений одним або декількома замінниками зі списку, один або кілька атомів водню біля атома вуглецю (якщо такі є) окремо і/або спільно можуть бути заміщені незалежно вибраним необов'язковим замінником. Якщо атом азоту замінника описаний як необов'язково заміщений одним або декількома замінниками з переліку, кожен з одного або декількох атомів водню біля атома азоту (якщо такі є) може бути заміщений незалежно вибраним необов'язковим замінником. Один типовий замінник може бути зображений як -МК'К", де К. і ЕК", разом з атомом азоту, до якого вони приєднані, можуть утворювати гетероциклічне кільце. Гетероциклічне кільце, утворене Кі К" разом з атомом азоту, до якого вони приєднані, може бути частково або повністю насиченим. В одному варіанті втілення зазначене гетероциклічне кільце містить від З до 7 атомів. В іншому варіанті втілення гетероциклічне кільце вибране із групи, яка складається з піролілу, імідазолілу, піразолілу, триазолілу, тетразолілу, ізоксазолілу, піридилу та тіазолілу.
ІЄ1) У даному описі терміни "замінник", "радикал" і "група" використовуються взаємозамінно.
І62| Якщо група замінників спільно описана як необов'язково заміщена одним або більше
Зо замінників з переліку, вказана група може включати:(1) замінники, які не заміщуються,(2) замінники, які заміщуються, незаміщені необов'язковими замінниками, і/або(3) замінники, які заміщуються, заміщені одним або більше необов'язкових замінників. 63) Якщо замінник описаний як необов'язково заміщений певною кількістю замінників, які не є воднем, то замінники можуть бути або (1) незаміщеними; або (2) заміщеними зазначеною певною кількістю замінників, які не є атомами водню, або за максимальною кількістю положень, які заміщуються, у складі замінника, залежно від того, яке значення із зазначених є меншим.
Так, наприклад, якщо замінник описаний як гетероарил, необов'язково заміщений до З замінниками, які не є атомами водню, то будь-який гетероарил з менш ніж З положеннями, які заміщуються, може, необов'язково, бути заміщеним лише до такої кількості замінників, які не є атомами водню, скільки положень, які заміщуються, містить зазначений гетероарил. Такі замінники в необмежуючих прикладах можуть бути вибрані з лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арилу, гетероарилу, гетероциклілу, галогену, гуанідинію |-МН(С-МН)ІМН»гЇ|, -ОВо, МАТОВА ТОг, -МО», -
МАСОВІ, -5Во, сульфоксиду, представленого -508721, сульфону, представленого -
ОВ, сульфонату -5О3М, сульфату -«О5ОзМ, сульфонаміду, представленого -502МА 182, ціаногрупи, азидної групи, -СОВ', -ОСОВ, -ОСОМА В о2 і мономера поліетиленгліколю (-
ОСНеСН») ВО, де М являє собою Н або фармацевтично прийнятний катіон (наприклад, Ма" або
КУ); кожна із ВО, ІД'сг і Ід'єз, незалежно, вибрані із Н, лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю (-ОСНаСН»)п-В, де п являє собою ціле число від 1 до 24, арилу, який має від 6 до 10 атомів вуглецю, гетероциклічного кільця, яке має від З до 10 атомів вуглецю, і гетероарилу, який має від 5 до 10 атомів вуглецю; а В'с" являє собою Н або лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю, де алкіл, алкеніл, алкініл, арил, гетероарил і гетероцикліл в групах, представлених ВО, До, Ід'с2, ІД'оз | дО, необов'язково заміщені одним або більше (наприклад, 2, 3, 4, 5, 6 або більше) замінників, незалежно вибраних із галогену, -ОН, -СМ, -МО» і незаміщеного лінійного або розгалуженого алкілу, який має від 1 до 4 атомів вуглецю.
Переважно замінники необов'язково заміщеного алкілу, алкенілу, алкінілу, циклічного алкілу, циклічного алкенілу, циклічного алкінілу, карбоциклілу, арилу, гетероциклілу і гетероарилу, описаних вище, включають галоген, -СМ, -МІА'92ВтО8, -СЕз, -О0ОВ8', арил, гетероарил, 60 гетероцикліл, -5891, -5ОВТ, -БО2В ї -5ОзМ.
І64| Терміни "сполука" або "цитотоксична сполука", "цдитотоксичний димер" і "цитотоксична димерна сполука" використовується на рівних підставах. Мається на увазі, що вони включають сполуки, для яких у даному винаході описана структура або формула, або будь-яке біологічно активне похідне, або їх структура або формула, або будь-яке похідне включені за допомогою посилання. Зазначений термін також включає стереоізомери, геометричні ізомери, таутомери, сольвати, метаболіти, солі (наприклад, фармацевтично прийнятні солі) і проліки, і солі проліків сполук усіх формул, описаних у даному винаході. Зазначений термін також включає будь-які сольвати, сгідрати і поліморфи кожного з вищевказаного. Конкретне перерахування "стереоізомерів", "геометричних ізомерів", "таутомерів", "сольватів", "метаболітів", "солі", "проліки", "солі проліків", "кон'югатів", "солей кон'югатів", "сольвату", "гідрату" або "поліморфу" у деяких аспектах винаходу, описаного в даний заявці, не повинно тлумачитися як передбачувана відсутність зазначених форм в інших аспектах винаходу, де термін "сполука" використовують без перерахування зазначених інших форм. В одному варіанті втілення цитотоксична сполука включає зв'язуючу групу або зв'язуючу групу із приєднаною до неї реакційноздатною групою. У якості альтернативи цитотоксична сполука не містить зв'язуючої групи або зв'язуючої групи із приєднаною до неї реакційноздатною групою.
ІБ5| Термін "кон'югат", як використовується тут, стосується сполуки, описаної тут, або її похідного, приєднаного до агента, який зв'язується із клітинами.
ІБ66Ї Термін "зв'язуваний з агентом, який зв'язується із клітиною", як використовується тут, стосується сполук, описаних тут, або їх похідних, які включають щонайменше одну зв'язуючу групу або її попередник, придатні для зв'язування цих сполук або їх похідних з агентом, який зв'язується із клітинами.
ІБЄ7| Термін "попередник" даної групи стосується будь-якої групи, яка може привести до одержання зазначеної групи за рахунок деблокування, хімічної модифікації або реакції приєднання.
ІЄ8Ї Термін "приєднаний до агента, який зв'язується із клітинами" стосується молекули кон'югату, яка включає щонайменше одну зі сполук, описаних тут (наприклад, сполук і сполук лікарська речовина-лінкер, описаних тут), або її похідне, зв'язане з агентом, який зв'язується із клітинами, за допомогою відповідної зв'язуючої групи або її попередника.
Зо ІБ69| Термін "хіральний" стосується молекул, які володіють властивістю не співпадати при накладенні зі своїм дзеркальним відображенням, у той час як термін "ахіральний" стосується молекул, які при накладенні співпадають зі своїм дзеркальним відображенням.
І70Ї Термін "стереоізомер" стосується сполук, які характеризуються однаковим хімічним складом і внутрішньомолекулярними зв'язками, але різними типами орієнтації атомів у просторі, які не можуть взаємоперетворюватися шляхом повороту навколо одинарних зв'язків.
ІЇ/11| "Диастереомери" стосується стереоізомерів із двома або більше центрів хіральності, молекули яких не є дзеркальними відображеннями один одного. Диастереоізомери мають різні фізичні властивості, наприклад, температури плавлення, температури кипіння, спектральні властивості і реакційну здатність. Суміші диастереоіїзомерів можна розділити за допомогою аналітичних методик з високим ступенем поділу, таких як кристалізація, електрофорез і хроматографія.
І72| "Енантіомери" стосується двох стереоізомерів сполуки, які є дзеркальними відображеннями один одного, які не співпадають при накладенні.
І/3Ї Стереохімічні визначення і умовні позначки, використовувані тут, у цілому відповідають 5. Р. Ражег, Ед., МсОгам-Нії! ОСісійопагу ої Спетіса! Тептв (1984) Мсатгам/-НІЇ ВоокК Сотрапу,
Мем Могк; і Еїеї, Е. апа М/йїеп, 5., "Зегеоспетівігу ої Огдапіс Сотроцйпаз, "Чойп У/йПеу 4 бопв,
Іпс., Мем МоїКк, 1994. Сполуки згідно з винаходом можуть містити асиметричні або хіральні центри і, отже, існують у різних стереоїзомерних формах. Передбачається, що всі стереоіїзомерні форми сполук згідно з винаходом, включаючи диастереомери, енантіомери і атропізомери, а також їх суміші, наприклад, рацемічні суміші, не обмежуючись ними, утворюють частину даного винаходу. Багато органічних сполук існують у вигляді оптично активних форм, тобто мають здатність обертати площину плоскополяризованого світла. Під час опису оптично активних сполук для позначення абсолютної конфігурації молекули відносно її хірального(их) центру(ів) використовують префікси О і Ї. або К і 5. Префікси а і І або (кю) і (-)у використовують для позначення знаку повороту плоскополяризованого світла сполукою, при цьому префікси (-) або | означають, що сполука є лівообертальною. Сполука із префіксом (8 або а є правообертальною. Для даної хімічної структури ці стереоіїзомери є однаковими, за винятком того, що вони являють собою дзеркальні відображення один одного. Конкретний стереоізомер також можна розглядати в якості енантіомера, при цьому суміш таких ізомерів часто називають бо енантіомерною сумішшю. Суміш енантіомерів 50:50 називають рацемічною сумішшю або рацематом; зазначена суміш може утворюватися у випадку, якщо в хімічній реакції або процесі відсутні стереовибірковість або стереоспецифічність. Терміни "рацемічна суміш" ії "рацемат" стосуються еквімолярної суміші двох типів енантіомерів, яка не володіє оптичною активністю.
І74| Термін "таутомер" або "таутомерна форма" стосується структурних ізомерів з різною енергією, взаємоперетворюваними при переході низькоенергетичного бар'єра. Наприклад, протонні таутомери (також відомі як прототропні таутомери) включають взаємоперетворення за допомогою міграції протона, наприклад, при кето-енольній та імін-енамінній ізомеризації.
Валентні таутомери включають взаємоперетворення шляхом реорганізації деяких електронних зв'язків.
І75| Термін "проліки", як використовується в даній заявці, стосується попередника або похідної сполуки згідно з винаходом, який здатен ферментативно або гідролітично активуватися або перетворюватися в більш активну вихідну форму. Див., наприклад, УМітап, "Ргодгидв іп
Сапсег Спетоїйпегару "Віоспетіса! босієїу Тгапзасіопв, 14, рр. 375-382, 6151 Мевійпо Веїгаві (1986) і 9івїа єї аї., "Ргоагидв: А Спетіса! Арргоасі іо Тагдеїсд Огид Оеєїїмегу, "Оігесієй Огид
Оеєїїмегу, ВогсНагаї еї аї., (єа.), рр. 247-267, Нитапа Ргез5 (1985). Проліки згідно з даним винаходом включають складноефірні проліки, фосфат-вмісні проліки, тіофосфат-вмісні проліки, сульфат-вмісні проліки, пептид-вмісні проліки, проліки, модифіковані О-амінокислотами, глікозильовані проліки, В-лактам-вмісні проліки, проліки, які містять необов'язково заміщений феноксиацетамід, проліки, які містять необов'язково заміщений фенілацетамід, 5- фторцитозинові та інші 5-фторуридинові проліки, які можно перетворити на більш активні цитотоксичні вільні лікарські речовини, але не обмежуються ними. Приклади цитотоксичних лікарських речовин, які можна перетворити у форму проліків для використання в даному винаході, включають сполуки згідно з винаходом та хіміотерапевтичні агенти, наприклад, описані вище, але не обмежуються ними.
Г/6| Крім того, мають на увазі, що термін "проліки" включає похідну сполуки, здатну піддаватися гідролізу, окисненню або іншим способом вступати в реакцію в біологічних умовах (іп міго або іп мімо) з одержанням сполуки згідно з даним винаходом. Проліки можуть бути активними тільки після такої реакції в біологічних умовах або можуть мати активність у непрореагованій формі. Приклади проліків, розглянуті в даному винаході, включають аналоги
Зо або похідні сполук будь-якої з формул, описаних тут, які включають молекули, які біогідролізуються, наприклад, біогідролізовні амідні, біогідролізовні складноефірні, біогідролізовні карбаматні, біогідролізовні карбонатні, біогідролізовні уреїдні, а також біогідролізовні фосфатні аналоги, але не обмежуються ними. Інші приклади проліків включають похідні сполук будь-якої з формул, описаних тут, які включають -МО, -МО», -ОМО або -ОМО»- групи. Проліки звичайно можна одержати, використовуючи широко відомі способи, наприклад, способи, описані в Вигдег5 Меаіїсіпаї Спетівігу апа Огид Оівсомегу (1995) 172-178, 949-982 (Мапітей Е. Умоїйї єд., Бій ей); див. також Соодтап апа Сіїтап'є, Те Рнагтасоіодіса! бавів ої
Тпегарецшіїсв, ВІЙ ва., МсСтгам-НІЇ!, Іпі. Еа. 1992, "Віоїгапвіогтаїйоп ої Огиав5".
Ї/7| Одна краща форма проліків згідно з винаходом включає сполуки (з або без лінкерних груп) і кон'югати згідно з винаходом, які містять адукт, утворений між імінним зв'язком сполук/кон'югатів і реагентом, здатним взаємодіяти з імінами.
І/8Ї Термін "реагент, здатний взаємодіяти з імінами" стосується реагенту, здатного взаємодіяти з іміногрупою. Приклади реагентів, здатних взаємодіяти з імінами, включають сульфіти (На5Оз, На5О» або сіль НбОз, 5037 або Н5О», утворену катіоном), метабісульфіт (На252О5 або сіль 52057, утворену катіоном), моно-, ди-, три- і тетратіофосфати (РОз5Н»Зз,
РО252Нз, РОЗзНаз, РоаНз або сіль РОз53 РО»2523, РОБ» або РБАУ, утворену катіоном), складні ефіри тіофосфату (ВО)2РБ(ОВ), ВІН, ВІ'ЗОН, ВІЗОН, ВІ5ОЗН), різні аміни (гідроксиламін (наприклад, МНеОН), гідразин (наприклад, МНеМНг), МН2гО-В, В'МН-В, МН-В), МН»-СО-МН»,
МНг-С(-5)-МН»», тіосульфат (Нг52Оз або сіль 52032, утворену катіоном), дитіоніт (Нг5204 або сіль 52047, утворену катіоном), фосфородитіоат (Р(І-5ХОВУ(ЗНІОН) або його сіль, утворену катіоном), гідроксамову кислоту (ВС(-0О)МНОН або сіль, утворену катіоном), гідразид (АВ'ЄОМНМНг), формальдегідсульфоксилат (НОСН»БОгН або сіль НОСНбО», утворену катіоном, наприклад, НОСН2гВО» Ма"), глікозильований нуклеотид (наприклад, СОР-манозу), флударабін або їх суміш, де В |і Ві, незалежно, являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, і заміщені щонайменше одним замінником, вибраним із -М(ВІ)2, -СО2Н, -50зН і РОЗН; В. ї В, необов'язково, можуть бути додатково заміщені замінником для алкілу, описаним тут; В) являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; а АК являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, гетероцикліл або гетероарил (переважно Вк являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; більш переважно НХ являє собою метил, етил або пропіл), але не обмежуються ними. Переважно катіон являє собою одновалентний катіон, наприклад, Ма" або К". Переважно реагент, здатний взаємодіяти з імінами, вибирають із сульфітів, гідроксиламіну, сечовини і гідразину. Більш переважно реагент, здатний взаємодіяти з імінами, являє собою Манзоз або КНБЗО».
ІЇ79| Як використовується тут, якщо не зазначене інше, терміни "біогідролізовний амідний", "біогідролізовний складноефірний", "біогідролізовний карбаматний", "біогідролізовний карбонатний", "біогідролізовний уреїдний" і "біогідролізовний фосфатний аналог" означає амідний, складноефірний, карбаматний, карбонатний, уреїдний або фосфатний аналог, відповідно, який або: 1) не порушує біологічної активності сполуки і надає зазначеній сполуці вигідні властивості іп мімо, наприклад, поглинання, тривалість дії або початок дії, або 2) сам по собі є біологічно неактивним, але перетвориться іп мімо у біологічно активну сполуку. Приклади біогідролізовних амідів включають аміди нижчих алкілів, аміди «-амінокислот, алкоксиациламіди та алкіламіноалкілкарбоніламіди, але не обмежуються ними. Приклади біогідролізовних складних ефірів включають складні ефіри нижчих алкілів, алкоксиацилоксиефіри, алкілациламіноалкілові складні ефіри та складні ефіри холіну, але не обмежуються ними.
Приклади біогідролізовних карбаматів включають нижчі алкіламіни, заміщені етилендиаміни, амінокислоти, гідроксиалкіламіни, гетероциклічні та гетероароматичні аміни та поліефірні аміни, але не обмежуються ними. Особливо кращими проліками і солями проліків є проліки, які підвищують біодоступність сполук згідно з винаходом при введенні таких сполук в організм ссавця.
ІЗОЇ Фраза "фармацевтично прийнятна сіль", як використовується тут, стосується фармацевтично прийнятних органічних або неорганічних солей сполуки згідно з даним винаходом. Типові солі включають сульфат, цитрат, ацетат, оксалат, хлорид, бромід, йодид, нітрат, бісульфат, фосфат, кислий фосфат, ізонікотинат, лактат, саліцилат, кислий цитрат, тартрат, олеат, таннат, пантотенат, бітартрат, аскорбат, сукцинат, малеат, гентизинат, фумарат, глюконат, глюкуронат, сахарат, форміат, бензоат, глутамат, метансульфонат "мезилат", етансульфонат, бензолсульфонат, п-толуолсульфонат, памоат (тобто 1,1'"-метилен- біс-(2-гідрокси-З-нафтоат)), солі лужних металів (наприклад, натрію і калію), солі
Зо лужноземельних металів (наприклад, магнію) і солі амонію, але не обмежуються ними.
Фармацевтично прийнятні солі можуть містити включення іншої молекули, наприклад, ацетат- іону, сукцинат-іону або іншого протиіїону. Протиїон може бути будь-якою органічною або неорганічною групою, яка стабілізує заряд вихідної сполуки. Крім того, фармацевтично прийнятна сіль може мати більше одного зарядженого атома у своїй структурі. У випадку, коли кілька заряджених атомів є частиною фармацевтично прийнятної солі, вона може містити декілька протиіонів. Таким чином, фармацевтично прийнятна сіль може мати один або більше заряджених атомів і/або один або більше протиіонів.
ІЗ1| Якщо сполука згідно з винаходом є основою, бажану фармацевтично прийнятну сіль можна одержати будь-яким підходящим способом, доступним у даній галузі техніки, наприклад, обробкою вільної основи неорганічною кислотою, наприклад, соляною кислотою, бромистоводневою кислотою, сірчаною кислотою, азотною кислотою, метансульфоновою кислотою, фосфорною кислотою і т.п., або органічною кислотою, наприклад, оцтовою кислотою, малеїновою кислотою, бурштиновою кислотою, мигдальною кислотою, фумаровою кислотою, малоновою кислотою, піровиноградною кислотою, щавлевою кислотою, гліколевою кислотою, саліциловою кислотою, піранозидною кислотою, наприклад, глюкуроновою кислотою або галактуроновою кислотою, альфа-гідроксикислотою, наприклад, лимонною кислотою або винною кислотою, амінокислотою, наприклад, аспарагіновою кислотою або глутаміновою кислотою, ароматичною кислотою, наприклад, бензойною кислотою або коричною кислотою, сульфоновою кислотою, наприклад, п-толуолсульфоновою кислотою або етансульфоновою кислотою і т.п.
І82| Якщо сполука згідно з винаходом є кислотою, бажану фармацевтично прийнятну сіль можна одержати будь-яким підходящим способом, наприклад, обробкою вільної кислоти неорганічною або органічною основою, наприклад, аміном (первинним, вторинним або третинним), гідроксидом лужного металу або гідроксидом лужноземельного металу і т.п.
Ілюстративні приклади підходящих солей включають органічні солі, які є похідними амінокислот, наприклад, гліцину і аргініну, аміаку, первинних, вторинних і третинних амінів і циклічних амінів, наприклад, піперидину, морфоліну і піперазину, і неорганічні солі, які є похідними натрію, кальцію, калію, магнію, марганцю, заліза, міді, цинку, алюмінію і літію, але не обмежуються ними. бо ІЗЗ| Як використовується тут, термін "сольват" означає сполуку, яка додатково включає в стехіометричних або нестехіометричних кількостях розчинник, наприклад, воду, ізопропанол, ацетон, етанол, метанол, ДМСО, етилацетат, оцтову кислоту та етаноламін, дихлорметан, 2- пропанол і т.п., зв'язаний за рахунок нековалентних міжмолекулярних сил. Сольвати або гідрати сполук легко одержати шляхом додавання щонайменше одного молярного еквівалента гідроксильного розчинника, наприклад, метанолу, етанолу, 1-пропанолу, 2-пропанолу або води до сполуки, яка приводить до сольватування або гідратування іміногрупи.
ІВ4| "Метаболіт" є продуктом, отриманим за рахунок метаболізму зазначеної сполуки, її похідного або її кон'югату, або її солі в організмі. Метаболіти сполуки, її похідного або її кон'югату можна ідентифікувати за допомогою звичайних методик, відомих у даній галузі техніки, і визначити їх активність за допомогою тестів, наприклад, описаних тут. Такі продукти можуть утворюватися, наприклад, у результаті окиснення, гідроксилювання, відновлення, гідролізу, амідування, дезамідування, етерифікації, деетерифікації, ферментативного розщеплення і т.п. введеної сполуки. Відповідно, даний винахід включає метаболіти сполук, їх похідних або їх кон'югату згідно з винаходом, включаючи сполуки, їх похідні або їх кон'югати, отримані способом, який включає здійснення контакту сполуки, її похідного або її кон'югату згідно з даним винаходом, із ссавцем протягом часу, достатнього для одержання його метаболічного продукту.
І85Ї Фраза "фармацевтично прийнятний" означає, що речовина або композиція повинні бути сумісні хімічно і/або токсикологічно з іншими інгредієнтами, які містяться у складі, і/або ссавцем, який піддається лікуванню з використанням речовини або композиції.
ІЇЗЄЇ Термін "захисна група" або "блокувальна група" стосується замінника, звичайно використовуваного для блокування або захисту певної функціональної групи при взаємодії інших функціональних груп зі сполукою, її похідним або її кон'югатом. Наприклад, "амінозахисна група" або "аміноблокуюча група" є замінником, приєднаним до аміногрупи, який блокує або захищає функціональну аміногрупу у сполуці. Такі групи добре відомі в даній галузі техніки (див., наприклад, Р. М/цїв апа Т. Стеепе, 2007, Ргоїесіїме Стоирз5 іп Огдапіс 5упіпевів, СНарів" 7,
У. Міеу б Бопв, М) і представлені карбаматами, наприклад, метил- та етилкарбаматом, ЕМОС, заміщеними етилкарбаматами, карбаматами, які розщеплюються за допомогою 1,6-р- елімінування (також називані "які жертвують собою"), похідними сечовини, амідами, пептидами,
Зо алкільними та арильними похідними. Підходящі аміноблокуючі групи включають ацетил, трифторацетил, трет-бутоксикарбоніл (ВОС), бензилоксикарбоніл (св і 9- флуоренілметиленоксикарбоніл (ЕГтос). Загальний опис захисних груп і їх використання див. в
Р. а.М. М/шв 4 Т. МУ. Стеепе, Ргоїесіїме Стоцрв іп Огдапіс З5упіпевів, допп Ууїєу 4 Бопв5, Мем мок, 2007.
ІВ7| Термін "група, яка відходить", стосується зарядженої або незарядженої групи, яка від'єднується під час заміни або заміщення. Такі групи, які відходять, добре відомі в даній галузі техніки і включають галогени, складні ефіри, алкокси, гідроксил, тозилати, трифлати, мезилати, нітрили, азид, карбамат, дисульфіди, складні тіоефіри, прості тіоефіри та сполуки діазонію, але не обмежуються ними.
ІВ8) Термін "біфункціональний зшиваючий агент", "біфункціональний лінкер" або "зшиваючий агент" стосується модифікуючих агентів, які володіють двома реакційноздатними групами, з'єднаними зі "зв'язуючою групою", одна з яких здатна взаємодіяти з агентом, який зв'язується із клітинами, а інша реагує із цитотоксичною сполукою, щоб приєднати зазначені дві молекули одна до одної. Такі біфункціональні агенти, які зшивають, добре відомі в даній галузі техніки (див., наприклад, ІзаІт апа Оеєпі іп Віосопійдайоп сНарієг 5, р218-363, Стомев Оісіопагієв Іпс.
Мем ХогКк, 1999). Наприклад, біфункціональні агенти, які зшивають, забезпечують приєднання за допомогою тіоефірного зв'язку, включають М-сукцинімідил-4-(М-малеїмідометил)-циклогексан-1- карбоксилат (5МОС) для впровадження малеїімідогруп, або М-сукцинімідил-4-(йодоацетил)- амінобензоат (ЗІАВ) для впровадження йодацетильних груп. Інші біфункціональні агенти, які зшивають, впроваджують малеїімідні групи або галоацетильні групи в агент, який зв'язується із клітинами, добре відомі в даній галузі техніки (див. заявки на патент США 2008/0050310, 20050169933, доступні в Рієгсе Віоїесппоіоду Іпс., п/с 117, Рокленд, штат Іллінойс 61105, США) і включають біс-малеімідполіетиленгліколь (ВМРЕО), ВМ(РЕО)», ВМ(РЕО)», М-(р- малеімідпропілокси)сукцинімідний ефір (ВМРБ), М-сукцинімідильний ефір у-малеімідмасляної кислоти (СМВ5), М-гідроксисукцинімідний ефір є-малеімідокапронової кислоти (ЕМСО5), МН5 5- малеімідвалеріанової кислоти, НВУ5, М-сукцинімідил-4-(М-малеімідметил)-циклогексан- 1- карбокси-(6-амідокапроат), який являє собою "довголанцюговий "аналог ЗМСОС (І С-5МСС), м- малеімідбензоїл-М-гідроксисукцинімідний ефір (МВ), гідразид або сіль НС! і 4-(4-М- малеімідфеніл)-масляної кислоти (МРВН), М-сукцинімідил-3-(бромацетамідо)пропіонат (ЗВАР), бо М-сукцинімідилиодацетат |(5ІА), М-сукцинімідильний ефір к-малеіїмідундеканової кислоти
(КМОА), М-сукцинімідил-4-(п-малеімідфеніл)-бутират (5МРВ), сукцинімідил-6-(ВД- малеімідпропіонамідо)угексаноат (5МРН), сукцинімідил-(4-винілсульфоніл)бензоат (5М5В), дитіобіс-малеїімідетан (ОТМЕ), 1,4-біс-малеімідбутан (ВМВ), 1,4-біс-малеімідил-2,3- дигідроксибутан (ВМОВ), біс-малеімідгексан (ВМН), біс-малеїмідетан (ВМОЕ), сульфосукцинімідил-4-(М-малеімідметил)циклогексан-1-карбоксилат (сульфо-5МСОС), сульфосукцинімідил(4-йодацетил)амінобензоат (сульфо-БІАВ), м-малеімідбензоїл-М- гідроксисульфосукцинімідний ефір (сульфо-МВ5), М-(у- малеімідобутирилокси)сульфосукцинімідний ефір (сульфо-ССМВ5), М-(в- малеїімідкапроїлокси)сульфосукцинімідний ефір (сульфо-ЕМО5), М-(к- малеїімідундеканоїлокси)усульфосукцинімідний ефір (сульфо-КМИ5) і сульфосукцинімідил-4-(п- малеімідофеніл)бутират (сульфо-5МРВ), але не обмежуються ними.
ЇЗ9| Гетеробіфункціональні агенти, які зшивають, є біфункціональними агентами, які зшивають і які мають дві різні реакційноздатні групи. Гетеробіфункціональні агенти, які зшивають і які містять М-гідроксисукцинімідну групу (МН5-групу), здатну взаємодіяти з аміногрупами, і гідразинову групу, здатну взаємодіяти з карбонільними групами, також можна використовувати для сполуки цитотоксичних сполук, описаних тут, з агентом, який зв'язується із клітинами (наприклад, антитіла). Приклади таких комерційно доступних гетеробіфункціональних зшиваючих агентів включають гідразон сукцинімідил-б-гідразиннікотинаміду ацетону (ЗАМН), гідрохлорид сукцинімідил-4-гідразидтерефталату (ЗНТН) і гідрохлорид сукцинімідилгідразинійнікотинату (ЗНМН). Кон'югати, які несуть кислотно-лабільний зв'язок, також можна одержати з використанням гідразин-несучого похідного бензодіазепіну згідно із даним винаходом. Приклади біфункціональних зшиваючих агентів, які можна використовувати, включають сукцинімідил-п-формілбензоат (ЕВ) і сукцинімідил-п-формілфеноксиацетат (ЗЕРА).
І20Ї Біфункціональні зшиваючі агенти, які забезпечують приєднання агента, який зв'язується з клітинами, з цитотоксичними сполуками за допомогою дисульфідних зв'язків, включають М- сукцинімідил-4-(4-нітропіридил-2-дитіо)бутаноат, а також інші агенти, відомі в даній галузі техніки, які включають М-сукцинімідил-3-(2-піридилдитіо)упропіонат (5РОР), М-сукцинімідил-4-(2- піридилдитіо)пентаноат (5РР), /М-сукцинімідил-4-(2-піридилдитіо)бутаноат (ЗРОВ), М- сукцинімідил-4-(2-піридилдитіо)-2-сульфобутаноат (сульфо-5РОВ), для впровадження
Зо дитіопіридильних груп. Інші біфункціональні агенти, які зшивають, які можна використовувати для впровадження дисульфідних груп, відомі в даній галузі техніки і описані в патентах США 6913748, 6716821 і публікаціях патентів США 20090274713 і 20100129314, усі з яких включені в даний опис за допомогою посилання. В альтернативному випадку також можна використовувати агенти, які зшивають, наприклад, 2-імінотіолан, гомоцистеїнтіолактон або 5- ацетилбурштиновий ангідрид, які впроваджують тіолові групи.
І91| "Лінкер", "лінкерна група" або "зв'язуюча група", як визначено тут, стосується групи, яка з'єднує дві групи, наприклад, агент, який зв'язує клітини, і цитотоксичну сполуку один з одним.
Біфункціональний агент, який зшиває, може включати дві реакційноздатні групи, по одній на кожному з кінців лінкерної групи, такої що одна реакційноздатна група може спочатку взаємодіяти із цитотоксичною сполукою, забезпечуючи сполуку, яка несе лінкер і другу реакційноздатну групу, яка потім може взаємодіяти з агентом, який зв'язується із клітинами. В альтернативному випадку один кінець біфункціонального зшиваючого агента може спочатку взаємодіяти з агентом, який зв'язується із клітинами, який несе лінкерну групу і другу реакційноздатну групу, яка потім може взаємодіяти із цитотоксичною сполукою. Зв'язуюча група може містити хімічний зв'язок, який забезпечує вивільнення цитотоксичної групи, у конкретному положенні. Підходящі хімічні зв'язки добре відомі в даній галузі техніки і включають дисульфідні зв'язки, тіоефірні зв'язки, кислотолабільні зв'язки, фотолабільні зв'язки, пептидазолабільні зв'язки та естеразолабільні зв'язки (див., наприклад, патенти США 5208020, 5475092, 6441163, 6716821, 6913748, 7276497, 7276499, 7368565, 7388026 і 7414073). Кращими є дисульфідні зв'язки, тіоефірні та пептидазолабільні зв'язки. Інш лінкери, які можна використовувати у даному винаході, включають нерозщепні лінкери, наприклад, детально описані в публікації патенту
США номер 20050169933, або заряжені лінкери, або гідрофільні лінкери, і описані в 05 2009/0274713, 05 2010/01293140 і МО 2009/134976, кожен з яких спеціально включений в даний документ шляхом посилання.
І92| В одному варіанті втілення зв'язуюча група з реакційноздатною групою, приєднаною до одного кінця, такою як реакційноздатний складний ефір, вибрана із наступного "Списку 1": -
О(СВгоВаі)т(СВггВгз) ці ОСНеСНа)в(СВаоВацв м (СВг«Вгв)д(СОХХ, -О(СВгоВгі)т(СВгв-СВг)т(«СВ2гВгз)ОСНеСНг)в(СВаоВадр м (СВгаВгв)да(СОХХ, -О(СВгоВгі)п(алкініл/т(СВггВгз) (ОСНегСНа)в(СВлоВацдв м (СВгаВо)(СОХхХ,
-О(СВгоВгі)т(піперазити(СВ2ггАВгз)(ОСНеСНа)в(СВаоВадь м (СВгаВов)д(СОХХ, -О(СВгоВгі)т(пірол)(СВггВгза) (Осн СНа)в(СВаоВаув м (СВгаВо)д((СОХХ, -О(СВгоВаі)тА т(СВггАгз)3ц(ОСНаСНа)в(СВалоВадр м (СВгаВгв)д(СОХХ, -СВгоВгі)дт(СВггВгз)(ОСНегСНа)в(СВаоВад)рм (СВга«Во)а((СОхХ, -(СВгоВгі)т(СВгв-СВгт)т(СВг2Вгз)(ОСНаСНа)в(СВаоВад)вм (СВгаВов)д(СОхХ, -(СВгоВгі)т(алкініл)т(«СВггВгз)(ОСНегСНа)в(СВаоВадви (СВ2аВо)д((СОхХ, -(СВгоВгі)т(піперазин(СВггВгз) (ОСНаСНа)в(СВалоВад)вм (СВгаВгв)д(СОхХ, -(СВгоВгі)дт(піроліСВггВгз) цОСНегСНа)в(СВаоВадви (СВгаВо)а((СОхХ г, -(СВгоВгідтА т(СВ2ггВгз)((ОСНеСНг)в(СВаоВадь м (СВгаВгв)д(СОХХ, -МВз3і(С-О)р'(СВгоВгі)т(С ВггВгз) (0 ОСНеСНг)в(СВаоВадь м (СВгаВгв)д(СОХХ, «МАз(С-Ор(СВоВа)дт(СВаж-СВелт(СВ2 Ва) ОСНСНав(СВаоВа р (СВаВоСОЮ, -МАзі(С-Ор(СВгоВгі)талкініл) (С ВггВг)іОСНаСНгв(СВаоВадв и (СВаВо)н (СО, -МВзі(С-О)р(СВгоВаі)т(піперазину(СВ2г Ва) ОСНСНав(СВаоВаи)р и (СВааВов)д(СОХ, «МАВзі(С-Ов(СВгоВгі)т(піролуСВга Ваг) «ОСНеСНовСВаоВадву (СВ Во (СО, «МАВзі(С-Ов(СВгоВаі)тА т(СВ2г В) ОСНеСНав(СВаоВад)р у (СВ2Во)і(СОХХ, -(СВгоВгі)дт(СВггВгз)(ОСНеаСНа)в(СВаоВадв (СВгаВго)д(СОХХ, -(СВгоВгі)т(СВгв-СВгт)т(«СВ2г Ваз) (ОСНаСНа)в(СВалоВадрм (СВгаВгв)д(СОхХ, -(СВгоВгі)т(іалкініл)и(СВггВгз)(ОСНегСНа)р(СВаоВадрм (СВгаВгв)д(СО, -(СВгоВгі)т(піперазинСВ2ггВгз)(ОСНеСНг)в(СВаоВадр м (СВгаВгв)да(СОХХ, -(СВгоВгідтА т(СВггВгз)(ОСНаСНа)в(СВалоВадвм (СВгаВгв)д(СО ХХ, -(СВгоВгі)т(СВге-М-МАзо)п(СВ2ггВАВгз) (ОСНаСНа)в(СВалоВадр м (СВгаВгв)д(СОхХ, -(СВгоВгі)т(СВге-М-МАзо)п(СВов- С В2т)т(СВг2Вгз)(ОСНеСНг)в(СВаоВаид)в м (СВгаВгв)а(СО ХХ,
АСВАоВадт(СВге-М-МАзо)г(алкінілут(С Аг Аг) ОСНСНав(СВаоВар и (СВа Водою, «(СВгоВаі)т(іСАге-М-МАВзо)тА т(САгг Аг) ОСНаСНав(СВаВадв (СВаВод(СОх, де: т, п, р, 4, т, п, ї являють собою цілі числа від 1 до 10, або, необов'язково, дорівнюють 0; т", п "і р "дорівнюють 0 або 1; Х "вибраний із ОВзв, 5Вз, МАзаВз»е, де Взв, Вз, Взв, Взо являє собою Н або лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 20 атомів вуглецю, і/або мономер поліетиленгліколю -(ОСНеСНг)»п, Вз7, необов'язково, являє собою тіол-блокуючу групу, якщо Її - 1, СОХ "утворює реакційноздатний складний ефір,
Зо вибраний із М-гідроксисукцинімідних ефірів, М-гідроксифталімідних ефірів, М- гідроксисульфосукцинімідних ефірів, пара-нітрофенілових ефірів, динітрофенілових ефірів, пентафторфенілових ефірів і їх похідних, причому указанні похідні полегшують утворення амідного зв'язку; У" відсутня або вибрана із 0, 5, 5-5 або МАз2, де Взг відповідає визначенню, наведеному вище для НВ, або, якщо У" не являє собою 5-5 ії - 0, Х" вибраний із малеїімідогрупи, галоацетильної групи або 5Аз7, де Нз7 відповідає вищенаведеному визначенню;
А" являє собою амінокислоту, вибрану із гліцину, аланіну, лейцину, валіну, лізину, цитруліну і глутамату, або поліпептид, який містить від 2 до 20 амінокислот; Рг2о, В», В22, В2з, Вгяа, Вг5, Вгв і
В27 є однаковими або різними і являють собою Н або лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 5 атомів вуглецю; В2г» і Взо є однаковими або різними і являють собою Н або алкіл, який містить від 1 до 5 атомів вуглецю; Взз являє собою Н або лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 12 атомів вуглецю, мономер поліетиленгліколю - (ОСНеСН 5»), або Взз являє собою -СОВза, -«С5Нз4,-50Нз4, або -502Нз4, де Вз« являє собою Н або лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 20 атомів вуглецю, або мономер поліетиленгліколю -(ОСНеаСНг)й; і одна із Нло і Вл являє собою, необов'язково, негативно або позитивно заряжену функціональну групу, а інша являє собою Н або алкіл, алкеніл, алкініл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю.
ІЇ23| Термін "амінокислота" стосується природної амінокислоти або неприродної амінокислоти, представленої МнНо-С(Вга Вег)-С(-О)ОН, де кожна із аг і Ваг, незалежно, являє собою Н, необов'язково заміщений лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1ї до 10 атомів вуглецю, арил, гетероарил або гетероцикліл. Термін "амінокислота" також стосується відповідного залишку, коли з М- і/або С-кінця амінокислоти вилучений один атом водню, наприклад, -МН-С(Ваа Вага)-С(-0)0-.
І94| Термін "катіон" стосується іону з позитивним зарядом. Катіон може бути одновалентним (наприклад, Ма», К:" ї т.д.), двовалентним (наприклад, Са", Му і т.д.) або полівалентним
(наприклад, АЇЗ:» і т.д.). Переважно катіон є одновалентним.
І95| Термін "терапевтично ефективна кількість" означає кількість активної сполуки або кон'югату, яка викликає бажану біологічну реакцію у суб'єкта. Така реакція включає полегшення симптомів захворювання або розладу, який підлягає лікуванню, запобігання, інгібування або затримку рецидиву симптому захворювання або самого захворювання, збільшення тривалості життя суб'єкта у порівнянні з відсутністю лікування або запобігання, інгібування або затримку прогресування симптому захворювання або самого захворювання. Визначення ефективної кількості перебуває в межах можливостей фахівців у даній галузі техніки, особливо у світлі наведеного тут докладного опису. Токсичність і терапевтичну ефективність сполуки Ї можна визначити за допомогою стандартних фармацевтичних процедур у культурах клітин і на експериментальних тваринах. Ефективна кількість сполуки або кон'югату згідно з даним винаходом або іншого терапевтичного агента, який підлягає введенню суб'єктові, залежить від стадії, категорії і стану множинної мієломи і характеристик суб'єкта, наприклад, загального стану здоров'я, віку, статі, маси тіла і витривалість до ліків. Ефективна кількість сполуки або кон'югату згідно з даним винаходом або іншого терапевтичного агента, який підлягає введенню, також залежить від шляху введення і дозованої лікарської форми. Кількість та інтервал дозування можна регулювати індивідуально, забезпечуючи рівні активної сполуки в плазмі, достатні для підтримки бажаного терапевтичного ефекту.
І96|Ї Термін "група, здатна взаємодіяти з тіолами" стосується функціональної групи, взаємодіючої з тіоловою групою. Приклади груп, здатних взаємодіяти з тіолами, включають малеїмідо, вінілпіридин, вінілсоульфон, вінілсоульфонамід, групу на основі галоацетилу (наприклад, галоацетамідо) або дисульфід (наприклад, -55НУ, де БЗ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю, феніл, нітрофеніл, динітрофеніл, карбоксинітрофеніл, піридил, 2-нітропіридил, 4-нітропіридил або З3-карбокси-4-нітропіридил), але не обмежуються ними.
І97| Термін "реакційноздатний складний ефір" стосується складного ефіру, який містить групу, яка відходить, легко витісняється аміногрупою або гідроксильною групою. Приклади реакційноздатних складних ефірів включають М-гідроксисукцинімідний ефір, /-М- гідроксисульфосукцинімідний ефір, нітрофеніловий ефір, динітрофеніловий ефір,
Зо тетрафторфеніловий ефір, сульфотетрафторфеніловий ефір і пентафторфеніловий ефір.
Переважно реакційноздатний складний ефір є М-гідроксисукцинімідним (МН) ефіром.
І8| Термін " імін-вмісна лікарська речовина" або " імін-вмісна цитотоксична сполука" стосується сполуки, описаної тут (без лінкерної групи), яка містить щонайменше одну імінну функціональну групу. Переважно імін-вмісна лікарська речовина містить одну |імінну функціональну групу.
Способи згідно з даним винаходом
І99| У першому аспекті даний винахід стосується способу одержання кон'югату, який включає агент, який зв'язується із клітинами (СВА), кон'югований із цитотоксичною сполукою за допомогою зв'язуючої групи, причому зазначений спосіб включає взаємодію цитотоксичної сполуки з модифікованим СВА за рН приблизно від 4 до 9, причому: а) модифікований СВА включає залишок біфункціонульного зшиваючого агента, зв'язаного з
СВА, а зазначений залишок включає зв'язуючу групу і групу, здатну взаємодіяти з тіолом; і б) цитотоксична сполука включає тіолову групу і групу, представлену наступною структурою:
Мн 47 у де:
У являє собою групу, яка відходить, і являє собою сульфіт (НБО», Н5бО» або сіль НбО»з, 5Оз2 або НО», утворену катіоном), метабісульфіт (Н2б2О5 або сіль 52052, утворену катіоном), моно-, ди-, три- і тетратіофосфат (РОз5Нз, РО»б2Не, РОЗЗзНе, РбаНго або сіль РОз5У, РО»52У,
РОБ» або РБАЗ-, утворену катіоном), складний ефір тіофосфату (В'Ю2РБ(ОВІ), В/5-, ВІБО,
ВіІБО», ВІБО», тіосульфат (Н5гОз або сіль 52032, утворену катіоном), дитіоніт (НбгОх або сіль 52042, утворену катіоном), фосфородитіоат (Р(-5ХОВО(5ХОН) або його сіль, утворену катіоном), гідроксамову кислоту (ВКС(-О)МОН або сіль, утворену катіоном), формальдегідсульфоксилат (НОСН»ВО: або сіль НОСНоБО:, утворену катіоном, наприклад,
НОСНоБО» Ма") або їх суміш, де В! являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, і заміщений щонайменше одним замінником, вибраним із -М(В/)2, -СО2Н, -БОзЗН і -РОзЗН; Ві, необов'язково, може бути додатково заміщений замінником для алкілу, описаним тут; ВІ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; Вк "'являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, гетероцикліл або гетероарил.
МП100) У деяких варіантах втілення цитотоксичну сполуку одержують взаємодією імін-вмісної цитотоксичної сполуки, яка несе тіолову групу, з реагентом, здатним взаємодіяти з імінами. 1011 У деяких варіантах втілення спосіб може додатково включати очищення цитотоксичної сполуки до взаємодії з модифікованим СВА. 102) У деяких варіантах втілення (1) імін-вмісна цитотоксична сполука представлена однією з наступних формул або її фармацевтично прийнятною сіллю: ху й
Кк. 7 порроттру, її Кк ву Ви (09) ВВ
Ко. Кг х т т. Ко --ї шк М-
ВУ ) 7 ат Що з і Вз ви ау Кв Кє мя Ка (1) (2) цитотоксична сполука представлена однією з наступних формул або її фармацевтично прийнятною сіллю: й ху т
ВА ож , вашей 2 2 Р 5, Рв Еє «0 а
Кз Кг (г) Кі 0 Ез «и й тя 7 й 2, 2» ви у Кв є мя Ва в аг) (3) цитотоксична сполука і фрагмент зв'язуючої групи кон'югату представлені однією з наступних формул:
У х т
Уж , ето 2 2: Ви ' ву Ви (16) Ві Ва
Во. гу ко Щи Кі Ко
Й А-0-І-0-А; М, що» «М С Ді ї рі М (Ш) де:
Х "вибрана із -Н, амін-блокуючої групи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНаСНегО)и-Не, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, і необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до б гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, Мі Р;
М "вибрана із -Н, оксогрупи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 6-18--ленного арилу, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів;
В: являє собою -Н або заміщений, або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; кожна із Ві, В», Вз, Ва, Ві, В», Вз ії Ви, незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -ОСНегСНг)-Не-, галогену, гуанідинію / (-МН(С-МН)ІМН»ІЇ, -ОВ, -МА'Я"З, -МО», -МСО, -МВ'ЄОВ", -58, сульфоксиду, представленого -«ЗХОВ, сульфону, представленого -5028", сульфонату -5Оз3 "Ме, сульфату -
Оо5Ох М", сульфонаміду, представленого -5О2МВ В", ціаногрупи, азидної групи, -«СОВ'", -ОСОВ,, -ОСОМВ'В";
В, в кожному випадку незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -"СНаСНгО)-Ве, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, або необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибранихізо,5, Мі Р; кожна із В і В", незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -ОВ, -МНА, -МАг, -СОВ, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -"СНаСНгО)-Н: ії необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із
О,5,МіР; п являє собою ціле число від 1 до 24;
М/ вибрана із С-О, С-5, СНе, ВН, 50 і 505;
Зо Ве являє собою -Н, -В, -ОВ, -58, -МВ'В", -МО» або галоген; 7 і 7, незалежно, вибрані із -«"СНег)п-, -«"СНг)и-СА7Ав-(СНег) па-, ««"СНг)и-МА»-(СНег) па-, -««(СНег)п-О- (СНг)па-- і ««СНг)-5-(СНег) па-; п'їпа 'є однаковими або різними і вибрані із 0, 1, 2 і З;
В; і Вг є однаковими або різними, і кожна із них, незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -5Н, -СООН, -МНВ", мономера поліетиленгліколю -"ОСНеСнНг)п-, амінокислоти, пептидної одиниці, яка несе від 2 до б амінокислот, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
В», незалежно, вибрана із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера полієтиленгліколю - (ОСНеСН 5) п-;
А і А" є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із -О-, оксо (-С(-0)-), -СВВ'О-, -СВВ -, -5-, -СВВ'5-, -М(В5)- і-СВВ'М(В5)-,
В5, в кожному випадку незалежно, являє собою -Н або необов'язково заміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; рі р' є однаковими або різними і, незалежно, відсутні або вибрані із групи, яка складається із необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, амінокислоти, пептиду, який несе від 2 до 6 амінокислот, і мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСНг)п-;
Ї відсутня або, якщо присутня, включає тіолову групу і являє собою мономер поліетиленгліколю (-ОСНеСНе»)-, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл або алкеніл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенільну групу, 3-18-ч-ленне гетероциклічне кільце або 5-18- членне гетероарильне кільце, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, М і
Р, де алкіл, алкеніл, феніл або гетероциклічне або гетероарильне кільце є необов'язково заміщеним; де щонайменше одна із Х, У, Ве, Ве, Ви, В», Вз, Ви, Ві, В2, Вз, Вл, І (наприклад, за допомогою необов'язково заміщеної групи) приєднана до зв'язуючої групи в формулах (ІБ) або (ПЬ).
МО3| У деяких варіантах втілення модифікований СВА одержують взаємодією СВА з біфункціонульним агентом, який зшиває, причому зазначений біфункціональний агент, який зшиває, містить групу, здатну взаємодіяти з тіолами, і групу, здатну взаємодіяти з СВА, обидва, приєднані до зв'язуючої групи. 1104) У деяких варіантах втілення група, здатна взаємодіяти з СВА, реагує з аміногрупою
СВА (наприклад, аміногрупою бічного ланцюга Гуз) або з тіоловою групою СВА (наприклад, тіоловою групою бічного ланцюга Суб). 105) У деяких варіантах втілення група, здатна взаємодіяти з тіолами, вибрана із групи, яка складається з малеїімідо, вінілпіридину, вінілсульфону, вінілсульфонаміду, групи на основі галоацетилу і дисульфідної групи. 106) У якості альтернативи група, здатна взаємодіяти з тіолами, може бути малеїмідо, галоацетамідо або -55Н59, де КЗ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю, феніл, нітрофеніл, динітрофеніл, карбоксинітрофеніл, піридил, 2- нітропіридил, 4-нітропіридил або 3-карбокси-4-нітропіридил. 11071 У деяких варіантах втілення модифікований СВА являє собою: (в) о (е)
Н
А ут | ур
М--СВА
Н ге) о ге)
Ге о о (о!
Н ЦІ ЦІ чук чу М М--СВА борсетртр п н ря о о о ) (9) о
Її АЖ чок | М М--СВА
М-СВА н в! (о) (в) о (0) (0)
Н п Н 5 п-2-20 (наприклад, 2, 4, 6, 8, 10) вон
Н ЦІ
М-сСВА М---СВА во ан о , о ,
ЗОЗ Н ц ую
М. и М-СВА р о
Кк: Ку два ши аа са щі й ХАН або МО: н ї Т ; 5. Мм- Отут дит
Мах аа ВА Х М о М СВА і и о 0076 вМмег» б
(о; о
М (о) (о) вата ч У овх в, СВА Ж, СВА о вин (9) Н або Н 108) Типова схема реакції показана на Фіг. 8, де на "першому етапі" реагент, здатний взаємодіяти з імінами (показаний на схемі реакції у вигляді нуклеофіла (Мис:)), додають до лікарської речовини, яка містить тіол, і забезпечують взаємодію та утворення модифікованої лікарської речовини, яка несе тіолову групу. Модифіковану лікарську речовину, необов'язково, очищають із метою видалення надлишку реагенту, здатного взаємодіяти з імінами. На "другому етапі" антитіло модифікують лінкером, який містить групу Х, здатну взаємодіяти з тіолами (малеїмід, БОРУ, вінілсульфон і т.д.), і піддають взаємодії з модифікованою лікарською речовиною, яка несе тіолову групу, за рН 6-9, одержуючи стабільний дисульфідний або тіоефірний зв'язок між лікарською речовиною та антитілом. На "третьому етапі" видаляють побічні продукти (наприклад, надлишок реагенту, здатного взаємодіяти з імінами, модифікованої лікарської речовини, який не прореагував з антитілом, і т.д.) і формують сполуку на основі кон'югату. Кількість молекул лікарської речовини, кон'югованих з антитілом, дорівнює п і може становити, наприклад, 1-10. 1109| Типовий приклад способу двоетапного кон'югування описаний на Фіг. 16, де антитіло спочатку модифікують біфункціонульним зшиваючим агентом, одержуючи антитіло, яке має бажану кількість лінкерів, придатних для взаємодії з димерною сполукою, яка має вільну тіолову групу. У зазначеному прикладі антитіло пПиМу9-6 спочатку модифікували 5РОВ, одержуючи антитіло з лінкерами, які містять дитіопіридилову групу. Потім модифіковане антитіло піддавали впливу вільного тіолу, наприклад, 2а, одержуючи необхідний кон'югат пиМуз-6-5РОВ-га.
Додаткові підходящі лінкери, здатні взаємодіяти з тіолами, які можна використовувати в аналогічних реакціях, включені у Фіг. 16. 110) Реагент, здатний взаємодіяти з імінами, можна змішати з лікарською речовиною, яка несе тіолову групу, в органічному розчиннику (наприклад, диметилацетаміді, диметилформаміді, диметилсульфоксиді, ацетонітрилі, етанолі, метанолі, метиленхлориді, хлороформі, диоксані або їх суміші) або суміші води (наприклад, деіонізованої води) і одного або більше органічних розчинників. При використанні тільки органічного розчинника реагент, здатний взаємодіяти з імінами, можна змішати з лікарською речовиною за кімнатної температури на 30 хв. або довше (наприклад, приблизно 1 година, приблизно 2 години,
Ко) приблизно З години, приблизно 4 години, приблизно 5 годин, приблизно 10 годин, приблизно 24 години або до завершення реакції). Кращий час інкубування/реакції становить приблизно 0-4 години або 1-3 години. Отриману суміш можна негайно використовувати для взаємодії з агентом, який зв'язується із клітинами (наприклад, антитілом), модифікованим групою, здатною взаємодіяти з тіолами, у буфері за рН від приблизно 4 до приблизно 9, переважно - від приблизно б до приблизно 9. У якості альтернативи суміш можна заморозити і зберігати, наприклад, за -20 "С або -80 "С, і використовувати пізніше при збереженні його здатності взаємодіяти з агентом, який зв'язується із клітинами (наприклад, антитілом). Якщо використовують суміш води і органічного розчинника(ів) у якості системи змішуваних співрозчинників (наприклад, води і диметилацетаміду), реакційну суміш лікарської речовини і реагенту, здатного взаємодіяти з імінами, використовують негайно або зберігають у замороженому вигляді до використання після змішування з метою взаємодії з агентом, який зв'язується із клітинами, який несе групу, здатну взаємодіяти з тіолами. Якщо використовують суміш води і органічного розчинника(ів) у якості системи незмішуваних співрозчинників (наприклад, води і метиленхлориду), лікарську речовину і реагент, здатний взаємодіяти з імінами, змішують на 10 хв. або довше (наприклад, приблизно 30 хвилин, приблизно 1 година, приблизно 2 години, приблизно 5 годин, приблизно 10 годин, приблизно 24 години або до завершення реакції), збирають водний шар, оцінюють в ньому кількість лікарської речовини та реакційноздатного тіолу (наприклад, УФ-спектроскопією та аналізом за Елманом з ОТМВ- реагентом (5,5'-дитіобіс-( 2-нітробензойною кислотою))) і додають до агента, який зв'язується із клітинами (наприклад, антитіла), який несе групу, здатну взаємодіяти з тіолами, у буфері за рн від приблизно 4 до приблизно 9, переважно - від приблизно 6 до приблизно 9. 111) У другому аспекті даний винахід забезпечує спосіб одержання кон'югату, який включає агент, який зв'язується із клітинами (СВА), кон'югований із цитотоксичною сполукою за допомогою зв'язуючої групи, причому зазначений спосіб включає взаємодію СВА з імін-вмісною цитотоксичною сполукою, реагентом, здатним взаємодіяти з імінами, і біфункціональним зшиваючим агентом, який включає зв'язуючу групу, з утворенням кон'югату.
112) У деяких варіантах втілення агент, який зв'язується із клітинами (наприклад, антитіло) приводять у контакт із лікарською речовиною (наприклад, імін-вмісною цитотоксичною сполукою) і реагентом, здатним взаємодіяти з імінами, з утворенням першої суміші; а потім першу суміш приводять у контакт із біфункціональним зшиваючим агентом з утворенням кон'югату агент, який зв'язується із клітинами/лікарська речовина. Переважно біфункціональний зшиваючий агент приводять у контакт із першою сумішшю безпосередньо після утворення першої суміші. У якості альтернативи першу суміш витримували протягом інтервалу часу (наприклад, приблизно 1-10 хвилин, приблизно 10-30 хвилин, приблизно від 30 хвилин до 1 години, приблизно від 1 до 5 годин, приблизно від 5 до 24 годин або приблизно від 1 до 2 днів) до контакту з біфункціональним агентом, який зшиває. 113) У деяких варіантах втілення зазначений спосіб може додатково включати очищення кон'югату. (114) Типова схема реакції показана на Фіг. 10, де на "першому етапі" реагент, здатний взаємодіяти з імінами (показаний на схемі реакції у вигляді нуклеофіла (Мис:)), додають до СВА (наприклад, антитіла), лікарської речовини, яка містить тіол, біфункціонального зшиваючого агента, який містить як групу Х, здатну взаємодіяти з тіолами (малеїмід, 55РУу, вінілсульфон і т.д.), так і реакційноздатну складноефірну групу, і забезпечують протікання реакції за рН 6-9, одержуючи стабільний кон'югат лікарська речовина/антитіло. На "другому етапі" видаляють побічні продукти (наприклад, надлишок реагенту, здатного взаємодіяти з імінами, модифікованої лікарської речовини, яка не прореагувала з антитілом і т.д.) і формують сполуку на основі кон'югату. Кількість молекул лікарської речовини, кон'югованих з антитілом, дорівнює п і може становити, наприклад, 1-10. 15) У третьому аспекті даний винахід забезпечує спосіб одержання кон'югату, який включає агент, який зв'язується із клітинами (СВА), кон'югований із цитотоксичною сполукою за допомогою зв'язуючої групи, спосіб, який включає: а) взаємодію цитотоксичної сполуки з біфункціональним зшиваючим агентом, який включає зв'язуючу групу, групу, яка реагує з СВА (наприклад, тіолову групу, малеїімідну групу, галоацетамідну групу або аміногрупу), і групу, здатну взаємодіяти із цитотоксичною сполукою з утворенням модифікованої цитотоксичної сполуки, ковалентно зв'язаної із залишком
Зо біфункціонального зшиваючого агента, причому зазначений залишок включає зв'язуючу групу і групу, здатну реагувати з СВА; причому цитотоксична сполука представлена однією з наступних формул або її фармацевтично прийнятною сіллю:
У. ху й
Ве що; МА А-0-І-0-А м- 2 В.
АХ, вва
Кз Кг (Г) Кз , гео. у ху м о Ко «АЙ рр -)-»
Ви ау Кв І м мя Ва з ФІ і де:
У являє собою групу, яка відходить, і являє собою сульфіт (НбО»з, НБбО:» або сіль Н5Оз, 5Оз2 або НО», утворену катіоном), метабісульфіт (Н2б2О5 або сіль 52052, утворену катіоном), моно-, ди-, три- і тетратіофосфат (РОзЗНз, РО»баН»е, РОзЗзНе, РоаНео або сіль РОз5У, РОг527,
РОБ» або РБАЗ, утворену катіоном), складний ефір тіофосфату (В'О)2РБ(ОНІ), В/і5-, ВІБО,
ВО», ВО», тіосульфат (Н5гОз або сіль 52032, утворену катіоном), дитіоніт (Н52Ох або сіль 52042, утворену катіоном), фосфородитіоат (Р(-5ХОВО(5ХОН) або його сіль, утворену катіоном), гідроксамову кислоту (ВКС(-О)МОН або сіль, утворену катіоном), формальдегідсульфоксилат (НОСН»ВО: або сіль НОСНоБО:, утворену катіоном, наприклад,
НОСНоБО» Ма") або їх суміш, де В! являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, і заміщений щонайменше одним замінником, вибраним із -М(В/)2, -СО2Н, -БОзЗН і -РОЗзН; Ві, необов'язково, може бути додатково заміщений замінником для алкілу, описаним тут; ВІ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; Вк "'являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, гетероцикліл або гетероарил;
Х "вибрана із -Н, амін-блокуючої групи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНаСНегО)и-Не, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, і необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до б гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, Мі Р;
М "вибрана із -Н, оксогрупи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 6-18--ленного арилу, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, необов'язково заміщеного 3-18-ч-ленного гетероциклічного кільця, який має від 71 до 6 гетероатомів;
Де являє собою -Н або заміщений, або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; кожна із Ві, В», Вз, Ва, Ві, В», Вз ії Ви, незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -ОСНегСНг)-Не-, галогену, гуанідинію |-МН(С-МН)ІМН»Ї, -ОВ, -МВА'ЯВ", -МО», -МСО, -МВ'ЄОВ", -58, сульфоксиду, представленого -«ЗХОВ, сульфону, представленого -5028", сульфонату -5Оз3 "Ме, сульфату -
Оо5Ох М", сульфонаміду, представленого -5О2МВ В", ціаногрупи, азидної групи, -«СОВ'", -ОСОВ,, -ОСОМВ'В";
В, в кожному випадку незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -"СНаСНгО)-Ве, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, або необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке
Ко) містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибранихізо,5, Мі Р; кожна із В і В", незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -ОВ, -МНА, -МАг, -СОВ, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНагСНгО)-В8: і необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із
О,5,МіР; п являє собою ціле число від 1 до 24;
М/ вибрана із С-О, С-5, СНе, ВН, 50 і 505;
Ве являє собою -Н, -В, -ОВ, -58, -МВ'В", -МО:» або галоген; 7 і 2, незалежно, вибрані із -««СНг)п-, -«СНг)и-СВ7Ав-(СНег) па, ««(СНг)а-МА»-(СНг)па-, -««СНг)т-О- (СНг)па-- і ««СНг)-5-(СНег) па-; п'їпа 'є однаковими або різними і вибрані із 0, 1, 2 і З;
В; і Вг є однаковими або різними, і кожна із них, незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -5Н, -СООН, -МНВ", мономера поліетиленгліколю -"ОСНеСнНг)п-, амінокислоти, пептидної одиниці, яка несе від 2 до б амінокислот, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
В», незалежно, вибрана із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера полієтиленгліколю - (ОСНеСН г) п-;
А і А" є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із -О-, оксо (-С(-0)-), -СВВ'О-, -СВВ -, -5-, -СВВ'5-, -М(В5)- і-СВВ'М(В5)-,
В5, в кожному випадку незалежно, являє собою -Н або необов'язково заміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; рі р' є однаковими або різними і, незалежно, відсутні або вибрані із групи, яка складається із необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, амінокислоти, пептиду, який несе від 2 до 6 амінокислот, і мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСН») п;
Ї відсутня або, якщо присутня, включає тіолову групу або являє собою мономер поліетиленгліколю (-ОСНеСНе»)-, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл або алкеніл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенільну групу, 3-18-ч-ленне гетероциклічне кільце або 5-18- членне гетероарильне кільце, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, М і
Р, де алкіл, алкеніл, феніл або гетероциклічне або гетероарильне кільце є необов'язково заміщеним; і б) взаємодію модифікованої цитотоксичної сполуки з СВА за допомогою групи, здатної взаємодіяти з СВА, за рН від приблизно 4 до приблизно 9, з утворенням кон'югату. 116) У деяких варіантах втілення цитотоксичну сполуку одержують за рахунок взаємодії імін-вмісної цитотоксичної сполуки, яка несе тіолову групу наступних формул, з реагентом, здатним взаємодіяти з імінами, у реакційній суміші ху Що ве Бут А-0-І-0-А; м, 2: В
Кз кг () и Кз ; о. Кг ху т що Ко «5 А-6-І-0--А: ше. ве що З я. че - ще ва (ФІ) 117) У деяких варіантах втілення зазначений спосіб може додатково включати очищення цитотоксичної сполуки перед етапом а). 118) У деяких варіантах втілення зазначений спосіб може додатково включати очищення модифікованої цитотоксичної сполуки перед етапом б). 119) У деяких варіантах втілення реакційну суміш зберігають у замороженому вигляді до відтавання замороженої суміші і проведення етапу а). 120) У деяких варіантах втілення зазначений спосіб може додатково включати зберігання реакційної суміші, отриманої на етапі а), у замороженому вигляді до відтавання і проведення етапу б). 21| У деяких варіантах втілення біфункціональний зшиваючий агент є біс- малеїмідогексаном або ВМРЕО. (1221) Типова схема реакції показана на Фіг. 11, де на "першому етапі" реагент, здатний взаємодіяти з імінами (показаний на схемі реакції у вигляді нуклеофіла (Мис:)), додають до цитотоксичної сполуки, яка містить тіол. Отриману цитотоксичну сполуку, необов'язково, очищають перед взаємодією цитотоксичної сполуки на "другому етапі" з біфункціональним зшиваючим агентом (наприклад, біс-малеімідогексаном або ВМРЕО), одержуючи другу модифіковану лікарську речовину, яка несе групу, яка взаємодіє з тіолами. Потім на "третьому етапі" додають тіол-вмісний СВА (наприклад, антитіло) і забезпечують протікання реакції (рН 6-
Зо 9), одержуючи стабільний кон'югат лікарська речовина/антитіло. На "четвертому етапі" видаляють побічні продукти (наприклад, надлишок реагенту, здатного взаємодіяти з імінами, модифікованої лікарської речовини, яка не прореагувала з антитілом і т.д.) і формують сполуку на основі кон'югату. Кількість молекул лікарської речовини, кон'югованих з антитілом, дорівнює п і може становити, наприклад, 1-10. 123) Реагент, здатний взаємодіяти з імінами, можна змішати з лікарською речовиною, яка несе групу, здатну взаємодіяти з тіолами, в органічному розчиннику (наприклад, диметилацетаміді, диметилформаміді, диметилсульфоксиді, ацетонітрилі, етанолі, метанолі, метиленхлориді, хлороформі, диоксані або їх суміші) або суміші води (наприклад, деіонізованої води) і одного або більше органічних розчинників. При використанні тільки органічного розчинника реагент, здатний взаємодіяти з імінами, можна змішати з лікарською речовиною за кімнатної температури на 30 хв. або довше (наприклад, приблизно 1 година, приблизно 2 години, приблизно З години, приблизно 4 години, приблизно 5 годин, приблизно 10 годин, приблизно 24 години або до завершення реакції). Кращий час інкубування/реакції становить приблизно 0-4 години або 1-3 години. Отриману суміш можна негайно використовувати для взаємодії з агентом, який зв'язується із клітинами (наприклад, антитілом), модифікованим групою, здатною взаємодіяти з тіолами, у буфері за рН від приблизно 4 до приблизно 9, переважно - від приблизно 6 до приблизно 9. У якості альтернативи суміш можна заморозити і зберігати, наприклад, за -20 "С або -80 "С, і використовувати пізніше при збереженні її здатності взаємодіяти з агентом, який зв'язується із клітинами (наприклад, антитілом). Якщо використовують суміш води і органічного розчинника(ів) у якості системи, співрозчинників, які змішуються (наприклад, води та диметилацетаміду), реакційну суміш лікарської речовини і реагенту, здатного взаємодіяти з імінами, використовують негайно після змішування або зберігають у замороженому вигляді до використання з метою взаємодії з агентом, який зв'язується із клітинами, який несе групу, здатну взаємодіяти з тіолами. Якщо використовують суміш води і органічного розчинника(ів) як систему незмішуваних співрозчинників (наприклад, води і метиленхлориду), лікарську речовину і реагент, здатний взаємодіяти з імінами, змішують на 10 хв. або довше (наприклад, приблизно 30 хвилин, приблизно 1 годину, приблизно 2 години, приблизно 5 годин, приблизно 10 годин, приблизно 24 години або до завершення реакції), збирають водний шар, оцінюють в ньому кількість лікарської речовини (наприклад, УФф- спектроскопією) і додають до агента, який зв'язується із клітинами (наприклад, антитіла), який несе тіолову групу, у буфері за рН від приблизно 4 до приблизно 9, переважно - від приблизно 6 до приблизно 9. 124) У четвертому аспекті даний винахід стосується способу одержання кон'югату, який включає агент, який зв'язується із клітинами (СВА), кон'югований із цитотоксичною сполукою за допомогою зв'язуючої групи, причому зазначений спосіб включає взаємодію модифікованої цитотоксичної сполуки з СВА за рН приблизно від 4 до 9, причому модифікована цитотоксична сполука включає: а) залишок біфункціонального зшиваючого агента, зв'язаний із цитотоксичною сполукою і який включає зв'язуючу групу і реакційноздатну групу, вибрану з реакційноздатного складного ефіру та групи, здатної взаємодіяти з тіолами, і б) групу, представлену:
Мн д- чо де:
У являє собою групу, яка відходить, і являє собою сульфіт (НбО»з, НО» або сіль НбоОз, 5Оз2 або Н5О», утворену катіоном), метабісульфіт (Н252О5 або сіль 52052, утворену катіоном), моно-, ди-, три- і тетратіофосфат (РОз5Нз, РОг252Не, РОззНе, РеаНег або сіль РОз5У, РОг252У,
РОБ» або РБАЗ-, утворену катіоном), складний ефір тіофосфату (В'Ю2РБ(ОВІ), В/5-, ВІБО,
ВО», ВО», тіосульфат (Н5гОз або сіль 52032, утворену катіоном), дитіоніт (Н52Ох або сіль зо 82042, утворену катіоном), фосфородитіоат. (Р(І-ЗХОВЮ(ЗХОН) або його сіль, утворену катіоном), гідроксамову кислоту (ВКС(-О)МОН або сіль, утворену катіоном), формальдегідсульфоксилат (НОСН»ВО: або сіль НОСНоБО:, утворену катіоном, наприклад,
НОСНоБО» Ма") або їх суміш, де В! являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, і заміщений щонайменше одним замінником, вибраним із -М(В/)2, -СО2Н, -БОзЗН і -РОЗзН; В, необов'язково, може бути додатково заміщений замінником для алкілу, описаним тут; ВІ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; Вк "'являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, гетероцикліл або гетероарил. (125) У деяких варіантах втілення модифіковану цитотоксичну сполуку одержують шляхом взаємодії реагенту, здатного взаємодіяти з імінами, з імін-вмісною цитотоксичною сполукою, яка несе зв'язуючу групу і реакційноздатну групу. 126) У деяких варіантах втілення зазначений спосіб може додатково включати очищення модифікованої цитотоксичної сполуки до взаємодії з СВА. 127) У деяких варіантах втілення реакційноздатний складний ефір може бути вибраний із групи, який складається з М-гідроксисукцинімідного ефіру, М-гідроксисульфосукцинімідного ефіру, нітрофенілового ефіру, динітрофенілового ефіру, тетрафторофенілового ефіру, сульфотетрафторофенілового ефіру і пентафторофенілового ефіру. Переважно реакційноздатний складний ефір є М-гідроксисукцинімідним ефіром.
П128) У деяких варіантах втілення група, здатна взаємодіяти з тіолами, може бути вибрана із групи, яка складається з малеімідо, вінілпіридину, вінілсульфону, вінілсульфонаміду, групи на основі галоацетилу і дисульфідної групи. 129| У деяких варіантах втілення група, здатна взаємодіяти з тіолами, може бути малеїмідо, галоацетамідо або -55Н89, де КЗ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю, феніл, нітрофеніл, динітрофеніл, карбоксинітрофеніл, піридил, 2- нітропіридил, 4-нітропіридил або 3З-карбокси-4-нітропіридил.
П1З30)| Типова схема реакції показана на Фіг. 7, де на "першому етапі" реагент, здатний взаємодіяти з імінами (показаний на схемі реакції у вигляді нуклеофіла (Мис:)), додають до лікарської речовини, яка містить реакційноздатний складний ефір (1с), і забезпечують взаємодію з утворенням модифікованої лікарської речовини. Модифіковану лікарську речовину, необов'язково, можна очистити з метою видалення надлишку реагенту, здатного взаємодіяти з імінами. На "другому етапі" модифіковану лікарську речовину з реакційноздатним складним ефіром піддають взаємодії з антитілом у буфері за рН 6-9. На "третьому етапі" видаляють побічні продукти (наприклад, надлишок реагенту, здатного взаємодіяти з імінами, модифікованої лікарської речовини, яка не прореагувала з антитілом і т.д.), і формують сполуку на основі кон'югату. Кількість молекул лікарської речовини, кон'югованих з антитілом, дорівнює п і може становити, наприклад, 1-10.
І131| Ще одна схема реакції, яка зображує типовий спосіб згідно з даним винаходом, показана на Фіг. 9. На "першому етапі" до лікарської речовини, яка містить групу, здатну взаємодіяти з тіолами (де К є малеїмідною групою, ЗОРУ і т.д.), додають реагент, здатний взаємодіяти з імінами, і забезпечують їх взаємодію і утворення модифікованої лікарської речовини. Модифіковану лікарську речовину, необов'язково, очищають із метою видалення надлишку реагенту, здатного взаємодіяти з імінами. На "другому етапі" модифіковану лікарську речовину піддають взаємодії з антитілом, яке містить реакційноздатний тіол, утворюючи кон'югат антитіло/лікарська речовина, який має антитіло, ковалентно зв'язане з лікарською речовиною за допомогою стабільного дисульфідного або тіоефірного зв'язку. Антитіла з реакційноздатною тіоловою групою можна одержати описаними тут способами, наприклад, шляхом відновлення міжланцюгових дисульфідних зв'язків, генетичним кодуванням цистеїну або шляхом модифікації антитіл лінкерами, які містять тіоли або хімічно замасковані тіоли. На "третьому етапі" видаляють лікарську речовину, яка не прореагувала з антитілами, і формують сполуку на основі кон'югату. Кількість молекул лікарської речовини, кон'югованих з антитілом, дорівнює п і може становити, наприклад, 1-10. (1321 Реагент, здатний взаємодіяти з імінами, можна змішати з лікарською речовиною, яка несе активований складний ефір (наприклад, М-гідроксисукцинімідний ефір, пентафторофеноловий ефір, сульфо-М-гідроксисукцинімідний ефір) в органічному розчиннику (наприклад, диметилацетаміді, етанолі, метиленхлориді, хлороформі, диоксані або їх суміші) або суміші води (наприклад, деїіонізованої води) і одного або більше органічних розчинників.
Зо При використанні тільки органічного розчинника реагент, здатний взаємодіяти з імінами, можна змішати з лікарською речовиною за температури 0-100 "С, переважно - за температури 0-30 гС, більш переважно - за кімнатної температури на 5 хв. або довше (наприклад, приблизно 30 хв., 1 година, приблизно 2 години, приблизно З години, приблизно 4 години, приблизно 5 годин, приблизно 10 годин, приблизно 24 години або до завершення реакції). Кращий час інкубування/реакції становить приблизно 0-4 години або 1-3 години. Отриману реакційну суміш можна негайно використовувати для взаємодії з агентом, який зв'язується із клітинами (наприклад, антитілом), у буфері за рН від приблизно 4 до приблизно 9, переважно - від приблизно б до приблизно 9. У якості альтернативи реакційну суміш можна заморозити і зберігати, наприклад, за температури приблизно -20 "С або -80 2С і використовувати пізніше при збереженні її здатності взаємодіяти з антитілом. Переважно очищення проміжних продуктів не потрібне. При використанні суміші води і органічного розчинника як системи змішуваних співрозчинників (наприклад, води і диметилацетаміду), суміш лікарської речовини і реагенту, здатного взаємодіяти з імінами, використовують негайно після змішування або зберігають у замороженому вигляді до взаємодії з агентом, який зв'язується із клітинами (наприклад, антитілом). При використанні суміші води і органічного розчинника як системи незмішуваних співрозчинників (наприклад, води і метиленхлориду), лікарську речовину і реагент, здатний взаємодіяти з імінами, змішують на 10 хв. або довше, збирають водний шар, оцінюють в ньому кількість лікарської речовини і додають до агента, який зв'язується з клітинами (наприклад, антитела), у буфері за рН від приблизно 4 до приблизно 9, переважно - від приблизно 6 до 9.
І133| У кожному з вищевказаних аспектів можна використовувати підходящу кількість реагенту, здатного взаємодіяти з імінами. Наприклад, можна використовувати від приблизно 0,1 до приблизно 30 молярних еквівалентів реагенту, здатного взаємодіяти з імінами. Переважно можна використовувати від приблизно 1 до приблизно 10 молярних еквівалентів, більш переважно - від приблизно 1 до приблизно 5 молярних еквівалентів, а ще більш переважно - від приблизно З до приблизно 5 молярних еквівалентів реагенту, здатного взаємодіяти з імінами. 134) Використовуючи зазначену загальну процедуру в будь-якому з вищеописаних аспектів можна використовувати будь-який з наступних реагентів, здатних взаємодіяти з імінами: сульфіти (На5Оз, На5О» або сіль НбОз, 5032 або Н5бБО», утворену катіоном), метабісульфіт (Нг5205 або сіль 52052, утворену катіоном), моно-, ди-, три- і тетратіофосфати (РОз5Нз, 60 РО252Нз, РОЗЗзНз, РеаНз або сіль РОз53 РОг»2523, РОБ» або РБАУ, утворену катіоном), складні
Зо ефіри тіофосфату (ВО)2РБ(ОНВ), ВІБН, ВІЗОН, ВІ5О2Н, ВІ5ОЗН), різні аміни (гідроксиламін (наприклад, МНеОН), гідразин (наприклад, МНеМНг), МН2гО-В, В'МН-В, МН-В), МН»-СО-МН»,
МНг-С(-5)-МН», тіосульфат (Нг52Оз або сіль 520327, утворену катіоном), дитіоніт (Нг52Ох або сіль 52042, утворену катіоном), фосфородитіоат (Р(-53ОВОУ(ЗНУОН) або його сіль, утворену катіоном), гідроксамову кислоту (Н«С(-О)МНОН або сіль, утворену катіоном), гідразид (АСОМНМНг), формальдегідсульфоксилат (НОСН»ВО»2Н або сіль НОСНобО:»:, утворену катіоном, наприклад, НОСН2гВО:» Ма"), глікозильований нуклеотид (наприклад, СОР-манозу), флударабін або їх суміш, де В і Ві, незалежно, являють собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, і заміщені щонайменше одним замінником, вибраним із -М(В)2, -СО2Н, -5ОЗзН і -РОЗН; В і В, необов'язково, можуть бути додатково заміщені замінником для алкілу, описаним тут; Ві являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до б атомів вуглецю; а Ве являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, гетероцикліл або гетероарил (переважно ВК являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; більш переважно Вк являє собою метил, етил або пропіл). Переважно катіон являє собою одновалентний катіон, наприклад, Ма" або К»У. (135) Переважно реагент, здатний взаємодіяти з імінами, вибирають із сульфітів (наприклад,
Манзоз або КНЗО»), гідроксиламіну, гідразину і сечовини. Більш переважно реагент, здатний взаємодіяти з імінами, є МанбОз або КН5ЗО». (136) В одному варіанті втілення модифіковані лікарські речовини, описані в будь-якому з вищевказаних аспектів, очищають перед взаємодією з агентом, який зв'язується із клітинами.
Для очищення модифікованої лікарської речовини можна використовувати будь-які підходящі способи, відомі в даній галузі техніки. Наприклад, модифікований препарат можна очистити за допомогою колонкової хроматографії (наприклад, хроматографії на силікагелі) або ВЕРХ.
І137| У ще одному варіанті втілення кон'югат агент, який зв'язується із клітинами /лікарська речовина, отриманий відповідно до будь-якого з вищеописаних аспектів, очищають за допомогою тангенціальної проточної фільтрації, адсорбційної хроматографії, адсорбційної фільтрації, вибіркового осадження, неабсорбційної фільтрації або їх комбінації. Для очищення кон'югатів переважно використовують тангенціальну проточну фільтрацію (ТЕЕ, також відому як
Зо фільтрація в тангенціальному потоці, ультрафільтрація та діафільтрація) і/або смоли для адсорбційної хроматографії.
І138| Можна використовувати будь-які підходящі системи ТЕЕ, у тому числі системи типу
Рейсоп (МійПіроге, Білерика, штат Массачусетс, США), систему Загіосоп Саззеце (Загіогіиз АС,
Еджвуд, Нью-Йорк, США) і систему типу Сепігазеце (Раї! Согр., Іст-Хілз, штат Нью-Йорк, США).
І139| Можна використовувати будь-яку підходящу смолу для адсорбційної хроматографії.
Кращі смоли для адсорбційної хроматографії включають смоли для хроматографії на гідроксиапатиті, гідрофобної хроматографії з індукцією заряду (НСІС), гідрофобної хроматографії (НІС), іонообмінної хроматографії, іонообмінної хроматографії змішаного типу, афінної хроматографії з використанням іммобілізованих металів (ІМАС), хроматографії барвник- ліганд, афінної хроматографії, обернено-фазової хроматографії і їх комбінацій. Приклади підходящих смол на основі гідроксиапатиту включають керамічний гідроксиапатит (СНТ І типу і
ІЇ типу, Віо-Най І арогаюгіє5, Херкуліз, штат Каліфорнія, США), гідроксиапатит НА Шкодеї! (Раїї
Согр., Іст-Хілз, штат Нью-Йорк, США) і керамічний фтороапатит (СЕТ І типу і І! типу, Віо-Вай
І арогайогієз, Херкуліз, штат Каліфорнія, США). Прикладом підходящої смоли для НСІС є смола
МЕР Нурег"сеї! (Раї! Согр., Іст-Хілз, штат Нью-Йорк, США). Приклади підходящих смол для НІС включають смоли ВшиїуІ-Зерпагозе, НехуІ-Зеранагозе, Рпепу!-Зерпагозе і Осуї! Зернагозе (всі від компанії СЕ Неайнсаге, Піскатауей, штат Нью-Джерсі, США), а також смоли Мастго-ргер Меїпу! і
Масто-Ргер І-Вшу! (Віогай І арогаюгевз, Херкуліз, штат Каліфорнія, США). Приклади підходящих іонообмінних смол включають смоли 5Р-Берпагозе, СМ-Зерпагозе і О-5ерпагозе (всі від компанії СЕ Неайїсаге, Піскатауей, штат Нью-Джерсі, США), а також смолу ОпозрНеге 5 (Віо-
Вай Іарогаюгієз, Херкуліз, штат Каліфорнія, США). Приклади підходящих іонообмінників змішаного типу включають смолу ВаКегтопа АВх (1 Вакег, Філіпсбург, штат Нью-Джерсі, США).
Приклади підходящих ІМАС-смол включають смолу СпПеїайпуд берпагозе (СЕ Неєайнсагеє,
Піскатауей, штат Нью-Джерсі, США) і смолу Ргоїїпйу ІМАС (Віо-Наай І абогаютієв, Херкуліз, штат
Каліфорнія, США). Приклади підходящих барвник-лігандних смол включають смолу Війє
Зерпагозе (СЕ Неайнсагеє, Піскатауей, штат Нью-Джерсі, США) і смолу АНйі-де! Віше (Віо-НРай
І арогайогіє5, Херкуліз, штат Каліфорнія, США). Приклади підходящих афінних смол включають смолу Ргоївіп А Зернагозе (наприклад, Марзбеїесі, СЕ Неайнсаге, Піскатауей, штат Нью-Джерсі,
США), де агент, який зв'язується з клітинами, являє собою антитіло, і лектинові афінні смоли, 60 наприклад, смолу І епії І есііп Зерпагозе (СЕ Неайнсаге, Піскатауей, штат Нью-Джерсі, США),
де агент, який зв'язується 3 клітинами, несе сайти зв'язування відповідного лектину. Як альтернативу можно використовувати антитіло, специфічне до агента, який зв'язується з клітинами. Таке антитіло можно іммобілізувати, наприклад, на смолі Зернпагозе 4 Раві Ріом/ (СЕ
Неанйсаге, Піскатауей, штат Нью-Джерсі, США). Приклади підходящих обернено-фазових смол включають смоли С4, С8 і С18 (Сгасе Мудас, Хесперія, штат Каліфорнія, США). 140) У способах згідно із даним винаходом можна використовувати будь-яку підходящу смолу для неабсорбційної хроматографії. Приклади підходящих хроматографічних смол включають смоли ЗЕРНАЮРЕХ"М (3-25, (1-50, 010-100, БЕРНАСВМУІ "М (наприклад, 5-200 і 5-300), смоли 5ОРЕВОЕХ'"М (наприклад, БОРЕВОЕХ"М 75 і 5БОРЕВОЕХ"М 200), смоли ВІО-СЕІ 9 (наприклад, Р-б, Р-10, Р-30, Р-60 і Р-100) та інші смоли, відомі фахівцям у даній галузі техніки, але не обмежуються ними.
Лікарські речовини, які несуть зв'язуючу групу 141) Лікарські речовини, які можна використовувати у способах згідно з даним винаходом, включають сполуки, описані в Ш5З2010/0316656, О5 2010/003641, 0О52010/0203007, усі з яких включені в даний опис за допомогою посилання. 1421) У деяких інших варіантах втілення цитотоксичні сполуки, які можна кон'югувати із агентами, які зв'язуються із клітинами, за допомогою зв'язуючої групи, не містять зв'язуючої групи. Замість цього для кон'югування цитотоксичної сполуки, яка не має лінкера, з СВА за допомогою лінкерної групи може бути потрібен біфункціональний зшиваючий реагент (який включає зв'язуючу групу).
І143)| Так, у першому специфічному варіанті втілення лікарська речовина, ковалентно з'єднана зі зв'язуючою групою за допомогою приєднаної до неї реакційноздатної групи, яку можна використовувати у способах згідно з даним винаходом (наприклад, в одноетапному реагентному способі, як описано вище в четвертому аспекті даного винаходу) або яка може бути проміжним продуктом способів згідно з даним винаходом (наприклад, способу, описаного в третьому аспекті даного винаходу), є цитотоксичною сполукою, яка несе реакційноздатну групу, наприклад, реакційноздатний складний ефір або групу, здатну взаємодіяти з тіолами (узагальнено "реакційноздатну групу"), яка включає зв'язуючу групу із приєднаною до неї реакційноздатною групою, здатною ковалентно зв'язувати цитотоксичну сполуку із СВА,
Зо причому зазначена цитотоксична сполука представлена будь-якою з наступних формул: ху Що «А щі ХА я
Кз кг Ка з (а) або
Во. Кг ку У Кк Ко -М дя
Ву А-0-іІ-0 -ХА - Ез «М з Ді Т рі М (Па) або їх фармацевтично прийнятною сіллю. Після взаємодії з реагентом, здатним взаємодіяти з імінами, цитотоксична сполука може бути представлена будь-якою з наступних формул:
М й ху М й
Аж , З 7 тру 5 252 В.
Ку кг (а) Ка. з або
Ко. ку х т г. Ко -/ «Й 7 Алея З й 2 ВЗ
Ки ау Кв є мя КА (Па) де:
У являє собою сульфіт (НбЗОз, НбО» або сіль НбОз, 5Оз32 або НО», утворену катіоном), метабісульфіт (Н2г520О5 або сіль 52052, утворену катіоном), моно-, ди-, три- і тетратіофосфат (РОзб5Нз, РОг52Н»е, РОН», РбаН» або сіль РОз5У, РО2527, РОБ» або РБАУ, утворену катіоном), складний ефір тіофосфату (В'О22РБ(ОВІ), ВІі5-, ВІБО, ВІБО», ВІ5О», тіосульфат (Н5гОз або сіль 52037, утворену катіоном), дитіоніт (НегОх або сіль 52047, утворену катіоном), фосфородитіоат (РІ-БХОВО(5ХОН) або його сіль, утворену катіоном), гідроксамову кислоту (ВКС(-О)МОН або сіль, утворену катіоном), формальдегідсульфоксилат (НОСН»ВО: або сіль НОСН»оБО», утворену катіоном, наприклад, НОСН2агбО» Ма") або їх суміш, де Ві являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, і заміщений щонайменше одним замінником, вибраним із -М(В))2, -СО2Н, -5О3Н і -РОЗН; Ві, необов'язково, може бути додатково заміщений замінником для алкілу, описаним тут; ВІ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; Вк "'являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, гетероцикліл або гетероарил;
Х "вибрана із -Н, -ОН, амін-блокуючої групи, зв'язуючої групи з приєднаною до неї реакційноздатною групою, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -СН»СНгО)0-Не, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, і необов'язково заміщеного 3-18- членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із 0,
З, Мі;
М "вибрана із -Н, оксогрупи, зв'язуючої групи з приєднаною до неї реакційноздатною групою, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 6-18-членного арилу, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, необов'язково заміщеного 3-18- членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів;
В: являє собою -Н або заміщений, або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який
Зо має від 1 до 4 атомів вуглецю, або зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою; кожна із Ві, В», Вз, Ва, Ві, В», Вз ії Ви, незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -ОСНегСНг)-Не-, галогену, гуанідинію. / |-МН(С-МН)ІМН»Ї, -ОВ, -МА'Я", -МО», -МСО, -МВ'ЄОВ", -58, сульфоксиду, представленого -«ЗХОВ, сульфону, представленого -5028", сульфонату -5Оз3 "Ме, сульфату -
Оо5Ох М", сульфонаміду, представленого -5О2МВ В", ціаногрупи, азидної групи, -«СОВ'", -ОСОВ,, -ОСОМВ' В "їі зв'язуючої групи з приєднаною до неї реакційноздатною групою;
В, в кожному випадку незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -"СНаСНгО)-Ве, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, або необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибранихізо,5, Мі Р; кожна із В і В", незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -ОВ, -МНА, -МАг, -СОВ, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНаСНгО)-Н8е ї необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, який має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із
О,5,МіР; п являє собою ціле число від 1 до 24;
М/ вибрана із С-О, С-5, СНе, ВН, 50 і 505;
Ве являє собою -Н, -В, -ОВ, -58, -МВ'В", -МО», галоген або зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою; 7 і 7, незалежно, вибрані із -«"СНег)п-, -«"СНг)и-СА7Ав-(СНег) па-, ««"СНг)и-МА»-(СНег) па-, -««(СНег)п-О- (СНег)па-- і -«"СНг)-5-(СНе) па-; п'їпа 'є однаковими або різними і вибрані із 0, 1, 2 і З;
В; і Вг є однаковими або різними, і кожна із них, незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -5Н, -СООН,
-МНВ", мономера поліетиленгліколю -"ОСНеСнНг)п-, амінокислоти, пептидної одиниці, яка несе від 2 до б амінокислот, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
В», незалежно, вибрана із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера полієтиленгліколю - (ОСНеСН г) п-;
А і А" є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із -О-, оксо (-С(-0)-), -СВВ'О-, -СВВ -, -5-, - СВ 5-, -МВ5 і -СВВ'М(В5)-;
В5, в будь-якому випадку незалежно, являє собою -Н або необов'язково заміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; рі р' є однаковими або різними і, незалежно, відсутні або вибрані із групи, яка складається із необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, амінокислоти, пептиду, який несе від 2 до 6 амінокислот, і мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСНг)п-;
Ї відсутня, являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою, мономер поліетиленгліколю (-ОСНеСНг)п-, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл або алкеніл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенільну групу, 3-18-членне гетероциклічне кільце або 5-18-членне гетероарильне кільце, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із
О, 5, М і Р, де алкіл або алкеніл, необов'язково, заміщені зв'язуючою групою з приєднаною до неї реакційноздатною групою, феніл або гетероциклічне або гетероарильне кільце можуть бути, необов'язково, заміщені, причому замінник може являти собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою.
Переважно І! відсутня або вибрана із необов'язково заміщеної фенільної групи і необов'язково заміщеної піридильної групи, де фенільна і піридильна група несе зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою, або І являє собою аміногрупу, яка несе зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою (тобто -М(зв'язуюча група)-), або
Ї являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл або алкеніл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю і несе зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою. 144) Деякі типові сполуки формул (Іа) і (Па) перераховані нижче: її їх раз р А. роя 2 ро в. чик оленя дебет ЗА чо "М вас ше ЧТ У "М Е й х нн ц Уся З Н п ря щ у де не Жодних пр ця вже М т 1 4 Ї Ж я як Мн Я т оме Мей ам ХУ п ЙО (5 І 5 (г я вна Ома у я
Кі яю, ссааня с мое я о М і кети дитя кутя М і І де
Н ж 9 он
Мась Й а и а не й ку й а спі че ся К
ГТ Її ект
З МИ і Ч рен реа 1 речи ШИН: МОЯ ТУМ, сш би Ми а С я пра ни дя 7 оре "м ня Мо їх й. (ях ий КОМ
Масьв. М С т
Шо / й ун п ваше в М
У |. | Ї й- - я тома Мей рак ден (І о Що о и в-Наюзсьма Хр й (145) У деяких варіантах втілення
Х вибрана із групи, яка складається із -Н, -ОН, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенілу, зв'язуючої групи з приєднаною до неї реакційноздатною групою і аміно- блокуючої групи. Переважно Х' являє собою -Н, -ОН, -Ме або зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою. Більш переважно Х' являє собою -Н;
Щ вибрана із групи, яка складається із -Н, оксогрупи, заміщеного або незаміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю. Переважно У" вибрана із -Н або оксогрупи. Більш переважно У" являє собою -Н;
УМ являє собою С-О; кожна із Р, В», Вз, Ва», Вт, В», Вз її Ви, незалежно, вибрана із -Н, -МВА'В", -МА'(С-О)В, -ОВ, -
ЗА, -МО5» і зв'язуючої групи з приєднаною до неї реакційноздатною групою. Переважно одна із
В», Вз, В» ї Вз являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою, а інші є -Н;
Е, в кожному випадку незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або фенілу;
В'Ї КЕ" є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із -Н, -ОН, -ОК, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або фенілу;
Ве являє собою -ОНВ: або -5Н82, де К: являє собою -Н, лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю. Переважно Кє являє собою -ОМе або -5Ме. Ще більш переважно
Вв являє собою -ОМе; 717 є-СНе-;
А і А" є однаковими або різними і вибрані із -О-, -5-, -МА5 і оксогрупи (С-О). Переважно А і А" є однаковими або різними і вибрані із -О- і -5-. Більш переважно А і А" є -О-;
БО ї р' є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із мономера поліеєтиленгліколю (-
ОСНоСН»)н, де п являє собою ціле число від 1 до 24, амінокислоти, пептиду, який несе від 2 до 6 амінокислот, або лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, де алкіл, алкеніл і алкініл, необов'язково, заміщені одним або
Зо більше (наприклад, 2, 3, 4, 5, 6 або більше) замінників, незалежно вибраних із групи, яка складається із галогену, -ОВ, -МВ'СОВ", -58 і СОВ;; переважно 0 і р" є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю. Більш переважно О і Ср" являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю. Ще більше переважно О і р" є однаковими або різними і вибрані із лінійного алкілу, який має від 1 до 4 атомів вуглецю;
Ї відсутня або вибрана із необов'язково заміщеної фенільної групи і необов'язково заміщеної піридильної групи, де фенільна і піридильна група несе зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою, або Ї являє собою аміногрупу, яка несе зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою (тобто -М(зв'язуюча група)-), або Ї являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл або алкеніл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю і несе зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою.
І146Ї У другому специфічному варіанті втілення для цитотоксичних димерів (Іа) або (Па) змінні описані нижче:
М/ являє собою СО;
Ві, В», В, В», Ва і Ва є -Н; одна із Ез або Кз, необов'язково, являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою, а інша являє собою -Н;
Вв являє собою -ОМе;
БО 717 є-СНе-;
Х "'являє собою -Н;
М "'являє собою -Н;
А Її А є -0О-; а інші змінні відповідають опису у першому специфічному варіанті втілення.
М47| У третьому специфічному варіанті втілення цитотоксичні димери (з'єднані зі зв'язуючою групою за допомогою приєднаної до неї реакційноздатної групи) формули (Іа) і (Па") представлені наступними формулами:
е їн І" , и й | х Й
А с А. 25 іс)
СО со аа) й е ч Ів Я І. й
Одоє єс їй М
М Кв не (ПАг') де:
Х' вибрана із групи, яка складається із -Н, -ОН, заміщеного або незаміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенілу і аміно-блокуючої групи. Переважно Х' являє собою -Н, -ОН або -Ме. Більш переважно Х' являє собою -Н;
Щ вибрана із групи, яка складається із -Н, оксогрупи, заміщеного або незаміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю. Переважно У" вибрана із -Н або -Ме. Більш переважно У" являє собою -Н;
ГУ, 7. "є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(ОСНеаСНг)Ае, галогену, гуанідинію |-
МН(С-МН)МН»гЇ, -ОВ, -МА'В", -МО», -МВ'ЄОВ", -58, сульфоксиду, представленого -5ОВ', сульфону, представленого -5О028Щ8', сульфонату -5О5"М", сульфату -О5О3"М", сульфонаміду, представленого -«5ХО2МВ В", ціаногрупи, азидної групи, -СОВ', -ОСОВ', -«ОСОМВ' В "її зв'язуючої групи з приєднаною до неї реакційноздатною групою, за умови, що тільки однаіз!і,! ЛІ" являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою. Переважно /' являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою. Як альтернатива одна із І, Її "або | "являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою, в той час як інші є -Н. Більш переважно /' являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою, а її "є -Н;
Ве являє собою -ОНВ: або -5Н2, де Кг являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю. Переважно Кеє являє собою -ОМе або -5Ме. Ще більш переважно Ке являє собою -ОМе;
А і А" вибрані із -О- і -5-. Переважно А і А" є -О-;
Е являє собою -Н, необов'язково заміщений лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або ПЕГ-групу (СНаСНгО)п-Ве; п являє собою ціле число від 1 до 24; і
ДА: являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю;
В'ї В "є однаковими або різними і вибрані із -Н, -ОН, -ОВ, -МВВ», -СОВ, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного арилу, який має від 6 до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів, вибраних із О, 5, М і Р, ПЕГ-групи -СН»СНгО)-Не, де п являє собою ціле число від 1 до 24, переважно п дорівнює 2, 4 або 8; а Во 'являє собою -Н, необов'язково заміщений лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або ПЕГ-групу (СНаСНгО)п-Не; а вибрана із -СН- або -М-; а інші змінні відповідають опису в першому специфічному варіанті втілення. (148) У четвертому специфічному варіанті втілення цитотоксичних димерів формули (ІАа) або (ПАа) І" представлена формулою:
Г-АВ-М-ВУ-У, де:
Зб
МІ ії М є однаковими або різними і кожна із них, незалежно, відсутня або вибрана із -свере-, -0-, -0-0(-0)-, -0(-0)-0-, -5-, -50-, -502-, -СНо-5-, -СНегО-, -СНМАе-, -0-(0-0)0-, -0-(0-О)М(8е)-, -М(Ве)-, -М(Не)-С(-0)-, -С(-0)-М(Ве)-, -М(Н8е)-С(-030-,. -М(С(-0)Не)С(-0)-, .--
М(С(-0)В8е)-, -0-СНе-СНг)-, -55- або -С(-О)-, або амінокислоти, або пептиду, який має від 2 до 8 амінокислот;
Ах ї ВУ є однаковими або різними і кожна із них, незалежно, відсутня або являє собою необов'язково заміщений лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, який має від б до 10 атомів вуглецю, або 3-8-ч-ленне гетероциклічне кільце, яке несе від 1 до З гетероатомів, вибраних із О, М або 5; де ї Ве є однаковими або різними і вибрані із -Н, лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або -«"СН2-СНе2-О)-АК, де Кк являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю, і необов'язково несе вторинну аміногрупу (наприклад, -МНІА') або третинну аміногрупу (-МАТОТАТОг), або 5- або б-членний азот-вмісний гетероцикл, наприклад, піперидин або морфолін, де кожна із К/2! ї Дб, незалежно, являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; переважно кожна Кі В'с2г, незалежно, являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; п являє собою ціле число від 1 до 24; і
У включає реакційноздатну групу, зв'язану з нею, і вибрана із малеїміду, галоацетамідо, -5Н, -5589, -СНеБ5Н, -СН(Ме)5Н, -С(Ме)25Н і -СОЕ, де -СОЕ являє собою реакційноздатний складний ефір, вибраний із М-гідроксисукцинімідного ефіру, М-гідроксисульфосукцинімідного ефіру, нітрофенілового (наприклад, 2- або 4-нітрофенілового) ефіру, динітрофенілового (наприклад, 2,4-динітрофенілового) ефіру, сульфотетрафторофенілового (наприклад, 4-сульфо-2,3,5,6- тетрафторофенілового) ефіру і пентафторофенілового ефіру, але не обмежується ними, а Ве! являє собою -Н або заміщений або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю, і
ВЗ вибрана із фенілу, нітрофенілу (наприклад, 2- або 4-нітрофенілу), динітрофенілу (наприклад, 2- або 4-нітрофенілу), карбоксинітрофенілу (наприклад, З-карбокси-4-нітрофенілу), піридилу або нітропіридилу (наприклад, 4-нітропіридилу).
Зо (149) Переважно У є -5Н, -55859, малеїмідом або М-гідроксисукцинімідним ефіром. 150) Переважно Ве являє собою -Н або -Ме; Ве являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю, або -(СН2-СНег-О)и-ВЕ; п являє собою ціле число від 2 до 8; переважно НВК являє собою -Н, -Ме або -«СНаСНо-ММег, а інші змінні відповідають опису, наведеному вище в третьому специфічному варіанті втілення. 151) У ще одному кращому варіанті втілення М є амінокислотою або пептидом, який має від 2 до 8 амінокислот. Більш переважно У є валін-цитруліном, діу-аіу-діу або аїа-Ієи-аїа-Іеи.
І152| У ще одному кращому варіанті втілення М/" являє собою-О-, -М(Не)- або -М(Не)-С(-0)-;
Ве являє собою -Н, лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю, або - (СНо-СнНе-О)0-ВК; Ах являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; М відсутня або являє собою -(0-СН2-СНг)-, -С(-0)-МН-, -5-, -МН-С(-0)-; ВУ відсутня або являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; а ) являє собою -5Н, -55823 або -СОЕ (переважно М-гідроксисукцинімідний ефір). Інші змінні відповідають опису в четвертому специфічному варіанті втілення. 153) У ще одному кращому варіанті втілення М/" являє собою-О-, -М(Не)- або -М(Не)-С(-0)-;
Де являє собою Н, -Ме або -"СНо-СНег-О)-Ме; п являє собою ціле число від 2 до 6; Ах являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; М і ВУ відсутні; а у являє собою -СОЕ, переважно М-гідроксисукцинімідний ефір. (154) У п'ятому специфічному варіанті втілення І" представлена наступною формулою:
М -ІСВІ"ВаІ-М-(Су|ю--(СВз"Ва7Ь-СОЕ, де: кожна із Е.", В2 "і Вз", незалежно, являє собою -Н або -Ме;
Ва "являє собою -Н, -Ме, -5О03Н або -5О3" М", де М" являє собою фармацевтично прийнятний катіон; а являє собою ціле число від 0 до 2, Б являє собою ціле число від 0 до З; а
Су являє собою, необов'язково, заміщене 5-членне гетероциклічне кільце, яке несе гетероатом М, переважно Су являє собою
(в) о- (в) . 155| У деяких варіантах втілення, наприклад, у четвертому або п'ятому специфічних варіантах втілення, МУ є -М(ІН2)-. 156| У деяких варіантах втілення, наприклад, у четвертому або п'ятому специфічних варіантах втілення, Ве являє собою -(СНо-СН2-О)26- ВУ, де ВК являє собою -Н , лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю.
І157| У деяких варіантах втілення, наприклад, у четвертому або п'ятому специфічних варіантах втілення, М є -5- або -55-. (158) У шостому специфічному варіанті втілення /", наприклад, як і в четвертому або п'ятому специфічних варіантах втілення, представлена наступною формулою: - МА2-(СВА:"Аг"|а-5-(САз"На"|-СОЕ. (159) У деяких варіантах втілення цитотоксична сполука, з'єднана зі зв'язуючою групою за допомогою реакційноздатної групи, приєднаної до неї, як в 4-му, 5-му і 6-му специфічних варіантах втілення, являє собою: (в) пива, о 7
Х Н н (в) 0) о) те
М ОМе МеО М (в) (в) або
ОН Ге) бутон
У. (в)
М М о) о) -
М ОМе МеО М є) (о) де У є -5ОзМ, а М є -Н або фармацевтично прийнятним катіоном. 1160) У сьомому специфічному варіанті втілення /", наприклад, як і в четвертому, п'ятому або шостому специфічних варіантах втілення, представлена наступною формулою: - МА2-(СВА"Аг"|а-5-Су-(САз"Агл-СОЕ. 1161) У деяких варіантах втілення цитотоксична сполука, з'єднана зі зв'язуючою групою за допомогою реакційноздатної групи, приєднаної до неї, як в 4-му, 5-му і 7-му специфічних варіантах втілення, являє собою: (Ф) о (9) тот о Го! н Н " М ше М-. - во мох (в) в) або но ня, 7 (9) н Н У
М а М-х 9 2 оме мес: - Ф (9) (9) де У є -5ОзМ, а М є -Н або фармацевтично прийнятним катіоном. (162) У восьмому специфічному варіанті втілення цитотоксичні сполуки формули (Іа) і (Па) представлені наступними формулами: мів бе р. -ї
А зе А 2
М Ве ве М аВа) , ме ве х, У й М (3. ще 5 вад ї - атва) де:
МУ відсутня або вибрана із -О-, -М(Вг)-, -(Не)-С(-0)-, -Щ(С(-0)Нг)-, -5- або -СНе2-5-, -СНаМНе-
Ах відсутня або вибрана із лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
Ве являє собою -Н, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або -(СН2-СН2-О)и-НКХ, де В" являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю і який, необов'язково, несе вторинну аміногрупу (наприклад, -МНА") або третинну аміногрупу (-МА'ОВ02), або 5- або 6- членний азот-вмісний гетероцикл, наприклад, піперидин або морфолін, де кожна із В"! ї ІВд702, незалежно, являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю. Переважно кожна із ВЩВ"с! ї В'бг, незалежно, являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; 72 являє собою -Н, -587;
АД" являє собою ВІ або заміщений, або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю і який несе реакційноздатний складний ефір, вибраний із М- гідроксисукцинімідних ефірів, М-гідроксифталімідних ефірів, М-гідроксисульфосукцинімідних ефірів, пара-нітрофенілових ефірів, динітрофенілових ефірів, пентафторофенілових ефірів;
ВЗ вибрана із фенілу, нітрофенілу, динітрофенілу, карбоксинітрофенілу, піридилу або нітропіридилу; п являє собою ціле число від 1 до 24, а інші змінні відповідають опису, наведеному вище в четвертому специфічному варіанті втілення.
І163| Переважно ЕХ є -Н або -Ме, а п є цілим числом від 2 до 8. Переважно Ех являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю, а інші змінні відповідають опису, наведеному вище у п'ятому специфічному варіанті втілення. (164) У деяких варіантах втілення для сполук формули (ІВа) і (Ва), описаних у восьмому специфічному варіанті втілення, змінні відповідають опису, наведеному нижче:
Х і обидва є -Н;
А і А "обидва є -О-;
Ав є -ОМе;
Ах являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю, а інші змінні відповідають опису, наведеному вище у восьмому специфічному варіанті втілення.
1165) Переважно В: являє собою -(СНг)р-(СВ/НЗз)-, де кожна із В' і Не, незалежно, вибрана із Н або лінійного або розгалуженого алкілу, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; р дорівнює 0, 1, 2 або 3. Більш переважно В! і Ве є однаковими або різними і вибрані із -Н і -Ме, а р дорівнює 1.
І166| У дев'ятому специфічному варіанті втілення цитотоксична сполука, з'єднана зі зв'язуючою групою за допомогою приєднаної до неї реакційноздатної групи, представлена будь- якою з наступних формул: 4 уп в
У й Хх, т бе ) -
А с А - іс)
М М
(Уша) або
Ех м 8-78
У х т й ХМ, й б
М
Кв ве (Ха) де:
У вибрана із -5Оз3М, -502М або -О5ОзМ;
М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон, наприклад, Ма" або КУ;
Х' вибрана із групи, яка складається із -Н, -ОН, заміщеного або незаміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенілу і аміно-блокуючої групи;
Ж вибрана із групи, яка складається із -Н, оксогрупи, заміщеного або незаміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
А і А вибрані із -О- і -5-;
УУ відсутня або вибрана із -О-, -М(В2)-, -М(Не)-С(-0)-, -(С(-0)Нг)-, -5- або -СНо-5-, -СНаМВе-;
Ах відсутня або вибрана із лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
Ве являє собою -Н, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або -(СН2-СН2-О)и-НКк, де БЕХ являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю і який, необов'язково, несе вторинну аміногрупу (наприклад, -МНА") або третинну аміногрупу (-МА"'В2), або 5- або 6- членний азот-вмісний гетероцикл, наприклад, піперидин або морфолін, де кожна із В'Я! ії Ід'о2, незалежно, являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
С вибрана із -СН- або -М-;
Зо 75 являє собою -Н або вибрана із будь-якої із наступних формул: о 90 р в) -ї дух дошниоої
Ах (СНе)д
З М о й ом о (ат); о о (0) о р -7(СНод НН о
М ан М вах: лося (аг); в) о " в)
я Х ш щ х Х ?
М ве но (а3); о (а4); (о) о о (в) (в) р (в)
Ме -
Я лоні ж я ту М о й о (а»); о (аб); о (в; ОМ (о; . о Як. на а М о ту М В 6) ІФ) (а7); (в) (ав); (в) (а9) і (е) з «КАХ Що» о Н М
М м. (ой рт о (а10), де: д являє собою ціле число від 1 до 5; переважно 4 дорівнює 2; п являє собою ціле число від 2 до 6; переважно п дорівнює 4; р являє собою -Н або -БОзМ;
М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон, наприклад, Ма: або КУ.
І167| У деяких варіантах втілення 2: представлена будь-якою з наступних формул: ) р о О0-М (в) 5Х :
М в) М Оо-М
Н
(в) (ат); (в) о о р о)
Оо-М В Ж
М о (ав); о (а5); о 9 (вагу;
І) до оо о М в) в)
О (а13). (168) У деяких варіантах втілення, наприклад, у дев'ятому специфічному варіанті втілення,
УМ є -М(Ве)-. 1169) У деяких варіантах втілення Не являє собою -(СНо-СНе2-О)0-НК, де АК являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю . (170) У деяких варіантах втілення ЕХ є -Н або -Ме, п дорівнює 4, а д дорівнює 2. 171) У деяких варіантах втілення ЕХ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю.
І172| У деяких варіантах втілення Ах являє собою -(СНг)р-(СВ'Н»)-, де кожна із В'ї Но незалежно вибрана із -Н або лінійного або розгалуженого алкілу, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; а р дорівнює 0, 1, 2 або 3. (173) У деяких варіантах втілення В." і Е9 є однаковими або різними і вибрані із -Н і -Ме;а р дорівнює 1. (174) У десятому специфічному варіанті втілення змінні дев'ятого специфічного варіанту втілення наведені нижче: М являє собою -5О3М; М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон (наприклад, Ма"); Х і М "обидва є -Н; А і А "обидва являють собою -О-; Ве являє собою -ОМе; а Ах являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю. 175) У будь-якому з вищенаведених варіантів втілення, наприклад, у специфічних варіантах втілення з 1-го по 9-й, М вибрана із -«503М, -502М і сульфату -0О5Оз3М. Переважно У являє собою -503М, де М переважно являє собою -Н, Ма" або КУ. 176) У будь-якому з вищенаведених варіантів втілення, наприклад, у специфічних варіантах втілення з 1-го по 10-й, МУ, якщо присутня, являє собою С-О.
І177| У будь-якому з вищенаведених варіантів втілення, наприклад, у специфічних варіантах втілення з 1-го по 10-й, 27 і 7, якщо присутні, являють собою -СН».. 178) У будь-якому з вищенаведених варіантів втілення, наприклад, у специфічних варіантах втілення з 1-го по 10-й, Х вибрана із групи, яка складається з -Н, -ОН, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенілу, зв'язуючої групи із приєднаною до неї реакційноздатною групою та аміно-блокувальної групи. Переважно Х' є -Н, -ОН, -Ме або зв'язуючою групою із приєднаною до неї реакційноздатною групою. Більш переважно Х' є -Н.
І179| У будь-якому з вищенаведених варіантів втілення, наприклад, у специфічних варіантах втілення з 1-го по 10-й, У" вибрана із групи, яка складається з -Н, оксогрупи, заміщеного або незаміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю. Переважно У" є -Н або оксогрупою. Більш переважно У є -Н. (1891 У будь-якому з вищенаведених варіантів втілення, наприклад, у специфічних варіантах
Ко) втілення з 1-го по 10-й, А і А 'є однаковими або різними і вибрані з -О-, -5-, -МВ5. і оксогрупи - (С-0)-. Переважно А і А" є однаковими або різними і вибрані із -О- і -5-. Більш переважно Лі є -О-. 181) У будь-якому з вищенаведених варіантів втілення, наприклад, у специфічних варіантах втілення з 1-го по 10-й, О і ФО, якщо присутні, є однаковими або різними і, незалежно, вибрані з мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСНг)», де п є цілим числом від 1 до 24, амінокислоти, пептиду, який несе від 2 до 6 амінокислот, або лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, де алкіл, алкеніл і алкініл, необов'язково, заміщені одним або більше замінників, незалежно вибраних із групи, яка складається з галогену, -ОВ, -МЕ"СОМ", -5К. і -СОК. Переважно 0 і р" являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю.
І182| В одинадцятому специфічному варіанті втілення різні групи цитотоксичних сполук першого, третього і дев'ятого специфічного варіанта втілення наведені нижче: МУ являє собою
С-О; Ві, В», Вт, В», Ва і Ва 'являють собою -Н; одна із Вз або Вз, необов'язково, являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою, а інша являє собою -Н; Нє являє собою -ОМе; 7 і 7 'є -СН»-; Х 'являє собою -Н; У 'являє собою -Н; ай і А "є -О-. (183) В іншому варіанті втілення зв'язуюча група із приєднаною до неї реакційноздатною групою, як у будь-якому з вищенаведених специфічних варіантів втілення, є будь-якою із груп, перерахованих у списку 1. (184) У ще одному варіанті втілення цитотоксичні димери без лінкерних груп (наприклад, лінксерних груп, описаних вище), приєднаних до них, можуть додатково взаємодіяти з біфункціональним зшиваючим реагентом з утворенням лікарської речовини, яка несе зв'язуючу групу із приєднаною до неї реакційноздатною групою, призначеної для використання в способах згідно з даним винаходом (наприклад, з метою подальшої взаємодії з агентом, який зв'язується із клітинами, з утворенням кон'югату лікарська речовина/СВА). Альтернативно цитотоксичні димери без лінкерних груп (наприклад, лінкерних груп, описаних вище), приєднаних до них, можуть додатково взаємодіяти з біфункціональним зшиваючим реагентом і реагентом, який зв'язується із клітинами, в одноетапній реакції з метою безпосереднього утворення кон'югату лікарська речовина/сВА. У будь-якому разі реагент, здатний взаємодіяти з імінами, можна додавати до реакційної суміші з утворенням адукту лікарська речовина - реагент, здатний бо взаємодіяти з імінами (наприклад, адукту бісульфіту) перед реакцією утворення кон'югату лікарська речовина/СВА. Переважно цитотоксичні димери без лінкерних груп (наприклад, лінкерних груп, описаних вище), приєднаних до них, можна спочатку попередньо інкубувати із реагентом, здатним взаємодіяти з імінами, з утворенням адукту, до використання реакційної суміші в наступній реакції з утворенням кон'югату лікарська речовина/СВА. (185) Так, у дванадцятому специфічному варіанті втілення імін-вмісна цитотоксична сполука представлена будь-якою з наступних формул або її фармацевтично прийнятною сіллю: ху М
У ж пориву, х 7 В «-Д, Рв Ве Мт нах ву Ви Ф Ва Вз
Ве. кг ку У в Во --м шк М- ву А-0-І-0-КА с Аз «М Фі Я М... ви От Ве ве Ми Я (1) а після реакції з реагентом, здатним взаємодіяти з імінами, цитотоксична сполука представлена наступною формулою або її фармацевтично прийнятною сіллю: ч ху фе ' МН М- в 2 7 плели з і Кк в. -Д, Рв Ве Мт нах вв ФО Ва Вз
Ко. Кг ч х т Кк. Ко / «3 А-09-І-0-А М, Вз -М С Г Її р М "у Вт Кв дв МЕ в, аг) де:
У являє собою сульфіт (НбЗОз, НбО» або сіль НбОз, 5Оз32 або НО», утворену катіоном), метабісульфіт (Н2г5205 або сіль 52052, утворену катіоном), моно-, ди-, три- і тетратіофосфат (РОз5Нз, РО252Н», РОЗзН», РН?» або сіль РОз5У, РО»Б2У, РОЗ»: або РБАУ, утворену катіоном), складний ефір тіофосфату (В'О22РБ(ОВІ), ВІі5-, ВІБО, ВІБО», ВІ5О», тіосульфат (Н5гОз або сіль 52037, утворену катіоном), дитіоніт (НбгОх або сіль 52047, утворену катіоном), фосфородитіоат (РІ-БХОВО(5ХОН) або його сіль, утворену катіоном), гідроксамову кислоту (ВКС(-О)МОН або сіль, утворену катіоном), формальдегідсульфоксилат (НОСН»бО» або сіль НОСНоБбО», утворену катіоном, наприклад, НОСН2агбО» Ма") або їх суміш, де Ві являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, і заміщений щонайменше одним замінником, вибраним із -М(В))2, -СО2Н, -5О3Н і -РОЗН; Ві, необов'язково, може бути додатково заміщений замінником для алкілу, описаним тут; ВІ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; Вк "'являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, гетероцикліл або гетероарил; переважно У являє собою адукт бісульфіту, гідросульфіту або метабісульфіту, або їх сіль (наприклад, сіль натрію);
Х "вибрана із групи, яка складається із -Н, -ОН, амін-блокуючої групи, необов'язково
Зо заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -"СНаСНгО)-НВе, необов'язково заміщеного арилу, який має від 6 до 18 атомів вуглецю (наприклад, фенілу), необов'язково заміщеного 5- 18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, і необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, М і Р. Переважно Х' являє собою -Н, -ОН або -Ме. Більш переважно Х' являє собою -Н;
ХМ "вибрана із групи, яка складається із -Н, оксогрупи, необов'язково заміщеного лінійного,
розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 6-18--ленного арилу, необов'язково заміщеного 5-18- членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до б гетероатомів. Переважно У" вибрана із -Н або оксогрупи. Більш переважно У" являє собою -Н;
В: являє собою -Н або заміщений, або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; кожна із Р, В», Вз, Ва, Ві, В», Вз ії Ви, незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -ОСНегСНг)-Н-, галогену, гуанідинію / (-МН(С-МН)ІМН»Ї, -ОВ8, -МА'Я"З, -МО», -МСО, -МВ'ЄОВ", -58, сульфоксиду, представленого -«ХОВ, сульфону, представленого -5028", сульфонату -5Оз'М", сульфату -
Оо5Ох М", сульфонаміду, представленого -«5О2МВ В", ціаногрупи, азидної групи, -СОВ', -ОСОВ -ОСОМВ'В". Переважно 1, 2, З або всі із В», Вз, В» і Вз 'є -Н;
М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон;
Е, в будь-якому випадку незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, амін-блокуючої групи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНаСНгО)-Ве, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, або необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, Мі Р;
В' ї В" є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із -Н, -ОН, -ОВ, -МНА, -МЕА», -СОВ, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНеСНгО)-В: і необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, М і Р; п являє собою ціле число від 1 до 24;
М/ вибрана із С-О, С-5, СНе, ВН, 50 і 505;
Ве являє собою -Н, -В, -ОВ, -58, -МВ'В", -МО», галоген, -ОВ: або -582; переважно Ве являє собою -ОМе або -5Ме. Ще більш переважно Нє являє собою -ОМе; 7 і 7, незалежно, вибрані із -«"СНег)п-, -«"СНг)и-СА7Ав-(СНег) па-, ««"СНг)и-МА»-(СНег) па-, -««(СНег)п-О- (СНг)па- і -(СНг)т-5-(СН?г) па-; п'їпа 'є однаковими або різними і вибрані із 0, 1, 2 і З;
В; і Вв є однаковими або різними і кожна із них, незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -5Н, -СООН, -МНВ", мономера поліетиленгліколю -"ОСНеСнНг)п-, амінокислоти, пептидної одиниці, яка несе від 2 до б амінокислот, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
В», незалежно, вибрана із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера полієтиленгліколю - (ОСНеСН г) п-;
А і А" є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із -О-, оксо (-С(-0)-), -СВВ'О-, -СВВ -, -5-, -СВВ'5-, -М(В5)- і -СВВ'М(В5)-. Переважно А і А" є однаковими або різними і вибрані із -О- і - 95-. Більш переважно А і А" є -О-;
В5, в будь-якому випадку незалежно, являє собою -Н або необов'язково заміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; рі р' є однаковими або різними і, незалежно, відсутні або вибрані із групи, яка складається із необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, амінокислоти, пептиду, який несе від 2 до 6 амінокислот, і мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСНг)п-;
Ї відсутня або, якщо присутня, включає тіолову групу і являє собою мономер поліетиленгліколю (-ОСНеСНе»)-, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл або алкеніл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенільну групу, 3-18-ч-ленне гетероциклічне кільце або 5-18- членне гетероарильне кільце, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, М і
Р, де алкіл, алкеніл, феніл або гетероциклічне або гетероарильне кільце є, необов'язково, заміщеним. 1186) Типові структури таких імін-вмісних цитотоксичних сполук показано в Таблиці 15. Див.
сполуки 1, 3, 4, 5 і 14.
І187| У деяких варіантах втілення
М являє собою С-О;
Ві, НВ», ВН», Ва, Вг, Вг, Вз'"ї В. являють собою -Н; 7 і 7 являють собою -СНе-;
А і доб "идва являють собою -О-;
М/ являє собою -(С-0)-;
С являє собою -СН-;
Ве являє собою -Н або, необов'язково, заміщений С1-С10 лінійний, С1-С10 розгалужений або С3-С7 циклічний алкіл, -О-алкіл або -О-гало-алкіл, наприклад, -ОМе;
Х' вибрана із групи, яка складається із -Н, -ОН, заміщеного або незаміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенілу і аміно-блокуючої групи; а
Щ вибрана із групи, яка складається із -Н, оксогрупи, заміщеного або незаміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю.
І188| Переважно М вибрана із -5О3М, -502М або -О5Оз3М, де М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон, наприклад, Ма" або КУ. (189) Переважно У являє собою -503М; М являє собою -Н або Ма". 1901 У деяких варіантах втілення імін-вмісна цитотоксична сполука представлена будь-якою з наступних формул: чт" І що и й ХХ ж пе, с -
М М
Ко ве б) або
І" ен І" ХХ; «т
Х с- і ! М-,
А сх А 2
М в М
Ре ве (ПА) де:
І, 7 "є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(ОСНеСНг)н-Не, галогену, гуанідинію |-
МН(С-МН)МН»гЇ, -ОВ, -МА'В", -МО», -МВ'ЄОВ", -58, сульфоксиду, представленого -5ОВ', сульфону, представленого -5О028Щ8', сульфонату -5Оз3М, сульфату -О5ОзМ, сульфонаміду, представленого -5О2МВ В", ціаногрупи, азидної групи, -СОВ, -ОСОВ,-ОСОМВ В;
М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон; а
С вибрана із -СН- або -ІМ-. 191) У деяких варіантах втілення цитотоксична сполука, за її присутності, представлена однією з наступних формул або її фармацевтично прийнятною сіллю: що ч п її І" ху пО,шОоВ с -
М М
Ко ве о або р ч І | щі Х, Ма
Н 4 | уч
А хе А; -
М в М
КЕ ке (ПА) 192) У деяких варіантах втілення одна з І", 1" або І" несе тіолову групу, а інші є -Н.
Переважно І" несе тіолову групу, а! "її "є-Н. 193) У деяких варіантах втілення А і А" обидва є -О-; Нє являє собою -ОМе; а б являє собою -СН-. 194) У деяких варіантах втілення імін-вмісна цитотоксична сполука може бути представлена будь-якою з наступних формул: вх ме ВН
А с А. 2 є)
М вс або мг вн
Хх.
У | уч -чтт А. -щ А; -
М в М
Кв ве ас) де:
МУ "відсутня або, за її присутності, вибрана із -СВевВе-, -О-, -0-0(-0)-, -С(-0)-0-, -5-, -80-, -
ЗО2-, -СНе-5-, -СНгО-, -СНаМАе-, -0-(0-0)0-, -0-(С0-О3М(82)-,. -М(Ве)-,. -М(8е)-С(-0)-, -С(-0)-
М(Ве)-, -М(Не)-С(-0)0-, -Щ(С(-О)Н8е)С(-0)-, -Щ(С(-0)Н82)-, -«"О-СНо-СНг)п-, -55- або -С(-0)-, або амінокислоти, або пептиду, який має від 2 до 8 амінокислот;
Ах відсутня або, якщо присутня, являє собою необов'язково заміщений лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, який має від 6 до 10 атомів вуглецю, або 3-8-ч-ленне гетероциклічне кільце, яке несе від 1 до З гетероатомів, вибраних із О, М або 5; де ї Ве є однаковими або різними і вибрані із -Н, лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або -(СНе-СНе-О)и-ВУ, де Вк являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю і який, необов'язково, несе вторинну аміногрупу (наприклад, -МНА'2) або третинну аміногрупу (-
МА" Во2), або 5- або 6б-ч-ленний азот-вмісний гетероцикл, наприклад, піперидин або морфолін, де кожна із В"! і Ід", незалежно, являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; переважно кожна В ії В'єсг, незалежно, являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; п являє собою ціле число від 1 до 24.
М195| У деяких варіантах втілення цитотоксична сполука, за її присутності, може бути представлена однією з наступних формул або її фармацевтично прийнятною сіллю: вх ме вн
Х т . ; ой до зд
А с А. 2 о
М М ке ге
Зо с) або ми Твн
У ХХ ж й
Об оі о б М (1099) 196) У деяких варіантах втілення
У вибрана із -БОЗМ, -502М або -Ю5ОзМ;
М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон, наприклад, Ма" або КУ;
Х' вибрана із групи, яка складається із -Н, -ОН, заміщеного або незаміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенілу і аміно-блокуючої групи;
Щ вибрана із групи, яка складається із -Н, оксогрупи, заміщеного або незаміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
А і А вибрані із -О- і -5-;
УМ відсутня або вибрана із -О-, -М(Нг)-, -(Не)-С(-0)-, -Щ(С(-0)Нг)-, -5- або -СНе2-5-, -СНаМНе-
Ах відсутня або вибрана із лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
Ве являє собою -Н, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або -(СН2-СН2-О)и-НКк, де БЕХ являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю і який, необов'язково, несе вторинну аміногрупу (наприклад, -МНА"С) або третинну аміногрупу (-МА'ОВ"О2), або 5- або 6- членний азот-вмісний гетероцикл, наприклад, піперидин або морфолін, де кожна із В'Я! ії Ід'о2, незалежно, являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
С вибрана із -СН- або -ІМ-. 197) У деяких варіантах втілення М/ є -М(Не)-. 198) У деяких варіантах втілення Не являє собою -(СНо-СНе2-О)0-НК, де АК являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю . (199) У деяких варіантах втілення ЕХ є -Н або -Ме, п дорівнює 4, а д дорівнює 2.
І200| У деяких варіантах втілення ЕХ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю.
Ко) (201| У деяких варіантах втілення Ах являє собою -(СНг)р-(СВ/В8)-, де кожна із В' і Ве, незалежно, вибрана із -Н або лінійного або розгалуженого алкілу, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; а р дорівнює 0, 1, 2 або 3. (2021) У деяких варіантах втілення В! і Не є однаковими або різними і вибрані із -Н і -Ме;а р дорівнює 1. (203) У деяких варіантах втілення
У являє собою -503М, -502М або сульфат -О5ОзМ; переважно -50Оз3М;
М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон (наприклад, Ма»);
Х іє обидва являють собою -Н;
А і А обидва "являють собою -О-;
Вв являє собою -ОМе; а
Ах являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю. (204) У деяких варіантах втілення біфункціональний зшиваючий агент являє собою: групу на основі малеїміду, вибрану із: М-сукцинімідил-4-(малеімідометил)циклогексанкарбоксилату (5МОС), М-сукцинімідил-4-(М-малеімідометил)-циклогексан-1-карбокси-(б-амідокапроату) (І С-
ЗМО), М-сукцинімідилового ефіру к-малеімідундеканової кислоти (КМОА), М-сукцинімідилового ефіру у-малеїмідмасляної кислоти (СМВ5), М-гідроксисукцинімідного ефіру 6- малеімідокапронової кислоти (ЕМСО5), м-малеїімідобензоїл-М-гідроксисукцинімідного ефіру (МВ), М-(а-малеїмідоацетокси)-сукцинімідного ефіру (АМА5Б), сукцинімідил-6-(ВД- малеїімідопропіонамідо)гексаноату (5МРН), М-сукцинімідил-4-(п-малеімідофеніл)бутирату (5МРВ), М-(п-малеімідофеніл)ізоціанату (РМРІ), М-сукцинімідил-4-(4-нітропіридил-2- дитіо)бутаноату; або групу на основі галоацетилу, вибрану із: М-сукцинімідил-4-(йодоацетил)- амінобензоату (ЗІАВ), М-сукцинімідилиодоацетату (5ІА), М-сукцинімідилбромоацетату (ЗВА) і М- сукцинімідил-3-(бромоацетамідо)пропіонату (ВАР), біс-малеімідополіетиленгліколю (ВМРЕО),
ВМ(РЕО)2», ВМ(РЕО)з, М-(р-малеімідопропілокси)сукцинімідного ефіру (ВМРБ) МН 5- малеімідовалеріанової кислоти, НВУ5Б, гідразиду"НСЇІ 4-(4-М-малеімідофеніл)-масляної кислоти (МРВН), сукцинімідил-(4-вінілсульфоніл)бензоату (5М58В), дитіобіс-малеімідоетану (ОТМЕ), 1,4- біс-малеімідобутану (ВМВ), 1,4-бісмалеїмідил-2,3-дигідроксибутану (ВМОВ), біс- малеімідогексану (ВМН), біс-малеіїмідоетану (ВМОЕ), сульфосукцинімідил 4-(М-малеїімідо- метил)циклогексан-1-карбоксилату (сульфо-5МСС), сульфосукцинімідил(4-йодо- ацетил)амінобензоату (сульфо-БІАВ), м-малеїімідобензоїл-М-гідроксисульфосукцинімідного ефіру (сульфо-МВ5), М-(у-малеімідобутирилокси)сульфосукцинімідного ефіру (сульфо-СМВ5),
М-(є-малеіїмідокапроїлокси)сульфосукцинімідного ефіру (сульфо-ЕМО5), М-(к- малеімідоундеканоїлокси)сульфосукцинімідного ефіру (сульфо-КМИ5), сульфосукцинімідил-4- (п-малеімідофеніл)бутирату (сульфо-5МРВ), СХ1-1, сульфо-Маї і ПЕГ.-Маї. (205) У деяких варіантах втілення біфункціональний зшиваючий агент вибраний із групи, яка складається з МОСС, сульфо-ЗМОС, ВМР5, (СМВ5, ІА, 5БІАВ, М-сукцинімідил-4-(4- нітропіридил-2-дитіо)бутаноату, біс-малеімідогексану або ВМРЕО. (206) У деяких варіантах втілення модифікований СВА, якщо присутній, являє собою: (в) (в) о зевн о
Н
А ут | АЖ
М-СВА
Н в) о в) о о о) о оч Ж ; ; м М М М--СВА
М М ог г -те у о (в) (в) (о) о о
АЖ Її м М--СВА | чує н М--СВА
Н о о о о о
АЖ що Нн що свА М--сВА
РУБ п-20-20 (наприклад, 2, 4, 6, 8, 10) о ! о ; вон
М--сВА М.О М-свА й вива (в) - (в) за В
М З - ге в СВА Н р З Ма Зв М-СВА
Х ДЕН зв МО» у Й о тя о фе; о о пе вно і я І у СОВА вк ! . . ри з ВМ(ПЕГЬ б "пн о) (о; (о) « ль СВА «Ж
І вин () М-СВА (в; або н .
І207| У тринадцятому специфічному варіанті втілення імін-вмісна цитотоксична сполука являє собою: пото 2
Н нм
М о о М- 9 поД я (в) (е); (208) Біфункціональні агенти, які зшивають, можуть бути будь-якими біфункціональними лінкерами, відомими в даній галузі техніки. Наприклад, біфункціональні лінкери, які можна використовувати для виготовлення сполук лікарська речовина-лінкер, є лінкерами, які утворюють дисульфідні зв'язки, прості тіоефірні зв'язки, кислотнолабильні зв'язки, фотолабільні зв'язки, пептидазо-лабільні зв'язки і естеразо-лабільні зв'язки із цитотоксичними сполуками (див. наприклад, патенти США 5208020; 5475092; 6441163; 6716821; 6913748; 7276497; 7276499; 7368565; 7388026 і 7414073, включені в даний документ за допомогою посилання).
Переважно біфункціональні агенти, які зшивають, є агентами, які утворюють дисульфідні зв'язки, прості тіоефірні зв'язки і пептидазо-лабільні зв'язки із цитотоксичними сполуками. Інші біфункціональні зшиваючі агенти, які можна використовувати у даному винаході, включають нерозщеплювані лінкери, наприклад, лінкери, описані в публікації патенту США Мо 2005/0169933, або заряжені лінкери, або гідрофільні лінкери, і описані в 05 2009/0274713, 005 2010/01293140 і МО 2009/134976, кожен із яких спеціально включений в даний документ за допомогою посилання. Біфункціональні агенти, які зшивають, які можна використовувати для виготовлення сполук лікарська речовина-лінкер згідно з даним винаходом, також включають сполуки, описані в Тпепто зЗсіепіййс Ріегсе Сто55іїпКіпд Тесппіса! НапароокК, зміст якої повністю включений в даний документ за допомогою посилання.
І209| У ще одному кращому варіанті лікарська речовина (з або без лінкерної групи із приєднаною до неї реакційноздатною групою), яку можна використовувати в даному винаході, є будь-якою зі сполук, показаних у Таблицях 1-7. У ще одному кращому варіанті втілення кон'югат агент, який зв'язується із клітинами/лікарська речовина, який можна виготовити згідно із даним винаходом, є будь-яким із кон'югатів, показаних у Таблиці 8.
Таблиця 1
Структури типових сполук згідно з даним винаходом. -М о.Д)о М М оо Ме, п | ї п у, вва ноу ва ше
У в) (в) с Ї | ; в) (в) й Ї (в) ср кру (в) (6)
М о. До М М о.Д)о Ма, і п | т. ( п т вва но вва еф в) в) (о) Ге) (о) чи ки гри п рве. вва но вва о у о о І) о ІФ)
Ор Оря,
Н Н
М г) (Ф) Ма, -М о в) М
М ОМе Меб М М ОМе МеО М в) о о (в; (в) ки кр о (в)
Н
М ОМе Ммео М М ОМе Ммео М в) в) Ів (9) (в) іє (в їжи Моя вра -М о. До. ач и, М о.Л о Мен, 0) 9) (в) о (о) нас й ефатоуитя
Примітки: п - 1 або З т - З або 4
М - ОН, ОМе, ОМН5, МНМН;», Н, Ме, РИ, пептид
Х - СН», О, 5, МН або ММе
У - СН» або відсутня 7 "7- Н, Ме, Ме, 5(СНг)зС(О)МНО або СНгС(О)МНО, або ВМРБ5, або 5МСС, або 5РУу, або
ЗРУ-МО»
Таблиця 2
Структури типових сполук згідно з даним винаходом (продовження).
Де Что са д т
М ОО. и | (о) М-. М | М щ 7 5 й Оу и те
М ОМе МеО М М ОМе МеО М в) (в о (в в) ух ух (в; МІ ре (- Т-
М о хо | Го) М. ї | Н ск 7 ся М (о) 5. о. Шк
М ОМе Мео М во во в) (в) у, й о 0 о щ 7 т Що 7 т
М ОМе МеО М М ОМе МмеО М о о в) о укрити чт я (в) о
М (о) з. | Го) чо щ | щі т 7 с М Ге) о о. м
М ОМе МмеО М во но в) (в) у, в у» аву й 7 т 7 52 а
М ОМе ме М М ОМе мМмеО М (в) (в) в) (в)
Примітка: пе1,2 або З т - З або 4
М - ОН, ОМе, ОМН5, МНМН», Н, Ме, РИ, пептид
Х - СН», О, 5, МН, ММе
У - відсутня або СНе 7 - СНабо М 7 7- Н, Ме, Ме, Б(СНг)зС(О)МН5 або СНгС(О)МНО, або ВМРО, або 5МСС, або ру, або 5РУу-
МО»
Таблиця З
Структури типових сполук згідно з даним винаходом (продовження) о х 4 вики ше ся с -М ше М. м Ф й г т о 7 о т во ва во о (в) о (в) о кур елуасу й о р "о
М Ге) хе | (о) ло М Ге) зе | Ге) М дн ет ку о (в) (в) о нн ие кори г лорі регу с М оз, о) М се М о. Ге) Шк ох ОМе Ме ке хх ОМе МеО ке о о 6) 6) о оо ду от Ах
М (о) 5 (о) Мо - М (о) ха (о) М ва во ва во о о о о в) (о) ч
АХ «ву пив. (в) а М Ф н ст М о) 5 (в) Ме --М Оки о М во в во во () (в) (в) (в) до в'я 2 о КОХ о М ем о уиннО Мо ва ноу ва ко б) (в) (в) (в
Примітка: пе1,2 або З т - З або 4
М - ОН, ОМе, ОМН5, МНМН», Н, Ме, РИ, пептид
Х - СН», О, 5, МН, ММе 7 - СНабо М 7 "7- Н, Ме, Ме, 5(СНг)зС(О)МНО або СНгС(О)МНО, або ВМРБ5, або 5МСС, або 5РУу, або
ЗРУ-МО»
Таблиця 4
Структури типових сполук згідно з даним винаходом (продовження). о о коки чит
М Ше М М «До М. сет (о) 5 о. сі 2 7 т
М ОМе Ме М М ОМе меО М о (о) (в) (в) ів) й о 0 5
Чо рт Чо и шт о -
М о. зх | Ге) ЧА М (о) х | (о) ча щ 7 т Щ 7 т
М ОМе Ммео М М ОМе меО М (в) (в) (в) (в) о
Чет де-оО - за о) -
М ОМе МмеО М о о о о 00
М бат Чо бум т о с 7 7 т. щ 7 т
М ОМе меО М М ОМе меО М в) (в в) (в
Примітка: пе1,2 або З т - З або 4
М - ОН, ОМе, ОМН5, МНМН», Н, Ме, РИ, пептид
Х - СН», О, 5, МН, ММе 7 - СНабо М 7 "7- Н, Ме, Ме, 5(СНг)зС(О)МНО або СНгС(О)МНО, або ВМРБ5, або 5МСС, або 5РУу, або
ЗРУ-МО»
Таблиця 5
Структури типових сполук згідно з даним винаходом мк очи М люло До. чи
З І 5 З У
М ОМе ме М М ОМе МмеО М (в) (о) (о) (о) (о) ре оре зн он (в) (в)
Н Н
М Ге) Ге) М, М о. о. Мат, -д, І 5 би у
М ОМе МеО М М ОМе МеО М (в) ів) ІФ) в) | ІФ) о. мо ки ом н Н
М О.О Мат, -М ода о) Ме,
Ї 7 / вва но М ОМе МмеО М в) (в) в) (в (в) нер сем Лор нм» о (в)
Н Н
-М О.О М. -М зе; М ва з о в ОМе меОо о щі о о (в) (в) й з. (Ф) ( сей алавня з (в) о б
Ге (в) - 5 од
ЖК ща у га; о в В З ще
Н (в) ТК оо в -М (в о М, н ГУ
М ОМе ме М С, во (в) (в) у, в в)
М
4 М о (в) (в) н
Нн - -8М о о С / ве ва т / М М во но Є ОМе Меб Д в) (в) н / б ОД
ЩІ (в) Оки М ро -- М (о! с Го) Ме,
М я ее о о М. вад
М ОМе МеО М / о о М ОМе МеО М в) (в)
Таблиця 6
Структури типових сполук згідно з даним винаходом (продовження) о ЗО. (в) - РП З
Її а шани, (9) ве но во о (в) (в) ія в
Я лай Ї с, - ОМе (в) ХХ вм ту
Н н с-м Со М М де М о о ще м ва о З щи во о (в) о о (в) о о 5. ща, в. ЖК іо; в о" усу й (в) їх о
Н Н
М о о шк м ше М ве во во ва (в) (в) (в) (в) о зам т) та 4 вих е 4 зно), вн
Н 7 Н се М о. о. М М (о) Б Ге) Мн во ва ва о (в) (в) в) (в) о у о ! о. А р З золю Жито й Й до М
М ше М М о о ще в ХХ / їй м ОМ ме М
М ОМе МеО М Ох -о е е о в) -8 о М (в)
М т о с-м окре о) ко о м
М ОМе ме М. во ХХ. (в) (в) М ОМе Ме не о (в) (в) о в; он о)
АХ збут А АХ ме до М Бе М с-м в) о Мо сх М о. о. Ме, во во о о (в) (в) (в) (в)
Таблиця 7
Структури типових сполук згідно з даним винаходом (продовження) (в) о Н о зн М о. дк ши Чо яву М (в) (в)
Н Н (о) с-м (о) о М-- --М (о) (о) М мк ОМе ва во в (9) Го) о Го! їх о
Ї Ж
МНМНь зве Чо "г 4 3 і
І у М до М с-м (в) о М, се М Го) в) М о о ме в М ОМе МеО М (6) (о) о (9)
Таблиця 5. Структурно типових кон'югатів згідно з даним винаходом
Агент, о М зв'язується Й й Й
Май мтотибитьсуй ет хпітенахи | ,К, ре шк миша ня й ше ие АК
М Ши й Ку ваш що Ме Меб в Ме т п пси Ге М Ї чу іч а най т
ІЗ М 2-Х і ЇН рем Ж тома мое р Бе 7 о хи й
Су т Гі: ї Фгент, що А а и й р МН зв'язується З ні Т йо 5 - ЦІ кайюнами инся Зк З ли 7 її а бек Г ра 2 сто ще г: С 4-х м. в ( В; мання кКш Ку М дтент, що
З Ж пом ук ттиномх Й й х З "зв'євуєтьяя
Сай : й Щ й в кгітинаки
М. т с Ст Ку о у ді ур пити Шк - ув КА й ше І З З
М поме мер ум и оме Ме ня
І МЛ ІЗ 8 ІФ Ї Й о а КІ ше о и ше
Го р сх дтвнт во і А ЇЇ Я ї Н клітинами
Ї КН тр «Ж «А ра чи ко.
МН Її. І ї Я ет ре у яд Ме ки ше її 4 с ц х що, Ж Кк тю , ех фе кер «Ме. рот Где во дю ло,
А том ме ум, тА Ї А. А щі м (У в «НВ і ша Мету -ї Б ПА 6 о їй Ї
А ди
В нн дсвіх зе
Ол од а Ат решти
Й Н соте. АХ бли шов ума Ме ям, (5 5 СІ
(210) У будь-якій зі сполук або кон'югатів, описаних вище в Таблицях 1-8, подвійний імінний зв'язок може взаємодіяти/прореагувати з будь-яким з реагентів, здатних взаємодіяти з імінами (наприклад, реагентами, описаними тут), у відповідності зі способами згідно з винаходом, з утворенням адуктів, у тому числі адуктів бісульфіту. Такі імін-блоковані адукти у сполуках з
Таблиць 1-7 можна використовувати в подальших реакціях, у відповідності зі способами згідно з даним винаходом, з метою одержання кон'югатів згідно 3 винаходом. Аналогічно сполуки, які містять імін-блоковані адукти, можна використовувати в способах згідно з даним винаходом для одержання кон'югатів з Таблиці 8. (211) У ще одному варіанті втілення лікарські речовини, які необов'язково містять зв'язуючу групу (наприклад, лінкерну групу із приєднаною до неї реакційноздатною групою), які можна використовувати у способах згідно з даним винаходом, представлені формулою (А1) або (Аг):
У, Х Х У / ху
Ви утро - В. -, Ве Ве «в
Аз Ве (А Ва Аз
Аг! Агу К Х Шо Ву Во
М Ме--, « Х-; А-0-їІ-0-А. г
Ви ев ве Ва (А2) : де: подвійна лінія -- між М і С являє собою одинарний зв'язок або подвійний зв'язок, за умови, що щонайменше одна із -- між М і С являє собою подвійний зв'язок, і, коли вона являє собою подвійний зв'язок, Х відсутня, а У являє собою -Н, а коли вона являє собою одинарний зв'язок,
Х являє собою -Н або аміно-блокуючу групу, яка перетворює сполуку на проліки; у переважному випадку, коли вона являє собою подвійний зв'язок, Х відсутня, У являє собою -Н, а подвійний зв'язок може взаємодіяти з реагентом згідно 3 винаходом, здатним взаємодіяти з імінами, з утворенням адукту (наприклад, адукту бісульфіту), перед використанням адукту в способах згідно з винаходом з метою отримання кон'югатів лікарська речовина/СВА;
У вибрана із -Н, -ОВ, складного ефіру, представленого -ОСОВ'", карбонату, представленого -
ОСООР', карбамату, представленого -ОСОМЕ' В", аміну або гідроксиламіну, представленого -
МАВ", аміду, представленого -МЧАСОВ'", пептиду, представленого -МВСОР, де Р являє собою амінокислоту або поліпептид, який містить від 2 до 20 амінокислот, тіоефір, представлений -5В', сульфоксид, представлений -5ОВ', сульфон, представлений -5О2В', сульфіт -5Оз, бісульфіт -
О50»з, -502М, -БОЗМ, -О50зМ, галоген, ціаногрупу, азидогрупу або тіол; де М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон (наприклад, Ма"); або
У являє собою сульфіт (НбЗОз, НбО» або сіль НбОз, 5Оз32 або НО», утворену катіоном), метабісульфіт (Н2г520О5 або сіль 52052, утворену катіоном), моно-, ди-, три- і тетратіофосфат (РОз5Нз, РОгб2Нег, РОЗзЗН», РоаН?е або сіль РОз55 РОгб2, РОБ» або РБЗАЗУ, утворену катіоном), складний ефір тіофосфату (Н'О)2РО(ОНІ), В/ІБ5-, ВІБО, ВІБО», ВІБО», тіосульфат (Н5гОз або сіль 52037, утворену катіоном), дитіоніт (Н52гОх або сіль 52042, утворену катіоном), фосфородитіоат (Р(І-ЗХОВОУ(5ХОН) або його сіль, утворену катіоном), гідроксамову кислоту (ВУС(-О)МОН або сіль, утворену катіоном), формальдегідсульфоксилат (НОСН»ВО: або сіль НОСН»оБО», утворену катіоном, наприклад, НОСН2агбО» Ма") або їх суміш, де Ві являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, і заміщений щонайменше одним замінником, вибраним із -М(Ад2, -СО2Н, -503Н і -РОЗН; Ві, необов'язково, може бути додатково заміщений замінником для алкілу, описаним тут; Ві являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; Ве 'являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, гетероцикліл або гетероарил;
В, В'ї В "є однаковими або різними і вибрані із -Н, заміщеного або незаміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономер поліетиленгліколю (-ОСНеСНг»г)п, де п являє собою ціле число від 1 до 2000 (переважно 1-200 або 1-20), 5- або б-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, 5-18-членної системи конденсованих кілець, де щонайменше одне із кілець являє собою ароматичне, яка містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, арилу, який має від 6 до 18 атомів вуглецю, 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів, вибраних із 0, 5, М і Р, де замінник вибраний із галогену, -ОВ?7, -МВвВ», -МО», -МАСОВ", -5Віо, сульфоксиду, представленого -5ОВЩ8, сульфону, представленого -5О28", сульфіту -5Оз, бісульфіту -050О»з, сульфонаміду, представленого -5ХО2МВАВ", ціаногрупи, азидогрупи, -СОВ 1, -
ОСОН або -ОСОМВ Аг; кожна із В»7, Рв, В», Но, Ви: і В:2, незалежно, вибрана із -Н, лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСНг»)п, де п являє собою ціле число від 1 до 2000 (переважно 1-200 або 1-20), 5- або б-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, 5-18-ч-ленної системи конденсованих кілець, де щонайменше одне із кілець являє собою ароматичне, яка містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, арилу, який має від 6 до 18 атомів вуглецю, 3-10-ч-ленного гетероциклічного кільця, яке має 3-18-ч-ленне гетероциклічне кільце, яке має від 1 до 6 гетероатомів, вибраних із О, 5, М і Р, а Во, необов'язково, являє собою 5Н!1з або
СОВІз;
Віз вибрана із лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, 5- або б-ч-ленного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, 5-18-ч-ленної системи конденсованих кілець, де щонайменше одне із кілець являє собою ароматичне, яка містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, арилу, який має від 6 до 18 атомів вуглецю, 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів, вибраних із О, 5, М і Р, Ви, необов'язково, являє собою ОН, де Віа має те ж значення, що й В,
В", необов'язково, являє собою -ОН;
М/ являє собою 0-0, 0-5, СН»г, ВН, 50 і 505; кожна із Ві, В», Вз, Ва, Ві, В», Вз ї Ва, незалежно, вибрана із -Н, заміщеного або незаміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСг)п, де п являє собою ціле
Ко) число від 1 до 2000 (переважно 1-200 або 1-20), або замінника, вибраного із галогену, гуанідинію (-МН(С-МН)МН?г1, «ОВ», -МАвВ», -МО», -МАСОВ', -5В:о, сульфоксиду, представленого - 5ОВ, сульфону, представленого -5028Щ8, сульфіту -5Оз, бісульфіту -050О»з, сульфонаміду, представленого -502МВВ', ціаногрупи, азидогрупи, -СОВІ:, «ОСОВІ:ї або -ОСОМВВіг, де В?,
В», В», Во, Ві: і Ві» такі, як визначено вище, необов'язково, кожна із Ві, В», Вз, В», Ві, В», Вз' або В; 'являє собою лінкерну групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою (за її присутності), яку можно вибрати із мономера поліпіроло, поліїндолілу, поліїмідазолілу, поліпіролоїмідазолілу, поліпіролоіїндолілу або поліімідазолоіїндолілу, який необов'язково несе лінкерну групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою; 7 вибрана із -(СНг)-, де п дорівнює 1, 2 або 3, -СВ:5В'в, -МА17, -О- або -5-, де кожна із В'в,
Вів і Ві, незалежно, вибрана із -Н, лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСН»)ни, де п являє собою ціле число від 1 до 2000 (переважно 1-200 або 1-20);
Ве являє собою -ОВ, -58. або -МВАВ", де В і В' відповідають вищенаведеним визначенням, необов'язково, Кеє являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою (за її присутності);
Х вибраний із -СНе, -МА, -СО, -ВН, -50 або -50», де К відповідає вищенаведеному визначенню; "у являє собою -0-, -СНе»-, -МЕ або -5, де ЕК відповідає вищенаведеному визначенню; 7 'являє собою -СНг або -(СНг)»н, де п дорівнює 2, З або 4, за умови, що не всііз Х, М 7 є
СН?» одночасно;
А і А! є однаковими або різними і вибрані із -О-, - СВВ'О, 5, -СВВ 5, -МВ:і5 або -СВВ'МНВ в, де К і К відповідають вищенаведеним визначенням і де К:5 має те ж значення, що й В; р ї 0 є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного будь-яким із галогену, -ОНВ;, -МАвА», -МО», -МАСОВ, -5В:о, сульфоксиду, представленого -5ХОВ, сульфону, представленого -5028Щ8, сульфіту -5Оз, бісульфіту -О5Оз, сульфонаміду, представленого -502МВА, ціаногрупи, азидогрупи, -СОВч:ї, -ОСОВ:: або -
ОСОМА1Н:2, де визначення К7, Нв, Не, Во, Ні: ії Ві2 відповідають вищевизначеним, або мономера поліетиленгліколю (-ОСНо2СНг)», де п являє собою ціле число від 1 до 2000 (переважно 1-200 або 1-20);
Ї являє собою необов'язкову фенільну групу або 3-18-членне гетероциклічне кільце, яке має від 1 до 6 гетероатомів, вибраних із О, 5, М і Р, необов'язково заміщений, причому замінник являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою (за її присутності) або вибраний із лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного будь-яким із галогену, -ОН?7, -МАвВе5, -
МО», -МАСОВ'", -5Виіо, сульфоксиду, представленого -5ОВ'", сульфону, представленого -5О28., сульфіту -5Оз, бісульфіту -О5Оз, сульфонаміду, представленого -5О2МВАВ, ціаногрупи, азидогрупи, -СОВ:ї, ОСОВ:: або ОСОМК:Н:Іг2, де К7, Нв, Не, Во, Н::ї і Ві відповідають вищенаведеним визначенням, мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСНг)п, де п являє собою ціле число від 1 до 2000 (переважно 1-200 або 1-20); необов'язково, І. сама по собі являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою; або її фармацевтично прийнятні сольвати, солі, гідрати або гідратовані солі, їх оптичні ізомери, рацемати, диастереомери, енантіомери або поліморфні кристалічні структури вказаних сполук; за умови, що вказана сполука містить не більше однієї зв'язуючої групи з приєднаною до неї реакційноздатною групою. (2121) В одному кращому варіанті втілення для лікарських речовин формули (А1) і (А2): подвійна лінія - між М і С являє собою одинарний зв'язок або подвійний зв'язок, за умови, що, коли вона являє собою подвійний зв'язок, Х відсутня, а У являє собою -Н, а коли вона являє собою одинарний зв'язок, Х являє собою -Н або аміно-блокуючу групу, яка перетворює сполуку на проліки;
У вибрана із -Н, -ОВ, МВА 'В", сульфіту -503М або бісульфіту -О5ОзМ, де М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон (наприклад, Ма");
В вибрана із -Н, лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСНг)п, де п являє собою ціле число від ї до 2000 (переважно 1-200 або 1-20), арилу, який має від б до 10 атомів вуглецю, гетероциклічного кільця, яке має від З до 10 атомів вуглецю;
Ко) М/ являє собою С-О, СНг або 505; кожна із Ві, В», В», Ва, Ві, В», Вз її Ви, незалежно, вибрана із -Н, -МО» або зв'язуючої групи з приєднаною до неї реакційноздатною групою (за її присутності);
Вв являє собою -ОН в, де Вів відповідає визначенню для В; 7 вибрана із -(СНг)п, де п дорівнює 1, 2 або 3, -СВ:5В'ів, -МА17, -О- або -5-, де кожна із Вів,
Вів і Ві, незалежно, вибрана із -Н, лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСН»)ни, де п являє собою ціле число від 1 до 2000 (переважно 1-200 або 1-20);
Х вибрана із -СНо або С-0;
У являє собою -О-, -МЕ. або -5, де К відповідає вищенаведеному визначенню; 2 являє собою -СНе- або -(СНг)»2-; кожна із А і А 'являє собою -О-;
Р ї р' є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
Ї являє собою необов'язкову фенільну групу або гетероциклічне кільце, яке має від З до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщений, причому замінник являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою (за її присутності) або вибраний із лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від ї до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного будь-яким із галогену, -ОВ?7, -МВаВ», -МО», -МАСОВ", -5В:о, сульфоксиду, представленого -5ОЩВ, сульфону, представленого -5О028Щ8, сульфіту -5Оз, бісульфіту -050з, сульфонаміду, представленого -«5ХО2МВВ", ціаногрупи, азидогрупи, -СОВ, -
ОСОВ:: або -ОСОМНА1В:и2, мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСН?г)п, де п являє собою ціле число від 1 до 2000 (переважно 1-200 або 1-20); необов'язково, | сама по собі являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою; або її фармацевтично прийнятні сольвати, солі, гідрати або гідратовані солі, їх оптичні ізомери, рацемати, диастереомери, енантіомери або поліморфні кристалічні структури вказаних сполук. (213) У ще одному кращому варіанті втілення лікарська речовина формули (А1) або (Аг) представлена сполуками формул (А4) або (АБ):
У х Х У 7 Аа А 2 ' М М -0- вве вах
Ез А Вз що
ГЕ її І" х й і А с | А ) -/ 7 2 с г
М М
Ко в (АБ) де: подвійна лінія - між М і С являє собою одинарний зв'язок або подвійний зв'язок, за умови, що, коли вона являє собою подвійний зв'язок, Х відсутня, а У являє собою -Н, а коли вона являє собою одинарний зв'язок, Х являє собою -Н або аміно-блокуючу групу, яка перетворює сполуку на проліки;
У вибрана із -Н, -ОН, ефіру, представленого -ОВ, -МВ' В", сульфіту -5Оз3М або бісульфіту -
О5БОЗМ;
М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон (наприклад, Ма");
В, В'ї КЕ" вибрані із лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; одна із Б», Вз, В» ії Вз 'являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою (за її присутності), а інші є -Н, -МЕСОЕ: або -МО»;
Ве являє собою -ОК, де К відповідає вищенаведеному визначенню; 7 являє собою -СНе- або -МЕ, де К відповідає вищенаведеному визначенню;
А являє собою -О- або -МНА 5;
Ї являє собою -(СНг)пп-, де пп являє собою 0 або ціле число від 1 до 5, або заміщений або незаміщений алкіл або алкеніл, який має від 2 до 4 атомів вуглецю, причому замінник вибраний із галогену, -ОВ?7, -МВвВ», -МО», -МАСОВ", -5Віо, сульфоксиду, представленого -5ОВ", сульфону, представленого -5О0283, сульфіту -5Оз, бісульфіту -О5Оз, сульфонаміду, представленого - 5О2МВВ, ціаногрупи, азидогрупи, -СОВІ:, «ОСОВІ: або -ОСОМВІ:1Ві2;
В?, Нв, На», Нио, Ві, Ві» і Ві5 відповідають вищенаведеному визначенню; необов'язково, | сама по собі являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою (за її присутності); одна із І", | "або | "являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою (за її присутності), в той час як інші є -Н; переважно І" являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою (за її присутності); а
Сб являє собою -СН- або -М-, або їх фармацевтично прийнятні сольвати, солі, гідрати або
Зо гідратовані солі, їх оптичні ізомери, рацемати, диастереомери, енантіомери або поліморфні кристалічні структури вказаних сполук. (214) У ще одному кращому варіанті втілення сполука формули (А1) або (Аг) представлена сполуками формул (Аб) або (А7): хх Хх У
Щ 7 о. ло в / У й осн НС ма
Кз й во з бо е и х и х У ча. б охо, (Ат) де: подвійна лінія - між М і С являє собою одинарний зв'язок або подвійний зв'язок, за умови, що, коли вона являє собою подвійний зв'язок, Х відсутня, а У являє собою -Н, а коли вона являє собою одинарний зв'язок, Х являє собою -Н або аміно-блокуючу групу, яка перетворює сполуку на проліки;
ХУ вибрана із -Н, -ОН, ефіру, представленого -ОК, сульфіту -50з або бісульфіту - 0505;
Е вибрана із лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; пп дорівнює 0 або ціле число від 1 до 5; одна із Б», Вз, В» ії Вз 'являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою (за її присутності), а інші є -Н, -МЕСОЕ: або -МО»; одна із І", | "або | "являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою (за її присутності ), за умови, що, якщо одна із І, | "або | "являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою, інші є -Н (наприклад; якщо І" являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою, то "її "є -Н);
Сб являє собою -СН- або -М-, або їх фармацевтично прийнятні сольвати, солі, гідрати або гідратовані солі, їх оптичні ізомери, рацемати, диастереомери, енантіомери або поліморфні кристалічні структури вказаних сполук. (215) В іншому специфічному варіанті втілення одна з Р», Вз, Во її Вз формул (А4) і (Ав) є зв'язуючою групою із приєднаною до неї реакційноздатною групою (якщо присутня) і представлена формулою -М/-В-М-ВУ-У, а інші є -Н; 1" їі 1" формул (А5) і (А7) є-Н, а є зв'язуючою групою із приєднаною до неї реакційноздатною групою (за її присутності ) і представлена формулою
МГ -В-М-ВУ-/, де:
М "відсутня, являє собою -СВеВе-, -О-, -0-С(-0)-, -5-, -СНо-5-, -0О-(0-0)0-, -0-(С-ОЖМ(В2)-, -М(Ве)-, -МЩ(Не)-С(-0)-, -Щ(8е)-С(-0)0- або -С(-0)-;
Ах відсутня або являє собою необов'язково заміщений лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
М відсутня, являє собою -(СНеа-СНе2-О)п-, -О-, -0-0(-0)-, -5-, -0О-(0-0)0-, О-(0-О)М(Ве)-, -
М(Ве)-, -М(Не)-С(-0)-, -М(Не)-С(-0)0-, -С(-0)-, амінокислоту або пептид, який має від 2 до 8 амінокислот;
ВУ відсутня або являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
В: являє собою -Н або лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю;
Ве являє собою -Н, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або -"СН2-СНе2-О)-В2, п являє собою ціле число від 1 до 24; а
У відповідає опису, наведеному вище в четвертому специфічному варіанті втілення. (216Ї Переважно Ко являє собою -Н або -Ме; Ве являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю, або -"(СНа-СНег-О)-В:, п являє собою ціле число від 2 до 8, а інші змінні відповідають опису, наведеному вище в четвертому специфічному варіанті втілення. (217| У ще одному кращому варіанті втілення М являє собою амінокислоту або пептид, який має від 2 до 8 амінокислот. Більш переважно У є валін-цитруліном, діу-аіу-дчіу або аїа-Ієи-аїа-Ієи. (2181) Переважно У є -5Н, -5589 або -СОЕ, як описано вище. (2191 У ще одному специфічному варіанті втілення одна з Б», Вз, Во її Вз формули (А4) і (Аб) є зв'язуючою групою із приєднаною до неї реакційноздатною групою (за її присутності ), і представлена формулою -М/ -8-5-75:1 "11 "" формул (АБ) і (АТ) є -Н, а І" представлена -М/ -В- 5-22, де змінні відповідають опису, наведеному у восьмому і дев'ятому специфічних варіантах втілення.
(220| В іншому варіанті втілення сполуки формули (А1)-(А7) (з або без попереднього інкубування з реагентом, здатним взаємодіяти з імінами), якщо зв'язуюча група із приєднаною до неї реакційноздатною групою вже відсутня, може далі взаємодіяти з біфункціональним зшиваючим реагентом, описаним вище, з утворенням імін-вмісної лікарської речовини, яка несе зв'язуючу групу із приєднаною до неї реакційноздатною групою, яку можна використовувати у способах згідно з даним винаходом. (221) У деяких варіантах втілення імін-вмісна лікарська речовина, яка несе зв'язуючу групу із приєднаною до неї реакційноздатною групою, яку можна використовувати у способах згідно з даним винаходом, представлена будь-якою з наступних формул: 4
МІУ в-лінкер
Х Хх У Х у ' і т ще М-, с
М М озерах і) і) й» ! де: "Лінкер" представлений формулою (а), (аг), (аЗ), (а4), (аб), (аб), (а7) або (ав), описаною вище (у дев'ятому специфічному варіанті втілення); д являє собою ціле число від 1 до 5; п являє собою ціле число від 2 до 6; р являє собою -Н або -БОзМ;
М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон, наприклад, Ма" або К»; а інші змінні відповідають опису у восьмому або дев'ятому специфічних варіантах втілення. (222) Переважно 4 дорівнює 2, а п дорівнює 4. (223) У кращому варіанті втілення лінкер представлений формулою (а), (а4), (а5), (а9) або (а10), описаною вище. (224) У деяких варіантах втілення для сполук формули (А8), описаних безпосередньо вище, змінні відповідають опису, наведеному нижче:
МУ "'являє собою -О-, -М(В2)-, -М(В2)-С(-0)-, - (СО Вг)-, -5- або -СНе-5-;
Ах відсутня або вибрана із лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до б атомів вуглецю;
Ве являє собою -Н, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або -(СНе-СН2-О)2-НХ, де В" являє собою -Н, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, який має від 1 до б атомів вуглецю і який, необов'язково,
Зо несе первинну, вторинну або третинну аміногрупу, або 5- або б-членний азот-вмісний гетероцикл, наприклад, піперидин або морфолін; п являє собою ціле число від 1 до 24, а інші змінні відповідають опису, наведеному у варіанті втілення безпосередньо вище. (225) Переважно ЕХ є -Н або -Ме, а п є цілим числом від 2 до 8. Переважно Ех являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю. (226) У ще одному кращому варіанті втілення лінкер представлений будь-якою формулою, вибраною з формул (а1), (а4), (а5), (а10) і (а11), показаних вище, а інші змінні відповідають опису, наведеному вище в дев'ятому специфічному варіанті втілення. (227) У деяких варіантах втілення для сполук формули (А8), описаних вище у варіантах втілення, змінні відповідають опису, наведеному нижче:
Х ї Є обидва являють собою -Н;
А і А "обидва являють собою -О- ;
Ав являє собою -ОМе;
Ах являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю, а інші змінні відповідають опису, наведеному вище. (228) Переважно В: являє собою -(СНг)р-(СВ'ВЗз)-, де кожна із В! і Ве, незалежно, вибрана із -
Н або лінійного, або розгалуженого алкілу, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; р дорівнює 0, 1, 2 або 3. Більш переважно Ві: і Не є однаковими або різними і вибрані із -Н і -Ме, а р дорівнює 1. (229) У ще одному кращому варіанті втілення лінкер представлений будь-якою формулою, вибраною з формул (а), (ад4), (аб), (а10) і (а11), показаних вище, а інші змінні відповідають опису, наведеному вище.
(230) У ще одному кращому варіанті втілення лікарська речовина формули (АТ), (Аг) або (АЗ) є будь-якою зі сполук, показаних у Таблицях 11-13, а кон'югат, який можна виготовити згідно зі способом відповідно до даного винаходу, є будь-яким з кон'югатів, показаних у Таблиці 14.
Таблиця 11
Структури типових лікарських речовин, які можна використовувати у способах згідно з даним винаходом
М 0-70 Ману т. бли (а
Ї 7 / 95 з 09 Фа (в) (в) (с) (в) (в! ню. с нку (в) (в)
М Ол 0. Ма й о иниО. з / 95 Фо во Фо (с) (в) (в) (в) (в) о Мо о я й О.О. Шк й дра о) - о Фо во Фо (в) (о) (в) (в) (в! ри Аа
М Он иО Ме, й о и лО. Ма 7 | 7 05 то М М 0700 То М (в) (в) (в) (в (в) орг вух (в) (в)
М о и ло Ме М бити М
У У
Ге о7 чо М М (в) (6) М
Ь и. (в) 0 о 7 о. (в) у крита том то тмто б й о и 0. г й орав) (а в Фо о о (в) (в) (в! (в) (в!
НК. о. ва» НК ро (в) (в)
М Он о. Му й О.О. з 7 / (в) (в) (в) (в)
АЖ ї ов о й О.О. з й опа о) я (в) (о) (в) (в) (в) вир вия й ОО. з й оре) г (в) (в) (в) (в (в) вве вх
Примітка: 7 "- Н, 5Ме, 5Ру, 5Ру-МО», Ас; Х "- МН;
Таблиця 12
Структури типових лікарських речовин, які можна використовувати у способах згідно з даним винаходом (продовження) й Он ло. Ше З Об ичО. з (в) (в о (в) о нн. ва нки (в) (в)
З оправ) я й ода о) Шк (в) (в) (в) (в) о о. и он й дра о) (я й ода о) я (в) (в) о (в) о и рання й Он но. Ше й ода ве) я в) (в) (в) (в) о о. нг ор схе (в) (в) 9 ра Х / М 0700 То М
М о (в) М і де і і го! 7 сви ол пруттетьто й о. 0. г З О.О. г о: 07 ев, де чо шен (в) (в) (в) (в) (в) о паса поту
М ода о) Ме Й очи. я (в) (в; (в) (в; о хе (в) 82" ту м 5 і ОО. я й очно г
С У вового (в) (в) (в) (в) 82" х" а ве
М. улОм тло. дич ЛЬ, ма ванни в о: ра ХХ / М осо М
М Ге) о М" Ь є, о о 5 52" З хе
Х ва (в)
Примітка: 7 "- Н, Ме, 5Ру, 5Ру-МО», Ас; Х "- МН;
Таблиця 13
Структури типових лікарських речовин, які можна використовувати у способах згідно з даним винаходом (продовження) (о дин злу 6) Го) о о
М ОМе вошог щева М во о п- 3,4 о ів) Й Й І) в) хх зн 7 З ори дич АВТ ОМ
Н
М оС о Ме, М оС о Мен пев швошов пе ве ош щу (9) 9) (в) (в) в)
Н (8) (0) сок гу утро
Ге) п
М «Лв м- дес о
То вошо ( ї т ОМе /МеО т вд (о) (в) о. й о. о
У у у, є Му у,
М о о М, М о о М ев швошо;; ее вошох; (в) (9) (в) (в) о 9 о 8 щ - фоуо о Дод га (в бо
М о. М М о М (9) (в) (в) (в) о у З
МеО - щ е фото е ша о в) Го) ІФ) ів) в)
М в в Ме МН о їв! Мене (в) (в; (в) (в) (о) (о)
М о-0 ем о т у; Ша у.
М о М МН о о М- ав вошох; Ок вошо,; (в) (в; (в; (в)
Н в) н - Коул меО М
М п ЗН фо Мт вн (в) п ї " «Хв ШЕ м «Ло М
КАС вошо;; Фа шошех; (в) (в) (в) (в) н
Кл о о по Ці Го) щ зубом
М о М-, Н 5 6) ів) ів)
Таблиня 14. Структури типових кон'югатів, які можна янгатовити згідно зі способами відновідно до даного винаходу ій о
Не й т у ши з І х щу 7 ве Арі, зе; доооме о мео Фони сей МорєтюМме омеот тр У -о 6 5 у
І де «А дев етно м о ра Кк у уд и М. дж «А 4 о. ас Між се еткя ог Мо. рес М полю Грона г С еч ли оч «Я кн ВИХ М сяду М се г фИТИМОМме ме сесій Еш ТОМе Ме ум ою. по о со в с ей Ж дитя Оу у Оу денс Інтитло
А иа м. з но дб че р ву чі я шо гу м 7 Ж ке в: ше они ше Ффофптарттоме меоттр у й
Димері хх о Димер? 5 о о о її Їж гм нету ю м боутнння» о же : А ДК
СЛ вл Ї Що и я ет СА о Ж і рих І ре моя ав щі ХМ льоту ряди А ві ред и Ме МеО и и ним ше
Аняагрї ж плн зима оомМебб зр 4 о Димер У п ке туз пра ке Її й що -х о маш - - «і. ях В Я М. і -(3іф-- - Дитини
К ря зро ума меот ер ря «кА спу-слу-сіу-Антиліно --й о - о о
Димер З гла "7 М тя пи Ї пу ях о -й У кут о - ри на Жов Х 0 --- Мав юю Антитіло и ДО томемеот и тр у а- Вту
Димер б І и- І а дж чн дитя Кн я СХ во А е
ЖК о еотомемер т Ко ви: У --6 Автшіпс й Димер 7 " й
Я і і-к «М. сто Антитіг ша М докт ваза им реч на М т о І, днтитілка
ЯлИХ, Ж. Ї Ї А. и, пк А г би лтротомемеет тро ие тя дб ї зи Я п
Димер 8 ще
І231| Будь-які сполуки з Таблиць 11-13 і будь-які кон'югати з Таблиці 14 можуть містити щонайменше один з імінних зв'язків, взаємодіючих з досліджуваним реагентом, здатним взаємодіяти з імінами, у такий спосіб утворюючи адукт, наприклад, адукт бісульфіту. (2321 В одному варіанті втілення імін-вмісна лікарська речовина, яка несе зв'язуючу групу, є сполуками, які мають реакційноздатну складноефірну групу, тіол або групу, здатну взаємодіяти з тіолами, описану вище. (233| Альтернативно вищеописана лікарська речовина може додатково взаємодіяти з біфункціональним зшиваючим агентом з утворенням лікарської речовини, яка несе зв'язуючу групу. Можна використовувати будь-які описані біфункціональні агенти, які зшивають. (234| У ще одному кращому варіанті втілення лікарська речовина, яку можна використовувати в даному винаході, є будь-якою зі сполук, показаних у Таблиці 15.
Таблиця 15
Типові лікарські сполуки, які можна використовувати у способах згідно з даним винаходом асан д М о о й
М т) о М Оки зтнятр (в)
М ОМе МеО М Н о о с-м Го) Го) Ме 1(в- н) 1ь (в - 5Ме) М ОМе мМеО М 1с (в - (СНІ С(-ОМН5 Го) 2 (8 - МН) о о гь (В - ОМе) 2с (В - 5(СН»)зС(:0)МН5)
МН - во (в о) го) о) 8.
Моя ра тає а В
М отити М, т. Н
М го) о) Ме
М ОМе меО М х (в) (в) з(в-н) М ОМ, (в- нео М
Зо (8 - ЗМ) сі-ожНВ (в) 4ь (В - ЗМе) (в)
Зс(в- н «ОН т с (8 - З(СН»)зб(-О)МНБ) 4с (В - В(СН»)зС(-О)МНВ) -ї, а ол ня у ше аз ши м о че :8 - М хх Геу
Ах сво в МОМ в А
ТЯ питних М Ходи и ню ди я
ОО ПО Ое
Кв си отоме Меп ришсня
І 1 о Фа -5РУВООРУМОЇ 5 Т 2 Н я ввів вілли Бен с-м О.А | о) Ме, век з тане тав
Її М М Її рі а а
Ку реяй о в х
М ОМе меО М А я-
Комент о вБ(в-н) о 5 я
БЬ (В - 5Ме) о а
Бе (В - 5(СН»)зС(-О)МНО) «тон дай
К ке! а хх М 5 -паі(вЕса бот а оман зОзМа
М «Хо М- пава» (в) 1а (в)
АГЕНТ, ЯКИЙ ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ ІЗ КЛІТИНАМИ (235) Ефективність кон'югатів згідно з винаходом в якості терапевтичних агентів залежить від ретельного добору відповідного агента, який зв'язується із клітинами. Агенти, які зв'язуються із клітинами, можуть бути агентами будь-якого типу, відомого в цей час, або досліджуваними агентами і включають пептиди та непептидні сполуки. У загальному випадку вони можуть бути антитілами (зокрема, моноклональними антитілами), лімфокінами, гормонами, факторами росту, вітамінами (наприклад, фолатом і т.д., здатним зв'язуватися з рецептором поверхні клітин, наприклад, рецептором фолату), молекулами-переносниками поживних речовин (наприклад, трансферином) або будь-якою іншою молекулою або речовиною, яка зв'язується із клітинами. (236| У деяких варіантах втілення агенти, які зв'язуються із клітинами, є білками або поліпептидами, або сполуками, які включають білки або поліпептиди. Переважно білки або поліпептиди включають один або більше залишків І ух з -МНе-групами бічного ланцюга. У якості альтернативи або доповнення білки або поліпептиди включають один або більше залишків Суб. - Зп-групи бічного ланцюга залишків Сух можуть бути інтактними або можуть перебувати в складі дисульфідного зв'язку, який можна відновити. Краще відновлення дисульфідного(их) зв'язку(ів) не виявляє істотного негативного впливу на функцію зв'язування із клітинами білків або поліпептидів (наприклад, у випадку антитіла або його антиген-зв'язуючого фрагмента відновлення дисульфідних зв'язків не приводить до істотного посилення дисоціації легких ланцюгів/важких ланцюгів). (237| -МНе-групи бічного ланцюга Гу і/або - 5нп-групи бічного ланцюга Су5 можуть бути ковалентно з'єднані з лінкерами, які, у свою чергу, з'єднані з димерними сполуками згідно з винаходом, тим самим здійснюючи кон'югування агентів, які зв'язуються із клітинами, з димерними сполуками згідно з винаходом. Кожні білкові агенти, які зв'язуються із клітинами, можуть містити декілька -МНе-груп бічних ланцюгів Гуз і/або - 5п-груп бічного ланцюга Сув, доступних для зв'язування сполуки згідно з винаходом за допомогою біфункціональних агентів, які зшивають. (238) Зокрема, приклади агентів, які зв'язуються із клітинами, які можна використовувати,
Зо включають: поліклональні антитіла; моноклональні антитіла; фрагменти антитіл, наприклад, Бар, Раб "її Е(аб)», Ем, мінітіла, діатіла, тритіла, тетратіла (Ратат, 9. Іттипої. 131:2895-2902 (1983); ріїіпа еї аї. У. Іттипої. 113:470-478 (1974); Мізопоїї еї аї. Агсп. Віоспет. Віорпуз. 89:230-244 (1960), Кіт еї аї., Мої, Сапсег ТНег., 7: 2486-2497 (2008), Сапег, Маїшге Немз., 6: 343-357 (2006)); інтерферони (наприклад, а, ВД, у); лімфокіни, наприклад, ІІ -2, І -3, ІІ -4, 1-6; гормони, наприклад, інсулін, ТКН (тиреотропін-рилізинг--ормон), МСГ (меланотропін- стимулулюючий гормон), стероїдні гормони, наприклад, андрогени і естрогени; фактори росту і колонієстимулюючі фактори, наприклад, ЕФР, ТФР-альфа, ЕСЕ, ФРЕС,
ГКСФ, МКСОФ і ГМ-КСФ (Вигдез5, Іттипоїоду Тодау 5:155-158 (1984)); трансферин (О Кевів ві а). У. Віої. Спет. 260:932-937 (1985)); вітаміни, наприклад, фолат;
Білкові каркасні структури на основі консенсусної послідовності повторів фібронектину ПІ типу (ЕМ3) (також відомих як Сепіугіп5; див. публікацію патенту США 2010/0255056, включену в даний документ за допомогою посилання);
Сконструйовані білки з анкіриновим повтором (САРРІП; заявки на патент США під номерами 20040132028; 20090082274; 20110118146; 20110224100, включенні в даний документ за допомогою посилання, С. 7аппа еї а). 2010, Сапсег Ке5., 70; 1595-1605, включена в даний документ за допомогою посилання); і
Каркасні білки домена фібронектину (аднектини: заявки на патент США під номери
20070082365; 20080139791, включені в даний документ за допомогою посилання). (239| Методики моноклональних антитіл забезпечують продукцію надзвичайно специфічних агентів, які зв'язуються із клітинами, у вигляді специфічних моноклональних антитіл. Особливо добре відомі в даній галузі методики створення моноклональних антитіл, які продукуються шляхом імунізації мишей, пацюків, хом'яків або будь-якого іншого ссавця антигеном, який представляє інтерес, наприклад, інтактною клітиною-мішенню, антигенами, виділеними із клітини-мішені, цільним вірусом, ослабленим цільним вірусом і вірусними білками, наприклад, білками оболонки вірусу. Крім того, можна використовувати сенсибілізовані клітини людини. Ще одним способом створення моноклональних антитіл є використання фагових бібліотек 5сЕм (одноланцюгових варіабельних областей), зокрема, 5сЕм людини (див., наприклад, сгіййниє еї аІ,, патенти США під номерами 5885793 і 5969108; МеСапйепу еї а!., МО 92/01047; І ітіпд еї аї.,
МО 99/06587). Крім того, можна використовувати антитіла з модифікованою поверхнею, описані в патенті США Мо 5639641, а також химерні та гуманізовані антитіла. Вибір підходящого агента, який зв'язується із клітинами, залежить від конкретної популяції клітин, які є потенційною мішенню, однак, в цілому переважними є моноклональні антитіла людини, якщо доступне відповідне антитіло. (240| Наприклад, моноклональне антитіло МУЗ є ІдбС:і-антитілом миші, яке специфічно зв'язується з антигеном СОЗ3 39.0. (згійп еї ані 8 ГеиКетіа Ке5., 521 (1984)), ії може використовуватися, якщо клітини-мішені експресують СОЗ33, як при гострому мієлобластному лейкозі (ГМЛ). Агент, який зв'язує клітини, може бути будь-якою сполукою, здатною зв'язувати клітину специфічним або неспецифічним чином. Як правило, зазначені агенти можуть бути антитілами ( зокрема, моноклональними антитілами і фрагментами антитіл), інтерферонами, лімфокінами, гормонами, факторами росту, вітамінами, транспортними молекулами поживних речовин (наприклад, трансферином) або будь-якою іншою молекулою або речовиною, яка зв'язується із клітинами. (241| Якщо агент, який зв'язується із клітинами, є антитілом, він зв'язується з антигеном, який є поліпептидом, і може бути трансмембранною молекулою (наприклад, рецептором) або лігандом, наприклад, фактором росту. Типові антигени включають такі молекули як ренін; гормон росту, включаючи гормон росту людину і бичачий гормон росту; рилізинг-фактор
Зо гормона росту; паратиреоїдний гормон; тиреотропний гормон; ліпопротеїни; альфа-1- антитрипсин; А-ланцюг інсуліну; В-ланцюг інсуліну; проінсулін; фолікулостимулюючий гормон; кальцитонін; лютеїнізуючий гормон; глюкагон; фактори згортання крові, наприклад, фактор мтс, фактор ІХ, тканинний фактор (ТЕ) і фактор Вілебранда; антикоагулянти, наприклад, протеїн С; передсердний натрійуретичний фактор; сурфактант легенів; активатор плазміногена, наприклад, урокіназу, сечу людину або тканинний активатор плазміногена (І-Ра); бомбезин; тромбін; гемопоетичний фактор росту; фактори некрозу пухлин-альфа і -бета; енкефаліназу;
ВАМТЕЗ (хемокін, який експресується і виділяється Т-клітинами при активації); макрофагальний білок запалення людини (МІР-1-Альфа); сироватковий альбумін, наприклад, людський сироватковий альбумін; мюлерову інгібуючу субстанцію; А-ланцюг релаксину; В-ланцюг релаксину; прорелаксин; пептид, зв'язаний з гонадотропіном мишії; мікробний білок, наприклад, бета-лактамазу; ДНазу; ІЧЕ; антиген, асоційований із цитотоксичними Т-лімфоцитами (СТІ А), наприклад, СТІ А-4; інігбін; активін; фактор росту ендотелію судин (ФРЕС); рецептори гормонів або факторів росту; білок А або 0; ревматоїдні фактори; нейротрофічний фактор, наприклад, нейротрофічний фактор кісток (ВОМЕ), нейротрофін-3, -4, -5 або -6 (МТ-3, МТ-4, МТ-5 або МТ-6) або фактор росту нервів, наприклад, МОБ-В; тромбоцитарний фактор росту (РОСЕ); фактор росту фібробластів, наприклад, агсСЕ і БЕСЕ; рецептор 2 фактора росту фібробластів (ЕСЕКЗ); епідермальний фактор росту (ЕФР); трансформуючий ростовий фактор (ТРФ), наприклад, ТРФ- альфа і ТРФ-бета, включаючи ТРФ-ДВ1, ТРФ-ВД2, ТРФ-ВЗ, ТРФ-В4 або ТРФ-ВД5; інсуліноподібний фактор росту-і і -ІІ (ІФР-Ї ї ІФР-ІЇ); дез(1-3)-ІФР-І (ІФР-І головного мозку); білки, який зв'язують інсуліноподібний фактор росту; ЕРСАМ, 203, РІГ.Т3, РОМА, РОСА, МОСІТ, МОС16, ЗТЕАР, СЕА,
ТЕМВ2, рецептори ЕрнпА, рецептори ЕривВ, рецептор фолату, ЕОЇ В, мезотелін, стгіріо, альфаубетаб, інтегрини, ФРЕС, МЕСЕВ, ЕСЕВ, рецептор трансферину, ІВТАТ, ІВТА2г, ІВТАЗ,
ІВТА4, ІВТА5; СО-білки, такі як СО2, СО3, 004, 005, С06, С08, СО11, С014, 0019, 0020,
СбОр21, 6022, 0025, 0026, 0028, С030, бО033, 6036, С037, б038, 6040, 0044, 6052, СО55, сбор5б6,С059, 0070, 0079, Сб080, Ср81, Ср103, 60105, 00134, 00137, С0138, 20152 або антитіло, яке зв'язується з одним або більше пухлиноасоційованих антигенів або рецепторів поверхні клітин, описаних у публікації патенту США Мо 20080171040 або публікації патенту США
Мо 20080305044 і повністю включені за допомогою посилання; еритропоетин; остеоіндуктивні фактори; імунотоксини; кістковий морфогенетичний білок (КМБ); інтерферон, наприклад, бо інтерферон-альфа, -бета і -гама; колонієстимулюючі фактори (КСФ), наприклад, МКСФ, ГМ-КСФ і ГКОСФ; інтерлейкіни (І), наприклад, від ІЇ/-1 до 1-10; супероксиддисмутазу; Т-клітинні рецептори; поверхневі білюи мембран; стимулятор гемолізу (ОАЕ-фактор); вірусний антиген, наприклад, фрагмент оболонки ВІЛ; транспортні білки; "хомінг'-рецептори; адресини; регуляторні білки; інтегрини, наприклад, СОТТа, СО116, СО1Т1с, СО18, ІСАМ, МІ А-4 і МСАМ; пухлиноасоційований антиген, наприклад, рецептор НЕН2, НЕВЗ або НЕНА4; ендоглін, с-Меї, 1СЕТ18, РОСА, МОЕР, РОМА, РОСА, І 285, В7НА і фрагменти будь-якого з перерахованих вище поліпептидів.
І242|) Альтернативно ГМ-КСФ, який зв'язується 3 мієлоїдними клітинами, можна використовувати в якості агента, який зв'язує хворі клітини при гострому мієлолейкозі. І -2, який зв'язується з активованими Т-клітинами, можна використовувати для профілактики відторгнення трансплантата, для лікування і профілактики реакції трансплантат проти хазяїна, а також для лікування гострого Т-клітинного лейкозу. МСГ, який зв'язується з меланоцитами, можна використовувати для лікування меланоми, як і антитіла проти меланоми. Фолієву кислоту можна використовувати для спрямованого впливу на рецептор фолату, який експресується пухлинами яєчників і іншими пухлинами. Епідермальний фактор росту можна використовувати для спрямованого впливу на види плоскоклітинного раку, наприклад, рак легенів і голови, і шиї.
Соматостатин можна використовувати для спрямованого впливу на нейробластому та інші типи пухлин. (243) Рак молочної залози і яєчок може бути мішенню естрогену (або аналогів естрогену) або андрогену (або аналогів андрогену), відповідно, використовуваних у якості агентів, які зв'язуються із клітинами. (244) В одному варіанті втілення агент, який зв'язується із клітинами, є гуманізованими моноклональними антитілами. У ще одному варіанті втілення агент, який зв'язується із клітинами, є пиМуЗ-6 або іншими спорідненими антитілами, описаними в патентах США під номерами 7342110 ї 7557189 (включених у даний опис за допомогою посилання). У ще одному варіанті втілення агент, який зв'язується із клітинами, є антитілом проти рецептора фолату, описаним у попередніх заявках США під номерами 61/307797, 61/346595, 61/413172 і заявці на патент США Мо13/033723 (опублікованій як 05 2012-0009181 АТ). Зміст усіх зазначених заявок повністю включений в даний документ за допомогою посилання.
Зо І245| У деяких варіантах втілення агент, який зв'язується із клітинами, може бути моноклональним антитілом або його антиген-зв'язуючими фрагментами, критичними для зв'язування антигена з антитілом, описаних тут, наприклад, пиМу9-6 або споріднених до нього антитіл, описаних у патентах США під номерами 7342110 і 7557189 (включених у даний документ за допомогою посилання). Зазначені похідні антитіл можуть містити практично однакові або ідентичні (1) СОК З3-області легкого ланцюга і/або важкого ланцюга; (2) СОКІ1,
СОК2 і СОК З3-області легкого ланцюга і/або важкого ланцюга; або (3) області легкого ланцюга іМабо важкого ланцюга, у порівнянні з антитілом, описаним тут. Послідовності в межах цих областей можуть містити консервативні амінокислотні заміни, у тому числі заміни всередині
СОВ-областей. Краще, щоб було не більше 1, 2, 3, 4 або 5 консервативних замін. У деяких варіантах втілення похідні антитіл містять область легкого ланцюга і/або область важкого ланцюга, щонайменше на 9095, 9595, 9995 або 10095 ідентичні антитілу, описаному тут.
Зазначені похідні антитіл можуть мати практично аналогічну специфічність зв'язування і/або спорідненість до антигена-мішені у порівнянні з антитілом, описаним тут. Переважно значення
Ка і/або Кожг похідних антитіл перебувають у межах 10-кратних (вище або нижче), 5-кратних (вище або нижче), 3-кратних (вище або нижче) або 2-кратних (вище або нижче) значень для антитіл, описаних тут. Зазначені похідні антитіл можуть бути повністю людськими антитілами або гуманізованими антитілами, або химерними антитілами. Похідні антитіл можна одержати будь-яким зі способів, відомих у даній галузі техніки. (246) В одному варіанті втілення антитіло проти рецептора є гуманізованим антитілом або його антиген-зв'язуючим фрагментом, який специфічно зв'язує рецептор 1 фолату людини, причому зазначене антитіло включає: (а) СОВ1 важкого ланцюга, який включає СМЕММ (ЗЕО 10
МО: 1); СОВ2 важкого ланцюга, який включає ВІНРУОСОТЕУМОХ аа ЕХаагХааз (5ЕО ІО МО: 2); і
СОВЗ важкого ланцюга, який включає УЮСЗВАМОМ (5ЕО ІО МО: 3) і (6) СОВІ1 легкого ланцюга, який включає КАБОБУБЕАСТОІ МН (5ЕО ІО МО: 4), СОВ2 легкого ланцюга, який включає
ВАБМІ ЕА (ЗЕО ІО МО: 5); і СОВЗ легкого ланцюга, який включає ООБАЕМРУТ (ЗЕО ІО МО: 6); де Хаа: вибрана із К, С), Н і В; Хаа: вибрана із С, Н, М і В; а Хааз вибрана із С, Е, Т, 5, А ЇМ.
Переважно послідовність СОВ2 важкого ланцюга включає ВІНРУВИОТЕММОКРЕОСИ (ЗЕО ІЮ МО: 7). (247| У ще одному варіанті втілення антитіло проти рецептора фолату є гуманізованим бо антитілом або його антиген-зв'язуючим фрагментом, який специфічно зв'язує рецептор 1 фолату людини, який включає важкий ланцюг, який має амінокислотну послідовність:
ОМОГ МОБІАЕУМУКРОАБУКІЗСКАБОМ ТЕТ МЕММУУКОЗРООБІ ЕМО ВІНРУрИЮОТЕУМОКРОС
КАТІ ТМОКЗ5ОЗМТАНМЕГТ 5І Т5ЕОРАУ УСТА УраввАМОУМУОСтТТУТУ5ЗАЗТКОаРБМУЕРІ АРЗБ5 кЗТЗаастААГасі МКОМЕРЕРУТУБММЗИаАГ Т5аМНТЕРАМІ О55С(01 51 55УМГУРЗБУ ИТОТМІС
МУМНКРУЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕГІЇ СОРБЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУУУЮСУ5
НЕОРЕМКЕМУМУУрамМЕМНМАКТКРАЕЄОММЗТУВУУМІ ТМ НОМ МЕОКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕ
КТІЗКАКЕОРАЕЕРОММТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І ТОЇ УК ЕМРЗОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ 05 рав;гЕг кі МОКЗАМООСММЕЗСЗУММНЕАЇ НМНУТОК5БІ 5І РОК (5ЕО І МО: 8). (248) У ще одному варіанті втілення антитіло проти рецептора фолату є гуманізованим антитілом або його антиген-зв'язуючим фрагментом, який кодується плазмідною ДНК, депонованою в АТСС 7 квітня 2010 року, яка має номери депонування АТСС РТА-10772 і РТА- 10773 або 10774.
І249| У ще одному варіанті втілення антитіло проти рецептора фолату є гуманізованим антитілом або його антиген-зв'язуючим фрагментом, який специфічно зв'язує рецептор 1 фолату людини, який включає легкий ланцюг, який має амінокислотну послідовність
РІМГТО5РІ 5І АУБ ОРАПЗСКАБОВУВЕАИТОІ МНУУНОКРООСОРАЦП ІМАВАЗМІ ЕАЕУМРОВЕЗОа
ЗаЗзКТОЕТІ МІЗРМЕАЕСААТУУСООЗАЕМРУТЕРССИИТКІ ЕІКАТМААРЗУРІЕРРБЗОЕОЇ КЗатАБМУМ
СГ ММЕМРАЕАКМОУМУКМОМАГОБЕМЗОЕЗУТЕООЗКОБЗТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМУТНО
СІ 55РУТКЗЕМВИаЕС (ЗЕО ІО МО: 9); або
РІМГТО5РІ 5І АУБ ОРАПЗСКАБОВУВЕАИТОІ МНУУНОКРООСООРАП ІМАВАЗМІ ЕАДОМРОВЕЗО
ЗаЗзКТОЕТІ ТІЗРУМЕАЕВААТУМСООЗВЕМУРУТЕРаСОИТКІ ЕІКАТМААРЗУРІЕРРБЗОЕОЇ КЗИатАБУМ
СГ ММЕМРАЕАКМОУМУКМОМАГОБЕМЗОЕЗУТЕООЗКОБЗТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМУТНО
СІ 55РУТКЗЕМАСИЕС (5ЕО І МО: 10). (250) У ще одному варіанті втілення антитіло проти рецептора фолату є гуманізованим антитілом або його антиген-зв'язуючим фрагментом, який специфічно зв'язує рецептор 1 фолату людини, який включає важкий ланцюг, який має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО: 8, і легкий ланцюг, який має амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 9 або ЗЕО ІО МО: 10.
Краще антитіло включає важкий ланцюг, який має амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 8, і легкий ланцюг, який має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 10 (пи БОГ КІ).
Зо (251| У ще одному варіанті втілення антитіло проти рецептора фолату є гуманізованим антитілом або його антиген-зв'язуючим фрагментом, який кодується плазмідною ДНК, депонованою в АТСС 7 квітня 2010 року, і який має номери депонування АТСС РТА-10772 і
РТА-10773 або 10774. (252) У ще одному варіанті втілення антитіло проти рецептора фолату є гуманізованим антитілом або його антиген-зв'язуючим фрагментом, який включає варіабельний домен важкого ланцюга, щонайменше приблизно на 9095, 9595, 9995 або 10095 ідентичний
ОМОЇ МОБІАЕУМУКРОаАБУКІЗСКАБОМ ТЕ ТОМ ЕММУУУКОЗРИОБІ ЕМО ВІНРУРИОТЕУМОКРОС
КАТІ ТМОКЗ5ОЗМТАНМЕГ 5І Т5ЗЕОРАУУУСсТАУразвАМОУМУСОСТТУТУ (5ЕО ІО МО: 11), ї варіабельний домен легкого ланцюга, щонайменше приблизно на 9095, 9595, 9995 або 10095 ідентичний
РІМГТО5РІ 5І АУБ ОРАПЗСКАБОВУВЕАИТОІ МНУУНОКРООСООРАП ІМАВАЗМІ ЕАДОМРОВЕЗО
ЗаЗзКТОЕТІ МІЗРМЕАЕСААТУУСООЗАЕМРУТРОССТКІБІКА (БО 10 МО: 12); або
РІМГТО5РІ 5І АУБ ОРАПЗСКАБОВУВЕАИТОІ МНУУНОКРООСООРАП ІМАВАЗМІ ЕАДОМРОВЕЗО
ЗазКТОЕ ТІ ТІЗРУМЕАЕВААТУМСООЗВЕМРУТРИСИтТкКІ ЕІКА (ЗЕО І МО: 13).
І253| Агент, який зв'язує клітини, наприклад, антитіло, можна модифікувати гетеробіфункціональним зшиваючим агентом, який несе групу, здатну взаємодіяти з амінами, наприклад М-гідроксисукцинімідну групу (МНО-групу), здатну взаємодіяти 3 тіолами, малеїімідогрупу, вінілпіридин, вінілсульфон, вінілсульфонамід або групу на основі галоацетилу, або тіолову групу. (254) Тіолові залишки можна ввести до складу антитіла за допомогою ряду способів, відомих у даній галузі техніки, у тому числі: а) модифікації антитіла тіол-генеруючими реагентами, наприклад, 2-імінотіолану або тіолактону гомоцистеїну, або б) за допомогою реакції з дисульфід-вмісним гетеробіфункціональним зшиваючим агентом, наприклад, 5РР, 5РОР,
ЗРОВ, сульфо-5РОВ, з наступним відновленням дисульфідного зв'язку ЮТТ або ТСЕР, одержуючи вільний тіол, в) мутагенезом з метою введення неприродних залишків цистеїну, наприклад, цистеїн-сконструйовані антитіла (052007/0092940 АТ, 05 2010/0003766 АТ, 05 7723485 В2), або г) відновлення нативних дисульфідних зв'язків (ає! Возагіо, В. В. єї а)., Сапсег
Вез. Зиррі. 1990, 50, 8045-8085). (255) Групу, здатну взаємодіяти з тіолами, наприклад, малеїмідо, вінілпіридин, вінілсульфон, бо вінілсульфонамід або групу на основі галоацетилу можна ввести в антитіло шляхом його модифікації гетеробіфункціональним зшиваючим агентом, який несе групу, здатну взаємодіяти з тіолпами (включаючи 5РОВ, М-сукцинімідил-4-(4-нітропіридил-2-дитіо)бутаноат, сульфо-5МОС,
ЗМОС, 1 0-5М0С, КМОА, ВМРБ5, СМВ5, сульфо-2МВ5, ЕМО5, сульфо-ЕМОС5, АМАБ5, 5У5ЗВ,
ЗРР, МНО-(ПЕГ)п-таї, де п - 1-24, переважно 2, 4, 8, 12 і 24, але не обмежуючись ними).
Зшиваючі агенти, які включають групу на основі малеімідогрупи, включають М-сукцинімідил-4- (малеімідометил)циклогексанкарбоксилат (5МСОС), М-сукцинімідил-4-(М-малеїімідометил)- циклогексан-1-карбокси-(б-амідокапроат), який являє собою "довголанцюговий" аналог МОСС (І 0-5МСС), М-сукцинімідильний ефір к-малеімідоундеканової кислоти (КМИОА), М- сукцинімідильний ефір у-малеімідомасляної кислоти (4МВ5), М-гідроксисукцинімідний ефір 6- малеімідокапронової кислоти (ЕМСО5), м-малеімідобензоїл-М-гідроксисукцинімідний ефір (МВ5),
М-(а-малеїмідоацетокси)-сукцинімідний ефір (АМА5), сукцинімідил-6-(Д- малеімідопропіонамідо)гексаноат (5МРН), М-сукцинімідил-4-(п-малеімідофеніл)бутират (5МРВ) і
М-(п-малеіїмідофеніл)їізоцианат (РМРІ). Описані сполуки, здатні взаємодіяти з тіолами, які містять вінілпіридин (Егієдтап М. еї. АЇ. пі. У). Реріїде Ргоївєїп Не. 1974, 6, 183-185; Мак А. еї. АЇ.
Апаї. Віоспет. 1978, 84, 432-440). Описані сполуки, здатні взаємодіяти з тіолами, які містять вінілсульфонову групу (Мав М. 5. У. Ргоїєїпй Спет., 1988, 7, 49-54; Могригдо, М. еї. АЇ.
Віосопішдаїє Спет. 1996, 7, 363-368). Зшиваючі реагенти, які включають групу на основі галоацетилу, включають М-сукцинімідил-4-(йодоацетил)-амінобензоат (БІАВ), М- сукцинімідилйодоацетат (5ІА), М-сукцинімідилбромоацетат (5ВА) і /М-сукцинімідил-3- (бромоацетамідо)пропіонат (5ВАР). (256) Модифіковане антитіло можна очистити за допомогою будь-яких підходящих способів, відомих у даній галузі техніки, наприклад, гель-фільтрації, тонкоплівкової фільтрації або іонообмінної хроматографії, або афінної хроматографії.
І257| Усі посилання, наведені тут і в наведених нижче прикладах, спеціально повністю включені за допомогою посилання.
КОН'ЮГАТИ "АГЕНТ, ЯКИЙ ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ ІЗ КЛІТИНАМИ - ЛІКАРСЬКА РЕЧОВИНА" (258| Даний винахід забезпечує вдосконалені способи одержання кон'югатів агент, який зв'язується із клітинами/лікарська речовина, які включають агент, який зв'язується із клітинами, приєднаний до однієї або більше цитотоксичних сполук згідно з даним винаходом за допомогою
Зо різних лінкерів, включаючи дисульфідні лінкери, прості тіоефірні лінкери, лінкери на основі амідних зв'язків, пептидазо-лабільні лінкери, кислото-лабільні лінкери, естеразо-лабільні лінкери, але не обмежуючись ними. (259) Типові кон'югати, які можна виготовити за допомогою способів згідно 3 винаходом, включають антитілолдитотоксична сполука, фрагмент антитіла/цитотоксична сполука, епідермальний фактор росту (ЕФР)/цитотоксична сполука, меланотропін (МСГ)/цитотоксична сполука, тиреотропін (ТТГ)/цитотоксична сполука, соматостатин/цитотоксична сполука, фолат/цитотоксична сполука, естроген/цитотоксична сполука, аналог естрогену/цитотоксична сполука, андроген/цитотоксична сполука і аналог андрогену/цитотоксична сполука. Типовий кон'югат фолат/цитотоксична сполука, який містить необов'язковий адукт -«5Оз3Ма при імінному зв'язку одного із двох мономерів лікарської речовини, зображений нижче. Типова схема синтезу зазначеного кон'югату показана на Фіг. 26. дл Мор я АД о
І ж ГФ) мео. тов вв о С соно 7 МН
Мабзв. М «С о М не мн йо Кр (в) (в) кон'югат фолат/цитотоксична сполука (260) У кращому варіанті втілення даний винахід забезпечує способи одержання кон'югатів, які включають індолінобензодіазепінову димерну сполуку (наприклад, формул (ІБ), (ППБ), (аб), (ПАБ), (ІВБ), (ПІВБ), (ХП), (ХБ) і т.д.) і агент, який зв'язується із клітинами, з'єднані за допомогою ковалентного зв'язку. Лінкнер може розщеплюватися в області пухлини/небажаних проліферуючих клітин, доставляючи цитотоксичний агент до його мішені різними шляхами.
Лінкер може бути розщепленим, наприклад, за низького рН (гідразон), у відновлюваному середовищі (дисульфід), шляхом протеолізу (амідний/лпептидний зв'язок) або шляхом ферментативної реакції (естеразної/глікозидазної). (261) У кращому аспекті типові цитотоксичні кон'югати, які можна виготовити за допомогою способів згідно з винаходом, являють собою кон'югати антитіло/індолінобензодіазепінову димерну сполуку, фрагмент антитіла/індолінобензодіазепінову димерну сполуку, епідермальний фактор росту (ЕФР)/ндолінобензодіазепінову димерну сполуку, меланотропін (МСГу/індолінобензодіазепінову димерну сполуку, тиреотропін (ТГ/індолінобензодіазепінову димерну сполуку, соматостатин/індолінобензодіазепінову димерну сполуку, фолат/індолінобензодіазепінову димерну сполуку, естроген/індолінобензодіазепінову димерну сполуку, аналог естрогену/індолінобензодіазепінову димерну сполуку, інгібітор простатоспецифічного мембранного антигена (РЗМА)/індолінобензодіазепінову димерну сполуку, інгібітор матриптази/ндолінобензодіазепінову димерну сполуку, сконструйовані білки з анкіриновими повторами (Оагріп)//ндолінобензодіазепінову димерну сполуку, андроген/індолінобензодіазепінову димерну сполуку і аналог андрогена/індолінобензодіазепінову димерну сполуку. (2621 Так, у чотирнадцятому специфічному варіанті втілення способи згідно з винаходом забезпечують одержання кон'югату, який включає: цитотоксичну сполуку і агент, який зв'язується із клітинами (СВА), причому зазначена цитотоксична сполука ковалентно зв'язана з
СВА за допомогою зв'язуючої групи, і фрагмент кон'югату, і при цьому цитотоксична сполука і зв'язуюча група представлені будь-якою з наступних формул:
У. ху й ву. ку МН ж лА-0-ї-0-А м- 2: Ві ' зо вве ав) во
Ко. ку ху фе Іще! Ко ки му Кв Ре мя ва (ть) або її фармацевтично прийнятною сіллю, де:
У являє собою групу, яка відходить, і являє собою сульфіт (НбОз, Н5ОО» або сіль Н5Оз, 5Оз2 або Н5О», утворену катіоном), метабісульфіт (Н252О5 або сіль 52052, утворену катіоном), моно-, ди-, три- і тетратіофосфат (РОз5Нз, РОгб2Н», РОззНег, РБаН»г або сіль РОз5У, РОг52У,
РОБ» або РБАЗ-, утворену катіоном), складний ефір тіофосфату (В'Ю2РБ(ОВІ), В/5-, ВІБО,
ВО», ВО», тіосульфат (Н5гОз або сіль 52032, утворену катіоном), дитіоніт (Н52Ох або сіль 52042, утворену катіоном), фосфородитіоат (Р(-5ХОВО(5ХОН) або його сіль, утворену катіоном), гідроксамову кислоту (ВКС(-О)МОН або сіль, утворену катіоном), формальдегідсульфоксилат (НОСН»ВО» або сіль НОСНобО», утворену катіоном, наприклад,
НОСНоБО» Ма") або їх суміш, де В! являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, і заміщений щонайменше одним замінником, вибраним із -М(В/)2, -СО2Н, -БОзЗН и -РОЗН; Ві, необов'язково, може бути додатково заміщений замінником для алкілу, описаним тут; ВІ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; Вк "'являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, гетероцикліл або гетероарил; переважно У являє собою адукт бісульфіту, гідросульфіту або метабісульфіту, або їх солі (наприклад, сіль натрію);
Х "вибрана із -Н, амін-блокуючої групи, зв'язуючої групи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНгСНгО)-Не, необов'язково заміщеного арилу, який має від 6 до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, і необов'язково заміщеного 3-18-ч-ленного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, Мі Р;
М вибрана із -Н, оксогрупи, зв'язуючої групи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 6-18--ленного арилу, необов'язково заміщеного 5-18- членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів;
В: являє собою -Н або заміщений, або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю або зв'язуючу групу; кожна із Ві, В», Вз, Ва, Ві, В», Вз ії Ви, незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -ОСНегСНг)-Не-, галогену, гуанідинію / (-МН(С-МН)ІМН»ІЇ, -ОВ, -МА'Я"З, -МО», -МСО, -МВ'ЄОВ", -58, сульфоксиду, представленого -«ЗХОВ, сульфону, представленого -5028", сульфонату -5Оз3 "Ме, сульфату -
О5О5 М», сульфонаміду, представленого -«ХО2МВ В", ціаногрупи, азидної групи, -СОВ", -ОСОВ,, -ОСОМВ' В "їі зв'язуючої групи;
М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон, наприклад, Ма»;
Е, в будь-якому випадку незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, амін-блокуючої групи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНаСНгО)-Ве, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, або необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, Мі Р; кожна із Кі К", незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -ОВ, -МНЕА, -МЕА», -СОК, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНаСНгО)-Н8е ї необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із
О,5,МіР;
Де являє собою -Н або заміщений, або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю або зв'язуючу групу; п являє собою ціле число від 1 до 24;
М/ вибрана із С-О, С-5, СНе, ВН, 50 і 505;
Ве являє собою -Н, -В, -ОВ, -58, -МА В", -МО», галоген або зв'язуючу групу; 7 і 2, незалежно, вибрані із -««СНг)п-, -«СНг)и-СВ7Ав-(СНег) па, ««(СНг)а-МА»-(СНг)па-, -««СНг)т-О- (СНг)па-- і ««СНг)-5-(СНег) па-; п'їпа 'є однаковими або різними і вибрані із 0, 1, 2 і З;
В; і Вг є однаковими або різними, і кожна із них, незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -5Н, -СООН, -МНВ", мономера поліетиленгліколю -"ОСНеСнНг)п-, амінокислоти, пептидної одиниці, яка несе від 2 до б амінокислот, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
В», незалежно, вибрана із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера полієтиленгліколю - (ОСНеСН г) п-;
А і А" є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із -О-, оксо (-С(-0)-), -СВВ'О-, -СВВ -, -5-, -СВВ'5-, -М(В5)- і-СВВ'М(В5)-,
А5, в будь-якому випадку незалежно, являє собою -Н або, необов'язково, заміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; рі р' є однаковими або різними і, незалежно, відсутні або вибрані із групи, яка складається із необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, амінокислоти, пептиду, який несе від 2 до 6 амінокислот, і мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСНг)п-;
Ї відсутня, являє собою зв'язуючу групу, мономер поліетиленгліколю (-ОСНеСНг)п-, необов'язково заміщений лінійний, розгалужений або циклічний алкіл або алкеніл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенільну групу, 3-18-членне гетероциклічне кільце або 5-18-членне гетероарильне кільце, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, М і Р, де алкіл або алкеніл, необов'язково, заміщені зв'язуючою групою, феніл або гетероциклічне або гетероарильне кільце можуть бути, необов'язково, заміщені, причому замінник може включати зв'язуючу групу. (263) Типовий кон'югат представлений нижче ("АБр" означає СВА, наприклад, антитіло):
В о о 5 Ск м яти ро п а ци а т рон и ри ж па лин в Є ї са т меохв ук. я зе. АЖ ше Я сб 7 ОМе Ме о М
Ї 5 «НИ (Я В кх На ВСЬМа щі (264) У деяких варіантах втілення У є -«502М, -«5Оз3М або -Ю5ОзМ. (І265| У деяких варіантах втілення кон'югати, які можна синтезувати згідно зі способами згідно з винаходом, включають наступні сполуки:
Н зу СВА (в)
Н Н й М ше М- ку в ме но. А м (в) (о) г .
М СВА тату (в)
Н Н Ух
М ше Ми ки о ме мно: Ху (о) (о) г .
М СВА з ит (о) / Н м
М Ге) Ф) М-и во во є) (в) г . (в) о св
М Ге! Ге! М во но (о) (в) г .
СВА
(в) м Й Н
М Ге) | Ге) М-- ва во (о) (о) г .
(о) (о! М СВА иа титр (е) во но (в) (в) г . о. о. М СВА ле о а ах сту І
М в) Ге) М во во с) (в)
Й ; (в) (о)
УА СВА
М ОЙ их ло М-- во ноя (в) (в) г . де:
СВА є агентом, який зв'язується із клітинами, г є цілим числом від 1 до 10, МУ є -Н, адуктом бісульфіту, гідросульфіту, метабісульфіту або їх солями, або -5О3М, а М є -Н або фармацевтично прийнятним катіоном. (266| У деяких варіантах втілення | відсутня або вибрана з необов'язково заміщеної фенільної групи і необов'язково заміщеної піридильної групи, де фенільна і піридильна група несе зв'язуючу групу, або І. є аміногрупою, яка несе зв'язуючу групу (тобто -М(зв'язуюча група)-), або І. є лінійним, розгалуженим або циклічним алкілом або алкенілом, який має від 1 до 6 атомів вуглецю і несе зв'язуючу групу.
І267| У п'ятнадцятому специфічному варіанті втілення цитотоксична сполука, приєднана до зв'язуючої групи, представлена будь-якою з наступних формул: ре І що х я ди хх ОС х : зе
А с А: 2, іє)
М М
Ре Ре бАв) або
І" у ре я І" ху с
М 8 М
Ре ке (ПА) де:
ГУ, 7. "є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(ОСНеСНг)п-Н-, галогену, гуанідинію |-
МН(С-МН)МН»гЇ, -ОВ, -МА'В", -МО», -МВ'ЄОВ", -58, сульфоксиду, представленого -5ОВ',
сульфону, представленого -5О028Щ8', сульфонату -5Оз3М, сульфату -О5ОзМ, сульфонаміду, представленого -«5ХО2МВ В", ціаногрупи, азидної групи, -СОВ', -ОСОВ', -«ОСОМВ' В "її зв'язуючої групи, за умови, що тільки однаізі",ї "її "являє собою зв'язуючу групу; а
Сб вибрана із -СН- або -М-. Інші групи відповідають опису, наведеному вище в чотирнадцятому специфічному варіанті втілення. (268) У деяких варіантах втілення одна з 1", І" або І " являє собою зв'язуючу групу, а інші є -
Н. Переважно /" являє собою зв'язуючу групу, а! "у! "є-Н. (269) У деяких варіантах втілення А і А" обидві є -О-, Вє являє собою -ОМе, а с являє собою -СсН-. (270| У шістнадцятому специфічному варіанті втілення І!" представлена наступною формулою: -МГАВ-МУ-ВУ-У, де:
МІ ії М є однаковими або різними і кожна із них, незалежно, відсутня або вибрана із -СвВеве-, -0-, -0-60(-0)-, -0(-0)-0-, -5-, -50-, -5025-, -СНе-5-, -СНгО-, -СНаМАе-, -0-(0-0)0-, - -0-(0-О)М(8е)-, -М(Не)-, -М(Не)-С(-0)-, -С(-0)-М(Ве)-, -М(Не)-С(-030-, -М(С(-0)8е)С(-0)-, .--
М(С(-0)В8е)-, -0-СНе-СНг)-, -55- або -С(-О)-, або амінокислоти, або пептиду, який має від 2 до 8 амінокислот;
Ах ї ВУ є однаковими або різними і кожна із них, незалежно, відсутня або являє собою необов'язково заміщений лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, який має від б до 10 атомів вуглецю, або 3-8-ч-ленне гетероциклічне кільце, яке несе від 1 до З гетероатомів, вибраних із О, М або 5;
Де ї Ве є однаковими або різними і вибрані із -Н, лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або -«"СН2-СНе2-О)-АК, де Кк являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю і який, необов'язково, несе вторинну аміногрупу (наприклад, -МНА") або третинну аміногрупу (-МАЛТОТАТОг), або 5- або б-членний азот-вмісний гетероцикл, наприклад, піперидин або морфолін, де кожна із В'"9! і Дб, незалежно, являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; переважно кожна КО! ї ІД'єЄ», незалежно, являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; п являє собою ціле число від 1 до 24; а
У ковалентно зв'язана з СВА і вибрана із сукциніміду, ацетамідо, -5-, -55-, -СНег95-, -
Сн(Ме)5-, -С(Ме)25-, -МА»-, -«СН»МАе-, -МАеМ- і -Ф(-0)-, де В! являє собою -Н або заміщений, або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю. (271|| У деяких варіантах втілення ./ являє собою -5-, -55-, сукцинімід або -С(-0)-. (272) У деяких варіантах втілення Не "'являє собою -Н або -Ме; Ве являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю, або -(СН2-СНе-О)0-ВК; п являє собою ціле число від 2 до 8; Вк являє собою -Н, -Ме або -СН.СНо-ММег, а інші змінні відповідають опису, наведеному вище в п'ятнадцятому специфічному варіанті втілення. (273) У деяких варіантах втілення М являє собою амінокислоту або пептид, який має від 2 до 8 амінокислот. (274| У деяких варіантах втілення У є валін-цитруліном, діу-діу-діу або аїа-Ієи-аіа-Іеи. (275) У деяких варіантах втілення
МУ "'являє собою -О-, -М(В2-)- або -М(В2)-С(-0)-;
Ве являє собою Н, лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю, або -«бно-СНео-О)-8Є
Ах являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю;
М відсутня або являє собою -(О-СНе-СНг)н-, -С(-0)-МН-, -5-, -МН-С(-О)-;
ВУ відсутня або являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; а
У являє собою -5-, -55- або -С(-0)-, а інші групи відповідають визначенню в шістнадцатому специфічному варіанті втілення. (276) У деяких варіантах втілення
МУ "'являє собою -О-, -М(В2)- або -М(В2)-С(-0)-;
Ве являє собою -Н, -Ме або -«"СН2-СНе-О)-Ме; п являє собою ціле число від 2 до 6;
Ах являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який несе від 1 до 6 атомів вуглецю;
М ї ВУ відсутні; а
У являє собою -С(-0О)-. Інші групи відповідають визначенню в шістнадцятому специфічному варіанті втілення. (І277| У сімнадцятому специфічному варіанті втілення І" із шістнадцятого специфічного варіанту втілення представлена наступною формулою:
М -ІСВІ"ВаІ-м-(Су|ю--ІСВз"Ва7ь-С(-0)-, де: кожна із Ви", В2 "і Вз", незалежно, являє собою -Н або лінійний, або розгалужений алкіл, який несе від 1 до 4 атомів вуглецю, переважно -Ме;
Ва "являє собою -Н, лінійний або розгалужений алкіл, який несе від 1 до 4 атомів вуглецю (переважно -Ме), -«5Оз3Н або -5О:3"М", де М" являє собою фармацевтично прийнятний катіон; а являє собою цілі числа від 0 до 5 (наприклад, від 0 до 2, 3, 4 або 5), а Б - ціле число від 0 до 6 (наприклад, від 0 до 3, 4, 5 або б); а
Су являє собою, необов'язково, заміщене 5-членне гетероциклічне кільце, яке несе гетероатом М, переважно Су являє собою в) но, (в) . (278| У деяких варіантах втілення, наприклад, у шістнадцятому або сімнадцятому специфічному варіанті втілення, М/ є -М(Не)-. (279| У деяких варіантах втілення, наприклад, у шістнадцятому або сімнадцятому специфічному варіанті втілення, Ве являє собою -(СНа-СНег-О)2-6-НК, де КК являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю.
І280| У деяких варіантах втілення, наприклад, у шістнадцятому або сімнадцятому специфічному варіанті втілення, М є -5- або -55-. (281) У вісімнадцятому специфічному варіанті втілення / із шістнадцятого або сімнадцятого специфічного варіанту втілення представлена наступною формулою: - МА--ІСВ"В2и-5-(СВАз"Валь-С(-0)-. (2821) У деяких варіантах втілення, наприклад, у шістнадцятому-сімнадцятому специфічних варіантах втілення, кон'югат являє собою: питати а й й п ж Н
М о еще: М- ва по М ; де
Й збо п пиши ме й в антитво і СВ хуй ФІ Н пи о Мк
Сом тоМме о меобЯ се
ІА о о ФІ
Зо й де г є цілим числом від 1 до 10, М є -503М, а М є -Н або фармацевтично прийнятним катіоном. (283) У деяких варіантах втілення, наприклад, у шістнадцятому-вісімнадцятому специфічних варіантах втілення, антитіло є пимМу9-6.
І284| У дев'ятнадцятому специфічному варіанті втілення !/' із шістнадцятого або сімнадцятого специфічного варіанту втілення представлена наступною формулою: - МАСА "В2"Іа-5-Су-(СВАз"Валь-С(-0)-.
І285| У деяких варіантах втілення, наприклад, у шістнадцятому, сімнадцятому і дев'ятнадцятому специфічних варіантах втілення, кон'югат являє собою: - о о сі антитіло бмтоттитьтк сх о як - ОМе мо м і а о й збо в, тот тд антитіло
З н
М хоАОЛНИ со Ме; М--
МК - ОМе Мес 5 щ ; о Ге
Е
Й де г є цілим числом від 1 до 10, М є -50О3М, а М є -Н або фармацевтично прийнятним катіоном.
І286| У деяких варіантах втілення, наприклад, у шістнадцятому, сімнадцятому і дев'ятнадцятому специфічних варіантах втілення, антитіло є пиМу9г-6.
І287| У двадцятому специфічному варіанті втілення цитотоксична сполука, приєднана до зв'язуючої групи, представлена наступною формулою: вх
Ме 7-2 є й дж
Мн А с | А: - с З
М М
Рв ке авь) ме ва х
Х й й -/
Ор Х -5 е М ав) де:
МУ відсутня або вибрана із -О-, -М(Нг)-, -(Не)-С(-0)-, -Щ(С(-0)Нг)-, -5-, -СН2-5- або -СН2МАе-
Ах відсутня або вибрана із лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
Ве являє собою -Н, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або -(СНа-СН2-О)0-НК де НК являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю і який, необов'язково, несе вторинну аміногрупу (наприклад, -МНА"С) або третинну аміногрупу (-МА'ОВ"О2), або 5- або 6- членний азот-вмісний гетероцикл, наприклад, піперидин або морфолін, де кожна із В"! ї Ід'о2, незалежно, являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; 7: приєднана до СВА і являє собою вуглець-вуглецевий зв'язок або -587-;
А" являє собою ВЗ або заміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю, який несе реакційноздатний складний ефір, вибраний із М- гідроксисукцинімідних ефірів, М-гідроксифталімідних ефірів, М-гідроксисульфосукцинімідних ефірів, пара-нітрофенілових ефірів, динітрофенілових ефірів і пентафторофенілових ефірів;
ВЗ вибрана із фенілу, нітрофенілу, динітрофенілу, карбоксинітрофенілу, піридилу або нітропіридилу; а п являє собою ціле число від 1 до 24, а інші змінні відповідають опису, наведеному вище у восьмому або п'ятнадцатому специфічному варіанті втілення.
І288) У двадцять першому специфічному варіанті втілення цитотоксична сполука, приєднана до зв'язуючої групи, представлена наступною формулою: ев у 7-2
Уч й дж
МН А хо | А - іє)
М М
Ре ве
Го) ми в-г о до дет,
Н ' 2
А с А 5 й М
М
Ве ке
Фь) , де:
МУ відсутня або вибрана із -О-, -М(Нг)-, -(Не)-С(-0)-, -Щ(С(-0)Нг)-, -5-, -СН2-5- або -СН2МАе-
Ах відсутня або вибрана із лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
Ве являє собою -Н, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або -(СН2-СН2-О)и-НКХ, де В" являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю і який, необов'язково, несе вторинну аміногрупу (наприклад, -МНА"С) або третинну аміногрупу (-МА'ОВ"О2), або 5- або 6-
Ко) членний азот-вмісний гетероцикл, наприклад, піперидин або морфолін, де кожна із В"! ї Ід'о2, незалежно, являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; п являє собою ціле число від 2 до 6; 75 приєднана до СВА і вибрана із: зв'язку;
Ф) о (01);
ів)
З (снодв- Ці 7 --
Ку о (62);
З (0) т (СНо) н о 7 а о о й (63); м Ї
М сна З пн я (54);
Кот чо ч (Фін. (сю СУ вв) (в) о я Ж ре
М
Н У (66); 5 зоре х,
ОО (67); 5
О (68); 5ОЗМ
Кут (Ф) (69) о 1 ААЖААЖ
Н
М М кове ва (г; (010), де: д являє собою ціле число від 1 до 5; а
М є -Н або фармацевтично прийнятним катіоном, наприклад, Ма: або Кз. (289) У деяких варіантах втілення 22 представлена будь-якою з наступних формул: в) о Ку
В м о о
М о (61); Н (4);
о : о о : (); у о (65); (9) (р12); (9) (013). (290) У деяких варіантах втілення, наприклад, в 21-му специфічному варіанті втілення, М/ є -М(Не)-.
І291| У деяких варіантах втілення, наприклад, в 21-му специфічному варіанті втілення, Ве являє собою -(СНо-СН2-О)0-АК, де ВК являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю. (2921) У деяких варіантах втілення, наприклад, в 21-му специфічному варіанті втілення, Вк являє собою -Н або - Ме, п дорівнює 4, а 4 дорівнює 2.
І293| У деяких варіантах втілення, наприклад, в 21-му специфічному варіанті втілення, Ах являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю. (І294| У деяких варіантах втілення, наприклад, в 21-му специфічному варіанті втілення, Ах являє собою -(СНг)р-(СВ'/Н9)-, де кожна із В'ї ВО незалежно вибрана із Н або лінійного або розгалуженого алкілу, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; а р дорівнює 0, 1, 2 або 3. (295) У деяких варіантах втілення, наприклад, в 21-му специфічному варіанті втілення, В. і
Де є однаковими або різними і вибрані із -Н і -Ме; а р дорівнює 1.
І296) У двадцять другому специфічному варіанті втілення, кон'югат формули (МІВ ї (ХУ), а також описаний у двадцять першому специфічному варіанті втілення, змінні відповідають опису, наведеному нижче:
У являє собою -50зМ;
М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон (наприклад, Ма"); як Х, такі У є -Н; як А, такі А 'є -О-;
Вв являє собою -ЮОМе; а
Ах являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до б атомів вуглецю. (297| У деяких варіантах втілення, наприклад, специфічних варіантах втілення з 14-го по 21- й, У вибрана із -50О3М, -502М і сульфату -«05ОзМ. Переважно У являє собою -503М. Переважно
М являє собою -Н, Ма: або КУ. (298) У деяких варіантах втілення, наприклад, специфічних варіантах втілення з 14-го по 22- й, МУ, якщо присутній, є С-О.
Зо (299) У деяких варіантах втілення, наприклад, специфічних варіантах втілення з 14-го по 22- й, 7 і 7, якщо присутні, є -СН»..
ІЗО0О) У деяких варіантах втілення, наприклад, специфічних варіантах втілення з 14-го по 22- й, Х вибрана із групи, яка складається з -Н, -ОН, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенілу, зв'язуючої групи і амін-блокуючої групи. У деяких варіантах втілення Х' є -Н, -
ОН, -Ме або зв'язуючою групою. Переважно Х' є -Н.
ІЗО1) У деяких варіантах втілення, наприклад, специфічних варіантах втілення з 14-го по 22- й, 7 вибрана із групи, яка складається з -Н, оксогрупи, заміщеного або незаміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю. Переважно У" являє собою -Н або оксогрупу. Більш переважно - -Н.
ІЗО2| У деяких варіантах втілення, наприклад, специфічних варіантах втілення з 14-го по 22- й, А і А 'є однаковими або різними, і вибрані з -О-, -5-, -М(В5)- і оксогрупи (С-О). Переважно А і
А" є однаковими або різними і вибрані з -О- і -5-. Більш переважно А і А" є -О-.
ЗОЗ) У деяких варіантах втілення, наприклад, специфічних варіантах втілення з 14-го по 22- й, ОО ії Об, якщо присутні, є однаковими або різними і незалежно вибрані з мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСНг)п, де п є цілим числом від 1 до 24, амінокислоти, пептиду, який несе від 2 до 6 амінокислот, або лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, де алкіл, алкеніл і алкініл, необов'язково, заміщені одним або більше замінників, незалежно вибраних із групи, яка складається з галогену, -ОН, - 0 МА'СОВ", -58 і -СОВ'. Переважно 0 і р" являють собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю.
ЇЗ0О4) У двадцять третьому специфічному варіанті втілення для сполук формули (160) або (ІВ), описаних у двадцятому специфічному варіанті втілення, змінні відповідають опису, наведеному нижче:
У являє собою -5ОзМ;
М являє собою -Н або Ма"; як Х, такі У є -Н; як А, такі А 'є -О-;
Вв являє собою -ОМе;
Ах являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до б атомів вуглецю .
ІЗО5Ї Переважно Ах являє собою -(СНг)р-(СВ'НЗз)-, де кожна із В' ї Не, незалежно, вибрана із -
Н або лінійного або розгалуженого алкілу, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; р дорівнює 0, 1, 2 або 3. Більш переважно Ві: і Не є однаковими або різними і вибрані із -Н і -Ме, а р дорівнює 1.
ІЗО6|Ї У двадцять четвертому специфічному варіанті втілення кон'югат згідно з даним винаходом, відповідно до опису в чотирнадцятому, п'ятнадцятому або двадцять першому специфічному варіанті втілення, представлений у такий спосіб:
М являє собою -50О3М, де М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон (наприклад, Мачх.);
УМ являє собою С-0О;
Ві, В», В, В», Ва і Ва є -Н; одна із Ез або Ез,, необов'язково, являє собою зв'язуючу групу, а інша являє собою -Н;
Вв являє собою -ОМе; 7 і 7 являють собою -СНе;
Х "являє собою -Н; т являє собою -Н; а
А і А 'являють собою -О-.
ЇЗО7| У будь-якому з вищеописаних специфічних варіантів втілення кон'югату згідно з даним винаходом, наприклад, специфічних варіантах втілення з 14-го по 24-й, М вибрана із -5О3М, - 5О2М і сульфату -«0О5ОзМ. Переважно У являє собою -50зМ.
ІЗО8)| У деяких варіантах втілення, наприклад, специфічних варіантах втілення з 14-го по 24- й, М є -Н, Ма: або КУ.
ЇЗО9|Ї У будь-якому з вищеописаних специфічних варіантів втілення кон'югату згідно з даним винаходом, наприклад, специфічних варіантах втілення з 14-го по 24-й, МУ, якщо присутній, є
С-О.
Зо ІЗ1О| У будь-якому з вищеописаних специфічних варіантів втілення кон'югату згідно з даним винаходом, наприклад, специфічних варіантах втілення з 14-го по 24-й, 7 і 7, якщо присутні, є -
СН».
ІЗ11) У будь-якому з вищеописаних специфічних варіантів втілення кон'югату згідно з даним винаходом, наприклад, специфічних варіантах втілення з 14-го по 24-й, Х' вибрана із групи, яка складається з -Н, -ОН, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенілу, зв'язуючої групи і амін-блокуючої групи. У деяких варіантах втілення Х' є -Н, -ОН, -Ме або зв'язуючою групою. У деяких варіантах втілення Х' є -Н.
ІЗ12) У будь-якому з вищеописаних специфічних варіантів втілення кон'югату згідно з даним винаходом, наприклад, у специфічних варіантах втілення з 14-го по 24-й, 7 вибрана із групи, яка складається з -Н, оксогрупи, заміщеного або незаміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю. У деяких варіантах втілення У" є -Н або оксогрупою. У деяких варіантах втілення У є -Н.
ІЗ13Ї У будь-якому з вищеописаних специфічних варіантів втілення кон'югату згідно з даним винаходом, наприклад, у специфічних варіантах втілення з 14-го по 24-й, А і А 'є однаковими або різними і вибрані з -О-, -5-, -М(В5)- і оксогрупи (С-О). У деяких варіантах втілення Лі А" є однаковими або різними і вибрані з -О- і -5-. В деяких варіантах втілення А і А" є -О-.
ЇЗ14) У будь-якому з вищеописаних специфічних варіантів втілення кон'югату згідно з даним винаходом, наприклад, у специфічних варіантах втілення з 14-го по 24-й, О і ОЮ", якщо присутні, є однаковими або різними і незалежно вибрані з мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСНг)п, де п являє собою ціле число від 1 до 24, амінокислоти, пептиду, який несе від 2 до 6 амінокислот, або лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, де алкіл, алкеніл і алкініл, необов'язково, заміщені одним або більше замінників, незалежно вибраних із групи, яка складається із галогену, -ОВ, -МА'СОВ", -58 і -
СОВ'. В деяких варіантах втілення О і С" являють собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю.
ІЇЗ15) У деяких варіантах втілення кон'югат згідно з будь-яким з описаних варіантів втілення, наприклад, специфічних варіантів втілення з 14-го по 24-й, може включати 1-10 цитотоксичних сполук, 2-9 цитотоксичних сполук, 3-8 цитотоксичних сполук, 4-7 цитотоксичних сполук або 5-6 цитотоксичних сполук, причому кожна цитотоксична сполука включає зв'язуючу групу, яка приєднує цитотоксичну сполуку до СВА, і всі цитотоксичні сполуки у складі кон'югату однакові.
ІЇЗ16) У деяких варіантах втілення кон'югат згідно з будь-яким з описаних варіантів втілення, наприклад, специфічних варіантів втілення з 14-го по 24-й, може включати 1-10 цитотоксичних сполук, 2-9 цитотоксичних сполук, 3-8 цитотоксичних сполук, 4-7 цитотоксичних сполук або 5-6 цитотоксичних сполук, причому кожна цитотоксична сполука включає зв'язуючу групу, яка приєднує цитотоксичну сполуку до СВА, і всі цитотоксичні сполуки у складі кон'югату однакові.
ІЗ17| У деяких варіантах втілення кон'югат згідно з будь-яким з описаних варіантів втілення, наприклад, специфічних варіантів втілення з 14-го по 24-й, може включати в цілому 1-10 цитотоксичних сполук та (немодифікованих) імін-вмісних цитотоксичних сполук, в цілому 2-9 цитотоксичних сполук і (немодифікованих) імін-вмісних цитотоксичних сполук, в цілому 3-8 цитотоксичних сполук і (немодифікованих) імін-вмісних цитотоксичних сполук, в цілому 4-7 цитотоксичних сполук і (немодифікованих) імін-вмісних цитотоксичних сполук, в цілому 5-6 цитотоксичних сполук і (немодифікованих) імін-вмісних цитотоксичних сполук, причому кожна цитотоксична сполука або (немодифікована) імін-вмісна цитотоксична сполука включає зв'язуючу групу, яка приєднує цитотоксичну сполуку або (немодифіковану) імін-вмісну цитотоксичну сполуку до СВА, і всі цитотоксичні сполуки або (немодифіковані) імін-вмісні цитотоксичні сполуки у складі кон'югату однакові (за винятком (бісульфітної) модифікації).
ЇЗ18| У будь-якому з варіантів втілення кон'югатів, наприклад, специфічних варіантах втілення з 14-го по 24-й, агент, який зв'язується із клітинами, може зв'язуватися із клітинами- мішеняи, вибраними з пухлинних клітин, клітин, інфікованих вірусом, клітин, інфікованих мікроорганізмами, клітин, інфікованих паразитами, аутоїмунних клітин, активованих клітин, мієлоїдних клітин, активованих Т-клітин, В-клітин або меланоцитів; клітин, які експресують СО4, соб, 6019, 6020, 6022, С030, 6033, 6037, 6038, 6040, 6044, СО56, ЕРСАМ, СапАд, СА А або антигени НЕВ-2, антигени Нег-3; або клітин, які експресують рецептор інсуліноподібного фактора росту, рецептор епідермального фактора росту, рецептор фолату.
ЇЗ19| У будь-якому з варіантів втілення кон'югатів, наприклад, специфічних варіантах втілення з 14-го по 24-й, агент, який зв'язується із клітинами, може бути антитілом, одноланцюговим антитілом, фрагментом антитіла, який специфічно зв'язується із клітиною- мішенню, моноклональним антитілом, одноланцюговим моноклональним антитілом або фрагментом моноклонального антитіла, який специфічно зв'язується із клітиною-мішенню, химерним антитілом, фрагментом химерного антитіла, який специфічно зв'язується із клітиною- мішенню, доменним антитілом, фрагментом доменного антитіла, який специфічно зв'язується із клітиною-мішенню, лімфокіном, гормоном, вітаміном, фактором росту, колонієсєтимулюючим фактором або молекулою транспорту поживних речовин.
ЇЗ20О| Антитіло може бути антитілом з модифікованою поверхнею, одноланцюговим антитілом з модифікованою поверхнею або фрагментом антитіла з модифікованою поверхнею.
ЇЗ21| Антитіло може бути моноклональним антитілом, одноланцюговим моноклональним антитілом або фрагментом моноклонального антитіла.
ЇЗ22| Антитіло може бути гуманізованим антитілом, гуманізованим одноланцюговим антитілом або фрагментом гуманізованого антитіла.
ЇЗ23| У будь-якому зі специфічних варіантів втілення, наведених тут, наприклад, специфічних варіантах втілення з 1-го по 24-й, реагент, здатний взаємодіяти з імінами, вибраний із групи, яка складається із сульфітів (Не5Оз, Не5О» або солі НбОз, 5032 або Н5бО», утвореної катіоном), метабісульфіту (Нг52О5 або солі 52057, утвореної катіоном), моно-, ди-, три- і тетратіофосфатів (РОз5Нз, РО»52Наз, РОзЗзНз, РеЗаНз або солі РОз5У, РОг252У, РОЗ: або
РБАаЗ-, утвореної катіоном), складних ефірів тіофосфату (В'О)2РБ(ОНВІ), ВІН, ВІЗОН, ВІБОН,
ВІБОЗН), різних амінів (гідроксиламіну (наприклад, МН2ОН), гідразину (наприклад, МНеМНг),
МНгО-Ві, В'МН-ВІ, МНе-В), МН»-СО-МНг, МНе-С(-5)-МНе, тіосульфату (Нгб2Оз або солі 52032, утвореної катіоном), дитіоніту (Н252О04 або солі 52042, утвореної катіоном), фосфородитіоату (Р(І-ХОРУ(ЗНХОН) або його солі, утвореної катіоном), гідроксамової кислоти (НЕС(-О)МНОН або солі, утвореної катіоном), сгідразиду (ВСОМНМН»г), формальдегідсульфоксилату (НОСН»ВО2Н або солі НОСН»бВО»:, утвореної катіоном, наприклад, НОСНгБО» Ма"), глікозильованого нуклеотиду (наприклад, СОР-манози), флударабіну або їх суміші, де Ві в! незалежно являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, і заміщені щонайменше одним замінником, вибраним із -М(В/)2, -СО2Н, -503Н і -РОЗН; ВІ і В! й необов'язково, можуть бути додатково заміщені замінником для алкілу, описаним тут; Ві являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до б атомів вуглецю; Вк являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів 60 вуглецю, арил, гетероцикліл або гетероарил.
ЇЗ24| Переважно реагент, здатний взаємодіяти з імінами, вибирають із сульфітів, гідроксиламіну, гідразину і сечовини. Більш переважно реагент, здатний взаємодіяти з імінами,
Є Манзоз або КНБЗОз.
ЇЗ25| У будь-якому зі специфічних варіантів втілення, наведених тут, наприклад, специфічних варіантах втілення з 1-го по 24-й, використовують від приблизно 0,1 до приблизно 30 молярних еквівалентів реагенту, здатного взаємодіяти з імінами, відносно імін-вмісної цитотоксичної сполуки. У деяких варіантах втілення використовують від приблизно 1 до приблизно 10 молярних еквівалентів реагенту, здатного взаємодіяти з імінами, відносно імін- вмісної цитотоксичної сполуки. У деяких варіантах втілення використовують від приблизно З до приблизно 5 молярних еквівалентів реагенту, здатного взаємодіяти з імінами, відносно імін- вмісної цитотоксичної сполуки.
ЇЗ26| У будь-якому зі специфічних варіантів втілення, наведених тут, наприклад, специфічних варіантів втілення з 1-го по 24-й, біфункціональний зшиваючий агент приєднує цитотоксичний агент до агента, який зв'язується 3з клітинами, за допомогою простого тіоефірного зв'язку і може містити групу на основі малеїмідогрупи або галоацетилу, причому біфункціональний зшиваючий агент, який містить групу на основі малеімідогрупи, вибраний із:
М-сукцинімідил-4-(малеімідометил)уциклогексанкарбоксилату (ЗМО), /М-сукцинімідил-4-(М- малеїімідометил)-циклогексан-1-карбокси-(б-амідокапроату) (10-5МОСС), М-сукцинімідилового ефіру к-малеімідоундеканової кислоти (КМОА), М-сукцинімідилового ефіру у-малеімідомасляної кислоти (ЯМВ5), М-гідроксисукцинімідного ефіру є-малеіїмідокапронової кислоти (ЕМС5), м- малеімідобензоїл-М-гідроксисукцинімідного ефіру (МВ5), М-(а-малеїмідоацетокси)- сукцинімідного ефіру (АМА5), сукцинімідил-6-(В-малеімідопропіонамідо)гексаноату (ЗМРН), М- сукцинімідил-4-(п-малеімідофеніл)бутирату (5МРВ), М-(п-малеіїмідофеніл)ізоціанату (РМРІ), М- сукцинімідил-4-(4-нітропіридил-2-дитіо)бутаноату; а біфункціональний зшиваючий агент, який містить групу на основі галоацетилу, вибраний із: М-сукцинімідил-4-(йодоацетил)-амінобензоату (ЗІАВ), М-сукцинімідилиодоацетату (5ІА), М-сукцинімідилбромоацетату (ЗВА) і М-сукцинімідил-3- (бромоацетамідо)пропіонату (5ВАР), біс-малеімідополіетиленгліколю (ВМРЕО), ВМ(РЕО)»,
ВМ(РЕО)», М-(р-малеімідопропілокси)сукцинімідного ефіру (ВМР), мно 5- малеімідовалеріанової кислоти, НВУ5Б, гідразиду"НСЇІ 4-(4-М-малеімідофеніл)-масляної кислоти
Зо (МРВН), сукцинімідил-(4-вінілсульфоніл)бензоату (5М58В), дитіобіс-малеімідоетану (ОТМЕ), 1,4- біс-малеімідобутану (ВМВ), 1,4-бісмалеїмідил-2,3-дигідроксибутану (ВМОВ), біс- малеїімідогексану (ВМН), біс-малеімідоетану (ВМОЕ), сульфосукцинімідил 4-(М- малеїімідометил)циклогексан-1-карбоксилату (сульфо-5МСОС), сульфосукцинімідил(4- йодоацетил)амінобензоату (сульфо-5ІАВ), м-малеїмідобензоїл-М-гідроксисульфосукцинімідного ефіру (сульфо-МВ5), М-(у-малеімідобутирилокси)сульфосукцинімідного ефіру (сульфо-СМВ5),
М-(є-малеіїмідокапроїлокси)сульфосукцинімідного ефіру (сульфо-ЕМО5), М-(к- малеімідоундеканоїлокси)сульфосукцинімідного ефіру (сульфо-КМИ5), сульфосукцинімідил-4- (п-малеімідофеніл)бутирату (сульфо-5МРВ), СХ1-1, сульфо-Маї і ПЕГ.-Маї.
ІЗ27| У деяких варіантах втілення біфункціональний зшиваючий агент вибраний із групи, яка складається із 5МОС, сульфо-5МОС, ВМРБ, ОМВ5, ІА, 5ІАВ, М-сукцинімідил-4-(4- нітропіридил-2-дитіо)бутаноату, біс-малеімідогексану або ВМРЕО.
ІЗ28) У будь-якому з варіантів втілення, наприклад, специфічних варіантах втілення з 1-го по 24-й, кон'югат очищують за допомогою тангенціальної проточної фільтрації, адсорбційної хроматографії, адсорбційної фільтрації, вибіркового осадження, неабсорбційної фільтрації або їх комбінації. Переважно кон'югат очищують за допомогою тангенціальної проточної фільтрації і/або адсорбційної хроматографії.
ІЗ29| У деяких варіантах втілення, наприклад, специфічних варіантах втілення з 1-го по 24-й, агент, який зв'язується із клітинами (СВА), який несе групу, здатну взаємодіяти з тіолами, являє собою: (о) іо)
Н
А и | др
М-СВА
Н
БО ге) о о
Ге о (о) (о) чук Ж М М
М М М М--сСВА
М М ог г те да (є) Ге! Ге! о Ге) о зон о АЖ чук | М М--СВА
М-сВА н
Н
Ге) о і АХ Ї
Щ; По тре Й. сви
РУ о п-2-20 (наприклад, 2, 4, 6, 8, 10) о возн
М--сВА МО М-свА й вива (в) - ІФ)
Оз Н Н - 5 М-СВА ма вав СВА мав р в) ) 2 ів; о о ми Оки ни От у о
Х СВА ХХ
ВМ: ПЕГ шк
У ( )з б Вг М СВА
Ф) (6) о
М плат св ре вин Ге! І М-сСВА (9) або н .
ЇЗЗОЇ Сполуки або кон'югати, отримані за допомогою способів згідно з даним винаходом, зокрема, включають:
У Н Н
М о. ХХ о Шк ве «В, (о) (о) ; ас ми чі (о) (о) -
М ОМе МеОо М о) (о)
в) 50 чутно их М брдбитон н Н х
М ше М Кк во мох (в) в) 250 М тету
Ге)
МН н
М ще М во оф (9) Ге) ) чути М тру ло в) хх Нн Н ої
М ще М
М во: ОМе мо, М
Ге) Ге) возн Ге) пасли лих вв о в)
Н Н (в) " М ще М н- 2 ОМе мес. 2 Ф
ІФ) (Ф) о з о о о) (в) 5 (в) м иту тини ТК ге) н н х М ще М те
М «Хо мо, М
Ге) Ге) з о) (в) чути М брдиито М у 2 (в) н Н м
М ХХ о М Кк во во
Ф) в) (Фе) чути титру: М 7 о хх Нн н
М (Фо! Ге) М во оф (Фе) Ге)
теру кт шани антитіла о т ї
Ж ве Мей ж
С ; г р оббити й в антитіло! о у. В Ше 7
М тоМме 0омеоб ум А о бо КІ
Е -
З АЛ З в; М: тантитнло
З Он 5-7 й я тру ти чи ТК Га н н " -М (фі о. о К- с ві СМмМе ощ . ше; о г а - биття р антитіпо!
Е Я -Щ-- у ! нн що о о ся к- ; їз І ит нам мок
СЯ 5 гли г яку тт ит тет Є чн і н г й Оси ииВ М се вом мо" ва Х фі: «щу
Р Є де г є цілим числом від 1 до 10, У є -Н або -503М, а М є -Н або фармацевтично прийнятним катіоном.
ЇЗ31|Ї У 25-му специфічному варіанті втілення винахід забезпечує спосіб одержання кон'югату наступної формули:
толк вт
Сам чн м пф ст вам Мей Ме о о о се г
ЗОН І ж тот ву сантитию,
У до КА вл рома в
М ме Ме М я
С :
Й о: ТІ вва: антитіло) ра ль мк | ко І
У Кк Сл ! дова т й -
Ме томе ме су, А
С и З г або
Са; тт дути пит Вин, ДНтТитлО
Са М М
ЕЗ Мн ре Кн в; М
М Фо мою
С !
Ї є причому зазначений спосіб включає взаємодію цитотоксичної сполуки наступної формули бутон 7 М д М в) о) - 2
М ОМе Мео М (о) |) с модифікованим СВА наступної формули, відповідно, за рН від приблизно 4 до приблизно 9,
Н св
М. ав й І-СВА - о м. ,8. яд сВА
ДН ве
Хх-Наю -МО, 2 о
КА А т ура же ; й
Іти шт Тр свА х - х о або г ра ща ВА де: г являє собою ціле число від 1 до 10;
М являє собою групу, яка відходить, і являє собою сульфіт (НБОз, НбО» або сіль НЗО»з, 5032 або Н5О»", утворену катіоном), метабісульфіт (Нг2520О5 або сіль 52052, утворену катіоном), моно-, ди-, три- і тетратіофосфат (РОз5Нз, РО»баН»о, РОзЗзНе, РоаНе або сіль РОз5У, РОг2527,
РОБ» або РБаЗ-, утворену катіоном), складний ефір тіофосфату (В'Ю2РБ(ОВІ), В/5-, ВІБО,
ВО», ВО», тіосульфат (Н5гОз або сіль 52032, утворену катіоном), дитіоніт (НЗгОх або сіль 52042, утворену катіоном), фосфородитіоат (Р(-5ЗХОВО(5ХОН) або його сіль, утворену катіоном), гідроксамову кислоту (ВКС(-О)МОН або сіль, утворену катіоном), формальдегідсульфоксилат (НОСНОВО: або сіль НОСНоБО:, утворену катіоном, наприклад,
НОСНоІБО» Ма") або їх суміш, де Р! являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, і заміщений щонайменше одним замінником, вибраним із -М(В/)2, -СО2Н, -БОзЗН і -РОЗзН; Ві, необов'язково, може бути додатково заміщений замінником для алкілу, описаним тут; Б/ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; ВК "'являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, гетероцикліл або гетероарил; переважно У являє собою -
ЗОзМ;а
М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон.
ЇЗ32| У деяких варіантах втілення М є -5О0з3М; а М є -Н або фармацевтично прийнятним катіоном.
ЇЗ33Ї) У деяких варіантах втілення цитотоксичну сполуку одержують взаємодією реагенту, здатного взаємодіяти з імінами, з імін-вмісною цитотоксичною сполукою наступної формули: ва лива нич
Н
М ще ку во во іо) (в)
ІЇЗ34| У деяких варіантах втілення СВА є пиму9-6.
ЇЗ35| У 26-му специфічному варіанті втілення винахід забезпечує спосіб одержання кон'югату наступної формули:
От Тв; З М ( антитіло! -ж масива мих зт З с й ко чн ЩО М
Моро в те шк
Її АК СОМ 0 меб Ж
І о о ій 8 бите вт М днититіло й й Го. т К я зош б М- ; вк СМме мо
Е
З а
Ваш антитіло) битаттитьск зо ? й М о о і к- кое он с г або
АЛ вл ра цк аа 8 роду, ко т М антинло і А й
ІЧ Е нд же До (фі Щи во Ме М
С де
ІЙ причому спосіб включає взаємодію СВА з імін-вмісною цитотоксичною сполукою, реагентом, здатним взаємодіяти з імінами, і біфункціональним зшиваючим агентом, який містить зв'язуючу 5 групу, з утворенням кон'югату, де: імін-вмісна цитотоксична сполука являє собою: асан ми
Нн
М ше М во во (в) (в) біфункціональний зшиваючий агент являє собою:
,; пу - (в) о
ЗО»з Ф) первииро у о) (Х --Н або -МО»), (є) о о руч о о або (в) і)
АЖ і) о ; відповідно, і реагент, здатний взаємодіяти з імінами, вибраний із: сульфітів (Не5Оз, На5О:» або солі НЗО»: л Оз або Н5БО», утвореної катіоном), метабісульфіту (Н2гЗ2О5 або солі 52052, утвореної катіоном), моно-, ди-, три- і тетратіофосфатів (РОз5Нз, РО»б2Нз, РОзЗзНз, РбаНз або солі РОЗз5У,
РО2527, РОБ»: або РБАУ, утвореної катіоном), складних ефірів тіофосфату (В'О)2РО(ОВІ), ВЗН,
ВБОН, ВБО»Н, ВБОзЗН), різних амінів (гідроксиламіну (наприклад, МН2ОН), гідразину (наприклад, МНеМНг), МН2гО-В, ВИМН-ВІ, МНе-В), МН»АСО-МН», МНг-С(-5)-МН», тіосульфату (Неб2Оз або солі 52032, утвореної катіоном), дитіоніту (Нгб2О4 або солі 52042, утвореної катіоном), фосфородитіоату (Р(-5ХОВОУ(ЗНУОН) або його солі, утвореної катіоном), гідроксамової кислоти (ВС(-О)МНОН або солі, утвореної катіоном), гідразиду (В'СОМНМН»), формальдегідсульфоксилату (НОСНаг5О-Н або солі НОСН5О»", утвореної катіоном, наприклад,
НОСНоБО»: Ма"), глікозильованого нуклеотиду (наприклад, СОР-манози), флударабіну або їх суміші, де В. і В! "незалежно являють собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, і заміщені щонайменше одним замінником, вибраним із -М(Р/)2, -СО2Н, -БОзЗН і-РОзН; В і в! , необов'язково, можуть бути додатково заміщені замінником для алкілу, описаним тут; ВІ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; ВК являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, гетероцикліл або гетероарил.
ЇЗ36| У деяких варіантах втілення М є -5О0з3М; а М є -Н або фармацевтично прийнятним катіоном.
ІЗ37| У деяких варіантах втілення СВА є пимМу9-6.
Цитотоксичність сполук і кон'югатів ІМ МІТНО
ЇЗ38| Можна виконати оцінку здатності цитотоксичних сполук і кон'югатів агент, який зв'язується із клітинами/лікарська речовина, отриманих способами згідно з даним винаходом, пригнічувати проліферацію різних ліній ракових клітин іп мійго. Наприклад, для оцінки цитотоксичності зазначених сполук і кон'югатів можна використовувати такі лінії клітин як лінія карциноми ободової кишки людини СО О 205, лінія клітин рабдоміосаркоми КН-30 і лінія клітин множинної мієломи МОГ Р-8. Клітини, використовувані для оцінки, можна піддавати впливу сполук або кон'югатів протягом 1-5 діб, а фракції клітин, які вижили, вимірювати шляхом прямого аналізу за допомогою відомих способів. Потім на підставі результатів аналізів можна розрахувати значення ІСзо. Як альтернативу або доповнення, як один із посібників з визначення типів раку, які можуть мати чутливість до лікування сполуками або кон'югатами, отриманими за допомогою способів згідно з винаходом, можна використовувати скринінг чутливості ліній клітин іп міго, наприклад, описаний у Національному інституті раку США (див. Мо5Кодіои-Мотікоз еї аї., 2003, Сііпіса! Сапсег Незв. 9: 42227-4239, включений у даний документ за допомогою посилання).
ЇЗ39| Приклади оцінки іп мійго активності і специфічності відносно мішені кон'югатів антитіло/цитотоксичний агент, отриманих за допомогою способів згідно з даним винаходом, показані на Фіг. 17. Усі кон'югати є надзвичайно цитотоксичними відносно антиген-позитивних ракових клітин з ІСво у низькому діапазоні. Антиген-негативні лінії клітин залишаються життєздатними під час впливу цих же кон'югатів. Показано, що спрямована специфічна активність індолбензодіазепінових димерів знижувалася вв 160 разів при блокуванні некон'югованим антитілом пиМуЗ-6 (проти СО33) (Фіг. 17) і знижувалася в 40 разів при блокуванні некон'югованим антитілом БОЇ К1 (антитіло проти рецептора фолату) (результат не показаний). Наприклад, кон'югат пиМуз-6-5РОВ-1ї, який несе адукти бісульфіту, знищував антиген-позитивні клітини НІ 60/3С зі значенням ІС5о, яке дорівнює 10,5 пМ, у той час як додавання надлишку некон'югованого антитіла пиму9-6 антитіло послаблювало цитотоксичну дію (ІСво - 1,69 нМ), демонструючи специфічність до антигена (Фіг. 17А). Крім того, кон'югат пимуЗ9-6-5РОВ-1ї також має високу активність як до лінії клітин НІ 60/АТСС зі значенням ІСво 21
ПМ, так і до лінії клітин МВ-4 зі значенням ІСзо 190 пМ (Фіг. 17Б і 178).
ІЗ40| Дію кон'югування на зв'язування антитіл вимірювали шляхом порівняння зв'язування як некон'югованого антитіла пиМу9-6, так ії кон'югату пимМуЗ-6-5РОВ-Ї з лінією клітин НІ 60/0С (Фіг. 18). ЕАС5-аналіз виявив, що зміни зв'язуючої здатності кон'югату з вільними антитілами відсутні, що вказує на відсутність порушень зв'язування, викликаних кон'югуванням цитотоксичного агента з антитілом.
ЇЗЯ1| В одному прикладі вимірювали активність кон'югату "агент, який зв'язує клітини/цитотоксичний агент" іп мімо. Бестимусних мишей, які несуть пухлини НІ 60/90С людини, лікували кон'югатом пимМуз-6-5РОВ-1ї і при багаторазових дозах спостерігали значний регрес пухлини, у той час як у необроблених мишей спостерігали швидкий ріст пухлини (Фіг. 19).
Активність спостерігалася при дозах 20 мкг/кг, що щонайменше в 35 разів нижче, ніж максимально стерпна доза.
ЇЗ42| Дія насичення іміногруп на витримку показана в Таблиці 9. Диїміновий кон'югат
ПЧЕОЇ ВІ1-лікарська речовина 1 випробовували при багаторазових дозах, усі з яких були визнані високотоксичними, причому, ті, що вижили залишалися тільки в групі, яка зазнала впливу мінімальних протестованих доз 50 мкг/кг. На противагу цьому виявлено, що частково відновлені моноімінові кон'югати пиИгОЇ-К1-лікарська речовина 2 і пиИРОСК1-5РОВ-М (пиРОСАТ-5РОВ-19,
Зо мали значно поліпшену здатність до витривалості, причому кон'югат пиБОї К1-5РОВ-СМ (пигО А1-5РОВ-1Я) демонстрував 10095 виживаність тварин при максимальних протестованих дозах 560 мкг/кг.
Приклади
ПРИКЛАД 1
ЇЗ43| Гуманізоване антитіло МУ9-6 у концентрації 2 мг/мл кон'югували з 9 молярними еквівалентами 2-МН5-ефіру (сполуки 2) протягом З год за 25 "С в 8595 РВ5, рН 74, який містить 1595 ДМА (об'єм/об'єм), а потім очищали на знесолювальній колонці 525 в РВ5, рН 7,4, для видалення лікарської речовини, яка не прореагувала, або гідролізованої некон'югованої.
Кон'югат діалізували в буфері, який складався з 10 мМ гістидину, 250 мМ гліцину, буфер із рН 6,5, який містить 1956 сахарози. На основі УФ-поглинання за 280 ії 320 нм і розрахунків з використанням коефіцієнтів екстинкції лікарської речовини і антитіла за 280 нм і 320 нм визначили, яке співвідношення лікарська речовина/антитіло (БАК) у складі кон'югату склало 1,4.
ІЗ44| Кон'югат аналізували на процентний вміст мономера ексклюзійною хроматографією (ЗЕС) на колонці Т5К-Сеье! С300О5МУУХІ. (7,8 мм х 300 мм, розмір часток 5 мкм), використовуючи ізократичну рухливу фазу - 400 мм перхлорат натрію, 150 мМ калій-фосфатний буфер, рН 7,0, зі швидкістю 1 мл/хв. Процентний вміст мономера (96 мономера) і агрегату визначали шляхом моніторингу УФ-поглинання всіх видів антитіл за 280 нм і вимірювання площі під кривою (ППК) кожного піка антитіла. Крім того, визначали процентний вміст (90) 2 лікарських речовин як у мономері, так і в агрегаті шляхом моніторингу УФ-поглинання всіх видів антитіл за 320 нм і 280 нм і вимірювання ПІК кожного піка антитіла. 90 мономера кон'югату пиМу9-6-2, який характеризувався значенням ВАК 1,4, становив 9195. 95 2 у мономері становив 80965.
ІЇЗ45| Для аналізу вільної (некон'югованої) лікарської речовини кон'югат екстрагували ацетоном для видалення білка, висушували, відновлювали в рухливій фазі і впорскували в Оф-
ВЕРХ-колонку МУБАС 208ТР С8 (4,6 х 250 мм, розмір часток 7 мкм), використовуючи лінійний градієнт від 2095 ацетонітрилу і 8095 деіонізованої води до 10095 ацетонітрилу, який містить 0,025965 оцтової кислоти, зі швидкістю 1 мл/хв. протягом 48 хв., і порівнювали зі стандартами лікарська речовина - метиловий ефір. Визначили, який відсоток вільної некон'югованої лікарської речовини в кон'югаті склав « 195 від вмісту кон'югованої лікарської речовини.
ІЇЗ46| Кон'югат ПпиМу9У-6-2 зі співвідношенням лікарська речовина/антитіло (ОАК) 1,4 бо аналізували за допомогою мас-спектрометрії (МС) після деглікозилювання (Фіг. 1А). На мас-
спектрограмі кон'югату показане некон'юговане антитіло (00) у вигляді найбільшого піка, менший пік О1 (антитіло з 1 приєднаною лікарською речовиною), і значно менші піки 02 і ОЗ для 2 і З лікарських речовин, приєднаних до антитіла. Ефективність кон'югування була низкою зі значенням БАК кон'югату, яке дорівнює 1,4, після кон'югування з 9-кратним молярним надлишком 2-МН5-ефіру у порівнянні з антитілом.
ПРИКЛАД 2
ЇЗ47| Для кон'югування 2-МН5-ефіру (сполука 2) з використанням бісульфіту натрію 2-МН5- ефір (сполука 2) попередньо інкубували з 0,9 молярного еквіваленту бісульфіту натрію (свіжоприготовлений розчин МанНзОз у деіонізованій воді) в 6б9Ую розчині ДМА (диметилацетаміду) у воді протягом 30 хв. за температури 25 об. Антитіло НиМу9-6 у концентрації 2 мг/мл кон'югували з 9 молярними еквівалентами 2-МНе-ефіру (з доданим
Манзоз) протягом З год за 25 "С в 8595 РВ5, рН 7,4, який містить 1595 ДМА (об'єм/об'єм), а потім очищали на знесолювальній колонці (325 в РВ5, рН 7,4, для видалення лікарської речовини, яка не прореагувала, або гідролізованої. Кон'югат діалізували в буфері, який містив 10 мМ гістидину, 250 мМ гліцину, 195 сахарози, рН 6,5.
ІЗ48)| САК кон'югату пимМу9-6-2, отриманого з використанням бісульфіту натрію, вимірювали за допомогою УФ-спектрофотометрії за 280 їі 320 нм; розраховане значення БАК склало 3,1. 90 мономера кон'югату склав 9595, а 95 2 у мономері склав 9195. На мас-спектрограмі кон'югату, отриманого з використанням бісульфіту натрію після деглікозилювання показаний найбільший пік 01 з однією приєднаною лікарською речовиною, а також піки 02, 03, 04, 05, 06 для 2-6 лікарських речовин на антитіло (Фіг. 1Б).
ЇЗ49| Кон'югат пимМу9-6-2, отриманий з використанням бісульфіту натрію, демонстрував значно більший ступінь введення лікарської речовини зі значенням БАК 3,1 у порівнянні з кон'югатом, отриманим без бісульфіту натрію, який мав значення БАК 1,4. На мас-спектрограмі кон'югату зі значенням БАК 3,1, отриманого з бісульфітом натрію, показані піки кон'югату з 1-6 приєднаними лікарськими речовинами, причому найбільший пік відповідає 01 з 1 приєднаною лікарською речовиною. На противагу цьому, на мас-спектрограмі кон'югату зі значенням ОСАК 14, отриманого без бісульфіту натрію, показаний найбільш високий пік некон'югованого антитіла (00) і значно менші піки кон'югатів із приєднаною лікарською речовиною 01, 02 ії 03.
Зо Процентний вміст лікарської речовини в мономері для кон'югату пПиМу9-6-2, отриманого з бісульфітом натрію, склав 9195, що було вище, ніж 8095 лікарської речовини в мономері для кон'югату пимМу9-6-2, отриманого без бісульфіту натрію. В цілому якість кон'югату пиМу9-6-2, отриманого з використанням бісульфіту натрію, таким чином, була значно вищою, ніж при традиційній процедурі кон'югування без бісульфіту натрію.
ЇЗ5ОЇ Кон'югування МН5З-ефірів декількох лікарських речовин (1,2, 3 і 4) з антитілами проводили за присутності бісульфіту натрію (Манзоз) і порівнювали із традиційним способом кон'югування без МанНбОз. Результати показані в Таблиці 16. У всіх випадках додавання бісульфіту натрію при кон'югації дозволяло одержати кон'югати зі значно кращою якістю, підвищеною БАК і 95 лікарської речовини в мономері, ніж кон'югати, отримані без додавання бісульфіту натрію.
Таблиця 16
Порівняння кон'югування антитіл з декількома МН5-ефірами лікарських речовин без або з додаванням бісульфіту натрію (Манзоз) обох Ге тараннреннни Тв ення Де торент нення ип лікарської речовини | САН | 95 мономера |95 лікарської речовини в мономері додавання я ним тт мита с ним а І я ми т липа 88190 6 я нин и ли
ЇЗ51| Кон'югат пиМу9-6-2, отриманий з бісульфітом натрію, демонстрував аналогічну цитотоксичність іп міго у порівнянні з кон'югатом, отриманим без бісульфіту натрію (Фіг. 2).
Таким чином, з використанням бісульфіту натрію одержували кон'югат кращої якості з підвищеним БАК і 95 лікарської речовини в мономері без втрати цитотоксичної активності.
Кон'югат антитіло проти СО22-2, отриманий з бісульфітом натрію, демонстрував аналогічну цитотоксичність іп міїго у порівнянні з кон'югатом, отриманим без бісульфіту натрію (Фіг. 3).
ЇЗ52| Кон'югат пимМу9-6-2, отриманий з використанням бісульфіту натрію, аналізували за допомогою електрофорезу у невідновлюваному ДСН-ПААГ з використанням аналізатора геля на чипі. Кон'югат продемонстрував тільки смугу інтактного антитіла; смуг важкого і легкого ланцюга не спостерігали, що вказувало на непередбачувану позитивну якість підходу, яка полягає в тому, що доданий бісульфіт натрію не викликав небажаного відновлення нативних міжланцюгових дисульфідних зв'язків у складі антитіла.
ЇЗ5ЗІ| 2-МН5З-ефір або ЗРОВ-МН5-ефіри 3, 4, 1 їі 5 попередньо інкубували з 0,5-3 молярними еквівалентами бісульфіту натрію (свіжоприготовлений розчин Манзоз у деіонізованій воді) в 66- 9895 розчині ДМА (диметилацетаміду) у воді протягом від 15 хвилин до 4 годин за 25 "С. Деякі із зазначених реакційних розчинів також залишали на ніч за 4 "С і використовували для кон'югування через 20 год.
ІЗ54| 2-МНо-ефір у ДМА, оброблений бісульфітом натрію або без додавання бісульфіту натрію, аналізували за допомогою ВЕРХ, використовуючи обернено-фазову колонку УХрАС С8 з лінійним градієнтом від 2095 ацетонітрилу і 8095 деіонізованої води до 10095 ацетонітрилу, який містить 0,02595 оцтову кислоту, за 1 мл/хв. протягом 48 хв. Як показано на фіг. 4, вихідний 2-МН5-ефір елюювався на -- 23 хв. Через 30 хв. обробки 0,9 молярними еквівалентами МанзоОз в 6695 розчині ДМА у воді за 25 "С більшу частину 2-МН5 перетворювали на сульфовану, більш полярну, форму, яка елюювалася на - 14 хв. Як не дивно, небажаного піка сульфованої гідролізованої 2 не спостерігали. Таким чином, спостерігали непередбачувано сприятливу реакцію бісульфіту натрію стосовно приєднання до імінного зв'язку без реакції з МН5-ефіром.
ЇЗ55| Аналогічно МНб-ефіри лікарських речовин обробляли реагентами, здатними взаємодіяти з імінами, які не являли собою бісульфіт натрію, перед кон'югуванням з антитілом.
Альтернативний підхід до кон'югування полягав у обробці суміші МН5З-ефіру лікарської речовини і антитіла бісульфітом натрію або іншого реагенту, здатного взаємодіяти з імінами.
ПРИКЛАД З
ЇЗ5б6|Ї Кон'югат антитіло-ЗРОВ-1, з'єднаний дисульфідним зв'язком, одержували з
Зо використанням синтезованого 1-5РОВ-МН5-ефіру (сполуки 1с). 1-5Р0ОВ-МН5-ефір попередньо обробляли З молярними еквівалентами бісульфіту натрію (використовуючи свіжоприготовлений розчин Манзоз у воді) в 96-9895 розчині ДМА у воді протягом 4-5 год за 25 "С. Розчин 1-5РОВ-
МН5-ефіру, обробленого бісульфітом натрію, у ДМА аналізували, використовуючи колонку
МУМАС С8 для обернено-фазової ВЕРХ і лінійний градієнт 2095 ацетонітрилу і 8095 деіонізованої води, який містить 0,02595 оцтову кислоту, за швидкості 1 мл/хв. протягом 48 хв.
ОФ-ВЕРХ-аналіз продемонстрував тільки бажану реакцію приєднання бісульфіту до імінного зв'язку без небажаної реакції бісульфіту з МН5О-ефіром.
ІЗ57| Для кон'югування гуманізоване антитіло в концентрації 2 мг/мл піддавали взаємодії з 5-7 молярними еквівалентами 1-5Р08-МН5-ефіру (попередньо обробленого Манзоз) протягом 6 год за 25 "С в 8595 водному РВ5-буфері, рН 7,4, який містив 1595 М,М-диметилацетамід (ДМА), а потім очищали фільтрацією через колонку 525 для гель-фільтрації в РВ5, рН 7,4, для видалення лікарської речовини, яка не прореагувала, або гідролізованої. Кон'югати гуманізоване антитіло-ЗРОВ-1 діалізували в буфері, який містив 10 мМ гістидину, 250 мМ гліцину, 195 сахарози, рН 6,5. Виміряне за рахунок УФ-поглинання за 280 ї 320 нм із використанням коефіцієнтів екстинкції лікарської речовини і антитіла за 280 нм їі 320 нм співвідношення лікарська речовина/антитіло (АК) кон'югатів склало 2,2-2,9. Визначений за допомогою 5ЕС (ексклюзійної хроматографії) процентний вміст мономера у препараті кон'югату склав 9095. На основі УФ-поглинання піка мономера, отриманого за допомогою 5ЕС, також продемонстрували, що пік мономера кон'югату містив приєднані молекули лікарської речовини.
За допомогою екстракції ацетоном і обернено-фазової ВЕРХ показано, що 95 некон'югованої лікарської речовини становив менше 195.
ЇЗ58| МС кон'югату деглікозильоване антитіло-ЗРОВ-1, отриманого з використанням бісульфіту натрію, доданого до кон'югування, продемонструвала значно кращий кон'югат у порівнянні з кон'югатами, отриманими при кон'югуванні без бісульфіту натрію (Фіг. 5). МС кон'югату, отриманого без бісульфіту натрію, продемонструвала середнє співвідношення 1,4 1/АБ ії молекули антитіл, які містили до трьох приєднаних молекул 1 (Фіг. 5А). На противагу цьому, МС кон'югату, отриманого з використанням бісульфіту натрію, продемонструвала середнє співвідношення 2,5 1/АБ і молекули антитіл, які містили до семи приєднаних молекул 1 (Фіг. 5Б). бо ЇЗ59| Аналіз кон'югату антитіл-ЗРОВ-1, з'єднаного дисульфідним зв'язком, отриманого з використанням бісульфіту натрію, за допомогою електрофорезу у невідновлюваному ДСН-
ПААГ с використанням аналізатора геля на чипі продемонстрував тільки смугу інтактного антитіла. Аналіз гелю на чипі проводили з використанням Адіїепі Ргоїеіп 230 Ргоївіп Спір і аналізували за допомогою Адіїепі 2300 Віоапаіулег. Смуг важкого і легкого ланцюга не спостерігали, що вказувало на непередбачувану позитивну властивість підходу, яка полягає в тому, що доданий бісульфіт натрію не викликав небажаного відновлення нативних міжланцюгових дисульфідних зв'язків у складі антитіла (Фіг. 6). Наявність приєднаної лікарської речовини в кон'югаті антитіло-ФРОВ-1, отриманому з використанням бісульфіту натрію, також продемонструвала, що, як не дивно, дисульфідний лінкер у кон'югаті був стабільний відносно доданого бісульфіту натрію.
ПРИКЛАД 4
ЇЗО|Ї Для одержання кон'югату 11-5Р08-МН5-ефір (сполука 1с, Фіг. 7) попередньо інкубували з З молярними еквівалентами бісульфіту натрію (свіжоприготовлений розчин
Манзоз у деїіонізованій воді) в 9695 розчині ДМА (диметилацетаміду) у воді протягом 5 год за 25 об, а потім інкубували протягом ночі за 4 "С до кон'югування. Гуманізоване антитіло в концентрації 2-3 мг/мл модифікували 8 молярними еквівалентами 11-5РОВ-МНе-ефіру за відсутності або за присутності бісульфіту натрію (-/4- МанНзоз) протягом 4 год за 25 "С у водному 9595 буфері, який містив 50 мМ НЕРЕЗХ, рН 8,5, і 595 ДМА (об'єм/об'єм), а потім очищали обидва кон'югати на знесолювальній колонці (325 в РВ5, рН 7,4, для видалення гідролізованої лікарської речовини, яка не прореагувала. Кон'югати діалізували в буфері, який містив 10 мМ гістидину, 250 мМ гліцину, 195 сахарози, рН 6,5. БАК кон'югату вимірювали за допомогою УФ- спектрофотометрії за 280 і 320 нм. 95 мономера і 95 лікарської речовини на мономер у кон'югаті визначали за допомогою 5ЕС. Некон'юговану лікарську речовину в кон'югаті визначали за допомогою обернено-фазової ВЕРХ після екстракції ацетоном. Зазначені реакції кон'югування проводили з використанням декількох гуманізованих антитіл.
ПРИКЛАД 5
ІЇЗ61| Для кон'югування лікарських речовин-тіолів з реакційноздатним дисульфідним лінкером, введеним в антитіло, гуманізоване моноклональне антитіло в концентрації 8 мг/мл модифікували 4-6 молярними еквівалентами гетеробіфункціонального лінкера 5РОВ протягом
Зо 1,5 год за 25 "С в 9095 водному РВ5-буфері, рН 7,5, з 5 95 ДМА (об'єм/об'єм), а потім очищали на знесолювальній колонці 525 у буфері, який містив 35 мМ цитрату, 2 мМ ЕДТА, 150 мМ Масі, рН 5,5 для видалення гідролізованного лінкера, який не прореагував. ГАК (співвідношення лінкер-антитіло) вимірювали за УФ-поглинанням за 280 ії 343 нм без і з додаванням 50 мМ дитіотреїтолу (для вимірювання загального вмісту антитіла і вивільнюваного Ру). ЗРОВ- модифіковане антитіло в концентрації 2 мг/мл піддавали взаємодії з 2 молярними еквівалентами лікарської речовини-тіолу, обробленого бісульфітом натрію, на лінкер протягом 2-20 год за 25 "С в 85-9095 буфері, який містив 50 мМ фосфату калію, 50 мМ масі, рН 7,5, а потім очищали на знесолювальній колонці (325 в РВ5, рН 7,4, для видалення гідролізованної лікарської речовини, яка не прореагувала. ОАК кон'югату антитіло-ЗЗРОВ-лікарська речовина вимірювали за УФ-поглинанням за 280 і 320 нм, а відсоток мономера і відсоток лікарської речовини в мономері у препараті кон'югату визначали за допомогою 5ЕС.
Приклад 6 Одержання пимМу9-6-сульфо-5РОВ-1 (2-етапний спосіб) те меО се) 8. мн-Му9-6 чали тн вк УЗ
М «Ло М
Се но ід (в) (в)
Му9-6-сульфо-5РОВ-1
ІЗ62| Реакційну суміш, яка містила б мг/мл антитіла пиМуЗ-6 і 9 молярних еквівалентів лінкера сульфо-5РОВ (робочий розчин 20 мМ у ДМА), інкубували протягом З год за 25 "С в 50
ММ ЕРРЗ-буфері, рН 8. Лінкер, який не прореагував, видаляли за допомогою знесолювальної колонки МАР (Шивзіга Зерпадех 0-25 ОМА Сгаде, СЕ НеайПсаге); виміряне на основі концентрації антитіл і ДТТ-вивільненої концентрації тіопіридину за допомогою спектроскопії в
Уф і видимій частині спектра (заз нм - 8080 см" М-1 для 2-тіопіридону) співвідношення лінкер- антитіло (ГАК) склало 3,7.
ІЗ6ЗЇ Ниму9-6, модифіковане сульфо-5РОВ, розбавляли до 2 мг/мл в 50 мМ ЕРРЗ, рН 8,5, 1095 об'єм/об'єм ДМА, і піддавали взаємодії з 2 молярними еквівалентами сполуки 14 на лінкер (робочий розчин 5 мМ у ДМА, 7,4 еквівалента на антитіло) протягом З год за 25 26.
ІЗ64| Після реакції кон'югат очищали і замінювали буфер на розчин 250 мМ гліцину, 10 мМ гістидину, 195 сахарози, 0,0195 твіну-20, 50 мкМ бісульфіту натрію за рН 6,2 за допомогою знесолювальної колонки (5-25 Зерпадех, їпе дгаде, СЕ НеайНсаге).
ІЗ65| Виявлено, що очищений кон'югат характеризувався в середньому 2,9 приєднаними молекулами сполуки 1 на антитіло (згідно зі спектроскопією в УФ і видимій частині спектра з використанням молярних коефіцієнтів екстинкції єззонм - 15484 см" М" і бгвонм - 30115 см" М" для сполуки 1 і Єгво нм - 207000 см" М" для антитіла ММ9-6), 97,895 мономера (згідно з ексклюзійною хроматографією), « 195 некон'югованої сполуки 1 (згідно з екстракцією ацетоном/ обернено-фазовою ВЕРХ), 6095 виходом в розрахунку на використану кількість антитіла, і 1895 загальним виходом в розрахунку на використану кількість сполуки 14. Кон'югат, отриманий за допомогою зазначеного способу, можна було концентрувати (за допомогою обладнання на основі кювети з перемішуванням або обладнання центрифугальної фільтрації АМІКОН) до » З мг/мл без осадження кон'югату.
Приклад 7 Одержання пимМуЗ-6-5РОВ-1
Место и виру мує о (9) ів Мму9-6-5РОВ-1
Спосіб 1 (одноетапний реагентний спосіб):
ІЗ66) Реакційну суміш, яка містить 2 мг/мл антитіла пиМу9-6 і 7 молярних еквівалентів 1-
ЗРОВ-МН5З (попередньо обробленого 5-кратним надлишком бісульфіту натрію в суміші 90:10
ДМА:вода (об'єм/об'єм) протягом 1 год за 25 "С і потім протягом ночі за 4 С) в 50 мМ НЕРЕЗ (4- (2-гідроксиетил)-1-піперазинетансульфонова кислота)-буфері, рН 8,5, і 1095 (об'єм/об'єм) ДМА (М.М-диметилацетаміді) у якості співрозчинника інкубували протягом З год за 25 2.
ІЗБ7| Після реакції кон'югат очищали і замінювали буфер на буфер для сполуки, яка містила 250 мМ гліцину, 10 мМ гістидину, 195 сахарозу, 0,0195 Твін, 50 мкМ бісульфіту натрію, за допомогою знесолювальної колонки МАР (Шивіга Зерпадех 5-25 ОМА Стгаде, СЕ Неайнсагє).
Діаліз здійснювали в цьому ж буфері протягом 4 осгодин за кімнатної температури, використовуючи касети для діалізу Зіїде-а-І улег (Тпептозсіепійіс 20000 МУ/СО).
ІЗ68| Виявлено, що очищений кон'югат характеризувався в середньому 4,0 приєднаними молекулами сполуки 1 на антитіло (згідно зі спектроскопією в УФ і видимій частині спектра з використанням молярних коефіцієнтів екстинкції Єззонм - 15484 см" М" і єгво ни-30115 см"! М" для сполуки 1 Її є2во них207000 см" М" для антитіла МУ9-6), 9295 мономера (згідно з ексклюзійною хроматографією, Т5К3000, ТО5БОН Віозсіепсев5), «195 некон'югованої сполуки 1 (згідно з екстракцією ацетоном/ обернено-фазовою ВЕРХ), 7295 виходом в розрахунку на використану кількість антитіла, 4095 загальним виходом в розрахунку на використану кількість 1-5РОВ-МНУЗ, і кінцевою концентрацією білка 1,0 мг/мл.
Спосіб 2 (двоетапний спосіб):
ІЗ69| Реакційну суміш, яка містила 4,8 мг/мл антитіла пимМуЗ-6 і 6 молярних еквівалентів лінкера 5РОВ (робочий розчин 18,5 мМ в етанолі), інкубували протягом З год за 25 "С в РВ5, рн 7,4. Лінкер, який не прореагував, видаляли за допомогою знесолювальної колонки МАР (Шивіга
Зерпадех 2-25 ОМА Сгаде, ЗЕ Неансаге); виміряне на основі концентрації антитіл і ДТТ- вивільненої концентрації 2-тіопіридону за допомогою спектроскопії в УФ і видимій частині спектра (6заз ни-8080 см" М-1 для 2-тіопіридону) співвідношення лінкер-антитіло (ГАК) склало 4,0.
ІЗ70Ї НимМуЗ-6, модифіковане ЗРОВ, розбавляли до 2 мг/мл в 50 мМ ЕРРБ, рН 8,5, 1095 об'єм/об'єм ДМА і піддавали взаємодії з 1,75 молярними еквівалентами сполуки 14 на лінкер (робочий розчин 5 мМ у ДМА, 7 еквівалентів на антитіло) протягом З год за 25 26.
ІЗ71| Після реакції кон'югат очищали і замінювали буфер на розчин 250 мМ гліцину, 10 мМ гістидину, 195 сахарози, 0,0195 твіну-20, 50 мкМ бісульфіту натрію за рН 6,2 за допомогою знесолювальної колонки (Шивіга зЗерпадех 5-25 ОМА Стгаде, СЕ НеайнНсаге).
ІЗ72| Виявлено, що очищений кон'югат характеризувався в середньому 3,8 приєднаними молекулами сполуки 1 на антитіло (згідно зі спектроскопією в УФ і видимій частині спектра з використанням молярних коефіцієнтів екстинкції єззонм - 15484 см" М" і бгвонм - 30115 см" М" для сполуки 1 і Єгво нм - 207000 см" М" для антитіла ММ9-6), 91,695 мономера (згідно з ексклюзійною хроматографією, Т5КЗ3000, ТО5ОН Віозсіепсев), «195 некон'югованої сполуки 1 (згідно з екстракцією ацетоном/ обернено-фазовою ВЕРХ), 4095 виходом в розрахунку на використану кількість антитіла, 22956 загальним виходом в розрахунку на використану кількість сполуки 14 і кінцевою концентрацією білка 0,5 мг/мл.
Приклад 8 Одержання пимМу9-6-СХ1-1-1 (о) т нХ АХ «пиму9-6
М ие й М Н 7у о
М. вчи о. лльи Ми пу порід (в) (6) пимуЗ9-6-СХ1-1-1
Спосіб 1 (одноетапний реагентний спосіб іп 5йи):
ЇЗ73|Ї У розчині ДМА, який містив 1,9 мМ сполуки 14, 1 мМ гетеробіфункціонального лінкера
СХм1-1 їз М-гідроксисукцинімідними (МН5З) і малеіїмідними групами та 20 мМ диїзопропілетиламіну (ОІРЕА), проводили реакцію за кімнатної температури протягом 8 хв.
Потім для нейтралізації надлишку сполуки ТЯ додавали З мМ малеїімідопропіонової кислоти (МРА). Реакційну суміш 1-СХ1-1-МНЗ зберігали в замороженому вигляді за температури -80 "С і пізніше після відтавання додавали двома порціями в забуферений розчин пиМу9-6 за 25 9С (2 мг/мл, 100 мМ ЕППС, рН 8,0, 1095 (об'єм/об'єм) ДМА); 4,8 молярних еквівалентів на антитіло (грунтуючись на концентрації лінкера), а потім, через 30 хв., 4,2 еквівалента. Після 2-годинної реакції кон'югат очищали і замінювали буфер на розчин, який містив 250 мМ гліцину, 10 мМ гістидину, 195 сахарози, 0,0195 Твін-20, 50 мкМ бісульфіту натрію за рН 6,2, за допомогою знесолювальної колонки (Оціск-вріп ргоївїп, 1-25 їїпе гезіп, Коспе), діалізу і, нарешті, стерильної фільтрації через 0,22-мкм фільтр.
ІЗ74| Виявлено, що очищений кон'югат характеризувався в середньому 3,3 приєднаними молекулами сполуки 1 на антитіло (згідно зі спектроскопією в УФ і видимій частині спектра з використанням молярних коефіцієнтів екстинкції єззонм - 15484 см" М" і бгвонм - 30115 см" М" для сполуки 1 і Єво нм - 207000 см' М" для антитіла МУ9-6), 9595 мономера (згідно з ексклюзійною хроматографією, Т5КЗ3000, ТО5ОН Віозсієпсев), «х 195 некон'югованої сполуки 1 (згідно з екстракцією ацетоном/ обернено-фазовою ВЕРХ), 4595 виходом в розрахунку на використану кількість антитіла, 1795 загальним виходом в розрахунку на використану кількість сполуки 14 і кінцевою концентрацією білка 0,7 мг/мл.
Спосіб 2 (одноетапний спосіб):
ІЇЗ75| У забуферений розчин антитіла пиМуЗ-6б (2 мг/мл, 50 мМ ЕРРБ, рН 8,5, 895 (об'єм/ об'єм) ДМА) додавали 14 молярних еквівалентів сполуки 14 (5 мМ робочий розчин у
ДМА), а потім 7 молярних еквівалентів лінкера СХ1-1 (15 мм розчин в етанолі) та інкубували протягом З год за 25 26.
ЇЗ76) Після реакції кон'югат очищали і замінювали буфер на розчин, який містив 250 мМ гліцину, 10 мМ гістидину, 195 сахарозу, 0,0195 Твін-20, 50 мкМ бісульфіту натрію за рН 6 2, за допомогою знесолювальної колонки (Пибіга зерпадех 5-25 ОМА Сгаде, СЕ Неайпсаге), потім 2 х діалізом за 4 "С у касетах для діалізу 5іІіде-а-І улег (Пептозсієпійіс 20000 МУ/СО).
ЇЗ77| Виявлено, що очищений кон'югат характеризувався в середньому 3,4 приєднаними молекулами сполуки 1 на антитіло (згідно зі спектроскопією в УФ і видимій частині спектра з використанням молярних коефіцієнтів екстинкції єззо нм - 15484 см' М" і єгвонм - 30115 см" М" для сполуки 1 і бЄгво нм - 207000 см" М" для антитіла МУ9-6), 9095 мономера (згідно з ексклюзійною хроматографією, Т5КЗ3000, ТО5ОН Віозсієпсев), «х 195 некон'югованої сполуки 1 (згідно з екстракцією ацетоном/ обернено-фазовою ВЕРХ), 4495 виходом в розрахунку на використану кількість антитіла, 1195 загальним виходом в розрахунку на використану кількість сполуки 14 і кінцевою концентрацією білка 1,48 мг/мл.
Приклад 9 Мс-аналіз деглікозильованого Му9-6-5Р. Ю8-11
І378| МуЗ-6-5РОВ-1ї одержували кон'югуванням сполуки 1ї, яка містила МНЗ-ефір, безпосередньо із залишками лізину антитіла (тобто відповідно до одноетапного реагентного способу, як описано вище), або кон'югуванням сполуки 14 з антитілом, модифікованим дитіопіридином (тобто згідно із двоетапним способом, як описано вище). Потім проводили мас- спектрометричний (МС) аналіз деглікозильованого Му9-6-5РОВ-1ї, як зазначено вище.
ЇЗ79| Одноетапний реагентний спосіб дозволяв одержати кон'югат з 0-9 модифікаціями сполуки 1ї, асиметричним розподілом кон'югованої лікарської речовини і значною кількістю некон'югованого антитіла. З іншого боку, кон'югат, отриманий згідно із двоетапним способом,
характеризувався МС-профілем з 0-6 модифікаціями сполуки 1ї, симетричним розподілом кон'югованої лікарської речовини і дуже малою кількістю некон'югованого антитіла. Див. Фіг. 12.
Обидва кон'югати мали аналогічне середнє співвідношення сполука 1ї/антитіло, яке становило "«« 4 згідно зі спектрометричним аналізом в УФ і видимій частині спектра.
Приклад 10 Дія рН на двоетапний синтез Му9-6-сульфо-5РОВ-1
ІЗ8ОЇ Дані МС для Му9-6б-сульфо-5РОВ-1Ї, отриманого за допомогою двоетапного способу за різних рН, показані на Фіг. 13. Коротко, МуЗ-6-сульфо5РОВ (3,7 лінкера/антитіло) піддавали взаємодії з З еквівалентами сполуки 14 на лінкер (або приблизно 11,1 еквівалентами на антитіло) протягом 18 год за рН 6, 7, 8 їі 8,5. Дані МС продемонстрували зменшення кількості лінкера, який не прореагував (супутні піки 260 а.е.м.), при зростанні рН реакційної суміші. Таким чином, виявилося, що рН впливає на реакцію кон'югування при синтезі кон'югату МуЗ-6-сульфо-
ЗРОВ-ЇЇ. Зокрема, для повної взаємодії сполуки Та з лінкером сульфо-5РОВ, приєднаним до антитіла, потрібно рН » 8.
Приклад 11 Дія співвідношення сполука/лінкер на двоетапний синтез СИКТІ-сульфо-5РОВ-1
ІЗВ1| На Фіг. 14 показані дані МС для сиКТІ-сульфо-5РОВ-1, отриманого при використанні двоетапного способу з різними співвідношеннями сполука Та/лінкер. сСИКтТІ-сульфо-5РОВ (3,7 лінкера/антитіло) взаємодіяв з 1,1, 1,3, 1,5 або 2 еквівалентами сполуки 14 на лінкер протягом З год за 25 "С, рН 8,5. МС продемонструвала зменшення кількості лінкера, який не прореагував (супутні піки 260 а.е.м), при зростанні еквівалентної кількості сполуки 14 на лінкер. Виявилося, що за цих умов для повної взаємодії з лінкером сульфо-5РОВ, приєднаним до антитіла, потрібне співвідношення сполука Та/лінкер » 1,3. Збільшення еквівалентної кількості сполуки та більше 1,5 на лінкер призвело до збільшення фрагментації антитіл (14-1995), у той час як 1,1-1,3 молекули сполуки Та/лінкера не викликали значної фрагментації антитіл.
ПРИКЛАД 12 Одержання кон'югату антитіло-5РОВ-лікарська речовина
ЇЗ82| Сполуку 1с попередньо обробляли З молярними еквівалентами бісульфіту натрію (використовуючи свіжоприготовлений розчин МанНзОз у воді) в 96-9895 розчині ДМА У воді протягом 4-5 год за 25 "С. Для кон'югування гуманізоване антитіло в концентрації 2 мг/мл піддавали взаємодії з 5-7 молярними еквівалентами сполуки 1с (попередньо обробленої
Манзоз) протягом 6 год за 25 "С в 85-9095 водному РВ5-буфері, рН 7,4, або 50 мМ водному
Зо Нерез-буфері, рН 8,5, який містив 10-1595 М,М-диметилацетаміду (ДМА), а потім очищали фільтрацією через колонку 525 для гель-фільтрації в РВ5, рН 7,4, для видалення лікарської сполуки, яка не прореагувала, або гідролізованної . Кон'югати гуманізоване антитіло-ЗРОВ- лікарська речовина діалізували в буфері, який містив 10 мМ гістидину, 250 мМ гліцину, 1905 сахарози, рН 6,5. Виміряне за рахунок УФ-поглинання за 280 їі 320 нм із використанням коефіцієнтів екстинкції лікарської речовини та антитіла за 280 нм (215000 М" см") і 320 нм (9137
МИ см7) співвідношення лікарська речовина/антитіло (ОАК) кон'югатів склало 2,2-2,9.
Визначений за допомогою 5ЕС (ексклюзійної хроматографії) при використанні колонки ТЗК-Сеї
СЗ005МУХІ (7,8 мм х 300 мм, розмір часток 5 мкм) процентний вміст мономера в кон'югатах склав » 9095. На основі УФ-поглинання піка мономера, отриманого за допомогою 5ЕС, також продемонстрували, що піки мономера кон'югату містили приєднані молекули лікарської речовини. Для аналізу вільної (некон'югованої) лікарської речовини кон'югат екстрагували ацетоном для видалення білка, висушували, відновлювали в рухливій фазі, впорскували в Оф-
ВЕРХ-колонку МУБАС 208ТР С8 (4,6х250 мм, розмір часток 7 мкм), і порівнювали зі стандартами. Визначили, що відсоток вільної лікарської сполуки в кон'югаті склав « 0,595 від вмісту кон'югованої лікарської сполуки.
Одержання кон'югату гуманізоване антитіло-5РОВ-га:
ІЗ83| Гуманізоване антитіло в концентрації 8 мг/мл модифікували 4-6 молярними еквівалентами гетеробіфункціонального лінкера 5РОВ протягом 1,5 год за 25 "С в 9595 РВ5, рн 7,4, який містить 595 ДМА (об'єм/об'єм), а потім очищали на знесолювальній колонці 525 у цитратному буфері (35 мМ цитратний буфер, рН 5,5, який містить 2 мМ ЕДТА, 150 мм Масі) для видалення лінкера, який не опрореагував. ГАК (співвідношення лінкер-антитіло), яке визначається шляхом вимірювання УфФ-поглинання за 280 і 343 нм без і з додаванням 50 мМ дитіотреїтолу ( для вимірювання загального вмісту антитіла і дитіотреітол-вивільнюваного 5РУ), склало 2,7-4,11. 5РОВ-модифіковане антитіло в концентрації 2 мг/мл піддавали взаємодії з 2 молярними еквівалентами сполуки 2а (солі НСІ) на приєднаний 5РОВ протягом 20 год за кімнатної температури в 8595 цитратному буфері, 15 95 ДМА (об'єм/об'єм), а потім очищали на знесолювальній колонці (325 в РВ5, рН 7,4, для видалення некон'югованої лікарської сполуки.
БАК кінцевого кон'югату гуманізоване антитіло-«ЗРОВ-2а вимірювали за допомогою Уф- спектрофотометрії за 280 і 350 нм; розраховане значення БАК склало - 1,7-2,1. Процентний бо вміст мономера і приєднаної лікарської сполуки на мономер у кон'югаті визначали за допомогою
ВЕРХ, використовуючи колонку для 5ЕС (ексклюзійною хроматографією). Див. Фіг. 16.
Приклад 13 Використання ковалентних імінових реагентів для поліпшення характеристик кон'югату антитіло/лікарська речовина (95 мономера і лікарського навантаження).
ІЗ84| Утворення адукту проводили з використанням 5 молярних еквівалентів імінного реагенту відносно МН5З-ВМР5Б-1 в 9095 ДМСО/1095 РВ5, рН 7,4, протягом 4 годин за 25 "С. Потім реакційну суміш додавали до антитіла пиму9-6 (4 молярних еквівалента лікарської речовини, 2 мг/мл, 1095 об'єм/об'єм ДМСО, 50 мМ Нерез-буфера, рн 8,5, 5 год, 25 С). Кон'югати, отримані з використанням гідросульфіту натрію, бісульфіту натрію або метабісульфіту натрію мали аналогічне співвідношення лікарська речовина/антитіло і процентний вміст мономера, у той час як кон'югати, отримані без обробки допоміжною добавкою, мали вкрай низький рівень вбудовування лікарської речовини.
Приклад 14 Дослідження здатності до витривалості кон'югатів ПРИРО В-1 іп мімо
ІЗ85) Здатність до витривалості кон'югатів пИРОЇ К-1 іп мімо досліджували на самках мишей
СО-1. За тваринами спостерігали протягом семи днів до початку дослідження і визнали здоровими. Мишам вводили однократну в/в ін'єкцію бісульфіт-несучого кон'югату і щодня відслідковували у тварин втрату маси тіла, захворюваність або смертність. У Таблиці 9 показано, що кон'югат пиРОЇК 1-лікарська речовина 1 переносився тільки в мінімальній протестованій дозі 50 мкг/кг. На противагу цьому виявлено, що обидва моноїмінні кон'югати
ПЕРО А 1-лікарська речовина 2 і пиРОЇ К1-5РОВ-1Е переносилися краще при максимальній стерпній дозі « 198 мкг/кг і » 560 мкг/кг, відповідно.
Таблиця 9. Дані щодо порівняння здатності до витривалості кон'югатів (А) ПиРОЇ К1- лікарська речовина 1, (Б) пигОЇї К 1-лікарська речовина 2 і (В) пигОїЇ К1-5РОВ-Е.
А) у ля са а ла и і В Пи ни пен во и що 4 Я ит
Доза то г КИ
М яті пе Я сяк, Мох ; ; що Ї же с яти ен т (мкг/кг іВнживаність я Ті І ТО - як М оМе Мед 50 100 (Я 9 з Сі
У - ей ЕЛЕН хви
БІ г (4) М плит імкгкРуВижинаність тер Агро ві я 7 ще КО ду в а и В то0 (7 г ї Оме мед і й 132 100 - перс в-пве | и ш 4
ЕС Мт й 1 за міти
В)
Доза то Й Мч Ч. питати о Кт з пЕОї в ! ї МКГКЕ ІВ пжЖиванітЬ Сай ЩІ о
Гл пери чи тек, се А. 120 100 т Тут - й и МеОб о тем, ей»
І М о режі КЕ хну о І
І 5 10 й на ЧІ КЗЗ би
ВЕТО» В вті
Приклад 15 Вплив пропіленгліколю на утворення сполуки та кон'югування
ІЗ86)| У даному прикладі продемонстровано, що при досліджуваних реакціях кон'югування, проведених за присутності пропіленгліколю в якості співрозчинника, не спостерігалося осадження кон'югатів, і що 4095 (і можливо навіть більш концентрований) пропіленгліколь можна використовувати без зниження 95 мономера в отриманому кон'югаті (за присутності 295 диметилацетаміду - дані не показані).
ІЗ87| Більше того, присутність пропіленгліколю під час очищення приводить до значного збільшення виходу (Таблиця 10).
ЇЗ88| Не обмежуючись рамками якої-небудь конкретної теорії, автори даної заявки вважають, що одним з основних джерел проблем при кон'югованні розглянутих кон'югатів є гідрофобність, властива молекулярним компонентам кон'югатів. Це може, щонайменше частково, пояснити низький вихід очищеного продукту, і в ряді випадків, аномальні профілі розподілу маси, спостережувані при розглянутих реакціях кон'югування.
ІЗ89| Варто також відзначити, що додавання ізопропанолу при ексклюзійній хроматографії розглянутих кон'югатів сильно зменшує уявну кількість агрегатів. Це спостереження показує, що низькомолекулярні гідрофобні розчинники можуть підвищити розчинність лікарської речовини і кон'югату згідно з винаходом.
ЇЗ90ОЇ Таким чином, розглянуті реакції кон'югування, етапи очищення після реакції, і/або формування сполуки утворених кон'югатів переважно здійснювали за присутності низькомолекулярних гідрофобних розчинників, наприклад, пропіленгліколю (наприклад, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 4596).
ІЗ91| Антитіло-сульфо-5РОВ одержували відповідно до раніше описаних способів шляхом додавання М-гідроксисукцинімідилової (МН) складноефірної форми сульфо-5РОВ до антитіла (пимуЗг-6) у воді, яка містить 395 ДМА і забуферена за рН 8,5 протягом З годин. Отриману проміжну сполуку ( антитіло-сульфо-5РОВ) очищали на 525 Зерпадех з метою видалення надлишку лінкера. Кількість антитіла і лінксера оцінювали спектроскопією в УФ-видимій області спектра шляхом вимірювання оптичної щільності за 280 нм за відсутності відновника, а також за 343 нм за присутності - 50 мМ ДТТ для вимірювання вивільнення 2-тіопіридину з кон'югованого лінкера.
ІЗ92| З метою кон'югування лікарської речовини антитіло-сульфо-5РОВ, отримане вище, піддавали взаємодії при 2 мг/мл антитіла з 2-кратним молярним надлишком сполуки т1а за присутності зазначених співрозчинників і за рН, підтримуваному на рівні 8,5 за допомогою
ЕРРБ5-буфера (кінцева концентрація 60 мМ). Диметилацетамід (ЗАЕС) і пропіленгліколь (Ага
Аезаг) використовували в тому вигляді, як вони були отримані, без додаткового очищення. Усі буферні розчини стерилізували пропущенням через 0,22-мікронний фільтр (Согпіпд), а воду очищали за допомогою зворотного осмосу/деїонізації. Реакційні суміші інкубували за 25" протягом З год, а потім очищали, використовуючи одноразову колонку 525 Зерпадех (Мар 25,
СЕ Неаййсаге) у буфері для сполуки, яка складалася з 10 мМ гістидину, 250 мМ гліцину, 195 сахарози, 0,0195 полісорбату 20, 50 мкМ бісульфіту натрію і забуференого за рН 6,2, а також зазначеного процентного вмісту пропіленгліколю (об'єм/об'єм).
Зо ЇЗ9З| Вихід реакції і лікарське навантаження визначали за допомогою спектроскопії поглинання. Усі зразки демонстрували » 9695 мономера відповідно до аналітичної ексклюзійної хроматографії.
ІЗ94) У Таблиці 10, наведеній нижче, показаний 95 виходу кон'югування залежно від вмісту пропіленгліколю в реакційній суміші або сполуці. Антитіло-сульфо-5ЗРОВ-1 одержували взаємодією сполуки 14 з антитіло-сульфо-5РОВ протягом 4 годин за рН 8,5 (неводні компоненти відповідають зазначеному) з наступним очищенням на 525 Зерпадех.
Таблиця 10 компоненти пропіленгліколю
ДМА
" Густий білий осад спостерігали у верхній частині колонки із сефадексом після очищення
ПРИКЛАД 16 Одержання пимМу9З-б-сульфо-5РОВ-1Я з використанням високоактивного лінкера 4-нітроРу-сульфо-5РО
ЇЗ95| Реакційну суміш, яка містила б мг/мл антитіла пиМуЗ-б і 5 молярних еквівалентів високоактивного лінкера М-сукцинімідил-4-(4-нітропіридил-2-дитіо)бутаноату (20 мМ робочий розчин в етанолі), інкубували протягом З год за 25 "С в 50 мМ ЕРР5-буфері за рН 8. Лінкер, який не прореагував, видаляли за допомогою знесолювальної колонки МАР (Шивіга Зерпадех 2-25 ОМА Сгаде, СЕ Неайсаге). Виміряне на основі концентрації антитіл і ДТТ-вивільненої концентрації нітропіридин-2-тіону за допомогою спектроскопії в УФ і видимій частині спектра (Єзоа нм У 14205 см"! М-1 для 2-тіо-4-нітропіридону) співвідношення лінкер-антитіло (ГАК) склало приблизно 2,3.
І396| Ниму9-6, модифіковане лінкером, розбавляли до 2 мг/мл в 50 мМ НЕРЕЗ -буфері за рН 8,5, 1095 об'єм/об'єм ДМА, і піддавали взаємодії з 2 молярними еквівалентами сполуки 14 на лінкер (робочий розчин 5 мМ у ДМА, 4,6 еквівалента на антитіло) протягом 30 хв. за 25 96.
Завершення реакції обміну дисульфідних зв'язків визначали, відслідковуючи збільшення оптичної щільності за 394 нм за допомогою УФ-спектроскопії. Після реакції кон'югат очищали і замінювали буфер на розчин 250 мМ гліцину, 10 мМ гістидину, 195 сахарози, 0,0195 твіну-20, 50
МКМ бісульфіту натрію за рН 6,2 за допомогою знесолювальної колонки (5-25 Зернадех, їїпе дгаде, СЕ Неаїйнсагє).
ІЗ97| Виявлено, що очищений кон'югат характеризувався в середньому 2,1 приєднаними молекулами 14 на антитіло (згідно зі спектроскопією в УФ і видимій частині спектра з використанням молярних коефіцієнтів екстинкції єззо нм - 15484 см' М" і єгвонм - 30115 см" М" для 14 і бгво нм - 207000 см" М" для пиМуЗ-6), 9895 мономера (згідно з ексклюзійною хроматографією), « 195 некон'югованого 1а (згідно з екстракцією ацетоном/ обернено-фазовою
ВЕРХ), 7095 виходом білка і 3295 загальним виходом 14. Див. Фіг. 28.
МЖЕЕЛЕМ УКХ ЛОЖНОМЄМУ
«1 ТММНМОМЖЕМ, ХМ мило СТИ сут ЕІ МАЦНЧ КИМДТ ЖИМ ху СКАЖИ УТРиМАНиИХ Кс ТІВ рт зро Июль «ли Хв ЛоИ «145 «іх сот п из УЗ еп ше пав, «в КР -05-по родах В ЖД. гу «лю аа, ОЙ
Шут МТУ ул шик водінні ло м дО пп ч1МУх пігаахиийо др туя В
ТУЮ жу ИН зт Ж
АЖ УлИ Іл»: «ЧЛ Ппрлеєтнх света д Бе сказ паЛОоК спи штучна послі левніт гля «дит Ж шу чНосМ: поеми 0 СТИЛЯМИ ОВУ пептИих ший «яп сФфррруо тк штІНВІ МмаХМ дм му уко Хна ММ сви 1 5 «сих білок сів опеєихна послуломцуваь пот «ЛИХ т йти зцетрттігі ту рили ил спри дити м. слитсьт ід хоФю шт СИПпИс цу чноМ. пошлоцвноютюх ло шинами пеилам «и «Шо МО ЕЕ «рода іа)... пн о он Зп нн ж ле ЗАЙВУ мл, УМО Пп ТО «ЕШлЮ ММА КЕ чЕшшУ У51..1
УАЗ шуй, міш, БА ОО ЛЕЧ спиш МОВО еОшшш ІСв тат ши 1.17 ване Шо НН ля Ше Мловосук і «ой бхфУм, Сіл ЛП, Жеву Аа сп У хо я ря шия тт ку п пох т хе Демі: Чо ЗБ: аж спюхої т мА пе се
Ел ОШіт ВЕ БЖ тує Дощ жіуУ До Тит БВ Тук Ал оджуп да ВЕН йдА т « та 15 как
ДЕМО поь пило ша оілок пшоно МТУ НА ПОУДЛДОВН АВ люлі гті и ати т хе ит - хх ріст ти а и паж спис цепучняст пис ллсвиио ті ї сМиФеЕтичНиМ пет пеиптиАй тах З
УЖ о пЧУ ме ал я ВМя МЕТ Во ГУХ
УК МТИВ молю тю, яд епі пло жі шШтучнд бпзипадачнАть
КІ СНИ земних поопідовисоть ї смютетизиМИ пситяу тай» й
УЖ Вл ше ба шеК Уа ше БВ Аїш осаду ТптІ ЕК ем ме Міш
НІ. с їе пе 1 з А и є» «тів сш була х ех ЛИШУуМц ЛІ М МЛ длУТе си он и НН НА ННЯ ямки ЛЕНИХ ИМЯ пис ла ливими А 1 Кан ТиММИ
Пец жтКММмо ся дхо дама дет Впбосжм мл Рід «ст тс ет білих сша пигутцня поль Млжкт ть вами
УК Ж: пбпяес;ї петлі внадитіні її пцзнетицини
Ед МІЙ пиву посад слишоМ її дини пяти М пах сх
А кеди с обвіпй сел о АТ САМ и ллє УМО ІЛ
СНИ НІ пліт» 47 світ пілок «шле Шасирна зрослі ніотх сито жило АКА ЦБУУ ДЯ. по АМЛОДОЕМИЛКТИОЇ ОДА УМХ
ТУПИЙ,
КУН КНе шк жи ла Ма яки пл дит хг пудах ММ Ме бю йоштаз тів фл ВН рі пт тТ1ї8 ніжок Тут ваввотіу Ввзрожих ВБе о ТтТУуг Аж бів бул тниФ ою 1 їх 15 КУ
Меч «Лю З ж 445 сід» пілок -дішВ щитухна посченовил ит «МУ
ШК ьсь гздіі Мепет ціх гей пихи 0 матки и аа чали РИС шу чнАМЕ лбдИЛОДОВНИшМИ их РОЛИКУ МІХ поміметении «капа тугт ро тім т чо радо жим яз» в'я і од в тиха фу; поізк щі ц пів Заї бій ца Узі пій бек піу дій бій хві УВх муз Бк» пім дів ї У їх ще
Ха мі Бжл о ї1їФа Мет сжв Му вія нак о Зфу уж ну Бп-есБаи ЗУ ХУ
А о те пе мих Ва тероМлі був сім Мек бра Зіу сій пет без» 1 кр о ї15
Во 3 т пахові Іїв нім Би Фуко дав ШУ Влю ть Бі Чек йди о Зі ря Мі
МОЖ мч сл вам раю ут мл шу Блек клю мМ ші ЗАТ МУ хия а п я ек мам Аж пз о ям МИЛО УМ БІО хи МАТ сш М ММ кодо 1Уд
Ба то тх о лящ тя жи блю Жов бтді срую тую доня мн Вл якдоо бю бохуяя сиза
Мейо дна би; ВЕ Ті ТИпЖк о Осеї ОЇ Ашвро ріж Аза узі Тух ТУ Су
ВУ зе 5 яцаско жЖукаї Же сда ху пд ще д з вод Бач пря уж йо гурт р тп оАхИа тУх АВК ОЗАУ белоАКа вів Меї Бдрофує ТЕвопаУу ЦЗ ОЗру ТВ
ТИ птц та ее Тих м
Чи Мт фен хи мно де доро Мк ати фуд пад зугу шк до ЗЗКДО їси мимо АТХ ОСИхК птло Малогій ех їм Буд пам шу шех ЖАХ МТУ ЕКО 115 М М ли ОТ Шауну ди ше и АН он АННИ Ні о Не ШК НЯ пл емо йля КО лшЕ Шеюк Буд пер лик дек осьу ее МЕ ДІВ Ах фоюму (1 7у 152 їх ї4чй талу тки ОУИЦОХ Хлито джу пеки щу бу тїачі фе Зк Я М пшоно Мото пул беж мМ мух Ар бух Байез тур ЗДО Бл уві ТВу МБ ОБелобтту Али так йо 1хх То жк пл діло битоє дж. т лхт ку оч трак ду пгсюх досади їм тт шчХ шу Аа БЕ ЛЕ пед шу УМ ЇМО КАТ ОКР Бо мів Мало са лий ле лк ша шу зму дви сухо шшл осей пе о шеак мазі Маг Мт Ума БроО сЗях ше
Іо Іо пе ше Уирлі и фя р, МВ спі жа шо бек щохть Зм ж і жу дугу ше за Бе су било ТВЯ бух мі бук овла» залом Мал ук Мис щем;
Мах п Б доня Якою та ЦІ жу; хх тик кт ли а нн
Заи оте їв Ві ДЕ пуд пз У Ай Бо Був о шек ую Ли гбме Ту гій ших ти
Ву тах тут Биз вто бух КЖУ Аід Бде Фім Бей ій: щі лу Бто ех суху, зи сте ке
Мк т хх жа
ЧА шт ри ил: бо ит тля Бк гл А у тех Май їз пох вкд чав шле їн Бе бто Би КЕ ОБХа пу АВрОоїМІ б Маї її щеб о ВЕд зас о їж
Тв хо біз Уві Чт осв Ми чаї Уві Млю бал сет НІія щі Бай о Бо р ти ла вк ТИВ я ща Мо тем бю фр тм чку Свіжі Дю ра Ем тт а мік вт дл алі ліф Буш ля й» Тгросух чаї АзросіУ ЗА осЗзій Увла мів пяй ХАІ шу шо ау лоза Пи жу Тк оку М М лях іл фол Жила Ями ши Кая, докт був о Зми уз Бро дез щу піз іп жук Дай аск Зк Тут Бучі Узі тд пл па
Пеу Ма ламі ТС лаї бе нії ція ВБле о ттев рей вай шу рух І Суху пед АВ МПД ОСМяХМ ом МІ: бал БО зро земІ мипочшУ Пух шк шу зпх 3 т о тил бтмже Ж Ан шик Ж, би йід т Ж го дея тд різ Хо ую пух служ Буж Ма жк йле УББ діа їм ба дів вс лів бі БУ ТЕХ що Бра шо тів опву злих Ді ву По віп го дура: бу ри мВ жує ех Фк шк Ух Ж кін ус шММ їхІЛХ МКлт Орос асп пал ма МЕ АВ и пи БЕН ши пе ку жом Домі Мову 0114 Стадії Ма то чо пл МЕД пек осбум ТОБ гла вжи кжхо пех оАка Вл піл олеи Хпх депо ВЗ) шоп о Жжві Кек фей хх шуй
Зх 5 Зх пом УМОВ тео ттях ТИЧ хх жи. жи сову Хр дов ау мух ТУТ. дух ем у і буму Кп тую бжс Жек Авро ті Аза улі ШУ ТИ обл ще: 373 з15 за зи сли ші м кре с дит мат сток ум пд су ру ут уд ромі й
Фк ФРЖ КІЛО МД си б МН ТУутосвух ла щику КАТ жу ма жи ям що о БкЯ о ше дя щу паєк рних каш там ст ву б Тир МІ ЗИЦрУ дрхжу буюю у пшХховшу сжіУу ЖУВХ БУ ст пе Тут пек ую зх Срлл а дл ем ОХ
БУчЯ РЕЯ ВІВ "ЖТуту їі ст Ре шт М ІМ: дит будо п гц ко тт сут дя
Агу Ттробдю ща У Вип) Ківі дае будо же жі БУ МХЖ ОМВО Ка же У ж ж зх Вл гемо Бл я дян щі в стик Тв. бій пед Дів імла; Жарв о лец йех вВтй бу гля ем окла им о худ Гал освІмй пули бу; Ще сил мех ро са у МуУй яті, й Ав
Ух Я ок «пЕїтМ кла ле
Ки ЕН сві» пілож да пл ка сло хх
ИЙ» «шоп ПИЛ шЕМУу і опо ЛІ денних 1 У Ден
УМ пепи и. апа як. ТЗ тА те лю Три оно б Те дере від АТ ех би хх вага ме їляих Лат бін ех бро їм3 Жек ої Дій Ммаї шШтя Бей о 1 х 4 їх дк - х Ак А оз и коли и ИН я о ме а и ВО МЛН т с В М Є Тих Ва до т М пі тм ей бтдмі Ме Ні ср бер ре іп оре бто поч пік пів Буг пім швх о пелоси мех Ні лю о тую Ме о Зівн був Бо ду пій бдь РКО п їй ок дою Тони: фот Стихи одним Жіруро су Ф ов тая дО ил МИ кт, й
ЕФ цей жей дав ЕМ БТ дал Щек мли цем ша вав шум Узі ККОо лю
СН п дл щу Кл Пів Зі бр Мр перо жид сет. до Ме Я ам ж гік ах
Вуд пе лат ххху Май озЗіз пек шує ХХ АйроКне тих Сей ВзпоїМе пех б ПО х БУ та. хр дуг Лу Я що Ва пт до Ру зи А сти (ко т ши ов ц жо Малозій вла ша пою йки Лія дих ТУЮ ТеК су бій баб ощел вжи реж С т: що ли Ух
«м ук БЕОе Уюди МО Бпе ьо піу ШЕУ тБЖ був лецо біз Іза Бу Аа 12195 її 115 ие ти НУ «кіс ззкут1 Вод ді, тиху Шок рії Ки кн Бу ев жом до У -д тн Ущі Вкя Аів о Бкб би Уві Би фе Бе Его вро Бех Авросі пі 115 зх т2З пон тіуитчо Фе ФФУ ЛЕТ фло Хо тв, пс М Фа: лет зи пуп о ЖВЕ бу ТК ОЛІЯ пе ому Ук шифе ом сіли ЛОЛИ ВЗ гИхе СУХ її 135 142
Тут де іп Вів бут МУР мі стю її Здаі дуг вих діш Бе Мій их
МК Ал хі Віз ШУЙ ші ПЬпОТЕв Муз дк зр вип АЇа бе шпон я ке ях ях, «сх іш дей шу щі піз йше ба бите ур; ол боту де туя де от ту пі АВП От спіл ша пет ау сл щура дом Веловуз Да» его Тех чик лу ясве тмж ми їже; паст пек тТВлосещ их сеиа пед пуп жів Впрожфуе с) їми
Іти БО не
Мп ТАКО й свинок "гір ДЮ ТАМ ає ЦЯ ля кі колу мм о Шк Во щвжш ПУ Мах тТуг ХА су пам ЩА ХМЕОНпКл ал олау ей су ше хто 155 й до ші утро тизе о дАУ рмде ДОВ: ех тім р оптув «Бик ОодУую ех ЕЦП ВОМ Бе У СУХО слу «ит ха «т112 515 «ях Мідь тах ЗМИЕ «ЕІ» Штучна побдлідавність «лют ток пики ОМ аЙух мумі МтИи Мі я пижма я у ЦИ. БИ ти СМС КА шина них пила пелптид прали зх
Б нення А и кН чн и а НН НН НН ше сіб Мах пе слі тм бю ко е»-и Бек оДей міх захо К Б су 1 З Ії їх жів Кіз Аз лає Тіт ду сш дув Біз Шез сяти ую зиЗ пах Ве лід та пе 5 пу тпж досту їм) мот ні таб отут Віз оси Було ле су ба пт сбжо ває о а жов ст т лу тя ух До дон ому ит 21 сх утіз айУу о уми люк, ж ше зей 1юе ую ВК дів КІ Аша зви сла ів бу ув шуФ вт ци 5 щу доби Уж сія сЩізк підем АХ ую схиляти фр см ру Кри Сід. Кт да пе пек щі пузж ФУ Вер олужи ЇМ Кар обла бмт о Ббеб жає Жре Шах й що ТЕ че сит МАТ ОТ АТ У де дова до о Мірою удо Ме я у доку
Вже ха бла Лів бро дво ліж Вія їй Тух ТУЮ лу біб опімй Бех ла цк дз пк, ля бр шу тя тю Шах і п у пд охоти. й ти Тр и іх ОК ЖЕО ЖУГ УЖ ЕПОеЇ слу шах ду жИК Буш о мез спуц дів пу ло г ще Ка
А и мА твк Чиї Хі Віз Бгто йзт Чаї пе тіє Бо Бо Беб ех Моз шо З 115 1 іх ит; о тік дррах КД ная х ша А пе ча кН ен зх о й Я лиху це Шу ду Пі чЧйк Віл Бех Уві Хаіф пу їз фей» Ази бле па тую 12 153 145 бути ДУ лі АД ти га ІМ о лиу жу шО Ту дет дим ват тим І: щу
АЙ ОАХУ А ДИВА Мут жк ІМ ОМ МУ ЗІ Бр АТ дя лм сти ми
Мав То та: МІ пл буді; Ше ЩІ в туби Шах МУ бен пли ша джем дит тло ми бен рве шум о взі шШел о біп ост Зак хі Тих Бій бів Ажродет бує АвроБех Тех та 17 ут «виго шим Жма се пруро тьютор ша Км Ж о сподух дян піл хи суХ йех Фей БтЕ й Мт іже ТлЖ Беб Яеє Буш Бій АЕрошжух МО Бух тав ще -х ники и о Ши ИН о В
Я пуМ УМ хУЖ о хвщ ж шАМмосеМ МК МКж сти ШУМ сам шлК ат Олох лом пет ро 19 шах века дао сти лиж ЖЕ не ий дай іт прости чМахоблпу Буд о жвх Кпе йо АуТрп бу сх обСух то го «з ТІ яті ллЕ лижі УВЕ сій шпілок «В зна посла внооштм ень дили ПоПКФШ шМучник псопмлодовнхиво коли ютУЮи ув тил аматеиий
КН ехо ми ха туіле Ма пІМ Те чаї спін жо і вів дім умі вл олуха ре пі щі
Піт Маї олій пеб Уаї бій чек обіу Вів ім уві Уві Буз Би ПІ Від
У З ке їх пмон о їбд здам Кі хе муж схищо тиви щу хід 33 ро рт м ри іс ях пвх Буш са пед ур мУуЖ ФПАлоО ШО су СУ ГПУ КТ зт су УЖ то п зп що их хо кре Мей вияв скеу дія тля піп Мегко Во яру пла Ятеу пебз 3 бе т
ЕпеоМмегс Вля терохлі бух сіл Мек ВТО Зім спіп йо Мем п СкроТ1з
З 4 З плоди м Ж шо Мету Ля ояух та ди Дод ТАрово Фу Срізх о булу ах ух бе сок Джо дає МВ оБус Туг ви о СіІу Авротвх Бпе туї Вль о щіл За рве сп кит. щі щ сти фхещо Дім тує тую СТУ, КЕ дя ях ШІх де дей тн вія МТ піт зт Бе Аів Твроїши Мк оба дар омух бе йек йно таб ові» ів
ОК сю ТЕтх. у її ще МЕ Ве
Мей осо жеч мем ше Мем лих ше СА Аврора віз УдУ ух КУ Су че: з тру дує мот Км Ім ойшу Ах Дід Ме; Аееосок че «щі жі щім сну сх о йка Тут ВврОФіУ Бчу дл оміа мех Авротут ЖАрохіУ бів шу сх упо Ух їтО пика дн дах тю
Вл йЖщ шен маже шо стаю уч вчи м тхїШ білок поли дтвУчна послуги ь. ких с на НАННЯ прийти тугих ть 5. - лика КАН сша цип пеуУчиОХ посил занисті : синтетичних полілвттим «асп» хх пароль УМ їм; ТАТ ОЛіц вело шко імн Жов фей Ада мі) ех ов бу тугть о шету діло бля тод еру слют их З'яї бод тт шт МА ки дна щі біт ЕКО ліз тіж тРе о пех о смЕ Шу дія дек о бім шех мі пек Бцєе Бід лам Че Пеле їдемо МмМише ря суду УМ Я ак З; флий три щу щшівоЗи Форт шу м мех ха тА Міли ую им сво Би ТО ба у Тс чу 4 4 мч ємо інь дію ую Ал і меж хи Бебі із МА МІ КЕ лопух сл хх ЗИ
Хоми ЛІ Жижи Ліс пі пі шує тилу Ак дик Кіа бе ламу Кл тлу. или
Зхуч о Бвз о Еет Піу Шек щу йек о пшує ХЕ АХероБре зр обец Бли Бі Зх хе о ТЕ ЗЕ
Хол мах схід Ваз ша йлю а ох хлор СЕ мг лей зано ВА йх за ЕК ря бити. ях зт СЛУ ак ру гл жи іс пуху лан ї,тядо т (115 а з Акт спам СМЕК УШшИ УшЖ й КП СКУ бЗаіу сах тп вуз цем о'хі кл Буш АК 105 155 їх пл хх
КО СИ
- я ї Е х жекучя з паса дове «тд» сдвис мтучаої посліеввості : синтетичних пУліпелХИд там уз
Вар Тл лАМ Їїжю; Чл Вр Ц Бех тую бжм); Жек їжи Ва и) пед БМ слу пів шко ліз Хе лів дах Сук Пежо Віа де біп о шек 1) ех тп: він пУж Ши цех ійФа мес Ніз оттр о хуУЮ МУє Зі їжа то ЗАУ ФМ озЗін Бкз диф опе» бимі Тіш Тк Ага Аз Бех два Бей фі жів ЗУ м Кит Ашр
Бхц Бе шок Му Щек Піх Пжу ура Ху Асу о Кре Жчу без Ху 1 Зеу піп Тук вра Тух та Биз ось Зіу су Тит Бу) фо Зіш КО був Ву п Чивучна псослідевимтих паті» бий штучаох посліцкоювосхх ї ФИиНтеЖИЧНИХ пити

Claims (101)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Спосіб одержання кон'югата, який включає агент, який зв'язується із клітинами (СВА), кон'югований із цитотоксичною сполукою за допомогою зв'язуючої групи, причому зазначений спосіб включає взаємодію модифікованої цитотоксичної сполуки з модифікованим СВА за рн приблизно від 4 до 9, причому: а) модифікований СВА включає залишок біфункціонального зшиваючого агента, зв'язаний з СВА, а зазначений залишок включає зв'язуючу групу і групу, здатну взаємодіяти з тіолом; і б) модифікована цитотоксична сполука включає тіолову групу і представлена наступною формулою:
У. ху т ВА ау А-0-І-0-А М, с Ви Її ХХ ро «У у Вв вє Мт у 1 ' ' Кз я (Її) Ка з
Во. Ку Кк У Кі Во МН М-, «-57 А-0-І-00--А;. 5)» -М С Її Лі рі М 19) або її фармацевтично прийнятною сіллю, де: У являє собою -50зМ, М являє собою Н або фармацевтично прийнятний катіон;
Х' вибрана із -Н, амінблокуючої групи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СНгСНгО)-В-, необов'язково заміщеного арилу, який має від 6 до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, і необов'язково заміщеного 3-
18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із 0,
5,МіР;
У вибрана із -Н, оксогрупи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 6-
18-членного арилу, необов'язково заміщеного 5-18--ленного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, необов'язково заміщеного 3-18-ч-ленного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів;
В: являє собою -Н або заміщений, або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; кожна із К:, Р», Вз, Ва, В, В», Вз' і Ву, незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -ОСНегСНг)-Н-, галогену, гуанідинію І-МН(С-МН)ІМН»гІЇ, -ОВ, -МАЯВ", -МО», -МСО, -МА'СОВ", -5К, сульфоксиду,
представленого -50ОВ8', сульфону, представленого -5028', сульфонату -505"МУ, сульфату -050: Ме, сульфонаміду, представленого -502МА'В", ціаногрупи, азидної групи, -СОВ, -ОСОВ,, - ОСОМВ В";
Е, в будь-якому випадку незалежно, вибраний з групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СН2гСНгО)и-8-, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, або необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, М і Р;
Ко) кожна із Кб ї К", незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -ОН, -МНА, -МА», -СОК, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -"СНаСНгО)-В: і необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О,5,Мі Р;
п являє собою ціле число від 1 до 24;
М вибрана із С-О, С-5, СН», ВН, 50 і 505;
Ве являє собою -Н, -В, -ОВ, -58, -МВ'В", -МО» або галоген;
24 і 2, незалежно, вибрані із -"СНг)н-, -««"СНг)и-СА;Ав-(СНег)па-, -«(СНг)п-МА»-(СНег) па-, -«(СНг)п-О- (СНг) па і -««СНег)п-5-(СН?г) па -;
п'ї па' є однаковими або різними і вибрані із 0, 1,2 і 3;
В; і Кв є однаковими або різними, і кожна із них незалежно вибрана із -Н, -ОН, -5Н, -СООН, - МНЕ", мономера поліетиленгліколю -ОСНеСНг)н-, амінокислоти, пептидної одиниці, яка несе від 2 до 6 амінокислот, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю;
В», незалежно, вибрана із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -ОСНеСНег)п-;
А і А" є однаковими або різними і незалежно вибрані із -О-, оксо (-С(-0)-), -СВРО-, -СВА-, -5-, - СсАА5-, -М(ВА5)- і -САА'М(Ав)-, В5, в будь-якому випадку незалежно, являє собою -Н або необов'язково заміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; рі р" є однаковими або різними і, незалежно, відсутні або вибрані із групи, яка складається із необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, амінокислоти, пептиду, який несе від 2 до 6 амінокислот, і мономера поліетиленгліколю (-ОСНаСНг)-;
Ї відсутня або, якщо присутня, включає тіолову групу і являє собою мономер поліетиленгліколю (-ОСнНоСН»)н-, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл або алкеніл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенільну групу, 3-18--ленне гетероциклічне кільце або 5-18-членне гетероарильне кільце, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, М і Р, де алкіл, алкеніл, феніл або гетероциклічне або гетероарильне кільце є, необов'язково,
бо заміщеним.
2. Спосіб згідно з п. 1, який відрізняється тим, що модифіковану цитотоксичну сполуку одержують взаємодією імінвмісної цитотоксичної сполуки, яка несе тіолову групу, що представлена наступною формулою: ху М ча поротру, - 2 Ви --, Ве ве «0 в ву Ви Ф Ва В ве. кг ху Я ще Ко --М шк М-, ви Му Кв ме м Ва ФІ) або її фармацевтично прийнятною сіллю, з реагентом, здатним взаємодіяти з імінами, що вибраний із групи, яка складається із сульфіту, метабісульфіту та дитіоніту.
З. Спосіб згідно з п. 1 або 2, який відрізняється тим, що додатково включає очищення цитотоксичної сполуки до взаємодії з модифікованим СВА.
4. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 1-3, який відрізняється тим, що група, здатна взаємодіяти з тіолами, вибрана із групи, яка складається з малеїімідо, вінілпіридину, вінілеоульфону, вінілсульфонаміду, групи на основі галоацетилу і дисульфідної групи.
5. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 1-3, який відрізняється тим, що група, здатна взаємодіяти з тіолами, являє собою малеїімідо, галоацетамідо або -5589, де КУ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю, феніл, нітрофеніл, динітрофеніл, карбоксинітрофеніл, піридил, 2-нітропіридил, 4-нітропіридил або 3-карбокси-4-нітропіридил.
6. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 1-5, який відрізняється тим, що модифікований СВА являє собою: Ге) н ОХ ія (е) Ге о о) |в) Н н Н уча Х М М--сВА ей о те Н Н (є) (е) Ге) о ; о зон о час М-СВА Н є) о о ол. Н о) Ге (є) чув М-СВА Н о о в) о) тя Н п Н о) п-2-20 (наприклад, 2, 4, 6, 8, 10) н М--СВА во (е) зон н М-СВА ва (в) М З М СВА пре - (в) ЗОЗ Н
М. 28. лу СВА іш ЛЯ ї й Х Х- Н або МО» Н Має Зв М-СВА -а (в о слав М СВА ВМ пеЕг З (пЕГ )З б (о) (е); М ут сви о вин (о) о о чен чук М-сСВА М-СВА н або Н .
7. Спосіб одержання кон'югата, який включає агент, який зв'язується із клітинами (СВА), кон'югований із цитотоксичною сполукою за допомогою зв'язуючої групи, причому зазначений спосіб включає взаємодію СВА з імінвмісною цитотоксичною сполукою, що представлена наступною формулою або її фармацевтично прийнятною сіллю:
У. ху т вх ж у дру 5 с Ви -- Ве Ве на Кз Кг (Її) Ка з
Ко. гу ху т тк КЕ МН НИ МА-, «57 ши в і 0)» ви у Ф щ ве мя Ви 19) реагентом, здатним взаємодіяти з імінами, що вибраний із сульфіту, метабісульфіту та дитіоніту, і біфункціональним зшиваючим агентом, який включає зв'язуючу групу, з утворенням кон'югата.
8. Спосіб згідно з п. 7, який відрізняється тим, що СВА приводять у контакт із імінвмісною цитотоксичною сполукою і реагентом, здатним взаємодіяти з імінами, з утворенням першої суміші; а потім першу суміш приводять у контакт із біфункціональним зшиваючим агентом з утворенням кон'югата.
9. Спосіб згідно з п. 8, який відрізняється тим, що біфункціональний зшиваючий агент приводять у контакт із першою сумішшю безпосередньо після утворення першої суміші.
10. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 7-9, який відрізняється тим, що додатково включає очищення кон'югата.
11. Спосіб одержання кон'югата, який включає агент, який зв'язується із клітинами (СВА), кон'югований із цитотоксичною сполукою за допомогою зв'язуючої групи, спосіб, який включає: а) взаємодію модифікованої цитотоксичної сполуки з біфункціональним зшиваючим агентом, який включає зв'язуючу групу, групу, яка реагує з СВА, і групу, здатну взаємодіяти з модифікованою цитотоксичною сполукою з утворенням другої модифікованої цитотоксичної сполуки, ковалентно зв'язаної із залишком біфункціонального зшиваючого агента, причому зазначений залишок включає зв'язуючу групу і групу, здатну реагувати з СВА; причому модифікована цитотоксична сполука представлена однією з наступних формул або її фармацевтично прийнятною сіллю: У ху ма че Х ММ я лА-0-І-0-А М К- Ве «-ГУ Шо Ке 5 М ке ' 1 ' Ву Ви (1) Ва Аз г. ку ху фе Кк Ко МН М-- -М М ва гот Кв мє ми Ва (1Г) і де: У являє собою -50ОзМ; Х' вибрана із -Н, амінблокуючої групи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СН2гСНгО)-В-, необов'язково заміщеного арилу, який має від 6 до 18 атомів Зо вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, і необов'язково заміщеного 3- 18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О,5,Мі Р; " вибрана із -Н, оксогрупи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 6- 18-членного арилу, необов'язково заміщеного 5-18--ленного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, необов'язково заміщеного 3-18-ч-ленного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів;
В: являє собою -Н або заміщений, або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; кожна із К:, Р», Вз, Ва, В, В», Вз' і Ву, незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -ОСНегСНг)-Н-, галогену, гуанідинію |-МН(С-МН)ІМН»гІЇ, -ОВ, -МАЯВ", -МО», -МСО, -МА'СОВ", -5К, сульфоксиду, представленого -«ЗОВ', сульфону, представленого -5028", сульфонату -5О53Ме, сульфату - О50О3 М", сульфонаміду, представленого -502МА' ВА", ціаногрупи, азидної групи, -СОВ', -ОСОВ, - ОСОМВ'В"; Е, в кожному випадку незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -"СНаСНгО)-Не, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, або необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із 0, 5, Мі Р; кожна із Кб ї К", незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -ОН, -МНА, -МА», -СОК, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -"СНаСНгО)-В: і необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О,5,Мі Р; п являє собою ціле число від 1 до 24; М вибрана із С-О, С-5, СН», ВН, 50 і 505; Ве являє собою -Н, -В, -ОВ, -58, -МВ'В", -МО» або галоген; й і 2, незалежно, вибрані із -(СНг)п-, -«"«СНг)и-СА?Нв-(СНе)па-,. -««"СНг)п-МА»-(СНг)па-, -«(СНг)п-О- (СНг) па і -««СНг)н--5-(СН?г)па-; п'ї па є однаковими або різними і вибрані із 0, 1, 2 і 3; В; і Кв є однаковими або різними, і кожна із них незалежно вибрана із -Н, -ОН, -5Н, -СООН, - МНВ", мономера поліетиленгліколю -"ОСНеСНег)-, амінокислоти, пептидної одиниці, яка несе від Зо 2 до 6 амінокислот, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; В», незалежно, вибрана із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -ОСНеСНег)п-; А і А є однаковими або різними і незалежно вибрані із -О-, оксо (-С(-0)-), -СВВ'О-, -СВВ'-, -5-, - свВ'5-, -М(В5)- і -СВВ'М(В5)-, В5, в кожному випадку незалежно, являє собою -Н або необов'язково заміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; рі р' є однаковими або різними і незалежно відсутні або вибрані із групи, яка складається із необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, амінокислоти, пептиду, який несе від 2 до 6 амінокислот, і мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСНг) п-; Ї відсутня або, якщо присутня, включає тіолову групу або являє собою мономер поліетиленгліколю (-ОСНеСНе»)-, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл або алкеніл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенільну групу, 3-18-ч-ленне гетероциклічне кільце або 5-18- членне гетероарильне кільце, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із 0, 5, М і Р, де алкіл, алкеніл, феніл або гетероциклічне або гетероарильне кільце є, необов'язково, заміщеним; і б) взаємодію другої модифікованої цитотоксичної сполуки з СВА за допомогою групи, здатної взаємодіяти з СВА, за рН від приблизно 4 до приблизно 9, з утворенням кон'югата.
12. Спосіб згідно з п. 11, який відрізняється тим, що група, здатна взаємодіяти з СВА, є тіоловою групою, малеїмідною групою, галоацетамідною групою або аміногрупою.
13. Спосіб згідно з п. 11, який відрізняється тим, що модифікована цитотоксична сполука включає тіолову групу, а група, здатна взаємодіяти з модифікованою цитотоксичною сполукою, є групою, здатною взаємодіяти з тіолами.
14. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 11-13, який відрізняється тим, що модифіковану цитотоксичну сполуку одержують за рахунок взаємодії імінвмісної цитотоксичної сполуки, яка несе тіолову групу наступної формули, з реагентом, здатним взаємодіяти з імінами, вибраним із сульфіту, метабісульфіту та дитіоніту, у реакційній суміші ху Що ВА ордеру 2 2 В. --, Кв Еє «0 в Ва 0 ви 0) Воовз г». Кг ху Я Кк Ко -Кк шк к-8 Ва ) о ши Що ві т Кз ви ду Ев Еє мія Ва (І)
15. Спосіб згідно з п. 14, який відрізняється тим, що додатково включає очищення модифікованої цитотоксичної сполуки до етапу а).
16. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 11-15, який відрізняється тим, що додатково включає очищення другої модифікованої цитотоксичної сполуки до етапу б).
17. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 2-16, який відрізняється тим, що імінвмісна цитотоксична сполука представлена будь-якою з наступних формул: е -- і й х Є веб - А с А. 2 іс) М М А) або що ГТ І хХ, в її г т О НАДА де Й І Ке не е (ПА) , де: ГУ С" є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(ОСНеСНг»г)н-Не, галогену, гуанідинію МН(С-МНІМН»гЇ, -ОВ, -МАЯ", -МО», -МА'ЄОВ", -5К, сульфоксиду, представленого -50ОН, сульфону, представленого -5О02Н8', сульфонату -50Оз3М, сульфату -О5Оз3М, сульфонаміду, представленого -502МА' В", ціаногрупи, азидної групи, -СОВ', -ОСОВ', -ОСОМАВ' В"; М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон; а С вибрана із -СН- або -ІМ-.
18. Спосіб згідно з п. 17, який відрізняється тим, що модифікована цитотоксична сполука, за її присутності, представлена однією з наступних формул або її фармацевтично прийнятною сіллю: е че | Шо ід - й ХХ т -/ А с А. 2 іс) М М А) або ч І 7 І" Хх. а н А сх | А. -, М 8 М Ре ее (ПА)
19. Спосіб згідно з п. 17 або 18, який відрізняється тим, що одна з", 1" або І" несе тіолову групу, а інші являють собою -Н.
20. Спосіб згідно з п. 19, який відрізняється тим, що /" несе тіолову групу, аЇ" ії Г" являють собою -Н.
21. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 2-20, який відрізняється тим, що як А, так і А" являє собою - О-; Нє являє собою -ОМе; а С являє собою -СН-.
22. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 2-21, який відрізняється тим, що імінвмісна цитотоксична сполука представлена будь-якою з наступних формул: вх Ми вН й | х ША А с А. 5
М. ас) або ук вн х, т 7-2 х Ос чо роя, в М ас) ; або її фармацевтично прийнятною сіллю, де: М" відсутня або, якщо присутня, вибрана із -СВевег-, -О-, -0-С(-0)-, -С(-0)-О-, -5-, -80-, -ЗО»-, - СНе-5-, -СН2гО-, -СНаМАе-, -0-(0-0)0-, -0-(С-О3М(82)-, -М(Ве2)-,. -М(Не)-С(-0)-, -С(-0)-М(Ве)-, - М(Не)-С(-030-, -М(С(-0)82)С(-0)-, -М(С(-0)8е)-, -(0-СНо-СНг)н-, -55- або -0(-0)-, або амінокислоти, або пептиду, який має від 2 до 8 амінокислот; Ах відсутня або, якщо присутня, являє собою необов'язково заміщений лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, який має від 6 до 10 атомів вуглецю, або 3-8-членне гетероциклічне кільце, яке несе від 1 до З гетероатомів, вибраних із О, М або 5; ре і Ве є однаковими або різними і вибрані із -Н, лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або -(СН2-СНе2-О)0-НАК, де ЕК являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю і який, необов'язково, несе вторинну аміногрупу (наприклад, -МНА"') або третинну аміногрупу (- МАВ ог), або 5- або б-ч-ленний азотвмісний гетероцикл, наприклад, піперидин або морфолін, де кожна із КО! і Вб, незалежно, являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; переважно кожна Кі са, незалежно, являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; п являє собою ціле число від 1 до 24.
23. Спосіб згідно з п. 22, який відрізняється тим, що модифікована цитотоксична сполука, за її Зо присутності, представлена однією з наступних формул або її фармацевтично прийнятною сіллю: вх ме вн й ей ; і 2) А. Зв А. - а, " І Ав не й ас або мг вн Х ХХ хх - Ох очах ій М (1099)
24. Спосіб згідно з п. 22 або 23, який відрізняється тим, що: Х вибрана із групи, яка складається із -Н, -ОН, заміщеного або незаміщеного лінійного,
розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенілу і аміноблокуючої групи; "7 вибрана із групи, яка складається із -Н, оксогрупи, заміщеного або незаміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; А і А вибрані із -О- і -5-; УМ відсутня або вибрана із -О-, -М(Вг)-, -Щ(Не)-С(-0)-, -(С(-0)Нг)-, -5- або -СНо-5-, -«СН2МАе-; Ах відсутня або вибрана із лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; Ве являє собою -Н, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або -(СН2-СНе2-О)-НК, де ЕХ являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до б атомів вуглецю і який, необов'язково, несе вторинну аміногрупу (наприклад, -МНА") або третинну аміногрупу (-МА"В!92), або 5- або б-ч-ленний азотвмісний гетероцикл, наприклад, піперидин або морфолін, де кожна із 9! і "02, незалежно, являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; С вибрана із -СН- або -ІМ-.
25. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 22-24, який відрізняється тим, що Му являє собою -М(Ве)-.
26. Спосіб згідно з п. 25, який відрізняється тим, що Ке являє собою -(СНо-СНе-О)и-НК, де Кк являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю.
27. Спосіб згідно з п. 26, який відрізняється тим, що ЕХ являє собою -Н або -Ме, п дорівнює 4, а а дорівнює 2.
28. Спосіб згідно з п. 27, який відрізняється тим, що Кх являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю.
29. Спосіб згідно з п. 27, який відрізняється тим, що Ех являє собою -(СНг)р-(СВ'Вз)-, де кожна із В і 95, незалежно, вибрана із -Н або лінійного або розгалуженого алкілу, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; а р дорівнює 0, 1, 2 або 3.
30. Спосіб згідно з п. 29, який відрізняється тим, що В! і Бе є однаковими або різними і вибрані із -Н і -Ме; а р дорівнює 1.
31. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 22-30, який відрізняється тим, що: як Х, такі являють собою -Н; як А, так і А" являють собою -О-; Вв являє собою -ОМе; а Ах являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю.
32. Спосіб згідно з будь-яким з пп. 2-31, який відрізняється тим, що біфункціональний зшиваючий агент вибраний із: М-сукцинімідил-4-(малеімідометил)циклогексанкарбоксилату (ЗМО), М-сукцинімідил-4-(М-малеімідометил)-циклогексан-1-карбокси-(б-амідокапроату) (І С- ЗМОС), М-сукцинімідилового ефіру к-малеімідоундеканової кислоти (КМИОА), /-М- сукцинімідилового ефіру у-малеімідомасляної кислоти (ЗМВ5), М-гідроксисукцинімідного ефіру є-малеіїмідокапронової кислоти (ЕМС5), м-малеімідобензоїл-М-гідроксисукцинімідного ефіру (МВ), М-(а-малеімідоацетокси)-сукцинімідного ефіру (АМАФБ), сукцинімідил-6-(ВД- малеїмідопропіонамідо)гексаноату (5МРН), М-сукцинімідил-4-(п-малеімідофеніл)бутирату (5МРВ), М-(п-малеімідофеніл)ізоціанату (РМРІ), М-сукцинімідил-4-(4-нітропіридил-2- дитіо)бутаноату, М-сукцинімідил-4-(йодоацетил)-амінобензоату (ЗІАВ), М- сукцинімідилйодоацетату (5ІА), М-сукцинімідилбромоацетату (5ВА) і М-сукцинімідил-3- (бромоацетамідо)пропіонату (ЗВАР), біс-малеіїмідополіетиленгліколю (ВМРЕ), ВМ(РЕО)», ВМ(РЕО)», М-(В-малеімідопропілокси)сукцинімідного ефіру (ВМРБ), Мнь 5- малеїімідовалеріанової кислоти, НВУ5, гідразиду НСІ 4-(4-М-малеіїмідофеніл)-масляної кислоти (МРВН), сукцинімідил-(4-вінілсульфоніл)бензоату (ЗМ5В), дитіобіс-малеімідоетану (ОТМЕ), 1,4- біс-малеімідобутану (ВМВ), 1,4-бісмалеімідил-2,3-дигідроксибутану (ВМОВ), біс- малеїмідогексану (ВМН), біс-малеімідоетану (ВМОЕ), сульфосукцинімідил 4-(М- малеїмідометил)циклогексан-і-карбоксилату (сульфо-5МОСС), сульфосукцинімідил(4-йодо- ацетил)амінобензоату (сульфо-5ІАВ), м-малеїімідобензоїл-М-гідроксисульфосукцинімідного ефіру (сульфо-МВ5), М-(у-малеімідобутирилокси)сульфосукцинімідного ефіру (сульфо-СМВ5), М-(є-малеіїмідокапроїлокси)сульфосукцинімідного ефіру (сульфо-ЕМО5), М-(к- малеїмідоундеканоїлокси)сульфосукцинімідного ефіру (сульфо-КМИ5), сульфосукцинімідил-4- (п-малеімідофеніл)бутирату (сульфо-5МРВ), СХ1-1, сульфо-Маї, ПЕГ.-Маї, Л-сукцинімідил-4-(4- нітропіридил-2-дитіо)бутаноату, Лсукцинімідил-3-(2-піридилдитіо)пропіонату (ЗРОР), М сукцинімідил-4-(2-піридилдитіо)пентаноату (ЗРР), М-сукцинімідил-4-(2-піридилдитіо)бутаноату бо (5РОВ) і Л-сукцинімідил-4-(2-піридилдитіо)-2-сульфобутаноату (сульфо-5РОВ).
33. Спосіб згідно з п. 32, який відрізняється тим, що біфункціональний зшиваючий агент вибраний із групи, яка складається із ЗМСС, сульфо-5ЗМОС, М-сукцинімідил-4-(2- піридилдитіо)бутаноату (ЗРОВ) і М-сукцинімідил-4-(2-піридилдитіо)-2-сульфобутаноату (сульфо- ЗРОВ).
34. Спосіб одержання кон'югата, який включає агент, який зв'язується із клітинами (СВА), кон'югований із цитотоксичною сполукою за допомогою зв'язуючої групи, спосіб, який включає взаємодію другої модифікованої цитотоксичної сполуки з СВА за рН приблизно від 4 до 9, причому друга модифікована цитотоксична сполука представлена будь-якою з наступних формул: У ху й ве к- МА ше /А-0-1-0-А: м- 2: В ГИ КЛІ я Кз г (Іа) Кз ,
Ко. Ку ху т Кі Ко вки дому Ав Ре Ми Ва (Па) або її фармацевтично прийнятною сіллю, де: У являє собою -БОЗМ Х вибрана із -Н, амінблокуючої групи, зв'язуючої групи з приєднаною до неї реакційноздатною групою, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -("СНаСНгО)-Ве, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-ч-ленного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, і необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із 0, 5, М і Р; У вибрана із -Н, оксогрупи, зв'язуючої групи з приєднаною до неї реакційноздатною групою, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 6-18-членного арилу, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, необов'язково заміщеного 3-18- членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів; В: являє собою -Н або заміщений, або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю, або зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою; Ко) кожна із ЕК, Р», Нз, Ва, В, В», Вз' ї Кг, незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -ОСНегСНг)-Н-, галогену, гуанідинію І-МН(С-МН)ІМН»гІЇ, -ОВ, -МАЯВ", -МО», -МСО, -МА'СОВ", -5К, сульфоксиду, представленого -50ОВ8', сульфону, представленого -5028', сульфонату -505"МУ, сульфату -050: Ме, сульфонаміду, представленого -502МА'В", ціаногрупи, азидної групи, -СОВ, -ОСОВ,, - ОСОМВ'В" і зв'язуючої групи з приєднаною до неї реакційноздатною групою; Е, в кожному випадку незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -"СНаСНгО)-Не, необов'язково заміщеного арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, або необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із 0, 5, Мі Р; кожна із Кб ї К", незалежно, вибрана із -Н, -ОН, -ОН, -МНА, -МА», -СОК, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -"СНаСНгО)-В: і необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О,5,Мі Р; п являє собою ціле число від 1 до 24;
МУ вибрана із С-О, С-5, СНе, ВН, 5О і 505; Ве являє собою -Н, -В, -ОВ, -58, -МВ'В", -МО», галоген або зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою; 24 і 2, незалежно, вибрані із -"СНг)н-, -««"СНг)и-СА;Ав-(СНег)па-, -«(СНг)п-МА»-(СНег) па-, -«(СНг)п-О- (СНег)па"- і -««СНг)п5-(СНег) па-; п'ї па є однаковими або різними і вибрані із 0, 1, 2 і 3; В; і Рв є однаковими або різними, і кожна із них незалежно вибрана із -Н, -ОН, -5Н, -СООН, - МНВ", мономера поліетиленгліколю -"ОСНеСНег)-, амінокислоти, пептидної одиниці, яка несе від 2 до 6 амінокислот, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; В», незалежно, вибрана із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -ОСНеСНег)п-; А і А є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із -О-, оксо (-С(-0)-), -СВВ'О-, -СВВ-, -5-, -СВВ'5-, -МВ5 і -СВВ'М(В5)-; В5, в кожному випадку незалежно, являє собою -Н або необов'язково заміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; рі р" є однаковими або різними і, незалежно, відсутні або вибрані із групи, яка складається із необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, амінокислоти, пептиду, який несе від 2 до 6 амінокислот, і мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСНг) п-; Ї відсутня, являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою, мономер поліетиленгліколю (-ОСНеСНг)-, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл або алкеніл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенільну групу, 3-18-членне гетероциклічне кільце або 5-18-членне гетероарильне кільце, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, М і Р, де алкіл або алкеніл, необов'язково, заміщені зв'язуючою групою з приєднаною до неї реакційноздатною групою, феніл або гетероциклічне, або гетероарильне кільце можуть бути, необов'язково, заміщені, причому замінник може являти собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою, причому реакційноздатна група вибрана з реакційноздатного складного ефіру і групи, здатної взаємодіяти з тіолами.
35. Спосіб згідно з п. 34, який відрізняється тим, що другу модифіковану цитотоксичну сполуку одержують шляхом взаємодії реагенту, здатного взаємодіяти з імінами, що вибраний із сульфіту, метабісульфіту та дитіоніту, з імінвмісною цитотоксичною сполукою, яка несе зв'язуючу групу і реакційноздатну групу.
36. Спосіб згідно з п. 34 або 35, який відрізняється тим, що додатково включає очищення другої цитотоксичної сполуки до взаємодії з СВА.
37. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 34-36, який відрізняється тим, що реакційноздатний складний ефір може бути вибраний із групи, яка складається із М-гідроксисукцинімідного ефіру, М-гідроксисульфосукцинімідного ефіру, нітрофенілового ефіру, динітрофенілового ефіру, тетрафторофенілового ефіру, сульфотетрафторофенілового ефіру і пентафторофенілового ефіру.
38. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 34-36, який відрізняється тим, що реакційноздатний складний ефір являє собою М-гідроксисукцинімідний ефір.
39. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 34-36, який відрізняється тим, що група, здатна взаємодіяти з тіолами, вибрана із групи, яка складається із малеїімідо, вінілпіридину, вінілсульфону, вінілсульфонаміду, групи на основі галоацетилу і дисульфідної групи.
40. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 34-36, який відрізняється тим, що група, здатна взаємодіяти з тіолами, являє собою малеїмідо, галоацетамідо або -55Н9, де КЗ являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю, феніл, нітрофеніл, динітрофеніл, карбоксинітрофеніл, піридил, 2-нітропіридил, 4-нітропіридил або 3-карбокси-4-нітропіридил.
41. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 34-40, який відрізняється тим, що І відсутня або вибрана з необов'язково заміщеної фенільної групи і необов'язково заміщеної піридильної групи, де фенільна і піридильна група несе зв'язуючу групу із приєднаною до неї реакційноздатною групою, або ГІ. є аміногрупою, яка несе зв'язуючу групу із приєднаною до неї реакційноздатною групою (тобто -М(зв'язуюча група)-), або Ї являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл або алкеніл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю і який несе зв'язуючу групу із приєднаною до неї реакційноздатною групою.
42. Спосіб згідно з п. 41, який відрізняється тим, що друга модифікована цитотоксична сполука представлена будь-якою з наступних формул:
е що І" А с А: 2 с) М (Аа) е У Ен Я І" ху і Ота о ій М М ве в (ПАа") або її фармацевтично прийнятною сіллю, де:
Г.С" є однаковими або різними і, незалежно, вибрані із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(ОСНеСНг)н-Не, галогену, гуанідинію |- МН(С-МН)МН»гЇ, -ОВ, -МА'В", -МО», -МВ'СЄОВ", -58, сульфоксиду, представленого -5ОВ', сульфону, представленого -5028Щ8', сульфонату -5Оз3М, сульфату -О5ОзМ, сульфонаміду, представленого -5О2МВ' В", ціаногрупи, азидної групи, -СОВ', -«ОСОВ', -ОСОМВ'В" і зв'язуючої групи з приєднаною до неї реакційноздатною групою, за умови, що тільки одна із І" являє собою зв'язуючу групу з приєднаною до неї реакційноздатною групою; М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон; а С вибрана із -СН- або -ІМ-.
43. Спосіб згідно з п. 42, який відрізняється тим, що одна з1", 1" або І" є зв'язуючою групою із приєднаною до неї реакційноздатною групою, у той час як інші являють собою -Н.
44. Спосіб згідно з п. 43, який відрізняється тим, що /" є зв'язуючою групою із приєднаною до неї реакційноздатною групою, а /" ії Ї" являють собою -Н.
45. Спосіб згідно з п. 43 або 44, який відрізняється тим, що як А, так і А" являють собою -О-, Не являє собою -ОМе, а С являє собою -СН-.
46. Спосіб згідно з пп. 43, 44 або 45, який відрізняється тим, що І" представлена наступною формулою: ААВАМ-ВУ-У, де: М ї М є однаковими або різними, і кожна із них, незалежно, відсутня або вибрана із -свере-, -6., -0-6(-0)-, -0(-0)-0-, -5-, -50-, -502-, -СН2-5-, -СНгО-, -СНеаМве-, -0-(0-0)0-, -0-(С0-О)М(В2)-, - М(Ве)-, -М(Не)-С(-0)-, -С(-0)-М(Ве)-,. -М(8е)-С(-0)0-, -Щ(С(-О)Н2)С(-0)-, -Щ(С(-0)8е)-,. --О-СНе- СНаг)-, -55- або -С(-0)-, або амінокислоти, або пептиду, який має від 2 до 8 амінокислот; Ах ї КУ є однаковими або різними, і кожна із них, незалежно, відсутня або являє собою необов'язково заміщений лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, який має від б до 10 атомів вуглецю, або 3-8-ч-ленне гетероциклічне кільце, яке несе від 1 до З гетероатомів, вибраних із О, М або 5; де і Ве є однаковими або різними і вибрані із -Н, лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або -(СН2-СН2-О)0-ВХ, де ЕХ являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю і який, необов'язково, несе вторинну аміногрупу (наприклад, -МНА") або третинну аміногрупу (- МАВ ог), або 5- або б-ч-ленний азотвмісний гетероцикл, наприклад, піперидин або морфолін, де кожна із КОТ ії 92, незалежно, являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; переважно кожна Ко і сг, незалежно, являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; п являє собою ціле число від 1 до 24; У включає реакційноздатну групу, зв'язану з нею, і вибрана із малеїміду, галоацетамідо, -ЗН, - ОН, -СНеЗН, -СН(Ме)5зН, -С(Ме)25Н і -СОЕ, де -СОЕ являє собою реакційноздатний складний ефір, вибраний із М-гідроксисукцинімідного ефіру, М-гідроксисульфосукцинімідного ефіру, нітрофенілового (наприклад, 2- або 4-нітрофенілового) ефіру, динітрофенілового (наприклад, 2,4-динітрофенілового) ефіру, сульфотетрафторофенілового (наприклад, 4-сульфо-2,3,5,6-
тетрафторофенілового) ефіру і пентафторофенілового ефіру, але не обмежуючись ними, а Ке! являє собою -Н або заміщений, або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю, а ВЗ вибрана із фенілу, нітрофенілу (наприклад, 2- або 4-нітрофенілу), динітрофенілу (наприклад, 2- або 4-нітрофенілу), карбоксинітрофенілу (наприклад, З-карбокси-4-нітрофенілу), піридилу або нітропіридилу (наприклад, 4-нітропіридилу).
47. Спосіб згідно з п. 46, який відрізняється тим, що .) являє собою -5Н, -55Н89, малеїмід або М- гідроксисукцинімідний ефір.
48. Спосіб згідно з п. 46 або 47, який відрізняється тим, що: Ве являє собою -Н або -Ме; Де являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю або -(СНе- Снег-О)-В8К п являє собою ціле число від 2 до 8; а В" являє собою -Н, -Ме або -СНаСНо-ММех».
49. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 46-48, який відрізняється тим, що М являє собою амінокислоту або пептид, який має від 2 до 8 амінокислот.
50. Спосіб згідно з п. 49, який відрізняється тим, що М є валін-цитруліном, діу-діу-діу або аїа- Іви-аїіа-Ієи.
51. Спосіб згідно з п. 46, який відрізняється тим, що: Ми являє собою -О-, -М(В2-)- або -М(Ве)-С(-0)-; Ве являє собою -Н, лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю, або - (СНАСН»-О)-ВЕ; Ах являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; М відсутня або являє собою -(О-СНе-СНг)н-, -С(-0)-МН-, -5-, -МН-С(-О)-; ВУ відсутня або являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; а У являє собою -5Н, -55Н89 або -СОБЕ.
52. Спосіб згідно з п. 46, який відрізняється тим, що: М являє собою -О-, -М(Ве)- або -М(В2)-С(-0)-; Зо Ве являє собою -Н, -Ме або -"(СН2-СНег-О)п-Ме; п являє собою ціле число від 2 до 6; Ах являє собою лінійний або розгалужений алкіл, яке несе від 1 до 6 атомів вуглецю; М і ЕУ відсутні; а У являє собою -СОЕ.
53. Спосіб згідно з п. 51 або 52, який відрізняється тим, що -СОЕ являє собою М- гідроксисукцинімідний ефір.
54. Спосіб згідно з п. 46, який відрізняється тим, що І" представлена наступною формулою: АСВ: "Вг"|в-М-(Су|1-(С Вз"Ва"-СОЕ, де: кожна із Кі", Вг" і Вз", незалежно, являє собою -Н або -Ме; Ва" являє собою -Н, -Ме, -503Н або -5053"М", де М" являє собою фармацевтично прийнятний катіон; а являє собою ціле число від 0 до 2, б являє собою ціле число від 0 до З; а Су являє собою, необов'язково, заміщене 5-ч-ленне гетероциклічне кільце, яке несе гетероатом М, переважно Су являє собою (в) но, (в) .
55. Спосіб згідно з п. 46 або 54, який відрізняється тим, що М/ являє собою -М(Ве)-.
56. Спосіб згідно з пп. 46, 54 або 55, який відрізняється тим, що Ке являє собою -(СНо-СНе-О)»- 6-ВК, де ЕК являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю.
57. Спосіб згідно з пп. 46, 54, 55 або 56, який відрізняється тим, що М являє собою -5- або /-
55-.
58. Спосіб згідно з пп. 46, 54, 55, 56 або 57, який відрізняється тим, що І!" представлена наступною формулою: - МА»-(СВА"А2"|а-5-(САз"На"|-СОЕ..
59. Спосіб згідно з п. 11 або 34, який відрізняється тим, що друга модифікована цитотоксична сполука являє собою: (9) пивеивиаао, Бе й й хх н н о М (Ф) (Ф) М-- ху 2 оме мес: о Ф (Ф) ІФ) або зозЗн Ге) пасли ех в У, |) М Ге) (Фе) М М ОМе Мео М Ф) |) або її фармацевтично прийнятну сіль, де М являє собою -5О3М, а М являє собою Н або фармацевтично прийнятний катіон.
60. Спосіб згідно з пп. 46, 54, 55, 56 або 57, який відрізняється тим, що І!" представлена наступною формулою: - МА»-(СА"А2"|з-5-Су-(САз"АаЬ-СОЕ.
61. Спосіб згідно з п. 11 або 34, який відрізняється тим, що друга модифікована цитотоксична сполука являє собою: Ф) о З асани о є) Нн Н й М ще М, - 9 е ме ме" ва (Ф) (9) або в) в) дове Кот 2 (в) (9) (9) 2 М ОМе МеО М ІФ) 6) або її фармацевтично прийнятну сіль, де М являє собою -5О3М, а М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон.
62. Спосіб згідно з п. 11 або 34, який відрізняється тим, що друга модифікована цитотоксична сполука представлена будь-якою з наступних формул: Ех Мб 8-2 бе р -ї А А 2 Зо М М ке ее (УШа) або
Ех м 8-23 Х х ж ХХ ОЗ ще АНЯ с А - задав вої, Ве ве й Са) ; або її фармацевтично прийнятною сіллю, де: У являє собою -50ОзМ; Х вибрана із групи, яка складається із -Н, -ОН, заміщеного або незаміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенілу та аміноблокуючої групи; "7 вибрана із групи, яка складається із -Н, оксогрупи, заміщеного або незаміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; А і А вибрані із -О- і -5-; УМ відсутня або вибрана із -О-, -М(Нг)-, -Щ(Не)-С(-0)-, -(С(-0)Нг)-, -5- або -СНо-5-, -СН2МАе-; Ах відсутня або вибрана із лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; Ве являє собою -Н, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або -(СН2-СНе2-О)2-ВК, де ЕХ являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до б атомів вуглецю і який, необов'язково, несе вторинну аміногрупу (наприклад, -МНА"') або третинну аміногрупу (-МА"'В"с2), або 5- або б-членний азотвмісний гетероцикл, наприклад, піперидин або морфолін, де кожна із 9! і "02, незалежно, являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; С вибрана із -СН- або -М-; 75 вибрана із будь-якої з наступних формул: о 0 В) Го) 0-М (в) ; (ат) в) 5 (сном. 7 З о М 2 3-8 М О7 о (в); ; (аг) (6) о р 177 ОН) Кн о М тр (у. (в) о й О (аз) як Ж Ї : М (СНе)а «У о-к о ; (а4) о (в) ОО чин Тісні НУ (9) ; (ах)
(о) (о) (в) р я АЖ лена м Н (в) ; (аб) (9) (о) куту - й (о) в; ; (ат) (6) 0) КА й о 6) о ; (аб) ОМ о (0) Ку вет В 6) (о (а9) і о) (о) Н ів; АЖ Що» (о) Н М
М м. (ой борти (о) (в; ; (а10) де: д являє собою ціле число від 1 до 5; переважно 4 дорівнює 2; п являє собою ціле число від 2 до 6; переважно п дорівнює 4; р являє собою -Н або -БОзМ; М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон, наприклад, Ма" або КУ.
63. Спосіб згідно з п. 62, який відрізняється тим, що 7: представлена будь-якою з наступних формул: (в) р о) 0-Мм (в) (ат); (в) ЗХ о М О-Мм Н о (а); в) ) я і О-М о) (ат);
о о) р З (в) - М (в) о о (а12); ІФ) о М (в) (в) О(а13).
64. Спосіб згідно з п. 62 або 63, який відрізняється тим, що М/ являє собою -М(Ве)-.
65. Спосіб згідно з п. 64, який відрізняється тим, що Ке являє собою -(СНо-СНе-О)и-НК, де Кк являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю.
66. Спосіб згідно з п. 65, який відрізняється тим, що ЕХ являє собою -Н або -Ме, п дорівнює 4, а а дорівнює 2.
67. Спосіб згідно з п. 66, який відрізняється тим, що Кх являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю.
68. Спосіб згідно з п. 66, який відрізняється тим, що Ех являє собою -(СНг)р-(СВ/ВЗ)-, де кожна із Б! і КЕ, незалежно, вибрана із -Н або лінійного або розгалуженого алкілу, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; а р дорівнює 0, 1, 2 або 3.
69. Спосіб згідно з п. 68, який відрізняється тим, що РК" і КЗ є однаковими або різними і вибрані із -Н і -Ме; а р дорівнює 1.
70. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 62-69, який відрізняється тим, що: як Х, такі являють собою -Н; як А, так і А являють собою -О-; Вв являє собою -ОМе; а Ах являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю.
71. Спосіб згідно з пп. 1, 7, 11 або 43, який відрізняється тим, що кон'югат являє собою: я з 5 НН ее - иа пий ни --к З - шин ше шин ро 5 5 й кое и а І й СЯ В . Г й р ин вс . 17 ї й що Пе інь се Мі І и В: НН ВХ не . сей за або те хх еВ метру Син х кі щити зи Кк антитіло) ож В й ї В Е о р ї ра Шк р й з і ХК М. я я ие чи з о г : сб 7 ТОМе меО тм, де 5 о г М 4 або її фармацевтично прийнятну сіль, де г є цілим числом від 1 до 10, М являє собою -50зМ, а М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон.
72. Спосіб згідно з п. 71, який відрізняється тим, що антитіло являє собою пиМу9-6.
73. Спосіб згідно з п. 1, 7, 11 або 43, який відрізняється тим, що кон'югат являє собою:
М т м ! ! / крик ел чея птах ех Г у ХК бе ЛлХ - З і ши Се Мей я ЩІ о ш Я або пани неон ши І-нтипло г п он Ід с сода о ге ж ; м ва мери чу М, ! Їх або її фармацевтично прийнятну сіль, де г є цілим числом від 1 до 10, У являє собою -50зМ, а М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон.
74. Спосіб згідно з п. 73, який відрізняється тим, що антитіло являє собою пиМу9-6.
75. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 1-74, який відрізняється тим, що кон'югат включає 1-10 цитотоксичних сполук.
76. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 1-75, який відрізняється тим, що агент, який зв'язується із клітинами, зв'язується із клітинами-мішенями, вибраними з пухлинних клітин, клітин, інфікованих вірусом, клітин, інфікованих мікроорганізмами, клітин, інфікованих паразитами, аутоїмунних клітин, активованих клітин, мієлоїдних клітин, активованих Т-клітин, В-клітин або меланоцитів; клітин, які експресують СО4, СОб6, 2019, Сб020, 0022, 6030, 2033, С037, СОЗ38, сра40, 26044, СО56, ЕрСАМ, СапАд, СА ГА або антигени НЕК-2, антигени Нег-3; або клітин, які експресують рецептор інсуліноподібного фактора росту, рецептор епідермального фактора росту і рецептор фолату.
77. Спосіб згідно з п. 76, який відрізняється тим, що агент, який зв'язується із клітинами, є антитілом, одноланцюговим антитілом, фрагментом антитіла, який специфічно зв'язується із клітиною-мішенню, моноклональним антитілом, одноланцюговим моноклональним антитілом або фрагментом моноклонального антитіла, який специфічно зв'язується із клітиною-мішенню, химерним антитілом, фрагментом химерного антитіла, який специфічно зв'язується із клітиною- мішенню, доменним антитілом, фрагментом доменного антитіла, який специфічно зв'язується із клітиною-мішенню, лімфокіном, гормоном, вітаміном, фактором росту, колонієсєтимулюючим фактором або молекулою транспорту поживних речовин.
78. Спосіб згідно з п. 77, який відрізняється тим, що антитіло є антитілом з модифікованою поверхнею, одноланцюговим антитілом з модифікованою поверхнею або фрагментом антитіла з модифікованою поверхнею.
79. Спосіб згідно з п. 77, який відрізняється тим, що антитіло є моноклональним антитілом, одноланцюговим моноклональним антитілом або фрагментом моноклонального антитіла.
80. Спосіб згідно з п. 77, який відрізняється тим, що антитіло є гуманізованим антитілом, Зо гуманізованим одноланцюговим антитілом або фрагментом гуманізованого антитіла.
81. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 2-80, який відрізняється тим, що реагент, здатний взаємодіяти з імінами, являє собою МанзоОз або КНБЗО».
82. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 2-81, який відрізняється тим, що використовують від приблизно 0,1 до приблизно 30 молярних еквівалентів реагенту, здатного взаємодіяти з імінами, стосовно імінвмісної цитотоксичної сполуки.
83. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 2-81, який відрізняється тим, що використовують від приблизно 1 до приблизно 10 молярних еквівалентів реагенту, здатного взаємодіяти з імінами, стосовно імінвмісної цитотоксичної сполуки.
84. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 2-81, який відрізняється тим, що використовують від приблизно З до приблизно 5 молярних еквівалентів реагенту, здатного взаємодіяти з імінами,
стосовно імінвмісної цитотоксичної сполуки.
85. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 1-84, який відрізняється тим, що кон'югат очищають за допомогою тангенціальної проточної фільтрації, адсорбційної хроматографії, адсорбційної фільтрації, вибіркового осадження, неабсорбційної фільтрації або їх комбінації.
86. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 1-84, який відрізняється тим, що кон'югат очищають за допомогою тангенціальної проточної фільтрації і/або адсорбційної хроматографії.
87. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 1-86, який відрізняється тим, що М являє собою Н, Ма" або
КУ.
88. Спосіб одержання кон'югата наступної формули: Гуд те я ит Кк -ЗО--ВНТИПло і Й, Я в й ше ой й зр ще : Н ит і а Ме г і пи сте ШИ зи ль и ШИ Кол гу оби ЕН і г Що ; ! возн ц ри кт рити тру шк зд зи Меч антитіло! І мА го В У В й ІЯй п М І ій М у: М у нен - ло ще і Гл і -й Й Й и: й та й Шини: ШЕ зай й роса и її" т І й в і й КА Янінтіло!
Н З. кииттруєт М; стук В ярлики Що Н ро Ж щ і А і у у оман в БО АК ще ДИ Я: одер оме ме с а або те є пеки и о Я зорі ролети тт ; ло ! н т Ну т у в. он КО од студе мо ек, ні іє ув ву або його фармацевтично прийнятної солі, спосіб, який включає взаємодію модифікованої цитотоксичної сполуки наступної формули: асан ши хх н н М Ге) Ге) М, М ОМе Ммео М і) ) з модифікованим СВА наступної формули, відповідно, за рН від приблизно 4 до приблизно 9,
М СВА М 5 - З ка - в) ЗОЗ Н
М. 5. М-СвА у вій й - (в) Х Х--Н зво -МО» о о ра Н с) (с) чук М-СВА Н де: г являє собою ціле число від 1 до 10; У являє собою -50Оз3М; а М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон.
89. Спосіб згідно з п. 88, який відрізняється тим, що модифіковану цитотоксичну сполуку одержують взаємодією реагенту, здатного взаємодіяти з імінами, з імінвмісною цитотоксичною сполукою наступної формули: а вина нич Н М Ге) Ге) Ма М ОМе Мео М (в) (в) причому реагент, здатний взаємодіяти з імінами, являє собою Манзоз або КНЗОз.
90. Спосіб згідно з п. 88 або 89, який відрізняється тим, що СВА являє собою пиМу9-6.
91. Спосіб одержання кон'югата наступної формули: З Е ь р І А я ЩЕ) А і У в о н ; о Пе о ше З 5 ше Бобер туя шина: ни : Щ т Кк їй : ! Н уолая г В ро Ї леї Й щ т і чи М: ке ни ПІДЕ зи ху іЕ ЩІ зола іш: а С Н - о де с ВНТИЦЛО з ; пошив ра зтруєттнй сайтнв ТК ху ! ж н ті | М вд ваше в їз Мн ! У ее ЧІ ще А и пз Ж М: МЕ ї Шк : . що м я щі ! ші або ! ей зд вари я че я р: я У прий М пннентнне ««ЗАНТИТІ л о і еК СЯ гу ї пана ! В де чеох ще ши ди чел те ! або його фармацевтично прийнятної солі, спосіб, який включає взаємодію СВА з імінвмісною цитотоксичною сполукою, реагентом, здатним взаємодіяти з імінами, і біфункціональним зшиваючим агентом, який містить зв'язуючу групу, з утворенням кон'югата, де: У являє собою -50ОзМ; М являє собою -Н, Ма: або КУ; імінвмісна цитотоксична сполука являє собою: вас нич Нн М Ге) Ге) М М ОМе Мео М і) і) ; біфункціональний зшиваючий агент являє собою: (о;
М. З о, (С ка - ,; о) з ОЗ Ге) М З ІФ) ГГ ака о о) (ХА-Н або -МО»), (в) о о - о о або о (о) чук (9) о ; Відповідно, і реагент, здатний взаємодіяти з імінами, являє собою Манзоз або КНЗО».
92. Спосіб згідно з п. 91, який відрізняється тим, що СВА являє собою пиМу9-6.
93. Спосіб одержання кон'югата наступної формули:
ОЗ. кляті і Моя чаш на ! Я ртрути рє в, пеки зт ' антитіло! ; я а ; і ж н ЩЕ: В і ! лк сь я нед ан: ще М та Н т Я й и 5. ї й ; я і АК ТОМ Мел, у не Н й б Н М з, 5 -к ше- з ОН і. ! іееееееєеєеее отут ск Веде шк ---ЯНи їлд го я Н У т. " ! У юю А о любе ГІЯ ї щ Її 4 ма Я св тома мо М, ні Со (ФІ 1 ЦЕ в УС ! дм кни Перше шк йНнтТитілО обои отрути і І к зу тих си т Кк 7 ! ща: я зома мой в ц Кох тя ;, або Ї ок іди ут появі готи рон ВНТИЛО Н хр ар и а ! Кт "ве а Ро її. НД ИН зась М. ше; пока ши ме їди УЮ т ДУ го М: В й ел Я, : Я й - або його фармацевтично прийнятної солі, де ХМ являє собою -5Оз3М; а М являє собою -Н або фармацевтично прийнятний катіон, причому спосіб включає: а) взаємодію модифікованого цитотоксичного агента з біфункціональним зшиваючим агентом з утворенням другого модифікованого цитотоксичного агента, причому модифікований цитотоксичний агент одержаний шляхом взаємодії імінвмісної цитотоксичної сполуки, представленої наступною формулою: вас ми Н М Ге) Ге) М М ОМе мео М і) і)
або її фармацевтично прийнятної солі, з МанзОз або КНЗО», і причому біфункціональний зшиваючий агент являє собою: (о; М 5 С втятро - (о) 9) з Оз Ге)
М. 5 е) Ф ка о о) (ХА-Н або -МО»), (о) о о я в) о або о (с) пущу (о) о ; Відповідно, і р) взаємодію другої модифікованої цитотоксичної сполуки з антитілом при рН від приблизно 4 до приблизно 9 з утворенням кон'югата.
94. Спосіб згідно з п. 93, який відрізняється тим, що кон'югат представлений наступною формулою: ЗО м пстестєтеттт и яетрут че шк т тк че - ванни М --аНИТІЛ Ід в о і дк Й т Й ге Я у" Еш АЯ о че С а і лий ее оме котик ! В: я або його фармацевтично прийнятною сіллю, а біфункціональний зшиваючий агент представлений наступною формулою: ЗОЗ )
М. З о Ф ака о о) (ХА-Н або -МО»).
95. Спосіб згідно з п. 93 або 94, який відрізняється тим, що антитіло являє собою пиМу9-6.
96. Спосіб одержання другої модифікованої цитотоксичної сполуки, що включає взаємодію модифікованої цитотоксичної сполуки з біфункціональним зшиваючим агентом, який включає зв'язуючу групу, групу, яка реагує з СВА, і групу, здатну взаємодіяти з модифікованою цитотоксичною сполукою з утворенням другої модифікованої цитотоксичної сполуки, ковалентно зв'язаної із залишком біфункціонального зшиваючого агента, причому зазначений залишок включає зв'язуючу групу і групу, здатну реагувати з СВА; причому модифікована цитотоксична сполука представлена однією з наступних формул або її фармацевтично прийнятною сіллю:
У ху й ви ку З 7 плолтося з й Кк Ві --, Рв Еє «0 в Ву Ве В) Ва Аз во. гу Хх ч Кк Ко МН уч Ви я уу Кв Ке мя ва (1Г) і де: У являє собою -50ОзМ; Х вибрана із -Н, амінблокуючої групи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -(СН2гСНгО)-В-, необов'язково заміщеного арилу, який має від 6 до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, і необов'язково заміщеного 3- 18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О,5,Мі Р; " вибрана із -Н, оксогрупи, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 6- 18-членного арилу, необов'язково заміщеного 5-18--ленного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, необов'язково заміщеного 3-18-ч-ленного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів; В: являє собою -Н або заміщений, або незаміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 4 атомів вуглецю; кожна із Р, В», Вз, Ви, В, В», Вз і Ви, незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -ОСНегСНг)-Не-, галогену, гуанідинію / (-МН(С-МН)ІМН»гЇ, -ОВ, -МА'В", -МО», -МСО, -МВ'СОВ", -58, сульфоксиду, представленого -5ОВ', сульфону, представленого -5028Щ8", сульфонату -5Оз3"Ме, сульфату - О50О3 М», сульфонаміду, представленого -5О2МВ' В", ціаногрупи, азидної групи, -«СОВ', -ОСОВ,, -ОСОМВ'В"; Е, в кожному випадку незалежно, вибрана із групи, яка складається із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -"СНаСНгО)-Не, необов'язково заміщеного Зо арилу, який має від б до 18 атомів вуглецю, необов'язково заміщеного 5-18-членного гетероарильного кільця, яке містить один або більше гетероатомів, незалежно вибраних із азоту, кисню і сірки, або необов'язково заміщеного 3-18-членного гетероциклічного кільця, яке містить від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із 0, 5, Мі Р; кожна із К' і КЕ" незалежно вибрана із -Н, -ОН, -ОВ, -МНА, -МА», -СОН, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -"СНаСНгО)-В: і необов'язково заміщеного 3-18- членного гетероциклічного кільця, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із 0, 5, МіР; п являє собою ціле число від 1 до 24; М вибрана із С-О, С-5, СН», ВН, 50 і 505; Ве являє собою -Н, -В, -ОВ, -58, -МВ'В", -МО» або галоген; 24 і 2, незалежно, вибрані із -"СНг)н-, -««"СНг)и-СА;Ав-(СНег)па-, -«(СНг)п-МА»-(СНег) па-, -«(СНг)п-О- (СНг) па і -««СНг)н--5-(СН?г)па-; п'ї па' є однаковими або різними і вибрані із 0, 1,2 і 3; В; і Кв є однаковими або різними, і кожна із них незалежно вибрана із -Н, -ОН, -5Н, -СООН, - МНВ", мономера поліетиленгліколю -"ОСНеСНег)н-, амінокислоти, пептидної одиниці, яка несе від
2 до 6 амінокислот, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; В», незалежно вибрана із -Н, необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, мономера поліетиленгліколю -ОСНеСНег)п-; АїЇд' є однаковими або різними і незалежно вибрані із -О-, оксо (-С(-0)-), -СВВ'О-, -СВВ-, -5-, - свВ'5-, -М(В5)- і -СВВ'М(В5)-, В5, в кожному випадку незалежно, являє собою -Н або необов'язково заміщений лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; рі р' є однаковими або різними і незалежно відсутні або вибрані із групи, яка складається із необов'язково заміщеного лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, амінокислоти, пептиду, який несе від 2 до 6 амінокислот, і мономера поліетиленгліколю (-ОСНеСНг) п-; Ї відсутня або, якщо присутня, включає тіолову групу або являє собою мономер поліетиленгліколю (-ОСНеСНе»)-, лінійний, розгалужений або циклічний алкіл або алкеніл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, фенільну групу, 3-18-ч-ленне гетероциклічне кільце або 5-18- членне гетероарильне кільце, яке має від 1 до 6 гетероатомів, незалежно вибраних із О, 5, М і Р, де алкіл, алкеніл, феніл або гетероциклічне або гетероарильне кільце є, необов'язково, заміщеним.
97. Спосіб згідно з п. 96, який відрізняється тим, що модифікована цитотоксична сполука представлена однією з наступних формул або її фармацевтично прийнятною сіллю: ме вн У х Є за ве У ас) , або ук вн У ХХ хе 2 х оба одо ій М ас або її фармацевтична прийнятною сіллю, де: М" відсутня або, якщо присутня, вибрана із -«СВеве-, -О-, -0-С(-0)-, -«С(-0)-О-, -5-, -50-, -ЗО»-, - СНе-5-, -СН2гО-, -СНаМАе-, -0-(0-0)0-, -0-(С-О3М(82)-, -М(Ве2)-,. -М(Не)-С(-0)-, -С(-0)-М(Ве)-, - М(Не)-С(-030-, -М(С(-0)82)С(-0)-, -М(С(-0)8е)-, -(0-СНо-СНг)н-, -55- або -0(-0)-, або амінокислоти, або пептиду, який має від 2 до 8 амінокислот; Ах відсутня або, якщо присутня, являє собою необов'язково заміщений лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, арил, який має від 6 до 10 атомів вуглецю, або 3-8-членне гетероциклічне кільце, яке несе від 1 до З гетероатомів, вибраних із О, М або 5; Де і Ве є однаковими або різними і вибрані із -Н, лінійного, розгалуженого або циклічного алкілу, алкенілу або алкінілу, який має від 1 до 10 атомів вуглецю, або -(СН2-СНе2-О)0-НАК, де ЕК являє собою -Н, лінійний, розгалужений, циклічний алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю і який, необов'язково, несе вторинну аміногрупу (наприклад, -МНА') або третинну аміногрупу (- МА" Во2), або 5- або 6б-ч-ленний азотвмісний гетероцикл, наприклад, піперидин або морфолін, де кожна із КО! і Вб, незалежно, являє собою лінійний, розгалужений або циклічний алкіл, алкеніл або алкініл, який має від 1 до 10 атомів вуглецю; переважно кожна Кі са, незалежно, являє собою лінійний або розгалужений алкіл, який має від 1 до 6 атомів вуглецю; п являє собою ціле число від 1 до 24.
98. Спосіб згідно з п. 96 або 97, який відрізняється тим, що біфункціональний зшиваючий агент вибраний із: М-сукцинімідил-4-(малеімідометил)циклогексанкарбоксилату (ЗМО), -М- сукцинімідил-4-(М-малеїмідометил)-циклогексан-1-карбоксі-(б-амідокапроату) (1С-5МОСС0), щ М- сукцинімідилового ефіру к-малеімідоундеканової кислоти (КМОА), М-сукцинімідилового ефіру у- малеіїмідомасляної кислоти (ЗМВ5), М-гідроксисукцинімідного ефіру є-малеімідокапронової кислоти (ЕМСЗ5), м-малеїмідобензоїл-М-гідроксисукцинімідного ефіру (МВ5), М-(а- малеїмідоацетокси)-сукцинімідного ефіру (АМА5Б), сукцинімідил-б-(р- малеїмідопропіонамідо)гексаноату (5МРН), М-сукцинімідил-4-(п-малеімідофеніл)бутирату
(5МРВ), М-(п-малеімідофеніл)ізоціанату (РМРІ), М-сукцинімідил-4-(4-нітропіридил-2- дитіо)бутаноату, М-сукцинімідил-4-(йодоацетил)-амінобензоату (ЗІАВ), М- сукцинімідилйодоацетату (5ІА), М-сукцинімідилбромоацетату (5ВА) і М-сукцинімідил-3- (бромоацетамідо)пропіонату (ЗВАР), біс-малеіїмідополіетиленгліколю (ВМРЕ), ВМ(РЕО)», ВМ(РЕО)», М-(В-малеімідопропілокси)сукцинімідного ефіру (ВМРБ), Мнь 5- малеїімідовалеріанової кислоти, НВУ5, гідразиду НСІ 4-(4-М-малеіїмідофеніл)-масляної кислоти (МРВН), сукцинімідил-(4-вінілсульфоніл)бензоату (ЗМ5В), дитіобіс-малеімідоетану (ОТМЕ), 1,4- біс-малеімідобутану (ВМВ), 1,4-бісмалеімідил-2,3-дигідроксибутану (ВМОВ), біс- малеїмідогексану (ВМН), біс-малеімідоетану (ВМОЕ), сульфосукцинімідил 4-(М- малеімідометил)циклогексан-і-карбоксилату (сульфо-ЗМСС), сульфосукцинімідил(4-йодо- ацетил)амінобензоату (сульфо-5ІАВ), м-малеїімідобензоїл-М-гідроксисульфосукцинімідного ефіру (сульфо-МВ5), М-(у-малеімідобутирилокси)сульфосукцинімідного ефіру (сульфо-СМВ5), М-(є-малеіїмідокапроїлокси)сульфосукцинімідного ефіру (сульфо-ЕМО5), М-(к- малеімідоундеканоїлокси)сульфосукцинімідного ефіру (сульфо-КМИ5), сульфосукцинімідил-4- (п-малеімідофеніл)бутирату (сульфо-5МРВ), СХ1-1, сульфо-Маї, ПЕГ.-Маї, М-сукцинімідил-4-(4- нітропіридил-2-дитіо)бутаноату, /М-сукцинімідил-3-(2-піридилдитіо)пропіонату (ЗРОР), М- сукцинімідил-4-(2-піридилдитіо)пентаноату (ЗРР), М-сукцинімідил-4-(2-піридилдитіо)бутаноату (5РОВ) і М-сукцинімідил-4-(2-піридилдитіо)-2-сульфобутаноату (сульфо-5РОВ).
99. Спосіб згідно з п. 96, який відрізняється тим, що модифікована цитотоксична сполука представлена наступною формулою: пасли ми чі ту-к д М М Ге) (Ф) дк во во (9) в) або її фармацевтично прийнятною сіллю; а друга модифікована цитотоксична сполука представлена наступною формулою: зОЗнЕ о пази, М Ге) Ге) М М ОМе Мео М (о) (Ф) або її фармацевтично прийнятною сіллю, де У являє собою -5О3М, а М являє собою Н або фармацевтично прийнятний катіон.
100. Спосіб згідно з п. 98 або 99, який відрізняється тим, що біфункціональний зшиваючий агент являє собою М-сукцинімідил-4-(2-піридилдитіо)-2-сульфобутаноат (сульфо-5РОВ).
101. Спосіб згідно з будь-яким із пп. 93-100, який відрізняється тим, що М являє собою Н, Ма" Коо) або КУ.
Фіг ЗА Мастпектрограрви кончегати деглікалилюрваново ПОМ УЧ Я, стримані йез із використанням бісукавфіту; що містяатн Я ОВЕ4А)Н ЗУ АВ ВІ відповідно. ро МО таброє її А, ше неМмуз-б-о, 14 ВАВ ше рі я З таті ше Е ре ек вв БОх п КО нд Іфмхю тато нях 1582 Іахшо таади таопи маса и. 18 Ти з о т КА Е мае і В. Ше їв пиМмув-б-2, ЗЛ САД : : Е завове : З х 3 кн ши ши Ще п п З зах ше ши ше ши Я : п : : й Мих 6 ов : й г Ії НЕ по вуж я. пен'агати Ну Яні стр еніКихіЗ Вика Вннам ФОНУ натр» демонструють визлогічну цизатокомчність ій Уго стосовно кп НО ще еклпрегують амтитим СОХ3 : Н Додакаюне Мак» да МН еру пиаровисі печавини при Н кОНіогуВанні не вплназк мо детменісто ди специфі Е кон'юнатй пиМуюо и янверський засіб де капи НІМ і і : Гдаскодоннмі зламати; ниж илітин о пучку; дна палацу З КТ і пратацте 15Тод і і і ; і що їі Ж : Х і фудвейоуйуаковнх, соді. що : 5 в са яка хо БА ДАМ ІМ : нич Н г і а У у ХА МАКИМЖНАЛМ : г ш і с У ї секоанЕ кнсїКоКх шин Ко з РУ : Хбащі 4 ж ех і 2 ус пах : дж і ще х я фі ПАК ою і е ля АК їх « ЗЛ ДАЙ ВИВИХ і шо Н наюМеЕмПок ЖИТНІ: і х І у Бех Н І Ж З - : ря ща вх т лаві не Ма і. ча 1 ща ФВ Лева ко Ман я: ї І З о і І : ; 1 нен «тшазме знах Н і ще о Ме : : М дно рддювфону і ДІД ану у у суч : ре с НН пи зх і : Місахрид кенценерація : З : ддадинт т дотоя СТВЖЖА І ПВаИУЕю 000022 МЕЖА ежмямо : ПЕН, дя СКК сяшнЯК і пшоно дже СОН слон ї у й Й в о
Фк. З Ком'ютате АВ-? проти СЛ, стримані бозіз викодУєтаниям Віста натрію, демонстоують знадогчну цупстоисичнть хе стосовна капих Ап оцоипИестима зніме СХ
Н -. й сек . т ї і Додавання ЯЗНООх дод КНУ кру пігарськох речовини при Н Н кан'юмуввнні не дпливах мак ианіть або пиецифНеть і ро яонмогата ди прот Спо дінарснкий зло до хлпини ВІДА і Н Н Н Н Н Н Н пехкюні охоти, МИХ хаеиКе; вуха дек волоху о ЖІ пром иихе Н Н код Н Н Н Н о ж і Н ї с ще ї Н ї о іа чи А ї і е Е ав і Н шо Ми дн ст а обом ОК Н г : ; Ше: ; Н жи х т Н і ве Ж х. Н
Н Ж. 4 їх 8 Н Н дя їі у, х бУмациМех. і ! Во я я ТЕЗ ІМжЖЮЮ Н Н х У у 6 поБтвАНСМНКЬ Н Н з і Я Е зем охокаНя Н Н Я ї 55 шинчих ї Н 5 т Н Н З і: у Ку Івоніка НИ ; Н щ- Н 5 ж ШАСІ ЕКаХНКО І
Н о. -з звиАайцагкнин і Н «1 у, МО ве Й ї Н Н литих і і І лалелому тую ст ет Н і з зам ХА З Ки за? Н ! пезвцецтраміві, М і і ка і Н Н і Мод ин і і пе як вк, і і уся гдз Мо ай Н Тл тя птн птн тт птн тт птн тт птн тт птн тт тт т тт т тт ти
ФЕ. 4 сберконсовозавнй ВЕЖА знав МЖН5: 2 ЧНІ, зброблекого Моулофист цатрію. »-МаНОМ Вихідне зєднання Х 11 х 3 х зак! і анео у вже : І Е г ; зак: «ЕНН ВОх Г2: :; - І аа вику. орви ій зп СН пвх пвлиї мин Яіг, 5 МаАнилі; дагпкаЗильованого ПИЛУ МІЯ, отр я два пульфігу Натороу. х звкопмствнмам З щолавких акмволецтнУ ДЗСВ-ММО ка антитіло. А Мон'югат адоржували поз використання соузьфіту натр зх кередннм Й сиівцідкоани ям вікартєки речовина ф/антіитіли, рних і; конУюгау или до тродх привднаних миле лікарської Мемакими З манти, вона ОДеожуюзим З ВИХ анням гулЬФиту мату песен мивнднкивнмни лівертьна Мечашима о г вні, півним Хі хонокниї Умов ди соми приєднимих молекуя ліхзольких човни Ї а ЯнтМИлх. ци ; погкум : ше Маму аЯнУР елкатка Не вечована З БЕХ МаНИО НЕ м їй молекули акапеьної і нт речовини куантитню ох хо очвюо ДЗ де Ал шт сЛеннях с с М ин НА ОНИ СО я; зеО рай 500 БиО сядю Ма 3 хх щ Й шк Й ВІ и МУЗ ЧМР ОВ ЗВО і Ша : - пеновиана Ма Мане Й її. : ре ДБ молокули аігалевиві дачевннмХ 1: :їочж змій ше : Н НИ НИ «ої : ! Роз 1 І осно па її : ї НИ З щ ї п їх ї І іму ся я У ро 5 ої же ВО о; От НК в де п. ЩО сл ІК Драми и Дена нКюнюкекн Кк вату КК ди я вк кк уник никчнинк МК 1 ІЖЖО зах ХК ткаша
Фк. Додазакних Бксульфту мжтувя да пені сумі: пра кончогищанні СХВОВЧНУ не привадить да фрзлеєціаці анти г здетреере у ДК ПАКТ, ще кое відновили знаахоівли на чн «Рі: іквхим'ютхя в Рохитежхх йосканує У сш дае ЖЕК ЖАХ хемомх КАК для кн СО КАНА Й оо неон тори ІЕЕ ПИ СЕ Б КК КК СКК МКК ЖКККИККА кефрали: «снрзайноги БК соя Я Я я г ЕПЕМКИ її : : ШО мн МО везе кв ще Бо вк ЩЕ х х х
Н.Я з. соч поні йде інв ве г 5 й- Кк ої х ово кове їж дк чих Б З ру ї 1 Є Кв пев с МІЙ їх ще. я шко ще ди й, Ь 8 й А 5, яке ее мое ре чу я у 2 сеохаМММ ач зер Ко Я: Із й ЖКасетувамихх ЗнЕМТиМУМ. Зм ві Шо Мебкиттдит «туту Е Бе се пюрдухеекх мок х ци розв х. ую ще ще я Е Ст КО,
Ї. ях Фіг 8 в кни р х ї и пе Меч Н я ех вія ех Я х : ТУ 4 Моє А несе Х щи нх реа ами фея ноу екон мож сода емо злом У пли па Вико то ум овхмх КК й д Ме Ей «Я» з кій дю оо а зріс. З ШИ їв І - не од с СЯ уки, наван пове 5 мх хі Я оч ї ВУ еІЗ ! пе МУММИКиХ В ж ї г х Н пи ех х : Ж дсисохохют ра; соб не Б НИ» і І мовчи нив Н В: еще х ; Н и о й Н та ЧИ жк» їх формує оемокх лю ою 7 і су Ж сом мо ї 3 і Мои, отут ! перех, Сен ни соку, пре ни
Фк. 10 ц інн оон и і Й сети 7 я сою К- хх за сг о Бош згока мето косоу хх ре суму еикно ! щи З І її те у на пов и ай І ДУХ ми фіреуюютвю хлову Не 5. За пре іні ви ша мюдичй у шо вікі ше г. 1 о о у ще ях хК 3 «овал ні бою и нії ел й моих я ши ДОМ мк кими Миа і Жеомтут и кутку х х ЧИ пов У ему атх Шен ї вузу сах о шк / я З Й Й КМЗ Д.оКУкут КК кум мозком, ВХ фе М МЕ пек к й у м Медик и їх прик ера Ще ех, вчених т із гу с ок де у КУ прекка, Ї й Ме вибере нн ії » Є МІХМА АХ х Як х «Ух. ; з МИ - й ре ї пи й м ин Н зе і я г Же вк Ки і Пика В окт ККД ; селі Що-к- ав ам жо Я рерр ч ос м Іа " кох жов Ко мана нн фе н щ х Ма реж 5 -я шк Я иа неви і ж ко хо Як
Фіг. 12 сте тала й ОВО ої лавона Одноєстявний 11аКОб4 : реагедтеий спос р : : Ко : : нн и У НН Ї : юю Еш шк шк НІ С ша ши п нн нм АЮ БАОЮ РБК ю 1ЗРЩюЮ 3еКщю 006 сно ная о : ; Драгівиний спос і ОР оНнюЗуЄ з НИ т УК С ї Н това : Н ї : т і Ї не й Вб: и НЕ НИ нн к. їх о ЩА СЯ К Аза Дурні кА ЕД рюкюння Ркйох юр дюсркжіжкит менш їщМЮюЮ жищюЮ Земнхю Ода
Фі.13 ке ме зх вне Ук, ня вва : ТІЇ : Н : : Тоді : і чо ПОЖ о «і як 20001 Іда й вкі. 1105 : НИ ЕН ще: ї ях 111 ОРЕ Ж ухмке ІМ : ке чиї ДВ потм ІІ пк ВМ І о ня Ден іхюнна жені гака і ІЗ я ПІВ кн, ЯК ЖЕ ЗКУХМУ МКМ здох СЕУ ОМЖУе ОсУШКе ОХ е ще . нт Мщ іх : Н " Ще ; Рв : : : і : : : : ї : : і : Ро: «і : : Б ОР. пол І У в вв щем у й ДК жи кк вдтеююекуюткио ОД у и п ОЦЕ Я
Й чяг. 14 Ноя ях мамина УгДдихИМУ хо. зт З мУлохути гадюки У Н міуох т : іполююко Н і й і і Н Тож : роя : в: НН ї х їх у ФОРТ ож 2 жерти їв Про: : гоя її ї її їх п : Н Н 1 ї ї з ин НН СУДНА ДЕННІ НЕ пкт Вб оїш т, ДО, М Же зу ЛИЖ їосмемиї ОХ. ТОМ МКК ве ни в о В Кр п а КК яомо еже змже пхю я пос жеУ п Поч чиїх г з я п - сх . ін ШИ Злжонеувх Дно ОМ, мох ЖК УЙИ У ЄДИНОМУ ї : хм косо» 1 Н ів : Го-х Ї рос и : й Ши | оре Н «ек 100017 ї ЕН: рим и ИН вв ї у : ї : ху у ї і ї ї : ШЕННЯ виш и ШИ Я По НО ж УК ямки «мили чих зАжХХ БУК ня зн ЯК
Фіг. 15 І Ван і лнзосвхв ремннна! І Ж ономевано 0 Ж авювохе ! Е івмтУтюоі У і і речовини коном! В і КВК і і і песо оо пн о Учні зи пив п Чин ппомидл аю 15 1 НКУ Н ов ооо вв о во зорово мо пово вввввонн і кут кація НКУ НЕ : 55 Н ВУ Те каф і Меган на Не :8Ї Н 1 Кехдаоащих НОЯ 15 НК Н ваоьоо овен ово в но:
Фу. 16 Дюветапия схема номсогуваюни ра ов ин З зн: В зу : г й ТОНЕ дики ди о к " 7 ЯЗМУЗЯ У ВИЦЕ селах Ж КОТ фречіюя Ки до окон З3 и й беуичн йо З Год» злУю мая ї Як І й іколуВ я ВН ТВТХ ня й й В ТІ гай, я Хода їм ть о, й КМ у ТХУх ди М й КН т і о 23 " М ТИОК лінкенн Зак Вадевія то Толя: ке ке 4 Е Ж ! мя Зі о со З ке ок ах А (ї зими ту хо МЕ зу, Її г З вет ка їх шо и Ед М ву х ще що ч ? Й в БО Ум ї щ- Ток доки, о м у 5 КУ км а шк са Е: Ж ооиий Її я Мк ах жом ра Ку Ка й ЗК Тї с х Й х З Тех Кк вк: 4 І мк -х ее Бу Ук клі що БУ «г З К Ж як полк Ж Її х суди меру ких Ко є мутна му е вн ДИ я в Є
Фі. 17 Дннпродіфератвкна витивнтю пику МОВ. М пости А) клітин Не іджіззи без блокування знижена яхуючих сантів, ібн НИХ ілв ітасвікацин МА й ах Н ч« х Н їаі о Бодетвй х ! і т я фка сх х 3 й етичне, З з Я 00тБхабнохрохюна А о ЧНО ЧИ каоноикї З Н Ж З кове вань жа с ї х як й У ЧЕ батеуюмнома м ІЗ К Ж Х вам хі х Е ян ха ЕЕ у х ! хх и вух ї Кл шив тин, й ; В же ше БЕ Я обходи дх ма мМ
І. ї як хо і У Ше: КЕ гу «Я ми оку В ВЕОВ В в ко джу р зада ки ав ми осв вн вв понесе Я зшевеноютьх Ж : БО я тку і г щ Х їв З сій з ї іжАЇ яке КНЯЖА ВК СУ Е щі КЕ оо че ФУМНаЖМ МІ КА ЕД ех : Е : РИ: Хо - хо вояж ом Я і Н і у ще раз щих зе панк они ЗШ еле іхзмемелкх М пухкі Я ї й Фі, 18 Слодідниніст» зв'язування пимуВче рив ЕД анлоїя щ ЧИ Кути її и В В В шу щи що. ІЙ З В як щ р чо щи Б у кана пики ву п ДВ КО ; -е ко м ї бо Ома Ме с пн. А Кк в іі Мк ме з Кисьн 7 аг вай нем еВ Ма - я хо СЕ е
;
В. й СУ а 5 ї 5 хи я я І: г Км Н 2 Ж А ТЗ г Ж ря з у; о нимуєвЕОВ З і Ч й ї ? : й м ; В ж антмтійс ВиМмуВяЬ Ку і Н ЩЕ і я й я |і ай Е п и КК КЕ из ит зу з з и ато шх зим ему М фіг. 13 Ефективність МоММуд- ЯРОВА п умо на пестімуєних мишах, Що насутх пухлини НОМИС «Коди ут оди кит я ми дит ет, Ж тт я Я с 5 дн дих - ї я НУ Кк и ї І Му з шин й : ! У у век ДК лет пк сн В М. т ві ХК ит чи ша ма В КМ К й Я ою В З ї Кк В сш ско х аг З В. ва ВИБУВ ва їжа з торі - кю Н Що вижили, ме 1 і містиля пули «т ла Н ідень АНІ З 3 Н зуб Укридююньк Х я і Н ткаій х я З маки МКК КЕ я Е вв: Ж і я микік; вх г те й Н тей мк се ев Я Ж теме дя УЖЕ КЕ же ЇЇ Н Ка ще Її «вд» від жах; ке 55 М зщ ії І, «век то зві ЯК т 1 Гн. жа 3 ай Со зов се З покіниій щі шо 5 13. її У хо За Донь після інохуляції -
фі. 0 дено сххНіх ме сечі ЗК КУМ умо ще хо ї нт - Н г пк г дити фетпативня зитмянт» имени ТЕМ ЯНУКТАН М ОЗМТУВНОЇ ЛЕМ КАТ. ЇДі кан МЕВИЯ ЗК БІ кат» МАХ АТ іКркалимМ МЕМ в каиви НЕБА І Б ВІ Й Ге : Н ре 1 я Ж ях УК ее нин на і я їх 4 ро ро БО І ї БУ ох полів х ЗУ 1 їх КЕ ни ши ливих їх ї она пана "хо Ох ВО я р Н «ч о Мали" ше і ее Ж. Кз ке жив Н ож У пептид няня : й по м в и вс Ко ДИН хехо мох юьх и же фкову ни р Та ІВ ле і у до Ж. 1 - Ї ! М КНУ Ве жом їі ке - і Хом Же ЩЕ рення їй ЕЕ Ван ШУ фен ї 1 Ух, хм хі х. Еш ЕЕ - - Я ж Їчччяндктят ння хоче тк члжт учет 1 «УШУПТИЦ. доб терени пеххокмаючем о а НЯ Й Щ Жозе Мом М ін З Фе, 21 Подівнальна витирати зитежакто (І кому ем ім пМклув суль 3 та ПМ ВИМ аММ проти нлітим НИК МУ із тя Бех бловуваНиХ ЗМУКТМХО ЗУ я САЙТ хі 152 хх о чї гм ц : Тс Я я уз йюмеукома соч не С ЧИ за ях 00 НБЕЖЖ 00 тру НОЮ ко у і ААлячдкчлАяя ЕК і х х є я" їх - їх У К т | я о х киш ше вам. хм із зд кі. хан х їх Я ї ще що МС ск ЩЕ х т х й й жо ке 0 кирммлемя ; Мф ло м ан Он неси и шах 8 : 7 їм сті ї х КУ г дк Хоб бо ваохування с ЧИЯ пише ЕОР зр до уаннякх Но х як КЗ ВЕУ С і ї й «Я чу шк х Кк Кк ї і е І х Ши вн шк Її х Й ! У КЕ У. Шк схо мшу св ВО ї ше МІ М З щі ВИМИ Ему АНА хх ї шу 7 неденнвкодк фо чуття нету ут кет а ен НЕ ее сКя Ж м ПМК ую ЕК КИМ. й " і ї «в Бох м муюиХ ще Й ря й А тов ї я о БО -х ще - КО У ке ВК ся Е З З Прпхуканкнях Кит т з й х жі Ме ! ве ри і, М В - Ху й 7 ло, ов ет, КУ і и пи НОЯ у З М пк ю Я хі тю ж-й ПОКуВУМЕКВщ ! ХК АД И КАи лемки
Фіг. 22 Перівнальна знтвпроліферативна зитнаність (АСВ ЗВ ЯРОВА та (Б) СПВЗ8 А сульфо- ЗРОВАМ протя кан СООгОо5івБі ді т ІН 1945 18 - Х і - о Н ї Н 2? я з ля хо я що іє я ХЕ ГовА КЗ і з 2 Н и що й Без блокування г Н о - вд зво ХХ я ху і С ЗМ «ке без блокування ей 4 й ЗК УШНИ ЕЕ 8 Ес Ж 5 Хаккуманнихх хи з З |і Со Н І о. ем Жов Н Н 1 Н днях тісту ук в я Б ке с РИМ п хе фути тику іспваві РОВНО М оди адм те й ІБК ірулюфоми в ВМ 2 з фіг 23 КБекіменість НиМниз- РОВІ Кл уко на мишах, що негуте пухлини НЕБО АХ щі і Н Ще вижили, не гати ща Ж-їож пухями іде 305 ВИК ри Н 7 т, Квредатиц: доза Ж зе носи х ак ; х зни й ей мат Не х М. ОН чан До вауне Фе - вл В С Н я замін: й щш 5 Я і че Я мейг 38 х В М Б я Ї; ЕД мкг Зв я 5 ДЕ є ! І Гей ща Я ей ВО мг «8 З 33 і Н З р ; ко 5; З Ж жа З яз Зх би 5 83 85 ЕІ Динвіпня пе цІ
Фіг. 28 періянильнх капи реліфедаєимя ект АХ ТНМуВ В вовни супи ВО, та ВІ ному ВМР прати хан ОСЬ АМІЗІАшН зла Без Блокування днтигенов яЗуючих Сай з Б зі як Н : я ; х Її че кр теру ХДОКуВВУми е хх « Й й ам , с ке Кит ніи Жди й З і з я з шхокуваемою кто ТК КЗ тр тему хі ї. І: шк Ех дея ої х з 5 а ї х К ; М. хх і ч у но ай сини я м в у ЗІ у ї Я ! Ж У Й Я - ша ся Я Мч Ме М а; Її А: Ед | Кк ї Її Й Що с Х аж у ще УЗ ВИ НІ х Її Її 5 ДІД ху чут ут юку ую яІ ее же ще ж жу Поч ОЕНеКХНИ
КЗ. Її же ще - че ж зр зі З КЛюКККОВЯ х Н Бк що І Е 1 ; Я з леоувцкуки х В т Ех Н і пу тоня Клин, фа и ИН Мо тах і у мийте ци юну г тери х у КЕ | х ЕЕ і ї г. ; : мим у і. ї 2. н в х ї ; х Кай Я Я се В | у Й . тк. го о вом ХУ ї м нку ОВ М М Ж і х ЕК Го 5 М Жов я г:4 помудткоунВ У и жу Ус йо ми о Зйх хде як Шомувчинуюао Мо ІВ М м і ьх агави пі є меш мк якіх ппіюуваних х 1 х х ях р З ям 500 збжнуванове а їх ; і: я
З в. - Кк й фищуй ЕЗ їе ; В Вт ннч. шк 5 Як х в х | х А с ХК А Я Х кі з. Я ту ї В ї о і і: А пе мк Май ї ї й с 5 іа Пас с Я НУ сі ПТО ве и Са таоееву м ВАВе В Че роко вик ю
Фр. 25 Ефективність ПИММуае Ме ру ня мишак, що нагуто пухлини МОХУ 603 ТО Щи вижили, не містили я пухлин (день 1101 х Х то зо Серядовніще» ї номли х 003 як В мкгкг В Ка чо 4 макеуке З к 800 а ; я х ВЗ лакгикі 5 Я й "я во чо т Ж - щі; рен -
я 3. Я У З зі їх ; ж ж М МЕН Денніміеля інокуляції)
Фіг. Зб Тилаха схимм лишуаху Кон'ютата сульфовазний фол цито з еднання и но. нед ОВ й вот в чи си НВ дело В НО І ї «КЕ Б ОЗ сани «ек ля й и кт, УК, я ку Ку ли ни МИ Ши ЧЕ і Е Я ке еще в Їй ша і: ЩО ж . У т це нак нн М рути хо ї , нем й кала Й х Ну кої йй УК» Ко пу рми осв ек її й - ла себе ср ВА, н Я ню у з й ре К ре ЧНУ | їв Е пн т Ж, пед ку дети пуд й 3 Пи: ї р і Х З: кеш КУ не К ден я ПОМ МЕ дитя гу пе им ес І я Її е по хни ях 7 Ме морю і г Н х СО Кк ;. х. и п Що пе и чи ню хм, ті І: КІ г сну и Кеди, ритми В рей с ск ме з ноу з Бу І. о я
Фіг. 27 Ефективність Би Муз б-лазрський зас али со ма яаинах, вро месуть пухакнии МЕНА з Е Ї її щ а щЩовижилян, це а ї містили пухлюн ідени Ес 1 х | схнюдоким- х М олово х Н
8. і : Я доб пк 8 х 4 фе ФВ сепуху 38 Р; 1 В в яр ДО метах а В Н зм З Н щ ї що Де ; : и М М М Дні пшявінекуляцї ОН
Фів. 28 а туя Ко в: ше я ВА і Я й їх Код Кк пекан іще АК ше ї З Х ї х ч пу г су р в дк ях роя саххлляхлладння ПНО ИХ, мі в и і: З Її у: они жа Гу и в у но дом ех, с я й зизошее з с ит, п ут Бай яки сш
У. ї х я неону мес ки диекук А й Ем ях : злі ле Я і ГИ їЯ ; раки я Мк би «й Б 5 З У. Ко
UAA201310945A 2011-02-15 2012-02-15 Спосіб одержання кон'югатів UA120696C2 (uk)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161443092P 2011-02-15 2011-02-15
US201161443062P 2011-02-15 2011-02-15
US201161483499P 2011-05-06 2011-05-06
PCT/US2012/025257 WO2012112687A1 (en) 2011-02-15 2012-02-15 Methods of preparation of conjugates

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA120696C2 true UA120696C2 (uk) 2020-01-27

Family

ID=45755579

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201310945A UA120696C2 (uk) 2011-02-15 2012-02-15 Спосіб одержання кон'югатів

Country Status (30)

Country Link
US (12) US8765740B2 (uk)
EP (6) EP3053600B1 (uk)
JP (8) JP6049642B2 (uk)
KR (6) KR20140010076A (uk)
CN (5) CN107335061B (uk)
AU (5) AU2012231640B2 (uk)
BR (2) BR112013019913B1 (uk)
CA (4) CA3034596C (uk)
CY (2) CY1117340T1 (uk)
DK (2) DK2675479T3 (uk)
ES (2) ES2717657T3 (uk)
HK (1) HK1186686A1 (uk)
HR (2) HRP20160164T1 (uk)
HU (2) HUE043976T2 (uk)
IL (6) IL279304B (uk)
LT (1) LT2675480T (uk)
ME (1) ME02381B (uk)
MX (2) MX346635B (uk)
MY (2) MY183977A (uk)
PL (2) PL2675479T3 (uk)
PT (1) PT2675480T (uk)
RS (2) RS58620B1 (uk)
RU (4) RU2621035C2 (uk)
SG (4) SG10201601046QA (uk)
SI (2) SI2675480T1 (uk)
SM (1) SMT201600099B (uk)
TW (1) TWI617555B (uk)
UA (1) UA120696C2 (uk)
WO (3) WO2012112687A1 (uk)
ZA (2) ZA201305386B (uk)

Families Citing this family (156)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8288557B2 (en) 2004-07-23 2012-10-16 Endocyte, Inc. Bivalent linkers and conjugates thereof
BRPI0615049B1 (pt) 2005-08-24 2023-04-25 Immunogen, Inc Processo para a preparação de um conjugado de anticorpo- maitansinóide
AU2008268432B2 (en) 2007-06-25 2015-01-15 Endocyte, Inc. Conjugates containing hydrophilic spacer linkers
US9877965B2 (en) 2007-06-25 2018-01-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
EP3100745B1 (en) 2009-02-05 2018-04-18 Immunogen, Inc. Novel benzodiazepine derivatives
DK2437790T3 (da) 2009-06-03 2019-05-20 Immunogen Inc Konjugeringsfremgangsmåder
EA024118B1 (ru) 2010-04-15 2016-08-31 Сиэтл Дженетикс, Инк. Конъюгаты пирролбензодиазепина направленного действия
AU2011239525B2 (en) 2010-04-15 2015-04-09 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
MY183977A (en) 2011-02-15 2021-03-17 Immunogen Inc Cytotoxic benzodiazepine derivatives
US8795673B2 (en) * 2011-03-29 2014-08-05 Immunogen, Inc. Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
AU2012311505B2 (en) 2011-09-20 2016-09-29 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines as unsymmetrical dimeric PBD compounds for inclusion in targeted conjugates
CA2850373C (en) 2011-10-14 2019-07-16 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
EA027386B1 (ru) 2011-10-14 2017-07-31 Медимьюн Лимитед Пирролобензодиазепины
EP2751111B1 (en) 2011-10-14 2017-04-26 MedImmune Limited Asymmetrical bis-(5H-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-one) derivatives for the treatment of proliferative or autoimmune diseases
EP3309162A1 (en) 2011-10-14 2018-04-18 Seattle Genetics, Inc. Targeted conjugates of pyrrolobenzodiazepines
US9717803B2 (en) 2011-12-23 2017-08-01 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
WO2013150623A1 (ja) * 2012-04-04 2013-10-10 株式会社ペルセウスプロテオミクス 抗ｃｄｈ３（ｐ－カドヘリン）抗体の薬剤コンジュゲート
US9504756B2 (en) 2012-05-15 2016-11-29 Seattle Genetics, Inc. Self-stabilizing linker conjugates
JP6423340B2 (ja) 2012-05-15 2018-11-14 シアトル ジェネティクス，インコーポレイティド 自己安定化リンカー結合体
WO2014009426A2 (en) 2012-07-13 2014-01-16 Innate Pharma Screening of conjugated antibodies
WO2014031566A1 (en) * 2012-08-22 2014-02-27 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
CN105209592A (zh) 2012-10-04 2015-12-30 伊缪诺金公司 使用pvdf膜纯化细胞结合剂细胞毒性剂缀合物
TR201902494T4 (tr) 2012-10-12 2019-03-21 Medimmune Ltd Pirrolobenzodiazepinler ve onların konjugatları.
SI2906296T1 (en) * 2012-10-12 2018-06-29 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
HUE035694T2 (en) 2012-10-12 2018-05-28 Adc Therapeutics Sa Pirrolobenzodiazepine anti-CD22 antibody conjugates
EP2906250B1 (en) 2012-10-12 2018-05-30 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates
PT2839860T (pt) 2012-10-12 2019-07-29 Medimmune Ltd Pirrolobenzodiazepinas e conjugados das mesmas
WO2014057118A1 (en) * 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
ES2660029T3 (es) 2012-10-12 2018-03-20 Medimmune Limited Conjugados de anticuerpo-pirrolobenzodiazepinas
CA2885305C (en) 2012-10-12 2019-11-12 Spirogen Sarl Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
ES2703151T3 (es) 2012-10-12 2019-03-07 Adc Therapeutics Sa Conjugados de anticuerpos de pirrolobenzodiazepinas
NZ707486A (en) 2012-10-12 2018-09-28 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine - anti-psma antibody conjugates
WO2014072482A1 (en) 2012-11-09 2014-05-15 Innate Pharma Recognition tags for tgase-mediated conjugation
EP2916835A4 (en) * 2012-11-12 2016-07-27 Redwood Bioscience Inc COMPOUNDS AND METHOD FOR PRODUCING A CONJUGATE
WO2014089177A2 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines
SG11201504887TA (en) 2012-12-21 2015-07-30 Bioalliance Cv Hydrophilic self-immolative linkers and conjugates thereof
CN105246894A (zh) * 2012-12-21 2016-01-13 斯皮罗根有限公司 用于治疗增殖性和自身免疫疾病的非对称吡咯并苯并二氮杂卓二聚物
EA031585B1 (ru) 2012-12-21 2019-01-31 Медимьюн Лимитед Пирролобензодиазепины и их конъюгаты
WO2014143622A1 (en) 2013-03-13 2014-09-18 Seattle Genetics, Inc. ACTIVATED CARBON FILTRATION FOR PURIFICATION OF BENZODIAZEPINE ADCs
SG10202009046SA (en) * 2013-03-13 2020-10-29 Seattle Genetics Inc Cyclodextrin and antibody-drug conjugate formulations
NZ710745A (en) 2013-03-13 2019-03-29 Genentech Inc Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CN105142674B (zh) 2013-03-13 2018-11-13 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂卓和其结合物
US10611824B2 (en) 2013-03-15 2020-04-07 Innate Pharma Solid phase TGase-mediated conjugation of antibodies
WO2014202773A1 (en) 2013-06-20 2014-12-24 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
WO2014202775A1 (en) 2013-06-21 2014-12-24 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
US10208125B2 (en) 2013-07-15 2019-02-19 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Anti-mucin 1 binding agents and uses thereof
KR20160044042A (ko) 2013-08-28 2016-04-22 스템센트알엑스 인코포레이티드 부위-특이적 항체 접합 방법 및 조성물
JP2016531914A (ja) * 2013-08-28 2016-10-13 ステムセントリックス， インコーポレイテッド 操作された抗ｄｌｌ３コンジュゲートおよび使用方法
US9993566B2 (en) 2013-08-28 2018-06-12 Abbvie Stemcentrx Llc SEZ6 modulators and methods of use
EP3041846B1 (en) * 2013-09-02 2018-11-07 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Novel cytotoxic agents for conjugation of drugs to cell binding molecule
EP3054983B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3054985B1 (en) 2013-10-11 2018-12-26 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2015052535A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CA2921707C (en) 2013-10-15 2023-03-28 Seattle Genetics, Inc. Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics
EP4190809A1 (en) 2014-02-11 2023-06-07 Seagen Inc. Selective reduction of proteins
KR20170008202A (ko) 2014-02-21 2017-01-23 애브비 스템센트알엑스 엘엘씨 흑색종에 사용하기 위한 항-ｄｌｌ3 항체 및 약물 접합체
US10550190B2 (en) * 2014-04-04 2020-02-04 Merck Sharp & Dohme Corp. Phosphate based linkers for intracellular delivery of drug conjugates
SG11201609357PA (en) * 2014-05-20 2016-12-29 Immunogen Inc Methods for characterizing and treating acute myeloid leukemia
MX2016016490A (es) * 2014-06-20 2017-07-28 Bioalliance Cv Conjugados de farmaco-anticuerpo anti-receptor de folato alfa (fra) y metodos de uso de los mismos.
WO2016008112A1 (en) 2014-07-16 2016-01-21 Medshine Discovery Inc. Linkers and application towards adc thereof
MA42561A (fr) * 2014-09-02 2018-04-25 Immunogen Inc Procédés de formulation de compositions de conjugués anticorps-médicament
EP3188733B1 (en) * 2014-09-03 2019-11-06 ImmunoGen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
TW201613930A (en) 2014-09-03 2016-04-16 Immunogen Inc Cytotoxic benzodiazepine derivatives
EA034138B1 (ru) * 2014-09-03 2020-01-09 Иммуноджен, Инк. Цитотоксические бензодиазепиновые производные
SG10201809668TA (en) 2014-09-12 2018-11-29 Genentech Inc Anti-her2 antibodies and immunoconjugates
GB201416112D0 (en) * 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CN107124870A (zh) * 2014-09-17 2017-09-01 基因泰克公司 包含抗her2抗体和吡咯并苯并二氮杂*的免疫缀合物
GB201419108D0 (en) 2014-10-27 2014-12-10 Glythera Ltd Materials and methods relating to linkers for use in antibody drug conjugates
SG11201703599VA (en) * 2014-11-19 2017-06-29 Immunogen Inc Process for preparing cell-binding agent-cytotoxic agent conjugates
AU2015352545B2 (en) 2014-11-25 2020-10-15 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CN107249643A (zh) * 2014-12-09 2017-10-13 艾伯维公司 具有细胞渗透性的bcl‑xl抑制剂的抗体药物缀合物
CN114230664A (zh) 2014-12-11 2022-03-25 皮埃尔法布雷医药公司 抗c10orf54抗体及其用途
ES2747386T3 (es) 2015-01-14 2020-03-10 Bristol Myers Squibb Co Dímeros de benzodiacepina unidos por heteroarileno, conjugados de los mismos y métodos de preparación y uso
CN107428780B (zh) 2015-01-14 2020-09-04 百时美施贵宝公司 苯并二氮杂*二聚体、其缀合物及制备和使用方法
CA2979527A1 (en) * 2015-03-13 2016-09-22 Endocyte, Inc. Conjugates of pyrrolobenzodiazepine (pbd) prodrugs for treating disease
EP3270903B1 (en) 2015-03-17 2020-05-06 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Disulfide-containing alkyne linking agents
US9504694B2 (en) 2015-03-19 2016-11-29 Cellerant Therapeutics, Inc. Isoquinolidinobenzodiazepines
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
EA039619B1 (ru) * 2015-05-20 2022-02-17 Иммуноджен, Инк. Способ получения индолинобензодиазепиновых соединений
GB201510010D0 (en) 2015-06-09 2015-07-22 King S College London PDD and BPD compounds
EP3313854A1 (en) 2015-06-23 2018-05-02 Bristol-Myers Squibb Company Macrocyclic benzodiazepine dimers, conjugates thereof, preparation and uses
LT3313845T (lt) * 2015-06-29 2020-12-10 Immunogen, Inc. Cisteino inžinerijos antikūnų konjugatai
WO2017004026A1 (en) * 2015-06-29 2017-01-05 Immunogen, Inc. Anti-cd 123 antibodies and conjugates and derivatives thereof
CN108026103B (zh) * 2015-07-21 2021-04-16 伊缪诺金公司 制备细胞毒性苯并二氮杂䓬衍生物的方法
GB201514928D0 (en) 2015-08-21 2015-10-07 King S College London PDD compounds
US20180339985A1 (en) 2015-08-21 2018-11-29 Femtogenix Limited Pdd compounds
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
US20170189548A1 (en) * 2015-11-25 2017-07-06 Immunogen, Inc. Pharmaceutical formulations and methods of use thereof
TWI753875B (zh) 2016-01-08 2022-02-01 美商美國全心醫藥生技股份有限公司 四價抗psgl-1抗體及其用途
GB201601431D0 (en) 2016-01-26 2016-03-09 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
EP3411075A1 (en) * 2016-02-05 2018-12-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Gcc-targeted antibody-drug conjugates
SG11201806478PA (en) * 2016-02-05 2018-08-30 Immunogen Inc Efficient process for preparing cell-binding agent-cytotoxic agent conjugates
GB201602359D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201602356D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
SG11201807827VA (en) 2016-03-25 2018-10-30 Seattle Genetics Inc Process for the preparation of pegylated drug-linkers and intermediates thereof
US20200323991A1 (en) * 2016-03-29 2020-10-15 Endocyte, Inc. Pbd conjugates for treating diseases
CN115181164A (zh) * 2016-04-20 2022-10-14 杭州多禧生物科技有限公司 鹅膏毒素的衍生物及其与细胞结合分子的偶联
AU2017254674A1 (en) 2016-04-21 2018-11-01 Abbvie Stemcentrx Llc Novel anti-BMPR1B antibodies and methods of use
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
US10918627B2 (en) 2016-05-11 2021-02-16 Massachusetts Institute Of Technology Convergent and enantioselective total synthesis of Communesin analogs
WO2017201132A2 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
JP7049276B2 (ja) 2016-06-24 2022-04-06 メルサナ セラピューティクス インコーポレイテッド ピロロベンゾジアゼピンおよびその結合体
TW201808343A (zh) 2016-08-09 2018-03-16 美商西雅圖遺傳學公司 具有改善之生理化學性質之具自我穩定連接子之藥物結合物
GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
KR20190107656A (ko) * 2016-11-02 2019-09-20 이뮤노젠 아이엔씨 항체-약물 콘주게이트 및 parp 억제제로 병용 치료
SG11201902857SA (en) * 2016-11-03 2019-05-30 Bristol Myers Squibb Co Activatable anti-ctla-4 antibodies and uses thereof
CN110392685B (zh) 2016-11-23 2023-07-04 伊缪诺金公司 苯并二氮卓衍生物的选择性磺化
JP7244987B2 (ja) 2016-12-14 2023-03-23 シージェン インコーポレイテッド 多剤抗体薬物コンジュゲート
ES2912266T3 (es) 2016-12-23 2022-05-25 Immunogen Inc Inmunoconjugados dirigidos a ADAM9 y procedimientos de uso de los mismos
TW201825515A (zh) 2017-01-04 2018-07-16 美商伊繆諾金公司 Ｍｅｔ抗體以及其免疫結合物及用途
US11377492B2 (en) 2017-01-24 2022-07-05 Innate Pharma NKp46 binding agents
KR102480594B1 (ko) 2017-01-25 2022-12-26 이뮤노젠 아이엔씨 세포독성 벤조디아제핀 유도체를 제조하는 방법
WO2018141959A1 (en) 2017-02-06 2018-08-09 Innate Pharma Immunomodulatory antibody drug conjugates binding to a human mica polypeptide
RS61795B1 (sr) 2017-02-08 2021-06-30 Adc Therapeutics Sa Konjugati pirolobenzodiazepin antitela
GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
IL269398B2 (en) 2017-03-24 2024-05-01 Seagen Inc A process for the preparation of glucuronide-drug binders and their intermediates
WO2018183494A1 (en) 2017-03-31 2018-10-04 Immunogen, Inc. Cd19-targeting antibody-drug conjugates
CN106841192B (zh) * 2017-04-18 2019-05-03 乐凯（沈阳）科技产业有限责任公司 一种二氮杂卓结构指示剂检测甲醛方法及其应用
WO2018192944A1 (en) 2017-04-18 2018-10-25 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
EP3612234B1 (en) 2017-04-20 2024-03-13 ADC Therapeutics SA Combination therapy with an anti-axl antibody-drug conjugate
US20180346488A1 (en) * 2017-04-20 2018-12-06 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives and conjugates thereof
JP7170663B2 (ja) * 2017-04-20 2022-11-14 イミュノジェン・インコーポレーテッド インドリノベンゾジアゼピン誘導体の調製方法
US11932650B2 (en) 2017-05-11 2024-03-19 Massachusetts Institute Of Technology Potent agelastatin derivatives as modulators for cancer invasion and metastasis
MX2019015042A (es) 2017-06-14 2020-08-06 Adc Therapeutics Sa Regimen de dosificacion.
CA3070984A1 (en) * 2017-07-26 2019-01-31 The University Of Queensland Disulfide bond containing compounds and uses thereof
AU2018316532B2 (en) 2017-08-18 2022-11-24 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
TWI820044B (zh) 2017-09-29 2023-11-01 日商第一三共股份有限公司 抗體－吡咯并苯二氮呯衍生物複合體
US10640508B2 (en) 2017-10-13 2020-05-05 Massachusetts Institute Of Technology Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers
US20190160089A1 (en) 2017-10-31 2019-05-30 Immunogen, Inc. Combination treatment with antibody-drug conjugates and cytarabine
WO2019092148A1 (en) 2017-11-10 2019-05-16 Innate Pharma Antibodies with functionalized glutamine residues
US11638760B2 (en) 2017-11-27 2023-05-02 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
EP3732178A1 (en) 2017-12-28 2020-11-04 ImmunoGen, Inc. Benzodiazepine derivatives
TW201934187A (zh) 2018-01-12 2019-09-01 美商免疫遺傳股份有限公司 抗體藥物結合、純化、及調配之方法
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
TW202003048A (zh) 2018-05-15 2020-01-16 美商伊繆諾金公司 用抗體-藥物偶聯物及flt3抑制劑之組合治療
TW202029980A (zh) 2018-10-26 2020-08-16 美商免疫遺傳股份有限公司 Ｅ ｐ Ｃ Ａ Ｍ 抗體、可活化抗體及免疫偶聯物以及其用途
WO2020102053A1 (en) 2018-11-12 2020-05-22 Immunogen, Inc. Methods of preparing cytotoxic benzodiazepine derivatives
US10851117B2 (en) 2018-11-12 2020-12-01 Immunogen, Inc. Methods of preparing cytotoxic benzodiazepine derivatives
CN111393502B (zh) * 2019-01-03 2022-04-29 北京京东方技术开发有限公司 一种类肽及其制备方法和用途
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
MA55520A (fr) * 2019-03-29 2022-02-09 Immunogen Inc Dérivés de bis-benzodiazépine cytotoxiques et leurs conjugués avec des agents de liaison à une cellule pour inhiber la croissance cellulaire anormale ou pour traiter des maladies prolifératives
KR20220027828A (ko) 2019-04-26 2022-03-08 이뮤노젠 아이엔씨 캄프토테신 유도체
US11535634B2 (en) 2019-06-05 2022-12-27 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates, and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines and uses thereof
US20230173093A1 (en) 2020-04-10 2023-06-08 Seagen Inc. Charge variant linkers
AU2021387795A1 (en) 2020-11-25 2023-06-01 Innate Pharma Treatment of cancer
MX2023010819A (es) 2021-03-18 2023-09-28 Seagen Inc Liberacion selectiva de farmacos a partir de conjugados internalizados de compuestos biologicamente activos.
US20230091653A1 (en) 2021-03-18 2023-03-23 Seagen Inc. Selective drug release from internalized conjugates of biologically active compounds
IL310764A (en) 2021-08-13 2024-04-01 Immunogen Inc Improved methods for the preparation of cytotoxic benzodiazepine derivatives
WO2023227660A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Innate Pharma Nectin-4 binding agents
WO2024015830A1 (en) 2022-07-12 2024-01-18 Cytomx Therapeutics, Inc. Epcam immunoconjugates and uses thereof
TW202409080A (zh) * 2022-07-26 2024-03-01 美商沙塔克實驗室股份有限公司 用於治療卵巢癌之組合療法
WO2024076973A1 (en) * 2022-10-04 2024-04-11 Brown University Compositions and methods of delivering large proteins
WO2024129756A1 (en) 2022-12-13 2024-06-20 Seagen Inc. Site-specific engineered cysteine antibody drug conjugates

Family Cites Families (128)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU11248A1 (ru) 1927-03-29 1929-09-30 В.С. Григорьев Способ очистки антрацена
US3453266A (en) 1966-03-14 1969-07-01 American Home Prod 1,2,5-benzothiadiazepine 1,1-dioxides
US3506646A (en) 1966-06-27 1970-04-14 American Home Prod Process for the preparation of 7h-pyrido (1,2-b)(1,2,5)benzothiadiazepine 5,5 - dioxides and pyrrolo(1,2-b)(1,2,5)benzothiadiazepine 5,5-dioxides
US3860600A (en) 1972-07-10 1975-01-14 Sterling Drug Inc Octahydropyrrido{8 2,1-c{9 {8 1,4{9 benzodiazepines
US3763183A (en) 1972-07-10 1973-10-02 Sterling Drug Inc 1,2,3,10,11,11a-hexahydro-5h-pyrrolo (2,1-c)(1,4)benzodiazepines
US3875162A (en) 1973-07-26 1975-04-01 Squibb & Sons Inc Certain 6H-pyrimido{8 1,2-c{9 {8 1,3,5{9 benzothiadiaza compounds
US4003905A (en) 1974-12-11 1977-01-18 E. R. Squibb & Sons, Inc. Diels-alder adducts of benzdiazepines
US4342771A (en) 1981-01-02 1982-08-03 Pfizer Inc. Hypoglycemic 5-substituted oxazolidine-2,4-diones
JPS57131791A (en) 1980-12-31 1982-08-14 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd Benzodiazepine derivative and its preparation
US4444688A (en) 1981-05-11 1984-04-24 Ciba-Geigy Corporation Imidazobenzothiadiazepines
US4678784A (en) 1984-04-11 1987-07-07 Mcneilab, Inc. Method for the treatment of LHRH diseases and conditions
JP2920385B2 (ja) 1988-08-18 1999-07-19 武田薬品工業株式会社 １，２，５‐ベンゾチアジアゼピン誘導体，その製造法および用途
GB8827305D0 (en) 1988-11-23 1988-12-29 British Bio Technology Compounds
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
ATE275198T1 (de) 1991-12-02 2004-09-15 Medical Res Council Herstellung von antikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken.
GB9205051D0 (en) 1992-03-09 1992-04-22 Cancer Res Campaign Tech Pyrrolobenzodiazepine derivatives,their preparation,and compositions containing them
CA2076465C (en) 1992-03-25 2002-11-26 Ravi V. J. Chari Cell binding agent conjugates of analogues and derivatives of cc-1065
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US5455258A (en) 1993-01-06 1995-10-03 Ciba-Geigy Corporation Arylsulfonamido-substituted hydroxamic acids
JPH08176070A (ja) 1994-12-19 1996-07-09 Mitsubishi Chem Corp ジデプシド誘導体及びｐｉ３キナーゼ阻害剤
JPH08175990A (ja) 1994-12-19 1996-07-09 Mitsubishi Chem Corp Ｐｉ３キナーゼ阻害剤とその製造法
US5863949A (en) 1995-03-08 1999-01-26 Pfizer Inc Arylsulfonylamino hydroxamic acid derivatives
JP3053222B2 (ja) 1995-04-20 2000-06-19 ファイザー・インコーポレーテッド Ｍｍｐおよびｔｎｆ抑制剤としてのアリールスルホニルヒドロキサム酸誘導体
GB9521987D0 (en) 1995-10-26 1996-01-03 Ludwig Inst Cancer Res Phosphoinositide 3-kinase modulators
GB9624482D0 (en) 1995-12-18 1997-01-15 Zeneca Phaema S A Chemical compounds
ATE225343T1 (de) 1995-12-20 2002-10-15 Hoffmann La Roche Matrix-metalloprotease inhibitoren
EP0880508B1 (en) 1996-02-13 2003-04-16 AstraZeneca AB Quinazoline derivatives as vegf inhibitors
ATE211134T1 (de) 1996-03-05 2002-01-15 4-anilinochinazolin derivate
EP0818442A3 (en) 1996-07-12 1998-12-30 Pfizer Inc. Cyclic sulphone derivatives as inhibitors of metalloproteinases and of the production of tumour necrosis factor
TR199900066T2 (xx) 1996-07-18 1999-04-21 Pfizer Inc. Matriks metalloproteazlar�n fosfinat bazl� inhibit�rleri
SK21499A3 (en) 1996-08-23 2000-05-16 Pfizer Arylsulfonylamino hydroxamic acid derivatives
GB9718972D0 (en) 1996-09-25 1997-11-12 Zeneca Ltd Chemical compounds
US6077864A (en) 1997-01-06 2000-06-20 Pfizer Inc. Cyclic sulfone derivatives
DE69817801T2 (de) 1997-02-03 2004-03-11 Pfizer Products Inc., Groton Arylsulfonylhydroxamsäurederivate
BR9807824A (pt) 1997-02-07 2000-03-08 Pfizer Derivados de n-hidróxi-beta-sulfonil-propionamida e seu uso como inibidores de metaloproteinases de matriz
EP0960098A1 (en) 1997-02-11 1999-12-01 Pfizer Inc. Arylsulfonyl hydroxamic acid derivatives
JP4367866B2 (ja) 1997-02-12 2009-11-18 ザ リージェンツ オブ ジ ユニバーシティ オブ ミシガン 肺癌用のタンパク質マーカーおよびその使用
WO1999006587A2 (en) 1997-08-01 1999-02-11 Morphosys Ag Novel method and phage for the identification of nucleic acid sequences encoding members of a multimeric (poly)peptide complex
TR200000368T2 (tr) 1997-08-08 2000-07-21 Pfizer Products Inc. Ariloksiariarilsülfonilamino hidroksamik asit türevleri.
GB9725782D0 (en) 1997-12-05 1998-02-04 Pfizer Ltd Therapeutic agents
GB9801690D0 (en) 1998-01-27 1998-03-25 Pfizer Ltd Therapeutic agents
JP4462654B2 (ja) 1998-03-26 2010-05-12 ソニー株式会社 映像素材選択装置及び映像素材選択方法
PA8469501A1 (es) 1998-04-10 2000-09-29 Pfizer Prod Inc Hidroxamidas del acido (4-arilsulfonilamino)-tetrahidropiran-4-carboxilico
PA8469401A1 (es) 1998-04-10 2000-05-24 Pfizer Prod Inc Derivados biciclicos del acido hidroxamico
US6156746A (en) 1998-08-25 2000-12-05 Bristol-Myers Squibb Company 1,2,5-benzothiadiazepine-1,1-dioxides with n-2 imidazolylalkyl substituents
GB9818731D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
WO2000012508A2 (en) 1998-08-27 2000-03-09 Spirogen Limited Pyrrolbenzodiazepines
DE69915004T2 (de) 1998-11-05 2004-09-09 Pfizer Products Inc., Groton 5-Oxo-pyrrolidine-2-Carbonsäure-Hydroxamidderivate
US7115396B2 (en) 1998-12-10 2006-10-03 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
ATE482946T1 (de) 1999-02-10 2010-10-15 Astrazeneca Ab Chinazolinderivate als angiogenesehemmer und zwischenprodukte dafür
FR2800507B1 (fr) 1999-10-27 2002-01-04 Valeo Systemes Dessuyage Commutateur electrique rotatif, notamment pour un moteur d'essuie-glace de vehicule automobile
JP3287409B2 (ja) 1999-10-28 2002-06-04 日本精工株式会社 ロック機構付シートベルト用リトラクターを備えたシートベルト装置
MXPA02004366A (es) 1999-11-05 2002-11-07 Astrazeneca Ab Derivados de quinazolina como inhibidores vegf.
DE60032633T2 (de) 1999-11-24 2007-10-04 Immunogen Inc., Cambridge Zytotoxische mittel, die taxane enthalten und ihre therapeutische anwendung
SK287142B6 (sk) 2000-02-15 2010-01-07 Sugen, Inc. Inhibítory proteínkináz na báze pyrolom substituovaného 2-indolinónu, farmaceutický prípravok s ich obsahom a ich použitie
JP2001247477A (ja) 2000-03-03 2001-09-11 Teikoku Hormone Mfg Co Ltd 抗腫瘍剤
US6608053B2 (en) 2000-04-27 2003-08-19 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Fused heteroaryl derivatives
US6403588B1 (en) 2000-04-27 2002-06-11 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Imidazopyridine derivatives
AU7490401A (en) * 2000-05-26 2001-12-11 Ortho Mcneil Pharm Inc Neuroprotective peptides
CA2421447C (en) 2000-09-08 2012-05-08 Universitat Zurich Collections of repeat proteins comprising repeat modules
EP1353693B1 (en) 2001-01-16 2005-03-16 Glaxo Group Limited Pharmaceutical combination containing a 4-quinazolineamine and paclitaxel, carboplatin or vinorelbine for the treatment of cancer
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
CA2454976C (en) 2001-07-26 2011-05-10 Santen Pharmaceutical Co., Ltd. Therapeutic agent for glaucoma comprising compound having pi3 kinase inhibitory action as active ingredient
US6703414B2 (en) 2001-09-14 2004-03-09 Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona Device and method for treating restenosis
AU2002349912A1 (en) 2001-10-24 2003-05-06 Iconix Pharmaceuticals, Inc. Modulators of phosphoinositide 3-kinase
AU2002357667A1 (en) 2001-10-24 2003-05-06 Iconix Pharmaceuticals, Inc. Modulators of phosphoinositide 3-kinase
JP2005509645A (ja) 2001-10-30 2005-04-14 ファルマシア・コーポレーション 炎症処置用のヘテロ芳香族カルボキサミド誘導体
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
US6756397B2 (en) 2002-04-05 2004-06-29 Immunogen, Inc. Prodrugs of CC-1065 analogs
GB0209467D0 (en) 2002-04-25 2002-06-05 Astrazeneca Ab Chemical compounds
US7538195B2 (en) * 2002-06-14 2009-05-26 Immunogen Inc. Anti-IGF-I receptor antibody
BR0312752A (pt) 2002-07-10 2005-04-26 Applied Research Systems Derivados de benzeno fundido de azolidinona-vinil
US20040092561A1 (en) 2002-11-07 2004-05-13 Thomas Ruckle Azolidinone-vinyl fused -benzene derivatives
AU2003255529B2 (en) 2002-07-10 2008-11-20 Laboratoires Serono Sa Use of compounds for increasing spermatozoa motility
KR20050032110A (ko) 2002-08-02 2005-04-06 이뮤노젠 아이엔씨 신규의 효능을 갖는 탁산을 포함하는 세포독성제 및 그치료용도
US6913748B2 (en) 2002-08-16 2005-07-05 Immunogen, Inc. Cross-linkers with high reactivity and solubility and their use in the preparation of conjugates for targeted delivery of small molecule drugs
AU2003255845A1 (en) 2002-08-22 2004-03-11 Piramed Limited Phosphadidylinositol 3,5-biphosphate inhibitors as anti-viral agents
EA010570B1 (ru) 2002-11-07 2008-10-30 Иммьюноджен, Инк. Антитело к cd33 и способы его применения
FR2850654A1 (fr) 2003-02-03 2004-08-06 Servier Lab Nouveaux derives d'azepines tricycliques, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
RU2338747C2 (ru) 2003-03-31 2008-11-20 Каунсил Оф Сайентифик Энд Индастриал Рисерч ДИМЕРЫ ПИРРОЛО [2, 1-c][1, 4] БЕНЗОДИАЗЕПИНА В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ СРЕДСТВ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ
RU2314309C2 (ru) * 2003-03-31 2008-01-10 Каунсил Оф Сайентифик Энд Индастриал Рисерч Пирроло [2.1-c][1.4] бензодиазепины, способ их получения и фармацевтическая композиция на их основе
WO2004087716A1 (en) 2003-03-31 2004-10-14 Council Of Scientific And Industrial Research Pyrrolo[(2,1-c)(1,4) benzodiazepines dimers as antitumour agents and process thereof
AU2003215821B2 (en) 2003-03-31 2009-04-23 Council Of Scientific And Industrial Research Non-cross-linking pyrrolo(2,1-c)(1,4)benzodiazepines as potential antitumour agents and process thereof
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
EP1675857B1 (en) 2003-10-22 2011-07-13 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Pyrrolobenzodiazepine derivatives, compositions comprising the same and methods related thereto
GB0404578D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
JP5166861B2 (ja) 2004-03-09 2013-03-21 スピロゲン リミティッド ピロロベンゾジアゼピン
GB0410725D0 (en) 2004-05-13 2004-06-16 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepine therapeutic agents
KR101200133B1 (ko) 2004-06-01 2012-11-13 제넨테크, 인크. 항체 약물 접합체 및 방법
CA2580141C (en) 2004-09-23 2013-12-10 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
GB0423653D0 (en) 2004-10-25 2004-11-24 Piramed Ltd Pharmaceutical compounds
EP1817341A2 (en) 2004-11-29 2007-08-15 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibodies and immunoconjugates
US7301019B2 (en) 2005-01-21 2007-11-27 Immunogen, Inc. Method for the preparation of maytansinoid esters
AU2006213662B2 (en) 2005-02-11 2010-08-05 Immunogen, Inc. Process for preparing stable drug conjugates
DK1902131T3 (da) 2005-07-08 2010-03-01 Univ Zuerich Fag-display under anvendelse af cotranslational translokation af fusionspolypeptider
US7772485B2 (en) 2005-07-14 2010-08-10 Konarka Technologies, Inc. Polymers with low band gaps and high charge mobility
ITRM20050416A1 (it) 2005-08-03 2007-02-04 Uni Degli Studi Di Roma Tor Vergata Derivati delle benzodiazepine e loro usi in campo medico.
ATE535529T1 (de) 2005-08-09 2011-12-15 Millennium Pharm Inc Verfahren zur acylierung von maytansinol mit chiralen aminosäuren
BRPI0615049B1 (pt) 2005-08-24 2023-04-25 Immunogen, Inc Processo para a preparação de um conjugado de anticorpo- maitansinóide
ATE427949T1 (de) 2005-10-05 2009-04-15 Spirogen Ltd 4-a4-(5-oxo-2,3,5,11a-tetrahydro-5h-pyrrolo a2, 1-cua1,4ubenzodiazepin-8-yloxy)-butyrylaminou-1 - pyrrol-2-carbonsaurealkylesterderivate und verwandte verbindung zur behandlung einer proliferativen erkrankung
GB0520657D0 (en) 2005-10-11 2005-11-16 Ludwig Inst Cancer Res Pharmaceutical compounds
EP1813614B1 (en) 2006-01-25 2011-10-05 Sanofi Cytotoxic agents comprising new tomaymycin derivatives
US7465724B2 (en) 2006-02-13 2008-12-16 Council Of Scientific And Industrial Research Bis-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine-anthraquinone conjugates and a process for the preparation thereof
BRPI0711249A2 (pt) 2006-05-30 2012-03-13 Genentech, Inc. Anticorpos, polinucleotídeos, vetores, células hospedeira, métodos para fabricar um anticorpo, para detectar a presença de cd2 em uma amostra biológica, para tratar uma disfunção proliferativa de células b, para inibir proliferaçõa de células b, para tratar câncer, para fabricar um composto conjugado anti-corpo-droga. imunoconjugados,composições farmacêuticas, formulações farmacêuticas, conjugado anticorpo-droga, compostos conjugados anti-corpo-droga, teste para detectar células b e artigo de fabricação
EP1864682A1 (en) 2006-06-09 2007-12-12 Sanofi-Aventis Leptomycin derivatives
AU2008251608B2 (en) 2007-05-08 2014-03-27 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-MUC16 antibodies and antibody drug conjugates
ES2435779T3 (es) * 2007-07-19 2013-12-23 Sanofi Agentes citotóxicos que comprenden nuevos derivados de tomaimicina y su uso terapéutico
JP5404624B2 (ja) * 2007-08-01 2014-02-05 カウンスィル オブ サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ 選択的な抗腫瘍薬として有用なピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−グリコシドプロドラッグ
US20100003641A1 (en) 2007-08-15 2010-01-07 Hansen John P Dental crown system
US9365629B2 (en) 2007-09-24 2016-06-14 University Of Zurich Designed armadillo repeat proteins
BRPI0911442A2 (pt) 2008-04-30 2019-03-12 Immunogen, Inc. conjugados potentes e ligantes hidrofílicos
SI2281006T1 (sl) 2008-04-30 2017-12-29 Immunogen, Inc. Premreževalci in njihova uporaba
GB0819095D0 (en) * 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
EP3100745B1 (en) 2009-02-05 2018-04-18 Immunogen, Inc. Novel benzodiazepine derivatives
JP5873335B2 (ja) 2009-02-12 2016-03-01 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド フィブロネクチンｉｉｉ型ドメインに基づくスカフォールド組成物、方法及び使用
ES2513915T3 (es) * 2009-04-24 2014-10-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Inhibidores de la tirosina quinasa de Bruton
EP2485150A1 (en) 2009-05-18 2012-08-08 Shuhei Nishiyama Meta-information sharing distributed database system in virtual single memory storage
EP2486023A4 (en) * 2009-10-06 2014-05-07 Immunogen Inc EFFICIENT CONJUGATES AND HYDROPHILIC BINDER
KR20220017432A (ko) 2010-02-24 2022-02-11 이뮤노젠 아이엔씨 엽산염 수용체 1 항체와 면역접합체 및 이들의 용도
EA024118B1 (ru) * 2010-04-15 2016-08-31 Сиэтл Дженетикс, Инк. Конъюгаты пирролбензодиазепина направленного действия
AU2011239525B2 (en) 2010-04-15 2015-04-09 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
BR112012026213B1 (pt) 2010-04-15 2021-12-28 Medimmune Limited Compostos de pirrolobenzodiazepinas, conjugado das mesmas, composição farmacêutica compreendendo o conjugado e uso do mesmo para o tratamento de uma doença proliferativa
JP5889912B2 (ja) 2010-11-17 2016-03-22 ジェネンテック， インコーポレイテッド アラニニルメイタンシノール抗体コンジュゲート
MY183977A (en) 2011-02-15 2021-03-17 Immunogen Inc Cytotoxic benzodiazepine derivatives
WO2014031566A1 (en) 2012-08-22 2014-02-27 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
JP2015202619A (ja) * 2014-04-14 2015-11-16 独立行政法人 国立印刷局 凹版版面

Also Published As

Publication number Publication date
MX343337B (es) 2016-11-01
CN103687623B (zh) 2017-06-09
JP5826863B2 (ja) 2015-12-02
US20130302359A1 (en) 2013-11-14
IL227963A0 (en) 2013-09-30
CA3034596C (en) 2021-05-25
AU2012231640B2 (en) 2015-07-09
US8889669B2 (en) 2014-11-18
JP2024026207A (ja) 2024-02-28
US8765740B2 (en) 2014-07-01
SG10202007640VA (en) 2020-09-29
CN113896731A (zh) 2022-01-07
EP3053600B1 (en) 2020-01-29
CY1117340T1 (el) 2017-04-26
HUE043976T2 (hu) 2019-09-30
US20190263924A1 (en) 2019-08-29
US9169272B2 (en) 2015-10-27
AU2019264595A1 (en) 2019-12-05
PL2675480T3 (pl) 2019-07-31
US20170044266A1 (en) 2017-02-16
HUE028736T2 (en) 2017-01-30
AU2017268554A1 (en) 2017-12-21
US20120238731A1 (en) 2012-09-20
US20180002440A1 (en) 2018-01-04
RS54667B1 (en) 2016-08-31
IL227964A (en) 2017-09-28
MX346635B (es) 2017-03-27
LT2675480T (lt) 2019-04-10
JP2018027966A (ja) 2018-02-22
MY183977A (en) 2021-03-17
US9868791B2 (en) 2018-01-16
RS58620B1 (sr) 2019-05-31
TWI617555B (zh) 2018-03-11
RU2017131902A (ru) 2019-02-06
JP2016040298A (ja) 2016-03-24
US9353127B2 (en) 2016-05-31
KR20200140939A (ko) 2020-12-16
US10364294B2 (en) 2019-07-30
JP6703632B2 (ja) 2020-06-03
EP3666289A1 (en) 2020-06-17
AU2016200752A1 (en) 2016-02-25
US20160324980A1 (en) 2016-11-10
US9840564B2 (en) 2017-12-12
USRE49918E1 (en) 2024-04-16
CN107335061A (zh) 2017-11-10
ME02381B (me) 2016-06-20
JP6049642B2 (ja) 2016-12-21
JP2020143102A (ja) 2020-09-10
BR112013020540B1 (pt) 2020-12-29
SI2675480T1 (sl) 2019-05-31
EP2675479A1 (en) 2013-12-25
ZA201704808B (en) 2020-11-25
PL2675479T3 (pl) 2016-09-30
ES2717657T3 (es) 2019-06-24
DK2675479T3 (en) 2016-04-11
WO2012112708A1 (en) 2012-08-23
AU2012231640A1 (en) 2013-05-02
KR20200141534A (ko) 2020-12-18
HK1186686A1 (zh) 2014-03-21
US20180037659A1 (en) 2018-02-08
SG191965A1 (en) 2013-08-30
HRP20160164T1 (hr) 2016-03-11
KR20140010067A (ko) 2014-01-23
RU2013141829A (ru) 2015-03-27
CA2824864C (en) 2019-04-09
EP2675479B1 (en) 2016-01-13
BR112013019913A2 (pt) 2017-10-17
CA2824864A1 (en) 2012-09-27
CN103687623A (zh) 2014-03-26
SG10201601046QA (en) 2016-03-30
IL227963A (en) 2017-08-31
US20160108129A1 (en) 2016-04-21
US9534000B2 (en) 2017-01-03
MX2013009417A (es) 2014-08-21
RU2748733C2 (ru) 2021-05-31
EP2675481A1 (en) 2013-12-25
SMT201600099B (it) 2016-04-29
SI2675479T1 (sl) 2016-04-29
CA2825919A1 (en) 2012-08-23
IL227964A0 (en) 2013-09-30
AU2016200752B2 (en) 2017-08-31
CN107335061B (zh) 2021-09-07
CN103702686B (zh) 2016-11-23
AU2012217719A1 (en) 2013-04-18
ZA201305386B (en) 2015-11-25
KR20190051081A (ko) 2019-05-14
JP6216356B2 (ja) 2017-10-18
EP3053600A1 (en) 2016-08-10
WO2012112687A1 (en) 2012-08-23
US20120244171A1 (en) 2012-09-27
US10179818B2 (en) 2019-01-15
JP2019142928A (ja) 2019-08-29
BR112013019913B1 (pt) 2021-01-05
AU2012217719B2 (en) 2015-11-05
RU2017117634A (ru) 2018-11-01
IL254055A0 (en) 2017-10-31
KR20140010076A (ko) 2014-01-23
BR112013020540A2 (pt) 2017-03-21
CN103702686A (zh) 2014-04-02
RU2017131902A3 (uk) 2020-11-05
CN107050468A (zh) 2017-08-18
KR20190089048A (ko) 2019-07-29
ES2567418T3 (es) 2016-04-22
NZ613162A (en) 2015-10-30
PT2675480T (pt) 2019-04-15
US10570212B2 (en) 2020-02-25
US20150099874A1 (en) 2015-04-09
IL293365A (en) 2022-07-01
JP2014506892A (ja) 2014-03-20
SG191955A1 (en) 2013-08-30
CY1121532T1 (el) 2020-05-29
HRP20190576T1 (hr) 2019-05-17
JP6526138B2 (ja) 2019-06-05
NZ613121A (en) 2015-05-29
JP2014521591A (ja) 2014-08-28
MX2013009420A (es) 2013-12-16
RU2017117634A3 (uk) 2020-08-26
RU2631498C2 (ru) 2017-09-25
CA3034596A1 (en) 2012-09-27
IL254128A0 (en) 2017-10-31
US9434748B2 (en) 2016-09-06
CA3110544A1 (en) 2012-09-27
JP2022009073A (ja) 2022-01-14
MY169448A (en) 2019-04-11
US20140088089A1 (en) 2014-03-27
DK2675480T3 (en) 2019-04-15
WO2012128868A1 (en) 2012-09-27
AU2017268554B2 (en) 2019-08-15
RU2621035C2 (ru) 2017-05-31
CA2825919C (en) 2018-05-01
RU2013142179A (ru) 2015-03-27
EP3498303A1 (en) 2019-06-19
EP2675480B1 (en) 2018-12-26
IL279304A (en) 2021-01-31
EP2675480A1 (en) 2013-12-25
IL279304B (en) 2022-07-01
TW201309674A (zh) 2013-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA120696C2 (uk) Спосіб одержання кон'югатів
AU2021290341B2 (en) Antibody drug conjugates (ADCs) and antibody prodrug conjugates (APDCs) with enzymatically cleavable groups
WO2023078021A1 (en) Bcma monoclonal antibody and the antibody-drug conjugate
AU2022215217B2 (en) Conjugation linkers containing 2,3-diaminosuccinyl group
KR101986404B1 (ko) 피롤로벤조디아제핀-항체 컨주게이트
DK2917195T5 (en) SPLICEOSTATINAL ANALOGES
ES2832527T3 (es) Conjugados de anticuerpos modificados con cisteína
RU2669807C2 (ru) Бифункциональные цитотоксические агенты
CA2934617A1 (en) Antibody drug conjugates (adcs) with kinesin spindle protein (ksp)
TWI757759B (zh) 細胞毒性苯并二氮呯衍生物
CN111757757A (zh) 吡咯并苯并二氮呯抗体共轭物
CA3014224A1 (en) Condensed benzodiazepine-indoline derivatives and processes to prepare said derivatives
CA2970565A1 (en) Antibody-drug conjugates (adcs) of ksp inhibitors with aglycosylated anti-tweakr antibodies
EA017196B1 (ru) Цитотоксические агенты, включающие новые производные томаймицина, конъюгаты, способы получения конъюгатов, фармацевтическая композиция, включающая конъюгат, и их терапевтическое применение
CA2957964A1 (en) Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
UA116524C2 (uk) Спосіб одержання кон'югата антитіло-майтансиноїд
CA2990408A1 (en) Antibody drug conjugates of kinesin spindel protein (ksp) inhibitors with anti-b7h3-antibodies
KR20150085814A (ko) 피롤로벤조디아제핀-항체 컨주게이트
JP2013506709A5 (uk)
JP6782250B2 (ja) Ｃｔｉファーマコフォアを含有する二官能性細胞毒性剤
CN106749665A (zh) Cc‑1065类似物和双功能接头的新型缀合物
CN107148285A (zh) 吡咯并苯并二氮杂*‑抗体缀合物
CN107921146A (zh) 纺锤体驱动蛋白(ksp)抑制剂与抗‑cd123的抗体的抗体药物缀合物(adc)
CN107921145A (zh) Ksp抑制剂与抗‑tweakr抗体的抗体药物缀合物（adc）
TW202400266A (zh) 配體藥物偶聯物及其應用