UA116524C2 - Спосіб одержання кон'югата антитіло-майтансиноїд - Google Patents

Спосіб одержання кон'югата антитіло-майтансиноїд Download PDF

Info

Publication number
UA116524C2
UA116524C2 UAA201312640A UAA201312640A UA116524C2 UA 116524 C2 UA116524 C2 UA 116524C2 UA A201312640 A UAA201312640 A UA A201312640A UA A201312640 A UAA201312640 A UA A201312640A UA 116524 C2 UA116524 C2 UA 116524C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
mixture
maytansinoid
cell
hours
Prior art date
Application number
UAA201312640A
Other languages
English (en)
Inventor
Сіньфан Лі
Джаред М. Уорфул
Original Assignee
Іммуноджен, Інк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Іммуноджен, Інк. filed Critical Іммуноджен, Інк.
Priority claimed from PCT/US2012/031243 external-priority patent/WO2012135517A2/en
Publication of UA116524C2 publication Critical patent/UA116524C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A61K47/6819—Plant toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6867—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of a blood cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
    • C07K1/113—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides without change of the primary structure
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Abstract

Винахід належить до способу одержання кон’югата антитіло-майтансиноїд, що включає приведення антитіла і майтансиноїду в контакт з утворенням першої суміші, що включає антитіло і майтансиноїд, потім приведення першої суміші в контакт з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв’язки й включає лінкер, у розчині, що має рівень рН від приблизно 4 до приблизно 9, з одержанням другої суміші, що включає (i) кон’югат антитіло-майтансиноїд, де антитіло є хімічно з’єднаним за допомогою лінкера з майтансиноїдом, (ii) незв’язаний майтансиноїд, і (iii) побічні продукти реакції; і очищення другої суміші, що включає кон’югат антитіло-майтансиноїд, для одержання очищеного кон’югата антитіло-майтансиноїд.

Description

ПЕРЕХРЕСНЕ ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ
ІО00О1) За даною заявкою вимагається перевага відносно попередньої заявки на патент США
Моб1/468997 від 29 березня 2011 р., і попередньої заявки на патент США Моб1/468981 від 29 березня 2011 р., які включені в даний документ за допомогою посилання.
РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
І0002| Кон'югати антитіло-препарат (КАП), які застосовують у лікуванні раку й інших захворювань, звичайно складаються із трьох різних елементів: клітиннозв'язувального агента; лінкера; й цитотоксичного агента. Стандартний спосіб кон'югації клітиннозв'язувального агента, такого як антитіло, з цитотоксичним агентом включає два різні етапи реакції з антитілом. На першому етапі реакції (етап модифікації) антитіло реагує з гетеробіфункціональним лінкером з одержанням модифікованого лінкером антитіла. Потім у деяких випадках продукт модифікованого антитіла очищають від надлишку лінкера або гідролізованого реагенту лінкера.
На другому етапі реакції (етап кон'югації) модифіковане лінкером антитіло реагує із цитотоксичним агентом, що містить реакційну групу, таку як тіол, для одержання кон'югата антитіло-цитотоксичний агент, який знову очищають на додатковому етапі очищення. 0003) Способи, які були раніше описані для виробництва кон'югатів антитіло-цитотоксичний агент, є складними з тієї причини, що вони ускладнені етапами, які є трудомісткими для проведення або одержання імунокон'югатів, що є менш чистими або менш стабільними, ніж оптимально необхідні. Таким чином, бажаними є модифікація або ліквідація одного або декількох етапів виробництва при покращенні якості продукту, наприклад, чистоти й/або стабільності. 0004) На підставі вищевикладеного, існує необхідність у науковій розробці покращеного способу одержання кон'югатів клітиннозв'язувального агента-цитотоксичного агента, що мають по суті високий ступінь чистоти, який можна одержати, уникнувши трудомістких етапів і скоротивши час і вартість для користувача. Винахід описує подібний спосіб. Ці й інші переваги винаходу, а також додаткові характеристики винаходу стануть очевидними з представленого в даному документі опису винаходу.
КОРОТКА СУТНІСТЬ ВИНАХОДУ
ЇО00О5| Винахід описує спосіб одержання кон'югата клітиннозв'язувальний агент-
Зо цитотоксичний агент, що включає етап контакту клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом з утворенням першої суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент, а потім контакт першої суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент, з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки й включає лінкер, у розчині, який має рівень рН від приблизно 4 до приблизно 9, з одержанням суміші, що включає () кон'югат клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент, при цьому клітиннозв'язувальний агент є хімічно з'єднаним за допомогою лінкера із цитотоксичним агентом, (її) незв'язаний цитотоксичний агент, і (ії) побічні продукти реакції. Спосіб може додатково включати етап очищення суміші для одержання очищеного кон'югата клітиннозв'язувальний агент- цитотоксичний агент. 0006) Способи згідно з даним винаходом описують кон'югат клітиннозв'язувальний агент- цитотоксичний агент із високою чистотою й/або стабільністю. Для одержання кон'югата з високою чистотою й/або стабільністю важливо, щоб спочатку цитотоксичний агент контактував із клітиннозв'язувальним агентом з утворенням суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент, перед контактом суміші з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки.
І0007| Даний винахід також включає кон'югат клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент, одержаний відповідно до описаних у даному документі способів.
ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
ІЇ0008| Винахід описує одноетапний спосіб одержання кон'югата клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент. Спосіб включає контакт клітиннозв'язувального агента (наприклад, антитіла) із цитотоксичним агентом з утворенням першої суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент, а потім контакт першої суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент, з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки й включає лінкер, у розчині, що має рівень рН від приблизно 4 до приблизно 9, для одержання другої суміші, що включає кон'югат клітиннозв'язувальний агент- цитотоксичний агент, незв'язаний цитотоксичний агент і побічні продукти реакції, при цьому клітиннозв'язувальний агент є хімічно з'єднаним за допомогою лінкера із цитотоксичним агентом. Потім другу суміш піддають очищенню з одержанням очищеного кон'югата клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент. бо ІЇ0009| В одному варіанті втілення винаходу контакт здійснюють забезпеченням клітиннозв'язувального агента, а потім контакту клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом з утворенням першої суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотокКсичний агент, а потім контакту першої суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент, з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки. Наприклад, в одному варіанті втілення винаходу клітиннозв'язувальний агент надають в реакційній посудині, цитотоксичний агент додають у реакційну посудину (забезпечуючи, тим самим, контакт із клітиннозв'язувальним агентом), а потім до суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент, додають біфункціональний реагент, що утворює перехресні зв'язки (забезпечуючи, тим самим, контакт суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент). В одному варіанті втілення винаходу клітиннозв'язувальний агент надають в реакційній посудині, і цитотоксичний агент додають у реакційну посудину безпосередньо після внесення клітиннозв'язувального агента в посудину. В іншому варіанті втілення винаходу клітиннозв'язувальний агент надають в реакційній посудині, і цитотокКсичний агент додають у реакційну посудину через інтервал часу після внесення клітиннозв'язувального агента в посудину (наприклад, приблизно через 5 хвилин, приблизно 10 хвилин, приблизно 20 хвилин, приблизно 30 хвилин, приблизно 40 хвилин, приблизно 50 хвилин, приблизно 1 годину, приблизно 1 день або більше після внесення клітиннозв'язувального агента в посудину).
Цитотоксичний агент можна додавати швидко (тобто протягом короткого інтервалу часу, такого як приблизно 5 хвилин, приблизно 10 хвилин) або повільно (наприклад, за допомогою помпи). 0010) Потім суміш, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент, можна піддавати контакту з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки, безпосередньо після контакту клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом або трохи пізніше (наприклад, від приблизно 5 хвилин до приблизно 8 годин або більше) після контакту клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом. Наприклад, в одному варіанті втілення винаходу біфункціональний реагент, що утворює перехресні зв'язки, додають до суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент, безпосередньо після додавання цитотоксичного агента в реакційну посудину, що містить клітиннозв'язувальний агент. Як варіант, потім суміш, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент, можна піддавати контакту з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки, через
Ко) приблизно 5 хвилин, приблизно 10 хвилин, приблизно 20 хвилин, приблизно 30 хвилин, приблизно 1 годину, приблизно 2 години, приблизно З години, приблизно 4 години, приблизно 5 годин, приблизно 6 годин, приблизно 7 годин, приблизно 8 годин або більше після контакту клітиннозв'язувального агента з цитотоксичним агентом. 0011) В іншому варіанті втілення винаходу цитотоксичний агент і біфункціональний реагент додають протягом декількох циклів (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або більше циклів). Наприклад, винахід описує спосіб, що складається з етапів: а) контакт клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом з утворенням першої суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент; і потім контакт першої суміші з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки й включає лінкер, у розчині, що має рівень рН від приблизно 4 до приблизно 9, для одержання другої суміші, що включає кон'югат клітиннозв'язувальний агент- цитотоксичний агент, незв'язаний цитотоксичний агент і побічні продукти реакції, при цьому клітиннозв'язувальний агент є хімічно з'єднаним за допомогою лінкера із цитотоксичним агентом; б) контакт другої суміші з цитотоксичним агентом з утворенням третьої суміші; а потім контакт третьої суміші з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки, при рн від приблизно 4 до приблизно 9 з одержанням четвертої суміші; і в) очищення четвертої суміші з одержанням очищеного кон'югата клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент. В одному варіанті втілення винаходу етап б) проводять після інтервалу часу (наприклад, приблизно через 1 годину, приблизно 2 години, приблизно З години або більше) після етапу а). В іншому варіанті втілення винаходу етап б) може бути повторений декілька разів (наприклад, 1, 2, 3, 4 або більше разів) перед проведенням етапу в). Додатковий етап б) може бути проведений після інтервалу часу(наприклад, приблизно 1 година, приблизно 2 години, приблизно З години або більше) після початкового етапу б).
ІЇ0012| В іншому варіанті втілення винаходу біфункціональний реагент, що утворює перехресні зв'язки, додають перед повним додаванням цитотоксичного агента. Наприклад, в одному варіанті втілення винаходу цитотоксичний агент додають до клітиннозв'язувального агента безупинно протягом інтервалу часу (наприклад, протягом приблизно 5 хвилин, приблизно 10 хвилин, приблизно 30 хвилин, приблизно 1 години, приблизно 2 годин, приблизно
З годин або більше) з утворенням суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент. Перед завершенням додавання цитотоксичного агента, в суміш, що бо включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент додають біфункціональний реагент,
що утворює перехресні зв'язки, за умови, що в будь-який час цитотоксичний агент перебуває в молярному надлишку в порівнянні з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки. В одному варіанті втілення винаходу біфункціональний реагент, що утворює перехресні зв'язки, додають безупинно протягом інтервалу часу (наприклад, протягом приблизно 5 хвилин, приблизно 10 хвилин, приблизно 30 хвилин, приблизно 1 години, приблизно 2 годин, приблизно
З годин або більше). 0013) Після того як суміш, що містить клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент, проконтактує з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки, реакції дають відбутися протягом приблизно 1 години, приблизно 2 годин, приблизно З годин, приблизно 4 годин, приблизно 5 годин, приблизно 6 годин, приблизно 7 годин, приблизно 8 годин, приблизно 9 годин, приблизно 10 годин, приблизно 11 годин, приблизно 12 годин, приблизно 13 годин, приблизно 14 годин, приблизно 15 годин, приблизно 16 годин, приблизно 17 годин, приблизно 18 годин, приблизно 19 годин, приблизно 20 годин, приблизно 21 години, приблизно 22 годин, приблизно 23 годин, приблизно 24 годин або більше (наприклад, приблизно 30 годин, приблизно 35 годин, приблизно 40 годин, приблизно 45 годин або приблизно 48 годин).
Ї0014| Контакт клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом, а потім з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки, (тобто етап реакції) відбувається в розчині, що має рівень рН від приблизно 4 до приблизно 9 (наприклад, приблизно 4, приблизно 4,5, приблизно 5, приблизно 5,5, приблизно б, приблизно 6,5, приблизно 7, приблизно 7,5, приблизно 8, приблизно 8,5 або приблизно 9). В одному варіанті втілення винаходу етап реакції відбувається в розчині, що має рівень рН приблизно б або менше (наприклад, від приблизно 4 до приблизно б, від приблизно 4 до приблизно 5,5 або від приблизно 4,5 до приблизно 5,5). 0015) В іншому варіанті втілення винаходу спосіб згідно з винаходом включає контакт клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом, а потім з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки, у розчині, що має рівень рН приблизно 6 або більше (наприклад, від приблизно 6 до приблизно 9, від приблизно 6 до приблизно 7, від приблизно 7 до приблизно 9, від приблизно 7 до приблизно 8,5, від приблизно 7,5 до приблизно 8.5, від приблизно 7,5 до приблизно 8,0, від приблизно 8,0 до приблизно 9,0, або від приблизно 8,5 до приблизно 9,0).
Наприклад, спосіб згідно з винаходом включає контакт клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом, а потім з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки, у розчині, що має рівень рН приблизно 6,0, приблизно 6,1, приблизно 6,2, приблизно 6,3, приблизно 6,4, приблизно 6,5, приблизно 6,6, приблизно 6,7, приблизно 6,8, приблизно 6,9, приблизно 7,0, приблизно 7,1, приблизно 7,2, приблизно 7,3, приблизно 7,4, приблизно 7,5, приблизно 7,6, приблизно 7,7, приблизно 7,8, приблизно 7,9, приблизно 8,0, приблизно 8,1, приблизно 8,2, приблизно 8,3, приблизно 8,4, приблизно 8,5, приблизно 8,6, приблизно 8,7, приблизно 8,8, приблизно 8,9 або приблизно 9,0. У специфічному варіанті втілення винаходу спосіб згідно з винаходом включає контакт клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом і біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки, у розчині, що має рівень рН приблизно 7,8 (наприклад, рН від 7,6 до 8,0 або рнН від 7,7 до 7,9). 0016) Спосіб згідно з винаходом включає проведення одноетапної реакції ( тобто контакт клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом, а потім з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки) за будь-якої придатної температури, відомої в науці. Наприклад, одноетапна реакція може виникнути за температури приблизно 20"С або менше (наприклад, за температури від приблизно -107С (за умови, що розчин захищений від заморожування, наприклад, присутністю органічного розчинника, використовуваного для розчинення цитотоксичного агента й біфункціонального реагенту, що утворює перехресні зв'язки) до приблизно 20"С, від приблизно 0"С до приблизно 18"С, від приблизно 4"С до приблизно 16"С), за кімнатної температури (наприклад, від приблизно 20"7С до приблизно 30"С або від приблизно 20"С до приблизно 25"С), або за підвищеної температури (наприклад, від приблизно 307С до приблизно 37"С). В одному варіанті втілення винаходу контакт клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом і біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки, відбувається за температури від приблизно 167С до приблизно 24"С (наприклад, приблизно 16"С, приблизно 17"С, приблизно 18"С, приблизно 197С, приблизно 20"7С, приблизно 21"7С, приблизно 22"С, приблизно 23"С, приблизно 24"С або приблизно 257С).
І0017| В іншому варіанті втілення винаходу контакт клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом, а потім з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки, відбувається за температури приблизно 157С або менше (наприклад, від приблизно -107С до приблизно 15"С, або від приблизно 0"С до приблизно 15"С). У цьому відношенні спосіб згідно з бо винаходом включає контакт клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом, а потім з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки, за температури приблизно 157С, приблизно 14"С, приблизно 13"С, приблизно 12"С, приблизно 11"С, приблизно 10"С, приблизно 9"С, приблизно 8"С, приблизно 7"С, приблизно 6"С, приблизно 5"С, приблизно 4"С, приблизно 3"С, приблизно 2"С, приблизно 1"С, приблизно 0"С, приблизно -17С, приблизно -2"С, приблизно -3"С, приблизно -47"С, приблизно -57"С, приблизно -67"С, приблизно -7"С, приблизно -87С, приблизно -9"С або приблизно -107С, за умови, що розчин захищений від заморожування, наприклад, присутністю органічного розчинника (-ів), використовуваного (-их) для розчинення біфункціонального реагенту, що утворює перехресні зв'язки. В одному варіанті втілення винаходу спосіб згідно з винаходом включає контакт клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом, а потім з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки, за температури від приблизно -107С до приблизно 15"С, від приблизно 0"С до приблизно 157С, від приблизно 0"С до приблизно 10"С, від приблизно 0"С до приблизно 5"С, від приблизно 57С до приблизно 15"С, від приблизно 10"7С до приблизно 15" або від приблизно 5"С до приблизно 107"С. В іншому варіанті втілення винаходу спосіб згідно з винаходом включає контакт клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом, а потім з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки, за температури приблизно 10"С (наприклад, за температури від приблизно 8"С до 12"С або за температури від 9"С до 117).
І0018| В одному варіанті втілення винаходу спосіб згідно з винаходом включає контакт клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом, а потім з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки, у розчині, що має високий рівень рН (наприклад, приблизно 7 або вище), за низької температури (наприклад, приблизно 15"С або менше). Наприклад, в одному варіанті втілення винаходу спосіб згідно 3 винаходом включає контакт клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом, а потім з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки, у розчині, що має рівень рН приблизно 7,5 за температури приблизно 15"С, у розчині, що має рН приблизно 7,8 за температури приблизно 10"С, у розчині, що має рН приблизно 8,2 за температури приблизно 0"С, або в розчині, що має рН приблизно 8,5 за температури приблизно 0"С. В іншому варіанті втілення винаходу спосіб згідно з винаходом включає контакт клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом, а потім з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки, у розчині, що має рівень рН від 7,0 до 8,5 (наприклад, рН від 7,5 до 8,0) за температури від 5"7С до 15760. 0019) В одному варіанті втілення винаходу спосіб згідно з винаходом додатково включає етап гасіння для гасіння будь-якого цитотоксичного агента, що не прореагував і/або біфункціонального реагенту, що утворює перехресні зв'язки, який не прореагував . Етап гасіння проводять перед очищенням кон'югата клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент.
Наприклад, спосіб згідно з винаходом включає (а) контакт клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом з утворенням суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент, а потім контакт суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки й включає лінкер, у розчині, що має рівень рН від приблизно 4 до приблизно 9, для одержання суміші, що включає () кон'югат клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент, при цьому клітиннозв'язувальний агент є хімічно з'єднаним за допомогою лінкера із цитотоксичним агентом, (її) незв'язаний цитотоксичний агент, і (ії) побічні продукти реакції, (б) гасіння суміші, одержаної на етапі (а) для гасіння будь-якого цитотоксичного агента, що не прореагував і/або біфункціонального реагенту, що утворює перехресні зв'язки, який не прореагував, і (в) очищення суміші для одержання очищеного кон'югата клітиннозв'язувальний агент- цитотоксичний агент.
І0020| В одному варіанті втілення винаходу суміш гасять шляхом контакту суміші з гасильним агентом. У контексті даного винаходу «гасильний агент» означає реагент, який реагує з незв'язаним цитотоксичним агентом і/або біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки.
І0021) В одному варіанті втілення винаходу для гарантії того, що в цитотоксичному агенті погашена будь-яка група, що не прореагувала (така як тіол), може використовуватися малеїмідні або галоацетильні гасильні агенти, такі як 4-малеіїмідомасляна кислота, 3- малеіїмідопропіонова кислота, М-етилмалеїмід, йодоацетамід або йодоацетамідопропіонова кислота. Етап гасіння може допомогти запобігти димеризації цитотоксичного агента, зокрема, цитотоксичного агента, що має тіолову групу, яка не прореагувала (такого як ОМ').
Димеризований цитотоксичний агент може бути важко видалити. Етап гасіння також може звести до мінімуму будь-яку небажану реакцію взаємодії тіол-дисульфід з дисульфідними групами нативного антитіла. Після гасіння полярними, зарядженими тіол-гасильними бо реагентами (такими як 4-малеімідомасляна кислота або З-малеімідопропіонова кислота),
надлишковий цитотоксичний агент, що не прореагував, перетворюють на полярний, заряджений, водорозчинний аддукт, який може бути легко відділений від ковалентно- приєднаного кон'югата в ході етапу очищення. Також може використовуватися гасіння неполярними й нейтральними тіол-гасильними реагентами.
І0022| В одному варіанті втілення винаходу суміш гасять контактом суміші з гасильним реагентом, який реагує з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки, який не прореагував. Наприклад, до суміші можна додати нуклеофіли для гасіння будь-якого біфункціонального реагенту, що утворює перехресні зв'язки, який не прореагував. Нуклеофіл краще є нуклеофілом, що містить аміногрупу, таким як лізин, таурин і гідроксиламін.
І0023| У кращому варіанті втілення винаходу реакції (тобто контакту клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом, а потім з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки) дають відбутися перед контактом суміші з гасильним реагентом. У цьому відношенні гасильний реагент додають до суміші приблизно через проміжок часу від 1 години до приблизно 48 годин (наприклад, приблизно через 1 годину, приблизно 2 години, приблизно З години, приблизно 4 години, приблизно 5 годин, приблизно 6 годин, приблизно 7 годин, приблизно 8 годин, приблизно 9 годин, приблизно 10 годин, приблизно 11 годин, приблизно 12 годин, приблизно 13 годин, приблизно 14 годин, приблизно 15 годин, приблизно 16 годин, приблизно 17 годин, приблизно 18 годин, приблизно 19 годин, приблизно 20 годин, приблизно 21 година, приблизно 22 години, приблизно 23 години, приблизно 24 години, або від приблизно 25 годин до приблизно 48 годин) після того, як суміш, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент, проконтактувала з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки. (00241 Спосіб згідно з винаходом у деяких випадках може включати додавання сахарози до етапу реакції (тобто контакту клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом, а потім з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки) для підвищення розчинності й відновлення кон'югатів клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент. Бажаним є додавання сахарози в концентрації від приблизно 0,195 (мас./об.) до приблизно 2095 (мас./об.) (наприклад, приблизно 0,195 (мас./об.), 195 (мас./об.), 595 (мас./об.), 1095 (мас./об.), 1595 (мас./об.) або 2095 (мас./об.)). Краще, сахарозу додають у концентрації від приблизно 195 (мас./об.) до приблизно
Зо 1095 (мас./о6.) (наприклад, приблизно 0,595 (мас./об.), приблизно 195 (мас./об.), приблизно 1,590 (мас./о0б.), приблизно 295 (мас./0б.), приблизно 395 (мас./0б.), приблизно 495 (мабс./об.), приблизно 595 (мас./об.), приблизно 695 (мас./об.), приблизно 795 (мас./06б.), приблизно 895 (мас./о0б.), приблизно 995 (мас./об.), приблизно 1095 (мас./об.) або приблизно 1195 (мас./об.)).
Крім того, етап реакції також може включати додавання буферного агента. Може використовуватися будь-який придатний буферний агент, відомий у науці. Придатні буферні агенти включають, наприклад, цитратний буфер, ацетатний буфер, сукцинатний буфер і фосфатний буфер. В одному варіанті втілення винаходу буферний агент вибирають з групи, що складається З НЕРРЗО (М-(2-гідроксиетил)піперазин-М'-(2-гідроксипропансульфонової кислоти)), РОРБЗО (піперазин-1,4-біс-(2-гідрокси-пропансульфонової кислоти) дегідрату), НЕРЕ5 (4-(2-гідроксиетил)піиперазин-1-етансульфонової кислоти), НЕРРБЗ (ЕРРБ) (4-(2- гідроксиетил)піперазин-1-пропансульфонової кислоти), ТЕ (М-Ігрис(гідроксиметил)метил|-2- аміноетансульфонової кислоти) і їх комбінацій.
І0025| Після етапу реакції кон'югат клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент піддають етапу очищення. У цьому відношенні кон'югат клітиннозв'язувальний агент- цитотоксичний агент може бути очищений від інших компонентів суміші (наприклад, незв'язаного цитотоксичного агента й побічних продуктів реакції) з використанням фільтрації тангенціальними потоками (ФТП), що являє собою спосіб фільтрації тангенціальними потоками на основі мембрани, неадсорбційної хроматографії, адсорбційної хроматографії, адсорбційної фільтрації, вибіркової преципітації або будь-якого іншого придатного способу очищення, а також їх комбінацій. В одному варіанті втілення винаходу кон'югат клітиннозв'язувальний агент- цитотоксичний агент очищають із використанням одного етапу очищення (наприклад, ФТП).
Краще, кон'югат очищають і включають у відповідну композицію з використанням одного етапу очищення (наприклад, ФТП). В іншому варіанті втілення винаходу кон'югат клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент очищають із використанням двох послідовних етапів очищення. Наприклад, спочатку кон'югат може бути очищений вибірковою преципітацією, адсорбційною фільтрацією, адсорбційною хроматографією або неадсорбційною хроматографією, з наступним очищенням ФТП. Фахівцю в даній галузі буде очевидним, що очищення кон'югата клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент дозволяє виділити стабільний кон'югат, що включає клітиннозв'язувальний агент, хімічно з'єднаний із 60 цитотоксичним агентом.
(0026) Для очищення можуть використовуватися будь-які придатні системи ФТП, включаючи систему типу Реїїсоп (МійПіроге, ВіПегіса, МА), касетну систему Запосоп (Запогіиз АС, Еадежмоод,
МУ) і систему типу Сепігазеце (Раї! Согр., Еабві НІЇЇ5, М).
Ї0027| Для очищення може використовуватися будь-яка придатна адсорбційна хроматографічна смола. Кращі адсорбційні хроматографічні смоли включають гідроксиапатитну хроматографію, гідрофобну хроматографію з індукційним зарядом (НСІС), хроматографію з гідрофобною взаємодією (НІС), іонообмінну хроматографію, іонообмінну хроматографію з комбінованим режимом, афінну хроматографію з іммобілізованим металом (ІМАС), лігандну хроматографію з барвником, афінну хроматографію, хроматографію з оберненими фазами і їх комбінації. Приклади придатних гідроксиапатитних смол включають керамічний гідроксиапатит (СНТ тип І і тип ІЇ, Віо-РБаєй І арогайогіе5, Негсшев, СА), гідроксиапатит НА ОйКгодеї! (Раї! Согр., Еаві
Нії5, МУ) ії керамічний фторапатит (СЕТ тип І ї тип ІІ, Віо-Вай І арогаюгев, Негсціев5, СА).
Прикладом придатної смоли НСІС є смола МЕР Нурегсеї! (Раї! Согр., Еаві Ніїї5, МУ). Приклади придатних смол НІС включають бутил-сефарозні, гексил-сефарозні, феніл-сефарозні й октил- сефарозні смоли (всі виробництва СЕ Неаїйсаге, Різсаїаулау, МО), а також смоли Масго-ргер метил і Масго-Ргер І-бутил (Віогай І арогафогіе5, Негсціе5, СА). Приклади придатних іонообмінних смол включають смоли 5Р-бЗерпагозєе, СМ-Зерпагозе і О-Зерпагозе (всі виробництва СЕ
Неансаге, Різсаїаугау, МУ) ї смолу Опозрпеге З (Віо-Вай І абогайтієв, Негсшез, СА). Приклади придатних іонообмінних смол змішаного режиму включають смолу ВаКегтопа АВх (УТ Вакег",
РиШіреригту МУ). Приклади придатних смол ІМАС включають хелатну сефарозну смолу (СЕ
Неайрсаге, Різсагїаулау, МУ)) і смолу Ргоїїпіку ІМАС (Віо-Кай І арогайюгіє5, Негсціе5, СА). Приклади придатних лігандних смол з барвником включають блакитну сефарозну смолу (СЕ Неаййсаге,
Різсагаулау, МУ) ії смолу АЙі-де! Віше (Віо-Кай І арогафогіє5, Негсціе5, СА). Приклади придатних афінних смол включають смолу сефарози й білка А (наприклад, Мабзеїесі, СЕ Неайнсаге,
Різсаїамау, МУ), при цьому клітиннозв'язувальний агент є антитілом, і лектин-афінні смоли, наприклад, лектин-сефарозна смола епі (ЗЕ Неакрсаге, Різсайажау, М), при цьому клітиннозв'язувальний агент містить відповідні сайти зв'язування лектину. З іншого боку, може використовуватись антитіло, специфічне до клітиннозв'язувального агента. Таке антитіло може бути іммобілізоване, наприклад, смолою Зерпагозе 4 Рабві Ріом/ (СЕ Неаййсаге, Різсаїамау, МУ).
Зо Приклади придатних смол з оберненими фазами включають смоли С4, С8 і С18 (Сгасе Муадас,
Незрегїіа, СА).
Ї0028| Для очищення може використовуватися будь-яка придатна неадсорбційна хроматографічна смола. Приклади придатних неадсорбційних хроматографічних смол включають, але не обмежуються перерахованим, смоли ЗЕРНАЮЕХ "М (3-25, (3-50, (-100,
ЗЕРНАСЕХІ "м (наприклад, 5-200 і 5-300), смоли ЗОРЕКОЕХ "М (наприклад, ЗОРЕКОЕХ "М 75 і
ЗИРЕКОЕХ М 200), смоли ВІО-СЕЦО (наприклад, Р-б, Р-10, Р-30, Р-6О і Р-100), ії інші, відомі фахівцю в даній галузі. 0029) В одному варіанті втілення винаходу спосіб згідно з винаходом додатково включає етап витримування для вивільнення нестабільно зв'язаних лінкерів від клітиннозв'язувальних агентів. Етап витримування включає витримування суміші перед очищенням кон'югата клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент (наприклад, після етапу реакції, між етапом реакції й етапом гасіння, або після етапу гасіння). Наприклад, спосіб згідно з винаходом включає (а) контакт клітиннозв'язувального агента з цитотоксичним агентом з утворенням суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент; а потім контакт суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент, з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки й включає лінкер, у розчині, що має рівень рН від приблизно 4 до приблизно 9, для одержання суміші, що включає (ї) кон'югат клітиннозв'язувальний агент- цитотоксичний агент, при цьому клітиннозв'язувальний агент є хімічно з'єднаним за допомогою лінкера із цитотоксичним агентом, (ії) незв'язаний цитотоксичний агент, і (ії) побічні продукти реакції, (6) витримування суміші, одержаної на етапі (а), для вивільнення нестабільно зв'язаних лінкерів від клітиннозв'язувального агента, і (в) очищення суміші для одержання очищеного кон'югата клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент.
І0030) В іншому варіанті втілення винаходу спосіб згідно з винаходом включає (а) контакт клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом з утворенням суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент; і потім контакт суміші, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент, з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки й включає лінкер, у розчині, що має рівень рН від приблизно 4 до приблизно 9, для одержання суміші, що включає (ї) кон'югат клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент, при цьому клітиннозв'язувальний агент є хімічно з'єднаним за допомогою лінкера із бо цитотоксичним агентом, (ії) незв'язаний цитотоксичний агент, і (ії) побічні продукти реакції, (б)
гасіння суміші, одержаної на етапі (а), для гасіння будь-якого цитотоксичного агента, що не прореагував і/або біфункціонального реагенту, що утворює перехресні зв'язки, який не прореагував, (в) витримування суміші, одержаної на етапі (б), для вивільнення нестабільно зв'язаних лінкерів від клітиннозв'язувального агента, і (г) очищення суміші для одержання очищеного кон'югата клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент.
ІЇ0О31| З іншого боку, етап витримування може проводитися після очищення кон'югата клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент із наступним додатковим етапом очищення. 0032) У кращому варіанті втілення винаходу реакції (тобто контакту клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом, а потім з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки) дають завершитися до етапу витримування. У цьому відношенні, етап витримування може проводитися через проміжок часу від приблизно 1 години до приблизно 48 годин (наприклад, приблизно через 1 годину, приблизно 2 години, приблизно З години, приблизно 4 години, приблизно 5 годин, приблизно б годин, приблизно 7 годин, приблизно 8 годин, приблизно 9 годин, приблизно 10 годин, приблизно 11 годин, приблизно 12 годин, приблизно 13 годин, приблизно 14 годин, приблизно 15 годин, приблизно 16 годин, приблизно 17 годин, приблизно 18 годин, приблизно 19 годин, приблизно 20 годин, приблизно 21 годину, приблизно 22 години, приблизно 23 години, приблизно 24 години, або від приблизно 24 годин до приблизно 48 годин) після того, як суміш, що включає клітиннозв'язувальний агент і цитотоксичний агент, проконтактувала з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки.
ІЇ0033| Етап витримування включає витримування розчину за відповідної температури (наприклад, від приблизно 0"С до приблизно 37"С) протягом відповідного періоду часу (наприклад, від приблизно 1 години до приблизно 1 тижня, від приблизно 1 години до приблизно 24 годин, від приблизно 1 години до приблизно 8 годин або від приблизно 1 години до приблизно 4 годин) для вивільнення нестабільно зв'язаних лінкерів від клітиннозв'язувального агента, при цьому стабільно зв'язані лінкери по суті не вивільняються від клітиннозв'язувальних агентів. В одному варіанті втілення винаходу етап витримування включає витримування розчину за температури приблизно 209С або менше (наприклад, від приблизно 0"С до приблизно 18"С, від приблизно 4"С до приблизно 16"С), за кімнатної температури (наприклад,
Ко) від приблизно 207С до приблизно 30"С або від приблизно 207"С до приблизно 25"), або за підвищеної температури (наприклад, від приблизно 30"С до приблизно 37"С). В одному варіанті втілення винаходу етап витримування включає витримування розчину за температури від приблизно 167С до приблизно 24"С (наприклад, приблизно 15"С, приблизно 16"С, приблизно 17"С, приблизно 18"С, приблизно 197С, приблизно 20"С, приблизно 21"7С, приблизно 22"С, приблизно 23"С, приблизно 247"С або приблизно 25"С). В іншому варіанті втілення винаходу етап витримування включає витримування розчину за температури від приблизно 27С до приблизно 8"С (наприклад, приблизно 0"С, приблизно 1"С, приблизно 2"С, приблизно 370, приблизно 4"С, приблизно 5"С, приблизно 6"С, приблизно 7"С, приблизно 8"С, приблизно 97С або приблизно 107С). В іншому варіанті втілення винаходу етап витримування включає витримування розчину за температури приблизно 37"С (наприклад, приблизно 34"С, приблизно 35"С, приблизно 36"С, приблизно 37"С, приблизно 38"С, приблизно 39"С або приблизно 407).
І0034| Тривалість етапу витримування залежить від температури, за якої проводять етап витримування. Наприклад, тривалість етапу витримування може бути по суті знижена проведенням етапу витримування за підвищеної температури, при цьому максимальна температура обмежена стабільністю кон'югата клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент. Етап витримування може включати витримування розчину протягом від приблизно 1 години до приблизно 1 дня (наприклад, протягом приблизно 1 години, приблизно 2 години, приблизно З години, приблизно 4 години, приблизно 5 годин, приблизно 6 годин, приблизно 7 годин, приблизно 8 годин, приблизно 9 годин, приблизно 10 годин, приблизно 12 годин,
БО приблизно 14 годин, приблизно 16 годин, приблизно 18 годин, приблизно 20 годин, приблизно 22 години або приблизно 24 години), від приблизно 10 годин до приблизно 24 годин, від приблизно 12 годин до приблизно 24 годин, від приблизно 14 годин до приблизно 24 годин, від приблизно 16 годин до приблизно 24 годин, від приблизно 18 годин до приблизно 24 годин, від приблизно 20 годин до приблизно 24 годин, від приблизно 5 годин до приблизно 1 тижня, від приблизно 20 годин до приблизно 1 тижня, від приблизно 12 годин до приблизно 1 тижня (наприклад, приблизно 12 годин, приблизно 16 годин, приблизно 20 годин, приблизно 24 години, приблизно 2 дні, приблизно З дні, приблизно 4 дні, приблизно 5 днів, приблизно 6 днів або приблизно 7 днів) або від приблизно 1 дня до приблизно 1 тижня.
І0035| В одному варіанті втілення винаходу етап витримування включає витримування бо розчину за температури від приблизно 2"С до приблизно 8"С протягом періоду, щонайменше,
від приблизно 12 годин до тижня. В іншому варіанті втілення винаходу етап витримування включає витримування розчину за температури від приблизно 2"С до приблизно 8"С протягом ночі (наприклад, від приблизно 12 до приблизно 24 годин, краще приблизно 20 годин). (0036) Значення рН для етапу витримування краще становить від приблизно 4 до приблизно 10. В одному варіанті втілення винаходу значення рН для етапу витримування становить приблизно 4 або більше, але не менше 6 (наприклад, від 4 до 5,9), або приблизно 5 або більше, але не менше 6 (наприклад, від 5 до 5,9). В іншому варіанті втілення винаходу значення рН для етапу витримування варіюють від приблизно 6 до приблизно 10 (наприклад, від приблизно 6,5 до приблизно 9, від приблизно б до приблизно 8). Наприклад, значення рН для етапу витримування можуть становити приблизно б, приблизно 6,5, приблизно 7, приблизно 7,5, приблизно 8, приблизно 8,5, приблизно 9, приблизно 9,5 або приблизно 10.
І0037| У специфічних варіантах втілення винаходу етап витримування може включати інкубацію суміші за температури 257С і рН приблизно 6-7,5 протягом від приблизно 12 годин до приблизно 1 тижня, інкубацію суміші за температури 4"С і рН приблизно 4,5-5,9 протягом від приблизно 5 годин до приблизно 5 днів, або інкубацію суміші за температури 25"7С і рн приблизно 4,5-5,9 протягом від приблизно 5 годин до приблизно 1 дня. 0038) Винахід описує спосіб одержання композицій стабільних кон'югатів, що включають клітиннозв'язувальний агент, хімічно з'єднаний із цитотоксичним агентом, при цьому композиції по суті не містять нестабільних кон'югатів. У цьому відношенні винахід описує спосіб одержання кон'югата клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент по суті з високою чистотою й стабільністю. Такі композиції можуть використовуватися для лікування захворювань через високу чистоту й стабільність кон'югатів. Композиції, що включають клітиннозв'язувальний агент, такий як антитіло, хімічно з'єднаний із цитотоксичним агентом, таким як майтансиноїд, описані, наприклад, у патенті США Ме7374762, повний зміст якого включений в даний документ у всій своїй повноті за допомогою посилання. В одному аспекті винаходу кон'югат клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент по суті високої чистоти володіє однією або декількома наступним характеристиками: (а) більше ніж приблизно 9095 (наприклад, більш ніж або дорівнює приблизно 9195, 9295, 9395, 9495, 9595, 9695, 9795, 9895, 9995 або 10095), краще більш ніж приблизно 9595 видів кон'югата є мономерними, (б) рівень некон'югованого лінкера в
Зо композиції кон'югата становить менше ніж приблизно 1095 (наприклад, менше ніж або дорівнює приблизно 995, 895, 7905, бю, 590, 4905, 395, 290, 195 або 095) (щодо загального вмісту лінкера), (в) менше ніж 1095 видів кон'югата зв'язані перехресними зв'язками (наприклад, менше ніж або дорівнює приблизно 995, 8905, 7905, бю, 590, 4905, 395, 295, 1950 або 095), (г) рівень незв'язаного цитотоксичного агента в композиції кон'югата становить менше ніж приблизно 295 (наприклад, менше ніж або дорівнює приблизно 1,595, 1,490, 1,390, 1,290, 1,195, 1,090, 0,995, 0,890, 0,790, 0,690, 0,595, 0,495, 0,395, 0,295, 0,195 або 095) (мольлмоль щодо загального вмісту цитотоксичного агента), і/або (д) відсутність по суті підвищення рівня незв'язаного цитотоксичного агента при зберіганні (наприклад, через приблизно 1 тиждень, приблизно 2 тижні, приблизно З тижні, приблизно 1 місяць, приблизно 2 місяці, приблизно З місяці, приблизно 4 місяці, приблизно 5 місяців, приблизно 6 місяців, приблизно 1 рік, приблизно 2 роки, приблизно З роки, приблизно 4 роки або приблизно 5 років). «По суті підвищення» рівня незв'язаного цитотоксичного агента означає, що після певного періоду зберігання (наприклад, приблизно через 1 тиждень, приблизно 2 тижні, приблизно З тижні, приблизно 1 місяць, приблизно 2 місяці, приблизно З місяці, приблизно 4 місяці, приблизно 5 місяців, приблизно 6 місяців, приблизно 1 рік, приблизно 2 роки, приблизно З роки, приблизно 4 роки або приблизно 5 років), збільшення рівня незв'язаного цитотоксичного агента становить менше ніж приблизно 0,195, приблизно 0,295, приблизно 0,395, приблизно 0,495, приблизно 0,595, приблизно 0,695, приблизно 0,795, приблизно 0,895, приблизно 0,995, приблизно 1,095, приблизно 1,195, приблизно 1,295, приблизно 1,390, приблизно 1,495, приблизно 1,595, приблизно 1,695, приблизно 1,795, приблизно 1,895, приблизно
БО 1,995, приблизно 2,095, приблизно 2,295, приблизно 2,595, приблизно 2,795, приблизно 3,090, приблизно 3,295, приблизно 3,595, приблизно 3,795 або приблизно 4,095.
ЇОО39| У контексті даного винаходу термін «некон'югований лінкер» означає клітиннозв'язувальний агент, який ковалентно приєднаний до біфункціонального реагенту, що утворює перехресні зв'язки, при цьому клітиннозв'язувальний агент нековалентно приєднаний до цитотоксичного агента за допомогою лінкера біфункціонального реагенту, що утворює перехресні зв'язки (тобто «некон'югованого лінкера» може бути представлений СВА-Ї, при цьому СВА є клітиннозв'язувальним агентом, а І! є біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки. На відміну від цього, кон'югат клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент може бути представлений як СВА-І -О, де О є цитотоксичним агентом). бо І0040| В одному варіанті втілення винаходу середнє молярне співвідношення цитотоксичного агента й клітиннозв'язувального агента в кон'югаті клітиннозв'язувальний агент- цитотоксичний агент становить від приблизно 1 до приблизно 10, від приблизно 2 до приблизно 7, від приблизно З до приблизно 5, від приблизно 2,5 до приблизно 4,5 (наприклад, приблизно 2,5, приблизно 2,6, приблизно 2,7, приблизно 2,8, приблизно 2,9, приблизно 3,0, приблизно 3,1, приблизно 3,3, приблизно 3,4, приблизно 3,5, приблизно 3,6, приблизно 3,7, приблизно 3,8, приблизно 3,9, приблизно 4,0, приблизно 4,1, приблизно 4,2, приблизно 4,3, приблизно 4.4, приблизно 4,5), від приблизно 3,0 до приблизно 4,0, від приблизно 3,2 до приблизно 4.2, або від приблизно 4,5 до 5,5 (наприклад, приблизно 4,5, приблизно 4,6, приблизно 4,7, приблизно 4,8, приблизно 4,9, приблизно 5,0, приблизно 5,1, приблизно 5,2, приблизно 5,3, приблизно 5,4 або приблизно 5,5).
І0041| Даний винахід описує більш ефективний спосіб одержання композиції стабільних кон'югатів, що включають клітиннозв'язувальний агент, хімічно з'єднаний із цитотоксичним агентом. В одному варіанті втілення винаходу в порівнянні із традиційним способом одержання кон'югатів клітиннозв'язувального агента й цитотоксичного агента, для досягнення подібного середнього молярного співвідношення цитотоксичного агента з клітиннозв'язувальним агентом в кон'югатах необхідна менша кількість цитотоксичного агента.
І0042| Клітиннозв'язувальний агент може бути будь-яким придатним агентом, який зв'язується з клітиною, звичайно й краще з тваринною клітиною (наприклад, клітиною людини).
Клітиннозв'язувальний агент краще є пептидом або ополіпептидом. Придатні клітиннозв'язувальні агенти включають, наприклад, антитіла (наприклад, моноклональні антитіла і їх фрагменти), інтерферони (наприклад, альфа, бета, гама), лімфокіни (наприклад, ІЛ- 2, ІЛ-3, ІЛ-4, ІЛ-6), гормони (наприклад, інсулін, ТРГ (тиреотропін-рилізинг гормон), МСГ (меланоцит-стимулюючий гормон), стероїдні гормони, такі як андрогени й естрогени), фактори росту й колонієстимулюючі фактори, такі як ЕФР, ФНП-альфа, ФФР, ФРЕС, К-КСФ, М-КСФ і ГМ-
КОСФ ( Вигдез5, Іпттипоіоду Тодау 5: 155-158 (1984) поживно-транспортні молекули (наприклад, трансферин), вітаміни (наприклад, фолат) і будь-які інші агенти або молекули, які специфічно зв'язуються з молекулою-мішенню на поверхні клітини.
ІЇ0043| Якщо клітиннозв'язувальний агент є антитілом, він зв'язується з антигеном, представленим поліпептидом або глікотопом, і може бути трансмембранною молекулою
Зо (наприклад, рецептором) або лігандом, таким як фактор росту. Типові антигени включають молекули, такі як ренін; гормон росту, включаючи гормон росту людини й бичачий гормон росту; рилізинг--фактор гормону росту; паратгормон; тироїд-стимулюючий гормон; ліпопротеїни; альфа-1-антитрипсин; А-ланцюг інсуліну; В-ланцюг інсуліну; проінсулін; фолікулостимулюючий гормон; кальцитонін; лютеїнізуючий гормон; глюкагон; фактори згортання, такі як фактор мтс, фактор ІХ, тканинний фактор (ТЕ) і фактор фон-Віллєбранда; фактори антикоагуляції, такі як протеїн С; передсердний натрійуретичний фактор; сурфактант легенів; активатор плазміногену, такий як урокіназа або сечовина людини або активатор плазміногену тканинного типу (І-РА); бомбезин; тромбін; гематопоетичний фактор росту; фактор некрозу пухлини -альфа й -бета; енкефаліназу; КАМТЕЗ (фактор регуляції активації здорової експресії й секреції Т-клітин); запальний білок макрофагів людини (МІР-1-альфа); сироватковий альбумін, такий як людський сироватковий альбумін; мюллерова інгібуюча субстанція; А-ланцю грелаксину; В-ланцюг релаксину; прорелаксин; мишачий гонадотропін-зв'язаний пептид; мікробний білок, такий як бета-лактамаза; ДНКаза; ЧЕ; цитотоксичний Т-лімфоцитарний зв'язаний антиген (СТІ А), такий як СТІ А-4; інгібін; активін; фактор росту ендотелію судин (ФРЕС); рецептори до гормонів або факторів росту; білок А або ОЮ; ревматоїдні фактори; нейротрофічний фактор, такий як нейротрофічний фактор, одержаний з кістки (ВОМЕ), нейротрофін-3, -4, -5 або -6 (МТ-3, МТ4, МТ- 5 або МТ-6) або ростовий фактор нервів, такий як МОБ-П; тромбоцитарний фактор росту (РОСБ); фактор росту фібробластів, такий як агсСЕ і БЕСЕ; епідермальний фактор росту (ЕФР); трансформуючий фактор росту (ТФР), такий як ТФР-альфа й ТФР-бета, включаючи ТФР-ЦІ,
ТФР-І 12, ТФР- 13, ТФР-| 4 або ТФР-. 5; інсуліноподібний фактор росту-І1 і -П (І-І ії ІСЕ-ІЇ); дез(1- 3)-ІЯ-І (мозковий ІСБЕ-І); білки, що зв'язують інсуліноподібний фактор росту; ЕРСАМ; 03;
ЕСТЗ3; РБМА; РБСА; МОС1; МОС16; 5ТЕАР; СЕА; ТЕМВ2; ЕрпА рецептори; ЕрпВ рецептори; фолатний рецептор; БОЇ К1; мезотелін; крипто; альфаубетавє; інтегрини; ФРЕС; МЕСЕК; ЕСЕЕ; рецептор трансферину; ІКТАТ1; ІКТА2; ІКТАЗ; ІКТА4; ІКТА5; СО білки, такі як СО2, СОЗ3, С04,
СОр5,СО06, 208, С011, С014, 6019, 0020, 021, 6022, 0025, С0р26, С0р28, 030, С033, СОЗ6, сбор37, 6038, 2040, 6044, 6052, 6055, 26056, 2059, 2070, 2079, 2080. 6081, 20103, СО105, ср134, С0р137, СОр138, С0О152 або антитіло, яке зв'язується з одним або декількома пухлиноасоційованими антигенами або рецепторами клітинних поверхонь, описаних у публікації заявки на патент США Ме2008/0171040 або публікації заявки на патент США Мо2008/0305044, які 60 включені сюди у всій своїй повноті за допомогою посилання; еритропоетин; остеоіндуктивні фактори; імунотоксини; морфогенетичний білок кістки (ВМР); інтерферон, такий як інтерферон- альфа, -бета й -гама; колонієстимулюючі фактори (КСФ), такі як. М-КСФ, ГМ-КСФ і Г-КОФ; інтерлейкіни (ІЛ), наприклад, від ІЛ-1ї до ІЛ-10; супероксиддисмутаза; Т-клітинні рецептори; поверхневі мембранні білки; комплементзалежний стимулятор гемолізу; вірусний антиген, такий як, наприклад, фрагмент капсиду ВІЛ; транспортні білки; «хомінг»-рецептори; адресини; регуляторні білки; інтегрини, такі як СО11а, СО116, СО11с, СО18, ІСАМ, МІ А-4 і МСАМ; пухлиноасоційований білок, такий як НЕК2, НЕКЗ або НЕКА рецептор; ендоглін; с-Меї; ІСЕТВ; простат-антигени, такі як РСАЗ, РБА, РОС, МОЕР, РОМА, РЗСА, ТМЕРЕРЕ2 і ЗТЕАРІ; І ОК5;
В7НЕе; і фрагменти будь-якого з перерахованих вище поліпептидів.
Ї0044| Крім того, ГМ-КСФ, який зв'язується з мієлоїдними клітинами, може використовуватися як клітиннозв'язувальний агент щодо клітин, уражених гострим мієлоїдним лейкозом. ІЛ-2, який зв'язується з активованими Т-клітинами, може використовуватися для профілактики відторгнення трансплантата, для лікування й запобігання захворювання трансплантат проти хазяїна і для лікування гострого Т-клітинного лейкозу. М5Н, який зв'язується з меланоцитами, може використовуватися для лікування меланоми, як і антитіла до меланом. Фолієва кислота може використовуватися для зв'язування фолатного рецептора, експресованого на пухлинах яєчників і інших пухлинах. Епідермальний фактор росту може використовуватися для зв'язування із плоскоклітинними видами раку, такими як рак легенів і рак голови й шиї. Соматостатин може використовуватися при нейробластомах і пухлинах інших типів. 0045) Рак молочної залози і яєчок можна з успіхом лікувати естрогеном (або аналогами естрогена) або андрогеном (або аналогами андрогена), відповідно, у вигляді клітиннозв'язувальних агентів.
І0046| Термін «антитіло» у контексті даного винаходу означає будь-який імуноглобулін, будь-який фрагмент імуноглобуліну, такий як Раб, Раб, Е(аб)», аб5Ем, 5Ем, мінітіла, діатіла, тритіла, тетратіла (Ратат, У. Іттипої., 131: 2895-2902 (1983); Зргіпо 6ї аї. у. Іттипої., 113: 470- 478 (1974); Мізопоїї єї аї. Агсй. Віоспет. Віорпувз., 89: 230-244 (1960), Кіт еї аї., Мої. Сапсег
ТНег., 7: 2486-2497 (2008), Сапег, Маїште Вемв., 6: 343-357 (2006)), або хімери імуноглобулінів, які можуть зв'язуватися з антигеном на поверхні клітин (наприклад, які містять регіон, що
Зо визначає комплементарність (СОК)). Як клітиннозв'язувальний агент може використовуватися будь-яке придатне антитіло. Фахівцю в даній галузі буде очевидним, що вибір відповідного антитіла буде залежати від популяції клітин-мішеней. У цьому відношенні тип і кількість молекул на поверхні клітини (тобто антигенів), які вибірково експресуються окремою популяцією клітин (звичайно й краще популяцією хворих клітин), будуть направляти вибір відповідного антитіла для використання в композиції згідно з винаходом. Профілі експресії клітинною поверхнею відомі для цілого ряду типів клітин, включаючи типи пухлинних клітин, або, якщо не відомі, вони можуть бути визначені з використанням стандартних способів молекулярної біології й гістохімії.
І0047| Антитіло може бути поліклональним або моноклональним, однак краще воно є моноклональним антитілом. У контексті даного винаходу «поліклональні» антитіла означають гетерогенні популяції молекул антитіл, що звичайно містяться в сироватці імунізованих тварин. «Моноклональне» антитіло означає гомогенні популяції молекул антитіл, специфічних до окремого антигена. Моноклональні антитіла звичайно виробляються окремим клоном В- лімфоцитів («В-клітин»). Моноклональні антитіла можуть бути одержані з використанням цілого ряду способів, відомих фахівцю в даній галузі, включаючи стандартний спосіб гібридоми (див., наприклад, Копіег апа Міївієїпй, Еиг. У. Іттипої., 5: 511-519 (1976), Напом/ апа І апе (едв.),
Апіібодіеєв: А І арогаїогу Мапиа!, С5Н Ргезх5 (1988), і С.А. дапемау еї аї. (едвз.), Іттипобіоіоду, 57
ЕдЯ., Сапапа Рибіїєпіпу, Мем Моїк, МУ (2001)). Короткий опис: спосіб гібридоми для одержання моноклональних антитіл звичайно включає введення шляхом ін'єкції антигена (тобто «імуногена») будь-якій придатній тварині, звичайно й краще миші. Тварину згодом умертвляють, і В-клітини, виділені з її селезінки, зливають із клітинами мієломи людини. Одержують гібридну клітину (тобто «гібридому»), яка проліферує необмежено довго й безупинно секретує високі титри антитіла з необхідною специфічністю іп мійго. Будь-який відповідний спосіб, відомий у науці, може використовуватися для ідентифікації клітин гібридоми, що виробляють антитіло з необхідною специфічністю. Такі способи включають, наприклад, твердофазний імуноферментний аналіз (ІФА), вестерн-блот і радіоїмуноаналіз. Популяцію клітин гібридоми піддають скринінгу для виділення окремих клонів, кожний з яких секретує окремі види антитіл до антигена. Беручи до уваги, що кожна гібридома є клоном, одержаним при злитті окремої В- клітини, всі молекули антитіл, які вона виробляє, є ідентичними за структурою, включаючи їх антигензв'язуючу ділянку й ізотип. Моноклональні антитіла також можуть бути одержані з 60 використанням інших придатних способів, включаючи спосіб ЕВМ-гібридоми (див., наприклад,
Нахкага апа Агенег, у). Іттипої. Меїпоав, 74(2): 361-67 (1984) і Кодег єї аІ., Методз Епгутої., 121: 140-67 (1986)), системи експресії вектора бактеріофага (див., наприклад, Низе еї аї.,
Зсіепсе, 246: 1275-81 (1989)) або бібліотеки фагових дисплеїв, що включають фрагменти антитіл, такі як Раб і з5сЕм (одноланцюговий варіабельний регіон) (див., наприклад, патенти США
Мо5885793 і 5969108, і публікації заявок на міжнародні патенти УМО 92/01047 ії УМО 99/06587).
І0048)| Моноклональне антитіло може бути виділене з або вироблене в будь-якій придатній тварині, але краще воно виробляється в організмі ссавця, більш краще, миші або людини, і більш краще, людини. Способи одержання антитіл у мишей відомі фахівцю в даній галузі й описані в тексті даної заявки. Щодо антитіл людини, фахівцю в даній галузі буде очевидним, що поліклональні антитіла можуть бути виділені із сироватки суб'єктів-людей, вакцинованих або імунізованих відповідним антигеном. З іншого боку, антитіла людини можуть бути одержані шляхом адаптації відомих способів для одержання антитіл людини у видів тварин, за винятком людини (див., наприклад, патенти США Ме5545806, 5569825 і 5714352, і публікацію заявки на патент США Мо2002/0197266 АТ).
І0049| Будучи ідеальним вибором для терапевтичного застосування у людини, антитіла людини, зокрема, моноклональні антитіла людини, звичайно більш важко одержати, ніж моноклональні антитіла миші. Мишачі моноклональні антитіла, однак, індукують швидку відповідь хазяїна на антитіло при введенні людині, що може знизити терапевтичний або діагностичний потенціал кон'югата антитіло-цитотоксичний агент. Щоб обійти такі ускладнення, моноклональне антитіло краще не розпізнається імунною системою людини як «стороннє».
ІЇ0О50| Для цього фагова бібліотека може використовуватися для одержання антитіла. В цьому відношенні фагові бібліотеки, що кодують антигензв'язувальні варіабельні домени (М) антитіл, можуть бути одержані з використанням стандартних способів молекулярної біології й рекомбінації ДНК (див., наприклад, Ззатьгоок еї аї. (ед5.), МоіІесшаг Сіопіпо, А І арогаогу Мапааї,
З Едайоп, Соїд 5ргіпд Нагбог І арогаїогу Рге55, Мем/ Могк (2001)). Фаг, що кодує варіабельний регіон з необхідною специфічністю, вибирають на предмет специфічного зв'язування з необхідним антигеном, і збирають повне антитіло людини, що включає вибраний варіабельний домен. Послідовності нуклеїнових кислот, що кодують відновлене антитіло, вводять у відповідну лінію клітин, таку як клітини мієломи, використовувані для вироблення антитіл, таких як антитіла
Зо людини, що мають характеристики моноклональних антитіл, що секретуються клітиною (див., наприклад, Чдапемжмау еї аї!., вище, Низе еї аї., вище, і патент США Моб265150). З іншого боку, моноклональні антитіла можуть бути одержані у мишей, які є трансгенними щодо специфічних генів важких і легких ланцюгів імуноглобуліну людини. Такі способи відомі в науці й описані, наприклад, у патентах США Ме5545806 і 5569825 і хапемау еї аї., вище.
ІЇОО51| Більш краще, антитіло є гуманізованим антитілом. У контексті даного винаходу «гуманізоване» антитіло є антитілом, у якому регіони, що визначають комплементарність (СОВ) мишачого моноклонального антитіла, що утворюють антигензв'язуючі петлі антитіла, прищеплені на каркасній ділянці молекули антитіла людини. Завдяки подібності каркасних ділянок антитіл миші й людини, загальноприйнятим в науці є те, що такий спосіб дозволяє одержати моноклональне антитіло, що є антигенно-ідентичним антитілу людини, яке зв'язується з тим самим антигеном, що й моноклональне антитіло, з якого одержані послідовності СОК.
Способи одержання гуманізованих антитіл добре відомі в науці й описані докладно, наприклад, в роботі дапеулау еї аіІ., вище, патентах США Мо5225539, 5585089 і 5693761, європейському патенті Ме0239400 ВІ і патенті Великобританії Ме2188638. Гуманізовані антитіла також можуть бути одержані з використанням способу змінення поверхні антитіла, описаного в патенті США
Мо5639641 і Редеггхеп еї аї., У. Мої. Віо!., 235: 959-973 (1994). У той час як антитіло, що бере участь у кон'югаті композиції згідно з винаходом, більш краще є гуманізованим моноклональним антитілом, моноклональне антитіло людини й моноклональне антитіло миші, як це описане вище, можуть також охоплюватися даним винаходом. 0052) Фрагменти антитіла, що мають, щонайменше, один антигензв'язуючий сайт, і, отже, розпізнають і зв'язують, щонайменше, один антиген або рецептор, присутні на поверхні клітини- мішені, і також включені в об'єм даного винаходу. В цьому відношенні протеолітичне розщеплення інтактної молекули антитіла може привести до утворення цілого ряду фрагментів антитіла, які зберігають здатність розпізнавати й зв'язувати антигени. Наприклад, обмежене розщеплення молекули антитіла протеазою папаїном звичайно приводить до утворення трьох фрагментів, два з яких є ідентичними й позначаються як фрагменти Еар, оскільки вони зберігають антигензв'язуючу активність молекули вихідного антитіла. Розщеплення молекули антитіла ферментом пепсин звичайно приводить до утворення двох Фрагментів антитіла, один з яких зберігає антигензв'язуючі ділянки молекули антитіла й, отже, позначається як фрагмент 60 Каб)». Редукція фрагмента Е(ар)2 дитіотреїтолом або меркаптоетиламіном приводить до утворення фрагмента, що позначається фрагментом ав. Одноланцюговий фрагмент варіабельного регіона (5Ем) антитіла, який складається з розгалуженого фрагмента Раб, що включає варіабельний домен антитіла (М) важкого ланцюга, приєднаний до домену М легкого ланцюга антитіла за допомогою синтетичного пептиду, може бути одержаний з використанням стандартних способів рекомбінації ДНК (див., наприклад, щдапемау єї аіІ., вище). Подібним чином, фрагменти варіабельних регіонів, стабілізованих дисульфідними зв'язками (а5Ем), можуть бути одержані з використанням способів рекомбінації ДНК (див., наприклад, Кейег еї аї., Ргоїеїп
Епаіпеегіпд, 7: 697-704 (1994)). Фрагменти антитіла в контексті винаходу, однак, не обмежені даними типовими типами фрагментів антитіл. Може використовуватися будь-який придатний фрагмент антитіла, який розпізнає й зв'язує необхідний рецептор клітинної поверхні або антиген. Фрагменти антитіла додатково описані, наприклад, в роботі Рагпат, 4). Іттипої!., 131: 2895-2902 (1983), Зргіпоу еї аї., у. Іттипої!., 113: 470-478 (1974), і Мізопоїї еї аї., Агсй. Віоспет.
Віорпувз., 89: 230-244 (1960). Зв'язування антитіло-антиген може бути оцінене з використанням будь-якого придатного способу, відомого в науці, такого як, наприклад, радіоімуноаналіз (РІА),
ІФА, вестерн-блот, імунопреципітація й аналізи конкурентного зв'язування (див., наприклад,
Уапеулау єї а!., вище, і публікацію заявки на патент США Ме2002/0197266 АТ).
ЇОО53| Крім того, антитіло може бути хімерним антитілом або його антигензв'язуючим фрагментом. Під «хімерним» розуміють антитіло, яке включає, щонайменше, два імуноглобуліни або фрагменти, одержані або вироблені, щонайменше, двома окремими видами (наприклад, два різні імуноглобуліни, такі як константний регіон імуноглобуліну людини, скомбінований з варіабельним регіоном імуноглобуліну миші). Антитіло також може бути доменним антитілом (АБ) або його антигензв'язуючим фрагментом, таким як, наприклад, антитіло верблюдових (див., наприклад, ЮОезіпуїег еї аї., Маїиге бігисі. Віої!., 3: 752, (1996)), або антитілом акулячих, таким як, наприклад, новий рецептор антигена (ІДМАК) (див., наприклад,
Огеепбего еї а!., Майфиге, 374: 168 (1995), і аппейа еї аї., 5сіепсе, 305: 1770-1773 (2004)).
Ї0054| У контексті винаходу може використовуватися будь-яке придатне антитіло.
Наприклад, моноклональне антитіло 9У5 є мишачим антитілом Ідс2га, специфічним до загального антигена гострого лімфобластного лейкозу (САГІ А) (Р їх еї аї., Масиге, 283: 583-585 (1980)), і може використовуватися для зв'язування клітин, що експресують САЇГА (наприклад,
Зо клітини гострого лімфобластного лейкозу). Моноклональне антитіло МУЗ є мишачим антитілом
ІДО1, яке специфічно зв'язується з антигеном СОЗ3З (сгійіп еї аїЇ., еикетіа Кев., 8: 521 (1984)), і може використовуватися для зв'язування клітин, що експресують СОЗ33 (наприклад, клітини гострого мієлогенного лейкозу (ГМЛ)).
Ї0055| Подібним чином, моноклональне антитіло до В4 (також позначається як В4) є мишачим антитілом ІдС1, яке зв'язується з антигеном СО19 на В-клітинах (Мааіег еї аї., 9.
Ітітипої., 131: 244-250 (1983)), і може використовуватися для зв'язування В-клітин, що експресують СО19 (наприклад, клітини неходжкінської лімфоми й клітини хронічного лімфобластного лейкозу). МО01 є мишачим моноклональним антитілом, яке зв'язується з антигеном СО56б (адгезійна молекула нейронних клітин), що знаходиться на клітинах нейроендокринного походження, включаючи дрібноклітинну пухлину легенів, і таке антитіло може використовуватися в кон'югаті для доставки препаратів до клітин нейроендокринного походження. У антитіл 95, МУ9У і В4 краще змінюють поверхню або гуманізують перед використанням як частини кон'югата. Зміна поверхні або гуманізація антитіл описані, наприклад, в роботі КодизкКа еї а!., Ргос. Маї). Асад. Зсі. ОБА, 91: 969-73 (1994).
ІЇ0056| Крім того, моноклональне антитіло С242 зв'язується з антигеном СапАд (див., наприклад, патент США Мо.5552293) і може використовуватися для доставки кон'югата до пухлин, що експресують СапАд, таких як колоректальний рак, рак підшлункової залози, недрібноклітинний рак легенів і рак шлунка. НиС242 є гуманізованою формою моноклонального антитіла С242 (див., наприклад, патент США Ме5552293). Гібридома, з якої виробляють НиС242, знаходиться в ЕСАСС під ідентифікаційним номером 90012601. НиС242 може бути одержане з використанням способу щеплення СОК (див., наприклад, патенти США Ме5585089, 5693761 і 5693762) або способу зміни поверхні (див., наприклад, патент США Мо5639641). НиС242 може використовуватися для доставки кон'югата до пухлинних клітин, що експресують антиген
СапАд, таким як, наприклад, клітини колоректального раку, раку підшлункової залози, недрібноклітинного раку легенів і раку шлунка.
І0057| Для зв'язку із клітинами раку яєчників і раку передміхурової залози в кон'югаті може використовуватись антитіло до МИСІ як клітиннозв'язувальний агент. Антитіла до МОС1 включають, наприклад, антитіло до НМЕС-2 (див., наприклад, Тауіог-Рарадітініои еї аї., Іпї. у.
Сапсег, 28: 17-21 (1981)), ЯСТМО! (див., наприклад, мап Ної еї аі., Сапсег Кев5., 56: 5179-5185 бо (1996)) ії 056. Клітини раку передміхурової залози також можуть бути зв'язані кон'югатом з використанням антитіла до простатспецифічного антигена (РОМА) як клітиннозв'язувального агента, такого як 9591 (див., наприклад, Гіи еї аІ., Сапсег Кев., 57: 3629-3634 (1997)). Крім того, ракові клітини, що експресують антиген Нег2, такі як клітини раку молочної залози, передміхурової залози і яєчників, можуть бути зв'язані кон'югатом з використанням антитіл до
Негг2, наприклад, трастузумабом, як клітиннозв'язувальним агентом. Клітини, які експресують рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕК) і його варіанти, такі як мутант із делецією за типом І, ЕСЕВМІЙ, можуть бути зв'язані кон'югатом з використанням антитіл до ЕСЕК. Антитіла до ЕСЕРМК описані в публікаціях міжнародних патентів МеРСТ/О511/058385 і РСТ/О511/058378.
Антитіла до ЕСЕКМІ описані в патентах США Ме7736644 і 7628986, і публікаціях заявок на патенти США 2010/0111979, 2009/0240038, 2009/0175887, 2009/0156790 і 2009/0155282.
Антитіла до ІСЕ-ІК, що зв'язуються з рецептором інсуліноподібного фактора росту, такі як антитіла, описані в патенті США Ме7982024, також можуть використовуватися в кон'югаті.
Антитіла, що зв'язуються з СО271, Стірю, СО138, СО38, ЕрнАг, інтегринами, СО37, фолатом,
СО20, РБОК, МОЕР, РБСА, ТМЕББЕ2, ЗТЕАРІ, ендогліном і Нег3, також можуть використовуватися в кон'югаті. 0058) В одному варіанті втілення винаходу антитіло вибирають із групи, що складається з пиМоО1, пиМу9-6, пиВ4, пиС242, антитіла до НЕК2 (наприклад, трастузумабу), біватузумабу, сибротузумабу, ритуксимабу, пиО56, антитіл до мезотеліну, описаних у публікаціях заявки на міжнародний патент УМО 2010/124797 (такого як МЕ-Т), антитіл до крипто, описаних у публікації заявки на патент США 2010/0093980 (такого як пивВЗЕб), антитіл до СО138, описаних у публікації заявки на патент США 2007/0183971 (такого як пиВ-В4), антитіл до ЕСЕК, описаних у заявках на міжнародний патент МеРСТ/О511/058385 і РСТ/О511/058378 (таке як ЕСЕК-7), антитіл до
ЕСЕРМІЇЇ, описаних у патентах США Мео7736644 і 7628986 і публікаціях заявки на патент США 2010/0111979, 2009/0240038, 2009/0175887, 2009/0156790 і 2009/0155282, гуманізованих антитіл ЕрпА2, описаних у публікаціях заявок на міжнародний патент УМО 2011/039721 і УМО 2011/039724 (такого як 2Н11К35К74); антитіл до СО38, описаних у публікації заявки на міжнародний патент УМО 2008/047242 (такого як пи385819), антитіл до фолату, описаних в публікації заявки на міжнародний патент УМО 2011/106528 і публікації заявки на патент США 2012/0009181 (наприклад, пиМом19); антитіл до ІСЕ1К, описаних у патентах США Ме5958872, 6596743 і 7982024; антитіл до СО37, описаних у публікації заявки на патент США 2011/0256153 (наприклад, пиСО37-3); антитіл до інтегрину оурв, описаних у публікації заявки на патент США 2006/0127407 (наприклад, СМТО95); і антитіл до НегЗ, описаних у публікації заявки на міжнародний патент УМО 2012/019024.
Ї0059| Зокрема, кращі антитіла 5 описаними тут гуманізованими моноклональними антитілами. Приклади включають, але не обмежуються, пиМе01, пиМуЗ-6, пиВ4, пиС242, гуманізоване моноклональне антитіло до Нег2 (наприклад, трастузумаб), біватузумаб, сибротузумаб, СМТО95, пиО5б і ритуксимаб (див., наприклад, патенти США Мо5639641 і 5665357, попередню заявку на патент США Моб0/424332 (яка відноситься до патенту США
Ме7557189), публікацію заявки на міжнародний патент (РСТ) МеУМО 02/16401, Редегзеп еї аї., вище, Кодизхка еї аї., вище, Гіми еї аІ., вище, Маадіег еї а!І., вище, Соіїотег еї а!., Сапсег Іпмебві., 19: 49-56 (2001), Неїдег еї а!., Еш. У. Сапсег, З1А: 2385-2391 (1995), Меїї еї аї!., У. Сіїп. Опсої., 12: 1193-1203 (1994), і МаіІопеу еї а1ї., Віоса, 90: 2188-2195 (1997)). У науці відомі й інші гуманізовані моноклональні антитіла, які можуть використовуватись у зв'язку з винаходом.
І0060) В одному варіанті втілення винаходу клітиннозв'язувальний агент є гуманізованим антифолатним антитілом або його антигензв'язуючим фрагментом, який специфічно зв'язується з рецептором фолату людини 1, при цьому антитіло включає: (а) СОКІ важкого ланцюга, що включає СМЕММ; СОКа2 важкого ланцюга, що включає КІНРУОСОТЕУМОХ аа: ЕХаагХааз; і СОКЗ важкого ланцюга, що включає МОС5КАМОМ; і (6) СОКІ легкого ланцюга, що включає
КАБОЗУЗЕАСТЗІ МН; СОКО2 легкого ланцюга,що включає КАЗМІ ЕА; і СОКЗ легкого ланцюга,
БО що включає ООБЕЕУРУТ; при цьому Хаа: вибирають із К, С, Н і Е; Хааг? вибирають із ОО, Н, М і
Е; і Хааз вибирають із с, Е, Т, 5, А і М. Краще, послідовність СОК2 важкого ланцюга включає
ВІНРУВаОЮТтТЕМУМОКРеОа.
І0О61| В іншому варіанті втілення винаходу антифолатне антитіло є гуманізованим антитілом або його антигензв'язуючим фрагментом, який специфічно зв'язується з рецептором фолату людину 1 і включає важкий ланцюг з амінокислотною послідовністю.
ОМОЇ МОБІАЕУМУКРОаАБУКІЗСКАБОМ ТЕ ТОМ ЕММУУУКОЗРИОБІ ЕМО ВІНРУрРИОТЕММОКЕ
ОСКАТІ ТМОКЗЗМТАНМЕГТ 5І Т5ЕОРАУМУСсТАУразвАМОУМУаО,аТТУТУ5ЗАЗТКОаРБЗМЕРІ А
РЗБКЗТЗаатАА ас УКОМЕРЕРУТУБУУМЗИАІ ТЗаМНТЕРАМІ О550І 51 55УУТУРБЗЗБІ СТО
ТМІСМУМНКРУЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕЇЇ СОС РЗМУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСУМУМУ
60 ВУ5НЕОРЕУКЕМУ УМВИаМЕМНМАКТКРАЕЄОУМЗТУВУММІ ТМ НОБУУЛІ МСКЕМКСКМУЗМКАЇ РА
РІЕКТІЗКАКИОРАЕЕРОММТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І ТОЇ УКИЕМРБЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ. розразгЕвггУЗкІтокЗАМОССаММЕ5СЗУМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І 5РИК.
І0062| В іншому варіанті втілення винаходу антифолатне антитіло є гуманізованим антитілом або його антигензв'язуючим фрагментом, що кодується плазмідною ДНК, включеною в АТСС 7 квітня 2010 р. під номерами АТСС МеРТА-10772 і РТА-10773 або 10774.
І0063| В одному варіанті втілення винаходу антифолатне антитіло є гуманізованим антитілом або його антигензв'язуючим фрагментом, що включає варіабельний домен важкого ланцюга, який, щонайменше, на 9095, 9595, 9995 або 10095 ідентичний
ОМОЇ МОБІАЕУМУКРОаАБУКІЗСКАБОМ ТЕ ТОМ ЕММУУУКОЗРИОБІ ЕМО ВІНРУрРИОТЕММОКЕ
ОСКАТІ ТМОКЗЗМТАНМЕГТІ 5І ТЗЕОБАУУУСТеМОБ5КАМОМУУСОСТТМУТМУ55, і варіабельний домен легкого ланцюга, який, щонайменше, на 9095, 9595, 9995 або 10095 є ідентичним
РІМГТО5РІ 5І АУБ ОРАПЗСКАБОВУВЕАИТОІ МНУУНОКРООСОРАЦП ІМАВАЗМІ ЕДОМРОВЕ
ЗО5ОЗКТОЕТІМІЗРМЕАЕОААТУУСООБКЕУРУТОССТКІ БІКЕ; або
РІМГТО5РІ 5І АУБ ОРАПЗСКАБОВУВЕАИТОІ МНУУНОКРООСООРАЦП ІМАВАЗМІ ЕДОМРОВЕ завзактОЕТІТІЗРУЕАЕСААТУМСООЗВЕУРУТРСО,СИТКІ ЕІКВ. 0064) У той час як клітиннозв'язувальний агент краще є антитілом, клітиннозв'язувальний агент також може бути молекулою, що не є антитілом. Такі придатні молекули, що не є антитілом, включають, наприклад, інтерферони (наприклад, альфа, бета або гама інтерферон), лімфокіни (наприклад, інтерлейкін 2 (ІЛ-2), ІЛ-3, ІЛ-4 або ІЛ-б), гормони (наприклад, інсулін), фактори росту (наприклад, ЕФР, ФНІП-альфа, ФФР або ФРЕС), колонієстимулюючі фактори (наприклад, Г-КСФ, М-КСФ ії ГМ-КСФ (див., наприклад, Вигдев55, Іттипоіоду Тодау, 5: 155-158 (1984)), соматостатин і трансферин (див., наприклад, О'Кеетге еї аї., У. ВіоЇ. Спет., 260: 932-937 (1985)). Наприклад, ГМ-КСФ, який зв'язується з мієлоїдними клітинами, може використовуватись як клітиннозв'язувальний агент для зв'язування клітин, уражених гострим мієлоїдним лейкозом.
Крім того, ІЛ-2, який зв'язується з активованими Т-клітинами, може використовуватися для профілактики відторгнення трансплантата, для лікування й запобігання захворювання трансплантат проти хазяїна, і для лікування гострого Т-клітинного лейкозу. Епідермальний фактор росту (ЕФР) може використовуватися для зв'язування із плоскоклітинними видами раку, такими як рак легенів і рак голови й шиї. Соматостатин може використовуватися для
Зо зв'язування клітин нейробластоми й клітин пухлин інших типів. 0065) Кон'югат може включати будь-які придатні цитотоксичні агенти. У контексті даного винаходу «цитотоксичний агент» означає будь-яку сполуку, що приводить до смерті клітини, індукує смерть клітини або знижує життєздатність клітини. Придатні цитотоксичні агенти включають, наприклад, майтансиноїди й ансамітоцини, що кон'югуються (див., наприклад, заявку на міжнародний патент МеРСТ/О511/59131 від З листопада 2011 р.), таксоїди, СС-1065 і аналоги СС-1065, а також доластатин і аналоги доластатину. У кращому варіанті втілення винаходу цитотоксичний агент є майтансиноїдом, включаючи майтансинол і аналоги майтансинолу. Майтансиноїди є сполуками, що інгібують утворення мікротрубочок і є надзвичайно токсичними для клітин ссавців. Приклади придатних аналогів майтансинолів включають сполуки, що мають модифіковане ароматичне кільце, і сполуки, що мають модифікації в інших положеннях. Такі майтансиноїди описані, наприклад, у патентах США
Мо4256746, 4294757, 4307016, 4313946, 4315929, 4322348, 4331598, 4361650, 4362663, 4364866, 4424219, 4371533, 4450254, 5475092, 5585499, 5846545 і 6333410. (0066) Приклади аналогів майтансинолу з модифікованим ароматичним кільцем включають: (1) С-19-дехлор (патент США Ме4256746) (одержаний відновленням ГАН ансамітоцину Рг), (2)
С-20-гідрокси (або С-20-деметил) ж/- С-19-дехлор (патенти США Мо4361650 і 4307016) (одержані шляхом деметилування з використанням Бігеріотусе5 або Асііпотусе5 або дехлоринацією з використанням ГАН) і (3) С-20-деметокси, С-20-ацилокси (-ОСОВ), -/-дехлор (патент США Мо 4294757) (одержаний шляхом ацилування з використанням ацилхлоридів).
І0067| Приклади аналогів майтансинолу, що мають модифікації в положеннях, відмінних від ароматичного кільця, включають: (1) С-9-5Н (патент США Мо 4424219) (одержані шляхом реакції майтансинолу з Но25З або Р2б5), (2) С-14-алкоксиметил (деметокси/СНг2ОкК) (патент США
Мо4331598), (3) С-14-гідроксиметил або ацилоксиметил (СН2ОН або СНгОдАс) (патент США
Мо4450254) (одержаний з Мосагаїа), (4) С-15-гідроксилацилокси (патент США Мо4364866) (одержаний конверсією майтансинолу 5ігеріоптусев), (5) С-15-метокси (патенти США Ме4313946 і 4315929) (виділений з Тгем/а пиайога), (6) 18-М-деметил (патенти США Ме4362663 і 4322348) (одержаний деметилуванням майтансинолу бігеріотусев) і (7) 4, 5-дезокси (патент США Мо 4371533) (одержаний відновленням трихлориду титану/ АН майтансинолу).
І0068| У кращому варіанті втілення винаходу кон'югат у якості цитотоксичного агента 60 використовує майтансиноїд ЮОМ'І, що містить тіол, також відомий як М2-деацетил-Ме -(3-
меркапто-1-оксопропіл)-майтансин. Структура ОМІ1 представлена формулою (1): (в) о; ри
М зн
СІ Х о о
МеО М о
С а МН осо
ОН
Мео (І)
І0069) В іншому кращому варіанті втілення винаходу кон'югат у якості цитотоксичного агента використовує майтансиноїд ОМА, що містить тіол,також відомий як М2-деацетил-М2-(4-метил-4- меркапто-1-оксопентил)-майтансин. Структура ОМА представлена формулою (ІІ): (6) (6)
М зн
СІ Х о о)
Мео М о (6) а рез (Фін!
Мео (1)
І0070| Інші майтансиноїди можуть використовуватися в контексті винаходу, включаючи, наприклад, майтансиноїди, що містять тіол і дисульфід і несуть моно- або діалкільні заміни на атомі вуглецю, що несе атом сірки. Зокрема, кращим є майтансиноїд, що має в С-3 положенні (а) С-14 гідроксиметил, С-15 гідрокси або С-20 десметил функціональність, і (б) ацильований амінокислотний бічний ланцюг з адильною групою, що несе блоковану сульфгідрильну групу, при цьому атом вуглецю ацильної групи, що несе тіолову функціональність, має одну або дві заміни, і зазначені заміни представлені СНз, С2Н5, лінійним або розгалуженим алкілом або алкенілом, що має від 1 до 10 атомів вуглецю, циклічним алкілом або алкенілом, що має від З до 10 атомів вуглецю, фенілом, заміщеним фенілом, або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом, і, крім того, одна із замін може бути представлена Н, і при цьому ацильна група має довжину лінійного ланцюга, що становить, щонайменше, три атоми вуглецю між карбонілом і атомом сірки. 0071) Додаткові майтансиноїди для використання в контексті винаходу включають сполуки, представлені формулою (ІП):
Й (в) о) А ре о
СІ ХХ о
Мео М о (в) а чо
Он
Мео (11), при цьому Є Є (СВ/ВвСВ»-СВо)р(СЕС аАо(СВ5Ав)тО СВ -СВ12г) (С ЕС)ВКС Аз Аа) СВ: В257, при цьому Кі і Ко кожний є незалежно СНз, Се2Нб5б, лінійним алкілом або алкенілом, що має від 1 до 10 атомів вуглецю, розгалуженим або циклічним алкілом або алкенілом, що має від З до 10 атомів вуглецю, фенілом, заміщеним фенілом або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом, і при цьому К2 також може бути Н, при цьому А, В, О є циклоалкілом або циклоалкенілом, що має 3-10 атомів вуглецю, простим або заміщеним арилом, або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом, при цьому
Вз, Ва, НВ», Нв, В7, Вв, На», Віо, Ви: і Бі2 кожний є незалежно Н, СН»з, СеНб5, лінійним алкілом або алкенілом, що має від 1 до 10 атомів вуглецю, розгалуженим або циклічним алкілом або алкенілом, що має від З до 10 атомів вуглецю, фенілом, заміщеним фенілом або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом, при цьому Ї, т, п, о, р, а, г, 5 ії кожний є незалежно нулем або цілим числом від 1 до 5, за умови, що, щонайменше, два І, т, п, о, ФР, 4, г, 5 ії не є нулем у будь-який момент часу, і при цьому 2 є Н, 5К або СОК, при цьому К є лінійним алкілом або алкенілом, що має від 1 до 10 атомів вуглецю, розгалуженим або циклічним алкілом або алкенілом, що має від З до 10 атомів вуглецю, або простим або Ззаміщеним арилом, або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом. 00721 Кращі варіанти втілення винаходу за формулою (Ії) включають сполуки за формулою (ПІ), при цьому (а) Кі. є Н, РЕ» є метилом і 2 є Н, (б) Е: і Е» є метилом і 2 є Н, (в) Кі є Н, Е»е є метилом і 2 є -5СН», і (г) К. і М» є метилом і 2 є -5СН». 0073) Такі додаткові майтансиноїди також включають сполуки, представлені формулою (ІМ-
І, (ІМ-0)), або (ІмМ-О, |): нс; 9 нс т нас, о (в); р. ХХ 6) А ре о р / /
Мау7 я У Мау ва у Мау ник у о) | (в) (в) (ІМ-) (М-0) (ІМ-О, |)
Ко) при цьому У є (СЕК7Ав)(СВА5Рв)т(САзНАл)иСА:Н252, при цьому Кі і Ко кожний незалежно є
СН», СН», лінійним алкілом або алкенілом, що має від 1 до 10 атомів вуглецю, розгалуженим або циклічним алкілом або алкенілом, що має від З до 10 атомів вуглецю, фенілом, заміщеним фенілом або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом, і при цьому
Аг також може бути Н, при цьому Кз, Ва, Н5, Нє, В; і Кв кожний незалежно є Н, СН»з, СеНб, лінійним алкілом або алкенілом, що має від 1 до 10 атомів вуглецю, розгалуженим або циклічним алкілом або алкенілом, що має від З до 10 атомів вуглецю, фенілом, заміщеним фенілом або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом, при цьому Ї, т і п кожний незалежно є цілим числом від 1 до 5, і, крім того, п може бути нулем, при цьому 2 є
Н, 5К або СОК, при цьому Е є лінійним або розгалуженим алкілом або алкенілом, що має від 1 до 10 атомів вуглецю, циклічним алкілом або алкенілом, що має від З до 10 атомів вуглецю, або простим або заміщеним арилом, або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом, і при цьому Мау є майтансиноїдом, що несе бічний ланцюг у положенні С-3, 0-14 гідроксиметил, С-15 гідрокси або С-20 десметил.
І0074| Кращі варіанти втілення винаходу за формулами (ІМ-І), (ІМ-О) ї (ІМ-О0,3 включають сполуки за формулами (ІМ-І), (ІМ-О) і (М-О,У), при цьому (а) Кі. є Н, ГЕ» є метилом, К»5, Вб, В; і Кв кожний Є Н, Ії т кожний є 1, пе, і 2 є Н, (б) Е: і ЕК» є метилом, К5, Вб, В7, Вв кожний ЄН,ЇЇї т є 1,пеб,ї и є Н, (в) К: є Н, КЕ» є метилом, К»5, Нв, І? і Кв кожний є Н, І ії т кожний єї, пед, є -
ЗСН», або (г) КЕ: і К» є метилом, Кб, Вв, В7, ВВ кожний ЄН, ГПітє1,п во, ї 2 є -5СН». (0075) Краще, цитотоксичний агент представлений формулою (ІМ-І.).
І0076| Додаткові кращі майтансиноїди також включають сполуки, представлені формулою (М):
Й (6) о і ре ва; у о
СІ у о
Мео Ф ж (6)
ОО о он
Мео (М) при цьому У є (СК7Ав)(СА5НАв)тщСВАзАл)иСАїА252, при цьому Кі і К» кожний незалежно є
СН», СН», лінійним алкілом або алкенілом, що має від 1 до 10 атомів вуглецю, розгалуженим або циклічним алкілом або алкенілом, що має від З до 10 атомів вуглецю, фенілом, заміщеним фенілом або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом, і при цьому
Аг також може бути Н, при цьому Кз, Ве, Н5, Не, РН; і Кв кожний незалежно є Н, СНЗз, Сг2Нбв, лінійним алкілом або алкенілом, що має від 1 до 10 атомів вуглецю, розгалуженим або циклічним алкілом або алкенілом, що має від З до 10 атомів вуглецю, фенілом, заміщеним фенілом або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом, при цьому Ї, т і п кожний незалежно є цілим числом від 1 до 5, і, крім того, п може бути нулем, і при цьому 7 є Н, ЗК або СОК, при цьому К є лінійним алкілом або алкенілом, що має від 1 до 10 атомів вуглецю, розгалуженим або циклічним алкілом або алкенілом, що має від З до 10 атомів вуглецю, або простим або заміщеним арилом, або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом.
Зо І0077| Кращі варіанти втілення винаходу за формулою (У) включають сполуки за формулою (М), при цьому (а) Кі є Н, Е» є метилом, К»5, Нв, В; і Кв кожний є Н; Її т кожний єї; пері Є Н, (6) РК. і КЕ» є метилом; Кб, Нв, РВ7, ВВ кожний ЄН, Гітеє1;п вео;і 2 є Н, (в) ЕК: є Н, Е2 є метилом,
В5, Вв, В; і Кв кожний є Н, І і т кожний є 1, п є 0, і 7 є -5СН»з, або (г) К. і Ко є метилом, КЕ», Нв, В?,
Ввкожний ЄН, ІПітє1,п о, і 27 є -5СН»..
І0078| Додаткові кращі майтансиноїди також включають сполуки, представлені формулою (МІ-)), (МІ-О) або (МІ-О, |: нс, но нас у, в) нс. НН о од. ре Ло й в) ре / о) (в); (в); (МІ-М) (МІ-Б) (МІ-Ю, У,
при цьому У» є (СЕ?Ав(СВА5Ав)т(САзАл)зоС Ві А2522, при цьому Кі: і К2 кожний незалежно є
СН», СН», лінійним алкілом або алкенілом, що має від 1 до 10 атомів вуглецю, розгалуженим або циклічним алкілом або алкенілом, що має від З до 10 атомів вуглецю, фенілом, заміщеним фенілом або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом, і при цьому
Аг також може бути Н, при цьому Кз, Ва, Н5, Нє, В; і Кв кожний незалежно є Н, СН»з, СеНб, лінійним циклічним алкілом або алкенілом, що має від 1 до 10 атомів вуглецю, розгалуженим або циклічним алкілом або алкенілом, що має від З до 10 атомів вуглецю, фенілом, заміщеним фенілом або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом, при цьому Ї, т і п кожний незалежно є цілим числом від 1 до 5, і, крім того, п може бути нулем, і при цьому 72 є ЗК або СОК, при цьому К є лінійним алкілом або алкенілом, що має від 1 до 10 атомів вуглецю, розгалуженим або циклічним алкілом або алкенілом, що має від З до 10 атомів вуглецю, або простим або заміщеним арилом, або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом, і при цьому Мау є макроциклічною кільцевою структурою майтансиноїду.
І0079)| Додаткові кращі майтансиноїди включають сполуки, представлені формулою (МІ):
Й (в); о - Ж ря У
СІ У о о
МеО М о (в);
Дн о он
Мео (МИ), при цьому У Є (СВ/ВвСВ»-СВо)р(СЕС аАо(СВ5Ав)тО СВ -СВ12г) (С ЕС)ВКСВз Аа) СВ: В2522, при цьому К. і
В: кожний є незалежно СНвз, СеНб5, лінійним розгалуженим алкілом або алкенілом, що має від 1 до 10 атомів вуглецю, циклічним алкілом або алкенілом, що має від З до 10 атомів вуглецю, фенілом, заміщеним фенілом або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом, і при цьому Ко може бути Н, при цьому А, В і ЮО кожний є незалежно циклоалкілом або циклоалкенілом, що має 3-10 атомів вуглецю, простим або заміщеним арилом, або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом, при цьому Кз, Ва, В5, Вб,
В, Вв, В», Но, Ви: і Кі2 кожний є незалежно Н, СНЗз, СеНб, лінійним алкілом або алкенілом, що
Зо має від 1 до 10 атомів вуглецю, розгалуженим або циклічним алкілом або алкенілом, що має від
З до 10 атомів вуглецю, фенілом, заміщеним фенілом або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом, при цьому Ї, т, п, 0, р, 4, г, 5 ії кожний є незалежно нулем або цілим числом від 1 до 5, за умови, що, щонайменше, дваЇ,ї т, п, о, ФР, 4, г, 5ії не є нулем у будь-який момент часу, і при цьому 72 є ЗК або -СОК, при цьому К є лінійним алкілом або алкенілом, що має від 1 до 10 атомів вуглецю, розгалуженим або циклічним алкілом або алкенілом, що має від З до 10 атомів вуглецю, або простим або заміщеним арилом, або гетероциклічним ароматичним або гетероциклоалкільним радикалом.
І0О80| Кращі варіанти втілення винаходу за формулою (МіІЇ) включають сполуки за формулою (МІЇ), при цьому Кі є Н і Кг є метилом. 00811 Крім майтансиноїдів, цитотоксичний агент, використовуваний у кон'югаті, може бути таксаном або його похідним. Таксани є сімейством сполук, які включають паклітаксел (Таксолф), цитотоксичний натуральний продукт, і доцетаксел (ТаксотерФб), напівсинтетичне похідне,
обидва з яких використовують у лікуванні раку. Таксани є інгібіторами мітотичного веретена й інгібують деполімеризацію тубуліну, приводячи до смерті клітини. У той час як доцетаксел і паклітаксел використовують у лікуванні раку, їх протипухлинна активність обмежена через їх неспецифічну токсичність щодо здорових клітин. Крім того, сполуки, подібні паклітакселу й доцетакселу, самі по собі не є досить сильними для використання в кон'югатах клітиннозв'язувальних агентів. (0082) Кращий таксан для використання в одержанні цитотоксичного кон'югата є таксаном за формулою (МІП):
І (в) 57 о з. о о он "кВ
М -
І 2 о ОН а НЕ о он О ОАс в)
Мео ОМе (МІ) 0083) Способи синтезу таксанів, які можуть використовуватися в контексті винаходу, разом зі способами кон'югації таксанів із клітиннозв'язувальними агентами, такими як антитіла, описані докладно в патентах США МоМо5416064, 5475092, 6340701, 6372738, 6436931, 6596757, 6706708, 6716821 і 7390898. (0084) Цитотоксичний агент також може бути представлений СС-1065 або його похідним.
Сб-1065 є сильним протипухлинним антибіотиком, виділеним з культуральної рідини зігеріотусев 76Їепвів. СО-1065 є приблизно в 1000 разів сильніше іп міго, в порівнянні зі звичайно використовуваними протираковими препаратами, такими як доксорубіцин, метотрексат і вінкристин (Впиуап еї аїЇ., Сапсег Ке5., 42: 3532-3537 (1982)). СО-1065 і його аналоги описані в патентах США Мо5585499, 5846545, 6340701 і 6372738. Цитотоксична активність СС-1065 корелювала з його алкілуючою активністю, а також активністю у зв'язуванні
ДНК і інтеркаляції ДНК. Ці дві властивості властиві двом окремим частинам молекули. В цьому відношенні алкілуюча активність властива одиниці циклопропапіролоіндолу (СРІ), а активність зв'язування ДНК властива двом одиницям піролоїндолу СО-1065.
І0085) У науці відомі декілька аналогів СС-1065, які також можуть використовуватись як цитотоксичний агент в кон'югаті (див., наприклад, УмагрепозхкКі еї аї!., У. Мед. Спет., 31: 590-603 (1988)). Була розроблена ціла серія аналогів СС-1065, у яких молекула СРІ заміщена
Зо молекулою циклопропабензиндолу (СВІ) (Водег еї аї., У. Огд. Спет., 55: 5823-5833 (1990), і
Водег єї аї., Віоогду. Мед. Спет. ІГей., 1: 115-120 (1991)). Такі аналоги СС-1065 підтримують високу активність вихідного препарату іп міго без виявлення вповільненої токсичності у мишей.
Подібно СС-1065, такі сполуки є алкілуючими агентами, які ковалентно зв'язуються з малою борозенкою ДНК для спричинення смерті клітини.
І0086| Терапевтична ефективність аналогів СС-1065 може бути по суті покращена зміною розподілення іп мімо за допомогою цілеспрямованої доставки до місця пухлини, що приводить до зниженої токсичності для інших тканин і, отже, до зниженої системної токсичності. Внаслідок цього були одержані кон'югати аналогів і похідних СС-1065 із клітиннозв'язувальними агентами, які специфічно спрямовані на пухлинні клітини (див., наприклад, патенти США МоМо5475092, 5585499 і 5846545). Ці кон'югати звичайно володіють високою мішень-специфічною цитотоксичністю іп міїго і протипухлинною активністю в моделях пухлинних ксенотрансплантатів у мишей (див., наприклад, СпПагі єї аІ., Сапсег Кев., 55: 4079-4084 (1995)).
І0087| Способи синтезу аналогів СС-1065 описані докладно в патентах США Ме5475092, 5585499, 5846545, 6534660, 6586618, 6756397 і 7329760. 0088) Такі препарати, як метотрексат, даунорубіцин, доксорубіцин, вінкристин, вінбластин, мелфалан, мітоміцин С, хлорамбуцил, каліхеаміцин, тубулізин і аналоги тубулізину, дуокарміцин і аналоги дуокарміцину, доластатин і аналоги доластатину також можуть використовуватись як цитотоксичний агент згідно з винаходом. Доксарубіцин і сполуки даунорубіцину (див., наприклад, патент США Моб6630579) також можуть використовуватись як цитотоксичні агенти.
ІЇ0089| Кон'югати клітиннозв'язувального агента й цитотоксичного агента можуть бути одержані способами іп міїго. Для приєднання цитотоксичного агента до антитіла використовують з'єднувальну групу. Придатні з'єднувальні групи є добре відомими у науці й включають дисульфідні групи, кислотонестійкі групи, фотонестійкі групи, пептидазонестійкі групи й естеразонестійкі групи, а також нерозщеплювані з'єднувальні групи. Наприклад, клітиннозв'язувальний агент є хімічно з'єднаним із цитотоксичним агентом за допомогою хімічних зв'язків, вибраних із групи, що складається з дисульфідних зв'язків, кислотонестійких зв'язків, фотонестійких зв'язків, пептидазонестійких зв'язків, тіоефірних зв'язків ( естеразонестійких зв'язків.
І0090) Відповідно до винаходу, клітиннозв'язувальний агент приєднаний до цитотоксичного агента за допомогою біфункціонального реагенту, що утворює перехресні зв'язки. У контексті даного винаходу термін «біфункціональний реагент, що утворює перехресні зв'язки» означає реагент, який володіє двома реакційними групами, одна з яких здатна реагувати із клітиннозв'язувальним агентом, у той час як інша здатна реагувати із цитотоксичним агентом для зв'язку клітиннозв'язувального агента із цитотоксичним агентом, утворюючи тим самим кон'югат.
ЇО0О91| Для використання у винаході може застосовуватися будь-який придатний біфункціональний реагент, що утворює перехресні зв'язки, за умови, що реагент лінкера забезпечує збереження терапевтичних характеристик, наприклад, цитотоксичності, й зв'язуючих характеристик цитотоксичного агента й клітиннозв'язувального агента, відповідно, без надмірної токсичності. Краще, молекула лінкера з'єднує цитотоксичний агент із клітиннозв'язувальним агентом за допомогою хімічних зв'язків (як це описане вище), таким чином, цитотоксичний агент і клітиннозв'язувальний агент є хімічно з'єднаними (наприклад, ковалентно з'єднаними) один з одним.
ІЇ0092| У одному варіанті втілення винаходу біфункціональний реагент, що утворює перехресні зв'язки, включає нерозщеплювані лінкери. Нерозщеплюваний лінкер є будь-якою хімічною молекулою, яка здатна зв'язувати цитотоксичний агент, такий як майтансиноїд, таксан або аналог СС-1065, з клітиннозв'язувальним агентом стабільним, ковалентним способом
Таким чином, нерозщеплювані лінкери по суті є стійкими до кислотного розщеплення, розщеплення індукованого світлом, розщеплення індукованого пептидазою, розщеплення індукованого естеразою, і розщеплення дисульфідного зв'язку за умов у яких цитотоксичний агент або клітиннозв'язувальний агент залишаються активними. 0093) Придатні реагенти, що утворюють перехресні зв'язки й нерозщеплювані лінкери між цитотоксичним агентом і клітиннозв'язувальним агентом, є добре відомими в науці. В одному варіанті втілення винаходу цитотоксичний агент приєднаний до клітиннозв'язувального агента за допомогою тіоефірного зв'язку. Приклади нерозщеплюваних лінкерів включають лінкери, що мають малеїімідо- або галоацетил-засновані молекули для реакції з цитотоксичним агентом. Такі біфункціональні реагенти, що утворюють перехресні зв'язки, добре відомі в науці (див. публікації заявок на патенти США Ме2010/0129314, 2009/0274713, 2008/0050310, 20050169933, 2009/0274713, 2010/0129314 і Ріегсе ВіоїесппоІоду Іпс. Р.О. Вох 117, КосКіапа, І 61105, ОА) і включають, але не обмежуються, М-сукцинімідил 4-(малеімідометил)циклогексанкарбоксилат (5МОС), М-сукцинімідил-4-(М-малеїмідометил)-циклогексан-1-карбокси-(б-амідокапроат), який є «довголанцюговим» аналогом ЗМОСС (1С0-5МСС), Г-малеімідоундеканоєвої кислоти /М- сукцинімідиловий ефір (КМОА), П-малеімідомасляної кислоти М-сукцинімідиловий ефір (ЗМВ5),
Пп-малеїмідокапроєвої кислоти М-гідроксисукцинімідний ефір (ЕМС5), т-малеімідобензоїл-М- гідроксисукцинімідний ефір (МВ5), М-(Г-малеімідоацетокси)-сукцинімідний ефір (АМАФ5), сукцинімідил-6-(( -малеіїмідопропіонамідо)гексаноат (5МРН), М-сукцинімідил 4-(р- малеімідофеніл)-бутират (ЗМРВБВ) і М-(р-малеімідофеніл)ізоціанат (РМРІ). Реагенти, що утворюють перехресні зв'язки і включають молекулу галоацетилу, включають М-сукцинімідил -4- (йодоацетил)-амінобензоат (ЗІАВ), М-сукцинімідил йодоацетат (5ІА), М-сукцинімідил бромацетат (ВА) и М-сукцинімідил 3-(бромацетамідо)пропіонат (ЗВАР), біс- малеідополіетиленгліколь (ВМРЕО), ВМ(РЕО)», ВМ(РЕО)», М-(В- малеїімідопропілокси)сукцинімідний ефір (ВМР5), 5-малеімідовалеріанової кислоти МН5, НВУ5, 4-(4-М-малеїмідофеніл)-масляної кислоти гідразидеНСІ (МРВН), сукцинімідил-(4- вінілсульфоніл)бензоат (5М5В), дитіобіс-малеімідоетан (ОТМЕ), 1,4-біс-малеімідобутан (ВМВ), 1,4 бісмалеїмідил-2,3-дигідроксибутан (ВМОВ), біс-малеіїмідогексан (ВМН), біс-малеімідоетан (ВМОЕ), сульфосукцинімідил 4-(М-малеїмідо-метил)циклогексан-1-карбоксилат (сульфо-5МОС), 60 сульфосукцинімідил(4-йодоацетил)амінобензоат (сульфо-5ІАВ), т-малеімідобензоїл-М-
гідроксисульфосукцинімідний ефір (сульфо-МВ5), М-(у- малеімідобутирилокси)сульфосукцинімідний ефір (сульфо-ССМВ5), М-(в- малеїімідокапроїлокси)сульфосукцинімідний ефір (сульфо-ЕМСО5), М-(к- малеімідоундеканоїлокси)сульфосукцинімідний ефір (сульфо-КМОИ5), сульфосукцинімідил 4-(р- малеімідофеніл)бутират (сульфо-ЗМРВ) СХ1-1, сульфо-Ма! і РЕС.-МаЇ. Краще, біфункціональний реагент, що утворює перехресні зв'язки, є ЗМСОС. о / Ї но Н (о;
М М (о
ОА я тр ув,
Но Но о о (СХ1-1); о о о
Син 6) зон о "(сульфо-Маї); (0) о о; ся (- о)
НМ 7 о- о З. З по 2-20 (наприклад, 2,468) о (РЕС» Май) 0094) В одному варіанті втілення винаходу з'єднуючий реагент є розщеплюваним лінкером.
Приклади придатних розщеплюваних лінкерів включають дисульфідні лінкери, кислотонестійкі лінкери, світлонестійкі лінкери, пептидазонестійкі лінкери й естеразоненестійкі лінкери. Лінкери, що містять дисульфід є лінкерами, розщеплюваними за допомогою дисульфідного обміну, який може виникати за фізіологічних умов. Кислотонестійкі лінкери є лінкерами, розщеплюваними при кислому рівні рН. Наприклад, певні внутрішньоклітинні компартменти, такі як ендосоми й лізосоми, мають кислий рівень рН (рН 4-5) і забезпечують умови, що підходять для розщеплення кислотонестійких лінкерів. Світлонестійкі лінкери застосовують на поверхні тіла й у більшості порожнин, доступних для світла. Крім того, інфрачервоне світло може проникати через тканину. Пептидазонестійкі лінкери також можуть застосовуватися для розщеплення певних пептидів усередині або назовні клітин (див., наприклад, Тгоцеї еї аї., Ргос. Маї!. Асай. зобі.
ИБА, 79: 626-629 (1982), і Штетоїо еї аї., Іпї. у. Сапсег, 43: 677-684 (1989)). В одному варіанті втілення винаходу розщеплюваний лінкер розщеплюється за помірних умов, тобто за таких умов у клітині, за яких активність цитотоксичного агента є збереженою.
ІЇ0095| В іншому варіанті втілення винаходу цитотоксичний агент приєднаний до клітиннозв'язувального агента за допомогою дисульфідного зв'язку. Молекула лінкера включає реакційну хімічну групу, яка реагує із клітиннозв'язувальним агентом. Кращими реакційними хімічними групами для реакції із клітиннозв'язувальним агентом, є М-сукцинімідилові ефіри й М- сульфосукцинімідилові ефіри. Крім того, лінкерна молекула включає реакційну хімічну групу,
Зо краще дитіопіридилову групу, яка може реагувати із цитотоксичним агентом з утворенням дисульфідного зв'язку. Біфункціональні реагенти, що утворюють перехресні зв'язки й здатні зв'язувати клітиннозв'язувальний агент із цитотоксичним агентом за допомогою дисульфідних зв'язків, відомі науці й включають, наприклад, М-сукцинімідил 3-(2-піридилдитіо)пропіонат (БРОР) (див., наприклад, Сагіззоп еї аї., Віоспет. у., 173: 723-737 (1978)), М-сукцинімідил 4-(2- піридилдитіо)бутаноат (5РОВ) (див., наприклад, патент США Мо4563304), М-сукцинімідил 4-(2- піридилдитіо)пентаноат (РР) (див., наприклад, СА5 реєстраційний номер 341498-08-6) і М- сукцинімідил-4-(2-піридилдитіо) 2-сульфобутаноат (сульфо-5РОВ) (див., наприклад, публікацію заявки на патент США Мо2009/0274713). Інші біфункціональні реагенти, що утворюють перехресні зв'язки, які можуть використовуватися для введення дисульфідних груп, відомі науці й описані в патентах США Мо 6913748, 6716821 і публікаціях заявок на патенти США 2009/0274713 ії 2010/0129314, всі з яких включені сюди у всій своїй повноті за допомогою посилання. 0096) У способі згідно з винаходом також можуть використовуватись і інші реагенти, що утворюють перехресні зв'язки, за відсутності атома сірки, який утворює нерозщеплювані лінкери. Такі лінкери можуть бути одержані з молекул на основі дикарбонової кислоти. Придатні молекули на основі дикарбонової кислоти включають, але не обмежуються, с, о-дикарбонові кислоти за загальною формулою (ІХ):
НООС-ХіІ-Хи-27т-СООН (ІХ), при цьому Х є лінійною або розгалуженою алкільною, алкенільною або алкінільною групою, що має від 2 до 20 атомів вуглецю, У є циклоалкільною або циклоалкенільною групою, що несе від З до 10 атомів вуглецю, 2 є заміщеною або незаміщеною ароматичною групою, що несе від 6 до 10 атомів вуглецю, або заміщеною або незаміщеною гетероциклічною групою, при цьому гетероатом вибирають із М, О або 5, і при цьому Ї, т і п кожний є 0 або 1, за умови, що Ї ті п у той самий час не є нулем.
І0097| Багато описаних тут нерозщеплюваних лінкерів детально описані в публікації заявки на патент США Ме2005/0169933 А1.
І0098)| Представлені нижче приклади додатково ілюструють винахід, але, звичайно ж, не повинні жодним чином обмежувати об'єм винаходу.
Приклад 1 (0099) Гуманізоване антитіло СО37-3 реагувало з гетеробіфункціональним реагентом 5МСОС, що утворює перехресні зв'язки, і майтансиноїдом ЮМІ з використанням описаного раніше способу (наприклад, патент США Ме5208020), а також одноетапного способу, описаного в тексті даної заявки.
ІО100| Для описаного раніше способу, пиСО37-3 (15 мг/мл) спочатку піддавали реакції з
ЗМОС (6,5-кратний молярний надлишок у порівнянні з кількістю антитіла) з утворенням модифікованого антитіла. Реакцію модифікації проводили за температури 16"С в 50 мМ буфера натрію фосфату (рН 6,9), що містить 2 мМ ЕДТА в 1095 ОМА протягом 90 хвилин. Реакцію гасили 1 М ацетату для корекції рН до 4,5, і модифіковане антитіло очищали з використанням колонки зі смолою Зерпадех 0-25Е із установленою рівновагою й елююванням в 20 мМ натрію ацетату (рН 4,5), що містить 2 мМ ЕДТА. Після очищення, модифіковане антитіло (у концентрації 5 мг/мл) реагувало з майтансиноїдом ЮМІ1 (6,8-кратний молярний надлишок у
Зо порівнянні з кількістю антитіла; 1,3-кратний молярний надлишок у порівнянні з виміряною кількістю лінкера на антитілі) з утворенням кон'югованого антитіла. Реакцію кон'югації проводили за температури 20"С в 20 мМ буфера натрію ацетату (рН 5,0), що містить 2 мм ЕДТА й 595 ОМА протягом приблизно 20 хвилин. Реакційну суміш потім очищали з використанням колонки зі смолою Зерпадех 0-25Е із установленою рівновагою й елюювали в 10 мМ натрію сукцинату (рН 5,0).
ІО101| Для способу згідно з винаходом пиСО37-3 (2,5 мг/мл) змішували з ОМ'1 (6,2-кратний молярний надлишок у порівнянні з кількістю антитіла) і потім з «МСС (5,2-кратний молярний надлишок у порівнянні з кількістю антитіла). Реакцію проводили за температури 20"С в 50 мМ
ЕРРБ |А-( 2-гідроксиетил)- 1-піперазинпропансульфонова кислота) буфері (рН 8,1), що містить 2
ММ ЕДТА і 1095 ОМА протягом приблизно 4 годин. Реакцію гасили додаванням 1 М ацетату для коректування рівня рН до 5,0. Потім реакційну суміш витримували за температури 2-87 протягом приблизно 20 годин. Після витримування, реакційну суміш профільтровували через 0,2 мкм ПВДФ фільтр і очищали й піддавали діафільтрації з 10 мМ натрію сукцинату (рН 5,0) з використанням фільтрації тангенціальними потоками (ФТП). 01021 Кон'югат, одержаний двома способами, аналізували у такий спосіб: УФ спектроскопія для визначення концентрації й навантаження цитотоксичного агента (співвідношення майтансиноїду до антитіла; МАК); мас-спектрометрія для визначення рівня некон'югованого лінкера; відновлювальний 505 РАСЕ електрофорез для визначення рівня невідновлюваних видів; ексклюзійна ВЕРХ для визначення мономера кон'югата; і стабільність при зберіганні щодо мономера кон'югата й вивільнення незв'язаного майтансиноїду.
ІО103| Співвідношення концентрації й майтансиноїду до антитіла (МАК) визначали вимірюванням поглинальності кон'югата при проведенні спектроскопії в УФ і видимому спектрі за довжини хвилі 252 і 280 нм і за використання коефіцієнтів молярної екстинкції ОМ'І і антитіла за двох довжин хвиль для розрахунків молярних концентрацій антитіла й ОМ'1.
ІО104| Рівень некон'югованого лінкера для кон'югатів аналізували за допомогою мас- спектрометрії: вимірювали площі піків окремих видів кон'югатів (включаючи кон'югати з некон'югованими лінкерами або без них); рівень некон'югованого лінкера розраховували за співвідношенням суми площ, що містять некон'юговані лінкери (зважене за кількістю лінкерів) до суми площ усіх кон'югованих видів (також зважені за кількістю лінкерів). 60 ЇО1О5| Рівень невідновлюваних видів кон'югатів аналізували за допомогою відновлювального гель-електрофорезу 505: вимірювали площі піків окремого відновленого виду кон'югата (включаючи відновлений легкий ланцюг, відновлений важкий ланцюг, легкі ланцюги, зшиті поперечними зв'язками, легкі й важкі ланцюги, зшиті поперечними зв'язками тощо); рівень невідновлюваних видів розраховували за співвідношенням сум площ невідновлюваних видів до суми площ усіх видів.
ІО106| Рівень мономерів кон'югатів аналізували за допомогою ексклюзійної ВЕРХ: вимірювали площі піків мономерів, димерів, агрегатів і низькомолекулярних видів з використанням детектора поглинання, встановленого на довжину хвилі 252 нм або 280 нм; рівень мономерів розраховували за співвідношенням площі мономерів до загальної площі.
ІЇО107| Кількість незв'язаного майтансиноїду, присутнього в кон'югаті, аналізували за допомогою двоколонкової ВЕРХ (колонки Нізер і С18): вимірювали площі піків загальних незв'язаних видів майтансиноїдів (елюйованих у градієнті й ідентифікованих порівнянням часу елюювання з відомими стандартами) з використанням детектора поглинання, встановленого на довжину хвилі 252 нм; кількість незв'язаного майтансиноїду розраховували з використанням стандартної кривої, одержаної за площею піків відомих кількостей стандартів.
ІЇО108| Як це показано в Таблиці 1 нижче, кон'югат, одержаний з використанням способу згідно з винаходом, перевершував кон'югат, одержаний з використанням описаного раніше способу відносно некон'югованого лінкера, невідновлюваних видів і мономера кон'югата. Крім того, стабільність кон'югата, одержаного способом згідно з винаходом, по суті була вище щодо вивільнення незв'язаного майтансиноїду після зберігання протягом п'яти місяців за температури 4"б. Рівні мономерів кон'югатів, одержаних обома способами, були стабільними.
Таблиця 1
Порівняння основних властивостей кон'югата СО37-3, одержаного способом згідно з винаходом, у порівнянні з описаним раніше способом 11111111 | Описанийранішеспосіб | Спосіб згідно з винаходом антитіла " "
Невідновлюванівиди(96). /////Ї77777777гггсл9411111111091
Мономер кон'югата, (96) (20) місяців за температури 4") " "
Незв'язаний майтансиноїд, (95) (2-0) 5 місяців за температури 4") " "
І0109| Результати експериментів, відображені в даному прикладі, показують покращений спосіб одержання кон'югатів клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент, що мають по суті підвищену чистоту. Крім покращень у чистоті й стабільності кон'югатів при використанні способу згідно з винаходом, також є покращення в часі одержання й сумісності через ліквідацію двох етапів одержання (реакції модифікації й очищення модифікованого антитіла).
Приклад 2
Зо 011091 Гуманізоване антитіло до фолатного рецептора пиМом19 (див. публікацію заявки на патент США Ме2012/0009181) реагувало з гетеробірункціональним реагентом сульфо-5РОВ, що утворює перехресні зв'язки, і майтансиноїдом ОМА з використанням двох описаних раніше способів, а також покращеного способу, описаного в тексті даної заявки. 0111) Для описаного раніше Способу А (двоетапний спосіб, див., Спагі еї аІЇ.,, патент США
Ме5208020), антитіло пиМом19 (20 мг/мл) спочатку реагувало з сульфо-5РОВ (5,7-кратний молярний надлишок щодо кількості антитіла, розчиненого в ОМА, диметилацетаміді) з утворенням модифікованого антитіла. Реакцію модифікації проводили за температури 207С в 50
ММ ЕРРЗ (4-(2-гідроксиетил) піперазин-1-пропансульфонова кислота) буфері (рН 8,1), що містить 596 ЮМА, протягом 180 хвилин. Модифіковане антитіло очищали з використанням колонки зі смолою Зерпадех О-25Е із установленою рівновагою й елюювали в 50 мМ ЕРРЗ (рн 8,1) 2 мМ ЕДТА (етилендіамінтетраоцтова кислота). Після очищення, модифіковане антитіло (в концентрації 5,0 мг/мл) реагувало з майтансиноїдом ЮМ4 (розчинений в ОМА; 9,7-кратний молярний надлишок у порівнянні з кількістю антитіла; 1,7-кратний молярний надлишок у порівнянні з виміряною кількістю лінкера на антитілі) з утворенням кон'югованого антитіла.
Реакцію кон'югації проводили за кімнатної температури в 50 мМ ЕРРЗ (рН 8,1), що містить 2 ММ
ЕДТА й 595 ОМА протягом приблизно 18 годин. Потім реакційну суміш очищали з використанням колонки зі смолою Зерпадех 0-25Е із установленою рівновагою й елюювали в 10 мМ натрію сукцинату (рН 5,0). 0112) Для описаного раніше Способу В (одноетапний спосіб, див., Оаї еї аїЇ., патент США
Ме7811572), антитіло пиМом19 (10 мг/мл) спочатку реагувало із сульфо-5РОВ (4,9-кратний молярний надлишок щодо кількості антитіла, розчиненого в ОМА) з утворенням модифікованого антитіла. Реакцію модифікації проводили за температури 20"С в 50 мМ буфера ЕРРЗ (рН 7,5), що містить 2 мМ ЕДТА в 1095 ОМА протягом 60 хвилин. Модифіковане антитіло не було очищено перед реакцією кон'югації. Замість цього неочищене модифіковане антитіло реагувало в концентрації 10 мг/мл з майтансиноїдом ОМА (8,3-кратний молярний надлишок щодо кількості антитіла, розчиненого в ОМА) з утворенням кон'югованого антитіла. Реакцію кон'югації проводили за кімнатної температури в 50 мМ буфері ЕРРЗ (рН 7,5), що містить 2 мМ ЕДТА й 10956 ОМА протягом приблизно 18 годин. Потім реакційну суміш очищали з використанням колонки зі смолою Зерпадех 0-25Е із установленою рівновагою й елюювали в 10 мМ натрію сукцинату (рН 5,0).
ІО113) Для способу згідно з винаходом, для якого використовували Зерпадех 0-25 (Спосіб 3, одноетапний спосіб) для очищення кон'югата, антитіло пПиМом19 (6,0 мг/мл) змішували з ОМА (9,7-кратний молярний надлишок щодо кількості антитіла, розчиненого в ОМА), а потім із сульфо-5РОВ (5,7-кратний молярний надлишок щодо кількості антитіла, розчиненого в ОМА).
Реакцію проводили за температури 20"С в 50 мМ буфері ЕРРЗ (рН 8,1), що містить 2 ММ ЕДТА й 1095 ОМА протягом приблизно 20 годин. Потім реакційну суміш очищали з використанням колонки зі смолою Зерпадех 0-25Е із установленою рівновагою й елюювали в 10 мм натрію сукцината (рН 5,0).
ЇО114| Для способу згідно з винаходом, для якого використовували фільтрацію тангенціальними потоками (ФТП) (Спосіб ЮО, одноетапний спосіб) для очищення кон'югата, антитіло пиМом19 (5,0 мг/мол) змішували з ЮМА4 (10,2-кратний молярний надлишок щодо кількості антитіла, розчиненого в ОМА) і потім їз сульфо-5РОВ (6,0-кратний молярний надлишок
Зо щодо кількості антитіла, розчиненого в ОМА). Реакцію проводили за температури 20"7С в 50 мМ буфері ЕРРЗ (рН 8,5), що містить 2 мМ ЕДТА й 1095 ОМА протягом приблизно 20 годин. Потім реакційну суміш очищали й піддавали діафільтрації з використанням ФТП в 10 мМ натрію сукцинату (рН 5,0).
ІЇО115| Кон'югат, одержаний різними способами, аналізували у такий спосіб: Уф спектроскопія (для визначення концентрації й співвідношення майтансиноїду до антитіла, МАК);
ВЕРХ з оберненими фазами для визначення незв'язаного майтансиноїду; мас-спектрометрія для визначення рівня некон'югованого лінкера й профілю розподілення мас; відновлювальний електрофорез 505 РАСЕ для визначення рівня невідновлюваних видів; невідновлювальний електрофорез 505 РАСЕ для визначення рівня фрагментації; ексклюзійна ВЕРХ для визначення мономера кон'югата. Стабільність під час зберігання оцінювали щодо мономера кон'югата й вивільнення незв'язаного майтансиноїду. Додаткові подробиці способів аналізу описані в Прикладі 1. (0116) Як це продемонстровано в Таблиці 2 нижче, кон'югат, одержаний з використанням способу згідно з винаходом, перевершував кон'югат, одержаний з використанням способу описаного раніше щодо мономера. Кон'югат, одержаний з використанням одностадійного й одноетапного способу, в якому проводили остаточне очищення кон'югата з використанням
Зерпадех (1-25, тобто Способів В ії С, відповідно, мав підвищений рівень незв'язаного майтансиноїду в порівнянні з кон'югатом, одержаним з використанням двоетапного способу,
Способу А. Однак при використанні іншого фінального способу очищення, ФТП (Спосіб 0), рівень незв'язаного майтансиноїду був дуже низьким і порівнянним з рівнем, який спостерігали у ході двоетапного способу, при цьому обидва рівня відзначали після первинного очищення й після зберігання за температури 4"С протягом шести тижнів. Щодо інших важливих характеристик кон'югата (наприклад, фрагментації, невідновлюваних видів, профілю розподілення мас і некон'югованого лінкера), кон'югат, одержаний з використанням способу згідно з винаходом, був еквівалентний коньюгату, одержаному з використанням описаного раніше способу.
Таблиця 2
Порівняння основних властивостей кон'югата пПиМом19, одержаного згідно способу за винаходом, у порівнянні з описаними раніше способами
Кількість однократних дій
Концентрація (мг/мл)
МАВ (УФ)
Мономер кон'югата, (96) приї 7-0
Яо;
Незв'язаний майтансиноїд, (6)приї-0 | 06 | 63 | З | 01
Незв'язаний майтансиноїд, (95) при ї - 6 54 2,7 0,4 тижнів, 47С
Невідновлювані види з використанням відновлюваного деїІ-спір (90 0,7 0,7 0,5
Профіль розподілення мас (МОР)
Некон'югований лінкер (МОР) " Очищений з використанням 5-25 "х Очищений з використанням ФТП
ІЇО117| Результати експериментів, відображені в даному прикладі, демонструють покращений спосіб одержання кон'югатів клітиннозв'язувальний агент-цитотоксичний агент, що мають по суті підвищену чистоту. Крім покращень у чистоті й стабільності кон'югатів при використанні способу згідно з винаходом, також є покращення в часі одержання й сумісності через елімінацію двох етапів одержання (реакції модифікації й очищення модифікованого антитіла).
Приклад З
ЇО118| Даний приклад показує, що описаний тут одноетапний спосіб може використовуватися для одержання кон'югатів з різними лінкерами й цитотоксичними агентами майтансиноїдами. 01191 Гуманізоване антитіло пиМе901 змішували з майтансиноїдом (ОМІ1 або ОМА) і потім з лінкером (сульфо-ЗМОС, МОСС, 5РОВ або 5РР). Реакцію проводили за температури 207С в 50
ММ фосфатному буфері (рН 7,5), що містить 2 мМ ЕДТА й 1095 ОМА протягом приблизно 20-24 годин. Потім реакційну суміш очищали з використанням колонки зі смолою Зерпадех О25БЕ із установленою рівновагою й елюювали в 10 мМ натрію сукцинату (рН 5,0).
ІО120| Як це продемонстровано в Таблиці З нижче, одноетапна реакція може бути проведена з різними комбінаціями лінкера й майтансиноїду з гарним виходом кон'югата, співвідношенням МАК і рівнями мономерів.
Таблиця З
Одержання кон'югатів з використанням різних комбінацій лінкера й майтансиноїду 77777171 ліннер, | ОМх | МАВконюгата | Мономер кон'югата (95)
Одноетапний 5РОВ (згідно з 5МОС винаходом) 5-5МОС 5РОВ
І01211| Усі посилання, включаючи публікації, заявки на патенти й патенти, процитовані в тексті даної заявки, включені сюди у всій своїй повноті за допомогою посилання тією самою мірою, як якби кожне посилання було представлено окремо і спеціально з вказівкою шляхом посилання й у повному своєму об'ємі.
ІО122| Покажчик однини й подібні поняття, використовувані в контексті опису даного винаходу (особливо в контексті представленої нижче формули винаходу), включають однину й множину, якщо чітко не зазначене інше або якщо це чітко не випливає з контексту. Терміни «включати», «мати», «включаючи» і «містити» позначають необмежуючі терміни (тобто позначають «включаючи, але не обмежуючись»), якщо не зазначене інше. Позначення діапазонів значень у тексті даної заявки служить як спосіб скорочення позначення посилання на кожне окреме значення, включене в діапазон, якщо не зазначене інше, і кожне окреме значення включене в текст, як якби воно було зазначено окремо. Всі описані тут способи можуть проводитися в будь-якому відповідному порядку, якщо не зазначене інше або якщо інше чітко не випливає з контексту. Використання будь-якого й усіх прикладів або типових термінів (наприклад, «такий як») у тексті даної заявки призначене тільки для ілюстрації винаходу й не повинне обмежувати об'єм винаходу, якщо не зазначене інше. Жоден термін у тексті заявки не повинен розглядатися як такий, що показує на будь-який незаявлений елемент як істотний для практичного використання винаходу. (0123) У даному документі описані кращі варіанти втілення даного винаходу, включаючи найбільш відомий спосіб здійснення винаходу, відомий дослідникам. Фахівцю в даній галузі після прочитання представленого вище опису стануть очевидними варіації кращих варіантів втілення винаходу. Дослідники очікують, що фахівці в даній галузі будуть використовувати дані варіації відповідним чином, крім того, дослідники припускають, що винахід може бути використаний іншим способом, ніж описаний в даній заявці. Відповідно до цього, даний винахід включає всі модифікації й еквіваленти сутності винаходу, представленої в прикладеній формулі винаходу відповідно до чинного законодавства. Більше того, будь-яка комбінація описаних вище елементів у всіх можливих варіаціях охоплюється даним винаходом, якщо інше не буде зазначене окремо або якщо це чітко не випливає з контексту.
список песлідевнОостей «ЩО» тей, НО «05 ОДЕРЖАННЯ КОН'ЮГАТІВ МАЙТАНСИНОЇДЗАНТИТІВУ ОДНОБТАЙНИМ СПОСОБОМ «ре Цю о «віх ин и9 й «ія НО БІО ЗУ хх ее ха 35 «ЯТОх БаєеасІв Уекаіой 3. чан У
МАЮ ків» БІЛОК І «ех штучна послідовність «Ех . хижі» ОКО важкого язнцюга «р 3
Ту тує Ре меж два 3 Х с» 2 хи» БІЛОК ; ; «аж Штучна посязаовнієть кл І «ве СБВХ важкого панцяга че аа» МІЯ ЕЕАТИКЕ «ва 43. 043 й ; «ке» хаа ї5 бує. Бій, Ні, Вк Ага као» кеяіЮ МБ ОКЕАТуВЕ хееїж хва ія ів, Мі, АяЙ, ог Ага «Елі» МІБСОКЕАТОВЕ «ай АН, , «СЯ» ха з Біу, ІЗ, ТВ; Хвг, 813, КО «НО»
Ага хів нів РКО тує аб піу Аєр тйе обБНе тує аБВ бій хай Бе хХва ї 5 їв 15 ха
ХЕ Я
«іх БІЛОК І «ЕІ» щтУчнНа послідовність
«енЯх СОКУ важкого ланцяга. «МЮх тук ав (1у чег ага Аа мех АяВ тує ї 5 «ле кіло й І киїїх Учна ВаслідеВніті хе «Я» СОВІ легжого лання
НМ Я кує їз бек шій хег Ма! бек вне 18 бі те Зек сер меє ніх ї КІ їв їй ха 5 сво «аж БілюВ й І «и» штучна пеослідеанікть «Ко «бЯ3ю «ВІ вегкого вана «М ага Аза дає ази вав іш аа ка «еівх ДОВ І І «вії» Щтучна вес довність «Ох ,
Ав ОК3 легкого лани ям В
Фів іо баб АгУ СТВ Тук бро тує тее я «Ввю «оо БІВОоК . й ха» Штучна послідовність ка І «ай» «МВБОУ язжеОго ванВшг а кое у КЯ м жів мія Рг Туг дер віх вв тик пе тук ахй бій вух вве бій 1 5 їв 15 щу «хаібх «иа З
«ок» Вілов . й хі» ж учна послідовність ка Ох . хім ВджЕий панцюг ню В
Бін Уві бів ев Уві бій Бек обіу АТ бів ма? УВІ фу РКО Бім дів ї 5 їв 15
Заг УВІ виб ків бек сСух Куб Вій же З1іу тує ТВе вне ТВе Б1у тує ж 25 я
РБе Мет ан тер оУзі ух Фів бек Рго біу бій хаб ем сін тТкн Тв ці ага 18 Ні БР Туг А» БіУ АБО ТВе РВЕ Туг ахАй БІВ (ух вне
За 55 ЩО шій 1Уу ух аї8 ТВг во Тк Узі АБр бух баг бек ази таг АВ ВІВ 7 7 що мес бів сви без бак гео їйг обоє бін бев вне АїВ а! Тук тує сСух 5 ЗО Кз
ТВг Ага тТук аа З бек Ага АТ Мет Зою Тут Тер ТУ бів Ту тТВк щю ОЗ о їбе Уді Тег УВІ ее бек АТ. бак твР бух бІу рко чек узі ве вте ї2о що
Шеу віз вго Збг щекє бує ее о тТвк хаб бу бі ТВг о АТа АТа вве сту
Її 135 Я суб о уві бух ав тує Бе вго ЗІ; Бо Ма! тТвг ма беб тТеВ АВ 145 ща Ку БО
Бек біу вів ем те Бер бі Уа нії ТК РВе вро АЇВ ЯР ве Фів 165 170 Т75 ес дек дтіу сен тТук бег їец бек Заг Уа УВІ ТВе уді БеБ бер ек іо 155 ЩО заг ван т Те ов Те о тТуУуК хів Суб ди уві ди Ні бух БгО Зег 135 М 205 а5а ТВР вує Ма! Ахр ух су уві бів вка бу хег о Сув Абр Ку ТВг жа тій 220
Мі тТВг сух вге РКО Сух Рго діа РРО 3й без ен оту Ту го бег «їх 230 Жах я
Узі вва ви Ве Рго РРО Куб РКО фух дер тТни сен Меб Хі баг АКО я5О 255
Те бго дію у(і Те оСує маї за уві Ар Уві беконі бів Абе вч
БО 65 хо ів УВІ руб Ре ден тт Тут мі АВ Оу Уді зів Мі ніх Аа АЇВ 375 ЯКО ЗВ вуж Те веб вра Ага сі бі бій Тук аяа дек тн тує ага ді Уві
ЗК 255 00 зек уві цею Тве о Уді ве) іє біз де жгв оо АБВ Оу Бу ЯБЦ Тук ще о з о
Буг сСує ук УВІ бек дахи бує АТ фем вто Аїа БО тів і бує ТНЕ 358 Б Я її Баг у5 віз бух Біу бій вге Ага Єв рго сій ма Тук тТвг бах
Бе, 345 350
Бгто Бго Заг аго азр обі ви ТвгР обу Аа ців УЗ; бег сен Те Сух 355 тб 5 іви Уа ух З1у Ве Ту РКО баг АБО Хів АТ Уа! ій Тр оби ек в 375 зко зва бік Бій го Біб Ах АБО ТУуК Буб ТВРг ОтТВУ тб бго уві їеб Або та ЗО 335 чю кег дев іу Зак вне вне іви Ту баг уж зей ТНК Узі два бує ет ще що ща дга тев бій бів Біт жа Узі Бе Зог сСух Заг УВІ меж нів «їв дій 350 Б що цев ніх ашп нів ТУ ТйгОБів уз Зак ем Бек зви зви во бу щує 435 Я 455 ха хащі БІК ха» ручна послідовність «Ех «йтЯ» варіанпеньний доме важкшго ланцюкх ям З сій Уві ія вес уві ств бе бі із Зі уві заї бу вка бію Аїа ї х їв і ее Уа Був Ііа 5ег вує Аїй Берг оіу Туг Тк РВе те сіу Тук вне щу 25 Зо мех аби тео Уаї уз бій хаб ко біу бій Зк ве бів Тгр о тіє о1у
Б. ях
Зо
Аква лів нія Рез Туг ар біу АХ ОТАК Ве Тук доза дій бух вве вій
З 5. бо щіу уз Аа ТНК ьо ТНг о УВІ АБ бує его бек ахи ТР Аа нів М то т що
ЗЕМ зей Заг зви ТВЄ хек бів аяр вве АТа за! туго тує суб ТР 85 щ Ки
Ага Тук Авр Яїу Бек АгОо віз мех аж тТуК Тер сту й т ТВРОТве
МЮ 155 М
Уві тв Уа! бек обек «вх кій БІЛО І хе» ВТУЗНЕ ПОКАЗ ДОВНІЄТЬ с ще «ий» жавівОельний домен вебкого панна «а дер сів ма! йяи Тне дій бер Рік фен Зег сви АТа Уа? Бак цей Ту ї 5 о ї5 шій ве аа Хе їїє чек бух бух аі5 бег Фін чек чаї ек вне Її то 25 Ко бі те Бек вва Ме нії Ткр тує мія бій губ рео бі» бів дів рго 35 БІ 5
АРц ев во їте тує ага аа аг АявВ жи зів іх в1у Уві Бо Ер ща 55 0 ага рве Зеє БЇу Жах Бі чек руб Тк йо Бе тир їв Аза її зер
Та т що
Бгто Ві ов вів бін ав АЇз АВ Так Тук Тук був Ів Бій дек Ага 85 що З5 вій тук бго тук тк РВе біу віу Бі тне рух вею бій Ті ув Аг
ЕК 103 о
Ом «ій» БІЛОК й «Я» Штучна послідовність
ОДИН - «СИ» Баріайельний деУен лего панивга аа лів У! нео Те щій бек вка ем бек во АЛа Уа бек ве Фу їХ х ЗО 15 оів ко іх тіє (16 Зак суг вує ді бек бій бак Уші бег Ре Аїа
М: я 30
Бі тТиг дак іяи Ме ні тво тує ніх бів куб то іУу бій ат вгеа 35 «в 45 :
Яга Бен нео Ще тує ага аа хек вп ев їв ів і» Уді ро АВ
Б ані ри че ій как Бі чек гу ТК ав вна ТВе ее ТК Мі Бек 55 70 75 що
Бео Уаі 1 АіВ 5; вав АЇВ А ТВ тує ТУР Єжх Вій Бі дек Ага 55 КІ з і УК БРа тує Те о РНе біу бі ші» тв? вух сей 30 Ї1а Буз гу
ЩО | ШО І що

Claims (42)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Спосіб одержання кон'югата антитіло-майтансиноїд, що включає стадії: (а) приведення антитіла і майтансиноїду в контакт з утворенням першої суміші, що включає антитіло і майтансиноїд, потім приведення першої суміші в контакт з біфункціональним реагентом, що утворює перехресні зв'язки й включає лінкер, у розчині, що має рН від приблизно 4 до приблизно 9, з одержанням другої суміші, що включає (ї) кон'югат антитіло-майтансиноїд, де антитіло хімічно з'єднане за допомогою лінкера з майтансиноїдом, (ії) незв'язаний майтансиноїд, і (ії) побічні продукти реакції; і (б) очищення другої суміші, що включає кон'югат антитіло-майтансиноїд, з одержанням очищеного кон'югата антитіло-майтансиноїд.
2. Спосіб за п. 1, в якому майтансиноїд додають до антитіла для утворення першої суміші протягом інтервалу часу.
З. Спосіб за п. 2, в якому біфункціональний реагент, який утворює перехресні зв'язки, додають протягом інтервалу часу з молярним надлишком майтансиноїду в розчині, що має рн від 4 до 9, для одержання другої суміші.
4. Спосіб за п. 2 або 3, в якому майтансиноїд додають безперервно.
5. Спосіб за будь-яким з пп. 2-4, в якому біфункціональний реагент, який утворює перехресні зв'язки, додають безперервно.
б. Спосіб за будь-яким з пп. 1-5, в якому другу суміш очищують піддаванням суміші фільтрації тангенціальними потоками, вибірковій преципітації, адсорбційній фільтрації, адсорбційній хроматографії, неадсорбційній хроматографії або їх комбінаціям для очищення кон'югата антитіло-майтансиноїд від незв'язаного майтансиноїду і побічних продуктів реакції.
7. Спосіб за п. 6, в якому другу суміш очищають піддаванням суміші фільтрації тангенціальними потоками.
8. Спосіб за будь-яким з пп. 1-7, в якому приведення в контакт на стадії (а) здійснюється наданням антитіла в реакційній посудині, додаванням майтансиноїду в реакційну посудину з утворенням першої суміші, що включає антитіло і майтансиноїд, і потім додаванням біфункціонального реагенту, що утворює перехресні зв'язки, до першої суміші.
9. Спосіб за будь-яким з пп. 1-8, який додатково включає утримання другої суміші між стадіями (а)-(б) для вивільнення нестабільно зв'язаних лінкерів від антитіла.
10. Спосіб за п. 9, в якому другу суміш утримують протягом приблизно 20 годин за температури від приблизно 2 "С до приблизно 8 "С.
11. Спосіб за будь-яким з пп. 1-10, який додатково включає гасіння другої суміші між стадіями (а)-(б) для гасіння будь-якого майтансиноїду, що не прореагував, і/або біфункціонального реагенту, що не прореагував, який утворює перехресні зв'язки.
12. Спосіб за п. 11, в якому суміш гасять приведенням другої суміші в контакт з гасильним реагентом, який реагує з незв'язаним майтансиноїдом.
13. Спосіб за п. 12, в якому гасильний реагент вибирають з групи, що складається з 4- малеїмідомасляної кислоти, З-малеімідопропіонової кислоти, М-етилмалеїміду, йодоацетаміду і йодоацетамідопропіонової кислоти.
14. Спосіб одержання кон'югата антитіло-майтансиноїд, що включає стадії: (а) приведення антитіла і майтансиноїду в контакт з утворенням першої суміші, що включає антитіло і майтансиноїд, потім приведення першої суміші в контакт з біфункціональним реагентом, який утворює перехресні зв'язки і включає лінкер, в розчині, який має рН від 4 до 9, з одержанням другої суміші, що включає (і) кон'югат антитіло-майтансиноїд, де антитіло хімічно з'єднане за допомогою лінкера з майтансиноїдом, (ії) незв'язаний майтансиноїд, і (іїї) побічні продукти реакції; (б) приведення другої суміші в контакт з майтансиноїдом для утворення третьої суміші; і потім приведення третьої суміші в контакт з біфункціональним реагентом, який утворює перехресні зв'язки, при рН від приблизно 4 до приблизно 9 для утворення четвертої суміші; і (в) очищення четвертої суміші, що включає кон'югат антитіло-майтансиноїд, з одержанням очищеного кон'югата антитіло-майтансиноїд.
15. Спосіб за п. 14, в якому стадію (б) повторюють один або більше разів перед виконанням стадії (в).
16. Спосіб за п. 15, в якому кожний повтор стадії (б) здійснюють після однієї або більше годин після первинної стадії (б).
17. Спосіб за будь-яким з пп. 14-16, в якому четверту суміш очищують піддаванням суміші фільтрації тангенціальними потоками, вибірковій преципітації, адсорбційній фільтрації, адсорбційній хроматографії, неадсорбційній хроматографії або їх комбінації для очищення кон'югата антитіло-майтансиноїд від незв'язаного майтансиноїду і побічних продуктів реакції.
18. Спосіб за п. 17, в якому четверту суміш очищають піддаванням суміші неадсорбційній хроматографії.
19. Спосіб за п. 17, в якому четверту суміш очищають піддаванням суміші фільтрації тангенціальними потоками.
20. Спосіб за будь-яким з пп. 14-19, в якому приведення в контакт на стадії (а) здійснюється наданням антитіла в реакційній посудині, додаванням майтансиноїду в реакційну посудину з утворенням першої суміші, що включає антитіло і майтансиноїд, і потім додаванням біфункціонального реагенту, який утворює перехресні зв'язки, до першої суміші.
21. Спосіб за будь-яким з пп. 15-20, який додатково включає утримання четвертої суміші між Зо стадіями (б)-(в) для вивільнення нестабільно зв'язаних лінкерів від антитіла.
22. Спосіб за п. 21, в якому четверту суміш утримують протягом приблизно 20 годин за температури від приблизно 2 "С до приблизно 8 "С.
23. Спосіб за будь-яким з пп. 15-22, який додатково включає гасіння четвертої суміші між стадіями (6б)-(в) для гасіння будь-якого майтансиноїду, що не прореагував, і/або біфункціонального реагенту, що не прореагував, який утворює перехресні зв'язки.
24. Спосіб за п. 23, в якому суміш гасять приведенням четвертої суміші в контакт з гасильним реагентом, який реагує з незв'язаним майтансиноїдом.
25. Спосіб за п. 24, в якому гасильний реагент вибирають з групи, що складається з 4- малеїмідомасляної кислоти, З-малеімідопропіонової кислоти, М-етилмалеїміду, йодоацетаміду і йодоацетамідопропіонової кислоти.
26. Спосіб за будь-яким з пп. 1-25, в якому приведення в контакт на стадії (а) здійснюють в розчині, який має рН від приблизно 7 до приблизно 9.
27. Спосіб за будь-яким з пп. 1-26, в якому приведення в контакт на стадії (а) здійснюють за температури від приблизно 16 "С до приблизно 24 "с.
28. Спосіб за будь-яким з пп. 1-26, в якому приведення в контакт на стадії (а) здійснюють за температури від приблизно 0 "С до приблизно 15 "С.
29. Спосіб за будь-яким з пп. 1-28, в якому антитіло являє собою моноклональне антитіло.
30. Спосіб за будь-яким з пп. 1-28, в якому антитіло являє собою гуманізоване моноклональне антитіло.
31. Спосіб за будь-яким з пп. 1-28, в якому антитіло вибирають з групи, що складається з пиМОО1, пиму9-6, пива, пиС242, трастузумабу, біватузумабу, сибротузумабу, СМТО95, пир5б, ритуксимабу, антитіла до Нег2, антитіла до ЕСЕК, антитіла до СО27Ї, антитіла до ЕСЕЕМІІЇ, Стірю, антитіла до СО138, антитіла до СОЗ8, антитіла до ЕрпАг, зв'язуючого інтегрин антитіла, антитіла до СО37, антитіла до фолату, антитіла до НегзЗ і антитіла до ІСРІК.
32. Спосіб за п. 31, де антитіло являє собою антитіло до СО37.
33. Спосіб за п. 31, в якому антитілом є трастузумаб.
34. Спосіб за будь-яким з пп. 1-33, в якому майтансиноїд являє собою М-деацетил-Ме-(3- меркапто-1-оксопропіл)-майтансин (ОМ).
35. Спосіб за будь-яким з пп. 1-33, де майтансиноїд являє собою М2-деацетил-М2-(4-метил-4- бо меркапто-1-оксопентил)-майтансин (ОМА).
36. Спосіб за будь-яким з пп. 1-35, в якому біфункціональний реагент, який утворює перехресні зв'язки, включає молекулу М-сукцинімідилового ефіру, молекулу М-сульфосукцинімідилового ефіру, малеімідоосновану молекулу або галоацетилосновану молекулу.
37. Спосіб за будь-яким з пп. 1-35, в якому біфункціональний реагент, який утворює перехресні зв'язки, вибирають з групи, що складається з М-сукцинімідил-3-(2-піридилдитіо)пропіонату (5РОР), М-сукцинімідил-4-(2-піридилдитіо)пентаноату (5РР), М-сукцинімідил-4-(2- піридилдитіо)бутаноату (5РОВ), М-сукцинімідил-4-(2-піридилдитіо)-2-сульфобутаноату (сульфо- ЗРОВ), М-сукцинімідил-4-(малеімідометил)уциклогексанкарбоксилату (5МСОС), РЕС-таї, сульфо- Маї ї СХ1-1.
38. Спосіб за будь-яким з пп. 1-37, в якому розчин на стадії (а) включає сахарозу.
39. Спосіб за будь-яким з пп. 1-38, в якому розчин на стадії (а) включає буферний агент, вибраний з групи, що складається з цитратного буфера, ацетатного буфера, сукцинатного буфера і фосфатного буфера.
40. Спосіб за будь-яким з пп. 1-38, в якому розчин на стадії (а) включає буферний реагент, вибраний з групи, що складається з НЕРРБО /(М-(2-гідроксіетил)/піперазин-М'-(2- гідроксипропансульфонова кислота)), РОРБО (піперазин-1,4-біс-(2-гідроксипропансульфонова кислота) дигідрат), НЕРЕБ5 (4-(2-гідроксіетил/піперазин-1-етансульфонова кислота), НЕРР5 (ЕРРБ) (4-(2-гідроксіеєтил)піперазин-1-пропансульфонова кислота), ТЕ5 (М- Ігрис(гідроксиметил)метилі|-2-аміноетансульфонова кислота) і їх комбінацій.
41. Спосіб за будь-яким з пп. 1-40, в якому майтансиноїд являє собою ЮМ'І1, біфункціональний реагент, який утворює перехресні зв'язки, являє собою ЗМСС, і антитілом є антитіло пиИСО37-3.
42. Спосіб за будь-яким з пп. 1-40, в якому майтансиноїд являє собою ЮМ'1, біфункціональний реагент, який утворює перехресні зв'язки, являє собою 5МСС, і антитілом є трастузумаб.
UAA201312640A 2011-03-29 2012-03-29 Спосіб одержання кон'югата антитіло-майтансиноїд UA116524C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161468997P 2011-03-29 2011-03-29
PCT/US2012/031243 WO2012135517A2 (en) 2011-03-29 2012-03-29 Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA116524C2 true UA116524C2 (uk) 2018-04-10

Family

ID=46928080

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201312640A UA116524C2 (uk) 2011-03-29 2012-03-29 Спосіб одержання кон'югата антитіло-майтансиноїд

Country Status (25)

Country Link
US (7) US8795673B2 (uk)
EP (2) EP3545977A1 (uk)
JP (5) JP6000329B2 (uk)
KR (6) KR20220009505A (uk)
CN (2) CN103717262B (uk)
AU (5) AU2012236398B2 (uk)
CA (1) CA2831467C (uk)
CY (1) CY1121321T1 (uk)
DK (1) DK2691155T3 (uk)
EA (2) EA201991268A3 (uk)
ES (1) ES2709577T3 (uk)
HR (1) HRP20190243T1 (uk)
HU (1) HUE041384T2 (uk)
IL (3) IL228559A (uk)
LT (1) LT2691155T (uk)
ME (1) ME03353B (uk)
MX (2) MX369659B (uk)
NZ (1) NZ726386A (uk)
PL (1) PL2691155T3 (uk)
PT (1) PT2691155T (uk)
RS (1) RS58367B1 (uk)
SI (1) SI2691155T1 (uk)
TR (1) TR201902180T4 (uk)
UA (1) UA116524C2 (uk)
ZA (1) ZA201605918B (uk)

Families Citing this family (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5149620B2 (ja) 2004-07-23 2013-02-20 エンドサイト，インコーポレイテッド ２価リンカーおよびその結合体
US20110166319A1 (en) * 2005-02-11 2011-07-07 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
IL282138B2 (en) 2005-08-24 2024-01-01 Immunogen Inc A process for preparing purified drug compounds
US9555139B2 (en) 2007-03-14 2017-01-31 Endocyte, Inc. Binding ligand linked drug delivery conjugates of tubulysins
US9877965B2 (en) 2007-06-25 2018-01-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
ES2732879T3 (es) 2007-06-25 2019-11-26 Endocyte Inc Conjugados que contienen enlazantes espaciadores hidrófilos
BRPI1010620B8 (pt) 2009-06-03 2021-05-25 Immunogen Inc métodos de conjugação
MX340437B (es) 2010-02-24 2016-07-08 Immunogen Inc Anticuerpos e inmunoconjugados del receptor 1 de folato y usos de los mismos.
MX338932B (es) 2010-03-12 2016-05-06 Immunogen Inc Moleculas de union cd37 y sus inmunoconjugados.
MX369659B (es) 2011-03-29 2019-11-15 Immunogen Inc Preparacion de conjugados de maitansinoides y anticuerpos mediante un proceso de una etapa.
DK2694106T3 (en) * 2011-04-01 2018-03-05 Immunogen Inc METHODS FOR INCREASING EFFECT OF FOLR1 CANCER THERAPY
WO2013126797A1 (en) 2012-02-24 2013-08-29 Purdue Research Foundation Cholecystokinin b receptor targeting for imaging and therapy
US20140080175A1 (en) 2012-03-29 2014-03-20 Endocyte, Inc. Processes for preparing tubulysin derivatives and conjugates thereof
BR112015004229B1 (pt) 2012-08-31 2023-02-07 Immunogen, Inc Anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente à proteína folr1, kit de imunoensaio, método de detecção in vitro de proteína folr1, uso de um agente ativo, e método para monitoramento da eficácia terapêutica
JP2015535215A (ja) * 2012-10-04 2015-12-10 イムノゲン インコーポレーティッド 細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートから不純物を除去するためのイオン交換膜の使用
US20150306242A1 (en) * 2012-10-04 2015-10-29 Immunogen, Inc. Process for preparing stable antibody maytansinoid conjugates
NZ707091A (en) 2012-10-04 2018-12-21 Immunogen Inc Use of a pvdf membrane to purify cell-binding agent cytotoxic agent conjugates
WO2014062697A2 (en) 2012-10-16 2014-04-24 Endocyte, Inc. Drug delivery conjugates containing unnatural amino acids and methods for using
US8769557B1 (en) 2012-12-27 2014-07-01 The Nielsen Company (Us), Llc Methods and apparatus to determine engagement levels of audience members
JP6494533B2 (ja) 2013-02-28 2019-04-03 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞結合剤及び細胞毒性剤としてのマイタンシノイドを含む複合体
WO2014134486A2 (en) 2013-02-28 2014-09-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
US9498532B2 (en) 2013-03-13 2016-11-22 Novartis Ag Antibody drug conjugates
MA38396B1 (fr) 2013-03-15 2019-05-31 Novartis Ag Anticorps medicamenteux conjugues et leurs compositions pharmaceutiques pour traiter un cancer positif a ckit
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
CN105814079B (zh) 2013-08-30 2021-02-09 伊缪诺金公司 用于检测叶酸受体1的抗体和测定
TWI541022B (zh) * 2013-12-18 2016-07-11 應克隆公司 針對纖維母細胞生長因子受體－３（ｆｇｆｒ３）之化合物及治療方法
EA035809B1 (ru) 2014-03-11 2020-08-14 Регенерон Фармасьютикалс, Инк. АНТИТЕЛА ПРОТИВ EGFRvIII И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
ES2785551T3 (es) 2014-06-30 2020-10-07 Glykos Finland Oy Derivado de sacárido de una carga útil tóxica y sus conjugados con anticuerpos
MX2017001946A (es) 2014-08-12 2017-06-19 Novartis Ag Conjugados de farmacos con anticuerpos anti-cdh6.
US20170333570A1 (en) * 2014-10-31 2017-11-23 Formation Biologics Inc. Egfr antibody-based combination therapy
CN106267225B (zh) * 2015-05-29 2020-03-06 上海新理念生物医药科技有限公司 三马来酰亚胺型连接子及其应用
TW201711702A (zh) 2015-06-04 2017-04-01 應克隆公司 使用針對纖維母細胞生長因子受體３（ｆｇｆｒ３）之化合物的療法
UA125496C2 (uk) 2015-06-08 2022-04-13 Дебіофарм Інтернаціонал, С.А. Спосіб лікування пацієнта з в-клітинним раком імунокон’югатом, який зв’язується з cd37 разом з антитілом, що зв'язується з cd20
US20190194315A1 (en) 2015-06-17 2019-06-27 Novartis Ag Antibody drug conjugates
WO2017040247A1 (en) * 2015-08-28 2017-03-09 Immunogen, Inc. Antibodies and assays for detection of cd37
IL298438A (en) 2015-09-17 2023-01-01 Immunogen Inc Medical combinations containing anti-folr1 immune conjugates
EP4335851A3 (en) 2015-11-25 2024-06-05 ImmunoGen, Inc. Pharmaceutical formulations and methods of use thereof
TW201731532A (zh) * 2016-02-05 2017-09-16 伊繆諾金公司 用於製備細胞結合劑-細胞毒性劑結合物之有效方法
CN108421048B (zh) * 2016-09-28 2021-04-20 首都医科大学附属北京世纪坛医院 纳米活性碳靶向药物递送系统、制备方法及其用途
US11278629B2 (en) 2016-11-02 2022-03-22 Debiopharm International, S.A. Methods for improving anti-CD37 immunoconjugate therapy
US10864279B2 (en) 2016-12-16 2020-12-15 Industrial Technology Research Institute Linker-drug and antibody-drug conjugate (ADC) employing the same
JOP20190187A1 (ar) 2017-02-03 2019-08-01 Novartis Ag مترافقات عقار جسم مضاد لـ ccr7
CA3054608A1 (en) * 2017-02-28 2018-09-07 Immunogen, Inc. Maytansinoid derivatives with self-immolative peptide linkers and conjugates thereof
WO2018185618A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Novartis Ag Anti-cdh6 antibody drug conjugates and anti-gitr antibody combinations and methods of treatment
WO2019142147A2 (en) * 2018-01-18 2019-07-25 Magenta Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the depletion of cd134+ cells
EP3552631A1 (en) 2018-04-10 2019-10-16 Inatherys Antibody-drug conjugates and their uses for the treatment of cancer
CN111620927B (zh) * 2019-05-20 2022-11-11 烟台迈百瑞国际生物医药股份有限公司 一种抗体药物偶联物中间体的一锅法制备工艺
AU2020307561A1 (en) * 2019-06-25 2022-01-20 Tva (Abc), Llc SSTR-targeted conjugates and formulations thereof
MX2022000450A (es) 2019-07-10 2022-04-25 Cybrexa 3 Inc Conjugados peptídicos de agentes dirigidos a microtúbulos como terapéuticos.
CA3146560A1 (en) 2019-07-10 2021-01-14 Cybrexa 2, Inc. Peptide conjugates of cytotoxins as therapeutics
US20230181756A1 (en) 2020-04-30 2023-06-15 Novartis Ag Ccr7 antibody drug conjugates for treating cancer
KR20230125129A (ko) 2022-02-17 2023-08-29 주식회사 노벨티노빌리티 항체-약물 접합체

Family Cites Families (166)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1043543A (en) 1912-02-15 1912-11-05 Robert H Shaw Poultry-house door.
SE430062B (sv) 1977-03-04 1983-10-17 Pharmacia Fine Chemicals Ab Kopplings- eller tioleringsreagens
US4137230A (en) * 1977-11-14 1979-01-30 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for the production of maytansinoids
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4563304A (en) 1981-02-27 1986-01-07 Pharmacia Fine Chemicals Ab Pyridine compounds modifying proteins, polypeptides or polysaccharides
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4664911A (en) 1983-06-21 1987-05-12 Board Of Regents, University Of Texas System Immunotoxin conjugates employing toxin B chain moieties
EP0397292B1 (fr) 1985-01-22 1993-04-21 Saint-Gobain Vitrage International Procédé pour la formation d'une couche mince d'oxydes métalliques sur un substrat, notamment en verre, et son utilisation comme vitrage
GB8600582D0 (en) 1986-01-10 1986-02-19 Ca Minister Nat Defence Purifying biological materials
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4859449A (en) 1987-09-14 1989-08-22 Center For Molecular Medicine And Immunology Modified antibodies for enhanced hepatocyte clearance
US5241078A (en) 1988-06-14 1993-08-31 Cetus Oncology Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom
US5024834A (en) 1988-07-12 1991-06-18 Cetus Corporation Thioether linked immunotoxin conjugates
CA2006408A1 (en) 1988-12-27 1990-06-27 Susumu Iwasa Bispecific monoclonal antibody, its production and use
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5714149A (en) 1989-02-10 1998-02-03 Celltech Therapeutics Limited Crosslinked antibodies and processes for their preparation
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US6316003B1 (en) 1989-12-21 2001-11-13 Whitehead Institute For Biomedical Research Tat-derived transport polypeptides
US5137877B1 (en) 1990-05-14 1996-01-30 Bristol Myers Squibb Co Bifunctional linking compounds conjugates and methods for their production
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
KR100272077B1 (ko) 1990-08-29 2000-11-15 젠팜인터내셔날,인코포레이티드 이종 항체를 생산할 수 있는 전이유전자를 가진 인간이외의 동물
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
CA2048078A1 (en) 1990-11-15 1992-05-16 Wolfgang A. Wrasidlo Chemical modification of antibodies for creation of immunoconjugates
US5252714A (en) * 1990-11-28 1993-10-12 The University Of Alabama In Huntsville Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde
SE9102074D0 (sv) 1991-07-03 1991-07-03 Kabi Pharmacia Ab Tomour antigen specific antibody
SE470006B (sv) * 1991-09-26 1993-10-25 Corline Systems Ab Nytt konjugat, dess framställning och användning samt substrat preparerat med konjugatet
PT1024191E (pt) 1991-12-02 2008-12-22 Medical Res Council Produção de auto-anticorpos a partir de reportórios de segmentos de anticorpo e exibidos em fagos
CA2076465C (en) 1992-03-25 2002-11-26 Ravi V. J. Chari Cell binding agent conjugates of analogues and derivatives of cc-1065
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US5556623A (en) * 1993-03-30 1996-09-17 Eli Lilly And Company Antibody-drug conjugates
IL111748A0 (en) 1993-12-03 1995-01-24 Zeneca Ltd Proteins
US5580853A (en) 1994-03-22 1996-12-03 New England Deaconess Hospital Modified polypeptides with increased biological activity
US5747446A (en) 1994-03-22 1998-05-05 Beth Israel Deaconess Medical Center Modified polypeptides with increased biological activity
US5919758A (en) 1994-03-22 1999-07-06 Beth Israel Deaconess Medical Center Modified polypeptides with altered biological activity
US5612474A (en) 1994-06-30 1997-03-18 Eli Lilly And Company Acid labile immunoconjugate intermediates
AU5908296A (en) * 1995-05-31 1996-12-24 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods for targeted delivery of effector m olecules
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
US5958872A (en) 1996-04-01 1999-09-28 Apoptosis Technology, Inc. Active survival domains of IGF-IR and methods of use
US6340461B1 (en) 1996-12-17 2002-01-22 David Stephen Terman Superantigen based methods and compositions for treatment of diseases
US6462070B1 (en) * 1997-03-06 2002-10-08 The General Hospital Corporation Photosensitizer conjugates for pathogen targeting
US6371975B2 (en) * 1998-11-06 2002-04-16 Neomend, Inc. Compositions, systems, and methods for creating in situ, chemically cross-linked, mechanical barriers
WO1998056906A1 (en) * 1997-06-11 1998-12-17 Thoegersen Hans Christian Trimerising module
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
US5958677A (en) 1997-07-28 1999-09-28 The New York Blood Center, Inc. Method for purifying viral nucleic acids
EP1005569A2 (en) 1997-08-01 2000-06-07 MorphoSys AG Novel method and phage for the identification of nucleic acid sequences encoding members of a multimeric (poly)peptide complex
US5965714A (en) 1997-10-02 1999-10-12 Connaught Laboratories, Inc. Method for the covalent attachment of polysaccharides to protein molecules
EP1027061B1 (en) * 1997-10-03 2005-05-25 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Imine-forming polysaccharides, preparation thereof and the use thereof as adjuvants and immunostimulants
US6121236A (en) * 1998-03-24 2000-09-19 The Children's Medical Center Corporation Multivalent ligands which modulate angiogenesis
WO1999055715A2 (en) * 1998-04-28 1999-11-04 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Polysaccharide-antigen conjugates
US5981564A (en) * 1998-07-01 1999-11-09 Universite Laval Water-soluble derivatives of paclitaxel, method for producing same and uses thereof
US7067109B1 (en) 1998-07-13 2006-06-27 Board Of Regents, The University Of Texas System Cancer treatment kits comprising therapeutic conjugates that bind to aminophospholipids
TW593241B (en) 1999-04-20 2004-06-21 Hoffmann La Roche Carbamic acid derivatives
AUPQ014799A0 (en) * 1999-05-04 1999-05-27 Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited Amplification of folate-mediated targeting to tumor cells using polymers
CA2385528C (en) 1999-10-01 2013-12-10 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
AU765588C (en) 1999-11-24 2004-12-16 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising taxanes and their therapeutic use
NZ518764A (en) 1999-12-29 2004-02-27 Immunogen Inc Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use
EP1257289A1 (en) 2000-02-08 2002-11-20 The Penn State Research Foundation Immunotherapy using interleukin 13 receptor subunit alpha 2
US7097840B2 (en) * 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
US6632979B2 (en) 2000-03-16 2003-10-14 Genentech, Inc. Rodent HER2 tumor model
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
US6596503B1 (en) 2000-08-18 2003-07-22 East Carolina University Monoclonal antibody DS6, tumor-associated antigen CA6, and methods of use thereof
US20060062786A1 (en) 2000-11-08 2006-03-23 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors
DZ3494A1 (fr) 2001-01-05 2002-07-11 Pfizer Anticorps anti-recepteur du facteur de croissance i analogue a l'insuline
AU2002240120B2 (en) 2001-01-29 2008-05-08 Biogen Idec Inc. Modified antibodies and methods of use
ATE337011T1 (de) * 2001-02-07 2006-09-15 Beth Israel Hospital Modifizierte psma-liganden und deren verwendung
EP1610751A4 (en) 2001-04-26 2006-05-24 Univ Texas AGENTE / LIGAND CONJUGATED THERAPEUTIC COMPOSITIONS, METHODS OF SYNTHESIS AND USE THEREOF
AU2002308637B2 (en) 2001-05-11 2007-05-17 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-cd26 monoclonal antibodies as therapy for diseases associated with cells expressing cd26
EP1258255A1 (en) 2001-05-18 2002-11-20 Boehringer Ingelheim International GmbH Conjugates of an antibody to CD44 and a maytansinoid
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
WO2002098897A2 (en) 2001-06-01 2002-12-12 Cornell Research Foundation, Inc. Modified antibodies to prostate-specific membrane antigen and uses thereof
US6576802B2 (en) 2001-06-04 2003-06-10 Shell Oil Company One-step production of 1, 3-propanediol from ethylene oxide and syngas with a catalyst with a phospholanoalkane ligand
JP2005532415A (ja) 2001-12-11 2005-10-27 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド スタフィロコッカス・アウレウスエキソポリサッカライド及び方法
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
EP1467758A4 (en) 2002-01-03 2007-11-14 Smithkline Beecham Corp PREPARATION OF IMMUNOCONJUGATES
US7591994B2 (en) * 2002-12-13 2009-09-22 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US8877901B2 (en) 2002-12-13 2014-11-04 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US6756397B2 (en) 2002-04-05 2004-06-29 Immunogen, Inc. Prodrugs of CC-1065 analogs
US6534660B1 (en) 2002-04-05 2003-03-18 Immunogen, Inc. CC-1065 analog synthesis
JP4319979B2 (ja) 2002-04-26 2009-08-26 ジェネンテック・インコーポレーテッド タンパク質の非アフィニティ精製
LT3127553T (lt) 2002-05-02 2022-04-11 Wyeth Holdings Llc Kalicheamicino darinio ir nešiklio konjugatai
US20090068178A1 (en) 2002-05-08 2009-03-12 Genentech, Inc. Compositions and Methods for the Treatment of Tumor of Hematopoietic Origin
US6596757B1 (en) 2002-05-14 2003-07-22 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
US20060182740A1 (en) 2002-06-21 2006-08-17 Biogen Idec, Inc. Buffered formulations for concentrating antibodies and methods of use thereof
US7390898B2 (en) 2002-08-02 2008-06-24 Immunogen Inc. Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use
JP2006500364A (ja) 2002-08-16 2006-01-05 イムノージェン インコーポレーテッド 高い反応性と溶解度を有する架橋剤および小分子薬物の標的化送達用コンジュゲートの調製におけるそれらの使用
ES2314238T3 (es) * 2002-10-08 2009-03-16 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugados de oligosacaridos farmaceuticamente activos.
NZ538993A (en) * 2002-10-30 2008-04-30 Nuevolution As Method for the synthesis of a bifunctional complex
CN102875680B (zh) 2002-11-07 2015-04-22 伊谬诺金公司 抗-cd33抗体和使用其治疗急性髓性白血病的方法
CA2525553C (en) 2003-05-14 2011-07-05 Immunogen, Inc. Maytansinoid-antibody conjugate compositions
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
US7276497B2 (en) * 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
DK1651162T3 (en) 2003-05-20 2016-02-01 Immunogen Inc IMPROVED CYTOTOXIC AGENTS WITH NEW MAYTANSINOIDS
MXPA05014152A (es) 2003-06-27 2006-05-25 Abgenix Inc Anticuerpos dirigidos a los mutantes de delecion de receptor de factor de crecimiento epidermico y sus usos.
WO2005002597A1 (en) * 2003-07-02 2005-01-13 Polycord, Inc. Method for delivering polymerized therapeutic agent compositions and compositions thereof
US20050112130A1 (en) * 2003-11-05 2005-05-26 Bhat Neelima M. Enhanced B cell cytotoxicity of CDIM binding antibody
US20050175619A1 (en) 2004-02-05 2005-08-11 Robert Duffy Methods of producing antibody conjugates
US20110064754A1 (en) 2005-03-03 2011-03-17 Center For Molecular Medicine And Immunology Immunoconjugates Comprising Poxvirus-Derived Peptides and Antibodies Against Antigen-Presenting Cells for Subunit-Based Poxvirus Vaccines
WO2005094882A1 (en) 2004-03-03 2005-10-13 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Modified antibodies to prostate-specific membrane antigen and uses thereof
WO2005115477A2 (en) 2004-04-13 2005-12-08 Quintessence Biosciences, Inc. Non-natural ribonuclease conjugates as cytotoxic agents
US20060073528A1 (en) * 2004-05-14 2006-04-06 Jean-Michel Lecerf Measurement methods
US7691962B2 (en) 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
MXPA06013413A (es) 2004-05-19 2007-01-23 Medarex Inc Enlazadores quimicos y conjugados de los mismos.
AU2005249490B2 (en) 2004-06-01 2010-07-29 Genentech, Inc. Antibody drug conjugates and methods
US20060045877A1 (en) 2004-08-30 2006-03-02 Goldmakher Viktor S Immunoconjugates targeting syndecan-1 expressing cells and use thereof
TW200630106A (en) 2004-10-08 2006-09-01 Wyeth Corp Immunotherapy of autoimmune disorders
JP2008521828A (ja) 2004-11-29 2008-06-26 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 操作された抗体およびイムノコンジュゲート
HUE025449T2 (en) 2004-12-09 2016-04-28 Janssen Biotech Inc Immunoconjugates against Integrin, a method for their preparation and use
US7408030B2 (en) 2005-01-13 2008-08-05 North Carolina State University Purification of immunoglobulins using affinity chromatography and peptide ligands
US20110166319A1 (en) * 2005-02-11 2011-07-07 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
ES2503719T3 (es) 2005-02-11 2014-10-07 Immunogen, Inc. Procedimiento para preparar conjugados de anticuerpos y de maitansinoides
US7678371B2 (en) 2005-03-04 2010-03-16 Biogen Idec Ma Inc. Methods of humanizing immunoglobulin variable regions through rational modification of complementarity determining residues
CA2618721A1 (en) 2005-04-15 2006-10-26 Immunogen, Inc. Elimination of heterogeneous or mixed cell population in tumors
GB2427360A (en) * 2005-06-22 2006-12-27 Complex Biosystems Gmbh Aliphatic prodrug linker
ES2744225T3 (es) 2005-07-15 2020-02-24 Angiochem Inc Uso de polipéptidos de aprotinina como portadores en conjugados farmacéuticos
WO2007019232A2 (en) * 2005-08-03 2007-02-15 Immunogen, Inc. Immunoconjugate formulations
JP2009506302A (ja) * 2005-08-04 2009-02-12 イェシバ・ユニバーシティ Ａｂｌによるタウのリン酸化
IL282138B2 (en) 2005-08-24 2024-01-01 Immunogen Inc A process for preparing purified drug compounds
EP1926498A2 (en) * 2005-09-22 2008-06-04 Hadasit Medical Research Services And Development Company Ltd. Dextran and arabinogalactan conjugates of therapeutically active compounds
US20080279868A1 (en) 2005-09-26 2008-11-13 Medarex, Inc. Antibody-Drug Conjugates and Methods of Use
EP1959958A4 (en) 2005-11-14 2010-07-14 Univ Southern California INTEGRIN-BINDING SMALL MOLECULES
US7964415B2 (en) * 2006-04-26 2011-06-21 Cardiogenics Inc. Stable water-soluble polyethylenimine conjugates and methods of use thereof
EP2446904B1 (en) 2006-05-30 2015-04-29 Genentech, Inc. Anti-CD22 antibodies, their immunoconjugates and uses thereof
JP5622390B2 (ja) 2006-07-18 2014-11-12 サノフイ 癌治療用対ｅｐｈａ２アンタゴニスト抗体
US20080213349A1 (en) * 2006-09-11 2008-09-04 Deepak Ramesh Thakker Liposome Complexes Containing Pharmaceutical Agents and Methods
WO2008057683A2 (en) 2006-10-03 2008-05-15 Novo Nordisk A/S Methods for the purification of polypeptide conjugates
EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
PT2019104E (pt) 2007-07-19 2013-12-03 Sanofi Sa Agentes citotóxicos compreendendo novos derivados de tomaimicina e sua utilização terapêutica
MY157165A (en) * 2008-04-30 2016-05-13 Immunogen Inc Cross-linkers and their uses
SG189817A1 (en) 2008-04-30 2013-05-31 Immunogen Inc Potent conjugates and hydrophilic linkers
GB0811743D0 (en) * 2008-06-26 2008-07-30 Hemosol Biopharma Inc Composition
EP2355799A4 (en) * 2008-11-17 2012-09-05 Enzon Pharmaceuticals Inc CLEANABLE FUSOGENIC LIPIDS FOR NUCLEIC ACID RELIEF SYSTEMS
CN102365021B (zh) 2009-02-05 2015-07-15 伊缪诺金公司 新型苯并二氮杂*衍生物
AR076284A1 (es) 2009-04-29 2011-06-01 Bayer Schering Pharma Ag Inmunoconjugados de antimesotelina y usos de los mismos
BRPI1010620B8 (pt) 2009-06-03 2021-05-25 Immunogen Inc métodos de conjugação
FR2947269B1 (fr) 2009-06-29 2013-01-18 Sanofi Aventis Nouveaux composes anticancereux
AR078471A1 (es) 2009-10-02 2011-11-09 Sanofi Aventis COMPUESTOS MAITANSINOIDES Y EL USO DE ESTOS PARA PREPARAR CONJUGADOS CON UN ANTICUERPO LOS CUALES SE UTILIZAN COMO AGENTES ANTICANCERIGENOS Y EL PROCEDIMIENTO DE PREPARACIoN DE ESTOS CONJUGADOS
TW201116297A (en) 2009-10-02 2011-05-16 Sanofi Aventis Antibodies that specifically bind to the EphA2 receptor
MX340437B (es) 2010-02-24 2016-07-08 Immunogen Inc Anticuerpos e inmunoconjugados del receptor 1 de folato y usos de los mismos.
MX338932B (es) 2010-03-12 2016-05-06 Immunogen Inc Moleculas de union cd37 y sus inmunoconjugados.
KR20110103182A (ko) 2010-03-12 2011-09-20 삼성전자주식회사 입체 영상 표시 장치
WO2012019024A2 (en) 2010-08-04 2012-02-09 Immunogen, Inc. Her3-binding molecules and immunoconjugates thereof
US20120149732A1 (en) * 2010-12-14 2012-06-14 Alexander Chucholowski Multifunctional linkers and methods for the use thereof
EP2675479B1 (en) * 2011-02-15 2016-01-13 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
MX369659B (es) 2011-03-29 2019-11-15 Immunogen Inc Preparacion de conjugados de maitansinoides y anticuerpos mediante un proceso de una etapa.
MY171008A (en) 2011-03-29 2019-09-23 Immunogen Inc Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
AU2012236403B2 (en) 2011-03-29 2016-08-04 Immunogen, Inc. Process for manufacturing conjugates of improved homogeneity
DK2694106T3 (en) 2011-04-01 2018-03-05 Immunogen Inc METHODS FOR INCREASING EFFECT OF FOLR1 CANCER THERAPY
US20130071482A1 (en) * 2011-09-20 2013-03-21 The University Of Kentucky Research Foundation Block copolymer cross-linked nanoassemblies as modular delivery vehicles
US20140350228A1 (en) 2011-12-13 2014-11-27 Immunogen, Inc. Use of n-hydroxysuccinimide to improve conjugate stability
US20150306242A1 (en) 2012-10-04 2015-10-29 Immunogen, Inc. Process for preparing stable antibody maytansinoid conjugates
JP2015535215A (ja) 2012-10-04 2015-12-10 イムノゲン インコーポレーティッド 細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートから不純物を除去するためのイオン交換膜の使用
NZ707091A (en) 2012-10-04 2018-12-21 Immunogen Inc Use of a pvdf membrane to purify cell-binding agent cytotoxic agent conjugates
ES2722924T3 (es) * 2012-12-05 2019-08-20 Univ Heidelberg Ruprecht Karls Conjugados de proteínas y péptidos multivalentes de penetración celular y sus usos

Also Published As

Publication number Publication date
SI2691155T1 (sl) 2019-03-29
KR102351886B1 (ko) 2022-01-17
CY1121321T1 (el) 2020-05-29
AU2016202832A1 (en) 2016-05-19
KR102272828B1 (ko) 2021-07-05
KR20200042965A (ko) 2020-04-24
AU2012236398A1 (en) 2013-05-16
JP2019056003A (ja) 2019-04-11
EA033468B1 (ru) 2019-10-31
EA201391398A1 (ru) 2014-02-28
HRP20190243T1 (hr) 2019-03-22
PL2691155T3 (pl) 2019-06-28
US11090390B2 (en) 2021-08-17
AU2018211331B2 (en) 2020-05-14
KR20220009505A (ko) 2022-01-24
IL228559A (en) 2017-03-30
IL258929A (en) 2018-07-31
IL250723B (en) 2018-05-31
JP6797885B2 (ja) 2020-12-09
MX369659B (es) 2019-11-15
US20120253021A1 (en) 2012-10-04
US20140309406A1 (en) 2014-10-16
AU2024200123A1 (en) 2024-01-25
US20220133899A1 (en) 2022-05-05
US20200330604A1 (en) 2020-10-22
US8795673B2 (en) 2014-08-05
MX2013011215A (es) 2013-10-30
CA2831467A1 (en) 2012-10-04
ES2709577T3 (es) 2019-04-16
US20180273581A1 (en) 2018-09-27
US20170037080A1 (en) 2017-02-09
LT2691155T (lt) 2019-02-25
KR20220123130A (ko) 2022-09-05
AU2018211331A1 (en) 2018-08-23
IL228559A0 (en) 2013-12-31
US9428543B2 (en) 2016-08-30
US9914748B2 (en) 2018-03-13
JP2021035990A (ja) 2021-03-04
JP6000329B2 (ja) 2016-09-28
ZA201605918B (en) 2021-07-28
DK2691155T3 (en) 2019-03-04
EA201991268A2 (ru) 2019-10-31
CN107537040A (zh) 2018-01-05
JP7269210B2 (ja) 2023-05-08
MX339927B (es) 2016-06-16
KR20230128583A (ko) 2023-09-05
CA2831467C (en) 2020-03-24
EP2691155B1 (en) 2018-11-14
NZ726386A (en) 2022-09-30
JP2023083504A (ja) 2023-06-15
ME03353B (me) 2019-10-20
IL250723A0 (en) 2017-06-29
AU2016202832B2 (en) 2018-05-10
AU2020217301A1 (en) 2020-08-27
NZ712414A (en) 2016-12-23
EA201991268A3 (ru) 2020-01-31
NZ616509A (en) 2015-10-30
CN103717262B (zh) 2017-09-15
CN103717262A (zh) 2014-04-09
US10435432B2 (en) 2019-10-08
HUE041384T2 (hu) 2019-05-28
KR102103302B1 (ko) 2020-04-23
JP2016204385A (ja) 2016-12-08
JP6456885B2 (ja) 2019-01-23
KR20140019414A (ko) 2014-02-14
BR112013025225A2 (pt) 2018-09-25
EP2691155A2 (en) 2014-02-05
JP2014514294A (ja) 2014-06-19
AU2012236398B2 (en) 2016-02-11
US11744900B2 (en) 2023-09-05
PT2691155T (pt) 2019-02-19
AU2020217301B2 (en) 2023-10-19
TR201902180T4 (tr) 2019-03-21
US20240156976A1 (en) 2024-05-16
EP3545977A1 (en) 2019-10-02
KR20210082267A (ko) 2021-07-02
RS58367B1 (sr) 2019-03-29
IL258929B (en) 2019-03-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA116524C2 (uk) Спосіб одержання кон'югата антитіло-майтансиноїд
CN102083461B (zh) 有效的偶联物和亲水性连接体
RU2595424C2 (ru) Способы конъюгации
AU2006283726C1 (en) Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
EA025786B1 (ru) Способ производства конъюгатов с улучшенной гомогенностью
RU2661083C2 (ru) Использование пвдф-мембраны для очистки конъюгатов клеточно-связывающий агент - цитотоксический агент
SG193997A1 (en) Process for manufacturing conjugates of improved homogeneity
CN107530422A (zh) Cd48抗体和其缀合物
AU2012352210A1 (en) Use of N-hydroxysuccinimide to improve conjugate stability
CA3013125A1 (en) Efficient process for preparing cell-binding agent-cytotoxic agent conjugates
AU2012227185B2 (en) Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
NZ616509B2 (en) Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
NZ712414B2 (en) Preparation of antibody maytansinoid conjugates
NZ616516B2 (en) Process for manufacturing conjugates of improved homogeneity