KR20200042965A - 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조 - Google Patents

일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조 Download PDF

Info

Publication number
KR20200042965A
KR20200042965A KR1020207010853A KR20207010853A KR20200042965A KR 20200042965 A KR20200042965 A KR 20200042965A KR 1020207010853 A KR1020207010853 A KR 1020207010853A KR 20207010853 A KR20207010853 A KR 20207010853A KR 20200042965 A KR20200042965 A KR 20200042965A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cell
hours
antibody
binding agent
cytotoxic agent
Prior art date
Application number
KR1020207010853A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102272828B1 (ko
Inventor
신팡 리
제어드 엠. 워풀
Original Assignee
이뮤노젠 아이엔씨
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 이뮤노젠 아이엔씨 filed Critical 이뮤노젠 아이엔씨
Priority to KR1020217019701A priority Critical patent/KR102351886B1/ko
Priority claimed from PCT/US2012/031243 external-priority patent/WO2012135517A2/en
Publication of KR20200042965A publication Critical patent/KR20200042965A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102272828B1 publication Critical patent/KR102272828B1/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A61K47/6819—Plant toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6867—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of a blood cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
    • C07K1/113—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides without change of the primary structure
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Abstract

본 발명은 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체를 제조하기 위한 일-단계 방법을 제시하고, 상기 방법은 세포-결합 작용제를 세포독성제와 접촉시켜 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 첫 번째 혼합물을 형성하고, 그리고 약 4 내지 약 9의 pH를 갖는 용액 내에서 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 첫 번째 혼합물을 링커를 제공하는 이작용성 가교 시약과 접촉시켜 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체, 여기서 세포-결합 작용제는 링커를 통해 세포독성제에 화학적으로 커플링되고, 유리 세포독성제, 그리고 반응 부산물을 포함하는 두 번째 혼합물을 제공하는 단계를 포함한다. 두 번째 혼합물은 이후, 정제된 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체를 제공하기 위해 정제에 선택적으로 종속된다.

Description

일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조{PREPARATION OF MAYTANSINOID ANTIBODY CONJUGATES BY A ONE-STEP PROCESS}
관련된 출원에 대한 교차-참조
본 특허 출원은 2011년 3월 29일자 제출된 U.S. 특허가출원 번호 61/468,997에 대한 우선권을 주장하고, 이는 참고문헌으로 편입된다.
전자 제출된 자료의 참고문헌 편입
다음과 같이 확인된 컴퓨터 판독가능한 뉴클레오타이드/아미노산 서열목록이 본 명세서에 그 전체가 참고문헌으로 편입된다: 2012년 4월 3일에 생성된 하나의 9,233바이트 ASCII(Text) 파일(파일명 "710088SequenceListing.TXT").
암 및 기타 질환의 치료에 유용한 항체-약물-접합체 (ADC's)는 통상적으로, 3가지 상이한 요소: 세포-결합 작용제; 링커; 그리고 세포독성제로 구성된다. 세포-결합 작용제, 예를 들면, 항체를 세포독성제에 접합하는 전통적인 방법은 항체와의 2가지 상이한 반응 단계를 이용한다. 첫 번째 반응 단계 (변형 단계)에서, 항체는 헤테로이작용성 링커와 반응되어 링커-변형된 항체가 생산된다. 변형된 항체 산물은 이후, 과량의 링커 또는 가수분해된 링커 시약으로부터 선택적으로 정제된다. 두 번째 반응 단계 (접합 단계)에서, 링커-변형된 항체는 반응성 기, 예를 들면, 티올을 내포하는 세포독성제와 반응되어 항체-세포독성제 접합체가 산출되고, 이것은 추가의 정제 단계에서 다시 한 번 정제된다.
항체-세포독성제 접합체의 제조를 위한 기존에 기술된 방법은 복잡한데, 그 이유는 이들이 수행하기 번잡하거나, 또는 최적으로 요망되는 것보다 덜 순수하거나 덜 안정한 면역접합체를 생산하는 단계로 방해되기 때문이다. 따라서 산물 속성, 예를 들면, 순도 및/또는 안정성을 향상시키면서 하나 또는 그 이상의 제조 단계를 변형하거나 제거하는 것이 바람직할 것이다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
미국 특허공보 US 5,208,020
전술한 것에 비추어, 실질적으로 높은 순도를 갖고, 그리고 번잡한 단계를 회피하고 사용자까지의 시간과 비용을 감소시키면서 제조될 수 있는 세포-결합 작용제-세포독성제 접합체를 제조하기 위한 향상된 방법을 개발하는 것이 당분야에서 요구된다. 본 발명은 이런 방법을 제시한다. 본 발명의 이들 이점 및 다른 이점뿐만 아니라 추가의 발명적 특질은 본원에서 제공된 발명의 상세한 설명으로부터 명백할 것이다.
발명의 간단한 요약
본 발명은 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체를 제조하기 위한 방법을 제시하고, 상기 방법은 세포-결합 작용제를 세포독성제와 접촉시켜 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 첫 번째 혼합물을 형성하고, 그리고 그 이후, 약 4 내지 약 9의 pH를 갖는 용액 내에서 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 첫 번째 혼합물을 링커를 포함하는 이작용성(bifunctional) 가교 시약과 접촉시켜 (i) 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체, 여기서 세포-결합 작용제는 링커를 통해 세포독성제에 화학적으로 커플링되고, (ii) 유리 세포독성제, 그리고 (iii) 반응 부산물을 포함하는 혼합물을 제공하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 혼합물을 정제하여 정제된 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체를 제공하는 단계를 더욱 포함할 수 있다.
본 발명의 방법은 높은 순도 및/또는 안정성을 갖는 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체를 제공한다. 접합체의 높은 순도 및/또는 안정성을 달성하기 위하여, 세포독성제가 먼저, 세포-결합 작용제와 접촉되어 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 혼합물을 형성하고, 그 이후에 상기 혼합물이 이작용성 가교 시약과 접촉되는 것이 필수적이다.
본 발명은 또한, 본원에서 기술된 방법에 따라 제조된 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체를 포함한다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체를 제조하기 위한 일-단계 방법을 제시한다. 상기 방법은 세포-결합 작용제 (가령, 항체)를 세포독성제와 접촉시켜 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 첫 번째 혼합물을 형성하고, 그리고 그 이후, 약 4 내지 약 9의 pH를 갖는 용액 내에서 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 첫 번째 혼합물을 링커를 포함하는 이작용성 가교 시약과 접촉시켜 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체, 유리 세포독성제, 그리고 반응 부산물을 포함하는 두 번째 혼합물을 제공하는 단계를 포함하고, 여기서 세포-결합 작용제는 링커를 통해 세포독성제에 화학적으로 커플링된다. 두 번째 혼합물은 이후, 정제된 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체를 제공하기 위해 정제에 종속된다.
한 구체예에서, 접촉은 세포-결합 작용제를 제공하고, 그 이후 세포-결합 작용제를 세포독성제와 접촉시켜 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 첫 번째 혼합물을 형성하고, 그리고 그 이후, 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 첫 번째 혼합물을 이작용성 가교 시약과 접촉시킴으로써 달성된다. 가령, 한 구체예에서, 세포-결합 작용제가 반응 용기 내에 제공되고, 세포독성제가 반응 용기에 첨가되고 (따라서 세포-결합 작용제와 접촉하고), 그리고 그 이후, 이작용성 가교 시약이 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 혼합물에 첨가된다 (따라서 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 혼합물과 접촉한다). 한 구체예에서, 세포-결합 작용제가 반응 용기 내에 제공되고, 그리고 세포독성제가 세포-결합 작용제를 용기에 제공한 직후에 반응 용기에 첨가된다. 다른 구체예에서, 세포-결합 작용제가 반응 용기 내에 제공되고, 그리고 세포독성제가 세포-결합 작용제를 용기에 제공한 이후에 일정한 시간 간격 (가령, 세포-결합 작용제를 공간에 제공한 후 약 5분, 약 10분, 약 20분, 약 30분, 약 40분, 약 50분, 약 1시간, 약 1일 또는 더욱 긴 기간) 후 반응 용기에 첨가된다. 세포독성제는 빠르게 (즉, 짧은 시간 간격, 예를 들면, 약 5분, 약 10분 이내에) 또는 느리게 (가령, 펌프를 이용하여) 첨가될 수 있다.
세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 혼합물은 이후, 세포-결합 작용제를 세포독성제와 접촉시킨 직후에, 또는 세포-결합 작용제를 세포독성제와 접촉시킨 후 일정한 후기 시점 (가령, 약 5분 내지 약 8시간 또는 더욱 긴 시점)에 이작용성 가교 시약과 접촉될 수 있다. 가령, 한 구체예에서, 이작용성 가교 시약은 세포-결합 작용제를 포함하는 반응 용기에 세포독성제의 첨가 직후에, 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 혼합물에 첨가된다. 대안으로, 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 혼합물은 세포-결합 작용제를 세포독성제와 접촉시킨 후, 약 5분, 약 10분, 약 20분, 약 30분, 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 또는 더욱 긴 시점에 이작용성 가교 시약과 접촉될 수 있다.
다른 구체예에서, 세포독성제와 이작용성 작용제는 복수 사이클 (가령, 1, 2, 3, 4, 5 또는 그 이상의 사이클)을 통해 첨가된다. 가령, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 방법을 제시한다: a) 세포-결합 작용제를 세포독성제와 접촉시켜 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 첫 번째 혼합물을 형성하고, 그리고 그 이후 약 4 내지 약 9의 pH를 갖는 용액 내에서 첫 번째 혼합물을 링커를 포함하는 이작용성 가교 시약과 접촉시켜 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체, 유리 세포독성제, 그리고 반응 부산물을 포함하는 두 번째 혼합물을 제공하는 단계, 여기서 세포-결합 작용제는 링커를 통해 세포독성제에 화학적으로 커플링되고; b) 두 번째 혼합물을 세포독성제와 접촉시켜 세 번째 혼합물을 형성하고, 그리고 그 이후 약 4 내지 약 9의 pH에서 세 번째 혼합물을 이작용성 가교 시약과 접촉시켜 네 번째 혼합물을 제공하는 단계; 그리고 c) 네 번째 혼합물을 정제하여 정제된 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체를 제공하는 단계. 한 구체예에서, 단계 b)는 단계 a) 이후에, 일정한 시간 간격 (가령, 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간 또는 더욱 긴 기간) 후 수행된다. 다른 구체예에서, 단계 b)는 단계 c)가 수행되기 이전에, 수회 (가령, 1, 2, 3, 4회 또는 그 이상) 반복될 수 있다. 추가 단계 b)는 초기 단계 b) 이후에, 일정한 시간 간격 (가령, 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간 또는 더욱 긴 기간) 후 수행될 수 있다.
다른 구체예에서, 이작용성 가교 시약은 세포독성제의 완전한 첨가 이전에 첨가된다. 가령, 한 구체예에서, 세포독성제는 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 혼합물을 형성하기 위해 일정한 시간 간격 (가령, 약 5분, 약 10분, 약 30분, 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 또는 더욱 긴 기간)에 걸쳐 연속적으로 세포-결합 작용제에 첨가된다. 세포독성제의 첨가가 완결되기 이전에, 이작용성 가교 시약이 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 혼합물에 첨가되고, 단서로써 임의의 시점에서, 세포독성제는 이작용성 가교 시약의 몰 과량으로 존재한다. 한 구체예에서, 이작용성 가교 시약은 일정한 시간 간격 (가령, 약 5분, 약 10분, 약 30분, 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 또는 더욱 긴 기간)에 걸쳐 연속적으로 첨가된다.
세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 혼합물이 이작용성 가교 시약과 접촉된 이후, 반응은 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간, 약 12시간, 약 13시간, 약 14시간, 약 15시간, 약 16시간, 약 17시간, 약 18시간, 약 19시간, 약 20시간, 약 21시간, 약 22시간, 약 23시간, 약 24시간, 또는 더욱 긴 기간 (가령, 약 30시간, 약 35시간, 약 40시간, 약 45시간, 또는 약 48시간) 동안 진행하도록 허용된다.
세포-결합 작용제를 세포독성제 및 그 이후, 이작용성 가교 시약과 접촉시키는 것 (즉, 반응 단계)은 약 4 내지 약 9 (가령, 약 4, 약 4.5, 약 5, 약 5.5, 약 6, 약 6.5, 약 7, 약 7.5, 약 8, 약 8.5, 또는 약 9)의 pH를 갖는 용액 내에서 일어난다. 한 구체예에서, 반응 단계는 약 6 또는 그 이하 (가령, 약 4 내지 약 6, 약 4 내지 약 5.5, 또는 약 4.5 내지 약 5.5)의 pH를 갖는 용액 내에서 일어난다.
다른 구체예에서, 본 발명의 방법은 약 6 또는 그 이상 (가령, 약 6 내지 약 9, 약 6 내지 약 7, 약 7 내지 약 9, 약 7 내지 약 8.5, 약 7.5 내지 약 8.5, 약 7.5 내지 약 8.0, 약 8.0 내지 약 9.0, 또는 약 8.5 내지 약 9.0)의 pH를 갖는 용액 내에서, 세포-결합 작용제를 세포독성제 및 그 이후, 이작용성 가교 시약과 접촉시키는 것을 포함한다. 가령, 본 발명의 방법은 약 6.0, 약 6.1, 약 6.2, 약 6.3, 약 6.4, 약 6.5, 약 6.6, 약 6.7, 약 6.8, 약 6.9, 약 7.0, 약 7.1, 약 7.2, 약 7.3, 약 7.4, 약 7.5, 약 7.6, 약 7.7, 약 7.8, 약 7.9, 약 8.0, 약 8.1, 약 8.2, 약 8.3, 약 8.4, 약 8.5, 약 8.6, 약 8.7, 약 8.8, 약 8.9, 또는 약 9.0의 pH를 갖는 용액 내에서, 세포-결합 작용제를 세포독성제 및 이작용성 가교 시약과 접촉시키는 것을 포함한다. 특정한 구체예에서, 본 발명의 방법은 약 7.8의 pH (가령, 7.6 내지 8.0의 pH 또는 7.7 내지 7.9의 pH)를 갖는 용액 내에서, 세포-결합 작용제를 세포독성제 및 이작용성 가교 시약과 접촉시키는 것을 포함한다.
본 발명의 방법은 당분야에 공지된 임의의 적절한 온도에서 일-단계 반응 (즉, 세포-결합 작용제를 세포독성제 및 그 이후, 이작용성 가교 시약과 접촉시킴)을 수행하는 것을 포함한다. 가령, 일-단계 반응은 약 20℃ 또는 그 이하 (가령, 약 -10℃ (단서로써 용액은 예로써, 세포독성제와 이작용성 가교 시약을 용해하는데 이용되는 유기 용매의 존재에 의해 동결로부터 예방된다) 내지 약 20℃, 약 0℃ 내지 약 18℃, 약 4℃ 내지 약 16℃), 실온 온도 (가령, 약 20℃ 내지 약 30℃ 또는 약 20℃ 내지 약 25℃), 또는 상승된 온도 (가령, 약 30℃ 내지 약 37℃)에서 일어날 수 있다. 한 구체예에서, 세포-결합 작용제를 세포독성제 및 이작용성 가교 시약과 접촉시키는 것은 약 16℃ 내지 약 24℃ (가령, 약 16℃, 약 17℃, 약 18℃, 약 19℃, 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 또는 약 25℃)의 온도에서 일어난다.
다른 구체예에서, 세포-결합 작용제를 세포독성제 및 그 이후, 이작용성 가교 시약과 접촉시키는 것은 약 15℃ 또는 그 이하의 온도 (가령, 약 -10℃ 내지 약 15℃, 또는 약 0℃ 내지 약 15℃)에서 일어난다. 이와 관련하여, 본 발명의 방법은 약 15℃, 약 14℃, 약 13℃, 약 12℃, 약 11℃, 약 10℃, 약 9℃, 약 8℃, 약 7℃, 약 6℃, 약 5℃, 약 4℃, 약 3℃, 약 2℃, 약 1℃, 또는 약 0℃, 약 -1℃, 약 -2℃, 약 -3℃, 약 -4℃, 약 -5℃, 약 -6℃, 약 -7℃, 약 -8℃, 약 -9℃, 또는 약 -10℃의 온도에서, 세포-결합 작용제를 세포독성제 및 그 이후, 이작용성 가교 시약과 접촉시키는 단계를 포함하고, 단서로써 용액은 예로써, 이작용성 가교 시약을 용해하는데 이용되는 유기 용매(들)의 존재에 의해 동결로부터 예방된다. 한 구체예에서, 본 발명의 방법은 약 -10℃ 내지 약 15℃, 약 0℃ 내지 약 15℃, 약 0℃ 내지 약 10℃, 약 0℃ 내지 약 5℃, 약 5℃ 내지 약 15℃, 약 10℃ 내지 약 15℃, 또는 약 5℃ 내지 약 10℃의 온도에서, 세포-결합 작용제를 세포독성제 및 그 이후, 이작용성 가교 시약과 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명의 방법은 약 10℃의 온도 (가령, 8℃ 내지 12℃의 온도 또는 9℃ 내지 11℃의 온도)에서, 세포-결합 작용제를 세포독성제 및 그 이후, 이작용성 가교 시약과 접촉시키는 단계를 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명의 방법은 낮은 온도 (가령, 약 15℃ 또는 그 이하)에서 높은 pH (가령, 약 7 또는 그 이상)를 갖는 용액 내에서, 세포-결합 작용제를 세포독성제 및 그 이후, 이작용성 가교 시약과 접촉시키는 단계를 포함한다. 가령, 한 구체예에서, 본 발명의 방법은 약 15℃의 온도에서 약 7.5의 pH를 갖는 용액, 약 10℃의 온도에서 약 7.8의 pH를 갖는 용액, 약 0℃의 온도에서 약 8.2의 pH를 갖는 용액, 또는 약 0℃의 온도에서 약 8.5의 pH를 갖는 용액 내에서, 세포-결합 작용제를 세포독성제 및 그 이후, 이작용성 가교 시약과 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명의 방법은 5℃ 내지 15℃의 온도에서 7.0 내지 8.5의 pH (가령, 7.5 내지 8.0의 pH)를 갖는 용액 내에서, 세포-결합 작용제를 세포독성제 및 그 이후, 이작용성 가교 시약과 접촉시키는 단계를 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명의 방법은 임의의 반응되지 않은 세포독성제 및/또는 반응되지 않은 이작용성 가교 시약을 진정시키는 진정 단계를 더욱 포함한다. 진정 단계는 세포-결합 작용제 세포독성제의 정제에 앞서 수행된다. 가령, 본 발명의 방법은 (a) 세포-결합 작용제를 세포독성제와 접촉시켜 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 혼합물을 형성하고, 그 이후 약 4 내지 약 9의 pH를 갖는 용액 내에서, 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 혼합물을 링커를 포함하는 이작용성 가교 시약과 접촉시켜 (i) 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체, 여기서 세포-결합 작용제는 링커를 통해 세포독성제에 화학적으로 커플링되고, (ii) 유리 세포독성제, 그리고 (iii) 반응 부산물을 포함하는 혼합물을 제공하는 단계, (b) 단계 (a)에서 제조된 혼합물을 진정시켜 임의의 반응되지 않은 세포독성제 및/또는 반응되지 않은 이작용성 가교 시약을 진정시키는 단계, 그리고 (c) 혼합물을 정제하여 정제된 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체를 제공하는 단계를 포함한다.
한 구체예에서, 혼합물은 혼합물을 진정 시약과 접촉시킴으로써 진정된다. 본원에서 이용된 바와 같이, "진정 시약"은 유리 세포독성제 및/또는 이작용성 가교 시약과 반응하는 시약을 지칭한다.
한 구체예에서, 말레이미드 또는 할로아세트아미드 진정 시약, 예를 들면, 4-말레이미도부티르산, 3-말레이미도프로피온산, N-에틸말레이미드, 요오드아세트아미드, 또는 요오드아세트아미도프로피온산이 세포독성제 내에 임의의 반응되지 않은 기 (가령, 티올)가 진정되도록 담보하는데 이용될 수 있다. 진정 단계는 세포독성제, 특히 반응되지 않은 티올 기를 갖는 세포독성제 (가령, DM1)의 이합체화를 예방하는데 도움을 줄 수 있다. 이합체화된 세포독성제는 제거하기 어려울 수 있다. 진정 단계는 또한, 고유 항체 이황화 기와의 임의의 원치 않는 티올-이황화 교환 반응을 최소화시킬지도 모른다. 극성의 하전된 티올-진정 시약 (가령, 4-말레이미도부티르산 또는 3-말레이미도프로피온산)으로 진정 직후에, 과량의 반응되지 않은 세포독성제는 극성의 하전된 물-용해성 부가물로 전환되고, 이것은 정제 단계 동안 공유-연결된 접합체로부터 쉽게 분리될 수 있다. 비-극성과 중성 티올-진정 시약으로 진정 역시 이용될 수 있다.
한 구체예에서, 혼합물은 반응되지 않은 이작용성 가교 시약과 반응하는 진정 시약과 혼합물을 접촉시킴으로써 진정된다. 가령, 임의의 반응되지 않은 이작용성 가교 시약을 진정시키기 위해 친핵성 시약이 혼합물에 첨가될 수 있다. 친핵성 시약은 바람직하게는, 아미노기 내포 친핵성 시약, 예를 들면, 리신, 타우린과 히드록실아민이다.
바람직한 구체예에서, 반응 (즉, 세포-결합 작용제를 세포독성제 및 그 이후, 이작용성 가교 시약과 접촉시킴)은 혼합물을 진정 시약과 접촉시키기에 앞서, 완결까지 진행하도록 허용된다. 이와 관련하여, 진정 시약은 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 혼합물이 이작용성 가교 시약과 접촉된 이후, 약 1시간 내지 약 48시간 (가령, 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간, 약 12시간, 약 13시간, 약 14시간, 약 15시간, 약 16시간, 약 17시간, 약 18시간, 약 19시간, 약 20시간, 약 21시간, 약 22시간, 약 23시간, 약 24시간, 또는 약 25시간 내지 약 48시간) 시점에 혼합물에 첨가된다.
본 발명의 방법은 세포-결합 작용제-세포독성제 접합체의 용해도와 회수를 증가시키기 위해, 반응 단계 (즉, 세포-결합 작용제를 세포독성제 및 이작용성 가교 시약과 접촉시킴)에 수크로오스의 첨가를 선택적으로 포함할 수 있다. 바람직하게는, 수크로오스는 약 0.1% (w/v) 내지 약 20% (w/v) (가령, 약 0.1% (w/v), 1% (w/v), 5% (w/v), 10% (w/v), 15% (w/v), 또는 20% (w/v))의 농도에서 첨가된다. 바람직하게는, 수크로오스는 약 1% (w/v) 내지 약 10% (w/v) (가령, 약 0.5% (w/v), 약 1% (w/v), 약 1.5% (w/v), 약 2% (w/v), 약 3% (w/v), 약 4% (w/v), 약 5% (w/v), 약 6% (w/v), 약 7% (w/v), 약 8% (w/v), 약 9% (w/v), 약 10% (w/v), 또는 약 11% (w/v))의 농도에서 첨가된다. 이에 더하여, 반응 단계는 또한, 완충제의 첨가를 포함할 수 있다. 당분야에 공지된 임의의 적절한 완충제가 이용될 수 있다. 적절한 완충제에는 예로써, 시트레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 숙시네이트 완충액, 그리고 포스페이트 완충액이 포함된다. 한 구체예에서, 완충제는 HEPPSO (N-(2-히드록시에틸)피페라진-N'-(2-히드록시프로판술폰산)), POPSO (피페라진-1,4-비스-(2-히드록시-프로판-술폰산) 탈수물), HEPES (4-(2-히드록시에틸)피페라진-1-에탄술폰산), HEPPS (EPPS) (4-(2-히드록시에틸)피페라진-1-프로판술폰산), TES (N-[트리스(히드록시메틸)메틸]-2-아미노에탄술폰산), 그리고 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택된다.
반응 단계 이후에, 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체는 정제 단계에 종속된다. 이와 관련하여, 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체는 막-기초된 접선 유동 여과 방법인 접선 유동 여과 (TFF), 비-흡착 크로마토그래피, 흡착 크로마토그래피, 흡착 여과, 선별 침전, 또는 임의의 다른 적절한 정제 방법뿐만 아니라 이들의 조합을 이용하여, 혼합물의 다른 성분 (가령, 유리 세포독성제와 반응 부산물)로부터 정제될 수 있다. 본 발명의 한 구체예에서, 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체는 단일 정제 단계 (가령, TFF)를 이용하여 정제된다. 바람직하게는, 접합체는 단일 정제 단계 (가령, TFF)를 이용하여 정제되고 적절한 제제로 교체된다. 본 발명의 다른 구체예에서, 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체는 2가지 순차적 정제 단계를 이용하여 정제된다. 가령, 접합체는 먼저, 선별 침전, 흡착 여과, 흡착 크로마토그래피 또는 비-흡착 크로마토그래피에 의해 정제되고, 그 이후에 TFF로 정제될 수 있다. 당업자는 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체의 정제가 세포독성제에 화학적으로 커플링된 세포-결합 작용제를 포함하는 안정된 접합체의 분리를 가능하게 한다는 것을 인지할 것이다.
Pellicon 타입 시스템 (Millipore, Billerica, MA), Sartocon Cassette 시스템 (Sartorius AG, Edgewood, NY), 그리고 Centrasette 타입 시스템 (Pall Corp., East Hills, NY)을 비롯한 임의의 적절한 TFF 시스템이 정제에 이용될 수 있다.
임의의 적절한 흡착 크로마토그래피 수지가 정제에 이용될 수 있다. 바람직한 흡착 크로마토그래피 수지에는 히드록시아파타이트 크로마토그래피, 소수성 전하 유도 크로마토그래피 (HCIC), 소수성 상호작용 크로마토그래피 (HIC), 이온 교환 크로마토그래피, 혼합형 이온 교환 크로마토그래피, 고정된 금속 친화성 크로마토그래피 (IMAC), 색소 리간드 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피, 그리고 이들의 조합이 포함된다. 적절한 히드록시아파타이트 수지의 실례에는 세라믹 히드록시아파타이트 (CHT 타입 I과 타입 II, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA), HA Ultrogel 히드록시아파타이트 (Pall Corp., East Hills, NY), 그리고 세라믹 플루오르아파타이트 (CFT 타입 I과 타입 II, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)가 포함된다. 적절한 HCIC 수지의 실례는 MEP Hypercel 수지 (Pall Corp., East Hills, NY)이다. 적절한 HIC 수지의 실례에는 부틸-세파로오스, 헥실-세파로오스, 페닐-세파로오스, 그리고 옥틸 세파로오스 수지 (이들 모두 GE Healthcare, Piscataway, NJ)뿐만 아니라 Macro-prep 메틸과 Macro-Prep t-부틸 수지 (Biorad Laboratories, Hercules, CA)가 포함된다. 적절한 이온 교환 수지의 실례에는 SP-세파로오스, CM-세파로오스, 그리고 Q-세파로오스 수지 (이들 모두 GE Healthcare, Piscataway, NJ), 그리고 Unosphere S 수지 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)가 포함된다. 적절한 혼합형 이온 교환체의 실례에는 Bakerbond ABx 수지 (JT Baker, Phillipsburg NJ)가 포함된다. 적절한 IMAC 수지의 실례에는 킬레이트화 세파로오스 수지 (GE Healthcare, Piscataway, NJ) 및 Profinity IMAC 수지 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)가 포함된다. 적절한 색소 리간드 수지의 실례에는 블루 세파로오스 수지 (GE Healthcare, Piscataway, NJ) 및 Affi-겔 블루 수지 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)가 포함된다. 적절한 친화성 수지의 실례에는 단백질 A 세파로오스 수지 (가령, MabSelect, GE Healthcare, Piscataway, NJ) (여기서, 세포-결합 작용제는 항체이다), 그리고 렉틴 친화성 수지, 예를 들면, Lentil 렉틴 세파로오스 수지 (GE Healthcare, Piscataway, NJ) (여기서, 세포-결합 작용제는 적절한 렉틴 결합 부위를 보유한다)가 포함된다. 대안으로, 세포-결합 작용제에 특이적인 항체가 이용될 수도 있다. 이런 항체는 예로써, 세파로오스 4 Fast Flow 수지 (GE Healthcare, Piscataway, NJ)에 고정될 수 있다. 적절한 역상 수지의 실례에는 C4, C8, 그리고 C18 수지 (Grace Vydac, Hesperia, CA)가 포함된다.
임의의 적절한 비-흡착 크로마토그래피 수지가 정제에 이용될 수 있다. 적절한 비-흡착 크로마토그래피 수지의 실례에는 SEPHADEX™ G-25, G-50, G-100, SEPHACRYL™ 수지 (가령, S-200 및 S-300), SUPERDEX™ 수지 (가령, SUPERDEX™ 75 및 SUPERDEX™ 200), BIO-GEL® 수지 (가령, P-6, P-10, P-30, P-60, 그리고 P-100), 그리고 당업자에 공지된 다른 것들이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
한 구체예에서, 본 발명의 방법은 세포-결합 작용제로부터 불안정하게 결합된 링커를 방출하기 위한 유지 단계를 더욱 포함한다. 유지 단계는 세포-결합 작용제-세포독성제 접합체의 정제에 앞서 (가령, 반응 단계 후, 반응 단계와 진정 단계 사이에, 또는 진정 단계 후), 혼합물을 유지하는 것을 포함한다. 가령, 본 발명의 방법은 (a) 세포-결합 작용제를 세포독성제와 접촉시켜 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 혼합물을 형성하고, 그 이후 약 4 내지 약 9의 pH를 갖는 용액 내에서, 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 혼합물을 링커를 제공하는 이작용성 가교 시약과 접촉시켜 (i) 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체, 여기서 세포-결합 작용제는 링커를 통해 세포독성제에 화학적으로 커플링되고, (ii) 유리 세포독성제, 그리고 (iii) 반응 부산물을 포함하는 혼합물을 제공하는 단계, (b) 단계 (a)에서 제조된 혼합물을 유지하여 세포-결합 작용제로부터 불안정하게 결합된 링커를 방출하는 단계, 그리고 (c) 혼합물을 정제하여 정제된 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체를 제공하는 단계를 포함한다.
다른 구체예에서, 본 발명의 방법은 (a) 세포-결합 작용제를 세포독성제와 접촉시켜 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 혼합물을 형성하고, 그 이후 약 4 내지 약 9의 pH를 갖는 용액 내에서, 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 혼합물을 링커를 제공하는 이작용성 가교 시약과 접촉시켜 (i) 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체, 여기서 세포-결합 작용제는 링커를 통해 세포독성제에 화학적으로 커플링되고, (ii) 유리 세포독성제, 그리고 (iii) 반응 부산물을 포함하는 혼합물을 제공하는 단계, (b) 단계 (a)에서 제조된 혼합물을 진정시켜 임의의 반응되지 않은 세포독성제 및/또는 반응되지 않은 이작용성 가교 시약을 진정시키는 단계, (c) 단계 (b)에서 제조된 혼합물을 유지하여 세포-결합 작용제로부터 불안정하게 결합된 링커를 방출하는 단계, 그리고 (d) 혼합물을 정제하여 정제된 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체를 제공하는 단계를 포함한다.
대안으로, 유지 단계는 세포-결합 작용제-세포독성제 접합체의 정제 후 수행되고, 추가의 정제 단계가 뒤따를 수 있다.
바람직한 구체예에서, 반응 (즉, 세포-결합 작용제를 세포독성제 및 그 이후, 이작용성 가교 시약과 접촉시킴)은 유지 단계에 앞서, 완결까지 진행하도록 허용된다. 이와 관련하여, 유지 단계는 세포-결합 작용제와 세포독성제를 포함하는 혼합물이 이작용성 가교 시약과 접촉된 이후, 약 1시간 내지 약 48시간 (가령, 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간, 약 12시간, 약 13시간, 약 14시간, 약 15시간, 약 16시간, 약 17시간, 약 18시간, 약 19시간, 약 20시간, 약 21시간, 약 22시간, 약 23시간, 약 24시간, 또는 약 24시간 내지 약 48시간) 시점에 수행될 수 있다.
유지 단계는 세포-결합 작용제로부터 안정하게 결합된 링커를 실질적으로 방출하지 않으면서 세포-결합 작용제로부터 불안정하게 결합된 링커를 방출하기 위해 적절한 온도 (가령, 약 0℃ 내지 약 37℃)에서 적절한 기간 (가령, 약 1시간 내지 약 1주, 약 1시간 내지 약 24시간, 약 1시간 내지 약 8시간, 또는 약 1시간 내지 약 4시간) 동안 용액을 유지하는 것을 포함한다. 한 구체예에서, 유지 단계는 약 20℃ 또는 그 이하 (가령, 약 0℃ 내지 약 18℃, 약 4℃ 내지 약 16℃), 실온 (가령, 약 20℃ 내지 약 30℃ 또는 약 20℃ 내지 약 25℃), 또는 상승된 온도 (가령, 약 30℃ 내지 약 37℃)에서 용액을 유지하는 것을 포함한다. 한 구체예에서, 유지 단계는 약 16℃ 내지 약 24℃ (가령, 약 15℃, 약 16℃, 약 17℃, 약 18℃, 약 19℃, 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 또는 약 25℃)의 온도에서 용액을 유지하는 것을 포함한다. 다른 구체예에서, 유지 단계는 약 2℃ 내지 약 8℃ (가령, 약 0℃, 약 1℃, 약 2℃, 약 3℃, 약 4℃, 약 5℃, 약 6℃, 약 7℃, 약 8℃, 약 9℃, 또는 약 10℃)의 온도에서 용액을 유지하는 것을 포함한다. 다른 구체예에서, 유지 단계는 약 37℃ (가령, 약 34℃, 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 약 39℃, 또는 약 40℃)의 온도에서 용액을 유지하는 것을 포함한다.
유지 단계의 지속 기간은 유지 단계가 수행되는 온도와 pH에 좌우된다. 가령, 유지 단계의 지속 기간은 상승된 온도에서 유지 단계를 수행함으로써 실질적으로 감소될 수 있는데, 최대 온도는 세포-결합 작용제-세포독성제 접합체의 안정성에 의해 제한된다. 유지 단계는 약 1시간 내지 약 1일 (가령, 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 12시간, 약 14시간, 약 16시간, 약 18시간, 약 20시간, 약 22시간, 또는 약 24시간), 약 10시간 내지 약 24시간, 약 12시간 내지 약 24시간, 약 14시간 내지 약 24시간, 약 16시간 내지 약 24시간, 약 18시간 내지 약 24시간, 약 20시간 내지 약 24시간, 약 5시간 내지 약 1주, 약 20시간 내지 약 1주, 약 12시간 내지 약 1주 (가령, 약 12시간, 약 16시간, 약 20시간, 약 24시간, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 또는 약 7일), 또는 약 1일 내지 약 1주 동안 용액을 유지하는 것을 포함할 수 있다.
한 구체예에서, 유지 단계는 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 적어도 약 12시간 내지 최대 1주의 기간 동안 용액을 유지하는 것을 포함한다. 다른 구체예에서, 유지 단계는 하룻밤 (가령, 약 12 내지 약 24시간, 바람직하게는 약 20시간) 동안 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 용액을 유지하는 것을 포함한다.
유지 단계를 위한 pH 값은 바람직하게는, 약 4 내지 약 10이다. 한 구체예에서, 유지 단계를 위한 pH 값은 약 4 또는 그 이상, 하지만 약 6 이하 (가령, 4 내지 5.9), 또는 약 5 또는 그 이상, 하지만 약 6 이하 (가령, 5 내지 5.9)이다. 다른 구체예에서, 유지 단계를 위한 pH 값은 약 6 내지 약 10의 범위 (가령, 약 6.5 내지 약 9, 약 6 내지 약 8)에서 변한다. 가령, 유지 단계를 위한 pH 값은 약 6, 약 6.5, 약 7, 약 7.5, 약 8, 약 8.5, 약 9, 약 9.5, 또는 약 10일 수 있다.
특정한 구체예에서, 유지 단계는 25℃ 및 약 6-7.5의 pH에서 약 12시간 내지 약 1주 동안 혼합물을 배양하거나, 4℃ 및 약 4.5-5.9의 pH에서 약 5시간 내지 약 5일 동안 혼합물을 배양하거나, 또는 25℃ 및 약 4.5-5.9의 pH에서 약 5시간 내지 약 1일 동안 혼합물을 배양하는 것을 포함할 수 있다.
본 발명은 세포독성제에 화학적으로 커플링된 세포-결합 작용제를 포함하는 안정된 접합체의 조성물을 제조하기 위한 방법을 제시하고, 여기서 이들 조성물은 안정되지 않은 접합체가 실질적으로 없다. 이와 관련하여, 본 발명은 실질적으로 높은 순도와 안정성의 세포-결합 작용제-세포독성제 접합체를 제조하기 위한 방법을 제시한다. 이런 조성물은 접합체의 높은 순도와 안정성으로 인하여 질환을 치료하는데 이용될 수 있다. 세포독성제, 예를 들면, 메이탄시노이드에 화학적으로 커플링된 세포-결합 작용제, 예를 들면, 항체를 포함하는 조성물은 예로써, U.S. 특허 7,374,762에서 설명되고, 이의 전체 교시는 본원에 전체로서 참고문헌으로 편입된다. 본 발명의 한 양상에서, 실질적으로 높은 순도의 세포-결합 작용제-세포독성제 접합체는 하기 특질 중에서 하나 또는 그 이상을 갖는다: (a) 접합체 종류 중에서 약 90% 이상 (가령, 약 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 또는 그 이상), 바람직하게는 약 95% 이상이 단위체이고, (b) 접합체 제조물 내에 비-접합된 링커 수준이 약 10% 이하 (가령, 약 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 또는 0% 또는 그 이하) (전체 링커에 비하여)이고, (c) 접합체 종류 중에서 10% 이하 (가령, 약 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 또는 0% 또는 그 이하)가 가교되고, (d) 접합체 제조물 내에 유리 세포독성제 수준이 약 2% 이하 (가령, 약 1.5%, 1.4%, 1.3%, 1.2%, 1.1%, 1.0%, 0.9%, 0.8%, 0.7%, 0.6%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 0.1%, 또는 0% 또는 그 이하) (전체 세포독성제에 비하여 mol/mol)이고, 및/또는 (e) 보관 시에 (가령, 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 1년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 또는 약 5년 후) 유리 세포독성제의 수준에서 실질적인 증가 없음. 유리 세포독성제의 수준에서 "실질적인 증가"는 일정한 보관 기간 (가령, 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 1년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 또는 약 5년) 후, 유리 세포독성제의 수준에서 증가가 약 0.1%, 약 0.2%, 약 0.3%, 약 0.4%, 약 0.5%, 약 0.6%, 약 0.7%, 약 0.8%, 약 0.9%, 약 1.0%, 약 1.1%, 약 1.2%, 약 1.3%, 약 1.4%, 약 1.5%, 약 1.6%, 약 1.7%, 약 1.8%, 약 1.9%, 약 2.0%, 약 2.2%, 약 2.5%, 약 2.7%, 약 3.0%, 약 3.2%, 약 3.5%, 약 3.7%, 또는 약 4.0% 이하라는 것을 의미한다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "비-접합된 링커"는 이작용성 가교 시약과 공유 연결되는 세포-결합 작용제를 지칭하고, 여기서 세포-결합 작용제는 이작용성 가교 시약의 링커를 통해 세포독성제에 공유 커플링되지 않는다 (즉, "비-접합된 링커"는 CBA-L로 표시될 수 있고, 여기서 CBA는 세포-결합 작용제를 나타내고, 그리고 L은 이작용성 가교 시약을 나타낸다. 대조적으로, 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체는 CBA-L-D로 표시될 수 있고, 여기서 D는 세포독성제를 나타낸다).
한 구체예에서, 세포-결합 작용제 세포독성제 접합체에서 세포독성제 대 세포-결합 작용제의 평균 몰 비율은 약 1 내지 약 10, 약 2 내지 약 7, 약 3 내지 약 5, 약 2.5 내지 약 4.5 (가령, 약 2.5, 약 2.6, 약 2.7, 약 2.8, 약 2.9, 약 3.0, 약 3.1, 약 3.3, 약 3.4, 약 3.5, 약 3.6, 약 3.7, 약 3.8, 약 3.9, 약 4.0, 약 4.1, 약 4.2, 약 4.3, 약 4.4, 약 4.5), 약 3.0 내지 약 4.0, 약 3.2 내지 약 4.2, 또는 약 4.5 내지 5.5 (가령, 약 4.5, 약 4.6, 약 4.7, 약 4.8, 약 4.9, 약 5.0, 약 5.1, 약 5.2, 약 5.3, 약 5.4, 또는 약 5.5)이다.
본 발명은 세포독성제에 화학적으로 커플링된 세포-결합 작용제를 포함하는 안정된 접합체의 조성물을 제조하기 위한 더욱 효과적인 방법을 제시한다. 한 구체예에서, 세포-결합 작용제와 세포독성제의 접합체를 제조하기 위한 전통적인 방법과 비교하여, 접합체를 위한 세포독성제 대 세포-결합 작용제의 동일한 평균 몰 비율을 달성하기 위해 더욱 적은 양의 세포독성제가 요구된다.
세포-결합 작용제는 세포, 전형적으로 및 바람직하게는, 동물 세포 (가령, 인간 세포)에 결합하는 임의의 적절한 작용제일 수 있다. 세포-결합 작용제는 바람직하게는, 펩티드 또는 폴리펩티드이다. 적절한 세포-결합 작용제에는 예로써, 항체 (가령, 단일클론 항체 및 이들의 단편), 인터페론 (가령, .알파., .베타., .감마.), 림포카인 (가령, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6), 호르몬 (가령, 인슐린, TRH (갑상선 자극 호르몬 방출 호르몬), MSH (멜라닌 세포 자극 호르몬), 스테로이드 호르몬, 예를 들면, 안드로겐과 에스트로겐), 성장 인자 및 집락-촉진 인자, 예를 들면, EGF, TGF-알파, FGF, VEGF, G-CSF, M-CSF와 GM-CSF (Burgess, Immunology Today 5:155-158 (1984)), 영양소-수송 분자 (가령, 트랜스페린), 비타민 (가령, 엽산염), 그리고 세포의 표면 상에서 표적 분자에 특이적으로 결합하는 임의의 다른 작용제 또는 분자가 포함된다.
세포-결합 작용제가 항체인 경우에, 이것은 폴리펩티드 또는 글리코토프이고 막통과 분자 (가령, 수용체) 또는 리간드, 예를 들면, 성장 인자일지도 모르는 항원에 결합한다. 예시적인 항원에는 레닌; 인간 성장 호르몬과 소 성장 호르몬을 비롯한 성장 호르몬; 성장 호르몬 방출 인자; 부갑상선 호르몬; 갑상선 자극 호르몬; 지질단백질; 알파-1-안티트립신; 인슐린 A-사슬; 인슐린 B-사슬; 프로인슐린; 여포 자극 호르몬; 칼시토닌; 황체 형성 호르몬; 글루카곤; 응고 인자, 예를 들면, 인자 vmc, 인자 IX, 조직 인자 (TF), 그리고 폰빌레브란트 인자; 항-응고 인자, 예를 들면, 단백질 C; 심방 나트륨이뇨성 인자; 폐 계면활성제; 플라스미노겐 활성제, 예를 들면, 우로키나아제 또는 인간 소변 또는 조직-유형 플라스미노겐 활성제 (t-PA); 봄베신; 트롬빈; 조혈 성장 인자; 종양 괴사 인자-알파와 -베타; 엔케팔리나아제; RANTES (활성화에서 조절되고 정상적으로 T-세포 발현되고 분비됨); 인간 대식세포 염증단백질 (MIP-1-알파); 혈청 알부민, 예를 들면, 인간 혈청 알부민; 뮐러관-저해 물질; 릴랙신 A-사슬; 릴랙신 B-사슬; 프로릴랙신; 생쥐 성선자극호르몬-연관된 펩티드; 미생물 단백질, 예를 들면, 베타-락타마아제; DNase; IgE; 세포독성 T-림프구 연관된 항원 (CTLA), 예를 들면, CTLA-4; 인히빈; 액티빈; 혈관 내피 성장 인자 (VEGF); 호르몬 또는 성장 인자에 대한 수용체; 단백질 A 또는 D; 류머티즘 인자; 신경영양 인자, 예를 들면, 뼈-유래된 신경영양 인자 (BDNF), 뉴로트로핀-3, -4, -5, 또는 -6 (NT-3, NT4, NT-5, 또는 NT-6), 또는 신경 성장 인자, 예를 들면, NGF-β; 혈소판-유래된 성장 인자 (PDGF); 섬유아세포 성장 인자, 예를 들면, aFGF와 bFGF; 표피 성장 인자 (EGF); 전환 성장 인자 (TGF), 예를 들면, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, TGF-β4, 또는 TGF-β5를 비롯한 TGF-알파와 TGF-베타; 인슐린-유사 성장 인자-I과 -II (IGF-I과 IGF-II); des(1-3)-IGF-I (뇌 IGF-I), 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질, EpCAM, GD3, FLT3, PSMA, PSCA, MUC1, MUC16, STEAP, CEA, TENB2, EphA 수용체, EphB 수용체, 엽산염 수용체, FOLR1, 메소텔린, 크립토, 알파v베타6, 인테그린, VEGF, VEGFR, EGFR, 트랜스페린 수용체, IRTA1, IRTA2, IRTA3, IRTA4, IRTA5; CD 단백질, 예를 들면, CD2, CD3, CD4, CD5, CD6, CD8, CD11, CD14, CD19, CD20, CD21, CD22, CD25, CD26, CD28, CD30, CD33, CD36, CD37, CD38, CD40, CD44, CD52, CD55, CD56, CD59, CD70, CD79, CD80. CD81, CD103, CD105, CD134, CD137, CD138, CD152 또는 본원에 전체로서 참고문헌으로 편입되는 U.S. 특허 출원 공개 번호 2008/0171040 또는 U.S. 특허 출원 공개 번호 2008/0305044에서 개시된 하나 또는 그 이상의 종양-연관된 항원 또는 세포-표면 수용체에 결합하는 항체; 에리트로포이에틴; 골유도성 인자; 면역독소; 골 형태발생 단백질 (BMP); 인터페론, 예를 들면, 인터페론-알파, -베타, 그리고 -감마; 집락 자극 인자 (CSFs), 예를 들면, M-CSF, GM-CSF, 그리고 G-CSF; 인터류킨 (ILs), 예를 들면, IL-1 내지 IL-10; 과산화물 디스뮤타아제; T-세포 수용체; 표면 막 단백질; 분해 촉진 인자; 바이러스 항원, 예를 들면, HIV 외피의 일부분; 수송 단백질; 호밍 수용체; 어드레신; 조절 단백질; 인테그린, 예를 들면, CD11a, CD11b, CD11c, CD18, ICAM, VLA-4와 VCAM; 종양 연관된 항원, 예를 들면, HER2, HER3 또는 HER4 수용체; 엔도글린, c-Met, IGF1R, 전립선 항원, 예를 들면, PCA3, PSA, PSGR, NGEP, PSMA, PSCA, TMEFF2, 그리고 STEAP1; LGR5, B7H4, 그리고 앞서-열거된 폴리펩티드 중에서 한 가지의 단편과 같은 분자가 포함된다.
부가적으로, 골수성 세포에 결합하는 GM-CSF가 급성 골수성 백혈병으로부터 병든 세포에 세포-결합 작용제로서 이용될 수 있다. 활성화된 T-세포에 결합하는 IL-2는 이식편 거부반응의 예방, 이식편-대-숙주 질환의 치료와 예방, 그리고 급성 T-세포 백혈병의 치료에 이용될 수 있다. 멜라닌세포에 결합하는 MSH는 흑색종을 지향하는 항체가 그러한 것처럼, 흑색종의 치료에 이용될 수 있다. 엽산은 난소 및 기타 종양에서 발현된 엽산염 수용체를 표적으로 하는데 이용될 수 있다. 표피 성장 인자는 폐 및 두경부와 같은 편평상피암을 표적으로 하는데 이용될 수 있다. 소마토스타틴은 신경모세포종 및 기타 종양 유형을 표적으로 하는데 이용될 수 있다.
유방과 고환의 암은 세포-결합 작용제로서 각각, 에스트로겐 (또는 에스트로겐 유사체) 또는 안드로겐 (또는 안드로겐 유사체)로 성공적으로 치료될 수 있다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "항체"는 임의의 면역글로불린, 임의의 면역글로불린 단편, 예를 들면, Fab, Fab', F(ab')2, dsFv, sFv, 미니바디, 디아바디, 트리바디, 테트라바디 (Parham, J. Immunol. 131: 2895-2902 (1983); Spring et al. J. Immunol. 113: 470-478 (1974); Nisonoff et al. Arch. Biochem. Biophys. 89: 230-244 (1960), Kim et al., Mol, Cancer Ther., 7: 2486-2497 (2008), Carter, Nature Revs., 6: 343-357 (2006)), 또는 세포의 표면 상에서 항원에 결합할 수 있는 (가령, 상보성 결정 영역 (CDR)을 내포하는) 면역글로불린 키메라를 지칭한다. 임의의 적절한 항체가 세포-결합 작용제로서 이용될 수 있다. 당업자는 적절한 항체의 선별이 표적화되는 세포 집단에 좌우된다는 것을 인지할 것이다. 이와 관련하여, 특정 세포 집단 (전형적으로 및 바람직하게는, 병든 세포 집단)에서 선별적으로 발현되는 세포 표면 분자 (즉, 항원)의 유형과 숫자는 본 발명의 조성물에서 이용을 위한 적절한 항체의 선별을 지배할 것이다. 세포 표면 발현 프로필은 종양 세포 유형을 비롯한 매우 다양한 세포 유형에 대해 알려져 있거나, 또는 알려져 있지 않으면, 일과적인 분자생물학과 조직화학 기술을 이용하여 결정될 수 있다.
항체는 다중클론 또는 단일클론일 수 있지만, 가장 바람직하게는 단일클론 항체이다. 본원에서 이용된 바와 같이, "다중클론" 항체는 면역화된 동물의 혈청 내에 전형적으로 포함되는, 항체 분자의 이질성 집단을 지칭한다. "단일클론" 항체는 특정 항원에 특이적인 항체 분자의 동질성 집단을 지칭한다. 단일클론 항체는 전형적으로, B 림프구 ("B 세포")의 단일 클론에 의해 생산된다. 단일클론 항체는 표준 하이브리도마 기술 (예로써, K
Figure pat00001
hler and Milstein, Eur. J. Immunol., 5: 511-519 (1976), Harlow and Lane (eds.), Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press (1988), 그리고 C.A. Janeway et al. (eds.), Immunobiology, 5th Ed., Garland Publishing, New York, NY (2001)를 참조한다)을 비롯하여, 당업자에게 공지된 다양한 기술을 이용하여 수득될 수 있다. 간단히 말하면, 단일클론 항체를 생산하는 하이브리도마 방법은 전형적으로, 임의의 적절한 동물, 전형적으로 및 바람직하게는 생쥐에 항원 (즉, "면역원")을 주입하는 것을 수반한다. 상기 동물은 차후 희생되고, 그리고 이의 비장으로부터 분리된 B 세포는 인간 골수종 세포와 융합된다. 하이브리드 세포 (즉, "하이브리도마")가 생산되고, 이것은 무한히 증식하고, 그리고 원하는 특이성을 갖는 높은 역가의 항체를 시험관내에서 연속적으로 분비한다. 당분야에 공지된 임의의 적절한 방법이 원하는 특이성을 갖는 항체를 생산하는 하이브리도마 세포를 확인하는데 이용될 수 있다. 이런 방법에는 예로써, 효소-연결 면역흡착 측정법 (ELISA), 웨스턴 블롯 분석, 그리고 방사면역측정법이 포함된다. 하이브리도마의 집단은 개별 클론을 분리하기 위해 스크리닝되고, 이들 각각은 항원에 대한 단일 항체 종류를 분비한다. 각 하이브리도마가 단일 B 세포와의 융합으로부터 유래된 클론이기 때문에, 이것이 생산하는 모든 항체 분자는 그들의 항원 결합 부위와 이소타입을 비롯하여, 구조에서 동일하다. 단일클론 항체는 또한, EBV-하이브리도마 기술 (예로써, Haskard and Archer, J. Immunol. Methods, 74(2): 361-67 (1984), 그리고 Roder et al., Methods Enzymol., 121: 140-67 (1986)을 참조한다), 박테리오파지 벡터 발현 시스템 (예로써, Huse et al., Science, 246: 1275-81 (1989)을 참조한다), 또는 항체 단편, 예를 들면, Fab와 scFv (단일 사슬 가변 영역)를 포함하는 파지 전시 라이브러리 (예로써, U.S. 특허 5,885,793과 5,969,108, 그리고 국제 특허 출원 공개 WO 92/01047과 WO 99/06587을 참조한다)을 비롯한 다른 적절한 기술을 이용하여 산출될 수도 있다.
단일클론 항체는 임의의 적절한 동물에서 분리되거나 생산될 수 있지만, 바람직하게는 포유동물, 더욱 바람직하게는 생쥐 또는 인간, 그리고 가장 바람직하게는 인간에서 생산된다. 생쥐에서 항체를 생산하기 위한 방법은 당업자에게 널리 알려져 있고 본원에서 설명된다. 인간 항체에 대하여, 당업자는 다중클론 항체가 적절한 항원으로 예방접종된 또는 면역화된 인간 개체의 혈청으로부터 분리될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 대안으로, 인간 항체는 생쥐와 같은 비-인간 동물에서 인간 항체를 생산하기 위한 공지된 기술을 개조함으로써 산출될 수 있다 (예로써, U.S. 특허 5,545,806, 5,569,825와 5,714,352, 그리고 U.S. 특허 출원 공개 번호 2002/0197266 A1을 참조한다).
인간 항체, 특히 인간 단일클론 항체는 인간에서 치료적 적용을 위한 이상적인 선택이긴 하지만, 전형적으로 생쥐 단일클론 항체보다 산출하기가 더욱 어렵다. 생쥐 단일클론 항체는 하지만, 인간에 투여될 때 급속한 숙주 항체 반응을 유도하고, 이것은 항체-세포독성제 접합체의 치료적 또는 진단적 잠재력을 감소시킬 수 있다. 이들 곤란한 상황을 피하기 위하여, 단일클론 항체는 바람직하게는, 인간 면역계에 의해 "이물"로서 인식되지 않는다.
이를 위하여, 파지 전시가 항체를 산출하는데 이용될 수 있다. 이와 관련하여, 항체의 항원-결합 가변 (V) 도메인을 인코딩하는 파지 라이브러리가 표준 분자생물학 및 재조합 DNA 기술을 이용하여 산출될 수 있다 (예로써, Sambrook et al. (eds.), Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3rd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (2001)를 참조한다). 원하는 특이성을 갖는 가변 영역을 인코딩하는 파지는 원하는 항원에 대한 특이적 결합에 대해 선별되고, 그리고 선별된 가변 도메인을 포함하는 완전한 인간 항체는 재구성된다. 재구성된 항체를 인코딩하는 핵산 서열은 단일클론 항체의 특징을 갖는 인간 항체가 세포에 의해 분비되도록, 하이브리도마 생산에 이용되는 적절한 세포주, 예를 들면, 골수종 세포 내로 도입된다 (예로써, Janeway et al., supra, Huse et al., supra, 그리고 U.S. 특허 6,265,150을 참조한다). 대안으로, 단일클론 항체는 특정한 인간 중쇄와 경쇄 면역글로불린 유전자에 대한 도입 유전자를 갖는 생쥐로부터 산출될 수 있다. 이런 방법은 당분야에 알려져 있고 예로써, U.S. 특허 5,545,806과 5,569,825, 그리고 Janeway et al., supra에서 설명된다.
가장 바람직하게는, 항체는 인간화 항체이다. 본원에서 이용된 바와 같이, "인간화" 항체는 항체의 항원 결합 루프를 형성하는, 생쥐 단일클론 항체의 상보성 결정 영역 (CDR)이 인간 항체 분자의 프레임워크 위에 이식되는 항체이다. 생쥐와 인간 항체의 프레임워크의 유사성으로 인하여, 이러한 접근법은 인간 항체에 항원적으로 동일하지만, CDR 서열이 유래된 생쥐 단일클론 항체와 동일한 항원에 결합하는 단일클론 항체를 생산하는 것으로 당분야에서 일반적으로 인정된다. 인간화 항체를 산출하기 위한 방법은 당분야에 널리 알려져 있고 예로써, Janeway et al., supra, U.S. 특허 5,225,539, 5,585,089와 5,693,761, European 특허 번호 0239400 B1, 그리고 United Kingdom 특허 번호 2188638에서 상세하게 설명된다. 인간화 항체는 또한, U.S. 특허 5,639,641 및 Pedersen et al., J. Mol. Biol., 235: 959-973 (1994)에서 설명된 항체 재포장 기술을 이용하여 산출될 수 있다. 본 발명의 조성물의 접합체에 이용되는 항체는 가장 바람직하게는, 인간화 단일클론 항체이지만, 전술한 바와 같은 인간 단일클론 항체 및 생쥐 단일클론 항체 역시 본 발명의 범위 내에 있다.
적어도 하나의 항원 결합 부위를 갖고, 따라서 표적 세포의 표면 상에 존재하는 적어도 하나의 항원 또는 수용체를 인식하고 여기에 결합하는 항체 단편 역시 본 발명의 범위 내에 있다. 이와 관련하여, 온전한 항체 분자의 단백분해 개열은 항원을 인식하고 이들에 결합하는 능력을 유지하는 다양한 항체 단편을 생산할 수 있다. 가령, 프로테아제 파파인으로 항체 분자의 제한된 절단은 전형적으로, 3개의 단편을 생산하고, 이들 중에서 2개는 동일하고 Fab 단편으로서 지칭되는데, 그 이유는 이들이 부모 항체 분자의 항원 결합 활성을 유지하기 때문이다. 효소 펩신으로 항체 분자의 개열은 정상적으로, 2개의 항체 단편을 생산하고, 이들 중에서 1개는 항체 분자의 양쪽 항원-결합 팔을 유지하고, 따라서 F(ab')2 단편으로서 지칭된다. 디티오트레이톨 또는 메르캅토에틸아민으로 F(ab')2 단편의 환원은 Fab' 단편으로서 지칭되는 단편을 생산한다. 합성 펩티드를 거쳐 항체 경쇄의 V 도메인에 연결된 항체 중쇄의 가변 (V) 도메인을 포함하는 절두된 Fab 단편으로 구성되는 단일-사슬 가변 영역 단편 (sFv) 항체 단편은 일과적인 재조합 DNA 기술 기술을 이용하여 산출될 수 있다 (예로써, Janeway et al., supra를 참조한다). 유사하게, 이황화-안정화된 가변 영역 단편 (dsFv)은 재조합 DNA 기술에 의해 제조될 수 있다 (예로써, Reiter et al., Protein Engineering, 7: 697-704 (1994)를 참조한다). 하지만, 본 발명의 배경에서 항체 단편은 항체 단편의 이들 예시적인 유형으로 한정되지 않는다. 원하는 세포 표면 수용체 또는 항원을 인식하고 여기에 결합하는 임의의 적절한 항체 단편이 이용될 수 있다. 항체 단편은 예로써, Parham, J. Immunol., 131: 2895-2902 (1983), Spring et al., J. Immunol., 113: 470-478 (1974), 그리고 Nisonoff et al., Arch. Biochem. Biophys., 89: 230-244 (1960)에서 더욱 설명된다. 항체-항원 결합은 당분야에 공지된 임의의 적절한 방법, 예를 들면, 방사면역측정법 (RIA), ELISA, 웨스턴 블롯, 면역침전, 그리고 경쟁 저해 측정법을 이용하여 분석평가될 수 있다 (예로써, Janeway et al., supra, 그리고 U.S. 특허 출원 공개 번호 2002/0197266 A1을 참조한다).
이에 더하여, 항체는 키메라 항체 또는 이의 항원 결합 단편일 수 있다. "키메라"는 항체가 적어도 2개의 상이한 종류로부터 수득되거나 유래된 적어도 2개의 면역글로불린 (가령, 2개의 상이한 면역글로불린, 예를 들면, 뮤린 면역글로불린 가변 영역과 합동된 인간 면역글로불린 불변 영역), 또는 이들의 단편을 포함한다는 것을 의미한다. 항체는 또한, 도메인 항체 (dAb) 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들면, 낙타 항체 (예로써, Desmyter et al., Nature Struct. Biol., 3: 752, (1996)를 참조한다), 또는 상어 항체, 예를 들면, 새로운 항원 수용체 (IgNAR) (예로써, Greenberg et al., Nature, 374: 168 (1995), 그리고 Stanfield et al., Science, 305: 1770-1773 (2004)을 참조한다)일 수 있다.
임의의 적절한 항체가 본 발명의 배경에서 이용될 수 있다. 가령, 단일클론 항체 J5는 공통 급성 림프아구성 백혈병 항원에 특이적이고 (CALLA) (Ritz et al., Nature, 283: 583-585 (1980)), 그리고 CALLA를 발현하는 세포 (가령, 급성 림프아구성 백혈병 세포)를 표적으로 하는데 이용될 수 있는 뮤린 IgG2a 항체이다. 단일클론 항체 MY9는 CD33 항원에 특이적으로 결합하고 (Griffin et al., Leukemia Res., 8: 521 (1984)), 그리고 CD33을 발현하는 세포 (가령, 급성 골수성 백혈병 (AML) 세포)를 표적으로 하는데 이용될 수 있는 뮤린 IgG1 항체이다.
유사하게, 단일클론 항체 항-B4 (일명, B4)는 B 세포 상에서 CD19 항원에 결합하고 (Nadler et al., J. Immunol., 131: 244-250 (1983)), 그리고 CD19를 발현하는 B 세포 또는 병든 세포 (가령, 비-호지킨 림프종 세포 및 만성 림프아구성 백혈병 세포)를 표적으로 하는데 이용될 수 있는 뮤린 IgG1 항체이다. N901은 소세포 폐 종양을 비롯한 신경내분비 원점의 세포 상에서 발견되는 CD56 (신경 세포 유착 분자) 항원에 결합하는 뮤린 단일클론 항체이고, 이것은 신경내분비 원점의 세포에 약물을 표적화하기 위해 접합체에 이용될 수 있다. J5, MY9, 그리고 B4 항체는 바람직하게는, 접합체의 일부로서 그들의 이용에 앞서 재포장되거나 인간화된다. 항체의 재포장 또는 인간화는 예로써, Roguska et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91: 969-73 (1994)에서 설명된다.
이에 더하여, 단일클론 항체 C242는 CanAg 항원에 결합하고 (예로써, U.S. 특허 5,552,293을 참조한다), 그리고 CanAg 발현 종양, 예를 들면, 결장직장, 췌장, 비-소세포 폐, 그리고 위 암에 접합체를 표적화하는데 이용될 수 있다. HuC242는 단일클론 항체 C242의 인간화 형태이다 (예로써, U.S. 특허 5,552,293을 참조한다). HuC242가 생산되는 하이브리도마는 ECACC 식별 번호 90012601로 기탁된다. HuC242는 CDR-이식 방법 (예로써, U.S. 특허 5,585,089, 5,693,761, 그리고 5,693,762를 참조한다) 또는 재포장 기술 (예로써, U.S. 특허 5,639,641을 참조한다)을 이용하여 제조될 수 있다. HuC242는 CanAg 항원을 발현하는 종양 세포, 예를 들면, 결장직장, 췌장, 비-소세포 폐, 그리고 위 암 세포에 접합체를 표적화하는데 이용될 수 있다.
난소 암과 전립선 암 세포를 표적으로 하기 위하여, 항-MUC1 항체가 접합체에서 세포-결합 작용제로서 이용될 수 있다. 항-MUC1 항체에는 예로써, 항-HMFG-2 (예로써, Taylor-Papadimitriou et al., Int. J. Cancer, 28: 17-21 (1981)을 참조한다), hCTM01 (예로써, van Hof et al., Cancer Res., 56: 5179-5185 (1996)를 참조한다), 그리고 DS6이 포함된다. 전립선 암 세포는 또한, 항-전립선-특이적 막 항원 (PSMA)을 세포-결합 작용제로서 이용한 접합체, 예를 들면, J591로 표적화될 수 있다 (예로써, Liu et al., Cancer Res., 57: 3629-3634 (1997)를 참조한다). 게다가, Her2 항원을 발현하는 암 세포, 예를 들면, 유방, 전립선, 그리고 난소 암은 항-Her2 항체, 예를 들면, 트라스투주맙을 세포-결합 작용제로서 이용한 접합체로 표적화될 수 있다. 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 및 이의 변이체, 예를 들면, 타입 III 결실 돌연변이, EGFRvIII을 발현하는 세포는 항-EGFR 항체를 이용한 접합체로 표적화될 수 있다. 항-EGFR 항체는 국제 특허 출원 번호 PCT/US11/058385 및 PCT/US11/058378에서 설명된다. 항-EGFRvIII 항체는 U.S. 특허 7,736,644와 7,628,986, 그리고 U.S. 특허 출원 공개 2010/0111979, 2009/0240038, 2009/0175887, 2009/0156790과 2009/0155282에서 설명된다. 인슐린-유사 성장 인자 수용체에 결합하는 항-IGF-IR 항체, 예를 들면, U.S. 특허 7,982,024에서 설명된 것들 역시 접합체에 이용될 수 있다. CD27L, 크립토, CD138, CD38, EphA2, 인테그린, CD37, 엽산염, CD20, PSGR, NGEP, PSCA, TMEFF2, STEAP1, 엔도글린, 그리고 Her3에 결합하는 항체 역시 접합체에 이용될 수 있다.
한 구체예에서, 항체는 huN901, huMy9-6, huB4, huC242, 항-HER2 항체 (가령, 트라스투주맙), 비바투주맙, 시브로투주맙, 리툭시맙, huDS6, 국제 특허 출원 공개 WO 2010/124797에서 설명된 항-메소텔린 항체 (가령, MF-T), U.S. 특허 출원 공개 2010/0093980에서 설명된 항-크립토 항체 (가령, huB3F6), U.S. 특허 출원 공개 2007/0183971에서 설명된 항-CD138 항체 (가령, huB-B4), 국제 특허 출원 번호 PCT/US11/058385와 PCT/US11/058378에서 설명된 항-EGFR 항체 (가령, EGFR-7), U.S. 특허 7,736,644와 7,628,986, 그리고 U.S. 특허 출원 공개 2010/0111979, 2009/0240038, 2009/0175887, 2009/0156790과 2009/0155282에서 설명된 항-EGFRvIII 항체, 국제 특허 출원 공개 WO 2011/039721과 WO 2011/039724에서 기술된 인간화 EphA2 항체 (가령, 2H11R35R74); 국제 특허 출원 공개 WO 2008/047242에서 설명된 항-CD38 항체 (가령, hu38SB19), 국제 특허 출원 공개 WO 2011/106528에서 설명된 항-엽산염 항체, 그리고 U.S. 특허 출원 공개 2012/0009181에서 설명된 항-엽산염 항체 (가령, huMov19); U.S. 특허 5,958,872, 6,596,743과 7,982,024에서 설명된 항-IGF1R 항체; U.S. 특허 출원 공개 2011/0256153에서 설명된 항-CD37 항체 (가령, huCD37-3); U.S. 특허 출원 공개 2006/0127407에서 설명된 항-인테그린 αvβ6 항체 (가령, CNTO95); 그리고 국제 특허 출원 공개 WO 2012/019024에서 설명된 항-Her3 항체로 구성된 군에서 선택된다.
특히 바람직한 항체는 본원에서 기술된 인간화 단일클론 항체이다. 실례에는 huN901, huMy9-6, huB4, huC242, 인간화 단일클론 항-Her2 항체 (가령, 트라스투주맙), 비바투주맙, 시브로투주맙, CNTO95, huDS6, 그리고 리툭시맙이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다 (예로써, U.S. 특허 5,639,641과 5,665,357, U.S. 특허가출원 번호 60/424,332 (이것은 U.S. 특허 7,557,189에 관련된다), 국제 (PCT) 특허 출원 공개 번호 WO 02/16401, Pedersen et al., supra, Roguska et al., supra, Liu et al., supra, Nadler et al., supra, Colomer et al., Cancer Invest., 19: 49-56 (2001), Heider et al., Eur. J. Cancer, 31A: 2385-2391 (1995), Welt et al., J. Clin. Oncol., 12: 1193-1203 (1994), 그리고 Maloney et al., Blood, 90: 2188-2195 (1997)를 참조한다). 기타 인간화 단일클론 항체는 당분야에 알려져 있고 본 발명과 관련하여 이용될 수 있다.
한 구체예에서, 세포-결합 작용제는 인간 엽산염 수용체 1에 특이적으로 결합하는 인간화 항-엽산염 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고, 여기서 상기 항체는 하기를 포함한다: (a) GYFMN(SEQ ID NO: 1)을 포함하는 중쇄 CDR1; RIHPYDGDTFYNQXaa1FXaa2Xaa3(SEQ ID NO: 2)을 포함하는 중쇄 CDR2; 그리고 YDGSRAMDY(SEQ ID NO: 3)를 포함하는 중쇄 CDR3; 그리고 (b) KASQSVSFAGTSLMH(SEQ ID NO: 4)를 포함하는 경쇄 CDR1; RASNLEA(SEQ ID NO: 5)를 포함하는 경쇄 CDR2; 그리고 QQSREYPYT(SEQ ID NO: 6)를 포함하는 경쇄 CDR3; 여기서 Xaa1은 K, Q, H, 그리고 R에서 선택되고; Xaa2는 Q, H, N, 그리고 R에서 선택되고; 그리고 Xaa3은 G, E, T, S, A, 그리고 V에서 선택된다. 바람직하게는, 중쇄 CDR2 서열은 RIHPYDGDTFYNQKFQG(SEQ ID NO: 7)를 포함한다.
다른 구체예에서, 항-엽산염 항체는 QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKASGYTFTGYFMNWVKQSPGQSLEWIGRIHPYDGDTFYNQKFQGKATLTVDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTRYDGSRAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO: 8)의 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 인간 엽산염 수용체 1에 특이적으로 결합하는 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
다른 구체예에서, 항-엽산염 항체는 2010년 4월 7일자에 ATCC에 기탁되고 ATCC 수탁 번호 PTA-10772 및 PTA-10773 또는 10774를 갖는 플라스미드 DNA에 의해 인코딩된 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
다른 구체예에서, 항-엽산염 항체는 QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKASGYTFTGYFMNWVKQSPGQSLEWIGRIHPYDGDTFYNQKFQGKATLTVDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTRYDGSRAMDYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO: 9)에 약 적어도 90%, 95%, 99% 또는 100% 동일한 중쇄 가변 도메인, 그리고 DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISCKASQSVSFAGTSLMHWYHQKPGQQPRLLIYRASNLEAGVPDRFSGSGSKTDFTLNISPVEAEDAATYYCQQSREYPYTFGGGTKLEIKR(SEQ ID NO: 10); 또는 DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISCKASQSVSFAGTSLMHWYHQKPGQQPRLLIYRASNLEAGVPDRFSGSGSKTDFTLTISPVEAEDAATYYCQQSREYPYTFGGGTKLEIKR(SEQ ID NO: 11)에 적어도 약 90%, 95%, 99% 또는 100% 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함하는 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
세포-결합 작용제는 바람직하게는, 항체이지만, 세포-결합 작용제는 또한, 비-항체 분자일 수 있다. 적절한 비-항체 분자에는 예로써, 인터페론 (가령, 알파, 베타, 또는 감마 인터페론), 림포카인 (가령, 인터류킨 2 (IL-2), IL-3, IL-4, 또는 IL-6), 호르몬 (가령, 인슐린), 성장 인자 (가령, EGF, TGF-알파, FGF, 그리고 VEGF), 집락-촉진 인자 (가령, G-CSF, M-CSF, 그리고 GM-CSF (예로써, Burgess, Immunology Today, 5: 155-158 (1984)을 참조한다), 소마토스타틴, 그리고 트랜스페린 (예로써, O'Keefe et al., J. Biol. Chem., 260: 932-937 (1985)을 참조한다)이 포함된다. 가령, 골수성 세포에 결합하는 GM-CSF는 급성 골수성 백혈병 세포를 표적으로 하기 위해 세포-결합 작용제로서 이용될 수 있다. 이에 더하여, 활성화된 T-세포에 결합하는 IL-2는 이식편 거부반응의 예방, 이식편-대-숙주 질환의 치료와 예방, 그리고 급성 T-세포 백혈병의 치료에 이용될 수 있다. 표피 성장 인자 (EGF)는 편평상피암, 예를 들면, 폐 암 및 두경부 암을 표적으로 하는데 이용될 수 있다. 소마토스타틴은 신경모세포종 세포 및 기타 종양 세포 유형을 표적으로 하는데 이용될 수 있다.
접합체는 임의의 적절한 세포독성제를 포함할 수 있다. 본원에서 이용된 바와 같이, "세포독성제"는 세포의 사멸을 유발하거나, 세포 사멸을 유도하거나, 또는 세포 생존능을 감소시키는 임의의 화합물을 지칭한다. 적절한 세포독성제에는 예로써, 메이탄시노이드 및 접합가능 안사미토신 (예로써, 2011년 11월 3일자 제출된 국제 특허 출원 번호 PCT/US11/59131을 참조한다), 탁소이드, CC-1065와 CC-1065 유사체, 그리고 돌라스타틴과 돌라스타틴 유사체가 포함된다. 본 발명의 바람직한 구체예에서, 세포독성제는 메이탄시놀과 메이탄시놀 유사체를 비롯한 메이탄시노이드이다. 메이탄시노이드는 미세소관 형성을 저해하고 포유동물 세포에 매우 유독한 화합물이다. 적절한 메이탄시놀 유사체의 실례에는 변형된 방향족 고리를 갖는 것들 및 다른 위치에서 변형을 갖는 것들이 포함된다. 이런 메이탄시노이드는 예로써, U.S. 특허 4,256,746, 4,294,757, 4,307,016, 4,313,946, 4,315,929, 4,322,348, 4,331,598, 4,361,650, 4,362,663, 4,364,866, 4,424,219, 4,371,533, 4,450,254, 5,475,092, 5,585,499, 5,846,545, 그리고 6,333,410에서 설명된다.
변형된 방향족 고리를 갖는 메이탄시놀 유사체의 실례에는 (1) C19-데클로로 (U.S. 특허 4,256,746) (안사미토신 P2의 LAH 환원에 의해 제조됨), (2) C-20-히드록시 (또는 C-20-데메틸) +/-C-19-데클로로 (U.S. 특허 4,361,650과 4,307,016) (스트렙토미세스 (Streptomyces) 또는 악티노미세스 (Actinomyces)를 이용한 탈메틸화, 또는 LAH를 이용한 탈염소에 의해 제조됨), 그리고 (3) C-20-데메톡시, C-20-아실옥시 (-OCOR), +/-데클로로 (U.S. 특허 4,294,757) (아실 염화물을 이용한 아실화에 의해 제조됨)가 포함된다.
방향족 고리 이외의 위치에서 변형을 갖는 메이탄시놀 유사체의 실례에는 (1) C-9-SH (U.S. 특허 4,424,219) (메이탄시놀과 H2S 또는 P2S5의 반응에 의해 제조됨), (2) C-14-알콕시메틸 (데메톡시/CH2OR) (U.S. 특허 4,331,598), (3) C-14-히드록시메틸 또는 아실옥시메틸 (CH2OH 또는 CH2OAc) (U.S. 특허 4,450,254) (노카드리아 (Nocardia)로부터 제조됨), (4) C-15-히드록시/아실옥시 (U.S. 특허 4,364,866) (스트렙토미세스 (Streptomyces)에 의한 메이탄시놀의 전환에 의해 제조됨), (5) C-15-메톡시 (U.S. 특허 4,313,946과 4,315,929) (트레위아 누디플로라 (Trewia nudiflora)로부터 분리됨), (6) C-18-N-데메틸 (U.S. 특허 4,362,663과 4,322,348) (스트렙토미세스 (Streptomyces)에 의한 메이탄시놀의 탈메틸화에 의해 제조됨), 그리고 (7) 4,5-데옥시 (U.S. 특허 4,371,533) (메이탄시놀의 티타늄 삼염산염/LAH 환원에 의해 제조됨)가 포함된다.
본 발명의 바람직한 구체예에서, 접합체는 N2'-데아세틸-N2'-(3-메르캅토-1-옥소프로필)-메이탄신으로 알려져 있는 티올-내포 메이탄시노이드 DM1을 세포독성제로서 이용한다. DM1의 구조는 화학식 (I)로 표시된다:
[화학식 I]
Figure pat00002
본 발명의 다른 바람직한 구체예에서, 접합체는 N2'-데아세틸-N2'-(4-메틸-4-메르캅토-1-옥소펜틸)-메이탄신으로 알려져 있는 티올-내포 메이탄시노이드 DM4를 세포독성제로서 이용한다. DM4의 구조는 화학식 (II)로 표시된다:
[화학식 II]
Figure pat00003
예로써, 황 원자를 보유하는 탄소 원자 상에서 모노 또는 디-알킬 치환을 보유하는 티올과 이황화-내포 메이탄시노이드를 비롯한 다른 메이탄시노이드가 본 발명의 배경에서 이용될 수도 있다. C-3 위치에서 (a) C-14 히드록시메틸, C-15 히드록시, 또는 C-20 데스메틸 기능성, 그리고 (b) 방해된 설피드릴 기를 보유하는 아실 기로 아실화된 아미노산 측쇄를 갖는 메이탄시노이드가 특히 바람직한데, 여기서 티올 기능성을 보유하는 아실 기의 탄소 원자는 1개 또는 2개의 치환기를 갖고, 상기 치환기는 CH3, C2H5, 1개 내지 10개 탄소 원자를 갖는 선형 또는 가지형 알킬 또는 알케닐, 3개 내지 10개 탄소 원자를 갖는 환상 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐, 또는 헤테로환상 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고, 그리고 게다가, 이들 치환기 중에서 1개는 H일 수 있고, 그리고 아실 기는 카르보닐 기능성 및 황 원자 사이에 적어도 3개 탄소 원자의 선형 사슬 길이를 갖는다.
본 발명의 배경에서 이용을 위한 추가의 메이탄시노이드에는 화학식 (III)으로 표시되는 화합물이 포함된다:
[화학식 III]
Figure pat00004
여기서 Y'는
(CR7R8)l(CR9=CR10)p(C≡C)qAo(CR5R6)mDu(CR11=CR12)r(C≡C)sBt(CR3R4)nCR1R2SZ이고,
여기서 R1과 R2는 각각 독립적으로 CH3, C2H5, 1 내지 10개 탄소 원자를 갖는 선형 알킬 또는 알케닐, 3 내지 10개 탄소 원자를 갖는 가지형 또는 환상 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로환상 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고, 그리고 여기서 R2는 또한, H일 수 있고,
여기서 A, B, D는 3-10개 탄소 원자를 갖는 시클로알킬 또는 시클로알케닐, 단순한 또는 치환된 아릴, 또는 헤테로환상 방향족, 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
여기서 R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, 그리고 R12는 각각 독립적으로 H, CH3, C2H5, 1 내지 10개 탄소 원자를 갖는 선형 알킬 또는 알케닐, 3 내지 10개 탄소 원자를 갖는 가지형 또는 환상 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로환상 방향족, 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
여기서 l, m, n, o, p, q, r, s, 그리고 t는 각각 독립적으로 0 또는 1 내지 5의 정수이고, 단서로써 l, m, n, o, p, q, r, s, 그리고 t 중에서 적어도 2개는 임의의 한때에 0이 아니고, 그리고
여기서 Z는 H, SR 또는 COR이고, 여기서 R은 1 내지 10개 탄소 원자를 갖는 선형 알킬 또는 알케닐, 3 내지 10개 탄소 원자를 갖는 가지형 또는 환상 알킬 또는 알케닐, 또는 단순한 또는 치환된 아릴 또는 헤테로환상 방향족, 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이다.
화학식 (III)의 바람직한 구체예에는 (a) R1이 H이고, R2가 메틸이고, 그리고 Z가 H이고, (b) R1과 R2가 메틸이고, 그리고 Z가 H이고, (c) R1이 H이고, R2가 메틸이고, 그리고 Z가 -SCH3이고, 그리고 (d) R1과 R2가 메틸이고, 그리고 Z가 -SCH3인 화학식 (III)의 화합물이 포함된다.
이런 추가의 메이탄시노이드에는 또한, 화학식 (IV-L), (IV-D), 또는 (IV-D,L)로 표시되는 화합물이 포함된다:
[화학식 IV-L] [화학식 IV-D] [화학식 IV-D,L]
Figure pat00005
여기서 Y는 (CR7R8)l(CR5R6)m(CR3R4)nCR1R2SZ이고,
여기서 R1과 R2는 각각 독립적으로 CH3, C2H5, 1 내지 10개 탄소 원자를 갖는 선형 알킬 또는 알케닐, 3 내지 10개 탄소 원자를 갖는 가지형 또는 환상 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐, 또는 헤테로환상 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고, 그리고 여기서 R2는 또한, H일 수 있고,
여기서 R3, R4, R5, R6, R7, 그리고 R8은 각각 독립적으로 H, CH3, C2H5, 1 내지 10개 탄소 원자를 갖는 선형 알킬 또는 알케닐, 3 내지 10개 탄소 원자를 갖는 가지형 또는 환상 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐, 또는 헤테로환상 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
여기서 l, m, 그리고 n은 각각 독립적으로 1 내지 5의 정수이고, 그리고 추가하여, n은 0일 수 있고,
여기서 Z는 H, SR, 또는 COR이고, 여기서 R은 1 내지 10개 탄소 원자를 갖는 선형 또는 가지형 알킬 또는 알케닐, 3 내지 10개 탄소 원자를 갖는 환상 알킬 또는 알케닐, 또는 단순한 또는 치환된 아릴 또는 헤테로환상 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고, 그리고
May는 C-3, C-14 히드록시메틸, C-15 히드록시, 또는 C-20 데스메틸에서 측쇄를 보유하는 메이탄시노이드이다.
화학식 (IV-L), (IV-D) 및 (IV-D,L)의 바람직한 구체예에는 (a) R1이 H이고, R2가 메틸이고, R5, R6, R7, 그리고 R8이 각각 H이고, l과 m이 각각 1이고, n이 0이고, 그리고 Z가 H이고, (b) R1과 R2가 메틸이고, R5, R6, R7, R8이 각각 H이고, l과 m이 1이고, n은 0이고, 그리고 Z는 H이고, (c) R1은 H이고, R2가 메틸이고, R5, R6, R7, 그리고 R8이 각각 H이고, l과 m이 각각 1이고, n이 0이고, 그리고 Z가 -SCH3이고, 또는 (d) R1과 R2가 메틸이고, R5, R6, R7, R8이 각각 H이고, l과 m이 1이고, n이 0이고, 그리고 Z가 -SCH3인 화학식 (IV-L), (IV-D) 및 (IV-D,L)의 화합물이 포함된다.
바람직하게는, 세포독성제는 화학식 (IV-L)로 표시된다.
추가의 바람직한 메이탄시노이드에는 또한, 화학식 (V)로 표시되는 화합물이 포함된다:
[화학식 V]
Figure pat00006
여기서 Y는 (CR7R8)l(CR5R6)m(CR3R4)nCR1R2SZ이고,
여기서 R1과 R2는 각각 독립적으로 CH3, C2H5, 1 내지 10개 탄소 원자를 갖는 선형 알킬 또는 알케닐, 3 내지 10개 탄소 원자를 갖는 가지형 또는 환상 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로환상 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고, 그리고 여기서 R2는 또한, H일 수 있고,
여기서 R3, R4, R5, R6, R7, 그리고 R8은 각각 독립적으로 H, CH3, C2H5, 1 내지 10개 탄소 원자를 갖는 선형 알킬 또는 알케닐, 3 내지 10개 탄소 원자를 갖는 가지형 또는 환상 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐, 또는 헤테로환상 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
여기서 l, m, 그리고 n은 각각 독립적으로 1 내지 5의 정수이고, 그리고 추가하여, n은 0일 수 있고, 그리고
여기서 Z는 H, SR 또는 COR이고, 여기서 R은 1 내지 10개 탄소 원자를 갖는 선형 알킬 또는 알케닐, 3 내지 10개 탄소 원자를 갖는 가지형 또는 환상 알킬 또는 알케닐, 또는 단순한 또는 치환된 아릴 또는 헤테로환상 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이다.
화학식 (V)의 바람직한 구체예에는 (a) R1이 H이고, R2가 메틸이고, R5, R6, R7, 그리고 R8이 각각 H이고; l과 m이 각각 1이고; n이 0이고; 그리고 Z가 H이고, (b) R1과 R2가 메틸이고; R5, R6, R7, R8이 각각 H이고, l과 m이 1이고; n이 0이고; 그리고 Z가 H이고, (c) R1이 H이고, R2가 메틸이고, R5, R6, R7, 그리고 R8이 각각 H이고, l과 m이 각각 1이고, n이 0이고, 그리고 Z가 -SCH3이고, 또는 (d) R1과 R2가 메틸이고, R5, R6, R7, R8이 각각 H이고, l과 m이 1이고, n이 0이고, 그리고 Z가 -SCH3인 화학식 (V)의 화합물이 포함된다.
또 다른 바람직한 메이탄시노이드에는 화학식 (VI-L), (VI-D), 또는 (VI-D,L)로 표시되는 화합물이 포함된다:
[화학식 VI-L] [화학식 VI-D] [화학식 VI-D, L]
Figure pat00007
여기서 Y2는 (CR7R8)l(CR5R6)m(CR3R4)nCR1R2SZ2이고,
여기서 R1과 R2는 각각 독립적으로 CH3, C2H5, 1 내지 10개 탄소 원자를 갖는 선형 알킬 또는 알케닐, 3 내지 10개 탄소 원자를 갖는 가지형 또는 환상 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로환상 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고, 그리고 여기서 R2는 또한, H일 수 있고,
여기서 R3, R4, R5, R6, R7, 그리고 R8은 각각 독립적으로 H, CH3, C2H5, 1 내지 10개 탄소 원자를 갖는 선형 환상 알킬 또는 알케닐, 3 내지 10개 탄소 원자를 갖는 가지형 또는 환상 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로환상 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
여기서 l, m, 그리고 n은 각각 독립적으로 1 내지 5의 정수이고, 그리고 추가하여, n은 0일 수 있고,
여기서 Z2는 SR 또는 COR이고, 여기서 R은 1 내지 10개 탄소 원자를 갖는 선형 알킬 또는 알케닐, 3 내지 10개 탄소 원자를 갖는 가지형 또는 환상 알킬 또는 알케닐, 또는 단순한 또는 치환된 아릴 또는 헤테로환상 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고, 그리고
여기서 May는 메이탄시노이드의 거대환상 고리 구조이다.
추가의 바람직한 메이탄시노이드에는 화학식 (VII)로 표시되는 화합물이 포함된다:
[화학식 VII]
Figure pat00008
여기서 Y2'는
(CR7R8)l(CR9=CR10)p(C≡C)qAo(CR5R6)mDu(CR11=CR12)r(C≡C)sBt(CR3R4)nCR1R2SZ2이고,
여기서 R1과 R2는 각각 독립적으로 CH3, C2H5, 1 내지 10개 탄소 원자를 갖는 선형 또는 가지형 알킬 또는 알케닐, 3 내지 10개 탄소 원자를 갖는 환상 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로환상 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고, 그리고 추가하여, R2는 H일 수 있고,
여기서 A, B, 그리고 D는 각각 독립적으로 3 내지 10개 탄소 원자를 갖는 시클로알킬 또는 시클로알케닐, 단순한 또는 치환된 아릴, 또는 헤테로환상 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
여기서 R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, 그리고 R12는 각각 독립적으로 H, CH3, C2H5, 1 내지 10개 탄소 원자를 갖는 선형 알킬 또는 알케닐, 3 내지 10개 탄소 원자를 갖는 가지형 또는 환상 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로환상 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
여기서 l, m, n, o, p, q, r, s, 그리고 t는 각각 독립적으로 0 또는 1 내지 5의 정수이고, 단서로써 l, m, n, o, p, q, r, s, 그리고 t 중에서 적어도 2개는 임의의 한때에 0이 아니고, 그리고
여기서 Z2는 SR 또는 -COR이고, 여기서 R은 1 내지 10개 탄소 원자를 갖는 선형 알킬 또는 알케닐, 3 내지 10개 탄소 원자를 갖는 가지형 또는 환상 알킬 또는 알케닐, 또는 단순한 또는 치환된 아릴 또는 헤테로환상 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이다.
화학식 (VII)의 바람직한 구체예에는 R1이 H이고, 그리고 R2가 메틸인 화학식 (VII)의 화합물이 포함된다.
메이탄시노이드 이외에, 접합체에 이용되는 세포독성제는 탁산 또는 이의 유도체일 수 있다. 탁산은 파클리탁셀 (Taxol®), 세포독성 자연 산물, 그리고 도세탁셀 (Taxotere®), 반-합성 유도체를 포함하는 화합물의 패밀리인데, 이들 둘 모두 암의 치료에서 폭넓게 이용된다. 탁산은 튜불린의 해중합화를 저해하여 세포 사멸을 유발하는 유사분열방추 독물이다. 도세탁셀과 파클리탁셀은 암의 치료에서 유용한 작용제이긴 하지만, 정상 세포를 향한 비-특이적 독성으로 인하여 그들의 항종양 활성이 제한된다. 게다가, 파클리탁셀 및 도세탁셀과 같은 화합물은 그 자체로는, 세포-결합 작용제의 접합체에서 이용될 만큼 충분히 유효하지 않다.
세포독성 접합체의 제조에서 이용을 위한 바람직한 탁산은 화학식 (VIII)의 탁산이다:
[화학식 VIII]
Figure pat00009
본 발명의 배경에서 이용될 수 있는 탁산을 합성하기 위한 방법은 탁산을 세포-결합 작용제, 예를 들면, 항체에 접합하기 위한 방법과 함께, U.S. 특허 5,416,064, 5,475,092, 6,340,701, 6,372,738, 6,436,931, 6,596,757, 6,706,708, 6,716,821, 그리고 7,390,898에서 상세하게 설명된다.
세포독성은 또한, CC-1065 또는 이의 유도체일 수 있다. CC-1065는 스트렙토미세스 젤렌시스 (Streptomyces zelensis)의 배양 액체배지로부터 분리된 강력한 항-종양 항생제이다. CC-1065는 시험관내에서, 통상적으로 이용되는 항-암 약물, 예를 들면, 독소루비신, 메토트렉사트, 그리고 빈크리스틴보다 약 1000-배 더 유효하다 (Bhuyan et al., Cancer Res., 42: 3532-3537 (1982)). CC-1065와 이의 유사체는 U.S. 특허 5,585,499, 5,846,545, 6,340,701, 그리고 6,372,738에서 개시된다. CC-1065의 세포독성 효능은 이의 알킬화 활성 및 DNA-결합 또는 DNA-삽입 활성과 상관하였다. 이들 2가지 활성은 분자의 별개 부분에 존재한다. 이와 관련하여, 알킬화 활성은 시클로프로파피롤로인돌 (CPI) 아단위에 있고, 그리고 DNA-결합 활성은 CC-1065의 2개 피롤로인돌 아단위에 존재한다.
몇몇 CC-1065 유사체는 당분야에 알려져 있고, 또한 접합체에서 세포독성제로서 이용될 수 있다 (예로써, Warpehoski et al., J. Med. Chem., 31: 590-603 (1988)을 참조한다). 일련의 CC-1065 유사체가 개발되었는데, 여기서 CPI 모이어티는 시클로프로파벤즈인돌 (CBI) 모이어티에 의해 대체된다 (Boger et al., J. Org. Chem., 55: 5823-5833 (1990), 그리고 Boger et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1: 115-120 (1991)). 이들 CC-1065 유사체는 생쥐에서 지연 독성을 유발하지 않으면서, 부모 약물의 높은 시험관내 효능을 유지한다. CC-1065와 유사하게, 이들 화합물은 DNA의 마이너 그루브에 공유 결합하여 세포 사멸을 유발하는 알킬화제이다.
CC-1065 유사체의 치료 효능은 종양 부위에 표적화된 전달을 통해 생체내 분포를 변화시켜 비-표적화된 조직에 대한 더욱 낮은 독성, 그리고 따라서, 더욱 낮은 전신 독성을 유발함으로써 크게 향상될 수 있다. 이를 위하여, CC-1065의 유사체와 유도체 및 종양 세포를 특이적으로 표적으로 하는 세포-결합 작용제의 접합체가 산출되었다 (예로써, U.S. 특허 5,475,092, 5,585,499, 그리고 5,846,545를 참조한다). 이들 접합체는 전형적으로, 시험관내에서 높은 표적-특이적 세포독성, 그리고 생쥐의 인간 종양 이종이식편 모델에서 항-종양 활성을 나타낸다 (예로써, Chari et al., Cancer Res., 55: 4079-4084 (1995)를 참조한다).
CC-1065 유사체를 합성하기 위한 방법은 U.S. 특허 5,475,092, 5,585,499, 5,846,545, 6,534,660, 6,586,618, 6,756,397, 그리고 7,329,760에서 상세하게 기술된다.
메토트렉사트, 다우노루비신, 독소루비신, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 멜팔란, 미토마이신 C, 클로람부실, 칼리케마이신, 튜불리신과 튜불리신 유사체, 두오카르마이신과 두오카르마이신 유사체, 돌라스타틴과 돌라스타틴 유사체와 같은 약물 역시 본 발명의 세포독성제로서 이용될 수 있다. 독소루비신과 다우노루비신 화합물 (예로써, U.S. 특허 6,630,579을 참조한다) 역시 세포독성제로서 이용될 수 있다.
세포-결합 작용제 세포독성제 접합체는 시험관내 방법에 의해 제조될 수 있다. 세포독성제를 항체에 연결하기 위하여, 연결 기가 이용된다. 적절한 연결 기는 당분야에 널리 알려져 있고, 여기에는 이황화 기, 산 불안정성 기, 광불안정성 기, 펩티다아제 불안정성 기, 그리고 에스테라아제 불안정성 기뿐만 아니라 비개열가능 연결 기가 포함된다. 가령, 세포 결합 작용제는 이황화 결합, 산 불안정성 결합, 광불안정성 결합, 펩티다아제 불안정성 결합, 티오에테르 결합, 그리고 에스테라아제 불안정성 결합으로 구성된 군에서 선택되는 화학적 결합을 거쳐 세포독성제에 화학적으로 커플링될 수 있다.
본 발명에 따라서, 세포-결합 작용제는 이작용성 가교 시약을 거쳐 세포독성제와 연결된다. 본원에서 이용된 바와 같이, "이작용성 가교 시약"은 2개의 반응성 기를 갖는 시약을 지칭한다; 이들 중에서 하나는 세포-결합 작용제와 반응할 수 있는 반면, 다른 하나는 세포독성제와 반응하여 세포-결합 작용제를 세포독성제와 연결하고, 따라서 접합체를 형성할 수 있다.
임의의 적절한 이작용성 가교 시약은 과도한 독성 없이, 각각 세포독성제와 세포-결합 작용제의 치료적, 예를 들면, 세포독성, 그리고 표적화 특징의 유지를 제공하기만 하면, 본 발명과 관련하여 이용될 수 있다. 바람직하게는, 링커 분자는 세포독성제 및 세포-결합 작용제가 서로에 화학적으로 커플링 (가령, 공유 결합)되도록, 화학적 결합 (앞서 기술된 바와 같음)을 통해 세포독성제를 세포-결합 작용제에 결합한다.
한 구체예에서, 이작용성 가교 시약은 비-개열가능 링커를 포함한다. 비-개열가능 링커는 안정된 공유 방식으로, 세포독성제, 예를 들면, 메이탄시노이드, 탁산, 또는 CC-1065 유사체를 세포-결합 작용제에 연결할 수 있는 임의의 화학적 모이어티이다. 따라서 비-개열가능 링커는 세포독성제 또는 세포-결합 작용제가 활성 상태로 존속하는 조건에서, 산-유도된 개열, 광-유도된 개열, 펩티다아제-유도된 개열, 에스테라아제-유도된 개열, 그리고 이황화 결합 개열에 실질적으로 저항한다.
세포독성제와 세포-결합 작용제 사이에 비-개열가능 링커를 형성하는 적절한 가교 시약은 당분야에 널리 알려져 있다. 한 구체예에서, 세포독성제는 티오에테르 결합을 통해 세포-결합 작용제에 연결된다. 비-개열가능 링커의 실례에는 세포독성제와의 반응을 위한 말레이미도- 또는 할로아세틸-기초된 모이어티를 갖는 링커가 포함된다. 이런 이작용성 가교 작용제는 당분야에 널리 알려져 있고 (U.S. 특허 출원 공개 번호 2010/0129314, 2009/0274713, 2008/0050310, 2005/0169933, 2009/0274713, 2010/0129314, 그리고 Pierce Biotechnology Inc. P.O. Box 117, Rockland, IL 61105, USA로부터 구입가능한 것들), 여기에는 N-숙신이미딜 4-(말레이미도메틸)시클로헥산카르복실레이트(SMCC), N-숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)-시클로헥산-1-카르복시-(6-아미도카프로에이트) (이것은 SMCC의 "긴 사슬" 유사체 (LC-SMCC)이다), κ-말레이미도운데칸산 N-숙신이미딜 에스테르 (KMUA), γ-말레이미도부티르산 N-숙신이미딜 에스테르 (GMBS), ε-말레이미도카프로산 N-히드록시숙신이미드 에스테르 (EMCS), m-말레이미도벤조일-N-히드록시숙신이미드 에스테르 (MBS), N-(α-말레이미도아세톡시)-숙신이미드 에스테르 (AMAS), 숙신이미딜-6-(β-말레이미도프로피온아미도)헥사노에이트 (SMPH), N-숙신이미딜 4-(p-말레이미도페닐)-부티레이트 (SMPB), 그리고 N-(p-말레이미도페닐)이소시아네이트 (PMPI)가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 할로아세틸-기초된 모이어티를 포함하는 가교 시약에는 N-숙신이미딜-4-(요오드아세틸)-아미노벤조에이트 (SIAB), N-숙신이미딜 요오드아세테이트 (SIA), N-숙신이미딜 브로모아세테이트 (SBA), 그리고 N-숙신이미딜 3-(브로모아세트아미도)프로피오네이트 (SBAP), 비스-말레이미도폴리에틸렌글리콜 (BMPEO), BM(PEO)2, BM(PEO)3, N-(β-말레이미도프로필옥시)숙신이미드 에스테르 (BMPS), 5-말레이미도발레르 산 NHS, HBVS, 4-(4-N-말레이미도페닐)-부티르산 히드라지드ㆍHCl (MPBH), 숙신이미딜-(4-비닐술포닐)벤조에이트 (SVSB), 디티오비스-말레이미도에탄 (DTME), 1,4-비스-말레이미도부탄 (BMB), 1,4 비스말레이미딜-2,3-디히드록시부탄 (BMDB), 비스-말레이미도헥산 (BMH), 비스-말레이미도에탄 (BMOE), 술포숙신이미딜 4-(N-말레이미도-메틸)시클로헥산-1-카르복실레이트(술포-SMCC), 술포숙신이미딜(4-요오드-아세틸)아미노벤조에이트 (술포-SIAB), m-말레이미도벤조일-N-히드록시술포숙신이미드 에스테르 (술포-MBS), N-(γ-말레이미도부티릴옥시)술포숙신이미드 에스테르 (술포-GMBS), N-(ε-말레이미도카프로일옥시)술포숙시미도 에스테르 (술포-EMCS), N-(κ-말레이미도운데카노일옥시)술포숙신이미드 에스테르 (술포-KMUS), 술포숙신이미딜 4-(p-말레이미도페닐)부티레이트 (술포-SMPB) CX1-1, 술포-Mal, 그리고 PEGn-Mal이 포함된다. 바람직하게는, 이작용성 가교 시약은 SMCC이다.
Figure pat00010
(CX1-1);
Figure pat00011
(술포-Mal);
Figure pat00012
(PEGn-Mal).
한 구체예에서, 연결 시약은 개열가능 링커이다. 적절한 개열가능 링커의 실례에는 이황화 링커, 산 불안정성 링커, 광불안정성 링커, 펩티다아제 불안정성 링커, 그리고 에스테라아제 불안정성 링커가 포함된다. 이황화 내포 링커는 생리학적 조건 하에 일어날 수 있는 이황화 교환을 통해 개열가능한 링커이다. 산 불안정성 링커는 산성 pH에서 개열가능한 링커이다. 가령, 일정한 세포내 구획, 예를 들면, 엔도솜과 리소좀은 산성 pH (pH 4-5)를 갖고, 그리고 산 불안정성 링커를 개열하는데 적절한 조건을 제공한다. 광 불안정성 링커는 광에 영향받기 쉬운 신체 표면에서 및 많은 체강 내에서 유용하다. 게다가, 적외선은 조직을 통과할 수 있다. 펩티다아제 불안정성 링커는 세포 내외부에서 일정한 펩티드를 개열하는데 이용될 수 있다 (예로써, Trouet et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79: 626-629 (1982), 그리고 Umemoto et al., Int. J. Cancer, 43: 677-684 (1989)를 참조한다). 한 구체예에서, 개열가능 링커는 온화한 조건, 다시 말하면, 세포독성제의 활성이 영향을 받지 않는 세포 내에 조건 하에 개열된다.
다른 구체예에서, 세포독성제는 이황화 결합을 통해 세포-결합 작용제에 연결된다. 링커 분자는 세포-결합 작용제와 반응할 수 있는 반응성 화학적 기를 포함한다. 세포-결합 작용제와의 반응을 위한 바람직한 반응성 화학적 기는 N-숙신이미딜 에스테르 및 N-술포숙신이미딜 에스테르이다. 부가적으로, 링커 분자는 세포독성제와 반응하여 이황화 결합을 형성할 수 있는 반응성 화학적 기, 바람직하게는 디티오피리딜 기를 포함한다. 이황화 결합을 거쳐 세포-결합 작용제와 세포독성제의 연쇄를 가능하게 하는 이작용성 가교 시약은 당분야에 알려져 있고 여기에는 예로써, N-숙신이미딜 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트 (SPDP) (예로써, Carlsson et al., Biochem. J., 173: 723-737 (1978)을 참조한다), N-숙신이미딜 4-(2-피리딜디티오)부타노에이트 (SPDB) (예로써, U.S. 특허 4,563,304를 참조한다), N-숙신이미딜 4-(2-피리딜디티오)펜타노에이트 (SPP) (예로써, CAS 등록 번호 341498-08-6을 참조한다), 그리고 N-숙신이미딜-4-(2-피리딜디티오)2-술포 부타노에이트 (술포-SPDB) (예로써, U.S. 특허 출원 공개 번호 2009/0274713을 참조한다)가 포함된다. 이황화 기를 도입하는데 이용될 수 있는 다른 이작용성 가교 시약은 당분야에 알려져 있고 U.S. 특허 6,913,748과 6,716,821, 그리고 U.S. 특허 출원 공개 2009/0274713과 2010/0129314에서 설명되고, 이들 모두 본원에 전체로서 참고문헌으로 편입된다.
비-개열가능 링커를 형성하는 황 원자가 없는 다른 가교 시약 역시 본 발명의 방법에 이용될 수 있다. 이런 링커는 디카르복실 산 기초된 모이어티로부터 유래될 수 있다. 적절한 디카르복실 산 기초된 모이어티에는 일반식 (IX)의 α,ω-디카르복실 산이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다:
HOOC-Xl-Yn-Zm-COOH
(IX),
여기서 X는 2 내지 20개 탄소 원자를 갖는 선형 또는 가지형 알킬, 알케닐, 또는 알키닐 기이고, Y는 3 내지 10개 탄소 원자를 갖는 시클로알킬 또는 시클로알케닐 기이고, Z는 6 내지 10개 탄소 원자를 갖는 치환된 또는 치환되지 않은 방향족 기, 또는 치환된 또는 치환되지 않은 헤테로환상 기이고, 여기서 헤테로 원자는 N, O 또는 S에서 선택되고, 그리고 l, m, 그리고 n은 각각, 0 또는 1이고, 단서로써 l, m, 그리고 n은 동시에 모두 0이지는 않다.
본원에서 개시된 많은 비-개열가능 링커는 U.S. 특허 출원 공개 번호 2005/0169933 A1에서 상세하게 설명된다.
하기 실시예는 본 발명을 더욱 예시하지만, 이의 범위를 한정하는 것으로 간주되지 않는다.
실시예 1
인간화 CD37-3 항체는 기존에 설명된 방법 (가령, U.S. 특허 5,208,020)뿐만 아니라 본 출원의 요부인 일-단계 방법을 이용하여, 헤테로이작용성 가교 시약 SMCC 및 메이탄시노이드 DM1과 반응되었다.
기존에 기술된 방법의 경우에, huCD37-3 (15 mg/mL)은 먼저, 변형된 항체를 형성하기 위해 SMCC (항체의 양에 비하여 6.5-배 몰 과량)와 반응되었다. 변형 반응은 16℃에서, 2 mM EDTA와 10% DMA를 내포하는 50 mM 인산나트륨 완충액 (pH 6.9)에서 90분 동안 수행되었다. 반응은 pH를 4.5로 조정하기 위해 1 M 아세테이트로 진정되고, 그리고 변형된 항체는 2 mM EDTA를 내포하는 20 mM 아세트산나트륨 (pH 4.5)에서 평형화되고 용리된 Sephadex G-25F 수지의 칼럼을 이용하여 정제되었다. 정제 후, 변형된 항체 (5 mg/mL)는 접합된 항체를 형성하기 위해 메이탄시노이드 DM1 (항체의 양에 비하여 6.8-배 몰 과량; 항체 상에서 링커의 측정된 양에 비하여 1.3-배 과량)과 반응되었다. 접합 반응은 20℃에서, 2 mM EDTA와 5% DMA를 내포하는 20 mM 아세트산나트륨 완충액 (pH 5.0)에서 대략 20시간 동안 수행되었다. 반응 혼합물은 이후, 10 mM 숙신산나트륨 (pH 5.0)에서 평형화되고 용리된 Sephadex G-25F 수지의 칼럼을 이용하여 정제되었다.
본 발명의 방법의 경우에, huCD37-3 (2.5 mg/mL)은 DM1 (항체의 양에 비하여 6.2-배 몰 과량) 및 그 이후, SMCC (항체의 양에 비하여 5.2-배 과량)와 혼합되었다. 반응은 20℃에서, 2 mM EDTA와 10% DMA를 내포하는 50 mM EPPS [(4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진프로판술폰산] 완충액 (pH 8.1)에서 대략 4시간 동안 수행되었다. 반응은 pH를 5.0으로 조정하기 위해 1 M 아세테이트를 첨가함으로써 진정되었다. 반응 혼합물은 이후, 2-8℃에서 대략 20시간 동안 유지되었다. 유지 후, 반응 혼합물은 0.2 ㎛ PVDF 필터를 통해 여과되고, 그리고 정제되고 접선 유동 여과 (TFF)를 이용하여 10 mM 숙신산나트륨 (pH 5.0) 내로 정용여과되었다.
이들 2가지 방법으로부터 도출된 접합체는 농도 및 세포독성제 적하의 경우에 UV 분광법 (메이탄시노이드 대 항체 비율, MAR); 비-접합된 링커 수준의 결정의 경우에 질량 분석법; 비-환원성 종류의 수준의 결정의 경우에 환원된 SDS PAGE 전기영동; 접합체 단위체의 결정의 경우에 SEC-HPLC; 그리고 접합체 단위체와 유리 메이탄시노이드 방출에 대하여 보관 동안 안정성에 의해 분석되었다.
농도 및 메이탄시노이드 대 항체 비율 (MAR)은 UV-VIS 분광광도계에서 252와 280 nm에서 접합체의 흡광도를 측정하고, 그리고 이들 2가지 파장에서 DM1과 항체의 몰 흡광 계수 (molar extinction coefficient)를 이용하여 항체와 DM1의 몰 농도를 계산함으로써 결정되었다.
접합체의 비-접합된 링커 수준은 질량 분석법에 의해 분석되었다: 개별 접합체 종류 (비-접합된 링커를 갖거나 갖지 않는 접합체 포함)의 피크 구역이 측정되었다; 비-접합된 링커 수준은 비-접합된 링커를 내포하는 구역의 합계 (링커의 숫자에 가중됨) 대 모든 접합체 종류의 구역의 합계 (링커의 숫자에 의해 가중됨)의 비율에 의해 계산되었다.
접합체의 비-환원성 종류 수준은 환원된 SDS 겔 전기영동에 의해 분석되었다: 개별 환원된 접합체 종류 (환원된 경쇄, 환원된 중쇄, 가교된 경쇄-경쇄, 가교된 경쇄-중쇄 등을 포함)의 피크 구역이 측정되었다; 비-환원성 종류 수준은 비-환원성 종류의 구역의 합계 대 모든 종류의 구역의 합계의 비율에 의해 계산되었다.
접합체의 단위체 수준은 크기 배제 HPLC에 의해 분석되었다: 단위체, 이합체, 집합체 및 저분자량 종류의 피크 구역은 252 nm 또는 280 nm의 파장에 설정된 흡광도 검출기를 이용하여 측정되었다; 단위체 수준은 단위체 구역 대 전체 구역의 비율에 의해 계산되었다.
접합체 내에 존재하는 유리 메이탄시노이드의 양은 이중 칼럼 (HiSep와 C18 칼럼) HPLC에 의해 분석되었다: 전체 유리 메이탄시노이드 종류 (구배에서 용리되고 공지된 표준과 용리 시간의 비교에 의해 확인됨)의 피크 구역은 252 nm의 파장에 설정된 흡광도 검출기를 이용하여 측정되었다; 유리 메이탄시노이드의 양은 공지된 양의 표준의 피크 구역에 의해 산출된 표준 곡선을 이용하여 계산되었다.
하기 표 1에서 도시된 바와 같이, 본 발명의 방법을 이용하여 제조된 접합체는 비-접합된 링커, 비-환원성 종류 및 접합체 단위체에 대하여, 기존에 설명된 방법을 이용하여 제조된 접합체보다 우수하였다. 이에 더하여, 본 발명의 방법에 의해 만들어진 접합체의 안정성은 4℃에서 5개월 동안 보관 후 유리 메이탄시노이드 방출에 대하여 훨씬 우수하였다. 양쪽 방법에 의해 만들어진 접합체의 단위체 수준은 안정하였다.
기존 방법과 비교하여 본 발명의 방법에 의해 제조된 CD37-3 접합체의 핵심 성질의 비교
기존 방법 본 발명의 방법
접합체 농도 3.9 8.1
메이탄시노이드 대 항체
비율		 4.1 3.4
접합되지 않은 링커 (%) 12 < 1
비-환원성 종류 (%) 9.4 0.9
접합체 단위체, (%) (t=0) 97.8 98.9
접합체 단위체, (%) (4℃에서 5개월 후) 97.8 98.4
유리 메이탄시노이드, (%) (t=0) 0.4 0.2
유리 메이탄시노이드, (%) (4℃에서 5개월 후) 3.3 0.5
본 실시예에서 반영된 실험의 결과는 실질적으로 높은 순도의 세포-결합 작용제-세포독성제 접합체를 제조하기 위한 향상된 방법을 증명한다. 본 발명의 방법을 이용함으로써 접합체 순도와 안정성에서 향상에 더하여, 2가지 가공처리 단계 (변형 반응 및 변형된 항체의 정제)의 제거로 인하여 가공처리 시간과 편의성 역시 향상된다.
실시예 2
인간화 엽산염 수용체 항체 huMov19 (U.S. 특허 출원 공개 2012/0009181을 참조한다)는 2가지 기존에 기술된 방법뿐만 아니라, 본 출원의 요부인 향상된 방법을 이용하여, 헤테로이작용성 가교 시약 술포-SPDB 및 메이탄시노이드 DM4와 반응되었다.
기존에 기술된 방법 A (2-단계 방법, 예로써 Chari et al., US 5,208,020)의 경우에, huMov19 항체 (20 mg/mL)는 먼저, 변형된 항체를 형성하기 위해 술포-SPDB (항체의 양에 비하여 5.7-배 몰 과량, DMA, 디메틸아세트아미드에서 용해됨)와 반응되었다. 변형 반응은 20℃에서, 5% DMA를 내포하는 50 mM EPPS (4-(2-히드록시에틸)피페라진-1-프로판술폰산) 완충액 (pH 8.1)에서 180분 동안 수행되었다. 변형된 항체는 2 mM EDTA (에틸렌디아민테트라아세트산)을 포함하는 50 mM EPPS (pH 8.1)에서 평형화되고 용리된 Sephadex G-25F 수지의 칼럼을 이용하여 정제되었다. 정제 후, 변형된 항체 (5.0 mg/mL)는 접합된 항체를 형성하기 위해 메이탄시노이드 DM4 (DMA에서 용해됨; 항체의 양에 비하여 9.7-배 몰 과량; 항체 상에서 링커의 측정된 양에 비하여 1.7-배 과량)와 반응되었다. 접합 반응은 실온에서, 2 mM EDTA와 5% DMA를 내포하는 50 mM EPPS (pH 8.1)에서 대략 18시간 동안 수행되었다. 반응 혼합물은 이후, 10 mM 숙신산나트륨 (pH 5.0)에서 평형화되고 용리된 Sephadex G-25F 수지의 칼럼을 이용하여 정제되었다.
기존에 기술된 방법 B (일-포트 방법, Dai et al., U.S. 특허 7,811,572)의 경우에, huMov19 항체 (10 mg/mL)는 먼저, 변형된 항체를 형성하기 위해 술포-SPDB (항체의 양에 비하여 4.9-배 몰 과량, DMA에 용해됨)와 반응되었다. 변형 반응은 20℃에서, 2mM EDTA와 10% DMA를 내포하는 50 mM EPPS 완충액 (pH 7.5)에서 60분 동안 수행되었다. 변형된 항체는 접합 반응 이전에 정제되지 않았다. 대신에, 비-정제된 변형된 항체는 접합된 항체를 형성하기 위해 10 mg/mL에서 메이탄시노이드 DM4 (항체의 양에 비하여 8.3-배 몰 과량, DMA에 용해됨)와 반응되었다. 접합 반응은 실온에서, 2 mM EDTA와 10% DMA를 내포하는 50mM EPPS 완충액 (pH 7.5)에서 대략 18시간 동안 수행되었다. 반응 혼합물은 이후, 10 mM 숙신산나트륨 (pH 5.0)에서 평형화되고 용리된 Sephadex G-25F 수지의 칼럼을 이용하여 정제되었다.
접합체를 정제하기 위해 Sephadex G-25가 이용된 본 발명의 방법 (방법 C, 일-단계 방법)의 경우에, huMov19 항체 (6.0 mg/mL)는 DM4 (항체의 양에 비하여 9.7-배 몰 과량, DMA에 용해됨)와 혼합되고, 그 이후 술포-SPDB (항체의 양에 비하여 5.7-배 과량, DMA에 용해됨)가 첨가되었다. 반응은 20℃에서, 2 mM EDTA와 10% DMA를 내포하는 50 mM EPPS 완충액 (pH 8.1)에서 대략 20시간 동안 수행되었다. 반응 혼합물은 이후, 10 mM 숙신산나트륨 (pH 5.0)에서 평형화되고 용리된 Sephadex G-25F 수지의 칼럼을 이용하여 정제되었다.
접합체를 정제하기 위해 접선 유동 여과 (TFF)가 이용된 본 발명의 방법 (방법 D, 일-단계 방법)의 경우에, huMov19 항체 (5.0 mg/mL)는 DM4 (항체의 양에 비하여 10.2-배 몰 과량, DMA에 용해됨)과 혼합되고, 그 이후 술포-SPDB (항체의 양에 비하여 6.0-배 과량, DMA에 용해됨)과 혼합되었다. 반응은 20℃에서, 2 mM EDTA와 10% DMA를 내포하는 50 mM EPPS 완충액 (pH 8.5)에서 대략 20시간 동안 수행되었다. 반응 혼합물은 이후, 정제되고 TFF를 이용하여 10 mM 숙신산나트륨 (pH 5.0) 내로 정용여과되었다.
이들 상이한 방법으로부터 도출된 접합체는 UV 분광법 (농도 및 메이탄시노이드 대 항체 비율, MAR의 경우에); 유리 메이탄시노이드의 결정의 경우에 역상 HPLC; 접합되지 않은 링커 수준 및 질량 분포 프로필의 결정의 경우에 질량 분석법; 비-환원성 종류의 수준의 결정의 경우에 환원된 SDS PAGE 전기영동; 단편화의 수준의 결정의 경우에 비-환원된 SDS PAGE 전기영동; 접합체 단위체의 결정의 경우에 SEC-HPLC에 의해 분석되었다. 보관 시에 안정성은 접합체 단위체와 유리 메이탄시노이드 방출에 대하여 평가되었다. 이들 분석 방법에 관한 추가의 상세는 실시예 1에서 제공된다.
하기 표 2에서 도시된 바와 같이, 본 발명의 방법을 이용하여 제조된 접합체는 단위체에 대하여, 기존에 기술된 방법을 이용하여 제조된 접합체보다 우수하였다. 접합체의 최종 정제가 Sephadex G-25를 이용하여 수행된 일-포트와 일-단계 방법, 각각 방법 B와 C를 이용하여 제조된 접합체는 2 단계 방법, 방법 A를 이용하여 제조된 접합체보다 더욱 높은 수준의 유리 메이탄시노이드를 가졌다. 하지만, 상이한 최종 정제 방법, TFF가 이용될 때 (방법 D), 유리 메이탄시노이드의 수준은 최초 정제 후 및 6주 동안 4℃에서 보관 후, 매우 낮고 2-단계 방법에서 관찰된 것에 필적하였다. 다른 중요한 접합체 속성 (가령, 단편화, 비-환원성 종류, 질량 분포 프로필 및 접합되지 않은 링커)에 대하여, 본 발명의 방법을 이용하여 제조된 접합체는 기존에 기술된 방법에 의해 제조된 것에 동등하였다.
기존 방법과 비교하여 본 발명의 방법에 의해 제조된 huMov19 접합체의 핵심 성질의 비교
방법 방법 A* 방법 B* 방법 C* 방법 D**
단위 작업의 횟수 5 4 3 3
농도 (mg/mL) 1.0 1.0 1.0 4.2
MAR (UV) 4 3.8 3.7 3.6
t = 0에서 접합체 단위체, (%) 94.8 97.4 98.9 98.6
t = 6주, 4℃에서 접합체 단위체, (%) 94.4
 97.5
 98.8
 98.1
t = 0에서 유리 메이탄시노이드, (%) 0.6 6.3 3.1 0.1
t = 6주, 4℃에서 유리 메이탄시노이드, (%) 0.6 5.4
 2.7
 0.4
비-환원성 겔-칩에 의한 단편화 (%) 10 14 14 12
환원성 겔-칩에 의한 비-환원성 종류 (%) 0.7 0.8 0.7 0.5
질량 분포 프로필 (MDP) 유사
접합되지 않은 링커 (MDP) 검출되지 않음
* Sephadex G-25로 정제됨
** TFF를 이용하여 정제됨
본 실시예에서 반영된 실험의 결과는 실질적으로 높은 순도의 세포-결합 작용제-세포독성제 접합체를 제조하기 위한 향상된 방법을 증명한다. 본 발명의 방법을 이용함으로써 접합체 순도와 안정성에서 향상에 더하여, 2가지 가공처리 단계 (변형 반응 및 변형된 항체의 정제)의 제거로 인하여, 가공처리 시간과 편의성 역시 향상된다.
실시예 3
본 실시예에서는 본원에서 기술된 일-단계 방법이 다양한 링커와 메이탄시노이드 세포독성제로 시작하는 접합체를 만드는데 이용될 수 있다는 것을 예시한다.
인간화 huN901 항체는 메이탄시노이드 (DM1 또는 DM4), 그 이후 링커 (술포-SMCC, SMCC, SPDB, 또는 SPP)와 혼합되었다. 반응은 20℃에서, 2 mM EDTA와 10% DMA를 내포하는 50 mM 포스페이트 완충액 (pH 7.5)에서 대략 20-24시간 동안 수행되었다. 반응 혼합물은 이후, 10 mM 숙신산나트륨 (pH 5.0)에서 평형화되고 용리된 Sephadex G25F 수지의 칼럼을 이용하여 정제되었다.
하기 표 3에 도시된 바와 같이, 일-단계 반응은 상이한 링커와 메이탄시노이드 조합에서 수행되고 우수한 MAR과 단위체 수준을 갖는 접합체를 산출할 수 있다.
상이한 링커와 메이탄시노이드 조합을 이용함으로써 접합체 제조
　 링커 DMx 접합체 MAR 접합체 단위체 (%)
2-단계 SPP DM1 3.5 96.8
일-단계
(본 발명)		 SPP DM1 3.4 97.5
SPDB DM1 4.6 97.7
SMCC DM4 4.5 95.1
S-SMCC DM1 3.5 98.0
SPDB DM4 3.8 97.3
본원에서 언급된 간행물, 특허 출원, 그리고 특허를 비롯한 모든 참고문헌은 마치 이들 각각이 참고문헌으로 편입되는 것으로 개별적으로 및 명백히 지시되고 본원에서 온전히 그대로 진술되는 것처럼 동일한 정도로, 참고문헌으로 편입된다. 본 발명을 기술하는 문맥에서 (특히, 하기 청구항의 문맥에서) 이용된 부정관사, 정관사 및 유사한 지시 대상은 본원에서 달리 지시되거나 문맥에 의해 명백하게 부정되지 않으면, 단수와 복수 둘 모두를 포함하는 것으로 해석된다. 용어 "포함하는", "갖는", "함유하는", 그리고 "내포하는"은 달리 명시되지 않으면, 개방적인 용어 (즉, "포함하지만 국한되지 않는"을 의미함)로서 해석되어야 한다. 본원에서 값의 범위의 열거는 본원에서 달리 지시되지 않으면, 상기 범위 내에 속하는 각 개별 값을 단순히 개별적으로 지칭하는 속기 방법으로서 기능하는 것으로 의도되고, 그리고 각 개별 값은 마치 본원에서 개별적으로 지칭되는 것처럼 본 명세서 내로 편입된다. 본원에서 기술되는 모든 방법은 본원에서 달리 지시되거나 문맥에 의해 명백하게 부정되지 않으면, 임의의 적절한 순서로 수행될 수 있다. 본원에서 제공된 임의의 모든 실례, 또는 예시의 어법 (가령, "예를 들면")의 이용은 본 발명을 더욱 충실하게 조명하기 위한 것으로 의도되고, 그리고 만약 그렇지 않으면 청구되는 본 발명의 범위를 한정하지 않는다. 본 명세서에서 어떤 어법도 발명의 실시에 필수적인 임의의 비-청구된 요소를 지시하는 것으로 해석되지 않는다.
본 발명을 수행하기 위한 본 발명자들에게 공지된 최적 양식을 비롯하여, 본 발명의 바람직한 구체예가 본원에서 기술된다. 이들 바람직한 구체예에서 변화는 상기 설명을 읽어보면 당업자에게 명백해질 것이다. 본 발명자들은 당업자가 적절하면 이런 변화를 이용할 것으로 예상하고, 그리고 본 발명자들은 본 발명이 본원에서 구체적으로 기술된 것과 달리 실시될 수 있는 것으로 의도한다. 따라서 본 발명은 적용 법률에 의해 허용되는, 본 명세서에 첨부된 청구항에서 언급된 요부의 모든 변형과 등가물을 포함한다. 게다가, 모든 가능한 변화에서 앞서 기술된 요소의 임의의 조합은 본원에서 달리 지시되거나, 또는 문맥에 의해 달리 명백하게 부정되지 않으면 본 발명에 포함된다.
<110> ImmunoGen, Inc. <120> PREPARATION OF MAYTANSINOID ANTIBODY CONJUGATES BY A ONE-STEP PROCESS <130> IPP-2013-0330 <150> US 61/468,997 <151> 2011-03-29 <160> 11 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy Chain CDR1 <400> 1 Gly Tyr Phe Met Asn 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy Chain CDR2 <220> <221> PEPTIDE <222> (14) <223> MISC_FEATURE Xaa is Lys, Gln, His, or Arg <220> <221> PEPTIDE <222> (16) <223> MISC_FEATURE Xaa is Gln, His, Asn, or Arg <220> <221> PEPTIDE <222> (17) <223> MISC_FEATURE Xaa is Gly, Glu, Thr, Ser, Ala, or Val <400> 2 Arg Ile His Pro Tyr Asp Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Xaa Phe Xaa 1 5 10 15 Xaa <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy Chain CDR3 <400> 3 Tyr Asp Gly Ser Arg Ala Met Asp Tyr 1 5 <210> 4 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light Chain CDR1 <400> 4 Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Ala Gly Thr Ser Leu Met His 1 5 10 15 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light Chain CDR2 <400> 5 Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ala 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light Chain CDR3 <400> 6 Gln Gln Ser Arg Glu Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 7 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy Chain CDR2 <400> 7 Arg Ile His Pro Tyr Asp Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 8 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy Chain <400> 8 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Phe Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile His Pro Tyr Asp Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala His 65 70 75 80 Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Tyr Asp Gly Ser Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 9 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy Chain Variable Domain <400> 9 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Phe 20 25 30 Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Arg Ile His Pro Tyr Asp Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Gln 50 55 60 Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala His Met 65 70 75 80 Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Thr 85 90 95 Arg Tyr Asp Gly Ser Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 10 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light Chain Variable Domain <400> 10 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ile Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Ala 20 25 30 Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Gln Gln Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ala Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Lys Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile Ser 65 70 75 80 Pro Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg 85 90 95 Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 11 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light Chain Variable Domain <400> 11 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ile Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Ala 20 25 30 Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Gln Gln Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ala Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Lys Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Pro Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg 85 90 95 Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110

Claims (1)

  1. (a) 항체를 메이탄시노이드와 접촉시켜 항체와 메이탄시노이드를 포함하는 첫 번째 혼합물을 형성하고, 그 이후 4 내지 9의 pH를 갖는 용액 내에서 첫 번째 혼합물을 링커를 포함하는 이작용성 가교 시약과 접촉시켜 (i) 항체-메이탄시노이드 접합체, 여기서 항체는 링커를 통해 메이탄시노이드에 화학적으로 커플링되고, (ii) 유리 메이탄시노이드, 그리고 (iii) 반응 부산물을 포함하는 두 번째 혼합물을 제공하는 단계
    를 포함하는, 항체-메이탄시노이드 접합체를 제조하기 위한 방법.
KR1020207010853A 2011-03-29 2012-03-29 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조 KR102272828B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020217019701A KR102351886B1 (ko) 2011-03-29 2012-03-29 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161468997P 2011-03-29 2011-03-29
US61/468,997 2011-03-29
PCT/US2012/031243 WO2012135517A2 (en) 2011-03-29 2012-03-29 Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
KR1020137028135A KR102103302B1 (ko) 2011-03-29 2012-03-29 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020137028135A Division KR102103302B1 (ko) 2011-03-29 2012-03-29 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020217019701A Division KR102351886B1 (ko) 2011-03-29 2012-03-29 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20200042965A true KR20200042965A (ko) 2020-04-24
KR102272828B1 KR102272828B1 (ko) 2021-07-05

Family

ID=46928080

Family Applications (6)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237029015A KR20230128583A (ko) 2011-03-29 2012-03-29 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조
KR1020217019701A KR102351886B1 (ko) 2011-03-29 2012-03-29 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조
KR1020227000970A KR20220009505A (ko) 2011-03-29 2012-03-29 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조
KR1020227028603A KR20220123130A (ko) 2011-03-29 2012-03-29 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조
KR1020207010853A KR102272828B1 (ko) 2011-03-29 2012-03-29 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조
KR1020137028135A KR102103302B1 (ko) 2011-03-29 2012-03-29 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조

Family Applications Before (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237029015A KR20230128583A (ko) 2011-03-29 2012-03-29 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조
KR1020217019701A KR102351886B1 (ko) 2011-03-29 2012-03-29 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조
KR1020227000970A KR20220009505A (ko) 2011-03-29 2012-03-29 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조
KR1020227028603A KR20220123130A (ko) 2011-03-29 2012-03-29 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020137028135A KR102103302B1 (ko) 2011-03-29 2012-03-29 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조

Country Status (25)

Country Link
US (6) US8795673B2 (ko)
EP (2) EP2691155B1 (ko)
JP (5) JP6000329B2 (ko)
KR (6) KR20230128583A (ko)
CN (2) CN107537040A (ko)
AU (5) AU2012236398B2 (ko)
CA (1) CA2831467C (ko)
CY (1) CY1121321T1 (ko)
DK (1) DK2691155T3 (ko)
EA (2) EA201991268A3 (ko)
ES (1) ES2709577T3 (ko)
HR (1) HRP20190243T1 (ko)
HU (1) HUE041384T2 (ko)
IL (3) IL228559A (ko)
LT (1) LT2691155T (ko)
ME (1) ME03353B (ko)
MX (2) MX369659B (ko)
NZ (1) NZ726386A (ko)
PL (1) PL2691155T3 (ko)
PT (1) PT2691155T (ko)
RS (1) RS58367B1 (ko)
SI (1) SI2691155T1 (ko)
TR (1) TR201902180T4 (ko)
UA (1) UA116524C2 (ko)
ZA (1) ZA201605918B (ko)

Families Citing this family (51)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5149620B2 (ja) 2004-07-23 2013-02-20 エンドサイト，インコーポレイテッド ２価リンカーおよびその結合体
US20110166319A1 (en) * 2005-02-11 2011-07-07 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
ES2533992T3 (es) 2005-08-24 2015-04-16 Immunogen, Inc. Procedimiento para preparar conjugados de anticuerpo maitansinoide
NZ599239A (en) 2007-03-14 2013-10-25 Endocyte Inc Binding ligand linked drug delivery conjugates of tubulysins
US9877965B2 (en) 2007-06-25 2018-01-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
WO2009002993A1 (en) 2007-06-25 2008-12-31 Endocyte, Inc. Conjugates containing hydrophilic spacer linkers
KR102444399B1 (ko) 2009-06-03 2022-09-16 이뮤노젠 아이엔씨 메이탄시노이드의 제조방법
SG10201501342UA (en) 2010-02-24 2015-04-29 Immunogen Inc Folate receptor 1 antibodies and immunoconjugates and uses thereof
MX338932B (es) 2010-03-12 2016-05-06 Immunogen Inc Moleculas de union cd37 y sus inmunoconjugados.
UA116524C2 (uk) 2011-03-29 2018-04-10 Іммуноджен, Інк. Спосіб одержання кон'югата антитіло-майтансиноїд
SG193514A1 (en) * 2011-04-01 2013-10-30 Immunogen Inc Methods for increasing efficacy of folr1 cancer therapy
US10080805B2 (en) 2012-02-24 2018-09-25 Purdue Research Foundation Cholecystokinin B receptor targeting for imaging and therapy
US20140080175A1 (en) 2012-03-29 2014-03-20 Endocyte, Inc. Processes for preparing tubulysin derivatives and conjugates thereof
KR102617499B1 (ko) 2012-08-31 2023-12-22 이뮤노젠 아이엔씨 엽산 수용체 1의 검출을 위한 진단성 검정 및 키트
RU2661083C2 (ru) 2012-10-04 2018-07-11 Иммуноджен, Инк. Использование пвдф-мембраны для очистки конъюгатов клеточно-связывающий агент - цитотоксический агент
WO2014055842A1 (en) * 2012-10-04 2014-04-10 Immunogen, Inc. Process for preparing stable antibody maytansinoid conjugates
US20150307596A1 (en) * 2012-10-04 2015-10-29 Immunogen, Inc. Use of an ion exchange membrane to remove impurities from cell-binding agent cytotoxic agent conjugates
IN2015DN04147A (ko) 2012-10-16 2015-10-16 Endocyte Inc
US8769557B1 (en) 2012-12-27 2014-07-01 The Nielsen Company (Us), Llc Methods and apparatus to determine engagement levels of audience members
EP2961434A2 (en) 2013-02-28 2016-01-06 ImmunoGen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
JP6423804B2 (ja) 2013-02-28 2018-11-14 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞結合剤及び細胞毒性剤を含む複合体
US9498532B2 (en) 2013-03-13 2016-11-22 Novartis Ag Antibody drug conjugates
MA38396B1 (fr) 2013-03-15 2019-05-31 Novartis Ag Anticorps medicamenteux conjugues et leurs compositions pharmaceutiques pour traiter un cancer positif a ckit
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
CN105814079B (zh) 2013-08-30 2021-02-09 伊缪诺金公司 用于检测叶酸受体1的抗体和测定
TWI541022B (zh) * 2013-12-18 2016-07-11 應克隆公司 針對纖維母細胞生長因子受體－３（ｆｇｆｒ３）之化合物及治療方法
HUE045307T2 (hu) * 2014-03-11 2019-12-30 Regeneron Pharma EGFRVIII-ellenes antitestek és alkalmazásaik
ES2785551T3 (es) 2014-06-30 2020-10-07 Glykos Finland Oy Derivado de sacárido de una carga útil tóxica y sus conjugados con anticuerpos
WO2016024195A1 (en) 2014-08-12 2016-02-18 Novartis Ag Anti-cdh6 antibody drug conjugates
CA2965362A1 (en) * 2014-10-31 2016-05-06 Formation Biologics Inc. Egfr antibody-based combination therapy
CN106267225B (zh) * 2015-05-29 2020-03-06 上海新理念生物医药科技有限公司 三马来酰亚胺型连接子及其应用
TW201711702A (zh) 2015-06-04 2017-04-01 應克隆公司 使用針對纖維母細胞生長因子受體３（ｆｇｆｒ３）之化合物的療法
US20170000900A1 (en) 2015-06-08 2017-01-05 Immunogen, Inc. Anti-cd37 immunoconjugate and anti-cd20 antibody combinations
US20190194315A1 (en) 2015-06-17 2019-06-27 Novartis Ag Antibody drug conjugates
MA42706A (fr) 2015-08-28 2021-04-14 Debiopharm Int Sa Anticorps et dosages pour la détection de cd37
CN108601828B (zh) 2015-09-17 2023-04-28 伊缪诺金公司 包含抗folr1免疫缀合物的治疗组合
RS65120B1 (sr) 2015-11-25 2024-02-29 Immunogen Inc Farmaceutske formulacije i postupci za njihovu upotrebu
EP3411077A1 (en) * 2016-02-05 2018-12-12 ImmunoGen, Inc. Efficient process for preparing cell-binding agent-cytotoxic agent conjugates
CN108421048B (zh) * 2016-09-28 2021-04-20 首都医科大学附属北京世纪坛医院 纳米活性碳靶向药物递送系统、制备方法及其用途
US11278629B2 (en) 2016-11-02 2022-03-22 Debiopharm International, S.A. Methods for improving anti-CD37 immunoconjugate therapy
US10864279B2 (en) 2016-12-16 2020-12-15 Industrial Technology Research Institute Linker-drug and antibody-drug conjugate (ADC) employing the same
JOP20190187A1 (ar) 2017-02-03 2019-08-01 Novartis Ag مترافقات عقار جسم مضاد لـ ccr7
CN116785450A (zh) * 2017-02-28 2023-09-22 伊缪诺金公司 具有自分解肽接头的类美登素衍生物和其缀合物
WO2018185618A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Novartis Ag Anti-cdh6 antibody drug conjugates and anti-gitr antibody combinations and methods of treatment
WO2019142147A2 (en) * 2018-01-18 2019-07-25 Magenta Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the depletion of cd134+ cells
EP3552631A1 (en) 2018-04-10 2019-10-16 Inatherys Antibody-drug conjugates and their uses for the treatment of cancer
CN111620927B (zh) * 2019-05-20 2022-11-11 烟台迈百瑞国际生物医药股份有限公司 一种抗体药物偶联物中间体的一锅法制备工艺
US20220257766A1 (en) * 2019-06-25 2022-08-18 Tva (Abc), Llc Sstr-targeted conjugates and formulations thereof
BR112022000297A2 (pt) 2019-07-10 2022-03-15 Cybrexa 3 Inc Conjugados de peptídeos de agentes de alvo de microtúbulos como terapêuticos
CN114341162A (zh) 2019-07-10 2022-04-12 赛博克萨2公司 作为治疗剂的细胞毒素的肽缀合物
US20230181756A1 (en) 2020-04-30 2023-06-15 Novartis Ag Ccr7 antibody drug conjugates for treating cancer

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5208020A (en) * 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use

Family Cites Families (165)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1043543A (en) 1912-02-15 1912-11-05 Robert H Shaw Poultry-house door.
SE430062B (sv) 1977-03-04 1983-10-17 Pharmacia Fine Chemicals Ab Kopplings- eller tioleringsreagens
US4137230A (en) * 1977-11-14 1979-01-30 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for the production of maytansinoids
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
US4563304A (en) 1981-02-27 1986-01-07 Pharmacia Fine Chemicals Ab Pyridine compounds modifying proteins, polypeptides or polysaccharides
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4664911A (en) 1983-06-21 1987-05-12 Board Of Regents, University Of Texas System Immunotoxin conjugates employing toxin B chain moieties
EP0397292B1 (fr) 1985-01-22 1993-04-21 Saint-Gobain Vitrage International Procédé pour la formation d'une couche mince d'oxydes métalliques sur un substrat, notamment en verre, et son utilisation comme vitrage
GB8600582D0 (en) 1986-01-10 1986-02-19 Ca Minister Nat Defence Purifying biological materials
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US4859449A (en) 1987-09-14 1989-08-22 Center For Molecular Medicine And Immunology Modified antibodies for enhanced hepatocyte clearance
US5241078A (en) 1988-06-14 1993-08-31 Cetus Oncology Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom
US5024834A (en) 1988-07-12 1991-06-18 Cetus Corporation Thioether linked immunotoxin conjugates
CA2006408A1 (en) 1988-12-27 1990-06-27 Susumu Iwasa Bispecific monoclonal antibody, its production and use
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5714149A (en) 1989-02-10 1998-02-03 Celltech Therapeutics Limited Crosslinked antibodies and processes for their preparation
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US6316003B1 (en) 1989-12-21 2001-11-13 Whitehead Institute For Biomedical Research Tat-derived transport polypeptides
US5137877B1 (en) 1990-05-14 1996-01-30 Bristol Myers Squibb Co Bifunctional linking compounds conjugates and methods for their production
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
CA2048078A1 (en) * 1990-11-15 1992-05-16 Wolfgang A. Wrasidlo Chemical modification of antibodies for creation of immunoconjugates
US5252714A (en) * 1990-11-28 1993-10-12 The University Of Alabama In Huntsville Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde
SE9102074D0 (sv) 1991-07-03 1991-07-03 Kabi Pharmacia Ab Tomour antigen specific antibody
SE470006B (sv) * 1991-09-26 1993-10-25 Corline Systems Ab Nytt konjugat, dess framställning och användning samt substrat preparerat med konjugatet
ES2227512T3 (es) 1991-12-02 2005-04-01 Medical Research Council Produccion de anticuerpos contra auto-antigenos a partir de repertorios de segmentos de anticuerpos fijados en un fago.
CA2076465C (en) 1992-03-25 2002-11-26 Ravi V. J. Chari Cell binding agent conjugates of analogues and derivatives of cc-1065
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US5556623A (en) * 1993-03-30 1996-09-17 Eli Lilly And Company Antibody-drug conjugates
IL111748A0 (en) 1993-12-03 1995-01-24 Zeneca Ltd Proteins
US5747446A (en) 1994-03-22 1998-05-05 Beth Israel Deaconess Medical Center Modified polypeptides with increased biological activity
US5919758A (en) 1994-03-22 1999-07-06 Beth Israel Deaconess Medical Center Modified polypeptides with altered biological activity
US5580853A (en) 1994-03-22 1996-12-03 New England Deaconess Hospital Modified polypeptides with increased biological activity
US5612474A (en) 1994-06-30 1997-03-18 Eli Lilly And Company Acid labile immunoconjugate intermediates
AU5908296A (en) * 1995-05-31 1996-12-24 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods for targeted delivery of effector m olecules
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
US5958872A (en) 1996-04-01 1999-09-28 Apoptosis Technology, Inc. Active survival domains of IGF-IR and methods of use
US6340461B1 (en) 1996-12-17 2002-01-22 David Stephen Terman Superantigen based methods and compositions for treatment of diseases
US6462070B1 (en) * 1997-03-06 2002-10-08 The General Hospital Corporation Photosensitizer conjugates for pathogen targeting
US6371975B2 (en) * 1998-11-06 2002-04-16 Neomend, Inc. Compositions, systems, and methods for creating in situ, chemically cross-linked, mechanical barriers
CA2304254C (en) * 1997-06-11 2012-05-22 Hans Christian Thogersen Trimerising module
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
US5958677A (en) 1997-07-28 1999-09-28 The New York Blood Center, Inc. Method for purifying viral nucleic acids
CA2297070A1 (en) 1997-08-01 1999-02-11 Morphosys Ag Novel method and phage for the identification of nucleic acid sequences encoding members of a multimeric (poly)peptide complex
US5965714A (en) 1997-10-02 1999-10-12 Connaught Laboratories, Inc. Method for the covalent attachment of polysaccharides to protein molecules
IL135148A0 (en) * 1997-10-03 2001-05-20 Galenica Pharmaceuticals Inc A polysaccharide conjugate and pharmaceutical compositions containing the same
US6121236A (en) * 1998-03-24 2000-09-19 The Children's Medical Center Corporation Multivalent ligands which modulate angiogenesis
US6573245B1 (en) * 1998-04-28 2003-06-03 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Modified polysaccharide adjuvant-protein antigen conjugates, the preparation thereof and the use thereof
US5981564A (en) * 1998-07-01 1999-11-09 Universite Laval Water-soluble derivatives of paclitaxel, method for producing same and uses thereof
BR9912053A (pt) 1998-07-13 2001-04-03 Univ Texas Processos de tratamento de câncer utilizando conjugados terapêuticos que se ligam a aminofosfolipìdios
TW593241B (en) 1999-04-20 2004-06-21 Hoffmann La Roche Carbamic acid derivatives
AUPQ014799A0 (en) * 1999-05-04 1999-05-27 Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited Amplification of folate-mediated targeting to tumor cells using polymers
EP2266607A3 (en) 1999-10-01 2011-04-20 Immunogen, Inc. Immunoconjugates for treating cancer
ATE349438T1 (de) 1999-11-24 2007-01-15 Immunogen Inc Cytotoxische wirkstoffe enthaltend taxane und deren therapeutische anwendung
WO2001049698A1 (en) 1999-12-29 2001-07-12 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use
WO2001058479A1 (en) 2000-02-08 2001-08-16 The Penn State Research Foundation Immunotherapy using interleukin 13 receptor subunit alpha 2
US7097840B2 (en) * 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
US6632979B2 (en) 2000-03-16 2003-10-14 Genentech, Inc. Rodent HER2 tumor model
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
US6596503B1 (en) 2000-08-18 2003-07-22 East Carolina University Monoclonal antibody DS6, tumor-associated antigen CA6, and methods of use thereof
US20060062786A1 (en) 2000-11-08 2006-03-23 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors
HUP0302525A2 (hu) 2001-01-05 2003-10-28 Abgenix, Inc. Az inzulinszerű növekedési faktor I receptor elleni ellenanyagok
CA2436092A1 (en) 2001-01-29 2002-08-08 Idec Pharmaceutical Corporation Modified antibodies and methods of use
MXPA03007037A (es) * 2001-02-07 2003-11-18 Beth Israel Hospital Ligandos del antigeno de membrana especifico de prostata (amep) y usos relacionados del mismo.
EP1389090A2 (en) 2001-04-26 2004-02-18 Board of Regents, The University of Texas System Diagnostic imaging compositions, their methods of synthesis and use
WO2002092127A1 (en) 2001-05-11 2002-11-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-cd26 monoclonal antibodies as therapy for diseases associated with cells expressing cd26
EP1258255A1 (en) 2001-05-18 2002-11-20 Boehringer Ingelheim International GmbH Conjugates of an antibody to CD44 and a maytansinoid
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
JP4619651B2 (ja) 2001-06-01 2011-01-26 コーネル・リサーチ・ファンデーション・インコーポレイテッド 前立腺特異的膜抗原に対する修飾抗体およびその使用
TW593239B (en) 2001-06-04 2004-06-21 Kevin Dale Allen One-step production of 1,3-propanediol from ethylene oxide and syngas with a catalyst with a phospholanoalkane ligand
ATE419005T1 (de) 2001-12-11 2009-01-15 Merck & Co Inc Staphylococcus aureus exopolysaccharid und verfahren
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
EP1467758A4 (en) 2002-01-03 2007-11-14 Smithkline Beecham Corp PREPARATION OF IMMUNOCONJUGATES
US7591994B2 (en) * 2002-12-13 2009-09-22 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US8877901B2 (en) 2002-12-13 2014-11-04 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US6534660B1 (en) 2002-04-05 2003-03-18 Immunogen, Inc. CC-1065 analog synthesis
US6756397B2 (en) 2002-04-05 2004-06-29 Immunogen, Inc. Prodrugs of CC-1065 analogs
US7323553B2 (en) 2002-04-26 2008-01-29 Genentech, Inc. Non-affinity purification of proteins
LT1507556T (lt) 2002-05-02 2016-10-10 Wyeth Holdings Llc Kalicheamicino darinio ir nešiklio konjugatai
US20090068178A1 (en) 2002-05-08 2009-03-12 Genentech, Inc. Compositions and Methods for the Treatment of Tumor of Hematopoietic Origin
US20050276812A1 (en) 2004-06-01 2005-12-15 Genentech, Inc. Antibody-drug conjugates and methods
US6596757B1 (en) 2002-05-14 2003-07-22 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
EP1551875A4 (en) 2002-06-21 2006-06-28 Biogen Idec Inc TAMPON PREPARATIONS FOR CONCENTRATING ANTIBODIES AND METHODS FOR USE THEREOF
US7390898B2 (en) 2002-08-02 2008-06-24 Immunogen Inc. Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use
ATE499116T1 (de) 2002-08-16 2011-03-15 Immunogen Inc Vernetzer mit hoher reaktivität und löslichkeit und ihre verwendung bei der herstellung von konjugaten für die gezielte abgabe von kleinmolekularen arzneimitteln
AU2003273413A1 (en) * 2002-10-08 2004-05-04 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Pharmaceutically active oligosaccharide conjugates
PT1558744E (pt) * 2002-10-30 2011-09-22 Nuevolution As Codificação enzimática
AU2003285878B2 (en) 2002-11-07 2011-04-28 Immunogen, Inc. Anti-CD33 antibodies and method for treatment of acute myeloid leukemia using the same
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
CN102940889A (zh) 2003-05-14 2013-02-27 伊缪诺金公司 药物缀合物组合物
EP3851126A1 (en) 2003-05-20 2021-07-21 ImmunoGen, Inc. Maytansinoid-cell-binding agent conjugates
US7276497B2 (en) * 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
AU2004259398A1 (en) 2003-06-27 2005-02-03 Amgen Fremont Inc. Antibodies directed to the deletion mutants of epidermal growth factor receptor and uses thereof
WO2005002597A1 (en) * 2003-07-02 2005-01-13 Polycord, Inc. Method for delivering polymerized therapeutic agent compositions and compositions thereof
MXPA06005104A (es) * 2003-11-05 2007-01-25 Palingen Inc Citotoxicidad de celulas b aumentada en anticuerpos de enlace a cdim.
US20050175619A1 (en) 2004-02-05 2005-08-11 Robert Duffy Methods of producing antibody conjugates
US20110064754A1 (en) 2005-03-03 2011-03-17 Center For Molecular Medicine And Immunology Immunoconjugates Comprising Poxvirus-Derived Peptides and Antibodies Against Antigen-Presenting Cells for Subunit-Based Poxvirus Vaccines
EP1610818A4 (en) 2004-03-03 2007-09-19 Millennium Pharm Inc MODIFIED ANTIBODIES AGAINST A PROSTATE-SPECIFIC MEMBRANE-ANTIGEN AND USE THEREOF
JP2008505853A (ja) 2004-04-13 2008-02-28 クインテセンス バイオサイエンシーズ インコーポレーティッド 細胞傷害性薬剤としての非天然のリボヌクレアーゼ複合体
US20060073528A1 (en) * 2004-05-14 2006-04-06 Jean-Michel Lecerf Measurement methods
CA2564076C (en) 2004-05-19 2014-02-18 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
US7691962B2 (en) 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
US20060045877A1 (en) 2004-08-30 2006-03-02 Goldmakher Viktor S Immunoconjugates targeting syndecan-1 expressing cells and use thereof
AR052774A1 (es) 2004-10-08 2007-04-04 Wyeth Corp Inmunoterapia para trastornos autoinmunes
EP1817341A2 (en) 2004-11-29 2007-08-15 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibodies and immunoconjugates
EA013323B1 (ru) 2004-12-09 2010-04-30 Сентокор, Инк. Иммуноконъюгаты против интегрина, способы и варианты применения
US7408030B2 (en) 2005-01-13 2008-08-05 North Carolina State University Purification of immunoglobulins using affinity chromatography and peptide ligands
US20110166319A1 (en) * 2005-02-11 2011-07-07 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
AU2006213662B2 (en) * 2005-02-11 2010-08-05 Immunogen, Inc. Process for preparing stable drug conjugates
CA2600929A1 (en) 2005-03-04 2006-09-14 Biogen Idec Ma Inc. Methods of humanizing immunoglobulin variable regions through rational modification of complementarity determining residues
EP1868649A4 (en) 2005-04-15 2011-06-29 Immunogen Inc ELIMINATION OF A POPULATION OF HETEROGENEOUS OR MIXED CELLS IN TUMORS
GB2427360A (en) * 2005-06-22 2006-12-27 Complex Biosystems Gmbh Aliphatic prodrug linker
CN101262890B (zh) 2005-07-15 2015-08-26 安吉奥化学公司 抑肽酶多肽作为载体在药物缀合物中的用途
CA2615122A1 (en) * 2005-08-03 2007-02-15 Immunogen, Inc. Immunoconjugate formulations
WO2007019273A2 (en) * 2005-08-04 2007-02-15 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Phosphorylation of tau by abl
ES2533992T3 (es) 2005-08-24 2015-04-16 Immunogen, Inc. Procedimiento para preparar conjugados de anticuerpo maitansinoide
CN101443044A (zh) * 2005-09-22 2009-05-27 哈达斯特医学研究服务与开发有限公司 治疗活性化合物的葡聚糖和阿拉伯半乳聚糖结合物
BRPI0617546A2 (pt) 2005-09-26 2011-07-26 Medarex Inc conjugado de fÁrmaco-anticorpo, formulaÇço farmacÊutica, mÉtodo para matar uma cÉlula de tumor, mÉtodo para retardar ou interromper o crescimento de um tumor em um sujeito mamÍfero e composto
EP2298308B1 (en) 2005-11-14 2013-01-16 University Of Southern California Integrin-binding small molecules
US7964415B2 (en) * 2006-04-26 2011-06-21 Cardiogenics Inc. Stable water-soluble polyethylenimine conjugates and methods of use thereof
WO2007140371A2 (en) 2006-05-30 2007-12-06 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates and uses therefor
KR101528939B1 (ko) 2006-07-18 2015-06-15 사노피 암 치료를 위한 ｅｐｈａ2에 대한 길항제 항체
US20080213349A1 (en) * 2006-09-11 2008-09-04 Deepak Ramesh Thakker Liposome Complexes Containing Pharmaceutical Agents and Methods
WO2008057683A2 (en) 2006-10-03 2008-05-15 Novo Nordisk A/S Methods for the purification of polypeptide conjugates
EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
SI2019104T1 (sl) 2007-07-19 2013-12-31 Sanofi Citotoksična sredstva, ki obsegajo nove tomaimicinske derivate, in njihova terapevtska uporaba
KR20230003298A (ko) * 2008-04-30 2023-01-05 이뮤노젠 아이엔씨 가교제 및 그 용도
EP2276506A4 (en) 2008-04-30 2014-05-07 Immunogen Inc EFFICIENT CONJUGATES AND HYDROPHILIC BINDER
GB0811743D0 (en) * 2008-06-26 2008-07-30 Hemosol Biopharma Inc Composition
TW201021852A (en) * 2008-11-17 2010-06-16 Enzon Pharmaceuticals Inc Releasable fusogenic lipids for nucleic acids delivery systems
IL271761B (en) 2009-02-05 2022-09-01 Immunogen Inc (12as)-8-methoxy-9-benzyloxy-11,12,12a,13-tetrahydro-6h-indolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine-6-one, 4-benzyloxy-5-methoxy -2-nitrobenzoic acid and a process for their preparation
AR076284A1 (es) 2009-04-29 2011-06-01 Bayer Schering Pharma Ag Inmunoconjugados de antimesotelina y usos de los mismos
KR102444399B1 (ko) 2009-06-03 2022-09-16 이뮤노젠 아이엔씨 메이탄시노이드의 제조방법
FR2947269B1 (fr) 2009-06-29 2013-01-18 Sanofi Aventis Nouveaux composes anticancereux
AR078471A1 (es) 2009-10-02 2011-11-09 Sanofi Aventis COMPUESTOS MAITANSINOIDES Y EL USO DE ESTOS PARA PREPARAR CONJUGADOS CON UN ANTICUERPO LOS CUALES SE UTILIZAN COMO AGENTES ANTICANCERIGENOS Y EL PROCEDIMIENTO DE PREPARACIoN DE ESTOS CONJUGADOS
AR078470A1 (es) 2009-10-02 2011-11-09 Sanofi Aventis Anticuerpos que se unen especificamente al receptor epha2
SG10201501342UA (en) 2010-02-24 2015-04-29 Immunogen Inc Folate receptor 1 antibodies and immunoconjugates and uses thereof
KR20110103182A (ko) 2010-03-12 2011-09-20 삼성전자주식회사 입체 영상 표시 장치
MX338932B (es) 2010-03-12 2016-05-06 Immunogen Inc Moleculas de union cd37 y sus inmunoconjugados.
WO2012019024A2 (en) 2010-08-04 2012-02-09 Immunogen, Inc. Her3-binding molecules and immunoconjugates thereof
US20120149732A1 (en) * 2010-12-14 2012-06-14 Alexander Chucholowski Multifunctional linkers and methods for the use thereof
RU2748733C2 (ru) * 2011-02-15 2021-05-31 Иммуноджен, Инк. Цитотоксические производные бензодиазепина
UA116524C2 (uk) * 2011-03-29 2018-04-10 Іммуноджен, Інк. Спосіб одержання кон'югата антитіло-майтансиноїд
MY171008A (en) 2011-03-29 2019-09-23 Immunogen Inc Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
MX2013011201A (es) 2011-03-29 2013-12-16 Immunogen Inc Proceso para la elaboracion de conjugados de mejor homogeneidad.
SG193514A1 (en) 2011-04-01 2013-10-30 Immunogen Inc Methods for increasing efficacy of folr1 cancer therapy
US20130071482A1 (en) * 2011-09-20 2013-03-21 The University Of Kentucky Research Foundation Block copolymer cross-linked nanoassemblies as modular delivery vehicles
AU2012352210A1 (en) 2011-12-13 2014-07-24 Immunogen, Inc. Use of N-hydroxysuccinimide to improve conjugate stability
US20150307596A1 (en) 2012-10-04 2015-10-29 Immunogen, Inc. Use of an ion exchange membrane to remove impurities from cell-binding agent cytotoxic agent conjugates
WO2014055842A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Immunogen, Inc. Process for preparing stable antibody maytansinoid conjugates
RU2661083C2 (ru) 2012-10-04 2018-07-11 Иммуноджен, Инк. Использование пвдф-мембраны для очистки конъюгатов клеточно-связывающий агент - цитотоксический агент
TR201905612T4 (tr) * 2012-12-05 2019-05-21 Univ Heidelberg Ruprecht Karls Proteinlerin ve çok değerlikli, hücreye nüfuz eden peptitlerin konjugatları ve bunların kullanımları.

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5208020A (en) * 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use

Also Published As

Publication number Publication date
JP2021035990A (ja) 2021-03-04
AU2018211331B2 (en) 2020-05-14
IL228559A0 (en) 2013-12-31
AU2018211331A1 (en) 2018-08-23
AU2016202832B2 (en) 2018-05-10
MX2013011215A (es) 2013-10-30
EP2691155A2 (en) 2014-02-05
KR102351886B1 (ko) 2022-01-17
CN103717262B (zh) 2017-09-15
IL250723A0 (en) 2017-06-29
JP6000329B2 (ja) 2016-09-28
KR102272828B1 (ko) 2021-07-05
US20200330604A1 (en) 2020-10-22
LT2691155T (lt) 2019-02-25
MX369659B (es) 2019-11-15
IL258929B (en) 2019-03-31
BR112013025225A2 (pt) 2018-09-25
KR20140019414A (ko) 2014-02-14
AU2016202832A1 (en) 2016-05-19
KR102103302B1 (ko) 2020-04-23
CN107537040A (zh) 2018-01-05
PT2691155T (pt) 2019-02-19
US10435432B2 (en) 2019-10-08
NZ616509A (en) 2015-10-30
US20120253021A1 (en) 2012-10-04
NZ726386A (en) 2022-09-30
AU2024200123A1 (en) 2024-01-25
CA2831467A1 (en) 2012-10-04
US11090390B2 (en) 2021-08-17
KR20220009505A (ko) 2022-01-24
AU2020217301A1 (en) 2020-08-27
US11744900B2 (en) 2023-09-05
ZA201605918B (en) 2021-07-28
JP7269210B2 (ja) 2023-05-08
US20140309406A1 (en) 2014-10-16
KR20210082267A (ko) 2021-07-02
JP2014514294A (ja) 2014-06-19
RS58367B1 (sr) 2019-03-29
NZ712414A (en) 2016-12-23
EP2691155B1 (en) 2018-11-14
IL258929A (en) 2018-07-31
AU2012236398B2 (en) 2016-02-11
SI2691155T1 (sl) 2019-03-29
UA116524C2 (uk) 2018-04-10
CA2831467C (en) 2020-03-24
KR20230128583A (ko) 2023-09-05
ME03353B (me) 2019-10-20
PL2691155T3 (pl) 2019-06-28
HRP20190243T1 (hr) 2019-03-22
EA201991268A2 (ru) 2019-10-31
EA201991268A3 (ru) 2020-01-31
CY1121321T1 (el) 2020-05-29
JP2023083504A (ja) 2023-06-15
JP6456885B2 (ja) 2019-01-23
DK2691155T3 (en) 2019-03-04
US20170037080A1 (en) 2017-02-09
IL250723B (en) 2018-05-31
AU2020217301B2 (en) 2023-10-19
EA201391398A1 (ru) 2014-02-28
US8795673B2 (en) 2014-08-05
HUE041384T2 (hu) 2019-05-28
US9428543B2 (en) 2016-08-30
US9914748B2 (en) 2018-03-13
US20180273581A1 (en) 2018-09-27
IL228559A (en) 2017-03-30
ES2709577T3 (es) 2019-04-16
AU2012236398A1 (en) 2013-05-16
CN103717262A (zh) 2014-04-09
JP2019056003A (ja) 2019-04-11
JP2016204385A (ja) 2016-12-08
TR201902180T4 (tr) 2019-03-21
KR20220123130A (ko) 2022-09-05
JP6797885B2 (ja) 2020-12-09
MX339927B (es) 2016-06-16
EP3545977A1 (en) 2019-10-02
US20220133899A1 (en) 2022-05-05
EA033468B1 (ru) 2019-10-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11744900B2 (en) Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
AU2012236403B2 (en) Process for manufacturing conjugates of improved homogeneity
WO2012135517A2 (en) Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
US20240156976A1 (en) Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
NZ616509B2 (en) Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
NZ712414B2 (en) Preparation of antibody maytansinoid conjugates

Legal Events

Date Code Title Description
A107 Divisional application of patent
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant