CN107530422A - Cd48抗体和其缀合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了特异性结合CD48的鼠类、嵌合、和人源化抗体以及其缀合物。

Description

CD48抗体和其缀合物
相关申请的交叉引用
本申请依照美国法典第35篇第119条(e)款要求2015年3月18日提交的美国临时专利申请号62/134,981的权益，该美国临时专利申请以引用的方式整体并入本文。
技术领域
本发明提供了特异性结合CD48的鼠类、嵌合、和人源化抗体以及其缀合物。
背景技术
CD48抗原(分化簇48)也被称为B淋巴细胞激活标志物(BLAST-1)或信号淋巴细胞激活分子2(SLAMF2)。CD48是免疫球蛋白超家族(IgSF)的CD2亚家族的成员，该CD2亚家族包括SLAM(信号淋巴细胞激活分子)蛋白，如CD84、CD150、CD229以及CD244。CD48存在于淋巴细胞和其它免疫细胞以及树突状细胞的表面上，并且参与这些细胞中的激活和分化途径。已知CD48在多发性骨髓瘤细胞和B细胞来源的其它癌症上表达，所述其它癌症例如非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkins lymphoma，NHL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、意义未明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom'sMacroglobulinemia，WM)、原发性/系统性淀粉样变性患者肿瘤细胞、以及滤泡性淋巴瘤(FL)。
发明内容
在一个方面，本公开提供了一种特异性结合人类CD48蛋白的嵌合或人源化抗体。所述抗体包括重链CDR序列SEQ ID NO:3-5和轻链CDR序列SEQ ID NO:6-8。与特异性结合人类CD48蛋白并且也包括重链CDR序列SEQ ID NO:3-5和轻链CDR序列SEQ ID NO:6-8的鼠类抗体相比，所述抗体对人类CD48蛋白表现出更高的结合亲和力。在一个实施方案中，所述嵌合或人源化抗体对人类CD48蛋白所表现出的结合亲和力是所述鼠类抗体的至少2倍。在另一个实施方案中，所述抗体是人源化抗体。在另一个实施方案中，所述抗体包括SEQ ID NO:1的重链可变区。在另一个实施方案中，所述抗体包括SEQ ID NO:2的轻链可变区。在另一个实施方案中，所述抗体包括SEQ ID NO:1的重链可变区和SEQ ID NO:2的轻链可变区。在一个实施方案中，所述抗体与和接头连接的细胞毒性药物缀合。
在另一个实施方案中，所述与所述抗体连接的药物-接头具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中Z表示具有能够与所述抗体上的官能团反应以与其形成共价连接的反应性位点的有机部分，n在8至36的范围内，RPR是氢或保护基，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元。
在另一个方面，本公开提供了一种特异性结合人类CD48蛋白的人源化抗体，所述抗体包括SEQ ID NO:1的重链可变区和SEQ ID NO:2的轻链可变区。
在一个实施方案中，所述抗体与和接头连接的细胞毒性药物缀合。示例性药物-接头具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中Z表示具有能够与所述抗体上的官能团反应以与其形成共价连接的反应性位点的有机部分，n在8至36的范围内，RPR是氢或保护基，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元。
用于与所公开的抗体缀合的另一种示例性药物-接头具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中Z表示具有能够与所述抗体上的官能团反应以与其形成共价连接的反应性位点的有机部分，n在8至36的范围内，RPR是氢或保护基，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元。
用于与所公开的抗体缀合的另一种示例性药物-接头具有下式
或其药学上可接受的盐，其中n在8至36的范围内，RPR是氢或保护基，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元。
用于与所公开的抗体缀合的另一种示例性药物-接头具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中n在8至36的范围内，RPR是氢或保护基，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元。
在本公开的一些实施方案中，值n可以在8至14的范围内。在本公开的其它实施方案中，值n在10至12的范围内。在本公开的另一个实施方案中，n的值是12。在另一个实施方案中，R21是-CH3或-CH2CH2CO2H。
在另一个方面，本公开提供了一种抗CD48抗体-药物缀合物化合物，所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐，Z表示经由共价键使所述抗体和药物-接头的其余部分连接的有机部分，n在8至36的范围内，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元，并且p是1至16。所述抗体可以是所公开的抗CD48抗体中的任一种。在一个优选的实施方案中，所述抗体具有SEQID NO:1的重链可变区和SEQ ID NO:2的轻链可变区。
用于与所公开的抗体缀合的另一种示例性药物-接头具有下式：
或其药学上可接受的盐。
用于与所公开的抗体缀合的另一种示例性药物-接头具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中RPR是氢或保护基。
用于与所公开的抗体缀合的另一种示例性药物-接头具有下式：
或其药学上可接受的盐。
用于与所公开的抗体缀合的另一种示例性药物-接头具有下式：
或其药学上可接受的盐。
用于与所公开的抗体缀合的另一种示例性药物-接头具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中RPR是氢或保护基。
在本公开的一些实施方案中，值n可以在8至14的范围内。在本公开的其它实施方案中，值n在10至12的范围内。在本公开的另一个实施方案中，n的值是12。在另一个实施方案中，R21是-CH3或-CH2CH2CO2H。
在另一个实施方案中，所公开的抗体-药物缀合物中的任一种具有8的p值。在另一个实施方案中，所述药物-接头经由所述抗体的链间二硫键的半胱氨酸残基与所述抗体连接。
在另一个实施方案中，所述抗体-药物缀合物组合物包括一群抗CD48抗体-药物缀合物分子，其中平均药物负载是8并且所述组合物中的主要药物负载是8。
在另一个方面，本公开提供了包括本文所公开的CD48抗体-药物缀合物的药物组合物和制剂。
在另一个方面，所述CD48抗体-药物缀合物用于治疗患有表达CD48的癌症的患者。在一个实施方案中，所述表达CD48的癌症是多发性骨髓瘤。在其它实施方案中，所述表达CD48的癌症是B细胞恶性肿瘤，例如非霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、意义未明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(WM)、原发性/系统性淀粉样变性患者肿瘤细胞、以及慢性淋巴细胞性白血病。可以使用本文所公开的方法治疗的表达CD48的癌症的另一个实例是急性骨髓性白血病。
定义
如本文所用的术语“单克隆抗体”指的是从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成所述群体的单个抗体是相同的，除了可能以少量存在的可能的天然存在的突变之外。修饰语“单克隆”表明抗体的特征在于是从一群基本上同质的抗体获得的，并且不应当被视为需要通过任何特定的方法产生所述抗体。举例来说，根据本发明使用的单克隆抗体可以通过首先由Kohler等(1975)Nature 256:495描述的杂交瘤方法来制备，或可以通过重组DNA方法(参见例如美国专利号4816567)来制备。“单克隆抗体”还可以使用例如Clackson等(1991)Nature,352:624-628和Marks等(1991)J.Mol.Biol.,222:581-597中所述的技术从噬菌体抗体文库中分离或可以通过其它方法来制备。本文所述的抗体是单克隆抗体。
抗体通常是以分离形式提供的。这意味着抗体通常是至少50％w/w不含源于它的生产或纯化的干扰蛋白质和其它污染物，但是并不排除所述抗体与过量的一种或多种药学上可接受的载体或旨在方便它使用的其它媒介物组合的可能性。有时，抗体是至少60％、70％、80％、90％、95％或99％w/w不含来自生产或纯化的干扰蛋白质和污染物。抗体(包括分离的抗体)可以与细胞毒性剂缀合并且作为抗体药物缀合物提供。
“分离的”多核苷酸指的是如下的多核苷酸，所述多核苷酸已经被鉴定并且从它的天然环境的组分分离和/或回收。
单克隆抗体与它的靶抗原的特异性结合意指至少106M-1、107M-1、108M-1、109M-1、或1010M-1的亲和力。相对于与至少一种无关靶标发生的非特异性结合，特异性结合在量值上是可检测地更高的并且可与之相区别。特异性结合可以是特定官能团之间形成键或特定空间配合(例如锁钥型)的结果，而非特异性结合通常是范德华力(van der Waals force)的结果。CD48定向抗体-药物缀合物和抗CD48抗体特异性结合CD48。
基本抗体结构单元是亚基的四聚体。每一个四聚体包括两对相同的多肽链，每一对具有一条“轻”链(约25kDa)和一条“重”链(约50kDa-70kDa)。每一条链的氨基末端部分包括主要负责抗原识别的具有约100个至110个或更多个氨基酸的可变区。该可变区最初被表达为与可切割的信号肽连接。没有信号肽的可变区有时被称为成熟可变区。因此，例如，轻链成熟可变区意指没有轻链信号肽的轻链可变区。轻链被分类为κ或λ。重链被分类为γ、μ、α、δ、或ε，并且分别将抗体的同种型限定为IgG、IgM、IgA、IgD以及IgE。在轻链和重链内，下标区和恒定区由具有约12个或更多个氨基酸的“J”区连接，重链还包括具有约10个或更多个氨基酸的“D”区。(一般参见《基础免疫学(Fundamental Immunology)》(Paul,W.编著,第2版,纽约的雷文出版社(Raven Press,N.Y.),1989,第7章)，其以引用的方式整体并入本文用于所有目的)。每一对轻链/重链的成熟可变区形成抗体结合位点。因此，完整抗体具有两个结合位点。所述链均表现出相同的通用结构，即相对保守的框架区(FR)由三个高变区连接，所述高变区也被称作互补决定区或CDR。来自每一对的两条链的CDR通过框架区对齐，从而使得能够与特异性表位结合。从N末端到C末端，轻链和重链这两者均包含结构域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3以及FR4。每一个结构域的氨基酸的分配是根据以下文献的定义进行的：Kabat,《免疫学相关蛋白质序列(Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest)》(马里兰州贝塞斯达的国家卫生研究院(National Institutes of Health,Bethesda,MD)，1987年和1991年)；或Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)；Chothia等,Nature 342:878-883(1989)。Kabat还提供了广泛使用的编号惯例(Kabat编号系统)，其中不同的重链可变区之间或不同的轻链可变区之间的相应残基被指定相同的编号。重链恒定区的编号是经由EU索引进行的，如Kabat(Kabat,《免疫学相关蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)》(马里兰州贝塞斯达的国家卫生研究院，1987年和1991年))中所述。
术语“抗体”包括完整抗体和其抗原结合片段。“完整抗体”是包含抗原结合可变区以及轻链恒定域(CL)和重链恒定域CH1、CH2、CH3以及CH4(视抗体类别而定)的抗体。恒定域可以是天然序列恒定域(例如人类天然序列恒定域)或其氨基酸序列变体。抗体片段与作为它们的来源的完整抗体竞争特异性结合靶标，包括单独的重链、轻链、Fab、Fab'、F(ab')2、F(ab)c、双体抗体、Dab、纳米抗体、以及Fv。片段可以通过重组DNA技术、或通过酶促或化学分离完整免疫球蛋白来产生。术语“抗体”还包括双体抗体(同二聚Fv片段)或微型抗体(VL-VH-CH3)、双特异性抗体等。双特异性或双功能抗体是具有两对不同的重链/轻链和两个不同的结合位点的人工杂合抗体(参见例如Songsivilai和Lachmann,Clin.Exp.Immunol.,79:315-321(1990)；Kostelny等,J.Immunol.,148:1547-53(1992))。
术语“患者”包括接受预防性治疗或治疗性治疗的人类和其它哺乳动物受试者。
为了将氨基酸取代分类为保守的或非保守的，将氨基酸如下分组：组I(疏水性侧链)：met、ala、val、leu、ile；组II(中性亲水性侧链)：cys、ser、thr；组III(酸性侧链)：asp、glu；组IV(碱性侧链)：asn、gln、his、lys、arg；组V(影响链取向的残基)：gly、pro；以及组VI(芳族侧链)：trp、tyr、phe。保守取代涉及同一类中的氨基酸之间的取代。非保守取代构成了这些类别中的一个的成员与另一个的成员交换。
序列同一性百分比是在通过Kabat编号惯例最大限度比对抗体序列的情况下确定的。在比对之后，如果正将主题抗体区域(例如重链或轻链的整个成熟可变区)与参考抗体的相同区域相比较，那么主题抗体区域与参考抗体区域之间的序列同一性百分比是主题抗体区域和参考抗体区域这两者中相同的氨基酸所占据的位置数目除以这两个区域的比对位置的总数(其中空位不被计算在内)乘以100以转换成百分比。
“包括”一个或多个所述的要素的组合物或方法可以包括未具体叙述的其它要素。举例来说，包含抗体的组合物可以含有单独的抗体或抗体与其它成分的组合。
术语“治疗有效量”或“有效量”指的是有效治疗哺乳动物的疾病或病症的抗体-药物缀合物的量。在癌症的情况下，治疗有效量的缀合物可以减少癌细胞的数目；减小肿瘤尺寸；抑制(即在某种程度上减缓并且优选地停止)癌细胞浸润到外周器官中；抑制(即在某种程度上减缓并且优选地停止)肿瘤转移；抑制肿瘤生长；和/或减轻与癌症相关的症状中的一个或多个。对于癌症治疗，功效可以例如通过评估疾病进展时间(TTP)和/或确定响应率(RR)来测量。术语“有效方案”指的是足以实现对病症的治疗的所施用的缀合物的量和给药频率的组合。
除非上下文另外指明，否则术语“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”指的是治疗性治疗，其中目标在于抑制或减缓(减轻)不期望的生理变化或病症，如癌症的发展或扩散。有益的或所期望的临床结果包括但不限于减轻症状、降低疾病程度、使疾病状态稳定(即不恶化)、延缓或减缓疾病进展、改善或缓和疾病状态、以及缓解(无论是部分还是完全)，无论是可检测的还是不可检测的。“治疗”还可以意指与在没有接受治疗的情况下预期的存活期相比延长存活期。需要治疗的那些个体包括患有可检测的疾病的那些。需要治疗的那些个体还可以包括患有不可检测的疾病的那些，例如在治疗表达CD48的病症之后已经实现完全响应，但是需要治疗以防止复发的患者。
术语“药学上可接受的”意指由联邦政府或州政府的监管机构批准或可由联邦政府或州政府的监管机构批准或在《美国药典(U.S.Pharmacopeia)》或其它普遍认可的药典中被列出为用于动物，更特别是人类。术语“药学上相容的成分”指的是与抗CD48抗体或抗体-药物缀合物一起向受试者施用的药学上可接受的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。
短语“药学上可接受的盐”指的是药学上可接受的有机盐或无机盐。示例性盐包括硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、丁二酸盐、顺丁烯二酸盐、龙胆酸盐、反丁烯二酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、以及双羟萘酸盐(即1,1'-亚甲基双-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。药学上可接受的盐可以涉及包括另外的分子，如乙酸根离子、丁二酸根离子或其它抗衡离子。所述抗衡离子可以是使母体化合物上的电荷稳定的任何有机部分或无机部分。此外，药学上可接受的盐在它的结构中可以具有多于一个带电荷的原子。其中多个带电荷的原子是药学上可接受的盐的一部分的实例可以具有多个抗衡离子。因此，药学上可接受的盐可以具有一个或多个带电荷的原子和/或一个或多个抗衡离子。
在本发明的背景下，溶剂化物是本发明的化合物的那些形式，所述形式经由与溶剂分子配位而形成固态或液态的复合物。水合物是溶剂化物的一种具体形式，其中与水进行配位。在本发明的背景下，优选的溶剂化物是水合物。
除非另外从上下文中显而易见，否则术语“约”涵盖了与所述值相差标准偏差以内的值。
附图说明
图1示出了鼠类MEM102抗体的重链可变区以及人源化vHA、vHB和vHC重链和所选择的人类生殖系接受体可变区序列的氨基酸序列。
图2示出了鼠类MEM102抗体的轻链可变区以及人源化vLA、vLB和vLC轻链和所选择的人类生殖系接受体可变区序列的氨基酸序列。
图3示出了在人类U-266多发性骨髓瘤细胞上MEM102抗体的饱和结合曲线。
图4示出了在用食蟹猴CD48转染的CHO细胞上MEM102抗体的饱和结合曲线。
图5示出了在用MEM-102ADC处理之后在人类NCI-H929多发性骨髓瘤细胞中胱天蛋白酶3/7的激活(细胞凋亡性细胞死亡)。
图6示出了在用MEM-102ADC处理之后在人类U-266多发性骨髓瘤细胞中胱天蛋白酶3/7的激活。
图7示出了在被植入有NCI-H929细胞的小鼠异种移植模型中hMEM102ADC的体内活性。这是多发性骨髓瘤的播散模型。
图8示出了在被植入有NCI-H929细胞的小鼠异种移植模型中hMEM102ADC的体内活性。这是多发性骨髓瘤的皮下模型。
图9示出了在被植入有MM.1R细胞的小鼠异种移植模型中hMEM102ADC的体内活性。这是多发性骨髓瘤的播散模型。
图10示出了在被植入有MM.1R细胞的小鼠异种移植模型中hMEM102ADC的体内活性。这是多发性骨髓瘤的皮下模型。
图11示出了在被植入有EJM细胞的小鼠异种移植模型中hMEM102ADC的体内活性。这是多发性骨髓瘤的播散模型。
具体实施方式
本发明部分地基于以下发现，即靶向CD48的抗体-药物缀合物(包括聚乙二醇化的MMAE抗体-药物缀合物)在杀伤表达CD48+的细胞方面是特别有效的。具体来说，已发现，高亲和力MEM102人源化抗体可以使用hIgG VH7-4-1/hIgG-JH5重链可变区人类生殖系作为重链可变区接受体序列来构建。对于轻链可变区，优选的接受体序列是hIgG-VK6-21/hIgG-JK4轻链可变区人类生殖系。值得注意的是，高亲和力MEM102人源化抗体是在不需要进行亲和力成熟的情况下构建的而同时保持鼠类抗体的CDR的特征。高亲和力MEM102人源化抗体作为抗体药物缀合物的一部分在药物递送方面也是有效的。当与SGD-5088聚乙二醇化的MMAE药物-接头缀合时，所得的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载缀合物对一组多发性骨髓瘤细胞系具有高活性。
靶分子
除非另外指明，否则CD48指的是人类CD48。示例性人类序列被指定为基因库登录号CAG33293.1。
本发明的抗体
人源化抗体是一种遗传工程抗体，其中来自非人类“供体”抗体的CDR被移植到人类“接受体”抗体序列中(参见例如Queen的US 5,530,101和5,585,089；Winter的US 5,225,539；Carter的US 6,407,213；Adair的US 5,859,205；以及Foote的US 6,881,557)。所述接受体抗体序列可以是例如成熟人类抗体序列、这样的序列的复合体、人类抗体序列的共有序列、或生殖系区域序列。
因此，人源化抗体是具有完全或基本上来自非人类供体抗体的一些或所有CDR以及完全或基本上来自人类抗体序列的可变区框架序列和恒定区(如果存在的话)的抗体。类似地，人源化重链具有完全或基本上来自供体抗体重链的至少一个、两个以及通常所有三个CDR以及基本上来自人类重链可变区框架和恒定区序列的重链可变区框架序列和重链恒定区(如果存在的话)。类似地，人源化轻链具有完全或基本上来自供体抗体轻链的至少一个、两个以及通常所有三个CDR以及基本上来自人类轻链可变区框架和恒定区序列的轻链可变区框架序列和轻链恒定区(如果存在的话)。除了纳米抗体和双体抗体之外，人源化抗体通常包含人源化重链和人源化轻链。当在对应的CDR之间至少60％、85％、90％、95％或100％的相应残基(如由Kabat所定义)相同时，人源化抗体或人类抗体中的CDR基本上来自非人类抗体中的相应CDR或基本上与非人类抗体中的相应CDR相同。在一些实施方案中，当在每一个CDR中存在不多于3个保守氨基酸取代时，人源化抗体或人类抗体中的CDR基本上来自非人类抗体中的相应CDR或基本上与非人类抗体中的相应CDR相同。当至少70％、80％、85％、90％、95％或100％的由Kabat定义的相应残基相同时，抗体链的可变区框架序列或抗体链的恒定区分别基本上来自人类可变区框架序列或人类恒定区。在本发明的一些人源化抗体中，在所述抗体的重链可变框架区中不存在回复突变，并且在所述抗体的轻链可变区中不存在回复突变。
尽管人源化抗体常常包含来自小鼠抗体的所有六个CDR(优选地如由Kabat所定义)，但是它们也可以由来自小鼠抗体的少于所有CDR(例如至少3个、4个、或5个CDR)来制备(例如Pascalis等,J.Immunol.169:3076,2002；Vajdos等,Journal of MolecularBiology,320:415-428,2002；Iwahashi等,Mol.Immunol.36:1079-1091,1999；Tamura等,Journal of Immunology,164:1432-1441,2000)。
来自人类可变区框架残基的某些氨基酸可以基于它们对CDR构象和/或与抗原结合的可能影响而被选用于取代。对这样的可能影响的研究是通过建模、研究特定位置处氨基酸的特征、或对特定氨基酸的取代或诱变的效应的经验观测来进行的。
本发明提供了针对CD48抗原的抗体。优选的抗体是源自于鼠类MEM102抗体的嵌合抗体或人源化抗体。
重链可变区的优选的接受体序列是hIgG VH7-4-1/hIgG-JH5重链可变区人类生殖系。对于轻链可变区，优选的接受体序列是hIgG-VK6-21/hIgG-JK4轻链可变区人类生殖系。
示例性抗CD48抗体是人源化抗体，所述人源化抗体包括如SEQ ID NO:1所示的重链CDR和如SEQ ID NO:2所示的轻链CDR并且另外具有与SEQ ID NO:1具有至少90％、91％、92％、93％、94％或95％同一性的成熟重链可变区和与SEQ ID NO:2具有至少90％、91％、92％、93％、94％或95％同一性的成熟轻链可变区。CDR如由Kabat所定义。
小鼠MEM102抗体的人源化形式包括三种举例说明的人源化重链成熟可变区(HA-HC)和三种举例说明的人源化轻链成熟可变区(LA-LC)。这些链的排列包括HALA、HALB、HALC、HBLA、HBLB、HBLC、HCLA、HCLB、以及HCLC。在这些排列中，HALA是优选的。HALA包含如SEQ ID NO:1所示的重链和如SEQ ID NO:2所示的轻链。然而，可以使用HALB、HALC、HBLA、HBLB、HBLC、HCLA、HCLB、以及HCLC中的任一个来代替HALA。
在一些方面，人源化MEM102抗体对人类CD48的表观解离常数(kd)优选地在0.1nM至10nM的范围内，甚至更优选地在0.1nM至5nM的范围内，甚至优选地在1nM至3nM或2nM至约3nM的范围内。在一些方面，本发明的抗体所具有的表观解离常数在鼠类MEM102抗体对人类CD48的表观解离常数的0.1倍至2.0倍、或甚至0.5倍至4倍的范围内。在一些方面，所述抗体对人类CD48的表观解离常数(kd)是约5.0。
恒定区的选择
人源化MEM102抗体的重链可变区和轻链可变区可以与人类恒定区的至少一部分连接。恒定区的选择可以部分地取决于是否期望抗体依赖性细胞介导的细胞毒性、抗体依赖性细胞吞噬作用和/或补体依赖性细胞毒性。举例来说，人类同种型IgG1和IgG3具有强的补体依赖性细胞毒性，人类同种型IgG2具有弱的补体依赖性细胞毒性并且人类IgG4缺乏补体依赖性细胞毒性。人类IgG1和IgG3还比人类IgG2和IgG4诱导更强的细胞介导的效应功能。轻链恒定区可以是λ或κ。抗体可以被表达为含有两条轻链和两条重链的四聚体、单独的重链、轻链、Fab、Fab'、F(ab')2、和Fv、或单链抗体，其中重链下标结构域和轻链下标结构域经由间隔区连接。
人类恒定区显示出不同个体之间的同种异型变异和同族同种异型变异(isoallotypic variation)，也就是说，恒定区可以在不同的个体中在一个或多个多态性位置处不同。同族同种异型与同种异型的不同之处在于识别同族同种异型的血清与一个或多个其它同种型的非多态性区域结合。
轻链和/或重链的氨基末端或羧基末端处的一个或几个氨基酸，如重链的C末端赖氨酸可能在一定比例或全部的分子中丢失或衍生化。可以在恒定区中进行取代以降低或提高效应功能，如补体介导的细胞毒性或ADCC(参见例如Winter等的美国专利号5,624,821；Tso等的美国专利号5,834,597；以及Lazar等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103:4005,2006)、或延长在人体内的半衰期(参见例如Hinton等,J.Biol.Chem.279:6213,2004)。
恒定区可以被修饰以允许药物-接头的位点特异性缀合。这样的技术包括使用天然存在的或工程化的半胱氨酸残基、二硫桥、聚组氨酸序列、糖工程化标签、以及转谷氨酰胺酶识别序列。用于使用细菌转谷氨酰胺酶的位点特异性缀合的示例性取代是N297S或N297Q。用于使用工程化的半胱氨酸的位点特异性缀合的示例性取代是S239C。抗体片段也可以被修饰以用于药物-接头的位点特异性缀合，参见例如Kim等,Mol Cancer Ther 2008；7(8)。
重组抗体的表达
人源化或嵌合MEM102抗体可以通过重组表达来产生。重组多核苷酸构建体通常包括与抗体链的编码序列可操作地连接的表达控制序列，包括天然缔合的或异源性启动子区。优选的是，所述表达控制序列在能够转化或转染真核宿主细胞的载体中是真核生物启动子系统。一旦所述载体已经被并入适当的宿主中，就将所述宿主维持在适用于核苷酸序列的高水平表达以及收集和纯化交叉反应性抗体的条件下。
哺乳动物细胞是用于表达编码免疫球蛋白或其片段的核苷酸片段的优选的宿主。参见Winnacker,《从基因到克隆(From Genes to Clones)》,(纽约的VCH出版社(VCHPublishers,NY),1987)。能够分泌完整的异源蛋白质的许多合适的宿主细胞系在本领域中已经被开发，并且包括CHO细胞系(例如DG44)、各种COS细胞系、HeLa细胞、HEK293细胞、L细胞、以及非抗体产生骨髓瘤，包括Sp2/0和NS0。优选的是，所述细胞是非人类细胞。用于这些细胞的表达载体可以包括表达控制序列，如复制起点、启动子、增强子(Queen等,Immunol.Rev.89:49(1986))、以及必要的加工信息位点，如核糖体结合位点、RNA剪接位点、多聚腺苷酸化位点、以及转录终止子序列。优选的表达控制序列是源自于内源基因、巨细胞病毒、SV40、腺病毒、牛乳头瘤病毒等的启动子。参见Co等,J.Immunol.148:1149(1992)。
一旦被表达，就可以根据本领域的标准程序来纯化抗体，包括HPLC纯化、柱色谱、凝胶电泳等(一般参见Scopes,《蛋白质纯化(Protein Purification)》(纽约的施普林格出版社(Springer-Verlag,NY),1982))。
核酸
本发明还提供了编码本文所述的人源化重链和轻链中的任一个的核酸。通常，所述核酸还编码与成熟的重链可变区和轻链可变区融合的信号肽。核酸上的编码序列可以与调节序列处于可操作的连接以确保编码序列的表达，如启动子、增强子、核糖体结合位点、转录终止信号等。编码重链和轻链的核酸可以分离形式存在或可以被克隆到一种或多种载体中。核酸可以通过例如固态合成或重叠寡核苷酸的PCR来合成。编码重链和轻链的核酸可以例如在表达载体内被连接成一个连续的核酸，或可以是分开的，例如每一个被克隆到它自身的表达载体中。
在一个实施方案中，本公开提供了一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸编码包含如HA、HB、或HC所示的氨基酸序列的抗体重链可变区。举例来说，所述分离的多核苷酸可以编码包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的抗体重链可变区。这种分离的多核苷酸还可以编码人类IgG重链恒定区。IgG恒定区的同种型是例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在一个实施方案中，IgG恒定区的同种型是IgG1。在另一个实施方案中，所编码的IgG1恒定区具有包含根据如Kabat系统中所述的EU索引的残基239处的取代，即S239C的氨基酸序列。本公开还提供了一种表达载体，所述表达载体包含编码抗体重链可变区的分离的多核苷酸，所述抗体重链可变区包含如HA、HB或HC所示的氨基酸序列(例如SEQ ID NO:1或其变体)；并且还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包含该表达载体。在一些实施方案中，所述宿主细胞是哺乳动物宿主细胞，例如CHO细胞。
在另一个实施方案中，本公开提供了一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸编码包含如LA、LB或LC所示的氨基酸序列的抗体轻链可变区。举例来说，分离的多核苷酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的抗体轻链可变区。这种分离的多核苷酸还可以编码人类IgG轻链恒定区。IgG轻链恒定区的同种型是例如κ恒定区。本公开还提供了一种表达载体，所述表达载体包含编码抗体轻链可变区的分离的多核苷酸，所述抗体轻链可变区包含如LA或LB或LC所示的氨基酸序列(例如SEQ ID NO:2或其变体)；并且还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包含该表达载体。在一些实施方案中，所述宿主细胞是哺乳动物宿主细胞，例如CHO细胞。
在另一个实施方案中，本公开提供了一种或多种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的抗体重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的抗体轻链可变区，所述重链可变域和所述轻链可变域形成特异性结合人类CD48的抗体或抗原结合片段。本公开还提供了一种表达载体，所述表达载体包含所述一种或多种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的抗体重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的抗体轻链可变区。还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包含所述一个或多个表达载体。所述宿主细胞优选地是哺乳动物细胞，例如CHO细胞。
在另一个实施方案中，本公开提供了第一载体和第二载体，所述第一载体和所述第二载体包含编码包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的抗体重链可变区的多核苷酸和编码包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的抗体轻链可变区的多核苷酸，所述重链可变域和所述轻链可变域形成特异性结合人类CD48的抗体或抗原结合片段。提供了包含所述载体的宿主细胞，优选地是哺乳动物宿主细胞，如CHO细胞。
抗体-药物缀合物
抗CD48抗体可以与治疗剂、诊断剂或稳定剂缀合以形成抗体缀合物。与治疗剂缀合的抗CD48抗体在本文被称作抗体-药物缀合物(ADC)。示例性治疗剂具有细胞抑制或细胞毒性作用并且也可以被称为细胞毒性剂或细胞抑制剂。示例性细胞毒性剂包括例如阿里他汀(auristatin)、喜树碱(camptothecin)、卡奇霉素(calicheamicin)、倍癌霉素(duocarmycin)、依托泊苷(etoposide)、类美登素(maytansinoid)(例如DM1、DM2、DM3、DM4)、紫杉烷(taxane)、苯并二氮杂卓(例如吡咯并[1,4]苯并二氮杂卓、二氢吲哚并苯并二氮杂卓、以及唑烷并苯并二氮杂卓，包括吡咯并[1,4]苯并二氮杂卓二聚体、二氢吲哚并苯并二氮杂卓二聚体、以及唑烷并苯并二氮杂卓二聚体)以及长春花生物碱(vincaalkaloid)。
用于使治疗剂与蛋白质，特别是抗体缀合的技术是公知的。(参见例如Alley等,Current Opinion in Chemical Biology 2010 14:1-9；Senter,Cancer J.,2008,14(3):154-169。)通常，治疗剂经由接头单元与抗体缀合。所述接头单元可以是可切割的或不可切割的。举例来说，可以使用可切割的接头使治疗剂与抗体连接，所述可切割的接头对表达CD48的癌细胞的细胞内环境中的切割敏感，但是对细胞外环境基本上不敏感，以使得当缀合物由表达CD48的癌细胞内化时，它从抗体上被切割(例如在内体、溶酶体环境中、或在胞膜窖环境中)。在另一个实施例中，可以经由不可切割的接头使治疗剂与抗体缀合并且药物释放是通过在由表达CD48的癌细胞内化之后的整体抗体降解来实现的。
通常，ADC在细胞毒性剂或细胞抑制剂与抗CD48抗体之间将包含接头区域。如上所述，通常，所述接头可以是可在细胞内条件下切割的，以使得接头的切割在细胞内环境中(例如在溶酶体或内体或胞膜窖内)从抗体释放治疗剂。所述接头可以是例如由包括溶酶体蛋白酶或内体蛋白酶的细胞内肽酶或蛋白酶切割的肽基接头。切割剂可以包括组织蛋白酶B和组织蛋白酶D以及纤溶酶(参见例如Dubowchik和Walker,Pharm.Therapeutics 83:67-123,1999)。最典型的是可由存在于表达CD48的细胞中的酶切割的肽基接头。举例来说，可以使用可由在癌组织中高表达的硫醇依赖性蛋白酶组织蛋白酶-B切割的肽基接头(例如包含Phe-Leu或Val-Cit肽的接头)。所述接头也可以是碳水化合物接头，包括由细胞内糖苷酶切割的糖接头(例如可由葡糖苷酸酶切割的葡糖苷酸接头)。
所述接头也可以是不可切割的接头，如顺丁烯二酰亚胺基-亚烷基接头或顺丁烯二酰亚胺-芳基接头，它直接与治疗剂连接并且通过抗体的蛋白水解降解释放。
抗CD48抗体可以经由抗体的杂原子与接头缀合。这些杂原子可以在天然状态下存在于抗体上或可以被引入抗体中。在一些方面，抗CD48抗体将经由赖氨酸残基的氮原子与接头缀合。在其它方面，抗CD48抗体将经由半胱氨酸残基的硫原子与接头缀合。所述半胱氨酸残基可以是天然存在的或被工程化到抗体中的半胱氨酸残基。经由赖氨酸残基和半胱氨酸残基使接头和药物-接头与抗体缀合的方法是本领域已知的。
示例性抗体-药物缀合物包括基于阿里他汀的抗体-药物缀合物(即药物组分是阿里他汀药物)。阿里他汀结合微管蛋白，已经被证实干扰微管动力学以及核和细胞分裂，并且具有抗癌活性。通常，基于阿里他汀的抗体-药物缀合物在阿里他汀药物与抗CD48抗体之间包含接头。所述接头可以是例如可切割的接头(例如肽基接头、碳水化合物接头)或不可切割的接头(例如通过抗体的降解释放的接头)。阿里他汀包括MMAF和MMAE。示例性阿里他汀的合成和结构描述于美国公开号7,659,241、7,498,298、2009-0111756、2009-0018086、以及7,968,687中，这些美国公开中的每一件以引用的方式整体并入本文并且用于所有目的。
其它示例性抗体-药物缀合物包括类美登素抗体-药物缀合物(即药物组分是类美登素药物)、以及苯并二氮杂卓抗体药物缀合物(即药物组分是苯并二氮杂卓(例如吡咯并[1,4]苯并二氮杂卓二聚体(PBD二聚体)、二氢吲哚并苯并二氮杂卓二聚体、以及唑烷并苯并二氮杂卓二聚体))。
用于本发明中的优选的PBD二聚体由式I表示。PBD二聚体的优选的立体化学如式Ia中所示：
或药用盐、溶剂化物、或所述盐的溶剂化物；其中下标n是1或3。
式(I)和(Ia)的溶剂化物通常是通过在一个或这两个PBD单体的亚胺官能团上添加水或醇溶剂以形成甲醇胺和/或甲醇胺醚而形成的。举例来说，在N10-C11位置处，可以存在亚胺(N＝C)、甲醇胺(NH-CH(OH))、或甲醇胺醚(NH-CH(OMe))，如由下式I'和Ia'所表示：
其中：
(a)R10是H，并且R11是OH或ORA，其中RA是饱和C1-4烷基(优选地是甲基)；或
(b)R10和R11在它们所结合的氮原子与碳原子之间形成氮-碳双键；或
(c)一个R10是H，并且R11是OH或ORA，其中RA是饱和C1-4烷基(优选地是甲基)；并且另一个R10和R11在它们所结合的氮原子与碳原子之间形成氮-碳双键。
式I或Ia的PBD二聚体(或其药用盐、溶剂化物、或所述盐的溶剂化物)通常经由接头单元LU与抗体连接。接头单元用于在靶位点处(例如在癌细胞内)释放式I或Ia的PBD二聚体(或其药用盐、溶剂化物、或所述盐的溶剂化物)。用于本发明中的PBD药物-接头化合物在下文由式II表示(如IIa中所示的优选的立体化学)，其中LU是接头单元。所述接头单元可以是例如可切割的肽接头单元(例如包含缬氨酸-丙氨酸肽的接头)或可切割的二硫化物接头单元：
或药用盐、溶剂化物、或所述盐的溶剂化物；其中下标n是1或3。
用于本发明中的优选的PBD药物-接头化合物由下式III表示：
或药用盐、溶剂化物、或所述盐的溶剂化物；其中下标n是1或3并且下标m是2至5的整数。
药物-接头的PBD药物组分的优选的立体化学如下式IIIa中所示：
PBD药物和接头组分的优选的立体化学如下式IIIb中所示：
PBD药物-接头与抗CD48抗体缀合以产生CD48靶向抗体-药物缀合物。举例来说，所述抗体可以与式II或式III的药物-接头缀合。示例性CD48靶向抗体-药物缀合物在下文以式IV、式IVa、以及式IVb示出：
或药用盐、溶剂化物、或所述盐的溶剂化物；其中下标n是1或3；下标m是2至5的整数；并且下标p是1至4。
示例性药物-接头包括MMAE药物-接头。本申请的发明人已经发现，与非聚乙二醇化对照相比，将聚乙二醇聚合物作为侧链并入到可切割的β-葡糖苷酸MMAE药物-接头中提供了在异种移植模型中具有降低的血浆清除率和增加的抗肿瘤活性的抗体药物缀合物。因此，用于与本发明的抗体连接的特别有利的药物-接头如下：
或其药学上可接受的盐。
这样的药物-接头的优选的立体化学示于下文中：
或其药学上可接受的盐，其中对于式V和式Va，Z表示具有能够与所述抗体上的官能团反应以与其形成共价连接的反应性位点的有机部分，n在8至36的范围内并且最优选地在8至14的范围内(最优选地是12)，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元，优选地是-CH3或-CH2CH2CO2H。
优选的Z部分是含有顺丁烯二酰亚胺基的部分。特别优选的Z部分示于以下药物-接头中：
或其药学上可接受的盐。
这样的药物-接头的优选的立体化学示于下文中：
或其药学上可接受的盐，其中对于式VI、式VIa、式VII以及式VIIa，n在8至36的范围内并且最优选地在8至14的范围内(最优选地是12)，RPR是氢或保护基，例如酸不稳定性保护基，例如BOC，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元，优选地是-CH3或-CH2CH2CO2H。
如上所述，RPR可以是氢或保护基。如本文所用的保护基指的是选择性地暂时或永久阻断多官能化合物中的反应性位点的基团。当保护基能够在实现分子中其它位置处所期望的化学转化所需的反应条件下以及在期望时在纯化新形成的分子期间防止或避免不必要的副反应或保护基的过早丧失，并且可以在对该新形成的分子的结构或立体化学完整性没有不利影响的条件下被去除时，所述保护基是合适的保护基。合适的胺保护基包括酸不稳定性氮保护基，包括由Isidro-Llobel等,“氨基酸保护基(Amino acid-protectinggroups)”Chem.Rev.(2009)109:2455-2504提供的那些。通常，酸不稳定性氮保护基将伯氨基或仲氨基转化成它相应的氨基甲酸酯并且包括氨基甲酸叔丁酯、氨基甲酸烯丙酯、以及氨基甲酸苯甲酯。
如上所述，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元。如本领域技术人员所将了解的那样，聚乙二醇单元可以由各种各样的有机部分(通常是相对非反应性的那些)末端封端。烷基和取代的烷基是优选的，包括例如-C1-10烷基、-C2-10烷基-CO2H、-C2-10烷基-OH、-C2-10烷基-NH2、C2-10烷基-NH(C1-3烷基)、或C2-10烷基-N(C1-3烷基)2。
一般来说，有1个至16个药物-接头与每一个抗体连接。
药物负载——“p”
关于CD48靶向抗体-药物缀合物，下标p表示药物负载并且根据背景，可以表示与单个抗体分子连接的药物-接头分子的分子数并且因而是整数值，或可以表示平均药物负载并且因而可以是整数值或非整数值，但是通常是非整数值。平均药物负载表示群体中每个抗体的药物-接头分子的平均数。通常但并非总是，当我们提到抗体，例如单克隆抗体时，我们指的是一群抗体分子。在包含一群抗体-药物缀合物分子的组合物中，平均药物负载是重要的质量属性，这是因为它决定了可以被递送到靶细胞中的药物的量。组合物中未缀合的抗体分子的百分比被包括在平均药物负载值中。
在本发明的优选的方面，平均药物负载在涉及包含一群抗体-药物缀合物化合物的组合物时是1至约16，优选地约2至约14，更优选地约2至约10。对于PBD抗体药物缀合物，如本文所举例说明的那些，特别优选的平均药物负载是约2。在一些方面，在这群抗体-药物缀合物化合物中单个抗体分子的实际药物负载是1至4、1至3或1至2，其中主要的药物负载是2。在优选的方面，2的平均药物负载是经由位点特异性缀合技术实现的(例如将工程化的半胱氨酸引入到抗体中，包括在位置239(根据EU索引编号系统)处引入)。
对于MMAE聚乙二醇化ADC，如本文所举例说明的那些，特别优选的平均药物负载是约8。在示例性实施方案中，所述药物-接头与还原的链间二硫化物的半胱氨酸残基缀合。在一些方面，这群抗体-药物缀合物化合物中单个抗体分子的实际药物负载是1至10(或6至10或6至8)，其中主要的药物负载是8。更高的药物负载可以例如在除了链间二硫化物之外，还使药物-接头与所引入的半胱氨酸残基(如在位置239(根据EU索引)处引入的半胱氨酸残基)缀合的情况下实现。
示例性ADC包括以下：
或其药学上可接受的盐，其中n在8至36的范围内并且最优选地在8至14的范围内(最优选地是12)，RPR是氢或保护基，例如酸不稳定性保护基，例如BOC，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元，优选地是-CH3或-CH2CH2CO2H，Ab表示抗CD48抗体并且p在涉及单个抗体分子时表示1至16，优选地1至14、6至12、6至10、或8至10范围内的整数，或在涉及一群抗体分子时表示约4或约6至约14，优选地约8的平均药物负载。
如上所述，药物接头的PEG(聚乙二醇)部分可以在8至36的范围内，然而，已经发现，具有12个环氧乙烷单元的PEG是特别优选的。已经发现，更长的PEG链可以引起更慢的清除，而更短的PEG链可以造成活性降低。因此，上述所有实施方案中的下标n优选地是8至14、8至12、10至12或10至14并且最优选地是12。
可以使用多分散PEG、单分散PEG以及离散PEG来制备本发明的聚乙二醇化抗体药物缀合物。多分散PEG是尺寸和分子量的异质混合物，而单分散PEG通常是从异质混合物纯化的并且因此提供单一链长和分子量。优选的PEG单元是离散PEG，即按逐步方式合成而不是经由聚合过程合成的化合物。离散PEG提供具有限定和指定的链长的单个分子。如同下标“p”一样，在涉及抗体-药物缀合物的群体时，下标“n”的值可以是平均数并且可以是整数或非整数。
在优选的实施方案中，抗体与药物-接头的共价连接是经由抗体的巯基官能团与药物接头的顺丁烯二酰亚胺官能团相互作用以形成硫代取代的丁二酰亚胺来实现的。巯基官能团可以在配体的天然状态下存在于配体单元上，例如天然存在的残基(链间二硫化物存在)中，或可以经由化学修饰或通过生物工程化、或这两种的组合来引入配体中。应当了解的是，抗体取代的丁二酰亚胺可以一种或多种水解形式存在。举例来说，在优选的实施方案中，ADC包含在与抗体键合时由以下结构表示的丁二酰亚胺部分：
或包含它的相应的酸-酰胺部分，该部分在与抗体键合时由以下结构表示：
波浪线指示与药物-接头的其余部分的连接。
治疗应用
本文所述的CD48靶向抗体-药物缀合物可以用于治疗表达CD48的病症，如表达CD48的癌症。通常，这样的癌症显示出在蛋白质水平(例如通过免疫测定)或RNA水平上所测量的可检测水平的CD48。一些这样的癌症显示出相对于相同类型的非癌组织，优选地来自同一患者的非癌组织升高水平的CD48。任选地，在进行治疗之前测量癌症中CD48的水平。
与CD48表达相关的癌症的实例包括多发性骨髓瘤、和其它B细胞恶性肿瘤，包括霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、套细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、原发性/系统性淀粉样变性患者肿瘤细胞、MGUS、以及淀粉样变性。一些急性骨髓性白血病(AML)细胞系(例如AML患者白血病胚细胞)已经被观测到表达CD48并且因此，患有表达CD48的AML癌症的患者可以使用所公开的CD48ADC来治疗。
本发明的方法包括治疗患有表达CD48的癌症的患者，所述治疗包括向所述患者施用本发明的抗体-药物缀合物。所述癌症可以是任何表达CD48的癌症，包括例如多发性骨髓瘤。
CD48定向抗体-药物缀合物是按有效方案施用的，所述有效方案意指延缓癌症发病、降低癌症的严重程度、抑制癌症的进一步恶化、和/或改善癌症的至少一个体征或症状的剂量、施用途径以及施用频率。
CD48定向聚乙二醇化MMAE缀合物的示例性剂量一般是约1.0μg/kg至10.0mg/kg、或约0.1mg/kg至5.0mg/kg或约0.5mg/kg至1.0μg/kg、2.0μg/kg、或4.0μg/kg，尽管考虑了替代剂量。优选的剂量范围是约0.3mg/kg至约2.0mg/kg。
施用可以通过多种施用途径来进行。在某些实施方案中，肠胃外施用所述缀合物，如静脉内、肌内、或皮下施用。对于用于治疗癌症的ADC的施用，可以通过静脉内施用或皮下施用递送到体循环中。在一个具体的实施方案中，施用是经由静脉内递送进行的。静脉内施用可以例如通过在诸如30分钟-90分钟的时间内输注或通过单次推注来进行。在一些方面，施用将经由在外周插入的中心静脉导管中缓慢静脉内推注(即在30秒-60秒内)来进行。
施用频率取决于许多不同的因素，包括施用方式、目标部位、患者的生理状态、患者是人类还是动物、以及施用的其它药物。频率可以是每天一次、每周一次、每月一次、每季度一次、或响应于患者的状况的变化或所治疗的癌症的进展，按不规则的时间间隔。用于静脉内施用的示例性频率是在连续的治疗过程中每周两次至每季度一次，尽管更频繁或不太频繁的给药也是可能的。用于静脉内施用的其它示例性频率是在连续的治疗过程中每三周一次或每周一次或每月一次，尽管更频繁或不太频繁的给药也是可能的。另一个示例性频率是每六周施用一次。对于皮下施用，示例性给药频率是每天一次至每月一次，尽管更频繁或不太频繁的给药也是可能的。
用于肠胃外施用的药物组合物优选地是无菌的和基本上等渗的并且是在GMP条件下制造的。药物组合物可以单位剂型(即用于单次施用的剂量)提供。药物组合物可以使用一种或多种生理学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或辅剂配制。制剂取决于所选择的施用途径。对于注射，缀合物可以在水溶液中，优选地在生理学上相容的缓冲液，如汉克氏溶液(Hank's solution)、林格氏溶液(Ringer's solution)、或生理盐水或乙酸盐缓冲液中配制(以减少注射部位处的不适)。所述溶液可以含有配制剂，如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。或者，抗体可以呈冻干形式以在使用前使用合适的媒介物，例如无菌的无热原的水复原。液体制剂中缀合物的浓度可以广泛变化。在一些方面，ADC以如下浓度存在：约0.5mg/ml至约30mg/ml、约0.5mg/ml至约10mg/ml、约1mg/ml至约10mg/ml、约2mg/ml至约10mg/ml、或约2mg/ml至约5mg/ml。
用本发明的缀合物进行的治疗可以与化学治疗、放射、干细胞治疗、手术、以及有效对抗所治疗的病症的其它治疗联合，包括用于所治疗的特定病症的护理标准。因此，本发明涵盖了作为单药治疗的治疗本文所述的疾病和病症的方法或所述方法与例如用于治疗这样的疾病和/或病症的护理标准或研究药物的联合治疗。用于治疗癌症的方法包括向有需要的患者施用有效量的本发明的CD48定向抗体-药物缀合物与治疗癌症的另外的抗癌剂或其它药剂的组合。
用于联合治疗的示例性药剂是卡非佐米(carfilzomib)(例如)，它是用于治疗多发性骨髓瘤的蛋白酶体抑制剂(参见Siegel DS等,《在患有复发性和难治性多发性骨髓瘤的患者中单药卡非佐米(PX-171-003-A1)的2期研究(A phase 2study ofsingle-agent carfilzomib(PX-171-003-A1)in patients with relapsed andrefractory multiple myeloma)》,Blood 2012；120:2817-2825)。卡非佐米可以作为静脉内/IV输注来施用。在一个实施方案中，卡非佐米是在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，卡非佐米是在与本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，卡非佐米是在与本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
卡非佐米也可以在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物和另外的药剂的联合治疗中被施用。卡非佐米已经与各种另外的药剂联合治疗多发性骨髓瘤。举例来说，卡非佐米已经与来那度胺(lenalidomide)和地塞米松(dexamethasone)联合(参见Stewart KA等,《用于复发性多发性骨髓瘤的卡非佐米、来那度胺、以及地塞米松(Carfilzomib,lenalidomide,and dexamethasone for relapsed multiple myeloma)》,N Engl JMed.2015；372:142-152)。在一个实施方案中，卡非佐米是在与来那度胺、地塞米松、以及本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，卡非佐米是在与来那度胺、地塞米松、以及本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，卡非佐米是在与来那度胺、地塞米松、以及本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
卡非佐米也已经与地塞米松联合(参见Dimopoulos MD等,《用于患有复发性或难治性多发性骨髓瘤的患者的卡非佐米和地塞米松对比硼替佐米和地塞米松(ENDEAVOR)：随机化、3期、开放标签、多中心研究(Carfilzomib and dexamethasone versus bortezomiband dexamethasone for patients with relapsed or refractory multiple myeloma(ENDEAVOR):a randomised,phase 3,open-label,multicentre study)》,LancetOncology 2016；17:27-38)。在一个实施方案中，卡非佐米是在与地塞米松和本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，卡非佐米是在与地塞米松和本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，卡非佐米是在与地塞米松和本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
卡非佐米也已经与帕比司他(panobinostat)联合(参见BerdejaJG等,《在患有复发性/难治性多发性骨髓瘤的患者中帕比司他和卡非佐米的组合的I期/II期研究(PhaseI/II study of the combination of panobinostat and carfilzomib in patientswith relapsed/refractory multiple myeloma)》,Haematologica 2015；100:670-676)。在一个实施方案中，卡非佐米是在与帕比司他和本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，卡非佐米是在与帕比司他和本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，卡非佐米是在与帕比司他和本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
卡非佐米也已经与泊马度胺(pomalidomide)和地塞米松联合(参见Shah J等,《卡非佐米、泊马度胺、以及地塞米松(CPD)在患有复发性和/或难治性多发性骨髓瘤的患者中(Carfilzomib,pomalidomide,and dexamethasone(CPD)in patients with relapsedand/or refractory multiple myeloma)》,Blood 2015；126:2284-2290)。在一个实施方案中，卡非佐米是在与泊马度胺、地塞米松、以及本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，卡非佐米是在与泊马度胺、地塞米松、以及本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，卡非佐米是在与泊马度胺、地塞米松、以及本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
用于联合治疗的另一种示例性药剂是达雷木单抗(daratumumab)(例如DARZALEXTM)，它是结合CD38(在多发性骨髓瘤细胞上高表达的糖蛋白)的人类单克隆抗体。达雷木单抗可以通过静脉内输注向患者施用以治疗多发性骨髓瘤(参见Lokhorst HM等,《在多发性骨髓瘤中用达雷木单抗单药治疗靶向CD38(Targeting CD38with daratumumabmonotherapy in multiple myeloma)》,N Engl J Med 2015；373:1207-1219)。在一个实施方案中，达雷木单抗是在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，达雷木单抗是在与本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，达雷木单抗是在与本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
达雷木单抗也可以在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物和另外的药剂的联合治疗中被施用。达雷木单抗已经与各种另外的药剂联合治疗多发性骨髓瘤。举例来说，达雷木单抗已经与硼替佐米(bortezomib)和来那度胺联合(参见Phipps C等,《达雷木单抗和它在治疗多发性骨髓瘤中的潜能：临床前和临床开发的概述(Daratumumab and itspotential in the treatment of multiple myeloma:overview of the preclinicaland clinical development)》,Ther Adv Hematol 2015；6:120-127)。在一个实施方案中，达雷木单抗是在与硼替佐米、来那度胺、以及本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，达雷木单抗是在与硼替佐米、来那度胺、以及本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，达雷木单抗是在与硼替佐米、来那度胺、以及本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
达雷木单抗也已经与硼替佐米和地塞米松联合(参见Phipps C等)。在一个实施方案中，达雷木单抗是在与硼替佐米、地塞米松、以及本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，达雷木单抗是在与硼替佐米、地塞米松、以及本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，达雷木单抗是在与硼替佐米、地塞米松、以及本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
用于联合治疗的另一种示例性药剂是埃罗妥珠单抗(elotuzumab)(例如EMPLICITITM)，它是结合作为恶性多发性骨髓瘤细胞的标志物的CD319或信号淋巴细胞激活分子F7(SLAMF7)的单克隆抗体。埃罗妥珠单抗可以通过静脉内输注向患者施用以治疗多发性骨髓瘤(参见Zonder JA等,《在患有晚期多发性骨髓瘤的患者中埃罗妥珠单抗的1期、多中心、开放标签、剂量递增研究(A phase 1,multicenter,open-label,dose escalationstudy of elotuzumab in patients with advanced multiple myeloma)》,Blood 2012；120:552-559)。在一个实施方案中，埃罗妥珠单抗是在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，埃罗妥珠单抗是在与本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，埃罗妥珠单抗是在与本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
埃罗妥珠单抗也可以在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物和另外的药剂的联合治疗中被施用。埃罗妥珠单抗已经与各种另外的药剂联合治疗多发性骨髓瘤。举例来说，埃罗妥珠单抗已经与来那度胺和地塞米松联合(参见Lonial S等,《用于复发性或难治性多发性骨髓瘤的埃罗妥珠单抗治疗(Elotuzumab therapy for relapsed or refractorymultiple myeloma)》,N Engl J Med 2015；373:621-631)。在一个实施方案中，埃罗妥珠单抗是在与来那度胺、地塞米松、以及本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，埃罗妥珠单抗是在与来那度胺、地塞米松、以及本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，埃罗妥珠单抗是在与来那度胺、地塞米松、以及本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
用于联合治疗的另一种示例性药剂是来那度胺(例如)，它是给予患者以治疗多发性骨髓瘤的免疫调节剂(参见Richardson PG,《来那度胺治疗用于患有复发性或复发性和难治性多发性骨髓瘤的患者的随机化2期研究(A randomized phase2study of lenalidomide therapy for patients with relapsed or relapsed andrefractory multiple myeloma)》,Blood 2006,108:3458-3464)。来那度胺可以作为用于口服施用的胶囊、丸剂或片剂包装。在一个实施方案中，来那度胺是在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，来那度胺是在与本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，来那度胺是在与本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
来那度胺也可以在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物和另外的药剂的联合治疗中被施用。来那度胺已经与治疗多发性骨髓瘤的各种另外的药剂联合。举例来说，来那度胺已经与硼替佐米和地塞米松联合(参见Richardson PG等,《来那度胺、硼替佐米、以及地塞米松联合治疗在被新诊断为患有多发性骨髓瘤的患者中(Lenalidomide,bortezomib,and dexamethasone combination therapy in patients with newly diagnosedmultiple myeloma)》,Blood 2010；116:679-686)。在一个实施方案中，来那度胺是在与硼替佐米、地塞米松、以及本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，来那度胺是在与硼替佐米、地塞米松、以及本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，来那度胺是在与硼替佐米、地塞米松、以及本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
来那度胺也已经与卡非佐米和地塞米松联合(参见Stewart KA等)。在一个实施方案中，来那度胺是在与卡非佐米、地塞米松、以及本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，来那度胺是在与卡非佐米、地塞米松、以及本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，来那度胺是在与卡非佐米、地塞米松、以及本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
来那度胺也已经与达雷木单抗和硼替佐米联合(参见Phipps C等)。在一个实施方案中，来那度胺是在与达雷木单抗、硼替佐米、以及本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，来那度胺是在与达雷木单抗、硼替佐米、以及本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，来那度胺是在与达雷木单抗、硼替佐米、以及本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
来那度胺也已经与埃罗妥珠单抗和地塞米松联合(参见Lonial S等,《用于复发性或难治性多发性骨髓瘤的埃罗妥珠单抗治疗(Elotuzumab therapy for relapsed orrefractory multiple myeloma)》,N Engl J Med 2015；373:621-631)。在一个实施方案中，来那度胺是在与埃罗妥珠单抗、地塞米松、以及本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，来那度胺是在与埃罗妥珠单抗、地塞米松、以及本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，来那度胺是在与埃罗妥珠单抗、地塞米松、以及本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
用于联合治疗的另一种示例性药剂是硼替佐米(例如)，它是给予患者以治疗多发性骨髓瘤和套细胞淋巴瘤的蛋白酶体抑制剂(参见Richardson PG等,《在复发性、难治性骨髓瘤中硼替佐米的2期研究(A phase 2study of bortezomib inrelapsed,refractory myeloma)》,N Engl J Med 2003；348:2609-2617)。硼替佐米可以经由静脉内注射向患者施用。在一个实施方案中，硼替佐米是在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，硼替佐米是在与本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，硼替佐米是在与本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
硼替佐米也可以在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物和另外的药剂的联合治疗中被施用。硼替佐米已经与各种另外的药剂联合治疗多发性骨髓瘤。举例来说，硼替佐米已经与沙利度胺(thalidomide)和地塞米松联合(参见Kapoor P等,《多发性骨髓瘤的硼替佐米联合治疗(Bortezomib combination therapy in multiple myeloma)》,SeminHematol 2012；3:228-242)。在一个实施方案中，硼替佐米是在与沙利度胺、地塞米松、以及本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，硼替佐米是在与沙利度胺、地塞米松、以及本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，硼替佐米是在与沙利度胺、地塞米松、以及本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
硼替佐米也已经与地塞米松、沙利度胺、顺铂(cisplatin)、多柔比星(doxorubicin)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、以及依托泊苷联合(参见Kapoor P等)。在一个实施方案中，硼替佐米是在与地塞米松、沙利度胺、顺铂、多柔比星、环磷酰胺、依托泊苷、以及本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，硼替佐米是在与地塞米松、沙利度胺、顺铂、多柔比星、环磷酰胺、依托泊苷、以及本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，硼替佐米是在与地塞米松、沙利度胺、顺铂、多柔比星、环磷酰胺、依托泊苷、以及本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE8-负载的联合治疗中被施用的。
硼替佐米也已经与达雷木单抗和来那度胺联合(参见Phipps C等)。在一个实施方案中，硼替佐米是在与达雷木单抗、来那度胺、以及本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，硼替佐米是在与达雷木单抗、来那度胺、以及本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，硼替佐米是在与达雷木单抗、来那度胺、以及本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
硼替佐米也已经与来那度胺和地塞米松联合(参见Richardson PG等,2010)。在一个实施方案中，硼替佐米是在与来那度胺、地塞米松、以及本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，硼替佐米是在与来那度胺、地塞米松、以及本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，硼替佐米是在与来那度胺、地塞米松、以及本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
硼替佐米也已经与帕比司他和地塞米松联合(参见Richardson P等,《PANORAMA2：帕比司他与硼替佐米和地塞米松的组合在患有复发性和硼替佐米难治性骨髓瘤的患者中(PANORAMA 2:panobinostat in combination with bortezomib and dexamethasonein patients with relapsed and bortezomib-refractory myeloma)》,Blood 2013；122:2331-2337)。在一个实施方案中，硼替佐米是在与帕比司他、地塞米松、以及本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，硼替佐米是在与帕比司他、地塞米松、以及本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，硼替佐米是在与帕比司他、地塞米松、以及本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
用于联合治疗的另一种示例性药剂是地塞米松(例如)，它是用于治疗癌症(包括多发性骨髓瘤、白血病、以及淋巴瘤)、炎症、过敏、以及恶心的糖皮质类固醇。地塞米松可以作为用于口服施用的片剂、丸剂、或胶囊、或通过静脉内输注来施用。在一个实施方案中，地塞米松是在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，地塞米松是在与本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，地塞米松是在与本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。地塞米松也可以在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物和另外的药剂的联合治疗中被施用。
用于联合治疗的另一种示例性药剂是环磷酰胺(例如)，它是用于治疗癌症(包括多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤、乳腺癌、以及肺癌等)的烷基化剂。环磷酰胺可以通过注射、输注、作为用于口服施用的片剂、丸剂、或胶囊、或通过注射到肌肉中、腹内层中、或肺内层中来施用。在一个实施方案中，环磷酰胺是在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，环磷酰胺是在与本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，环磷酰胺是在与本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。环磷酰胺也可以在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物和另外的药剂的联合治疗中被施用。
用于联合治疗的另一种示例性药剂是美法仑(melphalan)，它是用于治疗癌症(包括多发性骨髓瘤和卵巢癌)的烷基化剂。美法仑可以口服、通过注射或输注来施用。在一个实施方案中，美法仑是在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，美法仑是在与本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，美法仑是在与本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
美法仑也可以在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物和另外的药剂的联合治疗中被施用。
用于联合治疗的另一种示例性药剂是泊马度胺(例如)，它是用于治疗多发性骨髓瘤的免疫调节剂。泊马度胺可以作为用于口服施用的胶囊、丸剂、或片剂施用。在一个实施方案中，泊马度胺是在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，泊马度胺是在与本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，泊马度胺是在与本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
泊马度胺也可以在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物和另外的药剂的联合治疗中被施用。泊马度胺已经与各种另外的药剂联合治疗多发性骨髓瘤。泊马度胺已经与地塞米松联合(参见Richardson P等,《单独的泊马度胺或泊马度胺与低剂量地塞米松的组合在复发性和难治性多发性骨髓瘤中：随机化2期研究(Pomalidomide alone or incombination with low-dose dexamethasone in relapsed and refractory multiplemyeloma:a randomized phase 2study)》,Blood 2014；123:1826-1832)。在一个实施方案中，泊马度胺是在与地塞米松和本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，泊马度胺是在与地塞米松和本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，泊马度胺是在与地塞米松和本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
泊马度胺也已经与卡非佐米和地塞米松联合(参见Shah J等,《卡非佐米、泊马度胺、以及地塞米松(CPD)在患有复发性和/或难治性多发性骨髓瘤的患者中(Carfilzomib,pomalidomide,and dexamethasone(CPD)in patients with relapsed and/orrefractory multiple myeloma)》,Blood 2015；126:2284-2290)。在一个实施方案中，泊马度胺是在与卡非佐米、地塞米松、以及本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，泊马度胺是在与卡非佐米、地塞米松、以及本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，泊马度胺是在与卡非佐米、地塞米松、以及本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
用于联合治疗的另一种示例性药剂是帕比司他(例如)，它是用于治疗癌症(包括多发性骨髓瘤)的组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂(参见Wolf JL等,《在患有晚期难治性多发性骨髓瘤的成人患者中口服帕比司他(LBH589)的II期研究(A phase IIstudy of oral panobinostat(LBH589)in adult patients with advanced refractorymultiple myeloma)》,ASH年会摘要(ASH Annual Meeting Abstracts),2008)。帕比司他可以作为用于口服施用的丸剂、胶囊或片剂施用。在一个实施方案中，帕比司他是在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，帕比司他是在与本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，帕比司他是在与本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
帕比司他也可以在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物和另外的药剂的联合治疗中被施用。帕比司他已经与各种另外的药剂联合治疗多发性骨髓瘤。举例来说，帕比司他已经与卡非佐米联合(参见Berdeja JG等)。在一个实施方案中，帕比司他是在与卡非佐米和本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，帕比司他是在与卡非佐米和本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，帕比司他是在与卡非佐米和本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE8-负载的联合治疗中被施用的。
帕比司他也已经与硼替佐米和地塞米松联合(参见Richardson P等,2013)。在一个实施方案中，帕比司他是在与硼替佐米、地塞米松、以及本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，帕比司他是在与硼替佐米、地塞米松、以及本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，帕比司他是在与硼替佐米、地塞米松、以及本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
用于联合治疗的另一种示例性药剂是伊沙佐米(ixazomib)，它是用于治疗癌症(包括多发性骨髓瘤)的蛋白酶体抑制剂。伊沙佐米可以口服施用。在一个实施方案中，伊沙佐米是在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，伊沙佐米是在与本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，伊沙佐米是在与本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
伊沙佐米也可以在与本发明的CD48定向抗体-药物缀合物和另外的药剂的联合治疗中被施用。伊沙佐米已经与各种另外的药剂联合治疗多发性骨髓瘤。举例来说，伊沙佐米已经与来那度胺和地塞米松联合(参见Moreau P等,《作为研究口服蛋白酶体抑制剂的伊沙佐米与来那度胺和地塞米松组合显著延长患有复发性和/或难治性多发性骨髓瘤的患者的无进展存活期：3期tourmaline-MM1研究(Ixazomib,an investigational oral proteasomeinhibitor,in combination with lenalidomide and dexamethasone,significantlyextends progression-free survival for patients with relapsed and/orrefractory multiple myeloma:the phase 3tourmaline-MM1study)》,ASH年会摘要(ASHAnnual Meeting Abstracts),2015)。在一个实施方案中，伊沙佐米是在与来那度胺、地塞米松、以及本发明的CD48定向抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，伊沙佐米是在与来那度胺、地塞米松、以及本发明的hMEM102抗体-药物缀合物的联合治疗中被施用的。在另一个实施方案中，伊沙佐米是在与来那度胺、地塞米松、以及本发明的hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE 8-负载的联合治疗中被施用的。
除非另外明确指明，否则本发明的任何特征、步骤、要素、实施方案、或方面可以与任何其它组合使用。尽管已经为了清楚和了解起见经由说明和实施例相当详细地描述了本发明，但是将显而易见的是，某些变化方案和改动方案可以在所附权利要求书的范围内实施。
实施例
提供以下实施例以说明而非限制要求保护的发明。
实施例1：抗体选择和人源化
鼠类MEM102抗体结合人类CD48蛋白质并且首先公开于Bazil等,Folia Biologica35:289-297(1989)中。对编码鼠类MEM102抗体的核酸进行测序并且鉴定出所编码的重链和轻链CDR序列，即SEQ ID NO:3-8。使用hIgG VH7-4-1/hIgG-JH5重链可变区人类生殖系和hIgG-VK6-21/hIgG-JK4轻链可变区人类生殖系作为人类接受体序列构建几种人源化MEM102抗体。所述抗体在待被突变回小鼠抗体或小鼠生殖系序列的氨基酸残基的选择方面不同。被命名为HALA(如SEQ ID NO:1所示的重链(vHA)和如SEQ ID NO:2所示的轻链(vLA))的抗体基于以下各项被选为先导人源化MEM102抗体：它与其它变体相比的(i)结合特征；(ii)递送药物的能力；以及(iii)回复突变的数目。人源化MEM102抗体也被称为hMEM102。
被命名为HCLA(具有被命名为vHC的重链可变区和被命名为vLA的轻链可变区的抗体)、HALB(具有被命名为vHA的重链可变区和被命名为vLB的轻链可变区的抗体)、HBLA(具有被命名为vHB的重链可变区和被命名为vLA的轻链可变区的抗体)、HBLB(具有被命名为vHB的重链可变区和被命名为vLB的轻链可变区的抗体)、HCLB(具有被命名为vHC的重链可变区和被命名为vLB的轻链可变区的抗体)的抗体可以用于本发明中以代替HALA抗体。关于vHA、vHB、vHC、vLA、vLB、以及vLC序列，参见图1和图2。MEM102的各种人源化形式的结合亲和力是相似的，无论是针对过表达人类CD48还是过表达食蟹猴CD48的细胞所测试。
实施例2：hMEM102结合特征
方法：为了确定抗CD48抗体的饱和结合，将人类U-266多发性骨髓瘤肿瘤细胞或食蟹猴CD48稳定转染的CHO-DG44克隆细胞用每个抗体负载约2个-4个荧光团的滴定的AlexaFluor-647缀合的抗体(0.8ng/ml-50μg/mL)染色。在冰上孵育1小时之后，用含有2％胎牛血清和0.02％叠氮化钠的磷酸盐缓冲盐水将细胞洗涤两次。在LSRII流式细胞仪上检测荧光并且在GraphPad Prism中使用单位点结合(双曲线)非线性回归来确定Kd值。
结果：表1以及图3和图4显示与cMEM102相比，hMEM102-HALA抗体在U-266细胞中具有相似的结合亲和力，如由低的Kd值所示的那样。hMEM102-HALA和cMEM102对稳定转染的CHO-DG44克隆细胞中的食蟹猴CD48的结合亲和力也是相当的。在这两种细胞系中，hMEM102-HALA和cMEM102这两者所具有的Kd均是mMEM102的Kd的小于1/4。抗CD48抗体对人类CD48所具有的结合亲和力是对食蟹猴CD48所具有的结合亲和力的约6倍。
表1
实施例3：合成MDpr-PEG(12)-glyc-MMAE和与hMEM102缀合
一般信息：所有可商购获得的无水溶剂均是不经进一步纯化而被使用的。PEG试剂是从Quanta BioDesign公司(俄亥俄州的鲍威尔(Powell,OH))获得的。在硅胶60F254铝板(新泽西州吉布斯敦的EMD化学品公司(EMD Chemicals,Gibbstown,NJ))上进行分析型薄层色谱。在Chromatotron装置(加利福尼亚州帕洛阿尔托的哈里斯研究公司(HarrisResearch,Palo Alto,CA))上进行径向色谱。在Biotage Isolera One快速纯化系统(北卡罗来纳州的夏洛特(Charlotte,NC))上进行柱色谱。在配置有Varian ProStar 330PDA检测器的Varian ProStar 210溶剂输送系统上进行分析型HPLC。在C12Phenomenex Synergi2.0mm×150mm，4μm，反相柱上洗脱样品。酸性流动相由均含有0.05％三氟乙酸或0.1％甲酸(标示每一种化合物)的乙腈和水组成。用从注射后1分钟时的5％，到11分钟时的95％，继而等度95％乙腈到15分钟的酸性乙腈的线性梯度来洗脱化合物(流速＝1.0毫升/分钟)。在两种不同的系统上进行LC-MS。LC-MS系统1由以下各项组成：与HP Agilent1100HPLC仪器交接的ZMD Micromass质谱仪，该HP Agilent 1100HPLC仪器配备有C12Phenomenex Synergi 2.0mm×150mm，4μm，反相柱。酸性洗脱剂由乙腈的线性梯度组成，该线性梯度是在10分钟内在0.1％甲酸水溶液中从5％到95％，继而等度95％乙腈，持续5分钟(流速＝0.4毫升/分钟)。LC-MS系统2由以下各项组成：与具有Waters 2996光电二极管阵列检测器的Waters 2695分离模块交接的Waters Xevo G2Tof质谱仪；柱、流动相、梯度、以及流速与LC-MS系统1相同。在与配备有Acquity UPLC BEH C182.1mm×50mm，1.7μm反相柱的Acquity Ultra Performance LC交接的Waters SQ质量检测器上进行UPLC-MS。酸性流动相(0.1％甲酸)由3％乙腈/97％水到100％乙腈的梯度组成(流速＝0.5毫升/分钟)。在配置有Varian ProStar 330PDA检测器的Varian ProStar 210溶剂输送系统上进行制备型HPLC。在C12Phenomenex Synergi 10.0mm×250mm，4μm，反相柱上纯化产物，用含0.1％甲酸的水(溶剂A)和含0.1％甲酸的乙腈(溶剂B)洗脱。纯化方法由以下溶剂A:溶剂B的梯度组成：从0分钟到5分钟，90:10；从5分钟到80分钟，90:10到10:90；继而等度10:90，持续5分钟。流速是4.6毫升/分钟，以254nm监测。方案3和方案4中化合物的制备型HPLC是用于这两种流动相中0.1％的三氟乙酸，而不是0.1％的甲酸来进行的。
方案1.
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-(3-氨基丙酰胺基)-4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-仲丁基)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-羟基-1-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-5,8-二异丙基-4,10-二甲基-3,6,9-三氧代-2,13-二氧杂-4,7,10-三氮杂十四烷基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-甲酸(2)：向容纳已知的(US 2008/0241128 A1中的化合物8a)葡糖苷酸-MMAE中间体2(40mg，26.8μmol)的烧瓶中添加0.9mL甲醇和0.9mL四氢呋喃。然后将溶液在冰浴中冷却并且逐滴添加一水合氢氧化锂(6.8mg，161μmol)于0.9mL水中的溶液。然后将反应物在冰上搅拌1.5小时，此时，LC/MS揭示完全转化成产物。然后添加冰乙酸(9.2μL，161μmol)并且将反应物浓缩到干燥。制备型HPLC得到呈油状残余物形式的完全脱保护的葡糖苷酸-MMAE接头中间体3(26mg，87％)。分析型HPLC(0.1％甲酸)：tR：9.3分钟。LC-MS系统1：tR：11.10分钟，m/z(ES+)实测值：1130.48(M+H)+，m/z(ES-)实测值：1128.63(M-H)-。
方案2.
(S)-44-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-38-氧代-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-十二氧杂-39-氮杂四十五烷-45-酸(4)：向容纳Nα-Fmoc-赖氨酸3(59mg，161μmol)的烧瓶中添加2.9mL无水二氯甲烷，继而添加甲氧基-PEG12-OSu(100mg，146μmol)。然后添加DIPEA(127μL，730μmol)并且在氮气下在室温下搅拌反应物，继而进行TLC和LC/MS。在2小时之后，LC/MS揭示转化成产物。将反应溶液在二氯甲烷中稀释并且通过硅胶色谱纯化。用含有递增量的甲醇(0％到20％)的二氯甲烷洗脱固定相，得到所期望的产物4(153mg，112％)。UPLC-MS：tR：1.77分钟，m/z(ES+)实测值：939.58(M+H)+。
(S)-44-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-38-氧代-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-十二氧杂-39-氮杂四十五烷-45-酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(5)：向烧瓶中加入Nα-Fmoc-赖氨酸(PEG12)-OH 4(153mg，163μmol)和1.6mL无水四氢呋喃。添加N-羟基丁二酰亚胺(28mg，245μmol)，继而添加二异丙基碳二亚胺(38μL，245μmol)。将反应物在氮气下密封并且搅拌过夜。将粗反应物在二氯甲烷中稀释并且在硅胶上纯化，用含递增量的甲醇(0％到10％)的二氯甲烷洗脱，得到所期望的活化酯5(155mg)。所述材料不经进一步表征而被继续使用。UPLC-MS：tR：1.92分钟，m/z(ES+)实测值：1036.48(M+H)+。
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((S)-44-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-38,45-二氧代-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-十二氧杂-39,46-二氮杂四十九酰胺基)-4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-仲丁基)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-羟基-1-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-5,8-二异丙基-4,10-二甲基-3,6,9-三氧代-2,13-二氧杂-4,7,10-三氮杂十四烷基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-甲酸(6)：将脱保护的葡糖苷酸-MMAE接头中间体2(92mg，81μmol)溶解在无水二甲基甲酰胺(1.6mL)中并且添加到容纳Nα-Fmoc-赖氨酸(PEG12)-OSu 5(101mg，97μmol)的烧瓶中。然后添加二异丙基乙胺(70μL，405μmol)，然后在氮气下在室温下搅拌反应物。在4.5小时之后，LC-MS揭示转化成产物。通过制备型HPLC纯化产物，得到呈油状残余物形式的Fmoc-Lys(PEG12)-葡糖苷酸-MMAE中间体6(111mg，62％(经过两个步骤))。UPLC-MS：tR：2.01分钟，m/z(ES+)实测值：2050.92(M+H)+。
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((S)-44-氨基-38,45-二氧代-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-十二氧杂-39,46-二氮杂四十九酰胺基)-4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-仲丁基)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-羟基-1-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-5,8-二异丙基-4,10-二甲基-3,6,9-三氧代-2,13-二氧杂-4,7,10-三氮杂十四烷基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-甲酸(7)：将Fmoc-Lys(PEG12)-葡糖苷酸-MMAE中间体6(111mg，54μmol)溶解在2.2mL无水二甲基甲酰胺中，继而添加0.5mL哌啶。在氮气下将反应物搅拌3小时，然后浓缩到干燥。通过制备型HPLC纯化产物，得到呈油状残余物形式的H-Lys(PEG12)-葡糖苷酸-MMAE中间体7(85mg，86％)。UPLC-MS：tR：1.50分钟，m/z(ES+)实测值：1829.31(M+H)+。
(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(9)：将(S)-Nα-顺丁烯二酰亚胺基-Nβ-Boc-二氨基丙酸8(NatureBiotechnology,2014,32,1059-1062)(400mg，1.4mmol)溶解在7mL无水二甲基甲酰胺中。添加N-羟基丁二酰亚胺(178mg，1.5mmol)，继而添加1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亚胺(298mg，1.5mmol)。将反应物在室温下在氮气下搅拌3小时。经由稀释到120mL水中实现水性后处理；然后用60mL乙酸乙酯将水层萃取三次。然后将合并的有机层用盐水洗涤，经过硫酸钠干燥，并且浓缩到干燥。通过快速柱色谱纯化产物，用己烷:乙酸乙酯的混合物(50:50到0:100)洗脱，得到(S)-Nα-顺丁烯二酰亚胺基-Nβ-Boc-二氨基丙酸NHS酯[MDpr(Boc)-OSu]9(297mg，55％)。LC-MS系统1：tR：12.23分钟，m/z(ES+)实测值：282.0599(M+H-Boc基团)+。LC-MS系统2：tR：11.30分钟，m/z(ES+)实测值：2580.2515(M+H)+。
方案3.
(2R/S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((S)-44-((S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)-38,45-二氧代-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-十二氧杂-39,46-二氮杂四十九酰胺基)-4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-仲丁基)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-羟基-1-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-5,8-二异丙基-4,10-二甲基-3,6,9-三氧代-2,13-二氧杂-4,7,10-三氮杂十四烷基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-甲酸(10)：将MDpr(Boc)-OSu 9(20mg，53μmol)溶解在2.2mL无水二甲基甲酰胺中并且添加到容纳H-Lys(PEG12)-葡糖苷酸-MMAE接头中间体7(86mg，44μmol)的烧瓶中。然后添加二异丙基乙胺(15μL，88μmol)，然后将反应物在氮气下在室温下搅拌2.5小时。用15μL冰乙酸淬灭反应并且通过制备型HPLC纯化，得到呈非对映体的混合物形式的MDpr(Boc)-Lys(PEG12)-葡糖苷酸-MMAE中间体10(37mg，40％)。所述非对映体是可通过手性色谱分离的。UPLC-MS：tR：1.84分钟，m/z(ES+)实测值：2095.44(M+H)+。
(2R/S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((S)-44-((R)-3-氨基-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)-38,45-二氧代-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-十二氧杂-39,46-二氮杂四十九酰胺基)-4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-仲丁基)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-羟基-1-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-5,8-二异丙基-4,10-二甲基-3,6,9-三氧代-2,13-二氧杂-4,7,10-三氮杂十四烷基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-甲酸(11)：将容纳MDpr(Boc)-Lys(PEG12)-葡糖苷酸-MMAE中间体10(34mg，16μmol)的烧瓶在冰浴中在氮气下冷却到0℃。逐滴添加10％三氟乙酸于二氯甲烷中的溶液(0.8mL)。然后将反应物在0℃搅拌2小时，此时LC-MS揭示完全Boc脱保护。然后将反应物浓缩成粗残余物并且通过制备型HPLC纯化，得到MDpr-Lys(PEG12)-葡糖苷酸-MMAE接头11(22mg，68％)。UPLC-MS：tR：1.50分钟，m/z(ES+)实测值：1995.18(M+H)+。
使用本领域已知的方法(参见例如美国专利号7,659,241)，以每个抗体8个药物的平均药物负载将化合物11经由它的链间硫醇与抗CD48抗体缀合。
实施例4：hMEM-102 ADC对多发性骨髓瘤癌细胞系的细胞毒性。
方法：将人类多发性骨髓瘤细胞系EJM(DSMZ；IMDM+20％FBS)、L363(DSMZ；RPMI1640+15％FBS)、MM.1R(ATCC；RPMI 1640+10％FBS)、NCI-H929(ATCC；RPMI 1640+10％FBS)、U-266(ATCC；RPMI 1640+15％FBS)、以及LP-1(DSMZ；IMDM+20％FBS)在37℃、5％CO2下培养。将抗CD48阿里他汀抗体药物缀合物在培养基中连续稀释3倍以产生10点剂量曲线(1,000ng/mL-0.05081ng/mL)并且施加到在96孔测定板中培养的多发性骨髓瘤细胞中(在200μL培养基中每孔10,000个至15,000个细胞)。在37℃、5％CO2下将细胞与ADC一起孵育总共96小时。使用Cell Titer Glo发光细胞毒性测定(普洛麦格公司(Promega))测定细胞活力，并且使用EnVision板读数器(珀金埃尔默公司(PerkinElmer))收集数据。以一式四份的数据点进行所有的细胞毒性测定并且报告来自2次-3次独立实验的平均IC50值。
使用胱天蛋白酶-Glo 3/7测定(普洛麦格公司)，使用与上文所述相同的测定条件来测量细胞凋亡性细胞死亡。
结果：结果示于表2中。使hMEM102抗体与vcMMAE(4-负载)、mcMMAF(4-负载)、以及MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(8负载，也被称为hMEM102-5088(8))缀合。对对照抗体非CD48结合抗体进行类似的缀合。相较于与vcMMAE(4)和mcMMAF(4)缀合的相同抗体，hMEM102-5088(8)表现出提高的细胞毒性活性。作为阴性对照，不表达CD48的细胞系LP-1也被包括在内。
表2
评估两种细胞系的细胞凋亡性细胞死亡，即NCI-H929和U-266。结果示于图5和图6中。在这两种细胞系中，在暴露于药物七十小时之后，hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(8)缀合物诱导细胞凋亡性细胞死亡。在经过与MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(8)缀合的对照抗体处理的细胞中没有看到细胞凋亡性死亡。在图中，药物接头被称为5088并且每个抗体缀合8个药物接头。在图5和图6中，hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(8)缀合物由实心正方形表示，而对照抗体-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(8)缀合物由空心正方形表示。
实施例5：体内多发性骨髓瘤异种移植研究
将每只动物250万个NCI-H929细胞静脉内植入雌性NSG(NOD scidγ；NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ)小鼠以产生多发性骨髓瘤的播散模型。在肿瘤细胞植入后5天，向每个处理组n＝8只小鼠给予hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(5088)ADC或非结合对照hIgG-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(5088)ADC或hMEM102-阿里他汀T(4830)或非结合对照hIgG-阿里他汀T(4830)的单次腹膜内注射。所研究的ADC剂量水平是0.33mg/kg和1.0mg/kg。在显示后肢麻痹、颅肿胀、和/或濒死的症状时，将带有晚期肿瘤负荷的小鼠处死。如图7中所示，这两种ADC在所有剂量水平下在8只/8只小鼠中均产生持久的完全响应(单次剂量)，而接受非结合对照ADC给药的小鼠到研究的第60天全部由于疾病而被处死。
将每只动物100万个NCI-H929多发性骨髓瘤细胞皮下植入雌性NSG(NOD scidγ；NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ)小鼠。当平均肿瘤体积达到100mm3时，向每个处理组n＝7只小鼠给予hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(5088)ADC或非结合对照hIgG-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(5088)ADC、或hMEM102-阿里他汀T(4830)或非结合对照hIgG-阿里他汀T(4830)、或hMEM102-vcMMAE(1006)ADC或非结合对照hIgG-vcMMAE(1006)的单次腹膜内注射。所研究的ADC剂量水平是0.33mg/kg和1.0mg/kg。当皮下NCI-H929肿瘤体积达到1,000mm3时，将单个小鼠处死。如图8中所示，hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(5088)ADC在1.0mg/kg剂量水平下在所有小鼠中产生持久的完全响应。在0.33mg/kg的更低的剂量水平下，hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(5088)产生肿瘤延缓。vcMMAE和阿里他汀T ADC仅在最高剂量下诱导肿瘤延缓。
将每只动物100万个MM.1R细胞静脉内植入雌性NSG(NODscidγ；NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ)小鼠以产生多发性骨髓瘤的播散模型。在肿瘤细胞植入后5天，向每个处理组n＝7只小鼠给予hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(5088)ADC或非结合对照hIgG-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(5088)ADC或hMEM102-阿里他汀T(4830)或非结合对照hIgG-阿里他汀T(4830)的单次腹膜内注射。所研究的ADC剂量水平是1.0mg/kg和3.0mg/kg。在显示后肢麻痹、颅肿胀、和/或濒死的症状时，将带有晚期肿瘤负荷的小鼠处死。如图9中所示，这两种ADC在所测试的所有剂量水平下在小鼠中均产生持久的完全响应(单次剂量)，而接受非结合对照ADC给药的小鼠到研究的第60天全部由于疾病而被处死。
将每只动物500万个MM.1R多发性骨髓瘤细胞皮下植入雌性NSG(NOD scidγ；NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ)小鼠。当平均肿瘤体积达到100mm3时，向每个处理组n＝7只小鼠给予hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(5088)ADC或非结合对照hIgG-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(5088)ADC、或hMEM102-阿里他汀T(4830)或非结合对照hIgG-阿里他汀T(4830)、或hMEM102-vcMMAE(1006)ADC或非结合对照hIgG-vcMMAE(1006)的单次腹膜内注射。所研究的ADC剂量水平是0.33mg/kg和1.0mg/kg。当皮下MM.1R肿瘤体积达到1,000mm3时，将单个小鼠处死。如图10中所示，hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(5088)ADC产生最强效的抗肿瘤响应和最长的肿瘤延缓。
将每只动物500万个EJM细胞静脉内植入雌性NSG(NOD scidγ；NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ)小鼠以产生多发性骨髓瘤的播散模型。在肿瘤细胞植入后5天，向每个处理组n＝8只小鼠给予hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(5088)ADC或非结合对照hIgG-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(5088)ADC或hMEM102-阿里他汀T(4830)或非结合对照hIgG-阿里他汀T(4830)的单次腹膜内注射。所研究的ADC剂量水平是0.33mg/kg和1.0mg/kg。在显示后肢麻痹、颅肿胀、和/或濒死的症状时，将带有晚期肿瘤负荷的小鼠处死。如图11中所示，hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(5088)ADC产生最强效的抗肿瘤响应，在0.33mg/kg下6只/8只产生完全响应并且在1.0mg/kg下7只/8只产生完全响应。接受非结合对照ADC给药的小鼠到研究的第60天全部由于疾病而被处死。
实施例6：效应功能
方法：对于WIL2-S靶细胞，使用纯化的自然杀伤(NK)细胞与抗体包被的CD48阳性靶细胞的组合，经由铬-51释放来测量抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。将WIL2-S肿瘤细胞用铬-51标记并且与抗体(0.1ng/mL-10μg/mL)一起预孵育30分钟。然后将靶细胞与NK效应细胞组合(效应细胞/靶细胞比：10:1)并且在37℃、5％CO2下再孵育4小时。然后在PerkinElmer TopCount板读数器上定量上清液中的铬-51。ADCC活性是作为相对于经过1％TritonX-100处理的对照靶细胞的最大裂解百分比来测量的。使用上文所述的相同的NK细胞效应比和抗CD48抗体或ADC滴定范围测定正常人类静息T细胞(All Cells公司)的ADCC；然而，使用PKH2绿色荧光细胞接头试剂盒(西格玛公司(Sigma))标记细胞膜(而非铬-51)。使用7-AAD染料通过使用LSRII流式细胞仪(Becton Dickinson公司)进行流式细胞术来测量T细胞活力。
通过将正常人类T细胞或WIL2-S肿瘤细胞与连续稀释的抗体(0.02μg/mL-50μg/mL)一起在含有10％热灭活的人类AB血清和5μM Sytox绿色荧光染料的RPMI 1640培养基中孵育来测量补体依赖性细胞毒性。然后将细胞在37℃、5％CO2下孵育2小时。在Envision板读数器上测量来自裂解细胞的荧光。靶细胞的最大特异性裂解是作为相对于经过1％Triton X-100处理的对照细胞的百分比而被计算的。
使用作为效应细胞的单核白细胞衍生的巨噬细胞和PKH26红色荧光染料标记的正常人类T细胞(All Cells公司)、WIL2-S、或Raji肿瘤细胞来测量抗体依赖性细胞吞噬作用。将靶细胞与连续稀释的抗体(0.2ng/mL-2μg/mL)一起预孵育30分钟，然后用磷酸盐缓冲盐水洗涤两次。将巨噬细胞于含有10％低IgG胎牛血清的RPMI 1640培养基中添加到靶细胞中(以4:1的比率)并且在37℃、5％CO2下孵育2小时。然后将巨噬细胞用Alexa-488缀合的小鼠抗人类CD11b抗体标记。肿瘤细胞阳性巨噬细胞在FACSCalibur流式细胞仪上被检测为显示绿色和红色双重荧光的事件。最大特异性吞噬活性被表示为减去非结合同种型对照背景活性后肿瘤阳性巨噬细胞的百分比。
结果：评估未缀合的hMEM102抗体和hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(5088)ADC的ADCC活性并且与(阿仑单抗(Alemtuzumab)，抗CD52抗体)和利妥昔单抗(rituximab)(抗CD20抗体)的ADCC活性相比较。如表3中所示，人源化MEM102-HALA抗体对正常静息T细胞和WIL2-S肿瘤细胞系具有中等的ADCC活性。在缀合5088时，ADCC活性显著降低，使得在T细胞中的ADCC活性是裸抗体的10/27。
表3：ADCC
CDC活性结果示于表4中。未缀合的hMEM102抗体和hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(5088)ADC都没有对正常静息T细胞和WIL2-S肿瘤细胞表现出CDC活性。阿仑单抗和利妥昔单抗这两者均对靶细胞表现出显著的CDC活性。
表4：CDC
ADCP结果示于表5中。未缀合的hMEM102抗体和hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(5088)ADC这两者均对正常静息T细胞或WIL2-S和Raji肿瘤细胞系表现出中等的ADCP活性，这与在Campath和利妥昔单抗的情况下所观测到的水平相一致。
表5：ADCP
应当了解的是，本文所述的实施例和实施方案仅是用于说明目的并且鉴于其的各种改动方案或变化方案将由本领域技术人员想到并且被包括在本申请的精神和范围以及所附权利要求书的范围内。本文引用的所有出版物、专利、以及专利申请在此以引用的方式整体并入本文用于所有目的。
非正式序列表
SEQ ID NO:1，hMEM102HA-重链可变区
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTFTGEPSYGNVFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARRHGNGNVFDSWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:2，hMEM102LA-轻链可变区
EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSIGSNIHWYQQKPDQSPKLLIKYTSESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQSNSWPLTFGGGTKVEIKR
SEQ ID NO:3，重链CDR1
DFGMN
SEQ ID NO:4，重链CDR2
WINTFTGEPSYGNVFKG
SEQ ID NO:5，重链CDR3
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SEQ ID NO:6，轻链CDR1
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SEQ ID NO:8，轻链CDR3
QQSNSWPLT
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SEQ ID NO:10，hMEM102LA轻链
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SEQ ID NO:11，天然存在的重链恒定区
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO:12，轻链恒定区
TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
序列表
<110> 西雅图基因公司(SEATTLE GENETICS, INC.)
<120> CD48抗体和其缀合物
<130> 4000-00111PC
<150> US 62/134,981
<151> 2015-03-18
<160> 12
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> hMEM102 HA-重链可变区
<400> 1
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe
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Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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<223> hMEM102 LA-轻链可变区
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Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Thr Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 3
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 重链CDR1
<400> 3
Asp Phe Gly Met Asn
1 5
<210> 4
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 重链CDR2
<400> 4
Trp Ile Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Ser Tyr Gly Asn Val Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 5
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 重链CDR3
<400> 5
Arg His Gly Asn Gly Asn Val Phe Asp Ser
1 5 10
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 轻链CDR1
<400> 6
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Asn Ile His
1 5 10
<210> 7
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 轻链CDR2
<400> 7
Tyr Thr Ser Glu Ser Ile Ser
1 5
<210> 8
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 轻链CDR3
<400> 8
Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu Thr
1 5
<210> 9
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> hMEM102 HA重链G1
<400> 9
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Phe Thr Gly Glu Pro Ser Tyr Gly Asn Val Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Gly Asn Gly Asn Val Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 10
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> hMEM102 LA轻链
<400> 10
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Thr Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 11
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 天然存在的重链恒定区
<400> 11
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 12
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 轻链恒定区
<400> 12
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
1 5 10 15
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
20 25 30
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
35 40 45
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
65 70 75 80
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
85 90 95
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105

Claims (51)

1.一种特异性结合人类CD48蛋白的嵌合或人源化抗体，其中所述抗体包含SEQ ID NO:3-5的重链CDR序列和SEQ ID NO:6-8的轻链CDR序列，并且其中与特异性结合所述人类CD48蛋白并且包含SEQ ID NO:3-5的重链CDR序列和SEQ ID NO:6-8的轻链CDR序列的鼠类抗体相比，所述抗体对所述人类CD48蛋白表现出更高的结合亲和力。
2.如权利要求1所述的抗体，其中所述嵌合或人源化抗体对所述人类CD48蛋白所表现出的结合亲和力是所述鼠类抗体的结合亲和力的至少2倍。
3.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是人源化抗体。
4.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含SEQ ID NO:1的重链可变区。
5.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含SEQ ID NO:2的轻链可变区。
6.如权利要求4所述的抗体，其中所述抗体包含SEQ ID NO:1的重链可变区。
7.如权利要求1至6中任一项所述的抗体，其中所述抗体与和接头连接的细胞毒性药物缀合。
8.如权利要求7所述的抗体，其中所述药物-接头具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中Z表示具有能够与所述抗体上的官能团反应以与其形成共价连接的反应性位点的有机部分，n在8至36的范围内，RPR是氢或保护基，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元。
9.一种特异性结合人类CD48蛋白的人源化抗体，其中所述抗体包含SEQ ID NO:1的重链可变区和SEQ ID NO:2的轻链可变区。
10.如权利要求9中任一项所述的抗体，其中所述抗体与和接头连接的细胞毒性药物缀合。
11.如权利要求10所述的抗体，其中所述药物-接头具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中Z表示具有能够与所述抗体上的官能团反应以与其形成共价连接的反应性位点的有机部分，n在8至36的范围内，RPR是氢或保护基，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元。
12.如权利要求10所述的抗体，其中所述药物-接头具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中Z表示具有能够与所述抗体上的官能团反应以与其形成共价连接的反应性位点的有机部分，n在8至36的范围内，RPR是氢或保护基，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元。
13.如权利要求10所述的抗体，其中药物-接头具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中n在8至36的范围内，RPR是氢或保护基，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元。
14.如权利要求10所述的抗体，其中药物-接头具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中n在8至36的范围内，RPR是氢或保护基，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元。
15.如权利要求1或9所述的抗体，其中n在8至14的范围内。
16.如权利要求1或9所述的抗体，其中n在10至12的范围内。
17.如权利要求1或9所述的抗体，其中n是12。
18.如权利要求15至17中任一项所述的抗体，其中R21是-CH3或-CH2CH2CO2H。
19.一种抗CD48抗体-药物缀合物化合物，所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中Ab是如权利要求1或9所述的抗CD48抗体，Z表示经由共价键使所述抗体和所述药物-接头的其余部分连接的有机部分，n在8至36的范围内，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元，并且p是1至16。
20.如权利要求19所述的抗CD48抗体-药物缀合物化合物，所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐。
21.如权利要求19所述的抗CD48抗体-药物缀合物化合物，所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中RPR是氢或保护基。
22.如权利要求19所述的抗CD48抗体-药物缀合物化合物，所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐。
23.如权利要求19所述的抗CD48抗体-药物缀合物化合物，所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐。
24.如权利要求19所述的抗CD48抗体-药物缀合物化合物，所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中RPR是氢或保护基。
25.如权利要求19至24中任一项所述的抗CD48抗体-药物缀合物化合物，其中n在8至14的范围内。
26.如权利要求19至24中任一项所述的抗CD48抗体-药物缀合物化合物，其中n在10至12的范围内。
27.如权利要求19至24中任一项所述的抗CD48抗体-药物缀合物化合物，其中n是12。
28.如权利要求19至27中任一项所述的抗CD48抗体-药物缀合物化合物，其中R21是-CH3或-CH2CH2CO2H。
29.如权利要求19至28中任一项所述的抗体-药物缀合物化合物，其中p是8。
30.如权利要求19至29中任一项所述的抗体-药物缀合物化合物，其中与Ab的连接是经由所述抗体的链间二硫键的半胱氨酸残基进行的。
31.一种抗体-药物缀合物组合物，所述组合物包含如权利要求19至30中任一项所述的抗CD48抗体-药物缀合物分子的群体，其中所述组合物的平均药物负载是8并且所述组合物中的主要药物负载是8。
32.如权利要求31所述的组合物，所述组合物是药物组合物。
33.一种治疗患有表达CD48的癌症的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用如权利要求31所述的组合物的步骤。
34.如权利要求33所述的方法，其中所述表达CD48的癌症是多发性骨髓瘤。
35.如权利要求33所述的方法，其中所述表达CD48的癌症选自由B细胞恶性肿瘤和急性骨髓性白血病组成的组。
36.一种分离的核酸，所述核酸包含序列，所述序列编码特异性结合人类CD48蛋白的抗体的包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:3-5的CDR的重链可变区和包含具有氨基酸序列SEQID NO:6-8的CDR的轻链可变区。
37.一种分离的载体，所述载体包含如权利要求36所述的核酸。
38.一种分离的宿主细胞，所述宿主细胞包含如权利要求37所述的载体。
39.如权利要求38所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是哺乳动物宿主细胞。
40.如权利要求39所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞选自由以下各项组成的组：CHO、COS、HeLA、HEK293、L、Sp2/0、以及NS0。
41.一种制备抗CD48抗体的方法，其中所述方法包括：
在适用于表达编码所述抗体的核酸的条件下培养如权利要求38所述的宿主细胞；以及
分离所述抗体。
42.一种制备抗CD48抗体药物缀合物的方法，其中所述方法包括：
在适用于表达编码所述抗体的核酸的条件下培养如权利要求38所述的宿主细胞；
分离所述抗体；以及
使与接头连接的细胞毒性药物与所述抗体缀合。
43.如权利要求42所述的方法，其中所述药物-接头具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中Z表示具有能够与所述抗体上的官能团反应以与其形成共价连接的反应性位点的有机部分，n在8至36的范围内，RPR是氢或保护基，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元。
44.一种分离的核酸，所述核酸包含序列，所述序列编码包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的轻链可变区。
45.一种分离的载体，所述载体包含如权利要求44所述的核酸。
46.一种分离的宿主细胞，所述宿主细胞包含如权利要求45所述的载体。
47.如权利要求46所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是哺乳动物宿主细胞。
48.如权利要求47所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞选自由以下各项组成的组：CHO、COS、HeLA、HEK293、L、Sp2/0、以及NS0。
49.一种制备抗CD48抗体的方法，其中所述方法包括：
在适用于表达编码所述抗体的核酸的条件下培养如权利要求46所述的宿主细胞；以及
分离所述抗体。
50.一种制备抗CD48抗体药物缀合物的方法，其中所述方法包括：
在适用于表达编码所述抗体的核酸的条件下培养如权利要求46所述的宿主细胞；
分离所述抗体；以及
使与接头连接的细胞毒性药物与所述抗体缀合。
51.如权利要求50所述的方法，其中所述药物-接头具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中Z表示具有能够与所述抗体上的官能团反应以与其形成共价连接的反应性位点的有机部分，n在8至36的范围内，RPR是氢或保护基，R21是所述聚乙二醇部分的封端单元。
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