TWI710633B - Ｂ型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｉＲＮＡ組成物及其用途方法 - Google Patents

Ｂ型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｉＲＮＡ組成物及其用途方法 Download PDF

Info

Publication number
TWI710633B
TWI710633B TW104136995A TW104136995A TWI710633B TW I710633 B TWI710633 B TW I710633B TW 104136995 A TW104136995 A TW 104136995A TW 104136995 A TW104136995 A TW 104136995A TW I710633 B TWI710633 B TW I710633B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
nucleotides
hbv
double
seq
rnai agent
Prior art date
Application number
TW104136995A
Other languages
English (en)
Other versions
TW201631156A (zh
Inventor
喬治 亥克爾
羅瑞尼諾 拉拉 史佩
瓦聖特 基哈夫
馬丁 馬爾
史特爾 米史坦
莫司 馬諾哈拉
卡拉司塔司爾Ｇ 拉傑
Original Assignee
美商阿尼拉製藥公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=54542627&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=TWI710633(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 美商阿尼拉製藥公司 filed Critical 美商阿尼拉製藥公司
Publication of TW201631156A publication Critical patent/TW201631156A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI710633B publication Critical patent/TWI710633B/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1131—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/02—Local antiseptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/322—2'-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/335—Modified T or U
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3521—Methyl
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/353—Nature of the modification linked to the nucleic acid via an atom other than carbon
    • C12N2310/3533—Halogen

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本發明係有關靶向B型肝炎病毒(HBV)基因組之RNAi劑，例如：雙股RNAi劑，及使用此等RNAi劑抑制一或多種HBV基因表現之方法及治療患有HBV感染及/或HBV-相關病症(例如：慢性B型肝炎感染)之個體之方法。

Description

B型肝炎病毒(HBV)iRNA組成物及其用途方法 相關申請案
本申請案主張2014年11月10日申請之美國臨時申請案62/077,799及2015年3月24日申請之美國臨時專利申請案62/137,464之優先權。上述各專利申請案之完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。
本申請案主張2014年11月10日申請之美國臨時申請案62/077,672之優先權，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。
本申請案係有關2015年11月10日申請之國際專利申請案PCT/US2015/XXXXX，名稱為“D型肝炎病毒(HDV)iRNA組成物及其用途方法”，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。
序列表
本申請案包含之序列表已呈ASCII格式電子檔交付，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。該於2015年11月5日製作之ASCII複本名稱為121301-02320_SL.txt，檔案大小為385,791位元組。
全世界已有超過4億人口慢性感染HBV，因此提高發展出嚴重肝病之風險，如：慢性肝炎、硬化、肝衰竭、及肝細胞癌(HCC)，估計每年造成600,000人死亡。
慢性HBV感染之自然演化包括連續四期：(1)早期“免疫耐受”期，高度病毒複製及最低度肝發炎；(2)免疫反應期，顯著肝發炎及血清胺基轉化升高；有些患者會進展到(3)“非複製”期，血清轉化成抗-HBe；無法檢測或低度病毒血症(以基於PCR之分析法測定低於2000IU/ml)；肝發炎緩解；及(4)HBeAg-陰性慢性B型肝炎，因為已出現特異病毒突變，其防止HBeAg產生，但未阻擋病毒複製。此型態之慢性B型肝炎(CHB)之特徵在於波動之血清HBV DNA及血清胺基轉化酶(ALT及AST)含量，及漸進惡化之肝病。其重點在於應注意CHB可能呈HBeAg-陽性或HBeAg-陰性CHB。縱向研究CHB患者顯示，5年累計發展出硬化之發生率為8至20%之範圍。5年累計肝代償不全之發生率為約20%。全世界HCC發生率已升高且已成為第五大常見癌症。每年HBV-相關之HCC發生率高，當確診硬化時，其發生率為2-5%之範圍。
治療HBV之主要目標為永久抑制HBV複製及改善肝疾病。臨床上重要之短期目標為達到HBeAg-血清轉化、恢復正常血清ALT與AST、緩解肝發炎及預防肝代償不全。最終治療目標為達到持久反應，防止發展出硬化、肝癌及延長存活。HBV感染無法完全根除，因為已感染之 肝細胞之細胞核中持續存在特定型式之病毒共價閉合環狀DNA(ccc HBV DNA)。然而，治療誘發清除血清HBsAg即成為終止慢性HBV感染之標記，且已與最佳長期結果相關。
目前治療HBV之標準方法包括基於干擾素或胸腺素a1-之免疫療法，並藉由抑制HBV聚合酶來壓制病毒產生。HBV聚合酶抑制劑可有效減少病毒複製，但幾乎無法有效快速減少HBsAg，或在有限數量患者中(如：採用泰諾福韋(tenofovir disoproxil fumarate)之病例)可以在長期治療下慢慢減少HBsAg。基於干擾素之免疫療法可達到同時減少病毒產生及提早排除血中HBsAg，但接受治療之患者僅有少數百分比能達成此結果。一般認為HBsAg在血中之角色為螯合抗-HBsAg抗體，並讓有感染力之病毒粒子逃過免疫偵測，此點可能成為HBV感染成為慢性病症之原因之一。除了HBsAg外，HBeAg與HBcAg均具有免疫抑制性質，在接受目前任何可採用之HBV療法投藥後，此等持續存在患者血中之病毒蛋白質似乎已顯著衝擊患者，阻礙其達成免疫控制其HBV感染。
雖然三種主要HBV蛋白質(HBsAg、HBeAg與HBcAg)均具有免疫抑制性質，但感染HBV之個體之循環中，HBsAg成為主要優勢之HBV蛋白質。此外，雖然排除(經由血清轉化)HBeAg或減少血清病毒血症與發展出治療後持續控制HBV感染沒有相關性，但在HBV感染中排除血中血清HBsAg(及血清轉化)已成為咸認可對治療之抗 病毒反應之預後指標，可用於控制治療後之HBV感染(儘管此點僅會發生在接受免疫療法之少數患者中)。因此，雖然減少所有三種主要HBV蛋白質(HBsAg、HBeAg與HBcAg)可能造成最佳之排除抑制效果，但單獨排除HBsAg時，其本身可能即足以使罹患HBV感染之個體排除大量病毒對免疫功能之抑制。
因此，在目前仍然沒有任何療法可以為大部分患者恢復免疫控制HBV下，需要一種對抗HBV感染之有效治療法，其應可為大多數患者抑制病毒複製並恢復免疫控制。因此，本領域上需要一種針對感染HBV及/或患有HBV相關疾病之個體之替代療法與組合療法。
本發明提供一種iRNA組成物，其引發RNA-誘導緘默複合體(RISC)介導裂解B型肝炎病毒(HBV)基因之RNA轉錄本。HBV基因可在細胞內，例如：在如：人類個體之細胞內。
本發明亦提供一種治療罹患可能因抑制或降低HBV基因表現而受益之病症(例如：HBV感染及/或HBV相關疾病，如：慢性B型肝炎感染(CHB)、硬化、肝衰竭、及肝細胞癌(HCC))之個體之方法與療法，其係使用可引發RNA-誘導緘默複合體(RISC)介導裂解HBV基因之RNA轉錄本之iRNA組成物，來抑制HBV基因表現。
本發明亦提供一種治療罹患可能因抑制或降低HBV基因表現而受益之病症(例如：HBV感染及/或 HBV相關疾病，如：慢性B型肝炎感染(CHB)、硬化、肝衰竭、及肝細胞癌(HCC))之個體之方法與療法，其係使用可引發RNA-誘導緘默複合體(RISC)介導裂解HBV基因之RNA轉錄本之iRNA組成物，來抑制HBV基因表現。本發明之RNAi劑已設計為靶向保留在所有8種HBV血清型中之HBV基因組之區域。此外，本發明之RNAi劑已設計為藉由抑制超過一種HBV基因之表現來抑制HBV生命週期之所有步驟，例如：病毒之複製、組合、與分泌，及次病毒抗原之分泌。特定言之，由於HBV基因組之轉錄產生多順反子之重疊RNA，因此靶向單一HBV基因之本發明RNAi劑可以顯著抑制大多數或所有HBV轉錄本之表現。例如：由於HBV基因組轉錄至單一mRNA中，因此靶向S基因之本發明RNAi劑將會不僅抑制S基因表現，而且亦抑制“下游”逆轉錄酶基因之表現。此外，本發明之RNAi劑已設計在於藉由靶向HBV結構基因而抑制HBV病毒複製，HBV X基因即可讓個體之免疫系統偵測到HBsAg之存在，並因映產生抗-HBV抗體來清除HBV感染，在不希望受到理論限制下，咸信上述性質與此等RNAi劑中特定標靶位置及/或特定修飾之組合或次組合均賦與改良之效力、穩定性、安全性、藥效及持久性。
因此，本發明一態樣中提供一種雙股RNAi劑，用於抑制B型肝炎病毒(HBV)於細胞中之表現。雙股RNAi劑包括形成雙股區之正義股與反義股，其中該正義股包含至少15個連續核苷酸，其與SEQ ID NO：1核苷酸序 列之差異不超過3個核苷酸，且該反義股包含至少15個連續核苷酸，其與SEQ ID NO：2核苷酸序列之差異不超過3個核苷酸，其中該正義股實質上所有核苷酸及該反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價之分支鏈結體附接之GalNAc衍生物。
一具體例中，反義股核苷酸序列中3個核苷酸差異中之一個或多個為在反義股中錯配之核苷酸。
另一具體例中，反義股核苷酸序列中3個核苷酸差異中之一個或多個為在正義股中錯配之核苷酸。
一具體例中，正義股之所有核苷酸及反義股之所有核苷酸為經修飾之核苷酸。
一具體例中，正義股及反義股包含互補區，其包含至少15個連續核苷酸，其與表3、4、6、7、12、13、22、23、25、及26中任一個表所列之任一序列之差異不超過3個核苷酸。
一具體例中，該至少一個該經修飾之核苷酸係選自下列核苷酸所組成群者：去氧-核苷酸、3’-末端去氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2’-O-甲基修飾之核苷酸、2’-氟修飾之核苷酸、2’-去氧-修飾之核苷酸、鎖核苷酸、非鎖核苷酸、構型限制性核苷酸、限制性乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、2’-胺基-修飾之核苷酸、2’-O-烯丙基-修飾之核苷酸、2’-C-烷基-修飾之核苷酸、2’-羥基-修飾之核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、2’-O-烷基-修飾之核苷酸、 N-嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、四氫哌喃修飾之核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾之核苷酸、環己烯基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基之核苷酸、包含甲基膦酸酯基之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、及包含5’-磷酸酯擬似物之核苷酸。
一具體例中，該至少一股包含至少1個核苷酸之3’突出段。另一具體例中，該至少一股包含至少2個核苷酸之3’突出段。
一具體例中，雙股區為15-30對核苷酸之長度。另一具體例中，雙股區為17-23對核苷酸之長度。再另一具體例中，雙股區為17-25對核苷酸之長度。一具體例中，雙股區為23-27對核苷酸之長度。另一具體例中，雙股區為19-21對核苷酸之長度。再另一具體例中，雙股區為21-23對核苷酸之長度。
一具體例中，各股具有15-30個核苷酸。另一具體例中，各股具有19-30個核苷酸。
一具體例中，該配體為
Figure 104136995-A0202-12-0007-1448
一具體例中，該RNAi劑係接合如下示之配 體
Figure 104136995-A0202-12-0008-1449
 其中X為O或S。
一具體例中，該RNAi劑係選自表3、4、6、7、12、13、22、23、25、及26中任一個表所列RNAi劑群組中。
一態樣中，本發明提供一種用於抑制細胞中B型肝炎病毒(HBV)表現之雙股RNAi劑。該雙股RNAi劑包括形成雙股區之正義股與反義股，其中該正義股包含5’-UCGUGGUGGACUUCUCUCA-3’(SEQ ID NO：5)，且該反義股包含5’-UGAGAGAAGUCCACCACGAUU-3’(SEQ ID NO：6)，其中該正義股實質上所有核苷酸及該反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價之分支鏈結體附接之GalNAc衍生物。本發明亦提供一種包含正義與反義核苷酸序列之RNAi劑，其與上述正義與反義核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性。
另一態樣中，本發明提供一種用於抑制細 胞中B型肝炎病毒(HBV)表現之雙股RNAi劑。該雙股RNAi劑包括形成雙股區之正義股與反義股，其中該正義股包含5’-GUGCACUUCGCUUCACCUCUA-3’(SEQ ID NO：7)，且該反義股包含5’-UAGAGGUGAAGCGAAGUGCACUU-3’(SEQ ID NO：8)，其中該正義股實質上所有核苷酸及該反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價之分支鏈結體附接之GalNAc衍生物。本發明亦提供一種包含正義與反義核苷酸序列之RNAi劑，其與上述正義與反義核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性。
另一態樣中，本發明提供一種用於抑制細胞中B型肝炎病毒(HBV)表現之雙股RNAi劑。該雙股RNAi劑包括形成雙股區之正義股與反義股，其中該正義股包含5’-CGUGGUGGACUUCUCUCAAUU-3’(SEQ ID NO：9)，且該反義股包含5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCAG-3’(SEQ ID NO：10)，其中該正義股實質上所有核苷酸及該反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價之分支鏈結體附接之GalNAc衍生物。本發明亦提供一種包含正義與反義核苷酸序列之RNAi劑，其與上述正義與反義核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性。
另一態樣中，本發明提供一種用於抑制細胞中B型肝炎病毒(HBV)表現之雙股RNAi劑。該雙股RNAi劑包括形成雙股區之正義股與反義股，其中正義股包含5’-CGUGGUGGUCUUCUCUAAAUU-3’(SEQ ID NO：37)，及反義股包含5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCUU-3’(SEQ ID NO：38)，其中正義股實質上所有核苷酸及反義股實質上所有核苷酸均為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價之分支鏈結體附接之GalNAc衍生物。本發明亦提供一種包含正義與反義核苷酸序列之RNAi劑，其與上述正義與反義核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性。
另一態樣中，本發明提供一種用於抑制細胞中B型肝炎病毒(HBV)表現之雙股RNAi劑。該雙股RNAi劑包括形成雙股區之正義股與反義股，其中該正義股包含5’-GGUGGACUUCUCUCAAUUUUA-3’(SEQ ID NO：11)，且該反義股包含5’-UAAAAUUGAGAGAAGUCCACCAC-3’(SEQ ID NO：12)，其中該正義股實質上所有核苷酸及該反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價之分支鏈結體附接之GalNAc衍生物。本發明亦提供一種包含正義與反義核苷酸序列之RNAi劑，其與上述正義與反義核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同 一性。
另一態樣中，本發明提供一種用於抑制細胞中B型肝炎病毒(HBV)表現之雙股RNAi劑。該雙股RNAi劑包括形成雙股區之正義股及反義股，其中該正義股包含5’-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3’(SEQ ID NO：39)，且該反義股包含5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：40)，其中該正義股實質上所有核苷酸及該反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價之分支鏈結體附接之GalNAc衍生物。本發明亦提供一種包含正義與反義核苷酸序列之RNAi劑，其與上述正義與反義核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性。
一具體例中，該正義股之所有核苷酸及該反義股之所有核苷酸包含一種修飾。
一具體例中，至少一個該經修飾之核苷酸係選自下列核苷酸所組成群者：3’-末端去氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸、2'-氟修飾之核苷酸、2'-去氧-修飾之核苷酸、鎖核苷酸、非鎖核苷酸、構型限制性核苷酸、限制性乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、2’-胺基-修飾之核苷酸、2’-O-烯丙基-修飾之核苷酸、2’-C-烷基-修飾之核苷酸、2’-羥基-修飾之核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、2’-O-烷基-修飾之核苷酸、N-嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、四氫哌喃修飾之核 苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾之核苷酸、環己烯基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基之核苷酸、包含甲基膦酸酯基之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、及包含5’-磷酸酯擬似物之核苷酸。
一具體例中，該5’-磷酸酯擬似物為5’-乙烯基磷酸酯(5’-VP)。
一具體例中，正義股包含5’-uscsguGfgUfGfGfacuucucuca-3’(SEQ ID NO：13)及反義股包含5’-usGfsagaGfaAfGfuccaCfcAfcgasusu-3’(SEQ ID NO：14)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2’-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
另一具體例中，正義股包含5’-uscsguGfgUfGfGfacuucucuca-3’(SEQ ID NO：15)及反義股包含5’-PusGfsagaGfaAfGfuccaCfcAfcgasusu-3’(SEQ ID NO：16)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
一具體例中，正義股包含5’-gsusgcacUfuCfGfCfuucaccucua-3’(SEQ ID NO：17)及反義股包含5’-usAfsgagGfugaagcgAfaGfugcacsusu-3’(SEQ ID NO：18)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、 g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
另一具體例中，正義股包含5’-gsusgcacUfuCfGfCfuucaccucua-3’(SEQ ID NO：19)及反義股包含5’-PusAfsgagGfugaagcgAfaGfugcacsusu-3’(SEQ ID NO：20)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
一具體例中，正義股包含5’-csgsugguGfgAfCfUfucucUfCfaauu-3’(SEQ ID NO：21)及反義股包含5’-asAfsuugAfgAfgAfaguCfcAfccagcsasg-3’(SEQ ID NO：22)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
另一具體例中，正義股包含5’-csgsugguGfgAfCfUfucucUfCfaauu-3’(SEQ ID NO：23)及反義股包含5’-PasAfsuugAfgAfgAfaguCfcAfccagcsasg-3’(SEQ ID NO：24)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
另一具體例中，正義股包含5’-csgsuggudGgucdTucucuaaauu-3’(SEQ ID NO：35)及反義股包含5’-asdAsuugagagdAagudCcaccagcsusu-3’(SEQ ID NO：36)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；dA、dC、dG、dT為去氧核糖A、C、G、及T；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
一具體例中，正義股包含5’-gsgsuggaCfuUfCfUfcucaAfUfuuua-3’(SEQ ID NO：25)及反義股包含5’-usAfsaaaUfuGfAfgagaAfgUfccaccsasc-3’(SEQ ID NO：26)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
另一具體例中，正義股包含5’-gsgsuggaCfuUfCfUfcucaAfUfuuua-3’(SEQ ID NO：27)及反義股包含5’-PusAfsaaaUfuGfAfgagaAfgUfccaccsasc-3’(SEQ ID NO：28)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
另一具體例中，正義股包含5’-gsusguGfcAfCfUfucgcuucaca-3’(SEQ ID NO：41)及反義股包含5’-usGfsugaAfgCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO： 42)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf或Uf為2'-氟A、G、C、或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
一具體例中，該配體為
Figure 104136995-A0202-12-0015-1450
一具體例中，該RNAi劑係接合如下示之配體
Figure 104136995-A0202-12-0015-1451
 其中X為O或S。
一具體例中，P為5’-磷酸酯擬似物。一具體例中，5’-磷酸酯擬似物為5’-乙烯基磷酸酯(5’-VP)。
另一態樣中，本發明提供一種組成物，其包含兩種或更多種用於抑制細胞中B型肝炎病毒(HBV)表 現之雙股RNAi劑，其中各雙股RNAi劑分別獨立包含形成雙股區之正義股與反義股，其中各該正義股分別獨立包含至少15個連續核苷酸，其與SEQ ID NO：1核苷酸序列之差異不超過3個核苷酸，及各該反義股分別獨立包含至少15個連續核苷酸，其與SEQ ID NO：2核苷酸序列之差異不超過3個核苷酸，其中各該正義股實質上所有核苷酸及各該反義股實質上所有核苷酸分別獨立為經修飾之核苷酸，其中各該正義股分別獨立接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價之分支鏈結體附接之GalNAc衍生物。
一具體例中，反義股核苷酸序列中3個核苷酸差異中之一個或多個為在反義股中錯配之核苷酸。另一具體例中，反義股核苷酸序列中3個核苷酸差異中之一個或多個為在正義股中錯配之核苷酸。
一具體例中，該正義股之所有核苷酸及該反義股之所有核苷酸為經修飾之核苷酸。
一具體例中，正義股及該反義股包含互補區，其包含至少15個連續核苷酸，其與表3、4、6、7、12、13、22、23、25、及26中任一個表所列之任一序列之差異不超過3個核苷酸。
一具體例中，至少一個該經修飾之核苷酸係選自下列核苷酸所組成群者：去氧-核苷酸、3’-末端去氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸、2'-氟修飾之核苷酸、2'-去氧-修飾之核苷酸、鎖核苷酸、非鎖核苷 酸、構型限制性核苷酸、限制性乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、2’-胺基-修飾之核苷酸、2’-O-烯丙基-修飾之核苷酸、2’-C-烷基-修飾之核苷酸、2’-羥基-修飾之核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、2’-O-烷基-修飾之核苷酸、N-嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、四氫哌喃修飾之核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾之核苷酸、環己烯基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基之核苷酸、包含甲基膦酸酯基之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、及包含5’-磷酸酯擬似物之核苷酸。
另一態樣中，本發明提供一種用於抑制細胞中B型肝炎病毒(HBV)表現之組成物，該組成物包含(a)第一雙股RNAi劑，其包含形成雙股區之第一正義股及第一反義股，其中該第一正義股實質上所有核苷酸及該第一反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該第一正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價之分支鏈結體附接之GalNAc衍生物；及(b)第二雙股RNAi劑，其包含形成雙股區之第二正義股及第二反義股，其中該第二正義股實質上所有核苷酸及該第二反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該第二正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物；其中該第一與第二正義股分別獨立包含選自下列序列所組成群中之序列：5’-UCGUGGUGGACUUCUCUCA-3’(SEQ ID NO：5)， 5’-GUGCACUUCGCUUCACCUCUA-3’(SEQ ID NO：7)，5’-CGUGGUGGACUUCUCUCAAUU-3’(SEQ ID NO：9)，5’-CGUGGUGGUCUUCUCUAAAUU-3’(SEQ ID NO：37)，5’-GGUGGACUUCUCUCAAUUUUA-3’(SEQ ID NO：11)，及5’-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3’(SEQ ID NO：39)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，且其中該第一與第二反義股分別獨立包含選自下列序列所組成群中之序列：5’-UGAGAGAAGUCCACCACGAUU-3’(SEQ ID NO：6)，5’-UAGAGGUGAAGCGAAGUGCACUU-3’(SEQ ID NO：8)，5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCAG-3’(SEQ ID NO：10)，5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCUU-3’(SEQ ID NO：38)，5’-UAAAAUUGAGAGAAGUCCACCAC-3’(SEQ ID NO：12)，及5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：40)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)。
一具體例中，該第一與第二正義股及/或該第一與第二反義股之所有核苷酸包含一種修飾。
一具體例中，至少一個該經修飾之核苷酸係選自下列核苷酸所組成群者：去氧-核苷酸、3’-末端去氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸、2'-氟修 飾之核苷酸、2'-去氧-修飾之核苷酸、鎖核苷酸、非鎖核苷酸、構型限制性核苷酸、限制性乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、2’-胺基-修飾之核苷酸、2’-O-烯丙基-修飾之核苷酸、2’-C-烷基-修飾之核苷酸、2’-羥基-修飾之核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、2’-O-烷基-修飾之核苷酸、N-N-嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、四氫哌喃修飾之核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾之核苷酸、環己烯基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基之核苷酸、包含甲基膦酸酯基之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、及包含5’-磷酸酯擬似物之核苷酸。
一具體例中，該第一與第二RNAi劑係選自下列各序列所組成群者：5’-uscsguGfgUfGfGfacuucucuca-3’(SEQ ID NO：13)5’-usGfsagaGfaAfGfuccaCfcAfcgasusu-3’(SEQ ID NO：14)；5’-uscsguGfgUfGfGfacuucucuca-3’(SEQ ID NO：15)5’-PusGfsagaGfaAfGfuccaCfcAfcgasusu-3’(SEQ ID NO：16)；5’-gsusgcacUfuCfGfCfuucaccucua-3’(SEQ ID NO：17)5’-usAfsgagGfugaagcgAfaGfugcacsusu-3’(SEQ ID NO：18)；5’-gsusgcacUfuCfGfCfuucaccucua-3’(SEQ ID NO：19)5’-PusAfsgagGfugaagcgAfaGfugcacsusu-3’(SEQ ID NO：20)；5’-csgsugguGfgAfCfUfucucUfCfaauu-3’(SEQ ID NO：21)5’-asAfsuugAfgAfgAfaguCfcAfccagcsasg-3’(SEQ ID NO： 22)；5’-csgsugguGfgAfCfUfucucUfCfaauu-3’(SEQ ID NO：23)5’-PasAfsuugAfgAfgAfaguCfcAfccagcsasg-3’(SEQ ID NO：24)；5’-csgsuggudGgucdTucucuaaauu-3’(SEQ ID NO：35)5’-asdAsuugagagdAagudCcaccagcsusu-3’(SEQ ID NO：36)；5’-gsgsuggaCfuUfCfUfcucaAfUfuuua-3’(SEQ ID NO：25)5’-usAfsaaaUfuGfAfgagaAfgUfccaccsasc-3’(SEQ ID NO：26)；5’-gsgsuggaCfuUfCfUfcucaAfUfuuua-3’(SEQ ID NO：27)5’-PusAfsaaaUfuGfAfgagaAfgUfccaccsasc-3’(SEQ ID NO：28)；及5’-gsusguGfcAfCfUfucgcuucaca-3’(SEQ ID NO：41)5’-usGfsugaAfgCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：42)’其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、及u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；dA、dC、dG、與dT係去氧核糖A、C、G、與T；s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
另一具體例中，該第一與第二RNAi劑為5’-uscsguGfgUfGfGfacuucucuca-3’(SEQ ID NO：15)5’-PusGfsagaGfaAfGfuccaCfcAfcgasusu-3’(SEQ ID NO：16)；5’-csgsugguGfgAfCfUfucucUfCfaauu-3’(SEQ ID NO：21) 5’-asAfsuugAfgAfgAfaguCfcAfccagcsasg-3’(SEQ ID NO：22)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
另一具體例中，該第一與第二RNAi劑為5’-gsgsuggaCfuUfCfUfcucaAfUfuuua-3’(SEQ ID NO：25)5’-usAfsaaaUfuGfAfgagaAfgUfccaccsasc-3’(SEQ ID NO：26)；及5’-gsusguGfcAfCfUfucgcuucaca-3’(SEQ ID NO：41)5’-usGfsugaAfgCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：42)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
一態樣中，本發明提供一種雙股RNAi劑，其包含表3、4、6、7、12、13、22、23、25、與26中任一個表所列之RNAi劑。
本發明亦提供一種載體及包含本發明雙股RNAi劑之細胞。
另一態樣中，本發明提供一種醫藥組成物，其包含本發明雙股RNAi劑、或本發明組成物、或本發明載體。
一具體例中，該雙股RNAi劑係呈未緩衝之 溶液投藥。一具體例中，該未緩衝之溶液為生理食鹽水或水。
另一具體例中，該雙股RNAi劑係使用緩衝溶液投藥。一具體例中，該緩衝溶液包含乙酸鹽、檸檬酸鹽、醇溶穀蛋白、碳酸鹽、或磷酸鹽或其任意組合。另一具體例中，該緩衝溶液為磷酸鹽緩衝之生理食鹽水(PBS)。
一態樣中，本發明提供一種抑制細胞中B型肝炎病毒(HBV)基因表現之方法。該方法包括使細胞與本發明雙股RNAi劑、或本發明組成物、或本發明載體、或本發明醫藥組成物接觸；並維持所產生之細胞一段足以答到HBV基因之mRNA轉錄本降解之時間，藉以抑制細胞中HBV基因之表現。
一具體例中，HBV基因係選自由C、X、P、S、與其組合所組成之群中。
一態樣中，本發明提供一種抑制細胞中B型肝炎病毒(HBV)複製之方法。該方法包括使細胞與本發明雙股RNAi劑、或本發明組成物、或本發明載體、或本發明醫藥組成物接觸；並維持所產生之細胞一段足以達到HBV基因之mRNA轉錄本降解之時間，藉以抑制細胞中HBV基因複製。
一具體例中，該細胞係在個體內。一具體例中，該個體為人類。
一具體例中，該個體罹患HBV相關疾病。
一具體例中，HBV基因表現受到抑制至少 約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約95%、約98%或約100%。
一具體例中，細胞中HBV之複製受到抑制至少約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約95%、約98%或約100%。
一態樣中，本發明提供一種使感染HBV之個體減少B型肝炎病毒(HBV)DNA含量之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之本發明雙股RNAi劑、或本發明組成物、或本發明載體、或本發明醫藥組成物，藉以減少個體中HBV ccc DNA含量。
另一態樣中，本發明提供一種使感染HBV之個體減少B型肝炎病毒(HBV)抗原含量之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之本發明雙股RNAi劑、或本發明組成物、或本發明載體、或本發明醫藥組成物，藉以減少個體中HBV抗原含量。
一具體例中，HBV抗原為HBsAg。另一具體例中，HBV抗原為HBeAg。
另一態樣中，本發明提供一種使感染HBV之個體減少B型肝炎病毒(HBV)之病毒量之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之本發明雙股RNAi劑、或本發明組成物、或本發明載體、或本發明醫藥組成物，藉以減少該個體之HBV之病毒量。
再另一態樣中，本發明提供一種使感染HBV之個體減少丙胺酸胺基轉化酶(ALT)含量之方法。該 方法包括對該個體投與醫療有效量之本發明雙股RNAi劑、或本發明組成物、或本發明載體、或本發明醫藥組成物，藉以減少個體之ALT含量。
另一態樣中，本發明提供一種使感染HBV之個體減少天冬胺酸胺基轉化酶(AST)含量之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之本發明雙股RNAi劑、或本發明組成物、或本發明載體、或本發明醫藥組成物，藉以減少個體之AST含量。
另一態樣中，本發明提供一種使感染HBV之個體提高抗-B型肝炎病毒(HBV)抗體含量之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之本發明雙股RNAi劑、或本發明組成物、或本發明載體、或本發明醫藥組成物，藉以提高個體之抗-HBV抗體含量。
一態樣中，本發明提供一種治療罹患B型肝炎病毒(HBV)感染之個體之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之本發明雙股RNAi劑、或本發明組成物、或本發明載體、或本發明醫藥組成物，藉以治療該個體。
另一態樣中，本發明提供一種治療患有B型肝炎病毒(HBV)-相關病症之個體之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之本發明雙股RNAi劑、或本發明組成物、或本發明載體、或本發明醫藥組成物，藉以治療該個體。
一具體例中，該HBV-相關病症係選自下列病症所組成群中：D型肝炎病毒感染、δ型(delta)肝炎、 急性B型肝炎；急性猛爆性B型肝炎；慢性B型肝炎；肝硬化；末期肝病；肝細胞癌。
一具體例中，該HBV-相關病症為慢性肝炎，且該個體為HBeAg陽性。另一具體例中，該HBV-相關病症為慢性肝炎，且該個體為HBeAg陰性。
一態樣中，本發明提供一種治療罹患B型肝炎病毒(HBV)感染之個體之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之雙股RNAi劑，其中該 雙股RNAi劑包含形成雙股區之正義股與反義股，其中該正義股包含5’-UCGUGGUGGACUU CUCUCA-3’(SEQ LD NO：5)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，且該反義股包含5’-UGAGAGAAGUCCACCACGAUU-3’(SEQ ID NO：6)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，其中該正義股實質上所有核苷酸及該反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物，藉以治療該個體。
另一態樣中，本發明提供一種治療患有B型肝炎病毒(HBV)-相關病症之個體之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之雙股RNAi劑，其中該 雙股RNAi劑包含形成雙股區之正義股與反義股，其中該正義股包含 5’-UCGUGGUGGACUUCUCUCA-3’(SEQ ID NO：5)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，且該反義股包含5’-UGAGAGAAGUCCACCACGAUU-3’(SEQ ID NO：6)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，其中該正義股實質上所有核苷酸及該反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物，藉以治療該個體。
一態樣中，本發明提供一種治療罹患B型肝炎病毒(HBV)感染之個體之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之雙股RNAi劑，其中該 雙股RNAi劑包含形成雙股區之正義股與反義股，其中該正義股包含5’-GUGCACUUCGCUUCACCUCUA-3’(SEQ ID NO：7)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，且該反義股包含5’-UAGAGGUGAAGCGAAGUGCACUU-3’(SEQ ID NO：8)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，其中該正義股實質上所有核苷酸及該反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一 或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物，藉以治療該個體。
另一態樣中，本發明提供一種治療患有B型肝炎病毒(HBV)-相關病症之個體之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之雙股RNAi劑，其中該 雙股RNAi劑包含形成雙股區之正義股與反義股，其中該正義股包含5’-GUGCACUUCGCUUCACCUCUA-3’(SEQ ID NO：7)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，且該反義股包含5’-UAGAGGUGAAGCGAAGUGCACUU-3’(SEQ ID NO：8)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，其中該正義股實質上所有核苷酸及該反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物，藉以治療該個體。
一態樣中，本發明提供一種治療罹患B型肝炎病毒(HBV)感染之個體之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之雙股RNAi劑，其中該 雙股RNAi劑包含形成雙股區之正義股與反義股，其中該正義股包含5’-CGUGGUGGACUUCUCUCAAUU-3’(SEQ ID NO：9)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)， 且該反義股包含5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCAG-3’(SEQ ID NO：10)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，其中該正義股實質上所有核苷酸及該反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物，藉以治療該個體。
另一態樣中，本發明提供一種治療患有B型肝炎病毒(HBV)-相關病症之個體之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之雙股RNAi劑，其中該雙股RNAi劑包含形成雙股區之正義股與反義股，其中該正義股包含5’-CGUGGUGGACUUCUCUCAAUU-3’(SEQ ID NO：9)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，且該反義股包含5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCAG-3’(SEQ ID NO：10)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，其中該正義股實質上所有核苷酸及該反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物，藉以治療該個體。
一態樣中，本發明提供一種治療罹患B型 肝炎病毒(HBV)感染之個體之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之雙股RNAi劑，其中該雙股RNAi劑包含形成雙股區之正義股與反義股，其中正義股包含5’-CGUGGUGGUCUUCUCUAAAUU-3’(SEQ ID NO：37)，(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，及反義股包含5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCUU-3’(SEQ ID NO：38)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，其中該正義股實質上所有核苷酸及該反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物，藉以治療該個體。
另一態樣中，本發明提供一種治療患有B型肝炎病毒(HBV)-相關病症之個體之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之雙股RNAi劑，其中該雙股RNAi劑包含形成雙股區之正義股與反義股，其中正義股包含5’-CGUGGUGGUCUUCUCUAAAUU-3’(SEQ ID NO：37)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，及反義股包含5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCUU-3’(SEQ ID NO：38)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或 99%同一性之核苷酸序列)，其中正義股實質上所有核苷酸及反義股實質上所有核苷酸均為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物，藉以治療該個體。
一態樣中，本發明提供一種治療罹患B型肝炎病毒(HBV)感染之個體之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之雙股RNAi劑，其中該雙股RNAi劑包含形成雙股區之正義股與反義股，其中該正義股包含5’-GGUGGACUUCUCUCAAUUUUA-3’(SEQ ID NO：11)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，且該反義股包含5’-UAAAAUUGAGAGAAGUCCACCAC-3’(SEQ ID NO：12)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，其中該正義股實質上所有核苷酸及該反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物，藉以治療該個體。
另一態樣中，本發明提供一種治療患有B型肝炎病毒(HBV)-相關病症之個體之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之雙股RNAi劑，其中該雙股RNAi劑包含形成雙股區之正義股與反義股，其中該正義股包含 5’-GGUGGACUUCUCUCAAUUUUA-3’(SEQ ID NO：11)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，且該反義股包含5’-UAAAAUUGAGAGAAGUCCACCAC-3’(SEQ ID NO：12)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，其中該正義股實質上所有核苷酸及該反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物，藉以治療該個體。
一態樣中，本發明提供一種治療罹患B型肝炎病毒(HBV)感染之個體之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之雙股RNAi劑，其中該雙股RNAi劑包含形成雙股區之正義股與反義股，其中該正義股包含5’-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3’(SEQ ID NO：39)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，且該反義股包含5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：40)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，其中該正義股實質上所有核苷酸及該反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種 利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物，藉以治療該個體。
另一態樣中，本發明提供一種治療患有B型肝炎病毒(HBV)-相關病症之個體之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之雙股RNAi劑，其中該雙股RNAi劑包含形成雙股區之正義股與反義股，其中該正義股包含5’-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3’(SEQ ID NO：39)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，且該反義股包含5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：40)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，其中該正義股實質上所有核苷酸及該反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物，藉以治療該個體。
一具體例中，該正義股之所有核苷酸及該反義股之所有核苷酸包含一種修飾。
一具體例中，至少一個該經修飾之核苷酸係選自下列各核苷酸所組成群中：去氧-核苷酸、3’-末端去氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸、2'-氟修飾之核苷酸、2'-去氧-修飾之核苷酸、鎖核苷酸、非鎖核苷酸、構型限制性核苷酸、限制性乙基核苷酸、無鹼基 核苷酸、2’-胺基-修飾之核苷酸、2’-O-烯丙基-修飾之核苷酸、2’-C-烷基-修飾之核苷酸、2’-羥基-修飾之核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、2’-O-烷基-修飾之核苷酸、N-嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、四氫哌喃修飾之核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾之核苷酸、環己烯基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基之核苷酸、包含甲基膦酸酯基之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、及包含5’-磷酸酯擬似物之核苷酸。
一具體例中，5’-磷酸酯擬似物為5’-乙烯基磷酸酯(5’-VP)。
一具體例中，正義股包含5’-uscsguGfgUfGfGfacuucucuca-3’(SEQ ID NO：13)及反義股包含5’-usGfsagaGfaAfGfuccaCfcAfcgasusu-3’(SEQ ID NO：14)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
另一具體例中，正義股包含5’-uscsguGfgUfGfGfacuucucuca-3’(SEQ ID NO：15)及反義股包含5’-PusGfsagaGfaAfGfuccaCfcAfcgasusu-3’(SEQ ID NO：16)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
一具體例中，正義股包含5’-gsusgcacUfuCfGfCfuucaccucua-3’(SEQ ID NO：17)及反義股包含5’-usAfsgagGfugaagcgAfaGfugcacsusu-3’(SEQ ID NO：18)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
另一具體例中，正義股包含5’-gsusgcacUfuCfGfCfuucaccucua-3’(SEQ ID NO：19)及反義股包含5’-PusAfsgagGfugaagcgAfaGfugcacsusu-3’(SEQ ID NO：20)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
一具體例中，正義股包含5’-csgsugguGfgAfCfUfucucUfCfaauu-3’(SEQ ID NO：21)及反義股包含5’-asAfsuugAfgAfgAfaguCfcAfccagcsasg-3’(SEQ ID NO：22)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
另一具體例中，正義股包含5’-csgsugguGfgAfCfUfucucUfCfaauu-3’(SEQ ID NO：23)及反義股包含5’-PasAfsuugAfgAfgAfaguCfcAfccagcsasg-3’ (SEQ ID NO：24)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
另一具體例中，正義股包含5’-csgsuggudGgucdTucucuaaauu-3’(SEQ ID NO：35)及反義股包含5’-asdAsuugagagdAagudCcaccagcsusu-3’(SEQ ID NO：36)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；dA、dC、dG、與dT為去氧核糖A、C、G、與T；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
一具體例中，正義股包含5’-gsgsuggaCfuUfCfUfcucaAfUfuuua-3’(SEQ ID NO：25)及反義股包含5’-usAfsaaaUfuGfAfgagaAfgUfccaccsasc-3’(SEQ ID NO：26)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
另一具體例中，正義股包含5’-gsgsuggaCfuUfCfUfcucaAfUfuuua-3’(SEQ ID NO：27)及反義股包含5’-PusAfsaaaUfuGfAfgagaAfgUfccaccsasc-3’(SEQ ID NO：28)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C或U；及s為硫代磷 酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
另一具體例中，正義股包含5’-gsusguGfcAfCfUfucgcuucaca-3’(SEQ ID NO：41)及反義股包含5’-usGfsugaAfgCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：42)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
一具體例中，該配體為
Figure 104136995-A0202-12-0036-1452
一具體例中，該RNAi劑係接合如下示之配體
Figure 104136995-A0202-12-0036-1453
 其中X為O或S。
一具體例中，該HBV-相關病症係選自下列病症所組成群者：D型肝炎病毒感染、δ型(delta)肝炎、急性B型肝炎；急性猛爆性B型肝炎；慢性B型肝炎；肝硬化；末期肝病；肝細胞癌。
一具體例中，該HBV-相關病症為慢性肝炎，且該個體為HBeAg陽性。另一具體例中，該HBV-相關病症為慢性肝炎，且該個體為HBeAg陰性。
一態樣中，本發明提供一種治療罹患B型肝炎病毒(HBV)感染之個體之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之用於抑制細胞中B型肝炎病毒(HBV)表現之組成物。該組成物包括：(a)第一雙股RNAi劑，其包含形成雙股區之第一正義股及第一反義股，其中該第一正義股實質上所有核苷酸及該第一反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該第一正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物；及(b)第二雙股RNAi劑，其包含形成雙股區之第二正義股及第二反義股，其中該第二正義股實質上所有核苷酸及該第二反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該第二正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物；其中該第一與第二正義股分別獨立包含選自下列序列所組成群中之序列：5’-UCGUGGUGGACUUCUCUCA-3’(SEQ ID NO：5)， 5’-GUGCACUUCGCUUCACCUCUA-3’(SEQ ID NO：7)，5’-CGUGGUGGACUUCUCUCAAUU-3’(SEQ ID NO：9)，5’-CGUGGUGGUCUUCUCUAAAUU-3’(SEQ ID NO：37)，5’-GGUGGACUUCUCUCAAUUUUA-3’(SEQ ID NO：11)，及5’-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3’(SEQ ID NO：39)(或與任何上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，且其中該第一與第二反義股分別獨立包含選自下列序列所組成群中之序列：5’-UGAGAGAAGUCCACCACGAUU-3’(SEQ ID NO：6)；5’-UAGAGGUGAAGCGAAGUGCACUU-3’(SEQ ID NO：8)；5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCAG-3’(SEQ ID NO：10)；5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCUU-3’(SEQ ID NO：38)，5’-UAAAAUUGAGAGAAGUCCACCAC-3’(SEQ ID NO：12)，及5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：40)(或與任何上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，藉以治療該個體。
另一態樣中，本發明提供一種治療患有B型肝炎病毒(HBV)-相關病症之個體之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之用於抑制細胞中B型肝炎病毒(HBV)表現之組成物。該組成物包括：(a)第一雙股RNAi劑，其包含形成雙股區之第一正義股及第一反義股，其中 該第一正義股實質上所有核苷酸及該第一反義股實質上所有核苷酸均為經修飾之核苷酸，其中該第一正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物；及(b)第二雙股RNAi劑，其包含形成雙股區之第二正義股及第二反義股，其中該第二正義股實質上所有核苷酸及該第二反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該第二正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物；其中該第一與第二正義股分別獨立包含選自下列序列所組成群中之序列：5’-UCGUGGUGGACUUCUCUCA-3’(SEQ ID NO：5)，5’-GUGCACUUCGCUUCACCUCUA-3’(SEQ ID NO：7)，5’-CGUGGUGGACUUCUCUCAAUU-3’(SEQ ID NO：9)，5’-CGUGGUGGUCUUCUCUAAAUU-3’(SEQ ID NO：37)，5’-GGUGGACUUCUCUCAAUUUUA-3’(SEQ ID NO：11)，及5’-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3’(SEQ ID NO：39)(或與任何上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，且其中該第一與第二反義股分別獨立包含選自下列序列所組成群中之序列：5’-UGAGAGAAGUCCACCACGAUU-3’(SEQ ID NO：6)；5’-UAGAGGUGAAGCGAAGUGCACUU-3’(SEQ ID NO：8)；5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCAG-3’(SEQ ID NO：10)； 5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCUU-3’(SEQ ID NO：38)；5’-UAAAAUUGAGAGAAGUCCACCAC-3’(SEQ ID NO：12)；及5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：40)(或與任何上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，藉以治療該個體。
一具體例中，該第一與第二正義股之所有核苷酸及該第一與第二反義股之所有核苷酸包含一種修飾。
一具體例中，至少一個該經修飾之核苷酸係選自下列核苷酸所組成群者：去氧-核苷酸、3’-末端去氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸、2'-氟修飾之核苷酸、2'-去氧-修飾之核苷酸、鎖核苷酸、非鎖核苷酸、構型限制性核苷酸、限制性乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、2’-胺基-修飾之核苷酸、2’-O-烯丙基-修飾之核苷酸、2’-C-烷基-修飾之核苷酸、2’-羥基-修飾之核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、2’-O-烷基-修飾之核苷酸、N-嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、四氫哌喃修飾之核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾之核苷酸、環己烯基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基之核苷酸、包含甲基膦酸酯基之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、及包含5’-磷酸酯擬似物之核苷酸。
一具體例中，該第一與第二RNAi劑係選自 下列序列所組成群者：5’-uscsguGfgUfGfGfacuucucuca-3’(SEQ ID NO：13)5’-usGfsagaGfaAfGfuccaCfcAfcgasusu-3’(SEQ ID NO：14)；5’-uscsguGfgUfGfGfacuucucuca-3’(SEQ ID NO：15)5’-PusGfsagaGfaAfGfuccaCfcAfcgasusu-3’(SEQ ID NO：16)；5’-gsusgcacUfuCfGfCfuucaccucua-3’(SEQ ID NO：17)5’-usAfsgagGfugaagcgAfaGfugcacsusu-3’(SEQ ID NO：18)；5’-gsusgcacUfuCfGfCfuucaccucua-3’(SEQ ID NO：19)5’-PusAfsgagGfugaagcgAfaGfugcacsusu-3’(SEQ ID NO：20)；5’-csgsugguGfgAfCfUfucucUfCfaauu-3’(SEQ ID NO：21)5’-asAfsuugAfgAfgAfaguCfcAfccagcsasg-3’(SEQ ID NO：22)；5’-csgsugguGfgAfCfUfucucUfCfaauu-3’(SEQ ID NO：23)5’-PasAfsuugAfgAfgAfaguCfcAfccagcsasg-3’(SEQ ID NO：24)；5’-csgsuggudGgucdTucucuaaauu-3’(SEQ ID NO：35)5’-asdAsuugagagdAagudCcaccagcsusu-3’(SEQ ID NO：36)；5’-gsgsuggaCfuUfCfUfcucaAfUfuuua-3’(SEQ ID NO：25)5’-usAfsaaaUfuGfAfgagaAfgUfccaccsasc-3’(SEQ ID NO：26)；5’-gsgsuggaCfuUfCfUfcucaAfUfuuua-3’(SEQ ID NO：27)5’-PusAfsaaaUfuGfAfgagaAfgUfccaccsasc-3’(SEQ ID NO： 28)；及5’-gsusguGfcAfCfUfucgcuucaca-3’(SEQ ID NO：41)5’-usGfsugaAfgCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：42)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；dA、dC、dG、及dT為去氧核糖A、C、G、與T；s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
一具體例中，該第一與第二RNAi劑為5’-uscsguGfgUfGfGfacuucucuca-3’(SEQ ID NO：15)5’-PusGfsagaGfaAfGfuccaCfcAfcgasusu-3’(SEQ ID NO：16)；及5’-csgsugguGfgAfCfUfucucUfCfaauu-3’(SEQ ID NO：21)5’-asAfsuugAfgAfgAfaguCfcAfccagcsasg-3’(SEQ ID NO：22)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
另一具體例中，該第一與第二RNAi劑為5’-gsgsuggaCfuUfCfUfcucaAfUfuuua-3’(SEQ ID NO：25)5’-usAfsaaaUfuGfAfgagaAfgUfccaccsasc-3’(SEQ ID NO：26)；及5’-gsusguGfcAfCfUfucgcuucaca-3’(SEQ ID NO：41)5’-usGfsugaAfgCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：42)， 其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
一具體例中，該配體為
Figure 104136995-A0202-12-0043-1454
一具體例中，該RNAi劑係接合如下示之配體
Figure 104136995-A0202-12-0043-1455
 其中X為O或S。
一具體例中，該個體為人類
一具體例中，該HBV-相關病症係選自下列各物所組成群中：D型肝炎病毒感染、δ型(delta)肝炎、急性B型肝炎；急性猛爆性B型肝炎；慢性B型肝炎；肝 硬化；末期肝病；肝細胞癌。
一具體例中，該HBV-相關病症為慢性肝炎，且該個體為HBeAg陽性。另一具體例中，該HBV-相關病症為慢性肝炎，且該個體為HBeAg陰性。
一具體例中，該雙股RNAi劑之投藥劑量為約0.01mg/kg至約10mg/kg或約0.5mg/kg至約50mg/kg。
一具體例中，該雙股RNAi劑之投藥劑量為約10mg/kg至約30mg/kg。另一具體例中，該雙股RNAi劑之投藥劑量為約3mg/kg。一具體例中，該雙股RNAi劑之投藥劑量為約10mg/kg。
一具體例中，該雙股RNAi劑之投藥劑量為約0.5mg/kg，每週2次。
一具體例中，該雙股RNAi劑係投與固定劑量約50mg至200mg。
一具體例中，該雙股RNAi劑係經皮下投藥。另一具體例中，該雙股RNAi劑係經靜脈內投藥。
一具體例中，該RNAi劑係投與2個或更多個劑量。
一具體例中，該RNAi劑係依選自下列所組成群中之投藥間隔投藥：約每12小時一次、約每24小時一次、約每48小時一次、約每72小時一次、及約每96小時一次。
一具體例中，該RNAi劑係每週投藥2次。另一具體例中，該RNAi劑係每隔一週投藥一次。
一具體例中，本發明方法進一步包括對個體投與另一種治療劑。
一具體例中，該另一種治療劑係選自下列各物所組成群中：抗病毒劑、反轉錄酶抑制劑、免疫刺激劑、醫療性疫苗、病毒侵入抑制劑、抑制HbsAg分泌或釋出之寡核苷酸、殼體抑制劑、cccDNA抑制劑，及上述任一者之組合。
另一具體例中，本發明方法進一步包括對個體投與反轉錄酶抑制劑。再另一具體例中，本發明方法進一步包括對個體投與反轉錄酶抑制劑及免疫刺激劑。
一具體例中，反轉錄酶抑制劑係選自下列各物所組成群者：泰諾福韋(tenofovir disoproxil fumarate)(TDF)、替諾福韋艾拉酚(Tenofovir alafenamide)、拉米夫定(Lamivudine)、阿德福韋酯(Adefovir dipivoxil)、恩替卡韋(Entecavir)(ETV)、喜必福(Telbivudine)、及AGX-1009。
有些具體例中，本發明方法進一步包括治療個體之D型肝炎病毒(HDV)。該治療方法可包括本領域中已知之任何治療方法。某些具體例中，使用本文說明之一種或多種靶向HBV之iRNA劑治療個體之HDV。
有些具體例中，本發明方法進一步包括調控，例如：降低PD-L1表現之方法。例如：PCT公告案案號WO2011/127180中提供降低PD-L1表現之組成物及方法，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。
一具體例中，免疫刺激劑係選自下列各物 所組成群者：聚乙二醇基化干擾素α 2a(PEG-IFN-α 2a)、干擾素α-2b、重組體人類介白素-7、與Toll-樣受體7(TLR7)促效劑。
另一態樣中，本發明提供一種治療患有B型肝炎病毒(HBV)相關病症之個體之方法，其包括對該個體投與醫療有效量之雙股RNAi劑，其中該雙股RNAi劑包含形成雙股區之正義股與反義股，其中正義股包含至少15個連續核苷酸，其與SEQ ID NO：29核苷酸序列之差異不超過3個核苷酸，且該反義股包含至少15個連續核苷酸，其與SEQ ID NO：30核苷酸序列之差異不超過3個核苷酸，其中正義股實質上所有核苷酸及反義股實質上所有核苷酸均為經修飾之核苷酸，其中正義股係接合附接在3’-末端之配體，及其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物，藉以治療該個體。
另一態樣中，本發明亦提供一種治療患有B型肝炎病毒(HBV)感染之個體之方法，其包括對該個體投與醫療有效量之用於抑制細胞中B型肝炎病毒(HBV)表現之組成物，該組成物包含：(a)第一雙股RNAi劑，其包含形成雙股區之第一正義股與第一反義股，其中第一正義股實質上所有核苷酸及該第一反義股實 質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該第一正義股係接合附接在3’-末端之配體，及其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物；及(b)第二雙股RNAi劑，其包含形成雙股區之第二正義股及第二反義股，其中第二正義股實質上所有核苷酸及第二反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中第二正義股係接合附接在3’-末端之配體，及其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物；其中第一正義股包含至少15個連續核苷酸，其與SEQ ID NO：1核苷酸序列之差異不超過3個核苷酸，及該第一反義股包含至少15個連續核苷酸，其與SEQ ID NO：2核苷酸序列之差異不超過3個核苷酸，其中該第二正義股包含至少15個連續核苷酸，其與SEQ ID NO：29核苷酸序列之差異不超過3個核苷酸，及第二反義股包含至少15個連續核苷酸，其與SEQ ID NO：30核苷酸序列之差異不超過3個核苷酸，藉以治療該個體。
有些具體例中，第一正義股包含選自下列序列所組成群中之序列：5’-UCGUGGUGGACUUCUCUCA-3’(SEQ ID NO：5)，5’-GUGCACUUCGCUUCACCUCUA-3’(SEQ ID NO：7)，5’-CGUGGUGGACUUCUCUCAAUU-3’(SEQ ID NO：9)， 5’-CGUGGUGGUCUUCUCUAAAUU-3’(SEQ ID NO：37)，5’-GGUGGACUUCUCUCAAUUUUA-3’(SEQ ID NO：11)，與5’-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3’(SEQ ID NO：39)，(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，且第二反義股包含選自下列序列所組成群中之序列：5’-UGAGAGAAGUCCACCACGAUU-3’(SEQ ID NO：6)；5’-UAGAGGUGAAGCGAAGUGCACUU-3’(SEQ ID NO：8)；5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCAG-3’(SEQ ID NO：10)；5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCUU-3’(SEQ ID NO：38)；5’-UAAAAUUGAGAGAAGUCCACCAC-3’(SEQ ID NO：12)；及5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：40)(或與上述核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)。
有些態樣中，正義股之所有核苷酸及反義股之所有核苷酸包含一種修飾。
某些具體例中，至少一個經修飾之核苷酸係選自下列核苷酸所組成群者：去氧-核苷酸、3’-末端去氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸、2'-氟修飾之核苷酸、2'-去氧-修飾之核苷酸、鎖核苷酸、非鎖核苷酸、構型限制性核苷酸、限制性乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、2’-胺基-修飾之核苷酸、2’-O-烯丙基-修飾之核苷酸、2’-C-烷基-修飾之核苷酸、2’-羥基-修飾之核苷酸、2’-甲氧 基乙基修飾之核苷酸、2’-O-烷基-修飾之核苷酸、N-嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、四氫哌喃修飾之核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾之核苷酸、環己烯基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基之核苷酸、包含甲基膦酸酯基之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、及包含5’-磷酸酯擬似物之核苷酸。
有些具體例中，該配體為
Figure 104136995-A0202-12-0049-1456
一項明確之具體例中，該RNAi劑係接合如下示之配體
Figure 104136995-A0202-12-0049-1457
 其中X為O或S。
某些具體例中，本文提供之雙股RNAi劑與組成物係用於治療HDV感染及/或HDV-相關病症。
因此本發明提供一種抑制細胞中D型肝炎病毒(HDV)複製之方法。該方法包括(a)使細胞與本文所提供之雙股RNAi劑、組成物、載體、或醫藥組成物接觸；及(b)維持於步驟(a)所產生之細胞一段足以達成HBV基因之mRNA轉錄本降解之時間，藉以抑制細胞中HDV之複製。某些具體例中，細胞係於個體內。某些具體例中，該個體為人類。
本發明進一步提供一種使感染HDV之個體減少D型肝炎病毒(HDV)抗原含量之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之本文所提供之雙股RNAi劑、組成物、載體、或醫藥組成物，藉以減少中HDV抗原(例如，例如：S-HDAg或L-HDAg)含量。
本發明亦提供一種使感染HDV之個體減少D型肝炎病毒(HDV)病毒量之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之本文所提供之雙股RNAi劑、組成物、載體、或醫藥組成物，藉以減少個體中HDV之病毒量。
本發明亦提供一種治療罹患D型肝炎病毒(HDV)感染之個體之方法，其包括對該個體投與醫療有效量之本文所提供之雙股RNAi劑、組成物、載體、或醫藥組成物，藉以治療該個體。
某些具體例中，雙股RNAi劑包含形成雙股區之正義股與反義股。正義股與反義股可選自下列RNAi劑，其中正義股包含5’-UCGUGGUGGACUUCUCUCA-3’(SEQ ID NO：5)，及反義股包含5’-UGAGAGAAGUCCACC ACGAUU-3’(SEQ ID NO：6)；正義股包含5’-GUGCACUUCGCUUCACCUCUA-3’(SEQ ID NO：7)，及反義股包含5’-UAGAGGUGAAGCGAAGUGCACUU-3’(SEQ ID NO：8)；正義股包含5’-CGUGGUGGACUUCUCUCAAUU-3’(SEQ ID NO：9)，及反義股包含5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCAG-3’(SEQ ID NO：10)；正義股包含5’-CGUGGUGGUCUUCUCUAAAUU-3’(SEQ ID NO：37)，及反義股包含5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCUU-3’(SEQ ID NO：38)；正義股包含5’-GGUGGACUUCUCUCAAUUUUA-3’(SEQ ID NO：11)，及反義股包含5’-UAAAAUUGAGAGAAGUCCACCAC-3’(SEQ ID NO：12)；或正義股包含5’-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3’(SEQ ID NO：39)，及反義股包含5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：40)，其中正義股實質上所有核苷酸及反義股實質上所有核苷酸均為經修飾之核苷酸，其中正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物，藉以治療該個體。
某些具體例中，該正義股之所有核苷酸及該反義股之所有核苷酸包含一種修飾。某些具體例中，至少一個經修飾之核苷酸係選自下列核苷酸所組成群者：去氧-核苷酸、3’-末端去氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸、2'-氟修飾之核苷酸、2'-去氧-修飾之核苷酸、鎖核苷酸、非鎖核苷酸、構型限制性核苷酸、限制性乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、2’-胺基-修飾之核苷酸、2’-O- 烯丙基-修飾之核苷酸、2’-C-烷基-修飾之核苷酸、2’-羥基-修飾之核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、2’-O-烷基-修飾之核苷酸、N-嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、四氫哌喃修飾之核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾之核苷酸、環己烯基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基之核苷酸、包含甲基膦酸酯基之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、及包含5’-磷酸酯擬似物之核苷酸。某些具體例中，5’-磷酸酯擬似物為5’-乙烯基磷酸酯(5’-VP)。
某些具體例中，正義股包含5’-uscsguGfgUfGfGfacuucucuca-3’(SEQ ID NO：13)及反義股包含5’-usGfsagaGfaAfGfuccaCfcAfcgasusu-3’(SEQ ID NO：14)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
某些具體例中，正義股包含5’-uscsguGfgUfGfGfacuucucuca-3’(SEQ ID NO：15)及反義股包含5’-PusGfsagaGfaAfGfuccaCfcAfcgasusu-3’(SEQ ID NO：16)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
某些具體例中，正義股包含5’-gsusgcacUfuCfGfCfuucaccucua-3’(SEQ ID NO：17)及反義股包含5’-usAfsgagGfugaagcgAfaGfugcacsusu-3’(SEQ ID NO：18)， 其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
某些具體例中，正義股包含5’-gsusgcacUfuCfGfCfuucaccucua-3’(SEQ ID NO：19)及反義股包含5’-PusAfsgagGfugaagcgAfaGfugcacsusu-3’(SEQ ID NO：20)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
某些具體例中，正義股包含5’-csgsugguGfgAfCfUfucucUfCfaauu-3’(SEQ ID NO：21)及反義股包含5’-AfsuugAfgAfgAfaguCfcAfccagcsasg-3’(SEQ ID NO：22)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf或Uf為2'-氟A、G、C或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
某些具體例中，正義股包含5’-csgsugguGfgAfCfUfucucUfCfaauu-3’(SEQ ID NO：23)及反義股包含5’-PasAfsuugAfgAfgAfaguCfcAfccagcsasg-3’(SEQ ID NO：24)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf或Uf為2'-氟A、G、C或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
某些具體例中，正義股包含5’- csgsuggudGgucdTucucuaaauu-3’(SEQ ID NO：35)及反義股包含5’-asdAsuugagagdAagudCcaccagcsusu-3’(SEQ ID NO：36)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；dA、dC、dG、與dT為去氧核糖A、C、G、與T；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
某些具體例中，正義股包含5’-gsgsuggaCfuUfCfUfcucaAfUfuuua-3’(SEQ ID NO：25)及反義股包含5’-usAfsaaaUfuGfAfgagaAfgUfccaccsasc-3’(SEQ ID NO：26)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf或Uf為2'-氟A、G、C或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
某些具體例中，正義股包含5’-gsgsuggaCfuUfCfUfcucaAfUfuuua-3’(SEQ ID NO：27)及反義股包含5’-PusAfsaaaUfuGfAfgagaAfgUfccaccsasc-3’(SEQ ID NO：28)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf或Uf為2'-氟A、G、C或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
某些具體例中，正義股包含5’-gsusguGfcAfCfUfucgcuucaca-3’(SEQ ID NO：41)及反義股包含5’-usGfsugaAfgCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：42)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、 c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf或Uf為2'-氟A、G、C或U；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
某些具體例中，該配體為
Figure 104136995-A0202-12-0055-1458
某些具體例中，該RNAi劑係接合如下示之配體
Figure 104136995-A0202-12-0055-1459
，其中X為O或S。
本發明提供一種治療罹患D型肝炎病毒(HDV)感染之個體之方法。該方法包括對該個體投與醫療有效量之用於抑制細胞中B型肝炎病毒(HBV)表現之組成物，該組成物包含(a)第一雙股RNAi劑，其包含形成雙股區之第一正義股及第一反義股，其中第一正義股實質上所有核苷酸及該第一反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中第一正義股係接合附接在3’-末端之配體，及其 中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物；及(b)第二雙股RNAi劑，其包含形成雙股區之第二正義股及第二反義股，其中第二正義股實質上所有核苷酸及第二反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中第二正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物；其中該第一與第二正義股分別獨立包含選自下列序列所組成群中之序列：5’-UCGUGGUGGACUUCUCUCA-3’(SEQ ID NO：5)，5’-GUGCACUUCGCUUCACCUCUA-3’(SEQ ID NO：7)，5’-CGUGGUGGACUUCUCUCAAUU-3’(SEQ ID NO：9)，5’-CGUGGUGGUCUUCUCUAAAUU-3’(SEQ ID NO：37)，5’-GGUGGACUUCUCUCAAUUUUA-3’(SEQ ID NO：11)，及5’-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3’(SEQ ID NO：39)，且其中該第一與第二反義股分別獨立包含選自下列序列所組成群中之序列：5’-UGAGAGAAGUCCACCACGAUU-3’(SEQ ID NO：6)；5’-UAGAGGUGAAGCGAAGUGCACUU-3’(SEQ ID NO：8)；5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCAG-3’(SEQ ID NO：10)；5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCUU-3’(SEQ ID NO：38)，5’-UAAAAUUGAGAGAAGUCCACCAC-3’(SEQ ID NO：12)，及5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：40)，藉以治療該個體。
某些具體例中，該第一與第二正義股之所有核苷酸及該第一與第二反義股之所有核苷酸包含一種修飾。某些具體例中，至少一個經修飾之核苷酸係選自下列核苷酸所組成群者：去氧-核苷酸、3’-末端去氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸、2'-氟修飾之核苷酸、2'-去氧-修飾之核苷酸、鎖核苷酸、非鎖核苷酸、構型限制性核苷酸、限制性乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、2’-胺基-修飾之核苷酸、2’-O-烯丙基-修飾之核苷酸、2’-C-烷基-修飾之核苷酸、2’-羥基-修飾之核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、2’-O-烷基-修飾之核苷酸、N-嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、四氫哌喃修飾之核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾之核苷酸、環己烯基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基之核苷酸、包含甲基膦酸酯基之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、及包含5’-磷酸酯擬似物之核苷酸。
某些具體例中，該第一與第二RNAi劑係選自下列各物所組成群中：5’-uscsguGfgUfGfGfacuucucuca-3’(SEQ ID NO：13)5’-usGfsagaGfaAfGfuccaCfcAfcgasusu-3’(SEQ ID NO：14)；5’-uscsguGfgUfGfGfacuucucuca-3’(SEQ ID NO：15)5’-PusGfsagaGfaAfGfuccaCfcAfcgasusu-3’(SEQ ID NO：16)；5’-gsusgcacUfuCfGfCfuucaccucua-3’(SEQ ID NO：17)5’-usAfsgagGfugaagcgAfaGfugcacsusu-3’(SEQ ID NO：18)； 5’-gsusgcacUfuCfGfCfuucaccucua-3’(SEQ ID NO：19)5’-PusAfsgagGfugaagcgAfaGfugcacsusu-3’(SEQ ID NO：20)；5’-csgsugguGfgAfCfUfucucUfCfaauu-3’(SEQ ID NO：21)5’-asAfsuugAfgAfgAfaguCfcAfccagcsasg-3’(SEQ ID NO：22)；5’-csgsugguGfgAfCfUfucucUfCfaauu-3’(SEQ ID NO：23)5’-PasAfsuugAfgAfgAfaguCfcAfccagcsasg-3’(SEQ ID NO：24)；5’-csgsuggudGgucdTucucuaaauu-3’(SEQ ID NO：35)5’-asdAsuugagagdAagudCcaccagcsusu-3’(SEQ ID NO：36)；5’-gsgsuggaCfuUfCfUfcucaAfUfuuua-3’(SEQ ID NO：25)5’-usAfsaaaUfuGfAfgagaAfgUfccaccsasc-3’(SEQ ID NO：26)；5’-gsgsuggaCfuUfCfUfcucaAfUfuuua-3’(SEQ ID NO：27)5’-PusAfsaaaUfuGfAfgagaAfgUfccaccsasc-3’(SEQ ID NO：28)；及5’-gsusguGfcAfCfUfucgcuucaca-3’(SEQ ID NO：41)5’-usGfsugaAfgCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：42)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C或U；dA、dC、dG、與dT係去氧核糖A、C、G、與T；s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
某些具體例中，該第一與第二RNAi劑為5’-uscsguGfgUfGfGfacuucucuca-3’(SEQ ID NO：15)5’-PusGfsagaGfaAfGfuccaCfcAfcgasusu-3’(SEQ ID NO：16)；及5’-csgsugguGfgAfCfUfucucUfCfaauu-3’(SEQ ID NO：21)5’-asAfsuugAfgAfgAfaguCfcAfccagcsasg-3’(SEQ ID NO：22)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
某些具體例中，該第一與第二RNAi劑為5’-gsgsuggaCfuUfCfUfcucaAfUfuuua-3’(SEQ ID NO：25)5’-usAfsaaaUfuGfAfgagaAfgUfccaccsasc-3’(SEQ ID NO：26)；及5’-gsusguGfcAfCfUfucgcuucaca-3’(SEQ ID NO：41)5’-usGfsugaAfgCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：42)，其中A、C、G、及U為核糖A、C、G、或U；a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、U、C、或G；Af、Cf、Gf、或Uf為2'-氟A、G、C、或U；s為硫代磷酸酯鏈結基；及P為5’-磷酸酯或5’磷酸酯擬似物。
某些具體例中，該配體為
Figure 104136995-A0202-12-0060-1460
 某些具體例中，該RNAi劑係接合如下示之配體
Figure 104136995-A0202-12-0060-1461
，其中X為O或S。
某些具體例中，該個體為人類。
某些具體例中，該雙股RNAi劑之投藥劑量為約0.01mg/kg至約10mg/kg或約0.5mg/kg至約50mg/kg。某些具體例中，該雙股RNAi劑之投藥劑量為約10mg/kg至約30mg/kg。某些具體例中，該雙股RNAi劑之投藥劑量為約3mg/kg。某些具體例中，該雙股RNAi劑之投藥劑量為約10mg/kg。某些具體例中，該雙股RNAi劑之投藥劑量為約0.5mg/kg，每週2次。某些具體例中，該雙股RNAi劑係投與固定劑量約50mg至200mg。
某些具體例中，該雙股RNAi劑係經皮下投藥。某些具體例中，該雙股RNAi劑係經靜脈內投藥。
某些具體例中，該RNAi劑係投與2個或更多個劑量。某些具體例中，該RNAi劑之投藥間隔係選自下列各項所組成群者：約每12小時一次、約每24小時一次、約每48小時一次、約每72小時一次、及約每96小時一次。某些具體例中，該RNAi劑係每週投藥2次。某些具體例中，該RNAi劑係每隔一週投藥一次。某些具體例中，該RNAi劑係一個月投藥一次。某些具體例中，該RNAi劑係每隔一個月投藥一次。某些具體例中，該RNAi劑係每隔3個月投藥一次。
某些具體例中，該RNAi劑係與另一種醫療劑共同投與個體。該另外之醫療劑包括例如：抗病毒劑、反轉錄酶抑制劑、免疫刺激劑、醫療性疫苗、病毒侵入抑制劑、抑制HbsAg之分泌或釋出之寡核苷酸、殼體抑制劑、共價閉合環狀(ccc)HBVDNA抑制劑，及上述任一者之組合。某些具體例中，該另外製劑為反轉錄酶抑制劑。某些具體例中，該另外製劑為反轉錄酶抑制劑及免疫刺激劑。逆轉錄酶抑制劑實例包括泰諾福韋(tenofovir disoproxil fumarate)(TDF)、替諾福韋艾拉酚(Tenofovir alafenamide)、拉米夫定(Lamivudine)、阿德福韋酯(Adefovir dipivoxil)、恩替卡韋(Entecavir)(ETV)、喜必福(Telbivudine)、與AGX-1009。免疫刺激劑實例包括聚乙二醇基化干擾素α 2a(PEG-IFN-α 2a)、干擾素α-2b、重組體人類介白素-7、與Toll-樣受體7(TLR7)促效劑。
本發明進一步提供一種治療罹患D型肝炎 病毒(HDV)感染之個體之方法，其包括對該個體投與醫療有效量之用於抑制細胞中B型肝炎病毒(HBV)表現之組成物，該組成物包含(a)第一雙股RNAi劑，其包含形成雙股區之第一正義股與第一反義股，其中第一正義股實質上所有核苷酸及第一反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中第一正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物；及(b)第二雙股RNAi劑，其包含形成雙股區之第二正義股及第二反義股，其中第二正義股實質上所有核苷酸及第二反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中第二正義股係接合附接在3’-末端之配體，及其中該配體為一或多種利用二價或三價分支之鏈結體附接之GalNAc衍生物；其中第一正義股包含至少15個連續核苷酸，其與SEQ ID NO：1核苷酸序列之差異不超過3個核苷酸，及第一反義股包含至少15個連續核苷酸，其與SEQ ID NO：2核苷酸序列之差異不超過3個核苷酸，其中第二正義股包含至少15個連續核苷酸，其與SEQ ID NO：29核苷酸序列之差異不超過3個核苷酸，及第二反義股包含至少15個連續核苷酸，其與SEQ ID NO：30核苷酸序列之差異不超過3個核苷酸，藉以治療該個體。
某些具體例中，第一正義股包含選自下列序列所組成群中之序列：5’-UCGUGGUGGACUUCUCUCA-3’(SEQ ID NO：5)，5’-GUGCACUUCGCUUCACCUCUA-3’(SEQ ID NO：7)， 5’-CGUGGUGGACUUCUCUCAAUU-3’(SEQ ID NO：9)，5’-CGUGGUGGUCUUCUCUAAAUU-3’(SEQ ID NO：37)，5’-GGUGGACUUCUCUCAAUUUUA-3’(SEQ ID NO：11)，及5’-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3’(SEQ ID NO：39)，及第二反義股包含選自下列序列所組成群中之序列：5’-UGAGAGAAGUCCACCACGAUU-3’(SEQ ID NO：6)；5’-UAGAGGUGAAGCGAAGUGCACUU-3’(SEQ ID NO：8)；5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCAG-3’(SEQ ID NO：10)；5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCUU-3’(SEQ ID NO：38)，5’-UAAAAUUGAGAGAAGUCCACCAC-3’(SEQ ID NO：12)，及5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：40)。
某些具體例中，正義股之所有核苷酸及反義股之所有核苷酸包含一種修飾。某些具體例中，該另外製劑為至少一種選自下列各物所組成群中之經修飾之核苷酸：去氧-核苷酸、3’-末端去氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸、2'-氟修飾之核苷酸、2'-去氧-修飾之核苷酸、鎖核苷酸、非鎖核苷酸、構型限制性核苷酸、限制性乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、2’-胺基-修飾之核苷酸、2’-O-烯丙基-修飾之核苷酸、2’-C-烷基-修飾之核苷酸、2’-羥基-修飾之核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、2’-O-烷基-修飾之核苷酸、N-嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、四氫哌喃修飾之核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾之核苷酸、環己烯基修飾之核苷酸、包含硫代 磷酸酯基之核苷酸、包含甲基膦酸酯基之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、及包含5’-磷酸酯擬似物之核苷酸。
某些具體例中，該配體為
Figure 104136995-A0202-12-0064-1462
某些具體例中，該RNAi劑係接合如下示之配體
Figure 104136995-A0202-12-0064-1463
，其中X為O或S。
本發明進一步利用下文與圖式詳細加以說明。
第1圖圖解說明約3.2kb雙股HBV基因組之結構。HBV基因組之複製係透過RNA中間物進行，並產生4種重疊病毒轉錄本(約3.5kb轉錄本、約2.4kb轉錄本、約2.1kb 轉錄本、與約0.7kb轉錄本)，其透過三種讀碼框之轉譯來編碼七種病毒蛋白質(pre-S1、pre-S2、S、P、X、pre-C與C)。
第2圖係說明在投與單劑3mg/kg所指定之iRNA劑後，HBsAg血清含量相對於投藥前HBsAg血清含量之下降對數值之圖示。
第3圖係說明在投與單劑3mg/kg所指定之iRNA劑後，HBsAg血清含量相對於投藥前HBsAg血清含量之下降對數值之圖示。
第4圖係說明在投與單劑3mg/kg所指定之iRNA劑後，第5天及第10天時相對於投藥前HBsAG之殘留百分比之圖示。第4圖亦說明投藥後第10天之HBsAG相對於接受3mg/kg靶向小鼠/大鼠轉甲狀腺素(transtherytin)(mrTTR)之對照dsRNA投藥後第10天之HBsAG殘留百分比。
第5圖係說明在投與單劑3mg/kg所指定之AD-65403後，HBsAg血清含量相對於投藥前HBsAg血清含量之下降對數值之圖示。
第6A圖係說明在經皮下投與單劑0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、或9mg/kg之AD-66810後，HBsAg血清含量相對於投藥前HBsAg血清含量依標準線性標度下降之圖式。
第6B圖係說明在經皮下投與單劑0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、或9mg/kg之AD-66810後，HBsAg血清含量 相對於投藥前HBsAg血清含量依log10 標度下降之圖示。
第7圖係說明每週3次經皮下投與3mg/kg劑量之AD-66810後，HBsAg血清含量相對於投藥前HBsAg血清含量依log10 標度下降之圖示。
本發明提供一種可引發RNA-誘導緘默複合體(RISC)介導裂解B型肝炎病毒(HBV)基因之RNA轉錄本之iRNA組成物。該基因可在細胞內，例如：個體(如：人類)之細胞內。使用此等iRNA可以靶向降解哺乳動物中相應基因(HBV基因)之mRNA。
本發明之RNAi劑已設計用於靶向保留在所有8種HBV血清型中之HBV基因組之區域。此外，本發明RNAi劑已設計用於藉由抑制一種以上HBV基因之表現來抑制HBV生命週期之所有步驟，例如：病毒之複製、組合、分泌，及次病毒抗原之分泌。特定言之，由於HBV基因組之轉錄造成多順反子之重疊RNA，靶向單一HBV基因之本發明RNAi劑造成顯著抑制大多數或所有HBV轉錄本之表現。例如：由於HBV基因組轉錄進入單一mRNA中，因此靶向S基因之本發明RNAi劑不僅抑制S基因表現，而且亦抑制“下游(downstream)”聚合酶基因之表現。此外，本發明之RNAi劑已設計用於藉由靶向HBV結構基因而抑制HBV病毒複製，使HBV X基因得以讓個體之免疫系統檢測HbsAg之存在並因此反應產生抗-HBV抗體來清除HBV感染。在不希望受到理論限制下，咸信上述性質與 特定標靶位點及/或特定修飾在此等RNAi劑中之組合或次組合賦與本發明RNAi劑改良之效力、安定性、安全性、藥效與耐久性。
本發明者已使用活體外與活體內試驗法證實該靶向HBV基因之iRNA可強力介導RNAi，而顯著抑制一種以上HBV基因之表現。本發明者亦已證實本發明RNAi劑在細胞質與及溶體中特別安定。因此，包括此等iRNA之方法與組成物適用於治療罹患HBV感染及/或HBV相關疾病(如：慢性B型肝炎(CHB))之個體。
因此，本發明亦提供一種使用可引發RNA-誘導緘默複合體(RISC)介導裂解HBV基因之RNA轉錄本之iRNA組成物來治療罹患可能因抑制或降低HBV基因表現而受益之病症(例如：HBV相關疾病，如：慢性B型肝炎感染(CHB))之個體之方法。
特定言之，極低劑量之本發明iRNA可明確且有效地介導RNA干擾(RNAi)，而顯著抑制相應基因(HBV基因)之表現。
本發明iRNA包括具有一區約30個或更少核苷酸長度之RNA股(反義股)，例如：15-30、15-29、15-28、15-27、15-26、15-25、15-24、15-23、15-22、15-21、15-20、15-19、15-18、15-17、18-30、18-29、18-28、18-27、18-26、18-25、18-24、18-23、18-22、18-21、18-20、19-30、19-29、19-28、19-27、19-26、19-25、19-24、19-23、19-22、19-21、19-20、20-30、20-29、20-28、20-27、20-26、20-25、 20-24,20-23、20-22、20-21、21-30、21-29、21-28、21-27、21-26、21-25、21-24、21-23、或21-22個核苷酸之長度，該區域與HBV基因之mRNA轉錄本中至少一部份實質上互補。
下列說明揭示如何製造及使用包含iRNA之組成物來抑制HBV基因之表現，並揭示治療罹患可能因抑制及/或降低HBV基因表現而受益之疾病與病症之個體之組成物、用途、與方法。
I. 定義
為了更容易了解本發明，首先定義某些術語。此外應注意，不論何時出示之參數數值或數值範圍，其均指示該出示數值及該範圍之間的數值與範圍亦為本發明一部份。
本文所採用冠詞“一種”與“一個”係指該文法上主詞為一或超過一(亦即至少一)。例如：“一個元素”係指一個元素或超過一個元素，例如：複數個元素。
本文所採用術語“包括”意指片語“包括(但不限於)：”，並可與其交換使用。
本文所採用術語“或”意指“及/或”，並可與其交換使用，除非另有說明。
本文所採用術語“B型肝炎病毒”可與術語“HBV”交換使用，係指本領域上習知之非細胞病變性之屬於肝病毒科(Hepadnaviridae)之嗜肝性DNA病毒。HBV基因組係部份雙鍵之環狀DNA，具有重疊讀碼框(參見例 如：第1圖)。
已知有四種由HBC基因組編碼之基因，稱為C、X、P、與S。該核心蛋白質係由基因C編碼(HBcAg)。B型肝炎抗原(HBeAg)則由前核心(pre-C)蛋白質經過蛋白質水解處理而產生。DNA聚合酶係由基因P編碼。基因S為編碼表面抗原(HBsAg)之基因。HBsAg基因為一種長的開放讀碼框，但框中包含3個“起始”(ATG)密碼子，將該基因分成3段：pre-S1、pre-S2、與S。由於此等多重起始密碼子，而產生三種不同大小之多肽，稱為大、中與小(pre-S1+pre-S2+S、pre-S2+S、或S)。由基因X編碼之非結構性蛋白質之功能並未完全了解，但其係與肝癌之發展有關，且係編碼一種誘餌蛋白質，讓血中HbsAg螯合抗-HBsAg抗體，並讓感染性病毒粒子逃避免疫偵測。
由HBV基因組編碼之蛋白質包括：套膜蛋白質-i)小型B型肝炎表面抗原(HBsAg)；ii)中型-preS2加HBsAg；iii)大型-preS1加preS2加HBsAg；核殼體蛋白質、B型肝炎核心抗原(HBcAg)。B型肝炎e抗原(HBeAg)為一種在HBV複製期間產生之非結構性蛋白質，與核殼體HBcAg有90%之共通胺基酸；及X蛋白質係一種非結構性蛋白質(HBx)，其在細胞質中之功能為活化各種不同信號途徑，其中許多途徑受到胞質液鈣之調控作用所控制，且在細胞核中之功能係透過與不同轉錄因子直接交互作用來調節轉錄，有些例子中，會加強其與專一性轉錄元素結合。
HBV為一種在包括病毒基因組之侵入、脫 殼及運送至核中等涉及多重步驟之複製過程中利用逆轉錄酶之少數DNA病毒。起初，HBV基因組之複製涉及產生RNA中間物，其再逆轉錄產生DNA病毒基因組。
當細胞感染HBV時，病毒基因組解開之環狀DNA(rcDNA)係運送至細胞核中，並轉化成游離型共價閉合環狀DNA(cccDNA)，其作為病毒mRNA之轉錄模板。經過轉錄及核運送後，細胞質病毒前基因體RNA(pgRNA)與HBV聚合酶及殼體蛋白質組合形成核殼體，在其中經過聚合酶催化之逆轉錄，產生負股DNA，其隨後拷貝成正股DNA，形成子代rcDNA基因組。成熟之核殼體再經過病毒套膜蛋白質包裝，呈病毒體粒子送出或運至核中，透過細胞內cccDNA擴增途徑擴增。cccDNA為HBV複製週期之必要組份，負責建立感染及病毒永續性。
HBV感染結果會產生兩種不同粒子：1)HBV病毒本身(或Dane粒子)，其包括從HBcAg組合之病毒殼體，並經過HBsAg轉化，可以再度感染細胞，及2)次病毒粒子(或SVP)，其係高密度之似脂蛋白粒子，由脂質、膽固醇、膽固醇酯類與非感染性之小型及中型B型肝炎表面抗原HBsAg組成。所產生之各病毒粒子釋放1,000-10,000個SVP至血液中。因此SVP(與其所攜帶之HBsAg蛋白質)代表血液中充斥著大量病毒蛋白質。感染HBV之細胞亦分泌前核蛋白質之可溶性蛋白質水解產物，稱為HBV e-抗原(HBeAg)。
已測定8種基因型HBV，稱為A至H，其 分別具有不同地理分佈。該病毒係非細胞病變性，具有病毒專一性之細胞免疫性，係曝露到HBV之後果(在肝病緩解6個月後急性感染；或經常與漸進性肝損傷有關之慢性HBV感染)之主要決定子。
本文所採用術語“HBV”包括8種基因型HBV(A至H)中任一種。HBV基因組之參考序列之胺基酸與完整編碼序列可參見例如：GenBank登錄號GI：21326584(SEQ ID NO：1)及GI：3582357(SEQ ID NO：3)。
HBV mRNA序列之其他實例很容易使用已公開之資料庫取得，例如：GenBank、UniProt、與OMIM。
本文所採用術語“HBV”亦指HBV基因組之任何天然產生之DNA序列變異。
本文所採用“D型肝炎病毒”可與術語“HDV”交換使用，係指習知之非細胞病變性之屬於肝病毒科(Hepadnaviridae)之嗜肝性DNA病毒。參見例如：Ciancio與Rizzetto之Nat.Rev.11：68-71,2014；Le Gal等人Emerg.Infect.Dis.12：1447-1450,2006；及Abbas與afzal,World J.Hep.,5：666-675,2013，其等均以引用之方式併入本文。除非另有指示，否則HDV係指HDV之所有支系與變異株。
HDV產生一種蛋白質，即HDAg。其出現兩種型式；27kDa大型-HDAg(本文亦稱為1HD及大型HDV抗原)與24kDa小型-HDAg(本文亦稱為sHD及小型HDV抗原)。這兩種型式之N-末端相同，其差異在於大型HDAge 之C-末端之19個胺基酸。這兩種同型均由在密碼子196含有UAG終止密碼子之相同讀碼框產生，其通常僅產生小型-HDAg。然而，藉由細胞酵素腺苷脫胺酶-1改變終止密碼子成為UCG，而得以產生大型-HDAg。儘管這兩種蛋白質具有90%相同序列，但其等在感染過程中扮演不同角色。HDAg-S係在感染早期產生，並進入核中，支持病毒複製。反之，HDAg-L係在感染後期產生，作為病毒複製之抑制劑，係病毒粒子進行組合時所必需。
HDV mRNA序列之其他實例很容易採用可公開取得之資料庫得到，例如：GenBank、UniProt、與OMIM。
本文所採用術語“HDV”亦指HDV基因組之天然產生之DNA序列變異。
本文所採用“標靶序列”係指在HBV基因轉錄期間所形成之mRNA分子之核苷酸序列中之連續部份，包括作為主要轉錄產物之RNA製程產物之mRNA。一具體例中，標靶之部份序列之長度應為至少足以作為受質之長度，讓iRNA所主導之裂解位置可在或接近HBV基因轉錄期間所形成mRNA分子之核苷酸序列部份。
該標靶序列可為約9-36個核苷酸之長度，例如：約15-30個核苷酸之長度。例如：該標靶序列可為約15-30個核苷酸、15-29、15-28、15-27、15-26、15-25、15-24、15-23、15-22、15-21、15-20、15-19、15-18、15-17、18-30、18-29、18-28、18-27、18-26、18-25、18-24、18-23、 18-22、18-21、18-20、19-30、19-29、19-28、19-27、19-26、19-25、19-24、19-23、19-22、19-21、19-20、20-30、20-29、20-28、20-27、20-26、20-25、20-24,20-23、20-22、20-21、21-30、21-29、21-28、21-27、21-26、21-25、21-24、21-23、或21-22個核苷酸之長度。上述範圍與長度之間之範圍與長度亦包括為本發明之一部份。
本文所採用術語“包含序列之股”係指包含核苷酸鏈之寡核苷酸，其係採用標準核苷酸命名法之序列說明。
“G”、“C”、“A”、“T”與“U”分別一般代表核苷酸，其分別包含鳥嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、胸苷與尿嘧啶之鹼基。然而，應了解，術語“核糖核苷酸”或“核苷酸”亦指經修飾之核苷酸，如下文中進一步說明，或改用置換部份體(參見例如：表2)。熟悉此相關技術者亦了解，鳥嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤與尿嘧啶可在不會實質上改變該包含帶有此等置換部份體之核苷酸之寡核苷酸鹼基配對性質下改用其他部份體置換。例如(但不限於)：包含肌苷作為其鹼基之核苷酸可與包含腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶之核苷酸形成鹼基對。因此，如本發明所說明特徵之dsRNA之核苷酸序列中包含尿嘧啶、鳥嘌呤或腺嘌呤之核苷酸可被包含例如：肌苷之核苷酸置換。另一項實例中，寡核苷酸中之任何腺嘌呤與胞嘧啶均可分別被鳥嘌呤與尿嘧啶置換，分別與標靶mRNA形成G-U搖擺鹼基對。包含此等置換部份體之序列適合如本發明所說明特徵之組成物 與方法。
本文所採用術語“iRNA”、“RNAi劑”、“iRNA劑”、“RNA干擾劑”可在本文中交換使用，係指包含如本文術語定義之RNA之製劑，其可經由RNA-誘導緘默複合體(RISC)途徑來介導靶向裂解RNA轉錄本。iRNA透過已知為RNA干擾(RNAi)之過程來主導mRNA之序列專一性降解。該iRNA調控(例如：抑制)細胞(例如：個體，如：哺乳動物個體內之細胞)中之HBV基因(例如：一或多種HBV基因)表現。
一具體例中，本發明RNAi劑包括會與標靶RNA序列(例如：HBV標靶mRNA序列)交互作用之單股RNA，以主導裂解標靶RNA。在不希望受到理論之限制下，咸信進入細胞中之長雙股RNA會被稱為Dicer之第III型內切核酸酶分解成siRNA(Sharp等人(2001)Genes Dev.15：485)。Dicer係一種類似核糖核酸酶-III之酵素，其會處理dsRNA成為19至23對鹼基之短型干擾RNA，其特徵在於兩個鹼基之3'突出段(Bernstein等人(2001)Nature 409：363)。該等siRNA隨後納入RNA-誘導緘默複合體(RISC)中，其中一或多種解螺旋酶解開siRNA雙螺旋，讓互補反義股指揮辨識標靶(Nykanen等人(2001)Cell 107：309)。當與適當標靶mRNA結合時，RISC內之一或多種內切核酸酶會裂解標靶，誘發緘默(Elbashir等人(2001)Genes Dev .15：188)。因此本發明一態樣係有關一種在細胞內產生之單股RNA(siRNA)，其會促進形成RISC複合物，引起標靶基因(亦 即HBV基因)緘默。因此，本文中亦採用術語“siRNA”意指如上述之RNAi。
另一具體例中，RNAi劑可為進入細胞或生物體中抑制標靶mRNA之單股siRNA。單股RNAi劑會與RISC內切核酸酶(Argonaute 2)結合，然後裂解標靶mRNA。該單股siRNA通常為15至30個核苷酸，且經過化學修飾。單股siRNA之設計與試驗說明於第8,101,348號美國專利案與Lima等人(2012)Cell 150：883-894，其完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。本文說明之任何反義核苷酸序列均可作為本文說明之單股siRNA使用或可採用Lima等人(2012)Cell 150：883-894說明之方法進行化學修飾。
另一具體例中，本發明組成物、用途與方法所使用之“iRNA”係雙股RNA，本文中稱為“’雙股RNAi劑”、“雙股RNA(dsRNA)分子”、“dsRNA劑”或“dsRNA”。術語“dsRNA”係指核糖核酸分子之複合物，其具有雙螺旋結構，包含兩個反向平行且實質上互補之核酸股，相對於標靶RNA(亦即HBV基因)具有“正義”與“反義”取向。有些本發明具體例中，雙股RNA(dsRNA)透過轉錄後基因-緘默機轉(本文稱為RNA干擾或RNAi)啟動標靶RNA(例如：mRNA)之降解。
通常，dsRNA分子之各股之大多數核苷酸為核糖核苷酸，但如同本文之詳細說明，各股或兩股亦可包括一個或多個非核糖核苷酸，例如：去氧核糖核苷酸及/ 或經修飾之核苷酸。此外，本說明書所採用“RNAi劑”可能包括經化學修飾之核糖核苷酸；RNAi劑可能在多重核苷酸上包括實質修飾。本文所採用術語”經修飾核苷酸”係指分別獨立具有糖部份基團、經修飾之核苷酸之間鏈結基、及/或經修飾之核鹼基之核苷酸。因此，術語”經修飾核苷酸”包括在核苷酸之間鏈結基、糖部份基團、或核鹼基上之取代、加成、或排除例如：官能基或原子。適用於本發明製劑之修飾法包括本文所揭示或本領域上已知之所有修飾型態。針對本說明書與申請專利範圍目的，“RNAi劑”包括用於siRNA型分子之任何此等修飾。
雙螺旋區之長度可為容許所需之標靶RNA透過RISC途徑進行專一性降解之任何長度，且可能長度在約9至36對鹼基之範圍內，例如：約15至30對鹼基之長度，例如：約9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、或36對鹼基之長度，如：約15-30、15-29、15-28、15-27、15-26、15-25、15-24、15-23、15-22、15-21、15-20、15-19、15-18、15-17、18-30、18-29、18-28、18-27、18-26、18-25、18-24、18-23、18-22、18-21、18-20、19-30、19-29、19-28、19-27、19-26、19-25、19-24、19-23、19-22、19-21、19-20、20-30、20-29、20-28、20-27、20-26、20-25、20-24,20-23、20-22、20-21、21-30、21-29、21-28、21-27、21-26、21-25、21-24、21-23、或21-22對鹼基之長度。上示範圍與長度之間的範圍與長度亦包括為本發明之一部 份。
形成雙螺旋結構之兩股可能為一個較大RNA分子之不同部份，或其可能為分開之RNA分子。若這兩股為一個較大RNA分子之一部份，且因此利用形成該雙螺旋結構之其中一股之3’-端與另一股之5’-端之間未中斷之核苷酸鏈連接時，該連接之RNA鏈稱為“髮夾環圈”。髮夾環圈可包含至少一個未配對之核苷酸。有些具體例中，髮夾環圈可包含至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少20個、至少23個、或更多個未配對之核苷酸。
若dsRNA之兩個實質上互補股包含在分開之RNA分子上時，彼等分子不一定需要，但可以共價鏈結。若這兩股利用其他除了形成該雙螺旋結構之其中一股之3’-端與另一股之5’-端之間未中斷之核苷酸鏈以外之連接方式連接時，該連接結構稱為“鏈結體”。RNA股可能具有相同或不同數量之核苷酸。鹼基對之最高數量即為dsRNA中最短股之核苷酸數量減去雙螺旋中任何突出段後之數量。除了雙螺旋結構外，RNAi亦可包含一個或多個核苷酸突出段。
一具體例中，本發明RNAi劑為各股包含24-30個核苷酸之dsRNA，其會與標靶RNA序列(例如：HBV標靶mRNA序列)交互作用，主導裂解標靶RNA。在不希望受到理論之限制下，進入細胞中之長的雙股RNA會被稱 為Dicer之第III型內切核酸酶分解成siRNA(Sharp等人(2001)Genes Dev .15：485)。Dicer係類似核糖核酸酶-III之酵素，其處理dsRNA形成19至23對鹼基之短干擾型RNA，其特徵在於兩個鹼基之3'突出段(Bernstein等人(2001)Nature 409：363)。該等siRNA隨後再引進RNA-誘導緘默複合體(RISC)中，其中一或多種解螺旋酶解開siRNA雙螺旋，讓該互補反義股可以指揮辨識標靶(Nykanen等人(2001)Cell 107：309)。當與適當標靶mRNA結合時，RISC內之一或多種內切核酸酶即裂解標靶而誘發緘默(Elbashir等人(2001)Genes Dev .15：188)。
本文所採用術語“核苷酸突出段”係指至少一個未配對之核苷酸從iRNA雙螺旋結構(例如：dsRNA)中突出。例如：當dsRNA中一股之3'-端超出另一股5'-端，或反之亦然時，即有一個核苷酸突出段。dsRNA可包含含有至少一個核苷酸之突出段；或者，該突出段可包含至少兩個核苷酸、至少三個核苷酸、至少四個核苷酸、至少五個核苷酸或更多個。核苷酸突出段可包含或其組成可為核苷酸/核苷類似物，包括去氧核苷酸/核苷。該(等)突出段可位於正義股、反義股或其任何組合。此外，突出段之核苷酸(群)可出現在dsRNA之反義或正義股之5'-端、3'-端或兩個末端。
一具體例中，dsRNA之反義股可在3’-端及/或5’-端之突出段具有1至10個核苷酸，例如：1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個核苷酸。一具體例中，dsRNA 之正義股可在3’-端及/或5’-端之突出段具有1至10個核苷酸，例如：1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個核苷酸。另一具體例中，突出段中一個或多個核苷酸被核苷硫代磷酸酯置換。
“鈍”或“鈍端”意指雙股RNAi劑之末端沒有未配對之核苷酸，亦即沒有核苷酸突出段。“鈍端”之RNAi劑為該dsRNA之整個長度均為雙股，亦即該分子之任一端均沒有核苷酸突出段。本發明RNAi劑包括在一端具有核苷酸突出段之RNAi劑(亦即具有一個突出段與一個鈍端之製劑)之RNAi劑或兩端均具有核苷酸突出段之RNAi劑。
術語“反義股”或“引導股”係指iRNA(例如：dsRNA)之該股包括一個與標靶序列(例如：HBVmRNA)實質上互補之區。本文所採用術語“互補區”係指反義股上與序列(例如：標靶序列，例如：如本文定義之HBV核苷酸序列)實質上互補之區。若當互補區未與標靶序列完全互補時，可能在分子內部或末端區發生錯配。通常，最能忍受之錯配係在末端區內，例如：iRNA之5’-及/或3’-末端之5、4、3、2、或1個核苷酸內。一具體例中，本發明雙股RNAi劑在反義股中包括核苷酸錯配。另一具體例中，本發明雙股RNAi劑在正義股中包括核苷酸錯配。一具體例中，核苷酸錯配係在iRNA之3’-末端之例如：5、4、3、2、或1個核苷酸內。另一具體例中，核苷酸錯配係在例如：iRNA之3’-末端核苷酸內。
本文所採用術語“正義股”或“隨從股”係指該iRNA之股包括一個與如本文所定義反義股區實質上互補之區。
本文所採用術語“裂解區”係指位在緊鄰裂解位點之區。裂解位點係在標靶上發生裂解之位點。有些具體例中，裂解區在任一端上且在緊鄰裂解位點包含三個鹼基。有些具體例中，裂解區在任一端上且在緊鄰裂解位點包含兩個鹼基。有些具體例中，裂解位點明確位於與反義股之核苷酸10與11結合之位點，且裂解區包含核苷酸11、12與13。
除非另有說明，否則當本文採用術語“互補”說明第一核苷酸序列與第二核苷酸序列之關係時，係指包含該第一核苷酸序列之寡核苷酸或聚核苷酸在熟悉此相關技術者咸了解之某些條件下與包含第二核苷酸序列之寡核苷酸或聚核苷酸雜交並形成雙螺旋結構之能力。此等條件可為例如：嚴苛條件，其中嚴苛條件包括：400mM NaCl、40mM PIPES pH 6.4、1mM EDTA，50℃或70℃下12-16小時，然後洗滌(參見例如：“Molecular Cloning：A Laboratory manual,Sambrook等人(1989)Cold Spring Harbor Laboratory Press”)。可採用其他條件，如：生物體內部可能承受之生理上可耐受之條件。熟悉此相關技術者均可依據最終雜交核苷酸之用途，決定最適合測試兩個序列之互補性之條件。
iRNA(例如：本文說明之dsRNA)內之互補序 列包括包含第一核苷酸序列之寡核苷酸或聚核苷酸與包含第二核苷酸序列之寡核苷酸或聚核苷酸沿著其中一或兩個核苷酸序列之整個長度之鹼基配對。此等序列可稱為其彼此“完全互補”。然而，若第一序列相對於本文第二序列稱為“實質上互補”時，則該等兩個序列可能完全互補，或當具有至多30對鹼基之雙螺旋在雜交時，其可能形成一或多對，但通常不會有超過5、4、3或2對錯配鹼基，同時仍保留其在與最終用途最相關之條件下(例如：經由RISC途徑抑制基因表現)雜交之能力。然而，若兩個寡核苷酸之設計在於雜交時形成一個或多個單股突出段時，則此等突出段不應在決定互補性時視為錯配。例如：包含一個長度為21個核苷酸之寡核苷酸與另一個長度為23個核苷酸之寡核苷酸之dsRNA中，包含一個與該較短寡核苷酸完全互補之21個核苷酸序列之較長寡核苷酸在本發明所說明目的下，仍可稱為“完全互補”。
本文所採用“互補”序列亦可包括非華生-克里克(Watson-Crick)鹼基對及/或由非天然與經修飾之核苷酸形成之鹼基對，或完全由其組成，只要符合上述雜交能力之要求即可。此等非華生-克里克鹼基對包括(但不限於)：G：U搖擺(Wobble)或胡斯坦(Hoogstein)鹼基配對。
本文中有關dsRNA正義股與反義股之間或iRNA劑之反義股與標靶序列之間鹼基配對之內容所採用之術語“互補”、“完全互補”與“實質上互補”可由其用法之內容中了解。
本文所採用與信使RNA(mRNA)“之至少一部份實質上互補”之聚核苷酸係指該聚核苷酸與所需mRNA(例如：編碼HBV基因之mRNA)之連續部份實質上互補。例如：若該序列係與編碼HBV基因之mRNA之非中斷部份實質上互補時，則該聚核苷酸係與至少一部份HBV mRNA互補。
因此有些具體例中，本文所揭示反義股聚核苷酸係與標靶HBV序列完全互補。其他具體例中，本文所揭示之反義股聚核苷酸係與標靶HBV序列實質上互補，且包含一段連續核苷酸序列，其整個長度與SEQ ID NO：1之核苷酸序列之同等區域至少約80%互補或SEQ ID NO：1之片段，如：約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約% 91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、或約99%互補。
一具體例中，本發明RNAi劑包括與反義聚核苷酸實質上互補且進而與標靶HBV序列互補之正義股，且其中正義股聚核苷酸包含一段連續核苷酸序列，其整個長度與SEQ ID NO：6、8、10、12、38、與40中任一核苷酸序列之同等區域至少約80%互補或SEQ ID NO：6、8、10、12、38、與40中任一片段，如：約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約% 91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、或約99%互補。另一具體例中，本發明RNAi劑包括標靶HBV序列實質上互補之反義股，且包含一段連續核苷酸序列， 其整個長度與SEQ ID NO：5、7、9、11、37、與39中任一核苷酸序列之同等區域至少約80%互補或SEQ ID NO：5、7、9、11、37、與39中任一片段，如：約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約% 91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、或約99%互補。
有些具體例中，各股之大多數核苷酸為核糖核苷酸，但如同本文之詳細說明，各股或兩股亦可包括一個或多個非核糖核苷酸，例如：去氧核糖核苷酸及/或經修飾之核苷酸。此外，“iRNA”可能包括經化學修飾之核糖核苷酸。此等修飾法可能包括本文所揭示或本領域上已知之所有修飾型態。針對本說明書與申請專利範圍目的，“iRNA”包括用於iRNA分子之任何此等修飾。
本發明一態樣中，本發明方法與組成物所採用之製劑為經由反義抑制機轉來抑制標靶mRNA之單股反義核酸分子。單股反義RNA分子係與標靶mRNA內之序列互補。單股反義寡核苷酸可依化學計量方式與mRNA進行鹼基配對並以物理方式封阻轉譯機轉來抑制轉譯，參見Dias,N.等人(2002)Mol Cancer Ther 1：347-355。單股反義RNA分子之長度可為約15至約30個核苷酸且具有與標靶序列互補之序列。例如：單股反義RNA分子可能包含選自本文所說明任一種反義序列中至少約15、16、17、18、19、20、或更多個連續核苷酸之序列。
本文所採用“個體”為動物，如：哺乳動 物，包括靈長類(如：人類、非人類靈長類，例如：猴子與黑猩猩)、非靈長類(如：牛、豬、駱駝、大羊駝、馬、山羊、兔子、綿羊、倉鼠、天竺鼠、貓、狗、大鼠、小鼠、馬與鯨魚)，或鳥類(例如：鴨或鵝)。一具體例中，該個體為人類，如：正接受治療或評估如本文所說明可能因降低HBV基因表現及/或複製而受益之疾病、病症或病症之人類；處於罹患可能因降低HBV基因表現及/或複製而受益之疾病、病症或病症之風險之人類；罹患可能因降低HBV基因表現及/或複製而受益之疾病、病症或病症之人類；及/或正接受治療可能因降低HBV基因表現及/或複製而受益之疾病、病症或病症之人類。另一具體例中，個體患有B型肝炎病毒(HBV)感染。另一具體例中，個體同時患有B型肝炎病毒(HBV)感染與D型肝炎病毒(HDV)感染。
本文所採用術語“治療”或“處理”係指下列有利或所需結果，包括(但不限於)：減輕或緩和與不期望之HBV基因表現及/或HBV複製相關之一或多種症狀，例如：出現血清及/或肝HBV ccc DNA、出現血清及/或肝HBV抗原，例如：HBsAg及/或HBeAg、提高之ALT、提高之AST、沒有或低量之抗-HBV抗體、肝損傷；硬化；δ型(delta)肝炎、急性B型肝炎；急性猛爆性B型肝炎；慢性B型肝炎；肝硬化；末期肝病；肝細胞癌；類似血清病症候群；厭食；噁心；嘔吐、低度發燒；肌痛；易疲勞性；味覺敏銳度與嗅覺感受度異常(厭惡食物與香煙)；及/或左上四分之一腹痛與心窩部痛(間歇性、輕度至中度)； 肝性腦病症；嗜睡；睡眠型態紊亂；精神錯亂；昏迷；腹水；胃腸出血；凝血病症；黃疸；肝腫大(輕度腫大，肝柔軟)；脾腫大；手掌紅斑；蜘蛛痣；肌肉消瘦；蜘蛛形血管瘤；血管炎；靜脈曲張出血；四肢水腫；男性乳房發育症；睪丸萎縮；腹部連結靜脈(靜脈擴張)；高含量丙胺酸胺基轉化酶(ALT)及天冬胺酸胺基轉化酶(AST)，在1000-2000IU/mL範圍內，但亦可判別到高於正常值上限(ULN)100倍；ALT含量高於AST含量；提高之γ-麩醯胺轉肽酶(GGT)及鹼性磷酸酶(ALP)含量(例如：不超過3倍ULN)；稍低之白蛋白含量；提高之血清鐵含量；白血球減少症(亦即粒細胞減少症)；血液淋巴細胞增多；紅血球沉降速率(ESR)升高；紅血球存活期縮短；溶血症；血小板減少症；國際標準凝血時間比(INR)延長；出現血清及/或肝HBsAg、HBeAg、B型肝炎核心抗體(抗-HBc)免疫球蛋白M(IgM)；B型肝炎表面抗體(抗-HBs)、B型肝炎e抗體(抗-HBe)、及/或HBV DNA；胺基轉化酶提高(
Figure 104136995-A0202-12-0085-51
5倍ULN)；ALT含量高於AST含量；膽紅素含量升高、凝血酶原時間(PT)延長；高球蛋白血症；出現非組織專一性抗體，如：抗平滑肌抗體(ASMA)或抗核抗體(ANA)(10-20%)；出現組織專一性抗體，如：對抗甲狀腺之抗體(10-20%)；類風濕性因子(RF)含量提高；高膽紅素血症、延長之PT、低量血小板及白血球細胞數、AST含量高於ALT含量；提高之鹼性磷酸酶(ALP)及GGT含量；小葉具有退化與再生肝細胞變化，及併發發炎；主要為小葉中心壞死，不論可檢測或不可檢測。“治 療”亦可意指比沒有接受治療時之預期存活性延長其存活性。
在個體或疾病標記物或症狀中之HBV基因表現及/或HBV複製程度之相關內容中使用之術語“降低”係指在統計上為顯著降低之程度。其可降低例如：至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、或更多，且較佳係降至未罹患此等病症之個體之正常範圍內之可接受程度。某些具體例中，恢復正常之目標表現，亦即降至未罹患此等病症之個體之正常範圍內之可接受程度，例如：讓疾病標記物(如：ALT或AST)含量降至未罹患此等病症之個體之正常範圍內之可接受程度。
本文用在可因降低HBV基因表現及/或複製而受益之疾病、病症或病症上所提及之“預防”或“防止”係指降低該個體發展出與此等疾病、病症、或病症有關之症狀之可能性，例如：不希望出現之HBV感染症狀，如：出現血清及/或肝HBV ccc DNA、出現血清HBV DNA、出現血清及/或肝HBV抗原，例如：HBsAg及/或HBeAg、提高之ALT、提高之AST、沒有或低量之抗-HBV抗體、肝損傷；硬化；δ型(delta)肝炎、急性B型肝炎；急性猛爆性B型肝炎；慢性B型肝炎；肝硬化；末期肝病；肝細胞癌；類似血清病症候群；厭食；噁心；嘔吐、低度發燒； 肌痛；易疲勞性；味覺敏銳度與嗅覺感受度異常(厭惡食物與香煙)；及/或左上四分之一腹痛與心窩部痛(間歇性、輕度至中度)；肝性腦病變；嗜睡；睡眠型態紊亂；精神錯亂；昏迷；腹水；胃腸出血；凝血病症；黃疸；肝腫大(輕度腫大、肝柔軟)；脾腫大；手掌紅斑；蜘蛛痣；肌肉消瘦；蜘蛛形血管瘤；血管炎；靜脈曲張出血；四肢水腫；男性乳房發育症；睪丸萎縮；腹部連結靜脈(靜脈擴張)；高含量丙胺酸胺基轉化酶(ALT)及天冬胺酸胺基轉化酶(AST)，在1000-2000IU/mL範圍內，但亦可判別到高於正常值上限(ULN)100倍；ALT含量高於AST含量；提高之γ-麩醯胺轉肽酶(GGT)及鹼性磷酸酶(ALP)含量(例如：不超過3倍ULN)；稍低之白蛋白含量；提高之血清鐵含量；白血球減少症(亦即粒細胞減少症)；血液淋巴細胞增多；紅血球沉降速率(ESR)升高；紅血球存活期縮短；溶血症；血小板減少症；國際標準凝血時間比(INR)延長；出現血清及/或肝HBsAg、HBeAg、B型肝炎核心抗體(抗-HBc)免疫球蛋白M(IgM)；B型肝炎表面抗體(抗-HBs)，B型肝炎e抗體(抗-HBe)，及/或HBV DNA；胺基轉化酶提高(
Figure 104136995-A0202-12-0087-52
5倍ULN)；ALT含量高於AST含量；膽紅素含量升高、凝血酶原時間(PT)延長；高球蛋白血症；出現非組織專一性抗體，如：抗平滑肌抗體(ASMAs)或抗核抗體(ANAs)(10-20%)；出現組織專一性抗體，如：對抗甲狀腺之抗體(10-20%)；類風濕性因子(RF)含量提高；高膽紅素血症、延長之PT、低量血小板及白血球細胞數、AST含量高於ALT含量；提高之鹼性磷 酸酶(ALP)及GGT含量；小葉具有退化與再生肝細胞變化，及併發發炎；主要為小葉中心壞死，不論可檢測或不可檢測。降低發展出例如：肝硬化之可能性，例如：當個體具有一或多種肝硬化之危險因子(例如：慢性B型肝炎感染)時，將不會發展成肝硬化或所發展之肝硬化之嚴重程度將低於具有相同危險因子但未接受本文所說明之治療之族群。不會發展出疾病、病症或症狀，或減輕與此等疾病、病症或病狀有關之症狀發展(例如：依據該疾病或病症之臨床上可接受之規度減輕至少約10%)或延緩該需要延緩之症狀出現(例如：數天、數週、數個月或數年)則視為有效之預防。
本文所採用術語“B型肝炎病毒相關疾病”或“HBV相關疾病”係指由HBV感染及/或複製引起或與其相關之疾病或病症。本文所採用術語“HBV相關疾病”包括可因降低HBV基因表現及/或複製而受益之疾病、病症或症狀。HBV相關疾病之非限制性實例包括例如：D型肝炎病毒感染、δ型(delta)肝炎、急性B型肝炎；急性猛爆性B型肝炎；慢性B型肝炎；肝硬化；末期肝病；肝細胞癌。
一具體例中，HBV相關疾病為D型肝炎病毒感染。D型肝炎病毒或δ型肝炎病毒(HDV)為人類病原菌。然而，該病毒有缺陷，且依賴B型肝炎病毒(HBV)所提供之義務助手功能進行傳播；事實上，HDV需要已聯合或預先存在之HBV感染而變成有傳染性並茁壯成長，特定 言之成為含有B型肝炎表面抗原之病毒套膜。HDV會造成嚴重急性與慢性型式之HBV相關肝疾病。D型肝炎感染及/或δ型肝炎具高度地方性侷限於幾個非洲國家、亞馬遜河流域、及中亞地區，但在除了地中海地區以外的工業化國家的流行率低。
HDV可能藉由同時感染HBV來傳播(共感染)或在慢性B型肝炎或B型肝炎帶原態時併發傳播(重覆感染)。HDV之重覆感染與共感染二者均造成比單純感染HBV時更嚴重之併發症。此等併發症包括在急性感染時發生肝衰竭之可能性較高，並快速惡化成肝硬化，在慢性感染時發展成肝癌之機會提高。與B型肝炎病毒合併之D型肝炎在所有肝炎感染中之死亡率最高，佔20%。
一具體例中，HBV相關疾病為急性B型肝炎。急性B型肝炎包括肝臟發炎持續6個月以下。急性B型肝炎之典型症狀為疲勞、厭食、噁心、與嘔吐。經常觀察到極高之胺基轉化酶值(>1000U/L)及高膽紅素血症。嚴重急性B型肝炎病例可能快速惡化成急性肝衰竭，其病癥為肝臟合成功能不良。此點經常由過去沒有肝疾病時之凝血酶原時間(PT)為16秒或國際標準凝血時間比(INR)為1.5來界定。急性B型肝炎可能慢慢演變成慢性B型肝炎。
一具體例中，HBV相關疾病為慢性肝炎。慢性B型肝炎(CHB)包括肝臟發炎持續6個月以上。患有慢性B型肝炎疾病之個體可具免疫耐受性或具有無活性慢性感染，沒有活性疾病證據，而且亦無症狀。罹患慢性活 性肝炎之患者尤其在複製狀態期間，可能具有類似急性肝炎之彼等症狀。CHB個體中HBV感染之永續性係ccc HBV DNA所致。一具體例中，患有CHB之個體為HBeAg陽性。另一具體例中，患有CHB之個體為HBeAg陰性。患有CHB之個體之血清HBV DNA含量低於約105 ，且轉胺酶(例如：ALT、AST與γ-麩醯胺轉化酶)持續升高。患有CHB之個體之肝活組織檢體指數(例如：壞死性炎症指數)小於約4。
一具體例中，HBV相關疾病為急性猛爆性B型肝炎。患有急性猛爆性B型肝炎之個體具有急性肝炎之症狀及其他意識混亂或昏迷之症狀(因為肝臟無法排除化學毒物)及瘀傷或出血(因為缺少凝血因子)。
患有HBV感染(例如：CHB)之個體可能發展出肝纖維化。因此一具體例中，HBV相關疾病為肝臟纖維化。肝纖維化(或肝硬化)之組織學定義為特徵在於纖維化(過量纖維結締組織)及正常肝構造轉化成結構異常結節之擴散肝臟之過程。
患有HBV感染(例如：CHB)之個體可能發展成末期肝病。因此一具體例中，HBV相關疾病為末期肝病。例如：肝硬化可能發展至身體無法再代償例如：肝硬化所造成下降之肝功能之階段，且造成例如：心智與神經症狀與肝衰竭。
患有HBV感染(例如：CHB)之個體可能發展出肝細胞癌(HCC)，亦稱為惡性肝瘤。因此一具體例中，HBV相關疾病為HCC。HCC通常出現在患有CHB之個體， 而且可能為纖維板層樣、偽腺體(腺樣體)、多形(巨細胞)或亮細胞。
“HDV-相關病症”或肝炎D-病毒相關病症”係一種與HDV表現有關之疾病或病症。HDV-相關病症實例包括：B型肝炎病毒感染、急性B型肝炎、急性D型肝炎；急性猛爆性D型肝炎；慢性D型肝炎；肝硬化；末期肝病；及肝細胞癌。
本文所採用“醫療有效量”意指包括RNAi劑之用量，當投與患者供治療罹患HBV感染及/或HBV相關疾病之個體時，其用量足以治療疾病(例如：減輕、緩解或維持現有疾病或疾病之一或多種症狀)。“醫療有效量”可能隨RNAi劑、該製劑之投藥法、該疾病與其嚴重性、及病史、年齡、體重、家庭病史、基因組態、HBV基因所介導病理過程之階段、可能進行之過去或併行之任何治療、及接受治療之患者之其他個別特徵而異。
本文所採用“預防有效量”意指包括RNAi劑之量，當投與尚未經歷或出現HBV感染及/或HBV相關疾病症狀，但有罹病傾向之個體時，足以預防或緩解疾病或疾病之一種或多種症狀。疾病之緩解包括減慢疾病過程或降低後來發展之疾病之嚴重性。“預防有效量”可能隨RNAi劑、或該製劑之投藥法、該疾病之風險程度、及病史、年齡、體重、家庭病史、基因組態、可能進行之過去或併行之任何治療、及接受治療之患者之其他個別特徵而異。
“醫療有效量”或“預防有效量”亦包括 RNAi劑可以在適用於任何治療之合理效益/危險比值下產生某些所需局部或全身性效應時之量。本發明方法所採用RNAi劑可能投與足以產生適用於此等治療之合理效益/危險比值之量。
本文所採用術語“檢體”係指從個體採集之類似流體、細胞或單離組織，及個體內之流體、細胞或組織。生物流體實例包括血液、血清與漿液、血漿、腦脊髓液、眼內液、淋巴液、尿液、唾液，等等。組織檢體可包括來自組織、器官或局部區域之檢體。例如：檢體可能衍生自特定器官、器官之一部份、或彼等器官內之流體或細胞。某些具體例中，檢體可能衍生自肝臟(例如：全肝臟或肝臟之某些節段或肝臟中某些細胞型態，如，例如：肝細胞)、視網膜或視網膜之一部份(例如：視網膜色素上皮)、中樞神經系統或中樞神經系統之一部份(例如：腦室或脈絡叢)、或胰臟或某些胰臟細胞或其一部份。有些具體例中，“衍生自個體之檢體”係指從該個體抽出之腦脊髓液(cerebrospinal fluid)。較佳具體例中，“衍生自個體之檢體”係指從該個體抽出之血液或血漿。另一具體例中，“衍生自個體之檢體”係指衍生自該個體之肝臟組織(或其次組份)或視網膜組織(或其次組份)。
II. 本發明之iRNA
本發明提供一種抑制一或多種HBV基因表現之iRNA。一具體例中，iRNA劑包括抑制細胞(如：罹患HBV相關疾病，例如：慢性B型肝炎之個體，例如：哺乳 動物，如：人類之細胞)中HBV基因表現之雙股核糖核酸(dsRNA)分子。該dsRNA包括具有可與在HBV基因表現形成之mRNA之至少一部份互補之互補區之反義股。該互補區之長度為約30個或更少個核苷酸(例如：約30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19或18個或更少個核苷酸之長度)。當接觸到表現HBV基因之細胞時，由例如：PCR或基於分支DNA(bDNA)之方法、或基於蛋白質之方法，如：免疫螢光分析法，使用例如：西方墨點或流式細胞計技術分析，該iRNA會抑制HBV基因表現至少約10%。
dsRNA包括兩個RNA股，其可在dsRNA所採用之條件下互補並雜交形成雙螺旋結構。dsRNA之其中一股(反義股)包括與標靶序列實質上互補，而通常完全互補之互補區。該標靶序列可衍生自HBV基因表現期間所形成之mRNA序列。另一股(正義股)包括與反義股互補之區，因此當在合適條件下組合時，這兩股可雜交並形成雙螺旋結構。如本文所說明且本領域上已知，亦可包括dsRNA之互補序列作為單一核酸分子之自我互補區，此點與出現在分開之寡核苷酸之方式相反。
通常，雙螺旋結構之長度為15至30對鹼基，例如：15-29、15-28、15-27、15-26、15-25、15-24、15-23、15-22、15-21、15-20、15-19、15-18、15-17、18-30、18-29、18-28、18-27、18-26、18-25、18-24、18-23、18-22、18-21、18-20、19-30、19-29、19-28、19-27、19-26、19-25、19-24、19-23、19-22、19-21、19-20、20-30、20-29、20-28、 20-27、20-26、20-25、20-24、20-23、20-22、20-21、21-30、21-29、21-28、21-27、21-26、21-25、21-24、21-23、或21-22對鹼基之長度。上示範圍與長度之間的範圍與長度亦包括為本發明之一部份。
同樣地，與標靶序列互補之區之長度為15至30個核苷酸，例如：15-29、15-28、15-27、15-26、15-25、15-24、15-23、15-22、15-21、15-20、15-19、15-18、15-17、18-30、18-29、18-28、18-27、18-26、18-25、18-24、18-23、18-22、18-21、18-20、19-30、19-29、19-28、19-27、19-26、19-25、19-24、19-23、19-22、19-21、19-20、20-30、20-29、20-28、20-27、20-26、20-25、20-24,20-23、20-22、20-21、21-30、21-29、21-28、21-27、21-26、21-25、21-24、21-23、或21-22個核苷酸之長度。上示範圍與長度之間的範圍與長度亦包括為本發明之一部份。
有些具體例中，dsRNA之長度為約15至約20個核苷酸，或約25至約30個核苷酸。通常，dsRNA之長度足以作為切丁酶(Dicer)酵素之受質。例如：本領域上已知長度超過約21至23個核苷酸之dsRNA可以作為切丁酶之受質。熟悉此相關技術者咸了解，作為裂解標靶之這一區RNA最常為較大RNA分子(經常為mRNA分子)之一部份。若相關時，mRNA標靶之“一部份”為mRNA標靶之連續序列，其長度應足以作為RNAi所主導裂解作用(亦即透過RISC途徑裂解)之受質。熟悉此相關技術者亦咸了解，雙螺旋區為dsRNA之主要功能部份，例如：約9至36 對鹼基之雙螺旋區，例如：約10-36、11-36、12-36、13-36、14-36、15-36、9-35、10-35、11-35、12-35、13-35、14-35、15-35、9-34、10-34、11-34、12-34、13-34、14-34、15-34、9-33、10-33、11-33、12-33、13-33、14-33、15-33、9-32、10-32、11-32、12-32、13-32、14-32、15-32、9-31、10-31、11-31、12-31、13-32、14-31、15-31、15-30、15-29、15-28、15-27、15-26、15-25、15-24、15-23、15-22、15-21、15-20、15-19、15-18、15-17、18-30、18-29、18-28、18-27、18-26、18-25、18-24、18-23、18-22、18-21、18-20、19-30、19-29、19-28、19-27、19-26、19-25、19-24、19-23、19-22、19-21、19-20、20-30、20-29、20-28、20-27、20-26、20-25、20-24,20-23、20-22、20-21、21-30、21-29、21-28、21-27、21-26、21-25、21-24、21-23、或21-22對鹼基。因此一具體例中，為了可供處理成為功能性雙螺旋(例如：15-30對鹼基)以靶向所需裂解之RNA，以具有超過30對鹼基之雙螺旋區之RNA分子或RNA分子之複合物作為dsRNA。因此熟悉此相關技術者咸了解，在一具體例中，miRNA為dsRNA。另一具體例中，dsRNA不為天然miRNA。另一具體例中，適用於靶向HBV基因表現之iRNA劑不會在標靶細胞中由較大dsRNA裂解產生。
本文所說明dsRNA可進一步包括一個或多個單股核苷酸突出段，例如：1、2、3、或4個核苷酸。具有至少一個核苷酸突出段之dsRNA令人意外地具有比其鈍端之對應物更優異之抑制性質。核苷酸突出段可包含或由 核苷酸/核苷類似物，包括去氧核苷酸/核苷。該(等)突出段可位於正義股、反義股或其任何組合所組成。此外，突出段之核苷酸(群)可出現在dsRNA之反義或正義股之5'-端、3'-端或兩端。
dsRNA可採用本領域上已知標準方法合成，進一步說明如下，例如：使用自動化DNA合成儀，如：商購取得自，例如：Biosearch、Applied Biosystems公司。
本發明iRNA化合物可採用兩個步驟製程製備。首先，分開製備雙股RNA分子之個別股。然後黏合該等分股。siRNA化合物之個別股可採用溶液相或固體相有機合成法或二者製備。有機合成法之優點在於容易製備包含非天然或經修飾之核苷酸之寡核苷酸股。本發明單股寡核苷酸可採用溶液相或固體相有機合成法或二者製備。
一態樣中，本發明之dsRNA包括至少兩個核苷酸序列：正義序列與反義序列。正義股係選自表3、4、6、7、12、13、22、23、25、與26中任一個表所提供序列之群中，且該正義股之相應反義股係選自表3、4、6、7、12、13、22、23、25、與26中任一個表所提供序列之群中。此態樣中，兩個序列中之一個序列係與該兩個序列中另一個序列互補，其中一個序列實質上與在HBV基因表現時所產生之mRNA序列互補。因此，此態樣中，dsRNA將包括兩個寡核苷酸，其中一個寡核苷酸為說明於表3、4、6、7、12、13、22、23、25、與26中任一個表之正義股，第二個寡核苷酸為說明於表3、4、6、7、12、13、22、23、25、 與26中任一個表中該正義股之對應反義股。一具體例中，dsRNA實質上互補序列係包含分開寡核苷酸。另一具體例中，dsRNA實質上互補序列係包含於單一寡核苷酸。
咸了解，雖然表3、4、6、7、12、13、22、23、25、與26所說明之有些序列為經修飾及/或接合序列，但本發明iRNA(例如：本發明之dsRNA)之RNA可能包含表3、4、6、7、12、13、22、23、25、與26中所示之任一個序列，其係未經修飾、未接合、及/或不同於本文所說明之修飾及/或接合。
熟悉此相關技術者咸了解，具有約20至23對鹼基(例如：21對鹼基)之雙螺旋結構之dsRNA已聲稱可特別有效誘發RNA干擾(Elbashir等人，EMBO 2001,20：6877-6888)。然而，其他人已發現較短或較長RNA雙螺旋結構亦有效(Chu與Rana(2007)RNA 14：1714-1719；Kim等人(2005)Nat Biotech 23：222-226)。上述具體例中，基於表3、4、6、7、12、13、22、23、25、與26中任一個表所提供寡核苷酸序列之性質，本文說明之dsRNA包括至少一個長度為至少21個核苷酸之股。合理認為，具有表3、4、6、7、12、13、22、23、25、與26中任一個表中一個序列之較短雙螺旋僅在其中一端或兩端減去幾個核苷酸時，仍與上述dsRNA具有類似有效性。因此，本發明範圍亦包括具有衍生自表3、4、6、7、12、13、22、23、25、與26中任一個表中一個序列之至少15、16、17、18、19、20、或更多個連續核苷酸之序列，且其抑制HBV基因表現之能力與 包含完整序列之dsRNA之抑制性之差異不超過約5、10、15、20、25、或30%之dsRNA。
此外，表3、4、6、7、12、13、22、23、25、與26中任一個表所提供之RNA可判別HBV轉錄本中可以感受RISC所介導之裂解之位點(群)。因此，本發明之進一步特徵在於靶向其中一個位點之iRNA。若iRNA促進轉錄本內任何特定位置裂解時，則稱本文所採用iRNA係靶向RNA轉錄本中該特定位點。此等iRNA通常包括來自表3、4、6、7、12、13、22、23、25、與26中任一個表所提供之一個序列之至少約15個連續核苷酸與來自HBV基因中所選定序列之鄰接區之其他核苷酸序列偶合。
雖然標靶序列之長度通常為約15至30個核苷酸，但為了主導裂解任何指定標靶RNA，特定序列仍會隨其適宜性在此範圍內有很大變化。已有各種不同套裝軟體與本文所出示之指引可指導針對任何特定標靶判別最佳標靶序列，但亦可採取實驗方法，其中將指定大小之“窗口”或“遮罩”(其非限制性實例為21個核苷酸)係事實上或表象上(包括例如：經由電腦模擬)置於標靶RNA序列上，以在該大小範圍內判別可作為標靶序列之序列。藉由從初始標靶序列位置向上或向下逐一移動一個核苷酸而移動該序列“窗口”，即可判別下一個可能之標靶序列，直到整個可能序列均針對任何所選定之標靶大小判別為止。此過程再偶聯系統性合成法，並測試已判別之序列(採用本文說明或本領域上已知之分析法)，來判別彼等最適合用於 判別彼等可作為iRNA劑標靶來介導最佳抑制標靶基因表達之RNA序列之序列。因此，雖然在例如：表3、4、6、7、12、13、22、23、25、與26中任一個表所判別之序列代表有效之標靶序列，但仍希望可藉由指定序列向上或向下逐一移動一個核苷酸來“移行窗口”，以判別具有同等或更佳抑制特性之序列，以便進一步最優化該抑制效力。
此外，希望使在例如：表3、4、6、7、12、13、22、23、25、與26中任一個表中判別之任何序列藉由系統性添加或移除核苷酸，來產生較長或較短序列，並由彼等所產生之序列從標靶RNA這一點開始，向上或向下移行該較長或較短序列窗口來進行測試，以便進一步最優化。此外，由這種產生新的候選標靶之方法併用根據本領域上已知及/或本文所說明之抑制性分析法測試基於彼等標靶序列之iRNA之有效性，可以進一步改善其抑制效力。再者，可調整此等最優化序列，例如：引進本文所說明或本領域上已知之經修飾核苷酸、添加或改變突出段、或本領域上已知及/或本文所討論之其他修飾法，可進一步最優化分子(例如：提高血清安定性或循環半衰期、提高熱安定性、加強穿膜傳遞性、靶向特定位置或細胞型態、提高與緘默途徑酵素之交互作用、促進從核內體釋出)，作為表現抑制劑。
本文說明之iRNA可包含與標靶序列之一個或多個錯配。一具體例中，本文說明之iRNA包含不超過3個錯配。若iRNA之反義股包含與標靶序列之錯配時，該 錯配之區域最好不位在互補區之中心。若iRNA之反義股包含與標靶序列之錯配時，該錯配最好侷限在互補區之5’-或3’-端起之最後5個核苷酸內。例如：對23個核苷酸之iRNA劑而言，作為HBV基因之互補區之該股通常不會在中心13個核苷酸內包含任何錯配。可採用本文說明之方法或本領域上已知方法決定包含與標靶序列錯配之iRNA是否可以有效抑制HBV基因表現。具有錯配之iRNA於抑制HBV基因表現上之效力考量很重要，尤其若在族群中已知HBV基因中之特定互補區具有多形性序列變異時。
III. 本發明之經修飾iRNA
一具體例中，本發明iRNA(例如：dsRNA)之RNA未經過修飾，且不包含例如：本領域上已知及本文說明之化學修飾及/或接合。另一具體例中，本發明iRNA(例如：dsRNA)之RNA係經過化學修飾，以加強安定性或其他有利特性。本發明某些具體例中，本發明iRNA實質上所有核苷酸均經修飾。本發明其他具體例中，本發明iRN之所有核苷酸均經修飾。本發明iRNA中“實質上所有核苷酸經修飾”係指大部份，但非全部經修飾，且可包括不超過5、4、3、2或1個未修飾之核苷酸。
如本發明所說明特徵之核酸可採用本領域上習知之方法合成及/或修飾，如：彼等說明於“Current protocols in nucleic acid chemistry,”Beaucage,S.L.等人(編輯)，John Wiley & Sons,Inc.,New York,NY,USA”，其揭示內容已以引用之方式併入本文中。修飾法包括例如：末 端修飾，例如：5’-端修飾(磷酸化、接合、反向鏈結)或3’-端修飾(接合、DNA核苷酸、反向鏈結，等等)；鹼基修飾，例如使用安定之鹼基、去安定化之鹼基或會與對象之擴張區之鹼基配對之鹼基置換、排除鹼基(去鹼基核苷酸)、或接合鹼基；糖修飾(例如：位於2’-位置或4’-位置上)或置換糖；及/或主幹修飾，包括修飾或置換磷酸二酯鏈結體。適用於本文所說明具體例之iRNA化合物之明確實例包括(但不限於)：包含經修飾主幹或沒有天然核苷之間鏈結體之RNA。具有經修飾主幹之RNA特別包括彼等主幹中沒有磷原子者。針對本說明書之目的及本領域上有時候提及者，其核苷之間主幹中沒有磷原子之經修飾RNA亦可視為寡核苷。有些具體例中，經修飾之iRNA將在核苷之間主幹中具有一個磷原子。
經修飾之RNA主幹包括例如：硫代磷酸酯、對掌性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、胺基烷基磷酸三酯、甲基與其他烷基之膦酸酯(包括膦酸3'-伸烷基酯與對掌性膦酸酯)、次膦酸酯、胺基磷酸酯(包括3'-胺基胺基磷酸酯與胺基烷基胺基磷酸酯)、硫羰基胺基磷酸酯、硫羰基烷基膦酸酯、硫羰基烷基磷酸三酯、與具有正常3'-5'鏈結體之硼代磷酸酯、其2'-5'-鏈結類似物、及彼等具有反向極性者，其中核苷單位之相鄰成對鹼基係依3'-5'鏈結5'-3'或2'-5'鏈結5'-2'。亦包括各種不同鹽類、混合鹽類與游離酸型。
教示上述含磷鏈結體製法之代表性美國專 利案包括(但不限於)：美國專利案案號3,687,808；4,469,863；4,476,301；5,023,243；5,177,195；5,188,897；5,264,423；5,276,019；5,278,302；5,286,717；5,321,131；5,399,676；5,405,939；5,453,496；5,455,233；5,466,677；5,476,925；5,519,126；5,536,821；5,541,316；5,550,111；5,563,253；5,571,799；5,587,361；5,625,050；6,028,188；6,124,445；6,160,109；6,169,170；6,172,209；6,239,265；6,277,603；6,326,199；6,346,614；6,444,423；6,531,590；6,534,639；6,608,035；6,683,167；6,858,715；6,867,294；6,878,805；7,015,315；7,041,816；7,273,933；7,321,029；及US Pat RE39464，其完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。
其中不包括磷原子之經修飾RNA主幹所具有之主幹係由短鏈烷基或環烷基核苷之間鏈結體、混合雜原子、及烷基或環烷基之核苷之間鏈結體、或一個或多個短鏈雜原子或雜環核苷之間鏈結體形成。此等包括彼等具有N-嗎啉基鏈結體(一部份從核苷之糖部份體形成)；矽氧烷主幹；硫醚、亞碸與碸主幹；甲醯乙醯基(formacetyl)與硫甲醯乙醯基主幹；亞甲基甲醯乙醯基與硫甲醯乙醯基主幹；含烯烴主幹；胺磺酸根主幹；亞甲基亞胺基及亞甲基肼基主幹；磺酸根與磺醯胺主幹；醯胺主幹；與其他具有混合N、O、S與CH2 組份者。
教示上述寡核苷製法之代表性美國專利案包括(但不限於)：美國專利案案號5,034,506；5,166,315； 5,185,444；5,214,134；5,216,141；5,235,033；5,64,562；5,264,564；5,405,938；5,434,257；5,466,677；5,470,967；5,489,677；5,541,307；5,561,225；5,596,086；5,602,240；5,608,046；5,610,289；5,618,704；5,623,070；5,663,312；5,633,360；5,677,437；及，5,677,439，其完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。
其他具體例中，希望包括合適RNA擬似物用於iRNA，其中核苷酸單位之糖與核苷之間鏈結體(亦即主幹)二者均被新穎基團置換。該等鹼基單位維持與適當核酸標靶化合物雜交。其中一種寡聚化合物為已顯示具有優異之雜交性質之RNA擬似物，稱為肽核酸(PNA)。PNA化合物中，RNA之糖主幹被包含醯胺之主幹(特定言之胺基乙基甘胺酸主幹)置換。核鹼基則保留並直接或間接結合主幹之醯胺部份之雜(aza)氮原子。教示PNA化合物製法之代表性美國專利案包括(但不限於)：美國專利案案號5,539,082；5,714,331；與5,719,262，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。適用於本發明iRNA之其他PNA化合物說明於例如：Nielsen等人Science ,1991,254,1497-1500。
如本發明所說明特徵之某些具體例包括具有硫代磷酸根主幹之RNA與具有雜原子主幹之寡核苷，特定言之上述美國專利案案號5,489,677之--CH2 --NH--CH2 -、--CH2 --N(CH3 )--O--CH2 --[稱為亞甲基(甲基亞胺基)或MMI主幹]、--CH2 --O--N(CH3 )--CH2 --、--CH2 --N(CH3 )-- N(CH3 )--CH2 --與--N(CH3 )--CH2 --CH2 --[其中天然磷酸二酯主幹係由--O--P--O--CH2 --代表]，與上述美國專利案案號5,602,240之醯胺主幹。有些具體例中，如本文所說明特徵之RNA具有上述美國專利案案號5,034,506之N-嗎啉基主幹結構。
經修飾之RNA亦可包含一個或多個經取代之糖部份基團。如本文所說明特徵之該等iRNA(例如：dsRNA)包括在2'-位置具有下列其中一項：OH；F；O-、S-、或N-烷基；O-、S-、或N-烯基；O-、S-或N-炔基；或O-烷基-O-烷基，其中該烷基、烯基與炔基可為經取代或未經取代之C1 至C10 烷基或C2 至C10 烯基與炔基。合適修飾實例包括O[(CH2 )n O]mCH3 、O(CH2 )‧n OCH3 、O(CH2 )n NH2 、O(CH2 )n CH3 、O(CH2 )n ONH2 、與O(CH2 )n ON[(CH2 )n CH3 )]2 ，其中n與m為1至約10。其他具體例中，dsRNA在2'-位置具有下列其中一項：C1 至C10 低碳數烷基、經取代之低碳數烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH3 、OCN、Cl、Br、CN、CF3 、OCF3 、SOCH3 、SO2 CH3 、ONO2 、NO2 、N3 、NH2 、雜環烷基、雜環烷芳基、胺基烷基胺基、聚烷基胺基、經取代之矽烷基、RNA裂解基團、報導子基團、嵌入劑、改善iRNA之藥物動力學之基團、或改善iRNA之藥效學性質之基團、及具有類似性質之取代基。有些具體例中，該修飾包括2'-甲氧基乙氧基(2'-O--CH2 CH2 OCH3 ，亦稱為2'-O-(2-甲氧基乙基)或2'-MOE)(Martin等人，Helv.Chim.Acta ,1995,78：486-504)，亦即烷氧-烷氧基。另一 種修飾實例為2'-二甲基胺基氧乙氧基，亦即O(CH2 )2 ON(CH3 )2 基團(亦稱為2'-DMAOE，其說明於下文實例中)與2'-二甲基胺基乙氧基乙氧基(本領域上亦稱為2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基或2'-DMAEOE)，亦即2'-O--CH2 --O--CH2 --N(CH2 )2 。
其他修飾包括2'-甲氧基(2'-OCH3 )、2'-胺基丙氧基(2'-OCH2 CH2 CH2 NH2 )與2'-氟(2'-F)。亦可在iRNA之RNA上其他位置進行類似修飾，特定言之在3'末端核苷酸上糖之3'位置或在2'-5'鏈結dsRNA與5'末端核苷酸之5'位置。iRNA亦可改具有糖擬似物(如環丁基部份基團)替代呋喃戊糖基糖。教示此等經修飾糖結構製法之代表性美國專利案包括(但不限於)：美國專利案案號4,981,957；5,118,800；5,319,080；5,359,044；5,393,878；5,446,137；5,466,786；5,514,785；5,519,134；5,567,811；5,576,427；5,591,722；5,597,909；5,610,300；5,627,053；5,639,873；5,646,265；5,658,873；5,670,633；及5,700,920，其中某些專利案已成為本申請案共同擁有。上述完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。
iRNA亦包括核鹼基(本領域上通常簡稱“鹼基”)修飾或取代。本文所採用“未經修飾”或“天然”核鹼基包括嘌呤鹼基腺嘌呤(A)與鳥嘌呤(G)，與嘧啶鹼基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)與尿嘧啶(U)。經修飾之核鹼基包括其他合成性與天然核鹼基，如：去氧-胸腺嘧啶(dT)、5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5-羥基甲基胞嘧啶、黃嘌呤、 次黃嘌呤、2-胺基腺嘌呤、腺嘌呤與鳥嘌呤之6-甲基與其他烷基衍生物、腺嘌呤與鳥嘌呤之2-丙基與其他烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶與2-硫胞嘧啶、5-鹵尿嘧啶與胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶與胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶與胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶、8-鹵基、8-胺基、8-硫醇、8-硫烷基、8-羥基與其他8-經取代之腺嘌呤與鳥嘌呤、5-鹵基(特定言之5-溴、5-三氟甲基)與其他5-經取代之尿嘧啶與胞嘧啶、7-甲基鳥嘌呤與7-甲基腺嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤與8-氮雜腺嘌呤、7-去氮雜鳥嘌呤與7-去氮雜腺嘌呤與3-去氮雜鳥嘌呤與3-去氮雜腺嘌呤。其他核鹼基包括彼等揭示於美國專利案案號3,687,808；彼等揭示於Modified Nucleosides in Biochemistry,Biotechnology and Medicine,Herdewijn,P.編輯Wiley-VCH,2008；彼等揭示於The Concise Encyclopedia Of Polymer Science and Engineering,p.858-859,Kroschwitz,J.L,ed.John Wiley & Sons,1990；彼等揭示於Englisch等人Angewandte Chemie,International Edition,1991,30,613，及彼等揭示於Sanghvi,Y S.，第15章，dsRNA Research and Applications,p.289-302,Crooke,S.T.及Lebleu,B.,Ed.,CRC Press,1993。其中某些核鹼基特別適用於提高如本發明所說明特徵之寡聚化合物之結合親和性。此等包括5-經取代之嘧啶、6-氮雜嘧啶與N-2、N-6與O-6經取代之嘌呤，包括2-胺基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶與5-丙炔基胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶取代已顯示可使核酸雙螺旋安定性提高 0.6-1.2℃(Sanghvi,Y.S.,Crooke,S.T.及Lebleu,B.編輯之dsRNA Research and Applications,CRC Press,Boca Raton,1993,pp.276-278)且成為鹼基取代實例，甚至更特別當與2'-O-甲氧基乙基糖修飾組合時。
教示上述某些經修飾之核鹼基及其他經修飾之核鹼基製法之代表性美國專利案包括(但不限於)：美國專利案案號3,687,808、4,845,205；5,130,30；5,134,066；5,175,273；5,367,066；5,432,272；5,457,187；5,459,255；5,484,908；5,502,177；5,525,711；5,552,540；5,587,469；5,594,121,5,596,091；5,614,617；5,681,941；5,750,692；6,015,886；6,147,200；6,166,197；6,222,025；6,235,887；6,380,368；6,528,640；6,639,062；6,617,438；7,045,610；7,427,672；及7,495,088，其完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。
iRNA之RNA亦可經修飾而包括一個或多個雙環糖部份基團。“雙環糖”係經過兩個原子之橋連基修飾之呋喃糖基環。“雙環核苷”(“BNA”)為具有糖部份基團之核苷，其包含一個連接糖環之兩個碳原子之橋連基，藉以形成雙環系。某些具體例中，該橋連基連接糖環之4'-碳與2'-碳。因此，有些具體例中，本發明製劑可包括一個或多個鎖核酸(LNA)。鎖核酸為具有經修飾之核糖部份基團之核苷酸，其中該核糖部份基團額外包含連接2'與4'碳之橋連基。換言之，LNA為包含雙環糖部份基團(其包含4'-CH2 -O-2'橋連基)之核苷酸。此結構有效地“封鎖” 3'-內部結構構形內之核糖。添加鎖核酸至siRNA中時，已顯示可以提高血清中siRNA安定性，並降低偏離標靶之效應(Elmen,J.等人(2005)Nucleic Acids Research 33(1)：439-447；Mook,OR.等人(2007)Mol Canc Ther 6(3)：833-843；Grunweller,A.等人(2003)Nucleic Acids Research 31(12)：3185-3193)。用於本發明聚核苷酸之雙環核苷實例包括(但不限於)在4'與2'核糖基環原子之間包含橋連基之核苷。某些具體例中，本發明反義聚核苷酸劑包括一個或多個包含4'至2'橋連基之雙環核苷。此等4'至2'橋連雙環核苷實例包括(但不限於)：4'-(CH2 )-O-2'(LNA)；4'-(CH2 )-S-2'；4'-(CH2)2-O-2'(ENA)；4'-CH(CH3 )-O-2'(亦稱為“限制性乙基”或“cEt”)及4'-CH(CH2 OCH3 )-O-2'(與其類似物；參見例如：美國專利案案號7,399,845)；4'-C(CH3 )(CH3 )-O-2'(與其類似物；參見例如：美國專利案案號8,278,283)；4'-CH2 -N(OCH3 )-2'(與其類似物；參見例如：美國專利案案號8,278,425)；4'-CH2 -O-N(CH3 )-2'(參見例如：美國專利公告案案號2004/0171570)；4'-CH2 -N(R)-O-2'，其中R為H、C1-C12烷基、或保護基(參見例如：美國專利案案號7,427,672)；4'-CH2 -C(H)(CH3 )-2'(參見例如：Chattopadhyaya等人J.Org.Chem .,2009,74,118-134)；及4'-CH2 -C(-CH2 )-2'(與其類似物；參見例如：美國專利案案號8,278,426)。上述完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。
教示鎖核酸核苷酸製法之其他代表性美國 專利案與美國專利公告案包括(但不限於)下列：美國專利案案號6,268,490；6,525,191；6,670,461；6,770,748；6,794,499；6,998,484；7,053,207；7,034,133；7,084,125；7,399,845；7,427,672；7,569,686；7,741,457；8,022,193；8,030,467；8,278,425；8,278,426；8,278,283；US 2008/0039618；及US 2009/0012281，其完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。
上述任何雙環核苷可以製成具有一或多個立體化學糖組態，包括例如：α-L-呋喃核糖及β-D-呋喃核糖(參見WO 99/14226)。
iRNA之RNA亦可經修飾而包括一或多個限制性乙基核苷酸。本文所採用"限制性乙基核苷酸"或"cEt"為包含雙環糖部份基團(其包含4'-CH(CH3 )-0-2'橋連基)之鎖核酸。一具體例中，限制性乙基核苷酸係S構形，本文中稱為“S-cEt”。
本發明iRNA亦包括一或多個“構形限制性核苷酸”(“CRN”)。CRN為具有連接核糖之C2’與C4’碳或核糖之C3與-C5'碳之鏈結基之核苷酸類似物。CRN封鎖核糖環成為安定構形，並提高對mRNA之雜交親和性。該鏈結基之長度足以將氧安置在具有最佳安定性與親和性之位置，產生較少核糖皺摺。
教示上述某些CRN之製法之代表性公開文獻包括(但不限於)：美國專利公告案案號2013/0190383；及PCT公告案WO 2013/036868，其完整揭示內容已分別以 引用之方式併入本文中。
本發明iRNA之一或多個核苷酸亦可包括經羥基甲基取代之核苷酸。“經羥基甲基取代之核苷酸”為無環2’-3’-裂環(seco)-核苷酸，亦稱為“非鎖核酸”(“UNA”)修飾。
教示UNA製法之代表性美國公告案包括(但不限於)美國專利案案號8,314,227；及美國專利公告案案號2013/0096289；2013/0011922；及2011/0313020，其完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。
RNA分子末端之可能安定化修飾包括N-(乙醯基胺基己醯基)-4-羥基脯胺醇(Hyp-C6-NHAc)、N-(己醯基)-4-羥基脯胺醇(Hyp-C6)、N-(乙醯基[-4-羥基脯胺醇(Hyp-NHAc)、胸苷-2'-O-去氧胸苷(醚)、N-(胺基己醯基)-4-羥基脯胺醇(Hyp-C6-胺基)、2-二十二碳烷醯基-尿苷-3"-磷酸酯、反向鹼基dT(idT)，等等。此修飾之揭示內容可參見PCT公告案案號WO 2011/005861。
本發明iRNA之核苷酸之其他修飾包括5’磷酸酯或5’磷酸酯擬似物，例如：RNAi劑之反義股上之5’-末端磷酸酯或磷酸酯擬似物。合適之磷酸酯擬似物揭示於例如：美國專利公告案案號2012/0157511，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。
A . 包含本發明基序之經修飾iRNA
本發明某些態樣中，本發明雙股RNAi劑包括經過如例如：WO 2013/075035(申請日：2012年11月16 日)之揭示內容進行化學修飾之製劑，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。如本文與PCT公告案案號WO 2013/075035所示，藉由在RNAi劑之正義股及/或反義股(特定言之在裂解位點或接近裂解位點處)引進一個或多個在三個連續核苷酸具有三個相同修飾之基序，可得到優異結果。有些具體例中，RNAi劑之正義股與反義股可能完全經修飾。引進此等基序會中斷正義及/或反義股上可能存在之修飾型態。RNAi劑可視需要例如：在正義股上接合GalNAc衍生物配體。所得RNAi劑即具有優異基因緘默活性。
更明確言之，已驚人地發現，當雙股RNAi劑之正義股與反義股為經完全修飾而在RNAi劑之至少一股之裂解位點或接近裂解位點處具有一個或多個在三個連續核苷酸具有三個相同修飾之基序時，可優異地提高RNAi劑之基因緘默活性。
因此本發明提供一種可於活體內抑制標靶基因(亦即HBV基因)表現之雙股RNAi劑。該RNAi劑包含正義股與反義股。該RNAi劑之各股之長度可能為12-30個核苷酸之範圍。例如：各股可能為14-30個核苷酸之長度、17-30個核苷酸之長度、25-30個核苷酸之長度、27-30個核苷酸之長度、17-23個核苷酸之長度、17-21個核苷酸之長度、17-19個核苷酸之長度、19-25個核苷酸之長度、19-23個核苷酸之長度、19-21個核苷酸之長度、21-25核苷酸之長度、或21-23個核苷酸之長度。
正義股與反義股通常形成雙螺旋雙股RNA (“dsRNA”)，本文亦稱為“RNAi劑”。RNAi劑之雙螺旋區之長度可能為12-30對核苷酸。例如：雙螺旋區可能為14-30對核苷酸之長度、17-30對核苷酸之長度、27-30對核苷酸之長度、17-23對核苷酸之長度、17-21對核苷酸之長度、17-19對核苷酸之長度、19-25對核苷酸之長度、19-23對核苷酸之長度、19-21對核苷酸之長度、21-25對核苷酸之長度、或21-23對核苷酸之長度。另一項實例中，雙螺旋區之長度係選自：15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、與27對核苷酸。
一具體例中，RNAi劑可能在其中一股或兩股之3’-端、5’-端或兩端包含一個或多個突出段區及/或封端基團。該突出段之長度可為1-6個核苷酸，例如：2-6個核苷酸之長度、1-5個核苷酸之長度、2-5個核苷酸之長度、1-4個核苷酸之長度、2-4個核苷酸之長度、1-3個核苷酸之長度、2-3個核苷酸之長度、或1-2個核苷酸之長度。該突出段可為其中一股長度超過另一股所造成，或為相同長度之兩股交錯所造成。突出段可與標靶mRNA形成錯配或其可與基因序列標靶互補或可為另一個序列。第一與第二股亦可例如：利用另一個鹼基聯結形成髮夾型，或利用其他非鹼基鏈結體聯結。
一具體例中，RNAi劑之突出段區之核苷酸可彼此分別獨立為經修飾或未經修飾之核苷酸，包括(但不限於)：2’-糖修飾，如：2-F、2’-O甲基、胸苷(T)、2`-O-甲氧基乙基-5-甲基尿苷(Teo)、2`-O-甲氧基乙基腺苷 (Aeo)、2`-O-甲氧基乙基-5-甲基胞苷(m5Ceo)與其任何組合。例如：TT可為任一股上任一端之突出段序列。突出段可與標靶mRNA形成錯配，或其可與基因序列標靶互補或可為另一個序列。
RNAi劑之正義股、反義股或兩股之5’-或3’-突出段可經過磷酸化。有些具體例中，突出段區(群)包含兩個核苷酸，其在這兩個核苷酸之間具有硫代磷酸根，其中這兩個核苷酸可相同或不同。一具體例中，突出段存在於正義股、反義股或兩股之3’-端。一具體例中，此3’-突出段存在於反義股。一具體例中，此3’-突出段存在於正義股上。
RNAi劑可能僅包含單一突出段，其可強化RNAi之干擾活性，不會影響整體安定性。例如：單股突出段可能位於正義股之3'末端，或者在反義股之3'末端。RNAi亦可能在反義股之5’-端(或正義股之3’-端)具有鈍端，或反之亦然。通常RNAi之反義股在3’-端具有核苷酸突出段，且5’-端為鈍端。在不希望受到理限制下，反義股5’-端之不對稱鈍端與反義股3’-端之突出段有利於引導該股進入RISC過程。
一具體例中，RNAi劑為兩端均為鈍端之19個核苷酸之長度，其中該正義股包含至少一個在5’端起之位置7、8、9三個連續核苷酸具有三個2’-F修飾之基序。反義股包含至少一個在5’端起之位置11、12、13三個連續核苷酸具有三個2’-O-甲基修飾之基序。
另一具體例中，RNAi劑為兩端均為鈍端之20個核苷酸之長度，其中該正義股包含至少一個在5’端起之位置8、9、10三個連續核苷酸具有三個2’-F修飾之基序。反義股包含至少一個在5’端起之位置11、12、13三個連續核苷酸具有三個2’-O-甲基修飾之基序。
再另一具體例中，RNAi劑為兩端均為鈍端之21個核苷酸之長度，其中該正義股包含至少一個在5’端起之位置9、10、11三個連續核苷酸具有三個2’-F修飾之基序。反義股包含至少一個在5’端起之位置11、12、13三個連續核苷酸具有三個2’-O-甲基修飾之基序。
一具體例中，RNAi劑包含21個核苷酸之正義股與23個核苷酸之反義股，其中該正義股包含至少一個在5’端起之位置9、10、11三個連續核苷酸具有三個2’-F修飾之基序；反義股包含至少一個在5’端起之位置11、12、13三個連續核苷酸具有三個2’-O-甲基修飾之基序，其中RNAi劑之一端為鈍端，而另一端包含具有2個核苷酸之突出段。較佳係該具有2個核苷酸之突出段位在反義股之3’-端。
當該具有2個核苷酸之突出段位在反義股之3’-端時，末端三個核苷酸之間可能有兩個硫代磷酸根之核苷酸之間鏈結基，其中該三個核苷酸中有兩個為突出段核苷酸，第三個核苷酸為鄰接該突出段核苷酸之配對核苷酸。一具體例中，RNAi劑在正義股5’-端與反義股5’-端之兩端之末端三個核苷酸之間另外具有兩個硫代磷酸根之核 苷酸之間鏈結基。一具體例中，RNAi劑之正義股與反義股中每一個核苷酸(包括作為基序之一部份之核苷酸)均為經修飾之核苷酸。一具體例，各殘基係分別獨立經2’-O-甲基或3’-氟修飾，例如：在交替之基序上。RNAi劑可視需要再包含配體(較佳為GalNAc3 )。
一具體例中，RNAi劑包含正義股與反義股，其中正義股之長度為25-30個核苷酸殘基，其中第一股始於5'末端核苷酸(位置1)之位置1至23包含至少8個核糖核苷酸；反義股之長度為36-66個核苷酸殘基，從3'末端核苷酸開始，在與正義股之位置1-23配對形成雙螺旋之位置包含至少8個核糖核苷酸；其中至少反義股之3'末端核苷酸未與正義股配對，且至多6個連續3'末端核苷酸未與正義股配對，藉以形成具有1-6個核苷酸之3'單股突出段；其中反義股5'末端包含10-30個未與正義股配對之連續核苷酸，藉以形成具有10-30個核苷酸之單股5'突出段；其中當正義與反義股依最大互補性進行排列時，至少正義股5'末端及3'末端核苷酸會與反義股之核苷酸形成鹼基對，藉以在正義與反義股之間形成實質上雙螺旋區；且該反義股沿著反義股上至少19個核糖核苷酸長度與標靶RNA充份互補時，可在雙股核酸引進哺乳動物細胞中時，降低標靶基因表現；且其中該正義股包含至少一個在三個連續核苷酸具有三個2’-F修飾之基序，其中至少一個基序出現在裂解位點或接近裂解位點處。該反義股在裂解位點或接近裂解位點處包含至少一個在三個連續核苷酸具 有三個2’-O-甲基修飾之基序。
一具體例中，RNAi劑包含正義與反義股，其中RNAi劑包含長度為至少25個及至多29個核苷酸之第一股與長度為至多30個核苷酸之第二股，其具有至少一個自5’端起位置11、12、13連續三個核苷酸上三個2’-O-甲基修飾之基序；其中第一股3’端與第二股5’端形成鈍端，且第二股之3’端比第一股長1至4個核苷酸，其中雙螺旋區之長度為至少25個核苷酸，且第二股與標靶mRNA沿著第二股至少19個核苷酸長度充份互補，當RNAi劑引進哺乳動物細胞中時，可以降低標靶基因表現，且其中dicer裂解RNAi劑較佳係產生包含第二股3’端之siRNA，藉以降低哺乳動物細胞中之標靶基因表現。該RNAi劑可視需要再包含配體。
一具體例中，RNAi之正義股劑包含至少一個在三個連續核苷酸具有三個相同修飾之基序，其中一個基序出現在正義股之裂解位點。
一具體例中，RNAi劑之反義股亦可包含至少一個在三個連續核苷酸具有三個相同修飾之基序，其中一個基序出現在反義股之裂解位點或接近裂解位點處。
當RNAi劑具有長度為17至23個核苷酸之雙螺旋區時，反義股之裂解位點通常約在自5’-端起之10、11與12位置。因此，三個相同修飾之基序可能出現在反義股之9、10、11位置；10、11、12位置；11、12、13位置；12、13、14位置；或13、14、15位置，其係從反義股 5’-端起之第一個核苷酸開始計數，或從反義股5’-端之雙螺旋區內第一對核苷酸開始計數。反義股中之裂解位點亦可能隨RNAi從5’-端開始之雙螺旋區長度變化。
RNAi劑之正義股可能在該股之裂解位點包含至少一個在三個連續核苷酸具有三個相同修飾之基序；且反義股可能在該股之裂解位點或接近裂解位點處具有至少一個在三個連續核苷酸具有三個相同修飾之基序。當正義股與反義股形成dsRNA雙螺旋時，正義股與反義股之排列可讓正義股上一個三個核苷酸之基序與反義股上一個三個核苷酸之基序具有至少一個核苷酸重疊，亦即正義股上至少一個三個核苷酸之基序與反義股上至少一個三個核苷酸之基序形成鹼基對。或者，可能至少兩個核苷酸重疊，或可能所有三個核苷酸重疊。
一具體例中，RNAi劑之正義股可能包含超過一個在三個連續核苷酸具有三個相同修飾之基序。該第一基序可能出現在該股之裂解位點或接近裂解位點，且該其他基序可能為側翼修飾。本文中術語“側翼修飾”係指出現在該股之另一部份上之基序，其與出現在相同股上之裂解位點或接近裂解位點之基序分開。該側翼修飾係與第一基序相鄰或分隔至少一個或更多個核苷酸。當彼等基序彼此緊鄰時，則該等基序之化學係彼此獨立，且當基序之間分隔一個或多個核苷酸時，則其化學可能相同或不同。可能出現兩個或更多個側翼修飾。例如：當存在兩個側翼修飾時，各側翼修飾可能存在於相對於該裂解位點或接近 裂解位點之第一基序之一端或在該前導基序之另一側。
如同正義股，RNAi劑之反義股可能包含超過一個在三個連續核苷酸具有三個相同修飾之基序，其中至少一個基序出現在該股之裂解位點或接近裂解位點。此反義股亦可能包含一個或多個側翼修飾，其排列應類似可能出現在正義股上之側翼修飾。
一具體例中，RNAi劑之正義股或反義股之側翼修飾通常不包括該股之3’-端、5’-端或兩端上第一個或兩個末端核苷酸。
另一具體例中，RNAi劑之正義股或反義股之側翼修飾通常不包括該股之3’-端、5’-端或兩端上雙螺旋區內第一個或兩個配對之核苷酸。
當RNAi劑之正義股與反義股各包含至少一個側翼修飾時，該側翼修飾可能落在雙螺旋區之同一端，且具有一、二或三個核苷酸重疊。
當RNAi劑之正義股與反義股各包含至少兩個側翼修飾時，正義股與反義股之排列可使各來自一股之兩個修飾落在雙螺旋區之一端，具有一、二或三個核苷酸重疊；各來自一股之兩個修飾落在雙螺旋區之另一端，具有一、二或三個核苷酸重疊；各來自一股之兩個修飾落在前導基序之每一側，且在雙螺旋區有一、二或三個核苷酸重疊。
一具體例中，RNAi劑之正義股與反義股中每一個核苷酸(包括作為基序之一部份之核苷酸)可能經過 修飾。各核苷酸可能經過相同或不同修飾法修飾，其可包括以下一或多種修改：一個或兩個非鏈結性磷酸態氧及/或一個或多個鏈結性磷酸態氧；修改核糖之組成，例如：核糖上之2' 羥基；以“去磷酸”鏈結體完全置換磷酸根部份基團；修飾或置換天然鹼基；及置換或修飾核糖-磷酸根主幹。
由於核酸為次單元之聚合物，因此許多修飾會出現在核酸內重覆之位置，例如：鹼基或磷酸根部份基團或磷酸根部份基團之非鏈結性O之修飾。有些例子中，將在核酸之所有個別位置進行修飾，但許多例子中並未進行修飾。例如：可能僅在3’或5’末端位置進行修飾，可能僅在一個末端區進行，例如：在末端核苷酸之位置或在一股之最後2、3、4、5或10個核苷酸。可能在雙股區、單股區或二者進行修飾。可能僅在RNA之雙股區或可能僅在RNA之單股區進行修飾，例如：在非鏈結性O位置之硫代磷酸根修飾可能在末端區之一個或兩個末端進行，例如：在一股之末端核苷酸位置或最後2、3、4、5、或10個核苷酸，或可能在雙股與單股區，特定言之末端進行。該或該等5’端可經磷酸化。
為了例如：加強安定性，可能在突出段中包括特定鹼基，或在單股突出段，例如：5’或3’突出段或二者包括經修飾之核苷酸或核苷酸替代物。例如：較佳在突出段中包括嘌呤核苷酸。有些具體例中，3’或5’突出段中所有或有些鹼基可經修飾，例如：具有本文所說明之修 飾。修飾法可包括，例如：可採用本領域上已知之修飾法在核糖之2’位置上進行修飾，例如：改用去氧核糖核苷酸、2’-去氧-2’-氟(2’-F)或2’-O-甲基修飾替代核鹼基之核糖；及磷酸根之修飾，例如：硫代磷酸根修飾法。突出段不一定與標靶序列同源。
一具體例中，正義股與反義股之各殘基分別獨立經LNA、CRN、cET、UNA、HNA、CeNA、2’-甲氧基乙基、2’-O-甲基、2’-O-烯丙基、2’-C-烯丙基、2’-去氧、2’-羥基、或2’-氟修飾。該等股包含超過一個修飾。一具體例中，正義股與反義股之各殘基分別獨立經2’-O-甲基或2’-氟修飾。
正義股與反義股上通常出現至少兩種不同修飾。這兩種修飾可能為2’-O-甲基或2’-氟修飾，或其他。
一具體例中，Na 及/或Nb 包含交替修飾型態。本文所採用語“交替基序”係指具有一或多種修飾之基序，各修飾係在一股之交替核苷酸上進行。該交替核苷酸可能係指每隔一個核苷酸有一個修飾或每隔三個核苷酸有一個修飾，或類似型態。例如：若A、B與C分別代表核苷酸上一種修飾時，則該交替基序可為“ABABABABABAB…”、“AABBAABBAABB…”、“AABAABAABAAB…”、“AAABAAABAAAB…”、“AAABBBAAABBB…”、或“ABCABCABCABC…”，等等。
交替基序中可能包括相同或不同之修飾型 態。例如：若A、B、C、D分別代表核苷酸上一種修飾型態時，交替型態(亦即每隔一個核苷酸上之修飾型態)可能相同，但各正義股或反義股之修飾型態可能分別選自交替基序中之數種修飾可能性，如：“ABABAB…”、“ACACAC…”、“BDBDBD…”或“CDCDCD…”，等等。
一具體例中，本發明RNAi劑包含在正義股上交替基序之修飾型態相對於反義股上交替基序之修飾型態出現位移。該位移可使正義股核苷酸之經修飾基團對應於反義股核苷酸之經不同修飾之基團，且反之亦然。例如：當正義股與dsRNA雙螺旋中反義股配對時，雙螺旋區內之正義股之交替基序可能始於該股之5’-3’之“ABABAB”，而反義股之交替基序可能始於該股之5’-3’之“BABABA”。另一項實例中，雙螺旋區內之正義股之交替基序可能始於該股之5’-3’之“AABBAABB”，而反義股之交替基序可能始於該股之5’-3’之“BBAABBAA”，因此正義股與反義股之間之修飾型態會出現完全或部份位移。
一具體例中，RNAi劑包含在原始正義股上2'-O-甲基修飾與2’-F修飾之交替基序型態相對於在原始反義股上2'-O-甲基修飾與2’-F修飾之交替基序型態出現位移，亦即正義股上之2'-O-甲基修飾之核苷酸與反義股上2'-F修飾之核苷酸形成鹼基配對，且反之亦然。正義股之1-位置可能始於2'-F修飾，及反義股之1-位置可能始於2'-O-甲基修飾。
正義股及/或反義股上引進一個或多個在三 個連續核苷酸具有三個相同修飾之基序時，可中斷正義股及/或反義股之原始修飾型態。這種在正義及/或反義股中引進一個或多個在三個連續核苷酸具有三個相同修飾之基序而中斷正義及/或反義股之修飾型態時，驚人地加強該基因對標靶基因之緘默活性。
一具體例中，當在任一股中引進在三個連續核苷酸具有三個相同修飾之基序時，鄰接該基序之核苷酸修飾為不同於該基序修飾之修飾。例如：包含該基序之序列部份為“…Na YYYNb …”，其中“Y”代表在三個連續核苷酸具有三個相同修飾之基序之修飾，及“Na ”與“Nb ”代表鄰接基序“YYY”之核苷酸之修飾，其不同於Y之修飾，且其中Na 與Nb 可為相同或不同修飾。或者，當出現側翼修飾時，Na 及/或Nb 可能存在或不存在。
RNAi劑可能進一步包含至少一個硫代磷酸根或甲基膦酸根之核苷酸之間鏈結基。硫代磷酸根或甲基膦酸根之核苷酸之間鏈結基修飾可能出現在正義股或反義股或兩股之股中任何位置之任何核苷酸上。例如：核苷酸之間鏈結基修飾可能出現在正義股及/或反義股之每一個核苷酸上；各核苷酸之間鏈結基修飾可能呈交替型態出現在正義股及/或反義股上；或正義股或反義股可能包含呈交替型態之兩種核苷酸之間鏈結基之修飾。正義股上核苷酸之間鏈結基之交替修飾型態可能與反義股相同或不同，正義股上核苷酸之間鏈結基之交替修飾型態可能相對於反義股上核苷酸之間鏈結基之交替修飾型態出現位移。一具體 例中，雙股RNAi劑包含6至8個硫代磷酸根之核苷酸之間鏈結基。一具體例中，反義股在5’-末端包含兩個硫代磷酸根之核苷酸之間鏈結基及在3’-末端包含兩個硫代磷酸根之核苷酸之間鏈結基，正義股則在5’-末端或3’-末端包含至少兩個硫代磷酸根之核苷酸之間鏈結基。
一具體例中，RNAi在突出段區包含硫代磷酸根或甲基膦酸根之核苷酸之間鏈結基修飾。例如：突出段區可能包含兩個核苷酸，其在兩個核苷酸之間具有硫代磷酸根或甲基膦酸根之核苷酸之間鏈結基。亦可能進行核苷酸之間鏈結基修飾來鏈結突出段核苷酸與雙螺旋區內末端配對之核苷酸。例如：至少2、3、4個或所有突出段核苷酸可能利用硫代磷酸根或甲基膦酸根之核苷酸之間鏈結基鏈結，且可視需要可能有額外硫代磷酸根或甲基膦酸根之核苷酸之間鏈結基鏈結該突出段核苷酸與鄰接該突出段核苷酸之配對核苷酸。例如：末端三個核苷酸之間可能有至少兩個硫代磷酸根之核苷酸之間鏈結基，三個核苷酸中有兩個為突出段核苷酸，第三個為鄰接該突出段核苷酸之配對核苷酸。末端這三個核苷酸可在反義股3’-端、正義股3’-端、反義股5’-端、及/或反義股5’-端。
一具體例中，該具有2個核苷酸之突出段係在反義股3’-端，且末端三個核苷酸之間有兩個硫代磷酸根之核苷酸之間鏈結基，這三個核苷酸中有兩個為突出段核苷酸，第三個核苷酸為鄰接該突出段核苷酸之配對核苷酸。該RNAi劑可視需要再於正義股5’-端與反義股5’-端 兩端，於末端三個核苷酸之間另包含兩個硫代磷酸根之核苷酸之間鏈結基。
一具體例中，RNAi劑在雙螺旋內包含與標靶錯配(群)，或其組合。錯配可能發生於突出段區或雙螺旋區。鹼基對可能依據其促進解離或熔解之傾向排序(例如：依據特定一對之結合或解離之自由能，最簡單之方法為檢視該一對核苷酸對另一對核苷酸，但亦可針對鄰接核苷酸或採用類似分析法)。以促進解離而言：A：U優於G：C；G：U優於G：C；與I：C優於G：C(I=肌苷)。錯配，例如：非典型或典型以外之配對(如本文中其他說明)優於典型(A：T、A：U、G：C)配對；且包括通用鹼基之配對優於典型配對。
一具體例中，RNAi劑包含雙螺旋區內反義股5’-末端起前1、2、3、4、或5對鹼基中至少一對，其係分別獨立選自：A：U、G：U、I：C，及錯配對，例如：非典型或典型以外之配對或包括通用鹼基之配對，以促進雙螺旋反義股5’-端之解離。
一具體例中，雙螺旋區中反義股5’-端起1-位置之核苷酸係選自下列各物所組成群中：A、dA、dU、U、與dT。或者，雙螺旋區中反義股5’-端起前1、2或3對鹼基中至少一對為AU鹼基對。例如：雙螺旋區中反義股5’-端起第一對鹼基為AU鹼基對。
另一具體例中，正義股3’-端之核苷酸為去氧-胸腺嘧啶(dT)。另一具體例中，反義股3’-端之核苷酸 為去氧-胸腺嘧啶(dT)。一具體例中，正義及/或反義股之3’-端上有一個去氧-胸腺嘧啶核苷酸短序列，例如：兩個dT核苷酸。
一具體例中，正義股序列可由式(I)代表：5'np-Na-(XXX)i-Nb-YYY-Nb-(ZZZ)j-Na-nq 3' (I)
其中：i及j分別獨立為0或1；p及q分別獨立為0-6；各Na分別獨立代表包含0-25個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列，各序列包含至少兩個經不同修飾之核苷酸；各Nb分別獨立代表包含0-10個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列；各np及nq分別獨立代表突出段核苷酸；其中Nb及Y不具有相同修飾；及XXX、YYY及ZZZ分別獨立代表一個在三個連續核苷酸具有三個相同修飾之基序。較佳為YYY為均經2’-F修飾之核苷酸。
一具體例中，Na 及/或Nb 包含交替型態之修飾。
一具體例中，YYY基序出現在正義股裂解位點或接近該位點。例如：當該RNAi劑具有17-23個核苷酸長度之雙螺旋區時，YYY基序出現在正義股之裂解位點或其鄰近位點(例如：可能在位置6、7、8，7、8、9，8、9、10，9、10、11，10、11、12，或11、12、13)，其係從5’-端 第一個核苷酸開始算起；或可視需要從雙螺旋區內5’-端第一對核苷酸算起。
一具體例中，i為1及j為0，或i為0及j為1，或i與j均為1。因此正義股可由下式代表：5' np -Na -YYY-Nb -ZZZ-Na -nq 3' (Ib)；5' np -Na -XXX-Nb -YYY-Na -nq 3' (Ic)；或5' np -Na -XXX-Nb -YYY-Nb -ZZZ-Na -nq 3' (Id)。
當正義股由式(Ib)代表時，Nb 代表包含0-10、0-7、0-5、0-4、0-2或0個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。各Na 可分別獨立代表包含2-20、2-15、或2-10個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。
當正義股由式(Ic)代表時，Nb 代表包含0-10、0-7、0-10、0-7、0-5、0-4、0-2或0個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。各Na 可分別獨立代表包含2-20、2-15、或2-10個經修飾核苷之寡核苷酸序列。
當正義股由式(Id)代表時，各Nb 分別獨立代表包含0-10、0-7、0-5、0-4、0-2或0個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。較佳係Nb 為0、1、2、3、4、5或6。各Na 可分別獨立代表包含2-20、2-15、或2-10個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。各X、Y及Z可彼此相同或相異。
其他具體例中，i為0及j為0，且正義股可由下式代表：5' np -Na -YYY-Na -nq 3' (Ia)。
當正義股由式(Ia)代表時，各Na 可分別獨立 代表包含2-20、2-15、或2-10個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。
一具體例中，RNAi之反義股序列可由式(II)代表：5'nq’ -Na '-(Z’Z'Z')k -Nb '-Y'Y'Y'-Nb '-(X'X'X')l -N'a -np '3' (II)
其中：k及l分別獨立為0或1；p’及q’分別獨立為0-6；各Na '分別獨立代表包含0-25個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列，各序列包含至少兩個經不同修飾之核苷酸；各Nb '分別獨立代表包含0-10個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列；各np '及nq '分別獨立代表突出段核苷酸；其中Nb ’及Y’不具有相同修飾；及X'X'X'、Y'Y'Y'及Z'Z'Z'分別獨立代表一個在三個連續核苷酸具有三個相同修飾之基序。
一具體例中，Na ’及/或Nb ’包含交替型態之修飾。
Y'Y'Y'基序出現在反義股之裂解位點或接近裂解位點。例如：當RNAi劑之雙螺旋區長度為17-23個核苷酸時，該Y'Y'Y'基序可發生於反義股之位置9、10、11；10、11、12；11、12、13；12、13、14；或13、14、15，其係從5’-端之第一個核苷酸開始計算；或可視需要從雙螺旋區內5’-端之第一對配對核苷酸開始計算。較佳係該 Y'Y'Y'基序出現在位置11、12、13。
一具體例中，Y'Y'Y'基序為均經2’-OMe修飾之核苷酸。
一具體例中，k為1及l為0，或k為0及l為1，或k與l均為1。
因此反義股可由下式代表：5'nq’ -Na '-Z'Z'Z'-Nb '-Y'Y'Y'-Na '-np’ 3' (IIb)；5'nq’ -Na '-Y'Y'Y'-Nb '-X'X'X'-np’ 3' (IIc)；或5'nq’ -Na '-Z'Z'Z'-Nb '-Y'Y'Y'-Nb '-X'X'X'-Na '-np’ 3' (IId)。
當反義股由式(IIb)代表時，Nb ’代表包含0-10、0-7、0-10、0-7、0-5、0-4、0-2或0個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。各Na ’分別獨立代表包含2-20、2-15、或2-10個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。
當反義股由式(IIc)代表時，Nb ’代表包含0-10、0-7、0-10、0-7、0-5、0-4、0-2或0個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。各Na ’分別獨立代表包含2-20、2-15、或2-10個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。
當反義股由式(IId)代表時，各Nb ’分別獨立代表包含0-10、0-7、0-10、0-7、0-5、0-4、0-2或0個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。各Na ’分別獨立代表包含2-20、2-15、或2-10個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。較佳係，Nb 為0、1、2、3、4、5或6。
其他具體例中，k為0及l為0，且反義股可由下式代表： 5'np’ -Na’ -Y’Y’Y’-Na’ -nq’ 3' (IIa)。
當反義股由式(IIa)代表時，各Na ’分別獨立代表包含2-20、2-15、或2-10個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。各X'、Y'及Z'可彼此相同或相異。正義股與反義股之各核苷酸可能分別獨立經LNA、CRN、UNA、cEt、HNA、CeNA、2’-甲氧基乙基、2’-O-甲基、2’-O-烯丙基、2’-C-烯丙基、2’-羥基、或2’-氟修飾。例如：正義股與反義股之各核苷酸係分別獨立經2’-O-甲基或2’-氟修飾。特定言之，各X、Y、Z、X'、Y'與Z'可代表2’-O-甲基修飾或2’-氟修飾。
一具體例中，當RNAi劑之雙螺旋區為21聚體時，其正義股可能包含出現在該股9、10與11位置之YYY基序，其係從5’-端第一個核苷酸開始算起，或可視需要從雙螺旋區內5’-端第一對配對核苷酸開始算起；及Y代表2’-F修飾。正義股可另外在雙螺旋區之相反端包含XXX基序或ZZZ基序作為側翼修飾；及XXX與ZZZ各分別獨立代表2’-OMe修飾或2’-F修飾。
一具體例中，反義股可能包含出現在該股之位置11、12、13之Y'Y'Y'基序，其係從5’-端第一個核苷酸開始算起，或可視需要從雙螺旋區內5’-端第一對配對核苷酸開始算起；及Y'代表2’-O-甲基修飾。該反義股可另外在雙螺旋區之相反端包含X'X'X'基序或Z'Z'Z'基序作為側翼修飾；及X'X'X'與Z'Z'Z'各分別獨立代表2’-OMe修飾或2’-F修飾。
由上式(Ia)、(Ib)、(Ic)與(Id)中任一式代表之正義股可分別與上式(IIa)、(IIb)、(IIc)與(IId)中任一式代表之反義股形成雙螺旋。
因此用於本發明方法之RNAi劑可包含正義股與反義股，各股具有14至30個核苷酸，RNAi雙螺旋由式(III)代表：正義：5'np -Na -(XXX)i -Nb -YYY-Nb -(ZZZ)j -Na -nq 3'反義：3'np ’ -Na ’ -(X’X'X')k -Nb ’ -Y'Y'Y'-Nb ’ -(Z'Z'Z')l -Na ’ -nq ’ 5'(III)
其中：i、j、k、及l分別獨立為0或1；p、p'、q、及q'分別獨立為0-6；各Na及Na’分別獨立代表包含0-25個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列，各序列包含至少兩個經不同修飾之核苷酸；各Nb及Nb’分別獨立代表包含0-10個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列；其中各np’、np、nq’、及nq，分別可能存在或不存在，分別獨立代表突出段核苷酸；及XXX、YYY、ZZZ、X'X'X'Y'Y'Y'、及Z'Z'Z'分別獨立代表一個在三個連續核苷酸具有三個相同修飾之基序。
一具體例中，i為0及j為0；或i為1及j為0；或i為0及j為1；或i與j均為0；或i與j均為1。另一具體例中，k為0及l為0；或k為1及l為0；k為0 及l為1；或k與l均為0；或k與l均為1。
形成RNAi雙螺旋之正義股及反義股之組合實例包括下式：5' np -Na -YYY-Na -nq 3' 3' np ’ -Na ’ -Y'Y'Y'-Na ’ nq ’ 5'(IIIa)
5' np -Na -YYY-Nb -ZZZ-Na -nq 3' 3' np ’ -Na ’ -Y'Y'Y'-Nb ’ -Z'Z'Z'-Na ’ nq ’ 5'(IIIb)
5' np -Na -XXX-Nb -YYY-Na -nq 3' 3' np ’ -Na ’ -X'X'X'-Nb ’ -Y'Y'Y'-Na ’ -nq ’ 5'(IIIc)
5' np -Na -XXX-Nb -YYY-Nb -ZZZ-Na -nq 3' 3' np ’ -Na ’ -X'X'X'-Nb ’ -Y'Y'Y'-Nb ’ -Z'Z'Z'-Na -nq ’ 5'(IIId)
當該RNAi劑由式(IIIa)代表時，各Na 分別獨立代表包含2-20、2-15、或2-10個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。
當該RNAi劑由式(IIIb)代表時，各Nb 分別獨立代表包含1-10、1-7、1-5或1-4個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。各Na 分別獨立代表包含2-20、2-15、或2-10個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。
當該RNAi劑由式(IIIc)代表時，各Nb 、Nb ’ 分別獨立代表包含0-10、0-7、0-10、0-7、0-5、0-4、0-2 或0個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。各Na 分別獨立代表包含2-20、2-15、或2-10個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。
當RNAi劑由式(IIId)代表時，各Nb 、Nb ’分別獨立代表包含0-10、0-7、0-10、0-7、0-5、0-4、0-2或0個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。各Na 、Na ’ 分別獨立代表包含2-20、2-15或2-10個經修飾核苷酸之寡核苷酸序列。各Na 、Na ’、Nb 與Nb ’ 分別獨立包含交替之修飾型態。
式(III)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)、與(IIId)中各X、Y與Z可彼此相同或相異。
當RNAi劑由式(III)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)與(IIId)代表時，至少一個Y核苷酸可與一個Y'核苷酸形成鹼基對。或者，至少兩個Y核苷酸與對應Y'核苷酸形鹼基對；或所有三個Y核苷酸均與對應Y'核苷酸形成鹼基對。
當RNAi劑由式(IIIb)或(IIId)代表時，至少一個Z核苷酸可與一個Z'核苷酸形成鹼基對。或者，至少兩個Z核苷酸可與對應Z'核苷酸形成鹼基對；或所有三個Z核苷酸均與對應Z'核苷酸形成鹼基對。
當RNAi劑由式(IIIc)或(IIId)代表時，至少一個X核苷酸可與一個X'核苷酸形成鹼基對。或者，至少兩個X核苷酸可與對應X'核苷酸形成鹼基對；或所有三個X核苷酸均與對應X'核苷酸形成鹼基對。
一具體例中，Y核苷酸上之修飾不同於Y’核苷酸上之修飾，Z核苷酸上之修飾不同於Z’核苷酸上之修飾，及/或X核苷酸上之修飾不同於X’核苷酸上之修飾。
一具體例中，當RNAi劑由式(IIId)代表時，Na 修飾為2' -O-甲基或2' -氟修飾。另一具體例中，當RNAi劑如式(IIId)代表時，Na 修飾為2' -O-甲基或2' -氟修飾，且np ' >0，及至少一個np ' 係利用硫代磷酸根鏈結基鏈結相鄰核苷酸。另一具體例中，當RNAi劑如式(IIId)代表時，該Na 修飾為2' -O-甲基或2' -氟修飾，np ' >0，及至少一個np ' 係利用硫代磷酸根鏈結基鏈結相鄰核苷酸，且正義股係利用附接之二價或三價分支鏈結體(如下說明)來接合一或多種GalNAc衍生物。另一具體例中，當RNAi劑如式(IIId)代表時，該Na 修飾為2' -O-甲基或2' -氟修飾，np ' >0，及至少一個np ' 係利用硫代磷酸根鏈結基鏈結相鄰核苷酸，正義股包含至少一個硫代磷酸根鏈結基，且正義股係利用附接之二價或三價分支鏈結體來接合一或多種GalNAc衍生物。
一具體例中，當RNAi劑由式(IIIa)代表時，Na 修飾為2' -O-甲基或2' -氟修飾，np ' >0，及至少一個np ' 係利用硫代磷酸根鏈結基鏈結相鄰核苷酸，正義股包含至少一個硫代磷酸根鏈結基，且正義股係利用附接之二價或三價之分支鏈結體來接合一或多種GalNAc衍生物。
一具體例中，RNAi劑為包含至少兩個如式(III)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)與(IIId)代表之雙螺旋之多聚體，其中雙螺旋係利用鏈結體連接。該鏈結體可以裂解或不可以裂解。該多聚體可視需要進一步包含配體。各雙螺旋可靶向相同基因或兩個不同基因；或各雙螺旋可靶向相同基因上之兩個不同標靶位點。
一具體例中，RNAi劑為包含三個、四個、五個、六個或更多個如式(III)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)與(IIId)所代表雙螺旋之多聚體，其中雙螺旋係利用鏈結體連接。該鏈結體可以裂解或不可以裂解。該多聚體可視需要進一步包含配體。各雙螺旋可靶向相同基因或兩個不同基因；或各雙螺旋可靶向相同基因上之兩個不同標靶位點。
一具體例中，兩個如式(III)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)與(IIId)代表之RNAi劑係在5’端及其中一個或兩個3’端彼此連接，且可視需要接合配體。各製劑可靶向相同基因或兩個不同基因；或各製劑可靶向相同基因上之兩個不同標靶位點。
各種不同文獻說明之多聚體RNAi劑均可用於本發明方法。此等文獻包括WO2007/091269、美國專利案案號7858769、WO2010/141511、WO2007/117686、WO2009/014887及WO2011/031520，其揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。
如下文更詳細說明，包含一或多個碳水化合物部份基團與RNAi劑之接合物之RNAi劑可使一或多種RNAi劑之性質達最佳化。許多例子中，由碳水化合物部份基團附接RNAi劑之經修飾亞單位。例如：dsRNA劑之一個或多個核糖核苷酸亞單位之核糖可被另一個部份基團(例如：附接碳水化合物配體之非碳水化合物(較佳為環狀)載劑)置換。依此方式置換亞單位中核糖之核糖核苷酸亞單位在本文中稱為核糖置換修飾亞單位(RRMS)。環狀載劑可 能為碳環狀環系(亦即所有環原子均為碳原子)或雜環狀環系(亦即一個或多個環原子可能為雜原子，例如：氮、氧、硫)。該環狀載劑可能為單環狀環系，或可能包含兩個或更多個環，例如：稠合環。環狀載劑可能為完全飽和環系，或其可能包含一個或多個雙鍵。
配體可能利用載劑附接聚核苷酸。該載劑包括(i)至少一個“主幹附接點”，較佳為兩個“主幹附接點”與(ii)至少一個“系鏈附接點”。本文所採用“主幹附接點”係指可用於且適於讓載劑進入主幹(例如：核糖核酸之磷酸根或經修飾磷酸根(例如：含硫)主幹)中之官能基，例如：羥基，或通常為一個鍵結。有些具體例中，“系鏈附接點”(TAP)係指環狀載劑之組成環原子，例如：碳原子或雜原子(不同於提供主幹附接點之原子)，其連接所選定之部份基團。該部份基團可為例如：碳水化合物，例如：單糖、雙醣、參醣、肆醣、寡醣、與多醣。該選定之部份基團可視需要利用穿插之系鏈(tether)連接該環狀載劑。因此該環狀載劑經常包括適合引進或連繫另一個化學部份體(例如：配體)至組成環之官能基，例如：胺基，或通常提供一個鍵結。
該RNAi劑可能利用載劑接合配體，其中該載劑可為環狀基團或無環基團；較佳為該環狀基團係選自：吡咯啶基、吡唑啉基、吡唑啶基、咪唑啉基、咪唑啶基、哌啶基、哌
Figure 104136995-A0202-12-0135-53
基、[1,3]二氧雜環戊烷、
Figure 104136995-A0202-12-0135-54
唑啶基、異
Figure 104136995-A0202-12-0135-56
唑啶基、N-嗎啉基、噻唑啶基、異噻唑啶基、喹
Figure 104136995-A0202-12-0135-57
啉基、 嗒
Figure 104136995-A0202-12-0136-58
酮基、四氫呋喃基、與萘烷；較佳該無環基團係選自：絲胺醇主幹或二乙醇胺主幹。
某些明確具體例中，用於本發明方法之RNAi劑為選自表3、4、6、7、12、13、22、23、25、與26中任一個表所列製劑之群中。此等製劑可進一步包含配體。
IV. 與配體接合之iRNA
本發明iRNA中RNA之另一種修飾涉及化學鏈結RNA與一個或多個可加強iRNA之活性、細胞分佈或細胞吸收之配體、部份基團或接合物。此等部份基團包括(但不限於)：脂質部份基團，如：膽固醇部份基團(Letsinger等人，Proc.Natl.Acid.Sci.USA ,1989,86：6553-6556)、膽酸(Manoharan等人，Biorg.Med.Chem.Let .,1994,4：1053-1060)、硫醚，例如：hexyl-S-三苯甲基硫醇(Manoharan等人，Ann.N.Y.Acad.Sci .,1992,660：306-309；Manoharan等人，Biorg.Med.Chem.Let .,1993,3：2765-2770)、硫膽固醇(Oberhauser等人，Nucl.Acids Res .,1992,20：533-538)、脂系鏈，例如：十二碳烷二醇或十一碳烷基(Saison-Behmoaras等人，EMBO J ,1991,10：1111-1118；Kabanov等人，FEBS Lett .,1990,259：327-330；Svinarchuk等人，Biochimie ,1993,75：49-54)、磷脂，例如：二-十六碳烷基-消旋性-甘油或1,2-二-O-十六碳烷基-消旋性-甘油基-3-膦酸三乙基銨鹽(Manoharan等人，Tetrahedron Lett .,1995,36：3651-3654；Shea等人，Nucl.Acids Res .,1990, 18：3777-3783)、多元胺或聚乙二醇鏈(Manoharan等人，Nuclosides & Nuclotides ,1995,14：969-973)、或金剛烷乙酸(Manoharan等人，Tetrahedron Lett .,1995,36：3651-3654)、棕櫚基部份基團(Mishra等人，Biochim.Biophys.Acta ,1995,1264：229-237)、或十八碳烷基胺或己基胺基-羰基氧膽固醇部份基團(Crooke等人，J.Pharmacol.Exp.Ther .,1996,277：923-937)。
一具體例中，iRNA劑引進配體後會改變其分佈、靶向或壽命。較佳具體例中，相較於例如：沒有此等配體之物種，該等配體可加強對所選定標靶(例如：對分子、細胞或細胞型態、隔室(例如：細胞或器官隔室)、組織、器官或身體區域)之親和性。較佳配體將不會參與雙螺旋核酸中之雙螺旋配對。
配體可包括天然物質，如：蛋白質(例如：人類血清白蛋白(HSA)、低密度脂蛋白(LDL)、或球蛋白)；碳水化合物(例如：葡聚糖、普藍多醣(pullulan)、幾丁質、幾丁聚醣、菊糖、環糊精、N-乙醯基半乳糖胺或玻尿酸)；或脂質。配體亦可為重組或合成性分子，如：合成性聚合物，例如：合成性聚胺基酸。聚胺基酸實例包括聚離胺酸(PLL)、聚L-天冬胺酸、聚L-麩胺酸等聚胺基酸：苯乙烯-馬來酸酐共聚物、聚(L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物、二乙烯基醚-馬來酸酐共聚物、N-(2-羥基丙基)甲基丙烯醯胺共聚物(HMPA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、聚胺基甲酸酯、聚(2-乙基丙烯酸)、N-異丙基丙烯醯胺聚合物、或聚 磷腈。多元胺實例包括：聚乙烯亞胺、聚離胺酸(PLL)、精胺、精脒、多元胺、偽肽-多元胺、肽擬似性多元胺、樹枝狀多元胺、精胺酸、脒、魚精蛋白、陽離子性脂質、陽離子性紫質、多元胺之四級鹽、或α螺旋肽。
配體亦可包括靶向基團，例如：靶向細胞或組織之製劑，例如：凝集素、醣蛋白、脂質或蛋白質，例如：會結合特定細胞型態(如：腎臟細胞)之抗體。靶向基團可為促甲狀腺激素、促黑激素、凝集素、醣蛋白、表面活性蛋白質A、黏蛋白碳水化合物、多價乳糖、多價半乳糖、N-乙醯基-半乳糖胺、N-乙醯基-葡萄糖胺、多價甘露糖、多價岩藻糖、糖基化聚胺基酸、多價半乳糖、轉鐵蛋白、雙膦酸、聚麩胺酸、聚天冬胺酸、脂質、膽固醇、類固醇、膽汁酸、葉酸鹽、維生素B12、維生素A、生物素、或RGD肽或RGD肽擬似物。
其他配體實例包括染料、螯合劑(例如：吖啶類)、交鏈劑(例如：補骨脂內酯、絲裂黴素C)、卟啉(TPPC4、德卟啉(texaphyrin)、噻啉(Sapphyrin))、多環狀芳香烴(例如：吩
Figure 104136995-A0202-12-0138-59
、二氫吩
Figure 104136995-A0202-12-0138-60
)、人造內切核酸酶(例如：EDTA)、親脂性分子，例如：膽固醇、膽酸、金剛烷乙酸、1-芘丁酸、雙氫睾酮、1,3-雙-O(十六碳烷基)甘油、香葉草基氧己基、十六碳烷基甘油、莰醇、薄荷醇、1,3-丙二醇、十七碳烷基、棕櫚酸、肉豆蔻酸、O3-(油基)石膽酸、O3-(油基)膽烯酸、二甲氧基三苯甲基、或吩
Figure 104136995-A0202-12-0138-61
)與肽接合物(例如：觸足肽(antennopedia peptide)、Tat肽)、烷化劑、磷酸 鹽、胺基、巰基、PEG(例如：PEG-40K)、MPEG、[MPEG]2 、聚胺基、烷基、經取代之烷基、標記放射性之標記物、酵素、半抗原(例如：生物素)、轉運/吸收促進劑(例如：阿斯匹靈、維生素E、葉酸)、合成性核糖核酸酶(例如：咪唑、雙咪唑、組織胺、咪唑簇集物、吖啶-咪唑接合物、Eu3+四氮雜大環複合物)、二硝基苯基、HRP、或AP。
配體可為蛋白質(例如：醣蛋白)、或肽(例如：對輔配體具有特異親和性之分子)、或抗體(例如：結合特異化細胞型態(如：肝細胞)之抗體)。配體亦可包括激素與激素受體。其亦可包括非肽物質，如：脂質、凝集素、碳水化合物、維生素、輔因子、多價乳糖、多價半乳糖、N-乙醯基-半乳糖胺、N-乙醯基-葡萄糖胺、多價甘露糖、或多價岩藻糖。配體可為例如：脂多醣、p38 MAP激酶之活化劑、或NF-κ B之活化劑。
配體可為例如：可藉由例如：破壞細胞之細胞骨架，例如：破壞細胞之微小管、微絲、及/或中間絲而促進細胞吸收iRNA劑之藥物物質。該藥物可為例如：紫杉醇(taxol)、長春新鹼、長春花鹼、細胞鬆弛素(cytochalasin)、諾考達唑(nocodazole)、促進微絲聚合劑(japlakinolide)、微絲解聚劑(latrunculin A)、毒傘素(phalloidin)、紅海海綿抗菌素(swinholide A)、茚酮衍生物(indanocine)、或邁爾素(myoservin)。
有些具體例中，附接本文所說明iRNA之配體之作用為藥物動力學調控劑(PK調控劑)。PK調控劑包 括：親脂物、膽汁酸、類固醇、磷脂類似物、肽類、蛋白質結合劑、PEG、維生素，等等。PK調控劑實例包括(但不限於)：膽固醇、脂肪酸、膽酸、石膽酸、二烷基甘油酯、二醯基甘油酯、磷脂類、鞘脂類、那普洛辛(naproxen)、布洛芬(ibuprofen)、維生素E、生物素，等等。亦已知包含許多硫代磷酸根鏈結基之寡核苷酸可以結合血清蛋白質，因此在主幹中包含許多硫代磷酸根鏈結基之短寡核苷酸，例如：約5個鹼基、10個鹼基、15個鹼基或20個鹼基之寡核苷酸亦適用為本發明之配體(例如：作為PK調控配體)。此外，在本文說明之具體例中，可結合血清組份(例如：血清蛋白質)之適體亦適用為PK調控配體。
本發明配體-接合寡核苷酸可利用帶有側接反應性官能基之寡核苷酸合成，如：由鏈結分子附接在寡核苷酸上所衍生者(如下文說明)。此反應性寡核苷酸可能直接與自商品取得之配體、經由合成而帶有任何各種不同保護基之配體、或已附接鏈結性部份基團之配體反應。
本發明接合物所使用之寡核苷酸可能適宜且照例採用習知之固相合成技術製造。此等合成法之儀器係由數個供應商提供，包括例如：Applied Biosystems(Foster City,Calif.)。亦可額外使用或改用本領域上已知任何其他方式進行此等合成法。亦已知使用類似技術來製備其他寡核苷酸，如：硫代磷酸酯與烷基化衍生物。
本發明配體-接合寡核苷酸與帶有配體分子之序列專一性鏈結核苷中，可能在合適之DNA合成儀上， 利用標準核苷酸或核苷前體、或已經帶有鏈結性部份基團之核苷酸或核苷接合物前體、已經帶有配體分子之配體-核苷酸或核苷-接合物前體、或帶有非核苷配體之構成嵌段組合成寡核苷酸與寡核苷。
當使用已經帶有鏈結性部份基團之核苷酸-接合物前體時，通常先完成與專一性序列鏈結之核苷之合成法，然後由配體分子與鏈結性部份基團反應，形成配體-接合寡核苷酸。有些具體例中，本發明寡核苷酸或鏈結核苷係採用自動化合成儀，除了使用可自商品購得常用於合成寡核苷酸之標準亞胺基磷酸酯與非標準亞胺基磷酸酯外，尚可使用衍生自配體-核苷接合物之亞胺基磷酸酯合成。
A. 脂質接合物
一具體例中，配體或接合物為脂質或基於脂質之分子。此等脂質或基於脂質之分子較佳係與血清蛋白質，例如：人類血清白蛋白(HSA)結合。HSA結合性配體可以讓接合物分佈在標靶組織上，例如：身體之非腎臟標靶組織。例如：該標靶組織可為肝臟，包括肝實質細胞。其他可結合HAS之分子亦可作為配體使用。例如：可使用那普洛辛或阿斯匹靈。脂質或基於脂質配體可以(a)提高接合物對降解之抗性，(b)提高靶向或轉運至標靶細胞或細胞膜，及/或(c)可用於調整與血清蛋白質(例如：HAS)之結合性。
基於脂質之配體可用於抑制(例如：控制) 接合物與標靶組織之結合性。例如：脂質或基於脂質之配體與HAS之結合性越強時，越不容易靶向腎臟，因此越不容易從身體清除。與HAS之結合性較低之脂質或基於脂質配體可用於讓該接合物靶向腎臟。
一項較佳具體例中，該基於脂質之配體會結合HAS。較佳係其與HAS具有充份親和性，以使該接合物較佳係分佈至非腎臟組織。然而，該親和性最好不會太強導致無法逆轉HSA-配體結合性。
另一項較佳具體例中，該基於脂質配體與HAS之親和性弱或完全沒有親和性，因此該接合物將會優先分佈至腎臟。除了基於脂質之配體外，亦可改用或額外使用其他靶向腎臟細胞之部份基團。
另一態樣中，該配體為例如：維生素之部份基團，其可被標靶細胞(例如：增生細胞)吸收。其等特別適用於治療特徵在於不期望之細胞增生之病症，例如：惡性或非惡性型，例如：癌細胞。維生素實例包括維生素A、E、與K。其他可被標靶細胞(如：肝細胞)吸收之維生素實例包括B維生素，例如：葉酸、B12、核黃素、生物素、吡哆醛或其他維生素，或營養素。亦包括HSA與低密度脂蛋白(LDL)。
B. 細胞滲透劑
另一態樣中，該配體為細胞滲透劑，較佳為螺旋細胞滲透劑。該製劑較佳為兩親性。該製劑實例為肽，如：tat肽或觸足肽。若該製劑為肽時，其可經修飾， 包括肽基擬似物、反轉異構物、非肽或偽肽鏈結基，及使用D-胺基酸。該螺旋劑較佳為α-螺旋劑，其較佳具有親脂相與疏脂相。
配體可為肽或肽擬似物。肽擬似物(本文亦稱為寡肽擬似物)為可以折疊成類似天然肽之限定三度空間結構之分子。在iRNA劑上附接肽及肽擬似物時，可以藉由如：加強細胞辨識與吸收來影響iRNA之藥物動力學分佈性。該肽或肽擬似物部份基團之長度可為約5至50個胺基酸，例如：長度約5、10、15、20、25、30、35、40、45或50個胺基酸。
肽或肽擬似物可為例如：細胞滲透肽、陽離子性肽、兩親性肽、或疏水性肽(例如：主要由Tyr、Trp或Phe組成)。肽部份基團可為樹枝狀肽、限定構象肽或交鏈肽。或者，肽部份基團可包括疏水性跨膜序列(MTS)。含疏水性MTS之肽實例為具有下列胺基酸序列之RFGF：AAVALLPAVLLALLAP(SEQ ID NO：43)。包含疏水性MTS之RFGF類似物(例如：胺基酸序列AALLPVLLAAP(SEQ ID NO：44))亦可作為靶向部份基團。該肽部份基團可為“傳遞”肽，其可攜帶大型極性分子(包括肽、寡核苷酸與蛋白質)穿越細胞膜。已發現例如：來自HIV Tat蛋白質(GRKKRRQRRRPPQ(SEQ ID NO：45)與果蠅觸足肽(Drosophila antennapedia)蛋白質(RQIKIWFQNRRMKWKK(SEQ ID NO：46)之序列具有作為傳遞肽之功能。肽或肽擬似物可由DNA之隨機序列編碼，如：從噬菌體展示庫或一 樹脂球一種化合物(one-bead-one-compound(OBOC))組合庫(Lam等人，Nature,354：82-84,1991)判別之肽。為了靶向細胞目的而藉由引進之單體單位與dsRNA劑系鏈之肽或肽擬似物實例為精胺酸-甘胺酸-天冬胺酸(RGD)-肽、或RGD擬似物。肽部份基團之長度範圍可為約5個胺基酸至約40個胺基酸。該肽部份基團具有之結構修飾為如：提高安定性或主導構型性質。可採用下文說明之任何結構修飾。
本發明方法與組成物所使用之RGD肽可為線性或環狀，且可經過修飾，例如：糖基化或甲基化，以促進靶向特定組織(群)。包含RGD之肽與肽擬似物可包括D-胺基酸及合成性RGD擬似物。除了RGD外，尚可使用靶向整合素配體之其他部份基團。此配體之較佳接合物係靶向PECAM-1或VEGF。
“細胞滲透性肽”可以通透細胞，例如：微生物細胞，如：細菌或真菌細胞，或哺乳動物細胞，如：人類細胞。可通透微生物細胞之肽可為例如：α-螺旋線性肽(例如：LL-37或Ceropin P1)、包含二硫鍵之肽(例如：α-防禦素(defensin)、β-防禦素或制菌肽(bactenecin))，或僅包含一個或兩個主要胺基酸之肽(例如：PR-39或吲哚抗生肽(indolicidin))。細胞滲透性肽亦可包括核定位訊號(NLS)。例如：細胞滲透性肽可為二部組合之兩親性肽，如：MPG，其係衍生自HIV-1 gp41與SV40大型T抗原之NLS之稠合肽功能域(Simeoni等人，Nucl.Acids Res.31：2717-2724,2003)。
C. 碳水化合物接合物
本發明組成物與方法之有些具體例中，iRNA寡核苷酸進一步包含碳水化合物。接合iRNA之碳水化合物之優點在於活體內傳遞核酸，且其組成物適合活體內之醫療用途，如本文所說明。本文所採用“碳水化合物”係指其本身即為由一個或多個具有至少6個碳原子(其可為線性、支鏈或環狀)與在各碳原子上鍵結之氧、氮或硫原子之單糖單位所組成碳水化合物之化合物；或具有由一個或多個具有至少6個碳原子(其可為線性、分支或環狀)與在各碳原子上鍵結之氧、氮或硫原子之單糖單位所組成之碳水化合物作為其中一部份之化合物。代表性碳水化合物包括糖類(單糖、雙醣、三醣與包含約4、5、6、7、8、或9個該單糖單位之寡醣類)，與多醣類，如：澱粉、肝醣、纖維素與多醣膠質。明確之單糖包括C5與更多碳(例如：C5、C6、C7、或C8)之糖類；雙醣與三醣包括具有兩個或三個該單糖單位之醣類(例如：C5、C6、C7、或C8)。
一具體例中，本發明方法與組成物所使用之碳水化合物接合物為單糖。另一具體例中，該單糖為N-乙醯基半乳糖胺，如：
Figure 104136995-A0202-12-0146-1464
另一具體例中，用於本發明組成物及方法之碳水化合物接合物係選自下列各物所組成群中：
Figure 104136995-A0202-12-0146-1465
Figure 104136995-A0202-12-0146-1466
Figure 104136995-A0202-12-0146-1467
Figure 104136995-A0202-12-0147-1468
Figure 104136995-A0202-12-0147-1469
Figure 104136995-A0202-12-0147-1470
Figure 104136995-A0202-12-0147-1471
Figure 104136995-A0202-12-0147-1472
Figure 104136995-A0202-12-0148-1473
Figure 104136995-A0202-12-0148-1474
Figure 104136995-A0202-12-0148-1475
Figure 104136995-A0202-12-0148-1476
Figure 104136995-A0202-12-0149-1477
Figure 104136995-A0202-12-0149-1478
Figure 104136995-A0202-12-0149-1479
Figure 104136995-A0202-12-0149-1480
Figure 104136995-A0202-12-0149-1481
Figure 104136995-A0202-12-0149-1482
Figure 104136995-A0202-12-0150-1483
Figure 104136995-A0202-12-0150-1484
Figure 104136995-A0202-12-0150-1485
用於本文所說明具體例之另一種代表性碳水化合物接合物包括(但不限於)：
Figure 104136995-A0202-12-0150-1486
 (式XXIII)，當X或Y中之一為寡核苷酸時，另一個為氫。
有些具體例中，碳水化合物接合物進一步包含一個或多個其他上述配體，如：PK調控劑及/或細胞 滲透性肽，但不限於此等。
其他適用於本發明之碳水化合物接合物(與鏈結體)包括彼等說明於PCT公告案案號WO 2014/179620及WO 2014/179627中者，其揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。
D. 鏈結體
有些具體例中，本文說明之接合物或配體可利用各種不同可以裂解或不可裂解之鏈結體附接iRNA寡核苷酸。
術語“鏈結體”或“鏈結基”意指連接化合物之兩個部份之有機部份基團，例如：共價附接化合物之兩個部份。該鏈結體通常包含一個直接鍵結或原子(如：氧或硫)、單位(如：NR8、C(O)、C(O)NH、SO、SO2 、SO2 NH或原子鏈)，如，(但不限於)：經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之烯基、經取代或未經取代之炔基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、雜芳基烷基、雜芳基烯基、雜芳基炔基、雜環基烷基、雜環基烯基、雜環基炔基、芳基、雜芳基、雜環基、環烷基、環烯基、烷基芳基烷基、烷基芳基烯基、烷基芳基炔基、烯基芳基烷基、烯基芳基烯基、烯基芳基炔基、炔基芳基烷基、炔基芳基烯基、炔基芳基炔基、烷基雜芳基烷基、烷基雜芳基烯基、烷基雜芳基炔基、烯基雜芳基烷基、烯基雜芳基烯基、烯基雜芳基炔基、炔基雜芳基烷基、炔基雜芳基烯基、炔基雜芳基炔基、烷基雜環基烷基、烷基雜環基烯基、烷基雜環基炔 基、烯基雜環基烷基、烯基雜環基烯基、烯基雜環基炔基、炔基雜環基烷基、炔基雜環基烯基、炔基雜環基炔基、烷基芳基、烯基芳基、炔基芳基、烷基雜芳基、烯基雜芳基、炔基雜芳基，其中一個或多個亞甲基可穿插或末端為O、S、S(O)、SO2 、N(R8)、C(O)、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之雜芳基、經取代或未經取代之雜環；其中R8為氫、醯基、脂系或經取代之脂系。另一具體例中，鏈結體為約1-24個原子、2-24、3-24、4-24、5-24、6-24、6-18、7-18、8-18個原子、7-17、8-17、6-16、7-16、或8-16個原子。
可裂解之鏈結基為在細胞外具有充份安定性，但當進入標靶細胞內時即會裂解而釋出該鏈結體所共同固定之兩個部份之基團。較佳具體例中，可裂解之鏈結基在標靶細胞中或在第一參考條件(其可為例如：選擇模擬或代表細胞內條件)之裂解速度比在個體血液中或在第二參考條件(其可為例如：選擇模擬或代表血液或血清中之條件)至少快約10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或更多倍，或至少快約100倍。
可裂解鏈結基可感受裂解劑之作用，例如：pH、氧化還原電位或降解性分子之存在。通常，裂解劑於細胞內部之存在或含量或活性高於其在血清或血液中。此等降解劑實例包括：針對特定受質選擇或沒有受質專一性之氧化還原劑，包括例如：存在於細胞中之氧化性或還原性酵素或還原劑，如：氫硫醇，其可利用還原作用 降解可經氧化還原性裂解之鏈結基；酯酶；核內體或可產生酸性環境之製劑，例如：彼等造成pH 5或更低之製劑；可水解或降解酸可裂解鏈結基之酵素，其作用為一般酸類、肽酶(其可為受質專一性)與磷酸酶。
可裂解鏈結基(如：二硫鍵)對pH敏感。人類血清之pH為7.4，而細胞內平均pH稍低，在約7.1-7.3之範圍內。核內體具有較酸之pH，在5.5-6.0之範圍內，溶小體之pH甚至更酸，約5.0。有些鏈結體具有可裂解之鏈結基，可在較佳pH裂解，藉以從細胞內之配體釋放陽離子性脂質，或進入所需之細胞隔室內。
鏈結體可包括可被特定酵素裂解之可裂解鏈結基。引進鏈結體中之可裂解鏈結基型態依所靶向之細胞而定。例如：靶向肝之配體可透過包括酯基之鏈結體連接陽離子性脂質。肝細胞富含酯酶，因此該鏈結體在肝細胞中之裂解效率高於在沒有富含酯酶之細胞型態中之效率。其他富含酯酶之細胞型態包括肺、腎皮質與睪丸之細胞。
當靶向富含肽酶之細胞型態(如：肝細胞與滑液膜細胞)時，可使用包含肽鍵之鏈結體。
通常，可藉由測試降解劑裂解候選鏈結基之能力(或條件)來分析該候選之可裂解鏈結基之合適性。亦需要亦測試候選之可裂解鏈結基於血液中或當與其他非標靶組織接觸時阻抗裂解之能力。因此，可以決定第一與第二條件之間對裂解作用之相對敏感性，其中所選擇之第 一條件係其於標靶細胞中之裂解指標，所選擇之第二條件係其於其他組織或生物液體(例如：血液或血清)中之裂解指標。該分析法可於無細胞系統、細胞、細胞培養物、器官或組織培養物、或在完整動物體中進行。其適用於在無細胞或培養條件下進行初次分析，並進一步在完整動物體內確認。較佳具體例中，適用之候選化合物在細胞(或在選擇擬似細胞內條件之活體外條件下)之裂解速度比在血液或血清(或在選擇擬似細胞外條件之活體外條件下)至少快約2、4、10、20、30、40、50、60、70、80、90、或約100倍。
i. 可經氧化還原裂解之鏈結基
一具體例中，可裂解之鏈結基為可經氧化還原裂解之鏈結基，亦即可在還原或氧化時裂解。可經還原裂解之鏈結基實例為二硫鏈結基(-S-S-)。可參見本文說明之方法來決定該候選之可裂解鏈結基是否為合適之“可經還原裂解之鏈結基”，或例如：是否適用於帶有特定iRNA部份基團與特定靶向劑。例如：可藉由與二硫蘇糖醇(DTT)或其他還原劑培養，使用本領域上已知擬似細胞(例如：標靶細胞)中所觀察到之裂解速率之試劑來分析候選物。該等候選物亦可在選擇擬似血液或血清之條件下分析。在一具體例中，候選化合物在血液中至多裂解約10%。其他具體例中，適用之候選化合物在細胞(或在選擇擬似細胞內條件之活體外條件下)之裂解速度比在血液(或在選擇擬似細胞外條件之活體外條件下)至少快約2、4、10、20、 30、40、50、60、70、80、90、或約100倍。候選化合物之裂解速度可採用標準酵素動力學分析法，在選擇擬似細胞內基質條件下分析，並與選擇擬似細胞外基質之條件下之結果比較。
ii. 基於磷酸根之可裂解鏈結基
另一具體例中，可裂解之鏈結體包含基於磷酸根之可裂解鏈結基。基於磷酸根之可裂解鏈結基係被可降解或水解磷酸根之製劑裂解。該可於細胞中裂解磷酸根之製劑為酵素，如：細胞中之磷酸酶。基於磷酸根之鏈結基實例為-O-P(O)(ORk)-O-、-O-P(S)(ORk)-O-、-O-P(S)(SRk)-O-、-S-P(O)(ORk)-O-、-O-P(O)(ORk)-S-、-S-P(O)(ORk)-S-、-O-P(S)(ORk)-S-、-S-P(S)(ORk)-O-、-O-P(O)(Rk)-O-、-O-P(S)(Rk)-O-、-S-P(O)(Rk)-O-、-S-P(S)(Rk)-O-、-S-P(O)(Rk)-S-、-O-P(S)(Rk)-S-。較佳具體例為-O-P(O)(OH)-O-、-O-P(S)(OH)-O-、-O-P(S)(SH)-O-、-S-P(O)(OH)-O-、-O-P(O)(OH)-S-、-S-P(O)(OH)-S-、-O-P(S)(OH)-S-、-S-P(S)(OH)-O-、-O-P(O)(H)-O-、-O-P(S)(H)-O-、-S-P(O)(H)-O、-S-P(S)(H)-O-、-S-P(O)(H)-S-、-O-P(S)(H)-S-。較佳具體例為-O-P(O)(OH)-O-。此等候選物可採用類似上述之方法分析。
iii. 酸可裂解之鏈結基
另一具體例中，該可裂解鏈結體包含酸可裂解之鏈結基。酸可裂解之鏈結基為可在酸性條件下裂解之鏈結基。較佳具體例中，酸可裂解之鏈結基為在pH約 6.5或更低(例如：約6.0、5.75、5.5、5.25、5.0或更低)之酸性環境下裂解，或被如同一般酸之作用之製劑(如：酵素)裂解之基團。在細胞中，明確之低pH細胞器(如：核內體與溶小體)可提供作為該酸可裂解鏈結基之裂解環境。該酸可裂解鏈結基實例包括(但不限於)：腙類、酯類及胺基酸之酯類。該酸可裂解基團具有通式-C=NN-、C(O)O，或-OC(O)。較佳具體例為當附接酯之氧(烷氧基)之碳為芳基、經取代之烷基、或三級烷基(如：二甲基戊基或第三丁基)時。此等候選物可採用類似彼等上述方法分析。
iv. 基於酯之鏈結基
另一具體例中，可裂解鏈結體包含基於酯之可裂解鏈結基。該基於酯之可裂解鏈結基可被細胞中之酵素裂解，如：酯酶與醯胺酶。基於酯之可裂解鏈結基實例包括(但不限於)：伸烷基、伸烯基與伸炔基之酯類。可裂解之酯鏈結基具有通式-C(O)O-或-OC(O)-。此等候選物可採用類似彼等上述方法分析。
v. 肽系裂解基團
再另一具體例中，該可裂解之鏈結體包含肽系之可裂解鏈結基。該肽系之可裂解鏈結基可被細胞中酵素裂解，如：肽酶與蛋白酶。該肽系之可裂解鏈結基為在胺基酸之間形成之肽鍵，產生寡肽(例如：二肽、三肽，等等)與多肽。該肽系之可裂解基團不包括醯胺基(-C(O)NH-)。該醯胺基可在任何伸烷基、伸烯基或伸炔基之間形成。肽鍵為在胺基酸之間形成醯胺鍵之特別型態， 產生肽與蛋白質。該肽系之裂解基團通常限於胺基酸之間之肽鍵(亦即醯胺鍵)，產生肽與蛋白質，且不包括整個醯胺官能基。該肽系之可裂解鏈結基具有通式-NHCHRAC(O)NHCHRBC(O)-，其中RA與RB為兩個相鄰胺基酸之R基團。此等候選物可採用彼等類似上述之方法分析。
一具體例中，本發明iRNA透過鏈結體接合碳水化合物。使用本發明組成物與方法之鏈結體之iRNA碳水化合物接合物之無限制實例包括(但不限於)：
Figure 104136995-A0202-12-0157-1487
Figure 104136995-A0202-12-0157-1488
Figure 104136995-A0202-12-0157-1489
Figure 104136995-A0202-12-0158-1490
Figure 104136995-A0202-12-0158-1491
Figure 104136995-A0202-12-0158-1492
Figure 104136995-A0202-12-0158-1493
Figure 104136995-A0202-12-0159-1494
當X或Y中之一為寡核苷酸時，另一個為氫。
本發明組成物與方法之某些具體例中，配體係透過二價或三價之分支鏈結體附接之一或多種“GalNAc”(N-乙醯基半乳糖胺)衍生物。
另一具體例中，本發明dsRNA係接合二價或三價之分支鏈結體，其係選自式(XXXII)-(XXXV)中任一式所示結構之群中：
Figure 104136995-A0202-12-0159-1495
 其中：q2A、q2B、q3A、q3B、q4A、q4B、q5A、q5B及q5C每次出現時代表分別獨立之0至20，且其中重覆單位可相同或不同； P2A 、P2B 、P3A 、P3B 、P4A 、P4B 、P5A 、P5B 、P5C 、T2A 、T2B 、T3A 、T3B 、T4A 、T4B 、T4A 、T5B 、T5C 每次出現時分別獨立為不存在、CO、NH、O、S、OC(O)，NHC(O)，CH2、CH2NH或CH2 O；Q2A 、Q2B 、Q3A 、Q3B 、Q4A 、Q4B 、Q5A 、Q5B 、Q5C 每次出現時分別獨立為不存在、伸烷基、經取代之伸烷基，其中可在一個或多個亞甲基中穿插或末端基團為一個或多個O、S、S(O)，SO2 、N(RN)、C(R’)=C(R’’)、C≡C或C(O)；R2A 、R2B 、R3A 、R3B 、R4A 、R4B 、R5A 、R5B 、R5C 每次出現時分別獨立為不存在、NH、O、S、CH2 、C(O)O、C(O)NH、NHCH(Ra)C(O)、-C(O)-CH(Ra)-NH-、CO、CH=N-O、
Figure 104136995-A0202-12-0160-1496
 或雜環基；L2A 、L2B 、L3A 、L3B 、L4A 、L4B 、L5A 、L5B 及L5C 代表配體；亦即每次出現時分別獨立為單糖(如：GalNAc)、雙醣、參醣、肆醣、寡醣或多醣；及Ra為H或胺基酸側鏈。RNAi劑特別適合使用三價接合GalNAc衍生物來抑制標靶基因表現，如：彼等式(XXXVI)：
Figure 104136995-A0202-12-0160-1497
 其中L5A 、L5B 與L5C 代表單糖，如：GalNAc衍生物。
合適之二價與三價之分支鏈結基接合GalNAc衍生物之實例包括(但不限於)：如上述式II、VII、XI、X、與XIII之結構。
教示RNA接合物製法之代表性美國專利案包括(但不限於)：美國專利案案號4,828,979；4,948,882；5,218,105；5,525,465；5,541,313；5,545,730；5,552,538；5,578,717,5,580,731；5,591,584；5,109,124；5,118,802；5,138,045；5,414,077；5,486,603；5,512,439；5,578,718；5,608,046；4,587,044；4,605,735；4,667,025；4,762,779；4,789,737；4,824,941；4,835,263；4,876,335；4,904,582；4,958,013；5,082,830；5,112,963；5,214,136；5,082,830；5,112,963；5,214,136；5,245,022；5,254,469；5,258,506；5,262,536；5,272,250；5,292,873；5,317,098；5,371,241,5,391,723；5,416,203,5,451,463；5,510,475；5,512,667；5,514,785；5,565,552；5,567,810；5,574,142；5,585,481；5,587,371；5,595,726；5,597,696；5,599,923；5,599,928及5,688,941；6,294,664；6,320,017；6,576,752；6,783,931；6,900,297；7,037,646；8,106,022，其完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。
上述化合物不一定所有位置均經一致修飾，事實上可在單一化合物中或甚至在iRNA之單一核苷中引進超過一個上述修飾。本發明亦包括為嵌合化合物之iRNA化合物。
本發明內容中，“嵌合”iRNA化合物或“嵌合體”為包含兩個或更多個化學上獨立區之iRNA化合物，較佳為dsRNA，該各區分別由至少一個單體單位組成，亦即以dsRNA化合物為例，為由核苷酸組成。此等iRNA通常包含至少一個區，其中RNA係經修飾，以致提高iRNA對抗核酸酶降解之抗性，提高細胞吸收性，及/或提高對標靶核酸之結合親和性。iRNA之額外一區可作為可以裂解RNA：DNA或RNA：RNA雜交體之酵素之受質。例如：RNase H為細胞內切核酸酶，其裂解RNA：DNA雙螺旋之RNA股。因此活化RNase H會裂解RNA標靶，藉以大幅加強iRNA抑制基因表現之效力。結果，當採用嵌合性dsRNA時，經常可以採用較短之iRNA得到類似硫代磷酸酯去氧dsRNA與相同標靶區雜交後得到之結果。RNA標靶之裂解作用照例可採用凝膠電泳分析法檢測，且若必要時，可聯合採用本領域上已知之核酸雜交技術。
某些例子中，iRNA之RNA可經過非配體基團修飾。許多種非配體分子已與iRNA接合，以加強iRNA之活性、細胞分佈性或細胞吸收性，且進行此等接合法之程序可從科學文獻中取得。此等非配體部份基團包括脂質部份基團，如：膽固醇(Kubo,T.等人Biochem.Biophys.Res.Comm .,2007,365(1)：54-61；Letsinger等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA ,1989,86：6553)、膽酸(Manoharan等人Bioorg.Med.Chem.Lett .,1994,4：1053)、硫醚，例如：己基-S-三苯甲基硫醇(Manoharan等人Ann.N.Y.Acad.Sci .,1992,660：306； Manoharan等人Bioorg.Med.Chem.Let .,1993,3：2765)、硫代膽固醇(Oberhauser等人Nucl.Acids Res .,1992,20：533)、脂系鏈，例如：十二碳烷二醇或十一碳烷基(Saison-Behmoaras等人，EMBO J ,1991,10：1111；Kabanov等人，FEBS Lett .,1990,259：327；Svinarchuk等人，Biochimie ,1993,75：49)、磷脂，例如：二-十六碳烷-消旋性-甘油或1,2-二-O-十六碳烷基-消旋性-甘油基-3-H-膦酸三乙基銨鹽(Manoharan等人，Tetrahedron Lett .,1995,36：3651；Shea等人，Nucl.Acids Res .,1990,18：3777)、多元胺或聚乙二醇鏈(Manoharan等人，Nuclosides & Nuclotides ,1995,14：969)、或金剛烷乙酸(Manoharan等人，Tetrahedron Lett .,1995,36：3651)、棕櫚基部份基團(Mishra等人，Biochim.Biophys.Acta ,1995,1264：229)、或十八碳烷基胺或己基胺基-羰基氧膽固醇部份基團(Crooke等人，J.Pharmacol.Exp.Ther .,1996,277：923)。教示此等RNA接合物製法之代表性美國專利案已如上述。典型接合法程序涉及在序列之一個或多個位置帶有胺基鏈結體之RNA之合成法。該胺基再與準備接合之分子採用適當偶合或活化試劑反應。該接合反應可在RNA仍結合在固態擔體上時進行或可在裂解RNA後，在溶液相中進行。通常採用HPLC法純化RNA接合物，產生純接合物。
V. 本發明iRNA之傳遞法
可採用許多不同方式傳遞本發明iRNA至細胞中，例如：個體(如：人類個體，例如：有此需要之個體， 如：罹患HBV-相關疾病之個體)之細胞。例如：可能由細胞與本發明iRNA於活體外或活體內接觸，進行傳遞。亦可直接投與包含iRNA(例如：dsRNA)之組成物給個體，於活體內傳遞。或者，可能間接投與編碼並主導iRNA表現之一或多種載體，於活體內傳遞。此等替代法更進一步於下文中說明。
通常，本發明iRNA可採用任何傳遞核酸分子之方法(活體外或活體內)(參見例如：Akhtar S.與Julian RL.(1992)Trends Cell.Biol .2(5)：139-144與WO94/02595，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中)。用於活體內傳遞時，要傳遞iRNA分子之考量因素包括例如：所傳遞分子之生物安定性、預防所傳遞分子在標靶組織中之非專一性效應及累積。可藉由局部投藥法使iRNA之非專一性效應降至最低，例如：採用直接注射或植入組織中或局部表面投與製劑。局部投藥至治療位點時，可使該製劑達最大局部濃度，限制該製劑曝露在可能會受到製劑傷害且使製劑降解之全身組織，並可以降低iRNA分子之總投藥劑量。數項研究已成功顯示，當局部投與iRNA時，可減弱基因產物。例如：在馬來猴(cynomolgus monkeys)玻璃體內注射(Tolentino,MJ.等人(2004)Retina 24：132-138)及在小鼠視網膜下注射(Reich,SJ.等人(2003)Mol.Vis .9：210-216)，以經眼內傳遞VEGF dsRNA時，均顯示可在老年性黃斑部病症之實驗模式中預防新血管形成。此外，直接在小鼠腫瘤內注射dsRNA時，可縮小腫瘤體積(Pille,J.等 人(2005)Mol.Ther .11：267-274)，並可延長帶腫瘤小鼠之壽命(Kim,WJ.等人(2006)Mol.Ther .14：343-350；Li,S.等人(2007)Mol.Ther .15：515-523)。RNA干擾法亦已顯示可藉由直接注射法成功局部傳遞至CNS(Dorn,G.，等人(2004)Nucleic Acids 32：e49；Tan,PH.等人(2005)Gene Ther .12：59-66；Makimura,H.等人(2002)BMC Neurosci .3：18；Shishkina,GT.等人(2004)Neuroscience 129：521-528；Thakker,ER.等人(2004)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A .101：17270-17275；Akaneya,Y.等人(2005)J.Neurophysiol .93：594-602)及藉由鼻內投藥法投與肺部(Howard,KA.等人(2006)Mol.Ther .14：476-484；Zhang,X.等人(2004)J.Biol.Chem .279：10677-10684；Bitko,V.等人(2005)Nat.Med .11：50-55)。全身投與iRNA以治療疾病時，RNA可經修飾或改用藥物傳遞系統傳遞；這兩種方法均可預防dsRNA於活體內被內切-與外切-核酸酶快速降解。修飾RNA或醫藥載劑亦可讓iRNA組成物靶向標靶組織，並避免不期望之偏離標靶效應。iRNA分子可採用化學法接合親脂性基團(如：膽固醇)進行修飾，以加強細胞吸收並預防降解。例如：由主導對抗ApoB之iRNA與親脂性膽固醇部份基團之接合物全身注射至小鼠，結果減弱肝與空腸中之apoB mRNA(Soutschek,J.等人(2004)Nature 432：173-178)。iRNA與適體之接合物已在小鼠攝護腺癌模式中顯示可抑制腫瘤生長，並介導腫瘤消退(McNamara,JO.等人(2006)Nat.Biotechnol .24：1005-1015)。另一具體例，可使用藥物傳遞 系統(如：奈米粒子、樹枝狀物、聚合物、脂質體或陽離子性傳遞系統)傳遞iRNA。帶正電價之陽離子性傳遞系統可促進iRNA分子(帶負電價)之結合性，亦加強在帶負電價之細胞膜上之交互作用，讓細胞有效吸收iRNA。陽離子性脂質、樹枝狀聚合物、或聚合物可與iRNA結合，或誘發形成包埋iRNA之囊泡或微胞(參見例如：Kim SH.等人(2008)Journalof Controlled Release 129(2)：107-116)。形成囊泡或微胞可在全身投藥時進一步預防iRNA降解。製造及投與陽離子性-iRNA複合物之方法係熟悉此相關技術者之能力範圍內(參見例如：Sorensen,DR.等人(2003)J.Mol.Biol 327：761-766；Verma,UN.等人(2003)Clin.Cancer Res .9：1291-1300；Arnold,AS等人(2007)J.Hypertens .25：197-205，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中)。適用於全身性傳遞iRNA之藥物傳遞系統之有些非限制性實例包括DOTAP(Sorensen,DR.等人(2003)，如上述文獻；Verma,UN.等人(2003)，如上述文獻)、寡染胺(Oligofectamine)"固態核酸脂質粒子"(Zimmermann,TS.等人(2006)Nature 441：111-114)、心磷脂(cardiolipin)(Chien,PY.等人(2005)Cancer Gene Ther .12：321-328；Pal,A.等人(2005)Int J.Oncol .26：1087-1091)、聚乙二亞胺(Bonnet ME.等人(2008)Pharm.Res .8月16日電子書(Epub ahead of print)；Aigner,A.(2006)J.Biomed.Biotechnol .71659)、Arg-Gly-Asp(RGD)肽類(Liu,S.(2006)Mol.Pharm .3：472-487)、與聚醯胺基胺類(Tomalia,DA.等人(2007)Biochem.Soc.Trans . 35：61-67；Yoo,H.等人(1999)Pharm.Res .16：1799-1804)。有些具體例中，iRNA與環糊精形成複合物，供全身性投藥。iRNA與環糊精之投藥方法與醫藥組成物可參見美國專利案案號7,427,605，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。
A. 編碼本發明iRNA之載體
靶向HBV基因之iRNA可由嵌入DNA或RNA載體中之轉錄單位表現(參見例如：Couture,A等人TIG.( 1996),12：5-10；Skillern,A.等人之國際PCT公告案案號WO 00/22113、Conrad之國際PCT公告案案號WO 00/22114、與Conrad之美國專利案案號6,054,299)。該表現可為過渡性(數小時至數週)或持續性(數週至數個月或更久)，依所採用之特定構築體與標靶組織或細胞型態而定。此等轉殖基因可呈線性構築體、環狀質體、或病毒載體引進，其可為整合或非整合載體。亦可構築該轉殖基因，使其得以呈染色體外質體遺傳(Gassmann等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA( 1995)92：1292)。
iRNA之個別股或兩股可由表現載體上之發動子轉錄。當希望這兩個分開股可以表現產生例如：dsRNA時，可以將兩個分開之表現載體共同引進(例如：轉染或感染)至標靶細胞中。或者，dsRNA之各個別股可利用均位於相同表現質體上之發動子轉錄。一具體例中，dsRNA係呈利用鏈結體聚核苷酸序列鏈結之反向重覆序列聚核苷酸表現，因此dsRNA具有莖與環結構。
iRNA表現載體通常為DNA質體或病毒載體。可採用可與真核生物細胞相容，較佳為彼等與脊椎動物細胞相容之表現載體來製造重組構築體，供表現本文所說明之iRNA。真核生物細胞表現載體係所屬領域上習知，且可從許多商品來源取得。通常，所提供之此等載體包含合宜之限制酶切割位點，供嵌入所需之核酸節段。可經全身性傳遞iRNA表現載體，如：經靜脈內或經肌內投藥、投藥至從患者取出之標靶細胞後再引進患者體內、或採用可以進入所需標靶細胞中之任何其他方式。
iRNA表現質體可與陽離子性脂質載劑(例如：寡染胺(Oligofectamine)或基於非陽離子性脂質之載劑(例如：Transit-TKOTM )形成複合物轉染至標靶細胞。本發明範圍內亦包括持續一週或更久之多重脂質轉染法，供iRNA介導減弱靶向標靶RNA之不同區。可採用各種不同已知方法追蹤成功引進載體進入宿主細胞。例如：過渡轉染可利用報導子之訊號，如：螢光標記物，如：綠色螢光蛋白質(GFP)。採用可讓轉染細胞對特定環境因子(例如：抗體與藥物)具有抗性之標記物，如：潮黴素B(hygromycin B)抗性來確認離體細胞之穩定轉染。
本文所說明方法與組成物可利用之病毒載體系統包括(但不限於)：(a)腺病毒載體；(b)逆轉錄病毒載體，包括(但不限於)：慢病毒(lentivirus)載體、莫洛尼氏白血病病毒(moloney murine leukemia virus)，等等；(c)腺相關病毒載體；(d)單純皰疹病毒載體；(e)SV 40載體；(f)多瘤 病毒載體；(g)乳突病毒載體；(h)小核糖核酸病毒載體；(i)痘病毒載體，如：正痘(orthopox)，例如：牛痘病毒載體或鳥痘，例如：金絲雀痘或禽痘；與(j)輔助病毒依賴性或無腸腺病毒。複製缺陷病毒亦有利。細胞基因組中不一定會引進不同載體。若需要時，該構築體可包括用於轉錄之病毒序列。或者，該構築體可引進可以進行附加體型複製之載體，例如：EPV與EBV載體。用於iRNA之重組表現之構築體通常需要調節元素，例如：發動子、加強子，等等，以確保iRNA於標靶細胞中之表現。下文將進一步說明有關載體與構築體之其他態樣。
適用於傳遞iRNA之載體包括足以在所需標靶細胞或組織中表現iRNA之調節元素(發動子、加強子，等等)。可選擇該等調節元素來提供組成性或調節/誘發性表現。
可以例如：利用對某些生理調節劑(例如：循環葡萄糖含量或激素)敏感之誘發性調節序列準確調節iRNA之表現(Docherty等人，1994,FASEB J .8：20-24)。此等適用於細胞中或哺乳動物中控制dsRNA表現之誘發性表現系統包括例如：利用蛻皮激素、雌激素、黃體酮、四環素、二聚合之化學誘發劑、與異丙基-β-D1-硫代哌喃半乳糖苷(IPTG)之調節作用。熟悉此相關技術者將有能力依據iRNA轉殖基因意圖之用途選擇適當之調節/發動子序列。
可使用包含編碼iRNA之核酸序列之病毒載體。例如：可使用逆轉錄病毒載體(參見Miller等人，Meth. Enzymol .217：581-599(1993))。此等逆轉錄病毒載體包含正確包裹病毒基因組並整合進入宿主細胞DNA時所必要之組份。選殖編碼iRNA之核酸序列進入一或多種載體中，促進傳遞核酸至患者中，有關逆轉錄病毒載體之更詳細說明可參見例如：Boesen等人之Biotherapy 6：291-302(1994)，其說明使用逆轉錄病毒載體傳遞mdr1基因至造血幹細胞，以便製造更能抵抗化療之幹細胞。其他說明逆轉錄病毒載體於基因療法中用途之參考文獻為：Clowes等人，J.Clin.Invest .93：644-651(1994)；Kiem等人，Blood 83：1467-1473(1994)；Salmons與Gunzberg,Human Gene Therapy 4：129-141(1993)；與Grossman與Wilson,Curr.Opin.In Genetics and Devel .3：110-114(1993)。欲使用之慢病毒載體包括例如：美國專利案案號6,143,520；5,665,557；與5,981,276所說明之基於HIV之載體，其揭示內容已以引用之方式併入本文中。
亦欲使用腺病毒來傳遞本發明iRNA。腺病毒為特別值得注意之媒劑，例如：用於傳遞基因至呼吸上皮。腺病毒會自然感染呼吸上皮，在此造成輕度疾病。基於腺病毒之傳遞系統之其他標靶為肝臟、中樞神經系統、內皮細胞、與肌肉。腺病毒之優點在於可以感染非分裂細胞。Kozarsky與Wilson,Current Opinion in Genetics and Development 3：499-503(1993)提出有關基於腺病毒之基因療法之概論。Bout等人，Human Gene Therapy 5：3-10(1994)證實使用腺病毒載體轉移基因至恒河猴之呼吸上皮。腺病 毒於基因療法中之其他用途實例可參見Rosenfeld等人，Science 252：431-434(1991)；Rosenfeld等人，Cell 68：143-155(1992)；Mastrangeli等人，J.Clin.Invest .91：225-234(1993)；PCT公告案WO94/12649；與Wang等人之Gene Therapy 2：775-783(1995)。適合表現如本文所說明特徵之iRNA之AV載體、構築重組AV載體之方法及傳遞載體至標靶細胞之方法說明於Xia H等人(2002)，Nat.Biotech .20：1006-1010。
亦可使用腺相關病毒(AAV)載體來傳遞本發明iRNA(Walsh等人，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.204：289-300(1993)；美國專利案案號5,436,146)。一具體例中，可由具有例如：U6或H1 RNA發動子或巨細胞病毒(CMV)發動子之重組AAV載體表現iRNA，其係呈兩個分開之互補單股RNA分子。適合表現如本發明所說明特徵之dsRNA之AAV載體、構築重組AV載體之方法及傳遞載體至標靶細胞之方法說明於Samulski R等人(1987)，J.Virol .61：3096-3101；Fisher K J等人(1996)，J.Virol ,70：520-532；Samulski R等人(1989)，J.Virol .63：3822-3826；美國專利案案號5,252,479；美國專利案案號5,139,941；國際專利申請案案號WO 94/13788；與國際專利申請案案號WO 93/24641，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。
另一種適合傳遞本發明iRNA之病毒載體為痘病毒，如：牛痘病毒，例如：減毒牛痘，如：經修飾之安卡拉(Ankara)病毒(MVA)或NYVAC、鳥痘，如：禽痘或 金絲雀痘。
病毒載體之向性可利用將帶有套膜蛋白質或來自其他病毒之其他表面抗原的載體假型化而進行修飾，或適當時改用不同病毒殼體蛋白質替代。例如：慢病毒載體可利用來自水泡性病毒(VSV)、狂犬病、伊波拉(Ebola)、蒙古拉(mokola)，等等之表面蛋白質進行假型處理。AAV載體可經過處理，讓載體表現不同殼體蛋白質血清型，而靶向不同細胞；參見例如：Rabinowitz J E等人(2002)，J Virol 76：791-801，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。
載體之醫藥製劑中可包括含在可接受之稀釋劑中之載體，或可包括其中已包埋基因傳遞媒劑之緩釋基質。或者，若可從重組細胞(例如：逆轉錄病毒載體)完整產生完整基因傳遞載體時，醫藥製劑可包括產生基因傳遞系統之一或多種細胞。
VI. 本發明醫藥組成物
本發明亦包括一種包含本發明iRNA之醫藥組成物與調配物。一具體例中，本文提供包含本文說明之iRNA與醫藥上可接受之載劑之醫藥組成物。包含iRNA之醫藥組成物適用於治療與HBV基因之表現或活性相關之疾病或病症。此等醫藥組成物係依據傳遞模式調配。其中一項實例為調配成以非經腸方式傳遞而全身性投藥之組成物，例如：經皮下(SC)或經靜脈內(IV)傳遞。另一項實例為調配成直接傳遞至腦實質之組成物，例如：採用如：連 續幫浦輸注至腦內。本發明醫藥組成物可投與足以抑制HBV基因表現之劑量。
一具體例中，本發明iRNA劑係依體重計算之劑量投與個體。“依體重計算之劑量”(例如：以mg/kg計之劑量)係指iRNA劑量之劑量將隨個體體重變化。另一具體例中，iRNA劑係依固定劑量投與個體。“固定劑量”(例如：以mg計之劑量)意指所有個體均採用同一種劑量之iRNA劑，不考慮與個體相關之任何特定因素，如：體重。一項特定具體例中，本發明iRNA劑之固定劑量係依據預定體重或年齡來決定。
通常，本發明iRNA之合適劑量將在每天對接受者每公斤體重投與約0.001至約200.0毫克之範圍內，通常在每天每公斤體重約1至50mg。例如：dsRNA可投與每單劑約0.01mg/kg、約0.05mg/kg、約0.5mg/kg、約1mg/kg、約1.5mg/kg、約2mg/kg、約3mg/kg、約10mg/kg、約20mg/kg、約30mg/kg、約40mg/kg、或約50mg/kg。
例如：dsRNA之投藥劑量可為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、 8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、或約10mg/kg。該所引用數值之間的數值與範圍亦意圖成為本發明之一部份。
另一具體例中，dsRNA係投與劑量約0.1至約50mg/kg、約0.25至約50mg/kg、約0.5至約50mg/kg、約0.75至約50mg/kg、約1至約50mg/kg、約1.5至約50mg/kg、約2至約50mg/kg、約2.5至約50mg/kg、約3至約50mg/kg、約3.5至約50mg/kg、約4至約50mg/kg、約4.5至約50mg/kg、約5至約50mg/kg、約7.5至約50mg/kg、約10至約50mg/kg、約15至約50mg/kg、約20至約50mg/kg、約20至約50mg/kg、約25至約50mg/kg、約25至約50mg/kg、約30至約50mg/kg、約35至約50mg/kg、約40至約50mg/kg、約45至約50mg/kg、約0.1至約45mg/kg、約0.25至約45mg/kg、約0.5至約45mg/kg、約0.75至約45mg/kg、約1至約45mg/kg、約1.5至約45mg/kg、約2至約45mg/kg、約2.5至約45mg/kg、約3至約45mg/kg、約3.5至約45mg/kg、約4至約45mg/kg、約4.5至約45mg/kg、約5至約45mg/kg、約7.5至約45mg/kg、約10至約45mg/kg、約15至約45mg/kg、約20至約45mg/kg、約20至約45mg/kg、約25至約45mg/kg、約25至約45mg/kg、約30至約45mg/kg、約35至約45mg/kg、約40至約45mg/kg、約0.1至約40mg/kg、約0.25至約40mg/kg、約0.5至約40mg/kg、約0.75至約40mg/kg、約1至約40mg/kg、約1.5至約40mg/kg、約2至約40 mg/kg、約2.5至約40mg/kg、約3至約40mg/kg、約3.5至約40mg/kg、約4至約40mg/kg、約4.5至約40mg/kg、約5至約40mg/kg、約7.5至約40mg/kg、約10至約40mg/kg、約15至約40mg/kg、約20至約40mg/kg、約20至約40mg/kg、約25至約40mg/kg、約25至約40mg/kg、約30至約40mg/kg、約35至約40mg/kg、約0.1至約30mg/kg、約0.25至約30mg/kg、約0.5至約30mg/kg、約0.75至約30mg/kg、約1至約30mg/kg、約1.5至約30mg/kg、約2至約30mg/kg、約2.5至約30mg/kg、約3至約30mg/kg、約3.5至約30mg/kg、約4至約30mg/kg、約4.5至約30mg/kg、約5至約30mg/kg、約7.5至約30mg/kg、約10至約30mg/kg、約15至約30mg/kg、約20至約30mg/kg、約20至約30mg/kg、約25至約30mg/kg、約0.1至約20mg/kg、約0.25至約20mg/kg、約0.5至約20mg/kg、約0.75至約20mg/kg、約1至約20mg/kg、約1.5至約20mg/kg、約2至約20mg/kg、約2.5至約20mg/kg、約3至約20mg/kg、約3.5至約20mg/kg、約4至約20mg/kg、約4.5至約20mg/kg、約5至約20mg/kg、約7.5至約20mg/kg、約10至約20mg/kg、或約15至約20mg/kg。該所引用數值之間的數值與範圍亦意圖成為本發明之一部份。
例如：dsRNA可投與劑量為約0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、 1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、或約10mg/kg。該所引用數值之間的數值與範圍亦意圖成為本發明之一部份。
另一具體例中，dsRNA係投與劑量約0.5至約50mg/kg、約0.75至約50mg/kg、約1至約50mg/kg、約1.5至約50mg/kg、約2至約50mg/kg、約2.5至約50mg/kg、約3至約50mg/kg、約3.5至約50mg/kg、約4至約50mg/kg、約4.5至約50mg/kg、約5至約50mg/kg、約7.5至約50mg/kg、約10至約50mg/kg、約15至約50mg/kg、約20至約50mg/kg、約20至約50mg/kg、約25至約50mg/kg、約25至約50mg/kg、約30至約50mg/kg、約35至約50mg/kg、約40至約50mg/kg、約45至約50mg/kg、約0.5至約45mg/kg、約0.75至約45mg/kg、約1至約45mg/kg、約1.5至約45mg/kg、約2至約45mg/kg、約2.5至約45mg/kg、約3至約45mg/kg、約3.5至約45mg/kg、約4至約45mg/kg、約4.5至約45mg/kg、約5至約45mg/kg、約7.5至約45mg/kg、約10至約45mg/kg、約15至約45mg/kg、約20至約45mg/kg、約20至約45 mg/kg、約25至約45mg/kg、約25至約45mg/kg、約30至約45mg/kg、約35至約45mg/kg、約40至約45mg/kg、約0.5至約40mg/kg、約0.75至約40mg/kg、約1至約40mg/kg、約1.5至約40mg/kg、約2至約40mg/kg、約2.5至約40mg/kg、約3至約40mg/kg、約3.5至約40mg/kg、約4至約40mg/kg、約4.5至約40mg/kg、約5至約40mg/kg、約7.5至約40mg/kg、約10至約40mg/kg、約15至約40mg/kg、約20至約40mg/kg、約20至約40mg/kg、約25至約40mg/kg、約25至約40mg/kg、約30至約40mg/kg、約35至約40mg/kg、約0.5至約30mg/kg、約0.75至約30mg/kg、約1至約30mg/kg、約1.5至約30mg/kg、約2至約30mg/kg、約2.5至約30mg/kg、約3至約30mg/kg、約3.5至約30mg/kg、約4至約30mg/kg、約4.5至約30mg/kg、約5至約30mg/kg、約7.5至約30mg/kg、約10至約30mg/kg、約15至約30mg/kg、約20至約30mg/kg、約20至約30mg/kg、約25至約30mg/kg、約0.5至約20mg/kg、約0.75至約20mg/kg、約1至約20mg/kg、約1.5至約20mg/kg、約2至約20mg/kg、約2.5至約20mg/kg、約3至約20mg/kg、約3.5至約20mg/kg、約4至約20mg/kg、約4.5至約20mg/kg、約5至約20mg/kg、約7.5至約20mg/kg、約10至約20mg/kg、或約15至約20mg/kg。一具體例中，dsRNA係投與劑量約10mg/kg至約30mg/kg。該所引用數值之間的數值與範圍亦意圖成為本發明之一部份。
例如：個體可接受例如：經皮下或經靜脈內投與單劑醫療量之iRNA，如：約0.1、0.125、0.15、0.175、0.2、0.225、0.25、0.275、0.3、0.325、0.35、0.375、0.4、0.425、0.45、0.475、0.5、0.525、0.55、0.575、0.6、0.625、0.65、0.675、0.7、0.725、0.75、0.775、0.8、0.825、0.85、0.875、0.9、0.925、0.95、0.975、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、31、32、33、34、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、或約50mg/kg。該所引用數值之間的數值與範圍亦意圖成為本發明之一部份。
有些具體例中，個體係接受例如：經皮下或經靜脈內投與多劑醫療量之iRNA，如：劑量為約0.1、0.125、0.15、0.175、0.2、0.225、0.25、0.275、0.3、0.325、0.35、0.375、0.4、0.425、0.45、0.475、0.5、0.525、0.55、 0.575、0.6、0.625、0.65、0.675、0.7、0.725、0.75、0.775、0.8、0.825、0.85、0.875、0.9、0.925、0.95、0.975、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、31、32、33、34、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、或約50mg/kg。多劑量療程可包括每天投與醫療量之iRNA，如：持續兩天、三天、四天、五天、六天、七天或更多天。
其他具體例中，該個體係接受例如：經皮下或經靜脈內重覆投與醫療量之iRNA，如：一劑約0.1、0.125、0.15、0.175、0.2、0.225、0.25、0.275、0.3、0.325、0.35、0.375、0.4、0.425、0.45、0.475、0.5、0.525、0.55、0.575、0.6、0.625、0.65、0.675、0.7、0.725、0.75、0.775、0.8、0.825、0.85、0.875、0.9、0.925、0.95、0.975、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、 2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、31、32、33、34、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、或約50mg/kg。重覆劑量療程可包括依規律方式投與醫療量之iRNA，如：每隔一天、每隔三天、每隔四天、一週兩次、一週一次、每隔一週、或一個月一次。
某些具體例中，例如：當本發明組成物包含如本文說明之dsRNA與脂質時，可對個體投與醫療有效量之iRNA，如：約0.01mg/kg至約5mg/kg、約0.01mg/kg至約10mg/kg、約0.05mg/kg至約5mg/kg、約0.05mg/kg至約10mg/kg、約0.1mg/kg至約5mg/kg、約0.1mg/kg至約10mg/kg、約0.2mg/kg至約5mg/kg、約0.2mg/kg至約10mg/kg、約0.3mg/kg至約5mg/kg、約0.3mg/kg至約10mg/kg、約0.4mg/kg至約5mg/kg、約0.4mg/kg至約10mg/kg、約0.5mg/kg至約5mg/kg、約0.5mg/kg 至約10mg/kg、約1mg/kg至約5mg/kg、約1mg/kg至約10mg/kg、約1.5mg/kg至約5mg/kg、約1.5mg/kg至約10mg/kg、約2mg/kg至約about 2.5mg/kg、約2mg/kg至約10mg/kg、約3mg/kg至約5mg/kg、約3mg/kg至約10mg/kg、約3.5mg/kg至約5mg/kg、約4mg/kg至約5mg/kg、約4.5mg/kg至約5mg/kg、約4mg/kg至約10mg/kg、約4.5mg/kg至約10mg/kg、約5mg/kg至約10mg/kg、約5.5mg/kg至約10mg/kg、約6mg/kg至約10mg/kg、約6.5mg/kg至約10mg/kg、約7mg/kg至約10mg/kg、約7.5mg/kg至約10mg/kg、約8mg/kg至約10mg/kg、約8.5mg/kg至約10mg/kg、約9mg/kg至約10mg/kg、或約9.5mg/kg至約10mg/kg。該所引用數值之間的數值與範圍亦意圖成為本發明之一部份。例如：dsRNA可投與劑量為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、或約10mg/kg。該所引用數值之間的數值與範圍亦意圖成為本發明之一部份。
某些本發明具體例中，例如：當雙股RNAi 劑包括修飾(例如：一或多個在三個連續核苷酸具有三個相同修飾之基序)(包括一個位在或接近製劑之裂解位點之此等基序)、六個硫代磷酸酯鏈結基、與配體時，此等製劑係投與劑量約0.01至約0.5mg/kg、約0.01至約0.4mg/kg、約0.01至約0.3mg/kg、約0.01至約0.2mg/kg、約0.01至約0.1mg/kg、約0.01mg/kg至約0.09mg/kg、約0.01mg/kg至約0.08mg/kg、約0.01mg/kg至約0.07mg/kg、約0.01mg/kg至約0.06mg/kg、約0.01mg/kg至約0.05mg/kg、約0.02至約0.5mg/kg、約0.02至約0.4mg/kg、約0.02至約0.3mg/kg、約0.02至約0.2mg/kg、約0.02至約0.1mg/kg、約0.02mg/kg至約0.09mg/kg、約0.02mg/kg至約0.08mg/kg、約0.02mg/kg至約0.07mg/kg、約0.02mg/kg至約0.06mg/kg、約0.02mg/kg至約0.05mg/kg、約0.03至約0.5mg/kg、約0.03至約0.4mg/kg、約0.03至約0.3mg/kg、約0.03至約0.2mg/kg、約0.03至約0.1mg/kg、約0.03mg/kg至約0.09mg/kg、約0.03mg/kg至約0.08mg/kg、約0.03mg/kg至約0.07mg/kg、約0.03mg/kg至約0.06mg/kg、約0.03mg/kg至約0.05mg/kg、約0.04至約0.5mg/kg、約0.04至約0.4mg/kg、約0.04至約0.3mg/kg、約0.04至約0.2mg/kg、約0.04至約0.1mg/kg、約0.04mg/kg至約0.09mg/kg、約0.04mg/kg至約0.08mg/kg、約0.04mg/kg至約0.07mg/kg、約0.04mg/kg至約0.06mg/kg、約0.05至約0.5mg/kg、約0.05至約0.4mg/kg、約0.05至約0.3mg/kg、約0.05至約0.2mg/kg、約0.05至約0.1mg/kg、約0.05mg/kg 至約0.09mg/kg、約0.05mg/kg至約0.08mg/kg、或約0.05mg/kg至約0.07mg/kg。該所引用數值之間的數值與範圍亦意圖成為本發明之一部份，例如：該RNAi劑可對個體投與約0.015mg/kg至約0.45mg/kg之劑量。
例如：該RNAi劑，例如：呈醫藥組成物之RNAi劑，可投與劑量約0.01mg/kg、0.0125mg/kg、0.015mg/kg、0.0175mg/kg、0.02mg/kg、0.0225mg/kg、0.025mg/kg、0.0275mg/kg、0.03mg/kg、0.0325mg/kg、0.035mg/kg、0.0375mg/kg、0.04mg/kg、0.0425mg/kg、0.045mg/kg、0.0475mg/kg、0.05mg/kg、0.0525mg/kg、0.055mg/kg、0.0575mg/kg、0.06mg/kg、0.0625mg/kg、0.065mg/kg、0.0675mg/kg、0.07mg/kg、0.0725mg/kg、0.075mg/kg、0.0775mg/kg、0.08mg/kg、0.0825mg/kg、0.085mg/kg、0.0875mg/kg、0.09mg/kg、0.0925mg/kg、0.095mg/kg、0.0975mg/kg、0.1mg/kg、0.125mg/kg、0.15mg/kg、0.175mg/kg、0.2mg/kg、0.225mg/kg、0.25mg/kg、0.275mg/kg、0.3mg/kg、0.325mg/kg、0.35mg/kg、0.375mg/kg、0.4mg/kg、0.425mg/kg、0.45mg/kg、0.475mg/kg、或約0.5mg/kg。上述該所引用數值之間的數值亦意圖成為本發明之一部份。
有些具體例中，該RNAi劑係投與固定劑量約100mg至約900mg之間，例如：約100mg至約850mg之間、約100mg至約800mg之間、約100mg至約750mg之間、約100mg至約700mg之間、約100mg至約650mg 之間、約100mg至約600mg之間、約100mg至約550mg之間、約100mg至約500mg之間、約200mg至約850mg之間、約200mg至約800mg之間、約200mg至約750mg之間、約200mg至約700mg之間、約200mg至約650mg之間、約200mg至約600mg之間、約200mg至約550mg之間、約200mg至約500mg之間、約300mg至約850mg之間、約300mg至約800mg之間、約300mg至約750mg之間、約300mg至約700mg之間、約300mg至約650mg之間、約300mg至約600mg之間、約300mg至約550mg之間、約300mg至約500mg之間、約400mg至約850mg之間、約400mg至約800mg之間、約400mg至約750mg之間、約400mg至約700mg之間、約400mg至約650mg之間、約400mg至約600mg之間、約400mg至約550mg、或約400mg至約500mg之間。
有些具體例中，該RNAi劑係投與固定劑量約100mg、約125mg、約150mg、約175mg、200mg、約225mg、約250mg、約275mg、約300mg、約325mg、約350mg、約375mg、約400mg、約425mg、約450mg、約475mg、約500mg、約525mg、約550mg、約575mg、約600mg、約625mg、約650mg、約675mg、約700mg、約725mg、約750mg、約775mg、約800mg、約825mg、約850mg、約875mg、或約900mg。
醫藥組成物可經靜脈內輸注持續一段時間，如：持續5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、及21、22、23、24、或約25分鐘。可能例如：依規律方式重覆投藥，如：每週、每兩週(亦即每隔一週)持續一個月、兩個月、三個月，四個月或更久。經過初次治療療程後，即可依較少頻率投藥治療。例如：經過每週或每兩週投藥一次持續三個月後，可以每個月重覆一次，持續六個月或一年或更久。
醫藥組成物可以一天投藥一次，或iRNA可在一天內依適當間隔投與兩個、三個或更多個小劑量，或甚至使用連續輸注或透過控制釋放之調配物傳遞。此時，各小劑量中之iRNA含量必需相對較少，以達到總日劑量。該劑量單位亦可組合以供持續傳遞數天，例如：採用常用之持續釋放調配物，其可歷經數天持續釋放iRNA。持續釋放調配物係本領域上已知，且特別適用於在特定位點傳遞該製劑，如：可與本發明製劑一起使用。此具體例中，該劑量單位包含對應之多重日劑量。
其他具體例中，醫藥組成物之單一劑量可以為長效性，因此下一個劑量可在間隔不超過3、4或5天內或間隔不超過1、2、3或4週內投藥。本發明有些具體例中，本發明醫藥組成物之單一劑量係一週投藥一次。本發明其他具體例中，本發明醫藥組成物之單一劑量係每兩個月投藥一次。本發明有些具體例中，本發明醫藥組成物之單一劑量係每個月投藥一次、每隔一個月投藥一次、或每季投藥一次(亦即每三個月投藥一次)。
相關技術者咸了解某些因素會影響有效治 療個體時所需之劑量與投藥時間，包括(但不限於)：疾病或病症之嚴重性、過去之治療、一般健康及/或該個體年齡、及其他現有疾病。此外，以醫療有效量之組成物治療該個體時可包括單次治療或連續治療。本發明所包括之個別iRNA可採用習知方法或使用本文說明之適當動物模式，依據活體內試驗估測其有效劑量及活體內半衰期。
本發明醫藥組成物可依許多方式投藥，端賴是否需要局部或全身性治療及需要治療之區域而定。投藥法可能為局部表面(例如：採用穿皮式貼布)、經肺部，例如：吸入或吹入粉劑或氣霧劑，包括利用噴霧器；經氣管內、經鼻內、經表皮與穿皮、經口或非經腸胃式。非經腸胃式投藥法包括經靜脈內、經動脈內、經皮下、經腹膜內或經肌內注射或輸注；皮膚下，例如：經由植入裝置；或經顱內，例如：經腦實質內(intraparenchymal)、脊髓內或腦室內投藥。
iRNA可依靶向方式傳遞到特定組織，如：肝臟(例如：肝臟之肝細胞)。
供局部表面投藥之醫藥組成物與調配物可包括穿皮式貼布、油膏、洗液、乳霜、凝膠、滴劑、栓劑、噴液、液體與粉劑。可能必須或需要使用常用之醫藥載劑、水性、粉狀或油性基質、增稠劑，等等。有塗層之保險套、手套，等等亦適用。合適之局部表面調配物包括彼等由如本發明所說明特徵之iRNA與局部表面傳遞劑(如：脂質、脂質體、脂肪酸、脂肪酸酯類、類固醇、螯合劑與表面活 性劑)混合者。合適脂質與脂質體包括中性(例如：二油醯基磷脂醯基DOPE乙醇胺、二肉豆蔻醯基磷脂醯基膽鹼DMPC、二硬脂醯基磷脂醯基膽鹼)、陰性(例如：二肉豆蔻醯基磷脂醯基甘油DMPG)與陽離子性(例如：二油醯基四甲基胺基丙基DOTAP與二油醯基磷脂醯基乙醇胺DOTMA)。如本發明所說明特徵之iRNA可包埋在脂質體內或可與其(特定言之為陽離子性脂質體)形成複合物。或者，iRNA可與脂質(特定言之與陽離子性脂質)複合。合適脂肪酸與酯類包括(但不限於)：花生四烯酸、油酸、廿碳烷酸、月桂酸、辛酸、癸酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸、亞麻酸、二癸酸酯、三癸酸酯、單油酸甘油酯、二月桂酸甘油酯、1-單癸酸甘油酯、1-十二碳烷基氮雜環庚烷-2-酮、醯基肉鹼、醯基膽鹼或C1-20 烷基酯(例如：肉豆蔻酸異丙基酯IPM)、單酸甘油脂、二酸甘油脂或其醫藥上可接受之鹽)。局部表面調配物詳細說明於美國專利案案號6,747,014，其揭示內容已以引用之方式併入本文中。
A. 包含膜分子組合之iRNA調配物
本發明方法與組成物中所使用之iRNA可調配成用於在膜分子組合(例如：脂質體或微胞)中傳遞。本文所採用術語“脂質體”係指由兩親性脂質排成至少一個雙層(例如：一個雙層或複數個雙層)所組成之囊泡。脂質體包括單層與多層囊泡，其具有由親脂性材料形成之膜與水性內部。該水性部份包含iRNA組成物。親脂性材料隔離該水性內部與水性外部(其通常不包括iRNA組成物，但 某些實例中可能包括)。脂質體適用於轉運及傳遞活性成份至作用位點。由於脂質體膜之結構類似生物膜，因此當施加脂質體至組織時，脂質體雙層會與細胞膜之雙層融合。當脂質體併入且繼續進行細胞過程時，包括iRNA之內部水性內容物即傳遞至細胞中，此時iRNA專一性結合標靶RNA，並可介導RNAi。有時候，脂質體亦為特定靶向，例如：主導iRNA專一性靶向特定細胞型態。
包含iRNA劑之脂質體可依各種不同方法製備。其中一項實例中，脂質體之脂質成分溶於清潔劑中，因此與脂質組份形成微胞。例如：脂質成分可為兩親性陽離子性脂質或脂質接合物。清潔劑具有高的臨界微胞濃度，且可能為非離子性。清潔劑實例包括膽酸鹽、CHAPS、辛基葡糖苷、去氧膽酸鹽、與月桂醯基肌胺酸。然後添加iRNA製劑至包括脂質組份之微胞中。脂質上之陽離子性基團會與iRNA劑交互作用，在iRNA劑周圍縮合，形成脂質體。濃縮後，排除清潔劑(例如：採用透析法)，產生iRNA劑之脂質體製劑。
若必要時，可在縮合反應期間添加(例如：採用控制添加法)促進縮合之載劑化合物。例如：載劑化合物可為核酸以外之聚合物(例如：精胺或精脒)。亦可調整pH以便有利於縮合。
引進聚核苷酸/陽離子性脂質複合物作為該傳遞媒劑之結構組份來製造安定之聚核苷酸傳遞媒劑之方法進一步說明於例如：WO 96/37194，其完整揭示內容已以 引用之方式併入本文中。脂質體調配物亦包括以下文獻所說明方法實例之一個或多個態樣：Felgner,P.L.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.,USA 8：7413-7417,1987；美國專利案案號4,897,355；美國專利案案號5,171,678；Bangham等人之M.Mol.Biol. 23：238,1965；Olson等人之Biochim.Biophys.Acta 557：9,1979；Szoka等人之Proc.Natl.Acad.Sci. 75：4194,1978；Mayhew等人之Biochim.Biophys.Acta 775：169,1984；Kim等人之Biochim.Biophys.Acta 728：339,1983；與Fukunaga等人之Endocrinol. 115：757,1984。常用於製備適當大小之脂質凝集物作為傳遞媒劑使用之技術包括音波處理法與冷凍-解凍加擠壓法(參見例如：Mayer等人之Biochim.Biophys.Acta 858：161,1986)。當需要一致之大小(50至200nm)且相當均一之凝集物時，可能使用微流體化法(Mayhew等人之Biochim.Biophys.Acta 775：169,1984)。很容易採用此等方法來包裹RNAi劑製劑進入脂質體中。
脂質體分成兩大類。陽離子性脂質體為帶正電價之脂質體，其會與帶著電負價之核酸分子反應，形成安定複合物。帶正電價之核酸/脂質體複合物會與帶負電價之細胞表面結合，並在核內體中內化。由於核內體中為酸性pH，因此脂質體會瓦解，釋出其內容物進入細胞質中(Wang等人，Biochem.Biophys.Res.Commun. ,1987,147,980-985)。
對pH-敏感或帶負電價之脂質體會包埋核 酸，而不是與其複合。由於核酸與脂質均帶同樣電價，因此會發生排斥而不是形成複合物。儘管如此，有些核酸會包埋在此等脂質體之水性內部。對pH敏感之脂質體已被用於傳遞編碼胸苷激酶基因之核酸至培養物之細胞單層中。已在標靶細胞中檢測到外源性基因之表現(Zhou等人，Journal of Controlled Release ,1992,19,269-274)。
其中一種主要脂質體組成物型態包括除了天然衍生之磷脂醯基膽鹼以外之磷脂質。中性脂質體組成物可由例如：二肉豆蔻醯基磷脂醯基膽鹼(DMPC)或二棕櫚醯基磷脂醯基膽鹼(DPPC)形成。陰離子性脂質體組成物通常係由二肉豆蔻醯基磷脂醯基甘油形成，而陰離子性基因融合性脂質體則主要由二油醯基磷脂醯基乙醇胺(DOPE)形成。另一種脂質體組成物係由磷脂醯基膽鹼(PC)形成，如，例如：大豆PC與蛋PC。另一種係由磷脂質及/或磷脂醯基膽鹼及/或膽固醇之混合物形成。
於活體外與活體內引進脂質體進入細胞之其他方法實例包括美國專利案案號5,283,185；美國專利案案號5,171,678；WO 94/00569；WO 93/24640；WO 91/16024；Felgner,J.Biol.Chem. 269：2550,1994；Nabel,Proc.Natl.Acad.Sci. 90：11307,1993；Nabel,Human Gene Ther. 3：649,1992；Gershon,Biochem. 32：7143,1993；及StraussEMBO J. 11：417,1992。
亦曾檢視非離子性脂質體系統，以判斷其傳遞藥物至皮膚之用途，特定言之包含非離子性表面活性 劑與膽固醇之系統。曾利用包含NovasomeTM I(二月桂酸甘油基酯/膽固醇/聚氧乙烯-10-硬脂基醚)與NovasomeTM II(二硬脂酸甘油基酯/膽固醇/聚氧乙烯-10-硬脂基醚)之非離子性脂質體調配物傳遞環孢素-A進入小鼠皮膚之真皮。結果顯示，此等非離子性脂質體系統可以有效促進環孢素-A沉積在不同皮膚層內(Hu等人S.T.P.Pharma.Sci .,1994,4(6)466)。
脂質體亦包括“立體上安定之”脂質體，本文所採用該名詞係指包含一或多種特異化脂質之脂質體，引進該等特異化脂質之脂質體，較缺乏此等特異化脂質之脂質體可更延長其循環壽命。立體上安定之脂質體實例為彼等在脂質體形成囊泡之脂質部份中，(A)包含一或多種配醣脂，如：單唾液酸神經節苷脂GM1 ，或(B)經一或多種親水性聚合物，如：聚乙二醇(PEG)部份加以衍化。雖然不希望受到任何特定理論之限制，但本領域上認為，至少針對包含神經節苷脂、鞘磷脂或PEG-衍生之脂質之立體上安定之脂質體，延長此等立體上安定之脂質體之循環半衰期可以減少吸收進入細胞之網狀內皮系統(RES)(Allen等人，FEBS Letters ,1987,223,42；Wu等人，Cancer Research ,1993,53,3765)。
本領域上已知各種不同包含一或多種配醣脂之脂質體。Papahadjopoulos等人(Ann.N.Y.Acad.Sci. ,1987,507,64)提出單唾液酸神經節苷脂GM1 、半乳糖腦苷脂硫酸酯與磷脂醯基肌醇改善脂質體之血液半衰期之能力。 此等結果已闡述於Gabizon等人(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. ,1988,85,6949)。均頒與Allen等人之美國專利案案號4,837,028與WO 88/04924揭示之脂質體包含(1)鞘磷脂與(2)神經節苷脂GM1 或半乳糖腦苷脂硫酸酯。美國專利案案號5,543,152(Webb等人)揭示包含鞘磷脂之脂質體。WO 97/13499(Lim等人)揭示包含1,2-sn-二肉豆蔻醯基磷脂醯基膽鹼之脂質體。
一具體例中，使用陽離子性脂質體。陽離子性脂質體之優點在於可與細胞膜融合。非陽離子性脂質體雖然無法如同漿膜一般有效融合，但可於活體內被巨噬細胞吸收，並可用於傳遞iRNA劑至巨噬細胞。
脂質體之其他優點包括：得自天然磷脂質之脂質體具有生物相容性與生物降解性；脂質體可進入許多種水可溶性與脂質可溶性藥物中；脂質體可保護包埋在其內部隔室內之iRNA劑免於被代謝與降解(Rosoff說明於"Pharmaceutical Dosage Forms"，Lieberman、Rieger與Banker(編輯)，1988，第一冊，p.245)。製備脂質體調配物時之重要考量為脂質表面電價、囊泡大小及脂質體之水性體積。
帶正電價之合成性陽離子性脂質：N-[1-(2,3-二油基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化銨(DOTMA)可用於形成小脂質體，其會與核酸自發性交互反應，形成脂質-核酸複合物，其可再與組織培養細胞之細胞膜之帶負電價脂質融合，造成傳遞iRNA劑(有關DOTMA及其使用DNA之方法之說明可參見例如：Felgner,P.L.等人，Proc.Natl. Acad.Sci.,USA 8：7413-7417,1987與美國專利案案號4,897,355)。
DOTMA類似物：1,2-雙(油醯基氧基)-3-(三甲基銨)丙烷(DOTAP)可與磷脂質組合使用，形成與DNA-複合之囊泡。LipofectinTM (Bethesda Research Laboratories,Gaithersburg,Md.)為一種傳遞高陰離子性核酸進入活組織培養細胞之有效劑，其包含帶正電價之DOTMA脂質體，會與帶負電價之聚核苷酸自發性交互作用，形成複合物。當使用帶充份正電價之脂質體時，所得複合物上淨電價亦帶正電。依此方式製得之帶正電價複合物會自發性附接帶負電價細胞表面，與漿膜融合，有效傳遞功能性核酸至例如：組織培養細胞中。另一種可自商品取得之陽離子性脂質：1,2-雙(油醯基氧基)-3,3-(三甲基銨)丙烷(“DOTAP”)(Boehringer Mannheim,Indianapolis,Indiana)不同於DOTMA之處在於該油醯基部份基團係利用酯而非醚鏈結基鏈結。
其他提出之陽離子性脂質化合物包括彼等已接合各種不同部份基團者，包括例如：羧基精胺，其已接合兩種脂質中之一，且包括化合物，如：5-羧基精胺基甘胺酸二辛基油醯基醯胺(“DOGS”)(TransfectamTM ,Promega,Madison,Wisconsin)與二棕櫚醯基磷脂醯基乙醇胺5-羧基精胺基-醯胺(“DPPES”)(參見例如：美國專利案案號5,171,678)。
另一種陽離子性脂質接合物包括經過膽固醇衍化之脂質(“DC-Chol”)，其已與DOPE組合調配至脂 質體中(參見Gao,X.與Huang,L.,Biochim.Biophys.Res.Commun. 179：280,1991)。有報告提出由聚離胺酸接合DOPE製成之脂聚離胺酸可以在血清之存在下有效轉染(Zhou,X.等人，Biochim.Biophys.Acta 1065：8,1991)。某些細胞株中，此等包含接合陽離子性脂質之脂質體據稱比包含DOTMA之組成物具有更低之毒性，並可提供更有效之轉染。其他可自商品取得之陽離子性脂質產品包括DMRIE與DMRIE-HP(Vical,La Jolla,California)與脂染胺(Lipofectamine)(DOSPA)(Life Technology,Inc.,Gaithersburg,Maryland)。其他適合傳遞寡核苷酸之陽離子性脂質說明於WO 98/39359與WO 96/37194。
脂質體調配物特別適合局部投藥，脂質體比其他調配物具有數項優點。此等優點包括降低與全身性高度吸收所投與藥物有關之副作用、提高所投與藥物在所需標靶處之累積量、及投與iRNA劑至皮膚中之能力。有些實施例中，採用脂質體傳遞iRNA劑至表皮細胞，且亦加強iRNA劑滲透進入真皮組織，例如：進入皮膚中。例如：脂質體可局部表面施用。藥物調配成脂質體經局部表面傳遞至皮膚之作用已有文獻說明(參見例如：Weiner等人Journal of Drug Targeting, 1992,vol.2,405-410及du Plessis等人Antivirus Research ,18,1992,259-265；Mannino,R.J.及Fould-Fogerite,S.,Biotechniques 6：682-690,1988；Itani,T.等人Gene 56：267-276.1987；Nicolau,C.等人Meth.Enz. 149：157-176,1987；Straubinger,R.M.及Papahadjopoulos,D.Meth.Enz. 101：512-527,1983；Wang,C.Y.及Huang,L.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：7851-7855,1987)。
亦曾檢測非離子性脂質體系統來判斷其於傳遞藥物至皮膚之用途，特定言之包含非離子性表面活性劑與膽固醇之系統。採用包含Novasome I(二月桂酸甘油基酯/膽固醇/聚氧乙烯-10-硬脂基醚)與Novasome II(二硬脂酸甘油基酯/膽固醇/聚氧乙烯-10-硬脂基醚)之非離子性脂質體調配物來傳遞藥物至小鼠皮膚之真皮。此等使用iRNA劑之調配物適用於治療皮膚病症。
包括iRNA之脂質體可具有高度變形性。此等變形性讓脂質體得以滲透比脂質體平均半徑更小之小孔。例如：傳遞體(transfersomes)即為一種可變形之脂質體。可以添加表面邊界活化劑(通常為表面活性劑)至標準脂質體組成物中來製備傳遞體。包括iRNA劑之傳遞體可例如：經皮下注射傳遞，以傳遞iRNA劑至皮膚中之角質細胞。為了穿過完整之哺乳動物皮膚，脂質囊泡必需在合適之跨皮梯度下穿過一系列細孔，每個孔之直徑均小於50nm。此外，基於脂質之性質，此等傳遞體可以自行最優化(配合例如：皮膚之小孔形狀)、自行修補，並經常不需要切斷即可到達其標靶，並經常可自行裝載。
其他適合本發明之調配物說明於例如：PCT公告案案號WO 2008/042973，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。
傳遞體為另一種脂質體型態，且為可高度 變形之脂質凝集體，其係傳遞藥物之媒劑之值得注意之候選物。傳遞體可稱為脂質液滴，其可高度變形，因此容易穿透小於液滴之小孔。傳遞體可適應所使用之環境，例如：其可自行最優化(配合皮膚之孔形狀)、自行修補，並經常不需要切斷即可到達其標靶，並經常可自行裝載。可以添加表面邊界活化劑(通常為表面活性劑)至標準脂質體組成物中來製備傳遞體。傳遞體曾用於傳遞血清白蛋白至皮膚。傳遞體所介導傳遞血清白蛋白已顯示與經皮下注射包含血清白蛋白之溶液一樣有效。
表面活性劑可廣泛用於如：乳液(包括微乳液)與脂質體之調配物。許多不同型態之表面活性劑(包括天然與合成性)之性質最常用之分類與分級方式為親水性/疏水性平衡值(HLB)。親水性基團(亦稱為"頭基")為調配物中所採用不同表面活性劑提供最適用之分類方式(Rieger述於“Pharmaceutical Dosage Forms”,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,1988,p.285)。
若表面活性劑分子未離子化，則歸類於非離子性表面活性劑。非離子性表面活性劑廣泛用於醫藥與化妝品，且適用於大範圍之pH值。通常其HLB值範圍為2至約18，依其結構而定。非離子性表面活性劑包括非離子性酯類，如：乙二醇酯類、丙二醇酯類、甘油基酯類、聚甘油基酯類、山梨糖醇酐酯類、蔗糖酯類與乙氧基化酯類。此類表面活性劑亦包括非離子性烷醇醯胺類與醚類，如：脂肪醇乙氧化物、丙氧化醇、與乙氧基化/丙氧基化嵌 段聚合物。聚氧乙烯表面活性劑為最常用之非離子性表面活性劑類之成員。
若溶解或分散於水中之表面活性劑分子攜帶負電價時，則該表面活性劑歸類為陰離子性。陰離子性表面活性劑包括羧酸鹽類，如：皂類、乳醯酸醯基酯類、胺基酸之醯基醯胺類、硫酸之酯類(如：硫酸烷基酯與硫酸乙氧基化烷基酯類)、磺酸酯類(如：苯磺酸烷基酯、羥乙基磺酸醯基酯、牛磺酸醯基酯與磺基琥珀酸酯類)、與磷酸酯類。陰離子性表面活性劑類之最重要成員為硫酸烷基酯類與皂類。
若溶解或分散於水中之表面活性劑分子攜帶正電價時，則該表面活性劑歸類為陽離子性。陽離子性表面活性劑包括四級銨鹽類與乙氧基化胺類。該四級銨鹽類為此類物質之最常用成員。
若表面活性劑分子有能力攜帶正電價或負電價時，該表面活性劑則歸類於兩親性。兩親性表面活性劑包括丙烯酸衍生物、經取代之烷基醯胺類、N-烷基甜菜鹼與磷脂。
表面活性劑於藥品、調配物與乳液中之用法已有說明(Rieger述於“Pharmaceutical Dosage Forms”,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,1988,p.285)。
本發明方法所使用之iRNA亦可呈微胞調配物提供。本文中“微胞”之定義為一種特別之分子集合，其中兩親性分子呈球狀結構排列，因此分子之所有疏水性 部份均向內，讓親水性部份與周圍水相接觸。若環境為疏水性時，其排列則相反。
適合穿過皮膚膜傳遞之混合微胞調配物之可能製法為混合siRNA組成物之水溶液、C8 至C22 烷基硫酸之鹼金屬鹽與微胞形成性化合物。微胞形成性化合物實例包括卵磷脂、玻尿酸、玻尿酸之醫藥上可接受之鹽、乙醇酸、乳酸、洋甘菊萃取物、小黃瓜萃取物、油酸、亞油酸、亞麻酸、單油酸甘油酯、單油酸酯、單月桂酸酯、琉璃苣油、月見草油、薄荷醇、三羥基側氧基膽烷基甘胺酸與其醫藥上可接受之鹽、甘油、聚甘油、離胺酸、聚離胺酸、三油酸甘油酯、聚氧乙烯醚類與其類似物、聚多卡醇(polidocanol)烷基醚類與其類似物、鵝去氧膽酸鹽、去氧膽酸鹽、與其混合物。微胞形成性化合物可能在烷基硫酸鹼金屬鹽同時或之後添加。實質上任何混合成份均可形成混合微胞，但需要劇烈混合，以提供較小微胞。
其中一種方法中，製備包含siRNA組成物與至少一種烷基硫酸鹼金屬鹽之第一微胞組成物。該第一微胞組成物再與至少三種微胞形成性化合物形成混合微胞組成物。另一種方法中，微胞組成物製法為混合siRNA組成物、烷基硫酸鹼金屬鹽與至少一種微胞形成性化合物，然後在劇烈混合下添加其餘微胞形成性化合物。
可能添加苯酚及/或間甲酚至混合微胞組成物中，以安定調配物，並保護防止細菌生長。或者，苯酚及/或間甲酚可能與微胞形成性成份一起添加。亦可在形成 混合微胞組成物後添加等滲劑，如：甘油。
呈噴液方式傳遞微胞調配物時，調配物可裝進氣霧劑配送器中，在該配送器中填裝推進劑。配送器中之推進劑在加壓下呈液態。調整成份比例，以使水相與推進劑相合而為一，亦即呈單一相。若出現兩相時，必需先搖動配送器，再通過例如：定量閥門配送一部份內容物。將會從定量閥門呈細霧推送出所配送劑量之醫藥劑。
推進劑可包括含氫之氯氟碳化物、含氫之氟碳化物、二甲基醚與乙醚。某些具體例中，可使用HFA 134a(1,1,1,2四氟乙烷)。
必要成份之明確濃度可由相當直接之實驗決定。從口腔吸收時，經常需要使劑量比透過注射或經過胃腸道投藥之劑量提高例如：至少兩倍或三倍。
B.脂質粒子
本發明iRNA，例如：dsRNA可以完全包埋在脂質調配物，例如：LNP或其他核酸-脂質粒子。
本文所採用術語“LNP”係指安定之核酸-脂質粒子。LNP通常包含陽離子性脂質、非陽離子性脂質、與防止粒子(例如：PEG-脂質接合物)凝集之脂質。LNP極適用於全身性投藥用途，因為其在經靜脈注射(i.v.)後，具有延長之循環壽命，並可在遠方位點(例如：離開投藥位點之身體部位)累積。LNP包括“pSPLP”，其包括包埋之縮合劑-核酸複合物，其說明於PCT公告案案號WO 00/03683。本發明粒子典型地具有平均直徑約50nm至約 150nm，更典型為約60nm至約130nm，更典型為約70nm至約110nm，最典型為約70nm至約90nm，且實質上無毒。此外，當核酸存在於本發明之核酸-脂質粒子中時，可以在水溶液中抵抗核酸酶之降解。核酸-脂質粒子與其製法揭示於例如：美國專利案案號5,976,567；5,981,501；6,534,484；6,586,410；6,815,432；美國公告案案號2010/0324120及PCT公告案案號WO 96/40964。
一具體例中，脂質對藥物之比值(質量/質量比值)(例如：脂質對dsRNA比值)將在約1：1至約50：1、約1：1至約25：1、約3：1至約15：1、約4：1至約10：1、約5：1至約9：1、或約6：1至約9：1之範圍。上述範圍之間之範圍亦包括在本發明之一部份。
該陽離子性脂質可為例如：N,N-二油基-N,N-二甲基氯化銨(DODAC)、N,N-二硬脂基-N,N-二甲基溴化銨(DDAB)、N-(1-(2,3-二油醯基氧基)丙基)-N,N,N-三甲基氯化銨(DOTAP)、N-(1-(2,3-二油基氧基)丙基)-N,N,N-三甲基氯化銨(DOTMA)、N,N-二甲基-2,3-二油基氧基)丙基胺(DODMA)、1,2-二亞油基氧-N,N-二甲基胺基丙烷(DLinDMA)、1,2-二亞麻基氧-N,N-二甲基胺基丙烷(DLenDMA)、1,2-二亞油基胺甲醯基氧-3-二甲基胺基丙烷(DLin-C-DAP)、1,2-二亞油基氧-3-(二甲基胺基)乙醯氧基丙烷(DLin-DAC)、1,2-二亞油基氧-3-N-嗎啉基丙烷(DLin-MA)、1,2-二亞油醯基-3-二甲基胺基丙烷(DLinDAP)、1,2-二亞油基硫-3-二甲基胺基丙烷 (DLin-S-DMA)、1-亞油醯基-2-亞油基氧-3-二甲基胺基丙烷(DLin-2-DMAP)、1,2-二亞油基氧-3-三甲基胺基丙烷氯化物鹽(DLin-TMA.Cl)、1,2-二亞油醯基-3-三甲基胺基丙烷氯化物鹽(DLin-TAP.Cl)、1,2-二亞油基氧-3-(N-甲基哌
Figure 104136995-A0202-12-0201-278
基)丙烷(DLin-MPZ)、或3-(N,N-二亞油基胺基)-1,2-丙二醇(DLinAP)、3-(N,N-二油基胺基)-1,2-丙二醇(DOAP)、1,2-二亞油基側氧基-3-(2-N,N-二甲基胺基)乙氧基丙烷(DLin-EG-DMA)、1,2-二亞麻基氧-N,N-二甲基胺基丙烷(DLinDMA)、2,2-二亞油基-4-二甲基胺基甲基-[1,3]-二氧雜環戊烷(DLin-K-DMA)或其類似物、(3aR,5s,6aS)-N,N-二甲基-2,2-二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)四氫-3aH-環戊并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-胺(ALN100)、4-(二甲基胺基)丁酸(6Z,9Z,28Z,31Z)-三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-基酯(MC3)、1,1'-(2-(4-(2-((2-(雙(2-羥基十二碳烷基)胺基)乙基)(2-羥基十二碳烷基)胺基)乙基)哌
Figure 104136995-A0202-12-0201-279
-1-基)乙基氮烷二基(azanediyl))十二碳烷-2-醇(Tech G1)、或其混合物。陽離子性脂質佔粒子中總脂質含量之約20莫耳%至約50莫耳%或約40莫耳%。
另一具體例中，可使用化合物2,2-二亞油基-4-二甲基胺基乙基-[1,3]-二氧雜環戊烷製備脂質-siRNA奈米粒子。2,2-二亞油基-4-二甲基胺基乙基-[1,3]-二氧雜環戊烷之合成法說明於美國臨時專利申請案案號61/107,998(申請日：2008年10月23日)，其揭示內容已以引用之方式併入本文中。
一具體例中，脂質-siRNA粒子包括40% 2,2-二亞油基-4-二甲基胺基乙基-[1,3]-二氧雜環戊烷：10% DSPC：40%膽固醇：10% PEG-C-DOMG(莫耳百分比)，粒度為63.0±20nm，及0.027 siRNA/脂質比值。
該離子化/非陽離子性脂質可為陰離子性脂質或中性脂質，包括(但不限於)：二硬脂醯基磷脂醯基膽鹼(DSPC)、二油醯基磷脂醯基膽鹼(DOPC)、二棕櫚醯基磷脂醯基膽鹼(DPPC)、二油醯基磷脂醯基甘油(DOPG)、二棕櫚醯基磷脂醯基甘油(DPPG)、二油醯基-磷脂醯基乙醇胺(DOPE)、棕櫚醯基油醯基磷脂醯基膽鹼(POPC)、棕櫚醯基油醯基磷脂醯基乙醇胺(POPE)、二油醯基-磷脂醯基乙醇胺4-(N-馬來醯亞胺基甲基)-環己烷-1-羧酸鹽(DOPE-mal)、二棕櫚醯基磷脂醯基乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻醯基磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂醯基-磷脂醯基-乙醇胺(DSPE)、16-O-單甲基PE、16-O-二甲基PE、18-1-反式PE、1-硬脂醯基-2-油醯基-磷脂醯基乙醇胺(SOPE)、膽固醇、或其混合物。若包含膽固醇時，該非陽離子性脂質可佔粒子中總脂質含量之約5莫耳%至約90莫耳%、約10莫耳%、或約58莫耳%。
該抑制粒子凝集之接合脂質可為例如：聚乙二醇(PEG)-脂質，包括(但不限於)：PEG-二醯基甘油(DAG)、PEG-二烷基氧丙基(DAA)、PEG-磷脂質、PEG-神經醯胺(Cer)，或其混合物。PEG-DAA接合物可為例如：PEG-二月桂基氧丙基(Ci2 )、PEG-二肉荳蔻基氧丙基(Ci4 )、PEG-二棕櫚基氧丙基(Ci6 )、或PEG-二硬脂基氧丙基(C]8 )。該防 止粒子凝集之接合脂質可佔粒子中總脂質含量之0莫耳%至約20莫耳%或約2莫耳%。
有些具體例中，該核酸-脂質粒子可進一步包括膽固醇，例如：佔粒子中總脂質含量之約10莫耳%至約60莫耳%或約48莫耳%。
一具體例中，可使用類脂質ND98‧4HCl(MW 1487)(參見美國專利申請案案號12/056,230(申請日：3/26/2008，其揭示內容已以引用之方式併入本文中)、膽固醇(Sigma-Aldrich)、與PEG-神經醯胺C16(Avanti Polar Lipids)製備脂質-dsRNA奈米粒子(亦即LNP01粒子)。分別於乙醇中製備各儲備液如下：ND98，133mg/ml；膽固醇，25mg/ml；PEG-神經醯胺C16，100mg/ml。然後由ND98、膽固醇、與PEG-神經醯胺C16儲備液依例如：42：48：10莫耳比組合。組合之脂質溶液再與dsRNA水溶液(例如：乙酸鈉溶液，pH 5)混合，使最終乙醇濃度為約35-45%，最終乙酸鈉濃度為約100-300mM。通常會在混合時自發形成脂質-dsRNA奈米粒子。依所需粒度分佈而定，所得奈米粒子混合物可使用例如：熱桶擠押機，如：Lipex Extruder(Northern Lipids,Inc)，經過聚碳酸膜(例如：截斷值100nm)擠押。有時候可以省略擠押步驟。可採用例如：透析或切向流過濾法排除乙醇，並同時進行緩衝液交換。緩衝液可與例如：約pH 7，例如：約pH 6.9、約pH 7.0、約pH 7.1、約pH 7.2、約pH 7.3、或約pH 7.4之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)交換。
Figure 104136995-A0202-12-0204-1498
LNP01調配物說明於，例如：國際申請案公告案案號WO 2008/042973，其揭示內容已以引用之方式併入本文中。
其他脂質-dsRNA調配物實例說明於表1。
Figure 104136995-A0202-12-0204-1499
Figure 104136995-A0202-12-0205-1500
Figure 104136995-A0202-12-0206-1501
DSPC：二硬脂醯基磷脂醯基膽鹼
DPPC：二棕櫚醯基磷脂醯基膽鹼
PEG-DMG：PEG-二肉豆蔻醯基甘油(C14-PEG或PEG-C14)(PEG平均分子量為2000)
PEG-DSG：PEG-二硬脂基甘油(C18-PEG或PEG-C18)(PEG平均分子量為2000)
PEG-cDMA：PEG-胺甲醯基-1,2-二肉荳蔻基氧丙基胺(PEG 平均分子量為2000)包含SNALP(1,2-二亞麻基氧基-N,N-二甲基胺基丙烷(DLinDMA))之調配物說明於國際公告案案號WO2009/127060(申請日：2009年4月15日)，其揭示內容已以引用之方式併入本文中。
包含XTC之調配物說明於例如：PCT公告案案號WO 2010/088537，其揭示內容已以引用之方式併入本文中。
包含MC3之調配物說明於例如：美國公告案案號2010/0324120(申請日：2010年6月10日)，其揭示內容已以引用之方式併入本文中。
包含ALNY-100之調配物說明於例如：PCT公告案案號WO 2010/054406，其揭示內容已以引用之方式併入本文中。
包含C12-200之調配物說明於PCT公告案案號WO 2010/129709，其揭示內容已以引用之方式併入本文中。
供經口投藥組成物與調配物包括粉劑或粒劑、微粒、奈米粒、含於水性或非水性介質中之懸浮液或溶液、膠囊、明膠囊、藥包、錠劑或迷你錠劑。可能需要增稠劑、調味劑、稀釋劑、乳化劑、分散助劑或結合劑。有些具體例中，經口調配物為彼等其中由如本發明所說明特徵之dsRNA與一或多種滲透加強劑表面活性劑及螯合劑組合投藥。合適表面活性劑包括脂肪酸及/或酯類或其鹽類、膽汁酸及/或其鹽類。合適膽汁酸/鹽類包括鵝去氧膽 酸(CDCA)與熊去氧鵝去氧膽酸(UDCA)、膽酸、去氫膽酸、去氧膽酸、葡膽酸、甘膽酸、去氧甘膽酸、牛磺膽酸、牛磺去氧膽酸、牛磺-24,25-二氫-褐黴酸鈉與醣二氫褐黴酸鈉。合適脂肪酸包括花生四烯酸、十一碳烷酸、油酸、月桂酸、辛酸、癸酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸、亞麻酸、二癸酸酯、三癸酸酯、單油酸甘油酯、二月桂酸甘油酯、1-單癸酸甘油酯、1-十二碳烷基氮雜環庚烷-2-酮、醯基肉鹼、醯基膽鹼、或單酸甘油脂、二酸甘油脂或其醫藥上可接受之鹽(例如：鈉鹽)。有些具體例中，可使用滲透加強劑之組合，例如：脂肪酸/鹽類與膽汁酸/鹽類之組合。其中一種組合實例為月桂酸鈉鹽、癸酸與UDCA之組合。其他滲透加強劑包括聚氧乙烯-9-月桂基醚、聚氧乙烯-20-鯨蠟基醚。如本發明所說明特徵之dsRNA可呈包括噴霧乾燥之粒子或複合形成微粒或奈米粒子之粒型經口傳遞。DsRNA複合劑包括聚-胺基酸；聚亞胺；聚丙烯酸酯；聚烷基丙烯酸酯、聚氧雜環丁烷(oxethane)、聚烷基氰基丙烯酸酯；陽離子化明膠、白蛋白、澱粉、丙烯酸酯、聚乙二醇(PEG)與澱粉；聚烷基氰基丙烯酸酯；DEAE-衍生之聚亞胺、短梗黴多醣(pollulans)、纖維素與澱粉。合適複合劑包括幾丁聚醣、N-三甲基幾丁聚醣、聚-L-離胺酸、聚組胺酸、聚鳥胺酸、聚精胺、魚精蛋白，聚乙烯吡啶、聚硫二乙基胺基甲基乙烯P(TDAE)、聚胺基苯乙烯(例如：對胺基)、聚(甲基氰基丙烯酸酯)、聚(乙基氰基丙烯酸酯)、聚(丁基氰基丙烯酸酯)、聚(異丁基氰基丙烯酸酯)、聚(異己基氰 基丙烯酸酯)、DEAE-甲基丙烯酸酯、DEAE-己基丙烯酸酯、DEAE-丙烯醯胺、DEAE-白蛋白與DEAE-葡聚糖、聚甲基丙烯酸酯、聚己基丙烯酸酯、聚(D,L-乳酸)、聚(DL-乳酸-共-乙醇酸(PLGA)、藻酸鹽、與聚乙二醇(PEG)。dsRNA之口服調配物與其製法詳細說明於美國專利案6,887,906、美國公告案案號20030027780與美國專利案案號6,747,014，其揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。
供非經腸胃式、侵入性腦內(進入腦中)、脊髓內、腦室內或肝內投藥之組成物與調配物可包括無菌水溶液，其中亦可包含緩衝劑、稀釋劑與其他合適添加劑，如，(但不限於)：滲透加強劑、載劑化合物與其他醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
本發明醫藥組成物包括(但不限於)：溶液、乳液與包含脂質體之調配物。此等組成物可由各種不同組份產生，包括(但不限於)：預成型液體、自行乳化之固體與自行乳化之半固體。當治療肝病症(如：肝癌瘤)時，特別佳為靶向肝臟之調配物。
適合呈單位劑型之本發明醫藥調配物可依據醫藥業習知技術製備。此等技術包括組合活性成份與醫藥載劑(群)或賦形劑(群)之步驟。通常，調配物之製法為均勻且密切組合活性成份與液態載劑或細碎固態載劑或二者，然後若必要時，使產物成型。
本發明組成物可調配成許多可能劑型中之任一種，如(但不限於)：錠劑、膠囊、明膠囊、液態糖漿、 軟明膠囊、栓劑與灌腸劑。本發明組成物亦可於水性、非水性或混合介質中調配成懸浮液。水性懸浮液可進一步包含可提高該懸浮液黏度之物質，包括例如：羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇及/或葡聚糖。該懸浮液亦可包含安定劑。
C.其他調配物
i.乳液
本發明組成物可製造並調配成乳液。乳液為其中一種液體呈直徑通常超過0.1μ m之液滴型態勻散在另一種液體中之典型不均相系統(參見例如：Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,Allen,LV.、Popovich NG.與Ansel HC.，2004，Lippincott Williams & Wilkins(第8版)，New York,NY；Idson述於“Pharmaceutical Dosage Forms”，Lieberman、Rieger與Banker(編輯)，1988，Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.，第一冊，p.199；Rosoff述於“Pharmaceutical Dosage Forms”，Lieberman、Rieger與Banker(編輯)，1988，Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.，第一冊，p.245；Block述於“Pharmaceutical Dosage Forms”，Lieberman、Rieger與Banker(編輯)，1988，Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.，第2冊，p.335；Higuchi等人述於“Remington’s Pharmaceutical Sciences”，Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,1985,p.301)。乳液通常為雙相系統，其包含兩個彼此密切混合與分散之不可混溶之液相。通常，乳液可為油包水(w/o)型或水包油(o/w)型。當水相分成小液滴均勻分佈且分散在 大體積之油相中時，所得組成物稱為油包水性(w/o)乳液。或者，當油相分成小液滴均勻分佈且分散在大體積之水相中時，所得組成物稱為水包油性(o/w)乳液。乳液中除了分散相外，可再包含其他組份，且活性藥物可呈溶液存在於水相、油相或本身另呈一相。需要時，乳液中亦可包含醫藥賦形劑，如：乳化劑、安定劑、染劑、與抗氧化劑。醫藥乳液亦可為由超過兩相組成之多相乳液，如，例如：以油包水包油性(o/w/o)與水包油包水性(w/o/w)乳液為例。此等複合調配物經常提供單純二元乳液沒有之優點。其中o/w乳液之個別油滴包埋小水滴之多相乳液即構成w/o/w乳液。同樣地，由油滴包埋在於油連續相中安定化之水球中，提供o/w/o乳液。
乳液之特徵在於很低或沒有熱動力學安定性。通常，乳液之分散相或不連續相均勻分佈在外相或連續相內，並利用乳化劑或調配物之黏度維持此型式。乳液之任一相可以為半固體或固體，如：乳液型油膏基質與乳霜。其他安定乳液方式可以使用乳化劑，引進乳液之任一相中。乳化劑可廣義分為四類：合成性表面活性劑、天然乳化劑、吸收基質、與均勻分散之固體(參見例如：Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,Allen,LV.、Popovich NG.與Ansel HC.，2004，Lippincott Williams & Wilkins(第8版)，New York,NY；Idson述於“Pharmaceutical Dosage Forms”，Lieberman、Rieger與Banker(編輯)，1988，Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.， 第一冊，p.199)。
合成性表面活性劑亦已知為表面活性劑，已廣泛用於乳液之調配物，且已於文獻中說明(參見例如：Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,Allen,LV.、Popovich NG.與Ansel HC.，2004，Lippincott Williams & Wilkins(第8版)，New York,NY；Rieger述於“Pharmaceutical Dosage Forms”，Lieberman、Rieger與Banker(編輯)，1988，Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.，第一冊，p.285；Idson述於“Pharmaceutical Dosage Forms”，Lieberman、Rieger與Banker(編輯)，Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,1988，第一冊，p.199)。表面活性劑通常為兩親性，其包含親水性與疏水性部份。表面活性劑之親水性對疏水性性質之比值稱為親水物/親脂物平衡值(HLB)，係在製備調配物時用於分類及選擇表面活性劑之有利工具。表面活性劑可依據親水性基團性質分成不同類型：非離子性、陰離子性、陽離子性、與兩親性(參見例如：Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,Allen,LV.、Popovich NG.與Ansel HC.，2004，Lippincott Williams & Wilkins(第8版)，New York,NY；Rieger述於“Pharmaceutical Dosage Forms”，Lieberman、Rieger與Banker(編輯)，1988，Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.，第一冊，p.285)。
用於乳液調配物之天然乳化劑包括羊毛脂、蜂蠟、磷脂、卵磷脂與阿拉伯膠。吸收性基質具有親 水性性質，因此可吸收水形成w/o乳液，但仍保留其半固態堅實度，如：無水羊毛脂與親水性石蠟。亦可使用細碎固體作為良好乳化劑，尤其與表面活性劑組合及用於黏性製劑中時。此等包括極性無機固體，如：重金屬氫氧化物、非膨脹性黏土，如：皂土、矽鎂土、鋰蒙脫石、高嶺土、蒙托土、膠體矽酸鋁與膠體矽酸鎂鋁、色素、與非極性固體，如：碳或三硬脂酸甘油酯。
乳液調配物中亦可包括許多種不同之非乳化材料，其可賦與乳液性質。此等物質包括脂肪、油類、蠟類、脂肪酸、脂肪醇類、脂肪酯類、保濕劑、親水性膠體、防腐劑與抗氧化劑(Block述於“Pharmaceutical Dosage Forms”，Lieberman、Rieger與Banker(編輯)，1988，Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.，第一冊，p.335；Idson述於“Pharmaceutical Dosage Forms”，Lieberman、Rieger與Banker(編輯)，1988，Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.，第一冊，p.199)。
親水性膠體或水膠體包括天然膠質與合成性聚合物，如：多醣類(例如：阿拉伯膠、洋菜、藻酸、鹿角菜膠、關華豆膠、卡拉膠與黃蓍膠)、纖維素衍生物(例如：羧甲基纖維素與羧丙基纖維素)、與合成性聚合物(例如：卡波姆(carbomers)、纖維素醚與羧乙烯基聚合物)。此等物質於水中分散或膨脹，形成膠體溶液，藉由在分散相之液滴周圍形成強力介面膜並提高外相之黏度，而安定該乳液。
由於乳液經常包含許多如：碳水化合物、蛋白質、固醇類、與磷脂之成份，很容易支持微生物生長，因此此等調配物經常添加防腐劑。常包括於乳液調配物中之防腐劑包括對羥基苯甲酸甲基酯、對羥基苯甲酸丙基酯、四級銨鹽類、氯化芐二甲烴銨、對羥基苯甲酸之酯類、與硼酸。亦經常添加抗氧化劑至乳液調配物中，以防止破壞調配物。所使用之抗氧化劑可為游離基清除劑，如：生育酚、烷基沒食子酸、丁基化羥基苯甲醚、丁基化羥基甲苯，或還原劑，如：抗壞血酸與偏亞硫酸氫鈉，與抗氧化促效劑，如：檸檬酸、酒石酸與卵磷脂。
乳液調配物經由皮膚、口、與非經腸胃式途徑之用途與其製造方法已有文獻說明(參見例如：Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,Allen,LV.、Popovich NG.與Ansel HC.，2004，Lippincott Williams & Wilkins(第8版)，New York,NY；Idson述於“Pharmaceutical Dosage Forms”，Lieberman、Rieger與Banker(編輯)，1988，Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.，第一冊，p.199)。用於經口傳遞之乳液調配物因為容易調配，且從吸收效力與生體可用率觀點，已極廣泛使用(參見例如：Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,Allen,LV.、Popovich NG.與Ansel HC.，2004，Lippincott Williams & Wilkins(第8版)，New York,NY；Rosoff述於“Pharmaceutical Dosage Forms”，Lieberman、Rieger與Banker(編輯)，1988，Marcel Dekker,Inc., New York,N.Y.，第一冊，p.245；Idson述於“Pharmaceutical Dosage Forms”，Lieberman、Rieger與Banker(編輯)，1988，Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.，第一冊，p.199)。基於礦物油之緩瀉劑、油溶性維生素與高脂肪營養製劑為常用於呈o/w乳液經口投藥之材料。
ii.微乳液
本發明一具體例中，iRNA與核酸之組成物係調配成微乳液。微乳液之定義為由水、油與兩親物形成單一之光學上各向同性且熱動力學上安定之液體溶液之系統(參見例如：Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,Allen,LV.、Popovich NG.與Ansel HC.，2004，Lippincott Williams & Wilkins(第8版)，New York,NY；Rosoff述於“Pharmaceutical Dosage Forms”，Lieberman、Rieger與Banker(編輯)，1988，Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.，第一冊，p.245)。典型微乳液為先讓油分散在水性表面活性劑溶液中，然後添加足量之第四組份所形成之系統，通常添加中鏈長醇類，以形成透明系統。因此，微乳液亦稱為兩種不混溶液體之動力學上安定之各向同性透明分散液，其係利用表面活性分子之界面膜安定化(Leung與Shah述於：“Controlled Release of Drugs：Polymers and Aggregate System”，Rosoff,M，編輯，1989,VCH Publishers,New York,p.185-215)。微乳液通常係由3至5種組份組合製成，其包括油、水、表面活性劑、輔表面活性劑與電解質。該微乳液為油包水(w/o)或水包油(o/w)型端 賴所使用油及表面活性劑之性質及表面活性劑分子之極性頭端與烴尾端之結構與幾何堆疊而定(Schott述於“Remington’s Pharmaceutical Sciences”，Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,1985,p.271)。
利用相態圖之現象學方法已有深入研究，且已產生大量知識，讓熟悉此相關技術者了解如何調配微乳液(參見例如：Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,Allen,LV.、Popovich NG.與Ansel HC.，2004，Lippincott Williams & Wilkins(第8版)，New York,NY；Rosoff述於“Pharmaceutical Dosage Forms”，Lieberman、Rieger與Banker(編輯)，1988，Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.，第一冊，p.245；Block述於“Pharmaceutical Dosage Forms”，Lieberman、Rieger與Banker(編輯)，1988，Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.，第一冊，p.335)。相較於一般乳液，微乳液之優點在於可在自發性形成之熱動力學上安定之液滴之調配物中溶解水不溶性藥物。
製備微乳液時所使用之表面活性劑包括(但不限於)：離子性表面活性劑、非離子性表面活性劑、Brij 96、聚氧乙烯油基醚類、聚甘油脂肪酸酯類、單月桂酸四甘油酯(ML310)、單油酸四甘油酯(MO310)、單油酸六甘油酯(PO310)、五油酸六甘油酯(PO500)、單癸酸十甘油酯(MCA750)、單油酸十甘油酯(MO750)、倍半油酸十甘油酯(SO750)、十油酸十甘油酯(DAO750)，其可單獨使用或與輔表面活性劑組合使用。輔表面活性劑通常為短鏈醇，如： 乙醇、1-丙醇、與1-丁醇，其藉由滲透表面膜，在表面活性劑分子之間產生空隙，因此造成無序膜，而提高界面流動性。然而不需要使用輔表面活性劑亦可製備微乳液，且本領域上已知不含醇之可自行乳化之微乳液系統。典型之水相為(但不限於)：水、藥物水溶液、甘油、PEG300、PEG400、聚甘油、丙二醇、與乙二醇之衍生物。該油相可包括(但不限於)：下列材料，如：Captex 300、Captex 355、Capmul MCM、脂肪酸酯類、中鏈(C8-C12)單酸-、二酸-、與三酸甘油酯、聚氧乙基化甘油基脂肪酸酯類、脂肪醇類、聚二醇化甘油酯類、飽和聚二醇化C8-C10甘油酯類、植物油與矽酮油類。
從藥物溶解度與加強藥物吸收性之觀點而言，微乳液特別值得注意。已提出基於脂質之微乳液(包括o/w與w/o)來加強藥物(包括肽)之口服生體可用率(參見例如：美國專利案案號6,191,105；7,063,860；7,070,802；7,157,099；Constantinides等人，Pharmaceutical Research ,1994,11,1385-1390；Ritschel之Meth.Find.Exp.Clin.Pharmacol. ,1993,13,205)。微乳液提供之優點為改善藥物溶解性、保護藥物免於酵素水解、可能基於表面活性劑誘發改變膜流動性與通透性而加強藥物吸收性、容易製備、比固態劑型容易經口投藥、改善臨床效力、及降低毒性(參見例如：美國專利案案號6,191,105；7,063,860；7,070,802；7,157,099；Constantinides等人，Pharmaceutical Researchh ,1994,11,1385；Ho等人，J.Pharm.Sci., 1996,85,138-143)。 當於環境溫度下將微乳液組份組合在一起時，經常可自發性形成微乳液。當調配對熱敏感之藥物、肽、或iRNA時，微乳液特別有利。微乳液亦可在化妝品與醫藥用途上有效地穿皮式傳遞活性組份。預期本發明微乳液組成物與調配物將可促進胃腸道提高iRNA與核酸之全身吸收性，並改善局部細胞吸收iRNA與核酸。
本發明微乳液亦可包含其他組份與添加劑，如：山梨糖醇酐單硬脂酸酯(Grill 3)、聚乙二醇-8-辛酸/癸酸酯(Labrasol)與滲透加強劑，以改善調配物性質，及加強本發明iRNA與核酸之吸收性。本發明微乳液所採用之滲透加強劑可分為1至5大類-表面活性劑、脂肪酸，膽汁鹽類、螯合劑與非螯合性非表面活性劑(Lee等人，“Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems” ,1991,p.92)。
iii.微粒子
本發明iRNA劑可以引至粒子，例如：微粒子中。微粒子可由噴霧乾燥法產生，但亦可採用其他方法，包括冷凍乾燥、蒸發、流化床乾燥、真空乾燥、或此等技術之組合。
iv.滲透加強劑
一具體例中，本發明使用各種不同滲透加強劑，讓核酸(特定言之iRNA)有效傳遞至動物皮膚。大多數藥物在溶液中係呈離子化與非離子化型。然而，通常僅有脂質可溶性或親脂性藥物容易通過細胞膜。已發現，若 膜經過滲透加強劑處理時，即使非親脂性藥物亦可穿過該細胞膜。此外，為了協助非親脂性藥物擴散通過細胞膜，滲透加強劑亦可加強親脂性藥物之通透性。
滲透加強劑可分成1至5大類，亦即表面活性劑、脂肪酸、膽汁鹽類、螯合劑、與非螯合性非表面活性劑(參見例如：Malmsten,M.之“Surfactants and polymers in drug delivery”,Informa Health Care,New York,NY,2002；Lee等人之“Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems)”,1991,p.92)。上述各類滲透加強劑將更詳細說明於下文中。
表面活性劑(或“界面活性劑”)為一種在溶於水溶液中時可以降低溶液之表面張力或水溶液與另一種液體之間之界面張力之化學物質，結果將加強iRNA通過黏膜之吸收性。除了膽汁鹽類與脂肪酸外，此等滲透加強劑包括例如：月桂基硫酸鈉、聚氧乙烯-9-月桂基醚與聚氧乙烯-20-鯨蠟基醚(參見例如：Malmsten,M.之“Surfactants and polymers in drug Delivery”,Informa Health Care,New York,NY,2002；Lee等人之“Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems”,1991,p.92)；與全氟化學乳液，如：FC-43,Takahashi等人，J.Pharm.Pharmacol. ,1988,40,252)。
作為滲透加強劑之各種不同脂肪酸與其衍生物包括例如：油酸、月桂酸、癸酸(正癸酸)、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸、亞麻酸、二癸酸酯、三癸酸酯、 單油酸甘油酯(1-單油基-消旋性-甘油)、二月桂酸甘油酯、辛酸、花生四烯酸、1-單癸酸甘油酯、1-十二碳烷基氮雜環庚烷-2-酮、醯基肉鹼、醯基膽鹼、其C1-20 烷基酯(例如：甲基酯、異丙基酯與第三丁基酯)、及其單酸-與二酸甘油酯(亦即油酸酯、月桂酸酯、癸酸酯、肉豆蔻酸酯、棕櫚酸酯、硬脂酸酯、亞油酸酯，等等)(參見例如：Touitou,E.等人之“Enhancement in Drug Delivery”,CRC Press,Danvers,MA,2006；Lee等人，“Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems”,1991,p.92；Muranishi之“Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems”,1990,7,1-33；El Hariri等人，J.Pharm.Pharmacol. ,1992,44,651-654)。
膽汁之生理性角色包括促進脂質與脂溶性維生素分散與吸收(參見例如：Malmsten,M.之“Surfactants and polymers in drug Delivery”,Informa Health Care,New York,NY,2002；Brunton述於：Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutic，第9版，第38章，Hardman等人編輯，McGraw-Hill,New York,1996,pp.934-935)。各種不同天然膽汁鹽類與其合成性衍生物均可作為滲透加強劑。因此術語“膽汁鹽類”包括膽汁之任何天然組份及其任何合成性衍生物。合適膽汁鹽包括例如：膽酸(或其醫藥上可接受之鈉鹽、膽酸鈉)、去氫膽酸(去氫膽酸鈉)、去氧膽酸(去氧膽酸鈉)、葡膽酸(葡膽酸鈉)、甘膽酸(甘膽酸鈉)、去氧甘膽酸(去氧甘膽酸鈉)、牛磺膽酸(牛 磺膽酸鈉)、牛磺去氧膽酸(牛磺去氧膽酸鈉)、鵝去氧膽酸(鵝去氧膽酸鈉)、熊去氧膽酸(UDCA)、牛磺-24,25-二氫-褐黴酸鈉(STDHF)、甘胺二氫褐黴酸鈉與聚氧乙烯-9-月桂基醚(POE)(參見例如：Malmsten,M.之“Surfactants and polymers in drug delivery”,Informa Health Care,New York,NY,2002；Lee等人之“Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems”,1991,p.92；Swinyard述於：“Remington's Pharmaceutical Sciences”，第18版，第39章，Gennaro編輯，Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,1990,p.782-783；Muranishi之“Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems”,1990,7,1-33；Yamamoto等人，J.Pharm.Exp.Ther. ,1992,263,25；Yamashita等人，J.Pharm.Sci. ,1990,79,579-583。
本發明所使用之螯合劑可定義為可與溶液中金屬離子形成複合物而藉以排除之化合物，結果可以藉此加強iRNA通過黏膜之吸收性。螯合劑在本發明中作為滲透加強劑之相關用法中，其附加價值在於亦可作為DNase抑制劑，因為大多數已判斷特徵之DNA核酸酶均需要二價金屬離子，供進行催化作用，因此可被螯合劑抑制(Jarrett,J.Chromatogr. ,1993,618,315-339)。合適螯合劑包括(但不限於)：乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、檸檬酸、水楊酸鹽(例如：水楊酸鈉、5-甲氧基水楊酸鹽與高碳香蘭酸鹽)、膠原蛋白之N-醯基衍生物、月桂基醚-9與β-二酮之N-胺基醯基衍生物(烯胺類)(參見例如：Katdare,A.等人之 “Excipient development for pharmaceutical,biotechnology，and drug delivery)”,CRC Press,Danvers,MA,2006；Lee等人，“Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems”,1991,p.92；Muranishi之“Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems”,1990,7,1-33；Buur等人，J.Control Rel. ,1990,14,43-51)。
本文所採用非螯合性非表面活性劑滲透加強化合物可定義為已證實沒有顯著螯合劑或表面活性劑之活性，但仍可加強iRNA通過消化道黏膜吸收之化合物(參見例如：Muranishi之“Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems”,1990,7,1-33)。此類滲透加強劑包括例如：不飽和環狀脲類、1-烷基-與1-烯基氮雜環-烷酮類衍生物(Lee等人，“Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems”,1991,p.92)；及非類固醇消炎劑，如：雙氯芬酸鈉(diclofenac sodium)、吲哚美辛(indomethacin)與苯丁吡唑酮(phenylbutazone)(Yamashita等人，J.Pharm.Pharmacol. ,1987,39,621-626)。
亦可添加可在細胞層級上加強吸收iRNA之本發明醫藥與其他組成物。亦已知例如：陽離子性脂質，如：微脂體(lipofectin)(Junichi等人，美國專利案案號5,705,188)、陽離子性甘油衍生物、與聚陽離子性分子，如：聚離胺酸(Lollo等人，PCT申請案WO 97/30731)可加強細胞吸收dsRNA。可自商品取得之轉染劑實例包括例如：LipofectamineTM (Invitrogen；Carlsbad,CA)、Lipofectamine 2000TM (Invitrogen；Carlsbad,CA)、293fectinTM (Invitrogen；Carlsbad,CA)、CellfectinTM (Invitrogen；Carlsbad,CA)、DMRIE-CTM (Invitrogen；Carlsbad,CA)、FreeStyleTM MAX(Invitrogen；Carlsbad,CA)、LipofectamineTM 2000 CD(Invitrogen；Carlsbad,CA)、LipofectamineTM (Invitrogen；Carlsbad,CA)、iRNAMAX(Invitrogen；Carlsbad,CA)、OligofectamineTM (Invitrogen；Carlsbad,CA)、OptifectTM (Invitrogen；Carlsbad,CA)、X-tremeGENE Q2轉染劑(Roche；Grenzacherstrasse，瑞士)、DOTAP脂質體轉染劑(Grenzacherstrasse，瑞士)、DOSPER脂質體轉染劑(Grenzacherstrasse，瑞士)、或Fugene(Grenzacherstrasse，瑞士)、Transfectam®試劑(Promega；Madison,WI)、TransFastTM 轉染劑(Promega；Madison,WI)、TfxTM -20試劑(Promega；Madison,WI)、TfxTM -50試劑(Promega；Madison,WI)、DreamFectTM (OZ Biosciences；Marseille，法國)、EcoTransfect(OZ Biosciences；Marseille，法國)、TransPassa D1轉染劑(New England Biolabs；Ipswich,MA,USA)、LyoVecTM /LipoGenTM (Invitrogen；San Diego,CA,USA)、PerFectin轉染劑(Genlantis；San Diego,CA,USA)、NeuroPORTER轉染劑(Genlantis；San Diego,CA,USA)、GenePORTER轉染劑(Genlantis；San Diego,CA,USA)、GenePORTER 2轉染劑(Genlantis；San Diego,CA,USA)、Cytofectin轉染劑(Genlantis；San Diego,CA,USA)、BaculoPORTER轉染劑(Genlantis；San Diego,CA,USA)、TroganPORTERTM 轉染劑 (Genlantis；San Diego,CA,USA)、RiboFect(Bioline；Taunton,MA,USA)、PlasFect(Bioline；Taunton,MA,USA)、UniFECTOR(B-Bridge International；Mountain View,CA,USA)、SureFECTOR(B-Bridge International；Mountain View,CA,USA)，或HiFectTM (B-Bridge International,Mountain View,CA,USA)，等等。
其他可用於為所投與核酸加強滲透之製劑包括二醇類(如：乙二醇與丙二醇)、吡咯類(如：2-吡咯)、氮酮類與萜烯類，如：檸檬烯與薄荷酮。
v.載劑
某些本發明組成物亦可在調配物中納入載劑化合物。本文所採用“載劑化合物”或“載劑”可指核酸或其類似物，其係惰性(亦即本身沒有生物活性)，但仍可在活體內過程中被辨識為核酸，該過程係藉由例如：降解生物活性核酸或促進其從循環過程中排出，而降低該具有生物活性之核酸之生體可用率。共同投與核酸與載劑化合物(後者物質通常使用過量)可以大幅降低肝臟、腎臟或其他外循環器官之核酸回收量，可能歸因於載劑化合物與核酸競爭共用受體所致。例如：當與聚肌苷酸、葡聚糖硫酸鹽、聚胞苷酸或4-乙醯胺基-4'異硫氰醯基-芪-2,2'-二磺酸共同投藥時，可減少肝臟組織回收部份硫代磷酸dsRNA(Miyao等人，DsRNA Res.Dev.,1995,5,115-121；Takakura等人，DsRNA & Nucl.Acid Drug Dev.,1996,6,177-183。
vi.賦形劑
與載劑化合物相反，“醫藥載劑”或“賦形劑”為供傳遞一或多種核酸至動物體之醫藥上可接受之溶劑、懸浮劑或任何其他醫藥惰性媒劑。賦形劑可呈液態或固態，並依計畫之投藥方式選擇，以在與核酸與指定之醫藥組成物中其他組份組合時提供所需之填充體積、堅實度，等等。典型醫藥載劑包括(但不限於)：結合劑(例如：預糊化玉米澱粉、聚乙烯吡啶咯酮或羥基丙基甲基纖維素，等等)；填料(例如：乳糖與其他糖類、微晶纖維素、果膠、明膠、硫酸鈣、乙基纖維素、聚丙烯酸酯或磷酸氫鈣，等等)；潤滑劑(例如：硬脂酸鎂、滑石、矽石、膠體二氧化矽、硬脂酸、硬脂酸金屬鹽、氫化植物油、玉米澱粉、聚乙二醇、苯甲酸鈉、乙酸鈉，等等)；崩解劑(例如：澱粉、澱粉乙醇酸鈉，等等)；與濕化劑(例如：月桂基硫酸鈉，等等)。
亦可使用適合非-非經腸胃式投藥且不會與核酸有不利反應之醫藥上可接受之有機或無機賦形劑來調配本發明組成物。合適之醫藥上可接受之載劑包括(但不限於)：水、鹽溶液、醇類、聚乙二醇、明膠、乳糖、直鏈澱粉、硬脂酸鎂、滑石、矽酸、黏性石蠟、羥甲基纖維素、聚乙烯吡咯啶酮，等等。
供局部表面投與核酸之調配物可包括無菌與非無菌水溶液、於常用溶劑(如：醇類)中之非水性溶液、或含核酸之液態或固態油基質溶液。溶液中亦可包含緩衝 劑、稀釋劑與其他合適添加劑。可使用適合非-非經腸胃式投藥且不會與核酸有不利反應之醫藥上可接受之有機或無機賦形劑。
合適之醫藥上可接受之賦形劑包括(但不限於)：水、鹽溶液、醇、聚乙二醇、明膠、乳糖、直鏈澱粉、硬脂酸鎂、滑石、矽酸、黏性石蠟、羥甲基纖維素、聚乙烯吡咯啶酮，等等。
viii.其他組份
本發明組成物可再包含醫藥組成物中常用且本領域上已建立用量之其他輔助組份。因此例如：組成物可再包含其他可相容之醫藥活性材料，如，例如：止癢劑、收斂劑、局部麻醉藥或消炎劑，或可包含其他適用於物理性調配本發明組成物各種不同劑型之材料，如：染劑、調味劑、防腐劑、抗氧化劑、不透明劑、增稠劑與安定劑。然而，當添加此等材料時，不應不當干擾本發明組成物中組份之生物活性。調配物可經過殺菌，且若需要時，可與不會與調配物之核酸(群)出現不良交互作用之輔劑混合，例如：潤滑劑、防腐劑、安定劑、濕化劑、乳化劑、影響滲透壓之鹽類、緩衝劑、著色劑、調味劑及/或芳香物質，等等。
水性懸浮液可包含提高懸浮液黏度之物質，包括例如：羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇及/或葡聚糖。該懸浮液亦可包含安定劑。
有些具體例中，如本發明所說明特徵之醫 藥組成物包括(a)一或多種iRNA化合物與(b)一或多種其功能為非iRNA機轉且適用於治療HBV感染之製劑。此等製劑實例包括(但不限於)：目標在於藉由干擾病毒複製來壓制或破壞HBV之抗病毒劑；及目標在於幫助人類免疫系統架起防禦來對抗病毒之免疫調控劑。反之，如：會誘發加強病毒及病毒抗原表現，及壓制T-淋巴球功能之皮質類固醇、或阿糖腺苷、無環鳥苷(acyclovir)、或二去氧肌苷等免疫調控劑並無法有利地治療慢性B型肝炎。合適製劑將於下文中更詳細討論。
此等化合物之毒性與醫療效力可採用標準醫藥製程，於細胞培養中或實驗動物中測定，例如：測定LD50(造成50%試驗群死亡時之劑量)與ED50(有效醫療50%試驗群時之劑量)。毒性與醫療效應之間之劑量比值即為醫療指數，以LD50/ED50比值表示。以醫療指數高之化合物較佳。
可採用由細胞培養分析法與動物研究得到之數據來調配用於人類之劑量範圍。如本發明所說明特徵之組成物之劑量通常落在包括極低或無毒性之ED50之循環濃度範圍內。劑量可依所採用劑型及所利用之投藥途徑，在此範圍內變化。用於如本發明所說明特徵之方法所使用之任何化合物之醫療有效劑量可先從細胞培養分析法估測。可在動物模式中調配劑量，以使該化合物或若適當時使標靶序列之多肽產物之循環血漿濃度範圍達到(例如：降低多肽濃度達到)包括細胞培養物所決定IC50(亦即 試驗化合物使症狀達到一半最大抑制性時之濃度)在內之範圍。此等資訊可用於更精確決定適用於人類之劑量。可藉由例如：高效液相層析法測定血漿中濃度。
除了如上述投藥法外，如本發明所說明特徵之iRNA可與其他已知可有效治療受HBV表現介導之病理過程之製劑組合投藥。任何情況下，投藥之醫師均可依據採用本領域上已知或本文所說明標準效力測定法所觀察到之結果來調整iRNA之投藥量與投藥時間。
VII. 本發明方法
本發明提供一種醫療與預防方法，其包括對患有HBV感染及/或HBV相關疾病、病症、及/或病症之個體、或有發展出HBV相關疾病、病症、及/或病症(例如：CHB)傾向之個體投與包含本發明iRNA劑之組成物、或包含iRNA劑之醫藥組成物、或包含本發明iRNA之載體。
本發明方法適用於治療患有HBV感染之個體，例如：可能因降低HBV基因表現及/或HBV複製而受益之個體。一態樣中，本發明提供一種使感染HBV之個體降低B型肝炎病毒ccc DNA含量之方法。另一態樣中，本發明提供一種使感染HBV之個體降低HBV抗原(例如：HbsAg及/或HbeAg)含量之方法。另一態樣中，本發明提供一種使感染HBV之個體降低HBV病毒量之方法。本發明亦提供一種使感染HBV之個體降低丙胺酸胺基轉化酶(ALT)及/或天冬胺酸胺基轉化酶(AST)含量之方法。一態樣中，本發明提供一種使感染HBV之個體提高抗-HBV抗體 含量之方法。另一態樣中，本發明提供一種治療患有HBV感染之個體之方法。一態樣中，本發明提供一種治療患有HBV相關疾病(例如：D型肝炎病毒感染、δ型(delta)肝炎、急性B型肝炎；急性猛爆性B型肝炎；慢性B型肝炎；肝硬化；末期肝病；肝細胞癌)之個體之方法。此外，由於HDV感染係依賴HBV所提供之義務助手功能進行傳播，因此，患有HBV感染之個體亦可能患有HDV感染，本文所說明治療方法亦適用於治療患有HDV感染及/或HDV-相關病症(如：B型肝炎病毒感染、慢性B型肝炎感染(CHB)、慢性B型肝炎感染(CHB)、硬化、肝衰竭、與肝細胞癌(HCC))之個體。本發明治療方法(與用途)包括對該個體(例如：人類)投與醫療有效量之本發明靶向HBV基因之iRNA劑或包含本發明靶向HBV基因之iRNA劑之醫藥組成物或包含本發明靶向HBV基因之iRNA劑之載體。
一態樣中，本發明提供一種為患有HBV感染之個體預防至少一種症狀之方法，例如：出現血清及/或肝HBV ccc DNA、出現血清HBV DNA、出現血清及/或肝HBV抗原(例如：HbsAg及/或HbeAg)、提高之ALT、提高之AST、沒有或低量之抗-HBV抗體、肝損傷；硬化；D型肝炎病毒感染、δ型(delta)肝炎、急性B型肝炎；急性猛爆性B型肝炎；慢性B型肝炎；肝硬化；末期肝病；肝細胞癌；類似血清病症候群；厭食；噁心；嘔吐、低度發燒；肌痛；易疲勞性；味覺敏銳度與嗅覺感受度異常(厭惡食物與香煙)；及/或左上四分之一腹痛與心窩部痛(間歇 性、輕度至中度)；肝性腦病症；嗜睡；睡眠型態紊亂；精神錯亂；昏迷；腹水；胃腸出血；凝血病症；黃疸；肝腫大(輕度腫大、肝柔軟)；脾腫大；手掌紅斑；蜘蛛痣；肌肉消瘦；蜘蛛形血管瘤；血管炎；靜脈曲張出血；四肢水腫；男性乳房發育症；睪丸萎縮；腹部連結靜脈(靜脈擴張)；高含量丙胺酸胺基轉化酶(ALT)及天冬胺酸胺基轉化酶(AST)，在1000-2000IU/mL之範圍內，但亦可判別到高於正常值上限(ULN)100倍；ALT含量高於AST含量；提高之γ-麩醯胺轉肽酶(GGT)及鹼性磷酸酶(ALP)含量(例如：不超過3倍ULN)；稍低之白蛋白含量；提高之血清鐵含量；白血球減少症(亦即粒細胞減少症)；血液淋巴細胞增多；紅血球沉降速率(ESR)升高；紅血球存活期縮短；溶血症；血小板減少症；國際標準凝血時間比(INR)延長；出現血清及/或肝HBsAg、HBeAg、B型肝炎核心抗體(抗-HBc)免疫球蛋白M(IgM)；B型肝炎表面抗體(抗-HBs)、B型肝炎e抗體(抗-HBe)、及/或HBV DNA；胺基轉化酶提高(
Figure 104136995-A0202-12-0230-281
5倍ULN)；ALT含量高於AST含量；膽紅素含量升高、凝血酶原時間(PT)延長；高球蛋白血症；出現非組織專一性抗體，如：抗平滑肌抗體(ASMAs)或抗核抗體(ANAs)(10-20%)；出現組織專一性抗體，如：對抗甲狀腺之抗體(10-20%)；類風濕性因子(RF)含量提高；高膽紅素血症、延長之PT、低量血小板及白血球細胞數、AST含量高於ALT含量；提高之鹼性磷酸酶(ALP)及GGT含量；小葉具有退化與再生肝細胞變化、及併發發炎；主要為小葉中心 壞死。該方法包括對該個體投與醫療有效量之本發明iRNA劑(例如：dsRNA)、醫藥組成物、或載體，藉以為罹患可能因降低HBV基因表現而受益之病症之個體，如：患有HBV感染之個體或同時罹患HBV與HDV感染之個體，預防至少一種症狀。
另一態樣中，本發明提供一種以醫療有效量之本發明iRNA劑於治療個體上之用途，例如：可能因降低及/或抑制HBV基因表現而受益之個體，如：患有HBV感染之個體或同時罹患HBV與HDV感染之個體。
另一態樣中，本發明提供一種以本發明靶向HBV基因之iRNA劑(例如：dsRNA)或包含靶向HBV基因之iRNA劑之醫藥組成物於製造供治療個體(例如：可能因降低及/或抑制HBV基因表現及/或HBV複製而受益之個體，如：患有HBV感染之個體或同時罹患HBV與HDV感染之個體，及罹患可能因降低HBV基因表現而受益之病症，例如：HBV相關疾病之個體)之醫藥上之用途。
另一態樣中，本發明提供一種以本發明iRNA，例如：dsRNA為罹患可能因降低及/或抑制HBV基因表現及/或HBV複製而受益之病症之個體預防至少一種+-+症狀之用途。
另一態樣中，本發明提供一種以本發明iRNA劑於製造為罹患可能因降低及/或抑制HBV基因表現及/或HBV複製而受益之病症(如：HBV相關疾病)之個體預防至少一種症狀之醫藥上之用途。
一具體例中，靶向HBV之iRNA劑係投與患有HBV感染或同時患有HBV與HDV感染、及/或HBV相關疾病之個體，使接受投與dsRNA劑時之個體之例如：細胞、組織、血液或其他組織或流體中一或多種HBV基因表現、HBV ccc DNA含量、HBV抗原含量、HBV病毒量、ALT、及/或AST降低至少約10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、62%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少約99%或更多。
一具體例中，靶向HBV之iRNA劑係投與患有患有HBV感染或同時患有HBV與HDV感染、及/或HBV相關疾病之個體，使接受投與dsRNA劑時之個體之例如：細胞、組織、血液或其他組織或流體中抗-HBV抗體含量升高至少約10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、 57%、58%、59%、60%、61%、62%、62%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少約99%或更高。
本發明方法及用途包括投與本文所說明組成物，以降低標靶HBV基因之表現，其係持續如：約1、2、3、4、5、6、7、8、12、16、18、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、或約80小時。一具體例中，可長期降低標靶HBV基因表現，例如：至少約兩天、三天、四天、五天、六天、七天或更久，例如：約一週、兩週、三週、或約四週或更久。
根據本發明方法與用途投與dsRNA可以為罹患HBV感染或同時罹患HBV與HDV感染、及/或HBV相關疾病之患者降低此等疾病或病症之嚴重性、癥兆、症狀及/或標記物。本文中，“降低”意指此等程度在統計學上顯著降低。該降低程度可為例如：至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或約100%。
治療或預防疾病之效力之評估法可為例如：測定疾病進展、疾病消退、症狀嚴重性、疼痛減輕、生活品質、需要維持治療效果時之醫藥劑量、適合該所治療疾病或預防目標之疾病標記物或任何其他可測量之參數。熟悉此相關技術者均有能力藉由測定其中任一種參數 或任何參數組合，來追蹤治療或預防之效力。例如：可能藉由例如：定期追蹤病毒量及傳播程度來評估CHB之治療效力。由後來之讀數與原始之讀數比較，即可指示醫師該治療是否有效。熟悉此相關技術者均有能力藉由測定其中任一種參數或任何參數組合，來追蹤治療或預防之效力。在投與靶向HBV之iRNA或其醫藥組成物之相關內容中，"有效對抗" HBV相關疾病係指依臨床上適當方式投藥時，可以讓至少統計上顯著比例之患者得到有利效應，如：改善症狀、治癒、減輕疾病、延長壽命、改善生活品質或熟悉治療HBV感染及/或HBV相關疾病及相關病因之醫師通常認定為正向之其他效應。
當一或多種疾病狀態之參數出現統計上顯著改善時，或不會再惡化或發展出原本預期之症狀時，即證實該治療或預防效果。例如：疾病之可測定參數之有利變化為至少10%，較佳為至少20%、30%、40%、50%或更高，表示為有效之治療。針對特定iRNA藥物或該藥物之調配物之效力亦可採用本領域上已知針對該疾病之實驗動物模式來判斷。當採用實驗動物模式時，當觀察到標記物或症狀在統計學上顯著下降時，即證實有治療效力。
可對個體投與醫療量之iRNA，如：約0.01mg/kg、0.02mg/kg、0.03mg/kg、0.04mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.15mg/kg、0.2mg/kg、0.25mg/kg、0.3mg/kg、0.35mg/kg、0.4mg/kg、0.45mg/kg、0.5mg/kg、0.55mg/kg、0.6mg/kg、0.65mg/kg、0.7mg/kg、0.75mg/kg、0.8mg/kg、 0.85mg/kg、0.9mg/kg、0.95mg/kg、1.0mg/kg、1.1mg/kg、1.2mg/kg、1.3mg/kg、1.4mg/kg、1.5mg/kg、1.6mg/kg、1.7mg/kg、1.8mg/kg、1.9mg/kg、2.0mg/kg、2.1mg/kg、2.2mg/kg、2.3mg/kg、2.4mg/kg、2.5mg/kg dsRNA、2.6mg/kg dsRNA、2.7mg/kg dsRNA、2.8mg/kg dsRNA、2.9mg/kg dsRNA、3.0mg/kg dsRNA、3.1mg/kg dsRNA、3.2mg/kg dsRNA、3.3mg/kg dsRNA、3.4mg/kg dsRNA、3.5mg/kg dsRNA、3.6mg/kg dsRNA、3.7mg/kg dsRNA、3.8mg/kg dsRNA、3.9mg/kg dsRNA、4.0mg/kg dsRNA、4.1mg/kg dsRNA、4.2mg/kg dsRNA、4.3mg/kg dsRNA、4.4mg/kg dsRNA、4.5mg/kg dsRNA、4.6mg/kg dsRNA、4.7mg/kg dsRNA、4.8mg/kg dsRNA、4.9mg/kg dsRNA、5.0mg/kg dsRNA、5.1mg/kg dsRNA、5.2mg/kg dsRNA、5.3mg/kg dsRNA、5.4mg/kg dsRNA、5.5mg/kg dsRNA、5.6mg/kg dsRNA、5.7mg/kg dsRNA、5.8mg/kg dsRNA、5.9mg/kg dsRNA、6.0mg/kg dsRNA、6.1mg/kg dsRNA、6.2mg/kg dsRNA、6.3mg/kg dsRNA、6.4mg/kg dsRNA、6.5mg/kg dsRNA、6.6mg/kg dsRNA、6.7mg/kg dsRNA、6.8mg/kg dsRNA、6.9mg/kg dsRNA、7.0mg/kg dsRNA、7.1mg/kg dsRNA、7.2mg/kg dsRNA、7.3mg/kg dsRNA、7.4mg/kg dsRNA、7.5mg/kg dsRNA、7.6mg/kg dsRNA、7.7mg/kg dsRNA、7.8mg/kg dsRNA、7.9mg/kg dsRNA、8.0mg/kg dsRNA、8.1mg/kg dsRNA、8.2mg/kg dsRNA、8.3mg/kg dsRNA、8.4mg/kg dsRNA、8.5mg/kg dsRNA、8.6mg/kg dsRNA、8.7mg/kg dsRNA、8.8mg/kg dsRNA、8.9mg/kg dsRNA、9.0mg/kg dsRNA、9.1mg/kg dsRNA、9.2mg/kg dsRNA、9.3mg/kg dsRNA、9.4mg/kg dsRNA、9.5mg/kg dsRNA、9.6mg/kg dsRNA、9.7mg/kg dsRNA、9.8mg/kg dsRNA、9.9mg/kg dsRNA、9.0mg/kg dsRNA、10mg/kg dsRNA、15mg/kg dsRNA、20mg/kg dsRNA、25mg/kg dsRNA、30mg/kg dsRNA、35mg/kg dsRNA、40mg/kg dsRNA、45mg/kg dsRNA、或約50mg/kg dsRNA。該所引用數值之間的數值與範圍亦意圖成為本發明之一部份。
某些具體例中，例如：當本發明組成物包含本文說明之dsRNA及脂質時，可對個體投與醫療量之iRNA，如：約0.01mg/kg至約5mg/kg、約0.01mg/kg至約10mg/kg、約0.05mg/kg至約5mg/kg、約0.05mg/kg至約10mg/kg、約0.1mg/kg至約5mg/kg、約0.1mg/kg至約10mg/kg、約0.2mg/kg至約5mg/kg、約0.2mg/kg至約10mg/kg、約0.3mg/kg至約5mg/kg、約0.3mg/kg至約10mg/kg、約0.4mg/kg至約5mg/kg、約0.4mg/kg至約10mg/kg、約0.5mg/kg至約5mg/kg、約0.5mg/kg至約10mg/kg、約1mg/kg至約5mg/kg、約1mg/kg至約10mg/kg、約1.5mg/kg至約5mg/kg、約1.5mg/kg至約10mg/kg、約2mg/kg至約2.5mg/kg、約2mg/kg至約10mg/kg、約3mg/kg至約5mg/kg、約3mg/kg至約10mg/kg、約3.5mg/kg至約5mg/kg、約4mg/kg至約5mg/kg、約4.5mg/kg至約5mg/kg、約4mg/kg至約10mg/kg、約4.5mg/kg至約10 mg/kg、約5mg/kg至約10mg/kg、約5.5mg/kg至約10mg/kg、約6mg/kg至約10mg/kg、約6.5mg/kg至約10mg/kg、約7mg/kg至約10mg/kg、約7.5mg/kg至約10mg/kg、約8mg/kg至約10mg/kg、約8.5mg/kg至約10mg/kg、約9mg/kg至約10mg/kg、或約9.5mg/kg至約10mg/kg。該所引用數值之間的數值與範圍亦意圖成為本發明之一部份。
例如：dsRNA可投與劑量為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、或約10mg/kg。該所引用數值之間的數值與範圍亦意圖成為本發明之一部份。
其他具體例中，例如：當本發明組成物包含本文說明之dsRNA與N-乙醯基半乳糖胺時，可對個體投與醫療量之iRNA，如：劑量為約0.1至約50mg/kg、約0.25至約50mg/kg、約0.5至約50mg/kg、約0.75至約50mg/kg、約1至約50mg/kg、約1.5至約50mg/kg、約2至約50mg/kg、約2.5至約50mg/kg、約3至約50mg/kg、約3.5 至約50mg/kg、約4至約50mg/kg、約4.5至約50mg/kg、約5至約50mg/kg、約7.5至約50mg/kg、約10至約50mg/kg、約15至約50mg/kg、約20至約50mg/kg、約20至約50mg/kg、約25至約50mg/kg、約25至約50mg/kg、約30至約50mg/kg、約35至約50mg/kg、約40至約50mg/kg、約45至約50mg/kg、約0.1至約45mg/kg、約0.25至約45mg/kg、約0.5至約45mg/kg、約0.75至約45mg/kg、約1至約45mg/kg、約1.5至約45mg/kg、約2至約45mg/kg、約2.5至約45mg/kg、約3至約45mg/kg、約3.5至約45mg/kg、約4至約45mg/kg、約4.5至約45mg/kg、約5至約45mg/kg、約7.5至約45mg/kg、約10至約45mg/kg、約15至約45mg/kg、約20至約45mg/kg、約20至約45mg/kg、約25至約45mg/kg、約25至約45mg/kg、約30至約45mg/kg、約35至約45mg/kg、約40至約45mg/kg、約0.1至約40mg/kg、約0.25至約40mg/kg、約0.5至約40mg/kg、約0.75至約40mg/kg、約1至約40mg/kg、約1.5至約40mg/kg、約2至約40mg/kg、約2.5至約40mg/kg、約3至約40mg/kg、約3.5至約40mg/kg、約4至約40mg/kg、約4.5至約40mg/kg、約5至約40mg/kg、約7.5至約40mg/kg、約10至約40mg/kg、約15至約40mg/kg、約20至約40mg/kg、約20至約40mg/kg、約25至約40mg/kg、約25至約40mg/kg、約30至約40mg/kg、約35至約40mg/kg、約0.1至約30mg/kg、約0.25至約30mg/kg、約0.5至約30mg/kg、約0.75至約30mg/kg、 約1至約30mg/kg、約1.5至約30mg/kg、約2至約30mg/kg、約2.5至約30mg/kg、約3至約30mg/kg、約3.5至約30mg/kg、約4至約30mg/kg、約4.5至約30mg/kg、約5至約30mg/kg、約7.5至約30mg/kg、約10至約30mg/kg、約15至約30mg/kg、約20至約30mg/kg、約20至約30mg/kg、約25至約30mg/kg、約0.1至約20mg/kg、約0.25至約20mg/kg、約0.5至約20mg/kg、約0.75至約20mg/kg、約1至約20mg/kg、約1.5至約20mg/kg、約2至約20mg/kg、約2.5至約20mg/kg、約3至約20mg/kg、約3.5至約20mg/kg、約4至約20mg/kg、約4.5至約20mg/kg、約5至約20mg/kg、約7.5至約20mg/kg、約10至約20mg/kg、或約15至約20mg/kg。一具體例中，當本發明組成物包含本文說明之dsRNA與N-乙醯基半乳糖胺時，可對個體投與醫療量約10至約30mg/kg之dsRNA。該所引用數值之間的數值與範圍亦意圖成為本發明之一部份。
例如：可對個體投與醫療量之iRNA，如：約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、 8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、31、32、33、34、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、或約50mg/kg。該所引用數值之間的數值與範圍亦意圖成為本發明之一部份。
某些本發明具體例中，例如：當雙股RNAi劑包括一種修飾(例如：一個或多個在三個連續核苷酸具有三個相同修飾之基序，包括一個在該製劑之裂解位點或接近裂解位點處之此等基序)、六個硫代磷酸酯鏈結體、與配體時，此等製劑之投藥劑量為約0.01至約0.5mg/kg、約0.01至約0.4mg/kg、約0.01至約0.3mg/kg、約0.01至約0.2mg/kg、約0.01至約0.1mg/kg、約0.01mg/kg至約0.09mg/kg、約0.01mg/kg至約0.08mg/kg、約0.01mg/kg至約0.07mg/kg、約0.01mg/kg至約0.06mg/kg、約0.01mg/kg至約0.05mg/kg、約0.02至約0.5mg/kg、約0.02至約0.4mg/kg、約0.02至約0.3mg/kg、約0.02至約0.2mg/kg、約0.02至約0.1mg/kg、約0.02mg/kg至約0.09mg/kg、約0.02mg/kg至約0.08mg/kg、約0.02mg/kg至約0.07mg/kg、約0.02mg/kg至約0.06mg/kg、約0.02mg/kg至約0.05mg/kg、約0.03至約0.5mg/kg、約0.03至約0.4mg/kg、約0.03至約0.3mg/kg、約0.03至約0.2mg/kg、約0.03至約0.1 mg/kg、約0.03mg/kg至約0.09mg/kg、約0.03mg/kg至約0.08mg/kg、約0.03mg/kg至約0.07mg/kg、約0.03mg/kg至約0.06mg/kg、約0.03mg/kg至約0.05mg/kg、約0.04至約0.5mg/kg、約0.04至約0.4mg/kg、約0.04至約0.3mg/kg、約0.04至約0.2mg/kg、約0.04至約0.1mg/kg、約0.04mg/kg至約0.09mg/kg、約0.04mg/kg至約0.08mg/kg、約0.04mg/kg至約0.07mg/kg、約0.04mg/kg至約0.06mg/kg、約0.05至約0.5mg/kg、約0.05至約0.4mg/kg、約0.05至約0.3mg/kg、約0.05至約0.2mg/kg、約0.05至約0.1mg/kg、約0.05mg/kg至約0.09mg/kg、約0.05mg/kg至約0.08mg/kg、或約0.05mg/kg至約0.07mg/kg。該所引用數值之間的數值與範圍亦意圖成為本發明之一部份，例如：該RNAi劑可投與個體之劑量為約0.015mg/kg至約0.45mg/kg。
例如：該RNAi劑，例如：於醫藥組成物之RNAi劑，可投與劑量為約0.01mg/kg、0.0125mg/kg、0.015mg/kg、0.0175mg/kg、0.02mg/kg、0.0225mg/kg、0.025mg/kg、0.0275mg/kg、0.03mg/kg、0.0325mg/kg、0.035mg/kg、0.0375mg/kg、0.04mg/kg、0.0425mg/kg、0.045mg/kg、0.0475mg/kg、0.05mg/kg、0.0525mg/kg、0.055mg/kg、0.0575mg/kg、0.06mg/kg、0.0625mg/kg、0.065mg/kg、0.0675mg/kg、0.07mg/kg、0.0725mg/kg、0.075mg/kg、0.0775mg/kg、0.08mg/kg、0.0825mg/kg、0.085mg/kg、0.0875mg/kg、0.09mg/kg、0.0925mg/kg、0.095 mg/kg、0.0975mg/kg、0.1mg/kg、0.125mg/kg、0.15mg/kg、0.175mg/kg、0.2mg/kg、0.225mg/kg、0.25mg/kg、0.275mg/kg、0.3mg/kg、0.325mg/kg、0.35mg/kg、0.375mg/kg、0.4mg/kg、0.425mg/kg、0.45mg/kg、0.475mg/kg、或約0.5mg/kg。該所引用數值之間的數值亦意圖成為本發明之一部份。
有些具體例中，該RNAi劑係投與固定劑量約100mg至約900mg之間，例如：約100mg至約850mg之間、約100mg至約800mg之間、約100mg至約750mg之間、約100mg至約700mg之間、約100mg至約650mg之間、約100mg至約600mg之間、約100mg至約550mg之間、約100mg至約500mg之間、約200mg至約850mg之間、約200mg至約800mg之間、約200mg至約750mg之間、約200mg至約700mg之間、約200mg至約650mg之間、約200mg至約600mg之間、約200mg至約550mg之間、約200mg至約500mg之間、約300mg至約850mg之間、約300mg至約800mg之間、約300mg至約750mg之間、約300mg至約700mg之間、約300mg至約650mg之間、約300mg至約600mg之間、約300mg至約550mg之間、約300mg至約500mg之間、約400mg至約850mg之間、約400mg至約800mg之間、約400mg至約750mg之間、約400mg至約700mg之間、約400mg至約650mg之間、約400mg至約600mg之間、約400mg至約550mg之間、或約400mg至約500mg之間。
有些具體例中，該RNAi劑係投與固定劑量約100mg、約125mg、約150mg、約175mg、200mg、約225mg、約250mg、約275mg、約300mg、約325mg、約350mg、約375mg、約400mg、約425mg、約450mg、約475mg、約500mg、約525mg、約550mg、約575mg、約600mg、約625mg、約650mg、約675mg、約700mg、約725mg、約750mg、約775mg、約800mg、約825mg、約850mg、約875mg、或約900mg。
該iRNA可經靜脈內輸注一段時間，如：歷經5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、或約25分鐘時間。該投藥法可以重覆，例如：定期重覆，如：每週、每兩週(亦即每兩個星期)，持續一個月、兩個月、三個月、四個月或更久。經過初次療程後，可依較低頻率投藥。例如：每週或每兩週投藥持續三個月後，可以每個月重覆投藥一次，持續6個月或一年或更久。
投與iRNA可以使患者之例如：細胞、組織、血液、尿液或其他隔室之血清及/或肝HBV ccc DNA含量、血清及/或肝HBV抗原(例如：HBsAg及/或HBeAg)含量、ALT含量、及/或AST含量降低至少約5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、 49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少約99%或以上，例如：降至分析檢測值以下。
投與iRNA可以使患者之例如：細胞、組織、血液、尿液或其他隔室之血清及/或肝抗HBV抗體含量提高至少約5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少約99%或以上。
投與全劑量iRNA之前，患者先接受投與較小劑量，如：5%輸液，並追蹤不良效應，如：過敏反應。另一項實例中，可以追蹤患者不期望之免疫刺激效應，如：細胞激素(例如：TNF-α或INF-α)含量升高。
由於根據本發明組成物或由其製成之醫藥組成物對HBV表現具有抑制效力，因此可以提高生活品 質。
本發明iRNA可呈“裸”型投藥，其中係由經修飾或未修飾之iRNA劑直接懸浮於水性或合適緩衝溶劑中，呈“游離iRNA”。游離iRNA係在沒有醫藥組成物之存在下投藥。游離iRNA可含於合適緩衝溶液中。緩衝溶液可能包含乙酸鹽、檸檬酸鹽、醇溶穀蛋白、碳酸鹽、或磷酸鹽、或其任何組合。一具體例中，緩衝溶液為磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)。可以調整包含iRNA之緩衝溶液之pH值與滲透壓以便適合投與個體。
或者，本發明iRNA可呈醫藥組成物投藥，如：dsRNA脂質體調配物。
可能因降低及/或抑制HBV基因表現而受益之個體為彼等罹患本文所說明患有HBV感染及/或HBV相關疾病或病症者。
可能因降低及/或抑制HBV基因表現而受益之個體之治療法包括醫療性與預防性治療法。
本發明進一步提供一種以iRNA劑或其醫藥組成物，與其他醫藥及/或其他療法(例如：已知醫藥及/或已知療法，如，例如：彼等目前用於治療此等病症者)組合，於治療可能因降低及/或抑制HBV基因表現而受益之個體(例如：罹患HBV相關疾病之個體)之方法與用途。
例如：某些具體例中，靶向一或多種HBV基因之iRNA係與例如：適用於治療本文所說明HBV相關疾病之製劑組合。例如：適用於治療可能因降低HBV基因 表現而受益之個體(例如：罹患HBV相關疾病之個體)之其他療法及醫療方法包括靶向不同之HBV基因組部份之iRNA劑、抗病毒劑、反轉錄酶抑制劑(例如：泰諾福韋(tenofovir disoproxil fumarate)(TDF)、替諾福韋艾拉酚(Tenofovir alafenamide)、拉米夫定(Lamivudine)、阿德福韋酯(Adefovir dipivoxil)、恩替卡韋(Entecavir)(ETV)、喜必福(Telbivudine)、及AGX-1009)、免疫刺激劑(例如：聚乙二醇基化干擾素α 2a(PEG-IFN-α 2a)、干擾素α -2b、重組體人類介白素-7、及Toll-樣受體7(TLR7)促效劑)、醫療性疫苗(例如：GS-4774、DV-601、及TG1050)、病毒侵入抑制劑(例如：麥克樂斯(Myrcludex))、抑制HbsAg之分泌或釋出之寡核苷酸(例如：REP 9AC)、殼體抑制劑(例如：Bay41-4109及NVR-1221)、cccDNA抑制劑(例如：IHVR-25)、或其他醫療劑及/或程序，例如：肝移植、用於HBV相關疾病之化療法、上述任何組合。
某些具體例中，靶向一或多種HBV基因之第一iRNA劑係與靶向不同HBV基因組部份之第二iRNA劑組合投藥。例如：靶向一或多種結構基因之第一iRNA劑可與靶向X基因之第二RNAi劑組合投藥。例如：第一RNAi劑包含形成雙股區之第一正義股及第一反義股，其中該第一正義股實質上所有核苷酸及該第一反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該第一正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價之分支鏈結體附接之GalNAc衍生物；及該第二RNAi 劑包含形成雙股區之第二正義股及第二反義股，其中第二正義股實質上所有核苷酸及第二反義股實質上所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中第二正義股係接合附接在3’-末端之配體，且其中該配體為一或多種利用二價或三價之分支鏈結體附接之GalNAc衍生物；其中第一正義股包含選自下列序列所組成群中之序列：5’-UCGUGGUGGACUUCUCUCA-3’(SEQ ID NO：5)，5’-GUGCACUUCGCUUCACCUCUA-3’(SEQ ID NO：7)，5’-CGUGGUGGACUUCUCUCAAUU-3’(SEQ ID NO：9)，5’-CGUGGUGGUCUUCUCUAAAUU-3’(SEQ ID NO：37)，5’-GGUGGACUUCUCUCAAUUUUA-3’(SEQ ID NO：11)，及5’-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3’(SEQ ID NO：39)(或與上述任何核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之核苷酸序列)，且其中該第一與第二反義股分別獨立包含選自下列序列所組成群中之序列：5’-UGAGAGAAGUCCACCACGAUU-3’(SEQ ID NO：6)；5’-UAGAGGUGAAGCGAAGUGCACUU-3’(SEQ ID NO：8)；5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCAG-3’(SEQ ID NO：10)；5’-AAUUGAGAGAAGUCCACCAGCUU-3’(SEQ ID NO：38)，5’-UAAAAUUGAGAGAAGUCCACCAC-3’(SEQ ID NO：12)，及5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：40)(或與上述任何核苷酸序列之全長度具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性 之核苷酸序列)，藉以治療該個體。
一具體例中，該第一與第二正義股之所有核苷酸及/或該第一與第二反義股之所有核苷酸包含一種修飾。
一具體例中，至少一個經修飾之核苷酸係選自下列各物所組成群中：3’-末端去氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸、2'-氟修飾之核苷酸、2'-去氧-修飾之核苷酸、鎖核苷酸、非鎖核苷酸、構型限制性核苷酸、限制性乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、2’-胺基-修飾之核苷酸、2’-O-烯丙基-修飾之核苷酸、2’-C-烷基-修飾之核苷酸、2’-羥基-修飾之核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、2’-O-烷基-修飾之核苷酸、N-嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、四氫哌喃修飾之核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾之核苷酸、環己烯基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基之核苷酸、包含甲基膦酸酯基之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、及包含5’-磷酸酯擬似物之核苷酸。
某些具體例中，靶向一或多種HBV基因之第一iRNA劑係與第二iRNA劑組合投藥，該第二iRNA劑靶向不同於該一或多種HBV基因之基因，例如：該靶向一或多種HBV基因之iRNA劑可與靶向CD274/PD-L1基因之iRNA劑組合投藥。該靶向CD274/PD-L1基因之iRNA劑實例說明於WO 2011/127180，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。靶向一或多種HBV基因之第一iRNA劑及 靶向不同於該一或多種HBV基因之基因(例如：CD274/PD-L1基因及/或HDV基因)之iRNA劑可作為同一種醫藥組成物之一部份投藥。或者，靶向一或多種HBV基因之第一iRNA劑及靶向不同於該一或多種HBV基因之基因(例如：CD274/PD-L1基因及/或HDV基因)之第二iRNA劑可作為不同醫藥組成物之一部份投藥。
CD274或PD-L1為由CD274基因在小鼠染色體19及人類染色體9上編碼之290個胺基酸之I型穿膜蛋白質。CD274/PD-L1之表現暗示其逃避涉及慢性感染例如：病毒(包括例如：HIV、HBV、HCV及HTLV，等等)、細菌(包括例如：幽門螺桿菌(Helicobacter pylori )，等等)及寄生蟲(包括例如：曼森氏住血吸蟲(Schistosoma mansoni ))之免疫反應。
PD-L1可藉由參與PD-1或B7-1(CD80)及修飾TCR或BCR訊號傳導來影響免疫反應，但亦可傳送訊號至表現PD-L1之細胞，亦即透過PD-L1逆轉訊號傳導。表面電漿共振研究證實PD-L1與B7-1之間(親和性1.7μ M)及PD-L1與PD-1之間(親和性0.5μ M)兩種專一性及獨特性交互作用。化學交聯研究顯示，PD-L1與B7-1，如同PD-L1與PD-1，亦可透過其IgV-樣功能域交互作用。PD-L1：B7-1介面與推斷之PD-L1：PD-1介面至少有部份重疊。B7-1：PD-L1交互作用可誘發抑制訊號傳導入T細胞。由PD-L1利用B7-1黏合至CD4 T細胞上，或由B7-1利用PD-L1黏合至CD4 T細胞上，即傳送具有顯著功能之抑制訊號。由 於PD-L1及B7-1二者均表現在T細胞、B細胞、DC、與巨噬細胞上，因此此等細胞型態上之B7-1與PD-L1之間可能有雙向交互作用。此外，非造血細胞上之PD-L1可能與T細胞上之B7-1及PD-1交互作用來調節細胞(Keir ME等人2008.Annu Rev Immunol. 26：677-704)。
在人類之慢性病毒感染中，有幾組研究已顯示PD-1高度表現在HIV-專一性(PetrovasC等人2006,J.Exp.Med. 203：2281-92；Day CL等人2006,Nature 443：350-54；Trautmann L等人2006,Nat.Med. 12：1198-202)、HBV-專一性(Boettler T等人2006,J.Virol. 80：3532-40；Boni C等人2007,J.Virol. 81：4215-25)、與HCV-專一性T細胞(Urbani S等人2006,J.Virol. 80：11398-403)。在慢性感染HBV患者之周邊血液CD14+單核細胞及骨髓性DC上(Chen L等人2007,J.Immunol. 178：6634-41；Ceng L等人2006,J.Virus Hepat. 13：725-33)、及HIV患者之CD14+細胞與T細胞(Trabattoni D等人2003.Blood 101：2514-20)上之PD-L1亦向上調節。於活體外阻斷PD-LPD-L交互作用可逆轉HIV-專一性、HBV-專一性(Boni C等人2007,J.Virol. 81：4215-25)、HCV-專一性、與SIV-專一性(Velu V等人2007,J.Virol. 81：5819-28)CD8及CD4 T細胞之消耗並恢復增殖及產生細胞素(Petrovas C等人2006,J.Exp.Med. 203：2281-92；Day CL等人2006,Nature 443：350-54；Trautmann L等人2006,Nat.Med. 12：1198-202；Urbani S等人2006,J.Virol. 80：11398-403)。最近研究顯示，HCV核心(即核殼體 蛋白質)可向上調節健康供體之T細胞上之PD-1及PD-L1表現，且該PD-1之上調係由HCV核心與補體受體C1QBP交互作用所介導(Yao ZQ等人2007,Virus Immunol. 20：276-87)。
接受投與第一RNAi劑或第一與第二RNAi劑之個體可進一步接受投與一或多種其他以非-iRNA機轉發揮功能且適用於治療HBV感染之療法。可用於與本發明療法組合之療法實例包括藉由例如：加強T-細胞助手活性、B淋巴細胞成熟、抑制T-細胞壓制劑、及加強HLA第I型表現來刺激免疫系統之免疫調節劑。合適之免疫調控劑包括具有各種不同性質之干擾素，包括抗病毒、免疫調控劑、及抗增殖效應。
例如：目前慢性B型肝炎之療法為干擾素療法，其係投與罹患HBV感染病史至少6個月、肝酵素(AST及ALT)提高及血液中有主動分化之病毒(HBeAg、及/或HBV DNA陽性試驗)之個體。干擾素-α療法在約35%彼等慢性B型肝炎患者中產生長期持續緩解疾病，恢復正常肝酵素，及消除三種活性感染之標記物(HBeAg、HBV DNA、與HBsAg)。罹患急性HBV感染、末期硬化或其他嚴重醫學問題之個體通常不採用干擾素治療。
此外，干擾素療法對罹患HBV-相關硬化之患者會顯著降低肝細胞癌(HCC)比例，尤其在具有大量血清HBV DNA之患者中。罹患HBeAg-陽性代償期肝硬化之患者，在干擾素療法後之病毒與生化緩解係與存活率改善 有關。罹患慢性HBV感染之患者中，使用干擾素-α治療後HBeAg之清除係與臨床結果改善有關。
該療法之標準持續期應為16週。在標準療程結束時具有低量病毒複製之患者將可在長期治療時受到最大效益。
可用於本發明組合療法之其他醫療劑實例包括例如：抗病毒劑、核苷酸類似物、核苷類似物、反轉錄酶抑制劑(例如：泰諾福韋(tenofovir disoproxil fumarate)(TDF)、替諾福韋艾拉酚(Tenofovir alafenamide)、拉米夫定(Lamivudine)、阿德福韋酯(Adefovir dipivoxil)、恩替卡韋(Entecavir)(ETV)、喜必福(Telbivudine)、AGX-1009、恩曲他濱(emtricitabine)、克拉夫定(clevudine)、利托那韋(ritonavir)、迪夫昔(dipivoxil)、洛布卡韋(lobucavir)、泛維爾(famvir)、FTC、N-乙醯基-半胱胺酸(NAC)、PC1323、特拉奇(theradigm)-HBV、胸腺素-α、及更昔洛韋(ganciclovir))、免疫刺激劑(例如：聚乙二醇基化干擾素α 2a(PEG-IFN-α 2a)、干擾素α -2b、重組體人類介白素-7、及Toll-樣受體7(TLR7)促效劑)、醫療性疫苗(例如：GS-4774、DV-601、及TG1050)、病毒侵入抑制劑(例如：麥克樂斯(Myrcludex))、抑制HbsAg之分泌或釋出之寡核苷酸(例如：REP 9AC)、殼體抑制劑(例如：Bay41-4109及NVR-1221)、cccDNA抑制劑(例如：IHVR-25)、或其他醫療劑及/或過程，例如：肝移植、用於HBV相關疾病之化療法、上述任一者之組合。
一具體例中，本發明方法包括對患有HBV感染及/或HBV-相關疾病之個體投與反轉錄酶抑制劑。另一具體例中，本發明方法包括對患有HBV感染及/或HBV-相關疾病之個體投與反轉錄酶抑制劑及免疫刺激劑。
iRNA劑(群)與另一種醫療劑及/或治療法可能在相同時間及/或相同組合中投藥，例如：非經腸胃式，或該另一種醫療劑成為分開組成物之一部份或在分開時間點及/或採用本領域上已知或本文說明之另一種方法投藥。
本發明亦提供一種使用本發明iRNA劑及/或包含本發明iRNA劑之組成物於降低及/或抑制細胞中HBV表現之方法。其他態樣中，本發明提供一種本發明iRNA及/或包含本發明iRNA之組成物，用於降低及/或抑制細胞中HBV基因之表現。再一態樣中，提供一種以本發明iRNA及/或包含本發明iRNA之組成物於製造供降低及/或抑制細胞中HBV基因之表現之醫藥上之方法。再另一態樣中，本發明提供一種本發明iRNA及/或包含本發明iRNA之組成物，用於降低及/或抑制細胞中之HBV複製。再另一態樣中，提供一種以本發明iRNA及/或包含本發明iRNA之組成物於製造用於降低及/或抑制細胞中HBV複製之醫藥上之用途。該等方法及用途包括使細胞與本發明iRNA(例如：dsRNA)接觸並維持細胞一段足以達到HBV基因之mRNA轉錄本降解之時間，藉以抑制細胞中HBV基因之表現或抑制細胞中之HBV複製。
可採用本領域上已知之任何方法分析基因 表現之降低。例如：測定HBV表現之降低之方法可能為採用熟悉此相關技術者習知之方法測定HBV之mRNA表現程度(例如：北方墨點法、qRT-PCR)，採用熟悉此相關技術者習知之方法測定HBV之蛋白質含量(如：西方墨點法、免疫技術，流式細胞計方法、ELISA)，及/或測定HBV之生物活性。
本發明方法與用途中，細胞可能於活體外或活體內(亦即細胞可能在個體內)接觸。
適合使用本發明方法處理之細胞可為任何表現HBV基因之細胞。例如：感染HBV之細胞或包含含有HBV基因組或HBV基因之一部份之表現載體之細胞。適合用於本發明方法與用途之細胞可為哺乳動物細胞，例如：靈長類細胞(如：人類細胞或非人類靈長類細胞，例如：猴細胞或黑猩猩細胞)、非靈長類細胞(如：牛細胞、豬細胞、駱駝細胞、駱馬細胞、馬細胞、山羊細胞、兔子細胞、綿羊細胞、倉鼠細胞、天竺鼠細胞、貓細胞、狗細胞、大鼠細胞、小鼠細胞、獅子細胞、老虎細胞、熊細胞或水牛細胞)、鳥細胞(例如：鴨細胞或鵝細胞)、或鯨魚細胞。一具體例中，細胞為人類細胞，例如：人類肝細胞。
細胞中之HBV基因表現可能被抑制至少約5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、 46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或約100%，亦即至分析檢測度以下。
細胞中之HBV複製可能被抑制至少約5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或約100%，亦即至分析檢測度以下。
本發明之活體內方法與用途可包括對該個體投與包含iRNA之組成物，其中該iRNA所包括之核苷酸序列可與所治療哺乳動物之HBV基因之RNA轉錄本之至少一部份互補。當所治療之生物體為人類時，該組成物可採用本領域上已知之任何方式投藥，包括(但不限於)：經 皮下、經靜脈內、經口、經腹膜內、或非經腸胃式途徑，包括經顱內(例如：腦室內、侵入性腦內與脊髓內)、經肌內、穿皮式、呼吸道(氣霧劑)、經鼻、直腸與局部(包括頰與舌下)投藥。某些具體例中，該組成物係經皮下注射投藥。某些具體例中，該組成物係經靜脈內輸注或注射投藥。其他具體例中，該組成物係經肌內注射投藥。
有些具體例中，係經由儲積式注射法投藥。儲積式注射可依持續方式長期釋放iRNA。因此儲積式注射法可減少為了達到所需效果(例如：需要抑制HBV，或醫療或預防效應)時之投藥頻率。儲積式注射法亦可提供更穩定之血清含量。儲積式注射法可包括經皮下注射或經肌內注射。較佳具體例中，儲積式注射法為皮下注射法。
有些具體例中，係利用幫浦投藥。該幫浦可能為體外幫浦或手術植入之幫浦。某些具體例中，該幫浦為經皮下植入之滲透壓幫浦。其他具體例中，該幫浦為輸注幫浦。該輸注幫浦可能用於經靜脈內、經皮下、動脈或硬膜外輸注。較佳具體例中，該輸注幫浦為皮下輸注幫浦。其他具體例中，該幫浦為手術植入之幫浦，其可傳遞iRNA至肝臟。
投藥模式可依據是否需要局部或全身性治療，且依據所治療之區域來選擇。可選擇投藥途徑與部位來加強靶向性。
一態樣中，本發明亦提供一種抑制哺乳動物(例如：人類)之HBV基因表現之方法。本發明亦提供一 種包含靶向哺乳動物細胞中HBV基因之iRNA(例如：dsRNA)之組成物，用於抑制哺乳動物之HBV基因表現。另一態樣中，本發明提供一種靶向哺乳動物細胞之HBV基因之iRNA(例如：dsRNA)之用途，供製造抑制哺乳動物之HBV基因表現之醫藥。
該等方法與用途包括對哺乳動物(例如：人類)投與包含靶向哺乳動物細胞之HBV基因之iRNA(例如：dsRNA)之組成物，並維持該哺乳動物一段足以達到HBV基因之mRNA轉錄本降解之時間，藉以抑制哺乳動物之HBV基因表現。
可採用本領域上已知之任何方法，例如：本文說明之qRT-PCR，來分析該接受iRNA投藥之個體之周邊血液檢體之基因表現之降低。可採用本領域上已知之任何方法及採用本文說明之方法，例如：ELISA或西方墨點法，分析蛋白質產物之降低。一具體例中，可採用肝穿刺切片檢體作為組織材料，來追蹤HBV基因及/或蛋白質表現之降低。另一具體例中，以血液檢體作為組織材料，來追蹤HBV基因及/或蛋白質表現之降低。
一具體例中，採用本領域上已知5’-RACE或其修改程序來證實投與iRNA劑後，RISC於活體內介導裂解標靶(Lasham A等人(2010)Nucleic Acid Res. ,38(3)p-e19)(Zimmermann等人(2006)Nature 441：111-4)。
本發明利用下列實例進一步說明，此等實例不應構成限制性實例。本文所摘錄所有參考文獻、專利 案與公開之專利申請案，及圖示與序列表等揭示內容均已以引用之方式併入本文中。
實例 實例1. iRNA合成法
試劑來源
若本文中未明確說明試劑來源時，則此等試劑可得自任何分子生物學試劑供應商，依分子生物學應用之品質/純度標準。
轉錄本
siRNA設計
採用兩種主要因素選擇靶向HBV之siRNA設計：a)效力及b)安定性，使用與所有已知血清型之大量已公開HBV序列(A至H)達超過90%比例之完全匹配之siRNA之需求。選擇siRNA時之協調性係相對於NCBI HBV參考基因組序列NC_003977.1(GenBank Accession No.GI：21326584(SEQ ID NO：1)決定。設計、合成及於活體外篩選包含結構活性修飾之第一組siRNA，包括集中在編碼表面抗原(HbSAg)與HBV聚合酶之HBV基因組之兩個相鄰區之各種不同2’-O-甲基及2’-氟取代型態。設計、合成及篩選靶向其他標靶區之第二組siRN，該標靶區特別著重於除了編碼HbSAg與聚合酶外，還編碼X基因之SEQ ID NO：1之位置1581-1599。
未修飾之HBV正義與反義股序列之詳細列表示於表3。
經修飾之HBV正義與反義股序列之詳細列表示於表4。
siRNA合成法
HBV siRNA序列係依1μ mol規模，於Mermade 192合成儀(BioAutomation)上，使用固態擔體媒介之亞胺基磷酸酯化學所合成。該固態擔體為控制孔徑之玻璃(500A)，添加訂製之GalNAc配體或通用之固態擔體(AM biochemical)。Ancillary合成試劑、2’-F與2’-O-甲基RNA及去氧亞胺基磷酸酯得自Thermo-Fisher(Milwaukee,WI)及Hongene(China)。利用對應之亞胺基磷酸酯引進2’F2’-O-甲基、GNA(二醇核酸)、5’磷酸酯及無鹼基修飾。與3’GalNAc接合之單股之合成法係於經GalNAc修飾之CPG擔體上進行。採用訂製之CPG通用固態擔體來合成反義單股。所有亞胺基磷酸酯(100mM乙腈溶液)使用5-乙基硫-1H-四唑(ETT)作為活化劑(0.6M乙腈溶液)之偶合時間為5分鐘。使用50mM 3-((二甲基胺基-亞甲基)胺基)-3H-1,2,4-二噻唑-3-硫酮(DDTT，得自Chemgenes(Wilmington,MA,USA))於無水乙腈/吡啶(1：1 v/v)中之溶液產生硫代磷酸酯鏈結基。氧化時間為3分鐘。所有序列在最後脫除DMT基團(“去除DMT”)後即合成。
當完成固相合成法時，從固態擔體上裂解寡核糖核苷酸，並於密封之96-深孔盤中，使用200μL甲基胺水溶液試劑，於60℃下20分鐘，以脫除保護基。裂解步驟及脫除保護基步驟結束後，讓合成盤回升室溫，添 加1mL乙腈：乙醇混合物(9：1)讓沉澱析出。分析盤於-80℃下冷卻2小時，藉助多注吸管小心傾析上清液。寡核苷酸集結塊再懸浮於20mM NaOAc緩衝液中，使用5mL HiTrap分子篩析管柱(GE Healthcare)，於加裝A905自動取樣器與Frac 950溶出液收集器之AKTA純化系統上脫鹽。於96-孔盤中收集脫鹽之樣本。採用LC-MS分析來自各序列之樣本，判別同一性，以UV(260nm)定量，及採用IEX層析法測定所選擇一組樣本之純度。
於Tecan液體自動操作器上黏合HBV單股。於96孔盤中組合正義與反義單股之等莫耳混合物並黏合。互補之單股組合後，密封96-孔盤，於100℃烘箱中加熱10分鐘，並經過2-3小時慢慢回升至室溫。於1X PBS中校正各雙螺旋濃度至10μ M。
實例2. 活體外篩選siRNA雙螺旋
細胞培養與轉染
取Cos7細胞(ATCC,Manassas,VA)於37℃與5% CO2 氛圍下，於補充10% FBS之DMEM(ATCC)中生長至接近匯合，然後使用胰蛋白酶處理，從培養板釋出細胞。使用脂染胺(Lipofectamine)2000(Invitrogen,Carlsbad CA.目錄# 11668-019)，讓在包含約1.1kb HBV基因組序列之psiCHECK2質體中所產生之Dual-Glo®螢光素酶構築體轉染至約15×104 個細胞中。在96孔盤之各孔中，添加0.2μ l脂染胺至含10ng質體載體之14.8μ l Opti-MEM中，並於室溫下複合15分鐘。然後添加混合物至已再懸浮於80μ l 新鮮完全培養基之細胞中。約24小時後，排除培養基，使用siRNA再轉染細胞。讓各siRNA轉染至已先經過psiCHECK2-HBV載體(其已與siRNA完全匹配)轉染之細胞中。siRNA之轉染法係在添加14.8μ l Opti-MEM加0.2μ l脂染胺RNAiMax(Invitrogen,Carlsbad CA.目錄# 13778-150)至96孔盤中每孔5μ l siRNA雙螺旋中，於室溫下培養15分鐘。然後添加混合物至已先經過psiCHECK2-HBV質體(其已與siRNA序列完全匹配)轉染之細胞中。細胞培養24小時後，測定螢光素酶。
以10nM及0.01nM最終雙螺旋濃度進行單劑量實驗。
Dual-Glo ® 螢光素酶分析法
siRNA轉染24小時後，測定螢火蟲(轉染對照組)與海腎(Rinella)(與HBV標靶序列稠合)螢光素酶。首先，排除細胞之培養基。然後在各孔中添加等於培養基體積之75μ l Dual-Glo® 螢光素酶試劑並混合，來測定螢火蟲螢光素酶活性。於室溫下培養混合物30分鐘後，於Spectramax(Molecular Devices)上測定發光度(500nm)，以檢測螢火蟲螢光素酶訊號。海腎螢光素酶活性測定法為添加75μ l室溫之Dual-Glo®Stop & Glo®試劑至各孔中，分析盤培養10-15分鐘後，再度測定發光度，以測定海腎螢光素酶訊號。以Dual-Glo®Stop & Glo®試劑中止螢火蟲螢光素酶訊號，並維持海腎螢光素酶反應之發光。以各孔之海腎(HBV)訊號相對於螢火蟲(對照組)訊號校正，測定siRNA 活性。然後相對於經過相同載體轉染但未經過siRNA處理之細胞或經過非靶向siRNA處理之細胞分析siRNA活性程度。所有轉染法均進行n=2或更多。
表5顯示經過所指定HBV iRNA轉染之Cos7細胞之單劑量篩選結果。數據係以相對於陰性對照組之mRNA殘留百分比表示。
Figure 104136995-A0202-12-0262-1502
Figure 104136995-A0202-12-0263-1503
Figure 104136995-A0202-12-0264-1504
Figure 104136995-A0202-12-0265-1505
Figure 104136995-A0202-12-0266-1506
Figure 104136995-A0202-12-0267-1507
Figure 104136995-A0202-12-0268-1508
Figure 104136995-A0202-12-0269-1509
Figure 104136995-A0202-12-0270-1510
Figure 104136995-A0202-12-0271-1511
Figure 104136995-A0202-12-0272-1512
Figure 104136995-A0202-12-0272-1513
Figure 104136995-A0202-12-0273-1514
Figure 104136995-A0202-12-0274-1515
Figure 104136995-A0202-12-0275-1516
Figure 104136995-A0202-12-0276-1517
Figure 104136995-A0202-12-0277-1518
Figure 104136995-A0202-12-0278-1519
Figure 104136995-A0202-12-0279-1520
Figure 104136995-A0202-12-0280-1521
Figure 104136995-A0202-12-0281-1522
Figure 104136995-A0202-12-0282-1523
Figure 104136995-A0202-12-0283-1524
Figure 104136995-A0202-12-0284-1525
Figure 104136995-A0202-12-0285-1526
Figure 104136995-A0202-12-0286-1527
實例3. 其他siRNA雙螺旋之合成與活體外篩選
如上述合成其他靶向HBV基因組之iRNA分子。其他未經修飾之HBV正義與反義股序列之詳細列表示於表6，及經修飾之HBV正義與反義股序列之詳細列表示於表7。
Figure 104136995-A0202-12-0287-1528
Figure 104136995-A0202-12-0288-1529
此等雙螺旋之單劑量篩選法係藉由雙螺旋轉染至HepG2.215及Hep3B細胞中及使用一對引子/探針來檢測HBV P開放讀碼框(ORF)RNA(PORF-1_A及PORF-1_B)及/或引子組來檢測HBV S ORF RNA(SORF-2_A及SORF-2_B)測定HBV病毒RNA進行二重覆。於HepG2.2.15細胞中之分析結果示於表8及於Hep3B細胞中之分析結果示於表9。
Figure 104136995-A0202-12-0290-1530
Figure 104136995-A0202-12-0291-1531
亦採用去污溶酶體安定性分析法與胞質液安定性分析法等兩種分析法分析此等雙螺旋之次組合之活體外代謝安定性。
去污溶酶體安定性分析法係取大鼠肝去污溶酶體(Xenotech訂製產品PR14044)解凍至室溫，稀釋成含0.5單位/mL酸性磷酸酶之20mM檸檬酸鈉pH 5.0緩衝液。24小時樣本製法係於微離心管中混合100μ L 0.5單位/mL酸性磷酸酶去污溶酶體與25μ L 0.4mg/mL siRNA樣本，並於設定在37℃及300rpm之Eppendorf Thermomixer中培養24小時。培養24小時後，添加300μ L Phenomenex溶胞加載緩衝液(Phenomenex Lysis Loading buffer)(目錄# ALO-8498)及12.5μ L 0.4mg/mL內標準物siRNA至各樣本中。0小時時間點樣本製法為混合100μ L 0.5單位/mL酸性磷酸酶去污溶酶體與25μ L 0.4mg/mL siRNA樣本、300μ L Phenomenex溶胞加載緩衝液、與12.5μ L 0.4mg/mL內標準物siRNA。使用Phenomenex Clarity OTX Starter Kit(目錄# KSO-8494)，從24小時樣本及0小時樣本中萃取siRNA。萃取樣本後，轉移至微離心管中，使用Labconco CentriVap Concentrator(目錄# 7810010)乾燥至乾。樣本再度懸浮於500μ L無核酸酶之水中。取50μ L各樣本於Agilent Technologies 1260 Infinity Binary LC偶聯Agilent Technologies 6130 Quadrupole LC/MS上操作。採用四元幫浦法，依0.400mL/min及下列時間表操作12.20分鐘：
Figure 104136995-A0202-12-0293-1532
 採用二元幫浦法，依0.700mL/min及下列時間表操作12.20分鐘：
Figure 104136995-A0202-12-0293-1533
 左欄及右欄均設定在75.00℃。測定260nm波長下之UV訊號。採用下列公式計算各股之殘留百分比：股殘留%=100*(波峰面積股24h /波峰面積股0h *(波峰面積標準物24h /波峰面積標準物0h ))。
胞質液安定性分析法係取雌性大鼠肝胞質液(Xenotech目錄# R1500.C)解凍至室溫，於50mM Tris緩 衝液：HCl pH 7.4、5mM MgCl2 中稀釋成含1mg/mL。24小時樣本製法係於微離心管中混合100μ L之1mg/mL胞質液與25μ L 0.4mg/mL siRNA樣本，並於設定在37℃及300rpm之Eppendorf Thermomixer中培養24小時。培養24小時後，添加300μ L Phenomenex溶胞加載緩衝液(Phenomenex Lysis Loading buffer)(目錄# ALO-8498)及12.5μ L 0.4mg/mL內標準物siRNA至各樣本中。0小時時間點樣本製法為混合100uL 1mg/mL胞質液與25uL 0.4mg/mL siRNA樣本、300μ L Phenomenex溶胞加載緩衝液、與12.5μ L 0.4mg/mL內標準物siRNA。使用Phenomenex Clarity OTX Starter Kit(目錄# KSO-8494)，從24小時樣本及0小時樣本中萃取siRNA。萃取樣本後，轉移至微離心管中，使用Labconco CentriVap Concentrator(目錄# 7810010)乾燥至乾。樣本再度懸浮於500μ L無核酸酶之水中。取50μ L各樣本於Agilent Technologies 1260 Infinity Binary LC偶聯Agilent Technologies 6130 Quadrupole LC/MS上操作。採用四元幫浦法，依0.400mL/min及下列時間表操作12.20分鐘：
Figure 104136995-A0202-12-0294-1534
 採用二元幫浦法，依0.700mL/min及下列時間表操作12.20分鐘：
Figure 104136995-A0202-12-0295-1535
 左欄及右欄均設定在75.00℃。測定260nm波長下之UV訊號。採用下列公式計算各股之殘留百分比：股殘留%=100*(波峰面積股24h /波峰面積股0h *(波峰面積標準物24h /波峰面積標準物0h ))。
24小時去污溶酶體安定性分析法結果示於表10，及24小時胞質液安定性分析法結果示於表11。
Figure 104136995-A0202-12-0296-1536
Figure 104136995-A0202-12-0297-1537
實例4. 其他siRNA雙螺旋之合成法與篩選法
如上述設計及合成其他靶向HBV基因組之iRNA分子。其他未經修飾HBV正義與反義股序列之詳細列表示於表12，及經修飾HBV正義與反義股序列之詳細列表示於表13。
Figure 104136995-A0202-12-0298-1538
Figure 104136995-A0202-12-0299-1539
此等iRNA雙螺旋之單劑量初篩選法係使用如上述Dual-Glo® 螢光素酶分析法進行。此篩選法於經過所指定HBV iRNA轉染之Cos7細胞中之結果示於表14中。數據係以24小時時相對於陰性對照組之殘留mRNA百分比表示。
Figure 104136995-A0202-12-0300-1540
亦如上述使用Dual-Glo® 螢光素酶分析法分析此等雙螺旋對緘默病毒RNA之劑量效應。此等分析法所使用雙螺旋劑量為50nM、8.333333333nM、1.388888889nM、0.231481481nM、0.038580247nM、0.006430041nM、0.001071674nM、0.000178612nM、2.97687×10-5 nM、4.96145×10-6 nM、8.26909×10-7 nM、及1.37818E×10-7 nM，其等代表雙螺旋從50nM開始經過1至6次稀釋之12種劑量。此篩選法於經過所指定HBV iRNA轉染之Cos7細胞中之結果示於表15。數據係以24小時時相對於陰性對照組之殘留mRNA百分比表示。
Figure 104136995-A0202-12-0301-1541
亦分析此等雙螺旋之活體外效力及藥效。特定言之，測定雙螺旋在經過轉染之HepG2.2.15及Hep3B細胞溶胞物中對緘默病毒RNA之劑量效應及在HepG2.2.15細胞上清液中對緘默HBsAg之劑量效應。細胞係經過50nM至1×10-7 nM範圍內之12種劑量之雙螺旋轉染，並在轉染72小時後，使用一對引子/探針檢測P ORF及/或S ORF測定病毒RNA量。使用ELISA分析法測定HBsAg量。
在HepG2.2.15細胞中使用所指定雙螺旋對P ORF病毒RNA緘默化結果示於表16。在HepG2.2.15細胞中使用所指定雙螺旋對S ORF病毒RNA緘默化結果示於表17。於HepG2.2.15細胞中之HBsAg緘默化結果示於表18。
於Hep3B細胞中使用所指定雙螺旋對P ORF病毒RNA緘默化結果示於表19。
Figure 104136995-A0202-12-0303-1542
Figure 104136995-A0202-12-0304-1543
Figure 104136995-A0202-12-0304-1544
Figure 104136995-A0202-12-0305-1545
亦如上述，採用去污溶酶體安定性分析法與胞質液安定性分析法等兩種分析法分析此等雙螺旋之活體外安定性。此等分析法結果示於表20。
Figure 104136995-A0202-12-0306-1546
亦於HepG2.215細胞中進行此等雙螺旋之各種不同組合之劑量-效應篩選法。用於分析法之雙螺旋劑量為50nM、8.333333333nM、1.388888889nM、0.231481481nM、0.038580247nM、0.006430041nM、0.001071674nM、0.000178612nM、2.97687×10-5 nM、4.96145×10-6 nM、8.26909×10-7 nM、及1.37818E×10-7 nM，其等代表雙螺旋從50nM開始經過1至6次稀釋之12種劑量。轉染此等雙螺旋72小時後，如上述測定病毒RNA(P ORF及S ORF)含量及HBsAg分泌量。此等分析法結果示於表21。
Figure 104136995-A0202-12-0307-1547
實例5. 其他siRNA雙螺旋之合成與活體外篩選
依上述設計及合成其他靶向HBV基因組之X ORF之iRNA分子。其他未經修飾之HBV正義與反義股序列之詳細列表示於表22。其他經修飾之HBV正義與反義股序列之詳細列表示於表23。
Figure 104136995-A0202-12-0309-1548
Figure 104136995-A0202-12-0310-1549
Figure 104136995-A0202-12-0311-1550
Figure 104136995-A0202-12-0312-1551
此等雙螺旋之單劑量篩選法係於Cos7細胞中，依1nM與50nM，使用上述Dual-Glo® 螢光素酶分析法進行。分析結果示於表24。
Figure 104136995-A0202-12-0314-1552
依據此等分析法，在HBV X ORF中選擇靶向5個位點(GenBank Accession No.NC_003977.1之核苷酸1551、1577、1580、1806、與1812)之RNAi劑，供最優化，並設計及合成其他製劑。如上述於活體外分析法中分析此等其他製劑。其他靶向HBV X ORF之未經修飾正義與反義股序列之詳細列表示於表25。其他靶向HBV X ORF之經修飾正義與反義股序列之詳細列表示於表26。
亦採用AAV-HBV小鼠模式(參見例如：Yang等人(2014)Cell and Mol Immunol 11：71)分析此等iRNA劑之活體內效力。此小鼠模式在感染帶有可複製之HBV基因組之重組體腺-相關病毒(AAV)後，具有持續性HBV病毒血症。此等小鼠之HBV基因之肝表現擬似人類之HBV感染，且此等小鼠具有顯著肝發炎及肝損傷，出現ALT含量升高、纖維化、及硬化等病癥。
對此等AAV-HBV小鼠經皮下投與單劑3mg/kg之AD-66808、AD-66809、AD-66810、AD-66811、AD-66812、AD-66813、AD-66814、AD-66815、AD-66816、及AD-66817，並在投藥前及投藥後第14/15天測定動物血清中HBsAg含量。此等實驗結果示於第2圖及表27，並證實此等製劑在投與單劑後可降低血清中HBsAg含量。表27亦提供以相同RNAi劑，於經過所指定HBV iRNA轉染之Cos7細胞中，採用如上述Dual-Glo® 螢光素酶分析法進行單劑量篩選法之結果。數據係以24小時時相對於陰性對照組之mRNA殘留百分比表示。
Figure 104136995-A0305-02-0318-1
Figure 104136995-A0202-12-0317-1554
Figure 104136995-A0305-02-0320-2
實例6. siRNA雙螺旋之活體內篩選法
由一小組前導iRNA劑採用上述AAV-HBV小鼠模式分析活體內效力。對AAV-HBV小鼠經皮下投與單劑3mg/kg之AD-66019,AD-65375、AD-65407、AD-65377、AD-66111、AD-65421、或AD-66110，並在投藥前及投藥後第5天及第10天測定動物血清中HBsAg含量。對照組則由AAV-HBV小鼠接受投與一劑3mg/kg之靶向小鼠/大鼠轉甲狀腺素(mrTTR)之dsRNA。此等實驗結果示於第3圖，並證實在投與單劑此等製劑後可降低血清中HBsAg含量。
第4圖係說明此等動物在接受投與單劑3mg/kg後亦於第5天及第10天測定其相對於投藥前HBsAg之殘留百分比之圖示。此等實驗結果示於第4圖。第4圖亦說明投藥後第10天之HBsAG相對於動物接受3mg/kg靶向小鼠/大鼠轉甲狀腺素(transtherytin)(mrTTR)之對照dsRNA投藥後第10天之HBsAG之殘留百分比。
至少一部份依據上述活體外與活體內分析結果，選擇緘默3HBV RNA之AD-65403及緘默X基因之AD-66810作為用於單方療法或組合療法之候選藥物(DC)。
第5圖證實感染HBV之AAV-HBV小鼠模式中，單劑3mg/kg之AD-65403即可達到強力且專一性地減弱HBsAg。特定言之，經皮下投與單劑3mg/kg之AD-65403可使HBsAg含量下降達3.9 log10 ，投與單劑5至10天後，平均HBsAg下降1.8 log10 。
第6A圖與6B證實感染HBV之AAV-HBV小鼠模式中，經皮下投與單劑0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、或9mg/kg之AD-66810可達到強力且專一性減弱HBsAg，尤其在高劑量AD-66810下。血清中HBsAg之下降百分比係以標準規度示於第6A圖，及以log10 規度示於第6B圖。第7圖證實感染HBV之AAV-HBV小鼠模式中，每週三次經皮下投與劑量0.3mg/kg之AD-66810後，可達到強力且專一性減弱HBsAg且持續4個月以上。
實例7. 使用靶向HBV之組合製劑治療HBV感染
由一小組本發明iRNA劑採用上述 AAV-HBV小鼠模式分析活體內效力。對AAV-HBV小鼠投與一劑或多劑AD-65403及AD-66810，其係單獨或彼此組合投藥。投藥療程實例包括單劑3mg/kg總iRNA劑量之AD-65403、AD-66810、或AD-65403與AD-66810之組合(亦即各iRNA劑為1.5mg/kg，總計3mg/kg之siRNA，呈混合物或分成兩個劑量投藥)；或投與單劑量0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、或9mg/kg總iRNA劑劑量之AD-65403、AD-66810、或AD-65403與AD-66810之組合。多劑量療程實例包括例如：依單劑量療程實例中所提供任何劑量程度投與三週劑量，一週一次。亦依本領域例行作法投與適當對照iRNA劑作為對照組。
在投藥前及在投藥後預定時間間隔下(例如：投藥後每5天)測定動物血清中HBsAg含量，直到HbsAg含量恢復至基線為止。投與AD-65403、AD-66810、或AD-65403與AD-66810之組合之結果可持續且專一性減弱血清HbsAg。
實例8. 使用靶向B型肝炎病毒之iRNA製劑治療HDV感染
δ型肝炎病毒(HDV)係一種缺陷型RNA病毒，其需要HBV協助新病毒粒子之複製與組合。因此，僅在出現活性HBV感染時才會感染HDV。HDV基因組僅包含一種主動轉錄之開放讀碼框，其編碼兩種D型肝炎抗原同型。涉及磷酸化與異戊二烯化之轉譯後修飾之小型及大型δ型抗原(S-HDAg與L-HDAg)分別賦與此等抗原之專一 性。HBV之有效治療亦緩解HDV感染。
HDV黑猩猩模式係已知者。由一小組本發明iRNA劑採用HDV黑猩猩模式或其他適當模式分析活體內效力。感染HDV之黑猩猩接受投與一劑或多劑之AD-65403與AD-66810，其係單獨或彼此組合投藥。投藥療程實例包括單劑3mg/kg總iRNA劑量之AD-65403、AD-66810、或AD-65403與AD-66810之組合(亦即各iRNA劑為1.5mg/kg，總計3mg/kg之siRNA，呈混合物或分成兩個劑量投藥)；或投與單劑量0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、或9mg/kg總iRNA劑劑量之AD-65403、AD-66810、或AD-65403與AD-66810之組合。多劑量療程實例包括例如：依單劑量療程實例中所提供任何劑量程度投與三週劑量，一週一次。亦依本領域例行作法投與適當對照iRNA劑作為對照組。
在投藥前及在投藥後預定時間間隔下(例如：投藥後每5天)測定動物血清中S-HDAg、L-HDAg、與HDV RNA中一者或多者之含量，可視需要與HbsAg組合，以監測抗原或RNA含量。投與AD-65403、AD-66810、或AD-65403與AD-66810之組合之結果可持續且專一性減弱血清HbsAg，造成緩解HDV，此點可由例如：S-HDAg、L-HDAg、與HDV RNA中之一或多者統計上顯著降低來證實。此等結果證實投與AD-65403與AD-66810中之一或二者可以有效治療HDV。
同等物
熟悉此相關技術者咸了解，或可採用例行實驗即可確認許多本文所說明之專一性具體例中及方法之同等物。此等同等物均意圖包括在下列申請專利範圍中。
<110> 阿尼拉製藥公司(ALNYLAM PHARMACEUTICALS,INC.)
<120> B型肝炎病毒(HBV)iRNA組成物及其用途方法 (HEPATITIS B VIRUS (HBV) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF)
<140> 104136995
<141> 2015-11-10
<150> 62/077,799
<151> 2014-11-10
<150> 62/077,672
<151> 2014-11-10
<150> 62/137,464
<151> 2015-03-24
<160> 1292
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 3215
<212> DNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 1
Figure 104136995-A0305-02-0325-3
Figure 104136995-A0202-12-0324-1557
Figure 104136995-A0202-12-0325-1558
<210> 2
<211> 3215
<212> DNA
<213> B型肝炎病毒
<400> 2
Figure 104136995-A0202-12-0325-1559
Figure 104136995-A0202-12-0326-1560
Figure 104136995-A0202-12-0327-1561
<210> 3
<211> 3215
<212> DNA
<213> B型肝炎病毒
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (2768)..(2768)
<223> a,c,t,g，未知物或其他
<400> 3
Figure 104136995-A0202-12-0327-1562
Figure 104136995-A0202-12-0328-1563
Figure 104136995-A0202-12-0329-1564
<210> 4
<211> 3215
<212> DNA
<213> B型肝炎病毒
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (448)..(448)
<223> a,c,t,g，未知物或其他
<400> 4
Figure 104136995-A0202-12-0330-1565
Figure 104136995-A0202-12-0331-1566
<210> 5
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 5
Figure 104136995-A0202-12-0332-1567
<210> 6
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 6
Figure 104136995-A0202-12-0332-1568
<210> 7
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 7
Figure 104136995-A0202-12-0332-1569
<210> 8
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 8
Figure 104136995-A0202-12-0333-1570
<210> 9
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 9
Figure 104136995-A0202-12-0333-1571
<210> 10
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 10
Figure 104136995-A0202-12-0333-1572
<210> 11
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 11
Figure 104136995-A0202-12-0333-1573
<210> 12
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 12
Figure 104136995-A0202-12-0334-1574
<210> 13
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 13
Figure 104136995-A0202-12-0334-1575
<210> 14
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 14
Figure 104136995-A0202-12-0334-1576
<210> 15
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 15
Figure 104136995-A0202-12-0334-1577
<210> 16
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 16
Figure 104136995-A0202-12-0335-1578
<210> 17
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 17
Figure 104136995-A0202-12-0335-1579
<210> 18
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 18
Figure 104136995-A0202-12-0335-1580
<210> 19
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 19
Figure 104136995-A0202-12-0335-1581
<210> 20
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 20
Figure 104136995-A0202-12-0336-1582
<210> 21
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 21
Figure 104136995-A0202-12-0336-1583
<210> 22
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 22
Figure 104136995-A0202-12-0336-1584
<210> 23
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 23
Figure 104136995-A0202-12-0336-1585
<210> 24
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 24
Figure 104136995-A0202-12-0337-1586
<210> 25
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 25
Figure 104136995-A0202-12-0337-1587
<210> 26
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 26
Figure 104136995-A0202-12-0337-1588
<210> 27
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 27
Figure 104136995-A0202-12-0337-1589
<210> 28
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 28
Figure 104136995-A0202-12-0338-1590
<210> 29
<211> 1553
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 29
Figure 104136995-A0202-12-0338-1591
Figure 104136995-A0202-12-0339-1592
<210> 30
<211> 1553
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 30
Figure 104136995-A0202-12-0339-1593
Figure 104136995-A0202-12-0340-1594
<210> 31
<211> 3653
<212> DNA
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 31
Figure 104136995-A0202-12-0340-1595
Figure 104136995-A0202-12-0341-1596
Figure 104136995-A0202-12-0342-1597
<210> 32
<211> 3653
<212> DNA
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 32
Figure 104136995-A0202-12-0342-1598
Figure 104136995-A0202-12-0343-1599
Figure 104136995-A0202-12-0344-1600
<210> 33
<211> 1080
<212> DNA
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 33
Figure 104136995-A0202-12-0345-1601
<210> 34
<211> 1080
<212> DNA
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 34
Figure 104136995-A0202-12-0345-1602
Figure 104136995-A0202-12-0346-1603
<210> 35
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 35
Figure 104136995-A0202-12-0346-1604
<210> 36
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 36
Figure 104136995-A0202-12-0347-1605
<210> 37
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 37
Figure 104136995-A0202-12-0347-1606
<210> 38
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 38
Figure 104136995-A0202-12-0347-1607
<210> 39
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 39
Figure 104136995-A0202-12-0347-1608
<210> 40
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 40
Figure 104136995-A0202-12-0348-1609
<210> 41
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 41
Figure 104136995-A0202-12-0348-1610
<210> 42
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 42
Figure 104136995-A0202-12-0348-1611
<210> 43
<211> 16
<212> PRT
<213> 未知物
<220>
<221> 來源
<223> /註="未知物說明：RFGF肽"
<400> 43
Figure 104136995-A0202-12-0348-1612
<210> 44
<211> 11
<212> PRT
<213> 未知物
<220>
<221> 來源
<223> /註="未知物說明：RFGF類似物肽"
<400> 44
Figure 104136995-A0202-12-0349-1613
<210> 45
<211> 13
<212> PRT
<213> 人類免疫缺陷病毒
<400> 45
Figure 104136995-A0202-12-0349-1614
<210> 46
<211> 16
<212> PRT
<213> 果蠅屬(Drosophila sp.)
<400> 46
Figure 104136995-A0202-12-0349-1615
<210> 47
<211> 1
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 47
Figure 104136995-A0202-12-0349-1616
<210> 48
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 48
Figure 104136995-A0202-12-0350-1617
<210> 49
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 49
Figure 104136995-A0202-12-0350-1618
<210> 50
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 50
Figure 104136995-A0202-12-0350-1619
<210> 51
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 51
Figure 104136995-A0202-12-0350-1620
<210> 52
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 52
Figure 104136995-A0202-12-0351-1621
<210> 53
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 53
Figure 104136995-A0202-12-0351-1622
<210> 54
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 54
Figure 104136995-A0202-12-0351-1623
<210> 55
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 55
Figure 104136995-A0202-12-0352-1624
<210> 56
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 56
Figure 104136995-A0202-12-0352-1625
<210> 57
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 57
Figure 104136995-A0202-12-0352-1626
<210> 58
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 58
Figure 104136995-A0202-12-0352-1627
<210> 59
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 59
Figure 104136995-A0202-12-0353-1628
<210> 60
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 60
Figure 104136995-A0202-12-0353-1629
<210> 61
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 61
Figure 104136995-A0202-12-0353-1630
<210> 62
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 62
Figure 104136995-A0202-12-0353-1631
<210> 63
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 63
Figure 104136995-A0202-12-0354-1632
<210> 64
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 64
Figure 104136995-A0202-12-0354-1633
<210> 65
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 65
Figure 104136995-A0202-12-0354-1634
<210> 66
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 66
Figure 104136995-A0202-12-0354-1635
<210> 67
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 67
Figure 104136995-A0202-12-0355-1636
<210> 68
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 68
Figure 104136995-A0202-12-0355-1637
<210> 69
<211> 7
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 69
Figure 104136995-A0202-12-0355-1638
<210> 70
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 70
Figure 104136995-A0202-12-0355-1639
<210> 71
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 71
Figure 104136995-A0202-12-0356-1640
<210> 72
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 72
Figure 104136995-A0202-12-0356-1641
<210> 73
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 73
Figure 104136995-A0202-12-0356-1642
<210> 74
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 74
Figure 104136995-A0202-12-0356-1643
<210> 75
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 75
Figure 104136995-A0202-12-0357-1644
<210> 76
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 76
Figure 104136995-A0202-12-0357-1645
<210> 77
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 77
Figure 104136995-A0202-12-0357-1646
<210> 78
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 78
Figure 104136995-A0202-12-0357-1647
<210> 79
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 79
Figure 104136995-A0202-12-0358-1648
<210> 80
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 80
Figure 104136995-A0202-12-0358-1649
<210> 81
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 81
Figure 104136995-A0202-12-0358-1650
<210> 82
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 82
Figure 104136995-A0202-12-0358-1651
<210> 83
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 83
Figure 104136995-A0202-12-0359-1652
<210> 84
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 84
Figure 104136995-A0202-12-0359-1653
<210> 85
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 85
Figure 104136995-A0202-12-0359-1654
<210> 86
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 86
Figure 104136995-A0202-12-0359-1655
<210> 87
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 87
Figure 104136995-A0202-12-0360-1656
<210> 88
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 88
Figure 104136995-A0202-12-0360-1657
<210> 89
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 89
Figure 104136995-A0202-12-0360-1658
<210> 90
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> 註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 90
Figure 104136995-A0202-12-0361-1659
<210> 91
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 91
Figure 104136995-A0202-12-0361-1660
<210> 92
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 92
Figure 104136995-A0202-12-0361-1661
<210> 93
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 93
Figure 104136995-A0202-12-0362-1662
<210> 94
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 94
Figure 104136995-A0202-12-0362-1663
<210> 95
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 95
Figure 104136995-A0202-12-0362-1664
<210> 96
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 96
Figure 104136995-A0202-12-0362-1665
<210> 97
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 97
Figure 104136995-A0202-12-0363-1666
<210> 98
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 98
Figure 104136995-A0202-12-0363-1667
<210> 99
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 99
Figure 104136995-A0202-12-0363-1668
<210> 100
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 100
Figure 104136995-A0202-12-0363-1669
<210> 101
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 101
Figure 104136995-A0202-12-0364-1670
<210> 102
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 102
Figure 104136995-A0202-12-0364-1671
<210> 103
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 103
Figure 104136995-A0202-12-0364-1672
<210> 104
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 104
Figure 104136995-A0202-12-0364-1673
<210> 105
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 105
Figure 104136995-A0202-12-0365-1674
<210> 106
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 106
Figure 104136995-A0202-12-0365-1675
<210> 07
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 107
Figure 104136995-A0202-12-0365-1676
<210> 108
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 108
Figure 104136995-A0202-12-0365-1677
<210> 109
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 109
Figure 104136995-A0202-12-0366-1678
<210> 110
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 110
Figure 104136995-A0202-12-0366-1679
<210> 111
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 111
Figure 104136995-A0202-12-0366-1680
<210> 112
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 112
Figure 104136995-A0202-12-0366-1681
<210> 113
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 113
Figure 104136995-A0202-12-0367-1682
<210> 114
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 114
Figure 104136995-A0202-12-0367-1683
<210> 115
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 115
Figure 104136995-A0202-12-0367-1684
<210> 116
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 116
Figure 104136995-A0202-12-0367-1685
<210> 117
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 117
Figure 104136995-A0202-12-0368-1686
<210> 118
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 118
Figure 104136995-A0202-12-0368-1687
<210> 119
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 119
Figure 104136995-A0202-12-0368-1688
<210> 120
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 120
Figure 104136995-A0202-12-0368-1689
<210> 121
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 121
Figure 104136995-A0202-12-0369-1690
<210> 122
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 122
Figure 104136995-A0202-12-0369-1691
<210> 123
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 123
Figure 104136995-A0202-12-0369-1692
<210> 124
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 124
Figure 104136995-A0202-12-0370-1693
<210> 125
<211> 1
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 125
Figure 104136995-A0202-12-0370-1694
<210> 126
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 126
Figure 104136995-A0202-12-0370-1695
<210> 127
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 127
Figure 104136995-A0202-12-0370-1696
<210> 128
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 128
Figure 104136995-A0202-12-0371-1697
<210> 129
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 129
Figure 104136995-A0202-12-0371-1698
<210> 130
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 130
Figure 104136995-A0202-12-0371-1699
<210> 131
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 131
Figure 104136995-A0202-12-0371-1700
<210> 132
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 132
Figure 104136995-A0202-12-0372-1701
<210> 133
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 133
Figure 104136995-A0202-12-0372-1702
<210> 134
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 134
Figure 104136995-A0202-12-0372-1703
<210> 135
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 135
Figure 104136995-A0202-12-0373-1704
<210> 136
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 136
Figure 104136995-A0202-12-0373-1705
<210> 137
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 137
Figure 104136995-A0202-12-0373-1706
<210> 138
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 138
Figure 104136995-A0202-12-0373-1707
<210> 139
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 139
Figure 104136995-A0202-12-0374-1708
<210> 140
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 140
Figure 104136995-A0202-12-0374-1709
<210> 141
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 141
Figure 104136995-A0202-12-0374-1710
<210> 142
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 142
Figure 104136995-A0202-12-0374-1711
<210> 143
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 143
Figure 104136995-A0202-12-0375-1712
<210> 144
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 144
Figure 104136995-A0202-12-0375-1713
<210> 145
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 145
Figure 104136995-A0202-12-0375-1714
<210> 146
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 146
Figure 104136995-A0202-12-0375-1715
<210> 147
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 147
Figure 104136995-A0202-12-0376-1716
<210> 148
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 148
Figure 104136995-A0202-12-0376-1717
<210> 149
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 149
Figure 104136995-A0202-12-0376-1718
<210> 150
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 150
Figure 104136995-A0202-12-0376-1719
<210> 151
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 151
Figure 104136995-A0202-12-0377-1720
<210> 152
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 152
Figure 104136995-A0202-12-0377-1721
<210> 153
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 153
Figure 104136995-A0202-12-0377-1722
<210> 154
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 154
Figure 104136995-A0202-12-0377-1723
<210> 155
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 155
Figure 104136995-A0202-12-0378-1724
<210> 156
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 156
Figure 104136995-A0202-12-0378-1725
<210> 157
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 157
Figure 104136995-A0202-12-0378-1726
<210> 158
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 158
Figure 104136995-A0202-12-0378-1727
<210> 159
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 159
Figure 104136995-A0202-12-0379-1728
<210> 160
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 160
Figure 104136995-A0202-12-0379-1729
<210> 161
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 161
Figure 104136995-A0202-12-0379-1730
<210> 162
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 162
Figure 104136995-A0202-12-0379-1731
<210> 163
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 163
Figure 104136995-A0202-12-0380-1732
<210> 164
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 164
Figure 104136995-A0202-12-0380-1733
<210> 165
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 165
Figure 104136995-A0202-12-0380-1734
<210> 166
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 166
Figure 104136995-A0202-12-0380-1735
<210> 167
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 167
Figure 104136995-A0202-12-0381-1736
<210> 168
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 168
Figure 104136995-A0202-12-0381-1737
<210> 169
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 169
Figure 104136995-A0202-12-0381-1738
<210> 170
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 170
Figure 104136995-A0202-12-0382-1739
<210> 171
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 171
Figure 104136995-A0202-12-0382-1740
<210> 172
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 172
Figure 104136995-A0202-12-0382-1741
<210> 173
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 173
Figure 104136995-A0202-12-0382-1742
<210> 174
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 174
Figure 104136995-A0202-12-0383-1743
<210> 175
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 175
Figure 104136995-A0202-12-0383-1744
<210> 176
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 176
Figure 104136995-A0202-12-0383-1745
<210> 177
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 177
Figure 104136995-A0202-12-0383-1746
<210> 178
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 178
Figure 104136995-A0202-12-0384-1747
<210> 179
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 179
Figure 104136995-A0202-12-0384-1748
<210> 180
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 180
Figure 104136995-A0202-12-0384-1749
<210> 181
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 181
Figure 104136995-A0202-12-0384-1750
<210> 182
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 182
Figure 104136995-A0202-12-0385-1751
<210> 183
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 183
Figure 104136995-A0202-12-0385-1752
<210> 184
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 184
Figure 104136995-A0202-12-0385-1753
<210> 185
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 185
Figure 104136995-A0202-12-0385-1754
<210> 186
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 186
Figure 104136995-A0202-12-0386-1755
<210> 87
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 187
Figure 104136995-A0202-12-0386-1756
<210> 188
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 188
Figure 104136995-A0202-12-0386-1757
<210> 189
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 189
Figure 104136995-A0202-12-0386-1758
<210> 190
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 190
Figure 104136995-A0202-12-0387-1759
<210> 191
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 191
Figure 104136995-A0202-12-0387-1760
<210> 192
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 192
Figure 104136995-A0202-12-0387-1761
<210> 193
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 193
Figure 104136995-A0202-12-0387-1762
<210> 194
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 194
Figure 104136995-A0202-12-0388-1763
<210> 195
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 195
Figure 104136995-A0202-12-0388-1764
<210> 196
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 196
Figure 104136995-A0202-12-0388-1765
<210> 197
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 197
Figure 104136995-A0202-12-0388-1766
<210> 198
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 198
Figure 104136995-A0202-12-0389-1767
<210> 199
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 199
Figure 104136995-A0202-12-0389-1768
<210> 200
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 200
Figure 104136995-A0202-12-0389-1769
<210> 201
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 201
Figure 104136995-A0202-12-0389-1770
<210> 202
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 202
Figure 104136995-A0202-12-0390-1771
<210> 203
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 203
Figure 104136995-A0202-12-0390-1772
<210> 204
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 204
Figure 104136995-A0202-12-0390-1773
<210> 205
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 205
Figure 104136995-A0202-12-0390-1774
<210> 206
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 206
Figure 104136995-A0202-12-0391-1775
<210> 207
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 207
Figure 104136995-A0202-12-0391-1776
<210> 208
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 208
Figure 104136995-A0202-12-0391-1777
<210> 209
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 209
Figure 104136995-A0202-12-0391-1778
<210> 210
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 210
Figure 104136995-A0202-12-0392-1779
<210> 211
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 211
Figure 104136995-A0202-12-0392-1780
<210> 212
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 212
Figure 104136995-A0202-12-0392-1781
<210> 213
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 213
Figure 104136995-A0202-12-0392-1782
<210> 214
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 214
Figure 104136995-A0202-12-0393-1783
<210> 215
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 215
Figure 104136995-A0202-12-0393-1784
<210> 216
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 216
Figure 104136995-A0202-12-0393-1785
<210> 217
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 217
Figure 104136995-A0202-12-0393-1786
<210> 218
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 218
Figure 104136995-A0202-12-0394-1787
<210> 219
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 219
Figure 104136995-A0202-12-0394-1788
<210> 220
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 220
Figure 104136995-A0202-12-0394-1789
<210> 221
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 221
Figure 104136995-A0202-12-0395-1790
<210> 222
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 222
Figure 104136995-A0202-12-0395-1791
<210> 223
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 223
Figure 104136995-A0202-12-0395-1792
<210> 224
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 224
Figure 104136995-A0202-12-0395-1793
<210> 225
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 225
Figure 104136995-A0202-12-0396-1794
<210> 226
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 226
Figure 104136995-A0202-12-0396-1795
<210> 227
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 227
Figure 104136995-A0202-12-0396-1796
<210> 228
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 228
Figure 104136995-A0202-12-0397-1797
<210> 229
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 229
Figure 104136995-A0202-12-0397-1798
<210> 230
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 230
Figure 104136995-A0202-12-0397-1799
<210> 231
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 231
Figure 104136995-A0202-12-0397-1800
<210> 232
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 232
Figure 104136995-A0202-12-0398-1801
<210> 233
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 233
Figure 104136995-A0202-12-0398-1802
<210> 234
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 234
Figure 104136995-A0202-12-0398-1803
<210> 235
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 235
Figure 104136995-A0202-12-0399-1804
<210> 236
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 236
Figure 104136995-A0202-12-0399-1805
<210> 237
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 237
Figure 104136995-A0202-12-0399-1806
<210> 238
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 238
Figure 104136995-A0202-12-0399-1807
<210> 239
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 239
Figure 104136995-A0202-12-0400-1808
<210> 240
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 240
Figure 104136995-A0202-12-0400-1809
<210> 241
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 241
Figure 104136995-A0202-12-0400-1810
<210> 242
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 242
Figure 104136995-A0202-12-0401-1811
<210> 243
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 243
Figure 104136995-A0202-12-0401-1812
<210> 244
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 244
Figure 104136995-A0202-12-0401-1813
<210> 245
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 245
Figure 104136995-A0202-12-0402-1814
<210> 246
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 246
Figure 104136995-A0202-12-0402-1815
<210> 247
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 247
Figure 104136995-A0202-12-0402-1816
<210> 248
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 248
Figure 104136995-A0202-12-0403-1817
<210> 249
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 249
Figure 104136995-A0202-12-0403-1818
<210> 250
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 250
Figure 104136995-A0202-12-0403-1819
<210> 251
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 251
Figure 104136995-A0202-12-0403-1820
<210> 252
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 252
Figure 104136995-A0202-12-0404-1821
<210> 253
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 253
Figure 104136995-A0202-12-0404-1822
<210> 254
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 254
Figure 104136995-A0202-12-0404-1823
<210> 255
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 255
Figure 104136995-A0202-12-0405-1824
<210> 256
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 256
Figure 104136995-A0202-12-0405-1825
<210> 257
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 257
Figure 104136995-A0202-12-0405-1826
<210> 258
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 258
Figure 104136995-A0202-12-0406-1827
<210> 259
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 259
Figure 104136995-A0202-12-0406-1828
<210> 260
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 260
Figure 104136995-A0202-12-0406-1829
<210> 261
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 261
Figure 104136995-A0202-12-0406-1830
<210> 262
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 262
Figure 104136995-A0202-12-0407-1831
<210> 263
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 263
Figure 104136995-A0202-12-0407-1832
<210> 264
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 264
Figure 104136995-A0202-12-0407-1833
<210> 265
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 265
Figure 104136995-A0202-12-0407-1834
<210> 266
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 266
Figure 104136995-A0202-12-0408-1835
<210> 267
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 267
Figure 104136995-A0202-12-0408-1836
<210> 268
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 268
Figure 104136995-A0202-12-0408-1837
<210> 269
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 269
Figure 104136995-A0202-12-0408-1838
<210> 270
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 270
Figure 104136995-A0202-12-0409-1839
<210> 271
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 271
Figure 104136995-A0202-12-0409-1840
<210> 272
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 272
Figure 104136995-A0202-12-0409-1841
<210> 273
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 273
Figure 104136995-A0202-12-0409-1842
<210> 274
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 274
Figure 104136995-A0202-12-0410-1843
<210> 275
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 275
Figure 104136995-A0202-12-0410-1844
<210> 276
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 276
Figure 104136995-A0202-12-0410-1845
<210> 277
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 277
Figure 104136995-A0202-12-0410-1846
<210> 278
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 278
Figure 104136995-A0202-12-0411-1847
<210> 279
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 279
Figure 104136995-A0202-12-0411-1848
<210> 280
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 280
Figure 104136995-A0202-12-0411-1849
<210> 281
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 281
Figure 104136995-A0202-12-0411-1850
<210> 282
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 282
Figure 104136995-A0202-12-0412-1851
<210> 283
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 283
Figure 104136995-A0202-12-0412-1852
<210> 284
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 284
Figure 104136995-A0202-12-0412-1853
<210> 285
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 285
Figure 104136995-A0202-12-0413-1854
<210> 286
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 286
Figure 104136995-A0202-12-0413-1855
<210> 287
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 287
Figure 104136995-A0202-12-0413-1856
<210> 288
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 288
Figure 104136995-A0202-12-0413-1857
<210> 289
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 289
Figure 104136995-A0202-12-0414-1858
<210> 290
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 290
Figure 104136995-A0202-12-0414-1859
<210> 291
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 291
Figure 104136995-A0202-12-0414-1860
<210> 292
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 292
Figure 104136995-A0202-12-0414-1861
<210> 293
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 293
Figure 104136995-A0202-12-0415-1862
<210> 294
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 294
Figure 104136995-A0202-12-0415-1863
<210> 295
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 295
Figure 104136995-A0202-12-0415-1864
<210> 296
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 296
Figure 104136995-A0202-12-0415-1865
<210> 297
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 297
Figure 104136995-A0202-12-0416-1866
<210> 298
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 298
Figure 104136995-A0202-12-0416-1867
<210> 299
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 299
Figure 104136995-A0202-12-0416-1868
<210> 300
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 300
Figure 104136995-A0202-12-0416-1869
<210> 301
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 301
Figure 104136995-A0202-12-0417-1870
<210> 302
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 302
Figure 104136995-A0202-12-0417-1871
<210> 303
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 303
Figure 104136995-A0202-12-0417-1872
<210> 304
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 304
Figure 104136995-A0202-12-0417-1873
<210> 305
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 305
Figure 104136995-A0202-12-0418-1874
<210> 306
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 306
Figure 104136995-A0202-12-0418-1875
<210> 307
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 307
Figure 104136995-A0202-12-0418-1876
<210> 308
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 308
Figure 104136995-A0202-12-0418-1877
<210> 309
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 309
Figure 104136995-A0202-12-0419-1878
<210> 310
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 310
Figure 104136995-A0202-12-0419-1879
<210> 311
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 311
Figure 104136995-A0202-12-0419-1880
<210> 312
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 312
Figure 104136995-A0202-12-0419-1881
<210> 313
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 313
Figure 104136995-A0202-12-0420-1882
<210> 314
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 314
Figure 104136995-A0202-12-0420-1883
<210> 315
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 315
Figure 104136995-A0202-12-0420-1884
<210> 316
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 316
Figure 104136995-A0202-12-0420-1885
<210> 317
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 317
Figure 104136995-A0202-12-0421-1886
<210> 318
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 318
Figure 104136995-A0202-12-0421-1887
<210> 319
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 319
Figure 104136995-A0202-12-0421-1888
<210> 320
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 320
Figure 104136995-A0202-12-0422-1889
<210> 321
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 321
Figure 104136995-A0202-12-0422-1890
<210> 322
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 322
Figure 104136995-A0202-12-0422-1891
<210> 323
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 323
Figure 104136995-A0202-12-0422-1892
<210> 324
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 324
Figure 104136995-A0202-12-0423-1893
<210> 325
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 325
Figure 104136995-A0202-12-0423-1894
<210> 326
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 326
Figure 104136995-A0202-12-0423-1895
<210> 327
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 327
Figure 104136995-A0202-12-0423-1896
<210> 328
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 328
Figure 104136995-A0202-12-0424-1897
<210> 329
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 329
Figure 104136995-A0202-12-0424-1898
<210> 330
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 330
Figure 104136995-A0202-12-0424-1899
<210> 331
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 331
Figure 104136995-A0202-12-0424-1900
<210> 332
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 332
Figure 104136995-A0202-12-0425-1901
<210> 333
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 333
Figure 104136995-A0202-12-0425-1902
<210> 334
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 334
Figure 104136995-A0202-12-0425-1903
<210> 335
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 335
Figure 104136995-A0202-12-0425-1904
<210> 336
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 336
Figure 104136995-A0202-12-0426-1905
<210> 337
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 337
Figure 104136995-A0202-12-0426-1906
<210> 338
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 338
Figure 104136995-A0202-12-0426-1907
<210> 339
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 339
Figure 104136995-A0202-12-0426-1908
<210> 340
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 340
Figure 104136995-A0202-12-0427-1909
<210> 341
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 341
Figure 104136995-A0202-12-0427-1910
<210> 342
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 342
Figure 104136995-A0202-12-0427-1911
<210> 343
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 343
Figure 104136995-A0202-12-0428-1912
<210> 344
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 344
Figure 104136995-A0202-12-0428-1913
<210> 345
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 345
Figure 104136995-A0202-12-0428-1914
<210> 346
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 346
Figure 104136995-A0202-12-0428-1915
<210> 347
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 347
Figure 104136995-A0202-12-0429-1916
<210> 348
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 348
Figure 104136995-A0202-12-0429-1917
<210> 349
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 349
Figure 104136995-A0202-12-0429-1918
<210> 350
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 350
Figure 104136995-A0202-12-0429-1919
<210> 351
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 351
Figure 104136995-A0202-12-0430-1920
<210> 352
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 352
Figure 104136995-A0202-12-0430-1921
<210> 353
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 353
Figure 104136995-A0202-12-0430-1922
<210> 354
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 354
Figure 104136995-A0202-12-0430-1923
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 355
Figure 104136995-A0202-12-0431-1924
<210> 356
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 356
Figure 104136995-A0202-12-0431-1925
<210> 357
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 357
Figure 104136995-A0202-12-0431-1926
<210> 358
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 358
Figure 104136995-A0202-12-0431-1927
<210> 359
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 359
Figure 104136995-A0202-12-0432-1928
<210> 360
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 360
Figure 104136995-A0202-12-0432-1929
<210> 361
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 361
Figure 104136995-A0202-12-0432-1930
<210> 362
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 362
Figure 104136995-A0202-12-0432-1931
<210> 363
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 363
Figure 104136995-A0202-12-0433-1932
<210> 364
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 364
Figure 104136995-A0202-12-0433-1933
<210> 365
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 365
Figure 104136995-A0202-12-0433-1934
<210> 366
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 366
Figure 104136995-A0202-12-0433-1935
<210> 367
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 367
Figure 104136995-A0202-12-0434-1936
<210> 368
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 368
Figure 104136995-A0202-12-0434-1937
<210> 369
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 369
Figure 104136995-A0202-12-0434-1938
<210> 370
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 370
Figure 104136995-A0202-12-0435-1939
<210> 371
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 371
Figure 104136995-A0202-12-0435-1940
<210> 372
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 372
Figure 104136995-A0202-12-0435-1941
<210> 373
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 373
Figure 104136995-A0202-12-0435-1942
<210> 374
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 374
Figure 104136995-A0202-12-0436-1943
<210> 375
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 375
Figure 104136995-A0202-12-0436-1944
<210> 376
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 376
Figure 104136995-A0202-12-0436-1945
<210> 377
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 377
Figure 104136995-A0202-12-0436-1946
<210> 378
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 378
Figure 104136995-A0202-12-0437-1947
<210> 379
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 379
Figure 104136995-A0202-12-0437-1948
<210> 380
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 380
Figure 104136995-A0202-12-0437-1949
<210> 381
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 381
Figure 104136995-A0202-12-0437-1950
<210> 382
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 382
Figure 104136995-A0202-12-0438-1951
<210> 383
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 383
Figure 104136995-A0202-12-0438-1952
<210> 384
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 384
Figure 104136995-A0202-12-0438-1953
<210> 385
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 385
Figure 104136995-A0202-12-0438-1954
<210> 386
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 386
Figure 104136995-A0202-12-0439-1955
<210> 387
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 387
Figure 104136995-A0202-12-0439-1956
<210> 388
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 388
Figure 104136995-A0202-12-0439-1957
<210> 389
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 389
Figure 104136995-A0202-12-0439-1958
<210> 390
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 390
Figure 104136995-A0202-12-0440-1959
<210> 391
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 391
Figure 104136995-A0202-12-0440-1960
<210> 392
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 392
Figure 104136995-A0202-12-0440-1961
<210> 393
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 393
Figure 104136995-A0202-12-0440-1962
<210> 394
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 394
Figure 104136995-A0202-12-0441-1963
<210> 395
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 395
Figure 104136995-A0202-12-0441-1964
<210> 396
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 396
Figure 104136995-A0202-12-0441-1965
<210> 397
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 397
Figure 104136995-A0202-12-0441-1966
<210> 398
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 398
Figure 104136995-A0202-12-0442-1967
<210> 399
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 399
Figure 104136995-A0202-12-0442-1968
<210> 400
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 400
Figure 104136995-A0202-12-0442-1969
<210> 401
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 401
Figure 104136995-A0202-12-0442-1970
<210> 402
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 402
Figure 104136995-A0202-12-0443-1971
<210> 403
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 403
Figure 104136995-A0202-12-0443-1972
<210> 404
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 404
Figure 104136995-A0202-12-0443-1973
<210> 405
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 405
Figure 104136995-A0202-12-0443-1974
<210> 406
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 406
Figure 104136995-A0202-12-0444-1975
<210> 407
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 407
Figure 104136995-A0202-12-0444-1976
<210> 408
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 408
Figure 104136995-A0202-12-0444-1977
<210> 409
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 409
Figure 104136995-A0202-12-0444-1978
<210> 410
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 410
Figure 104136995-A0202-12-0445-1979
<210> 411
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 411
Figure 104136995-A0202-12-0445-1980
<210> 412
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 412
Figure 104136995-A0202-12-0445-1981
<210> 413
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 413
Figure 104136995-A0202-12-0445-1982
<210> 414
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 414
Figure 104136995-A0202-12-0446-1983
<210> 415
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 415
Figure 104136995-A0202-12-0446-1984
<210> 416
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 416
Figure 104136995-A0202-12-0446-1985
<210> 417
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 417
Figure 104136995-A0202-12-0446-1986
<210> 418
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 418
Figure 104136995-A0202-12-0447-1987
<210> 419
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 419
Figure 104136995-A0202-12-0447-1988
<210> 420
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 420
Figure 104136995-A0202-12-0447-1989
<210> 421
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 421
Figure 104136995-A0202-12-0447-1990
<210> 422
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 422
Figure 104136995-A0202-12-0448-1991
<210> 423
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 423
Figure 104136995-A0202-12-0448-1992
<210> 424
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 424
Figure 104136995-A0202-12-0448-1993
<210> 425
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 425
Figure 104136995-A0202-12-0449-1994
<210> 426
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 426
Figure 104136995-A0202-12-0449-1995
<210> 27
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 427
Figure 104136995-A0202-12-0449-1996
<210> 428
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 428
Figure 104136995-A0202-12-0449-1997
<210> 429
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 429
Figure 104136995-A0202-12-0450-1998
<210> 430
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 430
Figure 104136995-A0202-12-0450-1999
<210> 431
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 431
Figure 104136995-A0202-12-0450-2000
<210> 432
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 432
Figure 104136995-A0202-12-0450-2001
<210> 433
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 433
Figure 104136995-A0202-12-0451-2002
<210> 434
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 434
Figure 104136995-A0202-12-0451-2003
<210> 435
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 435
Figure 104136995-A0202-12-0451-2004
<210> 436
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 436
Figure 104136995-A0202-12-0451-2005
<210> 437
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 437
Figure 104136995-A0202-12-0452-2006
<210> 438
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 438
Figure 104136995-A0202-12-0452-2007
<210> 439
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> 註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 439
Figure 104136995-A0202-12-0452-2008
<210> 440
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 440
Figure 104136995-A0202-12-0453-2009
<210> 441
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 441
Figure 104136995-A0202-12-0453-2010
<210> 442
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 442
Figure 104136995-A0202-12-0453-2011
<210> 443
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 443
Figure 104136995-A0202-12-0453-2012
<210> 444
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 444
Figure 104136995-A0202-12-0454-2013
<210> 445
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 445
Figure 104136995-A0202-12-0454-2014
<210> 446
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 446
Figure 104136995-A0202-12-0454-2015
<210> 447
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 447
Figure 104136995-A0202-12-0455-2016
<210> 448
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 448
Figure 104136995-A0202-12-0455-2017
<210> 449
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 449
Figure 104136995-A0202-12-0455-2018
<210> 450
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 450
Figure 104136995-A0202-12-0456-2019
<210> 451
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 451
Figure 104136995-A0202-12-0456-2020
<210> 452
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 452
Figure 104136995-A0202-12-0456-2021
<210> 453
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 453
Figure 104136995-A0202-12-0456-2022
<210> 454
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 454
Figure 104136995-A0202-12-0457-2023
<210> 455
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 455
Figure 104136995-A0202-12-0457-2024
<210> 456
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 456
Figure 104136995-A0202-12-0457-2025
<210> 457
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221>
<223> /註="人工來源序列說明： 合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 457
Figure 104136995-A0202-12-0458-2026
<210> 458
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 458
Figure 104136995-A0202-12-0458-2027
<210> 459
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 459
Figure 104136995-A0202-12-0458-2028
<210> 460
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 460
Figure 104136995-A0202-12-0459-2029
<210> 461
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 461
Figure 104136995-A0202-12-0459-2030
<210> 462
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 462
Figure 104136995-A0202-12-0459-2031
<210> 463
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 463
Figure 104136995-A0202-12-0459-2032
<210> 464
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 464
Figure 104136995-A0202-12-0460-2033
<210> 465
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 465
Figure 104136995-A0202-12-0460-2034
<210> 466
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 466
Figure 104136995-A0202-12-0460-2035
<210> 467
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 467
Figure 104136995-A0202-12-0461-2036
<210> 468
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 468
Figure 104136995-A0202-12-0461-2037
<210> 469
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 469
Figure 104136995-A0202-12-0461-2038
<210> 470
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註=" 組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 470
Figure 104136995-A0202-12-0462-2039
<210> 471
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 471
Figure 104136995-A0202-12-0462-2040
<210> 472
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 472
Figure 104136995-A0202-12-0462-2041
<210> 473
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 473
Figure 104136995-A0202-12-0462-2042
<210> 474
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 474
Figure 104136995-A0202-12-0463-2043
<210> 475
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 475
Figure 104136995-A0202-12-0463-2044
<210> 476
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=" 人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 476
Figure 104136995-A0202-12-0463-2045
<210> 477
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 477
Figure 104136995-A0202-12-0464-2046
<210> 478
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 478
Figure 104136995-A0202-12-0464-2047
<210> 479
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 479
Figure 104136995-A0202-12-0464-2048
<210> 480
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 480
Figure 104136995-A0202-12-0465-2049
<210> 481
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 481
Figure 104136995-A0202-12-0465-2050
<210> 482
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 482
Figure 104136995-A0202-12-0465-2051
<210> 483
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 483
Figure 104136995-A0202-12-0465-2052
<210> 484
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 484
Figure 104136995-A0202-12-0466-2053
<210> 485
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 485
Figure 104136995-A0202-12-0466-2054
<210> 486
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 486
Figure 104136995-A0202-12-0466-2055
<210> 487
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 487
Figure 104136995-A0202-12-0466-2056
<210> 488
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 488
Figure 104136995-A0202-12-0467-2057
<210> 489
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 489
Figure 104136995-A0202-12-0467-2058
<210> 490
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 490
Figure 104136995-A0202-12-0467-2059
<210> 491
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 491
Figure 104136995-A0202-12-0468-2060
<210> 492
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (23)..(23)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 492
Figure 104136995-A0202-12-0468-2061
<210> 493
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 493
Figure 104136995-A0202-12-0468-2062
<210> 494
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 494
Figure 104136995-A0202-12-0468-2063
<210> 495
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 495
Figure 104136995-A0202-12-0469-2064
<210> 496
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 496
Figure 104136995-A0202-12-0469-2065
<210> 497
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (21)..(21)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 497
Figure 104136995-A0202-12-0469-2066
<210> 498
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 498
Figure 104136995-A0202-12-0470-2067
<210> 499
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 499
Figure 104136995-A0202-12-0470-2068
<210> 500
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 500
Figure 104136995-A0202-12-0470-2069
<210> 501
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 501
Figure 104136995-A0202-12-0470-2070
<210> 502
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 502
Figure 104136995-A0202-12-0471-2071
<210> 503
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (21)..(21)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 503
Figure 104136995-A0202-12-0471-2072
<210> 504
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 504
Figure 104136995-A0202-12-0471-2073
<210> 505
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 505
Figure 104136995-A0202-12-0472-2074
<210> 506
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 506
Figure 104136995-A0202-12-0472-2075
<210> 507
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 507
Figure 104136995-A0202-12-0472-2076
<210> 508
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 508
Figure 104136995-A0202-12-0472-2077
<210> 509
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 509
Figure 104136995-A0202-12-0473-2078
<210> 510
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 510
Figure 104136995-A0202-12-0473-2079
<210> 511
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 511
Figure 104136995-A0202-12-0473-2080
<210> 512
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 512
Figure 104136995-A0202-12-0473-2081
<210> 513
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 513
Figure 104136995-A0202-12-0474-2082
<210> 514
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 514
Figure 104136995-A0202-12-0474-2083
<210> 515
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 515
Figure 104136995-A0202-12-0474-2084
<210> 516
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明： 合成寡核苷酸"
<400> 516
Figure 104136995-A0202-12-0475-2085
<210> 517
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 517
Figure 104136995-A0202-12-0475-2086
<210> 518
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 518
Figure 104136995-A0202-12-0475-2087
<210> 519
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 519
Figure 104136995-A0202-12-0476-2088
<210> 520
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 520
Figure 104136995-A0202-12-0476-2089
<210> 521
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 521
Figure 104136995-A0202-12-0476-2090
<210> 522
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 522
Figure 104136995-A0202-12-0476-2091
<210> 523
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 523
Figure 104136995-A0202-12-0477-2092
<210> 524
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 524
Figure 104136995-A0202-12-0477-2093
<210> 525
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 525
Figure 104136995-A0202-12-0477-2094
<210> 526
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 526
Figure 104136995-A0202-12-0477-2095
<210> 527
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 527
Figure 104136995-A0202-12-0478-2096
<210> 528
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 528
Figure 104136995-A0202-12-0478-2097
<210> 529
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 529
Figure 104136995-A0202-12-0478-2098
<210> 530
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 530
Figure 104136995-A0202-12-0478-2099
<210> 531
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (23)..(23)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 531
Figure 104136995-A0202-12-0479-2100
<210> 532
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 532
Figure 104136995-A0202-12-0479-2101
<210> 533
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 533
Figure 104136995-A0202-12-0479-2102
<210> 534
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 534
Figure 104136995-A0202-12-0480-2103
<210> 535
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 535
Figure 104136995-A0202-12-0480-2104
<210> 536
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 536
Figure 104136995-A0202-12-0480-2105
<210> 537
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (21)..(21)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 537
Figure 104136995-A0202-12-0481-2106
<210> 538
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 538
Figure 104136995-A0202-12-0481-2107
<210> 539
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 539
Figure 104136995-A0202-12-0481-2108
<210> 540
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 540
Figure 104136995-A0202-12-0481-2109
<210> 541
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 541
Figure 104136995-A0202-12-0482-2110
<210> 542
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (21)..(21)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 542
Figure 104136995-A0202-12-0482-2111
<210> 543
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 543
Figure 104136995-A0202-12-0482-2112
<210> 544
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 544
Figure 104136995-A0202-12-0483-2113
<210> 545
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 545
Figure 104136995-A0202-12-0483-2114
<210> 546
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 546
Figure 104136995-A0202-12-0483-2115
<210> 547
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 547
Figure 104136995-A0202-12-0483-2116
<210> 548
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 548
Figure 104136995-A0202-12-0484-2117
<210> 549
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 549
Figure 104136995-A0202-12-0484-2118
<210> 550
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 550
Figure 104136995-A0202-12-0484-2119
<210> 551
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 551
Figure 104136995-A0202-12-0484-2120
<210> 552
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 552
Figure 104136995-A0202-12-0485-2121
<210> 553
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 553
Figure 104136995-A0202-12-0485-2122
<210> 554
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 554
Figure 104136995-A0202-12-0485-2123
<210> 555
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 555
Figure 104136995-A0202-12-0486-2124
<210> 556
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 556
Figure 104136995-A0202-12-0486-2125
<210> 557
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 557
Figure 104136995-A0202-12-0486-2126
<210> 558
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 558
Figure 104136995-A0202-12-0487-2127
<210> 559
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 559
Figure 104136995-A0202-12-0487-2128
<210> 560
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 560
Figure 104136995-A0202-12-0487-2129
<210> 561
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 561
Figure 104136995-A0202-12-0487-2130
<210> 562
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 562
Figure 104136995-A0202-12-0488-2131
<210> 563
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 563
Figure 104136995-A0202-12-0488-2132
<210> 564
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 564
Figure 104136995-A0202-12-0488-2133
<210> 565
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 565
Figure 104136995-A0202-12-0488-2134
<210> 566
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 566
Figure 104136995-A0202-12-0489-2135
<210> 567
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 567
Figure 104136995-A0202-12-0489-2136
<210> 568
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 568
Figure 104136995-A0202-12-0489-2137
<210> 569
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 569
Figure 104136995-A0202-12-0489-2138
<210> 570
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 570
Figure 104136995-A0202-12-0490-2139
<210> 571
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 571
Figure 104136995-A0202-12-0490-2140
<210> 572
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 572
Figure 104136995-A0202-12-0490-2141
<210> 573
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 573
Figure 104136995-A0202-12-0491-2142
<210> 574
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 574
Figure 104136995-A0202-12-0491-2143
<210> 575
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 575
Figure 104136995-A0202-12-0491-2144
<210> 576
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 576
Figure 104136995-A0202-12-0491-2145
<210> 577
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 577
Figure 104136995-A0202-12-0492-2146
<210> 578
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 578
Figure 104136995-A0202-12-0492-2147
<210> 579
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 579
Figure 104136995-A0202-12-0492-2148
<210> 580
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 580
Figure 104136995-A0202-12-0492-2149
<210> 581
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 581
Figure 104136995-A0202-12-0493-2150
<210> 582
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 582
Figure 104136995-A0202-12-0493-2151
<210> 583
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 583
Figure 104136995-A0202-12-0493-2152
<210> 584
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 584
Figure 104136995-A0202-12-0493-2153
<210> 585
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 585
Figure 104136995-A0202-12-0494-2154
<210> 586
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 586
Figure 104136995-A0202-12-0494-2155
<210> 587
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 587
Figure 104136995-A0202-12-0494-2156
<210> 588
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 588
Figure 104136995-A0202-12-0494-2157
<210> 589
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 589
Figure 104136995-A0202-12-0495-2158
<210> 590
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 590
Figure 104136995-A0202-12-0495-2159
<210> 591
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 591
Figure 104136995-A0202-12-0495-2160
<210> 592
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 592
Figure 104136995-A0202-12-0495-2161
<210> 593
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 593
Figure 104136995-A0202-12-0496-2162
<210> 594
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 594
Figure 104136995-A0202-12-0496-2163
<210> 595
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 595
Figure 104136995-A0202-12-0496-2164
<210> 596
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 596
Figure 104136995-A0202-12-0496-2165
<210> 597
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 597
Figure 104136995-A0202-12-0497-2166
<210> 598
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 598
Figure 104136995-A0202-12-0497-2167
<210> 599
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 599
Figure 104136995-A0202-12-0497-2168
<210> 600
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 600
Figure 104136995-A0202-12-0497-2169
<210> 601
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 601
Figure 104136995-A0202-12-0498-2170
<210> 602
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 602
Figure 104136995-A0202-12-0498-2171
<210> 603
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 603
Figure 104136995-A0202-12-0498-2172
<210> 604
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 604
Figure 104136995-A0202-12-0498-2173
<210> 605
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 605
Figure 104136995-A0202-12-0499-2174
<210> 606
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 606
Figure 104136995-A0202-12-0499-2175
<210> 607
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 607
Figure 104136995-A0202-12-0499-2176
<210> 608
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 608
Figure 104136995-A0202-12-0499-2177
<210> 609
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 609
Figure 104136995-A0202-12-0500-2178
<210> 610
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 610
Figure 104136995-A0202-12-0500-2179
<210> 611
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 611
Figure 104136995-A0202-12-0500-2180
<210> 612
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 612
Figure 104136995-A0202-12-0500-2181
<210> 613
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 613
Figure 104136995-A0202-12-0501-2182
<210> 614
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 614
Figure 104136995-A0202-12-0501-2183
<210> 615
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 615
Figure 104136995-A0202-12-0501-2184
<210> 616
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 616
Figure 104136995-A0202-12-0501-2185
<210> 617
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 617
Figure 104136995-A0202-12-0502-2186
<210> 618
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 618
Figure 104136995-A0202-12-0502-2187
<210> 619
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 619
Figure 104136995-A0202-12-0502-2188
<210> 620
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 620
Figure 104136995-A0202-12-0502-2189
<210> 621
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 621
Figure 104136995-A0202-12-0503-2190
<210> 622
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 622
Figure 104136995-A0202-12-0503-2191
<210> 623
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 623
Figure 104136995-A0202-12-0503-2192
<210> 624
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223>
<400> 624
Figure 104136995-A0202-12-0503-2193
<210> 625
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 625
Figure 104136995-A0202-12-0504-2194
<210> 626
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 626
Figure 104136995-A0202-12-0504-2195
<210> 627
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 627
Figure 104136995-A0202-12-0504-2196
<210> 628
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 628
Figure 104136995-A0202-12-0505-2197
<210> 629
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 629
Figure 104136995-A0202-12-0505-2198
<210> 630
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 630
Figure 104136995-A0202-12-0505-2199
<210> 631
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 631
Figure 104136995-A0202-12-0505-2200
<210> 632
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 632
Figure 104136995-A0202-12-0506-2201
<210> 633
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 633
Figure 104136995-A0202-12-0506-2202
<210> 634
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 634
Figure 104136995-A0202-12-0506-2203
<210> 635
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 635
Figure 104136995-A0202-12-0506-2204
<210> 636
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 636
Figure 104136995-A0202-12-0507-2205
<210> 637
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 637
Figure 104136995-A0202-12-0507-2206
<210> 638
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 638
Figure 104136995-A0202-12-0507-2207
<210> 639
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 639
Figure 104136995-A0202-12-0507-2208
<210> 640
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 640
Figure 104136995-A0202-12-0508-2209
<210> 641
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 641
Figure 104136995-A0202-12-0508-2210
<210> 642
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 642
Figure 104136995-A0202-12-0508-2211
<210> 643
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 643
Figure 104136995-A0202-12-0508-2212
<210> 644
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 644
Figure 104136995-A0202-12-0509-2213
<210> 645
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 645
Figure 104136995-A0202-12-0509-2214
<210> 646
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 646
Figure 104136995-A0202-12-0509-2215
<210> 647
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 647
Figure 104136995-A0202-12-0509-2216
<210> 648
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 648
Figure 104136995-A0202-12-0510-2217
<210> 649
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 649
Figure 104136995-A0202-12-0510-2218
<210> 650
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 650
Figure 104136995-A0202-12-0510-2219
<210> 651
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 651
Figure 104136995-A0202-12-0510-2220
<210> 652
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 652
Figure 104136995-A0202-12-0511-2221
<210> 653
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 653
Figure 104136995-A0202-12-0511-2222
<210> 654
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 654
Figure 104136995-A0202-12-0511-2223
<210> 655
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 655
Figure 104136995-A0202-12-0512-2224
<210> 656
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 656
Figure 104136995-A0202-12-0512-2225
<210> 657
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 657
Figure 104136995-A0202-12-0512-2226
<210> 658
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 658
Figure 104136995-A0202-12-0513-2227
<210> 659
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 659
Figure 104136995-A0202-12-0513-2228
<210> 660
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 660
Figure 104136995-A0202-12-0513-2229
<210> 661
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 661
Figure 104136995-A0202-12-0514-2230
<210> 662
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 662
Figure 104136995-A0202-12-0514-2231
<210> 663
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 663
Figure 104136995-A0202-12-0514-2232
<210> 664
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 664
Figure 104136995-A0202-12-0514-2233
<210> 665
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 665
Figure 104136995-A0202-12-0515-2234
<210> 666
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 666
Figure 104136995-A0202-12-0515-2235
<210> 667
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 667
Figure 104136995-A0202-12-0515-2236
<210> 668
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 668
Figure 104136995-A0202-12-0516-2237
<210> 669
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 669
Figure 104136995-A0202-12-0516-2238
<210> 670
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 670
Figure 104136995-A0202-12-0516-2239
<210> 671
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 671
Figure 104136995-A0202-12-0517-2240
<210> 672
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 672
Figure 104136995-A0202-12-0517-2241
<210> 673
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (17)..(17)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-4-甲氧基-3-磷酸酯(無鹼基2’-OMe呋喃糖)
<400> 673
Figure 104136995-A0202-12-0518-2242
<210> 674
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 674
Figure 104136995-A0202-12-0518-2243
<210> 675
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 675
Figure 104136995-A0202-12-0518-2244
<210> 676
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 676
Figure 104136995-A0202-12-0519-2245
<210> 677
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 677
Figure 104136995-A0202-12-0519-2246
<210> 678
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 678
Figure 104136995-A0202-12-0519-2247
<210> 679
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 679
Figure 104136995-A0202-12-0520-2248
<210> 680
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 680
Figure 104136995-A0202-12-0520-2249
<210> 681
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明合成寡核苷酸"
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-4-甲氧基-3-磷酸酯 (無鹼基2’-OMe呋喃糖)
<400> 681
Figure 104136995-A0202-12-0520-2250
<210> 682
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 682
Figure 104136995-A0202-12-0521-2251
<210> 683
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 683
Figure 104136995-A0202-12-0521-2252
<210> 684
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 684
Figure 104136995-A0202-12-0521-2253
<210> 685
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 685
Figure 104136995-A0202-12-0522-2254
<210> 686
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 686
Figure 104136995-A0202-12-0522-2255
<210> 687
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-4-甲氧基-3-磷酸酯(無鹼基2’-OMe呋喃糖)
<400> 687
Figure 104136995-A0202-12-0522-2256
<210> 688
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 688
Figure 104136995-A0202-12-0523-2257
<210> 689
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 689
Figure 104136995-A0202-12-0523-2258
<210> 690
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 690
Figure 104136995-A0202-12-0523-2259
<210> 691
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 691
Figure 104136995-A0202-12-0524-2260
<210> 692
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 692
Figure 104136995-A0202-12-0524-2261
<210> 693
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 693
Figure 104136995-A0202-12-0524-2262
<210> 694
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 694
Figure 104136995-A0202-12-0525-2263
<210> 695
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 695
Figure 104136995-A0202-12-0525-2264
<210> 696
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 696
Figure 104136995-A0202-12-0525-2265
<210> 697
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 697
Figure 104136995-A0202-12-0525-2266
<210> 698
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 698
Figure 104136995-A0202-12-0526-2267
<210> 699
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 699
Figure 104136995-A0202-12-0526-2268
<210> 700
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 700
Figure 104136995-A0202-12-0526-2269
<210> 701
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 701
Figure 104136995-A0202-12-0526-2270
<210> 702
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 702
Figure 104136995-A0202-12-0527-2271
<210> 703
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 703
Figure 104136995-A0202-12-0527-2272
<210> 704
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 704
Figure 104136995-A0202-12-0527-2273
<210> 705
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 705
Figure 104136995-A0202-12-0527-2274
<210> 706
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 706
Figure 104136995-A0202-12-0528-2275
<210> 707
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 707
Figure 104136995-A0202-12-0528-2276
<210> 708
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 708
Figure 104136995-A0202-12-0528-2277
<210> 709
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 709
Figure 104136995-A0202-12-0528-2278
<210> 710
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 710
Figure 104136995-A0202-12-0529-2279
<210> 711
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 711
Figure 104136995-A0202-12-0529-2280
<210> 712
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 712
Figure 104136995-A0202-12-0529-2281
<210> 713
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 713
Figure 104136995-A0202-12-0529-2282
<210> 714
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 714
Figure 104136995-A0202-12-0530-2283
<210> 715
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 715
Figure 104136995-A0202-12-0530-2284
<210> 716
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 716
Figure 104136995-A0202-12-0530-2285
<210> 717
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 717
Figure 104136995-A0202-12-0530-2286
<210> 718
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 718
Figure 104136995-A0202-12-0531-2287
<210> 719
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 719
Figure 104136995-A0202-12-0531-2288
<210> 720
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 720
Figure 104136995-A0202-12-0531-2289
<210> 721
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 721
Figure 104136995-A0202-12-0531-2290
<210> 722
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 722
Figure 104136995-A0202-12-0532-2291
<210> 723
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 723
Figure 104136995-A0202-12-0532-2292
<210> 724
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 724
Figure 104136995-A0202-12-0532-2293
<210> 725
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 725
Figure 104136995-A0202-12-0532-2294
<210> 726
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 726
Figure 104136995-A0202-12-0533-2295
<210> 727
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 727
Figure 104136995-A0202-12-0533-2296
<210> 728
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 728
Figure 104136995-A0202-12-0533-2297
<210> 729
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 729
Figure 104136995-A0202-12-0533-2298
<210> 730
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 730
Figure 104136995-A0202-12-0534-2299
<210> 731
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 731
Figure 104136995-A0202-12-0534-2300
<210> 732
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 732
Figure 104136995-A0202-12-0534-2301
<210> 733
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 733
Figure 104136995-A0202-12-0535-2302
<210> 734
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 734
Figure 104136995-A0202-12-0535-2303
<210> 735
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 735
Figure 104136995-A0202-12-0535-2304
<210> 736
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 736
Figure 104136995-A0202-12-0535-2305
<210> 737
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 737
Figure 104136995-A0202-12-0536-2306
<210> 738
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 738
Figure 104136995-A0202-12-0536-2307
<210> 739
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 739
Figure 104136995-A0202-12-0536-2308
<210> 740
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 740
Figure 104136995-A0202-12-0536-2309
<210> 741
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 741
Figure 104136995-A0202-12-0537-2310
<210> 742
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 742
Figure 104136995-A0202-12-0537-2311
<210> 743
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 743
Figure 104136995-A0202-12-0537-2312
<210> 744
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 744
Figure 104136995-A0202-12-0538-2313
<210> 745
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 745
Figure 104136995-A0202-12-0538-2314
<210> 746
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 746
Figure 104136995-A0202-12-0538-2315
<210> 747
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 747
Figure 104136995-A0202-12-0538-2316
<210> 748
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 748
Figure 104136995-A0202-12-0539-2317
<210> 749
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 749
Figure 104136995-A0202-12-0539-2318
<210> 750
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 750
Figure 104136995-A0202-12-0539-2319
<210> 751
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 751
Figure 104136995-A0202-12-0539-2320
<210> 752
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 752
Figure 104136995-A0202-12-0540-2321
<210> 753
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 753
Figure 104136995-A0202-12-0540-2322
<210> 754
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 754
Figure 104136995-A0202-12-0540-2323
<210> 755
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 755
Figure 104136995-A0202-12-0540-2324
<210> 756
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 756
Figure 104136995-A0202-12-0541-2325
<210> 757
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 757
Figure 104136995-A0202-12-0541-2326
<210> 758
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 758
Figure 104136995-A0202-12-0541-2327
<210> 759
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 759
Figure 104136995-A0202-12-0541-2328
<210> 760
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 760
Figure 104136995-A0202-12-0542-2329
<210> 761
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 761
Figure 104136995-A0202-12-0542-2330
<210> 762
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 762
Figure 104136995-A0202-12-0542-2331
<210> 763
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 763
Figure 104136995-A0202-12-0542-2332
<210> 764
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 764
Figure 104136995-A0202-12-0543-2333
<210> 765
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 765
Figure 104136995-A0202-12-0543-2334
<210> 766
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 766
Figure 104136995-A0202-12-0543-2335
<210> 767
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 767
Figure 104136995-A0202-12-0543-2336
<210> 768
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 768
Figure 104136995-A0202-12-0544-2337
<210> 769
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 769
Figure 104136995-A0202-12-0544-2338
<210> 770
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 770
Figure 104136995-A0202-12-0544-2339
<210> 771
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 771
Figure 104136995-A0202-12-0544-2340
<210> 772
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 772
Figure 104136995-A0202-12-0545-2341
<210> 773
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 773
Figure 104136995-A0202-12-0545-2342
<210> 774
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 774
Figure 104136995-A0202-12-0545-2343
<210> 775
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 775
Figure 104136995-A0202-12-0546-2344
<210> 776
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 776
Figure 104136995-A0202-12-0546-2345
<210> 777
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 777
Figure 104136995-A0202-12-0546-2346
<210> 778
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明： 合成寡核苷酸"
<400> 778
Figure 104136995-A0202-12-0546-2347
<210> 779
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 779
Figure 104136995-A0202-12-0547-2348
<210> 780
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 780
Figure 104136995-A0202-12-0547-2349
<210> 781
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 781
Figure 104136995-A0202-12-0547-2350
<210> 782
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 782
Figure 104136995-A0202-12-0547-2351
<210> 783
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 783
Figure 104136995-A0202-12-0548-2352
<210> 784
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 784
Figure 104136995-A0202-12-0548-2353
<210> 785
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 785
Figure 104136995-A0202-12-0548-2354
<210> 786
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 786
Figure 104136995-A0202-12-0548-2355
<210> 787
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 787
Figure 104136995-A0202-12-0549-2356
<210> 788
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 788
Figure 104136995-A0202-12-0549-2357
<210> 789
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 789
Figure 104136995-A0202-12-0549-2358
<210> 790
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 790
Figure 104136995-A0202-12-0549-2359
<210> 791
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 791
Figure 104136995-A0202-12-0550-2360
<210> 792
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 792
Figure 104136995-A0202-12-0550-2361
<210> 793
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 793
Figure 104136995-A0202-12-0550-2362
<210> 794
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 794
Figure 104136995-A0202-12-0551-2363
<210> 795
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 795
Figure 104136995-A0202-12-0551-2364
<210> 796
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 796
Figure 104136995-A0202-12-0551-2365
<210> 797
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 797
Figure 104136995-A0202-12-0551-2366
<210> 798
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 798
Figure 104136995-A0202-12-0552-2367
<210> 799
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 799
Figure 104136995-A0202-12-0552-2368
<210> 800
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苔酸"
<400> 800
Figure 104136995-A0202-12-0552-2370
<210> 801
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 801
Figure 104136995-A0202-12-0552-2369
<210> 802
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 802
Figure 104136995-A0202-12-0553-2371
<210> 803
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 803
Figure 104136995-A0202-12-0553-2372
<210> 804
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 804
Figure 104136995-A0202-12-0553-2373
<210> 805
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 805
Figure 104136995-A0202-12-0553-2374
<210> 806
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 806
Figure 104136995-A0202-12-0554-2375
<210> 807
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 807
Figure 104136995-A0202-12-0554-2376
<210> 808
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 808
Figure 104136995-A0202-12-0554-2377
<210> 809
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 809
Figure 104136995-A0202-12-0554-2378
<210> 810
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 810
Figure 104136995-A0202-12-0555-2379
<210> 811
<211> 3
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 811
Figure 104136995-A0202-12-0555-2380
<210> 812
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 812
Figure 104136995-A0202-12-0555-2381
<210> 813
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 813
Figure 104136995-A0202-12-0555-2382
<210> 814
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 814
Figure 104136995-A0202-12-0556-2383
<210> 815
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 815
Figure 104136995-A0202-12-0556-2384
<210> 816
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 816
Figure 104136995-A0202-12-0556-2385
<210> 817
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 817
Figure 104136995-A0202-12-0556-2386
<210> 818
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 818
Figure 104136995-A0202-12-0557-2387
<210> 819
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 819
Figure 104136995-A0202-12-0557-2388
<210> 820
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 820
Figure 104136995-A0202-12-0557-2389
<210> 821
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 821
Figure 104136995-A0202-12-0557-2390
<210> 822
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 822
Figure 104136995-A0202-12-0558-2391
<210> 823
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 823
Figure 104136995-A0202-12-0558-2392
<210> 824
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 824
Figure 104136995-A0202-12-0558-2393
<210> 825
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 825
Figure 104136995-A0202-12-0558-2394
<210> 826
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 826
Figure 104136995-A0202-12-0559-2395
<210> 827
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 827
Figure 104136995-A0202-12-0559-2396
<210> 828
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 828
Figure 104136995-A0202-12-0559-2397
<210> 829
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 829
Figure 104136995-A0202-12-0559-2398
<210> 830
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 830
Figure 104136995-A0202-12-0560-2399
<210> 831
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 831
Figure 104136995-A0202-12-0560-2400
<210> 832
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 832
Figure 104136995-A0202-12-0560-2401
<210> 833
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 833
Figure 104136995-A0202-12-0560-2402
<210> 834
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 834
Figure 104136995-A0202-12-0561-2403
<210> 835
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 835
Figure 104136995-A0202-12-0561-2404
<210> 836
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 836
Figure 104136995-A0202-12-0561-2405
<210> 837
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 837
Figure 104136995-A0202-12-0561-2406
<210> 838
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 838
Figure 104136995-A0202-12-0562-2407
<210> 839
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 839
Figure 104136995-A0202-12-0562-2408
<210> 840
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 840
Figure 104136995-A0202-12-0562-2409
<210> 841
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 841
Figure 104136995-A0202-12-0562-2410
<210> 842
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 842
Figure 104136995-A0202-12-0563-2411
<210> 843
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 843
Figure 104136995-A0202-12-0563-2412
<210> 844
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 844
Figure 104136995-A0202-12-0563-2413
<210> 845
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 845
Figure 104136995-A0202-12-0563-2414
<210> 846
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 846
Figure 104136995-A0202-12-0564-2415
<210> 847
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 847
Figure 104136995-A0202-12-0564-2416
<210> 848
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 848
Figure 104136995-A0202-12-0564-2417
<210> 849
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 849
Figure 104136995-A0202-12-0565-2418
<210> 850
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 850
Figure 104136995-A0202-12-0565-2419
<210> 851
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 851
Figure 104136995-A0202-12-0565-2420
<210> 852
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 852
Figure 104136995-A0202-12-0565-2421
<210> 853
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 853
Figure 104136995-A0202-12-0566-2422
<210> 854
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 854
Figure 104136995-A0202-12-0566-2423
<210> 855
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 855
Figure 104136995-A0202-12-0566-2424
<210> 856
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 856
Figure 104136995-A0202-12-0566-2425
<210> 857
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 857
Figure 104136995-A0202-12-0567-986
<210> 858
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 858
Figure 104136995-A0202-12-0567-987
<210> 859
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 859
Figure 104136995-A0202-12-0567-988
<210> 860
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 860
Figure 104136995-A0202-12-0567-989
<210> 861
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 861
Figure 104136995-A0202-12-0568-990
<210> 862
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 862
Figure 104136995-A0202-12-0568-991
<210> 863
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 863
Figure 104136995-A0202-12-0568-992
<210> 864
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 864
Figure 104136995-A0202-12-0568-993
<210> 865
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 865
Figure 104136995-A0202-12-0569-994
<210> 866
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 866
Figure 104136995-A0202-12-0569-995
<210> 867
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 867
Figure 104136995-A0202-12-0569-996
<210> 868
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 868
Figure 104136995-A0202-12-0570-997
<210> 869
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 869
Figure 104136995-A0202-12-0570-998
<210> 870
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 870
Figure 104136995-A0202-12-0570-999
<210> 871
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 871
Figure 104136995-A0202-12-0570-1000
<210> 872
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 872
Figure 104136995-A0202-12-0571-1001
<210> 873
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 873
Figure 104136995-A0202-12-0571-1002
<210> 874
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 874
Figure 104136995-A0202-12-0572-1003
<210> 875
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 875
Figure 104136995-A0202-12-0572-1004
<210> 876
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 876
Figure 104136995-A0202-12-0572-1005
<210> 877
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 877
Figure 104136995-A0202-12-0572-1006
<210> 878
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明： 合成寡核苷酸"
<400> 878
Figure 104136995-A0202-12-0573-1007
<210> 879
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 879
Figure 104136995-A0202-12-0573-1008
<210> 880
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 880
Figure 104136995-A0202-12-0573-1009
<210> 881
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 881
Figure 104136995-A0202-12-0574-1010
<210> 882
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 882
Figure 104136995-A0202-12-0574-1011
<210> 883
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 883
Figure 104136995-A0202-12-0574-1012
<210> 884
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 884
Figure 104136995-A0202-12-0575-1013
<210> 885
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 885
Figure 104136995-A0202-12-0575-1014
<210> 886
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 886
Figure 104136995-A0202-12-0575-1015
<210> 887
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 887
Figure 104136995-A0202-12-0576-1016
<210> 888
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 888
Figure 104136995-A0202-12-0576-1017
<210> 889
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 889
Figure 104136995-A0202-12-0576-1018
<210> 890
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明： 合成寡核苷酸"
<400> 890
Figure 104136995-A0202-12-0576-1019
<210> 891
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 891
Figure 104136995-A0202-12-0577-1020
<210> 892
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 892
Figure 104136995-A0202-12-0577-1021
<210> 893
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 893
Figure 104136995-A0202-12-0577-1022
<210> 894
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 894
Figure 104136995-A0202-12-0578-1023
<210> 895
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 895
Figure 104136995-A0202-12-0578-1024
<210> 896
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 896
Figure 104136995-A0202-12-0578-1025
<210> 897
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 897
Figure 104136995-A0202-12-0579-1026
<210> 898
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 898
Figure 104136995-A0202-12-0579-1027
<210> 899
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 899
Figure 104136995-A0202-12-0579-1028
<210> 900
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 900
Figure 104136995-A0202-12-0580-1029
<210> 901
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 901
Figure 104136995-A0202-12-0580-1030
<210> 902
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 902
Figure 104136995-A0202-12-0580-1031
<210> 903
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 903
Figure 104136995-A0202-12-0581-1032
<210> 904
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 904
Figure 104136995-A0202-12-0581-1033
<210> 905
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 905
Figure 104136995-A0202-12-0581-1034
<210> 906
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明： 合成寡核苷酸"
<400> 906
Figure 104136995-A0202-12-0582-1035
<210> 907
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 907
Figure 104136995-A0202-12-0582-1036
<210> 908
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 908
Figure 104136995-A0202-12-0582-1037
<210> 909
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 909
Figure 104136995-A0202-12-0583-1038
<210> 910
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 910
Figure 104136995-A0202-12-0583-1039
<210> 911
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 911
Figure 104136995-A0202-12-0583-1040
<210> 912
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 912
Figure 104136995-A0202-12-0583-1041
<210> 913
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 913
Figure 104136995-A0202-12-0584-1042
<210> 914
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 914
Figure 104136995-A0202-12-0584-1043
<210> 915
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 915
Figure 104136995-A0202-12-0584-1044
<210> 916
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 916
Figure 104136995-A0202-12-0584-1045
<210> 917
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 917
Figure 104136995-A0202-12-0585-1046
<210> 918
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 918
Figure 104136995-A0202-12-0585-1047
<210> 919
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 919
Figure 104136995-A0202-12-0585-1048
<210> 920
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 920
Figure 104136995-A0202-12-0585-1049
<210> 921
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 921
Figure 104136995-A0202-12-0586-1050
<210> 922
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 922
Figure 104136995-A0202-12-0586-1051
<210> 923
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 923
Figure 104136995-A0202-12-0586-1052
<210> 924
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 924
Figure 104136995-A0202-12-0586-1053
<210> 925
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 925
Figure 104136995-A0202-12-0587-1054
<210> 926
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 926
Figure 104136995-A0202-12-0587-1055
<210> 927
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 927
Figure 104136995-A0202-12-0587-1056
<210> 928
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 928
Figure 104136995-A0202-12-0587-1057
<210> 929
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 929
Figure 104136995-A0202-12-0588-1058
<210> 930
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 930
Figure 104136995-A0202-12-0588-1059
<210> 931
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 931
Figure 104136995-A0202-12-0588-1060
<210> 932
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 932
Figure 104136995-A0202-12-0589-1061
<210> 933
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 933
Figure 104136995-A0202-12-0589-1062
<210> 934
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 934
Figure 104136995-A0202-12-0589-1063
<210> 935
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 935
Figure 104136995-A0202-12-0589-1064
<210> 936
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 936
Figure 104136995-A0202-12-0590-1065
<210> 937
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 937
Figure 104136995-A0202-12-0590-1066
<210> 938
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 938
Figure 104136995-A0202-12-0590-1067
<210> 939
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 939
Figure 104136995-A0202-12-0591-1068
<210> 940
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 940
Figure 104136995-A0202-12-0591-1069
<210> 941
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 941
Figure 104136995-A0202-12-0591-1070
<210> 942
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 942
Figure 104136995-A0202-12-0591-1071
<210> 943
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 943
Figure 104136995-A0202-12-0592-1072
<210> 944
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 944
Figure 104136995-A0202-12-0592-1073
<210> 945
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 945
Figure 104136995-A0202-12-0592-1074
<210> 946
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 946
Figure 104136995-A0202-12-0592-1075
<210> 947
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 947
Figure 104136995-A0202-12-0593-1076
<210> 948
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 948
Figure 104136995-A0202-12-0593-1077
<210> 949
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 949
Figure 104136995-A0202-12-0593-1078
<210> 950
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 950
Figure 104136995-A0202-12-0593-1079
<210> 951
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 951
Figure 104136995-A0202-12-0594-1080
<210> 952
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 952
Figure 104136995-A0202-12-0594-1081
<210> 953
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 953
Figure 104136995-A0202-12-0594-1082
<210> 954
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 954
Figure 104136995-A0202-12-0594-1083
<210> 955
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 955
Figure 104136995-A0202-12-0595-1084
<210> 956
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 956
Figure 104136995-A0202-12-0595-1085
<210> 957
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 957
Figure 104136995-A0202-12-0595-1086
<210> 958
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 958
Figure 104136995-A0202-12-0595-1087
<210> 959
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 959
Figure 104136995-A0202-12-0596-1088
<210> 960
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 960
Figure 104136995-A0202-12-0596-1089
<210> 961
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 961
Figure 104136995-A0202-12-0596-1090
<210> 962
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 962
Figure 104136995-A0202-12-0596-1091
<210> 963
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 963
Figure 104136995-A0202-12-0597-1092
<210> 964
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 964
Figure 104136995-A0202-12-0597-1093
<210> 965
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 965
Figure 104136995-A0202-12-0597-1094
<210> 966
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 966
Figure 104136995-A0202-12-0597-1095
<210> 967
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 967
Figure 104136995-A0202-12-0598-1096
<210> 968
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 968
Figure 104136995-A0202-12-0598-1097
<210> 969
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (21)..(21)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 969
Figure 104136995-A0202-12-0598-1098
<210> 970
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 970
Figure 104136995-A0202-12-0599-1099
<210> 971
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 971
Figure 104136995-A0202-12-0599-1100
<210> 972
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 972
Figure 104136995-A0202-12-0599-1101
<210> 973
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<220>
<221> 經修飾_鹼基
<222> (23)..(23)
<223> 2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯
<400> 973
Figure 104136995-A0202-12-0600-1102
<210> 974
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 974
Figure 104136995-A0202-12-0600-1103
<210> 975
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 975
Figure 104136995-A0202-12-0600-1104
<210> 976
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 976
Figure 104136995-A0202-12-0600-1105
<210> 977
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 977
Figure 104136995-A0202-12-0601-1106
<210> 978
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 978
Figure 104136995-A0202-12-0601-1107
<210> 979
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 979
Figure 104136995-A0202-12-0601-1108
<210> 980
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 980
Figure 104136995-A0202-12-0601-1109
<210> 981
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 981
Figure 104136995-A0202-12-0602-1110
<210> 982
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 982
Figure 104136995-A0202-12-0602-1111
<210> 983
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 983
Figure 104136995-A0202-12-0602-1112
<210> 984
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 984
Figure 104136995-A0202-12-0603-1113
<210> 985
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 985
Figure 104136995-A0202-12-0603-1114
<210> 986
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 986
Figure 104136995-A0202-12-0603-1115
<210> 987
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 987
Figure 104136995-A0202-12-0603-1116
<210> 988
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 988
Figure 104136995-A0202-12-0604-1117
<210> 989
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 989
Figure 104136995-A0202-12-0604-1118
<210> 990
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 990
Figure 104136995-A0202-12-0604-1119
<210> 991
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 991
Figure 104136995-A0202-12-0604-1120
<210> 992
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 992
Figure 104136995-A0202-12-0605-1121
<210> 993
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 993
Figure 104136995-A0202-12-0605-1122
<210> 994
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 994
Figure 104136995-A0202-12-0605-1123
<210> 995
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 995
Figure 104136995-A0202-12-0606-1124
<210> 996
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 996
Figure 104136995-A0202-12-0606-1125
<210> 997
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 997
Figure 104136995-A0202-12-0606-1126
<210> 998
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 998
Figure 104136995-A0202-12-0606-1127
<210> 999
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 999
Figure 104136995-A0202-12-0607-1128
<210> 1000
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1000
Figure 104136995-A0202-12-0607-1129
<210> 1001
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1001
Figure 104136995-A0202-12-0607-1130
<210> 1002
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1002
Figure 104136995-A0202-12-0607-1131
<210> 1003
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1003
Figure 104136995-A0202-12-0608-1132
<210> 1004
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1004
Figure 104136995-A0202-12-0608-1133
<210> 1005
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1005
Figure 104136995-A0202-12-0608-1134
<210> 1006
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1006
Figure 104136995-A0202-12-0608-1135
<210> 1007
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1007
Figure 104136995-A0202-12-0609-1136
<210> 1008
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1008
Figure 104136995-A0202-12-0609-1137
<210> 1009
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1009
Figure 104136995-A0202-12-0609-1138
<210> 1010
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1010
Figure 104136995-A0202-12-0609-1139
<210> 1011
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1011
Figure 104136995-A0202-12-0610-1140
<210> 1012
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 1012
Figure 104136995-A0202-12-0610-1141
<210> 1013
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1013
Figure 104136995-A0202-12-0610-1142
<210> 1014
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 1014
Figure 104136995-A0202-12-0611-1143
<210> 1015
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1015
Figure 104136995-A0202-12-0611-1144
<210> 1016
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1016
Figure 104136995-A0202-12-0611-1145
<210> 1017
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1017
Figure 104136995-A0202-12-0611-1146
<210> 1018
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1018
Figure 104136995-A0202-12-0612-1147
<210> 1019
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 1019
Figure 104136995-A0202-12-0612-1148
<210> 1020
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1020
Figure 104136995-A0202-12-0612-1149
<210> 1021
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 1021
Figure 104136995-A0202-12-0613-1150
<210> 1022
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1022
Figure 104136995-A0202-12-0613-1151
<210> 1023
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1023
Figure 104136995-A0202-12-0613-1152
<210> 1024
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 1024
Figure 104136995-A0202-12-0613-1153
<210> 1025
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1025
Figure 104136995-A0202-12-0614-1154
<210> 1026
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1026
Figure 104136995-A0202-12-0614-1155
<210> 1027
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1027
Figure 104136995-A0202-12-0614-1156
<210> 1028
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1028
Figure 104136995-A0202-12-0614-1157
<210> 1029
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1029
Figure 104136995-A0202-12-0615-1158
<210> 1030
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1030
Figure 104136995-A0202-12-0615-1159
<210> 1031
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1031
Figure 104136995-A0202-12-0615-1160
<210> 1032
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 1032
Figure 104136995-A0202-12-0616-1161
<210> 1033
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1033
Figure 104136995-A0202-12-0616-1162
<210> 1034
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1034
Figure 104136995-A0202-12-0616-1163
<210> 1035
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1035
Figure 104136995-A0202-12-0616-1164
<210> 1036
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1036
Figure 104136995-A0202-12-0617-1165
<210> 1037
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1037
Figure 104136995-A0202-12-0617-1166
<210> 1038
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1038
Figure 104136995-A0202-12-0617-1167
<210> 1039
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1039
Figure 104136995-A0202-12-0617-1168
<210> 1040
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1040
Figure 104136995-A0202-12-0618-1169
<210> 1041
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1041
Figure 104136995-A0202-12-0618-1170
<210> 1042
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1042
Figure 104136995-A0202-12-0618-1171
<210> 1043
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1043
Figure 104136995-A0202-12-0618-1172
<210> 1044
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 1044
Figure 104136995-A0202-12-0619-1173
<210> 1045
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1045
Figure 104136995-A0202-12-0619-1174
<210> 1046
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1046
Figure 104136995-A0202-12-0619-1175
<210> 1047
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1047
Figure 104136995-A0202-12-0619-1176
<210> 1048
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1048
Figure 104136995-A0202-12-0620-1177
<210> 1049
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1049
Figure 104136995-A0202-12-0620-1178
<210> 1050
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1050
Figure 104136995-A0202-12-0620-1179
<210> 1051
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1051
Figure 104136995-A0202-12-0620-1180
<210> 1052
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1052
Figure 104136995-A0202-12-0621-1181
<210> 1053
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1053
Figure 104136995-A0202-12-0621-1182
<210> 1054
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 1054
Figure 104136995-A0202-12-0621-1183
<210> 1055
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1055
Figure 104136995-A0202-12-0621-1184
<210> 1056
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1056
Figure 104136995-A0202-12-0622-1185
<210> 1057
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1057
Figure 104136995-A0202-12-0622-1186
<210> 1058
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1058
Figure 104136995-A0202-12-0622-1187
<210> 1059
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1059
Figure 104136995-A0202-12-0622-1188
<210> 1060
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1060
Figure 104136995-A0202-12-0623-1189
<210> 1061
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1061
Figure 104136995-A0202-12-0623-1190
<210> 1062
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1062
Figure 104136995-A0202-12-0623-1191
<210> 1063
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1063
Figure 104136995-A0202-12-0623-1192
<210> 1064
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1064
Figure 104136995-A0202-12-0624-1193
<210> 1065
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<220>
<221> 來源
<223> /註="組合之DNA/RNA分子說明：合成寡核苷酸"
<400> 1065
Figure 104136995-A0202-12-0624-1194
<210> 1066
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1066
Figure 104136995-A0202-12-0624-1195
<210> 1067
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1067
Figure 104136995-A0202-12-0625-1196
<210> 1068
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1068
Figure 104136995-A0202-12-0625-1197
<210> 1069
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1069
Figure 104136995-A0202-12-0625-1198
<210> 1070
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1070
Figure 104136995-A0202-12-0625-1199
<210> 1071
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1071
Figure 104136995-A0202-12-0626-1200
<210> 1072
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1072
Figure 104136995-A0202-12-0626-1201
<210> 1073
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1073
Figure 104136995-A0202-12-0626-1202
<210> 1074
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1074
Figure 104136995-A0202-12-0626-1203
<210> 1075
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1075
Figure 104136995-A0202-12-0627-1204
<210> 1076
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1076
Figure 104136995-A0202-12-0627-1205
<210> 1077
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1077
Figure 104136995-A0202-12-0627-1206
<210> 1078
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1078
Figure 104136995-A0202-12-0627-1207
<210> 1079
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1079
Figure 104136995-A0202-12-0628-1208
<210> 1080
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1080
Figure 104136995-A0202-12-0628-1209
<210> 1081
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1081
Figure 104136995-A0202-12-0628-1210
<210> 1082
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1082
Figure 104136995-A0202-12-0628-1211
<210> 1083
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1083
Figure 104136995-A0202-12-0629-1212
<210> 1084
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1084
Figure 104136995-A0202-12-0629-1213
<210> 1085
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1085
Figure 104136995-A0202-12-0629-1214
<210> 1086
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 1086
Figure 104136995-A0202-12-0629-1215
<210> 1087
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1087
Figure 104136995-A0202-12-0630-1216
<210> 1088
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1088
Figure 104136995-A0202-12-0630-1217
<210> 1089
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1089
Figure 104136995-A0202-12-0630-1218
<210> 1090
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1090
Figure 104136995-A0202-12-0630-1219
<210> 1091
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1091
Figure 104136995-A0202-12-0631-1220
<210> 1092
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1092
Figure 104136995-A0202-12-0631-1221
<210> 1093
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1093
Figure 104136995-A0202-12-0631-1222
<210> 1094
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1094
Figure 104136995-A0202-12-0631-1223
<210> 1095
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1095
Figure 104136995-A0202-12-0632-1224
<210> 1096
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1096
Figure 104136995-A0202-12-0632-1225
<210> 1097
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1097
Figure 104136995-A0202-12-0632-1226
<210> 1098
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1098
Figure 104136995-A0202-12-0632-1227
<210> 1099
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1099
Figure 104136995-A0202-12-0633-1228
<210> 1100
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 1100
Figure 104136995-A0202-12-0633-1229
<210> 1101
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1101
Figure 104136995-A0202-12-0633-1230
<210> 1102
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1102
Figure 104136995-A0202-12-0634-1231
<210> 1103
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1103
Figure 104136995-A0202-12-0634-1232
<210> 1104
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1104
Figure 104136995-A0202-12-0634-1233
<210> 1105
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1105
Figure 104136995-A0202-12-0634-1234
<210> 1106
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1106
Figure 104136995-A0202-12-0635-1235
<210> 1107
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1107
Figure 104136995-A0202-12-0635-1236
<210> 1108
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1108
Figure 104136995-A0202-12-0635-1237
<210> 1109
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1109
Figure 104136995-A0202-12-0635-1238
<210> 1110
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1110
Figure 104136995-A0202-12-0636-1239
<210> 1111
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1111
Figure 104136995-A0202-12-0636-1240
<210> 1112
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1112
Figure 104136995-A0202-12-0636-1241
<210> 1113
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 1113
Figure 104136995-A0202-12-0636-1242
<210> 1114
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 1114
Figure 104136995-A0202-12-0637-1243
<210> 1115
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1115
Figure 104136995-A0202-12-0637-1244
<210> 1116
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1116
Figure 104136995-A0202-12-0637-1245
<210> 1117
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1117
Figure 104136995-A0202-12-0637-1246
<210> 1118
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1118
Figure 104136995-A0202-12-0638-1247
<210> 1119
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1119
Figure 104136995-A0202-12-0638-1248
<210> 1120
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1120
Figure 104136995-A0202-12-0638-1249
<210> 1121
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1121
Figure 104136995-A0202-12-0638-1250
<210> 1122
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1122
Figure 104136995-A0202-12-0639-1251
<210> 1123
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1123
Figure 104136995-A0202-12-0639-1252
<210> 1124
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1124
Figure 104136995-A0202-12-0639-1253
<210> 1125
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1125
Figure 104136995-A0202-12-0639-1254
<210> 1126
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1126
Figure 104136995-A0202-12-0640-1255
<210> 1127
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1127
Figure 104136995-A0202-12-0640-1256
<210> 1128
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1128
Figure 104136995-A0202-12-0640-1257
<210> 1129
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1129
Figure 104136995-A0202-12-0640-1258
<210> 1130
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1130
Figure 104136995-A0202-12-0641-1259
<210> 1131
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1131
Figure 104136995-A0202-12-0641-1260
<210> 1132
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1132
Figure 104136995-A0202-12-0641-1261
<210> 1133
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1133
Figure 104136995-A0202-12-0641-1262
<210> 1134
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1134
Figure 104136995-A0202-12-0642-1263
<210> 1135
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1135
Figure 104136995-A0202-12-0642-1264
<210> 1136
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1136
Figure 104136995-A0202-12-0642-1265
<210> 1137
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1137
Figure 104136995-A0202-12-0642-1266
<210> 1138
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1138
Figure 104136995-A0202-12-0643-1267
<210> 1139
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1139
Figure 104136995-A0202-12-0643-1268
<210> 1140
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1140
Figure 104136995-A0202-12-0643-1269
<210> 1141
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1141
Figure 104136995-A0202-12-0643-1270
<210> 1142
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1142
Figure 104136995-A0202-12-0644-1271
<210> 1143
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1143
Figure 104136995-A0202-12-0644-1272
<210> 1144
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1144
Figure 104136995-A0202-12-0644-1273
<210> 1145
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1145
Figure 104136995-A0202-12-0644-1274
<210> 1146
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1146
Figure 104136995-A0202-12-0645-1275
<210> 1147
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1147
Figure 104136995-A0202-12-0645-1276
<210> 1148
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 1148
Figure 104136995-A0202-12-0645-1277
<210> 1149
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1149
Figure 104136995-A0202-12-0645-1278
<210> 1150
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1150
Figure 104136995-A0202-12-0646-1279
<210> 1151
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1151
Figure 104136995-A0202-12-0646-1280
<210> 1152
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1152
Figure 104136995-A0202-12-0646-1281
<210> 1153
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1153
Figure 104136995-A0202-12-0646-1282
<210> 1154
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1154
Figure 104136995-A0202-12-0647-1283
<210> 1155
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1155
Figure 104136995-A0202-12-0647-1284
<210> 1156
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1156
Figure 104136995-A0202-12-0647-1285
<210> 1157
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1157
Figure 104136995-A0202-12-0648-1286
<210> 1158
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1158
Figure 104136995-A0202-12-0648-1287
<210> 1159
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1159
Figure 104136995-A0202-12-0648-1288
<210> 1160
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1160
Figure 104136995-A0202-12-0648-1289
<210> 1161
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1161
Figure 104136995-A0202-12-0649-1290
<210> 1162
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1162
Figure 104136995-A0202-12-0649-1291
<210> 1163
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1163
Figure 104136995-A0202-12-0649-1292
<210> 1164
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1164
Figure 104136995-A0202-12-0649-1293
<210> 1165
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1165
Figure 104136995-A0202-12-0650-1294
<210> 1166
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1166
Figure 104136995-A0202-12-0650-1295
<210> 1167
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1167
Figure 104136995-A0202-12-0650-1296
<210> 1168
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1168
Figure 104136995-A0202-12-0650-1297
<210> 1169
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 1169
Figure 104136995-A0202-12-0651-1298
<210> 1170
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1170
Figure 104136995-A0202-12-0651-1299
<210> 1171
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1171
Figure 104136995-A0202-12-0651-1300
<210> 1172
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1172
Figure 104136995-A0202-12-0651-1301
<210> 1173
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1173
Figure 104136995-A0202-12-0652-1302
<210> 1174
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1174
Figure 104136995-A0202-12-0652-1303
<210> 1175
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1175
Figure 104136995-A0202-12-0652-1304
<210> 1176
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1176
Figure 104136995-A0202-12-0652-1305
<210> 1177
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1177
Figure 104136995-A0202-12-0653-1306
<210> 1178
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1178
Figure 104136995-A0202-12-0653-1307
<210> 1179
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1179
Figure 104136995-A0202-12-0653-1308
<210> 1180
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1180
Figure 104136995-A0202-12-0653-1309
<210> 1181
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1181
Figure 104136995-A0202-12-0654-1310
<210> 1182
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1182
Figure 104136995-A0202-12-0654-1311
<210> 1183
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1183
Figure 104136995-A0202-12-0654-1312
<210> 1184
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1184
Figure 104136995-A0202-12-0654-1313
<210> 1185
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1185
Figure 104136995-A0202-12-0655-1314
<210> 1186
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1186
Figure 104136995-A0202-12-0655-1315
<210> 1187
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1187
Figure 104136995-A0202-12-0655-1316
<210> 1188
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1188
Figure 104136995-A0202-12-0655-1317
<210> 1189
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1189
Figure 104136995-A0202-12-0656-1318
<210> 1190
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1190
Figure 104136995-A0202-12-0656-1319
<210> 1191
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1191
Figure 104136995-A0202-12-0656-1320
<210> 1192
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1192
Figure 104136995-A0202-12-0656-1321
<210> 1193
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1193
Figure 104136995-A0202-12-0657-1322
<210> 1194
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1194
Figure 104136995-A0202-12-0657-1323
<210> 1195
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1195
Figure 104136995-A0202-12-0657-1324
<210> 1196
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1196
Figure 104136995-A0202-12-0657-1325
<210> 1197
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1197
Figure 104136995-A0202-12-0658-1326
<210> 1198
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1198
Figure 104136995-A0202-12-0658-1327
<210> 1199
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1199
Figure 104136995-A0202-12-0658-1328
<210> 1200
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1200
Figure 104136995-A0202-12-0658-1329
<210> 1201
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1201
Figure 104136995-A0202-12-0659-1330
<210> 1202
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1202
Figure 104136995-A0202-12-0659-1331
<210> 1203
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1203
Figure 104136995-A0202-12-0659-1332
<210> 1204
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1204
Figure 104136995-A0202-12-0659-1333
<210> 1205
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1205
Figure 104136995-A0202-12-0660-1334
<210> 1206
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1206
Figure 104136995-A0202-12-0660-1335
<210> 1207
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1207
Figure 104136995-A0202-12-0660-1336
<210> 1208
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1208
Figure 104136995-A0202-12-0660-1337
<210> 1209
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1209
Figure 104136995-A0202-12-0661-1338
<210> 1210
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1210
Figure 104136995-A0202-12-0661-1339
<210> 1211
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1211
Figure 104136995-A0202-12-0661-1340
<210> 1212
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 1212
Figure 104136995-A0202-12-0662-1341
<210> 1213
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1213
Figure 104136995-A0202-12-0662-1342
<210> 1214
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1214
Figure 104136995-A0202-12-0662-1343
<210> 1215
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1215
Figure 104136995-A0202-12-0662-1344
<210> 1216
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1216
Figure 104136995-A0202-12-0663-1345
<210> 1217
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1217
Figure 104136995-A0202-12-0663-1346
<210> 1218
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1218
Figure 104136995-A0202-12-0663-1347
<210> 1219
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1219
Figure 104136995-A0202-12-0663-1348
<210> 1220
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1220
Figure 104136995-A0202-12-0664-1349
<210> 1221
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1221
Figure 104136995-A0202-12-0664-1350
<210> 1222
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1222
Figure 104136995-A0202-12-0664-1351
<210> 1223
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1223
Figure 104136995-A0202-12-0664-1352
<210> 1224
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 1224
Figure 104136995-A0202-12-0665-1353
<210> 1225
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1225
Figure 104136995-A0202-12-0665-1354
<210> 1226
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1226
Figure 104136995-A0202-12-0665-1355
<210> 1227
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 1227
Figure 104136995-A0202-12-0665-1356
<210> 1228
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1228
Figure 104136995-A0202-12-0666-1357
<210> 1229
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1229
Figure 104136995-A0202-12-0666-1358
<210> 1230
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1230
Figure 104136995-A0202-12-0666-1359
<210> 1231
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1231
Figure 104136995-A0202-12-0666-1360
<210> 1232
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1232
Figure 104136995-A0202-12-0667-1361
<210> 1233
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1233
Figure 104136995-A0202-12-0667-1362
<210> 1234
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1234
Figure 104136995-A0202-12-0667-1363
<210> 1235
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1235
Figure 104136995-A0202-12-0667-1364
<210> 1236
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1236
Figure 104136995-A0202-12-0668-1365
<210> 1237
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1237
Figure 104136995-A0202-12-0668-1366
<210> 1238
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1238
Figure 104136995-A0202-12-0668-1367
<210> 1239
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1239
Figure 104136995-A0202-12-0668-1368
<210> 1240
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1240
Figure 104136995-A0202-12-0669-1369
<210> 1241
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1241
Figure 104136995-A0202-12-0669-1370
<210> 1242
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1242
Figure 104136995-A0202-12-0669-1371
<210> 1243
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1243
Figure 104136995-A0202-12-0669-1372
<210> 1244
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1244
Figure 104136995-A0202-12-0670-1373
<210> 1245
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1245
Figure 104136995-A0202-12-0670-1374
<210> 1246
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1246
Figure 104136995-A0202-12-0670-1375
<210> 1247
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1247
Figure 104136995-A0202-12-0670-1376
<210> 1248
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1248
Figure 104136995-A0202-12-0671-1377
<210> 1249
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1249
Figure 104136995-A0202-12-0671-1378
<210> 1250
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1250
Figure 104136995-A0202-12-0671-1379
<210> 1251
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1251
Figure 104136995-A0202-12-0671-1380
<210> 1252
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1252
Figure 104136995-A0202-12-0672-1381
<210> 1253
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1253
Figure 104136995-A0202-12-0672-1382
<210> 1254
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1254
Figure 104136995-A0202-12-0672-1383
<210> 1255
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1255
Figure 104136995-A0202-12-0672-1384
<210> 1256
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1256
Figure 104136995-A0202-12-0673-1385
<210> 1257
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1257
Figure 104136995-A0202-12-0673-1386
<210> 1258
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1258
Figure 104136995-A0202-12-0673-1387
<210> 1259
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1259
Figure 104136995-A0202-12-0673-1388
<210> 1260
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1260
Figure 104136995-A0202-12-0674-1389
<210> 1261
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1261
Figure 104136995-A0202-12-0674-1390
<210> 1262
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1262
Figure 104136995-A0202-12-0674-1391
<210> 1263
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1263
Figure 104136995-A0202-12-0674-1392
<210> 1264
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1264
Figure 104136995-A0202-12-0675-1393
<210> 1265
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1265
Figure 104136995-A0202-12-0675-1394
<210> 1266
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1266
Figure 104136995-A0202-12-0675-1395
<210> 1267
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1267
Figure 104136995-A0202-12-0676-1396
<210> 1268
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1268
Figure 104136995-A0202-12-0676-1397
<210> 1269
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1269
Figure 104136995-A0202-12-0676-1398
<210> 1270
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1270
Figure 104136995-A0202-12-0676-1399
<210> 1271
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1271
Figure 104136995-A0202-12-0677-1400
<210> 1272
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 1272
Figure 104136995-A0202-12-0677-1401
<210> 1273
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1273
Figure 104136995-A0202-12-0677-1402
<210> 1274
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1274
Figure 104136995-A0202-12-0677-1403
<210> 1275
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1275
Figure 104136995-A0202-12-0678-1404
<210> 1276
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1276
Figure 104136995-A0202-12-0678-1405
<210> 1277
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1277
Figure 104136995-A0202-12-0678-1406
<210> 1278
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1278
Figure 104136995-A0202-12-0678-1407
<210> 1279
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 1279
Figure 104136995-A0202-12-0679-1408
<210> 1280
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1280
Figure 104136995-A0202-12-0679-1409
<210> 1281
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸〞
<400> 1281
Figure 104136995-A0202-12-0679-1410
<210> 1282
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1282
Figure 104136995-A0202-12-0679-1411
<210> 1283
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明： 合成寡核苷酸"
<400> 1283
Figure 104136995-A0202-12-0680-1412
<210> 1284
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1284
Figure 104136995-A0202-12-0680-1413
<210> 1285
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1285
Figure 104136995-A0202-12-0680-1414
<210> 1286
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1286
Figure 104136995-A0202-12-0680-1415
<210> 1287
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1287
Figure 104136995-A0202-12-0681-1416
<210> 1288
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1288
Figure 104136995-A0202-12-0681-1417
<210> 1289
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1289
Figure 104136995-A0202-12-0681-1418
<210> 1290
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1290
Figure 104136995-A0202-12-0681-1419
<210> 1291
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1291
Figure 104136995-A0202-12-0682-1420
<210> 1292
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註="人工序列說明：合成寡核苷酸"
<400> 1292
Figure 104136995-A0202-12-0682-1421
由於本案的圖為實驗數據，並非本案的代表圖。
故本案無指定代表圖。

Claims (21)

  1. 一種用於抑制細胞中B型肝炎病毒(HBV)表現之雙股RNAi劑，其中該雙股RNAi劑包含形成雙股區之正義股與反義股，其中該正義股包含5’-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3’(SEQ ID NO：39)，且該反義股包含5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：40)，其中該正義股所有核苷酸及該反義股所有核苷酸為經修飾之核苷酸，其中該正義股係接合附接在3’-末端之配體，及其中該配體為一或多種利用二價或三價之分支鏈結體附接之GalNAc衍生物。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之雙股RNAi劑，其中至少一個該經修飾之核苷酸係去氧-核苷酸、3’-末端去氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸、2'-氟修飾之核苷酸、2'-去氧-修飾之核苷酸、鎖核苷酸、非鎖核苷酸、構型限制性核苷酸、限制性乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、2’-胺基-修飾之核苷酸、2’-O-烯丙基-修飾之核苷酸、2’-C-烷基-修飾之核苷酸、2’-羥基-修飾之核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、2’-O-烷基-修飾之核苷酸、N-嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、四氫哌喃修飾之核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾之核苷酸、環己烯基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基之核苷酸、包含甲基膦酸酯基之核 苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、或包含5’-磷酸酯擬似物之核苷酸。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之雙股RNAi劑，其中，該5’-磷酸酯擬似物為5’-乙烯基磷酸酯(5’-VP)。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之雙股RNAi劑，其中正義股包含5’-gsusguGfcAfCfUfucgcuucaca-3’(SEQ ID NO：41)及反義股包含5’-usGfsugaAfgCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：42)，其中a、g、c、與u分別為2'-O-甲基(2'-OMe)A、2'-OMe G、2'-OMe C和2'-OMe U；Af、Cf、Gf和Uf分別為2'-氟A、2'-氟G、2'-氟C和2'-氟U；及s為硫代磷酸酯鏈結基。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之雙股RNAi劑，其中至少一股包含至少1個或至少2個核苷酸之3’突出段。
  6. 如申請專利範圍第1項所述之雙股RNAi劑，其中雙股區為19-21對核甘酸之長度，23-27對核甘酸之長度，或21-23對核甘酸之長度。
  7. 如申請專利範圍第1項所述之雙股RNAi劑，其中該正義股和該反義股各具有19-30個核甘酸。
  8. 如申請專利範圍第1項所述之雙股RNAi劑，其中該配體為
    Figure 104136995-A0305-02-0687-4
  9. 如申請專利範圍第8項所述之雙股RNAi劑，其中該RNAi劑係接合如下示之配體
    Figure 104136995-A0305-02-0687-5
     其中X為O或S。
  10. 如申請專利範圍第1項所述之雙股RNAi劑，其中該正義股包含5’-gsusguGfcAfCfUfucgcuucacaL96-3’(SEQ ID NO：1275)，且該反義股包含5’-usGfsugaAfgCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：1285)，其中a、c、g以及u分別為2'-O-甲基(2'-OMe)A、2'-OMe C、2'-OMe G以及2'-OMe U；Af、Cf、Gf以及Uf分別為2'-氟A、2'-氟C、2'-氟G以及2'-氟U；s為硫代磷酸酯鏈結基；及L96為N-[參(GalNAc-烷基)-醯胺基癸醯基)]-4-羥基脯胺醇。
  11. 一種細胞，其包含如申請專利範圍第1至10項中任一項所述之雙股RNAi劑。
  12. 一種醫藥組成物，其包含(a)如申請專利範圍第1至10項中任一項所述之雙股RNAi劑；(b)醫藥上可接受之載劑。
  13. 一種在體外抑制細胞中B型肝炎病毒(HBV)基因表現之方法，該方法包括：(a)使細胞與如申請專利範圍第1至10項中任一項所述之雙股RNAi劑接觸；及(b)維持步驟(a)所產生之細胞一段足以達到HBV基因之mRNA轉錄本降解之時間，藉以抑制細胞中HBV基因之表現。
  14. 如申請專利範圍第1至10項中任一項所述之雙股RNAi劑，其係用於降低感染HBV之個體中B型肝炎病毒(HBV)病毒量；係用於降低感染HBV之個體中共價閉合環狀HBV(ccc)DNA含量；係用於降低感染HBV之個體中B型肝炎病毒(HBV)抗原含量；係用於降低感染HBV之個體中丙胺酸胺基轉化酶(ALT)含量；係用於降低感染HBV之個體中天冬胺酸胺基轉化酶(AST)含量；係用於提高感染HBV之個體中抗-B型肝炎病毒(HBV)抗體含量。
  15. 如申請專利範圍第12項中所述之醫藥組成物，係用於降低感染HBV之個體中B型肝炎病毒(HBV)病毒量；係用於降低感染HBV之個體中共價閉合環狀 HBV(ccc)DNA含量；係用於降低感染HBV之個體中B型肝炎病毒(HBV)抗原含量；係用於降低感染HBV之個體中丙胺酸胺基轉化酶(ALT)含量；係用於降低感染HBV之個體中天冬胺酸胺基轉化酶(AST)含量；係用於提高感染HBV之個體中抗-B型肝炎病毒(HBV)抗體含量。
  16. 如申請專利範圍第1至10項所述之雙股RNAi劑，其中該雙股RNAi劑係用於治療患有B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV-相關病症。
  17. 如申請專利範圍第12項中所述之醫藥組成物，其中該組成物係用於治療患有B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV-相關病症。
  18. 如申請專利範圍第12項中所述之醫藥組成物，其中該雙股RNAi劑之投藥劑量為約0.01mg/kg至約10mg/kg或約0.5mg/kg至約50mg/kg；約10mg/kg至約30mg/kg；約3mg/kg；約10mg/kg；約50mg至200mg。
  19. 如申請專利範圍第12項中所述之醫藥組成物，其中該雙股RNAi劑係經皮下或靜脈內投藥。
  20. 如申請專利範圍第12項中所述之醫藥組成物，其中包括對個體投與另一種治療劑。
  21. 如申請專利範圍第20項中所述之醫藥組成物，該另一種治療劑係選自下列各物所組成群中：抗病毒劑、反轉錄酶抑制劑、免疫刺激劑、醫療性疫苗、病毒侵入抑制劑、抑制HbsAg分泌或釋出之寡核苷酸、殼體抑 制劑、共價閉合環狀(ccc)DNA抑制劑，及上述任一者之組合。
TW104136995A 2014-11-10 2015-11-10 Ｂ型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｉＲＮＡ組成物及其用途方法 TWI710633B (zh)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462077672P 2014-11-10 2014-11-10
US201462077799P 2014-11-10 2014-11-10
US62/077,799 2014-11-10
US62/077,672 2014-11-10
US201562137464P 2015-03-24 2015-03-24
US62/137,464 2015-03-24

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201631156A TW201631156A (zh) 2016-09-01
TWI710633B true TWI710633B (zh) 2020-11-21

Family

ID=54542627

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW104136994A TW201628659A (zh) 2014-11-10 2015-11-10 Ｄ型肝炎病毒（ＨＤＶ）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
TW109136893A TWI769565B (zh) 2014-11-10 2015-11-10 Ｂ型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｉＲＮＡ組成物及其用途方法
TW104136995A TWI710633B (zh) 2014-11-10 2015-11-10 Ｂ型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｉＲＮＡ組成物及其用途方法
TW111121452A TWI834187B (zh) 2014-11-10 2015-11-10 Ｂ型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｉＲＮＡ組成物及其用途方法

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW104136994A TW201628659A (zh) 2014-11-10 2015-11-10 Ｄ型肝炎病毒（ＨＤＶ）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
TW109136893A TWI769565B (zh) 2014-11-10 2015-11-10 Ｂ型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｉＲＮＡ組成物及其用途方法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW111121452A TWI834187B (zh) 2014-11-10 2015-11-10 Ｂ型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｉＲＮＡ組成物及其用途方法

Country Status (23)

Country Link
US (4) US10640770B2 (zh)
EP (3) EP3647424A1 (zh)
JP (5) JP6728163B2 (zh)
KR (3) KR20170077251A (zh)
CN (4) CN108064294B (zh)
AU (4) AU2015346513A1 (zh)
BR (2) BR112017008868B1 (zh)
CA (2) CA3233743A1 (zh)
CY (1) CY1122520T1 (zh)
DK (1) DK3218489T3 (zh)
ES (1) ES2761912T3 (zh)
HK (1) HK1255502A1 (zh)
HR (1) HRP20192177T1 (zh)
HU (1) HUE047535T2 (zh)
JO (2) JOP20200092A1 (zh)
MA (2) MA40843A (zh)
MX (2) MX2017005958A (zh)
PL (1) PL3218489T3 (zh)
PT (1) PT3218489T (zh)
SG (3) SG11201703638XA (zh)
SI (1) SI3218489T1 (zh)
TW (4) TW201628659A (zh)
WO (2) WO2016077349A1 (zh)

Families Citing this family (64)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8575327B2 (en) 2003-06-12 2013-11-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Conserved HBV and HCV sequences useful for gene silencing
KR102554783B1 (ko) 2011-06-30 2023-07-11 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 B형 간염 바이러스의 유전자 발현 저해용 조성물 및 방법
JOP20200092A1 (ar) 2014-11-10 2017-06-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc تركيبات iRNA لفيروس الكبد B (HBV) وطرق لاستخدامها
CN108271387B (zh) 2015-08-07 2023-06-27 箭头药业股份有限公司 乙型肝炎病毒感染的RNAi疗法
EP3334499A4 (en) 2015-08-14 2019-04-17 University of Massachusetts BIOACTIVE CONJUGATES FOR THE RELEASE OF OLIGONUCLEOTIDES
US10478503B2 (en) 2016-01-31 2019-11-19 University Of Massachusetts Branched oligonucleotides
MA45478A (fr) 2016-04-11 2019-02-20 Arbutus Biopharma Corp Compositions de conjugués d'acides nucléiques ciblés
JOP20170161A1 (ar) 2016-08-04 2019-01-30 Arrowhead Pharmaceuticals Inc عوامل RNAi للعدوى بفيروس التهاب الكبد ب
CN107703197B (zh) * 2016-08-08 2020-01-17 西南医科大学附属中医医院 一种快速检测乙肝环状dna的方法
JP6970187B2 (ja) * 2016-09-14 2021-11-24 ヤンセン バイオファーマ インク． 修飾オリゴヌクレオチド及び使用方法
WO2018089914A1 (en) * 2016-11-11 2018-05-17 Alios Biopharma, Inc. Oligonucleotide targeting strategy for hbv cccdna
CA3043768A1 (en) 2016-11-29 2018-06-07 PureTech Health LLC Exosomes for delivery of therapeutic agents
EP3610017A2 (en) * 2017-04-11 2020-02-19 Arbutus Biopharma Corporation Targeted compositions
JP2020516673A (ja) * 2017-04-18 2020-06-11 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． Ｂ型肝炎ウイルス（ｈｂｖ）感染を有する対象を処置する方法
US11324820B2 (en) 2017-04-18 2022-05-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods for the treatment of subjects having a hepatitis b virus (HBV) infection
BR112019021852A2 (pt) * 2017-04-18 2020-06-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Agente de rnai e uma vacina contra hbv, uso ou método e kit para tratamento
US20220265817A1 (en) * 2017-05-31 2022-08-25 Arbutus Biopharma Corporation Therapeutic compositions and methods for treating hepatitis b
US10844377B2 (en) 2017-06-23 2020-11-24 University Of Massachusetts Two-tailed self-delivering siRNA
SG11202002149XA (en) * 2017-09-14 2020-04-29 Janssen Biopharma Inc Galnac derivatives
RS64001B1 (sr) * 2017-10-20 2023-03-31 Dicerna Pharmaceuticals Inc Metode za lečenje infekcije hepatitisom b
JP7365052B2 (ja) 2017-12-01 2023-10-19 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド 核酸、当該核酸を含む組成物及び複合体ならびに調製方法と使用
KR20200095483A (ko) 2017-12-01 2020-08-10 쑤저우 리보 라이프 사이언스 컴퍼니, 리미티드 핵산, 이를 포함하는 조성물과 컨쥬게이트, 및 그의 제조 방법과 용도
CN110944675B9 (zh) 2017-12-01 2024-08-09 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
EP3719126A4 (en) 2017-12-01 2021-10-20 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. NUCLEIC ACID, COMPOSITION AND CONJUGATE CONTAINING NUCLEIC ACID, ASSOCIATED PREPARATION PROCESS AND USE
JP2021504415A (ja) * 2017-12-01 2021-02-15 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッドＳｕｚｈｏｕ Ｒｉｂｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｏ．， Ｌｔｄ． 二本鎖オリゴヌクレオチド、二本鎖オリゴヌクレオチドを含む組成物および複合体ならびに調製方法と使用
US11633482B2 (en) 2017-12-29 2023-04-25 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Conjugates and preparation and use thereof
CN112055749A (zh) 2018-04-05 2020-12-08 豪夫迈·罗氏有限公司 Fubp1抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途
CN108588097B (zh) * 2018-04-28 2021-07-13 北京锦篮基因科技有限公司 改造后的hbv基因组和相关组合物及其应用
KR20210018267A (ko) * 2018-05-07 2021-02-17 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 간외 전달
EP3837366A1 (en) * 2018-08-13 2021-06-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis b virus (hbv) dsrna agent compositions and methods of use thereof
EP3842534A4 (en) * 2018-08-21 2022-07-06 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. NUCLEIC ACID, COMPOSITION AND CONJUGATE CONTAINING NUCLEIC ACID AND METHOD OF USE THEREOF
US11279930B2 (en) * 2018-08-23 2022-03-22 University Of Massachusetts O-methyl rich fully stabilized oligonucleotides
WO2020063198A1 (zh) 2018-09-30 2020-04-02 苏州瑞博生物技术有限公司 一种siRNA缀合物及其制备方法和用途
US20210395751A1 (en) * 2018-10-31 2021-12-23 The University Of Sydney Compositions and methods for treating viral infections
AU2019370561A1 (en) * 2018-11-02 2021-06-17 Arbutus Biopharma Corporation Bivalent targeted conjugates
US20210388356A1 (en) * 2018-11-09 2021-12-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified double stranded oligonucleotide
CA3122402A1 (en) * 2018-12-20 2020-06-25 Vir Biotechnology, Inc. Combination hbv therapy
CN111378656B (zh) * 2018-12-28 2022-07-26 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种抑制埃博拉病毒的核酸、含有该核酸的药物组合物及其用途
CN111377985B (zh) * 2018-12-29 2023-11-10 苏州瑞博生物技术股份有限公司 化合物和缀合物及其制备方法和用途
CN109979531B (zh) * 2019-03-29 2021-08-31 北京市商汤科技开发有限公司 一种基因变异识别方法、装置和存储介质
CN114126628A (zh) * 2019-05-13 2022-03-01 维尔生物科技有限公司 用于治疗乙型肝炎病毒(hbv)感染的组合物及方法
EP3974529A4 (en) * 2019-05-22 2024-02-07 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. NUCLEIC ACID, PHARMACEUTICAL COMPOSITION, CONJUGATE, PROCESS OF PREPARATION AND USE
CN111973618B (zh) * 2019-05-23 2024-02-02 苏州瑞博生物技术股份有限公司 核酸、药物组合物与siRNA缀合物及制备方法和用途
CN110218728A (zh) * 2019-06-28 2019-09-10 厦门甘宝利生物医药有限公司 一种新化合物及其应用
MX2022001710A (es) 2019-08-09 2022-05-10 Univ Massachusetts Oligonucleótidos modificados químicamente dirigidos a los snp.
WO2021107097A1 (ja) * 2019-11-28 2021-06-03 株式会社ボナック Ｂ型肝炎治療用核酸分子
MX2022007909A (es) 2019-12-24 2022-07-21 Hoffmann La Roche Combinacion farmaceutica de agentes antivirales que actuan sobre hbv y/o un inmunomodulador para el tratamiento de hbv.
AU2020410993A1 (en) 2019-12-24 2022-06-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical combination of a therapeutic oligonucleotide targeting hbv and a tlr7 agonist for treatment of hbv
WO2021198958A1 (en) 2020-04-01 2021-10-07 Janssen Biopharma, Inc. Nucleic acid polymers
AU2021288648A1 (en) 2020-06-10 2023-02-09 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co., Ltd. Conjugate of double-stranded siRNA analogue
CN115702006A (zh) * 2020-06-10 2023-02-14 南京明德新药研发有限公司 缀合基团及其缀合物
CA3186763A1 (en) * 2020-06-11 2021-12-16 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co., Ltd. Conjugate of double-stranded sirna analogue
US20210403908A1 (en) * 2020-06-22 2021-12-30 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treatment of hepatitis d virus infection
US20230242621A1 (en) 2020-06-24 2023-08-03 Vir Biotechnology, Inc. Engineered hepatitis b virus neutralizing antibodies and uses thereof
WO2022088342A1 (zh) * 2020-10-28 2022-05-05 苏州吉玛基因股份有限公司 一种靶向FOXP3基因的siRNA及其修饰方法
CN114621951A (zh) * 2020-12-10 2022-06-14 施能康生物科技有限公司 靶向乙肝病毒的核酸及其用途
WO2022131883A1 (ko) * 2020-12-18 2022-06-23 올릭스 주식회사 HBV 발현을 억제하는 RNAi 제제 및 이의 용도
CN114763367B (zh) * 2021-01-14 2024-08-06 施能康生物科技有限公司 化合物、缀合物及其用途
WO2022189861A1 (en) 2021-03-08 2022-09-15 Tollys Carbohydrate conjugates of tlr3 ligands and uses thereof
CN113171371B (zh) * 2021-04-13 2022-01-25 厦门甘宝利生物医药有限公司 一种抑制乙型肝炎病毒基因表达的rna抑制剂及其应用
CN117836006A (zh) * 2021-08-04 2024-04-05 和博医药有限公司 用于递送治疗活性剂的配体缀合物
CA3234478A1 (en) 2021-11-11 2023-05-19 Souphalone LUANGSAY Pharmaceutical combinations for treatment of hbv
TW202329987A (zh) * 2021-11-29 2023-08-01 大陸商上海舶望製藥有限公司 用於抑制乙型肝炎病毒（hbv）蛋白表達的組合物和方法
WO2023246750A1 (zh) * 2022-06-21 2023-12-28 正大天晴药业集团股份有限公司 用于抑制乙型肝炎病毒的双链核糖核酸

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130005793A1 (en) * 2011-06-30 2013-01-03 Arrowhead Research Corporation Compositions and Methods for Inhibiting Gene Expression of Hepatitis B Virus

Family Cites Families (351)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US513030A (en) 1894-01-16 Machine for waxing or coating paper
US564562A (en) 1896-07-21 Joseph p
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
US4476301A (en) 1982-04-29 1984-10-09 Centre National De La Recherche Scientifique Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon
JPS5927900A (ja) 1982-08-09 1984-02-14 Wakunaga Seiyaku Kk 固定化オリゴヌクレオチド
FR2540122B1 (fr) 1983-01-27 1985-11-29 Centre Nat Rech Scient Nouveaux composes comportant une sequence d'oligonucleotide liee a un agent d'intercalation, leur procede de synthese et leur application
US4605735A (en) 1983-02-14 1986-08-12 Wakunaga Seiyaku Kabushiki Kaisha Oligonucleotide derivatives
US4948882A (en) 1983-02-22 1990-08-14 Syngene, Inc. Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis
US4824941A (en) 1983-03-10 1989-04-25 Julian Gordon Specific antibody to the native form of 2'5'-oligonucleotides, the method of preparation and the use as reagents in immunoassays or for binding 2'5'-oligonucleotides in biological systems
US4587044A (en) 1983-09-01 1986-05-06 The Johns Hopkins University Linkage of proteins to nucleic acids
US5118802A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology DNA-reporter conjugates linked via the 2' or 5'-primary amino group of the 5'-terminal nucleoside
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
US5550111A (en) 1984-07-11 1996-08-27 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
US5430136A (en) 1984-10-16 1995-07-04 Chiron Corporation Oligonucleotides having selectably cleavable and/or abasic sites
US5258506A (en) 1984-10-16 1993-11-02 Chiron Corporation Photolabile reagents for incorporation into oligonucleotide chains
US4828979A (en) 1984-11-08 1989-05-09 Life Technologies, Inc. Nucleotide analogs for nucleic acid labeling and detection
US4897355A (en) 1985-01-07 1990-01-30 Syntex (U.S.A.) Inc. N[ω,(ω-1)-dialkyloxy]- and N-[ω,(ω-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5235033A (en) 1985-03-15 1993-08-10 Anti-Gene Development Group Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5405938A (en) 1989-12-20 1995-04-11 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US4762779A (en) 1985-06-13 1988-08-09 Amgen Inc. Compositions and methods for functionalizing nucleic acids
US5139941A (en) 1985-10-31 1992-08-18 University Of Florida Research Foundation, Inc. AAV transduction vectors
US5317098A (en) 1986-03-17 1994-05-31 Hiroaki Shizuya Non-radioisotope tagging of fragments
JPS638396A (ja) 1986-06-30 1988-01-14 Wakunaga Pharmaceut Co Ltd ポリ標識化オリゴヌクレオチド誘導体
US4837028A (en) 1986-12-24 1989-06-06 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US4920016A (en) 1986-12-24 1990-04-24 Linear Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US4904582A (en) 1987-06-11 1990-02-27 Synthetic Genetics Novel amphiphilic nucleic acid conjugates
ATE113059T1 (de) 1987-06-24 1994-11-15 Florey Howard Inst Nukleosid-derivate.
US5585481A (en) 1987-09-21 1996-12-17 Gen-Probe Incorporated Linking reagents for nucleotide probes
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
US5188897A (en) 1987-10-22 1993-02-23 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates
US5525465A (en) 1987-10-28 1996-06-11 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Oligonucleotide-polyamide conjugates and methods of production and applications of the same
DE3738460A1 (de) 1987-11-12 1989-05-24 Max Planck Gesellschaft Modifizierte oligonukleotide
US5082830A (en) 1988-02-26 1992-01-21 Enzo Biochem, Inc. End labeled nucleotide probe
EP0406309A4 (en) 1988-03-25 1992-08-19 The University Of Virginia Alumni Patents Foundation Oligonucleotide n-alkylphosphoramidates
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5109124A (en) 1988-06-01 1992-04-28 Biogen, Inc. Nucleic acid probe linked to a label having a terminal cysteine
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5262536A (en) 1988-09-15 1993-11-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company Reagents for the preparation of 5'-tagged oligonucleotides
US5512439A (en) 1988-11-21 1996-04-30 Dynal As Oligonucleotide-linked magnetic particles and uses thereof
US5599923A (en) 1989-03-06 1997-02-04 Board Of Regents, University Of Tx Texaphyrin metal complexes having improved functionalization
US5457183A (en) 1989-03-06 1995-10-10 Board Of Regents, The University Of Texas System Hydroxylated texaphyrins
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
FR2645866B1 (fr) 1989-04-17 1991-07-05 Centre Nat Rech Scient Nouvelles lipopolyamines, leur preparation et leur emploi
US5391723A (en) 1989-05-31 1995-02-21 Neorx Corporation Oligonucleotide conjugates
US4958013A (en) 1989-06-06 1990-09-18 Northwestern University Cholesteryl modified oligonucleotides
US5451463A (en) 1989-08-28 1995-09-19 Clontech Laboratories, Inc. Non-nucleoside 1,3-diol reagents for labeling synthetic oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5436146A (en) 1989-09-07 1995-07-25 The Trustees Of Princeton University Helper-free stocks of recombinant adeno-associated virus vectors
US5254469A (en) 1989-09-12 1993-10-19 Eastman Kodak Company Oligonucleotide-enzyme conjugate that can be used as a probe in hybridization assays and polymerase chain reaction procedures
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
AU658562B2 (en) 1989-10-24 1995-04-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2' modified oligonucleotides
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
US5292873A (en) 1989-11-29 1994-03-08 The Research Foundation Of State University Of New York Nucleic acids labeled with naphthoquinone probe
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
CA2029273A1 (en) 1989-12-04 1991-06-05 Christine L. Brakel Modified nucleotide compounds
US5486603A (en) 1990-01-08 1996-01-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide having enhanced binding affinity
US5629153A (en) 1990-01-10 1997-05-13 Chiron Corporation Use of DNA-dependent RNA polymerase transcripts as reporter molecules for signal amplification in nucleic acid hybridization assays
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US6783931B1 (en) 1990-01-11 2004-08-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Amine-derivatized nucleosides and oligonucleosides
US5578718A (en) 1990-01-11 1996-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Thiol-derivatized nucleosides
US5670633A (en) 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US7037646B1 (en) 1990-01-11 2006-05-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Amine-derivatized nucleosides and oligonucleosides
US5852188A (en) 1990-01-11 1998-12-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having chiral phosphorus linkages
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
AU7579991A (en) 1990-02-20 1991-09-18 Gilead Sciences, Inc. Pseudonucleosides and pseudonucleotides and their polymers
US5214136A (en) 1990-02-20 1993-05-25 Gilead Sciences, Inc. Anthraquinone-derivatives oligonucleotides
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
US5264618A (en) 1990-04-19 1993-11-23 Vical, Inc. Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules
US5610050A (en) 1990-04-20 1997-03-11 The General Hospital Corporation Methods of preventing viral replication
GB9009980D0 (en) 1990-05-03 1990-06-27 Amersham Int Plc Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides
DE69032425T2 (de) 1990-05-11 1998-11-26 Microprobe Corp., Bothell, Wash. Teststreifen zum Eintauchen für Nukleinsäure-Hybridisierungsassays und Verfahren zur kovalenten Immobilisierung von Oligonucleotiden
AU652566B2 (en) 1990-06-18 1994-09-01 United States of America, as represented by the Secretary, U.S. Department of Commerce, The Eukaryotic expression vector system
US5981276A (en) 1990-06-20 1999-11-09 Dana-Farber Cancer Institute Vectors containing HIV packaging sequences, packaging defective HIV vectors, and uses thereof
US5677437A (en) 1990-07-27 1997-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5218105A (en) 1990-07-27 1993-06-08 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
US5688941A (en) 1990-07-27 1997-11-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods of making conjugated 4' desmethyl nucleoside analog compounds
DE69126530T2 (de) 1990-07-27 1998-02-05 Isis Pharmaceutical, Inc., Carlsbad, Calif. Nuklease resistente, pyrimidin modifizierte oligonukleotide, die die gen-expression detektieren und modulieren
US5623070A (en) 1990-07-27 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5618704A (en) 1990-07-27 1997-04-08 Isis Pharmacueticals, Inc. Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling
US5138045A (en) 1990-07-27 1992-08-11 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5245022A (en) 1990-08-03 1993-09-14 Sterling Drug, Inc. Exonuclease resistant terminally substituted oligonucleotides
NZ239247A (en) 1990-08-03 1993-11-25 Sterling Drug Inc Oligonucleosides containing a non-phosphate inter nucleoside linkage
US5512667A (en) 1990-08-28 1996-04-30 Reed; Michael W. Trifunctional intermediates for preparing 3'-tailed oligonucleotides
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5561225A (en) 1990-09-19 1996-10-01 Southern Research Institute Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages
EP0549686A4 (en) 1990-09-20 1995-01-18 Gilead Sciences Inc Modified internucleoside linkages
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
EP0556301B1 (en) 1990-11-08 2001-01-10 Hybridon, Inc. Incorporation of multiple reporter groups on synthetic oligonucleotides
GB9100304D0 (en) 1991-01-08 1991-02-20 Ici Plc Compound
US7015315B1 (en) 1991-12-24 2006-03-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligonucleotides
US5719262A (en) 1993-11-22 1998-02-17 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having amino acid side chains
US5714331A (en) 1991-05-24 1998-02-03 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
US5539082A (en) 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
US5371241A (en) 1991-07-19 1994-12-06 Pharmacia P-L Biochemicals Inc. Fluorescein labelled phosphoramidites
US5571799A (en) 1991-08-12 1996-11-05 Basco, Ltd. (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response
US5283185A (en) 1991-08-28 1994-02-01 University Of Tennessee Research Corporation Method for delivering nucleic acids into cells
DE59208572D1 (de) 1991-10-17 1997-07-10 Ciba Geigy Ag Bicyclische Nukleoside, Oligonukleotide, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
US5252479A (en) 1991-11-08 1993-10-12 Research Corporation Technologies, Inc. Safe vector for gene therapy
US6235887B1 (en) 1991-11-26 2001-05-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation directed by oligonucleotides containing modified pyrimidines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
ATE515510T1 (de) 1991-12-24 2011-07-15 Isis Pharmaceuticals Inc Durch dna-abschnitte unterbrochene modifizierte oligonukleotide
US6277603B1 (en) 1991-12-24 2001-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. PNA-DNA-PNA chimeric macromolecules
US5595726A (en) 1992-01-21 1997-01-21 Pharmacyclics, Inc. Chromophore probe for detection of nucleic acid
US5565552A (en) 1992-01-21 1996-10-15 Pharmacyclics, Inc. Method of expanded porphyrin-oligonucleotide conjugate synthesis
FR2687679B1 (fr) 1992-02-05 1994-10-28 Centre Nat Rech Scient Oligothionucleotides.
DE4203923A1 (de) 1992-02-11 1993-08-12 Henkel Kgaa Verfahren zur herstellung von polycarboxylaten auf polysaccharid-basis
US5633360A (en) 1992-04-14 1997-05-27 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation
US20030206887A1 (en) 1992-05-14 2003-11-06 David Morrissey RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA)
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
US5587308A (en) 1992-06-02 1996-12-24 The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services Modified adeno-associated virus vector capable of expression from a novel promoter
CA2134773A1 (en) 1992-06-04 1993-12-09 Robert J. Debs Methods and compositions for in vivo gene therapy
AU4541093A (en) 1992-06-18 1994-01-24 Genpharm International, Inc. Methods for producing transgenic non-human animals harboring a yeast artificial chromosome
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
US5272250A (en) 1992-07-10 1993-12-21 Spielvogel Bernard F Boronated phosphoramidate compounds
AU4769893A (en) 1992-07-17 1994-02-14 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Method and reagent for treatment of animal diseases
US6346614B1 (en) 1992-07-23 2002-02-12 Hybridon, Inc. Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
CA2145641C (en) 1992-12-03 2008-05-27 Richard J. Gregory Pseudo-adenovirus vectors
US5478745A (en) 1992-12-04 1995-12-26 University Of Pittsburgh Recombinant viral vector system
US5574142A (en) 1992-12-15 1996-11-12 Microprobe Corporation Peptide linkers for improved oligonucleotide delivery
US5476925A (en) 1993-02-01 1995-12-19 Northwestern University Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups
RU2123492C1 (ru) 1993-02-19 1998-12-20 Ниппон Синяку Ко., Лтд Производные глицерина, средство для доставки физиологически активного вещества и фармацевтическая композиция
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
ES2107205T3 (es) 1993-03-30 1997-11-16 Sanofi Sa Analogos de nucleosidos aciclicos y secuencias oligonucleotidas que los contienen.
DE69407032T2 (de) 1993-03-31 1998-07-02 Sanofi Sa Oligonucleotide mit amidverkettungen die phosphoesterverkettungen einsetzen
DE4311944A1 (de) 1993-04-10 1994-10-13 Degussa Umhüllte Natriumpercarbonatpartikel, Verfahren zu deren Herstellung und sie enthaltende Wasch-, Reinigungs- und Bleichmittelzusammensetzungen
US6191105B1 (en) 1993-05-10 2001-02-20 Protein Delivery, Inc. Hydrophilic and lipophilic balanced microemulsion formulations of free-form and/or conjugation-stabilized therapeutic agents such as insulin
US5955591A (en) 1993-05-12 1999-09-21 Imbach; Jean-Louis Phosphotriester oligonucleotides, amidites and method of preparation
US6015886A (en) 1993-05-24 2000-01-18 Chemgenes Corporation Oligonucleotide phosphate esters
US6294664B1 (en) 1993-07-29 2001-09-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of oligonucleotides
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
CA2176256A1 (en) 1993-11-16 1995-05-26 Lyle John Arnold, Jr. Synthetic oligomers having chirally pure phosphonate internucleosidyl linkages mixed with non-phosphonate internucleosidyl linkages
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5446137B1 (en) 1993-12-09 1998-10-06 Behringwerke Ag Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5599922A (en) 1994-03-18 1997-02-04 Lynx Therapeutics, Inc. Oligonucleotide N3'-P5' phosphoramidates: hybridization and nuclease resistance properties
US5627053A (en) 1994-03-29 1997-05-06 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid
US5625050A (en) 1994-03-31 1997-04-29 Amgen Inc. Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics
WO1995027788A1 (fr) 1994-04-11 1995-10-19 Dainabot Co., Ltd. Polypeptide derive d'une variante du virus de l'hepatite b, gene le codant et adn associe
WO2000022114A1 (en) 1998-10-09 2000-04-20 Ingene, Inc. PRODUCTION OF ssDNA $i(IN VIVO)
US6054299A (en) 1994-04-29 2000-04-25 Conrad; Charles A. Stem-loop cloning vector and method
EP0759979A4 (en) 1994-05-10 1999-10-20 Gen Hospital Corp ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDES INHIBITION OF HEPATITIS C VIRUS
JPH07303485A (ja) 1994-05-13 1995-11-21 Tonen Corp Ｈｃｖアンチセンスｒｎａ、それを含む発現ベクター、及び該ｒｎａ又は発現ベクターを含むｈｃｖ関連疾患治療剤
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US5543152A (en) 1994-06-20 1996-08-06 Inex Pharmaceuticals Corporation Sphingosomes for enhanced drug delivery
US5597696A (en) 1994-07-18 1997-01-28 Becton Dickinson And Company Covalent cyanine dye oligonucleotide conjugates
US5646262A (en) 1994-07-28 1997-07-08 Georgetown University Antisense oligonucleotides against hepatitis B viral replication
US5580731A (en) 1994-08-25 1996-12-03 Chiron Corporation N-4 modified pyrimidine deoxynucleotides and oligonucleotide probes synthesized therewith
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
US6608035B1 (en) 1994-10-25 2003-08-19 Hybridon, Inc. Method of down-regulating gene expression
US5665557A (en) 1994-11-14 1997-09-09 Systemix, Inc. Method of purifying a population of cells enriched for hematopoietic stem cells populations of cells obtained thereby and methods of use thereof
US5571026A (en) 1994-12-09 1996-11-05 Kcs Industries, Inc. Flat mount electrode socket
JP3269301B2 (ja) 1994-12-28 2002-03-25 豊田合成株式会社 ガラスラン用ゴム配合物
US6057153A (en) 1995-01-13 2000-05-02 Yale University Stabilized external guide sequences
US6166197A (en) 1995-03-06 2000-12-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds having pyrimidine nucleotide (S) with 2'and 5 substitutions
WO1996027606A1 (en) 1995-03-06 1996-09-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Improved process for the synthesis of 2'-o-substituted pyrimidines and oligomeric compounds therefrom
CA2220950A1 (en) 1995-05-26 1996-11-28 Somatix Therapy Corporation Delivery vehicles comprising stable lipid/nucleic acid complexes
US7422902B1 (en) 1995-06-07 2008-09-09 The University Of British Columbia Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5981501A (en) 1995-06-07 1999-11-09 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers
CA2222328C (en) 1995-06-07 2012-01-10 Inex Pharmaceuticals Corporation Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5858397A (en) 1995-10-11 1999-01-12 University Of British Columbia Liposomal formulations of mitoxantrone
WO1997014809A2 (en) 1995-10-16 1997-04-24 Dana-Farber Cancer Institute Novel expression vectors and methods of use
US6160109A (en) 1995-10-20 2000-12-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Preparation of phosphorothioate and boranophosphate oligomers
CN1120707C (zh) 1995-11-22 2003-09-10 约翰斯·霍普金斯大学 增强生物分子的细胞摄取的配体
US5998203A (en) 1996-04-16 1999-12-07 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures
US5858401A (en) 1996-01-22 1999-01-12 Sidmak Laboratories, Inc. Pharmaceutical composition for cyclosporines
US5994316A (en) 1996-02-21 1999-11-30 The Immune Response Corporation Method of preparing polynucleotide-carrier complexes for delivery to cells
US5843770A (en) 1996-03-11 1998-12-01 The Immune Response Corporation Antisense constructs directed against viral post-transcriptional regulatory sequences
US5877162A (en) 1996-03-14 1999-03-02 Innovir Laboratories, Inc. Short external guide sequences
AU737680C (en) 1996-05-16 2002-05-02 Nissin Foods Holdings Co., Ltd. Novel compounds having antiviral activity
US6444423B1 (en) 1996-06-07 2002-09-03 Molecular Dynamics, Inc. Nucleosides comprising polydentate ligands
US6610478B1 (en) 1996-08-16 2003-08-26 Yale University Phenotypic conversion of cells mediated by external guide sequences
US5981274A (en) 1996-09-18 1999-11-09 Tyrrell; D. Lorne J. Recombinant hepatitis virus vectors
AUPO434196A0 (en) 1996-12-24 1997-01-23 Crown In The Right Of The Queensland Department Of Health, The An improved therapeutic
US6172209B1 (en) 1997-02-14 2001-01-09 Isis Pharmaceuticals Inc. Aminooxy-modified oligonucleotides and methods for making same
US6576752B1 (en) 1997-02-14 2003-06-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Aminooxy functionalized oligomers
US6639062B2 (en) 1997-02-14 2003-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Aminooxy-modified nucleosidic compounds and oligomeric compounds prepared therefrom
US6034135A (en) 1997-03-06 2000-03-07 Promega Biosciences, Inc. Dimeric cationic lipids
US6770748B2 (en) 1997-03-07 2004-08-03 Takeshi Imanishi Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
DE19725803C1 (de) 1997-06-18 1999-02-11 Deutsches Krebsforsch HBV-gerichtete Antisense-Nukleinsäuren
DE69834038D1 (de) 1997-07-01 2006-05-18 Isis Pharmaceutical Inc Zusammensetzungen und verfahren zur verabreichung von oligonukleotiden über die speiseröhre
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
DE04020014T1 (de) 1997-09-12 2006-01-26 Exiqon A/S Bi-zyklische - Nukleosid,Nnukleotid und Oligonukleotid-Analoga
IL135140A0 (en) 1997-09-17 2001-05-20 Univ East Carolina Multiple target hybridizing nucleic acids, their preparation, compositions, formulation, kits and applications
US6528640B1 (en) 1997-11-05 2003-03-04 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated Synthetic ribonucleic acids with RNAse activity
US6617438B1 (en) 1997-11-05 2003-09-09 Sirna Therapeutics, Inc. Oligoribonucleotides with enzymatic activity
US6320017B1 (en) 1997-12-23 2001-11-20 Inex Pharmaceuticals Corp. Polyamide oligomers
AU747140B2 (en) 1998-01-27 2002-05-09 British Biocell International Limited Method for detection of nucleic acid target sequences involving (in vitro) transcription from an RNA promoter
US7273933B1 (en) 1998-02-26 2007-09-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for synthesis of oligonucleotides
US7045610B2 (en) 1998-04-03 2006-05-16 Epoch Biosciences, Inc. Modified oligonucleotides for mismatch discrimination
IL123998A (en) 1998-04-08 2004-09-27 Galmed Int Ltd Conjugates of bile salts and pharmaceutical preparations containing them
US6531590B1 (en) 1998-04-24 2003-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Processes for the synthesis of oligonucleotide compounds
US6300319B1 (en) 1998-06-16 2001-10-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Targeted oligonucleotide conjugates
US6867294B1 (en) 1998-07-14 2005-03-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligomers having site specific chiral phosphorothioate internucleoside linkages
EP1096921B1 (en) 1998-07-20 2003-04-16 Protiva Biotherapeutics Inc. Liposomal encapsulated nucleic acid-complexes
JP2002527061A (ja) 1998-10-09 2002-08-27 インジーン・インコーポレイテッド ｓｓＤＮＡの酵素的合成
CA2361201A1 (en) 1999-01-28 2000-08-03 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. Composition and method for in vivo and in vitro attenuation of gene expression using double stranded rna
US6465628B1 (en) 1999-02-04 2002-10-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Process for the synthesis of oligomeric compounds
AU3243300A (en) 1999-02-23 2000-09-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Multiparticulate formulation
US7601494B2 (en) 1999-03-17 2009-10-13 The University Of North Carolina At Chapel Hill Method of screening candidate compounds for susceptibility to biliary excretion
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
CA2372085C (en) 1999-05-04 2009-10-27 Exiqon A/S L-ribo-lna analogues
US6525191B1 (en) 1999-05-11 2003-02-25 Kanda S. Ramasamy Conformationally constrained L-nucleosides
US6593466B1 (en) 1999-07-07 2003-07-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Guanidinium functionalized nucleotides and precursors thereof
US6147200A (en) 1999-08-19 2000-11-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-acetamido modified monomers and oligomers
EP1238061A2 (en) 1999-11-24 2002-09-11 Pharmasset, Ltd. A new genotype of hepatitis b virus
AU2358201A (en) 1999-12-03 2001-06-12 Innogenetics N.V. New hbv sequences
WO2001053307A1 (en) 2000-01-21 2001-07-26 Geron Corporation 2'-arabino-fluorooligonucleotide n3'→p5'phosphoramidates: their synthesis and use
US8273866B2 (en) 2002-02-20 2012-09-25 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SINA)
US7491805B2 (en) 2001-05-18 2009-02-17 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
US8202979B2 (en) 2002-02-20 2012-06-19 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid
US20070026394A1 (en) 2000-02-11 2007-02-01 Lawrence Blatt Modulation of gene expression associated with inflammation proliferation and neurite outgrowth using nucleic acid based technologies
US7833992B2 (en) 2001-05-18 2010-11-16 Merck Sharpe & Dohme Conjugates and compositions for cellular delivery
WO2003070918A2 (en) 2002-02-20 2003-08-28 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated Rna interference by modified short interfering nucleic acid
ATE450621T2 (de) 2000-03-30 2009-12-15 Whitehead Biomedical Inst Mediatoren von rns-interferenz, die rns- sequenzspezifisch sind
US6573048B1 (en) 2000-04-18 2003-06-03 Naxcor Degradable nucleic acid probes and nucleic acid detection methods
IT1318539B1 (it) 2000-05-26 2003-08-27 Italfarmaco Spa Composizioni farmaceutiche a rilascio prolungato per lasomministrazione parenterale di sostanze idrofile biologicamente
US7439016B1 (en) 2000-06-15 2008-10-21 Digene Corporation Detection of nucleic acids by type-specific hybrid capture method
US6680059B2 (en) 2000-08-29 2004-01-20 Tripep Ab Vaccines containing ribavirin and methods of use thereof
EP1334109B1 (en) 2000-10-04 2006-05-10 Santaris Pharma A/S Improved synthesis of purine locked nucleic acid analogues
CN100406065C (zh) 2000-12-01 2008-07-30 细胞工厂治疗公司 糖基化/半乳糖基化肽、双官能接头和核苷酸单体/多聚体的缀合物以及相关的组合物和使用方法
BRPI0115814B8 (pt) 2000-12-01 2021-05-25 Europaeisches Laboratorium Fuer Molekularbiologie Embl moléculas de rna de filamento duplo, seu método de preparação e composição farmacêutica compreendendo as mesmas
US20030087855A1 (en) 2001-09-13 2003-05-08 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of protein kinase R expression
WO2002072763A2 (en) 2001-03-09 2002-09-19 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
DE60231868D1 (de) 2001-04-24 2009-05-20 Purdue Research Foundation Folat-mimetika und deren folatrezeptorbindende konjugate
JP2002335968A (ja) 2001-05-16 2002-11-26 Kokuritsu Iyakuhin Shokuhin Eisei Kenkyusho 新規転写因子、その遺伝子及びその結合ｄｎａ配列
JP4358521B2 (ja) 2001-05-18 2009-11-04 サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド 細胞デリバリーのためのコンジュゲートおよび組成物
US7109165B2 (en) 2001-05-18 2006-09-19 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
CA2448567C (en) 2001-05-25 2014-05-20 Duke University Modulators of nucleic acid ligands
US7691995B2 (en) 2001-07-12 2010-04-06 University Of Massachusetts In vivo production of small interfering RNAS that mediate gene silencing
US20030148928A1 (en) 2001-07-20 2003-08-07 Leonid Beigelman Enzymatic nucleic acid peptide conjugates
US7063860B2 (en) 2001-08-13 2006-06-20 University Of Pittsburgh Application of lipid vehicles and use for drug delivery
DE10163098B4 (de) 2001-10-12 2005-06-02 Alnylam Europe Ag Verfahren zur Hemmung der Replikation von Viren
JP2005514012A (ja) 2001-12-06 2005-05-19 ザ アーロン ダイアモンド エイズ リサーチ センター キメラバクテリオファージ標準を使用する高感度ゲノムアッセイ
US9657294B2 (en) 2002-02-20 2017-05-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
EP1432724A4 (en) 2002-02-20 2006-02-01 Sirna Therapeutics Inc RNA inhibition mediated inhibition of MAP KINASE GENES
NZ535461A (en) 2002-03-27 2007-03-30 Aegera Therapeutics Inc Antisense IAP nucleobase oligomers and uses thereof
EP2314690A1 (en) 2002-07-10 2011-04-27 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. RNA-interference by single-stranded RNA molecules
AU2003274906A1 (en) 2002-07-31 2004-02-16 Nucleonics, Inc. Double stranded rna structures and constructs, and methods for generating and using the same
ES2280826T5 (es) 2002-08-05 2017-08-03 Silence Therapeutics Gmbh Nuevas formas adicionales de moléculas de ARN de interferencia
US6878805B2 (en) 2002-08-16 2005-04-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Peptide-conjugated oligomeric compounds
CA2498772A1 (en) 2002-09-11 2004-03-25 Santaris Pharma A/S Modified pna molecules
EP1556402B1 (en) 2002-09-25 2011-06-22 University of Massachusetts In vivo gene silencing by chemically modified and stable sirna
AU2003291753B2 (en) 2002-11-05 2010-07-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
AU2003290597A1 (en) 2002-11-05 2004-06-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modified oligonucleotides for use in rna interference
US9150605B2 (en) 2002-11-05 2015-10-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation
EP1560931B1 (en) 2002-11-14 2011-07-27 Dharmacon, Inc. Functional and hyperfunctional sirna
EP2298886A3 (en) 2002-11-22 2011-12-14 Bio-Think Tank Co., Ltd. Method for searching target base sequence of RNA interference, method for designing base sequence of polynucleotide for causing RNA interference, method for producing double-stranded polynucleotide, method for inhibiting gene expression, base sequence processing apparatus, program for running base sequence processing method on computer, recording medium, and base sequence processing system
WO2004063375A1 (en) 2003-01-15 2004-07-29 Hans Prydz OPTIMIZING siRNA BY RNAi ANTISENSE
US20060128617A1 (en) 2003-01-24 2006-06-15 Tokyo Metropolitan Organization For Medical Research Oligoribonucleotide or peptidic nucleic acid inhibiting function of hepatitis c virus
CN1257284C (zh) 2003-03-05 2006-05-24 北京博奥生物芯片有限责任公司 一种体外阻断乙肝病毒表达的方法
EP2239329A1 (en) 2003-03-07 2010-10-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic compositions
AU2004227414A1 (en) 2003-04-03 2004-10-21 Alnylam Pharmaceuticals iRNA conjugates
EP1620544B1 (en) 2003-04-17 2018-09-19 Alnylam Pharmaceuticals Inc. MODIFIED iRNA AGENTS
US20070027099A1 (en) 2003-05-19 2007-02-01 Lin Marie C Gene therapy of HBV infection via adeno-associated viral vector mediated long term expression of small hairpin RNA (shRNA)
US7067249B2 (en) 2003-05-19 2006-06-27 The University Of Hong Kong Inhibition of hepatitis B virus (HBV) replication by RNA interference
US8575327B2 (en) 2003-06-12 2013-11-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Conserved HBV and HCV sequences useful for gene silencing
US8350021B2 (en) 2003-06-12 2013-01-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Conserved HBV and HCV sequences useful for gene silencing
CN1322898C (zh) 2003-06-17 2007-06-27 杭州新瑞佳生物医药技术开发有限公司 攻击人类乙型肝炎病毒的小干扰RNA分子（SiRNA）及其应用
WO2005021570A1 (ja) 2003-08-28 2005-03-10 Gene Design, Inc. Ｎ−０結合性架橋構造型新規人工核酸
US20100145038A1 (en) 2003-11-24 2010-06-10 Merck & Co., Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
CA2554212A1 (en) 2004-02-10 2005-08-25 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of gene expression using multifunctional short interfering nucleic acid (multifunctional sina)
US7626014B2 (en) 2004-04-27 2009-12-01 Alnylam Pharmaceuticals Single-stranded and double-stranded oligonucleotides comprising a 2-arylpropyl moiety
CA2501422C (en) * 2004-04-29 2014-08-12 University Of Rochester Lymphoid chemokines in the diagnosis, monitoring and treatment of autoimmune disease
US7582744B2 (en) 2004-08-10 2009-09-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chemically modified oligonucleotides
DE602005024015D1 (de) 2004-08-23 2010-11-18 Alnylam Pharmaceuticals Inc Expressionskonstrukte mit mehreren rna-polymerase-iii-promotoren
CN100494214C (zh) * 2004-12-07 2009-06-03 浙江大学 乙肝病毒基因的小干扰核糖核酸序列及制备方法
CA2592099A1 (en) 2004-12-22 2006-06-29 Nucleonics, Inc. Conserved hbv and hcv sequences useful for gene silencing
US20060148740A1 (en) 2005-01-05 2006-07-06 Prosensa B.V. Mannose-6-phosphate receptor mediated gene transfer into muscle cells
PL1866414T3 (pl) 2005-03-31 2012-10-31 Calando Pharmaceuticals Inc Inhibitory podjednostki 2 reduktazy rybonukleotydowej i ich zastosowania
CN101426912A (zh) * 2005-08-17 2009-05-06 瑟纳治疗公司 介导rna干扰的化学修饰短干扰核酸分子
KR20080036650A (ko) 2005-08-17 2008-04-28 시르나 쎄러퓨틱스 인코퍼레이티드 Ｒｎａ 간섭을 매개하는 화학적으로 변형된 짧은 간섭 핵산분자
KR20090003147A (ko) 2005-09-12 2009-01-09 소마제닉스 인코포레이티드 소형 간섭 ｒｎａ를 이용한 바이러스 유전자 발현의 억제
CN100447243C (zh) 2005-11-15 2008-12-31 中国人民解放军第四军医大学 HBV特异性干涉靶位点基因及其siRNA和其在抗HBV感染中的应用
US7569686B1 (en) 2006-01-27 2009-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for synthesis of bicyclic nucleic acid analogs
ES2516815T3 (es) 2006-01-27 2014-10-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos modificados en la posición 6
US8362229B2 (en) 2006-02-08 2013-01-29 Quark Pharmaceuticals, Inc. Tandem siRNAS
CA2648585C (en) 2006-04-07 2017-07-25 Idera Pharmaceuticals, Inc. Stabilized immune modulatory rna (simra) compounds for tlr7 and tlr8
WO2007134181A2 (en) 2006-05-11 2007-11-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-modified bicyclic nucleic acid analogs
CA2848238C (en) 2006-10-03 2016-07-19 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Lipid containing formulations
JP2010519203A (ja) 2007-02-16 2010-06-03 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション 生物活性分子の活性を強化するための組成物及び方法
WO2008103380A2 (en) * 2007-02-21 2008-08-28 Fox Chase Cancer Center Hepatitis b virus compositions and methods of use
US20100105134A1 (en) 2007-03-02 2010-04-29 Mdrna, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting gene expression and uses thereof
NZ580712A (en) 2007-05-22 2011-12-22 Marina Biotech Inc Hydroxymethyl substituted rna oligonucleotides and rna complexes containing acyclic monomers
EP2170917B1 (en) 2007-05-30 2012-06-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
CN101314047A (zh) * 2007-06-01 2008-12-03 中国科学院微生物研究所 治疗病毒感染的方法及其药物
EP2173760B2 (en) 2007-06-08 2015-11-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
EP2176280B2 (en) 2007-07-05 2015-06-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-disubstituted bicyclic nucleic acid analogs
JP5737937B2 (ja) 2007-07-09 2015-06-17 イデラ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッドＩｄｅｒａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 安定化免疫調節ｒｎａ（ｓｉｍｒａ）化合物
CA2708173C (en) 2007-12-04 2016-02-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Targeting lipids
HUE034483T2 (en) 2008-04-15 2018-02-28 Protiva Biotherapeutics Inc New lipid preparations for introducing a nucleic acid
CN103275971A (zh) * 2008-06-13 2013-09-04 厦门大学 可用于乙型肝炎病毒感染治疗的rna干扰靶点
CN101603042B (zh) * 2008-06-13 2013-05-01 厦门大学 可用于乙型肝炎病毒感染治疗的rna干扰靶点
CN101322847A (zh) 2008-06-23 2008-12-17 淮安市第四人民医院 基于siRNA池干扰的复合载体介导的抗乙肝病毒基因药物
US8034922B2 (en) * 2008-08-22 2011-10-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Compositions and methods for modulating activity of capped small RNAs
CA3033577A1 (en) 2008-11-10 2010-05-14 Arbutus Biopharma Corporation Novel lipids and compositions for the delivery of therapeutics
SG171879A1 (en) 2008-12-03 2011-07-28 Marina Biotech Inc Usirna complexes
WO2010080724A1 (en) 2009-01-12 2010-07-15 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel lipid nanoparticles and novel components for delivery of nucleic acids
AU2010208035B2 (en) 2009-01-29 2016-06-23 Arbutus Biopharma Corporation Improved lipid formulation for the delivery of nucleic acids
JP5769701B2 (ja) 2009-05-05 2015-08-26 テクミラ ファーマシューティカルズ コーポレイションＴｅｋｍｉｒａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 脂質組成物
ES2804764T3 (es) 2009-06-01 2021-02-09 Halo Bio Rnai Therapeutics Inc Polinucleótidos para la interferencia de ARN multivalente, composiciones y métodos de uso de los mismos
PL2440183T3 (pl) 2009-06-10 2019-01-31 Arbutus Biopharma Corporation Ulepszona formulacja lipidowa
US9512164B2 (en) 2009-07-07 2016-12-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide end caps
US8927513B2 (en) 2009-07-07 2015-01-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5′ phosphate mimics
PT2470656E (pt) 2009-08-27 2015-07-16 Idera Pharmaceuticals Inc Composição para inibir expressão de gene e suas utilizações
EP2512491B1 (en) 2009-10-16 2017-10-11 Glaxo Group Limited Hbv antisense inhibitors
AU2011237630B2 (en) 2010-04-06 2016-01-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of CD274/PD-L1 gene
WO2011139710A1 (en) 2010-04-26 2011-11-10 Marina Biotech, Inc. Nucleic acid compounds with conformationally restricted monomers and uses thereof
CA2807307C (en) 2010-08-17 2021-02-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Rna interference mediated inhibition of hepatitis b virus (hbv) gene expression using short interfering nucleic acid (sina)
CN101948827A (zh) 2010-08-19 2011-01-19 中国人民解放军第三〇二医院 一种低载量乙型肝炎病毒全基因组克隆的方法
CN101979553B (zh) * 2010-10-28 2015-07-01 百奥迈科生物技术有限公司 一种干扰HBV基因的siRNA分子及其抗病毒应用
EP3505528B1 (en) 2011-04-21 2020-11-25 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression
US9751909B2 (en) 2011-09-07 2017-09-05 Marina Biotech, Inc. Synthesis and uses of nucleic acid compounds with conformationally restricted monomers
CN102559657A (zh) 2011-11-09 2012-07-11 中国人民解放军第三〇二医院 两片段连接法进行hbv全基因组克隆的方法
IL308752A (en) * 2011-11-18 2024-01-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc RNAI factors, compositions and methods of using them for the treatment of transthyretin-related diseases
EP3366775B1 (en) * 2011-11-18 2022-04-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified rnai agents
US9133461B2 (en) * 2012-04-10 2015-09-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the ALAS1 gene
CN103333890B (zh) 2012-12-21 2015-04-15 厦门成坤生物技术有限公司 治疗乙型病毒性肝炎的rna干扰制剂
CN103014045B (zh) * 2012-12-30 2014-09-17 中国人民解放军第三军医大学 表达特异性HBV shRNA的重组HBV载体及其构建方法和应用
WO2014126828A1 (en) * 2013-02-15 2014-08-21 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel ph-switchable peptides for membrane insertion and pore formation
CN104031916B (zh) * 2013-03-04 2017-06-06 中国科学院上海生命科学研究院 新型RNAi前体及其制备和应用
PL2992098T3 (pl) 2013-05-01 2019-09-30 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Kompozycje i sposoby modulowania ekspresji hbv i ttr
JOP20200092A1 (ar) 2014-11-10 2017-06-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc تركيبات iRNA لفيروس الكبد B (HBV) وطرق لاستخدامها
CN108271387B (zh) 2015-08-07 2023-06-27 箭头药业股份有限公司 乙型肝炎病毒感染的RNAi疗法
KR20180100228A (ko) 2016-01-12 2018-09-07 헬름홀츠 젠트룸 뮌헨-도이체스 포르슝스젠트룸 퓌르 게준드하이트 운트 움벨트 게엠베하 Hbv를 치료하기 위한 수단 및 방법
BR112019021852A2 (pt) 2017-04-18 2020-06-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Agente de rnai e uma vacina contra hbv, uso ou método e kit para tratamento
US10799808B2 (en) 2018-09-13 2020-10-13 Nina Davis Interactive storytelling kit

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130005793A1 (en) * 2011-06-30 2013-01-03 Arrowhead Research Corporation Compositions and Methods for Inhibiting Gene Expression of Hepatitis B Virus

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Poster Session 4:Hepatitis B therapy,Hepatology,vol.60,1 October 2014,pages 1088A-1128A. *

Also Published As

Publication number Publication date
ES2761912T3 (es) 2020-05-21
EP3218489B1 (en) 2019-10-09
AU2015346566A1 (en) 2017-06-08
PT3218489T (pt) 2019-12-18
TW202106878A (zh) 2021-02-16
CN108064294B (zh) 2021-09-17
BR112017008868B1 (pt) 2023-03-21
TW201628659A (zh) 2016-08-16
TW201631156A (zh) 2016-09-01
TW202237849A (zh) 2022-10-01
JP6947880B2 (ja) 2021-10-13
CN108064294A (zh) 2018-05-22
CY1122520T1 (el) 2021-01-27
US20200140864A1 (en) 2020-05-07
US20200291405A1 (en) 2020-09-17
AU2015346566B2 (en) 2021-09-09
JP2024056714A (ja) 2024-04-23
CN108064293A (zh) 2018-05-22
JOP20200092A1 (ar) 2017-06-16
SI3218489T1 (sl) 2020-01-31
US20170349901A1 (en) 2017-12-07
EP3218489A1 (en) 2017-09-20
HRP20192177T1 (hr) 2020-02-21
US10640770B2 (en) 2020-05-05
AU2024203390A1 (en) 2024-06-27
US20170349900A1 (en) 2017-12-07
PL3218489T3 (pl) 2020-05-18
MA40851A (fr) 2017-09-20
CA2967408A1 (en) 2016-05-19
JP2020172506A (ja) 2020-10-22
MX2017005958A (es) 2017-09-15
US10513703B2 (en) 2019-12-24
KR20230088857A (ko) 2023-06-20
BR122021001218B1 (pt) 2023-03-14
CN113801882A (zh) 2021-12-17
AU2015346513A1 (en) 2017-06-08
JP7426973B2 (ja) 2024-02-02
AU2021277625A1 (en) 2021-12-23
HK1255502A1 (zh) 2019-08-16
AU2021277625B2 (en) 2024-02-29
WO2016077321A1 (en) 2016-05-19
WO2016077349A1 (en) 2016-05-19
JO3573B1 (ar) 2020-07-05
JP2017538679A (ja) 2017-12-28
DK3218489T3 (da) 2019-12-16
KR20170077251A (ko) 2017-07-05
MX2021006635A (es) 2021-07-07
KR20170077250A (ko) 2017-07-05
BR112017008868A2 (pt) 2018-01-16
EP3647424A1 (en) 2020-05-06
EP3218487A1 (en) 2017-09-20
MA40843A (fr) 2017-09-20
CA2967408C (en) 2024-05-07
US11060091B2 (en) 2021-07-13
JP6728163B2 (ja) 2020-07-22
HUE047535T2 (hu) 2020-04-28
TWI834187B (zh) 2024-03-01
JP2022003055A (ja) 2022-01-11
CN113699151A (zh) 2021-11-26
SG11201703638XA (en) 2017-06-29
SG10202007323VA (en) 2020-09-29
CN113699151B (zh) 2024-01-19
KR102545316B1 (ko) 2023-06-22
TWI769565B (zh) 2022-07-01
EP3218487B1 (en) 2021-06-16
CA3233743A1 (en) 2016-05-19
JP2017534290A (ja) 2017-11-24
SG11201703569XA (en) 2017-05-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI710633B (zh) Ｂ型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｉＲＮＡ組成物及其用途方法
TWI726866B (zh) 含類馬鈴薯儲藏蛋白磷脂酶域３（ＰＮＰＬＡ３）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
TWI806034B (zh) 第十二因子（哈格曼因子）（Ｆ１２）、激肽釋放素Ｂ、血漿（夫列契因子）１（ＫＬＫＢ１）及激肽原１（ＫＮＧ１）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
TW202344688A (zh) 甲狀腺素運載蛋白（ＴＴＲ）ｉＲＮＡ組成物及其治療或預防ＴＴＲ相關疾病之使用方法
EA039127B1 (ru) КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ iRNA ПРОТИВ ВИРУСА ГЕПАТИТА В (HBV) И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ