SK287311B6

SK287311B6 - Substituované xantíny, lieková kompozícia s ich obsahom, ich použitie a spôsob ich prípravy

Info

Publication number: SK287311B6
Application number: SK663-2002A
Authority: SK
Inventors: William F. Kiesman; James E. Dowling; Carol L. Ensinger; Gnanasambandam Kumaravel; Russell C. Petter; He Xi Chang; Ko Chung Lin
Original assignee: Biogen Idec Ma Inc.
Priority date: 1999-11-12
Filing date: 2000-11-13
Publication date: 2010-06-07
Also published as: SK6632002A3; CN101255162A; NZ527917A; NO20022238D0; US6649600B1; CN1402729A; US7579354B2; NO20022238L; KR20020049050A; IS6379A; TR200201260T2; ES2323357T3; CA2390496A1; PL206890B1; MEP42208A; EE05365B1; US20060252730A1; EP2305684A1; MXPA02004796A; WO2001034610A1

Abstract

Opísané sú zlúčeniny vzorca (I), ktoré sú účinnými a selektívnymi inhibítormi adenozínového A1 receptora. Adenozínové A1 antagonisty sú užitočné pri prevencii a liečení mnohých ochorení, vrátane srdcových ochorení, ochorení obehového systému, degeneratívnych ochorení centrálneho nervového systému, respiračných ochorení a pod. Opísaný je aj spôsob výroby týchto zlúčenín, ich využitie pri výrobe liečivých kompozícií a ich použitie pri liečení uvedených ochorení.

Description

Vynález sa týka antagonistov adenozínových receptorov a spôsobov ich výroby a spôsobov ich použitia pri liečení ochorení.

Adenozín je intramolekulový a extracelulárny mediátor generovaný všetkými bunkami tela. Generuje sa taktiež extracelulárne pomocou enzymatickej premeny. Adenozín sa viaže na sedem transmembránových s g-proteínom zviazaných receptorov, ktoré aktivuje, pričom vyvoláva rad fyziologických odoziev. Adenozín sám osebe, látky, ktoré napodobňujú účinky adenozínu (agonisty) a látky, ktoré antagonizujú jeho pôsobenie, majú veľmi dôležité klinické použitie. Adenozínové receptory sú rozdelené do štyroch známych podtypov (t. j.: A], A_2a, A₂b a A₃). Tieto subtypy vyvolávajú unikátne a niekedy navzájom opačné efekty. Napríklad, aktivácia adenozínového Aj receptora vedie ku zvýšeniu renálnej vaskulárnej rezistencie, zatiaľ čo aktivácia adenozínového A_2a receptora vyvoláva zníženie renálnej vaskulárnej rezistencie.

Vo väčšine orgánových systémov vedú obdobia zníženého metabolického stresu ku zvýšenej koncentrácii adenozínu v tkanivách. Napríklad, srdce produkuje a uvoľňuje adenozín vo forme adaptívnej odozvy na stres, ako je spomalenie srdcovej činnosti a koronárnej vazodilatácie. Podobne, koncentrácia adenozínu v obličkách sa zvyšuje ako odozva na hypoxiu, metabolický stres a ako odozva na mnohé nefrotoxické látky. Obličky tiež produkujú adenozín konštitutívne. Obličky nastavujú množstvo konštitutívne produkovaného adenozínu s cieľom regulovať glomerulámu filtráciu a reabsorpciu elektrolytov. Pokiaľ ide o kontrolu glomerulámej filtrácie, aktivácia A] receptora vedie ku konstrikcii aferentných arteriol, zatiaľ čo aktivácia A_2a receptorov vedie k dilatácii eferentných arteriol. Aktivácia A_2a receptorov môže tiež vyvolať vazodilatačné efekty pri aferentných arteriolách. Celkovo, efekt aktivácie týchto glomerulámych adenozínových receptorov vedie ku zníženiu rýchlosti glomerulámej filtrácie. Okrem toho, Ai adenozínové receptory sú umiestnené v proximálnych a distálnych tubuloch. Aktivácia týchto receptorov stimuluje reabsorpciu sodíka z tubulámeho lumenu. Blokovanie efektu adenozínu na tieto receptory teda následne vedie ku zvýšeniu rýchlosti glomerulámej filtrácie a ku zvýšeniu sodíkovej exkrécie.

Doterajší stav techniky

Dokumenty EP-A-0 415 456, EP-A-0 501 379, EP-A-0 541 120, EP-A-0 556 778, EP-A-0 560 354, WO 94/16702 A, DE 198 16 857 A, WO 98/57645 A, US-A-5 525 607, WO 98/57644 A, WO 94/03456 A, EP-A-0 619 316, US-A-5 290 782, J. MED. CHEM., Vol. 35, No. 5, 1992, pages 924-930 (XP002160035), PATENT ABSTRACTS OF JAPAN Vol. 017, No. 200, 20 Apríl 1993 (1993-04-20) & JP 04 346986 A, DE 38 43 117 A, DE 40 19 892 A opisujú zlúčeniny, ktoré sa líšia od zlúčenín podľa predkladaného vynálezu v tom, že bicyklické, tricyklické a pentacyklické skupiny vo význame R³ sú odlišné.

Táto prihláška si nárokuje prioritu na základe U.S. Predbežnej prihlášky číslo 60/165,191, podanej 12. novembra 1999.

Podstata vynálezu

Vynález sa týka zistenia, že zlúčeniny všeobecného vzorca (I) sú nečakane vysoko účinnými a selektívnymi inhibítormi niektorých subtypov adenozínových receptorov. Adenozínové antagonisty môžu byť užitočné pri prevencii a/alebo liečení mnohých ochorení, vrátane srdcových porúch alebo porúch obehového systému, degeneratívnych porúch centrálneho nervového systému, respiračných porúch a mnohých ochorení, pri ktorých je vhodné diuretické liečenie.

Predmetom vynálezu sú zlúčeniny všeobecného vzorca (I)

R² kde R¹ a R² sú nezávisle zvolené zo skupiny pozostávajúcej z:

(I), (a) vodíka;

(b) alkylu, alkenylu aspoň s 3 atómami uhlíka, alebo alkinylu aspoň s 3 atómami uhlíka; kde alkyl, alkenyl, alebo alkinyl je buď nesubstituovaný, alebo funkcionalizovaný s jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z hydroxy, alkoxy, amino, alkylamino, dialkylamino, heterocyklyl, acylamino, alkylsulfonylamino a heterocyklylkarbonylamino; a (c) arylu alebo substituovaného arylu;

R³ je vybraná zo skupiny, ktorá pozostáva z:

kde R³ je buď nesubstituovaná, alebo funkcionalizovaná s jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z hydroxy, R⁵- a R⁵-alkenylu;

kde R³ je buď nesubstituovaná, alebo funkcionalizovaná s jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z hydroxy, R⁵-alkylu, -R⁵, R⁵-alkenylu, alkoxykarbonylu, alkoxykarbonylalkylu, alkoxykarbonylalkenylu, hydroxyalkylu, aldehydo, alkoxyalkylu, R⁵-alkoxy, fosfátu, R⁵-alkylkarbamoylu a R⁵-alkyl(alkyl)karbamoylu;

kde R³ je buď nesubstituovaná, alebo funkcionalizovaná s jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z R⁵-alkylu, -R⁵, R⁵-alkenylu, alkoxykarbonylu, alkoxykarbonylalkenylu, hydroxyalkylu, aldehydo a hydroxylu;

kde R³ je buď nesubstituovaná, alebo funkcionalizovaná s jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z R⁵-alkylu, -R⁵, R⁵-alkenylu, R⁵-alkoxy, alkoxykarbonylu, alkoxykarbonylalkenylu, hydroxyalkylu, aldehydo a hydroxylu; a

kde R³ je buď nesubstituovaná alebo funkcionalizovaná s jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z hydroxy, R⁵-alkoxy, R⁵-alkenylu, alkoxykarbonylu a karbonylu;

SK 287311 Β6

R⁴ je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z vodíka, C_b4-alkylu, C]_₄-alkyl-CO₂H a fenylu, kde skupiny C_b4-alkyl, C_b4-alkyl-CO₂H a fenyl sú buď nesubstituované, alebo funkcionalizované s jedným až tromi substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z halogénu, -OH, -OMe, -NH₂, -NO₂, benzylu a benzylu funkcionalizované ho s jedným až tromi substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z halogénu, -OH, -OMe, -NH₂ a NO₂;

R⁵ je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -CH2COOH, -C(CF3)2OH, -CONHNHSO2CF3, -CONHOR⁴, -CONHSO2R⁴, -CONHSO2NHR⁴, -C(OH)R⁴PO3H₂, -nhcocf₃, -NHCONHSO₂R⁴, -NHPO3H2, NHSO2R⁴, -NHSO2NHCOR⁴, -OPO3H2, -OSO3H, -PO(OH)R⁴, -PO3H₂, -SO₃H, -SO₂NHR⁴, -SO3NHCOR⁴, -SO3NHCONHCO2R⁴ a z nasledujúcich:

Zje vybrané zo skupiny pozostávajúcej z jednoduchej väzby, -Ο-, -(CH₂)_b3-, -O(CII₂)_b2-, -CH₂OCH₂-, -(CH₂)_b2O-, -CH=CHCH₂-, -CH=CH- a -CH₂CH=CH-; a

R⁶ je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z vodíka, alkylu, acylu, alkylsulfonylu, aralkylu, substituovaného aralkylu, substituovaného alkylu a heterocyklylu.

R⁶ je výhodne atóm vodíka. Ale ak R⁶ je metylová skupina alebo iný nevodíkový substituent, zlúčenina môže byť vysoko selektívna pri inhibícii adenozínových A_2a receptorov.

V niektorých uskutočneniach R¹ a R² môžu byť rovnaké alebo rôzne alkylové skupiny (napríklad jedna alebo obe môžu byť w-propyl).

R³ môže byť aralkylová skupina substituovaná s -OH, -OMe alebo halogénom, -metyl alebo 3-hydroxypropyl a Z môže byť jednoduchá väzba.

V niektorých uskutočneniach vynálezu R³ môže byť:

a môže byť nesubstituovaný alebo funkcionalizovaný s jedným alebo viac (t. j. 1, 2, 3 alebo viac) substituentmi, ako sú hydroxyskupinu, skupina R⁵- alebo R⁵-alkenylová skupina. Zlúčenina teda môže byť napríklad 5-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-177-purm-8-yl)bicyklo[3.2.1]oktán-l-karboxylová kyselina; 8-(4-hydroxy-bicyklo[3.2.1]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión alebo 5-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)bicyklo[3.2.1]-oktán-2-karboxylová kyselina.

V ďalších uskutočneniach R³ môže byť:

a môže byť nesubstituovaný alebo funkcionalizovaný s jedným alebo viac substituentmi, ako sú hydroxyskupina, R^s-alkylová skupina, skupina -R⁵, R^s-alkenylová skupina, alkoxykarbonylová skupina, alkoxykarbonylalkylová skupina, alkoxykarbonylalkenylová skupina, hydroxyalkylskupina, aldehydoskupina, alkoxyalky lová skupina, R⁵-alkoxyskupina, fosfátová skupina, R^s-alkylkarbamoylová skupina a R⁵-alkyl(alkyl)karbamoylová skupina. Zlúčenina teda môže byť napríklad 8-(4-hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión; 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktán-1-karboxylová kyselina; 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2.3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbaldehyd; metylester 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lÄ/-purin-8-yI)bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny; metylester 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo- [2.2.2] okt-l-yl]-akrylovej kyseliny, metylester 3-(4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-propiónovej kyseliny; 3-(4-(2,6-dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro- 1/7-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-akrylová kyselina; 3-(4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-propiónová kyselina; 4-(4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]butánová kyselina; mono[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]ester fosforečnej kyseliny; {[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbonyl]-metylamino}-octová kyselina; {[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbonyl]-amino}-octová kyselina; 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yloxy)propiónová kyselina; metylester 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yloxy]-propiónovej kyseliny, terc-butylester 3(4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yloxyjpropiónovej kyseliny alebo 3-(4-(2,6-dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro- l//-purin-8-yl)-bicyklo- [2.2.2] okt-l-yl]-2-metyl-propiónová kyselina.

V ďalšom uskutočnení R³ môže byť:

a môže byť nesubstituovaný alebo funkcionalizovaný s jedným alebo viac substituentmi, ako sú R⁵-alkylová skupina, skupina -R⁵, R⁵-alkenylová skupina, alkoxykarbonylová skupina, alkoxykarbonylalkenylová skupina, hydroxyalkylová skupina, aldehydoskupina a hydroxyskupina. Zlúčenina teda môže byť napríklad 6-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-kubán-3-karboxylová kyselina; 8-(6-hydroxymetyl-kuban-3-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión alebo 3-(6-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-kuban-3-yl]-akrylová kyselina.

V ďalšom uskutočnení R³ môže byť:

a môže byť nesubstituovaný alebo funkcionalizovaný s jedným alebo viac substituentmi, ako sú R⁵-alkylová skupina, skupina -R⁵, R⁵-alkenylová skupina, R⁵-alkoxyskupina, alkoxykarbonylová skupina, alkoxykarbonylalkenylová skupina, hydroxyalkylová skupina, aldehydoskupina a hydroxyskupina. Zlúčenina teda môže byť napríklad [5-{2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl}-bicyklo[3.2.2]non-l-yloxy]-octová kyselina; 8-(5-hydroxy-bicyklo[3.2.2]non-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydro-purin-2,6-dión alebo 5-(2,6-dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-177-purin-8-yl)-bicyklo[3.2.2]nonán-l-karboxylová kyselina.

V ďalšom uskutočnení R³ môže byť:

a môže byť nesubstituovaný alebo funkcionalizovaný s jedným alebo viac substituentmi, ako sú hydroxyskupina, R⁵-alkoxyskupina, R⁵-alkenylová skupina, alkoxykarbonylová skupina a karbonylová skupina. Zlúčenina teda môže byť napríklad 8-(4-hydroxy-7-metyl-2,6-dioxo-bicyklo[3.3.1]non-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión alebo [l-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-7-metyl-2,6-dioxo-bicyklo [3.3.1 ]non-4-yloxy] -octová kyselina.

Zlúčeniny môžu byť, napríklad, vo forme achirálnej zlúčeniny, racemátu, opticky aktívnej zlúčeniny, čistého diastereoméru, zmesi diastereomérov alebo farmakologicky prijateľnej adičnej soli.

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu môžu byť tiež modifikované pripojením vhodných funkčných skupín na zvýšenie biologického účinku. Tieto modifikácie sú známe odborníkom v danej oblasti a zahŕňajú také, ktoré zvyšujú biologickú penetráciu do daného biologického systému (napr. krvi, lymfatického systému, centrálneho nervového systému), zvyšujú dostupnosť orálnym podávaním, zvyšujú rozpustnosť umožňujúcu podávanie pomocou injekcií, menia metabolizmus a/alebo menia rýchlosť vylučovania. Príklady týchto modifikácií zahŕňajú (zoznam nie je vyčerpávajúci) esterifíkáciu s polyetylénglykolmi, derivatizáciu s pivalátmi alebo substituenty mastných kyselín, prevedenie na karbamáty, hydroxyláciu aromatického kruhu a substitúciu heteroatómu pri aromatických kruhoch.

Vynález sa tiež týka liečivých kompozícií, ktoré zahŕňajú ľubovoľnú zlúčeninu podľa tohto vynálezu, a to samotnú alebo v kombinácii s vhodným excipientom.

Vynález tiež opisuje použitie účinného adenozín antagonizujúceho množstva zlúčeniny vzorca (I) na prípravu farmaceutickej kompozície na liečenie stavov, ktoré sa vyznačujú zvýšenou koncentráciou adenozínu a/alebo zvýšenou senzitivitou na adenozín. Stavmi môžu byť napr. poruchy srdca, poruchy obehové, degeneratívne poruchy centrálneho nervového systému, respiračné poruchy, ochorenie, pri ktorom je indikovaná diuretická liečba, hypertenzia, Parkinsonova choroba, depresia, traumatické poškodenia mozgu, poinfarktový neurologický deficit, respiračné depresie, neonatálne mozgové traumy, dyslexia, hyperaktivita, cystická fibróza, cirhotická ascites, neonatálne apnoe, zlyhanie obličiek, diabetes, astma, edémy, kongestívne zlyhanie srdca alebo obličková disfunkcia (napr. disfunkcie spojené s použitím diuretík pri kongestívnom zlyhaní srdca alebo pri renálnej toxicite, spôsobenej liečením pomocou chemoterapeutík).

Vynález sa tiež vzťahuje na spôsoby výroby 8-substituovaných xantínov. Spôsob výroby zahŕňa kroky získania N7,C8-dihydroxantínu, napr. zlúčeniny 10 na obr. 1, chránenej vxantínovej polohe N7 (napr. ako THP alebo BOM éter), deprotonáciu polohy C8 pomocou silnej zásady (ako je lítium-diizopropylamid alebo n-butyllítium) za vzniku aniónu, zachytenie aniónu s karboxylovou, karbonylovou, aldehydickou alebo ketonickou zlúčeninou a odchránenie chránenej N7 pozície za vzniku 8-substituovaného xantínu.

V tomto vynáleze „alkylová“ skupina označuje nasýtenú alifatickú uhľovodíkovú skupinu. Alkylová skupina môže byť priama alebo rozvetvená a môže obsahovať napr. 1 až 6 uhlíkových atómov v reťazci. Príklady priamych alkylových skupín zahŕňajú, ale bez obmedzenia, etylová a butylová skupina. Príklady rozvetvených alkylových skupín zahŕňajú (zoznam nie je vyčerpávajúci) izopropylovú a íerc-butylovú skupinu.

„Alkenylová“ skupina je alifatická uhľovodíková skupina, ktorá má aspoň jednu dvojitú väzbu. Alkenylová skupina môže byť priama alebo rozvetvená a môže mať napr. 3 až 6 uhlíkových atómov v reťazci a 1 alebo 2 dvojité väzby. Príklady alkenylových skupín zahŕňajú (zoznam nie je vyčerpávajúci) alylovú skupinu a izoprenylovú skupinu.

„Alkinylová“ skupina je alifatická uhľovodíková skupina, ktorá má aspoň jednu trojitú väzbu. Alkinylová skupina môže byť priama alebo rozvetvená a môže mať napr. 3 až 6 uhlíkových atómov v reťazci a 1 alebo 2 trojité väzby. Príklady alkinylových skupín zahŕňajú (zoznam nie je vyčerpávajúci) propargylovú skupinu a butinylovú skupinu.

„Arylová skupina je fenylová alebo naftylová skupina, alebo jej deriváty. „Substituovaná arylová“ skupina je arylová skupina substituovaná s jedným a viac substituentmi, ako sú alkylová skupina, alkoxyskupina, aminoskupina, nitroskupina, karboxyskupina, karboalkoxyskupina, kyanoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, halogénskupina, hydroxyskupina, hydroxyalkylová skupina, merkaptylová skupina, alkylmerkaptylová skupina, trihalogénalkylová skupina, karboxyalkylová skupina, sulfoxyskupina alebo karbamoylová skupina.

„Aralkylová“ skupina je alkylová skupina, ktorá je substituovaná s arylovou skupinou. Príkladom aralkylovej skupiny je benzylová skupina.

„Cykloalkylová“ skupina je alifatický kruh, napr. s 3 až 8 atómami uhlíka. Príkladom cykloalkylovej skupiny je cyklopropylová skupina a cyklohexylová skupina.

„Acylová“ skupina je priama alebo rozvetvená alkyl-C(=O)-skupina alebo formylová skupina. Príklady acylovej skupiny zahŕňajú alkanoylové skupiny (napr. ktoré majú 1 až 6 uhlíkových atómov v alkylovej skupine). Príklady acylových skupín sú acetylová skupina a pivaloylová skupina. Acylové skupiny môžu byť substituované alebo sú nesubstituované.

„Karbamoylová“ skupina je skupina, ktorá má štruktúru H₂N-CO₂-. „Alkylkarbamoyl“ a „dialkylkarbamoyl“ označuje karbamoylové skupiny, kde dusíkový atóm má jednu alebo dve alkylové skupiny namiesto vodíka. Analogicky, „arylkarbamoyľ'a „arylalkylkarbamoyl“ skupiny zahŕňajú namiesto vodíka arylovú skupinu, a prípadne alkylovú skupinu namiesto ďalšieho vodíka.

„Karboxylová“ skupina označuje skupinu -COOH.

„Alkoxyskupina“ je skupina alkyl-O, kde „alkyl“ bol opísaný.

„Alkoxyalkylová“ skupina je alkylová skupina podľa uvedeného opisu, kde vodíkový atóm je nahradený už opísanou alkoxyskupinou.

„Halogén“ alebo „halo“ skupina je fluór, chlór, bróm alebo jód.

„Heterocyklylová“ skupina je 5- až 10-členná kruhová štruktúra, kde jeden alebo viac atómov kruhu je iný prvok ako uhlík, napr. N, O, S. Heterocyklylová skupina môže byť aromatická alebo nearomatická, to znamená, môže byť nasýtená alebo čiastočne, alebo úplne nenasýtená. Príklady heterocyklylovej skupiny zahŕňajú pyridyl, imidazolyl, furanyl, tienyl, tiazolyl, tetrahydrofúranyl, tetrahydropyranyl, morfolinyl, tiomorfolinyl, indolyl, indolinyl, izoindolinyl, piperidinyl, pyrimidinyl, piperazinyl, izoxazolyl, izoxazolidinyl, tetrazolyl a benzimidazolyl.

„Substituovaná heterocyklylová“ skupina je heterocyklylová skupina, kde jeden alebo viac atómov vodíka sú nahradené substituentmi, ako sú alkoxyskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, karbalkoxyskupina, karbamoylová skupina, kyanoskupina, halogénskupina, trihalogénmetylová skupina, hydroxyskupina, karbonylová skupina, tiokarbonylová skupina, hydroxyalkylová skupina alebo nitroskupina.

„Hydroxyalkylová“ skupina označuje alkylovú skupinu substituovanú s hydroxyskupinou.

„Sulfamoylová“ skupina je skupina štruktúry -S(O)₂NH₂.

„Alkylsulfamoyl“ a „dialkylsulfamoyl“ označuje sulfamoylové skupiny, kde dusík nesie jednu alebo dve alkylové skupiny namiesto atómov vodíka. Analogicky, „arylsulfamoyl“ a „arylalkylsulfamoyl“ označuje sulfamoylové skupiny, ktoré nesú na dusíku arylovú skupinu, prípadne arylovú a alkylovú skupinu namiesto atómu vodíka.

„Antagonista“ je molekula, ktorá sa viaže na receptor bez aktivácie receptora. Súťaží pritom s endogénnym ligandom o toto väzbové miesto a teda znižuje schopnosť endogénneho ligandu stimulovať receptor.

V kontexte tohto vynálezu označuje „selektívny antagonista“ antagonistu, ktorý sa viaže na špecifický subtyp adenozínového receptora s vyššou afinitou ako ostatné subtypy. Antagonisty podľa tohto vynálezu môžu mať napr. vyššiu afinitu pre A¹ receptory alebo pre A_2a receptory a sú selektívne, keď (a) majú nanomolámu väzbovú afinitu pre jeden z týchto dvoch subtypov a (b) majú aspoň 10-krát, výhodne 50-krát a najvýhodnejšie aspoň 100-krát vyššiu afinitu pre jeden z oboch subtypov.

Vynález poskytuje mnohé výhody. Zlúčeniny sa ľahko vyrábajú z dostupných východiskových látok, pomocou relatívne malého počtu krokov. Zlúčeniny majú mnoho variabilných oblastí, čo umožňuje systematické široké využitie. Ako špecifické antagonisty majú zlúčeniny široké použitie v medicíne. Pretože zlúčeniny sú vysoko účinné a špecifické antagonisty, (1) môžu sa použiť v nízkych dávkach z dôvodu minimalizácie pravdepodobnosti výskytu vedľajších účinkov a (2) môžu sa zaviesť do mnohých dávkových foriem vrátane (zoznam nie je vyčerpávajúci) tabletiek, tabliet, kapsúl, aerosólov, čapíkov, kvapalných prípravkov na požitie alebo pre injekcie, prídavkov do potravín alebo preparátov na miestnu aplikáciu. Okrem medicínskych aplikácií sa antagonisty môžu použiť pri liečení dobytka a domácich zvierat.

Ak nie je uvedené inak, všetky technické a odborné termíny použité v tomto vynáleze majú rovnaký význam, ako je obvyklé u odborníkov v danej oblasti. Napriek tomu, že metódy a materiály podobné alebo ekvivalentné tým, ktoré sa už opísali, môžu byť použité pri uskutočňovaní a testovaní tohto vynálezu, vhodné metódy a materiály sú opísané ďalej. Všetky tu zmienené publikácie, patentové prihlášky, patenty a ďalšie referencie, sú zahrnuté vo forme odkazov. Okrem toho, materiály, metódy a príklady sú len ilustratívne a nie sú chápané ako obmedzujúce. Ďalšie rysy a výhody tohto vynálezu budú zrejmé z nasledovného detailného opisu a z nárokov.

Prehľad obrázkov na výkresoch

Obr. 1 je séria príkladov zlúčenín podľa tohto vynálezu.

Obr. 2 je schematické znázornenie syntézy zlúčenín podľa tohto vynálezu.

Obr. 3 je schematické znázornenie alternatívneho uskutočnenia syntézy zlúčenín podľa tohto vynálezu.

Obr. 4 je schematické znázornenie transformácie zlúčeniny VII na zodpovedajúci olefín XII cez štádium alkoholu X.

Obr. 5 je schematické znázornenie ďalšieho uskutočnenia syntézy zlúčenín podľa tohto vynálezu.

Obr. 6 je schematické znázornenie syntézy zlúčeniny XXI, ktorá je východiskovým materiálom použitým v reakcii zobrazenej na obr. 3.

Obr. 7 je schematické znázornenie alternatívneho uskutočnenia syntézy zlúčeniny XXI.

Obr. 8 je schematické znázornenie syntézy rôznych zlúčenín podľa tohto vynálezu.

Opis výhodných uskutočnení

Všeobecne sa vynález zaoberá vysoko účinnými a selektívnymi antagonistami adenozínového A| receptora. Tiež opísané sú selektívne antagonisty adenozínového A_2a receptora.

Syntéza adenozínových antagonistov

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu môžu byť pripravené mnohými známymi spôsobmi. Sú opísané dve všeobecné metódy. Každá z nich používa bežné východiskové zlúčeniny 1,3-disubstituované 5,6-diaminouracily (zlúčenina VI), ako je zobrazené v dvoch uvedených schémach. 1,3-Disubstituované 5,6-diamino-uracily sa môžu pripraviť reakciou zodpovedajúcich symetricky alebo nesymetricky substituovaných močovín s kyano octovou kyselinou, následnou nitrozáciou a redukciou (pozri napr. J. Org. Chem 16, 1879, 1951; Can J. Chem 46, 3413, 1968, tu zahrnuté ako referencia). Nesymetricky substituované xantíny sa môžu získať metódou podľa Muellera (J. Med Chem. 36, 3341, 1993, tu zahrnuté ako referencia). Podľa tejto metódy sa 6-aminouracil monoalkyluje špecificky v polohe N3 uracilu za Vorbruggenových podmienok. Alternatívne, nesubstituované N1 alebo N3 polohy sa môžu funkcionalizovať (napr. alkylovať) v poslednom kroku syntézy.

V prvej všeobecnej metóde sa môže l,3-disubstituovaný-5,6-diaminouracil najskôr podrobiť cyklizačnej reakcii za vzniku xantínového intermediátu, ktorý je nesubstituovaný v polohe 8. Tento intermediát sa potom kondenzuje so zlúčeninou prekurzoru zo skupiny Z-R³ za vzniku 8-substituovaných xantínov. Z uvedenej schémy 1 je zrejmé, že východiskový l,3-disubstituovaný-5,6-diaminouracil (t. j. zlúčenina VI) najskôr reaguje s HC(OEt)₃, pričom sa podrobí cyklizačnej reakcii za vzniku xantínového intermediátu, ktorý je nesubstituovaný v polohe 8 (t. j. zlúčenina (A)). Tento intermediát sa chráni aminochrániacou skupinou (napr. s THP alebo BOM v polohe N7) a podrobí sa ďalej kondenzačnej reakcii v prítomnosti silnej zásady (napr. nbutyllítia (n-BuLi) alebo lítiumdiizopropylamidu (LDA)) s prekurzorovou zlúčeninou skupiny Z-R³ (napr. aldehyd alebo ketón) za vzniku alkoholu (t. j. zlúčeniny (C)).

Hydroxylová skupina alkoholu sa potom môže previesť na aminoskupinu, merkaptán, éter, laktón (napr. zlúčeninu (E)) alebo inak funkcionalizovanú zlúčeninu pomocou metód dobre známych odborníkom v danej oblasti. Chránenie na N7 polohe môže byť potom odstránené za vzniku odchráneného produktu (t. j. zlúčeniny (F)), ktorá môže byť ďalej funkcionalizovaná za vzniku zlúčeniny podľa tohto vynálezu. Pozri napr. príklady 1-6, 51 a 52.

Schéma 1

(VI)

HC(0Et)3 reflux

(A) o ochranná skupina

PPT₅, CHClj

(D)

Ac₂O zahrievanie

(E)

Odstránenie ochrannej skupiny (na odstránenie ochrannej skupiny THP sa používa IN HCL v THF/MeOH)

(F)

V druhom všeobecnom postupe môžu byť zlúčeniny podľa tohto vynálezu pripravené reakciou východiskovej látky, ktorou je l,3-disubstituovaný-5,6-diaminouracil, sprekurzorom skupiny Z-R³ (napr. aldehydy alebo karboxylové kyseliny, alebo chloridy karboxylovej kyseliny) za vzniku 6-amid-substituovaného uracilového intermediátu, ktorý potom podlieha cyklizačnej reakcii za vzniku požadovanej xantínovej zlúčeniny. Ako vyplýva zo schémy 2, východiskový l,3-disubstituovaný-5,6-diaminouracil (t. j. zlúčenina VI) najskôr kondenzuje s dikarboxyl/ester substituovanou prekurzorovou zlúčeninou skupiny Z-R³, HOOC-Z-R³-COOR^a(t. j. zlúčenina (G), R^a reprezentuje H, Ci^-alkyl alebo benzyl, pričom fenylový kruh je prípadne substituovaný s 1 až 3 substituentmi vybranými zo skupiny, ktorá obsahuje halogénskupinu, hydroxyskupinu alebo Cu-alkoxyskupinu) za vzniku 6-amidsubstituovaného uracilového intermediátu (t. j. zlúčeniny (H)), a to reakciami, ktoré sú dobre známe odborníkom v danej oblasti (napr. využitím kaplovacích činidiel, ako sú benzotriazol-l-yl-oxy-írá-(dimetylamino)fosfónium hexaíluórfosfát (BOP), O-benzotriazol-l-yl-WV, V’-tetrametylurónium hexaíluórfosfát (HBTU) alebo O-(7-azabenzotriazol-l -ylj-A, Α,Λ'’,Λ''-tetrametylurónium hexafluórfosfát (HATU)). Príklady zlúčeniny (G) zahŕňajú monometylester bicyklo[3.2.1]oktán-l,5-dikarboxylovej kyseliny a monoetylester bicyklo[2.2.2]oktán-l,4-dikarboxylovej kyseliny. Pozri napr. príklady 8 a 13. Uracilový intermediát sa potom môže podrobiť cyklizácii v zásaditých podmienkach (napr. použitím KOH a izopropylalkoholu) za vzniku xantínovej zlúčeniny (t. j. zlúčeniny (J)), ktorá ďalej podlieha funkcionalizácii za vzniku rôznych zlúčenín podľa tohto vynálezu.

Schéma 2

HOOC-Z-R³-COOR^a (G) kaplovacie činidlo

(H) (VI)

KOH, iPrOH

-------------* reflux

Požadované aldehydy, ketóny, karboxylové kyseliny a chloridy karboxylových kyselín sú komerčne dostupné (napr. od firmy Aldrich Chemical Co., Inc., Milwaukee, Wisc.) alebo sa môžu ľahko pripraviť z komerčne dostupných materiálov pomocou dobre známych syntetických metód. Tieto syntetické metódy zahŕňajú (zoznam nie je vyčerpávajúci) oxidáciu, redukciu, hydrolýzu, alkyláciu a Wittigovu homologačnú reakciu. Referencie, ktoré sa týkajú prípravy bicykloalkánových karboxylových kyselín podľa tohto vynálezu (napr. zlúčenina (III), ktorá je príkladom zlúčeniny (G)), pozri napr. Aust. J. Chem. 38, 1705, 1985; Aust. J. Chem. 39, 2061, 1986; J. Am. Chem. Soc. 75, 637, 1953; J. Am. Chem. Soc. 86, 5183, 1964; J. Am. Chem. Soc. 102, 6862, 1980; J. Org. Chem. 46, 4795, 1981 a J. Org. Chem. 60, 6873, 1995.

V prípade, že zlúčenina (G) je bicyklo[2.2.2]oktán-l,4-dikarboxylová kyselina alebo jej zodpovedajúci ester (kde Zje jednoduchá väzba a R³ je bicyklo-[2.2.2]-oktyl, je tu mnoho spôsobov jej prípravy. Podľa obr. 2, východiskový materiál (t. j. zlúčenina (I)) je l-COOR^a-4-COOR^b-cyklohexán, kde R^a a R° nezávisle reprezentujú H, Ci.5-alkyl alebo benzyl, pričom fenylový kruh je prípadne substituovaný s 1 až 3 substituentmi vybranými zo skupiny, ktorá obsahuje halogénskupinu, hydroxylovú skupinu alebo C₁.₃-alkoxyskupinu. Vý hodne sú R^a a R^b identické a reprezentujú metyl alebo etyl. Na obr. 2 sú znázornené tri rôzne syntetické cesty transformácie zlúčeniny (I) na zlúčeninu (III) (príklad zlúčeniny (G)). Cesta (1) (t. j. kroky (A) a (B) zahŕňajú prevedenie zlúčeniny (I) na jej zodpovedajúci chlóretyl, ktorý obsahuje zlúčeninu (II), a tá potom podlieha cyklizačnej reakcii za vzniku zodpovedajúcej bicyklo[2.2.2]oktánkarboxylovej kyseliny alebo jej esteru (III), pozri príklady 79 a 80. Cesta (2) tiež zahŕňa zlúčeninu (II), ktorá sa prevedie na zlúčeninu (III) cez ďalší intermediát, zlúčeninu (XXV), jódetyl, ktorý obsahuje derivát zlúčeniny (I), pozri príklady 101 a 102. Cesta (3) (t. j. krok (TT), zahŕňa transformáciu zlúčeniny (I) na l,4-bicyklo[2.2.2]oktánovú kyselinu alebo jej ester (III) bez izolácie intermediátov, t. j. zlúčeniny (II), pozri príklad 110.

Na prípravu zlúčeniny (II) sa východisková látka, zlúčenina (I), nechá reagovať asi s 1 až 1,5 ekvivalentným množstvom silnej zásady. Silná zásada, ktorá sa môže využiť v tejto reakcii, zahŕňa lítiumdiizopropylamid (LDA) a lítiumizopropylcyklohexylamid, pričom výhodnou zásadou je LDA. Ako typické rozpúšťadlá pre túto reakciu sa používajú tetrahydrofurán (THF), dimetoxyetán, dioxán a ŕerc-butylmetylester, výhodne THF. Reakcia by sa mala uskutočniť v teplotnom rozsahu od -100 °C do asi - 60 °C. Reakčná zmes sa potom nechá reagovať s 1 až 1,5 ekvivalentným množstvom brómchlóretánu v prítomnosti aspoň štyroch ekvivalentov činidla, ako je 1,1,3,3-tetrametylmočovina (TMU), l,3-dimetyl-3,4,5,6-tetrahydro-2(l//)-pyrimidinón (DMPU), 15-crown-5 a 12-crown-4, výhodne TMU. Reakcia sa môže uskutočniť v rozpúšťadlách, ako je THF, dimetoxyetán, dioxán alebo ŕerc-butylmetylester (ako rozpúšťadlo sa uprednostňuje THF) a pri teplotách pohybujúcich sa od -80 °C do asi 0 °C. Cyklizačná reakcia sa môže uskutočniť reakciou zlúčeniny (II) asi s štyrmi ekvivalentmi hexylmetylfosforamidu (HMPA), po ktorej nasleduje reakcia so silnou zásadou, ako je n-butyllítium a diizopropylamín (DIEA).

Pokiaľ ide o cestu (2), chlóretylová skupina, ktorú obsahuje intermediát (II), sa môže nechať reagovať s jodidom za vzniku požadovaného jódetylového intermediátu (XXV). Príkladom j odídu, ktorý sa môže použiť do reakcie, sú jodid sodný, jodid draselný, jodid lítny alebo tetrabutylammóniumjodid, pričom výhodným jodidom je Nal. Cyklizačná reakcia sa potom uskutočňuje v prítomnosti vhodnej silnej zásady, ako je LDA alebo lítiumizopropylcyklohexylamid (výhodne LDA) a reakčnými činidlami sú TMU alebo DMPU. Ako typické rozpúšťadlá sa používajú v tejto reakcii THF, dimetoxyetán, dioxán alebo ŕerc-butylmetylester (výhodne THF). Reakcia sa uskutočňuje pri teplotách od -80 °C do 25 °C.

Pokiaľ ide o cestu (3), východisková látka, zlúčenina (I) sa prevádza priamo na zlúčeninu (III). Zlúčenina (I) sa najskôr nechá reagovať s 1 až 1,5 ekvivalentným množstvom silnej zásady, ako je LDA alebo lítiumizopropylcyklohexylamid (výhodne LDA) vo vhodnom rozpúšťadle, ako je THF, dimetoxyetán, dioxán alebo ŕerc-butylmetyléter (výhodne THF). Teplota reakcie by mala byť v rozmedzí od -100 °C do asi -60 °C. Vzniknutá reakčná zmes sa potom nechá reagovať aspoň s jedným ekvivalentom brómchlóretánu v prítomnosti aspoň štyroch ekvivalentov HPMA pri teplotách od - 80 °C do asi 25 °C. Vzniknutá reakčná zmes sa nechá ďalej reagovať s 1 až 1,5 ekvivalentom silnej zásady, ako je LDA alebo lítiumizopropylcyklohexylamid (výhodne LDA) a aspoň štyrmi ekvivalentmi HPMA vo vhodnom rozpúšťadle, ako je THF, dimetoxyetán, dioxán alebo ŕerc-butylmetyléter (výhodne THF). Táto reakcia sa má uskutočňovať pri -100 °C až -60 °C. Nutné je si všimnúť, že v ceste (3) nie je potrebné izolovať intermediáty.

Je mnoho spôsobov ďalšej funkcionalizácie zlúčeniny (J), ktorá obsahuje karboxylovú kyselinu alebo ester pripojené kR³-skupine. Napríklad, zlúčenina (J) sa môže ďalej previesť na zodpovedajúci derivát akrylovej kyseliny. Jednou z ciest je najskôr hydrolýza esterovej skupiny zlúčeniny (J) (ak sa predpokladá, že R^anie je H), pričom vznikne zodpovedajúca karboxylová kyselina, redukcia karboxylovej kyseliny na zodpovedajúci alkohol, oxidácia alkoholu na zodpovedajúci aldehyd a potom uskutočnenie Wadsworth-Homer-Emmonsovej alebo Wittigovej reakcie za vzniku zodpovedajúceho derivátu akrylovej kyseliny. Pozri napr. príklady 5, 6, 15, 16 a 17. Zlúčenina (J) sa môže tiež previesť na zodpovedajúci alkohol (pozri napr. príklad 4). Iným variantom je premena zlúčeniny (J) priamo na zodpovedajúci aldehyd. Ďalším variantom je prevedenie zlúčeniny (J), ktorá obsahuje ester, na zodpovedajúcu karboxylovú kyselinu a potom priamo na aldehyd. Alternatívne sa môže funkcionalizovať prekurzor zlúčeniny obsahujúcej skupinu Z-R³ pred kondenzáciou s l,3-disubstituovaným-8-substituovaným xantínom v schéme 1 alebo l,3-disubstituovaným-5,6-diaminouracilom v schéme 2. Ďalej sa môžu zlúčeniny podľa tohto vynálezu pripraviť na pevnom nosiči (napr. Wangova živica), pozri príklad 36.

Na obr. 3 sa opisuje alternatívny proces prípravy zlúčeniny (XIV), vychádzajúci zo zlúčeniny (IV). Proces znázornený na obr. 3 využíva podobné chemické vlastnosti ako proces na obr. 2, ale najskôr sa pripraví postranný reťazec propiónovej kyseliny na bicyklo[2.2.2]oktylovom zvyšku a potom aduje 1,3-disubstituovaná uracilová skupina, nasledovaná cyklizáciou za vzniku požadovanej zlúčeniny (XIV). Pokiaľ ide o zlúčeniny (XX), R³ a R⁴ musia byť vo svojej reaktivite chemicky rôzne (napr. metyl a benzyl).

Na obr. 4 sa opisuje alternatívny spôsob transformácie zlúčeniny (VII) na zodpovedajúci alkohol (X) a následnú transformáciu alkoholu (X) na olefín (XII). Kroky (F’) až (H) sú cyklizácie, nasleduje saponifíkácia esteru (VIII) na kyselinu (IX) a redukcia na alkohol (X), pozri príklady 84, 85 a 86. Zlúčenina (VII) alternatívne môže podliehať redukcii (krok (Y), pozri príklad 103) a cyklizačným reakciám za vzniku zlúčeniny (X) (krok (Z), pozri napr. príklad 84a). Ďalšia alternatívna cesta zahŕňa saponifikáciu a cyklizáciu zlúčeniny (VII) za vzniku zlúčeniny (IX) (kroky (Y’) a (Z’)). Tieto reakcie sú dobre známe odborníkom v danej oblasti, pozri napr. príklady 85a a 84a. Kroky (I) až (DD) opisujú alternatívny proces transformácie alkoholov (X) na zodpovedajúci olefín (XII). Konkrétne, kroky (J), (AA) a (C) (pozri príklady 89, 104 a 105) sú alternatívnymi spôsobmi transformácie aldehydu s jedným uhlíkom v zlúčenine (XI) na zvyšok, ktorý obsahuje akrylovú kyselinu/ester pomocou metód známych v danej oblasti.

Pokiaľ ide o obr. 5, zlúčeniny (XXIX) a (XXX) už boli opísané v literatúre (Grob, C. A., Rich, R. Helv. Chim. Acta. 1979, 62, 2802; Ahmed, S. A., Hickmoti, P. W. J. Chem. Soc. Perkin Trans I, 1979, 2180) (t. j. kroky (EE) a (FF)). Zlúčenina (XXX) sa môže previesť na zlúčeninu (XXXI) pomocou dobre známych metód. Napríklad, zlúčenina (XXX) sa môže redukovať priamo pomocou Wolf-Kižnerovej alebo Clemmensonovej redukcie. Alternatívne, ketonická funkcia zlúčeniny (XXX) môže byť najskôr prevedená na ditioketalový derivát, ako napríklad 1,3-ditián, 1,3-ditiolán alebo 1,3-dialkyltioketal. Tento intermediát sa môže desulfurizovať pomocou Raney-Ni. Manipulácie funkčných skupín tohto typu sú bežné a sú dobre známe odborníkom v oblasti. Nasledovné dva kroky (t. j. kroky (GG) a (HH)) reprezentujú príklady kondenzácie 1,3-disubstituovaného-5,6-diaminouracilu s karboxylovou kyselinou, po ktorých nasleduje bázická cyklizácia kruhu. V kroku (II) sa terciámy hydroxyl prevádza na zodpovedajúci bromid, jodid alebo trifluórmetánsulfonát reakciou s PBr₃, TMSBr, TMSI, KI a H₃PO₄ alebo anhydridom kyseliny trifluórmetánsulfónovej v prítomnosti nenukleofilnej zásady. Zlúčenina (XXXV) sa môže potom pripraviť pôsobením (XXXIV) s katalyzátorom odvodeným od solí paládia (Pd(OAc)₂, PdCl₂, Pd(O₂CCF₃) a pod.) a fosfínového ligandu (PPh₃, P(o-tolyl)₃ a pod.), nasleduje reakcia s olefínom (ako je metylmetakrylát, metylpropiolát a pod.). Hydrogenácia zlúčeniny (XXXV), po ktorej nasleduje prevedenie esteru na zodpovedajúcu kyselinu, poskytne zlúčeninu (XIV). Alternatívne sa ester môže najskôr previesť na kyselinu a potom sa môže uskutočniť hydrogenácia za vzniku zlúčeniny (XIV).

Na obr. 6 sa opisuje spôsob prípravy kyseliny (zlúčenina (XXI)), ktorá je východiskovou látkou na obr. 3.

V kroku (LL) poskytuje reakcia zlúčeniny (XXXI) s anhydridom kyseliny trifluórmetánsulfónovej v prítomnosti zásady ako je pyridín zlúčeninu XXXVI (R⁸ = OTf). Nasledujúci krok, (t. j. krok (MM)), zahŕňa reakciu zlúčeniny (XXXVI) (R⁸ = OTf) s katalyzátorom odvodeným od solí paládia (Pd(OAc)₂, PdCl₂, Pd(O₂CCF₃) a pod.) a fosfínového ligandu (PPh₃, P(o-tolyl)₃ a pod), po ktorej nasleduje reakcia s olefínom (metylakrylát, metylpropionát a pod.) za vzniku zlúčeniny (XXXVII) (kde M = -C=C- alebo -CH=CH-). V kroku (NN) podlieha zlúčenina (XXXVII) hydrogenácii s paládiom na uhlí pod atmosférou vodíka za vzniku zlúčeniny (XXI).

Na obr. 7 sa znázorňuje prevedenie zlúčeniny (X) na zlúčeninu (XL), ktorá obsahuje odstupujúcu skupinu (LG), ako je napr. halogén (Cl, Br alebo I), mesylát, nosylát, tosylát a trifluórmetánsulfonát. Odstupujúca skupina (LG) sa môže nahradiť esterom malónovej kyseliny, ako je napríklad dimetylmalonát, v prítomnosti zásady, ako je metoxid. Odstupujúca skupina (LG) sa môže tiež nahradiť Meldrumovou kyselinou v prítomnosti zásady, ako je metoxid. Konverzia esterov alebo cyklických anhydridov, v prípade Meldrumovej kyseliny, na zodpovedajúcu kyselinu, po ktorej nasleduje dekarboxylácia, poskytne zlúčeninu (XXXV).

Na obr. 8 sa opisuje prehľad syntetických metód, ktoré sa môžu použiť pri príprave rôznych zlúčenín podľa tohto vynálezu. V kroku 1 sa na zlúčeninu 7-1 (Z = Br, I alebo OTf a R = H, tetrahydropyran-2-ylalebo 1-pyrolidinylmetyl) pôsobí s katalyzátorom odvodeným od solí paládia (Pd(OAc)₂, PdCl₂, Pd(O₂CCF₃) a pod.) a fosfínovým ligandom (PPh₃, P(o-tolyl)₃ a pod), nasleduje reakcia so zlúčeninou 7-2 (X = Li, ZnCl, MgBr, SnBu₃, B(OH)₂ aR’= CO₂H, CO₂Me, CO₂Et, C=CCO₂Me, C=CCO₂Et, CH=CHCO₂Me, CH=CHCO₂Et, CH₂CH₂CO₂Me, CH₂CH₂CO₂Et) za vzniku zlúčeniny 7-3 (R = H, tetrahydropyran-2-yl- alebo 1-pyrolidinylmetyl a R’= CO₂H, CO₂Me, CO₂Et, C=CCO₂Me, C=CCO₂Et, CH=CHCO₂Me, CH= =CHCO₂Et, CH₂CH₂CO₂Me, CH₂CH₂CO₂Et), Ak R = tetrahydropyran-2-yl- alebo 1-pyrolidinylmetyl, pôsobením s kyselinou (TFA, PPTS, HC1 a pod.) sa získa zlúčenina 7-3, kde R = H. V kroku 2 sa na zlúčeninu 7-2 (Z = Br, I alebo OTf aR’= CO₂H, CO₂Me, CO₂Et, C=CCO₂Me, C=CCO₂Et, CH=CHCO₂Me, CH=CHCO₂Et, CH₂CH₂CO₂Me, CH₂CH₂CO₂Et) pôsobí s katalyzátorom odvodeným od solí paládia (Pd(OAc)₂, PdCl₂, Pd(O₂CCF₃) a pod.) a fosfínovým ligandom (PPh₃, P(o-tolyl)₃ a pod.) nasleduje reakcia so zlúčeninou 7-1 (X = Li, ZnCl, MgBr, SnBu₃, B(OH)₂ a R = tetrahydropyran-2-yl- alebo 1-pyrolidinylmetyl) za vzniku zlúčeniny 7-3 (R = tetrahydropyran-2-yl- alebo 1-pyrolidinylmetyl aR- CO₂H, CO₂Me, CO₂Et, C=CCO₂Me, C=CCO₂Et, CH=CHCO₂Me, CH=CHCO₂Et, CH₂CH₂CO₂Me, CH₂CH₂CO₂Et). Ak R = tetrahydropyran-2-yl- alebo 1-pyrolidinylmetyl, reakcia s kyselinou (TFA, PPTS, HC1 a pod.) poskytuje zlúčeninu 7-3, kde R = H. Krok 3 opisuje kondenzačnú reakciu diaminouracilového zvyšku s bicyklo[2.2.2]oktánovou kyselinou (ktorá už bola opísaná), katalyzovanú pomocou HATU. V kroku 4 sa na zlúčeninu 7-4 (X = Cl, Br, I) pôsobí s katalyzátorom odvodeným od solí paládia (Pd(OAc)₂, PdCl₂, Pd(O₂CCF₃) a pod.) a fosfínovým ligandom (PPh₃, P(o-tolyl)₃ a pod.) nasleduje reakcia s olefínom (metyl-akrylát, metylpropiolát, alylalkohol a pod.) za vzniku zlúčeniny 7-5 (R’= C=CCO₂Me, C=CCO₂Et, CH=CHCO₂Me, CH=CHCO₂Et, CH₂CH₂CHO a pod.). Krok 5 opisuje bázickú cyklizáciu uracilu 7-5 na xantín typu 7-3 (už opísaný). Podobne, bázický katalyzovaná cyklizácia uracilu 7-4 na xantín typu 7-6 v kroku 6 bola už opísaná.

V kroku 7 sa na zlúčeninu 7-6 (X = Cl, Br, I, OTf) pôsobí s katalyzátorom odvodeným od solí paládia (Pd(OAc)₂, PdCl₂, Pd(O₂CCF₃) a pod.) a fosfínovým ligandom (PPh₃, P(o-tolyl)₃ a pod.) nasleduje reakcia s olefínom (metyl-akrylát, metylpropiolát, alylalkohol a pod.) za vzniku zlúčeniny 7-3 (R = H, R’= =C=CCO₂Me, C=CCO₂Et, CH=CHCO₂Me, CH=CHCO₂Et, CH₂CH₂CHO a pod.). Krok 8 zahŕňa oxidáciu koncovej aldehydovej skupiny zlúčeniny 7-3 (R = H, R’= CH₂CH₂CHO), ktorá sa uskutočňuje štandardným spôsobom (a. NaC10₂, NaH₂PO₄, 2-metyl-2-butén, b. NaIO₄, a pod.).

Definície

Všetky teploty sú uvádzané v stupňoch Celzia (°C).

TLC označuje tenko vrstvovú chromatografiu.

HPLC označuje vysokotlakovú kvapalinovú chromatografiu.

HMPA označuje hexametylfosforamid.

THF označuje tetrahydrofurán.

THP ozačuje tetrahydropyranyl.

DMSO označuje dimetylsulfoxid.

DMF označuje dimetylformamid.

DDQ označuje 2,3-dichlór-5,6-dikyano-l,4-benzochinón.

DBU označuje l,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-én.

DBN označuje l,5-diazabicyklo[4.3.0]non-5-én.

DMAC označuje dimetylacetamid.

LDA označuje lítium diizopropylamid.

p-TSA označuje monohydrát p-toluénsul iónovej kyseliny.

NBS označuje jV-brómsukcínimid.

NCS označuje N-chlórsukcínimid.

TEA označuje trietylamín.

BOC označuje terc-butylkarbamát alebo íerc-butoxykarbonyl.

Hunigova báza označuje diizopropyletylamín, [(CH₃)₂CH]₂-N-CH₂-CH₃.

DMAP označuje dimetylaminopyridín, (CH₃)₂N-pyrid-l-yl.

TFA označuje kyselinu trifluóroctovú, CF₃-COOH.

CDI označuje l,ľ-karbonyldiimidazol.

DIBAL označuje diizobutylalumíniumhydrid.

THAM označuje írá-(hydroxymetyl)aminometán.

TMS označuje trimetylsilyl.

15-crown-5 označuje 1,4,7,10,13-pentaoxacyklopentadekán.

12-crown-4 označuje 1,4,7,10-tetraoxacyklododekán.

DMPU označuje l,3-dimetyl-3,4,5,6-tetrahydro-2(l//)-pyrimidinón.

TMU označuje 1,1,3,3-tetrametylmočovinu.

Soľanka označuje nasýtený vodný roztok chloridu sodného.

Chromatografia (stĺpcová a flash chromatografia) označuje čistenie/separáciu zlúčenín vyjadrenú formou: (nosič,eluent). Je zrejmé, že príslušné frakcie sú spojené a koncentrované za vzniku požadovanej zlúčeniny, zlúčenín.

IR označuje infračervenú spektroskopiu.

FTIR označuje infračervenú spektroskopiu s Fourierovou transformáciou.

ATR označuje metódu merania zoslabenia celkovej odrazivosti.

UV označuje ultrafialovú spektroskopiu.

NMR označuje nukleárnu (protónovú) magnetickú rezonančnú spektroskopiu, chemické posuny sú udávané v ppm (d) vzhľadom na posun tetrametylsilánu.

psi označuje tlak v librách na palec štvorcový.

[a]_D ²⁵ označuje uhol otáčania roviny polarizovaného svetla (špecifická optická rotácia) pri 25 °C so sodíkovou D čiarou (589A).

MS označuje hmotnostnú spektrometriu vyjadrovanú v jednotkách m/e, m/z alebo hmotnosť/náboj. [M+H]⁺označuje pozitívny molekulový ión plus atóm vodíka. EI označuje elektrón impakt. Cl označuje chemickú ionizáciu. FAB označuje metódu bombardovania rýchlymi atómami.

Termín “farmakologicky prijateľný” označuje také vlastnosti a/alebo látky, ktoré sú akceptovateľné pre pacienta z farmakologického/toxikologického hľadiska a pre farmaceutických chemikov vo výrobe z fyzikálneho/chemického hľadiska, pokiaľ ide o zloženie, formuláciu, stabilitu, prijateľnosť pre pacienta a biodostupnosť.

Farmaceutický prijateľné aniónové soli zahŕňajú soli nasledujúcich kyselín: metánsulfónová, chlorovodíková, bromovodíková, sírová, fosforečná, dusičná, benzoová, citrónová, vínna, fumarová, maleínová, CH₃-(CH₂)_n-COOH, kde n je 0 až 4, HOOC-(CH₂)_n-COOH, kde n je už definované.

Ak sa používajú dvojice rozpúšťadiel, pomery rozpúšťadiel sú udané ako objemové: objem/objem (v/v).

V prípade rozpustnosti pevnej látky v rozpúšťadle sa používa pomer pevnej látky a rozpúšťadla, ktorý sa udáva ako pomer hmotnosti rozpustenej látky na objem rozpúšťadla (wt/v).

R^a je H, Ci.₅-alkyl, benzyl, kde fenylové jadro je prípadne substituované s jedným až troma atómami halogénu, hydroxyskupinami alebo Ci.j-alkoxyskupinami.

R^b je H, Ci.s-alkyl, benzyl, kde fenylové jadro je prípadne substituované s jedným až troma atómami halogénu, hydroxyskupinami alebo C |.₃-alkoxyskupinami. Ak R^a a R^b sú obe prítomné v molekule, môžu byť rovnaké alebo rozdielne.

R^c je H, Ci-5-alkyl, benzyl, kde fenylové jadro je prípadne substituované s jedným až troma atómami halogénu, hydroxyskupinami alebo Ci.₃-alkoxyskupinami. Ak R^a a R^c sú obe prítomné v molekule, môžu byť rovnaké alebo rozdielne.

R^d je H, , Ci.s-alkyl, benzyl, kde fenylové jadro je prípadne substituované s jedným až troma atómami halogénu, hydroxyskupinami alebo C|.₃-alkoxyskupinami. Ak R^c a R^d sú obe prítomné v molekule ako napríklad v zlúčenine (XX), musia byť rozdielne. Ak R^a a R^d sú obe prítomné v molekule, musia byť rozdielne.

R^e je H, C^-alkyl, benzyl, kde fenylové jadro je prípadne substituované s jedným až troma atómami halogénu, hydroxyskupinami alebo Ci_₃-alkoxyskupinami. Ak R^a a R^e sú obe prítomné v molekule, musia byť rozdielne.

R^f je -(CH₂)_n-CO-OR’ a -CH=CH-CO-OR’, kde n = 0, 1 alebo 2 a R’je H alebo Ci_₃-alkyl.

R⁸ je atóm halogénu alebo triflát. M je -CH₂-CH₂- alebo -CH=CH-.

Tf označuje trifluórmetylsulfonyl, -SO₂-CF₃.

LG označuje odstupujúcu skupinu „leaving group“ a je -O-SO₂-fenyl-NO₂, -O-SO₂-CH_3> -O-SO₂-fenyl-CH₃alebo -O-SO₂-CF₃

Použitie pre adenozínové antagonisty

Aktivácia adenozínových receptorov vyvoláva mnoho fyziologických odoziev, vrátane zníženia krvného toku obličkami, zníženie glomerulárnej filtračnej rýchlosti a zvýšenie reabsorpcie sodíka obličkami. Aktivácia adenozínových receptorov znižuje rýchlosť srdca, znižuje rýchlosť kondukcie a znižuje kontraktilitu. Tieto a ďalšie efekty aktivácie adenozínových receptorov v ďalších orgánoch sú normálnymi regulovanými procesmi. Ale, tieto účinky v mnohých ochoreniach prechádzajú na patologické. Adenozínové antagonisty majú široké použitie tak pri prevencii ako aj pri liečení ochorení. Ochorenia, ktorým sa môže predchádzať a/alebo sa môžu liečiť pomocou antagonistov adenozínového receptora, zahŕňajú akékoľvek stavy (a) vyznačujúce sa prítomnosťou abnormálnych koncentrácií adenozínu a/alebo (b) vyžadujúce liečenie inhibície alebo stimulácie uvoľňovania, a/alebo produkcie adenozínu. Tieto stavy zahŕňajú (zoznam nie je vyčerpávajúci) kongestívne zlyhanie srdca, kardiopulmonámu resuscitáciu, hemoragický šok a ďalšie poruchy srdca alebo obehu; degeneratívne poruchy centrálneho nervového systému; respiračné poruchy (napr. bronchiálna astma, alergické pľúcne ochorenie) a mnoho ochorení, pri ktorých je indikované diuretické liečenie (napr. akútne a chronické zlyhanie obličiek, obličková nedostatočnosť, hypertenzia). Degeneratívne ochorenia, ako sú Parkinsonova choroba, depresie, traumatické poškodenia mozgu, poinfarktový neurologický deficit, neonatálne mozgové traumy, dyslexie, hyperaktivita a cystická fibróza, sú všetky spojené s aktivitou adenozínového receptora. Ďalšie stavy, kde má terapeutické použitie liečenie pomocou antagonistov adenozínového receptora, zahŕňajú cirhotický ascites, neonatálne apnoe, zlyhanie obličiek spojené s terapiu tradičnými diuretikami, diabetes a astma.

Okrem toho prihlasovatelia zistili, že podávame vysoko selektívnych a účinných adenozínových A¹ receptorových antagonistov môže napr. vyvolať diuretickú odozvu pri podávam antagonistov samotných a môže umocniť diuretickú odozvu na podávanie tradičných diuretík. Okrem toho, podávanie antagonistov adenozínového receptora s tradičnými diuretikami zoslabuje zníženie glomerulárnej filtračnej rýchlosti indukovanej tradičným diuretikom. Nárokované metódy sú aplikovateľné napr. v edematóznych podmienkach, ako je kongestívne zlyhanie srdca a ascites.

Podávanie adenozínových antagonistov

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu môžu byť podávané živočíchom (napr. cicavcom, ako sú človek, primáty, kone, psy, kravy, prasatá, ovce, kozy, mačky, myši, potkany, morčatá, králičí, škrečkovia, fretky, jašterice, plazy alebo vtáci). Zlúčeniny sa môžu podávať akýmkoľvek vhodným spôsobom pre podávanie farmaceutických zlúčenín, vrátane (zoznam nie je vyčerpávajúci) tabletiek, tabliet, kapsúl, aerosólov, čapíkov, kvapalných prípravkov na požitie alebo pre injekciu, alebo na použitie ako očné a ušné kvapky, prídavky do jedla a preparáty na lokálnu aplikáciu. Zlúčeniny môžu byť podávané orálne, intranazálne, transdermálne, intradermálne, vaginálne, intraaurálne, intraokuláme, bukálne, rektálne, transmuskuláme alebo pomocou inhalácie, implatačne (napr. chirurgicky) alebo intravenózne.

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu môžu byť prípadne podávané v spojení s inými neadenozínovými modifikujúcimi farmaceutickými prípravkami (napr. kombinácia neadenozínového modifikujúceho diuretika pod13

SK 287311 Β6 ľa opisu napr. v doteraz neukončenej prihláške PCT/US99/08879, podanej 23. apríla 1999, ktorá je tu zahrnutá ako referencia).

Vynález bude ďalej opísaný pomocou príkladov, ktoré neobmedzujú rozsah vynálezu uvedený v nárokoch.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

8-(3-Oxo-2-oxa-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión l,3-Dipropyl-7-(tetrahydropyran-2-yl)-3,7-dihydro-purin-2,6-dión (3,0 g, 9,37 mmol) sa rozpustil v 100 ml bezvodého tetrahydrofuránu a ochladil sa na -78 °C. Potom sa pridal h-BuLí (2,5 M roztok v hexáne, 4,70 ml), následne etylester 4-oxo-cyklohexánkarboxylovej kyseliny (9,37 mmol, 1,5 ml) a reakčná zmes sa pomaly zahrievala na laboratórnu teplotu a nechala miešať pri laboratórnej teplote cez noc. Nasledujúci deň sa reakcia ukončila prídavkom nasýteného vodného roztoku NH₄C1. Reakcia sa zriedila s vodou a extrahovala s AcOEt. Organická vrstva sa vysušila a zahustila pri zníženom tlaku. Čistením pomocou chromatografíe (2 : 1 hexán/EtOAc) sa získalo 1,30 g požadovaného alkoholového derivátu.

Tento produkt (290 mg, 0,592 mmol) sa rozpustil v 3 ml THF a pridal sa vodný roztok LiOH (2M, 0,60 ml). Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote 18 hod. Potom sa rozložila prídavkom 10 % vodného roztoku kyseliny citrónovej a extrahovala sa s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄a zahustila sa.

Vzniknutá kyselina sa rozpustila v acetanhydride (3 ml) a zahriela sa do refluxu 1 hod. Po ochladení na laboratórnu teplotu sa reakčná zmes zahustila. Vzniknutý zvyšok sa rozpustil v etylacetáte a premyl nasýteným vodným roztokom NaHCO₃, roztokom NaCl, sušil sa nad Na₂SO₄ a zakoncentroval sa. Čistením pomocou chromatografíe (2 : 1 EtOAc/hexán) sa získala zlúčenina uvedená v názve. MS (ES⁺) 361.

Príklad 2

8-(2-Oxa-bicyklo[2.2.2]okt-1 -yl)-1,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión

Etylester 4-[2,6-dioxo-l,3-dipropyl-7-(tetrahydropyran-2-yl)-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl]-4-hydroxycyklohexánkarboxylovej kyseliny (príklad 1) (270 mg, 0,551 mmol) sa rozpustil vo 4 ml bezvodého THF a pridal sa LiBH₄ (2,0 M roztok v THF, 0,55 ml). Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc. Nasledujúci deň sa reakčná zmes rozložila s 10 % vodným roztokom kyseliny citrónovej a extrahovala s etylacetátom. Organická vrstva sa zahustila pri zníženom tlaku a vzniknutý surový zvyšok sa čistil pomocou chromatografíe (1:1 hexán/EtOAc).

Čistý diol (90 mg, 0,201 mmol) sa rozpustil v dichlórmetáne (5 ml) a pridal sa Et₃N (1,2 ekv.) Potom sa pridal MsCl (1,1 ekv.). Reakčná zmes sa potom nechala miešať pri laboratórnej teplote 1 hod. a potom sa rozložila prídavkom nasýteného roztoku NH₄C1 a zmes sa extrahovala.

Vzniknutý zvyšok sa rozpustil v THF (2 ml) a IN HCl (1 ml). Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote 12 hod. a potom sa zriedila vodou a extrahovala s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila sa pri zníženom tlaku. Čistením pomocou HPLC s použitím vodného CH₃CN ako eluentu sa získala zlúčenina uvedená v názve. MS(ES⁺) 347.

Príklad 3 l-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)-2-oxa-bicyklo[2.2.2]okt-4-yl-metylester octovej kyseliny

Etylester 4-oxo-cyklohexánkarboxylovej kyseliny sa previedol na zodpovedajúci ketalový derivát podľa publikovaného postupu (Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, 3.vydanie). Tento ketalový derivát (1,0 g, 4,67 mmol) sa rozpustil v bezvodom THF (15 ml). V inej banke sa rozpustil 2,2,6,6-tetrametylpiperidín (1,0 ml, 1,5 ekv.) v 30 ml THF a ochladil sa na -78 °C a pridal sa m-BuLí (2,80 ml, 2,5 M roztok v hexáne, 1,5 ekv.). Po 15 min. sa pridal roztok ketalu a reakčná zmes sa miešala 1 hod. pri -78 °C. Pridal sa metylchlórformiát (0,72 ml, 2 ekv.) a reakčná zmes sa zahriala na laboratórnu teplotu. Reakcia sa zastavila prídavkom nasýteného vodného roztoku NH₄C1 a extrahovala sa s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila sa pri zníženom tlaku. Čistením pomocou chromatografíe (2 : 1 hexán/EtOAc) sa získal intermediát.

Tento diester (8,0 g, 29,4 mmol) sa rozpustil v suchom Et₂O (500 ml), ochladil sa na 0 °C a potom sa po malých dávkach pridával LiAlH₄ (2,2 g, 2 ekv.) počas 15 min. Reakčná zmes sa miešala počas 15 min. pri 0 °C a potom sa zahriala na laboratórnu teplotu a miešala sa počas 1 hod. Potom sa ochladila na 0 °C a opatrne sa rozložila prídavkom 5 % vodného roztoku NaOH (10 ml). Zmes sa prefiltrovala a filtrát sa zahustil vo vákuu za vzniku 3,30 g diolového intermediátu.

Tento diol (1,60 g, 7,9 mmol) sa rozpustil v pyridíne (10 ml) a pridal sa TsCl (3,3 g, 2,2 ekv.). Reakčná zmes sa miešala počas 18 hod. pri laboratórnej teplote. Potom sa zriedila s etylacetátom a premyla s 10 % vodným roztokom kyseliny citrónovej. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila sa za vzniku ditosylátového intermediátu.

Tento materiál sa rozpustil v THF (60 ml) a pridalo sa IN HC1 (30 ml). Reakčná zmes sa nechala miešať pod refluxom 1 hod. Reakčná zmes sa ochladila na laboratórnu teplotu a extrahovala s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila pri zníženom tlaku. Čistením pomocou chromatografie (1:1 hexán/EtOAc) sa získalo 2,0 g ditosylátového derivátu 4,4-ó/.s-hydroxymetylcyklohexanónu.

l,3-Dipropyl-7-(tetrahydropyran-2-yl)-3,7-dihydropurin-2,6-dión (5,30 g, 16,5 mmol) sa rozpustil v bezvodom THF (250 ml) a ochladil na -78 °C. Pridalo sa «-BuLi (2,5 M v hexáne, 6,60 ml, 1 ekv.), následne sa pridal ditosylátový derivát 4,4-hú-hydroxymetylcyklohexanónu (7,7 g, 1 ekv.) a reakčná zmes sa nechala pomaly zahriať na laboratórnu teplotu. Nasledujúci deň sa reakčná zmes rozložila prídavkom nasýteného vodného roztoku NH₄C1. Reakčná zmes sa zriedila s vodou a extrahovala s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila a zahustila pri zníženom tlaku. Čistením pomocou chromatografie (2 : 1 hexán/EtOAc) sa získalo 10,4 g ditosylátu xantínového derivátu.

Tento intermediát (9,0 g) sa rozpustil v suchom THF (200 ml) a pridal sa práškový NaOH (9,0 g). Reakčná zmes sa nechala miešať pod refluxom 24 hodín, potom sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu, zriedila sa s vodou a extrahovala s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila pri zníženom tlaku. Čistením pomocou chromatografie (2 : 1 hexán/EtOAc) sa získalo 5,6 g monotosylátového derivátu.

Tento monotosylátový derivát (4,0 g, 6,5 g) sa rozpustil v DMSO (70 ml). Potom sa pridal NaOAc (9 g) a reakčná zmes sa nechala miešať počas 2 dní pri 70 až 80 °C. Reakčná zmes sa ochladila na laboratórnu teplotu, zriedila sa s vodou a extrahovala s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila sa. Čistením pomocou chromatografie (2 : 1 hexán/EtOAc) sa získalo 800 mg zlúčeniny uvedenej v názve. MS (ES⁺)419.

Príklad 4

3-(4-Hydroxymetyl-2-oxa-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión l-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-2-oxabicyklo[2.2.2]okt-4-yl-metylester octovej kyseliny sa pripravil podľa opisu v príklade 3. Tento acetátový derivát (120 mg, 0,287 mmol) sa rozpustil v MeOH (5 ml). Potom sa pridal K₂CO₃ (200 mg, 5 ekv.) vo forme roztoku v 5 ml vody. Reakčná zmes sa miešala počas 2 hod. pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa zriedila s vodou a extrahovala s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a koncentrovala sa vo vákuu. Vzniknutý zvyšok sa čistil pomocou preparatívnej HPLC s použitím vodného CH₃CN ako eluentu za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve. MS (ES⁺) 377.

Príklad 5 l-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-2-oxabicyklo[2.2.2]oktán-4-karboxylová kyselina

Metylester l-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-2-oxabicyklo[2.2.2]okt-4-yl-octo vej kyseliny sa pripravil podľa opisu v príklade 3. Tento acetátový derivát (400 mg) sa rozpustil v 3 ml dichlórmetánu a 3 ml dihydropyránu. Pridal sa PPTS (10 mg) a reakčná zmes sa miešala 18 hod. pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa zriedila s dichlórmetánom a premyla s roztokom NaHCO₃, 5 % kyselinou citrónovou a nasýteným vodným roztokom Načl. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila pri zníženom tlaku.

Vzniknutý zvyšok sa rozpustil v 10 ml MeOH a pridal sa K₂CO₃ (450 mg) vo forme roztoku v 10 ml vody. Vzniknutá zmes sa miešala pri laboratórnej teplote počas 18 hod. Potom sa zriedila s vodou a extrahovala s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila za vzniku alkoholového derivátu, 8-(4-hydroxymetyl-2-oxa-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-7-(tetrahydropyran-2-yl)-3,7-dihydropurin-2,6-dión.

Tento materiál (320 mg, 0,7 mmol) sa rozpustil v 8 ml DMF, pridal sa PDC (1,0 g, 4 ekv.) a reakčná zmes sa miešala 18 hod. pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa zriedila s 3 ml 10 % kyseliny citrónovej a 20 ml vody a rýchlo sa extrahovala s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila sa pri zníženom tlaku. Zvyšok sa rozpustil v 10 ml vody a 20 ml CH₃CN spoločne s 1 ml TFA. Reakčná zmes sa miešala 18 hod. pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa zahustila. Vzniknutý zvyšok sa čistil pomocou preparatívnej HPLC s použitím vodného CH₃CN ako eluentu za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve. MS (ES⁺)391.

Príklad 6

3-[l-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-2-oxa-bicyklo[2.2.2]okt-4-yl]akrylová kyselina

8-(4-Hydroxymetyl-2-oxa-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-7-(tetrahydropyran-2-yl)-3,7-dihydropu rin-2,6-dión sa pripravil podľa opisu v príklade 4. Tento alkoholový derivát (140 mg, 0,3 mmol) sa rozpustil v 5 ml dichlórmetánu spoločne s Dess-Martinovým činidlom (Lancaster, 155 mg, 0,3 mmol). Reakčná zmes sa miešala 1 hod. pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa potom zriedila s vodným roztokom siričitanu sodného (IM) a extrahovala sa s dichlórmetánom. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila sa pri zníženom tlaku za vzniku aldehydického intermediátu.

Tento materiál sa hneď rozpustil v 4 ml bezvodého tetrahydrofuránu. V ďalšej banke sa rozpustil trime tylfosfonoacetát (60 μΐ, 1,2 ekv.) v 3 ml bezvodého THF a ochladil sa na 0 °C a potom sa pridal KHDMS (0,5 M v toluéne, 730 μΐ). Zmes sa miešala 10 min. pri 0 °C a potom sa pridala k aldehydu. Reakčná zmes sa 3 hod. a reakcia sa potom prerušila prídavkom nasýteného vodného roztoku NH₄C1 a reakčná zmes sa extrahovala s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila sa.

Vzniknutý zvyšok sa rozpustil v 4 ml THF a 4 ml vody, ktorá obsahuje LiOH (4 ekv.) a zmes sa miešala 18 hod. pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa potom zriedila s vodnou kyselinou citrónovou a extrahovala sa s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila sa. Čistením pomocou preparatívnej HPLC s použitím vodného CH₃CN ako eluentu sa získala zlúčenina uvedená v názve. MS (ES⁺) 417.

Príklad 7 3-[l-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purm-8-yl)-2-oxabicyklo[2.2.2]okt-4-yl]propiónová kyselina

3-[l-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-2-oxabicyklo[2.2.2]okt-4-yl]akrylová kyselina sa rozpustila v 50 ml metanolu. Pridal sa 10 % Pd/C (10 mg) a reakčná zmes sa hydrogenovala počas 30 min. pri laboratórnej teplote a tlaku nižšom ako (38,669 kPa) 55 psi vodíka. Reakčná zmes sa prefiltrovala cez vrstvu celitu a filtrát sa zahustil pri zníženom tlaku za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve. MS (ES⁺) 419.

Príklad 8 (2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-2-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylová kyselina

K roztoku monometylesteru bicyklo[3.2.1]oktán-l,5-dikarboxylovej kyseliny (Delia, E. W., Tsanaktisidis, J. Aust. J. Chem. 1985, 38, 1705, Delia, E. W., Tsanaktsidis, J. Aust. J. Chem. 1986, 39, 2061) (5,94 mmol, 1,26 g), HATU (5,94 mmol, 2,26 g) a 5,6-diamino-l,3-dipropyl-l/7-pyrimidín-2,4-dión hydrochloridu (Daly, J. W. et al., J. Med. Chem. 1985, 28(4), 487) (5,94 mmol, 1,56 g) vo 25 ml DMF sa pridal i-Pr₂NEt (17,82 mmol, 3,1 ml). Reakčná zmes sa miešala cez noc pri laboratórnej teplote. Potom sa zahustila na pumpe s cieľom odstrániť DMF. Zvyšok sa rozpustil v etylacetáte a premyl s IN HC1, 5 % NaHCO₃ a nasýteným vodným roztokom NaCl a vysušil sa nad MgSO₄. Filtráciou a odparením a následnou flash chromatografiou na stĺpci, s použitím elučnej zmesi 3 : 1 EtOAc/hexán, sa získal produkt (0,7g, 28 %) vo forme oleja. MS (ES⁺) 443,1 (M+Na, 100 %), 421,4 (M+H, 10 %).

Roztok etylesteru 5-(6-amino-2,4-dioxo-l,3-dipropyl-l,2,3,4-tetrahydropyrimidin-5-yl-karbamoyl)-bicyklo[3.2.1]-oktán-l-karboxylovej kyseliny (0,238 mmol, 0,10 g) v 20 % NaOH (2,0 ml) a MeOH (10,0 ml) sa miešal pod refluxom 5 hod. Reakčná zmes sa ochladila na laboratórnu teplotu a potom sa zahustila s cieľom odstrániť MeOH. Vodná fáza sa okyslila (pH 2-3) kone. HC1 a potom sa extrahovala s etylacetátom. Spojené organické extrakty sa premyli s vodou a nasýteným vodným roztokom NaCl a vysušili nad MgSO₄. Filtráciou a odparením, a následnou chromatografiou na HPLC s reverznou fázou sa získal produkt (0,039 g, 42 %) vo forme tuhej látky. MS (ES⁺) 389,12 (M+H, 100 %).

Príklad 9 8-(4-Hydroxy-2,6-dioxa-tricyklo[3.3.1.0³’⁷]non-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurín-2,6-dión

Roztok LDA sa pripravil pri -78 °C pridaním w-BuLi (1,8 M v hexáne, 1,7 ml) do roztoku z-Pr₂NH (3,61 mmol, 0,506 ml) vo 25 ml THF. Po pridaní sa LDA nechalo stáť 45 min. pri -78 °C. Potom sa k nemu pomaly prikvapkal roztok l,3-dipropyl-7-(tetrahydropyran-2-yl)-3,7-dihydropurin-2,6-diónu (príklad 52) (2,78 mmol, 0,89 g) v THF (35 ml) pri -78 °C. Zmes sa miešala 1 hod. pri -78 °C a potom sa pridal roztok 8-oxa-bicyklo[3.2.1]okt-6-en-3-ónu (Mann, J. a ďalší, J. Chem. Soc. Perkin. Trans 1, 1992, 787), (2,78 mmol, 0,345 g) v 5 ml THF. Reakčná zmes sa miešala cez noc, pričom sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu. Reakčná zmes sa potom rozložila prídavkom nasýteného roztoku NH₄C1 a extrahovala sa s etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyli s nasýteným roztokom NH₄C1, vodou a nasýteným vodným roztokom NaČl a vysušili nad MgSO₄. Filtráciou a odparením a následnou flash chromatografiou, eluované zmesou etylacetát/dichlórmetán gradient, sa získal produkt kondenzácie (0,55 g, 45 %). MS (ESP⁺, 60V): 445,07 (M+H, 35 %), 361,06 (48 %), 343,05 (100 %).

K roztoku 8-(3-hydroxy-8-oxa-bicyklo[3.2.1]okt-6-en-3-yl)-l,3-dipropyl-7-(tetrahydropyran-2-yl)-6,7-dihydropurin-2,6-dión (pripravený skôr) (0,225 mmol, 0,10 g) v i-PrOH (2 ml) a vode (1 ml) sa pridal MMPP (80 %, 0,45 mmol, 0,233 g) v jednej dávke. Po 5 dňoch pri laboratórnej teplote sa reakcia zastavila prídavkom nasýteného vodného roztoku Na₂S₂O₃ a zahustila sa s cieľom odstrániť i-PrOH. Vodný zvyšok sa rozdelil medzi etylacetát a nasýtený roztok NaHCO₃. Organické extrakty sa premyli s vodou a nasýteným vodným roztokom NaCl a vysušili nad MgSO₄. Filtráciou a odparením sa získal produkt (0,093 g, 90 %) vo forme peny. ^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃): 11,50, 11,63, 21,55, 21,61, 21,72, 23,00, 25,01, 32,17, 37,96, 40,42, 43,52, 45,19, 54,46, 54,62, 70,46, 70,79, 71,51, 71,64, 86,09, 107,18, 147,34, 151,21, 155,19, 157,82.

K roztoku 8-(4-hydroxy-2,6-dioxa-tricyklo[3.3.1.0^3,7]non-1 -yl)-1,3-dipropyl-7-(tetrahydropyran-2-yl)-3,7-dihydropurin-2,6-diónu (0,065 mmol, 0,030 g) v 1 : 1 zmesi THF/MeOH (6 ml) sa pridala IN HC1 (3 kvapky). Reakčná zmes sa miešala 4 hod. pri laboratórnej teplote a potom sa odparila do sucha. Zvyšok sa čistil pomocou HPLC chromatografie na reverznej fáze za vzniku produktu (0,0094 g, 38 %). ’H NMR (400 MHz, d₆-DMSO): 0,80-0,89 (m, 6H), 1,45-1,56 (m, 2H), 1,60-1,70 (m, 2H), 1,9-2,09 (m, 2H), 2,2-2,25 (m, 1H), 3,89-3,91 (m, 2H), 3,99 (s, 1H), 4,21 (br s, 1H), 4,51 (br s, 1H), 4,80 (m, 1H).

Príklad 10

8-(5-Hydroxymetyl-bicyklo[3.2.1]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión

K roztoku metylesteru 5-(6-amino-2,4-dioxo-l,3-dipropyl-l,2,3,4-tetrahydropyrimidin-5-ylkarbamoyl)bicyklo[3.2.1]oktán-1-karboxylovej kyseliny (pripravenej podľa opisu v príklade 8) (0,714 mmol, 0,30 g) sa pridal LiBH₄ (2M v THF, 0,54 ml). Po miešaní cez noc pri laboratórnej teplote sa reakčná zmes zahriala do varu počas 90 min. Reakcia sa zastavila pri laboratórnej teplote prídavkom IN HC1, zriedila sa s vodou a extrahovala s etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyli s nasýteným roztokom NaHCO₃ vodou a nasýteným vodným roztokom NaCl a vysušili nad MgSO₄. Filtráciou a odparením sa získal produkt (0,20 g, 71 %) vo forme oleja. MS (ES⁺) 415,15 (M+Na, 100 %), 393,5 (M+H, 48 %).

Roztok (6-amino-2,4-dioxo-l,3-dipropyl-l,2,3,4-tetrahydropyrimidin-5-yl)amidu 5-hydroxymetyl-bicyklo[3.2.l]oktán-l-karboxylovej kyseliny (0,51 mmol, 0,20 g) v 20 % NaOH (2,0 ml) a MeOH (10,0 ml) sa miešal pod refluxom cez noc. Reakčná zmes sa ochladila na laboratórnu teplotu a potom sa zahustila s cieľom odstrániť MeOH. Vodná fáza sa okyslila (pH 2-3) s kone. HC1 a potom sa extrahovala s etylacetátom. Spojené acetátové extrakty sa premyli nasýteným vodným roztokom NaHCO₃, vodou a nasýteným vodným roztokom NaCl a vysušili nad MgSO₄. Filtráciou a odparením a následnou flash chromatografiou, eluované zmesou 3 : 2 etylacetát/dichlórmetán, sa získala titulná zlúčenina (0,077 g, 40 %) vo forme oleja.

¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃): 11,53 (q), 11,74 (g), 20,26 (t), 21,71 (t), 31,62 (t), 34,15 (t), 37,29 (t), 43,49 (s), 45,54 (t), 45,67 (t), 46,14 (t), 46,90 (t), 70,51 (t), 71,11 (s), 107,03 (s), 149,25 (s), 151,54 (s), 155,88 (s), 162,58 (s).

Príklad 11 [l-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-2,6-dioxa-tricyklo[3.3.1.0³’⁷]non-4-yloxy]octová kyselina

K roztoku 8-(4-hydroxy-2,6-dioxa-tricyklo[3.3.1,0^3,7]non-1 -yl)-1,3-dipropyl-7-(tetrahydropyran-2-yl)-3,7-dihydropurin-2,6-diónu (príklad 9) (0,065 mmol, 0,030 g) v 2 ml THF sa pridal NaH (60 % disperzia, 0,068 mmol, 0,0027 g) v jednej dávke. Reakčná zmes sa nechala miešať pri laboratórnej teplote 1 hod. a potom sa pridal terc-butylbrómacetát (0,068 mmol, 10 μΐ). Po 3 dňoch sa reakcia ukončila prídavkom nasýteného roztoku NH₄C1 a extrahovala sa s etylacetátom (3x). Spojené organické fázy sa premyli nasýteným vodným roztokom NaCl a vysušili nad MgSO₄. Po filtrácii a odparení sa získal produkt (0,059 g) znečistený terc-butylbrómacetátom. MS (ES⁺) 575,15 (M+H).

Roztok terc-butylesteru {l-[2,6-dioxo-l,3-dipropyl-7-(tetrahydropyran-2-yl)-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-pu rin-8-yl]-2,6-dioxa-tricyklo[3.3.1.0³’⁷]non-4-yloxy}-octovej kyseliny (0,10 mmol, 0,059 g) v dichlórmetáne (1 ml) sa nechal reagovať s TFA (1 ml) a zmes sa odparila do sucha a zvyšok sa čistil pomocou HPLC na reverznej fáze za vzniku produktu (0,0036 g, 8 %). MS (ES⁺) 435,13 (M+H).

Príklad 12

3-[5-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/f-purin-8-yl)-bicyklo[3.2.1]okt-l-yl]akrylová kyselina

K roztoku 5-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[3.2.1]oktán-karboxylovej kyseliny (príklad 8) (1,29 mmol, 0,50 g), HATU (1,29 mmol, 0,49 g), a ΛζΟ-dimetylhydroxylamín hydrochloridu (1,29 mmol, 0,126 g) v 12 ml DMF sa pridal i-Pr₂NEt (3,86 mmol, 0,67 ml). Reakčná zmes sa miešala cez noc pri laboratórnej teplote a potom sa zahustila na pumpe s cieľom odstrániť DMF. Zvyšok sa rozpustil v etylacetáte a premyl s IN HC1, nasýteným roztokom NaHCO₃ a nasýteným vodným roztokom NaCl a sušil nad MgSO₄. Filtráciou a odparením sa získal produkt (0,791 g), znečistený DMF. MS (ES⁺) 432,13 (M+H).

K roztoku metoxymetylamidu 5-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo- [3.2.1]oktán-l-karboxylovej kyseliny (0,232 mmol, 0,100 g) v 3 ml THF sa pri -78 °C pridal roztok LiAlH₄(IM v THF. 0,52 ml). Po pridaní sa reakčná zmes miešala 30 min. pri -78 °C a potom 30 min. pri 0 °C. Reakcia sa zastavila opatrne postupným pridávaním vody (20 μΐ), NaOH (20 %, 20 μΐ) a vody (40 μΐ). Suspenzia sa veľmi rýchlo miešala cez noc, potom sa prefiltrovala cez vrstvu celitu, premyla s THF. Odparením a následnou flash chromatografiou, eluované s 5 % THF/dichlórmetánom, sa získal produkt (0,048 g, 56 %) vo forme oleja. MS (ES^+): 373,17 (M+H).

K roztoku trimetylfosfonoacetátu (0,310 mmol, 0,056 g) v 4 ml THF sa pri 0 °C pridal roztok KHMDS (0,5 M roztok v toluéne, 0,6 ml). Po 45 min. miešaní sa pridal roztok 5-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[3.2.1] oktán-1-karbaldehydu (0,129 mmol, 0,048 g) v 2 ml THF. Zmes sa miešala cez noc pri laboratórnej teplote, potom sa rozložila s koncentrovaným roztokom NH₄C1 a extrahovala etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyli s nasýteným roztokom NaHCO₃, nasýteným vodným roztokom NaCl a vysušili nad MgSO₄. Filtrácia a odparenie poskytli produkt (0,119 g) znečistený nadbytkom trimetyl-fosfonoacetátu. MS (ES⁺) 429,16 (M+H).

Roztok metylesteru 3-[5-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[3.3.1]okt-l-yljakrylovej kyseliny (0,129 mmol, 0,055 g) v THF (4 ml) sa nechal reagovať pri laboratórnej teplote s IN LiOH (1,1 ml). Reakčná zmes sa zahrievala cez noc do refluxu. Reakčná zmes sa ochladila na laboratórnu teplotu, zriedila sa s vodou, okyslila s kone. HC1 (pH 2-3) a extrahovala s etylacetátom. Spojené organické extrakty sa premyli s nasýteným vodným roztokom NaCl a vysušili nad MgSO₄. Filtrácia a odparenie, a následná chromatografia na reverznej fáze, poskytli čistý produkt (0,010 g, 19 %). MS (ES⁺) 397,24 (M+H-OH), 100 %, MS (ES⁺) 413,01 (M-H, 100 %).

Príklad 13

4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylová kyselina

K miešanému roztoku 2,00 g (8,84 mmol) monoetylesterubicyklo[2.2.2]oktán-l,4-dikarboxylovej kyseliny, 2,60 g (9,89 mmol) 5,6-diamino-l,3-dipropyl-l/f-pyrimidin-2,4-dión hydrochloridu, 5,32 ml (38,1 mmol) NEt₃ a 30 ml bezvodého acetonitrilu sa pridalo 3,76 g (9,89 mmol) HATU. Reakčný roztok sa miešal 1 hod. pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa zahustila vo vákuu a spojila sa so 40 ml etylacetátu a 40 ml 10 % kyseliny citrónovej. Vodná vrstva sa oddelila a premyla dvakrát so 40 ml dávky etylacetátu. Spojené organické frakcie sa premyli s 20 ml dávky nasýteného roztoku NaHCO₃ a nasýteným vodným roztokom NaCl a zahustili sa vo vákuu. Vzniknutá tuhá látka sa spojila v 200 ml banke s guľatým dnom so spätným chladičom so zmesou 35 ml i-PrOH a 35 ml IN KOH (35 mmol) a zmes sa zahrievala do refluxu. Po 1 hod. varu sa reakčný roztok odparil vo vákuu, zvyšok sa vybral do 40 ml vody a dvakrát sa extrahoval s 30 ml dichlórmetánu. Vodná vrstva sa okyslila pomocou kone. HC1 a vzniknutá zrazenina sa odfiltrovala za vzniku 3,00 g (87 % výťažok) belavej tuhej látky. (MH⁺ = 389,25).

Nasledovné zlúčeniny sa pripravili analogickým spôsobom:

Príklad 13a: 8-(4-Hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺ = 361,15) Príklad 13b: 8-(4-Pentyl-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺ = 415,19) Príklad 13c: 5-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7—purin-8-yl)bicyklo[3.2.2]nonán-l-karboxylová kyselina, (MH⁺ = 403,30)

Príklad 13d: Metylester [4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yI)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yljkarbámovej kyseliny, (MH⁺ = 418,15)

Príklad 13e: 8-(4-Brómbicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MNa⁺ = 425,22) Príklad 13f: 8-(l-Aza-bicyklo[2.2.2]okt-4-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺ = 346,31) N-3 alkylácie prekurzorových monopropyluracilov sa uskutočnili podľa v literatúre uvedených postupov (Muller, C. E.; Geis, U.; Hipp, J.; Schobert, U.; Frobenius, W.; Pawlowski, M.; Suzuki, F.; SandovalRamirez, J.; J. Med. Chem. 1997, 40, 4396-4406.) pri BOC chránených 5,6-diamino-l-propyluracilov so súčasným odstránením BOC s 4N HC1 v dioxáne. Uvedený syntetický protokol sa potom aplikoval pri príprave nasledovných xantínových derivátov.

Príklad 13g: 3-(2-Metoxy-etyl)-8-(4-pentyl-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l-propyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺ = 431,64)

Príklad 13h: 4-[3-(2-Metoxyetyl)-2,6-dioxo-l-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl]-bicyklo[2.2.2]oktán-1-karboxylová kyselina, (MH⁺ = 405,63)

Príklad 13i: 3-[2-(4-Metoxyfenyl)etyl]-8-(4-pentyl-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-l-propyl-3,7-dihydro-purin-2,6-dión, (MH⁺ = 507,30)

Príklad 13j: 4-{3-[2-(4-Metoxyfenyl)etyl]-2,6-dioxo-l-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl}-bicyklo- [2.2.2]oktán-l-karboxylová kyselina, (MH⁺ = 481,2)

Príklad 13k: 3-Metyl-8-(4-pentyl-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l-propyl-3,7-dihydro-purin-2,6-dión, (MH⁺ = = 387,21)

Príklad 131: 4-[3-(4-Metoxyfenyl)-2,6-dioxo-l-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl]-bicyklo[2.2.2]oktán-1-karboxylová kyselina, (MH⁺ = 453,4)

Príklad 13m: 4-(2,6-Dioxo-l,3-ôfr-(3,3,3-trifluórpropyl)-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo- [2.2.2]oktán-l-karboxylová kyselina, (MH⁺ = 496,98)

Príklad 13n: Metylester 4-[2,6-dioxo-l,3-te-(3,3,3-trifluórpropyl)-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl]-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylová kyselina, (MH⁺ = 511,3)

Príklad 13o: 3-[4-(6-Oxo-l,3-dipropyl-2-tioxo-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]

-propiónovej kyseliny, (MH⁺ = 432,98) z 5,6-diamino-l,3-dipropyl-2-tioxo-2,3-dihydro-lH-pyrimidín-4-ónu, pripraveného postupom podľa literatúry (Jacobson, K. A.; Kiriasis, L.; Barone, S.; Bradbury, B. A.; Kammula, U.; Campagne, M.; Secunda, S.; Daly, J. W.; Neumeyer, J. L.; Pfleiderer, W. J.; Med. Chem. 1989, 32, 1873-1879).

Príklad 13p: 4-(6-Oxo-1,3-dipropyl-2-tioxo-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-1 -karboxylová kyselina, (MH⁺ = 405,04) z 5,6-diamino-l,3-dipropyl-2-tioxo-2,3-dihydro-17/-pyrimidín-4-ónu, pripraveného postupom podľa literatúry (Jacobson, K. A.; Kiriasis, L.; Barone, S.; Bradbury, B. A.; Kammula, U.; Campagne, M.; Secunda, S.; Daly, J. W.; Neumeyer, J. L.; Pfleiderer, W. J. Med. Chem. 1989, 32, 1873-1879).

Príklad 14

Metylester 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny

4-(2,6-Dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-1 A/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (príklad 13) (1,50 g, 3,86 mmol) sa spojil so 60 ml MeOH a 10 kvapkami kone. H₂SO₄. Reakčný roztok sa zahrieval do refluxu až do spotrebovania všetkého východiskového materiálu. Potom sa pridal nasýtený roztok NaHCO₃ až do neutrálneho pH a reakčná zmes sa zahustila vo vákuu. Zvyšok sa extrahoval s etylacetátom a premyl sa nasýteným roztokom NaHCO₃, nasýteným vodným roztokom NaCl a sušil sa nad Na₂SO₄. Etylacetátový roztok sa zahustil vo vákuu za vzniku 1,51 g (97 % výťažok) belavej tuhej látky (MH⁺ = = 403,13).

Príklad 15 8-(4-Hydroxymetyl-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión

Metylester 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (príklad 14) (1,40 g, 3,48 mmol) sa spojil s LiBH₄ (0,379 g, 17,4 mmol), MeOH (0,141 ml, 3,48 mmol) a 100 ml THF a vzniknutá zmes sa zahrievala do varu 18 hod. Po ochladení na laboratórnu teplotu sa pridalo 50 ml IM HC1 a zmes sa odparila vo vákuu. Zvyšok sa extrahoval s etylacetátom a premyl s IM HC1, nasýteným roztokom NaHCO₃, nasýteným vodným roztokom NaCl a sušil sa nad Na₂SO₄. Etylacetátový roztok sa odparil vo vákuu za vzniku 1,15 g (88 % výťažok) bielej tuhej látky (MH⁺ = 375,50).

Príklad 16 4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbaldehyd

K roztoku 0,092 g (0,246 mmol) 8-(4-hydroxymetyl-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-diónu (príklad 15) v 5 ml dichlórmetánu sa pridalo 0,125 g (0,295 mmol) Dess-Martinovho činidla. Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote až ukončenia oxidácie. Reakčný roztok sa odfiltroval cez bázickú alumínu, premyl sa nasýteným roztokom NaHCO₃, nasýteným vodným roztokom NaCl a vysušil nad Na₂SO₄. Dichlórmetánový roztok sa zahustil vo vákuu za vzniku 0,057 g (62 % výťažok) belavej tuhej látky. (MH⁺ = 373,30).

Príklad 17 3-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-akrylová kyselina

Trimetylfosfonoacetát (0,0161 g, 0,886 mmol) sa rozpustil v toluéne ochladenom na 0 až 5 °C. Potom sa v priebehu miešania pridal po kvapkách KHMDS (0,5 M v toluéne) (3,54 ml) počas 5 min. Po ďalších 30 min. pri 0 až 5 °C sa k reakčnej zmesi pridalo 0,300 g (0,805 mmol) zlúčeniny z príkladu 16, 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbaldehydu a reakčná zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu a miešať 16 hod. Reakčná zmes sa zahustila vo vákuu. Surový zvyšok sa rozpustil v 25 ml MeOH a 10 ml vody a pridalo sa 0,150 g LiOH a zmes sa miešala cez noc. Zmes sa zahustila vo vákuu a zvyšok sa rozpustil v 15 ml vody. Vodná vrstva sa trikrát extrahovala s etylacetátom (3 x 20 ml), okyslila sa s kone. HC1 a zrazenina sa odfiltrovala za vzniku 0,190 g (57 % výťažok) derivátu (íra«s)-akrylovej kyseliny (MH+ = 415,08).

Príklad 18

3-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-127-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-propiónová kyselina

3-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-akrylová kyselina (príklad 17) (0,050 g) sa rozpustila v 5 ml MeOH a spojila sa s 0,005 g 10 % Pd/C. Do reakčnej nádoby sa trikrát zavádzal dusík a potom sa umiestnila pod balón s vodíkom. Po 2 hod. sa reakčná zmes prefiltrovala a zahustila za vzniku 0,037 g (74 % výťažok) bielej tuhej látky. (MH⁺ = 417,30) Príklad 18a: 3-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-177-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-2-metylpropiónová kyselina sa pripravila analogickým spôsobom. (MH⁺ = 431,36)

Príklad 19 {[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-12/-purin-8-yl}-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbonyl]metylamino} octová kyselina

K miešanej zmesi 0,100 g (0,257 mmol) 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylová kyselina (príklad 13), 0,039 g (0,257 mmol) sarkozínhydrochloridu, 0,143 ml (1,03 mmol) NEt₃ a 2 ml bezvodého acetonitrilu sa pridalo 0,103 g HATU (0,270 mmol). Reakčný roztok sa nechal miešať pri laboratórnej teplote 16 hod. Reakčná zmes sa potom zahustila vo vákuu a spojila s 10 ml etylacetátu a 10 ml 10 % kyseliny citrónovej. Vodná vrstva sa oddelila a dvakrát premyla s 10 ml etylacetátu. Spojené organické frakcie sa premyli s 10 ml podielmi nasýteného roztoku NaHCO₃ a vodného roztoku NaCl a zahustili sa vo vákuu. Vzniknutá tuhá látka sa rozpustila v zmesi 5 ml MeOH a 5 ml IN NaOH a miešala sa 16 hod. Reakčný roztok sa zakoncentroval vo vákuu, zvyšok sa vybral do 10 ml vody a vodná vrstva sa premyla dvakrát s 10 ml dichlórmetánu. Vodná vrstva sa okyslila s kone. HCI a vzniknutá zrazenina sa odfiltrovala za vzniku 0,094 g (77 % výťažok) belavej tuhej látky. (MH⁺ = 460,18).

Nasledovné zlúčeniny sa pripravili analogickým spôsobom:

Príklad 19a: (2-Dimetylamino-etyl)amid 4-(2,6-dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro- l/f-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny, (MH⁺ = 459,17)

Príklad 19b: Metylester {[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl}-bicyklo[2.2.2]oktán-1-karbonyl]-amino}-octovej kyseliny, (MH⁺ = 460,3)

Príklad 19c: Metylester 3-{[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbonyl]-amino}-propiónovej kyseliny, (MH⁺ = 389,3)

Príklad 19d: {[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-177-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbonyl]-amino}-octová kyselina, (MH⁺ = 446,06)

Príklad 19e: 1 -[4-(2,6-Dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l 77-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-1 -karbonylJ-piperidín-4-karboxylová kyselina, 'H NMR (400 MHz, CDC1₃): δ = 0,84 (t, 3H), 0,085 (t, 3H), 1,50-1,68 (m, 6H), 1,84-1,92 (m, 14H), 2,44 (m, 1H), 2,86 (m, 2H), 3,78 (t, 2H), 3,91 (t, 2H), 4,15 (m, 2H). Príklad 19f: 8-(4-Dimetylaminometyl-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺ = 402,08)

Príklad 19g: 8-{4-[(2-Dimetylamino-etylamino)-metyl]-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl}-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺= 445,24)

Príklad 19h: (2-Aminoetyl)amid4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-1-karboxylová kyselina, (MH⁺ = 431,06)

Príklad 20

8-(4-Amino-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión

Metylester [4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyI-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]karbámovej kyseliny (príklad 13d) (8,3 mg, 20 mmol) sa zahrieval do refluxu v 40 ml kone. HCI počas 3 hod. Reakčná zmes sa zahustila vo vákuu za vzniku tuhej látky, ktorá sa triturovala s acetonitrilom za vzniku 5,8 mg (77 %) bielej tuhej látky (MH⁺ = 360,22).

Príklad 21

2-(7?)-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yloxy]-l,3-propiónová kyselina

8-(4-Amino-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión (príklad 20) (0,100 g, 0,279 mmol) sa nechal reagovať s 1,5 ml (7?)-metyllaktátom a 0,075 ml izoamylnitritu. Zmes sa zahrievala na 60 °C počas 2 hod. a potom sa ochladila na laboratórnu teplotu. Reakčná zmes sa zahustila vo vákuu a zvyšok sa miešal s 8 ml roztoku 50 % MeOH a 0,050 g LiOH cez noc. Reakčná zmes sa odparila vo vákuu, rozpustila v 8 ml vody, pH roztoku sa nastavilo na 10 a zmes sa extrahovala dvakrát so 6 ml dichlórmetánu. Vodná vrstva sa okyslila s kone. HCI a vzniknutá zrazenina sa odfiltrovala za vzniku 0,024 g (20 % výťažok) produktu. (MH⁺ = 433,08)

Nasledovné zlúčeniny sa pripravili analogickým spôsobom:

Príklad 21a: 2-(S)-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yloxy]-1,3-propiónová kyselina, (MH⁺ = 433,10)

Príklad 21b: 8-(4-Izopropoxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺ = 403,13) Príklad 21c: 8-(4-Alyloxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺ = 401,11) Príklad21d: [4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yloxy]octová kyselina, (MH⁺ = 419,08)

Príklad 21e: l,3-Dipropyl-8-(4-(2,2,2-trifluór-l-trifluórmetyletoxy)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺ = 511,00)

Príklad 21 f: 2-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yloxy]-2-metylpropiónová kyselina, (MH⁺ = 447,17)

Príklad 21g: 3-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yloxy]propiónová kyselina, (MH⁺= 433,6)

Príklad 21h: 3-(7?)-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purm-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yloxy]butánová kyselina, (MH⁺ = 447,34)

Príklad 21i: 3-(5)-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yloxy]butánová kyselina, (MH⁺ = 447,33)

Príklad 2lj: 3-{4-(2,6-Dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yloxy}-2(S)-metylpropiónová kyselina, (MH⁺ = 447,32)

Príklad 21k: 3-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yloxy]-2(7?)-metylpropiónová kyselina, (MH⁺ = 447,33)

Príklad 211: 3-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yloxy]-2,2-dimetylpropiónová kyselina, (MH⁺ = 461,32)

Príklad 21m: [5-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[3.2.2]non-l-yloxy]octová kyselina, (MH⁺ = 433,3)

Príklad 2ln: 3-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylmetoxy]-2,2-dimetylpropiónová kyselina, ’H NMR (400 MHz, CDC1₃):ô = 0,86 (t, 6H), 1,15 (m, 6H), 1,45 (m, 6H), 1,58 (td, 2H), 1,67 (td, 2H), 1,84 (m, 6H), 3,32 (s, 2H), 3,38 (s, 2H), 3,90 (t, 2H), 3,98 (t, 2H)

Príklad 21 o: 3-[5-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purm-8-yl)-bicyklo[3.2.2]non-l-yloxy]propiónová kyselina, (MH⁺ = 447,32)

Príklad 21p: 2-(7?)-[5-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[3.2.2]non-l-yloxy]propiónová kyselina, (MH⁺ = 447,26)

Príklad 22

8-(4-Fenoxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión

K roztoku 60 mg 8-(4-hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-diónu (príklad 13a) (0,167 mmol) v 2 ml dichlórmetánu sa pridalo 27 μΐ pyridínu a reakčná zmes sa ochladila na 0 °C. K tomuto roztoku sa pridalo 40 μΐ triflikanhydridu (0,24 mmol) v dichlórmetáne (1 ml). Reakčná zmes sa cez noc udržiavala pri 10 °C. Reakčná zmes sa zriedila s 5 ml dichlórmetánu a premyla sa s chladnou IN HC1, nasýteným roztokom NaHCO₃ a nasýteným vodným roztokom NaCl. Potom sa vysušila nad síranom sodným a zahustila sa vo vákuu za vzniku žltého oleja. Surový triflát sa rozpustil v 1,4-dioxáne (3 ml) a pridalo sa 100 mg fenolu (1,08 mmol) a zmes sa zahrievala na 80 °C cez noc. Reakčná zmes sa zahustila a zvyšok sa vybral do etylacetátu (10 ml), premyl sa s IN KOH (5 ml), nasýteným roztokom NaHCO₃ (5 ml), IN HC1 (5 ml) a nasýteným vodným roztokom NaCl. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila sa vo vákuu na bezfarebný olej, ktorý sa čistil pomocou stĺpcovej chromatografie (SiO₂, 1 : 1 hexán/etylacetát) za vzniku 11 mg zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej tuhej látky (MH⁺ = 437,29).

Nasledovné zlúčeniny boli pripravené analogickým spôsobom po saponifikácii metylesteru.

Príklad 22a: [4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/f-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylsulfanyl]octová kyselina, (MH⁺= 435,35)

Príklad 22b: {[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-metylamino}octová kyselina, (MH⁺ = 432,31)

Príklad 22c: [4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-sulfonyl]octová kyselina, (MH⁺= 467,31)

Príklad 23

4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylester metánsulfónovej kyseliny

K roztoku 50 mg 8-(4-hydroxy-bicyklo[2.3.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-diónu (príklad 13a) (0,14 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) sa pridalo 20 μΐ Et₃N a reakčná zmes sa ochladila v ľadovom kúpeli. Potom sa pridalo 20 μΐ metánsulfonylchloridu (0,26 mmol) a reakčná zmes sa miešala pri 10 °C cez noc. Reakčná zmes sa zahustila vo vákuu a zvyšok sa extrahoval do etylacetátu a premyl so zriedenou HC1 (2 x x 5 ml). Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila. Zvyšok sa trituroval s acetonitrilom za vzniku 36 mg (59 %) čistej bielej tuhej látky (MH⁺ = 439,4).

Príklad 24

4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lA/-purm-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylester toluén-4-sulfónovej kyseliny

K roztoku 100 mg 8-(4-hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-diónu (príklad 13 a) (0,28 mmol) v dichlórmetáne (10 ml) sa pridalo 40 μΐ Et₃N a reakčná zmes sa ochladila v ľadovom kúpeli. Potom sa pridalo 100 mg p-toluénsulfonylchloridu (0,52 mmol) a reakcia sa udržovala pri 10 °C cez noc. Reakčná zmes sa zahustila vo vákuu a zvyšok sa extrahoval s etylacetátom, premyl dvakrát so zriedenou

HC1 (10 ml). Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila sa. Zvyšok sa trituroval s acetonitrilom za vzniku 78 mg (54 %) čistej bielej tuhej látky (MH⁺ = 515,10).

Príklad 25 jV-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]metánsulfonamid

K roztoku 100 mg 8-(4-amino-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-diónu (príklad 20) (0,28 mmol) v 2 ml pyridínu ochladeného v ľadovom kúpeli sa pridalo 22 μΐ metánsulfonylchloridu (0,28 mmol). Zistilo sa, že po 24 hod. pri 10 °C je konverzia 30 %. Pridali sa ďalšie dva alikvóty (22 μΐ a 50 μΐ) metánsulfonylchloridu s cieľom ukončiť reakciu. Reakčná zmes sa zahustila vo vákuu za vzniku žltého oleja, ktorý sa rozpustil v etylacetáte (10 ml) a premyl dvakrát s nasýteným roztokom NaHCO₃ (5 ml), raz s 0,5 N HC1 a raz s nasýteným vodným roztokom NaCl. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila vo vákuu na olej. Kryštalizácia z acetonitrilu poskytla 27 mg (22 %) bielej tuhej látky (MH⁺ = 438,08).

Nasledovné zlúčeniny sa pripravili analogickým spôsobom:

Príklad 25a: 3-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylsulfamoyljbenzénsulfónová kyselina, (MH⁺ = 579,95)

Príklad 25b: [4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/f-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylsulfamoyl]octová kyselina, (MH⁺ = 482,27)

Príklad 25c: Metylester 3-(4-(2,61,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17f-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylsulfamoyl]-tiofén-2-karboxylovej kyseliny, (MH⁺ = 564,19)

Príklad 25d: 3-(4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purm-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylsulfamoyl]-tiofén-2-karboxylová kyselina, (MH⁺ = 550,20)

Príklad 25e: jV-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylmetyl]-metánsulfónamid, (MH⁺ = 388,32)

Príklad 25f: Metylester 3-{[4-(2,61,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylmetyl]-sulfamoyl}tiofén-2-karboxylovej kyseliny, (MH⁺ = 578,3)

Príklad 25g: 3-((4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylmetyl]-sulfamoyl}-tiofén-2-karboxylová kyselina, (MH⁺ = 564,24)

Príklad 25h: (4-(2,6-Dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/f-purin-8-yl)-bicyklo(2.2.2]okt-l-ylkarbamoyl]-metánsulfónová kyselina, (MH⁺ = 480,13)

Príklad 26

1,3-Dipropyl-8- (4-[tiofén-2-ylmetyl)-amino]-bicyklo[2.2.2]okt-1 -yl} -3,7-dihydropurin-2,6-dión

K roztoku 100 mg 8-(4-amino-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-diónu (príklad 20) (0,28 mmol) a 37 mg tiofén-2-karboxaldehydu (0,33 mmol) v 5 ml dichlórmetánu sa pridalo 5 kvapiek ľadovej kyseliny octovej a 100 mg natrium-triacetoxyborohydrátu (0,47 mmol). K úplnej konverzii došlo počas 24 hod. pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa rozložila s 2 ml etanolu a 2 ml 2 N HC1 a potom sa zahustila vo vákuu za vzniku bezfarebného oleja, ktorý sa čistil z bezvodého acetonitrilu za vzniku 50,8 mg (40 %) bielej tuhej látky (MH⁺ = 456,29). Nasledovné zlúčeniny sa pripravili analogickým spôsobom: Príklad 26a: {[4-(2,6-Dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purm-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-1 -ylmetyl]amino}octová kyselina, (MH⁺ = 432,32)

Príklad26b: 8-{4-[(l//-Imidazol-2-ylmetyl)-amino-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl}-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺ = 440,09)

Príklad26c: [4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylaminoJ-octová kyselina, (MH⁺ = 418,15)

Príklad 26d: 8-{4-[(Furan-2-ylmetyl)-amino]-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl}-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺ = 440,30)

Príklad 26e: l,3-Dipropyl-8-(4-{[(tiofen-2-ylmetyl)-amino]metyl}-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺= 470,31)

Príklad 26f: 8-(4-{((3/7-Imidazol-4-ylmetyl)-amino]-metyl}-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺ = 454,35)

Príklad 26g: 4-((4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylamino]metyl}benzoová kyselina, (MH⁺ = 494,34)

Príklad 26h: 4-(((4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/Y-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylmetyl]-amino}metyl)benzoová kyselina, (MH⁺ = 608,31)

Príklad 26i: l,3-Dipropyl-8-(4-([pyridin-4-ylmetyl)-amino]metyl}-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺ = 465,3)

Príklad 26j: 8-(4-{[(Furan-2-ylmetyl)-amino]-metyl}-bicyklo[2.2.2]okt-1 -yl)-1,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺ = 454,33)

Príklad 26k: 5-((4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylamino]-metyl}-furan-2-sulfónová kyselina, (MH⁺ = 520,26)

Príklad 261: 8-(4-Cyklopentylamino-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺ = 428,38)

Príklad26m: 8-(4-Cyklopentylaminometyl-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺ = 442,56)

Príklad 26n: 8-{4-[(l-Metyl-butylamino)-metyl]-bicyklo[2.2.2]okt-1 -yl}-1,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺ = 444,60)

Príklad 27

4-[3-(4-Hydroxyfenyl)-2,6-dioxo-l-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-127-purin-8-yl]bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylová kyselina

K roztoku 10 mg 4-[3-(4-metoxyfenyl)-2,6-dioxo-l-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl]-bicyklo- [2.2.2] oktán-l-karboxylovej kyseliny (príklad 131) (0,022 mmol) v 2 ml dichlórmetánu sa za chladenia suchým ľadom v acetóne pridal 1 ml IM bromidu boritého (1 mmol) v dichlórmetáne. Reakčná zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu a miešať 2 hod. Potom sa reakčná zmes ochladila v suchom ľade a rozložila s MeOH. Surový produkt sa izoloval po zahustení vo vákuu a rekryštalizácii z acetonitrilu za vzniku 10 mg bielej tuhej látky (MH⁺ = 439,09).

Nasledovné zlúčeniny sa pripravili podobným spôsobom.

Príklad 27a: 4-{3-[2-(4-Hydroxyfenyl)-etyl]-2,6-dioxo-l-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl}-bicyklo- [2.2.2] oktán-l-karboxylová kyselina, (MH⁺ = 467,4)

Príklad 27b: 4-[3-(2-Hydroxyetyl)-2,6-dioxo-l-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-177-purin-8-yl]-bicyklo[2.2.2]oktán-1-karboxylová kyselina, (MH⁺ = 391,12)

Príklad 27c: 4-[3-(4-Hydroxyfényl)-2,6-dioxo-l-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl]-bicyklo[2.2.2]oktán-1-karboxylová kyselina, (MH⁺ = 459,09)

Príklad 27d: 3-(4-{3-[2-(4-Hydroxyfenyl)-etyl]-2,6-dioxo-l-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purm-8-yl}-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-propiónová kyselina, (MH⁺ = 495,12)

Príklad 27e: 8-(4-Hydroxybicyklo-[2.2.2]okt-l-yl)-3-[2-(4-hydroxyfenyl)-etyl]-l-propyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión, (MH⁺= 439,14)

Príklad 28

4-{3-[2-(4-Hydroxy-3-jódfenyl)etyl]-2,6-dioxo-l-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl}-bicyklo[2.2.2]oktán-1-karboxylová kyselina

K roztoku 50 mg 4-{3-[2-(4-hydroxyfenyl)etyl]-2,6-dioxo-l-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl}-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (príklad 27a) (0,107 mmol) v 10 ml vody, ktorá obsahuje 1 ekv. lNNaOH(110 μΐ), sa pri laboratórnej teplote pridal roztok 30 mg jódu (0,107 mmol) v 1 ml etanolu. Reakčná zmes sa zahustila vo vákuu a surový produkt sa čistil pomocou preparatívnej chromatografie za vzniku 12 mg (20 %) požadovaného produktu (MH⁺ = 592,89).

Nasledovné zlúčeniny sa pripravili podobným spôsobom:

Príklad 28a: 4-{3-[2-(4-Hydroxy-3,5-dijódfenyl)etyl]-2,6-dioxo-l-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl}-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylová kyselina, (MH⁺ = 718,50)

Príklad 28b: 3-(4-{3-[2-(4-Hydroxy-3-jódfenyl)etyl]-2,6-dioxo-l-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl}-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)propiónová kyselina, (MH⁺ = 621,08)

Príklad 29

Amid4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/-/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny

K roztoku 200 mg 4-(2,6-dioxo-l ,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (príklad 13) (0,515 mmol) v 5 ml DMF sa pridalo 235 mg HATU (0,618 mmol) a 0,4 ml /V, A'-diizopropyletylamínu. Zmes sa nechala miešať 30 min. pri laboratórnej teplote. Potom sa pridalo po kvapkách 2,1 ml 0,5 M NH₃ v dioxáne (1,03 mmol) počas 5 min. Reakčná zmes sa nechala miešať cez noc a pridalo sa 0,5 ekv. 0,5 M NH₃ v dioxáne (0,5 ml). Potom sa pridal etylacetát a IN NaOH až do pH = 9 a zmes sa premyla s 10 % kyselinou citrónovou, nasýteným roztokom NaHCO₃ a nasýteným vodným roztokom NaCl. Vysušila sa nad Na₂SO₄ a zahustila sa vo vákuu za vzniku 80,9 mg (40 %) čistého produktu (MH⁺ = 388,34).

Príklad 30

8-(4-Aminometyl-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión

K roztoku 50 mg amidu 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-1-karboxylovej kyseliny (príklad 29) (0,129 mmol) v 10 ml THF sa po kvapkách pridalo pri laboratórnej teplote 0,28 ml IM komplexu BH₃-THF (0,284 mmol) a zmes sa pomaly priviedla do refluxu. Zmes sa zahrievala do varu 3,5-hod. a potom sa ochladila a rozložila pomocou 10 ml metanolu a znova refluxovala.

Zmes sa zahustila vo vákuu, zvyšok sa rozpustil v etylacetáte a vysušil nad Na₂SO₄ a zakoncentroval za vzniku 30,2 mg (63 %) amínu (MH⁺ = 374,31).

Príklad 31

5-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purm-8-yl)-bicyklo[3.2.1]oktán-2-karboxylová kyselina

Využitím postupu opísaného v literatúre, Kraus, W., a další, Liebigs Ann. Chem. 1981, 10, 1826 a Kraus, W., a další, Tetrahedrón Lett. 1978, 445; Filippini, M.-H. a další, J. Org. Chem. 1995, 60. 6872, sa etylester 4-oxo-bicyklo[3.2.1]oktán-l-karboxylovej kyseliny (6,17 mmol, 1,21 g) previedol na etylester 4-metoxymetylén-bicyklo[3.2.1]oktán-l-karboxylovej kyseliny. Flash chromatografia, eluovaná zmesou 10 % dietyléter/hexán, poskytla čistý produkt (0,96 g, 69 %) vo forme kvapaliny (zmes E/Z izomérov). ¹³C NMR (100 MHz, CDClj): 14,31 (q), 19,15 (t), 22,97 (t), 23,61 (c), 23,91 (t), 29,97 (t), 31,13 (t), 32,04 (t), 32,36 (t), 34,61 (t), 34,85 (d), 35,81 (t), 43,18 (t), 43,63 (t), 50,47 (s), 50,77 (s), 59,63 (q), 59,69 (t), 121,04 (s), 121,4 (s), 137,18 (d), 138,16 (d), 177,60 (s), 177,63 (s).

Využitím podobného postupu ako v príklade 50 sa etylester 4-metoxymetylén-bicyklo[3.2.1]-oktán-l-karboxylovej kyseliny (3,84 mmol, 0,86 g) previedol na etylester 4-formyl-bicyklo[3.2.1 ]oktán-l-karboxylovej kyseliny (0,81 g, 100 %). TLC (silikagél, 20 % Et₂O/hexán, 20 % PMA/EtOH vizualizácia) R_f (titulná zlúčenina) = 0,29.

K ľadom chladenému roztoku etylesteru 4-formyl-bicyklo[3.2.1]oktán-l-karboxylovej kyseliny (3,85 mmol, 0,81 g) sa pomaly pridalo Jonesovo činidlo (2,7 M, 1,43 ml).

Reakčná zmes sa nechala miešať počas chladenia ľadom 20 min. a potom sa rozložila prídavkom i-PrOH, zriedila s vodou a extrahovala s dietyléterom (3x). Spojené organické extrakty sa premyli s vodou (2x), nasýteným vodným roztokom NaCl (lx) a vysušili nad MgSO₄. Filtráciou a odparením sa získal viskózny olejovitý 1-etylester bicyklo[3.2.1]oktán-l,4-dikarboxylovej kyseliny (0,76 g, 87 %) ako zmes ekvatoriálnej a axiálnej kyseliny. ^I3C NMR (100 MHz, CDC1₃): 14,16 (q), 19,86 (t), 21,07 (t), 25,98 (t), 29,20 (t), 31,52 (t), 31,87 (t), 32,27 (t), 33,39 (t), 37,80 (d), 38,07 (t), 38,10 (d), 42,06 (t), 44,80 (d), 45,78 (d), 49,38 (s), 49,60 (s), 60,31 (t), 60,36 (t), 177,08 (s), 180,01 (s).

Pri 0 °C sa pridal roztok DCC (0,5 M v dichlórmetáne, 5,5 ml) k roztoku 1-etylesteru bicyklo[3.2.1]oktán-l,4-dikarboxylovej kyseliny (2,52 mmol, 0,57 g), íerc-butanol (7,56 mmol, 0,56 g) aDMAP (2,02 mmol, 0,247 g) v 15 ml dichlórmetánu. Zmes sa nechala miešať cez noc pri laboratórnej teplote, reakčná zmes sa potom odfiltrovala s cieľom odstrániť tuhé látky a filtrát sa premyl s 5 % kyselinou citrónovou, nasýteným roztokom NaHCO₃ a sušil nad Na₂SO₄. Filtráciou a odparením sa získal produkt (0,71 g, 100 %) vo forme oleja. MA (ES⁺) 225,24 (M+W-tBu).

Roztok 4-terc-butyl-l-etylesteru bicyklo[3.2.1]oktán-l,4-dikarboxylovej kyseliny (2,52 mmol, 0,71 g) v 12 ml THF sa nechal reagovať s IN LiOH (12,6 ml) a zmes sa nechala miešať 3 hod. pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa zahustila, aby sa odstránil THF a vodná fáza sa extrahovala s dietyléterom, aby sa odstránili neutrálne nečistoty. Vodná fáza sa okyslila (pH 2-3) pri 0 °C s IN HC1 a potom sa rýchlo extrahovala s etylacetátom. Spojené organické extrakty sa premyli vodou, nasýteným vodným roztokom NaCl a sušili nad MgSO₄. Po filtrácii a odparení sa získal produkt (0,48 g, 75 %).

Použitím postupu opísaného v príklade 8 sa 4-Zerc-butylester bicyklo[3.2.1]oktán-l,4-dikarboxylovej kyseliny (1,89 mmol, 0,48 g) nechal reagovať s 5,6-diamino-l,3-dipropyl-lň^ľ-pyrimidín-2,4-dión hydrochloridom (1,89 mmol, 0,597 g) za vzniku produktu (0,81 g, 93 %). MS (ES⁺): 463,14 (M+H).

Použitím postupu opísaného v príklade 8 sa terc-butylester 5-(6-amino-2,4-dioxo-l,3-dipropyl-l,2,3,4-tetrahydropyrimidín-5-ylkarbamoyl)-bicyklo[3.2.1]oktán-2-karboxylovej kyseliny (1,75 mmol, 0,81 g) sa previedol na produkt (0,501 g, 70 %).

Roztok /erc-butylesteru 5-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[3.2.1]oktán-2-karboxylovej kyseliny (1,13 mmol, 0,501 g) v 5 ml dichlórmetánu sa nechal reagovať s 5 ml TFA. Zmes sa nechala miešať pri laboratórnej teplote cez noc, odparila sa dosucha. Použila sa kvapalinová chromatografia na reverznej fáze na rozdelenie ekvatoriálneho (prvý pík, 0,010 g) a axiálneho (druhý pík, 0,010 g) izoméru kyseliny. HPLC (10 % až 90 % MeCN, (0,1 % TFA)/voda (0,1 % TFA), YMC 120 A/S-5 ODS-AM kolóna, 100 mm x 4,6 mm, 1,5 ml/min.: R_T(ekvatoriálny) = 6,49 min., R_T(axiálny) = 6,75.

Príklad 32

3-(5-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/V-purin-8-yl)-bicyklo[3.2. l]okt-l-yl]-propiónová kyselina

Suspenzia metylesteru 3-(5-(2,6-dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro- 17/-purin-8-yl)-bicyklo[3.2. ljokt-l-yl]akrylovej kyseliny (príklad 12) (0,58 mmol, 0,25 g) a 10 % Pd/C (50 % voda, 0,029 mmol, 0,062 g) v 20 ml metanolu sa hydrogenovala pri tlaku vodíka 40 psi (28, 123 kPa) cez noc. Reakčná zmes sa potom prefiltrovala cez vrstvu celitu, ktorý sa potom premyl metanolom. Po odparení sa získal požadovaný produkt (0,196 g, 79 %) vo forme oleja. MS (ES⁺) 431,18 (M+H)

Roztok metylesteru 3-(5-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-piirin-8-yl)-bicyklo[3.2.1 ]okt-l-yljpropiónovej kyseliny (0,456 mmol, 0,196 g) v 10 ml tetrahydrofuránu sa nechal reagovať s 20 % NaOH (2 ml) a nechal sa miešať cez noc pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa zahustila, aby sa odstránil THF. Vodná fáza sa okyslila (pH 2-3) pomocou kone. HC1 a pridal sa i-PrOH. Roztok sa potom zakoncentroval na rotačnej vákuovej odparke až do chvíle, keď začala vypadávať tuhá látka. Zmes sa potom chladila 1 hod. v ľadovom kúpeli, vypadnutá zrazenina sa odsala, premyla s malým množstvom vody a éteru. Tuhá látka sa vysušila na filtračnom papieri za vzniku požadovaného produktu (0,061 g, 32 %) ¹³C NMR (100 MHz, CDClj): 11,11 (q), 11,26 (q), 20,04 (t), 21,31 (t), 21,31 (t), 29,51 (s), 33,97 (t), 35,15 (s), 36,16 (t), 36,39 (t), 43,32 (t), 43,41 (t), 45,38 (t), 49,18 (t), 106,01 (s), 149,40 (s), 150,90 (s), 156,30 (s), 161,56 (s), 178,54 (s).

Príklad 33 (1RS, 2R, 557?)-{[5-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purm-8-yl)-bicyklo[3.2.1]oktán-l-karbonyl]-amino}fenyloctová kyselina

Použitím postupu opísaného v príklade 8 sa 5-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[3.2.1]oktán-l-karboxylová kyselina (príklad 8) (0,052 mmol, 0,020 g) a (Ä)-fenylglycínmetylester hydrochlorid (0,064 mmol, 0,013 g) nechali reagovať za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve (0,0134 g, 48 %) ako zmes diastereoizomérov. MS (ES⁺) 536,36 (M+H).

Roztok metylesteru (JRS,2R,5SR)-{[5-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklo[3.2.1]oktán-l-karbonyl]-amino}fenyloctovej kyseliny (0,022 mmol, 0,012 g) v 2 ml THF sa nechal reagovať s IN LiOH (0,22 ml) 3 dni. THF sa odstránil na rotačnej vákuovej odparke, vodný zvyšok sa okyslil (pH 2) s IN HC1 a extrahoval s etylacetátom. Spojené organické extrakty sa premyli vodou, nasýteným vodným roztokom NaCl a sušili nad MgSO₄. Po filtrácii a odparení a následnou HPLC chromatografiou na reverznej fáze sa získal požadovaný produkt (0,0055 g, 48 %) ako zmes diastereoizómerov. HPLC (10 % až 90 % MeCN), (0,1 % TFA)/voda (0,1 % TFA), YMC 120 A/S-5 ODS-AM kolóna, 100 mm x 4,6 mm, 1,5 ml/min.: R_T = 6,88 min.

Nasledovná zlúčenina sa pripravila analogickým spôsobom:

Príklad 33a: (/RS,2S,5SÄ)-{[5-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lF/-purin-8-yl)-bicyklo[3.2.1]oktán-1 -karbonyl] -amino} fenylocto vá kyselina

Príklad 34

8-(4-Hydroxy-bicyklo[3.2.1]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión

Použitím postupu opísaného v príklade 8 sa 4-hydroxy-bicyklo[3.2.1]oktán-l-karboxylová kyselina (Kraus, W., et al., Liebigs Ann. Chem. 1981, 10, 1826) (0,50 mmol, 0,085 g) nechala reagovať s 5,6-diamino-l,3-dipropyl-l//-pyrimidín-2,4-dión hydrochloridom (0,50 mmol, 0,132 g) za vzniku požadovaného produktu (0,081 g, 44 %).

Použitím postupu opísaného v príklade 8 sa 4-hydroxy-bicyklo[3.2.1]oktán-l-karboxylová kyselina (6-ammo-2,4-dioxo-l,3-dipropyl-l,2,3,4-tetrahydropyrimidin-5-yl)amid (0,21 mmol, 0,081 g) previedol na požadovaný produkt. MS (ES⁺) 361,36 (M+H).

Príklad 35 3-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-2-oxa-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-propiónová kyselina

Vinylmagnézium bromid (1,0 M v THF, 100 ml) sa ochladil na 0 °C a pridal sa ditosylátový derivát 4,4-brí-hydroxy. Reakčná zmes sa zahustila pri zníženom tlaku. Čistením chromatografiou (1:1 hexán/AcOEt) sa získalo 5,0 g alkoholového intermediátu.

Tento materiál (5,0 g) sa rozpustil v 200 ml bezvodého DMF a pridalo sa 730 mg NaH (3 ekv.). Reakčná zmes sa nechala miešať pod refluxom 18 hod. Potom sa ochladila na laboratórnu teplotu a rozložila sa s nasýteným vodným roztokom NH₄C1 a extrahovala s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄a zahustila sa za vzniku 3,30 g monotosylátového intermediátu.

Tento monotosylát (4,40 g, 13,7 mmol) sa rozpustil v 20 ml DMSO a pridal sa NaOAc.3H₂O (18,0 g, 10 ekv.). Reakčná zmes sa nechala miešať pri 60 °C 2 dni. Potom sa zriedila s vodou a extrahovala s etylacetátom. Organická vrstva sa premyla s vodou, vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila sa za vzniku 2,60 g acetátového derivátu, l-vinyl-2-oxa-bicyklo[2.2.2]okt-4-ylmetyl esteru kyseliny octovej.

Tento acetát (2,60 g, 12,4 mmol) sa rozpustil v 40 ml MeOH a pridal sa K₂CO₃ (8,5 g, 5 ekv.) ako roztok v 50 ml vody. Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote 3 hod. Potom sa zahustila a extrahovala s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila sa. Čistením chromatografiou (2 : 1 EtOAc/hexán) sa získalo 1,20 g alkoholového derivátu (l-vinyl-2-oxa-bicyklo[2.2.2]okt-4-yl)-metanol.

Tento materiál (1,20 g, 7,14 mmol) sa rozpustil v 20 ml acetónu a ochladil sa na 10 °C. Potom sa pridal CrO₃ (2,1 g, 3 ekv.) ako roztok v 10 ml 1,5 N vodnej H₂SO₄. Reakčná zmes sa miešala pri 10 °C 15 min. a potom sa zahriala na laboratórnu teplotu a miešala 45 min. Potom sa zmes zriedila s vodou a extrahovala s etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyli s vodou a potom extrahovali s vodným roztokom KOH. Vodná vrstva sa okyslila na pH=l s kone. HC1 a extrahovala s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila

SK 287311 Β6 (Na₂SO₄) a zahustila sa za vzniku 920 mg derivátu karboxylovej kyseliny, l-vinyl-2-oxa-bicyklo[2.2.2]oktán-4-karboxylovej kyseliny.

Tento materiál sa nechal reagovať s 5,6-diamino-l,3-dipropyl-l//-pyrimidín-2,4-diónom rovnakým spôsobom, ako je to opísané pri príprave zodpovedajúceho xantínového derivátu, l,3-dipropyl-8-(l-vinyl-2-oxa-bicyklo[2.2.2]okt-4-yl)-3,7-dihydropurin-2,6-dión.

l,3-Dipropyl-8-(l-vinyl-2-oxa-bicyklo[2.2.2]okt-4-yl)-3,7-dihydro-purin-2,6-dión (400 mg, 1,08 mmol) sa suspendoval v 8 ml dioxánu a pridal sa 1 ml 2,5 % roztoku OsO₄ v ŕerc-BuOH a 3 ml vody. Po 10 min. sa pridal NaIO₄ a reakčná zmes sa miešala 3 hod. pri laboratórnej teplote. Potom sa zriedila s vodou a extrahovala s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila sa za vzniku aldehydického intermediátu, 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-2-oxa-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbaldehydu.

Tento materiál sa rozpustil v 8 ml THF a pridal sa metyl(trifenylfosforanilín)acetát (720 mg, 2 ekv.). Reakčná zmes sa nechala miešať 18 hod. pri laboratórnej teplote. Potom sa pridal LiOH (155 mg, 6 ekv.) ako roztok v 8 ml vody a vzniknutá reakčná zmes sa miešala 4 hod. pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa potom extrahovala s etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila sa za vzniku 250 mg akrylového derivátu, 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-2-oxa-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]akrylovej kyseliny.

Tento materiál sa rozpustil v 25 ml 95 % THF a 5 % vody. Pridal sa 10 % Pd/C (80 mg) a reakčná zmes sa hydrogenovala pri tlaku vodíka 50 psi (35, 153kPa) 3 hodiny. Reakčná zmes sa odfiltrovala cez vrstvu celitu a filtrát sa zakoncentroval. Preparatívna HPLC s použitím CH₃CN poskytla zlúčeninu uvedenú v názve. MS (ES⁺)419.

Príklad 36

4-Aminometylbenzylamid 3-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-adamantán-l-karboxylovej kyseliny

Krok 1: K Wangovej živici (10 g, Advanced ChemTech, substitúcia 0,7 mmol/g) v 100 ml suchého THF sa pridal CDI (10 g) a živica sa nechala trepať cez noc. Nasledujúci deň sa živica odfiltrovala a premyla s THF (3 x 100 ml) a vysušila sa.

Krok 2: Živica (každá 2,5 g, 1,75 mmol) z kroku 1 sa nechala reagovať s ôsmimi rôznymi diaminmi (8,75 mmol, 5 ekv.) v 25 ml THF. Napríklad sa použil 4-aminometylbenzylamín. Reakčná zmes sa miešala cez noc a živica sa premyla s THF (3 x 25 ml), metanolom (3 x 25 ml), dichlórmetánom (3 x 25 ml), metanolom (3 x 25 ml) a vysušila sa.

Krok 3: Adamantán-l,3-dikarboxylová kyselina (3,5 g) sa rozpustila vo 20 ml DMF a pridal sa DIC (1,36 ml) a zmes sa miešala 1 hod. Vzniknutý anhydrid sa pridal k živici z kroku 2. Zmes sa nechala trepať cez noc. Nasledujúci deň sa živica odfiltrovala, premyla s DMF (3 x 25 ml), dichlórmetánom (3 x 25 ml), metanolom (3 x 25 ml) a vysušila sa.

Krok 4: l,3-Dipropyl-5,6-diaminouracil hydrochlorid sa kondenzoval k živici z kroku 3, pričom sa použil PyBOP, A'-metylmorfolín v DMF cez noc. Živica sa premyla s DMF (3 x 25 ml), dichlórmetánom (3 x x 25 ml), metanolom (3 x 25 ml) a vysušila sa.

Krok 5: K živici z kroku 4 sa pridali 2 ml roztoku KOH (7,5 g KOH v 200 ml zmesi voda:metanol:THF = = 10 : 90 : 100, 10 ekv.) a zmes sa zahriala na 60 °C cez noc. Nasledujúci deň po ochladení na laboratórnu teplotu sa živica premyla s metanolom (3x2 ml), THF (3x2 ml), dichlórmetánom (3x2 ml) a vysušila sa. Živica sa odštiepila pomocou zmesi 1:1= TFA: dichlórmetán (2 ml) počas 1 hod. Živica sa odfiltrovala a premyla s dichlórmetánom. Spojené organické rozpúšťadlá sa odparili na rotačnej vákuovej odparke. Zvyšok sa rozpustil v zmesi CH₃CN:voda 1 : 1 (2 ml) a lyofilizoval sa. Produkty sa identifikovali pomocou LCMS. Hmotnostné spektrum (ES⁺) 533.

Príklad 37

3-Aminometyl-benzylamid 3-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-adamantán-l-karboxylovej kyseliny

Použil sa postup uvedený v príklade 36, v kroku 2 sa použil 3-aminometyl-benzylamín. Hmotnostné spektrum ((ES⁺) 533).

Príklad 38

3-Aminopropylamid 3-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)-adamantán-l -karboxylovej kyseliny

Použil sa postup uvedený v príklade 36, v kroku 2 sa použil 1,3-diaminopropán. Hmotnostné spektrum ((ES⁺) 471).

Príklad 39 {3-[4-(3-Aminopropyl)-piperazin-1 -yl]propyl} amid 3-(2,6-dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-1 /Y-purin-8-yl)-adamantán-1 -karboxylovej kyseliny

Použil sa postup uvedený v príklade 36, v kroku 2 sa použil 3-[4-(3-aminopropyl)-piperazín-l-yl)propylamín. Hmotnostné spektrum ((ES⁺) 599).

Príklad 40 [4-(4-Aminocyklohexylmetyl)cyklohexyl]amid 3-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)-adamantán-1 -karboxylovej kyseliny

Použil sa postup uvedený v príklade 36, v kroku 2 sa použil 4,4’-metylén-tó-(cyklohexylamín). Hmotnostné spektrum ((ES⁺) 607).

Príklad 41 (4-Aminocyklohexyl)amid 3-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-adamantán-l-karboxylovej kyseliny

Použil sa postup uvedený v príklade 36, v kroku 2 sa použil cyklohexán-l,4-diamín. Hmotnostné spektrum ((ES⁺) 511).

Príklad 42 8-[3-(Piperazín-l-karbonyl)-adamantan-l-yl]-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión

Použil sa postup uvedený v príklade 36, v kroku 2 sa použil piperazín. Hmotnostné spektrum ((ES⁺) 483).

Príklad 43

Amid 3-(2,6-dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-1 /7-purm-8-yl)-adamantán-1 -karboxylovej kyseliny

Použil sa postup uvedený v príklade 36, krok 3. Použila sa Rinkova živica namiesto Wangovej živice. Hmotnostné spektrum ((ES⁺) 414).

Príklad 44

3-(2,6-Dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro- l//-purin-8-yl)-adamantán-l -karboxylová kyselina

Symetrický anhydrid sa pripravil z adamantán-l,3-dikarboxylovej kyseliny s použitím DIC v DMF sa kaploval s l,3-dipropyl-5,6-diaminouracil.HCl. Produkt sa cyklizoval s použitím KOH v zmesi izopropanol/voda. Hmotnostné spektrum ((ES⁺) 415).

Príklad 45 8-(3-Hydroxymetyl-adamantan-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydro-purin-2,6-dión

Použil sa postup opísaný v príklade 46. Hmotnostné spektrum ((ES⁺) 401).

Príklad 46

5-(2,6-Dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro- 12/-purin-8-yl)-bicyklo[3.3.1 Jnonán-1 -karboxylová kyselina

Monometylester bicyklo[3.3.1]nonán-l,5-dikarboxylovej kyseliny (900 mg) sa rozpustil v dichlórmetáne (25 ml), pridal sa oxalylchlorid (417 μΐ) a 2 kvapky DMF a zmes sa nechala miešať pri laboratórnej teplote počas 2 hod. Po 2 hodinách sa rozpúšťadlo odparilo na vákuovej odparke. Zvyšok sa rozpustil v 20 ml dichlórmetánu. Pridal sa diaminouracil hydrochlorid (1,25 g) a diizopropyletylamín (1,7 ml) a zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc. Nasledujúci deň sa zmes zriedila s vodou, extrahovala s dichlórmetánom, premyla sa nasýteným vodným roztokom NaCl a vysušila nad Na₂SO₄ a zahustila sa. Surový produkt sa rozpustil v zmesi izopropanolivoda (2 : 1, 100 ml) a pridal sa KOH (890 mg) a zmes sa zahrievala do refluxu cez noc. Nasledujúci deň sa reakčná zmes ochladila na laboratórnu teplotu, rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku, zmes sa zriedila s vodou a okyslila s IN HCl. Vylúčená zrazenina sa odfiltrovala a vysušila. Výťažok: 900 mg. Hmotnostné spektrum: ((ES⁺) 403).

Príklad 47 8-(5-Hydroxymetyl-bicyklo[3.3.1]non-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión

5-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/Y-purin-8-yl)-bicyklo[3.3.1 jnonán-1 -karboxylová kyselina (700 mg) sa rozpustila v 25 ml THF, pridal sa komplex BH₃THF (IM, 3,5 ml) a nechala sa miešať cez noc pri laboratórnej teplote. Nasledujúci deň sa reakčná zmes rozložila s metanolom. Rozpúšťadlo sa odparilo na odparke. Zvyšok sa zriedil s vodou a extrahoval s etylacetátom, premyl s vodou, nasýteným vodným roztokom NaCl, sušil a zakoncentroval. Výťažok: 690 mg. Hmotnostné spektrum: ((ES⁺) 389).

Príklad 48

8- {5-[(2-Dimetylamino-etylamino)-metyl]-bicyklo[3.3.1 ]non-1 -yl} -1,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión

Krokl: 8-(5-Hydroxymetyl-bicyklo[3.3.1]non-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión (690 mg) sa rozpustil v 50 ml DMSO. Pridal sa komplex pyridín.SO₃ (844 mg) a trietylamín (1,6 ml) a zmes sa nechala miešať cez noc. Potom sa pridal ďalší podiel komplexu pyridín.SO₃ (844 mg) a zmes sa nechala miešať cez noc. Reakčná zmes sa zriedila s etylacetátom (100 ml) a premyla s IN HC1, vodou, nasýteným vodným roztokom NaCl a vysušila sa nad Na₂SO₄. Po zakoncentrovaní sa získal surový produkt, ktorý sa použil v ďalšom kroku bez ďalšieho čistenia.

Krok 2: 5-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[3.3.1]nonán-l-karbaldehyd (40 mg) sa rozpustil v 5 ml dichlórmetánu. Pridal sa V/, V/-dimetyletán-l,2-diamín (40 mg), Na(OAc)₃BH (100 mg), pridali sa aj 2 kvapky kyseliny octovej a zmes sa miešala cez noc. Nasledujúci deň sa reakčná zmes zriedila s etylacetátom, premyla s nasýteným roztokom NaHCO₃, nasýteným vodným roztokom NaCl a vysušila sa nad MgSO₄. Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu. Surový produkt sa čistil pomocou preparatívnej HPLC. Hmotnostné spektrum ((ES⁺) 459).

Príklad 49

3-(5-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/f-purin-8-yl)-bicyklo[3.3.1]non-l-yl]akrylová kyselina

5-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yí)-bicyklo[3.3.1]nonán-l-karbaldehyd (355 mg) sa rozpustil v THF (25 ml). Potom sa pridal metylester trifenylfosfanylidén-octovej kyseliny (614 mg) a zmes sa zahrievala do refluxu cez noc. Nasledujúci deň sa pridalo ďalších 460 mg metylesteru trifenylfosfanylidénoctovej kyseliny a zmes sa zahrievala do varu ďalších 24 hod. Po ochladení na laboratórnu teplotu sa pidalo 210 mg LiOH, 2 ml vody, 5 ml metanolu a zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc. Rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku. Zvyšok sa zriedil s vodou (25 ml), extrahoval s etylacetátom (3 x x 25 ml). Vodná vrstva sa okyslila s IN HC1 a extrahovala s etylacetátom (3 x 50 ml), vysušila sa nad Na₂SO₄ a zahustila. Výťažok: 254 mg. Hmotnostné spektrum (ES⁺ 429).

Príklad 50

3-[5-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[3.3.1]non-l-yl]propiónová kyselina

3-[5-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[3.3.1]non-l-yl]akrylová kyselina (150 mg) sa hydrogenovala v prítomnosti 10 % Pd/C v zmesi THF/MeOH (2 : 1, 5 ml) pri tlaku 60 psi (42, 184 kPa) cez noc. Katalyzátor sa odfiltroval na vrstve celitu a rozpúšťadlo sa zakoncentrovalo. Tuhá látka sa kryštalizovala z éteru za vzniku 105 mg produktu. Hmotnostné spektrum (ES⁺ 431).

Príklad 51 5-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-9-oxa-bicyklo[3.3.1]nonán-2-karboxylová kyselina

Krok 1:

l,3-Dipropyl-7-pyrolidin-l-yl-metyl-3,7-dihydro-purin-2,6-dión (638 mg) sa rozpustil v 10 ml THF pri -78 °C. Potom sa pomaly pridal n-BuLi (0,88 ml, 2,5 M v hexáne). Reakčná zmes sa miešala 30 min. pri -78 °C, pričom farba sa zmenila na oranžovú. Potom sa pridal cyklo-4-oktenón (298 mg) rozpustený v 3 ml THF. Reakčná zmes sa miešala 30 min. pri -78 °C a potom sa pomaly zahriala na laboratórnu teplotu počas 2 hod. Reakčná zmes sa rozložila s nasýteným roztokom NH₄C1 a extrahovala s etylacetátom (3x50 ml). Spojené organické vrstvy sa premyli s IN HC1, vodou a nasýteným vodným roztokom NaCl, vysušili nad Na₂SO₄ a zakoncentrovali. Surový produkt sa čistil chromatografiou na silikagéli, eluovaný zmesou etyacetát: hexán (1 : 1). Hmotnostné spektrum (ES⁺ 361).

Krok 2:

8-(l-Hydroxy-cyklo-4-oktenyl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión (180 mg, z kroku 1) sa rozpustil v 15 ml metanolu pri laboratórnej teplote. Roztok sa prebublával oxidom uhoľnatým, pridal sa PdCl₂ (9 mg) a CuCl₂ (201 mg). Roztok sa nechal prebublávať oxidom uhoľnatým 4 hod. pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa vyčírila po 3 hod. Po 4 hod. sa odstránil metanol pri zníženom tlaku. Zvyšok sa zriedil s vodou, extrahoval s etylacetátom. Etylacetátová vrstva sa premyla s vodou, nasýteným vodným roztokom NaCl a vysušila nad Na₂SO₄. Po zakoncentrovaní sa surový produkt čistil chromatografiou na silikagéli, eluoval zmesou etylacetát: hexán (1 : 1). Výťažok: 120 mg. Hmotnostné spektrum (ES⁺ 419).

Krok 3:

Metylester 5-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l é/-purin-8-yl)-9-oxa-bicyklo[3.3.l]nonán-2-karboxylovej kyseliny (50 mg, z kroku 2) sa rozpustil v 5 ml metanolu. Potom sa pridal LiOH (15 mg) a zmes sa miešala pri laboratórnej teplote cez noc. Nasledujúci deň sa odstránil metanol pri zníženom tlaku, zvyšok sa zriedil s vodou a extrahoval s etylacetátom. Vodná vrstva sa okyslila s IN HC1, extrahovala s etylacetátom (3 x 25 ml). Spojené organické vrstvy sa premyli s nasýteným vodným roztokom NaCl a sušili nad Na₂SO₄.

Po zakoncentrovaní rozpúšťadla sa získala biela tuhá látka, ktorá sa čistila kryštalizáciou z éteru. Hmotnostné spektrum (ES⁺ 405).

Príklad 52

8-(5-Hydroxy-9-oxa-bicyklo[3.3.1 Jnon-1 -yl)-1,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión l,3-Dipropyl-7-pyrolidin-l-ylmetyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión (638 mg) sa rozpustil v 10 ml THF pri -78 °C. Potom sa pomaly prikvapkával n-BuLi (0,88 ml, 2,5M roztok v hexáne) pri -78 °C. Reakčná zmes zmenila farbu na oranžovú a miešala sa 30 min. pri - 78 °C. Cyklooktán-l,5-dión (280 mg) sa rozpustil v 3 ml THF a pridal sa do reakčnej zmesi. Zmes sa nechala miešať 30 min. pri -78 °C a potom sa pomaly zahriala na laboratórnu teplotu a nechala sa miešať cez noc. Reakčná zmes sa rozložila s nasýteným roztokom NH₄C1 a extrahovala sa s etylacetátom (3 x 50 ml). Spojené organické vrstvy sa premyli s IN HC1, vodou a nasýteným vodným roztokom NaCl. Potom sa vysušili nad Na₂SO₄ a zahustili sa. Surový produkt sa čistil chromatografiou na silikagéli, eluovaný s etylacetátom (1 : 1). Hmotnostné spektrum (ES⁺ 377).

Príklad 53

5-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-8-oxa-bicyklo[3.2.l]oktán-2-karboxylová kyselina

Krok 1:

Podľa postupu opísanom v príklade 51, krok 1. Cyklo-4-heptenón sa použil namiesto cyklo-4-oktenónu. Hmotnostné spektrum (ES⁺ 347).

Krok 2:

8-(l-Hydroxy-cyklo-4-heptenyl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión (50 mg) sa rozpustil v 10 ml metanolu pri laboratórnej teplote. Potom cez reakčnú zmes prebublával oxid uhoľnatý počas 10 min., pridal sa PdCl₂ (25 mg), CuCl₂ (58 mg) a oxid uhoľnatý sa nechal prebublávať ešte 3 hod. Reakčná zmes sa nechala miešať cez noc. Reakčná zmes sa zriedila s metanolom, vodou a vylúčená zrazenina sa prefiltrovala cez celit. MeOH sa odstránil na rotačnej vákuovej odparke, zvyšok sa extrahoval s etylacetátom. Etylacetátová vrstva sa premyla vodou, nasýteným vodným roztokom NaCl a vysušila nad Na₂SO₄. Po zakoncentrovaní sa surový produkt rozpustil v 5 ml MeOH, pridala sa voda (1 ml), LiOH (25 mg) a zmes sa nechala miešať cez noc pri laboratórnej teplote. Nasledujúci deň sa metanol odstránil na odparke, zvyšok sa rozpustil vo vode (20 ml) a extrahoval s etylacetátom (2 x 50 ml). Etylacetátové vrstvy sa premyli s nasýteným vodným roztokom NaCl a vysušili sa. Po zakoncentrovaní sa produkt rozpustil v éteri a prefiltroval cez vrstvu silikagélu. Zakoncentrovaním sa získalo 30 mg produktu. Hmotnostné spektrum (ES⁺ 391).

Príklad 54 Mono-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]ester fosforečnej kyseliny

8-(4-Hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión (príklad 13a) (180 mg, 0,5 mmol) sa rozpustil v zmesi 1/7-tetrazolu (350 mg, 5 mmol) v 10 ml suchého acetonitrilu a 10 ml suchého dichlórmetánu. Potom sa pri laboratórnej teplote pridal dibenzyl-dietylfosforamidit (476 mg, 1,5 mmol) v atmosfére dusíka a zmes sa miešala 2 hod. Potom sa pridal 70 % roztok íerc-butylhydroperoxidu (1 ml) a zmes sa miešala 1 hod. Pri 0 °C sa pridal 10 % roztok NaHSO₃ (150 ml) a zmes sa miešala ďalších 15 min. Zmes sa potom extrahovala s dichlórmetánom a organická vrstva sa premyla vodou. Odparením rozpúšťadla sa získal dibenzylester 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)ester fosforečnej kyseliny vo forme žltého oleja, ktorý sa čistil pomocou stĺpcovej chromatografie. Frakcie, ktoré obsahovali dibenzylester 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)ester fosforečnej kyseliny, sa spojili a zahustili vo vákuu za vzniku 280 mg produktu. Hmotnostné spektrum (M+l) 621.

Dibenzylester 4-(2,6-dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro- l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-1 -yl)ester fosforečnej kyseliny sa rozpustil v zmesi 15 ml metanolu a 10 ml THF, pridal sa Pd/C (10 %, 50 mg) a zmes sa hydrogenovala 8 hod. pri tlaku 50 psi. Pd/C sa odfiltrovalo a rozpúšťadlo sa odparilo. Zvyšok sa rekryštalizoval zo zmesi metanol a etylacetát za vzniku 190 mg produktu uvedeného v názve (výťažok 86 %). MS (M+l, 441).

Príklad 55 3-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]propionyloxymetylester 4-chlór-2-[(furan-2-ylmetyl)-amino]-5-sulfamoylbenzoovej kyseliny

Zmes 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]propiónovej kyseliny (208 mg, 0,5 mmol), hydrogenuhličitanu sodného (168 mg, 2 mmol) a tetra-(«-butylamó nium)hydrogénsulfátu (17 mg, 0,05 mmol) vo vode (5 ml) a dichlórmetánu (5 ml) sa intenzívne miešala pri 0 °C. Po 10 min. sa do reakčnej zmesi pridal roztok chlórmetylchlórsulfonátu v 1 ml dichlórmetánu a zmes sa nechala za intenzívneho miešania zahriať na laboratórnu teplotu. Po niekoľkých hodinách sa organická vrstva oddelila a premyla s nasýteným vodným roztokom NaCl. Organické extrakty sa vysušili nad síranom sodným. Po odstránení rozpúšťadla vo vákuu sa zvyšok čistil pomocou stĺpcovej chromatografie na silikagéli s použitím zmesi etylacetát/hexán (1:5) ako eluentu za vzniku (200 mg, 86 % výťažok) chlórmetylesteru 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]propiónovej kyseliny. MS (M+l 465).

K roztoku 4-chlór-2-[(fiiran-2-ylmetyl)-amino]-5-sulfamoyl-benzoovej kyseliny (142,5 mg, 0,43 mmol) v 3 ml DMF sa pridal trietylamín (10 mg, 0,95 mmol) a reakčná zmes sa nechala miešať 1 hod. Chlórmetylester (200 mg, 0,43 mmol) z predchádzajúceho kroku a Nal (130 mg, 0,86 mmol) sa pridali k reakčnej zmesi a tá sa miešala cez noc pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa zahustila vo vákuu. Zvyšok sa rozdelil medzi etylacetát a vodu. Organická vrstva sa zahustila a čistila sa stĺpcovou chromatografiou za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve (190 mg, 58 % výťažok) vo forme bielej tuhej látky. MS (M+l) 759.

Príklad 56 l-Karboxy-3-{3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-propionyloxy-metoxykarbonylj-propylamónium-tnfluóroacetát

Podľa postupu opísanom v príklade 54, l-/erc-butyl-5-{3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-177-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-propionyloxy-metyl}ester kyseliny 2-ŕerc-butoxykarbonylaminopentándiovej sa pripravil použitím 1-terc-butyl esteru 2-íerc-butoxykarbonylaminopentándiovej kyseliny, chlórmetylesteru 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-propiónovej kyseliny, trietylamínu a Nal v DMF.

Deprotekciou v zmesi dichlórmetán/TFA (50/50) pri laboratórnej teplote počas 8 hod. a preparatívnou HPLC sa získala zlúčenina uvedená v názve ako TFA soľ (20 % výťažok). MS (M+l 576).

Príklad 57 l-Karboxy-3-(N’-{3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-propionyl} -hydrazinokarbonyl)-propylammónium trifluoracetát

Zmes 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-propiónovej kyseliny (208 mg, 0,5 mmol) (príklad 18) v 15 ml THF, N-metylmorfolínu (56 mg, 0,55 mmol) a izobutylchlórformiátu (75 mg, 0,55 mmol) sa nechala miešať 1 hod. Potom sa k reakčnej zmesi pridal íerc-butylester hydrazínkarboxylovej kyseliny (100 mg, 0,75 mmol) a reakcia sa nechala prebiehať ďalšie 2 hod. Reakčná zmes sa premyla s NaHCO₃, NaHSO₄ a nasýteným vodným roztokom NaCl. THF sa odstránilo vo vákuu a zvyšok sa čistil pomocou stĺpcovej chromatografie, nasledovanej deprotekciou pomocou zmesi dichlórmetán/THF za vzniku hydrazidu 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-propiónovej kyseliny vo forme TFA soli. MS (M+l, 431).

Získaná TFA soľ sa zalkalizovala pomocou trietylamínu s použitím rovnakého postupu cez zmesový anhydrid, ako sa už opísalo reakciou s íerc-butylesterom 2-íerc-butoxykarbonylaminopentándiovej kyseliny, následnou stĺpcovou chromatografiou, deprotekciou pomocou zmesí dichlórmetán/TFA a čistením pomocou preparatívnej chromatografie za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve vo forme TFA soli. MS (M+l, 559).

Príklad 58 [3-(2,6-Dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-ylmetyl)-adamantan-1 -yl]-octová kyselina

Podľa postupu opísanom v príklade 45 sa použil (3-metoxykarbonylmetyladamantan-l-yl)-octovej kyseliny namiesto monometylesteru bicyklo[3.3.1]-nonán-l,5-dikarboxylovej kyseliny. Hmotnostné spektrum (ES⁺ 443).

Príklad 59

4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-kubán-l-karboxylová kyselina

K roztoku metylesteru 4-(6-amino-2,4-dioxo-l,3-dipropyl-l,2,3,4-tetrahydro-pyrimidin-5-ylkarbamoyl)-kubán-1-karboxylovej kyseliny (400 mg, 0,966 mmol) v MeOH (20 ml) sa pridali 4 ml 20 % vodného roztoku NaOH a vzniknutá zmes sa zahrievala do refluxu cez noc (12 hod.). Ochladená reakčná zmes sa zahustila vo vákuu, zriedila s niekoľkými kúskami ľadu a okyslila prikvapkaním koncentrovanej HC1. Vzniknutá zrazenina sa odfiltrovala, premyla s éterom za vzniku bielej tuhej látky (280 mg, 76 %). *H NMR (400 MHz, DMSO-d⁶) δ 1,05 (náhodný t, 6H), 1,70 (m, 2H), 1,83 (m, 2H), 3,99 (m, 2H), 4,08 (m, 2H), 4,27 (m, 3H), 4,38 (m, 3H). MS: 383 (MH⁺).

Príklad 60

8-(1 -Hydroxymetyl-kuban-4-yl)-1,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión

K suspenzii 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-177-purin-8-yl)-kubán-l-karboxylovej kyseliny (100 mg, 0,261 mmol) a HATU (1,1 ekv., 0,288 mmol, 110 mg), ktorá sa miešala, v 6 ml MeCN sa pridala Hunigova báza (1,1 ekv., 0,288 mmol, 37 mg) cez striekačku. Vzniknutá heterogénna zmes sa miešala 3 hod. a pridal sa NaBH₄ (2,0 ekv., 0,522 mmol, 20 mg) v jednej dávke. Zmes sa miešala ďalšie 2 hod., ochladila sa pomocou ľadového kúpeľa a po kvapkách sa okyslila prídavkom koncentrovanej HC1. Vzniknutá svetložltá zrazenina sa odfiltrovala, vysušila a znovu sa rozsuspendovala v MeCN. Po miešaní cez noc sa tuhá látka odfiltrovala a vysušila za vzniku belavej tuhej látky (50 mg, 52 %). MS: 369 (MH⁺)Príklad 61 4-(7-Benzyl-2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylová kyselina

K roztoku metylesteru 4-[(6-amino-2,4-dioxo-l,3-dipropyl-1,2,3,4-tetrahydropyrimidin-5-yl)-benzyl-karbamoyl]-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (430 mg, 0,843 mmol) vo 20 ml i-PrOH sa pridal 2N KOH (4,0 ekv., 3,37 mmol, 1,7 ml) a vzniknutá zmes sa zahrievala do refluxu 26 hod. Ochladená reakčná zmes sa zahustila vo vákuu za vzniku polotuhého zvyšku, ktorý sa rozpustil vo vode a extrahoval s chloroformom. Vodná fáza sa okyslila s kone. HC1 za vzniku bielej zrazeniny, ktorá sa odfiltrovala a vysušila za vzniku produktu (381 mg, 91 %). MS: 479 (MH⁺)

Príklad 62

4-(2,6-Dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro- DY-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l -karbaldehyd oxím

K roztoku 4-(2,6-dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-1 -karbaldehydu (1,6 g, 4,3 mmol) v 30 ml metanolu sa pridal hydroxylamín hydrochlorid (1,2 ekv., 5,16 mmol, 356 mg) a roztok NaOAc (trihydrát, 1,5 ekv., 6,45 mmol, 890 mg) v 10 ml vody. Vzniknutá zmes sa nechala miešať pri laboratórnej teplote cez noc. Zmes sa zahustila vo vákuu a tuhá látka sa suspendovala v 15 ml vody, odfiltrovala sa, premyla vodou a vysušila za vzniku bieleho prášku (1,4 g, 84 %). Táto metóda sa použila tiež pri príprave nasledovnej zlúčeniny:

Príklad 62a: [4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-l//-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]acetaldehydoxím. MS: 404 (MH⁺)

Príklad 63 3-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-13/-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]akrylonitril

K suspenzii 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l£/-punn-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbaldehydu (535 mg, 1,44 mmol) a (kyanometyl)trifenylfosfónium-chloridu (1,2 ekv., 1,73 mmol, 582 mg), ktorá sa miešala vo 30 ml THF, sa pri 0 °C pridal KHMDS (0,5 M v toluéne, 2,2 ekv., 3,16 mmol, 6,3 ml). Vzniknutá reakčná zmes sa zahrievala 5 hod. na teplotu 55 °C. Ochladená reakčná zmes sa rozdelila medzi etylacetát (10 ml) a nasýtený roztok NH₄C1 (20 ml) a vodná fáza sa extrahovala s etylacetátom (20 ml). Spojené organické fázy sa premyli s nasýteným roztokom NaCl (2 x 20 ml), sušili sa nad MgSO₄, odfiltrovali sa a odparili za vzniku tuhého zvyšku, ktorý sa čistil pomocou radiálnej chromatografie (2 mm doštičky) s použitím 5 % MeOH v dichlórmetáne ako eluentu za vzniku 425 mg (75 %) drobiacej sa peny (zmes cis/trans izomérov). MS: 396 (MH⁺)

Táto metóda sa použila aj pri syntéze nasledovnej zlúčeniny:

Príklad 63a: Dietylester (2-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-1 H-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-1 -yl]-vinyl)-fosforečnej kyseliny MS: 507 (MH⁺)

Príklad 64 3-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]propionitril

Roztok 3-[4-(2,6-dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro- l//-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-1 -yljakrylonitrilu (110 mg, 0,278 mmol) v 20 ml metanolu a 5 ml dichlórmetánu sa hydrogenoval s použitím Pd na uhlí (10 mol %) a balónu naplneného vodíkom, pripevnenom k trojcestnému sklenému kohútu. Zmes sa nechala miešať cez noc, potom sa odplynila, odfiltrovala cez celit a zahustila vo vákuu za vzniku drobiacej sa peny (100 mg, 90 %). ‘H NMR (400 MHz, CDC1₃); δ 0,93 (náhodné triplety, 6H), 1,53 (m, 6H), 1,57 (t, 2H), 1,67 (m, 2H), 1,77 (m, 2H), 2,00 (m, 6H), 2,24 (t, 2H), 3,99 (t, 2H), 4,05 (t, 2H), 12,17 (s, 1H).

Nasledovné zlúčeniny sa pripravili analogickým spôsobom:

Príklad 64a: Metylester 4-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yljbutánovej kyseliny, MS: 445 (MH⁺)·

Príklad 64b: Dietylester {2-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-etyl}fosforečnej kyseliny, MS: 509 (MH⁺)

Príklad 65 4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-l//-purÍn-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbonitril

K suspenzii 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbaldehyd oxímu (400 mg, 1,03 mmol), ktorá sa mieša v 20 ml chloroformu ochladenom v ľadovom kúpeli sa pridalo POC1₃ (1,5 ekv., 237 mg) a vzniknutá reakčná zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu počas noci (17 hod.). Reakčná zmes sa naliala do vody, fázy sa oddelili a organická fáza sa premyla s nasýteným vodným roztokom NaHCO₃, vysušila nad Na₂SO₄, odfiltrovala a zahustila vo vákuu za vzniku bielej, drobiacej sa peny (360 mg, 95 %). MS: 370 (MH⁴).

Príklad 66 4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]acetaldehyd

K suspenzii metoxymetyltrifenylfosfónium chloridu (1,1 g, 3,2 mmol) v THF (60 ml) sa pri -78 °C pridal KHMDS (0,5 M v toluéne, 10 ml, 5 mmol). Vzniknutá žltá zmes sa nechala miešať pri tejto teplote 1,5-hod. a potom sa počas 20 min. pridal roztok 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo- [2.2.2]oktán-l-karbaldehydu (372 mg, 1,0 mmol) v 12 ml THF. Zmes sa udržiavala pri -78 °C 6 hod. a potom sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu cez noc (12 hod). Reakčná zmes sa rozdelila medzi nasýtený vodný roztok NH₄C1 (100 ml) a etylacetát (100 ml) a vodná fáza sa extrahovala s 50 ml etylacetátu. Spojené organické extrakty sa premyli s nasýteným roztokom NaCl (100 ml), zahustili vo vákuu, zvyšok sa opäť rozpustil v THF a zakoncentroval na približne 20 ml. K roztoku sa pridal rovnaký objem IN HC1 a zmes sa nechala miešať cez noc. Zmes sa zriedila s 20 ml etylacetátu a vodná fáza sa oddelila a extrahovala s etylacetátom (10 ml). Spojené organické fázy sa potom premyli nasýteným roztokom NaCl (2 x 25 ml), sušili nad MgSO₄, odfiltrovali a zahustili pri zníženom tlaku. Zvyšný oranžový olej sa čistil po dávkach pomocou radiálnej chromatografie (2 mm doštička) s použitím 3 % MeOH a 3 % THF v dichlórmetáne ako eluentu. Frakcie, ktoré obsahovali produkt, sa spojili a zahustili za vzniku 290 mg (75 %) bielej tuhej látky. MS: 387 (MH⁴).

Príklad 67 [4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-l//-purin-8-yI)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]octová kyselina

K roztoku [4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-17/-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-acetaldehydu (170 mg, 0,440 mmol) v 10 ml t-BuOH a 2-metyl-2-buténu (10 ekv., 4,4 mmol, 470 ml) ochladenom v ľadovom kúpeli sa pridal NaClO₂ (1,5 ekv., 0,66 mmol). Vzniknutý žltý roztok sa nechal zahriať na laboratórnu teplotu počas 14 hod. a potom sa zakoncentroval vo vákuu. Vzniknutý olejovitý zvyšok sa rozdelil medzi 10 ml vody a 10 ml dichlórmetánu. Vodná fáza sa okyslila prídavkom koncentrovanej HC1 a vzniknutá zrazenina sa odfiltrovala a premyla, získalo sa 105 mg (59 %) bieleho prášku. 'H NMR (400 MHz, CDC1₃); δ 0,91 (t, 3H), 0,93 (t, 3H), 1,63 (m, 2H), 1,77 (m, 2H, čiastočne prekryté), 1,82 (m, 6H), 2,01 (m, 6H), 2,32 (s, 2H), 3,95 (m, 2H), 4,07 (m, 2H), 12,74 (s, 1H).

Príklad 68

Monoetylester {2-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktyl-l-yl]etyl} fosforečnej kyseliny

Dietylester {2-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktyl-l-yl]etyl}fosforečnej kyseliny (30 mg, 59 pmol) sa rozpustil v IN NaOH (4 ml) a roztok sa zahrieval 3 hod. na 80 °C. Zmes sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu a pomaly sa okyslila pomocou koncentrovanej HC1. Vzniknutá zrazenina sa odfiltrovala a vysušila (22 mg, 79 %). ’H NMR (400 MHz, CDC1₃); δ 0,93 (náhodné triplety, 6H), 1,31 (t, 3H), 1,48 (m, 8H), 1,70 (br m, 6H), 1,95 (m, 6H), 3,95 (t, 2H), 4,07 (t, 2H), 12,2 (br s, 1H).

Príklad 69 8-(4-(3-Hydroxypropyl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-l,3-dipropyl-3,7-dihydro-purin-2,6-dión

K roztoku 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-177'-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktyl-1-yl]propiónovej kyseliny (417 mg, 1,0 mmol) v 25 ml THF, ochladenom na 0 °C pomocou ľadového kúpeľa, sa pridal BH₃ (1,0 M v THF, 3,0 mmol). Vzniknutá reakčná zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu a miešala sa 60 hod. Potom sa pridalo 10 ml metanolu a zmes sa zahustila pri zníženom tlaku za vzniku bielej tuhej látky, ktorá sa rozpustila v 20 ml metanolu, nechala sa miešať pri laboratórnej teplote 2 hod. a odparila sa dosucha. Vzniknutá biela tuhá látka sa rekryštalizovala z etylacetátu za vzniku 345 mg (86 %) bieleho prášku. MS: 403 (MH⁺).

Táto metóda sa tiež použila na prípravu:

Príklad 69a: 8-[4-(2-Hydroxyetyl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-l,3-dipropyl-3,9-dihydropurm-2,6-dión. MS: 389 (MH⁴)

Príklad 70

3-(4-(2,6-Dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-1 W-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-1 -yl]propiónamid

K roztoku 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-177-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]propiónovej kyseliny (510 mg, 1,22 mmol) a HATU (1,1 ekv., 1,34 mmol, 511 mg) v 10 ml DMF sa pridala Hunigova báza (1,3 ekv., 1,6 mmol, 205 mg). Vzniknutá suspenzia sa nechala miešať 1 hod. a potom sa pridal nadbytok amoniaku (0,5 M v dioxáne, 4,0 ml) a zmes sa nechala miešať 14 hod. pri laboratórnej teplote. Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozdelil medzi dichlórmetán (10 ml) a IN HC1 (10 ml) pomocou 2 ml MeOH na podporu prenosu a zlepšenie rozpustnosti. Vodná fáza sa extrahovala s dichlórmetánom (2 x 10 ml), spojené organické fázy sa premyli s 1 N HC1 (2 x 10 ml), vysušili nad MgSO₄, odfiltrovali a odparili vo vákuu za vzniku belavej tuhej látky (455 mg, 90 %). MS: 416 (MH⁺).

Táto metóda sa použila aj pri syntéze nasledujúcich zlúčenín:

Príklad 70a: 3-(4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purm-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-V-( 177-tetrazol-5-yl)-propiónamid, MS: 484 (MH⁺)

Príklad 70b: M-(2-Kyanoetyl-3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-propiónamid, MS: 469 (MH )

Príklad 70c: Metylester 2-((4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-177-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbonyl]-amino}-3-hydroxybutánovej kyseliny, MS: 504 (MH⁺)

Príklad 70d: Metylester 2-((4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-177-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbonyl]-amino}-3-hydroxypropiónovej kyseliny, MS: 480 (MH⁺)

Príklad 71 (2-(4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-177-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-etyl}fosforečná kyselina

K roztoku dietylesteru (2-(4-(2,6-dioxo-l ,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-177-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-etyl}-fosforečnej kyseliny (30 mg, 59 pmol) v 8 ml dichlórmetánu sa pridalo TMSBr (nadbytok) a vzniknutá zmes sa nechala miešať pri laboratórnej teplote cez noc. Potom sa pridal ďalší TMSBr a reakčná zmes sa zahrievala 6 hod. na teplotu 55 °C. Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu za vzniku oranžovej tuhej látky, ktorej farba sa odstránila trituráciou s vodou. Látka sa odfiltrovala, premyla s vodou a sušila (20 mg, 77 %). MS: 453 (MH⁺)

Príklad 72

3- (5-(2-(4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-177-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-etyl}-tetrazol-1 -yl)-propionitril

Roztok7V-(2-kyanoetyl-3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-177-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-propionamidu (500 mg, 1,06 mmol, 1,0 ekv.), Ph₃P (2,0 ekv., 2,13 mmol, 560 mg), TMSN₃ (2,0 ekv., 2,13 mmol, 245 mg) a DEAD (2,0 ekv., 2,13 mmol, 371 mg) v 10 ml THF sa nechal miešať 24 hod. pri laboratórnej teplote. Reakčná nádoba sa znova naplnila zmesou reakčných činidiel (2,0 ekv., 2,13 mmol) a zmes sa nechala miešať ďalších 24 hod. Reakčná zmes sa rozložila prídavkom 5 % vodného roztoku (NH₄)₂Ce(NO₃)₆ a extrahovala sa etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyli s nasýteným vodným roztokom NaCl, vysušili nad MgSO₄, odfiltrovali a odparili vo vákuu za vzniku viskózneho bezfarebného oleja. Časť tohto materiálu sa čistila pomocou preparatívnej kvapalinovej chromatografie za vzniku 20 mg čistej látky. MS: 494 (MH⁺)

Príklad 73

1,3-Dipropyl-8- (4-(2-( 177-tetrazol-5-yl)-etyl]-bicyklo[2.2.2]okt-l -yl} -3,7-dihydropurin-2,6-dión

K roztoku 3-(5-(2-(4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-etyl-}-tetrazol-l-yl)-propionitril (150 mg, 0,30 mmol) v 20 ml THF sa pridali 3 ml IN roztoku NaOH. Vzniknutá zmes sa nechala miešať 8 hod. pri laboratórnej teplote, zahustila sa vo vákuu a extrahovala s dichlórmetánom (2x10 ml). Vodná fáza sa okyslila opatrným prídavkom koncentrovanej HC1 a vzniknutá zrazenina sa odfiltrovala, premyla s vodou a vysušila za vzniku 55 mg (41 %) bieleho prášku. MS: 441 (MH⁺).

Táto metóda sa tiež použila pri syntéze nasledovnej zlúčeniny:

Príklad 73a: l,3-Dipropyl-8-[4-(177-tetrazol-5-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-3,7-dihydropurin-2,6-dión. MS: 413 (MH⁺)

Príklad 74

4- (4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17f-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-butánová kyselina

Roztok metylesteru 4-(4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-butánovej kyseliny (45 mg, 100 pmol) v 4 ml THF sa nechal reagovať s IM LiOH (2 ml) a vzniknutý zakalený roztok sa miešal cez noc pri laboratórnej teplote. Roztok sa zakoncentroval pri zníženom tlaku, zriedil sa s 2 ml vody a okyslil opatrným prídavkom koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej. Vzniknutá zrazenina sa odfiltrovala, premyla s vodou a vysušila za vzniku bieleho prášku (35 mg, 81 %). MS: 431 (MH⁺).

Táto metóda sa použila aj pri syntéze nasledujúcich zlúčenín:

Príklad 74a: 3-(4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lZ/-purin-8-yl)-kuban-l-yl]-akrylová kyselina, MS: 409 (MH⁺)

Príklad 74b: 3-(4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-4,5-dihydro-izoxazol-5-karboxylová kyselina, MS: 458 (MH⁺)

Príklad 74c: 3-(4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-177-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-izoxazol-5-karboxylová kyselina, MS: 456 (MH⁺)

Príklad 74d: 2-(4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-tiazol-4-karboxylová kyselina, MS: 472 (MH⁺)

Príklad 74e: 2-{2-(4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylJ-etyl}-tiazol-4-karboxylová kyselina, MS: 500 (MH⁺)

Príklad 74f: 4-(4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-but-2-énová kyselina, MS: 429 (MH⁺)

Príklad 74g: 3-(4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-lH-purm-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylmetyl]-izoxazol-5-karboxylová kyselina, MS: 470 (MH⁺)

Príklad 75 8-(4-(5-Hydroxymetyl-izoxazol-3-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-l,3-dipropyl-3,9-dihydropurin-2,6-dión

Roztok 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbaldehyd oxím (87 mg, 0,22 mmol) a V-chlórsukcínimid (1,2 ekv., 0,27 mmol, 36 mg) v 6 ml DMF sa zahrieval 1,5-hod. na teplotu 60 °C (olejový kúpeľ). Reakčná banka sa vybrala z kúpeľa a zmes sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu a pridal sa propargylalkohol (2,0 ekv., 0,44 mmol, 25 mg). Banka sa opäť vložila do olejového kúpeľa, pridal sa Et₃N (2,0 ekv., 0,44 mmol, 44 mg) počas 15 min. a vzniknutá zmes sa zahrievala na teplotu 60 °C počas 3,5-hod. Ochladená reakčná zmes sa odparila vo vákuu za vzniku tuhého zvyšku, ktorý sa čistil pomocou radiálnej chromatografie (2 mm doštička) s použitím gradientu 2 - 10 % MeOH v dichlórmetáne ako eluentu. Frakcie, ktoré obsahovali produkt, sa spojili a zahustili za vzniku 31 mg (26 %) bielej tuhej látky. MS: 442 (MH⁺).

Nasledovné zlúčeniny boli pripravené analogickým spôsobom:

Príklad 75a: Metylester 3-(4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-4,5-dihydroizoxazol-5-karboxylovej kyseliny, MS: 472 (MH⁺)

Príklad 75b: Metylester 3-(4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-izoxazol-5-karboxylovej kyseliny, MS: 475 (MH⁺)

Príklad 75c: 8-{4-[5-(4-Metoxyfenyl)-izoxazol-3-yl]-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl}-l,3-dipropyl-3,9-dihydropurin-2,6-dión, MS: 518 (MH⁺)

Príklad 75d: Metylester 3-(4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylmetyl]-izoxazol-5-karboxylovej kyseliny, MS: 484 (MH⁺)

Príklad 76

3-(4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-tiopropiónamid

Suspenzia P₄Si₀ (23 mg, 53 mmol) a Na₂CO₃ (4 mg, 53 mmol) v 4 ml THF sa nechala miešať intenzívne 20 min. a pridal sa 3-(4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]propiónamid (20 mg, 45 pmol). Vzniknutý svetložltý roztok sa miešal 1 hod. pri laboratórnej teplote, odparil sa dosucha a sušil sa vo vákuu cez noc. Surový materiál sa čistil pomocou radiálnej chromatografie (1 mm doštička) s použitím 2 - 5 % MeOH v dichlórmetáne ako eluentu za vzniku 11 mg bielej tuhej látky (55 %). MS: 432 (MH⁺).

Táto metóda sa použila aj pri syntéze nasledujúcej zlúčeniny:

Príklad 76a: Amid 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbotiovej kyseliny, MS: 404 (MH⁺)

Príklad 77 l,3-Dipropyl-8-(4-vinyl-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-3,9-dihydropurin-2,6-dión

K miešanej suspenzii metyl(trifenyl)fosfónium-chloridu (1,07 g, 3,0 mmol) v 20 ml THF sa pri 0 °C pridalo w-BuLi (1,4 M v hexáne, 2,14 ml, 3,0 mmol). Vzniknutá červenohnedá zmes sa nechala miešať pri tejto teplote 0,5-hod. a potom 0,5-hod. pri laboratórnej teplote. Potom sa pridal roztok 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,9-tetrahydro-l/Y-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbaldehyd (372 mg, 1,0 mmol) v 10 ml THF počas 20 min. a vzniknutá zmes sa nechala miešať cez noc (12 hod.). Reakčná zmes sa rozdelila medzi nasýtený vodný roztok NH₄C1 (20 ml) a etylacetát (20 ml) a vodná fáza sa extrahovala s etylacetátom (20 ml). Spo jené organické extrakty sa premyli s nasýteným nasýteným vodným roztokom NaCl (50 ml), vysušili nad MgSO, prefiltrovali sa a odparili pri zníženom tlaku za vzniku oleja, ktorý sa čistil pomocou radiálnej chromatografie (2 mm doštička) s použitím 0 - 5 % MeOH v dichlórmetáne. Frakcie, ktoré obsahovali produkt, sa spojili a zahustili za vzniku 140 mg (38 %) bielej tuhej látky. MS: 371 (MH⁺).

Príklad 78

Etylester 2-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-tiazol-4-karboxylovej kyseliny

Suspenzia amidu 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-karbotiovej kyseliny (20 mg, 50 μηιοί) a KHCO₃ (8,0 ekv., 400 μτηοΐ) v 5 ml THF sa intenzívne miešala 5 min. a potom sa pridal cez striekačku etylbrómpyruát (29 mg, 150 pmol). Vzniknutý svetložltý roztok sa miešal pri laboratórnej teplote 1 hod., potom sa ochladil na 0 °C pomocou ľadového kúpeľa a potom sa postupne pridal pyridín (8,0 ekv., 400 μηιοί) a (CF₃CO)₂O (4,0 ekv., 42 mg, 200 μηιοί). Vzniknutý tmavočervený roztok sa zakoncentroval a extrahoval s dichlórmetánom (2x10 ml). Spojené organické fázy sa premyli s 2N HC1, vysušili nad Na₂SO₄, prefiltrovali a zahustili vo vákuu. Roztok sa čistil pomocou radiálnej chromatografie (1 mm doštička) s použitím 2 - 5 % MeOH v dichlórmetáne ako eluentu za vzniku bielej tuhej látky (22 mg, 88 %). MS: 500 (MH⁺).

Príklad 79

Dimetylester cí.s//raw5-l-(2-chlóretyl)-cyklohexán-l,4-dikarboxylovej kyseliny (II)

Zmes n-butyllítia (1,6 M vhexáne, 0,275 mol) sa pridala počas 25 min. do roztoku izopropylamínu (0,3 mol, 42 ml) v suchom THF (200 ml), ktorý sa počas miešania v atmosfére dusíka ochladil na -78 °C. Vzniknutá zmes sa miešala pri -78 °C 30 min. K tejto zmesi sa pridalo TMU (1,675 mol, 200 ml) počas 20 min. K zmesi LDU a TMU sa pridal 1,4-dimetyl-cyklohexándikarboxylát (I, 0,25 mol, 45 ml) počas 10 min. Zmes sa miešala ďalších 40 min. a potom sa pridal brómchlóretán (0,30 mol, 25 ml) počas 10 min. Vzniknutá zmes sa miešala 30 min. pri -78 °C, ľadový kúpeľ sa potom odstránil a reakčná zmes sa nechala zahriať na 20 - 25 °C cez noc. Potom sa pridala HC1 (3N, 200 ml) a zmes sa intenzívne miešala 10 min. THF sa odstránil pri zníženom tlaku a vzniknutý vodný zvyšok sa extrahoval s hexánom (3 x 200 ml). Spojené organické extrakty sa premyli s HC1 (3N, 2 x 200 ml), vodou (1 x 100 ml) a nasýteným vodným roztokom NaCl (1 x 100 ml) a sušili sa nad MgSO₄. Filtrácia a zahustenie pri zníženom tlaku poskytlo zlúčeninu uvedenú v názve.

Príklad 80

Dimetylester bicyklo[2.2.2]oktán-l,4-dikarboxylovej kyseliny n-Butyllítium (2,5 M vhexáne, 313 mmol) sa pridal pomaly do roztoku diizopropylamínu (50 ml, 357 mmol), ktorý sa miešal v suchom THF (450 ml) ochladenom na -30 °C v atmosfére dusíka. Zmes sa miešala 30 min. pri -30 °C a potom sa ochladila na -78 °C. V inej banke sa miešaním pripravila zmes dimetylesteru cis- a ŕrans-izoméru l-(2-chlóretyl)-cyklohexán-l,4-dikarboxylovej kyseliny (II, príklad 79, 80 g, 303 mmol) v THF (1100 ml) a HMPA (225 ml, 1280 mmol) v atmosfére dusíka pri -78 °C. Roztok LDA sa potom pridal počas 1 hod. pomocou kanyly. Vzniknutá zmes sa miešala pri -78 °C 1 hod. a potom počas 2 hod. sa zahriala na 20 - 25 °C a miešala sa ďalších 30 min. Potom sa do reakčnej zmesi pridala voda (500 ml) a zmes sa extrahovala s hexánom (3 x 350 ml). Spojené organické extrakty sa premyli s nasýteným vodným roztokom NaCl, sušili nad síranom sodným, prefiltrovali a zakoncentrovali. Surový produkt sa kryštalizoval z hexánu za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 81

Monometylester bicyklo[2.2.2]oktán-l,4-dikarboxylovej kyseliny (IV)

Zmes dimetylesteru bicyklo[2.2.2]oktán-l,4-dikarboxylovej kyseliny (III, príklad 80, 20,4 g, 89,5 mmol), oktahydrátu bámatého (14 g, 44,7 mmol) v metanole (160 ml) a 40 ml vody sa miešala 18 hod. pri teplote 20 - 25 °C. Zmes sa zriedila so 600 ml vody a extrahovala sa s hexánom (150 ml x 2). Vodná zmes sa okyslila s 5N HC1 na pH 1 - 2 a extrahovala sa s chloroformom (150 ml x 2). Spojené chloroformové extrakty sa zakoncentrovali. Zvyšok sa rozpustil v toluéne, prefiltroval a zakoncentroval za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve, teplota topenia: 169 - 173 °C.

Príklad 82

Metylester 4-chlórkarbonyl-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (V)

Monometylester bicyklo[2.2.2]oktán-l,4-dikarboxylovej kyseliny (IV, príklad 81, 1 hmotnostný diel) sa rozpustil v dichlórmetáne (6,25 obj.) a pridal sa dimetylformamid (0,025 obj.). Zároveň sa rozpustil oxalylchlorid (0,5125 obj.) v dichlórmetáne (0,625 obj.) a vzniknutá zmes sa pridala ku zmesi, ktorá obsahuje monometylester bicyklo[2.2.2]oktán-l,4-dikarboxylovej kyseliny (IV) pri teplotách od 12 do 17 °C, pričom sa dávalo pozor na vývoj plynu. Zmes sa miešala pri 15 - 25 °C počas 2 až 4 hodín, pričom sa reakcia monitorovala pomocou TLC (dichlórmetán/metanol : 1/1), vizualizácia brómkrezolovou zeleňou). Rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku pri 40 až 45 °C, potom sa pridal dichlórmetán (5 obj.), zmes sa miešala 5 až 15 min. a dichlórmetán sa potom odstránil pri zníženom tlaku pri 40 až 45 °C. Proces sa opakoval prídavkom dichlórmetánu (5 vol.), zmes sa miešala 5 až 15 min. a rozpúšťadlo sa opäť odstránilo pri zníženom tlaku pri 40 až 45 °C. Potom sa pridal acetonitril (6,25 obj.) za vzniku roztoku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 83a

Metylester 4-(6-amino-2,4-dioxo-l,3-dipropyl-l,2,3,4-tetrahydropyrimidin-5-ylkarbamoyl)bicyklo[2.2.2]oktán-1-karboxylovej kyseliny (VII)

Diaminodipropyluracil hydrochlorid (VI, 1,36 hmôt.) sa suspendoval v acetonitrile (12,5 obj.), ochladil na 0 až 5 °C a pridal sa trietylamín (2,46 obj.) pri teplotách od 0 do 10 °C. Zmes sa potom ochladila na 0 až 5 °C. Potom sa k diaminodipropyluracilu pridala zmes metylesteru 4-chlórkarbonylbicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (V, príklad 82) v acetonitrile pri teplotách od 0 do 20 °C. Reakčná zmes sa zahriala na 15 až 25 °C a miešala sa 15 až 20 hod., pričom všetok metylester 4-chlórkarbonyl-bicyklo[2.2.2]oktán-lkar-boxylovej kyseliny (V) sa počas tejto doby spotreboval (V) (kontrola pomocou TLC, dichlórmetán/metanol, 9/1, vizualizácia pomocou brómkrezolovej zelene). Reakčná zmes sa zriedila s vodou (3,12 obj.) a zahustila sa pri zníženom tlaku pri teplote 40 až 45 °C (odstránilo sa 18 až 20 obj. rozpúšťadla). Koncentrát sa extrahoval s etylacetátom (3x6 obj.) a spojené organické vrstvy sa premyli postupne s kyselinou citrónovou (10 %, 3 x 3,12 obj.), kyselinou chlorovodíkovou (IM, 2,5 obj.), vodou (3,12 obj.), nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (3,12 obj.) a nasýteným vodným roztokom NaCl (3,12 obj.). Zmes sa vysušila nad síranom horečnatým (0,75 hmôt.) počas 5 až 15 min., prefiltrovala sa, premyla s etylacetátom (1 obj.) a rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku pri teplotách 40 až 45 °C za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 83b

Metylester 4-(6-amino-2,4-dioxo-l,3-dipropyl-l,2,3,4-tetrahydropyrimidin-5-ylkarbamoyl)bicyklo[2.2.2]oktán-1-karboxylovej kyseliny (VII, krok E)

Metylester 4-chlórkarbonylbicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (V, príklad 82, 0,562 kg) sa rozpustil v dichlórmetáne (3,55 1) a pridal sa dimetylformamid (0,014 1). Súčasne sa oxalylchlorid (0,291 1) rozpustil v dichlórmetáne (0,355 1) a vzniknutá zmes sa pridala k roztoku metylesteru 4-chlórkarbonyl-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (V, príklad 82) pri teplotách od 12 do 17 °C. Zmes sa potom miešala 2 hod. pri teplotách 15-25 °C, pričom počas tejto doby sa všetok metylester 4-chlórkarbonylbicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (V, príklad 82) spotreboval (kontrola TLC, dichlórmetán/metanol : : 9/1, vizualizácia pomocou brómkrezolovej zelene). Rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku pri teplote 40 až 45 °C, potom sa pridal dichlórmetán (0,355 1), zmes sa miešala 5 až 15 min. a rozpúšťadlo sa opäť odstránilo pri zníženom tlaku pri teplote 40 až 45 °C. Tento postup sa opakoval prídavkom dichlórmetánu (2,83 1), miešaním zmesi 5 až 15 min. a potom zakoncentrovaním vo vákuu pri teplotách od 40 do 45 °C. Potom sa pridalo 3,54 1 acetonitrilu (zmes A). V ďalšej banke sa suspendoval diaminodipropyluracil hydrochlorid (VI, 0,772 kg) v acetonitrile (7,09 1), ochladil sa na 0 až 5 °C a pridal sa trietylamín (1,40 1) pri teplotách medzi 0 a 10 °C (zmes B). Zmes sa potom ochladila na 0 až 5 °C. Zmes A sa pridala ku zmesi B pri teplotách od 0 do 20 °C. Reakčná zmes sa zahriala na teplotu 15 až 25 °C a miešala 16 hod., počas ktorých sa všetok chlorid kyseliny spotreboval (TLC, dichlórmetán/metanol : 9/1, vizualizácia pomocou brómkrezolovej zelene). Reakčná zmes sa zriedila s vodou (1,77 1) a zahustila sa pri zníženom tlaku pri teplotách od 40 do 45 °C. Koncentrát sa extrahoval s etylacetátom (3 x 3,41 1) a spojené organické podiely sa postupne premyli s kyselinou citrónovou (10 %, 3 x 1,77 1), kyselinou chlorovodíkovou (IM, 1,42 1), vodou (1,77 1), nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (1,77 1) a nasýteným nasýteným vodným roztokom NaCl (1,77 1). Zmes sa vysušila nad MgSO₄ (0,426 kg) 5 až 15 min., prefiltrovala sa, premyla s etylacetátom (0,568 1) a rozpúšťadlo sa odparilo pri zníženom tlaku pri teplotách od 40 do 45 °C za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 84a

Metylester 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l -karboxylovej kyseliny (VIII)

Metylester 4-(6-amino-2,4-dioxo-1,3-dipropyl-1,2,3,4-tetrahydro-pyrimidín-5-ylkarbamoyl)bicyklo- [2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (VII, príklad 83a, 1 hmotn. diel) a izopropanol (4,76 obj.) sa zmiešali v atmosférou dusíka. Potom sa pridal hydroxid draselný (4,76 obj.). Pripravila sa titulná zlúčenina, ktorá sa však neizolovala.

Príklad 85 a 4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yI)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylová kyselina (ix)

Metylester 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (VIII, príklad 84a) sa v prostredí hydroxidu draselného zahrieval do refluxu 2 až 3 hodiny až do úplného prebehnutia reakcie (kontrola NMR). Zmes sa potom ochladila na 15 až 25 °C. Pridala sa voda (11,16 obj.) a toluén (1,25 obj.) a obsah sa intenzívne miešal 5 až 15 min. Vrstvy sa oddelili, k vodnej vrstve sa pridal toluén (1,25 obj.) a zmes sa intenzívne miešala 5 až 15 min. Vrstvy sa oddelili. K vodnej vrstve sa pridal toluén (1,25 obj.), zmes sa 5 až 15 min. intenzívne miešala a vrstvy sa oddelili. Vodná fáza sa potom ochladila na teplotu 0 až 10 °C a okyslila pomocou koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej (0,74 obj.), pričom teplota sa udržiavala pod 10 °C. Zmes sa potom miešala pri teplote 0 až 10 °C počas 60 až 90 min. Tuhá látka sa odfiltrovala a vysušila pri zníženom tlaku za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 84b a 85 b

4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (VIII; IX, Kroky F a G)

Pripravila sa zmes metylesteru 4-(6-amino-2,4-dioxo-l,3-dipropyl-l,2,3,4-tetrahydro-pyrimidin-5-ylkarbamoyl)-bicyklo[2.2.2]oktán-karboxylovej kyseliny (VII, príklad 83b, 0,760 kg) a izopropanolu (3,62 1). Zmes sa miešala v atmosfére dusíka a pridal sa KOH (2 M, 3,62 1). Obsah sa zahrieval do refluxu 3 hod. (úplnosť doreagovania sa sledovala pomocou NMR). Zmes sa potom nechala ochladiť na 15 až 25 °C. Potom sa pridala voda (8,48 1) a toluén (0,95 1) a obsah sa intenzívne miešal 5 až 15 min. Vrstvy sa oddelili. Extrakcie s toluénom sa uskutočnili ešte dvakrát. Vodná fáza sa potom ochladila na teplotu 0 až 10 °C a okyslila s koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou (0,562 1). Zmes sa miešala 60 min. pri teplotách medzi 0 až 10 °C. Tuhý produkt sa odfiltroval a sušil pri zníženom tlaku pri 50 až 60 °C za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 86a 8-(4-Hydroxymetyl-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-3,6-dión (X, Krok H)

4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylová kyselina (IX, príklad 85a, 1 hmotn. diel) a tetrahydrofurán (11 obj.) sa miešali v atmosfére dusíka. Potom sa pridal komplex borán-tetrahydrofurán (IM) v THF (5,1 obj.) takou rýchlosťou, aby sa teplota vnútri reakčnej zmesi pohybovala medzi 10 až 20 °C. Zmes sa nechala miešať pri teplote 10 až 20 °C počas 17 až 20 hod. až do úplného spotrebovania kyseliny (TLC kontrola, dichlórmetán/metanol, 9/1, vizualizácia pomocou UV a potom pomocou manganistanu draselného). K reakčnej zmesi, zahrievanej do refluxu počas 45 až 75 min., sa pridal metanol (4,2 obj.). Reakcia sa ochladila na 15 až 40 °C a rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku pri teplote 40 až 45 °C. Zvyšok sa rozdelil medzi etylacetát (16,6 obj.) a kyselinu chlorovodíkovú (IM, 2,5 obj.) a vodná vrtsva sa odstránila vrátane všetkého nerozpusteného materiálu. Táto zmes sa vyčírila a zvyšná organická fáza z filtrácie vodnej fázy, ktorá obsahovala tuhú látku, sa spojila s organickou vrstvou. Potom sa pridal nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného (2,5 obj.) a vrstvy sa oddelili tak, že nerozpustený materiál sa ponechal vo vodnej fáze. Vodná fáza, ktorá obsahovala tuhú látku, sa odfitrovala a zvyšná organická fáza sa spojila s hlavným podielom. Spojené organické fázy sa potom premyli s nasýteným vodným roztokom NaCl (2,5 obj.), vrstvy sa oddelili, pričom tuhá látka sa ponechala vo vodnej fáze. Organická fáza z materských roztokov po filtrácii sa spojila s hlavnou organickou fázou, ktorá sa vysušila nad MgSO₄ (0,5 hmôt.) počas 5 až 10 min. Potom sa organická fáza prefiltrovala, premyla s etylacetátom (1 obj.) a rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku pri teplotách od 40 do 45 °C za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 86b 8-(4-Hydroxymetyl-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión (X, krok H)

4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylová kyselina (IX, príklad 85b, 0,82 kg) a tetrahydrofurán (9,02 1) sa miešali v atmosfére dusíka. Potom sa pridal komplex borán-tetrahydrofuránu (IM) v THF (4,18 1) takou rýchlosťou, aby teplota vnútri reakčnej zmesi bola medzi 10 až 20 °C. Zmes sa nechala miešať pri teplote 10 až 20 °C počas 17 hod. až do úplného spotrebovania východiskovej kyseliny (TLC, dichlórmetán/metynol, 9/1, vizualizácia pomocou UV a potom pomocou manganistanu draselného). K reakčnej zmesi sa pridal metanol (3,44 1) a zmes sa zahrievala do refluxu 1 hod. Reakčná zmes sa ochladila na 15 až 40 °C a rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku pri teplote 40 až 45 °C. Zvyšok sa rozdelil medzi etylacetát (13,61 1) a kyselinu chlorovodíkovú (IM, 2,23 1) a vodná vrstva sa odstránila vrátane všetkého nerozpusteného materiálu. Táto zmes sa vyčírila a zvyšná organická fáza z filtrácie vodnej fázy, ktorá obsahuje tuhú látku, sa spojila s organickou vrstvou. Potom sa pridal nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného (2,23 1) a vrstvy sa oddelili tak, že nerozpustený materiál sa ponechal vo vodnom kúpeli. Vodná fáza, ktorá obsahuje tuhú látku, sa prefiltrovala a zvyšok organickej fázy sa spojil s hlavným podielom. Spojené organické fázy sa premyli s nasýteným vodným roztokom NaCl (2,23 1), vrstvy sa oddelili, pričom tuhá látka sa ponechala vo vodnej fáze. Vodná fáza, ktorá obsahuje tuhú látku, sa prefiltrovala a zvyšok organickej fázy sa spojil s hlavným podielom. Organická fáza z materských roztokov po filtrácii sa spojila s hlavnou organickou fázou, ktorá sa vysušila nad MgSO₄ (0,41 kg). Potom sa organická fáza prefiltrovala, premyla s etylacetátom (0,82 1) a rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku pri teplotách 40 až 45 °C za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 87a 4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/f-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbaldehyd (XI)

8-(4-Hydroxymetyl-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión (X, príklad 86a, 1 hmotn. diel) a dimetylsulfoxid (4 obj.) sa miešali v atmosfére dusíka, zmes sa miešala 5 až 15 min, a pridal sa trietylamín (2,42 obj.). Potom sa pridal do zmesi komplex SO₃-pyridín (1,275 hmotn.) v dimetylsulfoxide (6 obj.), pričom teplota vnútri reakčnej zmesi sa udržiavala pod 30 °C. Teplota sa adjustovala na 15 až 20 °C a reakčná zmes sa miešala pri tejto teplote 16 až 20 hod. až do ukončenia reakcie (kontrola NMR). Pokiaľ je prítomný nejaký východiskový alkohol, pridá sa zostávajúci komplex SO₃-pyridín (0,15 hmotn.) a reakčná zmes sa zahrievala ďalšie 2 až 3 hod. pri 14 až 20 °C. Potom sa pridal etylacetát (20 obj.) a kyselina chlorovodíková (IM, 10 obj.) a reakčná zmes sa intenzívne miešala 5 až 15 min. Fázy sa oddelili a organická fáza sa opäť premyla s kyselinou chlorovodíkovou (IM, 10 obj.). Fázy sa oddelili a organická fáza sa premyla s nasýteným vodným roztokom NaCl (5 obj.), vysušila nad síranom horečnatým (0,5 hmôt.) 5 až 10 min, a prefíltrovala sa. Filtračný koláč sa premyl s etylacetátom (1 obj.). Rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku pri teplote 10 až 45 °C za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 87b

4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbaldehyd (XI, Krok I)

8-(4-Hydroxymetyl-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión (X, príklad 8, 0,440 kg) a dimetylsulfoxid (1,76 1) sa miešali v atmosfére dusíka a zmes sa miešala 5 až 15 min. Potom sa pridal trietylamín (1,065 1). Potom sa pridal komplex SO₃-pyridín (0,561 kg) v dimetylsulfoxide (2,64 1), pričom teplota zmesi sa udržiavala pod 30 °C. Teplota sa potom adjustovala na 14 až 20 °C a zmes sa nechala miešať 20 hod. Pridal sa etylacetát (8,80 1) a kyselina chlorovodíková (IM, 4,40 1) a reakčná zmes sa intenzívne miešala 15 min. Vrstvy sa oddelili a organická vrstva sa dvakrát premyla s kyselinou chlorovodíkovou (IM, 4,40 1). Organická vrstva sa premyla s nasýteným vodným roztokom NaCl (2,20 1), vysušila nad síranom horečnatým (0,233 kg) 10 min., prefíltrovala a filtračný koláč sa premyl s etylacetátom (0,440 1). Rozpúšťadlo sa odparilo pri zníženom tlaku pri teplotách 40 až 45 °C za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 88

Metylester cz5/ŕra«5-3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]akrylovej kyseliny (XII)

4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbaldehyd (XI, príklad 87a, 1 hmotn.) a tetrahydrofurán (16,5 obj.) sa miešali v atmosfére dusíka a pridal sa metyl(trifenylfosforanylidén)acetát (1,85 hmotn.). Reakčná zmes sa zahrievala na teplotu 65 až 75 °C a miešala sa pri tejto teplote až do spotrebovania všetkého východiskového aldehydu (kontrola pomocou NMR). Zmes sa ochladila na 35 až 40 °C a pridal sa roztok LiOH (0,45 hmotn.) vo vode (16,5 obj.). Zmes sa zahrievala do refluxu a miešala až do úplnej hydrolýzy esteru (určované pomocou NMR, typický reakčný čas bol 3 až 6 hod.). Reakčná zmes sa nechala ochladiť na 35 až 40 °C a organické rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku pri teplote 40 až 45 °C. K vodnému zvyšku sa pridal etylacetát (10 obj.) a voda (6 obj.) a zmes sa intenzívne miešala 5 až 15 min. Fázy sa oddelili a vodná fáza sa premyla s etylacetátom (2 x 10 obj.). Vodná fáza sa prefíltrovala. Filtrát sa ochladil na 0 až 5 °C a okyslil pomocou koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej na pH 1 (0,90 obj.). Zmes sa nechala miešať pri 0 až 5 °C počas 45 až 75 minút. Vzniknutá zmes sa prefíltrovala a filtračný koláč sa premyl vodou (1 obj.). Tuhá látka sa vysušila vo vákuu pri teplote 45 až 55 °C počas 16 až 24 hodín za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 89

3-(4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-177-purm-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]akrylová kyselina (XIII, kroky J a K)

K 4-(2,6-dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l 7/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-1 -karbaldehyd (XI, príklad 97b, 0,300kg) a tetrahydrofurán (4,95 1), ktoré sa miešali v atmosfére dusíka, sa pridal metyl(trifenylfosforanylidén)acetát (0,555 kg). Reakčná zmes sa zahrievala na teplotu 65 až 75 °C a miešala sa pri tejto teplote až do spotrebovania všetkého východiskového aldehydu (17 hod.). Zmes sa ochladila na 35 až 40 °C a pridal sa roztok NaOH (0,132 kg) vo vode (4,95 1). Zmes sa zahrievala do refluxu a miešala až do úplnej hydrolýzy esteru (3 hod.). Reakčná zmes sa ochladila na 35 až 40 °C a organické rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku pri teplote 40 až 45 °C. K vodnému zvyšku sa pridal etylacetát (3,00 1) a voda (1,80 1) a zmes sa intenzívne miešala 15 min. Fázy sa oddelili a vodná fáza sa premyla s etylacetátom (2 x 3,00 1). Vodná fáza sa prefiltrovala. Filtrát sa ochladil na 0 až 5 °C a okyslil pomocou koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej na pH 1 (0,270 1). Zmes sa miešala 1 hod. pri teplote 0 až 5 °C. Vzniknutá kaša sa prefiltrovala a filtračný koláč sa premyl s vodou (0,300 1). Tuhá látka sa vysušila vo vákuu pri teplote 45 až 55 °C počas 24 hod. za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 90

3- [4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]propiónová kyselina (xiv)

3- [4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/f-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]akrylová kyselina (XIII, príklad 89, 1,934 kg), tetrahydrofurán (11,875 1), voda (0,625 1) a aktívne uhlie (0,100 kg) sa miešali 30 min. pri teplote 16 až 25 °C a potom prefiltrovali. Filtračný koláč sa premyl s THF (0,500 1). V ďalšej banke sa predložil Pd na uhlíku (10 %, 0,130 kg) a filtrovaná zmes východiskového materiálu v tetrahydrofuráne/vode. Banka sa evakuovala a naplnila s dusíkom. Celý cyklus evakuácie a naplnenia dusíkom sa dvakrát opakoval. Banka a obsah banky sa evakuovali a naplnili s vodíkom. Cyklus sa opäť dvakrát opakoval. Zmes sa 3 hod. intenzívne miešala pri 20 °C pod vodíkovou atmosférou. Reakčná banka sa evakuovala a naplnila dusíkom. Cyklus sa trikrát opakoval. Obsah sa potom prefiltroval cez celit (0,500 kg) a filtračný koláč sa premyl s tetrahydrofuránom (2 x 0,500 1). Rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku pri teplote 40 až 45 °C. Potom sa ku zvyšku pridal vodný acetonitril (50 %, 7,540 1) a vzniknutá kaša sa miešala 3 hod. pri teplote 0 až 5 °C a prefiltrovala sa. Filtračný koláč sa premyl s vodným acetonitrilom (50 %, 1,93 1), umiestnil do sušiarne a sušil pri teplote 50 až 60 °C pri zníženom tlaku 24 hod. za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 91

Metylester 4-hydroxymetylbicyklo[2.2.2]oktán-1 -karboxylovej kyseliny

4- Metylmorfolín (15 ml, 136 mmol) a izobutylchlórformiát (15,0 ml, 123 mmol) sa postupne pridali do monometylesteru bicyklo[2.2.2]oktán-l,4-dikarboxylovej kyseliny (IV) vo 165 ml DME, ochladenom na -7 °C.

Po asi 2 min. sa reakčná zmes prefiltrovala a tuhá látka sa premyla s DME. Spojené filtráty sa previedli do 2-litrovej banky s guľatým dnom a ochladili sa na -5 °C. Potom sa pridal vodný roztok natrium-borohydridu (7,02 g, 185 mmol) v 75 ml vody počas 1 min. (pozor: masívne uvoľňovanie plynov). Po 15 min. sa reakčná zmes zriedila s vodou (100 ml) a extrahovala s etylacetátom (3 x 250 ml). Spojené organické vrstvy sa premyli s nasýteným vodným roztokom NaCl (150 ml x 3), sušili nad bezvodým síranom sodným a zahustili za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 92

4- Hydroxymetylbicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylová kyselina

Hydroxid lítny (2N, 250 ml) sa pridal ku zmesi metylesteru 4-hydroxymetylbicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (XVI, príklad 91) v zmesi THF (50 ml) a metanolu (75 ml). Vzniknutá reakčná zmes sa miešala 16 hod. pri teplote 20 až 25 °C a potom sa zahustila. Zvyšok sa zriedil s vodou (30 ml) a premyl s dichlórmetánom (100 ml) a etylacetátom (100 ml). Vodná vrstva sa potom okyslila s koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou na pH 0 a extrahovala sa s etylacetátom (3 x 250 ml). Etylacetátové vrstvy sa spojili a premyli s nasýteným vodným roztokom NaCl (3 x 50 ml), sušili nad bezvodým síranom sodným a zahustili za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve, NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 3,09, 1,72 a 1,29.

Príklad 93

Benzylester 4-hydroxymetylbicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (XVIII, krok O)

4-Hydroxymetylbicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylová kyselina (XVII, príklad 14, 24,8 g, 135 mmol) sa rozpustila v 950 ml DMF. Potom sa pomaly pridal bezvodý uhličitan draselný (25 g, 181 mmol) a potom benzylbromid (22 g, 12,94 mmol). Reakčná zmes sa nechala 16 hod. zahrievať na teplotu 80 °C. Do reakčnej zmesi sa pridala voda (150 ml) a zmes sa zahustila za vzniku oleja, ktorý sa rozpustil v zmesi etylacetát/hexán (5/1, 500 ml). Zmes sa premyla s nasýteným vodným roztokom NaCl (2 x 200 ml), vysušila nad bezvodým síranom sodným a zahustila za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve. 'H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,39, 5,11,3,28, 1,84 a 1,41.

Príklad 94

Benzylester 4-formylbicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (XIX, krok P)

Oxalylchlorid (COC1)₂ (16,5 ml, 188 mmol) v dichlórmetáne (150 ml) sa ochladil na -63 °C a potom sa po kvapkách pridal DMSO (18 ml, 362 mmol). Vzniknutá zmes sa miešala 30 min. a potom sa pridal roztok benzylesteru kyseliny 4-hydroxymetylbicyklo-[2.2.2]oktán-l-karboxylovej (XVIII, príklad 93, 34,5 g, 125 mmol) v dichlórmetáne (100 ml) počas 15 min. Po ďalších 30 min. sa počas 25 min. pridal roztok trietylamínu (70 ml, 502 mmol) v 30 ml dichlórmetánu. (Pozor: extrémne exotermická reakcia po pridaní prvého ekvivalentu trietylamínu). Reakčná zmes sa miešala ďalších 45 min., odstránil sa chladiaci kúpeľ a teplota sa nechala vystúpiť na 20 až 25 °C. Potom sa pridala voda (50 ml) a organická vrstva sa oddelila, vysušila nad bezvodým síranom sodným a zahustila za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve. NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 9,51,7,32, 5,22, 1,88 a 1,64.

Príklad 95

Benzylester cú7íraw.s’-4-(2-metoxykarbonylvinyl)-bicyklo[2.2.2]oktán-1 -karboxylovej kyseliny

Metyl(trifenylfosforanylidén)acetát (60,2 g, 173 mmol) sa pridal k roztoku benzylesteru kyseliny 4-formylbicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej (XIX, príklad 94, 33,5 g, 123,2 mmol), ktorý sa miešal v 550 ml THF. Táto zmes sa potom opatrne zahrievala do refluxu počas 16 hod. Potom sa reakčná zmes ochladila na 20 až 25 °C a pridal sa chlorid amónny (nasýtený roztok, 75 ml) a zmes sa miešala počas 10 min. Potom sa pridal etylacetát (250 ml) a hexán (300 ml) a zmes sa miešala 10 min. Vzniknutá zmes sa prefiltrovala cez vrstvu silikagélu (850 g) s tenkou vrstvou celitu na vrchole. Tuhá látka sa premyla so zmesou etylacetát/hexán (1/1, 250 ml). Filtráty sa spojili a zahustili za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve. NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,24, 6,81, 5,59, 5,01, 3,63, 1,81 a 1,48.

Príklad 96

4-(2-Metoxykarbonyletyl)bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylová kyselina (XXI, Krok R)

Benzylester 4-(2-metoxykarbonyl-vinyl)-bicyklo[2.2.2]-oktán-l-karboxylovej kyseliny (XX, príklad 95, 35 g, 106,6 mmol) sa rozpustil v zmesi etylacetát/voda (9/1, 300 ml) a umiestnil do Porterovho zariadenia pre tlakové reakcie. Potom sa ku zmesi pridal Pd/C (10 %, 5 g) a zmes sa hydrogenovala 48 hod. pri tlaku 65 psi (45, 700 kPa). Reakčná zmes sa prefiltrovala cez celit a spojené filtráty sa odparili za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve, NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 3,58, 2,18, 1,74, 1,44 a 1,38.

Príklad 97

Metylester 3-(4-chlórkarbonylbicyklo[2.2.2]okt-l-yl)propiónovej kyseliny (XXII, krok S)

Oxalylchlorid (794 mg, 6,25 mmol) v 5 ml dichlórmetánu s kvapkou DMF sa pomaly pridal do roztoku 4-(2-metoxykarbonyletyl)bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (XXI, príklad 96, 1,2 g, 5 mmol) v 20 ml dichlórmetánu. Reakčná zmes sa miešala 2 hod. a potom sa zahustila za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve, NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 3,66, 2,29, 1,95, 1,54 a 1,46.

Príklad 98

Metylester 3-[4-(6-amino-2,4-dioxo-l,3-dipropyl-l,2,3,4-tetrahydropyrimidin-5-ylkarbamoyl)bicyklo[2.2.2Jokt-l-yl]propiónovej kyseliny (XXIII, Krok T)

K suspenzii 5,6-diamino-l,3-dipropyluracil hydrochloridu (1,45 g, 5,5 mmol) v dichlórmetáne (15 ml) sa pomaly pridal trietylamín (2,6 ml, 18,7 mmol) pri -10 °C v ľadovom kúpeli sa počas 15 min roztok metylesteru 3-(4-chlórkarbonylbicyklo[2.2.2]okt-l-yl)propiónovej kyseliny (XXII, príklad 97, 1,3 g, 5 mmol) v 5 ml dichlórmetánu. Reakčná zmes sa potom zahriala na 20 až 25 °C a zmes sa miešala ďalších 16 hod. Potom sa k reakčnej zmesi pridala voda (2 ml) a zmes sa zahustila. Koncentrát sa rozpustil v etylacetáte (20 ml) a premyl s kyselinou citrónovou (5 %, 2 x 10 ml), nasýteným vodným roztokom NaCl (10 ml), sušil sa nad bezvodým síranom sodným a zakoncentroval za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve, NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,40, 5,46, 3,81, 3,59, 2,21, 1,88, 1,67, 1,62, 1,52, 1,46, 0,99 a 0,92.

Príklad 99

Metylester 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]propiónovej kyseliny (XXIV, Krok U)

Pozri príklad 100; metylester 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)bicyklo- [2.2.2]okt-l-yl]propiónovej kyseliny (XXIV) sa pripravil in situ a previedol na voľnú kyselinu v príklade 100 ako časť one pot postupu.

Príklad 100 3-[4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]propiónová kyselina (XIV, Krok V)

Metylester 3-[4-(6-amino-2,4-dioxo-l,3-dipropyl-l,2,3,4-tetrahydropyrimidin-5-ylkarbamoyl)bicyklo- [2.2.2]okt-l-yl]propiónovej kyseliny (XXIII, príklad 98, 1,95 g, 4,35 mmol) sa rozpustil v 2-propanole (15 ml) a pridal sa hydroxid draselný (2N, 15 ml). Vzniknutá zmes sa 1 hod. zahrievala do refluxu a potom sa ochladila na 20 až 25 °C. Pridala sa voda (15 ml) a zmes sa premyla s dichlórmetánom (3x15 ml). Vodná vrstva sa okyslila pomocou koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej na pH 2. Zrazenina sa odfiltrovala a sušila vo vákuovej sušiarni 16 hod. za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve, HPLC analýza ukazuje čistotu vyššiu ako 96 %.

Príklad 101

Dimetylester czs/trans-l-(2-jódetyl)-cykIohexán-l,4-dikarboxylovej kyseliny (XXV)

Zmes dimetylesteru cis/trans l-(2-chlóretylcyklohexán-l,4-dikarboxylovej kyseliny (II, príklad 79, 8,1 mmol, 2,12 g), jodidu sodného (8,88 mmol, 1,33 g) a THF (20 ml) sa zahrievala do refluxu 6 hod. Zmes sa potom ochladila na 20 až 25 °C, zriedila s hexánom (50 ml) a premyla s vodou (2 x 25 ml). Spojené vodné podiely sa extrahovali s hexánom (1 x 25 ml). Spojené organické extrakty sa premyli s vodou (25 ml), do ktorej sa pridalo niekoľko kvapiek nasýteného roztoku Na₂S₂O₄ a s nasýteným vodným roztokom NaCl (1 x x 25 ml) a sušili nad síranom horečnatým. Filtrácia a zakoncentrovanie pri zníženom tlaku poskytlo zlúčeninu uvedenú v názve, NMR (CDC1₃) δ 1,99, 25,71, 25,80, 33,09, 42,00, 44,03, 46,09, 52,19, 52,7, 67,72, 175,25 a 175,64.

Príklad 102

Dimetylester bicyklo[2.2.2]oktán-l,4-dikarboxylovej kyseliny (III)

Ku zmesi dimetylesteru czs/ifrans-l-(2-jódetyl)-cyklohexán-l,4-dikarboxylovej kyseliny (XXV, príklad 101, 2,14 g, 6,04 mmol) v 20 ml THF a TMU (2,9 ml, 24,16 mmol) sa pridal pri -78 °C roztok LDA (z 1,02 ml diizopropylamínu a 4,16 ml 1,6 M zz-butyllítia) v THF (9 ml). Reakčná zmes sa miešala a postupne zahrievala na 20 až 25 °C. Potom sa pridala kyselina chlorovodíková (3N, 20 ml) a zmes sa intenzívne miešala 10 min. THF sa potom odstránilo vo vákuu a vzniknutý vodný zvyšok sa extrahoval s hexánom (2 x 20 ml). Spojené organické extrakty sa premyli s kyselinou chlorovodíkovou (3N, 2 x 20 ml), vodou (1 x 10 ml), nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (2x10 ml) a nasýteným vodným roztokom NaCl (1x10 ml) a sušili sa nad síranom horečnatým. Filtrácia a zakoncentrovanie pri zníženom tlaku poskytlo zlúčeninu uvedenú v názve, *H NMR (CDC1₃) δ 1,78 a 3,6.

¹³C NMR (CDC1₃) δ 27,99, 39,98, 53,12 a 177,62.

Príklad 103 4-(Hydroxymetyl-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-2,6-purindión (XXVI, Kroky Y a Z)

Metylester 4-(6-amino-2,4-dioxo-l,3-dipropyl-l,2,3,4-tetrahydro-pyrimidin-5-ylkarbamoyl)bicyklo- [2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny (VII, príklad 83, 0,500 g) sa rozpustil v 10 ml THF a umiestnil do atmosféry dusíka. Potom sa pri 25 °C pridal lítiumborohydrid (0,052 g) a zmes sa miešala pod refluxom 2 hod. Rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku. K surovému produktu sa pridal hydroxid draselný (Im, 3,57 ml) a izopropanol (4 ml). Zmes sa zahrievala do varu počas 1 hod. za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 104

3- [4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]akrylová kyselina (XII, Kroky AA a BB)

4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbaldehyd (XI, príklad 9, 0,490 g, 1,32 mmol) sa pridal do zmesi kyseliny malónovej (0,275 g, 2,64 mmol), pyridínu (2 ml) a piperidínu (1 kvapka). Zmes sa zahrievala počas 16 hod. na 100 °C. Potom sa pridali ďalšie štyri ekvivalenty kyseliny malónovej a pokračovalo sa v zahrievaní ďalších 16 hod. až do úplného spotrebovania východiskového aldehydu za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 105

Etylester 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]akrylovej kyseliny (XXVIII, XII, Kroky CC a DD)

Etylester czs/írans-3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)akrylovej kyseliny (XII) sa získal aldolovou kondenzáciou medzi aldehydom (XI) (1 ekvivalent) a etylacetátom (4,7 ekvivalent) v prítomnosti silnej bázy, ako je etoxid sodný (1,2 ekvivalentu).

Príklad 106

4- (2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-177-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-ylmetylester metánsulfónovej kyseliny (XL)

K zmesi 8-(4-hydroxymetylbicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-diónu (X, príklad 86) v pyridíne sa pri 0 °C pridal metánsulfonylchlorid (1,2 ekv.) v pyridíne. Zmes sa miešala pri 0 °C až do úplnej konverzie a rozpúšťadlo sa potom odstránilo pri zníženom tlaku.

Príklad 107

Dimetylester 2-[4-(2,6-dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-177-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-1 -ylmetyl]-malónovej kyseliny (XLI)

4-(2,6-Dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-ylmetylester metásulfónovej kyseliny (XL, príklad 106) sa nechá reagovať s aniónom dimetylmalonátu (vzniká reakciou 1 ekv. dimetylmalonátu s 1,25 ekv. hydridu sodného alebo podobnej bázy v THF) pri 20 až 25 °C za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 108

Metylester 3-(4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl] propiónovej kyseliny (XXXV)

Hydrolýza dimetylesteru 2-(4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro- 17/-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2Jokt-l-ylmetyl]malónovej kyseliny (XLI, príklad 107) shydroxidom za zvýšenej teploty poskytla zlúčeninu uvedenú v názve.

Príklad 109

Dimetylester bicyklo[2.2.2]oktán-1,4-dikarboxylovej kyseliny (III)

Zmes dimetylesteru c7.s7ŕra«.s-l-(2-chlóretyl)-cyklohexán-l,4-dikarboxylovej kyseliny (I, 7,63 mmol, 2,00 g), jodidu sodného (8,39 mmol, 1,26 g) a THF (20 ml) sa miešala pod refluxom 6 hod. Zmes sa potom ochladila na 20 až 25 °C, pridal sa TMU (30,52 mmol, 3,65 ml) a zmes sa potom ochladila na 78 °C. K ochladenej zmesi sa pridal roztok LDA (z 1,28 ml diizopropylamínu s 5,25 ml 1,6 M roztoku w-butyllítia) v 11 ml THF. Reakčná zmes sa miešala a postupne zahrievala na 20 až 25 °C. Potom sa pridala kyselina chlorovodíková (3N, 20 ml) a zmes sa intenzívne miešala 10 min. Potom sa THF odstránil pri zníženom tlaku a vzniknutý vodný zvyšok sa extrahoval s hexánom (2 x 20 ml). Spojené organické extrakty sa premyli s kyselinou chlorovodíkovou (3N, 2 x 20 ml), vodou (1x10 ml), nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (2 x 10 ml) a nasýteným vodným roztokom NaCl (1x10 ml) a sušili sa nad síranom horečnatým. Filtrácia a zakoncentrovanie pri zníženom tlaku poskytlo zlúčeninu uvedenú v názve.

Príklad 110

Dimetylester bicyklo[2.2.2]oktán-l,4-dikarboxylovej kyseliny (III, krok TT)

K roztoku diizopropylamínu (84,5 ml, 600 mmol) v THF (bezvodý, 700 ml) ochladenému na -30 °C sa za stáleho miešania a v atmosfére dusíka pridal n-butyllítium (2,5 M v hexáne, 220 ml, 550 mmol) pomocou striekačky. Zmes sa miešala 30 min. pri -30 °C a potom sa ochladila na -78 °C. Potom sa pridal HMPA (360 ml, 4 ekvivalenty, 2 mol) pomocou striekačky a následne dimetyl-cyklohexán-l,4-dikarboxylát (100 g, 500 mmol) v THF (bezvodý, 100 ml). Zmes sa miešala ďalších 40 min. Potom sa pridal l-bróm-2-chlóretán (41,5 ml, 500 mmol) a zmes sa miešala pri -78 °C počas 20 min. Chladiaci kúpeľ sa odstránil a pokračovalo sa v miešaní ďalšiu 1 hod. Reakčná zmes sa opäť chladila na -78 °C a pridal sa roztok HMPA (360 ml, 4 ekv., 2 mol) v 600 ml THF. Potom sa do reakčnej zmesi cez kanylu pridal čerstvo pripravený LDA (200 ml n-butyllítia, 2,5 M v hexáne, 500 mmol sa pridal k diizopropylamínu (78 ml, 556 mmol) v THF (bezvodý, 700 ml)) pri -78 °C. Reakčná zmes sa miešala 1,33 hod. pri -78 °C, potom sa odstránil chladiaci kúpeľ a zmes sa nechala miešať ďalších 5 až 6 hod. Zmes sa rozložila prídavkom nasýteného roztoku NH₄C1 (400 ml) a zahustila pri zníženom tlaku pri 35 °C. Zvyšok sa zriedil s vodou (800 ml) a extrahoval s hexánom (3 x 600 ml). Spojené extrakty sa premyli s nasýteným vodným roztokom NaCl (700 ml) a sušili nad síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstránilo na rotačnej vákuovej odparke pri teplote kúpeľa 35 °C za vzniku zvyšku, ktorý sa miešal s hexánom (50 ml) pri 20 až 25 °C počas 0,5-hod. Výsledná suspenzia sa ochladila na 0 °C počas 2 hod. a prefiltrovala sa za vzniku zlúčeniny uvedenej v názve.

Príklad 111

Metodológia stanovenia

Pripravilo sa 184 xantínových derivátov, ktorých štruktúra je neznačená na obrázku 2. Pri niektorých týchto zlúčeninách sa určili hodnoty K; pre adenozín krýs a adenozín ľudí A] receptor a pre ľudský adenozín A_2a receptor s použitím nasledujúceho protokolu pre testovanie konštanty viazania. Vyrátal sa pomer A_2a/A,.

Materiály

Adenozín deamináza a HEPES sa získali od firmy Sigma (St. Louis, MO). Hamovo F-12 bunkové kultivačné médium a sérum teľacieho plodu sa získalo od firmy GIBCO Life Technologies (Gaithersburg, MD). Antibiotické G-418 Falcon 150-mM kultivačné doštičky a Costar 12-jamkové kultivačné doštičky sa získali od firmy Fisher (Pittsburgh, PA). [³H]CPX sa získal od firmy DuPont-New England Nuclear Research Products (Boston, MA).

Zmes antibiotík Penicilin/streptomycín sa získala od firmy Mediatech (Washington, DC). Zloženie

HEPES-pufrovaného Hankovho roztoku bolo: 130 mM NaCl, 5,0 mM Cl, 1,5 mM CaCl₂, 0,41 mM MgSO₄, 0,49 mM Na₂HPO₄, 5,6 mM dextróza a 5 mM HEPES (pH 7,4).

Príprava membrány

Krysí A, receptor: Membrány sa pripravili z cerebrálneho kortexu krýs izolovaného z čerstvo zabitých krýs. Tkanivá sa homogenizovali v pufri A (10 mM EDTA, 10 mM Na-HEPES, pH 7,4) doplnenom proteázovými inhibítormi (10 pg/ml benzamidín, 100 μΜ PMSF a 2 μg/ml aprotinínu, 2 pg/ml pepstatínu a 2 pg/ml leupeptínu), odstredili sa pri 20,000 x g počas 20 min. Pelety sa znova suspendovali a premyli dvakrát s pufrom HE (10 mM Na-HEPES, 1 mM EDTA, pH 7,4, plus proteázové inhibítory). Nakoniec sa pelety resuspendovali v pufri HE, doplnenom s 10 % (hmotn./obj.) sacharózy a proteázovými inhibítormi a zmrazili sa v alikvótach pri -80 °C. Koncentrácia proteínu sa merala s použitím BCA súpravy na stanovenie proteínov (Pierce).

Ľudský Ai receptor: cDNA ľudského Ai adenozínového receptora sa získala pomocou RT-PCR a subklonovala do pcDNA3.1 (Invitrogen). Stabilná transfekcia CHO-K1 buniek sa uskutočnila použitím LIPOFECTAMINE-PLUS (GIBCO-BRL) a kolónie sa vybrali v 1 mg/ml G418, preverili sa s použitím rádio ligandového stanovenia viazania. Pri membránových preparátoch, CHO-K1 bunky pestované ako monovrstvy v kompletnom médiu (F12+10 %FCS+1 mg/ml G418) sa premyli v PBS a zozbierali v pufri A doplnenom proteázovými inhibítormi. Bunky sa homogenizovali, odstredili a premyli dvakrát s HE podľa uvedeného opisu. Alikvóty výsledných peliet sa skladovali pri -80 °C.

Stanovenie rádioligandového viazania

Membrány (50 pg membránového proteínu pre krysy AlARs a 25 pgCHO-Kl membránového proteínu pre ľudský AlARs), rádioligandy a rôzne koncentrácie kompetitívnych ligandov sa inkubovali v trojnásobnom uskutočnení v 0,1 ml pufri HE plus 2 jednotky/ml adenozín deaminázy počas 2,5-hod. pri teplote 21 °C. Rádioligand [³H]DPCPX (112 Ci/mmol z NEN, finálna koncentrácia : lnM) sa použil pre kompetitívne stanovenie viazania na A[ARs. Nešpecifické viazanie sa meralo v prítomnosti 10 μΜ BG9719. Stanovenie viazania sa ukončilo filtráciou cez Whatman GF/C filter zo sklenených vláken s použitím bunkového harvesteru BRANDEL. Filtre sa trikrát premyli so 3 - 4 ml ľadom chladeného 10 mM Tris-HCl, pH 7,4 a 5 mM MgCl₂pri 4 °C. Filtračný papier sa previedol do vialky a pridalo sa 3 ml scintilačného kokteilu ScintiVerse II (Fisher). Rádioaktivita sa merala pomocou zariadenia Wallac β-counter.

Analýza dát viazania

Určenie Kí·’ Kompetitívne dáta viazania sa fitovali na model s jedným miestom viazania s použitím Prizm GraphPad. Cheng-Prusoffova rovnica Kj = IC_5O(1+[T]/K_D) sa použila pre výpočet K] hodnôt z IC₅₀ hodnôt, kde K_t je konštanta afinity pre kompetitívny ligand, [T] je koncentrácia voľného rádioligandu a K_D konštanta afinity pre rádioligand.

Percentá viazania: Pri jednomiestnom viazaní sa dáta prezentovali ako % celkového špecifického viazania pri 1 μΜ kompetitívnej zlúčeniny: % celkové = 100* (špecifické viazanie s 1 μΜ kompetitívnej zlúčeniny/celkové špecifické viazanie).

Výsledky

Všetky testované zlúčeniny mali K; hodnoty pre krysí Ai v rozmedzí od 0,6 do 433,8 nM, pre ľudský A] boli Kj hodnoty medzi 1,6 až 1 000 nM a pre ľudský A_2a boli K, hodnoty medzi 132 a 49 930. Všetky tieto zlúčeniny mali pomer A_2a/Ai vyšší než 10, väčšinou vyšší ako 20, mnohé ako 50 a niektoré vyšší ako 100. Aspoň jedna zlúčenina má pomer A_2a/A, vyšší ako 1 000.

Príklad 112

Alternatívna metodológia stanovenia.

Materiály

Pozri príklad 111.

Bunková kultúra

CHO bunky, stabilne exprimujúce rekombinantnou ľudskou AjAdoR (CHO: A,AdoR bunky) sa pripravili podľa opisu (Kollias-Barker et al., J. Pharma. Exp. Ther. 281(2), 761, 1997) a kultivované ako pri CHO: Wild buniek. CHO bunky sa kultivovali ako monovrstvy na plastových miskách vHamovom F-12 médiu doplnenom o 10 % sérum teľacieho plodu, 100 U penicilín G a 100 pg streptomycínu vo vlhčenej atmosfére 5 % CO₂/95 % vzduch pri 37 °C. Hustota [³H]CPX miest viazania v CHO bunkách bola 26 + 2 (n=4) fmol/mg proteínu. Bunky sa subkultivovali dvakrát týždenne po zozbieraní s 1 mM EDTA vHEPES-pufrovanom Hankovom roztoku bez Ca²⁺ a Mg²⁺ iónov. Na experiment sa použili tri rôzne klony CHO:

AiAdoR buniek a všetky výsledky boli potvrdené s bunkami z dvoch alebo troch klonov. Hustota AjAdoR pri týchto bunkách bola 4 000 - 8 000 fmol/mg proteínu, ako sa určilo [³H]CPX špecifickým viazaním.

Viazanie rádioligandu

CHO bunky, pestované na 150 mm kultivačných miskách, sa premyli s HEPES-pufrovaným Hankovým roztokom, potom sa odstránili s bunkovou škrabkou a homogenizovali sa v ľade chladenom 50 mM Tris-HC1, pH 7,4. Bunkové membrány sa centrifugovali do formy peliet z bunkového homogenizátu pri 48,000 x g počas 15 min. Membránové pelety sa premyli dvakrát opätovnou suspendáciou v čerstvom pufŕi a centrifugáciou. Finálne pelety sa opätovne suspendovali v malom množstve 50 mM Tris-HCl, pH 7,4 a skladovali sa ako 1 ml alikvóty pri -80 °C až do ich použitia pri stanovení viazania.

K určeniu hustoty AjAdoR v CHO bunkových membránach, 100 μΐ alikvót membrán (5 μg proteínu) sa inkubovalo počas 2 hod. pri 25 °C s 0,15 - 20 nM [³H]CPX a adenozín deaminázou (2 U/ml) v 100 μΐ 50 mM Tris-HCl, pH 7,4. Inkubácia sa ukončila nariedením so 4 ml ľadom chladeného 50 mM Tris-HCl pufra a membrány sa okamžite zozbierali na sklenom filtri (Schleicher and Schuell, Keene, NH) pomocou vákuovej filtrácie (Brandel, Gaithersburg, MD). Filtre sa potom trikrát rýchlo premyli ľadom chladeným pufrom z dôvodu odstránenia nenaviazaného rádioligandu. Filtračné disky, ktoré obsahovali zachytené membrány s naviazaným rádioligandom, sa umiestnili do 4 ml Scintiverse BD (Fisher) a rádioaktivita sa kvantifikovala pomocou kvapalného scintilačného počítača. Na určenie nešpecifického viazania [³H]CPX sa membrány inkubovali podľa uvedeného opisu a k inkubačnému pufru sa pridalo 10 μΜ CPT. Nešpecifické viazanie sa definovalo ako viazanie [³H]CPX v prítomnosti 10μΜ CPT. Špecifické viazanie rádioligandu k A]AdoR sa určilo odčítaním nešpecifického viazania od celkového viazania. Zistilo sa, že nešpecifické viazanie lineárne rastie so zvýšením [³H]CPX koncentrácie. Pri každej testovanej koncentrácii [³H]CPX sa robili tri merania.

Na určenie afinity antagonistov AjAdoR pre ľudský rekombinantný AjAdoR exprimovaný v CHO bunkách sa meralo viazanie 2 nM [³H]CPX v prítomnosti zvyšujúcich sa koncentrácií antagonistov. Alikvóty CHO bunkových membrán (100 μΐ, 5 pg proteínu, [³H]CPX, antagonista (0,1 nM - 100 μΜ) a adenozín deamináza (2 U/ml) sa inkubovali počas 3 hod. pri 25 °C v 200 μΐ 50 mM Tris-HCl pufra (pH 7,4). Stanovenie sa ukončilo podľa uvedeného opisu.

Parametre viazania (napr.: B_raax, K_D, IC₅₀, K; a Hillov koeficient) sa určili s použitím programu stanovenia viazania rádioligandu LIGAND 4,0 (Elsevier-Biosoft).

Ďalšie uskutočnenia

Je zrejmé, že aj keď je vynález opísaný pomocou tu uvedených detailných opisov, zámerom týchto príkladov je ilustrovať a v žiadnom prípade nie obmedzovať rozsah vynálezu, ktorý je definovaný rozsahom nasledujúcich nárokov. Ďalšie aspekty, výhody a modifikácie spadajú do rozsahu nasledujúcich nárokov.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. Substituované xantíny všeobecného vzorca (I) (Ď, kde R¹ a R² sú nezávisle zvolené zo skupiny pozostávajúcej z:

(a) vodíka;

(b) alkylu, alkenylu aspoň s 3 atómami uhlíka, alebo alkinylu aspoň s 3 atómami uhlíka; kde alkyl, alkenyl alebo alkinyl je buď nesubstituovaný, alebo fúnkcionalizovaný s jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z hydroxy, alkoxy, amino, alkylamino, dialkylamino, heterocyklyl, acylamino, alkylsulfonylamino a heterocyklylkarbonylamino; a (c) arylu alebo substituovaného arylu;

R³ je vybraná zo skupiny, ktorá pozostáva z:

kde R³ je buď nesubstituovaná, alebo funkcionalizovaná s jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z hydroxy, R⁵- a R^s-alkenylu;

kde R³ je buď nesubstituovaná, alebo funkcionalizovaná s jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z hydroxy, R⁵-alkylu, -R⁵, R^s-alkenylu, alkoxykarbonylu, alkoxykarbonylalkylu, alkoxykarbonylalkenylu, hydroxyalkylu, aldehydo, alkoxyalkylu, R⁵-alkoxy, fosfátu, R⁵-alkylkarbamoylu a R^s-alkyl(alkyl)karbamoylu;

kde R³ je buď nesubstituovaná, alebo funkcionalizovaná s jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z R⁵-alkylu, -R⁵, R⁵-alkenylu, R⁵-alkoxy, alkoxykarbonylu, alkoxykarbonylalkenylu, hydroxyalkylu, aldehydo a hydroxylu; a kde R³ je buď nesubstituovaná, alebo funkcionalizovaná s jedným alebo viacerými substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z hydroxy, R⁵-alkoxy, R^s-alkenylu, alkoxykarbonylu a karbonylu;

R⁴ je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z vodíka, C|.₄-alkylu, Ci_₄-alkyl-CO₂H a fenylu, kde skupiny C].₄-alkyl, C₁.₄-alkyl-CO₂H a fenyl sú buď nesubstituované, alebo funkcionalizované s jedným až tromi substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z halogénu, -OH, -OMe, -NH₂, -NO₂, benzylu a benzylu funkcionalizovaného s jedným až tromi substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z halogénu, -OH, -OMe, -NH₂ a NO₂;

R⁵ je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -CH2COOH, -C(CF3)2OH, -CONHNHSO2CF3, -CONHOR⁴, -CONHSO2R⁴, -CONHSO2NHR⁴, -C(OH)R⁴PO3H₂, -NHCOCF₃, -NHCONHSO₂R⁴, -NHPO3H2, NHSO2R⁴, -NHSO2NHCOR⁴, -OPO3H2, -OSO3H, -PO(OH)R⁴, -po3h₂, -SO₃H, -SO₂NHR⁴, -SO3NHCOR⁴, -SOjNHCO45

NHCO₂R⁴ a z nasledujúcich:

Zje vybrané zo skupiny pozostávajúcej z jednoduchej väzby, -0-, -(CH₂)₁.₃-, -O(CH₂)i_₂-, -CH₂OCH₂-, -(CH₂)₁.₂O-, -CH=CHCH₂-, -CH=CH- a -CH₂CH=CH-; a

2. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčenina je vo forme vybranej zo skupiny pozostávajúcej z achirálnej zlúčeniny, racemátu, opticky aktívnej zlúčeniny, čistého diastereoméru, zmesi diastereomérov a farmakologicky prijateľnej adičnej soli.

3. Zlúčenina podľa nároku 1, kde R¹ a R² sú každý alkylová skupina.

4. Zlúčenina podľa nároku 1, kde R¹ a R² sú každý n-propyl.

5. Zlúčenina podľa nároku 1, kde R¹ je w-propyl a R³ je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z aralkylu substituovaného s -OH, -OMe alebo -halogénom; metylu; a 3-hydroxypropylu.

6. Zlúčenina podľa nároku 1, kde Z je jednoduchá väzba.

7. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je 5-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)-bicyklo [3.2.1] oktán-1 -karboxylová kyselina.

8. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je 8-(4-hydroxy-bicyklo[3.2.1]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión.

9. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je 5-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[3.2.l]oktán-2-karboxylová kyselina.

10. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je 8-(4-hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión.

11. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylová kyselina.

12. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-12/-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbaldehyd.

13. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je metylester 4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej kyseliny.

14. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je metylester 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-akrylovej kyseliny.

15. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je metylester 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purm-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-1 -yl]-propiónovej kyseliny.

16. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-1 -yl]-akrylovej kyseliny.

17. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/Z-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l -yl]-propiónová kyselina.

18. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je 4-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-17/-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-butánová kyselina.

19. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je mono[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/Y-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-ester fosforečnej kyseliny.

20. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je {[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purm-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbonyl]-metylamino}-octová kyselina.

21. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je {[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktán-1 -karbonyl]-amino} -octová kyselina.

22. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je 3-(4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yloxy]-propiónová kyselina.

23. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je metylester 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yloxy]-propiónovej kyseliny.

24. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je íerc-butylester 3-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purm-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yloxy]-propiónovej kyseliny.

25. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je 3-(4-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-1 -yl]-2-metyl-propiónová kyselina.

26. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je 6-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/7-purin-8-yl)kubán-3-karboxylová kyselina.

27. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je 8-(6-hydroxymetylkuban-3-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión.

28. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je 3-(6-(2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-kuban-3-yl]-akrylová kyselina.

29. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je [5-{2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[3.2.2]-non-1 -yloxyjoctová kyselina.

30. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je 8-(5-hydroxy-bicyklo[3.2.2]non-l-yl)-l,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión.

31. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je 5-{2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l//-purin-8-yl)-bicyklo[3.2.2]-nonán-l-karboxylová kyselina.

32. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je 8-(4-hydroxy-7-metyl-2,6-dioxa-bicyklo[3.3.1]non-l-yl) -1,3-dipropyl-3,7-dihydropurin-2,6-dión.

33. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčeninou je [l-{2,6-dioxo-l,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/Y-purin-8-yl)-7-metyl-2,6-dioxa-bicyklo[3.3.1]-non-4-yloxy]-octová kyselina.

34. Lieková kompozícia, vyznačujúca sa tým, že obsahuje zlúčeninu podľa nároku 1 spoločne s vhodným excipientom.

35. Použitie účinného adenozín antagonizujúceho množstva zlúčeniny podľa nároku 1 na prípravu farmaceutickej kompozície na liečenie stavov, ktoré sa vyznačujú zvýšenou koncentráciou adenozínu a/alebo zvýšenou senzitivitou na adenozín.

36. Použitie podľa nároku 35, kde stavy sú vybrané zo skupiny pozostávajúcej z porúch srdca a obehového systému, degeneratívnych porúch centrálneho nervového systému, respiračných porúch, ochorení s indikovaným diuretickým liečením, Parkinsonovej choroby, depresie, traumatického poškodenia mozgu, poinfarktového neurologického deficitu, respiračnej depresie, neonatálnej mozgovej traumy, dyslexie, hyperaktivity, cystickej fibrózy, cirhotického ascites, neonatálneho apnoe, zlyhania obličiek, diabetu, astmy a edématóznych stavov.

37. Použitie podľa nároku 35, kde stavom je kongestívne zlyhanie srdca alebo renálna disfunkcia.

38. Spôsob prípravy 8-substituovaných xantínov, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa kroky:

a) získanie N7, C8-dihydroxantínu;

b) chránenie N7 polohy xantínu;

c) deprotonáciu C8 polohy silnou bázou, pričom sa generuje anión;

d) zachytenie aniónu s karboxylovou, karbonylovou, aldehydovou alebo ketónovou zlúčeninou a

e) deprotekciu chránenej N7 polohy na získanie 8-substituovaného xantínu.