RU2729463C2 - Меченые химерные эффекторные молекулы и их рецепторы - Google Patents
Меченые химерные эффекторные молекулы и их рецепторы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2729463C2 RU2729463C2 RU2016129045A RU2016129045A RU2729463C2 RU 2729463 C2 RU2729463 C2 RU 2729463C2 RU 2016129045 A RU2016129045 A RU 2016129045A RU 2016129045 A RU2016129045 A RU 2016129045A RU 2729463 C2 RU2729463 C2 RU 2729463C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- tag
- gly
- domain
- strep
- Prior art date
Links
- 239000012636 effector Substances 0.000 title claims abstract description 110
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 272
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 220
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims abstract description 124
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims abstract description 124
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 77
- 108010011170 Ala-Trp-Arg-His-Pro-Gln-Phe-Gly-Gly Proteins 0.000 claims abstract description 65
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 61
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims abstract description 56
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 43
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000004492 positive regulation of T cell proliferation Effects 0.000 claims abstract 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 291
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 claims description 95
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 claims description 95
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 claims description 73
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 claims description 73
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 56
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 51
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 50
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 claims description 47
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 claims description 47
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 44
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 44
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 44
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 44
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 37
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 37
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 claims description 35
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 claims description 35
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 30
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 29
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 26
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 25
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 claims description 24
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 23
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 claims description 20
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 claims description 20
- HKZAAJSTFUZYTO-LURJTMIESA-N (2s)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]acetyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HKZAAJSTFUZYTO-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 19
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 18
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 15
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 claims description 14
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 claims description 13
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 claims description 13
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 13
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 13
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims description 13
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims description 13
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 claims description 12
- -1 MAGE-A Proteins 0.000 claims description 12
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 12
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 claims description 11
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 9
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 claims description 8
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 claims description 8
- 108010028230 Trp-Ser- His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys Proteins 0.000 claims description 7
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 6
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 claims description 6
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 101001109501 Homo sapiens NKG2-D type II integral membrane protein Proteins 0.000 claims description 5
- 101001103036 Homo sapiens Nuclear receptor ROR-alpha Proteins 0.000 claims description 5
- 102100022680 NKG2-D type II integral membrane protein Human genes 0.000 claims description 5
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 claims description 4
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 claims description 4
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims description 4
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 claims description 4
- 101001103033 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR2 Proteins 0.000 claims description 4
- 108010061593 Member 14 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 claims description 4
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100028680 Protein patched homolog 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100028785 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100039616 Tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR2 Human genes 0.000 claims description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 claims description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 4
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 claims description 3
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000679851 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 claims description 3
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 claims description 3
- 102000003735 Mesothelin Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000015 Mesothelin Proteins 0.000 claims description 3
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 claims description 3
- 108010065129 Patched-1 Receptor Proteins 0.000 claims description 3
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100029215 Signaling lymphocytic activation molecule Human genes 0.000 claims description 3
- 102100022748 Wilms tumor protein Human genes 0.000 claims description 3
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 claims description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 2
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 claims description 2
- 102100027205 B-cell antigen receptor complex-associated protein alpha chain Human genes 0.000 claims description 2
- 102100027203 B-cell antigen receptor complex-associated protein beta chain Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024217 CAMPATH-1 antigen Human genes 0.000 claims description 2
- 102100035893 CD151 antigen Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038078 CD276 antigen Human genes 0.000 claims description 2
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 108010058905 CD44v6 antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 108010065524 CD52 Antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 102100027221 CD81 antigen Human genes 0.000 claims description 2
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 claims description 2
- 102000000584 Calmodulin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010041952 Calmodulin Proteins 0.000 claims description 2
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025473 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024965 Caspase recruitment domain-containing protein 11 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010055196 EphA2 Receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 102100030340 Ephrin type-A receptor 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100020948 Growth hormone receptor Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033365 Growth hormone-releasing hormone receptor Human genes 0.000 claims description 2
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 claims description 2
- 102100029360 Hematopoietic cell signal transducer Human genes 0.000 claims description 2
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 claims description 2
- 101000914489 Homo sapiens B-cell antigen receptor complex-associated protein alpha chain Proteins 0.000 claims description 2
- 101000914491 Homo sapiens B-cell antigen receptor complex-associated protein beta chain Proteins 0.000 claims description 2
- 101000946874 Homo sapiens CD151 antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 101000884279 Homo sapiens CD276 antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 101000914479 Homo sapiens CD81 antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000914324 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000914326 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000914321 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 7 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000761179 Homo sapiens Caspase recruitment domain-containing protein 11 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001075287 Homo sapiens Growth hormone receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 101000997535 Homo sapiens Growth hormone-releasing hormone receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 101000990188 Homo sapiens Hematopoietic cell signal transducer Proteins 0.000 claims description 2
- 101001034652 Homo sapiens Insulin-like growth factor 1 receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 101000998120 Homo sapiens Interleukin-3 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 2
- 101000599048 Homo sapiens Interleukin-6 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 2
- 101001043594 Homo sapiens Low-density lipoprotein receptor-related protein 5 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001137987 Homo sapiens Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000623901 Homo sapiens Mucin-16 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001051490 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule L1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001024605 Homo sapiens Next to BRCA1 gene 1 protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101000586302 Homo sapiens Oncostatin-M-specific receptor subunit beta Proteins 0.000 claims description 2
- 101000617725 Homo sapiens Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000946860 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Proteins 0.000 claims description 2
- 101000669402 Homo sapiens Toll-like receptor 7 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000801234 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000955999 Homo sapiens V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100039688 Insulin-like growth factor 1 receptor Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033493 Interleukin-3 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037792 Interleukin-6 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037795 Interleukin-6 receptor subunit beta Human genes 0.000 claims description 2
- 101710152369 Interleukin-6 receptor subunit beta Proteins 0.000 claims description 2
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021926 Low-density lipoprotein receptor-related protein 5 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023123 Mucin-16 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024964 Neural cell adhesion molecule L1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030098 Oncostatin-M-specific receptor subunit beta Human genes 0.000 claims description 2
- 108010071083 Patched-2 Receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 claims description 2
- 102100022019 Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 101150097792 Robo1 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 108010074687 Signaling Lymphocytic Activation Molecule Family Member 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100035794 T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033456 TGF-beta receptor type-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036407 Thioredoxin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010060818 Toll-Like Receptor 9 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100039390 Toll-like receptor 7 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033117 Toll-like receptor 9 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010011702 Transforming Growth Factor-beta Type I Receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 108010082684 Transforming Growth Factor-beta Type II Receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 108010023649 Tripartite Motif Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102100033728 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033732 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Human genes 0.000 claims description 2
- 101710187743 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Proteins 0.000 claims description 2
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 claims description 2
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 claims description 2
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 claims description 2
- 102100038929 V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010053099 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 claims description 2
- 108010087914 epidermal growth factor receptor VIII Proteins 0.000 claims description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 2
- 229920000370 gamma-poly(glutamate) polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 108010018381 streptavidin-binding peptide Proteins 0.000 claims description 2
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 claims description 2
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 claims description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 claims description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 claims description 2
- 101000621309 Homo sapiens Wilms tumor protein Proteins 0.000 claims 2
- 102100026882 Alpha-synuclein Human genes 0.000 claims 1
- 101000834898 Homo sapiens Alpha-synuclein Proteins 0.000 claims 1
- 101001103039 Homo sapiens Inactive tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR1 Proteins 0.000 claims 1
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims 1
- 101000652359 Homo sapiens Spermatogenesis-associated protein 2 Proteins 0.000 claims 1
- 101000851018 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 1 Proteins 0.000 claims 1
- 102100039615 Inactive tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR1 Human genes 0.000 claims 1
- 101100268066 Mus musculus Zap70 gene Proteins 0.000 claims 1
- 102100036894 Protein patched homolog 2 Human genes 0.000 claims 1
- 102100033455 TGF-beta receptor type-2 Human genes 0.000 claims 1
- 102100033733 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Human genes 0.000 claims 1
- 101710187830 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Proteins 0.000 claims 1
- 108010053100 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-3 Proteins 0.000 claims 1
- 102100033178 Vascular endothelial growth factor receptor 1 Human genes 0.000 claims 1
- 102100033179 Vascular endothelial growth factor receptor 3 Human genes 0.000 claims 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 16
- 239000008187 granular material Substances 0.000 abstract description 6
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 abstract description 2
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 abstract description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 68
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 68
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 62
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 60
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 59
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 44
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 42
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 40
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 40
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 40
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 32
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 31
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 31
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 31
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 31
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 30
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 27
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 26
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 26
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 24
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 22
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 21
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 21
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 20
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 20
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 20
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 18
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 18
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 18
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 16
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 14
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 14
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 13
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 13
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 13
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 230000006870 function Effects 0.000 description 12
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 12
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 12
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 12
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 12
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 11
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 11
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 10
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 9
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 9
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 9
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 9
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 9
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 8
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 8
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 8
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 8
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 8
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 7
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 7
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 7
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 6
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 6
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 6
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 6
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 6
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 6
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 6
- 238000007837 multiplex assay Methods 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 5
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 5
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 5
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 5
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 5
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 5
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 5
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 5
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 5
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 5
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 5
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 4
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 4
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 4
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 4
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 4
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 4
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 4
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 4
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 4
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 4
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 125000000151 cysteine group Chemical class N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 4
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 4
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 4
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 4
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 description 4
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 4
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 102220058139 rs372082751 Human genes 0.000 description 4
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 3
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 3
- 102100025218 B-cell differentiation antigen CD72 Human genes 0.000 description 3
- 108091007741 Chimeric antigen receptor T cells Proteins 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 241000713800 Feline immunodeficiency virus Species 0.000 description 3
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 3
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 3
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 3
- 101000934359 Homo sapiens B-cell differentiation antigen CD72 Proteins 0.000 description 3
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 description 3
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 3
- 208000010159 IgA glomerulonephritis Diseases 0.000 description 3
- 206010021263 IgA nephropathy Diseases 0.000 description 3
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 3
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 3
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 3
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 3
- 101150069255 KLRC1 gene Proteins 0.000 description 3
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 3
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 3
- 101100404845 Macaca mulatta NKG2A gene Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 208000005927 Myosarcoma Diseases 0.000 description 3
- 102100022682 NKG2-A/NKG2-B type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 3
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 3
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 3
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 3
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 3
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 102000013814 Wnt Human genes 0.000 description 3
- 108050003627 Wnt Proteins 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 3
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 201000002077 muscle cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 3
- 201000006292 polyarteritis nodosa Diseases 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 201000003076 Angiosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 2
- 208000031212 Autoimmune polyendocrinopathy Diseases 0.000 description 2
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000713704 Bovine immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 108010040163 CREB-Binding Protein Proteins 0.000 description 2
- 102100021975 CREB-binding protein Human genes 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 208000005243 Chondrosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 206010014967 Ependymoma Diseases 0.000 description 2
- 241000713730 Equine infectious anemia virus Species 0.000 description 2
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 2
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 2
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 2
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 2
- 241001663880 Gammaretrovirus Species 0.000 description 2
- 208000007465 Giant cell arteritis Diseases 0.000 description 2
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 2
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 2
- 208000001258 Hemangiosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 208000035186 Hemolytic Autoimmune Anemia Diseases 0.000 description 2
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 2
- 102000003745 Hepatocyte Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 2
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 101000851181 Homo sapiens Epidermal growth factor receptor Proteins 0.000 description 2
- 101100127356 Homo sapiens KLRD1 gene Proteins 0.000 description 2
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 2
- 101001030069 Homo sapiens Major vault protein Proteins 0.000 description 2
- 101000971513 Homo sapiens Natural killer cells antigen CD94 Proteins 0.000 description 2
- 101001043564 Homo sapiens Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 2
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 2
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 2
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 2
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 2
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282838 Lama Species 0.000 description 2
- 208000032514 Leukocytoclastic vasculitis Diseases 0.000 description 2
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 2
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 2
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 2
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 2
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 2
- 241000714177 Murine leukemia virus Species 0.000 description 2
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 201000002481 Myositis Diseases 0.000 description 2
- 102100021462 Natural killer cells antigen CD94 Human genes 0.000 description 2
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 2
- 208000005890 Neuroma Diseases 0.000 description 2
- 241000713112 Orthobunyavirus Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 2
- 208000007452 Plasmacytoma Diseases 0.000 description 2
- 229920000037 Polyproline Polymers 0.000 description 2
- 102100021923 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 2
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 2
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 description 2
- 206010038802 Reticuloendothelial system stimulated Diseases 0.000 description 2
- 206010042033 Stevens-Johnson syndrome Diseases 0.000 description 2
- 102000036693 Thrombopoietin Human genes 0.000 description 2
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 2
- 208000011341 adult acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 2
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 2
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 2
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 201000000448 autoimmune hemolytic anemia Diseases 0.000 description 2
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000008236 biological pathway Effects 0.000 description 2
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 2
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 201000003278 cryoglobulinemia Diseases 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 208000030172 endocrine system disease Diseases 0.000 description 2
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 2
- 229940084937 glyset Drugs 0.000 description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 102000045108 human EGFR Human genes 0.000 description 2
- 208000003532 hypothyroidism Diseases 0.000 description 2
- 239000012216 imaging agent Substances 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 201000010260 leiomyoma Diseases 0.000 description 2
- 108020001756 ligand binding domains Proteins 0.000 description 2
- 206010024627 liposarcoma Diseases 0.000 description 2
- 208000012804 lymphangiosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 239000006148 magnetic separator Substances 0.000 description 2
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 2
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 208000001611 myxosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 201000004071 non-specific interstitial pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 2
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 2
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 108010026466 polyproline Proteins 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 102000034285 signal transducing proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091006024 signal transducing proteins Proteins 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 206010043207 temporal arteritis Diseases 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 2
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 208000035408 type 1 diabetes mellitus 1 Diseases 0.000 description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 2
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxy-15-(4-hydroxy-18-methoxycarbonyl-5,18-seco-ibogamin-18-yl)-16-methoxy-1-methyl-6,7-didehydro-aspidospermidine-3-carboxylic acid methyl ester Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100033051 40S ribosomal protein S19 Human genes 0.000 description 1
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VDABVNMGKGUPEY-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein succinimidyl ester Chemical compound C=1C(O)=CC=C2C=1OC1=CC(O)=CC=C1C2(C1=C2)OC(=O)C1=CC=C2C(=O)ON1C(=O)CCC1=O VDABVNMGKGUPEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XGWFJBFNAQHLEF-UHFFFAOYSA-N 9-anthroic acid Chemical compound C1=CC=C2C(C(=O)O)=C(C=CC=C3)C3=CC2=C1 XGWFJBFNAQHLEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010400 APUDoma Diseases 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000026872 Addison Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003200 Adenoma Diseases 0.000 description 1
- 206010001233 Adenoma benign Diseases 0.000 description 1
- 206010027654 Allergic conditions Diseases 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 208000005034 Angiolymphoid Hyperplasia with Eosinophilia Diseases 0.000 description 1
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 1
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 108010014223 Armadillo Domain Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000016904 Armadillo Domain Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010031480 Artificial Receptors Proteins 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010064539 Autoimmune myocarditis Diseases 0.000 description 1
- 206010055128 Autoimmune neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000032568 B-cell prolymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010003908 B-cell small lymphocytic lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 206010004146 Basal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000009137 Behcet syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010061692 Benign muscle neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100027314 Beta-2-microglobulin Human genes 0.000 description 1
- 208000003609 Bile Duct Adenoma Diseases 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- 208000033932 Blackfan-Diamond anemia Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000033386 Buerger disease Diseases 0.000 description 1
- 208000023611 Burkitt leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 108090000342 C-Type Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000003930 C-Type Lectins Human genes 0.000 description 1
- 102000002086 C-type lectin-like Human genes 0.000 description 1
- 108050009406 C-type lectin-like Proteins 0.000 description 1
- 102100024210 CD166 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100036008 CD48 antigen Human genes 0.000 description 1
- 201000002829 CREST Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 101001039256 Caenorhabditis elegans Low-density lipoprotein receptor-related protein Proteins 0.000 description 1
- 101100364669 Caenorhabditis elegans lin-18 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100476210 Caenorhabditis elegans rnt-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010007270 Carcinoid syndrome Diseases 0.000 description 1
- 201000000274 Carcinosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010067225 Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 1
- 102000016289 Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 description 1
- 206010007953 Central nervous system lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 206010008263 Cervical dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 206010008642 Cholesteatoma Diseases 0.000 description 1
- 201000005262 Chondroma Diseases 0.000 description 1
- 201000009047 Chordoma Diseases 0.000 description 1
- 206010008748 Chorea Diseases 0.000 description 1
- 241001342895 Chorus Species 0.000 description 1
- 208000006344 Churg-Strauss Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 1
- 241000193155 Clostridium botulinum Species 0.000 description 1
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 description 1
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108091033380 Coding strand Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 206010053138 Congenital aplastic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000009798 Craniopharyngioma Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 201000005171 Cystadenoma Diseases 0.000 description 1
- 241000289632 Dasypodidae Species 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 108700022150 Designed Ankyrin Repeat Proteins Proteins 0.000 description 1
- 201000004449 Diamond-Blackfan anemia Diseases 0.000 description 1
- 206010051392 Diapedesis Diseases 0.000 description 1
- 108010049959 Discoidins Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 102000012545 EGF-like domains Human genes 0.000 description 1
- 108050002150 EGF-like domains Proteins 0.000 description 1
- 208000003468 Ehrlich Tumor Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000018428 Eosinophilic granulomatosis with polyangiitis Diseases 0.000 description 1
- 108091008815 Eph receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000056118 Ephrin receptor family Human genes 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 101000867232 Escherichia coli Heat-stable enterotoxin II Proteins 0.000 description 1
- 208000005163 Extra-Adrenal Paraganglioma Diseases 0.000 description 1
- 206010016207 Familial Mediterranean fever Diseases 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000714165 Feline leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241000714174 Feline sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000381 Fibroblast growth factor 4 Proteins 0.000 description 1
- 102100028072 Fibroblast growth factor 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 206010053717 Fibrous histiocytoma Diseases 0.000 description 1
- 102100035233 Furin Human genes 0.000 description 1
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 208000007569 Giant Cell Tumors Diseases 0.000 description 1
- 241001416183 Ginglymostomatidae Species 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 201000005618 Glomus Tumor Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 244000060234 Gmelina philippensis Species 0.000 description 1
- 208000024869 Goodpasture syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010072579 Granulomatosis with polyangiitis Diseases 0.000 description 1
- 208000005234 Granulosa Cell Tumor Diseases 0.000 description 1
- 208000003807 Graves Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035895 Guillain-Barré syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000002927 Hamartoma Diseases 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 208000002125 Hemangioendothelioma Diseases 0.000 description 1
- 208000006050 Hemangiopericytoma Diseases 0.000 description 1
- 201000004331 Henoch-Schoenlein purpura Diseases 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 1
- 208000002291 Histiocytic Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 101000694288 Homo sapiens 40S ribosomal protein SA Proteins 0.000 description 1
- 101100273713 Homo sapiens CD2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000716130 Homo sapiens CD48 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 1
- 101000998953 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001008255 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1D-8 Proteins 0.000 description 1
- 101001047628 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2-29 Proteins 0.000 description 1
- 101001008321 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2D-26 Proteins 0.000 description 1
- 101001047619 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3-20 Proteins 0.000 description 1
- 101001008263 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3D-15 Proteins 0.000 description 1
- 101001076418 Homo sapiens Interleukin-1 receptor type 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001043809 Homo sapiens Interleukin-7 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101001047640 Homo sapiens Linker for activation of T-cells family member 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000917826 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Proteins 0.000 description 1
- 101000917824 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101001063392 Homo sapiens Lymphocyte function-associated antigen 3 Proteins 0.000 description 1
- 101001109508 Homo sapiens NKG2-A/NKG2-B type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 101000695187 Homo sapiens Protein patched homolog 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000702132 Homo sapiens Protein spinster homolog 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000738769 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase alpha Proteins 0.000 description 1
- 101001059454 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase MARK2 Proteins 0.000 description 1
- 101000934346 Homo sapiens T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 description 1
- 238000012450 HuMAb Mouse Methods 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000235789 Hyperoartia Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010021067 Hypopituitarism Diseases 0.000 description 1
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 1
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 102100036887 Immunoglobulin heavy variable 1-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100022964 Immunoglobulin kappa variable 3-20 Human genes 0.000 description 1
- 102000016844 Immunoglobulin-like domains Human genes 0.000 description 1
- 108050006430 Immunoglobulin-like domains Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 102100026016 Interleukin-1 receptor type 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100021593 Interleukin-7 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037396 Intraductal Noninfiltrating Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003456 Juvenile Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 206010059176 Juvenile idiopathic arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000011200 Kawasaki disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 108091008555 LTK receptors Proteins 0.000 description 1
- 101150028321 Lck gene Proteins 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 208000018142 Leiomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 108010006444 Leucine-Rich Repeat Proteins Proteins 0.000 description 1
- 201000004462 Leydig Cell Tumor Diseases 0.000 description 1
- 102100024032 Linker for activation of T-cells family member 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000019298 Lipocalin Human genes 0.000 description 1
- 108050006654 Lipocalin Proteins 0.000 description 1
- 206010024612 Lipoma Diseases 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 206010025219 Lymphangioma Diseases 0.000 description 1
- 208000004138 Lymphangiomyoma Diseases 0.000 description 1
- 102100030984 Lymphocyte function-associated antigen 3 Human genes 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 208000008095 Malignant Carcinoid Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000035771 Malignant Sertoli-Leydig cell tumor of the ovary Diseases 0.000 description 1
- 102100027754 Mast/stem cell growth factor receptor Kit Human genes 0.000 description 1
- 208000000172 Medulloblastoma Diseases 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 208000002030 Merkel cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010153 Mesonephroma Diseases 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 206010049567 Miller Fisher syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 208000034486 Multi-organ failure Diseases 0.000 description 1
- 208000010718 Multiple Organ Failure Diseases 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101100437777 Mus musculus Bmpr1a gene Proteins 0.000 description 1
- 101100364671 Mus musculus Ryk gene Proteins 0.000 description 1
- 101000763311 Mus musculus Thrombomodulin Proteins 0.000 description 1
- 206010028424 Myasthenic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000003926 Myelitis Diseases 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 201000004458 Myoma Diseases 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010077854 Natural Killer Cell Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000010648 Natural Killer Cell Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100038082 Natural killer cell receptor 2B4 Human genes 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 206010029266 Neuroendocrine carcinoma of the skin Diseases 0.000 description 1
- 201000004404 Neurofibroma Diseases 0.000 description 1
- 208000009905 Neurofibromatoses Diseases 0.000 description 1
- 102000014736 Notch Human genes 0.000 description 1
- 108010070047 Notch Receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000005913 Notch signaling pathway Effects 0.000 description 1
- 102000001759 Notch1 Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010029755 Notch1 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000016978 Orphan receptors Human genes 0.000 description 1
- 108070000031 Orphan receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 240000007019 Oxalis corniculata Species 0.000 description 1
- 206010033661 Pancytopenia Diseases 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 206010061332 Paraganglion neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000007497 Patched-2 Receptor Human genes 0.000 description 1
- 206010034277 Pemphigoid Diseases 0.000 description 1
- 201000011152 Pemphigus Diseases 0.000 description 1
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 1
- 208000031845 Pernicious anaemia Diseases 0.000 description 1
- PSKRILMFHNIUAO-JYJNAYRXSA-N Phe-Glu-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N PSKRILMFHNIUAO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 208000007641 Pinealoma Diseases 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010035742 Pneumonitis Diseases 0.000 description 1
- 206010065159 Polychondritis Diseases 0.000 description 1
- 208000007048 Polymyalgia Rheumatica Diseases 0.000 description 1
- 206010036105 Polyneuropathy Diseases 0.000 description 1
- 206010036297 Postpartum hypopituitarism Diseases 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010065857 Primary Effusion Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 206010036697 Primary hypothyroidism Diseases 0.000 description 1
- 206010036711 Primary mediastinal large B-cell lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035416 Prolymphocytic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 206010037075 Protozoal infections Diseases 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 208000034541 Rare lymphatic malformation Diseases 0.000 description 1
- 208000003782 Raynaud disease Diseases 0.000 description 1
- 208000012322 Raynaud phenomenon Diseases 0.000 description 1
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 108091005682 Receptor kinases Proteins 0.000 description 1
- 208000033464 Reiter syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000712909 Reticuloendotheliosis virus Species 0.000 description 1
- 241000712907 Retroviridae Species 0.000 description 1
- 208000005678 Rhabdomyoma Diseases 0.000 description 1
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 1
- 241000606701 Rickettsia Species 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 101100173585 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) fft1 gene Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100028904 Serine/threonine-protein kinase MARK2 Human genes 0.000 description 1
- 208000003274 Sertoli cell tumor Diseases 0.000 description 1
- 208000000097 Sertoli-Leydig cell tumor Diseases 0.000 description 1
- 201000009895 Sheehan syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101000677856 Stenotrophomonas maltophilia (strain K279a) Actin-binding protein Smlt3054 Proteins 0.000 description 1
- 231100000168 Stevens-Johnson syndrome Toxicity 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 208000027522 Sydenham chorea Diseases 0.000 description 1
- 229940100514 Syk tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 description 1
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- 208000001106 Takayasu Arteritis Diseases 0.000 description 1
- BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N Temozolomide Chemical compound O=C1N(C)N=NC2=C(C(N)=O)N=CN21 BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010043276 Teratoma Diseases 0.000 description 1
- 206010043540 Thromboangiitis obliterans Diseases 0.000 description 1
- 206010043781 Thyroiditis chronic Diseases 0.000 description 1
- 206010044223 Toxic epidermal necrolysis Diseases 0.000 description 1
- 231100000087 Toxic epidermal necrolysis Toxicity 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 102000004060 Transforming Growth Factor-beta Type II Receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 102100037236 Tyrosine-protein kinase receptor UFO Human genes 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 206010046798 Uterine leiomyoma Diseases 0.000 description 1
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000010094 Visna Diseases 0.000 description 1
- 208000006110 Wiskott-Aldrich syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000004156 Wnt signaling pathway Effects 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 241000021375 Xenogenes Species 0.000 description 1
- 101001038499 Yarrowia lipolytica (strain CLIB 122 / E 150) Lysine acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 208000010029 ameloblastoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 201000009431 angiokeratoma Diseases 0.000 description 1
- 208000000252 angiomatosis Diseases 0.000 description 1
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001745 anti-biotin effect Effects 0.000 description 1
- 230000003432 anti-folate effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 229940127074 antifolate Drugs 0.000 description 1
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000003080 antimitotic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 229940121357 antivirals Drugs 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000006470 autoimmune attack Effects 0.000 description 1
- 201000011385 autoimmune polyendocrine syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 208000003373 basosquamous carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000001119 benign fibrous histiocytoma Diseases 0.000 description 1
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000003362 bronchogenic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000000594 bullous pemphigoid Diseases 0.000 description 1
- 208000005761 carcinoid heart disease Diseases 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000004640 cellular pathway Effects 0.000 description 1
- 239000004568 cement Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000009920 chelation Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 201000005217 chondroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 208000019069 chronic childhood arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000025302 chronic primary adrenal insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000009060 clear cell adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 108091008034 costimulatory receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013211 curve analysis Methods 0.000 description 1
- 201000010305 cutaneous fibrous histiocytoma Diseases 0.000 description 1
- 208000004921 cutaneous lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 208000017763 cutaneous neuroendocrine carcinoma Diseases 0.000 description 1
- HAORKNGNJCEJBX-UHFFFAOYSA-N cyprodinil Chemical compound N=1C(C)=CC(C2CC2)=NC=1NC1=CC=CC=C1 HAORKNGNJCEJBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002445 cystadenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000003568 cytokine secretion assay Methods 0.000 description 1
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000001981 dermatomyositis Diseases 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 208000028715 ductal breast carcinoma in situ Diseases 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 208000010932 epithelial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 1
- 210000002304 esc Anatomy 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 201000006569 extramedullary plasmacytoma Diseases 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 201000008825 fibrosarcoma of bone Diseases 0.000 description 1
- 108700014844 flt3 ligand Proteins 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 239000004052 folic acid antagonist Substances 0.000 description 1
- 201000003444 follicular lymphoma Diseases 0.000 description 1
- ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N furosemide Chemical compound C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC(C(O)=O)=C1NCC1=CC=CO1 ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000008361 ganglioneuroma Diseases 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000005626 glomangioma Diseases 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 201000006604 granular cell tumor Diseases 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 201000011066 hemangioma Diseases 0.000 description 1
- 208000007475 hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 210000003701 histiocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000009379 histiocytoid hemangioma Diseases 0.000 description 1
- 201000000284 histiocytoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 102000057310 human KLRC1 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000004678 hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000002989 hypothyroidism Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 238000003318 immunodepletion Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 208000025095 immunoproliferative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 1
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 206010022498 insulinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 1
- 108091008582 intracellular receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000027411 intracellular receptors Human genes 0.000 description 1
- 208000026876 intravascular large B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 201000002215 juvenile rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 210000004901 leucine-rich repeat Anatomy 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000023404 leukocyte cell-cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 201000007919 lymphoplasmacytic lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 201000006812 malignant histiocytosis Diseases 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 201000007924 marginal zone B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000021937 marginal zone lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010027191 meningioma Diseases 0.000 description 1
- 208000004197 mesenchymoma Diseases 0.000 description 1
- 208000011831 mesonephric neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 206010063344 microscopic polyangiitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 208000001725 mucocutaneous lymph node syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 208000029744 multiple organ dysfunction syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003333 near-infrared imaging Methods 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 101150006061 neur gene Proteins 0.000 description 1
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000004931 neurofibromatosis Diseases 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 208000004128 odontoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009210 ongoing activation Effects 0.000 description 1
- 208000005963 oophoritis Diseases 0.000 description 1
- 210000001328 optic nerve Anatomy 0.000 description 1
- 201000005737 orchitis Diseases 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000008798 osteoma Diseases 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000012221 ovarian Sertoli-Leydig cell tumor Diseases 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 208000007312 paraganglioma Diseases 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000001976 pemphigus vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 108091005709 peripheral membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 238000012831 peritoneal equilibrium test Methods 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 208000024724 pineal body neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000004123 pineal gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 description 1
- 230000007824 polyneuropathy Effects 0.000 description 1
- 210000004896 polypeptide structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000012636 positron electron tomography Methods 0.000 description 1
- 238000012877 positron emission topography Methods 0.000 description 1
- 208000017805 post-transplant lymphoproliferative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 208000016800 primary central nervous system lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 201000006037 primary mediastinal B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012342 propidium iodide staining Methods 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 201000005825 prostate adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 201000003456 pulmonary hemosiderosis Diseases 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 201000008158 rapidly progressive glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 208000002574 reactive arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000022120 response to tumor cell Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 201000006845 reticulosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000029922 reticulum cell sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 201000003068 rheumatic fever Diseases 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 206010048628 rheumatoid vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 102220285789 rs562456790 Human genes 0.000 description 1
- 102220079741 rs797045487 Human genes 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000007781 signaling event Effects 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000008410 smoothened signaling pathway Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 201000005671 spondyloarthropathy Diseases 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012128 staining reagent Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000011834 subacute cutaneous lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229960004964 temozolomide Drugs 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 208000008732 thymoma Diseases 0.000 description 1
- 206010043778 thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012250 transgenic expression Methods 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 208000029387 trophoblastic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N vindesine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(N)=O)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1N=C1[C]2C=CC=C1 UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N 0.000 description 1
- 229960004355 vindesine Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
- A61K35/545—Embryonic stem cells; Pluripotent stem cells; Induced pluripotent stem cells; Uncharacterised stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/1774—Immunoglobulin superfamily (e.g. CD2, CD4, CD8, ICAM molecules, B7 molecules, Fc-receptors, MHC-molecules)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
- A61K38/2013—IL-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
- A61K38/2086—IL-13 to IL-16
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
- A61K39/464412—CD19 or B4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70521—CD28, CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
- C12N5/0637—Immunosuppressive T lymphocytes, e.g. regulatory T cells or Treg
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
- C12N5/0638—Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
- G01N33/56972—White blood cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K2035/124—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells the cells being hematopoietic, bone marrow derived or blood cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
- C07K2319/22—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a Strep-tag
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/95—Fusion polypeptide containing a motif/fusion for degradation (ubiquitin fusions, PEST sequence)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Virology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к гибридным белкам, содержащим кассету с Strep-меткой и к меченым химерным эффекторным молекулам, меченым химерным молекулам антигенных рецепторов, рекомбинантным клеткам-хозяевам, продуцирующим такие гибридные белки. Одноцепочечный гибридный белок для активации и стимулирования пролиферации Т-клеток содержит трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным компонентом и внутриклеточным компонентом, содержащим эффекторный домен. Внеклеточный компонент содержит домен связывания, который специфически связывает мишень, множество меток и соединительную область, содержащую шарнир. Множество меток содержит от двух до пяти меток и по меньшей мере две из множества меток содержат Strep-метку. Рекомбинантные клетки-хозяева, продуцирующие такие гибридные белки, можно идентифицировать, отделить, отсортировать, вызвать пролиферацию, отследить, устранить и/или использовать в качестве терапевтического средства в адоптивной иммунотерапии. Изобретения позволяют в значительной степени активировать и стимулировать пролиферацию Т-клеток, продуцирующие указанные гибридные белки, в присутствии гранул Strep-Tactin. 12 н. и 21 з.п. ф-лы, 32 ил., 16 пр.
Description
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННУЮ ЗАЯВКУ
Данная заявка заявляет приоритет согласно 35 U.S.C. § 119(e) предварительной заявки на патент США № 61/919201, поданной 20 декабря 2013 г., которая включена в данный документ в полном объеме посредством ссылки.
ИНФОРМАЦИЯ О ПРАВИТЕЛЬСТВЕННОЙ ПОДДЕРЖКЕ
Настоящее изобретение выполнено при государственной поддержке в рамках гранта/контракта № CA136551, присужденного Национальными институтами здравоохранения (National Institutes of Health). Государство обладает определенными правами на настоящее изобретение.
ИНФОРМАЦИЯ О ПЕРЕЧНЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
Перечень последовательностей, прилагающийся к данной заявке, представлен в текстовом формате вместо бумажной копии и, таким образом, включен посредством ссылки в настоящее описание. Название текстового файла, содержащего перечень последовательностей, 360056_426WO_SEQUENCE_LISTING.txt. Текстовый файл имеет размер 32,3KB, был создан 22 декабря 2014 г. и подается в электронном виде посредством EFS-Web.
ПРЕДПОСЫЛКИ
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее раскрытие относится к гибридным белкам, содержащим кассету с меткой и, более конкретно, к меченым химерным эффекторным молекулам (Key-ChEM), и меченым химерным молекулам антигенных рецепторов (T-ChARM), и рекомбинантным клеткам-хозяевам, продуцирующим такие гибридные белки, где рекомбинантные клетки-хозяева можно идентифицировать, отделить, отсортировать, вызвать пролиферацию, отследить, устранить и/или использовать в качестве терапевтического средства (например, в адоптивной иммунотерапии).
Уровень техники
Способы иммунотерапии на основе Т-клеток начали развиваться, когда были обнаружены активные по отношению к опухоли Т-клетки среди популяции инфильтрировавших опухоль лимфоцитов (TIL) (Clark et al., Cancer Res. 29:705, 1969). Одна стратегия, известная как адоптивный перенос Т-клеток, включает в себя выделение инфильтрирующих опухоль лимфоцитов, предварительно отобранных на реакционную способность относительно опухоли, клональное размножение активных по отношению к опухоли Т-клеток, индуцированных антителами к CD3 и к CD28 в присутствии IL-2 и, наконец, инфузию размноженной популяции клеток обратно пациенту с опухолью (вместе с химиотерапией и повторяющимся введением IL-2) (Dudley et al., Science 298:850, 2002). Данная форма адоптивной Т-клеточной терапии инфильтрирующими опухоль лимфоцитами является технически громоздкой и приводит к полной ремиссии только у незначительной части пациентов с меланомой и редко эффективна при других формах рака (Besser et al., Clin. Cancer Res. 16:2646, 2010).
Выделение активных по отношению к опухолям Т-клеточных клонов привело к развитию еще одного иммунотерапевтического подхода - созданию рекомбинантных Т-клеточных рецепторов (TCR), специфичных к конкретным антигенам, которые вводятся в Т-клетки с помощью векторной системы доставки для придания специфичности к ассоциированному с опухолью пептиду, презентируемому молекулой MHC, экспрессируемой на клетке опухоли. Аналогичный подход вводит синтетический рецептор, называемый химерным антигенным рецептором (CAR), который содержит антиген-связывающий домен, который, например в контексте противоопухолевой терапии, может связываться с опухоль-специфическим или ассоциированным антигеном, связан с одним или более внутриклеточными компонентами, содержащими эффекторные домены, такие как TCR и/или костимулирующие сигнальные домены. В отличие от TIL, основные процедуры для Т-клеточной иммунотерапии при помощи TCR или CAR представляют собой генетическую модификацию человеческих Т-клеток трансгеном, кодирующим часть, нацеливающую на опухоль, размножение ex vivo рекомбинантных Т-клеток и переливание размноженных Т-клеток обратно пациентам. В случае адоптивной терапии Т-клетками с CAR состав синтетической структуры CAR, а также качество и чистота генетически сконструированных Т-клеток будут определять in vivo терапевтическую эффективность против опухолей. Но существуют проблемы с размножением и отбором популяций рекомбинантных клеток, а также с уверенностью в том, что клетки являются достаточно эффективными и специфичными in vivo, чтобы избежать серьезных аутоиммунных побочных эффектов.
В настоящее время остается потребность в области иммунотерапии в композициях и способах идентификации, эффективных отделения/отсортировки, селективного размножения, отслеживания in vivo и контроля или устранения сконструированных клеток, таких как сконструированные иммунные клетки (например, T-клетки).
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ
В определенных аспектах настоящее раскрытие направлено на одноцепочечный гибридный белок, содержащий внеклеточный компонент и внутриклеточный компонент, соединенные гидрофобным участком, где внеклеточный компонент содержит домен связывания, который специфически связывает мишень, кассету с меткой и соединительную область, содержащую шарнир, и где внутриклеточный компонент содержит эффекторный домен.
В некоторых аспектах настоящее раскрытие направлено на химерную молекулу антигенного рецептора, содержащую гибридный белок, имеющий одну или более внеклеточных кассет с метками, (a) расположенных на амино-конце внеклеточного домена связывания, (b) встроенную внутри внеклеточного домена связывания или (c) расположенную между и соединенную с внеклеточным доменом связывания и внутриклеточным компонентом, содержащим эффекторный домен.
В дополнительных аспектах настоящее раскрытие направлено на одноцепочечный гибридный белок, содержащий гидрофобный участок, расположенный между и соединенный с внеклеточным компонентом и внутриклеточным компонентом, где внеклеточный компонент содержит кассету с меткой и соединительную область, содержащую шарнир, и где внутриклеточный компонент содержит эффекторный домен.
В других дополнительных аспектах настоящее раскрытие направлено на способ активации клетки, такой как Т-клетка (например, отличная от природной Т-клетка), включающий приведение в контакт клетки с доменом связывания, специфичным к кассете с меткой, где клетка содержит молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок в соответствии с данным раскрытием, и домен связывания, специфичный к кассете с меткой, прикреплен к твердой поверхности.
В других дополнительных аспектах настоящее раскрытие направлено на способ стимуляции пролиферации клеток, такой как пролиферация Т-клеток, включающий приведение в контакт клетки (например, отличной от природной Т-клетки) с доменом связывания, специфичным к кассете с меткой, и фактором роста, представляющим собой цитокин, на время, достаточное для роста клеток, где клетка содержит молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок в соответствии с данным раскрытием, и домен связывания, специфичный к кассете с меткой, прикреплен к твердой поверхности.
В других определенных аспектах настоящее раскрытие направлено на способ идентификации клетки, такой как Т-клетка, включающий приведение в контакт образца, содержащего клетку, такую как Т-клетка (например, отличная от природной Т-клетка), с доменом связывания, специфичным к кассете с меткой, где клетка содержит молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок в соответствии с данным раскрытием, и домен связывания, специфичный к кассете с меткой, содержит детектируемую часть, и обнаружение присутствия клетки, экспрессирующей гибридный белок, в образце.
В определенных дополнительных аспектах настоящее раскрытие направлено на способ отсортировки Т-клетки, включающий приведение в контакт образца, содержащего отличную от природной Т-клетку, с доменом связывания, специфичным к кассете с меткой, где отличная от природной Т-клетка содержит молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок в соответствии с данным раскрытием, и домен связывания, специфичный к кассете с меткой, содержит детектируемую часть, и отсортировку отличной от природной T-клетки, экспрессирующей гибридный белок, от других клеток, не экспрессирующих гибридный белок, в образце.
В определенных аспектах настоящее раскрытие направлено на способ накопления или отделения Т-клетки, включающий приведение в контакт образца, содержащего отличную от природной Т-клетку, с доменом связывания, специфичным к кассете с меткой, где отличная от природной Т-клетка содержит молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок в соответствии с данным раскрытием, и домен связывания, специфичный к кассете с меткой, содержит детектируемую часть, и накопление или отделение отличной от природной T-клетки, экспрессирующей гибридный белок, от других клеток, не экспрессирующих гибридный белок, в образце.
В дополнительных аспектах настоящее раскрытие направлено на способ истощения определенных Т-клеток, включающий приведение в контакт отличной от природной Т-клетки с доменом связывания, специфичным к кассете с меткой, где отличная от природной Т-клетка содержит молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок в соответствии с данным раскрытием, и где связывание домена связывания, специфичного к кассете с меткой, приводит к клеточной гибели Т-клеток, экспрессирующих гибридный белок.
Эти и другие аспекты настоящего изобретения станут очевидными при обращении к нижеследующим подробному описанию и прилагающимся графическим материалам. Все ссылки, раскрытые в данном документе, включены, таким образом, посредством ссылки в полном объеме, как если бы каждая была включена отдельно.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
На фигурах 1A-1H показаны иллюстрации различных одноцепочечных химерных эффекторных молекул, содержащих одну или более кассет с аффинными метками (A-D, упоминаются в данном документе как Key-ChEM) и факультативно содержащих один или более специфических доменов связывания (E-G, упоминаются в данном документе как T-ChARM). Одноцепочечные ChEM и ChARM содержат внутриклеточный домен. Кассеты с метками могут быть аффинной меткой любого типа, такой как Strep tag® II (SEQ ID NO:1), Myc-меткой (SEQ ID NO:7), V5-меткой (SEQ ID NO:8), Flag®-меткой (SEQ ID NO:3), His-меткой, или другими пептидами или молекулами, которые распознаются неэндогенным родственным партнером связывания (например, рецептором, белком, антителом). Как показано, Key-ChEM может содержать (A, B) одну кассету с меткой, (C) две кассеты с метками (Key-ChEM2), (D) три кассеты с метками (Key-ChEM3) или более. Кроме того, химерные молекулы могут иметь несколько эффекторных доменов (например, молекулы из A и C-G имеют два, тогда как молекула, показанная на B, имеет три эффекторных домена) и кассеты с метками могут располагаться в различных областях молекулы Key-ChEM или T-ChARM. В данных конкретных примерах T-ChARM имеют одну кассету с меткой, расположенную между специфическим доменом связывания и эффекторным доменом (E), на дистальном конце (например, амино-конце) специфического домена связывания (F), встроенную внутрь специфического домена связывания (G) (например, расположенную в гибком линкере между цепями VH и VL из scFv) и имеют две различные метки — одну на C-конце домена связывания и другую на N-конце домена связывания (H). T-ChARM могут также иметь две, три или более кассет с метками, как показано для Key-ChEM. Как видно из этих иллюстраций, кассета с меткой может соединяться с другим компонентом Key-ChEM или T-ChARM или с другой меткой через линкерный блок (например, гибкий линкерный блок (GlyxSer)n). Длина линкера может быть адаптирована, чтобы быть длиннее или короче, для достижения наилучшего взаимодействия специфического домена связывания с целевым лигандом или антигеном и для достижения наилучшего взаимодействия между клеткой, экспрессирующей ChEM или T-ChARM, и целевой клеткой.
На фигурах 2A-2D показана цитолитическая активность человеческих эффекторных Т-клеток, экспрессирующих различные виды T-ChARM к CD19 и обычные CAR к CD19 (без кассеты с меткой и с короткими, средними и длинными спейсерными доменами), по отношению к клеткам лейкоза K562, трансфицированным для экспрессии CD19 или ROR1 (контроль), клеткам лимфомы CD19+ /ROR1+ Raji и В-клеткам, трансформированным EBV, которые экспрессируют мембраносвязанное одноцепочечное моноклональное антитело к CD3 (scFv OKT3) для активации всех эффекторных Т-клеток.
На фигурах 3A-3F показаны результаты мультиплексного анализа цитокинов (Luminex®) в отношении супернатантов, полученных через 24 часа после того, как Т-клетки, экспрессирующие различные T-ChARM к CD19 (A-C) и обычные CAR к CD19 (D-F), совместно культивировали с клетками K562, экспрессирующими либо CD19 (A и D), либо ROR1 (отрицательный контроль; B и E), и с PMA/иономицином (положительный контроль; C и F).
На фигурах 4A и 4B показаны результаты мультиплексного анализа цитокинов (Luminex®) в отношении супернатантов, полученных через 24 часа после того, как Т-клетки, экспрессирующие различные T-ChARM к CD19 (A) и CAR к CD19 (B), совместно культивировали с клетками CD19+ Raji.
На фигуре 5 показаны результаты анализа пролиферации Т-клеток, где разбавление карбоксифлуоресцеинового красителя указывает, что CD8+ Т-клетки к CD19, экспрессирующие T-ChARM (содержащие одну, две или три кассеты с метками) или обычные CAR (CD19 (с длинным)), пролиферировали в ответ на опухолевые клетки, экспрессирующие CD19 (синий), в то время как не пролиферировали в присутствии опухолевых клеток, экспрессирующих ROR1 (красный).
На фигурах 6A-6E показано, что человеческие Т-клетки к CD19, экспрессирующие T-ChARM (содержащий одну, две или три кассеты с метками) или обычные CAR (содержащие короткие или средние соединительные области), могут уничтожать развившиеся опухоли Raji у мышей NSG. В этих экспериментах клетки Raji трансфицируют для экспрессии гена люциферазы светлячка и рост опухоли измеряют с помощью введения мышам люциферина и биолюминесцентной визуализации.
На фигуре 7 показано, что человеческие Т-клетки, экспрессирующие CAR и T-ChARM к CD19, могут сохраняться в крови после адоптивного переноса мышам NSG, которых инокулировали лимфомой Raji. Человеческие Т-клетки отличают с помощью окрашивания моноклональными антителами, специфичными к человеческим молекулам клеточной поверхности CD8 и CD45.
На фигурах 8A-8D показано, что Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM, можно идентифицировать с помощью проточной цитометрии с использованием специфичного к метке связывающего средства. В примерах очищенные Т-клетки с T-ChARM обнаруживают с помощью маркера экспрессии tEGFR (A), обнаруживают с помощью антитела к Strep-метке II (STII) (B) или со StrepTactin APC (C, D).
На фигуре 9 показано, что Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM, можно отсортировать с помощью проточной цитометрии со степенью чистоты от низкой (15% в примере) до высокой (99% в примере) с использованием специфичного к метке связывающего средства, соединенного с флуорохромом. В примере метка представляет собой StrepTag II и специфичное к метке связывающее средство представляет собой моноклональное антитело к STII, соединенное с флуорохромом.
На фигуре 10 показано прямое накопление Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM (содержащего три кассеты с метками Strep-tag), с использованием гранул Strep-Tactin® различного размера. На секциях слева показано окрашивание фракции с накопленными клетками, а на секциях справа показан выходящий поток (фракция без накопленных клеток).
На фигуре 11 показаны световые микрофотографии Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM (содержащий одну, две или три кассеты с метками) или обычный CAR к CD19 (CD19 с длинным), которые совместно культивировали с гранулами, соединенными со связывающим лигандом (Strep-Tactin®), специфичным в отношении последовательности метки. На микрофотографиях показана селективная кластеризация и пролиферация Т-клеток с T-ChARM.
На фигуре 12 показана кривая роста Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM (содержащих одну, две или три кассеты с метками), на протяжении 10 дней культивирования с микрогранулами со Strep-Tactin®.
На фигурах 13A и 13B показана активация Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM, определенная по повышенной регуляции CD25 и CD69 после связывания кассеты с меткой либо микрогранулами Streptactin, наногранулами либо моноклональным антителом к StrepTag II по отдельности или в комбинации с моноклональным антителом к CD28. Данные показаны после (A) 24 часов и (B) 48 часов стимуляции.
На фигурах 14A и 14B показано селективное размножение Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM. Неотсортированные Т-клетки (CD8+ и CD4+), трансдуцированные T-ChARMV1/4-1BB и T-ChARM1/CD28, культивировали с микрогранулами (MB) с антителами к Strep-метке/CD28 в течение 9 дней. Процентное содержание клеток с T-ChARM оценивали с помощью (A) проточной детекции экспрессии Strep-метки на Т-клетках до и после культивирования. Культивированные клетки, обработанные только MB с антителом к CD3/CD28, использовали в качестве контроля. (B) Отсортированные с помощью FACS EGFR+ Т-клетки с ChARM к CD19 после размножения иммортализованной линии CD19+ B-клеток (TM-LCL). Окрашено с помощью антител к EGFR (верхний ряд) и к Streptag II (нижний ряд) соответственно.
На фигуре 15 показана пролиферация Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM к CD19 (содержащих одну, две или три кассеты с метками), измеренная по уровню белка Ki-67 через 7 дней после стимуляции различным количеством гранул Strep-Tactin®. На нижней секции показана экспрессия Ki-67 в Т-клетках, экспрессирующих T-ChARM, после стимуляции через компонент T-ChARM, связывающий антитело к CD19, с помощью CD19+ EBV-LCL (TM-LCL).
На фигуре 16 показана кривая роста Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM, культивированных на различного вида гранулах, конъюгированных со Streptactin, антителом к Streptag II или антителом к CD3/CD28.
На фигурах 17A и 17B показано селективное размножение Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM к CD19, на гранулах Strep-Tactin (A). Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM к CD19, в дальнейшем можно размножать путем стимуляции через химерный рецептор к CD19 с помощью CD19+ LCL (B).
На фигурах 18A-18D показано, что Т-клетки можно трансдуцировать T-ChARM двух типов (эффекторный домен 4-1BB/CD3ζ (A и B) или CD28/CD3ζ (C и D)) после культивирования в присутствии IL-7 и IL-15 без предварительной активации с помощью гранул с антителом к CD3/CD28. Трансдуцированные Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM, можно подвергать селективному размножению и накапливать их путем добавления в культуру гранул с антителом к Strep-метке II (B и D) (даже в отсутствии стимуляции гранулами с антителом к CD3/CD28), но они не размножаются, если гранулы с антителом к Strep-метке II не добавлены в культуру (A и C).
На фигурах 19A-19D показано, что Т-клетки с T-ChARM1 к CD19, которые размножали путем стимуляции микрогранулами со Strep-Tactin®, сохраняют сопоставимую или превосходящую способность к продуцированию цитокинов (GM-CSF, интерферон-γ, IL-2 и TNF-α) при повторной стимуляции CD19-положительными опухолевыми клетками (A. K562/CD19; B- Raji) по сравнению с контрольными Т-клетками, которые экспрессируют CAR к CD19 (с коротким) (CD19-S). Клетки K562 (C) и PMA-иономицин (D) служили в качестве отрицательного и положительного контроля соответственно.
На фигуре 20 показано, что Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM, можно индуцировать с образованием кластеров и с пролиферацией только гранулами с антителом к Strep-метке или гранулами, содержащими антитела к Strep-метке и к CD27 или содержащими антитела к Strep-метке и к CD28.
На фигуре 21 показан анализ проточной цитометрии (MFI) отсортированных с помощью FACS EGFR+ Т-клеток с ChARM к CD19 после размножения иммортализованной линии CD19+ B-клеток (TM-LCL). Окрашено с помощью антител к EGFR (верхний ряд) и к Streptag II (нижний ряд) соответственно.
На фигуре 22 показаны результаты анализа с высвобождением хрома для изучения цитотоксического эффекта Т-клеток (эффекторов), трансдуцированных различными ChARM к CD19, относительно клеток K562, трансдуцированных CD19 (K562/CD19) или ROR1 (K562/ROR1), или CD19+ опухолевых клеток Raji (мишени). E/T = соотношение эффектор/мишень.
На фигурах 23A и 23B показана цитотоксическая активность T-клеток, экспрессирующих (A) рецептор к CD19 с коротким, T-ChARM1, T-ChARM2, T-ChARM3 с эффекторным доменом CD28/CD3ζ, и (B) имеющих R12 к ROR1 с коротким и T-ChARM1 с эффекторным доменом 41BB/CD3ζ. Клетки исследовали на цитолитическую активность по отношению к клеткам K562, трансдуцированным CD19 (K562/CD19) или ROR1 (K562/ROR1), или CD19+ опухолевым клеткам Raji (мишени). E/T = соотношение эффектор/мишень.
На фигуре 24 показана продукция IL2/IFN-γ Т-клетками (эффекторами), трансдуцированными различными T-ChARM к CD19, относительно клеток K562, трансдуцированных CD19 (K562/CD19) или ROR1 (K562/ROR1), или CD19+ опухолевых клеток Raji (мишень).
На фигурах 25A-25C показан мультиплексный анализ цитокинов, Luminex, в трех повторах супернатантов совместной культуры Т-клеток, трансдуцированных ChARM, с CD19+ клетками Raji (в соотношении 1:4) через 24 ч. Данные получены из трех независимых экспериментов с использованием Т-клеток от разных доноров, и все данные выражены как средние значения ± SD. Выполнили тест с использованием t-критерия Стьюдента. * P<0,01. (A) Сравнение продукции цитокинов CD8+ T-клетками, экспрессирующими CAR к CD19 с длинным (CH3-CH2-шарнир), средним (CH3-шарнир) и коротким (только шарнир) спейсерами. Данные мультиплексного анализа цитокинов 3 независимых экспериментов нормализовали (высвобождение цитокинов с помощью CD19-CAR ’длинный/41BB’ =1); (B) сравнение продукции цитокинов CD8+ T-клетками, экспрессирующими T-ChARM1 (1ST), T-ChARM2 (2ST), T-ChARM3 (3ST) к CD19 с эффекторным доменом 4-1BB/CD3ζ по сравнению с CAR-короткий к CD19 с эффекторным доменом 4-1BB/CD3ζ; данные мультиплексного анализа цитокинов 3 независимых экспериментов нормализовали (высвобождение цитокинов с помощью CD19-CAR-короткий: Hi/4-1BB = 1); и (C) сравнение продукции цитокинов CD8+ T-клетками, экспрессирующими T-ChARM1 (1ST), T-ChARM2 (2ST), T-ChARM3 (3ST) к CD19 с эффекторным доменом CD28/CD3ζ по сравнению с CAR-короткий к CD19 с эффекторным доменом CD28/CD3ζ; данные мультиплексного анализа цитокинов 3 независимых экспериментов нормализовали (высвобождение цитокинов с помощью CD19-CAR-короткий: Hi/CD28 = 1).
На фигуре 26 показано разбавление красителя CFSE, использованное для измерения пролиферации Т-клеток, экспрессирующих ChARM с 4-1BB или CD28 к CD19, через 5 дней после стимуляции с помощью CD19+ опухолевых клеток Raji (сплошной серый) или только средой (серые линии) без добавления экзогенных цитокинов.
На фигурах 27A-27D показаны отсортированные с помощью FACS EGFR+ с ChARM к CD19 (A) CD8+ T-клетки (CD19-Hi/4-1BB, ST-CD19/4-1BB, CD19(VH-ST-VL)/4-1BB; CD19-1ST/4-1BB, CD19-2ST/4-1BB, CD19-3ST/4-1BB CAR); (B) CD4+ T-клетки (CD19-Hi/4-1BB, ST-CD19/4-1BB, CD19(VH-ST-VL)/4-1BB; CD19-1ST/4-1BB, CD19-2ST/4-1BB, CD19-3ST/4-1BB CAR); (C) CD8+ T-клетки с ChARM к CD19 (CD19-Hi/CD28, CD19-1ST/CD28, CD19-2ST/CD28, CD19-3ST/CD28 CAR) и (D) T-клетки с ChARM R12 к ROR1 (R12-Hi/4-1BB, R12-1ST/4-1BB), которые стимулировали с помощью микрогранул, покрытых StrepTactin (StrepTactin-MB), микрогранула, покрытых антителом к Streptag или антителами к Streptag/CD28 (αStrep-метка-MB и αStrep-метка/CD28-MB) в культуре с IL2. Через 48 часов после стимуляции клетки собирали и оценивали маркер Т-клеточной активации, CD25, с помощью проточной цитометрии. Необработанные клетки (среда) использовали в качестве контролей.
На фигуре 28 показаны характерные изображения с микроскопа отсортированных с помощью FACS EGFR+ Т-клеток (CD8+) с ChARM с 4-1BB к CD19, которые стимулировали с помощью StrepTactin-MB, αStrep-метка-MB и αStrep-метка/CD28-MB в присутствии IL2. Необработанные клетки (среда) использовали в качестве контроля. Изображения с микроскопа сделаны через 48 ч. после стимуляции.
На фигурах 29A и 29B показаны кривые роста Т-клеток с ChARM. Отсортированные с помощью FACS EGFR+ (A) CD8+ и (B) CD4+ T-клетки с ChARM к CD19 культивировали в среде CTL со StrepTactin-MB, αStrep-метка-MB и α Strep-метка/CD28-MB в присутствии IL2.
На фигурах 30A-30F показаны стимулированные с помощью микрогранул с антителом к CD3/CD28 CD8+ T-клетки, трансдуцированные CAR к CD19-1ST/4-1BB или CD19-1ST/CD28; после окрашивания EGFR и отсортировки чистые T-клетки с CAR размножали с TM-LCL или αStrep-метка-MB или α Strep-метка/CD28-MB в течение 8 дней. Исследования функциональности in vitro провели для оценки функции Т-клеток с CAR до (αCD3/CD28-MB) или после размножения (TM-LCL или αStrep-метка-MB или αStrep-метка/CD28-MB). (A) Анализы на высвобождение хрома проводили для изучения цитолитического эффекта Т-клеток с ChARM относительно целевых клеток (K562/CD19) или контрольных клеток (K562/ROR1), E/T: соотношение эффектор/мишень; (B) продукцию цитокинов измеряли с помощью ELISA с оценкой IFN-γ и IL2 в супернатантах, полученных через 24 часа из совместных культур 5 x 104 Т-клеток с ChARM к CD19 с целевыми клетками (K562/CD19) или контрольными клетками (K562/ROR1); Т-клетки, стимулированные PMA/иономицином, использовали в качестве положительного контроля, (n=3; * P<0,05); (C) анализ пролиферации с CFSE Т-клеток с ChARM через 5 дней после стимуляции целевыми клетками (K562/CD19) (сплошной серый) или контрольными клетками (K562/ROR1) (серые линии) без добавления экзогенных цитокинов; для анализа объединяли по три лунки и анализировали пролиферацию живых (PI-), EGFR-положительных Т-клеток с CAR; (D) проточная детекция экспрессии CD45RO, CD62L, CD28 и CD27 на Т-клетках с ChARM перед (αCD3/CD28-MB) или после размножения (TM-LCL или αStrep-метка-MB или αStrep-метка/CD28-MB); (E) когорты мышей инокулировали Raji-ffluc с помощью инъекции в хвостовую вену на 1 день, и затем 5 x 106 CD8+ Т-клеток с ChARM (CD19-Hi/4-1BB и CD19-1ST/4-1BB), которые размножали либо на CD19+ B LCL, либо на αStrep-метка/CD28-MB, вводили через 7 дней после приживления опухоли; прогрессирование и распространение опухоли оценивали с помощью последовательной биолюминесцентной визуализации после инъекции люциферинового субстрата; и (F) сохраняемость Т-клеток с ChARM к CD19 после адоптивного переноса мышам NSG/Raji; проточно-цитометрический анализ Т-клеток с ChARM в периферической крови (взятие крови из орбиты глаза) когорты мышей, обработанных Т-клетками, трансдуцированными различными ChARM, в разные моменты времени после инфузии Т-клеток; частоту CD8+ tEGFR+ и ChARM+ T-клеток использовали в виде процентного содержания живых клеток периферической крови.
На фигуре 31 показано разбавление красителя CFSE, использованное для измерения пролиферации Т-клеток с CD19-СAR-короткий, T-ChARM1, T-ChARM3 и Myc-ChARM с 4-1BB через 5 дней после стимуляции с помощью CD19 (K562/CD19), ROR1 (K562/ROR1), только среды или CD19+ опухолевых клеток Raji без добавления экзогенных цитокинов.
На фигуре 32 показаны анализы с высвобождением хрома, проведенные для изучения цитолитического эффекта Т-клеток с CD19-CAR-короткий, T-ChARM1, T-ChARM3 и Myc-ChARM с 4-1BB относительно целевых клеток (K562/CD19) или контрольных клеток (K562/ROR1). E/T: соотношение эффектор/мишень.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Настоящее раскрытие предусматривает композиции и способы для получения различных гибридных белков, содержащих одну или более кассет с аффинными метками, которые являются химерными эффекторными молекулами (ChEM), функционирующими подобно «ключу» для доступа к любому из различных биологических путей и его управления (т. e. включения, или выключения, или модулирования). Эти химерные эффекторные молекулы упоминаются в данном документе как Key-ChEM. Молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие такие гибридные белки, можно использовать для получения модифицированных клеток-хозяев, в которых специфические клеточные ответы, такие как пролиферация или уничтожение, вызываются, контролируются или и то, и другое. Например, определенные типы клеток-предшественников можно получить от субъекта, модифицировать для экспрессии гибридного белка, содержащего кассету с меткой, вызвать пролиферацию и затем переливать обратно субъекту для конкретного терапевтического эффекта (например, восстановления истощенной иммунной системы субъекта). В качестве альтернативы, такие гибридные белки, содержащие метку, могут дополнительно иметь домен связывания, специфичный к конкретной мишени (например, к опухолевому антигену). В таких примерах такие гибридные белки представляют собой меченые химерные молекулы антигенных рецепторов (T-ChARM), которые можно вводить в конкретную клетку и затем использовать для идентификации, отсортировки, активации или размножения этой модифицированной клетки. В определенных вариантах осуществления такие меченые химерные молекулы трансдуцируют и экспрессируют в клетках, таких как иммунные клетки (например, T-клетки).
В определенных аспектах настоящее раскрытие дополнительно предусматривает способы селективных активации, стимуляции пролиферации, идентификации, отсортировки, накопления, отделения, отслеживания и истощения клеток (например, T-клеток), содержащих молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок, имеющий одну или более кассет с метками (Key-ChEM или T-ChARM). Кроме того, данное раскрытие предусматривает Key-ChEM или T-ChARM, а также клетки, композиции и способы применения Key-ChEM или T-ChARM по данному раскрытию в различных терапевтических применениях, в том числе в лечении заболевания у субъекта (например, рака, инфекционного заболевания, воспалительного заболевания, иммунологического заболевания, возрастного заболевания).
Перед тем, как перейти к более подробному изложению настоящего раскрытия, для его понимания может быть полезным привести определения некоторых терминов, используемых в данном документе. Дополнительные определения изложены на всем протяжении настоящего раскрытия.
В настоящем описании любой диапазон концентраций, процентный диапазон, диапазон соотношений или диапазон целых чисел следует понимать с включением значения любого целого числа в пределах указанного диапазона и, при необходимости, его долей (таких как одна десятая и одна сотая целого числа), если не указано иное. Кроме того, любой числовой диапазон, указанный в данном документе, относящийся к любому из физических признаков, такому как субъединицы, размер или толщина полимера, следует понимать с включением любого целого числа в пределах указанного диапазона, если не указано иное. Используемое в данном документе выражение «приблизительно» означает ± 20% к указанному диапазону, значению или позиции, если не указано иное. Следует понимать, что формы единственного числа, используемые в данном документе, относятся к «одному или более» перечисленным компонентам. Использование предлогов альтернативы (например, «или») следует понимать как обозначение либо одной, одной и другой либо любой комбинации альтернатив. Используемые в данном документе выражения «включает», «имеет» и «содержит» используют синонимично, при этом подразумевают, что выражения и их варианты толкуют как неограничивающие.
Кроме того, следует понимать, что индивидуальные соединения, или группы соединений, полученные из различных комбинаций структур и заместителей, описанных в данном документе, раскрываются в настоящей заявке в той же степени, как если бы каждое соединение или группа соединений были изложены отдельно. Таким образом, выбор конкретных структур или конкретных заместителей находится в пределах объема настоящего раскрытия.
Выражение «состоящий, по сути, из» ограничивает объем пункта формулы изобретения конкретными материалами или этапами или тем, что существенно не влияет на основные характеристики заявленного изобретения. Например, домен белка, область, блок, или кассета (например, домен связывания, шарнирная область, линкерный блок, кассета с меткой), или белок (который может иметь одно или более из доменов, областей, блоков или кассет) «состоит, по сути, из» конкретной аминокислотной последовательности, когда аминокислотная последовательность домена, области, блока, кассеты или белка включает в себя удлинения, делеции, мутации или их комбинации (например, аминокислоты на амино- или карбокси-конце или между доменами), которые, в комбинации, составляют не более 20% (например, не более 15%, 10%, 8%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% или 1%) от длины домена, области, блока, кассеты или белка и не оказывают существенного влияния (т. e. не уменьшают активность более чем на 50%, например не более чем на 40%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% или 1%) на активность домена(ов), области(ей), блока(ов), кассеты(кассет) или белка (например, сродство связывания мишени у связывающего белка или кассеты с меткой).
Термин «домен связывания» (также называемый «областью связывания» или «связывающей частью»), используемый в данном документе, относится к молекуле, такой как пептид, олигопептид, полипептид или белок, которая обладает способностью специфически и нековалентно ассоциироваться, сопрягаться или объединяться с целевой молекулой (например, CD19, CD20, CD22, ROR1, мезотелином, PD-L1, PD-L2, PSMA). Домен связывания включает в себя любой встречающийся в природе, синтетический, полусинтетический или полученный рекомбинантным способом партнер связывания для биологической молекулы или другой мишени, представляющей интерес. В некоторых вариантах осуществления домен связывания представляет собой антиген-связывающий домен, такой как антитело или Т-клеточный рецептор (TCR) или функциональный домен связывания или его антиген-связывающий фрагмент. Иллюстративные домены связывания включают одноцепочечные вариабельные области антитела (например, доменные антитела, sFv, scFv, Fab), эктодомены рецепторов (например, TNF-α), лиганды (например, цитокины, хемокины), антиген-связывающие области T-клеточных рецепторов (TCR), такие как одноцепочечные TCR (scTCR), или синтетические полипептиды, выбранные по специфической способности связываться с биологической молекулой.
Используемое в данном документе выражение «специфически связывается» относится к ассоциации или сопряжению домена связывания или его гибридного белка с целевой молекулой со сродством или Ka (т. e. равновесной константой ассоциации для конкретного взаимодействия связывания с единицами 1/M) равной или большей 105 M-1, в то же время без существенных ассоциации или сопряжения с любыми другими молекулами или компонентами в образце. Домены связывания (или их гибридные белки) могут классифицироваться как домены связывания (или их гибридные белки) с «высоким сродством» или домены связывания (или их гибридные белки) с «низким сродством». Домены связывания с «высоким сродством» относятся к доменам связывания с Ka по меньшей мере 107 M-1, по меньшей мере 108 M-1, по меньшей мере 109 M-1, по меньшей мере 1010 M-1, по меньшей мере 1011 M-1, по меньшей мере 1012 M-1 или по меньшей мере 1013 M-1. Домены связывания с «низким сродством» относятся к доменам связывания с Ka до 107 M-1, до 106 M-1, до 105 M-1. Альтернативно, сродство может быть определено как равновесная константа диссоциации (Kd) конкретного взаимодействия связывания с единицами M (например, от 10-5 M до 10-13 M). В определенных вариантах осуществления домен связывания может характеризоваться «повышенным сродством», что относится к подвергнутому отбору или разработанному с помощью генной инженерии домену связывания с более сильным связыванием с целевым антигеном, чем у домена связывания дикого типа (или исходного). Например, повышенное сродство может быть связано с Ka (равновесной константой ассоциации) для целевого антигена, которая выше, чем у домена связывания дикого типа, или связано с Kd (константой диссоциации) для целевого антигена, которая меньше, чем у домена связывания дикого типа, или связано со скоростью диссоциации (Koff) для целевого антигена, которая меньше, чем у домена связывания дикого типа. Различные анализы известны для идентификации доменов связывания по настоящему раскрытию, которые специфически связывают конкретную мишень, а также для определения степеней сродства домена связывания или гибридного белка, такие как анализ вестерн-блот, ELISA и Biacore® (см. также, например, Scatchard et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660, 1949; и патенты США №№ 5283173, 5468614 или их эквиваленты).
Используемый в данном документе термин «гетерологичный», или «неэндогенный», или «экзогенный» относится к любому из гена, белка, соединения, молекулы или активности, которые не являются нативными для клетки-хозяина или субъекта, или представляет собой любое из гена, белка, соединения, молекулы или активности, нативных для хозяина или клетки-хозяина, но которые были изменены или подвергнуты мутации, так что структура, активность или и то, и другое различны у нативной и мутированной молекулы. В определенных вариантах осуществления гетерологичные, неэндогенные или экзогенные молекулы (например, рецепторы, лиганды) могут не быть эндогенными для клетки-хозяина или субъекта, но вместо этого нуклеиновая кислота, кодирующая такие молекулы, может быть добавлена в клетку-хозяина путем конъюгации, трансформации, трансфекции, электропорации или тому подобного, где добавленная молекула нуклеиновой кислоты может интегрироваться в геном клетки-хозяина или может существовать в виде внехромосомного генетического материала (например, в виде плазмиды или другого самореплицирующегося вектора). Термин «гомологичный» или «гомолог» относится к молекуле или активности, обнаруженной или полученной из клетки-, вида- или штамма-хозяина. Например, гетерологичные или экзогенные молекула или ген, кодирующий молекулу, могут быть гомологичными нативным молекуле или гену, который кодирует молекулу, хозяина или клетки-хозяина соответственно, но могут иметь измененные структуру, последовательность, уровень экспрессии или их комбинации. Неэндогенная молекула может быть получена от того же вида, от другого вида или их комбинации.
Используемый в данном документе термин «эндогенный» или «нативный» относится к гену, белку, соединению, молекуле или активности, которая в норме присутствует у хозяина или в клетке-хозяине.
Используемое в данном документе выражение «кассета с меткой» относится к уникальной пептидной последовательности, прикрепленной, слитой или являющейся частью белка, представляющего интерес, с которой гетерологичная или неэндогенная родственная связывающая молекула (например, рецептор, лиганд, антитело или другой партнер связывания) способна специфически связываться, где свойство связывания может использоваться для обнаружения, идентификации, отделения или очистки, отслеживания, накопления или нацеливания меченого белка или клеток, экспрессирующих меченый белок, особенно если меченый белок является частью гетерогенной популяции белков или другого материала, или если клетки, экспрессирующие меченый белок, являются частью гетерогенной популяции клеток (например, такого биологического образца, как периферическая кровь). В определенных вариантах осуществления клетка, экспрессирующая меченый белок, может вступать в контакт с гетерологичной или неэндогенной родственной связывающей молекулой и индуцировать биологический ответ, такой как стимуляция активации клеток, пролиферации клеток или гибели клеток. В предусмотренных гибридных белках способность кассеты(кассет) с меткой специфически связываться родственной(ыми) связывающей(ими) молекулой(ами) отличается от или дополняет способность домена(ов) связывания специфически связываться с целевой(ыми) молекулой(ами). Кассета с меткой, как правило, не является антиген-связывающей молекулой, например не является антителом или TCR или его антиген-связывающей частью.
Используемый в данном документе термин «шарнирная область» или «шарнир» относится к (a) шарнирной последовательности иммуноглобулина (состоящей, например, из верхней и коровой областей) или ее функциональному фрагменту или варианту, (b) междоменной (стволовой) области С-лектина типа II или ее функциональному фрагменту или варианту или к (c) стволовой области молекулы кластера дифференцировки (CD) или ее функциональному фрагменту или варианту. Используемое в данном документе выражение «шарнирная область иммуноглобулина дикого типа» относится к встречающимся в природе верхним и средним шарнирным аминокислотным последовательностям, расположенным между и соединяющим домены CH1 и CH2 (для IgG, IgA и IgD) или расположенным между и соединяющим домены CH1 и CH3 (для IgE и IgM), обнаруженным в тяжелой цепи антитела. В определенных вариантах осуществления шарнирная область является человеческой и в конкретных вариантах осуществления включает в себя шарнирную область IgG человека.
Используемый в данном документе термин «соединительная область» относится к одному или более белкам, полипептидам, олигопептидам, пептидам, доменам, областям, блокам, кассетам, мотивам или любой их комбинации, которые соединяют два или более из белков, полипептидов, олигопептидов, пептидов, доменов, областей, блоков, кассет, мотивов или любой их комбинации в гибридном белке. Например, соединительная область может обеспечивать спейсерную функцию для облегчения взаимодействия двух одноцепочечных гибридных белков или располагать один или более доменов связывания таким образом, что полученная полипептидная структура сохраняет специфическое сродство связывания с целевой молекулой или сохраняет сигнальную активность (например, активность эффекторного домена) или и то, и другое. В определенных вариантах осуществления соединительная область может содержать «линкерный блок», который представляет собой аминокислотную последовательность, имеющую от приблизительно двух до приблизительно 500 аминокислот, которая может обеспечивать гибкость и пространство для конформационного движения между двумя областями, доменами, мотивами, кассетами или блоками, соединенными линкером. Иллюстративные линкерные блоки включают те, которые имеют от одного до приблизительно десяти повторов GlyxSery, где x и y независимо являются целыми числами от 0 до 10 при условии, что x и y оба не равняются 0 (например, (Gly4Ser)2 (SEQ ID NO:67), (Gly3Ser)2 (SEQ ID NO:68), Gly2Ser или их комбинация, такая как (Gly3Ser)2Gly2Ser) (SEQ ID NO:69). В определенных других вариантах осуществления соединительная область может иметь линкерный блок, который содержит одну или более константных областей тяжелой цепи иммуноглобулина, такую как только CH3 или CH2CH3. В дополнительных вариантах осуществления соединительная область может содержать шарнирную область или кассету с меткой. Каждый такой соединительный компонент не является взаимоисключающим. Например, соединительная область может содержать шарнир и один или более линкерных блоков, или соединительная область может содержать шарнир, один или более линкерных блоков и одну или более кассет с метками. Иллюстративные соединительные области могут варьировать по длине, например, от приблизительно пяти до приблизительно 500 аминокислот, или от приблизительно десяти до приблизительно 350 аминокислот, или от приблизительно 15 до приблизительно 100 аминокислот, или от приблизительно 20 до приблизительно 75 аминокислот, или от приблизительно 25 до приблизительно 35 аминокислот.
Термин «гидрофобный участок», используемый в данном документе, означает любую аминокислотную последовательность, имеющую трехмерную структуру, которая является термодинамически стабильной в клеточной мембране и обычно находится в диапазоне длин от приблизительно 15 аминокислот до приблизительно 30 аминокислот. Структура гидрофобного домена может включать альфа-спираль, бета-цилиндр, бета-лист, бета-спираль или любую их комбинацию.
Используемый в данном документе «эффекторный домен» представляет собой внутриклеточную часть гибридного белка или рецептора, которая может непосредственно или опосредованно стимулировать биологический или физиологический ответ в клетке при получении соответствующего сигнала. В определенных вариантах осуществления эффекторный домен является частью белка или белкового комплекса, который принимает сигнал при связывании, или он непосредственно связывается с целевой молекулой, что приводит в действие сигнал от эффекторного домена. Эффекторный домен может непосредственно стимулировать клеточный ответ, если он содержит один или более сигнальных доменов или мотивов, таких как активационный тирозинсодержащий мотив иммунорецепторов (ITAM). В других вариантах осуществления эффекторный домен будет опосредованно стимулировать клеточный ответ путем ассоциации с одним или более другими белками, которые прямо стимулируют клеточный ответ.
«Линкер вариабельной области» в конкретном случае относится к последовательности, включающей от пяти до приблизительно 35 аминокислот, которая соединяет вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина с вариабельной областью легкой цепи иммуноглобулина, или соединяет Vα/β и Cα/β цепи Т-клеточного рецептора (например, Vα-Cα, Vβ-Cβ, Vα-Vβ), или соединяет каждую пару Vα-Cα, Vβ-Cβ, Vα-Vβ с шарниром или гидрофобным доменом, что обеспечивает спейсерную функцию и гибкость, достаточную для взаимодействия двух доменов субсвязывания, так что полученный одноцепочечный полипептид сохраняет специфическое сродство связывания с той же целевой молекулой, что и антитело или Т-клеточный рецептор. В определенных вариантах осуществления линкер вариабельной области содержит от приблизительно десяти до приблизительно 30 аминокислот или от приблизительно 15 до приблизительно 25 аминокислот. В конкретных вариантах осуществления линкерный пептид вариабельной области содержит от одного до десяти повторов GlyxSery, где x и y независимо являются целыми числами от 0 до 10 при условии, что x и y оба не равняются 0 (например, Gly4Ser (SEQ ID NO:10), Gly3Ser (SEQ ID NO:71), Gly2Ser или (Gly3Ser)n(Gly4Ser)1 (SEQ ID NO:72), (Gly3Ser)n(Gly2Ser)n (SEQ ID NO:73), (Gly3Ser)n(Gly4Ser)n (SEQ ID NO:72) или (Gly4Ser)n (SEQ ID NO:10), где n является целым числом равным 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) и где соединенные вариабельные области образуют функциональный иммуноглобулиноподобный домен связывания (например, scFv, scTCR). Иллюстративные линкеры вариабельной области включают аминокислотные последовательности, изложенные под SEQ ID NO:44, 65-69 и 71-73, и (Gly4Ser)n (SEQ ID NO:10), где n равняется 3, как обнаружено в T-ChARM с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:57.
Термины «соединительные аминокислоты» или «соединительные аминокислотные остатки» относится к одному или более (например, приблизительно 2-20) аминокислотным остаткам между двумя смежными мотивами, областями или доменами полипептида, таким как между доменом связывания и смежной линкерной областью, или между гидрофобным доменом и смежным эффекторным доменом, или на одном или обоих концах линкерной области, которая связывает два мотива, две области или два домена (например, между линкером и смежным доменом связывания и/или между линкером и смежным шарниром). Соединительные аминокислоты могут быть результатом моделирования конструкции гибридного белка (например, аминокислотные остатки, полученные в результате применения сайта для рестрикционного фермента при конструировании молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей гибридный белок). Например, одна соединительная аминокислота, аспарагин, кодируемая кодоном AAT, находится между последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей сигнальную последовательность для секреции (SEQ ID NO:63), и последовательностью, кодирующей кассету с меткой (SEQ ID NO:38), в T-ChARM, кодируемом последовательностью нуклеиновой кислоты, изложенной под SEQ ID NO:58. Аналогично, соединительная аминокислота аспарагин (N) находится между аминокислотной последовательностью гибкого линкера GGSGSG (SEQ ID NO:65) и аминокислотной последовательностью метки WSHPQFEK (SEQ ID NO:1), обнаруженной в T-ChARM с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:54.
Термины, понятные специалисту в области техники антител, имеют значение, приобретенное в данной области техники, если иное прямо не указано в данном документе. Термин «антитело» относится к интактному антителу, содержащему по меньшей мере две тяжелые (H) цепи и две легкие (L) цепи, соединенные между собой дисульфидными связями, а также к антиген-связывающему участку интактного антитела, который имеет или сохраняет способность связывать целевую молекулу. Моноклональное антитело или его антиген-связывающий участок может быть отличным от человеческого, химерным, гуманизированным или человеческим, предпочтительно гуманизированным или человеческим. Структура и функция иммуноглобулинов рассматриваются, например, в Harlow et al., Eds., Antibodies: A Laboratory Manual, Chapter 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, 1988).
Например, термины «VL» и «VH» относятся к вариабельной связывающей области легкой и тяжелой цепи антитела соответственно. Вариабельные связывающие области содержат дискретные, четко определенные подобласти, известные как «определяющие комплементарность области» (CDR) и «каркасные области» (FR). Термин «CL» относится к «константной области легкой цепи иммуноглобулина» или «константной области легкой цепи», т. e. к константной области из легкой цепи антитела. Термин «CH» относится к «константной области тяжелой цепи иммуноглобулина» или «константной области тяжелой цепи», которая дополнительно делится в зависимости от изотипа антитела на домены CHI, CH2 и CH3 (IgA, IgD, IgG) или CH1, CH2, CH3 и CH4 (IgE, IgM). «Fab» (антиген-связывающий фрагмент) представляет собой часть антитела, которая связывается с антигенами и включает в себя вариабельную область и CH1 тяжелой цепи, связанной с легкой цепью через межцепочечные дисульфидные связи.
Используемый в данном документе термин «участок Fc-области» относится к сегменту константной области тяжелой цепи Fc-фрагмента (область «кристаллизующегося фрагмента» или Fc-область) антитела, который может включать в себя один или более константных доменов, таких как CH2, СН3, СН4, или любую их комбинацию. В определенных вариантах осуществления участок Fc-области включает в себя домены CH2 и CH3 из антитела IgG, IgA или IgD или любую их комбинацию или домены CH3 и CH4 из антитела IgM или IgE и любую их комбинацию. В других вариантах осуществления структура CH2CH3 или CH3CH4 характеризуется доменами подобластей из антитела того же изотипа и является человеческой, такой как из IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE или IgM человека (например, CH2CH3 из IgG1 человека). Для справки, Fc-область отвечает за эффекторные функции иммуноглобулина, такие как ADCC (антитело-зависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность), CDC (комплемент-зависимая цитотоксичность) и фиксация комплемента, связывание с Fc-рецепторами (например, CD16, CD32, FcRn), больший период полураспада in vivo относительно полипептида без Fc-области, связывание белка A и, возможно даже, плацентарный перенос (см. Capon et al., Nature 337:525, 1989). В определенных вариантах осуществления участок Fc-области, находящийся в гибридных белках по настоящему раскрытию, будет способен к опосредованию одной или более из этих эффекторных функций или будет лишен одной или более из этих активностей или всех в результате, например, одной или более мутаций, известных из уровня техники.
Кроме того, антитела имеют шарнирную последовательность, которая, как правило, расположена между Fab и Fc-областью (но нижний сегмент шарнира может включать аминоконцевой участок Fc-области). Для справки, шарнир иммуноглобулина действует в качестве гибкого спейсера, позволяя Fab-участку свободно двигаться в пространстве. В отличие от константных областей, шарниры структурно разнообразны, варьируя как по последовательности, так и по длине между классами иммуноглобулинов и даже среди подклассов. Например, шарнирная область IgG1 человека является свободно гибкой, что позволяет Fab-фрагментам вращаться вокруг их осей симметрии и перемещаться внутри сферы с центром на первом из двух дисульфидных мостиков между тяжелыми цепями. Для сравнения, шарнир IgG2 человека является относительно коротким и содержит жесткую полипролиновую двойную спираль, стабилизированную с помощью четырех дисульфидных мостиков между тяжелыми цепями, которые ограничивают гибкость. Шарнир IgG3 человека отличается от других подклассов своей уникальной внедоменной шарнирной областью (приблизительно в четыре раза длиннее, чем шарнир IgG1), содержащей 62 аминокислоты (в том числе 21 пролин и 11 цистеинов), образующей негибкую полипролиновую двойную спираль и обеспечивающей большую гибкость, поскольку Fab-фрагменты находятся относительно далеко от Fc-фрагмента. Шарнир IgG4 человека короче, чем у IgG1, но имеет такую же длину, что и у IgG2, и его гибкость является промежуточной между гибкостью у IgG1 и IgG2.
«T-клеточный рецептор» (TCR) относится к молекуле, находящейся на поверхности T-клеток (или T-лимфоцитов), которая совместно с CD3, как правило, отвечает за распознавание антигенов, связанных с молекулами главного комплекса гистосовместимости (MHC). В большинстве T-клеток TCR представляет собой связанный дисульфидными связями гетеродимер высоковариабельных α и β цепей (также известных как TCRα и TCRβ соответственно). В меньшей субпопуляции T-клеток TCR представляет собой гетеродимер вариабельных γ и δ цепей (также известных как TCRγ и TCRδ соответственно). Каждая цепь TCR является представителем суперсемейства иммуноглобулинов и содержит один N-концевой вариабельный домен иммуноглобулина, один константный домен иммуноглобулина, трансмембранную область и короткий цитоплазматический «хвост» на C-конце (см. Janeway et al., Immunobiology: The Immune System in Health and Disease, 3rd Ed., Current Biology Publications, p. 4:33, 1997). TCR, как используется в настоящем раскрытии, может быть получен от различных видов животных, в том числе человека, мыши, крысы, кошки, собаки, козы, лошади или других млекопитающих. TCR могут быть связанными с клеткой (т. e. иметь трансмембранную область или домен) или могут быть в растворимой форме.
«Молекулы главного комплекса гистосовместимости» (молекулы MHC) относятся к гликопротеинам, которые доставляют пептидные антигены на клеточную поверхность. Молекулы MHC класса I являются гетеродимерами, состоящими из трансмембранной α-цепи (с тремя α-доменами) и нековалентно связанного β2 микроглобулина. Молекулы MHC класса II состоят из двух трансмембранных гликопротеинов, α и β, оба из которых проходят через мембрану. Каждая цепь имеет два домена. Молекулы MHC класса I доставляют пептиды, продуцирующиеся в цитозоле, на клеточную поверхность, где комплекс пептид:MHC распознается CD8+ T-клетками. Молекулы MHC класса II доставляют пептиды, продуцирующиеся в везикулярной системе, на клеточную поверхность, где они распознаются CD4+ T-клетками. Молекула MHC может быть получена от различных видов животных, в том числе человека, мыши, крысы или других млекопитающих.
«Вектор» представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, способную переносить другую нуклеиновую кислоту. Векторами могут быть, например, плазмиды, космиды, вирусы или фаг. «Вектор экспрессии» представляет собой вектор, способный управлять экспрессией белка, кодируемого одним или более генами, находящимися в векторе, когда он находится в соответствующем окружении.
«Ретровирусы» представляют собой вирусы с РНК-геномом. «Гаммаретровирус» относится к роду семейства Retroviridae. Иллюстративные гаммаретровирусы включают вирус, поражающий стволовые клетки мышей, вирус лейкоза мышей, вирус лейкоза кошачьих, вирус саркомы кошачьих и вирусы ретикулоэндотелиоза птиц.
«Лентивирус» относится к роду ретровирусов, способных инфицировать делящиеся и неделящиеся клетки. Некоторые примеры лентивирусов включают HIV (вирус иммунодефицита человека: в том числе HIV 1 типа и HIV 2 типа); вирус инфекционной анемии лошадей; вирус иммунодефицита кошачьих (FIV); бычий вирус иммунодефицита (BIV) и вирус иммунодефицита обезьян (SIV).
«Гемопоэтическая клетка-предшественник» представляет собой клетку, полученную из гемопоэтической стволовой клетки или фетальной ткани, способную к дальнейшей дифференцировке в зрелые типы клеток (например, клетки T-клеточной линии дифференцировки). В определенных вариантах осуществления являются пригодными гемопоэтические клетки-предшественники CD2410 Lin- CD117+. Как определено в данном документе, гемопоэтические клетки-предшественники могут включать эмбриональные стволовые клетки, способные к дальнейшей дифференцировке в клетки T-клеточной линии дифференцировки. Гемопоэтические клетки-предшественники могут быть получены от различных видов животных, в том числе человека, мыши, крысы или других млекопитающих. «Клетка-предшественник тимоцит» или «тимоцит» представляет собой гемопоэтическую клетку-предшественника, присутствующую в тимусе.
«Гемопоэтические стволовые клетки» относятся к недифференцированным гемопоэтическим клеткам, способным к самообновлению также in vivo, к практически неограниченному размножению in vitro и способным к дифференцировке в другие типы клеток, включая клетки T-клеточной линии дифференцировки. Гемопоэтические стволовые клетки могут быть выделены, например, без ограничения из эмбриональной печени, костного мозга, пуповинной крови.
«Эмбриональные стволовые клетки», или «ES-клетки», или «ESC» относятся к недифференцированным эмбриональным стволовым клеткам, обладающим способностью интегрироваться и становиться частью зародышевой линии развивающегося эмбриона. Эмбриональные стволовые клетки способны к дифференцировке в гемопоэтические клетки-предшественники и любую ткань или орган. Эмбриональные стволовые клетки, пригодные для применения в данном документе, включают клетки из клеточной линии J1 ES, клеточной линии 129J ES, клеточной линии стволовых клеток мышей D3 (Американская коллекция типовых культур), клеточных линий R1 или E14K, полученных от мышей 129/Sv, клеточных линий, полученных от мышей Balb/c и C57Bl/6, и эмбриональные стволовые клетки человека (например, из WiCell Research Institute, Висконсин, или ES cell International, Мельбурн, Австралия).
«Клетки T-клеточной линии дифференцировки» относятся к клеткам, у которых наблюдается по меньшей мере одна фенотипическая характеристика T-клетки или ее клетки ранней стадии дифференцировки или предшественника, которая отличает клетки от других лимфоидных клеток и клеток эритроидной или миелоидной линий дифференцировки. Такие фенотипические характеристики могут включать экспрессию одного или более белков, специфичных для T-клеток (например, CD3+, CD4+, CD8+), или физиологический, морфологический, функциональный или иммунологический признак, характерный для T-клетки. Например, клетками T-клеточной линии дифференцировки могут быть предшественники или клетки ранней стадии дифференцировки, коммитированные в направлении T-клеточной линии дифференцировки; незрелые и неактивированные CD25+ T-клетки; клетки, которые прошли коммитирование в направлении CD4 или CD8 линии дифференцировки; клетки-предшественники тимоциты, которые являются CD4+CD8+ дважды положительными; моноположительными CD4+ или CD8+; TCRαβ или TCRγδ или зрелые и функционально-способные или активированные T-клетки.
«Молекула нуклеиновой кислоты» или полинуклеотиды могут быть в форме РНК или ДНК, что включает кДНК, геномную ДНК и синтетическую ДНК. Молекула нуклеиновой кислоты может быть двунитевой или однонитевой и в случае однонитевой может представлять собой кодирующую нить или некодирующую (антисмысловую нить). Кодирующая молекула может иметь кодирующую последовательность, идентичную кодирующей последовательности, известной из уровня техники, или может иметь другую кодирующую последовательность, которая в результате избыточности или вырожденности генетического кода или в результате сплайсинга может кодировать тот же полипептид.
«Лечить», или «лечение», или «облегчение» относится к медицинскому контролю заболевания, нарушения или состояния у субъекта (например, человека или отличного от человека млекопитающего, такого как примат, лошадь, собака, мышь, крыса). В целом, соответствующую дозу или схему лечения, включающую клетку-хозяина, экспрессирующую Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию, и необязательно вспомогательное средство, вводят/применяют в количестве, достаточном, чтобы вызвать терапевтическую или профилактическую пользу. Терапевтическая или профилактическая/предупредительная польза включает в себя улучшение клинического исхода; уменьшение или ослабление симптомов, ассоциированных с заболеванием; снижение степени проявления симптомов; улучшение качества жизни; более длительный период состояния без признаков заболевания; уменьшение степени заболевания, стабилизацию болезненного состояния; задержку прогрессирования заболевания; ремиссию; выживание; длительное выживание или любую их комбинацию.
Термин «терапевтически эффективное количество» или «эффективное количество» гибридного белка или клетки, экспрессирующей гибридный белок по настоящему раскрытию (например, Key-ChEM, T-ChARM), относится к такому количеству соединения или клеток, которое достаточно для получения облегчения одного или более симптомов заболевания, подлежащего лечению, статистически значимым образом. Когда речь идет об индивидуальном активном ингредиенте или клетке, экспрессирующей один активный ингредиент, вводимый отдельно, терапевтически эффективная доза относится только к эффектам такого ингредиента или клетки, экспрессирующей этот ингредиент. Когда речь идет о комбинации, терапевтически эффективная доза относится к объединенным количествам активных ингредиентов или объединенным вспомогательному активному ингредиенту с клеткой, экспрессирующей активный ингредиент, что приводит к терапевтическому эффекту при введении последовательно или одновременно. Еще одна комбинация может представлять собой клетку, экспрессирующую более одного активного ингредиента, как, например, два разных T-ChARM, T-ChARM и TCR, T-ChARM и CAR или их комбинации.
Дополнительные определения приводятся по всему настоящему раскрытию.
Key-ChEM и T-ChARM
В определенных аспектах настоящее раскрытие предусматривает одноцепочечный гибридный белок, называемый Key-ChEM, который содержит внеклеточный компонент и внутриклеточный компонент, соединенные гидрофобным участком, где внеклеточный компонент содержит кассету с меткой и соединительную область, содержащую шарнир, и где внутриклеточный компонент содержит эффекторный домен. В определенных вариантах осуществления соединительная область дополнительно содержит линкерный блок или одну или более кассет с метками, расположенных в пределах соединительной области. В определенных других вариантах осуществления одна или более кассет с метками соединены с соединительной областью при помощи линкерного блока.
В дополнительных вариантах осуществления Key-ChEM гибридный белок содержит от амино-конца к карбокси-концу: кассету с меткой, соединительную область, содержащую шарнир, гидрофобный участок и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен (см., например, фигуры 1 A и 1 B). В других дополнительных вариантах осуществления Key-ChEM гибридный белок содержит от амино-конца к карбокси-концу: первую соединительную область, кассету с меткой, вторую соединительную область, содержащую шарнир, гидрофобный участок и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен. В других дополнительных вариантах осуществления Key-ChEM гибридный белок содержит от амино-конца к карбокси-концу: первую кассету с меткой, первую соединительную область, вторую кассету с меткой, вторую соединительную область, содержащую шарнир, гидрофобный участок и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен (см., например, фигуру 1 C). В других дополнительных вариантах осуществления Key-ChEM гибридный белок содержит от амино-конца к карбокси-концу: первую кассету с меткой, первую соединительную область, вторую кассету с меткой, вторую соединительную область, третью кассету с меткой, третью соединительную область, содержащую шарнир, гидрофобный участок и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен (см., например, фигуру 1 D).
В других определенных вариантах осуществления Key-ChEM гибридный белок дополнительно содержит нековалентно ассоциированный домен связывания, такой как домен связывания, ассоциированный с кассетой с меткой (т. e. многоцепочечный T-ChARM). В других вариантах осуществления Key-ChEM нековалентно ассоциированный домен связывания является биспецифичным, где первая связывающая концевая часть является специфичной к кассете с меткой, а вторая связывающая концевая часть является специфичной к мишени, отличной от кассеты с меткой, или первая и вторая связывающие части обе являются специфичными к кассете с меткой. В других вариантах осуществления Key-ChEM нековалентно ассоциированный домен связывания является мультиспецифичным, где первая концевая часть связывается с кассетой с меткой, а вторая концевая часть является специфичной к одной или более мишеням, отличным от кассеты с меткой. В таких вариантах осуществления Key-ChEM содержит мультимерный белок. В некоторых вариантах осуществления такие Key-ChEM, содержащие один или более нековалентно ассоциированных доменов связывания, содержат гетеромультимеры.
В других аспектах настоящее раскрытие предусматривает одноцепочечный гибридный белок, называемый T-ChARM, который содержит внеклеточный компонент и внутриклеточный компонент, соединенные гидрофобным участком, где внеклеточный компонент содержит домен связывания, который специфически связывает мишень, кассету с меткой и соединительную область, содержащую шарнир, и где внутриклеточный компонент содержит эффекторный домен. В определенных вариантах осуществления домен связывания T-ChARM представляет собой scFv, scTCR, эктодомен рецептора или лиганд.
В дополнительных вариантах осуществления T-ChARM гибридный белок содержит от амино-конца к карбокси-концу: внеклеточный домен связывания, кассету с меткой, соединительную область, содержащую шарнир, гидрофобный участок и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен (см., например, фигуру 1E). В других дополнительных вариантах осуществления T-ChARM гибридный белок содержит от амино-конца к карбокси-концу: внеклеточный домен связывания, первую соединительную область, кассету с меткой, вторую соединительную область, содержащую шарнир, гидрофобный участок и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен. В других дополнительных вариантах осуществления T-ChARM гибридный белок содержит от амино-конца к карбокси-концу: внеклеточный домен связывания, первую кассету с меткой, первую соединительную область, вторую кассету с меткой, вторую соединительную область, содержащую шарнир, гидрофобный участок и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен. В других дополнительных вариантах осуществления T-ChARM гибридный белок содержит от амино-конца к карбокси-концу: внеклеточный домен связывания, первую кассету с меткой, первую соединительную область, вторую кассету с меткой, вторую соединительную область, третью кассету с меткой, третью соединительную область, содержащую шарнир, гидрофобный участок и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен.
В других определенных вариантах осуществления T-ChARM гибридный белок содержит от амино-конца к карбокси-концу: кассету с меткой, внеклеточный домен связывания, соединительную область, содержащую шарнир, гидрофобный участок и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен (см., например, фигуру 1 F). В других вариантах осуществления T-ChARM гибридный белок содержит от амино-конца к карбокси-концу: внеклеточный домен связывания scFv или scTCR, содержащий линкер вариабельной области, содержащий кассету с меткой, расположенную между вариабельными областями (например, на или ближе к N-концу линкера вариабельной области, на или ближе к C-концу линкера вариабельной области или встроенную ближе к середине линкера вариабельной области), соединительную область, содержащую шарнир, гидрофобный участок и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен Иллюстративная кассета с меткой, встроенная в линкер вариабельной области, содержит GGSGSG(X)nWSHPQFEKGSGSG (SEQ ID NO:45), где X является необязательным, может быть любой аминокислотой, и n равняется 0, 1, 2, 3, 4 или 5. В SEQ ID NO:54 присутствует такой линкер вариабельной области, имеющий встроенную метку, где n равняется 1, и X представляет собой аспарагин (N).
Key-ChEM или T-ChARM может быть связанным с клеткой (например, экспрессироваться на клеточной поверхности) или может быть в растворимой форме. В определенных вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие гибридные белки Key-ChEM или T-ChARM, могут быть кодон-оптимизированы для повышения или увеличения до максимума экспрессии в определенных типах клеток, таких как T-клетки (Scholten et al., Clin. Immunol. 119:135, 2006).
В других вариантах осуществления Key-ChEM или T-ChARM может дополнительно содержать цитотоксический компонент (например, химиотерапевтические лекарственные средства, такие как антимитотические (например, виндезин), антифолаты, алкилирующие средства (например, темозоломид), бактериальные токсины, рицин, противовирусные, радиоизотопы, радиоактивные металлы), которые пригодны для специфического уничтожения или повреждения раковой клетки, инфицированной клетки или другой пораженной болезнью клетки. В дополнительных вариантах осуществления Key-ChEM или T-ChARM может дополнительно содержать детектируемый компонент (например, биотин, флуоресцентную часть, радионуклид), который пригоден для отслеживания или визуализации раковых клеток, инфицированных клеток или других тканей (например, ткани, подвергающейся аутоиммунной атаке). В других дополнительных вариантах осуществления Key-ChEM или T-ChARM может дополнительно содержать функциональный компонент (например, иммуностимулирующую часть, цитокин, иммуномодулятор, белок иммуноглобулин или тому подобное).
Составные части гибридных белков по настоящему раскрытию дополнительно подробно описаны в данном документе.
Кассета с меткой
Кассета с меткой, содержащаяся в одноцепочечном гибридном белке согласно настоящему раскрытию (например, Key-ChEM или T-ChARM), будет представлять собой внеклеточный компонент, который может специфически связываться с родственным рецептором или партнером связывания (например, антителом) с высоким сродством или авидностью, где родственный рецептор или партнер связывания является гетерологичным или неэндогенным для хозяина или клетки, экспрессирующей Key-ChEM или T-ChARM. В пределах структуры одноцепочечного гибридного белка кассета с меткой может располагаться (a) непосредственно с амино-конца соединительной области, (b) быть помещена между линкерными блоками и соединять их, (c) непосредственно с карбокси-конца домена связывания, (d) быть помещена между доменом связывания (например, scFv) и эффекторным доменом и соединять их, (e) быть помещена между субъединицами домена связывания и соединять их или (f) на амино-конце одноцепочечного гибридного белка по настоящему раскрытию. В определенных вариантах осуществления одна или более соединительных аминокислот могут располагаться между и соединять кассету с меткой и гидрофобный участок, или располагаться между и соединять кассету с меткой и соединительную область, или располагаться между и соединять кассету с меткой и линкерный блок, или располагаться между и соединять кассету с меткой и домен связывания.
Иллюстративные кассеты с метками включают Strep-метку (которая относится к оригинальной Strep® метке, Strep® метке II или любому ее варианту; см., например, патент США № 7981632, Strep-метки из которого включены в данный документ посредством ссылки), His-метку, Flag-метку (SEQ ID NO:3), Xpress-метку (SEQ ID NO:4), Avi-метку (SEQ ID NO:5), кальмодулиновую метку (SEQ ID NO: 19), полиглутаматную метку, HA-метку (SEQ ID NO:6), Myc-метку (SEQ ID NO:7), Nus-метку, S-метку, SBP-метку, SofTag 1 (SEQ ID NO:9), SofTag 3 (SEQ ID NO:32), V5-метку (SEQ ID NO:8), CREB-связывающий белок (CBP), глутатион-S-трансферазу (GST), связывающий мальтозу белок (MBP), зеленый флуоресцентный белок (GFP), тиоредоксиновую метку или любую их комбинацию. В определенных вариантах осуществления кассета с меткой представляет собой Strep-метку с аминокислотной последовательностью Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys (SEQ ID NO:1) или Trp-Arg-His-Pro-Gln-Phe-Gly-Gly (SEQ ID NO:2). В других вариантах осуществления кассета с меткой может представлять собой сконструированный способами генной инженерии сайт сродства, такой как минимальный сайт хелатирования (например, HGGHHG, SEQ ID NO:33).
Кассеты с метками могут присутствовать в нескольких копиях в гибридных белках по настоящему раскрытию. Например, гибридный белок по настоящему раскрытию может иметь одну, две, три, четыре или пять кассет с метками (например, Strep-меткой). В определенных вариантах осуществления соединительная область Key-ChEM или T-ChARM включает в себя одну кассету с меткой, две кассеты с метками, три кассеты с метками, четыре кассеты с метками или пять кассет с метками. Каждая из множества кассет с метками может быть такой же или отличной. Иллюстративные варианты осуществления включают в себя Key-ChEM или T-ChARM, имеющий Strep-метку и кассету со Strep-меткой, или His-метку и кассету со Strep-меткой, или HA-метку и кассету со Strep-меткой, или Myc-метку и кассету со Strep-меткой. В качестве альтернативы, Key-ChEM или T-ChARM будет иметь несколько кассет с метками одного типа или с одинаковой аминокислотной последовательностью, как, например, две, три, четыре или пять кассет со Strep-метками (например, Strep-меткой II).
Например, Key-ChEM или T-ChARM может иметь по меньшей мере две различные кассеты с метками. В некоторых вариантах осуществления первая кассета с меткой может обеспечивать сигнал стимуляции и отличная от нее вторая кассета с меткой может использоваться для ассоциации с проявляющим реагентом или ассоциации с конъюгатом антитело-токсин или с конъюгатом антитело-визуализирующее средство. В дополнительных вариантах осуществления две или более первых кассет с метками могут располагаться в разных областях Key-ChEM или T-ChARM. В определенных вариантах осуществления первая кассета с меткой располагается в соединительной области, и вторая кассета с меткой располагается на амино-конце или карбокси-конце или на том и другом Key-ChEM или T-ChARM (см., например, фигура 1 H).
В определенных вариантах осуществления кассета с меткой содержит от приблизительно пяти до приблизительно 500 аминокислот, или от приблизительно шести до приблизительно 100 аминокислот, или от приблизительно семи до приблизительно 50 аминокислот, или от приблизительно восьми до приблизительно 20 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления кассета с меткой имеет от семи до десяти аминокислот. Предпочтительно, кассета с меткой является неиммуногенной или минимально иммуногенной. По сути, кассета с меткой может функционировать в качестве идентификатора или маяка для обеспечения идентификации, накопления, отделения, стимуляции пролиферации, активации, отслеживания или устранения клеток, экспрессирующих Key-ChEM или T-ChARM.
В определенных вариантах осуществления кассета с меткой располагается в соединительной области гибридного белка по настоящему раскрытию. Например, соединительная область может дополнительно содержать линкерный блок, смежный с кассетой с меткой, где линкерный блок с кассетой с меткой имеет аминокислотную последовательность (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)2-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys (SEQ ID NO:20), Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)2 (SEQ ID NO:21), (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)2-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(Gly-Gly-Gly-Ser)2-Gly-Gly-Ser-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys (SEQ ID NO:22), Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(Gly-Gly-Gly-Ser)2-Gly-Gly-Ser-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)2 (SEQ ID NO:23), (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)2-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(Gly-Gly-Gly-Ser)2-Gly-Gly-Ser-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)2-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys (SEQ ID NO:24) или Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)2-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(Gly-Gly-Gly-Ser)2-Gly-Gly-Ser-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(Gly- Gly-Gly-Gly-Ser)2 (SEQ ID NO:25).
Одноцепочечный гибридный белок, содержащий одну или более кассет с метками, описываемых в данном документе, будет способен ассоциироваться с родственным партнером связывания, где родственный партнер связывания является гетерологичным для хозяина или клетки, экспрессирующей гибридный белок, содержащий кассету с меткой, описываемую в данном документе. В определенных вариантах осуществления кассета с меткой, присутствующая в одноцепочечном Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию, представляет собой Strep-метку, использующую стрептавидин, стрептактин или и то, и другое в качестве родственного партнера связывания, или распознается антителами, специфичными к Strep-метке. В определенных вариантах осуществления родственный партнер связывания (например, рецептор, белок, антитело) может быть растворимым, частью матричной композиции или конъюгированным с твердой поверхностью (например, планшетом, гранулой). Иллюстративные твердые поверхности включают гранулы и частицы (например, микро- и нано-), такие как магнитные гранулы и частицы.
В вариантах осуществления одноцепочечного гибридного белка T-ChARM белковый комплекс может образовываться между гибридным белком и родственным партнером связывания для кассеты с меткой, который является результатом связывания между кассетой с меткой и партнером связывания. В определенных вариантах осуществления T-ChARM содержит домен связывания scFv или scTCR, где кассета с меткой расположена в линкере вариабельной области (между субъединицами домена связывания). В других вариантах осуществления T-ChARM содержит кассету с меткой, расположенную на амино-конце домена связывания. В таких белковых комплексах или структурах гибридного белка домен связывания T-ChARM будет сохранять свою специфичность по отношению к мишени или свое специфическое сродство связывания мишени.
Соединительная область и шарнир
Соединительная область, содержащая шарнир, в одноцепочечном гибридном белке согласно настоящему раскрытию может располагаться (a) непосредственно с амино-конца от гидрофобного участка, (b) быть вставленной между кассетой с меткой (например, Strep-меткой) и эффекторным доменом и соединять их, (c) непосредственно с карбокси-конца от домена связывания или (d) быть вставленной между линкерным блоком и эффекторным доменом и соединять их. Одноцепочечный гибридный белок, содержащий соединительную область с шарниром, описываемый в данном документе, будет способен ассоциироваться с другим одноцепочечным гибридным белком с образованием димера (например, гомодимера или гетеродимера), где димер Key-ChEM или T-ChARM будет содержать одну или более кассет с метками, способных к связыванию родственного партнера связывания, и димер T-ChARM будет дополнительно содержать домен связывания, который сохраняет свою специфичность по отношению к мишени или свое специфическое сродство связывания мишени.
Соединительная область может состоять только из шарнира, только из линкерных блоков, из шарнира и линкерных блоков или из шарнира, одного или более линкерных блоков и одной или более кассет с метками. В определенных вариантах осуществления линкерные блоки содержат от приблизительно двух до приблизительно 20 аминокислот, которые образуют гибкую структуру. Иллюстративные линкерные блоки включают CH2CH3 иммуноглобулина, CH3 иммуноглобулина или один или более GlyxSery, где x и y независимо являются целыми числами от 0 до 10 при условии, что x и y оба не равняются 0 (например, (Gly4Ser)2 (SEQ ID NO:67), (Gly3Ser)2 (SEQ ID NO:68), Gly2Ser или их комбинация, как например (Gly3Ser)2Gly2Ser) (SEQ ID NO:69). В дополнительных вариантах осуществления соединительная область содержит кассету с меткой. Например, соединительная область включает от одной до пяти кассет с метками, где каждая кассета с меткой соединяется с одним или двумя линкерными блоками, содержащими (GlyxSery)n, где n является целым числом от 1 до 10, и x и y независимо являются целыми числами от 0 до 10 при условии, что x и y оба не равняются 0. Иллюстративные линкерные блоки характеризуются аминокислотной последовательностью Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO:10), (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)2 (SEQ ID NO:11), (Gly-Gly-Gly-Ser)2-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO:12), которая может присутствовать в любой комбинации в пределах соединительной области.
В определенных вариантах осуществления шарнир, присутствующий в одноцепочечном Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию, может быть шарнирной областью иммуноглобулина, такой как шарнирная область иммуноглобулина дикого типа или измененная шарнирная область иммуноглобулина. В определенных вариантах осуществления шарнир представляет собой шарнирную область человеческого иммуноглобулина дикого типа. В других определенных вариантах осуществления один или более аминокислотных остатков можно добавлять с амино- или карбокси-конца шарнирной области иммуноглобулина дикого типа как часть модели конструкции гибридного белка. Например, один, два или три дополнительных соединительных аминокислотных остатка могут присутствовать на амино-конце или карбокси-конце шарнира, или шарнир может содержать концевую или внутреннюю делецию и иметь добавление одного, двух или трех дополнительных соединительных аминокислотных остатков.
В определенных вариантах осуществления шарнир представляет собой измененный шарнир иммуноглобулина, в котором один или более цистеиновых остатков в шарнирной области иммуноглобулина дикого типа замещены одним или более другими аминокислотными остатками. Иллюстративные измененные шарниры иммуноглобулина включают шарнирную область иммуноглобулина IgG1, IgG2 или IgG4 человека, имеющую один, два или три цистеиновых остатка, обнаруженных в шарнире человеческого IgG1, IgG2 или IgG4 дикого типа, замещенных одним, двумя или тремя отличными аминокислотными остатками (например, серином или аланином). В определенных вариантах осуществления шарнирный полипептид содержит или является последовательностью, которая по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 81%, по меньшей мере на 82%, по меньшей мере на 83%, по меньшей мере на 84%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 86%, по меньшей мере на 87%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 89%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% идентична шарнирной области иммуноглобулина дикого типа, такой как шарнир человеческого IgG1 дикого типа, шарнир человеческого IgG2 дикого типа или шарнир человеческого IgG4 дикого типа.
В дополнительных вариантах осуществления шарнир, присутствующий в одноцепочечном Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию, может представлять собой шарнир, который не основан или не получен из шарнира иммуноглобулина (т. e. шарнир не иммуноглобулина дикого типа или измененный шарнир не иммуноглобулина). Примеры таких шарниров включают пептиды, содержащие от приблизительно пяти до приблизительно 150 аминокислот стволовой области C-лектинов II типа или молекул CD, в том числе пептиды, содержащие от приблизительно восьми до приблизительно 25 аминокислот, или пептиды, содержащие от приблизительно семи до приблизительно 18 аминокислот, или их варианты.
«Стволовая область» молекулы С-лектина II типа или CD относится к части внеклеточного домена молекулы С-лектина II типа или CD, которая располагается между доменом, подобным лектину C-типа (CTLD; например, подобным CTLD рецепторов натуральных клеток-киллеров), и гидрофобным участком (трансмембранным доменом). Например, внеклеточный домен CD94 человека (номер доступа в GenBank AAC50291.1) соответствует аминокислотным остаткам 34-179, но CTLD соответствует аминокислотным остаткам 61-176, так что стволовая область молекулы CD94 человека содержит аминокислотные остатки 34-60, которые располагаются между гидрофобным участком (трансмембранным доменом) и CTLD (см. Boyington et al., Immunity 10:75, 1999; в отношении описания других стволовых областей см. также Beavil et al., Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 89:753, 1992 и Figdor et al., Nat. Rev. Immunol. 2:77, 2002). Эти молекулы С-лектина II типа или CD могут также иметь соединительные аминокислоты между стволовой областью и трансмембранной областью или CTLD. В другом примере белок NKG2A человека (номер доступа в GenBank P26715.1) из 233 аминокислот имеет гидрофобный участок (трансмембранный домен) в пределах аминокислот 71-93 и внеклеточный домен в пределах аминокислот 94-233. CTLD включает в себя аминокислоты 119-231, и стволовая область включает в себя аминокислоты 99-116, которые могут фланкироваться дополнительными соединительными аминокислотами. Другие молекулы С-лектина II типа или CD, а также их внеклеточные лиганд-связывающие домены, стволовые области и CTLD, известны из уровня техники (см., например, номера доступа в GenBank NP 001993.2; AAH07037.1; NP_001773.1; AAL65234.1; CAA04925.1 для последовательностей CD23, CD69, CD72, NKG2A и NKG2D человека и их описаний соответственно).
«Производное» шарнира стволовой области или его фрагмента из молекулы С-лектина II типа или CD включает в себя последовательность, содержащую от приблизительно восьми до приблизительно 150 аминокислот, в которой одна, две или три аминокислоты стволовой области молекулы С-лектина II типа или CD дикого типа имеют делецию, вставку, замену или любую их комбинацию. Например, производное может содержать одну или более аминокислотных замен и/или аминокислотную делецию. В определенных вариантах осуществления производное стволовой области является более устойчивым к протеолитическому расщеплению по сравнению с последовательностью стволовой области дикого типа, как, например, полученная из аминокислот от приблизительно восьми до приблизительно 20 аминокислот из NKG2A, NKG2D, CD23, CD64, CD72 или CD94.
В определенных вариантах осуществления шарниры стволовой области могут содержать от приблизительно семи до приблизительно 18 аминокислот и могут образовывать α-спиральную суперспиральную структуру. В определенных вариантах осуществления шарниры стволовой области содержат 0, 1, 2, 3 или 4 цистеина. Иллюстративные шарниры стволовых областей включают фрагменты стволовых областей, такие как части, содержащие от приблизительно десяти до приблизительно 150 аминокислот из стволовых областей из CD69, CD72, CD94, NKG2A и NKG2D.
Альтернативные шарниры, которые можно использовать в одноцепочечных Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию, происходят из частей рецепторов клеточной поверхности (междоменных областей), которые соединяют иммуноглобулин-подобные V-домены или иммуноглобулин-подобные C-домены. Области между Ig-подобными V-доменами, где рецептор клеточной поверхности содержит несколько Ig-подобных V-доменов последовательно, и между Ig-подобными C-доменами, где рецептор клеточной поверхности содержит несколько последовательно расположенных Ig-подобных C-областей, также рассматриваются как шарниры, пригодные в одноцепочечных Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию. В определенных вариантах осуществления шарнирные последовательности, состоящие из междоменных областей рецептора клеточной поверхности, могут дополнительно содержать встречающийся в природе или добавленный мотив, такой как коровая шарнирная последовательность IgG, с обеспечением одной или более дисульфидных связей для стабилизации образования димера Key-ChEM или T-ChARM. Примеры шарниров, включают медждоменные области между Ig-подобными V- и Ig-подобными C-областями из CD2, CD4, CD22, CD33, CD48, CD58, CD66, CD80, CD86, CD150, CD 166 или CD244.
В определенных вариантах осуществления шарнирные последовательности имеют от приблизительно 5 до приблизительно 150 аминокислот, от приблизительно 5 до приблизительно 10 аминокислот, от приблизительно 10 до приблизительно 20 аминокислот, от приблизительно 20 до приблизительно 30 аминокислот, от приблизительно 30 до приблизительно 40 аминокислот, от приблизительно 40 до приблизительно 50 аминокислот, от приблизительно 50 до приблизительно 60 аминокислот, от приблизительно 5 до приблизительно 60 аминокислот, от приблизительно 5 до приблизительно 40 аминокислот, например от приблизительно 8 до приблизительно 20 аминокислот или от приблизительно 10 до приблизительно 15 аминокислот. Шарниры могут быть в основном гибкими, но могут также обеспечивать более жесткие характеристики или могут содержать, главным образом, α-спиральную структуру с минимальным содержанием β-листовой структуры.
В определенных вариантах осуществления шарнирная последовательность является стабильной в плазме и сыворотке и устойчива к протеолитическому расщеплению. Например, первый лизин в верхней шарнирной области IgG1 может быть подвергнут мутации или удален для сведения к минимуму степени протеолитического расщепления, и шарниры могут включать в себя соединительные аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления шарнирная последовательность может содержать встречающийся в природе или добавленный мотив, такой как коровая структура шарнира иммуноглобулина CPPCP (SEQ ID NO:26), который придает способность к формированию дисульфидной связи или нескольких дисульфидных связей для стабилизации образования димера.
Гидрофобный участок
Гидрофобный участок, содержащийся в одноцепочечном гибридном белке по настоящему раскрытию (например, Key-ChEM или T-ChARM), позволит гибридному белку данного раскрытия ассоциироваться с клеточной мембраной таким образом, что часть гибридного белка будет располагаться внеклеточно (например, кассета с меткой, соединительная область, домен связывания), а часть будет располагаться внутриклеточно (например, эффекторный домен). Гидрофобный участок, как правило, будет располагаться в пределах фосфолипидного бислоя клеточной мембраны. В определенных вариантах осуществления одна или более соединительных аминокислот могут располагаться между и соединять гидрофобный участок и эффекторный домен, или располагаться между и соединять гидрофобный участок и соединительную область, или располагаться между и соединять гидрофобный участок и кассету с меткой.
В определенных вариантах осуществления гидрофобный домен представляет собой трансмембранный домен, как, например, полученный из интегрального мембранного белка (например, рецептора, молекулы кластера дифференцировки (CD), фермента, переносчика, молекулы клеточной адгезии и тому подобного). В конкретных вариантах осуществления гидрофобный участок представляет собой трансмембранный домен из CD4, CD8, CD27 или CD28. В определенных вариантах осуществления трансмембранный домен представляет собой трансмембранный домен из CD28 с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:16.
Эффекторный домен
Эффекторный домен, содержащийся в одноцепочечном гибридном белке по настоящему раскрытию (например, Key-ChEM или T-ChARM), будет представлять собой внутриклеточный компонент и будет способен передавать функциональные сигналы в клетку. В определенных вариантах осуществления одноцепочечный Key-ChEM или T-ChARM будет димеризоваться со вторым одноцепочечным Key-ChEM или T-ChARM соответственно, где димеризация позволяет внутриклеточному компоненту, содержащему эффекторный домен, находиться в непосредственной близости и стимулировать сигнальную трансдукцию при воздействии подходящего сигнала. В дополнение к образованию таких димерных белковых комплексов эффекторные домены могут дополнительно ассоциироваться с другими сигнальными факторами, такими как костимулирующие факторы, с образованием комплексов из нескольких белков, которые вызывают внутриклеточный сигнал. В определенных вариантах осуществления эффекторный домен будет опосредованно стимулировать клеточный ответ путем ассоциации с одним или более другими белками, которые непосредственно стимулируют клеточный ответ. Эффекторный домен может включать в себя один, два, три или более рецепторных сигнальных домена, костимулирующих домена или их комбинации. Любой внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен, костимулирующий домен или и то, и другое из любой из множества сигнальных молекул (например, рецепторов сигнальной трансдукции), можно использовать в гибридных белках по настоящему раскрытию.
Эффекторный домен, пригодный в гибридных белках по настоящему раскрытию, может быть из белка сигнального пути Wnt (например, LRP, Ryk, ROR2), сигнального пути NOTCH (например, NOTCH1, NTOCH2, NOTCH3, NOTCH4), сигнального пути Hedgehog (например, PTCH, SMO), рецепторных тирозинкиназ (RTK) (например, семейства рецепторов эпидермального фактора роста (EGF), семейства рецепторов фактора роста фибробластов (FGF), семейства рецепторов фактора роста гепатоцитов (HGF), семейства инсулиновых рецепторов (IR), семейства рецепторов тромбоцитарного фактора роста (PDGF), семейства рецепторов фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), семейства рецепторов тропомицин-рецепторной киназы (Trk), семейства рецепторов эфрина (Eph), семейства рецепторов AXL, семейства рецепторов тирозинкиназы лейкоцитов (LTK), семейства рецепторов тирозинкиназы с иммуноглобулиноподобными и EGF-подобными доменами 1 (TIE), семейства орфанных рецепторов, подобных рецепторной тирозинкиназе (ROR), семейства рецепторов дискоидинового домена (DDR), семейства рецепторов с перестройкой во время трансфекции (RET), семейства рецепторов, подобных тирозиновой протеинкиназе (PTK7), семейства рецепторов, родственных рецепторной тирозинкиназе (RYK), семейства рецепторов специфической мышечной киназы (MuSK)); G-белок-связанных рецепторов, GPCR (Frizzled, Smoothened); серин/треонинкиназных рецепторов (BMPR, TGFR) или цитокиновых рецепторов (IL1R, IL2R, IL7R, IL15R).
В определенных вариантах осуществления эффекторный домен содержит сигнальный домен рецептора лимфоцитов или содержит аминокислотные последовательности с одним или множеством активационных тирозинсодержащих мотивов иммунорецепторов (ITAM). В других дополнительных вариантах осуществления эффекторный домен содержит цитоплазматический участок, который ассоциирован с цитоплазматическим сигнальным белком, где цитоплазматический сигнальный белок представляет собой рецептор лимфоцитов или его сигнальный домен, белок, содержащий множество ITAM, костимулирующий фактор или любую их комбинацию.
Иллюстративные эффекторные домены включают полученные из 4-1BB (например, SEQ ID NO:17), CD3ε, CD3δ, CD3ζ (например, SEQ ID NO:18), CD27, CD28 (например, SEQ ID NO:35), CD79A, CD79B, CARD11, DAP10, FcRα, FcRβ, FcRγ, Fyn, HVEM, ICOS, Lck, LAG3, LAT, LRP, NOTCH1, Wnt, NKG2D, OX40, ROR2, Ryk, SLAMF1, Slp76, pTα, TCRα, TCRβ, TRIM, Zap70, PTCH2 или любую их комбинацию.
В конкретных вариантах осуществления эффекторный домен Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию представляет собой CD3ζ и CD28, представляет собой CD3ζ и 4-1BB или представляет собой CD3ζ, CD28 и 4-1BB.
Домен связывания
Описываемый в данном документе одноцепочечный гибридный белок T-ChARM по настоящему раскрытию содержит домен связывания, который специфически связывает мишень. Связывание мишени доменом связывания может блокировать взаимодействие между мишенью (например, рецептором или лигандом) и другой молекулой и, например, вмешиваться в, уменьшать или устранять определенные функции мишени (например, сигнальную трансдукцию), или связывание мишени может индуцировать определенные биологические пути или идентифицировать мишень для устранения.
Домен связывания может быть любым пептидом, который специфически связывает представляющую интерес мишень. Источники доменов связывания включают вариабельные области антител от различных видов (которые могут быть в форме антител, sFv, scFv, Fab, «grababody» на основе scFv или растворимых VH-доменов или доменных антител), в том числе человека, грызунов, птиц или овец. Дополнительные источники доменов связывания включают вариабельные области антител от разных видов, таких как верблюдовые (от верблюдов, дромадеров или лам; Ghahroudi et al., FEBS Lett. 414:521, 1997; Vincke et al.,J. Biol. Chem. 284:3273, 2009; Hamers- Casterman et al., Nature 363:446, 1993 и Nguyen et al., J. Mol. Biol. 275:413, 1998), акулы-няньки (Roux et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. (USA) 95:11804, 1998), американский гидролаг (Nguyen et al., Immunogen. 54:39, 2002) или миноговые (Herrin et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. (USA) 105:2040, 2008 и Alder et al. Nat. Immunol. 9:319, 2008). Эти антитела могут образовывать антиген-связывающие области с использованием только вариабельной области тяжелой цепи, т. e. эти функциональные антитела являются гомодимерами только тяжелых цепей (называемые «антителами, состоящими только из тяжелых цепей») (Jespers et al., Nat. Biotechnol. 22:1161, 2004; Cortez-Retamozo et al., Cancer Res. 64:2853, 2004; Baral et al., Nature Med. 12:580, 2006 и Barthelemy et al., J. Biol. Chem. 283:3639, 2008).
Альтернативные источники доменов связывания по настоящему раскрытию включают в себя последовательности, которые кодируют случайные пептидные библиотеки, или последовательности, которые кодируют сконструированное многообразие аминокислот в областях петли альтернативных, отличных от антител каркасов, таких как scTCR (см., например, Lake et al., Int. Immunol.11:745, 1999; Maynard et al., J. Immunol. Methods 306:51, 2005; патент США № 8361794), домены фибриногена (см., например, Weisel et al., Science 230:1388, 1985), домены Kunitz (см., например, патент США № 6423498), смоделированные белки анкириновых повторов (DARPin) (Binz et al., J. Mol. Biol. 332:489, 2003 и Binz et al., Nat. Biotechnol. 22:575, 2004), фибронектин-связывающие домены (аднектины или монотела) (Richards et al., J. Mol. Biol. 326:1475, 2003; Parker et al., Protein Eng. Des. Selec. 18:435, 2005 и Hackel et al. (2008) J. Mol. Biol. 381:1238-1252), минибелки с цистеиновыми узлами (Vita et al. (1995) Proc. Nat'l. Acad. Sci. (USA) 92:6404-6408; Martin et al. (2002) Nat. Biotechnol. 21:71, 2002 и Huang et al. (2005) Structure 13:755, 2005), домены тетратрикопептидных повторов (Main et al., Structure 11:497, 2003 и Cortajarena et al., ACS Chem. Biol. 3:161, 2008), домены богатых лейцином повторов (Stumpp et al.,J. Mol. Biol. 332:471, 2003), липокалиновые домены (см., например, WO 2006/095164, Beste et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. (USA) 96:1898, 1999 и Schönfeld et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. (USA) 106:8198, 2009), V-подобные домены (см., например, публикацию заявки на выдачу патента США 2007/0065431), лектиновые домены C-типа (Zelensky and Gready, FEBS J. 272:6179, 2005; Beavil et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. (USA) 89:753, 1992 и Sato et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. (USA) 100:7779, 2003), mAb2 или Fcab™ (см., например, публикации PCT-заявок на выдачу патентов №№ WO 2007/098934; WO 2006/072620), белки с повторами армадилло (см., например, Madhurantakam et al., Protein Sci. 21:1015, 2012; публикация PCT-заявки на выдачу патента № WO 2009/040338), аффилин (Ebersbach et al., J. Mol. Biol. 372:172, 2007), аффитело, авимеры, ноттины, финомеры, атримеры, белок-4, ассоциированный с цитотоксическим Т-лимфоцитом (Weidle et al., Cancer Gen. Proteo. 10:155, 2013) или подобные (Nord et al., Protein Eng. 8:601, 1995; Nord et al., Nat. Biotechnol. 15:772, 1997; Nord et al., Euro. J. Biochem. 268:4269, 2001; Binz et al., Nat. Biotechnol. 23:1257, 2005; Boersma and Pluckthun, Curr. Opin. Biotechnol. 22:849, 2011).
Домены связывания по настоящему раскрытию можно получать как описано в данном документе или с помощью различных способов, известных из уровня техники (см., например, патенты США №№ 6291161 и 6291158). Например, домены связывания по настоящему раскрытию могут быть идентифицированы путем скрининга фаговой библиотеки Fab для Fab-фрагментов, которые специфически связываются с представляющей интерес мишенью (см. Hoet et al., Nat. Biotechnol. 23:344, 2005). Кроме того, общепринятые стратегии получения гидридом с использованием представляющей интерес мишени в качестве иммуногена в подходящих системах (например, мышах, HuMAb mouse®, TC mouse™, KM-mouse®, ламах, курах, крысах, хомячках, кроликах и др.) можно использовать для создания доменов связывания по настоящему раскрытию.
В некоторых вариантах осуществления домен связывания представляет собой одноцепочечный Fv-фрагмент (scFv), который содержит области VH и VL, специфичные к представляющей интерес мишени. В определенных вариантах осуществления области VH и VL являются человеческими. Иллюстративные области VH и VL включают в себя сегменты специфичного моноклонального антитела к CD19, FMC63, (см., например, SEQ ID NO:51 и 52 соответственно).
В определенных вариантах осуществления домен связывания содержит или представляет собой последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентична аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи (VL) (например, из FMC63, SEQ ID NO:52; из R12, SEQ ID NO:56) или вариабельной области тяжелой цепи (VH) (например, из FMC63, SEQ ID NO:51; из R12, SEQ ID NO:55) или обеим, где каждый CDR содержит ноль изменений или не более одного, двух или трех изменений по сравнению с моноклональным антителом или его фрагментом или производным, которое специфически связывается с представляющей интерес мишенью (например, CD 19, ROR1).
В определенных вариантах осуществления VH-область домена связывания по настоящему раскрытию может быть получена из или на основе VH известного моноклонального антитела и может содержать одну или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) вставок, одну или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8, 9, 10) делеций, одну или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) аминокислотных замен (например, консервативных аминокислотных замен или неконсервативных аминокислотных замен) или комбинацию вышеуказанных изменений по сравнению с VH известного моноклонального антитела. Вставка, делеция или замена может находиться в любом месте в VH-области, в том числе на амино- или карбокси-конце или на обоих концах данной области, при условии, что каждый CDR содержит ноль изменений или не более одного, двух или трех изменений, и при условии, что домен связывания, содержащий модифицированную VH-область, по-прежнему может специфически связывать свою мишень со сродством, подобным сродству домена связывания дикого типа.
В дополнительных вариантах осуществления VL-область в домене связывания по настоящему раскрытию получают из или на основе VL известного моноклонального антитела, и она содержит одну или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) вставок, одну или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) делеций, одну или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) аминокислотных замен (например, консервативных аминокислотных замен) или комбинацию вышеуказанных изменений по сравнению с VL известного моноклонального антитела. Вставка, делеция или замена может находиться в любом месте VL-области, в том числе на амино- или карбокси-конце или на обоих концах данной области, при условии, что каждый CDR содержит ноль изменений или не более одного, двух или трех изменений, и при условии, что домен связывания, содержащий модифицированную VL-область, по-прежнему может специфически связывать свою мишень со сродством, подобным сродству домена связывания дикого типа.
VH- и Vl-домены могут располагаться в любой ориентации (т. e. от амино-конца к карбокси-концу, VH-VL или VL-VH) и могут соединяться аминокислотной последовательностью (например, имеющей длину от приблизительно пяти до приблизительно 35 аминокислот), способной обеспечивать спейсерную функцию, так что два субдомена связывания могут взаимодействовать с образованием функционального домена связывания. В определенных вариантах осуществления линкер вариабельной области, который соединяет домены VH и VL, включает в себя относящиеся к семейству (GlynSer), такие как (Gly3Ser)n(Gly4Ser)1 (SEQ ID NO:72), (Gly3Ser)1(Gly4Ser)n (SEQ ID NO:72), (Gly3Ser)n(Gly4Ser)n (SEQ ID NO:72) или (Gly4Ser)n (SEQ ID NO:10), где n представляет собой целое число от 1 до 5. В определенных вариантах осуществления линкер представляет собой (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)3 (SEQ ID NO:13) или Gly-Gly-Gly-Ser)4 (SEQ ID NO:14). В определенных вариантах осуществления эти линкеры на основе (GlynSer) используются для связи доменов VH и VL в домене связывания, и эти линкеры могут также использоваться для связи домена связывания с соединительной областью или с кассетой с меткой или для связи кассеты с меткой с эффекторным доменом. В определенных других вариантах осуществления кассета с меткой представляет собой часть или располагается в пределах линкера на основе (GlynSer), используемого для связи доменов VH и VL в домене связывания. В других дополнительных вариантах осуществления линкер на основе (GlynSer) может использоваться для соединения одной или более кассет с метками с N-концевой частью домена связывания T-ChARM.
В некоторых вариантах осуществления домен связывания представляет собой одноцепочечный T-клеточный рецептор (scTCR), содержащий цепи Vα/β и Cα/β (например, Vα-Cα, Vβ-Cβ, Vα-Vβ) или содержащий пару Vα-Cα, Vβ-Cβ, Vα-Vβ, специфичную к представляющей интерес мишени (например, комплексу пептид-MHC).
В определенных вариантах осуществления домен связывания содержит или представляет собой последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентична аминокислотной последовательности Vα, Vβ, Cα или Cβ TCR, где каждый CDR содержит ноль изменений или не более одного, двух или трех изменений, из TCR или его фрагмента или производного, которое специфически связывается с представляющей интерес мишенью.
В определенных вариантах осуществления Vα, Vβ, Cα или Cβ-область домена связывания по настоящему раскрытию может быть получена из или на основании Vα, Vβ, Cα или Cβ из известного TCR (например, TCR с высоким сродством) и содержать одну или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) вставок, одну или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) делеций, одну или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) аминокислотных замен (например, консервативных аминокислотных замен или неконсервативных аминокислотных замен) или комбинацию вышеуказанных изменений по сравнению с Vα, Vβ, Cα или Cβ из известного TCR. Вставка, делеция или замена может находиться в любом месте в Vα, Vβ, Cα или Cβ-области, в том числе на амино- или карбокси-конце или на обоих концах данной области, при условии, что каждый CDR содержит ноль изменений или не более одного, двух или трех изменений, и при условии, что домен связывания, содержащий модифицированную Vα-, Vβ-, Cα- или Cβ-область, по-прежнему может специфически связывать свою мишень со сродством, подобным сродству дикого типа.
Целевая молекула, которая специфически связывается доменом связывания, содержащимся в одноцепочечном гибридном белке T-ChARM по настоящему раскрытию, может находиться на представляющей интерес клетке или в ассоциации с ней («целевая клетка»). Иллюстративные целевые клетки включают в себя раковую клетку, клетку, связанную с аутоиммунным заболеванием или нарушением или с воспалительным заболеванием или нарушением, и инфекционные организм или клетку (например, бактерию, вирус, инфицированную вирусом клетку). Клетка инфекционного организма, такого как паразит млекопитающего, также предусматривается в качестве целевой клетки.
В определенных вариантах осуществления домены связывания одноцепочечного гибридного белка T-ChARM по настоящему раскрытию распознают мишень, выбранную из антигена опухоли, В-клеточной мишени, представителя суперсемейства рецепторов TNF, представителя семейства Hedgehog, рецепторной тирозинкиназы, протеогликан-родственной молекулы, представителя суперсемейства TGF-β, Wnt-связанной молекулы, T-клеточной мишени, мишени, представляющей собой дендритную клетку, мишени, представляющей собой NK-клетку, мишени, представляющей собой моноцитарную/макрофагальную клетку, или ангиогенной мишени. В дополнительных вариантах осуществления домены связывания одноцепочечного гибридного белка T-ChARM по настоящему раскрытию связывают рецепторный белок, такой как периферические мембранные рецепторные белки или трансмембранные рецепторные белки.
В определенных вариантах осуществления одноцепочечный гибридный белок T-ChARM по настоящему раскрытию специфически связывает мишень, такую как CD3, CEACAM6, c-Met, EGFR, EGFRvIII, ErbB2, ErbB3, ErbB4, EphA2, IGF1R, GD2, O-ацетил-GD2, O-ацетил-GD3, GHRHR, GHR, FFT1, KDR, FFT4, CD44v6, CD151, CA125, CEA, CTLA-4, GITR, BTLA, TGFBR2, TGFBR1, IL6R, gp130, Lewis A, Lewis Y, TNFR1, TNFR2, PD1, PD-L1, PD-L2, HVEM, MAGE-A, мезотелин, NY-ESO-1, PSMA, RANK, ROR1, TNFRSF4, CD40, CD137, TWEAK-R, HLA, пептиды, полученные из опухоли или патогена, связанные с HLA (такие как из hTERT, тирозиназы или WT-1), LTβR, LIFRβ, LRP5, MUC1, OSMRβ, TCRα, TCRβ, CD19, CD20, CD22, CD25, CD28, CD30, CD33, CD52, CD56, CD80, CD81, CD86, CD123, CD171, CD276, B7H4, TLR7, TLR9, PTCH1, PTCH1, Robo1, α-фетопротеин (AFP), Frizzled, OX40 (также называемый CD134) или CD79b. В определенных вариантах осуществления одноцепочечный гибридный белок T-ChARM по настоящему раскрытию специфически связывает патоген-специфичную молекулу, экспрессированную на инфицированных клетках, такую как молекулы из аденовируса, буньявируса, герпесвируса (например, вируса Эпштейна-Барра, цитомегаловируса), паповавируса, папилломавируса (например, вируса папилломы человека, HPV), парамиксовируса, пикорнавируса, рабдовируса (например, вируса бешенства), ортомиксовируса (например, вируса гриппа), поксивируса (например, вируса коровьей оспы), реовируса, ретровируса, лентивируса (например, вируса иммунодефицита человека, HIV), флавивируса (например, вируса гепатита C, HCV; вируса гепатита B, HBV).
Клетки-хозяева и нуклеиновые кислоты
В определенных аспектах настоящее раскрытие предусматривает молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют любой один или более из Key-ChEM или T-ChARM, описанных в данном документе. Такие молекулы нуклеиновых кислот могут быть вставлены в соответствующий вектор (например, вирусный вектор или невирусный плазмидный вектор) для введения в клетку-хозяина, представляющую интерес (например, гемопоэтическую клетку-предшественника, Т-клетку).
Используемый в данном документе термин «рекомбинантный» или «отличный от природного» относится к организму, микроорганизму, клетке, молекуле нуклеиновой кислоты или вектору, которое включает в себя по меньшей мере одно генетическое изменение или было модифицировано путем введения экзогенной молекулы нуклеиновой кислоты, где такие изменения или модификации вводят с помощью способов генной инженерии. Генетические изменения включают в себя, например, модификации с введением экспрессируемых молекул нуклеиновых кислот, кодирующих белки, гибридные белки или ферменты, или другие добавления молекул нуклеиновых кислот, делеции, замены или другие функциональные нарушения генетического материала клетки. Дополнительные модификации включают в себя, например, некодирующие регуляторные области, в которых модификации изменяют экспрессию гена или оперона. В определенных вариантах осуществления клетка, такая как Т-клетка, полученная от субъекта, может быть преобразована в отличную от природной или рекомбинантную клетку (например, отличную от природной или рекомбинантную Т-клетку) путем введения нуклеиновой кислоты, которая кодирует Key-ChEM или T-ChARM, описываемые в данном документе, и в результате чего клетка экспрессирует расположенные на клеточной поверхности Key-ChEM или T-ChARM.
Вектор, который кодирует нуклеокапсид вируса, называют в данном документе «вирусным вектором». Существует большое количество доступных вирусных векторов, пригодных для применения с композициями настоящего раскрытия, в том числе те, которые идентифицированы для применений в генной терапии человека (см. Pfeifer and Verma, Ann. Rev. Genomics Hum. Genet. 2:177, 2001). Подходящие вирусные векторы включают в себя векторы на основе РНК-вирусов, такие как векторы, полученные на основе ретровируса, например, векторы на основе вируса мышиного лейкоза Молони (MLV), и включают в себя более сложные векторы, полученные на основе ретровирусов, например, векторы, полученные на основе лентивируса. Векторы, полученные на основе HIV-1, относятся к этой категории. Другие примеры включают лентивирусные векторы, полученные из HIV-2, FIV, вируса инфекционной анемии лошадей, SIV и вируса Меди-Висна (лентивируса овец). Способы использования ретровирусных и лентивирусных вирусных векторов и пакующих клеток для трансдукции клеток млекопитающих-хозяев вирусными частицами, содержащими трансгены химерных антигенных рецепторов, известны в данной области техники и были ранее описаны, например, в патенте США № 8119772; Walchli et al., PLoS One 6:327930, 2011; Zhao et al., J. Immunol. 174:4415, 2005; Engels et al., Hum. Gene Ther. 14:1155, 2003; Frecha et al., Mol. Ther. 18:1748, 2010; Verhoeyen et al., Methods Mol. Biol. 506:97, 2009. Ретровирусные и лентивирусные векторные конструкции и системы экспрессии также коммерчески доступны.
В определенных вариантах осуществления вирусный вектор применяют для введения неэндогенной последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей Key-ChEM, или неэндогенной последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей T-ChARM, специфичного к мишени. Вирусный вектор может представлять собой ретровирусный вектор или лентивирусный вектор. Вирусный вектор может также включать последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие маркер трансдукции. Маркеры трансдукции для вирусных векторов известны в данной области и включают маркеры отбора, которые могут придавать устойчивость к лекарственным средствам, или детектируемые маркеры, такие как флуоресцентные маркеры, или белки клеточной поверхности, которые могут быть выявлены с помощью таких способов, как проточная цитометрия. В конкретных вариантах осуществления вирусный вектор дополнительно содержит ген-маркер для трансдукции, включающий зеленый флуоресцентный белок, внеклеточный домен CD2 человека или усеченный EGFR человека (huEGFRt; см. Wang et al., Blood 118:1255, 2011). Если геном вирусного вектора содержит множество последовательностей нуклеиновых кислот, которые необходимо экспрессировать в клетке-хозяине в виде отдельных транскриптов, то вирусный вектор может также содержать дополнительные последовательности между двумя (или более) транскриптами, что обеспечивает возможность бицистронной или мультицистронной экспрессии. Примеры таких последовательностей, применяемых в вирусных векторах, включают участки внутренней посадки рибосомы (IRES), участки расщепления фурином, вирусный пептид 2A или любую их комбинацию.
Другие векторы также можно применять для доставки полинуклеотидов, в том числе векторы на основе вирусной ДНК, включая, например, векторы на основе аденовируса и векторы на основе адено-ассоциированного вируса (AAV); векторы, полученные из вирусов простого герпеса (HSV), в том числе ампликон-векторы, HSV с недостаточной репликацией и аттенуированный HSV (Krisky et al., Gene Ther. 5:1517, 1998).
Другие векторы, ранее разработанные для применений в генной терапии, также можно применять с композициями и способами по настоящему раскрытию. Такие векторы включают векторы, полученные из бакуловирусов и α-вирусов (Jolly, D J. 1999. Emerging Viral Vectors, pp 209-40 в Friedmann T. ed. The Development of Human Gene Therapy. New York: Cold Spring Harbor Lab) или плазмидные векторы (такие как «спящая красавица» и другие транспозонные векторы). В некоторых вариантах осуществления вирусный или плазмидный вектор дополнительно содержит генный маркер трансдукции (например, зеленый флуоресцентный белок, huEGFRt).
В определенных вариантах осуществления гемопоэтические клетки-предшественники или эмбриональные стволовые клетки модифицированы так, чтобы содержать неэндогенную молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию. Гемопоэтические клетки-предшественники могут включать в себя клетки-предшественники тимоциты или индуцированные плюрипотентные стволовые клетки, которые могут быть получены или происходить из эмбриональной ткани печени, костного мозга, пуповинной крови или периферической крови. Гемопоэтические клетки-предшественники могут быть получены от человека, мыши, крысы или других млекопитающих. В конкретных вариантах осуществления используют клетки-предшественники тимоциты CD24lo Lin- CD117+.
В определенных вариантах осуществления условия культивирования подразумевают культивирование гемопоэтических клеток-предшественников, экспрессирующих гибридные белки по настоящему раскрытию, в течение времени, достаточного, чтобы индуцировать пролиферацию или дифференцировку. Клетки удерживать в культуре, как правило, в течение от приблизительно 3 дней до приблизительно 5 дней, или от приблизительно 4 до приблизительно 10 дней, или от приблизительно 5 до приблизительно 20 дней. Будет понятно, что клети можно удерживать в течение соответствующего количества времени, необходимого для получения желаемого результата, т. e. необходимых состава клеток или уровня пролиферации. Например, для получения состава клеток, содержащего, главным образом, незрелые и неактивированные T-клетки, клетки можно удерживать в культуре в течение от приблизительно 5 до приблизительно 20 дней. Клетки можно удерживать в культуре в течение от приблизительно 20 до приблизительно 30 дней для получения состава клеток, содержащего, главным образом, зрелые T-клетки. Неадгезивные клетки также можно собирать из культуры в различные моменты времени, как, например, от приблизительно нескольких дней до приблизительно 25 дней. В определенных вариантах осуществления гемопоэтические клетки совместно культивируют на линиях стромальных клеток (патент США № 7575925; Schmitt et al., Nat. Immunol. 5:410, 2004; Schmitt et al., Immunity 17:749, 2002).
В культуру можно добавлять один или более цитокинов, которые стимулируют коммитирование и дифференцировку гемопоэтических клеток-предшественников. Цитокины могут быть человеческими или отличными от человеческих. Типичные примеры цитокинов, которые можно применять, включают всех представителей семейства FGF, включая FGF-4 и FGF-2; Flt-3-лиганд, фактор стволовых клеток (SCF), тромбопоэтин (TPO) и IL-7. Цитокины можно применять в комбинации с гликозаминогликаном, таким как гепарин сульфат.
В некоторых вариантах осуществления клетками, способными экспрессировать гибридный белок по настоящему раскрытию на клеточной поверхности, являются T-клетки, в том числе первичные клетки или клеточные линии, полученные от человека, мыши, крысы или других млекопитающих. При получении от млекопитающего Т-клетка может быть получена из различных источников, включая кровь, костный мозг, лимфатический узел, тимус или другие ткани или жидкости. T-клетка может быть накоплена или очищена. T-клеточные линии хорошо известны из уровня техники, некоторые из них описаны в Sandberg et al., Leukemia 21:230, 2000. В определенных вариантах осуществления применяют Т-клетки, лишенные эндогенной экспрессии цепей α и β TCR. Такие T-клетки могут естественным образом не иметь эндогенной экспрессии цепей α и β TCR или могут быть модифицированы с блокированием экспрессии (например, T-клетки от трансгенных мышей, которые не экспрессируют цепи α и β TCR, или клетки, которые подвергли манипуляции для ингибирования экспрессии цепей α и β TCR) или с нокаутом α-цепи TCR, β-цепи TCR или обоих генов. В определенных вариантах осуществления клетками, способными экспрессировать гибридный белок по настоящему раскрытию на клеточной поверхности, являются не Т-клетки или клетки Т-клеточной линии дифференцировки, а клетки, являющиеся клетками-предшественниками, стволовыми клетками или клетками, которые были изменены для экспрессии антитела к CD3 на клеточной поверхности.
В определенных вариантах осуществления Т-клетка-хозяин, трансфицированная для экспрессии Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию, является функциональной Т-клеткой, такой как вирус-специфичная Т-клетка, специфичная к опухолевому антигену цитотоксическая Т-клетка, наивная Т-клетка, стволовая Т-клетка памяти, Т-клетка центральной или эффекторной памяти или регуляторная CD4+ CD25+ T-клетка.
В культуру можно добавлять один или более факторов роста-цитокинов, которые стимулируют пролиферацию Т-клеток, экспрессирующих Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию. Цитокины могут быть человеческими или отличными от человеческих. Иллюстративные факторы роста-цитокины, которые можно применить для стимуляции пролиферации Т-клеток, включают IL2, IL15 или подобные.
Применения
Заболевания, которые можно лечить с использованием клеток, экспрессирующих Key-ChEM или T-ChARM, описываемые в настоящем раскрытии, включают рак, инфекционные заболевания (вирусные, бактериальные, протозойные инфекции), иммунные заболевания (например, аутоиммунные) или заболевания, связанные со старением (например, физиологическим старением). Адоптивная иммунная и генная терапия представляют собой перспективные способы лечения различных типов рака (Morgan et al., Science 314:126, 2006; Schmitt et al., Hum. Gene Ther. 20:1240, 2009; June, J. Clin. Invest. 117:1466, 2007) и инфекционных заболеваний (Kitchen et al., PLoS One 4:38208, 2009; Rossi et al., Nat. Biotechnol. 25:1444, 2007; Zhang et al., PLoS Pathog. 6:e1001018, 2010; Luo et al., J. Mol. Med. 89:903, 2011).
Разнообразные формы рака, включая солидные опухоли и формы лейкоза, восприимчивы к композициям и способам, раскрытым в данном документе. Иллюстративные типы рака, которые можно лечить, включают аденокарциному молочной железы, предстательной железы и толстой кишки; все формы бронхогенного рака легкого; миелоидный лейкоз; меланому; гепатому; нейробластому; папиллому; апудому; хористому; бранхиогенную опухоль; злокачественный карциноидный синдром; карциноидную болезнь сердца и виды эпителиомы (например, крациносаркому Уокера, базально-клеточную эпителиому, базальную плоскоклеточную карциному, карциному Брауна-Пирса, внутрипротоковый рак, опухоль Эрлиха, карциному Кребса 2, карциному из клеток Меркеля, слизеобразующий рак, немелкоклеточный рак легкого, овсяноклеточный рак, папиллокарциному, фиброзный рак, рак бронха, бронхогенный рак, плоскоклеточный рак и переходноклеточный рак). Дополнительные типы рака, которые можно лечить, включают ассоциированные с гистиоцитами нарушения; злокачественный гистиоцитоз; лейкоз; болезнь Ходжкина; иммунопролиферативную болезнь тонкого кишечника; неходжкинскую лимфому; плазмоцитому; ретикулоэндотелиоз; меланому; хондробластому; хондрому; хондросаркому; фиброму; фибросаркому; гигантоклеточные опухоли; гистиоцитому; липому; липосаркому; мезотелиому; миксому; миксосаркому; остеому; остеосаркому; хордому; краниофарингиому; дисгерминому; гамартому; мезенхимому; мезонефрому; миосаркому; амелобластому; цементому; одонтому; тератому; тимому; трофобластическую опухоль. Кроме того, следующие типы рака также рассматриваются как поддающиеся лечению: аденома; холангиома; холестеатома; циклиндрома; цистаденокарцинома; цистаденома; гранулезоклеточная опухоль; арренобластома; гепатома; гидраденома; инсулома; опухоль из клеток Лейдига; папиллома; опухоль из клеток Сертоли; текаклеточная опухоль; лейомиома; лейомиосаркома; зернисто-клеточная миобластома; миома; миосаркома; рабдомиома; рабдомиосаркома; эпендимома; ганглионеврома; глиома; медуллобластома; менингиома; невринома; нейробластома; эпендимома; нейрофиброма; неврома; параганглиома; нехромаффинная параганглиома. Типы рака, которые можно лечить, также включают ангиокератому; ангиолимфоидную гиперплазию с эозинофилией; склерозирующую ангиому; ангиоматоз; гломангиому; гемангиоэндотелиому; гемангиому; гемангиоперицитому; гемангиосаркому; лимфангиому; лимфангиомиому; лимфангиосаркому; пинеалому; карциносаркому; хондросаркому; листовидную цистосаркому; фибросаркому; гемангиосаркому; леймиосаркому; лейкосаркому; липосаркому; лимфангиосаркому; миосаркому; миксосаркому; рак яичников; рабдомиосаркому; саркому; новообразования; нейрофиброматоз и дисплазию шейки матки.
Иллюстрацией различных гиперпролиферативных нарушений, восприимчивых к терапии при помощи Key-ChEM или T-ChARM, являются формы B-клеточного рака, в том числе B-клеточные лимфомы (такие как различные формы болезни Ходжкина, неходжкинская лимфома (NHL) или лимфомы центральной нервной системы), лейкозы (такие как острый лимфобластный лейкоз (ALL), хронический лимфолейкоз (CLL), злокачественный ретикулоэндотелиоз, бласттрансформация В-клеток при хроническом миелоидном лейкозе) и миеломы (такие как множественная миелома). Дополнительные формы В-клеточного рака включают мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому, B-клеточный пролимфоцитарный лейкоз, лимфоплазмоцитарную лимфому, лимфому маргинальной зоны селезенки, плазмаклеточную миелому, солитарную плазмоцитому кости, экстраоссальную плазмоцитому, экстранодальную В-клеточную лимфому маргинальной зоны лимфоидной ткани слизистых (MALT), нодальную В-клеточную лимфому маргинальной зоны, фолликулярную лимфому, лимфому из клеток мантийной зоны, диффузную В-крупноклеточную лимфому, В-крупноклеточную лимфому средостения (из тимуса), внутрисосудистую В-крупноклеточную лимфому, первичную выпотную лимфому, лимфому/лейкоз Беркитта, формы B-клеточной пролиферации с неопределенным потенциалом злокачественности, лимфогранулематоз и посттрансплантационное лимфопролиферативное расстройство.
Воспалительные и аутоиммунные заболевания включают артрит, ревматоидный артрит, ювенильный ревматоидный артрит, остеоартрит, полихондрит, псориатический артрит, псориаз, дерматит, полимиозит/дерматомиозит, миозит с включенными тельцами, воспалительный миозит, токсический эпидермальный некролиз, системную склеродермию и склероз, CREST-синдром, воспалительное заболевание кишечника, болезнь Крона, неспецифический язвенный колит, респираторный дистресс-синдром, респираторный дистресс-синдром взрослых (ARDS), менингит, энцефалит, увеит, колит, гломерулонефрит, аллергические состояния, экзему, астму, состояния, включающие инфильтрацию Т-клеток и хронические воспалительные реакции, атеросклероз, аутоиммунный миокардит, нарушение адгезии лейкоцитов, системную красную волчанку (SLE), подострую кожную красную волчанку, дискоидную волчанку, миелит при системной красной волчанке, энцефалит при системной красной волчанке, ювенильный диабет, рассеянный склероз, аллергический энцефаломиелит, нейромиелит зрительного нерва, острый ревматизм, хорею Сиденгама, иммунные реакции, ассоциированные с острой гиперчувствительностью и гиперчувствительностью замедленного типа, опосредованными цитокинами и Т-лимфоцитами, туберкулез, саркоидоз, гранулематоз, в том числе гранулематоз Вегенера и болезнь Чарга-Стросса, агранулоцитоз, васкулит (в том числе аллергический васкулит/ангиит, ANCA и ревматоидный васкулит), апластическую анемию, анемию Даймонда-Блекфана, иммунную гемолитическую анемию, в том числе аутоиммунную гемолитическую анемию (AIHA), пернициозную анемию, истинную эритроцитарную аплазию (PRCA), дефицит фактора VIII, гемофилию А, аутоиммунную нейтропению, панцитопению, лейкопению, заболевания, связанные с диапедезом лейкоцитов, воспалительные заболевания центральной нервной системы (CNS), синдром полиорганной недостаточности, миастению гравис, заболевания, опосредованные комплексом антиген-антитело, легочный гемосидероз с гломерулонефритом, антифосфолипидный синдром, аллергический неврит, болезнь Бехчета, синдром Каслмана, синдром Гудпасчера, миастенический синдром Ламберта-Итона, синдром Рейно, синдром Шегрена, синдром Стивенса-Джонсона, отторжение трансплантата паренхиматозных органов, болезнь «трансплантат против хозяина» (GVHD), буллезный пемфигоид, обыкновенную пузырчатку, формы аутоиммунной полиэндокринопатии, формы серонегативной спондилоартропатии, болезнь Рейтера, синдром скованного человека, гигантоклеточный артериит, нефрит, ассоциированный с нарушенным выведением иммунных комплексов, IgA-нефропатию, формы IgM-полиневропатии или опосредованную IgM невропатию, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру (ITP), тромбоцитопенический акроангиотромбоз (TTP), пурпуру Шенлейна-Геноха, аутоиммунную тромбоцитопению, аутоиммунное заболевание яичек и яичников, в том числе аутоиммунные орхит и оофорит, первичный гипотиреоз, аутоиммунные эндокринные заболевания, в том числе аутоиммунный тиреоидит, хронический тиреоидит (тиреоидит Хашимото), подострый тиреоидит, идиопатический гипотиреоз, болезнь Аддисона, болезнь Грейвса, аутоиммунные полигландулярные синдромы (или синдромы полигландулярной эндокринопатии), диабет I типа, также известный как инсулин-зависимый сахарный диабет (IDDM) и синдром Шихана, аутоиммунный гепатит, лимфоидный интерстициальный пневмонит (HIV), облитерирующий бронхиолит (без пересадки), неспецифическую интерстициальную пневмонию (NSIP), синдром Гийена-Барре, васкулит крупных сосудов (в том числе ревматическую полимиалгию и гигантоклеточный артериит (синдром Такаясу), васкулит средних сосудов (в том числе болезнь Кавасаки и узелковый полиартериит), узелковый полиартериит (PAN), анкилозирующий спондилоартрит, болезнь Бергера (IgA-нефропатию), быстро прогрессирующий гломерулонефрит, первичный билиарный цирроз печени, целиакию-спру (глютеновую энтеропатию), криоглобулинемию, криоглобулинемию, ассоциированную с гепатитом, латеральный амиотрофический склероз (ALS), ишемическую болезнь сердца, семейную средиземноморскую лихорадку, микроскопический полиангиит, синдром Когана, синдром Вискотта-Олдрича и облитерирующий тромбангиит.
В конкретных вариантах осуществления способ лечения субъекта с использованием Key-ChEM или T-ChARM, раскрытых в данном документе, включает лечение острого миелоцитарного лейкоза, острого лимфобластного лейкоза и хронического миелоцитарного лейкоза.
Инфекционные заболевания включают в себя заболевания, связанные с возбудителями инфекции, которые включают любое из множества бактерий (например, патогенных E. coli, S. typhimurium, P. aeruginosa, B. anthracis, C. botulinum, C. difficile, C. perfringens, H. pylori, V. cholerae, Listeria spp., Rickettsia spp., Chlamydia spp. и тому подобное), микобактерий и паразитов (в том числе любого из известных паразитарных представителей Protozoa). Инфекционные вирусы включают вирусы эукариотических клеток, такие как аденовирус, буньявирус, герпесвирус, паповавирус, папилломавирус (например, HPV), парамиксовирус, пикорнавирус, рабдовирус (например, вирус бешенства), ортомиксовирус (например, вирус гриппа), поксвирус (например, вирус коровьей оспы), реовирус, ретровирус, лентивирус (например, HIV), флавивирус (например, HCV, HBV) или тому подобное. В определенных вариантах осуществления инфекцию, вызванную цитозольными патогенами, антигены которых обрабатываются и презентируются молекулами MHC класса I, лечат с использованием Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию.
Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию могут быть введены субъекту в связанной с клеткой форме (например, генная терапия популяции целевых клеток (зрелых T-клеток (например, CD8+ или CD4+ T-клетки) или других клеток Т-клеточной линии дифференцировки)). В конкретном варианте осуществления клетки Т-клеточной линии дифференцировки, экспрессирующие Key-ChEM или T-ChARM, вводимые субъекту, являются сингенными, аллогенными или аутологичными клетками. В других вариантах осуществления Key-ChEM или T-ChARM можно вводить субъекту в растворимой форме. Растворимые TCR известны из уровня техники (см., например, Molloy et al., Curr. Opin. Pharmacol. 5:438, 2005; патент США № 6759243).
Фармацевтические композиции, включающие в себя Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию, можно вводить способом, подходящим для заболевания или состояния, подлежащего лечению (или предупреждению), определяемым специалистами в области медицины. Соответствующая доза, подходящая длительность и частота введения композиций будут определяться такими факторами, как состояние пациента, габариты, тип и тяжесть заболевания, конкретная форма активного ингредиента и способ введения. Настоящее раскрытие предусматривает фармацевтические композиции, содержащие клетки, экспрессирующие Key-ChEM или T-ChARM, раскрытые в данном документе, и фармацевтически приемлемые носитель, растворители или наполнитель. Пригодные наполнители включают воду, физиологический раствор, декстрозу, глицерин или подобное и их комбинации.
Преимуществом настоящего раскрытия является то, что клетки, экспрессирующие Key-ChEM или T-ChARM, вводимые пациенту, можно подвергнуть истощению с помощью родственного партнера связывания для кассеты с меткой. В определенных вариантах осуществления настоящее раскрытие предусматривает способ истощения Т-клеток, экспрессирующих Key-ChEM или T-ChARM, с помощью антитела, специфичного для кассеты с меткой, с помощью родственного партнера связывания, специфичного для кассеты с меткой, или с помощью Т-клетки вторичного иммунного ответа, экспрессирующей CAR и имеющей специфичность по отношению к кассете с меткой. В определенных вариантах осуществления кассета с меткой предусматривает иммунодеплецию Т-клеток, экспрессирующих Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию. Устранение сконструированных Т-клеток можно осуществлять с использованием средств для истощения, специфичных к кассете с меткой. Например, если используют Strep-метку, тогда можно применять антитело к Strep-метке, scFv к Strep-метке или Streptactin, каждый из которых слит или конъюгирован с токсичным для клетки реагентом (таким как токсин, радиоактивный металл), или можно применять биспецифичный scFv к Strep-метке/CD3 или Т-клетку с CAR к Strep-метке.
В других определенных вариантах осуществления клетки, экспрессирующие Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию, можно идентифицировать, отсортировать, накапливать или отделять путем связывания с антителами, имеющими специфичность по отношению к кассете с меткой (например, антитела к метке), или с помощью других белков, специфически связывающих кассету с меткой (например, Streptactin связывается со Strep-меткой), которые конъюгированы с гранулами, планшетом для клеточной культуры или любой другой матрицей твердой поверхности. В определенных вариантах осуществления такие клетки сортируют, накапливают или отделяют с помощью аффинной колонки.
В определенных вариантах осуществления настоящее раскрытие предусматривает способ селективной активации Т-клетки путем приведения в контакт отличной от природной или рекомбинантной Т-клетки, экспрессирующей Key-ChEM или T-ChARM, с доменом связывания, специфичным к кассете с меткой и прикрепленным к твердой поверхности или в виде части биосовместимой матрицы (например, альгината, матрицы базальной мембраны (Matrigel®), биополимера). Рекомбинантная Т-клетка содержит экзогенную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию. Например, T-клетку, экспрессирующую Key-ChEM или T-ChARM, можно активировать с помощью гранул, покрытых или конъюгированных с родственным партнером связывания (например, антителом), специфичным к кассете с меткой. Например, если кассета с меткой представляет собой Strep-метку, тогда для индукции активации Т-клеток можно применить гранулы, покрытые StrepTactin, или гранулы, конъюгированные с антителом к Strep-метке. В определенных вариантах осуществления способ включает активацию ex vivo рекомбинантных T-клеток, экспрессирующих Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию, и необязательно дополнительную экспрессию химерного антигенного рецептора (CAR). Такие активированные Т-клетки пригодны в способах лечения заболеваний, описанных в данном документе.
В другом аспекте настоящее раскрытие предусматривает способ селективной стимуляции пролиферации рекомбинантной Т-клетки, экспрессирующей Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию. В определенных вариантах осуществления способ включает селективную пролиферацию ex vivo Т-клеток, экспрессирующих Key-ChEM или T-ChARM, с помощью партнера связывания для метки, такого как антитело. В дополнительных вариантах осуществления способ включает размножение функциональных Т-клеток (например, вирус-специфичных, специфичных к TAA (опухолеассоциированному антигену) CTL или специфических подклассов Т-клеток, таких как наивные T-клетки, стволовые T-клетки памяти, T-клетки центральной или эффекторной памяти, регуляторные CD4+ CD25+ T-клетки) с партнером связывания для метки, таким как антитело, которое необязательно может быть выполнено в присутствии партнера связывания для костимулирующей молекулы (такого как антитело к CD27 или к CD28). В определенных вариантах осуществления партнеры связывания, представляющие собой антитела к метке, можно использовать для активации трансдуцированной Key-ChEM (например, Wnt или Notch Key-ChEM) гемопоэтической стволовой клетки, эмбриональной стволовой клетки или тканевой стволовой клетки (например, нервной стволовой клетки) к самообновлению, пролиферации или дифференцировке в один или более требуемых фенотипов для терапевтического применения.
В других дополнительных вариантах осуществления Key-ChEM или T-ChARM позволяет селективно стимулировать пролиферацию Т-клеток in vivo при экспрессии Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию. В определенных вариантах осуществления T-клетка, экспрессирующая CAR, содержащий кассету с меткой, позволяет in vivo размножить Т-клетку с CAR при контакте с клетками, экспрессирующими лиганд (например, в том числе клеточные лиганды Т-клеток-супрессоров PD-L1, PD-L2). Такие размноженные Т-клетки пригодны в способах лечения заболеваний, описанных в данном документе. В определенных вариантах осуществления пролиферацию или размножение клеток, экспрессирующих Key-ChEM или T-ChARM, раскрытые в данном документе, индуцируют in vivo, что можно вызвать с помощью партнера связывания для кассеты с меткой (такого как антитело к метке) и необязательно партнера связывания для костимулирующей молекулы (такого как антитело к CD27 или к CD28).
В некоторых дополнительных вариантах осуществления клетки, экспрессирующие Key-ChEM или T-ChARM, раскрытые в данном документе, активируют in vivo, как, например, в месте опухоли. Например, композиция (например, альгинат, матрица базальной мембраны (Matrigel®), биополимер или другая матрица) или носитель (например, микрогранула, наночастица или другая твердая поверхность), содержащий партнера связывания для кассеты с меткой (такого как антитело к метке) и партнера связывания для костимулирующей молекулы (такого как антитело к CD27 или CD28), могут быть использованы для локальной активации в месте опухоли (например, солидной опухоли) Т-клетки, экспрессирующей Key-ChEM или T-ChARM, раскрытые в данном документе.
В определенных вариантах осуществления рекомбинантные клетки, экспрессирующие Key-ChEM или T-ChARM, можно обнаруживать или отслеживать in vivo с помощью антител, которые связывают со специфичностью кассету с меткой (например, антител к метке), или с помощью других родственных связывающих белков, которые специфически связывают последовательность кассеты с меткой (например, Streptactin связывается со Strep-меткой), где партнеры связывания для кассеты с меткой конъюгированы с флуоресцентным красителем, радиоактивной меткой, наночастицей с оксидом железа или другим визуализирующим средством, известным из уровня техники, для детекции с помощью рентгеновского анализа, КT-сканирования, МРТ-сканирования, ПЭТ-сканирования, ультразвукового исследования, проточной цитометрии, систем визуализации в ближней инфракрасной области спектра или других методов визуализации (см., например, Yu et al., Theranostics 2:3,2012).
В дополнительных вариантах осуществления клетки, экспрессирующие Key-ChEM или T-ChARM по настоящему раскрытию, можно применять в диагностических способах или способах визуализации, включая способы, используемые применительно к показаниям или состояниям, указанным в данном документе.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
Химерные эффекторные молекулы-ключи (Key-ChEM) и меченые молекулы антигенных рецепторов (T-ChARM) и их производные
Иллюстративные химерные гибридные белки, содержащие одну или более кассет с аффинными метками, показаны на фигуре 1. Кассеты с метками являются, как правило, небольшими (т. e. минимально иммуногенными или неиммуногенными) и не ассоциированы или не связаны с какой-либо молекулой, эндогенной по отношению к хозяину или клетке-хозяину. Метки специфически связываются с гетерологичным родственным рецептором (например, лигандом, антителом или другим партнером связывания), при этом связывание можно применять в отношении данных химерных эффекторных молекул (ChEM) в качестве «ключа» для доступа к и управления (т. e. включения, или выключения, или модулирования) любым из множества клеточных путей (называемые в данном документе как Key-ChEM). Эти меченые химерные гибридные белки могут дополнительно содержать домен связывания, специфичный к конкретной мишени (например, к опухолевому антигену). Например, меченые химерные гибридные белки включают в себя химерные молекулы антигенного рецептора (называемые в данном документе как T-ChARM).
Иллюстративная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая Key-ChEM (фигура 1 A), содержит следующие элементы (от 5' к 3'): Strep tag® II (SEQ ID NO:38, кодирующая пептид Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys, изложенный под SEQ ID NO:1), соединительный участок, в том числе линкерный блок (SEQ ID NO:42, кодирующая пептид (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)2, изложенный под SEQ ID NO:11) и модифицированный шарнир из IgG4 (SEQ ID NO:27, кодирующая пептид Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Pro-Cys-Pro, изложенный под SEQ ID NO:15), трансмембранный домен CD28 (SEQ ID NO:27, кодирующая пептид, изложенный под SEQ ID NO:16) и внутриклеточный компонент, включающий в себя эффекторный домен, содержащий участок 4-1BB (SEQ ID NO:29, кодирующая пептид, изложенный под SEQ ID NO:17) и участок CD3ζ (SEQ ID NO:30, кодирующая пептид, изложенный под SEQ ID NO:18; Kowolik et al., Cancer Res.66:10995, 2006). Эту молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую Key-ChEM (одна метка), клонировали в лентивирусный вектор epHIV7, как описано в Yam et al. (Mol. Ther. 5:479, 2002) и Wang et al. (Blood 118:1255, 2011).
Лентивирусный вектор epHIV7 получили из вектора pHIV7 путем замещения цитомегаловирусного промотора из pHIV7 на промотор EF-1 (Wang et al., 2011; Yam et al., 2002). Лентивирусный вектор также кодирует усеченный полипептид EGFR человека (huEGFRt), который лишен внеклеточных N-концевых лиганд-связывающих доменов и внутриклеточной рецепторной тирозинкиназной активности, но сохраняет нативную аминокислотную последовательность, трансмембранную типа I локализацию на клеточной поверхности и конформационно интактный связывающий эпитоп для моноклонального антитела к EGFR, цетуксимаба (Wang et al., 2011). Лентивирусные векторы скоординировано экспрессируют Key-ChEM и huEGFRt, разделенные саморасщепляющейся последовательностью T2A (Szymczak et al., Nat. Biotechnol. 22:589, 2004), где huEGFRt служит в качестве альтернативного эпитопа для отбора Key-ChEM-положительных клеток с помощью биотинилированного цетуксимаба в сочетании с иммуномагнитными микрогранулами с антителом к биотину.
Иллюстративная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая T-ChARM (фигура 1 E), содержит следующие элементы: scFv, содержащий сегменты генов VH и VL из CD19-специфичного моноклонального антитела FMC63 (SEQ ID NO:36; Wang et al., 2011), Strep tag® II (SEQ ID NO:38, кодирующая пептид Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys, изложенный под SEQ ID NO:1), соединительный участок, в том числе линкерный блок (SEQ ID NO:39, 40 или 41, кодирующая пептид (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)2, изложенный под SEQ ID NO:11) и шарнир из IgG4 (SEQ ID NO:27), трансмембранный домен CD28 (SEQ ID NO:28) и внутриклеточный компонент, включающий в себя эффекторный домен, содержащий участок 4-1BB (SEQ ID NO:29) и участок CD3ζ (SEQ ID NO:30). Иллюстративный T-ChARM, содержащий две метки (T-ChARM2), отличается от T-ChARM с одной меткой (T-ChARM1) включением второго линкерного блока (кодирующего пептид (Gly-Gly-Gly-Ser)2-Gly-Gly-Ser, изложенный под SEQ ID NO:12) между первой и второй Strep-метками. Иллюстративный T-ChARM, содержащий три метки (T-ChARM3), отличается от T-ChARM с двойной меткой включением третьего линкерного блока (кодирующего пептид (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)2, изложенный под SEQ ID NO:11) между второй и третьей Strep-метками. В определенных вариантах осуществления scFv включает в себя области VH и VL из ROR1-специфичного R12 моноклонального антитела (Yang et al., PLoS One 6:e21018, 2011), изложенного под SEQ ID NO:57, и линкер вариабельного домена, изложенный под SEQ ID NO:13. Кроме того, T-ChARM как к CD19, так и к ROR1 в качестве альтернативы конструировали с внутриклеточным компонентом, включающим в себя эффекторный домен, содержащий участок CD28 (SEQ ID NO:35) вместо участка 4-1BB.
В определенных вариантах осуществления любой из гибридных белков, описанных в данном документе, содержит от амино-конца к карбокси-концу: внеклеточный домен связывания scFv или scTCR, кассету с меткой, соединительную область, содержащую шарнир из IgG, трансмембранный домен и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен. В некоторых вариантах осуществления эффекторный домен содержит спаренные 4-1BB и CD3ζ, CD27 и CD3ζ, CD28 и CD3ζ, OX40 и CD3ζ, CD28, 4-1BB и CD3ζ, OX40, 4-1BB и CD3ζ или CD28, OX40 и CD3ζ. Как определено в данном документе, эффекторный домен для любой из этих молекул может представлять собой весь внутриклеточный участок или может включать только эффекторный участок выбранной молекулы.
Иллюстративная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая T-ChARM (N1ChARM; фигура 1 F; SEQ ID NO:58), имеющий N-концевую метку, содержит следующие элементы: секреторную сигнальную последовательность (SEQ ID NO:63, кодирующая пептид MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP, изложенный под SEQ ID NO:47, который отщепляется от зрелого белка), соединительную аминокислоту аспарагин, Strep tag® II (SEQ ID NO:38, кодирующая пептид Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys, изложенный под SEQ ID NO:1), линкерный блок (SEQ ID NO:42, кодирующая пептид (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)2, изложенный под SEQ ID NO:11), scFv из сегментов генов VH и VL из CD19-специфичного моноклонального антитела FMC63 (SEQ ID NO:36; Wang et al., 2011), шарнир из IgG4 (SEQ ID NO:27), трансмембранный домен CD28 (SEQ ID NO:28) и внутриклеточный компонент, включающий в себя эффекторный домен, содержащий участок 4-1BB (SEQ ID NO:29) и участок CD3ζ (SEQ ID NO:30).
Иллюстративная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая T-ChARM (Ch1 ARM; фигура 1 G; SEQ ID NO:59), имеющий метку, встроенную в линкер вариабельной области, содержит следующие элементы: секреторную сигнальную последовательность (SEQ ID NO:63, кодирующая пептид MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP, изложенный под SEQ ID NO:47, который отщепляется от зрелого белка), сегмент гена VH из CD19-специфичного моноклонального антитела FMC63 (кодирующий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:51), первый линкерный блок (кодирующий пептид Gly-Gly-Ser-Gly-Ser-Gly, изложенный под SEQ ID NO:65), соединительную аминокислоту аспарагин, Strep tag® II (SEQ ID NO:38, кодирующая пептид Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys, изложенный под SEQ ID NO:1), второй линкерный блок (кодирующий пептид Gly-Ser-Gly-Ser-Gly, изложенный под SEQ ID NO:66), сегмент гена VL из CD19-специфичного моноклонального антитела FMC63 (кодирующий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:52), шарнир из IgG4 (SEQ ID NO:27), трансмембранный домен CD28 (SEQ ID NO:28) и внутриклеточный компонент, включающий в себя эффекторный домен, содержащий участок 4-1BB (SEQ ID NO:29) и участок CD3ζ (SEQ ID NO:30).
Молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие каждый из этих иллюстративных T-ChARM (например, с одинарной, двойной или тройной меткой, N-концевой меткой, вставленной меткой, с указанными scFv), отдельно клонировали в лентивирусный вектор epHIV7, как описано в Yam et al. (Mol. Ther. 5:479, 2002) и использовали для трансдукции Т-клеток, как описано в примерах в данном документе. В определенных вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие Key-ChARM по настоящему раскрытию, кодон-оптимизировали перед клонированием в лентивирусный вектор epHIV7. Супернатанты с лентивирусом, кодирующим T-ChARM, получили в клетках 293T, совместно трансфицированных каждой из лентивирусных векторных плазмид и упаковочными векторами pCHGP-2, pCMV-Rev2 и pCMV-G с использованием реагента для трансфекции Calphos (Clontech, Маунтин-Вью, Калифорния). Среду заменяли через 16 часов после трансфекции и лентивирусы собирали через 24, 48 и 72 часа.
Пример 2
Получение рекомбинантных T-клеток и экспрессия T-ChARM
CD8+ и CD4+ выделяли из PBMC от нормальных доноров с помощью набора для выделения CD8+/CD4+ T-клеток (Miltenyi Biotec), активировали с помощью гранул с антителом к CD3/CD28 (Life Technologies) согласно инструкциям изготовителя и трансдуцировали лентивирусным супернатантом (как указано в каждом примере) (MOI = 3) с добавлением 0,8 мг/мл полибрена (Millipore, Бедфорд, Массачусетс) на 3 день после активации путем центрифугирования при 2100 об./мин. в течение 45 мин. при 32°C. T-клетки размножали в среде RPMI, 10% человеческой сыворотки, 2 мM L-глутамина и 1% пенициллина-стрептомицина (среда CTL) с добавлением рекомбинантного человеческого (rh) IL-2 до конечной концентрации 50 ед./мл каждые 48 часов. После размножения аликвоту из каждой трансдуцированной Т-клеточной линии окрашивали конъюгированным с биотином антителом к EGFR и стрептавидином-PE (Miltenyi, Оберн, Калифорния). tEGFR+ T-клетки отделяли путем отсортировки на клеточном сортере FACS-Aria (Becton Dickinson). Затем субпопуляцию tEGFR+ T-клеток стимулировали облученными (8000 рад) CD19+ B-LCL в соотношении T-клетки:LCL 1:7 и размножали в течение 8 дней в среде CTL с добавлением 50 ед./мл rh IL-2 каждые 48 часов или с использованием протокола быстрого размножения для T-ChARM R12 (Riddell and Greenberg, J. Immunol. Methods 128:189, 1990).
Следующие конъюгированные антитела использовали для фенотипирования и анализа методом проточной цитометрии: CD4, CD8, CD25, CD137, CD45, аннексин V, CD62L, CD27, CD28 (BD Biosciences), антитело к Streptag II (Genscript), антитело к EGFR (ImClone Systems Incorporated, Бранчбург, Нью-Джерси); StrepTavidin-PE (BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния). Окрашивание пропидиум йодидом (PI, BD Biosciences) проводили для распознавания живых/мертвых клеток в соответствии с указаниями изготовителя. Проточный цитометрический анализ проводили на FACS Canto II, отсортировку-очистку на FACS AriaII (Becton Dickinson, Франклин Лейкс, Нью-Джерси) и данные анализировали с использованием программного обеспечения FlowJo (Treestar, Ашленд, Орегон).
Для изучения экспрессии T-ChARM на клеточной поверхности трансдуцированные Т-клетки отсортировывали по экспрессии EGFRt и оценивали с помощью окрашивания флуорохромом, меченным моноклональным антителом к Streptag. Средняя интенсивность флуоресценции (MFI) окрашивания EGFR была аналогичной у T-клеток, трансдуцированных каждым из T-ChARM и CAR CD19-коротким, что указывало на то, что введение метки в CAR с получением ChARM не мешало экспрессии трансгенов (фигура 21). Моноклональное антитело к Streptag специфически окрашивало T-клетки, трансдуцированные различными T-ChARM, независимо от положения или количества последовательностей меток в каждом из ChARM. Значение MFI окрашивания антителом к Streptag было выше для Т-клеток, трансдуцированных T-ChARM2 и T-ChARM3 по сравнению с T-ChARM1, предположительно, из-за большего чиста сайтов на каждом T-ChARM2 и T-ChARM3 для связывания конъюгата антитело-флуорохром (фигура 21).
Пример 3
Цитолитическая активность Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM
Эффекторную функцию in vitro для основной массы CD8+ T-клеток, сконструированных для экспрессии T-ChARM1, T-ChARM2 или T-ChARM3 (scFv) к CD19, сравнивали с эффекторной функцией Т-клеток, сконструированных для экспрессии CAR к CD19, содержащих соединительные области различной длины - только шарнир из IgG4 (короткий), CH3 и шарнир из IgG4 (средний) и CH2CH3 и шарнир из IgG4 (длинный) соответственно - в анализе с высвобождением хрома. Коротко, целевые клетки метили с 51Cr (PerkinElmer, Норуолк, Коннектикут) в течение ночи, промывали и инкубировали в трех повторах при 1-2 x 103 клеток/лунку с эффекторными Т-клетками при различных соотношениях эффектор:мишень (E:T). Супернатанты собирали для γ-радиометрии после инкубации в течение 4 часов и рассчитывали специфический лизис с использованием стандартной формулы. В качестве целевых клеток использовали Raji/ROR1 (естественные CD19+, трансдуцированные для экспрессии неродственного антигена ROR1) и K562/CD19 (трансдуцированные для экспрессии CD19) с K562/ROR1 (естественными CD19-, трансдуцированными для экспрессии неродственного антигена RОR1), использованными в качестве отрицательного контроля, и клетками LCL-OKT3 (трансдуцированными для экспрессии антитела к CD3 на клеточной поверхности), использованными в качестве положительного контроля. Клетки лимфобластоидной клеточной линии (LCL), сконструированные для экспрессии связанного с мембраной scFv к CD3 (LCL-OKT3), использовали в качестве эталонного стандарта максимального потенциала активации Т-клеточной линии, поскольку эти OKT3-экспрессирующие клетки активируют Т-клетки посредством связывания CD3-комплекса.
T-клетки, экспрессирующие каждую из различных конструкций T-ChARM и CAR к CD19, не были цитотоксическими относительно клеток K562/ROR1 (фигура 2 C), но активировались, становясь цитолитическими, в присутствии экспрессирующих антитело к CD3 клеток LCL/OKT3 (фигура 2 D). Кроме того, Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM или CAR, подтвердили специфическую цитолитическую активность в отношении CD19+ клеток, клеток Raji (фигура 2 B) и K562/CD19 (фигура 2 A). Аналогичные результаты получали, когда метку располагали на амино-конце T-ChARM (N1ChARM) или встраивали в scFv (VH-метка-VL; Ch1 ARM) (см. фигуру 22). Кроме того, эффективность лизиса не была затронута использованными эффекторным доменом (CD28 вместо 4-1BB; см. фигуру 23 A), доменом связывания (к ROR1 вместо к CD19; см. фигуру 23 B) или мишенью (на фигуре 32 показан цитолитический эффект ChARM, меченного Myc). Клетки, экспрессирующие T-ChARM, уничтожали клетки опухоли с той же эффективностью, что и клетки с CAR, содержащим короткий, средний и длинный спейсеры Fc IgG4.
Пример 4
Высвобождение цитокинов Т-клетками, экспрессирующими T-ChARM, при совместном культивировании с клетками K562
Для анализа секреции цитокинов эффекторные (E) клетки (Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM и CAR к CD19) и целевые (T) клетки (K562/CD19 и K562/ROR1, отрицательный контроль) совместно культивировали в трех повторах при соотношении E:T 4:1, инкубировали 24 часа и затем в супернатантах измеряли уровни GM-CSF, IFN-γ, IL-2 и TNF-α с использованием мультиплексного анализа цитокинов (Luminex®).
Из результатов (фигура 3 D) видно, что клетки, экспрессирующие CAR к CD19 с короткой соединительной областью, продуцируют большие количества цитокинов после контакта с целевыми клетками, чем Т-клетки, экспрессирующие CAR к CD19 со средней или длинной соединительной областями. Аналогичную картину наблюдали с клетками, экспрессирующими T-ChARM к CD19, где (фигура 3 A) клетки с T-ChARM1, имеющие более короткий линкер и одну метку, продуцируют большее количество цитокинов после контакта с целевыми клетками, чем клетки с T-ChARM2 или T-ChARM3, имеющие две метки и три метки соответственно. Уровни продуцируемых цитокинов были сходными для клеток с T-ChARM к CD19 и CAR к CD19, хотя клетки, экспрессирующие T-ChARM, индуцировали значительно более высокий уровень продукции IFN-γ, чем клетки, экспрессирующие CAR. На фигурах 3 B и 3 E показано, что продукция цитокинов не индуцировалась в клетках K562, которые не экспрессируют CD19. На фигурах 3 C и 3 F показаны результаты положительного контроля, который представляет собой стимуляцию PMA/иономицином. Аналогичные результаты наблюдали при изучении конструкций N1ChARM и Ch1 ARM (см. фигуру 24). Кроме того, иерархия продукции цитокинов и пролиферации Т-клеток, трансдуцированных ChARM к CD19, не зависела от костимулирующего домена (4-1BB или CD28), используемого в ChARM (фигура 25).
Пример 5
Высвобождение цитокинов Т-клетками, экспрессирующими молекулы T-ChARM, при совместном культивировании с клетками В-клеточной лимфомы Raji
T-клетки, экспрессирующие различные T-ChARM или CAR к CD19, совместно культивировали с CD19+ клетками Raji в течение 24 часов, и супернатанты изучали в мультиплексном анализе цитокинов (Luminex®). Для анализа секреции цитокинов эффекторные (E) клетки (Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM и CAR к CD19) и целевые (T) клетки (Raji) совместно культивировали в трех повторах при соотношении E:T 2:1, инкубировали 24 часа и затем в супернатантах измеряли уровни GM-CSF, IFN-γ, IL-2 и TNF-α с использованием мультиплексного анализа цитокинов (Luminex®).
Результаты указывают, что Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM к CD19 с одной, двумя или тремя кассетами с метками, способны продуцировать намного более высокие уровни IFN-γ и GM-CSF при совместном культивировании с клетками Raji (фигура 4 A) по сравнению с Т-клетками, экспрессирующими любой из обычных CAR к CD19 (фигура 4 B).
Пример 6
Пролиферация T-клеток, экспрессирующих молекулы T-ChARM
Для анализа клеточной пролиферации Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM или CAR к CD19, метили с помощью 0,2 мкM карбоксифлуоресцеинсукцинимидилового сложного эфира (CFSE, Invitrogen), который связывается с внутриклеточными белками и делает клетки видимыми при проточной цитометрии в канале FITC. После внесения метки клетки промывали и высевали в трех повторах с клетками-стимуляторами в соотношении 4:1 (K562/CD19 или K562/ROR1, отрицательный контроль) в среду CTL без экзогенных цитокинов. После инкубирования в течение 72 часов клетки метили PI для исключения мертвых клеток из анализа. Образцы анализировали с помощью проточной цитометрии и клеточное деление живых CD3+ Т-клеток оценивали по степени разбавления CFSE (т. e. разбавление красителя является индикатором пролиферации, так как концентрация метки разбавляется наполовину с каждым делением клетки).
Для анализа лунки трех повторов объединяли и измеряли пролиферацию живых CD8+ T-клеток. Крайний левый столбец представляет собой график прямого светорассеяния/бокового светорассеяния общего числа клеток, средний столбец представляет собой график гейтированных относительно CD8+ T-клеток и крайний правый столбец представляет собой гистограмму, показывающую разбавление CFSE в субпопуляции CD8+ T-клеток (увеличенное разбавление слева). Красный пик в крайнем правом столбце указывает на отсутствие деления клеток, а голубые пики представляют указание ≥3, 2 или 1 клеточное деление, и три числа в каждой из гистограмм указывают процент клеток, которые имеют разбавленный CFSE и подверглись более чем 3, 2 или 1 клеточному делению соответственно. Из гистограммы видно, что Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM и CAR интенсивно пролиферировали в течение 72 часов после стимуляции совместным культивированием с клетками K562/CD19 (синий), но не с клетками отрицательного контроля K562/ROR1 (красный) (фигура 5). Среднее число клеточных делений было выше у Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM1 и T-ChARM2, по сравнению с Т-клетками, экспрессирующими T-ChARM3 или CAR (с длинным). Аналогичным образом, уровень пролиферации не зависел от костимулирующего домена (4-1BB или CD28), используемого в ChARM (фигура 26), и не зависел от используемой метки (на фигуре 31 показана равная пролиферация при использовании Myc-метки).
Пример 7
In vivo адоптивный перенос Т-клеток, экспрессирующих молекулы T-ChARM
Самок мышей NOD.CB17-Prkdcscid/J (NOD/SCID) или NOD.Cg-Prkdescid112rgtm1Wjl/SzJ (NSG) возрастом от шести до восьми недель получали из Jackson Laboratory или разводили своими силами. Мышам вводили внутривенно (i. v.) 0,5 x 106 опухолевых клеток лимфомы Raji, трансфицированных люциферазой светлячка (Raji-ffluc), через хвостовую вену и позволяли опухоли прижиться в течение 6 дней. На 7 день мышам вводили одну внутривенную (i. v.) инъекцию 5 x 106 T-клеток, трансдуцированных одной из человеческих Т-клеток с T-ChARM1, T-ChARM2, T-ChARM3, CAR (с коротким), CAR (со средним) и CAR (с длинным) (scFv) к CD19. Для подтверждения приживления опухоли проводили биолюминесцентную визуализацию на 6 день после инокуляции Raji-ffluc (фигура 6 A). Для контроля противоопухолевой активности адоптивной Т-клеточной терапии проводили биолюминесцентную визуализацию на 7 день (фигура 6 B), 11 день (фигура 6 C), 18 день (фигура 6 D) и 26 день (фигура 6 E) после введения T-клеток.
Для биолюминесцентной визуализации опухолевых клеток мышам вводили внутрибрюшинные (i. p.) инъекции люциферинового субстрата (CaliperFife Sciences, Гопкинтон, Массачусетс), ресуспендированного в PBS (15 мкг/г массы тела). Мышей анестезировали изофлураном в индукционной камере и поддавали визуализации с помощью системы визуализации in vivo Xenogen IVIS (Caliper Life Sciences) через 10, 12 и 14 минут после инъекции люциферина в режиме отсортировки небольшого количества при времени обнаружения 1 секунда -1 минута для получения ненасыщенных изображений. Люциферазную активность анализировали с помощью программного обеспечения Living Image Software (Caliper Life Sciences) и поток фотонов анализировали в представляющих интерес областях, которые охватывали все тело каждой отдельной мыши.
На биолюминесцентных изображениях видно, что Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM1, T-ChARM2 или T-ChARM3 к CD19, уничтожали опухоль также эффективно, как и Т-клетки, экспрессирующие CAR (с коротким) или CAR (со средним) к CD19, тогда как T-клетки, экспрессирующие CAR (с длинным), были не очень эффективны для данной конкретной конструкции и/или мишени (фигура 6).
Пример 8
In vivo устойчивость T-клеток, экспрессирующих молекулы T-ChARM
Когорту мышей NSG, несущих опухоли Raji, обрабатывали 5 x 106 человеческих Т-клеток, экспрессирующих CAR/huEGFRt или T-ChARM/huEGFRt к CD19, и через 3 недели анализировали периферическую кровь (взятие крови из орбиты глаза) с помощью проточной цитометрии с использованием моноклональных антител к huEGFR, к CD8 человека и к CD45 человека. Количество CD8+ huEGFRt+ (Wang et al., 2011) T-клеток показано в виде процентного содержания от живых клеток периферической крови на фигуре 7. Уровень детектируемых huEGFRt коррелирует с уровнем Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM.
Хотя Т-клетки, экспрессирующие CAR (с длинным) к CD19 не были систематически видны через 3 недели, все другие Т-клетки, экспрессирующие CAR и T-ChARM к CD19, легко обнаруживали в периферической крови мышей NSG в течение по меньшей мере 3 недель после адоптивного переноса и уничтожения опухоли. Из этих результатов видно, что Т-клетки, экспрессирующие CAR и T-ChARM к CD19, могут сохраняться в течение длительного периода времени in vivo и опосредовать противоопухолевую активность.
Пример 9
Идентификация T-клеток, экспрессирующих молекулы T-ChARM
Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM/huEFRt к CD19, окрашивали комплексами антитело к EGFR-биотин/стрептавидин-PE, антитело к Strep-метке II-FITC, Strep-Tactin®-APC (аллофикоцианин) и затем анализировали с помощью проточной цитометрии. Т-клетки, трансдуцированные CAR (с коротким) к CD19, использовали в качестве контроля. Все из трансдуцированных T-клеток с T-ChARM и CAR (с коротким) к CD19 положительно окрашивались моноклональным антителом к EGFR, что указывало на то, что они трансдуцированы и экспрессируют huEGFRT (фигура 8 A).
Из результатов видно, что Т-клетки, трансдуцированные T-ChARM2 и T-ChARM3, можно легко отличить от нетрансдуцированных клеток с помощью реагентов, которые окрашивают последовательность метки, экспрессируемую в клетках с T-ChARM (фигура 8 B, C). Т-клетки, трансдуцированные T-ChARM1, T-ChARM2 и T-ChARM3, но не CAR (с коротким) к CD19, положительно окрашивались антителом к Strep-метке II-FITC (фигура 8 B). Те, которые были с большим числом копий последовательности метки, имели повышенный сигнал окрашивания. Клетки с T-ChARM также окрашивались Streptactin APC (фигура 8 C), что показывало, что в случае Strep-метки можно использовать более одного реагента для окрашивания, чтобы обнаружить Т-клетки.
Пример 10
Отсортировка T-клеток, экспрессирующих молекулы T-ChARM
Т-клетки, трансдуцированные T-ChARM2, окрашивали антителом к Strep-метке, меченным FITC, и затем отсортировывали с помощью настольного клеточного сортера FACS (клеточный сортер BD FACSAria II, BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния). На фигуре 9 показаны популяции клеток до отсортировки (верхний ряд) и после отсортировки (нижний ряд). На самой дальней правой секции (после отсортировки) показано, что Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM2, накопили из 15,8% популяции клеток до популяции клеток, которая составляла более 99% Т-клеток с T-ChARM2.
Пример 11
Накопление Т-клеток, экспрессирующих молекулы T-ChARM, с помощью иммуномагнитного отбора
Клетки инкубировали со Streptactin-микрогранулами или наногранулами (IBA, Геттинген, Германия), затем загружали на колонку MACS (Miltenyi Biotec) в магнитном сепараторе. Колонку промывали 3 раза 3 мл буфера MACS. Затем колонку удаляли из сепаратора и магнитные гранулы со Streptactin® с прикрепленными Т-клетками, экспрессирующими Strep-метку, промывали, уверенно толкая поршень в колонку. Т-клетки, трансдуцированные T-ChARM3, смешанные с контрольными Т-клетками, метили одним из следующих видов гранул: микрогранулы со Strep-Tactin № 1 (как правило, используются для очистки белков, размер приблизительно от 0,5 до 1,5 мкм); микрогранулы со Strep-Tactin № 2 (как правило, используются для выделения клеток с помощью Fab Streptamers® [Strep-меченый Fab-фрагмент], размер приблизительно 0,5 мкм); наногранулы со Strep-Tactin № 3 (как правило, используются для выделения клеток с помощью стрептамеров MHC I [Strep-меченый мономер MHCI], размер приблизительно 100 нм); загружали на колонку MACS® (Miltenyi) и вставляли в магнитный сепаратор. Непосредственно выходящую и удержанную фракции отдельно окрашивали антителом к Strep-метке, меченным FITC, и анализировали способом проточной цитометрии.
В первом ряду фигуры 10 показаны популяции клеток до нанесения на колонку с гранулами со Strep-Tactin, тогда как во втором, третьем и четвертом рядах на фигуре 10 показаны популяции клеток из каждого образца после прохождения через колонку с гранулами № 1, № 2 и № 3 соответственно. Во втором ряду показано, что была некоторая потеря клеток, которая могла быть обусловлена размером микрогранул со Strep-Tactin № 1, не позволяющего некоторым клетками проходить через колонку. В целом, по данным видно, что любой тип испытанных гранул со Strep-Tactin был пригоден для прямого накопления Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM.
Пример 12
Активация Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM на клеточной поверхности, с помощью реагентов, связывающих метку
Активация и пролиферация Т-клеток требует двух сигналов: опосредованного вовлечением Т-клеточного антиген-специфического рецептора (TCR) и костимулирующего сигнала, наиболее типично, связывания CD28 с CD80 и CD86 (Ledbetter et al., Blood 75:1531, 1990). Соответственно, были разработаны микрогранулы, покрытые моноклональным антителом к CD3/CD28, для обеспечения обоих необходимых сигналов и неспецифических активации и размножения T-клеток для клинических применений (Riddell and Greenberg, 1990). Стимуляция Т-клеток антителом к CD3/CD28 также облегчает трансдукцию ретровирусными или лентивирусными векторами, которые кодируют CAR, но не селективное размножение трансдуцированных Т-клеток.
T-клетки, трансдуцированные T-ChARM3 к CD19, культивировали в течение 48 ч. в среде CTL либо без обработки (отрицательный контроль), либо с одним из следующих видов обработки: (a) микрогранулы со Strep-Tactin® № 1; (b) микрогранулы со Strep-Tactin № 2; (c) наногранулы со Strep-Tactin № 3; (d) гранулы с G-белком, конъюгированным с антителом к Strep-метке (размер приблизительно 2 мкм); (e) гранулы с G-белком, дважды конъюгированным с антителом к Strep-метке /антителом к CD28, или (f) совместно культивировали с облученными клетками TM-LCL с 50 ед./мл IL2 (положительный контроль). Для определения того, были ли клетки активированы после культивирования в течение 24 ч. и 48 ч., клетки исследовали на присутствие CD25/CD69 с использованием иммунофлуоресцентного окрашивания и проточной цитометрии. T-клетки экспрессируют de novo молекулы активации, в том числе CD69 и CD25, после активации через рецептор на Т-клеточной поверхности или при передаче сигнала через CAR, который экспрессирует CD3ζ. CD69 является одним из самых ранних маркеров активации клеточной поверхности и может быть вовлечен в проходящий процесс активации. Синтез CD25 (α-цепи рецептора IL2), наряду с самим IL2, индуцируется активацией Т-клеток при первоначальном контакте с антигеном.
По данным неожиданно обнаружили, что связывание Strep-метки Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM, посредством гранул, покрытых либо Strep-Tactin, либо антителом к Strep-метке, в значительной степени активировало эти Т-клетки, и дополнительно обнаружили, что размер гранул также может оказывать влияние на уровень активации Т-клеток (фигура 13).
В дальнейших экспериментах с дополнительными конструкциями микрогранулы со Strep-Tactin индуцировали положительную регуляцию CD25 на CD8+ (фигура 27 A) и CD4+ (фигура 27 B) T-клетках, которые экспрессируют ChARM2 и ChARM3, но не на T-клетках, которые экспрессируют ChARM1 или CAR без метки, что указывало на то, что сродство ChARM1 для связывания микрогранул со Strep-Tactin является субоптимальным для основанной на ChARM активации T-клеток. Однако микрогранулы, покрытые антителом к Strep-метке, имеющие сродство связывания со Strep-меткой (KD = ~10 нМ) в 100 раз более высокое, чем у Strep-Tactin (KD = ~1 мкM), активировали различные Т-клетки с ChARM вне зависимости от числа копий или расположения метки в ChARM (фигуры 27 A и B). Следует отметить, что опосредованную связыванием со Strep-меткой активацию можно обнаружить как в T-клетках с 4-1BB и CD28 ChARM (фигура 27 C), так и в T-клетках с ChARM, нацеленных не на CD19 (фигура 27 D, ROR1-нацеленные ChARM1 R12).
Пример 13
Пролиферация Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM на клеточной поверхности, с помощью реагентов, связывающих метку
Т-клетки, трансдуцированные T-ChARM1, T-ChARM2, T-ChARM3 к CD19 и CAR (с длинным) (отрицательный контроль), отдельно культивировали в среде CTL с микрогранулами со Strep-Tactin® и 50 ед./мл IL2. По изображению, полученному при помощи микроскопа, на 5 день видно, что Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM2 и T-ChARM3, неожиданно формировали крупные кластеры вокруг гранул, что указывает на пролиферацию клеток на гранулах со Strep-Tactin, которая не наблюдалась у Т-клеток, экспрессирующих CAR (с длинным) к CD19 (фигура 11). Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM1, показали менее обширные клеточные кластеры, но присутствовало явное размножение клеток, поскольку больше клеток было видно на планшете по сравнению с отрицательным контролем. В дополнительных экспериментах различные Т-клетки, экспрессирующие разные ChARM (в том числе N1ChARM и Ch1 ARM), характеризовались кластерами пролиферации в течение только 48 часов после стимуляции либо микрогранулами со StrepTactin, либо микрогранулами с антителом к Streptag (фигура 28). Т-клетки с CAR с обычным коротким спейсером (CD19-Hi) использовали в качестве отрицательного контроля.
Определяли кривую роста Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM, при культивировании на микрогранулах со Strep-Tactin® (см. фигуры 12 и 29). В общей сложности приблизительно 1 x 106 Т-клеток, трансдуцированных T-ChARM1, T-ChARM2 и T-ChARM3 к CD19, отдельно высевали в среду CTL с микрогранулами со Strep-Tactin, микрогранулами, покрытыми моноклональным антителом к Strep-метке или моноклональными антителами к Strep-метке/CD28 (фигура 28), в присутствии 50 ед./мл IL2 и 5 нг/мл IL15 и культивировали в течение 10 дней. Количество клеток для каждой лунки подсчитывали на 3, 6 и 9 день. По данным видно, что Т-клетки, трансдуцированные T-ChARM3, имели самые высокие темпы роста в течение 9 дней при стимуляции гранулами со Strep-Tactin. При стимуляции гранулами со Strep-Tactin CD8+ или CD4+ T-клетки с ChARM к CD19 размножались в приблизительно 20 - приблизительно 100 раз и наибольшую степень размножения наблюдали у Т-клеток с ChARM3 (фигуры 29 A и B). Гранулы, покрытые антителом к Strep-метке и моноклональными антителами к Strep-метке /CD28, индуцировали даже больший рост (в 100-250 раз) у общего количества Т-клеток с ChARM, и в отличие от стимуляции гранулами со StrepTactin, CD8+ и CD4+ T-клетки, экспрессирующие ChARM1, демонстрировали тенденцию к большей степени размножения, чем Т-клетки, экспрессирующие ChARM2 или ChARM3. T-клетки, которые экспрессировали CD28 ChARM или ChARM к ROR1, также эффективно размножались с гранулами с антителами к Strep-метке/CD28, что показывало применимость данного подхода для размножения Т-клеток с ChARM с различными костимулирующими доменами и специфичностью к различным опухолевым мишеням (данные не показаны).
В другом анализе кривой роста в общей сложности приблизительно 5 x 105 Т-клеток, трансдуцированных T-ChARM3 к CD19, высевали в среду CTL с 50 ед./мл IL2; одними из следующих гранул: (a) микрогранулы со Strep-Tactin № 1, (b) микрогранулы со Strep-Tactin № 2, (c) наногранулы со Strep-Tactin № 3, (d) гранулы с G-белком, конъюгированным с антителом к Strep-метке, (e) гранулы с G-белком, дважды конъюгированным с антителом к Strep-метке /антителом к CD28, или (f) гранулы с двойным антителом к CD3/CD28 (положительный контроль); и культивировали в течение 7 дней. Количество клеток для каждой лунки подсчитывали на 3 день, 5 день и 7 день. По данным видно, что гранулы с G-белком, дважды конъюгированным с антителом к Strep-метке /антителом к CD28, стимулируют максимальную пролиферацию Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM3, на 5 день, что было значительно лучше, чем у положительного контроля с антителом к CD3/CD28 (фигура 16). Реагенты, захватывающие Strep-метку, отличные от микрогранул со Strep-Tactin № 2, стимулировали пролиферацию Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM, до приблизительно такого же уровня, что и положительный контроль с антителом к CD3/CD28.
Для дополнительного подтверждения пролиферации Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM, измеряли уровень белка Ki-67 в качестве суррогатного критерия пролиферации. Ki-67 представляет собой ядерный белок, ассоциированный с и, возможно, необходимый для клеточной пролиферации. T-клетки, трансдуцированные T-ChARM3 к CD19, культивировали в течение 5 дней в среде CTL в присутствии одного из следующих видов обработки: (a) микрогранул со Strep-Tactin® № 1, (b) микрогранул со Strep-Tactin № 2, (c) наногранул со Strep-Tactin № 3, (d) гранул с G-белком, конъюгированным с антителом к Strep-метке, (e) гранул с G-белком, дважды конъюгированным с антителом к Strep-метке /антителом к CD28, или (f) гранул с двойным антителом к CD3/CD28 (положительный контроль). После культивирования в течение 5 дней клетки фиксировали, пермеабилизовали, окрашивали антителом к Ki-67, конъюгированным с FITC, и анализировали с помощью проточной цитометрии.
Из этих данных видно, что гранулы со Strep-Tactin или гранулы с антителом к Strep-метке могут стимулировать селективную клеточную пролиферацию, и пролиферация, измеряемая с помощью окрашивания Ki-67, была лучше, чем наблюдавшаяся с антителом к CD3/CD28 положительного контроля (фигура 14).
Дополнительный уровень белка Ki-67 проводили на Т-клетках, трансдуцированных T-ChARM1, T-ChARM2 или T-ChARM3 к CD19 и культивировавшихся в течение 7 дней в среде CTL при: (a) отсутствии обработки; (b) присутствии микрогранул со Strep-Tactin® № 1 в дозе 15 мкг, 50 мкг или 150 мкг на 1 x 106 клеток или (c) совместном культивировании с облученными клетками ТM-LCL с 50 ед./мл IL2 (положительный контроль). После культивирования в течение 7 дней клетки фиксировали, пермеабилизовали, окрашивали антителом к Ki-67, конъюгированным с FITC, и анализировали с помощью проточной цитометрии. Из этих результатов также видно, что гранулы со Strep-Tactin могут стимулировать пролиферацию Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM, независимо от количества использованных гранул, в частности, для клеток с T-ChARM2 и T-ChARM3 (фигура 15). Кроме того, Т-клетки, экспрессирующие каждый из T-ChARM, пролиферировали в присутствии гранул со Strep-Tactin на том же ил более высоком уровне, нежели при положительной контрольной стимуляции с помощью TM-LCL.
Пример 14
Селективное размножение Т-клеток, экспрессирующих молекулы T-ChARM
В общей сложности приблизительно 5 x 105 CD8+ T-клеток человека стимулировали с помощью гранул с антителом к CD3/CD28. На 2 день обработанные клетки трансдуцировали лентивирусом, содержащим молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую T-ChARM1/huEGFRt к CD19. На 5 день гранулы с антителом к CD3/CD28 удаляли. В этот момент обработанные клетки разделяли на две группы, одну группу дополнительно не обрабатывали, а другую группу обрабатывали микрогранулами со Strep-Tactin® (от приблизительно 0,5 мкм до приблизительно 1,5 мкм). На 10 день клетки из каждой группы собирали, окрашивали иммунофлуоресцентным антителом к Strep-метке и анализировали с помощью проточной цитометрии. По кривой роста видно, что после удаления гранул с антителом к CD3/CD28 добавление микрогранул со Strep-Tactin продолжает стимулировать значительную пролиферацию Т-клеток (фигура 17 A). Из анализа проточной цитометрии видно, что клетки, которые были пролиферирующими, фактически представляли собой Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM, поскольку присутствовал значительно более высокий процент Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM (как измерено посредством окрашивания huEGFRt) в группе, обработанной гранулами со Strep-Tactin (нижняя секция), по сравнению с контрольной группой (верхняя секция) (фигура 17 B). Клетки из каждой группы затем дополнительно отсортировывали с помощью маркера для huEGFRt, после чего 5,0 x 105 клеток размножали путем стимуляции с помощью CD19+ TM-LCL. Клетки, предварительно обработанные микрогранулами со StrepTactin, подвергались значительной и быстрой пролиферации до уровня приблизительно 8,0 x 107 клеток через 7 дней по сравнению только лишь с 4,0 x 106 клеток в контрольной группе. Это показывает, что после стимуляции микрогранулами со Strep-Tactin через последовательность метки T-ChARM последующая повторная стимуляция через scFv-компонент к CD19 T-ChARM является высокоэффективной.
Для определения того, нужна ли вообще стимуляция гранулами с антителом к CD3/CD28 для размножения Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM, авторы данной заявки исследовали, могут ли быть Т-клетки трансдуцированы для экспрессии T-ChARM только с помощью стимуляции цитокинами и затем селективно размножены посредством обработки только гранулами с антителом к Strep-метке. В общей сложности приблизительно 5 x 105 CD8+ T-клеток человека культивировали с 5 нг/мл IL-7 и 10 нг/мл IL-15 в течение 24 ч. и затем трансдуцировали с тем же титром вирусов, кодирующих два типа T-ChARM3 к CD19 (с эффекторным доменом 41BB или CD28). Трансдуцированные клетки на 2 день обрабатывали гранулами с G-белком, конъюгированным с антителом к Strep-метке, и затем на 7 день собирали, окрашивали с помощью иммунофлуоресцентного антитела к Strep-метке II и анализировали с помощью проточной цитометрии.
По данным видно, что гранулы с G-белком, конъюгированным с антителом к Strep-метке, стимулировали пролиферацию Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM, до более чем 60% клеток в культуре (фигуры 18 B и 18 D) в отсутствие стимуляции гранулами с антителом к CD3/CD28. Если трансдуцированные клетки не подвергали воздействию гранул с антителом к Strep-метке, то пролиферировало менее 1% трансдуцированных клеток (фигуры 18 A и 18 C).
Функциональность Т-клеток с ChARM после размножения на гранулах, покрытых только моноклональным антителом к Strep-метке или моноклональными антителами к Strep-метке/CD28, проверяли, чтобы убедиться, что стимуляция через ChARM не будет оказывать неблагоприятного воздействия на распознавание опухоли in vitro или in vivo. Независимо от костимулирующего домена в модели, Т-клетки с ChARM, размноженные на микрогранулах с антителом к Strep-метке, показывали мощную цитолитическую активность, эффективное высвобождение цитокинов и сохраненную экстенсивную пролиферативную способность в комплексе с антигенной стимуляцией по сравнению с клетками до размножения или после вызванного антигеном размножения (TM-LCL) (фигуры 30 A - 30 C). После селективного размножения Т-клетки с ChARM характеризовались высокой жизнеспособностью (>90%), большой долей сохраненной экспрессии костимулирующих рецепторов (CD27/CD28) и маркеров Т-клеток центральной памяти CD45RO и CD62L (фигура 30 D), были способны устранять клетки опухоли Raji у мышей NSG (фигура 30 E) и были способны сохраняться так же, как Т-клетки с CAR, размноженные посредством стимуляции CD19+ B-клетками (фигура 30 L).
Пример 15
Влияние вовлечения реагентов, связывающих метку, на высвобождение цитокинов Т-клетками, экспрессирующими T-ChARM
Т-клетки, экспрессирующие CAR (с коротким) (размноженные при стимуляции TM-LCL) или T-ChARM1 (размноженные при стимуляции TM-LCL или микрогранулами со StrepTactin) к CD19, совместно культивировали в течение 24 часов с клетками Raji (фигура 19 C) или клетками K562, экспрессирующими либо CD19 (фигура 19 A), либо ROR1 (отрицательный контроль) (фигура 19 B). PMA/иономицин использовали в качестве положительного контроля (фигура 19 D). Супернатанты собирали и анализировали с помощью мультиплексного анализа цитокинов (Luminex®). Уровень высвобождения цитокинов Т-клетками, экспрессирующими T-ChARM1 к CD19, культивированными на микрогранулах со Strep-Tactin, был выше (за исключением IFN-γ), чем наблюдавшийся для Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM1, стимулированных клетками TM-LCL (фигура 19 A, C и D). Вне зависимости от условий группа совместного культивирования с клетками K562/ROR1 (отрицательный контроль) не продуцировала каких-либо обнаруживаемых цитокинов (фигура 19 B). Интересно отметить, что наблюдался значительно более высокий уровень продуцирования IL2 в культурах, индуцированных гранулами со Strep-Tactin (более чем 10-кратное повышение), по сравнению с группой, стимулированной TM-LCL.
Пример 16
Пролиферация, усиленная с помощью антитела к Strep-метке в комбинации с антителами к CD27 или к CD28
Очищенные Т-клетки, экспрессирующие T-ChARM3 к CD19 (5 x 105), помещали в среду CTL с 50 ед./мл IL2 на 0 день, и затем в культуру клеток добавляли 2 мкг магнитных гранул с G-белком (NEB), гранулы с G-белком, конъюгированным с антителом к Strep-метке II (0,5 мкг)/ антителом к CD27 (0,5 мкг), или гранулы с G-белком, конъюгированным с антителом к Strep-метке II (0,5 мкг)/ антителом к CD28 (0,5 мкг). Клетки только в культуральной среде использовали в качестве отрицательного контроля. На 5 день клетки изучали под микроскопом.
На фигуре 20 показано, что гранулы с G-белком, конъюгированным с антителом к Strep-метке II, стимулировали размножение Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM, и что комбинирование антитела к Strep-метке II либо с антителом к CD28, либо с антителом к CD27 будет стимулировать размножение Т-клеток, экспрессирующих T-ChARM, еще более эффективно.
Различные варианты осуществления, описанные выше, можно объединять с получением дополнительных вариантов осуществления. Все патенты США, публикации заявок на выдачу патентов США, заявки на выдачу патентов США, иностранные патенты, заявки на иностранный патент и непатентные публикации, упомянутые в данном описании и/или перечисленные в информационном листке заявки, включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме. Аспекты вариантов осуществления могут быть модифицированы, если необходимо использовать концепции различных патентов, заявок и публикаций, для получения дополнительных вариантов осуществления.
Эти и другие изменения могут быть сделаны в вариантах осуществления с учетом приведенного выше подробного описания. В целом, в нижеследующей формуле изобретения используемые термины не должны толковаться как ограничивающие формулу изобретения конкретными вариантами осуществления, раскрытыми в настоящем описании и формуле изобретения, но должны быть истолкованы с включением всех возможных вариантов наряду с полным объемом эквивалентов, на которые эта формула изобретения имеет право. Соответственно, формула изобретения не ограничивается настоящим раскрытием.
Claims (70)
1. Одноцепочечный гибридный белок для активации и стимулирования пролиферации Т-клеток для использования в адоптивной иммунотерапии, содержащий трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным компонентом и внутриклеточным компонентом, где
внеклеточный компонент содержит домен связывания, который специфически связывает мишень, множество меток и соединительную область, содержащую шарнир, и где множество меток содержит от двух до пяти меток и по меньшей мере две из множества меток содержат Strep-метку, и
внутриклеточный компонент содержит эффекторный домен.
2. Одноцепочечный гибридный белок по п. 1, где соединительная область дополнительно содержит
(a) линкерный блок; и/или
(b) линкерный блок, где линкерный блок содержит один или более GlyxSery, где x и y независимо являются целыми числами от 0 до 10 при условии, что x и y оба не равняются 0; и/или
(c) линкерный блок, где линкерный блок представляет собой (GlyxSer)n, где x является целым числом от 1 до 5 и n является целым числом от 1 до 10; и/или
(d) линкерный блок, где линкерный блок представляет собой константную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CH2CH3 или CH3.
3. Одноцепочечный гибридный белок по п. 1 или 2, где
одна или более из множества меток находятся в соединительной области; или
одна или более из множества меток находятся в соединительной области, при этом каждая метка соединена с одним или двумя линкерными блоками, содержащими (GlyxSery)n, где n является целым числом от 1 до 10, x и y независимо являются целыми числами от 0 до 10 при условии, что x и y оба не равняются 0; или
одна или более из множества меток находятся в соединительной области, при этом каждая метка соединена с одним или двумя линкерными блоками, которые имеют аминокислотную последовательность Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 10), (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)2 (SEQ ID NO: 11), (Gly-Gly-Gly-Ser)2-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 12) или любую их комбинацию; или
от одной до пяти меток из множества меток находятся в соединительной области; или
от одной до пяти меток из множества меток находятся в соединительной области, при этом каждая метка соединена с одним или двумя линкерными блоками, содержащими (GlyxSery)n, где n является целым числом от 1 до 10, x и y независимо являются целыми числами от 0 до 10 при условии, что x и y оба не равняются 0; или
соединительная область содержит от одной до пяти меток, при этом каждая метка соединена с одним или двумя линкерными блоками, которые имеют аминокислотную последовательность Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 10), (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)2 (SEQ ID NO: 11), (Gly-Gly-Gly-Ser)2-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 12) или любую их комбинацию.
4. Одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-3, где одноцепочечный гибридный белок дополнительно содержит His-метку, Flag®-метку, Xpress®-метку, Avi-метку, кальмодулиновую метку, полиглутаматную метку, HA-метку, Myc-метку, Nus-метку, S-метку, X-метку, SBP-метку, SofTag, V5-метку, CBP, GST, MBP, GFP, тиоредоксиновую метку или любую их комбинацию.
5. Одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-4, где две или более из множества меток представляют собой или содержат Strep-метку с аминокислотной последовательностью Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys (SEQ ID NO: 1) или Trp-Arg-His-Pro-Gln-Phe-Gly-Gly (SEQ ID NO: 2).
6. Одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-5, где трансмембранный домен представляет собой трансмембранный домен CD4, CD8, CD28 или CD27.
7. Одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-6, где
(a) эффекторный домен содержит внутриклеточный участок или его эффекторный участок из CD3ε, CD3δ, CD3ζ, CD27, CD28, CD79A, CD79B, CD134, CD137, CARD11, DAP10, FcRα, FcRβ, FcRγ, Fyn, HVEM, ICOS, Lck, LAG3, LAT, LRP, NKG2D, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NOTCH4, ROR2, Ryk, SLAMF1, Slp76, pTα, TCRα, TCRβ, TRIM, Zap70, PTCH2 или любую их комбинацию; или
(b) эффекторный домен содержит внутриклеточный участок или его эффекторный участок из (i) CD3ζ и (ii) одного или более из 4-1BB (CD137), CD27, CD28 и OX40 (CD134).
8. Одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-7, где гибридный белок содержит от амино-конца к карбокси-концу:
(a) первую соединительную область, первую Strep-метку, вторую соединительную область, вторую Strep-метку, третью соединительную область, содержащую шарнир, трансмембранный домен и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен; или
(b) первую Strep-метку, первую соединительную область, вторую Strep-метку, вторую соединительную область, содержащую шарнир, трансмембранный домен и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен; или
(c) первую Strep-метку, первую соединительную область, вторую Strep-метку, вторую соединительную область, третью Strep-метку, третью соединительную область, содержащую шарнир, трансмембранный домен и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен; или
(d) от двух до пяти Strep-меток, соединительную область, содержащую шарнир, трансмембранный домен и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен; или
(e) первую Strep-метку, первую соединительную область, вторую Strep-метку, вторую соединительную область, содержащую шарнир из IgG, трансмембранный домен и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен, содержащий внутриклеточный участок или его эффекторный участок из 4-1BB и CD3ζ, CD27 и CD3ζ, CD28 и CD3ζ или CD28, 4-1BB и CD3ζ; или
(f) первую Strep-метку, первую соединительную область, вторую Strep-метку, вторую соединительную область, содержащую шарнир, трансмембранный домен и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен, выбранный из LRP, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NOTCH4, ROR2 или Ryk.
9. Одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-8, где домен связывания содержит scFv, scTCR, эктодомен рецептора или лиганд.
10. Одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-9, где гибридный белок содержит от амино-конца к карбокси-концу:
(a) внеклеточный домен связывания, от двух до пяти Strep-меток, соединительную область, содержащую шарнир, трансмембранный домен и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен; или
(b) внеклеточный домен связывания, первую соединительную область, первую Strep-метку, вторую соединительную область, вторую Strep-метку, третью соединительную область, содержащую шарнир, трансмембранный домен и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен; или
(c) внеклеточный домен связывания, первую Strep-метку, первую соединительную область, вторую Strep-метку, вторую соединительную область, содержащую шарнир, трансмембранный домен и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен; или
(d) внеклеточный домен связывания, первую Strep-метку, первую соединительную область, вторую Strep-метку, вторую соединительную область, третью Strep-метку, третью соединительную область, содержащую шарнир, трансмембранный домен и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен; или
(e) от двух до пяти Strep-меток, внеклеточный домен связывания, соединительную область, содержащую шарнир, трансмембранный домен и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен; или
(f) внеклеточный домен связывания, от двух до пяти Strep-меток, соединительную область, содержащую шарнир, трансмембранный домен и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен; или
(g) внеклеточный домен связывания scFv или scTCR, содержащий линкер вариабельной области, расположенный между вариабельными областями и содержащий по меньшей мере две Strep-метки, соединительную область, содержащую шарнир, трансмембранный домен и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен; или
(h) внеклеточный домен связывания scFv или scTCR, от двух до пяти Strep-меток, соединительную область, содержащую шарнир из IgG, трансмембранный домен и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен, где эффекторный домен выбран из (A) 4-1BB и CD3ζ, (B) CD27 и CD3ζ, (C) CD28 и CD3ζ, (D) OX40 и CD3ζ, (E) CD28, 4-1BB и CD3ζ, (F) OX40, 4-1BB и CD3ζ или (G) CD28, OX40 и CD3ζ; или
(i) внеклеточный домен связывания, содержащий эктодомен рецептора, от двух до пяти Strep-меток, соединительную область, содержащую шарнир, трансмембранный домен и внутриклеточный компонент, содержащий эффекторный домен, где эффекторный домен содержит внутриклеточный участок или его эффекторный участок из 4-1BB, CD27, CD28 или OX40.
11. Одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-8, где гибридный белок дополнительно содержит
(a) домен связывания, нековалентно ассоциированный с внеклеточным компонентом; и/или
(b) домен связывания, нековалентно ассоциированный с внеклеточным компонентом, где нековалентно ассоциированный домен связывания ассоциирует с меткой; и/или
(c) домен связывания, нековалентно ассоциированный с внеклеточным компонентом, где нековалентно ассоциированный домен связывания представляет собой scFv, scTCR, эктодомен рецептора или лиганд; и/или
(d) биспецифичный домен связывания, нековалентно ассоциированный с внеклеточным компонентом, где первая связывающая концевая часть биспецифичного домена связывания является специфичной к метке, а вторая связывающая концевая часть биспецифичного домена связывания является специфичной к мишени, отличной от метки; и/или
(e) биспецифичный домен связывания, нековалентно ассоциированный с внеклеточным компонентом, где обе связывающие концевые части биспецифичного домена связывания являются специфичными к метке; и/или
(f) мультиспецифичный домен связывания, нековалентно ассоциированный с внеклеточным компонентом, где первая концевая часть мультиспецифичного домена связывания связывается с меткой, а вторая концевая часть мультиспецифичного домена связывания является специфичной к одной или более мишеням, отличным от метки.
12. Одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-11, где домен связывания является специфичным к CD3, CEACAM6, c-Met, EGFR, EGFRvIII, ErbB2, ErbB3, ErbB4, EphA2, IGF1R, GD2, O-ацетил-GD2, O-ацетил-GD3, GHRHR, GHR, FLT1, KDR, FLT4, CD44v6, CD151, CA125, CEA, CTLA-4, GITR, BTLA, TGFBR2, TGFBR1, IL6R, gp130, Lewis A, Lewis Y, TNFR1, TNFR2, PD1, PD-L1, PD-L2, HVEM, MAGE-A, мезотелину, NY-ESO-1, PSMA, RANK, ROR1, TNFRSF4, CD40, CD137, TWEAK-R, HLA, ассоциированному с опухолью или патогеном пептиду, связанному с HLA, пептиду hTERT, связанному с HLA, пептиду тирозиназы, связанному с HLA, пептиду WT-1, связанному с HLA, LTβR, LIFRβ, LRP5, MUC1, OSMRβ, TCRα, TCRβ, CD19, CD20, CD22, CD25, CD28, CD30, CD33, CD52, CD56, CD80, CD81, CD86, CD123, CD171, CD276, B7H4, TLR7, TLR9, PTCH1, WT-1, Robo1, α-фетопротеину (AFP), Frizzled, OX40 или CD79b.
13. Молекула нуклеиновой кислоты для активации и стимулирования пролиферации Т-клеток для использования в адоптивной иммунотерапии, кодирующая одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-12.
14. Вектор для экспрессии одноцепочечного гибридного белка по любому из пп. 1-12, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 13.
15. Вектор по п. 14, где вектор является вирусным вектором.
16. Вектор по п. 15, где вирусный вектор является ретровирусным вектором или лентивирусным вектором.
17. Клетка-хозяин для экспрессии одноцепочечного гибридного белка по любому из пп. 1-12, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-12.
18. Клетка-хозяин по п. 17, где клетка-хозяин представляет собой Т-клетку.
19. Способ активации иммунной клетки, содержащей одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-12 и/или молекулу нуклеиновой кислоты по п. 13, при этом способ включает приведение в контакт иммунной клетки с реагентом, содержащим домен связывания, специфичный к Strep-метке гибридного белка.
20. Способ по п. 19, где реагент дополнительно содержит домен связывания, специфичный к другой метке, содержащейся в гибридном белке.
21. Способ стимулирования пролиферации иммунной клетки, содержащей одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-12 и/или молекулу нуклеиновой кислоты по п. 13, при этом способ включает приведение в контакт иммунной клетки с реагентом, содержащим домен связывания, специфичный к Strep-метке гибридного белка, и фактором роста-цитокином в течение времени, достаточного для роста клеток.
22. Способ по п. 21, где реагент дополнительно содержит домен связывания, специфичный к другой метке, содержащейся в гибридном белке.
23. Способ идентификации иммунной клетки, содержащей одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-12 и/или молекулу нуклеиновой кислоты по п. 13, при этом способ включает:
приведение в контакт образца, содержащего иммунную клетку, с реагентом, содержащим домен связывания, специфичный к Strep-метке гибридного белка, где реагент дополнительно содержит детектируемую часть, и
обнаружение присутствия в образце иммунной клетки, экспрессирующей гибридный белок, которая специфически связывается с реагентом.
24. Способ по п. 23, где реагент дополнительно содержит домен связывания, специфичный к другой метке, содержащейся в гибридном белке.
25. Способ накопления иммунной клетки или популяции иммунных клеток, содержащих одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-12 и/или молекулу нуклеиновой кислоты по п. 13, при этом способ включает приведение в контакт образца, содержащего иммунную клетку, с реагентом, содержащим домен связывания, специфичный к Strep-метке гибридного белка, и накопление иммунной клетки, экспрессирующей гибридный белок, которая специфически связывается с реагентом, от других клеток, не экспрессирующих гибридный белок в образце.
26. Способ по п. 25, где реагент дополнительно содержит домен связывания, специфичный к другой метке, содержащейся в гибридном белке.
27. Способ отделения иммунной клетки или популяции иммунных клеток, содержащих одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-12 и/или молекулу нуклеиновой кислоты по п. 13, при этом способ включает приведение в контакт образца, содержащего иммунную клетку, с реагентом, содержащим домен связывания, специфичный к Strep-метке гибридного белка, и отделение иммунной клетки, экспрессирующей гибридный белок, которая специфически связывается с реагентом, от других клеток, не экспрессирующих гибридный белок в образце.
28. Способ по п. 27, где реагент дополнительно содержит домен связывания, специфичный к другой метке, содержащейся в гибридном белке.
29. Способ истощения иммунных клеток, содержащих одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-12 и/или молекулу нуклеиновой кислоты по п. 13, включающий приведение в контакт иммунной клетки с реагентом, содержащим белок связывания, специфичный к Strep-метке гибридного белка, где реагент дополнительно содержит токсичный для клетки реагент, где связывание белка связывания со Strep-меткой приводит к гибели иммунных клеток, экспрессирующих одноцепочечный гибридный белок.
30. Способ по п. 29, где реагент дополнительно содержит белок связывания, специфичный к другой метке, содержащейся в гибридном белке.
31. Применение одноцепочечного гибридного белка по любому из пп. 1-12 в производстве лекарственного средства для адоптивной иммунотерапии.
32. Способ отслеживания иммунных клеток, содержащих одноцепочечный гибридный белок по любому из пп. 1-12 и/или молекулу нуклеиновой кислоты по п. 13, при этом способ включает введение субъекту связывающей молекулы, содержащей детектируемую часть, где субъекту вводят или были введены иммунные клетки, и при этом связывающая молекула специфически связывается с по меньшей мере двумя Strep-метками, содержащимися в одноцепочечном гибридном белке, и обнаружение присутствия молекулы, связавшейся с иммунной клеткой, в субъекте in vivo или в образце, полученном от субъекта после введения, тем самым обнаруживая иммунные клетки в субъекте или в его ткани или жидкости.
33. Способ по п. 32, где способ дополнительно включает введение субъекту связывающей молекулы, специфически связывающейся с другой(ими) меткой(ами), содержащейся(имися) в одноцепочечном гибридном белке.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361919201P | 2013-12-20 | 2013-12-20 | |
US61/919,201 | 2013-12-20 | ||
PCT/US2014/072007 WO2015095895A1 (en) | 2013-12-20 | 2014-12-22 | Tagged chimeric effector molecules and receptors thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2016129045A RU2016129045A (ru) | 2018-01-23 |
RU2729463C2 true RU2729463C2 (ru) | 2020-08-06 |
Family
ID=52396818
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016129045A RU2729463C2 (ru) | 2013-12-20 | 2014-12-22 | Меченые химерные эффекторные молекулы и их рецепторы |
Country Status (25)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US10494434B2 (ru) |
EP (1) | EP3083671B1 (ru) |
JP (4) | JP6942467B2 (ru) |
KR (2) | KR102483822B1 (ru) |
CN (2) | CN113354744A (ru) |
AU (3) | AU2014368892B2 (ru) |
BR (1) | BR112016014156A8 (ru) |
CA (1) | CA2933707A1 (ru) |
CY (1) | CY1123747T1 (ru) |
DK (1) | DK3083671T3 (ru) |
ES (1) | ES2837856T3 (ru) |
HR (1) | HRP20201906T1 (ru) |
HU (1) | HUE052573T2 (ru) |
IL (1) | IL245845B (ru) |
LT (1) | LT3083671T (ru) |
MX (1) | MX2016007927A (ru) |
MY (1) | MY178233A (ru) |
NZ (2) | NZ720520A (ru) |
PL (1) | PL3083671T3 (ru) |
PT (1) | PT3083671T (ru) |
RS (1) | RS61223B1 (ru) |
RU (1) | RU2729463C2 (ru) |
SG (2) | SG10201804439PA (ru) |
SI (1) | SI3083671T1 (ru) |
WO (1) | WO2015095895A1 (ru) |
Families Citing this family (125)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2948544A4 (en) | 2013-01-28 | 2016-08-03 | St Jude Childrens Res Hospital | CHIMERIC RECEPTOR WITH NKG2D SPECIFICITY FOR CELL THERAPY AGAINST CANCER AND INFECTION DISEASES |
SG10201804439PA (en) * | 2013-12-20 | 2018-06-28 | Hutchinson Fred Cancer Res | Tagged chimeric effector molecules and receptors thereof |
EP3105333B1 (en) * | 2014-02-10 | 2020-04-08 | Emory University | Expression of chimeric polypeptide with variable lymphocyte receptors on immune cells and uses for treating cancer |
US9394365B1 (en) | 2014-03-12 | 2016-07-19 | Yeda Research And Development Co., Ltd | Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of alzheimer's disease |
US10519237B2 (en) | 2014-03-12 | 2019-12-31 | Yeda Research And Development Co. Ltd | Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS |
US10618963B2 (en) | 2014-03-12 | 2020-04-14 | Yeda Research And Development Co. Ltd | Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS |
MX2016011832A (es) | 2014-03-12 | 2017-05-12 | Yeda Res & Dev | Reduccion de los niveles o la actividad de las células t reguladoras sistémicas para el tratamiento de enfermedad y lesión del sistema nervioso central (snc). |
IL280738B (en) | 2014-04-16 | 2022-07-01 | Juno Therapeutics Gmbh | Methods, kits and device for increasing cell populations |
US10428305B2 (en) | 2014-05-15 | 2019-10-01 | National University Of Singapore | Modified natural killer cells that express IL15 and uses thereof |
JP6940406B2 (ja) * | 2014-07-25 | 2021-09-29 | テラベクティTheravectys | キメラ抗原レセプター分子の制御的発現のためのレンチウイルスベクター |
TWI805109B (zh) | 2014-08-28 | 2023-06-11 | 美商奇諾治療有限公司 | 對cd19具專一性之抗體及嵌合抗原受體 |
GB201415344D0 (en) * | 2014-08-29 | 2014-10-15 | Ucl Business Plc | Protein |
MA41346A (fr) | 2015-01-12 | 2017-11-21 | Juno Therapeutics Inc | Eléments régulateurs post-transcriptionnels d'hépatite modifiée |
EP3245231B1 (en) | 2015-01-16 | 2020-08-12 | Juno Therapeutics, Inc. | Antibodies and chimeric antigen receptors specific for ror1 |
KR102661969B1 (ko) * | 2015-01-26 | 2024-04-29 | 셀렉티스 에스.에이. | 조작된 면역 세포들의 분류/고갈을 위한 mAb-주도의 키메라 항원 수용체 시스템들 |
MA42971A (fr) | 2015-03-13 | 2018-08-15 | Cytomx Therapeutics Inc | Anticorps anti-pdl1, anticorps anti-pld1 activables, et leurs procédés d'utilisation |
GB201504840D0 (en) * | 2015-03-23 | 2015-05-06 | Ucl Business Plc | Chimeric antigen receptor |
WO2016176652A2 (en) | 2015-04-29 | 2016-11-03 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Modified stem cells and uses thereof |
US20180355318A1 (en) * | 2015-04-29 | 2018-12-13 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Modified hematopoietic stem/progenitor and non-t effector cells, and uses thereof |
ES2819976T5 (es) | 2015-05-18 | 2024-02-23 | Tcr2 Therapeutics Inc | Composiciones y usos médicos para la reprogramación de TCR con proteínas de fusión |
CA2991976A1 (en) | 2015-07-13 | 2017-01-19 | Cytomx Therapeutics, Inc. | Anti-pd-1 antibodies, activatable anti-pd-1 antibodies, and methods of use thereof |
WO2017023138A1 (ko) * | 2015-08-05 | 2017-02-09 | 주식회사 유영제약 | 키메라 항원 수용체 및 키메라 항원 수용체가 발현된 t 세포 |
AU2016301196B2 (en) | 2015-08-06 | 2022-09-08 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Tunable endogenous protein degradation |
MA45488A (fr) | 2015-10-22 | 2018-08-29 | Juno Therapeutics Gmbh | Procédés, kits et appareil de culture de cellules |
BR112018008111A2 (pt) * | 2015-10-22 | 2018-11-06 | Juno Therapeutics Gmbh | métodos, kits, agentes e aparelhos para transdução |
MA45489A (fr) | 2015-10-22 | 2018-08-29 | Juno Therapeutics Gmbh | Procédés de culture de cellules, kits et appareil associés |
EP3368077A4 (en) | 2015-10-30 | 2019-10-16 | Aleta Biotherapeutics Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS OF TUMOR TRANSDUCTION |
MA43135A (fr) | 2015-10-30 | 2018-09-05 | Aleta Biotherapeutics Inc | Compositions et méthodes pour le du traitement du cancer |
JP7092662B2 (ja) * | 2015-10-30 | 2022-06-28 | チルドレンズ ナショナル メディカル センター | ナイーブt細胞集団からのhpv抗原特異的t細胞の生成 |
WO2017132535A1 (en) | 2016-01-28 | 2017-08-03 | The Regents Of The University Of California | Methods for selectively expanding and enriching cells transduced with chimeric antigen receptors and treating hiv infection |
WO2017161353A1 (en) | 2016-03-18 | 2017-09-21 | Fred Hutchinson Cancer Researh Center | Compositions and methods for cd20 immunotherapy |
CN109415409B (zh) | 2016-04-01 | 2022-03-15 | 亘喜生物科技(上海)有限公司 | Flag标记的cd19-car-t细胞 |
CN106399255B (zh) * | 2016-04-13 | 2019-10-18 | 阿思科力(苏州)生物科技有限公司 | Pd-1 car-t细胞及其制备方法和应用 |
BR112018070676A2 (pt) * | 2016-04-15 | 2019-02-05 | Zymeworks Inc | construtos de ligação a antígeno multiespecífico que têm como alvo agentes imunoterapêuticos |
CN105907719B (zh) * | 2016-04-18 | 2019-10-18 | 阿思科力(苏州)生物科技有限公司 | Anti ROBO1 CAR-T细胞及其制备和应用 |
CN107365387B (zh) * | 2016-05-12 | 2022-03-15 | 阿思科力(苏州)生物科技有限公司 | 一种双特异性抗原结合构建体及其制备方法和应用 |
US11339225B2 (en) | 2016-05-12 | 2022-05-24 | Asclepius (Suzhou) Technology Company Group, Co., Ltd. | Bispecific antigen-binding construct and preparation method and use thereof |
WO2017201281A1 (en) * | 2016-05-18 | 2017-11-23 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Targeting pd-l1 on tumor cells |
CN107522786A (zh) * | 2016-06-20 | 2017-12-29 | 深圳市体内生物医药科技有限公司 | 一种分子、表达其的细胞及其制备方法和用途 |
BR112019000693A2 (pt) * | 2016-07-15 | 2019-04-24 | Poseida Therapeutics, Inc. | composições de muc1- car e métodos para uso |
KR20190057275A (ko) * | 2016-07-18 | 2019-05-28 | 헬릭스 바이오파마 코포레이션 | 암을 치료하기 위한 암배아 항원 관련 세포 부착 분자 6에 대한 car 면역 세포 |
AU2017306432A1 (en) | 2016-08-02 | 2019-03-21 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for TCR reprogramming using fusion proteins |
CA3000514A1 (en) | 2016-08-04 | 2018-02-08 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Cancer antigen targets and uses thereof |
EP3445787B1 (en) | 2016-10-07 | 2020-12-02 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for t-cell receptors reprogramming using fusion proteins |
MX2019005029A (es) | 2016-11-03 | 2019-10-24 | Juno Therapeutics Inc | Terapia de combinación de una terapia de células t y un inhibidor de tirosina cinasa de bruton (btk). |
WO2018098365A2 (en) | 2016-11-22 | 2018-05-31 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins |
US20190358262A1 (en) | 2016-12-03 | 2019-11-28 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods for modulation of car-t cells |
CN106701827A (zh) * | 2016-12-05 | 2017-05-24 | 刘晓明 | 表达cd19和cd20抗体基因嵌合抗原受体t细胞的转化及扩增培养与保存方法 |
WO2018112415A1 (en) * | 2016-12-16 | 2018-06-21 | B-Mogen Biotechnologies, Inc. | ENHANCED hAT FAMILY TRANSPOSON-MEDIATED GENE TRANSFER AND ASSOCIATED COMPOSITIONS, SYSTEMS, AND METHODS |
WO2018128486A1 (ko) * | 2017-01-05 | 2018-07-12 | 한국생명공학연구원 | Ceacam6에 특이적으로 결합하는 항-ceacam6 키메릭 항원 수용체 |
CA3050085A1 (en) | 2017-01-20 | 2018-07-26 | Juno Therapeutics Gmbh | Cell surface conjugates and related cell compositions and methods |
WO2018148440A1 (en) | 2017-02-08 | 2018-08-16 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Regulating chimeric antigen receptors |
EP3580568A1 (en) | 2017-02-09 | 2019-12-18 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Biomarkers and uses thereof for selecting immunotherapy intervention |
EP4269594A3 (en) | 2017-02-17 | 2023-12-20 | Fred Hutchinson Cancer Center | Combination therapies for treatment of bcma-related cancers and autoimmune disorders |
JP7270253B2 (ja) | 2017-03-27 | 2023-05-10 | ナショナル ユニヴァーシティ オブ シンガポール | ナチュラルキラー細胞のエクスビボ拡大及び活性化のための刺激細胞株 |
MX2019011514A (es) | 2017-03-27 | 2020-01-27 | Nat Univ Singapore | Receptores quimericos nkg2d truncados y usos de los mismos en inmunoterapia con celulas asesinas naturales. |
CN110730908A (zh) | 2017-04-07 | 2020-01-24 | 朱诺治疗学股份有限公司 | 表达前列腺特异性膜抗原(psma)或其修饰形式的工程化细胞及相关方法 |
BR112019022356A2 (pt) | 2017-04-27 | 2020-05-26 | Juno Therapeutics Gmbh | Reagentes de partícula oligoméricos e métodos de uso dos mesmos |
WO2018222880A1 (en) * | 2017-05-31 | 2018-12-06 | Trustees Of Boston University | Mechano-activated control of gene expression |
WO2018222949A1 (en) | 2017-06-01 | 2018-12-06 | Cytomx Therapeutics, Inc. | Activatable anti-pdl1 antibodies, and methods of use thereof |
JP2020522489A (ja) | 2017-06-02 | 2020-07-30 | ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド | 養子細胞療法を用いる処置のための製造物品および方法 |
CN107098969B (zh) * | 2017-06-28 | 2018-10-12 | 武汉波睿达生物科技有限公司 | 一种治疗hiv感染的嵌合抗原受体的重组基因构建及其应用 |
CN107541499B (zh) * | 2017-07-27 | 2020-04-14 | 山东兴瑞生物科技有限公司 | 一种靶向免疫检测点tnfr2的cik的制备及其应用 |
MX2020001287A (es) * | 2017-08-11 | 2020-08-20 | Hutchinson Fred Cancer Res | Receptor de linfocitos t (tcrs) especificos de braf y usos de los mismos. |
US20200299340A1 (en) * | 2017-08-25 | 2020-09-24 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Fusion proteins comprising detectable tags, nucleic acid molecules, and method of tracking a cell |
JP7319250B2 (ja) * | 2017-09-06 | 2023-08-01 | フレッド ハッチンソン キャンサー センター | Strep-タグ特異的結合タンパク質およびその使用 |
JP7407701B2 (ja) * | 2017-09-06 | 2024-01-04 | フレッド ハッチンソン キャンサー センター | strepタグ特異的キメラ受容体およびその使用 |
US20200292526A1 (en) | 2017-09-07 | 2020-09-17 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods of identifying cellular attributes related to outcomes associated with cell therapy |
SG11202003543WA (en) | 2017-10-18 | 2020-05-28 | Intrexon Corp | Polypeptide compositions comprising spacers |
CN109706120A (zh) * | 2017-10-26 | 2019-05-03 | 深圳宾德生物技术有限公司 | 一种双靶点特异性t淋巴细胞及其制备方法和应用 |
MA50860A (fr) | 2017-11-01 | 2020-09-09 | Juno Therapeutics Inc | Récepterus chimériques d'antigène contre l'antigène de maturation des cellules b et polynucleotides codants |
US11649294B2 (en) | 2017-11-14 | 2023-05-16 | GC Cell Corporation | Anti-HER2 antibody or antigen-binding fragment thereof, and chimeric antigen receptor comprising same |
CN109810995B (zh) * | 2017-12-06 | 2020-10-02 | 阿思科力(苏州)生物科技有限公司 | 编码car的核苷酸序列、表达该car的robo1 car-nk细胞及其制备和应用 |
JP2021505615A (ja) | 2017-12-08 | 2021-02-18 | ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド | 細胞療法および関連方法のための表現型マーカー |
EP3720949A1 (en) | 2017-12-08 | 2020-10-14 | Juno Therapeutics, Inc. | Serum-free media formulation for culturing cells and methods of use thereof |
US20210069246A1 (en) | 2018-01-31 | 2021-03-11 | Celgene Corporation | Combination therapy using adoptive cell therapy and checkpoint inhibitor |
WO2019152957A1 (en) * | 2018-02-02 | 2019-08-08 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University | Dna-chimeric antigen receptor t cells for immunotherapy |
WO2019157496A1 (en) * | 2018-02-12 | 2019-08-15 | University Of Florida Researchfoundation, Inc. | Fviii chimeric antigen receptor tregs for tolerance induction in hemophilia a |
US20210079061A1 (en) | 2018-02-26 | 2021-03-18 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Compositions and methods for cellular immunotherapy |
WO2019178342A1 (en) * | 2018-03-15 | 2019-09-19 | Fundamental Solutions Corporation | Programmable immunocyte receptor complex system |
WO2019213184A1 (en) | 2018-05-03 | 2019-11-07 | Juno Therapeutics, Inc. | Combination therapy of a chimeric antigen receptor (car) t cell therapy and a kinase inhibitor |
US20210223248A1 (en) | 2018-06-01 | 2021-07-22 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Biomarkers, uses thereof for selecting immunotherapy intervention, and immunotherapy methods |
EP3807317A4 (en) * | 2018-06-15 | 2022-03-30 | The Regents of University of California | CHIMERIC FUSION FRAGMENT ANTIGEN RECEPTORS AND USES THEREOF |
CN109136244A (zh) * | 2018-08-31 | 2019-01-04 | 河北璋达生物科技有限公司 | 一种可诱导凋亡的携带检测标签的cd20嵌合抗原受体t淋巴细胞及其应用 |
EP3847188A1 (en) * | 2018-09-03 | 2021-07-14 | Technische Universität München | A double peptide tag combining reversibility and flexible functionalization |
US20210393690A1 (en) | 2018-11-01 | 2021-12-23 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods for treatment using chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen |
AU2019381827A1 (en) | 2018-11-16 | 2021-06-10 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods of dosing engineered T cells for the treatment of B cell malignancies |
CN109467598B (zh) * | 2018-11-28 | 2021-11-09 | 生命谷(海南)生物科技股份有限公司 | 肿瘤相关基因notch1突变短肽及其应用 |
BR112021010120A2 (pt) | 2018-11-30 | 2021-08-31 | Juno Therapeutics, Inc. | Métodos para dosagem e tratamento de malignidades celulares em terapia celular adotiva |
JP2022513685A (ja) | 2018-11-30 | 2022-02-09 | ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド | 養子細胞療法を用いた処置のための方法 |
CN113365660A (zh) | 2019-01-29 | 2021-09-07 | 朱诺治疗学股份有限公司 | 对受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)具特异性的抗体及嵌合抗原受体 |
EP3773918A4 (en) | 2019-03-05 | 2022-01-05 | Nkarta, Inc. | CD19 DIRECTED CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS AND THEIR USES IN IMMUNOTHERAPY |
EP3725370A1 (en) | 2019-04-19 | 2020-10-21 | ImmunoBrain Checkpoint, Inc. | Modified anti-pd-l1 antibodies and methods and uses for treating a neurodegenerative disease |
CN114269371A (zh) | 2019-06-12 | 2022-04-01 | 朱诺治疗学股份有限公司 | 细胞介导的细胞毒性疗法与促存活bcl2家族蛋白的抑制剂的组合疗法 |
CN110358734B (zh) * | 2019-06-13 | 2020-08-25 | 首都医科大学宣武医院 | 以Tcm为主要效应成分的CAR-T制备方法及其应用 |
CN114269770A (zh) | 2019-07-03 | 2022-04-01 | 肽梦想株式会社 | Cd38结合剂及其用途 |
US20210040174A1 (en) * | 2019-08-08 | 2021-02-11 | Navrogen, Inc. | Composition and Use of Humoral Immune Suppressor Antagonists for the Treatment of Humoral Immune Suppressed Diseases |
US20220401483A1 (en) | 2019-11-07 | 2022-12-22 | Juno Therapeutics, Inc. | Combination of a t cell therapy and (s)-3-[4-(4-morpholin-4-ylmethyl-benzyloxy)-l-oxo-l,3-dihydro-isoindol-2-yl]-piperidine-2,6-dione |
CN110734931A (zh) * | 2019-11-18 | 2020-01-31 | 山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司 | 一种靶向CD19的人源化scFv嵌合抗原受体T细胞及制备方法、应用 |
WO2021101349A1 (ko) * | 2019-11-21 | 2021-05-27 | 에이비엘바이오 주식회사 | Ror1 및 b7-h3에 결합하는 항체, 이를 포함하는 항체-약물 접합체 및 그 용도 |
WO2021098834A1 (zh) * | 2019-11-22 | 2021-05-27 | 上海一宸医药科技有限公司 | Psma抗体及其应用 |
KR20220132527A (ko) | 2019-12-06 | 2022-09-30 | 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 | B 세포 악성 종양을 치료하기 위한 세포 요법과 연관된 독성 및 반응과 관련된 방법 |
EP4093433A1 (en) | 2020-01-24 | 2022-11-30 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods for dosing and treatment of follicular lymphoma and marginal zone lymphoma in adoptive cell therapy |
EP4103204A1 (en) | 2020-02-12 | 2022-12-21 | Juno Therapeutics, Inc. | Cd19-directed chimeric antigen receptor t cell compositions and methods and uses thereof |
EP4114449A2 (en) | 2020-03-05 | 2023-01-11 | Neotx Therapeutics Ltd. | Methods and compositions for treating cancer with immune cells |
CN113402612A (zh) * | 2020-03-17 | 2021-09-17 | 西比曼生物科技(香港)有限公司 | 靶向cd19和cd20的联合嵌合抗原受体及其应用 |
CN115335407A (zh) * | 2020-03-25 | 2022-11-11 | 北京艺妙神州医药科技有限公司 | 结合cd19的嵌合抗原受体及其用途 |
JP2023528215A (ja) | 2020-05-13 | 2023-07-04 | ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド | 臨床応答に関連する特徴量の特定方法およびその使用 |
CN112552404B (zh) * | 2020-07-20 | 2022-02-08 | 北京鼎成肽源生物技术有限公司 | 一种靶向c-Met的单链抗体、嵌合抗原受体、重组载体、CAR-T细胞及应用 |
WO2022036495A1 (en) * | 2020-08-17 | 2022-02-24 | Utc Therapeutics Inc. | Lymphocytes-antigen presenting cells co-stimulators and uses thereof |
AU2021376354A1 (en) | 2020-11-04 | 2023-06-22 | Myeloid Therapeutics, Inc. | Engineered chimeric fusion protein compositions and methods of use thereof |
WO2022133030A1 (en) | 2020-12-16 | 2022-06-23 | Juno Therapeutics, Inc. | Combination therapy of a cell therapy and a bcl2 inhibitor |
AU2021401052A1 (en) | 2020-12-18 | 2023-06-22 | Century Therapeutics, Inc. | Chimeric antigen receptor systems with adaptable receptor specificity |
EP4301755A1 (en) | 2021-03-03 | 2024-01-10 | Juno Therapeutics, Inc. | Combination of a t cell therapy and a dgk inhibitor |
CN117858719A (zh) | 2021-03-29 | 2024-04-09 | 朱诺治疗学股份有限公司 | 使用检查点抑制剂疗法和car t细胞疗法的组合进行给药和治疗的方法 |
IL307257A (en) | 2021-03-29 | 2023-11-01 | Juno Therapeutics Inc | A combination of car cell therapy and an immunomodulatory compound for the treatment of lymphoma |
WO2022216811A2 (en) * | 2021-04-08 | 2022-10-13 | Artiva Biotherapeutics, Inc. | Chimeric antigen receptor comprising an anti-cd19 antibody or antigen-binding fragment thereof and natural killer cells comprising the same |
CN113549158B (zh) * | 2021-07-19 | 2022-10-21 | 广州百暨基因科技有限公司 | 包含突变型il15以及嵌合抗原受体的融合蛋白 |
WO2023058406A1 (ja) | 2021-10-06 | 2023-04-13 | 旭化成株式会社 | 印刷版の製造方法、及び印刷方法 |
WO2023081727A1 (en) * | 2021-11-02 | 2023-05-11 | Fred Hutchinson Cancer Center | Treatments for cancers utilizing cell-targeted therapies and associated research protocols |
WO2023081715A1 (en) | 2021-11-03 | 2023-05-11 | Viracta Therapeutics, Inc. | Combination of car t-cell therapy with btk inhibitors and methods of use thereof |
WO2023215725A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Fred Hutchinson Cancer Center | Compositions and methods for cellular immunotherapy |
WO2023250400A1 (en) | 2022-06-22 | 2023-12-28 | Juno Therapeutics, Inc. | Treatment methods for second line therapy of cd19-targeted car t cells |
WO2024054944A1 (en) | 2022-09-08 | 2024-03-14 | Juno Therapeutics, Inc. | Combination of a t cell therapy and continuous or intermittent dgk inhibitor dosing |
CN116179495A (zh) * | 2022-11-28 | 2023-05-30 | 上海恩凯细胞技术有限公司 | 转基因免疫细胞及其应用 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2167676C2 (ru) * | 1995-02-24 | 2001-05-27 | Дзе Дженерал Хоспитал Корпорейшн | Перенаправление клеточного иммунитета посредством химерных рецепторов |
WO2008045437A2 (en) * | 2006-10-09 | 2008-04-17 | The General Hospital Corporation | Chimeric t-cell receptors and t-cells targeting egfrviii on tumors |
WO2011041093A1 (en) * | 2009-10-01 | 2011-04-07 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Anti-vascular endothelial growth factor receptor-2 chimeric antigen receptors and use of same for the treatment of cancer |
WO2012127464A2 (en) * | 2011-03-23 | 2012-09-27 | Gavish-Galilee Bio Applications Ltd | Constitutively activated t cells for use in adoptive cell therapy |
WO2013044225A1 (en) * | 2011-09-22 | 2013-03-28 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | A universal immune receptor expressed by t cells for the targeting of diverse and multiple antigens |
WO2013123061A1 (en) * | 2012-02-13 | 2013-08-22 | Seattle Children's Hospital D/B/A Seattle Children's Research Institute | Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof |
Family Cites Families (93)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6291158B1 (en) | 1989-05-16 | 2001-09-18 | Scripps Research Institute | Method for tapping the immunological repertoire |
US6291161B1 (en) | 1989-05-16 | 2001-09-18 | Scripps Research Institute | Method for tapping the immunological repertiore |
US5283173A (en) | 1990-01-24 | 1994-02-01 | The Research Foundation Of State University Of New York | System to detect protein-protein interactions |
US5637481A (en) | 1993-02-01 | 1997-06-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell |
US5420032A (en) | 1991-12-23 | 1995-05-30 | Universitge Laval | Homing endonuclease which originates from chlamydomonas eugametos and recognizes and cleaves a 15, 17 or 19 degenerate double stranded nucleotide sequence |
US5792632A (en) | 1992-05-05 | 1998-08-11 | Institut Pasteur | Nucleotide sequence encoding the enzyme I-SceI and the uses thereof |
ES2229236T3 (es) | 1994-01-11 | 2005-04-16 | Dyax Corporation | Inhibidores de la plasmina humana derivados de los dominios de kunitz. |
DE19641876B4 (de) | 1996-10-10 | 2011-09-29 | Iba Gmbh | Streptavidinmuteine |
US6759243B2 (en) | 1998-01-20 | 2004-07-06 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | High affinity TCR proteins and methods |
PL195990B1 (pl) | 1998-02-23 | 2007-11-30 | Eurogene Ltd | Białko, cząsteczka kwasu nukleinowego i ich zastosowanie oraz zrekombinowany wektor ekspresyjny |
AUPP221098A0 (en) | 1998-03-06 | 1998-04-02 | Diatech Pty Ltd | V-like domain binding molecules |
DE69937888T2 (de) | 1998-07-31 | 2009-01-02 | Genzyme Corp., Cambridge | Verfahren zur Herstellung mesenchymaler Stammzellen |
US6410319B1 (en) | 1998-10-20 | 2002-06-25 | City Of Hope | CD20-specific redirected T cells and their use in cellular immunotherapy of CD20+ malignancies |
WO2000075188A1 (en) * | 1999-06-09 | 2000-12-14 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Method of measuring plasma membrane targeting of glut4 |
EP1144607B1 (en) | 1999-07-20 | 2008-12-17 | MorphoSys AG | Methods for displaying (poly)peptides/proteins on bacteriophage particles via disulfide bonds |
CA2409991A1 (en) | 2000-05-24 | 2001-11-29 | Imclone Systems Incorporated | Bispecific immunoglobulin-like antigen binding proteins and method of production |
US6946292B2 (en) | 2000-10-06 | 2005-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity |
US7399633B2 (en) | 2000-10-27 | 2008-07-15 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Methods for immortalizing cells |
EP1227321A1 (en) * | 2000-12-28 | 2002-07-31 | Institut für Bioanalytik GmbH | Reversible MHC multimer staining for functional purification of antigen-specific T cells |
DE10113776B4 (de) | 2001-03-21 | 2012-08-09 | "Iba Gmbh" | Isoliertes streptavidinbindendes, kompetitiv eluierbares Peptid, dieses umfassendes Fusionspeptid, dafür codierende Nukleinsäure, Expressionsvektor, Verfahren zur Herstellung eines rekombinanten Fusionsproteins und Verfahren zum Nachweis und/oder zur Gewinnung des Fusionsproteins |
US7070995B2 (en) | 2001-04-11 | 2006-07-04 | City Of Hope | CE7-specific redirected immune cells |
US7514537B2 (en) | 2001-04-30 | 2009-04-07 | City Of Hope | Chimeric immunoreceptor useful in treating human gliomas |
WO2002102989A2 (en) | 2001-06-18 | 2002-12-27 | Psychiatric Genomics, Inc. | Method for neural stem cell differentiation using valproate |
DE10137792A1 (de) | 2001-08-06 | 2003-02-27 | Erdmann Volker | Verfahren zur Genexpression |
ATE541921T1 (de) | 2001-09-14 | 2012-02-15 | Stem Cell Therapeutics Inc | Prolaktin-induzierte zunahme an neuronalen stammzellen und dessen therapeutische anwendung |
WO2003027247A2 (en) | 2001-09-24 | 2003-04-03 | Sangamo Biosciences, Inc. | Modulation of stem cells using zinc finger proteins |
EP1485475B2 (en) | 2002-03-15 | 2017-09-20 | Cellectis | Hybrid and single chain meganucleases and use thereof |
CA2492442A1 (en) | 2002-07-31 | 2004-02-05 | Stem Cell Therapeutics Inc. | Method of enhancing neural stem cell proliferation, differentiation, and survival using pituitary adenylate cyclase activating polypeptide (pacap) |
EP1400534B1 (en) | 2002-09-10 | 2015-10-28 | Affimed GmbH | Human CD3-specific antibody with immunosuppressive properties |
US7575925B2 (en) | 2002-12-10 | 2009-08-18 | Sunnybrook Health Sciences Centre | Cell preparations comprising cells of the T cell lineage and methods of making and using them |
EP3202899B1 (en) | 2003-01-28 | 2020-10-21 | Cellectis | Custom-made meganuclease and use thereof |
US7368428B2 (en) | 2003-06-23 | 2008-05-06 | A&G Pharmaceutical, Inc. | Compositions and methods for restoring sensitivity of tumor cells to antitumor therapy and inducing apoptosis |
DE602005022595D1 (de) | 2004-06-29 | 2010-09-09 | Immunocore Ltd | Einen modifizierten t-zellen-rezeptor exprimierende zellen |
EP2028193B1 (en) | 2005-01-05 | 2012-03-07 | f-star Biotechnologische Forschungs- und Entwicklungsges.m.b.H. | Synthetic immunoglobulin domains with binding properties engineered in regions of the molecule different from the complementarity determining regions |
JP2008527001A (ja) | 2005-01-13 | 2008-07-24 | ザ ジョンズ ホプキンス ユニバーシティー | 前立腺幹細胞抗原ワクチンおよびその使用 |
GB0504767D0 (en) | 2005-03-08 | 2005-04-13 | Ares Trading Sa | Lipocalin protein |
EP2357226B1 (en) | 2005-10-18 | 2012-03-14 | Precision Biosciences | Rationally-designed meganucleases with altered sequence specificity and DNA-binding affinity |
US20090220501A1 (en) | 2006-01-30 | 2009-09-03 | Fey Georg H | Anti-CD19 Antibody, Immunotoxin and Treatment Method |
EP1829895A1 (en) | 2006-03-03 | 2007-09-05 | f-star Biotechnologische Forschungs- und Entwicklungsges.m.b.H. | Bispecific molecule binding TLR9 and CD32 and comprising a T cell epitope for treatment of allergies |
EP1878744A1 (en) | 2006-07-13 | 2008-01-16 | Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin (MDC) | Epitope-tag for surface-expressed T-cell receptor proteins, uses thereof and method of selecting host cells expressing them |
US8119772B2 (en) | 2006-09-29 | 2012-02-21 | California Institute Of Technology | MART-1 T cell receptors |
WO2008066330A1 (en) | 2006-11-30 | 2008-06-05 | Medipost Co., Ltd. | Use of a composition contaning human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cell for inducing differentiation and proliferation of neural precursor cells or neural stem cells to neural cells |
CA2684878A1 (en) | 2007-01-09 | 2008-07-17 | Lead Pharma Cel Models Ip B.V. | Provision of new cardiomyocyte progenitor cells and cardiomyocytes derived therefrom |
US20090042795A1 (en) | 2007-06-05 | 2009-02-12 | Pasan Fernando | Cardiac stem cell proliferation proteins, fragments thereof and methods of modulating stem cell proliferation and differentiation |
WO2009040338A1 (en) | 2007-09-24 | 2009-04-02 | University Of Zürich | Designed armadillo repeat proteins |
KR101319499B1 (ko) | 2008-02-22 | 2013-10-17 | 엘지디스플레이 주식회사 | 화학적 자기조립 방법을 이용한 나노선 혹은탄소나노튜브의 적층 및 패턴형성 방법과, 이를 적용한액정표시장치의 제조방법 |
HUE058891T2 (hu) | 2008-08-26 | 2022-09-28 | Hope City | Módszer és készítmények a T-sejtek fokozott tumorellenes effektor mûködésének fokozására |
EP2344686B1 (en) | 2008-10-03 | 2014-03-05 | XOMA Technology Ltd. | Novel triple tag sequences and methods of use thereof |
NZ593469A (en) | 2008-11-21 | 2012-12-21 | Mascoma Corp | Yeast expressing cellulases for simultaneous saccharification and fermentation using cellulose |
EP2210903A1 (en) | 2009-01-21 | 2010-07-28 | Monoclonal Antibodies Therapeutics | Anti-CD160 monoclonal antibodies and uses thereof |
EP2424882A2 (en) * | 2009-02-05 | 2012-03-07 | Intercell AG | Peptides protective against e. faecalis, methods and uses relating thereto |
DK2419447T3 (en) | 2009-04-17 | 2017-09-25 | Immunas Pharma Inc | ANTIBODIES THAT SPECIFICALLY BIND TO A BETA OLIGOMER AND USE THEREOF |
EP2258719A1 (en) | 2009-05-19 | 2010-12-08 | Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin (MDC) | Multiple target T cell receptor |
CN102803491A (zh) | 2010-01-21 | 2012-11-28 | 奥克西雷恩英国有限公司 | 用于在酵母细胞表面上展示多肽的方法和组合物 |
EP3156062A1 (en) | 2010-05-17 | 2017-04-19 | Sangamo BioSciences, Inc. | Novel dna-binding proteins and uses thereof |
GB201008682D0 (en) * | 2010-05-25 | 2010-07-07 | Vib Vzw | Epitope tag for affinity based applications |
ES2768229T3 (es) | 2010-07-06 | 2020-06-22 | Nanologica Ab | Método mejorado para diferenciación de células madre in vivo mediante la administración de morfógenos con sílice mesoporosa y principios activos farmacéuticos correspondientes |
EP2614151B1 (en) | 2010-09-08 | 2019-07-24 | Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg-Speyer-Haus | Interleukin 15 as selectable marker for gene transfer in lymphocytes |
US20120107282A1 (en) | 2010-10-01 | 2012-05-03 | S. Biomedics Co., Ltd. | Neural stem cell composition capable of treating cancer and method of treatment |
WO2012068378A1 (en) | 2010-11-17 | 2012-05-24 | Wake Forest University Health Sciences | Stem cell differentiation using keratin biomaterials |
DK3214091T3 (en) | 2010-12-09 | 2019-01-07 | Univ Pennsylvania | USE OF CHEMICAL ANTIGEN RECEPTOR MODIFIED T CELLS FOR TREATMENT OF CANCER |
EP2651442B1 (en) * | 2010-12-14 | 2020-04-22 | University of Maryland, Baltimore | Universal anti-tag chimeric antigen receptor-expressing t cells and methods of treating cancer |
LT2697257T (lt) | 2011-04-13 | 2016-12-27 | Bristol-Myers Squibb Company | Su fc sulieti baltymai, apimantys naujus linkerius ir išsidėstimus |
US20120308530A1 (en) | 2011-06-03 | 2012-12-06 | Beijing Allgens Medical Science & Technology Co., Ltd. | Materials Composition and Methods to Control Neural Progenitor and Stem Cell Attachment, Proliferation and Guide Cell Differentiation |
US9676854B2 (en) | 2011-08-15 | 2017-06-13 | Medimmune, Llc | Anti-B7-H4 antibodies and their uses |
WO2013076726A1 (en) | 2011-11-21 | 2013-05-30 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Stem cell-derived neural cells for cell therapy in neurological disorders |
EP2790711A4 (en) | 2011-12-12 | 2015-07-29 | Univ California | METHOD FOR THE USE OF NEURAL STEM CELL COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF LESIONS OF THE CENTRAL NERVOUS SYSTEM |
EP2808383B1 (en) | 2012-01-27 | 2018-07-25 | Kyoto University | Method for inducing cardiac differentiation of pluripotent stem cell |
CN106940268B (zh) | 2012-02-23 | 2021-09-21 | 朱诺治疗有限公司 | 细胞和其它复杂生物材料的色谱分离 |
MA37663B1 (fr) | 2012-05-25 | 2019-12-31 | Univ California | Procédés et compositions permettant la modification de l'adn cible dirigée par l'arn et la modulation de la transcription dirigée par l'arn |
LT2884999T (lt) | 2012-08-20 | 2021-04-12 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Ląstelinės imunoterapijos būdas ir kompozicijos |
US8697359B1 (en) | 2012-12-12 | 2014-04-15 | The Broad Institute, Inc. | CRISPR-Cas systems and methods for altering expression of gene products |
EP3064585B1 (en) | 2012-12-12 | 2020-02-05 | The Broad Institute, Inc. | Engineering and optimization of improved systems, methods and enzyme compositions for sequence manipulation |
MX2015007846A (es) | 2012-12-19 | 2016-04-28 | Amplimmune Inc | Anticuerpos anti-b7-h4 humana y sus usos. |
US20150329640A1 (en) | 2012-12-20 | 2015-11-19 | Bluebird Bio, Inc. | Chimeric antigen receptors and immune cells targeting b cell malignancies |
CA2913052A1 (en) | 2013-05-24 | 2014-11-27 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Chimeric antigen receptor-targeting monoclonal antibodies |
US9816070B2 (en) | 2013-06-14 | 2017-11-14 | Massachusetts Institute Of Technology | Articles and methods for stem cell differentiation |
WO2015066551A2 (en) | 2013-10-31 | 2015-05-07 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Modified hematopoietic stem/progenitor and non-t effector cells, and uses thereof |
EP2871189A1 (en) | 2013-11-07 | 2015-05-13 | Institut Pasteur | High-affinity monoclonal anti-strep-tag antibody |
US20160298096A1 (en) | 2013-11-18 | 2016-10-13 | Crispr Therapeutics Ag | Crispr-cas system materials and methods |
JP6433498B2 (ja) | 2013-11-21 | 2018-12-05 | ユーシーエル ビジネス ピーエルシー | 細胞 |
SG10201804439PA (en) * | 2013-12-20 | 2018-06-28 | Hutchinson Fred Cancer Res | Tagged chimeric effector molecules and receptors thereof |
JP6560235B2 (ja) | 2014-01-13 | 2019-08-14 | シティ・オブ・ホープCity of Hope | Fcスペーサー領域に変異を有するキメラ抗原受容体(CAR)及びそれらの使用方法 |
GB201415347D0 (en) | 2014-08-29 | 2014-10-15 | Ucl Business Plc | Signalling system |
WO2016040724A1 (en) | 2014-09-12 | 2016-03-17 | Genentech, Inc. | Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates |
KR20170062485A (ko) | 2014-10-03 | 2017-06-07 | 다나-파버 캔서 인스티튜트 인크. | 글루코코티코이드-유도 종양 괴사 인자 수용체(gitr) 항체 및 이의 사용 방법 |
LT3258951T (lt) | 2015-02-19 | 2020-05-11 | Compugen Ltd. | Anti-pvrig antikūnai ir jų panaudojimo būdai |
US20180355318A1 (en) | 2015-04-29 | 2018-12-13 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Modified hematopoietic stem/progenitor and non-t effector cells, and uses thereof |
WO2016176652A2 (en) | 2015-04-29 | 2016-11-03 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Modified stem cells and uses thereof |
JO3620B1 (ar) | 2015-08-05 | 2020-08-27 | Amgen Res Munich Gmbh | مثبطات نقطة فحص مناعية للاستخدام في علاج سرطانات محمولة عبر الدم |
CA3050085A1 (en) | 2017-01-20 | 2018-07-26 | Juno Therapeutics Gmbh | Cell surface conjugates and related cell compositions and methods |
JP7319250B2 (ja) | 2017-09-06 | 2023-08-01 | フレッド ハッチンソン キャンサー センター | Strep-タグ特異的結合タンパク質およびその使用 |
JP7407701B2 (ja) | 2017-09-06 | 2024-01-04 | フレッド ハッチンソン キャンサー センター | strepタグ特異的キメラ受容体およびその使用 |
-
2014
- 2014-12-22 SG SG10201804439PA patent/SG10201804439PA/en unknown
- 2014-12-22 PL PL14830770.5T patent/PL3083671T3/pl unknown
- 2014-12-22 RU RU2016129045A patent/RU2729463C2/ru active
- 2014-12-22 NZ NZ720520A patent/NZ720520A/en unknown
- 2014-12-22 JP JP2016540620A patent/JP6942467B2/ja active Active
- 2014-12-22 AU AU2014368892A patent/AU2014368892B2/en active Active
- 2014-12-22 WO PCT/US2014/072007 patent/WO2015095895A1/en active Application Filing
- 2014-12-22 CN CN202110592499.XA patent/CN113354744A/zh active Pending
- 2014-12-22 EP EP14830770.5A patent/EP3083671B1/en active Active
- 2014-12-22 LT LTEP14830770.5T patent/LT3083671T/lt unknown
- 2014-12-22 RS RS20201392A patent/RS61223B1/sr unknown
- 2014-12-22 SI SI201431722T patent/SI3083671T1/sl unknown
- 2014-12-22 BR BR112016014156A patent/BR112016014156A8/pt active Search and Examination
- 2014-12-22 PT PT148307705T patent/PT3083671T/pt unknown
- 2014-12-22 US US15/106,657 patent/US10494434B2/en active Active
- 2014-12-22 CA CA2933707A patent/CA2933707A1/en active Pending
- 2014-12-22 KR KR1020167017510A patent/KR102483822B1/ko active IP Right Grant
- 2014-12-22 NZ NZ759969A patent/NZ759969A/en unknown
- 2014-12-22 MX MX2016007927A patent/MX2016007927A/es unknown
- 2014-12-22 DK DK14830770.5T patent/DK3083671T3/da active
- 2014-12-22 MY MYPI2016001073A patent/MY178233A/en unknown
- 2014-12-22 ES ES14830770T patent/ES2837856T3/es active Active
- 2014-12-22 SG SG11201605046YA patent/SG11201605046YA/en unknown
- 2014-12-22 HU HUE14830770A patent/HUE052573T2/hu unknown
- 2014-12-22 KR KR1020227046118A patent/KR20230007559A/ko active IP Right Grant
- 2014-12-22 CN CN201480075007.8A patent/CN105980402B/zh active Active
-
2016
- 2016-05-25 IL IL245845A patent/IL245845B/en active IP Right Grant
-
2019
- 2019-03-04 JP JP2019038969A patent/JP2019083821A/ja active Pending
- 2019-09-13 AU AU2019229438A patent/AU2019229438B2/en active Active
- 2019-10-25 US US16/664,706 patent/US11046766B2/en active Active
-
2020
- 2020-11-30 HR HRP20201906TT patent/HRP20201906T1/hr unknown
- 2020-12-23 CY CY20201101218T patent/CY1123747T1/el unknown
-
2021
- 2021-05-24 US US17/329,115 patent/US11993652B2/en active Active
- 2021-06-29 AU AU2021204475A patent/AU2021204475B2/en active Active
- 2021-07-14 JP JP2021116355A patent/JP2021164482A/ja active Pending
-
2022
- 2022-10-05 JP JP2022161138A patent/JP2022176327A/ja not_active Withdrawn
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2167676C2 (ru) * | 1995-02-24 | 2001-05-27 | Дзе Дженерал Хоспитал Корпорейшн | Перенаправление клеточного иммунитета посредством химерных рецепторов |
WO2008045437A2 (en) * | 2006-10-09 | 2008-04-17 | The General Hospital Corporation | Chimeric t-cell receptors and t-cells targeting egfrviii on tumors |
WO2011041093A1 (en) * | 2009-10-01 | 2011-04-07 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Anti-vascular endothelial growth factor receptor-2 chimeric antigen receptors and use of same for the treatment of cancer |
WO2012127464A2 (en) * | 2011-03-23 | 2012-09-27 | Gavish-Galilee Bio Applications Ltd | Constitutively activated t cells for use in adoptive cell therapy |
WO2013044225A1 (en) * | 2011-09-22 | 2013-03-28 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | A universal immune receptor expressed by t cells for the targeting of diverse and multiple antigens |
WO2013123061A1 (en) * | 2012-02-13 | 2013-08-22 | Seattle Children's Hospital D/B/A Seattle Children's Research Institute | Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof |
Non-Patent Citations (5)
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11993652B2 (en) | Tagged chimeric effector molecules and receptors thereof | |
RU2700765C2 (ru) | Способ и композиции для клеточной иммунотерапии | |
JP2023145589A (ja) | 共刺激のための新規のプラットフォーム、新規のcar設計、および養子細胞療法のための他の増強 | |
US20220025001A1 (en) | Nucleic acid constructs for co-expression of chimeric antigen receptor and transcription factor, cells containing and therapeutic use thereof | |
JP2019536452A (ja) | 融合タンパク質を用いたtcrの再プログラミングのための組成物及び方法 | |
JP2021525509A (ja) | 細胞療法のための多様な抗原結合ドメイン、新規プラットフォームおよびその他の強化 | |
KR20210118426A (ko) | 양자 세포 요법을 위한 표적화된 공자극을 제공하는 수용체 | |
US11890302B2 (en) | Gamma delta CAR-T cells comprising Fc gamma intracellular signaling domains | |
US20220064255A1 (en) | Anti-tcr antibody molecules and uses thereof | |
JP2023534808A (ja) | 養子細胞療法のための標的共刺激を提供する受容体 | |
AU2019305223A1 (en) | Anti-LYPD3 car T-cell therapy for the treatment of cancer | |
CN117202921A (zh) | 用于多种免疫细胞的单链和多链合成抗原受体 |