BR112021010120A2 - Métodos para dosagem e tratamento de malignidades celulares em terapia celular adotiva - Google Patents

Métodos para dosagem e tratamento de malignidades celulares em terapia celular adotiva Download PDF

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Heidi Gillenwater
Tina Albertson
Jason A. Dubovsky
Jerill Thorpe
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Juno Therapeutics, Inc.
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Abstract

são fornecidos métodos de terapia celular adotiva que envolvem administrar doses de células para o tratamento de doenças e condições, incluindo determinadas malignidades de células b. as células geralmente expressam receptores recombinantes, tais como receptores antigênicos quiméricos (cars). em algumas modalidades, os métodos são para o tratamento de indivíduos que têm leucemia linfocítica crônica (cll) e linfoma linfocítico pequeno (sll). em algumas modalidades, os métodos são para o tratamento de indivíduos que têm cll e sll recidivantes ou refratários. também são fornecidos artigos de manufatura e tratamentos profiláticos em relação a métodos de terapia adotiva.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MÉTODOS PARA DOSAGEM E TRATAMENTO DE MALIGNIDADES CELULARES EM TERAPIA CELULAR ADOTIVA". Referência Cruzada a Pedidos Relacionados
[001] O presente pedido reivindica prioridade do Pedido Provisório Norte-Americano Nº 62/774.168, depositado em 30 de novembro de 2018, intitulado "METHODS FOR DOSING AND TREATMENT OF B CELL MALIGNANCIES IN ADOPTIVE CELL THERAPY", Pedido Provisório Norte-Americano Nº 62/774.858, depositado em 3 de dezembro de 2018, intitulado "METHODS FOR DOSING AND
TREATMENT OF B CELL MALIGNANCIES IN ADOPTIVE CELL THERAPY", Pedido Provisório Norte-Americano Nº 62/847.897, depositado em 14 de maio de 2019, intitulado "METHODS FOR
DOSING AND TREATMENT OF B CELL MALIGNANCIES IN ADOPTIVE CELL THERAPY", Pedido Provisório Norte-Americano Nº 62/854.957, depositado em 30 de maio de 2019, intitulado "METHODS
FOR DOSING AND TREATMENT OF B CELL MALIGNANCIES IN ADOPTIVE CELL THERAPY" e Pedido Provisório Norte-Americano Nº 62/931.143, depositado em 5 de novembro de 2019, intitulado "METHODS FOR DOSING AND TREATMENT OF B CELL MALIGNANCIES IN ADOPTIVE CELL THERAPY", cujo conteúdo é incorporado a título de referência na íntegra. Incorporação a Título de Referência de Listagem de Sequências
[002] O presente pedido está sendo depositado juntamente com uma Listagem de Sequências em formato eletrônico. A Listagem de Sequências é fornecida como um arquivo intitulado 735042019740SeqList.txt, criado em 21 de novembro de 2019, o qual tem 34,1 kilobytes de tamanho. As informações no formato eletrônico da Listagem de Sequências são incorporadas a título de referência na íntegra.
Campo
[003] A presente invenção refere-se, em alguns aspectos, à terapia celular adotiva que envolve administrar doses de células para o tratamento de indivíduos com doenças e condições, tais como determinadas malignidades de células B, e métodos, composições, usos e artigos de manufatura relacionados. As células geralmente expressam receptores recombinantes, tais como receptores antigênicos quiméricos (Chimeric Antigen Receptors, CARs). Em algumas modalidades, a doença ou condição é uma leucemia linfocítica crônica (Chronic Lymphocytic Leukemia, CLL), tal como CLL recidivante ou refratária. Em algumas modalidades, a doença ou condição é um linfoma linfocítico pequeno (Small Lymphocytic Lymphoma, SLL). Em algumas modalidades, o indivíduo pertence a um grupo específico ou subconjunto de indivíduos com CLL ou SLL, tais como indivíduos fortemente pré-tratados ou de prognóstico ruim. Antecedentes
[004] A leucemia linfocítica crônica (e linfoma linfocítico pequeno) é um câncer indolente no qual linfócitos imaturos são encontrados no sangue e na medula óssea e/ou nos nódulos linfáticos. A leucemia linfocítica crônica e o linfoma linfocítico pequeno são a mesma doença, porém, em CLL, as células cancerosas são encontradas principalmente no sangue e na medula óssea. Em SLL, as células cancerosas são encontradas principalmente nos gânglios linfáticos. A CLL é considerada incurável. Os pacientes eventualmente recaem ou se tornam refratários às terapias disponíveis. Antagonistas do receptor de células B mostraram melhores resultados para pacientes com CLL recidivante/refratária, no entanto, as taxas de remissão completa permanecem baixas e os pacientes que progridem durante ou após a terapia têm resultados ruins. São necessárias terapias eficazes para pacientes com CLL e SLL que não obtiveram sucesso na terapia com um antagonista do receptor de células B. São métodos fornecidos e usos que atendem a tais necessidades. Sumário
[005] São fornecidos no presente documento métodos, usos, composições, formulações e artigos de manufatura para o tratamento de indivíduos que têm ou suspeitos de ter uma doença ou condição, tal como CLL, SLL ou um subtipo dos mesmos. Os métodos e outras modalidades referem-se, em geral, à administração, ao indivíduo, de células T, geralmente células T manipuladas, tais como aquelas que expressam ou contêm um receptor recombinante, tal como um receptor antigênico quimérico (CAR) ou TCR.
[006] Em algumas modalidades, a dose de células ou células administradas em relação a quaisquer modalidades dos métodos, composições, artigos de manufatura e usos fornecidos, contém células T CD4+ ou um subtipo ou fenótipo das mesmas (tal como um receptor modificado ou recombinante que expressa células T CD4+) e/ou células T CD8+ ou um subtipo das mesmas (tais como células CD4+ expressas por um receptor recombinante ou manipuladas). Em algumas modalidades, as células CD8+ ou subtipo ou fenótipo das mesmas estão presentes em uma dose ou quantidade ou número particular; em algumas modalidades, as células CD4+ ou subtipo ou fenótipo das mesmas estão presentes em uma dose ou quantidade ou número específico. Em algumas modalidades, as células CD8+ ou subtipo ou fenótipo das mesmas das mesmas e as células CD4+ ou subtipo ou fenótipo das mesmas das mesmas estão presentes no artigo ou composição ou combinação ou são administradas nos métodos, em uma proporção definida, tal como igual ou cerca de 1:1 ou entre igual ou cerca de 1:3 e igual ou cerca de 3:1. Em algumas modalidades, a dose ou administração contém ou é de uma determinada quantidade ou número de uma população de células e a proporção é uma proporção definida ou é uma proporção de ocorrência natural, tal como no sangue do indivíduo a partir do qual as células são derivadas ou uma proporção que ocorre sem seleção ou controle para uma proporção particular.
[007] Em algumas modalidades, as células T CD4 + (ou subconjunto das mesmas) e as células T CD8+ (ou subconjunto das mesmas), individualmente, contêm um receptor que se liga especificamente a um antígeno-alvo expresso pela doença ou condição ou uma célula ou tecido da mesma e/ou que está associado à doença ou condição.
[008] Em algumas modalidades, o método de tratamento de um indivíduo que tem leucemia linfocítica crônica (CLL) ou linfoma linfocítico pequeno (SLL) compreende administrar ao indivíduo uma dose de células T manipuladas que compreendem células T CD4+ e CD8+, as células T CD4+ e CD8+ compreendendo um receptor antigênico quimérico (CAR) que se liga especificamente à CD19, em que o indivíduo apresentou recidiva seguido de remissão após tratamento com, tornou-se refratário ao tratamento com, não obteve sucesso com e/ou é intolerante a um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTKi), venetoclax ou BTKi e venetoclax. Em modalidades particulares, o indivíduo apresentou recidiva seguido de remissão após tratamento com, tornou-se refratário ao tratamento com, não obteve sucesso e/ou é intolerante ao tratamento com um BTKi e venetoclax. Em algumas modalidades, o BTKi é ibrutinibe.
[009] Em algumas modalidades, o método de tratamento de um indivíduo que tem leucemia linfocítica crônica (CLL) ou linfoma linfocítico pequeno (SLL) compreende administrar ao indivíduo uma dose de células T manipuladas que compreendem células T CD4+ e CD8+, as células T CD4+ e CD8+ compreendendo um receptor antigênico quimérico (CAR) que se liga especificamente à CD19, em que o indivíduo apresentou recidiva seguido de remissão após tratamento com, tornou-se refratário ao tratamento com, não obteve sucesso e/ou é intolerante ao ibrutinibe e/ou venetoclax. Em modalidades particulares, o indivíduo apresentou recidiva seguido de remissão após tratamento com, tornou-se refratário ao tratamento com, não obteve sucesso e/ou é intolerante ao tratamento com ibrutinibe e venetoclax.
[0010] Em algumas modalidades, a dose de células T manipuladas é enriquecida para células T CD4+ e CD8+ humanas primárias.
[0011] Em algumas modalidades, a dose de células T manipuladas compreende uma proporção definida de células CD4+ que expressam o CAR para células CD8+ que expressam o CAR, opcionalmente em que a proporção está entre aproximadamente 1:3 e aproximadamente 3:1. Em algumas modalidades, a dose de células T manipuladas compreende cerca de 2,5 x 107 células que expressam CAR no total a cerca de 1,5 x 108 células que expressam CAR no total.
[0012] Em algumas modalidades, a administração compreende administrar uma pluralidade de composições separadas, em que a pluralidade de composições separadas compreende uma primeira composição que compreende uma das células T CD4+ e as células T CD8+ e uma segunda composição que compreende a outra das células T CD4+ e as células T CD8+. Em determinadas modalidades de qualquer um dos métodos fornecidos, o receptor contido pelas células T CD4+ e/ou o receptor contido pelas células T CD8+ compreende células T que têm um receptor recombinante e/ou em que as células T CD4+ e/ou as células T CD8+ são geneticamente manipuladas para expressar o receptor.
[0013] Em alguns aspectos, o método compreende o tratamento de um indivíduo que tem ou suspeito de ter leucemia linfocítica crônica (CLL) ou linfoma linfocítico pequeno (SLL), o método compreendendo administrar ao indivíduo uma dose de células T manipuladas que compreendem células T CD4+ e CD8+, as células T CD4+ e CD8+ compreendendo um CAR que se liga especificamente à CD19, em que a administração compreende administrar uma pluralidade de composições separadas, a pluralidade de composições separadas compreendendo uma primeira composição que compreende uma das células T CD4+ e as células T CD8+ e uma segunda composição que compreende a outra das células T CD4+ e as células T CD8+.
[0014] Em algumas modalidades, a dose de células T CD4+ e CD8+ manipuladas compreende uma proporção definida de células CD4+ que expressam o CAR para células CD8+ que expressam o CAR que está entre aproximadamente 1:3 e aproximadamente 3:1. Em algumas modalidades, a dose de células T manipuladas compreende cerca de 2,5 x 107 células que expressam CAR no total ou cerca de 1,5 x 10 8 células que expressam CAR no total. Em algumas modalidades, a dose de células T manipuladas é enriquecida para células T CD4+ e CD8+ humanas primárias.
[0015] Em algumas modalidades, a dose de células enriquecidas em células T CD4+ e CD8+ manipuladas compreende mais ou mais de cerca de 70%, mais ou mais de cerca de 75%, mais ou mais de cerca de 80%, mais ou mais de cerca de 85 %, mais ou mais de cerca de 90%, mais ou mais de cerca de 95% ou mais ou mais de cerca de 98% de células T CD4+ e CD8+ humanas primárias.
[0016] Em algumas modalidades, a dose de células T CD4+ e CD8+ manipuladas compreende uma proporção definida de células CD4+ que expressam o CAR para células CD8+ que expressam o CAR que é ou é de aproximadamente 1:1. Em algumas modalidades, a dose de células T manipuladas compreende cerca de 2,5 x 107 células que expressam CAR no total ou cerca de 1,0 x 108 células que expressam CAR no total. Em algumas modalidades, a dose de células T manipuladas compreende ou cerca de 2,5 x 107 células que expressam CAR no total. Em algumas modalidades, a dose de células T manipuladas compreende cerca de 5 x 107 células no total ou células que expressam CAR no total. Em algumas modalidades, as células T manipuladas compreendem cerca de 1 x 108 células no total ou células que expressam CAR no total.
[0017] Em algumas modalidades, o CAR compreendido pelas células T CD4+ e/ou o CAR compreendido pelas células T CD8+ compreende um CAR que é o mesmo e/ou em que as células T CD4+ e/ou as células T CD8+ são geneticamente manipuladas para expressar um CAR que é o mesmo.
[0018] Em modalidades particulares, a primeira composição compreende as células T CD8+ e a segunda composição compreende as células T CD4+. Em algumas modalidades, o início da administração da primeira composição é realizado antes do início da administração da segunda composição.
[0019] Em algumas modalidades, a administração da primeira composição e a administração da segunda composição são realizadas no mesmo dia, são realizadas com não mais de 36 horas de intervalo, não mais de 24 horas de intervalo, não mais de 12 horas de intervalo, não mais de 6 horas de intervalo, não mais de 4 horas de intervalo, não mais de 2 horas de intervalo ou não mais de 1 hora de intervalo ou não mais de 30 minutos de intervalo. Em algumas modalidades, a administração da primeira composição e a administração da segunda composição são realizadas entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 48 horas, entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 36 horas, entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 24 horas, entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 12 horas, entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 6 horas, entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 2 horas, entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 1 horas, entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 30 minutos, entre igual ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 48 horas, entre igual ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 36 horas, entre igual ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 24 horas, entre igual ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 12 horas, entre igual ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 6 horas, entre igual ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 4 horas, entre igual ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 2 horas, entre igual ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 1 hora, entre igual ou cerca de 1 horas e igual ou cerca de 48 horas, entre igual ou cerca de 1 hora e igual ou cerca de 36 horas, entre igual ou cerca de 1 hora e igual ou cerca de 24 horas, entre igual ou cerca de 1 hora e igual ou cerca de 12 horas, entre igual ou cerca de 1 hora e igual ou cerca de 6 horas, entre igual ou cerca de 1 hora e igual ou cerca de 4 horas, entre igual ou cerca de 1 hora e igual ou cerca de 2 horas, entre igual ou cerca de 2 horas e igual ou cerca de 48 horas, entre igual ou cerca de 2 horas e igual ou cerca de 36 horas, entre igual ou cerca de 2 horas e igual ou cerca de 24 horas, entre igual ou cerca de 2 horas e igual ou cerca de 12 horas, entre igual ou cerca de 2 horas e igual ou cerca de 6 horas, entre igual ou cerca de 2 horas e igual ou cerca de 4 horas, entre igual ou cerca de 4 horas e igual ou cerca de 48 horas, entre igual ou cerca de 4 horas e igual ou cerca de 36 horas, entre igual ou cerca de 4 horas e igual ou cerca de 24 horas, entre igual ou cerca de 4 horas e igual ou cerca de 12 horas, entre igual ou cerca de 4 horas e igual ou cerca de 6 horas, entre igual ou cerca de 6 horas e igual ou cerca de 48 horas, entre igual ou cerca de 6 horas e igual ou cerca de 36 horas, entre igual ou cerca de 6 horas e igual ou cerca de 24 horas, entre igual ou cerca de 6 horas e igual ou cerca de 12 horas, entre igual ou cerca de 12 horas e igual ou cerca de 48 horas, entre igual ou cerca de 12 horas e igual ou cerca de 36 horas, entre igual ou cerca de 12 horas e igual ou cerca de 24 horas, entre igual ou cerca de 24 horas e igual ou cerca de 48 horas, entre igual ou cerca de 24 horas e igual ou cerca de 36 horas ou entre igual ou cerca de 36 horas e igual ou cerca de 48 horas.
[0020] Em algumas modalidades, a administração da primeira composição e a administração da segunda composição são realizadas no mesmo dia, são realizadas entre cerca de 0 e cerca de 12 horas de intervalo, entre cerca de 0 e cerca de 6 horas de intervalo ou entre cerca de 0 a 2 horas de intervalo; ou o início da administração da primeira composição e o início da administração da segunda composição são realizados entre cerca de 1 minuto e cerca de 1 hora de intervalo ou entre cerca de 5 minutos e cerca de 30 minutos de intervalo. Em algumas modalidades, a primeira composição e a segunda composição são administradas não mais do que 2 horas, não mais do que 1 hora, não mais do que 30 minutos, não mais do que 15 minutos, não mais do que 10 minutos ou não mais do que 5 minutos de intervalo.
[0021] Em algumas modalidades, a primeira composição e a segunda composição são administradas não mais do que 2 horas, não mais do que 1 hora, não mais do que 30 minutos, não mais do que 15 minutos, não mais do que 10 minutos ou não mais do que 5 minutos de intervalo.
[0022] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos fornecidos, o indivíduo tem CLL ou é suspeito de ter CLL; ou o indivíduo é identificado ou selecionado como tendo CLL. Em algumas modalidades, a CLL é CLL recidivante ou refratária.
[0023] Em algumas modalidades, o indivíduo tem SLL ou é suspeito de ter SLL; ou o indivíduo é identificado ou selecionado como tendo SLL. Em algumas modalidades, o SLL é um SLL recidivante ou refratário.
[0024] Em algumas modalidades, antes da administração da dose de células T manipuladas, o indivíduo foi tratado com uma0000000000000000000000000000000000 ou mais terapias anteriores para CLL ou SLL, diferente de outra dose de células que expressam CAR ou uma terapia de linfodepleção. Em algumas modalidades, a uma ou mais terapias anteriores compreendem pelo menos duas terapias anteriores, opcionalmente três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou mais.
[0025] Em algumas modalidades, no momento ou imediatamente antes do momento da administração da dose de células, o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com ou tornou-se refratário, não obteve sucesso e/ou era intolerante ao tratamento com uma ou mais terapias anteriores para CLL ou SLL. Em algumas modalidades, o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com ou tornou-se refratário, não obteve sucesso e/ou era intolerante ao tratamento com duas ou mais terapias anteriores. Em algumas modalidades, no momento ou imediatamente antes do momento da administração da dose de células, o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com ou tornou-se refratário, não obteve sucesso e/ou era intolerante ao tratamento com três ou mais terapias anteriores. Em algumas modalidades, as terapias anteriores são selecionadas a partir de um inibidor de quinase, opcionalmente um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTK), opcionalmente ibrutinibe; venetoclax; uma terapia combinada que compreende fludarabina e rituximabe; radioterapia; e transplante de células-tronco hematopoéticas (Hematopoietic Stem Cell Transplantation, HSCT). Em algumas modalidades, as terapias anteriores compreendem ibrutinibe e/ou venetoclax. Em algumas modalidades, as terapias anteriores compreendem ibrutinibe e venetoclax.
[0026] Em algumas modalidades, o indivíduo apresentou recidiva seguido de remissão após tratamento com, tornou-se refratário, não obteve sucesso e/ou é intolerante ao tratamento com ibrutinibe e/ou venetoclax. Em algumas modalidades, o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com, tornou-se refratário, não obteve sucesso e/ou é intolerante ao tratamento com ibrutinibe e venetoclax.
[0027] Em algumas modalidades, durante ou antes da administração da dose de células: o indivíduo é ou foi identificado como tendo uma ou mais anormalidades citogenéticas, opcionalmente associadas à CLL de alto risco, opcionalmente selecionadas a partir de: cariótipo complexo ou anormalidades citogenéticas, del 17p, gene IGVH não mutante e mutação TP53; o indivíduo é ou foi identificado como tendo CLL de alto risco.
[0028] Em algumas modalidades, o indivíduo é ou foi identificado como tendo um estado no ECOG de 0 ou 1; e/ou o indivíduo não tem um estado no ECOG de > 1. Em algumas modalidades, durante ou imediatamente antes da administração da dose de células manipuladas ou da terapia de linfodepleção, o indivíduo não tem uma transformada de Richter de CLL ou SLL.
[0029] Em algumas modalidades, o indivíduo é um adulto e/ou tem cerca de 50, 60 ou 70 anos de idade.
[0030] Em algumas modalidades, as células T são células T primárias obtidas de um indivíduo. Em algumas modalidades, as células T são autólogas ao indivíduo. Em algumas modalidades, a dose de células manipuladas são células viáveis.
[0031] Em algumas modalidades, antes da administração da dose de células manipuladas, a terapia de linfodepleção é administrada ao indivíduo. Em algumas modalidades, o indivíduo foi precondicionado com uma terapia de linfodepleção. Em algumas modalidades, a terapia de linfodepleção compreende administrar fludarabina e/ou ciclofosfamida. Em algumas modalidades, a terapia de linfodepleção compreende administrar ciclofosfamida em cerca de 200-400 mg/m2, opcionalmente igual ou cerca de 300 mg/m2, inclusive e/ou fludarabina em cerca de 20-40 mg/m2, opcionalmente 30 mg/m2, diariamente durante 2-4 dias, opcionalmente durante 3 dias. Em algumas modalidades, a terapia de linfodepleção compreende administrar ciclofosfamida igual ou cerca de 300 mg/m2 e fludarabina em cerca de 30 mg/m2 diariamente durante 3 dias, opcionalmente em que a dose de células é administrada pelo menos igual ou cerca de 2-7 dias após a terapia de linfodepleção ou pelo menos igual ou cerca de 2-7 dias após o início da terapia de linfodepleção.
[0032] Em algumas modalidades, durante ou antes da administração da dose de células: o indivíduo é ou foi identificado como tendo uma ou mais anormalidades citogenéticas, opcionalmente associadas à CLL ou SLL de alto risco, opcionalmente selecionadas a partir de: cariótipo complexo ou anormalidades citogenéticas, del 17p, gene IGVH não mutante e mutação TP53; e/ou o indivíduo é ou foi identificado como tendo CLL ou SLL de alto risco.
[0033] Em algumas modalidades, no momento ou imediatamente antes do momento da administração da dose de células, o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com ou tornou-se refratário, não obteve sucesso e/ou era intolerante ao tratamento com duas ou mais terapias anteriores. Em algumas modalidades, durante ou antes da administração da dose de células, o indivíduo é ou foi identificado como tendo um CLL ou SLL de risco padrão. Em algumas modalidades, no momento ou imediatamente antes do momento da administração da dose de células, o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com ou tornou-se refratário, não obteve sucesso e/ou era intolerante ao tratamento com três ou mais terapias anteriores. Em algumas modalidades, durante ou antes da administração da dose de células, o indivíduo é ou foi identificado como sendo intolerante a um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTK) e recebeu um inibidor de BTK durante um período de menos de ou cerca de 6 meses e/ou é inelegível para tratamento com um inibidor de BTK.
[0034] Em algumas modalidades, (i) o indivíduo é ou foi identificado como tendo CLL ou SLL de alto risco e, no momento ou imediatamente antes do momento da administração da dose de células, o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com ou tornou-se refratário a, não obteve sucesso e/ou era intolerante ao tratamento com uma ou mais terapias anteriores que não o inibidor de BTK; ou (ii) o indivíduo é ou foi identificado como tendo uma CLL ou SLL de risco padrão e, no momento ou imediatamente antes do momento da administração da dose de células, o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com ou tornou-se refratário a, não obteve sucesso e/ou era intolerante ao tratamento com duas ou mais terapias anteriores que não o inibidor de BTK.
[0035] Em algumas modalidades, a administração da dose de células e/ou a terapia de linfodepleção é realizada por meio de administração ambulatorial. Em algumas modalidades, a dose de células é administrada através da via parentérica, opcionalmente através da via intravenosa.
[0036] Em algumas modalidades, a resposta em pelo menos 35%, pelo menos 40 %, pelo menos 50%, pelo menos 60% ou pelo menos 70% dos indivíduos tratados é remissão completa (Complete Remission, CR) nos indivíduos tratados de acordo com o método. Em algumas modalidades, a duração da resposta até a progressão é durável por mais de 3 meses ou mais de 6 meses. Em algumas modalidades, nos indivíduos tratados de acordo com o método, mais de 50%, mais de 60% ou mais de 70% tinham doença residual mínima (Minimal Residual Disease, MRD) indetectável por pelo menos um mês, pelo menos dois meses, pelo menos três meses ou pelo menos 6 meses após administração da dose de células.
[0037] Em algumas modalidades, dos indivíduos tratados de acordo com o método, não mais do que 10 % dos indivíduos exibem uma síndrome de liberação de citocinas (Cytokine Release Syndrome, CRS)
superior ao grau 2. Em algumas modalidades, dentre uma pluralidade de indivíduos tratados de acordo com o método, não mais de 10 %, não mais de 20%, não mais de 30% ou não mais de 40% dos indivíduos exibem neurotoxicidade superior ao grau 2. Em algumas modalidades, a pluralidade de indivíduos tratados de acordo com o método compreende uma pluralidade de indivíduos que tiveram recidiva seguido de remissão após tratamento com, tornaram-se refratários, não obtiveram sucesso e/ou são intolerantes ao tratamento com ibrutinibe e venetoclax.
[0038] Em alguns aspectos, o método compreende: ensaiar uma amostra biológica quanto ao nível, quantidade ou concentração de TNF- alfa, em que a amostra biológica é de um indivíduo que é candidato ao tratamento, opcionalmente com uma terapia celular, a dita terapia celular compreendendo uma dose de células manipuladas que compreendem células T que expressam um CAR para o tratamento de uma doença ou condição, em que a amostra biológica é obtida do indivíduo antes da administração da terapia celular e/ou a dita amostra biológica não compreende o CAR e/ou as ditas células manipuladas; e comparar o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa com um nível limite, em que: (1) se o nível, quantidade ou concentração de TNF- alfa estiver em ou acima de um nível limite, identificar o indivíduo como em risco de desenvolver uma neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular; e (2) se o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa estiver abaixo do nível limite, identificar o indivíduo como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular.
[0039] Em algumas modalidades, o indivíduo é identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior e o método compreende ainda: (i) administrar ao indivíduo a terapia celular, opcionalmente em uma dose reduzida, opcionalmente em que (a) o método compreende ainda administrar ao indivíduo um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento da neurotoxicidade; e/ou (b) a administração da terapia celular ao indivíduo é realizada ou é especificada para ser realizada em um ambiente de internação e/ou com admissão hospitalar durante um ou mais dias; ou (ii) administrar ao indivíduo um tratamento alternativo diferente da terapia celular para tratar a doença ou condição.
[0040] Em algumas modalidades, o indivíduo é identificado como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular: (i) o indivíduo não recebe um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade, a menos ou até que os indivíduos exibam um sinal ou sintoma de uma toxicidade, opcionalmente em ou após o indivíduo exibir uma febre sustentada ou uma febre que é ou não foi reduzida ou não abaixou em mais de 1°C após tratamento com antipirético; e/ou (ii) a administração e qualquer acompanhamento é realizado em um regime ambulatorial e/ou sem internação do indivíduo em um hospital e/ou sem pernoite em um hospital e/ou sem a necessidade de internação ou pernoite em um hospital, opcionalmente, a menos ou até que o indivíduo apresente febre sustentada ou não reduzida ou não abaixou em mais de 1 °C após tratamento com um antipirético.
[0041] Em algumas modalidades, o ensaio compreende: (a) contatar uma amostra biológica com um ou mais reagentes capazes de detectar ou que são específicos para TNF-alfa, opcionalmente em que o um ou mais reagentes compreendem um anticorpo que reconhece especificamente o TNF-alfa ; e (b) detectar a presença ou ausência de um complexo que compreende um ou mais reagentes e TNF-alfa.
[0042] Em alguns aspectos, o método compreende administrar a um indivíduo uma terapia celular para o tratamento de uma doença ou condição, a dita terapia celular compreendendo uma dose de células manipuladas que compreendem células T que expressam um CAR, em que: (1) se o indivíduo tem um nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa em uma amostra biológica do indivíduo que está em ou acima de um nível limite, o indivíduo é identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular e o método compreende : (i) administrar ao indivíduo a terapia celular em uma dose reduzida, (ii) administrar posteriormente ao indivíduo um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade; e/ou (iii) a administração da terapia celular ao indivíduo é realizada ou é especificada para ser realizada em um ambiente de internação e/ou com admissão hospitalar durante um ou mais dias; ou (2) se o indivíduo for selecionado ou identificado como tendo um nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa em uma amostra biológica do indivíduo que está abaixo de um nível limite, o indivíduo é identificado como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular, (i) não administrar ao indivíduo um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade, a menos ou até que os indivíduos exibam um sinal ou sintoma de uma toxicidade, opcionalmente durante ou após o indivíduo exibir febre sustentada ou não reduzida ou não abaixou em mais de 1°C após tratamento com um antipirético; e/ou (ii) a administração e qualquer acompanhamento são realizados em um regime ambulatorial e/ou sem internação do indivíduo em um hospital e/ou sem pernoite em um hospital e/ou sem a necessidade de admissão ou pernoite em um hospital, opcionalmente, a menos ou até que o indivíduo exiba febre sustentada ou uma febre que é ou não foi reduzida ou não abaixou em mais de 1°C após tratamento com um antipirético, em que o indivíduo é um candidato ao tratamento com a terapia celular, a dita amostra biológica obtida do indivíduo antes da administração da terapia celular e/ou a dita amostra biológica não compreende o CAR e/ou as ditas células manipuladas.
[0043] Em algumas modalidades, o indivíduo é identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular e o método compreende administrar um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade, em que o agente é administrado ao indivíduo simultaneamente com a terapia celular ou dentro de três dias da administração da terapia celular ao indivíduo.
[0044] Em algumas modalidades, o nível limite está dentro de 25%, dentro de 20%, dentro de 15%, dentro de 10% ou dentro de 5% e/ou está dentro de um desvio padrão acima do nível, quantidade ou concentração média ou mediana ou é ou está próximo do nível, quantidade ou concentração média ou mediana do TNF-alfa em uma amostra biológica obtida de um grupo de indivíduos antes de receber uma terapia celular, em que cada um dos indivíduos do grupo não exibiu qualquer grau de neurotoxicidade após administração de uma dose de células manipuladas que expressam o CAR para o tratamento da mesma doença ou condição; o nível limite é igual ou maior do que 1,25 vezes superior, igual ou maior do que 1,3 vezes superior, igual ou maior do que 1,4 vezes superior ou igual ou maior do que 1,5 vezes superior ao nível, quantidade ou concentração média ou mediana do TNF-alfa em uma amostra biológica obtida de um grupo de indivíduos antes de receber uma terapia celular, em que cada um dos indivíduos do grupo não exibe qualquer grau de neurotoxicidade após administração de uma dose de células manipuladas que expressam o CAR para o tratamento da mesma doença ou condição; o nível limite é igual ou maior do que 1,25 vezes superior, igual ou maior do que 1,3 vezes superior, igual ou maior do que 1,4 vezes superior ou igual ou maior do que 1,5 vezes superior ao nível, quantidade ou concentração do TNF-alfa em uma amostra biológica obtida de um grupo de indivíduos normais ou saudáveis que não são candidatos ao tratamento com a terapia celular.
[0045] Em algumas modalidades, o nível limite é igual ou maior do que 1000 pg/mL da amostra biológica, igual ou maior do que 1100 pg/mL da amostra biológica, igual ou maior do que 1200 pg/mL da amostra biológica, igual ou maior do que 1300 pg/mL da amostra biológica, igual ou maior do que 1400 pg/mL da amostra biológica ou igual ou maior do que 1500 pg/mL da amostra biológica.
[0046] Em alguns aspectos, o método compreende: (a) ensaiar uma amostra biológica de um indivíduo quanto ao nível, quantidade ou concentração de IL-16, o dito indivíduo tendo recebido a administração de uma terapia celular que compreende uma dose de células manipuladas que compreendem células que expressam um CAR para o tratamento de uma doença ou condição, em que a amostra biológica é obtida do indivíduo dentro de um, dois ou três dias após o início da administração da terapia celular; e (b) comparar o nível, quantidade ou concentração de IL-16 com um nível limite, em que: (1) se o nível, quantidade ou concentração de IL-16 estiver em ou acima de um nível limite, identificar o indivíduo como em risco para desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior; e (2) se o nível, quantidade ou concentração de IL-16 estiver abaixo do nível limite, identificar o indivíduo como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior.
[0047] Em algumas modalidades, se o indivíduo for identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior, um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar,
reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade é administrado.
[0048] Em algumas modalidades, o ensaio compreende: (a) contatar uma amostra biológica com um ou mais reagentes capazes de detectar ou que são específicos para IL-16, opcionalmente em que o um ou mais reagentes compreendem um anticorpo que reconhece especificamente a IL-16; (b) detectar a presença ou ausência de um complexo que compreende o reagente e IL-16. Em algumas modalidades, o método compreende ainda, antes do ensaio, administrar ao indivíduo a terapia celular.
[0049] Em alguns aspectos, o método compreende administrar a um indivíduo, identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior, um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade, o dito indivíduo tendo recebido anteriormente a administração de uma terapia celular para o tratamento de uma doença ou condição em que, em ou imediatamente antes da administração do agente, o indivíduo é selecionado ou identificado como estando em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior se o nível ou quantidade ou concentração de IL-16 em uma amostra biológica, obtida do indivíduo dentro de um, dois ou três dias após o início da administração da terapia celular, estiver acima de um nível limite.
[0050] Em algumas modalidades, a administração do agente é realizada em um momento em que o indivíduo exibe uma febre sustentada ou uma febre que é ou não foi reduzida ou não abaixou em mais de 1°C após tratamento com um antipirético. Em algumas modalidades, a administração da terapia celular ao indivíduo foi realizada em um regime ambulatorial e, se o nível, quantidade ou concentração de IL-16 estiver acima de um nível limite, o método compreende a admissão do paciente no hospital durante um ou mais dias.
[0051] Em algumas modalidades, o nível limite está dentro de 25 %, dentro de 20 %, dentro de 15 %, dentro de 10 % ou dentro de 5 % e/ou está dentro de um desvio padrão acima do nível, quantidade ou concentração média ou mediana ou é ou está próximo do nível, quantidade ou concentração média ou mediana da IL-16 em uma amostra biológica obtida, a partir de um grupo de indivíduos, dentro de um, dois ou três dias após receber uma terapia celular que compreende administrar uma dose de células que expressam o CAR para o tratamento da mesma doença ou condição, em que cada um dos indivíduos do grupo não exibiu qualquer grau de neurotoxicidade após administração da terapia celular.
[0052] Em algumas modalidades, o nível limite é igual ou maior do que 1,3 vezes superior, igual ou maior do que 1,4 vezes superior, igual ou maior do que 1,5 vezes superior, igual ou maior do que 1,6 vezes superior, igual ou maior do que 1,7 vezes superior, igual ou maior do que 1,8 vezes superior, igual ou maior do que 1,9 vezes superior ou igual ou maior do que 2,0 vezes superior ao nível, quantidade ou concentração média ou mediana de IL-16 em um amostra biológica obtida de um grupo de indivíduos antes de receber uma terapia celular, em que cada um dos indivíduos do grupo não exibiu qualquer grau de neurotoxicidade após administração de uma dose de células manipuladas que expressam o CAR para o tratamento da mesma doença ou condição.
[0053] Em algumas modalidades, o nível limite é igual ou maior do que 1,3 vezes superior, igual ou maior do que 1,4 vezes superior, igual ou maior do que 1,5 vezes superior, igual ou maior do que 1,6 vezes superior, igual ou maior do que 1,7 vezes superior, igual ou maior do que 1,8 vezes superior, igual ou maior do que 1,9 vezes superior ou igual ou maior do que 2,0 vezes superior ao nível, quantidade ou concentração de IL-16 em uma amostra biológica obtida de um grupo de indivíduos normais ou saudáveis que não são candidatos ao tratamento com a terapia celular.
[0054] Em algumas modalidades, o nível limite é igual ou maior do que 1000 pg/mL da amostra biológica, igual ou maior do que 1500 pg/mL da amostra biológica, igual ou maior do que 2000 pg/mL da amostra biológica, igual ou maior do que 2500 pg/mL da amostra biológica ou igual ou maior do que 3000 pg/mL da amostra biológica.
[0055] Em algumas modalidades, a amostra biológica é ou é obtida de uma amostra de sangue, plasma ou soro. Em algumas modalidades, a amostra biológica é uma amostra de soro. Em algumas modalidades, o ensaio ou avaliação das células no analito compreende um imunoensaio. Em algumas modalidades, a doença ou condição é um câncer. Em algumas modalidades, a doença ou condição é um mieloma, leucemia ou linfoma.
[0056] Em algumas modalidades, o antígeno é ROR1, antígeno de maturação de células B (BCMA), anidrase carbônica 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (receptor de tirosina quinase erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA e antígeno na superfície de hepatite B, receptor anti-folato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, dímeros de erbB, EGFR VIII, proteína de ligação ao folato (FBP), FCRL5, FCRH5, receptor fetal de acetilcolina, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL-13R-alfa2, receptor de domínio de inserção de quinase (kdr), cadeia leve capa, Lewis Y, molécula de adesão celular L1 (L1-CAM), antígeno associado ao melanoma (MAGE) -A1, MAGE-A3, MAGE-A6, Antígeno expresso preferencialmente em melanoma (PRAME), survivina, TAG72, B7-H6, receptor alfa 2 de IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171,
G250/CAIX, HLA-A1 MAGE A1, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor- de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina avb6, 8H9, NCAM, receptores de VEGF, 5T4, AchR fetal, ligantes de NKG2D, CD44v6, antígeno duplo, um antígeno de câncer testicular, mesotelina, CMV de murino, mucina 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antígeno oncofetal, ROR1, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), Her2/neu, receptor de estrogênio, receptor de progesterona, efrina B2, CD123, c-Met, GD-2, GD2 O-acetilado (OGD2), CE7, Tumor de Wilm 1 (WT-1), uma ciclina, ciclina A2, CCL-1, CD138, Receptor 5D Acoplado à Proteína G (GPCR5D) ou um antígeno específico para patógeno.
[0057] Em algumas modalidades, o antígeno é CD19.
[0058] Em algumas modalidades, a doença ou condição é uma malignidade de células B e/ou é leucemia linfoblástica aguda (Acute Lymphoblastic Leukemia, ALL), ALL em adultos, leucemia linfoblástica crônica (CLL), linfoma linfocítico pequeno (SLL), linfoma não-Hodgkin (NHL) e Linfoma Difuso de Grandes Células B (DLBCL). Em algumas modalidades, a doença ou condição é CLL ou SLL.
[0059] Em algumas modalidades, o agente é ou compreende tocilizumabe, siltuximabe ou dexametasona.
[0060] Em algumas modalidades, o CAR compreende um domínio de ligação a antígeno extracelular específico para CD19, um domínio transmembrana, um domínio de sinalização citoplasmático derivado de uma molécula coestimuladora a qual é opcionalmente 4-1BB e um domínio de sinalização citoplasmático derivado de uma molécula que contém ITAM de sinalização primária a qual é opcionalmente uma CD3zeta; o CAR compreende, nesta ordem, um domínio de ligação a antígeno extracelular específico para CD19, um domínio transmembrana, um domínio de sinalização citoplasmático derivado de uma molécula coestimuladora e um domínio de sinalização citoplasmático derivado de uma molécula que contém ITAM de sinalização primária.
[0061] Em algumas modalidades, o domínio de ligação a antígeno é um scFv.
[0062] Em algumas modalidades, o scFv compreende uma sequência de CDRL1 de RASQDISKYLN (SEQ ID NO: 35), uma sequência de CDRL2 de SRLHSGV (SEQ ID NO: 36) e/ou uma sequência de CDRL3 de GNTLPYTFG (SEQ ID NO: 37) e/ou uma sequência de CDRH1 de DYGVS (SEQ ID NO: 38), uma sequência de CDRH2 de VIWGSETTYYNSALKS (SEQ ID NO: 39) e/ou uma sequência de CDRH3 de YAMDYWG (SEQ ID NO: 40); o scFv compreende uma região variável de cadeia pesada de FMC63 e uma região variável de cadeia leve de FMC63 e/ou uma sequência de CDRL1 de FMC63, uma sequência de CDRL2 de FMC63, uma sequência de CDRL3 de FMC63, uma sequência de CDRH1 de FMC63, uma sequência de CDRH2 de FMC63 e uma sequência de CDRH3 de FMC63 ou se liga ao mesmo epítopo ou compete pela ligação com qualquer um dos anteriores; o scFv compreende uma VH apresentada em SEQ ID NO: 41 e uma VL apresentada em SEQ ID NO: 42, opcionalmente em que a VH e a VL são separadas por um ligante flexível, opcionalmente em que o ligante flexível é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 24; e/ou o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 43.
[0063] Em algumas modalidades, a região de sinalização coestimuladora é um domínio de sinalização de CD28 ou 4-1BB. Em algumas modalidades, a região de sinalização coestimuladora é um domínio de sinalização de 4-1BB.
[0064] Em algumas modalidades, o domínio coestimulador compreende SEQ ID NO: 12 ou uma variante da mesma que tem pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %,
95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização primário é um domínio de sinalização de CD3zeta. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização primário compreende SEQ ID NO: 13 ou 14 ou 15 que tem pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência.
[0065] Em algumas modalidades, o CAR compreende ainda um espaçador entre o domínio transmembrana e o scFv. Em algumas modalidades, o espaçador é um espaçador polipeptídico que compreende ou consiste em toda ou uma parte de uma dobradiça de imunoglobulina ou uma versão modificada da mesma, opcionalmente uma dobradiça de IgG4 ou uma versão modificada da mesma. Em algumas modalidades, o espaçador tem cerca de 15 aminoácidos ou menos e não compreende uma região extracelular de CD28 ou uma região extracelular de CD8. Em algumas modalidades, o espaçador tem cerca de 12 aminoácidos de comprimento.
[0066] Em algumas modalidades, o espaçador tem ou consiste na sequência de SEQ ID NO: 1, uma sequência codificada por SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 ou uma variante de qualquer uma das anteriores que tem pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93%, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência; e/ou compreende ou consiste na fórmula X1PPX2P, em que X1 é glicina, cisteína ou arginina e X2 é cisteína ou treonina.
[0067] Em algumas das modalidades, o indivíduo é um ser humano.
[0068] Em alguns dos artigos de manufatura fornecidos, o artigo de manufatura compreende uma composição de uma terapia celular ou uma dentre uma pluralidade de composições de uma terapia celular que compreendem células T que expressam um receptor antigênico quimérico anti-CD19 (CAR) e instruções para administrar a terapia celular, em que as instruções especificam a administração da composição de células T de acordo com qualquer um dos métodos fornecidos. Breve Descrição dos Desenhos
[0069] A Figura 1 mostra um gráfico da frequência de células T CAR no sangue total, conforme medido por meio de citometria de fluxo. As caixas se estendem do 1º ao 3º quartil, com a mediana mostrada como uma linha horizontal. Os whiskers se estendem até 1,5 vezes a faixa interquartil, com medições fora desta faixa representadas como pontos individuais.
[0070] A Figura 2 mostra um gráfico das células medianas/µl ao longo do tempo por nível de dose. Pacientes, N = 16; amostras, n. A barra de erro superior representa o terceiro quartil; a barra de erro inferior representa o primeiro quartil. A dose foi administrada no dia 1.
[0071] A Figura 3A e a Figura 3B mostram gráficos da análise de biomarcadores de IL-16 e TNFα em pacientes ao longo do tempo. Pacientes, N = 13. Trinta e nove citocinas foram analisadas em 13 pacientes nos primeiros trinta dias de tratamento.
[0072] A Figura 4A mostra os resultados da melhor resposta geral em indivíduos com R/R CLL (N = 22) que receberam células T anti-CD19 CAR+ em DL1 (5 x 107 células T que expressam CAR) ou DL2 (1 x 108 células T que expressam CAR). A Figura 4B mostra os resultados de doença residual mínima indetectável (uMRD) no sangue por meio de citometria de fluxo ou na medula óssea por meio de sequenciamento de próxima geração (Next Generation Sequencing, NGS) em qualquer ponto de tempo após administração a indivíduos com R/R CLL de células T que expressam CAR anti-CD19 em DL1 (5 x 107 células T que expressam CAR) ou DL2 (1 x 108 células T que expressam CAR).
[0073] A Figura 5 mostra um gráfico da duração da resposta ao longo do tempo em indivíduos com R/R CLL (N = 22) que receberam células T anti-CD19 CAR+ em DL1 (5 x 107 células T que expressam CAR) ou DL2 (1 x 108 células T que expressam CAR).
[0074] A Figura 6 mostra um gráfico das células medianas/µl ao longo do tempo por níveis de dose em indivíduos com R/R CLL que receberam células T anti -CD19 CAR+ em DL1 (5 x 107 células T que expressam CAR) ou DL2 (1 x 108 células T que expressam CAR). A barra de erro superior representa o terceiro quartil, a barra de erro inferior representa o primeiro quartil. A dose de células T anti-CD19 CAR+ foi administrada no dia 1.
[0075] A Figura 7A mostra os resultados da melhor resposta geral em indivíduos com R/R CLL (N = 22) ou indivíduos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior com um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTKi) e venetoclax (N = 9). A Figura 7B mostra os resultados de doença residual mínima indetectável (uMRD) no sangue por meio de citometria de fluxo ou na medula óssea por meio de sequenciamento de próxima geração (NGS) a qualquer momento após administração, a indivíduos com CLL R/R (N = 20) ou indivíduos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior, de BTKi e venetoclax (N = 8). aAvaliável quanto à resposta definida como tendo uma avaliação pré-tratamento e ≥ 1 avaliação pós-linha de base; avaliável quanto à MRD foi definido como pacientes com MRD detectável no início do estudo. Um indivíduo b não foi avaliável quanto à resposta. Não obteve sucesso com venetoclax definido como descontinuação em virtude de PD ou < PR após ≥ 3 meses de terapia. cDois indivíduos não foram avaliados quanto à MRD. dUm indivíduo não foi avaliável quanto à MRD. CI, intervalo de confiança; CRi, resposta completa com recuperação incompleta pelo hemograma; NGS, sequenciamento de última geração; nPR, resposta parcial nodular; PD, doença progressiva (Progressive Disease); PR, resposta parcial; SD, doença estável; uMRD, doença residual mínima indetectável.
[0076] A Figura 8 mostra um gráfico da duração da resposta ao longo do tempo em indivíduos com R/R CLL que não obtiveram sucesso no tratamento anterior tanto com BTKi como venetoclax, e os outros indivíduos tratados. * MRD não avaliável. Ocorreram 7 mortes no estudo: 5 indivíduos morreram em virtude de progressão da doença; 1 indivíduo tinha insuficiência respiratória de grau 5 (DL1) não relacionada ao tratamento de terapia com células T CAR+; 1 indivíduo teve choque séptico, lesão renal aguda e pneumonia (DL2), não relacionado ao tratamento de terapia com células T CAR+. Nenhuma morte ocorreu nos primeiros 30 dias. ND, não feito; RT, Transformada de Richter.
[0077] A Figura 9 mostra um gráfico das células medianas/µL ao longo do tempo por níveis de dose em indivíduos tratados avaliáveis e indivíduos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior com um BTKi e venetoclax. A barra de erro superior representa o terceiro quartil, a barra de erro inferior representa o primeiro quartil. A terapia com células T CAR+ foi administrada no Dia 1. AUC0–29, área sob a curva dos dias 0 a 29; Cmax, concentração máxima; PK/PD, farmacocinética/farmacodinâmica; Q, quartil; Tmax, tempo até a concentração máxima. Descrição Detalhada
[0078] São fornecidos no presente documento métodos e usos de células manipuladas (por exemplo, células T) e/ou composições das mesmas, para o tratamento de indivíduos que têm uma doença ou condição a qual, em geral, é ou inclui um câncer ou um tumor, tal como uma leucemia ou um linfoma, mais particularmente leucemia linfocítica crônica (CLL) ou linfoma linfocítico pequeno (SLL). Em alguns aspectos, os métodos e usos fornecem ou alcançam uma resposta aumentada e/ou respostas mais duráveis ou eficazes e/ou um risco reduzido de toxicidade ou outros efeitos colaterais, por exemplo, em grupos particulares de indivíduos tratados, comparado com determinados métodos alternativos. Em algumas modalidades, os métodos são vantajosos em virtude da administração de números especificados ou números relativos das células manipuladas, a administração de proporções definidas de tipos específicos de células, tratamento de populações de pacientes específicos, tais como aqueles que têm um perfil de risco específico, estadiamento e/ou histórico de tratamento anterior e/ou combinações dos mesmos.
[0079] Também são fornecidos métodos que incluem a avaliação de parâmetros específicos, por exemplo, expressão de biomarcadores ou analitos específicos, os quais podem ser correlacionados com o desenvolvimento de toxicidade, e métodos para tratamento, por exemplo, terapia de intervenção, para prevenir e/ou melhorar as toxicidades. Também são fornecidos métodos que envolvem a avaliação de parâmetros específicos, por exemplo, expressão de biomarcadores ou analitos específicos, que podem ser correlacionados com um resultado, tal como um resultado terapêutico, incluindo uma resposta, tal como uma resposta completa (CR) ou uma resposta parcial (PR); ou um resultado de segurança, tal como o desenvolvimento de uma toxicidade, por exemplo, neurotoxicidade ou CRS, após administração de uma imunoterapia e/ou terapia celular. Também são fornecidos métodos para avaliar a probabilidade de resposta e/ou probabilidade de risco de toxicidade, com base na avaliação dos parâmetros, tal como a expressão de biomarcadores ou analitos. Também são fornecidas composições para uso em terapia celular. Também são fornecidos artigos de manufatura e kits, por exemplo, para uso nos métodos fornecidos no presente documento. Em algumas modalidades, os artigos de manufatura e kits contêm opcionalmente instruções de uso, de acordo com os métodos fornecidos no presente documento.
[0080] Em particular, dentre as modalidades fornecidas estão métodos de tratamento de indivíduos com CLL ou SLL. Em alguns aspectos, a CLL é considerada uma doença incurável e os indivíduos eventualmente têm uma recidiva ou se tornam refratários às terapias ou tratamentos disponíveis. Em algumas das modalidades, os indivíduos têm uma doença de alto risco. Em algumas modalidades dos métodos fornecidos, os indivíduos têm um CLL ou SLL de alto risco. Em alguns casos, as estratégias de tratamento existentes para indivíduos de alto risco e risco muito alto podem incluir fludarabina, ciclofosfamida e rituximabe (FCR), inibidores da tirosina quinase de Bruton (BTK) (por exemplo, ibrutinibe) e/ou transplante de células-tronco alogênicas (Puiggros et al., BioMed Research International, Volume 2014 (2014), ID Artigo 435983). Muitas das terapias existentes incluem medicamentos orais os quais, para alguns pacientes com CLL, melhoraram os resultados do tratamento. No entanto, alguns pacientes se mostram intolerantes ou resistentes à terapia e/ou não conseguem obter uma resposta completa com MRD indetectável (uMRD). Em alguns aspectos, os indivíduos que apresentam doença progressiva após tratamento com as terapias disponíveis apresentam resultados ruins. Por exemplo, em alguns aspectos, os indivíduos tratados para CLL exibem resultados ruins em longo prazo. Por exemplo, em alguns casos, indivíduos refratários (R/R) com CLL de alto risco exibem baixa sobrevida após a descontinuação do ibrutinibe (Jain et al. (2015) Blood 125 (13): 2062-2067). Há uma necessidade de métodos aprimorados para o tratamento de CLL e, em alguns aspectos, aqueles apropriados para o tratamento de CLL de alto e/ou risco muito alto e/ou indivíduos que tiveram uma recidiva ou se tornaram refratários a múltiplas terapias anteriores.
[0081] Em algumas modalidades, os métodos incluem administrar células a um indivíduo selecionado ou identificado como tendo um determinado prognóstico ou risco de CLL. A leucemia linfocítica crônica (CLL) é uma doença geralmente variável. Alguns indivíduos com CLL podem sobreviver sem tratamento, enquanto que outros podem exigir intervenção imediata. Em alguns casos, os indivíduos com CLL podem ser classificados em grupos que podem informar o prognóstico da doença e/ou estratégia de tratamento recomendada. Em alguns casos, estes grupos podem ser de "baixo risco", "risco intermediário", "alto risco" e/ou "risco muito alto" e os pacientes podem ser classificados como tal, dependendo de uma série de fatores incluindo, porém sem limitações, anomalias genéticas e/ou características morfológicas ou físicas. Em algumas modalidades, os indivíduos tratados de acordo com o método são classificados ou identificados com base no risco de CLL. Em algumas modalidades, o indivíduo é aquele que tem CLL de alto risco.
[0082] Em algumas modalidades, os métodos e usos fornecem ou alcançam respostas ou eficácia aumentadas ou mais duráveis comparado com determinados métodos alternativos, tal como em grupos específicos de indivíduos tratados, tais como em pacientes com leucemia, como CLL ou SLL, incluindo aqueles com doença de alto risco. Em algumas modalidades, os métodos são vantajosos em virtude da administração de terapia com células T, tal como uma composição que inclui células para terapia com células adotivas, por exemplo, como células T que expressam CAR, por exemplo, células T anti-CD19 CAR+. Em algumas modalidades, os métodos também incluem, antes da terapia com células T, uma terapia de linfodepleção, por exemplo, tal como ciclofosfamida, fludarabina ou combinações das mesmas.
[0083] Em alguns aspectos, as modalidades fornecidas são com base em observações, tais como aquelas descritas nos Exemplos fornecidos no presente documento, de que os métodos fornecidos podem ser usados para atingir uma alta taxa de resposta com alta durabilidade, comparado com determinados métodos disponíveis para terapia celular, sem um risco aumentado de toxicidade. Em algumas modalidades, os métodos fornecidos permitem a persistência prolongada de células transferidas adotivamente para terapia celular e/ou baixa taxa de desenvolvimento de toxicidade no indivíduo. Em algumas modalidades, os métodos podem ser usados para selecionar indivíduos para tratamento com terapia celular que são prováveis ou mais prováveis de responder à terapia e/ou para determinar as doses ou regimes de dosagem apropriados para maior taxa de resposta e/ou resposta mais durável, ao mesmo tempo em que minimiza o risco de toxicidade. Tais métodos podem informar estratégias racionais para facilitar a aplicação clínica segura e eficaz da terapia com células adotivas, tal como a terapia com células CAR-T.
[0084] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos alcançam uma alta taxa de resposta em uma população fortemente pré-tratada de indivíduos com CLL (ou SLL) de alto risco, todos os quais receberam uma ou mais terapias anteriores, incluindo ibrutinibe. Em algumas modalidades, os indivíduos tratados incluem indivíduos que tiveram uma recidiva seguido de remissão inicial com ibrutinibe ou que são refratários ou intolerantes ao tratamento com ibrutinibe. Em modalidades particulares, os indivíduos tratados incluem indivíduos que tiveram recidiva seguido de remissão ou são refratários ou intolerantes a uma ou mais terapias anteriores além de ibrutinibe, tal como 1, 2, 3, 4, 5 ou mais terapias anteriores. Em algumas modalidades, os indivíduos tiveram uma recidiva ou são refratários a um tratamento anterior com ibrutinibe e venetoclax. Em algumas modalidades, os indivíduos que são refratários a tal tratamento progrediram após uma ou mais terapias anteriores. Em algumas modalidades, os indivíduos tratados, incluindo aqueles tratados com uma ou mais terapias anteriores (por exemplo, ibrutinibe e/ou venetoclax), incluem aqueles com citogenética de alto risco, incluindo mutação TP53, cariótipo complexo (ou seja, pelo menos três alterações cromossômicas) e del17 (p). Em algumas modalidades, os indivíduos para tratamento de acordo com as modalidades fornecidas no presente documento incluem indivíduos que não obtiveram sucesso com um inibidor de BTK (por exemplo, ibrutinibe) e venetoclax. Conforme demonstrado no presente documento, os resultados de um ensaio clínico em andamento demonstram uma alta taxa de resposta global (ORR) de mais de 65 % dos indivíduos tratados em vários níveis de dose, incluindo remissão completa (CR) com recuperação incompleta do hemograma (CRi) em mais de 35 % dos indivíduos tratados. Destes indivíduos, todos foram previamente tratados com ibrutinibe e aproximadamente metade foi previamente tratada com ibrutinibe e venetoclax. Em alguns aspectos, os resultados estão associados à obtenção de MRD indetectável (uMRD); foi relatado que a obtenção de uMRD está correlacionada com melhores resultados (Kovacs et al. (2016) J. Clin. Oncol., 34: 3758-3765; Thompson e Wierda (2016) Blood, 127: 279-286). Em algumas modalidades, os métodos fornecidos resultam em uma alta porcentagem de respostas sustentadas que continuam sem progressão por mais de 1 mês, mais de 3 meses, mais de seis meses ou mais.
[0085] Tais resultados alcançados em indivíduos de alto risco são superiores comparado com algumas outras terapias alternativas. Em particular, a CLL é geralmente considerada incurável e os pacientes frequentemente têm uma recidiva ou tornam-se refratários às terapias disponíveis (DIGHiero e Hamblin (2008) The Lancet, 371: 1017-1029). Em alguns casos, CR e uMRD são inadequadas e/ou os indivíduos progridem ou têm resultados ruins após tratamento com alguns outros agentes, tal como o agente único ibrutinibe, venetoclax-Rituximabe, Bendamustina-Rituximabe ou tanto ibrutinibe como venetoclax. Além disso, os relatórios indicaram que algumas outras terapias com células
CAR T podem não atingir tais taxas de resposta duráveis.
[0086] Em algumas modalidades, os métodos e usos incluem administrar as células em questão que expressam receptores na superfície celular geneticamente manipuladas (recombinantes) em terapia celular adotiva, os quais geralmente são receptores quiméricos, tais como receptores antigênicos quiméricos (CARs), que reconhecem um antígeno expresso por, associado com e/ou específico para leucemia ou linfoma e/ou tipo de célula do qual é derivado. Em modalidades particulares, o antígeno alvo é CLL. As células são, em geral, administradas em uma composição formulada para administração; os métodos geralmente envolvem a administração de uma ou mais doses das células ao indivíduo, dose(s) a(s) qual(is) pode(m) incluir um determinado número ou número relativo de células ou células manipuladas e/ou uma proporção definida ou composições de dois ou mais subtipos dentro da composição, tais como células T CD4 vs. CD8.
[0087] Em modalidades particulares, os métodos são realizados com um produto de células T terapêuticas que envolve a administração separada de composições de células T de CAR CD4+ e CD8+ administradas em um número particular preciso como uma dose plana e/ou como uma proporção definida de células T CD4+ e CD8+ CAR. Em alguns casos, os métodos incluem a produção ou manipulação da composição de células T CAR por meio de um processo que inclui isolamento, seleção ou enriquecimento separado de células T CD4+ e CD8+ a partir de uma amostra biológica. Em alguns casos, os métodos para produzir uma composição de células CAR-T que incluem o enriquecimento de células T CD4+ e CD8+ evitam o risco de incluir células tumorais no produto de células CAR-T ou durante a fabricação do produto de células CAR-T. Comparado com outras doenças, a CLL é um câncer no qual as células tumorais são encontradas na periferia o que, em alguns contextos, pode interferir e/ou impactar a eficácia de um produto CAR-T que pode incluir tais células ou ser derivado de um composição inicial que contém tais células.
[0088] Todas as publicações, incluindo documentos de patentes, artigos científicos e bancos de dados, citados no presente pedido são incorporados a título de referência na íntegra para todas as finalidades, na mesma medida como se cada publicação individual fosse individualmente incorporada a título de referência. Se uma definição apresentada no presente documento for contrária ou de outra forma inconsistente com uma definição apresentada nas patentes, pedidos, pedidos publicados e outras publicações que são incorporadas ao presente documento a título de referência, a definição apresentada no presente documento prevalece sobre a definição que é incorporada ao presente documento a título de referência.
[0089] Os títulos das seções usados no presente documento são apenas para fins organizacionais e não devem ser interpretados como limitando o assunto descrito. I. MÉTODOS E USOS DE TERAPIA CELULAR COM CÉLULAS
GENETICAMENTE MANIPULADAS
[0090] Em algumas modalidades, os métodos e usos fornecidos no presente documento incluem administrar as células em questão que expressam receptores na superfície celular geneticamente modificados (recombinantes) em terapia celular adotiva, os quais geralmente são receptores quiméricos, tais como receptores antigênicos quiméricos (CARs), que reconhecem um antígeno expresso por, associado com e/ou específico para leucemia ou linfoma e/ou tipo de célula do qual é derivado. As células são, em geral, administradas em uma composição formulada para administração; os métodos geralmente envolvem a administração de uma ou mais doses das células ao indivíduo, dose(s) a(s) qual(is) pode(m) incluir um número particular ou número relativo de células ou células manipuladas e/ou uma proporção definida ou composições de dois ou mais subtipos dentro da composição, tais como células T CD4 vs. CD8.
[0091] Em algumas modalidades, as células, populações e composições são administradas a um indivíduo que tem a doença ou condição específica a ser tratada, por exemplo, por meio de terapia com células adotivas, tal como terapia com células T adotivas. Em algumas modalidades, os métodos envolvem o tratamento de um indivíduo que tem linfoma ou leucemia, tal como leucemia linfocítica crônica (CLL) ou linfoma linfocítico pequeno (SLL) com uma dose de células que expressam o receptor antigênico (por exemplo, células que expressam CAR).
[0092] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos envolvem o tratamento de um grupo específico ou subconjunto de indivíduos, por exemplo, indivíduos identificados como tendo doença de alto risco, por exemplo, CLL de alto risco. Em alguns aspectos, os métodos tratam indivíduos com uma forma de CLL agressiva e/ou de mau prognóstico, tal como CLL recidivante ou é refratária (R/R) à terapia padrão e tem um prognóstico ruim. Em algumas modalidades, o indivíduo não obteve sucesso com uma ou mais terapias anteriores. Em algumas modalidades, o indivíduo não é elegível para outra terapia anterior. Em algumas modalidades, o indivíduo não obteve sucesso com uma terapia anterior com um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTKi), tal como ibrutinibe. Em algumas modalidades, o indivíduo não obteve sucesso com ibrutinibe e venetoclax. Em alguns casos, a taxa de resposta global (ORR; também conhecida, em alguns casos, como taxa de resposta objetiva) às terapias disponíveis, a um padrão de atendimento ou a uma terapia de referência para a doença e/ou população de pacientes para a qual a terapia é indicada, é inferior a 40 % e/ou a resposta completa (CR; também conhecida, em alguns casos, como remissão completa) é inferior a 20%.
[0093] Em algumas modalidades, os métodos, usos e artigos de manufatura envolvem ou são usados para o tratamento de indivíduos que envolvem, selecionam ou identificam um determinado grupo ou subconjunto de indivíduos, por exemplo, com base em tipos específicos de doença, critérios de diagnóstico, tratamentos e/ou resposta a tratamentos anteriores. Em algumas modalidades, os métodos envolvem o tratamento de um indivíduo que teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com ou se tornou refratário a uma ou mais terapias anteriores; ou um indivíduo que teve uma recidiva ou é refratário (R/R) a uma ou mais terapias anteriores, por exemplo, uma ou mais linhas de terapia padrão. Em algumas modalidades, os métodos envolvem o tratamento de indivíduos que têm leucemia linfocítica crônica. Em algumas modalidades, os métodos envolvem o tratamento de indivíduos que têm linfoma linfocítico pequeno. Em algumas modalidades, os métodos envolvem o tratamento de um indivíduo que tem um estado de desempenho no Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) de 0-1. Em algumas modalidades, os métodos tratam uma população de pacientes com CLL com prognóstico ruim ou indivíduo da mesma que geralmente respondem mal a uma terapia ou terapias de referência particulares, tal como um com citogenética de alto risco (ou seja, Del (17p), mutação TP53, IGHV mutante e cariótipo complexo).
[0094] Em algumas modalidades, o receptor antigênico (por exemplo, CAR) se liga especificamente a um antígeno alvo associado à doença ou condição, tal como associado à CLL. Em algumas modalidades, o receptor antigênico se liga a um antígeno alvo associado ao SLL. Em algumas modalidades, o antígeno associado à doença ou transtorno é CD19.
[0095] Em algumas modalidades, os métodos incluem administrar as células ou uma composição que contém as células a um indivíduo, tecido ou célula, tal como aquele que tem, está em risco ou é suspeito de ter a doença, condição ou transtorno. Em algumas modalidades, o indivíduo é um adulto. Em algumas modalidades, o indivíduo tem mais de 50, 60 ou 70 anos de idade.
[0096] Em algumas modalidades, o indivíduo foi previamente tratado com uma terapia ou um agente terapêutico direcionado à doença ou condição, por exemplo, CLL ou SLL, antes da administração das células que expressam o receptor recombinante. Em algumas modalidades, o indivíduo foi tratado anteriormente com um transplante de células-tronco hematopoiéticas (HSCT), por exemplo, HSCT alogênico ou HSCT autólogo. Em algumas modalidades, o indivíduo teve um prognóstico ruim após tratamento com terapia padrão e/ou não obteve sucesso com uma ou mais linhas de terapia anterior, por exemplo, pelo menos igual ou cerca de 1, 2, 3, 4 ou mais linhas de terapia anterior. Em algumas modalidades, o indivíduo foi tratado ou recebeu anteriormente pelo menos ou cerca de pelo menos ou cerca de 1, 2, 3 ou 4 outras terapias para o tratamento de CLL além de uma terapia de linfodepleção e/ou dose de células que expressam o receptor antigênico. Em algumas modalidades, o indivíduo foi tratado anteriormente com quimioterapia ou radioterapia. Em alguns aspectos, o indivíduo é refratário ou não responde à outra terapia ou agente terapêutico. Em algumas modalidades, o indivíduo tem doença persistente ou recidivante, por exemplo, após tratamento com outra terapia ou intervenção terapêutica, incluindo quimioterapia ou radiação. Em algumas modalidades, os indivíduos têm uma leucemia linfocítica crônica recidivante ou refratária (R/R) (CLL) e não obtiveram sucesso ou são inelegíveis para uma terapia com inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTKi).
[0097] Em algumas modalidades, o indivíduo foi tratado anteriormente com uma terapia ou um agente terapêutico direcionado à doença ou condição, por exemplo, CLL, antes da administração das células que expressam o receptor antigênico recombinante. Em algumas modalidades, o agente terapêutico é um inibidor de quinase, tal como um inibidor de tirosina quinase de Bruton (Btk), por exemplo, ibrutinibe. Em algumas modalidades, o agente terapêutico é um inibidor de linfoma de células B-2 (Bcl-2), por exemplo, venetoclax. Em algumas modalidades, o agente terapêutico é um anticorpo (por exemplo, anticorpo monoclonal) que se liga especificamente a um antígeno expresso pelas células da CLL ou NHL, por exemplo, um antígeno de qualquer um ou mais dentre CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Igcapa, Iglambda, CD79a, CD79b ou CD30. Em algumas modalidades, o agente terapêutico é um anticorpo anti-CD20, por exemplo, rituximabe. Em algumas modalidades, o agente terapêutico é uma quimioterapia de depleção que é uma terapia combinada que inclui rituximabe, por exemplo, uma terapia combinada de fludarabina e rituximabe ou uma terapia combinada de antraciclina e rituximabe. Em algumas modalidades, o indivíduo foi tratado anteriormente com transplante de células-tronco hematopoiéticas (HSCT), por exemplo, HSCT alogênico ou HSCT autogênico. Em algumas modalidades, o indivíduo foi tratado ou recebeu anteriormente pelo menos ou cerca de pelo menos ou cerca de 1, 2, 3 ou 4 outras terapias para o tratamento de CLL, além da terapia de linfodepleção e/ou a dose de células que expressam o receptor antigênico. Em algumas modalidades, o indivíduo foi tratado anteriormente com quimioterapia ou radioterapia.
[0098] Em alguns aspectos, o indivíduo é refratário ou não responde à outra terapia ou agente terapêutico. Em algumas modalidades, o indivíduo tem doença persistente ou recidivante, por exemplo, após tratamento com outra terapia ou intervenção terapêutica, incluindo quimioterapia ou radiação.
[0099] Em algumas modalidades, o indivíduo é aquele que é elegível para um transplante, tal como é elegível para um transplante de células-tronco hematopoéticas (HSCT), por exemplo, HSCT alogênico. Em algumas de tais modalidades, o indivíduo não recebeu anteriormente um transplante, apesar de ser elegível, antes da administração das células manipuladas (por exemplo, células CAR-T) ou uma composição que contém as células ao indivíduo, conforme fornecido no presente documento.
[00100] Em algumas modalidades, o indivíduo é aquele que não é elegível para um transplante, tal como não é elegível para um transplante de células-tronco hematopoiéticas (HSCT), por exemplo, HSCT alogênico. Em algumas modalidades, tal indivíduo recebe células manipuladas (por exemplo, células CAR-T) ou uma composição que contém as células de acordo com as modalidades fornecidas no presente documento.
[00101] Em algumas modalidades, os métodos incluem administrar células a um indivíduo selecionado ou identificado como tendo CLL de alto risco. Em algumas modalidades, o indivíduo exibe uma ou mais anormalidades citogenéticas, tais como associadas à CLL de alto risco. Em alguns aspectos, a população a ser tratada inclui indivíduos com um estado de desempenho no Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) que está em qualquer faixa entre 0-1.
[00102] Em alguns aspectos de qualquer uma das modalidades, os indivíduos a serem tratados não obtiveram sucesso em duas ou mais terapias anteriores. Em alguns aspectos de qualquer uma das modalidades, o indivíduo a ser tratado não obteve sucesso em três ou mais terapias anteriores. Em algumas modalidades, as terapias anteriores incluem qualquer uma dentre uma terapia com um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTK), tal como ibrutinibe; venetoclax; uma terapia combinada que compreende fludarabina e rituximabe;
radioterapia; e transplante de células-tronco hematopoéticas (HSCT). Em algumas modalidades, o indivíduo ou paciente recebeu anteriormente, mas teve recidiva seguido de remissão, é refratário, não obteve sucesso e/ou é intolerante ao tratamento com ibrutinibe e/ou venetoclax. Em algumas modalidades, o indivíduo ou paciente recebeu anteriormente, mas teve uma recidiva seguido de remissão, é refratário, não obteve sucesso e/ou é intolerante ao tratamento com ibrutinibe e venetoclax.
[00103] Em algumas modalidades, são fornecidos métodos de tratamento de indivíduos selecionados ou identificados como tendo recidiva seguido de remissão ou que são refratários ao tratamento anterior com ibrutinibe e venetoclax para o tratamento de CLL ou SLL. Em alguns aspectos, os indivíduos selecionados ou identificados recebem uma terapia de células T CAR, por exemplo, terapia de células T anti-CD19 CAR-T, de acordo com os métodos fornecidos.
[00104] Em algumas modalidades, o indivíduo nunca atingiu uma resposta completa (CR), nunca recebeu um transplante autólogo de células-tronco (ASCT), é refratário a 1 ou mais terapias de segunda linha, tem doença refratária primária e/ou tem uma pontuação de desempenho no ECOG que está entre 0 e 1.
[00105] Em alguns aspectos, os indivíduos a serem tratados de acordo com as modalidades fornecidas incluem indivíduos com um diagnóstico de CLL ou SLL. Em algumas modalidades, os indivíduos com CLL incluem aqueles com diagnóstico de CLL com indicação de tratamento com base nas diretrizes do Workshop on Chronic Lymphocytic Leukemia (iwCLL) e doença clínica mensurável (envolvimento da medula óssea em > 30 % de linfócitos, linfocitose de sangue periférico > 5x109/L e/ou linfonodos mensuráveis e/ou comprometimento hepático ou esplenomegalia. Em algumas modalidades, os indivíduos com SLL incluem aqueles com diagnóstico de SLL com base em linfadenopatia e/ou esplenomegalia e < 5 × 109 linfócitos B clonais CD19+ CD5+/L [< 5000/μL] no sangue periférico no momento de diagnóstico com doença mensurável definida como pelo menos uma lesão > 1,5 cm no maior diâmetro transversal e que é SLL comprovado por biópsia.
[00106] Em alguns aspectos, os indivíduos são inelegíveis para o tratamento com inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTKi, por exemplo, ibrutinibe) em virtude de uma necessidade de anticoagulante em dose completa ou histórico de arritmia ou não obtiveram sucesso no tratamento após terem recebido previamente BTKi, conforme determinado por doença estável (Stable Disease, SD) ou doença progressiva (PD) como melhor resposta, PD após resposta anterior ou descontinuação em virtude de intolerância (por exemplo, toxicidade incontrolável). Em alguns aspectos, os indivíduos são tratados de acordo com as modalidades fornecidas se eles tivessem doença de alto risco (conforme determinado por anormalidades citogenéticas complexas (por exemplo, cariótipo complexo), del (17p), mutação TP53, IGVH não mutante) e não obtiveram sucesso em mais de ou igual a (por exemplo, pelo menos) 2 terapias anteriores; ou se eles tinham doença de risco padrão e não obtiveram sucesso em mais de ou igual a (por exemplo, pelo menos) 3 terapias anteriores. Em alguns aspectos, os indivíduos a serem tratados de acordo com as modalidades fornecidas excluem os indivíduos com doença do SNC não tratada ativa, ECOG > 1 ou transformada de Richter.
[00107] Em alguns aspectos, são fornecidas composições, métodos e usos para a administração de uma composição definida da terapia celular, em doses particulares, as quais estão associadas a uma alta taxa de resposta e/ou alta durabilidade de resposta e baixos níveis e/ou incidência de toxicidade. Em algumas modalidades, a composição ou dose administrada é uma dose plana e/ou fixa, tal como uma dose plana precisa, de células e/ou de uma ou mais células com um fenótipo particular, tal como um determinado número de tais células ou um número que está dentro de uma determinada faixa e/ou grau de variabilidade ou variância comparado com um número alvo.
Em algumas modalidades, a composição ou dose administrada contém uma proporção definida de células CD4+ e CD8+ (por exemplo, proporção de 1:1 de células T CD4+:CD8+ CAR+) e/ou contém uma proporção que está dentro de um determinado grau de variabilidade de tal proporção, tal como não mais de + 10%, tal como não mais de + 8%, tal como um grau de variabilidade ou variância de não mais de + 10%, tal como não mais de + 8%. Em algumas modalidades, as células CD4+ e CD8+ são formuladas e administradas individualmente.
Em algumas modalidades, as células administradas exibem atividade e/ou função consistente, por exemplo, produção de citocinas, apoptose e/ou expansão.
Em algumas modalidades, as composições fornecidas exibem atividade altamente consistente e definida e baixa variabilidade entre as células, por exemplo, em termos de número de células, função celular e/ou atividade celular, na composição ou entre preparações.
Em algumas modalidades, a consistência na atividade e/ou função, por exemplo, baixa variabilidade entre as preparações das composições, permite eficácia e/ou segurança aprimoradas.
Em algumas modalidades, a administração das composições definidas resultou em baixa variabilidade do produto e baixa toxicidade, por exemplo, CRS ou neurotoxicidade, comparado com a administração de composições celulares com alta heterogeneidade.
Em algumas modalidades, a composição consistente definida também exibe expansão celular consistente.
Tal consistência pode facilitar a identificação da dose, janela terapêutica, avaliação da resposta à dose e identificação de fatores do indivíduo que podem se correlacionar com resultados de segurança ou toxicidade.
[00108] Em algumas modalidades, em uma determinada coorte de indivíduos que recebem uma única infusão de um determinado nível de dose, os indivíduos em algumas coortes podem atingir uma taxa de resposta global (ORR, em alguns casos também conhecida como taxa de resposta objetiva) de mais de 80%, uma taxa de resposta completa (CR) de mais de 50% em 3 meses. Em algumas modalidades, os indivíduos que recebem uma dose definida apresentam resultados de segurança aprimorados. Em alguns aspectos, a taxa de CRS grave ou NT grave é baixa. Em algumas modalidades, fatores particulares do indivíduo, por exemplo, determinados biomarcadores (por exemplo, TNF-alfa ou IL-16), podem ser usados para prever o risco de toxicidade. Em algumas modalidades, as modalidades fornecidas podem ser usadas para atingir alta taxa de resposta com baixo risco de toxicidade.
[00109] Em algumas modalidades, não mais de 25%, não mais de 20%, não mais de 15%, não mais de 10% ou não mais de 5% dos indivíduos tratados usando as composições fornecidas, artigos de manufatura, kits, métodos e usos recebem um agente (por exemplo, tocilizumabe e/ou dexametasona) para melhorar, tratar ou prevenir uma toxicidade, antes ou após administração da terapia celular. Em algumas modalidades, o indivíduo não recebe qualquer tratamento profilático antes de receber as células manipuladas (por exemplo, células CAR-T).
[00110] Em algumas modalidades, as modalidades fornecidas conferem uma vantagem, por exemplo, permite a administração da terapia celular em um regime ambulatorial. Em algumas modalidades, a administração da terapia celular, por exemplo, dose de células T de acordo com as modalidades fornecidas, pode ser realizada em um regime ambulatorial ou não requer admissão do indivíduo ao hospital, tal como a admissão no hospital que requer pernoite. Em algumas modalidades, tal administração ambulatorial pode permitir acesso aumentado e custos reduzidos, ao mesmo tempo em que mantém uma taxa de resposta alta e durável com baixa toxicidade. Em alguns aspectos, o tratamento ambulatorial pode ser vantajoso para pacientes que já estão imunocomprometidos por tratamentos anteriores, por exemplo, pós-linfodepleção, e correm um risco maior de exposições em uma internação hospitalar ou em ambiente de internação. Em alguns aspectos, os tratamentos ambulatoriais também aumentam as opções de tratamento para indivíduos que podem não ter acesso à internação, configurações hospitalares ou centros de transplante, deste modo, expandindo o acesso ao tratamento.
[00111] Em algumas modalidades, os métodos e usos fornecem ou alcançam uma taxa de resposta mais alta e/ou respostas ou eficácia mais duráveis e/ou um risco reduzido de toxicidade ou outros efeitos colaterais que possam estar associados à terapia celular, tal como neurotoxicidade (NT) ou síndrome de liberação de citocinas (CRS). Em alguns aspectos, as observações fornecidas indicaram uma baixa taxa de NT grave (sNT) ou CRS grave (sCRS) e uma alta taxa de pacientes sem quaisquer toxicidades, por exemplo, NT ou CRS.
[00112] Em algumas modalidades, pelo menos pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70% ou pelo menos 75% ou mais dos indivíduos tratados de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos alcançam uma resposta completa (CR). Em algumas modalidades, pelo menos 75%, pelo menos 80 % ou pelo menos 90 % dos indivíduos tratados de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos alcançam uma resposta objetiva (OR). Em algumas modalidades, pelo menos 35%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60 % ou mais dos indivíduos tratados de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos alcançam uma CR ou OR em um mês, em dois meses ou em três meses. Em algumas modalidades, pelo menos 45%, pelo menos 5 %, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70% ou pelo menos 75% ou mais dos indivíduos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior com um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTKi) e venetoclax tratados de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos alcançam uma resposta completa (CR). Em algumas modalidades, pelo menos 75 %, pelo menos 80 % ou pelo menos 90 % dos indivíduos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior com um BTKi e venetoclax tratados de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos alcançam uma resposta objetiva (OR). Em algumas modalidades, pelo menos 35%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60% ou mais dos indivíduos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior com um BTKi e venetoclax tratados de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos alcançam uma CR ou OR em um mês, em dois meses ou em três meses. Em algumas modalidades, nos indivíduos tratados de acordo com o método, mais de 50 %, mais de 60 % ou mais de 70 % tinham doença residual mínima indetectável (MRD) por pelo menos um mês, pelo menos dois meses, pelo menos três meses ou pelo menos 6 meses após administração da dose de células. Em algumas modalidades, nos indivíduos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior com um BTKi e venetoclax tratados de acordo com os métodos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos, mais de 50%, mais de 60% ou mais de 70% tinham doença residual mínima indetectável (MRD) por pelo menos um mês, pelo menos dois meses, pelo menos três meses ou pelo menos 6 meses após administração da dose de células.
[00113] Em algumas modalidades, três meses após o início da administração da terapia celular, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, em pelo menos 85% ou mais dos indivíduos tratados de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos permanecem em resposta, tal como permanecem em CR ou OR e/ou têm MRD indetectável. Em algumas modalidades, tal resposta, tal como CR ou OR, é durável por pelo menos três meses. Em algumas modalidades, três meses após o início da administração da terapia celular, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85% ou mais dos indivíduos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior com um BTKi e venetoclax tratados de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos permanecem em resposta, tal como permanecem em CR ou OR e/ou têm MRD indetectável. Em algumas modalidades, tal resposta, tal como CR ou OR, é durável por pelo menos três meses.
[00114] Em algumas modalidades, a resposta resultante observada em tais indivíduos através do tratamento de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos está associada ou resulta em um baixo risco de qualquer toxicidade ou baixo risco de toxicidade grave na maioria dos indivíduos tratados. Em algumas modalidades, mais ou mais de cerca de 30 %, 35%, 40 %, 50 %, 55 %, 60 % ou mais dos indivíduos tratados de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos não exibem qualquer grau de CRS ou qualquer grau de neurotoxicidade (NT). Em algumas modalidades, mais ou mais de cerca de 50 %, 60 %, 70 %, 80 % ou mais dos indivíduos tratados de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos não exibem CRS grave ou CRS de grau 3 ou superior. Em algumas modalidades, mais ou mais de cerca de 50 %,
60 %, 70 %, 80 % ou mais dos indivíduos tratados de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos não exibem neurotoxicidade grave ou neurotoxicidade de grau 3 ou superior, tal como neurotoxicidade de grau 4 ou 5.
[00115] Em algumas modalidades, a resposta resultante observada em tais indivíduos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior com um BTKi e venetoclax através do tratamento de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos está associada a ou resulta em baixo risco de qualquer toxicidade ou baixo risco de toxicidade grave na maioria dos indivíduos tratados. Em algumas modalidades, mais ou mais de cerca de 30%, 35%, 40 %, 50 %, 55 %, 60 % ou mais dos indivíduos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior com um BTKi e venetoclax tratados de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos não exibem qualquer grau de CRS ou qualquer grau de neurotoxicidade (NT). Em algumas modalidades, mais ou mais de cerca de 50 %, 60 %, 70 %, 80 % ou mais dos indivíduos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior com um BTKi e venetoclax tratados de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos não exibem CRS grave ou CRS de grau 3 ou superior. Em algumas modalidades, mais ou mais de cerca de 50 %, 60 %, 70 %, 80 % ou mais dos indivíduos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior com um BTKi e venetoclax tratados de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos não exibem neurotoxicidade grave ou neurotoxicidade de grau 3 ou superior, tal como neurotoxicidade de grau 4 ou 5.
[00116] Em algumas modalidades, pelo menos igual ou cerca de 45%, 50 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % dos indivíduos tratados de acordo com o método e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos não exibem CRS ou neurotoxicidade de início precoce e/ou não exibem início de CRS antes de 1 dia, 2 dias, 3 dias ou 4 dias após o início da administração. Em algumas modalidades, pelo menos igual ou cerca de 45 %, 50 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % dos indivíduos tratados de acordo com os métodos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos não exibem início de neurotoxicidade antes de 3 dias, 4 dias, 5 dias, seis dias ou 7 dias após o início da administração. Em alguns aspectos, o início mediano de neurotoxicidade dentre os indivíduos tratados de acordo com os métodos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos é em ou após o pico mediano ou tempo mediano para resolução de CRS em indivíduos tratados de acordo com o método. Em alguns casos, o início mediano de neurotoxicidade dentre os indivíduos tratados de acordo com o método é maior do que igual ou cerca de 8, 9, 10 ou 11 dias.
[00117] Em algumas modalidades, pelo menos igual ou cerca de 45 %, 50 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % dos indivíduos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior com um BTKi e venetoclax, tratados de acordo com o método e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior com um BTKi e venetoclax não exibem CRS ou neurotoxicidade de início precoce e/ou não exibem início de CRS antes de 1 dia, 2 dias, 3 dias ou 4 dias após o início da administração. Em algumas modalidades, pelo menos igual ou cerca de 45 %, 50 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % dos indivíduos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior com um BTKi e venetoclax tratados de acordo com os métodos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos não exibem início de neurotoxicidade antes de 3 dias, 4 dias, 5 dias, seis dias ou 7 dias após o início da administração. Em alguns aspectos, o início mediano de neurotoxicidade dentre os indivíduos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior com um BTKi e venetoclax tratados de acordo com os métodos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos está em ou após o pico médio ou tempo médio para resolução de CRS em indivíduos tratados de acordo com o método. Em alguns casos, o início médio de neurotoxicidade dentre os indivíduos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior com um BTKi e venetoclax tratados de acordo com o método é maior do que ou cerca de 8, 9, 10 ou 11 dias.
[00118] Em algumas modalidades, tais resultados são observados após administração de ou cerca de 2,5 x 107 a cerca de 1,5 x 108, tal como de cerca de 5 x 107 a ou cerca de 1 x 108 células T que expressam o receptor recombinante no total (por exemplo, células T CAR+), tal como uma dose de células T que inclui células T CD4+ e CD8+ administradas em uma proporção definida conforme descrito no presente documento, por exemplo, igual ou cerca de uma proporção de 1:1 e/ou em um número preciso ou plano ou fixo de células T CAR+ ou número preciso ou plano ou fixo de um tipo particular de células T CAR+, tais como células T CD4+ CAR+ e/ou células T CD8+ CAR+ e/ou um número entre qualquer uma destas células que está dentro de um determinado grau de variação, tal como não mais de + ou - (mais ou menos, em alguns casos indicado como ±), 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15 % comparado com tal número preciso ou plano ou fixo. Em algumas modalidades, tal número plano ou fixo de células é igual ou cerca de 2,5 x 107 células T CAR+ no total ou células T CD8+ e/ou CD4+ CAR+, 5 × 107 células T CAR+ no total ou células T CD8+ e/ou CD4+ CAR+ ou 1 x 108 células T CAR+ no total ou células T CD8+ e/ou CD4+ CAR+. Em algumas modalidades, o número de células na dose inclui ou consiste em ou consiste essencialmente em 2,5 x 107 células T CAR+ (opcionalmente 1,25 x 107 células T CD4+ CAR+ e 1,25 x 107 células T
CD8+ CAR+); em algumas modalidades, inclui ou consiste em ou consiste essencialmente em 5 × 107 células T CAR+ (opcionalmente 2,5 x 107 células T CD4+ CAR+ e 2,5 x 107 células T CD8+ CAR+); em algumas modalidades, inclui 1 x 108 células T CAR+ (opcionalmente 0,5 x 108 células T CD4+ CAR+ e 0,5 x 108 células T CD8+ CAR+). Em alguns aspectos, o número de células administradas está dentro de um determinado grau de variação de tais números nas modalidades mencionadas, tal como dentro de mais ou menos (±) 5, 6, 7, 8, 9 ou 10%, tal como dentro de mais ou menos 8%, comparado com este(s) número(s) de células. Em alguns aspectos, a dose está dentro de uma faixa na qual uma correlação é observada (opcionalmente uma relação linear) entre o número de tais células (por exemplo, de células T CAR+ no total ou células T CD8+ e/ou CD4+ CAR+) e um ou mais resultados indicativos de resposta terapêutica ou duração da mesma (por exemplo, probabilidade de atingir uma remissão, uma remissão completa e/ou uma duração particular de remissão) e/ou duração de qualquer um dos anteriores. Em alguns aspectos, descobriu-se que a dose mais elevada de células administradas pode resultar em maior resposta sem impactar ou afetar substancialmente a incidência ou risco de toxicidade (por exemplo, CRS ou neurotoxicidade) ou grau de incidência ou risco de toxicidade no indivíduo, por exemplo, CRS grave ou neurotoxicidade grave.
[00119] Em alguns aspectos, o indivíduo a ser tratado de acordo com as modalidades fornecidas tem função de órgãos adequada. Por exemplo, em alguns aspectos, os indivíduos exibem um ou mais dos seguintes: creatinina sérica ≤ 1,5 × limite máximo do normal (Upper Limit of Normal, ULN) ajustado para a idade ou clearance de creatinina calculada (Cockcroft e Gault) > 30 mL/min; alanina aminotransferase (ALT) ≤ 5 × ULN e bilirrubina total < 2,0 mg/dL (ou < 3,0 mg/dL para indivíduos com síndrome de Gilbert ou infiltração leucêmica hepática); função pulmonar adequada, definida como ≤ Common Terminology Criteria for Adverse Events (CTCAE) Grau 1 de dispneia e oxigênio saturado (SaO2) ≥ 92% em ar ambiente; e/ou função cardíaca adequada, definida como fração de ejeção do ventrículo esquerdo (Left Ventricular Ejection Fraction, LVEF) ≥ 40% conforme avaliado por ecocardiograma (ECHO) ou varredura de aquisição controlada de captação múltipla (Multiple Uptake Gated Acquisition, MUGA) realizada dentro de 30 dias antes da avaliação dos indivíduos para administração da composição de células.
[00120] Em alguns aspectos, os métodos fornecidos podem atingir uma taxa alta ou uma taxa particular de resposta (tal como uma taxa de resposta dentre uma população avaliada após um determinado período pós-administração, tal como um mês ou três meses), por exemplo, ORR (tal como uma ORR de 1 mês ou 3 meses) de igual ou cerca de 75 % ou mais, 80 % ou mais, 85 % ou mais, e uma taxa de CR (tal como uma taxa de CR de 1 mês ou 3 meses) de igual ou cerca de 30 % ou mais, 35 % ou mais, 40 % ou mais, 45 % ou mais, 50 % ou mais, 55 % ou mais, 60 % ou mais, 65 % ou mais, 70 % ou mais, 71 % ou mais, 72 % ou mais, 73 % ou mais, 74 % ou mais ou aproximadamente 75 % ou mais. Em algumas modalidades, tais taxas de resposta e durabilidade são obtidas após apenas uma única administração ou dose de tal terapia. O tratamento de tais indivíduos por meio dos métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos, em algumas modalidades, também resulta nos indivíduos alcançando uma alta taxa de resposta, mas não exibindo maior incidência de toxicidade em desenvolvimento, tal como neurotoxicidade ou CRS, mesmo com uma dosagem de células mais elevada.
[00121] Assim, em algumas modalidades, os métodos, artigos de manufatura e/ou composições fornecidos podem conferir vantagens em relação a outros métodos ou soluções ou abordagens disponíveis para o tratamento, tal como para a terapia celular adotiva. Em particular, dentre as modalidades fornecidas, estão aquelas que conferem uma vantagem para indivíduos com CLL de alto risco ao alcançar uma resposta durável em uma taxa elevada, com incidência reduzida de toxicidades ou efeitos colaterais. A. Método de Tratamento
[00122] São fornecidos no presente documento métodos de tratamento que envolvem a administração de células manipuladas ou composições que contêm células manipuladas, tais como células T manipuladas. Também são fornecidos métodos e usos de células manipuladas (por exemplo, células T) e/ou composições das mesmas, incluindo métodos para o tratamento de indivíduos que têm uma doença ou condição, tal como uma leucemia ou um linfoma, por exemplo, uma leucemia linfocítica crônica (CLL) ou um linfoma linfocítico pequeno (SLL), que envolvem administrar as células manipuladas e/ou composições das mesmas. Em algumas modalidades, os métodos e usos fornecidos podem alcançar uma resposta aumentada e/ou respostas ou eficácia mais duráveis e/ou um risco reduzido de toxicidade ou outros efeitos colaterais, por exemplo, em grupos específicos de indivíduos tratados, comparado com determinados métodos alternativos. Em alguns aspectos, também são fornecidos métodos de administração de células manipuladas ou composições que contêm células manipuladas, tais como células T manipuladas, a um indivíduo, tal como um indivíduo que tem uma doença ou transtorno. Em alguns aspectos, também são fornecidos usos de células manipuladas ou composições que contêm células manipuladas, tais como células T manipuladas, para o tratamento de uma doença ou transtorno. Em alguns aspectos, também são fornecidos os usos de células manipuladas ou composições que contêm células manipuladas, tais como células T manipuladas, para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou transtorno. Em alguns aspectos, também são fornecidos métodos de administração de células manipuladas ou composições que contêm células manipuladas, tais como células T manipuladas, para uso no tratamento de uma doença ou transtorno ou para administração a um indivíduo que tem uma doença ou transtorno. Em alguns aspectos, os usos das células manipuladas ou composições que contêm células manipuladas, tais como células T manipuladas, são de acordo com qualquer um dos métodos descritos no presente documento.
[00123] As células manipuladas que expressam um receptor recombinante, tal como um receptor antigênico quimérico (CAR), ou composições que compreendem as mesmas, descritas no presente documento são úteis em uma variedade de indicações terapêuticas, diagnósticas e profiláticas. Por exemplo, as células manipuladas ou composições que compreendem as células manipuladas são úteis no tratamento de uma variedade de doenças e transtornos em um indivíduo. Tais métodos e usos incluem métodos e usos terapêuticos, por exemplo, que envolvem administrar as células manipuladas ou composições que contêm as mesmas a um indivíduo que tem uma doença, condição ou transtorno, tal como um tumor ou câncer. Em algumas modalidades, as células manipuladas ou composições que compreendem as mesmas são administradas em uma quantidade eficaz para efetuar o tratamento da doença ou transtorno. Os usos incluem o uso de células ou composições modificadas em tais métodos e tratamentos e na preparação de um medicamento para realizar tais métodos terapêuticos. Em algumas modalidades, as células manipuladas ou composições que compreendem as células manipuladas são para uso no tratamento de uma variedade de doenças e transtornos em um indivíduo, por exemplo, de acordo com os métodos terapêuticos. Em algumas modalidades, os métodos são realizados ao administrar as células manipuladas ou composições que compreendem as mesmas ao indivíduo que tem ou é suspeito de ter a doença ou condição. Em algumas modalidades, os métodos tratam, assim, a doença ou condição ou transtorno no indivíduo.
[00124] Métodos gerais para administração de células para terapia celular adotiva são conhecidos e podem ser usados em relação aos métodos e composições fornecidos. Por exemplo, métodos de terapia com células T adotivas são descritos, por exemplo, na Publicação de Pedido de Patente Norte-Americana N° 2003/0170238 para Gruenberg et al; Patente Norte-Americana N° 4.690.915 para Rosenberg; Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8 (10): 577-85). Consulte, por exemplo, Themeli et al. (2013) Nat Biotechnol. 31 (10): 928-933; Tsukahara et al. (2013) Biochem Biophys Res Commun 438 (1): 84-9; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8 (4): e61338.
[00125] A doença ou condição que é tratada pode ser qualquer uma na qual a expressão de um antígeno está associada e/ou envolvida na etiologia de uma condição ou transtorno patológico, por exemplo, causa, agrava ou de outra forma está envolvida em tal doença, condição ou transtorno. Doenças e condições exemplificativas podem incluir doenças ou condições associadas à malignidade ou transformação de células (por exemplo, câncer), doença autoimune ou inflamatória ou uma doença infecciosa, por exemplo, causada por uma bactéria, vírus ou outro patógeno. Antígenos exemplificativos que incluem antígenos associados a várias doenças e condições que podem ser tratadas são descritos acima. Em modalidades particulares, o receptor antigênico quimérico ou TCR transgênico se liga especificamente a um antígeno associado à doença ou condição.
[00126] Dentre as doenças, condições e transtornos estão tumores,
incluindo tumores sólidos, malignidades hematológicas e melanomas, e incluindo tumores localizados e metastáticos, doenças infecciosas, tal como infecção por um vírus ou outro patógeno, por exemplo, HIV, HCV, HBV, CMV, HPV, e doenças parasitárias e doenças autoimunes e inflamatórias. Em algumas modalidades, a doença, transtorno ou condição é um tumor, câncer, malignidade, neoplasia ou outra doença ou transtorno proliferativo. Tais doenças para tratamento de acordo com os métodos fornecidos no presente documento incluem, porém sem limitações, leucemia, linfoma, por exemplo, leucemia linfocítica crônica (CLL) e linfoma linfocítico pequeno (SLL).
[00127] Em algumas modalidades, o indicador de estado de desempenho no Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) pode ser usado para avaliar ou selecionar indivíduos para tratamento, por exemplo, indivíduos que tiveram baixo desempenho em terapias anteriores (consulte, por exemplo, Oken et al. (1982) Am J Clin Oncol. 5: 649-655). A Escala ECOG de Estado de Desempenho descreve o nível de funcionalidade de um paciente em termos de sua capacidade de cuidar de si mesmo, atividade diária e capacidade física (por exemplo, caminhar, trabalhar, etc.). Em algumas modalidades, um estado de desempenho ECOG de 0 indica que um indivíduo pode realizar uma atividade normal. Em alguns aspectos, os indivíduos com um estado de desempenho ECOG de 1 exibem alguma restrição na atividade física, mas o indivíduo é totalmente deambulador. Em alguns aspectos, os pacientes com um estado de desempenho ECOG de 2 são mais de 50 % deambuladores. Em alguns casos, o indivíduo com um estado de desempenho ECOG de 2 também pode ser capaz de cuidar de si mesmo; consulte, por exemplo, Sørensen et al., (1993) Br J Cancer 67 (4) 773-775. Os critérios que refletem o estado de desempenho ECOG são descritos na Tabela 1 abaixo: Tabela 1. Critérios de Estado de Desempenho no ECOG
Grau Estado de Desempenho no ECOG Totalmente ativo, capaz de realizar todo o desempenho pré-doença sem 0 restrição Restrito atividade fisicamente extenuante, mas deambulador e capaz de 1 realizar trabalhos de natureza leve ou sedentária, por exemplo, trabalho em faróis, trabalho de escritório Deambulador e capaz de todo autocuidados, mas incapaz de realizar 2 qualquer atividade trabalhosa; até e cerca de mais de 50 % das horas de vigília Capaz de autocuidados apenas limitado; confinado à cama ou cadeira mais 3 de 50 % das horas de vigília Completamente incapaz; não pode cuidar de si mesmo; totalmente 4 confinado à cama ou cadeira 5 Morte
[00128] Os antígenos direcionados pelos receptores (por exemplo, CAR) incluem, em algumas modalidades, antígenos associados a uma malignidade de células B, tal como qualquer um de uma série de marcadores de células B. Em algumas modalidades, o antígeno é ou inclui CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Igcapa, Iglambda, CD79a, CD79b ou CD30. Em algumas modalidades, o antígeno é CD19.
[00129] Em algumas modalidades, a terapia celular, por exemplo, terapia com células T adotivas, é realizada por meio de transferência autóloga, em que as células são isoladas e/ou preparadas a partir do indivíduo que receberá a terapia celular ou de uma amostra derivada de tal indivíduo. Assim, em alguns aspectos, as células são derivadas de um indivíduo, por exemplo, paciente, que precisa de um tratamento e as células, após o isolamento e o processamento, são administradas ao mesmo indivíduo.
[00130] Em algumas modalidades, a terapia celular, por exemplo, terapia com células T adotivas, é realizada por meio de transferência alogênica, na qual as células são isoladas e/ou de outro modo preparadas a partir de um indivíduo que não um indivíduo que receberá ou que finalmente recebe a terapia celular, por exemplo, um primeiro indivíduo. Em tais modalidades, as células são administradas a um indivíduo diferente, por exemplo, um segundo indivíduo da mesma espécie. Em algumas modalidades, os primeiro e segundo indivíduos são geneticamente idênticos. Em algumas modalidades, os primeiro e segundo indivíduos são geneticamente similares. Em algumas modalidades, o segundo indivíduo expressa a mesma classe HLA ou supertipo que o primeiro indivíduo.
[00131] As células podem ser administradas através de qualquer meio adequado, por exemplo, por meio de infusão em bolus, através de injeção, por exemplo, injeções intravenosas ou subcutâneas, injeção intraocular, injeção periocular, injeção sub-retinal, injeção intravítrea, injeção trans-septal, injeção subescleral, injeção intracoroidal, injeção intracameral, injeção subconjuntival, injeção subconjuntival, injeção subtenoniana, injeção retrobulbar, injeção peribulbar ou administração justascleral posterior. Em algumas modalidades, a administração é através da via parentérica, intrapulmonar e intranasal e, se desejado para tratamento local, administração intralesional. As infusões parentéricas incluem administração intramuscular, intravenosa, intra- arterial, intraperitoneal ou subcutânea. Em algumas modalidades, uma determinada dose é administrada através de uma única administração de bolus das células. Em algumas modalidades, ela é administrada através de múltiplas administrações de bolus das células, por exemplo, ao longo de um período de não mais de 3 dias, ou através de administração por infusão contínua das células. Em algumas modalidades, a administração da dose de células ou quaisquer terapias adicionais, por exemplo, terapia de linfodepleção, terapia de intervenção e/ou terapia combinada, é realizada por meio de administração ambulatorial.
[00132] Para a prevenção ou tratamento da doença, a dosagem apropriada pode depender do tipo de doença a ser tratada, o tipo de células ou receptores recombinantes, a gravidade e o curso da doença, se as células são administradas para fins preventivos ou terapêuticos, terapia anterior, histórico clínico do indivíduo e resposta às células, e a critério do médico que faz o atendimento. As composições e células são, em algumas modalidades, adequadamente administradas ao indivíduo em um momento ou ao longo de uma série de tratamentos.
[00133] Em algumas modalidades, os métodos compreendem administrar um agente quimioterapêutico, por exemplo, um agente quimioterapêutico de condicionamento.
[00134] Indivíduos sob precondicionamento com terapias de imunodepleção (por exemplo, linfodepleção) podem, em alguns aspectos, melhorar os efeitos da terapia celular adotiva (Adoptive Cell Therapy, ACT).
[00135] Assim, em algumas modalidades, os métodos incluem administrar um agente de precondicionamento, tal como um agente de linfodepleção ou quimioterapêutico, tal como ciclofosfamida, fludarabina ou combinações dos mesmos, a um indivíduo antes do início da terapia celular. Por exemplo, o indivíduo pode receber um agente de precondicionamento pelo menos 2 dias antes, tal como pelo menos 3, 4, 5, 6 ou 7 dias antes do início da terapia celular. Em algumas modalidades, o indivíduo recebe um agente de precondicionamento não mais de 7 dias antes, tal como não mais de 6, 5, 4, 3 ou 2 dias antes do início da terapia celular.
[00136] Em algumas modalidades, o indivíduo é precondicionado com ciclofosfamida em uma dose entre ou entre cerca de 20 mg/kg e 100 mg/kg, tal como entre ou entre cerca de 40 mg/kg e 80 mg/kg. Em alguns aspectos, o indivíduo é precondicionado com ou com cerca de 60 mg/kg de ciclofosfamida. Em algumas modalidades, a ciclofosfamida pode ser administrada em uma dose única ou pode ser administrada em uma pluralidade de doses, tal como fornecida diariamente, em dias alternados ou a cada três dias. Em algumas modalidades, a ciclofosfamida é administrada uma vez ao dia durante um ou dois dias. Em algumas modalidades, onde o agente de linfodepleção compreende ciclofosfamida, o indivíduo recebe ciclofosfamida em uma dose entre ou entre cerca de 100 mg/m2 e 500 mg/m2, tal como entre ou entre cerca de 200 mg/m2 e 400 mg/m2 ou 250 mg/m2 e 350 mg/m2, inclusive. Em alguns casos, o indivíduo recebe cerca de 300 mg/m2 de ciclofosfamida. Em algumas modalidades, a ciclofosfamida pode ser administrada em uma única dose ou pode ser administrada em uma pluralidade de doses, tal como fornecida diariamente, em dias alternados ou a cada três dias. Em algumas modalidades, a ciclofosfamida é administrada diariamente, por exemplo, durante 1-5 dias, por exemplo, durante 3 a 5 dias. Em alguns casos, o indivíduo recebe cerca de 300 mg/m2 de ciclofosfamida, diariamente, durante 3 dias, antes do início da terapia celular.
[00137] Em algumas modalidades, onde o agente de linfodepleção compreende fludarabina, o indivíduo recebe fludarabina em uma dose entre ou entre cerca de 1 mg/m2 e 100 mg/m2, tal como entre ou entre cerca de 10 mg/m2 e 75 mg/m2, 15 mg/m2 e 50 mg/m2, 20 mg/m2 e 40 mg/m2 ou 24 mg/m2 e 35 mg/m2, inclusive. Em alguns casos, o indivíduo recebe cerca de 30 mg/m2 de fludarabina. Em algumas modalidades, a fludarabina pode ser administrada em uma dose única ou pode ser administrada em uma pluralidade de doses, tal como fornecida diariamente, em dias alternados ou a cada três dias. Em algumas modalidades, a fludarabina é administrada diariamente, tal como durante 1-5 dias, por exemplo, durante 3 a 5 dias. Em alguns casos, o indivíduo recebe cerca de 30 mg/m2 de fludarabina, diariamente, durante 3 dias, antes do início da terapia celular.
[00138] Em algumas modalidades, o agente de linfodepleção compreende uma combinação de agentes, tal como uma combinação de ciclofosfamida e fludarabina. Assim, a combinação de agentes pode incluir ciclofosfamida em qualquer dose ou esquema de administração, tais como aqueles descritos acima, e fludarabina em qualquer dose ou esquema de administração, tais como aqueles descritos acima. Por exemplo, em alguns aspectos, o indivíduo recebe 60 mg/kg (~ 2 g/m2) de ciclofosfamida e 3 a 5 doses de 25 mg/m2 de fludarabina antes da primeira dose ou da dose subsequente.
[00139] Após administração das células, a atividade biológica das populações de células manipuladas é, em algumas modalidades, medida, por exemplo, através de qualquer um de uma série de métodos conhecidos. Os parâmetros para avaliar incluem a ligação específica de uma célula T manipulada ou natural ou outra célula imune ao antígeno, in vivo, por exemplo, através de imagiologia, ou ex vivo, por exemplo, através de ELISA ou citometria de fluxo. Em determinadas modalidades, a capacidade das células manipuladas de destruir células-alvo pode ser medida usando quaisquer métodos conhecidos adequados, tais como ensaios de citotoxicidade descritos, por exemplo, em Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32 (7): 689-702 (2009) e Herman et al., J. Immunological Methods, 285 (1): 25-40 (2004). Em determinadas modalidades, a atividade biológica das células é medida por meio do ensaio de expressão e/ou secreção de uma ou mais citocinas, tais como CD107a, IFNγ, IL-2 e TNF.
[00140] Em determinadas modalidades, as células manipuladas são ainda modificadas de várias maneiras, de modo que sua eficácia terapêutica ou profilática seja aumentada. Por exemplo, o CAR ou TCR concebido expresso pela população pode ser conjugado direta ou indiretamente através de um ligante a uma porção de direcionamento. A prática de conjugação de compostos, por exemplo, o CAR ou TCR, para ter como alvo determinadas porções é conhecida. Consulte, por exemplo, Wadwa et al., J. Drug Targeting 3: 111 (1995) e Patente Norte- Americana N° 5.087.616. Em algumas modalidades, as células são administradas como parte de um tratamento combinado, tal como simultânea ou sequencialmente com, em qualquer ordem, outra intervenção terapêutica, tal como um anticorpo ou célula manipulada ou receptor ou agente, tal como um agente citotóxico ou terapêutico. As células, em algumas modalidades, são coadministradas com um ou mais agentes terapêuticos adicionais ou em relação à outra intervenção terapêutica, simultânea ou sequencialmente em qualquer ordem. Em alguns contextos, as células são coadministradas com outra terapia suficientemente próxima no tempo, de modo que as populações de células aumentem o efeito de um ou mais agentes terapêuticos adicionais ou vice-versa. Em algumas modalidades, as células são administradas antes de um ou mais agentes terapêuticos adicionais. Em algumas modalidades, as células são administradas após um ou mais agentes terapêuticos adicionais. Em algumas modalidades, o um ou mais agentes adicionais incluem uma citocina, tal como IL-2, por exemplo, para aumentar a persistência. B. Dosagem
[00141] Em algumas modalidades, uma dose de células é administrada a indivíduos de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos. Em algumas modalidades, o tamanho ou o momento das doses é determinado em função da doença ou condição particular no indivíduo. Em alguns casos, o tamanho ou o momento das doses para uma doença particular, tendo em vista a descrição fornecida, pode ser determinado empiricamente.
[00142] Em determinadas modalidades, as células ou populações individuais de subtipos de células são administradas ao indivíduo em uma faixa de cerca de um milhão a cerca de 100 bilhões de células e/ou tal quantidade de células por quilograma de peso corporal tal como, por exemplo, 1 milhão a cerca de 50 bilhões de células (por exemplo, cerca de 5 milhões de células, cerca de 25 milhões de células, cerca de 500 milhões de células, cerca de 1 bilhão de células, cerca de 5 bilhões de células, cerca de 20 bilhões de células, cerca de 30 bilhões de células, cerca de 40 bilhões de células ou uma faixa definida por quaisquer dois dos valores anteriores), tal como cerca de 10 milhões a cerca de 100 bilhões de células (por exemplo, cerca de 20 milhões de células, cerca de 30 milhões de células, cerca de 40 milhões de células, cerca de 60 milhões de células, cerca de 70 milhões de células, cerca de 80 milhões de células, cerca de 90 milhões de células, cerca de 10 bilhões de células, cerca de 25 bilhões de células, cerca de 50 bilhões de células, cerca de 75 bilhões de células, cerca de 90 bilhões de células ou uma faixa definida por quaisquer dois dos valores anteriores) e, em alguns casos, cerca de 100 milhões de células a cerca de 50 bilhões de células (por exemplo, cerca de 120 milhões de células, cerca de 250 milhões de células, cerca de 350 milhões de células, cerca de 450 milhões de células, cerca de 650 milhões de células, cerca de 800 milhões de células, cerca de 900 milhões de células, cerca de 3 bilhões células, cerca de 30 bilhões de células, cerca de 45 bilhões de células) ou qualquer valor entre estas faixas e/ou por quilograma de peso corporal. As dosagens podem variar dependendo dos atributos específicos da doença ou transtorno e/ou paciente e/ou outros tratamentos. Em algumas modalidades, tais valores referem-se a números de células que expressam receptores recombinantes; em outras modalidades, eles referem-se ao número de células T ou PBMCs ou células administradas no total. Em algumas modalidades, o número de células é o número de tais células que são células viáveis.
[00143] Em algumas modalidades, a dose de células é uma dose plana de células ou uma dose fixa de células, de modo que a dose de células não esteja vinculada ou baseada na área de superfície corporal ou peso de um indivíduo.
[00144] Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente manipuladas compreende a partir de igual ou cerca de 1 x 10 5 a igual ou cerca de 5 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 105 a igual ou cerca de 2,5 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 105 a igual ou cerca de 1 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 105 a igual ou cerca de 5 x 107 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 105 a igual ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 105 a igual ou cerca de 1 x 107 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 105 a igual ou cerca de 5 x 106 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 105 a igual ou cerca de 2,5 x 106 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 105 a igual ou cerca de 1 x 106 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 106 a igual ou cerca de 5 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 106 a igual ou cerca de 2,5 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 10 6 a igual ou cerca de 1 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 106 a igual ou cerca de 5 x 107 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 106 a igual ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 106 a igual ou cerca de 1 x 107 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 106 a igual ou cerca de 5 x 106 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 106 a igual ou cerca de 2,5 x 106 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 106 a igual ou cerca de 5 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 106 a igual ou cerca de 2,5 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 106 a igual ou cerca de 1 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 106 a igual ou cerca de 5 x 107 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 106 a igual ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 106 a igual ou cerca de 1 x 107 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 106 a igual ou cerca de 5 x 106 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 106 a igual ou cerca de 5 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 106 a igual ou cerca de 2,5 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 106 a igual ou cerca de 1 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 106 a igual ou cerca de 5 x 107 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 106 a igual ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 106 a igual ou cerca de 1 x 107 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 107 a igual ou cerca de 5 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 107 a igual ou cerca de 2,5 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 107 a igual ou cerca de 1 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 107 a igual ou cerca de 5 x 107 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 107 a igual ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 107 a igual ou cerca de 5 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 107 a igual ou cerca de 2,5 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 107 a igual ou cerca de 1 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 107 a igual ou cerca de 5 x 107 células T que expressam CAR no total,
a partir de igual ou cerca de 5 x 107 a igual ou cerca de 5 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 10 7 a igual ou cerca de 2,5 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 107 a igual ou cerca de 1 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 108 a igual ou cerca de 5 x 108 células T que expressam CAR no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 108 a igual ou cerca de 2,5 x 108 células T que expressam CAR no total ou a partir de igual ou cerca de 2,5 x 10 8 a igual ou cerca de 5 x 108 células T que expressam CAR no total. Em algumas modalidades, o número de células é o número de tais células que são células viáveis.
[00145] Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente manipuladas compreende a partir de igual ou cerca de 2,5 x 107 a ou cerca de 1,5 x 108 células T que expressam CAR no total, tal como 5 x 107 a 1 x 108 células T que expressam CAR no total. Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente manipuladas compreende pelo menos ou pelo menos cerca de 2,5 x 10 7 células que expressam CAR, pelo menos ou pelo menos cerca de 5 x 10 7 células que expressam CAR ou pelo menos ou pelo menos cerca de 1 x 10 8 células que expressam CAR. Em algumas modalidades, a dose de células T compreende: igual ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR. Em algumas modalidades, a dose de células T compreende cerca de 1 x 108 células T que expressam CAR. Em algumas modalidades, a dose de células T compreende cerca de 5 x 107 células T que expressam CAR. Em algumas modalidades, o número de células é o número de tais células que são células viáveis.
[00146] Em algumas modalidades, o número é com referência ao número total de células CD3+, CD8+ ou CD4+ e CD8+, em alguns casos também células que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR+). Em algumas modalidades, o número de células é o número de tais células que são células viáveis.
[00147] Em algumas modalidades, a terapia celular compreende administrar uma dose que compreende um número de células a partir de ou a partir de cerca de 1 x 105 a ou a cerca de 5 x 108 células T CD3+, CD8+ ou CD4+ e CD8+ no total ou células que expressam receptor recombinante CD3+, CD8+, CD4+ e CD8+ (por exemplo, CAR+), a partir de ou a partir de cerca de 5 x 105 a ou a cerca de 1 x 107 células T no total ou células que expressam receptor recombinante CD3+, CD8+, CD4+ e CD8+ (por exemplo, CAR+) ou a partir de ou a partir de cerca de 1 x 106 a ou a cerca de 1 x 107 células T CD3+, CD8+ ou CD4+ e CD8+ no total ou células que expressam receptor recombinante CD3+, CD8+, CD4+ e CD8+, cada um inclusive. Em algumas modalidades, a terapia celular compreende administrar uma dose que compreende um número de células a partir de ou a partir de cerca de 1 x 105 a ou a cerca de 5 x 108 células CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ CD4+/CD8+/CAR+ no total, a partir de ou a partir de cerca de 5 x 105 a ou a cerca de 1 x 107 células CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ no total ou a partir de ou cerca de 1 x 106 a ou a cerca de 1 x 107 células CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ no total, cada um inclusive. Em algumas modalidades, o número de células é o número de tais células que são células viáveis.
[00148] Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente manipuladas compreende a partir de igual ou cerca de 2,5 x 10 7 a 1,5 x 108 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ no total, tal como 5 x 107 a 1 x 108 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ no total. Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente manipuladas compreende pelo menos ou pelo menos cerca de 2,5 x 107 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+, pelo menos ou pelo menos cerca de 5 x 107 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ ou pelo menos ou pelo menos cerca de 1 x 108 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+. Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente manipuladas compreende cerca de 2,5 x 10 7 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ ou cerca de 5 x 107 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ ou igual ou cerca de 1 x 108 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+. Em algumas modalidades, o número de células é o número de tais células que são células viáveis.
[00149] Em algumas modalidades, a dose de células T compreende: igual ou cerca de 5 x 107 células T que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR) ou cerca de 2,5 x 107 células T CD8+ que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR). Em algumas modalidades, a dose de células T compreende: igual ou cerca de 1 x 108 células T que expressam receptores recombinantes (por exemplo, CAR) ou cerca de 5 x 107 células T CD8+ que expressam receptores recombinantes (por exemplo, CAR). Em algumas modalidades, a dose de células T compreende: igual ou cerca de 1,5 x 108 células T que expressam receptores recombinantes (por exemplo, CAR) ou cerca de 0,75 x 108 células T CD8+ que expressam receptores recombinantes (por exemplo, CAR). Em algumas modalidades, o número de células é o número de tais células que são células viáveis.
[00150] Em algumas modalidades, as células T na dose incluem células T CD4+, células T CD8+ ou células T CD4+ e CD8+. Em algumas modalidades, por exemplo, onde o indivíduo é um ser humano, as células T CD8+ na dose, incluindo em uma dose que inclui células T CD4+ e CD8+, incluem entre cerca de 2,5 x 107 e 1 x 108 células CD8+ que expressam receptor recombinante no total (por exemplo, CAR) ou uma fração das mesmas, tal como presente em uma proporção de células CD4+ para células T CD8+ de 1:3 a 3:1, opcionalmente igual ou cerca de 1:1.
[00151] Em algumas modalidades, o paciente recebe doses múltiplas e cada uma das doses ou a dose total pode estar dentro de qualquer um dos valores anteriores. Em algumas modalidades, a dose de células compreende administrar a partir de ou a partir de cerca de 1 x 10 5 a ou a cerca de 5 x 108 células T que expressam receptor recombinante no total (por exemplo, CAR) ou células T no total, a partir de ou a partir de cerca de 1 x 105 a ou a cerca de 1,5 x 108 células T que expressam receptor recombinante no total (por exemplo, CAR) ou células T no total, a partir de ou a partir de cerca de 1 x 105 a ou a cerca de 1 x 108 células T que expressam receptor recombinante no total (por exemplo, CAR) ou células T no total, a partir de ou a partir de cerca de 5 x 105 a ou a cerca de 1 x 107 células T que expressam receptor recombinante no total (por exemplo, CAR) ou células T no total ou a partir de ou a partir de cerca de 1 x 106 a ou a cerca de 1 x 107 células T que expressam receptor recombinante no total (por exemplo, CAR) ou células T no total, cada um inclusive.
[00152] Em algumas modalidades, a dose de células é uma dose plana de células ou uma dose fixa de células, de modo que a dose de células não seja vinculada ou baseada na área de superfície corporal ou peso de um indivíduo.
[00153] Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente manipuladas compreende partir de ou a partir de cerca de 1 x 105 a 5 x 108 células T que expressam CAR no total, 1 x 105 a 2,5 x 108 células T que expressam CAR no total, 1 x 105 a 1 x 108 células T que expressam CAR no total, 1 x 105 a 5 x 107 células T que expressam CAR no total, 1 x 105 a 2,5 x 107 células T que expressam CAR no total, 1 x 105 a 1 x 107 células T que expressam CAR no total, 1 x 105 a 5 x 106 células T que expressam CAR no total, 1 x 105 a 2,5 x 106 células T que expressam CAR no total, 1 x 105 a 1 x 106 células T que expressam CAR no total, 1 x 106 a 5 x 108 células T que expressam CAR no total,
1 x 106 a 2,5 x 108 células T que expressam CAR no total, 1 x 106 a 1 x 108 células T que expressam CAR no total, 1 x 106 a 5 x 107 células T que expressam CAR no total, 1 x 106 a 2,5 x 107 células T que expressam CAR no total, 1 x 106 a 1 x 107 células T que expressam CAR no total, 1 x 106 a 5 x 106 células T que expressam CAR no total, 1 x 106 a 2,5 x 106 células T que expressam CAR no total, 2,5 x 106 a 5 x 108 células T que expressam CAR no total, 2,5 x 106 a 2,5 x 108 células T que expressam CAR no total, 2,5 x 106 a 1 x 108 células T que expressam CAR no total, 2,5 x 106 a 5 x 107 células T que expressam CAR no total, 2,5 x 106 a 2,5 x 107 células T que expressam CAR no total, 2,5 x 106 a 1 x 107 células T que expressam CAR no total, 2,5 x 106 a 5 x 106 células T que expressam CAR no total, 5 x 106 a 5 x 108 células T que expressam CAR no total, 5 x 106 a 2,5 x 108 células T que expressam CAR no total, 5 x 106 a 1 x 108 células T que expressam CAR no total, 5 x 106 a 5 x 107 células T que expressam CAR no total, 5 x 106 a 2,5 x 107 células T que expressam CAR no total, 5 x 106 a 1 x 107 células T que expressam CAR no total, 1 x 107 a 5 x 108 células T que expressam CAR no total, 1 x 107 a 2,5 x 108 células T que expressam CAR no total, 1 x 107 a 1 x 108 células T que expressam CAR no total, 1 x 107 a 5 x 107 células T que expressam CAR no total, 1 x 107 a 2,5 x 107 células T que expressam CAR no total, 2,5 x 107 a 5 x 108 células T que expressam CAR no total, 2,5 x 107 a 2,5 x 108 células T que expressam CAR no total, 2,5 x 107 a 1 x 108 células T que expressam CAR no total, 2,5 x 107 a 5 x 107 células T que expressam CAR no total, 5 x 107 a 5 x 108 células T que expressam CAR no total, 5 x 107 a 2,5 x 108 células T que expressam CAR no total, 5 x 107 a 1 x 108 células T que expressam CAR no total, 1 x 108 a 5 x 108 células T que expressam CAR no total, 1 x 108 a 2,5 x 108 células T que expressam CAR no total ou 2,5 x 108 a 5 x 108 células T que expressam CAR no total.
Em algumas modalidades, o número de células é o número de tais células que são células viáveis.
[00154] Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente manipuladas compreende a partir de igual ou cerca de 2,5 x 107 a ou cerca de 1,5 x 108 células T que expressam CAR no total, tal como 5 x 107 a 1 x 108 células T que expressam CAR no total. Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente manipuladas compreende pelo menos ou pelo menos cerca de 2,5 x 10 7 células que expressam CAR, pelo menos ou pelo menos cerca de 5 x 10 7 células que expressam CAR ou pelo menos ou pelo menos cerca de 1 x 10 8 células que expressam CAR. Em algumas modalidades, a dose de células T compreende: igual ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR. Em algumas modalidades, a dose de células T compreende cerca de 1 x 108 células T que expressam CAR. Em algumas modalidades, a dose de células T compreende cerca de 5 x 107 células T que expressam CAR. Em algumas modalidades, o número de células é o número de tais células que são células viáveis.
[00155] Em algumas modalidades, o número é com referência ao número total de células CD3+, CD8+ ou CD4+ e CD8+, em alguns casos também células que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR+). Em algumas modalidades, o número de células é o número de tais células que são células viáveis.
[00156] Em algumas modalidades, a terapia celular compreende administrar uma dose que compreende um número de células a partir de ou a partir de cerca de 1 x 105 a ou a cerca de 5 x 108 células T CD3+, CD8+ ou CD4+ e CD8+ no total ou células CD3+, CD8+, CD4+ e CD8+ que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR+), a partir de ou a partir de cerca de 5 x 105 a ou a cerca de 1 x 107 células T CD3+, CD8+ ou CD4+ e CD8+ no total ou células CD3+, CD8+, CD4+ e CD8+ que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR+) ou a partir de ou a partir de cerca de 1 x 106 a ou a cerca de 1 x 107 células T CD3+,
CD8+, CD4+ e CD8+ no total ou células CD3+, CD8+, CD4+ e CD8+ que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR+), cada um inclusive. Em algumas modalidades, a terapia celular compreende administrar uma dose que compreende um número de células a partir de ou a partir de cerca de 1 x 105 a ou a cerca de 5 x 108 células CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ no total, a partir de ou a partir de cerca de 5 x 105 a ou a cerca de 1 x 107 células CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ no total ou a partir de ou a partir de cerca de 1 x 106 a ou a cerca de 1 x 107 células CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ no total, cada um inclusive. Em algumas modalidades, o número de células é o número de tais células que são células viáveis.
[00157] Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente manipuladas compreende a partir de igual ou cerca de 2,5 x 107 a 1,5 x 108 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ no total, tal como 5 x 107 a 1 x 108 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ no total. Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente manipuladas compreende pelo menos ou pelo menos cerca de 2,5 x 107 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+, pelo menos ou pelo menos cerca de 5 x 107 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ ou pelo menos ou pelo menos cerca de 1 x 108 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+. Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente manipuladas compreende cerca de 2,5 x 10 7 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ ou cerca de 5 x 107 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ ou igual ou cerca de 1 x 108 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+. Em algumas modalidades, o número de células é o número de tais células que são células viáveis.
[00158] Em algumas modalidades, a dose de células T compreende:
igual ou cerca de 5 x 107 células T que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR) ou cerca de 2,5 x 107 células T CD8+ que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR). Em algumas modalidades, a dose de células T compreende: igual ou cerca de 1 x 108 células T que expressam receptores recombinantes (por exemplo, CAR) ou cerca de 5 x 107 células T CD8+ que expressam receptores recombinantes (por exemplo, CAR). Em algumas modalidades, a dose de células T compreende: igual ou cerca de 1,5 x 108 células T que expressam receptores recombinantes (por exemplo, CAR) ou cerca de 0,75 x 108 células T CD8+ que expressam receptores recombinantes (por exemplo, CAR). Em algumas modalidades, o número de células é o número de tais células que são células viáveis.
[00159] Em algumas modalidades, o paciente recebe doses múltiplas e cada uma das doses ou a dose total pode estar dentro de qualquer um dos valores anteriores. Em algumas modalidades, a dose de células compreende administrar a partir de ou a partir de cerca de 1 x 10 5 a ou a cerca de 5 x 108 células T que expressam o receptor recombinante no total (por exemplo, CAR) ou células T no total, a partir de ou a partir de cerca de 1 x 105 a ou a cerca de 1,5 x 108 células T que expressam receptor recombinante no total (por exemplo, CAR) ou células T no total, a partir de ou a partir de cerca de 1 x 105 a ou a cerca de 1 x 108 células T que expressam receptor recombinante no total (por exemplo, CAR) ou células T no total, a partir de ou a partir de cerca de 5 x 105 a ou a cerca de 1 x 107 células T que expressam receptor recombinante no total (por exemplo, CAR) ou células T no total ou a partir de ou a partir de cerca de 1 x 106 a ou a cerca de 1 x 107 células T que expressam receptor recombinante no total (por exemplo, CAR) ou células T no total, cada um inclusive.
[00160] Em algumas modalidades, as células T na dose incluem células T CD4+, células T CD8+ ou células T CD4+ e CD8+.
[00161] Em algumas modalidades, a dose de células, por exemplo, células T que expressam o receptor recombinante, é administrada ao indivíduo como uma dose única ou é administrada apenas uma vez dentro de um período de duas semanas, um mês, três meses, seis meses, 1 ano ou mais.
[00162] No contexto da terapia celular adotiva, a administração de uma determinada "dose" abrange a administração de uma determinada quantidade ou número de células como uma única composição e/ou administração única ininterrupta, por exemplo, tal como uma única injeção ou infusão contínua, e também abrange a administração de uma determinada quantidade ou número de células como uma dose dividida ou como uma pluralidade de composições, fornecidas em múltiplas composições ou infusões individuais, ao longo de um período de tempo especificado, tal como em não mais de 3 dias. Assim, em alguns contextos, a dose é uma administração única ou contínua do número especificado de células, fornecida ou iniciada em um único ponto no tempo. Em alguns contextos, no entanto, a dose é administrada em múltiplas injeções ou infusões ao longo de um período de não mais de três dias, tal como uma vez por dia durante três dias ou dois dias ou através de múltiplas infusões durante um único dia.
[00163] Assim, em alguns aspectos, as células da dose são administradas em uma única composição farmacêutica. Em algumas modalidades, as células da dose são administradas em uma pluralidade de composições que contêm coletivamente as células da dose.
[00164] Em algumas modalidades, as células da dose podem ser administradas através de administração dentre uma pluralidade de composições ou soluções, tal como uma primeira e uma segunda, opcionalmente mais, cada uma contendo algumas células da dose. Em alguns aspectos, a pluralidade de composições, cada uma contendo uma população diferente e/ou subtipos de células, são administradas separada ou independentemente, opcionalmente com um determinado período de tempo. Por exemplo, as populações ou subtipos de células podem incluir células T CD8+ e CD4+, respectivamente, e/ou populações enriquecidas com células T CD8+ e CD4+, respectivamente, por exemplo, células T CD4+ e/ou CD8+, cada incluindo individualmente células geneticamente manipuladas para expressar o receptor recombinante. Em algumas modalidades, a administração da dose compreende administrar uma primeira composição que compreende uma dose de células T CD8+ ou uma dose de células T CD4+ e administrar uma segunda composição que compreende a outra da dose de células T CD4+ e as células T CD8+.
[00165] Em algumas modalidades, a administração da composição ou dose, por exemplo, a administração da pluralidade de composições celulares, envolve administrar as composições de células separadamente. Em alguns aspectos, as administrações separadas são realizadas simultânea ou sequencialmente, em qualquer ordem. Em modalidades particulares, as administrações separadas são realizadas sequencialmente através de administração, em qualquer ordem, de uma primeira composição que compreende uma dose de células T CD8 + ou uma dose de células T CD4+ e uma segunda composição que compreende a outra da dose de células T CD4+ e as células T CD8+. Em algumas modalidades, a dose compreende uma primeira composição e uma segunda composição, e a primeira composição e a segunda composição são administradas dentro de 48 horas uma da outra, tal como não mais de 36 horas uma da outra ou não mais de 24 horas uma da outra. Em algumas modalidades, a primeira composição e a segunda composição são administradas em ou cerca de 0 a ou cerca de 12 horas de intervalo, a partir de ou a partir de cerca de 0 a ou cerca de 6 horas de intervalo ou a partir de ou a partir de cerca de 0 a ou cerca de 2 horas de intervalo. Em algumas modalidades, o início da administração da primeira composição e o início da administração da segunda composição são realizados em não mais de ou cerca de 2 horas, não mais de ou cerca de 1 hora ou não mais de ou cerca de 30 minutos de intervalo, não mais de ou cerca de 15 minutos, não mais de ou cerca de 10 minutos ou não mais de ou cerca de 5 minutos de intervalo. Em algumas modalidades, o início e/ou conclusão de administração da primeira composição e a conclusão e/ou início da administração da segunda composição são realizados em não mais de ou cerca de 2 horas, não mais de ou cerca de 1 hora ou não mais de ou cerca de 30 minutos de intervalo, não mais de ou cerca de 15 minutos, não mais de ou cerca de 10 minutos ou não mais de ou cerca de 5 minutos de intervalo.
[00166] Em alguma composição, a primeira composição, por exemplo, a primeira composição da dose, compreende células T CD4+. Em algumas modalidades, a primeira composição, por exemplo, a primeira composição da dose, compreende células T CD8+. Em algumas modalidades, a primeira composição é administrada antes da segunda composição. Em modalidades particulares, as células T CD8+ são administradas antes das células T CD4+.
[00167] Em algumas modalidades, a dose ou composição de células inclui uma proporção definida ou alvo de células CD4 + que expressam um receptor recombinante (por exemplo, CAR) para células CD8+ que expressam um receptor recombinante (por exemplo, CAR) e/ou de células CD4+ para células CD8+, proporção a qual é opcionalmente de aproximadamente 1:1 ou está entre aproximadamente 1:3 e aproximadamente 3:1, tal como aproximadamente 1:1. Em alguns aspectos, a administração de uma composição ou dose com a proporção alvo ou desejada de diferentes populações de células (tal como proporção CD4+:CD8+ ou proporção de CAR+ CD4+:CAR+ CD8+, por exemplo, 1:1) envolve administrar uma composição de células que contém uma das populações e, em seguida, administrar uma composição de células separada que compreende a outra das populações, em que a administração é igual ou aproximadamente igual à proporção alvo ou desejada. Em alguns aspectos, a administração de uma dose ou composição de células em uma proporção definida leva à expansão, persistência e/ou atividade antitumoral da terapia com células T.
[00168] Em algumas modalidades, a dose ou composição de células inclui uma proporção definida ou alvo de células CD4 + que expressam um receptor recombinante para células CD8+ que expressam um receptor recombinante e/ou de células CD4+ para células CD8+, proporção a qual é opcionalmente de aproximadamente 1:1 Em alguns aspectos, a administração de uma composição ou dose com a proporção alvo ou desejada de diferentes populações de células (tal como proporção CD4+:CD8+ ou proporção de CAR+ CD4+:CAR+ CD8+, por exemplo, 1:1) envolve administrar uma composição de células que contém uma das populações e, em seguida, administrar uma composição de células separada que compreende a outra das populações, em que a administração é igual ou aproximadamente a proporção alvo ou desejada. Em alguns aspectos, a administração de uma dose ou composição de células em uma proporção definida leva à expansão, persistência e/ou atividade antitumoral da terapia com células T.
[00169] Em modalidades particulares, os números e/ou concentrações de células referem-se ao número de células que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR) ou ao número de células T que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR) ou um subconjunto de células T CD3+ ou CD4+ e/ou CD8+ das mesmas. Em algumas modalidades, o número e/ou concentração de células refere-se a tal número de células que são células viáveis.
[00170] Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente manipuladas é ou é cerca de 5 x 107 células CD3+ CAR+ viáveis, incluindo uma dose separada de ou cerca de 2,5 x 107 células CD4+ CAR+ viáveis e cerca de 2,5 x 107 células CD8+ CAR+ viáveis. Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente manipuladas é ou é cerca de 1 x 108 células CD3+ CAR+ viáveis, incluindo uma dose separada de ou cerca de 5 x 107 células CD4+ CAR+ viáveis e cerca de 5 x107 células CD8+ CAR+ viáveis. Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente manipuladas é ou é cerca de 1,5 x 10 8 células CD3+ CAR+ viáveis, incluindo uma dose separada de ou cerca de 0,75 x 108 células CD4+ CAR+ e cerca de 0,75 x108 células CD8+ CAR+ viáveis. C. Resposta, Eficácia e Sobrevida
[00171] Em algumas modalidades, a administração trata efetivamente o indivíduo, apesar do indivíduo não ter obtido sucesso, ter se tornado refratário a e/ou resistente à outra terapia. Em algumas modalidades, a administração trata efetivamente o indivíduo, apesar do indivíduo ter se tornado resistente à outra terapia. Em algumas modalidades, pelo menos 30 % dos indivíduos tratados de acordo com o método alcançam remissão completa (CR); e/ou pelo menos cerca de 75% dos indivíduos tratados de acordo com o método alcançam uma resposta objetiva (OR). Em algumas modalidades, pelo menos ou cerca de pelo menos 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60% ou mais dos indivíduos tratados de acordo com o método alcançam CR e/ou pelo menos ou cerca de pelo menos 50 %, 60 %, 70 % ou 80 % alcançam uma resposta objetiva (OR). Em algumas modalidades, pelo menos 30% dos indivíduos que não obtiveram sucesso em uma terapia anterior com inibidor de BTK (por exemplo, ibrutinibe) e venetoclax tratados de acordo com o método alcançam remissão completa (CR); e/ou pelo menos cerca de 75% dos indivíduos que não obtiveram sucesso em uma terapia anterior com inibidor de BTK (por exemplo, ibrutinibe) e venetoclax tratados de acordo com o método alcançam uma resposta objetiva (OR). Em algumas modalidades, pelo menos ou cerca de pelo menos 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 % ou mais dos indivíduos que não obtiveram sucesso em uma terapia anterior com inibidor de BTK (por exemplo, ibrutinibe) e venetoclax tratados de acordo para o método alcançam CR e/ou pelo menos ou cerca de pelo menos 50%, 60%, 70% ou 80% alcançam uma resposta objetiva (OR). Em algumas modalidades, os critérios avaliados para o tratamento eficaz incluem taxa de resposta global (ORR; também conhecida, em alguns casos, como taxa de resposta objetiva), resposta completa (CR; também conhecida, em alguns casos, como resposta completa), remissão completa com recuperação incompleta pelo hemograma (CRi), doença estável (SD) e/ou doença parcial (PD).
[00172] Em algumas modalidades, a duração da resposta antes da progressão é maior do que 1 mês, maior do que 2 meses, maior do que 3 meses, maior do que 6 meses ou mais. Em algumas modalidades, pelo menos 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 % ou mais dos indivíduos tratados de acordo com os métodos fornecidos no presente documento alcançam remissão completa (CR; também conhecida, em alguns casos, como resposta completa) igual ou cerca de 3 meses ou igual ou cerca de 6 meses após administração da terapia celular.
[00173] Em alguns aspectos, a administração de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos geralmente reduz ou evita a expansão ou carga da doença ou condição no indivíduo. Por exemplo, onde a doença ou condição é um tumor, os métodos geralmente reduzem o tamanho do tumor, volume, metástase, porcentagem de blastos na medula óssea ou câncer detectável molecularmente e/ou melhoram o prognóstico ou a sobrevida ou outro sintoma associado à carga tumoral.
[00174] A carga da doença pode abranger um número total de células da doença no indivíduo ou em um órgão, tecido ou fluido corporal do indivíduo, tal como o órgão ou tecido do tumor ou outro local, por exemplo, o que indicaria metástase. Por exemplo, as células tumorais podem ser detectadas e/ou quantificadas no sangue ou na medula óssea no contexto de determinadas doenças hematológicas. A carga da doença pode incluir, em algumas modalidades, a massa de um tumor, o número ou extensão das metástases e/ou a porcentagem de células blásticas presentes na medula óssea.
[00175] Em algumas modalidades, um indivíduo tem leucemia. A extensão da carga da doença pode ser determinada pela avaliação da leucemia residual no sangue ou na medula óssea.
[00176] Em alguns aspectos, as taxas de resposta em indivíduos, tais como indivíduos com CLL, são com base nos critérios de resposta do Workshop on Chronic Lymphocytic Leukemia (IWCLL) (Hallek, et al., Blood, 15 de junho de 2008; 111 (12): 5446-5456). Em alguns aspectos, as taxas de resposta em indivíduos, tais como indivíduos com CLL, são com base nos critérios de resposta do Workshop on Chronic Lymphocytic Leukemia (IWCLL) (Hallek et al., Blood 2018 131 (25): 2745-2760). Em alguns aspectos, estes critérios são descritos a seguir: remissão completa (CR; também conhecida, em alguns casos, como resposta completa) a qual, em alguns aspectos, requer a ausência de linfócitos clonais de sangue periférico através de imunofenotipagem, ausência de linfadenopatia, ausência de hepatomegalia ou esplenomegalia, ausência de sintomas constitucionais e contagens sanguíneas satisfatórias; remissão completa com recuperação incompleta da medula (CRi) a qual, em alguns aspectos, é descrita como CR acima, mas sem contagens sanguíneas normais; remissão parcial (RP; também conhecida, em alguns casos, como resposta parcial) a qual, em alguns aspectos, é descrita como queda ≥ 50 % na contagem de linfócitos, redução ≥ 50 % na linfadenopatia ou redução ≥ 50 % no fígado ou baço, juntamente com melhora em contagens de sangue periférico; doença progressiva (PD) a qual, em alguns aspectos, é descrita como aumento ≥ 50 % na contagem de linfócitos para > 5 x109/L, aumento ≥ 50 % na linfadenopatia, aumento ≥ 50 % no tamanho do fígado ou baço, transformada de Richter ou novas citopenias em virtude de CLL; e doença estável a qual, em alguns aspectos, é descrita como não atendendo aos critérios para CR, CRi, PR ou PD.
[00177] Em algumas modalidades, os indivíduos exibem uma CR ou OR se, dentro de 1 mês da administração da dose de células, os nódulos linfáticos no indivíduo têm menos de ou cerca de 20 mm de tamanho, menos de ou cerca de 10 mm de tamanho ou menos de ou cerca de 10 mm de tamanho.
[00178] Em algumas modalidades, um clone de índice da CLL não é detectado na medula óssea do indivíduo (ou na medula óssea acima de 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 % ou mais dos indivíduos tratados de acordo com os métodos). Em algumas modalidades, um clone de índice da CLL é avaliado por meio de sequenciamento profundo de IGH. Em algumas modalidades, o clone de índice não é detectado em um momento que é igual ou cerca de ou pelo menos igual ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 ou 24 meses após administração das células.
[00179] Em algumas modalidades, um indivíduo exibe doença morfológica se houver mais ou igual a 5 % de blastos na medula óssea, por exemplo, conforme detectado por meio de microscopia luminosa, tal como maior ou igual a 10 % de blastos na medula óssea, maior ou igual a 20 % de blastos na medula óssea, maior ou igual a 30 % de blastos na medula óssea, maior ou igual a 40 % de blastos na medula óssea ou maior ou igual a 50 % de blastos na medula óssea. Em algumas modalidades, um indivíduo exibe remissão completa ou clínica se houver menos de 5% de blastos na medula óssea.
[00180] Em algumas modalidades, um indivíduo tem leucemia. A extensão da carga da doença pode ser determinada por meio de avaliação da leucemia residual no sangue ou na medula óssea.
[00181] Em algumas modalidades, um indivíduo exibe doença morfológica se houver maior ou igual a 5 % de blastos na medula óssea, por exemplo, conforme detectado por meio de microscopia luminosa, tal como maior ou igual a 10% de blastos na medula óssea, maior ou igual a 20% de blastos na medula óssea, maior ou igual a 30% de blastos na medula óssea, maior ou igual a 40% de blastos na medula óssea ou maior ou igual a 50% de blastos na medula óssea. Em algumas modalidades, um indivíduo exibe remissão completa ou clínica se houver menos de 5 % de blastos na medula óssea.
[00182] Em algumas modalidades, um indivíduo pode exibir remissão completa, mas uma pequena proporção de células leucêmicas residuais morfologicamente indetectáveis (através de técnicas de microscopia luminosa) estão presentes. Diz-se que um indivíduo exibe doença residual mínima (MRD) se o indivíduo exibe menos de 5 % de blastos na medula óssea e exibe câncer detectável molecularmente. Em algumas modalidades, o câncer detectável molecularmente pode ser avaliado usando qualquer uma de uma variedade de técnicas moleculares que permitem a detecção sensível de um pequeno número de células. Em alguns aspectos, tais técnicas incluem ensaios de PCR, os quais podem determinar rearranjos gênicos de receptores de células T/Ig exclusivos ou transcritos de fusão produzidos por translocações cromossômicas. Em algumas modalidades, citometria de fluxo pode ser usada para identificar células cancerosas com base em imunofenótipos específicos para leucemia. Em algumas modalidades, a detecção molecular de câncer pode detectar apenas 1 célula leucêmica em
100.000 células normais. Em algumas modalidades, um indivíduo exibe
MRD que é detectável molecularmente se pelo menos ou mais de 1 célula leucêmica em 100.000 células for detectada, tal como através de PCR ou citometria de fluxo. Em algumas modalidades, a carga da doença de um indivíduo é indetectável molecularmente ou MRD- de modo que, em alguns casos, nenhuma célula leucêmica seja capaz de ser detectada no indivíduo usando técnicas de PCR ou citometria de fluxo.
[00183] Em algumas modalidades, um clone de índice da leucemia, por exemplo CLL, não é detectado na medula óssea do indivíduo (ou na medula óssea de mais de 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou mais dos indivíduos tratados de acordo com os métodos). Em algumas modalidades, um clone de índice da leucemia, por exemplo, CLL, é avaliado por meio de sequenciamento profundo de IGH. Em algumas modalidades, o clone de índice não é detectado em um momento que é igual ou cerca de ou pelo menos igual ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 ou 24 meses após administração das células.
[00184] Em alguns aspectos, a MRD é detectada por meio de citometria de fluxo. A citometria de fluxo pode ser usada para monitorar a medula óssea e amostras de sangue periférico quanto a células cancerosas. Em aspectos particulares, a citometria de fluxo é usada para detectar ou monitorar a presença de células cancerosas na medula óssea. Em alguns aspectos, detecção imunológica multiparâmetros por meio de citometria de fluxo é usada para detectar células cancerosas (consulte, por exemplo, Coustan-Smith et al., (1998) Lancet 351: 550- 554). Em alguns aspectos, detecção imunológica multiparâmetros por meio de citometria de massa é usada para detectar células cancerosas. Em alguns exemplos, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50 parâmetros podem ser usados para detectar células cancerosas. Os antígenos usados para detecção são selecionados com base no câncer que está sendo detectado (Foon e
Todd (1986) Blood 68: 1-31). Em algumas modalidades, a MRD é descrita como indivíduos que não têm evidência de CLL no sangue periférico ou medula, isto é, CR ou PR com base em linfadenopatia residual ou esplenomegalia. Em alguns aspectos, a MRD é medida por meio de citometria de fluxo de sangue periférico e sequenciamento profundo de IGHV da medula óssea.
[00185] Em alguns exemplos, a medula óssea é coletada através de aspirados de medula óssea ou biópsias de medula óssea e os linfócitos são isolados para análise. Anticorpos monoclonais e/ou policlonais conjugados a um fluorocromo (por exemplo, isotiocianato de fluoresceína (FITC), ficoeritrina, proteína de clorofila de peridinina ou biotina) podem ser usados para detectar epítopos, tais como desoxinucleotidil transferase terminal (TdT), CD3, CD10, CD11c, CD13, CD14, CD33, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD34, CD45, CD56, CD79b, IgM e/ou KORSA3544, em linfócitos isolados. As células marcadas podem, então, ser detectadas usando citometria de fluxo, tal como citometria de fluxo multiparâmetros ou citometria de massa, para detectar múltiplos epítopos.
[00186] As células linfoides podem ser identificadas e bloqueadas com base em um gráfico de pontos de dispersão de luz e, em seguida, secundariamente bloqueadas para identificar populações de células que expressam as características imunofenotípicas de interesse. Epítopos exemplificativos são apresentados na Tabela 2 abaixo. Outra classificação imunológica de leucemias e linfomas é fornecida por Foon e Todd (Blood (1986) 68 (1): 1-31). Em alguns aspectos, a avaliação por citometria de fluxo de MRD pode ser alcançada pela quantificação de linfócitos vivos com um ou mais imunofenótipos de CLL (por exemplo, baixa dispersão frontal/lateral; CD3neg; CD5+; CD14neg; CD19+; CD23+; CD45+; CD56neg). Tabela 2. Características Exemplificativas de Imunofenótipo e
Citogenética Doença Imunofenótipo Citogenética Trissomia 12 del(13)(q14.3) del 11q22-q23 del 17p13 (p53) t(11;14)(q13;q32) rearranjo de Leucemia Pan-B+; CD5+; BCL1/IGH Linfocítica CD23+; CD79b/CD22 t(14;19)(q32;q13) Crônica (CLL) fraco; FMC7-; sIg fraco deleção de IGH (14q32) del(6q) +8q24 +3 +18 del 6q21 Linfoma Pan-B+; CD5+; Linfocítico CD23+; CD10-; sIgM+ del(6)(q21-23) Pequeno (SLL) fraco +: positivo em > 90 % dos casos +/-: positivo em mais de 50 % dos casos -/+: positivo em menos de 50 % dos casos -: positivo em < 10 % dos casos Marcadores Pan-B: por exemplo, CD19, CD20, CD79a sIG: imunoglobulinas na superfície cyIg: imunoglobulinas citoplásmicas
[00187] Em alguns aspectos, o sequenciamento profundo do locus da cadeia pesada de imunoglobulina (IGH) de células B coletadas pode ser usado para detectar doença residual mínima (MRD). A presença clonal de um rearranjo de IgG particular pode constituir um marcador para detectar a presença de malignidades de células B, tal como CLL, e/ou presença residual de células malignas das mesmas. Em alguns aspectos, as células, tal como uma população que contém ou suspeita de conter células B, são coletadas e isoladas do sangue. Em alguns aspectos, as células são coletadas e isoladas da medula óssea, por exemplo, de aspirados da medula óssea ou biópsias da medula óssea,
e/ou de outras amostras biológicas. Em alguns aspectos, a amplificação por reação em cadeia de polimerase (Polymerase Chain Reaction, PCR) da região determinante de complementaridade 3 (CDR3) é alcançada usando iniciadores para sequências altamente conservadas dentro das regiões V e J do locus gênico, as quais podem ser usadas para identificar populações clonais de células para avaliar a doença residual mínima. Outros métodos para detectar populações clonais, tal como abordagens de sequenciamento de célula única, incluindo aqueles que fornecem informações sobre o número de células de uma linhagem particular e/ou que expressa uma cadeia variável particular, tal como cadeia pesada variável ou local de ligação da mesma, tal como uma população clonal, pode ser usado. Em alguns aspectos, o DNA de IGH é amplificado usando iniciadores degenerados ou iniciadores que reconhecem regiões de cadeias variáveis compartilhadas entre diferentes clones de células, tais como aqueles que reconhecem as regiões V de consenso e J de consenso degeneradas da sequência de IGH. Uma sequência exemplificativa da região V é ACACGGCCTCGTGTATTACTGT (SEQ ID NO: 57). Uma sequência de consenso degenerada exemplificativa da região J é ACCTGAGGAGACGGTGACC (SEQ ID NO: 58).
[00188] O produto de PCR ou resultado de sequenciamento é, em alguns aspectos, específico para o alelo rearranjado e serve como um marcador clonal para a detecção de MRD. Após a amplificação por PCR da região CDR3, os produtos de PCR podem ser sequenciados para produzir oligonucleotídeos específicos para o paciente construídos como sondas para PCR específica para alelo para detecção sensível de MRD após tratamento de doenças malignas de células B com terapia com células CAR-T, por exemplo, terapia de células T CAR anti-CD19. Nos exemplos nos quais um produto de PCR não é gerado usando os iniciadores de consenso, iniciadores específicos para família da região
V para a região estrutural 1 podem ser usados em seu lugar.
[00189] Em alguns aspectos, a persistência de células tumorais detectáveis por PCR, tais como células da malignidade de células B, tal como CLL, tais como sequências de IGH detectáveis que correspondem às sequências de IGH malignas ou clonais, após tratamento está associada a um risco aumentado de recidiva. Em alguns aspectos, os pacientes que são negativos para sequências de IGH malignas após tratamento (em alguns aspectos, mesmo no contexto de outros critérios que indiquem doença progressiva ou apenas uma resposta parcial, tal como persistência de linfonodos aumentados ou outros critérios que possam, em alguns contextos, ser considerados como tendo uma probabilidade aumentada de entrar em RC ou RC durável ou sobrevida prolongada, comparado com pacientes com sequências de IGH malignas persistentes. Em algumas modalidades, tais determinações de prognóstico e estadiamento são particularmente relevantes para tratamentos nos quais a eliminação de células malignas é observada dentro de um curto período de tempo após administração da terapia, por exemplo, comparado com a resolução de outros sintomas clínicos, tal como tamanho do linfonodo ou outros critérios de estadiamento. Por exemplo, em alguns destes aspectos, a ausência de IGH detectável ou doença residual mínima em uma amostra, tal como a medula óssea, pode ser uma leitura preferida para a resposta ou probabilidade de resposta ou durabilidade da mesma, comparado com outras abordagens de estadiamento ou prognóstico disponíveis. Em alguns aspectos, os resultados para a MRD, por exemplo, informações de sequenciamento profundo de IGH, podem informar uma intervenção adicional ou a falta dela. Por exemplo, os métodos e outras modalidades fornecidos, em alguns contextos, estipulam que um indivíduo considerado negativo para IGH maligna pode, em alguns aspectos, não ser tratado posteriormente ou não receber uma dose da terapia fornecida ou que o indivíduo receberá uma dose inferior ou dose reduzida. Por outro lado, pode ser fornecido ou especificado que um indivíduo que exibe MRD via sequenciamento profundo de IGH seja tratado posteriormente, por exemplo, com a terapia inicialmente administrada em uma dose similar ou superior ou com um tratamento adicional. Em alguns aspectos, a doença ou condição persiste após administração da primeira dose e/ou a administração da primeira dose não é suficiente para erradicar a doença ou condição no indivíduo.
[00190] Em algumas modalidades, o método reduz a carga da doença ou condição, por exemplo, número de células tumorais, tamanho do tumor, duração da sobrevida do paciente ou sobrevida sem eventos, em um grau maior e/ou durante um período de tempo maior comparado com a redução que seria observada com um método comparável usando um regime de dosagem alternativo, tal como aquele em que o indivíduo recebe um ou mais medicamentos alternativos antes e/ou aquele em que o indivíduo não recebe uma dose de células e/ou um agente de linfodepleção de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos. Em algumas modalidades, a carga de uma doença ou condição no indivíduo é detectada, avaliada ou medida. A carga da doença pode ser detectada, em alguns aspectos, através da detecção do número total de doenças ou células associadas à doença, por exemplo, células tumorais, no indivíduo ou em um órgão, tecido ou fluido corporal do indivíduo, tal como sangue ou soro. Em alguns aspectos, a sobrevida do indivíduo, a sobrevida dentro de um determinado período de tempo, a extensão da sobrevida, a presença ou duração da sobrevida sem eventos ou sem sintomas ou a sobrevida sem recidiva, é avaliada. Em algumas modalidades, qualquer sintoma da doença ou condição é avaliado. Em algumas modalidades, a medida da carga de doença ou condição é especificada.
[00191] Em algumas modalidades, após tratamento por meio do método, a probabilidade de recidiva é reduzida comparado com outros métodos, por exemplo, métodos nos quais o indivíduo recebe um ou mais agentes terapêuticos alternativos e/ou um no qual o indivíduo não recebe uma dose de células e/ou um agente de linfodepleção de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos.
[00192] Em alguns casos, a farmacocinética das células administradas, por exemplo, células transferidas de forma adotiva, é determinada para avaliar a disponibilidade, por exemplo, a biodisponibilidade das células administradas. Métodos para determinar a farmacocinética de células transferidas de forma adotiva podem incluir coletar sangue periférico de indivíduos que receberam as células manipuladas e determinar o número ou proporção das células manipuladas no sangue periférico. Abordagens para selecionar e/ou isolar células podem incluir o uso de anticorpos específicos para o receptor antigênico quimérico (CAR) (por exemplo, Brentjens et al., Sci. Transl. Med. Março de 2013; 5 (177): 177ra38), Proteína L (Zheng et al., J. Transl. Med. Fevereiro de 2012; 10:29), marcadores de epítopo, tais como sequências Strep-Tag, introduzidas diretamente em locais específicos no CAR, em que reagentes de ligação à Strep-Tag são usados para avaliar diretamente o CAR (Liu et al. (2016) Nature Biotechnology, 34: 430; Publicação de Pedido de Patente Internacional Nº WO2015095895) e anticorpos monoclonais que se ligam especificamente a um polipeptídeo CAR (consulte Publicação de Pedido de Patente Internacional Nº WO2014190273). Genes marcadores extrínsecos podem, em alguns casos, ser usados em relação a terapias com células manipuladas para permitir a detecção ou seleção de células e, em alguns casos, também para promover o suicídio celular. Um receptor de fator de crescimento epidérmico truncado (EGFRt) pode, em alguns casos, ser coexpresso com um transgene de interesse (um CAR ou TCR) em células transduzidas (consulte, por exemplo, Patente Norte- Americana N° 8.802.374). O EGFRt pode conter um epítopo reconhecido pelo anticorpo cetuximabe (Erbitux) ou outro anticorpo anti-EGFR terapêutico ou molécula de ligação que possa ser usada para identificar ou selecionar células que foram manipuladas com a construção de EGFRt e outro receptor recombinante, tal como um receptor antigênico quimérico (CAR) e/ou para eliminar ou separar células que expressam o receptor. Consulte Patente Norte-Americana N° 8.802.374 e Liu et al., Nature Biotech. Abril de 2016; 34 (4): 430– 434).
[00193] Em algumas modalidades, o número de células T CAR+ em uma amostra biológica obtida do paciente, por exemplo, sangue, pode ser determinado em um período de tempo após administração da terapia celular, por exemplo, para determinar a farmacocinética das células. Em algumas modalidades, o número de células T CAR+, opcionalmente células T CAR+ CD8+ e/ou células T CAR+ CD4+, detectáveis no sangue do indivíduo ou na maioria dos indivíduos assim tratados por meio do método é maior do que 1 célula por µL, maior do que 5 células por µL ou maior do que 10 células por µL. D. Toxicidade
[00194] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos são concebidos para ou incluem características que resultam em uma taxa mais baixa e/ou menor grau de toxicidade, resultado ou sintoma tóxico, perfil de promoção de toxicidade, fator ou propriedade, tal como um sintoma ou resultado associado ou indicativo de síndrome de liberação de citocinas (CRS) ou neurotoxicidade, por exemplo, comparado com a administração de uma terapia celular alternativa, tal como uma composição alternativa de células T CAR+ e/ou uma dosagem alternativa de células, por exemplo, uma dosagem de células que não é administrada em uma proporção definida.
[00195] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos não resultam em uma alta taxa ou probabilidade de toxicidade ou resultados tóxicos ou reduzem a taxa ou probabilidade de toxicidade ou resultados tóxicos, tal como neurotoxicidade (NT), síndrome de liberação de citocinas (CRS), tal como comparado com algumas outras terapias celulares. Em algumas modalidades, os métodos não resultam em ou não aumentam o risco de NT (sNT) grave, CRS grave (sCRS), síndrome de ativação macrofágica, síndrome de lise tumoral, febre de pelo menos 38 graus Celsius ou cerca de três ou mais dias e um nível plasmático de CRP de pelo menos ou cerca de 20 m g/dL. Em algumas modalidades, mais ou mais de cerca de 30 %, 35 %, 40 %, 50 %, 55 %, 60 % ou mais dos indivíduos tratados de acordo com os métodos fornecidos não exibem qualquer grau de CRS ou qualquer grau de neurotoxicidade. Em algumas modalidades, não mais de 50 % dos indivíduos tratados (por exemplo, pelo menos 60 %, pelo menos 70 %, pelo menos 80%, pelo menos 90 % ou mais dos indivíduos tratados) exibem uma síndrome de liberação de citocinas (CRS) superior ao grau 2 e/ou neurotoxicidade superior ao grau 2. Em algumas modalidades, pelo menos 50 % dos indivíduos tratados de acordo com o método (por exemplo, pelo menos 60 %, pelo menos 70 %, pelo menos 80 %, pelo menos 90 % ou mais dos indivíduos tratados) não exibem um resultado tóxico grave (por exemplo, CRS grave ou neurotoxicidade grave), tal como não exibem neurotoxicidade de grau 3 ou superior e/ou não exibem CRS grave ou não o fazem dentro de um determinado período de tempo após tratamento, tal como dentro de uma semana, duas semanas ou um mês após administração das células. Em algumas modalidades, mais ou mais de cerca de 30 %, 35 %, 40 %, 50 %, 55 %, 60 % ou mais dos indivíduos que não obtiveram sucesso em uma terapia anterior com inibidor de BTK (por exemplo, ibrutinibe) e venetoclax tratados de acordo com os métodos fornecidos não exibem qualquer grau de CRS ou qualquer grau de neurotoxicidade. Em algumas modalidades, não mais de 50 % dos indivíduos tratados (por exemplo, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou mais dos indivíduos tratados que não obtiveram sucesso com um inibidor de BTK anterior (por exemplo, terapia com ibrutinibe e venetoclax) exibem uma síndrome de liberação de citocinas (CRS) superior ao grau 2 e/ou uma neurotoxicidade superior ao grau 2. Em algumas modalidades, pelo menos 50% dos indivíduos que não obtiveram sucesso em ambos os inibidores de BTK anteriores (por exemplo, ibrutinibe) terapia e venetoclax tratados de acordo com o método (por exemplo, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou mais dos indivíduos tratados) não exibem um resultado tóxico grave (por exemplo, CRS grave ou neurotoxicidade grave), tal como não exibem neurotoxicidade de grau 3 ou superior e/ou não exibem CRS grave ou não o fazem dentro de um determinado período de tempo após tratamento, tal como dentro de uma semana, duas semanas ou um mês da administração das células. Em algumas modalidades, os parâmetros avaliados para determinar determinadas toxicidades incluem eventos adversos (Adverse Events, AEs), eventos adversos emergentes do tratamento, toxicidades limitantes de dose (Dose- Limiting Toxicities, DLTs), CRS, eventos neurológicos e NT.
[00196] A administração de terapia com células T adotivas, tal como tratamento com células T que expressam receptores antigênicos quiméricos, pode induzir a efeitos ou resultados tóxicos, tais como síndrome de liberação de citocinas e neurotoxicidade. Em alguns exemplos, tais efeitos ou resultados são paralelos aos altos níveis de citocinas em circulação, os quais podem ser a base da toxicidade observada.
[00197] Em alguns aspectos, o resultado tóxico é ou está associado ou é indicativo de síndrome de liberação de citocinas (CRS) ou CRS grave (sCRS). CRS, por exemplo, sCRS, pode ocorrer em alguns casos após terapia adotiva com células T e administração a indivíduos de outros produtos biológicos. Consulte Davila et al., Sci Transl. Med. 6, 224ra25 (2014); Brentjens et al., Sci. Transl. Med. 5, 177ra38 (2013); Grupp et al., N. Engl. J. Med. 368, 1509–1518 (2013); e Kochenderfer et al., Blood 119, 2709–2720 (2012); Xu et al., Cancer Letters 343 (2014), 172-78.
[00198] Normalmente, a CRS é causada por uma resposta imune sistêmica exagerada mediada, por exemplo, por células T, células B, células NK, monócitos e/ou macrófagos. Estas células podem liberar uma grande quantidade de mediadores inflamatórios, tais como citocinas e quimiocinas. As citocinas podem desencadear uma resposta inflamatória aguda e/ou induzir a danos aos órgãos endoteliais, os quais podem resultar em vazamento microvascular, insuficiência cardíaca ou morte. A CRS grave e com risco de vida pode causar infiltração pulmonar e lesão pulmonar, insuficiência renal ou coagulação intravascular disseminada. Outras toxicidades graves com risco de vida podem incluir toxicidade cardíaca, dificuldade respiratória, toxicidade neurológica e/ou insuficiência hepática.
[00199] A CRS pode ser tratada usando terapia anti-inflamatória, tal como uma terapia anti-IL-6, por exemplo, anticorpo anti-IL-6, por exemplo, tocilizumabe, ou antibióticos ou outros agentes, conforme descrito. Resultados, sinais e sintomas da CRS são conhecidos e incluem aqueles descritos no presente documento. Em algumas modalidades, onde um determinado regime de dosagem ou efeitos de administração não afetam um determinado resultado, sinal ou sintoma associado à CRS, resultados, sinais e sintomas particulares e/ou quantidades ou graus dos mesmos podem ser especificados.
[00200] No contexto da administração de células que expressam CAR, a CRS ocorre tipicamente 6-20 dias após a infusão de células que expressam um CAR. Consulte Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172-
78. Em alguns casos, a CRS ocorre menos de 6 dias ou mais de 20 dias após a infusão de células T CAR. A incidência e o momento da CRS podem estar relacionados aos níveis basais de citocinas ou à carga tumoral no momento da infusão. Comumente, a CRS envolve níveis séricos elevados de interferon (IFN)-γ, fator de necrose tumoral (TNF)- α e/ou interleucina (IL) -2. Outras citocinas que podem ser rapidamente induzidas na CRS são IL-1β, IL-6, IL-8 e IL-10.
[00201] Resultados exemplificativos associados à CRS incluem febre, calafrios, tremores, hipotensão, dispneia, síndrome do desconforto respiratório agudo (Acute Respiratory Distress Syndrome, ARDS), encefalopatia, elevação de ALT/AST, insuficiência renal, transtornos cardíacos, hipóxia, transtornos neurológicos e morte. As complicações neurológicas incluem delírio, atividade similar à convulsão, confusão, dificuldade em encontrar palavras, afasia e/ou torpor. Outros resultados relacionados à CRS incluem fadiga, náusea, cefaleia, convulsão, taquicardia, mialgias, erupção cutânea, síndrome de vazamento vascular agudo, comprometimento da função hepática e insuficiência renal. Em alguns aspectos, a CRS está associada a um aumento em um ou mais fatores, tais como ferritina sérica, dímero-d, aminotransferases, lactato desidrogenase e triglicerídeos ou hipofibrinogenemia ou hepatoesplenomegalia. Outros sinais ou sintomas exemplificativos associados à CRS incluem instabilidade hemodinâmica, neutropenia febril, aumento da proteína C reativa sérica (CRP), alterações nos parâmetros de coagulação (por exemplo, proporção normalizada internacional (International Normalized Ratio, INR), tempo de protrombina (PTI) e/ou fibrinogênio), alterações na função cardíaca e de outros órgãos e/ou contagem absoluta de neutrófilos (Absolute Neutrophil Count, ANC).
[00202] Em algumas modalidades, os resultados associados à CRS incluem um ou mais dos seguintes: febre persistente, por exemplo, febre de uma temperatura especificada, por exemplo, maior do que ou cerca de 38 graus Celsius, durante dois ou mais, por exemplo, três ou mais, por exemplo, quatro ou mais dias ou pelo menos três dias consecutivos; febre superior a ou cerca de 38 graus Celsius; elevação de citocinas, tal como uma alteração na fold change, por exemplo, de pelo menos pelo menos 75 ou cerca de 75, comparado com os níveis pré-tratamento de pelo menos duas citocinas (por exemplo, pelo menos duas do grupo que consiste em interferon gama (IFNγ), GM -CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, fractalcina e IL-5 e/ou fator de necrose tumoral alfa (TNFα)) ou uma alteração na fold change, por exemplo, de pelo menos ou cerca de 250 de pelo menos uma destas citocinas; e/ou pelo menos um sinal clínico de toxicidade, tal como hipotensão (por exemplo, medida por pelo menos um pressor vasoativo intravenoso); hipóxia (por exemplo, níveis plasmáticos de oxigênio (PO2) inferiores a ou cerca de 90 %); e/ou um ou mais transtornos neurológicos (incluindo alterações do estado mental, obnubilação e convulsões).
[00203] Resultados relacionados à CRS exemplificativos incluem níveis séricos aumentados ou elevados de um ou mais fatores, incluindo citocinas e quimiocinas e outros fatores associados à CRS. Resultados exemplificativos incluem ainda aumentos na síntese ou secreção de um ou mais de tais fatores. Tal síntese ou secreção pode ser pela célula T ou uma célula que interage com a célula T, tal como uma célula imune inata ou célula B.
[00204] Em algumas modalidades, os fatores séricos associados à CRS ou resultados relacionados à CRS incluem citocinas inflamatórias e/ou quimiocinas, incluindo interferon gama (IFN-γ), TNF-, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, sIL-2Ra, fator estimulador de colônia de macrófagos e granulócitos (GM-CSF), proteína inflamatória de macrófagos (MIP)-1, fator de necrose tumoral alfa (TNFα), IL -6 e IL-10, IL-1β, IL-8, IL-2, MIP-1, Flt-3L, fractalcina e/ou IL-5. Em algumas modalidades, o fator ou resultado inclui a proteína C reativa (CRP). Além de ser um fator de risco precoce e facilmente mensurável para CRS, a PCR também é um marcador de expansão celular. Em algumas modalidades, os indivíduos que são medidos como tendo altos níveis de CRP, tal como ≥ 15 mg/dL, têm CRS. Em algumas modalidades, os indivíduos que são medidos como tendo altos níveis de CRP não têm CRS. Em algumas modalidades, uma medida de CRS inclui uma medida de CRP e outro fator indicativo de CRS.
[00205] Em algumas modalidades, uma ou mais citocinas inflamatórias ou quimiocinas são monitoradas antes, durante ou após tratamento com CAR. Em algumas modalidades, TNF-alfa ou IL-16 é avaliada ou monitorada em um indivíduo, tal como de acordo com os métodos no presente documento.
[00206] Critérios de CRS que parecem se correlacionar com o início de CRS para prever quais pacientes estão mais propensos a estar em risco de desenvolver sCRS foram desenvolvidos (consulte Davilla et al. Science Translational Medicine. 2014; 6 (224): 224ra25). Os fatores incluem febres, hipóxia, hipotensão, alterações neurológicas, níveis séricos elevados de citocinas inflamatórias, tal como um conjunto de sete citocinas (IFNγ, IL-5, IL-6, IL-10, Flt-3L, fractalcina e GM-CSF) cuja elevação induzida através do tratamento pode se correlacionar bem com a carga tumoral pré-tratamento e os sintomas de sCRS. Outras diretrizes sobre o diagnóstico e gerenciamento de CRS são conhecidas (consulte, por exemplo, Lee et al., Blood. 2014; 124 (2): 188-95). Em algumas modalidades, os critérios refletivos do grau de CRS são aqueles detalhados na Tabela 3 abaixo. Tabela 3: Critérios de Classificação Exemplificativos para CRS
Grau Descrição de Sintomas Sem risco de vida, requer apenas tratamento sintomático, tal 1 como antipiréticos e antieméticos (por exemplo, febre, leve náusea, fadiga, dor de cabeça, mialgias, mal-estar Requer e responde à intervenção moderada: • Necessidade de oxigênio < 40 %, ou 2 • Hipotensão responsiva a fluidos ou baixa dose de um único moderado vasopressor, ou • Toxicidade de órgão de grau 2 (por CTCAE v4.0) Requer e responde à intervenção agressiva: • Necessidade de oxigênio ≥ 40 %, ou • Hipotensão que requer alta dose de um único vasopressor (por exemplo, norepinefrina ≥ 20 µg/kg/min, dopamina ≥ 10 µg/kg/min, fenilefrina ≥ 200 µg/kg/min ou epinefrina ≥ 10 3 µg/kg/min), ou Grave • Hipotensão que requer vários vasopressores (por exemplo, vasopressina + um dos agentes acima ou combinação de vasopressores equivalentes a ≥ 20 µg/kg/min de norepinefrina), ou • Toxicidade de órgão de grau 3 ou transaminite de grau 4 (por CTCAE v4.0) 4 • Requisito de suporte ventilatório, ou Risco de • Toxicidade de órgão de grau 4 (excluindo transaminite) vida 5 Morte Fatal
[00207] Em algumas modalidades, os resultados associados à CRS grave ou CRS de grau 3 ou superior, tal como grau 4 ou superior, incluem um ou mais dos seguintes: febre persistente, por exemplo, febre de uma temperatura especificada, por exemplo, maior do que ou cerca de 38 graus Celsius, durante dois ou mais, por exemplo, três ou mais, por exemplo, quatro ou mais dias ou pelo menos três dias consecutivos;
febre superior a ou cerca de 38 graus Celsius; elevação de citocinas, tal como uma alteração na fold change, por exemplo, de pelo menos pelo menos 75 ou cerca de 75, comparado com os níveis pré-tratamento de pelo menos duas citocinas (por exemplo, pelo menos duas do grupo que consiste em interferon gama (IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, fractalcina e IL-5 e/ou fator de necrose tumoral alfa (TNFα)) ou uma alteração na fold change, por exemplo, de pelo menos ou cerca de 250 de pelo menos uma destas citocinas; e/ou pelo menos um sinal clínico de toxicidade, tal como hipotensão (por exemplo, medida por pelo menos um pressor vasoativo intravenoso); hipóxia (por exemplo, níveis plasmáticos de oxigênio (PO2) inferiores a ou cerca de 90 %); e/ou um ou mais transtornos neurológicos (incluindo alterações do estado mental, obnubilação e convulsões). Em algumas modalidades, a CRS grave inclui CRS que requer gerenciamento ou cuidados na unidade de terapia intensiva (UTI).
[00208] Em algumas modalidades, a CRS, tal como CRS grave, abrange uma combinação de (1) febre persistente (febre de pelo menos 38 graus Celsius durante pelo menos três dias) e (2) um nível sérico de CRP de pelo menos igual ou cerca de 20 mg/dL. Em algumas modalidades, a CRS abrange hipotensão que requer o uso de dois ou mais vasopressores ou insuficiência respiratória que requer ventilação mecânica. Em algumas modalidades, a dosagem de vasopressores é aumentada em uma segunda administração ou administração subsequente.
[00209] Em algumas modalidades, a CRS grave ou CRS de grau 3 abrange um aumento na alanina aminotransferase, um aumento na aspartato aminotransferase, calafrios, neutropenia febril, dor de cabeça, disfunção ventricular esquerda, encefalopatia, hidrocefalia e/ou tremor.
[00210] O método de medição ou detecção dos vários resultados pode ser especificado.
[00211] Em alguns aspectos, o resultado tóxico é ou está associado à neurotoxicidade. Em algumas modalidades, os sintomas associados a um risco clínico de neurotoxicidade incluem confusão, delírio, afasia, afasia expressiva, obnubilação, mioclonia, letargia, estado mental alterado, convulsões, atividade similar à convulsão, convulsões (opcionalmente, conforme confirmado por eletroencefalograma [EEG]), níveis elevados de beta amiloide (Aβ), níveis elevados de glutamato e níveis elevados de radicais de oxigênio. Em algumas modalidades, a neurotoxicidade é classificada com base na gravidade (por exemplo, usando uma escala de Grau 1-5 (consulte, por exemplo, Guido Cavaletti e Paola Marmiroli, Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (dezembro de 2010); National Cancer Institute - Common Toxicity Criteria, versão 4.03 (NCI-CTCAE v4.03).
[00212] Em alguns casos, os sintomas neurológicos podem ser os primeiros sintomas de sCRS. Em algumas modalidades, os sintomas neurológicos são observados como iniciando 5 a 7 dias após a infusão da terapia celular. Em algumas modalidades, a duração das alterações neurológicas pode variar a partir de 3 a 19 dias. Em alguns casos, a recuperação das alterações neurológicas ocorre após a resolução de outros sintomas de sCRS. Em algumas modalidades, o tempo ou grau de resolução das alterações neurológicas não é acelerado através do tratamento com anti-IL-6 e/ou esteroide(s).
[00213] Em algumas modalidades, considera-se que um indivíduo desenvolve "neurotoxicidade grave" em resposta ou secundária à administração de uma terapia celular ou dose de células da mesma se, após administração, o indivíduo exibir sintomas que limitam o autocuidado (por exemplo tomar banho, vestir-se e despir-se, alimentar- se, usar o banheiro, tomar medicamentos) dentre: 1) sintomas de neuropatia motora periférica, incluindo inflamação ou degeneração dos nervos motores periféricos; 2) sintomas de neuropatia sensorial periférica, incluindo inflamação ou degeneração dos nervos sensoriais periféricos, disestesia, tal como distorção da percepção sensorial, resultando em uma sensação anormal e desagradável, neuralgia, tal como sensação de dor intensa ao longo de um nervo ou grupo de nervos e/ou parestesia, tais como transtornos funcionais dos neurônios sensoriais, resultando em sensações cutâneas anormais de formigamento, dormência, pressão, frio e calor na ausência de estímulo. Em algumas modalidades, a neurotoxicidade grave inclui neurotoxicidade com um grau de 3 ou mais, tal como apresentado na Tabela 4. Tabela 4: Critérios de Classificação Exemplificativos para Neurotoxicidade Grau Descrição de Sintomas 1 Assintomático Assintomático ou sintomas leves ou leve Presença de sintomas que limitam as atividades 2 instrumentais da vida diária (ADL), tais como preparar Moderado refeições, comprar mantimentos ou roupas, usar o telefone, administrar dinheiro Presença de sintomas que limitam a ADL para 3 autocuidado, tais como tomar banho, vestir-se e despir-se, Grave alimentar-se, usar o banheiro, tomar medicamentos 4 Sintomas que ameaçam a vida e que requerem Risco de Vida intervenção urgente 5 Morte Fatal
[00214] Em algumas modalidades, os métodos reduzem os sintomas associados à CRS ou neurotoxicidade comparado com outros métodos. Em alguns aspectos, os métodos fornecidos reduzem os sintomas, resultados ou fatores associados à CRS, incluindo sintomas, resultados ou fatores associados à CRS grave ou CRS de grau 3 ou superior, comparado com outros métodos. Por exemplo, os indivíduos tratados de acordo com os presentes métodos podem não ser detectáveis e/ou ter sintomas, resultados ou fatores reduzidos de CRS, por exemplo, CRS grave ou CRS de grau 3 ou superior, tal como qualquer descrito, por exemplo, apresentado, na Tabela 3. Em algumas modalidades, os indivíduos tratados de acordo com os presentes métodos podem ter sintomas reduzidos de neurotoxicidade, tais como fraqueza ou dormência dos membros, perda de memória, visão e/ou intelecto, comportamentos obsessivos e/ou compulsivos incontroláveis, delírios, dor de cabeça, problemas cognitivos e comportamentais, incluindo perda de controle motor, deterioração cognitiva e disfunção do sistema nervoso autônomo e disfunção sexual, comparado com indivíduos tratados através de outros métodos. Em algumas modalidades, os indivíduos tratados de acordo com os presentes métodos podem ter sintomas reduzidos associados à neuropatia motora periférica, neuropatia sensorial periférica, disetesia, neuralgia ou parestesia.
[00215] Em algumas modalidades, os métodos reduzem os resultados associados à neurotoxicidade, incluindo danos ao sistema nervoso e/ou cérebro, tal como a morte de neurônios. Em alguns aspectos, os métodos reduzem o nível de fatores associados à neurotoxicidade, tais como beta amiloide (Aβ), glutamato e radicais de oxigênio.
[00216] Em algumas modalidades, o resultado da toxicidade é uma toxicidade limitante da dose (DLT). Em algumas modalidades, o resultado tóxico é uma toxicidade limitante da dose. Em algumas modalidades, o resultado tóxico é a ausência de uma toxicidade limitante da dose. Em algumas modalidades, uma toxicidade limitante de dose (DLT) é definida como qualquer toxicidade de grau 3 ou superior, conforme avaliado por quaisquer diretrizes conhecidas ou publicadas para avaliar a toxicidade específica, tal como qualquer uma descrita acima e incluindo o Common Terminology Criteria for Adverse Events (CTCAE) versão 4.0 do National Cancer Institute (NCI).
[00217] Em alguns aspectos, uma DLT pode ser descrita como quaisquer AEs de grau 4 ou 5 emergentes do tratamento, exceto aqueles listados nas exceções abaixo; quaisquer EAs emergentes do tratamento de grau 3 que não são reversíveis para grau ≤ 2 dentro de 7 dias, exceto aqueles listados nas exceções abaixo; quaisquer crises de grau 3 emergentes do tratamento que não são reversíveis para grau ≤ 2 dentro de 3 dias; e qualquer grau de toxicidade autoimune emergente do tratamento ≥ 3, com exceção da aplasia de células B (a qual é um risco esperado associado à administração de células manipuladas); as exceções listadas abaixo não são consideradas DLTs: qualquer AE emergente do tratamento que é claramente não relacionado à administração das células manipuladas (por exemplo, acidente com veículo motorizado); toxicidades infusionais de grau 4 que são reversíveis para grau ≤ 2 em 8 horas; febre de grau 3 ou 4 ou neutropenia febril por ≤ 2 semanas; transaminite de grau 4 que é considerada um sintoma de CRS; transaminite de grau 3 por ≤ 2 semanas; dor óssea de grau 3 em virtude de expansão das células T nos compartimentos da medula por ≤ 2 semanas; TLS de grau 3 ou 4 por ≤ 7 dias; hipotensão de grau 3 ou 4 (sem outros sintomas de CRS) que requer um único vasopressor para suporte que é reversível para grau < 3 em ≤ 72 horas; CRS de grau 3 ou 4 com hipotensão que requer apenas um único vasopressor para suporte (sem necessidade de intubação) que é reversível para grau < 3 em ≤ 72 horas ou CRS de grau 3 com gravidade com base em transaminite de grau 4; encefalopatia de grau 3 ou 4 por ≤ 7 dias que reverte para o valor basal em ≤ 14 dias a partir do início do evento de grau ≥ 3; calafrios de grau 3; linfopenia de grau 3 ou 4; leucopenia grau 3 ou 4; anormalidades eletrolíticas assintomáticas de grau 3 ou 4 que são reversíveis com reposição; trombocitopenia de grau 3 ou 4; anemia de grau 3 ou 4; e aplasia de células B de grau 3 ou 4 e hipogamaglobulinemia.
[00218] Em algumas modalidades, a baixa taxa, risco ou probabilidade de desenvolver uma toxicidade, por exemplo, CRS ou neurotoxicidade ou CRS grave ou neurotoxicidade, por exemplo, CRS de grau 3 ou superior, ou neurotoxicidade, observada com a administração de uma dose de células T de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos permite a administração da terapia celular em um regime ambulatorial. Em algumas modalidades, a administração da terapia celular, por exemplo, dose de células T (por exemplo, células CAR + T) de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos, é realizada em um regime ambulatorial ou não requer admissão do indivíduo ao hospital, tal como admissão para o hospital que requer pernoite.
[00219] Em alguns aspectos, os indivíduos que recebem a terapia celular, por exemplo dose de células T (por exemplo, células CAR+ T) de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos, incluindo indivíduos tratados em um regime ambulatorial, não recebem uma intervenção para o tratamento de qualquer toxicidade antes ou com administração da dose de células, a menos ou até que o indivíduo exiba um sinal ou sintoma de uma toxicidade, tal como de uma neurotoxicidade ou CRS. Agentes exemplificativos para tratar, retardar, atenuar ou melhorar uma toxicidade são descritos na Seção II.
[00220] Em algumas modalidades, se um indivíduo recebeu a terapia celular, por exemplo, dose de células T (por exemplo, células CAR+ T), incluindo indivíduos tratados em um regime ambulatorial, exibe uma febre que o indivíduo recebe ou é instruído a receber ou administrar um tratamento para reduzir a febre. Em algumas modalidades, a febre no indivíduo é caracterizada como uma temperatura corporal do indivíduo que é (ou é medida em) igual ou acima de um determinado limite ou nível de temperatura. Em alguns aspectos, a temperatura limite é aquela associada a pelo menos febre baixa, pelo menos febre moderada e/ou pelo menos febre alta. Em algumas modalidades, a temperatura limite é uma temperatura ou faixa particular. Por exemplo, a temperatura limite pode ser igual ou cerca de ou pelo menos igual ou cerca de 38, 39, 40, 41 ou 42 graus Celsius e/ou pode estar em uma faixa de ou cerca de 38 graus Celsius a ou cerca de 39 graus Celsius, uma faixa de ou cerca de 39 graus Celsius a ou cerca de 40 graus Celsius, uma faixa de ou cerca de 40 graus Celsius a ou cerca de 41 graus ou uma faixa de ou cerca de 41 graus Celsius a ou cerca de 42 graus Celsius.
[00221] Em algumas modalidades, o tratamento concebido para reduzir a febre inclui o tratamento com um antipirético. Um antipirético pode incluir qualquer agente, por exemplo, composto, composição ou ingrediente, que reduza a febre, tal como um de qualquer número de agentes conhecidos por ter efeitos antipiréticos, tais como NSAIDs (tais como ibuprofeno, naproxeno, cetoprofeno e nimesulida), salicilatos, tais como aspirina, salicilato de colina, salicilato de magnésio e salicilato de sódio, paracetamol, acetaminofeno, Metamizol, Nabumetona, Fenoxona, antipirina, febrífugos. Em algumas modalidades, o antipirético é acetaminofeno. Em algumas modalidades, o paracetamol pode ser administrado em uma dose de 12,5 mg/kg através da via oral ou intravenosa até a cada quatro horas. Em algumas modalidades, ele é ou compreende ibuprofeno ou aspirina.
[00222] Em algumas modalidades, se a febre é uma febre sustentada, o indivíduo recebe um tratamento alternativo para o tratamento da toxicidade, tal como qualquer um descrito na Seção II abaixo. Para indivíduos tratados em um regime ambulatorial, o indivíduo é instruído a retornar ao hospital se o indivíduo tem e/ou é determinado como tendo febre sustentada. Em algumas modalidades, o indivíduo tem e/ou é determinado ou considerado como tendo uma febre sustentada se exibe febre igual ou acima da temperatura limite relevante, e onde a febre ou temperatura corporal do indivíduo não é reduzida ou não é reduzida em ou em mais de uma quantidade especificada (por exemplo, em mais de 1°C, e geralmente não flutua em cerca de ou em mais de cerca de 0,5°C, 0,4°C, 0,3°C ou 0,2°C), após um tratamento específico, tal como um tratamento concebido para reduzir a febre, tal como o tratamento com um antipirético, por exemplo, NSAIDs ou salicilatos, por exemplo, ibuprofeno, paracetamol ou aspirina. Por exemplo, um indivíduo é considerado com febre sustentada se exibe ou foi determinado como exibindo uma febre de pelo menos 38 ou 39 graus Celsius que não é reduzida em ou não é reduzida em mais de ou cerca de 0,5°C, 0,4°C, 0,3°C ou 0,2°C ou igual ou cerca de 1%, 2%, 3%, 4% ou 5% ao longo de um período de 6 horas, ao longo de um período de 8 horas ou ao longo de um período de 12 horas ou ao longo de um período de 24 horas, mesmo após tratamento com o antipirético, tal como paracetamol. Em algumas modalidades, a dosagem do antipirético é uma dosagem normalmente eficaz em tal como indivíduo para reduzir a febre ou febre de um tipo particular, tal como febre associada a uma infecção bacteriana ou viral, por exemplo, uma infecção localizada ou sistêmica.
[00223] Em algumas modalidades, o indivíduo tem e/ou é determinado ou considerado como tendo uma febre sustentada se exibe uma febre igual ou superior a uma temperatura limite e onde a febre ou temperatura corporal do indivíduo não flutua em cerca de ou em mais de cerca de 1°C, e geralmente não flutua em cerca de ou em mais de cerca de 0,5°C, 0,4°C, 0,3°C ou 0,2°C. Tal ausência de flutuação acima de ou em um determinado valor geralmente é medida ao longo de um determinado período de tempo (tal como ao longo de um período de tempo de 24 horas, 12 horas, 8 horas, 6 horas, 3 horas ou 1 hora, o qual pode ser medido a partir do primeiro sinal de febre ou da primeira temperatura acima do limite indicado). Por exemplo, em algumas modalidades, um indivíduo é considerado ou é determinado como exibindo febre sustentada se exibe uma febre de pelo menos ou cerca de ou pelo menos a ou cerca de 38 ou 39 graus Celsius que não flutua em mais de ou cerca de 0,5 °C, 0,4 °C, 0,3 °C ou 0,2 °C durante um período de 6 horas, durante um período de 8 horas ou durante um período de 12 horas ou durante um período de 24 horas.
[00224] Em algumas modalidades, a febre é uma febre sustentada; em alguns aspectos, o indivíduo é tratado em um momento em que foi determinado que o indivíduo tinha febre sustentada, tal como dentro de uma, duas, três, quatro, cinco, seis ou menos horas de tal determinação ou da primeira de tal determinação após a terapia inicial com potencial para induzir à toxicidade, tal como terapia celular, tal como a dose de células T, por exemplo células T CAR+.
[00225] Em algumas modalidades, uma ou mais intervenções ou agentes para tratar a toxicidade, tais como terapias que têm como alvo a toxicidade, são administrados em um momento no qual ou imediatamente após o qual o indivíduo é determinado ou confirmado (tal como é primeiro determinado ou confirmado) como exibindo febre sustentada, por exemplo, conforme medido de acordo com qualquer uma das modalidades supracitadas. Em algumas modalidades, uma ou mais terapias que têm como alvo a toxicidade são administradas dentro de um determinado período de tempo de tal confirmação ou determinação, tal como dentro de 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 6 horas ou 8 horas do mesmo. E. Biomarcadores
[00226] Dentre os métodos fornecidos estão métodos de tratamento que envolvem a avaliação de um risco de desenvolvimento de toxicidade associada à terapia celular em um indivíduo que envolve a avaliação ou detecção de biomarcadores (por exemplo, analitos) ou parâmetros que estão associados à toxicidade, por exemplo, neurotoxicidade, tal como neurotoxicidade grave e/ou CRS, tal como CRS grave. Em alguns aspectos, uma terapia é administrada ao indivíduo, por exemplo, terapia de células T manipuladas, com base na avaliação. Em algumas modalidades, os biomarcadores incluem TNF- alfa (TNFα) e interleucina-16 (IL-16).
[00227] Em algumas modalidades, os métodos envolvem avaliar ou detectar a presença ou ausência de biomarcadores (por exemplo, TNFα ou IL-16) e/ou parâmetros (por exemplo, concentração, quantidade, nível ou atividade) associados a biomarcadores (por exemplo, TNFα ou IL- 16). Em alguns casos, os métodos podem incluir comparar um ou mais parâmetros com um determinado valor de referência, tal como um nível limite (também denominado de "valor limiar" no presente documento), por exemplo, aqueles associados a um risco de desenvolver toxicidade, tal como CRS ou NT e/ou toxicidade grave, por exemplo, CRS ou NT grave. Em algumas modalidades, os métodos também envolvem selecionar indivíduos para tratamento com uma terapia celular com base na avaliação da presença ou ausência do biomarcador e/ou comparação dos biomarcadores com um valor de referência ou nível limite do biomarcador. Em algumas modalidades, os métodos também envolvem administrar um agente ou terapia que pode tratar, prevenir, retardar e/ou atenuar o desenvolvimento da toxicidade,
por exemplo, com base na avaliação da presença ou ausência do biomarcador e/ou comparação do biomarcadores para um valor de referência ou nível limite do biomarcador.
[00228] Em algumas modalidades, os métodos envolvem avaliar o risco de desenvolvimento de uma toxicidade, antes e/ou após administração de uma terapia celular. Em algumas modalidades, os métodos envolvem avaliar o nível, quantidade ou concentração dos biomarcadores (por exemplo, TNFα ou IL-16) em uma amostra biológica, em que a amostra biológica é de um indivíduo que é candidato ao tratamento com a terapia celular, a dita terapia celular opcionalmente compreendendo uma dose ou composição de células geneticamente manipuladas que expressam um receptor recombinante; e a amostra biológica é obtida do indivíduo antes da administração da terapia celular e/ou a dita amostra biológica não compreende o receptor recombinante e/ou as ditas células manipuladas. Em alguns aspectos, os métodos envolvem comparar, individualmente, o nível, quantidade ou concentração do analito na amostra com um nível limite, deste modo, determinando um risco de desenvolver uma toxicidade após administração da terapia celular. Em alguns aspectos, as comparações podem ser usadas para determinar o risco de desenvolvimento de uma toxicidade após administração de uma terapia celular.
[00229] Em algumas modalidades, os métodos envolvem o ensaio de uma amostra biológica quanto ao nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa, onde na amostra biológica é de um indivíduo que é um candidato para tratamento, opcionalmente com uma terapia celular, a dita terapia celular compreendendo uma dose de células manipuladas que compreendem células T que expressam um CAR para o tratamento de uma doença ou condição, em que a amostra biológica é obtida do indivíduo antes de administrar a terapia celular e/ou a dita amostra biológica não compreende o CAR e/ou as ditas células manipuladas; e comparar o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa com um nível limite, em que: (1) se o nível, quantidade ou concentração de TNF- alfa estiver em ou acima de um nível limite, identificar o indivíduo como em risco de desenvolver uma neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular; e (2) se o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa estiver abaixo do nível limite, identificar o indivíduo como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular.
[00230] Em algumas modalidades, se o indivíduo for identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior, o método envolve ainda: (i) administrar ao indivíduo a terapia celular, opcionalmente em uma dose reduzida, opcionalmente em que (a) o método compreende ainda administrar ao indivíduo um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento da neurotoxicidade; e/ou (b) a administração da terapia celular ao indivíduo é realizada ou é especificada para ser realizada em um ambiente de internação e/ou com admissão hospitalar durante um ou mais dias; ou (ii) administrar ao indivíduo um tratamento alternativo diferente da terapia celular para tratar a doença ou condição.
[00231] Em algumas modalidades, se o indivíduo for identificado como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular: (i) o indivíduo não recebe um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade, a menos ou até que os indivíduos exibam um sinal ou sintoma de uma toxicidade, opcionalmente durante ou após o indivíduo exibir uma febre sustentada ou uma febre que é ou não foi reduzida ou não reduzido em mais de 1 °C após tratamento com um antipirético; e/ou (ii) a administração e qualquer acompanhamento são realizados em um regime ambulatorial e/ou sem internação do indivíduo em um hospital e/ou sem pernoite em um hospital e/ou sem a necessidade de internação ou pernoite em um hospital, opcionalmente, a menos ou até que o indivíduo apresente febre sustentada ou não reduzida ou não abaixou em mais de 1°C após tratamento com um antipirético.
[00232] Em algumas modalidades, o método de ensaio envolve: (a) contatar uma amostra biológica com um ou mais reagentes capazes de detectar ou que são específicos para TNF-alfa, opcionalmente em que o um ou mais reagentes compreendem um anticorpo que reconhece especificamente o TNF-alfa; e (b) detectar a presença ou ausência de um complexo que compreende um ou mais reagentes e TNF-alfa.
[00233] Em algumas modalidades, o método envolve administrar a um indivíduo uma terapia celular para o tratamento de uma doença ou condição, a dita terapia celular compreendendo uma dose de células manipuladas que compreendem células T que expressam um CAR, em que: (1) se o indivíduo tem um nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa em uma amostra biológica do indivíduo que está em ou acima de um nível limite, o indivíduo é identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular: (i) administração ao indivíduo a terapia celular em uma dose reduzida, (ii) administração adicional ao indivíduo de um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade; e/ou (iii) a administração da terapia celular ao indivíduo é realizada ou é especificada para ser realizada em um ambiente de internação e/ou com admissão hospitalar durante um ou mais dias; ou (2) se o indivíduo for selecionado ou identificado como tendo um nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa em uma amostra biológica do indivíduo que está abaixo de um nível limite, o indivíduo é identificado como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular: (i) não administrar ao indivíduo um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade, a menos ou até que os indivíduos exibam um sinal ou sintoma de uma toxicidade, opcionalmente durante ou após o indivíduo apresentar febre sustentada ou que não reduziu ou não abaixou em mais de 1 °C após tratamento com um antipirético; e/ou (ii) a administração e qualquer acompanhamento são realizados em um regime ambulatorial e/ou sem internação do indivíduo em um hospital e/ou sem pernoite em um hospital e/ou sem a necessidade de admissão ou pernoite em um hospital, opcionalmente a menos ou até que o indivíduo exiba febre sustentada ou uma febre que é ou não foi reduzida ou não abaixou em mais de 1°C após tratamento com um antipirético, em que o indivíduo é um candidato ao tratamento com a terapia celular, a dita amostra biológica obtida do indivíduo antes da administração da terapia celular e/ou a dita amostra biológica não compreende o CAR e/ou as ditas células manipuladas.
[00234] Em algumas modalidades, se o indivíduo for identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular, o método envolve administrar o agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade, em que o agente é administrado ao indivíduo simultaneamente com a terapia celular ou dentro de três dias de administração da terapia celular ao indivíduo.
[00235] Em algumas modalidades, o método inclui (a) ensaiar uma amostra biológica de um indivíduo quanto ao nível, quantidade ou concentração de IL-16, o dito indivíduo tendo recebido a administração de uma terapia celular que compreende uma dose de células manipuladas que compreendem células T que expressam um CAR para o tratamento de uma doença ou condição, em que a amostra biológica é obtida do indivíduo dentro de um, dois ou três dias após o início da administração da terapia celular; e (b) comparar o nível, quantidade ou concentração de IL-16 com um nível limite, em que: (1) se o nível, quantidade ou concentração de IL-16 estiver em ou acima de um nível limite, identificar o indivíduo como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior; e (2) se o nível, quantidade ou concentração de IL-16 estiver abaixo do nível limite, identificar o indivíduo como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior.
[00236] Em algumas modalidades, se o indivíduo for identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior, o método envolve administrar um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade. Em algumas modalidades, o ensaio envolve (a) contatar uma amostra biológica com um ou mais reagentes capazes de detectar ou que são específicos para IL-16, opcionalmente em que o um ou mais reagentes compreendem um anticorpo que reconhece especificamente a IL-16; e (b) detectar a presença ou ausência de um complexo que compreende um ou mais reagentes e IL-16. Em algumas modalidades, o método envolve, antes do ensaio, administrar a terapia celular ao indivíduo.
[00237] Em algumas modalidades, o método envolve administrar a um indivíduo identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior, um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade, o dito indivíduo tendo recebido anteriormente a administração de uma terapia celular para o tratamento de uma doença ou condição em que, em ou imediatamente antes da administração do agente, o indivíduo é selecionado ou identificado como estando em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior se o nível ou quantidade ou concentração de IL-16 em uma amostra biológica obtida do indivíduo dentro de um, dois ou três dias após o início da administração da terapia celular, estiver acima de um nível limite. Em algumas modalidades, a administração do agente é realizada em um momento em que o indivíduo exibe uma febre sustentada ou uma febre que é ou não foi reduzida ou não abaixou em mais de 1°C após tratamento com um antipirético. Em algumas modalidades, a administração da terapia celular ao indivíduo foi realizada em um regime ambulatorial e, se o nível, quantidade ou concentração de IL-16 estiver acima de um nível limite, o método compreende admissão do paciente no hospital durante um ou mais dias.
[00238] Em algumas modalidades, a amostra biológica é ou é obtida de uma amostra de sangue, plasma ou soro. Em algumas modalidades, o ensaio compreende um imunoensaio. Em algumas modalidades, é fornecida uma terapia celular para uso em um método de tratamento, em que o método compreende: ensaiar uma amostra biológica quanto ao nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa, em que a amostra biológica é de um indivíduo que é um candidato ao tratamento, opcionalmente com uma terapia celular, a dita terapia celular compreendendo uma dose de células manipuladas que compreendem células T que expressam um CAR para o tratamento de uma doença ou condição, em que a amostra biológica é obtida do indivíduo antes da administração da terapia celular e/ou a dita amostra biológica não compreende o CAR e/ou as ditas células manipuladas; comparar o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa com um nível limite, em que: (1) se o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa estiver em ou acima de um nível limite, identificar o indivíduo como em risco de desenvolver um neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular; e (2) se o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa estiver abaixo do nível limite, identificar o indivíduo como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular; e administrar ao indivíduo a terapia celular, opcionalmente em uma dose reduzida, opcionalmente em que (a) o método compreende ainda administrar ao indivíduo um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento da neurotoxicidade; e/ou (b) a administração da terapia celular ao indivíduo é realizada ou é especificada para ser realizada em um ambiente de internação e/ou com admissão hospitalar durante um ou mais dias.
[00239] Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma neurotoxicidade para uso em um método de redução da neurotoxicidade após administração de uma terapia celular, em que o método compreende: ensaiar uma amostra biológica quanto ao nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa , em que a amostra biológica é de um indivíduo que é candidato ao tratamento, opcionalmente com uma terapia celular, a dita terapia celular compreendendo uma dose de células manipuladas que compreendem células T que expressam um CAR para o tratamento de uma doença ou condição, em que a amostra biológica é obtida do indivíduo antes da administração da terapia celular e/ou a dita amostra biológica não compreende o CAR e/ou as ditas células manipuladas; comparar o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa com um nível limite, em que: (1) se o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa estiver em ou acima de um nível limite, identificar o indivíduo como em risco de desenvolver um neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular; e (2) se o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa estiver abaixo do nível limite, identificar o indivíduo como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular; e administrar ao indivíduo o agente ou outro tratamento e terapia celular, opcionalmente em uma dose reduzida, e/ou (b) a administração da terapia celular ao indivíduo é realizada ou é especificada para ser realizada em um ambiente hospitalar e/ou com internação hospitalar durante um ou mais dias.
[00240] Em algumas modalidades, é fornecida no presente documento uma terapia celular para uso em um método de tratamento, em que o método compreende administrar a um indivíduo a terapia celular, opcionalmente em uma dose reduzida, opcionalmente em que (a) o método compreende ainda administrar ao indivíduo um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento da neurotoxicidade; e/ou (b) a administração da terapia celular ao indivíduo é realizada ou é especificada para ser realizada em um ambiente de internação e/ou com admissão hospitalar durante um ou mais dias, em que o dito paciente foi identificado como em risco de desenvolver uma neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular com base em um método que compreende: ensaiar uma amostra biológica do indivíduo que é um candidato ao tratamento com uma terapia celular, a dita terapia celular compreendendo uma dose de células manipuladas que compreendem células T que expressam um CAR para o tratamento de uma doença ou condição, em que a amostra biológica é obtida do indivíduo antes da administração da terapia celular e/ou a dita amostra biológica não compreende o CAR e/ou as ditas células manipuladas quanto ao nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa, e comparar o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa com um nível limite, em que: (1) se o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa está em ou acima de um nível limite, identificar o indivíduo como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular; e (2) se o nível, quantidade ou concentração de TNF- alfa estiver abaixo do nível limite, identificar o indivíduo como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular.
[00241] Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma neurotoxicidade para uso em um método de redução da neurotoxicidade após administração de uma terapia celular, em que o método compreende: administrar a um indivíduo a terapia celular, opcionalmente em uma dose reduzida, e o agente ou outro tratamento, opcionalmente em que a administração da terapia celular ao indivíduo e do agente ou outro tratamento é realizada ou é especificada para ser realizada em ambiente hospitalar e/ou com admissão hospitalar durante um ou mais dias, em que o dito paciente foi identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular com base em um método que compreende: ensaiar uma amostra biológica do indivíduo que é um candidato ao tratamento com uma terapia celular, a dita terapia celular compreendendo uma dose de células manipuladas que compreendem células T que expressam um CAR para o tratamento de uma doença ou condição, em que a amostra biológica é obtida do indivíduo antes da administração da terapia celular e/ou a dita amostra biológica não compreende o CAR e/ou as ditas células manipuladas quanto ao nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa, e comparar o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa com um nível limite, em que: (1) se o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa estiver em ou acima de um nível limite, identificar o indivíduo como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular; e (2) se o nível, quantidade ou concentração de TNF- alfa estiver abaixo do nível limite, identificar o indivíduo como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular. II. INTERVENÇÕES OU AGENTES QUE TRATAM OU ALIVIAM OS
SINTOMAS DE TOXICIDADE
[00242] Em algumas modalidades, os métodos e artigos de manufatura fornecidos podem ser usados em relação a ou envolvem ou incluem um ou mais agentes ou tratamentos para tratar, prevenir, retardar ou atenuar o desenvolvimento de uma toxicidade. Em alguns exemplos, o agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar ou atenuar o desenvolvimento de uma toxicidade é administrado antes e/ou simultaneamente com a administração de uma composição terapêutica de células que compreende as células geneticamente manipuladas.
[00243] Em algumas modalidades, o agente, por exemplo, um agente que tem como alvo a toxicidade ou tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar ou atenuar o desenvolvimento de uma toxicidade é um esteroide, é um antagonista ou inibidor de um receptor de citocina, tal como receptor de IL-6, receptor de CD122 (receptor de IL-2Rbeta) ou CCR2 ou é um inibidor de uma citocina, tal como IL-6, MCP-1, IL-10, IFN-γ, IL-8 ou IL-18. Em algumas modalidades, o agente é um agonista de um receptor de citocina e/ou citocina, tal como TGF-β. Em algumas modalidades, o agente, por exemplo, agonista, antagonista ou inibidor, é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno, uma pequena molécula, uma proteína ou peptídeo ou um ácido nucleico.
[00244] Em algumas modalidades, um bolo de fluido pode ser empregado como uma intervenção, tal como para tratar a hipotensão associada à CRS. Em algumas modalidades, os níveis de hematócrito alvo são > 24%. Em algumas modalidades, a intervenção inclui o uso de tecnologia de resina absorvente de sangue ou filtração de plasma. Em alguns casos, a intervenção inclui diálise, plasmaferese ou tecnologias similares. Em algumas modalidades, vasopressores ou paracetamol podem ser empregados.
[00245] Em algumas modalidades, o agente pode ser administrado sequencialmente, de forma intermitente ou ao mesmo tempo ou na mesma composição terapêutica, tal como células para terapia celular adotiva. Por exemplo, o agente pode ser administrado antes, durante, simultaneamente ou após administração da imunoterapia e/ou terapia celular.
[00246] Em algumas modalidades, o agente é administrado em um momento conforme descrito no presente documento e de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos. Em algumas modalidades, o agente que tem como alvo a toxicidade é administrado em um momento que está dentro, tal como menos ou não mais de, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 dias após o início da imunoterapia e/ou terapia celular. Em algumas modalidades, o agente que tem como alvo a toxicidade é administrado em ou dentro de cerca de 1 dia, 2 dias ou 3 dias após o início da administração da imunoterapia e/ou terapia celular.
[00247] Em algumas modalidades, o agente, por exemplo, agente que tem como alvo a toxicidade, é administrado a um indivíduo após o início da administração da imunoterapia e/ou terapia celular em um momento em que o indivíduo não exibe CRS de grau 2 ou superior ou neurotoxicidade de grau 2 ou superior. Em alguns aspectos, o agente que tem como alvo a toxicidade é administrado após o início da administração da imunoterapia e/ou terapia celular em um momento em que o indivíduo não exibe CRS grave ou neurotoxicidade grave. Assim, entre o início da administração da imunoterapia e/ou terapia celular e o agente que tem como alvo a toxicidade, o indivíduo é aquele que não exibe CRS de grau 2 ou superior, tal como CRS grave, e/ou não exibe CRS de grau 2 ou superior neurotoxicidade, tal como neurotoxicidade grave.
[00248] Exemplos não limitativos de intervenções para tratar ou melhorar uma toxicidade, tal como CRS grave (sCRS) ou neurotoxicidade grave, são descritos na Tabela 5. Em algumas modalidades, a intervenção inclui tocilizumabe ou outro agente que tem como alvo a toxicidade, conforme descrito, que pode ser em um momento em que há uma febre sustentada ou persistente maior do que ou cerca de 38 °C ou maior ou maior do que cerca de 39 °C no indivíduo. Em algumas modalidades, a febre é sustentada no indivíduo por mais de 10 horas, mais de 12 horas, mais de 16 horas ou mais de 24 horas antes da intervenção. Tabela 5. Intervenções Exemplificativas Sintomas relacionados à CRS Intervenção Sugerida Acetaminofeno (12,5 mg/kg) PO/IV Febre de ≥ 38,3 °C até a cada quatro horas Febre persistente de ≥ 39 °C por 10 horas que não responde ao Tocilizumabe (8-12 mg/kg) IV acetaminofeno 5-10 mg de dexametasona IV/PO Febre persistente de ≥ 39 °C após até a cada 6-12 horas com tocilizumabe antipiréticos contínuos Recorrência dos sintomas 48 horas Tocilizumabe (8-12 mg/kg) IV após a dose inicial de tocilizumabe Bolo de fluido, hematócrito alvo > Hipotensão 24% Hipotensão persistente/recorrente após bolo de fluido inicial (dentro de Tocilizumabe (8-12 mg/kg) IV 6 horas)
Uso de pressores de baixa dose 5-10 mg de dexametasona IV/PO para hipotensão por mais tempo do até a cada 6 horas com uso que 12 horas contínuo de pressores Início de pressores em dose mais 5-10 mg de dexametasona IV/PO alta ou adição de um segundo até a cada 6 horas com uso pressor para hipotensão contínuo de pressores Início da suplementação de Tocilizumabe (8-12 mg/kg) IV oxigênio 5-10 mg de dexametasona IV/PO Aumento do suporte respiratório até a cada 6 horas com uso com preocupação de intubação contínuo de pressores Recorrência/persistência dos sintomas para os quais tocilizumabe Tocilizumabe (8-12 mg/kg) IV foi administrado ≥ 48 horas após a dose inicial ter sido administrada
[00249] Em alguns casos, o agente ou terapia ou intervenção, por exemplo, agente que tem como alvo a toxicidade, é administrado individualmente ou é administrado como parte de uma composição ou formulação, tal como uma composição ou formulação farmacêutica, conforme descrito no presente documento. Assim, o agente individualmente ou como parte de uma composição farmacêutica pode ser administrado através da via intravenosa ou oral ou através de qualquer outra via de administração aceitável conhecida ou conforme descrito no presente documento.
[00250] Em algumas modalidades, a dosagem do agente ou a frequência de administração do agente em um regime de dosagem é reduzida comparado com a dosagem do agente ou sua frequência em um método em que um indivíduo é tratado com o agente após CRS ou neurotoxicidade de grau 2 ou superior, tal como após CRS grave, por exemplo, de grau 3 ou superior, ou após neurotoxicidade grave, por exemplo, de grau 3 ou superior, ter sido desenvolvida ou diagnosticada
(por exemplo, após sinais físicos ou sintomas de CRS ou neurotoxicidade de grau 3 ou superior se manifestarem). Em algumas modalidades, a dosagem do agente ou a frequência de administração do agente em um regime de dosagem é reduzida comparado com a dosagem do agente ou frequência do mesmo em um método em que um indivíduo é tratado para CRS ou neurotoxicidade mais de 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 1 semana, 2 semanas, três semanas ou mais após administração da imunoterapia e/ou terapia celular. Em algumas modalidades, a dosagem é reduzida em mais ou mais de cerca de 1,2 vezes, 1,5 vezes, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes ou mais. Em algumas modalidades, a dosagem é reduzida em mais ou cerca de 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50%, 60 %, 70 %, 80 %, 90 % ou mais. Em algumas modalidades, a frequência de dosagem é reduzida, tal como o número de doses diárias é reduzido ou o número de dias de dosagem é reduzido. A. Esteroide
[00251] Em algumas modalidades, o agente, por exemplo, agente que tem como alvo a toxicidade, que trata e/ou que previne, retarda ou atenua o desenvolvimento ou o risco de desenvolver uma toxicidade para uma imunoterapia e/ou terapia celular, é um esteroide, por exemplo, corticosteroide. Os corticosteroides geralmente incluem glicocorticoides e mineralocorticoides.
[00252] Qualquer corticosteroide, por exemplo, glucocorticoide, pode ser usado nos métodos fornecidos no presente documento. Em algumas modalidades, os glicocorticoides incluem glicocorticoides sintéticos e não sintéticos. Glicocorticoides exemplificativos incluem, porém sem limitações: alclometasonas, algestonas, beclometasonas (por exemplo, dipropionato de beclometasona), betametasonas (por exemplo, 17- valerato de betametasona, acetato de betametasona sódica, fosfato de betametasona sódica, valerato de betametasona), budesonidas,
clobetasóis (por exemplo, propionato de clobetasol), clobetasonas, clocortolonas (por exemplo, pivalato de clocortolona), cloprednóis, corticosteronas, cortisonas e hidrocortisonas (por exemplo, acetato de hidrocortisona), cortivazóis, deflazacortes, desonidas, desoximetasonas, dexametasonas (por exemplo, 21-fosfato de dexametasona, acetato de dexametasona, fosfato de dexametasona sódica), diflorasonas (por exemplo, diacetato de diflorasona), diflucortolonas, difluprednatos, enoxolonas, fluazacortes, flucloronidas, fludrocortisonas (por exemplo, acetato de fludrocortisona), flumetasonas (por exemplo, pivalato de flumetasona), flunisolidas, fluocinolonas (por exemplo, fluocinolona acetonida), fluocinonidas, fluocortinas, fluocortolonas, fluorometolonas (por exemplo, acetato de fluorometolona), fluperolonas (por exemplo, acetato de fluperolona), fluprednidenos, fluprednisolonas, flurandrenolidas, fluticasonas (por exemplo, propionato de fluticasona), formocortais, halcinonidas, halobetasóis, halometasonas, halopredonas, hidrocortamatos, hidrocortisonas (por exemplo, 21-butirato de hidrocortisona, aceponato de hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, buteprato de hidrocortisona, butirato de hidrocortisona, cipionato de hidrocortisona, hemissuccinato de hidrocortisona, probutato de hidrocortisona, fosfato de hidrocortisona sódica, succinato de hidrocortisona sódica, valerato de hidrocortisona), etabonato de loteprednol, mazipredonas, medrisonas, meprednisonas, metilprednisolonas (aceponato de metilprednisolona, acetato de metilprednisolona, hemissuccinato de metilprednisolona, succinato de metilprednisolona sódica), mometasonas (por exemplo, furoato de mometasona), parametasonas (por exemplo, acetato de parametasona), prednicarbatos, prednisolonas (por exemplo, 25-dietilaminoacetato de prednisolona, fosfato de prednisolona sódica, 21-hemissuccinato de prednisolona, acetato de prednisolona; farnesilato de prednisolona, hemissuccinato de prednisolona, prednisolona-21 (beta-D-glucuronida), metassulfobenzoato de prednisolona, esteaglato de prednisolona, tebutato de prednisolona, tetra-hidroftalato de prednisolona), prednisonas, prednivais, prednilidenos, rimexolonas, tixocortóis, triancinolonas (por exemplo, triancinolona acetonida, triancinolona benetonida, triancinolona hexacetonida, 21-palmitato de triancinolona acetonida, diacetate de triancinolona). Estes glucocorticoides e os sais dos mesmos são discutitos em detalhes, por exemplo, em Remington’s Pharmaceutical Sciences, A. Osol, ed., Mack Pub. Co., Easton, Pa. (16ª ed. 1980).
[00253] Em alguns exemplos, o glicocorticoide é selecionado a partir de cortisonas, dexametasonas, hidrocortisonas, metilprednisolonas, prednisolonas e prednisonas. Em um exemplo particular, o glicocorticoide é dexametasona.
[00254] Em algumas modalidades, o agente é um corticosteroide e é administrado em uma quantidade que é terapeuticamente eficaz para tratar, melhorar ou reduzir um ou mais sintomas de uma toxicidade para uma imunoterapia e/ou uma terapia celular, tal como CRS ou neurotoxicidade. Em algumas modalidades, os indicadores de melhoria ou tratamento bem-sucedido incluem a determinação da falha em manifestar uma pontuação relevante na escala de graduação de toxicidade (por exemplo, escala de graduação de CRS ou neurotoxicidade), tal como uma pontuação menor do que 3 ou uma mudança na classificação ou gravidade na escala de classificação, conforme discutido no presente documento, tal como uma mudança de uma pontuação de 4 para uma pontuação de 3 ou uma mudança de uma pontuação de 4 para uma pontuação de 2, 1 ou 0.
[00255] Em alguns aspectos, o corticosteroide é fornecido em uma dose terapeuticamente eficaz. A concentração terapeuticamente eficaz pode ser determinada empiricamente testando em sistemas in vitro ou in vivo conhecidos (por exemplo, modelo animal). Por exemplo, a quantidade de um corticosteroide selecionado a ser administrado para melhorar os sintomas ou efeitos adversos de uma toxicidade para uma imunoterapia e/ou uma terapia celular, tal como CRS ou neurotoxicidade, pode ser determinada por meio de técnicas clínicas padrão. Além disso, modelos animais podem ser empregados para ajudar a identificar as faixas de dosagem ideais. A dosagem precisa, a qual pode ser determinada empiricamente, pode depender da preparação terapêutica particular, do regime e esquema de dosagem, da via de administração e da gravidade da doença.
[00256] O corticosteroide pode ser administrado em qualquer quantidade que seja eficaz para melhorar um ou mais sintomas associados à toxicidade, tal como CRS ou neurotoxicidade. O corticosteroide, por exemplo, glucocorticoide, pode ser administrado, por exemplo, em uma quantidade entre ou cerca de 0,1 e 100 mg, por dose, 0,1 a 80 mg, 0,1 a 60 mg, 0,1 a 40 mg, 0,1 a 30 mg, 0,1 a 20 mg, 0,1 a 15 mg, 0,1 a 10 mg, 0,1 a 5 mg, 0,2 a 40 mg, 0,2 a 30 mg, 0,2 a 20 mg, 0,2 a 15 mg, 0,2 a 10 mg, 0,2 a 5 mg, 0,4 a 40 mg, 0,4 a 30 mg, 0,4 a 20 mg, 0,4 a 15 mg, 0,4 a 10 mg, 0,4 a 5 mg, 0,4 a 4 mg, 1 a 20 mg, 1 a 15 mg ou 1 a 10 mg a um ser humano adulto de 70 kg. Normalmente, o corticosteroide, tal como um glicocorticoide, é administrado em uma quantidade entre ou cerca de 0,4 e 20 mg, por exemplo ou cerca de 0,4 mg, 0,5 mg, 0,6 mg, 0,7 mg, 0,75 mg, 0,8 mg, 0,9 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg, 10 mg, 11 mg, 12 mg, 13 mg, 14 mg, 15 mg, 16 mg, 17 mg, 18 mg, 19 mg ou 20 mg por dose para um ser humano adulto médio.
[00257] Em algumas modalidades, o corticosteroide pode ser administrado, por exemplo, em uma dosagem de ou cerca de 0,001 mg/kg (do indivíduo), 0,002 mg/kg, 0,003 mg/kg, 0,004 mg/kg, 0,005 mg/kg, 0,006 mg/kg, 0,007 mg/kg, 0,008 mg/kg, 0,009 mg/kg, 0,01 mg/kg, 0,015 mg/kg, 0,02 mg/kg, 0,025 mg/kg, 0,03 mg/kg, 0,035 mg/kg, 0,04 mg/kg, 0,045 mg/kg, 0,05 mg/kg, 0,055 mg/kg, 0,06 mg/kg, 0,065 mg/kg, 0,07 mg/kg, 0,075 mg/kg, 0,08 mg/kg, 0,085 mg/kg, 0,09 mg/kg, 0,095 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,15 mg/kg, 0,2 mg/kg, 0,25 mg/kg, 0,30 mg/kg, 0,35 mg/kg, 0,40 mg/kg, 0,45 mg/kg, 0,50 mg/kg, 0,55 mg/kg, 0,60 mg/kg, 0,65 mg/kg, 0,70 mg/kg, 0,75 mg/kg, 0,80 mg/kg, 0,85 mg/kg, 0,90 mg/kg, 0,95 mg/kg, 1 mg/kg, 1,05 mg/kg, 1,1 mg/kg, 1,15 mg/kg, 1,20 mg/kg, 1,25 mg/kg, 1,3 mg/kg, 1,35 mg/kg ou 1,4 mg/kg a um ser humano adulto médio que pesa, tipicamente, cerca de 70 kg a 75 kg.
[00258] O corticosteroide ou glucocorticoide, por exemplo, dexametasona, pode ser administrado através da via oral (comprimidos, líquido ou concentrado líquido), PO, através da via intravenosa (IV), intramuscular ou através de qualquer outra via conhecida ou descrita no presente documento (por exemplo, em relação a formulações farmacêuticas). Em alguns aspectos, o corticosteroide é administrado em bolus e, em outros aspectos, pode ser administrado ao longo de um período de tempo.
[00259] Em alguns aspectos, o glicocorticoide pode ser administrado durante um período de mais de um dia, tal como durante dois dias, ao longo de 3 dias ou ao longo de 4 ou mais dias. Em algumas modalidades, o corticosteroide pode ser administrado uma vez por dia, duas vezes por dia ou três vezes ou mais por dia. Por exemplo, o corticosteroide, por exemplo, dexametasona pode, em alguns exemplos, ser administrado a 10 mg (ou equivalente) IV duas vezes por dia durante três dias.
[00260] Em algumas modalidades, a dosagem de corticosteroide, por exemplo, glicocorticoide, é administrada em dosagens sucessivamente mais baixas por tratamento. Portanto, em alguns destes regimes de tratamento, a dose de corticosteroide é reduzida. Por exemplo, o corticosteroide pode ser administrado em uma dose inicial (ou dose equivalente, tal como com referência à dexametasona) de 4 mg, e a cada administração sucessiva a dose pode ser reduzida, de modo que a dose seja de 3 mg para a próxima administração, 2 mg para a próxima administração e 1 mg para a próxima administração.
[00261] Em geral, a dose de corticosteroide administrada depende do corticosteroide específico, uma vez que há uma diferença na potência entre os diferentes corticosteroides. Tipicamente, entende-se que os fármacos variam quanto à potência e que as doses podem, portanto, variar, a fim de obter efeitos equivalentes. A Tabela 6 mostra a equivalência em termos de potência para vários glicocorticoides e vias de administração. A potência equivalente na dosagem clínica é bem conhecida. Informações relacionadas à dosagem de esteroides equivalentes (de maneira não cronoterapêutica) podem ser encontradas no British National Formulary (BNF) 37, março de 1999. Tabela 6: Administração de Glicocorticoide Potência de Glucocorticoide (Via) Equivalência Hidrocortisona (IV ou PO) 20 Prednisona 5 Prednisolona (IV ou PO) 5 Acetato de metilprednisolona sódica (IV) 4 Dexametasona (IV ou PO) 0,5-0,75
[00262] Assim, em algumas modalidades, o esteroide é administrado em uma quantidade de dosagem equivalente de ou de cerca de 1,0 mg a 20 mg de dexametasona por dia, tal como 1,0 mg a 15 mg de dexametasona por dia, 1,0 mg a 10 mg de dexametasona por dia, 2,0 mg a 8 mg de dexametasona por dia ou 2,0 mg a 6,0 mg de dexametasona por dia, cada inclusive. Em alguns casos, o esteroide é administrado em uma dose equivalente de ou cerca de 4 mg ou igual ou cerca de 8 mg de dexametasona por dia.
[00263] Em algumas modalidades, o esteroide é administrado se a febre persistir após tratamento com tocilizumabe. Por exemplo, em algumas modalidades, a dexametasona é administrada através da via oral ou intravenosa em uma dosagem de 5-10 mg a cada 6-12 horas com febre contínua. Em algumas modalidades, o tocilizumabe é administrado simultaneamente ou após a suplementação de oxigênio. B. Inibidor de Células Microgliais
[00264] Em algumas modalidades, o inibidor na terapia combinada é um inibidor da atividade de uma célula microglial. Em algumas modalidades, a administração do inibidor modula a atividade da microglia. Em algumas modalidades, o inibidor é um antagonista que inibe a atividade de uma via de sinalização na microglia. Em algumas modalidades, o inibidor da microglia afeta a homeostase, sobrevivência e/ou proliferação da microglia. Em algumas modalidades, o inibidor tem como alvo a via de sinalização ao CSF1R. Em algumas modalidades, o inibidor é um inibidor de CSF1R. Em algumas modalidades, o inibidor é uma pequena molécula. Em alguns casos, o inibidor é um anticorpo.
[00265] Em alguns aspectos, a administração do inibidor resulta em um ou mais efeitos selecionados a partir de uma alteração na homeostase e viabilidade microglial, uma diminuição ou bloqueio da proliferação de células microgliais, uma redução ou eliminação de células microgliais, uma redução na ativação microglial, uma redução na produção de óxido nítrico da microglia, uma redução na atividade da óxido nítrico sintase na microglia ou proteção dos neurônios motores afetados pela ativação microglial. Em algumas modalidades, o agente altera o nível de um biomarcador sérico ou sanguíneo de inibição de CSF1R ou uma diminuição no nível de colágeno urinário tipo 1 N- telopeptídeo reticulado (NTX) comparado com um momento imediatamente antes do início do administração do inibidor. Em algumas modalidades, a administração do agente inibe transitoriamente a atividade da atividade da microglia e/ou em que a inibição da atividade da microglia não é permanente. Em algumas modalidades, a administração do agente inibe transitoriamente a atividade de CSF1R e/ou em que a inibição da atividade de CSF1R não é permanente.
[00266] Em algumas modalidades, o agente que reduz a atividade das células microgliais é uma pequena molécula, peptídeo, proteína, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, um mimético de anticorpo, um aptâmero ou uma molécula de ácidos nucleicos. Em algumas modalidades, o método envolve administrar um inibidor da atividade da microglia. Em algumas modalidades, o agente é um antagonista que inibe a atividade de uma via de sinalização na microglia. Em algumas modalidades, o agente que reduz a atividade das células microgliais afeta a homeostase, sobrevivência e/ou proliferação microglial.
[00267] Em algumas modalidades, o agente que reduz a ativação das células microgliais é selecionado a partir de um agente anti- inflamatório, um inibidor de NADPH oxidase (NOX2), um bloqueador do canal de cálcio, um bloqueador do canal de sódio, inibidor de GM-CSF, inibidor de CSF1R, se liga especificamente ao CSF-1, se liga especificamente à IL-34, inibe a ativação do fator nuclear capa B (NF- κB), ativa um receptor CB2 e/ou é um agonista de CB2, um inibidor de fosfodiesterase, inibe o microRNA-155 (miR-155), regula positivamente o microRNA-124 (miR-124), inibe a produção de óxido nítrico na microglia, inibe a sintase do óxido nítrico ou ativa o fator de transcrição NRF2 (também denominado de fator nuclear (derivado de eritroide 2)- like 2 ou NFE2L2).
[00268] Em algumas modalidades, o agente que reduz a atividade das células microgliais tem como alvo CSF1 (também denominado de fator estimulador de colônias de macrófagos MCSF). Em algumas modalidades, o agente que reduz a atividade das células microgliais afeta a fosforilação estimulada por MCSF do receptor M-CSF (Pryer et al., Proc Am Assoc Cancer Res, AACR Abstract Nº DDT02-2 (2009)). Em alguns casos, o agente que reduz a atividade das células microgliais é MCS110 (Publicação de Pedido de Patente Internacional Número WO2014001802; Registro de Estudo Clínico Nos: A1 NCT00757757; NCT02807844; NCT02435680; NCT01643850).
[00269] Em algumas modalidades, o agente que reduz a atividade das células microgliais é uma pequena molécula que tem como alvo a via de CSF1. Em algumas modalidades, o agente é uma pequena molécula que se liga ao CSF1R. Em algumas modalidades, o agente é uma pequena molécula que inibe a atividade da quinase CSF1R ao competir com a ligação do ATP à quinase CSF1R. Em algumas modalidades, o agente é uma pequena molécula que inibe a ativação do receptor CFS1R. Em alguns casos, a ligação do ligante CSF-1 ao CSF1R é inibida. Em algumas modalidades, o agente que reduz a atividade das células microgliais é qualquer um dos inibidores descritos na Publicação de Pedido de Patente Norte-Americana Número US20160032248.
[00270] Em algumas modalidades, o agente é um inibidor de pequena molécula selecionado a partir de PLX-3397, PLX7486, JNJ- 40346527, JNJ28312141, ARRY-382, PLX73086 (AC-708), DCC-3014, AZD6495, GW2580, Ki20227, BLZ945, PLX647, PLX5622. Em algumas modalidades, o agente é qualquer um dos inibidores descritos em Conway et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 102 (44): 16078-83 (2005); Dagher et al., Journal of Neuroinflammation, 12: 139 (2015); Ohno et al., Mol Cancer Ther. 5 (11): 2634-43 (2006); von Tresckow et al., Clin Cancer Res., 21 (8) (2015); Manthey et al., Mol Cancer Ther. (8 (11): 3151-61 (2009); Pyonteck et al., Nat Med. 19 (10): 1264–1272 (2013); Haegel et al., Cancer Res AACR Abstract Nº 288 (2015); Smith et al., Cancer Res AACR Abstract Nº 4889 (2016); Registro de Estudo de
Ensaio Clínico Nos: NCT01525602; NCT02734433; NCT02777710; NCT01804530; NCT01597739; NCT01572519; NCT01054014; NCT01316822; NCT02880371; NCT02673736; Publicações de Pedidos de Patente Internacional Números WO2008063888A2, WO2006009755A2, Publicações de Pedidos de Patente Norte- Americana Números US20110044998, US 2014/0065141 e US 2015/0119267.
[00271] Em algumas modalidades, o agente que reduz a atividade das células microgliais é 4-((2-(((1R,2R)-2-hidroxiciclo- hexil)amino)benzo[d]tiazol-6-il)óxi)-N-metilpicolinamida (BLZ945) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivados do mesmo. Em algumas modalidades, o agente é o seguinte composto: em que R1 é um alquil pirazol ou uma alquil carboxamida e R2 é uma hidroxicicloalquila, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00272] Em algumas modalidades, o agente que reduz a atividade das células microgliais é 5-((5-cloro-1H-pirrolo [2,3-b] piridin-3-il)metil)- N-((6-(trifluorometil))piridin-3-il)metil)piridin-2-amina, N-[5-[(5-cloro-1H- pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)metil]-2-piridinil]-6-(trifluorometil)-3- piridinametanamina) (PLX 3397) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivados dos mesmos. Em algumas modalidades, o agente é dicloridrato de 5-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-N-[[4- (trifluorometil)fenil]metil]-2-piridinamina (PLX647) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivados da mesma. Em algumas modalidades, o agente que reduz a atividade das células microgliais é o seguinte composto:
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, o agente que reduz a atividade das células microgliais é o seguinte composto: ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, o agente é qualquer um dos inibidores descritos na Patente Norte-Americana N° US7893075.
[00273] Em algumas modalidades, o agente que reduz a atividade das células microgliais é monocloridrato de 4-ciano-N-[2-(1-ciclo-hexen- 1-il)-4-[1-[(dimetilamino)acetil]-4-piperidinil]fenil]-1H-imidazol-2- carboxamida (JNJ28312141) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivados da mesma. Em algumas modalidades, o agente é o seguinte composto: ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, o agente é qualquer um dos inibidores descritos na Patente Norte-Americana N° US7645755.
[00274] Em algumas modalidades, o agente que reduz a atividade das células microgliais é 1H-Imidazol-2-carboxamida, ácido 5-ciano-N-
(2-(4,4-dimetil-1-ciclo-hexen-1-il)-6-(tetra-hidro-2,2,6,6-tetrametil-2H- piran-4-il)-3-piridinil)-4-ciano-1H-imidazol-2-carboxílico, N-(2-(4,4- dimetilciclo-hex-1-enil)-6-(2,2,6,6-tetrametiltetra-hidropiran-4-il)piridin- 3-il)amida, 4-ciano-N-(2-(4,4-dimetilciclo-hex-1-en-1-il)-6-(2,2,6,6- tetrametil-tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-1H-imidazol-2- carboxamida (JNJ-40346527) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivados dos mesmos. Em algumas modalidades, o agente é o seguinte composto: ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00275] Em outra modalidade, o agente que reduz a atividade das células microgliais é 5-(3-Metóxi-4-((4- metoxibenzil)óxi)benzil)pirimidina-2,4-diamina (GW2580) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivados da mesma. Em algumas modalidades, o agente é o seguinte composto: ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (Publicação de Pedido de Patente Internacional Número WO2009099553).
[00276] Em algumas modalidades, o agente que reduz a atividade das células microgliais é 4-(2,4-difluoroanilino)-7-etóxi-6-(4- metilpiperazin-1-il)quinolina-3-carboxamida (AZD6495) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivados da mesma. Em algumas modalidades, o agente é o seguinte composto:
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00277] Em algumas modalidades, o agente que reduz a atividade das células microgliais é N-{4-[(6,7-dimetóxi-4-quinolil)oxi]-2- metoxifenil}-N0-[1-(1,3-tiazol-2-il)etil] ureia (Ki20227) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivados da mesma. Em algumas modalidades, o agente é o seguinte composto: ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00278] Em algumas modalidades, o agente que reduz a ativação das células microgliais é um anticorpo que tem como alvo a via de CSF1. Em algumas modalidades, o agente é um anticorpo que se liga ao CSF1R. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CSF1R bloqueia a dimerização de CSF1R. Em algumas modalidades, o anticorpo anti- CSF1R bloqueia a interface de dimerização CSF1R que é formada pelos domínios D4 e D5 (Ries et al., Cancer Cell 25 (6): 846-59 (2014)). Em alguns casos, o agente é selecionado a partir de emactuzumabe (RG7155; RO5509554), Cabiralizumabe (FPA-008), LY-3022855 (IMC- CS4), AMG-820, TG-3003, MCS110, H27K15, 12-2D6, 2- 4A5 (Rovida e Sbarba, J Clin Cellular Immunol. 6: 6 (2015); Registro de Estudo de Ensaio Clínico Nos: NCT02760797; NCT01494688; NCT02323191;
NCT01962337; NCT02471716; NCT02526017; NCT01346358; NCT02265536; NCT01444404; NCT02713529, NCT00757757; NCT02807844; NCT02435680; NCT01643850).
[00279] Em algumas modalidades, o agente que reduz a ativação das células microgliais é um antibiótico de tetraciclina. Por exemplo, o agente afeta a concentração de IL-1b, IL-6, TNF-α ou iNOS em células da microglia (Yrjänheikki et al., PNAS 95 (26): 15769-15774 (1998); Registro de Estudo Clínico Nº: NCT01120899). Em algumas modalidades, o agente é um antagonista opioide (Younger et al., Pain Med. 10 (4): 663-672 (2009.) Em algumas modalidades, o agente reduz a neurotransmissão glutamatérgica (Patente Norte-Americana N°
5.527.814). Em algumas modalidades, o agente modula a sinalização de NFkB (Valera et al., J. Neuroinflammation 12:93 (2015); Registro de Estudo de Ensaio Clínico Nº: NCT00231140). Em algumas modalidades, o agente tem como alvo os receptores canabinoides (Ramírez et al., J. Neurosci 25 (8): 1904-13 (2005)). Em algumas modalidades, o agente é selecionado a partir de minociclina, naloxona, riluzol, lenalidomida e um canabinoide (opcionalmente WIN55 ou 212- 2).
[00280] Acredita-se que a produção de óxido nítrico a partir da microglia, em alguns casos, resulta ou aumenta a neurotoxicidade. Em algumas modalidades, o agente modula ou inibe a produção de óxido nítrico da microglia. Em algumas modalidades, o agente inibe a óxido nítrico sintase (NOS). Em algumas modalidades, o inibidor de NOS é Ronopterina (VAS-203), também conhecido como 4-amino-tetra- hidrobiopterina (4-ABH4). Em algumas modalidades, o inibidor de NOS é cindunistate, A-84643, ONO-1714, L-NOARG, NCX-456, VAS-2381, GW-273629, NXN-462, CKD-712, KD-7040 ou dissulfeto de guanidinoetildissulfeto. Em algumas modalidades, o agente é qualquer um dos inibidores descritos em Höing et al., Cell Stem Cell. 2 de novembro de 2012; 11 (5): 620-32.
[00281] Em algumas modalidades, o agente bloqueia o tráfego de células T, tal como para o sistema nervoso central. Em algumas modalidades, o bloqueio do tráfego de células T pode reduzir ou impedir que as células imunes cruzem as paredes dos vasos sanguíneos para o sistema nervoso central, incluindo o cruzamento da barreira hematoencefálica. Em alguns casos, as células T específicas para antígeno ativadas produzem citocinas pró-inflamatórias, incluindo IFN-γ e TNF, após reativação no SNC, levando à ativação de células residentes, tais como microglia e astrócitos. Consulte Kivisäkk et al., Neurology. 2 de junho de 2009; 72 (22): 1922–1930. Assim, em algumas modalidades, o sequestro de células T ativadas de células microgliais, tal como por meio do bloqueio do tráfego e/ou inibição da capacidade de tais células de cruzar a barreira hematoencefálica, pode reduzir ou eliminar a ativação microglial. Em algumas modalidades, o agente inibe moléculas de adesão em células imunes, incluindo células T. Em algumas modalidades, o agente inibe uma integrina. Em algumas modalidades, a integrina é integrina alfa-4. Em algumas modalidades, o agente é natalizumabe (Tysabri). Em algumas modalidades, o agente modula um receptor na superfície celular. Em algumas modalidades, o agente modula o receptor de esfingosina-1-fosfato (S1P), tal como S1PR1 ou S1PR5. Em algumas modalidades, o agente causa a internalização de um receptor celular, tal como um receptor de esfingosina-1-fosfato (S1P), tal como S1PR1 ou S1PR5. Em algumas modalidades, o agente é fingolimode (Gilenya) ou ozanimode (RPC- 1063).
[00282] Acredita-se que o fator de transcrição NRF2 regula a resposta antioxidante, por exemplo, ativando genes que contêm um elemento de cis atuação em sua região promotora. Um exemplo de tal elemento inclui um elemento de resposta antioxidante (Antioxidant
Response Element, ARE). Em algumas modalidades, o agente ativa NRF2. Em algumas modalidades, a ativação de NRF2 em células microgliais reduz a capacidade de resposta das células microgliais ao IFN e LPS. Em algumas modalidades, a ativação de NRF2 inibe, retarda ou reduz a desmielinização, perda axonal, morte neuronal e/ou morte de oligodendrócitos. Em algumas modalidades, o agente regula positivamente a via citoprotetora celular regulada por NRF2. Em algumas modalidades, o agente que ativa NRF2 é fumarato de dimetila (Tecfidera). Em algumas modalidades, o agente é qualquer um dos inibidores descritos Patente Norte-Americana N° 8.399.514. Em algumas modalidades, o agente é qualquer um dos inibidores descritos em Höing et al., Cell Stem Cell. 2 de novembro de 2012; 11 (5): 620-32.
[00283] Em algumas modalidades, o agente que reduz a ativação das células microgliais é (4S,4aS,5aR,12aS)-4,7-bis(dimetilamino)- 3,10,12,12a-tetra-hidróxi-1,11-dioxo-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-octa- hidrotetraceno-2-carboxamida (Minociclina) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivados da mesma. Em algumas modalidades, o agente é qualquer um dos compostos descritos na Publicação de Pedido de Patente Norte-Americana N° US20100190755. Em algumas modalidades, o agente é o seguinte composto: ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00284] Em algumas modalidades, o agente que reduz a ativação das células microgliais é 3-(7-amino-3-oxo-1H-isoindol-2-il)piperidina- 2,6-diona (lenalidomida) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivados da mesma. Em algumas modalidades, o agente é o seguinte composto:
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00285] Em algumas modalidades, o agente que reduz a ativação das células microgliais é (4R,4aS,7aR,12bS)-4a,9-di-hidróxi-3-prop-2- enil-2,4,5,6,7a,13-hexa-hidro-1H-4,12-metanobenzofuro[3,2- e]isoquinolina-7-ona (naloxona) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivados da mesma. Em algumas modalidades, o agente é qualquer um dos compostos descritos na Patente Norte-Americana N° US8247425. Em algumas modalidades, o agente é o seguinte composto: ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00286] Em algumas modalidades, o agente que reduz a ativação das células microgliais é 2-amino-6-(trifluorometóxi)benzotiazol, 6- (trifluorometóxi)benzo[d]tiazol-2-amina ou 6-(trifluorometóxi)-1,3- benzotiazol-2-amina (riluzol) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivados dos mesmos, conforme descrito na Patente Norte-Americana N° US5527814. Em algumas modalidades, o agente é o seguinte composto: ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00287] Em algumas modalidades, o agente que reduz a ativação das células microgliais é um modulador de uma via de sinalização na microglia. Em alguns casos, o agente reduz a separação da microglia. Em algumas modalidades, o agente é um inibidor de GM-CSF (CSF2). Em outras modalidades, o agente que reduz a ativação das células microgliais é um bloqueador do canal iônico. Em algumas modalidades específicas, o agente é um bloqueador do canal de cálcio. Por exemplo, em alguns exemplos específicos, o agente é um bloqueador do canal de cálcio de di-hidropiridina. Em algumas modalidades, o agente é um inibidor de microRNA. Por exemplo, o agente tem como alvo miR-155. Em algumas modalidades, o agente que reduz a ativação das células microgliais é selecionado a partir de MOR103, Nimodipine, IVIg e LNA- anti-miR-155 (Butoxsky et al., Ann Neurol., 77 (1): 75-99 (2015) e Sanz et al., Br J Pharmacol. 167 (8): 1702–1711 (2012); Winter et al., Ann Clin and Transl Neurol. 2328-9503 (2016); Registro de Estudo de Ensaio Clínico Nº: NCT01517282, NCT00750867).
[00288] Em algumas modalidades, o agente que reduz a ativação das células microgliais é 2,6-dimetil-4-(3-nitrofenil)-1,4-di-hidropiridina- 3,5-dicarboxilato de 3-(2-metoxietil)-5-propan-2-ila (nimodipina) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivados do mesmo. Em algumas modalidades, o agente é qualquer um dos inibidores descritos na Patente Norte-Americana N° US3799934. Em algumas modalidades, o agente é o seguinte composto: ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00289] Em alguns casos, o agente que reduz a ativação das células microgliais é administrado de uma forma que afeta apenas o sistema nervoso central e/ou não afeta macrófagos associados a tumores. Em algumas modalidades, o agente promove a quiescência da microglia, mas não elimina ou reduz o número de microglias. Em algumas modalidades, o método envolve a inibição da atividade da microglia especificamente no cérebro, conforme descrito em Ponomarev et al., Nature Medicine, (1): 64-70 (2011).
[00290] Agentes exemplificativos que reduzem a ativação das células microgliais e regimes de dosagem exemplificativos para a administração de tais agentes são apresentados na Tabela 7 abaixo. Tabela 7. Inibidores de Microglia e Regimes de Dosagem Exemplificativos Inibidor Tipo de Alvo(s) Regime(s) de Dosagem Exemplificativo Molécula Molecular(es) Exemplificativo(s) Comprimidos de 200 mg, duas vezes por dia durante 28 dias; administrar diariamente como regime de dose dividida, cinco níveis de dose possíveis na parte Pexidartinibe Pequena CSF1R; c-Kit; de escalonamento de (PLX3397) molécula FLT3 dose: 400 mg 5 dias com 2 dias de intervalo (esquema intermitente), 400 mg, 600 mg, 800 mg ou 1000 mg; 1000 mg/dia durante 2 semanas, então, 800 mg/dia durante 22 semanas Emactuzumabe Anticorpo 100-3000 mg uma vez a (RG1755; monoclona CSF1R cada 2 semanas RO5509554) l Infusão intravenosa Cabiralizumabe Anticorpo CSF1R durante 30 minutos a (FPA-008) cada 2 semanas Distribuição intravenosa LY-3022855 Anticorpo de 1,25 mg/kg a cada 2 monoclona CSF1R (IMC-CS4) semanas durante 6 l semanas
Inibidor Tipo de Alvo(s) Regime(s) de Dosagem Exemplificativo Molécula Molecular(es) Exemplificativo(s) 100 mg duas vezes por Pequena dia durante 12 semanas; JNJ-40346527 CSF1R molécula cápsulas de 100-1000 mg diariamente até 4 doses de 10 mg/kg de MCS110 administradas MCS110 Anticorpo MCSF (CSF1) intravenosamente a cada 4 semanas, começando no Dia 1 6 doses de 0,5-2,0 mg/kg MOR103 Anticorpo GM-CSF durante 70 dias Infusão intravenosa de Imunoglob IVIg Desconhecido 0,4 g/kg a cada mês ulina durante 6 meses Antibiótico de amplo Dose oral de 100 mg de Pequena Minocilina espectro: IL- minociclina duas vezes molécula 1b; IL-6, TNF- por dia durante 24 meses ; iNOS Pequena 4,5 mg de cápsulas de molécula Receptores cloridrato de naltrexona Naloxona opioides uma vez/dia durante 8 semanas Lenalidomida/tal Pequena Sinalização ao 100-400 mg diariamente idomida molécula NFkB Pequena Liberação de molécula glutamato por Riluzol 50 mg duas vezes por dia microglias
Canabinoides/c Pequena anabidiol molécula Oralmente 10 mg/kg/dia Receptores (por exemplo, durante 6 semanas canabinoides WIN55,212-2) (média de 700 mg/dia)
Pequena Dose inicial de 120 mg molécula tomada oralmente duas vezes/dia durante 7 dias.
Fumarato de Sinalização ao Dose aumentada para dimetila Nrf2 240 mg tomada (Tecfidera). oralmente duas vezes/dias depois
Inibidor Tipo de Alvo(s) Regime(s) de Dosagem Exemplificativo Molécula Molecular(es) Exemplificativo(s) 300 mg infundidos Natalizumabe intravenosamente Anticorpo alfa-4 integrina (Tysabri) durante uma hora a cada quatro semanas Pequena Receptores Fingolimode 0,5 mg oralmente uma molécula S1P, incluindo (Gilenya) vez por dia S1PR1 Ozanimode Pequena S1PR1 e 0,25 mg, 0,5 mg ou 1 mg (RPC-1063) molécula S1PR5 uma vez por dia C. Outros Agentes (por exemplo, agentes que têm como alvo citocinas)
[00291] Em algumas modalidades, o agente, por exemplo agente que tem como alvo a toxicidade, que trata ou melhora os sintomas de uma toxicidade em imunoterapia e/ou uma terapia celular, tal como CRS ou neurotoxicidade, é aquele que tem como alvo uma citocina, por exemplo, é um antagonista ou inibidor de uma citocina, tal como o fator beta de crescimento transformador (TGF-beta), interleucina 6 (IL-6), interleucina 10 (IL-10), IL-2, MIP1β (CCL4), TNF alfa, IL-1, interferon gama (IFN-gama) ou proteína quimioatraente de monócitos -1 (MCP-1). Em algumas modalidades, o agente que trata ou melhora os sintomas de uma toxicidade em uma imunoterapia e/ou uma terapia celular, tal como CRS ou neurotoxicidade, é aquele que tem como alvo (por exemplo, inibe ou é um antagonista de) um receptor de citocina, tal como receptor de IL-6 (IL-6R), receptor de IL-2 (IL-2R/CD25), receptor de MCP-1 (CCL2) (CCR2 ou CCR4), receptor de TGF-beta (TGF-beta I, II ou III), receptor de IFN-gama (IFNGR), receptor de MIP1β (por exemplo, CCR5), receptor de TNF alfa (por exemplo, TNFR1), receptor de IL-1 (IL1-Rα/IL-1Rβ) ou receptor de IL-10 (IL-10R).
[00292] A quantidade de um agente selecionado que trata ou melhora os sintomas de uma toxicidade de uma imunoterapia e/ou uma terapia celular, tal como CRS ou neurotoxicidade, a ser administrada para melhorar os sintomas ou efeitos adversos de uma toxicidade a uma imunoterapia e/ou uma terapia celular, tal como CRS ou neurotoxicidade, pode ser determinada por meio de técnicas clínicas padrão. Eventos adversos exemplificativos incluem, porém sem limitações, um aumento na alanina aminotransferase, um aumento na aspartato aminotransferase, calafrios, neutropenia febril, dor de cabeça, hipotensão, disfunção ventricular esquerda, encefalopatia, hidrocefalia, convulsão e/ou tremor.
[00293] Em algumas modalidades, o agente é administrado em uma quantidade de dosagem a partir de ou a partir de cerca de 30 mg a 5000 mg, tal como 50 mg a 1000 mg, 50 mg a 500 mg, 50 mg a 200 mg, 50 mg a 100 mg, 100 mg a 1000 mg, 100 mg a 500 mg, 100 mg a 200 mg, 200 mg a 1000 mg, 200 mg a 500 mg ou 500 mg a 1000 mg.
[00294] Em algumas modalidades, o agente é administrado a partir de ou a partir de cerca de 0,5 mg/kg a 100 mg/kg, tal como a partir de ou a partir de cerca de 1 mg/kg a 50 mg/kg, 1 mg/kg a 25 mg/kg, 1 mg/kg a 10 mg/kg, 1 mg/kg a 5 mg/kg, 5 mg/kg a 100 mg/kg, 5 mg/kg a 50 mg/kg, 5 mg/kg a 25 mg/kg, 5 mg/kg a 10 mg/kg, 10 mg/kg a 100 mg/kg, 10 mg/kg a 50 mg/kg, 10 mg/kg a 25 mg/kg, 25 mg/kg a 100 mg/kg, 25 mg/kg a 50 mg/kg a 50 mg/kg a 100 mg/kg. Em algumas modalidades, o agente é administrado em uma quantidade de dosagem a partir de ou a partir de cerca de 1 mg/kg a 10 mg/kg, 2 mg/kg a 8 mg/kg, 2 mg/kg a 6 mg/kg, 2 mg/kg a 4 mg/kg ou 6 mg/kg a 8 mg/kg, cada inclusive. Em alguns aspectos, o agente é administrado em uma quantidade de dosagem de pelo menos ou pelo menos cerca de 1 mg/kg, 2 mg/kg, 4 mg/kg, 6 mg/kg, 8 mg/kg, 10 mg/kg ou mais. Em algumas modalidades, o agente é administrado em uma dose de 4 mg/kg ou 8 mg/kg.
[00295] Em algumas modalidades, o agente é administrado através de injeção, por exemplo, injeções intravenosas ou subcutâneas, injeção intraocular, injeção periocular, injeção sub-retiniana, injeção intravítrea,
injeção trans-septal, injeção subescleral, injeção intracoroidal, injeção intracameral, injeção conjuntival, injeção subtenoniana, injeção retrobulbar, injeção peribulbar ou administração justascleral posterior. Em algumas modalidades, eles são administrados através da via parentérica, intrapulmonar e intranasal e, se desejado para tratamento local, administração intralesional. As infusões parentéricas incluem administração intramuscular, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal ou subcutânea.
[00296] Em algumas modalidades, a quantidade do agente é administrada cerca de ou aproximadamente duas vezes ao dia, diariamente, em dias alternados, três vezes por semana, semanalmente, a cada duas semanas ou uma vez por mês.
[00297] Em algumas modalidades, o agente é administrado como parte de uma composição ou formulação, tal como uma composição ou formulação farmacêutica, conforme descrito abaixo. Assim, em alguns casos, a composição que compreende o agente é administrada conforme descrito abaixo. Em outros aspectos, o agente é administrado individualmente e pode ser administrado através de qualquer via de administração aceitável conhecida ou uma descrita no presente documento, tal como em relação a composições e formulações farmacêuticas.
[00298] Em algumas modalidades, o agente que trata ou melhora os sintomas de uma toxicidade da imunoterapia e/ou terapia celular, tal como CRS ou neurotoxicidade, é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno. Em algumas modalidades, o agente é tocilizumabe, siltuximabe, sarilumabe, olokizumabe (CDP6038), elsilimomabe, ALD518/BMS-945429, sirukumabe (CNTO 136), CPSI-2634, ARGX- 109, FE301 ou FM101.
[00299] Em algumas modalidades, o agente é um antagonista ou inibidor de IL-6 ou do receptor de IL-6 (IL-6R). Em alguns aspectos, o agente é um anticorpo que neutraliza a atividade de IL-6, tal como um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno que se liga à IL-6 ou IL- 6R. Por exemplo, em algumas modalidades, o agente é ou compreende tocilizumabe (atlizumabe) ou sarilumabe, anticorpos anti-IL-6R. Em algumas modalidades, o agente é um anticorpo anti-IL-6R descrito na Patente Norte-Americana N° 8.562.991. Em alguns casos, o agente que tem como alvo a IL-6 é um anticorpo anti-IL-6, tal como siltuximabe, elsilimomabe, ALD518/BMS-945429, sirukumabe (CNTO 136), CPSI- 2634, ARGX-109, FE301, FM101 ou olokizumabe (CDP6038). Em alguns aspectos, o agente pode neutralizar a atividade de IL-6 inibe as interações ligante-receptor. A viabilidade deste tipo geral de abordagem foi demonstrada com um antagonista do receptor de ocorrência natural para a interleucina-1. Consulte Harmurn, C. H. et al., Nature (1990) 343: 336-340. Em alguns aspectos, o antagonista ou inibidor de IL-6/IL-6R é uma muteína de IL-6, tal como uma descrita na Patente Norte- Americana N° 5.591.827. Em algumas modalidades, o agente que é um antagonista ou inibidor de IL-6/IL-6R é uma pequena molécula, uma proteína ou peptídeo ou um ácido nucleico.
[00300] Em algumas modalidades, o agente é tocilizumabe. Em algumas modalidades, tocilizumabe é administrado como uma intervenção precoce de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos em uma dosagem de ou cerca de 1 mg/kg a 12 mg/kg, tal como igual ou cerca de 4 mg/kg, 8 mg/kg ou 10 mg/kg. Em algumas modalidades, o tocilizumabe é administrado através de infusão intravenosa. Em algumas modalidades, o tocilizumabe é administrado para uma febre persistente superior a 39 °C durante 10 horas que não responde ao paracetamol. Em algumas modalidades, uma segunda administração de tocilizumabe é fornecida se os sintomas recorrem após 48 horas da dose inicial.
[00301] Em algumas modalidades, o agente é um agonista ou estimulador de TGF-β ou um receptor de TGF-β (por exemplo, receptor de TGF-β I, II ou III). Em alguns aspectos, o agente é um anticorpo que aumenta a atividade de TGF-β, tal como um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno que se liga a oTGF-β ou um de seus receptores. Em algumas modalidades, o agente que é um agonista ou estimulador de TGF-β e/ou seu receptor é uma pequena molécula, uma proteína ou peptídeo ou um ácido nucleico.
[00302] Em algumas modalidades, o agente é um antagonista ou inibidor de MCP-1 (CCL2) ou um receptor de MCP-1 (por exemplo, receptor de MCP-1 CCR2 ou CCR4). Em alguns aspectos, o agente é um anticorpo que neutraliza a atividade de MCP-1, tal como um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno que se liga à MCP-1 ou um de seus receptores (CCR2 ou CCR4). Em algumas modalidades, o antagonista ou inibidor de MCP-1 é qualquer um descrito em Gong et al., J Exp Med. 7 de julho de 1997; 186 (1): 131–137 ou Shahrara et al., J Immunol 2008; 180: 3447-3456. Em algumas modalidades, o agente que é um antagonista ou inibidor de MCP-1 e/ou receptor da mesma (CCR2 ou CCR4) é uma pequena molécula, uma proteína ou peptídeo ou um ácido nucleico.
[00303] Em algumas modalidades, o agente é um antagonista ou inibidor de IFN-γ ou um receptor de IFN-γ (IFNGR). Em alguns aspectos, o agente é um anticorpo que neutraliza a atividade do IFN-γ, tal como um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno que se liga ao IFN-γ ou seu receptor (IFNGR). Em alguns aspectos, o anticorpo neutralizante de IFN-gama é qualquer um descrito em Dobber et al., Cell Immunol. Fevereiro de 1995; 160 (2): 185-92 ou Ozmen et al., J Immunol. 1 de abril de 1993; 150 (7): 2698-705. Em algumas modalidades, o agente que é um antagonista ou inibidor de IFN-γ/IFNGR é uma pequena molécula, uma proteína ou peptídeo ou um ácido nucleico.
[00304] Em algumas modalidades, o agente é um antagonista ou inibidor de IL-10 ou do receptor de IL-10 (IL-10R). Em alguns aspectos, o agente é um anticorpo que neutraliza a atividade de IL-10, tal como um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno que se liga à IL-10 ou IL-10R. Em alguns aspectos, o anticorpo neutralizante de IL-10 é qualquer um descrito em Dobber et al., Cell Immunol. Fevereiro de 1995; 160 (2): 185-92 ou Hunter et al., J Immunol. 1 de junho de 2005; 174 (11): 7368-75. Em algumas modalidades, o agente que é um antagonista ou inibidor de IL-10/IL-10R é uma pequena molécula, uma proteína ou peptídeo ou um ácido nucleico.
[00305] Em algumas modalidades, o agente é um antagonista ou inibidor de IL-1 ou do receptor de IL-1 (IL-1R). Em alguns aspectos, o agente é um antagonista do receptor de IL-1, o qual é uma forma modificada de IL-1R, tal como anaquinra (consulte, por exemplo, Fleischmann et al., (2006) Annals of the Reumatic Disease. 65 (8): 1006–12). Em alguns aspectos, o agente é um anticorpo que neutraliza a atividade de IL-1, tal como um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno que se liga à IL-1 ou IL-1R, tal como canaquinumabe (consulte também documento EP 2277543). Em algumas modalidades, o agente que é um antagonista ou inibidor de IL-1/IL-1R é uma pequena molécula, uma proteína ou peptídeo ou um ácido nucleico.
[00306] Em algumas modalidades, o agente é um antagonista ou inibidor de um fator de necrose tumoral (TNF) ou um receptor de fator de necrose tumoral (TNFR). Em alguns aspectos, o agente é um anticorpo que bloqueia a atividade do TNF, tal como um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno que se liga a um TNF, tal como TNFα ou seu receptor (TNFR, por exemplo, TNFRp55 ou TNFRp75). Em alguns aspectos, o agente é selecionado a partir de infliximabe, adalimumabe, certolizumabe pegol, golimumabe e etanercepte. Em algumas modalidades, o agente que é um antagonista ou inibidor de TNF/TNFR é uma pequena molécula, uma proteína ou peptídeo ou um ácido nucleico. Em algumas modalidades, o agente é uma pequena molécula que afeta o TNF, tal como a lenalidomida (consulte, por exemplo, Muller et al. (1999) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 9 (11): 1625).
[00307] Em algumas modalidades, o agente é um antagonista ou inibidor de sinalização através da Janus quinase (JAK) e duas cascatas de sinalização de Transdutor de Sinal e Ativador de Transcrição (STAT). As proteínas JAK/STAT são componentes comuns da sinalização do receptor de citocinas e citocinas. Em algumas modalidades, o agente que é um antagonista ou inibidor de JAK/STAT, tal como ruxolitinibe (consulte, por exemplo, Mesa et al. (2012) Nature Reviews Drug Discovery. 11 (2): 103-104), tofacitinibe (também conhecido como Xeljanz, Jakvinus tasocitinibe e CP-690550), Baricitinibe (também conhecido como LY-3009104, INCB-28050), Filgotinibe (G-146034, GLPG-0634), Gandotinibe (LY-2784544), Lestaurtinibe (CEP-701), Momelotinibe (GS-0387, CYT-387), Pacritinibe (SB1518) e Upadacitinibe (ABT-494). Em algumas modalidades, o agente é uma pequena molécula, uma proteína ou peptídeo ou um ácido nucleico.
[00308] Em algumas modalidades, o agente é um inibidor de quinase. Em algumas modalidades, o agente é um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTK). Em algumas modalidades, o inibidor é ou compreende ibrutinibe ou acalabrutinibe (consulte, por exemplo, Barrett et al., ASH 58th Annual Meeting San Diego, CA, 3-6 de dezembro de 2016, Abstract 654; Ruella et al., ASH 58th Annual Meeting San Diego, CA, 3-6 de dezembro de 2016, Abstract 2159). Em algumas modalidades, o agente é um inibidor, conforme descrito nas Patentes Norte-Americanas Nos 7.514.444; 8.008.309; 8.476.284; 8.497.277;
8.697.711; 8.703.780; 8.735.403; 8.754.090; 8.754.091; 8.957.079;
8.999.999; 9.125.889; 9.181.257; ou 9.296.753.
[00309] Em algumas modalidades, um dispositivo, tal como a tecnologia de resina absorvente de sangue ou filtração de plasma, pode ser usado para reduzir os níveis de citocinas. Em algumas modalidades, o dispositivo usado para reduzir os níveis de citocinas é um absorvente físico de citocinas, tal como um absorvente extracorpóreo de citocinas. Em algumas modalidades, um absorvente físico de citocinas pode ser usado para eliminar citocinas da corrente sanguínea de uma maneira extracorpórea ex vivo. Em algumas modalidades, o agente é um polímero poroso. Em algumas modalidades, o agente é CytoSorb (consulte, por exemplo, Basu et al., Indian J Crit Care Med. (2014) 18 (12): 822-824). III. RECEPTORES ANTIGÊNICOS RECOMBINANTES EXPRESSOS
PELAS CÉLULAS
[00310] Em algumas modalidades, as células para uso ou administradas em relação aos métodos fornecidos contêm ou são manipuladas para conter um receptor manipulado, por exemplo, um receptor antigênico manipulado, tal como um receptor antigênico quimérico (CAR) ou um receptor de células T (TCR). Também são fornecidas populações de tais células, composições que contêm tais células e/ou enriquecidas para tais células, tais como nas quais células de um determinado tipo, tais como células T ou células CD8+ ou CD4+, são enriquecidas ou selecionadas. Dentre as composições estão composições farmacêuticas e formulações para administração, tal como para terapia celular adotiva. Também são fornecidos métodos terapêuticos para administrar as células e composições a indivíduos, por exemplo, pacientes, de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos.
[00311] Em algumas modalidades, as células incluem um ou mais ácidos nucleicos introduzidos por meio de engenharia genética e, assim, expressam produtos recombinantes ou geneticamente modificados de tais ácidos nucleicos. Em algumas modalidades, a transferência gênica é realizada primeiro ao estimular as células, por exemplo, combinando- as com um estímulo que induz a uma resposta, tal como proliferação, sobrevivência e/ou ativação, por exemplo, conforme medido pela expressão de uma citocina ou marcador de ativação, seguido por transdução das células ativadas e expansão em cultura para números suficientes para aplicações clínicas.
[00312] As células geralmente expressam receptores recombinantes, tais como receptores antigênicos, incluindo receptores antigênicos não-TCR funcionais, por exemplo, receptores antigênicos quiméricos (CARs) e outros receptores de ligação a antígenos, tais como receptores de células T transgênicas (TCRs). Também dentre os receptores estão outros receptores quiméricos. A. Receptores Antigênicos Quiméricos (CARs)
[00313] Em algumas modalidades dos métodos e usos fornecidos, os receptores quiméricos, tais como os receptores antigênicos quiméricos, contêm um ou mais domínios que combinam um domínio de ligação a ligante (por exemplo, anticorpo ou fragmento de anticorpo) que confere especificidade por um antígeno desejado (por exemplo, antígeno tumoral) com domínios de sinalização intracelular. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular é uma porção de domínio intracelular de estimulação ou ativação, tal como um domínio de estimulação ou ativação de células T, que fornece um sinal de ativação primário ou um sinal primário. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular contém ou contém adicionalmente um domínio de sinalização coestimulador para facilitar as funções efetoras. Em algumas modalidades, os receptores quiméricos, quando geneticamente manipulados em células imunes, podem modular a atividade das células T e, em alguns casos, podem modular a diferenciação ou homeostase das células T, deste modo, resultando em células geneticamente manipuladas com longevidade, sobrevivência e/ou persistência aprimoradas in vivo, tal como para uso em métodos de terapia celular adotiva.
[00314] Receptores antigênicos exemplificativos, incluindo CARs, e métodos para a manipulação e introdução de tais receptores em células, incluem aqueles descritos, por exemplo, nas Publicações de Pedido de Patente Internacional Números WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061, Publicações de Pedido de Patente Norte-Americana Números US2002131960, US2013287748, US20130149337, Patentes Norte-Americanas Nos: 6.451.995,
7.446.190, 8.252.592, 8.339.645, 8.398.282, 7.446.179, 6.410.319,
7.453.754, 7.446.795, 7.454.791, 7.446.791 e 7.454.319, 7.446.319,
7.454.459, 7.454.459, 7.454.209, 7.446.319, 7.484.459, 7.446.209 e
7.484.319; Pedido de Patente Número EP2537416 e/ou aqueles descritos por Sadelain et al., Cancer Discov. Abril de 2013; 3 (4): 388– 398; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8 (4): e61338; Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., Outubro de 2012; 24 (5): 633-39; Wu et al., Cancer, 18 de março de 2012 (2): 160-75. Em alguns aspectos, os receptores antigênicos incluem um CAR conforme descrito na Patente Norte- Americana N° 7.446.190 e aqueles descritos na Publicação de Pedido de Patente Internacional Nº WO/2014055668 A1. Exemplos de CARs incluem CARs conforme descrito em qualquer uma das publicações supracitadas, tais como WO2014031687, US 8.339.645, US 7.446.179, US 2013/0149337, Patente Norte-Americana N° 7.446.190, Patente Norte-Americana N° 8.389.282, Kochenderfer et al., 2013, Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276 (2013); Wang et al. (2012) J. Immunother. 35 (9): 689-701; e Brentjens et al., Sci Transl Med. 2013 5 (177). Consulte também documentos WO2014031687, US 8.339.645, US 7.446.179, US 2013/0149337, Patente Norte-Americana N°
7.446.190 e Patente Norte-Americana N° 8.389.282.
[00315] Os receptores quiméricos, tais como CARs, geralmente incluem um domínio de ligação a antígeno extracelular, tal como uma porção de uma molécula de anticorpo, geralmente uma região variável de cadeia pesada (VH) e/ou região variável de cadeia leve (VL) do anticorpo, por exemplo, um fragmento de anticorpo scFv.
[00316] Em algumas modalidades, o antígeno direcionado pelo receptor é um polipeptídeo. Em algumas modalidades, é um carboidrato ou outra molécula. Em algumas modalidades, o antígeno é seletivamente expresso ou superexpresso em células da doença ou condição, por exemplo, células tumorais ou células patogênicas, comparado com células ou tecidos normais ou não-alvo. Em outras modalidades, o antígeno é expresso em células normais e/ou é expresso nas células manipuladas.
[00317] Em algumas modalidades, o antígeno direcionado pelo receptor é ou compreende um selecionado a partir de integrina αvβ6 (integrina avb6), antígeno de maturação de células B (BCMA), B7-H3, B7-H6, anidrase carbônica 9 (CA9, também conhecido como CAIX ou G250), um antígeno de câncer de testículo, antígeno de câncer/testículo 1B (CTAG, também conhecido como NY-ESO-1 e LAGE-2), antígeno carcinoembriônico (CEA), uma ciclina, ciclina A2, motivo CC ligante de quimiocina 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, sulfato de condroitina, proteoglicano 4 (CSPG4), proteína fator de crescimento epidérmico (EGFR), mutação do receptor de fator de crescimento epidérmico de tipo III (EGFR VIII), glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), efrina B2, receptor A2 de efrina (EPHa2), receptor de estrogênio, receptor Fc-like 5 (FCRL5; também conhecido como homólogo de receptor Fc 5 ou FCRH5), receptor de acetilcolina fetal (AchR fetal), uma proteína de ligação a folato (FBP), receptor alfa de folato, gangliosídeo GD2, O-acetilado GD2
(OGD2), gangliosídeo GD3, glicoproteína 100 (gp100), glipicana-3 (GPC3), receptor acoplado à proteína G de classe C, grupo 5, membro D (GPRC5D), Her2/neu (receptor de tirosina quinase erb-B2), Her3 (erb- B3), Her4 (erb-B4), dímeros de erbB, antígeno associado ao melanoma de elevado peso molecular humano (HMW-MAA), antígeno na superfície de hepatite B, antígeno de leucócito humano A1 (HLA-A1), antígeno de leucócito humano A2 (HLA-A2), receptor alfa de IL-22 (IL- 22Rα), receptor alfa 2 de IL-13 (IL-13Rα2), receptor de domínio de inserção de quinase (kdr), cadeia leve capa, molécula de adesão de células L1 (L1-CAM), epítopo CE7 de L1-CAM, repetição rica em leucina que contém 8 membros da família A (LRRC8A), Lewis Y, antígeno associado a melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MAGE-A10, mesotelina (MSLN), c-Met, citomegalovírus de murino (CMV), mucina 1 (MUC1), MUC16, ligantes de células assassinas naturais (NKG2D), membro D, grupo 2, melana A (MART-1), molécula de adesão de células neurais (NCAM), antígeno oncofetal, antígeno expresso preferencialmente em melanoma (PRAME), receptor de progesterona, um antígeno específico para próstata, antígeno de células-tronco da próstata (PSCA), antígeno de membrana específico para próstata (PSMA), Receptor Órfão 1 de Tirosina Quinase (ROR1), survivina, Glicoproteína de Trofoblasto (TPBG também conhecido como 5T4), glicoproteína associada ao tumor 72 (TAG72), proteína relacionada à tirosinase 1 (TRP1, também conhecida como TYRP1 ou gp75), proteína relacionada à tirosinase 2 (TRP2, também conhecida como dopacromo tautomerase, dopacromo delta-isomerase ou DCT), receptor de fator de crescimento endotelial vascular (VEGFR), receptor 2 de fator de crescimento endotelial vascular (VEGFR2), tumor de Wilm 1 (WT-1), um antígeno específico para patógeno ou expresso por patógeno ou um antígeno associado a uma etiqueta universal e/ou moléculas biotiniladas e/ou moléculas expressas por HIV, HCV, HBV ou outros patógenos.
Os antígenos que são alvo de receptores incluem, em algumas modalidades, antígenos associados a uma malignidade de células B, tal como qualquer um de uma série de marcadores de células B. Em algumas modalidades, o antígeno que é alvo do receptor é CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Igcapa, Iglambda, CD79a, CD79b ou CD30. Em algumas modalidades, o antígeno é ou inclui um antígeno específico para patógeno ou expresso pelo patógeno. Em algumas modalidades, o antígeno é um antígeno viral (tal como um antígeno viral de HIV, HCV, HBV, etc.), antígenos bacterianos e/ou antígenos parasitários.
[00318] Em algumas modalidades, o antígeno é CD19. Em algumas modalidades, o scFv contém uma VH e uma VL derivadas de um anticorpo ou fragmento de anticorpo específico para CD19. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de anticorpo que se liga à CD19 é um anticorpo derivado de camundongo, tal como FMC63 e SJ25C1. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de anticorpo é um anticorpo humano, por exemplo, conforme descrito na Publicação de Patente Norte-Americana N° US 2016/0152723.
[00319] Em algumas modalidades, os domínios scFv e/ou VH são derivados de FMC63. FMC63 refere-se, em geral, a um anticorpo IgG1 monoclonal de camundongo produzido contra células Nalm-1 e -16 que expressam CD19 de origem humana (Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte Typing III. 302). Em algumas modalidades, o anticorpo FMC63 compreende uma CDR-H1 e uma CDR-H2 apresentadas em SEQ ID NOS: 38 e 39, respectivamente, e uma CDR-H3 apresentada em SEQ ID NO: 40 ou 54; e uma CDR-L1 apresentada em SEQ ID NO: 35 e uma CDR-L2 apresentada em SEQ ID NO: 36 ou 55 e uma CDR- L3 apresentada em SEQ ID NO: 37 ou 56. Em algumas modalidades, o anticorpo FMC63 compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 41 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 42.
[00320] Em algumas modalidades, o scFv compreende uma cadeia leve variável que contém uma sequência de CDR-L1 de SEQ ID NO: 35, uma sequência de CDR-L2 de SEQ ID NO: 36 e uma sequência de CDR-L3 de SEQ ID NO: 37 e/ou uma cadeia pesada variável que contém uma sequência de CDR-H1 de SEQ ID NO: 38, uma sequência de CDR-H2 de SEQ ID NO: 39 e uma sequência de CDR-H3 de SEQ ID NO: 40. Em algumas modalidades, o scFv compreende uma região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 41 e uma região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 42. Em algumas modalidades, as cadeias pesadas variáveis e leves variáveis são conectadas através de um ligante. Em algumas modalidades, o ligante é apresentado em SEQ ID NO: 24. Em algumas modalidades, o scFv compreende, nesta ordem, uma VH, um ligante e uma VL. Em algumas modalidades, o scFv compreende, nesta ordem, uma VL, um ligante e uma VH. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 25 ou uma sequência que exibe pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 43 ou uma sequência que exibe pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 43.
[00321] Em algumas modalidades, o scFv é derivado de SJ25C1. SJ25C1 é um anticorpo IgG1 monoclonal de camundongo produzido contra células Nalm-1 e -16 que expressam CD19 de origem humana (Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte Typing III. 302). Em algumas modalidades, o anticorpo SJ25C1 compreende sequências de CDR-H1,
CDR-H2 e CDR-H3 apresentadas em SEQ ID NOS: 47-49, respectivamente, e sequências de CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 apresentadas em SEQ ID NOS: 44-46, respectivamente. Em algumas modalidades, o anticorpo SJ25C1 compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50 e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 51.
[00322] Em algumas modalidades, o scFv compreende uma cadeia leve variável que contém uma sequência de CDR-L1 de SEQ ID NO: 44, uma sequência de CDR-L2 de SEQ ID NO: 45 e uma sequência de CDR-L3 de SEQ ID NO: 46 e/ou uma cadeia pesada variável que contém uma sequência de CDR-H1 de SEQ ID NO: 47, uma sequência de CDR-H2 de SEQ ID NO: 48 e uma sequência de CDR-H3 de SEQ ID NO: 49. Em algumas modalidades, o scFv compreende uma região variável de cadeia pesada apresentada em SEQ ID NO: 50 e uma região variável de cadeia leve apresentada em SEQ ID NO: 51. Em algumas modalidades, a cadeia pesada variável e a cadeia leve variável são conectadas através de um ligante. Em algumas modalidades, o ligante é apresentado em SEQ ID NO: 52. Em algumas modalidades, o scFv compreende, nesta ordem, uma VH, um ligante e uma VL. Em algumas modalidades, o scFv compreende, nesta ordem, uma VL, um ligante e uma VH. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 53 ou uma sequência que exibe pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93%, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 53.
[00323] Em algumas modalidades, o receptor antigênico quimérico inclui uma porção extracelular que contém um anticorpo ou fragmento de anticorpo. Em alguns aspectos, o receptor antigênico quimérico inclui uma porção extracelular que contém o anticorpo ou fragmento e um domínio de sinalização intracelular. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento inclui um scFv.
[00324] O termo "anticorpo", no presente documento, é usado no sentido mais amplo e inclui anticorpos policlonais e monoclonais, incluindo anticorpos intactos e fragmentos de anticorpos funcionais (ligação a antígeno), incluindo fragmentos de ligação a antígeno (Fab), fragmentos F(ab')2, fragmentos Fab', fragmentos Fv, fragmentos de IgG recombinante (rIgG), regiões variáveis de cadeia pesada (VH) capazes de se ligar especificamente ao antígeno, fragmentos de anticorpo com uma única cadeia, incluindo fragmentos variáveis com uma única cadeia (scFv) e fragmentos de anticorpos com um único domínio (por exemplo, sdAb, sdFv, nanocorpo). O termo abrange formas geneticamente manipuladas e/ou de outra forma modificadas de imunoglobulinas, tais como intracorpos, pepticorpos, anticorpos quiméricos, anticorpos totalmente humanos, anticorpos humanizados e anticorpos heteroconjugados, anticorpos multiespecíficos, por exemplo, biespecíficos ou triespecíficos, diacorpos, triacorpos e tetracorpos, di- scFv em tandem, tri-scFv em tandem. A menos que indicado de outra forma, o termo "anticorpo" deve ser entendido como abrangendo fragmentos de anticorpos funcionais dos mesmos, também denominados no presente documento como "fragmentos de ligação a antígeno". O termo também abrange anticorpos intactos ou de comprimento total, incluindo anticorpos de qualquer classe ou subclasse, incluindo IgG e suas subclasses, IgM, IgE, IgA e IgD.
[00325] Os termos "região determinante de complementaridade" e "CDR", sinônimos de "região hipervariável" ou "HVR", são conhecidos, em alguns casos, por referir-se a sequências não contíguas de aminoácidos dentro de regiões variáveis de anticorpo que conferem especificidade antigênica e/ou afinidade de ligação. Em geral, há três CDRs em cada região variável de cadeia pesada (CDR-H1, CDR-H2,
CDR-H3) e três CDRs em cada região variável de cadeia leve (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3). "Regiões estruturais" e "FR" são conhecidas, em alguns casos, por referir-se às porções não CDR das regiões variáveis das cadeias pesadas e leves. Em geral, há quatro FRs em cada região variável de cadeia pesada de comprimento total (FR-H1, FR-H2, FR-H3 e FR-H4) e quatro FRs em cada região variável de cadeia leve de comprimento total (FR- L1, FR-L2, FR-L3 e FR-L4).
[00326] Os limites precisos da sequência de aminoácidos de uma dada CDR ou FR podem ser facilmente determinados usando qualquer um de uma série de esquemas bem conhecidos, incluindo aqueles descritos por Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5ª Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (esquema de numeração de "Kabat"); Al- Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 (esquema de numeração de "Chothia"); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996), " Antibody-Antigen Interactions: Contact Analysis and Binding Site Topography", J. Mol. Biol. 262, 732-745. " (Esquema de numeração "Contact"); Lefranc M.P. et al., "IMGT Unique Numbering for Immunoglobulin and T Cell Receiver Variables and Ig Superfamily V- Like Domains", Dev Comp Immunol, Janeiro de 2003; 27 (1): 55-77 (esquema de numeração "IMGT"); Honegger A. e Plückthun A., "Yet Another Numbering Scheme for Immunoglobulin Variable Domains: An Automatic Modeling and Analysis Tool", J Mol Biol, 08 de junho de 2001; 309 (3): 657-70 (esquema de numeração "Aho"); e Martin et al., "Modeling Antibody Hypervariable Loops: A Combined Algorithm", PNAS, 1989, 86 (23): 9268-9272, (esquema de numeração "AbM").
[00327] Os limites de uma determinada CDR ou FR podem variar dependendo do esquema usado para identificação. Por exemplo, o esquema de Kabat se baseia em alinhamentos estruturais, enquanto que o esquema de Chothia se baseia em informações estruturais. A numeração para os esquemas de Kabat e Chothia se baseia nos comprimentos de sequência de região de anticorpo mais comuns, com inserções acomodadas por letras de inserção, por exemplo, "30a" e eliminações aparecendo em alguns anticorpos. Os dois esquemas colocam determinadas inserções e eliminações ("indels") em posições diferentes, resultando em numeração diferencial. O esquema Contact se baseia na análise de estruturas cristalinas complexas e é similar, em muitos aspectos ,ao esquema de numeração de Chothia. O esquema AbM é um meio-termo entre as definições de Kabat e Chothia com base naquelas usadas pelo software de modelagem de anticorpos AbM da Oxford Molecular.
[00328] A Tabela 8, abaixo, lista limites de posição exemplificativos de CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3 e CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3 conforme identificado pelos esquemas de Kabat, Chothia, AbM e Contact, respectivamente. Para CDR-H1, a numeração de resíduos é listada usando os esquemas de numeração de Kabat e Chothia. FRs estão localizadas entre CDRs, por exemplo, com a FR-L1 localizada antes da CDR-L1, FR-L2 localizada entre a CDR-L1 e a CDR-L2, a FR-L3 localizada entre a CDR-L2 e a CDR-L3 e assim por diante. Deve ser observado que, uma vez que o esquema de numeração de Kabat mostrado coloca inserções em H35A e H35B, o final do loop de CDR- H1 de Chothia, quando numerado usando a convenção de numeração Kabat mostrada, varia entre H32 e H34, dependendo do comprimento do loop. Tabela 8. Limites da CDRs de Acordo com Vários Esquemas de Numeração CDR Kabat Chothia AbM Contact CDR-L1 L24--L34 L24--L34 L24--L34 L30--L36 CDR-L2 L50--L56 L50--L56 L50--L56 L46--L55 CDR-L3 L89--L97 L89--L97 L89--L97 L89--L96
CDR-H1 (numeração de H31--H35B H26--H32.34 H26--H35B H30--H35B Kabat1) CDR-H1 (numeração de H31--H35 H26--H32 H26--H35 H30--H35 Chothia2) CDR-H2 H50--H65 H52--H56 H50--H58 H47--H58 CDR-H3 H95--H102 H95--H102 H95--H102 H93--H101 1 - Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5ª Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD 2 - Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273: 927-948
[00329] Assim, a menos que especificado de outra forma, uma "CDR" ou "região determinante de complementaridade" ou CDRs individuais especificadas (por exemplo, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3), de um determinado anticorpo ou região do mesmo, tal como uma região variável do mesmo, deve ser entendida como abrangendo uma (ou a específica) região determinante de complementaridade, conforme definido por qualquer um dos esquemas supracitados ou outros esquemas conhecidos. Por exemplo, onde é afirmado que uma CDR particular (por exemplo, uma CDR-H3) contém a sequência de aminoácidos de uma CDR correspondente em uma determinada sequência de aminoácidos da região VH ou VL, deve ser entendido que tal CDR tem uma sequência da CDR correspondente (por exemplo, CDR-H3) dentro da região variável, conforme definido por qualquer um dos esquemas supracitados ou outros esquemas conhecidos. Em algumas modalidades, sequências de CDR específicas são especificadas. Sequências de CDR exemplificativas de anticorpos fornecidos são descritas usando vários esquemas de numeração, embora seja entendido que um anticorpo fornecido pode incluir CDRs conforme descrito de acordo com qualquer um dos outros esquemas de numeração supracitados ou outros esquemas de numeração conhecidos por aqueles versados na técnica.
[00330] Da mesma forma, a menos que especificado de outra forma, uma FR ou FR(s) individua(is) especificada(s) (por exemplo, FR-H1, FR- H2, FR-H3, FR-H4), de um determinado anticorpo ou região do mesmo, tal como uma variável região da mesma, deve ser entendido como abrangendo uma (ou a específica) região estrutural, conforme definido por qualquer um dos esquemas conhecidos. Em alguns casos, o esquema para identificação de uma determinada CDR, FR ou FRs ou CDRs é especificado, tal como a CDR conforme definido por meio do método de Kabat, Chothia, AbM ou Contact ou outros esquemas conhecidos. Em outros casos, é fornecida a sequência de aminoácidos particular de uma CDR ou FR.
[00331] O termo "região variável" ou "domínio variável" refere-se ao domínio de uma cadeia pesada ou leve de anticorpo que está envolvida na ligação do anticorpo ao antígeno. As regiões variáveis de cadeia pesada e cadeia leve (VH e VL, respectivamente) de um anticorpo nativo geralmente têm estruturas similares, com cada domínio compreendendo quatro regiões estruturais conservadas (FRs) e três CDRs (consulte, por exemplo, Kindt et al., Kuby Immunology, 6ª ed., WH Freeman and Co., página 91 (2007). Um único domínio VH ou VL pode ser suficiente para conferir especificidade de ligação a antígeno. Além disso, os anticorpos que se ligam a um antígeno particular podem ser isolados usando um domínio VH ou VL de um anticorpo que se liga ao antígeno para rastrear uma biblioteca de domínios VL ou VH complementares, respectivamente. Consulte, por exemplo, Portolano et al., J. Immunol. 150: 880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352: 624- 628 (1991).
[00332] Dentre os anticorpos incluídos nos CARs fornecidos estão fragmentos de anticorpos. Um "fragmento de anticorpo" ou "fragmento de ligação a antígeno" refere-se a uma molécula diferente de um anticorpo intacto que compreende uma porção de um anticorpo intacto que se liga ao antígeno ao qual o anticorpo intacto se liga. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem, porém sem limitações, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; diacorpos; anticorpos lineares; regiões variáveis de cadeia pesada (VH), moléculas de anticorpo com uma única cadeia, tais como scFvs, e anticorpos com um único domínio que compreendem apenas a região VH; e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpos. Em algumas modalidades, o domínio de ligação a antígeno nos CARs fornecidos é ou compreende um fragmento de anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma cadeia leve variável (VL). Em modalidades particulares, os anticorpos são fragmentos de anticorpos com uma única cadeia que compreendem uma região variável de cadeia pesada (VH) e/ou uma região variável de cadeia leve (VL), tais como scFvs.
[00333] O termo "região variável" ou "domínio variável" refere-se ao domínio de uma cadeia pesada ou leve de anticorpo que está envolvida na ligação do anticorpo ao antígeno. Os domínios variáveis da cadeia pesada e cadeia leve (VH e VL, respectivamente) de um anticorpo nativo geralmente têm estruturas similares, com cada domínio compreendendo quatro regiões estruturais conservadas (FRs) e três CDRs (consulte, por exemplo, Kindt et al., Kuby Immunology, 6ª ed., WH Freeman and Co., página 91 (2007). Um único domínio VH ou VL pode ser suficiente para conferir especificidade de ligação a antígeno. Além disso, os anticorpos que se ligam a um antígeno particular podem ser isolados usando um domínio VH ou VL de um anticorpo que se liga ao antígeno para rastrear uma biblioteca de domínios VL ou VH complementares, respectivamente. Consulte, por exemplo, Portolano et al., J. Immunol. 150: 880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352: 624- 628 (1991).
[00334] Os anticorpos com um único domínio são fragmentos de anticorpos que compreendem a totalidade ou uma parte do domínio variável de cadeia pesada ou a totalidade ou uma parte do domínio variável de cadeia leve de um anticorpo. Em determinadas modalidades, um anticorpo com um único domínio é um anticorpo com um único domínio humano. Em algumas modalidades, o CAR compreende um domínio de cadeia pesada de anticorpo que se liga especificamente ao antígeno, tal como um marcador de câncer ou antígeno na superfície celular de uma célula ou doença a ser direcionada, tal como uma célula tumoral ou uma célula cancerosa, tal como qualquer um dos antígenos alvo descritos no presente documento ou conhecidos.
[00335] Os fragmentos de anticorpos podem ser produzidos por meio de várias técnicas incluindo, porém sem limitações, digestão proteolítica de um anticorpo intacto, bem como produção por células hospedeiras recombinantes. Em algumas modalidades, os anticorpos são fragmentos produzidos de forma recombinante, tais como fragmentos que compreendem arranjos que não ocorrem naturalmente, tais como aqueles que têm duas ou mais regiões ou cadeias de anticorpos unidas através de ligantes sintéticos, por exemplo, ligantes peptídicos, e/ou que não podem ser produzidos por digestão enzimática de um anticorpo intacto de ocorrência natural. Em algumas modalidades, os fragmentos de anticorpo são scFvs.
[00336] Um anticorpo "humanizado" é um anticorpo no qual todos ou substancialmente todos os resíduos de aminoácidos das CDRs são derivados de CDRs não humanas e todos ou substancialmente todos os resíduos de aminoácidos das FRs são derivados de FRs humanas. Um anticorpo humanizado pode opcionalmente incluir pelo menos uma porção de uma região constante de anticorpo derivada de um anticorpo humano. Uma "forma humanizada" de um anticorpo não humano refere- se a uma variante do anticorpo não humano que foi submetido à humanização, tipicamente para reduzir a imunogenicidade para seres humanos, ao mesmo tempo em que retém a especificidade e afinidade do anticorpo não humano original. Em algumas modalidades, alguns resíduos de FR em um anticorpo humanizado são substituídos por resíduos correspondentes de um anticorpo não humano (por exemplo, o anticorpo do qual os resíduos da CDR são derivados), por exemplo, para restaurar ou melhorar a especificidade ou afinidade do anticorpo.
[00337] Em algumas modalidades, a porção de anticorpo do receptor recombinante, por exemplo, CAR, inclui ainda pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina, tal como uma região de dobradiça, por exemplo, uma região de dobradiça de IgG4 e/ou uma região CH1/CL e/ou Fc. Em algumas modalidades, a região ou porção constante é de uma IgG humana, tal como IgG4 ou IgG1. Em alguns aspectos, a porção da região constante serve como uma região espaçadora entre o componente de reconhecimento antigênico, por exemplo, scFv e domínio transmembrana. O espaçador pode ter um comprimento que confere maior responsividade da célula quando de ligação ao antígeno comparado com a ausência do espaçador. Espaçadores exemplificativos incluem, porém sem limitações, aqueles descritos em Hudecek et al. (2013) Clin. Cancer Res., 19: 3153, Publicação de Pedido de Patente Internacional Número WO2014031687, Patente Norte-Americana N° 8.822.647 ou Pedido Publicado Nº US2014/0271635.
[00338] Em algumas modalidades, a região ou porção constante é de uma IgG humana, tal como IgG4 ou IgG1. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência ESKYGPPCPPCP (apresentada em SEQ ID NO: 1) e é codificado pela sequência apresentada em SEQ ID NO:
2. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência apresentada em SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência apresentada em SEQ ID NO: 4. Em algumas modalidades, a região ou porção constante é de IgD. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência apresentada em SEQ ID NO: 5. Em algumas modalidades, o espaçador tem uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92%, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência com qualquer uma de SEQ ID NOS: 1, 3, 4 ou 5. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência apresentada em SEQ ID NOS: 26-34. Em algumas modalidades, o espaçador tem uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88%, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99% ou mais identidade de sequência com qualquer uma de SEQ ID NOS: 26-34.
[00339] Em algumas modalidades, o receptor antigênico compreende um domínio intracelular ligado direta ou indiretamente ao domínio extracelular. Em algumas modalidades, o receptor antigênico quimérico inclui um domínio transmembrana que liga o domínio extracelular e o domínio de sinalização intracelular. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular compreende um ITAM. Por exemplo, em alguns aspectos, o domínio de reconhecimento de antígeno (por exemplo, domínio extracelular) geralmente está ligado a um ou mais componentes de sinalização intracelular, tais como componentes de sinalização que imitam a ativação por meio de um complexo de receptor antigênico, tal como um complexo de TCR no caso de um CAR e/ou sinal por meio de outro receptor na superfície celular. Em algumas modalidades, o receptor quimérico compreende um domínio transmembrana ligado ou fundido entre o domínio extracelular (por exemplo, scFv) e o domínio de sinalização intracelular. Assim, em algumas modalidades, o componente de ligação a antígeno (por exemplo, anticorpo) está ligado a um ou mais domínios de sinalização transmembrana e intracelular.
[00340] Em uma modalidade, um domínio transmembrana que está naturalmente associado a um dos domínios no receptor, por exemplo, CAR, é usado. Em alguns casos, o domínio transmembrana é selecionado ou modificado através de uma substituição de aminoácidos para evitar a ligação de tais domínios aos domínios transmembrana das mesmas ou diferentes proteínas de membrana na superfície para minimizar as interações com outros membros do complexo receptor.
[00341] O domínio transmembrana, em algumas modalidades, é derivado de uma fonte natural ou sintética. Quando a fonte é natural, o domínio é, em alguns aspectos, derivado de qualquer proteína ligada à membrana ou transmembrana. Regiões transmembrana incluem aquelas derivadas de (isto é, compreendem pelo menos a(s) região(ões) transmembrana das cadeias alfa, beta ou zeta do receptor de células T, CD28, CD3 épsilon, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD13 4, CD137, CD154. Alternativamente, o domínio transmembrana é, em algumas modalidades, sintético. Em alguns aspectos, o domínio transmembrana sintético compreende resíduos predominantemente hidrofóbicos, tais como leucina e valina. Em alguns aspectos, um tripleto de fenilalanina, triptofano e valina será encontrado em cada extremidade de um domínio transmembrana sintético. Em algumas modalidades, a ligação é através de ligantes, espaçadores e/ou domínio(s) transmembrana. Em alguns aspectos, o domínio transmembrana contém uma porção transmembrana de CD28.
[00342] Em algumas modalidades, o domínio extracelular e o domínio transmembrana podem ser ligados direta ou indiretamente. Em algumas modalidades, o domínio extracelular e a transmembrana são ligados através de um espaçador, tal como qualquer um descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o receptor contém a porção extracelular da molécula da qual o domínio transmembrana é derivado, tal como uma porção extracelular de CD28.
[00343] Dentre os domínios de sinalização intracelular estão aqueles que imitam ou aproximam um sinal através de um receptor antigênico natural, um sinal através de tal receptor em combinação com um receptor coestimulador e/ou um sinal através de um receptor coestimulador individualmente. Em algumas modalidades, um ligante de oligo- ou polipeptídeo curto, por exemplo, um ligante de entre 2 e 10 aminoácidos de comprimento, tal como um que contém glicinas e serinas, por exemplo, uma dupla de glicina-serina, está presente e forma uma ligação entre o domínio transmembrana e o domínio de sinalização citoplasmática do CAR.
[00344] A ativação de células T é, em alguns aspectos, descrita como sendo mediada por duas classes de sequências de sinalização citoplasmática: aquelas que iniciam a ativação primária dependente de antígeno por meio do TCR (sequências de sinalização citoplasmática primária) e aquelas que atuam de uma maneira independente de antígeno para fornecer um sinal secundário ou coestimulador (sequências de sinalização citoplasmática secundárias). Em alguns aspectos, o CAR inclui um ou ambos os componentes de sinalização.
[00345] O receptor, por exemplo, o CAR, geralmente inclui pelo menos um componente ou componentes de sinalização intracelular. Em alguns aspectos, o CAR inclui uma sequência de sinalização citoplasmática primária que regula a ativação primária do complexo de TCR. As sequências de sinalização citoplasmática primárias que atuam de maneira estimuladora podem conter motivos de sinalização que são conhecidos como motivos de ativação com base em tirosina imunorreceptores ou ITAMs. Exemplos de ITAMs que contêm sequências de sinalização citoplasmática primárias incluem aquelas derivadas da cadeia zeta de CD3, FcR gama, CD3 gama, CD3 delta e CD3 épsilon. Em algumas modalidades, a(s) molécula(s) de sinalização citoplasmática no CAR contém/contêm um domínio de sinalização citoplasmática, porção do mesmo ou sequência derivada de CD3 zeta.
[00346] Em algumas modalidades, o receptor inclui um componente intracelular de um complexo de TCR, tal como uma cadeia CD3 de TCR que medeia a ativação de células T e citotoxicidade, por exemplo, cadeia de CD3 zeta. Assim, em alguns aspectos, a porção de ligação a antígeno está ligada a um ou mais módulos de sinalização celular. Em algumas modalidades, os módulos de sinalização celular incluem um domínio transmembrana de CD3, domínios de sinalização intracelular de CD3 e/ou outros domínios transmembrana de CD3. Em algumas modalidades, o receptor, por exemplo, CAR, inclui ainda uma porção de uma ou mais moléculas adicionais, tal como o receptor Fcγ, CD8, CD4, CD25 ou CD16. Por exemplo, em alguns aspectos, o CAR ou outro receptor quimérico inclui uma molécula quimérica entre CD3-zeta (CD3- ζ) ou receptor Fcγ e CD8, CD4, CD25 ou CD16.
[00347] Em algumas modalidades, após a ligação do CAR ou outro receptor quimérico, o domínio citoplasmático ou domínio de sinalização intracelular do receptor ativa pelo menos uma das funções efetoras normais ou respostas da célula imune, por exemplo, células T manipuladas para expressar o CAR. Por exemplo, em alguns contextos, o CAR induz a uma função de uma célula T, tal como atividade citolítica ou atividade T auxiliar, tal como secreção de citocinas ou outros fatores. Em algumas modalidades, uma porção truncada de um domínio de sinalização intracelular de um componente do receptor antigênico ou molécula coestimuladora é usada no lugar de uma cadeia imunoestimuladora intacta, por exemplo, se transduz o sinal da função efetora. Em algumas modalidades, o domínio ou domínios de sinalização intracelular incluem as sequências citoplasmáticas do receptor de células T (TCR) e, em alguns aspectos, também aqueles de correceptores os quais, no contexto natural, atuam em conjunto com tais receptores para iniciar a transdução de sinal após acoplamento do antígeno ao receptor.
[00348] No contexto de um TCR natural, a ativação total geralmente requer não apenas a sinalização por meio do TCR, mas também um sinal coestimulador. Assim, em algumas modalidades, para promover a ativação completa, um componente para gerar um sinal secundário ou coestimulador também está incluído no CAR. Em outras modalidades, o CAR não inclui um componente para gerar um sinal coestimulador. Em alguns aspectos, um CAR adicional é expresso na mesma célula e fornece o componente para a geração do sinal secundário ou coestimulador.
[00349] Em algumas modalidades, o receptor antigênico quimérico contém um domínio intracelular de uma molécula coestimuladora de células T. Em algumas modalidades, o CAR inclui um domínio de sinalização e/ou porção transmembrana de um receptor coestimulador, tal como CD28, 4-1BB, OX40, DAP10 e ICOS. Em alguns aspectos, o mesmo CAR inclui os componentes de ativação e coestimulador. Em algumas modalidades, o receptor antigênico quimérico contém um domínio intracelular derivado de uma molécula coestimuladora de células T ou uma variante funcional da mesma, tal como entre o domínio transmembrana e o domínio de sinalização intracelular. Em alguns aspectos, a molécula coestimuladora de células T é CD28 ou 41BB.
[00350] Em algumas modalidades, o domínio de ativação está incluído em um CAR, enquanto que o componente coestimulador é fornecido por outro CAR que reconhece outro antígeno. Em algumas modalidades, os CARs incluem CARs ativadores ou estimuladores, CARs coestimuladores, ambos expressos na mesma célula (consulte documento WO2014/055668). Em alguns aspectos, as células incluem um ou mais CAR estimuladores ou ativadores e/ou um CAR coestimulador. Em algumas modalidades, as células incluem ainda CARs inibidores (iCARs, consulte Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5 (215) (dezembro de 2013), tal como um CAR que reconhece um antígeno diferente daquele associado a e/ou específico para a doença ou condição na qual um sinal de ativação distribuído através do CAR que tem como alvo a doença é diminuído ou inibido pela ligação do CAR inibidor ao seu ligante, por exemplo, para reduzir os efeitos fora-do-alvo.
[00351] Em determinadas modalidades, o domínio de sinalização intracelular compreende um domínio transmembrana de CD28 e um domínio de sinalização ligado a um domínio intracelular de CD3 (por exemplo, CD3-zeta). Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular compreende domínios coestimuladores de CD28 e CD137 (4-1BB, TNFRSF9) quiméricos ligados a um domínio intracelular de CD3 zeta.
[00352] Em algumas modalidades, o CAR abrange um ou mais, por exemplo, dois ou mais, domínios coestimuladores e um domínio de ativação, por exemplo, domínio de ativação primário, na porção citoplasmática. CARs exemplificativos incluem componentes intracelulares de CD3-zeta, CD28 e 4-1BB.
[00353] Em algumas modalidades, o vetor que codifica o receptor antigênico e/ou as células que expressam o CAR ou outro receptor antigênico inclui ainda uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um ou mais marcador(es). Em algumas modalidades, o um ou mais marcador(es) é um marcador de transdução, marcador substituto e/ou um marcador de seleção. Em algumas modalidades, o marcador é um marcador substituto, tal como um marcador na superfície celular, o qual pode ser usado para confirmar a transdução ou manipulação da célula para expressar o receptor.
[00354] Em algumas modalidades, o marcador é um marcador de transdução ou um marcador substituto. Um marcador de transdução ou um marcador substituto pode ser usado para detectar células que foram introduzidas com o polinucleotídeo, por exemplo, um polinucleotídeo que codifica um receptor recombinante. Em algumas modalidades, o marcador de transdução pode indicar ou confirmar a modificação de uma célula. Em algumas modalidades, o marcador substituto é uma proteína que é feita para ser coexpressa na superfície da célula com o receptor recombinante, por exemplo, CAR. Em modalidades particulares, tal marcador substituto é uma proteína na superfície que foi modificada para ter pouca ou nenhuma atividade. Em determinadas modalidades, o marcador substituto é codificado no mesmo polinucleotídeo que codifica o receptor recombinante. Em algumas modalidades, a sequência de ácidos nucleicos que codifica o receptor recombinante está operativamente ligada a uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um marcador, opcionalmente separada por um sítio de entrada ribossômico interno (Internal Ribosome Entry Site, IRES) ou um ácido nucleico que codifica um peptídeo de autoclivagem ou um peptídeo que causa o salto ribossômico, tal como uma sequência 2A, tal como uma T2A, uma P2A, uma E2A ou uma F2A. Genes marcadores extrínsecos podem, em alguns casos, ser usados em relação a células manipuladas para permitir a detecção ou seleção de células e, em alguns casos, também para promover o suicídio celular.
[00355] Marcadores substitutos exemplificativos podem incluir formas truncadas de polipeptídeos na superfície celular, tais como formas truncadas que não são funcionais e não transduzem ou não são capazes de transduzir um sinal ou um sinal normalmente transduzido pela forma de comprimento total da célula polipeptídica na superfície e/ou não são ou não são capazes de internalizar. Polipeptídeos na superfície celular truncados exemplificativos incluem formas truncadas de fatores de crescimento ou outros receptores, tal como um receptor de fator de crescimento epidérmico humano truncado 2 (tHER2), um receptor de fator de crescimento epidérmico truncado (tEGFR, sequência de tEGFR exemplificativa apresentada em SEQ ID NO: 11 ou 76) ou um antígeno da membrana específico para próstata (PSMA)
ou sua forma modificada.
O tEGFR pode conter um epítopo reconhecido pelo anticorpo cetuximabe (Erbitux) ou outro anticorpo anti-EGFR terapêutico ou molécula de ligação, a qual pode ser usada para identificar ou selecionar células que foram manipuladas com a construção de tEGFR e uma proteína exógena codificada e/ou eliminar ou separar células que expressam a proteína exógena codificada.
Consulte Patente Norte-Americana N° 8.802.374 e Liu et al., Nature Biotech.
Abril de 2016; 34 (4): 430–434). Em alguns aspectos, o marcador, por exemplo, marcador substituto, inclui toda ou parte (por exemplo, forma truncada) de CD34, um NGFR, uma CD19 ou uma CD19 truncada, por exemplo, uma CD19 não humana truncada ou receptor de fator de crescimento epidérmico (por exemplo, tEGFR). Em algumas modalidades, o marcador é ou compreende uma proteína fluorescente, tal como proteína fluorescente verde (Green Fluorescent Protein, GFP), proteína fluorescente verde intensificada (Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP), tal como GFP Super-Fold (sfGFP), proteína fluorescente vermelha (Red Fluorescent Protein, RFP), tal como tdTomato, mCherry, mStrawberry, AsRed2, DsRed ou DsRed2, proteína fluorescente ciano (Cyan Fluorescent Protein, CFP), proteína fluorescente verde/azul (Blue Green Fluorescent Protein, BFP), proteína fluorescente azul intensificada (Enhanced Blue Fluorescent Protein, EBFP) e proteína fluorescente amarela (Yellow Fluorescent Protein, YFP) e variantes das mesmas, incluindo variantes de espécies, variantes monoméricas e variantes com códons otimizados e/ou proteínas fluorescentes intensificadas.
Em algumas modalidades, o marcador é ou compreende uma enzima, tal como uma luciferase, o gene lacZ de E. coli, fosfatase alcalina, fosfatase alcalina embrionária secretada (Secreted Embryonic Alkaline Phosphatase, SEAP), cloranfenicol acetiltransferase (CAT). Genes repórter emissores de luz exemplificativos incluem luciferase (luc), β-galactosidase, cloranfenicol acetiltransferase (CAT), β-glucuronidase (GUS) ou variantes das mesmas.
[00356] Em algumas modalidades, o marcador é um marcador de seleção. Em algumas modalidades, o marcador de seleção é ou compreende um polipeptídeo que confere resistência a agentes exógenos ou fármacos. Em algumas modalidades, o marcador de seleção é um gene de resistência a antibióticos. Em algumas modalidades, o marcador de seleção é um gene de resistência a antibióticos que confere resistência a antibióticos a uma célula de mamífero. Em algumas modalidades, o marcador de seleção é ou compreende um gene de resistência à puromicina, um gene de resistência à higromicina, um gene de resistência à blasticidina, um gene de resistência à neomicina, um gene de resistência à geneticina ou um gene de resistência à zeocina ou uma forma modificada dos mesmos.
[00357] Em algumas modalidades, a molécula é uma molécula não própria, por exemplo, proteína não própria, isto é, uma que não é reconhecida como "própria" pelo sistema imune do hospedeiro ao qual as células serão transferidas de forma adotiva.
[00358] Em algumas modalidades, o marcador não tem função terapêutica e/ou não produz nenhum efeito além de ser usado como um marcador para engenharia genética, por exemplo, para selecionar células manipuladas com sucesso. Em outras modalidades, o marcador pode ser uma molécula terapêutica ou molécula que exerce algum efeito desejado, tal como um ligante para uma célula a ser encontrada in vivo, tal como uma molécula do ponto de verificação imune ou coestimuladora para aumentar e/ou amortecer as respostas das células após transferência adotiva e encontro com o ligante.
[00359] Em algumas modalidades, o ácido nucleico que codifica o marcador está operativamente ligado a um polinucleotídeo que codifica uma sequência de ligação, tal como uma sequência de ligação clivável, por exemplo, uma T2A. Por exemplo, um marcador e, opcionalmente, uma sequência de ligação, pode ser qualquer um conforme descrito na Pub. PCT. Nº WO2014031687. Por exemplo, o marcador pode ser um EGFR truncado (tEGFR) o qual é opcionalmente ligado a uma sequência ligante, tal como uma sequência ligante clivável T2A.
[00360] Um polipeptídeo exemplificativo para um EGFR truncado (por exemplo, tEGFR) compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 7 ou 16 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92%, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência com SEQ ID NO: 7 ou 16. Uma sequência de ligação T2A exemplificativa compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 6 ou 17 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência com SEQ ID NO: 6 ou 17.
[00361] Em algumas modalidades, o marcador é uma molécula, por exemplo, proteína na superfície celular, não encontrada naturalmente nas células T ou não encontrada naturalmente na superfície das células T ou uma porção das mesmas.
[00362] Em alguns casos, os CARs são denominados de CARs de primeira, segunda e/ou terceira geração. Em alguns aspectos, um CAR de primeira geração é aquele que fornece apenas um sinal induzido pela cadeia de CD3 mediante ligação a antígeno; em alguns aspectos, um CARs de segunda geração é aquele que fornece tal sinal e um sinal coestimulador, tal como um que inclui um domínio de sinalização intracelular de um receptor coestimulador, tal como CD28 ou CD137; em alguns aspectos, um CAR de terceira geração é aquele que inclui vários domínios coestimuladores de diferentes receptores coestimuladores.
[00363] Por exemplo, em algumas modalidades, o CAR contém um anticorpo, por exemplo, um fragmento de anticorpo, um domínio transmembrana que é ou contém uma porção transmembrana de CD28 ou uma variante funcional do mesmo, e um domínio de sinalização intracelular que contém uma porção de sinalização de CD28 ou variante funcional da mesma e uma porção de sinalização de CD3 zeta ou variante funcional da mesma. Em algumas modalidades, o CAR contém um anticorpo, por exemplo, fragmentos de anticorpo, um domínio transmembrana que é ou contém uma porção transmembrana de CD28 ou uma variante funcional da mesma e um domínio de sinalização intracelular que contém uma porção de sinalização de uma 4-1BB ou variante funcional da mesma e uma porção de sinalização de CD3 zeta ou variante funcional da mesma. Em algumas destas modalidades, o receptor inclui ainda um espaçador que contém uma porção de uma molécula de Ig, tal como uma molécula de Ig humana, tal como uma dobradiça de Ig, por exemplo, uma dobradiça de IgG4, tal como um espaçador de dobradiça.
[00364] Em algumas modalidades, o domínio transmembrana do receptor recombinante, por exemplo, o CAR, é ou inclui um domínio transmembrana de CD28 humana (por exemplo, Nº de Acesso P01747.1) ou variante do mesmo, tal como um domínio transmembrana que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 8 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência com SEQ ID NO: 8; em algumas modalidades, a porção que contém o domínio transmembrana do receptor recombinante compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 9 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %,
89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência com a mesma.
[00365] Em algumas modalidades, o(s) componente(s) de sinalização intracelular do receptor recombinante, por exemplo, o CAR, contém um domínio de sinalização coestimulador intracelular de CD28 humana ou uma variante funcional ou porção da mesma, tal como um domínio com uma substituição L-L por G-G nas posições 186-187 de uma proteína CD28 nativa. Por exemplo, o domínio de sinalização intracelular pode compreender a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 10 ou 11 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90%, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência para SEQ ID NO: 10 ou 11. Em algumas modalidades, o domínio intracelular compreende um domínio de sinalização coestimulador intracelular de 4-1BB (por exemplo, (Nº de Acesso Q07011.1) ou variante funcional ou porção da mesma, tal como a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 12 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88%, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99% ou mais identidade de sequência para SEQ ID NO: 12.
[00366] Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular do receptor recombinante, por exemplo, o CAR compreende um domínio de sinalização estimulador zeta de CD3 humana ou variante funcional da mesma, tal como um domínio citoplasmático 112 AA da isoforma 3 de CD3ζ humano (Nº de Acesso: P20963.2) ou um domínio de sinalização de CD3 zeta conforme descrito na Patente Norte- Americana N° 7.446.190 ou Patente Norte-Americana N° 8.911.993. Por exemplo, em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular compreende a sequência de aminoácidos conforme apresentada em SEQ ID NO: 13, 14 ou 15 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90%, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência para SEQ ID NO: 13, 14 ou 15.
[00367] Em alguns aspectos, o espaçador contém apenas uma região de dobradiça de uma IgG, tal como apenas uma dobradiça de IgG4 ou IgG1, tal como o espaçador apenas de dobradiça apresentada em SEQ ID NO: 1. Em outras modalidades, o espaçador é ou contém uma dobradiça de Ig, por exemplo, uma dobradiça derivada de IgG4, opcionalmente ligada a um domínio CH2 e/ou CH3. Em algumas modalidades, o espaçador é uma dobradiça de Ig, por exemplo, uma dobradiça de IgG4, ligada aos domínios CH2 e CH3, conforme apresentado em SEQ ID NO: 4. Em algumas modalidades, o espaçador é uma dobradiça de Ig, por exemplo, um IgG4 dobradiça, ligada a um domínio CH3 apenas, conforme apresentado em SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades, o espaçador é ou compreende uma sequência rica em glicina-serina ou outro ligante flexível, tais como ligantes flexíveis conhecidos.
[00368] Por exemplo, em algumas modalidades, o CAR inclui um anticorpo, tal como um fragmento de anticorpo, incluindo scFvs, um espaçador, tal como um espaçador que contém uma porção de uma molécula de imunoglobulina, tal como uma região de dobradiça e/ou um ou mais regiões constantes de uma molécula de cadeia pesada, tal como um espaçador que contém dobradiça de Ig, um domínio transmembrana que contém toda ou uma porção de um domínio transmembrana derivado de CD28, um domínio de sinalização intracelular derivado de CD28 e um domínio de sinalização CD3 de zeta. Em algumas modalidades, o CAR inclui um anticorpo ou fragmento, tal como scFv, um espaçador tal como qualquer um dos espaçadores que contém Ig-dobradiça, um domínio transmembrana derivado de CD28, um domínio de sinalização intracelular derivado de 4-1BB e um domínio de sinalização derivado de CD3 zeta.
[00369] Em modalidades particulares, o CAR é um CAR que tem como alvo a CD19 que contém um domínio de ligação a antígeno scFv de FMC63; um espaçador de dobradiça de imunoglobulina, um domínio transmembrana e um domínio de sinalização intracelular que contém uma região de sinalização coestimuladora que é um domínio de sinalização de 4-1BB e um domínio de sinalização de uma cadeia CD3- zeta (CD3ζ). Em algumas modalidades, o scFv contém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 43. Em algumas modalidades, o scFv tem uma VL que tem CDRs que compreendem uma sequência de aminoácidos de RASQDISKYLN (SEQ ID NO: 35), uma sequência de aminoácidos de SRLHSGV (SEQ ID NO: 36) e uma sequência de aminoácidos de GNTLPYTFG (SEQ ID NO: 37); e uma VH que tem CDRs que compreendem uma sequência de aminoácidos de DYGVS (SEQ ID NO: 38), uma sequência de aminoácidos de VIWGSETTYYNSALKS (SEQ ID NO: 39) e YAMDYWG (SEQ ID NO: 40)). Em algumas modalidades, o domínio transmembrana tem a sequência apresentada em SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, o domínio transmembrana tem uma sequência que tem pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência com SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização coestimulador de 4-1BB tem a sequência apresentada em SEQ ID NO: 12. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização coestimulador de 4-1BB tem uma sequência de pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência com SEQ ID NO: 12. Em algumas modalidades, o domínio de CD3-zeta tem a sequência apresentada em SEQ ID NO: 13. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização de CD3zeta tem uma sequência que tem pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %,
91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais de identidade de sequência. Em algumas modalidades, o CAR que tem como alvo a CD19 se liga à CD19 e media a produção de citocinas e/ou atividade citotóxica contra células alvo CD19+ quando expresso em uma célula T e estimulado por meio do CAR, tal como através de ligação à CD19.
[00370] Em algumas modalidades, as moléculas de ácido nucleico que codificam tais construções de CAR incluem ainda uma sequência que codifica um elemento de salto ribossômico T2A e/ou uma sequência de tEGFR, por exemplo, a jusante da sequência que codifica o CAR. Em algumas modalidades, a sequência codifica um elemento de salto ribossômico T2A apresentada em SEQ ID NO: 6 ou 17 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88%, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99% ou mais identidade de sequência com SEQ ID NO: 6 ou 17. Em algumas modalidades, células T que expressam um receptor antigênico (por exemplo, CAR) também podem ser geradas para expressar um EGFR truncado (EGFRt) como um epítopo de seleção não imunogênico (por exemplo, pela introdução de uma construção que codifica o CAR e EGFRt separados por um switch ribossômico T2A para expressar duas proteínas a partir da mesma construção) a qual pode, então, ser usada como um marcador para detectar tais células (consulte, por exemplo, Patente Norte-Americana N° 8.802.374). Em algumas modalidades, a sequência codifica uma sequência de tEGFR apresentada em SEQ ID NO: 7 ou 16 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais de identidade de sequência com SEQ ID NO: 7 ou 16.
[00371] Em algumas modalidades, um único promotor pode controlar a expressão de um RNA que contém, em um único quadro de leitura aberta (Open Reading Frame, ORF), dois ou três genes (por exemplo, codificam a molécula envolvida na modulação de uma via metabólica e codificam o receptor recombinante) separados entre si por sequências que codificam um peptídeo de autoclivagem (por exemplo, sequências 2A) ou um sítio de reconhecimento de protease (por exemplo, furina). O ORF codifica, assim, um único polipeptídeo o qual, durante (no caso de 2A) ou após a tradução, é processado nas proteínas individuais. Em alguns casos, o peptídeo, tal como T2A, pode fazer com que o ribossomo pule (salto ribossômico) a síntese de uma ligação peptídica no C-término de um elemento 2A, levando à separação entre o final da sequência 2A e o próximo peptídeo a jusante (consulte, por exemplo, de Felipe. Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004) e de Felipe et al. Traffic 5: 616-626 (2004)). Muitos elementos 2A são conhecidos. Exemplos de sequências 2A que podem ser usadas nos métodos e ácidos nucleicos descritos no presente documento, sem limitação, sequências 2A do vírus da febre aftosa (F2A, por exemplo, SEQ ID NO: 21), vírus da rinite A equina (E2A, por exemplo, SEQ ID NO: 20), vírus Thosea asigna (T2A, por exemplo, SEQ ID NO: 6 ou 17) e teschovírus- 1 suíno (P2A, por exemplo, SEQ ID NO: 18 ou 19), conforme descrito na Publicação de Patente Norte-Americana N° 20070116690.
[00372] Os receptores recombinantes, tal como CARs, expressos pelas células administradas ao indivíduo geralmente reconhecem ou se ligam especificamente a uma molécula que é expressa em, associada a e/ou específica para a doença ou condição ou células das mesmas sendo tratadas. Após ligação específica à molécula, por exemplo, antígeno, o receptor geralmente administração um sinal imunoestimulador, tal como um sinal transduzido por ITAM, para a célula, deste modo, promovendo uma resposta imune que tem como alvo a doença ou condição. Por exemplo, em algumas modalidades, as células expressam um CAR que se liga especificamente a um antígeno expresso por uma célula ou tecido da doença ou condição ou associado à doença ou condição. B. Receptores de Células T (TCRs)
[00373] Em algumas modalidades, células manipuladas, tal como células T, usadas em relação aos métodos, usos, artigos de manufatura ou composições fornecidos são células que expressam um receptor de célula T (TCR) ou porção de ligação a antígeno que reconhece um epítopo de peptídeo ou epítopo de célula T de um polipeptídeo-alvo, tal como um antígeno de um tumor, proteína viral ou autoimune.
[00374] Em algumas modalidades, um "receptor de células T" ou "TCR" é uma molécula que contém cadeias α e β variáveis (também conhecidas como TCRα e TCRβ, respectivamente) ou cadeias γ e δ variáveis (também conhecidas como TCRα e TCRβ, respectivamente) ou suas porções de ligação a antígeno, e que é capaz de se ligar especificamente a um peptídeo ligado a uma molécula do MHC. Em algumas modalidades, o TCR está na forma αβ. Normalmente, os TCRs que existem nas formas αβ e γδ são, em geral, estruturalmente similares, mas as células T que os expressam podem ter funções ou localizações anatômicas distintas. Um TCR pode ser encontrado na superfície de uma célula ou na forma solúvel. Em geral, um TCR é encontrado na superfície das células T (ou linfócitos T), onde geralmente é responsável pelo reconhecimento de antígenos ligados às moléculas do principal complexo de histocompatibilidade (Major Histocompatibility Complex, MHC).
[00375] Salvo indicação em contrário, o termo "TCR" deve ser entendido como abrangendo TCRs completos, bem como porções de ligação a antígeno ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos. Em algumas modalidades, o TCR é um TCR intacto ou de comprimento total, incluindo TCRs na forma αβ ou forma γδ. Em algumas modalidades, o TCR é uma porção de ligação a antígeno que é menor do que um TCR de comprimento total, mas que se liga a um peptídeo específico ligado a uma molécula do MHC, tal como se liga a um complexo de MHC-peptídeo. Em alguns casos, uma porção de ligação a antígeno ou fragmento de um TCR pode conter apenas uma porção dos domínios estruturais de um TCR de comprimento total ou intacto, mas ainda é capaz de se ligar ao epítopo do peptídeo, tal como o complexo de MHC-peptídeo, a ao qual o TCR completo se liga. Em alguns casos, uma porção de ligação a antígeno contém os domínios variáveis de um TCR, tais como cadeia α variável e cadeia β variável de um TCR, suficiente para formar um sítio de ligação para ligação a um complexo de MHC-peptídeo específico. Em geral, as cadeias variáveis de um TCR contêm regiões determinantes de complementaridade envolvidas no reconhecimento do complexo de peptídeo, MHC e/ou MHC-peptídeo.
[00376] Em algumas modalidades, os domínios variáveis do TCR contêm loops hipervariáveis ou regiões determinantes de complementaridade (CDRs), as quais geralmente são os contribuintes primários para o reconhecimento antigênico e capacidades e especificidade de ligação. Em algumas modalidades, uma CDR de um TCR ou combinação dos mesmos forma todos ou substancialmente todos os sítios de ligação a antígeno de uma determinada molécula de TCR. As várias CDRs dentro de uma região variável de uma cadeia de TCR geralmente são separadas por regiões estruturais (FRs), as quais geralmente exibem menos variabilidade entre as moléculas de TCR comparado com as CDRs (consulte, por exemplo, Jores et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 87: 9138, 1990; Chothia et al., EMBO J. 7: 3745, 1988; consulte também Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27:55, 2003). Em algumas modalidades, a CDR3 é a principal CDR responsável pela ligação ou especificidade antigênica ou é a mais importante dentre as três CDRs em uma determinada região variável do
TCR para reconhecimento antigênico e/ou para interação com a porção peptídica processada pelo complexo de peptídeo-MHC. Em alguns contextos, a CDR1 da cadeia alfa pode interagir com a parte N-terminal de determinados peptídeos antigênicos. Em alguns contextos, a CDR1 da cadeia beta pode interagir com a parte C-terminal do peptídeo. Em alguns contextos, a CDR2 contribui mais fortemente ou é a CDR primária responsável pela interação ou reconhecimento da porção MHC do complexo de MHC-peptídeo. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia β pode conter uma região hipervariável adicional (CDR4 ou HVR4), a qual geralmente está envolvida na ligação do superantígeno e não no reconhecimento antigênico (Kotb (1995) Clinical Microbiology Reviews, 8: 411-426).
[00377] Em algumas modalidades, um TCR também pode conter um domínio constante, um domínio transmembrana e/ou uma cauda citoplasmática curta (consulte, por exemplo, Janeway et al., Immunobiology: The Immune System in Health and Disease, 3ª Ed., Current Biology Publications, páginas 4: 33, 1997). Em alguns aspectos, cada cadeia do TCR pode possuir um domínio variável de imunoglobulina N-terminal, um domínio constante de imunoglobulina, uma região transmembrana e uma cauda citoplasmática curta na extremidade C-terminal. Em algumas modalidades, um TCR está associado a proteínas invariantes do complexo de CD3 envolvido na mediação da transdução de sinal.
[00378] Em algumas modalidades, uma cadeia de TCR contém um ou mais domínios constantes. Por exemplo, a porção extracelular de uma determinada cadeia de TCR (por exemplo, cadeia α ou cadeia ) pode conter dois domínios similares a imunoglobulinas, tal como um domínio variável (por exemplo, Vα ou V; tipicamente com base nos aminoácidos 1 a 116 de acordo com a numeração de Kabat (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991, 5ª ed.) e um domínio constante (por exemplo, domínio constante de cadeia α ou Cα, tipicamente as posições 117 a 259 da cadeia com base na numeração de Kabat ou domínio constante da cadeia  ou C, tipicamente as posições 117 a 295 da cadeia com base em Kabat) adjacentes à membrana celular. Por exemplo, em alguns casos, a porção extracelular do TCR formada pelas duas cadeias contém dois domínios constantes proximais à membrana e dois domínios variáveis distais à membrana, em que cada domínio variável contém CDRs. O domínio constante do TCR pode conter sequências de ligação curtas nas quais um resíduo de cisteína forma uma ligação de dissulfeto, deste modo, ligando as duas cadeias do TCR. Em algumas modalidades, um TCR pode ter um resíduo de cisteína adicional em cada uma das cadeias α e β, de modo que o TCR contenha duas ligações de dissulfeto nos domínios constantes.
[00379] Em algumas modalidades, as cadeias de TCR contêm um domínio transmembrana. Em algumas modalidades, o domínio transmembrana é positivamente carregado. Em alguns casos, a cadeia de TCR contém uma cauda citoplasmática. Em alguns casos, a estrutura permite que o TCR se associe a outras moléculas, tal como CD3 e suas subunidades. Por exemplo, um TCR que contém domínios constantes que têm uma região transmembrana pode ancorar a proteína na membrana celular e se associar a subunidades invariantes da maquinaria ou complexo de sinalização de CD3. As caudas intracelulares das subunidades de sinalização à CD3 (por exemplo, cadeias CD3γ, CD3δ, CD3ε e CD3ζ) contêm um ou mais motivos de ativação com base em tirosina imunorreceptor ou ITAM que estão envolvidos na capacidade de sinalização ao complexo de TCR.
[00380] Em algumas modalidades, o TCR pode ser um heterodímero de duas cadeias α e β (ou opcionalmente γ e δ) ou pode ser uma construção de TCR com uma única cadeia. Em algumas modalidades, o TCR é um heterodímero que contém duas cadeias separadas (cadeias α e β ou cadeias γ e δ) que estão ligadas, tal como através de uma ligação de dissulfeto ou ligações de dissulfeto.
[00381] Em algumas modalidades, o TCR pode ser gerado a partir de (uma) sequência(s) de TCR conhecida(s), tais como sequências de cadeias Vα, β, para as quais uma sequência de codificação substancialmente completa está prontamente disponível. Métodos para obter sequências de TCR de comprimento total, incluindo sequências de cadeia V, a partir de fontes de células são bem conhecidos. Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos que codificam o TCR podem ser obtidos a partir de uma variedade de fontes, tal como através de amplificação por reação em cadeia de polimerase (PCR) de ácidos nucleicos que codificam o TCR dentro ou isolado a partir de uma determinada célula ou células ou síntese de sequências de DNA de TCR publicamente disponíveis.
[00382] Em algumas modalidades, o TCR é obtido a partir de uma fonte biológica, tal como a partir de células, tal como a partir de uma célula T (por exemplo, célula T citotóxica), hibridomas de células T ou outra fonte publicamente disponível. Em algumas modalidades, as células T podem ser obtidas a partir de células isoladas in vivo. Em algumas modalidades, o TCR é um TCR selecionado timicamente. Em algumas modalidades, o TCR é um TCR restrito a neoepítopos. Em algumas modalidades, as células T podem ser um hibridoma ou clone de células T cultivadas. Em algumas modalidades, o TCR ou porção de ligação a antígeno do mesmo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo pode ser gerado sinteticamente a partir do conhecimento da sequência do TCR.
[00383] Em algumas modalidades, o TCR é gerado a partir de um TCR identificado ou selecionado a partir da triagem de uma biblioteca de TCRs candidatos contra um antígeno polipeptídico alvo ou seu epítopo de célula T alvo.
Bibliotecas de TCR podem ser geradas por meio de amplificação do repertório de Vα e Vβ de células T isoladas de um indivíduo, incluindo células presentes em PBMCs, baço ou outro órgão linfoide.
Em alguns casos, as células T podem ser amplificadas a partir de linfócitos infiltrantes de tumor (Tumor-Infiltrating Lymphocytes, TILs). Em algumas modalidades, as bibliotecas de TCR podem ser geradas a partir de células CD4+ ou CD8+. Em algumas modalidades, os TCRs podem ser amplificados a partir de uma fonte de células T de um indivíduo normal ou saudável, ou seja, bibliotecas de TCR normais.
Em algumas modalidades, os TCRs podem ser amplificados a partir de uma fonte de células T de um indivíduo doente, ou seja, bibliotecas de TCR doentes.
Em algumas modalidades, iniciadores degenerados são usados para amplificar o repertório de genes de Vα e Vβ, tal como através de RT-PCR em amostras, tais como células T, obtidas de seres humanos.
Em algumas modalidades, as bibliotecas de scTv podem ser montadas a partir de bibliotecas Vα e Vβ não expostas nas quais os produtos amplificados são clonados ou montados para serem separados através de um ligante.
Dependendo da fonte do indivíduo e das células, as bibliotecas podem ser específicas para o alelo de HLA.
Alternativamente, em algumas modalidades, as bibliotecas de TCR podem ser geradas por meio de mutagênese ou diversificação de uma molécula de TCR precursora ou de base.
Em alguns aspectos, os TCRs são submetidos à evolução direcionada, tal como através de mutagênese, por exemplo, da cadeia α ou β.
Em alguns aspectos, resíduos específicos dentro de CDRs do TCR são alterados.
Em algumas modalidades, os TCRs selecionados podem ser modificados por meio de maturação de afinidade.
Em algumas modalidades, as células T específicas para antígeno podem ser selecionadas, tal como através de triagem, para avaliar a atividade de CTL contra o peptídeo.
Em alguns aspectos, TCRs, por exemplo presentes nas células T específicas para antígeno, podem ser selecionadas, tal como através da atividade de ligação, por exemplo, afinidade ou avidez particular pelo antígeno.
[00384] Em algumas modalidades, o TCR ou porção de ligação a antígeno do mesmo é aquele que foi modificado ou concebido. Em algumas modalidades, métodos de evolução direcionada são usados para gerar TCRs com propriedades alteradas, tal como com maior afinidade por um complexo de MHC-peptídeo específico. Em algumas modalidades, a evolução direcionada é alcançada por meio de métodos de exibição incluindo, porém sem limitações, exibição em leveduras (Holler et al. (2003) Nat Immunol, 4, 55-62; Holler et al. (2000) Proc Natl Acad Sci USA, 97, 5387-92), exibição em fagos (Li et al. (2005) Nat Biotechnol, 23, 349-54) ou exibição em células T (Chervin et al. (2008) J Immunol Methods, 339, 175-84). Em algumas modalidades, as abordagens de exibição envolvem manipulação ou modificação de um TCR precursor conhecido ou TCR de referência. Por exemplo, em alguns casos, um TCR de tipo selvagem pode ser usado como um modelo para a produção de TCRs mutantes nos quais em um ou mais resíduos das CDRs sofreram mutação e mutantes que têm uma propriedade alterada desejada, tal como maior afinidade por um antígeno alvo, são selecionados.
[00385] Em algumas modalidades, os peptídeos de um polipeptídeo alvo para uso na produção ou geração de um TCR de interesse são conhecidos ou podem ser facilmente identificados. Em algumas modalidades, os peptídeos adequados para uso na geração de TCRs ou porções de ligação a antígeno podem ser determinados com base na presença de um motivo restrito ao HLA em um polipeptídeo alvo de interesse, tal como um polipeptídeo alvo descrito abaixo. Em algumas modalidades, os peptídeos são identificados usando modelos de previsão computadorizada disponíveis. Em algumas modalidades, para prever sítios de ligação de MHC classe I, tais modelos incluem, porém sem limitações, ProPred1 (Singh e Raghava (2001) Bioinformatics 17 (12): 1236-1237, e SYFPEITHI (consulte Schuler et al. (2007) Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, 409 (1): 75-93 2007). Em algumas modalidades, o epítopo restrito ao MHC é HLA-A0201, o qual é expresso em aproximadamente 39-46 % de todos os caucasianos e, portanto, representa uma escolha adequada do antígeno MHC para uso na preparação de um TCR ou outra molécula peptídica de ligação ao MHC.
[00386] Motivos de ligação ao HLA-A0201 e os sítios de clivagem para proteassomas e proteassomas imunes usando modelos de predição de computador são conhecidos. Para prever sítios de ligação de MHC classe I, tais modelos incluem, porém sem limitações, ProPred1 (descrito em mais detalhes em Singh e Raghava, Propred: Prediction of HLA-DR Binding Sites. BIOINFORMATICS 17 (12): 1236-1237 2001) e SYFPEITHI (consulte Schuler et al. SYFPEITHI, Database for Searching and T-Cell Epitope Prediction em Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, vol, 409 (1): 75-93 2007).
[00387] Em algumas modalidades, o TCR ou porção de ligação a antígeno do mesmo pode ser uma proteína natural produzida de forma recombinante ou sua forma mutante na qual uma ou mais propriedades, tal como característica de ligação, foram alteradas. Em algumas modalidades, um TCR pode ser derivado de uma de várias espécies animais, tal como um ser humano, camundongo, rato ou outro mamífero. Um TCR pode estar ligado à célula ou na forma solúvel. Em algumas modalidades, para fins dos métodos fornecidos, o TCR está na forma de ligação celular expressa na superfície de uma célula.
[00388] Em algumas modalidades, o TCR é um TCR de comprimento total. Em algumas modalidades, o TCR é uma porção de ligação a antígeno. Em algumas modalidades, o TCR é um TCR dimérico (dTCR). Em algumas modalidades, o TCR é um TCR com uma única cadeia (sc- TCR). Em algumas modalidades, um dTCR ou scTCR tem as estruturas descritas nos documentos WO 03/020763, WO 04/033685, WO2011/044186.
[00389] Em algumas modalidades, o TCR contém uma sequência que corresponde à sequência transmembrana. Em algumas modalidades, o TCR contém uma sequência que corresponde a sequências citoplasmáticas. Em algumas modalidades, o TCR é capaz de formar um complexo de TCR com a CD3. Em algumas modalidades, qualquer um dos TCRs, incluindo um dTCR ou scTCR, pode ser ligado a domínios de sinalização que produzem um TCR ativo na superfície de uma célula T. Em algumas modalidades, o TCR é expresso na superfície das células.
[00390] Em algumas modalidades, um dTCR contém um primeiro polipeptídeo em que uma sequência que corresponde a uma sequência de região variável de cadeia α de TCR é fundida ao N-término de uma sequência que corresponde a uma sequência extracelular da região constante de cadeia α de TCR e um segundo polipeptídeo no qual uma sequência que corresponde a uma sequência da região variável de cadeia β de TCR é fundida ao N-término, uma sequência que corresponde a uma sequência extracelular da região constante da cadeia β de TCR, os primeiro e segundo polipeptídeos estando ligados através de uma ligação de dissulfeto. Em algumas modalidades, a ligação pode corresponder à ligação de dissulfeto intercadeia nativa presente em TCRs αβ diméricos nativos. Em algumas modalidades, as ligações de dissulfeto intercadeia não estão presentes em um TCR nativo. Por exemplo, em algumas modalidades, uma ou mais cisteínas podem ser incorporadas nas sequências extracelulares da região constante do par de polipeptídeos de dTCR. Em alguns casos, tanto uma ligação de dissulfeto nativa quanto uma não-nativa podem ser desejáveis. Em algumas modalidades, o TCR contém uma sequência transmembrana para ancoragem à membrana.
[00391] Em algumas modalidades, um dTCR contém uma cadeia α de TCR que contém um domínio α variável, um domínio α constante e um primeiro motivo de dimerização ligado ao C-término do domínio α constante e uma cadeia β de TCR que compreende um domínio β variável, um domínio β constante e um primeiro motivo de dimerização ligado ao C-término do domínio β constante, em que os primeiro e segundo motivos de dimerização interagem facilmente para formar uma ligação covalente entre um aminoácido no primeiro motivo de dimerização e um aminoácido no segundo motivo de dimerização que liga as cadeias TCR α e TCR β juntas.
[00392] Em algumas modalidades, o TCR é um scTCR. Normalmente, um scTCR pode ser gerado usando métodos conhecidos. Consulte, por exemplo, Soo Hoo, W. F. et al. PNAS (USA) 89, 4759 (1992); Wülfing, C. e Plückthun, A., J. Mol. Biol. 242, 655 (1994); Kurucz, I. et al. PNAS (USA) 90 3830 (1993); Publicações Internacionais PCT Nos WO 96/13593, WO 96/18105, WO99/60120, WO99/18129, WO 03/020763, WO2011/044186; e Schlueter, C. J. et al. J. Mol. Biol. 256, 859 (1996). Em algumas modalidades, um scTCR contém uma ligação intercadeia de dissulfeto não nativa introduzida para facilitar a associação das cadeias de TCR (consulte, por exemplo, Publicação Internacional PCT Nº WO 03/020763). Em algumas modalidades, um scTCR é um TCR truncado não ligado por dissulfeto em que zíperes de leucina heterólogos fundidos aos seus C-términos facilitam a associação de cadeia (consulte, por exemplo, Publicação Internacional PCT Nº WO99/60120). Em algumas modalidades, um scTCR contém um domínio variável de TCRα covalentemente ligado a um domínio variável de TCRβ através de um ligante peptídico (consulte, por exemplo, Publicação Internacional PCT Nº WO99/18129).
[00393] Em algumas modalidades, um scTCR contém um primeiro segmento constituído por uma sequência de aminoácidos que corresponde a uma região variável de cadeia α de TCR, um segundo segmento constituído por uma sequência de aminoácidos que corresponde a uma sequência de região variável de cadeia β de TCR fundida ao N-término de uma sequência de aminoácidos que corresponde a uma sequência extracelular do domínio constante da cadeia β de TCR e uma sequência de ligação que liga o C-término do primeiro segmento ao N-término do segundo segmento.
[00394] Em algumas modalidades, um scTCR contém um primeiro segmento constituído por uma sequência de região variável de cadeia α fundida ao N-término de uma sequência de domínio constante extracelular de cadeia α e um segundo segmento constituído por uma sequência de região variável de cadeia β fundida ao N-término de uma constante extracelular de cadeia β de sequência e sequência transmembrana e, opcionalmente, uma sequência de ligação que liga o C-término do primeiro segmento ao N-término do segundo segmento.
[00395] Em algumas modalidades, um scTCR contém um primeiro segmento constituído por uma sequência de região variável de cadeia β de TCR fundida ao N-término de uma sequência de domínio constante extracelular de cadeia β e um segundo segmento constituído por uma sequência de região variável de cadeia α fundida ao N-término de um domínio constante extracelular da cadeia α e sequência transmembrana e, opcionalmente, uma sequência de ligação que liga o C-término do primeiro segmento ao N-término do segundo segmento.
[00396] Em algumas modalidades, o ligante de um scTCRs que liga os primeiro e segundo segmentos de TCR pode ser qualquer ligante capaz de formar uma única fita polipeptídica, ao mesmo tempo em que retém a especificidade de ligação ao TCR. Em algumas modalidades, a sequência de ligação pode, por exemplo, ter a fórmula -P-AA-P-, em que P é prolina e AA representa uma sequência de aminoácidos em que os aminoácidos são glicina e serina. Em algumas modalidades, os primeiro e segundo segmentos são emparelhados de modo que as sequências da região variável dos mesmos sejam orientadas para tal ligação. Portanto, em alguns casos, o ligante tem um comprimento suficiente para abranger a distância entre o C-término do primeiro segmento e o N-término do segundo segmento, ou vice-versa, mas não é muito longo para bloquear ou reduzir a ligação do scTCR ao ligante alvo. Em algumas modalidades, o ligante pode conter a partir de ou cerca de 10 a 45 aminoácidos, tal como 10 a 30 aminoácidos ou 26 a 41 resíduos de aminoácidos, por exemplo 29, 30, 31 ou 32 aminoácidos. Em algumas modalidades, o ligante tem a fórmula -PGGG-(SGGGG)5-P-, em que P é prolina, G é glicina e S é serina (SEQ ID NO: 28). Em algumas modalidades, o ligante tem a sequência GSADDAKKDAAKKDGKS (SEQ ID NO: 29)
[00397] Em algumas modalidades, o scTCR contém uma ligação de dissulfeto covalente que liga um resíduo da região de imunoglobulina do domínio constante da cadeia α a um resíduo da região de imunoglobulina do domínio constante da cadeia β. Em algumas modalidades, a ligação de dissulfeto intercadeia em um TCR nativo não está presente. Por exemplo, em algumas modalidades, uma ou mais cisteínas podem ser incorporadas nas sequências extracelulares da região constante dos primeiro e segundo segmentos do polipeptídeo de scTCR. Em alguns casos, tanto uma ligação de dissulfeto nativa quanto uma não-nativa podem ser desejáveis.
[00398] Em algumas modalidades de um dTCR ou scTCR que contém ligações de dissulfeto intercadeia introduzidas, ligações de dissulfeto nativas não estão presentes. Em algumas modalidades, uma ou mais das cisteínas nativas que formam ligações de dissulfeto intercadeia nativas são substituídas por outro resíduo, tal como por uma serina ou alanina. Em algumas modalidades, uma ligação de dissulfeto introduzida pode ser formada por meio de mutação de resíduos diferentes de cisteína nos primeiro e segundo segmentos por cisteína. Ligações de dissulfeto não nativas exemplificativas de um TCR são descritas na Publicação Internacional PCT Nº WO2006/000830.
[00399] Em algumas modalidades, o TCR ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo exibe uma afinidade que tem uma constante de ligação de equilíbrio por um antígeno alvo entre ou entre cerca de 10-5 e 10-12 M e todos os valores e faixas individuais. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é um complexo de MHC-peptídeo ou ligante.
[00400] Em algumas modalidades, o ácido nucleico ou os ácidos nucleicos que codificam um TCR, tal como as cadeias α e β, podem ser amplificados por PCR, clonagem ou outros meios adequados e clonados em um vetor ou vetores de expressão adequados. O vetor de expressão pode ser qualquer vetor de expressão recombinante adequado e pode ser usado para transformar ou transfectar qualquer hospedeiro adequado. Vetores adequados incluem aqueles concebidos para propagação e expansão ou para expressão, ou ambos, tais como plasmídeos e vírus.
[00401] Em algumas modalidades, o vetor pode ser um vetor da série pUC (Fermentas Life Sciences), da série pBluescript (Stratagene, LaJolla, Calif.), da série pET (Novagen, Madison, Wis.), da série pGEX (Pharmacia Biotech, Uppsala, Suécia) ou da série pEX (Clontech, Palo Alto, Califórnia). Em alguns casos, vetores de bacteriófagos, tais como λG10, λGT11, λZapII (Stratagene), λEMBL4 e λNM1149, também podem ser usados. Em algumas modalidades, os vetores de expressão de plantas podem ser usados e incluem pBI01, pBI101.2, pBI101.3, pBI121 e pBIN19 (Clontech). Em algumas modalidades, os vetores de expressão animal incluem pEUK-Cl, pMAM e pMAMneo (Clontech). Em algumas modalidades, um vetor viral é usado, tal como um vetor retroviral.
[00402] Em algumas modalidades, os vetores de expressão recombinantes podem ser preparados usando técnicas de DNA recombinante padrão. Em algumas modalidades, os vetores podem conter sequências reguladoras, tais como códons de início e término de transcrição e tradução, os quais são específicos para o tipo de hospedeiro (por exemplo, bactéria, fungo, planta ou animal) no qual o vetor deve ser introduzido, conforme apropriado e levando em consideração se o vetor é com base em DNA ou RNA. Em algumas modalidades, o vetor pode conter um promotor não nativo operativamente ligado à sequência de nucleotídeos que codifica o TCR ou porção de ligação a antígeno (ou outra molécula de ligação do peptídeo do MHC). Em algumas modalidades, o promotor pode ser um promotor não viral ou um promotor viral, tal como um promotor de citomegalovírus (CMV), um promotor de SV40, um promotor de RSV e um promotor encontrado na repetição do terminal longa do vírus de células-tronco de murino. Outros promotores conhecidos também são considerados.
[00403] Em algumas modalidades, para gerar um vetor que codifica um TCR, as cadeias α e β são amplificadas por PCR a partir do cDNA total isolado de um clone de células T que expressam o TCR de interesse e clonadas em um vetor de expressão. Em algumas modalidades, as cadeias α e β são clonadas no mesmo vetor. Em algumas modalidades, as cadeias α e β são clonadas em vetores diferentes. Em algumas modalidades, as cadeias α e β geradas são incorporadas em um vetor retroviral, por exemplo, lentiviral. B. Células Geneticamente Manipuladas e Métodos de Produção de Células
[00404] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos envolvem administrar um indivíduo que tem uma doença ou condição células que expressam um receptor antigênico recombinante. Vários métodos para a introdução de componentes geneticamente modificados, por exemplo, receptores recombinantes, por exemplo, CARs ou TCRs, são bem conhecidos e podem ser usados com os métodos e composições fornecidos. Métodos exemplificativos incluem aqueles para transferência de ácidos nucleicos que codificam os receptores, incluindo via viral, por exemplo, retroviral ou lentiviral, transdução, transposons e eletroporação.
[00405] Dentre as células que expressam os receptores e são administradas por meio dos métodos fornecidos estão células manipuladas. A engenharia genética geralmente envolve a introdução de um ácido nucleico que codifica o componente recombinante ou concebido em uma composição que contém as células, tal como através de transdução retroviral, transfecção ou transformação. C. Receptores de Autoanticorpos Quiméricos (CAARs)
[00406] Em algumas modalidades, dentre o receptor recombinante expresso pelas células manipuladas usadas em relação aos métodos, usos, artigos de manufatura e composições fornecidos está um receptor de autoanticorpo quimérico (CAAR). Em algumas modalidades, o CAAR é específico para um autoanticorpo. Em algumas modalidades, uma célula que expressa o CAAR, tal como uma célula T concebida para expressar um CAAR, pode ser usada para se ligar e matar especificamente células que expressam autoanticorpos, mas não células que expressam anticorpos normais. Em algumas modalidades, as células que expressam CAAR podem ser usadas para tratar uma doença autoimune associada à expressão de autoantígenos, tais como doenças autoimunes. Em algumas modalidades, as células que expressam CAAR podem ter como alvo células B as quais, em última análise, produzem os autoanticorpos e exibem os autoanticorpos em suas superfícies celulares, marcam estas células B como alvos específicos da doença para intervenção terapêutica. Em algumas modalidades, as células que expressam CAAR podem ser usadas para ter como alvo e matar de forma eficiente as células B patogênicas em doenças autoimunes, ao ter como alvo as células B causadoras de doenças usando um receptor de autoanticorpo quimérico específico para antígeno. Em algumas modalidades, o receptor recombinante é um CAAR, tal como qualquer um descrito na Publicação de Pedido de Patente Norte-Americana N° US 2017/0051035.
[00407] Em algumas modalidades, o CAAR compreende um domínio de ligação de autoanticorpo, um domínio transmembrana e uma região de sinalização intracelular. Em algumas modalidades, a região de sinalização intracelular compreende um domínio de sinalização intracelular. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular é ou compreende um domínio de sinalização primário, um domínio de sinalização que é capaz de induzir a um sinal de ativação primário em uma célula T, um domínio de sinalização de um componente de receptor de célula T (TCR) e/ou um domínio de sinalização que compreende um motivo de ativação com base em tirosina imunorreceptor (ITAM). Em algumas modalidades, a região de sinalização intracelular compreende uma região de sinalização secundária ou coestimuladora (regiões de sinalização intracelular secundárias).
[00408] Em algumas modalidades, o domínio de ligação de autoanticorpo compreende um autoantígeno ou um fragmento do mesmo. A escolha do autoantígeno pode depender do tipo de autoanticorpo alvo. Por exemplo, o autoantígeno pode ser escolhido porque reconhece um autoanticorpo em uma célula alvo, tal como uma célula B, associada a um estado patológico particular, por exemplo, uma doença autoimune, tal como uma doença autoimune mediada por autoanticorpos. Em algumas modalidades, a doença autoimune inclui pênfigo vulgar (PV). Autoantígenos exemplificativos incluem desmogleína 1 (Dsg1) e Dsg3. D. Multi-Direcionamento
[00409] Em algumas modalidades, as células usadas em relação aos métodos, usos, artigos de manufatura e composições fornecidos incluem células que empregam estratégias de multi-direcionamento, tal como a expressão de dois ou mais receptores geneticamente modificados na célula, cada um reconhecendo o mesmo ou um antígeno diferente e, tipicamente, cada um incluindo um componente de sinalização intracelular diferente. Tais estratégias de multi- direcionamento são descritas, por exemplo, na Publicação de Pedido de Patente Internacional Nº WO 2014055668 A1 (a qual descreve combinações de CARs ativadores e coestimuladores, por exemplo, que têm como alvo dois antígenos diferentes presentes individualmente fora-do-alvo, por exemplo, células normais, mas presentes juntos apenas nas células da doença ou condição a ser tratada) e Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5 (215) (2013) (o qual descreve células que expressam um CAR ativador e inibidor, tais como aqueles nos quais o CAR ativador se liga a um antígeno expresso em células normais ou não doentes e células da doença ou condição a ser tratada, e o CAR inibidor se liga a outro antígeno expresso apenas nas células normais ou nas células que não se deseja tratar).
[00410] Por exemplo, em algumas modalidades, as células incluem um receptor que expressa um primeiro receptor antigênico geneticamente modificado (por exemplo, CAR ou TCR) que é capaz de induzir a um sinal de ativação ou estimulador para a célula, geralmente mediante ligação específica ao antígeno reconhecido pelo primeiro receptor, por exemplo, o primeiro antígeno. Em algumas modalidades,
a célula inclui ainda um segundo receptor antigênico geneticamente modificado (por exemplo, CAR ou TCR), por exemplo, um receptor coestimulador quimérico, o qual é capaz de induzir a um sinal coestimulador para a célula imune, geralmente mediante ligação específica a um segundo antígeno reconhecido pelo segundo receptor. Em algumas modalidades, o primeiro antígeno e o segundo antígeno são iguais. Em algumas modalidades, o primeiro antígeno e o segundo antígeno são diferentes.
[00411] Em algumas modalidades, os primeiro e/ou segundo receptores antigênicos geneticamente modificados (por exemplo, CAR ou TCR) são capazes de induzir a um sinal de ativação para a célula. Em algumas modalidades, o receptor inclui um componente de sinalização intracelular que contém ITAM ou motivos similares a ITAM. Em algumas modalidades, a ativação induzida pelo primeiro receptor envolve uma transdução de sinal ou alteração na expressão da proteína na célula, resultando em início de uma resposta imune, tal como fosforilação de ITAM e/ou início da cascata de transdução de sinal mediada por ITAM, formação de uma sinapse imunológica e/ou agrupamento de moléculas próximo do receptor ligado (por exemplo, CD4 ou CD8, etc.), ativação de um ou mais fatores de transcrição, tais como NF-κB e/ou AP-1, e/ou indução da expressão gênica de fatores tais como citocinas, proliferação e/ou sobrevivência.
[00412] Em algumas modalidades, os primeiro e/ou segundo receptores incluem domínios de sinalização intracelular ou regiões de receptores coestimuladores, tais como CD28, CD137 (4-1BB), OX40 e/ou ICOS. Em algumas modalidades, os primeiro e segundo receptores incluem um domínio de sinalização intracelular de um receptor coestimulador que são diferentes. Em uma modalidade, o primeiro receptor contém uma região de sinalização coestimuladora de CD28 e o segundo receptor contém uma região de sinalização coestimuladora de 4-1BB ou vice-versa.
[00413] Em algumas modalidades, os primeiro e/ou segundo receptores incluem um domínio de sinalização intracelular que contém ITAM ou motivos similares a ITAM e um domínio de sinalização intracelular de um receptor coestimulador.
[00414] Em algumas modalidades, o primeiro receptor contém um domínio de sinalização intracelular que contém ITAM ou motivos similares a ITAM e o segundo receptor contém um domínio de sinalização intracelular de um receptor coestimulador. O sinal coestimulador, em combinação com o sinal de ativação induzido na mesma célula, é aquele que resulta em uma resposta imune, tal como uma resposta imune robusta e sustentada, tal como expressão gênica aumentada, secreção de citocinas e outros fatores, e funções efetoras mediadas por células T, tal como morte celular.
[00415] Em algumas modalidades, nem a ligação do primeiro receptor individualmente, nem a ligação do segundo receptor individualmente induz a uma resposta imune robusta. Em alguns aspectos, se apenas um receptor for ligado, a célula se torna tolerante ou não responde ao antígeno ou é inibida e/ou não é induzida a proliferar ou secretar fatores ou desempenhar funções efetoras. Em algumas destas modalidades, no entanto, quando a pluralidade de receptores é ligada, tal como após o encontro de uma célula que expressa os primeiro e segundo antígenos, uma resposta desejada é alcançada, tal como ativação ou estimulação imune completa, por exemplo, conforme indicado pela secreção de uma ou mais citocinas, proliferação, persistência e/ou realização de uma função efetora imune, tal como morte citotóxica de uma célula alvo.
[00416] Em algumas modalidades, os dois receptores induzem, respectivamente, a um sinal de ativação e inibidor para a célula, de modo que a ligação por um dos receptores ao seu antígeno ativa a célula ou induz a uma resposta, mas a ligação pelo segundo receptor inibidor a seu antígeno induz a um sinal que suprime ou amortece esta resposta. Exemplos são combinações de CARs ativadores e CARs inibidores ou iCARs. Tal estratégia pode ser usada, por exemplo, onde o CAR ativador se liga a um antígeno expresso em uma doença ou condição, mas também é expresso em células normais, e o receptor inibidor se liga a um antígeno separado que é expresso nas células normais, mas não células da doença ou condição.
[00417] Em algumas modalidades, a estratégia de multi- direcionamento é empregada em um caso onde um antígeno associado a uma doença ou condição particular é expresso em uma célula não doente e/ou é expresso na própria célula manipulada, seja transitoriamente (por exemplo, mediante estimulação associada à engenharia genética) ou permanentemente. Em tais casos, ao requerer a ligação de dois receptores antigênicos específicos separados e individualmente, a especificidade, a seletividade e/ou a eficácia podem ser aprimoradas.
[00418] Em algumas modalidades, a pluralidade de antígenos, por exemplo, os primeiro e segundo antígenos, são expressos na célula, tecido ou doença ou condição alvo, tal como na célula cancerosa. Em alguns aspectos, a célula, tecido, doença ou condição é mieloma múltiplo ou uma célula de mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, um ou mais dentre a pluralidade de antígenos geralmente também é expresso em uma célula que não se deseja atingir com a terapia celular, tal como uma célula ou tecido normal ou não doente e/ou as próprias células manipuladas. Em tais modalidades, ao requerer a ligação de múltiplos receptores para alcançar uma resposta da célula, a especificidade e/ou eficácia é aumentada. IV. MÉTODOS DE MANIPULAÇÃO DE CÉLULAS
[00419] Em modalidades particulares, as células manipuladas são produzidas por meio de um processo que gera uma composição de saída de células T enriquecidas a partir de uma ou mais composições de entrada e/ou de uma única amostra biológica. Em determinadas modalidades, a composição de saída contém células que expressam um receptor recombinante, por exemplo, um CAR, tal como um CAR anti-CD19. Em modalidades particulares, as células das composições de saída são adequadas para administração a um indivíduo como uma terapia, por exemplo, uma terapia de células autólogas. Em algumas modalidades, a composição de saída é uma composição de células T CD4+ ou CD8+ enriquecida.
[00420] Em algumas modalidades, o processo para gerar ou produzir células manipuladas é através de um processo que inclui algumas ou todas as etapas de: coleta ou obtenção de uma amostra biológica; isolar, selecionar ou enriquecer células de entrada da amostra biológica; criopreservar e armazenar as células de entrada; descongelar e/ou incubar as células de entrada sob condições estimulantes; manipular as células estimuladas para expressar ou conter um polinucleotídeo recombinante, por exemplo, um polinucleotídeo que codifica um receptor recombinante, tal como um CAR; cultivar as células manipuladas, por exemplo, em uma quantidade, densidade ou expansão limite; formular as células cultivadas em uma composição de saída; e/ou criopreservar e armazenar das células de saída formuladas até que as células sejam liberadas para infusão e/ou sejam adequadas para serem administradas a um indivíduo. Em determinadas modalidades, o processo é realizado com duas ou mais composições de entrada de células T enriquecidas, tal como uma composição de células T CD4+ separada e uma composição de células T CD8+ separada, as quais são processadas separadamente e manipuladas a partir da mesma amostra biológica inicial ou inicial e infundidas de volta no indivíduo em uma proporção definida, por exemplo, uma proporção de 1:1 de células T CD4+ para CD8+. Em algumas modalidades, as células T enriquecidas são ou incluem células T manipuladas, por exemplo, células T transduzidas para expressar um receptor recombinante.
[00421] Em modalidades particulares, uma composição de saída de células manipuladas que expressam um receptor recombinante (por exemplo, anti-CD19 CAR) é produzida a partir de uma composição inicial e/ou de entrada de células. Em algumas modalidades, a composição de entrada é uma composição de células T enriquecidas, células T CD4+ enriquecidas e/ou células T CD8+ enriquecidas (daqui em diante denominadas também como composições de células T enriquecidas, composições de células T CD4+ enriquecidas e composições de células T CD8+ enriquecidas, respectivamente). Em algumas modalidades, a dose de células T manipuladas empregadas nas modalidades fornecidas no presente documento, para administração a um indivíduo, é enriquecida para células T CD4+ ou CD8+. Em alguns aspectos, o enriquecimento é comparado à quantidade ou porcentagem de células CD4+ ou CD8+ que estão presentes na composição de entrada e/ou uma única amostra biológica, tal como uma amostra obtida do indivíduo. Em algumas modalidades, uma composição enriquecida em células T CD4+ contém pelo menos 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % ou 99,9 % de células T CD4+. Em modalidades particulares, a composição de células T CD4+ enriquecidas contém 100 % de células T CD4+. Em determinadas modalidades, a composição de células T enriquecidas inclui ou contém menos de 20 %, menos de 10 %, menos de 5 %, menos de 1 %, menos de 0,1 % ou menos de 0,01 % de células T CD8+ e/ou não contém células T CD8+ e/ou é isenta ou substancialmente isenta de células T CD8+. Em algumas modalidades, as populações de células consistem essencialmente em células T CD4+. Em algumas modalidades, uma composição enriquecida em células T CD8+ contém pelo menos 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % ou 99,9 % de células T CD8+ ou contém ou contém cerca de 100 % de células T CD8+. Em determinadas modalidades, a composição de células T CD8+ enriquecidas inclui ou contém menos de 20 %, menos de 10 %, menos de 5 %, menos de 1 %, menos de 0,1 % ou menos de 0,01 % de células T CD4+ e/ou não contém células T CD4+ e/ou é isenta ou substancialmente isenta de células T CD4+. Em algumas modalidades, as populações de células consistem essencialmente em células T CD8+.
[00422] Em determinadas modalidades, o processo para a produção de células manipuladas pode incluir ainda um ou mais dentre: ativar e/ou estimular células, por exemplo, células de uma composição de entrada; manipular geneticamente as células ativadas e/ou estimuladas, por exemplo, para introduzir um polinucleotídeo que codifica uma proteína recombinante por meio de transdução ou transfecção; e/ou cultivar as células manipuladas, por exemplo, sob condições que promovam a proliferação e/ou expansão. Em modalidades particulares, os métodos fornecidos podem ser usados em relação à semeadura, coleta e/ou formulação de composições de saída produzidas após as células terem sido incubadas, ativadas, estimuladas, manipuladas, transduzidas, transfectadas e/ou cultivadas.
[00423] Em algumas modalidades, células manipuladas, tal como aquelas que expressam um CAR anti-CD19 conforme descrito, usadas de acordo com os métodos fornecidos são produzidas ou geradas por meio de um processo para selecionar, isolar, ativar, estimular, expandir, cultivar e/ou formular células. Em algumas modalidades, tais métodos incluem qualquer um conforme descrito no presente documento.
[00424] Em algumas modalidades, as células manipuladas, tais como aquelas que expressam um CAR anti-CD19 conforme descrito, usadas de acordo com os métodos e usos fornecidos são produzidas ou geradas por meio de um processo para selecionar, isolar, ativar, estimular, expandir, cultivar e/ou formular células. Em algumas modalidades, tais métodos incluem qualquer um conforme descrito no presente documento.
[00425] Em algumas modalidades, células manipuladas, tais como aquelas que expressam um CAR anti-CD19 conforme descrito, são usadas de acordo com os métodos e usos fornecidos e são produzidas ou geradas por meio de processos exemplificativos conforme descrito, por exemplo, nos documentos WO 2019/089855 e WO 2015/164675.
[00426] Em algumas modalidades, processos exemplificativos para gerar, produzir ou fabricar as células manipuladas, tais como aquelas que expressam um CAR anti-CD19 conforme descrito ou uma composição que compreende tais células, tal como uma composição que compreende células T CD4+ manipuladas e células T CD8+ manipuladas, cada uma expressando o mesmo receptor antigênico quimérico anti-CD19 (CAR), envolvem submeter populações de células CD4+ e CD8+ enriquecidas, separadamente, a etapas de processamento. Em alguns aspectos do processo exemplificativo para gerar ou fabricar células manipuladas, as células CD4+ e CD8+ são selecionadas separadamente a partir de células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) humano, por exemplo, as quais são obtidas através de leucaferese, gerando composições de células CD4+ e CD8+ enriquecidas separadas. Em alguns aspectos, tais células podem ser criopreservadas. Em alguns aspectos, as composições de células T CD4+ e CD8+ podem ser subsequentemente descongeladas e separadamente submetidas a etapas de estimulação, transdução e expansão.
[00427] Em alguns aspectos do processo exemplificativo para gerar ou produzir células manipuladas, células CD4+ e CD8+ descongeladas são estimuladas separadamente, por exemplo, na presença de esferas revestidas com poliestireno paramagnético acopladas a anticorpos anti- CD3 e anti-CD28 (tal como em uma proporção de esferas para célula de 1:1). Em alguns aspectos, a estimulação é realizada em meios que contêm IL-2 recombinante humana, IL-15 recombinante humana e N- acetil cisteína (NAC). Em alguns aspectos, o meio de cultura de células para células CD4+ também pode incluir IL-7 recombinante humana.
[00428] Em alguns aspectos do processo exemplificativo para gerar ou produzir células manipuladas, após a introdução das esferas, as células CD4+ e CD8+ são transduzidas separadamente com um vetor lentiviral que codifica o mesmo CAR, tal como o mesmo CAR anti-CD19. Em alguns aspectos, o CAR pode conter um scFv anti-CD19 derivado de um anticorpo de murino, um espaçador de imunoglobulina, um domínio transmembrana derivado de CD28, uma região coestimuladora derivada de 4-1BB e um domínio de sinalização intracelular de CD3- zeta. Em alguns aspectos, o vetor pode codificar um receptor truncado que serve como um marcador substituto para a expressão do CAR que está conectado à construção de CAR através de uma sequência T2A. Em alguns aspectos do processo exemplificativo, as células são transduzidas na presença de 10 µg/ml de sulfato de protamina.
[00429] Em alguns aspectos do processo exemplificativo para gerar ou fabricar células manipuladas, após a transdução, as esferas são removidas das composições de células através de exposição a um campo magnético. Em alguns aspectos, as composições de células CD4+ e CD8+ são cultivadas separadamente para expansão com mistura contínua e transferência de oxigênio por um biorreator (por exemplo, um Biorreator Xuri W25). Em alguns casos, poloxâmero é adicionado ao meio. Em alguns aspectos, as composições de células CD4+ e CD8+ são cultivadas na presença de IL-2 e IL-15. Em alguns aspectos, o meio de células CD4+ também incluiu IL-7. Em alguns casos, as células CD4+ e CD8+ são, cada uma, cultivadas, antes da colheita, para uma expansão de 4 vezes. Em alguns aspectos, um dia após atingir o limite, as células de cada composição podem ser coletadas, formuladas e criopreservadas separadamente. Em alguns aspectos, os processos exemplificativos para gerar, produzir ou fabricar as células manipuladas, tais como aquelas que expressam um CAR anti-CD19 conforme descrito ou uma composição que compreende tais células, tal como uma composição que compreende células T CD4+ manipuladas e célula T CD8+ manipuladas, cada uma expressando o mesmo receptor antigênico quimérico anti-CD19 (CAR), incluem aquelas descritas na Tabela 11 abaixo. Tabela 11: Processo Exemplificativo Para Gerar Células T-CAR CD4+ e CD8+ Estágio Células CD4+ Células CD8+  Esferas  esferas conjugadas com anticorpo conjugadas com anticorpo anti-CD3/CD28 anti-CD3/CD28 Estimulação  proporção de  proporção de (dia 1-2) esferas para células de 1:1 esferas para células de 1:1  meio: IL-2, IL-7,  meio: IL-2, IL-15 IL-15 e NAC e NAC  transdução  transdução Transdução adjuvante (por exemplo, 10 adjuvante (por exemplo, 10 (dia 2-5) µg/ml de sulfato de µg/ml de sulfato de protamina) protamina) Remoção de  remoção de  remoção de esferas esferas magnéticas esferas magnéticas (dia 5*)  biorreator de  biorreator de Expansão movimento oscilante e/ou movimento oscilante e/ou (dia 5* – mistura contínua mistura contínua Coleta)  meio: IL-2, IL-7,  meio: IL-2, IL15 IL15 e poloxâmero e poloxâmero *Aproximado
[00430] Em outros aspectos, um processo exemplificativo diferente para gerar, produzir ou fabricar as células manipuladas ou uma composição que compreende tais células inclui um processo que difere do processo exemplificativo acima em que: NAC não é adicionado ao meio durante estimulação; o meio de células CD4+ não contém IL-2; as células são estimuladas em uma proporção de esferas para células de 3:1; as células são transduzidas com uma concentração mais alta de sulfato de protamina; a remoção das esferas ocorre por volta do dia 7; e a expansão é realizada em um ambiente estático, isto é, sem mistura ou perfusão contínua (por exemplo, perfusão semicontínua e/ou gradual) e sem poloxâmero.
[00431] Em algumas modalidades, pelo menos uma composição separada de células T CD4+ enriquecidas e pelo menos uma composição separada de células T CD8+ enriquecidas são isoladas, selecionadas, enriquecidas ou obtidas a partir de uma única amostra biológica, por exemplo, uma amostra de PBMCs ou outros glóbulos brancos do mesmo doador, tal como um paciente ou indivíduo saudável. Em algumas modalidades, uma composição separada de células T CD4+ enriquecidas e uma composição separada de células T CD8+ enriquecidas originadas, por exemplo, foram inicialmente isoladas, selecionadas e/ou enriquecidas, a partir da mesma amostra biológica, tal como uma única amostra biológica obtida, coletadas e/ou retiradas de um único indivíduo. Em algumas modalidades, uma amostra biológica é primeiro submetida à seleção de células T CD4+, onde ambas as frações negativas e positivas são retidas, e a fração negativa é ainda submetida à seleção de células T CD8+. Em outras modalidades, uma amostra biológica é primeiro submetida à seleção de células T CD8+, onde ambas as frações negativas e positivas são retidas, e a fração negativa é ainda submetida à seleção de células T CD4+. Em algumas modalidades, os métodos de seleção são realizados conforme descrito na Publicação Internacional PCT Nº WO2015/164675. Em algumas modalidades, os métodos de seleção são realizados conforme descrito na publicação Internacional PCT Nº
WO 2019/089855. Em alguns aspectos, uma amostra biológica é primeiro selecionada positivamente para células T CD8+ para gerar pelo menos uma composição de células T CD8+ enriquecidas e a fração negativa é, então, selecionada positivamente para células T CD4+ para gerar pelo menos uma composição de células T CD4+ enriquecidas, de modo que a pelo menos uma composição de células T CD8+ enriquecidas e a pelo menos uma composição de células T CD4+ enriquecidas sejam composições separadas da mesma amostra biológica, por exemplo, do mesmo paciente doador ou indivíduo saudável. Em alguns aspectos, duas ou mais composições separadas de células T enriquecidas, por exemplo, pelo menos uma sendo uma composição de células T CD4+ enriquecidas e pelo menos uma sendo uma composição separada de células T CD8+ enriquecidas do mesmo doador, são congeladas separadamente, por exemplo, crioprotegidas ou criopreservadas em um meio de criopreservação.
[00432] Em alguns aspectos, duas ou mais composições separadas de células T enriquecidas, por exemplo, pelo menos uma sendo uma composição de células T CD4+ enriquecidas e pelo menos uma sendo uma composição separada de células T CD8+ enriquecidas da mesma amostra biológica, são ativadas e/ou estimuladas através de contato com um reagente estimulador (por exemplo, através de incubação com esferas magnéticas conjugadas com anticorpos anti-CD3/anti-CD28 para ativação de células T). Em alguns aspectos, cada uma das composições de células ativadas/estimuladas é concebida, transduzida e/ou transfectada, por exemplo, usando um vetor viral que codifica uma proteína recombinante (por exemplo, CAR), para expressar a mesma proteína recombinante nas células T CD4+ e CD8+ de cada composição de células. Em alguns aspectos, o método compreende remover o reagente estimulador, por exemplo, esferas magnéticas, da composição de células. Em alguns aspectos, uma composição de células que contêm células T CD4+ manipuladas e uma composição de células que contêm células T CD8+ manipuladas são cultivadas separadamente, por exemplo, para expansão separada das populações de células T CD4+ e células T CD8+ nas mesmas. Em determinadas modalidades, uma composição de células da cultura é colhida e/ou coletada e/ou formulada, por exemplo, através de lavagem da composição de células em um tampão de formulação. Em determinadas modalidades, uma composição de células formuladas que compreende células T CD4+ e uma composição de células formuladas que compreende células T CD8+ é congelada, por exemplo, crioprotegida ou criopreservada em um meio de criopreservação. Em alguns aspectos, as células T CD4+ manipuladas e as células T CD8+ em cada formulação se originam do mesmo doador ou amostra biológica e expressam a mesma proteína recombinante (por exemplo, CAR, tal como CAR anti-CD19). Em alguns aspectos, uma formulação separada de CD4+ concebida e uma formulação separada de CD8+ concebida são administradas em uma proporção definida, por exemplo, 1:1, para um indivíduo que precisa, tal como o mesmo doador. A. Células e Preparação de Células Para Engenharia Genética
[00433] Em algumas modalidades, as células, tais como células T, usadas em relação aos métodos, usos, artigos de manufatura ou composições fornecidos, são células que foram geneticamente manipuladas para expressar um receptor recombinante, por exemplo, um CAR ou um TCR descrito no presente documento. Em algumas modalidades, as células manipuladas são usadas no contexto da terapia celular, por exemplo, terapia celular adotiva. Em algumas modalidades, as células manipuladas são células imunes. Em algumas modalidades, as células manipuladas são células T, tais como células T CD4+ ou CD8+.
[00434] Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos, tais como os ácidos nucleicos que codificam um receptor recombinante, são heterólogos, isto é, normalmente não estão presentes em uma célula ou amostra obtida da célula, tal como uma obtida de outro organismo ou célula a qual, por exemplo, normalmente não é encontrada na célula que está sendo manipulada e/ou um organismo do qual tal célula é derivada. Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos não ocorrem naturalmente, tal como um ácido nucleico não encontrado na natureza, incluindo um que compreende combinações quiméricas de ácidos nucleicos que codificam vários domínios de vários tipos de células diferentes.
[00435] As células geralmente são células eucariotas, tais como células de mamíferos, e normalmente são células humanas. Em algumas modalidades, as células são derivadas do sangue, medula óssea, linfa ou órgãos linfoides, são células do sistema imune, tais como células do sistema imune inato ou adaptativo, por exemplo, células mieloides ou linfoides, incluindo linfócitos, tipicamente T células e/ou células NK. Outras células exemplificativas incluem células-tronco, tais como células-tronco multipotentes e pluripotentes, incluindo células- tronco pluripotentes induzidas (iPSCs). As células são, tipicamente, células primárias, tais como aquelas isoladas diretamente de um indivíduo e/ou isoladas de um indivíduo e congeladas. Em algumas modalidades, as células incluem um ou mais subconjuntos de células T ou outros tipos de células, tais como populações de células T inteiras, células CD4+, células CD8+ e subpopulações das mesmas, tais como aquelas definidas por função, estado de ativação, maturidade, potencial para capacidades de diferenciação, expansão, recirculação, localização e/ou persistência, especificidade antigênica, tipo de receptor antigênico, presença em um órgão ou compartimento particular, perfil de secreção de marcador ou citocina e/ou grau de diferenciação. Com referência ao indivíduo a ser tratado, as células podem ser alogênicas e/ou autólogas.
Dentre os métodos, incluem-se os métodos prontos para uso. Em alguns aspectos, tal como para tecnologias prontas para uso, as células são pluripotentes e/ou multipotentes, tais como células-tronco, tais como células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs). Em algumas modalidades, os métodos incluem isolar células do indivíduo, preparar, processar, cultivar e/ou manipulá-las e reintroduzi-las no mesmo indivíduo, antes ou após a criopreservação.
[00436] Dentre os subtipos e subpopulações de células T e/ou de células T CD4+ e/ou de CD8+ estão células T (TN) não expostas, células T efetoras (TEFF), células T de memória e seus subtipos, tais como células T de memória de células-tronco (TSCM), célula T de memória central (TCM), células T de memória efetoras (TEM) ou células T de memória efetoras terminalmente diferenciadas, linfócitos infiltrantes de tumor (TIL), células T imaturas, células T maduras, células T auxiliares, células T citotóxicas, células T invariantes associadas à mucosa (MAIT), células T reguladoras adaptativas e de ocorrência natural (Treg), células T auxiliares, tais como células TH1, células TH2, células TH3, células TH17, células TH9, células TH22, células T auxiliares foliculares, células T alfa/beta e células T delta/gama.
[00437] Em algumas modalidades, as células são células assassinas naturais (NK). Em algumas modalidades, as células são monócitos ou granulócitos, por exemplo, células mieloides, macrófagos, neutrófilos, células dendríticas, mastócitos, eosinófilos e/ou basófilos.
[00438] Em algumas modalidades, as células incluem um ou mais ácidos nucleicos introduzidos por meio de engenharia genética e, assim, expressam produtos recombinantes ou geneticamente modificados de tais ácidos nucleicos. Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos são heterólogos ou seja, normalmente não estão presentes em uma célula ou amostra obtida da célula, tal como uma obtida de outro organismo ou célula a qual, por exemplo, normalmente não é encontrada na célula que está sendo manipulada e/ou um organismo do qual tal célula é derivada. Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos não ocorrem naturalmente, tal como um ácido nucleico não encontrado na natureza, incluindo um que compreende combinações quiméricas de ácidos nucleicos que codificam vários domínios de vários tipos de células diferentes.
[00439] Em algumas modalidades, a preparação das células manipuladas inclui uma ou mais etapas de cultura e/ou preparação. As células para introdução do ácido nucleico que codifica o receptor transgênico, tal como o CAR, podem ser isoladas de uma amostra, tal como uma amostra biológica, por exemplo, uma obtida ou derivada de um indivíduo. Em algumas modalidades, o indivíduo do qual a célula é isolada é aquele que tem a doença ou condição ou precisa de uma terapia celular ou ao qual a terapia celular será administrada. O indivíduo em algumas modalidades é um ser humano que precisa de uma intervenção terapêutica particular, tal como a terapia celular adotiva para a qual as células estão sendo isoladas, processadas e/ou manipuladas.
[00440] Consequentemente, as células, em algumas modalidades, são células primárias, por exemplo, células humanas primárias. As amostras incluem tecido, fluido e outras amostras retiradas diretamente do indivíduo, bem como amostras resultantes de uma ou mais etapas de processamento, tais como separação, centrifugação, engenharia genética (por exemplo, transdução com vetor viral), lavagem e/ou incubação. A amostra biológica pode ser uma amostra obtida diretamente de uma fonte biológica ou uma amostra que é processada. As amostras biológicas incluem, porém sem limitações, fluidos corporais, tais como sangue, plasma, soro, líquido cefalorraquidiano, líquido sinovial, urina e suor, tecido e amostras de órgãos, incluindo amostras processadas derivadas dos mesmos.
[00441] Em alguns aspectos, a amostra da qual as células são derivadas ou isoladas é sangue ou uma amostra derivada de sangue ou é ou é derivada de um produto de aférese ou leucaferese. Amostras exemplificativas incluem sangue total, células mononucleares de sangue periférico (PBMCs), leucócitos, medula óssea, timo, biópsia de tecido, tumor, leucemia, linfoma, nódulo linfático, tecido linfoide associado ao intestino, tecido linfoide associado à mucosa, baço, outros tecidos linfoides, fígado, pulmão, estômago, intestino, cólon, rim, pâncreas, mama, osso, próstata, colo do útero, testículos, ovários, amígdalas ou outro órgão e/ou células derivadas dos mesmos. As amostras incluem, no contexto da terapia celular, por exemplo, terapia celular adotiva, amostras de fontes autólogas e alogênicas.
[00442] Em algumas modalidades, as células são derivadas de linhagens de células, por exemplo, linhagens de células T. As células, em algumas modalidades, são obtidas de uma fonte xenogênica, por exemplo, de camundongo, rato, primata não humano e porco.
[00443] Em algumas modalidades, o isolamento das células inclui uma ou mais etapas de preparação e/ou separação de células com base em ausência de afinidade. Em alguns exemplos, as células são lavadas, centrifugadas e/ou incubadas na presença de um ou mais reagentes, por exemplo, para remover componentes indesejados, enriquecer componentes desejados, lisar ou remover células sensíveis a reagentes específicos. Em alguns exemplos, as células são separadas com base em uma ou mais propriedades, tais como densidade, propriedades aderentes, tamanho, sensibilidade e/ou resistência a componentes específicos.
[00444] Em alguns exemplos, as células sanguíneas em circulação de um indivíduo são obtidas, por exemplo, por meio de aferese ou leucaferese. As amostras, em alguns aspectos, contêm linfócitos, incluindo células T, monócitos, granulócitos, células B, outros glóbulos brancos nucleados, glóbulos vermelhos e/ou plaquetas e, em alguns aspectos, contêm células diferentes de glóbulos vermelhos e plaquetas.
[00445] Em algumas modalidades, as células sanguíneas coletadas do indivíduo são lavadas, por exemplo, para remover a fração plasmática e colocar as células em um tampão ou meio apropriado para as etapas de processamento subsequentes. Em algumas modalidades, as células são lavadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS). Em algumas modalidades, a solução de lavagem carece de cálcio e/ou magnésio e/ou muitos ou todos os cátions divalentes. Em alguns aspectos, uma etapa de lavagem é realizada em uma centrífuga de "fluxo direto" semiautomática (por exemplo, o processador de células Cobe 2991, Baxter) de acordo com as instruções do fabricante. Em alguns aspectos, uma etapa de lavagem é realizada por meio de filtração de fluxo tangencial (TFF) de acordo com as instruções do fabricante. Em algumas modalidades, as células são ressuspensas em uma variedade de tampões biocompatíveis após a lavagem tal como, por exemplo, PBS isento de Ca++/Mg++. Em determinadas modalidades, os componentes de uma amostra de células sanguíneas são removidos e as células diretamente ressuspensas no meio de cultura.
[00446] Em algumas modalidades, os métodos incluem métodos de separação de células com base na densidade, tal como a preparação de glóbulos brancos a partir do sangue periférico por meio de lise dos glóbulos vermelhos e centrifugação através de um gradiente de Percoll ou Ficoll.
[00447] Em algumas modalidades, pelo menos uma parte da etapa de seleção inclui a incubação de células com um reagente de seleção. A incubação com um reagente ou reagentes de seleção, por exemplo, como parte dos métodos de seleção que podem ser realizados usando um ou mais reagentes de seleção para a seleção de um ou mais tipos de células diferentes com base na expressão ou presença na ou sobre a célula de um ou mais moléculas específicas, tais como marcadores na superfície, por exemplo, proteínas na superfície, marcadores intracelulares ou ácido nucleico. Em algumas modalidades, qualquer método conhecido que usa um reagente de seleção ou reagentes para separação com base em tais marcadores pode ser usado. Em algumas modalidades, o reagente ou reagentes de seleção resultam em uma separação que se baseia em afinidade ou imunoafinidade. Por exemplo, a seleção, em alguns aspectos, inclui incubação com um reagente ou reagentes para separação de células e populações de células com base na expressão das células ou nível de expressão de um ou mais marcadores, normalmente marcadores na superfície celular, por exemplo, através de incubação com um anticorpo ou parceiro de ligação que se liga especificamente a tais marcadores, seguido geralmente por etapas de lavagem e separação de células que se ligaram ao anticorpo ou parceiro de ligação daquelas células que não se ligaram ao anticorpo ou parceiro de ligação.
[00448] Em alguns aspectos de tais processos, um volume de células é misturado com uma quantidade de um reagente de seleção com base em afinidade desejado. A seleção com base em imunoafinidade pode ser realizada usando qualquer sistema ou método que resulte em uma interação energética favorável entre as células que estão sendo separadas e a molécula que se liga especificamente ao marcador na célula, por exemplo, o anticorpo ou outro parceiro de ligação na superfície sólida, por exemplo, partícula. Em algumas modalidades, os métodos são realizados usando partículas, tais como esferas, por exemplo, esferas magnéticas, as quais são revestidas com um agente de seleção (por exemplo, anticorpo) específico para o marcador das células. As partículas (por exemplo, esferas) podem ser incubadas ou misturadas com células em um recipiente, tal como um tubo ou saco, enquanto se agita ou mistura, com uma proporção de densidade celular para partícula (por exemplo, esferas) constante para auxiliar na promoção de interações energeticamente favorecidas. Em outros casos, os métodos incluem selecionar células nas quais toda ou uma parte da seleção é realizada na cavidade interna de uma câmara centrífuga, por exemplo, sob rotação centrífuga. Em algumas modalidades, a incubação de células com reagentes de seleção, tais como reagentes de seleção com base em imunoafinidade, é realizada em uma câmara centrífuga. Em determinadas modalidades, o isolamento ou separação é realizado usando um sistema, dispositivo ou equipamento descrito na Publicação de Pedido de Patente Internacional Número WO2009/072003 ou US 20110003380 A1. Em um exemplo, o sistema é um sistema conforme descrito na Publicação Internacional Número WO2016/073602.
[00449] Em algumas modalidades, ao conduzir tais etapas de seleção ou partes das mesmas (por exemplo, incubação com partículas revestidas de anticorpo, por exemplo, esferas magnéticas) na cavidade de uma câmara centrífuga, o usuário é capaz de controlar determinados parâmetros, tais como o volume de várias soluções, adição de solução durante o processamento e seu tempo, o que pode conferir vantagens comparado com outros métodos disponíveis. Por exemplo, a capacidade de diminuir o volume de líquido na cavidade durante a incubação pode aumentar a concentração das partículas (por exemplo, reagente nas esferas) usado na seleção e, portanto, o potencial químico da solução, sem afetar o número total de células em a cavidade. Isto, por sua vez, pode aumentar as interações de pares entre as células que estão sendo processadas e as partículas usadas para a seleção. Em algumas modalidades, a realização da etapa de incubação na câmara, por exemplo, quando associada aos sistemas, circuitos e controle conforme descrito no presente documento, permite ao usuário efetuar a agitação da solução no(s) tempo(s) desejado(s) durante a incubação, o que também pode melhorar a interação.
[00450] Em algumas modalidades, pelo menos uma parte da etapa de seleção é realizada em uma câmara centrífuga que inclui incubação de células com um reagente de seleção. Em alguns aspectos de tais processos, um volume de células é misturado com uma quantidade de um reagente de seleção com base em afinidade desejado que é muito menor do que o normalmente empregado ao realizar seleções similares em um tubo ou recipiente para a seleção do mesmo número de células e/ou volume de células de acordo com as instruções do fabricante. Em algumas modalidades, uma quantidade de reagente ou reagente de seleção que é/são não mais de 5 %, não mais de 10 %, não mais de 15%, não mais de 20 %, não mais de 25 %, não mais de 50 %, não mais de 60%, não mais de 70% ou não mais de 80 % da quantidade do(s) mesmo(s) reagente(s) de seleção empregado(s) para a seleção de células em um tubo ou incubação com base em recipiente para o mesmo número de células e/ou o mesmo volume de células de acordo com as instruções do fabricante.
[00451] Em algumas modalidades, para seleção, por exemplo, seleção com base em imunoafinidade das células, as células são incubadas na cavidade da câmara em uma composição que também contém o tampão de seleção com um reagente de seleção, tal como uma molécula que especificamente se liga a um marcador na superfície em uma célula que deseja enriquecer e/ou empobrecer, mas não em outras células na composição, tal como um anticorpo, que opcionalmente é acoplado a um suporte, tal como um polímero ou superfície, por exemplo, esfera, por exemplo, esfera magnética, tais como esferas magnéticas acopladas a anticorpos monoclonais específicos para CD4 e CD8. Em algumas modalidades, conforme descrito, o reagente de seleção é adicionado às células na cavidade da câmara em uma quantidade que é substancialmente menor (por exemplo, não é mais de 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70% ou 80 % da quantidade) comparado com a quantidade do reagente de seleção que é tipicamente usado ou seria necessário para atingir a mesma eficiência ou eficiência similar de seleção do mesmo número de células ou o mesmo volume de células quando a seleção é realizada em um tubo com agitação ou rotação. Em algumas modalidades, a incubação é realizada com a adição de um tampão de seleção às células e reagente de seleção para atingir um volume alvo com incubação do reagente, por exemplo, de 10 mL a 200 mL, tal como pelo menos ou cerca de pelo menos 10 mL, 20 mL, 30 mL, 40 mL, 50 mL, 60 mL, 70 mL, 80 mL, 90 mL, 100 mL, 150 mL ou 200 mL. Em algumas modalidades, o tampão de seleção e o reagente de seleção são pré- misturados antes da adição às células. Em algumas modalidades, o tampão de seleção e o reagente de seleção são adicionados separadamente às células. Em algumas modalidades, a incubação de seleção é realizada com condição de mistura suave periódica, o que pode auxiliar na promoção de interações energeticamente favorecidas e permite o uso de menos reagente de seleção geral, ao mesmo tempo em que obtém uma alta eficiência de seleção.
[00452] Em algumas modalidades, a duração total da incubação com o reagente de seleção é a partir de ou a partir de cerca de 5 minutos a 6 horas, tal como 30 minutos a 3 horas, por exemplo, pelo menos ou cerca de pelo menos 30 minutos, 60 minutos, 120 minutos ou 180 minutos.
[00453] Em algumas modalidades, a incubação geralmente é realizada sob condições de mistura, tal como na presença de rotação, geralmente em uma força ou velocidade relativamente baixa, tal como uma velocidade menor do que aquela usada para sedimentar as células, tal como a partir de ou a partir de cerca de 600 rpm a 1700 rpm (por exemplo, igual ou cerca de ou pelo menos 600 rpm, 1000 rpm ou 1500 rpm ou 1700 rpm), tal como em um RCF na amostra ou parede da câmara ou outro recipiente a partir de ou a partir de cerca de 80 g a 100 g (por exemplo, igual ou cerca de ou pelo menos 80 g, 85 g, 90 g, 95 g ou 100 g). Em algumas modalidades, a rotação é realizada usando intervalos repetidos de uma rotação em baixa velocidade seguido por um período de descanso, tal como uma rotação e/ou descanso durante 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 segundos, tal como uma rotação de aproximadamente 1 ou 2 segundos, seguido por um descanso de aproximadamente 5, 6, 7 ou 8 segundos.
[00454] Em algumas modalidades, tal processo é realizado dentro do sistema totalmente fechado ao qual a câmara é parte integrante. Em algumas modalidades, este processo (e, em alguns aspectos, também uma ou mais etapas adicionais, tal como uma etapa de lavagem anterior que lava uma amostra que contém as células, tal como uma amostra de aferese) é realizado de forma automatizada, de modo que as células, reagente e outros componentes sejam puxados para dentro e empurrados para fora da câmara em momentos apropriados e centrifugação efetuada, de modo a concluir a etapa de lavagem e ligação em um único sistema fechado usando um programa automatizado.
[00455] Em algumas modalidades, após a incubação e/ou mistura das células e reagentes e/ou reagentes de seleção, as células incubadas são submetidas a uma separação para selecionar células com base na presença ou ausência do reagente ou reagentes em particular. Em algumas modalidades, a separação é realizada no mesmo sistema fechado em que a incubação de células com o reagente de seleção foi realizada. Em algumas modalidades, após a incubação com os reagentes de seleção, as células incubadas, incluindo células nas quais o reagente de seleção se ligou, são transferidas para um sistema para separação das células com base em imunoafinidade. Em algumas modalidades, o sistema para separação com base em imunoafinidade é ou contém uma coluna de separação magnética.
[00456] Em algumas modalidades, os métodos de isolamento incluem a separação de diferentes tipos de células com base na expressão ou presença na célula de uma ou mais moléculas específicas, tais como marcadores na superfície, por exemplo, proteínas na superfície, marcadores intracelulares ou ácido nucleico. Em algumas modalidades, qualquer método conhecido para separação com base em tais marcadores pode ser usado. Em algumas modalidades, a separação é uma separação com base em afinidade ou imunoafinidade. Por exemplo, o isolamento, em alguns aspectos, inclui a separação de células e populações de células com base na expressão das células ou nível de expressão de um ou mais marcadores, normalmente marcadores na superfície celular, por exemplo, através de incubação com um anticorpo ou parceiro de ligação que se liga especificamente a tais marcadores, seguidos geralmente por etapas de lavagem e separação de células que se ligaram ao anticorpo ou parceiro de ligação daquelas células que não se ligaram ao anticorpo ou parceiro de ligação.
[00457] Estas etapas de separação podem ser com base na seleção positiva, em que as células que se ligaram aos reagentes são retidas para uso posterior e/ou seleção negativa, em que as células que não se ligaram ao anticorpo ou parceiro de ligação são retidas. Em alguns exemplos, ambas as frações são retidas para uso posterior. Em alguns aspectos, a seleção negativa pode ser particularmente útil onde nenhum anticorpo está disponível que identifique especificamente um tipo de célula em uma população heterogênea, de modo que a separação seja melhor realizada com base em marcadores expressos por células diferentes da população desejada.
[00458] A separação não precisa resultar em 100 % de enriquecimento ou remoção de uma determinada população de células ou células que expressam um determinado marcador. Por exemplo, seleção positiva ou enriquecimento para células de um tipo particular, tais como aquelas que expressam um marcador, refere-se ao aumento do número ou porcentagem de tais células, mas não precisa resultar em uma ausência completa de células que não expressam o marcador. Da mesma forma, a seleção negativa, remoção ou esgotamento de células de um tipo particular, tais como aquelas que expressam um marcador, refere-se à diminuição do número ou porcentagem de tais células, mas não precisa resultar na remoção completa de todas estas células.
[00459] Em alguns exemplos, várias rodadas de etapas de separação são realizadas, em que a fração selecionada positiva ou negativamente a partir de uma etapa é submetida à outra etapa de separação, tal como uma seleção positiva ou negativa subsequente. Em alguns exemplos, uma única etapa de separação pode esgotar as células que expressam múltiplos marcadores simultaneamente, tal como ao incubar as células com uma pluralidade de anticorpos ou parceiros de ligação, cada um específico para um marcador direcionado para seleção negativa. Da mesma forma, vários tipos de células podem ser simultaneamente selecionados positivamente ao incubar as células com uma pluralidade de anticorpos ou parceiros de ligação expressos nos vários tipos de células.
[00460] Por exemplo, em alguns aspectos, subpopulações específicas de células T, tais como células positivas ou que expressam altos níveis de um ou mais marcadores na superfície, por exemplo, células T CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+ e/ou CD45RO+, são isoladas por meio de técnicas de seleção positiva ou negativa.
[00461] Por exemplo, células T CD3+, CD28+ podem ser selecionadas positivamente usando esferas magnéticas conjugadas com anticorpos anti-CD3/anti-CD28 (por exemplo, DYNABEADS M- 450 CD3/CD28 T Cell Expander).
[00462] Em algumas modalidades, o isolamento é realizado por meio de enriquecimento para uma determinada população de células através de seleção positiva ou esgotamento de uma determinada população de células através de seleção negativa. Em algumas modalidades, a seleção positiva ou negativa é realizada ao incubar as células com um ou mais anticorpos ou outro agente de ligação que se ligam especificamente a um ou mais marcadores na superfície expressos ou expressos (marcador+) em um nível relativamente mais alto (marcador hIGH) nas células positivas ou negativas selecionadas, respectivamente.
[00463] Em modalidades particulares, uma amostra biológica, por exemplo, uma amostra de PBMCs ou outros glóbulos brancos, é submetida à seleção de células T CD4+, onde tanto a fração negativa como a positiva são retidas. Em determinadas modalidades, as células T CD8+ são selecionadas da fração negativa. Em algumas modalidades, uma amostra biológica é submetida à seleção de células T CD8+, onde ambas as frações negativas e positivas são retidas. Em determinadas modalidades, as células T CD4+ são selecionadas da fração negativa.
[00464] Em algumas modalidades, as células T são separadas de uma amostra de PBMC através de seleção negativa de marcadores expressos em células não T, tais como células B, monócitos ou outros glóbulos brancos, tal como CD14. Em alguns aspectos, uma etapa de seleção de CD4+ ou CD8+ é usada para separar células T auxiliares CD4+ e CD8+ citotóxicas. Estas populações CD4+ e CD8+ podem ser ainda classificadas em subpopulações por meio de seleção positiva ou negativa para marcadores expressos ou expressos em um grau relativamente mais alto em uma ou mais subpopulações de células T não expostas, de memória e/ou efetoras.
[00465] Em algumas modalidades, as células CD8+ são ainda enriquecidas ou esgotadas de células-tronco não expostas, de memória central, de memória efetoras e/ou de memória centrais, tal como através de seleção positiva ou negativa com base em antígenos na superfície associados à respectiva subpopulação. Em algumas modalidades, o enriquecimento por células T de memória centrais (TCM) é realizado para aumentar a eficácia, tal como para melhorar a sobrevivência a longo prazo, expansão e/ou enxertia após administração o que, em alguns aspectos, é particularmente robusto em tais subpopulações. Consulte Terakura et al. (2012) Blood 1: 72–82; Wang et al. (2012) J Immunother. 35 (9): 689-701. Em algumas modalidades, a combinação de células T CD8+ enriquecidas com TCM e células T CD4+ aumenta ainda mais a eficácia.
[00466] Em modalidades, as células T de memória estão presentes em ambos os subconjuntos CD62L+ e CD62L- de linfócitos de sangue periférico CD8+. As PBMCs podem ser enriquecidas ou esgotadas de frações CD62L-CD8+ e/ou CD62L+ CD8+, tal como o uso de anticorpos anti-CD8 e anti-CD62L.
[00467] Em algumas modalidades, o enriquecimento por células T de memória centrais (TCM) é com base na expressão positiva ou alta na superfície de CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 e/ou CD127; em alguns aspectos, é com base na seleção negativa por células que expressam ou expressam CD45RA e/ou granzima B. Em alguns aspectos, o isolamento de uma população CD8+ enriquecida por células TCM é realizado pela depleção de células que expressam CD4, CD14, CD45RA e seleção positiva ou enriquecimento por células que expressam CD62L. Em um aspecto, o enriquecimento para células T de memória centrais (TCM) é realizado começando com uma fração negativa de células selecionadas com base na expressão de CD4, a qual é submetida a uma seleção negativa com base na expressão de
CD14 e CD45RA, e uma seleção positiva com base em CD62L. Estas seleções, em alguns aspectos, são realizadas simultaneamente e, em outros aspectos, são realizadas sequencialmente, em qualquer ordem. Em alguns aspectos, a mesma etapa de seleção com base na expressão de CD4 usada na preparação da população ou subpopulação de células CD8+ também é usada para gerar a população ou subpopulação de células CD4+, de modo que tanto as frações positiva como negativa da separação com base em CD4 sejam retidas e usadas em etapas subsequentes dos métodos, opcionalmente após uma ou mais etapas de seleção positiva ou negativa adicionais.
[00468] Em um exemplo particular, uma amostra de PBMCs ou outra amostra de glóbulos brancos é submetida à seleção de células CD4+, onde ambas as frações negativa e positiva são retidas. A fração negativa é, então, submetida à seleção negativa com base na expressão de CD14 e CD4 5RA ou CD19 e seleção positiva com base em um marcador característico de células T de memória centrais, tal como CD62L ou CCR7, onde as seleções positiva e negativa são realizadas em qualquer ordem.
[00469] As células T auxiliares CD4+ são classificadas em células não expostas, de memória centrais e efetoras por meio da identificação de populações de células que possuem antígenos na superfície celular. Os linfócitos CD4+ podem ser obtidos por meio de métodos padrão. Em algumas modalidades, os linfócitos T CD4+ não expostos são células T CD45RO-, CD45RA+, CD62L+, CD4+. Em algumas modalidades, as células CD4+ de memória central são CD62L+ e CD45RO+. Em algumas modalidades, as células efetoras CD4+ são CD62L- e CD45RO-.
[00470] Em um exemplo, para enriquecer células CD4+ por meio de seleção negativa, um coquetel de anticorpos monoclonais inclui tipicamente anticorpos para CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR e CD8. Em algumas modalidades, o anticorpo ou parceiro de ligação é ligado a um suporte sólido ou matriz, tal como uma esfera magnética ou esfera paramagnética, para permitir a separação de células para seleção positiva e/ou negativa. Por exemplo, em algumas modalidades, as células e populações de células são separadas ou isoladas usando técnicas de separação imunomagnética (ou afinidade magnética) (revisadas em Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In Vitro e In Vivo, páginas 17- 25 Editado por: S.A. Brooks e U. Schumacher © Humana Press Inc., Totowa, NJ).
[00471] Em alguns aspectos, a amostra ou composição de células a serem separadas é incubada com material pequeno, magnetizável ou magneticamente responsivo, tais como partículas magneticamente responsivas ou micropartículas, tais como esferas paramagnéticas (por exemplo, tais como esferas Dynalbeads ou MACS). O material magneticamente responsivo, por exemplo, partícula, geralmente é direta ou indiretamente ligado a um parceiro de ligação, por exemplo, um anticorpo, que se liga especificamente a uma molécula, por exemplo, marcador na superfície, presente na célula, células ou população de células que se deseja separar, por exemplo, que se deseja selecionar negativa ou positivamente.
[00472] Em algumas modalidades, a partícula magnética ou grânulo compreende um material magneticamente responsivo ligado a um membro de ligação específico, tal como um anticorpo ou outro parceiro de ligação. Há muitos materiais responsivos magneticamente bem conhecidos usados em métodos de separação magnética. Partículas magnéticas adequadas incluem aquelas descritas em Molday, Patente Norte-Americana N° 4.452.773, e na Especificação de Patente Europeia EP 452342 B, as quais são incorporadas a título de referência ao presente documento. Partículas de tamanho coloidal, tais como aquelas descritas em Owen, Patente Norte-Americana N° 4.795.698, e Liberti et al., Patente Norte-Americana N° 5.200.084 são outros exemplos.
[00473] A incubação geralmente é realizada sob condições pelas quais os anticorpos ou parceiros de ligação ou moléculas, tais como anticorpos secundários ou outros reagentes, que se ligam especificamente a tais anticorpos ou parceiros de ligação que estão ligados à partícula ou esfera magnética, se ligam especificamente às moléculas na superfície celular, se presentes nas células da amostra.
[00474] Em alguns aspectos, a amostra é colocada em um campo magnético e as células com partículas magneticamente responsivas ou magnetizáveis ligadas às mesmas serão atraídas para o ímã e separadas das células não marcadas. Para seleção positiva, as células que são atraídas pelo ímã são retidas; para seleção negativa, as células que não são atraídas (células não marcadas) são retidas. Em alguns aspectos, uma combinação de seleção positiva e negativa é realizada durante a mesma etapa de seleção, onde as frações positivas e negativas são retidas e posteriormente processadas ou submetidas a outras etapas de separação.
[00475] Em determinadas modalidades, as partículas magneticamente responsivas são revestidas com anticorpos primários ou outros parceiros de ligação, anticorpos secundários, lectinas, enzimas ou estreptavidina. Em determinadas modalidades, as partículas magnéticas são fixadas às células por meio de um revestimento de anticorpos primários específicos para um ou mais marcadores. Em determinadas modalidades, as células, em vez das esferas, são marcadas com um anticorpo primário ou parceiro de ligação e, em seguida, partículas magnéticas revestidas com anticorpo secundário específico para tipo de célula ou outro parceiro de ligação (por exemplo, estreptavidina) são adicionadas. Em determinadas modalidades, partículas magnéticas revestidas com estreptavidina são usadas em conjunto com anticorpos primários ou secundários biotinilados.
[00476] Em algumas modalidades, as partículas responsivas magneticamente são deixadas ligadas às células que serão subsequentemente incubadas, cultivadas e/ou manipuladas; em alguns aspectos, as partículas são deixadas ligadas às células para administração a um paciente. Em algumas modalidades, as partículas magnetizáveis ou magneticamente responsivas são removidas das células. Métodos para remover partículas magnetizáveis de células são conhecidos e incluem, por exemplo, o uso de anticorpos não marcados competidores e partículas magnetizáveis ou anticorpos conjugados com ligantes cliváveis. Em algumas modalidades, as partículas magnetizáveis são biodegradáveis.
[00477] Em algumas modalidades, a seleção com base em afinidade é através de classificação de células ativadas magneticamente (MACS) (Miltenyi Biotec, Auburn, CA). Os sistemas Magnetic Activated Cell Sorting (MACS) são capazes de seleção de alta pureza de células com partículas magnetizadas ligadas às mesmas. Em determinadas modalidades, o MACS opera em um modo pelo qual as espécies não alvo e alvo são sequencialmente eluídas após aplicação do campo magnético externo. Ou seja, as células presas às partículas magnetizadas são mantidas no lugar, enquanto que as espécies não presas são eluídas. Então, após conclusão desta primeira etapa de eluição, as espécies que ficaram presas no campo magnético e foram impedidas de serem eluídas são liberadas de alguma maneira para que possam ser eluídas e recuperadas. Em determinadas modalidades, as células não-alvo são marcadas e esgotadas da população heterogênea de células.
[00478] Em determinadas modalidades, o isolamento ou separação é realizada usando um sistema, dispositivo ou equipamento que realiza uma ou mais das etapas dos métodos de isolamento, preparação celular, separação, processamento, incubação, cultura e/ou formulação. Em alguns aspectos, o sistema é usado para realizar cada uma destas etapas em um ambiente fechado ou estéril, por exemplo, para minimizar o erro, manuseio do usuário e/ou contaminação. Em um exemplo, o sistema é um sistema conforme descrito na Publicação de Pedido de Patente Internacional Número WO2009/072003 ou US 20110003380 A1.
[00479] Em algumas modalidades, o sistema ou equipamento realiza uma ou mais, por exemplo, todas as etapas de isolamento, processamento, manipulação e formulação em um sistema integrado ou autocontido e/ou de forma automatizada ou programável. Em alguns aspectos, o sistema ou equipamento inclui um computador e/ou programa de computador em comunicação com o sistema ou equipamento, o que permite que um usuário programe, controle, avalie o resultado e/ou ajuste vários aspectos das etapas de processamento, isolamento, manipulação e formulação.
[00480] Em alguns aspectos, a etapa de separação e/ou outras etapas são realizadas usando o sistema CliniMACS (Miltenyi Biotec), por exemplo, para separação automatizada de células em um nível de escala clínica em um sistema fechado e estéril. Os componentes podem incluir um microcomputador integrado, unidade de separação magnética, bomba peristáltica e várias válvulas de aperto. O computador integrado, em alguns aspectos, controla todos os componentes do instrumento e direciona o sistema para executar procedimentos repetidos em uma sequência padronizada. A unidade de separação magnética, em alguns aspectos, inclui um ímã permanente móvel e um suporte para a coluna de seleção. A bomba peristáltica controla a vazão em todo o conjunto de tubos e, juntamente com as válvulas de aperto, assegura o fluxo controlado de tampão através do sistema e suspensão contínua das células.
[00481] O sistema CliniMACS, em alguns aspectos, usa partículas magnetizáveis acopladas a anticorpos que são fornecidas em uma solução estéril não pirogênica. Em algumas modalidades, após marcação das células com partículas magnéticas, as células são lavadas para remover o excesso de partículas. Um saco de preparação de células é, então, conectado ao conjunto de tubos o qual, por sua vez, é conectado a um saco que contém tampão e um saco de coleta de células. O conjunto de tubos consiste em tubos estéreis pré-montados, incluindo uma pré-coluna e uma coluna de separação, e são para uso único. Após o início do programa de separação, o sistema aplica automaticamente a amostra de células na coluna de separação. As células marcadas são retidas na coluna, enquanto que as células não marcadas são removidas através de uma série de etapas de lavagem. Em algumas modalidades, as populações de células para uso com os métodos descritos no presente documento não são marcadas e não são retidas na coluna. Em algumas modalidades, as populações de células para uso com os métodos descritos no presente documento são marcadas e são retidas na coluna. Em algumas modalidades, as populações de células para uso com os métodos descritos no presente documento são eluídas da coluna após remoção do campo magnético e são coletadas dentro do saco de coleta de células.
[00482] Em determinadas modalidades, a separação e/ou outras etapas são realizadas usando o sistema CliniMACS Prodigy (Miltenyi Biotec). O sistema CliniMACS Prodigy, em alguns aspectos, é equipado com uma unidade de processamento de células que permite a lavagem automática e o fracionamento de células por meio de centrifugação. O sistema CliniMACS Prodigy também pode incluir uma câmera integrada e um software de reconhecimento de imagem que determina o ponto final de fracionamento de célula ideal ao discernir as camadas macroscópicas do produto de célula de origem. Por exemplo, o sangue periférico é automaticamente separado em camadas de eritrócitos, glóbulos brancos e plasma. O sistema CliniMACS Prodigy também pode incluir uma câmara de cultura de células integrada que realiza protocolos de cultura de células tais como, por exemplo, diferenciação e expansão de células, carregamento de antígeno e cultura de células de longo prazo. As portas de entrada podem permitir a remoção estéril e a reposição de meio e células pode ser monitorada usando um microscópio integrado. Consulte, por exemplo, Klebanoff et al. (2012) J Immunother. 35 (9): 651–660, Terakura et al. (2012) Blood 1: 72–82 e Wang et al. (2012) J Immunother. 35 (9): 689-701.
[00483] Em algumas modalidades, uma população de células descrita no presente documento é coletada e enriquecida (ou esgotada) por meio de citometria de fluxo, na qual as células coradas para múltiplos marcadores na superfície celular são transportadas em uma corrente fluídica. Em algumas modalidades, uma população de células descrita no presente documento é coletada e enriquecida (ou esgotada) por meio de classificação em escala preparativa (FACS). Em determinadas modalidades, uma população de células descrita no presente documento é coletada e enriquecida (ou esgotada) pelo uso de chips de sistemas microeletromecânicos (MicroElectroMechanical Systems, MEMS) em combinação com um sistema de detecção com base em FACS (consulte, por exemplo, documento WO 2010/033140, Cho et al. (2010) Lab Chip 10, 1567-1573; e Godin et al. (2008) J Biophoton. 1 (5): 355-376. Em ambos os casos, as células podem ser marcadas com vários marcadores, permitindo o isolamento de subconjuntos de células T em alta pureza.
[00484] Em algumas modalidades, os anticorpos ou parceiros de ligação são marcados com um ou mais marcadores detectáveis para facilitar a separação para seleção positiva e/ou negativa. Por exemplo, a separação pode ser com base na ligação a anticorpos marcados com fluorescência. Em alguns exemplos, a separação de células com base na ligação de anticorpos ou outros parceiros de ligação específicos para um ou mais marcadores na superfície celular são transportados em uma corrente fluídica, tal como através de classificação de células ativadas por fluorescência (FACS), incluindo escala preparativa (FACS) e/ou chips de sistemas microeletromecânicos (MEMS), por exemplo, em combinação com um sistema de detecção de citometria de fluxo. Estes métodos permitem a seleção positiva e negativa com base em vários marcadores simultaneamente.
[00485] Em algumas modalidades, os métodos de preparação incluem etapas para congelamento, por exemplo, criopreservação das células, antes ou após o isolamento, incubação e/ou manipulação. Em algumas modalidades, a etapa de congelamento e descongelamento subsequente remove granulócitos e, até determinado ponto, monócitos na população de células. Em algumas modalidades, as células são suspensas em uma solução de congelamento, por exemplo, após uma etapa de lavagem para remover o plasma e as plaquetas. Qualquer uma de uma variedade de soluções e parâmetros de congelamento conhecidos em alguns aspectos podem ser usados. Um exemplo envolve o uso de PBS que contém DMSO a 20% e albumina de soro humano (HSA) a 8% ou outro meio de congelamento de células adequado. Este é, então, diluído a 1:1 com meio de modo que a concentração final de DMSO e HSA sejam 10% e 4%, respectivamente. As células são, em geral, congeladas a -80°C em uma taxa de 1° por minuto e armazenadas na fase de vapor de um tanque de armazenamento de nitrogênio líquido.
[00486] Em algumas modalidades, o isolamento e/ou seleção resulta em uma ou mais composições de entrada de células T enriquecidas, por exemplo, células T CD3+, células T CD4+ e/ou células T CD8+. Em algumas modalidades, duas ou mais composições de entrada separadas são isoladas, selecionadas, enriquecidas ou obtidas a partir de uma única amostra biológica. Em algumas modalidades, composições de entrada separadas são isoladas, selecionadas, enriquecidas e/ou obtidas a partir de amostras biológicas separadas coletadas, tomadas e/ou obtidas do mesmo indivíduo.
[00487] Em determinadas modalidades, a uma ou mais composições de entrada é ou inclui uma composição de células T enriquecidas que inclui pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, em pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95 %, pelo menos 98 %, pelo menos 99 %, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,9% ou igual ou cerca de 100 % de células T CD3+. Em uma modalidade particular, a composição de entrada de células T enriquecidas consiste essencialmente em células T CD3+.
[00488] Em determinadas modalidades, a uma ou mais composições de entrada é ou inclui uma composição de células T CD4+ enriquecidas que inclui pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80 %, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95 %, pelo menos 98 %, pelo menos 99%, pelo menos 99,5 %, pelo menos 99,9 % ou igual ou cerca de 100 % de células T CD4+. Em determinadas modalidades, a composição de entrada de células T CD4+ inclui menos de 40 %, menos de 35 %, menos de 30 %, menos de 25%, menos de 20 %, menos de 15 %, menos de 10 %, menos de 5 %, menos de 1 %, menos de 0,1 % ou menos de 0,01 % de células T CD8+ e/ou não contém células T CD8+ e/ou é isenta ou substancialmente isenta de células T CD8+. Em algumas modalidades, a composição de células T enriquecidas consiste essencialmente em células T CD4+.
[00489] Em determinadas modalidades, a uma ou mais composições é ou inclui uma composição de células T CD8+ que é ou inclui pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,9% ou igual ou cerca de 100% de células T CD8+. Em determinadas modalidades, a composição de células T CD8+ contém menos de 40%, menos de 35%, menos de 30%, menos de 25%, menos de 20%, menos de 15 %, menos de 10%, menos de 5 %, menos de 1 %, menos de 0,1% ou menos de 0,01 % de células T CD4+ e/ou é isenta de células T CD4+ ou substancialmente isenta de células T CD4+. Em algumas modalidades, a composição de células T enriquecidas consiste essencialmente em células T CD8+. B. Ativação e Estimulação
[00490] Em algumas modalidades, as células são incubadas e/ou cultivadas antes ou em relação à manipulação genética. As etapas de incubação podem incluir cultura, cultivo, estimulação, ativação e/ou propagação. A incubação e/ou manipulação pode ser realizada em um recipiente de cultura, tal como uma unidade, câmara, cavidade, coluna, tubo, conjunto de tubulação, válvula, frasco, disco de cultura, saco ou outro recipiente para cultura ou cultivo de células. Em algumas modalidades, as composições ou células são incubadas na presença de condições estimulantes ou um agente estimulador. Tais condições incluem aquelas concebidas para induzir a proliferação, expansão, ativação e/ou sobrevivência de células na população, para imitar a exposição ao antígeno e/ou preparar as células para manipulação genética, tal como para a introdução de um receptor antigênico recombinante.
[00491] As condições podem incluir um ou mais dos meios, temperatura, teor de oxigênio, teor de dióxido de carbono, tempo, agentes, por exemplo, nutrientes, aminoácidos, antibióticos, íons e/ou fatores estimuladores particulares, tais como citocinas, quimiocinas, antígenos, parceiros de ligação, proteínas de fusão, receptores solúveis recombinantes e quaisquer outros agentes concebidos para ativar as células.
[00492] Em algumas modalidades, as condições ou agentes estimulantes incluem um ou mais agentes, por exemplo, ligante, os quais são capazes de estimular ou ativar um domínio de sinalização intracelular de um complexo de TCR. Em alguns aspectos, o agente se liga ou inicia a cascata de sinalização intracelular de TCR/CD3 em uma célula T. Estes agentes podem incluir anticorpos, tais como aqueles específicos para um TCR, por exemplo, anticorpo anti-CD3. Em algumas modalidades, as condições de estimulação incluem um ou mais agentes, por exemplo, ligante, os quais são capazes de estimular um receptor coestimulador, por exemplo, anticorpo anti-CD28. Em algumas modalidades, tais agentes e/ou ligantes podem ser ligados a um suporte sólido, tal como uma esfera, e/ou uma ou mais citocinas. Opcionalmente, o método de expansão pode compreender ainda a etapa de adicionar anticorpo anti-CD3 e/ou anti-CD28 ao meio de cultura (por exemplo, em uma concentração de pelo menos cerca de 0,5 ng/mL). Em algumas modalidades, os agentes estimulantes incluem IL- 2, IL-15 e/ou IL-7. Em alguns aspectos, a concentração de IL-2 é de pelo menos cerca de 10 unidades/mL.
[00493] Em alguns aspectos, a incubação é realizada de acordo com técnicas tais como aquelas descritas na Patente Norte-Americana N°
6.040.177 para Riddell et al., Klebanoff et al. (2012) J Immunother. 35 (9): 651–660, Terakura et al. (2012) Blood 1: 72–82 e/ou Wang et al. (2012) J Immunother. 35 (9): 689-701.
[00494] Em algumas modalidades, as células T são expandidas adicionando a uma composição de início de cultura células alimentadoras, tais como células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) sem divisão (por exemplo, de modo que a população de células resultante contenha pelo menos cerca de 5, 10, 20 ou 40 ou mais células alimentadoras PBMCs para cada linfócito T na população inicial a ser expandida); e incubar a cultura (por exemplo, durante um tempo suficiente para expandir o número de células T). Em alguns aspectos, as células alimentadoras sem divisão podem compreender células alimentadoras PBMCs com radiação gama. Em algumas modalidades, as PBMC são irradiadas com raios gama na faixa de cerca de 3000 a 3600 rads para evitar a divisão celular. Em alguns aspectos, as células alimentadoras são adicionadas ao meio de cultura antes da adição das populações de células T.
[00495] Em algumas modalidades, as condições de estimulação incluem uma temperatura adequada para o crescimento de linfócitos T humanos, por exemplo, pelo menos cerca de 25 graus Celsius, geralmente pelo menos cerca de 30 graus e normalmente igual ou cerca de 37 graus Celsius. Opcionalmente, a incubação pode ainda compreender a adição de células linfoblastoides transformadas por EBV sem divisão (LCL) como células alimentadoras. O LCL pode ser irradiado com raios gama na faixa de cerca de 6.000 a 10.000 rads. As células alimentadoras LCL, em alguns aspectos, são fornecidas em qualquer quantidade adequada, tal como uma proporção de células alimentadoras LCL para linfócitos T iniciais de pelo menos cerca de 10:1.
[00496] Em modalidades, células T específicas para antígeno, tais como células T CD4+ e/ou CD8+ específicas para antígeno, são obtidas ao estimular linfócitos T não expostos ou específicos para antígeno com antígeno. Por exemplo, linhagens de células T ou clones específicos para antígenos podem ser gerados para antígenos de citomegalovírus ao isolar células T de indivíduos infectados e estimular as células in vitro com o mesmo antígeno.
[00497] Em algumas modalidades, pelo menos uma parte da incubação na presença de uma ou mais condições estimuladoras ou agentes estimuladores é realizada na cavidade interna de uma câmara centrífuga, por exemplo, sob rotação centrífuga, conforme descrito na Publicação Internacional Número WO2016/073602. Em algumas modalidades, pelo menos uma parte da incubação realizada em uma câmara centrífuga inclui mistura com um reagente ou reagentes para induzir à estimulação e/ou ativação. Em algumas modalidades, as células, tais como as células selecionadas, são misturadas com uma condição estimuladora ou agente estimulador na câmara centrífuga. Em alguns aspectos de tais processos, um volume de células é misturado com uma quantidade de uma ou mais condições ou agentes estimulantes que é muito menor do que normalmente empregado ao realizar estímulos similares em uma placa de cultura de células ou outro sistema.
[00498] Em algumas modalidades, o agente estimulador é adicionado às células na cavidade da câmara em uma quantidade que é substancialmente menor (por exemplo, não é mais de 5 %, 10 %, 20%, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 % ou 80 % da quantidade) comparado com a quantidade do agente estimulador que é tipicamente usado ou seria necessário para atingir a mesma ou similar eficiência de seleção do mesmo número de células ou o mesmo volume de células quando a seleção é realizada sem mistura em uma câmara centrífuga, por exemplo, em um tubo ou saco com agitação ou rotação periódica. Em algumas modalidades, a incubação é realizada com a adição de um tampão de incubação às células e agente estimulador para atingir um volume alvo com a incubação do reagente, por exemplo, de 10 mL a 200 mL, tal como pelo menos ou cerca de pelo menos ou cerca de ou 10 mL, 20 mL, 30 mL, 40 mL, 50 mL, 60 mL, 70 mL, 80 mL, 90 mL, 100 mL, 150 mL ou 200 mL. Em algumas modalidades, o tampão de incubação e o agente estimulador são pré-misturados antes da adição às células. Em algumas modalidades, o tampão de incubação e o agente estimulador são adicionados separadamente às células. Em algumas modalidades, a incubação estimulante é realizada com condição de mistura suave periódica, o que pode auxiliar na promoção de interações energeticamente favorecidas e, assim, permitir o uso de menos agente estimulante geral, ao mesmo tempo em que se atinge a estimulação e ativação das células.
[00499] Em algumas modalidades, a incubação geralmente é realizada sob condições de mistura, tal como na presença de rotação, normalmente em uma força ou velocidade relativamente baixa, tal como uma velocidade menor do que aquela usada para sedimentar as células, tal como a partir de ou a partir de cerca de 600 rpm a 1700 rpm (por exemplo, igual ou cerca de ou pelo menos 600 rpm, 1000 rpm ou 1500 rpm ou 1700 rpm), tal como em um RCF na amostra ou parede da câmara ou outro recipiente a partir de ou a partir de cerca de 80 g a 100 g (por exemplo, igual ou cerca de ou pelo menos 80 g, 85 g, 90 g, 95 g ou 100 g). Em algumas modalidades, a rotação é realizada usando intervalos repetidos de uma rotação em baixa velocidade, seguido por um período de descanso, tal como uma rotação e/ou descanso durante 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 segundos, tal como uma rotação de aproximadamente 1 ou 2 segundos, seguido por um descanso de aproximadamente 5, 6, 7 ou 8 segundos.
[00500] Em algumas modalidades, a duração total da incubação, por exemplo, com o agente estimulador, está entre ou entre cerca de 1 hora e 96 horas, 1 hora e 72 horas, 1 hora e 48 horas, 4 horas e 36 horas, 8 horas e 30 horas ou 12 horas e 24 horas, tal como pelo menos ou cerca de pelo menos 6 horas, 12 horas, 18 horas, 24 horas, 36 horas ou 72 horas. Em algumas modalidades, a incubação adicional é durante um período de tempo entre ou cerca de 1 hora e 48 horas, 4 horas e 36 horas, 8 horas e 30 horas ou 12 horas e 24 horas, inclusive.
[00501] Em modalidades particulares, as condições de estimulação incluem incubar, semear e/ou cultivar uma composição de células T enriquecidas com e/ou na presença de uma ou mais citocinas. Em modalidades particulares, a uma ou mais citocinas são citocinas recombinantes. Em algumas modalidades, a uma ou mais citocinas são citocinas recombinantes humanas. Em determinadas modalidades, a uma ou mais citocinas se ligam a e/ou são capazes de se ligar a receptores que são expressos por e/ou são endógenos às células T. Em modalidades particulares, a uma ou mais citocinas é ou inclui um membro da família do loop de 4-alfa-hélice de citocinas. Em algumas modalidades, os membros da família do loop de 4-alfa-hélice de citocinas incluem, porém sem limitações, interleucina-2 (IL-2), interleucina-4 (IL-4), interleucina-7 (IL-7), interleucina-9 (IL-9), interleucina 12 (IL-12), interleucina 15 (IL-15), fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF) e fator estimulador de colônias de granulócitos-macrófagos (GM-CSF).
[00502] Em algumas modalidades, a estimulação resulta na ativação e/ou proliferação das células, por exemplo, antes de transdução. C. Vetores e Métodos Para Manipulação Genética
[00503] Em algumas modalidades, as células manipuladas, tais como células T, usadas em relação aos métodos, usos, artigos de manufatura ou composições fornecidos são células que foram geneticamente manipuladas para expressar um receptor recombinante, por exemplo, um CAR ou um TCR descrito no presente documento. Em algumas modalidades, as células são manipuladas por meio de introdução, administração ou transferência de sequências de ácidos nucleicos que codificam o receptor recombinante e/ou outras moléculas.
[00504] Em algumas modalidades, os métodos para a produção de células manipuladas incluem introduzir um polinucleotídeo que codifica um receptor recombinante (por exemplo, anti-CD19 CAR) em uma célula, por exemplo, tal como uma célula estimulada ou ativada. Em modalidades particulares, as proteínas recombinantes são receptores recombinantes, tal como qualquer uma descrita no presente documento. A introdução das moléculas de ácidos nucleicos que codificam a proteína recombinante, tal como o receptor recombinante, na célula pode ser realizada usando qualquer um de uma série de vetores conhecidos. Tais vetores incluem sistemas virais e não virais, incluindo sistemas lentivirais e gama-retrovirais, bem como sistemas com base em transposon, tal como PiggyBac, ou sistemas de transferência gênica com base em Sleeping Beauty. Métodos exemplificativos incluem aqueles para transferência de ácidos nucleicos que codificam os receptores, incluindo via viral, por exemplo, retroviral ou lentiviral, transdução, transposons e eletroporação. Em algumas modalidades, a manipulação produz uma ou mais composições manipuladas de células T enriquecidas.
[00505] Em determinadas modalidades, uma ou mais composições de células T estimuladas são ou incluem duas composições estimuladas separadas de células T enriquecidas. Em modalidades particulares, duas composições separadas de células T enriquecidas, por exemplo, duas composições separadas de células T enriquecidas que foram selecionadas, isoladas e/ou enriquecidas a partir da mesma amostra biológica, são manipuladas separadamente. Em determinadas modalidades, as duas composições separadas incluem uma composição de células T CD4+ enriquecidas. Em modalidades particulares, as duas composições separadas incluem uma composição de células T CD8+ enriquecidas. Em algumas modalidades, duas composições separadas de células T CD4+ enriquecidas e células T CD8+ enriquecidas são geneticamente manipuladas separadamente.
[00506] Em algumas modalidades, a transferência gênica é realizada primeiro ao estimular a célula, por exemplo, combinando-a com um estímulo que induz a uma resposta, tal como proliferação, sobrevivência e/ou ativação, por exemplo, conforme medido pela expressão de uma citocina ou marcador de ativação, seguido por transdução das células ativadas e expansão em cultura para números suficientes para aplicações clínicas. Em determinadas modalidades, a transferência gênica é realizada primeiro ao incubar as células sob condições estimulantes, tal como através de qualquer um dos métodos descritos no presente documento.
[00507] Em algumas modalidades, os métodos de manipulação genética são realizados por meio do contato de uma ou mais células de uma composição com uma molécula de ácidos nucleicos que codifica a proteína recombinante, por exemplo, receptor recombinante. Em algumas modalidades, o contato pode ser realizado com centrifugação, tal como espinoculação (por exemplo, inoculação centrífuga). Tais métodos incluem qualquer um daqueles descritos na Publicação Internacional Número WO2016/073602. Câmaras centrífugas exemplificativas incluem aquelas produzidas e vendidas pela Biosafe SA, incluindo aquelas para uso com os sistemas Sepax e Sepax 2, incluindo câmaras centrífugas A-200/F e A-200 e vários kits para uso com tais sistemas. Câmaras, sistemas e instrumentação de processamento e gabinetes exemplificativos são descritos, por exemplo, na Patente Norte-Americana N° 6.123.655, Patente Norte- Americana N° 6.733.433 e Publicação de Pedido de Patente Norte- Americana N° 2008/0171951 e na Publicação de Pedido de Patente Internacional Nº WO 00/38762, os conteúdos de cada um dos quais são incorporados ao presente documento a título de referência na íntegra. Kits exemplificativos para uso com tais sistemas incluem, porém sem limitações, kits de uso único vendidos pela BioSafe SA sob as marcas CS-430.1, CS-490.1, CS-600.1 ou CS-900.2.
[00508] Em algumas modalidades, o contato pode ser realizado com centrifugação, tal como espinoculação (por exemplo, inoculação centrífuga). Em algumas modalidades, a composição que contém células, partículas virais e reagente pode ser centrifugada, geralmente em uma força ou velocidade relativamente baixa, tal como uma velocidade menor do que aquela usada para sedimentar as células, tal como a partir de ou cerca de 600 rpm a 1700 rpm (por exemplo, igual ou cerca de ou pelo menos 600 rpm, 1000 rpm ou 1500 rpm ou 1700 rpm). Em algumas modalidades, a rotação é realizada com uma força, por exemplo, uma força centrífuga relativa, a partir de ou a partir de cerca de 100 g a 3200 g (por exemplo, igual ou cerca de ou pelo menos igual ou cerca de 100 g, 200 g, 300 g, 400 g, 500 g, 1000 g, 1500 g, 2000 g, 2500 g, 3000 g ou 3200 g), conforme medido, por exemplo, em uma parede interna ou externa da câmara ou cavidade. O termo "força centrífuga relativa" ou RCF é geralmente entendido como a força efetiva transmitida a um objeto ou substância (tal como uma célula, amostra ou pelota e/ou um ponto na câmara ou outro recipiente que está sendo centrifugado), em relação à força gravitacional da Terra, em um ponto particular no espaço comparado com o eixo de rotação. O valor pode ser determinado usando fórmulas bem conhecidas, levando em consideração a força gravitacional, a velocidade de rotação e o raio de rotação (distância do eixo de rotação e o objeto, substância ou partícula na qual a RCF está sendo medida).
[00509] Em algumas modalidades, a introdução é realizada pelo contato de uma ou mais células de uma composição com uma molécula de ácidos nucleicos que codifica a proteína recombinante, por exemplo, receptor recombinante. Em algumas modalidades, o contato pode ser realizado com centrifugação, tal como espinoculação (por exemplo, inoculação centrífuga). Tais métodos incluem qualquer um daqueles descritos na Publicação Internacional Número WO2016/073602. Câmaras centrífugas exemplificativas incluem aquelas produzidas e vendidas pela Biosafe SA, incluindo aquelas para uso com os sistemas Sepax e Sepax 2, incluindo câmaras centrífugas A-200/F e A-200 e vários kits para uso com tais sistemas. Câmaras, sistemas e instrumentação de processamento e gabinetes exemplificativos são descritos, por exemplo, na Patente Norte-Americana N° 6.123.655, Patente Norte-Americana N° 6.733.433 e Publicação de Pedido de Patente Norte-Americana N° 2008/0171951 e Publicação de Pedido de Patente Internacional Nº WO 00/38762, os conteúdos de cada um dos quais são incorporados ao presente documento a título de referência na íntegra. Kits exemplificativos para uso com tais sistemas incluem, porém sem limitações, kits de uso único vendidos pela BioSafe SA sob as marcas CS-430.1, CS-490.1, CS-600.1 ou CS-900.2.
[00510] Em algumas modalidades, o sistema é incluído e/ou colocado em associação com outra instrumentação, incluindo instrumentação para operar, automatizar, controlar e/ou monitorar aspectos da etapa de transdução e uma ou mais várias outras etapas de processamento realizadas na sistema, por exemplo, uma ou mais etapas de processamento que podem ser realizadas com ou em relação ao sistema de câmara centrífuga, conforme descrito no presente documento ou na Publicação Internacional Número WO2016/073602. Esta instrumentação, em algumas modalidades, está contida em um gabinete. Em algumas modalidades, a instrumentação inclui um gabinete que inclui um compartimento que contém circuitos de controle, uma centrífuga, uma tampa, motores, bombas, sensores, monitores e uma interface de usuário. Um dispositivo exemplificativo é descrito na Patente Norte-Americana N° 6.123.655, Patente Norte-Americana N°
6.733.433 e documento US 2008/0171951.
[00511] Em algumas modalidades, o sistema compreende uma série de recipientes, por exemplo, sacos, tubos, torneiras, braçadeiras, conectores e uma câmara de centrifugação. Em algumas modalidades, os recipientes, tais como sacos, incluem um ou mais recipientes, tais como sacos, que contêm as células a serem transduzidas e as partículas do vetor viral, no mesmo recipiente ou em recipientes separados, tal como o mesmo saco ou sacos separados. Em algumas modalidades, o sistema inclui ainda um ou mais recipientes, tais como sacos, que contêm meio, tal como diluente e/ou solução de lavagem, que é puxado para a câmara e/ou outros componentes para diluir, ressuspender e/ou lavar os componentes e/ou composições durante os métodos. Os recipientes podem ser conectados em uma ou mais posições no sistema, tal como em uma posição que corresponde a uma linha de admissão, linha de diluente, linha de lavagem, linha de descarga e/ou linha de saída.
[00512] Em algumas modalidades, a câmara está associada a uma centrífuga que é capaz de efetuar a rotação da câmara, tal como em torno de seu eixo de rotação. A rotação pode ocorrer antes, durante e/ou após a incubação em relação à transdução das células e/ou em uma ou mais das outras etapas de processamento. Assim, em algumas modalidades, uma ou mais das várias etapas de processamento são realizadas sob rotação, por exemplo, em uma força particular. A câmara é, tipicamente, capaz de rotação vertical ou geralmente vertical, de modo que a câmara assente verticalmente durante a centrifugação e a parede lateral e o eixo sejam verticais ou geralmente verticais, com a(s) parede(s) terminal(s) horizontal(is) ou geralmente horizontal(is).
[00513] Em algumas modalidades, a composição que contém células, o vetor, por exemplo, partículas virais, e o reagente podem ser centrifugados, geralmente em uma força ou velocidade relativamente baixa, tal como uma velocidade menor do que aquela usada para peletizar as células, tal como a partir de ou a partir de cerca de 600 rpm a 1700 rpm (por exemplo, igual ou cerca de ou pelo menos 600 rpm, 1000 rpm ou 1500 rpm ou 1700 rpm). Em algumas modalidades, a rotação é realizada em uma força, por exemplo, uma força centrífuga relativa, a partir de ou a partir de cerca de 100 g a 3200 g (por exemplo,
igual ou cerca de ou pelo menos igual ou cerca de 100 g, 200 g, 300 g, 400 g, 500 g, 1000 g, 1500 g, 2000 g, 2500 g, 3000 g ou 3200 g), conforme medido, por exemplo, em uma parede interna ou externa da câmara ou cavidade. O termo "força centrífuga relativa" ou RCF é geralmente entendido como a força efetiva transmitida a um objeto ou substância (tal como uma célula, amostra ou pelota e/ou um ponto na câmara ou outro recipiente que está sendo centrifugado), em relação à força gravitacional da Terra, em um ponto particular no espaço comparado com o eixo de rotação. O valor pode ser determinado usando fórmulas bem conhecidas, levando em consideração a força gravitacional, a velocidade de rotação e o raio de rotação (distância do eixo de rotação e o objeto, substância ou partícula na qual a RCF está sendo medida).
[00514] Em algumas modalidades, durante pelo menos uma parte da manipulação genética, por exemplo transdução e/ou subsequente à manipulação genética, as células são transferidas para um conjunto de bolsa de biorreator para cultura das células geneticamente manipuladas, tal como para cultivo ou expansão das células.
[00515] Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos recombinantes são transferidos para células usando partículas de vírus infecciosos recombinantes tais como, por exemplo, vetores derivados do vírus símio 40 (SV40), adenovírus, vírus adeno-associado (AAV). Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos recombinantes são transferidos para células T usando vetores lentivirais recombinantes ou vetores retrovirais, tais como vetores gama-retrovirais (consulte, por exemplo, Koste et al. (2014) Gene Therapy, 3 de abril de 2014. doi:
10.1038/gt. 2014.25; Carlens et al. (2000) Exp Hematol 28 (10): 1137- 46; Alonso-Camino et al. (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93; Park et al., Trends Biotechnol. novembro de 2011 29 (11): 550–557.
[00516] Em algumas modalidades, o vetor retroviral tem uma sequência de repetição terminal longa (LTR), por exemplo, um vetor retroviral derivado do vírus da leucemia de Moloney de murinos (MoMLV), vírus do sarcoma mieloproliferativo (MPSV), vírus da célula- tronco embrionária de murino (MESV), vírus de células-tronco de murino (MSCV) ou vírus formador de foco em baço (SFFV). A maioria dos vetores retrovirais são derivados de retrovírus de murino. Em algumas modalidades, os retrovírus incluem aqueles derivados de qualquer fonte de células de aves ou mamíferos. Os retrovírus são, tipicamente, anfotrópicos, o que significa que são capazes de infectar células hospedeiras de várias espécies, incluindo seres humanos. Em uma modalidade, o gene a ser expresso substitui as sequências retrovirais gag, pol e/ou env. Vários sistemas retrovirais ilustrativos foram descritos (por exemplo, Patentes Norte-Americanas Nos 5.219.740; 6.207.453;
5.219.740; Miller e Rosman (1989) BioTechniques 7: 980-990; Miller, A.D. (1990) Human Gene Therapy 1: 5-14; Scarpa et al. (1991) Virology 180: 849-852; Burns et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 8033- 8037; e Boris-Lawrie e Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3: 102-
109.
[00517] Métodos de transdução lentiviral são conhecidos. Métodos exemplificativos são descritos, por exemplo, em Wang et al. (2012) J. Immunother. 35 (9): 689-701; Cooper et al. (2003) Blood 101: 1637– 1644; Verhoeyen et al. (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114; e Cavalieri et al. (2003) Blood. 102 (2): 497-505.
[00518] Em algumas modalidades, as partículas do vetor viral contêm um genoma derivado de um vetor com base no genoma retroviral, tal como derivado de um vetor com base no genoma lentiviral. Em alguns aspectos dos vetores virais fornecidos, o ácido nucleico heterólogo que codifica um receptor recombinante, tal como um receptor antigênico, tal como um CAR, está contido e/ou localizado entre as sequências LTR 5' e LTR 3' do genoma do vetor.
[00519] Em algumas modalidades, o genoma do vetor viral é um genoma de lentivírus, tal como um genoma de HIV-1 ou um genoma de SIV. Por exemplo, os vetores lentivirais foram gerados por múltiplos genes de atenuação de virulência, por exemplo, os genes env, vif, vpu e nef podem ser excluídos, tornando o vetor mais seguro para fins terapêuticos. Vetores lentivirais são conhecidos. Consulte Naldini et al., (1996 e 1998); Zufferey et al., (1997); Dull et al., 1998, Patentes Norte- Americanas Nos 6.013.516; e 5.994.136). Em algumas modalidades, estes vetores virais são com base em plasmídeo ou vírus e são configurados para transportar as sequências essenciais para incorporar ácido nucleico estranho para seleção e transferência do ácido nucleico para uma célula hospedeira. Lentivírus conhecidos podem ser facilmente obtidos a partir de depositários ou coleções, tal como a American Type Culture Collection ("ATCC"; 10801 University Blvd., Manassas, Va. 20110-2209) ou isolados a partir de fontes conhecidas usando técnicas comumente disponíveis.
[00520] Exemplos não limitativos de vetores lentivirais incluem aqueles derivados de um lentivírus, tal como o vírus da imunodeficiência humana 1 (HIV-1), HIV-2, um vírus da imunodeficiência símia (SIV), vírus linfotrópico T humano 1 (HTLV-1), HTLV-2 ou vírus da anemia de infecção equina (E1AV). Por exemplo, vetores lentivirais foram gerados pela atenuação múltipla dos genes de virulência do HIV, por exemplo, os genes env, vif, vpr, vpu e nef são excluídos, tornando o vetor mais seguro para fins terapêuticos. Vetores lentivirais são conhecidos na técnica; consulte Naldini et al., (1996 e 1998); Zufferey et al., (1997); Dull et al., 1998, Patentes Norte-Americanas Nos 6.013.516; e
5.994.136). Em algumas modalidades, estes vetores virais são com base em plasmídeo ou vírus e são configurados para transportar as sequências essenciais para incorporar ácido nucleico estranho para seleção e transferência do ácido nucleico para uma célula hospedeira.
Lentivírus conhecidos podem ser facilmente obtidos a partir de depositários ou coleções, tal como a American Type Culture Collection ("ATCC"; 10801 University Blvd., Manassas, Va. 20110-2209) ou isolados a partir de fontes conhecidas usando técnicas comumente disponíveis.
[00521] Em algumas modalidades, o vetor do genoma viral pode conter sequências de 5' e LTR 3's de um retrovírus, tal como um lentivírus. Em alguns aspectos, a construção do genoma viral pode conter sequências das 5' e LTR 3's de um lentivírus e, em particular, pode conter as sequências R e U5 da LTR 5' de um lentivírus e uma LTR 3' inativada ou autoinativada de um lentivírus. As sequências LTR podem ser sequências LTR de qualquer lentivírus de qualquer espécie. Por exemplo, podem ser sequências LTR de HIV, SIV, FIV ou BIV. Normalmente, as sequências LTR são sequências LTR de HIV.
[00522] Em algumas modalidades, o ácido nucleico de um vetor viral, tal como um vetor viral de HIV, carece de unidades de transcrição adicionais. O genoma do vetor pode conter uma LTR 3' inativada ou autoinativada (Zufferey et al., J Virol 72: 9873, 1998; Miyoshi et al., J Virol 72: 8150, 1998). Por exemplo, uma eliminação na região U3 da LTR 3' do ácido nucleico usado para produzir o vetor viral RNA pode ser usada para gerar vetores de autoinativação (SIN). Esta eliminação pode, então, ser transferida para a LTR 5' do DNA proviral durante transcrição reversa. Um vetor de autoinativação tem, em geral, uma eliminação das sequências intensificadoras e promotoras da repetição terminal longa (LTR) 3', a qual é copiada para a LTR 5' durante integração do vetor. Em algumas modalidades, sequência o bastante pode ser eliminada, incluindo a remoção de uma caixa TATA, para abolir a atividade de transcrição da LTR. Isto pode impedir a produção de RNA de vetor de comprimento total em células transduzidas. Em alguns aspectos, o elemento U3 da 3' LTR contém uma eliminação de sua sequência intensificadora, a caixa TATA, os sítios Sp1 e NF-capa B. Como um resultado da autoinativação da 3' LTR, o provírus que é gerado após a entrada e a transcrição reversa contém uma LTR 5' inativada. Isto pode melhorar a segurança ao reduzir o risco de mobilização do genoma do vetor e a influência da LTR em promotores celulares próximos. A 3' LTR de autoinativação pode ser construída por meio de qualquer método conhecido na técnica. Em algumas modalidades, isto não afeta as titulações do vetor ou as propriedades in vitro ou in vivo do vetor.
[00523] Opcionalmente, a sequência U3 da LTR 5' lentiviral pode ser substituída por uma sequência promotora na construção viral, tal como uma sequência promotora heteróloga. Isto pode aumentar a titulação de vírus recuperado a partir da linhagem de células de empacotamento. Uma sequência intensificadora também pode ser incluída. Qualquer combinação de intensificador/promotor que aumente a expressão do genoma de RNA viral na linhagem de células de empacotamento pode ser usada. Em um exemplo, é usada a sequência intensificadora/promotora de CMV (Patente Norte-Americana N°
5.385.839 e Patente Norte-Americana N° 5.168.062).
[00524] Em determinadas modalidades, o risco de mutagênese de inserção pode ser minimizado pela construção do genoma do vetor retroviral, tal como o genoma do vetor lentiviral, para ser defeituoso de integração. Uma variedade de abordagens pode ser buscada para produzir um genoma de vetor não integrado. Em algumas modalidades, (uma) mutação(ões) pode(m) ser manipulada(s) no componente da enzima integrase do gene pol, de modo que codifique uma proteína com uma integrase inativa. Em algumas modalidades, o próprio genoma do vetor pode ser modificado para evitar a integração, por exemplo, através de mutação ou eliminação de um ou ambos os sítios de fixação ou ao tornar o trato proximal da LTR 3' de polipurina (PPT) não funcional por meio de eliminação ou modificação. Em algumas modalidades, abordagens não genéticas estão disponíveis; estas incluem agentes farmacológicos que inibem uma ou mais funções da integrase. As abordagens não são mutuamente exclusivas; ou seja, mais de uma delas podem ser usadas ao mesmo tempo. Por exemplo, os sítios de integrase e de ligação podem ser não funcionais ou a integrase e o sítio de PPT podem ser não funcionais ou os sítios de ligação e o sítio de PPT podem ser não funcionais ou todos eles podem ser não funcionais. Tais métodos e genomas de vetores virais são conhecidos e estão disponíveis (consulte Philpott e Thrasher, Human Gene Therapy 18: 483, 2007; Engelman et al., J Virol 69: 2729, 1995; Brown et al., J Virol 73: 9011 (1999); documento WO 2009/076524; McWilliams et al., J Virol 77: 11150, 2003; Powell e Levin, J Virol 70: 5288, 1996).
[00525] Em algumas modalidades, o vetor contém sequências para propagação em uma célula hospedeira, tal como uma célula hospedeira procariota. Em algumas modalidades, o ácido nucleico do vetor viral contém uma ou mais origens de replicação para propagação em uma célula procariota, tal como uma célula bacteriana. Em algumas modalidades, os vetores que incluem uma origem de replicação procariota também podem conter um gene cuja expressão confere um marcador detectável ou selecionável, tal como resistência a fármaco.
[00526] O genoma do vetor viral é, tipicamente, construído em uma forma de plasmídeo que pode ser transfectada em uma linhagem de células de empacotamento ou produtora. Qualquer um de uma variedade de métodos conhecidos pode ser usado para produzir partículas retrovirais cujo genoma contém uma cópia de RNA do genoma do vetor viral. Em algumas modalidades, pelo menos dois componentes estão envolvidos na produção de um sistema de administração de genes com base em vírus: primeiro, plasmídeos de empacotamento, abrangendo as proteínas estruturais, bem como as enzimas necessárias para gerar uma partícula de vetor viral e, segundo, o próprio vetor viral, ou seja, o material genético a ser transferido. As salvaguardas de biossegurança podem ser introduzidas na concepção de um ou de ambos os componentes.
[00527] Em algumas modalidades, o plasmídeo de empacotamento pode conter todas as proteínas retrovirais, tal como HIV-1, outras proteínas do envelope (Naldini et al., 1998). Em outras modalidades, os vetores virais podem não ter genes virais adicionais, tais como aqueles que estão associados à virulência, por exemplo, vpr, vif, vpu e nef e/ou tat, um transativador primário do HIV. Em algumas modalidades, os vetores lentivirais, tais como vetores lentivirais com base em HIV, compreendem apenas três genes do vírus original: gag, pol e rev, o que reduz ou elimina a possibilidade de reconstituição de um vírus de tipo selvagem através de recombinação.
[00528] Em algumas modalidades, o genoma do vetor viral é introduzido em uma linhagem de células de empacotamento que contém todos os componentes necessários para empacotar o RNA genômico viral, transcrito a partir do genoma do vetor viral, em partículas virais. Alternativamente, o genoma do vetor viral pode compreender um ou mais genes que codificam componentes virais, além de uma ou mais sequências, por exemplo, ácidos nucleicos recombinantes, de interesse. Em alguns aspectos, a fim de evitar a replicação do genoma na célula alvo, no entanto, os genes virais endógenos necessários para a replicação são removidos e fornecidos separadamente na linhagem de células de empacotamento.
[00529] Em algumas modalidades, uma linhagem de células de empacotamento é transfectada com um ou mais vetores de plasmídeo que contêm os componentes necessários para gerar as partículas. Em algumas modalidades, uma linhagem de células de empacotamento é transfectada com um plasmídeo que contém o genoma do vetor viral,
incluindo as LTRs, a sequência de empacotamento de cis atuação e a sequência de interesse, ou seja, um ácido nucleico que codifica um receptor antigênico, tal como um CAR; e um ou mais plasmídeos auxiliares que codificam os componentes enzimáticos e/ou estruturais do vírus, tais como gag, pol e/ou rev. Em algumas modalidades, vários vetores são usados para separar os vários componentes genéticos que geram as partículas do vetor retroviral. Em algumas de tais modalidades, o fornecimento de vetores separados para a célula de empacotamento reduz a chance de eventos de recombinação que poderiam, de outra forma, gerar vírus competentes para replicação. Em algumas modalidades, um único vetor de plasmídeo com todos os componentes retrovirais pode ser usado.
[00530] Em algumas modalidades, a partícula de vetor retroviral, tal como a partícula de vetor lentiviral, é pseudotipada para aumentar a eficiência de transdução das células hospedeiras. Por exemplo, uma partícula de vetor retroviral, tal como uma partícula de vetor lentiviral, em algumas modalidades é pseudotipada com uma glicoproteína VSV- G, que fornece uma ampla variedade de células hospedeiras que estende os tipos de células que podem ser transduzidas. Em algumas modalidades, uma linhagem de células de empacotamento é transfectada com um plasmídeo ou polinucleotídeo que codifica uma glicoproteína de envelope não nativa, de modo a incluir envelopes xenotrópicos, politrópicos ou anfotrópicos, tal como o envelope do vírus Sindbis, GALV ou VSV-G.
[00531] Em algumas modalidades, a linhagem de células de empacotamento fornece os componentes, incluindo proteínas reguladoras e estruturais virais, que são necessários em trans para o empacotamento do RNA genômico viral em partículas de vetor lentiviral. Em algumas modalidades, a linhagem de células de empacotamento pode ser qualquer linhagem de células que seja capaz de expressar proteínas lentivirais e produzir partículas de vetor lentiviral funcional. Em alguns aspectos, linhagens de células de empacotamento adequadas incluem células 293 (ATCC CCL X), 293T, HeLA (ATCC CCL 2), D17 (ATCC CCL 183), MDCK (ATCC CCL 34), BHK (ATCC CCL-10) e Cf2Th (ATCC CRL 1430).
[00532] Em algumas modalidades, a linhagem de células de empacotamento expressa estavelmente a(s) proteína(s) viral(ais). Por exemplo, em alguns aspectos, pode ser construída uma linhagem de células de empacotamento que contém gag, pol, rev e/ou outros genes estruturais, mas sem a LTR e os componentes de empacotamento. Em algumas modalidades, uma linhagem de células de empacotamento pode ser transfectada transitoriamente com moléculas de ácidos nucleicos que codificam uma ou mais proteínas virais juntamente com o genoma do vetor viral que contém uma molécula de ácidos nucleicos que codifica uma proteína heteróloga e/ou um ácido nucleico que codifica uma glicoproteína do envelope viral.
[00533] Em algumas modalidades, os vetores virais e os plasmídeos de empacotamento e/ou auxiliares são introduzidos por meio de transfecção ou infecção na linhagem de células de empacotamento. A linhagem de células de empacotamento produz partículas de vetor viral que contêm o genoma do vetor viral. Métodos de transfecção ou infecção são bem conhecidos. Exemplos não limitativos incluem fosfato de cálcio, DEAE-dextrana e métodos de lipofecção, eletroporação e microinjeção.
[00534] Quando um plasmídeo recombinante e a LTR retroviral e as sequências de empacotamento são introduzidos em uma linhagem de células especial (por exemplo, por precipitação com fosfato de cálcio, por exemplo), as sequências de empacotamento podem permitir a transcrição de RNA do plasmídeo recombinante a ser empacotado em partículas virais o qual pode, então, ser secretado para os meios de cultura. O meio que contém os retrovírus recombinantes é, em algumas modalidades, coletado, opcionalmente concentrado e usado para a transferência gênica. Por exemplo, em alguns aspectos, após a cotransfecção dos plasmídeos de empacotamento e o vetor de transferência para a linhagem de células de empacotamento, o vírus ou as partículas são recuperadas do meio de cultura e tituladas por meio de métodos padrão usados por aqueles versados na técnica.
[00535] Em algumas modalidades, um vetor retroviral, tal como um vetor lentiviral, pode ser produzido em uma linhagem de células de empacotamento, tal como uma linhagem de células HEK 293T exemplificativa, através de introdução de plasmídeos para permitir a geração de partículas lentivirais. Em algumas modalidades, uma célula de empacotamento é transfectada e/ou contém um polinucleotídeo que codifica gag e pol e um polinucleotídeo que codifica um receptor recombinante, tal como um receptor antigênico, por exemplo, um CAR. Em algumas modalidades, a linhagem de células de empacotamento é opcional e/ou adicionalmente transfectada com e/ou contém um polinucleotídeo que codifica uma proteína rev. Em algumas modalidades, a linhagem de células de empacotamento é opcional e/ou adicionalmente transfectada com e/ou contém um polinucleotídeo que codifica uma glicoproteína do envelope não nativa, tal como VSV-G. Em algumas de tais modalidades, aproximadamente dois dias após a transfecção de células, por exemplo, células HEK 293T, o sobrenadante celular contém vetores lentivirais recombinantes, os quais podem ser recuperados e titulados.
[00536] Partículas de vetor retroviral recuperadas e/ou produzidas podem ser usadas para transduzir células-alvo usando os métodos descritos. Uma vez nas células-alvo, o RNA viral é transcrito reversamente, importado para o núcleo e integrado de forma estável no genoma do hospedeiro. Um ou dois dias após a integração do RNA viral,
a expressão da proteína recombinante, por exemplo, receptor antigênico, tal como CAR, pode ser detectada.
[00537] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos envolvem métodos de transdução de células pelo contato, por exemplo, incubação, de uma composição de células que compreende uma pluralidade de células com uma partícula viral. Em algumas modalidades, as células a serem transfectadas ou transduzidas são ou compreendem células primárias obtidas de um indivíduo, tais como células enriquecidas e/ou selecionadas a partir de um indivíduo.
[00538] Em algumas modalidades, a concentração de células a serem transduzidas da composição é a partir de ou a partir de cerca de 1,0 x 105 células/mL a 1,0 x 108 células/mL, tal como pelo menos ou cerca de pelo menos ou cerca de 1,0 x 105 células/mL, 5 x 105 células/mL, 1 x 106 células/mL, 5 x 106 células/mL, 1 x 107 células/mL, 5 x 107 células/mL ou 1 x 108 células/mL.
[00539] Em algumas modalidades, as partículas virais são fornecidas em uma determinada proporção de cópias das partículas do vetor viral ou unidades infecciosas (IU) das mesmas por número total de células a serem transduzidas (IU/célula). Por exemplo, em algumas modalidades, as partículas virais estão presentes durante o contato em igual ou cerca de ou pelo menos igual ou cerca de 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50 ou 60 UI das partículas do vetor viral por célula.
[00540] Em algumas modalidades, a titulação de partículas de vetor viral está entre ou entre cerca de 1 x 106 IU/mL e 1 x 108 IU/mL, tal como entre ou entre cerca de 5 x 106 IU/mL e 5 x 107 IU/mL, tal como pelo menos 6 x 106 IU/mL, 7 x 106 IU/mL, 8 x 106 IU/mL, 9 x 106 IU/mL, 1 x 107 IU/mL, 2 x 107 IU/mL, 3 x 107 IU/mL, 4 x 107 IU/mL ou 5 x107 IU/mL.
[00541] Em algumas modalidades, a transdução pode ser alcançada em uma multiplicidade de infecção (MOI) de menos de 100, tal como geralmente menos de 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5 ou menos.
[00542] Em algumas modalidades, o método envolve o contato ou incubação das células com as partículas virais. Em algumas modalidades, o contato é de 30 minutos a 72 horas, tal como 30 minutos a 48 horas, 30 minutos a 24 horas ou 1 hora a 24 horas, tal como pelo menos ou cerca de pelo menos 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 36 horas ou mais.
[00543] Em algumas modalidades, o contato é realizado em solução. Em algumas modalidades, as células e partículas virais são colocadas em contato em um volume a partir de ou a partir de cerca de 0,5 mL a 500 mL, tal como a partir de ou a partir de cerca de 0,5 mL a 200 mL, 0,5 mL a 100 mL, 0,5 mL a 50 mL, 0,5 mL a 10 mL, 0,5 mL a 5 mL, 5 mL a 500 mL, 5 mL a 200 mL, 5 mL a 100 mL, 5 mL a 50 mL, 5 mL a 10 mL, 10 mL a 500 mL, 10 mL para 200 mL, 10 mL a 100 mL, 10 mL a 50 mL, 50 mL a 500 mL, 50 mL a 200 mL, 50 mL a 100 mL, 100 mL a 500 mL, 100 mL a 200 mL ou 200 mL a 500 mL.
[00544] Em determinadas modalidades, as células de entrada são tratadas, incubadas ou colocadas em contato com partículas que compreendem moléculas de ligação que se ligam ou reconhecem o receptor recombinante que é codificado pelo DNA viral.
[00545] Em algumas modalidades, a incubação das células com as partículas do vetor viral resulta ou produz uma composição de saída que compreende células transduzidas com as partículas do vetor viral.
[00546] Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos recombinantes são transferidos para células T via eletroporação (consulte, por exemplo, Chicaybam et al., (2013) PLoS ONE 8 (3): e60298 e Van Tedeloo et al. (2000) Gene Therapy 7 (16): 1431-1437). Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos recombinantes são transferidos para células T via transposição (consulte, por exemplo, Manuri et al. (2010) Hum Gene Ther 21 (4): 427-437; Sharma et al. (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74; e Huang et al. (2009) Methods Mol
Biol 506: 115-126). Outros métodos de introdução e expressão de material genético em células imunes incluem transfecção de fosfato de cálcio (por exemplo, conforme descrito em Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.), fusão de protoplastos, transfecção mediada por lipossoma catiônico; bombardeamento de micropartículas facilitado por partículas de tungstênio (Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)); e coprecipitação com DNA de fosfato de estrôncio (Brash et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031- 2034 (1987)).
[00547] Outras abordagens e vetores para a transferência dos ácidos nucleicos que codificam os produtos recombinantes são aquelas descritas, por exemplo, na Publicação de Pedido de Patente Internacional Nº: WO2014055668 e Patente Norte-Americana N°
7.446.190.
[00548] Em algumas modalidades, as células, por exemplo, células T, podem ser transfectadas durante ou após a expansão, por exemplo, células T, com um receptor de células T (TCR) ou um receptor antigênico quimérico (CAR). Esta transfecção para a introdução do gene do receptor desejado pode ser realizada com qualquer vetor retroviral adequado, por exemplo. A população de células geneticamente manipuladas pode, então, ser libertada do estímulo inicial (o estímulo anti-CD3/anti-CD28, por exemplo) e subsequentemente ser estimulada com um segundo tipo de estímulo, por exemplo, através de um receptor introduzido de novo). Este segundo tipo de estímulo pode incluir um estímulo antigênico na forma de uma molécula de peptídeo/MHC, o ligante cognato (ligação cruzada) do receptor geneticamente introduzido (por exemplo, ligante natural de um CAR) ou qualquer ligante (tal como um anticorpo) que se liga diretamente à estrutura do novo receptor (por exemplo, que reconhece regiões constantes dentro do receptor). Consulte, por exemplo, Cheadle et al., "Chimeric Antigen Receptors for
T-Cell Based Therapy", Methods Mol Biol. 2012; 907: 645-66 ou Barrett et al., Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer, Annual Review of Medicine Vol. 65: 333-347 (2014).
[00549] Em alguns casos, pode ser usado um vetor que não requeira que as células, por exemplo, células T, sejam ativadas. Em alguns destes casos, as células podem ser selecionadas e/ou transduzidas antes da ativação. Assim, as células podem ser manipuladas antes ou após a cultura das células e, em alguns casos, ao mesmo tempo ou durante pelo menos uma parte da cultura.
[00550] Dentre os ácidos nucleicos adicionais, por exemplo, genes para introdução são aqueles para melhorar a eficácia da terapia, tal como por meio da promoção da viabilidade e/ou função das células transferidas; genes para fornecer um marcador genético para seleção e/ou avaliação das células, tal como para avaliar a sobrevivência ou localização in vivo; genes para melhorar a segurança, por exemplo, ao tornar a célula suscetível à seleção negativa in vivo, conforme descrito por Lupton S. D. et al., Mol. and Cell Biol., 11: 6 (1991); e Riddell et al., Human Gene Therapy 3: 319-338 (1992); consulte também as publicações PCT/US91/08442 e PCT/US94/05601 para Lupton et al. que descrevem o uso de genes de fusão selecionáveis bifuncionais derivados da fusão de um marcador selecionável positivo dominante com um marcador selecionável negativo. Consulte, por exemplo, Riddell et al., Patente Norte-Americana N° 6.040.177, nas colunas 14-17. D. Cultivo, Expansão e Formulação de Células Manipuladas
[00551] Em algumas modalidades, os métodos para gerar as células manipuladas, por exemplo, para terapia celular de acordo com qualquer um dos métodos, usos, artigos de manufatura ou composições fornecidos, incluem uma ou mais etapas para o cultivo de células, por exemplo, cultivo de células sob condições que promovem a proliferação e/ou expansão. Em algumas modalidades, as células são cultivadas sob condições que promovem a proliferação e/ou expansão subsequente a uma etapa de manipulação genética, por exemplo, a introdução de um polipeptídeo recombinante nas células por meio de transdução ou transfecção. Em modalidades particulares, as células são cultivadas após as células terem sido incubadas sob condições estimuladoras e transduzidas ou transfectadas com um polinucleotídeo recombinante, por exemplo, um polinucleotídeo que codifica um receptor recombinante. Assim, em algumas modalidades, uma composição de células T positivas para CAR que foi concebida através de transdução ou transfecção com um polinucleotídeo recombinante que codifica o CAR é cultivada sob condições que promovem a proliferação e/ou expansão.
[00552] Em determinadas modalidades, uma ou mais composições de células T manipuladas são ou incluem duas composições separadas de células T enriquecidas, tais como duas composições separadas de células T enriquecidas que foram manipuladas com um polinucleotídeo que codifica um receptor recombinante, por exemplo, um CAR. Em modalidades particulares, duas composições separadas de células T enriquecidas, por exemplo, duas composições separadas de células T enriquecidas selecionadas, isoladas e/ou enriquecidas da mesma amostra biológica, são cultivadas separadamente sob condições estimuladoras, tal como subsequente a uma etapa de geneticamente manipulação, por exemplo, introdução de um polipeptídeo recombinante nas células através de transdução ou transfecção. Em determinadas modalidades, as duas composições separadas incluem uma composição de células T CD4+ enriquecidas, tal como um composto uma das células T CD4+ enriquecidas que foram manipuladas com um polinucleotídeo que codifica um receptor recombinante, por exemplo, um CAR. Em modalidades particulares, as duas composições separadas incluem uma composição de células T CD8+ enriquecidas,
tal como uma composição de células T CD4+ enriquecidas que foram manipuladas com um polinucleotídeo que codifica um receptor recombinante, por exemplo, um CAR. Em algumas modalidades, duas composições separadas de células T CD4+ enriquecidas e células T CD8+ enriquecidas, tal como uma composição de células T CD4+ enriquecidas e uma composição de células T CD8+ enriquecidas que foram, cada uma, separadamente manipuladas com um polinucleotídeo que codifica um receptor recombinante, por exemplo, um CAR, são cultivadas separadamente, por exemplo, sob condições que promovem a proliferação e/ou expansão.
[00553] Em algumas modalidades, o cultivo é realizado sob condições que promovem a proliferação e/ou expansão. Em algumas modalidades, tais condições podem ser manipuladas para induzir à proliferação, expansão, ativação e/ou sobrevivência de células na população. Em modalidades particulares, as condições de estimulação podem incluir um ou mais de meios particulares, temperatura, teor de oxigênio, teor de dióxido de carbono, tempo, agentes, por exemplo, nutrientes, aminoácidos, antibióticos, íons e/ou fatores estimuladores, tais como citocinas, quimiocinas, antígenos, parceiros de ligação, proteínas de fusão, receptores solúveis recombinantes e quaisquer outros agentes concebidos para promover o crescimento, divisão e/ou expansão das células.
[00554] Em modalidades particulares, as células são cultivadas na presença de uma ou mais citocinas. Em modalidades particulares, a uma ou mais citocinas são citocinas recombinantes. Em algumas modalidades, a uma ou mais citocinas são citocinas recombinantes humanas. Em determinadas modalidades, a uma ou mais citocinas se ligam a e/ou são capazes de se ligar a receptores que são expressos por e/ou são endógenos às células T. Em modalidades particulares, a uma ou mais citocinas, por exemplo, uma citocina recombinante, são ou incluem um membro da família do feixe de 4-alfa-hélice de citocinas. Em algumas modalidades, os membros da família do feixe de 4-alfa-hélice de citocinas incluem, porém sem limitações, interleucina-2 (IL-2), interleucina-4 (IL-4), interleucina-7 (IL-7), interleucina-9 (IL-9), interleucina 12 (IL-12), interleucina 15 (IL-15), fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF) e fator estimulador de colônias de granulócitos-macrófagos (GM-CSF). Em algumas modalidades, a uma ou mais citocinas recombinantes incluem IL-2, IL-7 e/ou IL-15. Em algumas modalidades, as células, por exemplo, células manipuladas, são cultivadas na presença de uma citocina, por exemplo, uma citocina humana recombinante, em uma concentração de entre 1 IU/mL e 2.000 IU/mL, entre 10 IU/mL e 100 IU/mL, entre 50 IU/mL e 200 IU/mL, entre 100 IU/mL e 500 IU/mL, entre 100 IU/mL e 1.000 IU/mL, entre 500 IU/mL e 2.000 IU/mL ou entre 100 IU/mL e 1.500 IU/mL.
[00555] Em algumas modalidades, o cultivo é realizado sob condições que geralmente incluem uma temperatura adequada para o crescimento de células imunes primárias, tais como linfócitos T humanos, por exemplo, pelo menos cerca de 25 graus Celsius, geralmente pelo menos cerca de 30 graus e, normalmente, igual ou cerca de 37 graus Celsius. Em algumas modalidades, a composição de células T enriquecidas é incubada em uma temperatura de 25 a 38°C, tal como 30 a 37°C, por exemplo, cerca de 37°C ± 2°C. Em algumas modalidades, a incubação é realizada durante um período de tempo até que a cultura, por exemplo, cultivo ou expansão, resulte em uma densidade desejada ou limite, número ou dose de células. Em algumas modalidades, a incubação dura mais de ou mais de cerca de ou é durante cerca de 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 5 dias, 6 dias, 7 dias, 8 dias, 9 dias ou mais.
[00556] Em modalidades particulares, o cultivo é realizado em um sistema fechado. Em determinadas modalidades, o cultivo é realizado em um sistema fechado sob condições estéreis. Em modalidades particulares, o cultivo é realizado no mesmo sistema fechado que uma ou mais etapas nos sistemas fornecidos. Em algumas modalidades, a composição de células T enriquecidas é removida de um sistema fechado e colocada e/ou conectada a um biorreator para o cultivo. Exemplos de biorreatores adequados para o cultivo incluem, porém sem limitações, GE Xuri W25, GE Xuri W5, Sartorius BioSTAT RM 20/50, Finesse SmartRocker Bioreactor Systems e Pall XRS Bioreactor Systems. Em algumas modalidades, o biorreator é usado para perfundir e/ou misturar as células durante pelo menos uma parte da etapa de cultivo.
[00557] Em algumas modalidades, a mistura é ou inclui oscilação e/ou movimento oscilante. Em alguns casos, o biorreator pode estar sujeito a movimento ou oscilação o que, em alguns aspectos, pode aumentar a transferência de oxigênio. O movimento do biorreator pode incluir, porém sem limitações, girar ao longo de um eixo horizontal, girar ao longo de um eixo vertical, um movimento de oscilação ao longo de um eixo horizontal inclinado do biorreator ou qualquer combinação dos mesmos. Dentro algumas modalidades, pelo menos uma parte da incubação é realizada com oscilação. A velocidade de oscilação e o ângulo de oscilação podem ser ajustados para atingir uma agitação desejada. Em algumas modalidades, o ângulo de oscilação é de 20°, 19°, 18°, 17°, 16°, 15°, 14°, 13°, 12°, 11°, 10°, 9°, 8°, 7°, 6°, 5°, 4°, 3°, 2° ou 1°. Em determinadas modalidades, o ângulo de oscilação está entre 6-16 °. Em outras modalidades, o ângulo de oscilação está entre 7-16°. Em outras modalidades, o ângulo de oscilação está entre 8-12°. Em algumas modalidades, a taxa de oscilação é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40 rpm. Em algumas modalidades, a taxa de oscilação está entre 4 e 12 rpm, tal como entre
4 e 6 rpm, inclusive.
[00558] Em algumas modalidades, o biorreator mantém a temperatura em ou próximo de 37°C e os níveis de CO2 em ou próximo de 5 % com um fluxo de ar constante igual a, em cerca de ou pelo menos 0,01 L/min, 0,05 L/min, 0,1 L/min, 0,2 L/min, 0,3 L/min, 0,4 L/min, 0,5 L/min, 1,0 L/min, 1,5 L/min ou 2,0 L/min ou acima de 2,0 L/min. Em determinadas modalidades, pelo menos uma parte do cultivo é realizada com perfusão, tal como com uma taxa de 290 ml/dia, 580 ml/dia e/ou 1160 ml/dia, por exemplo, dependendo do tempo em relação ao início do cultivo e/ou densidade das células cultivadas. Em algumas modalidades, pelo menos uma parte da expansão da cultura de células é realizada com um movimento de oscilação, tal como em um ângulo entre 5° e 10°, tal como 6°, em uma velocidade de oscilação constante, tal como uma velocidade entre 5 e 15 RPM, tal como 6 RMP ou 10 RPM.
[00559] Em algumas modalidades, os métodos para fabricar, gerar ou produzir uma terapia celular e/ou células manipuladas, de acordo com os métodos, usos ou artigos de manufatura fornecidos, podem incluir a formulação de células, tal como a formulação de células geneticamente manipuladas resultante das etapas de processamento antes ou após a incubação, manipulação e cultivo e/ou uma ou mais outras etapas de processamento, conforme descrito. Em algumas modalidades, uma ou mais das etapas de processamento, incluindo a formulação de células, podem ser realizadas em um sistema fechado. Em alguns casos, as células são processadas em uma ou mais etapas (por exemplo, realizadas na câmara centrífuga e/ou sistema fechado) para a fabricação, geração ou produção de uma terapia celular e/ou células manipuladas podem incluir formulação de células, tal como formulação de células geneticamente manipuladas resultantes das etapas de processamento de transdução antes ou após a cultura, por exemplo, cultivo e expansão e/ou uma ou mais outras etapas de processamento conforme descrito. Em algumas modalidades, as células geneticamente manipuladas são formuladas como composições em forma de dose unitária, incluindo o número de células para administração em uma determinada dose ou fração.
[00560] Em algumas modalidades, a dose de células que compreende células manipuladas com um receptor antigênico recombinante, por exemplo, CAR ou TCR, é fornecida como uma composição ou formulação, tal como uma composição ou formulação farmacêutica. Estas composições podem ser usadas de acordo com os métodos fornecidos, tais como no tratamento de doenças, condições e transtornos ou em métodos de detecção, diagnóstico e prognóstico, e usos e artigos de manufatura. Em alguns casos, as células podem ser formuladas em uma quantidade para administração de dosagem, tal como para uma administração de dosagem unitária única ou administração de dosagem múltipla.
[00561] Em algumas modalidades, as células podem ser formuladas em um recipiente, tal como um saco ou frasco. Em algumas modalidades, o frasco pode ser um frasco de infusão. Em algumas modalidades, o frasco é formulado com uma única dose unitária das células manipuladas, incluindo o número de células para administração em uma determinada dose ou fração.
[00562] Em algumas modalidades, as células são formuladas em um tampão farmaceuticamente aceitável o qual pode, em alguns aspectos, incluir um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o processamento inclui a troca de um meio em um meio ou tampão de formulação que é farmaceuticamente aceitável ou desejado para administração a um indivíduo. Em algumas modalidades, as etapas de processamento podem envolver a lavagem das células transduzidas e/ou expandidas para substituir as células em um tampão farmaceuticamente aceitável que pode incluir um ou mais carreadores ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis opcionais. Exemplos de tais formas farmacêuticas, incluindo carreadores ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis, podem ser descritos abaixo em conjunto com formas aceitáveis para a administração de células e composições a um indivíduo. A composição farmacêutica, em algumas modalidades, contém as células em quantidades eficazes para tratar ou prevenir a doença ou condição, tal como uma quantidade terapeuticamente eficaz ou profilaticamente eficaz.
[00563] Em algumas modalidades, o tampão de formulação contém um crioconservante. Em algumas modalidades, as células são formuladas com uma solução de crioconservante que contém solução de DMSO a 1,0% a 30%, tal como uma solução de DMSO a 5% a 20% ou uma solução de DMSO a 5% a 10%. Em algumas modalidades, a solução de criopreservação é ou contém, por exemplo, PBS que contém DMSO a 20% e albumina de soro humano (HSA) a 8% ou outro meio de congelamento de células adequado. Em algumas modalidades, a solução de crioconservante é ou contém, por exemplo, DMSO a pelo menos ou cerca de 7,5%. Em algumas modalidades, as etapas de processamento podem envolver a lavagem das células transduzidas e/ou expandidas para substituir as células em uma solução de crioconservante. Em algumas modalidades, as células são congeladas, por exemplo, crioprotegidas ou crioconservadas, em meio e/ou solução que tem uma concentração final de DMSO a partir de ou a partir de cerca de 12,5 %, 12,0 %, 11,5 %, 11,0 %, 10,5 %, 10,0 %, 9,5 %, 9,0 %, 8,5%, 8,0 %, 7,5 %, 7,0 %, 6,5 %, 6,0 %, 5,5 % ou 5,0 % ou DMSO entre 1% e 15 %, entre 6 % e 12 %, entre 5 % e 10 % ou entre 6 % e 8 %. Em modalidades particulares, as células são congeladas, por exemplo, crioprotegidas ou crioconservadas, em meio e/ou solução que tem uma concentração final de HSA de ou cerca de 5,0 %, 4,5 %, 4,0 %, 3,5 %, 3,0 %, 2,5 %, 2,0 %, 1,5 %, 1,25 %, 1,0 %, 0,75 %, 0,5 % ou 0,25 % ou
HSA entre 0,1 % e 5 %, entre 0,25 % e 4 %, entre 0,5 % e 2 % ou entre 1 % e 2 %.
[00564] Em algumas modalidades, a formulação é realizada usando uma ou mais etapas de processamento, incluindo lavagem, diluição ou concentração das células, tais como as células cultivadas ou expandidas. Em algumas modalidades, o processamento pode incluir diluição ou concentração das células para uma concentração ou número desejado, tal como composições em forma de dose unitária, incluindo o número de células para administração em uma determinada dose ou fração. Em algumas modalidades, as etapas de processamento podem incluir uma redução de volume para, deste modo, aumentar a concentração de células conforme desejado. Em algumas modalidades, as etapas de processamento podem incluir uma adição de volume para, deste modo, diminuir a concentração de células conforme desejado. Em algumas modalidades, o processamento inclui a adição de um volume de um tampão de formulação às células transduzidas e/ou expandidas. Em algumas modalidades, o volume do tampão de formulação é a partir de ou a partir de cerca de 10 mL a 1000 mL, tal como pelo menos ou pelo menos cerca de ou cerca de 50 mL, 100 mL, 200 mL, 300 mL, 400 mL, 500 mL, 600 mL, 700 mL, 800 mL, 900 mL ou 1000 mL.
[00565] Em algumas modalidades, tais etapas de processamento para formular uma composição de células são realizadas em um sistema fechado. Exemplos de tais etapas de processamento podem ser realizados usando uma câmara centrífuga em conjunto com um ou mais sistemas ou kits associados a um sistema de processamento de células, tal como uma câmara centrífuga produzida e vendida pela Biosafe SA, incluindo aquelas para uso com os sistemas de processamento de células Sepax ou Sepax 2. Um exemplo de sistema e processo é descrito na Publicação Internacional Número WO2016/073602. Em algumas modalidades, o método inclui efetuar a expressão a partir da cavidade interna da câmara centrífuga de uma composição formulada, a qual é a composição resultante de células formuladas em um tampão de formulação, tal como um tampão farmaceuticamente aceitável, em qualquer uma das modalidades acima, conforme descrito. Em algumas modalidades, a expressão da composição formulada é para um recipiente, tais como os frascos dos recipientes de material biomédico descritos no presente documento, o qual está operativamente ligado como parte de um sistema fechado à câmara centrífuga. Em algumas modalidades, os recipientes de material biomédico são configurados para integração e/ou conexão operável e/ou são integrados ou operativamente conectados a um sistema fechado ou dispositivo que desempenha uma ou mais etapas de processamento. Em algumas modalidades, o recipiente de material biomédico é conectado a um sistema em uma linha de saída ou posição de saída. Em alguns casos, o sistema fechado é conectado ao frasco do recipiente de material biomédico no tubo de entrada. Sistemas de fechamento exemplificativos para uso com os recipientes de material biomédico descritos no presente documento incluem os sistemas Sepax e Sepax 2.
[00566] Em algumas modalidades, o sistema fechado, tal como associado a uma câmara centrífuga ou sistema de processamento de células, inclui um kit de saída de múltiplas portas que contém um coletor de tubulação de múltiplas vias associado, em cada extremidade de uma linha de tubulação, a uma porta à qual um ou uma pluralidade de recipientes podem ser conectados para expressão da composição formulada. Em alguns aspectos, um número desejado ou pluralidade de frascos pode ser conectado de forma estéril a uma ou mais, geralmente duas ou mais, tal como pelo menos 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou mais das portas da porta com múltiplas saídas. Por exemplo, em algumas modalidades, um ou mais recipientes, por exemplo, recipientes de material biomédico,
podem ser presos às portas ou a menos do que todas as portas. Assim, em algumas modalidades, o sistema pode efetuar a expressão da composição de saída em uma pluralidade de frascos dos recipientes de material biomédico.
[00567] Em alguns aspectos, as células podem ser expressas para um ou mais da pluralidade de recipientes de saída, por exemplo, frascos, em uma quantidade para administração de dosagem, tal como para uma administração de dosagem unitária única ou administração de dosagem múltipla. Por exemplo, em algumas modalidades, os frascos podem conter, cada um, o número de células para administração em uma determinada dose ou fração. Assim, cada frasco, em alguns aspectos, pode conter uma única dose unitária para administração ou pode conter uma fração de uma dose desejada, de modo que mais de um dente a pluralidade de frascos, tal como dois dos frascos ou 3 dos frascos, juntos constituem uma dose para administração. Em algumas modalidades, 4 frascos juntos constituem uma dose para administração.
[00568] Assim, os recipientes, por exemplo, sacos ou frascos, geralmente contêm as células a serem administradas, por exemplo, uma ou mais doses unitárias das mesmas. A dose unitária pode ser uma quantidade ou número de células a serem administradas ao indivíduo ou duas vezes o número (ou mais) de células a serem administradas. Ela pode ser a dose mais baixa ou a dose mais baixa possível das células que seriam administradas ao indivíduo. Em alguns aspectos, os artigos de manufatura fornecidos incluem um ou mais dentre a pluralidade de recipientes de saída.
[00569] Em algumas modalidades, cada um dos recipientes, por exemplo sacos ou frascos, compreende individualmente uma dose unitária das células. Assim, em algumas modalidades, cada um dos recipientes compreende o mesmo ou aproximadamente ou substancialmente o mesmo número de células. Em algumas modalidades, cada dose unitária contém pelo menos cerca de ou pelo menos ou pelo menos cerca de 1 x 106, 2 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107 ou 1 x 108 células manipuladas, células totais, células T ou PBMCs.
Em algumas modalidades, cada dose unitária contém pelo menos cerca de ou pelo menos ou pelo menos cerca de 1 x 106, 2 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107 ou 1 x 108 células T CAR+ que são CD3+, tais como CD4+ ou CD8+ ou um subconjunto viável das mesmas.
Em algumas modalidades, o volume da composição de células formuladas em cada recipiente, por exemplo, saco ou frasco, está entre igual ou cerca de 10 mL e igual ou cerca de 100 mL, tal como igual ou cerca de ou pelo menos ou pelo menos cerca de 20 mL, 30 mL, 40 mL, 50 mL, 60 mL, 70 mL, 80 mL, 90 mL ou 100 mL.
Em algumas modalidades, o volume da composição de células formuladas em cada recipiente, por exemplo, saco ou frasco, está entre igual ou cerca de 1 mL e igual ou cerca de 10 mL, tal como entre igual ou cerca de 1 mL e igual ou cerca de 5 mL.
Em algumas modalidades, o volume da composição de células formuladas em cada recipiente, por exemplo, saco ou frasco, é entre ou cerca de 4 mL e ou cerca de 5 mL.
Em algumas modalidades, o volume da composição de células formuladas em cada recipiente, por exemplo, saco ou frasco, é ou tem cerca de 4,4 mL.
Em algumas modalidades, o volume da composição de células formuladas em cada recipiente, por exemplo, saco ou frasco, é ou tem cerca de 4,5 mL.
Em algumas modalidades, o volume da composição de células formuladas em cada recipiente, por exemplo, saco ou frasco, é ou tem cerca de 4,6 mL.
Em algumas modalidades, o volume da composição de células formuladas em cada recipiente, por exemplo, saco ou frasco, é ou tem cerca de 4,7 mL.
Em algumas modalidades, o volume da composição de células formuladas em cada recipiente, por exemplo, saco ou frasco, é ou tem cerca de 4,8 mL.
Em algumas modalidades, o volume da composição de células formuladas em cada recipiente, por exemplo, saco ou frasco, é ou tem cerca de 4,9 mL. Em algumas modalidades, o volume da composição de células formuladas em cada recipiente, por exemplo, saco ou frasco, é ou tem cerca de 5,0 mL.
[00570] Em algumas modalidades, a composição de células formulada tem uma concentração maior do que ou cerca de 0,5 x 10 6 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL, mais de ou cerca de 1,0 x 106 recombinante células que expressam receptor (por exemplo, CAR+)/CD3+ ou tais células viáveis por mL, maior que ou cerca de 1,5 x 106 células que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL, maior que ou cerca de 2,0 x 106 células que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/CD3+ ou células viáveis por mL, mais de ou cerca de 2,5 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL, mais de ou cerca de 2,6 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL, mais de ou cerca de 2,7 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL, mais de ou cerca de 2,8 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis células por mL, maiores do que ou cerca de 2,9 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL maiores do que ou cerca de 3,0 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou similares células viáveis por mL, mais de ou cerca de 3,5 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL, mais de ou cerca de 4,0 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL, mais de ou cerca de 4,5 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL ou mais de igual ou cerca de 5 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL. Em algumas modalidades, as células CD3+ são células T CD4+. Em algumas modalidades, as células CD3+ são células T CD8+. Em algumas modalidades, as células T CD3+ são células T CD4+ e CD8+.
[00571] Em algumas modalidades, as células no recipiente, por exemplo saco ou frascos, podem ser crioconservadas. Em algumas modalidades, o recipiente, por exemplo, frascos, pode ser armazenado em nitrogênio líquido até uso posterior.
[00572] Em algumas modalidades, tais células produzidas por meio do método, ou uma composição que compreende tais células, são administradas a um indivíduo para o tratamento de uma doença ou condição, por exemplo, de acordo com os métodos, usos e artigos de manufatura descritos no presente documento. V. COMPOSIÇÕES E FORMULAÇÕES
[00573] Em algumas modalidades, a dose de células que compreende células manipuladas com um receptor antigênico recombinante, por exemplo, CAR ou TCR, é fornecida como uma composição ou formulação, tal como uma composição ou formulação farmacêutica. Composições e formulações exemplificativas são descritas acima, incluindo aquelas produzidas em relação a métodos de manipulação das células. Tais composições podem ser usadas de acordo com os métodos ou usos fornecidos e/ou com os artigos de manufatura ou composições fornecidos, tal como na prevenção ou tratamento de doenças, condições ou transtornos, ou em métodos de detecção, diagnóstico e prognóstico.
[00574] O termo "formulação farmacêutica" refere-se a uma preparação que está em uma forma que permite que a atividade biológica de um ingrediente ativo contido na mesma seja eficaz, e que não contém componentes adicionais que são inaceitavelmente tóxicos para um indivíduo ao qual a formulação será administrada.
[00575] Um "carreador farmaceuticamente aceitável" refere-se a um ingrediente em uma formulação farmacêutica, diferente de um ingrediente ativo, que não é tóxico para um indivíduo. Um carreador farmaceuticamente aceitável inclui, porém sem limitações, um tampão, excipiente, estabilizante ou conservante.
[00576] Em alguns aspectos, a escolha do carreador é determinada em parte pela célula ou agente particular e/ou o método de administração. Consequentemente, há uma variedade de formulações adequadas. Por exemplo, a composição farmacêutica pode conter conservantes. Conservantes adequados podem incluir, por exemplo, metil parabeno, propil parabeno, benzoato de sódio e cloreto de benzalcônio. Em alguns aspectos, uma mistura de dois ou mais conservantes é usada. O conservante ou misturas dos mesmos estão, tipicamente, presentes em uma quantidade de cerca de 0,0001 % a cerca de 2 % em peso da composição total. Carreadores são descritos, por exemplo, por Remington’s Pharmaceutical Sciences 16ª edição, Osol, A. Ed. (1980). Carreadores farmaceuticamente aceitáveis são, em geral, não tóxicos para os receptores nas dosagens e concentrações empregadas e incluem, porém sem limitações: tampões, tais como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes, incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (tais como cloreto de octadecildimetilbenzilamônio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio; cloreto de benzetônio; fenol, álcool butílico ou benzílico; alquilparabenos, tais como metil ou propil parabeno; catecol; resorcinol; ciclo-hexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos de cerca de 10 resíduos); proteínas, tais como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, tal como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tais como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes, tal como EDTA; açúcares, tais como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contra-íons formadores de sal, tal como sódio; complexos metálicos (por exemplo, complexos de Zn- proteína); e/ou tensoativos não iônicos, tal como polietileno glicol (PEG).
[00577] Agentes de tamponamento, em alguns aspectos, estão incluídos nas composições. Agentes de tamponamento adequados incluem, por exemplo, ácido cítrico, citrato de sódio, ácido fosfórico, fosfato de potássio e vários outros ácidos e sais. Em alguns aspectos, uma mistura de dois ou mais agentes de tamponamento é usada. O agente de tamponamento ou misturas dos mesmos estão, tipicamente, presentes em uma quantidade de cerca de 0,001 % a cerca de 4 % em peso da composição total. Métodos para preparar composições farmacêuticas administráveis são conhecidos. Métodos exemplificativos são descritos em mais detalhes, por exemplo, em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21ª ed. (1 de maio de 2005).
[00578] A formulação ou composição também pode conter mais de um ingrediente ativo útil para a indicação, doença ou condição particular que está sendo prevenida ou tratada com as células ou agentes, em que as respectivas atividades não afetam adversamente umas às outras. Tais ingredientes ativos estão adequadamente presentes em combinação em quantidades que são eficazes para a finalidade pretendida. Assim, em algumas modalidades, a composição farmacêutica inclui ainda outros agentes ou fármacos farmaceuticamente ativos, tais como agentes quimioterapêuticos, por exemplo, asparaginase, busulfan, carboplatina, cisplatina, daunorrubicina, doxorrubicina, fluorouracil, gencitabina, hidroxiureia,
metotrexato, paclitaxel, ritublastinaxel, ritublastinebe, vincristina, etc. Em algumas modalidades, os agentes ou células são administrados na forma de um sal, por exemplo, um sal farmaceuticamente aceitável. Sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem aqueles derivados de ácidos minerais, tais como ácidos clorídrico, bromídrico, fosfórico, metafosfórico, nítrico e sulfúrico, e ácidos orgânicos, tais como ácidos tartárico, acético, cítrico, málico, láctico, fumárico, benzoico, glicólico, glucônico, succínico e arilsulfônico, por exemplo, ácido p-toluenossulfônico.
[00579] A composição farmacêutica, em algumas modalidades, contém agentes ou células em quantidades eficazes para tratar ou prevenir a doença ou condição, tal como uma quantidade terapeuticamente eficaz ou profilaticamente eficaz. A eficácia terapêutica ou profilática, em algumas modalidades, é monitorada por meio de avaliação periódica dos indivíduos tratados. Para administrações repetidas durante vários dias ou mais, dependendo da condição, o tratamento é repetido até que ocorra a supressão desejada dos sintomas da doença. No entanto, outros regimes de dosagem podem ser úteis e podem ser determinados. A dosagem desejada pode ser distribuída através de uma única administração em bolus da composição, através de múltiplas administrações em bolus da composição ou através de administração por infusão contínua da composição.
[00580] Os agentes ou células podem ser administrados através de qualquer meio adequado, por exemplo, através de infusão em bolus, através de injeção, por exemplo, injeções intravenosas ou subcutâneas, injeção intraocular, injeção periocular, injeção sub-retinal, injeção intravítrea, injeção trans-septal, injeção subescleral, injeção intracoroidal, injeção intracameral, injeção subconjuntival, injeção subtenoniana, injeção retrobulbar, injeção peribulbar ou administração justascleral posterior. Em algumas modalidades, eles são administrados através da via parentérica, intrapulmonar e intranasal e, se desejado para tratamento local, administração intralesional. As infusões parentéricas incluem administração intramuscular, intravenosa, intra- arterial, intraperitoneal ou subcutânea. Em algumas modalidades, uma determinada dose é administrada através de uma única administração de bolus das células ou agente. Em algumas modalidades, ela é administrada através de múltiplas administrações de bolus das células ou agente, por exemplo, ao longo de um período de não mais de 3 dias, ou administração por infusão contínua das células ou agente.
[00581] Para a prevenção ou tratamento da doença, a dosagem apropriada pode depender do tipo de doença a ser tratada, do tipo de agente ou agentes, do tipo de células ou receptores recombinantes, da gravidade e do curso da doença, quer o agente ou células sejam administrados para fins preventivos ou terapêuticos, terapia anterior, histórico clínico do indivíduo e resposta ao agente ou às células, e a critério do médico que faz o atendimento. As composições são, em algumas modalidades, adequadamente administradas ao indivíduo de uma vez ou ao longo de uma série de tratamentos.
[00582] As células ou agentes podem ser administrados usando técnicas de administração, formulações e/ou dispositivos padrão. São fornecidas formulações e dispositivos, tais como seringas e frascos, para armazenamento e administração das composições. Em relação às células, a administração pode ser autóloga ou heteróloga. Por exemplo, células imunorresponsivas ou progenitoras podem ser obtidas a partir de um indivíduo e administradas ao mesmo indivíduo ou a um indivíduo compatível diferente. Células imunorresponsivas derivadas de sangue periférico ou sua progênie (por exemplo, derivadas in vivo, ex vivo ou in vitro) podem ser administradas por meio de injeção localizada, incluindo administração por cateter, injeção sistêmica, injeção localizada, injeção intravenosa ou administração parentérica. Ao administrar uma composição terapêutica (por exemplo, uma composição farmacêutica que contém uma célula imunorresponsiva geneticamente modificada ou um agente que trata ou melhora os sintomas de neurotoxicidade), ela geralmente será formulada em uma forma injetável de dosagem unitária (solução, suspensão, emulsão).
[00583] As formulações incluem aquelas para administração oral, intravenosa, intraperitoneal, subcutânea, pulmonar, transdérmica, intramuscular, intranasal, bucal, sublingual ou supositório. Em algumas modalidades, o agente ou as populações de células são administrados através da via parentérica. O termo "parentérica", conforme usado no presente documento, inclui administração intravenosa, intramuscular, subcutânea, retal, vaginal e intraperitoneal. Em algumas modalidades, o agente ou as populações de células são administrados a um indivíduo usando administração sistêmica periférica através de injeção intravenosa, intraperitoneal ou subcutânea.
[00584] As composições, em algumas modalidades, são fornecidas como preparações líquidas estéreis, por exemplo, soluções aquosas isotônicas, suspensões, emulsões, dispersões ou composições viscosas as quais podem, em alguns aspectos, ser tamponadas para um pH selecionado. As preparações líquidas são normalmente mais fáceis de preparar do que géis, outras composições viscosas e composições sólidas. Além disso, as composições líquidas são um pouco mais convenientes de administrar, especialmente através de injeção. As composições viscosas, por outro lado, podem ser formuladas dentro da faixa de viscosidade apropriada para fornecer períodos de contato mais longos com tecidos específicos. As composições líquidas ou viscosas podem compreender carreadores, os quais podem ser um solvente ou meio de dispersão que contém, por exemplo, água, solução salina, solução salina tamponada com fosfato,
poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol, polietileno glicol líquido) e misturas adequadas dos mesmos.
[00585] As soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas ao incorporar o agente ou células em um solvente, tal como em mistura com um carreador, diluente ou excipiente adequado, tal como água estéril, soro fisiológico, glicose, dextrose ou similar.
[00586] As formulações a serem usadas para administração in vivo são, em geral, estéreis. A esterilidade pode ser facilmente alcançada, por exemplo, por meio de filtração através de membranas de filtração estéreis. VI. ARTIGOS DE MANUFATURA E KITS
[00587] Também são fornecidos artigos de manufatura e kits que contêm células manipuladas que expressam um receptor recombinante ou composições das mesmas e, opcionalmente, instruções de uso, por exemplo, instruções para administração, de acordo com os métodos fornecidos.
[00588] Em algumas modalidades, são fornecidos artigos de manufatura e/ou kits que incluem uma composição que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer uma das células manipuladas descritas no presente documento e instruções para administração a um indivíduo para o tratamento de uma doença ou condição. Em algumas modalidades, as instruções podem especificar alguns ou todos os elementos dos métodos fornecidos no presente documento. Em algumas modalidades, as instruções especificam instruções particulares para a administração das células para terapia celular, por exemplo, doses, tempo, seleção e/ou identificação de indivíduos para administração e condições para administração. Em algumas modalidades, os artigos de manufatura e/ou kits incluem ainda um ou mais agentes adicionais para terapia, por exemplo, terapia de linfodepleção e/ou terapia combinada, tal como qualquer um descrito no presente documento e, opcionalmente, incluem ainda instruções para a administração do agente adicional para terapia. Em algumas modalidades, os artigos de manufatura e/ou kits compreendem ainda um agente para terapia de linfodepleção e, opcionalmente, incluem ainda instruções para a administração da terapia de linfodepleção. Em algumas modalidades, as instruções podem ser incluídas como um rótulo ou bula que acompanha as composições para administração.
[00589] Em algumas modalidades, tais critérios incluem indivíduos com CLL recidivante/refratária e/ou CLL ou SLL de alto risco. Em alguns aspectos, a população a ser tratada inclui, por exemplo, indivíduos com um estado de desempenho no Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) que está em qualquer faixa entre 0-1. Em algumas modalidades, de qualquer uma das modalidades, os indivíduos a serem tratados não obtiveram sucesso em duas ou mais terapias anteriores.
[00590] Em algumas modalidades, as instruções especificam a dose de células a ser administrada. Por exemplo, em algumas modalidades, a dose especificada nas instruções inclui células que expressam um receptor recombinante no total (por exemplo, CAR), tal como 2,5 x 107, 5 x 107 ou 1 x 108 no total de tais células.
[00591] Em algumas modalidades, o artigo de manufatura ou kit compreende um recipiente, opcionalmente um frasco que compreende uma pluralidade de células T CD4+ que expressam um receptor recombinante (por exemplo, CAR) e um recipiente, opcionalmente um frasco que compreende uma pluralidade de células T CD8+ que expressam um receptor recombinante (por exemplo, CAR). Em algumas modalidades, o artigo de manufatura ou kit compreende um recipiente, opcionalmente um frasco que compreende uma pluralidade de células T CD4+ que expressam um receptor recombinante e compreende ainda, no mesmo recipiente, uma pluralidade de células T CD8+ que expressam um receptor recombinante (por exemplo CAR). Em algumas modalidades, um crioconservante é incluído com as células. Em alguns aspectos, o recipiente é um saco. Em alguns aspectos, o recipiente é um frasco.
[00592] Em algumas modalidades, o recipiente, tal como o frasco, compreende mais de ou cerca de 0,5 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL, mais de ou cerca de 1,0 x 106 do receptor recombinante - expressão (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL, mais de ou cerca de 1,5 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL, mais de ou cerca de 2,0 x 106 células que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/CD3+ ou células viáveis por mL. maior do que ou cerca de 2,5 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL, mais de ou cerca de 2,6 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL, mais de ou cerca de 2,7 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL, mais de ou cerca de 2,8 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis células por mL, maiores do que ou cerca de 2,9 x 10 6 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL maiores do que ou cerca de 3,0 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou similares células viáveis por mL, mais de ou cerca de 3,5 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL, mais de ou cerca de 4,0 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL, mais de ou cerca de 4,5 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL ou mais de igual ou cerca de 5 x 106 células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+)/células CD3+ ou tais células viáveis por mL. Em algumas modalidades, as células CD3+ são células T CD4+. Em algumas modalidades, as células CD3+ são células T CD8+. Em algumas modalidades, as células T CD3+ são células T CD4+ e CD8+.
[00593] Em algumas modalidades, a pluralidade de frascos ou pluralidade de células ou dose unitária de células especificadas para administração, coletivamente, inclui uma dose de células que compreende a partir de ou a partir de cerca de 2,5 x 107 a 5 x 107 células T que expressam o receptor recombinante no total ou células T no total ou 5 x 107 a 1 x 108 células T que expressam o receptor recombinante no total ou células T no total. Em algumas modalidades, as células T são células CD3+. Em algumas modalidades, as células CD3+ são células T CD8+. Em algumas modalidades, as células T CD3+ são células T CD4+ e CD8+. Em algumas modalidades, a pluralidade de frascos ou a pluralidade de células ou dose unitária de células especificadas para administração incluem uma ou mais doses unitárias de células T CD3+ CD4+ que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR) e uma ou mais doses unitárias de células T CD3+ CD8+ que expressam receptor recombinante (por exemplo CAR). Em algumas modalidades, o número de células de cada dose unitária são células viáveis.
[00594] Em alguns aspectos, o artigo compreende uma ou mais doses unitárias das células CD4+ e CD8+ ou das células do receptor CD4+ (por exemplo, CAR+) e células do receptor CD8+ (por exemplo, CAR+), em que a dose unitária compreende entre igual ou cerca de 1 x 107 e igual ou cerca de 2 x 108 células T que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR), entre igual ou cerca de 5 x 107 e igual ou cerca de 1,5 x 108 células T que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR), igual ou cerca de 5 x 107 células T que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR) ou cerca de 1 x 108 células T que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR) ou cerca de 1,5 x 108 células T que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR), opcionalmente em que a informação no artigo especifica a administração de uma ou uma pluralidade de doses unitárias e/ou um volume que corresponde a tal uma ou pluralidade de doses unitárias.
Em alguns casos, o artigo compreende uma ou mais doses unitárias das células CD8+, em que a dose compreende entre cerca de 5 x 106 e cerca de 1 x 108 células T CD8+ que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR), a dose compreende entre igual ou cerca de 1 x 107 e igual ou cerca de 0,75 x 108 células T CD8+ que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR), a dose compreende igual ou cerca de 2,5 x 10 7 células T CD8+ que expressam receptor recombinante (por exemplo CAR) ou a dose compreende igual ou cerca de 5 x 107 células T CD8+ que expressam receptor recombinante (por exemplo) ou a dose compreende igual ou cerca de 0,75 x 108 células T CD8+ que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR), opcionalmente em que a informação no artigo especifica a administração de uma ou uma pluralidade de doses unitárias e/ou um volume que corresponde a tal uma ou pluralidade de doses unitárias.
Em alguns casos, o artigo compreende uma ou mais doses unitárias das células CD4+, em que a dose compreende entre cerca de 5 x 106 e cerca de 1 x 108 células T CD4+ que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR), a dose compreende entre igual ou cerca de 1 x 107 e igual ou cerca de 0,75 x 108 células T CD4+ que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR), a dose compreende igual ou cerca de 2,5 x 10 7 células T CD4+ que expressam receptor recombinante (por exemplo CAR) ou a dose compreende pelo ou cerca de 5 x 107 células T CD4+ que expressam receptor recombinante (por exemplo) ou a dose compreende igual ou cerca de 0,75 x 108 células T CD4+ que expressam receptor recombinante (por exemplo, CAR), opcionalmente em que a informação no artigo especifica a administração de uma ou uma pluralidade de doses unitárias e/ou um volume que corresponde a tal uma ou pluralidade de doses unitárias. Em algumas modalidades, as células no artigo compreendem, coletivamente, uma dose de células que compreende não mais de ou cerca de 1 x 108 células T que expressam o receptor recombinante no total (por exemplo, CAR) ou células CD3+ no total, não mais de igual ou cerca de 1 x 107 células T que expressam o receptor recombinante no total (por exemplo, CAR) ou células CD3+ no total, não mais de ou cerca de 0,5 x 107 células T que expressam o receptor recombinante no total (por exemplo, CAR) ou células CD3+ no total, não mais de ou cerca de 1 x 10 6 células T que expressam o receptor recombinante no total (por exemplo, CAR) ou células CD3+ no total, não mais de ou cerca de 0,5 x 106 células T que expressam o receptor recombinante no total (por exemplo, CAR) ou células CD3+ no total. Em algumas modalidades, o número de células de cada dose unitária são células viáveis.
[00595] Em algumas modalidades, cada frasco ou a pluralidade de frascos ou pluralidade de células ou dose unitária de células especificadas para administração compreende, coletivamente, uma dose plana de células ou dose fixa de células, de modo que a dose de células não esteja vinculada ou seja com base na área na superfície corporal ou peso de um indivíduo.
[00596] Em algumas modalidades, uma dose unitária de uma célula é ou compreende o número ou a quantidade de células, tais como células T manipuladas, que podem ser administradas a um indivíduo ou paciente em uma dose única. Em algumas modalidades, tal dose unitária é uma fração do número de células para administração em uma determinada dose.
[00597] Em algumas modalidades, as instruções para a administração de uma dose especificam a administração de um número de células que compreende pelo menos ou pelo menos cerca de 2,5 x 107 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+, pelo menos ou pelo menos cerca de 5 x 107 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ ou pelo menos ou pelo menos cerca de 1 x 108 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+. Em algumas modalidades, as instruções para administração de uma dose especificam a administração de um número de células que compreende igual ou cerca de 2,5 x 107 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ ou cerca de 5 x 107 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+ ou igual ou cerca de 1 x 108 células T CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ ou CD4+/CD8+/CAR+. Em algumas modalidades, o número de células é o número de tais células que são células viáveis.
[00598] Em algumas modalidades, o artigo de manufatura ou kit compreende uma pluralidade de células T CD4+ que expressam um receptor recombinante e instruções para administração, a um indivíduo que tem uma doença ou condição, da totalidade ou uma parte da pluralidade de células T CD4+ e administração ainda de células T CD8+ que expressam um receptor recombinante. Em algumas modalidades, as instruções especificam a administração das células T CD4+ antes de administrar as células CD8+. Em alguns casos, as instruções especificam a administração das células T CD8+ antes da administração das células CD4+. Em algumas modalidades, o artigo de manufatura ou kit compreende uma pluralidade de células T CD8+ que expressam um receptor recombinante e instruções para administração, a um indivíduo que tem uma doença ou condição, da totalidade ou uma parte da pluralidade de células T CD8+ e células T CD4+ que expressam um receptor recombinante. Em algumas modalidades, as instruções especificam o regime de dosagem e o tempo de administração das células.
[00599] Em algumas modalidades, as instruções para a administração de uma dose especificam a administração de um número de células que é ou é cerca de 5 x 107 células CD3+ CAR+ viáveis, incluindo uma dose separada de ou cerca de 2,5 x 107 células CD4+ CAR+ viáveis e igual ou cerca de 2,5 x 107 células CD8+ CAR+ viáveis. Em algumas modalidades, as instruções para a administração de uma dose especificam a administração de um número de células que é ou é cerca de 1 x 108 células CD3+ CAR+ viáveis, incluindo uma dose separada de ou cerca de 5 x 107 células CD4+ CAR+ viáveis e igual ou cerca de 5 x 107 células CD8+ CAR+ viáveis. Em algumas modalidades, as instruções para a administração de uma dose especificam a administração de um número de células que é ou é cerca de 1,5 x 108 células CD3+ CAR+ viáveis, incluindo uma dose separada de ou cerca de 0,75 x 108 células CD4+ CAR+ viáveis e igual ou cerca de 0,75 x108 células CD8+ CAR+ viáveis.
[00600] Em alguns aspectos, as instruções especificam a administração de toda ou uma parte das células T CD4+ e toda ou uma parte das células T CD8+ com 48 horas de intervalo, tal como não mais de 36 horas de intervalo, não mais de 24 horas de intervalo, não mais de 12 horas, separados, tal como 0 a 12 horas de intervalo, 0 a 6 horas de intervalo ou 0 a 2 horas de intervalo. Em alguns casos, as instruções especificam a administração das células T CD4+ e das células T CD8+ em bão mais de 2 horas, não mais de 1 hora, não mais de 30 minutos, não mais de 15 minutos, não mais de 10 minutos ou não mais de 5 minutos de intervalo. Em algumas modalidades, as instruções especificam a administração das células T CD8+ antes das células T CD4+.
[00601] Em algumas modalidades, os artigos de manufatura e/ou kits incluem ainda um ou mais agentes adicionais para terapia, por exemplo, terapia de linfodepleção, conforme descrito no presente documento e, opcionalmente, instruções para administrar os agentes adicionais.
[00602] Em algumas modalidades, os artigos de manufatura e/ou kits incluem ainda um ou mais agentes ou tratamentos para tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade e/ou instruções para a administração de um ou mais agentes ou tratamentos para tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade no indivíduo. Em algumas modalidades, o agente é ou compreende um anticorpo anti-IL-6 ou anticorpo anti-receptor de IL-6. Por exemplo, em algumas modalidades, o agente ou tratamento é ou compreende um agente selecionado a partir de tocilizumabe, siltuximabe, clazakizumabe, sarilumabe, olokizumabe (CDP6038), elsilimomabe, ALD518/BMS-945429, sirukumabe (CNTO 136), CPSI-2634, ARGX-109, FE301 e FM101. Por exemplo, em algumas modalidades, o agente ou tratamento é ou compreende um ou mais de um esteroide; um antagonista ou inibidor de um receptor de citocina ou citocina selecionada a partir de IL-10, IL- 10R, IL-6, receptor de IL-6, IFNγ, IFNGR, IL-2, IL-2R/CD25, MCP-1, CCR2, CCR4, MIP1β, CCR5, TNFalfa, TNFR1, IL-1 e IL-1Ralfa/IL- 1beta; ou um agente capaz de prevenir, bloquear ou reduzir a atividade ou função das células microgliais.
[00603] Em algumas modalidades, o agente capaz de prevenir, bloquear ou reduzir a atividade ou função das células microgliais é selecionado a partir de um agente anti-inflamatório, um inibidor de NADPH oxidase (NOX2), um bloqueador do canal de cálcio, um bloqueador do canal de sódio, um inibidor de GM-CSF, um inibidor de CSF1R, se liga especificamente ao CSF-1, se liga especificamente à IL- 34, inibe a ativação do fator nuclear capa B (NF-κB), ativa um receptor
CB2 e/ou é um agonista de CB2, um inibidor de fosfodiesterase, inibe microRNA-155 (miR-155) ou regula positivamente o microRNA-124 (miR-124). Em alguns casos, o agente é selecionado a partir de minociclina, naloxona, nimodipina, Riluzol, MOR103, lenalidomida, um canabinoide (opcionalmente WIN55 ou 212-2), imunoglobulina intravenosa (IVIg), ibudilaste, ácido nucleico bloqueado anti-miR-155 (LNA), MCS110, PLX-3397, PLX647, PLX108-D1, PLX7486, JNJ- 40346527, JNJ28312141, ARRY-382, AC-708, DCC-3014, 5-(3-metóxi- 4-((4-metoxibenzil)óxi)benzil)pirimidina-2,4-diamina (GW2580), AZD6495, Ki20227, BLZ945, emactuzumabe, IMC-CS4, FPA008, LY- 3022855, AMG-820 e TG-3003. Em algumas modalidades, o agente é um inibidor do receptor do fator 1 de estimulação de colônia (CSF1R). Por exemplo, o agente é PLX-3397, PLX647, PLX108-D1, PLX7486, JNJ-40346527, JNJ28312141, ARRY-382, AC-708, DCC-3014, 5- (3- metóxi-4-((4-metoxibenzil)óxi)benzil)pirimidina-2,4-diamina (GW2580), AZD6495, Ki20227, BLZ945 ou um sal farmacêutico ou profármaco do mesmo; emactuzumabe, IMC-CS4, FPA008, LY-3022855, AMG-820 e TG-3003 ou é um fragmento de ligação a antígeno do mesmo ou uma combinação de qualquer um dos anteriores.
[00604] Em algumas modalidades, os artigos de manufatura e/ou kits incluem ainda um ou mais reagentes para o ensaio de amostras biológicas, por exemplo, amostras biológicas de indivíduos que são candidatos à administração ou que receberam a terapia e, opcionalmente, instruções de uso dos reagentes ou ensaios. Em algumas modalidades, a amostra biológica é ou é obtida de uma amostra de sangue, plasma ou soro. Em algumas modalidades, os reagentes podem ser usados antes da administração da terapia celular ou após administração da terapia celular, para fins de diagnóstico, para identificar indivíduos e/ou para avaliar os resultados do tratamento e/ou toxicidades. Por exemplo, em algumas modalidades, o artigo de manufatura e/ou kits contêm ainda reagentes para medir o nível de biomarcadores específicos, por exemplo, citocinas ou analitos, que estão associados com toxicidade e instruções para medição. Em algumas modalidades, os reagentes incluem componentes para realizar um ensaio in vitro para medir os biomarcadores (por exemplo, analitos), tal como um imunoensaio, um ensaio com base em aptâmero, um ensaio histológico ou citológico ou um ensaio de nível de expressão de mRNA. Em algumas modalidades, o ensaio in vitro é selecionado a partir de um ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA), imunoblotting, imunoprecipitação, radioimunoensaio (RIA), imunocoloração, ensaio de citometria de fluxo, ressonância plasmônica em superfície (SPR), ensaio de quimioluminescência, imunoensaio de fluxo lateral, ensaio de inibição e ensaio de avidez. Em alguns aspectos, o reagente é um reagente de ligação que se liga especificamente aos biomarcadores (por exemplo, analitos). Em alguns casos, o reagente de ligação é um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, um aptâmero ou uma sonda de ácidos nucleicos.
[00605] Em algumas modalidades, os artigos de manufatura e/ou kits compreendem um ou mais reagentes capazes de detectar um ou mais analitos e instruções para usar o reagente para testar uma amostra biológica de um indivíduo que é candidato ao tratamento, em que o um ou mais analitos podem ser TNF-alfa ou IL-16. Em algumas modalidades, instruções para testar a presença ou ausência, nível, quantidade ou concentração de um analito no indivíduo comparado com um nível limite do analito também estão incluídas. Em algumas modalidades, as instruções especificam métodos para realizar avaliação ou monitoramento de tais analitos, por exemplo, TNF-alfa ou IL-16, de acordo com qualquer um dos métodos fornecidos.
[00606] Em algumas modalidades, são incluídas instruções as quais especificam que, se o nível, quantidade ou concentração do analito na amostra estiver em ou acima de um nível limite para o analito, administrar ao indivíduo um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade (i) antes de, (ii) dentro de um, dois ou três dias de, (iii) simultaneamente com e/ou (iv) na primeira febre a após o início da administração da terapia celular ao indivíduo. Em alguns casos, as instruções especificam que, se o nível, quantidade ou concentração do analito na amostra estiver em ou acima de um nível limite para o analito, a terapia celular é administrada ao indivíduo em uma dose reduzida ou em uma dose que é não está associado ao risco de desenvolver toxicidade ou toxicidade grave ou não está associado ao risco de desenvolver toxicidade ou toxicidade grave na maioria dos indivíduos e/ou na maioria dos indivíduos que têm uma doença ou condição que o indivíduo tem ou se suspeita que tem após administração da terapia celular. Em alguns casos, as instruções especificam que, se o nível, quantidade ou concentração do analito na amostra estiver em ou acima de um nível limite para o analito, a terapia celular é administrada em ambiente hospitalar e/ou com admissão hospitalar durante um ou mais dias, opcionalmente em que a terapia celular deve ser administrada a indivíduos em um regime ambulatorial ou sem admissão hospitalar durante um ou mais dias.
[00607] Em algumas modalidades, as instruções para administração da terapia celular especificam que, se o nível, quantidade ou concentração do analito na amostra estiver abaixo de um nível limite, administrar ao indivíduo a terapia celular, opcionalmente em uma dose não reduzida, opcionalmente em um regime ambulatorial ou sem internação no hospital durante um ou mais dias. Em algumas modalidades, as instruções para administração da terapia celular especificam que, se o nível, quantidade ou concentração do analito na amostra está abaixo de um nível limite, antes ou simultaneamente com a administração da terapia celular e/ou antes do desenvolvimento de um sinal ou sintoma de uma toxicidade diferente da febre, um agente ou tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar ou atenuar o desenvolvimento da toxicidade não é administrado ao indivíduo. Em alguns aspectos, as instruções para administrar a terapia celular especificam que, se o nível, quantidade ou concentração do analito na amostra estiver abaixo de um nível limite, a administração da terapia celular deve ser ou pode ser administrada ao indivíduo em um ambiente ambulatorial e/ou sem admissão do indivíduo no hospital durante a noite ou durante um ou mais dias consecutivos e/ou sem admissão do indivíduo no hospital durante um ou mais dias.
[00608] Os artigos de manufatura e/ou kits podem incluir ainda uma terapia celular e/ou incluir ainda instruções para uso com, antes e/ou em relação ao tratamento com a terapia celular. Em algumas modalidades, as instruções são incluídas para a administração do agente e as instruções especificam se o nível, quantidade ou concentração do analito na amostra está igual ou acima de um nível limite de administração ao indivíduo do agente. Em alguns aspectos, as instruções especificam ainda a administração de uma terapia celular ao indivíduo, em que a administração do agente deve ser realizada (i) antes de, (ii) dentro de um, dois ou três dias de, (iii) simultaneamente com e/ou (iv) na primeira febre após o início da administração da terapia celular ao indivíduo.
[00609] Os artigos de manufatura e/ou kits podem incluir um recipiente e um rótulo ou bula no recipiente ou associado ao mesmo. Recipientes adequados incluem, por exemplo, garrafas, frascos, seringas, sacos de solução IV, etc. Os recipientes podem ser formados a partir de uma variedade de materiais, tal como vidro ou plástico. O recipiente, em algumas modalidades, contém uma composição que é por si só ou combinada com outra composição eficaz para tratar,
prevenir e/ou diagnosticar a condição. Em algumas modalidades, o recipiente tem uma abertura de acesso estéril. Recipientes exemplificativos incluem sacos de solução intravenosa, frascos, incluindo aqueles com rolhas perfuráveis por uma agulha para injeção ou frascos para agentes administrados através da via oral. O rótulo ou folheto informativo pode indicar que a composição é usada para o tratamento de uma doença ou condição. O artigo de manufatura pode incluir (a) um primeiro recipiente com uma composição contida no mesmo, em que a composição inclui células manipuladas que expressam um receptor recombinante; e (b) um segundo recipiente com uma composição contida no mesmo, em que a composição inclui o segundo agente. Em algumas modalidades, o artigo de manufatura pode incluir (a) um primeiro recipiente com uma primeira composição contida no mesmo, em que a composição inclui um subtipo de células manipuladas que expressam um receptor recombinante; e (b) um segundo recipiente com uma composição contida no mesmo, em que a composição inclui um subtipo diferente de células manipuladas que expressam um receptor recombinante. O artigo de manufatura pode incluir ainda um folheto informativo indicando que as composições podem ser usadas para tratar uma condição particular. Alternativa ou adicionalmente, o artigo de manufatura pode incluir ainda outro ou o mesmo recipiente que compreende um tampão farmaceuticamente aceitável. Ele pode ainda incluir outros materiais, tais como outros tampões, diluentes, filtros, agulhas e/ou seringas. VII. MODALIDADES EXEMPLIFICATIVAS
[00610] Dentre as modalidades fornecidas estão:
[00611] 1. Um método para tratar um indivíduo que tem leucemia linfocítica crônica (CLL) ou linfoma linfocítico pequeno (SLL), o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma dose de células T manipuladas que compreendem células T CD4+ e CD8+, cada uma das células T, individualmente, compreendendo um receptor antigênico quimérico (CAR) que se liga especificamente à CD19, em que a dose de células T manipuladas (i) é enriquecida em células T CD4+ e CD8+ humanas primárias; (ii) compreende uma proporção definida de células CD4+ que expressam o CAR para células CD8+ que expressam o CAR, cuja proporção está opcionalmente entre aproximadamente 1:3 e aproximadamente 3:1, e (iii) compreende cerca de 2,5 x 107 que células que expressan CAR no total a igual ou cerca de 1,5 x 108 células que expressam CAR no total.
[00612] 2. Um método de tratamento de um indivíduo que tem leucemia linfocítica crônica (CLL) ou linfoma linfocítico pequeno (SLL), o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma dose de células T manipuladas que compreende células T CD4+ e CD8+, cada uma das células T CD4+ e CD8+, individualmente, compreendendo um receptor antigênico quimérico (CAR) que se liga especificamente à CD19, em que o indivíduo apresentou recidiva seguido de remissão após tratamento com, tornou-se refratário, não obteve sucesso e/ou é intolerante ao tratamento com ibrutinibe e/ou venetoclax.
[00613] 3. O método de acordo com a modalidade 2, em que a dose de células T manipuladas é enriquecida para células T CD4+ e CD8+ humanas primárias.
[00614] 4. O método de acordo com a modalidade 2 ou modalidade 3, em que a dose de células T manipuladas compreende uma proporção definida de células CD4+ que expressam o CAR para células CD8+ que expressam o CAR, proporção a qual está opcionalmente entre aproximadamente 1:3 e aproximadamente 3:1.
[00615] 5. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 2-4, em que a dose de células T manipuladas compreende cerca de 2,5 x 107 células que expressam CAR no total ou cerca de 1,5 x 108 células que expressam CAR no total.
[00616] 6. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 1-5, em que a administração compreende administrar uma pluralidade de composições separadas, a pluralidade de composições separadas compreendendo uma primeira composição que compreende uma das células T CD4+ e as células T CD8+ e uma segunda composição que compreende a outra das células T CD4+ e as células T CD8+.
[00617] 7. Um método de tratamento de um indivíduo que tem ou suspeito de ter leucemia linfocítica crônica (CLL) ou linfoma linfocítico pequeno (SLL), o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma dose de células T manipuladas que compreendem células T CD4+ e CD8+, cada uma das células T CD4+ e células T CD8+, individualmente, compreendendo um receptor antigênico quimérico que se liga especificamente à CD19, em que a administração compreende administrar uma pluralidade de composições separadas, a pluralidade de composições separadas compreendendo uma primeira composição que compreende uma das células T CD4+ e as células T CD8+ e uma segunda composição que compreende a outra das células T CD4+ e as células T CD8+.
[00618] 8. O método de acordo com a modalidade 7, em que a dose de células T CD4+ e CD8+ compreende uma proporção definida de células CD4+ que expressam o CAR para células CD8+ que expressam o CAR que está entre aproximadamente 1:3 e aproximadamente 3:1.
[00619] 9. O método de acordo com a modalidade 7 ou modalidade 8, em que a dose de células T manipuladas compreende igual ou cerca de 2,5 x 107 células que expressam CAR no total ou cerca de 1,5 x 108 células que expressam CAR no total.
[00620] 10. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 7-9, em que a dose de células T manipuladas é enriquecida para células T CD4+ e CD8+ humanas primárias.
[00621] 11. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1, 3-6 e 10, em que a dose de células enriquecidas em células T CD4+ e CD8+ compreende mais ou mais de cerca de 70 %, mais ou mais de cerca de 75 %, mais ou mais de cerca de 80 %, mais ou mais de cerca de 85 %, mais ou mais de cerca de 90 %, mais ou mais de cerca de 95 % ou mais ou mais de cerca de 98 % de células T CD4+ e CD8+ humanas primárias.
[00622] 12. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-11, em que a dose de células T CD4+ e CD8+ compreende uma proporção definida de células CD4+ que expressam o CAR para células CD8+ que expressam o CAR que é ou é de aproximadamente 1:1.
[00623] 13. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-12, em que a dose de células T manipuladas compreende pelo menos 2,5 x 107 células que expressam CAR no total ou cerca de 1,0 x 108 células que expressam CAR no total.
[00624] 14. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-13, em que a dose de células T manipuladas compreende ou cerca de 2,5 x 107 células que expressam CAR no total.
[00625] 15. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-14, em que a dose de células T manipuladas compreende pelo menos 5 x 107 células no total ou células que expressam CAR no total.
[00626] 16. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-15, em que a dose de células T manipuladas compreende cerca de 1 x 108 células no total ou células que expressam CAR no total.
[00627] 17. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 6-16, em que o CAR compreendido pelas células T CD4+ e/ou o CAR compreendido pelas células T CD8+ compreende um CAR que é o mesmo e/ou em que as células T CD4+ e/ou as células T CD8+ são geneticamente manipuladas para expressar um CAR que é o mesmo.
[00628] 18. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 6-17, em que a primeira composição compreende as células T CD8+ e a segunda composição compreende as células T CD4+.
[00629] 19. O método, de acordo com a modalidade 18, em que o início da administração da primeira composição é realizado antes do início da administração da segunda composição.
[00630] 20. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 6-19, em que a administração da primeira composição e a administração da segunda composição são realizadas em não mais de 48 horas de intervalo.
[00631] 21. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 6-20, em que a administração da primeira composição e a administração da segunda composição são realizadas com não mais de 36 horas de intervalo, não mais de 24 horas de intervalo, não mais de 12 horas de intervalo, não mais de 6 horas de intervalo, não mais de 4 horas de intervalo, não mais de 2 horas de intervalo, não mais de 1 hora de intervalo ou não mais de 30 minutos de intervalo.
[00632] 22. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 6-21, em que a administração da primeira composição e a administração da segunda composição são realizadas entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 48 horas, entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 36 horas, entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 24 horas, entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 12 horas, entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 6 horas, entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 2 horas, entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 6 horas, entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 2 horas, entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 1 hora, entre igual ou cerca de 0 e igual ou cerca de 30 minutos, entre igual ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 48 horas, entre igual ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 36 horas, entre igual ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 48 horas, entre ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 36 horas, entre igual ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 24 horas, entre igual ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 12 horas, entre ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 6 horas, entre ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 4 horas, entre igual ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 2 horas, entre igual ou cerca de 30 minutos e igual ou cerca de 1 hora, entre igual ou cerca de 1 hora e igual ou cerca de 48 horas, entre igual ou cerca de 1 hora e igual ou cerca de 36 horas, entre igual ou cerca de 1 hora e igual ou cerca de 24 horas, entre igual ou cerca de 1 hora e igual ou cerca de 12 horas, entre igual ou cerca de 1 hora e igual ou cerca de 6 horas, entre igual ou cerca de 1 hora e igual ou cerca de 4 horas, entre igual ou cerca de 1 hora e igual ou cerca de 2 horas, entre ou cerca de 2 horas e igual ou cerca de 48 horas, entre igual ou cerca de 2 horas e igual ou cerca de 36 horas, entre igual ou cerca de 2 horas e igual ou cerca de 24 horas, entre igual ou cerca de 2 horas e igual ou cerca de 12 horas, entre igual ou cerca de 2 horas e igual ou cerca de 6 horas, entre igual ou cerca de 2 horas e igual ou cerca de 4 horas, entre igual ou cerca de 4 horas e igual ou cerca de 48 horas, entre igual ou cerca de 4 horas e igual ou cerca de 36 horas, entre igual ou cerca de 4 horas e igual ou cerca de 24 horas, entre igual ou cerca de 4 horas e igual ou cerca de 12 horas, entre igual ou cerca de 4 horas e igual ou cerca de 6 horas, entre igual ou cerca de 6 horas e igual ou cerca de 48 horas, entre igual ou cerca de 6 horas e igual ou cerca de 36 horas, entre igual ou cerca de 6 horas e igual ou cerca de 24 horas, entre igual ou cerca de 6 horas e igual ou cerca de 12 horas, entre ou cerca de 12 horas e igual ou cerca de 48 horas, entre igual ou cerca de 12 horas e igual ou cerca de 36 horas, entre igual ou cerca de 12 horas e igual ou cerca de 24 horas, entre ou cerca de 24 horas e igual ou cerca de 48 horas, entre igual ou cerca de 24 horas e igual ou cerca de 36 horas ou entre igual ou cerca de 36 horas e igual ou cerca de 48 horas.
[00633] 23. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 6-22, em que:
[00634] a administração da primeira composição e a administração da segunda composição são realizadas no mesmo dia, são realizadas entre cerca de 0 e cerca de 12 horas de intervalo, entre cerca de 0 e cerca de 6 horas de intervalo ou entre cerca de 0 a 2 horas de intervalo; ou
[00635] o início da administração da primeira composição e o início da administração da segunda composição são realizados entre cerca de 1 minuto e cerca de 1 hora de intervalo ou entre cerca de 5 minutos e cerca de 30 minutos de intervalo.
[00636] 24. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 6-23, em que a primeira composição e a segunda composição são administradas em não mais de 2 horas, não mais de 1 hora, não mais de 30 minutos, não mais de 15 minutos, não mais de 10 minutos ou não mais de 5 minutos de intervalo.
[00637] 25. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 1-24, em que:
[00638] o indivíduo tem CLL ou é suspeito de ter CLL; ou
[00639] o indivíduo é identificado ou selecionado como tendo CLL.
[00640] 26. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 1-25, em que a CLL é um CLL recidivante ou refratária.
[00641] 27. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 1-24, em que:
[00642] o indivíduo tem SLL ou é suspeito de ter SLL; ou
[00643] o indivíduo é identificado ou selecionado como tendo SLL.
[00644] 28. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-24 e 27, em que o SLL é um SLL recidivante ou refratário.
[00645] 29. O método de acordo com as modalidades 1 e 6-28 em que, antes da administração da dose de células T manipuladas, o indivíduo foi tratado com uma ou mais terapias anteriores para CLL ou SLL, diferente de outra dose de células que expressam CAR ou uma terapia de linfodepleção.
[00646] 30. O método de acordo com a modalidade 29, em que a uma ou mais terapias anteriores compreendem pelo menos duas terapias anteriores, opcionalmente 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou mais.
[00647] 31. O método de acordo com a modalidade 29 ou modalidade 30 em que, no momento ou imediatamente antes do momento da administração da dose de células, o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com ou tornou-se refratário, não obteve sucesso e/ou era intolerante ao tratamento com uma ou mais terapias anteriores para o CLL.
[00648] 32. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 29-31, em que, no momento ou imediatamente antes do momento da administração da dose de células, o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com ou tornou-se refratário a, não obteve sucesso e/ou era intolerante ao tratamento com duas ou mais terapias anteriores.
[00649] 33. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 29-31, em que, no momento ou imediatamente antes do momento da administração da dose de células, o indivíduo apresentou recidiva seguido de remissão após tratamento com ou tornou-se refratário, não obteve sucesso e/ou era intolerante ao tratamento com três ou mais terapias anteriores.
[00650] 34. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 29-33, em que as terapias anteriores são selecionadas a partir de um inibidor de quinase, opcionalmente um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTK), opcionalmente ibrutinibe; venetoclax; uma terapia combinada que compreende fludarabina e rituximabe; radioterapia; e transplante de células-tronco hematopoéticas (HSCT).
[00651] 35. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 29-34, em que as terapias anteriores compreendem ibrutinibe e/ou venetoclax.
[00652] 36. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 29-35, em que as terapias anteriores compreendem ibrutinibe e venetoclax.
[00653] 37. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 e 6-36, em que o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com, tornou-se refratário, não obteve sucesso e/ou é intolerante ao tratamento com ibrutinibe e/ou venetoclax.
[00654] 38. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-37, em que o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com, tornou-se refratário, não obteve sucesso e/ou é intolerante ao tratamento com ibrutinibe e venetoclax.
[00655] 39. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 1-38, em que ou antes da administração da dose de células:
[00656] o indivíduo é ou foi identificado como tendo uma ou mais anormalidades citogenéticas, opcionalmente associadas à CLL de alto risco, opcionalmente selecionadas a partir de: cariótipo complexo ou anormalidades citogenéticas, del 17p, gene IGVH não mutante e mutação TP53;
[00657] o indivíduo é ou foi identificado como tendo CLL de alto risco.
[00658] 40. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 1-39, em que:
[00659] o indivíduo é ou foi identificado como tendo um estado no ECOG de 0 ou 1; e/ou
[00660] o indivíduo não tem um estado no ECOG de > 1.
[00661] 41. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-40, em que em ou imediatamente antes da administração da dose de células manipuladas ou da terapia de linfodepleção, o indivíduo não tem uma transformada de Richter de CLL ou SLL.
[00662] 42. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-41, em que o indivíduo é um adulto e/ou tem cerca de 50, 60 ou 70 anos de idade.
[00663] 43. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-42, em que as células T são células T primárias obtidas de um indivíduo.
[00664] 44. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-43, em que as células T são autólogas ao indivíduo.
[00665] 45. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-44, em que a dose de células manipuladas são células viáveis.
[00666] 46. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-45 que compreende ainda, antes da administração da dose de células manipuladas, administrar uma terapia de linfodepleção ao indivíduo.
[00667] 47. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-46 em que, antes da administração, o indivíduo foi precondicionado com uma terapia de linfodepleção.
[00668] 48. O método de acordo com a modalidade 46 ou modalidade 47, em que a terapia de linfodepleção compreende administrar fludarabina e/ou ciclofosfamida.
[00669] 49. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 46-48, em que a terapia de linfodepleção compreende administrar ciclofosfamida em cerca de 200-400 mg/m2, opcionalmente igual ou cerca de 300 mg/m2, inclusive, e/ou fludarabina em cerca de
20-40 mg/m2, opcionalmente 30 mg/m2, diariamente durante 2-4 dias, opcionalmente durante 3 dias.
[00670] 50. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 46-49, em que a terapia de linfodepleção compreende administrar ciclofosfamida em igual ou cerca de 300 mg/m2 e fludarabina em cerca de 30 mg/m2 diariamente durante 3 dias, opcionalmente em que a dose de células é administrada pelo menos igual ou cerca de 2-7 dias após a terapia de linfodepleção ou pelo menos ou cerca de 2-7 dias após o início da terapia de linfodepleção.
[00671] 51. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-50, em que a administração da dose de células e/ou a terapia de linfodepleção é realizada por meio de administração ambulatorial.
[00672] 52. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-51, em que a dose de células é administrada através da via parentérica, opcionalmente através da via intravenosa.
[00673] 53. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-52, em que, dentre os indivíduos tratados de acordo com o método, a resposta em pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% dos indivíduos tratados é uma taxa de resposta objetiva.
[00674] 54. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-53 em que, dentre os indivíduos tratados de acordo com o método, a resposta em pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60% ou pelo menos 70% dos indivíduos tratados é remissão completa (CR).
[00675] 55. O método de acordo com a modalidade 53 ou modalidade 64, em que a duração da resposta até a progressão é durável por mais de 3 meses ou mais de 6 meses.
[00676] 56. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-55, em que, dos indivíduos tratados de acordo com o método, mais de 50 %, mais de 60 % ou mais de 70 % tinham doença residual mínima indetectável (MRD) durante pelo menos um mês, pelo menos dois meses, pelo menos três meses ou pelo menos 6 meses após administração da dose de células.
[00677] 57. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-56, em que, dentre os indivíduos tratados de acordo com o método, não mais de 10 % dos indivíduos apresentam uma síndrome de liberação de citocinas (CRS) superior ao grau 2.
[00678] 58. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-57 em que, dentre os indivíduos tratados de acordo com o método, não mais de 10%, não mais de 20%, não mais de 30% ou não mais de 40% dos indivíduos apresentam neurotoxicidade superior ao grau 2.
[00679] 59. Um método de tratamento caracterizado pelo fato de que compreende:
[00680] ensaiar uma amostra biológica quanto ao nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa, em que a amostra biológica é de um indivíduo que é um candidato ao tratamento, opcionalmente com uma terapia celular, a dita terapia celular que compreende uma dose de células manipuladas que compreendem células T que expressam um CAR para o tratamento de uma doença ou condição, em que a amostra biológica é obtida do indivíduo antes da administração da terapia celular e/ou a dita amostra biológica não compreende o CAR e/ou as ditas células manipuladas; e
[00681] comparar o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa com um nível limite, em que: (1) se o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa estiver em ou acima de um nível limite, identificar o indivíduo como em risco de desenvolver um neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular; e (2) se o nível,
quantidade ou concentração de TNF-alfa estiver abaixo do nível limite, identificar o indivíduo como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular.
[00682] 60. O método, de acordo com a modalidade 59, em que o indivíduo é identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior e o método compreende ainda:
[00683] (i) administrar ao indivíduo a terapia celular, opcionalmente em uma dose reduzida, opcionalmente em que (a) o método compreende ainda administrar ao indivíduo um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento da neurotoxicidade; e/ou (b) a administração da terapia celular ao indivíduo é realizada ou é especificada para ser realizada em um ambiente de internação e/ou com admissão hospitalar durante um ou mais dias; ou
[00684] (ii) administrar ao indivíduo um tratamento alternativo diferente da terapia celular para tratar a doença ou condição.
[00685] 61. O método, de acordo com a modalidade 59, em que o indivíduo é identificado como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular, e em que:
[00686] (i) não é administrado ao indivíduo um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade, a menos ou até que os indivíduos exibam um sinal ou sintoma de uma toxicidade, opcionalmente em ou após o indivíduo exibir febre sustentada ou febre que é ou não foi reduzida ou não em mais de 1 °C após tratamento com um antipirético; e/ou
[00687] (i) a administração e qualquer acompanhamento são realizados em um regime ambulatorial e/ou sem internação do indivíduo em um hospital e/ou sem pernoite em um hospital e/ou sem a necessidade de admissão ou pernoite em um hospital, opcionalmente a menos ou até que o indivíduo exiba febre sustentada ou não reduzida ou não abaixou em mais de 1 °C após tratamento com um antipirético.
[00688] 62. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 59-61, em que o ensaio compreende:
[00689] (a) contatar uma amostra biológica com um ou mais reagentes capazes de detectar ou que são específicos para TNF-alfa, opcionalmente em que o um ou mais reagentes compreendem um anticorpo que reconhece especificamente o TNF-alfa;
[00690] (b) detectar a presença ou ausência de um complexo que compreende o reagente e o TNF-alfa.
[00691] 63. O método de tratamento, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um indivíduo uma terapia celular para tratar uma doença ou condição, a dita terapia celular compreendendo uma dose de células manipuladas que compreendem células T que expressam um CAR, em que:
[00692] (1) se o indivíduo tem um nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa em uma amostra biológica do indivíduo que está em ou acima de um nível limite, o indivíduo é identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular e o método compreende: (i) administrar ao indivíduo a terapia celular em uma dose reduzida, (ii) administrar posteriormente ao indivíduo um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade; e/ou (iii) a administração da terapia celular ao indivíduo é realizada ou é especificada para ser realizada em um ambiente de internação e/ou com admissão hospitalar durante um ou mais dias; ou
[00693] (2) se o indivíduo for selecionado ou identificado como tendo um nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa em uma amostra biológica do indivíduo que está abaixo de um nível limite, o indivíduo é identificado como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular e o método compreende ainda: (i) não administrar ao indivíduo um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade, a menos ou até que os indivíduos exibam um sinal ou sintoma de uma toxicidade, opcionalmente durante ou após o indivíduo exibir febre sustentada ou não reduzida ou não abaixou em mais de 1 °C após tratamento com um antipirético; e/ou (ii) a administração e qualquer acompanhamento são realizados em um regime ambulatorial e/ou sem internação do indivíduo em um hospital e/ou sem pernoite em um hospital e/ou sem a necessidade de admissão ou pernoite em um hospital, opcionalmente, a menos ou até que o indivíduo exiba febre sustentada ou uma febre que é ou não foi reduzida ou não abaixou em mais de 1 °C após tratamento com um antipirético,
[00694] em que o indivíduo é um candidato ao tratamento com a terapia celular, a dita amostra biológica obtida do indivíduo antes da administração da terapia celular e/ou a dita amostra biológica não compreende o CAR e/ou as ditas células manipuladas.
[00695] 64. O método, de acordo com a modalidade 60, 62 ou 63, em que o indivíduo é identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular e o método compreende administrar um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzindo ou atenuando o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade, em que o agente é administrado ao indivíduo simultaneamente com a terapia celular ou dentro de três dias de administração da terapia celular ao indivíduo.
[00696] 65. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 59-64, em que:
[00697] o nível limite está dentro de 25 %, dentro de 20 %, dentro de 15 %, dentro de 10 % ou dentro de 5 % e/ou está dentro de um desvio padrão acima do nível, quantidade ou concentração média ou mediana ou é ou está próximo do nível, quantidade ou concentração média ou mediana do TNF em uma amostra biológica obtida de um grupo de indivíduos antes de receber uma terapia celular, em que cada um dos indivíduos do grupo não exibiu qualquer grau de neurotoxicidade após administração de uma dose de células que expressam o CAR para o tratamento da mesma doença ou condição;
[00698] o nível limite é igual ou maior do que 1,25 vezes superior, igual ou maior do que 1,3 vezes superior, igual ou maior do que 1,4 vezes superior ou igual ou maior do que 1,5 vezes superior ao nível, quantidade ou concentração média ou mediana do TNF em uma amostra biológica obtida de um grupo de indivíduos antes de receber uma terapia celular, em que cada um dos indivíduos do grupo não exibiu qualquer grau de neurotoxicidade após administração de uma dose de células manipuladas que expressam o CAR para tratar o mesma doença ou condição;
[00699] o nível limite é igual ou maior do que 1,25 vezes superior, igual ou maior do que 1,3 vezes superior, igual ou maior do que 1,4 vezes superior ou igual ou maior do que 1,5 vezes superior ao nível, quantidade ou concentração do TNF em uma amostra biológica obtida de um grupo de indivíduos normais ou saudáveis que não são candidatos ao tratamento com a terapia celular.
[00700] 66. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 59-65, em que o nível limite é igual ou maior do que 1000 pg/mL da amostra biológica, igual ou maior do que 1100 pg/mL da amostra biológica, igual ou maior do que 1200 pg/mL da amostra biológica, igual ou maior do que 1300 pg/mL da amostra biológica, igual ou maior do que 1400 pg/mL da amostra biológica ou igual ou maior do que 1500 pg/mL da amostra biológica.
[00701] 67. Um método de tratamento, o método caracterizado pelo fato de que compreende:
[00702] (a) ensaiar uma amostra biológica de um indivíduo quanto ao nível, quantidade ou concentração de IL-16, o dito indivíduo tendo recebido a administração de uma terapia celular que compreende uma dose de células manipuladas que compreendem células T que expressam um CAR para o tratamento de uma doença ou condição, em que a amostra biológica é obtida do indivíduo dentro de um, dois ou três dias após o início da administração da terapia celular; e
[00703] (b) comparar o nível, quantidade ou concentração de IL-16 com um nível limite, em que: (1) se o nível, quantidade ou concentração de IL-16 estiver em ou acima de um nível limite, identificar o indivíduo como em risco de desenvolver uma neurotoxicidade de grau 3 ou superior; e (2) se o nível, quantidade ou concentração de IL-16 estiver abaixo do nível limite, identificar o indivíduo como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior.
[00704] 68. O método, de acordo com a modalidade 67, em que se o indivíduo for identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior, administrar um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de um toxicidade.
[00705] 69. O método de acordo com a modalidade 67 ou modalidade 68, em que o ensaio compreende:
[00706] (a) contatar uma amostra biológica com um ou mais reagentes capazes de detectar ou que seja específico para IL-16, opcionalmente em que o um ou mais reagentes compreendem um anticorpo que especificamente reconhece a IL-16;
[00707] (b) detectar a presença ou ausência de um complexo que compreende o reagente e a IL-16.
[00708] 70. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 67-69 que compreende ainda, antes do ensaio, administrar ao indivíduo a terapia celular.
[00709] 71. Um método de tratamento, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um indivíduo, identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior, um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade, o dito indivíduo tendo recebido anteriormente a administração de uma terapia celular para o tratamento de uma doença ou condição em que, em ou imediatamente antes da administração do agente, o indivíduo é selecionado ou identificado como estando em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior se o nível ou quantidade ou concentração de IL-16 em uma amostra biológica, obtida do indivíduo dentro de um, dois ou três dias após o início da administração da terapia celular, estiver acima de um nível limite.
[00710] 72. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 68-71, em que a administração do agente é realizada em um momento em que o indivíduo exibe uma febre sustentada ou uma febre que é ou não foi reduzida ou não abaixou em mais de 1°C após tratamento com um antipirético.
[00711] 73. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 68-72, em que a administração da terapia celular ao indivíduo foi realizada em um regime ambulatorial e, se o nível, quantidade ou concentração de IL-16 estiver acima de um nível limite, o método compreende a admissão o paciente ao hospital durante um ou mais dias.
[00712] 74. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 67-73, em que o nível limite está dentro de 25 %, dentro de 20 %, dentro de 15 %, dentro de 10 % ou dentro de 5 % e/ou está dentro de um desvio padrão acima do nível, quantidade ou concentração média ou mediana ou é ou é cerca do nível, quantidade ou concentração média ou mediana da IL-16 em uma amostra biológica obtida a partir de um grupo de indivíduos dentro de um, dois ou três dias após receber uma terapia celular que compreende administração de uma dose de células manipuladas que expressam o CAR para o tratamento da mesma doença ou condição, em que cada um dos indivíduos do grupo não exibiu qualquer grau de neurotoxicidade após administração da terapia celular;
[00713] 75. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 67-73, em que o nível limite é igual ou maior do que 1,3 vezes superior, igual ou maior do que 1,4 vezes superior, igual ou maior do que 1,5 vezes superior, igual ou maior do que 1,6- vezes superior, igual ou maior do que 1,7 vezes superior, igual ou maior do que 1,8 vezes superior, igual ou maior do que 1,9 vezes superior ou igual ou maior do que 2,0 vezes superior ao nível, quantidade ou concentração média ou mediana de IL-16 em uma amostra biológica obtida de um grupo de indivíduos antes de receber uma terapia celular, em que cada um dos indivíduos do grupo não exibiu qualquer grau de neurotoxicidade após administração de uma dose de células manipuladas que expressam o CAR para tratamento a mesma doença ou condição.
[00714] 76. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 67-73, em que o nível limite é igual ou maior do que 1,3 vezes superior, igual ou maior do que 1,4 vezes superior, igual ou maior do que 1,5 vezes superior, igual ou maior do que 1,6- vezes superior, igual ou maior do que 1,7 vezes superior, igual ou maior do que 1,8 vezes superior, igual ou maior do que 1,9 vezes superior ou igual ou maior do que 2,0 vezes superior ao nível, quantidade ou concentração do IL- 16 em uma amostra biológica obtida de um grupo de indivíduos normais ou saudáveis que não são candidatos ao tratamento com a terapia celular.
[00715] 77. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 67-76, em que o nível limite é igual ou maior do que 1000 pg/mL da amostra biológica, igual ou maior do que 1500 pg/mL da amostra biológica, igual ou maior do que 2000 pg/mL da amostra biológica, igual ou maior do que 2500 pg/mL da amostra biológica ou igual ou maior do que 3000 pg/mL da amostra biológica.
[00716] 78. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 59-77, em que a amostra biológica é ou é obtida de uma amostra de sangue, plasma ou soro.
[00717] 79. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 59-78, em que a amostra biológica é uma amostra de soro.
[00718] 80. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 59-79, em que o ensaio ou avaliação das células do analito compreende um imunoensaio.
[00719] 81. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 59-80, em que a doença ou condição é um câncer.
[00720] 82. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 59-81, em que a doença ou condição é um mieloma, leucemia ou linfoma.
[00721] 83. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 59-82, em que o antígeno é ROR1, antígeno de maturação de células B (BCMA), anidrase carbônica 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (receptor de tirosina quinase erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA e antígeno na superfície de hepatite B, receptor anti- folato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, dímeros de erbB, EGFR VIII, proteína de ligação ao folato (FBP), FCRL5, FCRH5, receptor fetal de acetilcolina, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL-13R-alfa2, receptor de domínio de inserção de quinase (kdr), cadeia leve capa, Lewis Y, molécula de adesão celular
L1 (L1-CAM), antígeno associado ao melanoma (MAGE) -A1, MAGE- A3, MAGE-A6, Antígeno expresso preferencialmente em melanoma (PRAME), survivina, TAG72, B7-H6, receptor alfa 2 de IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-A1 MAGE A1, HLA- A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor- de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina avb6, 8H9, NCAM, receptores de VEGF, 5T4, AchR fetal, ligantes de NKG2D, CD44v6, antígeno duplo, um antígeno de câncer testicular, mesotelina, CMV de murino, mucina 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antígeno oncofetal, ROR1, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), Her2/neu, receptor de estrogênio, receptor de progesterona, efrina B2, CD123, c- Met, GD-2, GD2 O-acetilado (OGD2), CE7, Tumor de Wilm 1 (WT-1), uma ciclina, ciclina A2, CCL-1, CD138, Receptor 5D Acoplado à Proteína G (GPCR5D) ou um antígeno específico para patógeno.
[00722] 84. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 59-83, em que o antígeno é CD19.
[00723] 85. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 59-84, em que a doença ou condição é uma malignidade de células B e/ou é leucemia linfoblástica aguda (ALL), ALL em adultos, leucemia linfoblástica crônica (CLL), linfoma linfocítico pequeno (SLL), linfoma não-Hodgkin (NHL) e linfoma difuso de células B grandes (DLBCL).
[00724] 86. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 60-66 e 68-85, em que o agente é ou compreende um anticorpo anti-IL-6, anticorpo anti-IL-6R ou um esteroide.
[00725] 87. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 60-66 e 68-86, em que o agente é ou compreende tocilizumabe, siltuximabe ou dexametasona.
[00726] 88. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-56, 84 e 85, em que:
[00727] o CAR compreende um domínio de ligação a antígeno extracelular específico para CD19, um domínio transmembrana, um domínio de sinalização citoplasmático derivado de uma molécula coestimuladora, o qual é opcionalmente é um domínio de 4-1BB, e um domínio de sinalização citoplasmático derivado de uma molécula que contém ITAM de sinalização primária, o qual é opcionalmente uma CD3zeta;
[00728] o CAR compreende, nesta ordem, um domínio de ligação a antígeno extracelular específico para CD19, um domínio transmembrana, um domínio de sinalização citoplasmático derivado de uma molécula coestimuladora e um domínio de sinalização citoplasmático derivado de uma molécula que contém ITAM de sinalização primária.
[00729] 89. O método de acordo com a modalidade 88, em que o domínio de ligação a antígeno é um scFv.
[00730] 90. O método de acordo com a modalidade 89, em que:
[00731] o scFv compreende uma sequência de CDRL1 de RASQDISKYLN (SEQ ID NO: 35), uma sequência de CDRL2 de SRLHSGV (SEQ ID NO: 36) e/ou uma sequência de CDRL3 de GNTLPYTFG (SEQ ID NO: 37) e/ou uma sequência de CDRH1 de DYGVS (SEQ ID NO: 38), uma sequência de CDRH2 de VIWGSETTYYNSALKS (SEQ ID NO: 39) e/ou uma sequência de CDRH3 de YAMDYWG (SEQ ID NO: 40);
[00732] o scFv compreende uma região variável de cadeia pesada de FMC63 e uma região variável de cadeia leve de FMC63 e/ou uma sequência de CDRL1 de FMC63, uma sequência de CDRL2 de FMC63, uma sequência de CDRL3 de FMC63, uma sequência de CDRH1 de FMC63, uma sequência de CDRH2 de FMC63, e uma sequência de CDRH3 de FMC63 ou se liga ao mesmo epítopo ou compete pela ligação com qualquer um dos anteriores;
[00733] o scFv compreende uma VH apresentada em SEQ ID NO:
41 e uma VL apresentada em SEQ ID NO: 42, opcionalmente em que a VH e a VL são separadas por um ligante flexível, opcionalmente em que o ligante flexível é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 24; e/ou
[00734] o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 43.
[00735] 91. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 88-90, em que a região de sinalização coestimuladora é um domínio de sinalização de CD28 ou 4-1BB.
[00736] 92. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 88-91, em que a região de sinalização coestimuladora é um domínio de sinalização de 4-1BB.
[00737] 93. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 88-92, em que o domínio coestimulador compreende SEQ ID NO: 12 ou uma variante da mesma que tem pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência com a mesma.
[00738] 94. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 88-93, em que o domínio de sinalização primário é um domínio de sinalização de CD3zeta.
[00739] 95. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 88-94, em que o domínio de sinalização primário compreende SEQ ID NO: 13 ou 14 ou 15 com pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência com as mesmas.
[00740] 96. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 88-95, em que o CAR compreende ainda um espaçador entre o domínio transmembrana e o scFv.
[00741] 97. O método, de acordo com a modalidade 96, em que o espaçador é um espaçador polipeptídico que compreende ou consiste em toda ou uma parte de uma dobradiça de imunoglobulina ou uma versão modificada da mesma, opcionalmente uma dobradiça de IgG4 ou uma versão modificada da mesma.
[00742] 98. O método, de acordo com a modalidade 96 ou modalidade 97, em que o espaçador tem cerca de 15 aminoácidos ou menos e não compreende uma região extracelular de CD28 ou uma região extracelular de CD8.
[00743] 99. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 96-98, em que o espaçador tem cerca de 12 aminoácidos de comprimento.
[00744] 100. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 96-99, em que:
[00745] o espaçador tem ou consiste na sequência de SEQ ID NO: 1, uma sequência codificada por SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 ou uma variante de qualquer uma das anteriores que tem pelo menos 85%, 86%, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96%, 97%, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência com as mesmas; e/ou
[00746] compreende ou consiste na fórmula X1PPX2P, em que X1 é glicina, cisteína ou arginina e X2 é cisteína ou treonina.
[00747] 101. O método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1-100, em que o indivíduo é um ser humano.
[00748] 102. Artigo de manufatura caracterizado pelo fato de que compreende uma composição de uma terapia celular ou uma dentre uma pluralidade de composições de uma terapia celular que compreendem células T que expressam um receptor antigênico quimérico anti-CD19 (CAR) e instruções para administrar a terapia celular, em que as instruções especificam a administração da composição de células T de acordo com os métodos de acordo com qualquer uma das modalidades 1-100. VIII. DEFINIÇÕES
[00749] A menos que definido de outra forma, todos os termos da técnica, notações e outros termos técnicos e científicos ou terminologia usados no presente documento se destinam a ter o mesmo significado conforme comumente entendido por aqueles versados na técnica à qual a invenção reivindicada se refere. Em alguns casos, os termos com significados comumente compreendidos são definidos no presente documento para clareza e/ou para pronta referência, e a inclusão de tais definições no presente documento não deve necessariamente ser interpretada como representando uma diferença substancial em relação ao que é geralmente entendido na técnica.
[00750] Os termos "polipeptídeo" e "proteína" são usados indistintamente para referir-se a um polímero de resíduos de aminoácidos e não estão limitados a um comprimento mínimo. Os polipeptídeos, incluindo os receptores fornecidos e outros polipeptídeos, por exemplo, ligantes ou peptídeos, podem incluir resíduos de aminoácidos, incluindo resíduos de aminoácidos naturais e/ou não naturais. Os termos também incluem modificações pós-expressão do polipeptídeo, por exemplo, glicosilação, sialilação, acetilação e fosforilação. Em alguns aspectos, os polipeptídeos podem conter modificações em relação a uma sequência nativa ou natural, contanto que a proteína mantenha a atividade desejada. Estas modificações podem ser deliberadas, tal como por meio de mutagênese sítio-dirigida, ou podem ser acidentais, tal como por meio de mutações de hospedeiros que produzem as proteínas ou erros em virtude de amplificação por PCR.
[00751] Conforme usado no presente documento, um "indivíduo" é um mamífero, tal como um ser humano ou outro animal, e normalmente é um ser humano. Em algumas modalidades, o indivíduo, por exemplo,
paciente, a quem o agente ou agentes, células, populações de células ou composições são administrados, é um mamífero, tipicamente um primata, tal como um ser humano. Em algumas modalidades, o primata é um macaco ou um chimpanzé. O indivíduo pode ser homem ou mulher e pode ter qualquer idade adequada, incluindo crianças, jovens, adolescentes, adultos e indivíduos geriátricos. Em algumas modalidades, o indivíduo é um mamífero não primata, tal como um roedor.
[00752] Conforme usado no presente documento, "tratamento" (e variações gramaticais do mesmo, tais como "tratar" ou "tratando") refere-se à melhora ou redução completa ou parcial de uma doença ou condição ou transtorno ou um sintoma, efeito adverso ou resultado ou fenótipo associado ao mesmo. Efeitos desejáveis do tratamento incluem, porém sem limitações, prevenção da ocorrência ou recorrência da doença, alívio dos sintomas, diminuição de quaisquer consequências patológicas diretas ou indiretas da doença, prevenção de metástase, diminuição da taxa de progressão da doença, melhora ou paliação do estado patológico e remissão ou melhor prognóstico. Os termos não implicam na cura completa de uma doença ou na eliminação completa de qualquer sintoma ou efeito(s) em todos os sintomas ou resultados.
[00753] Conforme usado no presente documento, "retardar o desenvolvimento de uma doença" significa adiar, impedir, diminuir, retardar, estabilizar, suprimir e/ou adiar o desenvolvimento da doença (tal como câncer). Este retardo pode ser de vários períodos de tempo, dependendo da histórico da doença e/ ou indivíduo sob tratamento. Em algumas modalidades, um retardo suficiente ou significativo pode, na verdade, abranger prevenção, pelo fato de que o indivíduo não desenvolve a doença. Por exemplo, um câncer em estágio avançado, tal como o desenvolvimento de metástases, pode ser retardado.
[00754] "Prevenção", conforme usado no presente documento, inclui o fornecimento de profilaxia com relação à ocorrência ou recorrência de uma doença em um indivíduo que pode estar predisposto à doença, mas ainda não foi diagnosticado com a doença. Em algumas modalidades, as células e composições fornecidas são usadas para retardar o desenvolvimento de uma doença ou retardar a progressão de uma doença.
[00755] Conforme usado no presente documento, "suprimir" uma função ou atividade é reduzir a função ou atividade quando comparado com as mesmas condições, exceto quanto a uma condição ou parâmetro de interesse ou, alternativamente, comparado com outra condição. Por exemplo, as células que suprimem o crescimento do tumor reduzem a taxa de crescimento do tumor comparado com a taxa de crescimento do tumor na ausência das células.
[00756] Uma "quantidade eficaz" de um agente, por exemplo, uma formulação farmacêutica, células ou composição, no contexto da administração, refere-se a uma quantidade eficaz, em dosagens/quantidades e durante períodos de tempo necessários, para atingir um resultado desejado, tal como um resultado terapêutico ou profilático.
[00757] Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" de um agente, por exemplo, uma formulação farmacêutica ou células, refere-se a uma quantidade eficaz, em dosagens e durante períodos de tempo necessários, para atingir um resultado terapêutico desejado, tal como para o tratamento de uma doença, condição ou transtorno e/ou efeito farmacocinético ou farmacodinâmico do tratamento. A quantidade terapeuticamente eficaz pode variar de acordo com fatores tais como o estado patológico, idade, sexo e peso do indivíduo e as populações de células administradas. Em algumas modalidades, os métodos fornecidos envolvem a administração das células e/ou composições em quantidades eficazes, por exemplo, quantidades terapeuticamente eficazes.
[00758] Uma "quantidade profilaticamente eficaz" refere-se a uma quantidade eficaz, nas dosagens e durante períodos de tempo necessários, para atingir o resultado profilático desejado. Tipicamente, mas não necessariamente, uma vez que uma dose profilática é usada em indivíduos antes ou em um estágio inicial da doença, a quantidade profilaticamente eficaz será menor do que a quantidade terapeuticamente eficaz. No contexto de menor carga tumoral, a quantidade profilaticamente eficaz, em alguns aspectos, será maior do que a quantidade terapeuticamente eficaz.
[00759] O termo "cerca de", conforme usado no presente documento, refere-se à faixa de erro usual para o respectivo valor prontamente conhecido pelo especialista neste campo técnico. Referência a "cerca de" um valor ou parâmetro no presente documento inclui (e descreve) modalidades que são dirigidas a este valor ou parâmetro per se.
[00760] Conforme usado no presente documento, as formas no singular "um", "uma" e "o/a" incluem as referências no plural, a menos que o contexto dite claramente o contrário. Por exemplo, "um" ou "uma" significa "pelo menos um(a)" ou "um(a) ou mais".
[00761] Ao longo da presente descrição, vários aspectos do assunto reivindicado são apresentados em um formato de faixas. Deve ser entendido que a descrição em formato de faixas é meramente por conveniência e brevidade e não deve ser interpretada como uma limitação inflexível no escopo do assunto reivindicado. Consequentemente, a descrição de uma faixa deve ser considerada como tendo descrito especificamente todas as subfaixas possíveis, bem como valores numéricos individuais dentro desta faixa. Por exemplo, onde uma faixa de valores é fornecida, deve ser entendido que cada valor intermediário, entre os limites máximo e mínimo desta faixa e qualquer outro valor declarado ou intermediário nesta faixa declarada,
está abrangido no assunto reivindicado. Os limites máximo e mínimo destas faixas menores podem ser independentemente incluídos nas faixas menores e também são abrangidos dentro do assunto reivindicado, sujeito a qualquer limite especificamente excluído na faixa declarada. Quando a faixa declarada inclui um ou ambos os limites, faixas que excluem um ou ambos os limites incluídos também estão incluídas no assunto reivindicado. Isto se aplica independentemente da amplitude da faixa.
[00762] Conforme usado no presente documento, uma composição refere-se a qualquer mistura de dois ou mais produtos, substâncias ou compostos, incluindo células. Ela pode ser uma solução, uma suspensão, líquido, pó, uma pasta, aquosa, não aquosa ou qualquer combinação dos mesmos.
[00763] Conforme usado no presente documento, "enriquecimento", quando de referência a um ou mais tipos de células ou população de células em particular, refere-se a aumentar o número ou porcentagem do tipo de célula ou população, por exemplo, comparado com o número total de células ou volume da composição ou em relação a outros tipos de células, tal como através de seleção positiva com base em marcadores expressos pela população ou célula ou através de seleção negativa com base em um marcador não presente na população de células ou célula a ser esgotada. O termo não requer a remoção completa de outras células, tipos de célula ou populações da composição e não requer que as células assim enriquecidas estejam presentes ou mesmo próximo de 100% na composição enriquecida.
[00764] Conforme usado no presente documento, uma declaração de que uma célula ou população de células é "positiva" para um marcador específico refere-se à presença detectável em ou na célula de um marcador específico, tipicamente um marcador na superfície. Quando de referência a um marcador na superfície, o termo refere-se à presença de expressão na superfície detectada por meio de citometria de fluxo, por exemplo, através de coloração com um anticorpo que se liga especificamente ao marcador e detecção do dito anticorpo, em que a coloração é detectável por meio de citometria de fluxo em um nível substancialmente acima da coloração detectada realizando o mesmo procedimento com um controle de correspondência de isotipo ou fluorescência (FMO) e controle de passagem sob outras condições idênticas e/ou em um nível substancialmente similar àquele da célula conhecida por ser positiva para o marcador e/ou em um nível substancialmente mais alto do que para uma célula conhecida como negativa para o marcador.
[00765] Conforme usado no presente documento, uma declaração de que uma célula ou população de células é "negativa" para um marcador específico refere-se à ausência de presença detectável substancial em ou na célula de um marcador específico, tipicamente um marcador na superfície. Quando de referência a um marcador na superfície, o termo refere-se à ausência de expressão na superfície detectada por meio de citometria de fluxo, por exemplo, através de coloração com um anticorpo que se liga especificamente ao marcador e detecção do dito anticorpo, em que a coloração não é detectada por meio de citometria de fluxo em um nível substancialmente acima da coloração detectada realizando o mesmo procedimento com um controle de correspondência de isotipo ou fluorescência (FMO) ou controle de passagem sob outras condições idênticas e/ou em um nível substancialmente inferior àquele da célula conhecida por ser positiva para o marcador e/ou em um nível substancialmente similar àquele de uma célula conhecida como negativa para o marcador.
[00766] O termo "vetor", conforme usado no presente documento, refere-se a uma molécula de ácidos nucleicos capaz de propagar outro ácido nucleico ao qual ela está ligada. O termo inclui o vetor como uma estrutura de ácidos nucleicos autorreplicante, bem como o vetor incorporado no genoma de uma célula hospedeira na qual ele foi introduzido. Determinados vetores são capazes de controlar a expressão de ácidos nucleicos aos quais estão operativamente ligados. Tais vetores são denominados, no presente documento, como "vetores de expressão".
[00767] A menos que definido de outra forma, todos os termos da técnica, notações e outros termos técnicos e científicos ou terminologia usados no presente documento se destinam a ter o mesmo significado conforme comumente entendido ao qual o assunto reivindicado pertence. Em alguns casos, os termos com significados comumente compreendidos são definidos no presente documento para maior clareza e/ou para pronta referência, e a inclusão de tais definições no presente documento não deve necessariamente ser interpretada como representando uma diferença substancial em relação ao que é geralmente entendido.
[00768] Todas as publicações, incluindo documentos de patentes, artigos científicos e bancos de dados, citados no presente pedido são incorporados a título de referência na íntegra para todas as finalidades, na mesma medida como se cada publicação individual fosse individualmente incorporada a título de referência. Se uma definição apresentada no presente documento for contrária ou de outra forma inconsistente com uma definição apresentada nas patentes, pedidos, pedidos publicados e outras publicações que são incorporadas ao presente documento a título de referência, a definição apresentada no presente documento prevalece sobre a definição que é incorporada ao presente documento a título de referência.
[00769] Os títulos das seções usados no presente documento são apenas para fins organizacionais e não devem ser interpretados como limitando o assunto descrito.
IX. EXEMPLOS
[00770] Os exemplos a seguir são incluídos apenas para fins ilustrativos e não se destinam a limitar o escopo da invenção. Exemplo 1: Administração de células que expressam CAR anti- CD19 a indivíduos que têm leucemia linfocítica crônica recidivante e refratária (CLL) ou linfoma linfocítico pequeno (SLL)
[00771] Composições de células T CAR+ terapêuticas que contêm células T autólogas que expressam um receptor antigênico quimérico (CAR) específico para CD19 foram administradas a seres humanos com leucemia linfocítica crônica (CLL) ou linfoma linfocítico pequeno (SLL).
[00772] Os indivíduos eram maiores ou pelo menos dezoito anos de idade e tinham um diagnóstico de CLL ou SLL. O diagnóstico de CLL foi com indicação de tratamento com base nas diretrizes do Workshop on Chronic Lymphocytic Leukemia (iwCLL) e doença clínica mensurável (envolvimento da medula óssea de > 30 % de linfócitos, linfocitose de sangue periférico > 5 x 109/L e/ou linfonodos mensuráveis e/ou comprometimento hepático ou esplenomegalia. O diagnóstico de SLL foi com base em linfadenopatia e/ou esplenomegalia e < 5 × 109 linfócitos B clonais CD19+ CD5+/L [< 5000/μL] no sangue periférico no diagnóstico com doença mensurável definida como pelo menos uma lesão > 1,5 cm no maior diâmetro transversal, e que é SLL comprovado por biópsia.
[00773] Os indivíduos eram inelegíveis para o tratamento com o inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTKi, por exemplo, ibrutinibe) em virtude de necessidade de anticoagulação em dose completa ou histórico ou arritmia ou não obtiveram sucesso no tratamento após terem sido recebido previamente BTKi, conforme determinado por doença (SD) ou doença progressiva (PD) como melhor resposta, PD após resposta anterior ou descontinuação em virtude de intolerância (por exemplo, toxicidade incontrolável). Mais especificamente, os indivíduos eram elegíveis se tivessem doença de alto risco (conforme determinado por anormalidades citogenéticas complexas (por exemplo, cariótipo complexo), del (17p), mutação TP53, IGVH não mutante) e não tivessem obtido sucesso em mais de ou igual a (por exemplo, pelo menos) 2 terapias anteriores; ou se eles tinham doença de risco padrão e não obtiveram sucesso em mais de ou igual a (por exemplo, pelo menos) 3 terapias anteriores. Indivíduos com doença do SNC não tratada ativa, ECOG > 1 ou transformada de Richter foram excluídos. A. Tratamento
[00774] Indivíduos elegíveis receberam as composições terapêuticas de células T anti-CD19. As composições terapêuticas de células T administradas foram geradas por meio de um processo que inclui enriquecimento com base em imunoafinidade (por exemplo, seleção imunomagnética) de células CD4+ e CD8+ de amostras de leucaferese dos indivíduos a serem tratados. As células T CD4+ e CD8+ isoladas foram ativadas separadamente e transduzidas de forma independente com um vetor viral (por exemplo, vetor lentiviral) que codifica um CAR anti-CD19, seguido por expansão separada e criopreservação das populações de células manipuladas em um baixo volume. O CAR continha um scFv anti-CD19 derivado de um anticorpo de murino (região variável derivada de FMC63, orientação VL-ligante-VH), um espaçador derivado de imunoglobulina, um domínio transmembrana derivado de CD28, uma região coestimuladora derivada de 4-1BB, e um domínio de sinalização intracelular de CD3-zeta. O vetor viral continha ainda sequências que codificam um receptor truncado, o qual serviu como um marcador substituto para a expressão de CAR; separado da sequência CAR por uma sequência de salto ribossômico T2A.
[00775] As composições de células criopreservadas foram descongeladas antes da administração intravenosa. A dose terapêutica de células T foi administrada como uma composição de células definida pela administração de uma população de células CD4+ CAR+ formulada e uma população de células CD8+ CAR+ formulada administrada em uma proporção alvo de aproximadamente 1:1.
[00776] Os indivíduos receberam uma dose única de células T que expressam CAR (cada dose única via infusões separadas de células T que expressam células T CAR CD4+ e células T que expressam CAR CD8+, respectivamente) como segue: uma dose única no nível de dose 1 (DL-1) que contém 5 x 107 células T que expressam CAR no total ou uma dose única no nível de dose 2 (DL-2) que contém 1 x 108 células T que expressam CAR no total. Se determinado como necessário, o nível de dose é diminuído para 2,5 × 107 células T CAR+. O escalonamento da dose seguiu um algoritmo de intervalo de probabilidade 2 de toxicidade modificado (mTIPI-2). As toxicidades limitantes da dose (DLTs) foram avaliadas durante vinte e oito dias após administração.
[00777] Antes da infusão de células T CAR+, os indivíduos receberam uma quimioterapia de linfodepleção com fludarabina (Flu, 30 mg/m2) e ciclofosfamida (Cy, 300 mg/m2) durante três (3) dias. Os indivíduos receberam células T que expressam CAR após a linfodepleção. B. Avaliação da Resposta
[00778] Os indivíduos foram monitorados quanto à resposta em um mês (trinta dias) e três meses após administração das células T CAR+.
[00779] As respostas foram avaliadas pelos critérios iwCLL (critérios de 2008: Hallek et al., Blood 2008; 111 (12): 5446-5456; critérios de 2018 Hallek et al., Blood 2018 131 (25): 2745-2760), exceto que a avaliação de eficácia inicial foi realizada no Dia 30. A resposta foi avaliada como remissão completa (CR), CR com recuperação incompleta da medula (CRi), remissão nodular parcial PR (nPR), remissão parcial (PR), doença estável ou com base em PD nas diretrizes do iwCLL. NPR e PR foram confirmadas com uma avaliação de repetição pelo menos oito semanas depois. A doença também foi avaliada com PET no início e após tratamento com células T que expressam CAR em uma base exploratória, conforme indicado no cronograma de eventos.
[00780] Uma avaliação de resposta foi conduzida no dia trinta pós- tratamento; meses dois (apenas hematologia), três, seis, nove, doze, dezoito e vinte e quatro (+ quatorze dias) ou até PD, evidência de progressão clínica, retirada do estudo ou necessidade de terapia alternativa. As avaliações de eficácia incluíram, conforme apropriado: Hematologia (CBC com diferencial), CT (qualidade diagnóstica), PET, aspirado de medula óssea (BMA)/biópsia de medula óssea (BMB) (avaliação inicial e no dia 30, e posteriormente apenas se outros resultados foram recentemente consistentes com CR, e em indivíduos que não tinham evidência de CLL no sangue periférico ou medula, mas tinham PR com base em linfadenopatia residual ou esplenomegalia), avaliação de doença residual mínima (MRD; em indivíduos que não têm evidência de CLL no sangue periférico ou medula, isto é, CR ou PR com base em linfadenopatia residual ou esplenomegalia).
[00781] Doença Residual Mínima (MRD) foi avaliada com sensibilidade de 1x10-4 por meio de citometria de fluxo de seis cores usando sangue periférico e, para aqueles que eram indetectáveis por fluxo, na medula óssea com sensibilidade de 1x10-6 usando sequenciamento de próxima geração (NGS) através de sequenciamento profundo clonoSEQ (Adaptive) de aspirados de medula óssea (BM). Exemplo 1.B.1
[00782] Os resultados são descritos neste Exemplo 1.B.1 para avaliação em um ensaio clínico em andamento. Neste ponto de tempo de análise, uma coorte de dez (10) indivíduos humanos adultos foi avaliada. Os dados demográficos e as características de linha de base dos indivíduos da coorte são apresentados na Tabela E1. Tabela E1: Características de Linha de Base Característica N=10 Idade mediana, anos (faixa) 64,5 (51-76) Estágio, n (%) Rai Estágio III/IV 6 (60) Binet Estágio C 6 (60) Citogenética de alto risco, n (%) 7 (70) Del(17p), n (%) 4 (40) Mutação TP53, n (%) 5 (50) IGHV sem mutação, n (%) 1 (10) Cariótipo complexo, n (%) 4 (40) Características do Paciente Linhas de terapia anteriores, mediana (faixa) 4 (3-8) Ibrutinibe anterior, n (%) 9 (90) Progressão para ibrutinibe e venetoclax anterior,a n (%) 6 (60)
[00783] Trinta dias após a dose, seis dos oito indivíduos (75 %) que foram avaliados quanto à resposta tiveram uma resposta objetiva, incluindo quatro CRs (50 %). Seis de sete indivíduos (85,7 %) avaliáveis quanto à doença residual mínima (MRD) tinham doença indetectável por fluxo no dia trinta de avaliação. Quatro dos cinco indivíduos avaliáveis quanto à resposta três meses após a dose tiveram resposta contínua e um progrediu com a transformada de Richter. Todos os quatro indivíduos com resposta contínua continuaram a ter MRD indetectável por meio de citometria de fluxo três meses após a dose. As respostas, incluindo CRs e respostas MRD indetectáveis, ocorreram em indivíduos com alto risco e com doença de risco padrão. As análises de medula óssea disponíveis a partir do clonoSEQ corroboram estas observações. Os resultados estão sumarizados na Tabela E2.
Tabela E2. Resposta Resposta, n (%) Total (n=8) Resposta global 6 (75) CR 4 (50) PR 2 (25) SD 1 (12,5) PD 1 (12,5) MRD indetectável (10-4 sangue), n (%) (n = 7) MRD indetectável global 6 (85,7) CR 3 (42,9) PR 2 (28,6) SD 1 (14,3) Exemplo 1.B.2
[00784] Em um ponto subsequente no tempo no estudo clínico descrito no Exemplo 1.B.1 acima, os resultados foram analisados. Neste ponto de tempo de análise, uma coorte de dezesseis (16) indivíduos humanos adultos com leucemia linfocítica crônica (R/R) recidivante ou refratária (CLL) que não obtiveram sucesso ou são inelegíveis para a terapia com BTKi foram avaliados.
[00785] Os dados demográficos e as características de linha de base dos indivíduos da coorte são apresentados na Tabela E3. Tabela E3. Características de Linha de Base Característica N=16 Idade mediana, anos (faixa) 64,5 (51-76) Male, n (%) 8 (50) Estágio, n (%) Rai Estágio III/IV 10 (62,5) Binet Estágio C 10 (62,5) Citogenética de alto risco (qualquer), n (%) 12 (75) Del (17p) 7 (43,8) Mutação TP53 10 (62,5)
IGHV sem mutação 2 (12,5) Cariótipo complexo 8 (50) Características do Paciente Linhas de terapia anteriores, mediana (faixa) 4,5 (2-11) Ibrutinibe anterior, n (%) 16 (100) Resistente/refratário ao ibrutinibe, n (%) 13 (81,3) Progressão para ibrutinibe e venetoclax anterior,a n (%) 8 (50) a Sete pacientes progrediram com venetoclax; 1 paciente teve melhor resposta de SD após 3 meses de tratamento.
[00786] As taxas de resposta estão sumarizadas na Tabela E4. Para os indivíduos em todas as doses, a melhor resposta geral observada foi uma ORR de 81,3 % com uma taxa de CR/CRi de 43,8 %. Neste ponto do estudo, a RC continuou em 5 de 6 pacientes com pelo menos 3 meses de acompanhamento. Tabela E4. Resposta Total DL1 DL2 Melhor Resposta global, n (%) (N = 16) (N = 6) (N = 10) ORR 13 (81,3) 6 (100) 7 (70) CR/CRi 7 (43,8) 5 (83,3) 2 (20) PR/nPR 6 (37,5) 1 (16,7) 5 (50) SD 2 (12,5) 0 2 (20) PD 1 (6,3) 0 1 (10) Resposta em 30 Dias pós-Dose, n (%) (N = 16) (N = 6) (N = 10) ORR 12 (75) 6 (100) 6 (60) CR/CRi 5 (31,3) 3 (50,0) 2 (20,0) PR/nPR 7 (43,8) 3 (50,0) 4 (40,0) Resposta em 3 Mesees pós-Dose, n (%) (N = 10) (N = 6) (N = 4) ORR 8 (80,0) 5 (83,3) 3 (75,0) CR/CRi 5 (50,0) 3 (50,0) 2 (50,0) PR/nPR 3 (30,0) 2 (33,3) 1 (25,0)
[00787] Onze dos quinze indivíduos (73,3 %) tinham MRD indetectável (uMRD) no sangue por meio de citometria de fluxo no dia trinta. Todos os indivíduos continuam indetectáveis no último acompanhamento no último momento avaliado neste estudo. Além disso, todos os cinco pacientes que tiveram acompanhamento no mês seis continuaram a manter a resposta de uMRD (CR, n = 4 e PR, n = 1 pelos critérios do iwCLL). Estes resultados estão sumarizados na Tabela E5. Tabela E5. Doença Residual Mínima: MRD Indetectável a Qualquer Momento MRD Negatividade, n (%) Total DL1 DL2 (N = 15) (n = 6) (n = 9) Sangue periférico, fluxo (10-4) 11 (73,3) 6 (100) 5 (55,6) (N = 8) (n = 5) (n = 3) Medula óssea, NGS (10-4) 7 (87,5) 4 (80,0) 3 (100) C. Avaliação de Segurança
[00788] Eventos adversos (AEs), eventos adversos graves (SAEs) e anormalidades laboratoriais (tipo, frequência e gravidade) foram coletados. Os eventos adversos de interesse especial (AESIs) incluíram reações à infusão, síndrome de liberação de citocinas (CRS), toxicidade neurológica, síndrome de ativação macrofágica (MAS) e síndrome de lise tumoral (TLS).
[00789] A presença ou ausência de eventos adversos emergentes do tratamento (TEAE) após administração da terapia com células CAR-T foi avaliada. Os indivíduos foram avaliados e monitorados quanto à neurotoxicidade (complicações neurológicas, incluindo sintomas de confusão, afasia, encefalopatia, ataques de mioclonia, convulsões, letargia e/ou estado mental alterado), classificadas em uma escala de 1-5, de acordo com o National Cancer Institute — Common Toxicity Criteria (CTCAE), versão 4.03 (NCI-CTCAE v4.03). Consulte Common Terminology for Adverse Events (CTCAE) Versão 4, U.S. Department of Health and Human Services, publicado: 28 de maio de 2009 (v4.03:14 de junho de 2010); e Guido Cavaletti & Paola Marmiroli, Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (dezembro de 2010). A síndrome de liberação de citocinas (CRS) foi determinada e monitorada, graduada com base na gravidade. Consulte Lee et al., Blood. 2014; 124 (2): 188-95. As toxicidades limitantes da dose (DLT) foram determinadas dentro de 28 dias após a infusão de células T que expressam CAR. Exemplo 1.C.1
[00790] O Exemplo 1.C.1 descreve AEs com base no ponto de tempo da análise no Exemplo 1.B.1. Nenhuma DLT foi identificada. Síndrome de liberação de citocinas (CRS), anemia, trombocitopenia e leucopenia foram os eventos adversos mais comuns. Eventos neurológicos (NE) foram relatados em três de dez indivíduos: concentração prejudicada de grau 1 e afasia, encefalopatia de grau 3 e afasia de grau 3. O tempo médio para o início da CRS e NE foi de 4,5 com um intervalo de 1-9 dias, e 11 com um intervalo de 11-21 dias, respectivamente. A duração mediana de CRS e NE foi de 5,5 com um intervalo de 3-30 dias, e 6 com um intervalo de 2-20 dias, respectivamente. Seis indivíduos receberam tocilizumabe e/ou esteroides para o manejo da CRS e/ou NE. AEs graves de graus 3-4 foram relatados em cinco de dez indivíduos. A Tabela E6 descreve a porcentagem de indivíduos que foram observados como tendo experimentado TEAEs. Tabela E6. Avaliação da Presença ou Ausência de TEAEs para o Exemplo 1.B.1 Evento Adverso, n (%) Total Todos os eventos de Grau 3-4 9 (90) Anemia 5 (50) Leucopenia 5 (50) Trombocitopenia 5 (50) Neutropenia 4 (40) Linfopenia 3 (30)
Todos os SAEs 5 (50) SAEs de Grau 3-4 5 (50) Afasia 1 (10) Fibrinogênio reduzido no sangue 1 (10) Encefalopatia 1 (10) Neutropenia febril 1 (10) Hiponatremia 1 (10) Infecção pulmonar 2 (20) Síndrome de liberação de citocinas 8 (80) Eventos de Grau 3-4 0 Eventos Neurológicos 3 (30) Eventos de Grau 3-4 2 (20) DLTs 0 Exemplo 1.C.2
[00791] O Exemplo 1.C.2 descreve AEs com base no ponto de tempo da análise no Exemplo 1.B.2. A Tabela E7 sumariza os TEAEs nos indivíduos neste momento (apenas AEs graves relacionados após noventa dias são mostrados). Observou-se que os TEAEs ocorreram em ≥ 20 % dos indivíduos. Uma DLT de hipertensão de grau 4 foi relatada no DL2. Tabela E7. Avaliação da Presença ou Ausência de TEAEs para o Exemplo 1.B.2 Todos os Grau > 3 Relacionados ao Graus Tratamento – Grau > 3 Qualquer TEAE, n (%) 16 (100) 16 (100) 9 (56,3) Anemia 14 (87,5) 11 (68,8) 4 (25) Trombocitopenia 13 (81,3) 12 (75) 5 (31,3) Síndrome de liberação de citocinas 12 (75) 1 (6,3) 1 (6,3)
Neutropenia 10 (62,5) 10 (62,5) 6 (37,5) Leucopenia 9 (56,3) 9 (56,3) 5 (31,3) Hipocalemia 8 (50) 0 0 Pirexia 6 (37,5) 0 0 Linfopenia 5 (31,3) 5 (31,3) 5 (31,3) Náusea 5 (31,3) 0 0 Diarreia 4 (25) 0 0 Neutropenia febril 4 (25) 3 (18,8) 1 (6,3) Dor de cabeça 4 (25) 0 0 Insônia 4 (25) 0 0 Tremor 4 (25) 0 0
[00792] A Tabela E8 sumariza os SAEs em indivíduos neste ponto de tempo. Todos os SAEs foram de grau > 3. Uma DLT de hipertensão de Grau 4 foi relatada no DL2. Tabela E8. Avaliação da Presença ou Ausência de SAEs para o Exemplo 1.B.2 Todos os Pacientes (N=16) Quaisquer SAEs de qualquer grau, n (%) 7 (43,8) Infecção pulmonar 3 (18,8) Afasia 1 (6,3) Fibrinogênio diminuído no sangue 1 (6,3) Encefalopatia 1 (6,3) Neutropenia febril 1 (6,3) Hipertensão 1 (6,3) Hiponatremia 1 (6,3)
[00793] Não houve eventos adversos de Grau 4/5 de interesse especial observados em qualquer um dos indivíduos na análise do Exemplo 1.B.2. A Tabela E9 sumariza a incidência da síndrome de liberação de citocinas (CRS) e eventos adversos de neurotoxicidade em indivíduos. Conforme mostrado na Tabela E9, baixas taxas de eventos neurológicos de grau 3 (6,3%) e de grau 3 (18,8%) foram observadas neste ponto do estudo.
Tabela E9. Avaliação da Presença ou Ausência de CRS e Eventos Adversos de Neurotoxicidade para o Exemplo 1.B.2 Total DL1 DL2 (N=16) (N=6) (N=10) CRS- qualquer grau, n (%) 12 (75) 6 (100) 6 (60) Tempo mediano até primeiro início, d 6,5 (1-10) 6,5 (1-9) 5 (2-10) (faixa) Duração mediana, d (faixa) 5,5 (2-30) 5,5 (3-30) 5,5 (2-13) Grade 3 1 (6,3) 0 1 (10) Eventos neurológicos (NE)a – qualquer 6 (37,5) 2 (33,3) 4 (40) grau, n (%) Tempo mediano até primeiro início, d 10 (4-21) 16 (11-21) 8 (4-11) (faixa) Duração mediana, d (faixa) 6,5 (2-20) 4 (2-6) 8 (3-20) Grau 3b 3 (18,8) 2 (33,3) 1 (10) Qualquer, n (%) CRS ou NEa 13 (81,3) 6 (100) 7 (70) CRS ou NEa 5 (31,3) 2 (33,3) 3 (30) Uso de tocilizumabe e/ou dexametasona 11 (68,8) 4 (66,7) 7 (70) Síndrome de lise tumoral – qualquer 2 (12,5) 1 (16,7) 1 (10) grau, n (%) Grau 3 2 (12,5) 1 (16,7) 1 (10) a Eventos neurológicos são eventos relacionados ao tratamento. b Encefalopatia n = 2; afasia n = 1; estado confusional n = 1 D. Avaliação de Células T CAR+ e Análise de Citocinas
[00794] A farmacocinética sanguínea das células T que expressam CAR foi determinada usando citometria de fluxo. Os perfis de quimiocinas e citocinas solúveis no soro para trinta e nove analitos foram avaliados usando uma plataforma de ensaio de eletroquimioluminescência (por exemplo, imunoensaios V-PLEX (MSD)). Os analitos, incluindo citocinas, foram medidos nos primeiros trinta dias de administração das composições terapêuticas de células T anti-CD19 CAR+. Exemplo 1.D.1
[00795] Com base nos dados do ponto de tempo descrito no Exemplo
1.B.1 e 1.C.1, a análise farmacocinética foi realizada para avaliar o número de células T CAR+ no pós-tratamento de sangue periférico. A Cmax média foi de 219 células T CAR+/µl com uma faixa a partir de 0,35 a 583,46. O tempo médio para atingir o pico de expansão foi de 15,5 dias, com variação de 13 a 19 dias. A área mediana sob a curva (AUC) foi de 1528 células por dia/µl, com uma faixa de 590 a 2847. No único indivíduo com uma melhor resposta de doença progressiva, foi observada expansão mínima de células CAR+ C (Figura 1). Células T CAR+ persistiram em indivíduos que mantiveram sua resposta três meses após a dose.
[00796] A análise do soro mostrou níveis elevados de múltiplos biomarcadores, incluindo CRP, IL-6, PLGF, IL-16 e IL-15 em conjunto com CRS e NE. Exemplo 1.D.2
[00797] Com base nos dados do ponto de tempo descrito no Exemplo
1.B.2 e 1.C.2, a análise farmacocinética foi realizada para avaliar o número de células T CAR+ no sangue periférico até noventa dias após administração. Conforme mostrado na Figura 2, as células T CAR+ persistiram em indivíduos que mantiveram sua resposta três meses após administração.
[00798] A análise de citocinas revelou IL-16 e TNF como potenciais biomarcadores de eventos neurológicos de alto grau (Figura 3A e 3B). Dentre as 38 citocinas avaliadas, a IL-16 e o TNF estavam elevados em três dos quatro pacientes antes do primeiro início de eventos neurológicos de grau 2 ou 3 (Tabela E9). Exemplo 2: Avaliação Adicional de Resposta, Segurança, Farmacocinética, Farmacodinâmica e Analitos no Sangue em
Indivíduos que têm Leucemia Linfocítica Crônica Recidivante e Refratária (CLL) ou Linfoma Linfocítico Pequeno (SLL)
[00799] Os resultados de resposta, resultados de segurança, parâmetros farmacocinéticos e farmacodinâmicos e analitos no sangue foram avaliados em indivíduos em um ponto subsequente no tempo no estudo clínico descrito no Exemplo 1 acima.
[00800] A análise neste ponto apresentada neste exemplo é com base em um total de dezesseis indivíduos que receberam as células que expressam o CAR anti-CD19. Os indivíduos elegíveis tinham recebido duas ou mais linhas de terapia anteriores, incluindo inibidores de tirosina quinase de Bruton (BTKi), por exemplo, ibrutinibe, a menos que medicamente contraindicado, e tinham um estado de desempenho no Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG PS) menor do que ou igual a 1. Após três dias de quimioterapia de linfodepleção, os indivíduos receberam uma dose única de células T que expressam CAR (cada dose única via infusões separadas de células T que expressam CAR CD4+ e células T que expressam CAR CD8+, respectivamente) como segue: uma dose única no nível de dose 1 (DL-1) que contém 5 x 107 células T que expressam CAR no total (n = 6) ou uma dose única no nível de dose 2 (DL-2) que contém 1 x 108 células T que expressam CAR no total (n = 10). A dose terapêutica de células T foi administrada como uma composição de células definida pela administração da população de células CD4+ CAR+ formulada e da população de células CD8+ CAR+ formulada administrada em uma proporção alvo de aproximadamente 1:1, conforme descrito no Exemplo 1.
[00801] Os indivíduos foram monitorados quanto a toxicidades limitantes da dose (DLTs) e a resposta foi avaliada pelos critérios do iwCLL 2008. A doença residual mínima foi avaliada com sensibilidade de 1 x 10-4 por meio de citometria de fluxo usando sangue periférico e na medula óssea com sensibilidade de 1 x 10-6 usando sequenciamento de última geração (NGS) por meio de sequenciamento profundo clonoSEQ (Adaptive) de aspirados de medula óssea (BM).
[00802] Neste ponto de tempo de análise, 75 % dos indivíduos tinham características de alto risco, tal como mutação TP53, cariótipo complexo ou del17p, 100 % tinham recebido terapia anterior com BTKi, por exemplo, ibrutinibe, e 50 % tinham recebido terapia anterior com venetoclax. O número médio de linhas de terapia anteriores foi de 4,5 (faixa de 2-11).
[00803] Houve uma toxicidade limitante de dose de hipertensão de grau (G) 4 em um indivíduo que recebeu DL2. Os eventos adversos emergentes do tratamento de Grau 3/4 mais comuns foram citopenias (trombocitopenia, 75%; anemia, 69%; neutropenia, 63%; leucopenia, 56%). Um indivíduo teve síndrome de liberação de citocinas G3 (CRS) e três indivíduos tiveram eventos neurológicos G3 (NE).
[00804] Dentre 15 indivíduos avaliáveis, a melhor taxa de resposta global (ORR) foi de 87 % (13/15), com 83 % (5/6) ORR em seis meses. Sete indivíduos (47 %) alcançaram remissão completa (CR) com ou sem recuperação completa no hemograma (CR/CRi).
[00805] Dez de quinze indivíduos (67 %) alcançaram doença residual mínima indetectável (uMRD) no sangue no dia 30 e uMRD foi alcançada em sete de oito indivíduos (88 %) em aspirados de medula óssea. CRs MRD-negativos foram observados em indivíduos que não obtiveram sucesso tanto com BTKi como venetoclax. O tempo médio para atingir o pico do nível de células T CAR+ no sangue foi de dezesseis dias (variação de 4-30).
[00806] Estes resultados demonstram que em indivíduos fortemente pré-tratados com CLL/SLL de risco padrão e alto, incluindo em indivíduos que receberam tratamento anterior com ibrutinibe, as toxicidades (isto é, CRS e NEs) após administração de uma composição de células T anti-CD19 CAR+ eram gerenciáveis. Além disso, destes indivíduos, CR/CRi e/ou uMRD foi alcançada rapidamente. Exemplo 3: Administração de Células que Expressam Anti-CD19 a Indivíduos que Têm Leucemia Linfocítica Crônica Recidivante e Refratária (CLL) ou Linfoma Linfocítico Pequeno (SLL)
[00807] Composições de células T CAR+ terapêuticas que contêm células T autólogas que expressam um receptor antigênico quimérico (CAR) específico para CD19 foram administradas a seres humanos que têm leucemia linfocítica crônica (CLL) ou linfoma linfocítico pequeno (SLL) em um estudo clínico, conforme descrito em Exemplos 1 e 2 acima. Os resultados de resposta e os resultados de segurança foram avaliados em indivíduos em um ponto subsequente no tempo no estudo clínico descrito nos Exemplos 1 e 2 acima. As composições de células T terapêuticas anti-CD19 foram produzidas conforme descrito no Exemplo 1. A fabricação da composição de células T terapêuticas anti- CD19 não teve sucesso para um indivíduo.
[00808] A análise neste ponto de tempo apresentada neste exemplo é com base em um total de 23 indivíduos que receberam as células que expressam o CAR anti-CD19 de acordo com a elegibilidade para o estudo clínico, conforme descrito no Exemplo 1 e 2. Dois indivíduos (9%) eram intolerantes ao ibrutinibe. As características de linha de base dos indivíduos tratados são mostradas na Tabela E10. Tabela E10: Características de Linha de Base Característica Todos os DL1 DL2 indivíduos n=9 n=14 N=23 Idade mediana, anos (faixa) 66 (49-79) 67 (49-76) 66 (53-79) Homens, n (%) 11 (47,8) 4 (44,4) 7 (50,0) a Doença volumosa > 5 cm, n (%) 8 (34,8) 3 (33,3) 5 (35,7) SPD (cm2), mediana (faixa) 24,7 (2-197) 30,0 (2-119) 24,7 (5-197) LDH (U/L), mediana (faixa) 243 (119- 227 (174- 275 (119- 634) 634) 527)
Receberam terapia de transição, n 17 (73,9) 5 (55,6) 12 (85,7) (%) Estágio, n (%) Rai Estágio III/IV 15 (65,2) 6 (66,7) 9 (64,3) Binet Estágio C 16 (69,6) 7 (77,8) 9 (64,3) Citogenética de alto risco, n (%) 19 (82,6) 6 (66,7) 13 (92,9) Del(17p), n (%) 8 (34,8) 3 (33,3) 5 (35,7) Mutação TP53, n (%) 14 (60,9) 4 (44,4) 10 (71,4) Cariótipo complexo, n (%)b 11 (47,8) 5 (55,6) 6 (42,9) Características do Paciente Linhas de terapia anteriores, 5 (2-11) 5 (3-8) 5 (2-11) mediana (faixa) Ibrutinibe anterior, n (%) 23 (100) 9 (100) 14 (100) Resistente/refratário ao ibrutinibe, 21 (91,3) 9 (100) 12 (85,7) n (%) Progressão para ibrutinibe e 13 (56,5) 5 (55,6) 8 (57,1) c venetoclax anterior, n (%) a Doença volumosa, definida como pelo menos uma lesão com o maior diâmetro > 5 cm. b Pelo menos três aberrações cromossômicas. c Doze indivíduos progrediram com venetoclax; um indivíduo teve melhor resposta de doença estável após três meses de tratamento.
[00809] Os indivíduos receberam quimioterapia de linfodepleção com fludarabina (Flu, 30 mg/m2) e ciclofosfamida (Cy, 300 mg/m2) durante três dias antes da infusão de células T CAR+. Células T que expressam CAR anti-CD19 foram produzidas com sucesso para 96% dos indivíduos. As composições de células anti-CD19 criopreservadas foram descongeladas antes da administração intravenosa. Os indivíduos receberam uma dose única de células T que expressam CAR (cada dose única via infusão separada de células T que expressam CAR CD4+ e células T que expressam CAR CD8+, respectivamente) como segue: uma dose única no nível de dose 1 (DL-1) que contém 5 x 107 células T que expressam CAR no total (n = 9 indivíduos) ou uma dose única no nível de dose 2 (DL-2) que contém 1 x 108 células T que expressam CAR no total (n = 14 indivíduos). A dose terapêutica de células T foi administrada como uma composição de células definida pela administração da população de células CD4+ CAR+ formulada e da população de células CD8+ CAR+ formulada administrada em uma proporção alvo de aproximadamente 1:1, conforme descrito no Exemplo
1. O escalonamento da dose seguiu um algoritmo de probabilidade de toxicidade modificada de 2 intervalos (mTIPI-2) (Guo et al. (2017) Contemp Clin Trials, 2017; 58: 23-33). As toxicidades limitantes da dose (DLTs) foram avaliadas por vinte e oito dias após administração. A. Avaliação da Resposta
[00810] As respostas foram avaliadas de acordo com os critérios do iwCLL, conforme descrito no Exemplo 1 e 2. A doença residual mínima foi avaliada com sensibilidade de 1 x 10-4 por meio de citometria de fluxo usando sangue periférico e na medula óssea com sensibilidade de 1 x 10-6 usando sequenciamento de próxima geração (NGS) por meio de sequenciamento profundo ClonoSEQ (Adaptive) de aspirados de medula óssea (BM). Os indivíduos foram monitorados quanto à resposta até vinte e quatro meses após administração das células T CAR+. O acompanhamento médio do estudo foi de nove meses, com acompanhamento mínimo de um mês.
[00811] As taxas de resposta são mostradas nas Figuras 4A-4B e Figura 5. Vinte e dois indivíduos foram avaliados quanto à resposta definida como tendo uma avaliação de pré-tratamento e pelo menos uma avaliação pós-linha de base. Um indivíduo não foi avaliável quanto à resposta. A melhor resposta geral é mostrada na Figura 4A. Conforme mostrado na Figura 4A, do número total de indivíduos avaliáveis, 4,5% demonstraram doença progressiva, 13,6% demonstraram doença estável, 36,4% demonstraram resposta parcial ou resposta parcial nodular e 45,5% demonstraram resposta completa ou resposta completa com recuperação incompleta no hemograma. Dos nove indivíduos avaliáveis que receberam DL1 (5 x 107 células T que expressam CAR), 22,2% demonstraram doença estável, 11,1% demonstraram resposta parcial ou resposta parcial nodular e 66,7% demonstraram resposta completa ou resposta completa com recuperação incompleta no hemograma. De treze indivíduos que receberam DL2 (1 x 108 células T que expressam CAR), 7,7% demonstraram doença progressiva, 7,7% demonstraram doença estável, 53,8% demonstraram resposta parcial ou resposta parcial nodular e 30,8% demonstraram resposta completa ou resposta completa com recuperação de contagem sanguínea incompleta. A melhor taxa de resposta global (ORR) foi de 82% (intervalo de confiança de 95 %: 59,7-94,8) e taxa de CR/CRi de 46% (um indivíduo com MRD não avaliável alcançou uma CR, mas progrediu posteriormente). Em um ponto de avaliação, sessenta e oito por cento (15/22) dos indivíduos alcançaram uma resposta objetiva no dia 30 após a infusão. 78% (7/9) dos respondedores com mais de 9 meses de acompanhamento pós- infusão permaneceram sem progressão.
[00812] Vinte indivíduos foram avaliados quanto à doença residual mínima definida como tendo doença residual mínima detectável na linha de base (Figura 4B). Conforme mostrado na Figura 4B, doença residual mínima indetectável (uMRD) foi alcançada em 75% do sangue periférico e 65% da medula óssea dos indivíduos (um indivíduo atingiu uMRD no sangue/BM e mais tarde teve MRD detectável). Dentre 8 indivíduos que receberam DL1 (5 x 107 células T que expressam CAR) uMRD foi alcançada em 75% do sangue periférico e medula óssea. Dentre 12 indivíduos que receberam DL2 (1 x 108 células T que expressam CAR), uMRD foi alcançada em 75% do sangue periférico e 58% da medula óssea.
[00813] A duração da resposta por tempo sem progressão continuou a melhorar ao longo do tempo (Figura 5). Dentre vinte e dois indivíduos, 27% (6/22) demonstraram aprofundamento da resposta após o dia trinta: 3 indivíduos que exibiram resposta parcial (PR) alcançaram CR posteriormente, 2 indivíduos passaram de doença estável (SD) para RP, e 1 indivíduo foi de SD para CR. Cinco dos seis indivíduos, 83 %, com RC em seis meses permaneceram em RC, incluindo três indivíduos que mantiveram resposta completa além de doze meses. Doze dos vinte indivíduos avaliáveis, 60% (12/20) tiveram MRD indetectável por meio de sequenciamento de próxima geração no dia trinta. A uMRD inicial observada em 60% dos indivíduos estava em andamento em 12 meses e em um ponto de tempo posterior de avaliação. B. Avaliação de Segurança
[00814] A presença ou ausência de eventos adversos emergentes do tratamento (TEAE) após administração de terapia com células CAR-T anti-CD19 foi avaliada conforme descrito no Exemplo 1. TEAEs foram relatados em ≥ 25 % dos indivíduos em todos os níveis de dose (Tabela E11). Em um determinado momento da avaliação, anemia de grau 3 ou 4 foi observada em 96% dos indivíduos. TEAEs graves ocorreram em alguns indivíduos (Tabela E12). A Tabela E13 relata a incidência de determinados eventos adversos, incluindo a síndrome de liberação de citocinas (CRS) e eventos neurológicos (NE). Nenhuma CRS ou NE de Grau 5 ocorreu. Os eventos neurológicos não foram mutuamente exclusivos. Encefalopatia foi observada em três indivíduos. Afasia, estado de confusão, fraqueza muscular e sonolência foram observados em um indivíduo. Toxicidades limitantes da dose ocorreram em dois indivíduos que receberam DL2 (1 x 108 células T que expressam CAR). Um indivíduo apresentou hipertensão de Grau 4, enquanto que um indivíduo apresentou encefalopatia de Grau 3, fraqueza muscular de Grau 3 e síndrome de lise tumoral de Grau 4. Um TEAE de insuficiência respiratória de Grau 5 foi observado em um indivíduo que recebeu DL1
(5 x 107 células T que expressam CAR). Para o tratamento de CRS e/ou NE, 61 % (n = 14) dos indivíduos receberam tocilizumabe e 48% (n = 11) receberam corticosteroides. Os eventos adversos foram controláveis em ambos os níveis de dose, com baixas taxas de CRS de Grau 3 (8,7 %) e NE de Grau 3 ou 4 (21,7 %). As taxas mais altas de CRS de graus 1-2 são consistentes com um perfil de segurança favorável da composição de células T anti-CD19 CAR+ neste grupo de indivíduos. A carga tumoral em linfonodos mostrou-se correlacionada com a NE (P = 0,025).
[00815] Os níveis séricos de citocinas e quimiocinas também foram avaliados nos indivíduos. A análise de citocinas mostrou que o início da NE foi precedido por TNFα e IL-16 elevados logo após a infusão de células T que expressam o CAR anti-CD19 (P < 0,01). Tabela E11: Avaliação da Presença ou Ausência de TEAEs Todos os Grau > 3 DL1 Grau > 3 DL2 Grau >3 Graus (N=23) (N=23) (n=9) (n=14) Qualquer TEAE, n (%) 23 (100,0) 22 (95,7) 8 (88,9) 14 (100) Anemia 19 (82,6) 18 (78,3) 7 (77,8) 11 (78,6) Síndrome de liberação 17 (73,9) 2 (8,7) 0 2 (14,3) de citocinas Trombocitopenia 17 (73,9) 16 (69,6) 4 (44,4) 12 (85,7) Neutropenia 13 (56,5) 13 (56,5) 4 (44,4) 9 (64,3) Leucopenia 11 (47,8) 10 (43,5) 4 (44,4) 6 (42,9) Hipocalemia 9 (39,1) 0 0 0 Pirexia 9 (39,1) 0 0 0 Náusea 8 (34,8) 0 0 0 Diarreia 7 (30,4) 0 0 0 Hipofosfatemia 7 (30,4) 4 (17,4) 0 4 (28,6) Tremor 7 (30,4) 0 0 0 Neutropenia febril 6 (26,1) 5 (21,7) 0 5 (35,7) Hipomagnesemia 6 (26,1) 0 0 0 Linfopenia 6 (26,1) 6 (26,1) 2 (22,2) 4 (28,6)
Tabela E12: TEAEs Graves Relatados em > 1 Indivíduo Todos os DL1 DL2 Indivíduos (N=23) (n=9) (n=14) TEAEs graves de qualquer 13 (56,5) 4 (44,4) 9 (64,3) grau, n (%) Síndrome de liberação de 6 (26,1) 1 (11,1) 5 (35,7) citocinas Pirexia 4 (17,4) 3 (33,3) 1 (7,1) Encefalopatia 3 (13,0) 1 (11,1) 2 (14,3) Neutropenia febril 3 (13,0) 0 3 (21,4) Pneumonia 3 (13,0) 2 (22,2) 1 (7,1) Lesão renal aguda 2 (8,7) 2 (22,2) 0 Afasia 2 (8,7) 1 (11,1) 1 (7,1) Infecção pulmonar 2 (8,7) 1 (11,1) 1 (7,1) Síndrome de lise tumoral 2 (8,7) 0 2 (14,3)
Tabela E13: TEAEs de Interesse Especial Total DL1 DL2 (N=23) (n=9) (n=14) CRS – qualquer grau, n (%) 17 (73,9) 7 (77,8) 10 (71,4) Tempo mediano até primeiro 4 (1-10) 6 (1-9) 3,5 (1-10) início, dia (faixa) Duração mediana, dia (faixa) 5 (2-30) 5 (3-30) 5,5 (2-27) Grau 3, n (%) 2 (8,7) 0 2 (14,3) NEa – qualquer grau, n (%) 9 (39,1) 2 (22,2) 7 (50,0) Tempo mediano até primeiro 4,0 (2-21) 16 (11-21) 4 (2-11) início, dia (faixa) Duração mediana, dia (faixa) 21,0 (6-169) 8,5 (6-11) 38 (9- 169) Grau > 3, b n (%) 5 (21,7) 2 (22,2) 3 (21,4) Qualquer, n (%)
CRS ou NEa 18 (78,3) 7 (77,8) 11 (78,6) CRS e NEa 8 (34,8) 2 (22,2) 6 (42,9) Uso de tocilizumabe e/ou 17 (73,9) 5 (55,6) 12 (85,7) esteroide Síndrome de lise tumoral – 4 (17,4) 1 (11,1) 3 (21,4) qualquer grau, n (%) Grau > 3, n (%) 4 (17,4) 1 (11,1) 3 (21,4) Eventos cardíacos, n (%) 1 (4,3) 1 (11,1) 0 a NEs são eventos relacionados ao tratamento b NEs não são mutuamente exclusivos C. Farmacocinética e Farmacodinâmica
[00816] A farmacocinética do sangue das células T que expressam o CAR anti-CD19 foi determinada usando citometria de fluxo para avaliar os números de células T CD3+ CAR+ no sangue periférico pós- tratamento. Os resultados são mostrados na Figura 6, onde células T anti-CD19 CAR+ foram administradas no dia 1 de estudo. Na Figura 6, a barra de erro superior representa o terceiro quartil e a barra de erro inferior representa o primeiro quartil. Um resumo dos parâmetros PK/PD é mostrado na Tabela E14, incluindo concentração máxima (Cmax) de células no sangue, tempo para atingir a concentração máxima (pico) (Tmax) e a área sob a curva (AUC). Tabela E14: Perfil Farmacocinético (PK) e Farmacodinâmico (PD) Mediana (Q1, Q3) Total (N=23) DL1 (N=9) DL2 (N=14) Cmax (células/µL) 125 (4,45, 320) 111 (3,25, 313) 130 (35,2, 305) Tmax (dia de estudo) 15 (15, 22) 15 (15, 22) 15 (15, 22) AUC1-29 1110 (34, 2120) 1080 (26,2, 1790) 1340 (215, 2230) (dia*células/ µL)
[00817] Os resultados foram consistentes com a observação de que resposta objetiva, resposta completa e uMRD foram alcançadas rapidamente após a infusão de células T que expressam CAR anti- CD19, com respostas duráveis observadas nos últimos 6 meses para os indivíduos fortemente pré-tratados com CLL/SLL recidivante/refratária (por exemplo, incluindo aqueles que receberam ibrutinibe anterior e aqueles que não obtiveram sucesso tanto com o venetoclax como ibrutinibe anteriores) em um estudo clínico. Os eventos adversos associados à administração de células T que expressam o CAR anti-CD19, incluindo síndrome de liberação de citocinas (CRS) e eventos neurológicos (NE), foram observados como controláveis em ambos os níveis de dose testados. D. Avaliação da Resposta, Segurança e Farmacocinética em Indivíduos que Não Obtiveram Sucesso no Tratamento Anterior Com BTKi e Venetoclax
[00818] Em um ponto de tempo de análise diferente, a resposta, a segurança e a farmacocinética foram avaliadas em um grupo de nove indivíduos, entre o total de 23 indivíduos que não obtiveram sucesso no tratamento anterior com um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTKi) e venetoclax. A Tabela E15 mostra as características de linha de base dos 23 indivíduos, avaliadas no Exemplo 3.A-3.C acima, e aquelas dos indivíduos que não obtiveram sucesso com BTKi e venetoclax. Tabela E15. Características de Linha de Base Todos os Não obtiveram Pacientes sucesso com BTKi (N=23) e Venetoclax (n=9) Idade, anos, mediana (faixa) 66 (49–79) 68 (59–76) Homens, n (%) 11 (48) 4 (44) Doença volumosa > 5 cm, n (%)a 8 (35) 4 (44) Pontuação de risco BALL1, 2 (0–3) 2 (0–3) mediana (faixa) SPD, cm2 mediana (faixa) 24,7 (2–197) 45,9 (2–197) LDH, U/L mediana (faixa) 243 (119–634) 245 (119–634) Receberam terapia de transição, n 17 (74) 7 (78) (%)
Estágio, n (%) Rai estágio III/IV 15 (65) 7 (78) Binet estágio C 16 (70) 7 (78) Características de alto risco 19 (83) 8 (89) (qualquer), n (%) Del(17p) 8 (35) 2 (22) Mutação TP53 14 (61) 6 (67) Cariótipo complexob 11 (48) 3 (33) Linhas de terapia anterior, 5 (2–11) 6 (5–10) mediana (faixa) Ibrutinibe anterior, n (%) 23 (100) 9 (100) Resistente/refratário ao ibrutinibe, 21 (91) 9 (100) n (%) Não obtive sucesso com BTKi e 9 (39) 9 (100) Venetoclax,c n (%) a Doença volumosa definida como ≥ 1 lesão com diâmetro maior > 5 cm. b ≥ 3 aberrações cromossômicas. c Não obteve sucesso com venetoclax definido como descontinuação em virtude de PD ou < PR após ≥ 3 meses de terapia. LDH, lactato desidrogenase; SPD, soma do produto dos diâmetros perpendiculares. 1 . Soumerai J.D. et al., Lancet Haematol. 2019; 6 (7): e366-e374.
[00819] A Tabela E16 mostra os eventos adversos emergentes do tratamento (TEAE) do total de 23 indivíduos ou dos nove indivíduos que não obtiveram sucesso tanto com BTKi quanto com venetoclax. Toxicidades limitantes de dose (DLTs) foram observadas em dois indivíduos que receberam DL2 das células manipuladas: um indivíduo exibiu hipertensão de grau 4 e um indivíduo, o qual estava no grupo que não obteve sucesso com BTKi e venetoclax, exibiu encefalopatia de grau 3, fraqueza muscular de grau 3 e síndrome de lise tumoral de grau
4. Tabela E16. Perfil de Segurança
Todos os Não obtiveram Pacientes sucesso com BTKi (N=23) e Venetoclax (n=9) TEAEs graves de qualquer grau, 13 (56,5) 5 (55,6) n (%) CRS 6 (26) 2 (22) Pirexia 4 (17) 2 (22) Encefalopatia 3 (13) 1 (11) Neutropenia febril 3 (13) 1 (11) Pneumonia 3 (13) 0 Lesão renal aguda 2 (9) 0 Afasia 2 (9) 1 (11) Infecção pulmonar 2 (9) 2 (22) TLS 2 (9) 1 (11)
[00820] A Tabela E17 mostra os eventos adversos emergentes do tratamento (TEAE) de interesse especial no total de 23 indivíduos ou nos nove indivíduos que não obtiveram sucesso tanto com BTKi quanto venetoclax. Tabela E17. TEAEs de Interesse Especial Todos os Não obtiveram Pacientesa sucesso com BTKi (N=23) e Venetoclax (n=9) CRS—qualquer grau, n (%) 17 (74) 6 (67) Tempo mediano até primeiro início, 4 (1–10) 1,5 (1–4) dias (faixa) Duração mediana do primeiro 12 (2–50) 21 (6–50) evento, dias (faixa) Grau 3, n (%) 2 (9) 1 (11) NEsb—qualquer grau, n (%) 9 (39) 4 (44) Tempo mediano até primeiro início, 6,5 (2–103) 6,5 (2–21) dias (faixa)
Duração mediana do primeiro 21 (6–312) 23,5 (6–49) evento, dias (faixa) Grau ≥ 3,c n (%) 5 (22) 3 (33) Qualquer CRS ou NEs,b n (%) 18 (78) 7 (78) Qualquer CRS e NEs,b n (%) 8 (35) 3 (33) Uso de tocilizumabe e/ou esteroide 17 (74) 6 (67) TLS, n (%) 4 (17) 1 (11) a Sem diferenças no perfil de TEAE entre os níveis de dose. b NEs são eventos relacionados ao tratamento definidos pelo investigador. c NEs não são mutuamente exclusivos; encefalopatia (n = 3); afasia (n = 1); estado confusional (n = 1); fraqueza muscular (n = 1); sonolência (n = 1).
[00821] As Figuras 7A e 7B mostram a melhor resposta geral (Figura 7A) e doença residual mínima indetectável (uMRD) no sangue por meio de citometria de fluxo ou na medula óssea por meio de sequenciamento de próxima geração (NGS) (Figura 7B). O acompanhamento médio do estudo foi de 11 meses. Conforme mostrado, foi observada uma alta proporção de respostas duráveis, incluindo CRs, com uma melhor ORR elevada de 81,5 % em todos os indivíduos avaliáveis e 89 % em indivíduos que não obtiveram sucesso em BTKi e venetoclax.
[00822] A Figura 8 mostra a avaliação da resposta individual de indivíduos tratados que não obtiveram sucesso em BTKi e venetoclax e os outros indivíduos avaliáveis. Os resultados mostraram que a maioria dos indivíduos alcançou uma resposta objetiva precoce no Dia 30 (68%; n = 15/22) e uMRD (75 %; n = 15/20), incluindo 6 indivíduos que não obtiveram sucesso tanto com BTKi como venetoclax (67 %). Os resultados mostraram que as respostas se aprofundaram ao longo do tempo em 27 % (n = 6/22) dos indivíduos em geral e 33 % dos indivíduos que não obtiveram sucesso com BTKi e venetoclax (n = 3/9). Os resultados também mostraram que respostas duráveis foram mantidas em 6 meses após administração na maioria dos indivíduos: 87 % de todos os indivíduos e (n = 13/15) 83 % dos indivíduos que não obtiveram sucesso tanto com BTKi quanto venetoclax (n = 5/6). 83 % (n = 5/6) dos indivíduos com RC em 6 meses permanecem em RC em 9 meses, com 3 indivíduos com RC nos últimos 12 meses. Dois indivíduos que não obtiveram sucesso tanto com o BTKi quanto com o venetoclax mantiveram as respostas nos últimos 12 meses.
[00823] A concentração média de células CD3+ CAR+ nos indivíduos ao longo do tempo após administração é mostrada na Figura 9. Os resultados mostraram que o subconjunto de indivíduos que não obtiveram sucesso com BTKi e venetoclax tinha um perfil de PK/PD similar âquele da população total de indivíduos. E. Conclusão
[00824] A administração de células que expressam o CAR anti-CD19 a indivíduos fortemente pré-tratados com CLL/SLL de alto risco, todos os quais não obtiveram sucesso antes com ibrutinibe, com mais da metade também não tendo obtido sucesso no tratamento anterior com venetoclax, resultou em toxicidade controlável e boa resposta clínica. Os eventos adversos foram controláveis, incluindo no subconjunto de indivíduos que não obtiveram sucesso tanto com um BTKi quanto com venetoclax. CRS de grau 3 (9 %) e NEs de grau 3 ou 4 (22 %) foram observados como baixos. Em um acompanhamento médio de 11 meses, a administração de células que expressam o CAR anti-CD19 resultou em uma alta proporção de respostas duráveis, incluindo CR, incluindo em indivíduos que não obtiveram sucesso tanto com BTKi quanto com venetoclax. Observou-se que as respostas clínicas são rápidas, melhoram com o tempo e são profundas e duráveis. Por exemplo, a maioria das respostas iniciais foi alcançada no Dia 30, e as respostas se aprofundaram ao longo do tempo em 27 % dos indivíduos avaliados e em 33 % dos indivíduos que não obtiveram sucesso tanto com BTKi quanto venetoclax. Respostas objetivas duráveis foram mantidas 6 meses após administração (87 % dos indivíduos avaliados, 83 % dos indivíduos que não obtiveram sucesso tanto com BTKi como venetoclax anteriores). 83 % dos indivíduos com RC em 6 meses permaneceram em RC em 9 meses, com 3 indivíduos com RC nos últimos 12 meses. Os indivíduos que não obtiveram sucesso tanto com BTKi como venetoclax anteriores exibiram um perfil de PK/PD similar àquele da população total de indivíduos. Os resultados suportam a administração das células CAR+ anti-CD19 para indivíduos com CLL/SLL, incluindo aqueles com CLL/SLL de alto risco e aqueles que não obtiveram sucesso em várias terapias anteriores, tal como uma terapia anterior com BTKi e venetoclax.
[00825] A presente invenção não se destina a ter o escopo limitado às modalidades particulares descritas, as quais são fornecidas, por exemplo, para ilustrar vários aspectos da invenção. Várias modificações nas composições e métodos descritos se tornarão evidentes a partir da descrição e dos ensinamentos no presente documento. Tais variações podem ser praticadas sem se afastar do verdadeiro escopo e espírito da invenção e se destinam a cair dentro do escopo da presente invenção.
SEQUÊNCIAS SEQ
SEQUÊNCIA DESCRIÇÃO ID NO. ESKYGPPCPPCP espaçador (Dobradiça de 1 IgG4) (aa) Homo sapiens GAATCTAAGTACGGACCGCCCTGCCCCCCTTGCC espaçador CT (Dobradiça de 2 IgG4) (nt) homo sapiens ESKYGPPCPPCPGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQ Dobradiça-CH3 VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV espaçador 3
LDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSLGK Homo sapiens
ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMIS
RTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV Dobradiça-CH2- 4 SNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMT CH3 espaçador KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT Homo sapiens
PPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSLGK RWPESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTR NTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPL
GVYLLTPAVQDLWLRDKATFTCFVVGSDLKDAHLT WEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQSQHSRLTLP IgD-dobradiça-Fc 5 RSLWNAGTSVTCTLNHPSLPPQRLMALREPAAQAP VKLSLNLLASSDPPEAASWLLCEVSGFSPPNILLMW Homo sapiens
LEDQREVNTSGFAPARPPPQPGSTTFWAWSVLRV PAPPSPQPATYTCVVSHEDSRTLLNASRSLEVSYVT
DH LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPR T2A 6 artificial
MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPRKVCNGIGIGEFKDSL SINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPL DPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEI
IRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVII SGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSC tEGFR 7 KATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRG artificial
RECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAM NITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGE NNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGC
PTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV CD28 (aminoácidos 8 153-179 de Nº de Acesso P10747) Homo sapiens IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPS CD28 KPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV (aminoácidos 9 114-179 de Nº de Acesso P10747) Homo sapiens RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPR CD28 DFAAYRS (aminoácidos 10 180-220 de P10747) Homo sapiens RSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPP CD28 (LL a GG) 11 RDFAAYRS Homo sapiens KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEE 4-1BB EEGGCEL (aminoácidos 12 214-255 de Q07011.1) Homo sapiens
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDV
LDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMA CD3 zeta 13 EAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDA LHMQALPPR Homo sapiens
RVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDV LDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMA CD3 zeta 14 EAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDA Homo sapiens
LHMQALPPR
RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVL DKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMA CD3 zeta 15 EAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDA Homo sapiens
LHMQALPPR RKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHI LPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQA WPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNI
TSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFG TSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWG tEGFR 16 PEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVE artificial
NSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYID GPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCH PNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLL
LVVALGIGLFM 17 EGRGSLLTCGDVEENPGP T2A artificial 18 GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP P2A 19 ATNFSLLKQAGDVEENPGP P2A 20 QCTNYALLKLAGDVESNPGP E2A 21 VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP F2A PGGG-(SGGGG)5-P- em que P é prolina, G é glicina 22 ligante e S é serina 23 GSADDAKKDAAKKDGKS ligante 24 GSTSGSGKPGSGEGSTKG ligante gacatccagatgacccagaccacctccagcctgagcgccagcctggg cgaccgggtgaccatcagctgccgggccagccaggacatcagcaagt acctgaactggtatcagcagaagcccgacggcaccgtcaagctgctga tctaccacaccagccggctgcacagcggcgtgcccagccggtttagcg gcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaac aggaagatatcgccacctacttttgccagcagggcaacacactgcccta cacctttggcggcggaacaaagctggaaatcaccggcagcacctccg gcagcggcaagcctggcagcggcgagggcagcaccaagggcgag gtgaagctgcaggaaagcggccctggcctggtggcccccagccagag Sequência que 25 cctgagcgtgacctgcaccgtgagcggcgtgagcctgcccgactacgg codifica scFv cgtgagctggatccggcagccccccaggaagggcctggaatggctgg gcgtgatctggggcagcgagaccacctactacaacagcgccctgaag agccggctgaccatcatcaaggacaacagcaagagccaggtgttcct gaagatgaacagcctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcg ccaagcactactactacggcggcagctacgccatggactactggggcc agggcaccagcgtgaccgtgagcagc
X1PPX2P 26 X1 é glicina, cisteína ou argininae Dobradiça X2 é cisteína ou treonina Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 27 Dobradiça Cys Pro 28 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Dobradiça
ELKTPLGDTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKS 29 Dobradiça
CDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCP 30 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Dobradiça 31 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Dobradiça 32 Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Dobradiça 33 Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Dobradiça Glu Val Val Val Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys 34 Dobradiça Pro 35 RASQDISKYLN CDR L1 36 SRLHSGV CDR L2 37 GNTLPYTFG CDR L3 38 DYGVS CDR H1 39 VIWGSETTYYNSALKS CDR H2 40 YAMDYWG CDR H3
EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVS
WIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIK 41 VH
DNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYA MDYWGQGTSVTVSS
DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWY 42 QQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDY VL
SLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWY QQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDY
SLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITG 43 STSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQS scFv
LSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIW GSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTD
DTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS 44 KASQNVGTNVA CDR L1 45 SATYRNS CDR L2 46 QQYNRYPYT CDR L3 47 SYWMN CDR H1 48 QIYPGDGDTNYNGKFKG CDR H2 49 KTISSVVDFYFDY CDR H3
EVKLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMN
WVKQRPGQGLEWIGQIYPGDGDTNYNGKFKGQAT 50 VH
LTADKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYFCARKTISSVV DFYFDYWGQGTTVTVSS DIELTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAW
YQQKPGQSPKPLIYSATYRNSGVPDRFTGSGSGTD 51 VL
FTLTITNVQSKDLADYFCQQYNRYPYTSGGGTKLEI
KR 52 GGGGSGGGGSGGGGS Ligante
EVKLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMN WVKQRPGQGLEWIGQIYPGDGDTNYNGKFKGQAT LTADKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYFCARKTISSVV
DFYFDYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSD 53 scFv
IELTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWY QQKPGQSPKPLIYSATYRNSGVPDRFTGSGSGTDF TLTITNVQSKDLADYFCQQYNRYPYTSGGGTKLEIK
R 54 HYYYGGSYAMDY CDR H3 55 HTSRLHS CDR L2 56 QQGNTLPYT CDR L3 57 ACACGGCCTCGTGTATTACTGT Iniciador IGH 58 ACCTGAGGAGACGGTGACC Iniciador IGH

Claims (108)

REIVINDICAÇÕES
1. Método de tratamento de um indivíduo que tem leucemia linfocítica crônica (CLL) ou linfoma linfocítico pequeno (SLL), caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao indivíduo uma dose de células T manipuladas que compreendem células T CD4+ e CD8+, as células T CD4+ e CD8+ células que compreendem um receptor antigênico quimérico (CAR) que se liga especificamente à CD19, em que a dose de células T manipuladas (i) é enriquecida em células T CD4+ e CD8+ humanas primárias; (ii) compreende uma proporção definida de células CD4+ que expressam o CAR para células CD8+ que expressam o CAR, opcionalmente em que a proporção está entre aproximadamente 1:3 e aproximadamente 3:1, e (iii) compreende igual ou cerca de 2,5 x 107 células que expressam CAR no total ou cerca de 1,5 x 108 células que expressam CAR no total.
2. Método de tratamento de um indivíduo que tem leucemia linfocítica crônica (CLL) ou linfoma linfocítico pequeno (SLL), caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao indivíduo uma dose de células T manipuladas que compreendem células T CD4+ e CD8+, as células T CD4+ e CD8+ compreendendo um receptor antigênico quimérico (CAR) que se liga especificamente à CD19, em que o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com, tornou-se refratário ao tratamento com, não obteve sucesso e/ou é intolerante a um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTKi) e venetoclax.
3. Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o BTKi é ibrutinibe.
4. Método de tratamento de um indivíduo que tem leucemia linfocítica crônica (CLL) ou linfoma linfocítico pequeno (SLL), caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao indivíduo uma dose de células T manipuladas que compreendem células T CD4+ e CD8+, as células T CD4+ e CD8+ compreendendo um receptor antigênico quimérico (CAR) que se liga especificamente à CD19, em que o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com, tornou-se refratário ao tratamento com, não obteve sucesso e/ou é intolerante ao ibrutinibe e venetoclax.
5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 4, caracterizado pelo fato de que a dose de células T manipuladas é enriquecida em células T CD4+ e CD8+ humanas primárias.
6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 5, caracterizado pelo fato de que a dose de células T manipuladas compreende uma proporção definida de células CD4+ que expressam o CAR para células CD8+ que expressam o CAR, opcionalmente em que a proporção está entre aproximadamente 1:3 e aproximadamente 3:1.
7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a administração compreende administrar uma pluralidade de composições separadas, em que a pluralidade de composições separadas compreende uma primeira composição que compreende uma das células T CD4+ e as células T CD8+ e uma segunda composição que compreende a outra das células T CD4+ e as células T CD8+.
8. Método de tratamento de um indivíduo que tem ou suspeito de ter leucemia linfocítica crônica (CLL) ou linfoma linfocítico pequeno (SLL), caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao indivíduo uma dose de células T manipuladas que compreendem células T CD4+ e CD8+, as células CD4+ e CD8+ compreendendo um CAR que se liga especificamente à CD19, em que a administração compreende administrar uma pluralidade de composições separadas, em que a pluralidade de composições separadas compreende uma primeira composição que compreende uma das células T CD4+ e as células T CD8+ e uma segunda composição que compreende a outra das células T CD4+ e as células T CD8+.
9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que a dose de células T manipuladas compreende uma proporção definida de células CD4+ que expressam o CAR para células CD8+ que expressam o CAR que está entre aproximadamente 1:3 e aproximadamente 3:1.
10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 9, caracterizado pelo fato de que a dose de células T manipuladas compreende igual ou cerca de 2,5 x 107 células que expressam CAR no total ou cerca de 1,5 x 108 células que expressam CAR no total.
11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 10, caracterizado pelo fato de que a dose de células T modificadas é enriquecida em células T CD4+ e CD8+ humanas primárias.
12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que a dose de células T manipuladas enriquecidas em células T CD4+ e CD8+ humanas primárias compreende mais ou mais de cerca de 70 %, mais ou mais de cerca de 75 %, mais ou mais de cerca de 80 %, mais ou mais de cerca de 85 %, mais ou mais de cerca de 90 %, mais ou mais de cerca de 95 % ou mais ou mais de cerca de 98 % de células T CD4+ e CD8+ humanas primárias.
13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que a dose de células T manipuladas compreende uma proporção definida de células CD4+ que expressam o CAR para células CD8+ que expressam o CAR que é ou é de aproximadamente 1:1.
14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que a dose de células T manipuladas compreende igual ou cerca de 2,5 x 107 células que expressam CAR no total ou cerca de 1,0 x 108 células que expressam CAR no total.
15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que a dose de células T manipuladas compreende cerca de 2,5 x 107 células que expressam CAR no total.
16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que a dose de células T manipuladas compreende cerca de 5 x 107 células no total ou células que expressam CAR no total.
17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que a dose de células T manipuladas compreende cerca de 1 x 108 células no total ou células que expressam CAR no total.
18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que o CAR compreendido pelas células T CD4+ e/ou o CAR compreendido pelas células T CD8+ compreende um CAR que é o mesmo e/ou em que as células T CD4+ e/ou as células T CD8+ são geneticamente manipuladas para expressar um CAR que é o mesmo.
19. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 18, caracterizado pelo fato de que a primeira composição compreende as células T CD8+ e a segunda composição compreende as células T CD4+.
20. Método, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que o início da administração da primeira composição é realizado antes do início da administração da segunda composição.
21. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 20, caracterizado pelo fato de que a administração da primeira composição e a administração da segunda composição são realizadas em não mais de 48 horas de intervalo.
22. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 21, caracterizado pelo fato de que a administração da primeira composição e a administração da segunda composição são realizadas em não mais de 36 horas de intervalo, não mais de 24 horas de intervalo, não mais de 12 horas de intervalo, não mais de 6 horas de intervalo, não mais de 4 horas de intervalo, não mais de 2 horas de intervalo, não mais de 1 hora de intervalo ou não mais de 30 minutos de intervalo.
23. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 22, caracterizado pelo fato de que: a administração da primeira composição e a administração da segunda composição são realizadas no mesmo dia, são realizadas entre cerca de 0 e cerca de 12 horas de intervalo, entre cerca de 0 e cerca de 6 horas de intervalo ou entre cerca de 0 e cerca de 2 horas de intervalo; ou o início da administração da primeira composição e o início da administração da segunda composição são realizados entre cerca de 1 minuto e cerca de 1 hora de intervalo ou entre cerca de 5 minutos e cerca de 30 minutos de intervalo.
24. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 23, caracterizado pelo fato de que a primeira composição e a segunda composição são administradas em não mais de 2 horas, não mais de 1 hora, não mais de 30 minutos, não mais de 15 minutos, não mais de 10 minutos ou não mais de 5 minutos de intervalo.
25. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizado pelo fato de que: o indivíduo tem CLL ou é suspeito de ter CLL; ou o indivíduo é identificado ou selecionado como tendo CLL.
26. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizado pelo fato de que a CLL é um CLL recidivante ou refratária.
27. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
1 a 26, caracterizado pelo fato de que: o indivíduo tem SLL ou é suspeito de ter SLL; ou o indivíduo é identificado ou selecionado como tendo SLL.
28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24 e 27, caracterizado pelo fato de que a SLL é um SLL recidivante ou refratário.
29. Método, de acordo com as reivindicações 1 a 28, caracterizado pelo fato de que, antes da administração da dose de células T manipuladas, o indivíduo foi tratado com uma ou mais terapias anteriores para CLL ou SLL, diferente de outra dose de células que expressam CAR ou uma terapia de linfodepleção.
30. Método, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que a uma ou mais terapias anteriores compreendem pelo menos duas terapias anteriores, opcionalmente 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou mais terapias anteriores.
31. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 30, caracterizado pelo fato de que, no momento ou imediatamente antes do momento da administração da dose de células T manipuladas, o indivíduo apresentou recidiva seguido de remissão após tratamento com ou tornou-se refratário a, não obteve sucesso e/ou era intolerante ao tratamento com uma ou mais terapias anteriores para CLL ou SLL.
32. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 31, caracterizado pelo fato de que, no momento ou imediatamente antes do momento da administração da dose de células T manipuladas, o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com ou tornou-se refratário a, não obteve sucesso e/ou era intolerante ao tratamento com duas ou mais terapias anteriores.
33. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, caracterizado pelo fato de que, no momento ou imediatamente antes do momento da administração da dose de células T manipuladas,
o indivíduo apresentou recidiva seguido de remissão após tratamento com ou tornou-se refratário a, não obteve sucesso e/ou era intolerante ao tratamento com três ou mais terapias anteriores.
34. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 33, caracterizado pelo fato de que uma ou mais terapias anteriores são selecionadas a partir de um inibidor de quinase, opcionalmente um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTK), opcionalmente ibrutinibe; venetoclax; uma terapia combinada que compreende fludarabina e rituximabe; radioterapia; e transplante de células-tronco hematopoéticas (HSCT).
35. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 35, caracterizado pelo fato de que uma ou mais terapias anteriores compreendem um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTK) e/ou venetoclax.
36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 35, caracterizado pelo fato de que uma ou mais terapias anteriores compreendem ibrutinibe e/ou venetoclax.
37. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 36, caracterizado pelo fato de que uma ou mais terapias anteriores compreendem ibrutinibe e venetoclax.
38. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 37, caracterizado pelo fato de que o indivíduo apresentou recidiva seguido de remissão após tratamento com, tornou-se refratário ao tratamento com, não obteve sucesso e/ou é intolerante a um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTK) e/ou venetoclax.
39. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 38, caracterizado pelo fato de que o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão, após tratamento com, tornou-se refratário, não obteve sucesso e/ou é intolerante ao tratamento com ibrutinibe e venetoclax.
40. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 39, caracterizado pelo fato de que, durante ou antes da administração da dose de células: o indivíduo é ou foi identificado como tendo uma ou mais anormalidades citogenéticas, opcionalmente associadas à CLL ou SLL de alto risco, opcionalmente selecionadas a partir de: cariótipo complexo ou anormalidades citogenéticas, del 17p, gene IGVH não mutante e mutação TP53; e/ou o indivíduo é ou foi identificado como tendo CLL ou SLL de alto risco.
41. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 40, caracterizado pelo fato de que, durante ou antes da administração da dose de células: o indivíduo é ou foi identificado como tendo uma ou mais anormalidades citogenéticas, opcionalmente associadas à CLL de alto risco, opcionalmente selecionadas a partir de: cariótipo complexo ou anormalidades citogenéticas, del 17p, gene IGVH não mutante e mutação TP53; e/ou o indivíduo é ou foi identificado como tendo CLL de alto risco.
42. Método, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que, no momento ou imediatamente antes do momento da administração da dose de células, o indivíduo apresentou recidiva seguido de remissão após tratamento com ou tornou-se refratário, não obteve sucesso e/ou era intolerante ao tratamento com dois ou mais terapias anteriores.
43. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 40, caracterizado pelo fato de que, durante ou antes da administração da dose de células, o indivíduo é ou foi identificado como tendo um CLL ou SLL de risco padrão.
44. Método, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que, no momento ou imediatamente antes do momento da administração da dose de células, o indivíduo apresentou recidiva seguido de remissão após tratamento com ou tornou-se refratário, não obteve sucesso e/ou era intolerante ao tratamento com três ou mais terapias anteriores.
45. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 44, caracterizado pelo fato de que, durante ou antes da administração da dose de células, o indivíduo é ou foi identificado como sendo intolerante a um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTK) e recebeu um inibidor de BTK durante um período de menos de ou cerca de 6 meses e/ou não é elegível para tratamento com um inibidor de BTK.
46. Método, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato de que: (i) o indivíduo é ou foi identificado como tendo CLL ou SLL de alto risco e, no momento ou imediatamente antes do momento da administração da dose de células, o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com ou tornou-se refratário a, não obteve sucesso e/ou era intolerante ao tratamento com uma ou mais terapias anteriores diferentes do inibidor de BTK; ou (ii) o indivíduo é ou foi identificado como tendo um CLL ou SLL de risco padrão e, no momento ou imediatamente antes do momento da administração da dose de células, o indivíduo teve uma recidiva seguido de remissão após tratamento com ou tornou-se refratário a, não obteve sucesso e/ou era intolerante ao tratamento com duas ou mais terapias anteriores diferentes do inibidor de BTK.
47. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 46, caracterizado pelo fato de que: o indivíduo é ou foi identificado como tendo um estado no ECOG de 0 ou 1; e/ou o indivíduo não tem um estado no ECOG de > 1.
48. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 47, caracterizado pelo fato de que, em ou imediatamente antes da administração da dose de células manipuladas ou da terapia de linfodepleção, o indivíduo não tem uma transformada de Richter de CLL ou SLL.
49. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 48, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um adulto e/ou tem mais de 50, 60 ou 70 anos de idade.
50. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 49, caracterizado pelo fato de que as células T manipuladas são células T primárias obtidas de um indivíduo.
51. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 50, caracterizado pelo fato de que as células T manipuladas são autólogas ao indivíduo.
52. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 51, caracterizado pelo fato de que a dose de células manipuladas são células viáveis.
53. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 52, caracterizado pelo fato de que compreende ainda, antes da administração da dose de células T manipuladas, administrar uma terapia de linfodepleção ao indivíduo.
54. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 53, caracterizado pelo fato de que o método compreende ainda precondicionar o indivíduo com uma terapia de linfodepleção.
55. Método, de acordo com a reivindicação 53 ou 54, caracterizado pelo fato de que a terapia de linfodepleção compreende administrar fludarabina e/ou ciclofosfamida.
56. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 55, caracterizado pelo fato de que a terapia de linfodepleção compreende administrar ciclofosfamida a cerca de 200-400 mg/m2,
opcionalmente igual ou cerca de 300 mg/m2, inclusive, e/ou fludarabina em cerca de 20-40 mg/m2, opcionalmente 30 mg/m2, diariamente durante 2-4 dias, opcionalmente durante 3 dias.
57. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 56, caracterizado pelo fato de que a terapia de linfodepleção compreende administrar ciclofosfamida em ou cerca de 300 mg/m2 e fludarabina em cerca de 30 mg/m2 diariamente durante 3 dias, opcionalmente em que a dose de células é administrada pelo menos em ou cerca de 2-7 dias após a terapia de linfodepleção ou pelo menos ou cerca de 2-7 dias após o início da terapia de linfodepleção.
58. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 57, caracterizado pelo fato de que a administração da dose de células T manipuladas e/ou da terapia de linfodepleção é realizada por meio de atendimento ambulatorial.
59. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58, caracterizado pelo fato de que a dose de células T manipuladas é administrada através da via parentérica, opcionalmente através da via intravenosa.
60. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 59, caracterizado pelo fato de que, dentre uma pluralidade de indivíduos tratados de acordo com o método, a resposta em pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% dos indivíduos tratados é uma taxa de resposta objetiva.
61. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 60, caracterizado pelo fato de que, dentre uma pluralidade de indivíduos tratados de acordo com o método, a resposta em pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60% ou pelo menos 70 % dos indivíduos tratados é remissão completa (CR).
62. Método, de acordo com a reivindicação 60 ou 61, caracterizado pelo fato de que a duração da resposta até progressão é durável por mais de 3 meses ou mais de 6 meses.
63. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 62, caracterizado pelo fato de que, dentre uma pluralidade de indivíduos tratados de acordo com o método, mais de 50%, mais de 60% ou mais de 70 % tinham doença residual mínima indetectável (MRD) durante pelo menos um mês, pelo menos dois meses, pelo menos três meses ou pelo menos 6 meses após administração da dose de células T manipuladas.
64. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 63, caracterizado pelo fato de que, dentre uma pluralidade de indivíduos tratados de acordo com o método, não mais de 10% dos indivíduos exibem uma síndrome de liberação de citocinas (CRS) superior ao grau 2.
65. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 64, caracterizado pelo fato de que, dentre uma pluralidade de indivíduos tratados de acordo com o método, não mais de 10 %, não mais de 20 %, não mais de 30 % ou não mais de 40 % dos indivíduos exibem neurotoxicidade superior ao grau 2.
66. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 60-64, caracterizado pelo fato de que a pluralidade de indivíduos tratados de acordo com o método compreende uma pluralidade de indivíduos que tiveram uma recidiva seguido de remissão após tratamento com, tornaram-se refratários, não obtiveram sucesso e/ou são intolerantes ao tratamento com ibrutinibe e venetoclax.
67. Método de tratamento, caracterizado pelo fato de que compreende: ensaiar uma amostra biológica quanto ao nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa, em que a amostra biológica é de um indivíduo que é um candidato ao tratamento, opcionalmente com uma terapia celular, a dita terapia celular compreendendo uma dose de células manipuladas que compreendem células T que expressam um CAR para o tratamento de uma doença ou condição, em que a amostra biológica é obtida do indivíduo antes da administração da terapia celular e/ou a dita amostra biológica não compreende o CAR e/ou as ditas células manipuladas; e comparar o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa com um nível limite, em que: (1) se o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa estiver em ou acima de um nível limite, identificar o indivíduo como em risco de desenvolver um neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular; e (2) se o nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa estiver abaixo do nível limite, identificar o indivíduo como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular.
68. Método, de acordo com a reivindicação 67, caracterizado pelo fato de que, se o indivíduo é identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior, o método compreende ainda: (i) administrar ao indivíduo a terapia celular, opcionalmente em uma dose reduzida, opcionalmente em que (a) o método compreende ainda administrar ao indivíduo um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento da neurotoxicidade; e/ou (b) a administração da terapia celular ao indivíduo é realizada ou é especificada para ser realizada em um ambiente de internação e/ou com admissão hospitalar durante um ou mais dias; ou (ii) administrar ao indivíduo um tratamento alternativo diferente da terapia celular para tratar a doença ou condição.
69. Método, de acordo com a reivindicação 67, caracterizado pelo fato de que, se o indivíduo for identificado como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular: (i) o indivíduo não recebe um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade, a menos ou até que os indivíduos exibam um sinal ou sintoma de uma toxicidade, opcionalmente em ou após o indivíduo exibir febre sustentada ou febre que é ou não foi reduzida ou não em mais de 1 °C após tratamento com um antipirético; e/ou (ii) a administração e qualquer acompanhamento são realizados em um regime ambulatorial e/ou sem internação do indivíduo em um hospital e/ou sem pernoite em um hospital e/ou sem a necessidade de admissão ou pernoite em um hospital, opcionalmente a menos ou até que o indivíduo exiba febre sustentada ou que não reduziu ou não abaixou em mais de 1°C após tratamento com um antipirético.
70. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 69, caracterizado pelo fato de que o ensaio compreende: (a) contatar uma amostra biológica com um ou mais reagentes capazes de detectar ou que são específicos para o TNF-alfa, opcionalmente em que o um ou mais reagentes compreendem um anticorpo que reconhece especificamente o TNF-alfa; e (b) detectar a presença ou ausência de um complexo que compreende um ou mais reagentes e o TNF-alfa.
71. Método de tratamento, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um indivíduo uma terapia celular para o tratamento de uma doença ou condição, a dita terapia celular compreendendo uma dose de células manipuladas que compreendem células T que expressam um CAR, em que: (1) se o indivíduo tem um nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa em uma amostra biológica do indivíduo que está em ou acima de um nível limite, o indivíduo é identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular: (i) administrar ao indivíduo a terapia celular em uma dose reduzida, (ii) administrar posteriormente ao indivíduo um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade; e/ou (iii) a administração da terapia celular ao indivíduo é realizada ou é especificada para ser realizada em um ambiente de internação e/ou com admissão hospitalar durante um ou mais dias; ou (2) se o indivíduo for selecionado ou identificado como tendo um nível, quantidade ou concentração de TNF-alfa em uma amostra biológica do indivíduo que está abaixo de um nível limite, o indivíduo é identificado como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular: (i) não administrar ao indivíduo um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade, a menos ou até que os indivíduos exibam um sinal ou sintoma de uma toxicidade, opcionalmente durante ou após o indivíduo apresentar febre sustentada ou que não reduziu ou não abaixou em mais de 1 °C após tratamento com um antipirético; e/ou (ii) a administração e qualquer acompanhamento são realizados em um regime ambulatorial e/ou sem internação do indivíduo em um hospital e/ou sem pernoite em um hospital e/ou sem a necessidade de admissão ou pernoite em um hospital, opcionalmente a menos ou até que o indivíduo exiba febre sustentada ou uma febre que é ou não foi reduzida ou não abaixou em mais de 1°C após tratamento com um antipirético, em que o indivíduo é um candidato ao tratamento com a terapia celular, a dita amostra biológica obtida do indivíduo antes da administração da terapia celular e/ou a dita amostra biológica não compreende o CAR e/ou as ditas células manipuladas.
72. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
68, 70 e 71, caracterizado pelo fato de que, se o indivíduo for identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior após administração da terapia celular, administrar o agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade, em que o agente é administrado ao indivíduo simultaneamente com a terapia celular ou dentro de três dias de administração da terapia celular ao indivíduo.
73. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 72, caracterizado pelo fato de que: o nível limite está dentro de 25 %, dentro de 20 %, dentro de 15 %, dentro de 10 % ou dentro de 5 % e/ou está dentro de um desvio padrão acima do nível, quantidade ou concentração média ou mediana ou é ou está próximo do nível, quantidade ou concentração média ou mediana do TNF-alfa em uma amostra biológica obtida de um grupo de indivíduos antes de receber uma terapia celular, em que cada um dos indivíduos do grupo não exibiu qualquer grau de neurotoxicidade após administração de uma dose de células manipuladas que expressam o CAR para o tratamento da mesma doença ou condição; o nível limite é igual ou maior do que 1,25 vezes superior ao nível, quantidade ou concentração média ou mediana do TNF-alfa em uma amostra biológica obtida de um grupo de indivíduos antes de receber uma terapia celular, em que cada um dos indivíduos do grupo não exibiu nenhum grau de neurotoxicidade após administração de uma dose de células manipuladas que expressam o CAR para o tratamento da mesma doença ou condição; o nível limite é igual ou maior do que 1,25 vezes superior ao nível, quantidade ou concentração do TNF-alfa em uma amostra biológica obtida de um grupo de indivíduos normais ou saudáveis que não são candidatos ao tratamento com a terapia celular.
74. Método de tratamento, caracterizado pelo fato de que o método compreende: (a) ensaiar uma amostra biológica de um indivíduo quanto ao nível, quantidade ou concentração de IL-16, o dito indivíduo tendo recebido a administração de uma terapia celular que compreende uma dose de células manipuladas que compreendem células T que expressam um CAR para o tratamento de uma doença ou condição, em que a amostra biológica é obtida do indivíduo dentro de um, dois ou três dias após o início da administração da terapia celular; e (b) comparar o nível, quantidade ou concentração de IL-16 com um nível limite, em que: (1) se o nível, quantidade ou concentração de IL-16 estiver em ou acima de um nível limite, identificar o indivíduo como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior; e (2) se o nível, quantidade ou concentração de IL-16 estiver abaixo do nível limite, identificar o indivíduo como sem risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior.
75. Método, de acordo com a reivindicação 74, caracterizado pelo fato de que, se o indivíduo é identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior, administrar um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade.
76. Método, de acordo com a reivindicação 74 ou 75, caracterizado pelo fato de que o ensaio compreende: (a) contatar uma amostra biológica com um ou mais reagentes capazes de detectar ou que são específicos para IL-16, opcionalmente em que o um ou mais reagentes compreendem um anticorpo que reconhece especificamente a IL-16; e (b) detectar a presença ou ausência de um complexo que compreende um ou mais reagentes e a IL-16.
77. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 74-76, caracterizado pelo fato de que compreende ainda, antes do ensaio, administrar ao indivíduo a terapia celular.
78. Método de tratamento, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um indivíduo, identificado como em risco de desenvolver neurotoxicidade de grau 3 ou superior, um agente ou outro tratamento capaz de tratar, prevenir, retardar, reduzir ou atenuar o desenvolvimento ou risco de desenvolvimento de uma toxicidade, o dito indivíduo tendo recebido anteriormente a administração de uma terapia celular para o tratamento de uma doença ou condição em que, em ou imediatamente antes da administração do agente, o indivíduo é selecionado ou identificado como estando em risco de desenvolver uma neurotoxicidade de grau 3 ou superior se o nível ou quantidade ou concentração de IL-16 em uma amostra biológica, obtida do indivíduo dentro de um, dois ou três dias após o início da administração da terapia celular, estiver acima de um nível limite.
79. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 78, caracterizado pelo fato de que a administração do agente é realizada em um momento no qual o indivíduo exibe uma febre sustentada ou uma febre que é ou não foi reduzida ou não abaixou em mais de 1°C após tratamento com um antipirético.
80. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 79, caracterizado pelo fato de que a administração da terapia celular ao indivíduo foi realizada em um regime ambulatorial e, se o nível, quantidade ou concentração de IL-16 estiver acima de um nível limite, o método compreende admissão o paciente ao hospital durante um ou mais dias.
81. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 74 a 80, caracterizado pelo fato de que o nível limite está dentro de 25% e/ou está dentro de um desvio padrão acima do nível, quantidade ou concentração média ou mediana ou é ou é cerca do nível, quantidade ou concentração média ou mediana de IL-16 em uma amostra biológica obtida a partir de um grupo de indivíduos dentro de um, dois ou três dias após receber uma terapia celular que compreende administrar uma dose de células manipuladas que expressam o CAR para o tratamento da mesma doença ou condição, em que cada um dos indivíduos do grupo não exibiu qualquer grau de neurotoxicidade após administração da terapia celular.
82. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 74 a 80, caracterizado pelo fato de que o nível limite é igual ou maior do que 1,3 vezes maior do que o nível, quantidade ou concentração média ou mediana de IL-16 em uma amostra biológica obtida de um grupo de indivíduos antes de receber uma terapia celular, em que cada um dos indivíduos do grupo não exibiu qualquer grau de neurotoxicidade após administração de uma dose de células manipuladas que expressam o CAR para o tratamento da mesma doença ou condição.
83. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 74 a 80, caracterizado pelo fato de que o nível limite é igual ou maior do que 1,3 vezes maior do que o nível, quantidade ou concentração de IL- 16 em uma amostra biológica obtida de um grupo de normais ou saudáveis indivíduos que não são candidatos ao tratamento com a terapia celular.
84. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 83, caracterizado pelo fato de que a amostra biológica é ou é obtida de uma amostra de sangue, plasma ou soro.
85. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 84, caracterizado pelo fato de que o ensaio compreende um imunoensaio.
86. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 85, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é um câncer.
87. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 86, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é um mieloma, leucemia ou linfoma.
88. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 87, caracterizado pelo fato de que a amostra biológica compreende um antígeno que é ROR1, antígeno de maturação de células B (BCMA), anidrase carbônica 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (receptor de tirosina quinase erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA e antígeno na superfície de hepatite B, receptor anti-folato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, dímeros de erbB, EGFR VIII, proteína de ligação ao folato (FBP), FCRL5, FCRH5, receptor fetal de acetilcolina, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL-13R-alfa2, receptor de domínio de inserção de quinase (kdr), cadeia leve capa, Lewis Y, molécula de adesão celular L1 (L1- CAM), antígeno associado ao melanoma (MAGE) -A1, MAGE-A3, MAGE-A6, Antígeno expresso preferencialmente em melanoma (PRAME), survivina, TAG72, B7-H6, receptor alfa 2 de IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-A1 MAGE A1, HLA- A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor- de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina avb6, 8H9, NCAM, receptores de VEGF, 5T4, AchR fetal, ligantes de NKG2D, CD44v6, antígeno duplo, um antígeno de câncer testicular, mesotelina, CMV de murino, mucina 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antígeno oncofetal, ROR1, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), Her2/neu, receptor de estrogênio, receptor de progesterona, efrina B2, CD123, c- Met, GD-2, GD2 O-acetilado (OGD2), CE7, Tumor de Wilm 1 (WT-1), uma ciclina, ciclina A2, CCL-1, CD138, Receptor 5D Acoplado à Proteína G (GPCR5D) ou um antígeno específico para patógeno.
89. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 88, caracterizado pelo fato de que a amostra biológica compreende um antígeno que é CD19.
90. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 89, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é uma malignidade de células B e/ou é leucemia linfoblástica aguda (ALL), ALL em adultos, leucemia linfoblástica crônica (CLL), linfoma linfocítico pequeno (SLL), linfoma não-Hodgkin (NHL) e linfoma difuso de células B grandes (DLBCL).
91. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 90, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é CLL ou SLL.
92. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 68 a 73 e 75 a 91, caracterizado pelo fato de que o agente ou outro tratamento é ou compreende um anticorpo anti-IL-6, anticorpo anti-IL- 6R ou um esteroide.
93. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 68 a 73 e 75 a 92, caracterizado pelo fato de que o agente é ou compreende tocilizumabe, siltuximabe ou dexametasona.
94. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 93, caracterizado pelo fato de que: o CAR compreende um domínio de ligação a antígeno extracelular específico para CD19, um domínio transmembrana, um domínio de sinalização citoplasmático derivado de uma molécula coestimuladora a qual opcionalmente é uma 4-1 BB e um domínio de sinalização citoplasmático derivado de uma molécula que contém ITAM de sinalização primária a qual é opcionalmente uma CD3zeta; o CAR compreende, nesta ordem, um domínio de ligação a antígeno extracelular específico para CD19, um domínio transmembrana, um domínio de sinalização citoplasmático derivado de uma molécula coestimuladora e um domínio de sinalização citoplasmático derivado de uma molécula que contém ITAM de sinalização primária.
95. Método, de acordo com a reivindicação 94, caracterizado pelo fato de que o domínio de ligação a antígeno é um scFv.
96. Método, de acordo com a reivindicação 95, caracterizado pelo fato de que: o scFv compreende uma sequência de CDRL1 de RASQDISKYLN (SEQ ID NO: 35), uma sequência de CDRL2 de SRLHSGV (SEQ ID NO: 36) e/ou uma sequência de CDRL3 de GNTLPYTFG (SEQ ID NO: 37) e/ou uma sequência de CDRH1 de DYGVS (SEQ ID NO: 38), uma sequência de CDRH2 de VIWGSETTYYNSALKS (SEQ ID NO: 39) e/ou uma sequência de CDRH3 de YAMDYWG (SEQ ID NO: 40); o scFv compreende uma região variável de cadeia pesada de FMC63 e uma região variável de cadeia leve de FMC63 e/ou uma sequência de CDRL1 de FMC63, uma sequência de CDRL2 de FMC63, uma sequência de CDRL3 de FMC63, uma sequência de CDRH1 de FMC63, uma sequência de CDRH2 de FMC63 e uma sequência de CDRH3 de FMC63 ou se liga ao mesmo epítopo ou compete pela ligação com qualquer um dos anteriores; o scFv compreende uma VH apresentada em SEQ ID NO: 41 e uma VL apresentada em SEQ ID NO: 42, opcionalmente em que a VH e a VL são separadas por um ligante flexível, opcionalmente em que o ligante flexível é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 24; e/ou o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 43.
97. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 94 a 96, caracterizado pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora é um domínio de sinalização de CD28 ou 4-1BB.
98. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 94 a 97, caracterizado pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora é um domínio de sinalização de 4-1BB.
99. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 94 a 98, caracterizado pelo fato de que o domínio coestimulador compreende SEQ ID NO: 12 ou uma variante da mesma que tem pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência com a mesma.
100. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 94 a 99, caracterizado pelo fato de que o domínio de sinalização primário é um domínio de sinalização de CD3zeta.
101. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 94 a 100, caracterizado pelo fato de que o domínio de sinalização primário compreende SEQ ID NO: 13 ou 14 ou 15 que tem pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência com as mesmas.
102. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 94 a 101, caracterizado pelo fato de que o CAR compreende ainda um espaçador entre o domínio transmembrana e o scFv.
103. Método, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo fato de que o espaçador é um espaçador polipeptídico que compreende ou consiste em toda ou uma parte de uma dobradiça de imunoglobulina ou uma versão modificada da mesma, opcionalmente uma dobradiça de IgG4 ou uma versão modificada da mesma.
104. Método, de acordo com a reivindicação 102 ou 103,
caracterizado pelo fato de que o espaçador tem cerca de 15 aminoácidos ou menos e não compreende uma região extracelular de CD28 ou uma região extracelular de CD8.
105. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 102 a 104, caracterizado pelo fato de que o espaçador tem cerca de 12 aminoácidos de comprimento.
106. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 102 a 105, caracterizado pelo fato de que: o espaçador tem ou consiste na sequência de SEQ ID NO: 1, uma sequência codificada por SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 ou uma variante de qualquer uma das anteriores que tem pelo menos 85 %, 86%, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97%, 98 %, 99 % ou mais identidade de sequência com as mesmas; e/ou compreende ou consiste na fórmula X1PPX2P, em que X1 é glicina, cisteína ou arginina e X2 é cisteína ou treonina.
107. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 106, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um ser humano.
108. Artigo de manufatura, caracterizado pelo fato de que compreende uma composição para terapia celular ou uma dentre uma pluralidade de composições para terapia celular que compreendem células T que expressam um receptor antigênico quimérico anti-CD19 (CAR) e instruções para administrar a terapia celular, em que as instruções especificam a administração da composição de células T de acordo com os métodos como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 106.
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