CN111971059A - 使用过继细胞疗法和检查点抑制剂的组合疗法 - Google Patents

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J·哈斯卡尔
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Abstract

提供了用于治疗患有疾病和病症如某些B细胞恶性肿瘤的受试者的组合疗法的方法、组合物、用途和制品，所述组合疗法涉及免疫疗法和检查点抑制剂的使用，所述免疫疗法如过继细胞疗法，例如T细胞疗法，所述检查点抑制剂如抗PD‑L1抗体或其抗原结合片段；以及提供相关的方法、组合物、用途和制品。所述细胞通常表达重组受体，如嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，所述疾病或病症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)，如复发性或难治性NHL或特定NHL亚型。

Description

使用过继细胞疗法和检查点抑制剂的组合疗法
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年1月31日提交的标题为“使用过继细胞疗法和抗PD-L1抗体的组合疗法(COMBINATION THERAPY USING ADOPTIVE CELL THERAPY AND ANTI-PD-L1ANTIBODY)”的美国临时申请号62/624,802的优先权，将其内容通过引用以其全文并入。
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技术领域
在一些方面，本公开文本涉及用于治疗患有疾病和病症如某些B细胞恶性肿瘤的受试者的组合疗法，所述组合疗法涉及免疫疗法如过继细胞疗法，例如T细胞疗法，和检查点抑制剂，如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段的使用；以及相关的方法、组合物、用途和制品。所述细胞通常表达重组受体，如嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，所述疾病或病症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)，如复发性或难治性NHL或特定NHL亚型。
背景技术
多种策略可用于免疫疗法，例如给予工程化T细胞用于过继疗法。例如，策略可用于工程化表达基因工程化抗原受体(如CAR)的T细胞，以及向受试者给予含有此类细胞的组合物。需要改进的策略来改善细胞的功效，例如，改善向受试者给予后细胞的持久性、活性和/或增殖。提供了满足此类需求的方法、组合物、试剂盒和系统。
发明内容
本文提供了涉及组合疗法的方法、组合物、用途、制品，所述组合疗法涉及向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予涉及细胞疗法(如T细胞疗法)的免疫疗法，并且随后向所述受试者给予检查点抑制剂，如免疫检查点途径的PD-1/PD-L1轴的抑制剂，如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。在一些方面，所述B细胞恶性肿瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)，如复发性或难治性NHL或特定NHL亚型。在一些方面，所提供的方法、用途和制品涉及给予T细胞疗法，如CAR表达T细胞，所述CAR包含与B细胞上表达的抗原或由B细胞恶性肿瘤的细胞表达的抗原或与所述细胞相关的抗原结合的抗原结合结构域。在一些方面，所述抗原是CD19。在一些方面，所提供的方法、用途和制品涉及给予检查点抑制剂，如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，包括在至少两个28天周期中给予所述检查点抑制剂，如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。在一些方面，例如对于给予某些检查点抑制剂，如抗PD-L1抗体或其片段，所述至少两个28天周期中的每一个包括给予为或约400mg至为或约2000mg，如为或约750mg至为或约2000mg、或为或约400mg至为或约600mg的总剂量量。在一些实施方案中，第一28天周期是通过给予更多数量的单独剂量的检查点抑制剂，如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段进行。在一些实施方案中，给予检查点抑制剂，如抗PD-L1抗体或其片段的第一28天周期是在起始给予所述细胞疗法的第22天与第36天之间的时间起始的。
本文提供了治疗方法，其涉及：(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；并且(b)随后向所述受试者给予检查点抑制剂，所述检查点抑制剂为能够阻断免疫检查点途径蛋白的抗体或其抗原结合片段，其中在至少两个剂量周期中的每一个中给予所述检查点抑制剂的总剂量量，其中所述至少两个剂量周期中的第一剂量周期中所述检查点抑制剂的所述总剂量量：等于或小于第二和/或随后的剂量周期中给予的所述总剂量量；并且在所述第一剂量周期的过程中以多于一个单独剂量给予，其中单独剂量的数量大于在所述第二和/或随后的剂量周期中给予的单独剂量的数量。
本文提供了治疗方法，其涉及向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予检查点抑制剂，所述检查点抑制剂为能够阻断免疫检查点途径蛋白的抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原，其中在至少两个剂量周期中的每一个中给予所述检查点抑制剂的总剂量量，其中所述至少两个剂量周期中的第一剂量周期中所述检查点抑制剂的所述总剂量量：等于或小于第二和/或随后的剂量周期中给予的所述总剂量量；并且在所述第一剂量周期的过程中以多于一个单独剂量给予，其中单独剂量的数量大于在所述第二和/或随后的剂量周期中给予的单独剂量的数量。
在一些任何此类实施方案中，所述剂量周期是21天周期。在一些任何此类实施方案中，所述剂量周期是28天周期。
在一些任何此类实施方案中，所述至少两个剂量周期中的第一剂量周期中的所述总剂量量与所述至少两个剂量周期中的第二剂量周期中的所述总剂量量相同。
在一些任何此类实施方案中，所述至少两个剂量周期中的第一剂量周期包括2、3、4或更多个单独剂量。
在一些任何此类实施方案中，所述剂量周期是28天周期并且所述至少两个28天周期中的第一28天周期的所述单独剂量被给予为四个剂量，各自每周一次(Q1W)；两个剂量，各自为Q1W剂量，持续连续两周；或两个剂量，各自为Q1W剂量，持续连续两周，且之后是两周一次(Q2W)一个剂量。
在一些任何此类实施方案中，所述至少两个剂量周期中的每一个包括独立地给予为或约400mg至为或约2000mg的总剂量量的所述检查点抑制剂。
在一些任何此类实施方案中，所述检查点抑制剂阻断选自PD-L1、PD-L2、PD-1和CTLA-4的免疫检查点途径蛋白。
在一些任何此类实施方案中，所述检查点途径是PD-1/PD-L1并且所述检查点抑制剂是抗PD-1抗体。在一些任何此类实施方案中，所述检查点抑制剂是纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)或西米普利单抗(cemiplimab)。在一些任何此类实施方案中，所述至少两个剂量周期中的每一个包括独立地给予为或约400mg至为或约600mg，任选地为或约480mg的总剂量量。
在一些任何此类实施方案中，所述检查点途径是PD-1/PD-L1并且所述检查点抑制剂是抗PD-L1抗体。在一些任何此类实施方案中，所述至少两个剂量周期中的每一个包括独立地给予750mg至2000mg，任选地为或约1500mg的总剂量量。
在一些任何此类实施方案中，所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在这样的时间起始的，所述时间是在以下各项时或之后，任选地以下各项之后立即或在以下各项之后1至3天内：(i)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平；(ii)在所述血液中已经可检测到之后，在所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量不可检测或减少了，任选地与在给予所述T细胞疗法之后的在前时间点相比减少了；(iii)所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量减少了或减少超过在起始给予所述T细胞疗法之后在所述受试者的血液中可检测到的所述T细胞疗法的峰值或最大细胞数量的1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多；(iv)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平之后的时间，在来自所述受试者的血液中可检测到的所述细胞的细胞数量或源自所述细胞的细胞数量为所述受试者的血液中的总外周血单核细胞(PBMC)的少于10％、少于5％、少于1％或少于0.1％；(v)所述受试者在用所述T细胞疗法治疗之后展现出疾病进展和/或在缓解后已经复发；和/或(iv)与在给予所述细胞之前或之后以及在起始给予所述检查点抑制剂之前的时间的肿瘤负荷相比，所述受试者展现出增加的肿瘤负荷。
在一些任何此类实施方案中，所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在如下时间时或在如下时间内起始的：起始给予所述T细胞疗法之后29天、36天、43天或50天。在一些任何此类实施方案中，所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后从或从约22天至36天起始的。在一些任何此类实施方案中，所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后29天或约29天起始的。在一些任何此类实施方案中，所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后43天或约43天起始的。
在一些任何此类实施方案中，在给予所述检查点抑制剂和/或开始所述第一剂量周期的时间，所述受试者未展现出给予所述T细胞疗法后的严重毒性。在一些任何此类实施方案中，所述严重毒性是严重细胞因子释放综合征(CRS)，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级CRS；和/或所述严重毒性是严重神经毒性，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级神经毒性。
本文提供了治疗方法，其涉及：(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤的细胞表达的靶抗原；并且(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中所述给予包括进行至少两个28天周期，其中：第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，持续所述28天周期中的连续两周，所述单独剂量中的每一个的量为或为约375mg，之后是在所述28天周期中两周一次(Q2W)一个剂量，所述一个剂量的量为或为约750mg；并且第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为一个剂量，每四周一次(Q4W)，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
本文提供了治疗方法，其涉及向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，其中：第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，持续所述28天周期的连续两周，所述单独剂量中的每一个的量为或为约375mg，之后是在所述28天周期中两周一次(Q2W)一个剂量，所述一个剂量的量为或为约750mg；并且第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为一个剂量，每四周一次(Q4W)，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
本文提供了治疗方法，其涉及：(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；并且(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述给予包括进行至少两个28天周期，其中：第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为四个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，持续所述28天周期，其中所述四个剂量包括各自独立地为或为约225mg的两个连续Q1W剂量，和之后的各自独立地为或为约375mg的两个连续Q1W剂量；并且第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个剂量，在所述28天周期中各自每两周一次(Q2W)，其中每个Q2W给予的量各自独立地为或为约750mg。
本文提供了治疗方法，其涉及向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，所述嵌合抗原受体特异性结合至所述B细胞恶性肿瘤上表达的靶抗原，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包括进行至少两个28天周期，其中：第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为四个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，持续所述28天周期，其中所述四个单独剂量包括各自独立地为或为约225mg的两个连续Q1W剂量，和之后的各自独立地为或为约375mg的两个连续Q1W剂量；并且第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个单独剂量，每两周一次(Q2W)，持续所述第二和/或随后的28天周期，其中每个剂量的量独立地为或为约750mg。
本文提供了治疗方法，其涉及：(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；并且(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述给予包括进行至少两个28天周期，其中：第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，其中所述两个剂量中的每一个独立地包含为或约375mg的量，任选地其中所述两个剂量是连续Q1W剂量，任选地其中所述两个剂量在所述28天周期中的第15天和第22天给予；并且第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：在所述第二和/或随后的28天周期中Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
本文提供了治疗方法，其涉及向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，所述嵌合抗原受体特异性结合至所述B细胞恶性肿瘤上表达的靶抗原，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，其中：第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，其中所述两个剂量中的每一个独立地包含为或约375mg的量，任选地其中所述两个剂量是连续Q1W剂量，任选地其中所述两个剂量在所述28天周期中的第15天和第22天给予；并且第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：在所述第二和/或随后的28天周期中Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
本文提供了治疗方法，其涉及：(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；并且(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中：所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，所述至少两个28天周期中的每一个包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或抗原结合片段；并且在所述至少两个28天周期中的至少一个中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过在所述至少一个28天周期的过程中给予多于一个单独剂量的所述抗体或片段进行。
本文提供了治疗方法，其涉及向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原，其中：所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，所述至少两个28天周期中的每一个独立地包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或抗原结合片段；并且在所述至少两个28天周期中的至少一个中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过在所述至少一个28天周期的过程中给予多于一个单独剂量的所述抗体或片段进行。
在一些任何此类实施方案中，在所述至少两个28天周期中的第一28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与第二和/或随后的28天周期中的给予相比给予更多数量的单独剂量的所述抗体或片段进行。
在一些任何此类实施方案中，每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量独立地在为或约750mg与为或约1500mg之间。在一些任何此类实施方案中，所述28天周期中的至少一个中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约750mg。在一些任何此类实施方案中，所述28天周期中的至少一个中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1200mg。在一些任何此类实施方案中，所述28天周期中的至少一个中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
在一些任何此类实施方案中，每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量独立地为或为约1500mg。
在一些任何此类实施方案中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量在所述至少两个28天周期中的至少两个中、且任选地所述至少两个28天周期中是相同的总剂量量。在一些任何此类实施方案中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量在所述至少两个28天周期中的至少两个中是不同的，或在所述至少两个28天周期中的每一个中是不同的。在一些任何此类实施方案中，所述至少两个28天周期中的第一28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量低于所述至少两个28天周期中的第二和/或随后的28天周期。
在一些任何此类实施方案中，所述至少两个28天周期中的第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括给予2、3或4个单独剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
在一些任何此类实施方案中，所述至少两个28天周期中的第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据选自以下的给药时间表将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为单独剂量：(i)两个单独剂量，在所述28天周期内各自每周一次(Q1W)，任选地在所述28天周期的第15天和第22天；(ii)四个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，持续所述28天周期，任选地在所述28天周期的第1天、第8天、第15天和第22天；(iii)两个单独剂量，各自Q1W，持续所述28天周期的连续两周，任选地在所述周期的第1天和第8天，之后是在所述28天周期中两周一次(Q2W)一个剂量，任选地在所述周期的第15天；或(iv)两个单独剂量，各自每两周一次(Q2W)，持续所述28天周期，任选地在所述28天周期的第1天和第15天。
在一些任何此类实施方案中，在所述第一28天周期中给予的每个Q1W剂量独立地为所述第一28天周期中给予的所述总剂量量的从或从为或约18％至为或约32％，任选地为所述第一28天周期中给予的所述总剂量量的25％或约25％；和/或在所述第一28天周期中给予的每个Q2W剂量独立地为所述第一28天周期中的所述总剂量量的从或从为或约40％至为或约62.5％，任选地为所述第一28天周期中给予的所述总剂量量的50％或约50％。
在一些任何此类实施方案中，所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据给药时间表(iii)给予所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中Q1W持续连续两周的所述两个单独剂量中的每一个的量各自独立地为或为约375mg，之后Q2W一次的一个剂量的量为或为约750mg；所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据(ii)中所示的给药时间表给予所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中所述四个单独Q1W剂量包括量为或为约225mg的两个连续Q1W剂量和之后的量为或为约375mg的两个连续Q1W剂量；或者所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据(i)中所示的给药时间表给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段，其中所述两个单独Q1W剂量中的每一个以为或约375mg的量进行两个连续Q1W剂量。
在一些任何此类实施方案中，所述至少两个28天周期中的第一28天周期中的总剂量量的给予包括根据选自以下的给药时间表给予单独剂量：(i)两个单独剂量，在所述28天周期的第15天或约第15天和第22天或约第22天；(ii)四个单独剂量，在所述28天周期的第1天或约第1天、第8天或约第8天、第15天或约第15天和第22天或约第22天；(iii)两个单独剂量，在所述28天周期的第1天或约第1天和第8天或约第8天，之后是一个剂量，在所述周期的第15天或约第15天；或(iv)两个剂量，在所述28天周期的第1天或约第1天和所述28天周期的第15天或约第15天。
在一些任何此类实施方案中，所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据给药时间表(iii)给予所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中所述两个单独剂量中的每一个包含在所述28天周期的第1天或约第1天和第8天或约第8天的为或约375mg的量，之后的一个剂量在所述周期的第15天或约第15天，量为或为约750mg；所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据(ii)中所示的给药时间表给予所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中所述四个单独剂量包括在第1天或约第1天和第8天或约第8天的量为或为约225mg的两个连续剂量，之后是在所述28天周期的第15天或约第15天和第22天或约第22天的量为或为约375mg的两个连续剂量；或者所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据(i)中所示的给药时间表给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段，其中所述两个单独剂量中的每一个包括在所述28天周期的第15天或约第15天和第22天或约第22天的量为或为约375mg的两个连续剂量。
在一些任何此类实施方案中，所述第二和/或随后的28天周期中的所述总剂量量的给予独立地包括给予1或2个剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
在一些任何此类实施方案中，所述第二和/或随后的28天周期中的所述总剂量量的给予独立地包括选自以下的给药时间表：(i)两个单独剂量，各自每两周一次(Q2W)，持续所述第二和/或随后的28天周期，任选地在所述第二和/或随后的周期的第1天和第15天；或(ii)一个剂量，在所述第二和/或随后的28天周期中每四周一次(Q4W)，任选地在所述第二和/或随后的周期的第1天。
在一些任何此类实施方案中，所述第二和/或随后的28天周期的每个Q2W剂量为或为约所述第二和/或随后的28天周期的所述总剂量量的50％；和/或所述第二和/或随后的28天周期的所述Q4W剂量为或为约所述第二和/或随后的28天周期的所述总剂量量。
在一些任何此类实施方案中，所述第二和/或随后的剂量包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q2W给予两个剂量，所述两个剂量的量为或为约750mg；或所述第二和/或随后的剂量包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
在一些任何此类实施方案中，至少两个28天周期进一步包括第三28天周期和/或其中所述随后的28天周期是第三28天周期。在一些任何此类实施方案中，所述第三28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量与所述第一和/或所述第二28天周期中给予的所述总剂量量相同。在一些任何此类实施方案中，所述第三28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
在一些任何此类实施方案中，(a)在所述第三28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与所述第一和/或第二28天周期中的相比以更多数量的单独剂量给予所述抗体或片段进行；或(b)在所述第三28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与所述第二28天周期相比给予相同数量的剂量的所述抗体或片段进行。
在一些任何此类实施方案中，所述第三28天周期中的所述总剂量量的给予包括在所述第三28天周期中每四周一次(Q4W)给予一个剂量，任选地在所述第三28天周期的第1天。
在一些任何此类实施方案中，所述至少两个28天周期中的第一28天周期是在这样的时间起始的，所述时间：(a)在起始给予所述T细胞疗法的第22天与第36天之间；或(b)在以下各项时或之后，任选地以下各项之后立即或在以下各项之后1至3天内：(i)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平；(ii)在所述血液中已经可检测到之后，在所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量不可检测或减少了，任选地与在给予所述T细胞疗法之后的在前时间点相比减少了；(iii)所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量减少了或减少超过在起始给予所述T细胞疗法之后在所述受试者的血液中可检测到的所述T细胞疗法的峰值或最大细胞数量的1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多；(iv)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平之后的时间，在来自所述受试者的血液中可检测到的所述细胞的细胞数量或源自所述细胞的细胞数量为所述受试者的血液中的总外周血单核细胞(PBMC)的少于10％、少于5％、少于1％或少于0.1％；(v)所述受试者在用所述T细胞疗法治疗之后展现出疾病进展和/或在缓解后已经复发；和/或(iv)与在给予所述细胞之前或之后以及在起始给予所述抗PD-L1抗体之前的时间的肿瘤负荷相比，所述受试者展现出增加的肿瘤负荷。
在一些任何此类实施方案中，所述至少两个28天周期中的第一28天周期是在起始给予所述T细胞疗法的第22天与第36天之间的时间起始的。在一些任何此类实施方案中，所述至少两个28天周期包括不超过三个28天周期，任选地其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期是在第22天或约第22天与第36天或约第36天之间起始的。在一些任何此类实施方案中，所述至少两个28天周期中的第一28天周期是在起始给予所述T细胞疗法之后的第29天或约第29天起始的。在一些任何此类实施方案中，所述至少两个28天周期中的第一28天周期是在起始给予所述T细胞疗法之后的第43天或约第43天起始的。
本文提供了治疗方法，其涉及：(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；并且(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中抗体或抗原结合片段的给予包括进行一至三个28天周期，每个周期包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或片段，任选地其中所述一至三个28天周期中的第一28天周期在起始所述T细胞疗法之后的第22天或约第22天与第36天或约第36天之间，任选地在第29天开始。
本文提供了治疗方法，其涉及向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原，其中所述抗体或抗原结合片段的给予包括进行一至三个28天周期，每个周期包括给予900mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或片段，任选地其中所述一至三个28天周期中的第一28天周期在起始所述T细胞疗法之后的第22天或约第22天与第36天或约第36天之间，任选地在约第29天开始。
提供了治疗方法，其涉及：(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞；并且(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中：所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，所述至少两个28天周期中的每一个独立地包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或抗原结合片段；并且在所述至少两个28天周期中的至少一个中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过在所述至少一个28天周期的过程中给予多于一个单独剂量的所述抗体或片段进行。
在此提供了治疗方法，其涉及：向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞，其中：所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，所述至少两个28天周期中的每一个独立地包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或抗原结合片段；并且在所述至少两个28天周期中的至少一个中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过在所述至少一个28天周期的过程中给予多于一个单独剂量的所述抗体或片段进行。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，在所述至少两个28天周期中的第一28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与第二和/或随后的28天周期中的给予相比给予更多数量的单独剂量的所述抗体或片段进行。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量独立地在为或约750mg与为或约1500mg之间。在一些实施方案中，所述28天周期中的至少一个中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约750mg。在一些实施方案中，所述28天周期中的至少一个中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1200mg。在一些实施方案中，所述28天周期中的至少一个中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量独立地为或为约1500mg。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量在所述至少两个28天周期中的至少两个中、且任选地所述至少两个28天周期中是相同的总剂量量。在一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量在所述至少两个28天周期中的至少两个中是不同的，或在所述至少两个28天周期中的每一个中是不同的。在一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量在所述至少两个28天周期中的第一28天周期中低于所述至少两个28天周期中的第二和/或随后的28天周期。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述至少两个28天周期中的第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括给予2、3或4个单独剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述至少两个28天周期中的第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据选自以下的给药时间表给予单独剂量：(i)每周一次(Q1W)给予两个单独剂量，任选地在所述28天周期的第15天和第22天；(ii)每周一次(Q1W)给予四个单独剂量，任选地在所述28天周期的第1天、第8天、第15天和第22天；(iii)Q1W给予两个连续剂量，任选地在所述周期的第1天和第8天，之后每两周一次(Q2W)给予一个剂量，任选地在所述周期的第15天；或(iv)每两周一次(Q2W)给予两个剂量，任选地在所述28天周期的第1天和第15天。在一些实施方案中，在所述第一28天周期中给予的每个Q1W剂量独立地为所述第一28天周期中给予的所述总剂量量的从或从为或约18％至为或约32％，任选地为所述第一28天周期中给予的所述总剂量量的25％或约25％；和/或在所述第一28天周期中给予的每个Q2W剂量独立地为所述总剂量量的从或从为或约40％至为或约62.5％，任选地为所述第一28天周期中给予的所述总剂量量的50％或约50％。在一些实施方案中，所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q1W给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量各自独立地为或为约375mg，之后Q2W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约750mg；所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q1W给予四个剂量，所述四个剂量包括为或约225mg的两个连续剂量和之后的为或约375mg的两个连续剂量；或者所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q1W给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量为或为约375mg。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述第二和/或随后的28天周期中的所述总剂量量的给予独立地包括给予1或2个剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述第二和/或随后的28天周期中的所述总剂量量的给予独立地包括选自以下的给药时间表：(i)每两周一次(Q2W)给予两个剂量，任选地在所述周期的第1天和第15天；或(ii)每四周一次(Q4W)给予一个剂量，任选地在所述周期的第1天。在一些实施方案中，所述第二和/或随后的28天周期的每个Q2W剂量为或为约所述总剂量量的50％；和/或所述第二和/或随后的28天周期的所述Q4W剂量为或为约所述总剂量量。在一些实施方案中，所述第二和/或随后的剂量包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q2W给予两个剂量，所述两个剂量的量为或为约750mg；或所述第二和/或随后的剂量包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
在此提供了治疗方法，其涉及：(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞；并且(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中所述给予包括进行至少两个28天周期，其中：第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量为或为约375mg，之后每两周一次(Q2W)给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约750mg；并且第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
在此提供了治疗方法，其涉及：向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，其中：第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量独立地为或为约375mg，且之后每两周一次(Q2W)给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约750mg；并且第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每四周一次(Q4W)给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
在此提供了治疗方法，其涉及：(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞；并且(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述给予包括进行至少两个28天周期，其中：第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予四个剂量，所述四个剂量包括各自独立地为或为约225mg的两个连续剂量，和之后的各自独立地为或为约375mg的两个连续剂量；并且第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每两周一次(Q2W)给予两个剂量，所述两个剂量的量各自独立地为或为约750mg。
在此提供了治疗方法，其涉及：向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包括进行至少两个28天周期，其中：第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予四个剂量，所述四个剂量包括各自独立地为或为约225mg的两个连续剂量，和之后的为或为约375mg的两个连续剂量；并且第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每两周一次(Q2W)给予两个剂量，所述两个剂量的量为或为约750mg。
在此提供了治疗方法，其涉及：(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞；并且(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述给予包括进行至少两个28天周期，其中：第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予两个剂量，所述两个剂量中的每一个各自独立地包含为或约375mg的量，任选地其中所述两个剂量是连续剂量，任选地其中所述两个剂量在所述28天周期中的第15天和第22天给予；并且第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
在此提供了治疗方法，其涉及：向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，其中：第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予两个剂量，所述两个剂量中的每一个独立地包含为或约375mg的量，任选地其中所述两个剂量是连续剂量，任选地其中所述两个剂量在所述28天周期中的第15天和第22天给予；并且第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，至少两个28天周期进一步包括第三28天周期和/或其中所述随后的28天周期是第三28天周期。在一些实施方案中，所述第三28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量与所述第一和/或所述第二28天周期中给予的所述总剂量量相同。在一些实施方案中，所述第三28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。在一些实施方案中，(a)在所述第三28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与所述第一和/或第二28天周期中的相比以更多数量的单独剂量给予所述抗体或片段进行；或(b)在所述第三28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与所述第二28天周期相比给予相同数量的剂量的所述抗体或片段进行。在一些实施方案中，所述第三28天周期中的所述总剂量量的给予包括每四周一次(Q4W)给予一个剂量，任选地在所述第三28天周期的第1天。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述至少两个28天周期中的第一28天周期是在这样的时间起始的，所述时间：(a)在起始给予所述T细胞疗法的第22天与第36天之间；或(b)在以下各项时或之后，任选地以下各项之后立即或在以下各项之后1至3天内：(i)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平；(ii)在所述血液中已经可检测到之后，在所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量不可检测或减少了，任选地与在给予所述T细胞疗法之后的在前时间点相比减少了；(iii)所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量减少了或减少超过在起始给予所述T细胞疗法之后在所述受试者的血液中可检测到的所述T细胞疗法的峰值或最大细胞数量的1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多；(iv)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平之后的时间，在来自所述受试者的血液中可检测到的所述细胞的细胞数量或源自所述细胞的细胞数量为所述受试者的血液中的总外周血单核细胞(PBMC)的少于10％、少于5％、少于1％或少于0.1％；(v)所述受试者在用所述T细胞疗法治疗之后展现出疾病进展和/或在缓解后已经复发；和/或(vi)与在给予所述细胞之前或之后以及在起始给予所述抗PD-L1抗体之前的时间的肿瘤负荷相比，所述受试者展现出增加的肿瘤负荷。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述至少两个28天周期包括不超过三个28天周期，任选地其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期在起始给予所述T细胞疗法之后的第22天或约第22天与第36天或约第36天之间，任选地在或在约第29天开始。
在此提供了治疗方法，其涉及：(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞；并且(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中抗体或抗原结合片段的给予包括进行一至三个28天周期，每个周期包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或片段，任选地其中所述一至三个28天周期中的第一28天周期在起始所述T细胞疗法之后的第22天或约第22天与第36天或约第36天之间，任选地在第29天开始。
在此提供了治疗方法，其涉及：向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞，其中所述抗体或抗原结合片段的给予包括进行一至三个28天周期，每个周期包括给予900mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或片段，任选地其中所述一至三个28天周期中的第一28天周期在起始所述T细胞疗法之后的第22天或约第22天与第36天或约第36天之间，任选地在约第29天开始。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量独立地为或为约1200mg至1500mg。在一些实施方案中，至少一个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1200mg。在一些实施方案中，至少一个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。在一些实施方案中，每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。在一些实施方案中，每个28天周期中的所述总剂量量包括给予1、2、3或4个剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，每个28天周期独立地包括选自以下的给药时间表：(i)每周一次(Q1W)给予四个剂量，任选地在第1天、第8天、第15天和第22天；(ii)Q1W给予两个连续剂量，任选地在第1天和第8天，之后每两周一次(Q2W)给予一个剂量，任选地在第15天；(iii)每两周一次(Q2W)给予两个剂量，任选地在第1天和第15天；或(iv)每四周一次(Q4W)给予一个剂量，任选地在第1天。
在一些任何此类实施方案中，每个28天周期独立地包括选自以下的给药时间表：(i)四个剂量，各自每周一次(Q1W)，任选地在所述28天周期的第1天、第8天、第15天和第22天；(ii)两个连续剂量，各自Q1W，任选地在第1天和第8天，之后是一个剂量，两周一次(Q2W)给予一个剂量，任选地在所述28天周期的第15天；(iii)两个剂量，各自每两周一次(Q2W)，任选地在所述28天周期的第1天和第15天；或(iv)一个剂量，每四周一次(Q4W)，任选地在所述28天周期的第1天。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在第一28天周期中的第1天、第8天和第15天，在第二28天周期中的第1天以及在第三28天周期中的第1天给予。在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在第一28天周期中的第1天、第8天、第15天和第22天，在第二28天周期中的第1天和第15天以及在第三28天周期中的第1天给予。在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在每个28天周期中的第1天给予。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，进一步涉及：如果所述受试者在所述治疗后只是展现出部分反应(PR)和/或在起始给予所述T细胞疗法和/或所述抗PD-L1抗体或片段后三个月只是展现出PR，则在一个或多个另外的28天周期中给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段。在一些任何此类实施方案中，在所述一个或多个另外的28天周期中的每一个中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段以900mg至2000mg的总剂量量，任选地以为或约1500mg的总剂量量给予。在一些实施方案中，在所述一个或多个另外的28天周期中的每一个中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段以900mg至2000mg、任选地为或约1500mg的总剂量量给予。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的总持续时间不超过12个月。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后大于21天起始的。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在这样的时间起始的，所述时间是在以下各项时或之后，任选地以下各项之后立即或在以下各项之后1至3天内：(i)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平；(ii)在所述血液中已经可检测到之后，在所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量不可检测或减少了，任选地与在给予所述T细胞疗法之后的在前时间点相比减少了；(iii)所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量减少了或减少超过在起始给予所述T细胞疗法之后在所述受试者的血液中可检测到的所述T细胞疗法的峰值或最大细胞数量的1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多；(iv)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平之后的时间，在来自所述受试者的血液中可检测到的所述细胞的细胞数量或源自所述细胞的细胞数量为所述受试者的血液中的总外周血单核细胞(PBMC)的少于10％、少于5％、少于1％或少于0.1％；(v)所述受试者在用所述T细胞疗法治疗之后展现出疾病进展和/或在缓解后已经复发；和/或(vi)与在给予所述细胞之前或之后以及在起始给予所述抗PD-L1抗体之前的时间的肿瘤负荷相比，所述受试者展现出增加的肿瘤负荷。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在如下时间时或在如下时间内起始的：起始给予所述T细胞疗法之后29天、36天、43天或50天。在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后从或从约22天至36天起始的。在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后29天或约29天起始的。在一些任何此类实施方案中，所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后43天或约43天起始的。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，在给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段和/或开始所述第一28天周期的时间，所述受试者未展现出给予所述T细胞疗法后的严重毒性。在一些实施方案中，所述严重毒性是严重细胞因子释放综合征(CRS)，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级CRS；和/或所述严重毒性是严重神经毒性，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级神经毒性。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段特异性结合至PD-L1的细胞外结构域。在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段是MEDI4736(德瓦鲁单抗(durvalumab))、MDPL3280A(阿特珠单抗(atezolizumab))、YW243.55.S70、MDX-1105(BMS-936559)、LY3300054或MSB0010718C(阿维单抗(avelumab))，或者是或包含前述任一项的抗原结合片段或区域。在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段是MEDI4736(德瓦鲁单抗)，或者是或包含其抗原结合片段或区域。在一些任何此类实施方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段是MEDI4736(德瓦鲁单抗)。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述B细胞恶性肿瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在一些实施方案中，其中，在给予所述T细胞疗法时或即将给予所述T细胞疗法的时间之前，所述受试者在用针对所述NHL的一种或多种先前疗法治疗之后在缓解后已经复发，或对于所述一种或多种先前疗法变为难治性的，所述一种或多种先前疗法任选地为除了表达所述CAR的细胞的另一剂量之外的一种或两种先前疗法，任选地其中所述先前疗法是或包含靶向CD20的药剂或蒽环类抗生素。在一些实施方案中，所述NHL包括侵袭性NHL；弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；DLBCL-NOS，任选地转化型惰性；EBV阳性DLBCL-NOS；富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤；原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)；滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)；和/或高级别B细胞淋巴瘤伴有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双/三打击)。在一些任何此类实施方案中，所述NHL包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；DLBCL-NOS；转化型惰性DLBCL-NOS；3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)；和/或高级别B细胞淋巴瘤伴有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双/三打击)。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述受试者被或已经被鉴定为具有小于或等于1的东部肿瘤协作组(Eastern Cooperative Oncology Group)(ECOG)体能状态。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述重组受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原。在一些实施方案中，所述靶抗原是B细胞抗原，任选地CD19。
在一些任何此类实施方案中，所述靶抗原是B细胞抗原。在一些任何此类实施方案中，所述靶抗原是CD19。
在一些任何此类实施方案中，所述嵌合抗原受体(CAR)包含特异性结合至靶抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域。在一些任何此类实施方案中，所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链的信号传导结构域。
在一些任何此类实施方案中，所述嵌合抗原受体(CAR)进一步包含共刺激信号传导区域，所述共刺激信号传导区域包含共刺激分子的细胞质信号传导结构域。在一些任何此类实施方案中，所述共刺激信号传导区域包含CD28或4-1BB的细胞质信号传导结构域。在一些任何此类实施方案中，所述共刺激结构域是或包含4-1BB的细胞质信号传导结构域。
在一些任何此类实施方案中，所述CAR包含对CD19具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选地是或包含4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域，并且任选地进一步包含在所述跨膜结构域与所述scFv之间的间隔子。
在一些任何此类实施方案中，所述CAR按顺序包含对CD19具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选地是或包含4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域。
在一些任何此类实施方案中，所述CAR按顺序包含对CD19具有特异性的scFv、间隔子、跨膜结构域、任选地是4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域。
在一些任何此类实施方案中，所述间隔子是多肽间隔子，所述多肽间隔子：(a)包含全部或部分免疫球蛋白铰链或其修饰形式或由其组成，或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，(b)包含全部或部分免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或其修饰形式或由其组成，和/或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，或(c)长度为或为约12个氨基酸和/或包含全部或部分免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或其修饰形式或由其组成。
在一些任何此类实施方案中，所述间隔子包含式X1PPX2P(SEQ ID NO:58)或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸。在一些任何此类实施方案中，所述间隔子包含以下各项或由其组成：SEQ ID NO:1的序列，由SEQ ID NO:2、SEQID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34编码的序列，或前述任一项的变体，所述变体具有与前述任一项的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性。在一些任何此类实施方案中，所述间隔子包含SEQ ID NO:1的序列。
在一些任何此类实施方案中，共刺激分子的所述细胞质信号传导结构域包含SEQID NO:12或其变体，所述变体具有与SEQ ID NO:12的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性，在一些任何此类实施方案中，源自含有ITAM的初级信号传导分子的所述细胞质信号传导结构域包含具有与其的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的SEQ ID NO:13或14或15。
在一些任何此类实施方案中，所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)的CDRL1序列、SRLHSGV(SEQ ID NO:36)的CDRL2序列和/或GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的CDRL3序列以及DYGVS(SEQ ID NO:38)的CDRH1序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的CDRH2序列和/或YAMDYWG(SEQ ID NO:40)的CDRH3序列。在一些任何此类实施方案中，所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含FMC63的CDRL1序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列。在一些任何此类实施方案中，所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区。在一些任何此类实施方案中，其中所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含含有在SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列的VH区。在一些任何此类实施方案中，其中所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含含有在SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的VL区。
在一些任何此类实施方案中，所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv按顺序包含任选地包含在SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列的VH、任选地包含SEQ ID NO:59的接头和任选地包含在SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的VL，和/或所述scFv包含柔性接头和/或包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列。在一些任何此类实施方案中，其中所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含在SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体(CAR)包含特异性结合所述抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体(CAR)进一步包含共刺激信号传导区域。在一些实施方案中，所述共刺激信号传导区域包含CD28或4-1BB的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域是或包含4-1BB的结构域。在一些实施方案中，所述CAR包含对所述抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、源自任选地是或包含4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域，并且任选地进一步包含在所述跨膜结构域与所述scFv之间的间隔子；所述CAR按顺序包含对所述抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选地是或包含4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域；或者所述CAR按顺序包含对所述抗原具有特异性的scFv、间隔子、跨膜结构域、任选地是4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域。在一些实施方案中，所述间隔子任选地是多肽间隔子，所述多肽间隔子：(a)包含全部或部分免疫球蛋白铰链或其修饰形式或由其组成，或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，(b)包含全部或部分免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或其修饰形式或由其组成，和/或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，或(c)长度为或为约12个氨基酸和/或包含全部或部分免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或其修饰形式或由其组成；或(d)具有以下各项或由其组成：SEQ ID NO:1的序列，由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:30、SEQ IDNO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34编码的序列，或前述任一项的变体，所述变体具有与前述任一项的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性；或(e)包含式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或其变体，所述变体具有与SEQ ID NO:12的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性；和/或所述初级信号传导结构域包含具有与其的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的SEQ ID NO:13或14或15；和/或所述scFv包含RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)的CDRL1序列、SRLHSGV(SEQ ID NO:36)的CDRL2序列和/或GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的CDRL3序列和/或DYGVS(SEQ ID NO:38)的CDRH1序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的CDRH2序列和/或YAMDYWG(SEQ ID NO:40)的CDRH3序列，或其中所述scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRL1序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或与前述任一项结合相同的表位或与前述任一项竞争结合，并且任选地其中所述scFv按顺序包含VH、任选地包含SEQ ID NO:41的接头和VL，和/或所述scFv包含柔性接头和/或包含如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，基因工程化T细胞的所述剂量包含从或从约1x105至5x108个总CAR表达T细胞、1x106至2.5x108个总CAR表达T细胞、5x106至1x108个总CAR表达T细胞、1x107至2.5x108个总CAR表达T细胞、5x107至1x108个总CAR表达T细胞，每个都包含端值。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，基因工程化T细胞的所述剂量包含至少或至少约1x105个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x105个CAR表达细胞、至少或至少约5x105个CAR表达细胞、至少或至少约1x106个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x106个CAR表达细胞、至少或至少约5x106个CAR表达细胞、至少或至少约1x107个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x107个CAR表达细胞、至少或至少约5x107个CAR表达细胞、至少或至少约1x108个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x108个CAR表达细胞、或者至少或至少约5x108个CAR表达细胞。在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，基因工程化T细胞的所述剂量包含为或约5x107个CAR表达细胞。在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，基因工程化T细胞的所述剂量包含为或约1x108个CAR表达细胞。在一些任何此类实施方案中，基因工程化T细胞的所述剂量包含为或约1.5x108个CAR表达细胞。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，肠胃外，任选地静脉内给予细胞的所述剂量。在一些实施方案中，所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述T细胞对所述受试者而言是自体的。在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述T细胞对所述受试者而言是同种异体的。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，基因工程化T细胞的所述剂量包含表达所述CAR的CD4+ T细胞和表达所述CAR的CD8+ T细胞，并且所述剂量的给予包括给予多种单独的组合物，所述多种单独的组合物包括包含所述CD4+ T细胞和所述CD8+ T细胞中的一种的第一组合物以及包含所述CD4+ T细胞或所述CD8+ T细胞中的另一种的第二组合物。在一些实施方案中，所述第一组合物和所述第二组合物的给予相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时，或者其中所述第一组合物的给予和所述第二组合物的给予在同一天进行、相隔约0至约12小时、相隔约0至约6小时或相隔约0至约2小时进行；和/或所述第一组合物的给予的起始和所述第二组合物的给予的起始相隔约1分钟至约1小时或相隔约5分钟至约30分钟进行。在一些实施方案中，所述第一组合物和所述第二组合物的给予相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟。在一些实施方案中，所述第一组合物包含所述CD4+ T细胞。在一些实施方案中，所述第一组合物包含所述CD8+ T细胞。在一些实施方案中，所述第一组合物是在所述第二组合物之前给予。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，在所述给予之前，已经用淋巴细胞清除疗法对所述受试者进行预调理，所述淋巴细胞清除疗法包括给予氟达拉滨和/或环磷酰胺。在一些实施方案中，在即将给予之前，向所述受试者给予淋巴细胞清除疗法，所述淋巴细胞清除疗法包括给予氟达拉滨和/或环磷酰胺。在一些实施方案中，所述淋巴细胞清除疗法包括每天给予约200-400mg/m2，任选地为或约300mg/m2并包含端值的环磷酰胺，和/或约20-40mg/m2，任选地30mg/m2的氟达拉滨，持续2-4天，任选地持续3天，或者其中所述淋巴细胞清除疗法包括给予约500mg/m2的环磷酰胺。在一些实施方案中，所述淋巴细胞清除疗法包括每天给予为或约300mg/m2的环磷酰胺和约30mg/m2的氟达拉滨，持续3天；和/或所述淋巴细胞清除疗法包括每天给予为或约500mg/m2的环磷酰胺和约30mg/m2的氟达拉滨，持续3天。
在本文提供的任何一种方法的一些实施方案中，所述受试者是人。
本文还提供了试剂盒，其包括：(a)T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；(b)检查点抑制剂，所述检查点抑制剂为能够阻断免疫检查点途径蛋白的抗体或其抗原结合片段，任选地其中其检查点抑制剂被配制为一个或多个单独剂量；以及(c)用于向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予所述T细胞疗法和/或所述检查点抑制剂的说明书，其中所述说明书规定根据本文所述的任何实施方案给予所述T细胞疗法和/或所述检查点抑制剂。
本文还提供了试剂盒，其包括：(a)T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；和(b)用于向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予所述T细胞疗法的说明书，其中所述说明书规定在给予所述T细胞疗法之后，所述受试者将被给予检查点抑制剂，所述检查点抑制剂为能够阻断免疫检查点途径蛋白的抗体或其抗原结合片段，其中所述说明书规定根据本文所述的任何实施方案给予所述T细胞疗法和/或所述检查点抑制剂。
本文还提供了试剂盒，其包括：(a)检查点抑制剂，所述检查点抑制剂为能够阻断免疫检查点途径蛋白的抗体或其抗原结合片段，任选地其中其检查点抑制剂被配制为一个或多个单独剂量；和(b)用于向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予所述检查点抑制剂的说明书，其中所述说明书规定在起始给予T细胞疗法之后给予所述检查点抑制剂，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原，其中所述说明书规定根据本文所述的任何实施方案给予所述T细胞疗法和/或所述检查点抑制剂。
在此提供了试剂盒，其涉及：(a)T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞；(b)抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，任选地其中所述抗PD-L1抗体或其片段被配制为一个或多个单位剂量；以及(c)用于向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予所述基因工程化细胞和/或所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的说明书，其中所述说明书包括指示：(i)所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予进行至少两个28天周期，所述至少两个28天周期中的每一个独立地包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或抗原结合片段；和(ii)在所述至少两个28天周期中的至少第一28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过给予多于一次的所述抗体或片段进行。
在此提供了治疗方法，其涉及：(a)T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞；和(b)用于向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予所述T细胞疗法的说明书，其中所述说明书规定在给予T细胞之后，所述受试者将被给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段；其中所述说明书包括指示：(i)所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予进行至少两个28天周期，所述至少两个28天周期中的每一个独立地包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或抗原结合片段；和(ii)在所述至少两个28天周期中的至少第一28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过给予多于一次的所述抗体或片段进行。
在此提供了治疗方法，其涉及：(a)抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，任选地其中所述抗PD-L1抗体或其片段被配制为一个或多个单位剂量；和(b)用于向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的说明书，其中所述说明书规定在起始给予T细胞疗法之后给予所述抗PD-L1抗体或片段，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞，其中所述说明书包括指示：(i)所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予进行至少两个28天周期，所述至少两个28天周期中的每一个独立地包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或其抗原结合片段；和(ii)在所述至少两个28天周期中的至少第一28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过给予多于一次的所述抗体或片段进行。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书进一步规定在所述至少两个28天周期中的第一28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与第二和/或随后的28天周期相比给予更多次数的所述抗体或片段进行。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的总量为或为约225mg至2000mg。在一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的总量为或为约750-1500mg。在一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段被配制为两个或更多个单位剂量，其中每个单位剂量为或为约225mg至2000mg。在一些实施方案中，每个单位剂量为或为约225mg至1500mg.
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段特异性结合至PD-L1的细胞外结构域。在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段是MEDI4736(德瓦鲁单抗)、MDPL3280A(阿特珠单抗)、YW243.55.S70、MDX-1105(BMS-936559)、LY3300054或MSB0010718C(阿维单抗)，或者是其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段是MEDI4736(德瓦鲁单抗)或是其抗原结合片段。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述重组受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原。在一些实施方案中，所述靶抗原是B细胞抗原，任选地CD19。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体(CAR)包含特异性结合所述抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链的细胞内结构域。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体(CAR)进一步包含共刺激信号传导区域。在一些实施方案中，所述共刺激信号传导区域包含CD28或4-1BB的信号传导结构域。在一些实施方案中，共刺激结构域是4-1BB的结构域。在一些实施方案中，所述CAR包含对所述抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、源自任选地是或包含4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域，并且任选地进一步包含在所述跨膜结构域与所述scFv之间的间隔子；所述CAR按顺序包含对所述抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选地是或包含4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域；或者所述CAR按顺序包含对所述抗原具有特异性的scFv、间隔子、跨膜结构域、任选地是4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域。在一些实施方案中，所述间隔子任选地是多肽间隔子，所述多肽间隔子：(a)包含全部或部分免疫球蛋白铰链或其修饰形式或由其组成，或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，(b)包含全部或部分免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或其修饰形式或由其组成，和/或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，或(c)长度为或为约12个氨基酸和/或包含全部或部分免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或其修饰形式或由其组成；或(d)具有以下各项或由其组成：SEQ ID NO:1的序列，由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34编码的序列，或前述任一项的变体，所述变体具有与前述任一项的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性；或(e)包含式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或其变体，所述变体具有与SEQ ID NO:12的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性；和/或所述初级信号传导结构域包含具有与其的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的SEQ ID NO:13或14或15；和/或所述scFv包含RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)的CDRL1序列、SRLHSGV(SEQ ID NO:36)的CDRL2序列和/或GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的CDRL3序列和/或DYGVS(SEQ ID NO:38)的CDRH1序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的CDRH2序列和/或YAMDYWG(SEQ ID NO:40)的CDRH3序列，或其中所述scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRL1序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或与前述任一项结合相同的表位或与前述任一项竞争结合，并且任选地其中所述scFv按顺序包含VH、任选地包含SEQ ID NO:41的接头和VL，和/或所述scFv包含柔性接头和/或包含如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述T细胞疗法包括从或从约1x105至5x108个总CAR表达T细胞、1x106至2.5x108个总CAR表达T细胞、5x106至1x108个总CAR表达T细胞、1x107至2.5x108个总CAR表达T细胞、5x107至1x108个总CAR表达T细胞，每个都包含端值。在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述T细胞疗法包括至少或至少约1x105个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x105个CAR表达细胞、至少或至少约5x105个CAR表达细胞、至少或至少约1x106个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x106个CAR表达细胞、至少或至少约5x106个CAR表达细胞、至少或至少约1x107个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x107个CAR表达细胞、至少或至少约5x107个CAR表达细胞、至少或至少约1x108个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x108个CAR表达细胞、或者至少或至少约5x108个CAR表达细胞。在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述T细胞疗法包括为、为约、或至少约5x107个CAR表达细胞。在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述T细胞疗法包括为、为约、或至少约1x108个CAR表达细胞。在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述T细胞疗法包括从所述受试者获得的原代T细胞。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述T细胞疗法包括对所述受试者而言自体的细胞。在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述T细胞疗法包括对所述受试者而言同种异体的细胞。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述T细胞疗法包括表达所述CAR的CD4+ T细胞和表达所述CAR的CD8+ T细胞，并且所述给予包括给予多种单独的组合物，所述多种单独的组合物包括包含所述CD4+ T细胞和所述CD8+ T细胞中的一种的第一组合物以及包含所述CD4+ T细胞或所述CD8+ T细胞中的另一种的第二组合物。在一些实施方案中，所述第一组合物和所述第二组合物的给予相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时，或者其中所述第一组合物的给予和所述第二组合物的给予在同一天进行、相隔约0至约12小时、相隔约0至约6小时或相隔约0至约2小时进行；和/或所述第一组合物的给予的起始和所述第二组合物的给予的起始相隔约1分钟至约1小时或相隔约5分钟至约30分钟进行。在一些实施方案中，所述说明书规定所述第一组合物和所述第二组合物的给予相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟。在一些实施方案中，所述第一组合物包含所述CD4+ T细胞。在一些实施方案中，所述第一组合物包含所述CD8+ T细胞。在一些实施方案中，所述说明书规定所述第一组合物是在所述第二组合物之前给予。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，进一步包括淋巴细胞清除疗法，其包括氟达拉滨和/或环磷酰胺。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述淋巴细胞清除疗法是在给予所述T细胞疗法和/或所述抗PD-L1抗体或其片段之前给予。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量独立地为在约750mg至约1500mg范围内的剂量或剂量范围。在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定至少一个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约750mg。在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定至少一个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1200mg。在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定至少一个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述至少两个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量是相同的。在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述至少两个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量是不同的。在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述第一28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量低于所述第二和/或随后的28天周期。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述第一28天周期是通过给予2、3或4个剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段进行。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述第一28天周期是通过选自以下的给药时间表进行：(i)每周一次(Q1W)给予两个剂量，任选地在第15天和第22天；(ii)每周一次(Q1W)给予四个剂量，任选地在第1天、第8天、第15天和第22天；(iii)Q1W给予两个连续剂量，任选地在第1天和第8天，之后每两周一次(Q2W)给予一个剂量，任选地在第15天；或(iv)每两周一次(Q2W)给予两个剂量，任选地在第1天和第15天。在一些实施方案中，所述说明书规定：所述第一28天周期的每个Q1W剂量独立地为所述总剂量量的从或从约18％至32％，任选地为所述周期中的所述总剂量量的25％或约25％；和/或所述第一28天周期的每个Q2W剂量独立地为所述总剂量量的从或从约40％至62.5％，任选地为所述周期的所述总剂量量的50％或约50％。在一些实施方案中，所述说明书规定：所述第一28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：Q1W给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量为或为约375mg，之后Q2W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约750mg；所述第一28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：Q1W给予四个剂量，所述四个剂量包括为或约225mg的两个连续剂量和之后的为或约375mg的两个连续剂量；或者所述第一28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：Q1W给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量为或为约375mg。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述第二和/或随后的28天周期是通过给予1或2个剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段进行。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述第二和/或随后的28天周期用选自以下的给药时间表进行：(i)每两周一次(Q2W)给予两个剂量，任选地在第1天和第15天；或(ii)每四周一次(Q4W)给予一个剂量，任选地在第1天。在一些实施方案中，所述说明书规定：所述第二和/或随后的28天周期的每个Q2W剂量为或为约所述总剂量量的50％；和/或所述第二和/或随后的28天周期的所述Q4W剂量为或为约所述总剂量量。在一些实施方案中，所述说明书规定：所述第二和/或随后的剂量是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：Q2W给予两个剂量，所述两个剂量的量为或为约750mg；或所述第二和/或随后的剂量是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定：所述第一28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：每周一次(Q1W)给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量为或为约375mg，之后每两周一次(Q2W)给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约750mg；并且所述第二和/或随后的28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定：所述第一28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：每周一次(Q1W)给予四个剂量，所述四个剂量具有为或约225mg的两个连续剂量和之后的为或约375mg的两个连续剂量；并且所述第二和/或随后的28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：每两周一次(Q2W)给予两个剂量，所述两个剂量的量为或为约750mg。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定：所述第一28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：每周一次(Q1W)给予两个剂量，所述剂量中的每一个为或为约为或约375mg的量，任选地其中所述剂量是连续剂量，任选地其中所述剂量在所述28天周期中的第15天和第22天进行；并且所述第二和/或随后的28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予进行至少三个28天周期。在一些实施方案中，所述说明书规定所述第三28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量与所述第一和/或第二28天周期相同。在一些实施方案中，所述说明书规定所述第三28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg，在一些实施方案中，所述说明书规定在所述第三28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与所述第一和/或第二28天周期相比给予更多次数的所述抗体或片段进行。在一些实施方案中，所述说明书规定在所述第三28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与所述第二28天周期相比给予相同次数的所述抗体或片段进行。在一些实施方案中，所述说明书规定所述第三28天周期用以下给药时间表进行：每四周一次(Q4W)给予一个剂量，任选地在第1天。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予是通过起始所述T细胞疗法之后的不超过三个28天周期进行。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定每个28天周期独立地用选自以下的给药时间表进行：(i)每周一次(Q1W)给予四个剂量，任选地在第1天、第8天、第15天和第22天；(ii)Q1W给予两个连续剂量，任选地在第1天和第8天，之后每两周一次(Q2W)给予一个剂量，任选地在第15天；(iii)每两周一次(Q2W)给予两个剂量，任选地在第1天和第15天；或(iv)每四周一次(Q4W)给予一个剂量，任选地在第1天。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在第一28天周期中的第1天、第8天和第15天，在第二28天周期中的第1天以及在第三28天周期中的第1天给予。在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在第一28天周期中的第1天、第8天、第15天和第22天，在第二28天周期中的第1天和第15天以及在第三28天周期中的第1天给予。在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在每个28天周期中的第1天给予。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定如果所述受试者在所述治疗后展现出部分反应(PR)，则通过一个或多个另外的28天周期进行所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予进行的总持续时间为约12个月或少于约12个月。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予是在起始给予所述T细胞疗法之后大于21天的时间(例如在约29天、在22-36天内)起始的。在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予是在如下时间时或在如下时间内起始的：在起始给予所述T细胞疗法之后约29天、36天、43天或50天。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书指示当所述受试者展现出严重毒性时，不应给予抗PD-L1抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，所述说明书规定：所述严重毒性是严重细胞因子释放综合征(CRS)，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级CRS；和/或所述严重毒性是严重神经毒性，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级神经毒性。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定：所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予是在这样的时间起始的，所述时间是在以下各项时或之后，任选地以下各项之后立即或在以下各项之后1至3天内：(i)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平；(ii)在所述血液中已经可检测到之后，在所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量不可检测或减少了，任选地与在给予所述T细胞疗法之后的在前时间点相比减少了；(iii)所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量减少了或减少超过在起始给予所述T细胞疗法之后在所述受试者的血液中可检测到的所述T细胞疗法的峰值或最大细胞数量的1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多；(iv)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平之后的时间，在来自所述受试者的血液中可检测到的所述细胞的细胞数量或源自所述细胞的细胞数量为所述受试者的血液中的总外周血单核细胞(PBMC)的少于10％、少于5％、少于1％或少于0.1％；(v)所述受试者在用所述T细胞疗法治疗之后展现出疾病进展和/或在缓解后已经复发；和/或(vi)与在给予所述细胞之前或之后以及在起始给予所述抗PD-L1抗体之前的时间的肿瘤负荷相比，所述受试者展现出增加的肿瘤负荷。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述受试者是人。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述T细胞疗法或所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予是用于治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在一些实施方案中，所述说明书规定所述T细胞疗法或所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予是用于治疗所述受试者的非霍奇金淋巴瘤(NHL)，其中所述受试者在用针对所述NHL的一种或多种先前疗法治疗之后在缓解后已经复发，或对于所述一种或多种先前疗法变为难治性的，所述一种或多种先前疗法任选地为除了表达所述CAR的细胞的另一剂量之外的一种或两种先前疗法，任选地其中所述先前疗法是或包含靶向CD20的药剂或蒽环类抗生素。在一些实施方案中，所述说明书规定所述NHL为以下各项中的任一者：侵袭性NHL；弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；DLBCL-NOS，任选地转化型惰性；EBV阳性DLBCL-NOS；富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤；原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)；滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)；和/或高级别B细胞淋巴瘤伴有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双/三打击)。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述说明书规定所述受试者必须被鉴定为具有小于或等于1的东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态，以有资格成为经历或将经历该试剂盒的使用的候选者。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述细胞适于肠胃外，任选地静脉内给予。
在本文提供的任何一种试剂盒的一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段适于肠胃外，任选地静脉内给予。
附图说明
图1描绘了如实施例1中所述，在解冻之后立即(时间0)，和在培养中与K562.CD19靶细胞以1.25:1的效应细胞:靶细胞(E:T)比率一起孵育24小时后，与荧光减一(FMO)对照相比，如通过流式细胞术检测的PD-1在以下细胞群上的表面表达：1)针对CD4和抗CD19嵌合抗原受体(CAR)二者的阳性表面表达进行门控的T细胞群(参见左图)，或2)针对CD8和抗CD19嵌合抗原受体(CAR)二者的阳性表面表达进行门控的T细胞群(参见右图)。
图2描绘了如实施例1中所述，在解冻之后立即(时间0，T0)，和在培养中与K562.CD19靶细胞以5:1、2.5:1或1.25:1的三种不同的效应细胞:靶细胞(E:T)比率一起孵育24小时后，如通过流式细胞术检测的PD-1在以下细胞群上按中值荧光强度的表面表达：1)针对CD4和抗CD19嵌合抗原受体(CAR)二者的阳性表面表达进行门控的T细胞群(参见上图)，或2)针对CD8和抗CD19嵌合抗原受体(CAR)二者的阳性表面表达进行门控的T细胞群(参见下图)。
图3A描绘了如实施例1中所述，来自3名供体的CD4阳性抗CD19 CAR表达细胞(参见图3A，上图)或CD8阳性抗CD19 CAR表达细胞(参见图3A，下图)的百分比，所述细胞在以2.5:1的效应细胞:靶细胞(E:T)比率刺激K562.CD19靶细胞后对PD-1表面表达呈阳性。图3B描绘了如实施例1中所述，在以2.5:1的效应细胞:靶细胞(E:T)比率刺激K562.CD19靶细胞后，CD4阳性抗CD19 CAR表达细胞(参见图3B，上图)或CD8阳性抗CD19 CAR表达细胞(参见图3B，下图)上PD-1的中值荧光强度(MFI)。
图4A至图4C描绘了如实施例2A中所述，在将来自三名不同供体(图4A、图4B和图4C)的抗CD19 CAR表达细胞与以下各项一起孵育24小时之后获取的上清液中细胞因子(IFNγ、IL-2和TNF-α)产生水平：(1)在德瓦鲁单抗的存在下的K562.CD19靶细胞(参见黑色倒三角形)，(2)在同种型对照的存在下的K562.CD19靶细胞(参见黑色圆形)，(3)在德瓦鲁单抗的存在下的K562.CD19.PDL1靶细胞(参见灰色倒三角形)或(4)在同种型对照的存在下的K562.CD19.PDL1靶细胞(参见灰色圆形)。
图5A至图5C描绘了如实施例2B中所述，在将细胞单独地与以下各项共培养24小时之后，来自供体1(参见图5A)、供体2(参见图5B)和供体3(参见图5C)的CD4阳性抗CD19 CAR表达细胞或CD8阳性抗CD19 CAR表达细胞上CD25、CD69和PD-1的表面表达：(1)在德瓦鲁单抗的存在下的K562.CD19靶细胞(参见黑色倒三角形)，(2)在同种型对照的存在下的K562.CD19靶细胞(参见黑色圆形)，(3)在德瓦鲁单抗的存在下的K562.CD19.PDL1靶细胞(参见灰色倒三角形)或(4)在同种型对照的存在下的K562.CD19.PDL1靶细胞(参见灰色圆形)。
图6描绘了如实施例3中所述，在某些时间点测量的患有化学难治性转化的DLBCL的受试者的外周血液中CD3阳性CAR表达T细胞、CD4阳性CAR表达T细胞和CD8阳性CAR表达T细胞的数量。
具体实施方式
本文提供了用于治疗疾病或病症(例如，B细胞恶性肿瘤)的组合疗法，其涉及给予细胞疗法(诸如T细胞疗法)和检查点抑制剂(诸如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))。在一些方面，检查点抑制剂能够抑制或阻断免疫检查点途径的蛋白或组分，如检查点途径的PD-1/PD-L1轴。在一些实施方案中，示例性检查点抑制剂包括抗PD-L1抗体或抗PD-1抗体。在一些方面，T细胞疗法是过继T细胞疗法，其包含特异性识别和/或靶向与疾病或障碍相关的抗原的T细胞，所述疾病或障碍例如癌症或增殖性疾病，如B细胞恶性肿瘤，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL)或其亚型。还提供了组合和制品(如试剂盒)，所述组合和制品含有包含T细胞疗法的组合物和/或包含免疫调节化合物的组合物；以及此类组合物和组合用于治疗或预防疾病、病症和障碍(包括癌症)的用途。
细胞疗法，如基于T细胞的疗法，例如过继T细胞疗法(包括涉及给予表达对所关注疾病或障碍具有特异性的嵌合受体(如嵌合抗原受体(CAR)和/或其他重组抗原受体)的细胞的那些，以及其他过继免疫细胞和过继T细胞疗法)可以有效地治疗癌症以及其他疾病和障碍。重组受体(如嵌合抗原受体(CAR))在T细胞表面上的工程化表达使得能够重定向T细胞特异性。在临床研究中，CAR表达T(CAR-T)细胞，例如抗CD19 CAR-T细胞在白血病和淋巴瘤患者中产生持久的完全反应(Porter等人(2015)Sci Transl Med.,7:303ra139；Kochenderfer(2015)J.Clin.Oncol.,33:540-9；Lee等人(2015)Lancet,385:517-28；Maude等人(2014)N Engl J Med,371:1507-17)。
在某些情境下，过继细胞疗法的有效方法可能并不总是完全令人满意。例如，尽管在许多患有淋巴瘤的受试者中可以检测到CAR T细胞持久性，但与患有急性成淋巴细胞白血病(ALL)的受试者相比，在患有NHL的受试者中观察到的完全反应(CR)较少。更具体地，虽然在输注CAR T细胞后报告了高达80％的较高总体反应率(CR率47％至60％)，但一些受试者中的反应是短暂的，并且已经显示受试者在持久性CAR T细胞的存在下复发(Neelapu,58th Annual Meeting of the American Society of Hematology(ASH):2016；圣地亚哥,加利福尼亚州,美国文摘号LBA-6.2016；Abramson,Blood.2016年12月1日；128(22):4192)。另一研究报告了40％的长期CR率(Schuster,Ann Hematol.2016年10月；95(11):1805-10)。
在一些方面，对此的解释是循环CAR表达T细胞的免疫学消耗和/或T淋巴细胞群体的变化。这是因为，在一些情境下，最佳功效可取决于所给予细胞的以下能力：有能力被激活，扩增，发挥各种效应子功能(包括细胞毒性杀伤和分泌各种因子如细胞因子)，持续存在(包括长期持续存在)，分化、转换或参与重编程为某些表型状态(如长期记忆、较低分化和效应子状态)，避免或减少疾病局部微环境中的免疫抑制条件，在清除并重新暴露于靶配体或抗原后提供有效且稳健的回忆应答，以及避免或减少消耗、无反应性、外周耐受、终末分化和/或分化为抑制状态。
在一些实施方案中，在给予至受试者后工程化细胞的暴露和持久性降低或下降。然而，观察结果表明，在一些情况下，所给予的表达重组受体的细胞(例如，随时间增加的细胞数量或持续时间)可以在体内再扩增以改善过继细胞疗法的功效和治疗结果。
在一些方面，所提供的实施方案例如由于给予检查点抑制剂，如PD-1/PD-L1免疫检查点轴的抑制剂(例如抗PD-L1或抗PD-1抗体)，而允许这种再扩增或减少或预防所给予细胞的消耗和/或抑制。
程序性细胞死亡1(PD-1)是在B细胞、NK细胞和T细胞中表达的免疫检查点蛋白(Shinohara等人,1995,Genomics 23:704-6；Blank等人,2007,Cancer ImmunolImmunother 56:739-45；Finger等人,1997,Gene 197:177-87；Pardoll(2012)NatureReviews Cancer 12:252-264)。PD-1的主要作用是在响应于感染的炎症过程中限制外周组织中T细胞的活性，以及限制自身免疫。在激活的T细胞中诱导PD-1表达，并且PD-1与其内源性配体之一的结合通过抑制刺激性激酶起到抑制T细胞激活的作用。PD-1还在调节性T细胞(Treg)上高度表达，并且可以在配体的存在下增加所述细胞的增殖(Pardoll(2012)NatureReviews Cancer 12:252-264)。PD-1与其配体连接的主要结果是抑制T细胞受体(TCR)下游的信号传导。据认为，PD-1信号传导需要与PD-1配体结合，而PD-1配体与主要组织相容性复合物(MHC)呈递的肽抗原紧密接近，所述肽抗原与TCR结合(Freeman,Proc.Natl.Acad.Sci.,U.S.A,105:10275-10276(2008))。PD-L1是在T细胞中引起抑制性信号转导的主要PD-1配体。PD-L2是不同的PD-1配体，其可以抑制T细胞功能或活性。
PD-L1(程序性细胞死亡配体-1；也称为B7同源物1(B7-H7)，或CD274基因编码的分化簇(CD274))与PD-1(程序性细胞死亡蛋白1)结合并在调节免疫系统功能(包括免疫和自身耐受性)中发挥作用。PD-L1在T细胞(例如调节性T细胞(Treg))、抗原呈递细胞(APC，例如树突细胞(DC)、巨噬细胞和B细胞)以及非造血细胞(包括胰岛细胞、血管内皮细胞(胎盘、睾丸、眼睛))上，以及在肿瘤中表达。PD-L1/PD-1途径参与自我反应性T细胞的减毒、诱导型Treg细胞的发育、CD4+效应T细胞和CD8+ T细胞的抑制。因此，干扰通过PD-L1/PD-1途径的抑制信号是增强抗肿瘤免疫性的治疗选择。
在一些实施方案中，激活的CD8+细胞毒性T细胞可以识别其在肿瘤细胞上呈递的靶抗原，并在形成免疫突触后起始肿瘤细胞杀伤。在一些情境下，肿瘤细胞可以通过表达与T细胞上的PD-1结合的PD-L1和/或PD-L2来减弱T细胞活性，从而导致降低细胞毒性并导致T细胞消耗的抑制性检查点信号传导。PD-L1在淋巴瘤中(既在肿瘤上和也在肿瘤微环境(TME)中)表达，并可能在CAR T细胞的肿瘤相关的免疫抑制中发挥作用(Andorsky,Clin.Cancer.Res.2011年7月1日；17(13):4232-44)。
在一些情境下，干扰免疫检查点的抗体通过破坏PD-L1/PD-1免疫检查点而在多种癌症中产生肿瘤消退。PD-1阻断性抗体抑制PD-L1和PD-L2与PD-1的相互作用，而抗PD-L1抗体抑制PD-L1与PD-1之间的相互作用，从而在一些情境下导致增强的T细胞活性、增加的细胞因子产生和肿瘤细胞定向的细胞毒性。已经在各种淋巴瘤中检测到PD-1和PD-L1的表达。高水平的PD-L1促进T细胞消耗，而PD-L1阻断恢复T细胞功能。
在一些情境下，肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)表达PD-1，并且初步数据还表明CAR T细胞在通过CAR刺激后会上调PD-1和PD-L1而不是PD-L2的表达。(参见PCT申请WO2016196388。)因此，在一些情况下，TIL和CAR表达T细胞二者都可能成为PD-1/PD-L1的抑制靶标。考虑到这些数据，与阻断经由PD-1途径的T细胞抑制的药剂组合给予的CAR T细胞可能由于改善了CAR T细胞的扩增以及延长了CAR T细胞的持久性和功能的持续时间而具有增强的抗肿瘤活性。在一些情境下，PD-L1响应于干扰素-γ(IFNγ)而上调(Chen,Immunobiology.2012年4月；217(4):385-93；Abiko,Br J Cancer.2015年4月28日；112(9):1501-9)。因此，可能由于激活的CAR T细胞分泌IFNγ，在CAR T细胞的作用位点在肿瘤细胞和其他浸润细胞上诱导或进一步上调PD-L1表达。淋巴瘤细胞的PD-L1表达可能在肿瘤微环境内的肿瘤相关免疫抑制中发挥作用。
已经显示针对PD-1或PD-L1的单克隆阻断抗体在患有各种癌症的受试者中是安全有效的，并且可以用于在用CAR T细胞治疗的受试者中逆转PD-L1介导的免疫抑制。已经在NHL中探索了对PD-1/PD-L1轴的阻断(Lesokhin,J Clin Oncol.2016年8月10日；34(23):2698-704)。PD-1拮抗剂单克隆抗体纳武单抗在NHL中的1期研究结果显示，在用于治疗实体瘤的相似剂量水平(1和3mg/kg)下，PD-1抑制具有可接受的安全性概况。在所治疗的31名患有B细胞NHL的受试者中，71％经历了药物相关的不良事件(AE)，包括两名(7％)具有肺炎的严重不良事件(SAE)的受试者。临床研究包括11名患有弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的受试者，并且观察到了临床活动的证据。两名受试者实现CR，并且两名另外的受试者实现PR。患有DLBCL的受试者群组的中位无进展存活期(PFS)为6周(范围6至29周)。目前正在进行评价德瓦鲁单抗在B细胞恶性肿瘤中的活性的研究。
来自在DLBCL中研究另一种CD19定向的CAR T细胞产品CTL019的临床试验的初步结果(Schuster,Blood.2016年12月1日；128(22):3026)鉴定出，在输注CAR T细胞之前淋巴瘤中的高PD-L1表达是一种可能的抗性机制。用PD-1阻断性抗体治疗对CAR T细胞疗法无反应的受试者导致临床上显著的抗肿瘤反应和CAR T细胞的扩增(Chong,Blood.2017年2月23日；129(8):1039-41)。
在某些实施方案中，发现在对细胞疗法有反应(例如展现出CR或客观反应(OR))的受试者与对细胞疗法无反应(例如展现出PD)的受试者之间，在给予细胞疗法后细胞疗法在受试者血液中的药代动力学(PK)相似或无显著不同。在一些实施方案中，此类观察结果表明，细胞疗法在受试者中已经或正在扩增，但是可能没有展现出最佳功效。在一些实施方案中，将抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)给予至对细胞疗法无反应(例如展现出进行性疾病(PD))的受试者或其中细胞疗法尚未展现出最佳疗效的受试者。
在一些情境下，细胞疗法的最佳功效可取决于所给予细胞的以下能力：识别并结合至靶标(例如，靶抗原)，运输、定位至并成功进入受试者、肿瘤和其环境内的适当位点。在一些情境下，最佳功效可能取决于所给予细胞的以下能力：被激活，扩增，发挥各种效应子功能(包括细胞毒性杀伤和分泌各种因子如细胞因子)，持续存在(包括长期持续存在)，分化、转换或参与重编程为某些表型状态(如长期记忆、较低分化和效应子状态)，避免或减少疾病局部微环境中的免疫抑制条件，在清除并重新暴露于靶配体或抗原后提供有效且稳健的回忆应答，以及避免或减少消耗、无反应性、外周耐受、终末分化和/或分化为抑制状态。
在一些方面，细胞疗法(例如T细胞疗法)的功效可能受到疾病或障碍的局部微环境(例如TME)中存在的免疫抑制活性或因子的限制。在一些方面，TME含有或产生可抑制T细胞疗法所给予的T细胞的活性、功能、增殖、存活和/或持久性的因子或条件。不受理论的束缚，所提供的方法和用途是基于以下假设：即细胞疗法(例如CAR表达细胞疗法)在功能上可能受到在淋巴瘤肿瘤微环境中遇到的免疫检查点途径的组分(如PD-L1)的抑制，并且受试者可能受益于包括细胞疗法和检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的组合疗法，以在遇到这种免疫抑制信号时延长细胞疗法，例如CAR表达T细胞效应子功能。
在一些实施方案中，在起始给予细胞疗法(例如一定剂量的T细胞(例如CAR+ T细胞))之后，给予检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))可以导致细胞疗法的活性、功效和/或持久性改善和/或改善所治疗受试者的反应。在一些实施方案中，组合疗法增强、加强和/或促进细胞疗法(例如工程化T细胞疗法，如CAR+ T细胞)的治疗效果的功效和/或安全性。在一些实施方案中，检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))增强或改善了所给予细胞，例如表达重组受体(例如CAR)的细胞的功效、存活或持久性。
在一些实施方案中，所提供的实施方案是基于以下观察结果：在起始给予细胞疗法(例如CAR+ T细胞)之后并以分次给药时间表向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体)通常是安全的，并且在某些受试者中与改善的药代动力学概况、总体反应和延长的反应相关。在一些方面，分次给药时间表包括涉及多个给予周期(例如，在至少两个28天周期中给予检查点抑制剂，如抗PD-L1抗体)的给药方案，其中第一周期是通过与第二或随后的周期中的单独剂量数量相比给予更多数量的单独剂量的检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体)进行。具体地，在给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体)之后，甚至在观察到CAR+ T细胞的初始减少的时间点之后，在某些受试者中仍观察到CAR+ T细胞扩增的改善和延长的反应，如延长的完全反应。在一些方面，这些观察结果与所给予CAR+ T细胞的再扩增或消耗减少和/或抑制降低是一致的。如对于示例性检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体德瓦鲁单抗)所示的结果支持：所提供的给药方案与CAR+ T细胞疗法组合是安全的，并且可以导致患者的临床反应，包括延长的缓解，特别是在给予检查点抑制剂之后实现CAR+ T细胞的再扩增和/或改善的药代动力学概况的患者中。在一些方面，此类结果支持CAR+ T细胞与检查点抑制剂(如靶向PD-1/PD-L1途径的抑制剂，如抗PD-L1抗体或抗PD-1抗体)的组合疗法，以实现改善的细胞疗法的活性、效力、扩增和/或持久性，和/或改善所治疗受试者的反应。
在一些方面，如与某些替代性方法相比，所提供的方法和用途提供或实现了改善的或更持久的反应或功效，所述替代性方法例如包括将T细胞疗法或检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体)以单一疗法给予或不作为如本文所述的组合疗法一起给予的方法，如在所治疗受试者的特定组中或基于特定的给药方法或方案。在一些实施方案中，所述方法由于给予T细胞疗法(如包含用于过继细胞疗法(例如像T细胞疗法)的细胞(例如CAR表达T细胞)的组合物)和检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))而是有利的。
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本文使用的章节标题仅用于组织目的，而不应解释为限制所描述的主题。
I.组合疗法
提供了工程化细胞(如T细胞(例如，CAR-T细胞))和检查点抑制剂(如免疫检查点途径的PD-1/PD-L1轴抑制剂，如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))及其组合物用于治疗患有疾病或病症的受试者的方法和用途，所述疾病或病症通常是或包括癌症或肿瘤，如某些B细胞恶性肿瘤。在一些方面，所述方法用于治疗白血病或淋巴瘤，如非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在一些方面，例如在所治疗的受试者的特定组中，与某些替代性方法相比，所述方法和用途提供或实现了改善的反应和/或更持久的反应或功效。还提供了例如用于本文提供的方法中的制品和试剂盒，所述制品和试剂盒包含含有细胞的T细胞疗法和/或检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段)。在一些实施方案中，所述制品和试剂盒任选地含有根据本文提供的方法的使用说明书。
工程化细胞和检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体或抗PD-1抗体或其片段)可用于多种治疗性、诊断性和预防性适应症。例如，工程化细胞或包含工程化细胞的组合物和检查点抑制剂可用于治疗受试者的多种疾病和障碍。此类方法和用途包括治疗方法和用途，例如，其涉及将工程化细胞和检查点抑制剂或含有它们的组合物给予至患有疾病、病症或障碍(如肿瘤或癌症)的受试者。在一些实施方案中，以实现疾病或障碍的治疗的有效量给予工程化细胞或包含所述工程化细胞的组合物和检查点抑制剂。用途包括工程化细胞或组合物和检查点抑制剂在此类方法和治疗中以及在制备药物以进行此类治疗方法中的用途。在一些实施方案中，通过向患有或怀疑患有疾病或病症的受试者单独地或一起给予工程化细胞或包含所述工程化细胞的组合物和检查点抑制剂来进行所述方法。在一些实施方案中，所述方法由此治疗受试者的疾病或病症或障碍。
在一些实施方案中，所述方法和用途包括：1)向受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法涉及表达基因工程化(重组)细胞表面受体的细胞，所述细胞表面受体通常是嵌合受体，如嵌合抗原受体(CAR)，所述受体识别由以下表达、与以下相关和/或为以下特有的抗原：B细胞恶性肿瘤如白血病或淋巴瘤(例如NHL)和/或衍生出其的细胞类型；和2)向受试者给予检查点抑制剂，例如抗-PD-L1抗体(或其抗原结合片段)。在一些实施方案中，检查点抑制剂(例如抗PD-L1或其抗原结合片段)在给予T细胞疗法之后(随后地)给予。在一些情况下，将检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体或抗原结合片段)给予至已接受T细胞疗法的给予的受试者。所述方法通常涉及向受试者给予一个或多个剂量的细胞和一个或多个剂量的检查点抑制剂，例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)。在一些实施方案中，将组合疗法给予至患有待治疗的特定疾病或病症的受试者。所治疗的疾病或病症可以是任何疾病或病症，其中抗原的表达与疾病、病症或障碍的病因学相关和/或参与其中，例如引起、加重或以其他方式参与这种疾病、病症或障碍。示例性疾病和病症可以包括与细胞的恶性肿瘤或转化(例如癌症)相关的疾病或病症。上文描述了示例性抗原，其包括与可以治疗的各种疾病和病症相关的抗原。在特定实施方案中，嵌合抗原受体或转基因TCR特异性结合至与疾病或病症相关的抗原。在一些实施方案中，受体靶向的抗原包括与B细胞恶性肿瘤相关和/或由B细胞恶性肿瘤表达的抗原，如许多已知B细胞标记中的任何一种。在一些实施方案中，受体靶向的抗原是CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。在一些方面，由B细胞恶性肿瘤表达和/或与B细胞恶性肿瘤相关的抗原是CD19。
所提供的实施方案包括用于治疗B细胞恶性肿瘤的方法。在一些实施方案中，待治疗的疾病或障碍包括白血病和淋巴瘤，例如急性髓样(或髓性)白血病(AML)、慢性髓样(或髓性)白血病(CML)、急性淋巴细胞(或成淋巴细胞)白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、毛细胞白血病(HCL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、边缘区淋巴瘤(MZL)、伯基特淋巴瘤(BL)、霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、滤泡性淋巴瘤、难治性滤泡性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和多发性骨髓瘤(MM)。在一些实施方案中，疾病或病症是选自以下的B细胞恶性肿瘤：急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一些实施方案中，疾病或病症是NHL，并且NHL选自侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)NOS型(从头的和从惰性转化的)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地，3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。
在一些实施方案中，所述方法包括用一定剂量的表达抗原受体的细胞(例如，CAR表达细胞)和随后剂量的检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))治疗患有淋巴瘤或白血病(如非霍奇金淋巴瘤(NHL))的受试者。
在一些实施例中，可以基于卢加诺(Lugano)分类来对NHL进行分期(参见例如Cheson等人,(2014)JCO 32(27):3059-3067；Cheson,B.D.(2015)Chin Clin Oncol 4(1):5)。在一些情况下，这些时期用罗马数字I至IV(1-4)进行描述，并且影响淋巴系统外的器官(结外器官)的局限期(I或II)淋巴瘤用“E”指示。I期表示一个结节或一组相邻结节受累，或无结节受累的单一结外病变(IE)。2期表示横膈同侧的两个或更多个结节组受累，或按结节范围的I或II期伴有局限性连续结外受累(IIE)。III期表示横膈两侧的结节或横膈上方的结节受累伴有脾脏受累。IV期表示另外的非连续淋巴外受累的受累。此外，“巨块疾病(bulky disease)”可用于描述胸部中的大型肿瘤，特别是对于II期。疾病的程度通过正电子发射断层扫描(PET)–计算机断层扫描(CT，用于亲嗜性(avid)淋巴瘤)和CT(用于非亲嗜性淋巴瘤)确定。
在一些实施方案中，东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态指标可用于评估或选择用于治疗的受试者，例如，在先前疗法中具有差表现的受试者(参见例如Oken等人(1982)Am JClin Oncol.5:649-655)。在一些实施方案中，受试者的ECOG状态小于或等于1。ECOG体能状态量表根据患者的自理能力、日常活动和身体能力(例如步行、工作等)来描述其机能水平。在一些实施例中，ECOG体能状态为0指示受试者可以进行正常活动。在一些方面，ECOG体能状态为1的受试者展现身体活动的一些限制，但是所述受试者是完全可自由走动的。在一些方面，ECOG体能状态为2的患者是超过50％可自由走动的。在一些情况下，ECOG体能状态为2的受试者也可能能够自理；参见例如
Figure BDA0002702674000000472
等人,(1993)Br J Cancer 67(4)773-775。下表1中描述了反映ECOG体能状态的标准：
Figure BDA0002702674000000471
在一些实施方案中，受试者已经或已经被鉴定为患有双/三打击淋巴瘤或双/三打击分子亚型的淋巴瘤。在一些实施方案中，淋巴瘤是双打击淋巴瘤，其特征在于MYC(髓细胞瘤致癌基因)、BCL2(B细胞淋巴瘤2)和/或BCL6(B细胞淋巴瘤6)基因重排(例如易位)的存在。在一些实施方案中，基因重排与另一种基因重排组合影响MYC/8q24基因座。例如，其他基因重排包括涉及BCL2的t(14；18)(q32；q21)。在一些实施方案中，基因重排与BCL6/3q27组合影响MYC/8q24基因座。在一些实施方案中，淋巴瘤是三打击淋巴瘤，其特征在于MYC、BCL2和BCL6基因重排的存在；参见例如Aukema等人,(2011)Blood 117:2319-2331。在此类实施方案的一些方面，受试者是ECOG0-1或不患有或被怀疑或表征为不患有从MZL或CLL转化的DLBCL。在多个方面中，疗法被指示用于此类受试者和/或说明书指示向这种群体内的受试者给予。在一些实施方案中，基于2016WHO标准(Swerdlow等人,(2016)Blood127(20):2375-2390)，双/三打击淋巴瘤可以被认为是高级别B细胞淋巴瘤伴有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双/三打击)。
在一些实施方案中，将组合疗法给予至如下受试者：对于用细胞疗法，例如一定剂量的T细胞(例如CAR+ T细胞)的治疗是、或可能是、或被预测是低反应者，和/或不、可能不、和/或被预测不反应，或不在一定时间内和/或以一定程度反应。在一些实施方案中，将组合疗法给予至如下受试者：如在起始给予细胞疗法之后的1个月内、两个月内或三个月内，不、或可能不、或被预测不展现出完全反应或总体反应。在一些实施方案中，将组合疗法给予至如下受试者：如在给予细胞疗法后的1个月、两个月或三个月内，展现出、或可能展现出、或被预测展现出进行性疾病(PD)。在一些实施方案中，基于用细胞疗法如此治疗或先前用细胞疗法治疗的多名处境相似的受试者，受试者可能或被预测不展现出反应或某一反应。
在一些实施方案中，所提供的方法涉及治疗受试者，例如被鉴定为患有高风险疾病(例如高风险NHL)的受试者的特定组或亚组。在一些方面，所述方法治疗如下受试者：患有某一形式的侵袭性和/或预后不良的B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)，如对于标准疗法已经复发或是难治性的(R/R)、具有不良预后的NHL。在一些情况下，对于疗法所指示用于的疾病和/或患者群体，对可用疗法、对护理标准或参考疗法的总体反应率(ORR)小于40％，和/或完全反应(CR)低于20％。在一些实施方案中，在化学难治性DLBCL中，使用参考或可用治疗或护理标准疗法的ORR为约26％，并且CR为约8％(Crump等人Outcomes in refractoryaggressive diffuse large B-cell lymphoma(DLBCL):Results from theinternational SCHOLAR study.ASCO 2016[文摘7516])。在一些方面，所提供的方法、组合物、用途和制品实现了对可用疗法的改善和优异的反应。
在一些实施方案中，所述方法、用途和制品涉及或用于受试者的治疗，所述治疗涉及例如基于疾病的特定类型、诊断标准、先前治疗和/或对先前治疗的反应来选择或鉴定特定组或亚组的受试者。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗在用一种或多种先前疗法治疗之后在缓解后已经复发，或对于所述一种或多种先前疗法变为难治性的受试者；或对于一种或多种先前疗法(例如，一个或多个线的标准疗法)已经复发或是难治性(R/R)的受试者。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗患有以下疾病的受试者：弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型(NOS；从头的和从惰性转化的)、原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤(PMBCL)或3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)、爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus，EBV)阳性DLBCL、或EBV阳性NOS。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗具有小于1(如0-1)的东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态的受试者。在一些实施方案中，所述方法治疗通常对疗法或特定参考疗法反应较差的不良预后群体或DLBCL患者或其受试者的不良预后群体，如具有一种或多种，如两种或三种染色体易位(如所谓的“双打击”或“三打击”淋巴瘤，其是高级别B细胞淋巴瘤伴有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学；具有易位MYC/8q24基因座，通常与t(14；18)(q32；q21)bcl-2基因或/和BCL6/3q27染色体易位组合；参见例如Xu等人(2013)Int J Clin Exp Pathol.6(4):788–794)的不良预后群体；和/或在给予自体干细胞移植(ASCT)后已经复发，任选地在12个月内复发的不良预后群体；和/或被认为是化学难治性的不良预后群体。
在一些实施方案中，抗原受体(例如CAR)特异性结合至与疾病或病症相关(如与NHL相关)的靶抗原。在一些实施方案中，与疾病或障碍相关的抗原选自CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。
在一些实施方案中，所述方法包括将细胞疗法和检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))给予至患有、有风险患有、或怀疑患有疾病、病症或障碍的受试者。在一些实施方案中，受试者是成人。在一些实施方案中，受试者超过或超过约30、40、50、60或70岁。
在一些实施方案中，所述方法包括向选择或鉴定为具有一定NHL预后或风险的受试者给予细胞。非霍奇金淋巴瘤(NHL)可以是多变疾病。一些患有NHL的受试者可能无需治疗即可存活，而其他受试者则可能需要立即干预。在一些情况下，可能将患有NHL的受试者分类为可以告知疾病预后和/或推荐的治疗策略的组。在一些情况下，这些组可能是“低风险”、“中等风险”、“高风险”和/或“非常高风险”，并且可以根据多种因素将患者如此分类，所述多种因素包括但不限于遗传异常和/或形态学或身体特征。在一些实施方案中，基于NHL的风险对根据所述方法和/或用所述制品或组合物治疗的受试者进行分类或鉴定。在一些实施方案中，受试者是具有高风险NHL的受试者。
在一些实施方案中，在给予表达重组受体的细胞之前，受试者先前已经用靶向疾病或病症(例如NHL)的疗法或治疗剂进行治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用造血干细胞移植(HSCT)，例如同种异体HSCT或自体HSCT进行治疗。在一些实施方案中，受试者在用标准疗法治疗之后具有不良预后和/或对一个或多个线的先前疗法已经无效。在一些实施方案中，受试者已经被治疗或先前已经接受了至少或约至少或约1、2、3、4、5、6或7种除了淋巴细胞清除疗法之外的其他用于治疗NHL的疗法。在一些实施方案中，受试者先前已经用化学疗法或放射疗法进行治疗。在一些方面，受试者对于其他疗法或治疗剂是难治性或无反应的。在一些实施方案中，受试者例如在用另一种疗法或治疗性干预(包括化学疗法或放射)治疗之后患有持久性或复发性疾病。
在一些实施方案中，所述方法包括向选择或鉴定为具有高风险NHL的受试者给予细胞。在一些实施方案中，受试者展现出一种或多种细胞遗传学异常，如与高风险NHL相关。在一些实施方案中，基于患有疾病或病症来选择或鉴定受试者，所述疾病或病症被表征或确定为侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)。在特定实施方案中，待使用本文提供的方法治疗的受试者包括患有以下疾病的受试者：侵袭性NHL，具体地弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型(NOS；从头的和从惰性转化的)、原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤(PMBCL)或3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)阳性DLBCL、EBV阳性NOS、或高级别B细胞淋巴瘤伴有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(“双打击”或“三打击”淋巴瘤)。在一些实施方案中，受试者具有较差体能状态。在一些方面，待治疗的群体包括东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态为0-2中的任何值的受试者。在任何实施方案的其他方面，待治疗的受试者包括ECOG 0-1受试者或不包括ECOG 2受试者。在任何实施方案的一些方面，待治疗的受试者对两种或更多种先前疗法已经无效。在一些实施方案中，受试者未患从边缘区淋巴瘤(MZL)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL；里希特氏(Richter's))转化的DLBCL。在一些实施方案中，患有CLL的受试者可能展现出里希特氏综合征(RS)，其定义为CLL转化成侵袭性淋巴瘤，最常见的是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(参见例如Parikh等人Blood 2014 123:1647-1657)。在一些实施方案中，受试者患有套细胞淋巴瘤(MCL)。在一些实施方案中，受试者具有与较差总存活期相关联的特征。在一些实施方案中，受试者从未实现完全反应(CR)，从未接受过自体干细胞移植(ASCT)，对一种或多种第二线疗法为难治性的，患有原发性难治性疾病和/或具有2的ECOG体能得分。
在一些实施方案中，待治疗的受试者包括患有以下疾病的受试者组：侵袭性NHL，具体地弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型(NOS；从头的和从惰性转化的)、原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤(PMBCL)或3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)阳性DLBCL、EBV阳性NOS、或高级别B细胞淋巴瘤伴有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学。在一些实施方案中，受试者的疾病对于至少两个先前治疗线已经复发或已经是难治性的。在一些实施方案中，先前疗法包括靶向CD20的药剂和/或蒽环类抗生素。在一些实施方案中，受试者在筛选时的ECOG得分为0-2或0-1。在一些实施方案中，根据卢加诺分类(Cheson,2014)，受试者患有正电子发射断层摄影(PET)阳性疾病。在一些实施方案中，受试者可以任选地先前已经用同种异体干细胞移植(SCT)进行治疗。
在一些实施方案中，受试者在他们被给予组合疗法时(例如，在他们被给予细胞疗法时)为至少40岁。在一些实施方案中，受试者在他们被给予组合疗法时(例如，在他们被给予细胞疗法时)小于40岁。在一些实施方案中，受试者在他们被给予组合疗法时(例如，在他们被给予细胞疗法时)为约40-65岁。在一些实施方案中，受试者在他们被给予组合疗法时(例如，在他们被给予细胞疗法时)为至少65岁。
在一些实施方案中，受试者是男性。在一些实施方案中，受试者是女性。
在一些实施方案中，受试者对于最后一种先前疗法是难治性的。在一些实施方案中，受试者对于最后一种先前疗法已经复发。如果受试者对最后一种先前疗法实现小于部分反应，则状态是难治性的。在一些实施方案中，受试者进行了先前化学疗法。在一些实施方案中，受试者对于先前化学疗法是化学难治性的。在一些实施方案中，受试者对于先前疗法是化学敏感性的。如果受试者对于最后一种含有化学疗法的方案实现稳定性疾病(SD)或进行性疾病(PD)或在自体干细胞移植之后小于12个月复发，则状态是化学难治性的。否则所述状态是化学敏感性的。
在一些实施方案中，所述方法、细胞和组合物可以对预后不良的高风险患者提供高持久反应率，并且降低了不良影响或毒性的风险。在一些实施方案中，所述方法和用途提供或实现了更高的反应率和/或更持久的反应或功效和/或降低的可能与包括细胞疗法的组合疗法相关的毒性或其他副作用(如神经毒性(NT)或细胞因子释放综合征(CRS))的风险。
在一些实施方案中，至少35％、至少40％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％或至少75％或更多的根据所提供的方法和/或用所提供的制品或组合物治疗的受试者实现CR。在一些实施方案中，至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％的根据所提供的方法和/或用所提供的制品或组合物治疗的受试者实现部分反应(PR)的客观反应。在一些实施方案中，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更多的根据所提供的方法和/或用所提供的制品或组合物治疗的受试者在截至一个月、截至两个月或截至三个月时实现CR或PR。
在一些实施方案中，截至起始给予细胞疗法之后三个月、四个月、五个月、六个月或更长时间，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更多的根据所提供的方法和/或用所提供的制品或组合物治疗的受试者保持处于反应中，如保持处于CR或OR中。在一些实施方案中，这种反应(如CR或OR)可持续至少三个月、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月或九个月，如在至少或约至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更多的根据所提供的方法治疗的受试者中，或在截至一个月或截至三个月实现CR的此类受试者中。在一些实施方案中，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更多的根据所提供的方法和/或用所提供的制品或组合物治疗的受试者，或截至一个月或截至三个月实现CR的此类受试者存活或无进展存活大于或大于约三个月、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月或九个月。
在一些方面，所提供的方法可以实现高反应率或特定反应率(如在给予后一定时段(如三个月或六个月)后评估的群体中的反应率)，例如75％、或80％、或81％、82％、83％、84％、或85％或更高的ORR(如6个月或3个月ORR)，以及50％或更高、55％或更高、60％或更高、65％或更高、70％或更高、71％、72％、73％或更高、或大约75％或更高的CR率(如6个月或3个月CR率)，所述反应率也可持续如特定时间段或至少特定时间段，例如在疗法起始后持续超过1、3或6个月或更长时间或9个月或更长时间。在一些实施方案中，在约1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次给予或剂量的检查点抑制剂(例如，抗PD-L1抗体或抗原结合片段)后，实现此类反应率和持久性。
A.细胞疗法的给予
用于过继细胞疗法的细胞的给予方法是已知的，并且可以与所提供的方法、组合物以及制品和试剂盒结合使用。例如，过继T细胞疗法方法描述于例如Gruenberg等人的美国专利申请公开号2003/0170238；Rosenberg的美国专利号4,690,915；Rosenberg(2011)Nat Rev Clin Oncol.8(10):577-85)。参见例如Themeli等人(2013)Nat Biotechnol.31(10):928-933；Tsukahara等人(2013)Biochem Biophys Res Commun 438(1):84-9；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338。
在一些实施方案中，用于在所提供的方法中使用或与所提供的方法结合给予的细胞含有或被工程化以含有工程化受体(例如工程化抗原受体，如嵌合抗原受体(CAR))或T细胞受体(TCR)。组合物包括用于给予(如用于过继细胞疗法)的药物组合物和配制品。还提供了用于根据所提供的方法和/或用所提供的制品或组合物将所述细胞和组合物给予至受试者(例如患者)的治疗方法。
细胞通常表达重组受体，如抗原受体(包括功能性非TCR抗原受体，例如嵌合抗原受体(CAR))，和其他抗原结合受体，如转基因T细胞受体(TCR)。受体还包括其他嵌合受体。用于作为所提供的方法的细胞疗法给予的示例性工程化细胞描述于章节II中。
在一些实施方案中，细胞疗法(例如，过继T细胞疗法)通过自体转移进行，其中从接受细胞疗法的受试者或从来源于这种受试者的样品中分离和/或以其他方式制备细胞。因此，在一些方面，细胞来源于需要治疗的受试者(例如，患者)，并且在分离和加工后将细胞给予至同一受试者。
在一些实施方案中，细胞疗法(例如，过继T细胞疗法)通过同种异体转移进行，其中从将要接受或最终接受细胞疗法的受试者以外的受试者(例如，第一受试者)分离和/或以其他方式制备细胞。在此类实施方案中，然后将所述细胞给予至相同物种的不同受试者，例如第二受试者。在一些实施方案中，第一受试者和第二受试者在遗传上是相同的。在一些实施方案中，第一受试者和第二受试者在遗传上是相似的。在一些实施方案中，第二受试者表达与第一受试者相同的HLA类别或超类型。
T细胞疗法的细胞可以以配制用于给予的组合物给予，或者可替代地以配制用于分开给予的多于一种组合物(例如两种组合物)给予。细胞的一个或多个剂量可以包括特定数量或相对数量的细胞或工程化细胞，和/或组合物内的限定比率或组成的两种或更多种亚型(如CD4与CD8 T细胞)。
所述细胞可以通过任何合适的方式给予，例如通过推注输注，通过注射例如静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下(subconjectval)注射、结膜下(subconjuntival)注射、眼球筋膜囊下(sub-Tenon)注射、球后注射、球周注射或后近巩膜(posteriorjuxtascleral)递送。在一些实施方案中，它们通过肠胃外、肺内和鼻内以及(如果局部治疗需要)病灶内给予来给予。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给予。在一些实施方案中，给定剂量通过细胞的单次推注给药来给予。在一些实施方案中，给定剂量通过细胞的多次推注给药例如在不超过3天的时间段内来给予，或通过细胞的连续输注给药来给予。在一些实施方案中，所述细胞剂量的给予或任何其他疗法(例如，淋巴细胞清除疗法、干预疗法和/或组合疗法)是通过门诊递送进行的。
为了治疗疾病，适当的剂量可取决于待治疗的疾病类型、细胞或重组受体的类型、疾病的严重程度和病程、先前疗法、受试者的临床病史和对细胞的反应以及主治医师的决断。在一些实施方案中，将组合物和细胞一次或在一系列治疗中以合适的方式给予至受试者。
在一些方面，使用免疫清除(例如，淋巴细胞清除)疗法预调理受试者可以改善过继细胞疗法(ACT)的效果。
因此，在一些实施方案中，所述方法包括在起始细胞疗法之前向受试者给予预调理剂，例如淋巴细胞清除剂或化学治疗剂，如环磷酰胺、氟达拉滨或其组合。例如，可以在起始细胞疗法之前至少2天(例如之前至少3、4、5、6或7天)，向受试者给予预调理剂。在一些实施方案中，在起始细胞疗法之前不超过7天(例如之前不超过6、5、4、3或2天)，向受试者给予预调理剂。
在一些实施方案中，将受试者用在或在约20mg/kg与100mg/kg之间、如在或在约40mg/kg与80mg/kg之间的剂量的环磷酰胺进行预调理。在一些方面，用或用约60mg/kg的环磷酰胺对受试者进行预调理。在一些实施方案中，可以将环磷酰胺以单一剂量给予或者可以按多个剂量给予，如每天给予、每隔一天给予或每三天给予。在一些实施方案中，环磷酰胺每天给予一次，持续一天或两天。在一些实施方案中，在淋巴细胞清除剂包含环磷酰胺的情况下，按以下剂量向受试者给予环磷酰胺：在或在约100mg/m2与500mg/m2之间，如在或在约200mg/m2与400mg/m2之间或250mg/m2与350mg/m2之间，包含端值。在一些情形中，向受试者给予约300mg/m2的环磷酰胺。在一些实施方案中，可以将环磷酰胺以单一剂量给予或者可以按多个剂量给予，如每天给予、每隔一天给予或每三天给予。在一些实施方案中，每天给予环磷酰胺，如持续1-5天，例如持续3至5天。在一些情形中，在起始细胞疗法之前，每天向受试者给予约300mg/m2的环磷酰胺，持续3天。
在一些实施方案中，在淋巴细胞清除剂包含氟达拉滨的情况下，按以下剂量向受试者给予氟达拉滨：在或在约1mg/m2与100mg/m2之间，如在或在约10mg/m2与75mg/m2之间、15mg/m2与50mg/m2之间、20mg/m2与40mg/m2之间或24mg/m2与35mg/m2之间，包含端值。在一些情形中，向受试者给予约30mg/m2的氟达拉滨。在一些实施方案中，可以将氟达拉滨以单一剂量给予或者可以按多个剂量给予，如每天给予、每隔一天给予或每三天给予。在一些实施方案中，每天给予氟达拉滨，如持续1-5天，例如持续3至5天。在一些情形中，在起始细胞疗法之前，每天向受试者给予约30mg/m2的氟达拉滨，持续3天。
在一些实施方案中，淋巴细胞清除剂包含药剂的组合，如环磷酰胺和氟达拉滨的组合。因此，药剂的组合可包括任何剂量或给予方案(如上述那些剂量或给予方案)下的环磷酰胺以及任何剂量或给予方案(如上述那些剂量或给予方案)下的氟达拉滨。例如，在一些方面，在第一剂量或随后的剂量之前，向受试者给予60mg/kg(约2g/m2)的环磷酰胺和3至5个剂量的25g/m2氟达拉滨。
在一些实施方案中，在给予细胞后，例如通过许多已知方法中的任一种测量工程化细胞群的生物活性。待评估的参数包括工程化或天然T细胞或其他免疫细胞与抗原的特异性结合，其在体内例如通过成像进行评估，或离体例如通过ELISA或流式细胞术进行评估。在某些实施方案中，工程化细胞破坏靶细胞的能力可以使用任何合适的已知方法来测量，所述已知方法如描述于例如以下文献中的细胞毒性测定：Kochenderfer等人,J.Immunotherapy,32(7):689-702(2009)，和Herman等人J.Immunological Methods,285(1):25-40(2004)。在一些实施方案中，通过测定一种或多种细胞因子(如CD107a、IFNγ、IL-2和TNF)的表达和/或分泌来测量细胞的生物活性。在一些方面，通过评估临床结果(如肿瘤负荷或负担的减少)来测量生物活性。
1.组合物和配制品
在一些实施方案中，将细胞疗法(如包含用重组抗原受体(例如CAR或TCR)工程化的细胞的T细胞疗法)的细胞的剂量作为组合物或配制品(如药物组合物或配制品)来提供。此类组合物可以根据所提供的方法使用和/或与所提供的制品或组合物一起使用，如用于治疗疾病、病症和障碍。
术语“药物配制品”是指这样的制剂，其处于使得其中所含活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对给予配制品的受试者具有不可接受的毒性的另外的组分。
“药学上可接受的载体”是指药物配制品中除了活性成分之外对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲液、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
在一些实施方案中，用药学上可接受的载体配制细胞疗法(如工程化T细胞(例如CAR T细胞))。在一些方面，载体的选择部分取决于特定细胞或药剂和/或取决于给予方法。因此，存在多种合适的配制品。例如，药物组合物可以含有防腐剂。合适的防腐剂可以包括例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠和苯扎氯铵。在一些方面中，使用两种或更多种防腐剂的混合物。防腐剂或其混合物通常以按总组合物的重量计约0.0001％至约2％的量存在。载体描述于例如Remington's Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编辑(1980)。药学上可接受的载体在所用的剂量和浓度下通常对接受者无毒，并且包括但不限于：缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；烷基对羟基苯甲酸酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖类，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，如钠；金属络合物(例如锌-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，如聚乙二醇(PEG)。
在一些方面，在所述组合物中包括缓冲剂。合适的缓冲剂包括例如柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸、磷酸钾和各种其他酸和盐。在一些方面中，使用两种或更多种缓冲剂的混合物。缓冲剂或其混合物通常以按总组合物的重量计约0.001％至约4％的量存在。用于制备可给予的药物组合物的方法是已知的。示例性方法更详细地描述于例如Remington:The Scienceand Practice of Pharmacy,Lippincott Williams&Wilkins；第21版(2005年5月1日)中。
配制品可以包括水溶液。配制品或组合物还可含有可用于用细胞或药剂治疗的特定适应症、疾病或病症的多于一种活性成分，其中各自的活性不会相互产生不利影响。此类活性成分以对于既定目的有效的量以合适的方式组合存在。因此，在一些实施方案中，药物组合物进一步包括其他药物活性药剂或药物，如化学治疗剂，例如，天冬酰胺酶、白消安、卡铂、顺铂、柔红霉素、多柔比星、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、紫杉醇、利妥昔单抗(rituximab)、长春碱、长春新碱等。
在一些实施方案中，药物组合物含有有效治疗疾病或病症的量(如治疗有效量或预防有效量)的细胞。在一些实施方案中，通过定期评估所治疗的受试者来监测治疗功效。对于数天或更长时间的重复给予，根据病症，重复所述治疗直至出现疾病症状的所需抑制为止。然而，其他剂量方案可能是有用的并且可以被确定。所需剂量可以通过单次推注给予组合物、通过多次推注给予组合物、或通过连续输注给予组合物来递送。
可以使用标准给予技术、配制品和/或装置来给予细胞。提供了用于储存和给予组合物的配制品和装置(如注射器和小瓶)。关于细胞，给予可以是自体的或异源的。例如，免疫应答细胞或祖细胞可以获得自一名受试者，并且给予至同一受试者或不同的相容受试者。外周血衍生的免疫应答细胞或其后代(例如，体内、离体或体外衍生的)可以经由局部注射(包括导管给予)、全身注射、局部注射、静脉内注射或肠胃外给予来给予。在给予治疗性组合物(例如，含有遗传修饰的免疫应答细胞的药物组合物)时，通常将其配制成单位剂量可注射形式(溶液、悬浮液、乳液)。
配制品包括用于口服、静脉内、腹膜内、皮下、经肺、透皮、肌内、鼻内、经颊、舌下或栓剂给予的那些。在一些实施方案中，肠胃外给予药剂或细胞群。如本文所用，术语“肠胃外”包括静脉内、肌内、皮下、直肠、阴道和腹膜内给予。在一些实施方案中，通过静脉内、腹膜内或皮下注射使用外周全身递送向受试者给予药剂或细胞群。
在一些实施方案中，组合物是作为无菌液体制剂来提供，所述无菌液体制剂例如，等渗水溶液、悬浮液、乳液、分散体或粘性组合物，其在一些方面可以被缓冲至选择的pH。液体制剂一般比凝胶、其他粘性组合物和固体组合物制备起来更容易。另外地，液体组合物稍微更方便给予，特别是通过注射。在另一方面，粘性组合物可以配制在适当的粘度范围内，以提供与特定组织的更长的接触时间。液体或粘性组合物可以包含载体，所述载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇)及其合适的混合物。
无菌可注射溶液可以通过将细胞掺入溶剂中来制备，例如与合适的载体、稀释剂或赋形剂(如无菌水、生理盐水、葡萄糖、右旋糖等)混合。
用于体内给予的配制品通常是无菌的。可以例如通过经无菌滤膜过滤容易地实现无菌。
2.给药
在一些实施方案中，根据所提供的方法和/或用所提供的制品或组合物将一定剂量的细胞给予受试者。在一些实施方案中，剂量的大小或时间安排根据受试者的特定疾病或病症确定。在一些情况下，鉴于所提供的描述，针对特定疾病的剂量的大小或时间安排可以凭经验来确定。
在一些实施方案中，细胞的剂量包含在为或约2x105个细胞/kg与为或约2x106个细胞/kg之间，如在为或约4x105个细胞/kg与为或约1x106个细胞/kg之间或在为或约6x105个细胞/kg与为或约8x105个细胞/kg之间。在一些实施方案中，细胞的剂量包含不超过2x105个细胞(例如，抗原表达细胞，如CAR表达细胞)/公斤受试者体重(细胞/kg)，如不超过或不超过约3x105个细胞/kg、不超过或不超过约4x105个细胞/kg、不超过或不超过约5x105个细胞/kg、不超过或不超过约6x105个细胞/kg、不超过或不超过约7x105个细胞/kg、不超过或不超过约8x105个细胞/kg、不超过或不超过约9x105个细胞/kg、不超过或不超过约1x106个细胞/kg、或不超过或不超过约2x106个细胞/kg。在一些实施方案中，细胞的剂量包含至少或至少约或为或约2x105个细胞(例如，抗原表达细胞，如CAR表达细胞)/公斤受试者体重(细胞/kg)，如至少或至少约或为或约3x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约4x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约5x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约6x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约7x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约8x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约9x105个细胞/kg、至少或至少约或为或约1x106个细胞/kg、或至少或至少约或为或约2x106个细胞/kg。
在某些实施方案中，所述细胞或单独的细胞亚型群体以约100万至约1000亿个细胞和/或按每公斤体重该细胞量的范围给予受试者，例如像为或约100万至为或约500亿个细胞(例如，为或约500万个细胞、为或约2500万个细胞、为或约5亿个细胞、为或约10亿个细胞、为或约50亿个细胞、为或约200亿个细胞、为或约300亿个细胞、为或约400亿个细胞或由任两个前述值限定的范围)，如约1000万至为或约1000亿个细胞(例如，为或约2000万个细胞、为或约3000万个细胞、为或约4000万个细胞、为或约6000万个细胞、为或约7000万个细胞、为或约8000万个细胞、为或约9000万个细胞、为或约100亿个细胞、为或约250亿个细胞、约500亿个细胞、为或约750亿个细胞、为或约900亿个细胞或由任两个前述值限定的范围)，并且在一些情况下为或约1亿个细胞至为或约500亿个细胞(例如，为或约1.2亿个细胞、为或约2.5亿个细胞、为或约3.5亿个细胞、为或约4.5亿个细胞、为或约6.5亿个细胞、为或约8亿个细胞、为或约9亿个细胞、为或约30亿个细胞、为或约300亿个细胞、为或约450亿个细胞)或在这些范围和/或每公斤体重的这些范围之间的任何值。剂量可以根据疾病或障碍和/或患者和/或其他治疗特有的属性而变化。
在一些实施方案中，细胞的剂量是细胞的平坦剂量或细胞的固定剂量，使得细胞的剂量不依赖于或不基于受试者的体表面积或体重。
在一些实施方案中，基因工程化细胞的剂量包含从或从约1x105至5x108个总CAR表达T细胞、1x105至2.5x108个总CAR表达T细胞、1x105至1x108个总CAR表达T细胞、1x105至5x107个总CAR表达T细胞、1x105至2.5x107个总CAR表达T细胞、1x105至1x107个总CAR表达T细胞、1x105至5x106个总CAR表达T细胞、1x105至2.5x106个总CAR表达T细胞、1x105至1x106个总CAR表达T细胞、1x106至5x108个总CAR表达T细胞、1x106至2.5x108个总CAR表达T细胞、1x106至1x108个总CAR表达T细胞、1x106至5x107个总CAR表达T细胞、1x106至2.5x107个总CAR表达T细胞、1x106至1x107个总CAR表达T细胞、1x106至5x106个总CAR表达T细胞、1x106至2.5x106个总CAR表达T细胞、2.5x106至5x108个总CAR表达T细胞、2.5x106至2.5x108个总CAR表达T细胞、2.5x106至1x108个总CAR表达T细胞、2.5x106至5x107个总CAR表达T细胞、2.5x106至2.5x107个总CAR表达T细胞、2.5x106至1x107个总CAR表达T细胞、2.5x106至5x106个总CAR表达T细胞、5x106至5x108个总CAR表达T细胞、5x106至2.5x108个总CAR表达T细胞、5x106至1x108个总CAR表达T细胞、5x106至5x107个总CAR表达T细胞、5x106至2.5x107个总CAR表达T细胞、5x106至1x107个总CAR表达T细胞、1x107至5x108个总CAR表达T细胞、1x107至2.5x108个总CAR表达T细胞、1x107至1x108个总CAR表达T细胞、1x107至5x107个总CAR表达T细胞、1x107至2.5x107个总CAR表达T细胞、2.5x107至5x108个总CAR表达T细胞、2.5x107至2.5x108个总CAR表达T细胞、2.5x107至1x108个总CAR表达T细胞、2.5x107至5x107个总CAR表达T细胞、5x107至5x108个总CAR表达T细胞、5x107至2.5x108个总CAR表达T细胞、5x107至1x108个总CAR表达T细胞、1x108至5x108个总CAR表达T细胞、1x108至2.5x108个总CAR表达T细胞或2.5x108至5x108个总CAR表达T细胞。
在一些实施方案中，基因工程化细胞的剂量包含至少或至少约1x105个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x105个CAR表达细胞、至少或至少约5x105个CAR表达细胞、至少或至少约1x106个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x106个CAR表达细胞、至少或至少约5x106个CAR表达细胞、至少或至少约1x107个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x107个CAR表达细胞、至少或至少约5x107个CAR表达细胞、至少或至少约1x108个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x108个CAR表达细胞、或者至少或至少约5x108个CAR表达细胞。
在一些实施方案中，细胞疗法包括给予一定剂量，所述剂量包含以下细胞数量：从或从约1x105至5x108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)、从或从约5x105至1x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)、或者从或从约1x6至1x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞疗法包括给予一定剂量的细胞，所述剂量包含以下细胞数量：至少或至少约1x105个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如至少或至少1x106、至少或至少约1x107、至少或至少约1x108个此类细胞。在一些实施方案中，所述数量是关于CD3+或CD8+的总数，在一些情况下也是关于重组受体表达(例如CAR+)细胞。在一些实施方案中，细胞疗法包括给予一定剂量，所述剂量包含以下细胞数量：从或从约1x105至5x108个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+重组受体表达细胞、从或从约5x105至1x107个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+重组受体表达细胞、或从或从约1x106至1x107个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+重组受体表达细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞疗法包括给予一定剂量，所述剂量包含以下细胞数量：从或从约1x105至5x108个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞、从或从约5x105至1x107个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞、或者从或从约1x106至1x107个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞，每个都包含端值。
在一些实施方案中，T细胞的剂量包含：为或约5x107个重组受体表达T细胞或为或约2.5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。在一些实施方案中，T细胞的剂量包含：为或约1x108个重组受体表达T细胞或为或约5x107个重组受体表达CD8+ T细胞。在一些实施方案中，T细胞的剂量包含：为或约1.5x108个重组受体表达T细胞或为或约0.75x108个重组受体表达CD8+ T细胞。
在一些实施方案中，例如，在所述受试者是人的情况下，所述剂量包括少于约5x108个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)，例如在约1x106至5x108个此类细胞的范围内，如2x106、5x106、1x107、5x107、1x108、2x108、3x108或4x108个总此类细胞，或任两个前述值之间的范围内。在一些实施方案中，在所述受试者是人的情况下，所述剂量包括约1x106与3x108个之间的总重组受体(例如，CAR)表达细胞，例如在约1x107至2x108个此类细胞的范围内，如1x107、5x107、1x108或1.5x108个总此类细胞，或任两个前述值之间的范围内。在一些实施方案中，给予患者多个剂量，并且每个所述剂量或总剂量可以在任何前述值内。在一些实施方案中，细胞的剂量包括给予从或从约1x105至5x108个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞、1x105至1.5x108个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞、1x105至1x108个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞、从或从约5x105至1x107个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞或者从或从约1x106至1x107个总重组受体(例如CAR)表达T细胞或总T细胞，每个都包含端值。
在一些实施方案中，所述剂量的T细胞包括CD4+ T细胞、CD8+ T细胞或CD4+和CD8+T细胞。
在一些实施方案中，例如，在所述受试者是人的情况下，所述剂量(包括在包括CD4+和CD8+ T细胞的剂量中)的CD8+ T细胞包括约1x106与1x108个之间的总重组受体(例如，CAR)表达CD8+细胞，例如在约5x106至1x108个此类细胞的范围内，如1x107、2.5x107、5x107、7.5x107或1x108个总此类细胞，或任两个前述值之间的范围内。在一些实施方案中，给予患者多个剂量，并且每个所述剂量或总剂量可以在任何前述值内。在一些实施方案中，细胞的剂量包括给予从或从约1x107至0.75x108个总重组受体表达CD8+ T细胞、1x107至2.5x107个总重组受体表达CD8+ T细胞、从或从约1x107至0.75x108个总重组受体表达CD8+ T细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞的剂量包括给予或给予约1x107、2.5x107、5x107、7.5x107或1x108个总重组受体表达CD8+ T细胞。
在一些实施方案中，例如，在所述受试者是人的情况下，所述剂量(包括在包括CD4+和CD8+ T细胞的剂量中)的CD4+ T细胞包括约1x106与1x108个之间的总重组受体(例如，CAR)表达CD4+细胞，例如在约5x106至1x108个此类细胞的范围内，如1x107、2.5x107、5x107、7.5x107或1x108个总此类细胞，或任两个前述值之间的范围内。在一些实施方案中，给予患者多个剂量，并且每个所述剂量或总剂量可以在任何前述值内。在一些实施方案中，细胞的剂量包括给予从或从约1x107至0.75x108个总重组受体表达CD4+ T细胞、1x107至2.5x107个总重组受体表达CD4+ T细胞、从或从约1x107至0.75x108个总重组受体表达CD4+ T细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞的剂量包括给予或给予约1x107、2.5x107、5x107、7.5x107或1x108个总重组受体表达CD4+ T细胞。
在一些实施方案中，细胞(例如，重组受体表达T细胞)的剂量作为单一剂量给予至受试者，或者在两周、一个月、三个月、六个月、1年或更长的时段内仅给予一次。
在过继细胞疗法的情境下，给予给定“剂量”涵盖给予作为单一组合物和/或单次不间断给予(例如，作为单次注射或连续输注)的给定量或数量的细胞，并且还涵盖在指定时间段中(如在不超过3天中)给予在多个单独组合物或输注中提供的作为分割剂量或作为多个组合物的给定量或数量的细胞。因此，在一些情境下，剂量是指定数量的细胞的单次或连续给予，在单个时间点给予或开始。然而，在一些情境下，剂量是在不超过三天的时间段中以多次注射或输注(如一天一次，持续三天或两天)来给予，或者是在一天的时间段中通过多次输注来给予。
因此，在一些方面，所述剂量的细胞以单一药物组合物给予。在一些实施方案中，所述剂量的细胞以多个组合物给予，它们共同含有所述剂量的细胞。
在一些实施方案中，术语“分割剂量”是指被分割使得其在超过一天中给予的剂量。这种类型的给药涵盖在本方法中并且被认为是单一剂量。
因此，细胞的剂量可以作为分割剂量给予，例如随时间给予的分割剂量。例如，在一些实施方案中，剂量可以在2天或3天内给予受试者。用于分割给药的示例性方法包括在第一天给予25％的剂量并在第二天给予剩余的75％的剂量。在其他实施方案中，可以在第一天给予33％的剂量，并且在第二天给予剩余的67％。在一些方面，在第一天给予10％的剂量，在第二天给予30％的剂量，并且在第三天给予60％的剂量。在一些实施方案中，分割剂量持续不超过3天。
在一些实施方案中，所述剂量的细胞可以通过给予多个组合物或溶液(例如第一和第二，任选地更多)来给予，它们各自含有所述剂量的一些细胞。在一些方面，任选地在一定时间段内，分开地或独立地给予多个组合物，每个组合物含有不同细胞群和/或细胞亚型。例如，细胞群或细胞亚型可以分别包括CD8+和CD4+ T细胞，和/或分别包括富集CD8+和CD4+的群体，例如CD4+和/或CD8+ T细胞，其各自单独地包括基因工程化以表达重组受体的细胞。在一些实施方案中，所述剂量的给予包括给予第一组合物，所述第一组合物包含CD8+T细胞的剂量或CD4+ T细胞的剂量，以及给予第二组合物，所述第二组合物包含CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的剂量中的另一者。
在一些实施方案中，含有待给予的细胞的组合物、或待给予的细胞的剂量或群体(如工程化T细胞的组合物、群体或剂量)富集或含有至少一定百分比或比例的特定细胞亚型。在一些实施方案中，用于给予的细胞的组合物或群体富集或含有至少一定百分比或比例的CD8+和/或CD4+ T细胞。
在一些实施方案中，用于给予的细胞的组合物或群体富集或含有至少一定百分比或比例的CD8+ T细胞。在一些任何实施方案中，用于给予的细胞的组合物或群体包含至少为或约50％、为或约60％、为或约70％、为或约80％、为或约90％、为或约91％、为或约92％、为或约93％、为或约94％、为或约95％、为或约96％、为或约97％、为或约98％或为或约99％的CD8+ T细胞。在一些实施方案中，用于给予的细胞的组合物或群体包含至少或至少约95％的CD8+T细胞。在一些实施方案中，用于给予的细胞的组合物或群体包含至少或至少约96％的CD8+ T细胞。在一些实施方案中，用于给予的细胞的组合物或群体包含至少或至少约97％的CD8+ T细胞。在一些实施方案中，用于给予的细胞的组合物或群体包含至少或至少约98％的CD8+ T细胞。在一些实施方案中，用于给予的细胞的组合物或群体包含至少或至少约99％的CD8+ T细胞。
在一些实施方案中，用于给予的细胞的组合物或群体富集或含有至少一定百分比或比例的CD4+ T细胞。在一些任何实施方案中，用于给予的细胞的组合物或群体包含至少为或约50％、为或约60％、为或约70％、为或约80％、为或约90％、为或约91％、为或约92％、为或约93％、为或约94％、为或约95％、为或约96％、为或约97％、为或约98％或为或约99％的CD4+ T细胞。在一些实施方案中，用于给予的细胞的组合物或群体包含至少或至少约95％的CD4+T细胞。在一些实施方案中，用于给予的细胞的组合物或群体包含至少或至少约96％的CD4+ T细胞。在一些实施方案中，用于给予的细胞的组合物或群体包含至少或至少约97％的CD4+ T细胞。在一些实施方案中，用于给予的细胞的组合物或群体包含至少或至少约98％的CD4+ T细胞。在一些实施方案中，用于给予的细胞的组合物或群体包含至少或至少约99％的CD4+ T细胞。
在一些实施方案中，用于给予的细胞的组合物或群体富集或含有至少一定组合百分比或比例的CD8+和CD4+ T细胞。在一些任何实施方案中，在用于给予的细胞的组合物或群体中，CD8+ T细胞和CD4+ T细胞合计的百分比或比例是至少为或约50％、为或约60％、为或约70％、为或约80％、为或约90％、为或约91％、为或约92％、为或约93％、为或约94％、为或约95％、为或约96％、为或约97％、为或约98％或为或约99％。在一些任何实施方案中，在用于给予的细胞的组合物或群体中，CD8+ T细胞和CD4+ T细胞合计的百分比或比例为至少或至少约95％。在一些任何实施方案中，在用于给予的细胞的组合物或群体中，CD8+ T细胞和CD4+ T细胞合计的百分比或比例为至少或至少约96％。在一些实施方案中，在一些任何实施方案中，在用于给予的细胞的组合物或群体中，CD8+ T细胞和CD4+ T细胞合计的百分比或比例为至少或至少约97％。在一些任何实施方案中，在用于给予的细胞的组合物或群体中，CD8+ T细胞和CD4+ T细胞合计的百分比或比例为至少或至少约98％。在一些任何实施方案中，在用于给予的细胞的组合物或群体中，CD8+ T细胞和CD4+ T细胞合计的百分比或比例为至少或至少约99％。
在一些实施方案中，组合物或剂量的给予(例如多个细胞组合物的给予)涉及分开给予所述细胞组合物。在一些方面，分开给予是同时或以任何顺序依次进行。在一些实施方案中，所述剂量包括第一组合物和第二组合物，并且第一组合物和第二组合物的给予在彼此的48小时，如彼此的不超过36小时或彼此的不超过24小时内。在一些实施方案中，第一组合物和第二组合物的给予相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时。在一些实施方案中，第一组合物的给予的起始和第二组合物的给予的起始相隔不超过2小时、不超过1小时或不超过30分钟，相隔不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟进行。在一些实施方案中，第一组合物的给予的起始和/或完成和第二组合物的给予的完成和/或起始相隔不超过2小时、不超过1小时或不超过30分钟，相隔不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟进行。
在一些实施方案中，第一组合物和第二组合物在给予至受试者中之前混合。在一些实施方案中，第一组合物和第二组合物在给予之前不久(例如6小时、5小时、4小时、3小时、2小时、1.5小时、1小时或0.5小时内)混合，在一些实施方案中，第一组合物和第二组合物在即将给予之前混合。
在一些组合物中，第一组合物(例如所述剂量的第一组合物)包含CD4+T细胞。在一些组合物中，第一组合物(例如所述剂量的第一组合物)包含CD8+ T细胞。在一些实施方案中，所述第一组合物是在所述第二组合物之前给予。
在一些实施方案中，细胞的剂量或组合物包括限定或靶标比率的表达重组受体的CD4+细胞与表达重组受体的CD8+细胞和/或限定或靶标比率的CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率任选地为大约1:1或者在大约1:3与大约3:1之间，如大约1:1。在一些方面，具有靶标或所需比率的不同细胞群(如CD4+:CD8+比率或CAR+CD4+:CAR+CD8+比率，例如，1:1)的组合物或剂量的给予涉及给予含有所述群体中的一种的细胞组合物，然后给予包含所述群体中的另一种的单独细胞组合物，其中所述给予是以或大约以所述靶标或所需比率来进行。在一些方面，以限定比率给予细胞的剂量或组合物导致T细胞疗法的扩增、持久性和/或抗肿瘤活性得到改善。
在一些实施方案中，受试者接受细胞的多个剂量，例如，两个或更多个剂量或多个连续剂量。在一些实施方案中，向受试者给予两个剂量。在一些实施方案中，受试者接受连续剂量，例如，第二剂量是在第一剂量后大约4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天给予的。在一些实施方案中，在第一剂量后给予多个连续剂量，使得在给予所述连续剂量后给予另外一个或多个剂量。在一些方面，在另外的剂量中给予至受试者的细胞数量与第一剂量和/或连续剂量相同或相似。在一些实施方案中，另外一个或多个剂量大于先前剂量。
在一些方面，第一和/或连续剂量的大小基于如以下的一个或多个标准来确定：受试者对先前治疗(例如化学疗法)的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、大小或程度)、转移的程度或类型、分期和/或受试者发生毒性结果(例如，CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所给予的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答)的可能性或发生率。
在一些方面，第一剂量的给予与连续剂量的给予之间的时间为约9至约35天、约14至约28天或15至27天。在一些实施方案中，连续剂量的给予是在给予第一剂量后大于约14天且小于约28天的时间点。在一些方面，第一剂量与连续剂量之间的时间为约21天。在一些实施方案中，在给予连续剂量后给予另外一个或多个剂量(例如连续剂量)。在一些方面，在给予先前剂量后至少约14天且小于约28天给予另外一个或多个连续剂量。在一些实施方案中，在先前剂量后少于约14天(例如在先前剂量后4、5、6、7、8、9、10、11、12或13天)给予另外的剂量。在一些实施方案中，在先前剂量后小于约14天不给予剂量，和/或在先前剂量后超过约28天不给予剂量。
在一些实施方案中，细胞(例如，重组受体表达细胞)的剂量包括两个剂量(例如，双剂量)，包含T细胞的第一剂量和T细胞的连续剂量，其中第一剂量和第二剂量中的一个或两个包括给予T细胞的分割剂量。
在一些实施方案中，细胞的剂量通常足够大以有效减轻疾病负荷。
在一些实施方案中，细胞以所需剂量给予，所述所需剂量在一些方面包括所需剂量或数量的细胞或一种或多种细胞类型和/或所需比率的细胞类型。因此，在一些实施方案中，细胞剂量基于细胞总数(或每kg体重的数量)和单独群体或亚型的所需比率，如CD4+与CD8+的比率。在一些实施方案中，细胞剂量基于单独群体中的细胞或单独细胞类型的细胞的所需总数(或每kg体重的数量)。在一些实施方案中，剂量基于此类特征的组合，此类特征是例如总细胞的所需数量、所需比率和单独群体中细胞的所需总数量。
在一些实施方案中，细胞的群体或亚型(如CD8+和CD4+ T细胞)是以总细胞的所需剂量(如T细胞的所需剂量)来给予，或在所述所需剂量的容忍差异内给予。在一些方面，所需剂量是所需细胞数量或被给予所述细胞的受试者的每单位体重的所需细胞数量(例如，细胞/kg)。在一些方面，所需剂量等于或高于最小细胞数量或每单位体重的最小细胞数量。在一些方面，在以所需剂量给予的总细胞中，单独群体或亚型是以等于或接近所需输出比率(如CD4+与CD8+比率)存在，例如，在这个比率的某一容忍差异或误差内。
在一些实施方案中，细胞是以细胞的一种或多种单独群体或亚型的所需剂量(如CD4+细胞的所需剂量和/或CD8+细胞的所需剂量)来给予，或在所述所需剂量的容忍差异内给予。在一些方面，所需剂量是所述亚型或群体的细胞的所需数量，或被给予所述细胞的受试者的每单位体重的此类细胞的所需数量(例如细胞/kg)。在一些方面，所需剂量等于或高于所述群体或亚型的最小细胞数或每单位体重的所述群体或亚型的最小细胞数。
因此，在一些实施方案中，剂量是基于总细胞的所需固定剂量和所需比率，和/或是基于一种或多种(例如，每种)单独亚型或亚群的所需固定剂量。因此，在一些实施方案中，所述剂量是基于T细胞的所需固定或最小剂量和CD4+与CD8+细胞的所需比率，和/或是基于CD4+和/或CD8+细胞的所需固定或最小剂量。
在一些实施方案中，细胞以多种细胞群或亚型(如CD4+和CD8+细胞或亚型)的所需输出比率或在所述所需输出比率的耐受范围内给予。在一些方面，所需比率可以是特定比率或可以是一系列比率。例如，在一些实施方案中，所述所需比率(例如，CD4+与CD8+细胞的比率)在为或约1:5与为或约5:1之间(或大于约1:5且小于约5:1)，或在为或约1:3与为或约3:1之间(或大于约1:3且小于约3:1)，如在为或约2:1与为或约1:5之间(或大于约1:5且小于约2:1)，如为或约5:1、4.5:1、4:1、3.5:1、3:1、2.5:1、2:1、1.9:1、1.8:1、1.7:1、1.6:1、1.5:1、1.4:1、1.3:1、1.2:1、1.1:1、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4、1:4.5或1:5。在一些方面，容忍差异在所需比率的约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％(包括这些范围之间的任何值)内。
在特定实施方案中，细胞的数量和/或浓度是指重组受体(例如，CAR)表达细胞的数量。在其他实施方案中，细胞的数量和/或浓度是指给予的所有细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)的数量或浓度。
在一些方面，剂量的大小基于如以下的一个或多个标准来确定：受试者对先前治疗(例如化学疗法)的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、大小或程度)、转移的程度或类型、分期和/或受试者发生毒性结果(例如，CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所给予的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答)的可能性或发生率。
在一些实施方案中，所述方法还包括给予一个或多个另外的剂量的表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞和/或淋巴细胞清除疗法，和/或重复所述方法的一个或多个步骤。在一些实施方案中，所述一个或多个另外的剂量与初始剂量相同。在一些实施方案中，所述一个或多个另外的剂量不同于初始剂量，例如比初始剂量高，如高2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍或更多倍，或者比初始剂量低，如低2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍或更多倍。在一些实施方案中，一个或多个另外的剂量的给予基于以下来确定：受试者对初始治疗或任何先前治疗的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、大小或程度)、转移的程度或类型、分期和/或受试者发生毒性结果(例如，CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所给予的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答)的可能性或发生率。
B.检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体或其片段)的给予
在本文提供的方法、组合物、组合、试剂盒或制品的一些实施方案中，组合疗法包括给予检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))，例如含有此类检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的药物组合物。在一些方面，检查点抑制剂能够抑制或阻断免疫检查点途径的蛋白或组分，如检查点途径的PD-1/PD-L1轴。在一些实施方案中，示例性检查点抑制剂包括抗PD-L1抗体或抗PD-1抗体。
1.抗PD-L1抗体或其片段
在本文提供的方法、组合物、组合、试剂盒或制品的一些实施方案中，组合疗法包括给予抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)，例如含有抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)的药物组合物。在一些任何实施方案中，检查点抑制剂是或包含抗PD-1抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)与PD-L1，如与PD-L1的细胞外区域特异性结合。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)以小于约5、4、3、2.5、2或1纳摩尔(nM)的结合亲和力(KD)与PD-L1结合。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)以下述结合亲和力(KD)与靶标(即PD-L1)结合：约5nM至约1nM；或约5nM至约2nM；或约5nM至约3nM；或约5nM至约4nM；或约3nM至约1nM；或约2nM至约1nM。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)以小于约950皮摩尔(pM)的结合亲和力(KD)与靶标(即PD-L1)结合。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)以小于约900、800、700、600、500、400、300、200或100pM的结合亲和力(KD)与靶标(即PD-L1)结合。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)以下述结合亲和力(KD)与靶标(即PD-L1)结合：约900pM至约100pM；或约900pM至约200pM；或约900pM至约300pM；或约900pM至约400pM；或约900pM至约500pM；或约900pM至约600pM；或约900pM至约700pM；或约200pM至约100pM；或约300pM至约200pM；或约400pM至约300pM。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)以小于约90pM、80pM、70pM、60pM、55pM或50pM的结合亲和力(KD)与靶标(即PD-L1)结合。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)以下述结合亲和力(KD)与靶标(即PD-L1)结合：约100pM至约50pM；或约100pM至约70pM；或约100pM至约80pM；或约100pM至约90pM；或约70pM至约50pM；或约60pM至约50pM；或约55pM至约50pM。可以使用本领域技术人员已知的方法(例如BIAcore测定，ELISA)(Biacore International AB，乌普萨拉，瑞典)评估KD。
在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)关于结合PD-L1的结合特性也可以通过参考解离或缔合速率(分别为k解离和k缔合)来测量。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)的k缔合速率(抗体(Ab)+抗原(Ag)k缔合→Ab-Ag)为至少约104M-1s-1、至少约5×104M-1s-1、至少约105M-1s-1、至少约2×105M-1s-1、至少约5×105M-1s-1、至少约106M-1s-1、至少约5×106M-1s-1、至少约107M-1s-1、至少约5×107M-1s-1或至少约108M-1s-1。在一些实施方案中，k缔合速率通过BIAcore测定来测量。
在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)的结合特性的k解离速率(抗体(Ab)+抗原(Ag)k解离→Ab-Ag)小于约5×10-1s-1、小于约10-1s-1、小于约5×10-2s-1、小于约10-2s-1、小于约5×10-3s-1、小于约10-3s-1、小于约5×10-4s-1、小于约10-4s-1、小于约5×10-5s-1、小于约10-5s-1、小于约5×10-6s-1、小于约10-6s-1、小于约5×10-7s-1、小于约10-7s-1、小于约5×10-8s-1、小于约10-8s-1、小于约5×10-9s-1、小于约10-9s-1或小于约10-10s-1。在一些实施方案中，k解离速率通过BIAcore测定来测量。
在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)不与PD-L2结合。在一些实施方案中，PD-L2是人PD-L2。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)不与B7-H2(例如，人B7-H2)结合。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)不与B7-H3(例如，人B7-H3)结合。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)不与CD28(例如，人CD28)结合。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)不与CTLA-4(例如，人CTLA-4)结合。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)不与PD-1(例如，人PD-1)结合。
在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)与来自除人之外的物种的PD-L1交叉反应。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)与食蟹猴PD-L1交叉反应。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)与小鼠PD-L1(例如2.7A4)交叉反应。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)与食蟹猴PD-L1且与小鼠PD-L1(例如2.7A4)交叉反应。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)与食蟹猴PD-L1交叉反应但不与小鼠PD-L1(例如2.9D10和2.14H9)交叉反应。
在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是完全人单克隆抗体或其片段。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是工程化抗体。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是嵌合或人源化抗体。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)在Fc区中包含至少一个突变。
本文中的术语“抗体”在最广泛的意义上使用，并且包括多克隆和单克隆抗体，包括完整抗体和功能性(抗原结合)抗体片段，包括片段抗原结合(Fab)片段、F(ab')2片段、Fab'片段、Fv片段、重组IgG(rIgG)片段、能够特异性结合抗原的重链可变(VH)区、单链抗体片段(包括单链可变片段(scFv))以及单结构域抗体(例如，sdAb、sdFv、纳米抗体)片段。所述术语涵盖免疫球蛋白的基因工程化的和/或以其他方式修饰的形式，如胞内抗体、肽体(peptibody)、嵌合抗体、全人抗体、人源化抗体和异缀合抗体(heteroconjugateantibody)、多特异性(例如，双特异性或三特异性)抗体、双抗体、三抗体和四抗体、串联二-scFv、串联三-scFv。除非另有说明，否则术语“抗体”应理解为涵盖其功能性抗体片段(在本文中也称为“抗原结合片段”)。所述术语还涵盖完整或全长抗体，包括任何类别或亚类(包括IgG及其亚类、IgM、IgE、IgA和IgD)的抗体。
术语“互补决定区”和“CDR”与“高变区”或“HVR”同义，在本领域中是已知的，指代抗体可变区内的氨基酸的非连续序列，其赋予抗原特异性和/或结合亲和力。通常，在每个重链可变区中有三个CDR(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)，并且在每个轻链可变区中有三个CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。“框架区”和“FR”在本领域中是已知的，指代重链和轻链的可变区的非CDR部分。通常，在每个全长重链可变区中有四个FR(FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4)，并且在每个全长轻链可变区中有四个FR(FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4)。
给定CDR或FR的精确氨基酸序列边界可以使用许多熟知的方案中的任一种容易地确定，包括以下文献中所述的那些：Kabat等人(1991),“Sequences of Proteins ofImmunological Interest,”第5版Public Health Service,National Institutes ofHealth,贝塞斯达,马里兰州(“Kabat”编号方案)；Al-Lazikani等人,(1997)JMB 273,927-948(“Chothia”编号方案)；MacCallum等人,J.Mol.Biol.262:732-745(1996),“Antibody-antigen interactions:Contact analysis and binding site topography,”J.Mol.Biol.262,732-745.”(“Contact”编号方案)；Lefranc MP等人,“IMGT uniquenumbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Igsuperfamily V-like domains,”Dev Comp Immunol,2003年1月；27(1):55-77(“IMGT”编号方案)；Honegger A和Plückthun A,“Yet another numbering scheme forimmunoglobulin variable domains:an automatic modeling and analysis tool,”JMol Biol,2001年6月8号；309(3):657-70(“Aho”编号方案)；以及Martin等人,“Modelingantibody hypervariable loops:a combined algorithm,”PNAS,1989,86(23):9268-9272(“AbM”编号方案)。
给定CDR或FR的边界可能根据用于鉴定的方案而变化。例如，Kabat方案是基于结构比对，而Chothia方案是基于结构信息。Kabat和Chothia方案的编号都是基于最常见的抗体区域序列长度，其中通过插入字母(例如“30a”)提供插入，并且在一些抗体中出现缺失。这两种方案将某些插入和缺失(“插入缺失(indel)”)放置在不同的位置，从而产生不同的编号。Contact方案是基于对复杂晶体结构的分析，并且在许多方面与Chothia编号方案相似。AbM方案是Kabat与Chothia定义之间的折衷，是基于Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用的方案。
下表2列出了分别通过Kabat、Chothia、AbM和Contact方案鉴定的CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3以及CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3的示例性位置边界。对于CDR-H1，使用Kabat和Chothia两种编号方案列出了残基编号。FR位于CDR之间，例如其中FR-L1位于CDR-L1之前，FR-L2位于CDR-L1与CDR-L2之间，FR-L3位于CDR-L2与CDR-L3之间等。应注意，因为所示的Kabat编号方案在H35A和H35B处放置插入，所以当使用所示的Kabat编号惯例进行编号时，ChothiaCDR-H1环的末端取决于环的长度而在H32与H34之间变化。
Figure BDA0002702674000000721
Figure BDA0002702674000000731
1-Kabat等人(1991),“Sequences of Proteins of Immunological Interest,”第5版Public Health Service,National Institutes of Health,贝塞斯达,马里兰州
2-Al-Lazikani等人,(1997)JMB 273,927-948
因此，除非另有规定，否则给定抗体或其区域(如其可变区)的“CDR”或“互补决定区”或单独指定的CDR(例如，CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)应理解为涵盖如由任何上述方案所定义的一个(或特定)互补决定区。例如，在声明特定的CDR(例如，CDR-H3)含有给定VH或VL区氨基酸序列中的相应CDR的氨基酸序列的情况下，应理解，这种CDR具有在可变区内的相应CDR(例如，CDR-H3)的序列，如由任何上述方案所定义的。在一些实施方案中，规定了特定的CDR序列。
同样，除非另有规定，否则给定抗体或其区域(如其可变区)的FR或单独指定的一个或多个FR(例如，FR-H1、FR-H2、FR-H3、FR-H4)应理解为涵盖如由任何已知方案所定义的一个(或特定)框架区。在一些情形中，规定了用于鉴定一个或多个特定的CDR或FR的方案，如通过Kabat、Chothia、AbM或Contact方法定义的CDR。在其他情况下，给出了CDR或FR的特定氨基酸序列。
术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原的结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变区(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，其中每个结构域包含四个保守的框架区(FR)和三个CDR。(参见例如Kindt等人Kuby Immunology,第6版,W.H.Freeman and Co.,第91页(2007))。单个VH或VL结构域可以足以赋予抗原结合特异性。此外，可以使用来自结合抗原的抗体的VH或VL结构域分离结合所述特定抗原的抗体，以分别筛选互补的VL或VH结构域的文库。参见例如Portolano等人,J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人,Nature 352:624-628(1991)。
所提供的抗体包括抗体片段。“抗体片段”或“抗原结合片段”是指除了完整抗体以外的分子，其包含完整抗体的结合完整抗体所结合的抗原的一部分。抗体片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双抗体；线性抗体；重链可变(VH)区、单链抗体分子(如scFv)和仅含有VH区的单结构域抗体；和由抗体片段形成的多特异性抗体。在特定实施方案中，抗体是包含重链可变(VH)区和/或轻链可变(VL)区的单链抗体片段(例如scFv)。
单结构域抗体(sdAb)是包含抗体的全部或部分重链可变区或者全部或部分轻链可变区的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体。
抗体片段可以通过各种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞产生。在一些实施方案中，抗体是重组产生的片段，如包含并非天然存在的排列的片段(如具有通过合成接头(例如，肽接头)接合的两个或更多个抗体区或链的那些)，和/或可能并非通过天然存在的完整抗体的酶消化产生的片段。在一些方面，抗体片段是scFv。
“人源化”抗体是这样的抗体，其中全部或基本上全部CDR氨基酸残基源自非人CDR，并且全部或基本上全部FR氨基酸残基源自人FR。人源化抗体任选地可以包括源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。非人抗体的“人源化形式”是指非人抗体的变体，其已经经历人源化以通常降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如CDR残基所来源于的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
根据所提供的实施方案的抗PD-L1抗体是人抗体。“人抗体”是具有与由人或人细胞或者非人来源产生的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体，所述非人来源利用人抗体库或其他人抗体编码序列(包括人抗体文库)。所述术语不包括包含非人抗原结合区的非人抗体的人源化形式，例如其中全部或基本上全部CDR都是非人CDR的那些。所述术语包括人抗体的抗原结合片段。
人抗体可以通过将免疫原给予至转基因动物来制备，所述转基因动物已经被修饰以响应于抗原激发产生完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有人免疫球蛋白基因座的全部或部分，来替代内源免疫球蛋白基因座，或者所述人免疫球蛋白基因座的全部或部分存在于染色体外或随机整合到动物的染色体中。在此类转基因动物中，通常已经使内源性免疫球蛋白基因座失活。人抗体也可以源自人抗体文库，包括噬菌体展示和无细胞文库，其含有源自人库的抗体编码序列。
所提供的抗体包括单克隆抗体，包括单克隆抗体片段。如本文所用的术语“单克隆抗体”是指由实质上均质抗体的群体(即，除了含有天然存在的突变或在单克隆抗体制剂的产生期间产生的可能变体(此类变体通常以少量存在)之外，构成所述群体的个别抗体是相同的)获得或在所述群体内的抗体。与通常包括针对不同表位的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，单克隆抗体制剂的每种单克隆抗体针对抗原上的单个表位。所述术语不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。单克隆抗体可以通过多种技术制备，包括但不限于从杂交瘤产生、重组DNA方法、噬菌体展示和其他抗体展示方法。
在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是IgG同种型的。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的变体。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是IgG2同种型的。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)具有降低的引起效应子功能的潜力。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是IgG1同种型的完全人单克隆抗体。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)具有增加的引起抗体引导的细胞介导的细胞毒性(ADCC)的潜力。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是z、za或f同种异型的。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)不是IgG抗体或其片段。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是IgM或IgD抗体或其片段，或IgM或IgD抗体或其片段的变体。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是单链可变片段(scFv)。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是非IgG样片段(例如纳米抗体，DARPin)。
示例性PD-L1抗体包括以下文献中所披露的那些：美国专利号8,217,149；序列号12/633,339；美国专利号8,383,796；序列号13/091,936；美国专利号8,552,154；序列号13/120,406；美国专利公开号20110280877；序列号13/068,337；美国专利公开号20130309250；序列号13/892,671；WO2013019906；WO 2013079174；美国申请序列号13/511,538(2012年8月7日提交的)，其是国际申请号PCT/US10/58007(2010年提交的)的美国国家阶段；以及美国申请序列号13/478,511(2012年5月23日提交的)。
示例性抗PD-L1抗体包括MDX-1105(Medarex)、MEDI4736(德瓦鲁单抗，Medimmune，参见US8,779.108)MPDL3280A(Genentech)、AMP224(GlaxoSmithKline)、MSB0010718C(阿维单抗，Pfizer)和BMS-935559(Bristol-Myers Squibb)。MEDI4736(德瓦鲁单抗)是与PD-L1结合并抑制所述配体与PD-1的相互作用的人单克隆抗体。MDPL3280A(Genentech/Roche)是与PD-L1结合的人Fc优化的IgG1单克隆抗体。MDPL3280A和针对PD-L1的其他人单克隆抗体描述于美国专利号7,943,743和美国公开号20120039906。其他抗PD-L1结合剂包括YW243.55.S70(参见WO 2010/077634)和MDX-1105(也称为BMS-936559，和例如WO2007/005874中所述的抗PD-L1结合剂)、或前述任一项的抗原结合片段。
在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是US 8,779,108中所披露的抗体(或其抗原结合片段)。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是包含US 8,799,108中所披露的抗体或靶向结合剂的CDR序列的抗体或其片段。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是包含US 8,799,108中所披露的抗体或靶向结合剂的VH/VL序列的抗体或其片段。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)包含在SEQ ID NO:60-61中所示的序列。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体或抗原结合片段是MEDI4736(德瓦鲁单抗)。
在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是包含本文所述的任何抗体的CDR的抗体或其片段。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是与本文所述的任何抗体竞争的抗体或其片段。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)是结合至与本文所述的任何抗体所结合至的表位相同的表位的抗体或其片段。
2.抗PD-1抗体或其片段
在本文提供的方法、组合物、组合、试剂盒或制品的一些实施方案中，组合疗法包括给予抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)，例如含有抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)的药物组合物。在一些任何实施方案中，检查点抑制剂是或包含抗PD-1抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体与PD-1特异性结合，如与PD-1的细胞外区域特异性结合。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)以小于约5、4、3、2.5、2或1纳摩尔(nM)的结合亲和力(KD)与PD-1结合。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)以下述结合亲和力(KD)与靶标(即PD-1)结合：约5nM至约1nM；或约5nM至约2nM；或约5nM至约3nM；或约5nM至约4nM；或约3nM至约1nM；或约2nM至约1nM。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)以小于约950皮摩尔(pM)的结合亲和力(KD)与靶标(即PD-1)结合。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)以小于约900、800、700、600、500、400、300、200或100pM的结合亲和力(KD)与靶标(即PD-1)结合。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)以下述结合亲和力(KD)与靶标(即PD-1)结合：约900pM至约100pM；或约900pM至约200pM；或约900pM至约300pM；或约900pM至约400pM；或约900pM至约500pM；或约900pM至约600pM；或约900pM至约700pM；或约200pM至约100pM；或约300pM至约200pM；或约400pM至约300pM。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)以小于约90pM、80pM、70pM、60pM、55pM或50pM的结合亲和力(KD)与靶标(即PD-1)结合。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)以下述结合亲和力(KD)与靶标(即PD-1)结合：约100pM至约50pM；或约100pM至约70pM；或约100pM至约80pM；或约100pM至约90pM；或约70pM至约50pM；或约60pM至约50pM；或约55pM至约50pM。可以使用本领域技术人员已知的方法(例如BIAcore测定，ELISA)(Biacore International AB，乌普萨拉，瑞典)评估KD。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)关于结合PD-1的结合特性也可以通过参考解离或缔合速率(分别为k解离和k缔合)来测量。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)的k缔合速率(抗体(Ab)+抗原(Ag)k缔合→Ab-Ag)为至少约104M-1s-1、至少约5×104M-1s-1、至少约105M-1s-1、至少约2×105M-1s-1、至少约5×105M-1s-1、至少约106M-1s-1、至少约5×106M-1s-1、至少约107M-1s-1、至少约5×107M-1s-1或至少约108M-1s-1。在一些实施方案中，k缔合速率通过BIAcore测定来测量。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)的结合特性的k解离速率(抗体(Ab)+抗原(Ag)k解离→Ab-Ag)小于约5×10-1s-1、小于约10-1s-1、小于约5×10-2s-1、小于约10- 2s-1、小于约5×10-3s-1、小于约10-3s-1、小于约5×10-4s-1、小于约10-4s-1、小于约5×10-5s-1、小于约10-5s-1、小于约5×10-6s-1、小于约10-6s-1、小于约5×10-7s-1、小于约10-7s-1、小于约5×10-8s-1、小于约10-8s-1、小于约5×10-9s-1、小于约10-9s-1或小于约10-10s-1。在一些实施方案中，k解离速率通过BIAcore测定来测量。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)是完全人单克隆抗体或其片段。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)是工程化抗体。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)是嵌合或人源化抗体。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)在Fc区中包含至少一个突变。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)是IgG同种型的。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的变体。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)是IgG2同种型的。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)具有降低的引起效应子功能的潜力。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)是IgG1同种型的完全人单克隆抗体。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)具有增加的引起抗体引导的细胞介导的细胞毒性(ADCC)的潜力。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)是z、za或f同种异型的。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)不是IgG抗体或其片段。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)是IgM或IgD抗体或其片段，或IgM或IgD抗体或其片段的变体。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)是单链可变片段(scFv)。在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)是非IgG样片段(例如纳米抗体，DARPin)。
程序性细胞死亡1(PD-1)是在B细胞、NK细胞和T细胞中表达的免疫检查点蛋白(Shinohara等人,1995,Genomics 23:704-6；Blank等人,2007,Cancer ImmunolImmunother 56:739-45；Finger等人,1997,Gene 197:177-87；Pardoll(2012)NatureReviews Cancer 12:252-264)。PD-1的主要作用是在响应于感染的炎症过程中限制外周组织中T细胞的活性，以及限制自身免疫。在激活的T细胞中诱导PD-1表达，并且PD-1与其内源性配体之一的结合通过抑制刺激性激酶起到抑制T细胞激活的作用。PD-1还起到抑制TCR“停止信号”的作用。PD-1在Treg细胞上高度表达，并且可以在配体的存在下增加所述Treg细胞的增殖(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)。抗PD 1抗体已被用于治疗黑色素瘤、非小细胞肺癌、膀胱癌、前列腺癌、结直肠癌、头颈癌、三阴性乳腺癌、白血病、淋巴瘤和肾细胞癌(Topalian等人,2012,N Engl J Med 366:2443-54；Lipson等人,2013,Clin Cancer Res 19:462-8；Berger等人,2008,Clin Cancer Res 14:3044-51；Gildener-Leapman等人,2013,Oral Oncol 49:1089-96；Menzies和Long,2013,Ther AdvMed Oncol 5:278-85)。示例性抗PD-1抗体包括纳武单抗(BMS的Opdivo)、派姆单抗(Merck的Keytruda)、匹利珠单抗(Cure Tech的CT-011)、兰姆利珠单抗(lambrolizumab)(Merck的MK-3475)和AMP-224(Merck)，纳武单抗(也称为Opdivo，BMS-936558或MDX1106；Bristol-Myers Squibb)是特异性地阻断PD-1的完全人IgG4单克隆抗体。纳武单抗(克隆5C4)和特异性结合PD-1的其他人单克隆抗体描述于US 8,008,449和WO 2006/121168。匹利珠单抗(CT-011；Cure Tech)是与PD-1结合的人源化IgG1k单克隆抗体。匹利珠单抗和其他人源化抗PD-1单克隆抗体描述于WO 2009/101611。派姆单抗(先前称为兰姆利珠单抗，也称为Keytruda，MK03475；Merck)是与PD-1结合的人源化IgG4单克隆抗体。派姆单抗和其他人源化抗PD-1抗体描述于US 8,354,509和WO2009/114335。其他抗PD-1抗体包括AMP 514(Amplimmune)，尤其是例如US 8,609,089、US 2010028330、US 20120114649和/或US 20150210769中描述的抗PD-1抗体。AMP-224(B7-DCIg；Amplimmune；例如，描述于WO2010/027827和WO 2011/066342中)是阻断PD-1与B7-H1之间相互作用的PD-L2 Fc融合可溶性受体。
在一些任何实施方案中，检查点抑制剂是或包含抗PD-1抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，检查点抑制剂是抗PD-1抗体，如纳武单抗、派姆单抗或西米普利单抗、或其抗原结合片段。在一些实施方案中，检查点抑制剂是纳武单抗。
3.其他免疫检查点抑制剂
如本文所用，术语“免疫检查点抑制剂”是指完全或部分降低、抑制、干扰或调节一种或多种检查点蛋白的分子。检查点蛋白调节T细胞激活或功能。这些蛋白质负责T细胞应答的共刺激或抑制性相互作用。免疫检查点蛋白调节和维持自身耐受性和生理免疫应答的持续时间和幅度。在一些实施方案中，可以向受试者给予另外的药剂，所述另外的药剂可以增强或加强针对疾病或病症(例如癌症，如本文所述的任何一种)的免疫应答，例如由本文所提供的结合分子(例如BCMA结合分子)、重组受体、细胞和/或组合物所产生的免疫应答。
免疫检查点抑制剂包括以统计学上显著的方式阻断或抑制免疫系统的抑制途径的任何药剂。此类抑制剂可包括小分子抑制剂或可包括抗体或其抗原结合片段，它们结合至并阻断或抑制免疫检查点受体、配体和/或受体-配体相互作用。在一些实施方案中，特定受体的调节、增强和/或刺激可以胜过免疫检查点途径组分。可以被靶向用于阻断、抑制、调节、增强和/或刺激的说明性免疫检查点分子包括但不限于PD-1(CD279)、PD-L1(CD274、B7-H1)、PDL2(CD273、B7-DC)、CTLA-4、LAG-3(CD223)、TIM-3、4-1BB(CD137)、4-1BBL(CD137L)、GITR(TNFRSF18、AITR)、CD40、OX40(CD134、TNFRSF4)、CXCR2、肿瘤相关抗原(TAA)、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、GAL9、B7H3、B7H4、VISTA、KIR、2B4(属于分子的CD2家族并且在所有NK、γδ和记忆CD8+(αβ)T细胞上表达)、CD160(也称为BY55)、CGEN-15049、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5)、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4、CD80、CD86、B7-H3(CD276)、B7-H4(VTCN1)、HVEM(TNFRSF14或CD270)、KIR、A2aR、MHC I类、MHC II类、GAL9、腺苷和转化生长因子受体(TGFR；例如，TGFRβ)。免疫检查点抑制剂包括抗体或其抗原结合片段或其他结合蛋白，它们结合至并阻断或抑制和/或增强或刺激一种或多种任何所述分子的活性。
示例性免疫检查点抑制剂包括曲美目单抗(Tremelimumab)(CTLA-4阻断抗体，也称为替西木单抗(ticilimumab)、CP-675,206)、抗OX40、PD-L1单克隆抗体(抗B7-H1；MEDI4736)、MK-3475(PD-1阻断剂)、纳武单抗(抗PD-1抗体)、CT-011(抗PD-1抗体)、BY55单克隆抗体、AMP224(抗PD-L1抗体)、BMS-936559(抗PD-L1抗体)、MPLDL3280A(抗PD-L1抗体)、MSB0010718C(抗PD-L1抗体)和伊匹单抗(ipilimumab)(抗CTLA-4抗体，也称为
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MDX-010和MDX-101)。免疫调节抗体的示例包括但不限于达珠单抗(Daclizumab)(Zenapax)、贝伐单抗(Bevacizumab)
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巴利昔单抗(Basiliximab)、伊匹单抗、纳武单抗、派姆单抗、MPDL3280A、匹利珠单抗(CT-011)、MK-3475、BMS-936559、MPDL3280A(阿替珠单抗(Atezolizumab))、曲美目单抗、IMP321、BMS-986016、LAG525、乌瑞鲁单抗(urelumab)、PF-05082566、TRX518、MK-4166、达西珠单抗(dacetuzumab)(SGN-40)、鲁卡木单抗(lucatumumab)(HCD122)、SEA-CD40、CP-870、CP-893、MEDI6469、MEDI6383、MOXR0916、AMP-224、MSB0010718C(阿维鲁单抗)、MEDI4736、PDR001、rHIgM12B7、乌鲁库单抗(Ulocuplumab)、BKT140、伐立鲁单抗(Varlilumab)(CDX-1127)、ARGX-110、MGA271、利瑞鲁单抗(lirilumab)(BMS-986015、IPH2101)、IPH2201、ARGX-115、艾马珠单抗(Emactuzumab)、CC-90002和MNRP1685A或其抗体结合片段。其他示例性免疫调节剂包括例如阿福图珠单抗(afutuzumab)(可从
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获得)；培非司亭(pegfilgrastim)
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来那度胺(lenalidomide)(CC-5013，
Figure BDA0002702674000000812
)；沙利度胺(thalidomide)
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actimid(CC4047)；和IRX-2(人细胞因子的混合物，包括白细胞介素1、白细胞介素2和干扰素γ，CAS 951209-71-5，可从IRX Therapeutics获得)。
细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA-4)(也称为CD152)是用于调节T细胞激活的共抑制分子。CTLA-4是仅在T细胞上表达的免疫球蛋白超家族的成员。CTLA-4起到抑制T细胞激活的作用，并且据报道其抑制辅助T细胞活性并增强调节性T细胞免疫抑制活性。尽管CTLA-4的准确作用机制仍在研究之中，但已经表明其通过在与CD80和CD86结合中与CD28竞争而胜出以及积极地将抑制剂信号递送至T细胞来抑制T细胞激活(Pardoll(2012)NatureReviews Cancer 12:252-264)。抗CTLA-4抗体已在临床试验中用于治疗黑色素瘤、前列腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(Robert和Ghiringhelli,2009,Oncologist 14:848-61；Ott等人,2013,Clin Cancer Res 19:5300；Weber,2007,Oncologist 12:864-72；Wada等人,2013,J Transl Med 11:89)。抗CTLA-4的重要特征是抗肿瘤作用的动力学，其中在生理反应所需的初始治疗后迟滞期长达6个月。在一些情况下，在治疗起始后，在观察到缩小之前，肿瘤的大小可能实际上增加(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)。示例性抗CTLA-4抗体包括伊匹单抗(Bristol-Myers Squibb)和曲美木单抗(Pfizer)。伊匹单抗最近获得FDA批准用于治疗转移性黑色素瘤(Wada等人,2013,J Transl Med 11:89)。
淋巴细胞激活基因-3(LAG-3)(也称为CD223)是另一免疫检查点蛋白。LAG-3与淋巴细胞活性的抑制相关，并且在一些情况下与淋巴细胞无反应性的诱导相关。LAG-3在免疫系统中的各种细胞上表达，包括B细胞、NK细胞和树突细胞。LAG-3是MHC II类受体的天然配体，所述MHC II类受体基本上在黑色素瘤浸润的T细胞(包括具有有效免疫抑制活性的那些T细胞)上表达。示例性抗LAG-3抗体包括BMS-986016(Bristol-Myers Squib)，其是靶向LAG-3的单克隆抗体。IMP701(Immutep)是拮抗剂LAG-3抗体并且IMP731(Immutep和GlaxoSmithKline)是耗尽的LAG-3抗体。其他LAG-3抑制剂包括IMP321(Immutep)，其是LAG-3的可溶部分与Ig的重组融合蛋白，所述重组融合蛋白结合至MHC II类分子并激活抗原呈递细胞(APC)。其他抗体描述于例如WO 2010/019570和US 2015/0259420。
已经显示最初在激活的Th1细胞上鉴定的T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3(TIM-3)是免疫应答的负调节物。TIM-3的阻断促进T细胞介导的抗肿瘤免疫，并且在一系列小鼠肿瘤模型中具有抗肿瘤活性。TIM-3阻断与其他免疫治疗剂如TSR-042、抗CD137抗体和其他的组合在增加抗肿瘤作用方面可以是加和的或协同的。TIM-3表达与许多不同的肿瘤类型(包括黑色素瘤、NSCLC和肾癌)相关，另外，已经显示肿瘤内TIM-3的表达与一系列肿瘤类型(包括NSCLC、宫颈癌和胃癌)中的不良预后相关。TIM-3的阻断也有利于促进提高的对许多慢性病毒性疾病的免疫。还已经显示TIM-3与许多配体(包括半乳糖凝集素-9、磷脂酰丝氨酸和HMGB1)相互作用，但是目前尚不清楚这些配体中有哪些(如果有的话)与抗肿瘤反应的调节有关。在一些实施方案中，靶向TIM-3的抗体、抗体片段、小分子或肽抑制剂可以与TIM-3的IgV结构域结合以抑制与其配体的相互作用。抑制TIM-3的示例性抗体和肽描述于US 2015/0218274、WO 2013/006490和US2010/0247521。其他抗TIM-3抗体包括RMT3-23的人源化形式(Ngiow等人,2011,Cancer Res,71:3540-3551)和克隆8B.2C12(Monney等人,2002,Nature,415:536-541)。抑制TIM-3和PD-1的双特异性抗体描述于US 2013/0156774。
在一些实施方案中，另外的药剂是CEACAM抑制剂(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5抑制剂)。在一些实施方案中，CEACAM的抑制剂是抗CEACAM抗体分子。示例性抗CEACAM-1抗体描述于WO2010/125571、WO 2013/082366、WO 2014/059251和WO 2014/022332，例如单克隆抗体34B1、26H7和5F4；或其重组形式，如在例如US 2004/0047858、US7,132,255和WO 99/052552中所述。在一些实施方案中，抗CEACAM抗体与CEACAM-5结合，如例如Zheng等人PLoS One.(2011)6(6):e21146)中所述，或与CEACAM-1和CEACAM-5交叉反应，如例如WO 2013/054331和US2014/0271618中所述。
4.组合物和配制品
在本文提供的组合疗法方法、组合物、组合、试剂盒和用途的一些实施方案中，组合疗法可以以一种或多种组合物给予，所述组合物例如含有检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))或其药学上可接受的盐或水合物的药物组合物。
在一些实施方案中，组合物(例如含有检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))或其药学上可接受的盐或水合物的药物组合物)可以包括载体，如稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物，检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))或其药学上可接受的盐或水合物和或细胞与所述载体一起给予的。合适的药物载体的例子由E.W.Martin描述于“Remington’s Pharmaceutical Sciences”中。此类组合物将含有治疗有效量的通常呈纯化形式的检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))或其药学上可接受的盐或水合物以及适量的载体，以便提供适当给予至患者的形式。此类药物载体可以是无菌液体，如水和油，包括石油、动物、植物或合成源的那些油，如花生油、大豆油、矿物油和芝麻油。盐水溶液和水性右旋糖和甘油溶液也可以用作液体载体，特别是用于可注射溶液。药物组合物可以含有以下中的任何一种或多种：一种或多种稀释剂、一种或多种佐剂、一种或多种抗粘附剂、一种或多种粘合剂、一种或多种涂层、一种或多种填充剂、一种或多种调味剂、一种或多种颜料、一种或多种润滑剂、一种或多种助流剂、一种或多种防腐剂、一种或多种洗涤剂、一种或多种吸附剂、一种或多种乳化剂、一种或多种药物赋形剂、一种或多种pH缓冲剂或一种或多种甜味剂及其组合。在一些实施方案中，药物组合物可以是液体、固体、冻干粉末、呈凝胶形式和/或其组合。在一些方面，载体的选择部分取决于特定抑制剂和/或给予方法。
药学上可接受的载体在所用的剂量和浓度下通常对接受者无毒，并且包括但不限于：缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；烷基对羟基苯甲酸酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖类，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，如钠；金属络合物(例如锌-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，如聚乙二醇(PEG)、稳定剂和/或防腐剂。含有检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))或其药学上可接受的盐或水合物的组合物也可以是冻干的。
在一些实施方案中，可以将药物组合物配制成用于通过本领域技术人员已知的任何途径给予，包括肌内、静脉内、皮内、病灶内、腹膜内注射、皮下、肿瘤内、硬膜外、经鼻、口服、经阴道、经直肠、外用(topical)、局部(local)、经耳、吸入、经颊(例如，舌下)以及透皮给予或任何途径。在一些实施方案中，也考虑了其他给予方式。在一些实施方案中，给予是通过推注输注，通过注射例如静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下(subconjectval)注射、结膜下(subconjuntival)注射、眼球筋膜囊下注射、球后注射、球周注射或后近巩膜递送。在一些实施方案中，给予是通过肠胃外、肺内和鼻内以及(如果局部治疗需要)病灶内给予来进行。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给予。在一些实施方案中，给定剂量通过单次推注给药来给予。在一些实施方案中，给定剂量通过多次推注给药例如在不超过3天的时间段内来给予，或通过连续输注给药来给予。
在一些实施方案中，给予可以是局部的、外用的或全身的，这取决于治疗位点。在一些实施方案中，局部给予至需要治疗的区域可以通过例如但不限于以下方式来实现：手术期间的局部输注、外用施用(例如，与手术后的伤口敷料结合)、通过注射、借助导管、借助栓剂或借助植入物。在一些实施方案中，组合物还可以与其他生物活性剂一起给予，它们是依次地、间歇地或在同一组合物中给予。在一些实施方案中，给予还可以包括控释系统，包括控释配制品和装置控释，如借助泵。在一些实施方案中，给予是口服的。
在一些实施方案中，药学和治疗活性化合物及其衍生物通常以单位剂型或多剂型配制和给予。每个单位剂量含有预定量的足以产生所需治疗效果的治疗活性化合物，与所需的药物载体、媒介物或稀释剂结合。在一些实施方案中，单位剂型包括但不限于含有适量化合物或其药学上可接受的衍生物的片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、无菌肠胃外溶液或悬浮液以及口服溶液或悬浮液和油水乳液。单位剂型可以容纳在安瓿和注射器中或单独包装的片剂或胶囊剂中。单位剂型可以按其分数或倍数给予。在一些实施方案中，多剂型是包装在单个容器中的待以分离的单位剂型给予的多个相同的单位剂型。多剂型的例子包括小瓶、片剂或胶囊剂瓶或者品脱或加仑瓶。
5.给药
在一些实施方案中，所提供的组合疗法方法涉及向受试者给予检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗))和细胞疗法(如T细胞疗法(例如CAR表达T细胞))。
在一些实施方案中，在给予细胞疗法(如T细胞疗法(例如CAR表达T细胞))之前、之后、期间、在其过程期间、与其同时、几乎同时、依次和/或间歇地起始给予检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗))。在一些实施方案中，所述方法涉及在给予T细胞疗法之后(继其之后)起始给予检查点抑制剂如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，在起始给予细胞疗法之后大于或大于约21天，给予检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗))。在某些方面，在所提供的组合疗法中的检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗))的给予的起始是在起始给予T细胞疗法之后从或从约22天至50天，例如在或约在起始给予T细胞疗法之后22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、32天、33天、34天、35天、36天、37天、38天、39天、40天、41天、42天、43天、44天、45天、46天、47天、48天、49天或50天。在一些实施方案中，检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗))的给予的起始是在起始给予T细胞疗法之后从或从约22天至43天，如22天至36天。在一些实施方案中，检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗))的给予的起始是在起始给予T细胞疗法之后29天或约29天。
在某些方面，所提供的方法可以在受试者中增强、增加或加强T细胞疗法，在所述受试者中已经观察到对T细胞疗法的峰值反应，但其中所述反应(例如T细胞的存在和/或肿瘤负荷的减少)已经变得减少了或不再可检测到。在一些情况下，检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗))的给予的起始是在以下各项时或在以下各项之后一周内(如1、2或3天内)进行的：(i)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平的时间；(ii)在所述血液中已经可检测到之后，在所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量不可检测或减少了，任选地与在给予所述T细胞疗法之后的在前时间点相比减少了；(iii)所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量减少了或减少超过在起始给予所述T细胞疗法之后在所述受试者的血液中可检测到的所述T细胞疗法的峰值或最大细胞数量的1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多；(iv)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平之后的时间，在来自所述受试者的血液中可检测到的所述细胞的细胞数量或源自所述细胞的细胞数量为所述受试者的血液中的总外周血单核细胞(PBMC)的少于10％、少于5％、少于1％或少于0.1％；(v)所述受试者在用所述T细胞疗法治疗之后展现出疾病进展和/或在缓解后已经复发；和/或(iv)与在给予所述细胞之前或之后以及在起始给予所述检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体)之前的时间的肿瘤负荷相比，所述受试者展现出增加的肿瘤负荷。
在一些实施方案中，在受试者被首次给予检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗))的时间，和/或在起始给予之后的任何随后时间，受试者未展现出严重毒性(如严重细胞因子释放综合征(CRS)或严重毒性)的体征或症状。在一些实施方案中，检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗))的给予是在受试者未展现出严重CRS的体征或症状和/或未展现出3级或更高级CRS，如延长的3级CRS或4或5级CRS的时间进行的。在一些实施方案中，检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗))的给予是在受试者未展现出严重神经毒性的体征或症状和/或未展现出3级或更高级神经毒性，如延长的3级神经毒性或4级或5级神经毒性的时间进行的。在一些方面，在起始给予T细胞疗法的时间与给予检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗))的时间之间，受试者尚未展现出严重CRS和/或尚未展现出3级或更高级CRS，如延长的3级CRS或4或5级CRS。在一些情形中，在起始给予T细胞疗法的时间与给予检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗))的时间之间，受试者尚未展现出严重神经毒性和/或未展现出3级或更高级神经毒性，如延长的3级神经毒性或4或5级神经毒性。
在一些实施方案中，抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)以治疗有效量给予。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体或抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)以如下量(例如，周期中的总剂量量)来给予：从或从约750mg至为或约2000mg，如从或从约1200mg至为或约1500mg。在一些情况中，所述量为或为至少或至少为或约750mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、1700mg、1800mg、1900mg或2000mg。在一些情况中，所述量为或为至少或至少为或约1500mg。在一些方面，抗PD-L1抗体或其抗原结合片段是德瓦鲁单抗。
在一些实施方案中，此类量是根据受试者体重的公斤给予的。在一些实施方案中，当基于mg/kg受试者提及剂量时，认为普通人受试者具有约70kg-75kg，如为或约75kg的质量。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体或抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)以如下量(例如，周期中的总剂量量)来给予：从或从约0.5mg/公斤受试者质量至为或约30mg/kg，如从或从约1mg/kg至为或约20mg/kg。在一些情况中，所述量为或为至少或至少约0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg或20mg/kg。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体或其抗原结合片段(例如纳武单抗)以治疗有效量给予。在一个实施方案中，抗PD-1抗体或抗原结合片段(例如纳武单抗)以如下量(例如，周期中的总剂量量)来给予：从或从约200mg至为或约2000mg，如从或从约400mg至为或约1000mg、或从或从约400mg至为或约600mg。在一些情况中，所述量为或为至少或至少为或约200mg、225mg、240mg、200mg、300mg、400mg、450mg、480mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1600mg、1700mg、1800mg、1900mg或2000mg。在一些情况中，所述量为或为至少或至少为或约480mg。在一些方面，抗PD-1抗体或其抗原结合片段是纳武单抗。
在一些实施方案中，此类量是根据受试者体重的公斤给予的。在一些实施方案中，当基于mg/kg受试者提及剂量时，认为普通人受试者具有约70kg-75kg，如为或约75kg的质量。在一些实施方案中，抗PD-1抗体或抗原结合片段(例如纳武单抗)以如下量(例如，周期中的总剂量量)来给予：从或从约0.1mg/公斤受试者质量至为或约10mg/kg，如从或从约1mg/kg至为或约5mg/kg。在一些情况中，所述量为或为至少或至少约0.1mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg或10mg/kg。在一些实施方案中，所提供的方法涉及在起始给予细胞疗法之后，如以规律间隔持续给予检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗))。
给予可以使用如本文所述的周期性给予来进行。在一些实施方案中，周期性疗法涉及给予一段时间的活性剂，任选地之后停药一段时间，并且重复这种依次给予。周期性疗法可以针对每种活性剂(例如，检查点抑制剂，如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段)在规定的持续时间内独立地进行。在一些实施方案中，所提供的方法是以28天周期进行的。在一些实施方案中，将周期如28天周期重复多次。在某些实施方案中，将周期重复多达或多达约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多次，如在连续周期中。在一些实施方案中，连续周期的总持续时间不超过12个月，或进行12个月或更短的总持续时间。
在一些实施方案中，如果受试者例如在给予的第一、第二或第三周期之后展现出进行性疾病，则中止如以多于一个周期给予检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗))。在一些实施方案中，组合疗法涉及在起始细胞疗法之后给予检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段)，持续3个月(例如三个28天周期)，在所述时间时，针对检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗))的进一步治疗重新评价受试者。在一些实施方案中，在接受了所提供的组合疗法(具有多达三个28天周期的检查点抑制剂，如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗))之后展现出部分反应(PR)的受试者可以接受一个或多个另外的周期(例如28天周期)的检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或其抗原结合片段)。
在一些实施方案中，将所述量(例如周期中的总剂量量)作为一个剂量给予或如在给予周期的过程中以多于一个剂量，例如2、3、4或更多个剂量给予。在一些实施方案中，给予频率在约每日剂量至约每月一次剂量的范围内。在某些实施方案中，给予是每天一次、每天两次、每天三次、每天四次、每隔一天一次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次。在一些实施方案中，一周一次(Q1W)，例如每月四次或每周一次给予检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或抗原结合片段)。在另一个实施方案中，每两周一次(Q2W)，例如每月两次给予检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或抗原结合片段)。在又另一个实施方案中，每4周一次(Q4W)，例如每月一次给予检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或抗原结合片段)。
在某些实施方案中，在28天周期的第1天、第8天、第15天和第22天给予抗PD-L1抗体或抗原结合片段。在某些实施方案中，在28天周期的第15天和第22天给予抗PD-L1抗体或抗原结合片段。在某些实施方案中，在28天周期的第1天和第15天给予抗PD-L1抗体或抗原结合片段。在某些实施方案中，在28天周期的第1天给予抗PD-L1抗体或抗原结合片段。
在一些实施方案中，两个或更多个周期中的给予总剂量量的第一或在前周期涉及给予低于第二或随后的周期的总剂量量的抗PD-L1抗体或抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)。在一些实施方案中，较低的剂量量是第二或随后的周期的总剂量量的50％至95％。在一些实施方案中，第一或在前给予周期中抗PD-L1抗体或抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)的总剂量量与第二或随后的给予周期相同或相似。
在一些实施方案中，在两个或更多个周期(例如28天周期)中的第一周期中，抗PD-L1抗体或抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)的总剂量量的给予在所述周期中进行多于一次，例如持续2、3、4或更多天，例如在第一周期的第1天、第8天、第15天和第22天，或第15天和第22天进行。在一些实施方案中，在两个或更多个或三个或更多个周期(例如28天周期)中的至少前两个周期中，抗PD-L1抗体或抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)的总剂量量的给予在前两个周期中的每一个中进行多于一次，例如在至少前两个周期中的每一个中独立地进行2、3或4次，如在前两个周期中的至少一个的第1天、第8天、第15天和第22天和/或在前两个周期中的至少一个的第15天和第22天独立地进行。在一些实施方案中，两个或更多个周期中的给予总剂量量的第一或在前周期是通过与第二或随后的周期(例如28天周期)相比在第一或在前周期中给予更多次数的抗PD-L1抗体或抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)进行。
在此类实施方案中，当例如在第一或在前周期中，与第二或随后的周期相比，以较低的总剂量量和/或以更多次数但以相同或相似的总剂量量给予抗PD-L1抗体或抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)时，抗PD-L1抗体或抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)的较低剂量量是通过周期中的每次给予来给予。在一些实施方案中设想，与在周期中以较少次数给予相似总剂量量的周期相比，在第一或在前周期中以更多次数给予较低剂量量可以导致在较低剂量下相同或相似的生物学PD-L1占有率，但半衰期较短。在一些实施方案中，提供具有较短半衰期的检查点抑制剂(如抗PD-L1抗体或抗原结合片段)的给药方案可以降低在组合疗法后发生毒性的风险。
在一些实施方案中，组合疗法涉及在28天周期中，如在涉及至少两个28天周期的治疗方案的第一28天周期中，将抗PD-L1抗体或抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)以如下方式给予：(i)每周一次(Q1W)给予两个剂量，任选地在第15天和第22天；(ii)每周一次(Q1W)给予四个剂量，任选地在第1天、第8天、第15天和第22天；(iii)Q1W给予两个连续剂量，任选地在第1天和第8天，之后每两周一次(Q2W)给予一个剂量，任选地在第15天；或(iv)每两周一次(Q2W)给予两个剂量，任选地在第1天和第15天。在一些实施方案中，每周一次(Q1W)或每隔一周一次(Q2W)剂量是周期(例如28天周期)中给予的总剂量量的级分或部分。在一些实施方案中，第一28天周期的每个Q1W剂量独立地为总剂量量的从或从约18％至32％，如为周期中的总剂量量的25％或约25％。在一些实施方案中，第一28天周期的每个Q2W剂量独立地为总剂量量的从或从约40％至62.5％，任选地为周期中的总剂量量的50％或约50％。
在一些实施方案中，在28天周期中，如在涉及至少两个28天周期的治疗方案的第一28天周期中，将抗PD-L1抗体或抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量为或为约375mg，之后每两周一次(Q2W)给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约750mg。在一些实施方案中，在28天周期中，如在涉及至少两个28天周期的治疗方案的第一28天周期中，将抗PD-L1抗体或抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予四个剂量。在一些实施方案中，四个剂量包括给予为或约225mg的两个连续剂量，之后是为或约375mg的两个连续剂量。
在一些实施方案中，在28天周期中，如在涉及至少两个28天周期的治疗方案的第一28天周期中，将抗PD-L1抗体或抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量为或为约375mg。
在一些实施方案中，在28天周期中，如在涉及至少两个28天周期的治疗方案的第二或随后的28天周期中，将抗PD-L1抗体或抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)在周期中以1或2个剂量给予。在一些实施方案中，在28天周期中，如在涉及至少两个28天周期的治疗方案的第二或随后的28天周期中，将抗PD-L1抗体或抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)以如下方式给予：(i)每两周一次(Q2W)给予两个剂量，任选地在第1天和第15天；或(ii)每四周一次(Q4W)给予一个剂量，任选地在第1天。在一些实施方案中，这种28天周期的每个Q2W剂量独立地为周期中的总剂量量的50％或约50％。在一些实施方案中，这种28天周期的每个Q4W剂量独立地为总剂量量的100％或约100％。
在一些实施方案中，在28天周期中，如在涉及至少两个28天周期的治疗方案的第二或随后的28天周期中，将抗PD-L1抗体或抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)以如下方式给予：每两周一次(Q2W)给予两个剂量，所述两个剂量的量为或为约750mg。
在一些实施方案中，在28天周期中，如在涉及至少两个28天周期的治疗方案的第二或随后的28天周期中，将抗PD-L1抗体或抗原结合片段(例如德瓦鲁单抗)以如下方式给予：每月一次(Q4W)给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
在一些实施方案中，抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段)的给予包括进行至少两个28天周期。在一些实施方案中，至少两个28天周期中的每一个包括给予为或约750mg至为或约2000mg，如750mg至2000mg的总剂量量的抗PD-L1抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，在至少两个28天周期中的至少第一28天周期中，抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过给予抗体或其抗原结合片段进行，是通过给予多于一次的抗体或片段进行。在一些实施方案中，在所述至少两个28天周期中的第一28天周期中，抗PD-L1抗体或抗原结合片段的总剂量量的给予是通过与第二和/或随后的28天周期相比给予更多次数的抗体或片段进行。在一些实施方案中，在起始给予细胞疗法之后大于21天(例如，22-50天)，起始抗PD-L1抗体或其抗原结合片段的给予。在一些实施方案中，在给予细胞疗法后，在给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段的时间，受试者未展现出严重毒性。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体或其抗原结合片段是德瓦鲁单抗。
在一些任何实施方案中，检查点抑制剂是或包含抗PD-1抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，检查点抑制剂是抗PD-1抗体，如纳武单抗、派姆单抗或西米普利单抗、或其抗原结合片段。在一些实施方案中，检查点抑制剂是纳武单抗。在一些实施方案中，例如，对于每个剂量周期，抗PD-1抗体以为或约400mg至为或约600mg，如400mg至600mg的总剂量量给予。在一些实施方案中，例如，对于每个剂量周期，抗PD-1抗体任选地为或为约480mg。
在一些实施方案中，在28天周期中，如在涉及至少两个28天周期的治疗方案的第一28天周期中，将抗PD-1抗体或抗原结合片段(例如纳武单抗)以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量为或为约120mg，之后每两周一次(Q2W)给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约240mg。在一些实施方案中，在28天周期中，如在涉及至少两个28天周期的治疗方案的第一28天周期中，将抗PD-1抗体或抗原结合片段(例如纳武单抗)以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予四个剂量。在一些实施方案中，四个剂量包括给予为或约225mg的两个连续剂量，之后是为或约120mg的两个连续剂量。
在一些实施方案中，在28天周期中，如在涉及至少两个28天周期的治疗方案的第一28天周期中，将抗PD-1抗体或抗原结合片段(例如纳武单抗)以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量为或为约120mg。
在一些实施方案中，在28天周期中，如在涉及至少两个28天周期的治疗方案的第二或随后的28天周期中，将抗PD-1抗体或抗原结合片段(例如纳武单抗)在周期中以1或2个剂量给予。在一些实施方案中，在28天周期中，如在涉及至少两个28天周期的治疗方案的第二或随后的28天周期中，将抗PD-1抗体或抗原结合片段(例如纳武单抗)以如下方式给予：(i)每两周一次(Q2W)给予两个剂量，任选地在第1天和第15天；或(ii)每四周一次(Q4W)给予一个剂量，任选地在第1天。在一些实施方案中，这种28天周期的每个Q2W剂量独立地为周期中的总剂量量的50％或约50％。在一些实施方案中，这种28天周期的每个Q4W剂量独立地为总剂量量的100％或约100％。
在一些实施方案中，在28天周期中，如在涉及至少两个28天周期的治疗方案的第二或随后的28天周期中，将抗PD-1抗体或抗原结合片段(例如纳武单抗)以如下方式给予：每两周一次(Q2W)给予两个剂量，所述两个剂量的量为或为约240mg。
在一些实施方案中，在28天周期中，如在涉及至少两个28天周期的治疗方案的第二或随后的28天周期中，将抗PD-1抗体或抗原结合片段(例如纳武单抗)以如下方式给予：每月一次(Q4W)给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约480mg。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体(或其抗原结合片段)的给予包括进行至少两个28天周期。在一些实施方案中，至少两个28天周期中的每一个包括给予为或约240mg至为或约1000mg的总剂量量的抗PD-1抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，在至少两个28天周期中的至少第一28天周期中，抗PD-1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过给予抗体或其抗原结合片段进行，是通过给予多于一次的抗体或片段进行。在一些实施方案中，在所述至少两个28天周期中的第一28天周期中，抗PD-1抗体或抗原结合片段的总剂量量的给予是通过与第二和/或随后的28天周期相比给予更多次数的抗体或片段进行。在一些实施方案中，在起始给予细胞疗法之后大于21天(例如，22-50天)，起始抗PD-1抗体或其抗原结合片段的给予。在一些实施方案中，在给予细胞疗法后，在给予抗PD-1抗体或其抗原结合片段的时间，受试者未展现出严重毒性。在一些实施方案中，抗PD-1抗体或其抗原结合片段是纳武单抗。
在一些实施方案中，B细胞恶性肿瘤是NHL，如复发性/难治性侵袭性NHL。在一些实施方案中，细胞疗法(如CAR表达T细胞)包含与B细胞抗原特异性结合的嵌合抗原受体。在一些实施方案中，由B细胞恶性肿瘤表达的抗原(如B细胞抗原)是CD19。
II.细胞疗法和工程化细胞
在一些实施方案中，用于根据所提供的组合疗法方法使用的细胞疗法(例如T细胞疗法)包括给予表达重组受体的工程化细胞，所述重组受体被设计用于识别和/或特异性结合至与疾病或病症相关的分子并在与此类分子结合后引起反应，如针对此类分子的免疫应答。受体可以包括嵌合受体(例如，嵌合抗原受体(CAR))和其他转基因抗原受体(包括转基因T细胞受体(TCR))。还提供了此类细胞的群体、含有此类细胞和/或富集此类细胞的组合物，如其中富集或选择某种类型的细胞(如T细胞或CD8+或CD4+细胞)。
在一些实施方案中，细胞含有或经工程化以含有工程化受体，例如工程化抗原受体(如嵌合抗原受体(CAR))或T细胞受体(TCR)。还提供了此类细胞的群体、含有此类细胞和/或富集此类细胞的组合物，如其中富集或选择某种类型的细胞(如T细胞或CD8+或CD4+细胞)。组合物包括用于给予(如用于过继细胞疗法)的药物组合物和配制品。还提供了用于向受试者(例如，患者)给予所述细胞和组合物的治疗方法。
在一些实施方案中，细胞包括经由基因工程化引入的一个或多个核酸，从而表达此类核酸的重组或基因工程化产物。在一些实施方案中，通过如下方式完成基因转移：首先刺激细胞，如通过将所述细胞与诱导反应(如增殖、存活和/或激活，例如如通过细胞因子或激活标记的表达测量的)的刺激物组合，然后转导激活的细胞，并且在培养中扩增至足以用于临床应用的数量。
A.重组受体
在一些实施方案中，提供了表达重组受体的工程化细胞，如免疫细胞，如T细胞。受体包括抗原受体以及含有其一种或多种组分的受体。重组受体可以包括嵌合受体(如含有配体结合结构域或其结合片段和细胞内信号传导结构域或区域的那些)、功能性非TCR抗原受体、嵌合抗原受体(CAR)、和T细胞受体(TCR)(如重组或转基因TCR)、嵌合自身抗体受体(CAAR)和前述任一项的组分。重组受体(如CAR)通常包括与一个或多个细胞内信号传导组分连接的细胞外抗原(或配体)结合结构域，在一些方面经由接头和/或一个或多个跨膜结构域来连接。
在一些实施方案中，将工程化细胞以任何数量的方式进一步修饰，从而增加其治疗或预防功效。例如，可以将所述群体表达的工程化CAR或TCR直接或通过接头间接缀合至靶向部分。将分子(如重组受体(例如，CAR或TCR))与靶向部分缀合的实践是已知的。参见例如，Wadwa等人,J.Drug Targeting 3:1 1 1(1995)和美国专利5,087,616。
1.嵌合抗原受体(CAR)
在一些实施方案中，提供了工程化细胞(如T细胞)，其表达对特定抗原(或标记或配体)具有特异性的CAR，所述特定抗原如在特定细胞类型的表面上表达的抗原。在一些实施方案中，抗原是多肽。在一些实施方案中，抗原是碳水化合物或其他分子。在一些实施方案中，与正常或非靶向细胞或组织相比，抗原在疾病或病症的细胞(例如，肿瘤或致病细胞)上选择性地表达或过表达。在其他实施方案中，抗原在正常细胞上表达和/或在工程化细胞上表达。
在特定实施方案中，重组受体(如嵌合受体)含有细胞内信号传导区域，所述细胞内信号传导区域包括细胞质信号传导结构域或区域(也可互换地称为细胞内信号传导结构域或区域)，例如能够在T细胞中诱导初级激活信号的细胞质(细胞内)区域，例如，T细胞受体(TCR)组分的细胞质信号传导结构域或区域(例如，CD3-zeta(CD3ζ)链的ζ链或其功能变体或信号传导部分的细胞质信号传导结构域或区域)；和/或所述细胞内信号传导区域包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)。
在一些实施方案中，嵌合受体进一步含有与配体(例如抗原)抗原特异性结合的细胞外配体结合结构域。在一些实施方案中，嵌合受体是含有与抗原特异性结合的细胞外抗原识别结构域的CAR。在一些实施方案中，配体(如抗原)是在细胞表面上表达的蛋白质。在一些实施方案中，CAR是TCR样CAR，并且抗原是加工的肽抗原，如细胞内蛋白的肽抗原，其在主要组织相容性复合物(MHC)分子的情境下像TCR一样在细胞表面上被识别。
示例性抗原受体(包括CAR)以及将此类受体工程化并引入细胞中的方法包括例如以下文献中所述的那些：国际专利申请公开号WO 200014257、WO 2013126726、WO 2012/129514、WO 2014031687、WO 2013/166321、WO 2013/071154、WO 2013/123061，美国专利申请公开号US 2002131960、US 2013287748、US 20130149337、美国专利号6,451,995、7,446,190、8,252,592、8,339,645、8,398,282、7,446,179、6,410,319、7,070,995、7,265,209、7,354,762、7,446,191、8,324,353、和8,479,118，以及欧洲专利申请号EP2537416；和/或以下文献中所述的那些：Sadelain等人，Cancer Discov.2013年4月；3(4):388–398；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338；Turtle等人,Curr.Opin.Immunol.,2012年10月；24(5):633-39；Wu等人,Cancer,2012年3月18(2):160-75。在一些方面，抗原受体包括如美国专利号7,446,190中描述的CAR，以及国际专利申请公开号WO/2014055668 A1中描述的那些。CAR的例子包括如在任何前述出版物中披露的CAR，所述出版物如WO 2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、美国专利号7,446,190、美国专利号8,389,282；Kochenderfer等人,2013,Nature Reviews Clinical Oncology,10,267-276(2013)；Wang等人(2012)J.Immunother.35(9):689-701；和Brentjens等人,Sci Transl Med.2013 5(177)。还参见WO 2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、美国专利号7,446,190和美国专利号8,389,282。
在一些实施方案中，CAR被构建为具有对特定抗原(或标记或配体)的特异性，所述特定抗原是如在待由过继疗法靶向的特定细胞类型中表达的抗原(例如癌症标记)和/或旨在诱导衰减反应的抗原(例如在正常或未患病细胞类型上表达的抗原)。因此，CAR通常在其细胞外部分中包括一种或多种抗原结合分子，例如一种或多种抗原结合片段、结构域或部分，或一种或多种抗体可变结构域，和/或抗体分子。在一些实施方案中，CAR包括抗体分子的一个或多个抗原结合部分，如源自单克隆抗体(mAb)的可变重链(VH)和可变轻链(VL)的单链抗体片段(scFv)。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分作为重组受体(如抗原受体)的一部分在细胞上表达。抗原受体包括功能性非TCR抗原受体，如嵌合抗原受体(CAR)。通常，含有展现出针对肽-MHC复合物的TCR样特异性的抗体或抗原结合片段的CAR也可以称为TCR样CAR。在一些实施方案中，TCR样CAR的对MHC-肽复合物具有特异性的细胞外抗原结合结构域与一种或多种细胞内信号传导组分连接，在一些方面经由接头和/或一个或多个跨膜结构域来连接。在一些实施方案中，此类分子通常可以模拟或接近通过天然抗原受体(如TCR)的信号和任选的通过这种受体与共刺激受体的组合的信号。
在一些实施方案中，重组受体(如嵌合受体(例如CAR))包括与抗原(或配体)结合(如特异性结合)的配体结合结构域。嵌合受体靶向的抗原包括在待经由过继细胞疗法靶向的疾病、病症或细胞类型的情境下表达的那些抗原。所述疾病和病症包括增殖性、肿瘤性和恶性疾病和障碍，包括癌症和肿瘤，包括血液癌、免疫系统癌症，如淋巴瘤、白血病和/或骨髓瘤，如B型、T型和骨髓性的白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
在一些实施方案中，抗原(或配体)是多肽。在一些实施方案中，抗原是碳水化合物或其他分子。在一些实施方案中，与正常或非靶向细胞或组织相比，抗原(或配体)在疾病或病症的细胞(例如，肿瘤或致病细胞)上选择性地表达或过表达。在其他实施方案中，抗原在正常细胞上表达和/或在工程化细胞上表达。
在一些实施方案中，CAR含有特异性识别在细胞表面上表达的抗原(如完整抗原)的抗体或抗原结合片段(例如scFv)。
在一些实施方案中，受体靶向的抗原包括与B细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知B细胞标记中的任何一种。在一些实施方案中，抗原是或包括CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。
在一些实施方案中，抗原是或包括病原体特有的抗原或病原体表达的抗原。在一些实施方案中，抗原是病毒抗原(如来自HIV、HCV、HBV等的病毒抗原)、细菌抗原和/或寄生虫抗原。
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段(例如scFv)特异性识别抗原，如CD19。
在一些实施方案中，抗原是CD19。在一些实施方案中，scFv含有源自对CD19具有特异性的抗体或抗体片段的VH和VL。在一些实施方案中，结合CD19的抗体或抗体片段是小鼠来源的抗体，如FMC63和SJ25C1。在一些实施方案中，抗体或抗体片段是人抗体，例如如美国专利公开号US2016/0152723中所述。
在一些实施方案中，scFv和/或VH源自FMC63。FMC63通常是指针对人来源的表达CD19的Nalm-1和Nalm-16细胞产生的小鼠单克隆IgG1抗体(Ling,N.R.等人(1987)。Leucocyte typing III.302)。在一些实施方案中，FMC63抗体包含分别在SEQ ID NO:38和39中所示的CDR-H1和CDR-H2，以及在SEQ ID NO:40或54中所示的CDR-H3，以及在SEQ IDNO:35中所示的CDR-L1、和在SEQ ID NO:36或55中所示的CDR-L2、和在SEQ ID NO:37或34中所示的CDR-L3。在一些实施方案中，FMC63抗体包含含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链可变区(VH)和含有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
在一些实施方案中，scFv包含含有SEQ ID NO:35的CDR-L1序列、SEQ ID NO:36的CDR-L2序列和SEQ ID NO:37的CDR-L3序列的可变轻链和/或含有SEQ ID NO:38的CDR-H1序列、SEQ ID NO:39的CDR-H2序列和SEQ ID NO:40的CDR-H3序列的可变重链。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:41中所示的可变重链区和SEQ ID NO:42中所示的可变轻链区。在一些实施方案中，可变重链和可变轻链通过接头连接。在一些实施方案中，接头如SEQ IDNO:56所示。在一些实施方案中，scFv按顺序包含VH、接头和VL。在一些实施方案中，scFv按顺序包含VL、接头和VH。在一些实施方案中，scFv由SEQ ID NO:57所示的核苷酸序列或展现出与SEQ ID NO:57至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列编码。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或展现出与SEQ ID NO:43至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，scFv源自SJ25C1。SJ25C1是针对人来源的表达CD19的Nalm-1和Nalm-16细胞产生的小鼠单克隆IgG1抗体(Ling,N.R.等人(1987)。Leucocyte typingIII.302)。在一些实施方案中，SJ25C1抗体包含分别在SEQ ID NO:47-49中所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，以及分别在SEQ ID NO:44-46中所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列。在一些实施方案中，SJ25C1抗体包含含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的重链可变区(VH)和含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
在一些实施方案中，scFv包含含有SEQ ID NO:44的CDR-L1序列、SEQ ID NO:45的CDR-L2序列和SEQ ID NO:46的CDR-L3序列的可变轻链和/或含有SEQ ID NO:47的CDR-H1序列、SEQ ID NO:48的CDR-H2序列和SEQ ID NO:49的CDR-H3序列的可变重链。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:50中所示的可变重链区和SEQ ID NO:51中所示的可变轻链区。在一些实施方案中，可变重链和可变轻链通过接头连接。在一些实施方案中，接头如SEQ IDNO:52所示。在一些实施方案中，scFv按顺序包含VH、接头和VL。在一些实施方案中，scFv按顺序包含VL、接头和VH。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列或展现出与SEQ ID NO:53至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，抗原是CD20。在一些实施方案中，scFv含有源自对CD20具有特异性的抗体或抗体片段的VH和VL。在一些实施方案中，结合CD20的抗体或抗体片段是作为或源自利妥昔单抗的抗体，如是利妥昔单抗scFv。
在一些实施方案中，抗原是CD22。在一些实施方案中，scFv含有源自对CD22具有特异性的抗体或抗体片段的VH和VL。在一些实施方案中，结合CD22的抗体或抗体片段是作为或源自m971的抗体，如是m971 scFv。
在一些实施方案中，CAR含有TCR样抗体，如特异性识别作为MHC-肽复合物于细胞表面上呈递的细胞内抗原(如肿瘤相关抗原)的抗体或抗原结合片段(例如scFv)。在一些实施方案中，识别MHC-肽复合物的抗体或其抗原结合部分可以作为重组受体(如抗原受体)的一部分在细胞上表达。抗原受体包括功能性非TCR抗原受体，如嵌合抗原受体(CAR)。通常，含有展现出针对肽-MHC复合物的TCR样特异性的抗体或抗原结合片段的CAR也可以称为TCR样CAR。
提及“主要组织相容性复合物”(MHC)是指含有多态性肽结合位点或结合沟的蛋白质，通常是糖蛋白，在一些情况下，所述蛋白质可以与多肽的肽抗原(包括由细胞机构加工的肽抗原)复合。在一些情况下，MHC分子可以在细胞表面上展示或表达，包括作为与肽的复合物，即MHC-肽复合物，以用于在T细胞上呈递处于可由抗原受体(如TCR或TCR样抗体)识别的构象的抗原。通常，MHC I类分子是异二聚体，其具有跨膜α链，在一些情况下具有三个α结构域和非共价缔合的β2微球蛋白。通常，MHC II类分子由两种跨膜糖蛋白α和β组成，两者通常都跨越膜。MHC分子可以包括MHC的有效部分，其含有用于结合肽的一个或多个抗原结合位点以及由适当抗原受体识别所需的序列。在一些实施方案中，MHC I类分子将源自胞质溶胶的肽递送至细胞表面，在此处MHC-肽复合物被T细胞(如通常是CD8+ T细胞，但是在一些情况下是CD4+ T细胞)识别。在一些实施方案中，MHC II类分子将源自囊泡系统的肽递送至细胞表面，在此处它们通常被CD4+ T细胞识别。通常，MHC分子由一组连锁基因座编码，其在小鼠中统称为H-2并且在人中统称为人白细胞抗原(HLA)。因此，通常人MHC也可以被称为人白细胞抗原(HLA)。
术语“MHC-肽复合物”或“肽-MHC复合物”或其变体是指肽抗原与MHC分子的复合物或缔合物，例如通常通过所述肽在MHC分子的结合沟或裂缝中的非共价相互作用来形成。在一些实施方案中，MHC-肽复合物存在或展示于细胞的表面上。在一些实施方案中，MHC-肽复合物可以由抗原受体(如TCR、TCR样CAR或其抗原结合部分)特异性识别。
在一些实施方案中，多肽的肽(如肽抗原或表位)可以与MHC分子缔合，例如用于由抗原受体识别。通常，肽源自或基于较长生物分子(如多肽或蛋白质)的片段。在一些实施方案中，肽的长度通常为约8至约24个氨基酸。在一些实施方案中，肽的长度为从或从约9至22个氨基酸，用于在MHC II类复合物中识别。在一些实施方案中，肽的长度为从或从约8至13个氨基酸，用于在MHC I类复合物中识别。在一些实施方案中，在MHC分子(如MHC-肽复合物)情境下识别肽后，抗原受体(如TCR或TCR样CAR)产生或触发激活信号至T细胞，诱导T细胞应答，如T细胞增殖、细胞因子产生、细胞毒性T细胞应答或其他应答。
在一些实施方案中，TCR样抗体或抗原结合部分是已知的或可通过已知方法产生(参见例如美国公开申请号US 2002/0150914；US 2003/0223994；US 2004/0191260；US2006/0034850；US 2007/00992530；US 20090226474；US 20090304679；和国际PCT公开号WO03/068201)。
在一些实施方案中，特异性结合至MHC-肽复合物的抗体或其抗原结合部分可以通过用有效量的含有特定MHC-肽复合物的免疫原对宿主进行免疫来产生。在一些情况下，MHC-肽复合物的肽是能够结合至MHC的抗原的表位，所述抗原如肿瘤抗原，例如通用肿瘤抗原、骨髓瘤抗原或如下所述的其他抗原。在一些实施方案中，然后向宿主给予有效量的免疫原以用于引发免疫应答，其中免疫原将其三维形式保持足够长的时间段以引发针对肽在MHC分子的结合沟中的三维呈递的免疫应答。然后测定从宿主收集的血清，以确定是否产生了识别肽在MHC分子的结合沟中的三维呈递的所需抗体。在一些实施方案中，可以评估所产生的抗体以确认所述抗体可以区分MHC-肽复合物与单独的MHC分子、单独的目的肽以及MHC与无关肽的复合物。然后可以分离所需抗体。
在一些实施方案中，与MHC-肽复合物特异性结合的抗体或其抗原结合部分可以通过采用抗体文库展示方法(如噬菌体抗体文库)来产生。在一些实施方案中，例如，可以产生突变型Fab、scFv或其他抗体形式的噬菌体展示文库，其中文库的成员在一个或多个CDR的一个或多个残基处突变。参见例如美国公开申请号US 20020150914、US 2014/0294841；和Cohen CJ.等人(2003)J Mol.Recogn.16:324-332。
本文中的术语“抗体”在最广泛的意义上使用，并且包括多克隆和单克隆抗体，包括完整抗体和功能性(抗原结合)抗体片段，包括片段抗原结合(Fab)片段、F(ab')2片段、Fab'片段、Fv片段、重组IgG(rIgG)片段、能够特异性结合抗原的重链可变(VH)区、单链抗体片段(包括单链可变片段(scFv))以及单结构域抗体(例如，sdAb、sdFv、纳米抗体)片段。所述术语涵盖免疫球蛋白的基因工程化的和/或以其他方式修饰的形式，如胞内抗体、肽体、嵌合抗体、全人抗体、人源化抗体和异缀合抗体、多特异性(例如，双特异性)抗体、双抗体、三抗体和四抗体、串联二-scFv、串联三-scFv。除非另有说明，否则术语“抗体”应理解为涵盖其功能性抗体片段。所述术语还涵盖完整或全长抗体，包括任何类别或亚类(包括IgG及其亚类、IgM、IgE、IgA和IgD)的抗体。
在一些实施方案中，抗原结合蛋白、抗体及其抗原结合片段特异性识别全长抗体的抗原。在一些实施方案中，抗体的重链和轻链可以是全长的或者可以是抗原结合部分(Fab、F(ab')2、Fv或单链Fv片段(scFv))。在其他实施方案中，抗体重链恒定区选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE，特别地选自例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，更特别地IgG1(例如人IgG1)。在另一个实施方案中，抗体轻链恒定区选自例如κ或λ，特别是κ。
所提供的抗体包括抗体片段。“抗体片段”是指不同于完整抗体的分子，其包含完整抗体的结合完整抗体所结合的抗原的一部分。抗体片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双抗体；线性抗体；可变重链(VH)区、单链抗体分子(如scFv)和单一结构域VH单一抗体；和由抗体片段形成的多特异性抗体。在特定实施方案中，抗体是包含可变重链区和/或可变轻链区的单链抗体片段，如scFv。
术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原的结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，其中每个结构域包含四个保守的框架区(FR)和三个CDR。(参见例如Kindt等人Kuby Immunology,第6版,W.H.Freeman and Co.,第91页(2007))。单个VH或VL结构域可以足以赋予抗原结合特异性。此外，可以使用来自结合抗原的抗体的VH或VL结构域分离结合所述特定抗原的抗体，以分别筛选互补的VL或VH结构域的文库。参见例如Portolano等人,J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人,Nature 352:624-628(1991)。
单结构域抗体是包含抗体的全部或部分重链可变结构域或者全部或部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体。在一些实施方案中，CAR包含特异性结合抗原的抗体重链结构域，所述抗原例如癌症标记或待靶向的细胞或疾病(例如肿瘤细胞或癌细胞)的细胞表面抗原，例如本文所述或已知的任何靶抗原。
抗体片段可以通过各种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞产生。在一些实施方案中，抗体是重组产生的片段，如包含并非天然存在的排列的片段(如具有通过合成接头(例如，肽接头)接合的两个或更多个抗体区或链的那些)，和/或可能并非通过天然存在的完整抗体的酶消化产生的片段。在一些实施方案中，抗体片段是scFv。
“人源化”抗体是这样的抗体，其中全部或基本上全部CDR氨基酸残基源自非人CDR，并且全部或基本上全部FR氨基酸残基源自人FR。人源化抗体任选地可以包括源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。非人抗体的“人源化形式”是指非人抗体的变体，其已经经历人源化以通常降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如CDR残基所来源于的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
因此，在一些实施方案中，嵌合抗原受体(包括TCR样CAR)包括含有抗体或抗体片段的细胞外部分。在一些实施方案中，抗体或片段包括scFv。在一些方面，嵌合抗原受体包括含有抗体或片段的细胞外部分和细胞内信号传导区域。在一些实施方案中，细胞内信号传导区域包含细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域是或包含初级信号传导结构域、能够在T细胞中诱导初级激活信号的信号传导结构域、T细胞受体(TCR)组分的信号传导结构域、和/或包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)的信号传导结构域。
在一些实施方案中，重组受体(如CAR，如其抗体部分)进一步包括间隔子，所述间隔子可以是或包括免疫球蛋白恒定区的至少一部分或其变体或经修饰形式，如铰链区(例如，IgG4铰链区)和/或CH1/CL和/或Fc区。在一些实施方案中，重组受体进一步包含间隔子和/或铰链区。在一些实施方案中，恒定区或部分是人IgG(如IgG4或IgG1)的。在一些方面，恒定区的所述部分用作抗原识别组分(例如，scFv)与跨膜结构域之间的间隔子区。与不存在间隔子的情况相比，间隔子的长度可以提供在抗原结合后增加的细胞应答性。在一些例子中，间隔子的长度为或为约12个氨基酸或者长度不超过12个氨基酸。示例性间隔子包括具有至少约10至229个氨基酸、约10至200个氨基酸、约10至175个氨基酸、约10至150个氨基酸、约10至125个氨基酸、约10至100个氨基酸、约10至75个氨基酸、约10至50个氨基酸，约10至40个氨基酸、约10至30个氨基酸、约10至20个氨基酸或约10至15个氨基酸(并且包括任何列出的范围的端点之间的任何整数)的那些。在一些实施方案中，间隔子区具有约12个或更少的氨基酸、约119个或更少的氨基酸或约229个或更少的氨基酸。示例性间隔子包括单独的IgG4铰链、与CH2和CH3结构域连接的IgG4铰链、或与CH3结构域连接的IgG4铰链。示例性间隔子包括但不限于以下文献中所述的那些：Hudecek等人(2013)Clin.Cancer Res.,19:3153；Hudecek等人(2015)Cancer Immunol Res.3(2):125–135或国际专利申请公开号WO2014031687。在一些实施方案中，间隔子具有SEQ ID NO:1中所示的序列，并且由SEQ IDNO:2中所示的序列编码。在一些实施方案中，间隔子具有SEQ ID NO:3中所示的序列。在一些实施方案中，间隔子具有SEQ ID NO:4中所示的序列。
在一些方面，间隔子是多肽间隔子，所述多肽间隔子：(a)包含全部或部分免疫球蛋白铰链或其修饰形式或由其组成，或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28胞外区或CD8胞外区，(b)包含全部或部分免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或其修饰形式或由其组成，和/或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28胞外区或CD8胞外区，或(c)长度为或为约12个氨基酸和/或包含全部或部分免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或其修饰形式或由其组成；或(d)由以下组成或包含以下：SEQ ID NO:1、3-5、27-34或58中所示的氨基酸序列或前述任一项的变体，所述变体具有与前述任一项的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性，或(e)包含式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸。
在一些实施方案中，恒定区或部分是IgD的。在一些实施方案中，间隔子具有SEQID NO:5中所示的序列。在一些实施方案中，间隔子具有展现出与SEQ ID NO:1、3、4和5中的任一者至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
抗原识别结构域通常连接至一种或多种细胞内信号传导组分，如模拟通过抗原受体复合物(如TCR复合物)(在CAR的情况下)进行激活和/或经由另一种细胞表面受体传导信号的信号传导组分。因此，在一些实施方案中，抗原结合组分(例如，抗体)与一个或多个跨膜和细胞内信号传导区域连接。在一些实施方案中，跨膜结构域与细胞外结构域融合。在一个实施方案中，使用与受体(例如，CAR)中的一个结构域天然缔合的跨膜结构域。在一些情形中，通过氨基酸取代选择或修饰跨膜结构域，以避免此类结构域与相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域结合，以使与受体复合物的其他成员的相互作用最小化。
在一些实施方案中，跨膜结构域源自天然来源或源自合成来源。在来源是天然的情况下，在一些方面，结构域源自任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。跨膜区包括源自以下的那些(即，包含以下的至少一个或多个跨膜区)：T细胞受体的α、β或ζ链、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154。可替代地，在一些实施方案中，跨膜结构域是合成的。在一些方面，合成跨膜结构域主要包含疏水性残基，如亮氨酸和缬氨酸。在一些方面，将在合成跨膜结构域的每个末端处发现苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。在一些实施方案中，连接是通过接头、间隔子和/或一个或多个跨膜结构域来实现。
所述细胞内信号传导区域包括模拟或接近以下的那些：通过天然抗原受体的信号、通过这种受体与共刺激受体的组合的信号、和/或仅通过共刺激受体的信号。在一些实施方案中，存在短的寡肽或多肽接头，例如长度在2与10个氨基酸之间的接头，如含有甘氨酸和丝氨酸的接头，例如甘氨酸-丝氨酸双联体，并且所述接头在CAR的跨膜结构域与胞质信号传导结构域之间形成连接。
受体(例如，CAR)通常包括至少一种或多种细胞内信号传导组分。在一些实施方案中，受体包括TCR复合物的细胞内组分，如介导T细胞激活和细胞毒性的TCR CD3链，例如CD3ζ链。因此，在一些方面，抗原结合或抗原识别结构域与一个或多个细胞信号传导模块连接。在一些实施方案中，细胞信号传导模块包括CD3跨膜结构域、CD3细胞内信号传导结构域和/或其他CD跨膜结构域。在一些实施方案中，受体(例如，CAR)进一步包括一种或多种另外的分子(如Fc受体γ、CD8、CD4、CD25或CD16)的一部分。例如，在一些方面，CAR包括在CD3-zeta(CD3-ζ)或Fc受体γ与CD8、CD4、CD25或CD16之间的嵌合分子。
在一些实施方案中，在连接CAR后，CAR的细胞质结构域或细胞内信号传导区域激活免疫细胞(例如，工程化以表达CAR的T细胞)的正常效应子功能或应答中的至少一种。例如，在一些情境下，CAR诱导T细胞的功能，如细胞溶解活性或T辅助活性，如细胞因子或其他因子的分泌。在一些实施方案中，使用抗原受体组分或共刺激分子的细胞内信号传导区域的截短部分(例如如果其转导效应子功能信号的话)代替完整的免疫刺激链。在一些实施方案中，细胞内信号传导区域(例如包含一个或多个细胞内信号传导结构域)包括T细胞受体(TCR)的细胞质序列，并且在一些方面还包括共受体的在天然情境下与这种受体协调起作用以在抗原受体接合后起始信号转导的那些，和/或此类分子的任何衍生物或变体，和/或具有相同功能能力的任何合成序列。
在天然TCR的情境下，完全激活通常不仅需要通过TCR进行信号传导，还需要共刺激信号。因此，在一些实施方案中，为了促进完全激活，用于产生次级或共刺激信号的组分也被包括在CAR中。在其他实施方案中，CAR不包括用于产生共刺激信号的组分。在一些方面，在同一细胞中表达另一CAR，并且提供用于产生次级或共刺激信号的组分。
在一些方面，将T细胞激活描述为由两个类别的细胞质信号传导序列来介导：通过TCR起始抗原依赖性初级激活的那些(初级细胞质信号传导序列)，以及以非抗原依赖性方式作用以提供次级或共刺激信号的那些(次级细胞质信号传导序列)。在一些方面，CAR包括此类信号传导组分中的一种或两种。
在一些方面，CAR包括调节TCR复合物的初级激活的初级细胞质信号传导序列。以刺激方式起作用的初级细胞质信号传导序列可以含有信号传导基序，所述信号传导基序被称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序或ITAM。含有ITAM的初级细胞质信号传导序列的例子包括源自TCR或CD3ζ、FcRγ或FcRβ的那些。在一些实施方案中，CAR中的一种或多种细胞质信号传导分子含有源自CD3ζ的细胞质信号传导结构域、其部分或序列。
在一些实施方案中，CAR包括共刺激受体(如CD28、4-1BB、OX40、DAP10和ICOS)的信号传导区域和/或跨膜部分。在一些方面，同一CAR包括信号传导区域和共刺激组分。
在一些实施方案中，信号传导区域被包括在一种CAR内，而共刺激组分由识别另一种抗原的另一种CAR提供。在一些实施方案中，CAR包括在同一细胞上表达的激活或刺激CAR和共刺激CAR二者(参见WO 2014/055668)。
在某些实施方案中，细胞内信号传导区域包含与CD3(例如，CD3-ζ)细胞内结构域连接的CD28跨膜和信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导区域包含与CD3ζ细胞内结构域连接的嵌合CD28和CD137(4-1BB，TNFRSF9)共刺激结构域。
在一些实施方案中，CAR在细胞质部分中涵盖一个或多个(例如，两个或更多个)共刺激结构域和激活结构域(例如，初级激活结构域)。示例性CAR包括CD3-ζ、CD28和4-1BB的细胞内组分。
在一些情况下，CAR被称为第一代、第二代和/或第三代CAR。在一些方面，第一代CAR是在抗原结合时仅提供CD3链诱导的信号的CAR；在一些方面，第二代CAR是提供这种信号和共刺激信号的CAR，如包括来自共刺激受体(如CD28或CD137)的细胞内信号传导结构域的CAR；在一些方面，第三代CAR是包括不同共刺激受体的多个共刺激结构域的CAR。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包括含有本文所述的抗体或片段的细胞外部分。在一些方面，嵌合抗原受体包括含有本文所述的抗体或片段的细胞外部分和细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，抗体或片段包括scFv或单结构域VH抗体，并且细胞内结构域含有ITAM。在一些方面，细胞内信号传导结构域包括CD3-zeta(CD3ζ)链的ζ链的信号传导结构域。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包括设置在细胞外结构域与细胞内信号传导区域之间的跨膜结构域。
在一些方面，跨膜结构域含有CD28的跨膜部分。细胞外结构域和跨膜可以直接或间接连接。在一些实施方案中，细胞外结构域和跨膜通过间隔子(如本文所述的任何间隔子)连接。在一些实施方案中，嵌合抗原受体含有T细胞共刺激分子的细胞内结构域，如位于跨膜结构域与细胞内信号传导结构域之间。在一些方面，所述T细胞共刺激分子是CD28或4-1BB。
在一些实施方案中，CAR含有抗体(例如，抗体片段)、跨膜结构域(其作为或含有CD28的跨膜部分或其功能变体)以及含有CD28的信号传导部分或其功能变体和CD3ζ的信号传导部分或其功能变体的细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，CAR含有抗体(例如，抗体片段)、跨膜结构域(其作为或含有CD28的跨膜部分或其功能变体)以及含有4-1BB的信号传导部分或其功能变体和CD3ζ的信号传导部分或其功能变体的细胞内信号传导结构域。在一些此类实施方案中，受体进一步包括含有Ig分子(如人Ig分子)的一部分(如Ig铰链，例如IgG4铰链)的间隔子，如仅铰链间隔子。
在一些实施方案中，受体(例如CAR)的跨膜结构域是人CD28的跨膜结构域或其变体，例如人CD28(登录号：P10747.1)的27个氨基酸的跨膜结构域，或者是包含SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列或展现出与SEQ ID NO:8至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列的跨膜结构域；在一些实施方案中，含有重组受体的部分的跨膜结构域包含SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列或具有与SEQ ID NO:9的至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体含有T细胞共刺激分子的细胞内结构域。在一些方面，所述T细胞共刺激分子是CD28或4-1BB。
在一些实施方案中，细胞内信号传导区域包含人CD28的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，例如其41个氨基酸的结构域，和/或在天然CD28蛋白的位置186-187处具有LL至GG取代的这种结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域可以包含SEQ ID NO:10或11中所示的氨基酸序列，或展现与SEQ ID NO:10或11至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，细胞内区域包含4-1BB的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，例如人4-1BB(登录号Q07011.1)的42个氨基酸的细胞质结构域或其功能变体或部分，例如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:12至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，细胞内信号传导区域包含人CD3链，任选地CD3ζ刺激性信号传导结构域或其功能变体，例如人CD3ζ(登录号：P20963.2)的亚型3的112个AA的细胞质结构域或如美国专利号7,446,190或美国专利号8,911,993中所述的CD3ζ信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导区域包含SEQ ID NO:13、14或15中所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:13、14或15至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些方面，间隔子仅含有IgG的铰链区，如仅IgG4或IgG1的铰链，如SEQ ID NO:1中所示的仅铰链间隔子。在其他实施方案中，间隔子是与CH2和/或CH3结构域连接的Ig铰链，例如IgG4铰链。在一些实施方案中，间隔子是与CH2和CH3结构域连接的Ig铰链，例如IgG4铰链，如SEQ ID NO:3中所示。在一些实施方案中，间隔子是仅与CH3结构域连接的Ig铰链，例如IgG4铰链，如SEQ ID NO:4中所示。在一些实施方案中，间隔子是或包含富甘氨酸-丝氨酸的序列或其他柔性接头，如已知的柔性接头。
2.T细胞受体(TCR)
在一些实施方案中，提供了工程化细胞(如T细胞)，其表达识别靶多肽(如肿瘤、病毒或自身免疫蛋白的抗原)的肽表位或T细胞表位的T细胞受体(TCR)或其抗原结合部分。
在一些实施方案中，“T细胞受体”或“TCR”是含有可变α和β链(也分别称为TCRα和TCRβ)或可变γ和δ链(也分别称为TCRα和TCRβ)的分子或其抗原结合部分，并且所述分子或其抗原结合部分能够与结合至MHC分子的肽特异性地结合。在一些实施方案中，TCR呈αβ形式。通常，以αβ和γδ形式存在的TCR在结构上大体相似，但是表达它们的T细胞可以具有不同的解剖学位置或功能。TCR可以在细胞的表面上发现或以可溶形式发现。通常，在T细胞(或T淋巴细胞)的表面上发现TCR，在此处它通常负责识别与主要组织相容性复合物(MHC)分子结合的抗原。
除非另有说明，否则术语“TCR”应当理解为涵盖完整的TCR以及其抗原结合部分或抗原结合片段。在一些实施方案中，TCR是完整或全长TCR，包括呈αβ形式或γδ形式的TCR。在一些实施方案中，TCR是这样的抗原结合部分，其少于全长TCR但与在MHC分子中结合的特定肽结合，如与MHC-肽复合物结合。在一些情况下，TCR的抗原结合部分或片段可以仅含有全长或完整TCR的结构性结构域的一部分，但是仍能够结合与完整TCR结合的肽表位(如MHC-肽复合物)。在一些情况下，抗原结合部分含有TCR的可变结构域(如TCR的可变α链和可变β链)，足以形成用于与特定MHC-肽复合物结合的结合位点。通常，TCR的可变链含有参与对肽、MHC和/或MHC-肽复合物的识别的互补决定区。
在一些实施方案中，TCR的可变结构域含有超变环或互补决定区(CDR)，其通常是抗原识别和结合能力和特异性的主要贡献者。在一些实施方案中，TCR的CDR或其组合形成给定TCR分子的全部或基本上全部的抗原结合位点。TCR链的可变区内的各个CDR通常由框架区(FR)隔开，与CDR相比，所述框架区通常在TCR分子之间展示较低可变性(参见，例如，Jores等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.U.S.A.87:9138,1990；Chothia等人,EMBO J.7:3745,1988；还参见Lefranc等人,Dev.Comp.Immunol.27:55,2003)。在一些实施方案中，CDR3是负责抗原结合或特异性的主要CDR，或者在给定TCR可变区上的三个CDR中对于抗原识别和/或对于与肽-MHC复合物的经加工肽部分的相互作用最重要。在一些情境下，α链的CDR1可以与某些抗原肽的N末端部分相互作用。在一些情境下，β链的CDR1可以与肽的C末端部分相互作用。在一些情境下，CDR2对与MHC-肽复合物的MHC部分的相互作用或识别贡献最大或者是主要负责的CDR。在一些实施方案中，β-链的可变区可以含有另外的高变区(CDR4或HVR4)，其通常参与超抗原结合而非抗原识别(Kotb(1995)Clinical Microbiology Reviews,8:411-426)。
在一些实施方案中，TCR还可以含有恒定结构域、跨膜结构域和/或短细胞质尾(参见例如，Janeway等人,Immunobiology:The Immune System in Health and Disease,第3版,Current Biology Publications,第4页:33,1997)。在一些方面，TCR的每条链可以具有一个N末端免疫球蛋白可变结构域、一个免疫球蛋白恒定结构域、跨膜区和位于C末端的短细胞质尾。在一些实施方案中，TCR与参与介导信号转导的CD3复合物的不变蛋白质缔合。
在一些实施方案中，TCR链含有一个或多个恒定结构域。例如，给定TCR链(例如，α链或β链)的细胞外部分可以含有与细胞膜相邻的两个免疫球蛋白样结构域，例如可变结构域(例如，Vα或Vβ；通常为基于Kabat编号的氨基酸1至116，Kabat等人,“Sequences ofProteins of Immunological Interest”,US Dept.Health and Human Services,PublicHealth Service National Institutes of Health,1991,第5版)和恒定结构域(例如，α链恒定域或Cα，通常为基于Kabat编号的位置117至259，或β链恒定结构域或Cβ，通常为基于Kabat的链的位置117至295)。例如，在一些情况下，由两条链形成的TCR的细胞外部分含有两个膜近端恒定结构域和两个膜远端可变结构域，所述可变结构域各自含有CDR。TCR的恒定结构域可以含有短连接序列，其中半胱氨酸残基形成二硫键，从而连接TCR的两条链。在一些实施方案中，TCR可以在α链和β链中的每一个中具有另外的半胱氨酸残基，使得TCR在恒定结构域中含有两个二硫键。
在一些实施方案中，TCR链含有跨膜结构域。在一些实施方案中，跨膜结构域带正电荷。在一些情况下，TCR链含有细胞质尾。在一些情况下，所述结构允许TCR与其他分子如CD3及其亚基缔合。例如，含有恒定结构域与跨膜区的TCR可以将蛋白质锚定在细胞膜中并与CD3信号传导装置或复合物的不变亚基缔合。CD3信号传导亚基(例如，CD3γ、CD3δ、CD3ε和CD3ζ链)的细胞内尾含有TCR复合物的信号传导能力中所涉及的一个或多个基于免疫受体酪氨酸的激活基序或ITAM。
在一些实施方案中，TCR可以是两条链α和β(或者任选地γ和δ)的异二聚体，或者它可以是单链TCR构建体。在一些实施方案中，TCR是含有如通过一个或多个二硫键连接的两条单独链(α和β链或γ和δ链)的异二聚体。
在一些实施方案中，TCR可以从一个或多个已知的TCR序列(如Vα、Vβ链的序列)产生，所述一个或多个已知的TCR序列的基本上全长的编码序列是容易获得的。用于从细胞来源获得全长TCR序列(包括V链序列)的方法是熟知的。在一些实施方案中，编码TCR的核酸可以从多种来源获得，如通过一种或多种给定细胞内的或从所述一种或多种给定细胞中分离的编码TCR的核酸的聚合酶链式反应(PCR)扩增获得，或者通过公众可获得的TCR DNA序列的合成获得。
在一些实施方案中，TCR是从生物来源获得，如来自细胞(如来自T细胞(例如细胞毒性T细胞))、T细胞杂交瘤或其他公众可获得的来源。在一些实施方案中，T细胞可以从体内分离的细胞获得。在一些实施方案中，TCR是胸腺选择的TCR。在一些实施方案中，TCR是新表位限制性TCR。在一些实施方案中，T细胞可以是经培养的T细胞杂交瘤或克隆。在一些实施方案中，TCR或其抗原结合部分或其抗原结合片段可以根据对所述TCR序列的知识以合成方式产生。
在一些实施方案中，TCR是从通过针对靶多肽抗原或其靶T细胞表位筛选候选TCR文库而鉴定或选择的TCR产生的。TCR文库可以通过扩增来自T细胞的Vα和Vβ库来产生，所述T细胞是从受试者分离，包括存在于PBMC、脾或其他淋巴器官中的细胞。在一些情况下，T细胞可以从肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)扩增。在一些实施方案中，TCR文库可以从CD4+或CD8+细胞产生。在一些实施方案中，TCR可以从正常或健康受试者的T细胞来源，即正常TCR文库扩增。在一些实施方案中，TCR可以从患病受试者的T细胞来源，即患病TCR文库扩增。在一些实施方案中，使用简并引物扩增Vα和Vβ的基因库，如在从人获得的样品(如T细胞)中通过RT-PCR扩增。在一些实施方案中，scTv文库可以从幼稚Vα和Vβ文库组装，其中经扩增的产物被克隆或组装以通过接头隔开。根据受试者和细胞的来源，所述文库可以是HLA等位基因特异性的。可替代地，在一些实施方案中，TCR文库可以通过亲本或支架TCR分子的诱变或多样化产生。在一些方面，使TCR经历例如α或β链的定向进化，如通过诱变来进行。在一些方面，TCR的CDR内的特定残基被改变。在一些实施方案中，可以通过亲和力成熟来修饰选择的TCR。在一些实施方案中，可以如通过筛选以评估针对肽的CTL活性来选择抗原特异性T细胞。在一些方面，可以选择例如存在于抗原特异性T细胞上的TCR，如通过结合活性，例如对抗原的特定亲和力或亲合力来选择。
在一些实施方案中，基因工程化的抗原受体包括重组T细胞受体(TCR)和/或从天然存在的T细胞克隆的TCR。在一些实施方案中，从患者鉴定、分离靶抗原(例如，癌抗原)的高亲和力T细胞克隆，并将其引入细胞中。在一些实施方案中，已经在用人免疫系统基因(例如，人白细胞抗原系统或HLA)工程化的转基因小鼠中产生针对靶抗原的TCR克隆。参见例如肿瘤抗原(参见例如，Parkhurst等人(2009)Clin Cancer Res.15:169–180和Cohen等人(2005)J Immunol.175:5799–5808。在一些实施方案中，使用噬菌体展示来分离针对靶抗原的TCR(参见例如，Varela-Rohena等人(2008)Nat Med.14:1390-1395和Li(2005)NatBiotechnol.23:349-354。
在一些实施方案中，TCR或其抗原结合部分是已修饰或工程化的TCR或其抗原结合部分。在一些实施方案中，使用定向进化方法来产生具有改变的特性(如对特定MHC-肽复合物具有较高亲和力)的TCR。在一些实施方案中，定向进化通过展示方法实现，所述展示方法包括但不限于酵母展示(Holler等人(2003)Nat Immunol,4,55-62；Holler等人(2000)ProcNatl Acad Sci U S A,97,5387-92)；噬菌体展示(Li等人(2005)Nat Biotechnol,23,349-54)或T细胞展示(Chervin等人(2008)J Immunol Methods,339,175-84)。在一些实施方案中，展示途径涉及工程化或修饰已知的亲本或参考TCR。例如，在一些情况下，野生型TCR可以用作模板以用于产生经诱变的TCR，其中CDR的一个或多个残基发生突变，并且选择具有所希望改变的特性(如对所希望的靶抗原具有更高的亲和力)的突变体。
在一些实施方案中，用于产生或生成目的TCR的靶多肽的肽是已知的或可以由熟练技术人员容易地鉴定。在一些实施方案中，适用于产生TCR或抗原结合部分的肽可以基于目的靶多肽(如下文所述的靶多肽)中HLA限制性基序的存在来确定。在一些实施方案中，使用可用的计算机预测模型来鉴定肽。在一些实施方案中，对于预测MHC I类结合位点，此类模型包括但不限于ProPred1(Singh和Raghava(2001)Bioinformatics 17(12):1236-1237)和SYFPEITHI(参见Schuler等人(2007)Immunoinformatics Methods in MolecularBiology,409(1):75-93 2007)。在一些实施方案中，MHC限制性表位是HLA-A0201，其在所有高加索人的大约39％-46％中表达，并且因此表示用于制备TCR或其他MHC-肽结合分子的MHC抗原的合适选择。
使用计算机预测模型的HLA-A0201结合基序以及蛋白酶体和免疫蛋白酶体的切割位点是已知的。对于预测MHC I类结合位点，此类模型包括但不限于ProPred1(更详细地描述于Singh和Raghava,ProPred:prediction of HLA-DR binding sites.BIOINFORMATICS17(12):1236-1237 2001)和SYFPEITHI(参见Schuler等人SYFPEITHI,Database forSearching and T-Cell Epitope Prediction.，Immunoinformatics Methods inMolecular Biology,第409(1)卷:75-93 2007)。
在一些实施方案中，TCR或其抗原结合部分可以是重组产生的天然蛋白或其突变形式，其中一种或多种特性(如结合特征)已发生改变。在一些实施方案中，TCR可以源自多个动物物种之一，如人、小鼠、大鼠或其他哺乳动物。TCR可以是细胞结合的或呈可溶形式。在一些实施方案中，出于所提供的方法的目的，TCR呈在细胞表面上表达的细胞结合形式。
在一些实施方案中，TCR是全长TCR。在一些实施方案中，TCR是抗原结合部分。在一些实施方案中，TCR是二聚体TCR(dTCR)。在一些实施方案中，TCR是单链TCR(sc-TCR)。在一些实施方案中，dTCR或scTCR具有如WO 03/020763、WO 04/033685、WO 2011/044186中所述的结构。
在一些实施方案中，TCR含有对应于跨膜序列的序列。在一些实施方案中，TCR确实含有对应于细胞质序列的序列。在一些实施方案中，TCR能够与CD3形成TCR复合物。在一些实施方案中，任何TCR(包括dTCR或scTCR)可以与信号传导结构域连接，从而在T细胞表面上产生活性TCR。在一些实施方案中，TCR在细胞表面上表达。
在一些实施方案中，dTCR含有第一多肽(其中对应于TCRα链可变区序列的序列与对应于TCRα链恒定区细胞外序列的序列的N末端融合)和第二多肽(其中对应于TCRβ链可变区序列的序列与对应于TCRβ链恒定区细胞外序列的序列的N末端融合)，所述第一和第二多肽通过二硫键连接。在一些实施方案中，所述键可以对应于天然二聚体αβ TCR中存在的天然链间二硫键。在一些实施方案中，所述链间二硫键不存在于天然TCR中。例如，在一些实施方案中，可以将一个或多个半胱氨酸掺入dTCR多肽对的恒定区细胞外序列中。在一些情况下，可能需要天然和非天然二硫键二者。在一些实施方案中，所述TCR含有跨膜序列以锚定至膜。
在一些实施方案中，dTCR含有TCRα链，所述TCRα链含有可变α结构域、恒定α结构域和附接至恒定α结构域C末端的第一二聚化基序；以及TCRβ链，所述TCRβ链包含可变β结构域、恒定β结构域和附接至恒定β结构域C末端的第一二聚化基序，其中所述第一和第二二聚化基序易于相互作用以在第一二聚化基序的氨基酸与第二二聚化基序的氨基酸之间形成共价键，从而将TCRα链与TCRβ链连接在一起。
在一些实施方案中，TCR是scTCR。通常，可以使用已知的方法产生scTCR。参见例如Soo Hoo,W.F.等人PNAS(USA)89,4759(1992)；Wülfing,C.和Plückthun,A.,J.Mol.Biol.242,655(1994)；Kurucz,I.等人PNAS(USA)903830(1993)；国际公开PCT号WO96/13593、WO 96/18105、WO 99/60120、WO 99/18129、WO 03/020763、WO 2011/044186；和Schlueter,C.J.等人J.Mol.Biol.256,859(1996)。在一些实施方案中，scTCR含有引入的非天然链间二硫键以促进TCR链的缔合(参见例如，国际公开PCT号WO 03/020763)。在一些实施方案中，scTCR是非二硫键连接的截短的TCR，其中与其C末端融合的异源亮氨酸拉链促进链缔合(参见例如，国际公开的PCT号WO99/60120)。在一些实施方案中，scTCR含有通过肽接头与TCRβ可变结构域共价连接的TCRα可变结构域(参见例如，国际公开PCT号WO 99/18129)。
在一些实施方案中，scTCR含有第一区段(其由对应于TCRα链可变区的氨基酸序列构成)、第二区段(其由与对应于TCRβ链恒定结构域细胞外序列的氨基酸序列的N末端融合的对应于TCRβ链可变区序列的氨基酸序列构成)和接头序列(其将第一区段的C末端连接至第二区段的N末端)。
在一些实施方案中，scTCR含有第一区段(其由与α链细胞外恒定结构域序列的N末端融合的α链可变区序列构成)和第二区段(其由与序列β链细胞外恒定和跨膜序列的N末端融合的β链可变区序列构成)以及任选地接头序列(其将第一区段的C末端连接至第二区段的N末端)。
在一些实施方案中，scTCR含有第一区段(其由与β链细胞外恒定结构域序列的N末端融合的TCRβ链可变区序列构成)和第二区段(其由与序列α链细胞外恒定和跨膜序列的N末端融合的α链可变区序列构成)以及任选地接头序列(其将第一区段的C末端连接至第二区段的N末端)。
在一些实施方案中，scTCR的连接第一和第二TCR区段的接头可以是能够在保持TCR结合特异性的同时形成单条多肽链的任何接头。在一些实施方案中，接头序列可例如具有式-P-AA-P-，其中P是脯氨酸并且AA代表氨基酸序列，其中所述氨基酸是甘氨酸和丝氨酸。在一些实施方案中，第一区段和第二区段配对，使得其可变区序列定向用于这种结合。因此，在一些情况下，接头具有足够的长度以跨越第一区段的C末端与第二区段的N末端之间的距离，或反之亦然，但是不能太长而阻断或减少scTCR与靶配体的结合。在一些实施方案中，接头可以含有从或从约10至45个氨基酸，如10至30个氨基酸或26至41个氨基酸残基，例如29、30、31或32个氨基酸。在一些实施方案中，接头具有式-PGGG-(SGGGG)5-P-，其中P是脯氨酸，G是甘氨酸并且S是丝氨酸(SEQ ID NO:22)。在一些实施方案中，所述接头具有序列GSADDAKKDAAKKDGKS(SEQ ID NO:23)
在一些实施方案中，scTCR含有共价二硫键，其将α链的恒定结构域的免疫球蛋白区域的残基连接至β链的恒定结构域的免疫球蛋白区域的残基。在一些实施方案中，天然TCR中不存在链间二硫键。例如，在一些实施方案中，可以将一个或多个半胱氨酸掺入scTCR多肽的第一和第二区段的恒定区细胞外序列中。在一些情况下，可能需要天然和非天然二硫键二者。
在dTCR或scTCR含有引入的链间二硫键的一些实施方案中，不存在天然二硫键。在一些实施方案中，形成天然链间二硫键的一个或多个天然半胱氨酸被取代为另一种残基，如丝氨酸或丙氨酸。在一些实施方案中，引入的二硫键可以通过使第一和第二区段上的非半胱氨酸残基突变为半胱氨酸来形成。TCR的示例性非天然二硫键描述于已公开的国际PCT号WO 2006/000830中。
在一些实施方案中，TCR或其抗原结合片段展现出对靶抗原的亲和力，其平衡结合常数在或在约10-5与10-12M之间以及其中的所有单独值和范围。在一些实施方案中，靶抗原是MHC-肽复合物或配体。
在一些实施方案中，编码TCR(如α和β链)的一种或多种核酸可以通过PCR、克隆或其他合适的方法扩增，并且克隆到一种或多种合适的表达载体中。表达载体可以是任何合适的重组表达载体，并且可以用于转化或转染任何合适的宿主。合适的载体包括设计用于繁殖和扩增或用于表达或用于两者的那些，如质粒和病毒。
在一些实施方案中，载体可以是以下系列的载体：pUC系列(Fermentas LifeSciences)、pBluescript系列(Stratagene，加利福尼亚州拉霍亚)、pET系列(Novagen，威斯康星州麦迪逊)、pGEX系列(Pharmacia Biotech，瑞典乌普萨拉)或pEX系列(Clontech，加利福尼亚州帕罗奥图)。在一些情况下，也可以使用噬菌体载体，如λG10、λGT11、λZapII(Stratagene)、λEMBL4和λNM1149。在一些实施方案中，可以使用植物表达载体，并且包括pBI01、pBI101.2、pBI101.3、pBI121和pBIN19(Clontech)。在一些实施方案中，动物表达载体包括pEUK-Cl、pMAM和pMAMneo(Clontech)。在一些实施方案中，使用病毒载体，如逆转录病毒载体。
在一些实施方案中，重组表达载体可以使用标准的重组DNA技术来制备。在一些实施方案中，载体可以含有调节序列(如转录和翻译起始和终止密码子)，其对引入载体的宿主(例如，细菌、真菌、植物或动物)的类型具有特异性，酌情并考虑所述载体是基于DNA还是基于RNA。在一些实施方案中，载体可以含有非天然启动子，其与编码TCR或抗原结合部分(或其他MHC-肽结合分子)的核苷酸序列可操作地连接。在一些实施方案中，启动子可以是非病毒启动子或病毒启动子，如巨细胞病毒(CMV)启动子、SV40启动子、RSV启动子和在鼠干细胞病毒的长末端重复序列中发现的启动子。还设想其他已知的启动子。
在一些实施方案中，在获得T细胞克隆后，将TCRα和β链分离并克隆到基因表达载体中。在一些实施方案中，TCRα和β基因经由小核糖核酸病毒2A核糖体跳跃肽连接，使得两条链共表达。在一些实施方案中，TCR的遗传转移是经由逆转录病毒或慢病毒载体或通过转座子完成(参见例如Baum等人(2006)Molecular Therapy:The Journal of the AmericanSociety of Gene Therapy.13:1050–1063；Frecha等人(2010)Molecular Therapy:TheJournal of the American Society of Gene Therapy.18:1748–1757；和Hackett等人(2010)Molecular Therapy:The Journal of the American Society of GeneTherapy.18:674-683。
在一些实施方案中，为了产生编码TCR的载体，将α和β链从表达目的TCR的T细胞克隆分离的总cDNA进行PCR扩增，并将其克隆到表达载体中。在一些实施方案中，将α和β链克隆到同一载体中。在一些实施方案中，将α和β链克隆到不同的载体中。在一些实施方案中，将所产生的α和β链掺入逆转录病毒(例如，慢病毒)载体中。
3.多靶向
在一些实施方案中，细胞和方法包括多靶向策略，例如在细胞上表达两种或更多种基因工程化受体，每种受体识别相同或不同的抗原，并且通常各自包括不同的细胞内信号传导组分。此类多靶向策略描述于例如以下文献中：国际专利申请公开号WO 2014055668A1(描述激活和共刺激CAR的组合，例如，靶向单独存在于脱靶(例如正常细胞)上，但仅一起存在于待治疗疾病或病症的细胞上的两种不同抗原)和Fedorov等人,Sci.Transl.Medicine，5(215)(2013年12月)(描述表达激活和抑制性CAR的细胞，例如其中激活CAR结合至同时在正常或非患病细胞和待治疗疾病或病症的细胞上表达的一种抗原，并且抑制性CAR结合至仅在正常细胞或不希望治疗的细胞上表达的另一种抗原的那些细胞)。
例如，在一些实施方案中，细胞包括表达第一基因工程化抗原受体(例如，CAR或TCR)的受体，其通常在与由第一受体识别的抗原(例如，第一抗原)特异性地结合后能够诱导激活或刺激信号至所述细胞。在一些实施方案中，细胞进一步包括第二基因工程化抗原受体(例如，CAR或TCR)，例如嵌合共刺激受体，所述受体通常在与由第二受体识别的第二抗原特异性地结合后能够诱导共刺激信号至免疫细胞。在一些实施方案中，第一抗原与第二抗原是相同的。在一些实施方案中，第一抗原与第二抗原是不同的。
在一些实施方案中，第一和/或第二基因工程化抗原受体(例如CAR或TCR)能够诱导激活或刺激信号至所述细胞。在一些实施方案中，受体包括含有ITAM或ITAM样基序的细胞内信号传导组分。在一些实施方案中，由第一受体诱导的激活涉及信号转导或细胞中蛋白质表达的变化，从而导致起始免疫应答(如ITAM磷酸化)和/或起始ITAM介导的信号转导级联、免疫突触的形成和/或所结合受体(例如CD4或CD8等)附近的分子的聚簇、一种或多种转录因子(如NF-κB和/或AP-1)的激活和/或对诸如细胞因子等因子的基因表达的诱导、增殖和/或存活。
在一些实施方案中，第一和/或第二受体包括共刺激受体的细胞内信号传导结构域，所述共刺激受体例如CD28、CD137(4-1BB)、OX40和/或ICOS。在一些实施方案中，第一和第二受体包括不同的共刺激受体的细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，第一受体含有CD28共刺激信号传导区域，并且第二受体含有4-1BB共刺激信号传导区域，或反之亦然。
在一些实施方案中，第一和/或第二受体包括含有ITAM或ITAM样基序的细胞内信号传导结构域和共刺激受体的细胞内信号传导结构域。
在一些实施方案中，第一受体含有包含ITAM或ITAM样基序的细胞内信号传导结构域，并且第二受体含有共刺激受体的细胞内信号传导结构域。与在相同细胞中诱导的激活或刺激信号组合的共刺激信号是导致免疫应答的共刺激信号，所述免疫应答例如为稳健且持续的免疫应答，例如增加的基因表达，细胞因子和其他因子的分泌，以及T细胞介导的效应子功能(如细胞杀伤)。
在一些实施方案中，单独的第一受体的连接和单独的第二受体的连接都不会诱导稳健的免疫应答。在一些方面，如果仅连接一个受体，则细胞变得耐受抗原或对抗原无反应，或被抑制，和/或不被诱导增殖或分泌因子或实现效应子功能。然而，在一些此类实施方案中，在连接多种受体时，如在遇到表达第一和第二抗原的细胞时，实现所需反应，如完全免疫激活或刺激，例如如通过一种或多种细胞因子的分泌、增殖、持久性和/或执行免疫效应子功能(如靶细胞的细胞毒性杀伤)所指示的。
在一些实施方案中，两种受体分别将激活和抑制信号诱导至细胞，使得一种受体与其抗原的结合激活细胞或诱导反应，但是第二抑制性受体与其抗原的结合诱导了抑制或减弱所述反应的信号。例子是激活CAR与抑制性CAR或iCAR的组合。例如，可以使用这种策略，其中激活CAR结合在疾病或病症中表达但也在正常细胞上表达的抗原，并且抑制性受体结合在正常细胞上表达但不在疾病或病症的细胞上表达的单独抗原。
在一些实施方案中，多靶向策略用于以下情况：其中与特定疾病或病症相关的抗原在未患病细胞上表达和/或在工程化细胞本身上表达，所述表达为瞬时表达(例如，在与基因工程化相关的刺激后)或永久表达。在此类情况下，通过需要连接两个分开的和单独特异性抗原受体，可以改善特异性、选择性和/或功效。
在一些实施方案中，多种抗原(例如第一和第二抗原)在所靶向的细胞、组织或疾病或病症上(例如在癌细胞上)表达。在一些方面，细胞、组织、疾病或病症是多发性骨髓瘤或多发性骨髓瘤细胞。在一些实施方案中，多种抗原中的一种或多种通常也在不需要用细胞疗法靶向的细胞(例如正常或未患病细胞或组织)和/或工程化细胞本身上表达。在此类实施方案中，通过需要连接多个受体以实现细胞的应答，实现特异性和/或功效。
B.用于基因工程的核酸、载体和方法
在一些实施方案中，将细胞(例如T细胞)基因工程化以表达重组受体。在一些实施方案中，通过引入编码重组受体的多核苷酸来进行工程化。还提供了编码重组受体的多核苷酸，以及含有此类核酸和/或多核苷酸的载体或构建体。
在一些情况下，编码重组受体的核酸序列含有编码信号肽的信号序列。在一些方面，信号序列可以编码源自天然多肽的信号肽。在其他方面，信号序列可以编码异源或非天然信号肽，例如SEQ ID NO:25所示并且由SEQ ID NO:24所示核苷酸序列编码的GMCSFRα链的示例性信号肽。在一些情况下，编码重组受体(例如嵌合抗原受体(CAR))的核酸序列含有编码信号肽的信号序列。信号肽的非限制性示例性例子包括例如SEQ ID NO:25中所示并且由SEQ ID NO:24中所示的核苷酸序列编码的GMCSFRα链信号肽，或SEQ ID NO:26中所示的CD8α信号肽。
在一些实施方案中，编码重组受体的多核苷酸含有至少一个启动子，所述启动子可操作连接以控制重组受体的表达。在一些例子中，多核苷酸含有两个、三个或更多个启动子，所述启动子可操作地连接以控制重组受体的表达。
在核酸分子编码两种或更多种不同多肽链(例如重组受体和标记)的某些情况下，每条多肽链可以由单独的核酸分子编码。例如，提供了两个单独的核酸，并且每一个可以单独转移到或引入细胞中以在细胞中表达。在一些实施方案中，编码重组受体的核酸和编码标记的核酸与相同的启动子可操作地连接，并且任选地通过内部核糖体进入位点(IRES)或编码自切割肽或导致核糖体跳跃的肽(其任选地是T2A、P2A、E2A或F2A)的核酸分开。在一些实施方案中，编码标记的核酸和编码重组受体的核酸可操作地连接至两个不同的启动子。在一些实施方案中，编码标记的核酸和编码重组受体的核酸存在或插入于细胞基因组内的不同位置。在一些实施方案中，例如通过逆转录病毒转导、转染或转化将编码重组受体的多核苷酸引入含有培养细胞的组合物中。
在一些实施方案，如其中多核苷酸含有第一和第二核酸序列的那些实施方案中，编码不同多肽链中每一条的编码序列可以可操作地连接至启动子，所述启动子可以是相同的或不同的。在一些实施方案中，核酸分子可以含有驱动两条或更多条不同多肽链表达的启动子。在一些实施方案中，此类核酸分子可以是多顺反子的(双顺反子或三顺反子的，参见例如美国专利号6,060,273)。在一些实施方案中，可以将转录单元工程化为含有IRES(内部核糖体进入位点)的双顺反子单元，其允许通过来自单一启动子的信息共表达基因产物(例如编码标记和编码重组受体)。可替代地，在一些情况下，单一启动子可引导RNA的表达，所述RNA在单一开放阅读框(ORF)中含有两个或三个基因(例如编码标记和编码重组受体)，所述基因通过编码自切割肽(例如，2A序列)的序列或蛋白酶识别位点(例如，弗林蛋白酶)彼此分开。因此，ORF编码单一多肽，其在翻译期间(在2A的情况下)或在翻译之后被加工成单一蛋白质。在一些情况下，肽(如T2A)可引起核糖体跳过2A元件C末端处肽键的合成(核糖体跳跃)，导致2A序列末端与下游相邻肽之间分开(参见，例如，de Felipe,GeneticVaccines and Ther.2:13(2004)和de Felipe等人Traffic 5:616-626(2004))。已知各种2A元件。可以用于本文公开的方法和系统中的2A序列的例子包括但不限于来自以下的2A序列：口蹄疫病毒(F2A，例如，SEQ ID NO:21)、马鼻炎A病毒(E2A，例如，SEQ ID NO:20)、明脉扁刺蛾β四体病毒(Thosea asigna virus)(T2A，例如，SEQ ID NO:6或17)和猪捷申病毒(porcine teschovirus)-1(P2A，例如，SEQ ID NO:18或19)，如美国专利公开号20070116690中所述。
本文所述的任何重组受体可以由呈任何组合或排列的含有编码重组受体的一种或多种核酸序列的多核苷酸编码。例如，一种、两种、三种或更多种多核苷酸可以编码一种、两种、三种或更多种不同的多肽，例如重组受体。在一些实施方案中，一种载体或构建体含有编码标记的核酸序列，并且单独的载体或构建体含有编码重组受体(例如CAR)的核酸序列。在一些实施方案中，编码标记的核酸和编码重组受体的核酸与两种不同的启动子可操作地连接。在一些实施方案中，编码重组受体的核酸存在于编码标记的核酸的下游。
在一些实施方案中，载体骨架含有编码一种或多种标记的核酸序列。在一些实施方案中，所述一种或多种标记是转导标记、替代标记和/或选择标记。
在一些实施方案中，标记是转导标记或替代标记。转导标记或替代标记可用于检测已经引入多核苷酸(例如编码重组受体的多核苷酸)的细胞。在一些实施方案中，转导标记可以指示或确认对细胞的修饰。在一些实施方案中，替代标记是经制备在细胞表面上与重组受体(例如，CAR)共表达的蛋白质。在特定实施方案中，这种替代标记是已经修饰以具有极少或无活性的表面蛋白。在一些实施方案中，替代标记是由编码重组受体的相同多核苷酸编码。在一些实施方案中，编码重组受体的核酸序列与编码标记的核酸序列可操作地连接，任选地通过内部核糖体进入位点(IRES)或编码自切割肽或导致核糖体跳跃的肽(例如2A序列，例如T2A、P2A、E2A或F2A)的核酸分开。在一些情况下，外在标记基因可以结合工程化细胞用于允许检测或选择细胞，并且在一些情况下还可以用于促进细胞自杀。
示例性替代标记可以包括截短形式的细胞表面多肽，如是非功能性的并且不转导或不能转导信号或通常被细胞表面多肽的全长形式转导的信号、和/或不内化或不能内化的截短形式。示例性截短的细胞表面多肽包括截短形式的生长因子或其他受体，如截短的人表皮生长因子受体2(tHER2)、截短的表皮生长因子受体(tEGFR，在SEQ ID NO:7或16中列出的示例性tEGFR序列)或前列腺特异性膜抗原(PSMA)或其修饰形式。tEGFR可以含有被抗体西妥昔单抗
Figure BDA0002702674000001211
或其他治疗性抗EGFR抗体或结合分子识别的表位，其可以被用于鉴定或选择已经用tEGFR构建体和编码的外源蛋白质工程化的细胞，和/或用于消除或分离表达所编码的外源蛋白质的细胞。参见美国专利号8,802,374和Liu等人,NatureBiotech.2016年4月；34(4):430-434)。在一些方面，标记(例如替代标记)包括全部或部分(例如，截短形式)的CD34、NGFR、CD19或截短的CD19(例如，截短的非人CD19)或表皮生长因子受体(例如，tEGFR)。
在一些实施方案中，编码标记的核酸与编码接头序列(如可切割接头序列，例如T2A)的多核苷酸可操作地连接。例如，标记和任选地接头序列可以是如PCT公开号WO2014031687中所披露的任一种。例如，标记可以是截短的EGFR(tEGFR)，其任选地连接至接头序列，如T2A可切割接头序列。用于截短的EGFR(例如，tEGFR)的示例性多肽包含SEQ IDNO:7或16中所示的氨基酸序列或展现出与SEQ ID NO:7或16至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，标记是或包含荧光蛋白，例如绿色荧光蛋白(GFP)、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)(例如超折叠GFP(sfGFP))、红色荧光蛋白(RFP)(例如tdTomato、mCherry、mStrawberry、AsRed2、DsRed或DsRed2)、青色荧光蛋白(CFP)、蓝绿色荧光蛋白(BFP)、增强型蓝色荧光蛋白(EBFP)和黄色荧光蛋白(YFP)及其变体，包括荧光蛋白的物种变体、单体变体、以及密码子优化的和/或增强的变体。在一些实施方案中，标记是或包含酶(如萤光素酶)、来自大肠杆菌的lacZ基因、碱性磷酸酶、分泌的胚胎碱性磷酸酶(SEAP)、氯霉素乙酰转移酶(CAT)。示例性发光报告基因包括萤光素酶(luc)、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶(CAT)、β-葡萄糖醛酸酶(GUS)或其变体。
在一些实施方案中，标记是选择标记。在一些实施方案中，选择标记是或包含赋予对外源药剂或药物的抗性的多肽。在一些实施方案中，选择标记是抗生素抗性基因。在一些实施方案中，选择标记是向哺乳动物细胞赋予抗生素抗性的抗生素抗性基因。在一些实施方案中，选择标记是或包含嘌呤霉素抗性基因、潮霉素抗性基因、杀稻瘟菌素抗性基因、新霉素抗性基因、遗传霉素抗性基因或博莱霉素抗性基因或其修饰形式。
在一些实施方案中，使用重组感染性病毒粒子(如例如源自猿猴病毒40(SV40)、腺病毒、腺相关病毒(AAV)的载体)将重组核酸转移至细胞中。在一些实施方案中，使用重组慢病毒载体或逆转录病毒载体(如γ-逆转录病毒载体)将重组核酸转移到T细胞中(参见，例如，Koste等人(2014)Gene Therapy 2014年4月3日.doi:10.1038/gt.2014.25；Carlens等人(2000)Exp.Hematol.,28(10):1137-46；Alonso-Camino等人(2013)Mol.Ther.Nucl.Acids.,2,e93；Park等人,Trends Biotechnol.,2011年11月29日(11):550–557。
在一些实施方案中，逆转录病毒载体具有长末端重复序列(LTR)，例如源自莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)、骨髓增生性肉瘤病毒(MPSV)、鼠胚胎干细胞病毒(MESV)、鼠干细胞病毒(MSCV)或脾病灶形成病毒(SFFV)的逆转录病毒载体。大多数逆转录病毒载体源自鼠逆转录病毒。在一些实施方案中，逆转录病毒包括源自任何禽类或哺乳动物细胞来源的那些。逆转录病毒通常是双嗜性的，这意味着它们能够感染包括人在内的若干种物种的宿主细胞。在一个实施方案中，待表达的基因替代逆转录病毒gag、pol和/或env序列。已描述许多说明性逆转录病毒系统(例如，美国专利号5,219,740、6,207,453、5,219,740；Miller和Rosman(1989)BioTechniques 7:980-990；Miller,A.D.(1990)Human Gene Therapy 1:5-14；Scarpa等人(1991)Virology180:849-852；Burns等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:8033-8037；以及Boris-Lawrie和Temin(1993)Cur.Opin.Genet.Develop.3:102-109。
慢病毒转导的方法是已知的。示例性方法描述于例如以下文献中：Wang等人(2012)J.Immunother.35(9):689-701；Cooper等人(2003)Blood.101:1637–1644；Verhoeyen等人(2009)Methods Mol Biol.506:97-114；以及Cavalieri等人(2003)Blood.102(2):497-505。
在一些实施方案中，经由电穿孔将重组核酸转移到T细胞中(参见例如，Chicaybam等人,(2013)PLoS ONE 8(3):e60298和Van Tedeloo等人(2000)Gene Therapy 7(16):1431-1437)。在一些实施方案中，经由转座将重组核酸转移到T细胞中(参见，例如，Manuri等人(2010)Hum Gene Ther 21(4):427-437；Sharma等人(2013)Molec Ther Nucl Acids2,e74；以及Huang等人(2009)Methods Mol Biol 506:115-126)。在免疫细胞中引入和表达遗传物质的其他方法包括磷酸钙转染(例如，如Current Protocols in MolecularBiology,John Wiley&Sons,纽约.纽约州中所述)、原生质体融合、阳离子脂质体介导的转染；钨颗粒促进的微粒轰击(Johnston,Nature,346:776-777(1990))；和磷酸锶DNA共沉淀(Brash等人,Mol.Cell Biol.,7:2031-2034(1987))。
用于转移编码重组产物的核酸的其他方法和载体是例如国际专利申请公开号WO2014055668和美国专利号7,446,190中描述的那些。
在一些实施方案中，细胞(例如，T细胞)可以在扩增期间或之后例如用T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)进行转染。例如，这种用于引入所需受体的基因的转染可以用任何合适的逆转录病毒载体进行。然后可以使基因修饰的细胞群摆脱初始刺激物(例如抗CD3/抗CD28刺激物)，并且随后用第二种类型的刺激物(例如经由从头引入的受体)进行刺激。该第二种类型的刺激物可以包括肽/MHC分子形式的抗原刺激物、基因引入的受体的同源(交联)配体(例如CAR的天然配体)或在新受体的框架内直接结合(例如通过识别受体内的恒定区)的任何配体(如抗体)。参见例如，Cheadle等人,“Chimeric antigen receptorsfor T-cell based therapy”Methods Mol Biol.2012；907:645-66或Barrett等人,Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine第65卷:333-347(2014)。
在一些情况下，可以使用不需要激活细胞(例如，T细胞)的载体。在一些此类情形中，可以在激活之前选择和/或转导细胞。因此，可以在培养细胞之前或之后将细胞工程化，并且在一些情况下在培养的同一时间或至少一部分期间将细胞工程化。
另外的核酸(例如，用于引入的基因)包括：用于改善治疗功效的那些，如通过促进所转移细胞的活力和/或功能；用于提供用于选择和/或评价细胞(如用于评估体内存活或定位)的遗传标记的基因；用于改善安全性的基因，例如通过使细胞在体内对阴性选择敏感，如以下文献中所述：Lupton S.D.等人,Mol.and Cell Biol.,11:6(1991)；和Riddell等人,Human Gene Therapy3:319-338(1992)；还参见Lupton等人的PCT/US91/08442和PCT/US94/05601的公开，所述文献描述了使用通过将显性阳性选择性标记与阴性选择性标记融合而衍生的双功能选择性融合基因。参见例如，Riddell等人,美国专利号6,040,177,第14-17栏。
C.用于基因工程化的细胞和细胞的制备
在一些实施方案中，核酸是异源的，即通常不存在于细胞或从细胞获得的样品中，如从另一种生物或细胞获得的核酸，例如，所述核酸通常不在被工程化的细胞和/或这种细胞所来源的生物中发现。在一些实施方案中，核酸不是天然存在的如自然界中未发现的核酸，包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的核酸的嵌合组合的核酸。
细胞通常是真核细胞，如哺乳动物细胞，并且通常是人细胞。在一些实施方案中，细胞源自血液、骨髓、淋巴或淋巴器官，是免疫系统的细胞，如先天性或适应性免疫的细胞，例如髓样或淋巴样细胞，包括淋巴细胞，通常为T细胞和/或NK细胞。其他示例性细胞包括干细胞，如多潜能干细胞和多能干细胞，包括诱导多能干细胞(iPSC)。细胞通常是原代细胞，如直接从受试者分离和/或从受试者分离并冷冻的那些。在一些实施方案中，细胞包括T细胞或其他细胞类型的一个或多个亚组，如整个T细胞群、CD4+细胞、CD8+细胞及其亚群，如由以下各项所定义的那些亚群：功能、激活状态、成熟度、分化的可能性、扩增、再循环、定位和/或持久能力、抗原特异性、抗原受体类型、在特定器官或区室中的存在、标记或细胞因子分泌谱和/或分化程度。关于待治疗的受试者，细胞可以是同种异体的和/或自体的。所述方法包括现成的方法。在一些方面，如对于现成的技术，细胞是多能的和/或多潜能的，如干细胞，如诱导多能干细胞(iPSC)。在一些实施方案中，所述方法包括从受试者分离细胞、制备、处理、培养和/或将它们工程化，并在低温保存之前或之后将它们重新引入同一受试者体内。
T细胞和/或CD4+和/或CD8+ T细胞的亚型和亚群包括幼稚T(TN)细胞、效应T细胞(TEFF)、记忆T细胞及其亚型(如干细胞记忆T(TSCM)、中枢记忆T(TCM)，效应记忆T(TEM)或终末分化效应记忆T细胞)、肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)、未成熟T细胞、成熟T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粘膜相关恒定T(MAIT)细胞、天然存在和适应性调节T(Treg)细胞、辅助T细胞(如TH1细胞、TH2细胞、TH3细胞、TH17细胞、TH9细胞、TH22细胞、滤泡性辅助T细胞)、α/β T细胞和δ/γ T细胞。
在一些实施方案中，细胞是自然杀伤(NK)细胞。在一些实施方案中，细胞是单核细胞或粒细胞，例如骨髓细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和/或嗜碱性粒细胞。
在一些实施方案中，细胞包括经由基因工程化引入的一个或多个核酸，从而表达此类核酸的重组或基因工程化产物。在一些实施方案中，核酸是异源的，即通常不存在于细胞或从细胞获得的样品中，如从另一种生物或细胞获得的核酸，例如，所述核酸通常不在被工程化的细胞和/或这种细胞所来源的生物中发现。在一些实施方案中，核酸不是天然存在的如自然界中未发现的核酸，包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的核酸的嵌合组合的核酸。
在一些实施方案中，工程化细胞的制备包括一个或多个培养和/或制备步骤。用于引入编码转基因受体(如CAR)的核酸的细胞可以从样品(如生物样品，例如，从受试者获得或衍生的生物样品)中分离。在一些实施方案中，分离出所述细胞的受试者是患有疾病或病症或需要细胞疗法或将对其给予细胞疗法的受试者。在一些实施方案中，受试者是需要特定治疗性干预(如过继细胞疗法，分离、处理和/或工程化细胞以用于所述过继细胞疗法)的人。
因此，在一些实施方案中，细胞是原代细胞，例如原代人细胞。样品包括直接取自受试者的组织、体液和其他样品，以及来自一个或多个加工步骤(如分离、离心、基因工程化(例如用病毒载体转导)、洗涤和/或孵育)的样品。生物样品可以是直接从生物来源获得的样品或经过加工的样品。生物样品包括但不限于体液(如血液、血浆、血清、脑脊液、滑液、尿液和汗液)、组织和器官样品，包括由其衍生的加工样品。
在一些方面，细胞从其中来源或分离的样品是血液或血液来源的样品，或者是或源自单采术或白细胞单采术产物。示例性样品包括全血、外周血单核细胞(PBMC)、白细胞、骨髓、胸腺、组织活检、肿瘤、白血病、淋巴瘤、淋巴结、肠相关淋巴组织、粘膜相关淋巴组织、脾脏、其他淋巴组织、肝脏、肺、胃、肠、结肠、肾脏、胰腺、乳房、骨、前列腺、宫颈、睾丸、卵巢、扁桃体或其他器官和/或源自它们的细胞。在细胞疗法(例如，过继细胞疗法)的情境下，样品包括来自自体和同种异体来源的样品。
在一些实施方案中，细胞源自细胞系，例如T细胞系。在一些实施方案中，细胞获自异种来源，例如获自小鼠、大鼠、非人灵长类动物和猪。
在一些实施方案中，细胞的分离包括一个或多个制备和/或并非基于亲和力的细胞分离步骤。在一些例子中，将细胞洗涤、离心和/或在一种或多种试剂存在下孵育，例如以去除不需要的组分、针对所需组分进行富集、裂解或去除对特定试剂敏感的细胞。在一些例子中，基于一种或多种特性(如密度、粘附特性、大小、对特定组分的敏感性和/或抗性)分离细胞。
在一些例子中，例如通过单采术或白细胞单采术获得来自受试者的循环血液的细胞。在一些方面，样品含有淋巴细胞(包括T细胞、单核细胞、粒细胞、B细胞)、其他有核白细胞、红细胞和/或血小板，并且在一些方面含有除红细胞和血小板之外的细胞。
在一些实施方案中，洗涤从受试者收集的血细胞，例如以去除血浆级分，并将细胞置于适当的缓冲液或介质中以用于随后的加工步骤。在一些实施方案中，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤细胞。在一些实施方案中，洗涤溶液缺乏钙和/或镁和/或许多或所有二价阳离子。在一些方面，根据制造商的说明书，通过半自动“流通式”离心机(例如，Cobe 2991细胞加工器，Baxter)完成洗涤步骤。在一些方面，根据制造商的说明书，通过切向流过滤(TFF)完成洗涤步骤。在一些实施方案中，洗涤后将所述细胞重悬于多种生物相容性缓冲液(如例如不含Ca++/Mg++的PBS)中。在某些实施方案中，去除血细胞样品的组分并将细胞直接重悬于培养基中。
在一些实施方案中，所述方法包括基于密度的细胞分离方法，如通过裂解红细胞并通过Percoll或Ficoll梯度离心而从外周血制备白细胞。
在一些实施方案中，分离方法包括基于一种或多种特定分子(如表面标记(例如表面蛋白)、细胞内标记或核酸)在细胞中的表达或存在来分开不同的细胞类型。在一些实施方案中，可以使用任何已知的基于此类标记的用于分离的方法。在一些实施方案中，分离是基于亲和力或基于免疫亲和力的分离。例如，在一些方面，分离包括基于一种或多种标记(通常是细胞表面标记)在细胞中的表达或表达水平来分离细胞和细胞群，例如通过与特异性结合至此类标记的抗体或结合配偶体一起孵育，之后通常进行洗涤步骤并将已结合所述抗体或结合配偶体的细胞与尚未结合至所述抗体或结合配偶体的那些细胞分离。
此类分离步骤可以基于阳性选择(其中保留已结合试剂的细胞以供进一步使用)和/或阴性选择(其中保留尚未结合至所述抗体或结合配偶体的细胞)。在一些例子中，保留两种级分以供进一步使用。在一些方面，在无法获得专门鉴定异质性群体中的细胞类型的抗体，使得最好基于除了所需群体以外的细胞表达的标记来进行分离的情况下，阴性选择可以特别有用。
分离不需要导致100％富集或去除特定细胞群或表达特定标记的细胞。例如，针对特定类型的细胞(如表达标记的那些)的阳性选择或富集是指增加此类细胞的数量或百分比，但不需要导致不表达所述标记的细胞的完全不存在。同样地，特定类型的细胞(如表达标记的那些)的阴性选择、去除或耗尽是指减少此类细胞的数量或百分比，但不需要导致所有此类细胞的完全去除。
在一些例子中，进行多轮分离步骤，其中来自一个步骤的阳性或阴性选择的级分经受另一个分离步骤，如随后的阳性或阴性选择。在一些例子中，单个分离步骤可以同时耗尽表达多种标记的细胞，如通过将细胞与多种抗体或结合配偶体(每种抗体或结合配偶体对阴性选择靶向的标记具有特异性)一起孵育。同样地，通过将细胞与在各种细胞类型上表达的多种抗体或结合配偶体一起孵育，可以对多种细胞类型同时进行阳性选择。
例如，在一些方面，通过阳性或阴性选择技术来分离T细胞的特定亚群，如对一种或多种表面标记呈阳性或高水平表达的细胞，例如CD28+、CD62L+、CCR7+、CD27+、CD127+、CD4+、CD8+、CD45RA+和/或CD45RO+ T细胞。
例如，可以使用抗CD3/抗CD28缀合的磁珠(例如，
Figure BDA0002702674000001271
M-450CD3/CD28 T细胞扩增器)阳性选择CD3+,CD28+ T细胞。
在一些实施方案中，通过以下方式进行分离：通过阳性选择富集特定细胞群，或通过阴性选择耗尽特定细胞群。在一些实施方案中，阳性或阴性选择是通过将细胞与一种或多种抗体或其他结合剂一起孵育完成的，所述一种或多种抗体或其他结合剂与分别在阳性或阴性选择的细胞上表达(标记+)或以相对较高水平表达(标记高)的一种或多种表面标记特异性地结合。
在一些实施方案中，通过对非T细胞(如B细胞、单核细胞或其他白细胞)上表达的标记(如CD14)进行阴性选择，将T细胞从PBMC样品分离。在一些方面，CD4+或CD8+选择步骤用于分离CD4+辅助T细胞和CD8+细胞毒性T细胞。通过对在一种或多种幼稚、记忆和/或效应T细胞亚群上表达或以相对较高程度表达的标记的阳性或阴性选择，可以将此类CD4+和CD8+群体进一步分类成亚群。
在一些实施方案中，如通过基于与相应亚群相关的表面抗原进行阳性或阴性选择，将CD8+细胞针对幼稚、中枢记忆、效应子记忆和/或中枢记忆干细胞进一步富集或耗尽。在一些实施方案中，针对中枢记忆T(TCM)细胞进行富集以增加功效，如以改善给予后的长期存活、扩增和/或移植，这在一些方面在此类亚群中特别稳健。参见Terakura等人(2012)Blood,1:72–82；Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。在一些实施方案中，组合富含TCM的CD8+ T细胞与CD4+ T细胞进一步增强功效。
在实施方案中，记忆T细胞存在于CD8+外周血淋巴细胞的CD62L+和CD62L-两个亚组中。可以如使用抗CD8和抗CD62L抗体将PBMC针对CD62L-CD8+和/或CD62L+CD8+级分进行富集或耗尽。
在一些实施方案中，对中枢记忆T(TCM)细胞的富集是基于CD45RO、CD62L、CCR7、CD28、CD3和/或CD127的阳性或高表面表达；在一些方面，它是基于表达或高度表达CD45RA和/或颗粒酶B的细胞的阴性选择。在一些方面，富含TCM细胞的CD8+群体的分离是通过耗尽表达CD4、CD14、CD45RA的细胞以及对表达CD62L的细胞的阳性选择或富集来进行的。在一个方面，中枢记忆T(TCM)细胞的富集从基于CD4表达所选择阴性细胞级分开始进行，对所述阴性细胞级分进行基于CD14和CD45RA的表达的阴性选择以及基于CD62L的阳性选择。在一些方面，此类选择是同时进行的，并且在其他方面，是以任何顺序依次进行的。在一些方面，用于制备CD8+细胞群或亚群的相同的基于CD4表达的选择步骤也用于产生CD4+细胞群或亚群，使得来自基于CD4的分离的阳性和阴性级分被保留并任选地在一个或多个其他阳性或阴性选择步骤之后用于所述方法的随后的步骤中。
在特定例子中，使PBMC样品或其他白细胞样品经历CD4+细胞的选择，其中保留了阴性和阳性级分二者。然后使阴性级分经历基于CD14和CD45RA或CD19的表达的阴性选择，以及基于中枢记忆T细胞特有的标记(如CD62L或CCR7)的阳性选择，其中阳性和阴性选择是以任一顺序来进行。
通过鉴定具有细胞表面抗原的细胞群，将CD4+ T辅助细胞分类为幼稚、中枢记忆和效应细胞。CD4+淋巴细胞可以通过标准方法获得。在一些实施方案中，幼稚CD4+ T淋巴细胞是CD45RO-、CD45RA+、CD62L+、CD4+ T细胞。在一些实施方案中，中枢记忆CD4+细胞是CD62L+且CD45RO+。在一些实施方案中，效应CD4+细胞是CD62L-且CD45RO-。
在一个例子中，为了通过阴性选择富集CD4+细胞，单克隆抗体合剂通常包括针对CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR和CD8的抗体。在一些实施方案中，抗体或结合配偶体与固体支持物或基质(如磁珠或顺磁珠)结合，以允许细胞分离以用于阳性和/或阴性选择。例如，在一些实施方案中，使用免疫磁性(或亲和磁性)分离技术来分开或分离细胞和细胞群(综述于Methods in Molecular Medicine,第58卷:Metastasis Research Protocols,第2卷:Cell Behavior In Vitro and In Vivo,第17-25页S.A.Brooks和U.Schumacher编辑
Figure BDA0002702674000001291
Humana Press Inc.,新泽西州托托瓦)。
在一些方面，将待分离的细胞的样品或组合物与小的可磁化或磁响应材料(如磁响应粒子或微粒，如顺磁珠(例如像Dynabead或MACS珠))一起孵育。磁响应材料(例如，颗粒)通常直接或间接地附接至结合配偶体(例如，抗体)，所述结合配偶体与需要分离(例如，需要进行阴性或阳性选择)的一种细胞、多种细胞或细胞群上存在的分子(例如，表面标记)特异性地结合。
在一些实施方案中，磁性颗粒或磁珠包含与特异性结合成员(如抗体或其他结合配偶体)结合的磁响应材料。有许多在磁分离方法中使用的熟知的磁响应材料。合适的磁性颗粒包括在Molday,美国专利号4,452,773和欧洲专利说明书EP 452342B中所述的那些，所述专利通过引用特此并入。其他例子是胶体大小的颗粒，如在Owen的美国专利号4,795,698；和Liberti等人的美国专利号5,200,084中所述的那些。
孵育通常在这样的条件下进行，由此抗体或结合配偶体或者与附接至磁性颗粒或磁珠的此类抗体或结合配偶体特异性地结合的分子(如二抗或其他试剂)与细胞表面分子(如果存在于样品内的细胞上的话)特异性地结合。
在一些方面，将样品置于磁场中，并且附接有磁响应或可磁化颗粒的那些细胞将被吸引至磁体并与未标记的细胞分离。对于阳性选择，保留被磁体吸引的细胞；对于阴性选择，保留未被吸引的细胞(未标记的细胞)。在一些方面，在同一选择步骤期间进行阳性与阴性选择的组合，其中保留阳性和阴性级分并进一步处理或使其经历进一步的分离步骤。
在某些实施方案中，磁响应颗粒被包被在一抗或其他结合配偶体、二抗、凝集素、酶或链霉亲和素中。在某些实施方案中，磁性颗粒通过对一种或多种标记具有特异性的一抗的包衣而附接至细胞。在某些实施方案中，用一抗或结合配偶体标记细胞而不是珠，然后添加细胞类型特异性二抗或其他结合配偶体(例如，链霉亲和素)包被的磁性颗粒。在某些实施方案中，将链霉亲和素包被的磁性颗粒与生物素化的一抗或二抗结合使用。
在一些实施方案中，磁响应颗粒保持附接至细胞，所述细胞随后被孵育、培养和/或工程化；在一些方面，颗粒保持附接至细胞以用于给予患者。在一些实施方案中，从细胞中去除可磁化或磁响应颗粒。用于从细胞中去除可磁化颗粒的方法是已知的，并且包括例如使用竞争性非标记抗体，以及与可切割接头缀合的可磁化颗粒或抗体等。在一些实施方案中，可磁化颗粒是可生物降解的。
在一些实施方案中，基于亲和力的选择是经由磁激活细胞分选(MACS)(MiltenyiBiotec，加利福尼亚州奥本)来进行的。磁激活细胞分选(MACS)系统能够高纯度选择附接有磁化颗粒的细胞。在某些实施方案中，MACS以如下模式操作，其中在施加外部磁场之后依次洗脱非靶种类和靶种类。也就是说，附接至磁化颗粒的细胞被保持在适当的位置，而未附接的种类被洗脱。然后，在完成这个第一洗脱步骤之后，以某种方式释放被捕获在磁场中而免于被洗脱的种类，使得它们可以被洗脱和回收。在某些实施方案中，标记非靶细胞并将其从异质性细胞群中耗尽。
在某些实施方案中，使用进行所述方法的分离、细胞制备、分开、处理、孵育、培养和/或配制步骤中的一个或多个的系统、装置或设备进行分离或分开。在一些方面，将系统用于在封闭或无菌环境中进行这些步骤中的每一个，例如以最小化错误、用户操作和/或污染。在一个例子中，系统是如国际专利申请公开号WO 2009/072003、或US 20110003380A1中所述的系统。
在一些实施方案中，所述系统或设备在集成或独立系统中和/或以自动化或可编程方式进行分离、处理、工程化和配制步骤中的一个或多个(例如，全部)。在一些方面，所述系统或设备包括与所述系统或设备通信的计算机和/或计算机程序，其允许用户对处理、分离、工程化和配制步骤的各个方面进行编程、控制、结果评估和/或调整。
在一些方面，使用CliniMACS系统(Miltenyi Biotec)进行分离和/或其他步骤，例如用于在封闭和无菌系统中在临床规模水平上的细胞的自动化分离。部件可以包括集成微计算机、磁分离单元、蠕动泵和各种夹管阀。在一些方面，集成计算机控制仪器的所有部件并引导系统以标准化顺序执行重复程序。在一些方面，磁分离单元包括可移动的永磁体和用于选择柱的支架。蠕动泵控制整个管组的流速，并且与夹管阀一起确保缓冲液在系统中的受控流动和细胞的持续悬浮。
在一些方面，CliniMACS系统使用抗体偶联的可磁化颗粒，其在无菌、无热原的溶液中提供。在一些实施方案中，在用磁性颗粒标记细胞之后，洗涤细胞以去除过量的颗粒。然后将细胞制备袋连接到管组，所述管组又连接到含有缓冲液的袋和细胞收集袋。管组由预装配的无菌管路(包括预柱和分离柱)组成，并且仅供一次性使用。在启动分离程序之后，系统自动地将细胞样品施加到分离柱上。标记的细胞保留在柱内，而未标记的细胞通过一系列洗涤步骤去除。在一些实施方案中，用于与本文描述的方法一起使用的细胞群是未标记的并且不保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文描述的方法一起使用的细胞群被标记并保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文所述方法一起使用的细胞群在去除磁场之后从柱中洗脱，并收集在细胞收集袋内。
在某些实施方案中，使用CliniMACS Prodigy系统(Miltenyi Biotec)进行分离和/或其他步骤。在一些方面，CliniMACS Prodigy系统配备有细胞加工联合体，其允许自动化洗涤和通过离心来分级分离细胞。CliniMACS Prodigy系统还可以包括机载相机和图像识别软件，所述图像识别软件通过辨识源细胞产品的宏观层来确定最佳细胞分级终点。例如，将外周血自动分离成红细胞、白细胞和血浆层。CliniMACS Prodigy系统还可以包括集成的细胞培育室，其实现细胞培养方案，如例如细胞分化和扩增、抗原加载和长期细胞培养。输入端口可允许无菌移除和补充培养基，并且可以使用集成显微镜监测细胞。参见例如，Klebanoff等人(2012)J Immunother.35(9):651–660,Terakura等人(2012)Blood.1:72–82，和Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。
在一些实施方案中，经由流式细胞术收集并富集(或耗尽)本文所述的细胞群，其中针对多种细胞表面标记染色的细胞携载于流体流中。在一些实施方案中，通过制备规模(FACS)分选收集和富集(或耗尽)本文描述的细胞群。在某些实施方案中，通过使用微机电系统(MEMS)芯片结合基于FACS的检测系统来收集和富集(或耗尽)本文描述的细胞群(参见例如，WO 2010/033140，Cho等人(2010)Lab Chip 10,1567-1573；和Godin等人(2008)JBiophoton.1(5):355–376。在两种情况下，可以用多种标记来标记细胞，从而允许以高纯度分离明确限定的T细胞亚组。
在一些实施方案中，用一种或多种可检测标记来标记抗体或结合配偶体，以促进用于阳性和/或阴性选择的分离。例如，分离可以基于与荧光标记的抗体的结合。在一些例子中，基于对一种或多种细胞表面标记具特异性的抗体或其他结合配偶体的结合来分离细胞在流体流中载携，如通过荧光激活细胞分选(FACS)，包括制备规模(FACS)和/或微机电系统(MEMS)芯片，例如与流式细胞检测系统组合。此类方法允许同时基于多种标记进行阳性和阴性选择。
在一些实施方案中，制备方法包括在分离、孵育和/或工程化之前或之后冷冻(例如，低温保存)细胞的步骤。在一些实施方案中，冷冻和随后的解冻步骤去除细胞群中的粒细胞，并且在一定程度上去除单核细胞。在一些实施方案中，例如，在洗涤步骤去除血浆和血小板之后，使所述细胞悬浮于冷冻溶液中。在一些方面，可以使用多种已知的冷冻溶液和参数中的任何一种。一个例子涉及使用含有20％DMSO和8％人血清白蛋白(HSA)的PBS，或其他合适的细胞冷冻培养基。然后将其用培养基1:1稀释，使得DMSO和HSA的最终浓度分别为10％和4％。然后通常将细胞以1℃/分钟的速率冷冻至-80℃并储存在液氮储罐的气相中。
在一些实施方案中，在基因工程化之前或与基因工程化结合孵育和/或培养细胞。孵育步骤可以包括培养、培育、刺激、激活和/或繁殖。孵育和/或工程化可以在培养容器中进行，所述培养容器是如单元、室、孔、柱、管、管组、阀、小瓶、培养皿、袋或其他用于培养或培育细胞的容器。在一些实施方案中，在刺激条件或刺激剂的存在下孵育组合物或细胞。此类条件包括设计用于以下的那些条件：诱导群体中的细胞的增殖、扩增、激活和/或存活，模拟抗原暴露，和/或引发细胞用于基因工程化(如用于引入重组抗原受体)。
条件可以包括以下中的一种或多种：特定培养基、温度、氧含量、二氧化碳含量、时间、药剂(例如，营养素、氨基酸、抗生素、离子和/或刺激因子(如细胞因子、趋化因子、抗原、结合配偶体、融合蛋白、重组可溶性受体和任何其他旨在激活细胞的药剂))。
在一些实施方案中，刺激条件或刺激剂包括能够刺激或激活TCR复合物的细胞内信号传导结构域的一种或多种药剂(例如，配体)。在一些方面，药剂在T细胞中开启或起始TCR/CD3细胞内信号传导级联。此类药剂可以包括抗体，如对TCR具有特异性的那些(例如抗CD3)。在一些实施方案中，刺激条件包括能够刺激共刺激受体的一种或多种药剂(例如配体)，例如抗CD28。在一些实施方案中，此类药剂和/或配体可以与固体支持物(如珠)和/或一种或多种细胞因子结合。任选地，扩增方法可以进一步包括向培养基中添加抗CD3和/或抗CD28抗体(例如，以至少约0.5ng/ml的浓度)的步骤。在一些实施方案中，刺激剂包括IL-2、IL-15和/或IL-7。在一些方面，IL-2浓度为至少约10单位/mL。
在一些方面，孵育是根据多种技术来进行，如以下文献中所述的那些技术：Riddell等人的美国专利号6,040,177；Klebanoff等人(2012)J Immunother.35(9):651–660,Terakura等人(2012)Blood.1:72-82；和/或Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。
在一些实施方案中，通过以下方式扩增T细胞：向培养起始组合物中添加饲养细胞(如非分裂外周血单核细胞(PBMC))(例如，使得对于要扩增的初始群体中的每个T淋巴细胞，所得细胞群含有至少约5、10、20或40个或更多个PBMC饲养细胞)；以及孵育培养物(例如，持续足以扩增所述T细胞数量的时间)。在一些方面，非分裂饲养细胞可以包含γ辐照的PBMC饲养细胞。在一些实施方案中，用约3000至3600拉德范围内的γ射线辐照PBMC以防止细胞分裂。在一些方面，在添加T细胞群之前将饲养细胞添加至培养基中。
在一些实施方案中，刺激条件包括适合于人T淋巴细胞生长的温度，例如至少约25摄氏度，通常为至少约30摄氏度，并且通常为或为约37摄氏度。任选地，孵育可以进一步包括添加非分裂EBV转化的类淋巴母细胞(LCL)作为饲养细胞。可以用约6000至10,000拉德范围内的γ射线辐照LCL。在一些方面，以任何合适的量提供LCL饲养细胞，如LCL饲养细胞与初始T淋巴细胞的比率为至少约10:1。
在实施方案中，通过用抗原刺激幼稚或抗原特异性T淋巴细胞获得抗原特异性T细胞如抗原特异性CD4+和/或CD8+ T细胞。例如，可以通过从被感染的受试者分离T细胞并在体外用相同抗原刺激所述细胞，产生针对巨细胞病毒抗原的抗原特异性T细胞系或克隆。
III.示例性治疗结果及其评估方法
在本文所提供的方法、组合物、组合、用途、试剂盒和制品的一些实施方案中，所提供的组合疗法产生一种或多种治疗结果，如与任何一种或多种与疗法或治疗相关的参数相关的特征，如下所述。在一些实施方案中，所述方法包括评估T细胞(例如基于T细胞的疗法所给予的T细胞)的暴露、持久性和增殖。在一些实施方案中，在本文所提供的方法中，细胞(例如，免疫疗法(例如T细胞疗法)所给予的细胞)的暴露、或延长的扩增和/或持久性，和/或所述细胞的细胞表型或功能活性的变化可以通过在体外或离体评估T细胞的特征来测量。在一些实施方案中，可以在给予本文所提供的组合疗法之前、期间或之后使用此类测定来确定或确认T细胞(例如T细胞疗法)的功能。
在一些实施方案中，组合疗法还可以包括一个或多个筛选步骤以鉴定用组合疗法治疗和/或继续组合疗法的受试者，和/或评估治疗结果和/或监测治疗结果的步骤。在一些实施方案中，评估治疗结果的步骤可以包括评价和/或监测治疗和/或鉴定给予疗法的其他或剩余步骤和/或重复疗法的受试者的步骤。在一些实施方案中，筛选步骤和/或治疗结果的评估可以用于确定本文所提供的组合疗法的剂量、频率、持续时间、时机和/或顺序。
在一些实施方案中，可以在给予所提供的组合疗法的一个或多个步骤(例如，给予T细胞疗法(例如CAR表达T细胞)和/或检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))之前、期间、过程期间或之后使用本文所述的任何筛选步骤和/或对治疗结果的评估。在一些实施方案中，在进行本文所提供的任何方法之前、期间、过程期间或之后进行评估。在一些实施方案中，在进行本文所提供的方法之前进行评估。在一些实施方案中，在进行本文所提供的方法的一个或多个步骤之后进行评估。在一些实施方案中，在给予所提供的组合疗法的一个或多个步骤之前进行评估，例如以筛选并鉴定适合于和/或易于接受组合疗法的患者。在一些实施方案中，在给予所提供的组合疗法的一个或多个步骤期间、过程期间或之后进行评估，例如以评估中间或最终治疗结果，例如以确定治疗功效和/或确定是否继续或重复治疗和/或确定是否给予组合疗法的剩余步骤。
在一些实施方案中，治疗结果包括改善的免疫功能，例如基于细胞的疗法所给予的T细胞和/或体内内源T细胞的免疫功能。在一些实施方案中，示例性治疗结果包括但不限于增强的T细胞增殖、增强的T细胞功能活性、免疫细胞表型标记表达的变化，例如与给予至受试者的工程化T细胞(例如CAR-T细胞)相关的此类特征。在一些实施方案中，示例性治疗结果包括降低的疾病负荷(例如肿瘤负荷)、改善的临床结果和/或增强的治疗功效。
在一些实施方案中，筛选步骤和/或治疗结果的评估包括评估基于细胞的疗法所给予的T细胞的存活和/或功能。在一些实施方案中，筛选步骤和/或治疗结果的评估包括评估细胞因子或生长因子的水平。在一些实施方案中，筛选步骤和/或治疗结果的评估包括评估疾病负荷和/或改善，例如评估肿瘤负荷和/或临床结果。在一些实施方案中，筛选步骤和/或治疗结果的评估中的任一个可以包括本文所述的和/或本领域已知的任何评估方法和/或测定，并且可以进行一次或多次，例如在给予组合疗法的一个或多个步骤之前、期间、过程期间或之后进行。与可以在本文所提供的方法的一些实施方案中评估的治疗结果相关的示例性参数集包括外周血免疫细胞群谱和/或肿瘤负荷。
在一些实施方案中，所述方法影响细胞疗法在受试者体内的功效。在一些实施方案中，与通过不给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的方法实现的持久性、扩增和/或存在相比，在所述方法中给予细胞剂量和检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))之后，重组受体表达(例如CAR表达)细胞在受试者体内的持久性、扩增和/或存在更大。在本文所提供的免疫疗法方法(如T细胞疗法(例如，CAR表达T细胞))的一些实施方案中，参数的评估包括评估与在不存在检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的情况下向受试者给予免疫疗法的方法相比，免疫疗法(例如，T细胞疗法)的所给予的T细胞在受试者体内的扩增和/或持久性。在一些实施方案中，与在不存在检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的情况下向受试者给予T细胞疗法的方法相比，所述方法导致所给予的T细胞在受试者体内展现出增加或延长的扩增和/或持久性。
在一些实施方案中，与在不存在检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的情况下向受试者给予表达重组受体的细胞剂量的方法相比，给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))减少了受试者的疾病负荷，例如肿瘤负荷。在一些实施方案中，与在不存在检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的情况下向受试者给予表达重组受体的细胞剂量的方法相比，给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))减少了受试者的骨髓原始细胞。在一些实施方案中，与在不存在检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的情况下向受试者给予表达重组受体的细胞剂量的方法相比，给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))导致改善的临床结果，例如客观反应率(ORR)、无进展存活(PFS)和总体存活(OS)。
在一些实施方案中，可以在给予组合疗法的一个或多个步骤之前筛选受试者。例如，可以在给予组合治疗之前针对疾病特征和/或疾病负荷(例如肿瘤负荷)敏筛选受试者，以确定给予组合疗法的适合性、反应性和/或感性。在一些实施方案中，筛选步骤和/或治疗结果的评估可以用于确定本文所提供的组合疗法的剂量、频率、持续时间、时机和/或顺序。
在一些实施方案中，可以在给予组合疗法的一个步骤之后筛选受试者，以确定和鉴定受试者以接受组合治疗的剩余步骤和/或监测治疗功效。在一些实施方案中，在给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))之前和/或之后评估所给予的T细胞的数量、水平或量和/或所给予的T细胞的增殖和/或活性。
在一些实施方案中，检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))在细胞疗法给予之后给予。在一些实施方案中，直到给予细胞疗法之后至少约22至50天，才给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的至少一个周期(例如28天周期)。在一些实施方案中，直到给予细胞疗法之后至少约22至50天，才给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的第一周期。在一些实施方案中，在给予细胞疗法之后约22至50天的时间点给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的至少一个周期(例如第一周期)。在一些实施方案中，检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))在周期中给予多于一次。在一些实施方案中，周期是28天周期。
在一些实施方案中，确定或评估与不同的评估时间点、不同条件、参考点和/或不同受试者的相同参数或结果的水平、值或测量值相比，参数或结果的水平、值或测量值的变化和/或改变(例如，增加、升高、降低或减少)。例如，在一些实施方案中，可以确定与不同条件(例如，在给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))之前)中的相同参数相比，特定参数(例如，样品中的工程化T细胞数量)的倍数变化(例如，增加或减少)。在一些实施方案中，确定两个或更多个参数的水平、值或测量值，并比较相对水平。在一些实施方案中，将所确定的参数的水平、值或测量值与来自对照样品或未处理样品的水平、值或测量值进行比较。在一些实施方案中，将所确定的参数的水平、值或测量值与在不同时间点来自同一受试者的样品的水平进行比较。可以将在单独参数的定量中获得的值组合用于疾病评估的目的，例如通过使用多参数分析对参数的水平、值或测量值形成算术或逻辑运算。在一些实施方案中，可以计算两个或更多个特定参数的比率。
A.T细胞暴露、持久性和增殖
在一些实施方案中，与疗法或治疗结果相关的参数(其包括可以评估用于筛选步骤和/或评估治疗结果和/或监测治疗结果的参数)是或包括对T细胞(例如，基于T细胞的疗法所给予的T细胞)的暴露、持久性和增殖的评估。在一些实施方案中，在本文所提供的方法中，细胞(例如，免疫疗法(例如T细胞疗法)所给予的细胞)的增加暴露、或延长的扩增和/或持久性，和/或所述细胞的细胞表型或功能活性的变化可以通过在体外或离体评估T细胞的特征来测量。在一些实施方案中，可以在给予本文所提供的组合疗法的一个或多个步骤之前或之后，使用此类测定来确定或确认用于免疫疗法(例如，T细胞疗法)的T细胞的功能。
在一些实施方案中，检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的给予被设计成如通过促进细胞随时间的扩增和/或持久性而促进受试者对所述细胞(例如，基于T细胞的疗法所给予的T细胞)的暴露。在一些实施方案中，与在不存在检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的情况下向受试者给予T细胞疗法的方法相比，T细胞疗法在受试者体内展现出增加或延长的扩增和/或持久性。
在一些实施方案中，所提供的方法增加受试者对所给予的细胞的暴露(例如，增加的细胞数量或随时间的持续时间)和/或改善免疫疗法(例如，T细胞疗法)的功效和治疗结果。在一些方面，与其他方法相比，所述方法的有利之处在于，对表达重组受体的细胞(例如，CAR表达细胞)的更大和/或更长程度的暴露改善治疗结果。此类结果可包括患者存活率和缓解，即使在具有严重肿瘤负荷的个体中。
在一些实施方案中，与在不存在检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的情况下仅给予T细胞相比，检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的给予可以增加受试者中对细胞(例如基于T细胞的疗法所给予的T细胞)的暴露的最大值、总和、和/或持续时间。在一些方面，在高疾病负荷(因此抗原量较高)和/或更具侵袭性或抗性的癌症的情境下，与在相同情境下在不存在检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的情况下仅给予T细胞(这可能导致免疫抑制、无反应性和/或消耗，从而可能阻止细胞的扩增和/或持久性)相比，给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))增强功效。
在一些实施方案中，在给予T细胞后以及在给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))之前、期间和/或之后，检测表达重组受体的细胞(例如，基于T细胞的疗法所给予的CAR表达细胞)在受试者体内的存在和/或量。在一些方面，使用定量PCR(qPCR)评估表达重组受体的细胞(例如，基于T细胞的疗法所给予的CAR表达细胞)在受试者的血液或血清或器官或组织样品(例如，疾病位点，例如肿瘤样品)中的量。在一些方面，持久性被定量为每微克的DNA中编码受体(例如，CAR)的DNA或质粒的拷贝，或者定量为每微升的样品(例如，血液或血清)中受体表达(例如，CAR表达)细胞的数量，或者每微升的样品中每个外周血单核细胞(PBMC)或白细胞或T细胞的总数中受体表达(例如，CAR表达)细胞的数量。
在一些实施方案中，在给予T细胞(例如，CAR表达T细胞)后，在或至少在4、7、10、14、18、21、24、27或28天，在受试者体内检测细胞。在一些方面，在给予T细胞后，在或至少在2、4或6周，或3、6或12、18或24或30或36个月，或1、2、3、4、5年或更长时间，检测所述细胞。
在一些实施方案中，与通过替代方法(如涉及在不存在检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的情况下仅给予免疫疗法，例如给予T细胞(例如，CAR表达T细胞)的那些方法)所实现的持久性相比，在给予T细胞(例如，CAR表达T细胞)和/或检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))后，通过所述方法在受试者体内实现的受体表达细胞(例如CAR表达细胞)的持久性更大。
指示扩增和/或持久性的细胞(例如，T细胞疗法所给予的T细胞)的暴露(例如，数量)可以根据以下方面来陈述：暴露至受试者的细胞的最大数量、可检测细胞或高于某一数量或百分比的细胞的持续时间、细胞数量相对于时间的曲线下面积和/或其组合和其指示物。此类结果可以使用已知方法来评估，如使用qPCR来检测与特定样品(例如血液、血清、血浆或组织，如肿瘤样品)中核酸或DNA的总量相比，编码重组受体的核酸的拷贝数；和/或使用流式细胞术测定，通常使用对受体具有特异性的抗体来检测表达受体的细胞。还可以使用基于细胞的测定来检测功能细胞的数量或百分比，所述功能细胞如能够结合至和/或中和疾病或病症的细胞或表达由所述受体所识别抗原的细胞的细胞，和/或能够诱导针对疾病或病症细胞或表达由所述受体所识别抗原的细胞的反应(例如细胞毒性反应)的细胞。
在一些方面，增加的受试者对细胞的暴露包括增加的细胞扩增。在一些实施方案中，在给予T细胞(例如，CAR表达T细胞)后和/或在给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))后，受体表达细胞(例如，CAR表达细胞)在受试者体内扩增。在一些方面，与其他方法(如涉及在不给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的情况下给予T细胞(例如，CAR表达T细胞)的那些方法)相比，所述方法导致细胞的更大扩增。
在一些方面，所述方法导致所给予的细胞的高体内增殖，例如通过流式细胞术所测量的。在一些方面，检测细胞的高峰比例。例如，在一些实施方案中，在给予T细胞(例如，CAR表达T细胞)和/或检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))后，在峰值或最大水平时，在受试者的血液或疾病部位或其白细胞级分(例如，PBMC级分或T细胞级分)中，至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％或至少约90％的细胞表达重组受体(例如，CAR)。
在一些实施方案中，所述方法导致受试者的血液或血清或其他体液或器官或组织中的浓度最大值为至少100、500、1000、1500、2000、5000、10,000或15,000个拷贝的编码受体(例如，CAR)的核酸/微克DNA，或为每个外周血单核细胞(PBMC)总数、单核细胞总数、T细胞总数或微升总数至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8或0.9个受体表达(例如，CAR表达)细胞。在一些实施方案中，表达受体的细胞被检测为受试者的血液中总PBMC的至少10％、20％、30％、40％、50％或60％，和/或在给予T细胞(例如，CAR表达T细胞)和/或检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))后在这个水平下持续至少1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、24周、36周、48周或52周，或在这种给予后持续1年、2年、3年、4年或5年或更长时间。
在一些方面，所述方法导致例如受试者的血清、血浆、血液或组织(例如肿瘤样品)中，每微克DNA中编码重组受体(例如CAR)的核酸的拷贝数增加至少2倍、至少4倍、至少10倍或至少20倍。
在一些实施方案中，在给予T细胞(例如，CAR表达T细胞)后或在给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))后至少20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、32天、33天、34天、35天、36天、37天、38天、39天、40天、41天、42天、43天、44天、45天、46天、47天、48天、49天、50天、51天、52天、53天、54天、55天、56天、57天、58天、59天或60天或更长时间，在给予T细胞(例如，CAR表达T细胞)和/或检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))后至少或至少约2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周或24周或更长时间，受试者的血清、血浆、血液或组织(例如，肿瘤样品)中的表达受体的细胞可以例如通过指定方法(如qPCR或基于流式细胞术的检测方法)检测到。
在一些方面，在受试者或其体液、血浆、血清、组织或隔室中，例如在其血液(例如外周血)或疾病位点(例如肿瘤)中，至少约1x102、至少约1x103、至少约1x104、至少约1x105、或至少约1x106或至少约5x106或至少约1x107或至少约5x107或至少约1x108个重组受体表达(例如CAR表达)细胞，和/或每微升至少10、25、50、100、200、300、400或500或1000个受体表达细胞(例如每微升至少10个细胞)是可检测或存在的。在一些实施方案中，在给予T细胞(例如，CAR表达T细胞)后和/或在给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))后的至少约20天、至少约40天、或至少约60天，或至少约3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月，或至少2年或3年，这种数量或浓度的细胞在受试者体内可检测到。此类细胞数量可以如通过基于流式细胞术或基于定量PCR的方法来检测，并使用已知方法外推至总细胞数量。参见例如，Brentjens等人,Sci TranslMed.2013 5(177),Park等人,Molecular Therapy15(4):825–833(2007)；Savoldo等人,JCI121(5):1822-1826(2011)；Davila等人,(2013)PLoS ONE 8(4):e61338；Davila等人,Oncoimmunology 1(9):1577-1583(2012)；Lamers,Blood 2011 117:72-82；Jensen等人,Biol Blood Marrow Transplant 2010September；16(9):1245–1256；Brentjens等人,Blood 2011118(18):4817-4828。
在一些方面，如通过免疫组织化学、PCR和/或流式细胞术所测量，在给予细胞(例如，CAR表达T细胞)和/或检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))后在约1周、约2周、约3周、约4周、约5周或至少约6周，或至少约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月或至少2或3年，例如在外周血或骨髓或其他隔室中，每100个细胞中编码重组受体的核酸的拷贝数(例如载体拷贝数)是至少0.01、至少0.1、至少1或至少10。在一些实施方案中，在给予T细胞(例如，CAR表达T细胞)、检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))后约1周、约2周、约3周或至少约4周，或在这种给予后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月或至少2或3年的时间，每微克基因组DNA中表达受体(例如，CAR)的载体的拷贝数是至少100、至少1000、至少5000、或至少10,000、或至少15,000或至少20,000。
在一些方面，在给予细胞后(例如，在起始给予T细胞(例如，CAR表达T细胞)和/或检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))后)至少约3个月、至少约6个月、至少约12个月、至少约1年、至少约2年、至少约3年或超过3年的时间，在受试者、其血浆、血清、血液、组织和/或疾病位点(例如，肿瘤位点)中，由细胞表达的受体(例如，CAR)可通过定量PCR(qPCR)或通过流式细胞术检测到。
在一些实施方案中，与通过替代给药方案(其中在不给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的情况下向受试者给予T细胞(例如，CAR表达T细胞))所实现的曲线下面积相比，在给予T细胞(例如，CAR表达T细胞)和/或检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))后，在受试者的体液、血浆、血清、血液、组织、器官和/或疾病位点(例如肿瘤位点)中，受体(例如，CAR)表达细胞的浓度随时间的曲线下面积(AUC)更大。
在一些方面，所述方法导致所给予的细胞的高体内增殖，例如通过流式细胞术所测量的。在一些方面，检测细胞的高峰比例。例如，在一些实施方案中，在T细胞(例如，CAR表达T细胞)和/或检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))后，在峰值或最大水平时，在受试者的血液、血浆、血清、组织或疾病位点或其白细胞级分(例如，PBMC级分或T细胞级分)中，至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％或至少约90％的细胞表达重组受体(例如，CAR)。
在一些方面，在给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的受试者体内，细胞剂量的增加或延长的扩增和/或持久性与受试者体内肿瘤相关结果的益处相关。在一些实施方案中，肿瘤相关结果包括受试者体内肿瘤负荷的降低或骨髓原始细胞的减少。在一些实施方案中，在给予所述方法后，肿瘤负荷降低或降低至少或至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。在一些实施方案中，与已经用不涉及给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的方法治疗的受试者相比，疾病负荷、肿瘤大小、肿瘤体积、肿瘤质量和/或肿瘤负担或体积在细胞剂量后降低至少或约50％、60％、70％、80％、90％或更多。
B.T细胞功能活性
在一些实施方案中，与疗法或治疗结果相关的参数(其包括可以评估用于筛选步骤和/或评估治疗结果和/或监测治疗结果的参数)包括T细胞的活性、表型、增殖或功能中的一种或多种。在一些实施方案中，可以使用本领域中用于评估T细胞(例如，T细胞疗法所给予的T细胞)的活性、表型、增殖和/或功能的任何已知测定。在给予细胞和/或检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))之前和/或之后，在一些实施方案中，例如通过多种已知方法中的任一种测量工程化细胞群的生物活性。待评估的参数包括工程化或天然T细胞或其他免疫细胞与抗原的特异性结合，其在体内例如通过成像进行评估，或离体例如通过ELISA或流式细胞术进行评估。在某些实施方案中，可以使用本领域已知的任何合适的方法(如描述于例如Kochenderfer等人,J.Immunotherapy,32(7):689-702(2009)和Herman等人J.Immunological Methods,285(1):25-40(2004)中的细胞毒性测定)测量工程化细胞破坏靶细胞的能力。在某些实施方案中，通过评估一种或多种细胞因子(如CD107a、IFNγ、IL-2、GM-CSF和TNFα)的表达和/或分泌和/或通过评估细胞溶解活性来测量细胞的生物活性。
在一些实施方案中，对T细胞(例如，T细胞疗法所给予的T细胞)的活性、表型、增殖和/或功能的测定包括但不限于ELISPOT、ELISA、细胞增殖、细胞毒性淋巴细胞(CTL)测定、与T细胞表位、抗原或配体结合、或细胞内细胞因子染色、增殖测定、淋巴因子分泌测定、直接细胞毒性测定和有限稀释测定。在一些实施方案中，可以测量T细胞的增殖反应，例如通过将3H-胸苷、BrdU(5-溴-2'-脱氧尿苷)或2'-脱氧-5-乙炔基尿苷(EdU)掺入T细胞的DNA中或使用诸如羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)、CellTrace Violet或膜染料PKH26等染料的染料稀释测定。
在一些实施方案中，评估T细胞(例如，T细胞疗法所给予的T细胞)的活性、表型、增殖和/或功能包括测量T细胞的细胞因子产生，和/或测量来自受试者的生物样品(例如血浆、血清、血液和/或组织样品，例如肿瘤样品)中的细胞因子产生。在一些情况下，此类所测量的细胞因子可以包括但不限于白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFNγ)、白细胞介素-4(IL-4)、TNF-α(TNFα)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-12(IL-12)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、CD107a和/或TGF-β(TGFβ)。测量细胞因子的测定是本领域所熟知的，并且包括但不限于ELISA、细胞内细胞因子染色、流式微珠阵列、RT-PCR、ELISPOT、流式细胞术和在存在测试样品的情况下测试对相关细胞因子有反应的细胞的反应性(例如，增殖)的生物测定。
在一些实施方案中，评估T细胞(例如，T细胞疗法所给予的T细胞)的活性、表型、增殖和/或功能包括评估细胞表型，例如特定细胞表面标记的表达。在一些实施方案中，评估T细胞(例如，T细胞疗法所给予的T细胞)中T细胞激活标记、T细胞消耗标记和/或T细胞分化标记的表达。在一些实施方案中，在给予之前评估细胞表型。在一些实施方案中，在给予细胞疗法和/或检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))期间或之后评估细胞表型。用于评估的T细胞激活标记、T细胞消耗标记和/或T细胞分化标记包括本领域已知用于特定T细胞亚组的任何标记，例如CD25、CD38、人白细胞抗原-DR(HLA-DR)、CD69、CD44、CD137、KLRG1、CD62L低、CCR7低、CD71、CD2、CD54、CD58、CD244、CD160、程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)、淋巴细胞激活基因3蛋白(LAG-3)、T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域蛋白3(TIM-3)、细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)、B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)和/或基于T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸的抑制基序结构域(TIGIT)(参见例如，Liu等人,CellDeath and Disease(2015)6,e1792)。在一些实施方案中，所评估的细胞表面标记是CD25、PD-1和/或TIM-3。在一些实施方案中，所评估的细胞表面标记是CD25。
在一些方面，检测表达水平包括进行体外测定。在一些实施方案中，体外测定是免疫测定、基于适配体的测定、组织学或细胞学测定或mRNA表达水平测定。在一些实施方案中，通过酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫印迹、免疫沉淀、放射免疫测定(RIA)、免疫染色、流式细胞术测定、表面等离子体共振(SPR)、化学发光测定、侧流免疫测定、抑制测定或亲合力测定来检测一种或多种因子、效应子、酶和/或表面标记各自的一种或多种的一个或多个参数。在一些实施方案中，细胞因子和/或表面标记的检测是使用特异性结合至少一种生物标记的结合试剂来确定的。在一些情况下，结合试剂是抗体或其抗原结合片段、适配体或核酸探针。
在一些实施方案中，给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))增加循环CAR T细胞的水平。
C.反应、功效和存活
在一些实施方案中，与疗法或治疗结果相关的参数(其包括可以评估用于筛选步骤和/或评估治疗结果和/或监测治疗结果的参数)包括肿瘤或疾病负荷。给予免疫疗法(如T细胞疗法(例如，CAR表达T细胞))和/或检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))可以降低或防止受试者的疾病或病症的扩增或负荷。例如，在疾病或病症是肿瘤的情况下，所述方法通常降低肿瘤大小、体积、转移、骨髓中原始细胞的百分比或可分子检测的癌症，和/或改善预后或存活或与肿瘤负荷相关的其他症状。
在一些方面，根据所提供的方法的和/或用所提供的制品或组合物的给予通常减少或防止受试者的疾病或病症的扩展或负荷。例如，在疾病或病症是肿瘤的情况下，所述方法通常降低肿瘤大小、体积、转移、骨髓中原始细胞的百分比或可分子检测的癌症，和/或改善预后或存活或与肿瘤负荷相关的其他症状。
在一些实施方案中，与在不给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的情况下给予免疫疗法(如T细胞疗法(例如CAR表达T细胞))的替代方法相比，所提供的方法导致所治疗受试者的肿瘤负荷减少。肿瘤负荷不一定在接受组合疗法的所有受试者中都实际上降低，但是例如基于临床数据，所治疗受试者的平均肿瘤负荷降低，其中大多数用这种组合疗法治疗的受试者展现出降低的肿瘤负荷，例如至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多用组合疗法治疗的受试者展现出降低的肿瘤负荷。
疾病负荷可以涵盖所述受试者中或所述受试者的器官、组织或体液(如肿瘤或例如可指示转移的另一位置的器官或组织)中所述疾病的总细胞数。例如，在某些血液恶性肿瘤的情境下，可以在血液、淋巴或骨髓中检测和/或定量肿瘤细胞。在一些实施方案中，疾病负荷可以包括肿瘤的质量、转移的数量或程度和/或骨髓中存在的原始细胞的百分比。
在一些实施方案中，受试者患有骨髓瘤、淋巴瘤或白血病。疾病负荷的程度可以通过评估血液或骨髓中的残留白血病来确定。在一些实施方案中，受试者患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤(MM))。在一些实施方案中，受试者患有MM或DBCBL。
在一些方面，受试者(如患有NHL的受试者)的反应率是基于卢加诺标准(Luganocriteria)。(Cheson等人,(2014)JCO.,32(27):3059-3067；Johnson等人,(2015)Radiology2:323–338；Cheson,B.D.(2015)Chin.Clin.Oncol.4(1):5)。在一些方面，反应评估利用临床、血液学和/或分子方法中的任何一种。在一些方面，使用卢加诺标准评估的反应涉及视情况使用正电子发射断层成像(PET)-计算机断层成像(CT)和/或CT。PET-CT评价还可包括使用氟脱氧葡萄糖(FDG)用于嗜FDG淋巴瘤。在一些方面，如果将使用PET-CT来评估嗜FDG组织学中的反应，则可以使用5分量表。在一些方面，5分量表包含以下标准：1，没有高于背景的摄取；2，摄取≤纵隔；3，摄取>纵隔但≤肝脏；4，摄取适度>肝脏；5，摄取显著高于肝脏和/或新病灶；X，新的摄取区域不可能与淋巴瘤有关。
在一些方面，如使用卢加诺标准描述的完全反应涉及在不同可测量位点处的完全代谢反应和完全放射学反应。在一些方面，这些位点包括淋巴结和淋巴外位点，其中当使用PET-CT时，在5分量表上CR被描述为得分为1、2或3，其具有或不具有残余肿块。在一些方面，在脾或骨髓内具有高生理摄取或激活的Waldeyer环或结节外位点中(例如，对于化学疗法或骨髓集落刺激因子)，摄取可以大于正常纵隔和/或肝脏。在这种情况下，如果在初始受累位点的摄取不大于周围的正常组织，即使所述组织具有高生理摄取，也可以推断为完全代谢反应。在一些方面，使用CT在淋巴结中评估反应，其中CR被描述为没有患病的淋巴外位点，并且靶淋巴结/淋巴结肿块必须复原至病变的最长横径(LDi)≤1.5cm。其他评估位点包括骨髓，其中基于PET-CT的评估应指示在骨髓中缺乏嗜FDG疾病的证据，并且基于CT的评估应指示正常形态，如果不确定则应是IHC阴性。其他位点可以包括对器官肿大的评估，其应复原至正常。在一些方面，评估未测量的病灶和新病灶，其在CR的情况下应不存在(Cheson等人,(2014)JCO 32(27):3059-3067；Johnson等人,(2015)Radiology 2:323–338；Cheson,B.D.(2015)Chin.Clin.Oncol.4(1):5)。
在一些方面，如使用卢加诺标准描述的部分反应(PR)涉及在不同可测量位点的部分代谢和/或放射学反应。在一些方面，这些位点包括淋巴结和淋巴外位点，其中在使用PET-CT时，PR被描述为得分为4分或5分，具有与基线相比降低的摄取和任何大小的一个或多个残余肿块。在中间时期，此类发现可以指示反应中的疾病。在治疗结束时，此类发现可以指示残留疾病。在一些方面，使用CT评估淋巴结中的反应，其中PR被描述为多达6个可测量的靶结节和结节外位点的SPD减小≥50％。如果病灶太小而无法在CT上测量，则将5mm×5mm指定为默认值；如果病灶不再可见，则所述值为0mm×0mm；对于>5mm×5mm但小于正常的结节，使用实际测量进行计算。其他评估位点包括骨髓，其中基于PET-CT的评价应指示残余摄取，所述残余摄取高于正常骨髓中的摄取但与基线相比有所降低(弥漫性摄取与来自所允许化学疗法的反应性变化相容)。在一些方面，如果在结节反应的情境下在骨髓中存在持续的局灶性变化，则应考虑用MRI或活组织检查或间隔扫描进一步评价。在一些方面，其他位点可以包括对器官肿大的评估，其中脾脏的超过正常的长度必须已经复原>50％。在一些方面，评估未测量的病灶和新病灶，其在PR的情况下应不存在/正常、复原但不增加。也可以使用基于PET-CT和/或CT的评估来测量无反应/稳定疾病(SD)或进行性疾病(PD)。(Cheson等人,(2014)JCO.,32(27):3059-3067；Johnson等人,(2015)Radiology2:323–338；Cheson,B.D.(2015)Chin.Clin.Oncol.,4(1):5)。
在一些方面中，无进展存活期(PFS)被描述为治疗疾病(如癌症)期间和之后，受试者带病生存但所述疾病不恶化的时间长度。在一些方面，客观反应(OR)被描述为可测量的反应。在一些方面，客观反应率(ORR)被描述为实现CR或PR的患者的比例。在一些方面，总存活期(OS)被描述为从疾病(如癌症)的诊断日期或治疗开始日期起，被诊断患有所述疾病的受试者仍然存活的时间长度。在一些方面，无事件存活期(EFS)被描述为在癌症治疗结束后，受试者保持没有所述治疗意图预防或延迟的某些并发症或事件的时间长度。这些事件可包括癌症的复发或某些症状的发作，如已经扩散到骨骼的癌症引起的骨痛，或死亡。
在一些实施方案中，反应持续时间(DOR)的量度包括从记录到肿瘤反应至疾病进展的时间。在一些实施方案中，用于评估反应的参数可以包括持久反应，例如，从起始治疗起一段时间之后持续存在的反应。在一些实施方案中，持久反应是由在起始治疗后约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18或24个月的反应率来指示。在一些实施方案中，反应可持续超过3个月或超过6个月。
在一些方面，使用RECIST标准确定客观肿瘤反应。(Eisenhauer等人,EuropeanJournal of Cancer 45(2009)228-247。)在一些方面，使用RECIST标准确定靶病灶的客观肿瘤反应。在一些方面，使用RECIST标准确定的完全反应被描述为所有靶病灶的消失，并且任何病理性淋巴结(无论是靶标还是非靶标)必须在短轴上减少至<10mm。在其他方面，使用RECIST标准确定的部分反应被描述为以基线总和直径为参考，靶病灶的直径总和减少至少30％。在其他方面，进行性疾病(PD)被描述为以研究中的最小总和作为参考(这包括基线总和，如果所述基线总和是研究中最小的)，靶病灶直径总和增加至少20％。除了相对增加20％之外，总和还必须证明至少5mm的绝对增加(在一些方面，一个或多个新病灶的出现也被认为是进展)。在其他方面，稳定疾病(SD)被描述为以研究期间的最小总直径作为参考，既没有足够的收缩以符合PR，也没有足够的增加以符合PD。
在MM的情况下，评估疾病负荷程度的示例性参数包括诸如以下等参数：克隆血浆细胞数量(例如，在骨髓活检中>10％或在来自其他组织的活检中的任何量；浆细胞瘤)、单克隆蛋白(副蛋白)在血清或尿液中的存在、感觉与血浆细胞障碍相关的终末器官损害的证据(例如，高钙血症(校正钙>2.75mmol/l)；骨髓瘤引起的肾功能不全；贫血(血红蛋白<10g/dl)；和/或骨病灶(溶解性病灶或具有压缩性骨折的骨质疏松症))。
在DLBCL的情况下，评估疾病负荷程度的示例性参数包括诸如以下等参数：细胞形态(例如，中心母细胞、免疫母细胞和间变细胞)、基因表达，miRNA表达和蛋白质表达(例如，BCL2、BCL6、MUM1、LMO2、MYC和p21的表达)。
在一些方面，受试者(如患有CLL的受试者)的反应率是基于国际慢性淋巴细胞白血病研讨会(IWCLL)反应标准(Hallek等人,Blood 2008年6月15日；111(12):5446-5456)。在一些方面，这些标准描述如下：完全缓解(CR)，其在一些方面要求不存在通过免疫表型分析的外周血克隆淋巴细胞、不存在淋巴结病、不存在肝肿大或脾肿大、不存在全身症状且血细胞计数令人满意；完全缓解伴随不完全骨髓恢复(CRi)，其在一些方面被描述为上文的CR，但没有正常的血细胞计数；部分缓解(PR)，其在一些方面被描述为淋巴细胞计数下降≥50％、淋巴结病减少≥50％、或肝或脾减小≥50％，以及外周血细胞计数改善；进展性疾病(PD)，其在一些方面被描述为淋巴细胞计数增加≥50％至>5x109/L、淋巴结病增加≥50％、肝或脾大小增加≥50％、Richter转化或由于CLL所致的新的血细胞减少；和稳定疾病，其在一些方面被描述为不符合CR、CRi、PR或PD的标准。
在一些实施方案中，如果在给予细胞剂量的1个月内，受试者的淋巴结大小小于或小于约20mm，大小小于或小于约10mm或大小小于或小于约10mm，则所述受试者展现CR或OR。
在一些实施方案中，在受试者的骨髓中(或在大于50％、60％、70％、80％、90％或更多的根据所述方法治疗的受试者的骨髓中)没有检测到CLL的指标克隆。在一些实施方案中，通过IgH深度测序评估CLL的指标克隆。在一些实施方案中，在给予细胞后为或约或至少或至少约1、2、3、4、5、6、12、18或24个月的时间，没有检测到所述指标克隆。
在一些实施方案中，如果例如如通过光学显微术检测，骨髓中存在大于或等于5％原始细胞，如骨髓中大于或等于10％原始细胞、骨髓中大于或等于20％原始细胞、骨髓中大于或等于30％原始细胞、骨髓中大于或等于40％原始细胞或骨髓中大于或等于50％原始细胞，则受试者展现形态学疾病。在一些实施方案中，如果骨髓中存在少于5％原始细胞，则受试者展现出完全或临床缓解。
在一些实施方案中，受试者可以展现完全缓解，但存在小部分形态学上(通过光学显微镜技术)不可检测的残余白血病细胞。如果受试者展现骨髓中小于5％原始细胞并且展现可分子检测的癌症，则称所述受试者展现最小残余疾病(MRD)。在一些实施方案中，可以使用允许灵敏检测少量细胞的各种分子技术中的任何一种来评估可分子检测的癌症。在一些方面，此类技术包括PCR测定，其可以确定通过染色体易位产生的独特Ig/T细胞受体基因重排或融合转录物。在一些实施方案中，可以使用流式细胞术基于白血病特有的免疫表型来鉴定癌细胞。在一些实施方案中，癌症的分子检测可以检测少至100,000个正常细胞中的1个白血病细胞。在一些实施方案中，如果如通过PCR或流式细胞术检测到100,000个细胞中至少或大于1个白血病细胞，则受试者展现可分子检测的MRD。在一些实施方案中，受试者的疾病负荷是不可分子检测的或MRD-，使得在一些情况下使用PCR或流式细胞术技术无法检测到所述受试者中的白血病细胞。
在白血病的情况下，疾病负荷程度可以通过评估血液或骨髓中残留的白血病来确定。在一些实施方案中，如果例如如通过光学显微镜检查检测的，在骨髓中存在大于或等于5％的原始细胞，则受试者展现出形态学疾病。在一些实施方案中，如果骨髓中存在少于5％原始细胞，则受试者展现出完全或临床缓解。
在一些实施方案中，对于白血病，受试者可展现出完全缓解，但是存在小部分形态学不可检测(通过光学显微镜检查技术)的残余白血病细胞。如果受试者展现骨髓中小于5％原始细胞并且展现可分子检测的癌症，则称所述受试者展现最小残余疾病(MRD)。在一些实施方案中，可以使用允许灵敏检测少量细胞的各种分子技术中的任何一种来评估可分子检测的癌症。在一些方面，此类技术包括PCR测定，其可以确定通过染色体易位产生的独特Ig/T细胞受体基因重排或融合转录物。在一些实施方案中，可以使用流式细胞术基于白血病特有的免疫表型来鉴定癌细胞。在一些实施方案中，癌症的分子检测可以检测少至100,000个正常细胞中的1个白血病细胞。在一些实施方案中，如果如通过PCR或流式细胞术检测到100,000个细胞中至少或大于1个白血病细胞，则受试者展现可分子检测的MRD。在一些实施方案中，受试者的疾病负荷是不可分子检测的或MRD-，使得在一些情况下使用PCR或流式细胞术技术无法检测到所述受试者中的白血病细胞。
在一些实施方案中，与在即将给予免疫疗法(例如，T细胞疗法)和/或检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))之前的时间的疾病负荷相比，所述方法和/或给予细胞疗法(如T细胞疗法(例如，CAR表达T细胞))和/或检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))减轻了疾病负荷。
在一些方面，给予免疫疗法(例如T细胞疗法)和/或检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))可以防止疾病负荷增加，并且这可以通过疾病负荷不变化来证明。
在一些实施方案中，与使用替代疗法的可比较方法(例如其中在不没有给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的情况下受试者仅接受免疫疗法(例如T细胞疗法)的一种方法)观察到的降低相比，所述方法以更大的程度和/或在更长的时间段内减少疾病或病症的负荷，例如，肿瘤细胞的数量、肿瘤的大小、患者存活或无事件存活的持续时间。在一些实施方案中，与通过给予单独的每种药剂(例如，向未接受免疫疗法(例如T细胞疗法)的受试者给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))；或者向未接受检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的受试者给予免疫疗法(例如T细胞疗法))将实现的降低相比，在给予免疫疗法(例如T细胞疗法)和检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的组合疗法后以更大的程度或在更长的持续时间内减少疾病负荷。
在一些实施方案中，检测、评估或测量受试者中疾病或病症的负荷。在一些方面，可以通过检测受试者中或受试者的器官、组织或体液(如血液或血清)中的疾病细胞或疾病相关细胞(例如肿瘤细胞)的总数来检测疾病负荷。在一些实施方案中，通过测量转移的数量或程度来评估疾病负荷，例如肿瘤负荷。在一些方面，评估受试者的存活、特定时间段内的存活、存活程度、无事件或无症状存活的存在或持续时间或无复发存活。在一些实施方案中，评估疾病或病症的任何症状。在一些实施方案中，规定疾病或病症负荷的量度。在一些实施方案中，用于确定的示例性参数包括指示疾病或病症(例如肿瘤)的改善或改良的特定临床结果。此类参数包括：疾病控制的持续时间，所述疾病控制包括完全反应(CR)、部分反应(PR)或稳定疾病(SD)(参见例如，实体瘤中的反应评价标准(Response EvaluationCriteria In Solid Tumors，RECIST)指南)、客观反应率(ORR)、无进展存活(PFS)和总体存活(OS)。可以设定参数的具体阈值以确定本文所提供的组合疗法方法的功效。
在一些方面，在给予免疫疗法(例如，T细胞疗法)之前，在给予免疫疗法(例如，T细胞疗法)之后但在给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))之前，和/或在给予免疫疗法(例如，T细胞疗法)和检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))二者之后，测量或检测疾病负荷。在多次给予组合疗法的一个或多个步骤的情境下，在一些实施方案中，可以在给予任何步骤、剂量和/或给予周期之前或之后，或者在给予任何步骤、剂量和/或给予周期之间的时间，测量疾病负荷。在一些实施方案中，检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))的给予进行至少两个周期(例如，28天周期),并且在每个周期之前、期间和/或之后测量或检测疾病负荷。
在一些实施方案中，与即将给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))和免疫疗法(例如，T细胞疗法)之前相比，通过所提供的方法，负荷降低或降低至少或至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。在一些实施方案中，与即将给予免疫疗法(例如，T细胞疗法)和/或检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))之前相比，在给予免疫疗法(例如，T细胞疗法)和检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))后，疾病负荷、肿瘤大小、肿瘤体积、肿瘤质量和/或肿瘤负担或体积减少至少或至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。
在一些实施方案中，通过所述方法减轻疾病负荷包括诱导形态学完全缓解，例如如在给予(例如，起始)组合疗法后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月或超过6个月时评估的。
在一些方面，例如如通过多参数流式细胞术测量的，对最小残留疾病的测定是阴性的，或最小残留疾病的水平小于约0.3％、小于约0.2％、小于约0.1％或小于约0.05％。
在一些实施方案中，与其他方法相比，所述方法提高受试者的无事件存活率或总体存活率。例如，在一些实施方案中，在本文所提供的组合疗法方法后6个月时，通过所述方法治疗的受试者的无事件存活率或概率大于约40％、大于约50％、大于约60％、大于约70％、大于约80％、大于约90％或大于约95％。在一些方面，总体存活率大于约40％、大于约50％、大于约60％、大于约70％、大于约80％、大于约90％或大于约95％。在一些实施方案中，用所述方法治疗的受试者展现出无事件存活、无复发存活或存活至少6个月或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10年。在一些实施方案中，至进展时间得到改善，如至进展时间大于或大于约6个月，或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10年。
在一些实施方案中，与其他方法相比，在通过所述方法治疗后，复发概率有所减小。例如，在一些实施方案中，在组合疗法方法后6个月时，复发概率小于约80％、小于约70％、小于约60％、小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％或小于约10％。
在一些情况下，确定所给予细胞(例如过继转移细胞)的药代动力学以评估所给予细胞的可用性，例如生物利用度。用于确定过继转移细胞的药代动力学的方法可以包括从已经被给予工程化细胞的受试者中抽取外周血，并确定外周血中工程化细胞的数量或比率。用于选择和/或分离细胞的途径可以包括使用嵌合抗原受体(CAR)特异性抗体(例如，Brentjens等人,Sci.Transl.Med.2013年3月；5(177):177ra38)蛋白L(Zheng等人,J.Transl.Med.2012年2月；10:29)，直接引入CAR中特异性位点中的表位标签如Strep-标签序列，其中Strep-标签的结合试剂用于直接评估CAR(Liu等人(2016)NatureBiotechnology,34:430；国际专利申请公开号WO 2015095895)以及与CAR多肽特异性结合的单克隆抗体(参见国际专利申请公开号WO 2014190273)。在一些情况下，外在标记基因可以结合工程化细胞疗法使用以允许检测或选择细胞，并且在一些情况下还允许促进细胞自杀。在一些情况下，截短的表皮生长因子受体(EGFRt)可以与转导细胞中目的转基因(CAR或TCR)共表达(参见例如美国专利号8,802,374)。EGFRt可含有由抗体西妥昔单抗
Figure BDA0002702674000001521
或其他治疗性抗EGFR抗体或结合分子识别的表位，其可以用于鉴定或选择已经用EGFRt构建体和另一个重组受体(例如嵌合抗原受体(CAR))工程化的细胞，和/或用于消除或分离表达受体的细胞。参见美国专利号8,802,374和Liu等人,Nature Biotech.2016年4月；34(4):430-434)。
在一些实施方案中，可以在给予细胞疗法之后的一段时间来确定获自患者的生物学样品(例如血液)中CAR+ T细胞的数量，例如以确定细胞的药代动力学。在一些实施方案中，在受试者的血液中或在通过所述方法如此治疗的大多数受试者中可检测到的CAR+ T细胞，任选地CAR+CD8+ T细胞和/或CAR+CD4+ T细胞的数量大于1个细胞/μL、大于5个细胞/μL或大于10个细胞/μL。
IV.毒性
在所提供的方法的实施方案中，在给予细胞疗法(例如，T细胞疗法)的受试者中，监测受试者的毒性，例如细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性(NT)的发生。在一些实施方案中，进行所提供的方法以降低毒性结果或症状、毒性促进概况、因素或特性(如与严重细胞因子释放综合征(CRS)或严重神经毒性相关或指示它们的症状或结果)的风险。
在一些实施方案中，如与某些其他细胞疗法相比，所提供的方法不导致高的毒性或毒性结果的比率或可能性，或者降低毒性或毒性结果的比率或可能性，所述毒性或毒性结果如严重神经毒性(NT)或严重细胞因子释放综合征(CRS)。在一些实施方案中，所述方法不导致以下事件或不增加以下事件的风险：严重NT(sNT)、严重CRS(sCRS)、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、至少在或在约38摄氏度发热三天或更多天、以及至少或至少约20mg/dL的CRP血浆水平。在一些实施方案中，大于或大于约30％、35％、40％、50％、55％、60％或更多的根据所提供方法治疗的受试者未展现出任何等级的CRS或任何等级的神经毒性。在一些实施方案中，不超过50％的所治疗受试者(例如，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多的所治疗受试者)展现出高于2级的细胞因子释放综合征(CRS)和/或高于2级的神经毒性。在一些实施方案中，至少50％的根据所述方法治疗的受试者(例如，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多的所治疗受试者)未展现出严重毒性结果(例如，严重CRS或严重神经毒性)，如未展现出3级或更高级的神经毒性和/或未展现出严重CRS，或者在治疗后某一时间段内(如在给予所述细胞的一周、两周或一个月内)未如此展现。在一些实施方案中，被评估以确定某些毒性的参数包括不良事件(AE)、剂量限制性毒性(DLT)、CRS和NT。
在一些方面，毒性结果是细胞因子释放综合征(CRS)或严重CRS(sCRS)或与细胞因子释放综合征(CRS)或严重CRS(sCRS)相关或指示细胞因子释放综合征(CRS)或严重CRS(sCRS)。在一些情况下，在过继T细胞疗法和向受试者给予其他生物制品后可发生CRS，例如sCRS。参见Davila等人,Sci Transl Med 6,224ra25(2014)；Brentjens等人,Sci.Transl.Med.5,177ra38(2013)；Grupp等人,N.Engl.J.Med.368,1509–1518(2013)；和Kochenderfer等人,Blood 119,2709–2720(2012)；Xu等人,Cancer Letters 343(2014)172-78。
通常，CRS由例如通过T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞和/或巨噬细胞介导的过度的全身免疫应答引起。此类细胞可释放大量炎症介质如细胞因子和趋化因子。细胞因子可能引发急性炎性反应和/或诱导内皮器官损伤，所述内皮器官损伤可能导致微血管渗漏、心力衰竭或死亡。严重危及生命的CRS可导致肺浸润和肺损伤、肾衰竭或弥散性血管内凝血。其他严重危及生命的毒性可以包括心脏毒性、呼吸窘迫、神经毒性和/或肝衰竭。可以使用抗炎疗法(如抗IL-6疗法，例如，抗IL-6抗体，例如，托珠单抗)或抗生素或如所述的其他药剂治疗CRS。
CRS的结果、体征和症状是已知的，并且包括本文所述的那些。在一些实施方案中，当特定剂量方案或给药影响或不影响给定的CRS相关的结果、体征或症状时，可指定特定结果、体征和症状和/或其量或程度。
在给予CAR表达细胞的情境下，CRS通常在输注表达CAR的细胞后6-20天发生。参见Xu等人,Cancer Letters 343(2014)172-78。在一些情况下，CRS在CAR T细胞输注后少于6天或超过20天发生。CRS的发生率和时机可能与在输注时的基线细胞因子水平或肿瘤负荷有关。通常，CRS包括干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α和/或白细胞介素(IL)-2的血清水平升高。可在CRS中快速诱导的其他细胞因子是IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10。
与CRS相关的示例性结果包括发热、寒颤、恶寒、低血压、呼吸困难、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、脑病、ALT/AST升高、肾衰竭、心脏病、缺氧、神经紊乱和死亡。神经系统并发症包括谵妄、癫痫样活动、意识错乱、找词困难、失语和/或变得迟钝。与CRS相关的其他结果包括疲劳、恶心、头痛、癫痫、心动过速、肌痛、皮疹、急性血管渗漏综合征、肝功能损害和肾衰竭。在一些方面，CRS与一种或多种因子(如血清铁蛋白、d-二聚体、氨基转移酶、乳酸脱氢酶和甘油三酯)的增加相关，或与低纤维蛋白原血或肝脾肿大相关。
在一些实施方案中，与CRS相关的结果包括以下中的一种或多种：持续发热，例如在指定温度(例如大于或大于约38摄氏度)的发热两天或更多天，例如三天或更多天，例如四天或更多天或至少连续三天；大于或大于约38摄氏度的发热；细胞因子的升高，如与至少两种细胞因子(例如，由以下各项组成的组中的至少两种：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、分形趋化因子(fracktalkine)和IL-5和/或肿瘤坏死因子α(TNFα))的治疗前水平相比，例如至少或至少约75倍的最大倍数变化，或此类细胞因子中至少一种的例如至少或至少约250倍的最大倍数变化；和/或至少一种毒性临床体征，如低血压(例如，如通过至少一种静脉内血管作用加压药所测量)；缺氧(例如，血浆氧(PO2)水平低于或低于约90％)；和/或一种或多种神经病学障碍(包括精神状态变化、迟钝和癫痫)。
示例性CRS相关结果包括一种或多种因子的增加的或高血清水平，所述一种或多种因子包括细胞因子和趋化因子以及与CRS相关的其他因子。示例性结果进一步包括一种或多种此类因子的合成或分泌的增加。这种合成或分泌可以通过T细胞或与T细胞相互作用的细胞(如先天免疫细胞或B细胞)。
在一些实施方案中，CRS相关的血清因子或CRS相关的结果包括炎性细胞因子和/或趋化因子，所述炎性细胞因子和/或趋化因子包括干扰素γ(IFN-γ)、TNF-a、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、sIL-2Ra、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1、肿瘤坏死因子α(TNFα)、IL-6和IL-10、IL-1β、IL-8、IL-2、MIP-1、Flt-3L、分形趋化因子和/或IL-5。在一些实施方案中，所述因子或结果包括C反应蛋白(CRP)。除了作为CRS的早期且易于测量的风险因子外，CRP也是细胞扩增的标记。在一些实施方案中，测量为具有高水平CRP(如≥15mg/dL)的受试者患有CRS。在一些实施方案中，测量为具有高水平CRP的受试者未患有CRS。在一些实施方案中，CRS的量度包括CRP的量度和指示CRS的另一因子。
在一些实施方案中，在CAR治疗之前、期间或之后监测一种或多种炎性细胞因子或趋化因子。在一些方面，一种或多种细胞因子或趋化因子包括IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-1β、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、sIL-2Rα、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)或巨噬细胞炎性蛋白(MIP)。在一些实施方案中，监测IFN-γ、TNF-α和IL-6。
已经研发CRS标准，其似乎与CRS的发作相关，以预测哪些患者更可能有风险患上sCRS(参见Davilla等人Science translational medicine.2014；6(224):224ra25)。因素包括发热、缺氧、低血压、神经系统改变、升高的炎性细胞因子血清水平，如一组七种细胞因子(IFNγ、IL-5、IL-6、IL-10、Flt-3L、分形趋化因子和GM-CSF)，这七种细胞因子的治疗诱导的升高可能与治疗前肿瘤负荷和sCRS症状密切相关。关于CRS的诊断和管理的其他指南是已知的(参见例如，Lee等人,Blood.2014；124(2):188-95)。在一些实施方案中，反映CRS等级的标准是下表3中详述的那些标准。
Figure BDA0002702674000001551
Figure BDA0002702674000001561
在一些实施方案中，受试者被认为响应于或继发于细胞疗法或其细胞剂量的给予而产生“严重CRS”(“sCRS”)，条件是给予后所述受试者展示：(1)至少38摄氏度的发热至少三天；(2)细胞因子升高，其包括(a)与紧跟着给予后的水平相比，下组七种细胞因子中至少两种的至少75倍的最大倍数变化：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、分形趋化因子和IL-5和/或(b)与紧跟着给予后的水平相比，下组七种细胞因子中的至少一种的至少250倍的最大倍数变化：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、分形趋化因子和IL-5；以及(c)至少一种毒性临床体征，如低血压(需要至少一次静脉内血管作用加压药)或缺氧(PO2<90％)或一种或多种神经障碍(包括精神状态改变、迟钝和/或癫痫)。在一些实施方案中，严重CRS包括3级或更高级CRS，如表3中所示。
在一些实施方案中，与严重CRS或3级或更高级，如4级或更高级CRS相关的结果包括以下中的一种或多种：持续发热，例如在指定温度(例如大于或大于约38摄氏度)的发热两天或更多天，例如三天或更多天，例如四天或更多天或至少连续三天；大于或大于约38摄氏度的发热；细胞因子的升高，如与至少两种细胞因子(例如，由以下各项组成的组中的至少两种：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、分形趋化因子和IL-5和/或肿瘤坏死因子α(TNFα))的治疗前水平相比，例如至少或至少约75倍的最大倍数变化，或此类细胞因子中至少一种的例如至少或至少约250倍的最大倍数变化；和/或至少一种毒性临床体征，如低血压(例如，如通过至少一种静脉内血管作用加压药所测量)；缺氧(例如，血浆氧(PO2)水平低于或低于约90％)；和/或一种或多种神经病学障碍(包括精神状态变化、迟钝和癫痫)。在一些实施方案中，严重CRS包括需要在重症监护病房(ICU)中进行管理或护理的CRS。
在一些实施方案中，CRS(如严重CRS)涵盖以下的组合：(1)持续发热(在至少38摄氏度发热至少三天)和(2)至少或至少约20mg/dL的血清CRP水平。在一些实施方案中，CRS涵盖需要使用两种或更多种血管加压药的低血压或需要机械通气的呼吸衰竭。在一些实施方案中，在第二次或随后的给予中增加血管加压药的剂量。
在一些实施方案中，严重CRS或3级CRS涵盖丙氨酸氨基转移酶的增加、天冬氨酸氨基转移酶的增加、恶寒、发热型嗜中性粒细胞减少症、头痛、左心室功能障碍、脑病、脑积水和/或震颤。
可以指定测量或检测各种结果的方法。
在一些方面，疗法(如细胞疗法)的毒性结果是神经毒性或严重神经毒性或与神经毒性或严重神经毒性相关或指示神经毒性或严重神经毒性。在一些实施方案中，与神经毒性的临床风险相关的症状包括意识模糊、谵妄、表达性失语、迟钝、肌阵挛、嗜睡、精神状态改变、惊厥、癫痫样活动、癫痫(任选地通过脑电图[EEG]证实)、升高的β淀粉样蛋白(Aβ)水平，升高的谷氨酸水平和升高的氧自由基水平。在一些实施方案中，基于严重程度对神经毒性进行分级(例如，使用1-5级量表(参见例如Guido Cavaletti&Paola Marmiroli NatureReviews Neurology 6,657-666(2010年12月)；美国国家癌症研究所—常见毒性标准第4.03版(NCI-CTCAE v4.03))。
在一些情形中，神经症状可能是sCRS的最早症状。在一些实施方案中，观察到神经症状在细胞疗法输注后5至7天开始。在一些实施方案中，神经系统变化的持续时间可能在3至19天的范围内。在一些情况下，在sCRS的其他症状消退后，会发生神经系统变化的恢复。在一些实施方案中，通过用抗IL-6和/或一种或多种类固醇治疗不会促进神经系统变化消退的时间或程度。
在一些实施方案中，如果在给予后受试者展示限制自理(例如洗澡、穿衣和脱衣、进食、如厕、服药)的以下症状，则认为受试者响应于或继发于细胞疗法或其细胞剂量的给予而发生“严重神经毒性”：1)外周运动神经病的症状，包括外周运动神经的炎症或退化；2)外周感觉神经病的症状，包括外周感觉神经的炎症或退化、感觉迟钝(如感官知觉失真，导致异常和不愉快的感觉)、神经痛(如沿着神经或一组神经的剧烈疼痛感)，和/或感觉异常(如感觉神经元的功能紊乱，导致在没有刺激物的情况下刺痛、麻木、压迫、冷和温的异常皮肤感觉)。在一些实施方案中，严重神经毒性包括3级或更高级神经毒性，如表4中所示。在一些实施方案中，如果3级神经毒性的症状持续10天或更长时间，严重神经毒性被认为是延长的3级。
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在一些实施方案中，与其他方法相比，所述方法减轻与CRS或神经毒性相关的症状。在一些方面，与其他方法相比，所提供的方法减轻与CRS相关的症状、结果或因素，包括与严重CRS或3级或更高级的CRS相关的症状、结果或因素。例如，根据本方法治疗的受试者可能缺少可检测的CRS(例如，严重CRS或3级或更高级的CRS)的症状、结果或因素和/或具有减少的所述症状、结果或因素，如所述的(例如表3中所示的)任何症状、结果或因素。在一些实施方案中，与通过其他方法治疗的受试者相比，根据本方法治疗的受试者可能具有减轻的神经毒性症状，如四肢无力或麻木、记忆、视力和/或智力受损、无法控制的强迫性和/或强制性行为、妄想、头痛、认知和行为问题(包括丧失运动控制、认知退化和自主神经系统功能障碍)以及性功能障碍。在一些实施方案中，根据本方法治疗的受试者可具有减轻的与外周运动神经病、外周感觉神经病、感觉迟钝、神经痛或感觉异常相关的症状。
在一些实施方案中，所述方法减轻与神经毒性相关的结果，包括对神经系统和/或脑的损害，如神经元的死亡。在一些方面，所述方法降低与神经毒性相关的因子的水平，如β淀粉样蛋白(Aβ)、谷氨酸和氧自由基。
在一些实施方案中，毒性结果是剂量限制性毒性(DLT)。在一些实施方案中，毒性结果是剂量限制性毒性的不存在。在一些实施方案中，剂量限制性毒性(DLT)定义为任何3级或更高级的毒性，如通过任何已知或公布的评估特定毒性的指南例如上述任何指南并且包括国家癌症研究所(National Cancer Institute，NCI)的不良事件通用术语标准(Common Terminology Criteria for Adverse Events，CTCAE)4.0版所描述或评估的。
在一些实施方案中，所提供的实施方案导致低的毒性(例如CRS或神经毒性或严重CRS或神经毒性，例如3级或更高级CRS或神经毒性)比率或低的发生所述毒性的风险，所述毒性如在根据所提供的组合疗法和/或用所提供的制品或组合物给予一定剂量的T细胞的情况下观察到的。在一些情况下，这允许在门诊基础上给予细胞疗法。在一些实施方案中，根据所提供的方法和/或用所提供的制品或组合物给予细胞疗法(例如T细胞(例如CAR+ T细胞)的剂量)是在门诊基础上进行，或者不要求受试者入院(如需要过夜的入院)。
在一些方面，根据所提供的方法和/或用所提供的制品或组合物给予细胞疗法(例如T细胞(例如CAR+ T细胞)的剂量)的受试者(包括在门诊基础上治疗的受试者)在给予细胞剂量之前或在给予细胞剂量的情况下不被给予用于治疗任何毒性的干预，除非或直到受试者展现出毒性，如神经毒性或CRS的体征或症状。
在一些实施方案中，如果被给予细胞疗法(例如，T细胞(例如，CAR+T细胞)的剂量)的受试者(包括在门诊基础上治疗的受试者)展现出发热，则给予所述受试者治疗或指示所述受试者接受或给予治疗，以减轻发热。在一些实施方案中，受试者的发热的特征为受试者的体温为(或被测量为)等于或高于某一阈值温度或水平。在一些方面，阈值温度是与至少低热、至少中度发热、和/或至少高热相关的温度。在一些实施方案中，阈值温度是特定温度或范围。例如，阈值温度可以是为或约或至少或至少约38、39、40、41或42摄氏度，和/或可以是为或约38摄氏度至为或约39摄氏度的范围、为或约39摄氏度至为或约40摄氏度的范围、为或约40摄氏度至为或约41度的范围或为或约41摄氏度至为或约42摄氏度的范围。
在一些实施方案中，被设计为减轻发热的治疗包括用退热药的治疗。退热药可以包括减轻发热的任何药剂(例如化合物、组合物或成分)，如已知具有退热作用的任何数量的药剂中的一种，如NSAID(如布洛芬、萘普生、酮洛芬和尼美舒利)、水杨酸盐(如阿司匹林、胆碱水杨酸盐、水杨酸镁和水杨酸钠)、扑热息痛、醋氨酚、安乃近、萘丁美酮(Nabumetone)、苯那克酮(Phenaxone)、安替比林、解热剂。在一些实施方案中，退热药是醋氨酚。在一些实施方案中，醋氨酚可以以12.5mg/kg的剂量口服或静脉内给予，最多每四小时一次。在一些实施方案中，退热药是或包括布洛芬或阿司匹林。
在一些实施方案中，如果发热是持续发热，则向受试者给予用于治疗毒性的替代性治疗。对于在门诊基础上治疗的受试者，如果受试者患有和/或被确定患有或将要患有持续发热，则指示受试者回到医院。在一些实施方案中，如果受试者展现出等于或高于相关阈值温度的发热，并且在指定治疗(如被设计为减轻发热的治疗，如使用退热药(例如，NSAID或水杨酸盐，例如，布洛芬、醋氨酚或阿司匹林)的治疗)后，受试者的发热或体温没有下降，或者没有下降指定量或超过指定量(例如，超过1℃，并且通常没有变动约或超过约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃)的情况下，所述受试者已经和/或被确定为或认为患有持续发热。例如，如果受试者展现出或被确定展现出至少或至少约38或39摄氏度的发热，即使在使用退热药(如醋氨酚)治疗后的6小时时段内、8小时时段内、12小时时段内、或24小时时段内，所述发热没有下降或没有下降超过为或约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃，或没有下降为或约1％、2％、3％、4％或5％，则所述受试者被认为患有持续发热。在一些实施方案中，退热药的剂量是在这种受试者中通常有效用于减轻发热或特定类型的发热(如与细菌或病毒感染例如局部或全身感染相关的发热)的剂量。
在一些实施方案中，如果受试者展现出等于或高于相关阈值温度的发热，并且在受试者的发热或体温没有变动约或超过约1℃，并且通常没有变动约或超过约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃的情况下，所述受试者已经患有和/或被确定为或认为患有持续发热。通常，高于或等于某一量的变动的这种不存在是在给定的时间段内测量(如，在24小时、12小时、8小时、6小时、3小时或1小时的时间段内，其可以从发烧的最初体征或最初高于所指示阈值的温度起测量)。例如，在一些实施方案中，如果受试者展现出至少或至少约38或39摄氏度的发热，所述发热的温度在6小时时段内、8小时时段内、或12小时时段内、或24小时时段内没有变动超过或超约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃，则所述受试者被认为或被确定为展现出持续发热。
在一些实施方案中，发热是持续发热；在一些方面，在受试者已经被确定患有持续发热的时间，如在具有诱导毒性的可能的初始疗法(如细胞疗法，如T细胞(例如CAR+ T细胞)的剂量)后的这种确定或首次这种确定的1、2、3、4、5、6小时或更短时间内，对受试者进行治疗。
在一些实施方案中，在例如，如根据任何前述实施方案所测量，在确定或确认受试者(如首次确定或确认)展现出持续发热时或此前不久的时间，给予用于治疗毒性的一种或多种干预或药剂(如靶向毒性的疗法)。在一些实施方案中，在这种确认或确定的某一时间段内，如在这种确认或确定的30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、6小时或8小时内，给予一种或多种靶向毒性的疗法。
V.制品和试剂盒
还提供了含有检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))和免疫疗法的组分(例如抗体或其抗原结合片段或T细胞疗法(例如工程化细胞))和/或其组合物的制品。所述制品可以包括容器和在容器上或与容器相连的标签或包装说明书。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可以由各种材料(例如玻璃或塑料)形成。在一些实施方案中，容器容纳组合物自身或组合物与有效治疗、预防和/或诊断病症的另一种组合物的组合。在一些实施方案中，容器具有无菌入口。示例性容器包括静脉内溶液袋、小瓶(包括具有可被注射针刺穿的塞子的那些溶液袋、小瓶)或用于口服给药剂的瓶子或小瓶。标签或包装说明书可以指示将组合物用于治疗疾病或病症。
制品可以包括(a)在其中含有组合物的第一容器，其中所述组合物包括用于免疫疗法(例如，T细胞疗法)的工程化细胞；和(b)在其中含有组合物的第二容器，其中所述组合物包括检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体(或其抗原结合片段))。在一些实施方案中，第一容器包含第一组合物和第二组合物，其中第一组合物包含用于免疫疗法的工程化细胞的第一群体(例如CD4+ T细胞疗法)，并且第二组合物包含工程化细胞的第二群体，其中第二群体(例如CD8+ T细胞疗法)可以与第一群体分开进行工程化。在一些实施方案中，第一和第二细胞组合物含有限定比率的工程化细胞，例如CD4+和CD8+细胞(例如，1:1比率的CD4+:CD8+CAR+ T细胞)。制品可以进一步包括指示组合物可以用于治疗特定病症的包装说明书。可替代地或另外，制品可以进一步包括另一种或相同的容器，所述容器包含药学上可接受的缓冲剂。所述容器可以进一步包括其他材料，如其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针和/或注射器。
VI.定义
除非另有定义，否则本文使用的所有技术术语、符号和其他技术和科学术语或用辞旨在具有与所要求保护的主题所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。在一些情况下，为了清楚和/或为了便于引用而在本文中定义具有通常理解的含义的术语，并且本文中包含此类定义不一定应当被解释为代表与本领域通常所理解的含义有实质性差异。
如本文所用，“受试者”是哺乳动物，如人或其他动物，并且通常是人。在一些实施方案中，被给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体或抗原结合片段)、工程化细胞、或组合物的受试者(例如，患者)是哺乳动物，通常是灵长类动物，如人。在一些实施方案中，灵长类动物是猴或猿。受试者可以是雄性或雌性，并且可以是任何合适的年龄，包括婴儿、幼年、青春期、成年和老年受试者。在一些实施方案中，受试者是非灵长类哺乳动物，如啮齿动物。
如本文所用，“治疗”(“treatment”)(及其语法变体如“治疗”(“treat”或“treating”))是指疾病或病症或障碍、或者与之相关的症状、不良影响或结果、或表型的完全或部分改善或减轻。所希望的治疗效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、缓和症状、减少疾病的任何直接或间接病理后果、预防转移、降低疾病进展的速度、改善或减缓疾病状态以及缓解或改善预后。所述术语并不暗示完全治愈疾病或完全消除任何症状或对所有症状或结果的一种或多种影响。
如本文所用，“延迟疾病的发生”意指推迟、阻碍、减缓、延缓、稳定、抑制和/或延期疾病(如癌症)的发生。此延迟可以具有不同的时间长度，这取决于病史和/或所治疗的个体。显而易见的是，足够或显著的延迟实际上可以涵盖预防，因为个体不会患上疾病。例如，可能延迟晚期癌症，如转移的发生。
如本文所用，“预防”包括提供关于受试者的疾病的发生或复发的预防，所述受试者可能易患所述疾病但尚未被诊断患有所述疾病。在一些实施方案中，所提供的细胞和组合物用于延迟疾病的发生或延缓疾病的进展。
如本文所用，“抑制”功能或活性是当与除了目的条件或参数以外其他都相同的条件相比时，或者可替代地与另一种条件相比时，降低功能或活性。例如，与不存在细胞的情况下的肿瘤生长速率相比，抑制肿瘤生长的细胞降低了肿瘤的生长速率。
在给予的情境下，药剂(例如，工程化细胞、检查点抑制剂(例如抗PD-L1或抗原结合片段)或其药物配制品或组合物)的“有效量”是指在必要的剂量/量下和必要的时间段内有效实现所需结果(如治疗或预防结果)的量。
药剂(例如，工程化细胞、检查点抑制剂(例如抗PD-L1或抗原结合片段)或其药物配制品或组合物)的“治疗有效量”是指在所需剂量下和所需时间段中有效实现所需治疗结果(如针对疾病、病症或障碍的治疗)和/或治疗的药代动力学或药效动力学作用的量。治疗有效量可以根据如以下的因素而变化：疾病状态、受试者的年龄、性别和体重、和所给予的免疫调节多肽或工程化细胞。在一些实施方案中，所提供的方法涉及以有效量(例如治疗有效量)给予检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体或抗原结合片段)、工程化细胞(例如细胞疗法)或组合物。
“预防有效量”是指在所需剂量下和所需时间段内有效实现所需预防结果的量。通常但不一定，因为预防剂量是在疾病之前或在疾病较早期用于受试者，所以预防有效量将小于治疗有效量。
术语“药物配制品”是指这样的制剂，其处于使得其中所含活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对给予配制品的受试者具有不可接受的毒性的另外的组分。
“药学上可接受的载体”是指药物配制品中除了活性成分之外对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲液、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
除非上下文另有明确规定，否则如本文所用，单数形式“一种/一个”(“a”)、“一种/一个”(“an”)和“所述”(“the”)包括复数指示物。例如，“一种/一个”(“a”)或“一种/一个”(“an”)意指“至少一种/至少一个”或“一种或多种/一个或多个”。应理解，本文描述的方面和变化包括“由方面和变化组成”和/或“基本上由方面和变化组成”。
在整个本公开文本中，所要求保护的主题的各个方面以范围形式呈现。应当理解，范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁，并且不应被解释为对所要求保护的主题的范围的僵硬限制。因此，应当将范围的描述视为已明确公开所有可能的子范围以及该范围内的单独数值。例如，在提供值的范围的情况下，应理解，该范围的上限与下限之间的每个中间值以及该所陈述范围中的任何其他所陈述值或中间值涵盖在所要求保护的主题内。这些较小范围的上限和下限可以独立地被包括在所述较小范围内，并且也涵盖在所要求保护的主题内，受制于在所陈述范围内任何明确排除的限值。在所陈述范围包括所述限值中的一个或两个的情况下，排除那些所包括限值中的任何一个或两个的范围也被包括在所要求保护的主题内。无论范围的广度如何，这都适用。
如本文所用的术语“约”是指本技术领域的技术人员容易知道的相应值的常用误差范围。本文对“约”某一值或参数的提及包括(并描述)涉及所述值或参数本身的实施方案。例如，提及“约X”的描述包括“X”的描述。
如本文所用，叙述核苷酸或氨基酸位置“对应于”所公开序列中的核苷酸或氨基酸位置(例如序列表中所述)是指，在使用标准比对算法(例如GAP算法)与所公开序列比对以使同一性最大化之后，所鉴定的核苷酸或氨基酸位置。通过比对序列，本领域技术人员可以例如使用保守和相同的氨基酸残基作为指导来鉴定相应的残基。通常，为了鉴定对应位置，比对氨基酸序列使得获得最高阶匹配(参见例如：Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.编辑,Oxford University Press,纽约,1988；Biocomputing:Informatics andGenome Projects,Smith,D.W.编辑,Academic Press,纽约,1993；Computer Analysis ofSequence Data,Part I,Griffin,A.M.和Griffin,H.G.编辑,Humana Press,新泽西州,1994；Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinje,G.,Academic Press,1987；和Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.和Devereux,J.编辑,M StocktonPress,纽约,1991；Carrillo等人(1988)SIAM J Applied Math48:1073)。
如本文所用，术语“载体”是指能传播其所连接的另一核酸分子的核酸分子。所述术语包括作为自我复制核酸结构的载体以及掺入已引入其的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导它们可操作地连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。载体包括病毒载体，例如逆转录病毒(例如γ逆转录病毒和慢病毒)载体。
术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，并且是指已引入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，其包括原代转化细胞和源自其的后代，不考虑传代次数。后代的核酸含量可能与亲代细胞不完全相同，但可能含有突变。本文包括如在初始转化细胞中所筛选或选择的，具有相同功能或生物活性的突变体后代。
如本文所用，细胞或细胞群针对特定标记呈“阳性”的陈述是指，特定标记(通常是表面标记)在细胞上或细胞中的可检测存在。当提及表面标记时，所述术语是指如通过流式细胞术检测到的，表面表达的存在，例如通过用与所述标记特异性地结合的抗体进行染色并检测所述抗体，其中所述染色通过流式细胞术以如下水平是可检测的，所述水平基本上高于在其他方面相同的条件下用同种型匹配对照进行相同程序检测到的染色，和/或所述水平与已知对所述标记呈阳性的细胞的水平基本上相似，和/或所述水平基本上高于已知对所述标记呈阴性的细胞的水平。
如本文所用，细胞或细胞群对特定标记呈“阴性”的陈述是指，特定标记(通常是表面标记)在细胞上或细胞中不存在基本上可检测的存在。当提及表面标记时，所述术语是指如通过流式细胞术检测到的，表面表达的不存在，例如通过用与所述标记特异性地结合的抗体进行染色并检测所述抗体，其中所述染色通过流式细胞术以如下水平没有检测到，所述水平基本上高于在其他方面相同的条件下用同种型匹配对照进行相同程序检测到的染色，和/或所述水平基本上低于已知对所述标记呈阳性的细胞的水平，和/或所述水平与已知对所述标记呈阴性的细胞的水平相比是基本上相似的。
如本文所用，在关于氨基酸序列(参考多肽序列)使用时，“氨基酸序列同一性百分比(％)”和“同一性百分比”定义为，在比对序列并在必要时引入空位以实现最大序列同一性百分比之后，并且在不考虑将任何保守取代作为序列同一性的一部分的情况下，候选序列(例如，主题抗体或片段)中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比的目的的比对可以以本领域熟知的多种方式来实现，例如，使用公众可获得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括在所比较序列的全长中实现最大比对所需的任何算法。
氨基酸取代可以包括用另一种氨基酸替代多肽中的一个氨基酸。所述取代可以是保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代。可以将氨基酸取代引入目的结合分子(例如抗体)、和针对所希望的活性(例如保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性或改善的ADCC或CDC)筛选的产物中。
通常可以根据以下常见的侧链特性将氨基酸进行分组：
(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性：Asp、Glu；
(4)碱性：His、Lys、Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly、Pro；
(6)芳香族：Trp、Tyr、Phe。
在一些实施方案中，保守取代可能涉及将这些类别之一的成员交换为同一类别的另一个成员。在一些实施方案中，非保守氨基酸取代可能涉及将这些类别之一的成员交换为另一个类别。
如本文所用，组合物是指两种或更多种产物、物质或化合物(包括细胞)的任何混合物。其可以是溶液、悬浮液、液体、粉末、糊剂、水性、非水性或其任何组合。
如本文所用，“受试者”是哺乳动物，如人或其他动物，并且通常是人。
VII.示例性实施方案
所提供的实施方案包括：
1.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞；以及
(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中：
所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，所述至少两个28天周期中的每一个包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或抗原结合片段；并且
在所述至少两个28天周期中的至少一个中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过在所述至少一个28天周期的过程中给予多于一个单独剂量的所述抗体或片段进行。
2.一种治疗方法，所述方法包括向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞，其中：
所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，所述至少两个28天周期中的每一个独立地包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或抗原结合片段；并且
在所述至少两个28天周期中的至少一个中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过在所述至少一个28天周期的过程中给予多于一个单独剂量的所述抗体或片段进行。
3.根据实施方案1或实施方案2所述的方法，其中在所述至少两个28天周期中的第一28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与第二和/或随后的28天周期中的给予相比给予更多数量的单独剂量的所述抗体或片段进行。
4.根据实施方案1-3中任一项所述的方法，其中每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量独立地在为或约750mg与为或约1500mg之间。
5.根据实施方案1-4中任一项所述的方法，其中所述28天周期中的至少一个中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约750mg。
6.根据实施方案1-4中任一项所述的方法，其中所述28天周期中的至少一个中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1200mg。
7.根据实施方案1-4中任一项所述的方法，其中所述28天周期中的至少一个中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
8.根据实施方案1-4和7中任一项所述的方法，其中每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量独立地为或为约1500mg。
9.根据实施方案1-8中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量在所述至少两个28天周期中的至少两个中、且任选地所述至少两个28天周期中是相同的总剂量量。
10.根据实施方案1-8中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量在所述至少两个28天周期中的至少两个中是不同的，或在所述至少两个28天周期中的每一个中是不同的。
11.根据实施方案2-8和10中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量低于所述至少两个28天周期中的第二和/或随后的28天周期。
12.根据实施方案1-11中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括给予2、3或4个单独剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
13.根据实施方案1-12中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据选自以下的给药时间表给予单独剂量：(i)每周一次(Q1W)给予两个单独剂量，任选地在所述28天周期的第15天和第22天；(ii)每周一次(Q1W)给予四个单独剂量，任选地在所述28天周期的第1天、第8天、第15天和第22天；(iii)Q1W给予两个连续剂量，任选地在所述周期的第1天和第8天，之后每两周一次(Q2W)给予一个剂量，任选地在所述周期的第15天；或(iv)每两周一次(Q2W)给予两个剂量，任选地在所述28天周期的第1天和第15天。
14.根据实施方案13所述的方法，其中：
在所述第一28天周期中给予的每个Q1W剂量独立地为所述第一28天周期中给予的所述总剂量量的从或从为或约18％至为或约32％，任选地为所述第一28天周期中给予的所述总剂量量的为或约25％；和/或
在所述第一28天周期中给予的每个Q2W剂量独立地为所述总剂量量的从或从为或约40％至为或约62.5％，任选地为所述第一28天周期中给予的所述总剂量量的为或约50％。
15.根据实施方案13或实施方案14所述的方法，其中：
所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q1W给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量各自独立地为或为约375mg，之后Q2W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约750mg；
所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q1W给予四个剂量，所述四个剂量包括为或约225mg的两个连续剂量和之后的为或约375mg的两个连续剂量；或者
所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q1W给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量为或为约375mg。
16.根据实施方案3-15中任一项所述的方法，其中所述第二和/或随后的28天周期中的所述总剂量量的给予独立地包括给予1或2个剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
17.根据实施方案3-16中任一项所述的方法，其中所述第二和/或随后的28天周期中的所述总剂量量的给予独立地包括选自以下的给药时间表：(i)每两周一次(Q2W)给予两个剂量，任选地在所述周期的第1天和第15天；或(ii)每四周一次(Q4W)给予一个剂量，任选地在所述周期的第1天。
18.根据实施方案17所述的方法，其中：
所述第二和/或随后的28天周期的每个Q2W剂量为或为约所述总剂量量的50％；和/或
所述第二和/或随后的28天周期的所述Q4W剂量为或为约所述总剂量量。
19.根据实施方案17或实施方案18所述的方法，其中：
所述第二和/或随后的剂量包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q2W给予两个剂量，所述两个剂量的量为或为约750mg；或
所述第二和/或随后的剂量包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
20.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞；以及
(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中所述给予包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量为或为约375mg，之后每两周一次(Q2W)给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约750mg；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
21.一种治疗方法，所述方法包括向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量独立地为或为约375mg，之后每两周一次(Q2W)给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约750mg；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每四周一次(Q4W)给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
22.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞；以及
(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述给予包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予四个剂量，所述四个剂量包括各自独立地为或约225mg的两个连续剂量和之后的各自独立地为或约375mg的两个连续剂量；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每两周一次(Q2W)给予两个剂量，所述两个剂量的量各自独立地为或为约750mg。
23.一种治疗方法，所述方法包括向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予四个剂量，所述四个剂量包括各自独立地为或约225mg的两个连续剂量和之后的为或约375mg的两个连续剂量；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每两周一次(Q2W)给予两个剂量，所述两个剂量的量为或为约750mg。
24.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞；以及
(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述给予包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予两个剂量，所述两个剂量中的每一个各自独立地包含为或约375mg的量，任选地其中所述两个剂量是连续剂量，任选地其中所述两个剂量在所述28天周期中的第15天和第22天给予；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
25.一种治疗方法，所述方法包括向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：每周一次(Q1W)给予两个剂量，所述两个剂量中的每一个独立地包含为或约375mg的量，任选地其中所述两个剂量是连续剂量，任选地其中所述两个剂量在所述28天周期中的第15天和第22天给予；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
26.根据实施方案1-25中任一项所述的方法，其中至少两个28天周期进一步包括第三28天周期和/或其中所述随后的28天周期是第三28天周期。
27.根据实施方案26所述的方法，其中所述第三28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量与所述第一和/或所述第二28天周期中给予的所述总剂量量相同。
28.根据实施方案26或实施方案27所述的方法，其中所述第三28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
29.根据实施方案26-28中任一项所述的方法，其中：
(a)在所述第三28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与所述第一和/或第二28天周期中的相比以更多数量的单独剂量给予所述抗体或片段进行；或
(b)在所述第三28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与所述第二28天周期相比给予相同数量的剂量的所述抗体或片段进行。
30.根据实施方案26-29中任一项所述的方法，其中所述第三28天周期中的所述总剂量量的给予包括每四周一次(Q4W)给予一个剂量，任选地在所述第三28天周期的第1天。
31.根据实施方案1-30中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期的开始或第1天是在这样的时间起始的，所述时间：
(a)在起始给予所述T细胞疗法的第22天与第36天之间；或
(b)在以下各项时或之后，任选地以下各项之后立即或在以下各项之后1至3天内：
(i)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平；
(ii)在所述血液中已经可检测到之后，在所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量不可检测或减少了，任选地与在给予所述T细胞疗法之后的在前时间点相比减少了；
(iii)所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量减少了或减少超过在起始给予所述T细胞疗法之后在所述受试者的血液中可检测到的所述T细胞疗法的峰值或最大细胞数量的1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多；
(iv)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平之后的时间，在来自所述受试者的血液中可检测到的所述细胞的细胞数量或源自所述细胞的细胞数量为所述受试者的血液中的总外周血单核细胞(PBMC)的少于10％、少于5％、少于1％或少于0.1％；
(v)所述受试者在用所述T细胞疗法治疗之后展现出疾病进展和/或在缓解后已经复发；和/或
(iv)与在给予所述细胞之前或之后以及在起始给予所述抗PD-L1抗体之前的时间的肿瘤负荷相比，所述受试者展现出增加的肿瘤负荷。
32.根据实施方案1-31中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期包括不超过三个28天周期，任选地其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期是在起始给予所述T细胞疗法之后的第22天或约第22天与第36天或约第36天之间，任选地在或在约第29天起始的。
33.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞；以及
(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中抗体或抗原结合片段的给予包括进行一至三个28天周期，每个周期包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或片段，任选地其中所述一至三个28天周期中的第一28天周期在起始所述T细胞疗法之后的第22天或约第22天与第36天或约第36天之间，任选地在第29天开始。
34.一种治疗方法，所述方法包括向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞，其中所述抗体或抗原结合片段的给予包括进行一至三个28天周期，每个周期包括给予900mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或片段，任选地其中所述一至三个28天周期中的第一28天周期在起始所述T细胞疗法之后的第22天或约第22天与第36天或约第36天之间，任选地在约第29天开始。
35.根据实施方案33或实施方案34所述的方法，其中每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量独立地为或为约1200mg至1500mg。
36.根据实施方案33-35中任一项所述的方法，其中至少一个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1200mg。
37.根据实施方案33-35中任一项所述的方法，其中至少一个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
38.根据实施方案33-35和37中任一项所述的方法，其中每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
39.根据实施方案33-38中任一项所述的方法，其中每个28天周期中的所述总剂量量包括给予1、2、3或4个剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
40.根据实施方案33-39中任一项所述的方法，其中每个28天周期独立地包括选自以下的给药时间表：(i)每周一次(Q1W)给予四个剂量，任选地在第1天、第8天、第15天和第22天；(ii)Q1W给予两个连续剂量，任选地在第1天和第8天，之后每两周一次(Q2W)给予一个剂量，任选地在第15天；(iii)每两周一次(Q2W)给予两个剂量，任选地在第1天和第15天；或(iv)每四周一次(Q4W)给予一个剂量，任选地在第1天。
41.根据实施方案33-40中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在第一28天周期中的第1天、第8天和第15天，在第二28天周期中的第1天以及在第三28天周期中的第1天给予。
42.根据实施方案33-40中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在第一28天周期中的第1天、第8天、第15天和第22天，在第二28天周期中的第1天和第15天以及在第三28天周期中的第1天给予。
43.根据实施方案33-40中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在每个28天周期中的第1天给予。
44.根据实施方案32-43中任一项所述的方法，其进一步包括：如果所述受试者在所述治疗后只是展现出部分反应(PR)和/或在起始给予所述T细胞疗法和/或所述抗PD-L1抗体或片段后三个月只是展现出PR，则在一个或多个另外的28天周期中给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段。
45.根据实施方案44所述的方法，其中在所述一个或多个另外的28天周期中的每一个中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段以900mg至2000mg，任选地为或约1500mg的总剂量量给予。
46.根据实施方案1-45中任一项所述的方法，其中给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的总持续时间不超过12个月。
47.根据实施方案1-46中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后大于21天起始的。
48.根据实施方案1-47中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在这样的时间起始的，所述时间是在以下各项时或之后，任选地以下各项之后立即或在以下各项之后1至3天内：
(i)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平；
(ii)在所述血液中已经可检测到之后，在所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量不可检测或减少了，任选地与在给予所述T细胞疗法之后的在前时间点相比减少了；
(iii)所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量减少了或减少超过在起始给予所述T细胞疗法之后在所述受试者的血液中可检测到的所述T细胞疗法的峰值或最大细胞数量的1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多；
(iv)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平之后的时间，在来自所述受试者的血液中可检测到的所述细胞的细胞数量或源自所述细胞的细胞数量为所述受试者的血液中的总外周血单核细胞(PBMC)的少于10％、少于5％、少于1％或少于0.1％；
(v)所述受试者在用所述T细胞疗法治疗之后展现出疾病进展和/或在缓解后已经复发；和/或
(iv)与在给予所述细胞之前或之后以及在起始给予所述抗PD-L1抗体之前的时间的肿瘤负荷相比，所述受试者展现出增加的肿瘤负荷。
49.根据实施方案1-48中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在如下时间时或在如下时间内起始的：起始给予所述T细胞疗法之后29天、36天、43天或50天。
50.根据实施方案1-49中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后从或从约22天至36天起始的。
51.根据实施方案1-50中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后29天或约29天起始的。
52.根据实施方案1-51中任一项所述的方法，其中在给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段和/或开始所述第一28天周期的时间，所述受试者未展现出给予所述T细胞疗法后的严重毒性。
53.根据实施方案52所述的方法，其中：
所述严重毒性是严重细胞因子释放综合征(CRS)，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级CRS；和/或
所述严重毒性是严重神经毒性，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级神经毒性。
54.根据实施方案1-53中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段特异性结合至PD-L1的细胞外结构域。
55.根据实施方案1-54中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段是MEDI4736(德瓦鲁单抗)、MDPL3280A(阿特珠单抗)、YW243.55.S70、MDX-1105(BMS-936559)、LY3300054或MSB0010718C(阿维单抗)，或者是或包含前述任一项的抗原结合片段或区域。
56.根据实施方案1-55中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段是MEDI4736(德瓦鲁单抗)，或者是或包含其抗原结合片段或区域。
57.根据实施方案1-56中任一项所述的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
58.根据实施方案57所述的方法，其中，在给予所述T细胞疗法时或即将给予所述T细胞疗法的时间之前，所述受试者在用针对所述NHL的一种或多种先前疗法治疗之后在缓解后已经复发，或对于所述一种或多种先前疗法变为难治性的，所述一种或多种先前疗法任选地为除了表达所述CAR的细胞的另一剂量之外的一种或两种先前疗法，任选地其中所述先前疗法是或包含靶向CD20的药剂或蒽环类抗生素。
59.根据实施方案57或实施方案58所述的方法，其中所述NHL包括侵袭性NHL；弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；DLBCL-NOS，任选地转化型惰性；EBV阳性DLBCL-NOS；富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤；原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)；滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)；和/或高级别B细胞淋巴瘤伴有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双/三打击)。
60.根据实施方案1-59中任一项所述的方法，其中所述受试者被或已经被鉴定为具有小于或等于1的东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态。
61.根据实施方案1-60中任一项所述的方法，其中所述重组受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原。
62.根据实施方案61所述的方法，其中所述靶抗原是B细胞抗原，任选地CD19。
63.根据实施方案1-62中任一项所述的方法，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
64.根据实施方案63所述的方法，其中所述嵌合抗原受体(CAR)包含特异性结合至所述抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域。
65.根据实施方案64所述的方法，其中所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链的信号传导结构域。
66.根据实施方案64或实施方案65所述的方法，其中所述嵌合抗原受体(CAR)进一步包含共刺激信号传导区域。
67.根据实施方案66所述的方法，其中所述共刺激信号传导区域包含CD28或4-1BB的信号传导结构域。
68.根据实施方案66或实施方案67所述的方法，其中所述共刺激结构域是或包含4-1BB的结构域。
69.根据实施方案63-68中任一项所述的方法，其中：
所述CAR包含对所述抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、源自任选地是或包含4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域，并且任选地进一步包含在所述跨膜结构域与所述scFv之间的间隔子；
所述CAR按顺序包含对所述抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选地是或包含4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域；或者
所述CAR按顺序包含对所述抗原具有特异性的scFv、间隔子、跨膜结构域、任选地是4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域。
70.根据实施方案69所述的方法，其中：
所述间隔子任选地是多肽间隔子，所述多肽间隔子：(a)包含全部或部分免疫球蛋白铰链或其修饰形式或由其组成，或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，(b)包含全部或部分免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或其修饰形式或由其组成，和/或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，或(c)长度为或为约12个氨基酸和/或包含全部或部分免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或其修饰形式或由其组成；或(d)具有以下各项或由其组成：SEQ ID NO:1的序列，由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34编码的序列，或前述任一项的变体，所述变体具有与前述任一项的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性；或(e)包含式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或
所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或其变体，所述变体具有与SEQ ID NO:12的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性；和/或
所述初级信号传导结构域包含具有与其的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的SEQ ID NO:13或14或15；和/或
所述scFv包含RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)的CDRL1序列、SRLHSGV(SEQ ID NO:36)的CDRL2序列和/或GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的CDRL3序列和/或DYGVS(SEQ ID NO:38)的CDRH1序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的CDRH2序列和/或YAMDYWG(SEQ ID NO:40)的CDRH3序列，或者其中所述scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRL1序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或与前述任一项结合相同的表位或与前述任一项竞争结合，并且任选地其中所述scFv按顺序包含VH、任选地包含SEQ ID NO:41的接头和VL，和/或所述scFv包含柔性接头和/或包含如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列。
71.根据实施方案1-70中任一项所述的方法，其中基因工程化T细胞的所述剂量包含从或从约1x105至5x108个总CAR表达T细胞、1x106至2.5x108个总CAR表达T细胞、5x106至1x108个总CAR表达T细胞、1x107至2.5x108个总CAR表达T细胞、5x107至1x108个总CAR表达T细胞，每个都包含端值。
72.根据实施方案1-71中任一项所述的方法，其中基因工程化T细胞的所述剂量包含至少或至少约1x105个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x105个CAR表达细胞、至少或至少约5x105个CAR表达细胞、至少或至少约1x106个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x106个CAR表达细胞、至少或至少约5x106个CAR表达细胞、至少或至少约1x107个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x107个CAR表达细胞、至少或至少约5x107个CAR表达细胞、至少或至少约1x108个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x108个CAR表达细胞、或者至少或至少约5x108个CAR表达细胞。
73.根据实施方案1-72中任一项所述的方法，其中基因工程化T细胞的所述剂量包含为或约5x107个CAR表达细胞。
74.根据实施方案1-72中任一项所述的方法，其中基因工程化T细胞的所述剂量包含为或约1x108个CAR表达细胞。
75.根据实施方案1-74中任一项所述的方法，其中肠胃外，任选地静脉内给予细胞的所述剂量。
76.根据实施方案75所述的方法，其中所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。
77.根据实施方案1-76中任一项所述的方法，其中所述T细胞对于所述受试者而言是自体的。
78.根据实施方案1-77中任一项所述的方法，其中所述细胞对于所述受试者而言是同种异体的。
79.根据实施方案1-78中任一项所述的方法，其中基因工程化T细胞的所述剂量包含表达所述CAR的CD4+ T细胞和表达所述CAR的CD8+ T细胞，并且所述剂量的给予包括给予多种单独的组合物，所述多种单独的组合物包括包含所述CD4+ T细胞和所述CD8+ T细胞中的一种的第一组合物以及包含所述CD4+ T细胞或所述CD8+ T细胞中的另一种的第二组合物。
80.根据实施方案79所述的方法，其中：
所述第一组合物和所述第二组合物的给予相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时，或者其中所述第一组合物的给予和所述第二组合物的给予在同一天进行、相隔约0至约12小时、相隔约0至约6小时或相隔约0至约2小时进行；和/或
所述第一组合物的给予的起始和所述第二组合物的给予的起始相隔约1分钟至约1小时或相隔约5分钟至约30分钟进行。
81.根据实施方案79或实施方案80所述的方法，其中所述第一组合物和所述第二组合物的给予相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟。
82.根据实施方案79-81中任一项所述的方法，其中所述第一组合物包含所述CD4+T细胞。
83.根据实施方案79-82中任一项所述的方法，其中所述第一组合物包含所述CD8+T细胞。
84.根据实施方案79-83中任一项所述的方法，其中所述第一化合物是在所述第二组合物之前给予。
85.根据实施方案1-84中任一项所述的方法，其中在所述给予之前，已经用淋巴细胞清除疗法对所述受试者进行预调理，所述淋巴细胞清除疗法包括给予氟达拉滨和/或环磷酰胺。
86.根据实施方案1-85中任一项所述的方法，其进一步包括，在即将给予之前，向所述受试者给予淋巴细胞清除疗法，所述淋巴细胞清除疗法包括给予氟达拉滨和/或环磷酰胺。
87.根据实施方案85或实施方案86所述的方法，其中所述淋巴细胞清除疗法包括每天给予约200-400mg/m2，任选地为或约300mg/m2并包含端值的环磷酰胺，和/或约20-40mg/m2，任选地30mg/m2的氟达拉滨，持续2-4天，任选地持续3天，或者其中所述淋巴细胞清除疗法包括给予约500mg/m2的环磷酰胺。
88.根据实施方案85-87中任一项所述的方法，其中：
所述淋巴细胞清除疗法包括每天给予为或约300mg/m2的环磷酰胺和约30mg/m2的氟达拉滨，持续3天；和/或
所述淋巴细胞清除疗法包括每天给予为或约500mg/m2的环磷酰胺和约30mg/m2的氟达拉滨，持续3天。
89.根据实施方案1-88中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
90.一种试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞；
(b)抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，任选地其中所述抗PD-L1抗体或其片段被配制为一个或多个单位剂量；以及
(c)用于向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予所述基因工程化细胞和/或所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的说明书，其中所述说明书规定：
(i)所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予进行至少两个28天周期，所述至少两个28天周期中的每一个包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或抗原结合片段；和
(ii)在所述至少两个28天周期中的至少第一28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过给予多于一次的所述抗体或片段进行。
91.一种试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞；以及
(b)用于向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予所述T细胞疗法的说明书，其中所述说明书规定在给予T细胞之后，所述受试者将被给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中所述说明书规定：
(i)所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予进行至少两个28天周期，所述至少两个28天周期中的每一个包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或抗原结合片段；和
(ii)在所述至少两个28天周期中的至少第一28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过给予多于一次的所述抗体或片段进行。
92.一种试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，任选地其中所述抗PD-L1抗体或其片段被配制为一个或多个单位剂量；以及
(b)用于向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的说明书，其中所述说明书规定在起始给予T细胞疗法之后给予所述抗PD-L1抗体或片段，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的基因工程化T细胞；其中所述说明书规定：
(i)所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予进行至少两个28天周期，所述至少两个28天周期中的每一个包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或其抗原结合片段；和
(ii)在所述至少两个28天周期中的至少第一28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过给予多于一次的所述抗体或片段进行。
93.根据实施方案90-92中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书进一步规定在所述至少两个28天周期中的第一28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与第二和/或随后的28天周期相比给予更多次数的所述抗体或片段进行。
94.根据实施方案90、92和93中任一项所述的试剂盒，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总量为或为约225mg至2000mg。
95.根据实施方案94所述的试剂盒，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总量为或为约750-1500mg。
96.根据实施方案94或95所述的试剂盒，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段被配制为两个或更多个单位剂量，其中每个单位剂量为或为约225mg至2000mg。
97.根据实施方案96所述的试剂盒，其中每个单位剂量为或为约225mg至1500mg。
98.根据实施方案90-97中任一项所述的试剂盒，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段特异性结合至PD-L1的细胞外结构域。
99.根据实施方案90-98中任一项所述的试剂盒，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段是MEDI4736(德瓦鲁单抗)、MDPL3280A(阿特珠单抗)、YW243.55.S70、MDX-1105(BMS-936559)、LY3300054或MSB0010718C(阿维单抗)，或者是其抗原结合片段。
100.根据实施方案99所述的试剂盒，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段是MEDI4736(德瓦鲁单抗)或是其抗原结合片段。
101.根据实施方案90-100中任一项所述的试剂盒，其中所述重组受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原。
102.根据实施方案101所述的试剂盒，其中所述靶抗原是B细胞抗原，任选地CD19。
103.根据实施方案90-102中任一项所述的试剂盒，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
104.根据实施方案103所述的试剂盒，其中所述嵌合抗原受体(CAR)包含特异性结合至所述抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域。
105.根据实施方案104所述的试剂盒，其中所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链的细胞内结构域。
106.根据实施方案103或实施方案104所述的试剂盒，其中所述嵌合抗原受体(CAR)进一步包含共刺激信号传导区域。
107.根据实施方案106所述的试剂盒，其中所述共刺激信号传导区域包含CD28或4-1BB的信号传导结构域。
108.根据实施方案106或实施方案107所述的试剂盒，其中所述共刺激结构域是4-1BB的结构域。
109.根据实施方案103-108中任一项所述的试剂盒，其中：
所述CAR包含对所述抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、源自任选地是或包含4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域，并且任选地进一步包含在所述跨膜结构域与所述scFv之间的间隔子；
所述CAR按顺序包含对所述抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选地是或包含4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域；或者
所述CAR按顺序包含对所述抗原具有特异性的scFv、间隔子、跨膜结构域、任选地是4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域。
110.根据实施方案109所述的试剂盒，其中：
所述间隔子任选地是多肽间隔子，所述多肽间隔子：(a)包含全部或部分免疫球蛋白铰链或其修饰形式或由其组成，或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，(b)包含全部或部分免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或其修饰形式或由其组成，和/或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，或(c)长度为或为约12个氨基酸和/或包含全部或部分免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或其修饰形式或由其组成；或(d)具有以下各项或由其组成：SEQ ID NO:1的序列，由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34编码的序列，或前述任一项的变体，所述变体具有与前述任一项的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性；或(e)包含式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或
所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或其变体，所述变体具有与SEQ ID NO:12的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性；和/或
所述初级信号传导结构域包含具有与其的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的SEQ ID NO:13或14或15；和/或
所述scFv包含RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)的CDRL1序列、SRLHSGV(SEQ ID NO:36)的CDRL2序列和/或GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的CDRL3序列和/或DYGVS(SEQ ID NO:38)的CDRH1序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的CDRH2序列和/或YAMDYWG(SEQ ID NO:40)的CDRH3序列，或者其中所述scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRL1序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或与前述任一项结合相同的表位或与前述任一项竞争结合，并且任选地其中所述scFv按顺序包含VH、任选地包含SEQ ID NO:41的接头和VL，和/或所述scFv包含柔性接头和/或包含如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列。
111.根据实施方案90-110中任一项所述的试剂盒，其中所述T细胞疗法包括从或从约1x105至5x108个总CAR表达T细胞、1x106至2.5x108个总CAR表达T细胞、5x106至1x108个总CAR表达T细胞、1x107至2.5x108个总CAR表达T细胞、5x107至1x108个总CAR表达T细胞，每个都包含端值。
112.根据实施方案90-111中任一项所述的试剂盒，其中所述T细胞疗法包括至少或至少约1x105个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x105个CAR表达细胞、至少或至少约5x105个CAR表达细胞、至少或至少约1x106个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x106个CAR表达细胞、至少或至少约5x106个CAR表达细胞、至少或至少约1x107个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x107个CAR表达细胞、至少或至少约5x107个CAR表达细胞、至少或至少约1x108个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x108个CAR表达细胞、或者至少或至少约5x108个CAR表达细胞。
113.根据实施方案90-112中任一项所述的试剂盒，其中所述T细胞疗法包括为或约5x107个CAR表达细胞。
114.根据实施方案90-113中任一项所述的试剂盒，其中所述T细胞疗法包括为或约1x108个CAR表达细胞。
115.根据实施方案90-114中任一项所述的试剂盒，其中所述T细胞疗法包括从所述受试者获得的原代T细胞。
116.根据实施方案90-115中任一项所述的试剂盒，其中所述T细胞疗法包括对所述受试者而言自体的细胞。
117.根据实施方案90-116中任一项所述的试剂盒，其中所述T细胞疗法包括对所述受试者而言同种异体的细胞。
118.根据实施方案90-117中任一项所述的试剂盒，其中所述T细胞疗法包括表达所述CAR的CD4+ T细胞和表达所述CAR的CD8+ T细胞，并且所述给予包括给予多种单独的组合物，所述多种单独的组合物包括包含所述CD4+ T细胞和所述CD8+ T细胞中的一种的第一组合物以及包含所述CD4+ T细胞或所述CD8+ T细胞中的另一种的第二组合物。
119.根据实施方案118所述的试剂盒，其中：
所述第一组合物和所述第二组合物的给予相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时，或者其中所述第一组合物的给予和所述第二组合物的给予在同一天进行、相隔约0至约12小时、相隔约0至约6小时或相隔约0至约2小时进行；和/或
所述第一组合物的给予的起始和所述第二组合物的给予的起始相隔约1分钟至约1小时或相隔约5分钟至约30分钟进行。
120.根据实施方案118或实施方案119所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述第一组合物和所述第二组合物的给予相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟。
121.根据实施方案118-120中任一项所述的试剂盒，其中所述第一组合物包含所述CD4+ T细胞。
122.根据实施方案118-121中任一项所述的试剂盒，其中所述第一组合物包含所述CD8+ T细胞。
123.根据实施方案118-122中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述第一化合物是在所述第二组合物之前给予。
124.根据实施方案90-123中任一项所述的试剂盒，其进一步包含用于给予淋巴细胞清除疗法的说明书，所述淋巴细胞清除疗法包括氟达拉滨和/或环磷酰胺。
125.根据实施方案90-124中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述淋巴细胞清除疗法是在给予所述T细胞疗法和/或所述抗PD-L1抗体或其片段之前给予。
126.根据实施方案90-125中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量独立地为在约750mg至约1500mg范围内的剂量或剂量范围。
127.根据实施方案90-126中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定至少一个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约750mg。
128.根据实施方案90-126中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定至少一个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1200mg。
129.根据实施方案90-126中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定至少一个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
130.根据实施方案90-126和实施方案129中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定至少一个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
131.根据实施方案90-130中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述至少两个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量是相同的。
132.根据实施方案90-130中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述至少两个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量是不同的。
133.根据实施方案90-130和实施方案132中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定，所述第一28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量低于所述第二和/或随后的28天周期。
134.根据实施方案90-133中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述第一28天周期是通过给予2、3或4个剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段进行。
135.根据实施方案90-134中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述第一28天周期是通过选自以下的给药时间表进行：(i)每周一次(Q1W)给予两个剂量，任选地在第15天和第22天；(ii)每周一次(Q1W)给予四个剂量，任选地在第1天、第8天、第15天和第22天；(iii)Q1W给予两个连续剂量，任选地在第1天和第8天，之后每两周一次(Q2W)给予一个剂量，任选地在第15天；或(iv)每两周一次(Q2W)给予两个剂量，任选地在第1天和第15天。
136.根据实施方案135中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定：
所述第一28天周期的每个Q1W剂量独立地为所述总剂量量的从或从约18％至32％，任选地为所述周期中的所述总剂量量的25％或约25％；和/或
所述第一28天周期的每个Q2W剂量独立地为所述总剂量量的从或从约40％至62.5％，任选地为所述周期中的所述总剂量量的50％或约50％。
137.根据实施方案135或实施方案136中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定：
所述第一28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：Q1W给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量为或为约375mg，之后Q2W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约750mg；
所述第一28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：Q1W给予四个剂量，所述四个剂量包括为或约225mg的两个连续剂量和之后的为或约375mg的两个连续剂量；或者
所述第一28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：Q1W给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量为或为约375mg。
138.根据实施方案90-137中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述第二和/或随后的28天周期是通过给予1或2个剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段进行。
139.根据实施方案90-138中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述第二和/或随后的28天周期用选自以下的给药时间表进行：(i)每两周一次(Q2W)给予两个剂量，任选地在第1天和第15天；或(ii)每四周一次(Q4W)给予一个剂量，任选地在第1天。
140.根据实施方案139所述的试剂盒，其中所述说明书规定：
所述第二和/或随后的28天周期的每个Q2W剂量为或为约所述总剂量量的50％；和/或
所述第二和/或随后的28天周期的所述Q4W剂量为或为约所述总剂量量。
141.根据实施方案139或实施方案140所述的试剂盒，其中所述说明书规定：
所述第二和/或随后的剂量是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：Q2W给予两个剂量，所述两个剂量的量为或为约750mg；或
所述第二和/或随后的剂量是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
142.根据实施方案90-141中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定：
所述第一28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：每周一次(Q1W)给予两个连续剂量，所述两个连续剂量的量为或为约375mg，之后每两周一次(Q2W)给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约750mg；并且
所述第二和/或随后的28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
143.根据实施方案90-141中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定：
所述第一28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：每周一次(Q1W)给予四个剂量，所述四个剂量具有为或约225mg的两个连续剂量和之后的为或约375mg的两个连续剂量；并且
所述第二和/或随后的28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：每两周一次(Q2W)给予两个剂量，所述两个剂量的量为或为约750mg。
144.根据实施方案90-141中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定：
所述第一28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：每周一次(Q1W)给予两个剂量，所述剂量中的每一个为或为约为或约375mg的量，任选地其中所述剂量是连续剂量，任选地其中所述剂量在所述28天周期中的第15天和第22天进行；并且
所述第二和/或随后的28天周期是通过将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予来进行：Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
145.根据实施方案90-144中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予进行至少三个28天周期。
146.根据实施方案145所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述第三28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量与所述第一和/或第二28天周期相同。
147.根据实施方案145或实施方案146所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述第三28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
148.根据实施方案145-147中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定在所述第三28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与所述第一和/或第二28天周期相比给予更多次数的所述抗体或片段进行。
149.根据实施方案145-148中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定在所述第三28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与所述第二28天周期相比给予相同次数的所述抗体或片段进行。
150.根据实施方案145-149中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述第三28天周期用以下给药时间表进行：每四周一次(Q4W)给予一个剂量，任选地在第1天。
151.根据实施方案90-150中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予是通过起始所述T细胞疗法之后的不超过三个28天周期进行。
152.根据实施方案90-151中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定每个28天周期独立地用选自以下的给药时间表进行：(i)每周一次(Q1W)给予四个剂量，任选地在第1天、第8天、第15天和第22天；(ii)Q1W给予两个连续剂量，任选地在第1天和第8天，之后每两周一次(Q2W)给予一个剂量，任选地在第15天；(iii)每两周一次(Q2W)给予两个剂量，任选地在第1天和第15天；或(iv)每四周一次(Q4W)给予一个剂量，任选地在第1天。
153.根据实施方案90-152中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在第一28天周期中的第1天、第8天和第15天，在第二28天周期中的第1天以及在第三28天周期中的第1天给予。
154.根据实施方案90-152中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在第一28天周期中的第1天、第8天、第15天和第22天，在第二28天周期中的第1天和第15天以及在第三28天周期中的第1天给予。
155.根据实施方案90-152中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在每个28天周期中的第1天给予。
156.根据实施方案90-155中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定如果所述受试者在所述治疗后展现出部分反应(PR)，则通过一个或多个另外的28天周期进行所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予。
157.根据实施方案90-156中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予进行的总持续时间为约12个月或少于约12个月。
158.根据实施方案90-157中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予是在起始给予所述T细胞疗法之后大于21天的时间(例如在约29天、在22-36天内)起始的。
159.根据实施方案90-157中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予是在如下时间时或在如下时间内起始的：在起始给予所述T细胞疗法之后约29天、36天、43天或50天。
160.根据实施方案90-159中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书指示当所述受试者展现出严重毒性时，不应给予抗PD-L1抗体或抗原结合片段。
161.根据实施方案160所述的试剂盒，其中所述说明书规定：
所述严重毒性是严重细胞因子释放综合征(CRS)，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级CRS；和/或
所述严重毒性是严重神经毒性，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级神经毒性。
162.根据实施方案90-161中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定：
所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予是在这样的时间起始的，所述时间是在以下各项时或之后，任选地以下各项之后立即或在以下各项之后1至3天内：
(i)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平；
(ii)在所述血液中已经可检测到之后，在所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量不可检测或减少了，任选地与在给予所述T细胞疗法之后的在前时间点相比减少了；
(iii)所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量减少了或减少超过在起始给予所述T细胞疗法之后在所述受试者的血液中可检测到的所述T细胞疗法的峰值或最大细胞数量的1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多；
(iv)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平之后的时间，在来自所述受试者的血液中可检测到的所述细胞的细胞数量或源自所述细胞的细胞数量为所述受试者的血液中的总外周血单核细胞(PBMC)的少于10％、少于5％、少于1％或少于0.1％；
(v)所述受试者在用所述T细胞疗法治疗之后展现出疾病进展和/或在缓解后已经复发；和/或
(iv)与在给予所述细胞之前或之后以及在起始给予所述抗PD-L1抗体之前的时间的肿瘤负荷相比，所述受试者展现出增加的肿瘤负荷。
163.根据实施方案90-162中任一项所述的试剂盒，其中所述受试者是人。
164.根据实施方案90-163中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述T细胞疗法或所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予是用于治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
165.根据实施方案164所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述T细胞疗法或所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予是用于治疗所述受试者的非霍奇金淋巴瘤(NHL)，其中所述受试者在用针对所述NHL的一种或多种先前疗法治疗之后在缓解后已经复发，或对于所述一种或多种先前疗法变为难治性的，所述一种或多种先前疗法任选地为除了表达所述CAR的细胞的另一剂量之外的一种或两种先前疗法，任选地其中所述先前疗法是或包含靶向CD20的药剂或蒽环类抗生素。
166.根据实施方案164或实施方案165所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述NHL为以下各项中的任一者：侵袭性NHL；弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；DLBCL-NOS，任选地转化型惰性；EBV阳性DLBCL-NOS；富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤；原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)；滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)；和/或高级别B细胞淋巴瘤伴有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双/三打击)。
167.根据实施方案90-166中任一项所述的试剂盒，其中所述说明书规定所述受试者必须被鉴定为具有小于或等于1的东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态，以有资格成为经历或将经历该试剂盒的使用的候选者。
168.根据实施方案90和92-167中任一项所述的试剂盒，其中所述细胞适于肠胃外，任选地静脉内给予。
169.根据实施方案90、91和93-168中任一项所述的试剂盒，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段适于肠胃外，任选地静脉内给予。
171.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；以及
(b)随后向所述受试者给予检查点抑制剂，所述检查点抑制剂为能够阻断免疫检查点途径蛋白的抗体或其抗原结合片段，其中在至少两个剂量周期中的每一个中给予所述检查点抑制剂的总剂量量，其中所述至少两个剂量周期中的第一剂量周期中所述检查点抑制剂的所述总剂量量：
等于或小于第二和/或随后的剂量周期中给予的所述总剂量量；并且
在所述第一剂量周期的过程中以多于一个单独剂量给予，其中单独剂量的数量大于在所述第二和/或随后的剂量周期中给予的单独剂量的数量。
172.一种治疗方法，所述方法包括向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予检查点抑制剂，所述检查点抑制剂为能够阻断免疫检查点途径蛋白的抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原，其中在至少两个剂量周期中的每一个中给予所述检查点抑制剂的总剂量量，其中所述至少两个剂量周期中的第一剂量周期中所述检查点抑制剂的所述总剂量量：
等于或小于第二和/或随后的剂量周期中给予的所述总剂量量；并且
在所述第一剂量周期的过程中以多于一个单独剂量给予，其中单独剂量的数量大于在所述第二和/或随后的剂量周期中给予的单独剂量的数量。
173.根据实施方案171或实施方案172所述的方法，其中所述剂量周期是21天周期。
174.根据实施方案171或实施方案172所述的方法，其中所述剂量周期是28天周期。
175.根据实施方案171-174中任一项所述的方法，其中所述至少两个剂量周期中的第一剂量周期中的所述总剂量量与所述至少两个剂量周期中的第二剂量周期中的所述总剂量量相同。
176.根据实施方案171-175中任一项所述的方法，其中所述至少两个剂量周期中的第一剂量周期包括2、3、4或更多个单独剂量。
177.根据实施方案176所述的方法，其中所述剂量周期是28天周期并且所述至少两个28天周期中的第一28天周期的所述单独剂量被给予为四个剂量，各自每周一次(Q1W)；两个剂量，各自为Q1W剂量，持续连续两周；或两个剂量，各自为Q1W剂量，持续连续两周，且之后是两周一次(Q2W)一个剂量。
178.根据实施方案171-177中任一项所述的方法，其中所述至少两个剂量周期中的每一个包括独立地给予为或约400mg至为或约2000mg的总剂量量的所述检查点抑制剂。
179.根据实施方案171-178中任一项所述的方法，其中所述检查点抑制剂阻断选自PD-L1、PD-L2、PD-1和CTLA-4的免疫检查点途径蛋白。
180.根据实施方案171-179中任一项所述的方法，其中所述检查点途径是PD-1/PD-L1并且所述检查点抑制剂是抗PD-1抗体。
181.根据实施方案180所述的方法，其中所述检查点抑制剂是纳武单抗、派姆单抗或西米普利单抗。
182.根据实施方案171-181中任一项所述的方法，其中所述至少两个剂量周期中的每一个包括独立地给予为或约400mg至为或约600mg，任选地为或约480mg的总剂量量。
183.根据实施方案171-179中任一项所述的方法，其中所述检查点途径是PD-1/PD-L1并且所述检查点抑制剂是抗PD-L1抗体。
184.根据实施方案171-181和183中任一项所述的方法，其中所述至少两个剂量周期中的每一个包括独立地给予750mg至2000mg，任选地为或约1500mg的总剂量量。
185.根据实施方案171-184中任一项所述的方法，其中所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在这样的时间起始的，所述时间是在以下各项时或之后，任选地以下各项之后立即或在以下各项之后1至3天内：
(i)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平；
(ii)在所述血液中已经可检测到之后，在所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量不可检测或减少了，任选地与在给予所述T细胞疗法之后的在前时间点相比减少了；
(iii)所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量减少了或减少超过在起始给予所述T细胞疗法之后在所述受试者的血液中可检测到的所述T细胞疗法的峰值或最大细胞数量的1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多；
(iv)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平之后的时间，在来自所述受试者的血液中可检测到的所述细胞的细胞数量或源自所述细胞的细胞数量为所述受试者的血液中的总外周血单核细胞(PBMC)的少于10％、少于5％、少于1％或少于0.1％；
(v)所述受试者在用所述T细胞疗法治疗之后展现出疾病进展和/或在缓解后已经复发；和/或
(iv)与在给予所述细胞之前或之后以及在起始给予所述检查点抑制剂之前的时间的肿瘤负荷相比，所述受试者展现出增加的肿瘤负荷。
186.根据实施方案171-185中任一项所述的方法，其中所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在如下时间时或在如下时间内起始的：起始给予所述T细胞疗法之后29天、36天、43天或50天。
187.根据实施方案171-186中任一项所述的方法，其中所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后从或从约22天至36天起始的。
188.根据实施方案171-187中任一项所述的方法，其中所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后29天或约29天起始的。
189.根据实施方案171-188中任一项所述的方法，其中所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后43天或约43天起始的。
190.根据实施方案171-189中任一项所述的方法，其中在给予所述检查点抑制剂和/或开始所述第一剂量周期的时间，所述受试者未展现出给予所述T细胞疗法后的严重毒性。
191.根据实施方案190所述的方法，其中：
所述严重毒性是严重细胞因子释放综合征(CRS)，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级CRS；和/或
所述严重毒性是严重神经毒性，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级神经毒性。
192.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤的细胞表达的靶抗原；以及
(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中所述给予包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，持续所述28天周期的连续两周，所述单独剂量中的每一个的量为或为约375mg，之后是在所述28天周期中两周一次(Q2W)一个剂量，所述一个剂量的量为或为约750mg；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为一个剂量，每四周一次(Q4W)，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
193.一种治疗方法，所述方法包括向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，持续所述28天周期的连续两周，所述单独剂量中的每一个的量为或为约375mg，之后是在所述28天周期中两周一次(Q2W)一个剂量，所述一个剂量的量为或为约750mg；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为一个剂量，每四周一次(Q4W)，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
194.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；以及
(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述给予包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为四个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，持续所述28天周期，其中所述四个剂量包括各自独立地为或约225mg的两个连续Q1W剂量和之后的各自独立地为或约375mg的两个连续Q1W剂量；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个剂量，在所述28天周期中各自每两周一次(Q2W)，其中每个Q2W给予的量各自独立地为或为约750mg。
195.一种治疗方法，所述方法包括向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，所述嵌合抗原受体特异性结合至在所述B细胞恶性肿瘤上表达的靶抗原，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为四个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，持续所述28天周期，其中所述四个单独剂量包括各自独立地为或约225mg的两个连续Q1W剂量和之后的各自独立地为或约375mg的两个连续Q1W剂量；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个单独剂量，每两周一次(Q2W)，持续所述第二和/或随后的28天周期，其中每个剂量的量独立地为或为约750mg。
196.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；以及
(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述给予包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，其中所述两个剂量中的每一个独立地包含为或约375mg的量，任选地其中所述两个剂量是连续Q1W剂量，任选地其中所述两个剂量在所述28天周期中的第15天和第22天给予；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：在所述第二和/或随后的28天周期中Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
197.一种治疗方法，所述方法包括向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，所述嵌合抗原受体特异性结合至在所述B细胞恶性肿瘤上表达的靶抗原，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，其中所述两个剂量中的每一个独立地包含为或约375mg的量，任选地其中所述两个剂量是连续Q1W剂量，任选地其中所述两个剂量在所述28天周期中的第15天和第22天给予；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：在所述第二和/或随后的28天周期中Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
198.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；以及
(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中：
所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，所述至少两个28天周期中的每一个包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或抗原结合片段；并且
在所述至少两个28天周期中的至少一个中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过在所述至少一个28天周期的过程中给予多于一个单独剂量的所述抗体或片段进行。
199.一种治疗方法，所述方法包括向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原，其中：
所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，所述至少两个28天周期中的每一个独立地包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或抗原结合片段；并且
在所述至少两个28天周期中的至少一个中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过在所述至少一个28天周期的过程中给予多于一个单独剂量的所述抗体或片段进行。
200.根据实施方案198或实施方案199所述的方法，其中在所述至少两个28天周期中的第一28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与第二和/或随后的28天周期中的给予相比给予更多数量的单独剂量的所述抗体或片段进行。
201.根据实施方案198-200中任一项所述的方法，其中每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量独立地在为或约750mg与为或约1500mg之间。
202.根据实施方案198-201中任一项所述的方法，其中所述28天周期中的至少一个中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约750mg。
203.根据实施方案198-202中任一项所述的方法，其中所述28天周期中的至少一个中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1200mg。
204.根据实施方案198-201中任一项所述的方法，其中所述28天周期中的至少一个中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
205.根据实施方案198-201和204中任一项所述的方法，其中每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量独立地为或为约1500mg。
206.根据实施方案198-205中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量在所述至少两个28天周期中的至少两个中、且任选地所述至少两个28天周期中是相同的总剂量量。
207.根据实施方案198-205中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量在所述至少两个28天周期中的至少两个中是不同的，或在所述至少两个28天周期中的每一个中是不同的。
208.根据实施方案198-205和207中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量低于所述至少两个28天周期中的第二和/或随后的28天周期。
209.根据实施方案198-208中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括给予2、3或4个单独剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
210.根据实施方案198-209中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据选自以下的给药时间表将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为单独剂量：(i)两个单独剂量，在所述28天周期内各自每周一次(Q1W)，任选地在所述28天周期的第15天和第22天；(ii)四个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，持续所述28天周期，任选地在所述28天周期的第1天、第8天、第15天和第22天；(iii)两个单独剂量，各自Q1W，持续所述28天周期的连续两周，任选地在所述周期的第1天和第8天，之后是在所述28天周期中两周一次(Q2W)一个剂量，任选地在所述周期的第15天；或(iv)两个单独剂量，各自每两周一次(Q2W)，持续所述28天周期，任选地在所述28天周期的第1天和第15天。
211.根据实施方案210所述的方法，其中：
在所述第一28天周期中给予的每个Q1W剂量独立地为所述第一28天周期中给予的所述总剂量量的从或从为或约18％至为或约32％，任选地为所述第一28天周期中给予的所述总剂量量的为或约25％；和/或
在所述第一28天周期中给予的每个Q2W剂量独立地为所述第一28天周期中的所述总剂量量的从或从为或约40％至为或约62.5％，任选地为所述第一28天周期中给予的所述总剂量量的50％或约50％。
212.根据实施方案210或实施方案211所述的方法，其中：
所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据给药时间表(iii)给予所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中Q1W持续连续两周的所述两个单独剂量中的每一个的量各自独立地为或为约375mg，之后Q2W一次的一个剂量的量为或为约750mg；
所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据(ii)中所示的给药时间表给予所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中所述四个单独Q1W剂量包括量为或为约225mg的两个连续Q1W剂量和之后的量为或为约375mg的两个连续Q1W剂量；或者
所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据(i)中所示的给药时间表给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段，其中所述两个单独Q1W剂量中的每一个以为或约375mg的量进行两个连续Q1W剂量。
213.根据实施方案198-210中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据选自以下的给药时间表给予单独剂量：(i)两个单独剂量，在所述28天周期的第15天或约第15天和第22天或约第22天；(ii)四个单独剂量，在所述28天周期的第1天或约第1天、第8天或约第8天、第15天或约第15天和第22天或约第22天；(iii)两个单独剂量，在所述28天周期的第1天或约第1天和第8天或约第8天，之后是一个剂量，在所述周期的第15天或约第15天；或(iv)两个剂量，在所述28天周期的第1天或约第1天和所述28天周期的第15天或约第15天。
214.根据实施方案198-213中任一项所述的方法，其中：
所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据给药时间表(iii)给予所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中所述两个单独剂量中的每一个包含在所述28天周期的第1天或约第1天和第8天或约第8天的为或约375mg的量，之后是在所述周期的第15天或约第15天的量为或为约750mg的一个剂量；
所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据(ii)中所示的给药时间表给予所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中所述四个单独剂量包括在第1天或约第1天和第8天或约第8天的量为或为约225mg的两个连续剂量，之后是在所述28天周期的第15天或约第15天和第22天或约第22天的量为或为约375mg的两个连续剂量；或者
所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据(i)中所示的给药时间表给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段，其中所述两个单独剂量中的每一个包括在所述28天周期的第15天或约第15天和第22天或约第22天的量为或为约375mg的两个连续剂量。
215.根据实施方案200-214中任一项所述的方法，其中所述第二和/或随后的28天周期中的所述总剂量量的给予独立地包括给予1或2个剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
216.根据实施方案200-215中任一项所述的方法，其中所述第二和/或随后的28天周期中的所述总剂量量的给予独立地包括选自以下的给药时间表：(i)两个单独剂量，各自每两周一次(Q2W)，持续所述第二和/或随后的28天周期，任选地在所述第二和/或随后的周期中的第1天和第15天；或(ii)一个剂量，在所述第二和/或随后的28天周期中每四周一次(Q4W)，任选地在所述第二和/或随后的周期的第1天。
217.根据实施方案216所述的方法，其中：
所述第二和/或随后的28天周期的每个Q2W剂量为或为约所述第二和/或随后的28天周期的所述总剂量量的50％；和/或
所述第二和/或随后的28天周期的所述Q4W剂量为或为约所述第二和/或随后的28天周期的所述总剂量量。
218.根据实施方案216或实施方案217所述的方法，其中：
所述第二和/或随后的剂量包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q2W给予两个剂量，所述两个剂量的量为或为约750mg；或
所述第二和/或随后的剂量包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
219.根据实施方案174-218中任一项所述的方法，其中至少两个28天周期进一步包括第三28天周期和/或其中所述随后的28天周期是第三28天周期。
220.根据实施方案219所述的方法，其中所述第三28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量与所述第一和/或所述第二28天周期中给予的所述总剂量量相同。
221.根据实施方案219或实施方案220所述的方法，其中所述第三28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
222.根据实施方案219-221中任一项所述的方法，其中：
(a)在所述第三28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与所述第一和/或第二28天周期中的相比以更多数量的单独剂量给予所述抗体或片段进行；或
(b)在所述第三28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与所述第二28天周期相比给予相同数量的剂量的所述抗体或片段进行。
223.根据实施方案219-222中任一项所述的方法，其中所述第三28天周期中的所述总剂量量的给予包括在所述第三28天周期中每四周一次(Q4W)给予一个剂量，任选地在所述第三28天周期的第1天。
224.根据实施方案192-223中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期是在这样的时间起始的，所述时间：
(a)在起始给予所述T细胞疗法的第22天与第36天之间；或
(b)在以下各项时或之后，任选地以下各项之后立即或在以下各项之后1至3天内：
(i)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平；
(ii)在所述血液中已经可检测到之后，在所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量不可检测或减少了，任选地与在给予所述T细胞疗法之后的在前时间点相比减少了；
(iii)所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量减少了或减少超过在起始给予所述T细胞疗法之后在所述受试者的血液中可检测到的所述T细胞疗法的峰值或最大细胞数量的1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多；
(iv)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平之后的时间，在来自所述受试者的血液中可检测到的所述细胞的细胞数量或源自所述细胞的细胞数量为所述受试者的血液中的总外周血单核细胞(PBMC)的少于10％、少于5％、少于1％或少于0.1％；
(v)所述受试者在用所述T细胞疗法治疗之后展现出疾病进展和/或在缓解后已经复发；和/或
(iv)与在给予所述细胞之前或之后以及在起始给予所述抗PD-L1抗体之前的时间的肿瘤负荷相比，所述受试者展现出增加的肿瘤负荷。
225.根据实施方案192-224中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期是在起始给予所述T细胞疗法的第22天与第36天之间的时间起始的。
226.根据实施方案192-225中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期包括不超过三个28天周期，任选地其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期是在第22天或约第22天与第36天或约第36天之间起始的。
227.根据实施方案192-226中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期是在起始给予所述T细胞疗法之后的第29天或约第29天起始的。
228.根据实施方案192-227中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期是在起始给予所述T细胞疗法之后的第43天或约第43天起始的。
229.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；以及
(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中抗体或抗原结合片段的给予包括进行一至三个28天周期，每个周期包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或片段，任选地其中所述一至三个28天周期中的第一28天周期在起始所述T细胞疗法之后的第22天或约第22天与第36天或约第36天之间，任选地在第29天开始。
230.一种治疗方法，所述方法包括向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原，其中所述抗体或抗原结合片段的给予包括进行一至三个28天周期，每个周期包括给予900mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或片段，任选地其中所述一至三个28天周期中的第一28天周期在起始所述T细胞疗法之后的第22天或约第22天与第36天或约第36天之间，任选地在约第29天开始。
231.根据实施方案229或实施方案230所述的方法，其中每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量独立地为或为约1200mg至1500mg。
232.根据实施方案229-231中任一项所述的方法，其中至少一个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1200mg。
233.根据实施方案229-231中任一项所述的方法，其中至少一个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
234.根据实施方案229-231和233中任一项所述的方法，其中每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
235.根据实施方案229-234中任一项所述的方法，其中每个28天周期中的所述总剂量量包括给予1、2、3或4个剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
236.根据实施方案229-235中任一项所述的方法，其中每个28天周期独立地包括选自以下的给药时间表：(i)四个剂量，各自每周一次(Q1W)，任选地在所述28天周期的第1天、第8天、第15天和第22天；(ii)两个连续剂量，各自Q1W，任选地在第1天和第8天，之后是一个剂量，两周一次(Q2W)给予一个剂量，任选地在所述28天周期的第15天；(iii)两个剂量，各自每两周一次(Q2W)，任选地在所述28天周期的第1天和第15天；或(iv)一个剂量，每四周一次(Q4W)，任选地在所述28天周期的第1天。
237.根据实施方案229-236中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在第一28天周期中的第1天、第8天和第15天，在第二28天周期中的第1天以及在第三28天周期中的第1天给予。
238.根据实施方案229-237中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在第一28天周期中的第1天、第8天、第15天和第22天，在第二28天周期中的第1天和第15天以及在第三28天周期中的第1天给予。
239.根据实施方案229-238中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在每个28天周期中的第1天给予。
240.根据实施方案229-239中任一项所述的方法，其进一步包括：如果所述受试者在所述治疗后只是展现出部分反应(PR)和/或在起始给予所述T细胞疗法和/或所述抗PD-L1抗体或片段后三个月只是展现出PR，则在一个或多个另外的28天周期中给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段。
241.根据实施方案240所述的方法，其中在所述一个或多个另外的28天周期中的每一个中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段以900mg至2000mg的总剂量量，任选地以为或约1500mg的总剂量量给予。
242.根据实施方案183-241中任一项所述的方法，其中给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的总持续时间不超过12个月。
243.根据实施方案183-242中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后大于21天起始的。
244.根据实施方案173-243中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在这样的时间起始的，所述时间是在以下各项时或之后，任选地以下各项之后立即或在以下各项之后1至3天内：
(i)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平；
(ii)在所述血液中已经可检测到之后，在所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量不可检测或减少了，任选地与在给予所述T细胞疗法之后的在前时间点相比减少了；
(iii)所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量减少了或减少超过在起始给予所述T细胞疗法之后在所述受试者的血液中可检测到的所述T细胞疗法的峰值或最大细胞数量的1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多；
(iv)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平之后的时间，在来自所述受试者的血液中可检测到的所述细胞的细胞数量或源自所述细胞的细胞数量为所述受试者的血液中的总外周血单核细胞(PBMC)的少于10％、少于5％、少于1％或少于0.1％；
(v)所述受试者在用所述T细胞疗法治疗之后展现出疾病进展和/或在缓解后已经复发；和/或
(iv)与在给予所述细胞之前或之后以及在起始给予所述抗PD-L1抗体之前的时间的肿瘤负荷相比，所述受试者展现出增加的肿瘤负荷。
245.根据实施方案183-244中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在如下时间时或在如下时间内起始的：起始给予所述T细胞疗法之后29天、36天、43天或50天。
246.根据实施方案183-245中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后从或从约22天至36天起始的。
247.根据实施方案183-246中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后29天或约29天起始的。
248.根据实施方案183-247中任一项所述的方法，其中所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后43天或约43天起始的。
249.根据实施方案183-248中任一项所述的方法，其中在给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段和/或开始所述第一28天周期的时间，所述受试者未展现出给予所述T细胞疗法后的严重毒性。
250.根据实施方案249所述的方法，其中：
所述严重毒性是严重细胞因子释放综合征(CRS)，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级CRS；和/或
所述严重毒性是严重神经毒性，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级神经毒性。
251.根据实施方案183-250中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段特异性结合至PD-L1的细胞外结构域。
252.根据实施方案183-251中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段是MEDI4736(德瓦鲁单抗)、MDPL3280A(阿特珠单抗)、YW243.55.S70、MDX-1105(BMS-936559)、LY3300054或MSB0010718C(阿维单抗)，或者是或包含前述任一项的抗原结合片段或区域。
253.根据实施方案183-252中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段是MEDI4736(德瓦鲁单抗)，或者是或包含其抗原结合片段或区域。
254.根据实施方案183-253中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段是MEDI4736(德瓦鲁单抗)。
255.根据实施方案171-254中任一项所述的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
256.根据实施方案255所述的方法，其中在给予所述T细胞疗法时或即将给予所述T细胞疗法的时间之前，所述受试者在用针对所述NHL的一种或多种先前疗法治疗之后在缓解后已经复发，或对于所述一种或多种先前疗法变为难治性的，所述一种或多种先前疗法任选地为除了表达所述CAR的细胞的另一剂量之外的一种或两种先前疗法，任选地其中所述一种或多种先前疗法是或包含靶向CD20的药剂或蒽环类抗生素。
257.根据实施方案255或实施方案256所述的方法，其中所述NHL包括侵袭性NHL；弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；DLBCL-NOS，任选地转化型惰性；EBV阳性DLBCL-NOS；富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤；原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)；滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)；和/或高级别B细胞淋巴瘤伴有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双/三打击)。
258.根据实施方案255-257中任一项所述的方法，其中所述NHL包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；DLBCL-NOS；转化型惰性DLBCL-NOS；3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)；和/或高级别B细胞淋巴瘤伴有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双/三打击)。
259.根据实施方案171-258中任一项所述的方法，其中所述受试者被或已经被鉴定为具有小于或等于1的东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态。
260.根据实施方案171-199中任一项所述的方法，其中所述靶抗原是B细胞抗原。
261.根据实施方案171-260中任一项所述的方法，其中所述靶抗原是CD19。
262.根据实施方案261所述的方法，其中所述嵌合抗原受体(CAR)包含特异性结合至靶抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域。
263.根据实施方案262所述的方法，其中所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链的信号传导结构域。
264.根据实施方案262或实施方案263所述的方法，其中所述嵌合抗原受体(CAR)进一步包含共刺激信号传导区域，所述共刺激信号传导区域包含共刺激分子的细胞质信号传导结构域。
265.根据实施方案264所述的方法，其中所述共刺激信号传导区域包含CD28或4-1BB的细胞质信号传导结构域。
266.根据实施方案264或实施方案265所述的方法，其中所述共刺激结构域是或包含4-1BB的细胞质信号传导结构域。
267.根据实施方案171-266中任一项所述的方法，其中：
所述CAR包含对CD19具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选地是或包含4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域，并且任选地进一步包含在所述跨膜结构域与所述scFv之间的间隔子。
268.根据实施方案171-266中任一项所述的方法，其中所述CAR按顺序包含对CD19具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选地是或包含4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域。
269.根据实施方案171-266中任一项所述的方法，其中所述CAR按顺序包含对CD19具有特异性的scFv、间隔子、跨膜结构域、任选地是4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域。
270.根据实施方案267或实施方案269所述的方法，其中：
所述间隔子是多肽间隔子，所述多肽间隔子：(a)包含全部或部分免疫球蛋白铰链或其修饰形式或由其组成，或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，(b)包含全部或部分免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或其修饰形式或由其组成，和/或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，或(c)长度为或为约12个氨基酸和/或包含全部或部分免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或其修饰形式或由其组成。
271.根据实施方案267、269和270中任一项所述的方法，其中所述间隔子包含式X1PPX2P(SEQ ID NO:58)或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸。
272.根据实施方案267和269-271中任一项所述的方法，其中所述间隔子包含以下各项或由其组成：SEQ ID NO:1的序列，由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34编码的序列，或前述任一项的变体，所述变体具有与前述任一项的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性。
273.根据实施方案267和269-272中任一项所述的方法，其中所述间隔子包含SEQID NO:1的序列。
274.根据实施方案264-273中任一项所述的方法，其中共刺激分子的所述细胞质信号传导结构域包含SEQ ID NO:182或其变体，所述变体具有与SEQ ID NO:182的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性。
275.根据实施方案262-274中任一项所述的方法，其中源自含有ITAM的初级信号传导分子的所述细胞质信号传导结构域包含具有与其的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的SEQ ID NO:13或14或15。
276.根据实施方案262-275中任一项所述的方法，其中所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)的CDRL1序列、SRLHSGV(SEQ IDNO:36)的CDRL2序列和/或GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的CDRL3序列以及DYGVS(SEQ ID NO:38)的CDRH1序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的CDRH2序列和/或YAMDYWG(SEQ IDNO:40)的CDRH3序列。
277.根据实施方案262-276中任一项所述的方法，其中所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含FMC63的CDRL1序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列。
278.根据实施方案262-277中任一项所述的方法，其中所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区。
279.根据实施方案262-278中任一项所述的方法，其中所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含含有在SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列的VH区。
280.根据实施方案262-279中任一项所述的方法，其中所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含含有在SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的VL区。
281.根据实施方案262-270中任一项所述的方法，其中所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv按顺序包含任选地包含在SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列的VH、任选地包含SEQ ID NO:59的接头和任选地包含在SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的VL，和/或所述scFv包含柔性接头和/或包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列。
282.根据实施方案262-281中任一项所述的方法，其中所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含在SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列。
283.根据实施方案171-282中任一项所述的方法，其中基因工程化T细胞的所述剂量包含从或从约1x105至5x108个总CAR表达T细胞、1x106至2.5x108个总CAR表达T细胞、5x106至1x108个总CAR表达T细胞、1x107至2.5x108个总CAR表达T细胞、5x107至1x108个总CAR表达T细胞，每个都包含端值。
284.根据实施方案171-283中任一项所述的方法，其中基因工程化T细胞的所述剂量包含至少或至少约1x105个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x105个CAR表达细胞、至少或至少约5x105个CAR表达细胞、至少或至少约1x106个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x106个CAR表达细胞、至少或至少约5x106个CAR表达细胞、至少或至少约1x107个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x107个CAR表达细胞、至少或至少约5x107个CAR表达细胞、至少或至少约1x108个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x108个CAR表达细胞、或者至少或至少约5x108个CAR表达细胞。
285.根据实施方案171-284中任一项所述的方法，其中基因工程化T细胞的所述剂量包含为或约5x107个CAR表达细胞。
286.根据实施方案171-284中任一项所述的方法，其中基因工程化T细胞的所述剂量包含为或约1x108个CAR表达细胞。
287.根据实施方案171-284中任一项所述的方法，其中基因工程化T细胞的所述剂量包含为或约1.5x108个CAR表达细胞。
288.根据实施方案171-287中任一项所述的方法，其中肠胃外，任选地静脉内给予基因工程化T细胞的所述剂量。
289.根据实施方案288所述的方法，其中所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。
290.根据实施方案171-289中任一项所述的方法，其中所述T细胞对于所述受试者而言是自体的。
291.根据实施方案171-289中任一项所述的方法，其中所述细胞对于所述受试者而言是同种异体的。
292.根据实施方案171-291中任一项所述的方法，其中基因工程化T细胞的所述剂量包含表达所述CAR的CD4+ T细胞和表达所述CAR的CD8+ T细胞，并且所述剂量的给予包括给予多种单独的组合物，所述多种单独的组合物包括包含所述CD4+ T细胞和所述CD8+ T细胞中的一种的第一组合物以及包含所述CD4+ T细胞或所述CD8+ T细胞中的另一种的第二组合物。
293.根据实施方案292所述的方法，其中：
所述第一组合物和所述第二组合物的给予相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时，或者其中所述第一组合物的给予和所述第二组合物的给予在同一天进行、相隔约0至约12小时、相隔约0至约6小时或相隔约0至约2小时进行；和/或
所述第一组合物的给予的起始和所述第二组合物的给予的起始相隔约1分钟至约1小时或相隔约5分钟至约30分钟进行。
294.根据实施方案292或实施方案293所述的方法，其中所述第一组合物和所述第二组合物的给予相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟。
295.根据实施方案122-294中任一项所述的方法，其中所述第一组合物包含所述CD4+ T细胞。
296.根据实施方案122-294中任一项所述的方法，其中所述第一组合物包含所述CD8+ T细胞。
297.根据实施方案122-296中任一项所述的方法，其中所述第一化合物是在所述第二组合物之前给予。
299.根据实施方案171-297中任一项所述的方法，其中在所述给予之前，已经用淋巴细胞清除疗法对所述受试者进行预调理，所述淋巴细胞清除疗法包括给予氟达拉滨和/或环磷酰胺。
300.根据实施方案171-299中任一项所述的方法，其进一步包括，在即将给予之前，向所述受试者给予淋巴细胞清除疗法，所述淋巴细胞清除疗法包括给予氟达拉滨和/或环磷酰胺。
301.根据实施方案299或实施方案300所述的方法，其中所述淋巴细胞清除疗法包括每天给予约200-400mg/m2，任选地为或约300mg/m2并包含端值的环磷酰胺，和/或约20-40mg/m2，任选地30mg/m2的氟达拉滨，持续2-4天，任选地持续3天，或者其中所述淋巴细胞清除疗法包括给予约500mg/m2的环磷酰胺。
302.根据实施方案299-301中任一项所述的方法，其中：
所述淋巴细胞清除疗法包括每天给予为或约300mg/m2的环磷酰胺和约30mg/m2的氟达拉滨，持续3天；和/或
所述淋巴细胞清除疗法包括每天给予为或约500mg/m2的环磷酰胺和约30mg/m2的氟达拉滨，持续3天。
303.根据实施方案171-302中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
304.一种试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；
(b)检查点抑制剂，所述检查点抑制剂为能够阻断免疫检查点途径蛋白的抗体或其抗原结合片段，任选地其中其检查点抑制剂被配制为一个或多个单独剂量；以及
(c)用于向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予所述T细胞疗法和/或所述检查点抑制剂的说明书，其中所述说明书规定根据实施方案171-303中任一项所述的方法给予所述T细胞疗法和/或所述检查点抑制剂。
305.一种试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；以及
(b)用于向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予所述T细胞疗法的说明书，其中所述说明书规定在给予所述T细胞疗法之后，所述受试者将被给予检查点抑制剂，所述检查点抑制剂为能够阻断免疫检查点途径蛋白的抗体或其抗原结合片段，其中所述说明书规定根据实施方案171-303中任一项所述的方法给予所述T细胞疗法和/或所述检查点抑制剂。
306.一种试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)检查点抑制剂，所述检查点抑制剂为能够阻断免疫检查点途径蛋白的抗体或其抗原结合片段，任选地其中其检查点抑制剂被配制为一个或多个单独剂量；以及
(b)用于向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予所述检查点抑制剂的说明书，其中所述说明书规定在起始给予T细胞疗法之后给予所述检查点抑制剂，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原，其中所述说明书规定根据实施方案171-303中任一项所述的方法给予所述T细胞疗法和/或所述检查点抑制剂。
VIII.实施例
以下实施例被包括在内仅用于说明目的，并不旨在限制本发明的范围。
实施例1对在PD-L1表达细胞的存在下CAR表达T细胞中PD-1表达的抗原特异性刺 激的评估
评估含有工程化为表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞的T细胞组合物在刺激条件的存在下孵育之后的PD-1表达。
含有抗CD19 CAR表达T细胞的T细胞组合物是通过如下过程从来自三名健康人成年供体的白细胞单采术样品产生的，所述过程包括从样品中基于免疫亲和力选择T细胞(包括CD4+和CD8+细胞)，以针对CD4+和CD8+ T细胞进行富集，从而产生分别富集CD8+和CD4+细胞的两种组合物。
将富集CD4+和CD8+组合物的细胞用抗CD3/抗CD28珠单独激活，并用编码抗CD19CAR的载体进行慢病毒转导。抗CD19 CAR含有源自鼠抗体的抗CD19 scFv(源自FMC63的可变区)、免疫球蛋白来源的间隔子、源自CD28的跨膜结构域、源自4-1BB的共刺激区域、和CD3-ζ细胞内信号传导结构域。病毒载体中的表达构建体进一步含有编码截短的受体的序列，所述序列用作CAR表达的替代标记；通过T2A核糖体跳跃序列与CAR序列分开。然后在刺激试剂的存在下分别孵育转导的群体用于细胞扩增。将扩增的CD8+和CD4+细胞分别配制并低温保存，并且储存。
将来自每名供体的低温保存的CD4+和CD8+抗CD19 CAR表达细胞解冻，以大约1:1CAR+CD4+:CD8+比率合并，并且将所产生的CAR+ T细胞组合物的5×104个细胞铺板于96孔平底板中。将用人CD19转导的靶K562细胞(K562.CD19)与CAR+ T细胞以下述3种不同的效应细胞与靶细胞(E:T)比率在37℃，5％CO2下共孵育过夜：5:1(1×104个细胞)、2.5:1(2×104个细胞)和1.25:1(4×104个细胞)。
在孵育后，使用识别转导细胞的抗体以及对CD3、CD4、CD8和PD-1具有特异性的抗体，通过流式细胞术分析来自所有条件的CAR+ T细胞的CAR表达。通过该测定认为呈CAR+(转导)的T细胞的百分比在供体之间以及在CD4+与CD8+ T细胞之间变化。CD4+ T细胞的范围为70.4％-80.5％CAR+，并且CD8+ T细胞的范围为47.5％-52.9％CAR+。在解冻后立即，CD3+CD4+和CD3+CD8+抗CD19 CAR表达细胞显示PD-1的细胞表面表达(时间0)，其在通过暴露于K562.CD19细胞进行24小时抗原暴露之后上调(图1)。观察到，CD4+和CD8+抗CD19 CAR表达细胞中PD-1响应于与K562细胞一起培养而上调的幅度与培养物中存在的靶细胞的相对数量相关联，如通过与5:1效应细胞与靶细胞比率相比，对于1.25:1效应细胞与靶细胞比率增加的PD-1表达(阳性细胞的MFI)所证明(图2)。
此外，在刺激后每天分析2.5:1E:T(CAR-T:K562.CD19)比率细胞培养物中的PD-1表达，持续4天，以监测PD-1表达的动力学。如图3A所示，在用抗原表达(K562.CD19)细胞单一刺激后的4天时段内，对PD-1表达呈阳性的抗CD19 CAR表达细胞的百分比是稳定的。然而，如通过针对PD-1染色的平均荧光强度确定的，CD4+和CD8+细胞二者的表面上表达的PD-1的量在刺激后一天迅速下降，截至第4天表面表达水平回到基线(图3B)。
实施例2关于抗CD19 CAR表达细胞的活性对抗PD-L1抗体的存在或不存在的评价
进行了研究以评估PD-1/PD-L1接合是否抑制指示抗CD19 CAR表达细胞活性的各种读出，以及在示例性抗PD-L1抗体德瓦鲁单抗的存在下是否可以阻断此类作用。在基本上如实施例1中所述与靶细胞共培养24小时后，在从三名健康供体产生的抗CD19 CAR表达T细胞组合物中评估细胞因子产生和T细胞激活标记的表达，所述靶细胞是K562.CD19细胞或被转导以表达人CD19和PD-L1的K562细胞(K562.CD19.PDL1)。在德瓦鲁单抗(20μg/mL)的存在或不存在下进行孵育。将同种型对照用作对照。
A.细胞因子产生
孵育后，收获来自每种条件的上清液并分析其细胞因子产生。
如图4A至图4C所示，在所有三种抗CD19 CAR表达供体细胞制剂中，在5:1至1.25:1的E:T比率下，与缺少PD-L1表达的K562.CD19细胞相比，在K562.CD19.PDL1细胞的存在下，IFNγ、IL-2和TNF-α细胞因子产生减少。观察到在源自不同供体的细胞组合物中，德瓦鲁单抗的存在恢复了细胞因子产生水平(图4A、图4B和图4C)，这表明PD-L1介导的对抗原诱导的IFN-γ、IL-2和TNF-α产生的抑制作用在德瓦鲁单抗的存在下得以恢复。
B.T细胞激活标记的表达
通过流式细胞术在CD4+和CD8+抗CD19 CAR表达细胞上评估PD-1和T细胞激活标记CD25和CD69的表达，所述细胞已经在德瓦鲁单抗的存在或不存在下与CD19+靶细胞(K562.CD19和K562.CD19.PDL1)一起孵育24小时。当对于与抗原表达K562.CD19细胞一起培养24小时的CAR表达细胞所观察到的PD-1表达增加未在其中靶细胞表达PD-L1(K562.CD19.PDL1靶细胞)的培养物中观察到时，这表明抗原诱导的抗CD19 CAR表达细胞上PD-1表达的增加受到靶细胞(K562.CD19.PDL1)上PD-L1的存在的抑制。参见图5A至图5C。如图所示，观察到德瓦鲁单抗的添加导致与PD-L1表达(K562.CD19.PDL1)靶细胞共培养的抗CD19 CAR表达细胞上PD-1表达水平的增加。在一些实施方案中，在PD-L1表达靶细胞的存在下PD-1表达的减少(或PD-1表达增加的抑制)可能是由于以下所致或与以下相关：PD-L1介导的对激活反应的抑制和/或受体在与其配体接合后脱落或内化。
相比于与不表达PD-L1的K562.CD19靶细胞的共培养，当将抗CD19 CAR表达细胞与PD-L1表达(K562.CD19.PDL1)靶细胞共培养时，观察到抗CD19CAR表达细胞上的CD25表达增加。相比于与不表达PD-L1的K562.CD19靶细胞的共培养，当与K562.CD19.PDL1靶细胞一起孵育时，CD4+而非CD8+抗CD19 CAR表达T细胞展现出早期T细胞激活标记CD69的表达降低，特别是在1.25:1E:T比率下。观察到在抗CD19 CAR表达细胞与K562.CD19.PDL1共培养期间，德瓦鲁单抗的存在可以逆转在PD-L1表达靶细胞的存在下所观察到的CD69表达的降低。数据表明，通过拮抗PD-L1，如通过使用抗PD-L1抗体，可以阻断PD-L1对激活标记的表面表达的作用。
实施例3抗CD19 CAR表达细胞在体内的再扩增
基本上如实施例1中所述产生抗CD19 CAR表达细胞组合物，并且将其给予至患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者。在给予CAR表达T细胞(d＝0)之前，将受试者每天用30mg/m2的氟达拉滨治疗，持续3天，并且每天用300mg/m2的环磷酰胺治疗，持续3天。在静脉内给予之前将低温保存的细胞组合物解冻。通过给予以大约1:1的目标比率给予的经配制CD4+CAR表达细胞群和经配制CD8+CAR表达群体，将治疗性T细胞剂量作为定义的细胞组合物来给予。
在d＝0时，通过静脉内输注以单剂量时间表起始对患有化学难治性转化型弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(生发中心亚型，伴有BCL2重排和多个拷贝的MYC和BCL6)的受试者的治疗。给予的每个剂量包括5x107个CAR表达T细胞(目标1:1CD4+:CD8+比率)。在某些时间点测量的外周血中CD3+/CAR+、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+ T细胞的数量示出在图6中。受试者先前已经用五个先前治疗线进行治疗，并且对于所述先前治疗线是难治性的，所述先前治疗线包括剂量调整的依托泊苷、多柔比星和环磷酰胺与长春新碱和泼尼松加利妥昔单抗(DA-EPOCH-R)以及来自8/8HLA匹配的无关供体的中等强度的同种异体干细胞移植。在同种异体干细胞移植后且接受抗CD19 CAR表达T细胞之前，受试者在所有血液谱系中显示100％供体嵌合状态，已经停止进行免疫抑制疗法，并且未患有移植物抗宿主病(GVHD)。在给予抗CD19CAR表达T细胞之前，受试者患有通过正电子发射断层成像和计算机断层成像(PET-CT)观察到的且通过磁共振成像(MRI)确认的耳廓周肿块和右颞叶脑病灶。
在接受抗CD19 CAR表达T细胞治疗之后，如通过PET-CT和脑MRI所示，受试者在输注后28天实现完全反应(CR)，并且没有观察到神经毒性或CRS的体征。输注CAR表达T细胞后三个月，在该受试者中记录到耳廓周肿块的复发，并进行切开式活检。在活检后，在没有进行进一步治疗的情况下，可见肿瘤消退。如图6所示，药代动力学分析显示外周血中CAR-T细胞的显著再扩增(达到高于观察到的初始扩增的水平，在输注后约113天观察到峰值水平)，这与肿瘤消退是一致的。然后受试者继续实现第二次CR，如通过活检后一个月的再分期PET-CT所证实，并且在CAR表达T细胞输注后6个月仍处于CR中。对受试者的进一步评估显示，CNS反应是持久的且受试者在12个月时仍处于CR中。
结果与以下结论一致：可以在功能性或活性CAR+ T细胞减少或损失和/或对CAR-T细胞疗法的抗肿瘤反应后的复发后，在体内起始CAR表达T细胞的再扩增和激活。此外，在初始CAR+ T细胞输注后较晚的体内再扩增后，CAR+ T细胞能够重新发挥抗肿瘤活性。所述结果支持，CAR+ T细胞再扩增和激活可在体内被触发，并且再激活或加强CAR+ T细胞的方法可以进一步扩大其功效。
实施例4对用抗CD19 CAR表达细胞治疗后活检样品上的PD-L1表达的评估
在CAR表达细胞的给予之前和/或之后从受试者收集的肿瘤活检中评估PD-L1的表达。
基本上如实施例1中所述产生抗CD19 CAR表达细胞组合物。从用治疗性CAR表达T细胞组合物的患有复发性或难治性(R/R)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或套细胞淋巴瘤(MCL)的选择受试者中收集肿瘤活检。在给予CAR表达T细胞之前(治疗前)和在给予之后7至20天(治疗后)获得肿瘤活检。检查了来自总计28名受试者(25名DLBCL和3名MCL)的43个活检(26个治疗前；17个治疗后和15个匹配对)的结果。
使用对编码抗CD19 CAR的mRNA具有特异性的原位杂交(ISH)探针定量CAR表达T细胞在肿瘤活检中的浸润。使用多重免疫荧光(IF)测定对CAR表达T细胞、非CAR T细胞和B细胞计数，所述多重免疫荧光测定检测CAR表达细胞的细胞表面替代标记以及CD4、CD8、CD19、CD20和PD-L1。将肿瘤活检切片用苏木精和伊红(H&E)染色，并评估组织质量和肿瘤鉴定。使用图像分析软件分析免疫荧光图像。
在治疗后时间点(给予后7至20天)，观察到CD4+和CD8+CAR T细胞都浸润了肿瘤区域。
PD-L1的表达在治疗前(0.16％；0-56％)和治疗后(3.3％；0-65％)在受试者之间变化。观察到匹配的活检中CD8+细胞的治疗后增加与PD-L1(R2＝0.61)表达的治疗后增加相关。该结果与以下结论一致：在评估时CD8+CAR+细胞的浸润可能表明此类细胞的存在和/或活性可导致肿瘤微环境(TME)因子的上调。在一些实施方案中，靶向这些因子(例如靶向PD-L1)的疗法(如在给予CAR-T细胞时或之后给予的那些疗法)可以在CAR+ T细胞给予后增强一种或多种治疗结果或其持续时间。
实施例5将抗CD19 CAR表达细胞与免疫检查点抑制剂(例如抗PD-L1抗体)组合给 予至患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者
基本上如实施例1中所述产生抗CD19 CAR表达T细胞组合物，并且将其给予至患有复发性/难治性(R/R)B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者。在一些方面，将此类组合物与抗PD-L1抗体组合给予至给此类受试者，所述抗PD-L1抗体在给予CAR表达T细胞组合物之后给予。选择用于治疗的受试者组包括患有以下疾病的受试者：弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；从头的或从惰性淋巴瘤转化的(NOS)；高级别B细胞淋巴瘤伴有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双/三打击淋巴瘤)；3b级滤泡性淋巴瘤(FLG3B)；富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤；爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)阳性DLBCL、NOS；和原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤(PMBCL)。经治疗的受试者在至少两个先前治疗线(包括靶向CD20的药剂和蒽环类抗生素)后已经复发或对于所述先前疗法是难治性的，并且在筛选时具有小于或等于1的东部肿瘤协作组(ECOG)得分。
在输注CAR+ T细胞之前，使受试者接受使用氟达拉滨(flu，30mg/m2)和环磷酰胺(Cy，300mg/m2)的淋巴细胞清除疗法持续三(3)天。使受试者在淋巴细胞清除之后2-7天接受CAR表达T细胞。向受试者给予如下剂量的CAR表达T细胞(每个单一剂量分别以1:1的CD4+CAR表达T细胞与CD8+CAR表达T细胞的比率经由单独输注)：5x107个总CAR表达T细胞的单一剂量(DL1)或1x108个CAR表达T细胞的单一剂量(DL2)。
将示例性抗PD-L1抗体德瓦鲁单抗以包括一个或多个28天周期的给药时间表以静脉内(IV)输注的形式在CAR-T细胞输注后给予至受试者，以产生如基于稳态曲线下面积与通过以1500mg Q4W的剂量(如10mg/kg Q2W或20mg/kg Q4W)给予德瓦鲁单抗所实现的相同或相似的暴露水平。据确定，在28天的周期中，预计375mg每周一次(Q1W)的剂量等同于5mg/kg Q1W的剂量，并且这种剂量和750mg每两周一次(Q2W)的剂量相当于10mg/kg Q2W和20mg/kg Q4W的剂量。具体地，据观察，在一个或多个28天周期期间更频繁地给予较低剂量的给药方法(如375mg Q1W持续两周的剂量、750mg Q2W的剂量和1500mg Q4W的剂量，与1500mg Q4W的两个剂量相比)导致相似的生物学PD-L1的占有率，但半衰期较短。不希望受到理论的束缚，在一些实施方案中，这种较短的半衰期可以导致给予后不良影响或不希望的作用如毒性的风险较低。
在接受DL1或DL2的抗CD19 CAR+ T细胞的一些受试者中，在CAR-T细胞输注后第29天(±7天)开始以如下方式给予德瓦鲁单抗：以375mg Q1W的剂量持续2周(例如在第29天和第36天)，然后是750mg Q2W的一个剂量(例如，在第43天)，之后1500mg Q4W给予两个剂量(例如，在第57天和第85天)。
在一些情况下，在已经例如以DL1接受了抗CD19 CAR+ T细胞的受试者中，给予涉及以较低剂量和/或以延迟剂量给予德瓦鲁单抗的替代性给药方案。德瓦鲁单抗的示例性较低给药时间表包括在CAR-T细胞输注后第29天(±7天)开始以如下方式给予：以225mgQ1W的剂量持续2周(例如在第29天和第36天)，然后375mg Q1W持续2周(例如，在第43天和第50天)，然后是750mg Q2W的两个剂量(例如，在第57天和第71天)，之后1500mg Q4W给予一个剂量(例如在第85天)。德瓦鲁单抗的示例性延迟给药时间表包括在CAR-T细胞输注后第43天(±7天)开始以如下方式给予：以375mg Q1W的剂量持续2周(例如在第43天和第50天)，然后是750mg Q2W的两个剂量(例如，在第57天和第71天)，之后1500mg Q4W给予一个剂量(例如在第85天)。
基于在治疗前的基线时和在治疗后的不同时间通过正电子发射断层扫描(PET)和/或计算机断层扫描(CT)或磁共振成像(MRI)扫描进行的放射摄影术肿瘤评估，评估对治疗的反应(例如，基于卢加诺分类，参见例如Cheson等人,(2014)JCO 32(27):3059-3067)。还评估了治疗后的治疗紧急不良事件(TEAE)的存在或不存在。还评估并监测受试者的神经毒性(神经系统并发症，包括以下症状：意识错乱、失语症、脑病、肌阵挛癫痫、惊厥、嗜睡和/或精神状态改变)，根据国家癌症研究所—常见毒性标准(CTCAE)量表4.03版(NCI-CTCAEv4.03)，按1-5量表评级。常见毒性标准(CTCAE)量表4.03版(NCI-CTCAE v4.03)。参见美国卫生和公共服务部的不良事件通用术语(CTCAE)第4版，公开于：2009年5月28日(v4.03：2010年6月14日)；和Guido Cavaletti&Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6,657-666(2010年12月)。还确定并监测细胞因子释放综合征(CRS)，并基于严重性进行评级。参见Lee等人,Blood.2014；124(2):188-95。还评估受试者在用德瓦鲁单抗治疗之前和之后的抗CD19 CAR+ T细胞的PK和德瓦鲁单抗的PK。
在三个28天周期之后(例如在3个月之后)，停止德瓦鲁单抗的给药，除非受试者实现部分反应(PR)，在这种情况下，可以继续德瓦鲁单抗的其他周期直到疾病进展，总持续时间长达12个月。
实施例6在抗CD19 CAR表达细胞与免疫检查点抑制剂(例如，抗PD-L1抗体)组合给 予之后对患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者中的反应、安全性和药代动 力学的评估
大体如以上实施例5中所述，向患有复发性/难治性(R/R)B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者给予含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞的治疗性CAR+ T细胞组合物和示例性抗PD-L1抗体德瓦鲁单抗。在正在进行的向患有R/R NHL受试者给予这种组合疗法的临床研究中，通过特定的时间点描述结果。
A.受试者和治疗
在研究中包括了成人受试者，包括患有以下疾病的那些：DLBCL NOS，包括转化型惰性NHL；高级别B细胞淋巴瘤伴有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双/三打击淋巴瘤)；FLG3B；富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤；EBV阳性DLBCL,NOS；或PMBCL(如通过正电子发射断层扫描(PET)所观察到的)，所述成人受试者在至少两个先前治疗线(包括靶向CD20的药剂和蒽环类抗生素)后复发或对于所述先前治疗线是难治性的，并且具有小于或等于到1的ECOG得分。在本研究中招募的受试者中，一些受试者患有DLBCL NOS；并且一些受试者患有复发性疾病。不基于先前同种异体造血干细胞移植(HSCT)(如果HSCT在白细胞单采术前超过90天进行)，或者不基于接受先前靶向CD19的CAR+ T细胞疗法或抗PD-L1抗体来排除受试者。
受试者接受使用氟达拉滨和环磷酰胺的淋巴细胞清除疗法三(3)天，然后给予5x107个总CAR+ T细胞的单一剂量(DL1；每个单一剂量分别以1:1的CD4+CAR+ T细胞与CD8+CAR+ T细胞的比率经由单独给予)或1x108个CAR+ T细胞的单一剂量(DL2)。在CAR+ T细胞给予后第29天(±7天)开始向受试者以如下方式给予德瓦鲁单抗：以375mg Q1W的剂量给予两个剂量(例如，在第29天和第36天)，然后是750mg Q2W的一个剂量(例如，在第43天)，之后1500mg Q4W给予两个剂量(例如在第57天和第85天)，例外是在第43天接受了第一剂量的德瓦鲁单抗的一名受试者，以及最后的1500mg剂量被延迟了8天、9天或44天的3名受试者。如以上实施例5中所述评估反应、治疗紧急不良事件(TEAE)和细胞因子释放综合征(CRS)或神经系统事件(NE)的发生率。通过流式细胞术在给予CAR+ T细胞后的不同时间点(例如，在第1、2、4、8、11、15、22、29、36、43、50、57、71、85、180、270或365天)评估基于外周血中CAR+ T细胞的数量的药代动力学参数。
在分析时间点，总共十一(11)名受试者已接受了CAR+ T细胞和至少一个剂量的德瓦鲁单抗。八(8)名受试者接受了DL1的CAR+ T细胞，并且那些受试者中的六(6)名受试者接受了全部5个剂量的德瓦鲁单抗；三(3)名受试者接受了DL2的CAR+ T细胞，并且那些受试者中的两(2)名受试者接受了全部5个剂量的德瓦鲁单抗。
B.反应和安全性
在分析时间点，在给予单独的或与德瓦鲁单抗组合的CAR+ T细胞后，未观察到剂量限制性毒性。
在给予CAR+ T细胞之后一个月(在或约在第一次给予德瓦鲁单抗的时间)，总体反应率(ORR)为91％(10/11；DL1，7/8和DL2，3/3)，并且64％的受试者(7/11)实现了完全反应(CR)(DL1，5/8；DL2，2/3)。在给予CAR+ T细胞之后的第3个月，一名在第1个月具有PR的受试者在第3个月转变为CR。在所治疗的受试者中，在给予CAR+ T细胞之后的第6个月评价6名受试者，并且那些受试者中的四(4)名受试者在6个月时实现了完全反应。一名这样的受试者在第1个月和第3个月具有PR，但在第6个月转变为CR。
C.药代动力学评估和反应
基于在给予CAR+ T细胞后的不同时间点测量的受试者的外周血中CAR+ T细胞的数量来评估药代动力学。在三名示例性受试者中，观察到血液中CAR+ T细胞的数量在第57天左右从初始扩增减少，但是在首次1500mg剂量的德瓦鲁单抗之后观察到了增加(例如，在约第57天与第85天之间)。在这三名受试者中的一名受试者中，血液中CAR+ T细胞的数量在第57天时不可检测，但在第85天增加，由此使得所述数量大于该受试者中在第8天或第22天血液中CAR+ T细胞的数量。在所述三名受试者中的另一名受试者中，观察到CAR+ T细胞扩增直到第6个月(在该受试者中，德瓦鲁单抗的最终1500mg剂量被延迟到第129天)，在该时间点所述数量大于第2个月(例如，第57天)的数量的超过10倍。在不同的示例性受试者中，从第22天开始观察到高数量的CAR+ T细胞，而在第57天左右未出现显著降低，并且所述高数量通常在第85天得以维持。观察到在德瓦鲁单抗的最终剂量后展现出血液中CAR+ T细胞的增加或高CAR+ T细胞的维持的这四名示例性受试者在第3个月至少具有部分反应，并且这些受试者是在第6个月实现了完全反应的4名受试者，包括从PR转变为CR的受试者。
D.结论
在正在进行的研究中的该时间点处，观察到如所述的示例性免疫检查点抑制剂抗PD-L1抗体德瓦鲁单抗与CD19特异性CAR+ T细胞的组合的给予展现出具有3级或更高级CRS和神经系统事件的低发生率的安全性概况，以及有利的反应结果。在一些受试者中，在给予德瓦鲁单抗后观察到药代动力学概况改善，并且这种改善还与延长的CR相关。所述结果与示例性免疫检查点抑制剂抗PD-L1抗体德瓦鲁单抗与抗CD19 CAR+ T细胞组合的特定给药时间表的可接受的安全性概况一致。所述结果也与如该组受试者中所示的CAR+ T细胞的药代动力学改善(包括延长的细胞持久性)和临床反应一致。
本发明并不旨在限于具体公开的实施方案的范围，所提供的实施例例如是为了说明本发明的各个方面。根据本文的描述和传授，对组合物和方法的各种修改将变得清楚。可以在不背离本公开文本的真实范围和精神的情况下实践此类变化，并且此类变化旨在落入本公开文本的范围内。
序列
Figure BDA0002702674000002241
Figure BDA0002702674000002251
Figure BDA0002702674000002261
Figure BDA0002702674000002271
Figure BDA0002702674000002281
Figure BDA0002702674000002291
序列表
<110> Celgene Corporation
FRANKEL, Stanley
HASSKARL, Jens
MANZKE, Oliver
<120> 使用过继细胞疗法和检查点抑制剂的组合疗法
<130> 735042015640
<140> 尚未分配
<141> 同时随同提交
<150> 62/624,802
<151> 2018-01-31
<160> 61
<170> 用于Windows 4.0版的FastSEQ
<210> 1
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 间隔子（IgG4铰链）
<400> 1
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 2
<211> 36
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> 间隔子（IgG4铰链）
<400> 2
gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36
<210> 3
<211> 119
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 铰链-CH3间隔子
<400> 3
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg
1 5 10 15
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
20 25 30
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
35 40 45
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
50 55 60
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
65 70 75 80
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
85 90 95
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
100 105 110
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
115
<210> 4
<211> 229
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 铰链-CH2-CH3间隔子
<400> 4
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 5
<211> 282
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> IgD-铰链-Fc
<400> 5
Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala
1 5 10 15
Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala
20 25 30
Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys
35 40 45
Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro
50 55 60
Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln
65 70 75 80
Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val
100 105 110
Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly
115 120 125
Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn
130 135 140
Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro
145 150 155 160
Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys
165 170 175
Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser
180 185 190
Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu
195 200 205
Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro
210 215 220
Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser
225 230 235 240
Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr
245 250 255
Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg
260 265 270
Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His
275 280
<210> 6
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> T2A
<400> 6
Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg
20
<210> 7
<211> 357
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> tEGFR
<400> 7
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly
20 25 30
Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe
35 40 45
Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala
50 55 60
Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu
65 70 75 80
Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile
85 90 95
Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu
100 105 110
Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala
115 120 125
Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu
130 135 140
Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr
145 150 155 160
Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys
165 170 175
Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly
180 185 190
Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu
195 200 205
Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys
210 215 220
Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu
225 230 235 240
Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met
245 250 255
Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala
260 265 270
His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val
275 280 285
Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His
290 295 300
Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro
305 310 315 320
Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala
325 330 335
Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly
340 345 350
Ile Gly Leu Phe Met
355
<210> 8
<211> 27
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> CD28
<300>
<308> UniProt P10747
<309> 1989-07-01
<400> 8
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 9
<211> 66
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> CD28
<300>
<308> UniProt P10747
<309> 1989-07-01
<400> 9
Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn
1 5 10 15
Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu
20 25 30
Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly
35 40 45
Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe
50 55 60
Trp Val
65
<210> 10
<211> 41
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> CD28
<300>
<308> UniProt P10747
<309> 1989-07-01
<400> 10
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 11
<211> 41
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> CD28
<400> 11
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 12
<211> 42
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 4-1BB
<300>
<308> UniProt Q07011.1
<309> 1995-02-01
<400> 12
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 13
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> CD3ζ
<400> 13
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 14
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> CD3ζ
<400> 14
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 15
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> CD3ζ
<400> 15
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 16
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> tEGFR
<400> 16
Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu
1 5 10 15
Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile
20 25 30
Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe
35 40 45
Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr
50 55 60
Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn
65 70 75 80
Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg
85 90 95
Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile
100 105 110
Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val
115 120 125
Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp
130 135 140
Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn
145 150 155 160
Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu
165 170 175
Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser
180 185 190
Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu
195 200 205
Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln
210 215 220
Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly
225 230 235 240
Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro
245 250 255
His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr
260 265 270
Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His
275 280 285
Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro
290 295 300
Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala
305 310 315 320
Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met
325 330 335
<210> 17
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> T2A
<400> 17
Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
1 5 10 15
Gly Pro
<210> 18
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2A
<400> 18
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 19
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2A
<400> 19
Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn
1 5 10 15
Pro Gly Pro
<210> 20
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> E2A
<400> 20
Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Gly Pro
20
<210> 21
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2A
<400> 21
Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<220>
<221> 重复序列
<222> (5)...(9)
<223> SGGGG重复5次
<400> 22
Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 23
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 23
Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Gly Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 24
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GMCSFRα链信号序列
<400> 24
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atccca 66
<210> 25
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GMCSFRα链信号序列
<400> 25
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro
20
<210> 26
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD8α信号肽
<400> 26
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala
<210> 27
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 27
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 28
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 28
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 29
<211> 61
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 29
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro
1 5 10 15
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu
20 25 30
Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
50 55 60
<210> 30
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 30
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 31
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 31
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 32
Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 33
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 34
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 34
Glu Val Val Val Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 35
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L1
<400> 35
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L2
<400> 36
Ser Arg Leu His Ser Gly Val
1 5
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L3
<400> 37
Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly
1 5
<210> 38
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H1
<400> 38
Asp Tyr Gly Val Ser
1 5
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H2
<400> 39
Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H3
<400> 40
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
1 5
<210> 41
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH
<400> 41
Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 42
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr
100 105
<210> 43
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> scFv
<400> 43
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly
100 105 110
Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys
115 120 125
Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser
130 135 140
Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser
145 150 155 160
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile
165 170 175
Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn
195 200 205
Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr
210 215 220
Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 44
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L1
<400> 44
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 45
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L2
<400> 45
Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser
1 5
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L3
<400> 46
Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 47
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H1
<400> 47
Ser Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H2
<400> 48
Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 49
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H3
<400> 49
Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 50
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH
<400> 50
Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 51
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL
<400> 51
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 52
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 52
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 53
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> scFv
<400> 53
Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys
145 150 155 160
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn
180 185 190
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe
210 215 220
Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Glu Ile Lys Arg
245
<210> 54
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR H3
<400> 54
His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 55
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L2
<400> 55
His Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
<210> 56
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR L3
<400> 56
Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr
1 5
<210> 57
<211> 735
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码scFv的序列
<400> 57
gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60
atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180
cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240
gaagatatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300
ggaacaaagc tggaaatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360
ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gaaagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420
cagagcctga gcgtgacctg caccgtgagc ggcgtgagcc tgcccgacta cggcgtgagc 480
tggatccggc agccccccag gaagggcctg gaatggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540
accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600
agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgc 660
gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720
gtgaccgtga gcagc 735
<210> 58
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(1)
<223> Xaa = Gly、 Cys或Arg
<220>
<221> 变体
<222> (4)...(4)
<223> Xaa = Cys或Thr
<400> 58
Xaa Pro Pro Xaa Pro
1 5
<210> 59
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 59
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 60
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链
<400> 60
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 61
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链
<400> 61
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215

Claims (135)

1.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；以及
(b)随后向所述受试者给予检查点抑制剂，所述检查点抑制剂为能够阻断免疫检查点途径蛋白的抗体或其抗原结合片段，其中在至少两个剂量周期中的每一个中给予所述检查点抑制剂的总剂量量，其中所述至少两个剂量周期中的第一剂量周期中所述检查点抑制剂的所述总剂量量：
等于或小于第二和/或随后的剂量周期中给予的所述总剂量量；并且
在所述第一剂量周期的过程中以多于一个单独剂量给予，其中单独剂量的数量大于在所述第二和/或随后的剂量周期中给予的单独剂量的数量。
2.一种治疗方法，所述方法包括向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予检查点抑制剂，所述检查点抑制剂为能够阻断免疫检查点途径蛋白的抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原，其中在至少两个剂量周期中的每一个中给予所述检查点抑制剂的总剂量量，其中所述至少两个剂量周期中的第一剂量周期中所述检查点抑制剂的所述总剂量量：
等于或小于第二和/或随后的剂量周期中给予的所述总剂量量；并且
在所述第一剂量周期的过程中以多于一个单独剂量给予，其中单独剂量的数量大于在所述第二和/或随后的剂量周期中给予的单独剂量的数量。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述剂量周期是21天周期。
4.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述剂量周期是28天周期。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述至少两个剂量周期中的第一剂量周期中的所述总剂量量与所述至少两个剂量周期中的第二剂量周期中的所述总剂量量相同。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述至少两个剂量周期中的第一剂量周期包括2、3、4或更多个单独剂量。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述剂量周期是28天周期并且所述至少两个28天周期中的第一28天周期的所述单独剂量被给予为四个剂量，各自每周一次(Q1W)；两个剂量，各自为Q1W剂量，持续连续两周；或两个剂量，各自为Q1W剂量，持续连续两周，且之后是两周一次(Q2W)一个剂量。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述至少两个剂量周期中的每一个包括独立地给予为或约400mg至为或约2000mg的总剂量量的所述检查点抑制剂。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述检查点抑制剂阻断选自PD-L1、PD-L2、PD-1和CTLA-4的免疫检查点途径蛋白。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述检查点途径是PD-1/PD-L1并且所述检查点抑制剂是抗PD-1抗体。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述检查点抑制剂是纳武单抗、派姆单抗或西米普利单抗。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述至少两个剂量周期中的每一个包括独立地给予为或约400mg至为或约600mg，任选地为或约480mg的总剂量量。
13.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述检查点途径是PD-1/PD-L1并且所述检查点抑制剂是抗PD-L1抗体。
14.根据权利要求1-11和13中任一项所述的方法，其中所述至少两个剂量周期中的每一个包括独立地给予750mg至2000mg，任选地为或约1500mg的总剂量量。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在这样的时间起始的，所述时间是在以下各项时或之后，任选地以下各项之后立即或在以下各项之后1至3天内：
(i)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平；
(ii)在所述血液中已经可检测到之后，在所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量不可检测或减少了，任选地与在给予所述T细胞疗法之后的在前时间点相比减少了；
(iii)所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量减少了或减少超过在起始给予所述T细胞疗法之后在所述受试者的血液中可检测到的所述T细胞疗法的峰值或最大细胞数量的1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多；
(iv)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平之后的时间，在来自所述受试者的血液中可检测到的所述细胞的细胞数量或源自所述细胞的细胞数量为所述受试者的血液中的总外周血单核细胞(PBMC)的少于10％、少于5％、少于1％或少于0.1％；
(v)所述受试者在用所述T细胞疗法治疗之后展现出疾病进展和/或在缓解后已经复发；和/或
(iv)与在给予所述细胞之前或之后以及在起始给予所述检查点抑制剂之前的时间的肿瘤负荷相比，所述受试者展现出增加的肿瘤负荷。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在如下时间时或在如下时间内起始的：起始给予所述T细胞疗法之后29天、36天、43天或50天。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后从或从约22天至36天起始的。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后29天或约29天起始的。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后43天或约43天起始的。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中在给予所述检查点抑制剂和/或开始所述第一剂量周期的时间，所述受试者未展现出给予所述T细胞疗法后的严重毒性。
21.根据权利要求20所述的方法，其中：
所述严重毒性是严重细胞因子释放综合征(CRS)，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级CRS；和/或
所述严重毒性是严重神经毒性，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级神经毒性。
22.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤的细胞表达的靶抗原；以及
(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中所述给予包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，持续所述28天周期的连续两周，所述单独剂量中的每一个的量为或为约375mg，之后是在所述28天周期中两周一次(Q2W)一个剂量，所述一个剂量的量为或为约750mg；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为一个剂量，每四周一次(Q4W)，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
23.一种治疗方法，所述方法包括向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，持续所述28天周期的连续两周，所述单独剂量中的每一个的量为或为约375mg，之后是在所述28天周期中两周一次(Q2W)一个剂量，所述一个剂量的量为或为约750mg；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为一个剂量，每四周一次(Q4W)，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
24.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；以及
(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述给予包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为四个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，持续所述28天周期，其中所述四个剂量包括各自独立地为或约225mg的两个连续Q1W剂量和之后的各自独立地为或约375mg的两个连续Q1W剂量；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个剂量，在所述28天周期中各自每两周一次(Q2W)，其中每个Q2W给予的量各自独立地为或为约750mg。
25.一种治疗方法，所述方法包括向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，所述嵌合抗原受体特异性结合至在所述B细胞恶性肿瘤上表达的靶抗原，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为四个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，持续所述28天周期，其中所述四个单独剂量包括各自独立地为或约225mg的两个连续Q1W剂量和之后的各自独立地为或约375mg的两个连续Q1W剂量；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个单独剂量，每两周一次(Q2W)，持续所述第二和/或随后的28天周期，其中每个剂量的量独立地为或为约750mg。
26.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；以及
(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述给予包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，其中所述两个剂量中的每一个独立地包含为或约375mg的量，任选地其中所述两个剂量是连续Q1W剂量，任选地其中所述两个剂量在所述28天周期中的第15天和第22天给予；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：在所述第二和/或随后的28天周期中Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
27.一种治疗方法，所述方法包括向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，所述嵌合抗原受体特异性结合至在所述B细胞恶性肿瘤上表达的靶抗原，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，其中：
第一28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为两个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，其中所述两个剂量中的每一个独立地包含为或约375mg的量，任选地其中所述两个剂量是连续Q1W剂量，任选地其中所述两个剂量在所述28天周期中的第15天和第22天给予；并且
第二和/或随后的28天周期包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：在所述第二和/或随后的28天周期中Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
28.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；以及
(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中：
所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，所述至少两个28天周期中的每一个包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或抗原结合片段；并且
在所述至少两个28天周期中的至少一个中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过在所述至少一个28天周期的过程中给予多于一个单独剂量的所述抗体或片段进行。
29.一种治疗方法，所述方法包括向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原，其中：
所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予包括进行至少两个28天周期，所述至少两个28天周期中的每一个独立地包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或抗原结合片段；并且
在所述至少两个28天周期中的至少一个中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过在所述至少一个28天周期的过程中给予多于一个单独剂量的所述抗体或片段进行。
30.根据权利要求28或权利要求29所述的方法，其中在所述至少两个28天周期中的第一28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与第二和/或随后的28天周期中的给予相比给予更多数量的单独剂量的所述抗体或片段进行。
31.根据权利要求28-30中任一项所述的方法，其中每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量独立地在为或约750mg与为或约1500mg之间。
32.根据权利要求28-31中任一项所述的方法，其中所述28天周期中的至少一个中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约750mg。
33.根据权利要求28-32中任一项所述的方法，其中所述28天周期中的至少一个中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1200mg。
34.根据权利要求28-31中任一项所述的方法，其中所述28天周期中的至少一个中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
35.根据权利要求28-31和34中任一项所述的方法，其中每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量独立地为或为约1500mg。
36.根据权利要求28-35中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量在所述至少两个28天周期中的至少两个中、且任选地所述至少两个28天周期中是相同的总剂量量。
37.根据权利要求28-35中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量在所述至少两个28天周期中的至少两个中是不同的，或在所述至少两个28天周期中的每一个中是不同的。
38.根据权利要求28-35和37中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量低于所述至少两个28天周期中的第二和/或随后的28天周期。
39.根据权利要求28-38中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括给予2、3或4个单独剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
40.根据权利要求28-39中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据选自以下的给药时间表将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段给予为单独剂量：(i)两个单独剂量，在所述28天周期内各自每周一次(Q1W)，任选地在所述28天周期的第15天和第22天；(ii)四个单独剂量，各自每周一次(Q1W)，持续所述28天周期，任选地在所述28天周期的第1天、第8天、第15天和第22天；(iii)两个单独剂量，各自Q1W，持续所述28天周期的连续两周，任选地在所述周期的第1天和第8天，之后是在所述28天周期中两周一次(Q2W)一个剂量，任选地在所述周期的第15天；或(iv)两个单独剂量，各自每两周一次(Q2W)，持续所述28天周期，任选地在所述28天周期的第1天和第15天。
41.根据权利要求40所述的方法，其中：
在所述第一28天周期中给予的每个Q1W剂量独立地为所述第一28天周期中给予的所述总剂量量的从或从为或约18％至为或约32％，任选地为所述第一28天周期中给予的所述总剂量量的为或约25％；和/或
在所述第一28天周期中给予的每个Q2W剂量独立地为所述第一28天周期中的所述总剂量量的从或从为或约40％至为或约62.5％，任选地为所述第一28天周期中给予的所述总剂量量的50％或约50％。
42.根据权利要求40或权利要求41所述的方法，其中：
所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据给药时间表(iii)给予所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中Q1W持续连续两周的所述两个单独剂量中的每一个的量各自独立地为或为约375mg，之后Q2W一次的一个剂量的量为或为约750mg；
所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据(ii)中所示的给药时间表给予所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中所述四个单独Q1W剂量包括量为或为约225mg的两个连续Q1W剂量和之后的量为或为约375mg的两个连续Q1W剂量；或者
所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据(i)中所示的给药时间表给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段，其中所述两个单独Q1W剂量中的每一个以为或约375mg的量进行两个连续Q1W剂量。
43.根据权利要求28-40中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据选自以下的给药时间表给予单独剂量：(i)两个单独剂量，在所述28天周期的第15天或约第15天和第22天或约第22天；(ii)四个单独剂量，在所述28天周期的第1天或约第1天、第8天或约第8天、第15天或约第15天和第22天或约第22天；(iii)两个单独剂量，在所述28天周期的第1天或约第1天和第8天或约第8天，之后是一个剂量，在所述周期的第15天或约第15天；或(iv)两个剂量，在所述28天周期的第1天或约第1天和所述28天周期的第15天或约第15天。
44.根据权利要求28-43中任一项所述的方法，其中：
所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据给药时间表(iii)给予所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中所述两个单独剂量中的每一个包含在所述28天周期的第1天或约第1天和第8天或约第8天的为或约375mg的量，之后是在所述周期的第15天或约第15天的量为或为约750mg的一个剂量；
所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据(ii)中所示的给药时间表给予所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中所述四个单独剂量包括在第1天或约第1天和第8天或约第8天的量为或为约225mg的两个连续剂量，之后是在所述28天周期的第15天或约第15天和第22天或约第22天的量为或为约375mg的两个连续剂量；或者
所述第一28天周期中的所述总剂量量的给予包括根据(i)中所示的给药时间表给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段，其中所述两个单独剂量中的每一个包括在所述28天周期的第15天或约第15天和第22天或约第22天的量为或为约375mg的两个连续剂量。
45.根据权利要求30-44中任一项所述的方法，其中所述第二和/或随后的28天周期中的所述总剂量量的给予独立地包括给予1或2个剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
46.根据权利要求30-45中任一项所述的方法，其中所述第二和/或随后的28天周期中的所述总剂量量的给予独立地包括选自以下的给药时间表：(i)两个单独剂量，各自每两周一次(Q2W)，持续所述第二和/或随后的28天周期，任选地在所述第二和/或随后的周期中的第1天和第15天；或(ii)一个剂量，在所述第二和/或随后的28天周期中每四周一次(Q4W)，任选地在所述第二和/或随后的周期的第1天。
47.根据权利要求46所述的方法，其中：
所述第二和/或随后的28天周期的每个Q2W剂量为或为约所述第二和/或随后的28天周期的所述总剂量量的50％；和/或
所述第二和/或随后的28天周期的所述Q4W剂量为或为约所述第二和/或随后的28天周期的所述总剂量量。
48.根据权利要求46或权利要求47所述的方法，其中：
所述第二和/或随后的剂量包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q2W给予两个剂量，所述两个剂量的量为或为约750mg；或
所述第二和/或随后的剂量包括将所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段以如下方式给予：Q4W给予一个剂量，所述一个剂量的量为或为约1500mg。
49.根据权利要求4-48中任一项所述的方法，其中至少两个28天周期进一步包括第三28天周期和/或其中所述随后的28天周期是第三28天周期。
50.根据权利要求49所述的方法，其中所述第三28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量与所述第一和/或所述第二28天周期中给予的所述总剂量量相同。
51.根据权利要求49或权利要求50所述的方法，其中所述第三28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
52.根据权利要求49-51中任一项所述的方法，其中：
(a)在所述第三28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与所述第一和/或第二28天周期中的相比以更多数量的单独剂量给予所述抗体或片段进行；或
(b)在所述第三28天周期中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量的给予是通过与所述第二28天周期相比给予相同数量的剂量的所述抗体或片段进行。
53.根据权利要求49-52中任一项所述的方法，其中所述第三28天周期中的所述总剂量量的给予包括在所述第三28天周期中每四周一次(Q4W)给予一个剂量，任选地在所述第三28天周期的第1天。
54.根据权利要求22-53中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期是在这样的时间起始的，所述时间：
(a)在起始给予所述T细胞疗法的第22天与第36天之间；或
(b)在以下各项时或之后，任选地以下各项之后立即或在以下各项之后1至3天内：
(i)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平；
(ii)在所述血液中已经可检测到之后，在所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量不可检测或减少了，任选地与在给予所述T细胞疗法之后的在前时间点相比减少了；
(iii)所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量减少了或减少超过在起始给予所述T细胞疗法之后在所述受试者的血液中可检测到的所述T细胞疗法的峰值或最大细胞数量的1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多；
(iv)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平之后的时间，在来自所述受试者的血液中可检测到的所述细胞的细胞数量或源自所述细胞的细胞数量为所述受试者的血液中的总外周血单核细胞(PBMC)的少于10％、少于5％、少于1％或少于0.1％；
(v)所述受试者在用所述T细胞疗法治疗之后展现出疾病进展和/或在缓解后已经复发；和/或
(iv)与在给予所述细胞之前或之后以及在起始给予所述抗PD-L1抗体之前的时间的肿瘤负荷相比，所述受试者展现出增加的肿瘤负荷。
55.根据权利要求22-54中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期是在起始给予所述T细胞疗法的第22天与第36天之间的时间起始的。
56.根据权利要求22-55中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期包括不超过三个28天周期，任选地其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期是在第22天或约第22天与第36天或约第36天之间起始的。
57.根据权利要求22-56中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期是在起始给予所述T细胞疗法之后的第29天或约第29天起始的。
58.根据权利要求22-57中任一项所述的方法，其中所述至少两个28天周期中的第一28天周期是在起始给予所述T细胞疗法之后的第43天或约第43天起始的。
59.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；以及
(b)随后向所述受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其中抗体或抗原结合片段的给予包括进行一至三个28天周期，每个周期包括给予750mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或片段，任选地其中所述一至三个28天周期中的第一28天周期在起始所述T细胞疗法之后的第22天或约第22天与第36天或约第36天之间，任选地在第29天开始。
60.一种治疗方法，所述方法包括向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述受试者已经被给予T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原，其中所述抗体或抗原结合片段的给予包括进行一至三个28天周期，每个周期包括给予900mg至2000mg的总剂量量的所述抗体或片段，任选地其中所述一至三个28天周期中的第一28天周期在起始所述T细胞疗法之后的第22天或约第22天与第36天或约第36天之间，任选地在约第29天开始。
61.根据权利要求59或权利要求60所述的方法，其中每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量独立地为或为约1200mg至1500mg。
62.根据权利要求59-61中任一项所述的方法，其中至少一个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1200mg。
63.根据权利要求59-61中任一项所述的方法，其中至少一个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
64.根据权利要求59-61和63中任一项所述的方法，其中每个28天周期中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的所述总剂量量为或为约1500mg。
65.根据权利要求59-64中任一项所述的方法，其中每个28天周期中的所述总剂量量包括给予1、2、3或4个剂量的所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
66.根据权利要求59-65中任一项所述的方法，其中每个28天周期独立地包括选自以下的给药时间表：(i)四个剂量，各自每周一次(Q1W)，任选地在所述28天周期的第1天、第8天、第15天和第22天；(ii)两个连续剂量，各自Q1W，任选地在第1天和第8天，之后是一个剂量，两周一次(Q2W)给予一个剂量，任选地在所述28天周期的第15天；(iii)两个剂量，各自每两周一次(Q2W)，任选地在所述28天周期的第1天和第15天；或(iv)一个剂量，每四周一次(Q4W)，任选地在所述28天周期的第1天。
67.根据权利要求59-66中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在第一28天周期中的第1天、第8天和第15天，在第二28天周期中的第1天以及在第三28天周期中的第1天给予。
68.根据权利要求59-67中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在第一28天周期中的第1天、第8天、第15天和第22天，在第二28天周期中的第1天和第15天以及在第三28天周期中的第1天给予。
69.根据权利要求59-68中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段在每个28天周期中的第1天给予。
70.根据权利要求59-69中任一项所述的方法，其进一步包括如果所述受试者在所述治疗后只是展现出部分反应(PR)和/或在起始给予所述T细胞疗法和/或所述抗PD-L1抗体或片段后三个月只是展现出PR，则在一个或多个另外的28天周期中给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段。
71.根据权利要求70所述的方法，其中在所述一个或多个另外的28天周期中的每一个中，所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段以900mg至2000mg的总剂量量，任选地以为或约1500mg的总剂量量给予。
72.根据权利要求13-71中任一项所述的方法，其中给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的总持续时间不超过12个月。
73.根据权利要求13-72中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后大于21天起始的。
74.根据权利要求13-73中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在这样的时间起始的，所述时间是在以下各项时或之后，任选地以下各项之后立即或在以下各项之后1至3天内：
(i)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平；
(ii)在所述血液中已经可检测到之后，在所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量不可检测或减少了，任选地与在给予所述T细胞疗法之后的在前时间点相比减少了；
(iii)所述血液中可检测到的所述T细胞疗法的细胞数量减少了或减少超过在起始给予所述T细胞疗法之后在所述受试者的血液中可检测到的所述T细胞疗法的峰值或最大细胞数量的1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多；
(iv)在所述受试者的血液中可检测到所述T细胞疗法的细胞的峰值或最大水平之后的时间，在来自所述受试者的血液中可检测到的所述细胞的细胞数量或源自所述细胞的细胞数量为所述受试者的血液中的总外周血单核细胞(PBMC)的少于10％、少于5％、少于1％或少于0.1％；
(v)所述受试者在用所述T细胞疗法治疗之后展现出疾病进展和/或在缓解后已经复发；和/或
(iv)与在给予所述细胞之前或之后以及在起始给予所述抗PD-L1抗体之前的时间的肿瘤负荷相比，所述受试者展现出增加的肿瘤负荷。
75.根据权利要求13-74中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在如下时间时或在如下时间内起始的：起始给予所述T细胞疗法之后29天、36天、43天或50天。
76.根据权利要求13-75中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后从或从约22天至36天起始的。
77.根据权利要求13-76中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段的给予和/或所述第一28天周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后29天或约29天起始的。
78.根据权利要求13-77中任一项所述的方法，其中所述检查点抑制剂的给予和/或所述第一剂量周期的开始是在起始给予所述T细胞疗法之后43天或约43天起始的。
79.根据权利要求13-78中任一项所述的方法，其中在给予所述抗PD-L1抗体或抗原结合片段和/或开始所述第一28天周期的时间，所述受试者未展现出给予所述T细胞疗法后的严重毒性。
80.根据权利要求79所述的方法，其中：
所述严重毒性是严重细胞因子释放综合征(CRS)，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级CRS；和/或
所述严重毒性是严重神经毒性，任选地3级或更高级、延长的3级或更高级或4或5级神经毒性。
81.根据权利要求13-80中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段特异性结合至PD-L1的细胞外结构域。
82.根据权利要求13-81中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段是MEDI4736(德瓦鲁单抗)、MDPL3280A(阿特珠单抗)、YW243.55.S70、MDX-1105(BMS-936559)、LY3300054或MSB0010718C(阿维单抗)，或者是或包含前述任一项的抗原结合片段或区域。
83.根据权利要求13-82中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段是MEDI4736(德瓦鲁单抗)，或者是或包含其抗原结合片段或区域。
84.根据权利要求13-83中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段是MEDI4736(德瓦鲁单抗)。
85.根据权利要求1-84中任一项所述的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
86.根据权利要求85所述的方法，其中，在给予所述T细胞疗法时或即将给予所述T细胞疗法的时间之前，所述受试者在用针对所述NHL的一种或多种先前疗法治疗之后在缓解后已经复发，或对于所述一种或多种先前疗法变为难治性的，所述一种或多种先前疗法任选地为除了表达所述CAR的细胞的另一剂量之外的一种或两种先前疗法，任选地其中所述一种或多种先前疗法是或包含靶向CD20的药剂或蒽环类抗生素。
87.根据权利要求85或权利要求86所述的方法，其中所述NHL包括侵袭性NHL；弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；DLBCL-NOS，任选地转化型惰性；EBV阳性DLBCL-NOS；富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤；原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)；滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)；和/或高级别B细胞淋巴瘤伴有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双/三打击)。
88.根据权利要求85-87中任一项所述的方法，其中所述NHL包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；DLBCL-NOS；转化型惰性DLBCL-NOS；3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)；和/或高级别B细胞淋巴瘤伴有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双/三打击)。
89.根据权利要求1-88中任一项所述的方法，其中所述受试者被或已经被鉴定为具有小于或等于1的东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态。
90.根据权利要求1-89中任一项所述的方法，其中所述靶抗原是B细胞抗原。
91.根据权利要求1-90中任一项所述的方法，其中所述靶抗原是CD19。
92.根据权利要求91所述的方法，其中所述嵌合抗原受体(CAR)包含特异性结合至靶抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域。
93.根据权利要求92所述的方法，其中所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链的信号传导结构域。
94.根据权利要求92或权利要求93所述的方法，其中所述嵌合抗原受体(CAR)进一步包含共刺激信号传导区域，所述共刺激信号传导区域包含共刺激分子的细胞质信号传导结构域。
95.根据权利要求94所述的方法，其中所述共刺激信号传导区域包含CD28或4-1BB的细胞质信号传导结构域。
96.根据权利要求94或权利要求95所述的方法，其中所述共刺激结构域是或包含4-1BB的细胞质信号传导结构域。
97.根据权利要求1-96中任一项所述的方法，其中：
所述CAR包含对CD19具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选地是或包含4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域，并且任选地进一步包含在所述跨膜结构域与所述scFv之间的间隔子。
98.根据权利要求1-96中任一项所述的方法，其中所述CAR按顺序包含对CD19具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选地是或包含4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域。
99.根据权利要求1-96中任一项所述的方法，其中所述CAR按顺序包含对CD19具有特异性的scFv、间隔子、跨膜结构域、任选地是4-1BB信号传导结构域的源自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、以及任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的源自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域。
100.根据权利要求97或权利要求99所述的方法，其中：
所述间隔子是多肽间隔子，所述多肽间隔子：(a)包含全部或部分免疫球蛋白铰链或其修饰形式或由其组成，或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，(b)包含全部或部分免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或其修饰形式或由其组成，和/或包含约15个或更少的氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，或(c)长度为或为约12个氨基酸和/或包含全部或部分免疫球蛋白铰链、任选地IgG4铰链或其修饰形式或由其组成。
101.根据权利要求97、99和100中任一项所述的方法，其中所述间隔子包含式X1PPX2P(SEQ ID NO:58)或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸。
102.根据权利要求97和99-101中任一项所述的方法，其中所述间隔子包含以下各项或由其组成：SEQ ID NO:1的序列，由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34编码的序列，或前述任一项的变体，所述变体具有与前述任一项的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性。
103.根据权利要求97和99-102中任一项所述的方法，其中所述间隔子包含SEQ ID NO:1的序列。
104.根据权利要求94-103中任一项所述的方法，其中共刺激分子的所述细胞质信号传导结构域包含SEQ ID NO:12或其变体，所述变体具有与SEQ ID NO:12的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性。
105.根据权利要求92-104中任一项所述的方法，其中源自含有ITAM的初级信号传导分子的所述细胞质信号传导结构域包含具有与其的至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的SEQ ID NO:13或14或15。
106.根据权利要求92-105中任一项所述的方法，其中所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)的CDRL1序列、SRLHSGV(SEQ ID NO:36)的CDRL2序列和/或GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的CDRL3序列以及DYGVS(SEQ ID NO:38)的CDRH1序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的CDRH2序列和/或YAMDYWG(SEQ ID NO:40)的CDRH3序列。
107.根据权利要求92-106中任一项所述的方法，其中所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含FMC63的CDRL1序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列。
108.根据权利要求92-107中任一项所述的方法，其中所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区。
109.根据权利要求92-108中任一项所述的方法，其中所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含含有在SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列的VH区。
110.根据权利要求92-109中任一项所述的方法，其中所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含含有在SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的VL区。
111.根据权利要求92-110中任一项所述的方法，其中所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv按顺序包含任选地包含在SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列的VH、任选地包含SEQ ID NO:59的接头和任选地包含在SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列的VL，和/或所述scFv包含柔性接头和/或包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列。
112.根据权利要求92-111中任一项所述的方法，其中所述细胞外抗原识别结构域是scFv并且所述scFv包含在SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列。
113.根据权利要求1-112中任一项所述的方法，其中基因工程化T细胞的所述剂量包含从或从约1x 105至5x 108个总CAR表达T细胞、1x 106至2.5x 108个总CAR表达T细胞、5x 106至1x 108个总CAR表达T细胞、1x 107至2.5x 108个总CAR表达T细胞、5x 107至1x 108个总CAR表达T细胞，每个都包含端值。
114.根据权利要求1-113中任一项所述的方法，其中基因工程化T细胞的所述剂量包含至少或至少约1x 105个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x 105个CAR表达细胞、至少或至少约5x 105个CAR表达细胞、至少或至少约1x 106个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x 106个CAR表达细胞、至少或至少约5x 106个CAR表达细胞、至少或至少约1x 107个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x 107个CAR表达细胞、至少或至少约5x 107个CAR表达细胞、至少或至少约1x108个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x 108个CAR表达细胞、或者至少或至少约5x 108个CAR表达细胞。
115.根据权利要求1-114中任一项所述的方法，其中基因工程化T细胞的所述剂量包含为或约5x 107个CAR表达细胞。
116.根据权利要求1-114中任一项所述的方法，其中基因工程化T细胞的所述剂量包含为或约1x 108个CAR表达细胞。
117.根据权利要求1-114中任一项所述的方法，其中基因工程化T细胞的所述剂量包含为或约1.5x 108个CAR表达细胞。
118.根据权利要求1-117中任一项所述的方法，其中肠胃外，任选地静脉内给予基因工程化T细胞的所述剂量。
119.根据权利要求118所述的方法，其中所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。
120.根据权利要求1-119中任一项所述的方法，其中所述T细胞对所述受试者而言是自体的。
121.根据权利要求1-119中任一项所述的方法，其中所述T细胞对于所述受试者而言是同种异体的。
122.根据权利要求1-121中任一项所述的方法，其中基因工程化T细胞的所述剂量包含表达所述CAR的CD4+T细胞和表达所述CAR的CD8+T细胞，并且所述剂量的给予包括给予多种单独的组合物，所述多种单独的组合物包括包含所述CD4+T细胞和所述CD8+T细胞中的一种的第一组合物以及包含所述CD4+T细胞或所述CD8+T细胞中的另一种的第二组合物。
123.根据权利要求122所述的方法，其中：
所述第一组合物和所述第二组合物的给予相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时，或者其中所述第一组合物的给予和所述第二组合物的给予在同一天进行、相隔约0至约12小时、相隔约0至约6小时或相隔约0至约2小时进行；和/或
所述第一组合物的给予的起始和所述第二组合物的给予的起始相隔约1分钟至约1小时或相隔约5分钟至约30分钟进行。
124.根据权利要求122或权利要求123所述的方法，其中所述第一组合物和所述第二组合物的给予相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟。
125.根据权利要求122-124中任一项所述的方法，其中所述第一组合物包含所述CD4+T细胞。
126.根据权利要求122-124中任一项所述的方法，其中所述第一组合物包含所述CD8+T细胞。
127.根据权利要求122-126中任一项所述的方法，其中所述第一组合物是在所述第二组合物之前给予。
128.根据权利要求1-127中任一项所述的方法，其中，在所述给予之前，已经用淋巴细胞清除疗法对所述受试者进行预调理，所述淋巴细胞清除疗法包括给予氟达拉滨和/或环磷酰胺。
129.根据权利要求1-129中任一项所述的方法，其进一步包括，即将给予之前，向所述受试者给予淋巴细胞清除疗法，所述淋巴细胞清除疗法包括给予氟达拉滨和/或环磷酰胺。
130.根据权利要求129或权利要求130所述的方法，其中所述淋巴细胞清除疗法包括每天给予约200-400mg/m2，任选地为或约300mg/m2并包含端值的环磷酰胺，和/或约20-40mg/m2，任选地30mg/m2的氟达拉滨，持续2-4天，任选地持续3天，或者其中所述淋巴细胞清除疗法包括给予约500mg/m2的环磷酰胺。
131.根据权利要求129-131中任一项所述的方法，其中：
所述淋巴细胞清除疗法包括每天给予为或约300mg/m2的环磷酰胺和约30mg/m2的氟达拉滨，持续3天；和/或
所述淋巴细胞清除疗法包括每天给予为或约500mg/m2的环磷酰胺和约30mg/m2的氟达拉滨，持续3天。
132.根据权利要求1-132中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
133.一种试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；
(b)检查点抑制剂，所述检查点抑制剂为能够阻断免疫检查点途径蛋白的抗体或其抗原结合片段，任选地其中其检查点抑制剂被配制为一个或多个单独剂量；以及
(c)用于向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予所述T细胞疗法和/或所述检查点抑制剂的说明书，其中所述说明书规定根据权利要求1-133中任一项所述的方法给予所述T细胞疗法和/或所述检查点抑制剂。
134.一种试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)T细胞疗法，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原；以及
(b)用于向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予所述T细胞疗法的说明书，其中所述说明书规定在给予所述T细胞疗法之后，所述受试者将被给予检查点抑制剂，所述检查点抑制剂为能够阻断免疫检查点途径蛋白的抗体或其抗原结合片段，其中所述说明书规定根据权利要求1-133中任一项所述的方法给予所述T细胞疗法和/或所述检查点抑制剂。
135.一种试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)检查点抑制剂，所述检查点抑制剂为能够阻断免疫检查点途径蛋白的抗体或其抗原结合片段，任选地其中其检查点抑制剂被配制为一个或多个单独剂量；以及
(b)用于向患有B细胞恶性肿瘤的受试者给予所述检查点抑制剂的说明书，其中所述说明书规定在起始给予T细胞疗法之后给予所述检查点抑制剂，所述T细胞疗法包括一定剂量的表达嵌合抗原受体的基因工程化T细胞，其中所述嵌合抗原受体特异性结合至由所述B细胞恶性肿瘤表达的靶抗原，其中所述说明书规定根据权利要求1-133中任一项所述的方法给予所述T细胞疗法和/或所述检查点抑制剂。
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