PT2177537E - Anticorpos contra madcam - Google Patents

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PT2177537E
PT2177537E PT10150359T PT10150359T PT2177537E PT 2177537 E PT2177537 E PT 2177537E PT 10150359 T PT10150359 T PT 10150359T PT 10150359 T PT10150359 T PT 10150359T PT 2177537 E PT2177537 E PT 2177537E
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PT
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madcam
monoclonal antibody
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amino acid
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PT10150359T
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Mary Haak-Frendscho
Nicholas Pullen
Elizabeth Molloy
Sirid-Aimee Kellermann
Larry L Green
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Amgen Fremont Inc
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Description

ΡΕ2177537 1 DESCRIÇÃO "ANTICORPOS CONTRA MAdCAM"
Este pedido de patente reivindica o beneficio do Pedido de Patente Provisória dos Estados Unidos 60/535490, entregue em 9 de Janeiro, 2004.
FUNDAMENTO DO INVENTO A molécula mucosal adressina de adesão celular (MAdCAM) é um membro da superfamilia das imunoglobulinas dos receptores de adesão celular. A selectividade do alojamento de linfócito em tecidos linfóides especializados e locais das mucosas do trato gastrointestinal é determinada pela expressão endotelial de MAdCAM (Berlin, C. et al., Cell, 80:413-422(1994); Berlin, C., et al., Cell, 74:185-195 (1993); e Erle, D.J., et al., J. Immunol., 153: 517-528 (1994)) . MAdCAM é expressa unicamente na superfície celular de vénulas endoteliais altas do tecido linfóide intestinal organizado, como seja as placas de Peyer e nódulos linfáticos mesentéricos ((Streeter et al., Nature, 331:41-6 (1988); Nakache et al., Nature, 337:179-81 (1989); Briskin et al., Am. J. Pathol. 151-97-110 (1997)) mas também noutros órgãos linfóides, tais como pâncreas, vesícula biliar e vénulas esplénicas e sinus marginal da polpa branca esplénica (Briskin et al(1997), supra; Kraal et al., Am. J. Path., 147: 763-771(1995)). 2 ΡΕ2177537
Apesar de mAdCAM desempenhar um papel fisiológico na vigilância imune do tubo digestivo, parece facilitar a extravasação linfocitária excessiva na doença inflamatória intestinal nas condições de inflamação crónica do trato gastrointestinal. TNFa e outras citocinas pró-inflamatórias aumentam a expressão de MAdCAM endotelial e, nas amostras de biopsias retiradas de doentes com doença de Cronhn e colite ulcerativa, existe um aumento focal de aproxima-damente 2-3 vezes da expressão de MAdCAM em locais de inflamação (Briskin et al. (1997), Souza et al., Gut, 45:856-63 (1999); Arihiro et al., Pathol Int., 52:367-74 (2002) ) . Padrões semelhantes de expressão elevada foram observados em modelos experimentais de colite (Hesterberg et al. , Gastroenterology, 111:1373-1380 (1997); Picarella et al. , J. Immunol., 158: 2099-2106 (1997); Connor et al., J Leukoc Biol., 65:349-55 (1999); Kato et al., J Pharmacol
Exp Ther., 295:183-9 (2000); Hokari et al., Clin Exp
Immunol., 26:259-65 (2001);Shigematsu et al., Am J Physiol
Gastrointest Liver Physiol., 281:G1309-15 (2001)). Noutros modelos pré-clinicos para as condições inflamatórias, tais como diabetes dependentes de insulina (Yang et al. Diabetes, 46:1542-7 (1997); Hãnninen et al., J Immunol., 160:6018-25 (1998)), doença de enxerto versus hospedeiro ((Fujisaki et al., Scand J Gastroenterol., 38:437-42 (2003) , Murai et al. , Nat Immunol., 4:154-60 (2003)), doença hepática crónica ((Hillan et al., Liver, 19:509-18 (1999); Grant et al., Hepatology, 33:1065-72 (2001)), encefalopatia inflamatória ((Stalder et al., Am J Pathol., 3 ΡΕ2177537 153:767-83 (1998); Kanawar et al. , Immunol Cell Biol., 78:641-5 (2000)), e gastrite ( (Barrett et al., J Leukoc
Biol., 67:169-73 (2000); Hatanaka et al., Clin Exp
Immunol., 130:183-9 (2002)), existe recomeço da expressão de MAdCAM fetal e participação de linfócitos α4β7+ activados na patogénese da doença. Nestes modelos inflamatórios, assim como em modelos coliticos de murganhos na transferência mediada por hapteno (e.g., TNBS, DSS, etc.) ou transferência adoptiva (CD4+CD45Rbhigh) , o anticorpo mono-clonal (mAb) de rato anti—MAdCAM de murganho, MECA-367, o qual bloqueia a ligação de linfócitos α4β7+ a MAdCAM, reduz o recrutamento de linfócitos, extravasação de tecidos, inflamação e gravidade da doença. Também foram descritos anticorpos monoclonais (mAbs) de murganho contra MAdCAM humano (ver, e.g., WO 96/24673 e WO 99/58573).
Considerando o papel de MAdCAM na doença inflamatória intestinal (IBD) e noutras doenças inflamatórias associadas ao trato gastrointestinal ou a outros tecidos, é desejável um meio para inibir a ligação a α4β7+ e o recrutamento de leucócitos mediado por MAdCAM. Poderá ainda ser desejável dispor de tais meios terapêuticos com propriedades vantajosas, incluindo mas não estando limitado à ausência de interacções indesejáveis com outras medicações nos doentes e propriedades fisicoquimicas favoráveis tais como valores pK/pD em humanos, solubilidade, estabilidade, vida de prateleira e semi-vida ín vivo. Uma proteína terapêutica, como seja um anticorpo, vantajosamente não incluirá modificações pós-tradução ou formação de agregados 4 ΡΕ2177537 indesejáveis. Assim, existe a necessidade critica de anticorpos terapêuticos anti-MAdCAM.
SUMÁRIO DO INVENTO 0 presente invento proporciona:
Forma de realização ("E") 1. Um anticorpo mono-clonal ou uma sua porção de ligação ao antigénio que se liga especificamente a MAdCAM com um Kd de 2,35 x 10_11M ou inferior, medido por ressonância de plasmões de superfície e inibe a ligação de MAdCAM humana a c^7+/· em que a cadeia pesada do anticorpo ou porção do mesmo de ligação ao antigénio compreende as sequências de aminoácidos CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e em que a cadeia leve do anticorpo ou sua porção de ligação ao antigénio compreende as sequências de aminoácidos CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve, do anticorpo monoclonal produzido pelo hibridoma ECACC N° de Acesso 03090909 (designação interna 7.16.6). E2. Um anticorpo monoclonal ou uma porção de ligação ao antigénio do mesmo que se liga especificamente a MAdCAM com um Kd de 2,35 x ΠΓηΜ ou inferior, medido por ressonância de plasmões de superfície e que inibe a ligação de MAdCAM humana a c^7% em que a cadeia pesada do anticorpo ou porção do mesmo de ligação ao antigénio compreende as sequências de aminoácidos CDR1, CDR2 e CDR3 em SEQ ID NO:34 e a cadeia leve do anticorpo ou sua porção de ligação ao antigénio compreende as sequências de aminoácidos CDR1, CDR2 e CDR3 em SEQ ID NO:36. 5 ΡΕ2177537 Ε3. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com EI ou 2, em que o anticorpo ou porção compreende uma cadeia pesada que utiliza um gene VH 1-18 humano. E4. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com El ou 2, em que o anticorpo ou porção compreende uma cadeia leve que utiliza um gene VK A2 humano. E5. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com El, em que o referido anticorpo ou porção de ligação ao antigénio do mesmo compreende uma ou mais das sequências de aminoácidos FR1, FR2, FR3 e FR4 do anticorpo monoclonal produzido pelo hibridoma N° de Acesso ECACC 03090909 (designação interna 7.16.6). E6. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com E2, em que o referido anticorpo ou porção de ligação ao antigénio do mesmo compreende uma ou mais das sequências de aminoácidos FR1, FR2, FR3 e FR4 em SEQ ID NO:34 ou SEQ ID NO:36. E7. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio em que a cadeia pesada e a cadeia leve compreendem as sequências de aminoácidos desde o começo da CDR1 até ao final da CDR3 da cadeia pesada e da cadeia leve, respectivamente, do anticorpo monoclonal produzido 6 ΡΕ2177537 pelo hibridoma ECACC N° de Acesso 03090909 (designação interna 7.16.6). E8. O anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com E7, em que os domínios variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve do anticorpo compreendem as sequências de aminoácidos do domínio variável da cadeia pesada e da cadeia leve, respectivamente, do anticorpo monoclonal produzido pelo hibridoma ECACC N° de Acesso 03090909 (designação interna 7.16.6). E9. O anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com E7 compreendendo as sequências de aminoácidos da cadeia pesada e leve do anticorpo monoclonal produzido pelo hibridoma ECACC N° de Acesso 03090909 (designação interna 7.16.6). E10. O anticorpo monoclonal de acordo com E9, em que o anticorpo é o anticorpo monoclonal humano produzido pelo hibridoma ECACC N° de Acesso 03090909 (designação interna 7.16.6).
Eli. O anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com E7, compreendendo as sequências de aminoácidos da cadeia pesada e da cadeia leve do anticorpo monoclonal produzido pelo hibridoma ECACC N° de Acesso 03090909 (designação interna 7.16.6), em que está eliminada a lisina C-terminal da cadeia pesada. 7 ΡΕ2177537 Ε12. Um anticorpo monoclonal ou sua porção de ligação ao antigénio, em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos desde o começo da CDR1 até ao final da CDR3 em SEQ ID NO:34 e a cadeia leve, compreende a sequência de aminoácidos desde o começo da CDR 1 até ao final da CDR3 em SEQ ID NO:36. E13. 0 anticorpo monoclonal ou sua porção de ligação ao antigénio de acordo com E12, em que a cadeia pesada do anticorpo ou da porção de ligação ao antigénio do mesmo compreende a sequência de aminoácidos do domínio variável da cadeia pesada em SEQ ID NO: 34 e a cadeia leve do anticorpo ou sua porção de ligação ao antigénio compreende a sequência de aminoácidos do domínio variável da cadeia leve em SEQ ID NO:36. E14. Um anticorpo monoclonal de acordo com E12 compreendendo as sequências de aminoácidos descritas em SEQ ID Nos:34 e 36 sem as sequências sinal. E15. Um anticorpo monoclonal de acordo com E12 compreendendo as sequências de aminoácidos descritas em SEQ ID NOs:34 e 36 sem as sequências sinal e em que a lisina C-terminal da cadeia pesada foi cortada. EI 6. Um anticorpo monoclonal de acordo com qualquer uma de EI a E15 que é uma molécula de imunoglobulina G (IgG), de IgM, de IgE, de IgA ou de IgD, ou um anticorpo biespecífico. ΡΕ2177537 Ε17. Uma porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma de EI a 15 que é um fragmento Fab, um fragmento F(ab')2^ um fragmento Fv ou um anticorpo de cadeia simples. E 18. Uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma de E 1 a 17 e um veiculo farmaceuticamente aceitável. E 19. A composição farmacêutica de acordo com E 18 compreendendo ainda um ou mais de outros agentes anti-inflamatórios ou imunomoduladores. E 20. A composição farmacêutica de acordo com E 19, em que um ou mais de outros agentes anti-inflamatórios ou imunomoduladores são seleccionados do grupo consistindo em: corticosteróides, amino-salicilatos, azatioprina, meto-trexato, ciclosporina, FK506, IL-10, GM-CSF, rapamicina, agentes anti-TNFa e antagonistas de moléculas de fusão. E 21. Uma vacina compreendendo o anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma de EI a 17 e um veiculo f armaceuticamente aceitável. E 22. A vacina de acordo com E21, em que a vacina é mucosal. 9 ΡΕ2177537 Ε 23. Um kit de diagnóstico compreendendo o anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma de EI a 17. E 24. Uma linha celular de hibridoma que produz um anticorpo monoclonal humano que se liga especificamente à Molécula Mucosal Adressina de Adesão Celular (MAdCAM), em que o hibridoma é o hibridoma ECACC N° de Acessão 03090909 (designação interna 7.16.6). E 25. Uma linha celular isolada que produz o anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma de EI a 17. E 26. A linha celular de acordo com E25 que produz o anticorpo da reivindicação 9 ou 14. E 27. Uma molécula de ácido nucleico isolada compreendendo uma sequência nucleotidica que codifica um anticorpo monoclonal de acordo com qualquer um de E 1 a 16. E 28. Um vector compreendendo a molécula de ácido nucleico de acordo com E27. E 29. Uma célula hospedeira compreendendo o vector de acordo com E28 ou a molécula de ácido nucleico de acordo com E27. 10 ΡΕ2177537 Ε30. Uma célula hospedeira compreendendo uma molécula de ácido nucleico codificadora da cadeia pesada ou porção de ligação ao antigénio da mesma e uma molécula de ácido nucleico codificadora da cadeia leve ou porção de ligação ao antigénio da mesma, do anticorpo monoclonal de acordo com qualquer uma de E 1 a 17. E 31. Um método para a produção de um anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio do mesmo que se liga especificamente a MAdCAM, compreendendo a célula hospedeira de acordo com E29 ou 30 ou a linha celular de acordo com E24 ou 25 em condições adequadas e recuperação do anticorpo ou da porção de ligação ao antigénio. E 32. Um animal transgénico não humano ou planta transgénica compreendendo uma molécula de ácido nucleico codificadora da cadeia pesada ou uma porção de ligação ao antigénio da mesma e uma molécula de ácido nucleico codificadora da cadeia leve ou uma porção de ligação ao antigénio da mesma, de um anticorpo de acordo com qualquer uma de EI a 16, em que são expressos os polipéptidos da cadeia pesada e da cadeia leve codificados pelas moléculas de ácido nucleico. E 33. Um método de isolamento de um anticorpo ou porção de ligação ao antigénio do mesmo que especificamente se liga a MAdCAM, compreendendo o passo de isolamento do anticorpo a partir do animal transgénico não humano ou planta transgénica de acordo com E32. 11 ΡΕ2177537 Ε 34. Um anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma de EI a 17, em que o anticorpo ou porção inibe a ligação de MAdCAM a α4β7, para usar no tratamento de doença inflamatória num indivíduo necessitado. E 35. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de E34, em que a doença inflamatória é uma doença inflamatória do trato gastrointestinal. E 36. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de E 35, em que a doença inflamatória do trato gastrointestinal é seleccionada do grupo consistindo em doença inflamatória intestinal, doença de Crohn, colite ulcerativa, doença diverticular, gastrite, doença hepática, esclerose biliar primária e colangite esclerosante. E 37. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de E35, em que a doença inflamatória do trato gastrointestinal é doença inflamatória intestinal, doença de Crohn ou colite ulcerativa. E 38. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de E 34, em que a doença inflamatória é diabetes dependente de insulina ou doença de enxerto contra hospedeiro. E 39.
Um anticorpo monoclonal ou porção de 12 ΡΕ2177537 ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma de EI a 17, em que o anticorpo ou porção é marcado de forma detectável, para usar na detecção de inflamação num indivíduo. E 40. Um anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma de EI a 17 para usar para determinar se existe um aumento no nível de cirulação de leucócitos que expressam α4β7 e assim detectar o efeito da administração de um anticorpo inibidor anti-MAdCAM ou porção de ligação ao antigénio do mesmo a um indivíduo. E 41. O anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com E40, em que os leucócitos são linfócitos. E 42. O anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com E 40, em que o aumento no nível de leucócitos que expressam α4β7 é determinado por análise FACS . E 43. Um anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma de EI a 17 para usar como um medicamento. E 44. Um método para o diagnóstico de um distúrbio caracterizado pela circulação de MAdCAM humana solúvel, compreendendo os passos de: (1) contacto de uma amostra biológica com o anticorpo monoclonal ou porção de 13 ΡΕ2177537 ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma de EI a 17 e (2) detecção da ligação do anticorpo ou porção a MAdCAM. E 45. Um vector de acordo com E2 8, em que o vector compreende uma sequência de controlo da expressão operacionalmente ligada à molécula de ácido nucleico.
Breve descrição dos desenhos
Figura 1 é um alinhamento das sequências de aminoácidos deduzidas das regiões variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve capa de doze anticorpos monoclonais humanos anti-MAdCAM com as sequências de aminoácidos germinais dos correspondentes genes humanos.
Figura IA mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia pesada para os anticorpos 1.7.2 e 1.8.2 com o produto do gene VH3-15 humano germinal.
Figura 1B mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos prevista da cadeia pesada para o anticorpo 6.14.2 com o produto do gene VH 3-23 humano germinal.
Figura 1 mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia pesada do anticorpo 6.22.2 com o produto do gene VH 3-33 humano germinal.
Figura 1D mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia pesada para o anticorpo 6.34.2 com o produto do gene VH 3-30 humano germinal. 14 ΡΕ2177537
Figura 1E mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia pesada para o anticorpo 6.67.1 com o produto do gene VH 4-4 humano germinal.
Figura 1F mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia pesada para o anticorpo 6.73.1 com o produto do gene VH 3-23 humano germinal.
Figura 1G mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia pesada para o anticorpo 6.77.1 com o produto do gene VH 3-21 humano germinal.
Figura 1H mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia pesada para os anticorpos 7.17.6 e 7.26.4 com o produto do gene VH 1-18 humano germinal.
Figura II mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia pesada para o anticorpo 7.20.5 com o produto do gene VH 4-4 humano germinal.
Figura 1J mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia pesada para o anticorpo 9.8.2 com o produto do gene VH 3-33 humano germinal.
Figura 1K mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia leve capa para os anticorpos 1.7.2 e 1.8.2 com o produto do gene A3 humano germinal. 15 ΡΕ2177537
Figura 1L mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia leve capa para o anticorpo 6.14.2 com o produto do gene 012 humano germinal.
Figura 1M mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia leve capa para o anticorpo 6.22.2 com o produto do gene A26 humano germinal.
Figura IN mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia leve capa para o anticorpo 6.34.2 com o produto do gene 012 humano germinal.
Figura 10 mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia leve capa para o anticorpo 6.67.1 com o produto do gene B3 humano germinal.
Figura IP mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia leve capa para o anticorpo 6.73.2 com o produto do gene 012 humano germinal.
Figura 1Q mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia leve capa para o anticorpo 6.77.1 com o produto do gene A2 humano germinal.
Figura IR mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia leve capa para os anticorpos 7.16.6 e 7.26.4 com o produto do gene A2 humano germinal. 16 ΡΕ2177537
Figura IS mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia leve capa para o anticorpo 7.20.5 com o produto do gene A3 humano germinal.
Figura 1T mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos deduzida da cadeia leve capa para o anticorpo 9.8.2 com o produto do gene 018 humano germinal.
Figura 2 são alinhamentos CLUSTAL para as sequências de aminoácidos deduzidas da cadeia pesada e leve capa dos anticorpos humanos anti-MAdCAM.
Figura 2A é um alinhamento CLUSTAL e árvore radial das sequências de aminoácidos deduzidas da cadeia leve capa mostrando o grau de similaridade entre as cadeias leve capa dos anticorpos anti-MAdCAM.
Figura 2B é um alinhamento CLUSTAL e árvore radial das sequências de aminoácidos deduzidas da cadeia pesada mostrando o grau de similaridade entre as cadeias pesadas dos anticorpos anti-MAdCAM.
Figura 3 é um alinhamento CLUSTAL da sequência de aminoácidos dos dois domínios N-terminais de MAdCAM cinomolgo e humano que forma o domínio de ligação α4β7. As cadeias β estão alinhadas de acordo com Tan et al., Structure (1998) 6:793-801.
Figura 4 é um gráfico representando os efeitos de 17 ΡΕ2177537 dose de 1.7.2 e 7.16.6 purificados biotinilados na adesão de linfócitos do sangue periférico humano a secções de endotélio de fígado humano congelado expressando MAdCAM.
Figura 5 mostra uma representação gráfica bidimensional baseada nos dados da Tabela 7 da diversidade de epitopos MAdCAM aos quais se ligam os anticorpos anti-MAdCAM, 1.7.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5,7.26.4, 9.8.2. Os anticorpos anti-MAdCAM dentro dos mesmos círculos mostram o mesmo padrão de reactividade, pertencem ao mesmo compartimento de epitopos e provavelmente reconhecem o mesmo epitopo em MAdCAM. Os clones de anticorpos anti-MAdCAM dentro dos círculos sobreponíveis são incapazes de se ligarem simultaneamente e provavelmente reconhecem, portanto, um epitopo sobreponível em MAdCAM. Os círculos que não se sobrepõem representam clones de anticorpos anti-MAdCAM com separação espacial distinta dos epitopos.
Figura 6 mostra dados de uma ELISA tipo sanduíche com os anticorpos anti-MAdCAM 1.7.2 e 7.16.6 marcados com Alexa 488, mostrando que os dois anticorpos que são capazes de detectar diferentes epitopos em MAdCAM poderão ser usados para detectar MAdCAM solúvel para fins de diagnóstico.
Figura 7 mostra o efeito de um anticorpo inibidor anti-MAdCAM (1 mg/kg) no número de linfócitos periféricos circulantes cqP7+, expresso como o número de vezes de 18 ΡΕ2177537 aumento relativamente ao mAb controlo IgG2a ou veículo, usando o mAb anti-MAdCAM 7.16.6 num modelo de macaco cinomolgo.
DESCRIÇÃO DETALHADA
Definições e técnicas gerais A menos que de outra forma seja aqui definido, ps termos científicos e técnicos usados em associação com o presente invento deverão ter os significados normalmente entendidos pelos familiarizados com área. Ainda, a menos que de outra forma seja necessário pelo contexto, os termos no singular deverão incluir os plurais e os termos no plural deverão incluir o singular. De um modo geral, as nomenclaturas e técnicas usadas em associação com a cultura de células e tecidos, biologia molecular, imunologia, microbiologia, genética, química de proteínas e de ácidos nucleicos e hibridação aqui descritas são conhecidas e normalmente usadas na área. Os métodos e técnicas do presente invento são, de um modo geral, realizados de acordo com métodos convencionais conhecidos na área e como descrito em várias referências gerais e mais específicas que são citadas e discutidas ao longo da presente especificação a menos que se outra forma seja indicado. Ver, e.g., Sambrook et al., "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989) e Ausubel et al., "Current Protocols in Molecular Biology", Greene Publishing Asso- 19 ΡΕ2177537 ciates (1992), e Harlow and Lane, "Antibodies: A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990). As reacções enzimáticas e as técnicas de purificação são realizadas de acordo com as especificações do fabricante, como normalmente realizado na área ou como aqui descrito. São usadas técnicas convencionais para síntese química, análises químicas, preparação farmacêutica, formulação e entrega e tratamento de doentes.
Os termos que se seguem, a menos que de outra forma seja indicado, deverão ser entendidos como tendo os seguintes significados: O termo "polipéptido" engloba proteínas nativas ou artificiais, fragmentos proteicos e análogos de polipé-ptidos de uma sequência proteica. Um polipéptido pode ser monomérico ou polimérico. O termo "proteína isolada" ou "polipéptido isolado" é uma proteína ou polipéptido que, devido à sua origem ou fonte de proveniência (1) não está associado a componentes naturais que o acompanham no seu estado nativo, (2) não está contaminado com outras proteínas da mesma espécie (3) é expresso por uma célula de uma espécie diferente ou (4) não ocorre na natureza. Assim, um polipéptido que é sintetizado quimicamente ou sintetizado num sistema celular diferente da célula de onde deriva naturalmente estará "isolado" dos seus componentes naturais. Uma proteína pode também ser conseguida numa 20 ΡΕ2177537 forma substancialmente não contaminada com os componentes naturalmente associados através do isolamento, usando técnicas de purificação de proteínas conhecidas na área.
Uma proteína ou polipéptido é "substancialmente pura", "substancialmente homogénea" ou "substancialmente purificada" quando pelo menos cerca de 60 a 75% de uma amostra apresenta uma única espécie de polipéptido. O polipéptido ou proteína pode ser monomérica ou multimérica. Um polipéptido ou proteína substancialmente puro compreenderá, tipicamente, cerca de 50%, 60%, 70%, 80% ou 90% p/p de uma amostra proteica, mais geralmente, cerca de 95% e, de preferência, será mais de 99% pura. A pureza da proteína ou homogenidade pode ser indicada por uma série de meios conhecidos na área, tais como electroforese em gel de poliacrilamida de uma amostra proteica, seguido de visualização de uma única banda polipeptídica quando da coloração do gel com um corante conhecido na área. Para determinados fins, pode ser conseguida uma maior resolução usando HPLC ou outros meios conhecidos na área para purificação. O termo "fragmento polipeptídico" como aqui usado refere-se a um polipéptido que tem uma deleção no extremo amina e/ou no extremo carboxilo, mas em que a restante sequência de aminoácidos é idêntica às posições correspondentes na sequência natural. Nalgumas formas de realização, os fragmentos têm pelo menos 5, 6, 8 ou 10 aminoácidos de comprimento. Noutras formas de realização, os fragmentos 21 ΡΕ2177537 têm pelo menos 14 aminoácidos de comprimento, mais de preferência pelo menos 20 aminoácidos de comprimento, geralmente pelo menos 50 aminoácidos de comprimento, mesmo mais de preferência pelo menos 70, 80. 90, 100, 150 ou 200 aminoácidos de comprimento. O termo "análogo polipeptídico" como aqui usado refere-se a um polipéptido que compreende um segmento de pelo menos 25 aminoácidos que tem identidade substancial com uma porção de uma sequência de aminoácidos e que tem pelo menos uma das seguintes propriedades: (1) ligação específica a MAdCAM em condições de ligação adequadas, (2) capacidade para inibir a ligação de a4P7-integrinas e/ou L-selectina a MAdCAM ou (3) capacidade para reduzir a expressão de MAdCAM na superfície celular in vitro ou in vivo. Tipicamente, os análogos de polipéptidos compreendem uma substituição de aminoácido conservada (ou inserção ou deleção) relativamente à sequência natural. Os análogos tipicamente têm pelo menos 20 aminoácidos de comprimento, de preferência pelo menos 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150 ou 200 aminoácidos de comprimento ou mais e podem muitas vezes ter o tamanho total do polipéptido natural.
As substituições de aminoácidos preferidas são aquelas que: (1) reduzem a susceptibilidade a proteólise, (2) reduzem a susceptibilidade à oxidação, (3) alteram a afinidade de ligação para a formação de complexos proteicos, (4) alteram a afinidade de ligação ou (5) conferem ou modificam outras propriedades fisicoquímicas ou 22 ΡΕ2177537 funcionais de tais análogos. Os análogos podem incluir várias muteínas de uma sequência diferente da sequência peptidica natural. Por exemplo, substituições de um ou mais aminoácidos (de preferência substituições conservadas de aminoácidos) podem ser feitas na sequência natural (de preferência na porção do polipéptido foram dos domínios que formam contactos intermoleculares. Uma substituição de aminoácido conservada não deverá alterar substancialmente as características estruturais da sequência parental (e.g., uma substituição de aminoácido não deverá tender a partir uma hélice que ocorra na sequência parental ou a destruir outros tipos de estrutura secundária que caracteriza a sequência parental) . Exemplos de estruturas secundárias e terciárias de polipéptidos reconhecidas na área estão descritos em "Proteins, Structures and Molecular Principies" (Creighton, Ed., W. H. Freeman and Company, New York (1984))/ "Introduction to Protein Structure" (C. Branden and J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y. (1991)); e Thornton et al., Nature, 354:105 (1991).
Na indústria farmacêutica são frequentemente usados análogos não peptídicos como fármacos com propriedades análogas às do péptido matriz. Estes tipos de compostos não peptídicos são designados "simulações de péptidos" ou "peptidomiméticos". Fauchere, J. Adv. Drug Res., 15:29(1986); Veber and Freidinger, TINS, p.392(1985); e Evans et al., J. Med. Chem., 30/ 1229(1987). Tais compostos são muitas vezes desenvolvidos com a ajuda de modulação molecular computarizada. As simulações de 23 ΡΕ2177537 péptidos que são estruturalmente semelhantes aos péptidos úteis em terapêutica podem ser usados para produzir um efeito terapêutico ou profilático equivalente. De um modo geral, os peptidomiméticos são estruturalmente semelhantes a um polipéptido paradigma (i.e., um polipéptido que tem uma propriedade bioquímica ou actividade farmacológica), como seja um anticorpo humano, mas possuem uma ou mais ligações peptídicas facultativamente substituídas por uma ligação do tipo: - CH2NH-, -CH2S-, -CH2-CH2-, -CH=CH- (cis e trans), -COCH2-, - CH(OH)CH2-, and -CH2SO-, por métodos conhecidos na área. A substituição sistemática de um ou mais aminoácidos de uma sequência de consenso com um D-aminoácido do mesmo tipo (e.g., D-lisina em lugar de L-lisina) pode também ser usada para gerar péptidos mais estáveis. Ainda, péptidos constringidos compreendendo uma sequência de consenso ou uma variação da sequência de consenso substancialmente idêntica podem ser gerados por métodos conhecidos na área (Rizo e Gierasch Ann. Rev. Biochem. 61:387 (1992)), por exemplo, através da adição de resíduos internos de cisteína capazes de formar pontes dissulfureto intramoleculares que tornam cíclico o péptido.
Uma "imunoglobulina" é uma molécula tetramérica. Numa imunoglobulina natural, cada tetrâmero é composto por dois pares idênticos de cadeias polipeptídicas, cada par tendo uma cadeia "leve" (cerca de 25 kDa) e uma cadeia "pesada" (cerca de 50-70 kDa) . A porção terminal amina de cada uma das cadeias inclui uma região variável de aproximadamente 100 a 110 ou mais aminoácidos responsáveis - 24 - ΡΕ2177537 principalmente pelo reconhecimento do antigénio. A porção terminal carboxilo de cada cadeia define uma região constante essencialmente responsável pela função efectora. As cadeias leves humanas são classificadas como cadeias κ e λ. As cadeias pesadas são classificadas como μ, δ, α ou ε e definem o isotipo do anticorpo como IgM, IgD, IgG, IgA e IgE, respectivamente. Dentro das cadeias leves e pesadas, as regiões variáveis e constantes são ligadas por uma região "J" de aproximadamente 12 ou mais aminoácidos, com a cadeia pesada incluindo também uma região "D" de aproximadamente 10 ou mais aminoácidos. Ver, de um modo geral, "Fundamental Immunology", Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989) ) . As regiões variáveis de cada par de cadeias leve/pesada formam o local de ligação do anticorpo de modo que uma imunoglobulina intacta possui dois locais de ligação.
As cadeias de imunoglobulina apresentam a mesma estrutura geral das regiões estruturais (FR) relativamente conservadas ligadas por três regiões hipervariáveis. Também designadas regiões determinantes de complementaridade ou CDRs. As CDRs das duas cadeias de cada par estão alinhadas pelas regiões estruturais para formar um local de ligação especifico de epitopo. A partir do extremo N para o extremo C, ambas as cadeias leves e pesadas compreendem os domínios FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FR4. A atribuição dos aminoácidos a cada domínio é de acordo com as definições de Kabat, "Sequences of Proteins of Immunological Interest" (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 25 ΡΕ2177537 1991)), ou Chothia & Leak, J. Mol. Biol., 196:901- 917(1987); Chothia et al. , Nature, 342:878-883(1989).
Um "anticorpo" refer-se a uma imunoglobulina intacta ou a uma porção da mesma de ligação ao antigénio que compete com o anticorpo intacto para a ligação especifica. Nalgumas formas de realização, um anticorpo é uma porção do mesmo de ligação ao antigénio. As porções de ligação ao antigénio podem ser produzidas por técnicas de DNA recombinante ou por clivagem enzimática ou química de anticorpos intactos. As porções de ligação ao antigénio incluem inter alia, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, dAb e os fragmentos da região determinante de complementaridade (CDR), anticorpos de cadeia simples (scFV), anticorpos quiméricos, "diabodies" e polipéptidos que possuem pelo menos uma porção de uma imunoglulina que é suficiente para conferir ligação específica ao antigénio. Um fragmento Fab é um fragmento monovalente consistindo nos domínios VL, VH, CL e CHI; um fragmento F(ab)2 é um fragmento bivalente compreendendo dois fragmentos Fab ligados por uma ponte dissulfureto na região de charneira; um fragmento Fd consiste nos domínios VH e CHI; um fragmento Fv consiste nos domínios VL e VH de um único braço de um anticorpo; e um fragmento dAb (Ward et al., Nature, 341:544-546(1989)) consiste num domínio VH.
Como aqui usado, um anticorpo que é referido como, e.g., 1.7.2,1.8.2, 6.14.2, 6.34.2, 5.67.1, 6.77.2, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4 ou 9.8.2, é um anticorpo monoclonal 26 ΡΕ2177537 que é produzido pelo hibridoma do mesmo nome. Por exemplo, o anticorpo 1.7.2 é produzido pelo hibridoma 1.7.2. Um anticorpo que é referido como 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod é um anticorpo monoclonal cuja sequência foi modificada a partir do correspondente anticorpo parental por mutagénese dirigida.
Um anticorpo de cadeia simples (scFv) é um anticorpo em que as regiões VL e VH estão emparelhadas para formar uma molécula monovalente através de um elemento de ligação sintético que lhes permite serem constituídas por uma única cadeia proteica (Bird et al., Science, 242:423-426 (1988) e Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 85:5879-5883 (1988)). Os diacorpos ("diabodies") são anticorpos biespecíficos bivalentes em que os domínios VH e VL são expressos numa única cadeia polipeptídica, mas usando um elemento de ligação que é demasiado curto para permitir o emparelhamento ente os dois domínios na mesma cadeia, forçando assim ao emparelhamento dos domínios com domínios complementares de uma outra cadeia e criando dois locais de ligação ao antigénio (ver, e.g., Holliger, P., et al. , Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 90: 6444-6448 (1993) e Poljak, R. J., et al., Structure, 2:1121-1123 (1994)). Uma ou mais CDRs de um anticorpo do invento podem ser incorporadas numa molécula, covalentemente ou não covalente-mente, para formar uma imunoadesina que se liga especi-ficamente a MAdCAM. Uma imunoadesina pode incorporar uma ou mais CDRs como parte de uma cadeia polipeptídica maior, pode ligar-se covalentemente às CDRs de uma outra cadeia 27 ΡΕ2177537 polipeptidica ou pode incorporar as CDRs não covalente-mente. As CDRs permitem à imunoadesina ligar-se especi-ficamente a um antigénio particular de interesse.
Um anticorpo pode ter um ou mais locais de ligação. Se existir mais de um local de ligação, os locais de ligação podem ser idênticos uns aos outros ou podem ser diferentes. Por exemplo, uma imunoglobulina natural possui dois locais de ligação idênticos, um anticorpo de cadeia simples ou fragmento Fab possui um local de ligação, enquanto um anticorpo "biespecifico" ou "bifuncional" (diacorpo) possui dois locais de ligação diferentes.
Um "anticorpo isolado" é um anticorpo que (1) não está associado a componentes naturais, incluindo outros anticorpos naturais, que o acompanham no seu estado nativo, (2) não está contaminado com outras proteínas da mesma espécie, (3) é expresso por uma célula de uma espécie diferente ou (4) não ocorre na natureza. Exemplos de anticorpos isolados produzidos por um hibridoma ou outra linha celular in vitro, é um anticorpo humano anti-MAdCAM derivado de um mamífero ou planta transgénica.
Como aqui usado, o termo "anticorpo humano" significa um anticorpo em que as sequências da região variável e constante são sequências humanas. 0 termo inclui anticorpos com sequências derivadas de genes humanos, mas que foram alterados, e.g., para diminuir a possível imunogenicidade, aumentar a afinidade, eliminar císteinas 28 ΡΕ2177537 ou locais de glicosilação que possam causar enrolamento indesejável, etc. 0 termo inclui anticorpos como os produzidos por via recombinante em células não humanas, os quais podem conferir glicosilação não tipica de células humanas. 0 termo também inclui anticorpos que foram induzidos num murganho transgénico que compreende parte ou a totalidade dos loci das cadeias pesada e leve de imunoglobulina humana.
Num aspecto, o invento proporciona um anticorpo humanizado. Nalgumas formas de realização, o anticorpo humanizado é um anticorpo que deriva de uma espécie não humana, no qual determinados aminoácidos nos domínios estruturais e constante das cadeias pesadas e leve foram alterados de forma a evitar ou abolir uma resposta imune em seres humanos. Nalgumas formas de realização, um anticorpo humanizado pode ser produzido através da fusão dos domínios constantes de um anticorpo humano com os domínios variáveis de uma espécie não humana. Exemplos de como produzir anticorpos humanizados podem ser encontrados nas Patentes dos Estados Unidos Nos. 6054297, 5886152 and 5877293. Nalgumas formas de realização, um anticorpo humanizado anti-MAdCAM do invento compreende a sequência de aminoácidos de uma ou mais regiões estruturais de um ou mais anticorpos anti-MAdCAM do invento.
Num outro aspecto, o invento inclui um "anticorpo quimérico". Nalgumas formas de realização, o anticorpo quimérico refere-se a um anticorpo que possui uma ou mais 29 ΡΕ2177537 regiões de um anticorpo e uma ou mais regiões de um ou mais de outros anticorpos. Numa forma de realização preferida, uma ou mais das CDRs derivam de um anticorpo humano anti-MAdCAM do invento. Numa forma de realização mais preferida, a totalidade das CDRs derivam de um anticorpo humano anti-MAdCAM do invento. Numa outra forma de realização preferida, as CDRs de um ou mais anticorpos humanos anti-MAdCAM do invento são misturadas e emparelhadas num anticorpo quimérico. Por exemplo, um anticorpo quimérico pode compreender uma CDR1 da cadeia leve de um primeiro anticorpo humano anti-MAdCAM pode ser combinada com CDR2 e CDR3 da cadeia leve de um segundo anticorpo humano anti-MAdCAM e as CDRs da cadeia pesada podem derivar de um terceiro anticorpo anti-MAdCAM. Ainda, as regiões estruturais podem derivar de um dos mesmos anticorpos anti-MAdCAM, de um ou mais anticorpos diferentes, tais como um anticorpo humano ou de um anticorpo humanizado.
Um "anticorpo neutralizante", "um anticorpo inibidor" ou anticorpo antagonista é um anticorpo que inibe a ligação de ο^βν ou de células que expressam α4β7 ou qualquer outro ligando cognato ou células que expressam o ligando cognato, a MAdCAM em pelo menos cerca de 20%. Numa forma de realização preferida, o anticorpo reduz ou inibe a ligação da integrina 0^4 β 7 ou de células que expressam Οί4β7 a MAdCAM em pelo menos 40%, mais de preferência em 60%, mesmo mais de preferência em 80%, 85%, 90%, 95% ou 100%. A redução da ligação pode ser medida por quaisquer meios conhecidos dos familiarizados com a área, por exemplo, 30 ΡΕ2177537 conforme medido num ensaio ín vitro de ligação competitiva. Um exemplo de medição da redução na ligação de células que expressam α4β7 a MAdCAM está apresentado no Exemplo 1.
Fragmentos ou análogos de anticorpos podem ser facilmente preparados pelos familiarizados com a área seguindo os ensinamentos desta especificação. Os extremos amina e carboxilo preferidos de fragmentos ou análogos correm perto das fronteiras de domínios funcionais. Os domínios estruturais e funcionais podem ser identificados por comparação dos dados de sequências nucleotídicas e/ou de aminoácidos com bases de dados públicas ou proprietárias. De preferência, são usados métodos de comparação computarizados para identificar motivos de sequências ou domínios conformacionais previstos para a proteína que ocorrem noutras proteínas de estrutura e/ou função conhecida. Os métodos para identificar sequências proteicas que se enrolam numa estrutura tridimensional conhecida são conhecidos (Bowie et al., Science, 253:164 (1991)). O termo "ressonância de plasmões de superfície", como aqui usado, refere-se a um fenómeno óptico que permite a análise de interacções biospecíficas em tempo real através da detecção de alterações nas concentrações proteicas dentro de uma matriz de biosensor, por exemplo, usando o sistema BIAcore (Pharmacia, Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J.). Para outras descrições, ver Jonsson, U., et al., Ann. Biol. Clin., 51:19-26 (1993); Jonsson, U., et al., Biotechniques, 11:620-627 (1991); 31 ΡΕ2177537
Johnsson, B., et al., J. Mol. Recognit., 8:125-131 (1995); e Johnnson, B., et al., Anal. Biochem., 198:268-277 (1991). 0 termo "k0ff" refere-se à constante da velocidade de dissociação para a dissociação de um anticorpo do complexo anticorpo/antigénio. 0 termo "kd" refere-se à constante de dissociação em equilíbrio de uma interacção particular antigénio-anticorpo. Um anticorpo é dito como se ligando a um antigénio quando a constante de dissociação é ^ 1 μΜ, de preferência ^100 nM e mais de preferência ^10 nM. 0 termo "epitopo" inclui qualquer determinante proteico capaz de se ligar especificamente a uma imuno-globulina ou receptor de células T ou de outra forma interagir com uma molécula. Os determinantes epitópicos geralmente consistem em grupos de moléculas quimicamente activos na superfície, tais como aminoácidos ou cadeias laterais de açúcar e, geralmente, possuem caracteristicas tridimensionais específicas, assim como caracteristicas de carga específicas. Um epitopo pode ser "linear" ou "conformacional". Num epitopo linear, a totalidade dos pontos de interacção entre a proteína e a molécula de interacção (como seja um anticorpo) ocorre linearmente ao longo da sequência de aminoácidos primária da proteína. Num epitopo conformacional, os pontos de interacção ocorrem ao longo dos resíduos de aminoácidos na proteína que estão separados uns dos outros. 32 ΡΕ2177537
Como aqui usado, os vinte aminoácidos convencionais e as suas abreviaturas seguem a utilização convencional. Ver, "Immunology - A Synthesis" (2nd Edition, E.S. Golub and D.R Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991)). Os esteroisómeros (e.g., D-aminoácidos) dos vinte aminoácidos convencionais, os aminoácios não naturais tais como aminoácidos a-,a-di-substituídos e N-alquil-aminoácidos, ácido láctico e outros aminoácidos não convencionais podem ser componentes adequados para os polipépti-dos do presente invento. Exemplos de aminoácidos não convencionais incluem: 4-hidroxipropilina, y-carboxiglutamato, ε-Ν,N,N-trimetil-lisina, ε-Ν-acetil-lisina, O-fosfo-serina, N-acetilserina, N-formilmetionina, 3-metil-histidina, 5-hidroxi-lisina, s-N-metilarginina e outros aminoácidos semelhantes (e.g., 4-hidroxiprolina). Na notação de polipé-ptidos aqui usada, a direcção para a esquerda é a direcção do extremo amina e a direcção para a direita é a direcção do extremo carboxilo, de acordo com a utilização e convenção convencionais. 0 termo "polinucleótido" como aqui referido significa uma forma polimérica de nucleótidos de pelo menos 10 bases de comprimento, ribonucleótidos ou desoxirribonu-cleótidos ou uma forma modificada de qualquer um dos tipos de nucleótidos. O termo inclui formas de DNA de cadeia simples e de cadeia dupla. O termo "polinucleótido isolado" como aqui usado 33 ΡΕ2177537 deverá significar um polinucleótido de origem genómica, de cDNA ou sintético ou alguma combinação destes, em que devido à sua origem o "polinucleótido isolado" (1) não está associado à totalidade ou a uma parte de um polinucleótido em que o "polinucleótido isolado" é encontrado na natureza, (2) está operacionalmente ligado a um polinucleótido a que não está ligado na natureza ou (3) não ocorre na natureza como parte de uma sequência maior. 0 termo "oligonucleótido" aqui referido inclui nucleótidos naturais e modificados ligados uns aos outros por ligações oligonucleotídicas naturais e não naturais. Os oligonucleótidos são uma subsérie de polinucleótidos geralmente compreendendo 200 bases ou menos. De preferência os oligonucleótidos possuem 10 a 60 bases de comprimento e mais de preferência 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ou 20 a 40 bases de comprimento. Os oligonucleótidos são geralmente de cadeia simples, e.g., para sondas; ainda que os oligonucleótidos possam ser de cadeia dupla, e.g., para usar na construção de um gene mutante. Os oligonucleótidos do invento podem ser oligonucleótidos com sentido ou anti-sentido. 0 termo "nucleótidos naturais" aqui referidos inclui desoxirribonucleótidos e ribonucleótidos. 0 termo "nucleótidos modificados" aqui referido inclui nucleótidos com grupos de açúcar modificados ou substituídos e similares. 0 termo "ligações oligonucleotídicas" aqui referido inclui ligações oligonucleotídicas tais como fosforo- 34 ΡΕ2177537 tioato, fosforoditioato, fosforo-selenoato, fosforodi-selenoato, fosforoanilotioato, fosforaniladato, fosforoami-dato e similares. Ver, e.g., LaPlanche et al., Nucl. Acids Res. 14:9081 (1986); Stec et al.,J. Am. Chem. Soc. 106:6077 (1984); Stein et al., Nucl. Acids Res., 16:3209(1988); Zon et al., Anti-Cancer Drug Design 6:539(1991); Zon et al., "Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach", pp. 87-108 (F. Eckstein, Ed., Oxford University Press, Oxford England(1991)); Stec et al., Patente U.S. No. 5,151,510; Uhlmann and Peyman, Chemical Reviews, 90:543(1990). Um oligonucleótido pode incluir, caso se pretenda, uma marca para detecção.
Sequências "ligadas operacionalmente" incluem sequências de controlo da expressão que são contíguas com o gene de interesse e sequências de controlo da expressão que actuam em trans ou a alguma distância para controlar o gene de interesse. O termo "sequência de controlo da expressão" como aqui usado refere-se a sequências polinucleotídicas que são necessárias para efectuar a expressão e processamento de sequências codificadoras a que estão ligadas. As sequências de controlo da expressão incluem sequências adequadas de iniciação e terminação da transcrição, promotores e estimuladores; sinais de processamento eficiente de RNA tais como sinais de "splicing" e de poliadenilação; sequências que estabilizam o mRNA citoplasmático; sequências que aumentam a eficiência da tradução (i.e., sequência de consenso Kozak); sequências que aumentam a estabilidade das proteínas; e quando pretendido, sequências que aumentam 35 ΡΕ2177537 a secreção de proteína. A natureza de tais sequências de controlo difere dependendo do organismo hospedeiro; nos procariotas, tais sequências de controlo geralmente incluem promotor, local de ligação ao ribossoma e sequência de terminação da transcrição; nos eucariotas, de um modo geral, tais sequências de controlo incluem promotores e sequências de terminação da transcrição. 0 termo "sequências de controlo" pretende incluir, no mínimo, todos os componentes cuja presença é essencial para a expressão e processamento e pode também incluir componentes adicionais cuja presença seja vantajosa, por exemplo, sequências líder e sequências parceiras de fusão. 0 termo "vector", como aqui usado, destina-se a referir uma molécula de ácido nucleico capaz de transportar uma outra molécula a que esteja ligada. Um tipo de vector é um "plasmídeo", que se refere a uma ansa de DNA de cadeia dupla circular no qual segmentos de DNA adicionais possam ser ligados. Um outro tipo de vector é um vector virai, em que segmentos de DNA adicionais podem ser ligados ao genoma virai. Determinados vectores são capazes de replicação autónoma numa célula hospedeira na qual são introduzidos (e.g., vectores bacterianos tendo uma origem de replicação bacteriana e vectores epissomais de mamífero). Outros vectores (e.g., vectores de mamífero não epissómicos) podem ser integrados no genoma de uma célula hospedeira quando da introdução na célula hospedeira e assim são replicados juntamente com o genoma hospedeiro. Ainda, determinados vectores são capazes de dirigir a expressão de genes aos 36 ΡΕ2177537 quais estão operacionalmente ligados. Tais vectores são aqui referidos como "vectores de expressão recombinantes" (ou simplesmente, "vectores de expressão"). Em geral, os vectores de expressão úteis nas técnicas de DNA recom-binante são muitas vezes na forma de plasmideos. Na presente especificação, "plasmídeo" e "vector" podem ser usados indiferentemente uma vez que o plasmideo é a forma de vector mais frequentemente usada. No entanto, o invento destina-se a incluir outras formas de vectores de expressão, tais como vectores virais (e.g., retrovirus defectivos para a replicação, adenovirus e virus adeno-associados) os quais servem funções equivalentes. 0 termo "célula hospedeira recombinante" (ou simplesmente "célula hospedeira"), como aqui usado, destina-se a referir uma célula na qual um vector de expressão recombinante tenha sido introduzido. Deve ser entendido que tais termos se destinam a referir não só a célula individual particular como a progénie de tal célula. Devido a determinadas modificações puderem ocorrer nas gerações sucessivas devido a mutação ou a influências ambientais, tal progénie pode de facto não ser idêntica à célula parental, mas ainda estão incluídas dentro do âmbito do termo "célula hospedeira" como aqui usado. 0 termo "híbrida selectivamente" aqui referido significa que se liga de forma detectável e especifica-mente. Polinucleótidos, oligonucleótidos e fragmentos dos mesmos de acordo com o invento hibridam selectivamente com 37 ΡΕ2177537 cadeias de ácido nucleico em condições de hibridação e lavagem que minimizam quantidades apreciáveis de ligação detectável a ácidos nucleicos não específicos. Condições de "restringência elevada" ou "altamente restringentes" podem ser usadas para se conseguir condições de hibridação selectiva como conhecido na área e aqui discutido. Um exemplo de "restringência elevada" ou condições "altamente restringentes" é um método de incubação de um polinucleó-tido com um outro polinucleótido, em que um polinucleótido pode ser fixado a uma superfície sólida, como seja uma membrana, num tampão de hibridação de SSPE ou SSC 6X, 50% de formamida, reagente de Denhardt 5X, 0,5% SDS, 100 pg/ml de DNA de esperma de salmão fragmentado desnaturado a uma temperatura de hibridação de 42°C durante 12-16 horas, seguido de duas lavagens a 55°C usando um tampão de lavagem de SSC IX, 0,5% SDS. O termo "percentagem de identidade de sequências" no contexto de sequências nucleotídicas refere-se aos resíduos em duas sequências que são os mesmos quando alinhados para correspondência máxima. O comprimento da comparação de identidade de sequências pode ser um segmento de pelo menos cerca de nove nucleótidos, geralmente pelo menos cerca de 18 nucleótidos, mais geralmente pelo menos cerca de 24 nucleótidos, tipicamente pelo menos cerca de 28 nucleótidos, mais tipicamente pelo menos cerca de 32 nucleótidos e, de preferência pelo menos cerca de 36, 48 ou mais nucleótidos. Existe uma série de diferentes algoritmos conhecidos na área que podem ser usados para medir a 38 ΡΕ2177537 identidade de sequências. Por exemplo, as sequências polinucleotidicas podem ser comparadas usando FASTA, Gap ou Bestfit, os quais são programas do pacote Wisconsin Versão 10.3, Accelrys, San Diego, CA. FASTA que inclui, e.g., o programa FASTA2 e FASTA3, proporciona alinhamentos e percentagem de identidade de sequências das regiões da melhor sobreposição entre a sequência a analisar e sequências de pesquisa (Pearson, Methods Enzymol., 183: 63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol., 132: 185-219 (2000); Pearson, Methods Enzymol., 266: 227-258 (1996); Pearson,J. Mol. Biol., 276: 71-84 (1998)). A menos que de outra forma seja especificado, são usados os parâmetros por defeito de um programa ou algoritmo particular. Por exemplo, a percentagem de identidade de sequências entre sequências nucleotidicas pode ser determinada usando FASTA com os seus parâmetros por defeito (um tamanho de palavra de 6 e o factor NOPAM para a matriz de pontuação) ou usando Gap com os seus parâmetros por efeito conforme proporcionado no Pacote Wisconsin Versão 10.3.
Uma referência a uma sequência nucleotidica engloba o seu complemento a menos que de outra forma seja especificado. Assim, uma referência a uma molécula de ácido nculeico tendo uma sequência particular deverá ser entendida para incluir a sua cadeia complementar, com a sua sequência complementar. 39 ΡΕ2177537
No campo da biologia molecular, os investigadores usam indiscriminadamente os termos "percentagem de identidade de sequências", "percentagem de similaridade de sequências" e "percentagem de homologia de sequências". Neste pedido de patente, estes termos deverão ter o mesmo significado relativamente às sequências nucleotidicas apenas. 0 termo "similaridade substancial" ou "similaridade de sequências substancial", quando se refere a um ácido nucleico ou um seu fragmento, indica que quando opti-mamemnte alinhado, com inserções ou deleções nucleotidicas adequadas, com um outro ácido nucleico (ou sua cadeia complementar), existe identidade de sequências nucleotidicas em pelo menos cerca de 85%, de preferência pelo menos cerca de 90% e mais de preferência pelo menos cerca de 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% das bases nucleotidicas, conforme medido por qualquer algoritmo conhecido de identidade de sequências, tais como FASTA, BLAST ou Gap, como discutido atrás.
Como aplicado a polipéptidos, o termo "identidade substancial" significa que as duas sequências peptidicas, quando optimamente alinhadas, como seja pelo programa GAP ou BESTFIT usando pesos de espaços por defeito, partilham pelo menos 75% ou 80% de identidade de sequências, de preferência pelo menos 90% ou 95% de identidade de sequências, mesmo mais de preferência pelo menos 98% ou 99% de identidade de sequências. De preferência, as posições 40 ΡΕ2177537 dos resíduos que não são idênticas diferem em substituições de aminoácidos conservadas. Uma "substituição de aminoáci-dos conservada" é uma em que um resíduo de aminoácido é substituído por um outro resíduo de aminoácido tendo uma cadeia lateral (grupo R) com propriedades químicas semelhantes (e.g., carga ou hidrofobicidade). Em geral, uma substituição de aminoácido conservada não alterará substancialmente as propriedades funcionais de uma proteína. Nos casos em que duas ou mais sequências de aminoácidos diferem uma da outra em substituições conservadas, a percentagem de identidade de sequências ou grau de similaridade pode ser ajustado para cima para corrigir a natureza conservada da substituição. Os meios para fazer este ajuste são conhecidos dos familiarizados com a área. Ver, e.g., Pearson, Methods Mol. Biol., 24: 307-31 (1994). Exemplos de grupos de aminoácidos que possuem cadeias laterais com propriedades químicas semelhantes incluem 1) cadeias laterais alifáticas: glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina; 2) cadeias laterais hidroxilo alifáticas: serina e treo-nina; 3) cadeias laterais contendo amida: asparagina e glutamina; 4) cadeias laterais aromáticas: fenilalanina, tirosina e triptofano; 5) cadeias laterais básicas: lisina, arginina e histidina; e 6) cadeias laterais contendo enxofre: cisteína e metionina. São descritas grupos de substituições de aminoácidos conservadas: valina-elucina-iso-leucina, fenilalanina-tirosina, lisina-arginina, alanina-valina, alanina-valina, glutamato-aspartato e asparagina-glutamina. 41 ΡΕ2177537
Como alternativa, uma substituição conservada é qualquer alteração tendo um valor positivo na matriz de verosimilhança log PAM250 descrita em Gonnet et al., Science, 256: 1443-45 (1992). Uma substituição "moderadamente conservada" é qualquer alteração tendo um valor não negativo na matriz de verosimilhança log PAM250. A similaridade de sequências para os polipéptidos é tipicamente medida usando programas de análise de sequências. Os programas de análise de proteínas fazem corresponder sequências semelhantes usando medidas de similaridade atribuídas a várias substituições, deleções e outras modificações, incluindo substituições de aminoácidos conservadas. Por exemplo, GCG contém programas tais como "Gap" e "Bestfit" que podem ser usados com parâmetros por defeito para determinar homologia de sequências ou identidade de sequências entre polipéptidos estreitamente relacionados, tais como polipéptidos homólogos de diferentes espécies de organismos ou entre uma proteína selvagem e uma sua muteína. Ver, e.g., o pacote Wisconsin Versão 10.3. As sequências polipeptídicas põem também ser comparadas usando FASTA usando parâmetros por defeito ou recomendados, um programa do pacote Wisconsin Versão 10.3. FASTA (e.g., FASTA2 e FASTA3) proporciona alinhamentos e percentagem de identidade de sequências das regiões da melhor sobreposição entre as sequências a analisar e de pesquisa (Pearson (1990); Pearson (2000)). Um outro algoritmo preferido quando da comparação de uma sequência do invento com uma base de dados contendo um grande número de sequências de 42 ΡΕ2177537 diferentes organismos é o programa de computador BLAST, especialmente blatp ou tblastn, usando parâmetros por defeito. Ver, e.g., Altschul et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990); Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-402 (1997). O comprimento das sequências polipeptidicas comparadas relativamente a homologia terá pelo menos cerca de 16 resíduos de aminoácidos, geralmente pelo menos cerca de 20 resíduos, mais geralmente pelo menos cerca de 24 resíduos, tipicamente pelo menos cerca de 28 resíduos e, de preferência, mais de cerca de 35 resíduos. Quando da pesquisa de uma base de dados contendo sequências de um grande número de organismos diferentes, é preferível comparar sequências de aminoácidos.
Como aqui usado, os termos "marca" ou "marcado" refere-se à incorporação de uma outra molécula no anticorpo. Numa forma de realização, a marca é uma marca detectável, e.g., incorporação de um aminoácido marcado radioactivamente ou ligação a um polipéptido de grupos biotinilo que podem ser detectados por avidina marcada (e.g., estreptavidina contendo uma marca fluorescente ou actividade enzimática que pode ser detectada por métodos ópticos ou colorimétricos). Numa outra forma de realização, a marca pode ser terapêutica, e.g., um conjugado de fármaco ou toxina. Vários métodos de marcação de polipéptidos e glicoproteínas são conhecidos na área e podem ser usados. 43 ΡΕ2177537
Exemplos de marcas para polipéptidos incluem, mas não estão limitados ao seguinte: isótopos radioactivos ou radionuclidos (e.g., 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, inIn, 125I, 131I), marcas fluorescentes (e.g., FITC, rodamina, lanta-nidos fosforoso), marcas enzimáticas (e.g., peroxidase de rábano silvestre, β-galactosidase, luciferase, fosfatase alcalina), marcadores quimioluminescentes, grupos biotini-lo, epitopos polipeptidicos pré-determinados reconhecidos por um repórter secundário (e.g., sequências de de fechos de leucina, locais de ligação a anticorpos secundários, domínios de ligação a metais, marcas de epitopos), agentes magnéticos, tais como quelatos de gadolinio, toxinas tais como toxina pertussis, taxol, citocalasina B, gramicidina D, brometo de etidio, emetina, mitomicina, etopósido, tenopósido, vincristina, vinblastina, coclchicina, doxorru-bicina, daunorrubicina, di-hidroxi antracinadiona, mitoxan-trona, mitramicina, actinomicina D, 1-desidrotestosterona, glucocorticóides, procaína, tetracaína, lidocaina, propano-lol e puromicina e análogos ou homólogos dos mesmos. Nalgumas formas de realização, as marcas são ligadas através de braços espaçadores de vários comprimentos para reduzir potencial obstrução estérica. 0 termo "agente" é aqui usado para significar um composto químico, uma mistura de compostos químicos, uma macromolécula biológica ou um extracto preparado a partir de materiais biológicos. 0 termo "agente ou droga farmacêutica" como aqui usado refere-se a um composto 44 ΡΕ2177537 químico ou composição capaz de induzir um efeito terapêutico pretendido quando adequadamente administrado a um doente. Outros termos químicos são aqui usados de acordo com a utilização convencional na área, conforme exemplificado por "The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms" (Parker, S., Ed., McGraw-Hill, San Francisco (1985)). 0 termo agente "anti-inflamatório" ou "imunomo-dulador" é aqui usado para referir agentes que possuem a propriedade funcional de inibição da inflamação, incluindo doença inflamatória num indivíduo, incluindo num ser humano. Em várias formas de realização deste invento, a doença inflamatória pode ser mas não está limitada a doenças inflamatórias do trato gastrointestinal incluindo doença de Crohn, colite ulcerativa, doença de divertículos, gastrite, doença hepática, esclerose biliar primária, colangite esclerosante. Doenças inflamatórias também incluem mas não estão limitadas a doença abdominal (incluindo peritonite, apendicite, doença do trato biliar), mielite transversa aguda, dermatite alérgica (incluindo pele alérgica, eczema alérgica, atopia da pele, eczema atópico, dermatite atópica, inflamação cutânea, eczema inflamatória, dermatite inflamatória, dermatite por pulgas, dermatite miliar, eczema miliar, dermatite por ácaros do pó da casa), espondilite anquilosante (síndrome de Reiters), asma, inflamação das vias aéreas, aterosclerose, arteriosclerose, atresia biliar, inflamação da bexiga, cancro da mama, inflamação cardiovascular (incluindo vasculite, manchas reumatóides à volta das unhas, úlceras das pernas, 45 ΡΕ2177537 polimiosite, inflamação vascular crónica, pericardite, doença pulmonar obstrutiva crónica), pancreatite crónica, inflamação perineural, colite (incluindo colite amoébica, colite infecciosa, colite bacteriana, colite de Crohn, colite isquémica, colite ulcerativa, proctocolite idiopá-tica, doença inflamatória intestinal, colite pseudomembra-nosa), distúrbios vasculares de colagénio (artrite reuma-tóide, SLE, esclerose istémica progressiva, doença do tecido conjuntivo misto, diabetes mellitus) , doença de Crohn (enterite regional, ileite granulomatosa, ileocolite, inflamação do sistema digestivo), doença desmielinizante (incluindo mielite, esclerose múltipla, esclerose disseminada, encefalomielite disseminada aguda, desmielinização perivenosa, deficiência em vitamina B12, sindrome de Guillain-Barre, retrovírus associado a MS), dermatomiosite, diverticulite, diarreia exudativa, gastrite, hepatite granulomatosa, inflamação granulomatosa, colecistite, diabetes mellitus dependente de insulina, doenças inflamatórias do fígado (cirrose biliar primária com fibrose hepática, hepatite, colangite esclerosante), inflamação do pulmão (fibrose pulmonar idiopática, granuloma eosinofílico do pulmão, hsitiocitose pulmonar X, inflamação peribronqui-olar, bronquite aguda), linfogranuloma venero, melanoma maligno, doença da boca/dentes (incluindo gengivite, doença periodontal), mucosite, inflamação do sistema musculosque-lético (miosite), esteato-hepatite não alcoólica (doença do fígado gordo não alcoólica), inflamação ocular & orbital (incluindo uveite, neurite óptica, ulceração reumatóide periférica, inflamação da córmea periférica), osteoartrite, 46 ΡΕ2177537 osteomielite, inflamação da faringe, poli-artrite, procti-te, psoriase, lesão por radiação, sarcoidose, necropatia das células falsiformes, tromboflebite superficial, síndro-me da resposta inflamtória sistémica, tiroidite, lúpus eritematoso sistémico, doença do enxerto versus hospedeiro, lesão aguda de queimadura, sindrome de Behçet, sindrome de Sj õgren.
Os termos doente e indivíduo incluem indivíduos humanos e animais.
Anticorpos humanos anti-MAdCAM e sua caracterização São descritos anticorpos anti-MAdCAM compreendendo sequências CDR humanas. São descritos anticorpos humanos anti-MAdCAM. Nalgumas descrições, os anticorpos humanos anti-MAdCAM são produzidos através da imunização de um animal transgénico não humano, e.g., um roedor, cujo genoma compreende genes de imunoglobulina humana de forma que o animal transgénico produz anticorpos humanos. Nalgumas descrições, o anticorpo anti-MAdCAM não se liga ao complemento.
Numa descrição o anticorpo anti-MAdCAM é 7.16.6. Numa outra descrição, o anticorpo anti-MAdCAM compreende uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos seleccionada a partir de SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 47 ΡΕ2177537 28, 32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 66 ou 68 (com ou sem a sequência sinal) ou a região variável de qualquer uma das referidas sequências de aminoácidos ou uma ou mais CDRs destas sequências de aminoácidos. Numa outra descrição, o anticorpo anti-MAdCAM compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos seleccionada de entre SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14,18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 56, 60 ou 64 (com ou sem a sequência sinal) ou a sequência de aminoácidos da região variável, ou de uma ou mais CDRs das referidas sequências de aminoácidos. São igualmente descritos anticorpos humanos anti-MAdCAM compreendendo a sequência de aminoácidos do começo da CDR1 até ao fim da CDR3 de qualquer uma das sequências atrás mencionadas. É ainda descrito um anticorpo anti-MAdCAM compreendendo uma ou mais regiões FR de qualquer uma das sequências atrás mencionadas.
É ainda descrito um anticorpo anti-MAdCAM compreendendo uma das sequências de aminoácidos atrás mencionadas em que foram feitas uma ou mais modificações. Nalgumas descrições, as cisteinas no anticorpo, que podem ser quimicamente reactivas, são substituídas com um outro resíduo, como seja, sem limites, alanina ou serina. Numa descrição, a substituição é numa císteina não canónica. A substituição pode ser feita numa CDR ou numa região estrutural de um domínio variável ou no domínio constante de um anticorpo. Nalgumas descrições, a císteina é canónica . 48 ΡΕ2177537
Nalgumas descrições, uma substituição de amino-ácido é feita para eliminar potenciais locais proteoliticos no anticorpo. Tais locais podem ocorrer numa CDR ou uma região estrutural de um domínio variável ou no domínio constante de um anticorpo. A substituição de resíduos de císteina e a remoção de locais proteoliticos pode diminuir a heterogeneidade no produto anticorpo. Nalgumas descrições, os pares de asparagina-glicina, que formam potenciais locais de desamidação, são eliminados através da alteração de um ou de ambos os resíduos. Nalgumas descrições, uma substituição de aminoácidos é feita para adicionar ou para remover potenciais locais de glicosilação na região variável de um anticorpo od invento.
Nalgumas descrições, a lisina C-terminal da cadeia pesada do anticorpo anti-MAdCAM do invento é clivada. Em várias descrições, as cadeias pesadas e leves dos anticorpos anti-MAdCAM podem, facultativamente incluir uma sequência sinal.
Doze anticorpos monoclonais humanos inibidores anti-MAdCAM e as linhas celulares de hibridoma que os produzem estão descritos na Tabela 1 que apresenta os identificadores das sequências (SEQ ID NO:) dos ácidos nucleicos codificadores das cadeias pesadas e leves de tamanho completo (incluindo sequências sinal) e as correspondentes sequências de aminoácidos deduzidas de tamanho completo. ΡΕ2177537 49
Tabela 1
ANTICORPOS HUMANOS ANTI-MAdCAM
Anticorpo monoclonal IDENTIFICADOR DA SEQUÊNCIA (SEQ ID NO) Tamanho completo Pesada Leve DNA Proteína DNA Proteína 1.7.2 1 2 3 4 1.82 5 6 7 8 6.14.2 9 10 11 12 6.22.2 13 14 15 16 6.34.2 17 18 19 20 6.67.1 21 22 23 24 6.73.2 25 26 27 28 6.77.1 29 30 31 32 7.16.6 33 34 35 36 7.20.5 37 38 39 40 7.26.4 41 42 43 44 9.8.2 45 46 47 48
Na Tabela 2 está descrita uma versão modificada de determinados anticorpos monoclonais humanos anti-MAdCAM atrás identificados com os identificadores das sequências para as sequências de DNA e de proteína dos anticorpos modificados. ΡΕ2177537 50
Tabela 2
ANTICORPOS HUMANOS ANTI-MAdCAM
Anticorpo monoclonal IDENTIFICADOR DA SEQUÊNCIA (SEQ ID NO) modificado Tamanho completo Pesada Leve DNA Proteína DNA Proteína 6.22.2-mod 51 52 53 54 6.34.2-mod 55 56 57 58 6.67.1-mod 59 60 61 62 6.77.1-mod 63 64 65 66 7.26.4-mod 41 42 67 68
Classe e subclasse de anticorpos anti-MAdCAM O anticorpo pode ser uma molécula de IgG, IgM, IgE, IgA ou IgD. Numa descrição, o anticorpo é da classe IgG e é da subclasse IgGi, IgG2, IgG3 ou IgG4. Numa descrição, o anticorpo anti-MAdCAM é o" ,c.. <, -""7 da subclasse IgG2 ou IgG4. Numa descrição, o anticorpo anti- MAdCAM é da mesma classe e subclasse dos anticorpos 1.7.2,1.8.2, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 6.22.2-mod, 6.34.2- mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod que é IgGz, ou 6.14.2.6.22.2.6.34.2,6.67.1, 6.73.2.6.77.1 ou 9.8.2, que é igG4. A classe e subclasse de anticorpos anti-MAdCAM podem ser determinadas por qualquer método conhecido na 51 ΡΕ2177537 área. Em geral, a classe e subclasse de um anticorpo pode ser determinada usando anticorpos que são específicos para uma classe e subclasse particulares de anticorpo. Tais anticorpos podem ser adquiridos comercialmente. Como alternativa, a classe e subclasse podem ser determinadas por sequenciação da totalidade ou de uma parte dos domínios constantes das cadeias pesada e/ou leve dos anticorpos, comparando as suas sequências de aminoácidos com sequências de aminoácidos conhecidas de várias classes e subclasses de imunoglobulinas e determinação da classe e subclasse dos anticorpos como a classe que apresenta a identidade de sequências mais elevada.
Sele atividade de espécie e molécula
Numa outra descrição, o anticorpo anti-MAdCAM demonstra selectividade de espécie e de molécula. Numa descrição, o anticorpo anti-MAdCAM liga-se a MAdCAM humana, de macaco cinomolgo ou de cão. Nalgumas descrições, o anticorpo anti-MAdCAM não se liga a espécies de macacos do Novo Mundo tais como saguis. Seguindo os ensinamentos da especificação pode-se determinar a selectividade da espécie para o anticorpo anti-MAdCAM usando métodos conhecidos na área. Por exemplo, pode-se determinar a selectividade da espécie usando transferências Western, FACS, ELISA ou imu-no-histoquímica. Numa descrição preferida, pode-se determinar a selectividade de espécie usando imuno-histoquímica.
Nalgumas descrições, um anticorpo anti-MAdCAM que 52 ΡΕ2177537 especificamente se liga a MAdCAM tem selectividade para MAdCAM relativamente a VCAM, fibronectina ou qualquer outro antigénio que seja pelo menos 10 vezes, de preferência pelo menos 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 ou 90 vezes, mais de preferência pelo menos 100 vezes. Numa descrição, o anticorpo anti-MAdCAM não apresenta qualquer ligação apreciável a VCAM, fibronectina ou qualquer outro tipo de antigénio que não seja MAdCAM. Pode-se determinar a selectividade do anticorpo anti-MAdCAM para MAdCAM usando métodos conhecidos na área seguindo os ensinamentos da especificação. Por exemplo, pode-se determinar a selectividade usando transferência Western, FACS, ELISA ou imuno-histoquimica.
Afinidade de ligação de anticorpos anti-MAdCAM para MAdCAM
Numa descrição, os anticorpos anti-MAdCAM ligam-se especificamente a MAdCAM com elevada afinidade. Numa descrição, o anticorpo anti-MAdCAM liga-se especificamente a MAdCAM com um Kd de 3 x 1CT8 M ou menos, conforme medido por ressonância de plasmões de superfície, como seja BIAcore. Numa descrição, o anticorpo liga-se especificamente a MAdCAM com um Kd de 1 x 10“8 M ou menos ou 1 x 1CT9 M ou menos. Numa descrição, o anticorpo liga-se especifica-mente a MAdCAM com um Kd de 1 x 10_1° M ou menos. Numa outra descrição um anticorpo liga-se especificamente a MAdCAM com um Kd de 2,35 x 1CT11 M ou menos ou 9 x 10“12 M ou menos. Numa outra descrição, o anticorpo liga-se especificamente a MAdCAM com um Kd de 1 x 1CT11 M ou menos. Numa outra 53 ΡΕ2177537 descrição, o anticorpo liga-se especificamente a MAdCAM com substancialmente o mesmo Kd de um anticorpo seleccionado de entre 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1,6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. Um anticorpo com "substancialmente o mesmo Kd" do anticorpo de referência possui um Kd que é ± 100 pM, mais de preferência ± 50 pM, mais de preferência ± 20 pM, ainda mais de preferência ± 10 pM, ± 5 pM ou ± 2 pM, comparado com o Kd do anticorpo de referência na mesma experiência. Numa outra descrição, o anticorpo liga-se a MAdCAM com substancialmente o mesmo Kd de um anticorpo que compreende um ou mais domínios variáveis ou uma ou mais CDRs de um anticorpo seleccionado entre 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1,6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. Ainda numa outra descrição, o anticorpo liga-se a MAdCAM com substancialmente o mesmo Kd de um anticorpo que compreende uma das sequências de aminoácidos seleccionada entre SEQ ID NOS: 2, 4, CO 10 , 12 \—1 , 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 ou 68 ( com ou sem a sequência sinal) ou o seu domínio variável. Numa outra descrição, o anticorpo liga-se a MAdCAM com substancialmente o mesmo Kd de um anticorpo que compreende uma mais CDRs de um anticorpo que compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada entre SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 ou 68 . 54 ΡΕ2177537 A afinidade de ligação de um anticorpo anti-MAdCAM a MAdCAM pode ser determinada por qualquer método conhecido na área. Numa descrição, a afinidade de ligação pode ser medida por ELISAs competitivos, RIAS ou ressonância de plasmões de superfície, como seja BIAcore. Numa outra descrição, a afinidade de ligação é medida por ressonância de plasmões de superfície. Numa outra descrição, a afinidade de ligação e a velocidade de dissociação é medida usando um BIAcore. Um exemplo de determinação da afinidade de ligação está descrita abaixo no Exemplo II.
Semi-vida de anticorpos anti-MAdCAM
De acordo com um outro objectivo da descrição, o anticorpo anti-MAdCAM tem uma semi-vida de pelo menos um dia in vitro ou in vivo. Numa descrição, o anticorpo ou parte dele tem uma semi-vida de pelo menos três dias, o anticorpo ou parte dele tem uma semi-vida de quatro ou mais dias. Numa outra descrição, o anticorpo ou parte dele tem uma semi-vida de oito dias ou mais. Numa outra descrição, o anticorpo ou porção de ligação ao antigénio do mesmo é derivatizado ou modificado de forma que possui uma semi-vida mais longa, como descrito abaixo. Numa outra descrição, o anticorpo pode conter mutações pontuais para aumentar a semi-vida no soro, como descrito em WO 00/09560, publicado em 24 de Fevereiro, 2000. A semi-vida do anticorpo pode ser medida por 55 ΡΕ2177537 quaisquer meios conhecidos dos familiarizados com a matéria. Por exemplo, a semi-vida do anticorpo pode ser medida por transferência Western, ELISA ou RIA durante um período de tempo adequado. A semi-vida dos anticorpos pode ser medida num animal adequado, como seja um primata, e.g., macaco cinomolgo, ou um ser humano.
Identificação de epitopos de MAdCAM reconhecidos por anticorpo Anti-MAdCAM É igualmente descrito um anticorpo anti-MAdCAM humano que se liga ao mesmo antigénio ou epitopos que um anticorpo anti-MAdCAM humano aqui proporcionado. Ainda, é descrito um anticorpo anti-MAdCAM humano que compete ou compete de forma cruzada com um anticorpo anti-MAdCAM humano. Numa descrição, o anticorpo anti-MAdCAM humano é 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. Numa outra descrição, o anticorpo anti-MAdCAM humano compreende um ou mais domínios variáveis ou uma ou mais CDRs de um anticorpo seleccionado entre 1.7.2, 1.8.2, 6.14,2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod or 7.26.4-mod. Ainda noutra descrição, o anticorpo anti-MAdCAM humano compreende uma das sequências de aminoácidos seleccionada entre SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 or 68 (com ou sem a sequência sinal) ou 56 ΡΕ2177537 um seu domínio variável. Numa outra descrição, o anticorpo anti-MAdCAM humano compreende uma ou mais CDRs de um anticorpo que compreende uma das sequências de aminoácidos seleccionada entre SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8,10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 ou 68. Numa descrição altamente preferida, o anticorpo anti-MAdCAM é um outro anticorpo humano.
Pode-se determinar se um anticorpo anti-MAdCAM se liga ao mesmo antigénio que um outro anticorpo anti-MAdCAM para capturar o antigénio, eluir o antigénio do anticorpo anti-MAdCAM e depois determinar se o anticorpo a testar se ligará ao antigénio eluído. Pode-se determinar se um anticorpo compete com um anticorpo anti-MAdCAM através da ligação do anticorpo anti-MAdCAM a MADCAM em condições saturantes e depois medindo a capacidade do anticorpo a testar para se ligar a MAdCAM. Se o anticorpo a testar for capaz de se ligar a MAdCAM ao mesmo tempo que o anticorpo anti-MAdCAM, então o anticorpo a testar liga-se a um epitopo diferente do anticorpo anti-MAdCAM. No entanto, se o anticorpo a testar não for capaz de se ligar a MAdCAM ao mesmo tempo, então o anticorpo a testar compete com o anticorpo anti-MAdCAM humano. Esta experiência pode ser realizada usando ELISA ou ressonância de plasmões de superfície ou, de preferência, BIAcore. Para testar se um anticorpo anti-MAdCAM competir cruzadamente com um outro anticorpo anti-MAdCAM, pode-se usar o método de competição atrás descrito em duas direcções, i.e. para determinar se o 57 ΡΕ2177537 anticorpo conhecido bloqueia o anticorpo a testar e vice versa.
Utilização dos genes da cadeia leve e da cadeia pesada É igualmente descrito um anticorpo anti-MAdCAM que compreende uma região variável da cadeia leve codificada por um gene k. Numa descrição, a região variável da cadeia leve é codificada por por uma família de genes humanos Vk A2, A3, A26, B3, 012 ou 018. Em várias descrições, a cadeia leve compreende não mais de onze, não mais de seis ou não mais de três substituições de amino-ácidos relativamente à sequência germinal humana Vk A2, A3, A26, B3, 012 ou 018. Numa descrição, as substituições de aminoácidos são substituições conservadas SEQ ID NOS: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44 e 48 proporcionam as sequências de aminoácidos das cadeias leves capa de tamanho completo de doze anticorpos anti-MAdCAM, 1.7.2, 1.8.2, 6.14,2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4 e 9.8.2. As Figuras 1K-1T são alinhamentos das sequências de aminoácidos dos domínios variáveis das cadeias leves de doze anticorpos anti-MAdCAM com as sequências germinais de onde derivam. A Figura 2a mostra um alinhamento das sequências de aminoácidos dos domínios variáveis da cadeia leve das cadeias leves capa de doze anticorpos anti-MAdCAM. Seguindo os ensinamentos desta especificação, os familiarizados com a 58 ΡΕ2177537 área poderão determinar as diferenças entre as sequências germinais e as sequências de anticorpos de outros anticorpos anti-MAdCAM. SEQ ID NOS: 54, 58, 62, 66 ou 68 proporcionam as sequências de aminoácidos das cadeias leves capa de tamanho completo de cinco anticorpos anti-MAdCAM adicionais, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod e 7.26.4-mod, modificadas por substituição de aminoácidos relativamente aos seus anticorpos parentais anti-MAdCAM, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.77.1 ou 7.26.4, rspectivamente.
Numa descrição, a VL do anticorpo anti-MAdCAM possui as mesmas mutações, relativamente à sequência de aminoácidos germinal de qualquer um ou mais das VL dos anticorpos 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. Descreve-se um anticorpo anti-MAdCAM que utiliza os mesmos genes humanos Vk e Jk de um anticorpo exemplificado. Nalgumas descrições, o anticorpo compreende uma ou mais das mesmas mutações da linha germinal como um ou mais anticorpos exemplificados. Nalgumas descrições, o anticorpo compreende diferentes substituições numa ou mais das mesmas posições de um ou mais dos anticorpos exemplificados. Por exemplo, o anticorpo anti-MAdCAM pode conter uma ou mais substituições de aminoácidos que são as mesmas presentes no anticorpo 7.16.6 e uma outra substituição de aminoácidos que é a mesma do anticorpo 7.26.4. Desta forma, pode-se misturar e emparelhar diferentes caracteristicas da ligação do anticorpo de forma a alterar, e.g., a afinidade do anticorpo 59 ΡΕ2177537 para MAdCAM ou a sua velocidade de dissociação do antigénio. Noutras descrições, são feitas mutações na mesma posição das encontradas em qualquer um dos VL dos anticorpos 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2- mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod, mas são feitas substituições de aminoácidos conservadas em vez de usar o mesmo aminoácido. Por exemplo, se a substituição de aminoácido comparada com a sequência germinal num dos anticorpos 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2- mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod for glutamato, pode-se substituir de forma conservada por aspartato. De forma semelhante, se a substituição de aminoácido for serina, pode-se substituir de forma conservada por treonina.
Numa outra descrição, a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é a mesma da sequência de aminoácidos da VL de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2- mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4- mod. Numa outra descrição, a cadeia leve compreende as sequências de aminoácidos que são as mesmas das regiões CDR da cadeia leve de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2- mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4- mod. Noutra descrição, a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos uma região CDR da 60 ΡΕ2177537 cadeia leve de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4- mod. Numa outra descrição, a cadeia leve compreende sequências de aminoácidos com CDRs de diferentes cadeias leves que usam os mesmos genes Vk e Jk. Numa forma de realização mais preferida, as CDRs de diferentes cadeias leves são obtidas a partir de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. Numa outra descrição preferida, a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada de entre 4, 8,12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 64, 66 ou 68 com ou sem a sequência sinal. Numa outra descrição, a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência nucleotídica seleccionada de entre SEQ ID NOS: 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 53, 57, 61, 65 ou 67 (com ou sem a sequência sinal) ou uma sequência nucleotídica que codifica uma sequência de aminoácidos tendo inserções, deleções ou substituições de 1-11 aminoácidos. De preferência, as substituições de aminoácidos são substituições de aminoácidos conservadas. Numa outra descrição, o anticorpo ou porção da mesma compreende uma cadeia leve lambda. É igualmente descrito um anticorpo anti-MAdCAM ou porção do mesmo que compreende uma sequência do gene VH humano ou uma sequência derivada de um gene VH. Numa descrição, a sequência de aminoácidos da cadeia pesada deriva 61 ΡΕ2177537 de uma família de genes humanos VH 1-18, 3-15, 3-21, 3-23, 3- 30, 3-33 ou 4-4. Em várias descrições, a cadeia pesada compreende não mais de quinze, não mais de seis ou não mais de três alterações de aminoácidos relativamente à sequência dos genes humanos VH 1-18, 3-15, 3-21, 3-23, 3-30, 3-33 ou 4- 4 . SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42 e 46 proporcionam as sequências de aminoácidos das cadeias pesadas de tamanho completo de doze anticorpos anti-MAdCAM. As Figuras 1A-1J são alinhamentos das sequências de aminoácidos das regiões variáveis das cadeias pesadas de doze anticorpos anti-MAdCAM com as sequências germinais de onde derivam. A Figura 2B mostra os alinhamentos das sequências de aminoácidos das regiões variáveis das cadeias pesadas de doze anticorpos anti-MAdCAM. Seguindo os ensinamentos desta especificação e as sequências nucleotídicas da descrição, os familiarizados com a área podem determinar a sequência de aminoácidos codificada das doze cadeias pesadas anti-MAdCAM e as cadeias pesadas germinais e determinar as diferenças entre as sequências germinais e as sequências dos anticorpos. SEQ ID NOS: 52, 56, 60 e 64 proporcionam as sequências de aminoácidos das cadeias pesadas de tamanho completo dos anticorpos anti-MAdCAM, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod e 6.67.1-mod, modificados pela substituição de aminoácidos relativamente aos seus anticorpos parentais anti-MAdCAM, 6.22.2, 6.34.2 e 6.67.1 respectivamente. Um outro anticorpo anti-MAdCAM modificado, 7.26.4-mod, possui uma sequência de aminoácidos da cadeia pesada de tamanho completo que é SEQ ID NO:42. 62 ΡΕ2177537
Numa descrição preferida, a VH do anticorpo anti-MAdCAM possui as mesmas mutações, relativamente à sequência de aminoácidos germinal, de qualquer uma ou mais das VH dos anticorpos1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. De forma semelhante ao descrito atrás, o anticorpo compreende uma ou mais das mesmas mutações da sequência germinal de um ou mais dos anticorpos exemplificados. Nalgumas descrições, o anticorpo compreende diferentes substituições numa ou mais das mesmas posições de um ou mais dos anticorpos exemplificados. Por exemplo, o VH do anticorpo anti-MAdCAM pode conter uma ou mais substituições de aminoácidos que são as mesmas presentes no anticorpo 7.16.6 e uma outra substituição de aminoácidos que é a mesma do anticorpo 7.26.4. Desta forma, pode-se misturar e combinar diferentes caracteristicas da ligação do anticorpo de forma a alterar, e.g., a afinidade do anticorpo para MAdCAM ou a sua velocidade de dissociação do antigénio. Numa outra descrição, uma substituição de aminoácidos relativamente à sequência germinal é feita na mesma posição de uma substituição relativamente à sequência germinal como encontrado em qualquer uma ou mais das VH dos anticorpos de referência 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod, mas a posição é substituída com um resíduo diferente, o qual é uma substituição conservada comparativamente com o anticorpo de referência. 63 ΡΕ2177537
Numa outra descrição, a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é a mesma da sequência de aminoácidos da VH de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2- mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4- mod. Numa outra descrição, a cadeia pesada compreende sequências de aminoácidos que são as mesmas das regiões CDR da cadeia pesada de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2- mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4- mod. Numa outra descrição, a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos de pelo menos uma região CDR da cadeia pesada de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2- mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4- mod. Numa outra descrição, a cadeia pesada compreende as sequências de aminoácidos com CDRs de diferentes cadeias pesadas. Numa outra descrição, as CDRs de diferentes cadeias pesadas são obtidas a partir de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. Numa outra descrição, a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 56, 60 ou 64 com ou sem a sequência sinal. Numa outra descrição, a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência nucleotidica seleccionada de SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 64 ΡΕ2177537 33, 37, 41, 45, 51, 55, 59 ou 63 ou uma sequência nucleotidica que codifica uma sequência de aminoácidos tendo inserções, deleções ou substituições de 1-15 aminoácidos. Numa outra descrição, as substituições são substituições de aminoácidos conservadas. Métodos de produção de anticorpos e linhas celulares produtoras de anticorpos
Imunização
Numa forma de realização do presente invento, são produzidos anticorpos humanos através da imunização de um animal não humano compreendendo alguns ou a totalidade dos loci das cadeias pesada e leve de imunoglobulina humana com um antigénio MAdCAM. Numa forma de realização preferida, o animal não humano é um animal XENOMOUSE™, o qual é uma estirpe de murganho manipulada que compreende fragmentos grandes dos loci de imunglobulinas humanas e é deficiente na produção de anticorpos de murganho. Ver, e.gu, Green et al., Nature Genetics 7:13-21 (1994) e Patentes dos Estados
Unidos 5916771, 5939598, 5985615, 5998209, 6075181,
6091001, 6114598 e 6130364. Ver também WO 91/10741, WO 94/02602, WO 96/34096 e WO 96/33735, WO 98/16654, WO 98/24893, WO 98/50433, WO 99/45031, WO 99/53049, WO 00 09560 e WO 00/037504. O animal XENOMOUSE™ produz um reportório de humano tipo adulto de anticorpos totalmente humanos e gera mAbs humanos específicos de antigénio. Uma segunda geração de animais XENOMOUSE™ possui aproximada- 65 ΡΕ2177537 mente 80% do reportório de genes V de anticorpos humanos através da introdução de fragmentos YAC com a configuração germinal com megabses de tamanho dos loci das cadeias pesadas e dos loci das cadeias leves κ humanas. Noutras formas de realização, o murganho XENOMOUSE™ possui aproxi-madamente a totalidade do locus da cadeia pesada e da cadeia leve λ humana. Ver Mendez et al., Nature Genetics 15:146-156 (1997), Green and Jakobovita, J. Exp. Med. 188:483-495(1998) . A descrição também proporciona um método para a preparação de anticorpos anti-MAdCAM a partir de animais não murganhos, não humanos através da imunização de animais transgénicos não humanos que compreendem os loci de imuno-globulinas humanas. Pode-se produzir tais animais usando os métodos descritos imediatamente atrás. Os métodos descritos nestes documentos podem ser modificados como descrito na Patente U.S. 5994619 (a "patente '619 " ) · A patente ' 619 descreve métodos para a produção de novas células em cultura da massa celular interna (CICM) e linhas celulares, derivadas de porcos e vacas e células CICM transgénicas nas quais foi introduzido DNA heterogéneo. As células transgénicas CICM podem ser usadas para produzir embriões transgénicos clonados, fetos e descendência. A patente '619 também descreve métodos de produção de animais transgénicos que são capazes de transmitir o DNA heterólogo à sua progénie. Numa forma de realização preferida, os animais não humanos podem ser ratos, ovelhas, porcos, cabras, gado bovino e cavalos. 66 ΡΕ2177537
Numa outra forma de realização, o animal não humano compreendendo loci de imunoglobulinas humanas são animais que possuem um "minilocus" de imunoglobulinas humanas. Na abordagem de minilocus, um locus de Ig exógeno é simulado através da inclusão de genes individuais do locus Ig. Assim, um ou mais genes VH, um ou mais genes DH, um ou mais genes JH, um ou mais dominios constantes μ e um segundo domínio constante (de preferência um ou mais domínios constantes gama) são formados numa construção para inserção num animal. Esta abordagem está descrita, inter alia, nas Patentes U.S. N°5545807, 5545806, 5625126, 5633425, 5661016, 5770429, 5789650, 5814318, 5591669, 5612205, 5721367, 5789215, e 5643763.
Uma vantagem da abordagem de minilocus é a rapidez com que as construções incluindo porções do locus Ig podem ser geradas e introduzidas nos animais. No entanto, uma desvantagem potencial da abordagem de minilocus é que pode não haver diversidade suficiente de imunoglobulinas para suportar o desenvolvimento completo das células B, de forma que pode haver menos produção de anticorpos.
Para produzir um anticorpo anti-MAdCAM, um animal não humano compreendendo parte ou a totalidade dos loci de imunoglobulinas humanas é imunizado com um antigénio MAdCAM e um anticorpo ou célula produtora de anticorpo é isolado do animal. O antigénio MAdCAM pode ser MAdCAM isolado e/ou purificado e é preferencialmente um MAdCAM humano. Numa 67 ΡΕ2177537 outra forma de realização, o antigénio MAdCAM é um fragmento de MAdCAM, de preferência o domínio extracelular de MAdCAM. Numa outra forma de realização, o antigénio MAdCAM é um fragmento que compreende pelo menos um epitopo de MAdCAM. Numa outra forma de realização, o antigénio MAdCAM é uma célula que expressa MAdCAM na sua superfície celular, de preferência uma célula que expressa em excesso MAdCAM na sua superfície. A imunização de animais pode ser feita por quaisquer métodos conhecidos na área. Ver, e.g., Harlow and Lane, "Antibodies: A Laboratory Manual", New York: Cold Spring Harbor Press (1990). Métodos para imunizar animais não humanos tais como murganhos, ratos, ovelhas, cabras, porcos, bovinos e cavalos são conhecidos na área. Ver, e.g., Harlow and Lane e Patente dos Estados Unidos 5994619. Numa forma de realização preferida, o antigénio MAdCAM é administrado com um adjuvante para estimular a resposta imune. Tais adjuvantes incluem adjuvante completo ou incompleto de Freund, RIBI (muramildipéptidos) ou ISCOM (complexos imunostimuladores). Tais adjuvantes podem proteger o polipéptido da dispersão rápida por sequestro num depósito local ou podem conter substâncias que estimulam o hospedeiro para secretar factores que são quimiotácticos para os macrófagos e outros componentes do sistema imune. De preferência, se um polipéptido está a ser administrado, o protocolo de imunização envolverá duas ou mais administrações do polipéptido, disseminação ao longo de várias semanas. 68 ΡΕ2177537 0 Exemplo 1 proporciona um protocolo para imunização de um animal XENOMOUSE™ com MAdCAM de tamanho completo em soro fisiológico tamponado com fosfatos.
Produção de anticorpos e linhas celulares produtoras de anticorpos
Após imunização de um animal com um antigénio MAdCAM, os anticorpos e/ou células produtoras de anticorpos pode ser obtido a partir do animal. Um soro contendo anticorpos anti-MAdCAM é obtido a partir do animal através da colheita de sangue ou sacrificando o animal. 0 soro pode ser usado tal como é obtido do animal, pode ser obtida uma fracção de imunoglobulinas ou os anticorpos anti-MAdCAM podem ser purificados a partir do soro.
Harlow e Lane
Numa outra forma de realização, as linhas celulares imortalizadas produtoras de anticorpos podem ser preparadas a partir do animal imunizado. Após imunização, o animal é sacrificado e as células B são imortalizadas usando métodos conhecidos na área. Métodos de imortalização de células incluem, mas não estão limitadas a transfecção com oncogenes, infecção com um virus oncogénico e cultura em condições gue seleccionam células imortalizadas, exposição das células a compostos carcinogénicos ou mtagénicos, fusão com uma célula imortalizada, e.g., uma célula de mieloma, e inactivação de um gene supressor de tumor. Ver, e.g. Harlow e Lane, supra. Em formas de realização 69 ΡΕ2177537 envolvendo as células de mieloma, as células de mieloma não secretam polipéptidos de imunoglobulina (uma linha celular não secretória). Após imortalização e selecção com antibióticos, as células imortalizadas ou os sobrenadantes de cultura são testados usando MAdCAM, uma porção do mesmo ou uma célula que expresse MAdCAM. Numa forma de realização preferida, o rastreio inicial é efectuado com um imuno-ensaio ligado a enzima (ELISA) ou com um radio-imunoensaio (RIA), de preferência um ELISA. Um exemplo de ELISA é proporcionado na Publicação PCT N° WO 00/37504.
Numa outra forma de realização, as células produtoras de anticorpos podem ser preparadas a partir de um ser humano que tem uma doença autoimune e que expressa anticorpos anti-MAdCAM. As células que expressam os anticorpos anti-MAdCAM podem ser isoladas através do isolamento de leucócitos e sujeitando-os a separação de células activada por fluorescência (FACS) ou por aderência a placas revestidas com MAdCAM ou uma porção do mesmo. Estas células podem ser fundidas com um mieloma humano não secretório para produzir hibridomas humanos expressando anticorpos humanos anti-MAdCAM. Em geral, esta é uma forma de realização menos preferida devido a ser provável que os anticorpos anti-MAdCAM terem baixa afinidade para MAdCAM.
As células produtoras de anticorpos anti-MAdCAM, e.g., hibridomas, são seleccionadas, clonadas e ainda testadas relativamente a caracteristicas pretendidas, incluindo um crescimento celular robusto, elevada produção 70 ΡΕ2177537 de anticorpos e caracterísiticas de anticorpos desejáveis, como discutido mais abaixo. Os hibrodomas podem ser cultivados e expandidos in vivo em animais singeneicos, em animais que não possuem um sistema imune, e.g., murganhos labro, ou em culturas celulares in vitro. Métodos de selecção, clonagem e expansão de hibridomas são conhecidos dos familiarizados com a área.
De preferência, o animal imunizado é um animal não humano que expressa genes de imunoglobulinas humanas e as células B do baço são fundidas com um mieloma derivado da mesma espécie do animal não humano. Mais de preferência, o animal imunizado é um animal XENOMOUSE™ e a linha celular de mieloma é um mieloma de murganho não secretório, como seja a linha celular de mieloma P3-X63-AG8-653 (ATCC). Ver, e.g., Exemplo 1.
Assim, a descrição proporciona métodos para a produção de uma linha celular que produz um anticorpo monoclonal humano ou um seu fragmento dirigido contra MAdCAM compreendendo (a) imunização de um animal trans-génico não humano aqui descrito com MAdCAM, uma porção de MAdCAM ou uma célula ou tecido que expresse MAdCAM; (b) permitindo que o animal transgénico monte uma resposta imune contra MAdCAM; (c) isolamento das células produtoras de anticorpos a partir do animal transgénico; (d) imortalização das células produtoras de anticorpos; (e) criação de populações monoclonais individuais das células produtoras de anticorpos imortalizadas; e (f) rastreio das 71 ΡΕ2177537 células produtoras de anticorpos imortalizadas ou sobre-nadantes de cultura das mesmas para identificar um anticorpo dirigido contra MAdCAM.
Num aspecto, o invento proporciona hibridomas que produzem anticorpos anti-MAdCAM. Numa forma de realização preferida, os hibridomas são hibridomas de murganho, como descrito atrás. Numa outra forma de realização, os hibridomas são produzidos numa espécie não humana não murganho como sejam ratos, ovelhas, porcos, cabras, gado bovino e cavalos. Numa outra forma de realização, os hibridomas são hibridomas humanos, nos quais uma célula de mieloma humana não secretória é fundida com uma célula humana que expressa um anticorpo anti-MAdCAM. Ácidos nucleicos, vectores, células hospedeiras e métodos recombinantes da preparação de anticorpos Ácidos nucleicos São proporcionadas moléculas de ácido nucleico codificadores de anticorpos anti-MAdCAM do invento. Numa forma de realização, a molécula de ácido nucleico codifica uma cadeia pesada e/ou leve de uma imunoglobulina anti-MAdCAM. Numa forma de realização preferida, uma molécula de ácido nucleico simples codifica uma cadeia pesada de uma imunoglobulina anti-MAdCAM e uma outra molécula de ácido nucleico codifica a cadeia leve de uma imunoglobulina anti-MAdCAM. Numa forma de realização preferida, a imunoglobu- 72 ΡΕ2177537 lina codificada é uma imunoglobulina humana, de preferência uma IgG humana. A cadeia leve codificada pode ser uma cadeia X ou uma cadeia k, de preferência uma cadeia k.
Numa forma de realização preferida, a molécula de ácido nucleico codificadora da região variável da cadeia leve compreende a sequência germinal de um gene Vk humano A2, A3, A26, B3, 012 ou 018 ou uma variante da referida sequência. Numa forma de realização preferida, a molécula de ácido nucleico codificadora da cadeia leve compreende uma sequência derivada de um gene JkI, Jk2, Jk3, Jk4 ou Jk5. Numa forma de realização preferida, a molécula de ácido nucleico codificadora da cadeia leve codifica não mais de onze alterações de aminoácidos do gene germinal Vk A2, A3, A26, B3, 012 ou 018, de preferência não mais de seis alterações de aminoácidos e mesmo ainda mais preferencialmente não mais de três alterações de aminoácidos. Numa forma de realização mais preferida, o ácido nucleico codificador da cadeia leve é a sequência germinal.
Descreve-se uma molécula de ácido nucleico que codifica uma região variável da cadeia leve (VL) contendo até onze alterações de aminoácidos comparativamente com a sequência germinal, em que as alterações de aminoácidos são idênticas às alterações de aminoácidos da sequência germinal da VL de um dos anticorpos 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. Também é descrita uma molécula de ácido 73 ΡΕ2177537 nucleico compreendendo uma sequência nucleotidica que codifica a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2- mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. Também é descrita uma molécula de ácido nucleico compreendendo uma sequência nucleotidica que codifica a sequência de aminoácidos de uma ou mais CDRs de qualquer uma das cadeias leves de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. Numa descrição, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência de nucleótidos que codifica a sequência de aminoácidos de todas as CDRs de qualquer uma das cadeias leves de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2- mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. Numa outra descrição, a molécula de ácido nucleico coompreende uma sequência nucleotidica que codifica a sequência de aminoácidos de uma das SEQ ID NOS: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 66, 68 ou
compreende uma sequência nucleotidica de uma das SEQ ID NOS: 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 53, 57, 61, 65 ou 67. Numa outra descrição, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência nucleotidica que codifica a sequência de aminoácidos de uma ou mais CDRs de qualquer uma das SEQ ID NOS: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 66, 68 ou compreende uma sequência
nucleotidica de uma ou mais CDRs de qualquer uma das SEQ ID 74 ΡΕ2177537 NOS: 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 53, 57, 61, 65 ou 67. Numa descrição, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência nucleotidica que codifica a sequência de aminoácidos de todas as CDRs de qualquer uma das SEQ ID NOS: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 66, 68 ou compreende a sequência
nucleotidica de todas as CDRs de qualquer uma das SEQ ID NOS: 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 53, 57, 61, 65 ou 67.
Descreve-se igualmente uma molécula de ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos de uma VL que tem a sequência de aminoácidos que é pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a uma VL descrita atrás, particularmente a uma VL que compreende uma sequência de aminoácidos de uma das SEQ ID NOS: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 66 or 68. Também é descrita uma sequência nucleotidica que é pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a uma sequência nucleotidica de uma das SEQ ID NOS: 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 53, 57, 61, 65 ou 67. É descrita uma molécula de ácido nucleico que híbrida em condições altamente restringentes com uma molécula de ácido nucleico codificadora de uma VL como descrito atrás, particularmente uma molécula de ácido nucleico que compreende uma sequência nucleotidica codificadora de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 4, 8, 75 ΡΕ2177537 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 66 ou 68. É igualmente proporcionada uma molécula de ácido nucleico que híbrida em condições altamente restringentes com uma molécula de ácido nucleico compreendendo uma sequência nucleotídica de uma das SEQ ID NOS: 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 53, 57, 61, 65 ou 67.
Também é descrita uma molécula de ácido nucleico codificadora de uma região variável da cadeia pesada (VH) que utiliza um gene VH humano 1-18, 3-15, 3-21, 3-23, 3-30, 3-33 ou 4-4. Nalgumas descrições, a molécula de ácido nucleico codificadora do gene VH ainda utiliza um gene humano da família JH4 ou JH6. Nalgumas descrições, a molécula de ácido nucleico codificadora do gene VH utiliza o gene humano JH4b ou JH6b. Numa outra descrição, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência derivada de um gene humano D 3-10, 4-23, 5-5, 6-6 ou 6-19. Numa outra descrição a molécula de ácido nucleico codificadora de VH possui não mais de quinze alterações de aminoácidos dos genes germinais VH1-18, 3-15, 3-21, 3-23, 3-30, 3-33 ou 4-4, de preferência não mais de seis alterações de aminoácidos e mesmo mais de preferência não mais de três alterações de aminoácidos. Numa outra descrição, a molécula de ácido nucleico codificadora de VH possui pelo menos uma alteração de aminoácidos comparativamente com a sequência germinal, em que a alteração de aminoácidos é idêntica a uma alteração de aminoácidos da sequência germinal da cadeia pesada de um dos anticorpos 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 76 ΡΕ2177537 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1- mod ou 7.26.4-mod. Numa outra descrição, a VH possui não mais de quinze alterações de aminoácidos comparativamente com as sequências germinais, em que as alterações são idênticas às alterações da sequência germinal da VH de um dos anticorpos 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2- mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod.
Numa descrição, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência nucleotidica que codifica a sequência de aminoácidos da VH de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1- mod ou 7.26.4-mod. Numa outra descrição, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência nucleotidica que codifica a sequência de aminoácidos de uma ou mais das CDRs da cadeia pesada de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2- mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4- mod. Numa descrição, a molécula de ácido nucleico compreende as sequências nucleotidicas que codificam as sequências de aminoácidos de todas as CDRs da cadeia pesada de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2- mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. Numa outra descrição, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência nucleotidica que codifica a sequência de aminoácidos de uma das SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 77 ΡΕ2177537 34, 38, 42, 46, 52, 56, 60 ou 64 ou que compreende uma sequência nucleotídica de uma das SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 51, 55, 59 ou 63. Numa outra descrição, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência nucleotídica que codifica a sequência de aminoácidos de uma ou mais das CDRs de qualquer uma das SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 56, 60 ou 64 ou compreende uma sequência nucleotídica de uma ou mais das CDRs de qualquer uma das das SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 51, 55, 59 ou 63.
Numa descrição, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência nucleotídica que codifica as sequências de
aminoácidos de todas as CDRs de qualquer uma das SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 56, 60 ou 64 ou compreende uma sequência nucleotídica de todas as CDRs de qualquer uma das SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 51, 55, 59 ou 63. Numa descrição, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência nucleotídica codificadora de uma região contígua desde o começo da CDR1 até ao fim da CDR3 de uma cadeia pesada ou leve de qualquer um dos anticorpos anti-MAdCAM atrás referidos.
Numa outra descrição, a molécula de ácido nucleico codifica uma sequência de aminoácidos de uma VH que é pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a uma das sequências de aminoácidos codificadora de uma VH como descrito imediatamente atrás, particularmente a uma VH que compreende uma sequência de 78 ΡΕ2177537 aminoácidos de uma das SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 56, 60 ou 64. É igualmente descrita uma sequência nucleotidica que é pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a uma sequência nucleotidica de uma das SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 51, 55, 59 ou 63.
Numa outra descrição, a molécula de ácido nucleico codificadora de uma VH é uma que híbrida em condições altamente restringentes com uma sequência nucleotidica codificadora de uma VH como atrás descrito, particularmente com uma VH que compreende uma sequência de aminoácidos de uma das SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 56, 60 ou 64. É igualmente proporcionada uma sequência nucleotidica codificadora de uma VH que híbrida em condições altamente restringentes com uma molécula de ácido nucleico compreendendo uma sequência nucleotidica de uma das SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 51, 55, 59 ou 63. A sequência nucleotidica codificadora de uma ou de ambas as cadeias pesada e leve de um anticorpo anti-MAdCAM ou das suas regiões variáveis pode ser obtida a partir de qualquer fonte que produza um anticorpo anti-MAdCAM. Métodos de isolamento de mRNA codificador de um anticorpo são bem conhecidos na área. Ver, e.g., Sambrook et ai., "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989) . O mRNA pode ser usado para produzir DNA para 79 ΡΕ2177537 usar na reacção em cadeia da polimerase (PCR) ou na clonagem de cDNA de genes de anticorpos. Numa forma de realização do invento, as moléculas de ácido nucleico podem ser obtidas a partir de um hibridoma que expressa um anticorpo anti-MAdCAM, como descrito atrás, de preferência um hibridoma que tem como parceiro de fusão uma célula de animal transgénico que expressa genes de imunoglobulina humana, tais como um animal XENOMOUSE™, um animal transgénico não humano murganho ou um animal transgénico não humano, não murganho. Numa outra forma de realização, o hibridoma deriva de um animal não humano não transgénico, o qual pode ser usado, e.g., para anticorpos humanizados.
Uma molécula de ácido nucleico codificadora da totalidade da cadeia pesada de um anticorpo anti-MAdCAM pode ser construída através da fusão de uma molécula de ácido nucleico codificadora da totalidade do domínio variável de uma cadeia pesada, ou de um domínio de ligação ao antigénio do mesmo, com um domínio constante de uma cadeia pesada. De forma semelhante, uma molécula de ácido nucleico codificadora da cadeia leve de um anticorpo anti-MAdCAM pode ser construída através da fusão de uma molécula de ácido nucleico codificadora do domínio variável de uma cadeia leve, ou de um seu domínio de ligação ao antigénio, com um domínio constante de uma cadeia leve. As moléculas de ácido nucleico codificadoras das regiões VH e VL podem ser convertidas em genes de anticorpos de tamanho completo através da sua inserção em vectores de expressão já codificadores das regiões constantes da cadeia pesada e da 80 ΡΕ2177537 cadeia leve, respectivamente, de forma que o segmento VH seja operacionalmente ligado a segmentos da região constante da cadeia pesada (CH) dentro do vector e o segmento VL seja operacionalmente ligado ao segmento da região constante da cadeia leve (CL) dentro do vector. Como alternativa, as moléculas de ácido nucleico codificadoras das cadeias VH ou VL são convertidas em genes de anticorpos de tamanho completo através da associação, e.g., ligação, da molécula de ácido nucleico codificadora de uma cadeia VH com uma molécula de ácido nucleico codificadora de uma cadeia CH usando técnicas convencionais de biologia molecular. 0 mesmo pode ser conseguido usando moléculas de ácido nucleico codificadoras das cadeias VL e CL. As sequências dos genes da região constante das cadeias pesada e leve humanas são conhecidas na área. Ver, e.g., Kabat et al., "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5th Ed., NIH Publ. No. 91-3242 (1991). As moléculas de ácido nucleico codificadoras das cadeias pesada e/ou leve de tamanho completo podem ser então expressas a partir de uma célula na qual foram introduzidas e isolado o anticorpo anti-MAdCAM.
Numa descrição, o ácido nucleico codificador da região variável da cadeia pesada codifica a região variável das sequências de aminoácidos das SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 4, 8, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 56, 60 ou 64 e a molécula de ácido nucleico codifiadora da região variável das cadeias leves codifica a região variável da sequência de aminoácidos das SEQ ID NOS: 4, 8,12, 16, 20, 24, 28, 32 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 66 ou 68. 81 ΡΕ2177537
Numa forma de realização, uma molécula de ácido nucleico codificadora da cadeia pesada de um anticorpo anti-MAdCAM ou de uma porção de ligação ao antigénio do mesmo ou a cadeia leve de uma anticorpo anti-MAdCAM ou de uma porção de ligação ao antigénio do mesmo pode ser isolada a partir de um animal não humano não murganho que expressa genes de imunoglobulina humana e foi imunizado com antigénio MAdCAM. Numa outra forma de realização, a molécula de ácido nucleico pode se risolada a partir de uma célula produtora de anticorpo anti-MAdCAM derivada de um animal não transgénico ou de um doente humano que produz anticorpos anti-MAdCAM. 0 mRNA das células produtoras do anticorpo anti-MAdCAM pode ser isolado por técnicas convencionais, clonado e/ou amplificado usando PCR e técnicas de construção de bibliotecas e testadas usando protocolos convencionais para obter moléculas de ácido nucleico codificadoras das cadeias pesada e leve anti-MAdCAM.
As moléculas de ácido nucleico podem ser usadas para expressar por via recombinante grandes quantidade de anticorpos anti-MAdCAM como descrito abaixo. As moléculas de ácido nucleico podem também ser usadas para produzir anticorpos quiméricos, anticorpos de cadeia simples, imunoadesinas, diacorpos, anticorpos mutados e derivados de anticorpos, como descrito mais abaixo. Se as moléculas de ácido nucleico derivarem de um animal não humano não transgénico, as moléculas de ácido nucleico podem ser 82 ΡΕ2177537 usadas para a humanização de anticorpos, igualmente como descrito abaixo.
Numa outra forma de realização, as moléculas de ácido nucleico do invento podem ser usadas como sondas ou sequências inciadoras de PCR para sequências de anticorpos específicos. Por exemplo, uma molécula de ácido nucleico sonda pode ser usada em métodos de diagnóstico ou uma molécula de ácido nucleico sequência iniciadora de PCR pode ser usada para amplificar regiões de DNA que poderão ser usadas, inter alia, para isolar sequências nucleotídicas para usar na produção de domínios variáveis de anticorpos anti-MAdCAM. Numa forma de realização preferida, as moléculas de ácido nucleico são oligonucleótidos. Numa forma de realização mais preferida, os oligonucleótidos são de regiões altamente variáveis das cadeias pesada e leve do anticorpo de interesse. Numa forma de realização ainda mais preferida, os oligonucleótidos codificam a totalidade ou parte de uma ou mais das CDRs.
Vectores 0 invento proporciona vectores compreendendo as moléculas de ácido nucleico do invento que codificam a cadeia pesada ou a sua porção de ligação ao antigénio. 0 invento também proporciona vectores compreendendo as moléculas de ácido nucleico do invento que codificam a cadeia leve ou a sua porção de ligação ao antigénio. 0 invento também proporciona vectores compreendnedo moléculas 83 ΡΕ2177537 de ácido nucleico codificadoras de proteínas de fusão, anticorpos modificados, fragmentos de anticorpos e sondas dos mesmos.
Para expressar os anticorpos, ou porções dos anticorpos do invento, DNAs codificadores de parte ou da totalidade das cadeias leve e pesada, obtidos como descrito atrás, são inseridos em vectores de expressão de forma que os genes sejam operacionalmente ligados a sequências de controlo da transcrição e da tradução. Os vectores de expressão incluem plasmídeos, retrovírus, adenovirus, virus adeno-associados (AAV), vírus de plantas tais como vírus do mosaico da couve-flor, vírus do mosaico do tabaco, cosmídeos, YACs, epissomas derivados de EBV e similares. 0 gene do anticorpo é ligado a um vector de forma que sequências de controlo da transcrição e da tradução dentro do vector sirvam a função a que se destinam de regulação da transcrição e da tradução do gene do anticorpo. 0 vector de expressão e as sequências de controlo da expressão são escolhidos de forma a serem compatíveis com a célula hospedeira de expressão usada. 0 gene da cadeia leve do anticorpo e o gene da cadeia pesada do anticorpo podem ser inseridos em vectores separados. Numa forma de realização preferida, ambos os genes são inseridos no mesmo vector de expressão. Os genes do anticorpo são inseridos no vector de expressão segundo métodos convencionais (e.g., ligação de locais de restrição complementares no fragmento do gene do anticorpo e do vector ou ligação de extremos cerses se não existirem locais de restrição). 84 ΡΕ2177537
Um vector conveniente é um que codifica uma sequência de imunoglobulina CH ou CL humana completamente funcional, com locais de restrição adequados introduzidos de forma que qualquer sequência VH ou VL possa ser facilmente inserida e expressa, como descrito atrás. Nesses vectores, geralmente ocorre "splicing" entre o local dador de "splicing" na região J inserida e o local aceitador de "splicing" que precede a região C humana e também nas regiões de "splicing" que surgem dentro dos exões CH humanos. A poliadenilação e a terminação da transcrição ocorrem em locais cromossómicos nativos a jusante das regiões codificadoras. 0 vector de expressão recombinante pode também codificar um péptido sinal que facilita a secreção da cadeia de anticorpo pela célula hospedeira. 0 gene da cadeia de anticorpo pode ser clonado no vector de forma que o péptido sinal seja ligado em grelha ao extremo amina do gene da cadeia de anticorpo. 0 péptido sinal pode ser um péptido sinal de imunoglobulina ou um péptido sinal heterólogo (i.e. um péptido sinal derivado de uma proteína não imunoglobulina).
Para além dos genes das cadeias de anticorpo, os vectores de expressão recombinantes do invento possuem sequências reguladoras que controlam a expressão dos genes das cadeias de anticorpo numa célula hospedeira. Será apreciado pelos familiarizados com a área que o desenho de um vector de expressão, incluindo a selecção de sequências reguladoras pode depender de factores tais como a escolha 85 ΡΕ2177537 da célula hospedeira a ser transformada, o nivel de expressão da proteína pretendida, etc. Sequências reguladoras preferidas para a expressão em células hospedeiras de mamífero incluem elementos virais que dirigem níveis elevados de expressão proteica em células de mamífero, tais como promotores e/ou estimuladores derivados de LTRs retroviriais, citomegalovírus (CMV) (tais como o promo-tor/estimulador de CMV), Vírus Símio 40 (SV40) (como seja o promotor/estimulador de SV40), adenovírus (e.g., o principal promotor tardio de adenovírus (AdMLP)) , polioma e promotores fortes de mamífero como sejam os promotores nativos de imnoglobulinas e de actina. Para mais descrição de elementos reguladores virais e suas sequências, ver, e.g., Patentes U.S. Nos 5168062, 4510245 e 4968615. Métodos para a expressão de anticorpos em plantas, incluindo uma descrição dos promotores e vectores, assim como para a transformação de plantas são conhecidos na área. Ver, e.g., Patente dos Estados Unidos 6517529. Métodos de expressão de polipéptidos em células bacterianas ou em células de fungos, e.g., células de levedura, são igualmente conhecidos na área.
Para além dos genes das cadeias de anticorpos e sequências reguladoras, os vectores de expressão recombi-nante do invento podem ser portadores de outras sequências que regulam a replicação do vector nas células hospedeiras (e.g., origens de replicação) e genes de marcas seleccio-náveis. O gene da marca seleccionável facilita a selecção de células hospedeiras nas quais o vector tenha sido 86 ΡΕ2177537 introduzido (ver, e.g., Pat. U.S. 4399216, 4634665 e 5179017). Por exemplo, tipicamente o gene da marca selec-cionável confere resistência a fármacos, como seja G418, higromicina ou metotrexato, numa célula hospedeira na qual o vector foi introduzido. Genes de marcas seleccionáveis preferidos incluem o gene da diidrofolato redutase (DHFR) (para usar em células hospedeiras dhfr- com selecção/am-plificação com metotrexato) e o gene neo (para selecção com G418) e o gene da sintetase de glutamato. Células hospedeiras não hibridoma e métodos recombinantes de produção de proteínas
As moléculas de ácido nucleico codificadoras da cadeia pesada ou de uma porção de ligação ao antigénio e/ou da cadeia leve ou uma porção de ligação ao antigénio de um anticorpo anti-MAdCAM e vectores compreendendo estas moléculas de ácido nucleico, podem ser usadas para trans-nformação de uma célula hospedeira adequada de mamífero, planta, bactéria ou levedura. A transformação pode ser por qualquer método conhecido para a introdução de polinucleó-tidos numa célula hospedeira. Métodos para a introdução de polinucleótidos heterólogos em células de mamífero são conhecidos na área e incluem transfecção mediada por dextrano, precipitação com fosfato de cálcio, transfecção mediada por polibreno, fusão de protoplastos, electropo-ração, encapsulação dos polinucleótidos em lipossomas, injecção biolística e microinjecção directa do DNA no núcleo. Ainda, as moléculas de ácido nucleico podem ser 87 ΡΕ2177537 introduzidas em células de mamífro através de vectores virais. Métodos de transformação de células são conhecidos na área. Ver, e.g., Patentes U.S. Nos. 4399216, 4912044, 4740461, e 4959455. Métodos de transformação de células vegetais são conhecidos na área, incluindo, e.g. transformação mediada por Agrobacterium, transformação biolistica, injecção directa, electroporação e transformação virai. Métodos de transformação de células bacterianas e de levedura são igualmente conhecidas na área.
Linhas celulares de mamífero disponíveis como hospedeiras para a expressão são conhecidas na área e incluem muitas linhas celulares imortalizadas disponíveis na American Type Culture Collection (ATCC). Estas incluem, inter alia, células de ovário de hamster chinês (CHO), NSO, células SP2, células HEK-293T, células NIH-3T3, células HeLa, células de rim de hamster bebé (BHK), células de rim de macaco (COS), células de carcinoma hepatocelular humano (e.g., Hep G2) , células A549, células 3T3 e uma série de outras linhas celulares. Células hospedeiras de mamífero incluem células humanas, de murganho, de rato, de cão, de macaco, de porco, de cabra, de bovino, de cavalo e de cobaio. Linhas celulares particularmente preferidas são seleccionadas determinando quais as linhas celulares que possuem níveis de expressão mais elevados. Outras linhas celulares que podem ser usadas são as linhas celulares de insecto, tais como células Sf9, células de anfíbios, células bacterianas, células vegetais e células de fungos. Quando os vectores de expressão recombinantes codificadores ΡΕ2177537 da cadeia pesada ou da porção de ligação ao antigénio da mesma, da cadeia leve e/ou da sua porção de ligação ao antigénio são introduzidos em células hospedeiras de mamífero, são produzidos anticorpos através da cultura das células hospedeiras durante um período de tempo suficiente para permitir a expressão do anticorpo nas células hospedeiras ou, mais de preferência, secreção do anticorpo para o meio de cultura em que as células hospedeiras são mantidas. Os anticorpos podem ser recuperados a partir do meio de cultura usando métodos convencionais de purificação de proteínas. Células hospedeiras vegetais incluem, e.g., Nicotiana, Arabidopsis, lentilha aquática, milho, trigo, batata, etc. Células hospedeiras bacterianas incluem E. coli e espécies de Streptomyces. Células hospedeiras de levedura incluem Schizosaccharomyces pombe, Saccharomyces cerevisiae e Pichia pastoris.
Ainda, a expressão de anticorpos do invento (ou partes dos mesmos) a partir de linhas celulares produtoras pode ser aumentada usando uma série de técnicas conhecidas. Por exemplo, o sistema de expressão do gene da sintetase de glutamina (o sistema GS) é uma abordagem comum para aumentar a expressão em determinadas condições. 0 sistema GS está discutido na sua totalidade ou em parte nas Patentes Europeias Nos. 0216 846, 0 256 055, 0 338 841 e 0 323 997. É provável que os anticorpos expressos por diferentes linhas celulares ou em animais transgénicos 89 ΡΕ2177537 terão glicosilação diferente. No entanto, todos os anticorpos codificados pelas moléculas de ácido nucleico aqui proporcionadas ou compreendendo as sequências de aminoácidos aqui proporcionadas são parte do presente invento, independentemente da glicosilação dos anticorpos.
Animais e plantas transgénicos 0 invento também proporciona animais transgénicos não humanos e plantas transgénicas compreendendo uma ou mais moléculas de ácido nucleico do invento que podem ser usados para produzir os anticorpos do invento. Os anticorpos podem ser produzidos e recuperados a partir de tecidos ou fluidos corporais, tais como leite, sangue ou urina, de cabras, vacas, cavalos, porcos, ratos, murganhos, coelhos, cobaios ou outros mamíferos. Ver, e.g., Patentes U.S. Nos. 5,827,690, 5,756,687, 5,750,172, e 5,741,957. Como descrito atrás, os animais transgénicos não humanos que compreendem loci de imunoglobulinas humanas podem ser imunizados com MAdCAM ou uma porção do mesmo. Métodos para a produção de anticorpo em plantas estão descritos, e.g., nas Patentes U.S. 6,046,037 e 5,959,177.
Numa outra forma de realização, animais transgénicos não humanos e plantas transgénicas são produzidas através da introdução de uma ou mais moléculas de ácido nucleico do invento no animal ou planta segundo técnicas transgénicas convencionais. Ver Hogan, supra. As células 90 ΡΕ2177537 transgénicas usadas na preparação do animal transgénico podem ser células estaminais embrionárias, células somáticas ou células de ovos fertilizados. Os organismos trans-génicos não humanos podem ser quiméricos, heterozigóticos não quiméricos e homozigóticos não quiméricos. Ver, e.g., Hogan et ai., "Manipulating the mouse Embryo: A Laboratory Manual" 2ed., Cold Spring Harbor Press (1999); Jackson et ai., "Mouse Genetics and Transgenics: A Practical Approach", Oxford University Press (2000); e Pinkert "Transgenic Animal Technology: A Laboratory Handbook", Academic Press (1999). Numa outra forma de realização, os organismos transgénicos não humanos podem ter uma disrupção orientada e substituição que codifica uma cadeia pesada e/ou leve de interesse. Numa forma de realização preferida, o animal ou plantas transgénicos compreendem e expressam moléculas de ácido nucleico codificadoras das cadeias pesada e leve que se combinam para se ligarem especifi-camente a MAdCAM, de preferência a MAdCAM humano. Numa outra forma de realização, os animais ou plantas transgénicos compreendem moléculas de ácido nucleico codificadoras de um anticorpo modificado como seja um anticorpo de cadeia simples, um anticorpo quimérico ou um anticorpo humanizado. Os anticorpos anti-MAdCAM podem ser feitos em qualquer animal transgénico. Numa forma de realização preferida, os animais não humanos são murganhos, ratos, ovelhas, porcos, cabras, bovinos ou cavalos. 0 animal transgénico não humano expressa os referidos polipéptidos no sangue, leite, urina, saliva, lágrimas, muco e outros fluidos corporais. 91 ΡΕ2177537
Bibliotecas de apresentaçao fágica A descrição proporciona um método para a produção de um anticorpo anti-MAdCAM u porção de ligação ao antigénio do mesmo compreendendo os passos de síntese de uma biblioteca de anticorpos humanos em fagos, rastreio da biblioteca com um MAdCAM ou porção do mesmo, isolamento dos fagos que se ligam a MAdCAM e obtenção do anticorpo a partir do fago. Um método para preparar a biblioteca de anticorpos compreende os passos de imunização de um animal hospedeiro não humanos compreendendo um locus de imuno-globulina humana com MAdCAM ou uma porção antigénica do mesmo para criar uma resposta imune, extracção das células do animal hospedeiro que são responsáveis pela produção de anticorpos; isolamento do RNA das células extraídas, transcrição reversa do RNA para produzir cDNA, amplificação do cDNA usando uma sequência iniciadora e inserção do cDNA no vector de apresentação fágica de forma que os anticorpos sejam expressos no fago. Os anticorpos recombinantes anti-MAdCAM do invento podem ser obtidos desta forma.
Anticorpos humanos recombinantes anti-MAdCAM do invento para além dos anticorpos anti-MAdCAM aqui descritos podem ser isolados através do rastreio de uma biblioteca combinatória de anticorpos recombinantes, de preferência uma biblioteca de apresenação fágica de scFv, preparada usando cDNAs de VL e VH humanos preparados a partir de mRNA isolado a partir de linfócitos humanos. As metodologias para a preparação e rastreio de tais bibliotecas são 92 ΡΕ2177537 conhecidas na área. Existem kits comerciais para a geração de bibliotecas de apresentação fágica (e.g., o Recombinant Phage Antibody System da Pharmacia, n° de catálogo 27-9400-01; e o kit de apresentação fágica SurfZAP” da Stratagene, n° de catálogo 240612). Existem também outros métodos e reagentes que podem ser usados na geração e rastreio de bibliotecas de apresentação de anticorpos (ver, e.g., U.S. Pat. No. 5,223,409; Publicação PCT No. WO 92/18619; Publicação PCT No. WO 91/17271; Publicação PCT No. WO 92/20791; Publicação PCT No. W092/15679; Publicação PCT No. WO 93/01288; Publicação PCT No. WO 92/01047; Publicação PCT No. WO 92/09690; Fuchs et al. (1991), Biotechnology, 9:1369-1372; Hay et al., Hum. Antibod. Hybridomas, 3:81-85 (1992); Huse et al., Science, 246:1275-1281 (1989); McCafferty et al., Nature, 348:552-554 (1990); Griffiths et al. , EMBO J, 12:725-734 (1993); Hawkins et al. , J. Mol. Biol., 226:889-896 (1992); Clackson et al. , Nature, 352:624-628 (1991); Gram et al., Proc. Natl. Acad Sei. USA, 89:3576-3580 (1992); Garrad et al., Biotechnology, 9:1373-1377 (1991); Hoogenboom et al., Nuc Acid Res, 19:4133-4137 (1991); e Barbas et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 88:7978-7982 (1991) .
Para isolar anticorpos humanos anti-MAdCAM com as caracteristicas pretendidas, um anticorpo humano anti-MAdCAM como aqui descrito é primeiro usado para seleccionar sequências das cadeia pesada e leve humanas tendo actividade de ligação semelhante para MAdCAM, usando os métodos de impressão de epitopos descritos em Hoogenboom et 93 ΡΕ2177537 al., Publicação PCT No. WO 93/06213. As bibliotecas de anticorpos usadas neste método são preferencialmente bibliotecas de scFv preparadas e testado como descrito em McCafferty et al., Publicação PCT No. WO 92/01047, McCafferty et al., Nature, 348:552-554 (1990); e Griffiths et al., EMBO J, 12:725-734 (1993). As bibliotecas de anticorpos scFv preferencialmente são testadas usando como antigénio MAdCAM humano.
Uma vez seleccionados os segmentos VL e VH humanos, são realizadas experiências de "mistura e combinação", em que diferentes pares dos segmentos VL e VH inicialmente seleccionados são testados relativamente à ligação de MAdCAM, para seleccionar combinações de pares VL/VH preferidas. Ainda, para melhorar mais a qualidade do anticorpo, os segmentos VL e VH dos pares VL/VH preferidos podem ser mutados ao acaso, de preferência dentro da região CDR3 de VH e/ou VL, num processo análogo ao processo de mutação somática ín vivo responsável pela maturação de afinidade dos anticorpos durante uma resposta imune natura. Esta maturação de afinidade in vitro pode ser conseguida através da amplificação das regiões VH e VL usando sequências iniciadoras de PCR complementares da CDR3 de VH e da CDR3 de VL, respectivamente, sequências iniciadoras essas que foram "aspergidas" com uma mistura ao acaso das quatros bases nucleotidicas em determinadas posições de forma que os produtos de PCR resultantes codificam segmentos VH e VL nos quais mutações ao acaso foram introduzidas nas regiões CDR3 de VH e/ou VL. Estes segmentos VH e VL 94 ΡΕ2177537 mutados ao acaso podem ser novamente testados relativamente à ligação a MAdCAM.
Após rastreio e isolamento de um anticorpo anti-MAdCAM do invento a partir de uma biblioteca de apresentação de imunoglobulinas recombinantes, o ácido nucleico codificador do anticorpo seleccionado pode ser recuperado a partir do pacote de apresentação (e.g., a partir do genoma fágico) e subclonado noutros vectores de expressão através de técnicas de DNA recombinante convencionais. Caso se pretenda, o ácido nucleico pode ainda ser manipulado para criar outras formas de anticorpos do invento, como descrito abaixo. Para expressar um anticorpo humano recombinante isolado através do rastreio de uma biblioteca combinatória, o DNA codificador do anticorpo é clonado num vector de expressão recombinante e introduzido em células hospedeiras de mamífero, como descrito atrás.
Mudança de classe
Uma outra descrição proporciona um mecanismo através do qual a classe de um anticorpo anti-MAdCAM pode ser mudada para outra. Uma molécula de ácido nucleico codificadora de VL ou VH é isolada usando métodos conhecidos na área de forma que não inclua quaisquer sequências nucleotidicas codificadoras de CL ou CH. A molécula de ácido nucleico codificadora de VL ou de VH é então operacionalmente ligada a uma sequência nucleotídica codificadora de uma CL ou CH de uma classe diferente de 95 ΡΕ2177537 molécula de imunoglobulina, como descrito atrás. Por exemplo, um anticorpo anti-MAdCAM que era originalmente IgM pode mudar de classe para uma IgG. Ainda, a mudança de classe pode ser usada para converter uma subclasse de IgG numa outra, e.g., de IgG4 para IgG2. Um método preferido para a produção de um anticorpo do invento compreendendo um isotipo pretendido ou subclasse de anticorpo compreende os passos de isolamento de um ácido nucleico codificador da cadeia pesada de um anticorpo anti-MAdCAM e um ácido nucleico codificador da cadeia leve de um anticorpo anti-MAdCAM, obtenção da região variável da cadeia pesada, ligação da região variável da cadeia pesada com o domínio constante de uma cadeia pesada do isotipo pretendido, expressão da cadeia leve e da cadeia ligada numa célula e colheita do anticorpo anti-MAdCAM com o isotipo pretendido.
Derivados de anticorpos
Pode-se usar as moléculas de ácido nucleico descritas atrás para gerar derivados de anticorpos usando técnicas e métodos conhecidos dos familiarizados com a área.
Anticorpos humanizados A imunogenicidade de anticorpos não humanos pode ser reduzida até certo ponto usando técnicas de humanização, potencialmente usando técnicas de apresentação e bibliotecas adequadas. Será compreendido que anticorpos 96 ΡΕ2177537 murinos ou anticorpos de outras espécies podem ser humanizados ou primatizados usando técnicas conhecidas na área. Ver, e.g., Winter and Harris, Immunol Today, 14:43-46 (1993) and Wright et al., Crit. Reviews in Immunol., 12125-168 (1992) . 0 anticorpo de interesse pode ser manipulado por técnicas de DNA recombinante para substituir domínios de charneira CH1, CH2, CH3, e/ou o domínio estrutural com a correspondente sequência humana (ver WO 92/02190 e Patentes U.S. Nos. 5530101, 5595089, 5693761, 5693792, 5714350, e 5777085). Noutras formas de realização, um anticorpo anti-MAdCAM não humano pode ser humanizado por substituição do domínio de charneira CH1. Os domínios CH2, CH3 e/ou estruturais com a correspondente sequência humana de um anticorpo anti-MAdCAM do invento.
Anticorpos mutados
Numa outra forma de realização, as moléculas de ácido nucleico, vectores e células hospedeiras podem ser usadas para preparar anticorpos anti-MAdCAM mutados. Os anticorpos podem ser mutados nos domínios variáveis das cadeias pesada e/ou leve para alterar uma propriedade de ligação do anticorpo. Por exemplo, pode ser feita uma mutação numa ou mais regiões de CDR para aumentar ou diminuir o Kd do anticorpo relativamente a MAdCAM. As técnicas de mutagénese dirigida são conhecidas na área. Ver, e.g., Sambrook et al., e Ausubel et ai., supra. Numa descrição, as mutações são preparadas num resíduo de aminoácido que se sabe estar alterado comparativamente com 97 ΡΕ2177537 a linha germinal numa região variável de um anticorpo anti-MAdCAM. Numa outra forma de realização da descrição, são feitas uma ou mais mutações num resíduo de aminoácido que se sabe estar alterado comparativamente com a linha germinal numa região variável ou região CDR de um dos anticorpos anti-MAdCAM 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 720.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. Numa outra descrição, são feitas uma ou mais mutações num resíduo de aminoácido que se sabe estar alterado comparativamente com a linha germinal numa região variável ou região CDR cuja sequência de aminoácidos está apresentada em SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 18,20.22, 24, 26, 28, 30,32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 ou 68 ou cuja sequência nucleotídica está apresentada em SEQ ID NOS: 1, 3, 5. 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 51, 53, 55, 57, 61, 63, 65 ou 67. Numa outra forma de realização, as moléculas de ácido nucleico são mutadas numa ou mais regiões estruturais. Uma mutação pode ser feita numa região estrutural ou domínio constante para aumentar a semi-vida do anticorpo anti-MAdCAM. Ver, e.g., 00/09560, publicado em 24 de Fevereiro, 2000. Numa forma de realização, pode haver uma, três ou cinco ou dez mutações pontuais e não mais de quinze mutações pontuais. Uma mutação numa região estrutural ou domínio constante pode também ser feita para alterar a imunogenicidade do anticorpo, para proporcionar um local para a ligação covalente ou não covalente a uma outra molécula ou para 98 ΡΕ2177537 alterar propriedades tais como fixação do complemento. Podem ser feitas mutações em cada uma das regiões estruturais, no domínio constante e nas regiões variáveis num único anticorpo mutado. Como alternativa, as mutações podem ser feitas em apenas um das regiões estruturais, das regiões variáveis ou do domínio constante num único anticorpo mutado.
Numa forma de realização, não há mais de quinze alterações de aminoácidos nas regiões VH ou VL do anticorpo anti-MAdCAM mutado comparativamente com o anticorpo anti-MAdCAM antes da mutação. Numa forma de realização mais preferida, não existem mais de dez alterações de aminoácidos nas regiões VH ou VL do anticorpo anti-MAdCAM mutado, mais de preferência não mais de cinco alterações de aminoácidos ou mesmo mais de preferência não mais de três alterações de aminoácidos. Numa outra forma de realização, não existem mais de quinze alterações de aminoácidos nos domínios constantes, mais de preferência, não mais de dez alterações de aminoácidos, mesmo mais de preferência, não mais de cinco alterações de aminoácidos.
Anticorpos modificados
Numa outra forma de realização, pode ser feito um anticorpo de fusão ou imunoadesina que compreende a totalidade ou uma porção de um anticorpo anti-MAdCAM ligado a um outro polipéptido. Numa forma de realização preferida, apenas as regiões variáveis do anticorpo anti-MAdCAM estão 99 ΡΕ2177537 ligadas ao polipéptido. Numa outra forma de realização preferida, o dominio VH de um anticorpo anti-MAdCAM é ligado a um primeiro polipéptido, enquanto o dominio VL de um anticorpo anti-MAdCAM é ligado a um segundo polipéptido que se associa com o primeiro polipéptido de forma que os domínios VH e VL podem interagir um com o outro para formar um local de ligação do anticorpo. Numa outra forma de realização preferida, o domínio VH é separado do domínio VL por um elemento de ligação de forma que os domínios VH e VL possam interagir um com ou outro (ver abaixo em Anticorpos de Cadeia Simples). 0 anticorpo VH-elemento de ligação-VL é então ligado ao polipéptido de interesse. 0 anticorpo de fusão é útil para dirigir um polipéptido para uma célula ou tecido que expressa MAdCAM. 0 polipéptido pode ser um agente terapêutico, como seja uma toxina, factor de crescimento ou outra proteína reguladora ou pode ser um agente de diagnóstico, como seja uma enzima que pode ser facilmente visualizado, como seja peroxidase de rábano silvestre. Ainda, podem ser criados anticorpos de fusão em que dois ou mais anticorpos de cadeia simples são ligados um ao outro. Isto é útil caso se pretenda criar um anticorpo divalente ou polivalente numa cadeia polipeptídica simples ou caso se pretenda criar um anticorpo biespecífico.
Para criar um anticorpo de cadeia simples, (scFv) os fragmentos de DNA codificadores de VH e VL são operacionalemte ligados a um outro fragmento codificador de um elemento de ligação flexível, e.g., codificador da 100 ΡΕ2177537 sequência de aminoácidos (Gly4-Ser)3, de forma que as sequências VH e VL possam ser expressas como uma proteína de cadeia simples contígua, com as regiões VL e VH ligadas por um elemento de ligação flexível (ver, e.g., Bird et al., Science, 242:423-426 (1988); Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 85:5879-5883 (1988); McCafferty et al., Nature, 348:552-554 (1990)). O anticorpo de cadeia simples pode ser monovalente, se apenas forem usadas uma única VH e VL, bivalente se forem usadas duas VH e VL ou polivalente se mais de duas VH e VL forem usadas.
Numa outra forma de realização, outros anticorpos modificados podem ser preparados usando moléculas de ácido nucleico codificadoras de anti-MAdCAM. Por exemplo, "corpos capa" (III et al. , Protein Eng, 10: 949-57(1997)), "Ivlinicorpos" (Martin et al. , EMBO J, 13: 5303-9(1994)), "Diacorpos" (Holliger et al., PNAS USA, 90: 6444-6448(1993)), ou "Janusinas" (Traunecker et al., EMBO J, 10:3655-3659 (1991) e Traunecker et al., "Janusin: new molecular design for bispecific reagents," Int J Câncer Suppl, 7:51-52 (1992)) podem ser preparados usando técnicas de biologia molecular convencionais seguindo os ensinamentos da especificação.
Num outro aspecto, podem ser gerados anticorpos quiméricos e biespecíficos. Pode ser produzido um anticorpo quimérico que compreende CDRs e regiões estruturais dos diferentes anticorpos. Numa forma de realização preferida, as CDRs do anticorpo quimérico compreende todas as CDRs da 101 ΡΕ2177537 região variável de uma cadeia leve ou cadeia pesada de um anticorpo humano anti-MAdCAM, enquanto as regiões estruturais derivam de um ou mais anticorpos diferentes. Numa forma de realização mais preferida, as CDRs do anticorpo quimérico compreendem a totalidade dos CDRs das regiões variáveis da cadeia leve e da cadeia pesada de um anticorpo humano anti-MAdCAM. As regiões estruturais podem ser de uma outra espécie e podem, numa forma de realização preferida, ser humanizados. Como alternativa, as regiões estruturais pode ser de um outro anticorpo humano.
Pode ser gerado um anticorpo biespecifico que se liga especificamente a MAdCAM através de um domínio de ligação e a uma segunda molécula através de um segundo domínio de ligação. O anticorpo biespecifico pode ser produzido através de técnicas recombinantes de biológica molecular ou pode ser fisicamente conjugado. Ainda, pode ser gerado um anticorpo de cadeia simples contendo mais de uma VH e VL que se liga especif icamente a MAdCAM e a uma outra molécula. Tais anticorpos biespecíficos podem ser grados usando técnicas que são bem conhecidas por exemplo em associação com (i) e (ii) ver, e.g., Fanger et al., Immunol Methods 4: 72-81 (1994) e Wright and Harris, supra E em associação com (iii) ver, e.g., Traunecker et al., Int. J. Câncer (Suppl.) 7: 51-52 (1992). Numa forma de realização preferida, o anticorpo biespecifico liga-se a MAdCAM e a uma outra molécula expressa em nível elevado nas células endoteliais. Numa forma de realização mais preferida, a outra molécula é VCAM, ICAM ou L-selectina. 102 ΡΕ2177537
Em várias descrições, os anticorpos modificados atrás descritos são preparados usando uma ou mais regiões CDR de um dos anticorpos sdeleccionados de entre 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 720.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1 -mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod.Numa outra descrição os anticorpos modificados são preparados usando uma ou mais das regiões variáveis ou uma ou mais regiões CDRs cuja sequência de aminoácidos está apresentada em SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8,10, 12,14,16, 18 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 ou 68 ou cuja sequência de nucleótidos está apresentada em SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 51, 53, 55, 57, 61 63, 65 ou 67.
Anticorpos derivatizados e marcados
Um anticorpo ou porção de anticorpo do invento pode ser derivatizado ou ligado a uma outra molécula (e.g., um outro péptido ou proteína). Em geral, os anticorpos ou porções dos mesmos são derivatizados de forma que a ligação a MAdCAM não seja afectada adversamente pela derivatização ou marcação. Assim, os anticorpos e porções de anticorpos do invento destinam-se a incluir formas intactas e modificadas dos anticorpos humanos anti-MAdCAM aqui descritos, até ao ponto de serem incluídos em reivindicações independentes. Por exemplo, um anticorpo ou porção de anticorpo do 103 ΡΕ2177537 invento pode ser funcionalmente ligado (através de acoplagem química, fusão genética, associação não covalente ou outra) a uma ou mais de outras entidades moleculares, como seja um outro anticorpo (e.g., um anticorpo biespecífico ou um diacorpo), um agente de detecção, um agente citotóxico, um agente farmacêutico e/ou uma proteína ou péptido que possa mediar a associação do anticorpo ou porção de anticorpo a uma outra molécula (como seja a região central da estreptavidina ou uma marca de poli-histidina).
Um tipo de anticorpo derivatizado é produzido através da ligação cruzada de dois ou mais anticorpos (do mesmo tipo ou de diferentes tipos, e.g., para criar anticorpos biespecíficos). Elementos de ligação adequados incluem os que são heterobifuncionais tendo dois grupos distintamente reactivos separados por um espaçador adequado (e.g.,éster de m-maleimidobenzoil-N-hidroxi-succinimida) ou homobifuncional (e.g., suberato de di-succinimidilo). Tais elementos de ligação estão disponíveis na Pierce Chemical Company, Rockford, III.
Um outro tipo de anticorpo derivatizado é um anticorpo marcado, agentes de detecção úteis com os quais um anticorpo ou porção de anticorpo do invento possam ser derivatizados incluem compostos fluorescentes, incluindo fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, rodamina, cloreto de 5-dimetilamina-l-naftalenossulfonilo, ficoeri-trina, lantanido fosforoso e similares. Um anticorpo pdoe 104 ΡΕ2177537 também ser marcado com enzimas que são úteis para a detec-ção, como seja peroxidase de rábano silvestre, β-galacto-sidase, luciferase, fosfatase alcalina, glucose oxidase e similares. Quando um anticorpo é marcado com uma enzima detectável, é detectado pela adição de outros reagentes que a enzima usa para produzir um produto de reacção que pode ser detectado. Por exemplo, quando está a peroxidase de rábano silvestre, a adição de peróxido de hidrogénio e diaminobenzidina leva a um produto de reacção corado, o qual é detectável. 0 anticorpo pode também ser marcado com biotina e detectado através da medição indirecta da ligação de avidina ou estreptavidina. Um anticorpo pode ser marcado com um agente magnético, como seja gadolinio. Um anticorpo pode também ser marcado com um epitopo polipeptidico pré-determinado reconhecido por um repórter secundário (e.g., sequências de fecho de pares de leucinas, locais de ligação para anticorpos secundários, domínios de ligação a metais, marcas de epitopos). Nalgumas formas de realização, as marcas são ligadas por braços espaçadores de vários tamanhos para reduzir o potencial bloqueio espacial.
Um anticopor anti-MAdCAM pode também ser marcado com um aminoácido marcado radioactivamente. A marca radioactiva pode ser usada para fins de diagnóstico e terapêuticos. Por exemplo, a marca radioactiva pode ser usada para detectar tecidos que expressam MAdCAM por raios X ou outras técnicas de diagnóstico. Ainda, a marca radioactiva pode ser usada terapeuticamente como uma toxina para tecido doente ou ou tumores que expressem MAdCAM. 105 ΡΕ2177537
Exemplos de marcas para polipéptidos incluem, mas não estão limitados aos seguintes isótopos radioactivos ou radionu-clidos - 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, "Tc, inIn, 125I, 131I.
Um anticorpo anti-MAdCAM pode também ser deriva-tizado com um grupo químico como seja polietilenoglicol (PEG), um grupo metilo ou etilo ou um grupo de açúcar. Estes grupos podem ser úteis para melhorar as caracte-rísticas biológicas do anticorpo, e.g., para aumentar a semi-vida no soro ou para aumentar a ligação ao tecido. Esta metodologia também se aplicará a quaisquer fragmentos de ligação a antigénio ou versões de anticorpos anti-MAdCAM .
Composições farmacêuticas e kits
Num outro aspecto, o invento proporciona composições compreendendo um anticorpo inibidor anti-MAdCAM humano e métodos para o tratamento de indivíduos com tais composições. Nalgumas formas de realização, o alvo de tratamento é um ser humano. Noutras formas de realização, o indivíduo é um animal. Nalgumas formas de realização, o animal é um cão ou um primata não humano. O tratamento pode envolver administração de um ou mais anticorpos monoclonais inibidores anti-MAdCAM do invento ou seus fragmentos de ligação ao antigénio, sozinho ou juntamente com um veículo farmaceuticamente aceitável. Anticorpos inibidores anti-MAdCAM do invento e composições 106 ΡΕ2177537 compreendendo os mesmos podem ser administrados em combinação com outros agentes terapêuticos, de diagnóstico e/ou profiláticos. Outros agentes terapêuticos incluem agentes anti-inflamatórios ou imunomoduladores. Estes agentes incluem mas não estão limitados a corticosteróides tópicos ou orais tais como prednisolona, metilprednisolona, NCX-1015 ou budesonido; os amino-salicilatos tais como mesalazina, olsalazina, balsalazida ou NCX-456; a classe de imunomoduladores tais como azatioprina, 6-mercaptopurina, metotrexato, ciclosporina, FK506, IL-10 (Ilodecakin), IL-11 (Oprelevkin), IL-12, antagonistas de MIF/CD74, antagonistas de CD40, tais como TNX100/5-D12, antagonistas OX40L, pimecrolimus ou rapamicina; a classe de agentes anti-TNFa tais como infliximab, adalimumab, CDP-870, onercept, etanercept; a classe de agentes anti-inflamatórios, tais como inbidores PDE-4 (roflumilast, etc.), inibidores TACE (DPC-333, RDP-58, etc) e inibidores ICE (VX-740, etc) assim como antagonistas do receptor de IL-12, tais como daclizumab, a classe de antagonistas da molécula de adesão selectivos, tais como natalizumab, MLN-02 ou alicaforsen, classes de agentes analgésicos tais como inibidores COX-2 mas não lhes estando limitados, como seja rofecoxib, valdecoxib, celecoxib, moduladores dos canais sensibilizados por voltagem tipo P/Q (α2δ) , como seja gabapentin e pregabalin, antagonistas do receptor NK-1, moduladores do receptor canabinóide e agonistas do receptor de delta opióides, assim como agentes anti-neoplásicos, anti-tumorais, anti-angiogénicos ou quimioterapêuticos. Tais agentes adicionais podem ser incluídos na mesma composição 107 ΡΕ2177537 ou administrados separadamente. Nalgumas formas de realização, um ou mais anticorpos inibidores anti-MAdCAM do invento podem ser usados como vacina ou como adjuvantes para uma vacina. Em particular, devido a MAdCAM ser expresso em tecido linfóide, os antigénios de vacinas podem ser vantajosamente direccionados para tecido linfóide através da conjugação do antigénio a um anticorpo anti-MAdCAM do invento.
Como aqui usado, "veiculo farmaceuticamente aceitável" significa qualquer solvente, meio de dispersão, revestimento, agentes antibacterianos e antifungicos, agentes isotónicos e estimuladores da absorção ou agentes de retardação e similares que sejam fisiologicamente compatíveis. Alguns exemplos de veículos farmaceuticamente aceitáveis são água, soro fisiológico, soro fisiológico tamponado com fosfatos, tampão acetato com cloreto de sódio, dextrrose, glicerol, polietilenoglicol, etanol e similares, assim como combinações dos mesmos. Em muitos casos, será preferível incluir agentes isotónicos, por exemplo aç~ucares, polialcoóis tais como manitol, sorbitol ou cloreto de sódio na composição. Outros exemplos de substâncias farmaceuticamente aceitáveis são tensioactivos, agentes molhantes ou quantidade diminutas de substâncias auxiliares tais como agentes molhantes ou emulsionantes, preservativos ou tampões, as quais aumentam a semi-vida ou eficácia do anticorpo.
As composições deste invento podem existir numa 108 ΡΕ2177537 variedade de formas, por exemplo, formas de dosagem liquidas, semi-sólidas e sólidas, tais como soluções liquidas {e.g., soluções injectáveis ou para infusão), dispersões ou suspensões, comprimidos, pílulas, biolos liofilizados, pós secos, lipossomas e supositórios. A forma preferida depende do modo de administração e terapêutica pretendidos. Composições tipicamente preferidas são na forma de soluções injectáveis ou para infusão, como sejam composições semelhantes às usadas para a imunização passiva de seres humanos. O modo de administração preferido é o parentérico (e.g., intravenosa, subcutânea, intraperito-neal, intramuscular, intradérmico). Numa forma de realização preferida, o anticorpo é administrado por infusão ou injecção intravenosa. Numa outra forma de realização preferida, o anticorpo é administrado por injecção intramuscular, intradérmica ou subcutânea.
As composições terapêuticas tipicamente devem ser estéreis e estáveis mas condições de produção e armazenamento. A composição pode ser formulada como uma solução, bolo liofilizado, pó seco, microemulsão, dispersão, lipos-soma, ou outra estrutura ordenada adequada para concentração elevada de fármacos. Soluções estéreis injectáveis podem ser preparadas através da incorporação do anticorpo anti-MAdCAM na quantidade necessária num solvente adequado com um ou uma combinação de ingredientes atrás enumerados, conforme necessário, seguido de esterilização. No caso de pós estéreis para a preparação soluções injecções estéreis, os métodos preferidos de preparação são secagem sob vácuo e 109 ΡΕ2177537 liofilização que dá um pó do ingrediente activo mais qualquer ingrediente adicional pretendido a partir de uma sua solução previamente esterilizada. De um modo geral, as dispersões são preparadas através da incorporaçõa do composto activo num veiculo estéril que contem um meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessários a partir dos enumerados atrás. As caracteristicas pretendidas de uma solução podem ser mantidas, por exemplo, através da utilização de tensioactivos e o tamanho das partículas necessário, no caso da dispersão, através da utilização de tensioactivos, fosfolípidos e polímeros. A absorção prolongada de composições injectáveis pode ser conseguida através da inclusão na composição de um agente que retarda a absorção, por exemplo sais de monostearato, materiais polimérticos, óleos e gelatinas.
Os anticorpos do presente invento podem ser administrados por uma variedade de métodos conhecidos na área, ainda que para muitas aplicações terapêuticas a via/modo de administração preferido é subcutâneo, intramuscular, intradérmico ou infusão intravenosa. Como será apreciado pelos familiarizados com a matéria, a via e/ou modo de administração variará dependendo dos resultados pretendidos.
Em determinadas formas de realização, as composições de anticorpos podem ser preparadas com um veículo que protegerá o anticorpo contra a libertação rápida, como seja formulação de libertação controlada, incluindo 110 ΡΕ2177537 implantes, pensos transdérmicos e sistemas de libertação microencapsulados. Podem ser usados polímeros biodegradáveis biocompatíveis, como seja acetato de etilenovinilo, polianidridos, ácido poliglicólico, colagénio, poliorto-ésteres e ácido poliláctico. Muitos métodos para a preparação de tais formulações estão patenteados ou são conhecidos de um modo geral dos familiarizados com a matéria. Ver, e.g., "Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems" (J. R. Robinson, ed., Mareei Dekker, Inc., New York (1978)).
Em determinadas formas de realização, o anticorpo anti-MAdCAM do invento pode ser administrado oralmente, por exemplo, com um diluente inerte ou um veículo edível assimilável. O composto (e outros ingredientes), caso se pretenda) pode também ser incluído numa cápsula de gelatina dura ou macia, prensado em comprimidos ou incorporado directamente na dieta do indivíduo. Para a administração terapêutica oral, os anticorpos anti-MAdCAM podem ser incorporados com excipientes e usados na forma de comprimidos ingeríveis, comprimidos bucais, pastilhas, cápsulas, elixires, suspensões, xaropes, bolachas e similares. Para administrar um composto do invento por uma outra administração que não a parentérica, pode ser necessário revestir o composto ou coadministrá-lo com um material para prevenir a sua inactivação.
As composições do invento podem incluir uma "quantidade terapeuticamente eficaz" ou uma "quantidade 111 ΡΕ2177537 profilaticamente eficaz" de um anticorpo ou porção de ligação ao antigénio do invento. Uma "quantidade tera-peuticamente eficaz" refere-se a uma quantiade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários para se conseguir o resultado terapêutico pretendido. Uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo ou porção de anticorpo pode variar de acordo com factores tais como estado da doença, idade, sexo e peso do indivíduo e a capacidade do anticorpo ou porção do anticorpo para induzir uma resposta pretendida no indivíduo. Uma quantidade terapeuticamente eficaz é igualmente uma em que quaisquer efeitos tóxicos ou prejudiciais do anticorpo ou porção do anticorpo sejam ultrapassados pelos efeitos terapeuticamente benéficos. Uma "quantidade profilaticamente eficaz" refere-se a uma quantidade eficaz, em dosagens e durante períodos de tempo necessários, para se conseguir o resultado profilático pretendido. Tipicamente, uma vez que a dose profilática é usada em indivíduos antes ou numa fase precoce da doença, a quantidade profilaticamente eficaz pode ser inferior à quantidade terapeuticamente eficaz.
Os regimes de dosagem podem ser ajustados para proporcionar a resposta óptima pretendida (e.g., uma resposta terapêutica ou profilática). Por exemplo, pode ser administrado um único bolus, podem ser administradas várias doses divididas ao longo do tempo ou a dose pode ser proporcionalmente reduzida ou aumentada como indicado pelas exigências da situação terapêutica. É especialmente vantajoso formular composições parentéricas na forma unitária de dosagem para facilitar a administração e uniformizar a 112 ΡΕ2177537 dosagem. A forma de disagem unitária refere-se aqui a unidades fisicamente discretas adequadas a dosagens unitárias para o mamífero a ser tratado; cada unidade contendo uma quantidade pré-determinada de composto activo calculado para produzir o efeito terapêutico em associação com o veículo farmacêutico necessário. A especificação das formas de dosagem unitárias do invento são ditadas e directamente dependentes (a) das características únicas do anticorpo anti-MAdCAM ou porção do mesmo e do efeito terapêutico ou profilático particular a ser atingido e (b) das limitações inerentes na área da formulação de compostos de tal anticorpo para o tratamento de sensibilidade em indivíduos.
Um gama exemplif icativa não limitante de uma quantidade terapeuticamente ou profilaticamente eficaz de um anticorpo ou porção do anticorpo do invento é 0,025 a 50 mg/kg, mais de preferência, 0,1 a 50 mg/kg, mais de preferência 0,1-25, 0,1 a 10 ou 0,1 a 3 mg/kg. Nalgumas formas de realização, a formulação contem 5 mg/ml de anticorpo num tampão de acetato de sódio 20 mM, pH 5,5, NaCl 140 mm e 0,2 mg/ml de polissorbato 80. Deve-se notar que os valores de dosagem podem variar com o tipo e gravidade da condição a ser aliviada. É ainda entendido que para qualquer indivíduo particular, regimes de dosagem específicos deverão ser ajustados ao longo do tempo de acordo com a necessidade do indivíduo e com a avaliação profissional da pessoa que administra ou supervisiona a administração das composições e que as gamas de dosagem aqui descritas sejam apenas exemplificativas e não destinadas a limitar o âmbito ou prática da composição reivindicada. 113 ΡΕ2177537
Um outro aspecto do presente invento proporciona kits compreendendo um anticorpo anti-MAdCAM ou porção de anticorpo do invento ou uma composição compreendendo tal anticorpo. Um kit pode incluir, para além do anticorpo ou composição, agentes de diagnóstico ou terapêuticos. Um kit pode igualmente conter instruções para uso num método de diagnóstico ou terapêutico. Numa forma de realização preferida, o kit inclui o anticorpo ou uma composição compreendendo o mesmo e um agente de diagnóstico que pode ser usado num método descrito abaixo. Numa outra forma de realização preferida, o kit inclui o anticorpo ou uma composição compreendendo o mesmo e um ou mais agentes terapêuticos que podem ser usados num método descrito abaixo.
Terapia génica
As moléculas de ácido nucleico do presente invento podem ser administradas a um doente necessitado através de terapia génica. A terapia pode ser in vivo ou ex vivo. Numa forma de realização preferida, as moléculas de ácido nucleico codificadoras de uma cadeia pesada e de uma cadeia leve são administradas a um doente. Numa forma de realização mais preferida, as moléculas de ácido nucleico são administradas de forma que sejam estavelmente integradas nos cromossomas das células B devido a estas células serem especializadas na produção de anticorpos. Numa forma de realização preferida, as células B precursoras são 114 ΡΕ2177537 transfectadas ou infectadas ex vivo e retransplantadas num doente necessitado. Numa outra forma de realização, as células B precursoras ou outras células são infectadas in vivo usando um vírus recombinante conhecido por infectar o tipo celular de interesse. Vectores típicos usados para a terapia génica incluem lipossomas, plasmídeos e vectores virais. São exemplos de vectores virais os retrovírus, adenovírus e vírus adeno-associados. Após infecção in vivo ou ex vivo, os níveis de expressão de anticorpos podem ser monitorizados colhendo uma amostra do doente tratado e usando-a em qualquer imunoensaio conhecido na área ou aqui discutido.
Numa forma de realização preferida, o método de terapia génica compreende os passos de administração de uma molécula de ácido nucleico isolada codificadora da cadeia pesada ou uma porção de ligação ao antigénio da mesma de um anticorpo anti-MAdCAM e expressão da molécula de ácido nucleico. Numa outra forma de realização preferida, o método de terapia génica compreende os passos de administração de uma molécula de ácido nucleico isolada codificadora da cadeia leve ou de uma porção de ligação ao antigénio da mesma de um anticorpo anti-MAdCAM e expressão da molécula de ácido nucleico. Num método mais preferido, o método de terapia génica compreende os passos de administração de uma molécula de ácido nucleico isolada codificadora da cadeia pesada ou de uma porção de ligação ao antigénio da mesma e de uma molécula de ácido nucleico isolada codificadora da cadeia leve ou de uma porção de ligação ao antigénio da 115 ΡΕ2177537 mesma de um anticorpo anti-MAdCAM do invento e expressão das moléculas de ácido nucleico. 0 método de trerapia génica pode também compreender o passo de administração de um outro agente anti-inflamatório ou imunomodulador. Métodos de diagnóstico com utilidade
Os anticorpos anti-MAdCAM podem ser usados para detectar MAdCAM numa amostra biológica in vitro ou in vivo. Os anticorpos anto-MAdCAM podem ser usados num imunoensaio convencional, incluindo sem limites um ELISA, um RIA, FACS, imuno-histoquimica de tecidos, transferência Western ou imunoprecipitação. Os anticorpos anti-MAdCAM do invento podem ser usados para detectar MAdCAM de primatas do Velho Mundo tais como macacos cinomolgos e macacos resos, chimpanzés e gibões. 0 invento proporciona um método para a detecção de MAdCAM numa amostra biológica compreendendo o contacto de uma amostra biológica com um anticorpo anti-MAdCAM do invento e detecção do anticorpo ligado a MAdCAM até ao ponto em que este está incluído nas reivindicações apensas. Numa forma de realização, o anticorpo anti-MAdCAM é directamente derivatizado com uma marca detectável. Numa outra forma de realização, o anticorpo anti-MAdCAM (o primeiro anticorpo) é não marcado e um segundo anticorpo ou outra molécula que se pode ligar ao anticorpo anti-MAdCAM é marcada. Como é do conhecimento dos familiarizados com a área, um segundo anticorpo é escolhido para se ligar especificamente à espécie específica e classe do primeiro anticorpo. Por exemplo, se o anticorpo anti-MAdCAM for uma 116 ΡΕ2177537
IgG humana, então o anticorpo secundário pode ser um anti-IgG humano. Outras moléculas que se podem ligar a anticorpos incluem, sem limites, Proteína A e Proteína G, ambas estão disponíveis comercialmente, e.g. da Pierce Chemical Co.
Marcas adequadas para o anticorpo secundário foram descritas supra e incluem várias enzimas, grupos prostéticos, materiais fluorescentes, materiais luminescen-tes, agentes magnéticos e materiais radioactivos. Exemplos de enzimas adequadas incluem peroxidase de rábano silvestre, fosfatase alcalina, β-galactosidase ou acetilcolines-terase; exemplos de complexos de grupos prostéticos adequados incluem estreptavidina/biotinna e abidina/biotina, exemplos de materiais fluorescentes adequados incluem umbeliferona, fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, rodamina diclorotriazinilamina fluoresceína, cloreto de dansilo ou ficoeritrina; um exemplo de um material lumines-cente inclui luminol, um exemplo de um agente magnético inclui gadolínio; e exemplos de materiais radioactivos adequados incluem 125I, 131I, 35S ou 3H.
Numa forma de realização alternativa, MAdCAM pode ser testado numa amostra biológica através de um imuno-ensaio de competição usando padrões de MAdCAM marcados com uma substância detectável e um anticorpo anti-MAdCAM não marcado. Neste ensaio, a amostra biológica, os padrões MAdCAM marcados e o anticorpo anti-MAdCAM são combinados e é determinada a quantidade de padrão MAdCAM marcado ligado 117 ΡΕ2177537 ao anticorpo não marcado. A quantidade de MAdCAM na amostra biológica é inversamente proporcional à quantidade de MAdCAM marcado ligado ao anticorpo anti-MAdCAM.
Pode-se usar os imunensaios descritos atrás para uma série de fins. Numa forma de realização, os anticorpos anti-MAdCAM podem ser usados para detectar MAdCAM em células em cultura. Numa forma de realização preferida, os anticorpos anti-MAdCAM podem ser usados para determinar o nível de expressão de MAdCAM na superfície celular após tratamento das células com vários compostos. Este método pode ser usado para testar compostos que podem ser usados para activar ou inibir MAdCAM. Neste método, uma amostra de células é tratada com um composto a testar durante um determinado período de tempo enquanto uma outra amostra é deixada sem tratamento, a expressão na superfície celular poderá então ser determinada por citometria de fluxo, imuno-histoquímica, transferência Western, ELISA ou RIA. Ainda, os imunoensaios podem ser sobredimensionados para rastreio de elevado número de amostras de forma a testar um grande número de compostos relativamente à activação ou inibição de MAdCAM.
Os anticorpos anti-MAdCAM do invento podem ser igualmente usados para determinar os níveis de MAdCAM num tecido ou em células derivadas do tecido. Numa forma de realização preferida, o tecido é um tecido doente. Numa forma de realização mais preferida, o tecido é trato gastrointestinal inflamado ou uma biopsia do mesmo. Numa 118 ΡΕ2177537 forma de realização preferida do método, um tecido ou biopsia do mesmo é retirado de um doente. 0 tecido ou biopsia é então usado num imunoensaio para determinar, e.g., os níveis de MAdCAM, os níveis de MAdCAM na superfície celular ou a localização de MAdCAM pelo método atrás discutido. 0 método pode ser usado para determinar se um tecido inflamado expressa MAdCAM num nivel elevado. 0 método de diagnóstico atrás descrito pode ser usado para determinar se um tecido expressa níveis elevados de MAdCAM, os quais podem ser indicativos de que o tecido responderá bem ao tratamento com um anticorpo anti-MAdCAM. Ainda, o método de diagnóstico pode também ser usado para determinar se o tratamento com anticorpo anti-MAdCAM (ver abaixo) faz com que um tecido expresse níveis mais baixos de MAdCAM e assim possa ser usado para determinar se o tratamento tem êxito.
Os anticorpos do presente invento podem ser igualmente usados in vivo para localizar tecidos e órgãos que expressam MAdCAM. Numa forma de realização preferida, os anticorpos anti-MAdCAM podem ser usados para localizar tecido inflamado. A vantagem dos anticorpos anti-MAdCAM do presente invento é que não dão origem a uma resposta imune quando administrados. 0 método compreende os passos de administração de um anticorpo anti-MAdCAM ou de uma composição farmacêutica do mesmo a um doente necessitado de tal teste de diagnóstico e sujeição do doente a análise por imagiologia para determinar a localização dos tecidos que 119 ΡΕ2177537 expressam MAdCAM. A análise por imagiologia é conhecida nas áreas médicas e inclui, sem limites, análise de raios X, cintigrafia gama, imagiologia de ressonância magnética (MRI), tomografia de emissão de positrões ou tomografia computarizada (CT). Numa outra forma de realização do método, obtem-se uma biopsia do doente para determinar se o tecido de interesse expressa MAdCAM em vez de submeter o doente a análise por imagiologia. Numa forma de realização preferida, is anticorpos anti-MAdCAM podem ser marcados com um agente detectável que pode ser visualizado num doente. Por exemplo, o anticorpo pode ser marcado com um agente de contraste, como seja o bário, o qual pode ser usado para análise por raios X ou um agente de contraste magnético, como seja um quelato de gadolinio, o qual pode ser usado para MRI ou CT. Outros agentes de marcação incluem, sem limites, isótopos radioactivos, tais como 99Tc. Numa outra forma de realização, o anticorpo anti-MAdCAM será não marcado e será visualizado através da administração de um segundo anticorpo ou de outra molécula que detectável e que se pode ligar ao anticorpo anti-MAdCAM.
Os anticorpos anti-MAdCAM do invento podem também ser usados para determinar os níveis de MAdCAM solúvel presentes numa amostra de sangue, soro, plasma, ou outro fluido corporal, incluindo mas não estando limitado a fezes, urina, expectoração ou biopsia. Numa forma de realização preferida, o fluido corporal é plasma. 0 fluido corporal é então usado num imunoensaio para determinar os níveis de MAdCAM solúvel. MAdCAM solúvel pode constituir 120 ΡΕ2177537 uma marca de inflamação gastrointestinal em curso e o método de detecção poderá ser usado como um marcador de diagnóstico para medir a gravidade da doença. O método de diagnóstico atrás descrito pode ser usado para determinar se um indivíduo expressa níveis elevados de MAdCAM solúvel, o que pode indicar se o indivíduo responderá bem ao tratamento com um anticorpo anti-MAdCAM. Ainda, o método de diagnóstico pode ser igualmente usado para determinar se o tratamento com um anticorpo anti-MAdCAM (ver abaixo) ou outro agente farmacêutico da doença faz com que um indivíduo expresse níveis mais baixos de de MAdCAM e assim possa ser usado para determinar se o tratamento tem êxito.
Inibição da adesão dependente de /MAdCAM por anticorpo anti-MAdCAM: É descrito um anticorpo anti-MAdCAM que se liga a MAdCAM e inibe a ligação e adesão de células portadoras de integrina 0ί4β7 ou de outros ligandos cognatos, como a selectina L, a MAdCAM. Numa descrição, o MAdCAM é humano e está numa forma solúvel ou é expresso na superfície de uma célula. Numa outra descrição, o anticorpo anti-MAdCAM é um anticorpo humano. Numa outra descrição, o anticorpo ou porção do mesmo inibe a ligação entre 0^7 e MAdCAM com um valor de IC50 não superior a 50 nM. Numa descrição, o valor de IC50 não é superior a 5 nM. Numa descrição, o valor de IC50 é inferior a 5 nM. Numa descrição, o valor de IC50 é inferior a 0,05 pg/ml, 0,04 pg/ml ou 0,03 pg/ml. Típica- 121 ΡΕ2177537 mente, um valor de IC50 pode ser medido por ELISA ou num ensaio de adesão. Numa descrição, o valor de IC50 é medido por um ensaio de adesão usando células ou tecido que expressam nativamente MAdCAM ou células ou tecido que foram manipuladas para expressarem MAdCAM.
Inibição do recrutamento de linfócitos pata tecido linfóide associado ao intestino por anticorpos anti-
MAdCAM É descrito um anticorpo anti-MAdCAM que se liga a MAdCAM expresso nativamente e inibe a ligação de linfócitos a tecido linfóide gastrointestinal especializado. Numa descrição, o MAdCAM expresso de forma nativa é MAdCAM humano ou de primata e está na forma solúvel ou é expresso na superfície de uma célula. Numa outra descrição. 0 anticorpo anti-MAdCAM é um anticorpo humano. Numa outra descrição, o anticorpo ou porção do mesmo inibe o recrutamento de linfócitos 0ί4β7+ com tropismo para o intestino para tecidos que expressam MAdCAM com um valor de IC50 não superior a 5 mg/Kg. Numa descrição, o valor de IC50 não é superior a 1 mg/kg. Numa outra descrição, o valor de IC50 é inferior a 0,1 mg/kg. Numa descrição o valor de IC50 pode ser determinado através da medição da relação dose efeito no recrutamento de linfócitos do sangue periférico marcados com tecnécio para o trato gastrointestinal usando cintigrafia gama ou tomografia computarizada. Numa outra descrição, o valor de IC50 pode ser determinado medindo o aumento de linfócitos cqP7+ com tropismo para o intestino, 122 ΡΕ2177537 como seja células T de memória CD4+ α4β7+, mas não lhes estando limitados, no sangue periférico usando citometria de fluxo em função da dose de anticorpo anti-MAdCAM.
Para que este invento possa ser melhor compreendido, são descritos os exemplos que se seguem. Estes exemplos, são apenas para fins ilustrativos e não devem ser considerados de alguma forma como limitantes do âmbito do invento. EXEMPLO 1:
Geração de hibridoma produtores de anti-MAdCAM
Os anticorpos do invento foram preparados, testados e seleccionados de acordo com o presente Exemplo.
Preparação do imunogénio primário:
Foram preparados dois imunogénios para imunização de murganhos XENOMOUSE™: (i) uma proteína de fusão MAdCAM-Fc de IgGi e (ii) membranas celulares preparadas a partir de células estavelmente transfectadas com MAdCAM. (i) Proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc
Construção do vector de expressão:
Um fragmento de cDNA EcoRI/BglII codificador do domínio extracelular maduro tipo imunoglobulina de MAdCAM 123 ΡΕ2177537 foi removido de um clone pINCY Incyte (3279276) e clonado nos locais EcoRI/BamHI do vector pIGl (Simmons, D.L. (1993) in "Cellular Interactions in Development: A Practical Approach", ed. Hartley, D. A. (Oxford Univ. Press, Oxford), pp. 93-127)) para gerar uma fusão com Fc de IgGi na mesma grelha de leitura. 0 inserto resultante foi removido com EcoRI/Notl e clonado em pCDNA3.1+ (Invitrogen). 0 cDNA de MAdCAM-Fc de IgGi no vector foi confirmado por sequenciação. A sequência de aminoácidos da proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc está apresentada abaixo:
Proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc:
MDFGLALLLAGLLGLLLGQSLQVKPLQVEPPBPVVAVALGASRQLTCRLACADRG ASVQWRGLDTSLGAVQSDTGRSVLTVRNASLSAAGTRVCVGSCGGRTFQHTVQLL VYAFPDQLTVSPAALVPGDPEVACTAHKVTPVDPNALSFSLLVGGQELEGAQALG PEVQEEEEEPQGDEDVTjFRVTERWRLPPLGTPVPPALYCQATMRLPGLELSHRQA IPVLHSPTSPEPPDTTSPESPDTTSPESPDTTSQEPPDTTSQEPPDTTSQEPPDT TSPEPPDKTSPEPAPQQGSTHTPRSPGSTRTRRPEXQPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKARGQPR EPQVYTL·PPSRDELTKNQVSL·TCL·VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKATPPVLD
S
Sublinhado: péptido sinal
Negrito: domínio extracelular de MAdCAM
Expressão/purificação da proteína recombinante:
As células CHO-DHFR foram transfectadas com o vector pCDN3.1+ contendo o cDNA da proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc e os clones estáveis expressando a proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc foram seleccionados em meio de 124 ΡΕ2177537
Iscove contendo 600 pg/ml de G418 e 100 ng/ml de metotre-xato. Para a expressão de proteínas, um bio-reactor de fibras ocas foi semeado com células CHO que expressam estavelmente MAdCAM-IgGi Fc em meio de Iscove contendo 10% de soro fetal bovino com baixo teor de IgG (Gibco), aminoácidos não essenciais (Gibco), glutamina 2 mM (Gibco), piruvato de sódio (Gibco), 100 pg/ml de G418 e 100 ng/ml de metotrexato e usado para gerar sobrenadante de meio concentrado. A proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc foi purificada a partir do sobrenadante colhido por cromatografia de afinidade. Resumidamente, o sobrenadante foi aplicado numa coluna Hi Trap Protein G Sepharose (5 ml, Pharmacia) (2 ml/min), lavada com Tris 25 mM pH 8, NaCl 150 mM (5 volumes de coluna) e eluida com glicina 100 mM pH 2,5 (1 ml/min), com neutralização imediata das fracções para pH 7,5 com Tris 1M pH 8. As fracções contendo a proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc foram identificadas por SDS-PAGE, reunidas e aplicadas a uma coluna de Sephacryl S100 (Pharmacia), pré-equilibrada com Tris 35 mM pH 6,5, NaCl 150 mM. A filtração em gel foi realizada a 0,35 ml/min, colhendo um pico da proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc em fracções de aproximada-mente 3 x 5 ml. Estas amostras foram reunidas e aplicadas numa coluna Resource Q (6 ml, Pharmacia), pré-equilibrada em Bis Tris 35 mM, pH 6,5. A coluna foi lavada com 5 volumes de coluna de Bis Tris 35 mM pH 6,5, NaCl 150 mM (6 ml/min) e a proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc eluida numa fracção de 4-6 ml com Bis Tris 35 mM, NaCl 400 mM. Nesta fase a proteína estava 90% pura e migrando como uma única banda de aproximadamente 68kD em SDS-PAGE. Para usar como 125 ΡΕ2177537 imunogénio e em todos os passos subsequentes, o material foi sujeito a troca de tampões para HEPES 25 mM pH 7,5, EDTA 1 mM, DTT 1 mM, , NaCl 100 mM, 50% de glicerol e guardado como aliquotas a -80°C.
(ii) Membranas celulares que expressam estavel-mente MAdCAM
Um fragmento Sacl/Notl compreendendo os nucleó-tidos 645-1222 da sequência MAdCAM publicada (Shyjan AM, et al., J Immunol., 156, 2851-7 (1996)) foi amplificado por PCR a partir de uma biblioteca de cDNA do cólon e clonada em locais Sacl/Notl do vector pIND-Hygro (Invitrogen). Um fragmento Saci, compreendendo a sequência codificadora 5' adicional foi subclonado nesta construção de pCDNA3.1 MAdCAM-IgGi Fc para gerar cDNA de MAdCAM de tamanho completo. Um fragmento Kpnl/Notl contendo o cDNA de MAdCAM foi então clonado nos locais correspondentes num vector pEF5FRTV5GWCAT (Invitrogen) com substituição da sequência codificadora de CAT. O inserto de cDNA foi verificado por sequenciação e usado em transfecções para gerar clones isolados com expressão estável em células Flpln NIH 3T3 (Invitrogen) por tecnologia de recombinase Flp, de acordo com as instruções do fabricante. Os clones com expressão estável foram seleccionados pela sua capacidade para suportar a ligação de uma linha celular linfoblastóide B humana α4β7+ JY (Chan BM, et al, J. Biol. Chem., 267:8366-70 (1992)), descrita abaixo. Os clones estáveis de células CHO expressando MAdCAM foram preparados da mesma forma, usando células CHO Flpn (Invitrogen). 126 ΡΕ2177537
As células Flpln NIH-3T3 expressando MAdCAM foram crescidas em meio de Eagle modificação de Dulbecco (Gibco), contendo L-glutamina 2 mM, 10% de soro de vitela Donor (Gibco) e 200 pg/ml de higromicina B (Invitrogen) e expandidas em frascos rolantes. As células CHO Flpn expressando MAdCAM foram crescidas em meio Ham's F12/ meio de Eagle modificação de Dulbecco (Gibco) contendo L-glutamina 2 mM, 10% de soro de vitela Donor (Gibco) e 350 pg/ml de higromicina B (Invitrogen) e expandidas em frascos rolantes. As células foram colhidas para usar numa solução não enzimática de dissociação de células (Sigma) e raspagem, lavagem com soro fisiológico tamponado com fosfatos por centrifugação. As membranas celulares foram preparadas a partir do sedimento de células através de dois ciclos de homogeneização com polytron em Bis Tris 25 mM pH 8, MgCl2lO mM, 0.015% (p/v) de aprotinina, 100 U/mL de bacitracina e centrifugação. O sedimento final foi ressuspenso no mesmo tampão e o equivalente a 50 x 106 células distribuídas em pequenas quantidades por tubos eppendorf de parede espessa e centrifugados a >100000g para gerar sedimentos de membranas celulares para imunizações de murganhos XenoMouse. O sobrenadante foi decantado e as membranas guardadas em eppendorfs a -80°C até serem necessárias. A confirmação da expressão da proteína nas membranas celulares foi determinada por SDS-PAGE e transferências Western com um anticorpo de coelho anti-péptido induzido contra os resíduos n-terminais de MAdCAM ([C]-KPLQVEPPEP). ΡΕ2177537 127
Imunização e geração de hibridomas:
Murganhos XENOMOUSE™ com oito a dez semanas de idade foram imunizados intraperitonealmente ou nas suas patas traseiras com a proteína de fusão recombinante purificada MAdCAM-IgGi Fc (10 pg/dose/murganho) ou com membranas celulares preparadas a partir de células CHO ou NIH-3T3 expressando estavelmente MAdCAM (10 x 106 célu-las/dose/murganho) . Esta dose foi repetida cinco a sete vezes ao longo de um período de três a oito semanas. Quatro dias antes da fusão, os murganhos receberam uma injecção final do domínio extracelular de MAdCAM humano em PBS. Os linfócitos do baço e dos nódulos linfáticos dos murganhos imunizados foram fundidos com a linha celular de mieloma não secretória P3-X63-Ag8.653 e foram sujeitos a selecção com HAT como anteriormente descrito (Galfre and Milstein, Methods Enzymol. 73:3-46 (1981)). Um painel de hibridomas todos secretores de anticorpos IgG2k e IgG^k humanos específicos de MAdCAM foram recuperados e subclonados. Doze subclones de hibridoma, 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4 e 9.8.2, produtores de anticorpos monoclonais espe'cificos de MAdCAM foram recuperados e detectados com os ensaios descritos abaixo. As linhas parentais 1.7, 1.8, 6.14, 6.22, 6.34, 6.67, 6.73, 6.77, 7.16, 7.20, 7.26 e 9.8 das quais derivam os subclones das linhas de hibridoma 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4 e 9.8. tinham todas actividade anti-MAdCAM. ΡΕ2177537 128
Ensaios de ELISA: A detecção de anticorpos específicos de antigénio em soro de murganho e no sobrenadante de hibridoma foi determinado por ELISA como descrito (Coligan et ai., Unit 2.1 "Enzyme-linked immunosorbent assays," in Current Protocols In Immunology(1994))usando a proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc para capturar os anticorpos. Para os animais que forma imunizados com a proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc, os anticorpos foram testados relativamente a reacti-vidade não específica contra IgGi humana e quanto à capacidade para se ligarem a células Flpln CHO MAdCAM por citometria de fluxo.
Num ensaio de ELISA preferido, foram usadas as técnicas que se seguem:
As placas de ELISA foram revestidas durante a noite a 4°C com 100 μΐ /alvéolo da fusão MAdCAM-IgGi Fc (4,5 pg/ml) em placas contendo tampão (tampão carbonato/bi-carbonato de sódio 100 mM, pH 9,6) . Após incubação, o tampão de revestimento foi removido e a placa bloqueada com 200 μΐ/alvéolo de tampão de bloqueio (5% BSA, 0,1 % Tween 20, em soro fisiológico tamponado com fosfatos) e incubada à temperatura ambiente durante 1 hora. O tampão de blqoueio foi removido e adicionado 50 μΐ/alvéolo de sobrenadante de hibridoma ou de outro soro ou sobrenadante (e.g., controlo positivo) durante 2 horas à temperatura ambiente. Após incubação a placa foi lavada com PBS (3 x 100 μΐ/alvéolo) e 129 ΡΕ2177537 a ligação do mAb do hibridoma detectada com anticorpos secundários conjugados com HRP (i.e. 1:1000 de anticorpos de murganho anti- IgG2 humana-HRP (SB Cat. No. 9060-05) para anticorpos IgG2 ou 1:1000 de anticorpos de murganho anti-IgG4 humana-HRP (Zymed Cat. No. 3840) para anticorpos IgG4) diluídos em PBS. As placas foram incubadas à temperatura ambiente durante 1 hora, lavadas em PBS (3 x 100 μΐ/alvéolo) e finalmente reveladas com 100 μΐ de OPD (o-fenilenodiamina (DAKO S2405) + 5 μΐ 30% H2O2/I2 mL) . As placas foram deixadas a revelar 10-12 mins, e a paragem da reacção foi feita com 100 μΐ de 2M H2SO4. As placas foram lidas a 490 nm.
Ensaios de adesão:
Os anticorpos que demonstraram ligação à proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc por ELISA, foram avaliados relativamente à actividade antagonista em ensaios de adesão com células α4β7+ JY e (i) proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc ou (ii) células MAdCAM-CHO. (i) Ensaio com a proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc 100 μΐ de uma solução a 4,5 pg/ml da proteína de fusão purificada MAdCAM-1 gGi Fc em PBS de Dulbecco foi adsorvida a placas de 96 alvéolos de fundo em u Black Microfluor "B" (Dynex #7805) durante a noite a 4°C. As placas revestidas com MAdCAM foram então invertidas e o 130 ΡΕ2177537 excesso de líquido retirado por absorção sobre toalhas de papel, antes do bloqueio a 37°C durante pelo menos 1 hora em 10% BSA/PBS. Durante este tempo, as células JY em cultura foram contadas usando exclusão com azul tripano (deverá ser aproximadamente 8 x 105 células/ml) e 20 x 106 células/placa de ensaio pipetadas para um tubo de centrífuga de 50 ml. As células JY foram cultivadas em meio RPMI1640 (Gibco) , contendo L-glutamina 2 mM e 10% de soro fetal bovino inactivado pelo calor (Life Technologies #10108-165) e semeadas a 1-2 x 105/ml cada 2-3 dias para evitar a diferenciação da cultura. As células foram lavadas duas vezes com meio RPMI 1640 (Gibco) contendo L-glutamina 2 mM (Gibco) por centrifugação (240 g) , ressuspendendo o sedimento celular final a 2 xlO6 células/ml em RPMI 1640 para adição de Calceína AM. A Calceína AM (Molecular Probes #C-3099) foi adicionada às células numa diluição de 1:200 em DMSO (concentração final de aproximadamente 5 μΜ) e as células protegidas da luz durante a incubação (37°C durante 30 mins). Durante este passo de incubação das células os anticorpos a serem testados foram diluídos como se segue: para o teste com uma única dose, os anticorpos foram preparados a 3 pg/ml final) em 0,1 mg/ml de BSA (Sigma #A3059) em PBS; para as curvas de IC50, os anticorpos forma diluídos em 0,1 mg/ml de BSA/PBS, com 3 pg/ml (1 pg/ml final) sendo a concentração máxima, depois duplicando as diluições (proporção de 1:2) ao longo da placa. O alvéolo final da fila foi usado para determinar a ligação total, assim foi usado 0,1 mg/ml de BSA em PBS. 131 ΡΕ2177537
Após bloqueio, os conteúdos das placas foram retirados e adicionados 50 μΐ de anticorpos/controlos a cada alvéolo e a placa incubada a 37°C durante 20 minutos. Durante este tempo, as células JY cheias de calceina foram lavadas uma vez com meio RPMI 1640 contendo 10% de soro fetal bovino e uma vez com 1 mg/ml de BSA/PBS por centrifugação, ressuspensão do sedimento de células final a lxl06/ml em 1 mg/ml de BSA/PBS. 100 μΐ de células foram adicionados a cada alvéolo da placa de fundo em U, a placa foi selada, centrifugada rapidamente (1000 rpm durante 2 min) e a placa depois incubada a 37°C durante 45 min. No final deste tempo, as placas foram lavadas com um lavador de placas Skatron e medida a fluorescência com um leitor Wallac Victor2 1420 Multilabel Reader (λ de excitação 485 nm, λ de emissão 535 nm contagem a partir do topo, 8 mm a partir do topo, durante 0,1 seg com abertura de emissão normal). Para cada concentração de anticorpo, a percentagem de adesão foi expressa como uma percentagem de resposta máxima de fluorescência na ausência de qualquer anticorpo menos a fluorescência associada a ligação inespecifica. O valor de IC50 foi definido como a concentração de anticorpo anti-MAdCAM à qual a resposta de adesão diminui em 50% a resposta observada na ausência de anticorpo anti-MAdCAM. Os anticorpos que foram capazes de inibir a ligação de células JY à fusão MAdCAM-IgGi Fc com um valor de IC50 <0,1 pg/ml, foram considerados como tendo forte actividade antagonista e foram usados no ensaio de adesão com MAdCAM-CHO. Os doze Abs testados mostraram forte actividade antagonista (Tabela 3). Os anticorpos monoclonais 1.7.2, 1.8.2, 7.16.6, 7.20.5 132 ΡΕ2177537 e 7.26.4 derivaram das linhagens IgG2K, e os anticorpos monoclonais 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1 e 9.8.2 derivaram das linhagens IgG4K.
(ii) Ensaio de adesão das células MAdCAM-CHO Células JY foram cultivadas como atrás descrito. As células CHO expressando MAdCAM foram geradas com a construção de cDNA pEF5FRT MAdCAM e usando a tecnologia da recombinase Flp (Invitrogen) como descrito atrás. Os clones isolados estáveis de células CHO expressando MAdCAM foram seleccionados com base na sua capacidade para suportar a adesão de células JY e a ligação por citometria de fluxo do anticorpo anti-péptido de coelho, induzido contra o extremo N de MAdCAM e descrito atrás. As células CHO que expressam MAdCAM foram cultivadas em meio DMEM/F12 (Gibco #21331-010) contendo L-glutamina 2 mM, 10% de soro fetal bovino (Gibco) e 350 pg/ml de higromicina B (Invitrogen), passadas a 1:5 cada 2/3 dias. Para o ensaio de adesão, as células CHO expressando MAdCAM foram semeadas a 4 x 104 células/alvéolo em placas de 96 alvéolos preta de fundo transparente (Costar #3904) em 200 μΐ de meio de cultura e crescidas durante a noite a 37°C/5% C02.
No dia seguinte, o sobrenadante dos hibridomas ou do anticorpo monoclonal foi didluido a partir de uma concentração de partida de 30 pg/ml (equivalente a uma concentração final de 10 pg/ml) em 1 mg/ml de BSA/PBS, como 133 ΡΕ2177537 atrás descrito. Para as células MAdCAM CHO, os conteúdos das placas foram removidos e adicionados 50 μΐ de anticorpos/controlos a cada alvéolo e a placa incubada a 37°C durante 20 minuto. O último alvéolo da fila foi usados para determinação da ligação total, assim usou-se 0,1 mg/ml de BSA em PBS. As células JY cheias de calceina AM numa concentração final a lxl06/ml em 1 mg/ml de BSA/PBS foram preparadas como atrás descrito, depois 100 μΐ foram adicionados à placa após o período de incubação de 20 min com o anticorpo. A placa foi depois incubada a 37°C durante 45 min. No final deste tempo, em seguida lavada com um lavador de placas Tecan (PW384) e medida a fluorescência com o leitor de placas como atrás descrito. Para cada concentração de anticorpo, a percentagem de adesão foi expressa como uma percentagem de resposta máxima de fluorescência na ausência de qualquer anticorpo menos a fluorescência associada a ligação inespecífica. Os anticorpos que foram capazes de inibir a ligação de células JY às células MAdCAM CHO com um valor de IC50 <0,1 pg/ml, foram considerados como tendo forte actividade antagonista. Como anteriormente, o valor de IC50 é definido como a concentração de anticorpo à qual a resposta de adesão teve um decréscimo para 50% da resposta na ausência de anticorpo anti-MAdCAM. As potências de IC50 para 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4 e 9.8.2 neste ensaio estão descritas abaixo na Tabela 3. 134 ΡΕ2177537
Tabela 3. Valores de IC50 dos anticorpos anti-MAdCAM exemplificados
I «H
Clone Fusa© MS.dCSM IgGi Fc Média ICm Ensaio M&dCÃM Flpln CHO Fc Média ICse Cpg/ml) 1X2 \ 0.030 λ 0.011 § 0.502 ± 0.280 0 0.027 ± 0.011 4 0.424 0.107 8 7.16.6 0.019 d 0.009 7 0.389 ± 0.093 16 7.20.5 0.025 0.027 7 0.387 ± 0.202 9 7.26.4 0.021 0.040 4 0.874 0.000 15 0.011 d 0.005 4 0.291 0.698 8 jjpljLsjjr ;· 0.018 á: 0.011 4 0.673 ± 0.188 7 0.013 ± 0.005 4 0.285 ± 0.O73 7 0.013 ± 0.070 4 0.298 0.116 8 0.020 0.010 4 0.369 ± 0.103 8 itávhtí 0.022 ± 0.004 4 0.520 0.100 4 0,020 ± mm 0.440 ± 0.342 m8
Para medir a potência antagonista de mAbs anti-MAdCAM emensaios baseados em fluxo, em condições de pressão de fricção destinadas a simular o ambiente microvascular nas vénulas endoteliais altas que servem o tecido linfóide associado ao intestino, as células CHO expressando MAdCAM foram semeadas em microlâminas de vidro (50 x 4 mm) e deixadas a aderir para formar uma monocamada confluente (cerca de 2,5 x 105 células). As células foram então incubadas com mAb purificado por afinidade numa larga gama de concentrações (0,1-10 pg/ml) durante 20 mins a 37°C, antes de serem ligadas ao sistema de ensaio de fluxo. Como controlo nega- 135 ΡΕ2177537 tivo foi usado um anticorpo do mesmo isotipo para IgG2 ou IgG4 (10 pg/ml). Os linfócitos de sangue periférico (PBLs) de dadores normais foram perfundidos sobre a monocamada de células a uma força de fricção constante de 0,05 Pa. As experiências foram editadas em vídeo e adesão total de linfócitos (rolamento + adesão firme) foi calculada. Todos os anticorpos monoclonais testados demonstraram ser fortes antagonistas nas condições descritas. (iii) Ensaios de Stamper-Woodruff
Para visualizar os vasos MadCAM+, foi gerado mAb anti-MAdCAM biotinilado em 1-2 mg de proteína purificada por afinidade, usando um excesso molar de biotina-NHS (Pierce) em soro fisiológico tamponado com fosfatos, de acordo com as instruções do fabricante. A reacção foi deixada correr à temperatura ambiente (30 min) e removido o sal com uma coluna PD-10 (Pharmacia) e determinada a concentração proteica. 0 nódulo linfático de fígado normal foi removido de um órgão dador, congelado rapidamente em azoto líquido e guardado a -70°C até ser usado. Secções de crióstato de 10 pm foram cortadas, secas ao ar sobre lâminas revestidas com poli-L lisina e fixadas em acetona antes do ensaio. As secções foram bloqueadas usando o sistema de bloqueio avidina-biotina (DAKO) e depois incubadas com mAb anti-MAdCAM biotinilado numa larga gama de concentrações (1-50 136 ΡΕ2177537 pg/ml) à temperatura ambiente (2 hrs). Como controlo negativo usou-se um anticorpo do mesmo isotipo do mAb IgG2 ou de IgG4 (50 pg/ml) e como controlo positivo um anticorpo bloqueador anti-βν (50 pg/ml).
Os linfócitos do sangue periférico, colhidos de dadores normais, foram marcados com um mAb anti-CD2 humano (DAKO) para permitir a subsequente visualização de células aderentes. 5 x 105 PBLs foram adicionados a cada secção de nósulo linfático e incubados durante 30 minutos antes de serem suavemente levados para evitar o descolamento das células aderentes. As secções foram então novamente fixadas e incubadas com mAb anti-MAdCAM biotinilado (10 pg/ml), seguido de anticorpos de cabra anti-mAb de murganho biotinilado (para reconhecer PBLs CD2 marcados e os vasos MAdCAM+ não corados) e depois streptABcomplex/HRP (DAKO). Finalmente, os vasos MAdCAM+ & PBLs CD2 marcados foram visualizados pela adição do substrato DAB (DAKO) às secções, com um produto de reacção castanho mostrando as áreas de coloração positiva. A adesão dos linfócitos foi quantificada pela contagem do número de linfócitos que aderiram a 50 vasos MAdCAM+ dos tratos portais, veias ou sinusoides. Os dados, expressos como valores médios, foram então normalizados relativamente à percentagem de adesão dos PBLs na ausência de qualquer anticorpo considerada como 100%. Os dados foram compilados com base em n=3 diferentes dadores de PBLs e para diferentes dadores de nódulos linfáticos do fígado. Os dados representativos para os 137 ΡΕ2177537 anticorpos monoclonais purificados biotinilados 1.7.2 e 7.16.6 estão descritos na Figura 4 comparando com um controlo de anticorpo bloqueador anti-βν.
Ensaios de selectividade: VCAM e a fibronectina são homólogos, em termos estruturais e de sequências, de MAdCAM. Os mAbs anti-MAdCAM purificados por afinidade foram testados relativamente à especificidade para MAdCAM através da determinação da sua capacidade para bloquear a ligação de células T Jurkat α4βι+/α5βι+(ΑΤΟΟ à sua molécula de adesão celular cognata. 100 μΐ de uma solução do fragmento de ligação da célula à fibronectina (110 kD, Europa Bioproducts Ltd, Cat. No. UBF4215-18) ou VCAM (Panvera) em PBS de Dulbecco foi adsorvido a placas de 96 alvéolos de fundo em U Black Microfluor "B" (Dynex #7805) durante a noite a 4°C. As placas revestidas foram então invertidas e o excesso de liquido retirado por absorção com papel, antes do bloqueio a 37°C durante pelo menos 1 hora em 10% BSA/PBS. Durante este tempo as células T Jurkat em cultura foram contadas usando exclusão com azul tripano e cheias com o corante calceina AM como anteriormente descrito para as células JY. Os anticorpos a seresm testados foram diluídos a partir de uma concentração máxima de 10 pg/ml em 0,1 mg/ml de BSA em PBS. O último alvéolo da fila foi psado para determinação da ligação total, de forma que foi usado 0,1 mg/ml de BSA em PBS. Echistatin (Bachem,Cat. No. H-9010) preparado em 138 ΡΕ2177537 PBS foi usado numa concentração máxima de 100 nM para blqoear a interacção α5βι/ίibronectina .Um mAb anti-CD106 (Clone 51-10C9, BD Pharmingen Cat. 555645) na concentração máxima de 1 pg/ml foi usado para bloquear a interacção cqPi/VGAM.
Após bloqueio, o conteúdo da placa foi retirado e adicionados 50 μΐ de anticorpos/controlos a cada alvéolo e a placa incubada a 37°C durante 20 minutos. Células T Jurkat cheias com calceina foram lavadas uma vez como anteriormente, ressuspendendo o sedimento final para 1 x 106/ml em 1 mg/ml de BSA/PBS. 100 μΐ de células foram adicionados a cada alvéolo da placa de fundo em U, a placa foi selada, centrifugada rapidamente (1000 rpm durante 2 min) e a placa foi depois incubada a 37°C durante 45 min. No final deste tempo, as placas foram lavadas com um lavador de placas Skatron e medida a fluorescência com um leitor Wallac Victor2 1420 Multilabel Reader (λ de excitação 485 nm, λ de emissão 535 nm contagem a partir do topo, 8 mm a partir do topo, durante 0,1 seg com abertura de emissão normal). Para cada concentração de anticorpo, o grau de inibição está expresso abaixo pictoricamente, na Tabela 4 (- inibição da adesão negligivel, *** inibição completa da adesão). Todos os mAbs exemplificados são anatagonistas anti-MAdCAM fortes e selectivos, demonstrando substancialmente mais de 100 vezes de selectividade para MAdCAM relativamente a VCAM e fibronectina. 139 ΡΕ2177537
Tabela 4. Selectividade comparativa do anticorpo anti-MAdCAM para MAdCAM relativamente a outras moléculas de adesão celular, fibronectina e VCAM
Clone Inifcição no ensaio 4565¾ /f llSEQilSCtiím Xmhição bo ensaia ay\/YGSM {10 pg/asl) Inibição no ensaio (10 pg/iai) 1.7J « *** 18.2 »4 *♦* 7 AêM - - *♦* 7MM #** 7,20.4 *» 4* *4* - $22¾¾ - - *** 4» *** W “ * M. *4* 44 4Η *** « - ***
Os hibridomas foram depositados Collection of Cell Cultures (ECACC), H.P.A at Down, Salisbury, Wiltshire SP4 OJG em 9 de com os seguintes números de depósito: na European CAMR, Porton Setembro 2003
Hibridoma1.7.21.8.2 6.14.26.22.2
Depósito No.03090901 03090902 03090903 03090904 6.34.2 03090905 140 ΡΕ2177537 6.67.1 03090906 6.73.2 03090907 6.77.1 03090908 7.16.6 03090909 7.20.5 03090910 7.26.4 03090911 9.8.2 03090912 EXEMPLO II:
Determinação das constantes de afinidade (Kd) de anticorpos monoclonais totalmente humanos anti-MAdCAM por BIAcore
Realizámos medições de afinidade dos anticorpos purificados por ressonância de plasmões de superfície usando o instrumento BIAcore 3000, seguindo os protocolos do fabricante.
Protocolo 1
Para realizar as análises cinéticas, preparou-se uma superfície de alta densidade de anticorpo de murganho anti-(IgG2 e IgG4) humanas sobre um sensor BIAcore CM5 usando acoplagem de aminas de rotina. Os sobrenadantes dos hibridomas foram diluídos 10, 5, 2 vezes em tampão de corrida HBS-P (HEPES 10 mM pH 7,4, NaCl 150 mM, 0, 005% tensioactivo P20) contendo 100 pg/ml de BSA e 10 mg/ml de carboximetildextrano ou usado bruto. Cada mAb foi capturado 141 ΡΕ2177537 numa superfície separada usando um tempo de contacto de 1 min e uma lavagem de 5 min para estabilização da linha de base do mAb. A proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc (141 nM) foi então injectada em todas as supefícies durante um minuto, seguido de uma dissociação de 3 minutos. Os dados foram normalizados para a quantidade de anticorpo capturado em cada superfície e avaliado com um ajuste global Langmuir 1:1, usando modelos de da linha de base disponíveis no programa BIAevauation fornecido pela BIAcore.
Protocolo 2
Os mAbs purificados por afinidade foram imobilizados na camada de dextrano de um biosensor CM5 usando acoplagem com amina. Os circuitos integrados foram preparados usando tampão acetato pH 4,5 como tampão de imobilização e densidades proteicas de 1,5-5,5 kRU foram atingidos. Amostras da proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc em tampão de amostra foram preparadas em concentrações que variaram entre 0,2 e 55 nM (uma solução 0 nM compreendendo tampão de corrida sozinho foi incluída como referência zero) . As amostras distribuídas ao acaso e injectadas em duplicado durante 3 min cada através de 4 células de fluxo HBS-EP (HEPES 10 mM pH 7,4, NaCl 150 mM, EDTA 3 mM, 0,005% Tensioactivo P20= como tampão de corrida. Um fluxo de 100 μΐ/min foi usado para minimizar os limites de transporte de massa. A dissociação da proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc foi monitorizada durante 180 mins, a superfície regenerada por uma injecção de 6 seg de 25 mM H3P04 (50 pL/min), ou 10 142 ΡΕ2177537
mM (6.22.2), 20 mM (6.67.1, 6.73.2, 6.77.1) a 25 mM (6.34.2) e 45 mM NaOH (6.14.2) e os dados analisados com o pacote informático BIAevaluation (v3.1). A Tabela 5 descreve as medições de afinidade de anticorpos anti-MAdCAM representativos do presente invento:
Tabela 5. Determinação da constante de afinidade, Kd, por ressonâncvia de plasmões de superfície (BIAcore)
stooole 1 Frotocolo 2 CLONE kp. (1/Ms) Kn(m 17*2 2.4 x 10® 1 x 10® 42 5,5 x# TaxF 23.6 18.2 : 2.9 X 10® 1x10* 35 1,8x10® 2,3 x 10*® 126 7.16.· 15x10® 2.2x10® 15 2.9x10® 14x10*® 4.6 7.20*5 4.5x10® 19x10* 42.2 1.0X10® 12x10*® 75 7.26.4 8.6 x 1^ 2,6x104 271 1,5x1o5 12x10*® 80 13x10® 1x10*® 7.7 5x1# <5x10*® <10 15x10® 14x10® 9,3 2,3x10® 8,7 x Wr 3.8 d&ÉjSi' 12x10® 19x10*® i$.a 3.3x10® < 5 x 10*® <15 5.9x10® 1x10*® 17 2,4 x 10® <5x1 0* <20 14x10® 13 x 104 m 15x10® ixier® 6,7 SÉêM: 2.3x10^ 2.3x10* 100 4.4 X 10® 14x10*® 32.5 A análise cinética indica que os anticorpos preparados de acordo com o invento possuem elevadas afinidade e fortes constantes de ligação para o domínio extra-celular de MAdCAM. ΡΕ2177537 143 EXEMPLO III:
Identificação da selectividade de epitopos e reactividade cruzada de espécies de mAbs anti-MAdCAM
Os anticorpos reconhecem epitopos expostos na superfície de antigénios como regiões de sequência linear (primária) ou de sequência estrutural (secundária). Compar-timentação de epitopos com Luminex, compartimentação com BIAcore e análise imuno-histoquímica de espécies foram usados concertadamente para definir o panoram de epitopos funcionais dos anticorpos anti-MAdCAM.
Compartimentação de epitopos baseada em Luminex:
Esferas conjugadas com MxhlgG 2,3.4 (Calbiochem Ml 1427) foram acopladas ao anticorpo primário anti-MAdCAM desconhecido. Adicionámos 150 μΐ de diluição do anticorpo primário desconhecido (0,1 pg/ml diluído em meio de hibridoma) ao alvéolo de uma placa de cultura de 96 alvéolos. As esferas foram agitadas suavemente com vortex e diluídas em sobrenadante para uma concentração de 0,5 x 105 esferas/ml. As esferas foram incubadas no sobrenadante num agitador durante a noite no escuro a 4°C.
Cada um dos alvéolos de uma placa com filtro de microtitulação de 96 alvéolos (Millipore # MABVN1250) foi pré-molhada pela adição de 200 μΐ de tampão de lavagem (PBS contendo 0,05% Tween 20) e removido por aspiração. Em 144 ΡΕ2177537 seguida, 50 μΐ/alvéolo do stock de 0,5 x 105 esferas/ml foi adicionado à placa com filtro e os alvéolos foram lavados com tampão de lavagem (2 x 100 μΐ/alvéolo). Adicionou-se 60 μΐ/alvéolo de antigénio MAdCAM-IgGi Fc diluído em meio de hibridoma (0,1 μg/ml). As placas foram cobertas e incubadas à temperatura ambiente com agitação suave durante uma hora. Os alvéolos foram lavados duas vezes pela adição de 100 μΐ/alvéolo de tampão de lavagem seguido de aspiração. Em seguida, adicionámos 60 μΐ/alvéolo de anticorpo secundário anti-MAdCAM desconhecido diluído em meio de hibridoma (0,1 pg/ml). As placas foram agitadas à temperatura ambiente no escuro durante duas horas. Em seguida os alvéolos foram lavados duas vezes pela adição de 100 μΐ/alvéolo de tampão de lavagem seguido de aspiração. Em seguida, adicionou-se 60 μΐ/alvéolo de MxhlgG 2,3,4 biotinilado (0,5 pg/ml). As placas foram agitadas à temperatura ambiente no escuro durante uma hora. Os alvéolos foram lavados duas vezes pela adição de 100 μΐ/alvéolo de tampão de lavagem seguido de aspiração. A cada alvéolo, adicionou-se 60 μΐ de 1 pg/ml de MxhlgG 2,3,4 Streptavidin-PE (Pharmacia #554061) diluído em eio de hibridoma. As placas foram agitadas à temperatura ambiente no escuro durante vinte minutos. Os alvéolos foram lavados pela adiçãoi de 100 μΐ/alvéolo de tampão de lavagem seguido de aspiração. Em seguida, cada alvéolo foi ressuspenso em 80 μΐ de tampão de bloqueio (PBS com 0,05% de albumina sérica bovina, 0,1% TWEEN e 0,01% de Thimerosal) cuidadosament epipetado para cima e para baixo para ressuspender as esferas. 145 ΡΕ2177537
Usando Luminex 100 e o programa informático apenso (Luminex® Corporation) as placas foram lidas para determinar as leituras de luminescência. Baseado nos dados de luminescência obtids para os vários anticorpos anti-MAdCAM testados, os anticorpos anti-MAdCAM foram agrupados de acordo com as suas especificidades de ligação. Os anticorpos anti-MAdCAM que foram testados caem numa série de compartimentos de epitopos, representados na Tabela 8.
Compartimentação BIAcore:
Num método semelhante ao atrás descrito, BIAcore pode também ser usado para determinar a exclusividade de epitopos dos anticorpos anti-MAdCAM exemplificados por este invento. Nove clones de anticorpos anti-MAdCAM, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.77.1, 7.20.5, 9.8.2, 1.7.2, 7.26.4 e 7.16.6, foram imobilizados na camada de dextrano de células de fluxo separadas de um circuito integrado de biosensor CM5 usando acoplagem com amina. 0 tampão de imobilização foi tampão acetato 10 mM pH 4,5 (clones 6.22.2, 6.34.2, 7.20.5, 9.8.2,1.7.2, 7.26.4 e 7.16.6) ou tampão acetato 10 mM pH 5.5 (clones 6.67.1 e 6.77.1). Uma densidade proteica de aproximadamente 3750 RU foi conseguida em todos os casos. A desactivação dos ésteres de H-hidro-siccinimida que não reagiram foi realizada usando hidrocloreto de etanolamina 1M, pH 8,5. A proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc foi diluída 146 ΡΕ2177537 para uma concentração de 1,5 pg/ml (aproximadamente 25 nM) em tampão de corrida HBS-EP (HEPES 0,01 M pH 7,4, NaCl 0,15 M, EDTA 3 mM, 0,005% Polissorbato 20). Foi então injectada através da primeira célula de fluxo, num volume de 50 μΐ a uma velocidade de 50 μΐ/min. Após a injecção estar completa, a primeira sonda de anticorpo foi adicionada à mesma célula de fluxo. Todos os anticorpos a testar foram diluídos para uma concentração de aproximadamente 20 pg/ml em HBS-EP e também injectados num volume de 50 μΐ a um fluxo de 5 μΐ/min. Quando não foi observada ligação do anticorpo a testar, o clone a testar seguinte foi injectado imediatamente a seguir. Quando ocorreu ligação, a superfície do sensor foi regenerada para remover a proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc e o anticorpo testado. Foi usada uma variedade de soluções de regeneração dependendo do anticorpo imobilizado e do anticorpo a testar presente. Na Tabela 6 está apresentado um sumário das condições de regeneração usadas.
Tabela 6. Sumário das condições de regeneração usadas para realizar o mapeamento de epitopos BIAcore
Anticorpo imobilizado Anticorpo a ser removido Solução de regeneração Volume de inj ecção 7.16.6 6.22.2 Ácido fosfórico 40 mM 20 μΐ 6.34.2 Ácido fosfórico 40 mM 40 μΐ 7.02.5 Ácido fosfórico 40 mM 20 μΐ 6.77.1 9.8.2 Ácido fosfórico 40 mM 10 μΐ 1.7.2 Ácido fosfórico 40 mM 5 μΐ 7.16.6 Ácido fosfórico 40 mM 10 μΐ ΡΕ2177537 147 (continuação)
Anticorpo imobilizado Anticorpo a ser removido Solução de regeneração Volume de inj ecção 1.7.2 6.77.1 Ácido fosfórico 25 mM 5 μΐ 9.8.2 Ácido fosfórico 25 mM 5 μΐ 7.20.5 Ácido fosfórico 25 mM 5 μΐ 6.22.2 Ácido fosfórico 25 mM 5 μΐ 6.34.2 Hidróxido de sódio 25 mM 5 μΐ 6.67.1 Hidróxido de sódio 25 mM 5 μΐ 6.22.2 9.8.2 Hidróxido de sódio 25 mM 2 0 μΐ 7.26.4 Hidróxido de sódio 25 mM 5 μΐ 6.34.2 9.8.2 Hidróxido de sódio 25 mM 7 0 μΐ 1.7.2 Hidróxido de sódio 40 mM 5 μΐ 7.26.4 Hidróxido de sódio 40 mM 5 μΐ 6.67.1 9.8.2 Hidróxido de sódio 40 mM 5 μΐ 1.7.2 Hidróxido de sódio 40 mM 5 μΐ 7.20.5 9.8.2 Ácido fosfórico 25 mM 5 μΐ 1.7.2 Ácido fosfórico 25 mM 5 μΐ 7.26.4 Ácido fosfórico 25 mM 5 μΐ 7.26.4 9.8.2 Hidróxido de sódio 40 mM 20 μΐ 6.22.2 Ácido fosfórico 75 mM 20 μΐ 7.20.5 Ácido fosfórico 75 mM 20 μΐ 7.16.6 Ácido fosfórico 75 mM 20 μΐ 9.8.2 9.8.2 Ácido fosfórico 25 mM 15 μΐ 6.22.2 Ácido fosfórico 25 mM 10 μΐ 7.20.5 Ácido fosfórico 25 mM 20 μΐ 7.16.6 Ácido fosfórico 25 mM 10 μΐ (0 fluxo foi de 50 μΐ/min durante todos os procedimentos de regeneração)
Após regeneração, a proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc foi novamente ligada e mais anticorpos a testar foram injectados. Estes procedimentos foram realizados ante todo o painel de clones ter sido injectado na superfície do 148 ΡΕ2177537 anticorpo imobilizado, com a proteína de fusão MAdCAM-IgGi Fc ligada. Uma nova célula de fluxo com um anticorpo diferente imobilizado e MAdCAM ligada foi então usada para testar os nove clones a testar. Era previsível que os anticorpos anti-MAdGAM 1.7.2 e 1.8.2 reconhecessem o mesmo epitopo MAdCAM, baseado na estreita homologia da sequência primária de aminoácidos das suas cadeias pesada e leve capa, SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8 respectivamente. Assim, apenas 1.7.2 foi avaliado na matriz de resposta BIAcore. Os anticorpos 6-14-2 e 6.73.2 foram omitidos desta análise, mas todas as outras combinações de pares de anticorpos anti-MAdCAM foram testadas desta forma. Um nível arbitrário de 100 RU foi escolhido como o patamar de ligação/não ligação e uma matriz de respostas, (Tabela 7), foi criada com base na ligação observada.
Tabela 7. Matriz de respostas com compartimentação de epitopos BIAcore Í23&G&Í.1 X Ξ Ãriticorpo secimdário 622.2 ; «34.2 6.67.1 6.77.1 7.26.5 9.8.2 1.7.2 7.26.4 7.16.6 - * - X X X X . f «J4JT t m - - X X X X - - - X X - - :6.ττ;ι···ν:.; * - X X X 7.20.S U - -4c * *· X X X X I X X X X &&&&& SSsíJPSSS * X - -1.7.2/( , X X X X X X X » 7.2&4 ' X X » «► X X X · / 736« - X X 4» m .tlLLLLLLLLLLLLU.U X 4 # ϋΐϋ
Matriz de resposta para todas as combinações de pares de anticorpos, -indica ausência de ligação do anticorpo sonda, x indica que foi observada ligação (acima de um patamar escolhido de 100 RU). 149 ΡΕ2177537 A diagonal da matriz na Tabela 7 (sombreado a cinzento) mostra os dados de ligação para pares de sondas idênticas. Em todos os casos, excepto para os dois clones 7.16.6 e 9.8.2, os anticorpos foram auto-bloqueadores. Os anticorpos 7.16.6 e 9.8.2 não competem de forma cruzada. A ausência de auto-bloqueio poderá ser devida a uma alteração conformacional induzida pelo mAb na proteína de fusão que permite a ligação adicional do mAb a um segundo local em MAdCAM-IgFc. 0 agrupamento dos clones que mostra o mesmo padrão de reactividade dá origem a pelo menos seis compartimentos de epitopos diferentes, como se mostra na representação gráfica (Figura 5).
Mais identificação precisa das sequências dos epitopos de MAdCAM com as quais um anticorpo anti-MAdCAM interage pode ser determinada por qualquer um de uma série de métodos, incluindo análise Western ou arranjos de bibliotecas de péptidos aplicados como manchas (Reineke et al., Curr. Topics in Microbiol. and Immunol 243: 23-36 (1999), M. Famulok, E-L Winnacker, C-H Wong eds., Springer-Verlag, Berlin), apresentação fágica ou bacteriana de bibliotecas de expressão flagelina/fliC ou simples análise MALDI-TOF de fragmentos proteicos ligados após proteólise limitada. ΡΕ2177537 150
Ensaios imuno-histoquimicos:
Amostras de tecidos congelados embebidos em OCT ou sucrose de ileo (placas de Peyer) , nódulos linfáticos mesentéricos, baço, estômago, duodeno, jejuno e cólon foram usados como controlos de coloração positiva para os mAbs anti-MAdCAM. Para a coloração de secções humanas com mAbs IgG2 humanos, foram gerados derivados biotinilados dos mAbs anti-MAdCAM. Secções de 10 pm de tecido congelado foram cortadas com lâminas revestidas a poli L-lisina, colocadas directamente em 100% de acetona a 4°C (10 min) , depois 3% de peróxido de hidrogénio em metanol (10 min), lavagem entre os passos com PBS. As lâminas foram bloqueadas com o Biotin Blocking System (DAKO Cat. No. X0590) antes da incubação com o anticorpo primário (1:100 - 1:1000) em PBS (1 hr), lavadas com PBS-Tween 20 (0,05%) e depois a ligação foi revelada com HRP-Estreptavidina Cat. N° 550946, 30 min) e o substrato DAB (Sigma Cat. N° D5905) . Para os mAbs IgG4, foi usado um anticorpo secundário de murganho anti-IgG4 humana conjugado com HRP (Zymed Cat. No. 3840). As lâminas foram contrastadas com Mayer's Haemalum (1 min), lavadas e depois montadas em DPX. A afinidade de ligação foi comparada para uma série de espécies (murganho, rato, coelho, cão, tecido cinomolgo e tecido humano). Não foi observada reactividade cruzada dos anticorpos anti-MAdCAM para MAdCAM de murganho recombinante, quando analisados por ELISA. Os dados para tecido humano, cinomolgo e de cão estão apresentados na forma de tabela, Tabela 8 abaixo: 151 ΡΕ2177537
Tabela 8. Padrão de reactividade cruzada de anticorpos anti-MAdCAM contra ortólogos de espécie de MAdCAM
Sem licfaçâo
ligação o. d : não de fce rraín.ado A ligação anti-MAdCAM a estruturas endoteliais especializadas e a tecido linfóide está indicada pelo sombreado, de acordo com a chave. A compartimentação de epitopos baseada na análise de epitopos por Luminex para os anticorpos anti-MAdCAM 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.3 e 6.77.1 (itálico) derivou de experiências separadas das realizadas para 1.7.2, 1.8.2, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4 e 9.8.2 (negrito), conforme indicado pela diferença do tipo de caracter. 152 ΡΕ2177537
Todos os anticorpos anti-MAdCAM testados tinham a capacidade de reconhecer um epitopo de MAÇAM humano expresso nos compartimentos do endotélio vascular do trato gastrointestinal. Para além de 1.7.2 e de 1.8.2, todos os anticorpos anti-MAdCAM testados foram capazes de se ligarem especificamente aos compartimentos do endotélio vascular do trato gastrointestinal de cinomolgo. Outros anticorpos anti-MAdCAM, nomeadamente 6.14.2 e 6.67.1 também possuem a capacidade de reconhecer especificamente o ortólogo MAdCAM de cão assim como o MAdCAM de cinomolgo.
Geração de uma linha celular CHO que expressa MAdCAM quimérico, cinomolgo/humano, funcionalmente activo:
As diferenças na afinidade de ligação de certos anticorpos anti-MAdCAM para MAdCAM humano e cinomolgo, levou-nos a determinar se podia haver uma base estrutural para esta observação. [0239] Com base na sequência de aminoácidos publciada para MAdCAM de macaco (Shyjan AM, et al. , J Immunol., 156, 2851-7 (1996)), foram desenhadas sequências iniciadoras para amplificar por PCR a sequência do domínio de ligação de MAdCAM ο^βν cinomolgo. O RNA total foi preparado a partir e nódulo linfático mesentérico de cinomolgo removido e congelado (cerca de 200 mg) usando o método Trizol (Invitrogen) de acordo com as instruções do fabricante. 1-2 pg foi iniciado com oligo-dT e sujeito a transcrição reversa com transcriptase reversa de AMV (Promega). Uma proporção do produto da transcrição reversa 153 ΡΕ2177537 foi sujeito a PCR com as sequências iniciadoras directa 5'-AGC ATG GAT CGG GGC CTG GCC-3’ (SEQ ID NO: 67) e reversa 5' -GTG CAG GAC CGG GAT GGC CTG-3’ (SEQ ID NO: 68) com polimerase GC-2 em GC melt 1M (Clontech) e uma temperatura de emparelhamento de 62°C. Um produto de RT-PCR do tamanho adequado foi excisado e purificado a partir de um gel de 1% de agarose após electroforese, depois clonado em TOPO-TA (Invitrogen) entre os locais EcoRI de pCR2.1. 0 inserto foi confirmado por sequenciação. As sequências de nucleótidos e de aminoácidos previstas estão apresentadas em SEQ ID NOS 49 e 50, respectivamente.
As sequências de aminoácidos de MAdCAM humano e cinomolgo previstas para todo o domínio de ligação α4β7 mostram um elevado grau de identidade de sequências (90.8%) quando alinhadas (Figura 3 proporciona este alinhamento de sequências). Para gerar uma linha celular que expresse MAdCAM cinomolgo funcionalmente activo, a qual simule o padrão de ligação anti-MAdCAM representado pela Tabela 8, um fragmento Saci correspondendo à sequência do domínio de ligação α4β7 cinomolgo em pCR2.1, foi subclonado directa-mente na construção de MAdCAM C-terminal humano pIND-Hygro contendo o pé de mucina C-terminal e o domínio transmembra-nar, atrás descrito. A sequência e a sua orientação foram verificadas, depois um fragmento Kpnl/Notl foi clonado no vector pEF5FRTV5GWCAT (Invitrogen), substituindo a sequência codificadora de CAT e usada em transfecções para gerar 154 ΡΕ2177537 clones isolados de expressão estável em células Flp In CHO (Invitrogen) de acordo com as instruções do fabricante. A ligação dos clones de anticorpos anti-MAdCAM às células CHO que expressam quimeras de MAdCAM cinomo-logo/humano foi avaliada por citometria de fluxo e a acti-vidade funcional dos anticorpos anti-MAdCAM foi determinada usando um ensaio de adesão de células JY muito semelhante ao atrás descrito. A actividade de ligação e funcional de anticorpos anti-MAdCAM estão expressas na Tabela 9.
Tabela 9. Correlação entre a actividade funcional no ensaio de adesão MAdCAM cinomolgo/humano-CHO/JY e a ligação de células CHO MAdCAM cinomolgo/humano, conforme medido por FACS, para uma gama de anticorpos anti-MAdCAM.
155 ΡΕ2177537
No conjunto, existe uma boa correlação entre a capacidade de um determinado anticorpo anti-MAdCAM se ligar a MAdCAM humano ou cinomolgo, conforme detectado por imuno-histoquímica (Tabela 8), com ligação baseada em células recombinantes e actividade funcional (Tabela 9) . Os anticorpos anti-MAdCAM 1.7.2,1.8.2 e 6.73.2, por exemplo, demonstraram uma ausência consistente de ligação a tecidos cinomolgos e a células que expressam uma proteína MAdCAM quimérica cinomolgo/humano. Os anticorpos anti-MAdCAM 1.7.2, 1.8.2 e 6.73.2 também não têm a capacidade para detectar a actividade bloqueadora funcional no ensaio de adesão MAdCAM cinomolgo/humano/JY.
Abordagens semelhantes poderão ser usadas para definir o epitopo dos anticorpos anti-MAdCAM 6.14.2 e 6.67.1 que reconhecem MAdCAM de cão.
Exemplo IV:
Utilização de mAbs anti-MAdCAM na detecção de MAdCAM solúvel circulante como método de diagnóstico de doença
Os anticorpos anti-MAdCAM podem ser usados para a detecção de MAdCAM solúvel circulante (sMAdCAM). A detecção de sMAdCAM em amostras clínicas de plasma, soro ou outros fluidos, tais como fezes, urina, espectoração, mas não lhe 156 ΡΕ2177537 estando limitado, é provável que seja útil como biomarcador de doença para a doença subjacente, incluindo doença inflamatória intestinal, mas não lhe estando limitado.
Com base nos dados de compartimentação de epitopos (Tabelas 7 e 8), os anticorpos anti-MAdCAM 1.7.2 e 7.16.6 parecem reconhecer epitopos diferentes em MAdCAM humano. Placas de ELISA foram revestidas durante a noite a 4°C com 100 μΐ/alvéolo de uma solução a 50 pg/ml de 1.7.2 em soro fisiológico tamponado com fosfatos (PBS) . Após incubação a placa foi bloqueada durante 1,5 horas comum tampão de bloqueio de PBS contendo 10% de leite (200 μΐ/alvéolo). Após incubação a placa foi lavada com PBS (2 x 100 μΐ/alvéolo) e diluições seriadas da proteína de fusão MAdCAM-IgGi-Fc, de uma concentração máxima de 50 pg/ml até aproximadamente 5 ng/ml em PBS, para um volume final de 100 μΐ, foram adicionadas à placa para incubação durante 2 horas à temperatura ambiente. Numa abordagem semelhante, a proteína MAdCAM-IgGi-Fc pode ser diluída em plasma ou soro, ou noutro biofluido relevante e usado para determinar a expressão de MAdCAM solúvel numa amostra clínica, como descrito abaixo. Como controlo negativo, apenas tampão foi adicionado aos alvéolos contendp o anticorpo anti-MAdCAM primário. Após este tempo, a placa foi lavada com PBS (3 x 100 μΐ/alvéolo) e a placa foi então incubada no escuro com 7.16.6 marcado com Alexa488 (100 μΐ, 5 pg/ml). 7.16.6 marcado com Alexa488 foi gerado usando um kit comercial (Molecular Probes, A-20181), seguindo os protocolos do fabricante . 157 ΡΕ2177537 A placa foi lavada com PBS contendo 0,05% de Tween-20 e a ligação de 7.16.6 marcado a MAdCAM solúvel capturado foi determinada medindo a fluorescência Wallac Victor2 1420 Multilabel Reader (λ de excitação 485 nm, λ de emissão 535 nm contagem a partir do topo, 8 mm a partir do topo, durante 0,1 seg com abertura de emissão normal). Quando a fluorescência é representada em função da concentração da proteína de fusão MAdCAM- IgGi-Fc, Figura 6, indica que 1.7.2 e 7.16.6 marcados podem ser usados para fins de diagnóstico para determinar o nível de MAdCAM solúvel circulante expresso numa amostra de biofluido ou clínica. Esta abordagem de ELISA tipo sanduíche não está restringida à utilização de 1.7.2 e 7.16.6, mas qualquer combinação de anticorpos anti-MAdCAM que reconhecem diferentes epitopos em MAdCAM, como descrito pelos dados e interpretação da Tabela 7 e da Figura 5. Estratégias semelhantes poderão ser aplicadas ao desenvolvimento de ensaios semlhantes, tais como imuno-histoquímica e transferência Western, com os outros anticorpos anti-MAdCAM descritos, usando diferentes parceiros, variantes, marcas, etc. EXEMPLO V:
Estrutura de aminoácidos de mAbs anti-MAdCAM preparados de acordo com o invento é proporcionada
Na discussão que se segue, 158 ΡΕ2177537 informação estrutural relacionada com os mAbs preparados de acordo com o invento.
Para analisar estruturas de mAbs produzidos de acordo com o invento, clonámos os genes codificadores dos fragmentos das cadeias pesada e leve do clone de hibridoma especifico. A clonagem do gene e sequenciação foram conseguidas como se segue: mRNA poli(A)+ foi isolado a partir de aproxi-madamente 2 x 105 células de hibridoma derivadas de murganhos XenoMouse imunizados usando o kit Fast-Track (Invi-trogen). A geração de cDNA iniciado aleatoriamente foi seguida de PCR. Para Sequências iniciadoras especificas da família de VH ou Vk humano (Marks et ai., "Oligonucleotide primers for polymerase chain reaction amplification of human immunoglobulin variable genese and design of family-specific oligonucleotide probes"; Eur. J. Immunol., 21, 985-991 (1991)) ou uma sequência universal para VH humano, MG-30 (5'-CAG GTG CAG CTG GAG CAG TCI GG-3 (SEQ ID NO: 108) foi usado conjuntamente com sequências iniciadoras específicas para Cy2 humana, MG40-d (5-GCT GAG GGA GTA GAG TCC TGA GGA-3 (SEQ ID NO: 109) ou região constante Ογ4, MG-40d (5'GCT GAG GGA GTA GAG TCC TGA GGA CTG T -3 (SEQ ID NO: 110), ou região constante Ck (hxP2; como anteriormente descrito em Green e tal., 1994). As sequências dos transcritos das cadeias pesada e capa derivadas de mAb humano derivadas 159 ΡΕ2177537 de hibridomas foram obtidas por sequenciação directa dos produtos de PCR gerados a partir de RNA poli (A+) usando as sequências iniciadoras atrás descrita. Os produtos de PCR foram clonados em pCR2.1 usando um kit de clonagem TOPO-TA (Invitrogen) e ambas as cadeias foram sequenciadas usando os kits de sequenciação com terminador corado Prism e um aparelho de sequenciação ABI 377. Todas as sequências foram analisadas através de alinhamentos com o "directório de sequências V BASE" (Tomlinson, et al, J. Mol. Biol., 227, 776-798 (1992); Hum. Mol. Genet., 3, 853-860 (1994); EMBO J. , 14, 4628-4638 (1995) . )
Ainda, cada um dos anticorpos, 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod e 7.26.4-mod, foram sujeitos a sequenciação do DNA completo. Para tal, RNA total foi isolado a partir de aproximadamente 3-6 x 106 células de hibridoma usando um kit RNeasy (Qiagen) . O mRNA foi sujeito a transcrição reversa usando oligo-dT e um sistema de transcriptase reversa baseada em AMV (Promega) . Usou-se a V BASE para projectar sequências iniciadoras 5' especificas para amplificação, contendo uma sequência Kozak óptima e um codão de iniciação ATG (sublinhado) e sequências iniciadoras reversas 3' para as cadeias pesada e capa especificas como descrito na
Tabela 10. 160 ΡΕ2177537
Tabela 10: Pares de sequências iniciadoras para PCR para amplificação de cDNA a partir de hibridomas que expressam o mAb anti-MAdCAM e sequências iniciadoras usadas na construção de versões modificadas de anticorpos anti-MAdCAM.
Sequência oligonucleotídica VHl-18 5' TATCTAAGCTTCTAGACTCGAGCGCCACCATGGACTGGACCTGGAGCATCCTT (SEQ ID NO: 70) 3' VH3-15 5' TATCTAAGCTTCTAGACTCGAGCGCCACCATOGAGTTTGGGCTGAGCGGATT 3 (SEQ ID NO: 71) I VH3-21 5' TATCTAAGCTTCTAGACTCGAGCGCCACCATGCTAAGGGGCTCCGCTGGGTT 3 (SEQ ID NO: 72) I VH3-23 5' TATCTAAGCTTCTAGACTCGAGCGCCACCATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTT (SEQ ID NO: 73) 3' VH3-30 5' TATCTAAGTTCTAGACTCGAGCGCCACCATGGAGTTTC GGCTGAGCTGGGTT (SEQ ID NO: 74) 3' VH3-33 5' TATCTAAGCTTCTAGACTCGAGCGCCACCATGGAGTTTGGGCTGAGCTCGGTT (SEQ ID NO: 75) 3' VH4-4 5' TATCTAAGCTTCTAGACTCGAGCCACCACCATGAAACACCTGTGGTTCTTCCTC (SEQ ID NO: 76) 3' A2/A3 5' TATCTAAGCTTCTAGACCCGGCCGCCTTCCATGAGGCTCCCTGCTCAGCTCCTG (SEQ ID NO: 77) 3' A26 5 ' TATCTAAGCTTCTAGACCCGGGCGCCACCATGTTGCCATCACAACTCATTGGG (SEQ ID NO: 78) 3' B3 5' TATCTAAGCTTCTAGACCCGGGCGCCACCATGGTTTGCAGACCCAGGTCTT 3' (SEQ ID NO: 79) 012 5 ' TATCTAAGCTTCTAGACCCGGGCGCCACCATGGACATGAGGGTCCCCGCTCAG (SEQ ID NO: 80) 3' 018 5' TATCTAAGCTTCTAGACCCGGGCGCCACCATGGACATGAGGGTCCCTGCTCAG (SEQ ID NO: 81) 3' RevlgG2 5' TTCT CTGATCAGAATTCCTAT CATTTACCCGGAGACAGGGAGAG 3' (SEQ ID NO: 82) RevlgG4 5' TTCTTTGATCAGAATTCTCACTAACACTCTCCCCTGTTGAAGC 3' (SEQ ID NO: 83) RevKappa 5 ' TTCTCTGATCGAGAATTCCTATCATTTACCCAGAGACAGGGAGAG 3 ' (SEQ ID NO: 84) ΡΕ2177537 161 (continuação)
ΡΕ2177537 162 (continuação)
Sequência oligonucleotídica 6.77.1VK Fl 5'-CCA TCT CCT GCA AGT CTA GTC AGA GCC TCC-3' (SEQ ID NO: 101) 6.77.1VK Rl 5'-GGA GGC TCT GAC TAG ACT TGC AGG AGA TGG-3' (SEQ ID NO: 102) 6.77-IVK F2 5' -GGT TTA TTA CTG CAT GCA AAG TAT ACA GCT TAT GTC CAG TTT TGG CC- 3' (SEQ ID NO: 103) 6.77.1VK R2 5'-GGC CAA AAC TGG ACA TAA GCT GTA TAC TTT GCA TGC AGT AAT AM CC- 3' (SEQ ID NO: 104) 7.26.4K Fl 5'-CCT GCA AGT CTA GTC AGA GCC TCC-3' (SEQ ID NO: 105) 7.26.4K Rl 5'-GGA GGC TCT GAC TAG ACT TGC AGG-3' (SEQ ID NO: 106)
Os pares de sequências iniciadoras foram usados para amplificar os cDNAs usando Expand High Fidelity Taq polymerase (Roche) e os produtos de PCR clonados em pCR2.1 TOPO-TA (Invitrogen) para subsequente sequenciação. Os clo-nes com a sequência verificada para a cadeia pesada e leve capa foram então clonados nos vectores pEE6.1 e pEE12.1 (LONZA) usando os locais Xbal/EcoRI e HindIII/EcoRI, res-pectivamente.
Análise da utilização de genes A Tabela 11 apresenta a utilização de genes da cadeia pesada e leve capa para cada hibridoma descrito no invento. ΡΕ2177537 163
Tabela 11: Utilização de genes da cadeia pesada e leve capa
Cadela pesada. Cadeia leve capa VH 1 ... 0..................L. .....'M V* Ac VM3-1S D8-18 m MB VH3-1S D8-19 M MB VH1-18 D3-8 JHSb m JK1 mm JHife ! A3 M4 VH1-18 úm A2 M1 VH3-23 D3-S #§4b 012 MB vm-m DS-12 A28 M4 VH3MI& D4-23 jmh 012 MB VH4-4 oa-10 JH4b 83 j m ; VH3*23 Οβ*1® êmb 012 JK2 Ί! ymm 06-18 ãmb A2 JK2 í VH3-33 D3-1®or 03-16 JH4b 018 JK5
Análise de sequências
Para melhor examinar a estrutura dos anticorpos, as sequências de aminoácidos previstas dos anticorpos foram obtidas a partir dos cDNAs obtidos dos clones.
Os números indentificadores das sequências (SEQ ID NOS 1-48 e 51-68 proporcionam as sequências nucleotí-dicas e de aminoácidos das cadeias pesada e leve capa dos anticorpos anti-MAdCAM 1.7.2 (SEQ ID NOS 1-4), 1.8.2 (SEQ ID NOS 5-8), 6.14.2 (SEQ ID NOS 9-12), 6.22.2 (SEQ ID NOS 13-16), 6.34.2 (SEQ ID NOS 17-20), 6.67.1 (SEQ ID NOS 21- 24), 6. 73.2 (SEQ ID NOS 25-28) , 6.77.1 (SEQ ID NOS 29-32), 7.16.6 (SEQ ID NOS 33-36), 7.20.5 ( SEQ ID NOS 37-40), 7.26.4 (SEQ ID NOS 41-44), 9. 8.2 (SEQ ID NOS 45-48) e os 164 ΡΕ2177537 anticorpos anti-MAdCAM modificados 6.22.2-mod (SEQ ID NOS 51-54), 6.34.2-mod (SEQ ID NOS 55-58), 6.67.1-mod (SEQ ID NOS 59-62) e 6.77.1-mod (SEQ ID NOS63-66) e 7.26.4-mod (SEQ ID NOS 41-42, 67-68) . Para cada sequência de anticorpo anti-MAdCAM clonada, as sequências da sequência do péptido sinal (ou as bases codificadoras das mesmas) estão indicadas em letras minúsculas e sublinhadas.
As Figuras 1A-1J proporcionam alinhamentos de sequências entre as sequências de aminoácidos previstas para a cadeia pesada dos anticorpos 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4 e 9.8.2 e a sequência de aminoácidos dos respectivos genes germinais. As posições das sequências CDR1, CDR2 e CDR3 dos anticorpos estão sublinhados, as diferenças entre a sequência expressa e a sequência germinal correspondente estão indicadas a negrito e onde existem adições na sequência expressa comparativamente com a da linha germinal estas estão indicadas como um (-) na sequência germinal.
As Figuraa 1K-1T proporcionam alinhamentos de sequências entre as sequências de aminoácidos prevista para a cadeia leve capa dos anticorpos 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4 e 9.8.2 e a sequência de aminoácidos dos respectivos produtos de genes germinais. As posições das sequências CDR1, CDR2 e CDR3 dos anticorpos estão sublinhadas, as diferenças entre a sequência expressa e a sequência germinal correspondente estão indicadas a negrito e onde exis- 165 ΡΕ2177537 tem adições na sequência expressa comparativamente com a sequência qerminal estas estão indicadas como um (-) na sequência qerminal.
Presença de modificação pós-tradução: glicosila-ção e desamidação:
0 efeito de algumas das alterações na sequência de anticorpos anti-MAdCAM expressa, comparativamente com a sequência derivada da linha germinal, é introduzir resíduos que potencialmente poderão ser alvo de N-glicosilação (Asn-X-Ser/Thr) e/ou desamidação (Asn-Gly) (ver Tabela 12). As sequências de ácido nucleico codificadoras do domínio variável da cadeia leve capa dos anticorpos anti-MAdCAM 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.26.4 e 9.8.2, (SEQ ID NOS: 16, 20, 24, 28, 32, 44 e 48) e do domínio variável da cadeia pesada do anticorpo 6.14.2 (SEQ ID NO:10), prevê a presença de N-glicosilação. A presenla desta modificação pós-tradução foi investigada usando a combinação de SDS-PAGE e coloração com and Pro-Q® Emerald 488 Glycoprotein (Molecular Probes) com os mAbs 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.26.4 e 9.8.2.
Resumidamente, aproximadamente 2 pg de anticorpo anti-MAdCAM reduzido foi aplicado num gel de 4-12% de SDS-poliacrilamida usando um tampão MOPS. Após electroforese, o gel foi fixado em 50% MeOH, 5% ácido acético e lavado em 3% de ácido acético. Quaisquer açúcares no gel foram então oxidados com ácido periódico e corados usando Pro-Q® 166 ΡΕ2177537
Emerald 488 Glycoprotein Stain Kit (Molecular Probes). Após um passo final de lavagem, a coloração da glicoproteima foi visualizada usando um varredor de fluorescência num comprimento de onda de 473 nm.
Após coloração da glicoproteína, o gel foi corado para as proteínas totais usando o corante de géis de proteínas SYPRO Ruby e analisado usando um varredor de fluorescência acertado para 473 nm. As cadeias leve capa dos anticorpos anti-MAdCAM 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.26.4 e 9.8.2 coraram todas positivamente relativamente à presença de glicosilação. Como confirmação adicional, o anticorpo anti-MAdCAM 7.26.4, foi sujeito a digestão tríptica/quimotríptica, a análise LC-NM/MS confirmou a presença de um péptido tríptico modificado e proporcionou confirmação adicional da glicosilação da cadeia leve capa.
Sequências específicas Asn-Gly nas regiões CDR1 dos anticorpos anti-MAdCAM, 1.7.2, 1.8.2, 6.22.2 e 7.20.5, tornaram estas regiões sensíveis à desamidação. A desami-dação a pH neutro introduz uma carga negativa e pode também conduzir a β-isomerização, a qual poderá afectar as propriedades de um anticorpo. Para os anticorpos anti-MAdCAM 1.7.2, 1.8.2 3 7.20.5, a presença de resíduos Asn-iso-aspartato foi avaliada por espectroscopia de massa após captura da cadeia lateral de isoaspartato com MeOH.
Resumidamente
para o anticorpo anti-MAdCAM 167 ΡΕ2177537 1.7.2, o estatuto do péptido triptico/Asp-N SSQSLLQSNGYNYL (SEQID NO: 69) (1573.7 Da) foi seleccionado para monitorização por LC-MS/MS. 0 anticorpo anti-MAdCAM 1.7.2 foi reduzido em DTT 10 mM, alquilado em Na iodoacetato 5 mM e subsequentemente trocado o tampão para tampão de digestão com tripsina (Tris HC1 50 nM, CaCl2 1 mM, pH 7,6). O anticorpo foi então misturado com tripsina modificada grau de pureza para sequenciação (Promega) numa proporção de prote-ase:proteína de 1:20. A proteína foi digerida em tripsina durante 15 horas a 30°C e os péptidos resultantes separados por HPLC usando C-18 RPC num sistema Ettan LC. O péptido contendo 33Asn (4032 Da) foi colhido da coluna e diluído em tampão de digestão Asp-N (tampão fosfato de sódio 650 mM, pH 8,0). Adicionou-se então a endoproteinase Asp-N (Roche) numa proporção aproximada de péptido:enzima de 10:1.
Adicionou-se cloreto de acetilo (100 μΐ) a uma amostra de metanol (1 m, -20°C), e a mistura foi aquecida à temperatura ambiente. A digestão tríptica+Asp-N foi seca num Speed-Vac e depois adicionou-se 5 μΐ de metanol/cloreto de acetilo (45 min, temperatura ambiente), depois secou-se novamente num Speed-Vac. O resíduo resultante foi reconstituído em 0,1% TFA e os péptidos analisados inicialmente num espectrómetro de massa Voyager-DE STR MALDI-TOF usando o método da preparação da amostra em camada fina de nitricelulose ou a purificação me fase inversa usando C18 Zip Tips (Millipore) seguido de mistura de gotas com matriz α-ciano. A mistura de péptidos metilados foi igualmente analisada usando LC-MS/MS num espectrómetro de massa Deca 168 ΡΕ2177537 XP Plus Ion Trpa como atrás. A eluição foi directamente canalisada para o Ion Trap MS e os péptidos foram subsequentemente analisados por MS e MS/MS. A MS foi regulada para analisar todos os iões entre 300 e 2000 Da. O ião mais forte em qualquer varrimento particular foi então sujeito a análise MS/MS.
Tabela 12: Modificação pós-tradução de anticorpos anti-MAdCAM
ei 01:-5: Cadeia pesada Cadeia leve capa G.I i c <5 sí laça a eiicósilação De s asidaçâo {/X; cor f irma do i; SXS / T) coTsf i zsa&do í iíS} con.f i rm&do 1.7Λ XiQSKSY» m 1.8.2 I^StíSYU MB 7.18.8 HGS»¥»¥ m 7.26.4 CKS»ttStt.Y MS/PAGS TiflssflBAíT? »-36 SOTHPT&TX ΡΑΠΚ :.8ί34&' ASQMXSSYI» PAGB uS.i- SSNHKTYLA PAGE EASQSW» PASB £rr&' SCNSSaSt PASSE T-itâki EStMt.8IT PAGE te.,...
Estudos de mutagénese: A sequência de aminoácidos primária dos anticorpos anti-MAdCAM exemplificados neste invento pode ser modificada, por mutagénese dirigida, para remover potenciais locais de modificação pós-tradução (e.g., glicosi-lação, desamidação) ou para alterar o fundo de isotipo ou 169 ΡΕ2177537 para fazer outras alterações que possam melhorar a utilidade terapêutica. Como exemplo, usou-se PCR para introduzir alterações nos anticorpos anti-MAdCAM6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.77.1 e 7.26.4, para reverter determinadas sequências estruturais para sequências germinais, para remover potenciais locais de glicosilação e/ou para alterar o fundo de isotipo para uma IgG2 humana. Os cDNAs clonados em pCR2.1 TOPO-TA (100 ng), correspondendo às sequências de nucleótidos da cadeia pesada SEQ ID NOS: 15, 19, 23, 31 e 43, foram usados como matriz numa série de PCRs usando sobreposição-extensão e um painel de séries de sequências iniciadoras descritos na Tabela 10.
Cadeia pesada 6.22.2: As séries de sequências iniciadoras para PCR6.22.2_VH_F1 e 6.22.2VH_CS* (1) e VH3-33 e 6.22.2_VH_R1(2) foram usadas para gerar produtos de PCR separados (1) e (2), usando uma polimerase Taq Expand e uma matriz de cDNA em pCR2.1 TOPO-TA (100 ng) representada pela sequência de nucleótidos SEQ ID NO:13. Os produtos (1) e (2) foram purificados e combinados num terceiro passo de PCR (cerca de 50 ng cada) juntamente com as sequências iniciadoras VH3-33 e VK6.22.2_CS*, para gerar o domínio V da cadeia pesada 6.22.2 modificada. Esta versão modificada possui uma mutação His/Phe em FR1 e introduz um local de restrição Xbal para permitir a clonagem em grelha num vector derivado de pEE6.1, designado pEE6.1CH, o qual possui o correspondente domínio constante de IgG2 humana. O fragmento de PCR final foi clonado no local Xbal de pEE6.1 CH, confirmado a orientação e verificada a sequência 170 ΡΕ2177537 completa do inserto. A sequência nucleotídica da cadeia pesada de 6.22.2 modificada está encontrada em SEQ ID NO:51 e a sequêcia de aminoácidos correspondente em SEQ ID NO:52. As alterações nas sequências nucleotidicas e de aminoácidos comparativamente com as sequências parentais estão indicadas.
Cadeia leve capa 6.22.2: As séries de sequências iniciadoras de PCR 6.22.2_VK_F1 e revKappa (1) e A2 6 e 6.22.2_VK_R1 (2) foram usadas para qerar produtos de PCR separados (1) e (2), usando uma polimerase Taq Expand e uma matriz de cDNA em pCR2.1 TOPO-TA (100 nq) representada pela sequência de nucleótidos SEQ ID NO:15. Os produtos (1) e (2) foram purificados e combinados num terceiro passo de PCR (cerca de 50 ng cada) juntamente com as sequências iniciadoras A26 e revKappa, para gerar o domínio V da cadeia leve capa 6.22.2 modificada. Esta versão modificada possui uma mutação Asn/Asp e Gly/Ser na sequência FR3. O fragmento de PCR resultante foi clonado em pEE12.1 usando os locais HindIII/EcoRI e verificada a sequência completa. A sequência nucleotídica da cadeia leve capa de 6.22.2 modificada está encontrada em SEQ ID NO:53 e a sequêcia de aminoácidos correspondente em SEQ ID NO:54. As alterações nas sequências nucleotidicas e de aminoácidos comparativamente com com as sequências parentais estão indicadas.
Cadeia pesada 6.34.2: As séries de sequências iniciadoras de PCR 6.34.2_VH_F1 e 6.22.2VH_CS* (1) e VH3-30 e 6.34.2 VH RI (2) foram usadas para gerar produtos de PCR 171 ΡΕ2177537 separados (1) e (2), usando uma polimerase Taq Expand e uma matriz de cDNA em pCR2.1 TOPO-TA (100 ng) representada pela sequência de nucleótidos SEQ ID NO:17. Os produtos (1) e (2) foram purificados e combinados num terceiro passo de PCR (cerca de 50 ng cada) juntamente com as sequências iniciadoras VH3-30 e VK6.22.2_CS*, para gerar o domínio V da cadeia pesada 6.34.2 modificada. Esta versão modificada possui uma mutação Ser/Arg em FR3 e introduz um local de restrição Xbal para permitir a clonagem em grelha num vector derivado de pEE6.1, designado pEE6.1CH, o qual possui o correspondente domínio constante de IgG2 humana. O fragmento de PCR final foi clonado no local Xbal de pEE6.1 CH, confirmado a orientação e verificada a sequência completa do inserto. A sequência nucleotídica da cadeia pesada de 6.34.2 modificada está encontrada em SEQ ID NO:55 e a sequêcia de aminoácidos correspondente em SEQ ID NO:56. As alterações nas sequências nucleotídicas e de aminoácidos comparativamente com as sequências parentais estão indicadas .
Cadeia leve capa 6-34.2: As séries de sequências iniciadoras de PCR 012 e 6.34.2_VK_R1 (1), 6.34.2_VK_F1 e 6.34.2_VK_R2 (2), assim como 6.34.2_VK_F2 e revKappa (3) foram usadas para gerar produtos de PCR separados (1), (2) e (3) usando uma polimerase Taq Expand e uma matriz de cDNA em pCR2.1 TOPO-TA (100 ng) representada pela sequência de nucleótidos SEQ ID NO:19. Os produtos (1), (2) e (3) foram purificados e (1) e (2) foram combinados num terceiro passo de PCR (cerca de 50 ng cada) juntamente com as sequências 172 ΡΕ2177537 iniciadoras 012 e 6.34.2_VK_R2, para gerar o produto de PCR (4) . Os produtos de PCR (2) e (3) foram combinados num quarto passo de PCR (cerca de 50 ng cada), juntamente com 6.34.2_VK_F1 e revKappa, para gerar o produto de PCR (5). Os produtos de PCR (4) e (5) foram purificados e combinados (Ceca de 50 ng cada) com as sequências iniciadoras 012 e revKappa para gerar o domínio V da cadeia leve capa 6.34.2 modificada. Esta versão modificada possui uma mutação Ser/Arg em CDR1, uma mutação Phe/Tyr em FR2 e as mutações Arg-Thr/Ser-Ser, Asp/Glu e Ser/Tyr na sequência FR3. O produto de PCR resultante foi clonado em pEE12.1 usando os locais HindIII/EcoRI e verificada a sequência completa. A sequência nucleotídica da cadeia leve capa de 6.34.2 modificada está encontrada em SEQ ID NO:57 e a sequêcia de aminoácidos correspondente em SEQ ID NO:58. As alterações nas sequências nucleotídicas e de aminoácidos comparativamente com com as sequências parentais estão indicadas.
Cadeia pesada 6.67.1: As séries de sequências iniciadoras de PCR 6.67.1_VH_F1 e 6.67.1 VH_CS* (1) e VH4-4 e 6.67.1_VH_R1 (2) foram usadas para gerar produtos de PCR separados (1) e (2), usando uma polimerase Taq Expand e uma matriz de cDNA em pCR2.1 TOPO-TA (100 ng) representada pela sequência de nucleótidos SEQ ID NO:21. Os produtos (1) e (2) foram purificados e combinados num terceiro passo de PCR (cerca de 50 ng cada) juntamente com as sequências iniciadoras VH4-4 e VK6.67.1_CS*, para gerar o domínio V da cadeia pesada 6.67.1 modificada. Esta versão modificada possui uma conversão Ile-Leu-Ala/Met-Ser-Val em FR3 e in- 173 ΡΕ2177537 troduz um local de restrição Xbal para permitir a clonagem em grelha num vector derivado de pEE6.1, designado pEE6.1CH, o qual possui o correspondente domínio constante de IgG2 humana. 0 fragmento de PCR final foi clonado no local Xbal de pEE6.1 CH, confirmado a orientação e verificada a sequência completa do inserto. A sequência nucleotídica da cadeia pesada de 6.67.1 modificada está encontrada em SEQ ID NO:59 e a sequêcia de aminoácidos correspondente em SEQ ID NO:60. As alterações nas sequências nucleotídicas e de aminoácidos comparativamente com as sequências parentais estão indicadas.
Cadeia leve capa 6.67.1: As sequências iniciadoras de PCR 6.67.1_VK_F1 e revKappa (1) e B3 e 6.67.1_VK_R1 (2) foram usadas para gerar os produtos de PCR separados (1) e (2), usando uma polimerase Taq Expand e uma matriz de cDNA em pCR2.1 TOPO-TA (100 ng) representada pela sequência de nucleótidos SEQ ID NO: 23. Os produtos (1) e (2) foram purificados e combinados num terceiro passo de PCR (cerca de 50 ng cada) juntamente com as sequências iniciadoras B3 e revKappa, para gerar o domínio V da cadeia leve capa 6.67.1 modificada. Esta versão modificada possui uma mutação Thr/Asn em CDR1 e uma mutação Arg/Gly em FR2. O produto de PCR resultante foi clonado em pEE12.1 usando os locais HindIII/EcoRI e verificada a sequência completa. A sequência nucleotídica da cadeia leve capa de 6.67.1 modificada está encontrada em SEQ ID NO:61 e a sequêcia de aminoácidos correspondente em SEQ ID NO:62. As alterações nas sequências nucleotídicas e de aminoácidos comparativamente com com as sequências parentais estão indicadas. 174 ΡΕ2177537
Cadeia pesada 6.77.1: As séries de sequências iniciadoras de PCR VH 3-21 e 6.22.2VH_CS* foram usadas para gerar um único produto de PCR, usando uma polimerase Taq Expand e uma matriz de cDNA em pCR2.1 TOPO-TA (100 ng) representada pela sequência de nucleótidos SEQ ID NO:29. Os produtos foram digeridos com Xbal, purificados em gel e clonados no local Xbal de ρΕΕβ.1 CH, e confirmada a orientação.O inserto foi verificado por sequenciação total. A sequência nucleotídica da cadeia pesada de 6.77.1 modificada está encontrada em SEQ ID NO:63 e a sequêcia de aminoácidos correspondente em SEQ ID NO:64. As alterações nas sequências nucleotídicas e de aminoácidos comparativamente com as sequências parentais estão indicadas.
Cadeia leve capa 6.77.1: As sequências iniciadoras de PCR 6.67.1_VK_F1 e revKappa (1) e 6.77.1_VK_VK_F1 e 6.77.1_R2 (2), assim como 6.77.1_VK_F2 e revKappa (3) foram usadas para gerar produtos de PCR separados (1), (2) e (3), usando usando uma polimerase Taq Expand e uma matriz de cDNA em pCR2.1 TOPO-TA (100 ng) representada pela sequência de nucleótidos SEQ ID NO:31. Os produtos (1), (2) e (3) foram purificados e (1) e (2) foram combinados num terceiro passo de PCR (cerca de 50 ng cada) juntamente com as sequências iniciadoras A2 e 6.77.1_VK_R2, para gerar o produto de PCR (4) . Os produtos de PCR (2) e (3) foram combinados num quarto passo de PCR (cerca de 50 ng cada) , juntamente com 6.77.1_VK_F1 e revKappa, para gerar o produto de PCR (5) . Os produtos de PCR (4) e (5) foram 175 ΡΕ2177537 purificados e combinados (Ceca de 50 ng cada) com as sequências iniciadoras 012 e revKappa para gerar o domínio V da cadeia leve capa 6.77.1 modificada. Esta versão modificada possui uma mutação Asn/Lys em CDR1, uma mutação Ser/Tyr em FR2 e uma alteração de resíduo Cys/Ser na sequência CDR3. O produto de PCR resultante foi clonado em pEE12.1 usando os locais HindIII/EcoRI e verificada a sequência completa. A sequência nucleotídica da cadeia leve capa de 6.77.1 modificada está encontrada em SEQ ID NO:65 e a sequêcia de aminoácidos correspondente em SEQ ID NO:66. As alterações nas sequências nucleotídicas e de aminoácidos comparativamente com com as sequências parentais estão indicadas.
Cadeia leve capa 7.26.4: As sequências iniciadoras de PCR 7.26.4_VK_F1 e revKappa (1) e A2 e 7.26.4_VK_R1 (2) foram usadas para gerar os produtos de PCR separados (1) e (2), usando uma polimerase Taq Expand e uma matriz de cDNA em pCR2.1 TOPO-TA (100 ng) representada pela sequência de nucleótidos SEQ ID NO: 43. Os produtos (1) e (2) foram purificados e combinados num terceiro passo de PCR (cerca de 50 ng cada) juntamente com as sequências iniciadoras A2 e revKappa, para gerar o domínio V da cadeia leve capa 7.26.4 modificada. Esta versão modificada possui uma mutação Asn/Ser em CDR1. O produto de PCR resultante foi clonado em pEE12.1 usando os locais HindIII/EcoRI e verificada a sequência completa. A sequência nucleotídica da cadeia leve capa de 7.26.4 modificada está encontrada em 176 ΡΕ2177537 SEQ ID NO:67 e a sequêcia de aminoácidos correspondente em SEQ ID NO:68. As alterações nas sequências nucleotídicas e de aminoácidos comparativamente com com as sequências parentais estão indicadas.
Um vector de expressão eucariótico funcional para cada uma das versões modificadas de 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.77.1 e 7.26.4, referidos como 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1- mod, 6.77.1-mod e 7.26.4-mod, e representando res-pectivamente as sequências de nucleótidos da cadeia pesada SEQ ID NOS: 51, 55, 59, 63 e 41, e as correspondentes sequências de aminoácidos SEQ ID NOS: 52, 56, 60, 64 e 42, assim como as sequências de nucleótidos da cadeia leve capa SEQ ID NOS: 53,57,61, 65 e 67, e as correspondentes sequências de aminoácidos SEQ ID NOS: 54, 58, 62, 66 e 68 foram montadas como se segue: os insertos de cDNA da cadeia pesada correspondento a 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod e 6.77.1-mod foram excisados do vector pEE6.1 CH com NotI/SalI, a versão parental das cadeias pesadas de 7.26.4 foi removida do vector pEE6.1 com NotI/SalI e os fragmentos purificados foram clonados em locais idênticos no correspondente vector pEE12.1 contendo as versões modificadas das sequências das cadeias leves capa 6.22.2-mod, 6.34.2- mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod e 7.26.4-mod. As sequências dos vectores foram confirmadas e as quantidades purificadas usadas em transfecções transitórias com células HEK 293T. Resumidamente, 9 x 106 células HEK 293T, semeadas num frasco T165 no dia antes da transfecção e lavadas com 177 ΡΕ2177537
Optimem, foram transfectadas transitoriamente com cDNAs em vectores correspondendo a 6.22.2-mod, 6.34.2-mod,6.67.1-mod, 6.77.1-mod e 7.26.4-mod (40 mg) usando Lipofectamine PLUS (Invitrogen) de acordo com as instruções do fabricante. As células foram incubadas durante 3 hrs, depois o meio de transfecção foi substituído com meio DMEM (Invitrogen 21969-035) contendo 10% de soro fetal de vitela com um teor ultra-baixo de IgG (Invitrogen 16250-078) e L-glutamina (50 ml) . O meio sobrenadante foi colhido 5 dias mais tarde, esterilizado por filtração e o anticorpo anti-MAdCAM purificado usando cromatografia de afinidade em proteína G Sepharose, de forma semelhante ao descrito atrás. A quantidade de anticorpo recuperado (20-100 pg) foi quantificada por um ensaio de Bradford. A actividade de anti-MAdCAM do anticorpo purificado por afinidade correspondente a 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod e 7.26.4-mod foi avaliada no ensaio da fusão MAdCAM-IgGl-Fc como anteriormente descrito. Os valores de IC50 destes anticorpos anti-MAdCAM comparados com os anticorpos anti-MAdCAM parentais dos quais derivam estão apresentados na Tabela 13. Houve um efeito mínimo das substituições de aminoácidos descritas atrás na actividade dos anticorpos anti-MAdCAM modificados comparativamente com os anticorpos parentais. Os anticorpos também mantiveram a sua ligação a células CHO expressando MAdCAM humana recom-binante ou a quimera MAdCAM cinomolgo/humano. 178 ΡΕ2177537
Tabela 13. Actividade das versões modificadas dos anticorpos anti-MAdCAM, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod e 7.26.4-mod comparativamente com a dos anticorpos parentais
Clone Ensaio da fusão MAdCAM IgGl Fc Média de IC50 (pg/ml) Parental Modificado 6.22.2 0, 018 0, 058 6.34.2 0, 013 0, 049 6.67.1 0, 013 0, 037 6.77.1 0, 022 0, 077 7.26.4 0, 021 0, 033
EXEMPLO VI
Aumento nos linfócitos B7+ na circulação periférica através do bloqueio de anticorpos anti-MAdCAM
Foi desenvolvido um ensaio para identificar e correlacionar um efeito mecanistico de um anticorpo anti-MAdCAM e do seu nível de circulação no sangue. Um anticorpo inibidor anti-MAdCAM deverá ter o efeito de inibição do recrutamento de leucócitos que expressam a integrina ο^βν para o trato gastrointestinal. As classes de leucócitos portadores de integrinas 0ί4β7 deverão assim estar restringidas à circulação periférica.
Isto foi demonstrado com um mAb 7.16.6 totalmente humano, anti-MAdCAM humano, em cinomolgo. 179 ΡΕ2177537 0 mAb 7.16.6 anti-MAdCAM humano (1 mg/kg) ou veículo (Na acetato 20 mM, 0,2 mg/ml de polissorbato, 80,45 mg/ml de manitol e 0,02 mg/ml de EDTA a pH 5,5) foram avaliados de forma semelhante por administração intravenosa via veia safena a dois grupos de macacos cinomolgos (n=4/grupo). No dia 3 pós-dosagem, colheram-se amostras de sangue em tubos com EDTA através de venipunctura femoral. Os anticorpos específicos de LPAM, os quais reagem de forma cruzada com a integrina α4β7 de cinomolgo, não são comercializados, assim foi usado um anticorpo anti-p7 (que reconhece as integrinas α4β7 e αΕβ7) . Os anticorpos (30 μΐ) , de acordo com a tabela que se segue, tabela 15, foram adicionados a tubos contendo 100 μΐ de sangue de cinomolgo, misturado por agitação suave com vortex e incubados durante 20-30 mins a 4°C.
Tabela 15. Anticorpos (PB Pharmingen) usados na imunofeno-tipagem de sangue cinomolgo
Número de catálogo Anticorpo ou isotipo 555748 mlgGl, k-FITC 555844 mIgG2a, k-PE 559425 mlgGl-PerCP 555751 mlgGl, k-APC 555728 CD 28-FITC 555945 βν-ΡΕ 558814 CD 95-APC 550631 CD4-PerCP 180 ΡΕ2177537 A cada um dos tubos, adicionou-se 1 ml de uma solução de lise 1:10 FACS (BD#349202), misturou-se com vortex suave e incubou-se à temperatura ambiente durante aproximadamente 12 minutos no escuro até estar completa a lise dos eritrócitos. Em seguida, adicionou-se a cada tubo 2 ml de tampão de coloração BD (#554656), misturou-se e centrifugou-se a 250 xg durante 6-7 mins à temperatura ambiente. O sobrenadante foi decantado e o sedimento ressuspenso em 3 ml de tampão de coloração, misturado de novo e centrifugado a 250 xg durante 6-7 mins à temperatura ambiente. O tampão Cytofix (BD#554655), contendo parafor-maldeído (100 μΐ) foi adicionado aos sedimentos de células de sangue periférico de macaco e bem misturado com vortex a velocidade média/moderada. As amostras foram mantidas a 4°C no escuro até serem usadas no FACSCalibur. Imediatamente antes da aquisição, adicionou-se PBS (100 μΐ) a todos os tubos. Os números absolutos de células CD4+p7+CD951oCD28 + (naive) , CD4+p7+CD95hiCD28 + (memória central) , ΟΌ4+β7- CD95hiCD28+ (memória central), CD4+p7+CD95hiCD28~ (memória efectora) foram adquiridos através de separação adequada e análise de quadrantes. Outras subséries de células T. por exemplo células de memória T CD8+ (P7+CD8+CD2 8+CD95+) e quaisquer outros leucócitos portadores de um ligando MAdCAM, podem também ser analisados por este método com os anticorpos adequados. Comparativamente com o controlo veiculo, o mAb anti-MAdCAM 7.16.6 causou um aumento de aproximadamente 3 vezes nos níveis de células T de memória centrais CD4+p7+CD95hiCD28 + , como se mostra na Figura 7. Não 181 ΡΕ2177537 houve efeitos na população de células T centrais de memória CD4+p7-CD95hiCD28+ circulantes, indicando que o efeito do mAb anti-MAdCAM 7.16.6 é especifico das células T alojadas no intestino. Os efeitos do mAb anti-MAdCAM 7.16.6 nas populações de linfócitos (α4)β7+ de cinonologo indicam que este é uma prova robusta do mecanismo do biomarcador, particularmente no contexto da aplicação prática num estabelecimento clinico.
Sequências SEQ ID NO: 1-48 e 51-68 proporcionam sequências de nucleótidos e de aminoácidos das cadeias pesadas e leves capa de doze anticorpos anti-MAdCAM humano, sequências de nucleótidos e de aminoácidos das sequências dos domínios de ligação cinomolgos MAdCAM α4β7 e sequências de nucleótidos e de aminoácidos de cinco anticorpos anti-MAdCAM humano modificados. SEQ ID NO: 1-48 proporiconam as sequências de nucleótidos e de aminoácidos das cadeias pesadas e leves capa de doze anticorpos monoclonais humanos anti-MAdCAM: 1.7.2 (SEQ ID NO: 1-4), 1.8.2 (SEQ ID NO: 5-8), 6.14.2 (SEQ ID NO: 9-12) , 6.22.2 (SEQ ID NO: 13-16), 6.34.2 (SEQ ID NO: 17-20), 6.67.1 (SEQ ID NO: 21-24), 6.73.2 (SEQ ID NO: 25-28), 6.77.1 (SEQ ID NO: 29-32), 7.16.6 (SEQ ID NO: 33-36), 7.20.5 (SEQ ID NO: 37-40), 7.26.4 (SEQ ID NO: 41-44), e 9.8.2 (SEQ ID NO: 45-48). 182 ΡΕ2177537 SEQ ID NO: 49-50 proporcionara sequências de nucleótidos e de aminoácidos das sequências de um domínio de ligação a MAdCAM α4β7 de cinomolgo. SEQ ID NO: 51-68 proporcionam as sequências de nucleótidos e de aminoácidos dos anticorpos monoclonais anti-MAdCAM humano modificados: 6.22.2 modificado (SEQ ID NO: 51-54), 6.34.2 modificado (SEQ ID NO: 55-58), 6.67.1
modificado (SEQ ID NO: 59-62), 6.77.1 modificado (SEQ ID NO: 63-66) e as sequências de nucleótidos e de aminoácidos da cadeia leve capa do anticorpo monoclonal anti-MAdCAM modificado: 7.26.4 modificado (SEQ ID NO:67-68). SEQ ID NOS: 70-106 e 108-110 proporcionam várias sequências iniciadoras. O presente invento descreve:
El. Um anticorpo monoclonal humano ou uma porção de ligação ao antigénio do mesmo que se liga especifi-camente à Molécula Mucosal Adressina de Adesão Celular ("Mucosal Adressin Cell Adhesion Molecule", MAdCAM). E2. O anticorpo monoclonal humano ou porção de ligação ao antigénio do mesmo de acordo com El, em que o referido anticorpo ou porção do mesmo possui pelo menos uma das seguintes propriedades: (a) Liga-se a células humanas; (b) Possui selectividade para MAdCAM relativamente a VCAM ou fibronectina de pelo menos 100 vezes; (c) liga-se a MAdCAM humano com um Kd de 3 x 10~10 M ou inferior; ou 183 ΡΕ2177537 (d) inibe a ligação de células que expressam α4β7 a MAdCAM humano; (e) inibe o recrutamento de linfócitos para o tecido linfóide gastrointestinal. E3. 0 anticorpo monoclonal humano ou porção de ligação ao antigénio de acordo com E2, em que o referido anticorpo ou porção se liga a MAdCAM humano com um Kd de 3 x 1(T10 M ou inferior e inibe a ligação de células que expressam α4β7 a MAdCAM humano. E4. Uma linha celular de hibridoma que produz o anticorpo monoclonal humano de acordo com El, em que o hibridoma é seleccionado do grupo consistindo em 1.7.2 (ECACC Accession No. 03090901) 03090902), 6.14.2 (ECACC No. (ECACC No. de Acesso 03090904) 03090905), 6.67.1 (ECACC No. (ECACC No. de Acesso 03090907) 03090908), 7.16.6 (ECACC No. (ECACC No. de Acesso 03090910) 03090911), e 9.8.2 (ECACC No. , 1.8.2 (ECACC Accession No. de Acesso 03090903), 6.22.2 , 6.34.2 (ECACC No. de Acesso de Acesso 03090906), 6.73.2 , 6.77.1 (BCACC No. de Acesso de Acesso 03090909), 7.20.5 , 7.26.4 (ECACC No. de Acesso de Acesso 03090912). E5. 0 anticorpo monoclonal humano produzid pela linha celular de hibridoma de acordo com E4 ou uma porção de ligação ao antigénio do referido anticorpo monoclonal. E6. O anticorpo monoclonal humano de acordo com E5, em que é clivada a lisina C-terminal da cadeia pesada. 184 ΡΕ2177537 Ε7. 0 anticorpo monoclonal humano ou sua porção de ligação ao antigénio de acordo com EI ou 5, em que o referido anticorpo ou porção de ligação ao antigénio inibe a ligação de MAdCAM a α4β7, e em que o anticorpo ou porção do mesmo possui uma das seguintes características: (a) compete de forma cruzada com um anticorpo de referência para a ligação a MAdCAM; (b) Compete com um anticorpo de referência para a ligação a MAdCAM; (c) liga-se ao mesmo epitopo de MAdCAM que um anticorpo de referência; (d) liga-se a MAdCAM com substancialmente o mesmo Kd de um anticorpo de referência; (e) liga-se a MAdCAM com substancialmente a mesma velocidade de dissociação de um anticorpo de referência; em que o anticorpo de referência é seleccionado do grupo consistindo em: anticorpo monoclonal 1.7.2, anticorpo monoclonal 1.8.2, anticorpo monoclonal 6.14.2, anticorpo monoclonal 6.22.2, anticorpo monoclonal 6.34.2, anticorpo monoclonal 6.67.1, anticorpo monoclonal 6.73.2, anticorpo monoclonal 6.77.1, anticorpo monoclonal 7.16.6, anticorpo monoclonal 7.20.5, anticorpo monoclonal 7.26.4, anticorpo mono clonal 9.8.2, anticorpo monoclonal 6.22.2-mod, anticorpo monoclonal 6.34.2-mod, anticorpo monoclonal 6.67.1-mod, anticorpo monoclonal 6.77.1-mod e anticorpo monoclonal 7.26.4-mod. 185 ΡΕ2177537 Ε8. Um anticorpo monoclonal que se liga especificamente a MAdCAM, em que o anticorpo é seleccionado do grupo consistindo em: (a) um anticorpo compreendendo as sequências de aminoácidos descritas em SEQ ID NO:2 e SEQ ID NO:4, sem as sequências sinal; (b) um anticorpo compreendendo as sequências de aminoácidos descritas em SEQ ID NO:6 e SEQ ID NO:8, sem as sequências sinal; (c) um anticorpo compreendendo as sequências de aminoácidos descritas em SEQ ID NO: 10 e SEQ as sequências sinal; ID NO:12, sem (d) um anticorpo compreendendo as sequências de aminoácidos descritas em SEQ ID NO: 14 e SEQ as sequências sinal; ID NO:16, sem (e) um anticorpo compreendendo as sequências de aminoácidos descritas em SEQ ID NO: 18 e SEQ as sequências sinal; ID NO: 2 0, sem (f) um anticorpo compreendendo as sequências de aminoácidos descritas em SEQ ID NO: 22 e SEQ as sequências sinal; ID NO: 2 4, sem (g) um anticorpo compreendendo as sequências de aminoácidos descritas em SEQ ID NO: 26 e SEQ as sequências sinal; ID NO:28, sem (h) um anticorpo compreendendo as sequências de aminoácidos descritas em SEQ ID NO: 30 e SEQ as sequências sinal; ID NO: 32, sem ΡΕ2177537 186 (i) um anticorpo compreendendo as aminoácidos descritas em SEQ ID NO: 34 e SEQ as sequências sinal; (j) um anticorpo compreendendo as aminoácidos descritas em SEQ ID NO: 38 e SEQ as sequências sinal; (k) um anticorpo compreendendo as aminoácidos descritas em SEQ ID NO: 42 e SEQ as sequências sinal; (l) um anticorpo compreendendo as aminoácidos descritas em SEQ ID NO: 46 e SEQ as sequências sinal; (m) um anticorpo compreendendo as aminoácidos descritas em SEQ ID NO: 52 e SEQ as sequências sinal; (n) um anticorpo compreendendo as aminoácidos descritas em SEQ ID NO: 56 e SEQ as sequências sinal; (o) um anticorpo compreendendo as aminoácidos descritas em SEQ ID NO: 60 e SEQ as sequências sinal; (p) um anticorpo compreendendo as aminoácidos descritas em SEQ ID NO: 64 e SEQ as sequências sinal; (q) um anticorpo compreendendo as aminoácidos descritas em SEQ ID NO: 42 e SEQ as sequências sinal. sequências ID NO:36, sequências ID NO:4 0, sequências ID NO:44, sequências ID NO:48, sequências ID NO:54, sequências ID NO:58, sequências ID NO:62, sequências ID NO:66, sequências ID NO:68, de sem de sem de sem de sem de sem de sem de sem de sem de sem E9. Um anticorpo monoclonal ou uma porção de 187 ΡΕ2177537 ligação ao antigénio do mesmo, em que a cadeia pesada do referido anticorpo ou porção do mesmo compreende as CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada ou em que a cadaeia leve compreende as CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de um anticorpo monoclonal seleccionado do grupo consistindo em: .7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod e 7.26.4-mod. E10. O anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com E9, em que o referido anticorpo ou porção do mesmo comprende uma cadeia pesada que utiliza um gene VH 1-18 humano, um gene VH 3-15 humano, um gene VH 3-21 humano, um gene VH 3-23 humano, um gene VH 3-30 humano, um gene VH 3-33 humano ou um gene VH 4-44 humano.
Eli. 0 anticorpo monoclonal ou uma porção de ligação ao antigénio do mesmo de acordo com E10, em que o referido anticorpo ou porção compreende uma cadeia leve que utiliza um gene VK A2 humano, um gene VK A3 humano, um gene VK A2 6 humano, um gene VK B3 humano, um gene VK 012 humano ou um gene VK 018 humano. E12. 0 anticorpo monoclonal humano ou porção de ligação ao antigénio de acordo com El, em que a região variável da cadeia pesada, a região variável da cadeia leve ou ambas são pelo menos 90% idênticas à sequência de aminoácidos da região ou regiões correspondentes de um anticorpo monoclonal seleccionado do grupo consistindo em: ΡΕ2177537 anticorpo monoclonal 1.7.2, anticorpo monoclonal 1.8.2, anticorpo monoclonal 6.14.2, anticorpo monoclonal 6.22.2, anticorpo monoclonal 6.34.2, anticorpo monoclonal 6.67.1, anticorpo monoclonal 6.73.2, anticorpo monoclonal 6.77.1, anticorpo monoclonal 7.16.6, anticorpo monoclonal 7.20.5, anticorpo monoclonal 7.26.4, anticorpo monoclonal 9.8.2, anticorpo monoclonal 6.22. 2-mod, anticorpo monoclonal 6.34.2-mod, anticorpo monoclonal 6.67.1-mod, anticorpo monoclonal 6.77.1-mod e anticorpo monoclonal 7.26.4-mod. E13. Um anticorpo monoclonal ou uma porção de ligação ao antigénio do mesmo que se liga especificamente a MAdCAM, em que: (a) a cadeia pesada compreende as sequências de aminoácidos de CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de um anticorpo de referência seleccionado do grupo consistindo em: 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2- mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod e 7.26.4-mod (b) a cadeia leve compreende as sequências de aminoácidos de CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de um anticorpo de referência seleccionado do grupo consistindo em: 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2- mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod e 7.26.4-mod (c) o anticorpo compreende uma cadeia pesada de (a) e uma cadeia leve de (b)/ e (d) o anticorpo de (c) em que as sequências de aminoácidos das CDRs das cadeia pesada e leve são seleccionadas do mesmo anticorpo de referência. 189 ΡΕ2177537 Ε14. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com E13, em que a cadeia pesada, a cadeia leve ou ambas compreendem a sequência de aminoácidos que vai do começo da CDR1 até ao final da CDR3 da cadeia pesada, da cadeia leve ou de ambas, respectivamente, do anticorpo de referência. E15. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com E13, em que o referido anticorpo compreende: (a) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada de um anticorpo seleccionado do grupo consistindo em: 1.7.2 (SEQ ID NO: 2); 1.8.2 (SEQ ID NO: 6); 6.14.2 (SEQ ID NO: 10);
6.22.2 (SEQ ID NO: 14); 6.34.2 (SEQ ID NO: 18); 6.67.1 (SEQ ID NO: 22); 6.73.2 (SEQ ID NO: 26); 6.77.1 (SEQ ID NO:30);
7.16.6 (SEQ ID NO: 34); 7.20.5 (SEQ ID NO: 38); 7.26.4 (SEQ ID NO: 42); and 9.8.2 (SEQ ID NO: 46); 6.22.2-mod (SEQ ID NO: 52); 6.34.2-mod (SEQ ID NO: 56); 6.67.1-mod (SEQ ID NO: 60); 6.77.1-mod (SEQ ID NO: 64); e 7.26.4-mod (SEQ ID NO: 42) ; (b) uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve de um anticorpo seleccionado do grupo consistindo em: 1.7.2 (SEQ ID NO: 4); 1.8.2 (SEQ ID NO: 8); 6.14.2 (SEQ ID NO: 12);
6.22.2 (SEQ ID NO: 16); 6.34.2 (SEQ ID NO: 20); 6.67.1 (SEQ ID NO: 24); 6.73.2 (SEQ ID NO: 28); 6.77.1 (SEQ ID NO: 32);
7.16.6 (SEQ ID NO: 36); 7.20.5 (SEQ ID NO: 40); 7.26.4 (SEQ 190 ΡΕ2177537
ID NO: 44); and 9.8.2 (SEQ ID NO: 48); 6.22.2-mod (SEQ ID NO: 54); 6.34.2-mod (SEQ ID NO: 58); 6.67.1-mod (SEQ ID NO: 62); 6.77.1-mod (SEQ ID NO:66); e 7.26.4-mod (SEQ ID NO: 68); ou (c) a cadeia pesada de (a) e a cadeia leve de (b) . EI6. O anticorpo monoclonal de acordo com qualquer uma de El-3 e 5-15 que é uma molécula de imuno-globulina G (IgG), IgM, IgE e IgA ou IgD, um anticorpo humanizado ou um anticorpo biespecifico. E17. A porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma de El-3, 5-7 e 9-16 que é um fragmento Fab, um fragmento F(ab')2, um fragmento Fv ou um anticorpo de cadeia simples. E18. Uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz do anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio do mesmo de acordo com qualquer uma de El-3 e 5-17 e um veículo farmaceuticamente aceitável. EI9. Um método de tratamento de doença inflamatória num indivíduo necessitado, compreendendo o passo de administração ao referido indivíduo do anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio do mesmo de acordo com qualquer uma das El-3 e 5-17 em que o referido anticorpo ou porção de ligação ao antigénio inibe a ligação de MAdCAM a 191 ΡΕ2177537 Ε20. 0 método de E19, em que a doença inflama tória é doença inflamatória do trato gastrointestinal. E21. 0 método de E20, em que a doença infla matória do trato gastrointestinal é seleccionada do grupo consistindo em doença inflamatória intestinal, doença de Crohn, colite ulcerativa, doença diverticular, gastrite, doença hepática, esclerose biliar primária e colangite esclerosante. E22. 0 método de E20, em que a doença inflama tória intestinal é doença de Crohn, colite ulcerativa ou ambas. E23. 0 método de E20, em que as doenças inflamatórias intestinais são diabetes dependente de insulina e doença de enxerto versus hospedeiro. E24. Uma linha celular isolada que produz o anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma de El-3 e 5-17 ou a cadeia pesada ou a cadeia leve do referido anticorpo ou da referida porção do mesmo. E25. A linha celular de acordo com E4 ou 24 que produz um anticorpo seleccionado do grupo consistindo em: 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4 e 9.8.2, ou um anticorpo 192 ΡΕ2177537 compreendendo as sequências de aminoácidos de um dos referidos anticorpos. E26. A linha celular de acordo com E25 que produz um anticorpo monoclonal seleccionado do grupo que consiste em: 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod e 7.26.4-mod ou um anticorpo compreendendo as sequências de aminoácidos dos referidos anticorpos. E27. Uma molécula de ácido nucleico isolada compreendendo uma sequência de nucleótidos que codifica a cadeia pesada ou uma porção de ligação ao antigénio da mesma ou a cadeia leve ou uma porção de ligação ao antigénio da mesma de um anticorpo de acordo com qualquer uma de El-3 e 5-17. E28. Um vector compreendendo a molécula de ácido nucleico de acordo com E27, em que o vector facultativamente compreende uma sequência de controlo da expressão operacionalmente ligada à molécula de ácido nucleico. E29. Uma célula hospedeira compreendendo o vector de acordo com E28 ou a molécula de ácido nucleico de acordo com E27. E30. Uma célula hospedeira de acordo com E29 compreendendo uma molécula de ácido nucleico codificadora da cadeia pesada ou de uma porção de ligação ao antigénio da mesma e uma molécula de ácido nucleico codificadora da 193 ΡΕ2177537 cadeia leve ou de uma porção de ligação ao antigénio da mesma de um anticorpo ou porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma de El-3 e 5-17. E31. Um método para a produçãi de um anticorpo monoclonal humano ou de uma porção de ligação ao antigénio do mesmo que especif icamente se liga a MAdCAM, compreendendo a cultura da célula hospedeira de acordo com E29 ou 30 ou a linha celular de acordo com E4 ou 24 em condições adequadas e recuperação do referido anticorpo ou porção de ligação ao antigénio. E32. Um animal transgénico não humano ou planta transgénica compreendendo (a) uma molécula de ácido nucleico codificadora da cadeia pesada ou e uma porção de ligação ao antigénio da mesma; (b) uma molécula de ácido nucleico codificadora da cadeia leve ou de uma porção de ligação ao antigénio da mesma; ou (c) ambas (a) e (b) de um anticorpo de acordo com qualquer uma de E 1-3 pu 5-17, em que o animal transgénico não humano ou planta transgénica expressa a referida cadeia pesada ou cadeia leve ou ambas. E33. Um método de isolamento de um anticorpo ou porção de ligação ao antigénio do mesmo que se liga especificamente a MAdCAM, compreendendo o passo de isolamento do anticorpo a partir do animal transgénico não humano ou planta transgénica de acordo com E32. E34. Um método de tratamento de um indivíduo 194 ΡΕ2177537 necessitado com um anticorpo humano ou porção de ligação ao antigénio do mesmo que se liga especificamente a MAdCAM e inibe a ligação a , compreendendo os passos de: (a) administração de uma quantidade eficaz de uma molécula de ácido nucleico isolado codificadora da cadeia pesada ou de uma porção de ligação ao antigénio da mesma, uma molécula de ácido nucleico isolada codificadora da cadeia leve ou de uma porção de ligação ao antigénio da mesma ou moléculas de ácido nucleico codificadoras da cadeia leve e da cadeia pesada ou porção de ligação ao antigénio das mesmas; e (b) e expressão da molécula de ácido nucleico. E35. Um método para a produção de um anticorpo monoclonal humano que se liga especificamente a MAdCAM, compreendendo os passos de: (a) imunização de um animal transgénico não humano que é capaz de produzir anticorpos humanos com MAdCAM, com uma porção imunogénica de MAdCAM ou com uma célula ou tecido que expresse MAdCAM; e (b) permitir que o animal transgénico monte uma resposta imune contra MAdCAM. E36. Um amticorpo monoclonal humano produzido pelo método de acordo com E35. E37. Um método de inibição da ligação de ο^βν a células que expressem MAdCAM humano compreedendo o contacto das células com o anticorpo monoclonal de acordo com 195 ΡΕ2177537 qualquer uma de El-3 e 5-17 ou uma porção de ligação ao antigénio do mesmo. E38. Um método de inibição da adesão de leucócitos-células endoteliais mediada por MAdCAM compreendendo o contacto das células endoteliais com o anticorpo monoclonal de acordo com qualquer uma de E 1-3 e 5-17 ou uma porção de ligação ao antigénio do mesmo. E39. Um método para inibição da adesão, migração e infiltração de leucócitos mediadas por MAdCAM em tecidos compreendendo o passo de contacto das células endoteliais com o anticorpo monoclonal de acordo com qualquer uma de E 1-3 e 5-17 ou uma porção de ligação ao antigénio do mesmo. E40. Um método de inibição de adesão celular dependente de c^Pv/MAdCAM compreendendo o passo de contacto das células que expressam MAdCAM humano com o anticorpo moncolonal de acordo com qualquer uma de E 1-3 e 5-17 ou porção de ligação ao antigénio do mesmo. E41. Um método para inibição do recrutamento de linfócitos mediado por MAdCAM para o tecido linfóide gastrointestinal compreendendo o passo de contacto das células que expressam MAdCAM humano com o anticorpo monoclonal de acordo com qualquer uma de E 1-3 e 5-17 ou porção de ligação ao antigénio do mesmo. E42. Um anticorpo monoclonal ou uma porção de ligação ao antigénio do mesmo que se liga especificamente a 196 ΡΕ2177537 MAdCAM, em que o referido anticorpo ou porção do mesmo compreende uma ou mais sequências de aminoácidos FRl, FR2, FR3 ou FR4 de um anticorpo monoclonal humano seleccionado do grupo consistindo em: 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod e 7.26.4-mod. E43. O anticorpo monoclonal humano ou porção de ligação ao antigénio de acordo com El, em que o anticorpo compreende: (a) uma sequência de aminoácidos da cadeia pesada que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da cadeia pesada de um anticorpo monoclonal seleccionado do grupo consistindo em: .7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2- mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod e 7.26.4-mod; (b) uma sequência de aminoácidos da cadeia leve que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da cadeia leve de um anticorpo monoclonal seleccionado do grupo consistindo em: .7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2- mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod e 7.26.4-mod; (c) ambas (a) e (b); ou (d) (a) , (b) ou (c) , com ou sem a sequ~encia sinal. E44. Um método para diagnosticar um distúrbio 197 ΡΕ2177537 caracterizado pela circulação de MAdCAM humano solúvel compreendendo os passos de: (1) contacto de uma amostra biológica com o anticorpo monoclonal de acordo com qualquer uma de E 1-3 e 5-17 ou uma porção de ligação ao antigénio e (2) detecção da ligação. E45. Um método para a detecção de inflamação num indivíduo compreendendo os passos de: (1) administração ao referido indivíduo do anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma de E 1-3 e 5-17 em que o referido anticorpo ou porção do mesmo está marcado de forma detectável e (2) detecção da ligação. E46. Um kit de diagnóstico compreendendo o anticorpo monoclonal de acordo com qualquer uma de El-3 e 5-17 ou porção de ligação ao antigénio. E47. A composição farmacêutica de acordo com E18 compreendendo ainda um ou mais de outros agentes anti-inflamatórios ou imunomoduladores. E48. A composição farmacêutica de acordo com E47, em que um ou mais de outros agentes anti-inflamatórios ou imunomodladores são seleccionados do grupo consistindo em: corticosteróides, amino-salicilatos, azatioprina, meto-trexato, ciclosporina, FK506, IL-10, GM-CSF, rapamicina, anti-TNFa e antagonistas das moléculas de adesão. E49. Uma vacina compreendendo uma quantidade eficaz do anticorpo humano de acordo com qualquer uma de 198 ΡΕ2177537
El-3 e 5-17 ou porção de ligação ao antigénio e um veiculo farmaceuticamente aceitável. E50. A vacina de acordo com E49, em que a vacina é mucosal. E51. Um método de detecção do efeito de administração de um anticorpo inibidor anti-MAdCAM ou porção de ligação ao antigénio do mesmo a um indivíduo compreendendo os passos de: (a) administração a um indivíduo de um anticorpo monoclonal humano que se liga especificamente a MAdCAM; e (b) determinação se existe um aumento nos níveis de leucócitos circulantes que expressam α4β7. E52. 0 método de acordo com E51, em que os referidos leucócitos são linfócitos. E53. 0 método de acordo com E51, em que o referido aumento nos níveis de leucócitos circulantes que expressam α4β7 é determinado por análise de FACS.
Chave:
Sequência sinal: letra minúsculas sublinhadas.
Alterações de aminoácidos nas sequências dos anticorpos anti-MAdCAM modificados comparativamente com as sequências parentais: letras maiúsculas sublinhadas. 199 ΡΕ2177537 SEQ ID NO:1
Sequência de nucleotides da cadeia pesada de 1.7.2
1 atgqagtttg ggctqagctg gattttcctt gctgctattt taaaaggtgt SI ccagtgtGAG GTGCAGCTGG TGGAGTCTGG GGGAGGCTTG GTGAAGCCTG 101 GGGGGTCCCT TAGACTCTCC TGTGTAGCCT CTGGATTCAC TTTCACTAAC 151 GCCTGGATGA TCTGGGTCCG CCAGGCTCCA GGGAAGGGGC TGGAGTGGGT 201 TGGCCGTATT AAAAGGAAAA CTGATGGTGG GACAACAGAC TACGCTGCAC 251 CCGTGAAAGG CAGATTCACC ATCTCAAGAG ATGATTCAAA AAACACGCTG 301 TATCTGCAAA TGAACAGCCT GAAAACCGAG GACACAGCCG TGTATTACTG 351 TACCACAGGG GGAGTGGCTG AGGACTACTO GGGCCAGGGA ACCCTGGTCA 401 CCGTCTCCTC AGCCTCCACC AAGGGCCCAT CGGTCTTCCC CCTGGCGCCC 451 TGCTCCAGGA GCACCTCCGA GAGCACAGCG GCCCTGGGCT GCCTGGTCAA 501 GGACTACTTC CCCGAACCGG TGACGGTGTC GTGGAACTCA GGCGCTCTGA 551 CCAGCGGCGT GCACACCTTC CCAGCTGTCC TACAGTCCTC AGGACTCTAC 601 TCCCTCAGCA GCGTGGTGAC CGTGCCCTCC AGCAACTTCG GCACCCAGAC 651 CTACACCTGC AACGTAGATC ACAAGCCCAG CAACACCAAG GTGGACAAGA 701 CAGTTGAGCG CAAATGTTGT GTCGAQTGCC CACCGTGCCC AGCACCACCT 751 GTGGCAGGAC CGTCAGTCTT CCTCTTCCCC CCAAAACCCA AGGACACCCT 801 CATGATCTCC CGGACCCCTG AGGTCACGTG CGTGGTGGTG GACGTGAGCC 851 ACGAAGACCC CGAGGTCCAG TTCAACTGGT ACGTGGACGG CGTGGAGGTG 901 CATAATGCCA AGACAAAGCC ACGGGAGGAG CAGTTCAACA GCACGTTCCG 951 TGTGGTCAGC GTCCTCACCG TTGTGCACCA GGACTGGCTG AACGGCAAGG 1001 AGTACAAGTG CAAGGTCTCC AACAAAGGCC TCCCAGCCCC CATCGAGAAA 1051 ACCATCTCCA AAACCAAAGG GCAGCCCCGA GAACCACAGG TGTACACCCT 1101 GCCCCCATCC CGGGAGGAGA TGACCAAGAA CCAGGTCAGC CTGACCTGCC 1151 TGGTCAAAGG CTTCTACCCC AGCGACATCG CCGTGGAGTG GGAGAGCAAT 1201 GGGGAGCCGG AGAACAACTA CAAGACCACA CCTCCCATGC TGGACTCCGA 1251 CGGCTCCTTC TTCCTCTACA GCAAGCTCAC CGTGGACAAG AGCAGGTGGC 1301 AGCAGGGGAA CGTCTTCTCA TGCTCCGTGA TGCATGAGGC TCTGCACAAC 1351 CACTACACGC AGAAGAGCCT CTCCCTGTCT CCGGGTAAAT GA SEQ ID NO. 2
Sequência proteica prevista para a cadeia pesada de 1.7.2
1 mefqlswif1 aailkgvqcE VQLVESGGGL VKPGGSLRLS CVASGPTPTN
51 AWMIWVRQAP GKGLEWVGRI KRKTDGGTTD YAAPVKGRFT XSRDDSKNTL
101 YIiQMMSLKTB DTAVYYCTTG GVAEDYWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP
151 CSRSTSESTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY
201 SLSSWTVPS SNFGTQTYTC NVDHKPSNTK VDKTVERKCC VBCPPCPAPP
251 VAGPSVPLFP PKPKDTLMIS RTPBVTCVW DVSHEDPEVQ FNWYVDGVEV
301 HNAKTKPREE QFNSTFRWS VLTWHQDWIi NGKEYKCKVS NKGLPAPIEK
351 TISKTKGQPR EPQVYTLPPS RBEMTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVBWESN
401 GQPENNYKTT PPMLDSDGSF FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN
451 HYTQKSIiSLS PGK 200 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 3
Sequência de nucleótidos da cadeia leve capa de 1.7.2
1 atgaggctcc ctgctcagct cçtgqqgctq ctaatgctct qqgtctctgq 51 atccaqtggg GATATTGTGA TGACTCAGTC TCCACTCTCC CTGCCCGTCA 101 CCCCTGGAGA GCCGGCCTCC ATCTCCTGCA GGTCTAGTCA GAGCCTCCTG 151 CAAAGTAATG GATACAACTA TTTGGATTGG TACCTGCAGA AGCCAGGGCA 201 GTCTCCACAG CTCCTGATCT ATTTGGGTTC TAATCGGGCC TCCGGGGTCC 251 CTGACAGGTT CAGTGGCAGT GGATCAGGCA CAGATTTTAC ACTGAAAATC 301 AGCAGAGTGG AGGCTGAGGA TGTTGGGGTT TATTACTGCA TGCAAGCTCT 351 ACAAACTATC ACCTTCGGCC AAGGGACACG ACTGGAQATT AAACGAACTG 401 TGGCTGCACC ATCTGTCTTC ATCTTCCCGC CATCTGATGA GCAGTTQAAA 451 TCTGGAACTG CCTCTGTTGT GTGCCTGCTG AATAACTTCT ATCCCAGAGA 501 GGCCAAAGTA CAGTGGAAGG TGGATAACGC CCTCCAATCG GGTAACTCCC 551 AGGAGAGTGT CACAOAGCAG GACAGCAAGG ACAGCACCTA CAGCCTCAGC 601 AGCACCCTGA CGCTOAGCAA AGCAGACTAC GAGAAACACA AAGTCTACGC 651 CTGCGAAGTC ACCCATCAGG OCCTGAGCTC GCCCGTCACA AAGAGCTTCA 701 ACAGGGGAGA GTGTTAGTGA SEQ ID N0. 4
Sequência proteica prevista para a cadeia leve capa de 1.7.2
1 mrlpaqllgl lmlwvagBSg DIVMTQSPLS LFVTPGEPAS ISCRSSQSLL 51 QSNGYNYUDW YLQKPGQSPQ LLIYLGSNRA SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI 101 SRVBABDVGV YYCMQALQTX TFGQGTRIíEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK 151 SGTASWCLL NNFYPRBAXV QWKVDNALQS GNSQESVTBQ DSKDSTYSLS
202 STLTLSKADY EKHKVYACBV THQGLSSPVT K3FNRGEC 201 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 5
Sequência de nucleótidos da cadeia pesada de 1.8.2
1 atggagtttq ggctgagctq qattttcctt gctgctattt taaaaqqtqt 51 ccagtgtGAG GTGCAGCTGG TGGAGTCTGG GGGAGGCTTG GTGAAGCCTG 101 GGGGGTCCCT TAGACTCTCC TGTGTAGTCT CTGGATTCAC TTTCACTAAC 151 GCCTGGATGA TCTGGGTCCG CCAGGCTCCA GGGAAGGGGC TGGAGTGGGT 201 TGGCCGTATT AAAAGGAAAA CTGATGGTGG GACAACAGAC TACGCTGCAC 251 CCGTGAAAGG CAGATTCACC ATCTCAAGAG ATGATTCAAA AAACACGCTG 301 TATCTGCAAA TGAACAGCCT GAAAACCGAG GACACAGCCG TGTATTACTG 351 TACCACAGGG OGAGTGGCTG AGGACTACTG GGGCCAGGGA ACCCTGGTCA 401 CCGTCTCCTC AGCCTCCACC AAGGG CCCAT CGGTCTTCCC CCTGGCGCCC 451 TGCTCCAGGA GCACCTCCGA GAGCACAGCG GCCCTGGÕCT GCCTGGTCAA 501 GGACTACTTC CCCGAACCGG TGACGGTGTC GTGGAACTCA GGOGCTCTGA 551 CCAGCGGCGT GCACACCTTC CCAGCTGTCC TACAGTCCTC AGGACTCTAC 601 TCCCTCAGCA GCGTGGTGAC CGTGCCCTCC AGCAACTTCG GCACCCAGAC 651 CTACACCTGC AACGTAGATC AGAAGCCCAG CAACACCAAG GTGGACAAGA 701 CAGTTGAGCG CAAATGTTGT GTCGAGTGCC CACCGTGCCC AGCACCACCT 751 GTGGCAGGAC CGTCAGTCTT CCTCTTCCCC CCAAAACCCA AGGACACCCT 801 CATGATCTCC CGGACCCCTG AGGTCACGTG CGTGGTGGTG GACGTGAGCC 851 ACGAAGACCC CGAGGTCCAG TTCAACTGGT ACGTGGACGG CGTGGAGGTG 901 CATAATGCCA AGACAAAGCC ACGGGAGGAG CAGTTCAACA GCACGTTCCG 951 TGTGGTCAGC GTCCTCACCG TTGTGCACCA GGACTGGCTG AACGGCAAGG 1001 AGTACAAGTG CAAGGTCTCC AACAAAGGCC TCCCAGCCCC CATCGAGAAA 1051 ACCATCTCCA AAACCAAAGG GCAGCCCCGA GAACCACAGG TGTACACCCT 1101 GCCCCCATCC CGGGAGGAGA TGACCAAGAA CCAGGTCAGC CTGACCTGCC 1151 TGGTCAAAGG CTTCTACCCC AGCGACATCG CCGTGGAGTG GGAGAGCAAT 1201 GGGCAGCCGG AGAACAACTA CAAGACCACA CCTCCCATGC TGGACTCCGA 1251 CGGCTCCTTC TTCCTCTACA GCAAGCTCAC CGTGGACAAG AGCAGGTGGC 1301 AGCAGGGGAA OGTCTTCTCA TGCTCCGTGA TGCATGAGGC TCTGCACAAC 1351 CACTACACGC AGAAGAGCCT CTCCCTGTCT CCGGGTAAAT GA SEQ ID NO. 6
Sequência proteica prevista para a cadeia pesada de 1.8.2
1 mefqlawifl aaiUcgvgcB VQLVESGGGL VKPGGSLRLS CWSGFTFTN
51 AWMIWVRQ AP GKGLEWVGRI KRKTDGGTTD YAAPVKGRFT ISRDDSKNTL
101 YLQMNSLKTE DTAVYYCTTG GVAEDYWGQG TLVTVSSAST KGPSVPPLAP
151 CSRSTSESTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTP PAVLQSSGLY
201 SLSSWTVPS SNFGTQTYTC NVDHKPSNTK VBKTVERKCC VECPPCPAPP
251 VAGPSVFLPP PKPKDTLMIS RTPEVTCVW DVSHEDPEVQ FNWYVDGVEV
301 HNAKTKPREE QFNSTPRWS VLTWHQDWL NGKEYKCKVS NKGLPAPIBK
351 TISKTKGQPR EPQVYTLPPS REEMTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVBWBSN
401 GQPENNYKTT PPMLDSDGSP FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHBADHN
451 HYTQKSLSLS PGK 202 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 7
Sequência de nucleótidos da cadeia leve capa de 1.8.2 1 SI 101 151 201 251 301 351 401 451 501 551 601 651 701 atcraqqctcc ctgctcaqct cctqgqgctq ctaatgctct qgqtctctgq atccagtggg
CCCCTGGAGA
CAAAGTAATG
GTCTCCACAG
CTGACAGGTT
AGCAGAGTGG
ACAAACTATC
TGGCTGCACC
TCTGGAACTG
GGCCAAAGTA
AGGAGAGTGT
AGCACCCTGA
CTGCGAAGTC
ACAGGGGAGA
GATATTGTGA
GCCGGCCTCC
GATTCAACTA
CTCCTGATCT
CAGTGGCAGT
AGGCTGAGGA
ACCTTGGGCC
ATCTGTCTTC
CCTCTGTTGT
CAGTGGAAGG
CACAGAGCAG
CGCTGAGCAA
ACCCATCAGG
GTGTTAGTGA
TGACTCAGTC
ATCTCCTGCA
TTTGGATTGG
ATTTGGGTTC
GGGTCAGGCA
TGTTGGGGTT
AAGGGACACG
ATCTTCCCGC
GTGCCTGCTG
TGGATAACGC
GACAGCAAGG
AGCAGACTAC
GCCTGAGCTC
TCCACTCTCC
GGTCTAGTCA
TACCTGCAGA
TAATCGGGCC
CAGATTTTAC
TATTACTGCA
ACTGGAGATT
CATCTGATGA
AATAACTTCT
CCTCCAATCG
ACAGCACCTA
GAGAAACACA
GCCCGTCACA
CTGCCCGTCA
GAGCCTCCTG
AGCCAGGGCA
TCCGGGGTCC
ACTGAAAATC
TGCAAGCTCT
AAACGAACTG
GCAGTTGAAA
ATCCCAGAGA
GGTAACTCCC
CAGCCTCAGC
AAGTCTACGC
AAGAGCTTCA SEQ ID NO. 8
Sequência proteica prevista para a cadeia leve capa 1.8.2
1 mrlpaqllgl lralwVBgseg DIVMTQSPLS LPVTPGEPAS ISCRSSQSLL 51 QSNGFNYLDW YLQKPGQSPQ LLIYLGSNRA SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI 101 SRVEAEDVGV YYCMQALQTI TFGQGTRLEI KRTVAAPSVP IPPPSDEQLK 151 SGTASWCLL NKFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS
202 STLTtiSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC 203 ΡΕ2177537 SEQ ID NO.9
Sequência de nucleótidos da cadeia pesada de 6.14.2
1 atggaqtttg ggctgagctg gctttttctt gtgqctattt taaaaqgtgt 51 CCagtgtGAG GTGCAGCTGT TGGAGTCTGG GGGAGGCTTG QTACAGCCTG 101 GGGGGTCCCT GAGACTCTCC TGTGCAGCCT CTGGACTCAC CTTTAACAAT 151 TCTGCCATGA CCTGGGTCCG CCAGGCTCCA GGGAAGGGGC TGGAGTGGGT 201 CTCAACTACT AGTGGAAGTG GTGGTACCAC ATACTACGCA GACTCCGTGA 251 AGGGCCGGTT CACCATCTCC AGAGACTCTC CCAAGAACAC GCTCTATCTG 301 CAAATGAACA GCCTGAGAGC CGAGGACACG GCCGTATATT ACTGTGCGGC 351 CCGTGGATAC AGCTATGGTA CGACCCCCTA TGAGTACTGG GGCCAGGGAA 401 CCCTGGTCAC CGTCTCCTCA GCTTCCACCA AGGGCCCATC CGTCTTCCCC 451 CTGGCGCCCT GTTCCAGGAG CACCTCCGAG AGCACAGCCG CCCTGGGCTG 501 CCTGGTCAAG GACTACTTCC CCGAACCGGT GACGGTGTCG TGGAACTCAG 551 GCGCCCTGAC CAGCGGCGTG CACACCTTCC CGGCTGTCCT ACAGTCCTCA 601 GGACTCTACT CCCTCAGCAG CGTGGTGACC GTGCCCTCCA GCAGCTTGGG 651 CACGAAGACC TACACCTGCA ACGTAGATCA CAAGCCCAGC AACACCAAGG 701 TGGACAAGAG AGTTGAGTCC AAATATGGTC CCCCATGCCC ATCATGCCCA 751 GCACCTGAGT TCCTGGGGGG ACCATCAGTC TTCCTGTTCC CCCCAAAACC 801 CAAGGACACT CTCATGATCT CCCGGACCCC TGAGGTCACG TGCGTGGTGG 851 TGGACGTGAG CCAGGAAGAC CCCGAGGTCC AGTTCAACTG GTACGTGGAT 901 GGCGTGGAGG TGCATAATGC CAAGACAAAG CCGCGGGAGG AGCAGTTCAA 951 CAGCACGTAC CGTGTGGTCA GCGTCCTCAC CGTCCTGCAC CAGGACTGGC 1001 TGAACGGCAA GGAGTACAAG TGCAAGGTCT CCAACAAAGG CCTCCCGTCC 1051 TCCATCGAGA AAACCATCTC CAAAGCCAAA GGGCAGCCCC GAGAGCCACA 1101 GGTGTACACC CTGCCCCCAT CCCAGGAGGA GATGACCAAG AACCAGGTCA 1151 GCCTGACCTG CCTGGTCAAA GGCTTCTACC CCAGCGACAT CGCCGTGGAG 1201 TGGGAGAGCA ATGGGCAGCC GGAGAACAAC TACAAGACCA CGCCTCCCGT 1251 GCTGGACTCC GACGGCTCCT TCTTCCTCTA CAGCAGGCTA ACCGTGGACA 1301 AGAGCAGGTG GCAGGAGGGG AATGTCTTCT CATGCTCCGT GATGCATGAG 1351 GCTCTGCACA ACCACTACAC ACAGAAGAGC CTCTCCCTGT CTCTGGGTAA 1401 ATGA SEQ ID NO. 10
Sequência proteica prevista para a cadeia pesada de 6.14.2
1 mefglewlfl vailkgvqcB VQLLESGGGL VQPGGSLRLS CAASGLTFNN 51 SAMTWVRQAP GKGLEWVSTT SOSGGTTYYA DSVKGRFTIS RDSPKNTLYL 101 QMNSIiRABDT AVYYCAARGY SYGTTPYEYW GQGTIiVTVSS ASTKGPSVFP 151 LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS 201 GLYSLSSWT VPSSSLGTKT YTCNVDHKPS NTKVDKRVES KYGPPCPSCP 251 APEPIiGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVWDVSQED PEVQPNWYVD 301 GVEVHNAKTK PREEQFNSTY RWSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS 351 SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQBEHTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE 401 WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE 451 ALHNHYTQKS LSLSLGK 204 ΡΕ2177537 SEQ ID NO.11
Sequência de nucleótidos da cadeia leve capa de 6.14.2
1 atqqacatqa qqqtccccqc tcaqctcctq qqqctcctgc tactctqgct 51 ccqaqgggcc aqatgtGACA TCCAGATGAC CCAGTCTCCA TCCTCCCTGT 101 CTGCATCTGT AGGAGACAGA GTCACCATCA CTTGCCGGGC AAGTCGGAGC 151 ATTAGCAGCT ATTTAAATTG GTATCAGCAG AAACCAGGGA AAGCCCCTAA 201 AGTCCTGATC TTTTTTGTGT CCAGTTTGCA AAGTGGGGTC CCATCAAGGT 251 TCAGTGGCAG TGGCTCTGGG ACAGATTTCA CTCTCACCAT CAGCAGTCTG 301 CAACCTGAAG ATTTTGCAAC TTACTACTGT CAACAGAATT ACATTCCCCC 351 TATTACCTTC GGCCAGGGGA CACGACTGGA GATCAGACGA ACTGTGGCTG 401 CACCATCTGT CTTCATCTTC CCGCCATCTG ATGAGCAGTT GAAATCTGGA 451 ACTGCCTCTG TTGTGTGCCT GCTGAATAAC TTCTATCCCA GAGAGGCCAA 501 AGTACAGTGG AAGGTGGATA ACGCCCTCCA ATCGGGTAAC TCCCAGGAGA 551 GTGTCACAGA GCAGGACAGC AAGGACAGCA CCTACAGCCT CAGCAGCACC 601 CTGACGCTGA GCAAAGCAGA CTACGAGAAA CACAAAGTCT ACGCCTGCGA 651 AGTCACCCAT CAGGGCCTGA GCTCGCCCGT CACAAAGAGC TTCAACAGGG 701 GAGAGTGTTA G SEQ ID NO. 12
Sequência proteica prevista para a cadeia leve capa 6.14.2
1 mdmrvpaqll gllllwlrga rcDIQMTQSP SSLSASVGDR VTITCRASRS 51 ISSYLNWYQQ KPGKAPKVLI FFVSSLQSGV PSRFSGSGSQ TDFTLTISSL 101 QPEDFATYYC QQNYIPPITF GQGTRLEIRR TVAAPSVFIP PPSDBQLKSG 151 TASWCUaiN FYPREAKVQW KVDNALQSGN SQBSVTEQDS KDSTYSLSST
202 LTLSKADYBK HKVYACEVTH QGLSSPVTKS FNRGEC 205 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 13
Sequência de nucleótidos da cadeia pesada de 6.22.2
1 atqqaqtttg gqctqaqctq qqttttcctc gttgctcttt taaqaqqtqt 51 CCaqtqtCAG GTGCAGCTGG TGGAGTCTGG GGGAGGCGTG GTCCAGCCTG 101 GGAGGTCCCT GAGACTCTCC TGTGCAGCGT CTGGACACAC CTTCAGTAGC 151 GATGGCATGC ACTGGGTCCG CCAGGCTCCA GGCAAGGGGC TGGAGTGGGT 201 GGCAATTATA TGGTATGATG GAAGTAATAA ATATTATGCA GACTCCGTGA 251 AGGGCCGATT CACCATCTCC AGAGACAATT CCAAGAACAC GCTGTATCTG 301 CAAATGAACA GCCTGAGAGC CGAGGACACG GCTGTATATT ACTGTGCGAG 351 AGATCCCGGC TACTATTACG GTATGGACGT CTGGGGCCAA GGGACCACGG 401 TCACCGTCTC CTCAGCTTCC ACCAAGGGCC CATCCGTCTT CCCCCTGGCG 451 CCCTGCTCCA GGAGCACCTC CGAGAGCACA GCCGCCCTGG GCTGCCTGGT 501 CAAGGACTAC TTCCCCGAAC CGGTGACGGT GTCGTGGAAC TCAGGCGCCC 551 TGACCAGCGG CGTGCACACC TTCCCGGCTG TCCTACAGTC CTCAGGACTC 601 TACTCCCTCA GCAGCGTGGT GACCGTGCCC TCCAGCAGCT TGGGCACGAA 651 GACCTACACC TGCAACGTAG ATCACAAGCC CAGCAACACC AAGGTGGACA 701 AGAGAGTTGA GTCCAAATAT GGTCCCCCAT GCCCATCATG CCCAGCACCT 751 GAGTTCCTGG GGGGACCATC AGTCTTCCTG TTCCCCCCAA AACCCAAGGA 801 CACTCTCATG ATCTCCCGGA CCCCTGAGGT CACGTGCGTG GTGGTGGACG 851 TGAGCCAGGA AGACCCCGAG GTCCAGTTCA ACTGGTACGT GGATGGCGTG 901 GAGGTGCATA ATGCCAAGAC AAAGCCGCGG GAGGAGCAGT TCAACAGCAC 951 GTACCGTGTG GTCAGCGTCC TCACCGTCCT GCACCAGGAC TGGCTGAACG 1001 GCAAGGAGTA CAAGTGCAAG GTCTCCAACA AAGGCCTCCC GTCCTCCATC 1051 GAGAAAACCA TCTCCAAAGC CAAAGGGCAG CCCCGAGAGC CACAGGTGTA 1101 CACCCTGCCC CCATCCCAGG AGGAGATGAC CAAGAACCAG GTCAGCCTGA 1151 CCTGCCTGGT CAAAGGCTTC TACCCCAGCG ACATCGCCGT GGAGTGGGAG 1201 AGCAATGGGC AGCCGGAGAA CAACTACAAG ACCGCGCCTC CCGTGCTGGA 1251 CTCCGACGGC TCCTTCTTCC TCTACAGCAG GCTAACCGTG GACAAGAGCA 1301 GGTGGCAGGA GGGGAATGTC TTCTCATGCT CCGTGATGCA TGAGGCTCTG 1351 CACAACCACT ACACACAGAA GAGCCTCTCC CTGTCTCTGG GTAAATGA SEQ ID NO. 14
Sequência proteica prevista para a cadeia pesada de 6.22.2
1 mefqlswvfl vallrqvqcQ VQLVESGGGV VQPGRSLRLS CAASGHTPSS 51 DGMHWVRQAP GKGLBWVAII WYDGSNKYYA DSVKGRFTIS RDNSKNTLYL 101 QMNSLRAEDT AVYYCARDPG YYYGMDVWGQ GTTVTVSSAS TKGPSVFPLA 151 PCSRSTSEST AALGCLVKDY FPEPVTVSWN SGALTSGVHT FPAVLQSSGL
201 YSnSSWTVP ssslgtktyt cnvdhkpsnt kvdkrvesky gppcpscpap 251 EFLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV WDVSQEDPE VQFNWYVDGV 301 EVHNAKTKPR BEQFNSTYRV VSVLTVLHQD WIiNGKEYKCK VSNKGLPSSX 351 EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSQEEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE 4 01 SNGQPENNYX TAPPVLDSDG SFFLYSRLTV DKSRWQEGKV FSCSVMHBAL
451 HNHYTQKSLS LSLGK 206 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 15
Sequência nucleotidica da cadeia leve capa 6.22.2
X atgttgccat cacaactcat tgggtttctg ctgctctgqq ttccagcttc 51 caggqqtGAA ATTGTGCTGA CTCAGTCTCC AGACTTTCAG TCTGTGACTC 101 CAAAAGAGAA AGTCACCATC ACCTGCCGGG CCAGTCAGAG AATTGGTAGT 151 AGCTTACACT GGTACCAGCA GAAACCAGAT CAGTCTCCAA AACTCCTCAT 201 CAAGTATGCT TCCCAGTCCT TCTCAGGGGT CCCCTCGAGG,TTCAGTGGCA 251 GTGGATCTGG GACAAATTTC ACCCTCACCA TCAATGGCCT GGAAGCTGAA 301 GATGCTGCAA CTTATTACTG TCATCAGAGT GGTCGTTTAC CGCTCACTTT 351 CGGCGGAGGG ACCAAGGTGG AGATCAAACG AACTGTGGCT GCACCATCTG 401 TCTTCATCTT CCCGCCATCT GATGAGCAGT TGAAATCTGG AACTGCCTCT 451 GTTGTGTGCC TGCTGAATAA CTTCTATCCC AGAGAGGCCA AAGTACAGTG 501 GAAGGTGGAT AACGCCCTCC AATCGGGTAA CTCCCAGGAG AGTGTCACAG 551 AGCAGGACAG CAAGGACAGC ACCTACAGCC TCAGCAGCAC CCTGACGCTG 601 AGCAAAGCAG ACTACGAGAA ACACAAAGTC TACGCCTGCG AAGTCACCCA 651 TCAGGGCCTG AGCTCGCCCG TCACAAAGAG CTTCAACAGG GGAGAGTGTT 701 AGTGA SEQ ID NO. 16
Sequência proteica prevista para a cadeia leve capa 6.22.2
1 mlpsqligfl IlwvpasrgB IVLTQSPDFQ SVTPKEKVTI TCRASQRIGS 51 SLHWYQQKPD QSPKLLIKYA SQSFSGVPSR FÇGSGSGTNF TLTINGIiEAE 101 DAATYYCHQS GRLPLTFGGG TKVBIKRTVA APSVFIFPPS DBQLKSGTAS 151 WCLLNNFYP REAKVQWKVD NALQSGNSQE SVTEQDSKDS TYSLSSTLTL
201 SKADYEKHKV YACEVTHQGL· SSPVTKSFNR GBC 207 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 17
Sequência de nucleótidos da cadeia pesada de 6.34.2
SEQ ID NO. 18
Sequência proteica prevista para a cadeia pesada de 6.34.2
1 mefglswvf 1 vallrcivqcQ VQLVESGGGV VQPGRSLRLS CAASGFTFSS
SI YGKHWVRQAP GKGLEWVAVI SNDGNNKYYA DSVKGRFTIS RDNSKNTIiYL 101 QMNSLSAEDT AVYYCARDST AITYYYYGMD VWGQGTTVTV SSASTKGPSV 1S1 FPLAPCSRST SBSTAALGCL· VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ 201 SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPS 251 CPAPEFLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVWDVSQ EDPEVQFNWY 301 VDGVEVHNAK TKPREEQFNS TYRWSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKGL
351 PSSIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSQEEM TKNQVSLTCL· VKGFYPSDIA
401 VEHE5NGQPE NNYKTTPPVL· DSDGSFFLYS RliTVDKSRWQ EGHVFSCSVM
451 HEALHNHYTQ KSLBLSLGK 208 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 19
Sequência de nucleótidos para a cadeia leve capa de 6.34.2 1 atqqacatqa gggtccccgc tcagctcctg qqqctcctgc tactctggct
51 ccqaqqtqcc agatqtGACA TCCAGATGAC CCAGTCTCCA TCCTCCCTGT
101 CTGCATCTGT CGGAGACAGA GTCACCATCA CTTGCCGGQC AAGTCAGAAT
151 ATTAGTAGCT ATTTAAATTG GTTTCAGCAG AAACCAGGGA AAGCCCCTAA
201 QCTCCTGATC TATGCTGCAT CCGGTTTGAA GCGTGGGGTC CCATCACGGT
251 TCAGTGGTAG TGGATCTGGG ACAGATTTCA CTCTCACCAT CAGGACTCTG
301 CAACCTGATG ATTTTGCAAC TTACTCCTGT CACCAGAGTT ACAGTCTCCC
351 ATTCACTTTC GGCCCTGGGA CCAAAGTGGA TATCAAACGA ACTGTGGCTG
401 CACCATCTGT CTTCATCTTC CCGCCATCTG ATGAGCAGTT GAAATCTGGA
451 ACTGCCTCTG TTGTGTGCCT GCTGAATAAC TTCTATCCCA GAGAGGCCAA
501 AGTACAGTGG AAGGTGGATA ACGCCCTCCA ATCGGGTAAC TCCCAGGAGA
551 GTGTCACAGA GCAGGACAGC AAGGACAGCA CCTACAGCCT CAGCAGCACC
601 CTGACGCTGA GCAAAGCAGA CTACGAGAAA CACAAAGTCT ACGCCTGCGA
651 AGTCACCCAT CAGGGCCTGA GCTCGCCCGT CACAAAGAGC TTCAACAGGG
701 GAGAGTGTTA GTGA SEQ ID NO. 20
Sequência proteica prevista para a cadeia leve capa de 6.34.2
1 mdmrvpaqll qllllwlrga rcDIQMTQSP SSLSASVGDR VTITCRASQN 51 ISSYLNWFQQ KPGKAPKLLI YAASGLKRGV PSRFSGSGSG TDFTLTIRTIi 101 QPDDFATYSC HQSYSLPFTF GPGTKVDIKR TVAAPSVFIF PPSDEQLKSG 151 TASWCLLNN FYPREAKVQW KVDNALQSGN SQESVTBQDS KDSTYSLSST
201 LTLSKADYEK HKVYACEVTH QGLSSPVTKS FNRGEC 209 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 21
Sequência de nucleótidos da cadeia pesada de 6.67.1
1 atgaaacacc tgtggttctt cctcctgctg gtggcaqctc ccagatgqqt 51 cetgtccCAG GTGCAGCTGC AGGAGTCGGG CCCAGGACTG GTGAAOCCTT 101 CGGAGACCCT GTCCCTCACC TGCACTGTCT CTGGTGACTC CATCAGTAGT 151 AACTATTGGA GCTGGATCCG GCAGCCCGCC GGGAAGGGAC TGGAGTGGAT 201 TGGGCGTATC TATACCAGTG GGGGCACCAA CTCCAACCCC TCCCTCAGGG 251 GTCGAGTCAC CATTTTAGCA GACACGTCCA AGAACCAGTT CTCTCTGAAA 301 CTGAGTTCTG TGACCGCCGC GGACACGGCC GTGTATTACT GTGCGAGAGA 351 TCGTATTACT ATAATTCGGG GACTTATTCC ATCCTTCTTT GACTACTGGG 401 GCCAGGGAAC CCTGGTCACC GTCTCCTCAG CTTCCACCAA GGGCCCATCC 451 GTCTTCCCCC TGGCGCCCTG CTCCAGGAGC ACCTCCGAGA GCACAGCCGC 501 CCTGGGCTGC CTGGTCAAGG ACTACTTCCC CGAACCGGTG ACGGTGTCGT 551 GGAACTCAGG CGCCCTGACC AGCGGCGTGC ACACCTTCCC GGCTGTCCTA 601 CAGTCCTÇAG GACTCTACTC CCTCAGCAGC GTGGTGACCG TGCCCTCCAG 651 CAGCTTGGGC ACGAAGACCT ACACCTGCAA CGTAGATCAC AAGCCCAGCA 701 ACACCAAGGT GGACAAGAGA GTTGAGTCCA AATATGGTCC CCCATGCCCA 751 TCATGCCCAG CACCTGAGTT CCTGGGGGGA CCATCAGTCT TCCTGTTCCC 801 CCCAAAACCC AAGGACACTC TCATGATCTC CCGGACCCCT GAGGTCACGT 851 GCGTGGTGGT GGACGTGAGC CAGGAAGACC CCGAGGTCCA GTTCAACTGG 901 TACGTGGATG GCGTGGAGGT GCATAATGCC AAGACAAAGC CGCGGGAGGA 951 GCAGTTCAAC AGCACGTACC GTGTGGTCAG CGTCCTCACC GTCCTGCACC 1001 AGGACTGGCT GAACGGCAAG GAGTACAAGT GCAAGGTCTC CAACAAAGGC 1051 CTCCCGTCCT CCATCGAGAA AACCATCTCC AAAQCCAAAG GGCAGCCCCG 1101 AG AG C CACAG GTGTACACCC TGCCCCCATC CCAGGAGGAG ATGACCAAGA
1151 ACCAGGTCAG CCTGACCTGC CTGGTCAAAG GCTTCTACCC CAGCGACATC 1201 GCCGTGGAGT GGGAGAGCAA TGGGCAGCCG GAGAACAACT ACAAGACCAC 1251 GCCTCCCGTG CTGGACTCCG ACOGCTCCTT CTTCCTCTAC AGCAGGCTAA 1301 CCGTGGACAA GAGCAGGTGG CAGGAGGGGA ATGTCTTCTC ATGCTCCGTG 1351 ATGCATOAGG CTCTGCACAA CCACTACACA CAGAAGAGCC TCTCCCTGTC 1401 TCTGGGTAAA TGA SEQ ID NO. 22
Sequência proteica prevista para a cadeia pesada de 6.67.1
1 mkhlwff111 vaaprwvlsQ VQLQESGPGL VKPSETLSLT CTVSGDSISS
51 NYWSWIRQPA GKGLEW1GRI YTSGGTNSNP SLRGRVTILA DTSKNQFSLK 101 LSSVTAADTA VYYCARDRIT IIRGLIPSFF DYWGQGTLVT VSSASTRGPS 151 VFPLAPCSRS TSESTAALGC LVKDYFPEPV TVSWNSGAliT SGVHTFPAVL 201 QSSGLYSLSS WTVPSSSLG TKTYTCNVDH KPSNTKVDKR VESKYGPPCP 251 SCPAPBFLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVWDVS QEDPEVQFNW 301 YVDGVBVHNA KTKPREEQFN STYRWSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKG 351 LPSSIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSQEE MTKMQVSLTC LVKGFYPSDI 401 AVEWESNGQP ENNYKTTPPV XjDSDGSFFLY SRIiTVDKSRW QEGNVFSCSV 451 MHEALHNHYT QKSLSLSLGK 210 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 23
Sequência de nucleótidos da cadeia leve capa de 6.67.1 1 atggtgttgc agacccagqt cttcatttct ctqttgctct ggatctctgg
51 tqcctacqqq GACATCGTGA TGACCCAGTC TCCAGACTCC CTGGCTGTGT
101 CTCTGGGCGA GAGGGCCACC ATCAACTGCA AGTCCAGCCA GAGTGTTTTA 151 TACAGCTCCA ACAATAAGAC CTACTTAGCT TGGTACCAAC AGAAACCAAG 201 ACAGCCTCCT AAATTGCTCA TTTACTGGGC ATCTATACGG GAATATGGGG 251 TCCCTGACCG ATTCAGTGGC AGCGGGTCTG GGACAGATTT CACTCTCACC 301 ATCAGCAGCC TGCAGGCTGA AGATGTGGCA GTTTATTTCT GTCAACAATA 351 TTATAGTATT CCTCCCCTCA CTTTCGGCGG AGGGACCAAG GTGGAGATCA 401 AACGAACTGT GGCTGCACCA TCTGTCTTCA TCTTCCCGCC ATCTGATGAG 451 CAGTTGAAAT CTGGAACTGC CTCTGTTGTG TGCCTGCTGA ATAACTTCTA SOI TCCCAGAGAG GCCAAAGTAC AGTGGAAGGT GGATAACGCC CTCCAATCGG 551 GTAACTCCCA GGAGAGTGTC ACAGAGCAGG ACAGCAAGGA CAGCACCTAC
601 AGCCTCAGCA GCACCCTGAC GCTGAGCAAA GCAGACTACG AGAAACACAA
651 AGTCTACGCC TGCGAAGTCA CCCATCAGGG CCTGAGCTCG CCCGTCACAA
701 AGAGCTTCAA CAGGGGAGAG TGTTAGTGA SEQ ID NO. 24
Sequência proteica prevista para a cadeia leve capa 6.67.1
1 mvlqtqvfis lllwiaqavq DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSVL
51 YSSNNKTYliA WYQQKPRQPP KLLIYWASIR EYGVPDRFSG SGSGTDFTLT 101 ISSLQAEOVA VYFCQQYYSI PPLTFGGGTK VEIKRTVAAP SVFIFPPSDE 151 QIiKSGTASW CJjLNKFYPHE AKVQWKVDHA LQSGNSQESV TEQDSKDSTY 201 SIíSSTLTLSK ADYEKHKVYA CEVTHQGLSS PVTKSFNRGE C 211 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 25
Sequência de nucleótidos da cadeia pesada de 6.73.2
1 atqqaqtttq qqctqaqctq qctttttctt gtqqctattt taaaaqqtqt 51 ccaqtqtGAO QTGCAGCTGT TGGAGTCTGG GGGAGACTTG GTCCAGCCTG 101 GGGGGTCCCT GAGACTCTCC TGTGCAGCCT CTGGATTCAC CTTTAGAAGT 151 TATGCCATGA ACTGGGTCCG ACAGGCTCCA GGGAAGGGGC TGGAGTGGGT 201 CTCAGTTATT AGTGGTCGTG GTGGTACTAC ATACTACGCA GACTCCGTGA 251 AGGGCCGGTT CACCATCTCC AGAGACAATT CCAAGAACAC GCTGTATCTG 301 CAAATGAACA GCCTGAGAGC CGAGGACGCO GCCGTATATT ACTGTGCGAA 351 GATAGCAGTG GCTGGAGAGG GGCTCTACTA CTACTACGGT ATGGACGTCT 401 GGGGCCAAGG GACCACGGTC ACCGTCTCCT CAGCTTCCAC CAAGGGCCCA 451 TCCGTCTTCC CCCTGGCGCC CTGCTCCAGG AGCACCTCCG AGAACACAGC 501 CGCCCTGGGC TGCCTGGTCA AGGACTACTT CCCCGAACCG GTGACGGTGT 551 CGTGGAACTC AGGCGCCCTG ACCAGCGGCG TGCACACCTT CCCGGCTGTC 601 CTACAGTCCT CAGGACTCTA CTCCCTCAGC AGCGTGGTGA COGTGCCCTC 651 TAGCAGCTTG GGCACGAAGA CCTACACCTG CAACGTAGAT CACAAGCCCA 701 GCAACACCAA GGTGGACAAG AGAGTTGAGT CCAAATATGG TCCCCCATGC 751 CCATCATGCC CAGCACCTGA GTTCCTGGGG GGACCATCAG TCTTCCTGTT 801 CCCCCCAAAA CCCAAGGACA CTCTCATGAT CTCCCGGACC CCTGAGGTCA 851 CGTGCGTGGT GGTGGACGTG AGCCAGGAAG ACCCCGAGGT CCAGTTCAAC 901 TGGTACGTGG ATGGCGTGGA GGTGCATAAT GCCAAGACAA AGCCGCGGGA 951 GGAGCAGTTC AACAGCACGT ACCGTGTGGT CAGCGTCCTC ACCGTCCTGC 1001 ACCAGGACTG GCTGAACGGC AAGGAGTACA AGTGCAAGGT CTCCAACAAA 1051 GGCCTCCCGT CCTCCATCGA GAAAACCATC TCCAAAGCCA AAGGGCAGCC 1101 CCGAGAGCCA CAGGTGTACA CCCTGCCCCC ATCCCAGGAG GAGATGACCA 1151 AGAACCAGGT CAGCCTGACC TGCCTGGTCA AAGGCTTCTA CCCCAGCGAC 12 01 ATCGCCGTGG AGTGGGAGAG CAATGGGCAG CCGGAGAACA ACTACAAGAC 1251 CACGCCTCCC GTGCTGGACT COGACGGCTC CTTCTTCCTC TACAGCAGGC
1301 TAACCGTGGA CAAGAGCAGG TGGCAGGAGG GGAATGTCTT CTCATGCTCC
1351 GTGATGCATG AGGCTCTGCA CAACCACTAC ACACAGAAGA GCCTCTCCCT
1401 GTCTCTGGGT AAATGATAG SEQ ID NO. 26
Sequência proteica prevista para a cadeia pesada de 6.73.2
1 mefqlawlfl vailkqvqcB VQLLESGGDL VQPGGSLRLS CAASGFTPRS 51 YAMNWVRQAP GKGLEMVSVI SGRGGTTYYA DSVKGRPTIS RDNSKNTLYL 101 QMNSLRAEDA AVYYCAKIAV AGEGLYYYYG MDVWGQGTTV TVSSASTKGP 151 SVFPLAPCSR STSENTAAIiG CLVKDYFPBP VTVSWNSGAL TSGVHTFPAV 201 LQSSGLYSLS SWTVPSSSL GTKTYTCNVD HKPSNTKVDK RVESKYGPPC 251 PSCPAPEFIiG GPSVFLFPPK PKDTLMISRT PBVTCVWDV SQBDPEVQFN 301 WYVDGVEVHN AKTKPREEQF NSTYRWSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK 3S1 GLPSSIEKTX SKAKGQPREP QVYTLPPSQE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD 401 IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFPL YSRLTVDKSR WQEONVFSCS
4 51 VMHEALHNHY TQKSLSLSLG K 212 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 27
Sequência de nucleótidos da cadeia leve capa de 6.73.2
1 atggacatga gggtccccgc tcaqctcctg gqqctcctgc tactctggct 51 ccgaggtqcc agatgtOACA TCCAGATGAC CCAGTCTCCA TCCTCCCTGT 101 CTGCATCTGT AGGTGACAGA GTCACCTTCA CTTGCCGGGC AAGTCAGAAC 151 ATTACCAACT ATTTAAATTG GTATCAGCAG AAACCAGGGA AGGCCCCTAA 201 GCTCCTGATC TATGCTGCGT CCAGTTTGCC AAGAGGGGTC CCATCAAGGT 251 TCCGTGGCAG TGGATCTGGG ACAGATTTCA CTCTCACCAT CAGCAGTCTG 301 CAACCTGAAG ATTTTGCAAC TTACTACTGT CAACAGAGTT ACAGTAATCC 351 TCCGGAGTGC GGTTTTGGCC AGGGGACCAC GCTGGATATC AAACGAACTG 401 TGGCTGCACC ATCTGTCTTC ATCTTCCCGC CATCTGATGA GCAGTTGAAA 451 TCTGGAACTG CCTCTGTTGT GTGCCTGCTG AATAACTTCT ATCCCAGAGA 501 GGCCAAAGTA CAGTGGAAGG TGGATAACGC CCTCCAATCG GGTAACTCCC 551 AGGAGAGTGT CACAGAGCAG GACAGCAAGG ACAGCACCTA CAGCCTCAGC 601 AGCACCCTGA CGCTGAGCAA AGCAGACTAC GAGAAACACA AAGTCTACGC 651 CTGCGAAGTC ACCCATCAGG GCCTGAGCTC GCCCGTCACA AAGAGCTTCA 701 ACAGGGGAGA GTGTTAGTGA SEQ ID NO. 28
Sequência proteica prevista para a cadeia leve capa 6.73.2
1 mdmrvpaqll gllllwlrga rcDIQMTQSP SSIiSASVGDR VTFTCRASQN 51 ITNYLNWYQQ KPGKAPKLLI YAASSLPRGV PSRFRGSGSG TDPTLTISSL 101 QPEDPATYYC QQSYSNPPEC GFGQGTTLDI KRTVAAPSVP IFPPSDBQLK 151 SGTASWCLXi NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS
201 STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC 213 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 29
Sequência de nucleótidos da cadeia pesada de 6.77.1
1 atqqaactgg ggctccgctg gqttttcctt gttgctattt taqaaggtqt 51 CCaqtqtQAG GTGCAGCTGG TGGAGTCTGG GGGAGGCCTG GTCAAGCCTG 101 GGGGGTCCCT GAGACTCTCC TGTGCAGCCT CTGGATTCAC CTTCAGTAGC 151 TATAGCATGA ACTGGGTCCG CCAGGCTCCA GGGAAGGGGC TGGAGTGGGT 201 CTCATCCATT AGTAGTAGTA GTAGTTACAT ATACTACGCA GACTCAGTGA 251 AGGGCCGATT CACCATCTCC AGAGACAACG CCAAGAACTC ACTGTATCTG 301 CAAATGAACA GCCTGAGAGC CGAGGACACG GCTGTGTATT ACTGTGCGAG 351 AGATGGGTAT AGCAGTGGCT GGTCCTACTA CTACTACTAC GGTATGGACG 401 TCTGGGGCCA AGGGACCACG GTCACCGTCT CCTCAGCTTC CACCAAGGGC 451 CCATCCGTCT TCCCCCTGGC GCCCTGCTCC AGGAGCACCT CCGAQAGCAC 501 AGCCGCCCTG GGCTGCCTGG TCAAGGACTA CTTCCCCGAA CCGGTGACGG 551 TGTCGTGGAA CTCAGGCGCC CTGACCAGCG GCGTGCACAC CTTCCCGGCT 601 GTCCTACAGT CCTCAGGACT CTACTCCCTC AGCAGCGTGG TGACCGTGCC 651 CTCCAGCAGC TTGGGCACGA AGACCTACAC CTGCAACGTA GATCACAAGC 701 CCAGCAACAC CAAGGTGGAC AAGAGAGTTG AGTCCAAATA TGGTCCCCCA 751 TGCCCATCAT GCCCAGCACC TGAGTTCCTG GGGGGACCAT CAGTCTTCCT 801 GTTCCCCCCA AAACCCAAGG ACACTCTCAT GATCTCCCGG ACCCCTGAGG 851 TCACGTGCGT GGTGGTGGAC GTGAGCCAGG AAGACCCCGA GGTCCAGTTC 901 AACTGGTACG TGGATGGCGT GGAGGTGCAT AATGCCAAGA CAAAGCCGCG 951 GGAGGAGGAS TTCAACAGCA CGTACCGTGT GGTCAGCGTC CTCACCGTCC 1001 TGCACCAGGA CTGGCTGAAC GGCAAGGAGT ACAAGTGCAA GGTCTCCAAC 1051 AAAGGCCTCC CGTCCTCCAT CGAGAAAACC ATCTCCAAAG CCAAAGGGCA 1101 GCCCCGAGAG CCACAGGTGT ACACCCTGCC CCCATCCCAG GAGGAGATGA 1151 CCAAGAACCA GGTCAGCCTG ACCTGCCTGG TCAAAGGCTT CTACCCCAGC 1201 GACATCGCCG TGGAGTGGGA GAGCAATGGG CAGCCGGAGA ACAACTACAA 1251 GACCACGCCT CCCGTGCTGG ACTCCGACGG CTCCTTCTTC CTCTACAGCA 1301 GGCTAACCGT GGACAAGAGC AGGTGGCAGG AGGGGAATGT CTTTTCACGC 1351 TCCGTGATGC ATGAGGCTCT GCACAACCAC TACACACAGA AGAGCCTCTC 1401 CCTGTCTCTG GGTAAATGAT AGGAATTCTG ATGA SEQ ID NO. 30
Sequência proteica prevista para a cadeia pesada de 6.77.1
1 melglrwyfl vallegvgcE VQLVESGGGL VKPGGSLRLS CAASGFTPSS
51 YSMNWVRQAP GKGLEWVSSI SSSSSYIYYA DSVKGRFTIS RDNAKNSLYL
101 QMNSLRABDT AVYYCARDGY SSGWSYYYYY GMDVWGQGTT VTVSSASTKG
151 PSVFPLAPCS RSTSESTAAL GCLVKDYFPE PVTVSWNSGA LTSGVHTFPA 201 VIiQSSGIjYSL sswtvpsss lgtktytcnv dhkpsntkvd krveskygpp
251 CPSCPAPEFL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVWD VSQEDPEVQF
301 NWYVDGVEVH NAKTKPRBEQ FNSTYRWSV IiTVLHQDWLN GKEYKCKVSN
351 K3LPSSIBKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSQ EEMTKNQVSL TCLVKGFYPS
401 DXAVEWESNG QPENNYKTTP PVUDSDGSFF LYSRLTVDKS RWQEGNVFSR
451 SVMHEALHNH YTQKSLSLSL GK 214 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 31
Sequência de nucleótidos da cadeia leve capa de 6.77.1 1 atgaqgctcc ctgctcagct cctggggctg ctaatgctct qqatacctgg
SI atccagtgca GATATTGTGA TGACCCAGAC TCCACTCTCT CTGTCCGTCA
101 CTCCTGGACA GCCGGCCTCC ATCTCCTGCA ACTCTAGTCA GAGCCTCCTG
151 CTTAGTGATG GAAAGACCTA TTTGAATTGG TACCTGCAGA AGCCCGGCCA
201 GCCTCCACAG CTCCTGATCT ATGAAGTTTC CAÁCCGGTTC TCTGGAGTGC
251 CAGACAGGTT CAGTGGCAGC GGGTCAGGGA CAGATTTCAC ACTGAAAATC
301 AGCCGGGTGG AGGCTGAGGA TGTTGGGGTT TATTCCTGCA TGCAAAGTAT
351 ACAGCTTATG TGCAGTTTTG GCCAGGGGAC CAAGCTGGAG ATCAAACGAA
401 CTGTGGCTGC ACCATCTGTC TTCATCTTCC CGCCATCTGA TGAGCAGTTG
451 AAATCTGGAA CTGCCTCTGT TGTGTGCCTG CTGAATAACT TCTATCCCAG
501 AGAGGCCAAA GTACAGTGGA AGGTGGATAA CGCCCTCCAA TCGGGTAACT
551 CCCAGGAGAG TGTCACAGAG CAGGACAGCA AGGACAGCAC CTACAGCCTC
601 AGCAGCACCC TGACGCTGAG CAAAGCAGAC TACGAGAAAC ACAAAGTCTA
651 CGCCTGCGAA GTCACCCATC AGGGCCTGAG CTCGCCCGTC ACAAAGAGCT
701 TCAACAGGGG AGAGTGTTAG TGA SEQ ID NO. 32
Sequência proteica prevista para a cadeia leve capa 6.77.1
1 mrlpaqllgl lmlwipgasa DIVMTQTPLS LSVTPGQPAS ISCNSSQSLL 51 LSDGKTYLNW YLQKPGQPPQ LLIYEVSNRF SGVPDRPSGS GSGTDFTLKI 101 SRVEAEDVGV YSCMQSIQLM CSFGQGTKBE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQI» 151 KSGTASWCI. LNNFYPRKAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTB QDSKDSTYSL
201 SSTLTLSKAD YBKHKVYACE VTHQGLSSPV TKSFNRGEC 215 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 33
Srquência de nucleótidos da cadeia pesada de 7.16.6
1 atgqactqga cctqgagcat ccttttcttg gtgqcagcaq caacaggtqc 51 eçaçtçeCAG GTTCAGCTGG TGCAGTCTGG AGCTGAGGTG AAGAAGCCTG 101 GGGCCTCAGT GAAGGTCTCC TGCAAGGCTT CTGGTTACAC CTTTACCAGC 151 TATGGTATCA ACTGGGTGCG ACAGGCCCCT GGACAAGGGC TTGAGTGGAT 201 GGGATGGATC AGCGTTTACA GTGGTAACAC AAACTATGCA CAGAAGGTCC 251 AGGGCAGAGT CACCATGACC GCAGACACAT CCACGAGCAC AGCCTACATG 301 GACCTGAGGA GCCTGAGATC TGACGACACG GCCGTGTATT ACTGTGCGAG 351 AGAGGGTAGC AGCTCGTCCG GAGACTACTA TTACGGTATG GACGTCTGGG 401 GCCAAGGGAC CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCTCCACCAA GGGCCCATCG 451. GTCTTCCCCC TGGCOCCCTG CTCCAGGAGC ACCTCCGAGA GCACAGCGGC 501 CCTGGGCTGC CTGGTCAAGG ACTACTTCCC CGAACCGGTG ACGGTGTCGT 551 GGAACTCAGG CGCTCTGACC AGCGGCGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTA 601 CAGTCCTCAG GACTCTACTC CCTCAGCAGC GTGGTGACCG TGCCCTCCAG 651 CAACTTCGGC ACCCAGACCT ACACCTGCAA CGTAGATCAC AAGCCCAGCA 701 ACACCAAGGT GGACAAGACA GTTGAGCGCA AATGTTGTGT CGAGTGCCCA 751 CCGTGCCCAG CACCACCTGT GGGAGGACCG TCAGTCTTCC TCTTCCCCCC 801 AAAACCCAAG GACACCCTCA TGATCTCCCG GACCCCTGAG GTCACGTGCG 851 TGGTGGTGGA CGTGAGCCAC GAAGACCCCG AGGTCCAGTT CAACTGGTAC 901 GTQGACGGCG TGGAGGTGCA TAATGCCAAG ACAAAGCCAC GGGAGGAGCA 951 GTTCAACAGC ACGTTCCGTG TGGTCAGCGT CCTCACCGTT GTGCACCAGG 1001 ACTGGCTGAA CGGCAAGGAG TACAAGTGCA AGGTCTCCAA CAAAGGCCTC 1051 CCAGCCCCCA TCGAGAAAAC CATCTCCAAA ACCAAAGGGC AGCCCCGAGA 1101 ACCACAGGTG TACACCCTGC CCCCATCCCG GGAGGAGATG ACCAAGAACC 1151 AGGTCAGCCT GACCTGCCTG GTCAAAGGCT TCTACCCCAG CGACATCGCC 1201 GTGGAGTGGG AGAGCAATGG GCAGCCGGAG AACAACTACA AGACCACACC 1251 TCCCATGCTG GACTCCGACG GCTCCTTCTT CCTCTACAGC AAGCTCACCG 1301 TGGACAAGAG CAGGTGGCAG CAGGGGAACG TCTTCTCATG CTCCQTGATG 1351 CATGAGGCTC TGCACAACCA CTACACGCAG AAGAGCCTCT CCCTGTCTCC 1401 GGGTAAATGA SEQ ID NO. 34
Sequência proteica prevista para a cadeia pesada de 7.16.6 1 mdwtwsilfl vaaatqahaQ VQLVQSGAEV KKPGASVKVS CKASGYTPTS 51 YGINWVRQAP GQGLEWMGWI SVYSGNTNYA QKVQGRVTMT ADTSTSTAYM 101 DLRSLRSDDT AVYYCAREGS SSSGDYYYGM DVWGQQTTVT VSSASTKGPS 151 VFPLAPCSRS TSESTAALGC LVKDYFPEPV TVSWNSGALT SGVHTFPAVL 201 QSSGLYSLSS WTVPSSNPG TQTYTCNVDH KPSNTKVDKT VERKCCVECP 251 PCPAPPVAGP SVFLPPPKPK DTLMISRTPE VTCVWDVSH BDPBVQPNWY 301 VDGVEVHNAK TKPREEQFNS TFRWSVliTV VHQDWLNGKE YKCKVSNKGL·
351 PAPIEKT1SK TRGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGPYPSD1A
401 VEWESNGQPE NNYKTTPPML DSDGSFPLYS KLTVDK5RHQ QGNVFSCSVM
451 HEALHNHYTQ KSLSLSPGK 216 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 35
Sequência de nucleótidos da cadeia leve capa de 7.16.6 1 atgaqqctcc ctgctcagct cctqgggctg ctaatgctct ggatacctgg
51 atccaqtqca GATATTGTGA TGACCCAGAC TCCACTCTCT CTGTCCGTCA
101 CCCCTGGACA GCCGGCCTCC ATCTCCTGCA AGTCTAGTCA GAGCCTCCTG
151 CATACTGATG GAACGACCTA TTTGTATTGG TACCTGCAGA AGCCAGGCCA
201 GCCTCCACAG CTCCTGATCT ATGAAGTTTC CAACCGGTTC TCTGGAGTGC
251 CAGATAGGTT CAGTGGCAGC GGGTCAGGGA CAGATTTCAC ACTGAAAATC
301 AGCCGGGTGG AGGCTGAGGA TGTTGGGATT TATTACTGCA TGCAAAATAT
351 ACAGCTTCCG TGGACGTTCG GCCAAGGGAC CAAGGTGGAA ATCAAACGAA
401 CTGTGGCTGC ACCATCTGTC TTCATCTTCC CGCCATCTGA TGAGCAGTTG
451 AAATCTGGAA CTGCCTCTGT TGTGTGCCTG CTGAATAACT TCTATCCCAG
501 AGAGGCCAAA GTACAGTGGA AGGTGGATAA CGCCCTCCAA TCGGGTAACT
551 CCCAGGAOAG TGTCACAGAG CAGGACAGCA AGGACAGCAC CTACAGCCTC
601 AGCAGCACCC TGACGCTGAG CAAAGCAGAC TACGAGAAAC ACAAAGTCTA
651 CGCCTGCGAA GTCACCCATC AGGGCCTGAG CTCGCCCGTC ACAAAGAGCT
701 TCAACAGGGG AGAGTGTTAG TGA SEQ ID NO. 36
Sequência proteica prevista para a cadeia leve capa 7.16.6
1 mrlpaqllql lmlwlpgssa DIVMTQTPLS LSVTPGQPAS XSCKSSQSLL 51 HTDGTTYLYW YLQKPGQPPQ LLIYEVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI 101 SRVEAEDVGI YYCMQNIQLP WTFGQGTKVE IKRTVAAPSV F1FPPSDEQL 151 KSGTASWCL LNNFYPREAK VQWKVDKALQ SGNSQBSVTE QDSKDSTYSL
201 SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV TKSFNRGEC 217 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 37
Sequência de nucleótidos da cadeia pesada de 7.20.5
1 atqaaacacc tgtgqttctt cctcctqctq qtqgcaqctc ccaqatqqgt 51 cctqtccCAG GTGCAGCTGC AGGAGTCGGG CCCAGGACTG GTGAAGCCTT 101 CGGAGACCCT GTCCCTCACC TGCACTGTCT CTGGTAGCTC CATCAGTAGT 151 TACCACTGGA ACTGGATCCG GCAGCCCGCC GGGAAGGGAC TGGAGTGGAT 201 TGGGCGTATC TATACCAGTG GGAGCACCAA CTACAACCCC TCCCTCAAGA 251 GTCGAGTCAC CATGTCACTA GACACGTCCA AGAACCAGTT CTCCCTGAAG 301 CTGAGCTCTG TGACCGCCGC GGACACGGCC GTGTATTACT GTGCGAGAGA 351 GGGGGTCAGG TATTACTATG CTTCGGGGAG TTATTACTAC GGTCTGGACG 401 TCTGGGGCCA AGGGACCACG GTCACCGTCT CCTCAGCCTC CACCAAGGGC 451 CCATCGGTCT TCCCCCTGGC GCCCTGCTCC AGGAGCACCT CCGAGAGCAC 501 AGCGGCCCTG GGCTGCCTGG TCAAGGACTA CTTCCCOGAA CCGGTGACGG 551 TGTCGTGGAA CTCAGGCGCT CTGACCAGCG GCGTGCACAC CTTCCCAGCT 601 GTCCTACAGT CCTCAGGACT CTACTCCCTC AGCAGCGTGG TGACCGTGCC 651 CTCCAGCAAC TTCGGCACCC AGACCTACAC CTGCAACGTA GATCACAAGC 701 CCAGCAACAC CAAGGTGGAC AAGACAGTTG AGCGCAAATG TTGTGTCGAG 751 TGCCCACCGT GCCCAGCACC ACCTGTGGCA GGACCGTCAG TCTTCCTCTT 801 CCCCCCAAAA CCCAAGGACA CCCTCATGAT CTCCCGGACC CCTGAGGTCA 851 CGTGCGTGGT GGTGGACGTG AGCCACGAAG ACCCCGAGGT CCAGTTCAAC 901 TGGTACGTGG ACGGCGTGGA GGTGCATAAT GCCAAGACAA AGCCACGGGA 951 GGAGCAGTTC AACAGCACGT TCCGTGTGGT CAGCGTCCTC ACCGTTGTGC 1001 ACCAGGACTG GCTGAACGGC AAGGAGTACA AGTGCAAGGT CTCCAACAAA 1051 GGCCTCCCAG CCCCCATCGA GAAAACCATC TCCAAAACCA AAGGGCAGCC 1101 CCGAGAACCA CAGGTGTACA CCCTGCCCCC ATCCCGGGAG GAGATGACCA 1151 AGAACCAGGT CAGCCTGACC TGCCTGGTCA AAGGCTTCTA CCCCAGCGAC 1201 ATCGCCGTGG AGTGGGAGAG CAATGGGCAG CCGGAGAACA ACTACAAGAC 1251 CACACCTCCC ATGCTGGACT CCGACGGCTC CTTCTTCCTC TACAGCAAGC
1301 TCACCGTGGA CAAGAGCAGG TGGCAGCAGG GGAACGTCTT CTCATGCTCC
1351 GTGATGCATG AGGCTCTGCA CAACCACTAC ACGCAGAAGA GCCTCTCCCT
1401 GTCTCCGGGT AAATGA SEQ ID NO. 38
Sequência proteica prevista para a cadeia pesada de 7.20.5
1 mkhlwfflll vaaprwvlsQ VQLQESGPGIi VKPSETLSLT CTVSGSSISS
51 YHWNWIRQPA GKGLEWIGRI YTSGSTNYNP SLKSRVTMSL DTSKNQFSLK
101 LSSVTAADTA VYYCAREGVR YYYASGSYYY GLDVWGQGTT VTVSSASTKG
151 PSVFPLAPCS RSTSESTAAL GCLVKDYFPE PVTVSWNSGA LTSGVHTFPA
201 VLQSSGLYSL SSWTVPSSN FGTQTYTCNV DHKPSNTKVD KTVERKCCVE
251 CPPCPAPPVA GPSVFLFPPK PKDTLiMISRT PEVTCVWDV SHEDPEVQFN
301 WYVDGVEVHN AKTKPREEQF NSTFRWSVL TWHQDWLNG KEYKCKVSNK
351 GLPAPIEKTI SfCTKGQPREP QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD
401 IAVEWESNGQ PENNYKTTPP MUDSDGSFFL YSKLTVDKSR HQQGNVFSCS
451 VMHEALHNHY TQKSLSLSPG K 218 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 39
Sequência de nucleótidos da cadeia leve capa de 7.20.5
1 atgaggctcc ctgctcaqct cctggggctg ctaatgctct gggtctctgg 51 atccaqtqgg GATATTGTGA TGACTCAGTC TCCACTCTCC CTGCCCGTCA 101 CCCCTGGAGA GCCGGCCTCC ATCTCCTGCA GGTCTAGTCA GAGCCTCCTG 1S1 CATGGTAATG GATACAACTA TTTGGATTGG TACCTGCAGA AGCCAGGGCA 201 GTCTCCACAG CTCCTGATCT ATTTGGGTTC TAATCGGGCC TCCGGGGTCC 251 CTGACAGGTT CAGTGGCAGT GGATCAGGCA CAGATTTTAC ACTGAAAATC 301 AGCAGAGTGG AGGCTGAGGA TGTTGGGGTT TATTACTGCA TGCAAGCTCT 351 ACAAACTCTC ACTTTCGGCG GAGGGACCAA GGTGGAGATC AAACGAACTG 401 TGGCTGCACC ATCTGTCTTC ATCTTCCCGC CATCTGATGA GCAGTTGAAA 451 TCTGGAACTG CCTCTGTTGT GTGCCTGCTG AATAACTTCT ATCCCAGAGA 501 GGCCAAAGTA CAGTGGAAGG TGGATAACGC CCTCCAATCG GGTAACTCCC 551 AGGAGAGTGT CACAGAGCAG GACAGCAAGG ACAGCACCTA CAGCCTCAGC 601 AGCACCCTGA CGCTGAGCAA AGCAGACTAC GAGAAACACA AAGTCTACGC 651 CTGCGAAGTC ACCCATCAGG GCCTGAGCTC GCCCGTCACA AAGAGCTTCA 701 ACAGGGGAGA GTGTTAGTGA SEQ ID NO. 40
Sequência proteica prevista para ca cadeia leve capa 7.20.5
1 mrlpagllql lmlwvsqBSq DIVMTQSPLS LPVTPGEPAS ISCRSSQSI.Ii 51 HGNGYNYLDW YLQKPGQSPQ LLIYLGSNRA SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI 101 SRVBAEDVGV YYCMQALQTL TFGGGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK 151 SGTASWCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS
201 STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSFVT KSFNRGBC 219 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 41
Sequência de nucleótidos da cadeia pesada de 7.26.4
1 atqqactgga cctggagcat ccttttcttg qtqgcagcaq caacaggtgc 51 ecactCCCAG GTTCAGCTGG TGCAGTCTGG AGCTGAGGTG AAGAAGCCTG 101 GGGCCTCAGT GAAGGTCTCC TGCGAGGCTT CTGGTTACAC CTTTACCAGC 151 TATGGTATCG ACTGGGTGCG ACAGGCCCCT GGACAAGGGC TTGAGTGGAT 201 GGGATGGATC AGCGTTTACA GTGGTAACAC AAACTATGCA CAGAAGCTCC 251 AGGGCAGAGT CACCATGTCC ACAGACACAT CCACGAGCAC AGCCTACATG 301 GAGCTGAGGA GCCTGAGATC TGACGACACG GCCGTGTATT ACTGTGCGAG 351 AGAGGGTAGC AGCTCGTCCG GAGACTACTA CTACGGTATG GACGTCTGGG 401 GCCAAGQGAC CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCTCCACCAA GGGCCCATCG 451 GTCTTCCCCC TGGCGCCCTG CTCCAGGAGC ACCTCCGAGA GCACAGCGGC 501 CCTGGGCTGC CTGGTCAAGG ACTACTTCCC CGAACCGGTG ACGGTGTCGT 551 GGAACTCAGG CGCTCTGACC AGCGGCGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTA 601 CAGTCCTCAG GACTCTACTC CCTCAGCAGC GTGGTGACCG TGCCCTCCAG 651 CAACTTCGGC ACCCAGACCT ACACCTGCAA CGTAGATCAC AAGCCCAGCA 701 ACACCAAGGT GGACAAGACA GTTGAGCGCA AATGTTGTGT CGAGTGCCCA 751 CCGTGCCCAG CACCACCTGT GGCAGGACCG TCAGTCTTCC TCTTCCCCCC 801 AAAACCCAAG GACACCCTCA TGATCTCCCG GACCCCTGAG GTCACGTGCG 851 TGGTGGTGGA CGTGAGCCAC GAAGACCCCG AGGTCCAGTT CAACTGGTAC 901 GTQGACGGCG TGGAGGTGCA TAATGCCAAG ACAAAGCCAC GGGAGGAGCA 951 GTTCAACAGC ACGTTCGST3 TGGTCAGCGT CCTCACCGTT GTSCACCAGG 1001 ACTGGCTGAA CGGCAAGGAG TACAAGTGCA AGGTCTCCAA CAAAGGCCTC 1051 CCAGCCCCCA TTGAGAAAAC CATCTCCAAA ACCAAAGGGC AGCCCCGAGA 1101 ACCACAGGTG TACACCCTGC CCCCATCCCG GGAGGAGATG ACCAAGAACC 1151 AGGTCAGCCT GACCTGCCTG GTCAAAGGCT TCTACCCCAG CGACATCGCC 1201 GTGGAGTGGG AGAGCAATGG GCAGCCGGAG AACAACTACA AGACCACACC 1251 TCCCATGCTG GACTCCGACG GCTCCTTCTT CCTCTACAGC AAGCTCACCG 1301 TGGACAAGAG CAGGTGGCAG CAGGGGAACG TCTTCTCATG CTCCGTGATG 1351 CATGAGGCTC TGCACAACCA CTACACGCAG AAGAGCCTCT CCCTGTCTCC 1402 GGGTAAATGA SEQ ID NO. 42
Sequência proteica prevista para a cadeia pesada de 7.26.4 1 51 101 151 201 251 301 351 401 451
mdwtwsilfl vaaatgahsQ VQLVQSGABV YGIDWVRQAP GQGLEHMGWI SVYSGNTNYA ELRSLRSDDT AVYYCAREGS SSSGDYYYGM VFPLAPCSRS TSESTAALGC LVKDYFPEPV QSSGIiYSLSS WTVPSSNFG TQTYTCNVDH PCPAPPVAGP SVFLPPPKPK DTLMISRTPE VDGVEVHNAK TKPREEQFNS TFRWSVLTV PAPIEKTISK TKGQPRBPQV YTLPPSREEH VEWESNGQPB NHYKTTPPMIi DSDGSPFLYS HEALHKHYTQ KSLSLSPGK
KKPGASVKVS QKLQGRVTMS DVWGQGTTVT TVSWNSGALT KPSNTKVDKT VTCWVDVSH VHQDWLNGKE TKNQVSLTCL KbTVDKSRWQ
CEASGYTPTS TDTSTSTAYM VSSA5TKGPS SGVHTPPAVL· VBRKCCVECP EDPEVQFNWY YKCKVSNKGIi VKGFYPSDIA QGNVFSCSVM 220 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 43
Sequência de nucleótidos da cadeia leve capa de 7.26.4 1 atgaggctcc ctgctcagct cctggqqctq ctaatgctct gqatacctgq
51 atccagtgcq GATATTGTGA TGACCCAGAC TCCACTCTCT CTGTCCGTCA
101 CCCCTGGACA GCCGGCCTCC ATCTCCTGCA AGTCTAATCA GAGCCTCCTG
151 TATAGTGATG GAAAGACCTA TTTGTTTTGG TACCTGCAGA AGCCAGGCCA
201 GCCTCCACAG CTCCTGATCT ATGAAGTTTC CAACCGATTC TCTGGAGTGC
251 CAGATAGGTT CAGTGGCAGC GGGTCAGGGA CAGATTTCAC ACTGAAAATC
301 AGCCGGGTGG AGGCTGAGGA TGTTGGGGTT TATTACTGCA TGCAAAGTAT
351 ACAGCTTCCG TGGACGTTCG GCCAAGGGAC CAAGGTGGAA ATCAAACGAA
401 CTGTGGCTGC ACCATCTGTC TTCATCTTCC CGCCATCTGA TGAGCAGTTG
451 AAATCTGGAA CTGCCTCTGT TGTGTGCCTO CTGAATAACT TCTATCCCAG
501 AGAGGCCAAA GTACAGTGGA AGGTGGATAA CGCCCTCCAA TCGGGTAACT
551 CCCAGGAGAG TGTCACAGAG CAGGACAGCA AGGACAGCAC CTACAGCCTC
601 AGCAGCACCC TGACGCTGAG CAAAGCAGAC TACGAGAAAC ACAAAGTCTA
651 CGCCTGCGAA GTCACCCATC AGGGCCTGAG CTCGCCCGTC ACAAAGAGCT
701 TCAACAGGGG AGAGTGTTAG TGA SEQ ID NO. 44
Sequência proteica prevista para a cadeia leve capa 7.26.4
1 mrlpaqllql lmlwipqssa DIVMTQTPLS LSVTPGQPAS ISCKSNQSLL 51 YSDGKTYLFW YLQKPGQPPQ LLIYEVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI 101 SRVEABDVGV YYCTÍQSIQLP WTFGQGTKVE IKRTVAAPSV PIFPPSDEQIj 151 KSGTASWCL LiNNFYPREAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL
201 SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV TKSFNRGEC 221 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 45
Sequência de nucleótidos da cadeia pesada de 9.8.2
1 atggagtttg ggctgagctg qgttttcctc qttgctcttt taagaggtgt 51 ccagtgtCAO GTGCAGCTGG TGGAGTCTGG GGGAGGCGTG GTCCAGCCTG 101 GGAGGTCCCT gagactctcc TGTGCAGCGT ctggattcac cttcagtagc 151 TATGGCATGC ACTGGGTCCG CCAGGCTCCA GGCAAGGGGC TGGAGTGGGT 201 GGCAGTTATA TGGTATGATG GAAGTAATGA ATACTATGCA GACTCCGTGA 251 AGGGCCGATT CACCATCTCC AGAGACAATT CCAAGAACAC GCTGTATCTG 301 CAAATGAACA GCCTGAGAGC CGAGGACACG GCTGTGTATT ACTGTGCGAG 351 GGGGGCGTAC CACTTTGCCT ACTGGGGCCA GGGAACCCTG GTCACCGTCT 401 CCTCAGCTTC CACCAAGGGC CCATCCGTCT TCCCCCTGGC GCCCTGCTCC 451 AGGAGCACCT CCGAGAGCAC AGCCGCCCTG GGCTgCCTGG TcAAGGACTA 501 CTTCCCCGAA CCGGTGACGG TGTCGTGGAA CTCAGGCGCC CTGACCAGCG 551 GCGTGCACAC CTTCCCGGCT GTCCTACAGT CCTCAGGACT CTACTCCCTC 601 AGCAGCGTGG TGACGGTGCC CTCCAGCAGC TTGGGCACGA AGACCTACAC 651 CTGCAACGTA GATCACAAGC CCAGCAACAC CAAGGTGGAC AAGAGAGTTG 701 AGTCCAAATA TGGTCCCCCA TGCCCATCAT GCCCAGCACC TGAGTTCCTG 751 GGGGGACCAT CAGTCTTCCT GTTCCCCCCA AAACCCAAGG ACACTCTCAT 801 GATCTCCCGG ACCCCTGAGG TCACGTGCGT GGTGGTGGAC GTGAGCCAGG Θ51 AAGACCCCGA GGTCCAGTTC AACTGGTACG TGGATGGCGT GGAGGTGCAT 901 AATGCCAAGA CAAAGCCGCG GGAGGAGCAG TTCAACAGCA CGTACCGTGT 951 GGTCAGCGTC CTCACCGTCC TGCACCAGGA CTGGCTGAAC GGCAAGGAGT 1001 ACAAGTGCAA GGTCTCCAAC AAAGGCCTCC CGTCCTCCAT CGAGAAAACC 1051 ATCTCCAAAG CCAAAGGGCA GCCCCGAGAG CCACAGGTGT ACACCCTGCC 1101 CCCATCCCAG GAGGAGATGA CCAAGAACCA GGTCAGCCTG ACCTGCCTGG 1151 TCAAAGGCTT CTACCCCAGC GACATCGCCG TGGAGTGGGA GAGCAATGGG 1201 CAGCCGGAGA ACAACTACAA GACCACGCCT CCCGTGCTGG ACTCCGACGG 1251 CTCCTTCTTC CTCTACAGCA GGCTAACCGT GGACAAGAGC AGGTGGCAGG 1301 AGGGGAATGT CTTCTCATGC TCCGTGATGC ATGAGGCTCT GCACAACCAC 1351 TACACACAGA AGAGCCTCTC CCTGTCTCTG GGTAAATGA SEQ ID NO. 46
Sequência proteica prevista para a cadeia pesada de 9.8.2
1 mefglswvf1 vallrgvqcQ VQLVESGGGV VQPGRSLRLS CAASGFTFSS
51 YGMHWVRQAP GKGLEWVAVI WYDGSNEYYA DSVKGRFTIS RDNSKNTLYL
101 QMNSLRAEDT AVYYCARGAY HFAYWGQGTL VTVSSASTKG PSVFPLAPCS
151 RSTSESTAAL GCLVKDYFPE FVTVSWNSGA LTSGVHTFPA VLQSSGLYSL
201 SSWTVPSSS LGTKTYTCNV DHKPSNTKVD KRVESKYGPP CPSCPAPEFL
251 GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVWD VSQEDPEVQF NWYVDGVEVH
301 NAKTKPREEQ FNSTYRWSV LTVLHQDVrtiN GKEYKCKVSN KGLPSSIEKT
351 ISKAKGQPRE PQVYTLPPSQ EEMTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG
401 QPENNY1CTTP PVLDSDGSFF LYSRLTVDKS RWQEGNVFSC SVMHEALHNH
451 YTQKSL·SLSL GK 222 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 47
Sequência de nucleótidos da cadeia leve capa de 9.8.2
1 atggacatga ggqtccctgc tcagctcctg ggqctcctgc tgctctggct 51 ctcagtcgca ggtgccagat gtGACATCCA QATGACCCAG TCTCCATCCT 101 CCCTGTCTGC ATCTGTAGGA GACAGAGTCA CCATCACTTG CCAGGCGAGT 151 CAGGACATTA GCAACTATTT AAATTGGTAT CAGCAGAAAC CAGGGAAAGC 201 CCCTAAGCTC CTGATCTACG ATGCATCCAA TTTGGAAACA GGGGTCCCAT 251 CAAGGTTCAG TGGAAGTGGA TCTGGGACAG ATTTTACTTT CACCATCAGC 301 AGCCTGCAGC CTGAAOATAT TGCAACATAT TCCTGTCAAC ACTCTGATAA 351 TCTCTCGATC ACCTTCGGCC AGGGGACACG ACTGGAGATT AAACGAACTG 401 TGGCTGCACC ATCTGTCTTC ATCTTCCCGC CATCTGATGA GCAGTTGAAA 451 TCTGGAACTG CCTCTGTTGT GTGCCTGCTG AATAACTTCT ACCCCAGAOA 501 GGCCAAAGTA CAGTGGAAGG TGGATAACGC CCTCCAATCG GGTAACTCCC 551 AGGAQAGTGT CACAGAGCAG GACAGCAAGG ACAGCACCTA CAGCCTCAGC 601 AGCACCCTGA CGCTGAGCAA AGCAGACTAC GAGAAACACA AAGTCTACGC 651 CTGCGAAGTC ACCCATCAGG GCCTGAGCTC GCCCGTCACA AAGAGCTTCA 701 ACAGGGGAGA GTGTTAGTGA SEQ ID NO. 48
Sequência proteica prevista para cadeia leve capa de 9.8.2
1 mdmrvpaqll qllllwlBva qarcPIQMTQ SPSSLSASVG DRVTITCQAS 51 QDISNYLNWY QQKPGKAPKL LIYDASNIiET GVPSRFSGSG SGTDFTFTIS 101 SIiQPEDIATY SCQHSDNLSI TFGQGTRLEI KRTVAAPSVP IFPPSDEQLK 151 SGTASWCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS
201 STLTLSKADY KKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC SEQ ID NO. 49
Sequência de nucleótidos do domínio de liqação a MAdCAM α4β7 cinomolgo
1 ATGGATCGGG GCCTGGCCCT CCTGCTGGCG GGGCTTCTGG GGCTCCTCCA 51 GCCGGGCTGC GGCCAGTCCC TCCAGGTGAA GCCCCTGCAG GTGGAGCCCC 101 CGGAGCCGGT GGTGGCCGTG GCCCTGGGCG CCTCTCGCCA GCTCACCTGC 151 CGCCTGGACT GCGCGGACGG CGGGGCCACG GTGCAGTGGC GGGGCCTGGA 201 CACCAGCCTG GGCGCGGTGC AGTCGGACGC GGGCCGCAGC GTCCTCACCG 251 TGCGCAACGC CTCGCTGTCG GCGGCCGGGA CCCGTGTGTG CGTGGGCTCC 301 TGCGGGGGCC GCACCTTCCA GCACACCGTG CGGCTCCTTG TGTACGCCTT 351 CCCGGACCAG CTGACCATCT CCCCGGCAGC CCTGGTGCCT GGTGACCCGG 401 AGGTGGCCTG TACGGCTCAC AAAGTCACGC CTGTGGACCC CAATGCGCTC 451 TCCTTCTCCC TGCTCCTGGG GGACCAGGAA CTGGAGGGGG CCCAGGCTCT 501 GGGCCCGGAG GTGGAGGAGG AGGAGGAGCC CCAGGAGGAG GAGGACGTGC 551 TGTTCAGGGT GACAGAGOGC TGGCGGCTGC CGACCCTGGC AACCCCTGTC 601 CTGCCCGCGC TCTACTGCCA GGCCACGATG AGGCTGCCTG GCTTGGAGCT
651 CAGCCACCGC CAGGCCATCC CGGTCCTGCA C 223 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 50
Sequência de amnoácidos do domínio de ligação MAdCAM α4β7 cinomolgo
1 MDRGLAUiLA GLLGLLQPGC GQSLQVKPLQ VEPPBPWAV ALGASRQLTC 51 RLDCADGGAT VQWRGLDTSL GAVQSDAGRS VLTVRNASLS AAGTRVCVGS
101 CGGRTFQHTV RLLVYAFPDQ LTISPAALVP GDPEVACTAH KVTPVDPNAL
151 SFSIiLLGDQE LEGAQALGPE VEEEEEPQEE EDVLFRVTER WRLPTLATPV
201 LiPALYCQATM RLPGLELSER QAIPVLH SEQ ID NO. 51 6.22.2
Sequência de nucleotides da cadeia pesada de modificado
1 atqqaqtttg gqctqagctq qcjttttcctc qttqctcttt taaqaqqtgt 51 CcaqtqtCAG GTGCAGCTGG TGGAGTCTGG GGGAGGCGTG GTCCAGCCTG 101 QGAGGTCCCT GAGACTCTCC TGTGCAGCGT CTGGATTCAC CTTCAGTAGC 151 GATGGCATGC ACTGGGTCCG CCAGGCTCCA GGCAAGGGGC TGGAGTGGGT 201 GGCAATTATA TGGTATGATG GAAGTAATAA ATATTATGCA GACTCCGTGA 251 AGGGCCGATT CACCATCTCC AGAGACAATT CCAAGAACAC GCTGTATCTG 301 CAAATGAACA GCCTGAGAGC CGAGGACACG GCTGTATATT ACTGTGCGAG 351 AGATCCCGQC TACTATTACG GTATGGACGT CTGGGGCCAA GGGACCACGG 401 TCACCGTCTC CTCAGCTTCC ACCAAGGGCC CATC CGTCTT CCCCCTGGCG 451 CCCTGCTCTA GAAGCACCTC CGAGAGCACA GCGGCCCTGG GCTGCCTGGT 501 CAAGGACTAC TTCCCGGAAC CGGTGACGGT GTCGTGGAAC TCAGGCGCTC 551 TGACCAGCGG CGTGCACACC TTCCCAGCTG TCCTACAGTC CTCAGGACTC 601 TACTCCCTCA GCAGCGTGGT GACCGTGCCC TCCAGCAACT TCGGCACCCA 651 GACCTACACC TGCAACGTAG ATCACAAGCC CAGCAACACC AAGGTGGACA 701 AGACAGTTGA GCGCAAATGT TGTGTCGAGT GCCCACCGTG CCCAGCACCA 751 CCTGTGGCAG GACCGTCAGT CTTCCTCTTC CCCCCAAAAC CCAAGGACAC 801 CCTCATGATC TCCCGGACCC CTGAGGTCAC GTGCGTGGTG GTGGACGTGA 851 GCCACGAAGA CCCCGAGGTC CAGTTCAACT GGTACGTGGA CGGCGTGGAG 901 GTGCATAATG ΡΓΑΕΠΔΡΛΛΛ wwnrw«n»»fioo GCCACGGGAG GAGCAGTTCA ACAGCACGTT 951 CCGTGTGGTC AGCGTCCTCA CCGTTGTGCA CCAGGACTGG CTGAACGGCA 1001 AGGAGTACAA GTGCAAGGTC TCCAACAAAG GCCTCCCAGC CCCCATCGAG 1051 AAAACCATCT CCAAAACCAA AGGGCAGCCC CGAGAACCAC AGGTGTACAC 1101 CCTGCCCCCA TCCCGGGAGG AGATGACCAA GAACCAGGTC AGCCTGACCT 1151 GCCTGGTCAA AGGCTTCTAC CCCAGCGACA TCGCCGTGGA GTGGGAGAGC 1201 AATGGGCAGC CGGAGAACAA CTACAAGACC ACACCTCCCA TGCTGGACTC 1251 CGACGGCTCC TTCTTCCTCT ACAGCAAGCT CACCGTGGAC AAGAGCAGGT 1301 GGCAGCAGGG GAACGTCTTC TCATGCTCCG TGATGCATGA GGCTCTGCAC 1351 AACCACTACA CGCAGAAGAG CCTCTCCCTG TCTCCGGGTA AATGATAG 224 ΡΕ2177537 SEQ ID NO.52
Sequência de aminoácidos da cadeia pesada de 6.22.2 modificado
1 mefqlswvf1 vallrgvgcQ VQLVESGGGV VQPGRSLRLS CAASGFTFSS
51 DGMHWVRQAP GKGLEWVAII WYDGSNKYYA DSVKGRFTIS RDNSKNTLYL 101 QMNSLRAEDT AVYYCARDPG YYYGMDVWGQ GTTVTVSSAS TKGPSVFPIA 151 PCSRSTSEST AALGCLVKDY FPEPVTVSWN SGALTSGVHT FPAVLQSSGL
201 YSLSSWTVP SSNFGTQTYT CNVDHKPSNT KVDKTVERKC CVECPPCPAP 251 PVAGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCW VDVSHEDPEV QFNWYVDGVE 301 VHNAKTKPRE BQFNSTFRW SVLTWHQDW LNGKEYKCKV SNKGLPAPZE 351 KTISKTKGQP REPQVYTLPP SREEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES 401 NGQPENNYKT TPPMLDSDGS FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEAIiH 451 NHYTQKSLSL SPGK SEQ ID NO. 53
Sequência nucleotidica da cadeia leve capa de 6.22.2 modificado
1 atgttqccat cacaactcat tqqqtttctq ctgctctqgq ttccaqcttc 51 caggggtGAA ATTGTGCTGA CTCAGTCTCC AGACTTTCAG TCTGTGACTC 101 CAAAAGAGAA AGTCACCATC ACCTGCCGGG CCAGTCAGAG AATTGGTAGT 151 AGCTTACACT GGTACCAGCA GAAACCAGAT CAGTCTCCAA AACTCCTCAT 201 CAAGTATGCT TCCCAGTCCT TCTCAGGGGT CCCCTCGAGG TTCAGTGGCA 251 GTGGATCTGG GACAGATTTC ACCCTCACCA TCAATAGCCT GGAAGCTGAA 301 GATGCTGCAA CTTATTACTG TCATCAGAGT GGTCGTTTAC CGCTCACTTT 351 CGGCGGAGGG ACCAAGGTGG AGATCAAACG AACTGTGGCT GCACCATCTG 401 TCTTCATCTT CCCGCCATCT GATGAGCAGT TGAAATCTGG AACTGCCTCT 451 GTTGTGTGCC TGCTGAATAA CTTCTATCCC AGAGAGGCCA AAGTACAGTG 501 GAAGGTGGAT AACGCCCTCC AATCGGGTAA CTCCCAGGAG AGTGTCACAG 551 AGCAGGACAG CAAGGACAGC ACCTACAGCC TCAGCAGCAC CCTGACGCTG 601 AGCAAAGCAG ACTACGAGAA ACACAAAGTC TACGCCTGCG AAGTCACCCA 651 TCAGGGCCTG AGCTCGCCCG TCACAAAGAG CTTCAACAGG GGAGAGTGTT 701 AGTGA SEQ ID NO. 54
Sequência de aminoácidos da cadeia leve capa de Modified 6.22.2 modificado
1 mlpsqllqfl llwvpaBrgS IVLTQSPDFQ SVTPKBKVTI TCRASQRXGS 51 SLHWYQQKPD QSPKLLIKYA SQSFSGVPSR FSGSGSGTDF TLTINSLEAE 101 DAATYYCHQS GRLPLTFGGG TKVEIKRTVA APSVF1FPPS DEQLKSGTAS 151 WCLLNNFYP REAKVQWKVD NALQSGNSQE SVTEQDSKDS TYSLSSTLTL
201 SKADYEKHKV YACEVTHQGL SSPVTKSFNR GEC 225 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 55
Sequência de nucleotides da cadeia pesada de 6.34 modificado
1 atqqaqtttq qqctqaqctq qqttttCCtC gttqctcttt taaqaqqtqt 51 ccaqtgtCAG GTGCAGCTGG TGGAGTCTGG GGGAGGCGTG GTCCAGCCTG 101 GGAGGTCCCT GAGACTCTCC TGTGCAGCCT CTGGATTCAC CTTCAGTAGC 151 TATGGCATGC ACTGGGTCCG CCAGGCTCCA GGCAAGGGGC TGGAGTGGGT 201 GGCAGTTATA TCAAATGATG GAAATAATAA ATACTATGCA GACTCCGTGA 251 AGGGCCGATT CACCATCTCC AGAGACAATT CCAAAAACAC GCTGTATCTG 301 CAAATGAACA gcctgcgcgc TGAGGACACG GCTGTGTATT ACTGTGCGAG 351 AGATAGTACG GCGATAACCT ACTACTACTA CGGAATGGAC gtctgggocc 401 AAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCTT CCACCAAGGG CCCATCCGTC 451 TTCCCCCTGG CGCCCTGCTC TAGAAGCACC TCCGAGAGCA CAGCGGCCCT 501 GGGCTGCCTG GTCAAGGACT ACTTCCCCGA ACCGGTGACG gtgtcgtgga 551 ACTCAGGCGC TCTGACCAGC GGCGTGCACA CCTTCCGAGC TGTCCTACAG 601 TCCTCAGGAC TCTACTCCCT CAGCAGCGTG GTGACCGTGC CCTCCAGCAA 651 CTTCGGCACC CAGACCTACA CCTGCAACGT AGATCACAAG CCCAGCAACA 701 CCAAGGTGGA CAAGACAGTT GAGCGCAAAT GTTGTGTCGA GTGCCCACCG 751 TGCCCAGCAC CACCTGTGGC AGGACCGTCA GTCTTCCTCT TCCCCCCAAA 801 ACCCAAGGAC ACCCTCATGA TCTCCCGGAC CCCTGAGGTC ACGTGCGTGG 851 TGGTGGACGT GAGCCACGAA GACCCCGAGG TCCAGTTCAA CTGGTACGTG 901 GACGGCGTGG AGGTGCATAA TGCCAAGACA AAGCCACGGG AGGAGCAGTT 951 CAACAGCACG TTCCGTGTGG TCAGCGTCCT CACCGTTGTG CACCAGGACT 1001 GGCTGAACGG CAAGGAGTAC AAGTGCAAGG TCTCCAACAA AGGCCTCCCA 1051 GCCCCCATCX3 AGAAAACCAT CTCCAAAACC AAAGGGCAGC CCCX3AGAA.CC 1101 ACAGGTGTAC ACCCTGCCCC CATCCCGGGA GGAGATGACC AAGAACCAGG 1151 TCAGCCTGAC CTGCGTGGTC AAAGGCTTCT ACCCCAGCGA CATCGCCGTG 1201 GAGTGGGAGA GCAATGGGCA GCCGGAGAAC AACTACAAGA CCACACCTCC 1251 CATGCTGGAC TCCGACGGCT CCTTCTTCCT CTACAGCAAG CTCACCGTGG 1301 ACAAGAGCAG GTGGCAGCAG GGGAACGTCT TCTCATGCTC CGTGATGCAT 1351 GAGGCTCTGC ACAACCACTA CACGCAGAAG AGCCTCTCCC TGTCTCCGGG 1401 TAAATGATAG SEQ ID NO. 56
Sequência de aminoácidos da cadeia pesada de 6.34 modificado
EALHNHYTQK SLSLSPQK 1 mefglBWVfl vallrqvqcQ VQIiVESGGGV VQPGRSLRLS CAASGFTFSS 51 YGMHWVRQAP GKGLEWVAVI SNDGNNKYYA DSVKGRFTIS RDNSKNTLYL 101 QMNSLRABDT AVYYCARDST AITYYYYGMD VWGQGTTVTV SSASTKGPSV 151 FPIiAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVIíQ 201 SSGIiYSLSSV VTVPSSNFGT QTYTCNVDHK PSNTKVDKTV BRKCCVECPP 251 CPAPPVAGPS VFLFPPKPKD TIiMISRTPEV TCVWDVSHB DPEVQFNWYV 301 DGVEVHHAKT KPREEQFNST FRWSVLTW HQDWLNGKEY KCKVSWKGLP 351 APIEKTISKT KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV KGFYPSD1AV 401 BWESNGQPBW NYKTTPPMIiD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH 451 226 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 57
Sequência de nucleótidos da cadeia leve capa de 6.34.2 modificado
1 atqqacatqa qqqtccccqc tcagctcctq ggqctcctgc tactctggct 51 ccqagqtqcc agatqtGACA TCCAGATGAC CCAGTCTCCA TCCTCCCTGT 101 CTGCATCTGT CGGAGACAGA GTCACCATCA CTTGCCGGGC AAGTCAGAGT 151 ATTAGTAGCT ATTTAAATTG GTATCAGCAG AAACCAGGGA AAGCCCCTAA 201 GCTCCTGATC TATGCTGCAT CCGGTTTGAA GCGTGGGGTC CCATCACGGT 251 TCAGTGGTAG TGGATCTGGG ACAGATTTCA CTCTCACCAT CAGTTCTCTG 301 CAACCTGAGG ATTTTGCAAC TTACTACTGT CACCAGAGTT ACAGTCTCCC 351 ATTCACTTTC GGCCCTGGGA CCAAAGTGGA TATCAAACGA ACTGTGGCTG 401 CACCATCTGT CTTCATCTTC CCGCCATCTG ATGAGCAGTT GAAATCTGGA 451 ACTGCCTCTG TTGTGTGCCT GCTGAATAAC TTCTATCCCA GAGAGGCCAA 501 AGTACAGTGG AAGGTGGATA ACGCCCTCCA ATCGGGTAAC TCCCAGGAGA 551 GTGTCACAGA QCAGGACAGC AAGGACAGCA CCTACAGCCT CAGCAGCACC 601 CTGACGCTGA GCAAAGCAGA CTACGAGAAA CACAAAGTCT ACGCCTGCGA 651 AGTCACCCAT CAGGGCCTGA GCTCGCCCGT CACAAAGAGC TTCAACAGGG 701 GAGAGTGTTA GTGA SEQ ID NO. 58
Sequência de aminoácidos da cadeia leve capa de 6.34.2 modificado
1 mdmrvpaqll qllllwlrqa rcDIQMTQSP SSLSASVGDR VTITCRASQS 51 ISSYIaNWYQQ KPGKAPKLLI YAASGLKRGV PSRFSGSGSG TDPTLTISSL 101 QPKDFATYYC HQSY8LPFTP GPGTKVDIKR TVAAPSVFIF PPSDEQLKSG 151 TA5WCLUOT FYPREAKVQW KVDHALQSGN SQESVTEQDS KDSTYSLSST
201 LTLSKADYEK HKVYACEVTH QGLSSPVTKS FNRGEC 227 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 59
Sequência de nucleotides da cadeia pesada de 6.67.1 modificado
1 atqaaacacc tqtqgttctt cctcctqctq qtqqcaqctc ccaqatqqqt 51 cctqtccCAG GTGCAGCTGC AGGAGTCGGG CCCAGGACTG GTGAAGCCTT 101 CGGAGACCCT GTCCCTCACC TGCACTGTCT CTGGTGACTC CATCAGTAGT 151 AACTATTGGA GCTGGATCCG GCAGCCCGCC GGGAAGGGAC TGGAGTGGAT 201 TGGGCGTATC TATACCAGTG GGGGCACCAA CTCCAACCCC TCCCTCAGGG 251 GTCGAGTCAC CATGTCAGTA GACACGTCCA AGAACCAGTT CTCTCTGAAA 301 CTGAGTTCTG TGACCGCCGC GGACACGGCC GTGTATTACT GTGCGAGAGA 351 TCGTATTACT ATAATTCGGG GACTTATTCC ATCCTTCTTT GACTACTGGG 401 GCCAGGGAAC CCTGGTCACC GTCTCCTCAG CTTCCACCAA GGGCCCATCC 451 GTCTTCCCCC TGGCGCCCTG CTCTAGAAGC ACCTCCGAGA GCACAGCGGC 501 CCTGGGCTGC CTGGTCAAGG ACTACTTCCC CGAACCGGTG ACGGTGTCGT 551 GGAACTCAGG CGCTCTGACC AGCGGCGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTA 601 CAGTCCTCAG GACTCTACTC CCTCAGCAGC GTGGTGACCG TGCCCTCCAG 651 CAACTTCGGC ACCCAGACCT ACACCTGCAA CGTAGATCAC AAGCCCAGCA 701 ACACCAAGGT GGACAAGACA GTTGAGCGCA AATGTTGTGT CGAGTGCCCA 751 CCGTGCCCAG CACCAC CTGT GGCAGGACCG TCAGXCTTCC TCTTCCCCCC Θ01 AAAACCCAAG GACACCCTCA TGATCTCCCG GACCCCTGAG GTCACGTGCG 851 TGGTGGTGGA CGTGAGCCAC GAAGACCCCG AGGTCCAGTT CAACTGGTAC 901 GTGGACGGCG TGGAGGTGCA TAATGCCAAG ACAAAGCCAC GGGAGGAGCA 951 GTTCAACAGC ACGTTCCGTG TGGTCAGCGT CCTCACCGTT GxGCACCAGG 1001 ACTGGCTGAA CGGCAAGGAG TACAAGTGCA AGGTCTCCAA CAAAGGCCTC 1051 CCAGCCCCCA TCGAGAAAAC CATCTCCAAA ACCAAAGGGC AGCCCCGAGA 1101 ACCACAGGTG TACACCCTGC CCCCATCCCG GGAGGAGATG ACCAAGAACC 1151 AGGTCAGCCT GACCTGCCTG GTCAAAGGCT TCTACCCCAG CGACATCGCC 1201 OTGGAGTGGG AGAGCAATGG GCAGCCGGAG AACAACTACA AGACCACACC 1251 TCCCATGCTG GACTCCGACG GCTCCTTCTT CCTCTACAGC AAGCTCACCG 1301 TGGACAAGAG CAGGTGGCAG CAGGGGAACG TCTTCTCATG CTCCGTGATG 1351 CATGAGGCTC TGCACAACCA CTACACGCAG AAGAGCCTCT CCCTGTCTCC 1401 GGGTAAATGA TAG SEQ ID NO. 60
Sequência de aminoácidos da cadeia pesada de 6.67.1 modificado
1 mkhlwfflll vaaprwvlsQ VQLQBSGPGL VKPSBTLSLT CTVSGDSISS 51 NYWSWIRQPA GKGLEWIGRI YTSGGTNSNP SIiRGRVTMSV DTSKNQFSLK 101 LSSVTAADTA VYYCARDRIT I1RGL1PSFF DYWGQGTLVT VSSASTKGPS 151 VFPIAPCSRS TSESTAALGC LVKDYFPBPV TVSWNSGALT SGVHTFPAVL 201 QSSGIiYSLSS WTVPSSNPG TQTYTCHVDH KPSNTKVDKT VERKCCVECP 251 PCPAPPVAGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVWDVSH EDPEVQFNWY 301 VDGVEVHNAK TKPRBBQFKS TFRWSVIiTV VHQDWUJQKE YKCKVSNKGL· 351 PAPIBKTISK TKGQPREPQV YTLPPSRBEM TKMQVSLTCL VKGFYPSD1A 401 VEWESNQQPE NNYKTTPPML DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM 451 HEALHNHYTQ KSLSLSPGK 228 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 61
Sequência de nucleótidos da cadeia leve capa de 6.67.1 modificado
1 atqqtqttqc aqacccaggt cttcatttct ctgttqctct ggatctctgg 51 tqcctacqqq GACATCGTGA TGACCCAGTC TCCAGACTCC CTGGCTGTGT 101 CTCTGGGCGA GAGGGCCACC ATCAACTGCA AGTCCAGCCA GAGTGTTTTA 151 TACAGCTCCA ACAATAAGAA CTACTTAGCT TGGTACCAAC AGAAACCAGG 201 ACAGCCTCCT AAATTGCTCA TTTACTGGGC ATCTATACGG GAATATGGGG 251 TCCCTGACCG ATTCAGTGGC AGCGGGTCTG GGACAGATTT CACTCTCACC 301 ATCAGCAGCC TGCAGGCTGA AGATGTGGCA GTTTATTTCT GTCAACAATA 351 TTATAGTATT CCTCCCCTCA CTTTCGGCGG AGGGACCAAG GTGGAGATCA 401 AACGAACTGT GGCTGCACCA TCTGTCTTCA TCTTCCCGCC ATCTGATGAG 451 CAGTTGAAAT CTOGAACTGC CTCTGTTGTG TGCCTGCTGA ATAACTTCTA 501 TCCCAGAGAG GCCAAAGTAC AGTGGAAGGT GGATAACGCC CTCCAATCGG 551 GTAACTCCCA GGAOAGTGTC ACAGAGCAGG ACAGCAAGGA CAGCACCTAC
601 AGCCTCAGCA GCACCCTGAC GCTGAGCAAA GCAGACTACG AGAAACACAA
651 AGTCTACGCC TGCGAAGTCA CCCATCAGGG CCTGAGCTCG CCCGTCACAA
701 AGAGCTTCAA CAGGGGAGAG TGTTAGTGA SEQ ID NO. 62
Sequência de aminoácidos da cadeia leve capa de 6.67.1 modificado
1 mvlcrtqvfis lllwisgayg DIVMTQSPDS LAVSbGBRAT INCKSSQSVL 51 YSSNNKNYIA WYQQKPGQPP KLLIYWASIR BYGVPDRFSG SGSGTDPTLT 101 ISSLQAEDVA VYFCQQYYSI PPLTFGGGTK VEIKRTVAAP SVFIFPPSDB 151 QLKSGTASW CLLNNFYPRE AKVQWKVDNA LQSGNSQESV TEQDSKDSTY 201 SLSSTLTLSK ADYEKHKVYA CEVTHQGLSS PVTKSFNRGE C SEQ ID NO. 63
Sequência de nucleótidos da cadeia pesada de 6.77.1 modificado
1 atggaactqq qqctccgctq ggttttcctt gttgctattt tagaaggtgt 51 CcagtqtGAG GTGCAGCTGG TGGAGTCTGG GGGAGGCCTG GTCAAGCCTG 101 GGGGGTCCCT GAGACTCTCC TGTGCAGCCT CTGGATTCAC CTTCAGTAGC 151 TATAGCATGA ACTGGGTCCG CCAGGCTCCA GGGAAGGGGC TGGAGTGGGT 201 CTCATCCATT AGTAGTAGTA GTAGTTACAT ATACTACGCA GACTCAGTGA 251 AGGGCCGATT CACCATCTCC AGAGACAACG CCAAGAACTC ACTGTATCTG 301 CAAATGAACA GCCTGAGAGC CGAGGACACG GCTGTGTATT ACTGTGCGAG 351 AGATGGGTAT AGCAGTGGCT GGTCCTACTA CTACTACTAC GGTATGGACG 4 01 TCTGGGGCCA AGGGACCACG GTCACCGTCT CCTCAGCTTC CACCAAGGGC 451 CCATCCGTCT TCCCCCTGGC GCCCTGCTCT AGAAGCACCT CCGAGAGCAC 501 AGCOGCCCTO GGCTGCCTGG TCAAGGACTA CTTCCCCGAA CCGGTGACGG 551 TGTCGTGGAA CTCAGGCGCT CTGACCAGCG GCGTGCACAC CTTCCCAGCT 229 ΡΕ2177537
601 GTCCTACAGT CCTCAGGACT CTACTCCCTC AGCAGCGTGG TOACCGTGCC 651 CTCCAGCAAC TTCGGCACCC AGACCTACAC CTGCAACGTA GATCACAAGC 701 CCAGCAACAC CAAGGTGGAC AAGACAQTTG ÀGCGCAAAT6 TTGTGTCGAG 751 TGCCCACCGT GCCCAGCACC ACCTGTGGCA GGACCGTCAG TCTTCCTCTT 801 CCCCCCAAAA CCCAAGGACA CCCTCATGAT CTCCCGGACC CCTGAGGTCA 851 CGTGCGTGGT GGTGGACGTG AGCCACGAAG ACCCCGAGGT CCAGTTCAAC 901 TGGTACGTGG ACQGCGTGGA GGTGCATAAT GCCAAGACAA AGCCACGGGA 951 GGAGCAGTTC AACAGCACGT TCCGTGTGGT CAGCGTCCTC ACCGTTGTGC 1001 ACCAGGACTG GCTGAACGGC AAGGAGTACA AGTGCAAGGT CTCCAACAAA 1051 GGCCTCCCAG CCCCCATCGA GAAAACCATC TCCAAAACCA AAGGGCAGCC 1101 CCGAGAACCA CAGGTGTACA CCCTGCCCCC ATCCCGGGAG GAGATGACCA 1151 AGAACCAGGT CAGCCTGACC TGCCTGGTCA AAGGCTTCTA CCCCAGCGAC 1201 ATCGCCGTGG AGTGGGAGAG CAATGGGCAG CCGGAGAACA ACTACAAGAC 1251 CACACCTCCC ATGCTGGACT CCGACGGCTC CTTCTTCCTC TACAGCAAGC 1301 TCACCGTGGA CAAGAGCAGG TGGCAGCAGG GGAACGTCTT CTCATGCTCC 1351 GTGATGCATG AGGCTCTGCA CAACCACTAC ACGCAGAAGA GCCTCTCCCT 1401 GTCTCCGGGT AAATGATAG SEQ ID NO. 64
Sequência proteica da cadeia pesada de 6.77.1 modificado
1 melglrwvfl valleqvqcE VQLVESGGGL VKPGGSLRLS CAASGFTPSS
51 YSMNWVRQAP GKGLEWVSSI SSSSSYIYYA DSVKGRFTIS RDNAKNSLYL
101 QMNSLRAEDT AVYYCARDGY SSGWSYYYYY GMDVWGQGTT VTVSSASTKG
151 PSVFPIiAPCS RSTSESTAAL GCLVKPYFPB PVTVSWNSGA LTSGVHTFPA
201 VLQSSGLYSL SSWTVPSSN FGTOTYTCNV DHKPSNTKVD KTVERKCCVB
251 CPPCPAPPVA GPSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCWVDV SHBDPEVQPN
301 WYVDGVBVHN AKTKPREBQP NSTFRWSVL TWHQDWIjNG KEYKCKVSNK
351 GXjPAPIBKTI sktkgqprep qvytlppsrb emtknqvslt CLVKGFYPSD
401 IAVEWESNGQ PBMNYKTTPP MLDSDGSPFL Y5KLTVDKSR WQQGWVFSCS
451 VMHEAliHNHY TQKSL3LSPG K SEQ ID NO. 65
Sequência de nucleótidos da cadeia leve capa de 6.77.1 modificado 1 atgaggctcc ctgctcagct cctqqqgçtq ctaatqctct gqatacctqg
51 atccagtgca GATATTGTGA TGACCCAGAC TCCACTCTCT CTGTCCGTCA
101 CTCCTGGACA GCCGGCCTCC ATCTCCTGCA AGTCTAGTCA GAGCCTCCTG
151 CTTAGTGATG GAAAGACCTA TTTGAATTGG TACCTGCAGA AGCCCGGCCA
201 GCCTCCACAG CTCCTGATCT ATGAAGTTTC CAACCGGTTC TCTGGAGTGC
251 CAGACAGGTT CAGTGGCAGC GGGTCAGGGA CAGATTTCAC ACTGAAAATC
301 AGCCGGGTGG AGGCTGAGGA TGTTGGGGTT TATTACTGCA TGCAAAGTAT
351 ACAGCTTATG TGCAGTTTTG GCCAGGGGAC CAAGCTGGAG ATCAAACGAA
401 CTGTGGCTGC ACCATCTGTC TTCATCTTCC CGCCATCTGA TGAGCAGTTG
451 AAATCTGGAA CTGCCTCTGT TGTGTGCCTG CTGAATAACT TCTATCCCAG
501 AGAGGCCAAA GTACAGTGGA AGGTGGATAA CGCCCTCCAA TCGGGTAACT
551 CCCAGGAGAG TGTCACAGAG CAGGACAGCA AGGACAGCAC CTACAGCCTC
601 AGCAGCACCC TGACGCTGAG CAAAGCAGAC TACGAGAAAC ACAAAGTCTA
651 CGCCTGCGAA GTCACCCATC AGGGCCTGAG CTCGCCCGTC ACAAAGAGCT
701 TCAACAGGGG AGAGTGTTAG TGA 230 ΡΕ2177537 SEQ ID NO. 66
Sequência de aminoácidos da cadeia leve capa de 6.77.1 modificado
1 mrlpaqllgl lmlwipqasa DIVMTQTPLS LSVTPGQPAS ISCKSSQSLL 51 LSDGKTYLNW YLQKPGQPPQ LLIYEVSNRF SQVPDRFSGS GSGTDFTLKI 101 SRVEAEDVGV YSCMQSIQLM SSFGQGTKLE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL 151 KSGTASWCL LNNFYPREAK VQWKVDNALQ SQNSQESVTE QDSKDSTYSL
201 SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV TKSFNRGEC SEQ ID NO. 67
Sequência de nucleótidos da cadeia leve de 7.26.4 modificado 1 atqaqgctcc ctgctcaqct cctgqqgctg ctaatgctct ggatacctqq
51 atccagtgcg GATATTGTGA TGACCCAGAC TCCACTCTCT CTGTCCGTCA
101 CCCCTGGACA GCCGGCCTCC ATCTCCTGCA AGTCTAGTCA GAGCCTCCTG
151 TATAGTGATG GAAAGACCTA TTTGTTTTGG TACCTGCAGA AGCCAGGCCA
201 GCCTCCACAG CTCCTGATCT ATGAAGTTTC CAACCX3ATTC TCTGGAGTGC
251 CAGATAGGTT CAGTGGCAGC GGGTCAGGGA CAGATTTCAC ACTGAAAATC
301 AGCCGGGTGG AGGCTGAGGA TGTTGGGGTT TATTACTGCA TGCAAAGTAT
351 ACAGCTTCCG TGGACGTTCG GCCAAGGGAC CAAGGTGGAA ATCAAACGAA
401 CTGTGGCTGC ACCATCTGTC TTCATCTTCC CGCCATCTGA TGAGCAGTTG
451 AAATCTGGAA CTGCCTCTGT TGTGTGCCTG CTGAATAACT TCTATCCCAG
SOI AGAGGCCAAA GTACAGTGGA AGGTGGATAA CGCCCTCCAA TCGGGTAACT
SS1 CCCAGGAGAG TGTCACAGAG CAGGACAGCA AGGACAGCAC CTACAGCCTC
601 AGCAGCACCC TGACGCTGAG CAAAGCAGAC TACGAGAAAC ACAAAGTCTA
651 CGCCTGCGAA GTCACCCATC AGGGCCTGAG CTCGCCCGTC ACAAAGAGCT
701 TCAACAGGGG AGAGTGTTAG TOA SEQ ID NO. 68
Sequência de aminoácidos da cadeia leve capa de 7.26.4 modificado
1 mrlpaqllgl lmlwlpgssa DIVMTQTPIiS IiSVTPGQPAS ISCKSSQSLL 51 YSDGKTYLFW YLQKPGQPPQ LLIYEVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDPTLKI 101 SRVEAEDVGV YYCMQSIQLP WTFGQGTKVE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL 151 KSGTASWCL LNNFYPREAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTB QDSKDSTYSL
201 SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV TKSFNRGEC 231 ΡΕ2177537
LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS <110> PFIZER INC. ABGENIX, INC.
PFIZER LIMITED
<120> ANTICORPOS CONTRA MAdCAM
<130> P29409EP-D1-PCT <140> Ainda não atribuído <141> 2005-01-07 <150> US 60/535,490 <151> 2004-01-09 <160> 147 <170> Patent In Ver. 3.3 <210> 1 <211> 1392
<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atggagtttg ggctgagctg gattttcctt gctgctattt taaaaggtgt ccagtgtgag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcttg gtgaagcctg gggggtccct tagactctcc 120 tgtgtagcct ctggattcac tttcactaac gcctggatga tctgggtccg ccaggctcca 180 gggaaggggc tggagtgggt tggccgtatt aaaaggaaaa ctgatggtgg gacaacagac 240 tacgctgcac ccgtgaaagg cagattcacc atctcaagag atgattcaaa aaacacgctg 300 tatctgcaaa tgaacagcct gaaaaccgag gacacagccg tgtattactg taccacaggg 360 ggagtggctg aggactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc 420 aagggcccat cggtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcg 480 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540 ggcgctctga ccagcggcgt gcacaccttc ccagctgtcc tacagtcctc aggactctac 600 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcaacttcg gcacccagac ctacacctgc 660 aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga cagttgagcg caaatgttgt 720 gtcgagtgcc caccgtgccc agcaccacct gtggcaggac cgtcagtctt cctcttcccc 780 ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacgtg cgtggtggtg 840 gacgtgagcc acgaagaccc cgaggtccag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 900 cataatgcca agacaaagcc acgggaggag cagttcaaca gcacgttccg tgtggtcagc 960 gtcctcaccg ttgtgcacca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1020 aacaaaggcc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg gcagccccga 1080 gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc 1140 ctgacctgcc tggtcaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1200 gggcagccgg agaacaacta caagaccaca cctcccatgc tggactccga cggctccttc 1260 ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1320 tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 1380 ccgggtaaat ga 1392
<210> 2 <211> 463 <212> PRT <213> Homo sapiens 232 ΡΕ2177537 <400> 2
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Ile Phe Leu Ala Ala Ile Leu Lys Gly 1 5 10 15 Val Gin Cys Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Thr Asn Ala Trp Met Ile Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Gly Arg Ile Lys Arg Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp 65 70 75 80 Tyr Ala Ala Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser 85 90 95 Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Gly Gly Val Ala Glu Asp Tyr Trp Gly 115 120 125 Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 145 150 155 160 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190 Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 210 215 220 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys 225 230 235 240 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 245 250 255 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 260 265 270 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 275 280 285 Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 290 295 300 233 ΡΕ2177537
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Vai Vai Ser 305 310 315 320 Vai Leu Thr Vai Vai His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 325 330 335 Cys Lys Vai Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 340 345 350 Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr Leu Pro 355 360 365 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr Cys Leu 370 375 380 Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Vai Glu Trp Glu Ser Asn 385 390 395 400 Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 405 410 415 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp Lys Ser Arg 420 425 430 Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu Ala Leu 435 440 445 His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 3 <211> 720
<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 atgaggctcc ctgctcagct cctggggctg ctaatgctct gggtctctgg atccagtggg 60 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 120 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg caaagtaatg gatacaacta tttggattgg 180 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 240 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 300 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactatc 360 accttcggcc aagggacacg actggagatt aaacgaactg tggctgcacc atctgtcttc 420 atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 480 aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 540 ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 600 agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 660 acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgttagtga 720
<210> 4 <211> 238 <212> PRT <213> Homo sapiens 234 ΡΕ2177537 <400> 4
Met Arg Leu Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Ser 1 5 10 15 Gly Ser Ser Gly Asp Ile Vai Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30 Vai Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser 35 40 45 Leu Leu Gin Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys 50 55 60 Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala 65 70 75 80 Ser Gly Vai Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 Thr Leu Lys ile Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110 Cys Met Gin Ala Leu Gin Thr Ile Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu 115 120 125 Glu Ile Lys Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 130 135 140 Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu 145 150 155 160 Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn 165 170 175 Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser 180 185 190 Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala 195 200 205 Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu val Thr His Gin Gly 210 215 220 Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 5 <211> 1392 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5 atggagtttg ggctgagctg gattttcctt gctgctattt taaaaggtgt ccagtgtgag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcttg gtgaagcctg gggggtccct tagactctcc 120 tgtgtagtct ctggattcac tttcactaac gcctggatga tctgggtccg ccaggctcca 180 gggaaggggc tggagtgggt tggccgtatt aaaaggaaaa ctgatggtgg gacaacagac 240 235 ΡΕ2177537 tacgctgcac ccgtgaaagg cagattcacc atctcaagag atgattcaaa aaacacgctg 300 tatctgcaaa tgaacagcct gaaaaccgag gacacagccg tgtattactg taccacaggg 360 ggagtggctg aggactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc 420 aagggcccat cggtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcg 480 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540 ggcgctctga ccagcggcgt gcacaccttc ccagctgtcc tacagtcctc aggactctac 600 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcaacttcg gcacccagac ctacacctgc 660 aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga cagttgagcg caaatgttgt 720 gtcgagtgcc caccgtgccc agcaccacct gtggcaggac cgtcagtctt cctcttcccc 780 ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacgtg cgtggtggtg 840 gacgtgagcc acgaagaccc cgaggtccag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 900 cataatgcca agacaaagcc acgggaggag cagttcaaca gcacgttccg tgtggtcagc 960 gtcctcaccg ttgtgcacca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1020 aacaaaggcc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg gcagccccga 1080 gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc 1140 ctgacctgcc tggtcaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1200 gggcagccgg agaacaacta caagaccaca cctcccatgc tggactccga cggctccttc 1260 ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1320 tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 1380 ccgggtaaat ga 1392
<210> 6 <211> 463 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Ile 1 5 Vai Gin Cys Glu Vai Gin Leu Vai 20 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser 35 40 Thr Asn Ala Trp Met Ile Trp Vai 50 55 Glu Trp Vai Gly Arg Ile Lys Arg 65 70 Tyr Ala Ala Pro Vai Lys Gly Arg 85 Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met 100 Ala Vai Tyr Tyr Cys Thr Thr Gly 115 120 Gin Gly Thr Leu Vai Thr Vai Ser 130 135 Vai Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 145 150
Phe Leu 10 Ala Ala Ile Leu Lys 15 Gly Glu 25 Ser Gly Gly Gly Leu 30 Vai Lys Cys Vai Vai Ser Gly 45 Phe Thr Phe Arg Gin Ala Pro 60 Gly Lys Gly Leu Lys Thr Asp 75 Gly Gly Thr Thr Asp 80 Phe Thr 90 Ile Ser Arg Asp Asp 95 Ser Asn 105 Ser Leu Lys Thr Glu 110 Asp Thr Gly Vai Ala Glu Asp 125 Tyr Trp Gly Ser Ala Ser Thr 140 Lys Gly Pro Ser Arg Ser Thr 155 Ser Glu Ser Thr Ala 160 236 ΡΕ2177537
Ala Leu Gly Cys Leu val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190 Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 210 215 220 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys 225 230 235 240 val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 245 250 255 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 260 265 270 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 275 280 285 val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly val Glu Val His Asn Ala Lys 290 295 300 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 305 310 315 320 Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 325 330 335 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 340 345 350 Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 355 360 365 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 370 375 380 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 385 390 395 400 Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 405 410 415 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 420 425 430 Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 435 440 445 His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 237 ΡΕ2177537 <210> 7 <211> 720
<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 7 atgaggctcc ctgctcagct cctggggctg ctaatgctct gggtctctgg atccagtggg 60 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 120 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg caaagtaatg gattcaacta tttggattgg 180 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 240 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt gggtcaggca cagattttac actgaaaatc 300 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactatc 360 accttcggcc aagggacacg actggagatt aaacgaactg tggctgcacc atctgtcttc 420 atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 480 aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 540 ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 600 agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 660 acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgttagtga 720
<210> 8 <211> 238 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8
Met Arg Leu Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Ser 1 5 10 15 Gly Ser Ser Gly Asp Ile Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu- Pro 20 25 30 Vai Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser 35 40 45 Leu Leu Gin Ser Asn Gly Phe Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys 50 55 60 Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala 65 70 75 80 Ser Gly Vai Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110 Cys Met Gin Ala Leu Gin Thr Ile Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu 115 120 125 Glu Ile Lys Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 130 135 140 Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val val Cys Leu Leu 145 150 155 160 238 ΡΕ2177537
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn 165 170 175 Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser 180 185 190 Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala 195 200 205 Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr HiS Gin Gly 210 215 220 Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 9 <211> 1404 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 9 ccagtgtgag 60 gagactctcc 120 ccaggctcca 180 atactacgca 240 gctctatctg 300 ccgtggatac 360 cgtctcctca 420 cacctccgag 480 gacggtgtcg 540 acagtcctca 600 cacgaagacc 660 agttgagtcc 720 accatcagtc 780 tgaggtcacg 840 gtacgtggat 900 cagcacgtac 960 ggagtacaag 1020 caaagccaaa 1080 gatgaccaag 1140 cgccgtggag 1200 gctggactcc 1260 gcaggagggg 1320 acagaagagc 1380 1404 atggagtttg ggctgagctg gctttttctt gtggctattt taaaaggtgt gtgcagctgt tggagtctgg gggaggcttg gtacagcctg gggggtccct tgtgcagcct ctggactcac ctttaacaat tctgccatga cctgggtccg gggaaggggc tggagtgggt ctcaactact agtggaagtg gtggtaccac gactccgtga agggccggtt caccatctcc agagactctc ccaagaacac caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtatatt actgtgcggc agctatggta cgacccccta tgagtactgg ggccagggaa ccctggtcac gcttccacca agggcccatc cgtcttcccc ctggcgccct gttccaggag agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag aaatatggtc ccccatgccc atcatgccca gcacctgagt tcctgggggg ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact ctcatgatct cccggacccc tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac cccgaggtcc agttcaactg ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagttcaa cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaacggcaa tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc tccatcgaga aaaccatctc gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccaggagga aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gacggctcct tcttcctcta cagcaggcta accgtggaca agagcaggtg aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac ctctccctgt ctctgggtaa atga
<210> 10 <211> 467 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Vai Ala Ile Leu Lys Gly 15 10 15 239 ΡΕ2177537
Val Gin Cys Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe 35 40 45 Asn Asn Ser Ala Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ser Thr Thr Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Pro Lys Asn 85 90 95 Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Gly Tyr Ser Tyr Gly Thr Thr Pro Tyr Glu 115 120 125 Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 130 135 140 Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu 145 150 155 160 Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 165 170 175 Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 180 185 190 Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 195 200 205 Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn 210 215 220 Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser 225 230 235 240 Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly 245 250 255 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 260 265 270 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin 275 280 285 Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr 305 310 315 320 240 ΡΕ2177537
Arg vai Vai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly 325 330 335 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile 340 345 350 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val 355 360 365 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Vai Ser 370 375 380 Leu Thr Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Vai Glu 385 390 395 400 Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 405 410 415 Vai Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val 420 425 430 Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met 435 440 445 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser 450 455 460
Leu Gly Lys 465 <210> 11 <211> 711
<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 11 atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tactctggct ccgaggggcc 60 agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcctccctgt ctgcatctgt aggagacaga 120 gtcaccatca cttgccgggc aagtcggagc attagcagct atttaaattg gtatcagcag 180 aaaccaggga aagcccctaa agtcctgatc ttttttgtgt ccagtttgca aagtggggtc 240 ccatcaaggt tcagtggcag tggctctggg acagatttca ctctcaccat cagcagtctg 300 caacctgaag attttgcaac ttactactgt caacagaatt acattccccc tattaccttc 360 ggccagggga cacgactgga gatcagacga actgtggctg caccatctgt cttcatcttc 420 ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 480 ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 540 tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 600 ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 660 cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgtta g 711
<210> 12 <211> 236 <212> PRT <213> Homo sapiens 241 ΡΕ2177537 <400> 12
Met Asp Met Arg Vai Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Vai Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 45 Arg Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Vai Leu Ile Phe Phe Val Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin 100 105 110 Asn Tyr Ile Pro Pro Ile Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu ile 115 120 125 Arg Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140 Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175 Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205 Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser 210 215 220 Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 13 <211> 1398 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 13 atggagtttg ggctgagctg ggttttcctc gttgctcttt taagaggtgt ccagtgtcag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcgtg gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc 120 tgtgcagcgt ctggacacac cttcagtagc gatggcatgc actgggtccg ccaggctcca 180 ggcaaggggc tggagtgggt ggcaattata tggtatgatg gaagtaataa atattatgca 240 242 ΡΕ2177537 gactccgtga agggccgatt caccatctcc caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg tactattacg gtatggacgt ctggggccaa accaagggcc catccgtctt ccccctggcg gccgccctgg gctgcctggt caaggactac tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct ttccccccaa aacccaagga cactctcatg gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc agcaatgggc agccggagaa caactacaag tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg ctgtctctgg gtaaatga
<210> 14 <211> 465 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 agagacaatt ccaagaacac gctgtatctg 300 gctgtatatt actgtgcgag agatcccggc 360 gggaccacgg tcaccgtctc ctcagcttcc 420 ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 480 ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 540 ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 600 tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 660 aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 720 gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 780 atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 840 gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 900 gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 960 tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 1020 gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1080 ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1140 taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1200 accgcgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1260 gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1320 cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1380 1398
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Vai 1 5 Vai Gin Cys Gin Vai Gin Leu Vai 20 Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser 35 40 Ser Ser Asp Gly Met His Trp Vai 50 55 Glu Trp Vai Ala Ile Ile Trp Tyr 65 70 Asp Ser vai Lys Gly Arg Phe Thr 85 Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser 100 Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Pro Gly 115 120 Gly Gin Gly Thr Thr Vai Thr Vai 130 135 Ser Vai Phe Pro Leu Ala Pro Cys 145 150
Phe Leu Vai Ala Leu Leu Arg Gly 10 15 Glu Ser Gly Gly Gly Vai Vai Gin 25 30 Cys Ala Ala Ser Gly His Thr Phe 45 Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 60 Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala 75 80 Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 90 95 Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Vai 105 110 Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Vai Trp 125 Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 140 Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 155 160 243 ΡΕ2177537
Ala Ala Leu Gly Vai Ser Trp Asn 180 Ala Vai Leu 195 Gin Vai Pro 210 Ser Ser His 225 Lys Pro Ser Gly Pro Pro Cys Ser Vai Phe Leu 260 Arg Thr Pro 275 Glu Pro Glu 290 Vai Gin Ala 305 Lys Thr Lys Vai Ser Vai Leu Tyr Lys Cys Lys 340 Thr Ile Ser 355 Lys Leu Pro 370 Pro Ser Cys 385 Leu Vai Lys Ser Asn Gly Gin Asp Ser Asp Gly 420 Ser Arg Trp 435 Gin Ala Leu 450 His Asn
Cys 165 Leu Vai Lys Ser Gly Ala Leu Ser Ser Gly Leu 200 Ser Leu Gly 215 Thr Asn Thr 230 Lys Vai Pro 245 Ser Cys Pro Phe Pro Pro Lys Vai Thr Cys Vai 280 Phe Asn Trp 295 Tyr Pro Arg 310 Glu Glu Thr 325 Vai Leu His Vai Ser Asn Lys Ala Lys Gly Gin 360 Gin Glu Glu 375 Met Gly Phe 390 Tyr Pro Pro 405 Glu Asn Asn Ser Phe Phe Leu Glu Gly Asn Vai 440 His Tyr Thr 455 Gin
Asp Tyr 170 Phe Pro Thr 185 Ser Gly vai Tyr Ser Leu Ser Lys Thr Tyr Thr 220 Asp Lys Arg 235 Vai Ala Pro 250 Glu Phe Pro 265 Lys Asp Thr Vai Vai Asp Vai Vai Asp Gly Val 300 Gin Phe Asn 315 Ser Gin Asp 330 Trp Leu Gly 345 Leu Pro Ser Pro Arg Glu Pro Thr Lys Asn Gin 380 Ser Asp Ile 395 Ala Tyr Lys 410 Thr Ala Tyr 425 Ser Arg Leu Phe Ser Cys Ser Lys Ser Leu Ser 460
Glu Pro Val 175 Thr His Thr 190 Phe Pro Ser 205 Val Val Thr Cys Asn Val Asp Glu Ser Lys Tyr 240 Leu Gly Gly 255 Pro Leu Met 270 Ile Ser Ser 285 Gin Glu Asp Glu Val His Asn Thr Tyr Arg Val 320 Asn Gly Lys 335 Glu Ser Ile 350 Glu Lys Gin 365 Val Tyr Thr Val Ser Leu Thr Val Glu Trp Glu 400 Pro Pro Val 415 Leu Thr Val 430 Asp Lys Val 445 Met His Glu Leu Ser Leu Gly 244 ΡΕ2177537
Lys 465 <210> 15 <211> 705 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 15 atgttgccat cacaactcat tgggtttctg ctgctctggg ttccagcttc caggggtgaa 60 attgtgctga ctcagtctcc agactttcag tctgtgactc caaaagagaa agtcaccatc 120 acctgccggg ccagtcagag aattggtagt agcttacact ggtaccagca gaaaccagat 180 cagtctccaa aactcctcat caagtatgct tcccagtcct tctcaggggt cccctcgagg 240 ttcagtggca. gtggatctgg gacaaatttc accctcacca tcaatggcct ggaagctgaa 300 gatgctgcaa cttattactg tcatcagagt ggtcgtttac cgctcacttt cggcggaggg 360 accaaggtgg agatcaaacg aactgtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 420 gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 480 agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 540 agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 600 agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 660 agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt agtga 705 <210> 16 <211> 233
<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16
Met Leu Pro Ser Gin Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp· Vai Pro Ala 1 5 10 15 Ser Arg Gly Glu Ile Vai Leu Thr Gin Ser Pro Asp Phe Gin Ser Vai 20 25 30 Thr Pro Lys Glu Lys Vai Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gin Arg Ile 35 40 45 Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gin Ser Pro Lys 50 55 60 Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gin Ser Phe Ser Gly Vai Pro Ser Arg 65 70 75 80 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asn Phe Thr Leu Thr Ile Asn Gly 85 90 95 Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Ser Gly Arg 100 105 110 Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai Glu Ile Lys Arg Thr 115 120 125 Vai Ala Ala Pro Ser Vai Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu 130 135 140 245 ΡΕ2177537
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 145 150 155 160 Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly 165 170 175 Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 180 185 190 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 195 200 205 Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Vai 210 215 220 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 <210> 17 <211> 1410
<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 17 atggagtttg ggctgagctg ggttttcctc gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcgtg tgtgcagcct ctggattcac cttcagtagc ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttata gactccgtga agggccgatt caccatctcc caaatgaaca gcGtgagcgc tgaggacacg gcgataacct actactacta cggaatggac tcctcagctt ccaccaaggg cccatccgtc tccgagagca cagccgccct gggctgcctg gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg aagacctaca cctgcaacgt agatcacaag gagtccaaat atggtccccc atgcccatca tcagtcttcc tgttcccccc aaaacccaag gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccag gtggatggcg tggaggtgca taatgccaag acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc gccaaagggc agccccgaga gccacaggtg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtggagtggg agagcaatgg acagccggag gactccgacg gctccttctt cctctacagc gaggggaatg tcttctcatg ctccgtgatg aagagcctct ccctgtctct gggtaaatga
<210> 18 <211> 469 <212> PRT <213> Homo sapiens gttgctcttt taagaggtgt ccagtgtcag gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc tatggcatgc actgggtccg ccaggctcca tcaaatgatg gaaataataa atactatgca agagacaatt ccaaaaacac gctgtatctg gctgtgtatt actgtgcgag agatagtacg gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc ttccccctgg cgccctgctc caggagcacc gtcaaggact acttccccga accggtgacg ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacg cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt tgcccagcac ctgagttcct ggggggacca gacactctca tgatctcccg gacccctgag gaagaccccg aggtccagtt caactggtac acaaagccgc gggaggagca gttcaacagc ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag ccgtcctcca tcgagaaaac catctccaaa tacaccctgc ccccatccca ggaggagatg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg aggctaaccg tggacaagag caggtggcag catgaggctc tgcacaacca ctacacacag 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1410 246 ΡΕ2177537 <400> 18
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val 1 5 vai Gin Cys Gin Vai Gin Leu Val 20 Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser 35 40 Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val 50 55 Glu Trp Vai Ala Vai Ile Ser Asn 65 70 Asp Ser Vai Lys Gly Arg Phe Thr 85 Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser 100 Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Ser Thr 115 120 Met Asp Vai Trp Gly Gin Gly Thr 130 135 Thr Lys Gly Pro Ser val Phe Pro 145 150 Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 165 Glu Pro Vai Thr Vai Ser Trp Asn 180 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 195 200 Ser Vai Vai Thr Val Pro Ser Ser 210 215 Cys Asn Vai Asp His Lys Pro Ser 225 230 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys 245 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 260 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 275 280 Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin 290 295
Phe Leu 10 Val Ala Leu Leu Arg Gly 15 Glu 25 Ser Gly Gly Gly Val 30 Val Gin Cys Ala Ala Ser Gly 45 Phe Thr Phe Arg Gin Ala Pro Gly 60 Lys Gly Leu Asp Gly Asn 75 Asn Lys Tyr Tyr Ala 80 Ile Ser 90 Arg Asp Asn Ser Lys 95 Asn Leu 105 Ser Ala Glu Asp Thr 110 Ala Val Ala Ile Thr Tyr Tyr 125 Tyr Tyr Gly Thr Val Thr Val 140 Ser Ser Ala Ser Leu Ala Pro 155 Cys Ser Arg Ser Thr 160 Cys Leu 170 Val Lys Asp Tyr Phe 175 Pro Ser 185 Gly Ala Leu Thr Ser 190 Gly Val Ser Ser Gly Leu Tyr 205 Ser Leu Ser Ser Leu Gly Thr 220 Lys Thr Tyr Thr Asn Thr Lys 235 Val Asp Lys Arg Val 240 Pro Ser 250 Cys Pro Ala Pro Glu 255 Phe Phe 265 Pro Pro Lys Pro Lys 270 Asp Thr Val Thr Cys Val Val 285 Val Asp Val Phe Asn Trp Tyr 300 val Asp Gly Val 247 ΡΕ2177537
Glu Vai His Asn Ala Lys Thr Lys 305 310 Thr Tyr Arg Vai Vai Ser Vai Leu 325 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 340 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 355 360 Gin Vai Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 370 375 Vai Ser Leu Thr Cys Leu Vai Lys 385 390 Vai Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 405 Pro Pro Vai Leu Asp Ser Asp Gly 420 Thr Vai Asp Lys Ser Arg Trp Gin 435 440 Vai Met His Glu Ala Leu His Asn 450 455 Leu Ser Leu Gly Lys 465
Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser 315 320 Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu 330 335 Vai Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 345 350 Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro 365 Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin 380 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 395 400 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 410 415 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 425 430 Glu Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser 445 His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser 460 <210> 19 <211> 714
<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 19 atggacatga gggtccccgc tcagctcctg agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca gtcaccatca cttgccgggc aagtcagaat aaaccaggga aagcccctaa gctcctgatc ccatcacggt tcagtggtag tggatctggg caacctgatg attttgcaac ttactcctgt ggccctggga ccaaagtgga tatcaaacga ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc gggctcctgc tactctggct ccgaggtgcc 60 tcctccctgt ctgcatctgt cggagacaga 120 attagtagct atttaaattg gtttcagcag 180 tatgctgcat ccggtttgaa gcgtggggtc 240 acagatttca ctctcaccat caggactctg 300 caccagagtt acagtctccc attcactttc 360 actgtggctg caccatctgt cttcatcttc 420 actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 480 aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 540 aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 600 cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 660 ttcaacaggg gagagtgtta gtga 714 <210> 20 <211> 236 248 ΡΕ2177537
<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20
Met Asp Met Arg Vai Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Vai Gly Asp Arg Vai Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 45 Gin Asn Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Gly Leu Lys Arg Gly Vai 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Arg Thr Leu Gin Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Ser Cys His Gin 100 105 110 Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Vai Asp Ile 115 120 125 Lys Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140 Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu 165 170 175 Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205 Glu Lys HÍS Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr HÍS Gin Gly Leu Ser 210 215 220 Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 21 <211> 1413
<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 21 atgaaacacc tgtggttctt cctcctgctg gtggcagctc ccagatgggt cctgtcccag 60 249 ΡΕ2177537 gtgcagctgc aggagtcggg cccaggactg tgcactgtct ctggtgactc catcagtagt gggaagggac tggagtggat tgggcgtatc tccctcaggg gtcgagtcac cattttagca ctgagttctg tgaccgccgc ggacacggcc ataattcggg gacttattcc atccttcttt gtctcctcag cttccaccaa gggcccatcc acctccgaga gcacagccgc cctgggctgc acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc cagtcctcag gactctactc cctcagcagc acgaagacct acacctgcaa cgtagatcac gttgagtcca aatatggtcc cccatgccca ccatcagtct tcctgttccc cccaaaaccc gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc tacgtggatg gcgtggaggt gcataatgcc agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc aaagccaaag ggcagccccg agagccacag atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg ctggactccg acggctcctt cttcctctac caggagggga atgtcttctc atgctccgtg cagaagagcc tctccctgtc tctgggtaaa
<210> 22 <211> 470 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 gtgaagcctt cggagaccct gtccctcacc 120 aactattgga gctggatccg gcagcccgcc 180 tataccagtg ggggcaccaa ctccaacccc 240 gacacgtcca agaaccagtt ctctctgaaa 300 gtgtattact gtgcgagaga tcgtattact 360 gactactggg gccagggaac cctggtcacc 420 gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc 480 ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 540 agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 600 gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc 660 aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga 720 tcatgcccag cacctgagtt cctgggggga 780 aaggacactc tcatgatctc ccggacccct 840 caggaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 900 aagacaaagc cgcgggagga gcagttcaac 960 gtcctgcacc aggactggct gaacggcaag 1020 ctcccgtcct ccatcgagaa aaccatctcc 1080 gtgtacaccc tgcccccatc ccaggaggag 1140 ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 1200 gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1260 agcaggctaa ccgtggacaa gagcaggtgg 1320 atgcatgagg ctctgcacaa ccactacaca 1380 tga 1413
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu 1 5 vai Leu Ser Gin Vai Gin Leu Gin 20 Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr 35 40 Ser Ser Asn Tyr Trp Ser Trp Ile 50 55 Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Thr 65 70 Ser Leu Arg Gly Arg Vai Thr Ile 85 Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Vai 100 Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Ile Thr 115 120 Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 130 135
Leu Leu 10 Vai Ala Ala Pro Arg 15 Trp Glu 25 Ser Gly Pro Gly Leu 30 Vai Lys Cys Thr vai Ser Gly 45 Asp Ser Ile Arg Gin Pro Ala 60 Gly Lys Gly Leu Ser Gly Gly 75 Thr Asn Ser Asn Pro 80 Leu Ala 90 Asp Thr Ser Lys Asn 95 Gin Thr 105 Ala Ala Asp Thr Ala 110 Vai Tyr Ile Ile Arg Gly Leu 125 Ile Pro Ser Thr Leu Vai Thr 140 Vai Ser Ser Ala 250 ΡΕ2177537
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser 145 150 155 160 Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe 165 170 175 Pro Glu Pro Vai Thr Vai Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 180 185 190 Vai His Thr Phe Pro Ala Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 195 200 205 Ser Ser Vai vai Thr vai Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr 210 215 220 Thr Cys Asn Vai Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Arg 225 230 235 240 Vai Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu 245 250 255 Phe Leu Gly Gly Pro Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 260 265 270 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp 275 280 285 Vai Ser Gin Glu Asp Pro Glu Vai Gin Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly 290 295 300 Vai Glu Vai His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn 305 310 315 320 Ser Thr Tyr Arg Vai Vai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp 325 330 335 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Gly Leu Pro 340 345 350 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu 355 360 365 Pro Gin Vai Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn 370 375 380 Gin Vai Ser Leu Thr Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 385 390 395 400 Ala Vai Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 405 410 415 Thr Pro Pro Vai Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg 420 425 430 Leu Thr Vai Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Vai Phe Ser Cys 435 440 445 251 ΡΕ2177537
Thr Gin Lys Ser Leu 460 ggatctctgg tgcctacggg 60 ctctgggcga gagggccacc 120 acaataagac ctacttagct 180 tttactgggc atctatacgg 240 ggacagattt cactctcacc 300 gtcaacaata ttatagtatt 360 aacgaactgt ggctgcacca 420 ctggaactgc ctctgttgtg 480 agtggaaggt ggataacgcc 540 acagcaagga cagcacctac 600 agaaacacaa agtctacgcc 660 agagcttcaa caggggagag 720 729
Ser Vai Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 450 455
Ser Leu Ser Leu Gly Lys 465 470 <210> 23 <211> 729
<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 23 atggtgttgc agacccaggt cttcatttct ctgttgctct gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca tggtaccaac agaaaccaag acagcctcct aaattgctca gaatatgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttatttct cctcccctca ctttcggcgg agggaccaag gtggagahca tctgtcttca tcttcccgcc atctgatgag cagttgaaat tgcctgctga ataacttcta tcccagagag gccaaagtac ctccaatcgg gtaactccca ggagagtgtc acagagcagg agcctcagca gcaccctgac gctgagcaaa gcagactacg tgcgaagtca cccatcaggg cctgagctcg cccgtcacaa tgttagtga
<210> 24 <211> 241 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24
Met Vai Leu Gin Thr Gin Vai Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser 1 5 10 15 Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Vai Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala 20 25 30 Vai Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gin Ser 35 40 45 Vai Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Thr Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin 50 55 60 Lys Pro Arg Gin Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ile Arg 65 70 75 80 Glu Tyr Gly Vai Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 85 90 95 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Vai Ala Vai Tyr 100 105 110
Phe Cys Gin Gin Tyr Tyr Ser Ile Pro Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly 252 ΡΕ2177537 115 120 125
Thr Lys Vai Glu Ile Lys Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile 130 135 140 Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser val Val 145 150 155 160 Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys 165 170 175 Vai Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu 180 185 190 Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu 195 200 205 Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr 210 215 220 His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu 225 230 235 240
Cys <210> 25 <211> 1419
<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 25 atggagtttg ggctgagctg gctttttctt gtggctattt taaaaggtgt ccagtgtgag 60 gtgcagctgt tggagtctgg gggagacttg gtccagcctg gggggtccct gagactctcc 120 tgtgcagcct ctggattcac ctttagaagt tatgccatga actgggtccg acaggctcca 180 gggaaggggc tggagtgggt ctcagttatt agtggtcgtg gtggtactac atactacgca 240 gactccgtga agggccggtt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctg 300 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacgcg gccgtatatt actgtgcgaa gatagcagtg 360 gctggagagg ggctctacta ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 420 accgtctcct cagcttccac caagggccca tccgtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg 480 agcacctccg agaacacagc cgccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 540 gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc 600 ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc tagcagcttg 660 ggcacgaaga cctacacctg caacgtagat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 720 agagttgagt ccaaatatgg tcccccatgc ccatcatgcc cagcacctga gttcctgggg 780 ggaccatcag tcttcctgtt ccccccaaaa cccaaggaca ctctcatgat ctcccggacc 840 cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg agccaggaag accccgaggt ccagttcaac 900 tggtacgtgg atggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagttc 960 aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaacggc 1020 aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa ggcctcccgt cctccatcga gaaaaccatc 1080 tccaaagcca aagggcagcc ccgagagcca caggtgtaca ccctgccccc atcccaggag 1140 gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac 1200 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag çcggagaaca actacaagac cacgcctccc 1260 gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaggc taaccgtgga caagagcagg 1320 tggcaggagg ggaatgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca çaaccactac 1380 acacagaaga gcctctccct gtctctgggt aaatgatag 1419 253 ΡΕ2177537
<210> 26 <211> 471 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Vai Ala ile Leu Lys Gly 1 5 10 15 Vai Gin Cys Glu Vai Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Vai Gin 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Arg Ser Tyr Ala Met Asn Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Vai Ser Vai Ile Ser Gly Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Ser Vai Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95 Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Ala Ala Vai 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Lys He Ala Vai Ala Gly Glu Gly Leu Tyr Tyr Tyr 115 120 125 Tyr Gly Met Asp Vai Trp Gly Gin Gly Thr Thr Vai Thr Vai Ser Ser 130 135 140 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 145 150 155 160 Ser Thr Ser Glu Asn Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr 165 170 175 Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 180 185 190 Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 195 200 205 Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 210 215 220 Tyr Thr Cys Asn Vai Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys 225 230 235 240 Arg Vai Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro 245 250 255
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 254 - ΡΕ2177537 260 265 270 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai 275 280 285 Asp Vai Ser Gin Glu Asp Pro Glu Vai Gin Phe Asn Trp Tyr Vai Asp 290 295 300 Gly Vai Glu Vai His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe 305 310 315 320 Asn Ser Thr Tyr Arg Vai Vai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp 325 330 335 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Gly Leu 340 345 350 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg 355 360 365 Glu Pro Gin Vai Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys 370 375 380 Asn Gin Vai Ser Leu Thr Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 385 390 395 400 Ile Ala Vai Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 405 410 415 Thr Thr Pro Pro Vai Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 420 425 430 Arg Leu Thr Vai Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Vai Phe Ser 435 440 445 Cys Ser Vai Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser 450 455 460 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 465 470 <210> 27 <211> 720 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 27 atggacatga agatgtgaca gtcaccttca aaaccaggga ccatcaaggt caacctgaag ggttttggcc atcttcccgc aataacttct gggtccccgc tccagatgac cttgccgggc aggcccctaa tccgtggcag attttgcaac aggggaccac catctgatga atcccagaga tcagctcctg ccagtctcca aagtcagaac gctcctgatc tggatctggg ttactactgt gctggatatc gcagttgaaa ggccaaagta gggctcctgc tcctccctgt attaccaact tatgctgcgt acagatttca caacagagtt aaacgaactg tctggaactg cagtggaagg tactctggct ctgcatctgt atttaaattg ccagtttgcc ctctcaccat acagtaatcc tggctgcacc cctctgttgt tggataacgc ccgaggtgcc 60 aggtgacaga 120 gtatcagcag 180 aagaggggtc 240 cagcagtctg 300 tccggagtgc 360 atctgtcttc 420 gtgcctgctg 480 cctccaatcg 540 255 ΡΕ2177537 ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 600 agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 660 acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgttagtga 720
<210> 28 <211> 238 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28
Met Asp Met Arg Vai Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Vai Gly Asp Arg Vai Thr Phe Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 45 Gin Asn Ile Thr Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Pro Arg Gly Vai 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin 100 105 110 Ser Tyr Ser Asn Pro Pro Glu Cys Gly Phe Gly Gin Gly Thr Thr Leu 115 120 125 Asp Ile Lys Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai Phe Ile Phe Pro Pro 130 135 140 Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu 145 150 155 160 Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn 165 170 175 Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser 180 185 190 Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala 195 200 205 Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly 210 215 220 Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 256 ΡΕ2177537 <210> 29 <211> 1434 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 29 atggaactgg ggctccgctg ggttttcctt gttgctattt tagaaggtgt ccagtgtgag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcctg gtcaagcctg gggggtccct gagactctcc 120 tgtgcagcct ctggattcac cttcagtagc tatagcatga actgggtccg ccaggctcca 180 gggaaggggc tggagtgggt ctcatccatt agtagtagta gtagttacat atactacgca 240 gactcagtga agggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaactc actgtatctg 300 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agatgggtat 360 agcagtggct ggtcctacta ctactactac ggtatggacg tctggggcca agggaccácg 420 gtcaccgtct cctcagcttc caccaagggc ccatccgtct tccccctggc gccctgctcc 480 aggagcacct ccgagagcac agccgccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 540 ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 600 gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 660 ttgggcacga agacctacac ctgcaacgta gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 720 aagagagttg agtccaaata tggtccccca tgcccatcat gcccagcacc tgagttcctg 780 gggggaccat cagtcttcct gttcccccca aaacccaagg acactctcat gatctcccgg 840 acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac gtgagccagg aagaccccga ggtccagttc 900 aactggtacg tggatggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 960 ttcaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaac 1020 ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaaggcctcc cgtcctccat cgagaaaacc 1080 atctccaaag ccaaagggca gccccgagag ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccag 1140 gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc 1200 gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1260 cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca ggctaaccgt ggacaagagc 1320 aggtggcagg aggggaatgt cttttcacgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1380 tacacacaga agagcctctc cctgtctctg ggtaaatgat aggaattctg atga 1434
<210> 30 <211> 472 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30
Met 1 Glu Leu Gly Leu 5 Arg Trp Vai Phe Leu 10 Vai Ala Ile Leu Glu Gly 15 Vai Gin Cys Glu 20 Vai Gin Leu Vai Glu 25 Ser Gly Gly Gly Leu 30 Vai Lys Pro Gly Gly 35 Ser Leu Arg Leu Ser 40 Cys Ala Ala Ser Gly 45 Phe Thr Phe Ser Ser 50 Tyr Ser Met Asn Trp 55 Vai Arg Gin Ala Pro 60 Gly Lys Gly Leu Glu 65 Trp Vai Ser Ser Ile 70 Ser Ser Ser Ser Ser 75 Tyr Ile Tyr Tyr Ala 80 Asp Ser Vai Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95
Ser Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Vai 257 ΡΕ2177537 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Tyr Ser Ser Gly Trp Ser Tyr Tyr Tyr 115 120 125 Tyr Tyr Gly Met Asp Vai Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 130 135 140 Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 145 150 155 160 Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 165 170 175 Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 180 185 190 Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr 195 200 205 Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys 210 215 220 Thr Tyr Thr Cys Asn Vai Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 225 230 235 240 Lys Arg Vai Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala 245 250 255 Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 260 265 270 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 275 280 285 Vai Asp Vai Ser Gin Glu Asp Pro Glu Vai Gin Phe Asn Trp Tyr Val 290 295 300 Asp Gly Vai Glu Vai His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin 305 310 315 320 Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Vai vai Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin 325 330 335 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly 340 345 350 Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro 355 360 365 Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr 370 375 380 Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 385 390 395 400
Asp Ile Ala Vai Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr 258 ΡΕ2177537 405 410 415
Lys Thr Thr Pro 420 Pro Vai Leu Asp Ser 425 Asp Gly Ser Phe Phe 430 Leu Tyr Ser Arg Leu 435 Thr Vai Asp Lys Ser 440 Arg Trp Gin Glu Gly 445 Asn Vai Phe Ser Arg 450 Ser Vai Met His Glu 4 55 Ala Leu His Asn His 460 Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 465 470 <210> 31 <211> 723
<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 31 atgaggctcc ctgctcagct cctggggctg ctaatgctct ggatacctgg atccagtgca 60 gatattgtga tgacccagac tccactctct ctgtccgtca ctcctggaca gccggcctcc 120 atctcctgca actctagtca gagcctcctg cttagtgatg gaaagaccta tttgaattgg 180 tacctgcaga agcccggcca gcctccacag ctcctgatct atgaagtttc caaccggttc 240 tctggagtgc cagacaggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac actgaaaatc 300 agccgggtgg aggctgagga tgttggggtt tattcctgca tgcaaagtat acagcttatg 360 tgcagttttg gccaggggac caagctggag atcaaacgaa ctgtggctgc accatctgtc 420 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 480 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 540 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 600 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 660 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 720 tga 723
<210> 32 <211> 239 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32
Met Arg Leu Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Ile Pro 1 5 10 15 Gly Ser Ser Ala Asp Ile Vai Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Ser 20 25 30 Vai Thr Pro Gly Gin Pro Ala Ser Ile Ser Cys Asn Ser Ser Gin Ser 35 40 45 Leu Leu Leu Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gin Lys 50 55 60 Pro Gly Gin Pro Pro Gin Leu Leu Ile Tyr Glu Vai Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80 259 ΡΕ2177537
Ser Gly vai Pro Asp Arg pne ser Gly ser Giy ser c. 1- ·< inr Asp rne 85 90 95 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Ser 100 105 110 Cys Met Gin Ser Ile Gin Leu Met Cys Ser Phe Gly Gin Gly Thr Lys 115 120 125 Leu Glu Ile Lys Arg Thr vai Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 130 135 140 Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 145 150 155 160 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Val Asp 165 170 175 Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp 180 185 190 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin 210 215 220 Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 33 <211> 1410 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 33 atggactgga gttcagctgg tgcaaggctt ggacaagggc cagaaggtcc gacctgagga agctcgtccg gtctcctcag acctccgaga acggtgtcgt cagtcctcag acccagacct gttgagcgca tcagtcttcc gtcacgtgcg gtggacggcg acgttccgtg tacaagtgca accaaagggc accaagaacc cctggagcat tgcagtctgg ctggttacac ttgagtggat agggcagagt gcctgagatc gagactacta cctccaccaa gcacagcggc ggaactcagg gactctactc acacctgcaa aatgttgtgt tcttcccccc tggtggtgga tggaggtgca tggtcagcgt aggtctccaa agccccgaga aggtcagcct ccttttcttg agctgaggtg ctttaccagc gggatggatc caccatgacc tgacgacacg ttacggtatg gggcccatcg cctgggctgc cgctctgacc cctcagcagc cgtagatcac cgagtgccca aaaacccaag cgtgagccac taatgccaag cctcaccgtt caaaggcctc accacaggtg gacctgcctg gtggcagcag aagaagcctg tatggtatca agcgtttaca gcagacacat gccgtgtatt gacgtctggg gtcttccccc ctggtcaagg agcggcgtgc gtggtgaccg aagcccagca ccgtgcccag gacaccctca gaagaccccg acaaagccac gtgcaccagg ccagccccca tacaccctgc gtcaaaggct caacaggtgc gggcctcagt actgggtgcg gtggtaacac ccacgagcac actgtgcgag gccaagggac tggcgccctg actacttccc acaccttccc tgccctccag acaccaaggt caccacctgt tgatctcccg aggtccagtt gggaggagca actggctgaa tcgagaaaac ccccatcccg tctaccccag ccactcccag gaaggtctcc acaggcccct aaactatgca agcctacatg agagggtagc cacggtcacc ctccaggagc cgaaccggtg agctgtccta caacttcggc ggacaagaca ggcaggaccg gacccctgag caactggtac gttcaacagc cggcaaggag catctccaaa ggaggagatg cgacatcgcc 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 260 ΡΕ2177537 1260 1320 1380 1410 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacacc tcccatgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga
<210> 34 <211> 469 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34
Met Asp Trp Thr Trp Ser Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Ser Tyr Gly Ile Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Trp Ile Ser Val Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala 65 70 75 80 Gin Lys Vai Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Asp Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Ser Ser Ser Ser Gly Asp Tyr Tyr Tyr 115 120 125 Gly Met Asp Vai Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala 130 135 140 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser 145 150 155 160 Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 165 170 175 Pro Glu Pro Vai Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 180 185 190 Vai His Thr Phe Pro Ala val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 195 200 205 Ser Ser Vai Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr 210 215 220 Thr Cys Asn Vai Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr 225 230 235 240 261 ΡΕ2177537
Vai Glu Arg Lys Cys Cys Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro 245 250 255 Vai Ala Gly Pro Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 260 265 270 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai 275 280 285 Ser His Glu Asp Pro Glu Vai Gin Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai 290 295 300 Glu Vai His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser 305 310 315 320 Thr Phe Arg Vai Vai Ser Vai Leu Thr Vai Vai His Gin Asp Trp Leu 325 330 335 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala 340 345 350 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro 355 360 365 Gin Vai Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin 370 375 380 Vai Ser Leu Thr Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 385 390 395 400 Vai Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 405 410 415 Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 420 425 430 Thr Vai Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser 435 440 445 Vai Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser 450 455 460
Leu Ser Pro Gly Lys 465 <210> 35 <211> 723
<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 35 atgaggctcc ctgctcagct cctggggctg ctaatgctct ggatacctgg atccagtgca 60 gatattgtga tgacccagac tccactctct ctgtccgtca cccctggaca gccggcctcc 120 atctcctgca agtctagtca gagcctcctg catactgatg gaacgaccta tttgtattgg 180 tacctgcaga agccaggcca gcctccacag ctcctgatct atgaagtttc caaccggttc 240 tctggagtgc cagataggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac actgaaaatc 300 262 ΡΕ2177537 agccgggtgg aggctgagga tgttgggatt tattactgca tgcaaaatat acagcttccg 360 tggacgttcg gccaagggac caaggtggaa atcaaacgaa ctgtggctgc accatctgtc 420 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 480 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 540 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 600 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 660 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 720 723 tga
<210> 36 <211> 239 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36
Met Arg Leu Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Ile Pro 1 5 10 15 Gly Ser Ser Ala Asp Ile Vai Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Ser 20 25 30 Vai Thr Pro Gly Gin Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gin Ser 35 40 45 Leu Leu His Thr Asp Gly Thr Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gin Lys 50 55 60 Pro Gly Gin Pro Pro Gin Leu Leu Ile Tyr Glu Vai Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80 Ser Gly Vai Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Vai Gly Ile Tyr Tyr 100 105 110 Cys Met Gin Asn Ile Gin Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys 115 120 125 Vai Glu Ile Lys Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai Phe Ile Phe Pro 130 135 140 Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Val Cys Leu 145 150 155 160 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Val Asp 165 170 175 Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp 180 185 190 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu val Thr His Gin 210 215 220 263 ΡΕ2177537 <210> 37 <211> 1416 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 37 atgaaacacc tgtggttctt cctcctgctg gtgcagctgc aggagtcggg cccaggactg tgcactgtct ctggtagctc catcagtagt gggaagggac tggagtggat tgggcgtatc tccctcaaga gtcgagtcac catgtcacta ctgagctctg tgaccgccgc ggacacggcc tattactatg cttcggggag ttattactac gtcaccgtct cctcagcctc caccaagggc aggagcacct ccgagagcac agcggccctg ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgta aagacagttg agcgcaaatg ttgtgtcgag ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat aacagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa tccaaaacca aagggcagcc ccgagaacca gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag atgctggact ccgacggctc cttcttcctc tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt gtggcagctc ccagatgggt cctgtcccag 60 gtgaagcctt cggagaccct gtccctcacc 120 taccactgga actggatccg gcagcccgcc 180 tataccagtg ggagcaccaa ctacaacccc 240 gacacgtcca agaaccagtt ctccctgaag 300 gtgtattact gtgcgagaga gggggtcagg 360 ggtctggacg tctggggcca agggaccacg 420 ccatcggtct tccccctggc gccctgctcc 480 ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 540 ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccagct 600 agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcaac 660 gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 720 tgcccaccgt gcccagcacc acctgtggca 780 cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 840 agccacgaag accccgaggt ccagttcaac 900 gccaagacaa agccacggga ggagcagttc 960 accgttgtgc accaggactg gctgaacggc 1020 ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1080 caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1140 tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac 1200 ccggagaaca actacaagac cacacctccc 1260 tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1320 gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1380 aaatga 1416 <210> 38 <211> 471 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu 1 5 Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Gin 20 Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr 35 40 Ser Ser Tyr HiS Trp Asn Trp Ile 50 55 Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Thr 65 70
Leu Leu 10 Val Ala Ala Pro Arg 15 Trp Glu 25 Ser Gly Pro Gly Leu 30 Val Lys Cys Thr Val Ser Gly 45 Ser Ser Ile Arg Gin Pro Ala 60 Gly Lys Gly Leu Ser Gly Ser 75 Thr Asn Tyr Asn Pro 80 264 ΡΕ2177537
Ser Leu Lys Ser Arg Vai Thr Met Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gin 85 90 95 Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Vai Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr 100 105 110 Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Vai Arg Tyr Tyr Tyr Ala Ser Gly Ser Tyr 115 120 125 Tyr Tyr Gly Leu Asp Vai Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 130 135 140 Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 145 150 155 160 Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 165 170 175 Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 180 185 190 Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr 195 200 205 Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin 210 215 220 Thr Tyr Thr Cys Asn vai Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 225 230 235 240 Lys Thr Vai Glu Arg Lys Cys Cys Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala 245 250 255 Pro Pro Vai Ala Gly Pro Se r Vai Phe T ucu ΠΚλ r nc Pro Pro Lys Pro Lys 260 265 270 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 275 280 285 Asp Vai Ser His Glu Asp Pro Glu Vai Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp 290 295 300 Gly Vai Glu Vai His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe 305 310 315 320 Asn Ser Thr Phe Arg Vai Vai Ser Vai Leu Thr Val Val His Gin Asp 325 330 335 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 34 0 345 350 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg 355 360 365 Glu Pro Gin Vai Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 370 375 380 265 ΡΕ2177537
Asn 385 Gin Vai Ser Leu Thr 390 Cys Leu Ile Ala Vai Glu Trp 405 Glu Ser Asn Thr Thr Pro Pro 420 Met Leu Asp Ser Lys Leu Thr 435 Val Asp Lys Ser Arg 440 Cys Ser 450 val Met His Glu Ala 4 55 Leu Leu 465 Ser Leu Ser Pro Gly 470 Lys <210> 39 <211> 720
<212> DNA <213> Homo sapiens
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 395 400 Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 410 415 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 425 430 Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser 445 His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser 460 <400> 39 atgaggctcc ctgctcagct cctggggctg gatattgtga tgactcagtc tccactctcc atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg tacctgcaga agccagggca gtctccacag tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt actttcggcg gagggaccaa ggtggagatc atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa aataacttct atcccagaga ggccaaagta ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag agcaccctga cgctgagcaa agcagactac acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca <210> 40 <211> 238
<212> PRT <213> Homo sapiens ctaatgctct gggtctctgg atccagtggg 60 ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 120 catggtaatg gatacaacta tttggattgg 180 ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 240 ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 300 tattactgca tgcaagctct acaaactctc 360 aaacgaactg tggctgcacc atctgtcttc 420 tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 480 cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 540 gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 600 gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 660 aagagcttca acaggggaga gtgttagtga 720 <400> 40
Met 1 Arg Leu Pro Ala 5 Gin Leu Leu Gly Ser Ser Gly 20 Asp Ile Val Met Val Thr Pro 35 Gly Glu Pro Ala Ser 40 Leu Leu 50 His Gly Asn Gly Tyr 55 Asn
Gly Leu 10 Leu Met Leu Trp Val 15 Ser Thr 25 Gin Ser Pro Leu Ser 30 Leu Pro Ile Ser Cys Arg Ser 45 Ser Gin Ser Tyr Leu Asp Trp 60 Tyr Leu Gin Lys 266 ΡΕ2177537
Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala 65 70 75 80 Ser Gly Vai Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 Thr Leu Lys Ile Ser Arg vai Glu Ala Glu Asp Vai Gly Vai Tyr Tyr 100 105 110 Cys Met Gin Ala Leu Gin Thr Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai 115 120 125 Glu lie Lys Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai Phe Ile Phe Pro Pro 130 135 140 Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu 145 150 155 160 Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn 165 170 175 Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser 180 185 190 Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala 195 200 205 Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly 210 215 220 Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 41 <211> 1410 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 41 atggactgga cctggagcat ccttttcttg gtggcagcag caacaggtgc ccactcccag 60 gttcagctgg tgcagtctgg agctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc 120 tgcgaggctt ctggttacac ctttaccagc tatggtatcg actgggtgcg acaggcccct 180 ggacaagggc ttgagtggat gggacggatc agcgtttaca gtggtaacac aaactatgca 240 cagaagctcc agggcagagt caccatgtcc acagacacat ccacgagcac agcctacatg 300 gagctgagga gcctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag agagggtagc 360 agctcgtccg gagactacta ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 420 gtctcctcag cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc 480 acctccgaga gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 540 acggtgtcgt ggaactcagg cgctctgacc agcggcgtgc acaccttccc agctgtccta 600 cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag caacttcggc 660 acccagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaca 720 gttgagcgca aatgttgtgt cgagtgccca ccgtgcccag caccacctgt ggcaggaccg 780 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 840 gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 900 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccac gggaggagca gttcaacagc 960 267 ΡΕ2177537 acgttccgtg tggtcagcgt cctcaccgtt gtgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 1020 tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccagccccca ttgagaaaac catctccaaa 1080 accaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1140 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1200 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacacc tcccatgctg 1260 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1320 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1380 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1410
<210> 42 <211> 469 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42
Met Asp Trp Thr Trp Ser Ile Leu Phe Leu val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Ser Tyr Gly Ile Asp Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Trp Ile Ser Val Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala 65 70 75 80 Gin Lys Leu Gin Gly Arg Val Thr Met Ser Thr Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Ser Ser Ser Ser Gly Asp Tyr Tyr Tyr 115 120 125 Gly Met Asp Vai Trp Gly Gin Gly Thr Thr val Thr Val Ser Ser Ala 130 135 140 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser 145 150 155 160 Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 165 170 175 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 180 185 190 Vai His Thr Phe Pro Ala val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 195 200 205 Ser Ser Vai Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr 210 215 220 268 ΡΕ2177537
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<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 43 atgaggctcc ctgctcagct cctggggctg ctaatgctct ggatacctgg atccagtgcg 60 269 ΡΕ2177537 tccactctct ctgtccgtca gagcctcctg tatagtgatg gcctccacag ctcctgatct cagtggcagc gggtcaggga tgttggggtt tattactgca caaggtggaa atcaaacgaa tgagcagttg aaatctggaa agaggccaaa gtacagtgga tgtcacagag caggacagca caaagcagac tacgagaaac ctcgcccgtc acaaagagct gatattgtga tgacccagac atctcctgca agtctaatca tacctgcaga agccaggcca tctggagtgc cagataggtt agccgggtgg aggctgagga tggacgttcg gccaagggac ttcatcttcc cgccatctga ctgaataact tctatcccag tcgggtaact cccaggagag agcagcaccc tgacgctgag gtcacccatc agggcctgag tga <210> 44 <211> 239
<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44 cccctggaca gccggcctcc 120 gaaagaccta tttgttttgg 180 atgaagtttc caaccgattc 240 cagatttcac actgaaaatc 300 tgcaaagtat acagcttccg 360 ctgtggctgc accatctgtc 420 ctgcctctgt tgtgtgcctg 480 aggtggataa cgccctccaa 540 aggacagcac ctacagcctc 600 acaaagtcta cgcctgcgaa 660 tcaacagggg agagtgttag 720 723
Gly Ser Ser Ala 20 Asp Ile val Met Vai Thr Pro 35 Gly Gin Pro Ala Ser 40 Leu Leu 50 Tyr Ser Asp Gly Lys 55 Thr Pro 65 Gly Gin Pro Pro Gin 70 Leu Leu Ser Gly Vai Pro Asp 85 Arg Phe Ser Thr Leu Lys Ile 100 Ser Arg Val Glu Cys Met Gin 115 Ser Ile Gin Leu Pro 120 Vai Glu 130 Ile Lys Arg Thr Val 135 Ala Pro 145 Ser Asp Glu Gin Leu 150 Lys Ser Leu Asn Asn Phe Tyr 165 Pro Arg Glu Asn Ala Leu Gin 180 Ser Gly Asn Ser Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Ser 25 30 Ile Ser Cys Lys Ser Asn Gin Ser 45 Tyr Leu Phe Trp Tyr Leu Gin Lys 60 Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe 75 80 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 90 95 Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 105 110 Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys 125 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 140 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 155 160 Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp 170 175 Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp 185 190 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 270 ΡΕ2177537 195 200 205
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His Gin 210 215 220
Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 45 <211> 1389
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Phe Leu 10 Val Ala Leu Leu Arg 15 Gly Glu 25 Ser Gly Gly Gly Val 30 Val Gin Cys Ala Ala Ser Gly 45 Phe Thr Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 271 ΡΕ2177537 50 55
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Asp Gly Ser 75 Asn Glu Tyr Tyr Ala 80 Ile Ser 90 Arg Asp Asn Ser Lys 95 Asn Leu 105 Arg Ala Glu Asp Thr 110 Ala Val His Phe Ala Tyr Trp 125 Gly Gin Gly Ser Thr Lys Gly 140 Pro Ser Val Phe Thr Ser Glu 155 Ser Thr Ala Ala Leu 160 Pro Glu 170 Pro Val Thr Val Ser 175 Trp Val 185 His Thr Phe Pro Ala 190 Val Leu Ser Ser Val Val Thr 205 Val Pro Ser Thr Cys Asn Val 220 Asp His Lys Pro Val Glu Ser 235 Lys Tyr Gly Pro Pro 240 Phe Leu 250 Gly Gly Pro Ser Val 255 Phe Thr 265 Leu Met Ile Ser Arg 270 Thr Pro Val Ser Gin Glu Asp 285 Pro Glu Val val Glu Val His 300 Asn Ala Lys Thr Ser Thr Tyr 315 Arg Val Val Ser Val 320 Leu Asn 330 Gly Lys Glu Tyr Lys 335 Cys Ser 345 Ser Ile Glu Lys Thr 350 Ile Ser
Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr Leu Pro Pro 272 ΡΕ2177537 355 350 365
Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin vai Ser Leu Thr Cys Leu Vai 370 375 380 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Vai Glu Trp Glu Ser Asn Gly 385 390 395 400 Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai Leu Asp Ser Asp 405 410 415 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Vai Asp Lys Ser Arg Trp 420 425 430 Gin Glu Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu Ala Leu His 435 440 445 Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 450 455 4 60 <210> 47 <211> 720
<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 47 atggacatga gggtccctgc tcagctcctg gggctcctgc tgctctggct ctcagtcgca 60 ggtgccagat gtgacatcca gatgacccag tctccatcct ccctgtctgc atctgtagga 120 gacagagtca ccatcacttg ccaggcgagt caggacatta gcaactattt aaattggtat 180 cagcagaaac cagggaaagc ccctaagctc ctgatctacg atgcatccaa tttggaaaca 240 ggggtcccat caaggttcag tggaagtgga tctgggacag attttacttt caccatcagc 300 agcctgcagc ctgaagatat tgcaacatat tcctgtcaac actctgataa tctctcgatc 360 accttcggcc aggggacacg actggagatt aaacgaactg tggctgcacc atctgtcttc 420 atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 480 aataacttct accccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 540 ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 600 agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 660 acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgttagtga 720
<210> 48 <211> 238 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48
Met 1 Asp Met Arg Vai 5 Pro Ala Gin Leu Leu 10 Gly Leu Leu Leu Leu 15 Trp Leu Ser vai Ala 20 Gly Ala Arg Cys Asp 25 Ile Gin Met Thr Gin 30 Ser Pro Ser Ser Leu 35 Ser Ala Ser Vai Gly Asp 40 Arg Vai Thr Ile 45 Thr Cys Gin Ala Ser Gin Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 273 ΡΕ2177537 50 55 60
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr 65 70 75 80 Gly Vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 85 90 95 Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Ser Cys 100 105 110 Gin His Ser Asp Asn Leu Ser ile Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu 115 120 125 Glu Ile Lys Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai Phe Ile Phe Pro Pro 130 135 140 Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu 145 150 155 160 Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn 165 170 175 Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser 180 185 190 Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala 195 200 205 Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu vai Thr His Gin Gly 210 215 220 Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235
<210> 49 <211> 681 <212> DNA <213> Macaca fascicularis <400> 49 atggatcggg gcctggccct cctgctggcg gggcttctgg ggctcctcca gccgggctgc 60 ggccagtccc tccaggtgaa gcccctgcag gtggagcccc cggagccggt ggtggccgtg 120 gccctgggcg cctctcgcca gctcacctgc cgcctggact gcgcggacgg cggggccacg 180 gtgcagtggc ggggcctgga caccagcctg ggcgcggtgc agtcggacgc gggccgcagc 240 gtcctcaccg tgcgcaacgc ctcgctgtcg gcggccggga cccgtgtgtg cgtgggctcc 300 tgcgggggcc gcaccttcca gcacaccgtg cggctccttg tgtacgcctt cccggaccag 360 ctgaccatct ccccggcagc cctggtgcct ggtgacccgg aggtggcctg tacggctcac 420 aaagtcacgc ctgtggaccc caatgcgctc tccttctccc tgctcctggg ggaccaggaa 480 ctggaggggg cccaggctct gggcccggag gtggaggagg aggaggagcc ccaggaggag 540 gaggacgtgc tgttcagggt gacagagcgc tggçggctgc cgaccctggc aacccctgtc 600 ctgcccgcgc tctactgcca ggccacgatg aggctgcctg gcttggagct cagccaccgc 660 caggccatcc cggtcctgca c : 681 <210> 50 274 ΡΕ2177537
<211> 227 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 50
Leu Leu Ala Gly Leu Leu Gly Leu Leu 10 15 Leu Gin Val Lys Pro Leu Gin Val Glu 25 30 Val Ala Leu Gly Ala Ser Arg Gin Leu 40 45 Asp Gly Gly Ala Thr Val Gin Trp Arg 60 Ala Val Gin Ser Asp Ala Gly Arg Ser 75 80 Ser Leu Ser Ala Ala Gly Thr Arg Val 90 95 Arg Thr Phe Gin His Thr Val Arg Leu 105 110 Gin Leu Thr Ile Ser Pro Ala Ala Leu 120 125 Ala Cys Thr Ala His Lys Val Thr Pro 140 Phe Ser Leu Leu Leu Gly Asp Gin Glu 155 160 Gly Pro Glu Val Glu Glu Glu Glu Glu 170 175 Leu Phe Arg Val Thr Glu Arg Trp Arg 185 190 Val Leu Pro Ala Leu Tyr Cys Gin Ala 200 205 Glu Leu Ser His Arg Gin Ala Ile Pro 220
Met 1 Asp Arg Gly Leu 5 Ala Leu Gin Pro Gly Cys 20 Gly Gin Ser Pro Pro Glu 35 Pro Vai Vai Ala Thr Cys 50 Arg Leu Asp Cys Ala 55 Gly 65 Leu Asp Thr Ser Leu 70 Gly Vai Leu Thr Vai Arg 85 Asn Ala Cys Vai Gly Ser 100 Cys Gly Gly Leu Vai Tyr 115 Ala Phe Pro Asp Vai Pro 130 Gly Asp Pro Glu Vai 135 Vai 145 Asp Pro Asn Ala Leu 150 Ser Leu Glu Gly Ala Gin 165 Ala Leu Pro Gin Glu Glu 180 Glu Asp vai Leu Pro Thr 195 Leu Ala Thr Pro Thr Met 210 Arg Leu Pro Gly Leu 215 Vai 225 Leu His <210> 51 <211> 1398 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 51 275 ΡΕ2177537 atggagtttg ggctgagctg ggttttcctc gttgctcttt taagaggtgt ccagtgtcag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcgtg gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc 120 tgtgcagcgt ctggattcac cttcagtagc gatggcatgc actgggtccg ccaggctcca 180 ggcaaggggc tggagtgggt ggcaattata tggtatgatg gaagtaataa atattatgca 240 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctg 300 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtatatt actgtgcgag agatcccggc 360 tactattacg gtatggacgt ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctcagcttcc 420 accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcta gaagcacctc cgagagcaca 480 gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 540 tcaggcgctc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccagctg tcctacagtc ctcaggactc 600 tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcaact tcggcaccca gacctacacc 660 tgcaacgtaq atcacaaqcc cagcaacacc aaggtggaca agacagttga gcgcaaatgt 720 tgtgtcgagt gcccaccgtg cccagcacca cctgtggcag gaccgtcagt cttcctcttc 780 cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac gtgcgtggtg 840 gtggacgtga gccacgaaga ccccgaggtc cagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 900 gtgcataatg ccaagacaaa gccacgggag gagcagttca acagcacgtt ccgtgtggtc 960 agcgtcctca ccgttgtgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtc 1020 tccaacaaag gcctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa agggcagccc 1080 cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1140 cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1200 acacctccca tgctggactc cgacggctcc 1260 aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 1320 aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1380 1398 agcctgacct gcctggtcaa aggcttctac aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac tctccgggta aatgatag
<210> 52 <211> 464 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Vai 1 5 Vai Gin Cys Gin Vai Gin Leu Vai 20 Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser 35 40 Ser Ser Asp Gly Met His Trp Vai 50 55 Glu Trp Vai Ala Ile Ile Trp Tyr 65 70 ASp Ser Vai Lys Gly Arg Phe Thr 85 Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser 100 Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Pro Gly 115 120 Gly Gin Gly Thr Thr Vai Thr Vai
Phe Leu 10 Vai Ala Leu Leu Arg 15 Gly Glu 25 Ser Gly Gly Gly Vai 30 Vai Gin Cys Ala Ala Ser Gly 45 Phe Thr Phe Arg Gin Ala Pro 60 Gly Lys Gly Leu Asp Gly Ser 75 Asn Lys Tyr Tyr Ala 80 Ile Ser 90 Arg Asp Asn Ser Lys 95 Asn Leu 105 Arg Ala Glu Asp Thr 110 Ala Vai Tyr Tyr Tyr Gly Met 125 Asp Vai Trp Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 276 ΡΕ2177537 130 135 140
Ser Vai Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 145 150 155 160 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr -T 165 170 175 Vai Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190 Ala Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 195 200 205 Vai Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 210 215 220 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 225 230 235 240 Cys Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 245 250 255 Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 260 265 270 Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 275 280 285 Glu Vai Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 290 295 300 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 305 310 31.5 320 Ser Vãl Leu Thr Vai Vai His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 325 330 335 Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 340 345 350 Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin val Tyr Thr Leu 355 360 365 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys 370 375 380 Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 385 390 395 400 Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 405 410 415 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430
Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu Ala 277 ΡΕ2177537 435 440 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 53 <211> 705
<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 53 atgttgccat cacaactcat tgggtttctg ctgctctggg ttccagcttc caggggtgaa 60 attgtgctga ctcagtctcc agactttcag tctgtgactc caaaagagaa agtcaccatc 120 acctgccggg ccagtcagag aattggtagt agcttacact ggtaccagca gaaaccagat 180 cagtctccaa aactcctcat caagtatgct tcccagtcct tctcaggggt cccctcgagg 240 ttcagtggca gtggatctgg gacagatttc accctcacca tcaatagcct ggaagctgaa 300 gatgctgcaa cttattactg tcatcagagt ggtcgtttac cgctcacttt cggcggaggg 360 accaaggtgg agatcaaacg aactgtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 420 gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 480 agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 540 agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 600 agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 660 agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt agtga 705
<210> 54 <211> 233 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54
Met Leu Pro Ser Gin Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Vai Pro Ala 1 5 10 15 Ser Arg Gly Glu Ile Vai Leu Thr Gin Ser Pro Asp Phe Gin Ser Vai 20 25 30 Thr Pro Lys Glu Lys vai Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gin Arg ile 35 40 45 Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gin Ser Pro Lys 50 55 60 Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gin Ser Phe Ser Gly Vai Pro Ser Arg 65 70 75 80 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser 85 90 95 Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Ser Gly Arg 100 105 110
Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai Glu Ile Lys Arg Thr 278 ΡΕ2177537 115 120
Vai Ala Ala Pro Ser Vai Phe Ile 130 135 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Vai 145 150 Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys 165 Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu 180 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu 195 200 Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr 210 215 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu 225 230 <210> 55 <211> 1410 <212> DNA <213> Homo sapiens 125
Phe Pro Pro Ser 140 Asp Glu Gin Leu Cys Leu Leu 155 Asn Asn Phe Tyr Pro 160 Vai Asp 170 Asn Ala Leu Gin Ser 175 Gly Gin 185 Asp Ser Lys Asp Ser 190 Thr Tyr Ser Lys Ala Asp Tyr 205 Glu Lys His His Gin Gly Leu 220 Ser Ser Pro Vai
Cys <400> 55 atggagtttg ggctgagctg ggttttcctc gtgcagçtgg tggagtctgg gggaggcgtg tgtgcagcct ctggattcac cttcagtagc ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttata gactccgtga agggccgatt caccatctcc caaatgaaca gcctgcgcgc tgaggacacg gcgataacct actactacta cggaatggac tcctcagctt ccaccaaggg cccatccgtc tccgagagca cagcggccct gggctgcctg gtgtcgtgga actcaggcgc tctgaccagc tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg cagacctaca cctgcaacgt agatcacaag gagcgcaaat gttgtgtcga gtgcccaccg gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac acgtgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca ttccgtgtgg tcagcgtcct caccgttgtg aagtgcaagg tctccaacaa aggcctccca aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat agcctctccc tgtctccggg taaatgatag gttgctcttt taagaggtgt ccagtgtcag 60 gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc 120 tatggcatgc actgggtccg ccaggctcca 180 tcaaatgatg gaaataataa atactatgca 240 agagacaatt ccaaaaacac gctgtatctg 300 gctgtgtatt actgtgcgag agatagtacg 360 gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc 420 ttccccctgg cgccctgctc tagaagcacc 480 gtcaaggact acttccccga accggtgacg 540 ggcgtgcaca ccttcccagc tgtcctacag 600 gtgaccgtgc cctccagcaa cttcggcacc 660 cccagcaaca ccaaggtgga caagacagtt 720 tgcccagcac cacctgtggc aggaccgtca 780 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 840 gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg 900 aagccacggg aggagcagtt caacagcacg 960 caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 1020 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc 1080 accctgcccc catcccggga ggagatgacc 1140 aaaggcttct accccagcga catcgccgtg 1200 aactacaaga ccacacctcc catgctggac 1260 ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1320 gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1380 1410 <210> 56 279 ΡΕ2177537
<211> 468 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly 1 5 10 15 Vai Gin Cys Gin Val Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin 20 25 • 30 Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Vai Ala Val Ile Ser Asn Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Ser Vai Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95 Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Ser Thr Ala Ile Thr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 115 120 125 Met Asp Vai Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 130 135 140 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 145 150 155 160 Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 165 170 175 Glu Pro Vai Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 180 185 190 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 195 200 205 Ser Vai v a± (Pkv> 111L Val Pro Ser Ser Asn Phe Γ' Λ .. Thr Gin Thr Tyr Thr 210 215 220 Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 225 230 235 240 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 245 250 255 Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270
Met He Ser Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser 280 ΡΕ2177537 275 280 285
His Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300 Vai His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr 305 310 315 320 Phe Arg val val Ser vai Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn 325 330 335 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 340 345 350 ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 355 360 365 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val 370 375 380 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 385 390 395 400 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 4 25 430 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460
Ser Pro Gly Lys 465 <210> 57 <211> 714
<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 57 atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tactctggct ccgaggtgcc 60 agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcctccctgt ctgcatctgt cggagacaga 120 gtcaccatca cttgccgggc aagtcagagt attagtagct atttaaattg gtatcagcag 180 aaaccaggga aagcccctaa gctcctgatc tatgctgcat ccggtttgaa gcgtggggtc 240 ccatcacggt tcagtggtag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagttctctg 300 caacctgagg attttgcaac ttactactgt caccagagtt acagtctccc attcactttc 360 ggccctggga ccaaagtgga tatcaaacga actgtggctg caccatctgt cttcatcttc 420 ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 480 ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 540 tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 600 ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 660 cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgtta gtga 714 281 ΡΕ2177537
<210> 58 <211> 236 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58
Met Asp Met Arg Vai Pro Ala Gin 1 5 Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp Ile 20 Leu Ser Ala Ser Vai Gly Asp Arg 35 40 Gin Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 50 55 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala 65 70 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly 85 Ile Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp 100 Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe 115 120 Lys Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser 130 135 Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala 145 150 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys vai 165 Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser 180 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr 195 200 Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys 210 215 Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn 225 230
Leu Leu 10 Gly Leu Leu Leu Leu 15 Trp Gin 25 Met Thr Gin Ser Pro 30 Ser Ser Vai Thr Ile Thr Cys 45 Arg Ala Ser Trp Tyr Gin Gin 60 Lys Pro Gly Lys Ala Ser Gly 75 Leu Lys Arg Gly Vai 80 Ser Gly 90 Thr Asp Phe Thr Leu 95 Thr Phe 105 Ala Thr Tyr Tyr Cys 110 His Gin Gly Pro Gly Thr Lys 125 Vai Asp Ile Vai Phe Ile Phe 140 Pro Pro Ser Asp Ser Vai Vai 155 Cys Leu Leu Asn Asn 160 Gin Trp 170 Lys Vai Asp Asn Ala 175 Leu Vai 185 Thr Glu Gin Asp Ser 190 Lys Asp Leu Thr Leu Ser Lys 205 Ala Asp Tyr Glu Vai Thr His 220 Gin Gly Leu Ser Arg Gly Glu 235 Cys
<210> 59 <211> 1413 <212> DNA 282 ΡΕ2177537 <213> Homo sapiens <400> 59 atgaaacacc tgtggttctt cctcctgctg gtggcagctc ccagatgggt cctgtcccag 60 gtgcagctgc aggagtcggg cccaggactg gtgaagcctt cggagaccct gtccctcacc 120 tgcactgtct ctggtgactc catcagtagt aactattgga gctggatccg gcagcccgcc 180 gggaagggac tggagtggat tgggcgtatc tataccagtg ggggcaccaa ctccaacccc 240 tccctcaggg gtcgagtcac catgtcagta gacacgtcca agaaccagtt ctctctgaaa 300 ctgagttctg tgaccgccgc ggacacggcc gtgtattact gtgcgagaga tcgtattact 360 ataattcggg gacttattcc atccttcttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 420 gtctcctcag cttccaccaa gggcccatcc gtcttccccc tggcgccctg ctctagaagc 480 acctccgaga gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 540 acggtgtcgt ggaactcagg cgctctgacc agcggcgtgc acaccttccc agctgtccta 600 cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag caacttcggc 660 acccagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaca 720 gttgagcgca aatgttgtgt cgagtgccca ccgtgcccag caccacctgt ggcaggaccg 780 tcagtettcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 840 gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 900 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccac gggaggagca gttcaacagc 960 acgttccgtg tggtcagcgt cctcaccgtt gtgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 1020 tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1080 accaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1140 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1200 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacacc tcccatgctg 1260 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1320 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1380 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga tag 1413
<210> 60 <211> 469 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 1 5 10 15 Vai Leu Ser Gin Vai Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys 20 25 30 Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Ile 35 40 45 Ser Ser Asn Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gin Pro Ala Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Thr Ser Gly Gly Thr Asn Ser Asn Pro 65 70 75 80 Ser Leu Arg Gly Arg Vai Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin 85 90 95 Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr 100 105 110
Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Ile Thr Ile Ile Arg Gly Leu Ile Pro Ser 125 125 283 ΡΕ2177537 115 120 Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 130 135 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 145 150 Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 165 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 180 Vai HiS Thr Phe Pro Ala Val Leu 195 200 Ser Ser Vai Val Thr Val Pro Ser 210 215 Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 225 230 Vai Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu 245 Vai Ala Gly Pro Ser val Phe Leu 260 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 275 280 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin 290 295 Glu Vai His Asn Ala Lys Thr Lys 305 310 Thr Phe Arg Val val Ser Val Leu 325 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 340 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 355 360 Gin Vai Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 370 375 Vai Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 385 390 Vai Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 405
Thr Leu val Thr 140 val Ser Ser Ala Pro Leu Ala 155 Pro Cys Ser Arg Ser 160 Gly Cys 170 Leu Val Lys Asp Tyr 175 Phe Asn 185 Sér Gly Ala Leu Thr 190 Ser Gly Gin Ser Ser Gly Leu 205 Tyr Ser Leu Ser Asn Phe Gly 220 Thr Gin Thr Tyr Ser Asn Thr 235 Lys Val Asp Lys Thr 240 Cys Pro 250 Pro Cys Pro Ala Pro 255 Pro Phe 265 Pro Pro Lys Pro Lys 270 Asp Thr Val Thr Cys Val Val 285 Val Asp Val Phe Asn Trp Tyr 300 Val Asp Gly Val Pro Arg Glu 315 Glu Gin Phe Asn Ser 320 Thr Val 330 Val His Gin Asp Trp 335 Leu Val 345 Ser Asn Lys Gly Leu 350 Pro Ala Thr Lys Gly Gin Pro 365 Arg Glu Pro Arg Glu Glu Met 380 Thr Lys Asn Gin Gly Phe Tyr 395 Pro Ser Asp Ile Ala 400 Pro Glu 410 Asn Asn Tyr Lys Thr 415 Thr
Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 284 ΡΕ2177537 420 425 430
Thr Vai Asp 435 Lys Ser Arg Trp Gin 440 Gin Gly Asn Vai Phe 445 Ser Cys Ser Vai Met 450 His Glu Ala Leu His 455 Asn His Tyr Thr Gin 4 60 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 465 <210> 61 <211> 729
<212> DNA <213> Homo sapiens < 4 0 0 > 61 atggtgttgc agacccaggt gacatcgtga tgacccagtc atcaactgca agtccagcca tggtaccaac agaaaccagg gaatatgggg tccctgaccg atcagcagcc tgcaggctga cctcccctca ctttcggcgg tctgtcttca tcttcccgcc tgcctgctga ataacttcta ctccaatcgg gtaactccca agcctcagca gcaccctgac tgcgaagtca cccatcaggg tgttagtga cttcatttct ctgttgctct ggatctctgg tgcctacggg 60 tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 120 gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 180 acagcctcct aaattgctca tttactgggc atctatacgg 240 attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 300 agatgtggca gtttatttct gtcaacaata ttatagtatt 360 agggaccaag gtggagatca aacgaactgt ggctgcacca 420 atctgatgag cagttgaaat ctggaactgc ctctgttgtg 480 tcccagagag gccaaagtac agtggaaggt ggataacgcc 540 ggagagtgtc acagagcagg acagcaagga cagcacctac 600 gctgagcaaa gcagactacg agaaacacaa agtctacgcc 660 cctgagctcg cccgtcacaa agagcttcaa caggggagag 720 729
<210> 62 <211> 241 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62
Met Vai Leu Gin Thr Gin Vai Phe ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser 1 5 10 15 Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Val Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala 20 25 30 Vai Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gin Ser 35 40 45 Vai Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin 50 55 60 Lys Pro Gly Gin Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ile Arg 65 70 75 80 Glu Tyr Gly Vai Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 85 90 95 285 ΡΕ2177537
Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu 100 Phe Cys Gin Gin Tyr Tyr Ser Ile 115 120 Thr Lys Vai Glu lie Lys Arg Thr 130 135 Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu 145 150 Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 165 Vai Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly 180 Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 195 200 Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 210 215 His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Vai 225 230
Gin Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr 105 110 Pro Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly 125 Vai Ala Ala Pro Ser val Phe Ile 140 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vál Val 155 160 Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys 170 175 Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu 185 190 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu 205 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr 220 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu 235 240
Cys <210> 63 <211> 1419 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 63 atggaactgg ggctccgctg ggttttcctt gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcctg tgtgcagcct ctggattcac cttcagtagc gggaaggggc tggagtgggt ctcatccatt gactcagtga agggccgatt caccatctcc caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg agcagtggct ggtcctacta ctactactac gtcaccgtct cctcagcttc caccaagggc agaagcacct ccgagagcac agcggccctg ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgta aagacagttg agcgcaaatg ttgtgtcgag ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat aacagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa tccaaaacca aagggcagcc ccgagaacca gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc gttgctattt tagaaggtgt ccagtgtgag 60 gtcaagcctg gggggtccct gagactctcc 120 tatagcatga actgggtccg ccaggctcca 180 agtagtagta gtagttacat atactacgca 240 agagacaacg ccaagaactc actgtatctg 300 gctgtgtatt actgtgcgag agatgggtat 360 ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 420 ccatccgtct tccccctggc gccctgctct 480 ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 540 ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccagct 600 agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcaac 660 gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 720 tgcccaccgt gcccagcacc acctgtggca 780 cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 840 agccacgaag accccgaggt ccagttcaac 900 gccaagacaa agccacggga ggagcagttc 960 accgttgtgc accaggactg gctgaacggc 1020 ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1080 caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1140 tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac 1200 286 ΡΕ2177537 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacacctccc 1260 atgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1320 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1380 acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaatgatag 1419
<210> 64 <211> 471 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64
Met Glu Leu Gly Leu Arg Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Glu Gly 1 5 10 15 Vai Gin Cys Glu Vai Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Ser Tyr Ser Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Vai Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Ser Vai Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95 Ser Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Tyr Ser Ser Gly Trp Ser Tyr Tyr Tyr 115 120 125 Tyr Tyr Gly Met Asp Vai Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 130 135 140 Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 145 150 155 160 Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 165 170 175 Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 180 185 190 Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr 195 200 205 Ser Leu Ser Ser Vai Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin 210 215 220 Thr Tyr Thr Cys Asn Vai Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 225 230 235 240 287 ΡΕ2177537
Lys Thr Vai Glu Arg Lys Cys Cys Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala 245 250 255 Pro Pro Vai Ala Gly Pro Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 260 265 270 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 275 280 285 Asp Vai Ser His Glu Asp Pro Glu Vai Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp 290 295 300 Gly Vai Glu Vai His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe 305 310 315 320 Asn Ser Thr Phe Arg Vai Vai Ser Vai Leu Thr Val Val His Gin Asp 325 330 335 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 340 345 350 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg 355 360 365 Glu Pro Gin Vai Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 370 375 380 Asn Gin Vai Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 385 390 395 400 Ile Ala Vai Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 405 410 415 Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 420 425 430 Lys Leu Thr Vai Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser 435 440 445 Cys Ser Vai Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser 450 455 460 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 465 470 <210> 65 <211> 723
<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 65 atgaçrgctcc ctgctcagct gatattgtga tgacccagac atctcctgca agtctagtca tacctgcaga agcccggcca tctggagtgc cagacaggtt cctggggctg ctaatgctct tccactctct ctgtccgtca gagcctcctg cttagtgatg gcctccacag ctcctgatct cagtggcagc gggtcaggga ggatacctgg atccagtgca 60 ctcctggaca gccggcctcc 120 gaaagaccta tttgaattgg 180 atgaagtttc caaccggttc 240 cagatttcac actgaaaatc 300 288 ΡΕ2177537 agccgggtgg tgcagttttg ttcatcttcc ctgaataact tcgggtaact agcagcaccc gtcacccatc tga aggctgagga gccaggggac cgccatctga tctatcccag cccaggagag tgacgctgag agggcctgag tgttggggtt caagctggag tgagcagttg agaggccaaa tgtcacagag caaagcagac ctcgcccgtc tattactgca atcaaacgaa aaatctggaa gtacagtgga caggacagca tacgagaaac acaaagagct tgcaaagtat ctgtggctgc ctgcctctgt aggtggataa aggacagcac acaaagtcta tcaacagggg acagcttatg 360 accatctgtc 420 tgtgtgcctg 480 cgccctccaa 540 ctacagcctc 600 cgcctgcgaa 660 agagtgttag 720 723
<210> 66 <211> 239 <212> PRT <213> Homo sapiens > 66 Met Arg Leu Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Ile Pro 1 5 10 15 Gly Ser Ser Ala Asp Ile Vai Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Ser 20 25 30 Vai Thr Pro Gly Gin Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gin Ser 35 40 45 Leu Leu Leu Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gin Lys 50 55 60 Pro Gly Gin Pro Pro Gin Leu Leu Ile Tyr Glu Vai Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80 Ser Gly Vai Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Vai Gly Vai Tyr Ser 100 105 110 Cys Met Gin Ser Ile Gin Leu Met Ser Ser Phe Gly Gin Gly Thr Lys 115 120 125 Leu Glu Ile Lys Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai Phe Ile Phe Pro 130 135 140 Pro Ser ASp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu 145 150 155 160 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp 165 170 175 Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp 180 185 190 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His Gin 210 215 220 289 ΡΕ2177537
Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 67 <211> 723
<212> DNA <213> Homo sapiens <400> 67 atgaggctcc ctgctcagct cctggggctg ctaatgctct ggatacctgg atccagtgcg 60 gatattgtga tgacccagac tccactctct ctgtccgtca cccctggaca gccggcctcc 120 atctcctgca agtctagtca gagcctcctg tatagtgatg gaaagaccta tttgttttgg 180 tacctgcaga agccaggcca gcctccacag ctcctgatct atgaagtttc caaccgattc 240 tctggagtgc cagataggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac actgaaaatc 300 agccgggtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaaagtat acagcttccg 360 tggacgttcg gccaagggac caaggtggaa atcaaacgaa ctgtggctgc accatctgtc 420 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 480 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 540 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 600 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 660 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 720 tga 723
<210> 68 <211> 239 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68
Met Arg Leu Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Ilè Pro 1 5 10 15 Gly Ser Ser Ala Asp Ile Vai Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Ser 20 25 30 Vai Thr Pro Gly Gin Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gin Ser 35 40 45 Leu Leu Tyr Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Leu Gin Lys 50 55 60 Pro Gly Gin Pro Pro Gin Leu Leu Ile Tyr Glu Vai Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80 Ser Gly Vai Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Vai Gly Vai Tyr Tyr 100 105 110 Cys Met Gin Ser Ile Gin Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys 115 120 125
Vai Glu Ile Lys Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai Phe Ile Phe Pro 290 ΡΕ2177537 130 135 140 Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu 145 150 155 160 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp 165 170 17 5 Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin ASp 180 185 190 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His Gin 210 215 220 Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235
<210> 69 <211> 14 <212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético <400> 69
Ser Ser Gin Ser Leu Leu Gin Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu 15 10
<210> 70 <211> 53 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência iniciadora sintética <400> 70 tatctaagct tctagactcg agcgccacca tggactggac ctggagcatc ctt 53
<210> 71 <211> 53 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> sequência iniciadora <223> Descrição da sequência artificial: sintética 291 ΡΕ2177537 <400> 71 tatctaagct tctagactcg agcgccacca tggagtttgg gctgagctgg att 53
<210> 72 <211> 53 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência iniciadora sintética <400> 72 tatctaagct tctagactcg agcgccacca tggaactggg gctccgctgg gtt 53
<210> 73 <211> 53 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência iniciadora sintética <400> 73 tatctaagct tctagactcg agcgccacca tggagtttgg gctgagctgg ctt 53
<210> 74 <211> 53 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência iniciadora sintética <400> 74 tatctaagct tctagactcg agcgccacca tggagtttgg gctgagctgg gtt 53
<210> 75 <211> 53 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência iniciadora sintética <400> 75 tatctaagct tctagactcg agcgccacca tggagtttgg gctgagctgg gtt 53 <210> 76 292 ΡΕ2177537
<211> 53 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: sequência iniciadora sintética <400> 76 tatctaagct tctagactcg agcgccacca tgaaacacct gtggttcttc ctc 53
<210> 77 <211> 53 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: sequência iniciadora sintética <400> 77 tatctaagct tctagacccg ggcgccacca tgaggctccc tgctcagctc ctg 53
<210> 78 <211> 53 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência iniciadora sintética <400> 78 tatctaagct tctagacccg ggcgccacca tgttgccatc acaactcatt ggg 53
<210> 79 <211> 53 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: sequência iniciadora sintética <400> 79 tatctaagct tctagacccg ggcgccacca tggtgttgca gacccaggtc ttc 53
<210> 80 <211> 53 <212> DNA <213> Sequência artificial <220> ΡΕ2177537 293 <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética iniciadora <400> 80 tatctaagct tctagacccg ggcgccacca tggacatgag ggtccccgct cag 53 <210> 81 <211> 53 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética iniciadora <400> 81 tatctaagct tctagacccg ggcgccacca tggacatgag ggtccctgct cag <210> 82 <211> 44 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética 53 iniciadora <400> 82 ttctctgatc agaattccta tcatttaccc ggagacaggg agag 44 <210> 83 <211> 43 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética iniciadora <400> 83 ttctttgatc agaattctca ctaacactct cccctgttga age 43 <210> 84 <211> 44 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética iniciadora <400> 84 ttctctgatc agaattccta tcatttaccc agagacaggg agag 44 ΡΕ2177537 294 <210> 85 <211> 44 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética iniciadora <400> 85 ggatctggga cagatttcac cctcaccatc aatagcctgg aagc 44 <210> 86 <211> 44 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética iniciadora <400> 86 gcttccaggc tattgatggt gagggtgaaa tctgtcccag atcc 44 <210> 87 <211> 27 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética iniciadora <400> 87 gcagcgtctg gattcacctt cagtagc 27 <210> 88 <211> 27 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética iniciadora <400> 88 gctactgaag gtgaatccag acgctgc 27
<210> 89 <211> 24 <212> DNA 295 ΡΕ2177537 <213> Sequência artificial <22 0> iniciadora <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética <400> 89 cggaggtgct tctagagcag ggcg 24
<210> 90 <211> 47 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> iniciadora <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética <400> 90 gcaagtcaga gtattagtag ctatttaaat tggtatcagc agaaacc 47
<210> 91 <211> 47 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> iniciadora <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética <400> 91 ggtttctgct gataccaatt taaatagcta ctaatactct gacttgc 47
<210> 92 <211> 48 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> iniciadora <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética <400> 92 ccatcagttc tctgcaacct gaggattttg caacttacta ctgtcacc 48
<210> 93 <211> 48 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> iniciadora <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética 296 ΡΕ2177537 <400> 93 ggtgacagta gtaagttgca aaatcctcag gttgcagaga actgatgg 48
<210> 94 <211> 31 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> iniciadora <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética <400> 94 gcaaatgaac agcctgcgcg ctgaggacac g 31
<210> 95 <211> 31 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> iniciadora <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética <400> 95 cgtgtcctca gcgcgcaggc tgttcatttg c 31
<210> 96 <211> 45 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> iniciadora <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética <400> 96 caataagaac tacttagctt ggtaccaaca gaaaccagga cagcc 45
<210> 97 <211> 45 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> iniciadora <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética <400> 97 ggctgtcctg gtttctgttg gtaccaagct aagtagttct tattg 45 297 ΡΕ2177537
<210> 98 <211> 45 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> iniciadora <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética <400> 98 ccctcagggg tcgagtcacc atgtcagtag acacgtccaa gaacc 45
<210> 99 <211> 45 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> iniciadora <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética <400> 99 ggttcttgga cgtgtctact gacatggtga ctcgacccct gaggg 45
<210> 100 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> iniciadora <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética <400> 100 attctagagc agggcgccag g 21
<210> 101 <211> 30 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> iniciadora <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética <400> 101 ccatctcctg caagtctagt cagagcctcc 30
<210> 102 <211> 30 <212> DNA <213> Sequência artificial ΡΕ2177537 298 <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética <400> 102 ggaggctctg actagacttg caggagatgg 30 <210> 103 <211> 47 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética <400> 103 ggtttattac tgcatgcaaa gtatacagct tatgtccagt tttggcc 47 <210> 104 <211> 47 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética <400> 104 ggccaaaact ggacataagc tgtatacttt gcatgcagta ataaacc 47 <210> 105 <211> 24 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética <400> 105 cctgcaagtc tagtcagagc ctcc 24 <210> 106 <211> 24 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sequência sintética iniciadora iniciadora iniciadora iniciadora iniciadora <400> 106 299 ΡΕ2177537 ggaggctctg actagacttg cagg 24
<210> 107 <211> 543 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 107
Met Asp Phe Gly Leu Ala Leu Leu Leu Ala Gly Leu Leu Gly Leu Leu 1 5 10 15 Leu Gly Gin Ser Leu Gin Vai Lys Pro Leu Gin Vai Glu Pro Pro Glu 20 25 30 Pro Vai vai Ala Vai Ala Leu Gly Ala Ser Arg Gin Leu Thr Cys Arg 35 40 45 Leu Ala Cys Ala Asp Arg Gly Ala Ser Vai Gin Trp Arg Gly Leu Asp 50 55 60 Thr Ser Leu Gly Ala Vai Gin Ser Asp Thr Gly Arg Ser Vai Leu Thr 65 70 75 80 Vai Arg Asn Ala Ser Leu Ser Ala Ala Gly Thr Arg Vai Cys Vai Gly 85 90 95 Ser Cys Gly Gly Arg Thr Phe Gin His Thr Vai Gin Leu Leu Vai Tyr 100 105 110 Ala Phe Pro Asp Gin Leu Thr Vai Ser Pro Ala Ala Leu Vai Pro Gly 115 120 125 Asp Pro Glu Vai Ala Cys Thr Ala His Lys vai Thr Pro Vai Asp Pro 130 135 140 Asn Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Vai Gly Gly Gin Glu Leu Glu Gly 145 150 155 160 Ala Gin Ala Leu Gly Pro Glu Vai Gin Glu Glu Glu Glu Glu Pro Gin 165 170 175 Gly Asp Glu Asp Vai Leu Phe Arg Vai Thr Glu Arg Trp Arg Leu Pro 180 185 190 Pro Leu Gly Thr Pro Vai Pro Pro Ala Leu Tyr Cys Gin Ala Thr Met 195 200 205 Arg Leu Pro Gly Leu Glu Leu Ser His Arg Gin Ala Ile Pro Vai Leu 210 215 220 His Ser Pro Thr Ser Pro Glu Pro Pro Asp Thr Thr Ser Pro Glu Ser 225 230 235 240 Pro Asp Thr Thr Ser Pro Glu Ser Pro Asp Thr Thr Ser Gin Glu Pro 245 250 255 300 ΡΕ2177537
Pro Asp Thr Thr Ser Gin Glu Pro Pro Asp Thr Thr Ser Gin Glu Pro 260 265 270 Pro ASp Thr Thr Ser Pro Glu Pro Pro Asp Lys Thr Ser Pro Glu Pro 275 280 285 Ala Pro Gin Gin Gly Ser Thr His Thr Pro Arg Ser Pro Gly Ser Thr 290 295 300 Arg Thr Arg Arg Pro Glu Ile Gin Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 305 310 315 320 Thr '-'J ~ Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu G1 v -- J Gly Pro Ser Vai 325 330 335 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 340 345 350 Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His Glu Asp Pro Glu 355 360 365 Vai Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vai His Asn Ala Lys 370 375 380 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Vai Vai Ser 385 390 395 400 Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 405 410 415 Cys Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 420 425 430 Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr Leu Pro 435 440 445 Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr Cys Leu 450 455 4 60 Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Vai Glu Trp Glu Ser Asn 465 470 475 480 Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Ala Thr Pro Pro Vai Leu Asp Ser 485 4 90 495 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp Lys Ser Arg 500 505 510 Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu Ala Leu 515 520 525 His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 530 535 540 <210> 108 <211> 23 ΡΕ2177537 301 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sintética sequencia iniciadora <400> 108 caggtgcagc tggagcagtc tgg 23 <210> 109 <211> 24 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sintética sequencia iniciadora <400> 109 gctgagggag tagagtcctg agga 24 <210> 110 <211> 28 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sintética sequencia iniciadora <400> 110 gctgagggag tagagtcctg aggactgt 28 <210> 111 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sintética sequencia iniciadora <400> 111 agcatggatc ggggcctggc c 21 <210> 112 <211> 21 <212> DNA <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: sintética sequencia iniciadora 302 ΡΕ2177537 <400> 112 gtgcaggacc gggatggcct g 21
<210> 113 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 113
Glu val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 50 55 60 Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Thr Val Ala Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110
Vai Ser Ser Ala 115
<210> 114 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 114
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 303 ΡΕ2177537
Leu Gin Met Asn Ser 85 Leu Arg Ala Glu Asp 90 Thr Ala Vai Tyr Tyr 95 Cys Ala Ala Gly Tyr 100 Ser Tyr Gly Tyr Trp Gly 105 Gin Gly Thr Leu 110. Vai Thr Vai Ser Ser 115 Ala
<210> 115 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 115
Gin Vál Gin Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ála Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala 115
<210> 116 <211> 122 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 116
Gin Vai Gin Leu Vai Glu Ser Gly Gly Gly Vai Vai Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Gly Met His Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Vai 35 40 45 304 ΡΕ2177537
Ala Vai Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Vai 50 55 60' Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Thr Vai Vai Thr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Vai Trp Gly 100 105 110 Gin Gly Thr Thr Vai Thr Vai Ser Ser Ala 115 120
<210> 117 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 117 Gin Vai Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Vai Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Vai Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gin Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Thr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Vai Thr Met Ser Vai Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Vai Thr Ala Ala Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ile Thr Met Vai Arg Gly Vai Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110 Thr Leu Vai Thr Vai Ser Ser Ala 115 120
<210> 118 <211> 121 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 118
Glu Vai Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Vai Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 305 ΡΕ2177537 20 25 30
Ala Met Ser Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ile Ala vai Ala Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Vai Trp Gly Gin 100 105 110 Gly Thr Thr Vai Thr Vai Ser Ser Ala 115 120
<210> 119 <211> 125 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 119
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala 115 120 125
<210> 120 <211> 121 <212> PRT <213> Homo sapiens 306 ΡΕ2177537 <400> 120
Gin Vai Gin Leu Vai Gin Ser Gly Ala Glu Vai Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Vai Lys Vai Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30
Gly Ile Ser Trp Vai Arg Gin Ala Pio Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu 50 55 60
Gin Gly Arg Vai Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Vai Trp Gly Gin 100 - 105 110
Gly Thr Thr Vai Thr Vai Ser Ser Ala 115 120
<210> 121 <211> 122 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 121
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gin Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Thr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala 115 120 307 ΡΕ2177537
<210> 122 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 122
Gly Arg 15 Ser Tyr Trp Vai Ser vai Leu Tyr 80 Tyr Cys 95 Ser Ala
Gin Vai Gin Leu Vai Glu Ser GÍy Gly Gly Vai Vai Gin Pro 15 10
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30
Gly Met His Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45
Ala Vai Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Vai Tyr 85 90
Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Vai Thr Vai Ser 100 105 110
<210> 123 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 123
Asp Ile Vai Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Vai Thr 1 5 10 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly 35 40 45 Pro Gin Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 65 70 75 Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Vai Gly Vai Tyr Tyr Cys Met 85 90 Leu Gin Thr Ile Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu Ile
Pro Gly 15
Gin Ser Gin Ser Vai Pro
Lys Ile 80
Gin Ala 95
Lys Arg 100 105 110 308 ΡΕ2177537
<210> 124 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 124
Asp Ile Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Vai Gly 15 10 15
Asp Arg vai Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Vai Leu Ile 35 40 45
Phe Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Thr 85 90 95
Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg 100 105
<210> 125 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 125
Glu Ile Vai Leu Thr Gin Ser Pro Asp Phe Gin Ser Vai Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Vai Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser Ile Gly Ser Ser 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gin Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gin Ser Phe Thr Gly Vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Ser Ser Ser Leu Thr Phe 85 90 95 309 ΡΕ2177537
Gly Gly Gly Thr Lys Vai Glu Ile Lys Arg 100 105
<210> 126 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 126
Asp Ile Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Vai Gly 1 5 10 15 Asp Arg Vai Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Ser Gin Gly Vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Vai Asp Ile Lys Arg 100 105
<210> 127 <211> 114 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 127
Asp 1 Ile Vai Met Thr 5 Gin Ser Pro Asp Ser 10 Leu Ala vai Ser Leu 15 Gly Glu Arg Ala Thr 20 Ile Asn Cys Lys Ser 25 Ser Gin Ser vai Leu 30 Tyr Ser Ser Asn Asn 35 Lys Asn Tyr Leu Ala 40 Trp Tyr Gin Gin Lys 45 Pro Gly Gin Pro Pro 50 Lys Leu Leu ile Tyr 55 Trp Ala Ser Thr Arg Glu 60 Ser Gly Vai Pro 65 Asp Arg Phe Ser Gly 70 Ser Gly Ser Gly Thr 75 Asp Phe Thr Leu Thr 80 Ile Ser Ser Leu Gin 85 Ala Glu Asp Vai Ala 90 Vai Tyr Tyr Cys Gin 95 Gin Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai Glu Ile 310 ΡΕ2177537 100 105 110
Lys Arg
<210> 128 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens : 0 0 > 128 Asp Ile Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Vai Gly 1 5 10 15 Asp Arg Vai Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95 Gly Gin Gly Thr Thr Leu Asp Ile Lys Arg 100 105
<210> 129 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 129 Asp Ile Vai Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Ser Vai Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gin Pro Ala Ser lie Ser Cys Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Pro 35 40 45 Pro Gin Leu Leu Ile Tyr Glu Vai Ser Asn Arg Phe Ser Gly Vai Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Vai Gly Vai Tyr Tyr Cys Met Gin Ser 85 90 95 311 ΡΕ2177537
Ile Gin Leu Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110
<210> 130 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 130
Asp Ile Vai Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Ser Vai Thr Pro Gly 15 10 15
Gin Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser 20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Pro 35 40 45
Pro Gin Leu Leu Ile Tyr Glu Vai Ser Asn Arg Phe Ser Gly Vai Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80
Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Vai Gly Vai Tyr Tyr Cys Met Gin Ser 85 90 95
Ile Gin Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Vai Glu Ile Lys 100 105 110
Arg
<210> 131 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 131
Asp Ile Vai Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Vai Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser He Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Gly 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45 Pro Gin Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Vai Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 ΡΕ2177537 312
Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Vai Gly 85
Vai Tyr Tyr Cys Met Gin Ala 90 95
Leu Gin Thr Leu Thr Phe Gly Gly Gly 100 105
Thr Lys Vai Glu Ile Lys Arg 110 <210> 132 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 132 ASp Ile Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Vai Gly 1 5 10 15 Asp Arg Vai Thr Ile Thr Cys Gin Ala Ser Gin Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp Asn Leu Ile Thr 85 90 95 Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 133 <211> 125 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> : 133 Gin Vai Gin Leu Vai Gin Ser Gly Ala Glu val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Vai Lys Vai Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Asp Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Val Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu 50 55 60
Gin Gly Arg Vai Thr Met Ser Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Phe 313 ΡΕ2177537 65 70 75 80
Phe Leu Leu Arg Ser 85 Leu Arg Ser Asp Asp 90 Thr Ala Vai Tyr Tyr 95 Cys Ala Arg Glu Gly 100 Ser Ser Ser Ser Gly 105 Asp Tyr Tyr Tyr Gly 110 Met Asp vai Trp Gly Gin Gly Thr Thr Vai Thr Vai Ser Ser Ala 115 120 125 <210> 134 <211> 10 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 134
Lys Pro Leu Gin Vai Glu Pro Pro Glu Pro 15 10
<210> 135 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 135
Thr Phe Asn Asn Ser Ala Met Thr 1 5
<210> 136 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 136
Cys Lys Ser Asn Gin Ser Leu Leu Tyr 1 5
<210> 137 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 137
Ser Gly Thr Asn Phe Thr Leu Thr Ile 1 5
<210> 138 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens 314 ΡΕ2177537 <400> 138
Ala Ser Gin Asn Ile Ser Ser Tyr Leu 1 5
<210> 139 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 139
Ser Ser Asn Asn Lys Thr Tyr Leu Ala 1 5
<210> 140 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 140
Arg Ala Ser Gin Asn Ile Thr Asn 1 5
<210> 141 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 141
Ser Cys Asn Ser Ser Gin Ser Leu 1 5
<210> 142 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 142
His Ser Asp Asn Leu Ser Ile Thr 1 5
<210> 143 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 143
Leu Gin Ser Asn Gly Tyr Asn 1 5 <210> 144 <211> 7 315 ΡΕ2177537
<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 144
Leu Gin Ser Asn Gly Tyr Asn 1 5
<210> 145 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 145
His Gly Asn Gly Tyr Asn Tyr 1 5
<210> 146 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 146
Leu Thr Ile Asn Gly Leu Glu Ala 1 5
<210> 147 <211> 15 <212> PRT <213> Sequência artificial <22 0> <223> Descrição da sequência artificial: péptido sintético de ligação <400> 147
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 15 10 15
Lisboa, 23 de Novembro de 2011

Claims (37)

  1. ΡΕ2177537 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um anticorpo monoclonal, ou uma porção de ligação ao antigénio do mesmo, que se liga especificamente a MAdCAM com um Kd de 2,35 x 10_11M, ou inferior, medido por ressonância de plasmões de superfície e que inibe a ligação de MAdCAM humana a α4β7+, em que a cadeia pesada do anticorpo ou porção do mesmo de ligação ao antigénio compreende as sequências de aminoácidos CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e em que a cadeia leve do anticorpo ou a sua porção de ligação ao antigénio compreende as sequências de aminoácidos CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve, do anticorpo monoclonal produzido pelo hibridoma ECACC N° de Acesso 03090909 (designação interna 7.16.6).
  2. 2. Um anticorpo monoclonal, ou uma porção de ligação ao antigénio do mesmo, que se liga especificamente a MAdCAM com um Kd de 2,35 x 10_11M, ou inferior, medido por ressonância de plasmões de superfície e que inibe a ligação de MAdCAM humana a α4β7+, em que a cadeia pesada do anticorpo ou porção do mesmo de ligação ao antigénio compreende as sequências de aminoácidos CDR1, CDR2 e CDR3 em SEQ ID NO: 34 e a cadeia leve do anticorpo ou a sua porção de ligação ao antigénio compreende as sequências de aminoácidos CDR1, CDR2 e CDR3 em SEQ ID NO:36.
  3. 3. O anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o 2 ΡΕ2177537 anticorpo ou porção compreende uma cadeia pesada que utiliza um gene VH 1-18 humano. 4. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o anticorpo ou porção compreende uma cadeia leve que utiliza um gene VK A2 humano. 5. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com a reivindicação 1, em que o referido anticorpo, ou porção de ligação ao antigénio do mesmo, compreende uma ou mais das sequências de aminoácidos FR1, FR2, FR3 e FR4 do anticorpo monoclonal produzido pelo hibridoma N° de Acesso ECACC 03090909 (designação interna 7.16.6) .
  4. 6. O anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com a reivindicação 2, em que o referido anticorpo ou porção de ligação ao antigénio do mesmo compreende uma ou mais das sequências de aminoácidos FR1, FR2, FR3 e FR4 em SEQ ID NO:34 ou SEQ ID NO:36.
  5. 7. O anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio do mesmo de acordo com a reivindicação 1, em que a cadeia pesada e a cadeia leve compreendem as sequências de aminoácidos desde o começo da CDR1 até ao final da CDR3 da cadeia pesada e da cadeia leve, respectivamente, do anticorpo monoclonal produzido pelo hibridoma ECACC N° de Acesso 03090909 (designação interna 7.16.6) . 3 ΡΕ2177537 8. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio, em que os dominios variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve do anticorpo compreendem as sequências de aminoácidos do domínio variável da cadeia pesada e da cadeia leve, respectivamente, do anticorpo monoclonal produzido pelo hibridoma ECACC N° de Acesso 03090909 (designação interna 7.16.6).
  6. 9. O anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com a reivindicação 8 compreendendo as sequências de aminoácidos da cadeia pesada e leve do anticorpo monoclonal produzido pelo hibridoma ECACC N° de Acesso 03090909 (designação interna 7.16.6).
  7. 10. O anticorpo monoclonal de acordo com a reivindicação 9, em que o anticorpo é o anticorpo monoclonal humano produzido pelo hibridoma ECACC N° de Acesso 03090909 (designação interna 7.16.6).
  8. 11. O anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com a reivindicação 8, compreendendo as sequências de aminoácidos da cadeia pesada e da cadeia leve do anticorpo monoclonal produzido pelo hibridoma ECACC N° de Acesso 03090909 (designação interna 7.16.6), em que está eliminada a lisina C-terminal da cadeia pesada.
  9. 12. Um anticorpo monoclonal ou sua porção de 4 ΡΕ2177537 ligação ao antigénio de acordo com a reivindicação 2, em que a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos desde o começo da CDR1 até ao final da CDR3 em SEQ ID NO:34 e a cadeia leve, compreende a sequência de aminoácidos desde o começo da CDR 1 até ao final da CDR3 em SEQ ID NO:3 6. 13. 0 anticorpo monoclonal ou sua porção de ligação ao antigénio, em que a cadeia pesada do anticorpo ou da porção de ligação ao antigénio do mesmo compreende a sequência de aminoácidos do domínio variável da cadeia pesada em SEQ ID NO:34 e a cadeia leve do anticorpo ou sua porção de ligação ao antigénio compreende a sequência de aminoácidos do domínio variável da cadeia leve em SEQ ID NO:3 6.
  10. 14. Um anticorpo monoclonal de acordo com a reivindicação 13 compreendendo as sequências de aminoácidos descritas em SEQ ID NOS:34 e 36 sem as sequências sinal.
  11. 15. Um anticorpo monoclonal de acordo com a reivindicação 13 compreendendo as sequências de aminoácidos descritas em SEQ ID NOS: 34 e 36 sem as sequências sinal e em que a lisina C-terminal da cadeia pesada foi cortada.
  12. 16. Um anticorpo monoclonal de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores que é uma molécula de imunoglobulina G (IgG), de IgM, de IgE, de IgA ou de IgD, ou um anticorpo biespecífico. 5 ΡΕ2177537
  13. 17. Uma porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15 que é um fragmento Fab, um fragmento F(ab')2, um fragmento Fv ou um anticorpo de cadeia simples.
  14. 18. Uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17 e um veiculo farmaceuticamente aceitável.
  15. 19. A composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 18 compreendendo ainda um ou mais de outros agentes anti-inflamatórios ou imunomoduladores.
  16. 20. A composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 19, em que um ou mais de outros agentes anti-inf lamatórios ou imunomoduladores são seleccionados do grupo consistindo em: corticosteróides, amino-salicilatos, azatioprina, metotrexato, ciclosporina, FK506, IL-10, GM-CSF, rapamicina, agentes anti-TNFa e antagonistas de moléculas de fusão.
  17. 21. Uma vacina compreendendo o anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17 e um veiculo farmaceuticamente aceitável.
  18. 22. A vacina de acordo com a reivindicação 21, em que a vacina é mucosal. 6 ΡΕ2177537
  19. 23. Um kit de diagnóstico compreendendo o anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17.
  20. 24. Uma linha celular de hibridoma que produz um anticorpo monoclonal humano que especificamente se liga à Molécula Mucosal Adressina de Adesão Celular (MAdCAM), em que o hibridoma é o hibridoma ECACC N° de Acesso 03090909 (designação interna 7.16.6).
  21. 25. Uma linha celular isolada que produz o anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17.
  22. 26. A linha celular de acordo com a reivindicação 25 que produz o anticorpo da reivindicação 9 ou 14 .
  23. 27. Uma molécula de ácido nucleico isolada compreendendo uma sequência nucleotidica que codifica um anticorpo monoclonal de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16.
  24. 28. Um vector compreendendo a molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 27.
  25. 29. Uma célula hospedeira compreendendo o vector de acordo com reivindicação 28 ou a molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 27. 7 ΡΕ2177537
  26. 30. Uma célula hospedeira compreendendo uma molécula de ácido nucleico codificador da cadeia pesada ou porção de ligação ao antigénio da mesma e uma molécula de ácido nucleico codificadora da cadeia leve ou porção de ligação ao antigénio da mesma, do anticorpo monoclonal de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17.
  27. 31. Um método para a produção de um anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio do mesmo que se liga especificamente a MAdCAM, compreendendo a célula hospedeira de acordo com a reivindicação 29 ou 30 ou a linha celular de acordo com a reivindicação 24 ou 25 em condições adequadas e recuperação do anticorpo ou da porção de ligação ao antigénio.
  28. 32. Um animal transgénico não humano ou planta transgénica compreendendo uma molécula de ácido nucleico codificadora da cadeia pesada ou uma porção de ligação ao antigénio da mesma e uma molécula de ácido nucleico codificadora da cadeia leve ou de uma porção de ligação ao antigénio da mesma, de um anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, em que são expressos os polipéptidos da cadeia pesada e da cadeia leve codificados pelas moléculas de ácido nucleico.
  29. 33. Um método de isolamento de um anticorpo ou porção de ligação ao antigénio do mesmo que se liga especificamente a MAdCAM, compreendendo o passo de ΡΕ2177537 isolamento do anticorpo a partir do animal transgénico não humano ou planta transgénica de acordo com a reivindicação 32 .
  30. 34. Um anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, em que o anticorpo ou porção inibe a ligação de MAdCAM a α4β7, para usar no tratamento de doença inflamatória num indivíduo necessitado. 35. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio da reivindicação 34, em que a doença inflamatória é uma doença inflamatória do trato gastrointestinal. 36. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio da reivindicação 35, em que a doença inflamatória do trato gastrointestinal é seleccionada do grupo consistindo em doença inflamatória intestinal, doença de Crohn, colite ulcerativa, doença diverticular, gastrite, doença hepática, esclerose biliar primária e colangite esclerosante. 37. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio da reivindicação 35, em que a doença inflamatória do trato gastrointestinal é doença inflamatória intestinal, doença de Crohn ou colite ulcerativa. 9 ΡΕ2177537 38. 0 anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio da reivindicação 34, em que a doença inflamatória é diabetes dependente de insulina ou doença de enxerto contra hospedeiro.
  31. 39. Um anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, em que o anticorpo ou porção é marcado de forma detectável, para usar na detecção de inflamação num indivíduo.
  32. 40. Um anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17 para determinar se existe um aumento no nível de cirulação de leucócitos que expressam α4β7 e assim detectar o efeito da administração de um anticorpo inibidor anti-MAdCAM, ou porção de ligação ao antigénio do mesmo, a um indivíduo.
  33. 41. O anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com a reivindicação 40, em que os leucócitos são linfócitos.
  34. 42. O anticorpo monoclonal ou porção de ligação ao antigénio de acordo com a reivindicação 40, em que o aumento no nível de leucócitos que expressam α4β7 é determinado por análise FACS.
  35. 43. Um anticorpo monoclonal ou porção de ligação 10 ΡΕ2177537 ao antigénio de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17 para usar como um medicamento.
  36. 44. Um método para o diagnóstico de um distúrbio caracterizado pela circulação de MAdCAM humana solúvel, compreendendo os passos de: (1) contacto de uma amostra biológica com o anticorpo monoclonal, ou porção de ligação ao antigénio, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17 e (2) detecção da ligação do anticorpo ou porção a MAdCAM.
  37. 45. Um vector de acordo com a reivindicação 28, em que o vector compreende uma sequência de controlo da expressão operacionalmente ligada à molécula de ácido nucleico. Lisboa, 23 de Novembro de 2011
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Families Citing this family (116)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2433800C (en) * 2001-01-05 2016-09-13 Pfizer Inc. Antibodies to insulin-like growth factor i receptor
US7658924B2 (en) * 2001-10-11 2010-02-09 Amgen Inc. Angiopoietin-2 specific binding agents
AR039067A1 (es) 2001-11-09 2005-02-09 Pfizer Prod Inc Anticuerpos para cd40
NZ540971A (en) * 2003-02-13 2008-04-30 Pfizer Prod Inc Uses of anti-insulin-like growth factor I receptor antibodies
WO2005026375A2 (en) 2003-05-22 2005-03-24 Fraunhofer Usa, Inc. Recombinant carrier molecule for expression, delivery and purification of target polypeptides
JP4315982B2 (ja) * 2004-01-09 2009-08-19 ファイザー インコーポレイティッド MAdCAMに対する抗体
RU2453558C2 (ru) 2004-09-03 2012-06-20 Дженентек, Инк. Гуманизированные антагонистические антитела против бета7 и их применение
WO2006096488A2 (en) * 2005-03-08 2006-09-14 Pharmacia & Upjohn Company Llc Composition comprising human igg2 antibody and chelating agent
AU2006232287B2 (en) 2005-03-31 2011-10-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for producing polypeptides by regulating polypeptide association
EP1904531B1 (en) * 2005-07-08 2010-10-06 Pfizer Limited Madcam antibodies
WO2007007160A2 (en) * 2005-07-11 2007-01-18 Pfizer Limited Anti-madcam antibodies to treat fever
MX2008000659A (es) * 2005-07-11 2008-03-13 Pfizer Ltd Nueva combinacion de anticuerpo contra madcam y de inhibidor de caspasa antifibrotico.
WO2007007151A2 (en) * 2005-07-11 2007-01-18 Pfizer Limited Use of anti-mad-cam antibody for the treatment of emphysema
WO2007117264A2 (en) 2005-08-03 2007-10-18 Fraunhofer Usa, Inc. Compositions and methods for production of immunoglobulins
JP5144499B2 (ja) 2006-03-31 2013-02-13 中外製薬株式会社 二重特異性抗体を精製するための抗体改変方法
EP4342995A2 (en) * 2006-03-31 2024-03-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies
US7745584B2 (en) * 2006-05-22 2010-06-29 California Institute Of Technology Antibodies to sulfated carbohydrates
EP1878747A1 (en) 2006-07-11 2008-01-16 greenovation Biotech GmbH Glyco-engineered antibodies
JP2010503668A (ja) * 2006-09-15 2010-02-04 フラウンホーファー ユーエスエー, インコーポレイテッド インフルエンザ抗体、組成物、および関連する方法
EP2162540A2 (en) 2007-05-22 2010-03-17 Amgen Inc. Compositions and methods for producing bioactive fusion proteins
CA2692933C (en) 2007-07-11 2016-10-18 Fraunhofer Usa, Inc. Yersinia pestis antigens, vaccine compositions, and related methods
EP3127921A1 (en) 2007-09-26 2017-02-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substition in cdr
MX2010003450A (es) 2007-09-26 2010-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Region constante de anticuerpo modificada.
US8912149B1 (en) 2007-11-28 2014-12-16 California Institute Of Technology Glycosaminoglycan mimetics
MX337081B (es) 2007-12-05 2016-02-10 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-nr10 y su uso.
JO2913B1 (en) 2008-02-20 2015-09-15 امجين إنك, Antibodies directed towards angiopoietin-1 and angiopoietin-2 proteins and their uses
EP2279004B1 (en) * 2008-05-16 2015-01-14 F. Hoffmann-La Roche AG Use of biomarkers for assessing treatment of gastrointestinal inflammatory disorders with beta7integrin antagonists
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
US8734803B2 (en) 2008-09-28 2014-05-27 Ibio Inc. Humanized neuraminidase antibody and methods of use thereof
WO2010107110A1 (ja) 2009-03-19 2010-09-23 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
TWI646193B (zh) 2009-03-19 2019-01-01 中外製藥股份有限公司 抗體恆定區域改變體
EP2408816B1 (en) * 2009-03-20 2019-09-04 Amgen Inc. Alpha-4-beta-7 heterodimer specific antagonist antibody
CA3018235C (en) 2009-03-20 2021-01-12 Amgen Inc. Carrier immunoglobulins and uses thereof
JP5669732B2 (ja) 2009-05-15 2015-02-12 中外製薬株式会社 抗axl抗体
US10150808B2 (en) 2009-09-24 2018-12-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant regions
WO2011041391A1 (en) 2009-09-29 2011-04-07 Fraunhofer Usa, Inc. Influenza hemagglutinin antibodies, compositions, and related methods
US20110158982A1 (en) * 2009-10-05 2011-06-30 The Regents Of The University Of Michigan COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING MAdCAM
US10435458B2 (en) 2010-03-04 2019-10-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variants with reduced Fcgammar binding
WO2011119948A1 (en) * 2010-03-26 2011-09-29 Kolltan Pharmaceuticals, Inc. Anti-kit antibodies and uses thereof
EA201370076A1 (ru) 2010-09-22 2013-08-30 Амген Инк. Иммуноглобулины-переносчики и их применение
MX355060B (es) 2010-11-17 2018-04-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula multiespecifica de union a antigeno que tiene funcion alternativa a la funcion del factor viii de coagulacion sanguinea.
CN102603649B (zh) * 2011-01-20 2016-05-25 赣南师范学院 一种以地巴唑为先导分子的荧光探针化合物及其制备方法
WO2012103165A2 (en) 2011-01-26 2012-08-02 Kolltan Pharmaceuticals, Inc. Anti-kit antibodies and uses thereof
KR102147548B1 (ko) 2011-02-25 2020-08-24 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 FcγRIIb 특이적 Fc 항체
EP2998320B1 (en) 2011-04-19 2018-07-18 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Human monoclonal antibodies specific for glypican-3 and use thereof
WO2012154987A1 (en) 2011-05-10 2012-11-15 Nestec Sa Methods of disease activity profiling for personalized therapy management
TW201817744A (zh) 2011-09-30 2018-05-16 日商中外製藥股份有限公司 具有促進抗原清除之FcRn結合域的治療性抗原結合分子
EP3939996A1 (en) 2011-09-30 2022-01-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule promoting disappearance of antigens having plurality of biological activities
TWI593705B (zh) 2011-12-28 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Humanized anti-epiregulin antibody and cancer therapeutic agent containing the antibody as an active ingredient
EP4063391A1 (en) 2012-07-25 2022-09-28 Celldex Therapeutics, Inc. Anti-kit antibodies and uses thereof
SG11201501286PA (en) * 2012-08-23 2015-05-28 Agensys Inc Antibody drug conjugates (adc) that bind to 158p1d7 proteins
US9273093B2 (en) * 2012-10-11 2016-03-01 Protagonist Therapeutics, Inc. α4β7 peptide dimer antagonists
UY35148A (es) 2012-11-21 2014-05-30 Amgen Inc Immunoglobulinas heterodiméricas
SG11201507226YA (en) 2013-03-15 2015-10-29 Protagonist Therapeutics Inc Hepcidin analogues and uses therof
US9708375B2 (en) 2013-03-15 2017-07-18 Amgen Inc. Inhibitory polypeptides specific to WNT inhibitors
MX2015017852A (es) 2013-06-24 2016-08-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agente terapeutico que comprende el anticuerpo anti-epirregulina humanizado con ingrediente activo contra el carcinoma de pulmon de celulas no pequeñas excluyendo el adenocarcinoma.
US9770461B2 (en) 2013-08-02 2017-09-26 California Institute Of Technology Tailored glycopolymers as anticoagulant heparin mimetics
US10227370B2 (en) 2013-08-02 2019-03-12 California Institute Of Technology Heparan sulfate/heparin mimetics with anti-chemokine and anti-inflammatory activity
MX2016002870A (es) 2013-09-05 2017-02-23 Amgen Inc Moleculas que contienen fc que presentan perfiles de glicoforma predecibles, consistentes y reproducibles.
SG11201601763SA (en) * 2013-09-20 2016-04-28 Bristol Myers Squibb Co Combination of anti-lag-3 antibodies and anti-pd-1 antibodies to treat tumors
JP6534615B2 (ja) 2013-09-27 2019-06-26 中外製薬株式会社 ポリペプチド異種多量体の製造方法
MX2016014761A (es) 2014-05-16 2017-05-25 Amgen Inc Ensayo para detectar poblaciones celulares linfocitos t colaboradores 1 (th1) y linfocitos t colaboradores (th2).
RS62392B1 (sr) 2014-05-16 2021-10-29 Protagonist Therapeutics Inc Tioetar peptidni antagonisti alfa4beta7 integrina
CN113908269A (zh) 2014-05-23 2022-01-11 塞尔德克斯医疗公司 嗜酸性粒细胞或肥大细胞相关病症的治疗
SG11201700327WA (en) 2014-07-17 2017-02-27 Protagonist Therapeutics Inc Oral peptide inhibitors of interleukin-23 receptor and their use to treat inflammatory bowel diseases
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
AU2015328002A1 (en) 2014-10-01 2017-04-27 Protagonist Therapeutics, Inc. Novel alpha4beta7 peptide monomer and dimer antagonists
WO2016054445A1 (en) 2014-10-01 2016-04-07 Protagonist Therapeutics, Inc. Novel cyclic monomer and dimer peptides having integrin antagonist activity
JP2017537105A (ja) 2014-11-26 2017-12-14 ミレニアム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドMillennium Pharmaceuticals, Inc. 瘻孔を伴うクローン病の治療用ベドリズマブ
MA41294A (fr) 2014-12-19 2017-11-08 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticorps anti-myostatine, polypeptides contenant des variants de régions fc, et procédés d'utilisation
EP3233921B1 (en) 2014-12-19 2021-09-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-c5 antibodies and methods of use
CA2916283A1 (en) * 2015-01-09 2016-07-09 Pfizer Inc. Dosage regimen for madcam antagonists
CN114773470A (zh) 2015-02-05 2022-07-22 中外制药株式会社 包含离子浓度依赖性的抗原结合结构域的抗体,fc区变体,il-8-结合抗体及其应用
CA2972393A1 (en) 2015-02-27 2016-09-01 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Composition for treating il-6-related diseases
US11142587B2 (en) 2015-04-01 2021-10-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing polypeptide hetero-oligomer
US10787490B2 (en) 2015-07-15 2020-09-29 Protaganist Therapeutics, Inc. Peptide inhibitors of interleukin-23 receptor and their use to treat inflammatory diseases
JP7141336B2 (ja) 2015-12-25 2022-09-22 中外製薬株式会社 抗ミオスタチン抗体および使用方法
SG11201803989WA (en) 2015-12-28 2018-06-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for promoting efficiency of purification of fc region-containing polypeptide
WO2017117411A1 (en) 2015-12-30 2017-07-06 Protagonist Therapeutics, Inc. Analogues of hepcidin mimetics with improved in vivo half lives
US11072666B2 (en) 2016-03-14 2021-07-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Cell injury inducing therapeutic drug for use in cancer therapy
CN109153721A (zh) 2016-03-14 2019-01-04 千禧制药公司 治疗或预防移植物抗宿主疾病的方法
US20200002422A1 (en) 2016-03-14 2020-01-02 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Method of preventing graft versus host disease
US10407468B2 (en) 2016-03-23 2019-09-10 Protagonist Therapeutics, Inc. Methods for synthesizing α4β7 peptide antagonists
EP3433275A1 (en) 2016-03-24 2019-01-30 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating gastrointestinal immune-related adverse events in immune oncology treatments
TW201735949A (zh) 2016-03-24 2017-10-16 千禧製藥公司 治療抗ctla4及抗pd-1組合治療中的胃腸道免疫相關不良事件之方法
KR101877349B1 (ko) 2016-08-05 2018-07-17 농업회사법인 주식회사 한라종합식품 황칠 구운 소금 제조방법
CN116271014A (zh) 2016-08-05 2023-06-23 中外制药株式会社 用于预防或治疗il-8相关疾病的组合物
JP2020513813A (ja) 2017-03-14 2020-05-21 アムジエン・インコーポレーテツド 細胞培養において産生される抗体の総非フコシル化グリコフォームの調節
CN110520436A (zh) * 2017-03-15 2019-11-29 潘迪恩治疗公司 靶向免疫耐受性
US11851486B2 (en) 2017-05-02 2023-12-26 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for predicting and evaluating therapeutic effect in diseases related to IL-6 and neutrophils
EP3630163A4 (en) * 2017-05-24 2021-06-09 Pandion Operations, Inc. TARGETED IMMUNTOLERANCE
LT3631454T (lt) 2017-05-30 2023-11-27 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 atžvilgiu teigiamų navikų gydymas
AU2018275209A1 (en) 2017-05-30 2019-10-17 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising an anti-LAG-3 antibody or an anti-LAG-3 antibody and an anti-PD-1 or anti-PD-L1 antibody
WO2018220588A1 (en) 2017-05-31 2018-12-06 Nestec S.A. Methods for assessing mucosal healing in crohn's disease patients
CR20200076A (es) * 2017-07-14 2020-06-10 Pfizer ANTICUERPOS CONTRA MAdCAM
US10278957B2 (en) 2017-09-11 2019-05-07 Protagonist Therapeutics, Inc. Opioid agonist peptides and uses thereof
US10174091B1 (en) 2017-12-06 2019-01-08 Pandion Therapeutics, Inc. IL-2 muteins
US10946068B2 (en) 2017-12-06 2021-03-16 Pandion Operations, Inc. IL-2 muteins and uses thereof
EP3720871A4 (en) * 2017-12-06 2021-09-15 Pandion Operations, Inc. TARGETED IMMUNTOLERANCE
WO2019114804A1 (zh) 2017-12-13 2019-06-20 凯惠科技发展(上海)有限公司 一种EGFRvIII抗体及其偶联物、制备方法和应用
CA3089868A1 (en) 2018-02-08 2019-08-15 Protagonist Therapeutics, Inc. Conjugated hepcidin mimetics
SG11202009216YA (en) 2018-03-26 2020-10-29 Amgen Inc Total afucosylated glycoforms of antibodies produced in cell culture
US20220041713A1 (en) * 2018-09-18 2022-02-10 Pandion Operations, Inc Targeted immunotolerance
US11739146B2 (en) 2019-05-20 2023-08-29 Pandion Operations, Inc. MAdCAM targeted immunotolerance
AU2020311395A1 (en) 2019-07-10 2022-02-03 Protagonist Therapeutics, Inc. Peptide inhibitors of interleukin-23 receptor and their use to treat inflammatory diseases
EP4034556A1 (en) 2019-09-26 2022-08-03 Amgen Inc. Methods of producing antibody compositions
CN110887966B (zh) * 2019-12-17 2021-02-12 丹娜(天津)生物科技股份有限公司 一种曲霉菌的化学发光检测试剂盒及其应用
BR112022013957A2 (pt) 2020-01-15 2022-10-11 Janssen Biotech Inc Inibidores peptídicos do receptor de interleucina-23 e uso dos mesmos para tratar doenças inflamatórias
US20230273126A1 (en) 2020-06-04 2023-08-31 Amgen Inc. Assessment of cleaning procedures of a biotherapeutic manufacturing process
CN111714781B (zh) * 2020-06-24 2022-08-05 北京夏禾科技有限公司 一种牙齿美白组合及其使用方法
JP2023548767A (ja) 2020-10-15 2023-11-21 アムジエン・インコーポレーテツド 抗体製造方法における相対不対グリカン
JP7397239B2 (ja) 2020-11-20 2023-12-12 ヤンセン ファーマシューティカ エヌ.ベー. インターロイキン-23受容体のペプチド阻害剤の組成物
AU2022289365A1 (en) 2021-06-07 2023-12-14 Amgen Inc. Using fucosidase to control afucosylation level of glycosylated proteins
IL309631A (en) * 2021-06-21 2024-02-01 Roussy Inst Gustave Methods for diagnosing cancer- or antibiotic-induced dysbiosis and their use for improving cancer treatment by immunotherapy
AU2022361382A1 (en) 2021-10-05 2024-03-28 Amgen Inc. Fc-gamma receptor ii binding and glycan content
WO2023215725A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Fred Hutchinson Cancer Center Compositions and methods for cellular immunotherapy

Family Cites Families (100)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4510245A (en) 1982-11-18 1985-04-09 Chiron Corporation Adenovirus promoter system
US4740461A (en) 1983-12-27 1988-04-26 Genetics Institute, Inc. Vectors and methods for transformation of eucaryotic cells
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
EP0216846B2 (en) 1985-04-01 1995-04-26 Celltech Limited Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
US4968615A (en) 1985-12-18 1990-11-06 Ciba-Geigy Corporation Deoxyribonucleic acid segment from a virus
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4959455A (en) 1986-07-14 1990-09-25 Genetics Institute, Inc. Primate hematopoietic growth factors IL-3 and pharmaceutical compositions
US4912040A (en) 1986-11-14 1990-03-27 Genetics Institute, Inc. Eucaryotic expression system
US5151540A (en) * 1986-11-26 1992-09-29 Hoechst Celanese Corporation Thio carbamates and their derivatives
US5750172A (en) 1987-06-23 1998-05-12 Pharming B.V. Transgenic non human mammal milk
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
GB8809129D0 (en) 1988-04-18 1988-05-18 Celltech Ltd Recombinant dna methods vectors and host cells
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US5633076A (en) 1989-12-01 1997-05-27 Pharming Bv Method of producing a transgenic bovine or transgenic bovine embryo
US6150584A (en) * 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
DE69133566T2 (de) 1990-01-12 2007-12-06 Amgen Fremont Inc. Bildung von xenogenen Antikörpern
US20040010810A1 (en) 1990-01-12 2004-01-15 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5151510A (en) 1990-04-20 1992-09-29 Applied Biosystems, Inc. Method of synethesizing sulfurized oligonucleotide analogs
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
ATE185601T1 (de) 1990-07-10 1999-10-15 Cambridge Antibody Tech Verfahren zur herstellung von spezifischen bindungspaargliedern
US5165424A (en) 1990-08-09 1992-11-24 Silverman Harvey N Method and system for whitening teeth
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1992003917A1 (en) 1990-08-29 1992-03-19 Genpharm International Homologous recombination in mammalian cells
US5462990A (en) * 1990-10-15 1995-10-31 Board Of Regents, The University Of Texas System Multifunctional organic polymers
WO1992009690A2 (en) 1990-12-03 1992-06-11 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins with altered binding properties
DE69233697T2 (de) 1991-03-01 2008-01-24 Dyax Corp., Cambridge Verfahren zur Entwicklung von bindenden Mikroproteinen
DK1471142T3 (da) 1991-04-10 2009-03-09 Scripps Research Inst Heterodimere receptor-biblioteker under anvendelse af fagemider
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
DE122004000008I1 (de) 1991-06-14 2005-06-09 Genentech Inc Humanisierter Heregulin Antikörper.
DE4122599C2 (de) 1991-07-08 1993-11-11 Deutsches Krebsforsch Phagemid zum Screenen von Antikörpern
AU2515992A (en) 1991-08-20 1993-03-16 Genpharm International, Inc. Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs
DK0605522T3 (da) 1991-09-23 2000-01-17 Medical Res Council Fremgangsmåde til fremstilling af humaniserede antistoffer
JPH05244982A (ja) 1991-12-06 1993-09-24 Sumitomo Chem Co Ltd 擬人化b−b10
US5777085A (en) 1991-12-20 1998-07-07 Protein Design Labs, Inc. Humanized antibodies reactive with GPIIB/IIIA
DE69331089T2 (de) 1992-02-18 2002-07-18 Otsuka Kagaku Kk Beta-Laktam und Cepham Verbindungen und Ihre Herstellung
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
ES2301158T3 (es) 1992-07-24 2008-06-16 Amgen Fremont Inc. Produccion de anticuerpos xenogenicos.
WO1994013312A1 (en) 1992-12-15 1994-06-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Mucosal vascular addressin, dna and expression
JP3801196B2 (ja) 1993-03-09 2006-07-26 ジェンザイム・コーポレイション 乳からの対象化合物の単離
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
US5643763A (en) 1994-11-04 1997-07-01 Genpharm International, Inc. Method for making recombinant yeast artificial chromosomes by minimizing diploid doubling during mating
US6046037A (en) 1994-12-30 2000-04-04 Hiatt; Andrew C. Method for producing immunoglobulins containing protection proteins in plants and their use
CA2212702C (en) * 1995-02-10 2010-04-20 Leukosite, Inc. Mucosal vascular addressins and uses thereof
US7803904B2 (en) 1995-09-01 2010-09-28 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Mucosal vascular addressing and uses thereof
US6551593B1 (en) 1995-02-10 2003-04-22 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Treatment of Inflammatory bowel disease by inhibiting binding and/or signalling through α 4 β 7 and its ligands and madcam
US7750137B2 (en) 1995-09-01 2010-07-06 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Mucosal vascular addressins
US6091001A (en) 1995-03-29 2000-07-18 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
US6130364A (en) 1995-03-29 2000-10-10 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
EP0826034A4 (en) 1995-04-21 2002-06-19 Cell Genesys Inc PRODUCTION OF LARGE GENOMIC DNA DELETIONS
EP0822830B1 (en) 1995-04-27 2008-04-02 Amgen Fremont Inc. Human anti-IL-8 antibodies, derived from immunized xenomice
AU2466895A (en) 1995-04-28 1996-11-18 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
CN101333516A (zh) 1995-08-29 2008-12-31 麒麟医药株式会社 嵌合体动物及其制备方法
US6037324A (en) 1996-01-04 2000-03-14 Leukosite, Inc. Inhibitors of MAdCAM-1-mediated interactions and methods of use therefor
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
US5994619A (en) 1996-04-01 1999-11-30 University Of Massachusetts, A Public Institution Of Higher Education Of The Commonwealth Of Massachusetts, As Represented By Its Amherst Campus Production of chimeric bovine or porcine animals using cultured inner cell mass cells
US7147851B1 (en) 1996-08-15 2006-12-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Humanized immunoglobulin reactive with α4β7 integrin
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
CA2722378C (en) 1996-12-03 2015-02-03 Amgen Fremont Inc. Human antibodies that bind tnf.alpha.
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
AU2978899A (en) 1998-03-03 1999-09-20 Abgenix, Inc. Cd147 binding molecules as therapeutics
US20020029391A1 (en) 1998-04-15 2002-03-07 Claude Geoffrey Davis Epitope-driven human antibody production and gene expression profiling
US7090845B2 (en) * 1998-05-13 2006-08-15 Genentech, Inc. Diagnosis and treatment of hepatic disorders
CA2330000C (en) * 1998-05-13 2015-06-23 Genentech, Inc. Diagnosis and treatment of hepatic disorders
US20020142374A1 (en) 1998-08-17 2002-10-03 Michael Gallo Generation of modified molecules with increased serum half-lives
NZ512553A (en) 1998-12-23 2004-02-27 Pfizer Human monoclonal antibodies to cytotoxic T lymphocyte antigen 4 (CTLA-4)
CA2382161A1 (en) 1999-09-03 2001-03-15 Human Genome Sciences, Inc. Immunoglobulin superfamily polynucleotides, polypeptides, and antibodies
US6517529B1 (en) 1999-11-24 2003-02-11 Radius International Limited Partnership Hemodialysis catheter
US20010046496A1 (en) * 2000-04-14 2001-11-29 Brettman Lee R. Method of administering an antibody
JP2003089656A (ja) * 2001-09-19 2003-03-28 Nippon Kayaku Co Ltd 移植による免疫反応抑制剤
CA2466034C (en) 2001-11-08 2012-12-18 Protein Design Labs, Inc. Stable aqueous pharmaceutical formulations of daclizumab antibodies
AR039067A1 (es) 2001-11-09 2005-02-09 Pfizer Prod Inc Anticuerpos para cd40
BR0307975A (pt) 2002-02-25 2005-01-11 Elan Pharm Inc Métodos para reduzir cronicamente a inflamação patológica em um paciente e para determinar a eficácia de um regime de administração crÈnica para tratar inflamação patológica em um indivìduo, composição e terapia combinada para tratamento crÈnico de inflamação patológica em um paciente e uso de um inibidor de alfa-4-integrina
WO2004081049A1 (en) * 2003-03-10 2004-09-23 Auckland Uniservices Limited Monoclonal antibodies that recognise mucosal addressin cell adhesion molecule-1 (madcam-1), soluble madcam-1 and uses thereof
JP4869064B2 (ja) 2003-04-04 2012-02-01 ジェネンテック, インコーポレイテッド 高濃度抗体及びタンパク質製剤
JP4315982B2 (ja) * 2004-01-09 2009-08-19 ファイザー インコーポレイティッド MAdCAMに対する抗体
NZ584288A (en) 2004-02-06 2011-10-28 Elan Pharm Inc Methods and compositions for treating tumors and metastatic disease
WO2006096488A2 (en) 2005-03-08 2006-09-14 Pharmacia & Upjohn Company Llc Composition comprising human igg2 antibody and chelating agent
EP1904103A2 (en) 2005-07-08 2008-04-02 Pfizer Limited Use of anti-madcam antibodies for the treatment of coeliac disease and tropical sprue
EP1904531B1 (en) 2005-07-08 2010-10-06 Pfizer Limited Madcam antibodies
WO2007007160A2 (en) 2005-07-11 2007-01-18 Pfizer Limited Anti-madcam antibodies to treat fever
WO2007007152A2 (en) 2005-07-11 2007-01-18 Pfizer Limited Anti-madcam antibodies to treat metastatic cancers and chloroma
MX2008000659A (es) 2005-07-11 2008-03-13 Pfizer Ltd Nueva combinacion de anticuerpo contra madcam y de inhibidor de caspasa antifibrotico.
WO2007007159A2 (en) 2005-07-11 2007-01-18 Pfizer Limited Anti-madcam antibodies to treat uterine disorders
WO2007007151A2 (en) 2005-07-11 2007-01-18 Pfizer Limited Use of anti-mad-cam antibody for the treatment of emphysema

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