PT1511790E

PT1511790E - Poliaminoácidos funcionalizados pelo alfa-tocoferol e suas aplicações, em particular, aplicações terapêuticas

Info

Publication number: PT1511790E
Application number: PT37406923T
Authority: PT
Inventors: You-Ping Chan; Olivier Breyne; Stephanie Angot
Original assignee: Flamel Tech Sa
Priority date: 2002-06-07
Filing date: 2003-06-03
Publication date: 2013-09-11
Also published as: DK1511790T3; EP1511790B1; CN101386677A; FR2840614A1; MXPA04012300A; FR2840614B1; CN1659214A; CN100535030C; CA2486944C; HK1079804A1; ES2427633T3; WO2003104303A1; JP2005531652A; CA2486944A1; ZA200409892B; KR100972264B1; IL165268A; SI1511790T1; IL165268A0; EP1511790A1

Description

ΡΕ1511790 1 DESCRIÇÃO "POLIAMINOÁCIDOS FUNCIONALIZADOS PELO ALFA-TOCOFEROL E SUAS APLICAÇÕES, EM PARTICULAR, APLICAÇÕES TERAPÊUTICAS" A presente invenção refere-se a novos materiais à base de poliaminoácidos biodegradáveis, particularmente úteis para a vetorização de princípio(s) ativo(s) (PA). A presente invenção também se refere a novas composições farmacêuticas, cosméticas, dietéticas ou fitos-sanitárias à base desses poliaminoácidos. Essas composições podem ser do tipo que que permitem a vetorização de PA e apresentam-se, preferencialmente, sob a forma de emulsões, de micelas, de partículas, de geles, de implantes ou de películas.

Os PA considerados para este efeito são vantajosamente compostos biologicamente ativos que podem assim ser administrados a um animal ou ser humano por via oral, parentérica, nasal, vaginal, ocular, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intracraniana, bucal, etc. A maior parte dos PA particularmente relacionados com a invenção, sem a limitar, são proteínas, glico-proteínas, péptidos, polissacáridos, lipopolissacáridos, 2 ΡΕ1511790 oligonucleótidos ou polinucleótidos e moléculas orgânicas. Mas podem também tratar-se de produtos cosméticos ou de produtos fitossanitários, tais como, herbicidas, inseticidas, fungicidas, etc.

No campo da vetorização de princípios ativos, em particular medicamentosos, existe uma necessidade, em diversas situações: - protegê-los contra a degradação (hidrólise, precipitação no local, digestão enzimática, etc.) até que atinjam os seus locais de ação, e/ou controlar a sua velocidade de libertação, a fim de manter um nivel constante durante um intervalo de tempo definido, ou - e/ou transportá-los (com proteção) para o local de ação.

Para esses fins, foram estudados diversos tipos de polímeros e alguns estão disponíveis comercialmente. Podem citar-se, por exemplo, os polímeros do tipo poliláctico, poliláctico-glicólico, polioxietileno-oxipro-pileno, poliaminoácido ou, ainda, polissacárido. Esses polímeros constituem matérias-primas de partida que permitem fabricar, por exemplo, implantes a granel, micropartículas, nanopartículas, vesículas, micelas ou geles. Para além do facto, desses polímeros terem de estar adaptados ao fabrico destes sistemas, devem também ser biocompatíveis, não tóxicos, não imunogénicos, económicos e devem poder ser facilmente eliminados do organismo e/ou ser 3 ΡΕ1511790 biodegradáveis. Relativamente a este último aspeto, além disso, é essencial que a biodegradação no organismo origine produtos não tóxicos. A titulo de ilustração do estado da técnica relativamente aos polímeros utilizados como matérias-primas de partida para a realização de sistemas de vetorização de PA, são referidos seguidamente, diversas patentes ou pedidos de patente ou artigos científicos. A patente US 4 652 441 descreve microcápsulas de polilactida a encapsular a hormona LH-RH. Essas microcápsulas são produzidas preparando-se uma emulsão água-óleo-água e compreendem uma fase interna aquosa, contendo a hormona, uma substância (gelatina) que a fixa, uma fase oleosa de polilactida, assim como uma fase externa aquosa (Álcool polivinílico) . A libertação do PA pode ser efectuada durante um período superior a 2 semanas após a administração da injeção subcutânea. A patente US 6 153 193 descreve composições à base de micelas de poli(oxietileno)-poli(oxipropileno) anfifílicas, para a vetorização de agentes anticancerígenos como a adriamicina.

Akiyoshi et.al. (J. Controlled Release 1998, 54, 313-320) descrevem pululanas que se tornam hidrófobas pelo enxerto de colesterol e que formam nanopartículas na água. Essas nanopartículas são capazes de complexação reversível com a insulina, formando suspensões coloidais estáveis. 4 ΡΕ1511790 A patente US 4 351 337 descreve co-poliamino-ácidos anfifílicos, à base de leucina e de glutamato, utilizáveis sob a forma de implantes ou de microparticulas para a libertação controlada de princípios ativos. A libertação destes princípios ativos pode ser efectuada num periodo de tempo muito longo, dependendo da velocidade de degradação do polímero. A patente US 4 888 398 descreve polímeros à base de poliglutamato ou poliaspartato, e, eventualmente, polileucina, com grupos pendentes de tipo alcoxicarbo-nilmetilo, colocados de forma aleatória sobre a cadeia poliaminoácido. Estes poliaminoácidos, enxertados por agrupamentos laterais, por exemplo, metoxicarbonilmetilo, são utilizáveis sob a forma de implantes biodegradáveis contendo um PA de libertação prolongada. A patente US 5 904 936 descreve nanopartículas obtidas a partir de um polímero em bloco polileucina-poliglutamato, capazes de formar suspensões coloidais estáveis e capazes de se associarem espontaneamente a proteínas biologicamente ativas sem as desnaturar. Estas proteínas podem seguidamente ser libertadas, in vivo, de forma controlada, durante um longo período de tempo. O pedido de patente WO 00/30618 descreve nanopartículas obtidas a partir de um polímero em bloco poli (glutamato de sódio) (poliglutamato de metilo, etilo, 5 ΡΕ1511790 hexadecilo ou dodecilo), capazes de formarem suspensões coloidais estáveis e capazes de se associarem espontaneamente com proteínas biologicamente ativas, sem as desnaturar. Estas proteínas podem ser, em seguida, libertadas de forma controlada, in vivo, durante um longo período de tempo.

Esses copoliaminoácidos anfifílicos são modificados pela presença de uma cadeia lateral alquilo hidrófobo. A patente US 5 449 513 descreve copolímeros em bloco anfifílicos compreendendo um bloco polioxietileno e um bloco poliaminoácido, por exemplo, poli(beta-benzil-L-aspartato). Esses polímeros polioxietileno-polibenzilas-partato formam micelas que são capazes de encapsular as moléculas ativas hidrófobas, tais como, adriamicina ou indometacina. 0 pedido de patente WO 99/61512 descreve polilisinas e poliornitinas funcionalizadas por um grupo hidrófobo (ácido palmítico ligado à polilisina ou ornitina e um grupo hidrófilo (polioxietileno) . Esses polímeros, por exemplo, a polilisina enxertada com cadeias polioxietileno e palmitoílo formam, na presença do colesterol, vesículas capazes de encapsular a doxorrubicina ou o ADN.

Além disso, é prática conhecida recorrer a derivados de vitamina E, e mais precisamente a alfa-tocoferol, para construir sistemas de vetorização de PA. A 6 ΡΕ1511790 vitamina E natural é constituída por uma mistura de compostos denominados tocoferóis (ver Burton et Ingold, Acc. Chem. Res. 1986, 19, 194-201), e nessa mistura, o derivado alfa-tocoferol está largamente em maioria. A vitamina E e alguns dos seus derivados são actualmente utilizados como fonte vitamínica ou como antioxidantes em alimentos e produtos cosméticos. Para essas utilizações comuns, encontra-se vitamina E sob a forma de D-alfa-tocoferol (a sua forma natural) ou sob a forma D,L-alfa-tocoferol (forma racémica e sintética). Esses dois produtos são considerados como essencialmente não tóxicos em doses consideravelmente superiores às doses terapêuticas. A estrutura do alfa-tocoferol é a seguinte:

As posições quirais estão marcadas com um asterisco. A forma natural possui as configurações R,R,R e a forma sintética é uma mistura na qual os carbonos quirais são independentemente R ou S.

Tratando-se dos derivados da vitamina E utilizados no domínio da vetorização de princípios ativos, não existe até hoje, e, no conhecimento dos inventores, nenhum produto polimérico à base de alfa-tocoferol, com exceção de polímeros do tipo polioxietileno, em que, uma das extremidades é enxertada por grupos alfa-tocoferol-succi- 7 ΡΕ1511790 nato. Por outro lado, está disponível no mercado Poli-EtilenoGlicol enxertado com alfa-tocoferol-succinato na extremidade da cadeia (vitamina E PEGilada) , comercializado sob a denominação TPGS 1000, pela empresa Eastman Chemical Ltd. Esse produto patenteado em 1954 (US 2 680 749) é, hoje em dia, utilizado como fonte de vitamina E por via oral. Este polímero, da mesma forma que o alfa-tocoferol-succinato e alfa-tocoferol não modificados, foram propostos para a vetorização de princípios ativos. A patente US 5 869 703 descreve compostos próximos em que a cadeia polioxietileno compreende o alfa-tocoferol numa extremidade e na outra extremidade um resíduo (meta)acrílico. Esses derivados de alfa-tocoferol são utilizados para preparar as vesículas anfifílicas (lipossomas) estáveis, utilizadas diretamente em aplicações cosméticas. O pedido de patente WO 00/71163 descreve formulações à base de polietilenoglicol enxertado, alfa-tocoferol-succinato na extremidade da cadeia (TPGS 1000) e alfa-tocoferol, para a solubilização de paclitaxel (produto anticancerígeno). Actualmente, a toxicidade ligada à parte polioxietileno não é conhecida e sabe-se que o polioxietileno não é degradado in vivo. Além disso, este composto contém apenas uma única unidade de alfa-tocoferol por cadeia de polímero e em solução tem propriedades semelhantes às dos tensioativos. Em qualquer dos casos, a utilização deste produto para a vetorização conduzirá a associações polímero-princípio ativo pouco estáveis. 8 ΡΕ1511790 A patente EP 0 243 446 descreve a utilização de (hemi)succinato de alfa-tocoferol (derivado de ácido orgânico alfa-tocoferol) para o fabrico de vesículas em associação com um sal de amina. Estas vesiculas podem ser utilizadas para a encapsulação de diversos princípios ativos, incluindo pequenas moléculas, péptidos e proteínas. De forma geral, está referido nesta patente que o ácido orgânico pode ser um aminoácido ou um poliaminoácido. Todavia, não são fornecidos detalhes em relação a este assunto. Apenas estão exemplificados os (hemi)succinatos de alfa-tocoferol.

Assim, mesmo se existirem no estado da técnica, numerosas soluções técnicas desenvolvidas e propostas para a vetorização dos princípios ativos medicamentosos, a resposta a todos os requisitos difícil de obter permanece insatisfatória.

Nesse contexto, um dos objetivos essenciais da presente invenção é o de proporcionar uma nova matéria-prima polimérica, que pode ser utilizada para a vetorização de PA e permitir satisfazer, de forma ótima todas, as especificações descritas: - biocompatibilidade, - biodegradação, - aptidão para se transformar fácil e economicamente em partículas de vetorização de princípios ativos, - essas partículas serem elas próprias capazes: ΡΕ1511790 9 • de formar suspensões coloidais aquosas estáveis, princípios • de se associarem facilmente com inúmeros ativos, e • da libertação desses princípios ativos in vivo.

Entre outros, este objetivo é atingido pela presente invenção que se relaciona primeiramente com poli-aminoácidos anfifílicos, compreendendo unidades aspárticas e/ou unidades glutâmicas, caracterizadas pelo facto de, pelo menos, uma parte dessas unidades serem portadoras de enxertos que compreendem pelo menos uma unidade de alfa-tocoferol.

Esses novos polímeros têm uma estrutura biodegradável à base de poliaminoácidos portadores de cadeias laterais que compreendem alfa-tocoferol. Esses polímeros apresentam propriedades de associação e/ou de encapsulação surpreendentes em comparação com produtos análogos e, além disso, são facilmente degradados na presença de enzimas. É mérito do requerente ter tido a ideia de associar, de forma criteriosa e vantajosa, os poliaminoácidos, em particular, poliAsp e/ou poliGlu biodegradáveis, com enxertos à base de alfa-tocoferol (vitamina E) para a vetorização de PA. o termo

Para os objectivos da invenção, 10 ΡΕ1511790 "poliaminoácido" abrange não só os oligoaminoácidos, compreendendo de 2 a 20 unidades de aminoácido, como também os poliaminoácidos compreendendo mais de 20 unidades de aminoácido.

Preferencialmente, os poliaminoácidos, de acordo com a presente invenção, são oligómeros ou homopolimeros que compreendem unidades repetidas de aminoácido glutâmico ou aspártico ou copolímeros compreendendo uma mistura desses dois tipos de unidades de aminoácidos, sendo essas unidades parcialmente substituídas por enxertos que compreendem alfa-tocoferol. As unidades consideradas nesses polímeros são aminoácidos que têm a configuração D,L ou D,L e estão ligados pelas suas posições alfa ou gama à unidade de glutamato ou glutâmica e alfa ou beta para a unidade aspártica ou aspartato.

As unidades de aminoácidos preferidas são aquelas que têm a configuração L e uma ligação de tipo alfa.

De acordo com geral (I) : forma mais preferida, os poliaminoácidos, de a invenção, correspondem à seguinte fórmula

NHR2 (I) 11 ΡΕ1511790 em que: • R1 representa H, um grupo acilo linear em C2 a CIO ou ramificado em C3 a CIO ou um piroglutamato; • R2 representa um H, um alquilo linear em C2 a CIO ou ramificado em C3 a CIO, um benzilo, uma unidade aminoácido terminal; • R3 é um H ou uma entidade catiónica, selecionada preferencialmente a partir do grupo compreendendo : catiões metálicos escolhidos vantajosamente a partir do subgrupo que compreende: sódio, potássio, cálcio, magnésio, catiões orgânicos escolhidos vantajosamente a partir do subgrupo que compreende: • catiões à base de amina, • catiões à base de oligoamina; • catiões à base de poliamina (sendo particularmente preferida a polietilenoimina), • catiões à base de aminoácido(s) escolhidos vantajosamente a partir da classe que compreende os catiões à base de lisina ou de arginina, ou os poliaminoácidos catiónicos escolhidos vantajosamente a partir do subgrupo compreendendo polilisina ou oligolisina; • R4 representa uma ligação direta ou um "espaçador" à base de 1 a 4 unidades de aminoácido; • A representa independentemente um radical -CH2-(unidade aspártica) ou -CH2-CH2- (unidade glutâmica); • n/(n+m) é definida como a taxa de enxerto molar e varia de 0,5 a 100% molar; 12 ΡΕ1511790 • η + m varia de 3 a 1 000, preferencialmente entre 30 e 300; • T representa uma unidade alfa-tocoferol.

Para essas utilizações comuns, a vitamina E encontra-se na sua forma D-alfa-tocoferol (a sua forma natural) ou na sua forma D,L-alfa-Tocoferol (forma racémica e sintética). Esses dois produtos são considerados fundamentalmente não tóxicos em doses muito superiores às doses terapêuticas. De acordo com a invenção, essas duas formas de alfa-tocoferol são preferidas. O alfa-tocoferol é de origem natural ou sintética.

De acordo com uma primeira forma de realização da invenção, os poliaminoácidos são homopolimeros alfa-L-glutamato ou ácido alfa-L-glutâmico.

De acordo com uma segunda forma de realização da invenção, os poliaminoácidos são homopolimeros alfa-L-aspartato ou ácido alfa-L-aspártico.

De acordo com uma terceira forma de realização da invenção, os poliaminoácidos são copolímeros alfa-L-aspartato/alfa-L-glutamato ou ácido alfa-L-aspártico/alfa- L-glutâmico.

De forma vantajosa, a distribuição das unidades 13 ΡΕ1511790 aspárticas e/ou glutâmicas portadoras de enxertos que compreendem, pelo menos, uma unidade alfa-tocoferol é tal que os polímeros assim constituídos são tanto aleatórios, como do tipo em bloco ou do tipo em multi-bloco.

De acordo com outra definição, os poliamino-ácidos, de acordo com a invenção, têm uma massa molar compreendida entre 2 000 e 100 000 g/mole, e, preferencialmente entre 5 000 e 40 000 g/mole.

Além disso, de acordo com a invenção, é preferível que a taxa do enxerto molar com alfa-tocoferol dos poliaminoácidos, esteja compreendida entre 3 e 70%, e preferencialmente, entre 5 e 50%.

Os poliaminoácidos da invenção são extraordinariamente, capazes de serem utilizados de várias formas em função do grau do enxerto. Os métodos de formação de um polímero para a encapsulação de um princípio ativo sob as diversas formas mencionadas na invenção, são conhecidas do especialista na matéria. De forma mais detalhada, pode-se referir, por exemplo, algumas referências particularmente pertinentes: "Microspheres, Microcapsules and Liposomes; vol. 1. Preparation and Chemical applications" Ed. R. Arshady, Citus Books 1999. ISBN:0-9532187-1-6. "Sustained-Release Injectable Products" Ed. J. Sénior et M. Radomsky, Interpharm Press 2000. ISBN: 1-57491-101-5. 14 ΡΕ1511790 "Colloidal Drug Delivery Systems" Ed. J. Kreuter, Mareei Dekker, Inc. 1994. ISBN: 0-8247-9214-9. "Handbook of Pharmaceutical Controlled Release Technology" Ed. D.L. Wise, Mareei Dekker, Inc. 2000. ISBN: 0-8247-0369-3.

Os poliaminoácidos são, além disso, extremamente vantajosos, devido ao facto de terem uma taxa de enxerto relativamente pequena, da ordem de 3 a 10%, e formam em água a pH 7,4 (por exemplo com um tampão fosfato) suspensões coloidais ou geles em função da concentração dos polimeros. Além disso, as partículas de poliaminoácidos que formam a fase dispersa da suspensão coloidal, podem associar-se prontamente com princípios ativos, tais como proteínas, péptidos ou pequenas moléculas. O processo de formação preferido é o descrito no pedido de patente WO 00/30618 da requerente e que consiste na dispersão do polímero em água e incubação da solução na presença de um PA. Esta solução pode em seguida ser filtrada através de um filtro de 0,2 pm, depois injetada diretamente num doente.

Com taxa de enxerto superior a 10%, o polímero pode formar micropartículas capazes de se associarem ou de encapsular os PA. Nesse contexto, o processo de formação das micropartículas pode ser efectuado pela co-dissolução do PA e polímero num solvente orgânico apropriado, e a mistura é depois precipitada em água. As partículas são em seguida recuperadas por filtração e podem ser seguidamente utilizadas para uma administração por via oral (na forma de 15 ΡΕ1511790 cápsula mole, na forma compactada e/ou na forma revestida, ou, ainda na forma dispersa num óleo) ou por via parentérica após redispersão em água.

Com taxas de enxerto superiores a 30%, a redispersão do polimero em fase aquosa torna-se mais dificil devido à reduzida quantidade das funções carbo-xilato ionizáveis e o polimero precipita. Nesse caso, o polimero pode ser dissolvido num solvente biocompativel, tal como, N-metilpirrolidona ou um óleo apropriado, tal como o Migliol®, seguidamente injetado, por via intramuscular, subcutânea ou directamente num tumor. A difusão do solvente ou do óleo resulta na precipitação do polimero no local da injeção e forma assim um depósito. Esses depósitos proporcionam em seguida uma libertação controlada por difusão e/ou por erosão e/ou por degradação hidrolitica ou enzimática do polimero.

De forma geral, os polímeros da invenção, na forma neutra ou ionizada, podem ser utilizados isoladamente ou numa composição liquida, sólida ou gel e em meio aquoso ou orgânico.

Deve ser entendido que o polimero à base de poliaminoácidos contém funções carboxilicas que são neutras (forma COOH) ou ionizadas dependendo do pH e composição. Por essa razão, a solubilidade numa fase aquosa depende diretamente do conteúdo de COOH livre (não enxertado com vitamina E) e do pH. Em solução aquosa, o contra-catião 16 ΡΕ1511790 pode ser um catião metálico, tal como sódio, cálcio ou magnésio, ou um catião orgânico, tal como, trietanolamina, tris(hidroximetil)aminometano ou uma poliamina, tal como polietilenoimina.

Os polímeros da invenção são obtidos para métodos conhecidos do especialista na matéria. Os poliaminoácidos podem ser obtidos pelo menos através de duas formas: • enxerto de alfa-tocoferol num poliamino-ácido, ou • polimerização dos derivados NCA de alfa-tocoferol seguida de uma hidrólise seletiva.

No primeiro caso, é preparado, por exemplo, um poliaminoácido, homopoliglutamato, homopoliaspartato ou um copolímero glutamato/aspartato, em bloco, em multi-bloco, de acordo com métodos clássicos.

Para a obtenção de poliaminoácidos de tipo alfa, a técnica mais comum baseia-se na polimerização de anidridos de N-carboxi-aminoácidos (NCA), descrita, por exemplo, no artigo "Biopolymers, 1976, 15, 1869" e na obra de H.R. Kricheldorf "alpha-Aminoacid-N-carboxy Anhydride and related Heterocycles" Springer Verlag (1987). Os derivados de NCA são preferencialmente derivados NCA-O-Me, NCA-O-Et ou NCA-O-Bz (Me = metilo, Et = Etilo e Bz = Benzilo). Os polímeros são depois hidrolisados em condições adequadas para se obter o polímero na sua forma ácida. Esses métodos são inspirados na descrição da patente FR 2 801 226 da requerente. Um certo número de polímeros 17 ΡΕ1511790 que podem ser utilizados de acordo com a invenção, por exemplo, do tipo poli(ácido alfa-L-aspártico), poli(ácido alfa-L-glutâmico) , poli(ácido alfa-D-glutâmico) e poli(ácido gama-L-glutâmico) de massas variáveis estão disponíveis comercialmente. 0 poli(ácido aspártico) do tipo alfa-beta é obtido por condensação do ácido aspártico (para se obter uma polissuccinimida) seguida de uma hidrólise básica (ver Tomida et al. Polymer 1997, 38, 4733-36) . 0 acoplamento do alfa-tocoferol com uma função ácido é realizado facilmente por reação do poliaminoácido com a vitamina E em presença de uma carbodiimida como agente de acoplamento e preferencialmente, um catalisador, tal como 4-dimetilaminopiridina e num solvente apropriado tal como, dimetilformamida (DMF), N-metilpirrolidona (NMP) ou sulfóxido de dimetilo (DMSO) . A carbodiimida é, por exemplo, diciclo-hexilcarbodiimida ou diisopropilcarbodi-imida. A taxa de enxerto é controlada quimicamente por estequiometria dos constituintes e reagentes ou pelo tempo de reação.

No segundo caso, sintetiza-se um derivado NCA de alfa-tocoferol com a seguinte estrutura. A síntese é análoga àquela descrita para o N-carboxianidrido de estearil-glutamato em Poche et al, Macromolecules 1995, 28, 6745-53.

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Seguidamente, o derivado NCA de alfa-tocoferol-glutamato é copolimerizado, por exemplo, com NCA de benzil-glutamato e para se obter as funções glutamato ou glutâmico, é realizada uma reação de hidrólise seletiva das funções benzilo numa mistura de ácido trifluoroacético e ácido bromidrico à temperatura ambiente. Convém salientar que essa segunda via de síntese permite realizar facilmente copolímeros aleatórios, em blocos ou em multi-blocos através, simplesmente, da alteração da ordem de adição dos monómeros. 0 acoplamento da vitamina E por via de um espaçador constituído por 1 a 4 aminoácidos pode ser realizado por reações sucessivas da vitamina E com aminoácidos, protegidos de forma apropriada, e depois desprotegidos para se obter uma função amina enxertável no polímero ou por reação com um oligopéptido. Por exemplo, a síntese de um alfa-tocoferol com uma unidade leucina é realizada segundo um método geral bem conhecido do especialista na matéria, de acordo com o seguinte esquema: I IrΓ 1 HO'

T

! 0- -J 1 19 ΡΕ1511790

Convém observar que o enxerto direto do alfa-tocoferol sobre o polímero realiza-se por via de uma função éster, enquanto que, no caso da presença de um espaçador à base de aminoácido (s) é realizada por via de uma função amida. Como para a realização de uma liqação éster, a ligação amida pode ser formada de forma semelhante, utilizando um agente de acoplamento clássico, tal como, uma dialquilcarbodiimida.

De acordo com uma variante da invenção, os poli-aminoácidos a que ela se refere são, não só portadores de enxertos de α-tocoferol, mas também, por molécula, de pelo menos um enxerto de tipo polialquilenoglicol ligado a uma unidade de glutamato e/ou aspartato e de preferência da seguinte fórmula (II):

em que: R'4 representa uma ligação direta ou um espaçador à base de 1 até 4 unidades de aminoácido; - X é um heteroátomo escolhido no grupo que compreende oxigénio, azoto ou enxofre; - R5 e R6 representam independentemente um H, um alquilo linear em Cl a C4; n varia de 3 até 1 000. 20 ΡΕ1511790

Preferencialmente, o polialquilenoglicol é um polietilenoglicol.

De acordo com uma outra característica preferida da invenção, a percentagem molar de enxerto do polialquilenoglicol varia de 1 até 30%. O enxerto desses grupos laterais pendentes (II) é realizado de forma conhecida per se e segundo técnicas ao alcance do especialisata na matéria, por exemplo, por formação de ligações amida, éster ou tioéster com os carboxilos dos monómeros glutamatos e/ou aspartatos. Essas técnicas podem ser as utilizadas, particularmente para o enxerto de alfa-tocoferol sobre uma estrutura de poli-aminoácido, estando essas técnicas descritas no presente pedido.

De acordo com um outro dos seus aspetos, a invenção refere-se a uma composição farmacêutica, cosmética, dietética ou fitossanitária, compreendendo pelo menos um dos poliaminoácidos, tais como os definidos anterior-mente .

De acordo com uma disposição vantajosa da invenção, essa composição compreende, para além do alfa-tocoferol, pelo menos um principio ativo, que pode ser terapêutico, cosmético, dietético ou fitossanitário. 21 ΡΕ1511790

Preferencialmente, o princípio ativo é uma proteína, uma glicoproteína, um polissacárido, um lipopolis-sacárido, um oligonucleótido, um polinucleótido ou um péptido.

Ainda mais preferencialmente, o princípio ativo é uma "pequena molécula" orgânica hidrófoba, hidrofílica ou anfifílica.

De acordo com a presente descrição, o termo "pequena molécula", significa, em particular, moléculas não proteicas.

Essa composição pode estar na forma de nano-partículas, micropartículas, soluções, emulsões, suspensões, geles, micelas, implantes, pós ou películas.

De acordo com uma das suas formas particularmente preferidas, a composição contendo ou não princípio ativo é uma suspensão coloidal estável de nanopartículas e/ou micropartículas e/ou micelas de poliaminoácidos, numa fase aquosa. A composição, de acordo com a invenção, quando é farmacêutica, pode ser administrada por via oral, paren-térica, nasal, vaginal, ocular, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intracraniana ou bucal. 22 ΡΕ1511790

Está igualmente previsto, que a composição esteja na forma de solução num solvente biocompativel, susceptível de ser injetada por via subcutânea, intramuscular ou directamento num tumor.

De acordo com uma outra alternativa, a composição, de acordo com a invenção, é formulada de forma a ser injetada e ser capaz de formar um depósito no local da inj eção. A invenção refere-se também às composições que compreendem poliaminoácidos, de acordo com a invenção, e princípios ativos que são susceptíveis de serem utilizados na preparação: • de medicamentos, em particular para administração oral, nasal, vaginal, ocular, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal ou intracraniana, os princípios ativos desses medicamentos podendo ser, em particular, proteínas, glicoproteínas, proteínas ligadas a uma ou mais cadeias de polial-quilenoglicol {por exemplo PoliEtilenoGlicol (PEG), neste caso são designadas por proteínas PEGiladas}, péptidos, polissacáridos, lipopolissacáridos, oligonucleótidos, poli-nucleótidos e pequenas moléculas orgânicas hidrófobas, hidrófilas ou anfifílicas; • e/ou nutrientes; • e/ou produtos cosméticos ou fitossani- tários. 23 ΡΕ1511790

De acordo ainda com um outro dos seus aspetos, a invenção refere-se ainda a um processo de preparação: • de medicamentos, em particular para administração oral, nasal, vaginal, ocular, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal ou intracraniana, os princípios ativos desses medicamentos podendo ser, em particular, proteínas, glicoproteínas, proteínas ligadas a uma ou a várias cadeias de polial-quilenoglicol {por exemplo polietilenoglicol (PEG), neste caso são designadas por proteínas PEGiladas}, péptido, polissacáridos, lipopolissacáridos, oligonucleótidos, poli-nucleótidos e pequenas moléculas orgânicas hidrófobas, hidrófilas ou anfifílicas; • e/ou nutrientes; • e/ou produtos cosméticos ou fitossani- tários; sendo este processo caracterizado pelo facto de consistir essencialmente na utilização de pelo menos um poliamino-ácido, tal como definido anteriormente e/ou a com- posição também descrita anteriormente.

Conforme indicado anteriormente, as técnicas de associação de um ou de vários PA aos poliaminoácidos enxertados com alfa-tocoferol, de acordo com a invenção, estão descritas, especialmente, no pedido de patente WO 00/30618 . 24 ΡΕ1511790 A invenção refere-se também a um método de tratamento terapêutico que consiste essencialmente em administrar a composição, tal como descrita na presente descrição, por via oral, parentérica, nasal, vaginal, ocular, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, in-traperitoneal, intracraniana ou bucal.

De acordo com uma forma de realização particular, o método de tratamento terapêutico consiste essencialmente na utilizar de uma composição tal como descrita anterior-mente na forma de solução num solvente biocompativel, e depois injetá-la por via subcutânea, intramuscular ou num tumor, preferencialmente, de modo a que forme um depósito no local da injeção.

Como exemplos de PA capazes de serem associados aos poliaminoácidos, de acordo com a invenção, quer estejam ou não na forma de (nano ou micro)partículas, pode-se referir: • proteínas, tais como insulina, inter-ferões, hormonas de crescimento, interleucinas, eritropoi-etina ou as citocinas; • péptido, tal como leuprolido ou ciclos-porina; • pequenas moléculas, tais como as que pertencem à família das antraciclinas, taxóides ou campto-tecinas; • e suas misturas. 25 ΡΕ1511790 A invenção será mais claramente compreendida e as suas vantagens e variáveis de aplicação tornam-se mais claras através nos exemplos que se seguem e que descrevem a síntese dos poliaminoácidos enxertados com alfa-tocoferol, a sua transformação em sistema de vetorização de PA (suspensão aquosa estável de nanopartículas) e a demonstração da capacidade desse sistema de se associar a PA (pequenas moléculas orgânicas, proteínas...) para formar composições farmacêuticas.

Exemplos 1: Polímero Pl Síntese de um poliglutamato enxertado por alfa-tocoferol de origem sintética. 0 polímero alfa-tocoferol, de massa equivalente a aproximadamente 10 000 em relação a um padrão de polioxietileno, é obtido por polimerização de NCAGluOMe, seguida de uma hidrólise, conforme descrito no pedido de patente FR 2 801 226. Solubilizam-se 5,5 g desse polímero alfa-L-poliglutamato em 92 mL de dimetilformamida (DMF), por aquecimento a 40°C, durante 2 horas. Uma vez o polímero solubilizado, deixa-se atingir a temperatura de 25°C e junta-se sucessivamente 1,49 g de D,L-alfa-tocoferol (> 98% fornecido por Fluka®) dissolvido previamente em 6 mL de DMF, 0,09 g de 4-dimetilaminopiridina previamente dissolvida em 6 mL de DMF e 0,57 g de diisopropilcarbodiimida previamente dissolvida em 6 mL de DMF. Após agitação durante 8 horas a 25°C, o meio reacional é vertido em 800 26 ΡΕ1511790 mL de água, contendo 15% de cloreto de sódio e ácido clorídrico (pH 2) . 0 polímero precipitado é, em seguida recuperado por filtração, lavado com ácido clorídrico 0,1 N e depois com água. O polímero é depois dissolvido novamente em 75 mL de DMF e depois precipitado novamente em água, contendo, tal como anteriormente, o sal e o ácido a pH 2. Após 2 lavagens com água, lava-se várias vezes com o éter diisopropílico. O polímero é seguidamente seco em estufa a 40°C sob vácuo. Obtém-se um rendimento da ordem de 85%. A taxa de enxerto estimado por RMN de protão é de aproximadamente 7,8% e uma análise por HPLC revela uma taxa residual de tocoferol inferior a 0,3%.

Mw (determinado por GPC e eluído com NMP) = 17 500 g/mole (como equivalente de polimetilmetacrilato).

Exemplos 2, 3, 4 e 5: Síntese de polímeros P2, P3, P4 e P5 São preparados do mesmo modo que os polímeros que têm quantidades variáveis de tocoferol.

Tabela 1:

Polímero Alfa-tocoferol Taxa de enxerto P2 Sintético: D,L 5,2% P3 Sintético: D,L 12,8% P4 Sintético: D,L 20,0% P5 Sintético: D,L 50,0% 27 ΡΕ1511790

Em todos os casos, a quantidade de tocoferol efetivamente enxertado foi confirmada por RMN.

Exemplo 6: Polímero P6 Síntese de um poliglutamato enxertado com alfa-tocoferol de origem natural.

De modo análogo, sintetiza-se o polímero P6 com 7,3% de D-alfa-tocoferol de origem natural (a 98,5% que é fornecido pela empresa ADM França). A massa molar é de 17 400 (GPC NMP, eq. PMMA).

Exemplo 7: Análise dos polímeros em solução aquosa

Os polímeros são dissolvidos em soro fisiológico tamponado com tampão fosfato a pH 7,4 num intervalo de concentrações que variam de 10 até 40 mg/mL e ajusta-se o pH a 7,4 pela adição hidróxido de sódio 0,1 N. A solubilização é observada visualmente.

Tabela 2: Solubilidade em soro fisiológico a pH 7,4

Polímero Taxa de enxerto Concentração Aspecto PI (D, L) 7,8% 10 a 30 mg/mL Solúvel e límpido P3 (D, L) 12% 10 mg/mL Precipitado muito fino P4 (D, L) 20% 10 mg/mL Precipitado muito fino P6 (D) 7,3% 10 a 30 mg/mL Solúvel e límpido

Tampão fosfato: fosfato a 0,01 M, KCl a 0,0027 M e NaCl a 0, 137 M. 28 ΡΕ1511790

Uma observação por transmissão eletrónica das soluções limpidas do polímero PI depositado sobre um suporte apresenta a existência de nanopartícuias de 15 a 25 nm. Uma análise comparativa das soluções do polímero Pl, P6 e alfa-tocoferol succinato a 15 mg/mL em solução aquosa a pH 7,4 (tampão fosfato) revela que só o alfa-tocoferol succinato desenvolve uma solução leitosa característica das vesículas, conforme descrito na patente EP 0243 446.

Exemplo 8: Adsorção de um corante sobre o polímero Pl

De acordo com um dos objetos da invenção, os polímeros podem ser utilizados na forma de suspensão coloi-dal em água e associados a um princípio ativo. Para este pedido de patente, é demonstrado na experiência seguinte que com certos polímeros, em especial aqueles com uma taxa de enxerto de cerca de 5 até 10% de tocoferol, a capacidade de adsorção é superior à de um composto análogo do estado da técnica.

Para esse estudo, comparou-se o polímero Pl com um polímero análogo contendo uma cadeia dodecanol enxertada sobre um poliglutamato. Este polímero está descrito no pedido de patente WO 00/30618. O estudo foi realizado da seguinte forma: os polímeros são dissolvidos numa solução aquosa a pH 7 (tampão fosfato) e adiciona-se 5 mg do corante denominado 29 ΡΕ1511790

Orange OT (Rn CAS: 2646-17-5). Deixam-se as soluções num banho ultrassónico durante uma hora para se obter a associação. As soluções são depois centrifugadas para eliminar o corante não associado e determina-se a densidade ótica no λ-máx do corante que se situa a 495 nm.

Tabela 3:

Polímero Taxa de Concentração OD enxerto do polímero normalizada PI (alfa-tocoferol) 7,8% molar 13,8 mg/mL 1 Polímero ccmparador* (dodecanol) 15% molar 17,3 mg/mL 0,45 *W0 00/30618.

Observa-se que para uma taxa de enxerto molar inferior a metade e a uma concentração de massa em polímero ligeiramente inferior, o polímero PI apresenta uma capacidade de associação ao corante Orange OT bastante superior.

Exemplo 9: Síntese do polímero P7 Síntese de um pollglutamato que tem um enxerto de alfa-tocoferol leucina.

Sintetiza-se em primeiro lugar o derivado alfa-tocoferol leucina da seguinte forma.

Faz-se reagir o D,L-alfa-tocoferol (4,3 g) com a BOC-Leucina (2,3 g) em 15 mL de diclorometano na presença 30 ΡΕ1511790 de 4-dimetilaminopiridina (244 mg) e diisopropilcarbodi-imida (1,5 g) . Após 2 horas a 30°C, o produto é purificado por filtração sobre uma coluna de silica. São obtidos 5 g de produto alfa-tocoferol leucina BOC (rendimento de 77%) . A sua estrutura é confirmada por espectroscopia de RMN. A desproteção do produto é realizada em ácido trifluoroacé-tico a uma temperatura compreendida entre 5 e 10°C durante uma hora. Após purificação por filtração sobre silica, isolam-se 3,3 g do produto desejado (rendimento de 78%). A sua estrutura é confirmada por espectroscopia de RMN.

Em seguida, realiza-se a reação de enxerto sobre um acido poliglutâmico nas mesmas condições utilizadas no exemplo 1, com uma taxa de enxerto de 7%. A estrutura do polimero e a taxa de enxerto foram confirmadas por espectroscopia de RMN.

Exemplo 10: Sintese do polimero P8

Sintese de um poliglutamato que tem um enxerto de alfa-tocoferol e um enxerto de polioxietilenoglicol.

Realiza-se uma reação de enxerto, conforme para o exemplo 1, com 11% molar de alfa-tocoferol e 2% molar de um metoxipolietilenoglicol aminado de fórmula MeO(CH2CH2O) nCfb-CH2NH2 e de massa molar 3 000 (produto fornecido pela empresa Shearwaters). O polimero na sua forma de ácido é obtido com um rendimento de 72%. A RMN de protão confirma uma taxa de enxerto de alfa-tocoferol de 10,9% e de polietilenoglicol de 1,9%. 31 ΡΕ1511790

Exemplo 11: Adsorção da insulina

Prepara-se uma solução de 1 mg de polímero PI e 7 mg de insulina a pH 7,0 em 1 mL de água e deixa-se a incubar durante 2 horas. A suspensão é depois ultrafiltrada (10 000G, 20 minutos com um limiar de 100 KDa). A insulina livre no filtrado é doseada por HPLC e quantidade de insulina associada é calculada por diferença. É determinada uma taxa de associação superior a 95% em relação à insulina utilizada. Nas mesmas condições, o polímero de comparação do exemplo 8, permite a associação de 40%. A capacidade de adsorção do polímero PI é, assim, superior.

Exemplo 12: Degradação do polímero Pl in vitro na presença de enzimas

Solubiliza-se o polímero Pl a pH 7,5 (tampão fosfato e 10 mM de catião cálcio) com uma concentração de 20 mg/mL. Adiciona-se 0,1 mL de protease (solução a 10 mg/mL) e seguidamente monitoriza-se a degradação por GPC aquoso.

Observa-se uma degradação relativamente rápida com um tempo de semi-vida do polímero inicial de aproxi-madamente 100 minutos.

Lisboa, 5 de setembro de 2013

Claims

ΡΕ1511790 1 REIVINDICAÇÕES 1. Poliaminoácidos compreendendo unidades as-párticas e/ou unidades glutâmicas, caracterizados pelo facto de pelo menos uma parte dessas unidades serem portadoras de enxertos compreendendo, pelo menos, uma unidade alfa-tocoferol.
2. Poliaminoácidos de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pela seguinte fórmula geral (I):

NHR2 em que: • R1 representa H, um grupo acilo linear em C2 a CIO ou ramificado em C3 a CIO, ou um piroglutamato; • R2 representa H, um alquilo linear em C2 a CIO ou ramificado em C3 a CIO, um benzilo ou uma unidade de aminoácido terminal; • R3 é H ou uma entidade catiónica, de preferência, selecionada no grupo que compreende: catiões metálicos escolhidos vantajosamente a partir do subgrupo que compreende: sódio, potássio, cálcio, magnésio, 2 ΡΕ1511790 catiões orgânicos escolhidos vantajosamente a partir do subgrupo que compreende: • catiões à base de amina, • catiões à base de oligoamina; • catiões à base de poliamina (sendo a polietilenoimina particularmente preferida), • catiões à base de aminoácido(s) escolhidos vantajosamente a partir da classe que compreende os catiões à base de lisina ou arginina, ou os poliaminoácidos catiónicos escolhidos vantajosamente do subgrupo que compreende polilisina ou oligolisina; • R1 representa uma ligação direta ou um "espaçador" à base de 1 a 4 unidades de aminoácido; • A representa independentemente um radical -CH2-(unidade aspártica) ou CH2-CH2- (unidade glutâmica); • n/(n+m) é definida como a taxa de enxerto molar e varia de 0,5 até 100% molar; • n + m varia de 3 a 1 000, preferencialmente entre 30 e 300; • T representa uma unidade alfa-tocoferol.
3. Poliaminoácidos de acordo com a reivindi cação 1 ou 2, caracterizados pelo facto do alfa-tocoferol ser de origem natural. 1 Poliaminoácidos de acordo com a reivindi cação 1 ou 2, caracterizados pelo facto do alfa-tocoferol ser de origem sintética. 3 ΡΕ1511790
5. Poliaminoácidos de acordo com a reivindicação 2, caracterizados pelo facto de serem constituídos por um homopolimero alfa-L-glutamato ou ácido alfa-L- glutâmico.
6. Poliaminoácidos de acordo com a reivindicação 2, caracterizados pelo facto de serem constituídos por um homopolimero alfa-L-aspartato ou ácido alfa-L-aspártico.
7. Poliaminoácidos de acordo com a reivindicação 2, caracterizados pelo facto de serem constituídos por um copolímero alfa-L-aspartato/alfa-L-glutamato ou ácido alfa-L-aspártico/ácido alfa-L-glutâmico.
8. Poliaminoácidos de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizados pelo facto da distribuição das unidades aspárticas e/ou glutâmicas portadoras de enxertos, compreendendo pelo menos uma unidade alfa-tocoferol é tal que os polímeros assim constituídos são ou aleatórios, ou de tipo em bloco, ou de tipo em multi-bloco.
9. Poliaminoácidos de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizados pelo facto da sua massa molar estar entre 2 000 e 100 000 g/mole, e, preferencialmente, entre 5 000 e 40 000 g/mole. 4 ΡΕ1511790
10. Poliaminoácidos de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizados pelo facto da taxa de enxerto molar estar entre 3 e 70% e preferencialmente entre 5 e 50%.
11. Poliaminoácidos de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizados pelo facto de serem portadores de pelo menos um enxerto do tipo polial-quilenoglicol ligado a uma unidade glutamato ou aspartato.
12. Poliaminoácidos de acordo com a reivindicação 11, em que o enxerto do tipo polialquilenoglicol ligado a uma unidade glutamato ou aspartato com a seguinte fórmula (II):

(H) em que: R'4 representa uma ligação direta ou um "espaçador" à base de 1 até 4 unidades de aminoácido; - X é um heteroátomo escolhido no grupo que compreende oxigénio, azoto ou enxofre; - R5 e R6 representam independentemente um H, um alquilo linear em Cl a C4; - n varia de 3 até 1 000.
13. Poliaminoácidos de acordo com a reivindicação 11 ou 12, caracterizados pelo facto do polialquilenoglicol ser um polietilenoglicol. 5 ΡΕ1511790
14. Poliaminoácidos de acordo com qualquer uma das reivindicações de 11 a 13, caracterizados pelo facto da percentagem molar de enxerto de polialquilenoglicol variar de 1 a 30%.
15. Composição farmacêutica, cosmética, dietética ou fitossanitária, compreendendo, pelo menos, um dos poliaminoácidos conforme definidos em qualquer uma das reivindicações de 1 a 14.
16. Composição de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo facto de compreender, pelo menos, um principio ativo.
17. Composição, de acordo com a reivindicação 16, caracterizada pelo facto do principio ativo ser uma proteina, uma glicoproteina, um polissacárido, um lipopo-lissacárido, um oligonucleótido, um polinucleótido ou um péptido.
18. Composição de acordo com a reivindicação 16, caracterizada pelo facto do principio ativo ser uma pequena molécula não proteica orgânica hidrófoba, hidrófila ou anfifilica.
19. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 15 a 18, caracterizada pelo facto de poder ser administrada por via oral, parenteral, nasal, 6 ΡΕ1511790 vaginal, ocular, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intracraniana ou bucal.
20 . Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 15 a 19, caracterizada pelo facto de estar na forma de um gel , de uma emulsão, de uma solução, de uma suspensão, de micelas, de nanopartícuias, de micropartícuias, de um pó ou uma película.
21. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 15 a 20, caracterizada pelo facto de ser uma suspensão coloidal de nanopartícuias e/ou de micro-partículas e/ou de micelas de poliaminoácidos, numa fase aquosa.
22. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 15 a 19, caracterizada pelo facto de estar na forma de uma solução num solvente biocompatível e pelo facto de poder ser injetada por via subcutânea, intramuscular ou num tumor.
23. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 15 a 22, caracterizada pelo facto de ser injetável e pelo facto de estar apta a formar um depósito sobre o local da injeção.
24. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 15 a 23, caracterizada pelo facto de ser destinada à preparação de: 7 ΡΕ1511790 • medicamentos, em particular para administração oral, nasal, vaginal, ocular, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal ou intracraniana, os princípios ativos desses medicamentos podem ser, em particular, proteínas, glicoproteínas, proteínas ligadas a uma ou mais cadeia(s) de polialquilenoglicol {por exemplo PoliEtilenoGlicol (PEG), neste caso são designadas por proteínas "PEGiladas"}, péptidos, polissacáridos, lipopo-lissacáridos, oligonucleótidos, polinucleótidos e pequenas moléculas não proteicas orgânicas hidrófobas, hidrófilas ou anfifílicas; • e/ou nutrientes; • e/ou produtos cosméticos ou fitossanitários.
25. Processo para a preparação de um poliamino-ácido conforme definido numa das reivindicações de 1 a 14, caracterizado pelo facto do referido poliaminoácido ser obtido por polimerização de anidridos de N-carboxi-amino-ácidos (NCA) , o polímero assim otido é depois hidrolizado sob condições adequadas para dar o polímero na sua forma ácida, o processo referido compreende ainda o acoplamento com um alfa-tocoferol.
26. Processo de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo facto do acoplamento com um alfa-tecoferol consistir num acoplamento do alfa-tecoferol com uma função ácido do poliaminoácido, o referido acoplamento é realizado por reação, num solvente adequado tal como a dimetilformamida (DMF), N-metilpirrolidona (NMP) ou sulfó- ΡΕ1511790 xido de dimetilo (DMSO), poliaminoácido com vitamina E na presença de uma carbodiimida como agente de acoplamento.
27. Processo para a preparação de um poliaminoácido conforme definido numa das reivindicações de 1 a 14, compreendendo a sintese do referido poliaminoácido por po-limerização de um derivado NCA do alfa-tocoferol, que consiste em: 1) sintetização de um derivado NCA de alfa- tocoferol-glutamato por acoplamento de um alfa-tocoferol com uma função ácido de um N-carboxianidrido glutamato, 2) copolimerização referida do derivado NCA de alfa-tocoferol-glutamato com um NCA benzilglutamato, 3) realização de uma reação de hidrólise selectiva das funções benzilo do copolímero, numa mistura de ácido trifluoroacético e ácido bromidrico à temepratura ambiente.
28. Processo de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo facto do acoplamento com um alfa- tocoferol ser realizado através de um espaçador constituído por 1 até 4 aminoácidos, o referido acoplamento ser realizado na presença de um agente de acoplamento, tal como, dialquilcarbodiimida e consistindo em: 1) reacções sucessivas de vitamina E com aminoácidos protegidos, os quais são depois desprotegidos para ter uma função amina enxertável sobre o polímero, ou 1') reação da vitamina E com um oligopéptido, 2) acoplamento do alfa-tocoferol-espaçador com uma função amina, com a função ácido carboxílico de um polímero para formar uma ligação amida. 9 ΡΕ1511790
29. Processo para a preparação de uma composição tal como definido numa das reivindicações de 16 a 24, caracterizado pelo facto do principio activo entrar em contacto com o referido poliaminoácido tal como definido numa das reivindicações de 1 a 14.
30. Processo para a preparação: • de medicamentos, em particular para administração por via oral, nasal, vaginal, ocular, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitonial ou intracraniana, os princípios activos desses medicamentos podem ser, especialmente, proteínas, glicoproteinas, proteínas ligadas a uma ou mais cadeias de polialquilenoglicol {por exemplo PoliEtilenoGlicol (PEG), neste caso são designadas por proteínas "PEGiladas"}, péptido, polissa-cáridos, lipopolissacáridos, oligonucleótidos, polinucleó-tidos e pequenas moléculas não proteicas orgânicas hidrófobas, hidrófilas ou anfifilicas; • e/ou nutrientes; • e/ou produtos cosméticos ou fitossanitários; caracterizado pelo facto de consistir essencialmente na utilização de, pelo menos, um poliaminoácido como reivindicado em qualquer uma das reivindicações de 1 a 14 e/ou na composição reivindicada em qualquer uma das reivindicações de 15 a 24. Lisboa, 5 de setembro de 2013 1 ΡΕ1511790 REFERENCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Documentos de patentes citadas na Descrição ♦ WOSSB1512A ♦ US28SS74SA ♦ USS868793A ♦ WO0O71183A ♦ EP 0243446 A « FR 2SOI226 * US 485244? Ã * US 8153193· A « US 4351337 A * US 4S8S39S Â * US 5994938-A » W© 0030613 A * UB 5448513 Â Literatura que não é de patentes citada na Descrição * HsfssíbooS. os' PtssTCisceiiÈissS Confroftecl Rsísoss Tsstrsctogy:, Marcai Dsfcfesr, Srs, 20CO * BfopsévmafB, 1876. wi. 15,1888 * HJt KraCtíELQQRF. 3:^h3^A,í?ssrsG0dd-N-csffe®íj· ÀíifcySfsás sstó ftía&et Spèssges· V«r- ssg, 1987 * TOMIBA «t aL Pa^sísr, 1997, vsL 33, 4733-38 * POCHf st aí. «tooíBa«M®SSBA. 1985, 28, 6745-83