FR3083089A1

FR3083089A1 - Solution injectable a ph 7 comprenant au moins une insuline basale dont le pi est compris entre 5,8 et 8,5 et un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes

Info

Publication number: FR3083089A1
Application number: FR1856067A
Authority: FR
Inventors: Alexandre GEISSLER
Original assignee: Adocia SAS
Current assignee: Adocia SAS
Priority date: 2018-06-29
Filing date: 2018-06-29
Publication date: 2020-01-03
Also published as: WO2020002696A1

Abstract

L'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins : a) de l'insuline glargine, b) un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy, ledit co-polyaminoacide étant constitué d'unités glutamiques ou aspartiques et lesdits radicaux hydrophobes Hy étant de formule I suivante : caractérisée en ce que la composition ne comprend pas d'une insuline basale dont le point isoélectrique pI est compris entre 5,8 et 8,5. Elle concerne également une composition caractérisée en ce qu'elle comprend en outre une insuline prandiale.

Description

SOLUTION INJECTABLE A PH 7 COMPRENANT AU MOINS UNE INSULINE BASALE DONT LE PI EST COMPRIS ENTRE 5,8 ET 8,5 ET UN CO-POLYAMINOACIDE PORTEUR DE CHARGES CARBOXYLATES ET DE RADICAUX HYDROPHOBES [0001] L'invention concerne les thérapies par injection d'insuline(s) pour traiter ie diabète.

[0002] L'invention concerne des compositions stables physiquement sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins une insuline basale dont le point isoélectrique (pi) est compris entre 5,8 et 10 8,5 et un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes.

[0003] Elle concerne plus particulièrement des compositions stables physiquement sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins une insuline basale dont le point isoélectrique (pi) est compris 15 entre 5,8 et 8,5 en association avec soit une insuline prandiale soit une hormone gastrointestinale soit une insuline prandiale et une hormone gastrointestinale, et un copolyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes.

[0004] L'insulinothérapie, ou thérapie du diabète par injection d'insuline, a connu 20 ces dernières années des progrès remarquables grâce notamment à la mise au point de nouvelles insulines offrant une meilleure correction de la glycémie des patients en comparaison de l'insuline humaine et qui permettent de mieux simuler l’activité physiologique du pancréas.

[0005] Lorsqu'un diabète de type II est diagnostiqué chez un patient, un 25 traitement graduel est mis en place. Le patient prend en premier lieu des antidiabétiques oraux (OAD) comme la Metformine. Lorsque les OAD seuls ne suffisent plus à réguler le niveau de glucose dans le sang, un changement dans le traitement doit être fait et, en fonction des spécificités des patients, différentes associations de traitements peuvent être mises en place. Le patient peut par exemple avoir un traitement à base d’une 30 insuline basale de type insuline glargine ou insuline detemir en complément des OAD, puis ensuite en fonction de l'évolution de la pathologie un traitement à base d'insuline basale et d'insuline prandiale.

[0006] Par ailleurs, aujourd'hui, pour assurer la transition des traitements par les

OAD, lorsque ceux-ci ne sont plus en mesure de contrôler le niveau de glucose dans le 35 sang, vers un traitement insuline basale/insuline prandiale, l'injection d'analogues de

GLP-1 RA est préconisée.

[0007] Les GLP-1 RA pour agonistes du récepteur Glucagon-Like Peptide-1, sont des peptides insulinotropiques ou incrétines, et appartiennent à la famille des hormones gastro-intestinales (ou Gut Hormones) qui stimulent la sécrétion d'insuline lorsque la glycémie est trop élevée, par exemple après un repas.

[0008] Les hormones gastro-intestinales (Gut hormones) sont aussi appelées hormones de satiété. Elles comprennent notamment le GLP-1 RA (Glucagon like peptide5 1 receptor agonist) et ie GIP (Glucose-dependent insulinotropic peptide), l'oxyntomoduline (un dérivé du proglucagon), le peptide YY, l'amyline, la cholecystokinine, le polypeptide pancréatique (PP), la ghreline et l'entérostatine qui ont des structures peptidiques ou protéiques. Elles stimulent également la sécrétion d'insuline, en réponse au glucose et aux acides gras et sont donc à ce titre des candidats 10 potentiels pour le traitement du diabète.

[0009] Parmi celles-ci, les GLP-1 RA sont celles qui ont apporté à ce jour les meilleurs résultats dans le développement de médicaments. Elles ont permis à des patients atteints de diabète de type II de perdre du poids tout en ayant un meilleur contrôle de leur glycémie.

[00010] Des analogues ou des dérivés de GLP-1 RA ont ainsi été développés notamment pour améliorer leur stabilité.

[00011] D'autre part, pour couvrir ses besoins journaliers en insuline, un patient diabétique dispose, actuellement, de façon schématisée, de deux types d’insulines ayant 20 des actions complémentaires : les insulines prandiales (ou insulines dites à action rapide) et les insulines basales (ou insulines dites à action lente).

[00012] Les insulines prandiales permettent une prise en charge rapide (métabolisation et/ou stockage) du glucose apporté lors des repas et collations. Le patient doit s'injecter une insuline prandiale avant chaque prise alimentaire, soit environ 25 2 à 3 injections par jour. Les insulines prandiales les plus utilisées sont. : l'insuline humaine recombinante, NovoLog® (insuline aspart de NOVO NORDISK), Humalog® (insuline Iispro de ELI LILLY) et Apidra® (insuline glulisine de SANOFI).

[00013] Les insulines basales assurent le maintien de l'homéostasie glycémique du patient, en dehors des périodes de prise alimentaire. Elles agissent essentiellement pour 30 bloquer la production endogène de glucose (glucose hépatique). La dose journalière d'insuline basale correspond généralement à 40-50% des besoins totaux journaliers en insuline. Selon l'insuline basale utilisée, cette dose est dispensée en 1 ou 2 injections, régulièrement réparties au cours de la journée. Les insulines basales les plus utilisées sont Levemir® (insuline detemir de NOVO NORDISK) et Lantus® (insuline glargine de 35 SANOFI).

[00014] On notera pour être exhaustif que la NPH (insuline NPH pour Neutral Protamine Hagedorn ; Humuline NPH®, Insulatard®) est la plus ancienne insuline basale. Cette formulation est le résultat d'une précipitation de l'insuline humaine (anionique à pH neutre) par une protéine cationique, ia protamine. Les microcristaux ainsi formés sont dispersés dans une suspension aqueuse et se dissolvent lentement après injection sous-cutanée. Cette dissolution lente assure une libération prolongée de l'insuline. Cependant cette libération n'assure pas une concentration constante d'insuline au cours du temps. Le profil de libération est en forme de cloche et dure seulement entre 12 et 16 heures. Elle est donc injectée deux fois par jour, Cette insuline basale NPH est bien moins performante que les insulines basales modernes, Levemir® et Lantus®. La NPH est une insuline basale à action intermédiaire.

[00015] Le principe de la NPH a évolué avec l'apparition des insulines analogues rapides pour donner des produits appelés « Premix » offrant à la fois une action rapide et une action intermédiaire. NovoLog Mix® (NOVO NORDISK) et Humalog Mix® (ELI LILLY) sont des formulations comprenant une insuline analogue rapide, Novolog® et Humalog®, complexée partiellement par la protamine. Ces formulations contiennent ainsi des microcristaux d'insuline analogue dont faction est dite intermédiaire et une partie d'insuline restée soluble dont l'action est rapide. Ces formulations offrent bien l'avantage d’une insuline rapide mais elles ont aussi le défaut de la NPH, c.-à-d. une durée d'action limitée entre 12 et 16 heures et une insuline libérée en « cloche ». Cependant, ces produits permettent au patient de s'injecter en une seule fois une insuline basale à action intermédiaire avec une insuline prandiale à action rapide. Or nombreux sont les patients soucieux de réduire leur nombre d'injections.

[00016] Les insulines basales actuellement commercialisées peuvent être classées en fonction de la solution technique qui permet d'obtenir l'action prolongée et à ce jour deux approches sont utilisées.

[00017] La première, celle de l'insuline detemir est la liaison à l'albumine in vivo. Il s'agit d'un analogue, soluble à pH 7, qui comprend une chaîne latérale d'acide gras (tetradecanoyl) fixée à la position B29 qui, in vivo, permet à cette insuline de s’associer à l’albumine. Son action prolongée est principalement due à cette affinité pour l'albumine après injection sous-cutanée.

[00018] Cependant son profil pharmacocinétique ne permet pas de couvrir une journée, ce qui fait qu’elle est le plus souvent utilisée en deux injections par jour.

[00019] Une autre insuline soluble à pH 7, est l’insuline degludec commercialisée sous le nom de Tresiba®^d. Elle comprend également une chaîne latérale d'acide gras fixée sur l'insuline (hexadecandioyl-y-L-Glu).

[00020] La seconde, celle de l'insuline glargine, est la précipitation à pH physiologique. L'insuline glargine est un analogue de l'insuline humaine obtenu par élongation de la partie C-terminale de la chaîne B de l'insuline humaine par deux résidus arginine, et par substitution du résidu d'asparagine A21, par un résidu de glycine (US 5,656,722), L'addition de deux résidus d'arginine a été pensée pour ajuster le pi (point isoélectrique) d'insuline glargine au pH physiologique, et ainsi rendre cet analogue de l'insuline humaine insoluble en milieu physiologique.

[00021] Aussi, la substitution de ΙΆ21 a été pensée afin de rendre l'insuline glargine stable à pH acide et pouvoir ainsi la formuler sous forme de solution injectable à pH acide. Lors de l'injection sous-cutanée, le passage de l'insuline glargine d'un pH acide (pH 4-4,5) à un pH physiologique (pH neutre) provoque sa précipitation sous la peau. La redissolution lente des micro-particules d'insuline glargine assure une action lente et prolongée.

[00022] L'effet hypoglycémiant de l'insuline glargine est quasi-constant sur une durée de 24 heures ce qui permet à la plupart des patients de se limiter à une seule injection par jour.

[00023] L'insuline glargine est considérée aujourd’hui comme l'insuline basale la plus utilisée.

[00024] Cependant le pH nécessairement acide des formulations d'insulines basales, dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5, de type insuline glargine, peut être un réel inconvénient, car ce pH acide de la formulation d'insuline glargine entraîne parfois chez les patients des douleurs à l'injection et surtout empêche toute formulation avec d’autres protéines et en particulier avec les insulines prandiales car ces dernières ne sont pas stables à pH acide. L'impossibilité de formuler une insuline prandiale, à pH acide, tient au fait qu'une insuline prandiale subit, dans ces conditions, une réaction secondaire de déamidation en position A21, ce qui ne permet pas de répondre aux exigences de stabilité applicables aux médicaments injectables.

[00025] A ce jour, dans les demandes WO 2013/021143 Al, WO 2013/104861 Al, WO 2014/124994 Al et WO 2014/124993 Al il a été démontré qu'il était possible de solubiliser ces insulines basales, de type insuline glargine dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5, à pH neutre, tout en maintenant une différence de solubilité entre le milieu in-vitro (le contenant) et le milieu in-vivo (sous la peau), indépendamment du pH.

[00026] La demande WO 2013/104861. Al, en particulier, décrit des compositions sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins (a) une insuline basale dont le point isoélectrique pi est compris entre 5,8 et 8,5 et (b) un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates substitué par des radicaux hydrophobes.

[00027] Ces compositions de l'art antérieur ont l'inconvénient majeur de ne pas être suffisamment stables pour répondre aux cahiers des charges applicables aux formulations pharmaceutiques.

[00028] Dans les exemples de la partie expérimentale de la présente demande de brevet il est démontré que les compositions décrites en particulier dans WO 2013/104861 Al présentent une stabilité insatisfaisante dans le temps.

[00029] Il existe donc un besoin de trouver une solution qui permet de solubiliser une insuline basale dont le point isoélectrique (pl) est compris entre 5,8 et 8,5 tout en conservant son profil basal après injection mais qui permettent également de satisfaire à des conditions de stabilité physique standard pour les produits pharmaceutiques à base d'insuline.

[00030] De manière surprenante, la demanderesse a trouvé que les co10 polyaminoaddes porteurs de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes selon l'invention permettent d'obtenir des compositions sous forme de solutions qui non seulement répondent aux exigences décrites dans WO 2013/104861 Al mais qui de plus sont en mesure de conférer une stabilité physique améliorée auxdites compositions sans avoir à augmenter ia quantité d'excipients utilisée.

[00031] Ces performances a priori jamais atteintes sont de plus conservées lorsque i'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 est associée dans la composition avec une insuline prandiale et/ou une hormone gastro-intestinale. [00032] Ainsi, de façon surprenante, l'affinité des co-polyaminoacides selon l'invention pour I’insuline glargine a été augmentée en ce qu'elle permet d'obtenir une solubilisation et une stabilisation des solutions d'insuline glargine à un ratio [Hy]/[insuline basale] inférieur à celui de l'art antérieur ; ces résultats sont de plus obtenus sans altérer, voire en améliorant, la propension de I'insuline glargine à précipiter comme cela est démontré dans la partie expérimentale.

[00033] Cette amélioration de l'affinité permet en outre dans le cadre de 25 traitements chroniques de limiter le niveau d'exposition auxdits excipients.

[00034] Les co-polyaminoacides porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy selon l’invention présentent une excellente résistance à l'hydrolyse. Ceci peut notamment être mis en évidence en conditions accélérées, par exemple par des tests d'hydrolyse à pH basique (pH 12).

[00035] En outre des tests d'oxydation forcée, par exemple du type oxydation de fenton, montrent que les co-polyaminoacides porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy présentent une bonne résistance à l'oxydation.

[00036] L'invention concerne ainsi des compositions stables physiquement sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins :

a) une insuline basale dont le point isoélectrique (pl) est compris entre 5,8 et 8,5, et

b) un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe de formule L [00037] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont ie pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins :

a) une insuline basale dont le point isoélectrique [pi) est compris entre 5,8 et 8,5, et

b) une insuline prandiale, et

c) un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe de formule L [00038] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins :

a) une insuline basale dont le point isoélectrique (pi) est compris entre 5,8 et 8,5, et

b) une hormone gastrointestinale, et

c) un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe de formule L [00039] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins :

b) une insuline prandiale et une hormone gastrointestinale, et

c) un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe de formule I.

[00040] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition stable physiquement sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins :

a) Une insuline glargine. et

b) un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy, ledit co-polyaminoacide étant constitué d'unités glutamiques ou aspartiques et lesdits radicaux hydrophobes Hy étant de formule I suivante :

*4._GpR V/-GpA^4 GpC) ^{1 3} P Formule I dans laquelle

- GpR est un radical de formules II, Γ ou Π * *—N—R~N—* _Ilou

H

R~-N--*_irou

II

- GpA est un radical de formules III ou ΙΙΓ ·:

0 HN-*
/
	0
	H H
HN ni ou	__11_A-N —* ni'

- GpC est un radical de formule IV :

- les * indiquent les sites de rattachement des différents groupes;

~ a est un entier égal à 0 ouà 1 ;

- b est un entier égal à 0 ouà 1;

p est un entier égal à 1 ou à 2 et o si p est égal à 1 alors a est égal à 0 ou à 1 et GpA est un radical de formule III' et, o si p est égal à 2 alors a est égal à 1, et GpA est un radical de formuleIII;

- c est un entier égal à 0 ou à 1, et si c est égal à 0 alors d est égal à 1 ou à2;

- d est un entier égal à 0, à 1 ou à 2;

- r est un entier égal à 0, à 1 ou à 2, et o si r est égal à 0 alors le radical hydrophobe de formule I est lié au copolyaminoacide via une liaison covalente entre un carbonyl du radical hydrophobe et un atome d'azote en position N terminale du copolyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction amine en position N terminale du précurseur du co-polyaminoacide et une fonction acide portée par le précurseur du radical hydrophobe , et o si r est égal à 1 ou 2 alors le radical hydrophobe de formule I est lié au copolyaminoacide :

» via une liaison covalente entre un atome d'azote du radical hydrophobe et un carbonyl du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction amine du précurseur du radical hydrophobe et une fonction acide portée par le précurseur du co-polyaminoacide ou * via une liaison covalente entre un carbonyl du radical hydrophobe et un atome d'azote en position N terminal du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction acide du précurseur du radical hydrophobe et une fonction amine en position N terminale portée par le précurseur du copolyaminoacide;

R est un radical choisi dans le groupe constitué par un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone portant une ou plusieurs fonctions -CONH2 ou un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène, un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone portant un ou plusieurs cycles insaturés ou un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène ; plus précisément, R est un radical choisi dans le groupe constitué par :

o un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié, comprenant, de 2 à 12 atomes de carbone si GpR est un radical de formule II ou de 1 à 11 atomes de carbone si GpR est un radical de formule ΙΓ ou Π ;

o un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié, comprenant, de 2 à 11 atomes de carbone si GpR est un radical de formule II ou de 1 à 11 atomes de carbone si GpR est un radical de formule ΙΓ ou Π, ledit radical alkyle portant une ou plusieurs fonctions -CONH2, et o un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène ;

- A est un radical choisi dans le groupe constitué par un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène ou un radical alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 8 atomes de carbone et éventuellement substitué par un radical issu d'un cycle saturé, insaturé ou aromatique ;

- B est un radical alkyle linéaire ou ramifié, éventuellement comprenant un noyau aromatique, comprenant de 1 à 9 atomes de carbone ;

·< Cx est un radical alkyl monovalent linéaire ou ramifié, éventuellement comprenant une partie cyclique, dans lequel x Indique le nombre d’atomes de carbone et :

o si p est égal à 1, x est compris entre 9 et 25 (9 < x < 25) :

o si p est égal à 2, x est compris entre 9 et 15 (9 < x < 15), le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques étant compris entre 0 < i < 0,5 ;

lorsque plusieurs radicaux hydrophobes sont portés par un co-polyaminoacide alors ils sont identiques ou différents ;

- le degré de polymérisation DP en unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 5 et 250 ;

les fonctions acides libres étant sous forme de sel de cation alkaiin choisi dans le groupe constitué par Na’ et K⁺ ;

[00041] Dans un mode de réalisation, l’invention concerne une composition stable physiquement sous forme d’une solution aqueuse injectable, dont ie pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins :

insuline glargine, insuline prandiale et/ou une hormone gastrointestinale, et co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy, ledit co-polyaminoacide étant constitué d'unités glutamiques ou aspartiques et lesdits radicaux hydrophobes Hy étant de formule I suivante :

une

b)

C) une un

P Formule I dans laquelle

- GpR est un radical de formules II ou II

TT *

II ou * TT'

II ou *

ΙΓ

GpA est un radical de formules III ou ΙΙΓ :

ο ΗΝΗΝ—

III ou

Η

A—-Ν—-* nr

- GpC est un radical de formule IV :

- les * indiquent les sites de rattachement des différents groupes;

- a est un entier égal à 0 ou à1 ;

- b est un entier égal à 0 ou à1;

p est un entier égal à 1 ou à2 et o si p est égal à 1 alors a est égal à 0 ou à 1 et GpA est un radical de formule ΙΙΓ et, o si p est égal à 2 alors a est égal à 1, et GpA est un radical de formuleIII;

- d est un entier égal à 0, à 1 ou à 2;

« via une liaison covalente entre un atome d'azote du radical hydrophobe et un carbonyl du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction amine du précurseur du radical hydrophobe et une fonction acide portée par le précurseur du co-polyaminoacide ou » via une liaison covalente entre un carbonyl du radical hydrophobe et un atome d'azote en position N terminal du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction acide du précurseur du radical hydrophobe et une fonction amine en position N terminale portée par le précurseur du copolyaminoacide;

- R est un radical choisi dans le groupe constitué par un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone portant une ou plusieurs fonctions -CONH2 ou un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène, un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone portant un ou plusieurs cycles insaturés ou un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène ; plus précisément, R est un radical choisi dans le groupe constitué par :

o un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifie, comprenant, de 2 à 11 atomes de carbone si GpR est un radical de formule II ou de 1 à 11 atomes de carbone si GpR est un radical de formule ΙΓ ou II, ledit radical alkyle portant une ou plusieurs fonctions -CONHz, et o un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène ;

- A est un radical alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 8 atomes de carbone et éventuellement substitué par un radical issu d'un cycle saturé, insaturé ou aromatique ;

- B est un radical choisi dans le groupe constitué par un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène ou un radical alkyle linéaire ou ramifié, éventuellement comprenant un noyau aromatique, comprenant de 1 à 9 atomes de carbone ;

- Cx est un radical alkyl monovalent linéaire ou ramifié, éventuellement comprenant une partie cyclique, dans lequel x indique le nombre d'atomes de carbone et :

o si p est égal à 1, x est compris entre 9 et 25 (9 < x < 25) :

le degré de polymérisation DP en unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 5 et 250 ;

- les fonctions acides libres étant sous forme de sel de cation alkalin choisi dans le 5 groupe constitué par Na⁺ et K* ;

[00042] Dans un mode de réalisation, lorsque r=2 alors le groupe GpR lié au PLG est choisi parmi les GpR de formule II.

[00043] Dans un mode de réalisation, lorsque r=2 alors le groupe GpR lié au PLG est choisi parmi les GpR de formule II et le deuxième GpR est choisi parmi les GpR de formule II.

[00044] Dans un mode de réalisation, un mode de réalisation, lorsque r=2 alors le groupe GpR lié au PLG est choisi parmi les GpR de formule II.

[00045] Dans un mode de réalisation, un mode de réalisation, lorsque r=2 alors le groupe GpR lié au PLG est choisi parmi les GpR de formule II et le deuxième GpR est choisi parmi les GpR de formule II, [00046] G est un radical alkyl monovalent linéaire ou ramifié, dans lequel x indique le nombre d’atomes de carbone et :

o si p est égal à l,x est compris entre 11 et 25 (11 < x < 25) :

si p est égal à 2, x est compris entre 9 et 15 (9 < x < 15), [00047] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que Hy comprend entre 15 et 100 atomes de carbone.

[00048] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que Hy comprend entre 30 et 70 atomes de carbone.

[00049] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que Hy comprend entre 40 et 60 atomes de carbone.

[00050] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que Hy comprend entre 20 et 30 atomes de carbone [00051] Dans un mode de réalisation, Hy comprend plus de 15 atomes de carbone.

[00052] Dans un mode de réalisation, Hy comprend plus de 30 atomes de carbone.

[00053] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le pH est compris entre 6,0 et 8,0.

[00054] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le pH est compris entre 6,6 et 7,8.

[00055] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que le pH est compris entre 7,0 et 7,8.

[00056] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le pH est compris entre 6,8 et 7,4.

[00057] Dans les formules les * indiquent les sites de rattachements des différents éléments représentés.

[00058] Dans les formules, les * indiquent les sites de rattachement des radicaux hydrophobes au co-polyaminoacide. Les radicaux -Hy sont rattachés au copolyaminoacide via des fonctions amides.

[00059] Dans les formules II et ΙΓ ou II”, les * indiquent, les sites de rattachement de GpR :

au co-polyaminoacide et à GpA si a = l ou à GPC si a = 0.

[00060] Dans les formules III et ΙΙΓ, les * indiquent, de gauche à droite respectivement, les sites de rattachement de GpA :

à GpR si r=l ou 2 ou au co-polyaminoacide si r=0 et à GpC.

[00061] Dans Sa formule IV, le * indique le site de rattachement de GpC :

à GpA si a==l, GpR si r-l ou 2 et a = 0 ou, au co-polyaminoacide si r=0 et a=0.

[00062] Tous les rattachements entre les différents groupes GpR, GpA, et GpC sont des fonctions amides.

[00063] Les radicaux -Hy, GpR, GpA, - et GpC, et D sont chacun indépendamment identiques ou différents d'une unité monomérique à l'autre.

[00064] Ledit co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy est soluble en solution aqueuse à pH compris entre 6,0 et 8,0, à une température de 25 °C et à une concentration inférieure à 60 mg/ml.

[00065] Les compositions sous forme d'une solution aqueuse injectable selon l'invention sont des solutions limpides.

[00066] On entend par « solution limpide », des compositions qui satisfont aux critères décrits dans les pharmacopées américaines et. européenne concernant les solutions injectables. Dans la pharmacopée américaine, les solutions sont définies dans la partie <1151> faisant référence à l'injection (<1>) (faisant référence à <788> selon USP 35 et précisé dans <788> selon USP 35 et dans <787>, <788> et <790> USP 38 (à partir du 1^er août 2014), selon USP 38). Dans la pharmacopée européenne, les solutions injectables doivent remplir les critères donnés dans les sections 2.9.19 et 2.9.20.

[00067] On entend par « composition stable physiquement » des compositions qui satisfont aux critères de l'inspection visuelle décrite dans la pharmacopée européenne, américaine et internationale, c'est-à-dire des compositions qui sont claires et qui ne contiennent pas de particules visibles, mais également incolores.

[00068] On entend par « solution aqueuse injectable » des solutions dont le solvant est l'eau qui répondent aux conditions des pharmacopées EP et US.

[00069] On entend par « co-polyaminoacide étant constitué d'unités glutamiques ou aspartiques » des enchaînements linéaires non cycliques d'unités acide glutamique ou acide aspartique liées entre elles par des liaisons peptidiques, lesdits enchaînements présentant une partie C-terminale, correspondant à l’acide carboxylique d'une extrémité, et une partie N-terminale, correspondant à l'amine de l'autre extrémité de l'enchaînement.

[00070] On entend par « soluble », susceptible de permettre de préparer une solution limpide et dépourvue de particules à une concentration inférieure à 60 mg/ml dans de l'eau distillée à 25 °C.

[00071] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle si p est égal à 1 (p=l) et si x est inférieur ou égal à 14 (x < 14) alors r=0 ou r=l.

[00072] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle si p est égal à 1 (p== 1) et si x est compris entre 15 et 16 (15 < x < 16), alors r=l.

[00073] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle si p est égal à 1 (p=l) et si x est supérieur à 17 (17 < x) alors r=l et R est un radical éther ou polyéther.

[00074] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle si p est. égal à 1 (p=== 1) alors x est compris entre 17 et 25 (1.7 < x < 25).

[00075] Dans un mode de réalisation, ledit au moins un radical hydrophobe —-Hy est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle r = 2 de formule le', telle que définie ci-dessous :

*—GpR—GpR--(GpA)----------(GpC) ^{a p} Formule Ic' dans laquelle GpRi est un radical de formule Π.

H H “N”~R”~N“ Formule II dans laquelle GpR,, GpA, GpC, R, a, et p ont les définitions données précédemment.

[00076] Dans un mode de réalisation, ledit au moins un radical hydrophobe —Hy est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle r = 2 de formule le', telle que définie ci-dessous :

*—GpR-GpR--(GpA)—(GpC) ^{a μ} Formule le' dans laquelle GpRi est un radical de formule II.

O O * H—R —LJ * Formule II dans laquelle GpR, GpA, GpC, R, a, et p ont les définitions données précédemment.

[00077] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle p=l, représentée par la formule V suivante :

*—t-GpR )—^-GpA^— GpC ^{r a} formule V

GpR, GpA, GpC, r et a ont les définitions données précédemment.

[00078] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle a = l et p=2, représentée par la formule VI suivante :

—/GpR —GpA—( GpCj r 2 Formule VI dans laquelle

GpR, GpA, GpC et r ont les définitions données précédemment.

[00079] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formules I, V ou VI dans lesquelles : r est égal à 1 (r== 1) et a est égal à 0 (a==0), [00080] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formules I, le', V ou VI dans lesquelles : r est égal à 2 (r=2) et a est égal à 0 (a = 0).

[00081] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, V ou VI dans laqueller est égal à 1 (r = 1) et a est égal à 1 (a = l).

[00082] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans lesquelles r est égal à 2 (r := 2) et a est égal à 1 (a~ 1).

[00083] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de f formule I, IcV ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule IL [00084] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical formule I, le', V ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est. un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 12 atomes de carbone.

[00085] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radicai hydrophobe est un radical formule I, le', V ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R. est un radical alkyle divalent comprenant de 2 à 6 atomes de carbone.

[00086] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 6 atomes de carbone.

[00087] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ie radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle divalent comprenant de 2 à 4 atomes de carbone.

[00088] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 4 atomes de carbone.

[00089] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle divalent comprenant 2 atomes de carbone.

[00090] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule ΙΓ.

[00091] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le’, V ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule ΙΓ dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 1 à 11 atomes de carbone.

[00092] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule ΙΓ dans laquelle R est un radical alkyle divalent comprenant de 1 à 6 atomes de carbone.

[00093] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ, dans laquelle R est un radical alkyle divalent, comprenant de 2 à 5 atomes de carbone et portant une ou plusieurs fonctions amide (-CONH2).

[00094] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule IT ou II, dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent, comprenant de 2 à 5 atomes de carbone et portant une ou plusieurs fonctions amide (CON Hz).

[00095] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle GpR. est un radical de formule Π ou II' dans laquelle R est un radical choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :

[00096] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que 1e radical R est lié au co-polyaminoacide via une fonction amide portée par le carbone en position delta ou epsilon (ou en position 4 ou 5) par rapport à la fonction amide (CON H₂).

[00097] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II, dans laquelle R est un radical linéaire éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène. [00098] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II, dans laquelle R est un radical éther.

[00099] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou Π, dans laquelle R est un radical éther comprenant de 4 à 6 atomes de carbone.

[000100] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, Ic',V ou VI dans lesquelles GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II” dans laquelle R est un radical éther représenté par la

[000101] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formules I, V ou VI dans lesquelles GpR est un radical de formule II, II’ ou II, dans laquelle R est un radical polyéther.

[000102] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II, dans laquelle R est un radical linéaire polyéther comprenant de 6 à 10 atomes de carbone et de ?.. à 3 atomes d'oxygène.

[000103] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radicai hydrophobe de formule I, le', V ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II, dans laquelle R est un radical polyéther choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :

[000104] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I, le’, V ou VI dans laquelle GpR est un radical de formule

Π dans laquelle R est un radical polyéther choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :

.0 [000105] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle a est égal à 0 (a=0) et r est égal à 0 (r=0).

[000106] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle a est égal à 1 (a = l) et le radical GpA est un radical de formule III' dans laquelle A est choisi dans le 10 groupe constitué des radicaux représentés par les formules ci-dessous :

[000107] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle a est égal à 1 15 (a = l) et le radical GpA est un radical de formule III dans laquelle A est choisi dans le groupe constitué des radicaux représentés par la formule ci-dessous :

O ----------' '.........7 | „ . __._________________.____________________________ΐ

[000108] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux de formules IVa, IVb ou 5 IVc ci-après représentées :

[000109] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle le radical GpC 10 est de formule IVa.

[000110] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux de formules IVa, IVb ou IVc dans lesquels b est égal à 0, répondant respectivement aux formules IVd, IVe, et 15 IVf ci-après représentées :

[000111] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ου VI dans laquelle le radical GpC répond à la formule IV ou IVa dans lesquelles b=0, et répond à la formule IVd.

[000112] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle le radical GpC de formule IV dans laquelle b=l est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels B est un résidu d'acide aminé choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous ·


* *	:	H y'I :
	®h₃	ch₃
	* *
		* *
<·. .S?		γ
ch₃		[^/XCH₃ :
	: H₃CG	CH₃ /

* *	i ^:
h₃c^x	h₃c^z/xch₃

[000113] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle le radical GpC de formule IV ou IVa dans lesquelles b = l, est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels B est un résidu d'acide aminé choisi dans le groupe constitué par

[000114] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le’, V ou VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans ie groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles linéaires.

[000115] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles ramifiés.

[000116] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle le radical GpC de formule ÏV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 11 et 14 atomes de carbone.

[000117] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ου VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules cidessous :

[000118] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le 25 radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 15 et 16 atomes de carbone.

[000119] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le 30 radical hydrophobe est un radical de formule I, V ou VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans ie groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par la formule ci-dessous ;

[000120] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par la formule ci-dessous i

	9^H3 .	x~16
* _{Λ Λ Λ}
‘s.	-_CH₃ :

[000121] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 17 et 25 atomes de carbone.

[000122] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 17 et 18 atomes de carbone.

[000123] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles représentés par la formule cidessous :

[000124] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 18 et 25 atomes de carbone.

[000125] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I, le', V ou VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles représentés par les formules cidessous :

[000126] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule VII suivante :

dans laquelle, • D représente, indépendamment, soit un groupe -CH?- (unité aspartique) soit un groupe -CH2-CH2- (unité glutamique) ;

* Hy est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, le', V ou VI,;

® Ri est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, le', V ou VI dans lesquelles r=0, r=l ou r== 2, ou un radical choisi dans !e groupe constitué par un H, un groupe acyle linéaire en C2 15 à CIO, un groupe acyle ramifié en C3 à CIO, un benzyle, une unité « acide aminé » terminale et un pyroglutamate ;

« R2 est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, le', V ou VI, ou un radical -NR'R, R' et R identiques ou différents étant choisis dans le groupe constitué par H, les alkyles linéaires 20 ou ramifiés ou cycliques en C2 à C10, le benzyle et lesdits R' et R alkyles pouvant former ensemble un ou des cycles carbonés saturés, insaturés et/ou aromatiques et/ou pouvant comporter des hétéroatomes, choisis dans le groupe constitué par O, N et S ;

« X représente un H ou une entité cationique choisie dans le groupe comprenant les cations métalliques ;

• n + m représente le degré de polymérisation DP du co-polyaminoacide, c'est-à-dire le nombre moyen d'unités monomériques par chaîne de copolyaminoacide et 5 < n + m < 250, « ledit copolyaminoacide comprenant au moins un radical -Hy, [000127] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule VII suivante :

VII dans laquelle, ® D représente, indépendamment, soit un groupe -CHz- (unité aspartique) soit un groupe -CH2-CH2- (unité glutamique) ;

• Hy est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI,;

® Ri est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI , ou un radical choisi dans le groupe constitué par un H, un groupe acyle linéaire en C2 à C10, un groupe acyle ramifié en C3 à C10, un benzyle, une unité « acide aminé » terminale et un pyroglutamate ;

• R2 est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI dans lesquelles r=l et GpR est un radical de formule II, ou un radical -NR'R, R' et R identiques ou différents étant choisis dans le groupe constitué par H, les alkyles linéaires ou ramifiés ou cycliques en C2 à C10, le benzyle et lesdits R' et R alkyles pouvant former ensemble un ou des cycles carbonés saturés, insaturés et/ou aromatiques et/ou pouvant comporter des hétéroatomes, choisis dans îe groupe constitué par O, N et S ;

• X représente un H ou une entité cationique choisie dans le groupe comprenant les cations métalliques ;

<* n + rn représente le degré de polymérisation DP du co-polyaminoacide, c'est-à-dire le nombre moyen d'unités monomériques par chaîne de copolyaminoacide et 5 < n + m < 250.

[000128] Le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d’au moins un radical hydrophobe de formule I peut également être appelé « co-polyaminoacide » dans la présente description.

[000129] On appelle « co-polyaminoacide statistique » un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d’au moins un radical hydrophobe, un co-polyaminoacide de formule Vila.

[000130] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formules VII, dans laquelle Ri=R'· et R2=R'z, de formule Vila suivante :

Vila dans laquelle, m, π, X, D et Hy ont les définitions données précédemment ;

- R’i est un radical choisi dans le groupe constitué par un H, un groupe acyle linéaire en C2 à C10, un groupe acyle ramifié en C3 à C10, un benzyle, une unité « acide aminé » terminale et un pyroglutarnate ;

- R^r2 est un radical -NR'R, R’ et R identiques ou différents étant choisis dans le groupe constitué par H, les alkyles linéaires ou ramifiés ou cycliques en C2 à C10, le benzyle et lesdits R' et R alkyles pouvant former ensemble un ou des cycles carbonés saturés, insaturés et/ou aromatiques et/ou pouvant comporter des hétéroatomes, choisis dans le groupe constitué par O, N et S.

[000131] On appelle « co-polyaminoacide défini » un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d’au moins un radical hydrophobe, un co-polyaminoacide de formule Vlïb.

[000132] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule VII dans laquelle n=0 de formule VÏIb 10 suivante :

dans laquelle m, X, D, Ri et Rz ont les définitions données précédemment et au moins Ri ou Rz est un radical hydrophobe de formule I, V ou VI.

[000133] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule VII dans laquelle n=0 de formule Vlïb et Ri ou Rz est un radical hydrophobe de formule I, V ou VI.

[000134] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule Vlïb dans laquelle Ri est un radical hydrophobe de formule I, V ou VI dans lesquelles r=0 ou r~l et GpR est de formule ΙΓ. [000135] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formules Vlïb dans laquelle Rz est un radical hydrophobe de formule I, V ou VI dans lesquelles r-1 et GpR est de formule IL [000136] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que Ri est un radical choisi dans le groupe constitué par un groupe acyle linéaire en Cz à Cio, un groupe acyle ramifié en C3 à Cio, un benzyle, une unité « acide aminé » terminale et un pyroglutamate.

[000137] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que Ri est un radical choisi dans le groupe constitué par un groupe acyle linéaire en Cz à Cio ou un groupe acyle ramifié en Cj à Cio.

[000138] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formules VII, Vila ou Vllb dans lesquels le groupe D est un groupe -CH2- (unité aspartique).

[000139] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formules VII, Vila ou Vllb dans lesquels ie groupe D est un groupe -CH2-CH2- (unité glutamique).

[000140] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,007 et 0,3.

[000141] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,3.

[000142] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,02 et 0,2.

[000143] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,007 et 0,15.

[000144] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,1.

[000145] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et ie nombre d’unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,02 et 0,08.

[000146] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI dans laquelle le radical Cx comprend entre 9 et 10 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,03 et 0,15.

[000147] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que le radicai hydrophobe répond à la formule VI dans laquelle le radical Cx comprend entre et 12 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et ie nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,015 et 0,1.

[000148] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI dans laquelle le radical Cx comprend entre 11 et 12 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,02 et 0,08.

[000149] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI dans laquelle le radical Cx comprend entre 13 et 15 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,1.

[000150] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI dans laquelle le radical Cx comprend entre 13 et 15 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,06.

[000151] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,007 et 0,3.

[000152] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V et le ratio i entre ie nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,3.

[000153] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V et le ratio i entre ie nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,015 et 0,2.

[000154] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V dans laquelle le radical Cx comprend entre 11 et 14 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,1 et 0,2.

[000155] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V dans laquelle le radical Cx comprend entre 15 et 16 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,04 et 0,15.

[000156] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V dans laquelle le radical Cx comprend entre 17 et 18 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,02 et 0,06.

[000157] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V dans laquelle le radical Cx comprend entre 19 et 25 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,06.

[000158] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V dans laquelle le radical Cx comprend entre 19 et 25 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,05.

[000159] Dans un mode de réalisation, ia composition selon l'invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 10 et 250.

[0001] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 10 et 200.

[0002] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 15 et 150.

[0003] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 15 et 100.

[0004] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 15 et 80.

[000160] Dans un mode de réalisation, la composition selon l’invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 15 et 65.

[0005] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 20 et 60.

[0006] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 20 et 50.

[000161] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 20 et 40.

[000162] L'invention concerne également lesdits co-polyaminoacides porteurs de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes de formule I et les précurseurs desdits radicaux hydrophobes.

[000163] Les co-polyaminoacides porteurs de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes de formule I sont solubles dans l'eau distillée à un pH compris entre 6 et 8, à une température de 25 °C et à une concentration inférieure à 60 mg/ml.

[000164] Dans un mode de réalisation, l’invention concerne aussi les précurseurs desdits radicaux hydrophobes de formule I.

[000165] L'invention concerne également lesdits co-polyaminoacides porteurs de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes de formule I, V ou VI.

[000166] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne aussi les précurseurs desdits radicaux hydrophobes de formule Γ, V' et VI¹ :

H-^-GpR j-^-GpA W Gpcj r a p formule Γ

H/GpRj-fGpAf-GpC _formutev.

Γ C3 ~^GpR j—GpA—Gpcj formule VI' dans lesquelles GpR, GpA, GpC, r, a, p ont les définitions données précédemment. [000167] . L'invention concerne en outre en une méthode de préparation de compositions injectables stables.

[000168] [000169] On entend par « soluble », susceptible de permettre de préparer une solution limpide et dépourvue de particules à une concentration inférieure à 100 mg/ml dans de l'eau distillée à 25°C.

[000170] On entend par « solution », une composition liquide dépourvue de particules visibles, en utilisant la procédure conforme aux pharmacopées européenne 8.0, au point 2.9.20, et américaine.

[000171] On entend par « composition stable physiquement », des compositions qui après une certaine durée de stockage à une certaine température satisfont aux critères de l'inspection visuelle décrite dans la pharmacopée européenne, américaine et internationale, c'est-à-dire des compositions qui sont limpides et qui ne contiennent pas de particules visibles, mais également incolores.

[000172] On entend par « composition stable chimiquement », des compositions qui, après stockage un certain temps et à une certaine température, présentent une recouvrance minimum des principes actifs et sont conformes aux cahiers des charges applicables aux produits pharmaceutiques.

[000173] On entend par « solution aqueuse injectable » des solutions à base d'eau qui répondent aux conditions des pharmacopées européenne et américaine, et qui sont suffisamment liquides pour être injectées.

[0001.74] On entend par « co-polyaminoacide étant constitué d'unités glutamiques ou aspartiques », des enchaînements linéaires non cycliques d'unités acide glutamique ou acide aspartique liées entre elles par des liaisons peptidiques, lesdits enchaînements présentant une partie C terminale, correspondant à l'acide carboxylique d'une 5 extrémité, et une partie N-terminale, correspondant à l'amine de l'autre extrémité de l'enchaînement.

[000175] On entend par « radical alkyl », une chaîne carbonée, linéaire ou ramifiée, qui ne comprend pas d'hétéroatome.

[000176] Le co-polyaminoacide est un co-polyaminoacide statistique ou bloc.

[000177] Le co-polyaminoacide est un co-polyaminoacide statistique dans l'enchaînement des unités glutamiques et/ou aspartiques.

[000178] Dans les formules les * indiquent les sites de rattachements des différents éléments représentés.

[000179] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par polymérisation.

[000180] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est 20 caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par polymérisation par ouverture de cycle d’un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide aspartique.

[000181] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par 25 polymérisation d’un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d'un dérivé de

N-carboxyanhydride d'acide aspartique comme décrit dans l'article Deming, TJ., Adv. Polym. Sci. 2006, 202, 1-18.

[000182] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par 30 polymérisation d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique.

[000183] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par polymérisation d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique choisi dans ie groupe constitué par le N-carboxyanhydride poly-glutamate de méthyle (GluOMe-NCA), 35 le N-carboxyanhydride poly-glutamate de benzyle (GluOBzl-NCA) et le Ncarboxyanhydride poly glutamate de t-butyle (GluOtBu-NCA).

[000184] Dans un mode de réalisation, le dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique est le N-carboxyanhydride poly-L-glutamate de méthyle (L-GluOMe-NCA).

[000185] Dans un mode de réalisation, le dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique est le N-carboxyanhydride poly-L-glutamate de benzyle (L-GluOBzl-NCA).

[000186] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoadde obtenu par polymérisation d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide aspartique en utilisant comme initiateur un complexe organométallique d’un métal de transition comme décrit dans la publication Deming, TJ,, Nature 1997, 390, 386-389.

[000187] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par polymérisation d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide aspartique en utilisant comme initiateur l'ammoniaque ou une amine primaire comme décrit dans le brevet FR 2,801,226 et les références citées par ce brevet.

[000188] Dans un mode de réalisation, la composition selon l’invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par polymérisation d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide aspartique en utilisant comme initiateur l'hexaméthyldisilazane comme décrit dans la publication Lu H. ; et al., J. Am. Chem. Soc. 2007, 129, 14114-14115 ou une amine silylée comme décrit dans la publication Lu H. et al., J. Am. Chem. Soc. 2008, 130, 12562-12563.

[000189] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le procédé de synthèse du polyaminoacide obtenu par polymérisation d'un dérivé de Ν-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide aspartique dont est issu le co-polyaminoacide comprend une étape d'hydrolyse de fonctions ester.

[000190] Dans un mode de réalisation, cette étape d'hydrolyse de fonctions ester peut consister en une hydrolyse en milieu acide ou une hydrolyse en milieu basique ou être effectuée par hydrogénation, [000191] Dans un mode de réalisation, cette étape d'hydrolyse de groupements ester est une hydrolyse en milieu acide.

[000192] Dans un mode de réalisation, cette étape d'hydrolyse de groupements ester est effectuée par hydrogénation.

[000193] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d’un polyaminoacide obtenu par dépolymérisation d'un polyaminoacide de plus haut poids moléculaire.

[000194] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoadde obtenu par dépolymérisation enzymatique d’un polyaminoadde de plus haut poids moléculaire, [000195] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoadde obtenu par dépolymérisation chimique d'un polyaminoadde de plus haut poids moléculaire, [000196] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d’un polyaminoadde obtenu par dépolymérisation enzymatique et chimique d'un polyaminoadde de plus haut poids moléculaire.

[000197] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoadde obtenu par dépolymérisation d'un polyaminoadde de plus haut poids moléculaire choisi dans le groupe constitué par le polygîutamate de sodium et le polyaspartate de sodium.

[000198] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoadde obtenu par dépolymérisation d'un polygîutamate de sodium de plus haut poids moléculaire.

[000199] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisés en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoadde obtenu par dépolymérisation d'un polyaspartate de sodium de plus haut poids moléculaire.

[000200] Dans un mode de réalisation, la composition selon l’invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est obtenu par greffage d’un groupe hydrophobe sur un poly-L-glutamique acide ou poly-L-aspartique acide en utilisant les procédés de formation de liaison amide bien connus de l'homme de l'art.

[000201] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est obtenu par greffage d'un groupe hydrophobe sur un poly-L-glutamique acide ou poly-L-aspartique acide en utilisant les procédés de formation de liaison amide utilisés pour la synthèse peptidique.

[000202] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est obtenu par greffage d'un groupe hydrophobe sur un poly-L-glutamique acide ou poly-L-aspartique acide comme décrit dans le brevet FR 2,840,614.

[000203] L'insuline glargine, ou « islet amyloid polypeptide » (IAPP), est une hormone peptidique à 37 résidus. Elle est co-sécrétée avec de l’insuline à partir des cellules béta pancréatiques dans le rapport d'environ 100/1. L'insuline glargine joue un rôle dans la régulation glycémique en stoppant la sécrétion du glucagon endogène et en ralentissant la vidange gastrique et en favorisant la satiété, réduisant ainsi les excursions glycémiques post-prandiales dans les niveaux de glucose sanguin.

[000204] L'IAPP est traité à partir d'une séquence codante de 89 résidus. Le pro-islet polypeptide amyloïde (proIAPP, proamyline, protéine proislet) est produit dans les cellules bêta pancréatiques (cellules beta) sous la forme d'un pro-peptide de 67 acides aminés, 7404 Dalton, et subit des modifications post-traductionnelles comprenant le clivage de protéase pour produire de l’insuline glargine.

[000205] Dans la présente demande, l’insuline glargine telle que mentionnée fait référence aux composés décrits dans les brevets US 5,124,314 et US 5,234,906.

[000206] On entend par « analogue », lorsqu’il est utilisé par référence à un peptide ou une protéine, un peptide ou une protéine, dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs de la séquence primaire ont été substitués par d'autres résidus d'acides aminés et / ou dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs ont été supprimés et / ou dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs ont été ajoutés. Le pourcentage d’homologie admis pour la présente définition d'un analogue est de 50 %. Dans le cas de l'insuline glargine, un analogue peut être par exemple dérivé de la séquence d'acide aminé primaire de l'insuline glargine en substituant un ou plusieurs acides aminés naturels ou non naturels ou peptidomimétiques.

[000207] On entend par « dérivé », lorsqu'il est utilisé par référence à un peptide ou une protéine, un peptide ou une protéine ou un analogue chimiquement modifié par un substituant qui n'est pas présent dans le peptide ou la protéine ou l'analogue de référence, c'est-à-dire un peptide ou une protéine qui a été modifié par création de liaisons covalentes, pour introduire des substituants de type non amino-acide.

Dans la suite, les unités utilisées sont pour les insulines celles recommandées par les pharmacopées dont les correspondances en mg/ml sont données dans le tableau ci-après :

InsuÎine	Pharmacopée EP 8.0 (2014)	Pharmacopée US - USP38 (2015)
Aspart	1U ----- 0,0350 mg d'insuline aspart	1 USP = 0,0350 mg d'insuline aspart
LiSpro	1U = 0,0347 mg d'insuline lispro	1 USP ----- 0,0347 mq d'insuline lispro
Humaine	1UI = 0,0347 mg d'insuline humaine	1 USP = 0,0347 mg d'insuline humaine
Glargine	1U = 0,0364 mg d'insuline glargine	1 USP = 0,0364 mg d'insuline glargine
Porcine	1UI = 0,0345 mg d'insuline porcine	1 USP = 0,0345 mq d’insuline porcine ;
Bovine	1UI 0,0342 mg d'insuline bovine	1 USP = 0,0342 mg d'insuline bovine

[000208] On entend par insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 une insuline insoluble à pH 7 et dont la durée d'action est comprise entre 8 et 24 heures ou supérieure dans les modèles standards de diabète.

[000209] Ces insulines basales dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et

8,5 sont des insulines recombinantes dont ia structure primaire a été modifiée principalement par introduction d'aminoacides basiques comme l'Arginine ou la Lysine. Elles sont décrites par exemple dans les brevets, demandes de brevets ou publications suivants WO 2003/053339, WO 2004/096854, US 5,656,722 et US 6,100,376.

[000210] Dans un mode de réalisation, l'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 est l'insuline glargine. L'insuline glargine est commercialisée sous la marque Lantus® (100 U/ml) ou Toujeo® (300 U/mi) par SANOFI.

[000211] Dans un mode de réalisation, l'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 est une insuline glargine biosimilaire.

[000212] Une insuline glargine biosimilaire est en voie de commercialisation sous la 15 marque Abasaglar® ou Basaglar® par ELI LILLY.

[000213] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent entre 40 et 500 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrlque est compris entre 5,8 et 8,5.

[000214] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 40 U/ml. d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5.

[000215] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 100 U/mL (soit environ 3,5 mg/mL) d'insuline basale dont le point 25 isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5.

[000216] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 150 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrlque est compris entre

5,8 et 8,5.

[000217] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention 30 comprennent 200 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5.

[000218] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 225 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrlque est compris entre

5,8 et 8,5.

[000219] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 250 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5.

un mode de

U/mL d'insuline un mode de

U/mL d'insuline un mode de réalisation, les compositions selon l'invention basale dont 1e point isoélectrique est compris entre réalisation, les compositions selon l'invention basale dont le point isoélectrique est compris entre réalisation, les compositions selon l'invention basale dont le point Isoélectrique est compris entre [000220] Dans comprennent 300 5,8 et 8,5.

[000221] Dans comprennent 400 5,8 et 8,5.

[000222] Dans comprennent 500 U/mL d'insuline

5,8 et 8,5.

[000223] Dans un mode de réalisation, le ratio massique entre l'insuline basale, dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5, et le co-polyaminoacide, soit copolyaminoacide /insuline basale, est compris entre 0,2 et 8.

[000224] [000225] [000226] [000227] [000228] [000229]

Dans

Dans un un un un un un mode de réalisation, le ratio massique est compris entre 0,2 et 6, mode de réalisation, le ratio mode de réalisation, le ratio mode de réalisation, le ratio mode de réalisation, le ratio mode de réalisation, le ratio massique est compris entre 0,2 et 5, massique est compris entre 0,2 et 4. massique est compris entre 0,2 et 3. massique est compris entre 0,2 et 2. massique est compris entre 0,2 et 1.

[000230] porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 60 mg/mL. [000231] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 40 rng/mL. [000232] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 20 mg/mL. [000233] Dans un mode de réalisation, ia concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 10 mg/mL. [000234] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus 5 mg/ml.

[000235] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus 2,5 mg/ml.

Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide [000236] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent une insuline prandiale. Les insulines prandiales sont solubles à pH 7. [000237] [000238] répondre aux besoins provoqués par l'ingestion des protéines et des glucides durant un repas, elles doivent agir en moins de 30 minutes.

On entend par insuline prandiale une insuline dite rapide ou « regular ».

Les insulines prandiales dites rapides sont des insulines qui doivent [000239] Dans un mode de réalisation, l'insuline prandiale dite « regular » est de l'insuline humaine.

[000240] Dans un mode de réalisation, l'insuline prandiale est une insuline humaine recombinante telle que décrite dans la Pharmacopée Européenne et la Pharmacopée américaine.

[000241] L'insuline humaine est par exemple commercialisée sous les marques Humulin® (ELI LILLY) et Novolin® (NOVO NORDISK).

[000242] Les insulines prandiales dites très rapides (fast acting) sont des insulines qui sont obtenues par recombinaison et dont la structure primaire a été modifiée pour diminuer leur temps d'action.

[000243] Dans un mode de réalisation, les insulines prandiales dites très rapides (fast acting) sont choisies dans le groupe comprenant l'insuline lispro (Humalog®), i'insuline glulisine (Apidra®) et l’insuline aspart (NovoLog®).

[000244] Dans un mode de réalisation, l'insuline prandiale est l'insuline lispro.

[000245] Dans un mode de réalisation, l'insuline prandiale est l’insuline glulisine, [000246] Dans un mode de réalisation, l’insuline prandiale est l'insuline aspart.

[000247] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent au total entre 60 et 800 U/mL d'insuline avec une combinaison d'insuline prandiale et d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5.

[000248] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent au total entre 100 et 500 U/mL d'insuline avec une combinaison d'insuline prandiale et d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5.

[000249] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent au total 800 U/mL d'insuline avec une combinaison d'insuline prandiale et d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5.

[000250] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent au total 700 U/mL d'insuline avec une combinaison d'insuline prandiale et d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5.

[000251] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent au total 600 U/mL d'insuline avec une combinaison d'insuline prandiale et d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5.

[000252] Dans un mode de réalisation, ies compositions selon l'invention comprennent au total 500 U/mL d'insuline avec une combinaison d'insuline prandiale et d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5.

[000253] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent au total 400 U/mL d’insuline avec une combinaison d'insuline prandiale et d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5.

[000254] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent au total 300 U/mL. d'insuline avec une combinaison d'insuline prandiale et d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5, [000255] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent au total 266 U/mL d’insuline avec une combinaison d'insuline prandiale et d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5.

[000256] Dans un mode de réalisation, ies compositions selon l'invention comprennent au total 200 U/mL d'insuline avec une combinaison d'insuline prandiale et d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5.

[000257] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent au total 100 U/mL d'insuline avec une combinaison d'insuline prandiale et d'insuline basale dont ie point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5.

[000258] Les proportions entre l'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et l'insuline prandiale sont par exemple en pourcentage de 25/75, 30/70, 40/60, 50/50, 60/40, 63/37, 70/30, 75/25, 80/20, 83/17, 90/10 pour des formulations telles que décrites ci-dessus comprenant de 60 à 800 U/mL. Cependant toute autre proportion peut être réalisée.

[000259] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent une hormone gastrointestinale.

[000260] On entend par « hormones gastrointestinales », les hormones choisies dans le groupe constitué par le GLP-1 RA (Glucagon like peptide-1 receptor agonist) et le GIP (Glucose-dependent insulinotropic peptide), l'oxyntomoduline (un dérivé du proglucagon), le peptide YY, l'amyline, la cholecystokinine, le polypeptide pancréatique (PP), la ghreline et l'entérostatine, leurs analogues ou dérivés et/ou leurs sels pharmaceutiquement. acceptables.

[000261] Dans un mode de réalisation, les hormones gastro-intestinales sont des analogues ou dérivés de GLP-1 RA choisis dans le groupe constitué par l'exenatide ou Byetta®(ASTRA-ZENECA) , le liraglutide ou Victoza® (NOVO NORDISK), le lixisenatide ou Lyxumia® (SANOFI), l’albiglutide ou Tanzeum® (GSK) ou le dulagîutide ou Trulicity® (ELI LILLY & CO), leurs analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.

[000262] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastro-intestinale est le pramlintide ou Symlin® ©(ASTRA-ZENECA).

[000263] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est l’exenatide ou Byetta®, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.

[000264] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinaîe est le liraglutide ou Victoza®, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.

[000265] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est le lixisenatide ou Lyxumia®, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.

[000266] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est l'aibiglutide ou Tanzeum®, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.

[000267] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est le dulaglutide ou Trulicity®, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.

[000268] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est le pramlintide 10 ou Symlin®, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.

[000269] On entend par « analogue », lorsqu'il est utilisé par référence à un peptide ou une protéine, un peptide ou une protéine, dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs ont été substitués par d'autres résidus d'acides aminés et/ou dans 1.5 lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs ont été supprimés et/ou dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs ont été ajoutés. Le pourcentage d'homologie admis pour la présente définition d'un analogue est de 50%.

[000270] On entend par « dérivé », lorsqu'il est utilisé par référence à un peptide ou une protéine, un peptide ou une protéine ou un analogue chimiquement modifié par un 20 substituant qui n'est pas présent dans le peptide ou la protéine ou l'analogue de référence, c’est-à-dire un peptide ou une protéine qui a été modifié par création de liaisons covalentes, pour introduire des substituants.

[000271] Dans un mode de réalisation, le substituant est choisi dans le groupe constitué des chaînes grasses.

[000272] Dans un mode de réalisation, la concentration en hormone gastrointestinaîe est comprise dans un intervalle de 0,01 à 100 mg/mL.

[000273] Dans un mode de réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise dans un intervalle de 0,04 à 0,5 mg/mL.

[000274] Dans un mode de réalisation, la concentration en liraglutide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise dans un intervalle de 1 à 10 mg/mL.

[000275] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise dans 35 un intervalle de 0,01 à 1 mg/mL.

[000276] Dans un mode de réalisation, la concentration en albiglutide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise entre 5 à 100 mg/mL.

[000277] Dans un mode de réalisation, la concentration en dulaglutide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise entre 0,1 à 10 mg/mL.

[000278] Dans un mode de réalisation, la concentration en pramlintide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise entre 0,1 à 5 mg/mL.

[000279] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention sont réalisées par mélange de solutions commerciales d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et de solutions commerciales de GLP-1 RA, d’analogue ou de dérivé de GLP-1 RA en ratios volumiques compris dans un intervalle de 10/90 à 90/10.

[000280] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention comprend une dose journalière d'insuline basale et une dose journalière d'hormone gastrointestinale.

[000281] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent entre 40 U/mL et 500 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et, entre 0,05 et 0,5 mg/mL d'exenatide.

[000282] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent entre 40 U/mL et 500 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et, de 1 à 10 mg/mL de liraglutide.

[000283] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent entre 40 U/mL et 500 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et, de 0,01 à 1 mg/mL de lixisenatide.

[000284] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent entre 40 U/mL et 500 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et, de 5 à 100 mg/mL d'albiglutide.

[000285] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent entre 40 U/mL et 500 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et, de 0,1 à 10 mg/mL de dulaglutide.

[000286] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 500 U/mL d'insuline basale dont le point isoéîectrlque est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 0,04 à 0,5 mg/mL d'exenatide.

[000287] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 500 U/mL d'insuline basale dont le point isoéiectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 1 à 10 mg/mL de liraglutide.

[000288] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 500 U/rnL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 0,01 à 1 mg/rnL de lixisenatide, [000289] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 500 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 5 à 100 mg/mL d'albiglutide.

[000290] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 500 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 0,1 à 10 mg/mL de dulaglutide.

[000291] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 400 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 0,04 à 0,5 mg/mL d'exenatide.

[000292] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 400 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 1 à 10 mg/mL de Iiraglutide, [000293] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 400 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 0,01 à 1 mg/mL de lixisenatide.

[000294] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 400 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 5 à 100 mg/mL d'albiglutide.

[000295] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 400 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 0,1 à 10 mg/mL de dulaglutide.

[000296] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 300 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 0,04 à 0,5 mg/mL d'exenatide.

[000297] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 300 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 1 à 10 mg/mL de liraglutide.

[000298] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 300 U/mL. d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 0,01 à 1 mg/mL de lixisenatide.

[000299] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 300 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 5 à 100 mg/mL d'albiglutide.

[000300] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 300 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 0,1 à 10 mg/mL de dulaglutide.

[000301] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 225 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 0,04 à 0,5 mg/mL d'exenatide.

[000302] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 225 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 1 à 10 mg/mL de llraglutide.

[000303] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 225 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 0,01 à 1 mg/ml. de lixisenatide.

[000304] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 225 U/mL d’insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 5 à 100 rng/mL d'albiglutide.

[000305] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 225 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 0,1 à lOmg/mL de dulaglutide.

[000306] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 200 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 0,04 à 0,5 mg/mL d'exenatide.

[000307] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l’invention comprennent 200 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 1 à 10 mg/mL de liraglutide.

[000308] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 200 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 0,01 à 1 mg/mL de lixisenatide.

[000309] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 200 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 5 à 100 rng/mL d'albiglutide.

[000310] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 200 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 0,1 à 10 mg/mL de dulaglutide.

[000311] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 100 U/mL (soit environ 3,6 mg/ml.) d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et, de 0,04 à 0,5 rng/mL d'exenatide.

[000312] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 100 U/mL (soit environ 3,6 mg/ml) d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et, de 1 à 10 mg/mL de liraglutide.

[000313] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 100 U/mL (soit environ 3,6 mg/rnL) d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et, de 0,01 à 1 mg/rnL de lixisenatide.

[000314] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 100 U/mL d'insuline basale dont ie point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 5 à 100 mg/mL d'albiglutide.

[000315] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 100 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre

5,8 et 8,5 et, de 0,1 à 10 mg/ml de dulaglutide.

[000316] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l’invention comprennent 40 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et, de 0,04 à 0,5 mg/rnL d'exenatide.

[000317] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l’invention comprennent 40 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et, de 1 à 10 mg/mL de liraglutide.

[000318] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 40 U/mL. d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et, de 0,01 à 1 mg/mL de lixisenatide.

[000319] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 40 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et, de 5 à 100 mg/ml d'albiglutide.

[00032.0] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent 40 U/mL d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et, de 0,1 à 10 mg/ml de dulaglutide.

[000321] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise entre 0 et 5000 μΜ.

[000322] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise entre 0 et 4000 μΜ.

[000323] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise entre 0 et 3000 pM.

[000324] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise entre 0 et 2000 μΜ.

[000325] Dans un mode de réalisation, les compositions selon i'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise entre 0 et 1000 μΜ.

[000326] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise entre 50 et 600 μΜ.

[000327] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise entre 100 et 500 μΜ.

[000328] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise entre 200 et 500 uM.

[000329] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des tampons.

[000330] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent des tampons à des concentrations comprises entre 0 et 100 mM.

[000331] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent des tampons à des concentrations comprises entre 15 et 50 mM.

[000332] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent un tampon choisi dans le groupe constitué par un tampon phosphate, le Tris (trishydroxyméthyiaminométhane) et le citrate de sodium.

[000333] Dans un mode de réalisation, le tampon est le phosphate de sodium.

[000334] Dans un mode de réalisation, le tampon est le Tris (trishydroxyméthyiaminométhane).

[000335] Dans un mode de réalisation, le tampon est le citrate de sodium.

[000336] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des conservateurs, [000337] Dans un mode de réalisation, les conservateurs sont choisis dans le groupe constitué par le m-crésol et le phénol, seuls ou en mélange.

[000338] Dans un mode de réalisation, la concentration des conservateurs est comprise entre 10 et 50 mM.

[000339] Dans un mode de réalisation, la concentration des conservateurs est comprise entre 10 et 40 mM.

[000340] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre un tensloactif.

[000341] Dans un mode de réalisation, le tensioactif est choisi dans le groupe constitué par le propylene glycol et le polysorbate.

[000342] Les compositions selon l'invention peuvent en outre comprendre des additifs tels que des agents de tonicité.

[000343] Dans un mode de réalisation, les agents de tonicité sont choisis dans le groupe constitué par la glycérine, le chlorure de sodium, le mannitol et la glycine.

[000344] Les compositions selon l'invention peuvent comprendre en outre tous les excipients conformes aux pharmacopées et compatibles avec les insulines utilisées aux concentrations d'usage.

[000345] L'invention concerne également une formulation pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce qu'elle est obtenue par séchage et/ou lyophilisation.

[000346] Dans le cas des libérations locale et systémique, les modes d'administration envisagés sont par voie intraveineuse, sous-cutanée, intradermique ou intramusculaire. [000347] Les voies d'administration transdermique, orale, nasale, vaginale, oculaire, buccale, pulmonaire sont également envisagées.

[000348] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,0 et 8,0 comprenant une insuline basale dont ie point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et une insuline prandiale.

[000349] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,0 et 8,0 comprenant une insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et une hormone gastrointestinal, telle que définie précédemment.

[000350] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,0 et 8,0 comprenant une insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 , une insuline prandiale et une hormone gastrointestinale, telle que définie précédemment.

[000351] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,6 et 7,8 comprenant une insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et une insuline prandiale.

[000352] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,6 et 7,8 comprenant une insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et une hormone gastrointestinale, telle que définie précédemment, [000353] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,6 et 7,8 comprenant une insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 , une insuline prandiale et une hormone gastrointestinale, telle que définie précédemment.

[000354] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,6 et 7,6 comprenant une insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et une insuline prandiale.

[000355] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,6 et 7,6 comprenant une insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 et une hormone gastrointestinale, telle que définie précédemment.

[000356] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,6 et 7,6 comprenant une insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 , une insuline prandiale et une hormone gastrointestinale, telle que définie précédemment.

[000357] Dans un mode de réalisation, les formulations unidoses comprennent en outre un co-polyaminoacide tel que défini précédemment.

[000358] Dans un mode de réalisation, les formulations sont sous forme d'une solution injectable.

[000359] Dans un mode de réalisation, l'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5 est l'insuline glargine.

[000360] Dans un mode de réalisation, l'insuline prandiale est l'insuline humaine.

[000361] Dans un mode de réalisation, l'insuline est une insuline humaine recombinante telle que décrite dans la Pharmacopée Européenne et la Pharmacopée américaine.

[000362] Dans un mode de réalisation, l'insuline prandiale est choisie dans le groupe comprenant l'insuline lispro (Humalog®), l'insuline glulisine (Apidra®) et l'insuline aspart (NovoLog®).

[000363] Dans un mode de réalisation, l'insuline prandiale est l'insuline lispro.

[000364] Dans un mode de réalisation, l'insuline prandiale est l'insuline glulisine.

[000365] Dans un mode de réalisation, l'insuline prandiale est l'insuline aspart.

[000366] Dans un mode de réalisation, le GLP-1 RA, analogue ou dérivé de GLP-1 RA est choisi dans le groupe comprenant exenatide (Byetta®), liraglutide (Victoza®), lixisenatide (Lyxumia®), albiglutide (Tanzeum®), dulaglutide (Trulicity®) ou l’un de leurs dérivés.

[000367] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est l'exenatide.

[000368] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est le liraglutide. [000369] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est le lixisenatide. [000370] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est l'albiglutide.

[000371] Dans un mode de réalisation, l'hormone gastrointestinale est le dulaglutide. [000372] La solubilisation à pH compris entre 6,0 et 8,0 des insulines basales dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5, par les co-polyaminoacides porteurs de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe selon l’invention, peut être constatée et contrôlée de manière simple, à l'œil nu, grâce à un changement d'aspect de ia solution, [000373] La solubilisation à pH compris entre 6,6 et 7,8 des insulines basales dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5, par les co-polyaminoacides porteurs de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe selon l'invention, peut être constatée et contrôlée de manière simple, à l’œil nu, grâce à un changement d'aspect de la solution.

[000374] Par ailleurs et de façon toute aussi importante, la demanderesse a pu vérifier qu'une insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5, solubilisée à pH compris entre 6,0 et 8,0 en présence d'un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe selon l'invention conserve son action d'insuline lente que ce soit seule ou en combinaison avec une insuline prandiale ou une hormone gastrointestinale.

[000375] La demanderesse a également pu vérifier qu'une insuline prandiale mélangée à pH compris entre 6,0 et 8,0 en présence d'un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe selon l'invention et d'une insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5, conserve son action d'insuline rapide.

[000376] La préparation d'une composition selon l'invention présente l'avantage de pouvoir être réalisée par simple mélange d'une solution aqueuse d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5, et d'un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe selon l'invention, en solution aqueuse ou sous forme lyophilisée. Si nécessaire, le pH de la préparation est ajusté à pH compris entre 6 et 8.

[000377] La préparation d'une composition selon l'invention présente l'avantage de pouvoir être réalisée par simple mélange d'une solution aqueuse d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5, d'une solution d'insuline prandiale, et d'un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe selon l'invention, en solution aqueuse ou sous forme lyophilisée. Si nécessaire, le pH de ia préparation est ajusté à pH compris entre 6 et 8.

[000378] La préparation d'une composition selon l'invention présente l'avantage de pouvoir être réalisée par simple mélange d'une solution aqueuse d'insuline basale dont ie point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5, d'une solution de GLP-1 RA, un analogue ou un dérivé de GLP-1 RA, et d'un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d’au moins un radical hydrophobe selon l'invention, en solution aqueuse ou sous forme lyophilisée. Si nécessaire, le pH de la préparation est ajusté à pH compris entre 6 et 8.

[000379] La préparation d'une composition selon l'invention présente l'avantage de pouvoir être réalisée par simple mélange d'une solution aqueuse d'insuline basale dont le point isoélectrique est compris entre 5,8 et 8,5, d’une solution d'insuline prandiale, d’une solution de GLP-1 RA ou d'un analogue ou dérivé de GLP-1 RA et d’un copolyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe selon l'invention, en solution aqueuse ou sous forme lyophilisée. Si nécessaire, le pH de la préparation est ajusté à pH compris entre 6 et 8.

[000380] Dans un mode de réalisation, le mélange d'insuline basale et de copolyaminoacide est concentré par ultrafiltration avant le mélange avec l'insuline prandiale en solution aqueuse ou sous forme lyophilisée.

[000381] Si nécessaire, la composition du mélange est ajustée en excipients tels que glycérine, m-crésol, chlorure de zinc, et polysorbate (Tween®) par ajout de solutions concentrées de ces excipients au sein du mélange. Si nécessaire, le pH de la préparation est ajusté à pH compris entre 6 et 8.

[000382] L'invention concerne également des compositions qui comprennent en outre des espèces ioniques, lesdites espèces ioniques permettant d’améliorer la stabilité des compositions.

[000383] Dans un mode de réalisation les espèces ioniques comprennent moins de 10 atomes de carbone.

[000384] Lesdites espèces ioniques sont choisies dans le groupe des anions, des cations et/ou zwitterions. Par zwitterion, on entend une espèce portant au moins une charge positive et au moins une charge négative sur deux atomes non adjacents.

[000385] Lesdites espèces ioniques sont utilisées seules ou en mélange et de préférence en mélange.

[000386] Dans un mode de réalisation, les anions sont choisis parmi les anions organiques.

[000387] Dans un mode de réalisation les anions organiques comprennent moins de 10 atomes de carbone.

[000388] Dans un mode de réalisation, les anions organiques sont choisis dans le groupe constitué par l'acétate, le citrate et le succinate [000389] Dans un mode de réalisation, les anions sont choisis parmi les anions d'origine minérale.

[000390] Dans un mode de réalisation, les anions d'origine minérale sont choisis dans le groupe constitué par les sulfates, les phosphates et les halogénures, notamment les chlorures.

[000391] Dans un mode de réalisation, les cations sont choisis parmi les cations organiques.

[000392] Dans un mode de réalisation les cations organiques comprennent moins de 10 atomes de carbone.

[000393] Dans un mode de réalisation, les cations organiques sont choisis dans le groupe constitué par les ammoniums, par exemple le 2-Amino-2(hydroxyméthyl)propane-l,3-diol où l'amine est sous forme d'ammonium, [000394] Dans un mode de réalisation, les cations sont choisis parmi les cations d'origine minérale.

[000395] Dans un mode de réalisation, les cations d'origine minérale sont choisis dans le groupe constitué par le zinc, en particulier Zn²⁺ et les métaux alcalins, en particulier Na⁺ et K⁺, [000396] Dans un mode de réalisation, les zwitterions sont choisis parmi les zwitterions d'origine organique.

[000397] Dans un mode de réalisation, les zwitterions d'origine organique sont choisis parmi les arninoacides.

[000398] Dans un mode de réalisation les arninoacides sont choisis parmi les arninoacides aliphatiques dans le groupe constitué par la glycine, l'alanine, la valine, l'isoleucine et la leucine.

[000399] Dans un mode de réalisation les arninoacides sont choisis parmi les arninoacides cycliques dans le groupe constitué par la proline.

[000400] Dans un mode de réalisation les arninoacides sont choisis parmi les arninoacides hydroxylés ou soufrés dans le groupe constitué par la cystéine, la sérine, ia thréonine, et la méthionine.

[000401] Dans un mode de réalisation les arninoacides sont choisis parmi les arninoacides aromatiques dans le groupe constitué par la phenylalanine, la tyrosine et le tryptophane.

[000402] Dans un mode de réalisation les arninoacides sont choisis parmi les arninoacides dont la fonction carboxyle de la chaîne latérale est amidifiée dans le groupe constitué par l'asparagine et la glutamine.

[000403] Dans un mode de réalisation, les zwitterions d'origine organique sont choisis dans le groupe constitué par les arninoacides ayant une chaîne latérale non chargée.

[000404] Dans un mode de réalisation, les zwitterions d’origine organique sont choisis dans le groupe constitué par les aminodiacides ou acides aminés acides.

[000405] Dans un mode de réalisation, les aminodiacides sont choisis dans le groupe constitué par l’acide glutamique et l'acide aspartique, éventuellement sous forme de sels, [000406] Dans un mode de réalisation, les zwitterions d'origine organique sont choisis dans le groupe constitué par les acides aminés basiques ou dits « cationiques ». [000407] Dans un mode de réalisation les aminoacides dits « cationiques » sont choisis parmi l'arginine, l'histidine et la lysine, en particulier arginine et lysine.

[000408] Tout particulièrement les zwitterions comprennent autant de charges négatives que de charges positives et donc une charge globale nulle au point isoélectrique et/ou à un pH compris entre 6 et 8.

[000409] Lesdites espèces ioniques sont introduites dans les compositions sous forme de sels. L'introduction de ceux-ci peut se faire sous forme solide avant mise en solution dans les compositions, ou sous forme de solution, en particulier de solution concentrée.

[000410] Par exemple, les cations d'origine minérale sont apportés sous forme de sels choisis parmi le chlorure de sodium, le chlorure de zinc, le phosphate de sodium, le sulfate de sodium, etc, [000411] Par exemples, les anions d'origine organique sont apportés sous forme des sels choisis parmi le citrate de sodium ou de potassium, l'acétate de sodium.

[000412] Par exemple, les acides aminés sont ajoutés sous forme de sels choisis parmi le chlorhydrate d'arginine, le chlorhydrate d'histidine ou sous forme non salifiée comme par exemple l'histidine, l'arginine.

[000413] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 10 mM.

[000414] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 20 mM.

[000415] Dans un mode de réalisation, ïa concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 30 mM.

[000416] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 50 mM.

[000417] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 75 mM.

[000418] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 100 mM.

[000419] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 200 mM.

[000420] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 300 mM.

[000421] Dans un mode de realisation, ia concentration molaire totale en especes ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 500 mM.

[000422] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 600 mM.

[000423] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est. supérieure ou égale à 700 mM.

[000424] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 800 mM.

[000425] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 900 mM.

[000426] Dans un mode de realisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000427] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000428] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000429] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000430] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000431] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000432] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000433] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000434] Dans un mode de réalisation, ia ioniques dans la composition est inférieure ou [000435] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000436] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000437] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000438] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou concentration molaire totale en especes égale à 1000 mM.

concentration molaire totale en espèces égale à 1500 mM.

concentration molaire totale en espèces égale à 1200 mM.

concentration molaire totale en espèces égale à 1000 mM.

concentration molaire totale en espèces égale à 900 mM.

concentration molaire totale en espèces égale à 800 mM.

concentration molaire totale en espèces égale à 700 mM.

concentration molaire totale en espèces égale à 600 mM, concentration molaire totale en espèces égale à 500 mM, concentration molaire totale en espèces égale à 400 mM.

concentration molaire totale en espèces égale à 300 mM.

concentration molaire totale en espèces égale à 200 mM.

concentration molaire totale en espèces égale à 100 mM.

[000439] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 1000 mM.

[000440] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 1000 mM.

[000441] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 1000 mM.

[000442] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 1000 mM.

[000443] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 1000 mM.

[000444] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 1000 mM.

[000445] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 200 et 1000 mM.

[000446] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 300 et 1000 mM.

[000447] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 400 et 1000 mM.

[000448] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 500 et 1000 mM.

[000449] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 600 et 1000 mM.

[000450] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 900 mM.

[000451] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 900 mM.

[000452] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 900 mM.

[000453] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 900 mM.

[000454] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 900 mM.

[000455] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 900 mM.

[000456] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 200 et 900 mM.

[000457] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 300 et 900 mM.

[000458] Dans un mode de réalisation, ia concentration molaire totale en espèces ioniques dans ia composition est comprise entre 400 et 900 mM.

[000459] Dans un mode de réalisation, la concentration moiaire totale en espèces ioniques dans ia composition est comprise entre 500 et 900 mM.

[000460] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 600 et 900 mM.

[000461] Dans un mode de réalisation, la concentration moiaire totale en espèces Ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 800 mM.

[000462] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 800 mM.

[000463] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 800 mM.

[000464] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 800 mM.

[000465] Dans un mode de réalisation, la concentration moiaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 800 mM.

[000466] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 800 mM.

[000467] Dans un mode de réalisation, la concentration moiaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 200 et 800 mM.

[000468] Dans un mode de réalisation, ia concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 300 et 800 mM.

[000469] Dans un mode de réalisation, ia concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 400 et 800 mM.

[000470] Dans un mode de réalisation, ia concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 500 et 800 mM.

[000471] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 600 et 800 mM.

[000472] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 700 mM.

[000473] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 700 mM.

[000474] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 700 mM.

[000475] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 700 mM.

[000476] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 700 mM.

[000477] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 700 mM.

[000478] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en ioniques dans la composition est comprise entre 200 et 700 mM.

[000479] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en ioniques dans la composition est comprise entre 300 et 700 mM.

[000480] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totaie en ioniques dans la composition est comprise entre 400 et 700 mM.

[000481] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en ioniques dans la composition est comprise entre 500 et 700 mM, [000482] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en ioniques dans la composition est comprise entre 600 et 700 mM.

[000483] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 600 mM.

[000484] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 600 mM.

[000485] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 600 mM.

[000486] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 600 mM.

[000487] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totaie en ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 600 mM.

[000488] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 600 mM.

[000489] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en ioniques dans la composition est comprise entre 200 et 600 mM.

[000490] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en ioniques dans la composition est comprise entre 300 et 600 mM.

[000491] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en ioniques dans la composition est comprise entre 400 et 600 mM, [000492] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en ioniques dans la composition est comprise entre 500 et 600 mM, [000493] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 500 mM.

[000494] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 500 mM.

[000495] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 500 mM.

espèces espèces espèces espèces espèces espèces espèces espèces espèces espèces espèces espèces espèces espèces espèces espèces espèces espèces espèces [000496] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 500 mM.

[000497] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 500 mM.

[000498] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 500 mM.

[000499] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 200 et 500 mM.

[000500] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 300 et 500 mM.

[000501] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 400 et 500 mM.

[000502] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 400 mM.

[000503] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et. 400 mM.

[000504] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 400 mM.

[000505] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 400 mM.

[000506] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 400 mM.

[000507] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 400 mM.

[000508] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 200 et 400 mM.

[000509] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 300 et 400 mM.

[000510] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 300 mM.

[000511] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 300 mM.

[000512] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 300 mM.

[000513] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 300 mM.

[000514] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 300 mM.

[000515] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 300 mM.

[000516] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 200 et 300 mM.

[000517] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 200 mM.

[000518] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 200 mM.

[000519] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 200 mM.

[000520] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 200 mM.

[000521] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 200 mM.

[000522] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 200 mM.

[000523] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 100 mM.

[000524] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 100 mM.

[000525] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 100 mM.

[000526] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 100 mM.

[000527] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 100 mM.

[000528] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 75 mM.

[000529] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 75 mM.

[000530] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 75 mM.

[000531] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 75 mM.

[000532] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 50 mM, [000533] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 50 mM,

	[000534] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 50 mM. [000535] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en
5	une concentration allant de 5 à 400 mM. [000536] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 5 à 300 mM. [000537] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 5 à 200 mM.
10	[000538] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 5 à 100 mM. [000539] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 5 à 75 mM, [000540] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en
15	une concentration allant de 5 à 50 mM, [000541] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 5 à 25 mM. [000542] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 5 à 20 mM.
20	[000543] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 5 à 10 mM. [000544] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 10 à 400 mM, [000545] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en
25	une concentration allant de 10 à 300 mM. [000546] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 10 à 200 mM. [000547] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 10 à 100 mM.
30	[000548] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 10 à 75 mM. [000549] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 10 à 50 mM. [000550] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en
35	une concentration allant de 10 à 25 mM. [000551] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 10 à 20 mM,

[000552] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 20 à 300 mM.

[000553] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 20 à 200 mM.

[000554] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 20 à 100 mM.

[000555] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 20 à 75 mM, [000556] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 20 à 50 mM.

[000557] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 20 à 25 mM.

[000558] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 50 à 300 mM.

[000559] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 50 à 200 mM.

[000560] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 50 à 100 mM.

[000561] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 50 à 75 mM.

[000562] S'agissant des cations d'origine minérale et en particulier de Zn²⁺, sa concentration molaire au sein de la composition peut être comprise entre 0,25 et 20 mM, en particulier entre 0,25 et 10 mM ou entre 0,25 et 5 mM.

Eartte_A

AAj^fciitoêsejdesjçomeo^ îUilstk*!

ιηΓμμϊϊ· [000563] Les composés intermédiaires hydrophobes sont représentés dans ie tableau suivant par la molécule hydrophobe correspondante avant greffage sur le copolyaminoacide.

N°	COMPOSES INTERMEDIAIRES HYDROPHOBES
AAI i	1 ,NH y H₂N' γ N

ι j' 'aA6

ΓΑΑ4~

AA5

AA7

AÂ8

COMPOSÉSÏNTËRMEDIAÏRËS HYDROPHOBES^

C^H

AA IΟ

ΝΗ

Η₂Ν' ί ΑΑ11 ί .ΝΗ

Ο θ' '27 î ΑΑ12 ,ΝΗ

H₂r ^π23

ΑΑ13

ΝΗ i ΑΑ14 η₂ν·

9^Η19 η₂ν ί COMPOSES INTERMEDIAIRES HYDROPHOBES i AA9

13’ '27

ΑΑ15 ,ê.

HA

ΝΗ

N°	COMPOSES INTERMEDIAIRES HYDROPHOBES
AAI6 i	^r M1 Ix _{F H} Hyto χχ A. Y X m _r ΧχΧχχΧ X/ -Q- X,' γ _χ
AA 17	A C H Ο ΧΑ--^15^Π31 'i NH JX J h₂n Y nh \ i o

Tableau ΙΑ : liste et structures des molécules hydrophobes synthétisées selon l'invention.

Exempte AAI : molécule AAI

Molécule Al : Produit obtenu par la réaction entre le chlorure de palmitoyle et la Lproline.

[000564] À une solution de L-proline (10,6 g, 92,1 mmol) dans de ia soude aqueuse 1 [000565] N (230 mL ; 230 mmol) est ajoutée goutte-à-goutte pendant 90 min une solution de chlorure de palmitoyle (23,0 g, 83,7 mmol) dans l’acétone (167 mL), Après 14 h d'agitation à température ambiante, le mélange hétérogène est refroidi à 0 °C, puis filtré sur fritté pour donner un solide blanc qui est lavé avec de l'eau (2 x 100 mL) puis du diisopropyléther (100 mL). Le solide est séché sous pression réduite. Le solide est alors dissout à reflux dans 200 mL d'eau puis 8 mL d'une solution d'acide chlorhydrique à 37 % sont ajoutés pour obtenir un pH = 1. Le milieu réactionnel opalescent est alors refroidi à 0 °C. Le précipité obtenu est filtré sur fritté puis lavé avec de l'eau (5 x 50 mL) jusqu’à obtenir des filtrats de pH physiologique compris entre 6,0 et 8,0 pour être ensuite séché dans une étuve à 50 °C sous vide pendant une nuit. Le produit est purifié par recristallisation dans le diisopropyléther. Un solide blanc est obtenu.

Rendement : 22,7 g (77 %).

RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,19-1,45 (24H) ; 1,58-1,74 (2H) ; 1,88-2,14 (3H) ; 2,15-2,54 (3H) ; 3,47 (1H) ; 3,58 (1H) ; 4,41 (0,lH) ; 4,61 (0,9H) 6,60-8,60 (1H).

Moi école A2 : Produit obtenu par réaction entre la molécule Al et la N-/V-Bocéthylènediamine.

[000566] À une solution de molécule Al (75,1 g, 212,4 mmol) dans 1500 mL de chloroforme sont ajoutés successivement et à température ambiante de la /V,/V diisopropyléthylamine (DIPEA) (68,8 g, 532,3 mmol), du 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) (37,1 g, 274,6 mmol) puis du /V-(3-diméthylaminopropyl)-/V’-éthylcarbodiimide (EDC) (53,1 g, 277,0 mmol). Après 15 min d'agitation à température ambiante, une solution de AZ-Boc-éthylènediamine (BocEDA) (37,6 g, 234,7 mmol) dans 35 mL de chloroforme est additionnée. Après 18 h d'agitation à température ambiante, une solution de HCl 0,1 N (2,1 L), puis une solution saturée de NaCi (1 L) sont ajoutées. Les phases sont séparées puis la phase organique est lavée successivement avec une solution de HCl 0,1 N / NaCi saturée (2,1 L/l L), une solution de NaCi saturée (2 L), une solution de NaHCCh saturée (2 L), puis une solution de NaCi saturée (2 L). La phase organique est séchée sur sulfate de sodium anhydre, filtrée puis concentrée sous pression réduite. Le solide obtenu est purifié par triturations dans le diisopropyléther (3 x 400 mL), pour donner un solide après séchage sous vide à 40 °C.

Rendement : 90,4 g (86 %).

RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,20-1,37 (24H) ; 1,44 (9H) ; 1,54-1,70 (2H) 1,79-1,92 (1H) ; 1,92-2,04 (1H) ; 2,03-2,17 (1H) ; 2,17-2,44 (3H) ; 3,14-3,36 (4H) ; 3,43 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,29 (0,1 H) ; 4,51 (0,9 H) ; 4,82 (0,lH) 5,02 (0,9H) ; 6,84 (0,lH) ; 7,22 (0,9H).

Moiécule AAI [000567] À une solution de molécule A2 (20,1 g, 40,5 mmol) dans 330 mL de dichlorométhane est ajoutée goutte-à-goutte et à 0 °C une solution d'acide chlorhydrique 4 N dans le dioxane (100 mL, 400 mmol). Après 3 h 30 d'agitation à température ambiante, la solution est concentrée sous pression réduite. Le résidu est purifié par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane) pour donner un solide blanc de molécule AAI sous forme de sel de chlorhydrate.

Rendement : 16,3 g (93 %).

RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,07-1,40 (24H) ; 1,49-1,63 (2H) ; 1,77-2,18 (4H) ; 2,18-2,45 (2H) ; 3,14-3,32 (2H) ; 3,42-3,63 (2H) ; 3,63-3,84 (2H) ; 4,37 (0,lH) ; 4,48 (0,9H) ; 6,81-8,81 (4H).

LC/MS (ESI) : 396,5 ; (calculé ([M + H]⁺) : 396,4).

Exemple AA2 : molécule AA2

Molécule A3 . 15-méthylhexadécan-l-ol.

[000568] Dans un tricol sous argon est introduit du magnésium (9,46 g, 389 mmol) en copeaux. Le magnésium est recouvert de THF (40 mL) anhydre et quelques gouttes de l-bromo-3-méthylbutane sont ajoutées à température ambiante pour initier la réaction. Après l'observation d'un exotherme et un léger trouble du milieu, le reste du l-bromo-3-méthylbutane (53,87 g, 357 mmol) est ajouté au goutte-à-goutte en 90 min alors que la température du milieu reste stable entre 50 et 60 °C. Le milieu réactionnel est ensuite chauffé à 70 °C pendant 2 h, [000569] Dans un tricol sous argon, à une solution de CuCI (482 mg, 4,86 mmol) dissout dans la NMP (62 mL) à 0 °C est ajoutée au goutte-à-goutte une solution de 12bromo-l-dodécanoi (43 g, 162,1 mmol) dans le THF (60 mL). À cette solution est ensuite ajoutée au goutte-à-goutte la solution de l'organomagnésien chaude fraîchement préparée de façon à maintenir la température du milieu en dessous de 20 °C. Le mélange est ensuite agité à température ambiante pendant 16 h. Le milieu est refroidi à 0 °C et la réaction est stoppée par addition d'une solution aqueuse d'HCI 1 N jusqu'à pH 1 et le milieu est extrait à l'acétate d'éthyle. Après lavage de la phase organique avec une solution saturée en NaCI et séchage sur NazSCU, la solution est filtrée et concentrée sous vide pour donner une huile. Après purification par DCVC sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle), une huile qui cristallise à température ambiante est obtenue.

Rendement : 32,8 g (74 %)

RMN (CDCh, ppm) : 0,87 (6H) ; 1,14 (2H) ; 1,20-1,35 (22H) ; 1,50-1,55 (3H) ; 3,64 (2H).

MaLêcuie_A4_i acide 15-méthylhexadécanoïque.

[000570] À une solution de molécule A3 (20,65 g, 80,5 mmol) et bromure de tétrabutylammonium (14,02 g, 42,5 mmol) dans un mélange d'acide acétique/dichloréthane/eau (124/400/320 mL) à température ambiante est ajouté par petites portions du permanganate de potassium (38,2 g, 241,5 mmol). Après agitation à reflux pendant 5 h et retour à température ambiante, le milieu est acidifié à pH 1 par ajout progressif de HCI 5 N. NazSOa (44,6 g, 354,3 mmol) est ensuite ajouté progressivement jusqu'à décoloration du milieu. La phase aqueuse est extraite au dichlorométhane et les phases organiques combinées sont séchées sur NaaSCU, filtrées et concentrées sous vide, Après purification par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle, acide acétique), un solide blanc est obtenu.

Rendement : 19,1 g (quantitatif)

RMN ^XH (CDCh, ppm) : 0,87 (6H) ; 1,14 (2H) ; 1,22-1,38 (20H) ; 1,51 (IH) ; 1,63 (2H) ; 2,35 (2H).

Molécule A5 : Produit obtenu par réaction entre la molécule A4 et la L-proline.

[000571] À une solution de molécule A4 (1.0 g, 37 mmol) dans le THF (360 mL) à 0 °C sont ajoutés successivement du dicydohexyle carbodiimide (DCC) (8,01 g, 38,8 mmol) et du /V-hydroxysuccinimide (NHS) (4,47 g, 38,8 mmol). Après 17 h d'agitation à température ambiante, le milieu est refroidi à 0 °C pendant 20 min, filtré sur fritté.

De la L-proiine (4 g, 37,7 mmol), de ia triéthylamine (34 mL) et de l'eau (30 ml.) sont ajoutées au filtrat. Après 20 h d'agitation à température ambiante, le milieu est traité avec une solution aqueuse d'HCl 1 N jusqu'à pH 1. La phase aqueuse est extraite avec du dichlorométhane (2 x 125 mL). Les phases organiques combinées sont lavées avec une solution aqueuse de HCl 1 N (2 x 100 mL), de l'eau (100 mL), puis une solution aqueuse saturée en NaCI (100 mL). Après séchage sur NazSCh, la phase organique est filtrée, concentrée sous vide et ie résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle, acide acétique)

Rendement : 9,2 g (72 %)

RMN ¹H (CDCh, Ppm) : 0,86 (6H) ; 1,14 (2H) ; 1,22-1,38 (20H) ; 1,50 (1H) ; 1,67 (2H) ; 1,95-2,10 (3H) ; 2,34 (2H) ; 2,49 (1H) ; 3,47 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,61 (1H). LC/MS (ESI) : 368,3 ; (calculé ([M + H]⁺) : 368,6).

Molécule A6 : Produit obtenu par réaction entre la molécule A5 et la /V-Bocéthylènediamine.

[000572] À une solution de molécule A5 (9,22 g, 25,08 mmol) dans un mélange THF/DMF (200/50 mL) sont ajoutés de la triéthylamine (TEA) (5,23 mL) et du 2-(lHbenzotriazol-l-ylj-ljl^S-tétraméthyluronium tétrafluoroborate (TBTU) à température ambiante. Après 10 min d'agitation, de la BocEDA (4,42 g, 27,6 mmol) est ajoutée. Après agitation à température ambiante pendant 17 h, le mélange est dilué avec de l'eau (300 mL) à 0 °C et agité à froid pendant 20 min. Le précipité formé est filtré sur fritté et le filtrat est extrait à l'acétate d'éthyle. Les phases organiques combinées sont lavées avec une solution saturée de NaHCOs, séchées sur NazSCh, filtrées, concentrées sous vide et le résidu est purifié par chromatographie flash (acétate d'éthyle, méthanol). Rendement : 6,9 g (54 %)

RMN ^XH (CDCh, ppm) : 0,86 (6H) ; 1,15 (2H) ; 1,22-1,38 (20H) ; 1,43 (9H) ; 1,50 (1H) ; 1,64 (4H) ; 1,85 (1H) ; 1,95 (1H) ; 2,10 (1H) ; 2,31 (2H) ; 3,20-3,35 (3H) ; 3,45 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,51 (1H) ; 5,05 (1H) ; 7,24 (1H).

LC/MS (ESI) : 510,6 ; (calculé ([M+H] *) : 510,8).

Moiécuie AA2 [000573] À une solution de ia molécule A6 (5,3 g, 10,40 mmol) dans le dichlorométhane (50 mL) à 0 °C est ajoutée une solution de HCl 4 N dans le dioxane (13 mL). Après 5 h d'agitation à 0 °C, le milieu est concentré sous vide, repris dans de l'eau et lyophilisé pour donner un solide blanc de molécule AA2 sous forme de sel de chlorhydrate.

Rendement : 4,6 g (99%)

RMN ¹H (DzO, ppm) : 0,91 (6H) ; 1,22 (2H) ; 1,22-1,50 (20H) ; 1,63 (3H) ; 1,98 (1H) ;

2,10 (2H) 2,26 (1H) ; 2,39 (1H) ; 2,43 (1H) ; 3,22 (2H) ; 3,45-3,60 (3H) ; 3,78 (1H) ; 4,42 (1H).

LC/MS (ESI) : 410,4 ; (calculé ([M + H]⁺) : 410,7),

Exemple AA3 : moiécoSe AA3 [000574] Molécule A7 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule Al et la Boctri(éthylèneglycol)diamine.

[000575] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule

A2 appliqué à la molécule Al (4,0 g, 11,3 mmol) et à la Boc-tri(éthylèneglycol)diamine (3,1 g, 12,4 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par chromatographie flash (méthanol, toluène).

Rendement : 5,5 g (84 %).

RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,09-1,39 (24H) ; 1,44 (9H) ; 1,64 (2H) ; 1,79-2,01 (2H) ; 2,06-2,43 (4H) ; 3,23-3,68 (14H) ; 4,33 (0,2H) ; 4,56 (0,8H) ; 5,25 (1H) ; 6,49 (0,2H) ; 7,13-7,50 (0,8H).

[000576] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule

AAI appliqué à la molécule A7 (5,5 g, 9,4 mmol), un solide blanc de molécule AA3 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane). Rendement : 4,3 g (92 %).

RMN (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,08-1,40 (24H) ; 1,40-1,52 (2H) ; 1,71-2,02 25 (4H) ; 2,02-2,31 (2H) ; 2,90-2,98 (2H) ; 3,15-3,47 (SH) ; 3,50-3,66 (7H) ; 4,24 (0,6H) ; 4,32 (0,4H) ; 7,83 (0,6H) ; 7,95 (3H) ; 8,17 (0,4H).

LC/MS (ESI) : 484,6 ; (calculé ([M + H]⁺ ) : 484,4).

Exemple AA4 : moiécuie AA4 [000577] Molécule A8 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule Al et la Bocl-amino-4,7,10”trloxa-13-tridécane amine, [000578] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A2 appliqué à la molécule Al (4,5 g, 12,7 mmol) et à la Boc-l-amino-4,7,10-trioxa-13tridécane amine (4,5 g, 14,0 mmol), une huile jaune est obtenue après purification par 35 chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).

Rendement : 7,7 g (92 %).

RMN ³Ή (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,22-1,37 (24H) ; 1,44 (9H) ; 1,59-1,67 (2H) ; 1,67-2,00 (6H) ; 2,06-2,45 (4H) ; 3,18-3,76 (18H) ; 4,28 (0,2H) ; 4,52 (0,8H) ; 4,695,04 (1H) ; 6,77 (O,2H) ; 7,20 (0,8H).

Molécule AA4 [000579] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A8 (7,7 g, 11,8 mmol), une huile jaune est obtenue après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane). Une coévaporation avec du diisopropyléther permet d'obtenir la molécule AA4 sous forme de sel de chlorhydrate sous forme d'un solide blanc qui est séché sous vide à 50 °C. Rendement : 5,4 g (76 %).

RMN ³H (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,08-1,40 (24H) ; 1,49-1,65 (2H) ; 1,76-2,39 (10H) ; 3,07-3,28 (3H) ; 3,34-3,80 (15H) ; 4,34 (0,05H) ; 4,64 (0,95H) ; 7,35 (0,05H) ; 7,66-8,58 (3,95H).

LC/MS (ESI) : 556,7 ; (calculé ([M + H]⁺) : 556,5).

Exempte AA5 : molécule AA5 [000580] Molécule A9 : Produit obtenu par réaction entre la molécule Al et l'ester méthyiique de la /V-Boc-L-lysine.

[000581] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A2 appliqué à la molécule Al (4 g, 11,3 mmol) et à l’ester méthyiique de la A/-Boc-Liysine (3,2 g, 12,4 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).

Rendement : 4,9 g (73 %).

RMN ^:ίΗ (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 0,99-1,54 (37H) ; 1,54-1,75 (3H) ; 1,75-2,04 (3H) ; 2,04-2,41 (4H) ; 2,94-3,19 (2H) ; 3,19-3,81 (5H) ; 4,2.8-4,64 (2.H) ; 4,94 (1H) ; 6,45 (0,lH) ; 7,36 (0,9H).

LC/MS (ESI) : 596,7 ; (calculé ([M+ H]⁺) : 596,5).

Mojj^:kule,.A10 : Produit obtenu par traitement de la molécule A9 avec de l'ammoniaque. [000582] À une suspension de molécule A9 (4,9 g, 8,2 mmol) dans 10 mL de méthanol sont ajoutés 320 mL d'une solution d'ammoniaque 7 N dans le méthanol. Après 19 h d'agitation à température ambiante en atmosphère fermée, 100 mL supplémentaires de solution d'ammoniaque sont ajoutés. Après 24 h d'agitation à température ambiante en atmosphère fermée, le milieu réactionnel est concentré sous pression réduite. Le résidu est purifié par trituration dans le diisopropyléther à reflux (100 mL), pour donner un solide blanc qui est séché sous vide à 50 °C.

Rendement : 4,1 g (85 %).

RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,06-1,57 (37H) ; 1,57-1,79 (3H) ; 1,88-2,41 (7H) ; 3,09 (2H) ; 3,49 (1H) ; 3,62 (1H) ; 4,34 (1H) ; 4,51 (1H) ; 4,69-4,81 (1H) ; 5,43 (0,95H) ; 5,57 (0,05H) ; 6,25 (0,05H) ; 6,52 (0,95H) ; 6,83 (0,05H) ; 7,11 (0,95H).

Molécule AA5 [000583] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A10 (388 mg, 0,67 mmol), un solide blanc de molécule AA5 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu après purification par trituration dans le diisopropyléther.

Rendement : 292 mg (85 %).

RMN (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,06-2,34 (38H) ; 2,61-2,81 (2H) ; 3,29-3,68 (2H) ; 4,05-4,17 (1,7H) ; 4,42 (0,3H) ; 7,00 (1H) ; 7,16 (0,7H) ; 7,43 (0,3H) ; 7,738,04(3,7H) ; 8,16 (0,3H).

LC/MS (ESÏ) : 481,6 ; (calculé ([M+H]⁺) : 481,4).

Exemple AA6 : molécule AA6

Molécule Al 1 : Produit obtenu par la réaction entre le chlorure de stéaroyle et la Lproline.

[000584] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule Al appliqué à la L-proline (5,0 g, 43,4 mmol) et au chlorure de stéaroyle (12,0 g, 39,6 mmol), un solide blanc est obtenu après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).

Rendement ·. 5,37 g (36 %)

RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,26-1,37 (28H) ; 1,64-1,70 (2H) ; 1,88-2,10 (3H) ; 2,36 (2H) ; 2,54-2,58 (1H) ; 3,46 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,62 (1H).

LC/MS (ESI) : 382,6 ; (calculé ([M-i-H]⁺) : 382,3).

Molécule A12 : Produit obtenu par réaction entre la molécule Ail et la Boctri(éthylèneglycol)diamine.

[000585] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A6 appliqué à la molécule Ail (33,81 g, 88,6 mmol) et à la Boctri(éthylèneglycol)diamine (26,4 g, 106,3 mmol) dans le THF en utilisant la DIPEA au lieu de la TEA, un solide blanc est obtenu après purification par chromatographie flash (acétate d'éthyle, méthanol).

Rendement : 43,3 g (80 %)

RMN (CDCh, ppm) : 0,87 (3H) ; 1,24 (30H) ; 1,43 (9H) ; 1,61 (2H) ; 1,82 (1H) ; 1,96 (1H) ; 2,25-2,45 (2H) ; 3,25-3,65 (14H) ; 4,30 (0,15H) ; 4,53 (0,85H) ; 5,25 (1H) ; 6,43 (0,15H) ; 7,25 (0,85H).

LC/MS (ESI) : 612,6 ; (calculé ([M + H]⁺) : 612,9).

Miîiécute AA6 [000586] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule

AA2 appliqué à la molécule A12 (43 g, 70,3 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide est trituré dans l'acétonitrile. La suspension est filtrée et ie solide lavé avec de l'acétonitrile puis de l'acétone. Après séchage sous vide, un solide blanc de molécule AA6 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu.

Rendement : 31,2 g (81 %)

K) RMN ^XH (DMSO-de, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,23 (28H) ; 1,45 (2H) ; 1,70-2,05 (4H) ; 2,13 (1H) ; 2,24 (1H) ; 2,95 (2H) ; 3,10-3,25 (2H) ; 3,30-3,65 (10H) ; 4,20-4,45 (1H) ; 7,85-8,25 (4H).

LC/MS (ESI) : 512,4 ; (calculé ([M + H]⁺) : 512,8).

Exemple AA7 : nwiécule AA7 [000587] Molécule A13 : Produit obtenu par réaction entre l'acide arachidique et la L-proline.

[000588] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A5 appliqué à l'acide arachidique (15,51 g, 49,63 mmol) et à la L-proline (6 g, 52,11 mmol) en utilisant la DIPEA à la place de la TEA, un solide blanc est obtenu après purification par colonne chromatographique sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle, acide acétique),

Rendement : 12,9 g (63 %)

RMN ^XH (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,28 (34H) ; 1,66 (2H) ; 1,95-2,15 (2H) ; 2,34 (2H) ; 2,45 (1H) ; 3,47 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,60 (1H).

LC/MS (ESI): 410,4 ; (calculé ([M+H]⁺): 410,6).

Molecule A14 . Produit obtenu par la réaction entre la molécule A13 et la Boc-l-amino4,7,10-trioxa-.13-tridécane amine.

[000589] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule

A12 appliqué à ia molécule A13 (10,96 g, 26,75 mmol) et à la Boc-l-amino-4,7,10trioxa-13-tridécane (10,29 g, 32,11 mmol), un solide est obtenu après purification par colonne chromatographique sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle, méthanol). Rendement : 14,2 g (75 %)

RMN '“H (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,24 (32H) ; 1,43 (9H) ; 1,61 (2H) ; 1,80 (1H) 1,96 (1H) ; 2,10-2,45 (4H) ; 3,20-3,75 (18H) ; 4,30 (0,20H) ; 4,55 (0,80H) ; 5,03 (1H) ; 6,75 (0,20H) ; 7,20 (0,80H).

LC/MS (ESI): 712,8 ; (calculé ([M-f-H]⁺): 713,1).

Molécule AA7 [000590] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AA2 appliqué à la molécule A14 (14,25 g, 20,01 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide du milieu réactionnel est dissout dans le méthanol et évaporé sous pression réduite, l'opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule AA7 sous forme de sel de chlorhydrate.

Rendement : 12,7 g (98 %)

RMN (DMSO-de, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,23 (32H) ; 1,45 (2H) ; 1,64 (2H) ; 1,70-2,05 (6H) ; 2,10-2,30 (2H) ; 2,82 (2H) ; 3,08 (2H) ; 3,30-3,60 (15H) ; 4,15-4,30 (1H) ; 7,73-8,13 (4H).

LC/MS (ESI): 612,7 ; (calculé ([M-i-H]⁺): 612,9).

Exemple AA8 i molécule AA8

Molécule, Ai 5 r Produit obtenu par la réaction entre la L-leucine et le chlorure de palmitoyle.

[000591] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule Al appliqué à de la L-leucine (15,0 g, 114,4 mmol) et au chlorure de palmitoyle (34,5 g, 125 mmol), un solide blanc est obtenu par trituration dans le diisopropyléther.

Rendement : 13,0 g (31 %)

RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 0,96 (6H) ; 1,16-1,35 (24H) ; 1,55-1,77 (5H) ; 2,23 (2H) ; 4,55-4,60 (1H) ; 5,88 (1H).

Molécule A 1.6 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule A15 et l'ester méthylique de la L-proline [000592] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A2 appliqué à la molécule A15 (6,00 g, 16,2 mmol) et à l’ester méthylique de la Lproline (3,23 g, 19,5 mmol), une huile légèrement jaune est obtenue après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).

Rendement : 5,8 g (74 %)

RMN !Η (CDCh, ppm) : 0,83-1,00 (9H) ; 1,18-1,32 (24H) ; 1,40-1,73 (5H) ; 1,84-2,33 (6H) ; 3,47-3,89 (2H) ; 3,70 (1,14H) ; 3,71 (1,21H) ; 3,74 (0,53H) ; 3,76 (0,12H) ; 4,40-4,56 (1H) ; 4,63-4,67 (0,04H) ; 4,84 (0,38) ; 4,90 (0,40) ; 5,06 (0,18) ; 5,99 (0,18H) ; 6,08-6,21 (0,82).

LC/MS (ESI) : 481,6 ; (calculé ([M + H]⁺) : 481,4).

Molécule Al7 : Produit obtenu par la saponification de l'ester méthylique de la molécule A16.

[000593] À une solution de molécule A16 (5,8 g, 12,06 mmol) dans 30 mL de méthanol est ajoutée de la soude 1 N (13,5 mL, 13,5 mmol). Après 20 h d'agitation à température ambiante, la solution est diluée avec de l'eau puis acidifiée par 20 mL d'acide chlorhydrique 1 N à 0 °C. Le précipité est. filtré puis rincé avec de l'eau (50 mL) 5 avant d'être solubilisé dans 50 mL de dichlorométhane. La phase organique est séchée sur NazSO4, filtrée puis concentrée sous pression réduite pour donner une huile incolore.

Rendement : 4,5 g (80 %)

RMN (CDCh, ppm) : 0,85-0,99 (9H) ; 1,14-1,41 (24H) ; 1,43-1,72 (5H) ; 1,87-2,47 (7H) ; 3,48-3,55 (0,6H) ; 3,56-3,62 (0,4H) ; 3,83-3,90 (0,4H) ; 3,90-3,96 (0,6H) ;

4,52-4,56 (0,6H) ; 4,56-4,59 (0,4H) ; 4,80-4,86 (0,4H) ; 4,86-4,91 (0,6H) ; 6,05 (0,4H) ; 6,11 (0,6H).

LC/MS (ESI) : 467,6 ; (calculé ([M+H]⁺) : 467,4).

M’OléeulfiProduit obtenu par ia réaction entre la /V-Boc-éthylènediamine et la 1.5 molécule A17.

[000594] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A2 appliqué à la molécule A17 (4,5 g, 9,64 mmol) et à la BocEDA (1,70 g, 10,61 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).

Rendement : 2,0 g (34 %)

RMN ^]H (CDCh, ppm) : 0,83-0,99 (9H) ; 1,19-1,32 (24H) ; 1,44 (9H) ; 1,48-2,37 (14H) ; 3,09-3,99 (4H) ; 4,28-5,01 (2H) ; 5,64-6,04 (1H) ; 6,87-7,06 (1H).

LC/MS (ESI) : 609,7 ; (calculé ([M + H]⁺) : 609,5).

Molécute AA8 [000595] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A18 (2 g, 3,28 mmol), un solide de molécule AA8 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).

Rendement : 1,5 g (90 %)

RMN ^ΓΗ (CDCh, ppm) : 0,83-1,00 (9H) ; 1,18-1,32 (24H) ; 1,37-1,77 (5H) ; 1,93-2,41 (6H) ; 3,07-3,97 (5H) ; 4,44-4,77 (2H) ; 7,66-8,21 (2H).

LC/MS (ESI) : 509,6 (calculé ([Μ+ΗΓ) : 509,4).

Exempte AA9 : molécule AA9

Molécule A19 : Produit obtenu par la réaction entre l'acide Iaurique et la L-phénylalanine.

[000596] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A5 appliqué à l'acide laurique (8,10 g, 40,45 mmol) et à la L-phénylalanine (7 g, 42,38 mmol), un solide blanc est obtenu.

Rendement : 12,7 g (98 %)

RMN (DMSO-ds, ppm) : 0,86 (3H) ; 1,10-1,30 (16H) ; 1,36 (2H) ; 2,02 (2H) ; 2,82 (1H) ; 3,05 (1H) ; 4,42 (1H) ; 7,15-7,30 (5H) ; 8,05 (1H) ; 12,61 (1H).

LC/MS (ESI) : 348,2 ; (calculé ([M + H]⁺) : 348,5).

Molécule A20 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule A19 et le sel de 10 chlorhydrate de l'ester méthylîque de la L-proline.

[000597] Par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation de la molécule A6 appliqué à la molécule A19 (9,98 g, 28,72 mmol) et au sel chlorhydrate de l'ester méthylîque de la L-proline (5,23 g, 31,59 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par colonne chromatographique sur gel de silice (cyclohexane, acétate 15 d'éthyle).

Rendement : 5,75 g (44 %)

RMN ’Ή (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,10-1,30 (16H) ; .1,50-1,75 (3H) ; 1,80-2,02 (3H) ; 2,17 (2H) ; 2,65 (0,5H) ; 2,95 (1H) ; 3,05-3,20 (1,5H) ; 3,50-3,65 (1H) ; 3,75 (3H) ;

4,29 (0,5H) ; 4,46 (0,5H) ; 4,70 (O,1H) ; 4,95 (0,9H) ; 6,20-6,30 (1H) ; 7,15-7,30 20 (5H).

LC/MS (ESI) : 459,2 ; (calculé ([M + H]⁺) : 459,6).

Molécule A21 : Produit obtenu par saponification de la molécule A20.

[000598] À une solution de molécule A20 (5,75 g, 12,54 mmol) dans un mélange 25 THF/méthanol/eau (40/40/40 mL) à 0 °C est ajoutée de l'hydroxyde de lithium (LiOH) (600,49 mg, 25,07 mmol) puis le mélange est agité à température ambiante pendant

h. Après évaporation des solvants organiques sous vide, la phase aqueuse est diluée dans l'eau, acidifiée avec une solution aqueuse de HCl 1 N jusqu'à pH 1. Le produit est alors extrait à l'acétate d'éthyle. Les phases organiques combinées sont lavées avec une 30 solution aqueuse saturée de NaCI, séchées sur NazSCh, filtrées et concentrées sous pression réduite pour donner une huile incolore.

Rendement : 5,7 g (quantitatif)

RMN !H (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,10-1,30 (16H) ; 1,50-1,80 (3H) ; 1,67-2,02 (2H) ;

2,20 (2H) ; 2,25 (0,4H) ; 2,60 (0,6H) ; 2,85-3,10 (2,6H) ; 3,55-3,65 (1,4H) ; ; 4,35 35 (0,6H) ; 4,55 (0,4H) ; 4,94 ( 1H) ; 6,28 (0,4H) ; 6,38 (0,6H) ; 7,20-7,30 (5H).

LC/MS (ESI) : 445,2 ; (calculé ([M + H]⁺) : 445,6).

Molécule A22 Produit obtenu par réaction entre la /V-Boc-éthylènediamine et la molécule A21.

[000599] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule

A6 appliqué à la molécule A21 (5,67 g, 12,75 mmol) et à la BocEDA (2,25 g, 14,03 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par colonne chromatographique sur gel de silice (dichlorométhane, méthanol).

Rendement : 5,7 g (76%)

RMN ⁱH (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,25 (16H) ; 1,43 (9H) ; 1,58 (2,6H) ; 1,75-1,95 (1,4H) ; 2,15-2,30 (3H) ; 2,64 (0,5H) ; 2,95-3,10 (2,5H) ; 3,20-3,40 (4H) ; 3,45 10 (0,5H) ; 3,55 (0,2H) ; 3,66 (IH) ; 4,44 (IH) ; 4,50 (0,2H) ; 4,60 (0,6H) ; 4,99 (0,7H) ; 5,54 (0,5H) ; 5,95 (0,2H) ; 6,17 (IH) ; 6,60 (0,5H) ; 7,07 (0,5H) ; 7,20-7,40 (5H).

LC/MS (ESI) : 587,4 ; (calculé ([M + H]⁺) : 587,8).

Molécule AA9 [000600] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule

AA2 appliqué à la molécule A22 (5,66 g, 9,65 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide du milieu réactionnel est dissout dans le méthanol et évaporé sous pression réduite, l’opération étant répétée 4 fois pour donner une mousse blanche de molécule AA9 sous forme de sel de chlorhydrate.

Rendement : 4,9 g (97 %)

RMN ³H (DMSO-de, 120 °C, ppm) : 0,89 (3H) ; 1,26 (16H) ; 1,43 (2H) ; 1,68 (0,6H) ;

1,75-2,00 (3H) ; 2,05-2,25 (2,4H) ; 2,82-3,05 (5H) ; 3,38 (2H) ; 3,50-3,70 (1,4H) ;

4,25 (0,6H) ; 4,63 (0,4H) ; 4,77 (0,6H) ; 7,25-7,50 (5H) /7,55-8,20 (4H).

LC/MS (ESI) : 487,4 ; (calculé ([M + H]⁺) : 487,7).

Exemple AA10 : molécule AAI©

Molécule,A23 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule B7 et la /V-Boc30 ethylènediamine [000601] À une solution de molécule B7 (190,00 g, 583,73 mmol) à 0 °C dans le DCM (2,9 L) sont ajoutés successivement du HOBt (8,94 g, 58,37 mmol) puis de la BocEDA (112,20 g, 700,00 mmol) en solution dans le DCM (150 mL). De l'EDC (123,10 g, 642,00 mmol) est ajouté puis le mélange est agité 17 h entre 0 °C et température 35 ambiante. Le mélange réactionnel est ensuite lavé avec une solution aqueuse saturée en NaHCOs (2x1,5 L), une solution aqueuse de HCl 1 N (2x1,5 L) puis une solution aqueuse saturée en NaCI (1,5 L), séché sur N32SO4, filtré et concentré sous pression réduite. Un solide blanc est obtenu après recristallisation dans l'acétonitrile,

Rendement : 256,50 g (93 %)

RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,16-1,38 (20H) ; 1,44 (9H) ; 1,56-1,71 (2H) ; 1,78-2,45 (6H) ; 3,11-3,72 (6H) ; 4,30 (O,1H) ; 4,51 (0,9H) ; 4,87 (O,1H) ; 5,04 (0,9H) ; 6,87 (O,1H) ; 7,23 (0,9H).

LC/MS (ESI) : 468,0 ; (calculé ([M+H]⁺) : 468,4).

Molécule AA10 [000602] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A23 (256,50 g, 548,43 mmol), un solide blanc de molécule AA10 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu par trituration dans du pentane (1,6 L) et séchage sous pression réduite à 40 °C.

[000603] Rendement : 220,00 g (99 %) [000604] RMN *Η (MeOD-d4, ppm) : 0,90 (3H) ; 1,21-1,43 (20H) ; 1,54-1,66 (2H) ; 1,85-2,28 (4H) ; 2,39 (2H) ; 3,00-3,17 (2H) ; 3,30-3,40 (1H) ; 3,43-3,71 (3H) ; 4,29 (0,94H) ; 4,48 (0,06H).

LC/MS (ESÏ) : 368,2 ; (calculé ([M+H]+) ; 368,3).

Exemple AA11 : molécule AA11

Molécule Α2Ί : Produit obtenu par la réaction entre ia molécule B7 et le Boc-l-amino4,7,10-trioxa-13-tridécane amine.

[000605] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A23 appliqué à la molécule B7 (24,00 g, 73,73 mmol) et au Boc-l-amino-4,7,10-trioxa13-tridécane amine (28,35 g, 88,48 mmol), une huile orange de molécule A24 est obtenue.

Rendement : 44,50 g (96 %)

RMN 1H (CDCh, ppm) : 0,87 (3H) ; 1,08-1,56 (20H) ; 1,43 (9H) ; 1,58-1,67 (2H) ; 1,70-2,00 (6H) ; 2,04-2,41 (4H) ; 3,16-3,77 (18H) ; 4,26-4,29 (0,2H) ; 4,50-4,54 (0,8H) ; 4,68-5,10 (1H) ; 6,74 (0,2H) ; 7,19 (0,8H).

LC/MS (ESI) : 628,4 ; (calculé ([M+H]⁴) : 628,5).

Molécule AAI 1 [000606] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A24 (43,40 g, 69,12 mmoi), un solide blanc de molécule AA11 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu après trituration 3 fois dans le diéthyléther, solubilisation du résidu dans l'eau et lyophilisation,

Rendement : 38,70 g (98 %)

RMN 1H (DMSO, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,07-1,38 (20H) ; 1,41-1,52 (2H) ; 1,55-1,66 (2H) ; 1,70-2,02 (6H) ; 2,08-2,30 (2H) ; 2,78-2,87 (2H) ; 3,00-3,16 (2H) ; 3,29-3,66 (14H) ; 4,16-4,22 (0,65 H) ; 4,25-4,30 (0,35H) ; 7,74 (0,65H) ; 7,86 (3H) ; 8,10 (0,35H). LC/MS (ESI) : 528,4 ; (calculé ([M+H]⁺] : 528,4).

Exemple AA12 : molécule AAÎ2

Molécule A25 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule B4 et la A/-Bocéthylènediamine.

[000607] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 10 A23 appliqué à la molécule B4 (12,00 g, 40,35 mmol) et à la BocEDA (7,76 g, 48,42 mmol), une huile incolore est obtenue et utilisée sans autre purification.

Rendement : 17,40 g (94 %)

RMN 1H (CDCh, ppm) : 0,86 (3H) ; 1,11-1,68 (18H) ; 1,41 (9H) ; 1,80-2,38 (6H) ; 3,06-3,35 (4H) ; 3,37-3,49 (1H) ; 3,51-3.73 (1H) ; 4,26-4,31 (0,lH) ; 4,45-4,52 (0,9H) 15 ; 4,91-5,19 (1H) ; 6,97 (0,lH) ; 7,23 (0,9H).LC/MS (ESI) : 440,4 (calculé ([M+H]⁺) :

440,3).

Molécule AA12 [000608] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule 20 AAI appliqué à la molécule A25 (8,85 g, 20,13 mmol), un solide blanc de molécule AA12 est obtenu après lavage basique, concentration sous pression réduite puis recristallisation dans l'acétonitrile.

Rendement : 6,53 g (96 %)

RMN 1H (DMSO, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,07-1,56 (20H) ; 1,68-2,03 (4H) ; 2,09-2,29 (2H) 25 ; 2,50-2,58 (2H) ; 2,96-3,11 (2H) ; 3,21-3,59 (2H) ; 4,17-4,21 (0,65H) ; 4,25-4,29 (0,35H) ; 7,68 (0,65H) ; 8,00 (0,35H)

LC/MS (ESI) : 340,3 ; (calculé ([M + H]⁺) : 340,3).

Exemple AA13 : molécule AA13

Molécul·-· A?6 Produit obtenu par couplage entre la molécule B1 et la A/-Bocéthylènediamine.

[000609] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A23 appliqué à la molécule B1 (30,00 g, 111,36 mmol) et à la BocEDA(21,41. g, 133,64 mmol), un solide blanc est obtenu après recristallisation dans l’acétonitrile.

Rendement : 34,90 g (76 %)

RMN 1H (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,10-1,70 (14H) ; 1,43 (9H) ; 1,80-1,91 (1H) ; 1,92-2,01 (1H) ; 2,04-2,42 (4H) ; 3,13-3,70 (6H) ; 4,27-4,31 (0,15H) ; 4,47-4,53 (0,85H) ; 4,83 (0,15H) ; 5,02 (0,85H) ; 6,85 (0,15H) ; 7,21 (0,85H).

LC/MS (ESI) : 412,2 ; (calculé ([M + H]⁺) : 412,3).

Molécule AA13 [000610] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A26 (34,90 g, 84,79 mmol), un solide blanc de molécule AA13 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu après solubilisation dans un mélange DCM/acétonitrile et concentration sous pression réduite.

Rendement : 29,50 g (99 %)

RMN 1H (DMSO, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,07-1,61 (14H) ; 1,70-2,06 (4H) ; 2,10-2,35 (2H) ; 2,76-2,87 (2H) ; 3,24-3,47 (3,25H) ; 3,56-3,64 (0,75H) ; 4,13-4,19 (0,75H) ; 4,314,36 (0,25H) ; 8,05-8,36 (3,75H) ; 8,50 (0,25H).

LC/MS (ESI) : 312,2 ; (calculé ([M+H]⁺) : 312,3).

Exemple AA14 : molécule AA14

Molécule.A27 : Produit obtenu par hydrogénation du phytol.

[000611] À une solution de phytol (30,00 g, 101,2.0 mmol) dans le THF (450 mL) sous argon est ajouté de l'oxyde de platine (PtOz, 1,15 g, 6,61 mmol) et le milieu est placé sous 1 bar de dihydrogène puis agité pendant 4 h à température ambiante. Après filtration sur célite en rinçant au THF, une huile noire de molécule A27 est obtenue après concentration sous pression réduite.

Rendement : 29,00 g (96 %)

RMN (CDCh, ppm) : 0,84 (6H) ; 0,86 (6H) ; 0,89 (3H) ; 1,00-1,46 (22H) ; 1,46-1,68 (3H) ; 3,61-3,73 (2H).

Molécule A28 : Produit obtenu par oxydation de la molécule A27 [000612] À une solution de molécule A27 (29,0 g, 97,13 mmol) dans un mélange dichloroéthane/eau (485 mL/388 mL) sont ajoutés successivement du bromure de tétrabutylammonium (16,90 g, 52,45 mmol), de l'acétide acétique (150 mL, 2,62 mol) puis du KMnCU (46,05 g, 291,40 mmol) par petites fractions en maintenant la température entre 16 et 19 °C. Le milieu réactionnel est ensuite agité pendant 4 h 30 au reflux, refroidi à 10 °C puis acidifié jusqu'à pH 1 avec une soîuition de HCl 6 N (20 mL). Du NajSCh (53,90 g) est ajouté progressivement en maintenant la température à 10 °C et le milieu est agité jusqu'à décoloration complète. De l'eau (200 mL) est ajoutée, les phases sont séparées et la phase aqueuse est extraite au DCM (2 x 400 mL). Les phases organiques combinées sont lavées par une solution aqueuse de HCl à 10 % (20 mmL), de l'eau (2 x 200 mL), une solution aqueuse saturée en NaCI (200 mL), séchées sur NazSCh, filtrées et concentrées sous pression réduite. Une huile jaune de molécule

A28 est obtenue après purification par chromatographie flash (éluant ; cyclohexane, AcOEt).

Rendement : 28,70 g (94 %)

RMN (CDCh, ppm) : 0,84 (6H) ; 0,86 (6H) ; 0,97 (3H) ; 1,00-1,41 (20H) - 1,52 (1H) ; 1,96 (1H) ; 2,14 (1H) ; 2,35 (1H) 11,31 (1H).

LC/MS (ESI) : 311,1 (calculé ([M H] ) : 311,3).

Molécule A29 : Produit obtenu par couplage entre la molécule A28 et la L-prolinate de méthyle.

[000613] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A2 appliqué à la molécule A28 (18,00 g, 57,59 mmol) et au chlorhydrate de L-prolinate de méthyle (14,31 g, 86,39 mmol), une huile jaune de molécule A29 est obtenue après lavage de la phase organique par une solution aqueuse saturée en NaHCCh (2 x 150 mL), une solution aqueuse de HCl à 10 % (2 x 150 mL), une solution aqueuse saturée en NaCi (2 x 150 mL), puis séchage sur NazSO^, filtration et concentration sous pression réduite.

Rendement : 23,20 g (95 %)

RMN (DMSO-dfi, ppm) : 0,78-0,89 (15H) ; 0,97-1,43 (20H) ; 1,43-1,56 (1H) ; 1,701,96 (4H) ; 1,96-2,32 (3H) ; 3,33-3,56 (2H) ; 3,59 (0,6H) ; 3,67 (2,4H) ; 4,27 (0,8H) ; 4,57 (0,2H).

LC/MS (ESI) : 424,4 (calculé ([M+H]⁺) : 424,4).

Molécule A30 : Produit obtenu par la saponification de la molécule A29.

[000614] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A21 appliqué à la molécule A29 (21,05 g, 49,68 mmol), une huile jaune de molécule A30 est obtenue.

Rendement : 20,40 g (99 %)

RMN (DMSO-de, ppm) : 0,77-0,91 (15H) ; 0,97-1,43 (20H) ; 1,43-1,56 (1H) ; 1,671,96 (4H) ; 1,96-2,29 (3H) ; 3,26-3,56 (2H) ; 4,20 (0,8H) ; 4,41 (0,2H).

LC/MS (ESI) : 410,3 (calculé ([M+H]⁺): 410,4).

Molécule A31 : Produit obtenu par le couplage entre la molécule A30 et le Boc-l-amino4,7,10-trioxa-13-tridécane amine.

[000615] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A23 appliqué à la molécule A30 (8,95 g, 21,85 mmol) et au Boc-l-amino-4,7,10-trioxa13-tridécane amine (8,40 g, 26,21 mmol), une huile incolore de molécule A31 est obtenue après purification par chromatographie flash (éluant : DCM, AcOEt, méthanol).

Rendement : 10.08 g (65 %)

RMN ^XH (DMSO-de, ppm) : 0,78-0,89 (15H) ; 0,97-1,43 (29H) ; 1,43-1,55 (1H) ; 1,551,66 (4H) ; 1,71-2,30 (7H) ; 2,95 (2H) ; 3,00-3,19 (2H) ; 3,34-3,58 (14H) ; 4,17-4,29 (1H) ; 6,30-6,79 (1H) ; 7,67 (0,65H) ; 8,00 (0,35H).

LC/MS (ESI) : 712,6 (calculé ([M + Hp): 712,6).

Melécsjfe AA14 [000616] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule

AAI appliqué à la molécule A31 (10,08 g, 14,16 mmol), le résidu obtenu après concentration sous pression réduite est solubilisé dans le DCM (200 mL), la phase 10 organique est lavée par une solution aqueuse de NaOH 2 N (2 x 100 mL), séchée sur

NazSCh, filtrée et concentrée sous pression réduite. Une huile incolore de molécule AA14 sous forme d'amine neutre est obtenue.

Rendement : 8,23 g (95 %)

RMN Ψ (DMSO-de, ppm) : 0,78-0,89 (15H) ; 0,97-1,43 (20H) ; 1,43-1,69 (6H) ; 1,6915 2,30 (8H) ; 2,56 (2H) ; 2,99-3,19 (2H) ; 3,31-3,58 (14H) ; 4,15-4,29 (1H) ; 7,70 (0,65H) ; 8,04 (0,35H).

LC/MS (ESI) : 612,5 (calculé ([M + H]⁺): 612,5).

Exemple AA15 : molécule AÂ15 [000617] La molécule AA15 est obtenue par la méthode conventionnelle de synthèse peptidique en phase solide (SPPS) sur résine 2-chlorotrityle.

[000618] À une solution de 4,7,10-trioxa~l,13-tridécanediamine (TOTA, 10,87 mL,

49,60 mmol) dans du DCM (50 mL) est ajoutée de la DIPEA (8,64 mL, 49,60 mmol).

Cette solution est ensuite versée sur de la résine 2-chlorotrityle (4,00 g, 1,24 mmol/g) 25 préalablement lavée au DCM dans un réacteur adapté à la SPPS. Après 2 h d'agitation à température ambiante, du méthanol (0,8 mL/g, 3,2 mL) est ajouté et le milieu est agité pendant 15 min. La résine est filtrée, lavée successivement avec du DCM (3 x 50 mL), du DMF (2 x 50 mL), du DCM (2 x 50 mL), de î'isopropanol (1 x 50 mL) et du DCM (3 x 50 mL). Les acides aminés protégés /V-Fmoc-L-glycine et N-Fmoc-L-proline puis 30 l'acide palmitique (3 équivalents) sont couplés successivement en utilisant le 1[bis(dirnéthy!a mi no)methylène]-l H-1,2,3-triazolo[4,5-b] pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate (HATU, 3 équivalents) comme agent de couplage en présence de

DIPEA (6 équivalents) dans un mélange DCM/DMF 1 : 1. Une solution de pipéridine à % dans le DMF est utilisée pour les étapes de clivage du groupe protecteur Fmoc. La résine est lavée par du DCM, du DMF et de I'isopropanol après chaque étape de couplage et de déprotection. Le clivage du produit de la résine est effectué en utilisant un mélange

TFA/DCM 1 : 1. Les solvants sont évaporés sous pression réduite, le résidu est solubilisé dans du DCM (50 mL) et la phase organique est lavée avec une solution aqueuse de NaOH 1 N (1 x 50 ml.) puis une solution saturée de NaCI (2 x 50 mL). Après séchage sur NazSO4, la phase organique est filtrée, concentrée sous pression réduite et le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice (dichlorométhane, méthanol, NH4OH). Rendement : 1,65 g (54 % global sur 7 étapes),

RMN ^XH (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,18-2,39 (38H) ; 2,79 (2H) ; 3,23-3,44 (2H) ; 3,47-3,69 (14H) ; 3,76 (0,92H) ; 3,82 (0,08H) ; 3,98 (0,08H) ; 4,03 (0,92H) ; 4,34 (0,08H) ; 4,39 (0,92H) ; 7,00-7,40 (2H).

LC/MS (ESI) : 613,7 ; (calculé ([M+H]⁺) : 613,5).

Exemple AA16 : molécule AA16 [000619] Par un procédé de SPPS similaire à celui utilisé pour la préparation de ia molécule AA15 et en utilisant de la /V-Fmoc-L-phénylalanine (3 équivalents) à la place de la N-Fmoc-L-glycine, la molécule AA16 est obtenue sous forme d'une huile jaune, Rendement : 14,07 g (69 %)

RMN ‘H (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,19-1,34 (24H) ; 1,41-1,61 (2H) ; 1,68-2,28 (12H) ; 2,84 (2H) ; 3,14 (2H) ; 3,23-3,67 (16H) 4,19-4,25 (0,lH) ; 4,38-4,45 (0,9H) ; 4,59-4,69 (1H) ; 6,86 (1H) ; 7,03 (1H) ; 7,12-7,30 (5H).

LC/MS (ESI) : 703,5 : (calculé ([M + H]⁺) : 703,5).

Exemple AA17 : molécule AA17

Par un procédé de SPPS similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AA15 et en utilisant du EDA (30.48 mL, 0,456mol)à la place du TOTA, la molécule AA17 est obtenue sous forme d'un solide blanc.

Rendement : 9,19 g (89 %)

RMN ^XH (MeOD-d4, ppm) : 0,90 (3H) ; 1,22-1,43 (24H) ; 1,55-1,67 (2H) ; 1,91-2,04 (2H) ; 2,04-2,15 (1H) ; 2,17-2,29 (1H) ; 2,39 (2H) ; 2,69-2,82 (2H) ; 3,25-3,36 (2H) ; 3,58-3,70 (2H) ; 3,70-3,97 (2H) ; 4,25-4,34 (0,9H) ; 4,44-4,50 (0,lH).

LC/MS (ESI) : 453,3 ; (calculé ([M + H]⁺) : 453,4),

AB : Synthèse des co-polyaminoacides

Co-polyaminoacides statistiques de formule VII ou Vila

CO-POLYAMINOACIDES PORTEUR DE CHARGES CARBOXYLATES ET

DE RADICAUX HYDROPHOBES

AB1 1 AZ ....... —

R·.,

C· *

i = 0,05, DP (m + n) = 23 ν'

ΑΒ2

NH

Ο

15^π31

R,

NH

Hy =

Ri = H ou pyroglutamate

Hy =

Ri = H ou pyroglutamate

Ax ONa.......”

0,05, DP (m + η) = 35

AB3

CO^OL^I^ÔACïDËFpO^ÛR^Ë^ÏÎARGËsCARBOXYLATES ET j

DE RADICAUX HYDROPHOBES

Ri = H ou pyroglutamate )_s .PNa 'S.'S. ,.X'

AB4~~

i - 0,052, DP (m + n) - 35

όη₃ ___Ri ~ H ou pyroglutamate

CO-POLYAMINOACIDES PORTEUR DE CHARGES CARBOXYLATES ET

DE RADICAUX HYDROPHOBES j ÂB5

AB6 (Ma

R<

w

NH

Ν'

NH ‘35

0,0b,

Hy =

R.i = H ou pyroglutamate

Crt ,ONa

R₁

N

H

Hy i 0,025, DP (m + n) = 20 Hy ,NH •S'

£)

N

^19^39

CO-POLYAMINOACIDES PORTEUR. DE CHARGES CARBOXYLATES ET

DE RADICAUX HYDROPHOBES

i 0,03, DP (rn + n) = 21 Hy == */ Q y/

R1CH3-CO-, H ou pyrogiutamate

ί Rt = H ou pyroglutamate

N° CO-POLYAHINOACIDES PORTEUR DE CHARGES CARBOXYLATES ET DE RADICAUX HYDROPHOBES

AB9 1 a

ΟΝκ

R.,

N

H i = 0,12, DP (m + ''o

n) = 30

NH ''N

Hy = _________Ri = H ou pyroglutamate ÀBÏO Γ ,ONa q·' θ15^Η31

Hy'' i = 0,05, DP (m + n) - 23

O_x ^NH_?

i i - 0,04, DP (m + n) - 26

I Hy = CH₃

I R.i = H ou pyroglutamate________

i = 0,15_f DP (m + n) = 39

NH

Hy =

Ri = H ou pyrogiütamate

AB25

Ri

I H

LM

H-, ^xii i = 0,20, DP (m + n) == 39

NH

NH 'N

AB26

Hy =

Ri - H ou pyroglutamatg

..

“N

H i = 0,20, DP (m +

Hy' O

n) = 22

NH

Ô

Hy = 0’

Ri = H ou pyroqiutamate

Ί®^π27

! = 0,15, DP (m + n) ~ 39

I Rt = H ou pyroglutamate

ÂB2ÏÏ’Y⁷

Hy^ '% i = 0,15, DP (m + n) 39

Ri = H ou pyroglutamate

AB29 I /«Na i AB30

j '''O

J ! = 0,15, DP (m + n) = 40 % >·ΝΗ 2

Y 'N \

l_{Hy =} ° (/<^19

JRi ~ pyrogjutamate ,ONa

RJ

ΓΝΗ

NH

13™27

Hy' ^XO i = 0,125, DP (m + n) - 40

NH

NH ; 1 Hy = _____ J Ri = pyroglutamate θ 0^^^13^27

I AB31”

O-k .ONa

R-jl

L^NH fHm

O i;nh

NH ’'N

Ί3^Π27

Hy ^x-0 i ~ 0,175, DP (m + n) ~ 40

ΝΗ

ΑΒ32

Hy = ~ pyroglutamate .ONa

Ί3^Π27 ‘H

H

Ln

Hy' ^X'O i = 0,109 DP (m + n) = 40 Hy

NH ι» ô

Ι,Η υ·ί,

Ri-pyroglutamate

Tableau 1b Liste des co-polyaminoacides synthétisés selon l'invention

Co-polyaminoacides de formule VII ou Vllb :

exem l E^® _ ΓΑΒ14 co-pohramirroacides porteur de charges carboxyiates et de radicaux hydrophobes

PNa 'N

H

I AB15

AB16

AB17

'31

N

O i = 0,04, DP (m) = 25

Ri H ou pyroglutamate ^:: ~ ’’b®”

Ül n ^s ©

i = 0,033, DP (m) = 30

Ri = H ou pyroglutamate

ONa

H·

M i = 0,021, DP (m) = 48 Ri = H ou pyroglutamate ~ ' ci» tî i = 0,038, DP (m) = 26 Ri = H ou pyroglutamate r^BÎg

F· t i = 0,045, DP (m) = 22

Jjh ~ H ou pyroglutamate ÂBÎîF î ’ ”

Ù.

Hs5

R, J jN

H '0' ⁰ i = 0,015, DP (m) = 65 ____j Ri = H ou pyroglutamate

AB20 cru '’îïF

I i = 0,017, DP (m) = 60 [ R1=CH3-CO-, H ou pyroglutamate AB33 F ' ' '

...

i = 0,045 , DP (m) = 22 RI ~ H ou pyroglutamate

AB34 .0.

'©

AB35 i = 0,043, DP (m) = 23 Rl_r= H ou pyroglutamate

AB36 i i = 0,045, DP (m) = 22 I RI = H ou pyroglutamate o· ^:©β·’Μ

AB37 i = 0,045, DP (m) = 22 RI ~ H ou pyroglutamate &

/4’ ~~ , o' i = 0,042, DP (m) = 24 _________________; RI - H ou pyroglutamate_______________

Tableau le : liste des co-polyaminoacides synthétisés selon l'invention.

Partie AB : synthèse des co-polyaminoacides

Exemple AB1 : Co-polyaminoacide ABi - poly-L-glutamate de sodium modifié par Sa molécule AAI et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2906 g/mol

Co-qqîvaminoacide,A.Bl-1 : acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) relative 3861 g/mol issu de la polymérisation du v-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride initiée par l'hexyîamine [000620] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve est placé sous vide du ybenzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (89,9 g, 341 mmol) pendant 30 min, puis du DMF anhydre (200 mL) est introduit. Le mélange est alors agité sous argon jusqu'à complète dissolution, refroidi à 4 °C, puis de i'hexyîamine (2,05 mL 15,5 mmol) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 2 jours. Le milieu réactionnel est ensuite chauffé à 65 °C pendant 2 h, refroidi à température ambiante puis coulé goutte-à-goutte dans du diisopropyléther (3 L) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec du diisopropyléther (2 x 200 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly(gamma-benzyl-Lglutamique) (PBLG).

[000621] À une solution de PBLG (74,8 g) dans l'acide trifluoroacétique (TFA, 340 mL) à 4 °C est ajoutée goutte-à-goutte une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33 % dans l'acide acétique (240 mL, 1,37 mol). Le mélange est agité à température ambiante pendant 2 h, puis coulé goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau sous agitation (4 L). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité bianc est récupéré par filtration, lavé avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (340 mL) puis avec de l'eau (340 mL).

[000622] Le solide obtenu est alors solubilisé dans de l’eau (1,5 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après solubilisation, la concentration théorique est ajustée à 20 g/L théorique par addition d'eau pour obtenir un volume final de 2,1 L.

[000623] La solution est filtrée sur filtre 0,45 pm puis purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 %, puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée jusqu'à obtenir un volume final de 1,8 L.

[000624] La solution aqueuse est alors acidifiée par ajout de solution d'acide chlorhydrique 37 % jusqu'à atteindre un pH de 2. Après 4 h d'agitation, le précipité obtenu est filtré, lavé avec de l'eau (2 x 340 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 3861 g/mol par rapport à un standard de poiyoxyéthylène (PEG).

Co-poiyamînoacide AB1 [000625] Le co-polyaminoacide AB1-1 (10,0 g) est solubilisé dans le DMF (700 mL) à 30-40 °C puis refroidi à 0 °C. La molécule AAI sous forme de sel de chlorhydrate (1,64 g, 3,8 mmol) est mise en suspension dans du DMF (23 mL) et de la triéthylamine (0,39 g, 3,8 mmol) est ensuite ajoutée et le mélange est légèrement chauffé sous agitation jusqu'à complète dissolution. À la solution de co-polyaminoacide à 0 °C, de la N-méthylmorpholine (NMM, 7,6 g, 75 mmol) dans le DMF (14 mL) et du chloroformate d'éthyle (ECF, 8,2 g, 75 mmol) sont ajoutés. Après 10 min à 0 °C, la solution contenant la molécule AAI est ajoutée et le milieu maintenu à 30 °C durant 2 h. Le milieu réactionnel est coulé goutte-à-goutte sur 5,5 L d'eau contenant du NaCI à 15 % massique et du HCl (pH 2), puis laissé reposer une nuit. Le précipité est collecté par filtration et séché sous vide pendant environ 30 min. Le solide blanc obtenu est repris dans de l'eau (500 mL) et le pH est ajusté à 7 par ajout lent d'une solution aqueuse de NaOH 1 N. Après filtration sur filtre 0,45 pm, la solution limpide obtenue est purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 % puis de l'eau, jusqu'à ce que la conductirnétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. Après déchargement, la solution est filtrée sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8 °C.

Extrait sec : 24,9 mg/g [000626] Un degré de polymérisation moyen (DP) de 23 est estimé par RMN ^XH dans DzO en comparant l'intégration des signaux provenant de l'hydrophobe greffé à celle des signaux provenant de la chaîne principale.

D'après la RMN ^XH : i = 0,05 [000627] La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB1 est calculée sur la base des masses molaires des radicaux Ri et Rz, des résidus aspartate et/ou glutamate (y compris une liaison amide), du radical hydrophobe, du DS et du DP.

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB1 est de 3945 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2900 g/mol.

Exemple AB2 : Co-polyamirroadde AB2 - poly-L-glutamate de sodium modifié par ia molécule AAI et ayant un® masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3700 g/mol [000628] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB1 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AAI (1,64 g, 3,8 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de Mn relative 5200 g/mol (10,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AAI est obtenu.

Extrait sec : 14,1 mg/g

DP (estimé d'après la RMN : 35

D'après la RMN *Η : i == 0,05

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB2 est de 5972 g/moi, HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn - 3700 g/mol.

Exemple AB3 i Co-poiyaminoacîde AB3 ~ pely-L-glutamate de sodium modifié par ia molécule AAI et ayant une masse meiaire moyenne en nombre (Mn) de 4900 g/mol [000629] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB1 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AAI (3,30 g, 7,6 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse moyenne en nombre (Mn) relative 5200 g/rnol (10,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AAI est obtenu.

Extrait sec : 23,4 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ’-H) : 35

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB3 est de 6594 g/mol. D’après la RMN : i == 0,10

HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4900 g/mol.

Exempte AB4 : Co-polyaminoacide AB4 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 1800 g/moi [000630] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB1 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA2 (1,09 g, 2,4 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse moyenne Mn == 5600 g/mol (6,3 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1 mais avec une étape de déprotection des esters benzyliques utilisant l'iodure de triméthylsilane selon le protocole décrit dans la publication J. Am. Chem. Soc. 2000, 122, 26-34 (Subramanian G., et al.), un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA2 est obtenu.

Extrait sec : 21,5 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ^) : 35

D'après la RMN : i == 0,052

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB4 est de 6022 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 1800 g/mol.

Exemple ABS : Co-polyaminoacide ABS - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA6 et ayant une masse molaire moyenne ers nombre (Mn) de 2600 g/mol [000631] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB1 appliqué au sel de chlorhydrate de ia molécule AA6 (2,06 g, 3,8 mmol) et à un acide poly-L-glutamique (9,8 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide ABl-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA6 est obtenu.

Extrait sec ·. 20,9 mg/g

DP (estimé d'après la RMN '‘H) : 23

D'après la RMN ^:1 = 0,05

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB5 est de 4079 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2600 g/mol.

Exempie ABS : Ce-po^yammoacide AB6 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA7 et ayant une masse malaire moyenne en nombre (Mn) de 4000 g/moi [000632] Un acide poly-L-glutamique de masse moyenne Mn = 3500 g/mol et de degré de polymérisation 22 (10,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide ABl-1 est solubilisé dans le DMF (420 mL) à 3040 °C puis maintenu à cette température. En parallèle, le sei de chlorhydrate de la molécule AA7 (1,47 g, 2,3 mmol) est mis en suspension dans du DMF (12 mL) et de la triéthylamine (0,23 g, 2,3 mmol) est ajoutée, puis le mélange est légèrement chauffé sous agitation jusqu'à complète dissolution. À ia solution de co-polyaminoacide dans le DMF, de la NMM (7,6 g, 75 mmol), la solution de AA7 puis de la ΛΖ-oxyde de 2hydroxypyridine (HOPO, 0,84 g, 7,5 mmol) sont ajoutées successivement. Le milieu réactionnel est alors refroidi à 0 °C, puis du EDC (1,44 g, 7,5 mmol) est ajouté et le milieu est remonté à température ambiante durant 2 h. Le milieu réactionnel est filtré sur filtre tissé 0,2 mm et coulé au goutte-à-goutte sur 3,5 L d'eau contenant du NaCI à 15 % massique et du HCI (pH 2) sous agitation. À la fin de l’ajout, le pH est réajusté à 2 avec une solution de HCl 37 %, et la suspension est laissée reposer une nuit, Le précipité est collecté par filtration, puis rincé par 100 mL d'eau. Le solide blanc obtenu est solubilisé dans 500 mL d'eau par ajout lent d'une solution aqueuse de NaOH 1 N jusqu'à pH 7 sous agitation, puis la solution est filtrée sur filtre 0,45 pm. La solution limpide obtenue est purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 % puis de l'eau, jusqu’à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution est filtrée sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8 °C,

Extrait sec : 21,6 mg/g

DP (estimé d'après la RMN Ψ) : 20

D'après la RMN Ψ : i ~ 0,025

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB6 est de 3369 g/moi.

HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4000 g/mol.

Exemple AB7 : Co-polyaminoacide AB7 ~ poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié par la molécule AA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3300 g/moi Co-polvaminoacide AB7-1 : acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en 10 nombre (Mn) relative 3600 g/mol et de DP 21 issu de la polymérisation du y-benzyl-Lglutamate /V-carboxyanhydride initiée par l'hexylamine et cappé à l'une de ses extrémités par un groupement acétyle [000633] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve est placé sous vide du ybenzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (Glu(OBn)-NCA, 100,0 g, 380 mmol) pendant 15 30 min puis du DMF anhydre (225 mL) est introduit. Le mélange est alors agité sous argon jusqu'à complète dissolution, refroidi à 4 °C, puis de l'hexylamine (1,78 g, 17 mmol) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 2 jours puis précipité dans du diisopropyléther (3,4 L). Le précipité est récupéré par filtration, lavé deux fois avec du diisopropyléther (225 mL) puis séché 20 pour donner un solide blanc qui est dissout dans 450 mL de THF. À cette solution sont ajoutés successivement de la DIPEA, (31 mL, 176 mmol) puis de l’anhydride acétique (17 mL, 176 mmol). Après une nuit d'agitation à température ambiante, la solution est versée lentement dans du diisopropyléther (3 L) sous agitation. Après 1 h d'agitation, le précipité est filtré, lavé deux fois avec du diisopropyléther (250 mL) puis séché sous 25 vide à 30 °C pour donner un acide poly(gamma-benzyl-L-glutamique) cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle.

[000634] À une solution du co-polyaminoacide ci-dessus (72 g) dans l'acide trifluoroacétique (TFA, 335 mL) à 4 °C est ajoutée goutte-à-goutte une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33 % dans l'acide acétique (235 mL). Le mélange est agité à 30 température ambiante pendant 3 h 30, puis coulé goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d’eau sous agitation (4 L). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (340 mL) puis avec de l'eau (340 mL).

[000635] Le solide obtenu est alors solubilisé dans de l'eau (1,5 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10N puis une solution aqueuse de soude

N. Après solubilisation, la solution est diluée par addition d'eau pour obtenir un volume final de 2,1 L, La solution est filtrée sur filtre 0,45 pm puis purifiée par ultrafiltration

100 contre une solution de NaCI 0,9 %, puis de l’eau jusqu’à ce que la conductimétrie du perrnéat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée jusqu’à obtenir un volume final de 1,8 L.

[000636] La solution aqueuse est alors acidifiée par ajout de solution d'acide chlorhydrique 37 % jusqu'à atteindre un pH de 2. Après 4 h d'agitation, le précipité obtenu est filtré, lavé avec de l’eau (330 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 3600 g/mol par rapport à un standard de polyoxyéthylène (PEG), et de degré moyen de polymérisation 21.

Co-polyaminoacide AB7 :

[000637] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB6 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA7 (1,43 g, 2,2 mmol) et au co-polyaminoacide AB7-1 (10,0 g), un acide poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA7 est obtenu.

Extrait sec : 24,3 rng/g

DP (estimé d'après la RMN ^:Η) : 21

D'après la RMN '^!H : i = 0,03

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB7 est de 3677 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3300 g/mol.

Exemple AB8 : Co-polyaminoacide AB8 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3600 g/mol acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 3800 g / mol et de degré de polymérisation 24 issu de la polymérisation du y-méthyl-L-glutamate W-carboxyanhydride initiée par l'ammoniac [000638] Par un procédé similaire à celui décrit dans la demande de brevet FR-A-2 801 226 appliqué au γ-méthyl-L-acide glutamique /V-carboxyanhydride (25,0 g, 133,6 mmol) et à une solution d'ammoniaque 0,5 N dans le dioxane (12,1 mL, 6,05 mmol), un acide poly-L-glutamique est obtenu.

101

Co-ptilyamïneacsde ABS :

[000639] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB6 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA7 (2,1 g, 3,24 mmol) et au co-polyaminoacide AB8-1 (14,3 g), un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA7 est obtenu.

Extrait sec : 25,2 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ^XH) : 24

D'après la RMN ^:1 = 0,03

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB8 est de 4099 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3600 g/mol.

Exemple AB9 : Co-polyaminoacide AB9 - poly-L-giutamate de sodium modifié par Îa molécule AA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3200 g/mol [000640] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB1 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA3 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA3 est obtenu.

Extrait sec : 14,7 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ^) : 30

D'après la RMN ’Ή : i = 0,12

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB9 est de 6192 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn ~ 3200 g/mol.

Exemple AB1O : Co-polyaminoacide AB10 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA4 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2600 g/mol [000641] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB7 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA4 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA4 est obtenu.

Extrait sec : 18,3 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ¹H) : 25

D'après la RMN : i = 0,08

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB10 est de 4870 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2600 g/mol.

102

Exemple ABU : Co-polyaminoacide ABU - poiy-L-glytamate de sodium modifié par la molécule AA5 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2700 g/mol [000642] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB6 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA5 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA5 est obtenu.

Extrait sec : 20,2 mg/g

DP (estimé d'après la RMN Ή) : 23

D'après la RMN ^:1 = 0,05

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide ABU est de 4072 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2700 g/mol,

Exemple AB12 : Co-polyaminoacide AB12 - paly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA8 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3000 g/mol [000643] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB1 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA8 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1.-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA8 est obtenu.

Extrait sec : 19,5 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ^:H) : 26

D'après la RMN ’Ή : i = 0,04

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB12 est de 4477 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3000 g/mol.

Exempte AB13 : Co-polyaminoacide ABÎ3 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA9 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3300 g/mol [000644] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB6 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA9 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1 en utilisant l'isoamylamine comme initiateur en place de l'hexylamine, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA9 est obtenu. Extrait sec : 22,3 mg/g

103

DP (estimé d'après la RMN ’H) : 35

D'après la RMN ^XH : i = 0,12

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoadde AB13 est de 7226 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3300 g/mol.

Exemple AB21 : Co-polyaminoacide AB21 - poUy-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3400 g/moi [000645] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB6 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA7 (2,44 g, 2,4 mmol) et à un acide poly-L-glutamique (10 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation du co-polyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA7 est obtenu.

Extrait sec : 22,7 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ¹H) : 22

D’après la RMN ^:1 = 0,056

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB21 est de 4090 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn ~= 3400 g/mol.

Exemple AB22 : Co-polyaminoacide AB22 ~ poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyie et modifié par la molécule AA10 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4000 g/mol [000646] Le sel de chlorhydrate de la molécule AA10 (4,56 g, 11,29 mmol) est mis en solution dans du chloroforme (60 mL) et de la triéthylamine (1,14 g, 11,29 mmol) est ajoutée. À une solution de co-polyaminoacide (10,0 g, 75,3 mmol) obtenu selon un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoadde B7-1 dans le DMF (420 mL), de la NMM (7,6 g, 75,26 mmol), puis de la HOPO (2,51 g, 22,58 mmol) sont ajoutées successivement. Le milieu réactionnel est alors refroidi à 0 °C, puis du EDC (4,33 g, 22,58 mmol) est ajouté, le milieu est agité 1 h à 0 °C puis la solution de molécule AA10 est ajoutée. Le mélange réactionnel est agité durant 2 h entre 0 °C et température ambiante. Le milieu réactionnel est filtré sur filtre tissé 0,2 mm et coulé au goutte-à-goutte sur 3,95 L d'eau contenant du NaCI à 15 % massique et du HCl (pH 2) sous agitation. À la fin de l'ajout, le pH est réajusté à 2 avec une solution de HCl 37 %, et la suspension est laissée reposer une nuit. Le précipité est collecté par filtration, puis solubilisé dans 780 mL d'eau par ajout lent d'une solution aqueuse de NaOH 1 N jusqu'à pH 7 sous agitation. Après filtration sur filtre 0,45 pm, la solution est diluée par addition d'eau puis de l'acétone est ajoutée pour obtenir une solution contenant 30 % massique d'acétone. Cette solution est filtrée sur filtre de charbon actif puis l'acétone est distillée

104 (40 °C, 100 mbar). Après filtration sur filtre 0,45 pm, le produit est purifié par ultrafiltration contre une solution aqueuse de NaCi à 0,9 %, une solution de tampon carbonate (150 mM), une solution aqueuse de NaCi à 0,9 %, une solution de tampon phosphate (150 mM), une solution aqueuse de NaCi à 0,9 %, puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution est ensuite concentrée, filtrée sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8 °C.

Extrait sec : 19,7 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ’H) : 38

D'après la RMN ^1 : i = 0,16

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB22 est de 7877 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 4000 g/mol.

Exemple AB23 : Co-poiyaminoacide AB23 - poly-L-glutamate de sodium et modifié par ia molécule ÂA10 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 760© g/mol

Cojaolya^ acide poly-L-glutamique issu de la polymérisation du ybenzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride initiée par i'hexyiamine et cappé à l'une de ses extrémités par un groupement pyroglutamate [000647] Un acide poly-L-glutamique (20,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1 est solubilisé dans le DMF à 80 °C puis maintenu à cette température. Après 24 h, le milieu réactionnel est coulé dans une solution de NaCi à 15 % et à pH 2. Après 4 h, le solide blanc est collecté par filtration, rincé à l'eau, puis séché sous vide à 30 °C.

[000648]

Co-poiyaminoamide AB23 [000649] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB22 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA10 (2,742 g, 6,79 mmol) et au co-polyaminoacide AB23-1 (9,0 g), un acide poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA1.0 est obtenu.

Extrait sec : 21,9 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ^-H) : 60

D'après la RMN ^XH : i = 0,1

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB23 est de 11034 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn - 7600 g/mol.

Exemple AB24 : Co-polyaminoacide AB24 - poly-L-glutamate de sodium et modifié par Sa molécule AA10 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4300 g/mol

105 [000650] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB23 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA10 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB23-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA10 est obtenu.

Extrait sec : 22,9 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ^XH) : 39

D'après la RMN ^:1 = 0,15

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB24 est de 7870 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) ; Mn = 4300 g/mol.

Exemple AB25 : Co-polyammoacide AB25 - poly-L-glutamate de sodium et modifié par la molécule AA10 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4200 g/mol [000651] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB23 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA10 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB23-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA10 est obtenu.

Extrait sec : 25,9 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ^XH) : 39

D'après la RMN ^:1 = 0,2

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB25 est de 8509 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) ; Mn ~ 4200 g/mol.

Exemple AB2ë : Co-polyaminoacide AB26 - poiy-L-gtutamate de sodium et modifié par Sa molécule AA10 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2700 g/mol [000652] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB23 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA10 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB23-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA10 est obtenu.

Extrait sec : 23,9 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ^XH) : 22

D'après la RMN ^]H : i = 0,21

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB26 est de 4899 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 2700 g/mol.

106

Exempte ΑΒ27 : Co-polyaminoacide AB27 - poly-L-glutamate de sodium et modifié par ia molécule AA11 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4500 g/ mol [000653] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB23 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA11 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB23-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA11 est obtenu.

Extrait sec : 26,8 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ³H) : 39

D'après la RMN ^:lH : i = 0,15

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB27 est de 8808 g/mol, HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn 4500 g/mol.

Exemple ÂB2S : Co-poiyaminoacide AB28 - poiy-L-gtetamate de sodium et modifié par Sa moîécuie AA12 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4000 g/mol [000654] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB23 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA12 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB23-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AAI2 est obtenu.

Extrait sec : 22,9 mg/g

DP (estimé d'après la RMN : 39

D'après la RMN ³Ή : i = 0,15

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB28 est de 7706 g/mol.

HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 4000 g/mol.

107

Exempte AB29 : Co-polyaminoacide AB29 - poly-L-gtetamate de sodium et modifié par la moiécuie AA13 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4000 g/mol

Co-aoIyaminœcide..AB29il : acide poly-L-glutamique issu de la polymérisation du ybenzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride initiée par l'hexylamïne [000655] Dans un réacteur à double enveloppe, du γ-benzyl-L-glutamate Ncarboxyanhydride (500 g, 1,90 mol) est solubilisé dans du DMF anhydre (1100 mL). Le mélange est alors agité jusqu'à complète dissolution, refroidi à 0 °C, puis de l'hexylamïne (6,27 mL, 47,5 mmol) est introduite rapidement. Le mélange est agité à 0 °C pendant 5 h, entre 0 °C et 20 °C pendant 7 h, puis à 20 °C pendant 7 h. Le milieu réactionnel est ensuite chauffé à 65 °C pendant 2 h, refroidi à 55 °C et du méthanol (3300 mL) est introduit en 1 h 30. Le mélange réactionnel est alors refroidi à 0 °C et laissé sous agitation pendant 18 h. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé au diisopropyléther (2 x 800 ml.) puis séché sous pression réduite à 30 °C pour donner un acide poly(gamma-benzyl-L-glutamique) (PBLG).

[000656] À une solution de PBLG (180 g) dans du /V,/V-diméthylacétamide (DMAc, 450 mL) est ajouté du Pd/AhCh (36 g) sous atmosphère d'argon. Le mélange est placé sous atmosphère d'hydrogène (10 bar) et agité à 60 °C pendant 24 h. Après refroidissement à température ambiante et filtration du catalyseur sur fritté P4 puis sur membrane Omnipore 0,2 gm PTFE hydrophile, une solution d'eau à pH 2 (2700 mL) est coulée goutte-à-goutte sur la solution de DMAc, sur une période de 45 min et sous agitation. Après 18 h sous agitation, le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec de l'eau puis séché sous pression réduite à 30 °C

Co-polyaminoacide AB29 [000657] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB23 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA13 et au copolyaminoacide AB29-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA13 est obtenu.

Extrait sec : 16,1 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ³Ή) : 40

D'après la RMN = 0,15

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB29 est de 7734 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 4000 g/mol.

108

Exemple AB30 : Co-polyaminoacide ΑΒ3Ώ - poly-L-glutamate de sodium et modifié par la molécule AA10 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4300 g/mol [000658] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB29 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA10 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB29-1 en utilisant la molécule AA10 comme initiateur en place de l'hexylamine, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA10 est obtenu. Extrait sec : 29,2 mg/g

DP (estimé d'après la RMN Ψ) : 40

D'après la RMN fri : i == 0,125

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB30 est de 7682 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 4300 g/mol.

Exemple AB31 : Co-poiyaminoacide AB30 ~ poly-L-glutamate de sodium et modifié par la molécule AA10 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de S300 g/moi [000659] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB29 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA10 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB29-1 en utilisant la molécule AA10 comme initiateur en place de l'hexylamine, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA10 est obtenu. Extrait sec : 23,1 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ¹H) ; 40

D'après la RMN fri : i = 0,175

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB31 est de 8337 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn == 6300 g/mol.

Exemple AB32 ; Co-polyaminoacide ÂB32 - poly-L-glutamate de sodium et modifié par ia molécule AA14 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4700 g/mol [000660] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB29 appliqué à la molécule AA14 et à l'acide poly-L-glutamique AB29-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA14 est obtenu. Extrait sec : 13,5 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ¹H) : 40

D'après la RMN ^:1 = 0,109

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB32 est de 8599 g/mol.

109

HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 4700 g/mol.

Co-polyaminoacides de formule VII ou Vllb

Exemple AB14 : Co-polyaminoacide AB14 - poly-L-gllutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AAI et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3400 g/mol [000661] Dans un contenant adapté sont introduits successivement le sel de chlorhydrate de la molécule AAI (2,03 g, 4,70 mmol), du chloroforme (5 mL), du tamis 10 moléculaire 4 Â (1,3 g), ainsi que de la résine échangeuse d'ion Amberlite IRN 150 (1,3 g). Après 1 h d'agitation sur rouleaux, le milieu est filtré et la résine est rincée avec du chloroforme. Le mélange est évaporé puis co-évaporé avec du toluène. Le résidu est solubilisé dans du DMF anhydre (30 mL) pour être utilisé directement dans la réaction de polymérisation.

[000662] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate Λ/carboxyanhydride (25,59 g, 97,2 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (140 mL) est introduit. Le mélange est agité sous argon jusqu'à solubilisation complète, refroidi à 4 °C, puis la solution de molécule AAI préparée comme décrit précédemment est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 20 °C et température ambiante pendant 2 jours, puis chauffé à 65 °C pendant 2 h. Le mélange réactionnel est alors refroidi à température ambiante puis versé goutte-àgoutte dans du diisopropyléther (1,7 L) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé deux fois avec du diisopropyléther (140 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour obtenir un solide blanc. Le solide est dilué dans du TFA (160 mL), et une 25 solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33 % dans de l'acide acétique (62 mL, 354 mmol) est alors ajoutée goutte-à-goutte et à 0 °C. La solution est agitée pendant 2 h à température ambiante puis est coulée goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther/eau et sous agitation (1,9 L). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par 30 filtration, lavé successivement avec un mélange 1 : 1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (280 ml.) puis avec de l'eau (140 mL). Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (530 mL) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après solubilisation, la concentration théorique est ajustée à 20 g/L théorique par addition d'eau pour obtenir un volume final de 800 mL.

Le mélange est filtré sur filtre 0,45 pm puis est purifié par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 % puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée à

110 environ 30 g/L théorique et le pH est ajusté à 7,0. La solution aqueuse est filtrée sur 0,2 pm et conservée à 4 °C.

Extrait sec : 24,1 mg/g

DP (estimé par RMN ⁱH) = 25 donc i = 0,04

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB14 est de 3378 g/mol.

HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3400 g/mol.

Exemple AB15 : Co-poiyaminoacide AB15 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 et ayant une masse 10 molaire moyenne en nombre (Mn) 4100 g/msi [000663] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB14 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA6 (2,16 g, 3,94 mmol) et à 25,58 g (97,2 mmol) de γ-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, un polyL-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 est obtenu.

Extrait sec : 45,5 mg/g

DP (estimé par RMN '‘H) = 30 donc i == 0,033

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB15 est de 5005 g/mol.

HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4100 g/mol.

Exemple AB16 : Co-polyaminoacide AB16 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 6500 g/mol [000664] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB14 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA6 (2,39 g, 4,36 25 mmol) et à 50,0 g (189,9 mmol) de γ-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, un polyL-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 est obtenu. Extrait sec : 28,5 mg/g

DP (estimé par RMN ^:Η) = 48 donc i - 0,021

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB16 est de 7725 g/mol.

HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn - 6500 g/mol.

Exemple AB17 : Co-poiyaminoacide AB17 - poiy-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par ia moïécyie AA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3500 g/moi [000665] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB14 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA7 (2,80 g, 4,32 mmol) et à 25,0 g (94,9 mmol) de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, un polyL-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA7 est obtenu.

Extrait sec : 25,2 mg/g

DP (estimé par RMN ^ΧΗ) = 26 donc i == 0,038

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB17 est de 4500 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3500 g/mol.

Exemple AB1S : Co-polyaminoacide AB18 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 37Θ0 g/mol [000666] Un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA7 est obtenu par polymérisation du γ-méthyl /V-carboxyanhydride d'acide glutamique (25,0 g, 133,6 mmol·) en utilisant le sel chlorhydrate de la molécule AA7 (2,80 g, 4,32 mmol) comme initiateur et en effectuant une déprotection des esters méthyliques par utilisation d'une solution d'acide chlorhydrique à 37 % selon le procédé décrit dans la demande de brevet FR-A-2 801 226.

Extrait sec : 44,3 mg/g

DP (estimé par RMN ¹H) = 22 donc i = 0,045

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB18 est de 3896 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn - 3700 g/mol.

Exemple AB19 : Co-poSyaminoacide AB10 ~ poiy-L-giutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par ia molécule AA6 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 10500 g/mol [000667] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB14 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA6 (1,64 g, 2,99 mmol) et au y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (49,3 g, 187 mmol), un polyL-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par ia molécule AA6 est obtenu. Extrait sec : 23,4 mg/g

DP (estimé par RMN ^:H) - 65 donc i = 0,015

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB19 est de 10293 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 10500 g/mol.

112

Exempte AB20 : Co-polyaminoacide AB20 - poly-L-glutamate de sodiism cappê à une de ses extrémités par un groupement acétyie et modifié à une de ses extrémités par ia molécule AA6 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 10400 g/mol [000668] Dans un contenant adapté sont introduits successivement le sel de chlorhydrate de la molécule AA6 (0,545 g, 1,00 mmol), du chloroforme (10 mL), du tamis moléculaire 4 Â (3 g), ainsi que de la résine échangeuse d'ion Amberlite IR.N 150 (3 g). Après 1 h d'agitation sur rouleaux, le milieu est filtré et la résine est rincée avec du chloroforme. Le mélange est évaporé puis co-évaporé avec du toluène, Le résidu est solubilisé dans du DMF anhydre (10 mL) pour être utilisé directement dans la réaction de polymérisation.

[000669] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du γ-benzyl-L-glutamate /Vcarboxyanhydride (17.0 g, 64,6 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (30 mL) est introduit. Le mélange est agité sous argon jusqu'à solubilisation complète, refroidi à 4 °C, puis la solution de molécule AA6 préparée comme décrit précédemment est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 2 jours, puis précipité dans du diisopropyléther (0,6 L). Le précipité est récupéré par filtration, lavé deux fois avec du diisopropyléther (40 mL) puis séché pour donner un solide blanc qui est dissout dans 80 mL de THF. À cette solution sont ajoutés successivement de la DIPEA, (1,7 mL, 9,8 mmol) puis de l'anhydride acétique (0,9 mL, 9,5 mmol). Après une nuit d'agitation à température ambiante, la solution est versée lentement dans du diisopropyléther (480 mL) sur une durée de 30 min et sous agitation. Après 1 h d'agitation, le précipité est filtré, lavé deux fois avec du diisopropyléther (80 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly(gamma-benzyl-L-glutamique) cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié à l'autre de ses extrémités par la molécule AA6 sous la forme d'un solide blanc.

[000670] Le solide est dilué dans du TFA (65 mL), et une solution d’acide bromhydrique (HBr) à 33 % dans de l'acide acétique (45 mL, 257,0 mmol) est alors ajoutée goutte-à-goutte et à 4 °C. La solution est agitée pendant 2 h à température ambiante puis est coulée goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther/eau et sous agitation (780 mL). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit, Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé successivement avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (70 mL) puis avec de l’eau (70 mL). Le solide obtenu est solubilisé dans de l’eau (300 mL) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N, Après solubilisation, la concentration théorique est ajustée à 20 g/L théorique par addition d'eau pour obtenir un volume final de 440 mL.

113

Le mélange est filtré sur filtre 0,45 pm puis est purifié par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 % puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm, La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée à environ 30 g/L théorique et le pH est ajusté à 7,0. La solution aqueuse est filtrée sur 5 0,2 pm et conservée à 4 °C.

Extrait sec : 21,5 mg/g

DP (estimé par RMN ^ΧΗ) = 60 donc i = 0,017

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB20 est de 9619 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 10400 g/mol.

Exemple AB33 : Co-polyammoacide AB33 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA15 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 1800 g/mol [000671] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co15 polyaminoacide AB14 appliqué à la molécule AA15 (0,82 g, 1,34 mmol) et à 7,75 g (29,4 mmol) de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, une solution de poly-Lglutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA15 est obtenu. Extrait sec : 16,8 mg/g

DP (estimé par RMN ‘^!H) - 22 donc i = 0,045

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB33 est de 3897 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 1800 g/mol.

Exemple AB34 : Co-polyaminoacide AB34 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA4 et ayant une masse 25 molaire moyenne en nombre (Mn) de 2600 g/mol [000672] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate /Vcarboxyanhydride (70,9 g, 269,3 mmol) est solubilisé dans du DMF anhydre (125 mL).

Le mélange est refroidi à 4 °C, puis une solution de molécule AA4 sous forme d'amine neutre (6,80 g, 12,23 mmol) dans le DMF (35 mL) est introduite rapidement. Le mélange 30 est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 18 h, puis chauffé à 65 °C pendant 2 h. Le milieu réactionnel est alors refroidi à température ambiante et versé goutte-à-goutte dans du diisopropyléther (2,4 L) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec du diisopropyléther (2 x 125 mL) puis séché sous pression réduite à 30 °C pour donner un solide blanc. Le solide est solubilisé dans du 35 /V,/V-diméthylacétamide (DMAc, 150 mL) puis du Pd/ADOs (6 g) est ajouté sous atmosphère d'argon. Le mélange est placé sous atmosphère d'hydrogène (10 bar) et agité à 60 °C pendant 24 h. Après refroidissement à température ambiante et filtration du catalyseur sur fritté P4 puis sur membrane Omnipore 0,2 pm PTFE hydrophile, une

114 solution d'eau à pH 2 (900 mL) est coulée goutte-à-goutte sur la solution de DMAc, sur une période de 45 min et sous agitation. Après 18 h sous agitation, le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec de l'eau puis séché sous pression réduite à 30 °C. Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (1,25 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 1 N. Le pH est ensuite ajusté à pH 12 et la solution est maintenue sous agitation pendant 1 h. Après neutralisation à pH 7, la solution est filtrée sur 0,2 pm, diluée avec de l'éthanol afin d'obtenir une solution contenant 30 % massique d'éthanol, puis filtrée sur filtre de charbon actif (3M R53SLP). La solution obtenue est filtrée sur 0,45 pm et purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 % puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/crn. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée à environ 3G g/L théorique et le pH est ajusté à 7. La solution aqueuse est filtrée sur 0,2 pm et conservée à 4 °C. Extrait sec : 38,1 mg/g

DP (estimé par RMN ¹H) = 23 donc i = 0,043

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB34 est de 3991 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn == 2600 g/mol.

Exemple AB35 : Co-polyaminoacide AB35 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par Sa moiécuie AA14 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mrs) de 2S00 g/mol [000673] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB34 appliqué à la molécule AA14 (0,4 g, 0,65 mmol) en solution dans le chloroforme (6,5 mL) et à 3,79 g (14,4 mmol) de y-benzyl-L-glutamate Ncarboxyanhydride en solution dans le DMF (6,5 mL), et en omettant l’étape de filtration sur charbon actif, une solution de poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA14 est obtenu.Extrait sec : 21,0 mg/g

DP (estimé par RMN *Η) = 22 donc i = 0,045

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB35 est de 3896 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 2600 g/mol.

Exemple AB36 : Co-polyaminoacide AB38 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA16 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2800 g/m©ï [000674] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB34 appliqué à la molécule AA16 (3,28 g, 4,67 mmol) et à 27,02 g (102,6 mmol) de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, une solution de poly-Lglutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA16 est obtenu. Extrait sec : 23,9 mg/g

115

DP (estimé par RMN ’Ή) = 22 donc i == 0,045

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB36 est de 3987 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 2800 g/rnol.

Exemple ÂB37 : Co-polyaminoacide AB37 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par ia molécule AA17 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2800 g/mol

Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB34 appliqué à la molécule AA17 (4,50 g, 9,73 mmol) et à 56,33 g (214,0 mmol) de ybenzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, une solution de poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA17 est obtenu.

Extrait sec : 26,8 mg/g

DP (estimé par RMN ⁱH) = 24 donc i = 0,042

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB37 est de 4049 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 2800 g/mol.

Partie B:

BB : synthèse des des composés intermédiaires hydrophobes Hy permettant d'obtenir les radicaux -Hy dans lesquelles p = 2 [000675] Les composés intermédiaires hydrophobes sont représentés dans le tableau suivant par la molécule hydrophobe correspondante avant greffage sur le copolyaminoacjde....

H.

O

116

117

Tableau Id : Liste des composés intermédiaires hydrophobes synthétisées selon l'invention.

Part BA : Synthèse des composés intermédiaires hydrophobes dans lesquelles p = 2

Exempte BAI : molécule BAI

Moléeule B1 · Produit obtenu par la réaction entre l'acide décanoïque et la L-proline.

[000676] À une solution d'acide décanoïque (14,28 g, 82,91 mmol) dans le THF (520 mL) à 0 °C sont ajoutés successivement du dicyclohexyle carbodiimide (DCC) (16,29 g, 10 78,96 mmol) et du /V-hydroxysuccinimide (NHS) (9,09 g, 78,96 mmol). Après 60 h

118 d'agitation à température ambiante, le milieu est refroidi à 0 °C pendant 20 min, filtré sur fritté. De la L-proline (10 g, 86,86 mmol), de la diisopropyléthylamine (DIPEA) (68,8 mL) et de l’eau (60 mL) sont ajoutés au filtrat. Après 24 h d’agitation à température ambiante, le milieu est dilué avec de l'eau (300 mL). La phase aqueuse est lavée avec de l'acétate d'éthyle (2 x 250 mL), acidifiée jusqu'à pH ~1 avec une solution aqueuse d'HCI 1 N puis extraite avec du dichlorométhane (3 x 150 mL). Les phases organiques combinées sont séchées sur NazSCU, filtrées, concentrées sous vide et le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle).

Rendement : 14,6 g (69 %)

RMN (CDCh, ppm) : 0,87 (3H) ; 1,26 (12H) ; 1,65 (2H) ; 2,02 (3H) 2,34 (2H) ; 2,41 (1H) ; 3,48 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,58 (1H).

LC/MS (ESI) : 270,2; (calculé ([M + H]⁺) : 270,4).

Molécule B2 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule B1 et la L-lysine.

[000677] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B1 appliqué à la molécule Bl. (14,57 g, 54,07 mmol) et à la L-lysine (4,15 g, 28,39 mmol), une huile jaune est obtenue.

Rendement : 16,4 g (93 %)

RMN ‘‘H (CDCh, ppm) : 0,88 (6H) : 1,26 (24H) ; 1,35-1,65 (8H) ; 1,85-2,35 (12H) ;

2,53 (0,2H) ; 2,90 (0,8H) ; 3,45-3,75 (5H) ; 4,50-4,70 (3H) ; 7,82 (1H).

LC/MS (ESI) : 649,6; (calculé ([M+H]+) : 649,9).

Molecule B3 : Produit obtenu par réaction entre la molécule B2 et la N-Bocéthylènediamine.

[000678] À une solution de molécule B2 (16,4 g, 25,27 mmol) dans le THF (170 mL) sont ajoutés de la DIPEA (8,80 mL) et du 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-l,1,3,3tétraméthyluronium tétrafluoroborate (TBTU, 8,52 g, 26,54 mmol) à température ambiante. Après 30 min d'agitation, de la BocEDA (4,45 g, 27,8 rnmol) est ajoutée. Après agitation à température ambiante pendant 2 h, le solvant est évaporé sous pression réduite et le résidu est dilué avec de l'acétate d'éthyle (400 mL). La phase organique est lavée avec de l'eau (250 mL), une solution aqueuse saturée de NaHCCH (250 ml), une solution aqueuse de 1 N HCl (250 mL), une solution aqueuse saturée en NaCI (250 mL) et est séchée sur NazSCu. Après filtration et concentration sous vide, le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (acétate d'éthyle, méthanol) pour donner une huile incolore.

Rendement : 12,8 g (64 %)

119

RMN ^JH (CDCh, ppm) : 0,87 (6H) ; 1,25-1,60 (42H) ; 1,80-2,05 (4H) ; 2,15-2,45 (9H) ; 3,10-3,75 (10H) ; 4,30 (1H) ; 4,50 (2H) ; 5,50 (0,6H) ; 5,89 (0,2H) ; 6,15 (0,2H) ; 7,03 (1H) ; 7,47 (1H).

LC/MS (ESI) : 791,8; (calculé ([M+H]⁺) : 792,1).

Molécule BAI [000679] À une solution de la molécule B3 (12,78 g, 16,1.5 mmol) dans le dichlorométhane (110 mL) à 5 °C est ajoutée une solution de HCl 4 N dans le dioxane (20.2 mL). Après 20 h d'agitation à 5 °C, le milieu est concentré sous vide. Le résidu obtenu est dissout dans le méthanol et évaporé sous vide, cette opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule BAI sous forme de sel de chlorhydrate. Rendement : 11,4 g (97 %)

RMN (DMSO-de, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,25-1,50 (33H) ; 1,57 (1H) ; 1,70-2,40 (12H) ; 2,82 (2H) ; 3,00 (2H) ; 3,25-3,70 (6H) ; 4,05-4,50 (3H) ; 7,75-8,45 (6H).

LC/MS (ESI) : 691,6 ; (calculé ([M-i-H]⁺) : 692,0).

Exemple BA2 : molécule BÂ2

Molécule B4 t Produit obtenu par la réaction entre l'acide Iaurique et la L-proline.

[000680] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B1 appliqué à l'acide Iaurique (31,83 g, 157,9 mmol) et à la L-proline (20 g, 173,7 mmol), une huile jaune est obtenue.

Rendement : 34,3 g (73 %)

RMN '^!H (CDCh, ppm) : 0,87 (3H) ; 1,26 (16H) ; 1,70 (2H) ; 1,90-2,10 (3H) ; 2,35 (2H) ; 2,49 (1H) ; 3,48 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,60 (1H).

LC/MS (ESI) : 298,2 ; (calculé f[M+H]⁺) : 298,4).

Molécule B5 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule B4 et la L-lysine.

[000681] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B1 appliqué à la molécule B4 (33,72 g, 113,36 mmol) et à la L-lysine (8,70 g, 59,51 mmol), un solide blanc est obtenu.

Rendement : 26,2 g (66 %)

RMN ’H (CDCh, ppm) : 0,88 (6H) ; 1,26 (32H) ; 1,35-1,65 (8H) ; 1,85-2,35 (15H) ;

2,87 (1H) ; 3,40-3,75 (5H) ; 4,50-4,75 (3H) ; 7,87 (1H).

LC/MS (ESI) : 705,6 ; (calculé ([M + H]⁺) : 706,0).

120

Molécule Βΰ : produit obtenu par réaction entre la N-Boc-éthylènediamine et la molécule B5.

[000682] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B3 appliqué à la molécule B5 (25,74 g, 36,51 mmol) et à la BocEDA (6,43 g, 40,16 mmol), une huile incolore est obtenue.

Rendement : 30,9 g (quantitatif)

RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (6H) ; 1,35-1,65 (50H) ; 1,85-2,35 (13H) ; 3,05-3,75 (10H) ; 4,25-4,65 (3H) ; 5,50 (0,4H) ; 5,88 (0,2H) ; 6,16 (0,2H) ; 7,08 (1H) ; 7,26 (1H) ; 7,49 (0,2H).

LC/MS (ESI) : 847,8 ; (calculé ([M + H]⁺) : 848,2).

Moiécute BA2 [000683] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule BAI appliqué à la molécule B6 (30,9 g, 36,47 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide est dissout dans le méthanol et évaporé sous vide, cette opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule BA2 sous forme de sel de chlorhydrate après séchage sous pression réduite.

Rendement : 27,65 g (97 %)

RMN ^]H (DMSO-ds, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,10-2,40 (54H) ; 2,75-3,15 (4H) ; 3,25-3,60 (6H) ; 4,05-4,50 (3H) ; 7,50-8,50 (6H).

LC/MS (ESI) : 747,6 ; (calculé ([M + H]⁺) : 748,1).

Exempte BÂ3 : molécule BA3

MolcajJg_B7_; Produit obtenu par la réaction entre l’acide myristique et la L-proline. [000684] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B1 appliqué à l'acide myristique (18,93 g, 82,91 mmol) et à la L-proline (10 g, 86,86 mmol), une huile jaunâtre est obtenue.

Rendement : 20 g (78 %)

RMN ‘H (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,28 (20H) ; 1,70 (2H) ; 1,90-2,10 (3H) ; 2,36 (2H) ; 2,51 (1H) ; 3,47 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,61 (1H).

LC/MS (ESI) : 326,2; (calculé ([M+H]⁴) : 326,6).

Molécule BS· : Produit obtenu par la réaction entre la molécule B7 et la L-lysine [000685] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B1 appliqué à 1a molécule B7 (20,02 g, 61,5 mmol) et à la L-lysine (4,72 g, 32,29 mmol), un solide blanc est obtenu.

Rendement : 12,3 g (53 %)

121

RMN ¹H (DMSO-ds, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,26 (40H) ; 1,35-1,50 (6H) ; 1,50-2,10 (1QH) ; 2,10-2,25 (4H) ; 3,01 (2H) ; 3,31-3,55 (4H) ; 4,10-4,40 (3H) ; 7,68 (0,6H) 7,97 (1H) ; 8,27 (0,4H) ; 12,50 (1H).

LC/MS (ESI) : 761,8 ; (calculé ([M-hH]⁺) : 762,1).

Molécule B9 : Produit obtenu par la réaction entre la N-Boc-éthylènediamine et la molécule B8.

[000686] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B3 appliqué à la molécule B8 (12 g, 15,77 mmol) et à la BocEDA (3,03 g, 18,92 mmol), 10 une huile incolore est obtenue après purification par colonne chromatographique sur gel de silice (acétate d'éthyle, méthanol).

Rendement : 12,5 g (88 %)

RMN '^!H (DMSO-ds, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,20-1,55 (55H) ; 1,50-2,25 (14H) ; 2,95-3,10 (6H) ; 3,31-3,55 (4H) ; 4,10-4,40 (3H) ; 6,74 (1H) ; 7,60-8,25 (3H).

LC/MS (ESI) : 904,1 ; (calculé ([M + H]⁺) : 904,3).

Moiécuie BÂ3 [000687] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule

BAI appliqué à la molécule B9 (12,5 g, 13,84 mmol), le résidu obtenu après 20 concentration sous vide est dissout dans le méthanol et évaporé sous vide, cette opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule BA3 sous forme de sel de chlorhydrate après séchage sous pression réduite.

Rendement : 9,2 g (79 %)

RMN ^XH (DMSO-ds, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,10-1,65 (48H) ; 1,70-2,35 (12H) ; 2,85 (2H) ; 25 3,01 (2H) ; 3,25-3,65 (6H) ; 4,10-4,50 (3H) ; 7,70-8,40 (6H).

LC/MS (ESI) : 803,9 ; (calculé ([M + H]+) : 804,2).

Exempte BA4 : molécule 8A4

Molécule BIP : Produit obtenu par la réaction entre la molécule B8 et le Boc-l-amino30 4,7,10-trioxa-13-tridécane amine.

[000688] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B3 appliqué à la molécule B8 (29,80 g, 39,15 mmol) et au Boc-l-amino-4,7,10-trioxa13-tridécane amine (15,05 g, 46,96 mmol), une huile épaisse incolore est obtenue. Rendement : 25,3 g (61 %)

RMN ^JH (DMSO-d_6f ppm) : 0,85 (6H) ; 1,25-2,35 (75H) ; 2,85-3,20 (6H) ; 3,25-3,65 (16H) ; 4,10-4,45 (3H) ; 6,38 (0,lH) ; 6,72 (0,9H) ; 7,50-8,25 (3H).

LC/MS (ESI) : 1064,2 ; (calculé ([M+H]⁺) : 1064,5).

122

Molécide BA4 [000689] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule BAI appliqué à la molécule B10 (25,3 g, 23,8 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide est dissout dans le méthanol et évaporé sous vide, cette opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule BA4 sous forme de sel de chlorhydrate après séchage sous pression réduite.

Rendement : 20,02 g (84 %)

RMN Ψ (DMSO-ds, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,15-2,35 (66H) ; 2,80-3,20 (6H) ; 3,30-3,65 (16H) ; 4,10-4,45 (3H) ; 7,55-8,60 (6H).

LC/MS (ESI) : 964,9 (calculé ([M+H]⁺) : 964,6).

Exemple BAS : molécule BAS

MoJécj.!je_Bllj. Produit obtenu par réaction entre la molécule Al et la L-Lysine [000690] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B1 appliqué à la molécule Al (19,10 g, 54,02 mmol) et à la L-lysine (4,15 g, 28,36 mmol), un résidu huileux est obtenu après concentration du milieu réactionnel sous pression réduite. Ce résidu est dilué dans de l'eau (150 mL), lavé à l'acétate d'éthyle (2 x 75 mL) puis la phase aqueuse est acidifiée jusqu'à pH 1 par addition lente de HCl 6 N. Le produit est extrait 3 fois au dichlorométhane, la phase organique est séchée sur Na₂SO« puis filtrée et concentrée sous pression réduite pour donner 11,2 g de résidu huileux jaune. Parallèlement, la phase organique d'acétate d'éthyle précédente est lavée avec une solution aqueuse de HCl 2 N (2 x 75 mL), une solution aqueuse saturée en NaCI (75 mL), séchée sur NazSOa, filtrée et concentrée pour donner 10,2 g de résidu huileux jaune. Un solide blanc est obtenu après recristaliisation de chacun de ces résidus dans l'acétone.

Rendement : 11,83 g (54 %)

RMN ‘H (CDCh, ppm) : 0,87 (6H) ; 1,06-2,44 (70H) ; 2,78-2,96 (IH) ; 3,35-3,75 (5H) ; 4,28-4,43 (0,lH) ; 4,43-4,52 (0,2H) ; 4,52-4,61 (1,8H) ; 4,61-4,75 (0,9H) ; 7,748,02 (2H).

LC/MS (ESI) : 818,0 ; (calculé ([M+H]⁺] : 818,7).

Molécule B12 : Produit obtenu par couplage entre la molécule Bll et la N-Bocéthylènediarnine [000691] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B3 appliqué à la molécule Bll (18,00 g, 22,02 mmol) en solution dans le THF et à la BocEDA (4,23 g, 26,43 mmol), un solide blanc est obtenu après recristaliisation deux fois dans l'acétonitrile.

Rendement : 17,5 g (83 %)

123

RMN ¹H (DMS0-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,15-2,29 (79H) ; 2,92-3,12 (6H) ; 3,30-3,59 (4M) ; 4,06-4,13 (0,65H) ; 4,16-4,29 (2H) ; 4,38-4,42 (0,35H) ; 6,71-6,76 (1H) ; 7,607,69 (1,3H) ; 7,76-7,81 (0,65H) ; 7,93-7,97 (0,35H) ; 8,00-8,04 (0,35H) ; 8,10-8,17 (0,35H).

LC/MS (ESI) : 960,4 ; (calculé ([M+H]⁺) : 960,8).

Molécule BAS [000692] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule BAI appliqué à la molécule B12 (24,4 g, 25,43 mmol), le résidu obtenu après 10 concentration sous vide est solubilisé dans du dichlorométhane (150 mL), la phase organique est lavée 2 fois avec une solution aqueuse de soude 2 N (90 mL). De l’acétonîtrile (120 mL) est ajouté et le dichlorométhane est éliminé par concentration sous pression réduite. Le milieu est ensuite laissé au repos pendant 72 h et un solide blanc est obtenu après filtration et rinçage à l'acétonîtrile puis séchage sous pression 15 réduite. Cette opération est répétée 4 fois.

Rendement : 14,28 g (65 %)

RMN (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,06-2,32 (70H) ; 2,53-2,63 (2H) ; 2,89-3,61 (10H) ; 4,04-4,43 (3H) ; 7,55-7,62 (0,65H) ; 7,65-7,72 (0,65H) ; 7,80 (0,65H) ; 7,91 (0,35H) ; 8,03 (0,35H) ; 8,14-8,23 (0,35H).

LC/MS (ESI) : 860,0 ; (calculé ([M+H]⁺) : 860,8).

Exemple BA6 : molécule BAS

Molécule B13 : Produit obtenu par la réaction entre le /V-(fert-butoxycarbonyl)-l,6diaminohexane et la molécule B8.

[000693] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule

B3 appliqué à la molécule 88 (10 g, 13,14 mmol) et au /V-(tert~butoxycarbonyl)-l,6diaminohexane (3,41 g, 15,77 mmol) dans le dichlorométhane, un solide blanc est obtenu après recristallisation dans l'acétonîtrile.

Rendement : 10,7 g (85 %)

RMN ^ΤΗ (CDCh, ppm) : 0,88 (6H) ; 1,17-2,40 (79H) ; 3,00-3,71 (10H) ; 4,26-4,58 (3H) ; 4,67 (1H) ; 6,74 (1H) ; 7,34-7,49 (2H),

LC/MS (ESI) : 959,9 ; (calculé ([M + H]⁺) : 959,8).

Molécule BAS [000694] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule

BAI appliqué à la molécule B13 (10,5 g, 10,94 mmol), une solution aqueuse de NaOH 2 N est ajoutée goutte-à-goutte au milieu réactionnel refroidi à 0 °C. La phase aqueuse est extraite au dichlorométhane puis ia phase organique est lavée 3 fois avec une

124 solution aqueuse de NaCI 5 %. Après séchage sur NazSOa, la phase organique est filtrée, concentrée sous vide et le résidu est recristallisé dans l'acétonitrile.

Rendement : 5,4 g (58 %)

RMN '^!H (CDCh, ppm) : 0,88 (6H) ; 1,19-2,40 (72H) ; 2,67 (2H) ; 3,03-3,70 (8H) ;

4,26-4,57 (3H) ; 6,71 (1H) ; 7,39-7,49 (2H).

LC/MS (ESI) : 859,8 ; (calculé ([M + H]⁺) : 859,7).

Exemple BA7 : molécule BA7

Molécule B14 : Produit obtenu par couplage entre la molécule B7 et l'acide 2,310 diaminopropionique [000695] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B1 appliqué à la molécule B7 (80,00 g, 245,78 mmol) et au dichlorhydrate de l'acide 2,3-diaminopropionique (22,84 g, 129,04 mmol), un solide blanc est obtenu après recristallisation dans l'acétonitrile.

Rendement : 69 g (78 %)

RMN (DMSO-d6, ppm) : 0,86 (6H) ; 1,08-1,38 (40H) ; 1,40-1,55 (4H) ; 1,68-2,30 (12H) ; 3,16-3,66 (6H) ; 4,20-4,39 (3H) ; 7,67-8,31 (2H) ; 12,70 (1H).

LC/MS (ESI) : 719,4 ; 741,5 ; (calculé ([M+H]⁺) : 719,6 ; ([M+Nap) : 741,6).

Molécule.......B15.....: Produit obtenu par couplage entre la molécule B14 et la N-Bocéthylènediamine [000696] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B3 appliqué à la molécule B14 (32,00 g, 44,50 mmol) en solution dans le dichlorométhane et à la BocEDA (8,56 g, 53,40 mmol), une huile incolore est obtenue 25 après purification par chromatographie sur gel de silice (acétate d'éthyle, méthanol).

Rendement : 24,5 g (64 %)

RMN ¹H (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,16-2,42 (65H) ; 2,89-3,14 (4H) ; 3,17-3,66 (6H) ; 4,11-4,43 (3H) ; 6,77 (1H) ; 7,38-8,23 (3H).

LC/MS (ESI) : 861,7 ; (calculé ([M + H]⁺) : 861,7).

Molécule BA7 [000697] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule BAI appliqué à la molécule B15 (24,50 g, 28,45 mmol), le milieu réactionnel est concentré sous pression réduite, le résidu est solubilisé dans le dichlorométhane, la 35 phase organique est lavée par une solution aqueuse de NaOH 2 N), séchée sur Na?.SO4, filtrée et concentrée sous pression réduite. Un solide blanc est obtenu après recristallisation dans l'acétonitrile.

Rendement : 19,7 g (91 %)

125

RMN Ή (DMS0-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,10-2,40 (58H) ; 2,51-2,62 (2H) ; 2,90-3,16 (2H) ; 3,16-3,67 (6H) ; 4,04-4,47 (3H) ; 7,33-8,27 (3H).

LC/MS (ESI) : 761,5 ; (calculé ([M+H]⁺) : 761,6).

&B.:_SYntbèse desi.copDly.aniinoacjdi^.

} N° l cb-PÔL¥AMINOACIDES''PORTÉ'üRS~rë^HÂSGËS~CÂRBÔX¥LÂTËS^_ËT^_j

Ri - H ou pyroqlutamate

126

127

128

Ri = H ou pyrogj utamate

129

130

DP (m + n) ~

11ⁿ23

NH

Rl = CHa-CO-, H ou pyroglutamate

131

ί == 0,042, DP (m + η) ~ . Ν

Hy

Q

⁰ θ11 ^Η23 ^C ί I^Η23

Hy = Ο

Ri = Η ου pyrogiutamate

132

i = 0,026, DP (m + n) = 21

Ri = H ou pyrogl utamate

133

134

135

136

RI- CH3-CO-, H ou pyroglutamate

137

Tableau le : Liste des co-polyaminoacides synthétisés selon l'invention

138

Co-poiyaminoacides de formule VÏI ou Vllb

BB14

BB1S

R,

CO-POLYAMÏHOACIDES PORTEUR. DE CHARGES CARBOXYLATES ET DE RADICAUX HYDROPHOBES

N

139

I BB17 ί

i === 0,043, DP (m) = 23

Ri = H ou pyrogj uta mate ’ONa ’

pBBIS

i = 0,015, DP (m) = 65

Ri = H ou pyroglutamate, ........______ ______________

i = 0,025, DP (m) = 40 Rl= H ou pyroglutamate

140

BB19

i - 0,045, DP (m + n) ~ 60

O^;''^XNH '^nh''^x^ⁿ\^A._nhÀ_>0 ^c'³^

Hy - θ

Ri ~ pyroglutamate

BB20

i = 0,043, DP (m) = 23 Rl=y H ou pyrogIutamate

141

i == 0,11, DP (m) = 9

i = 0,04, DP (m) = 25 Rl = H ou pyroglutamate

142

Ί i = 0,048, DP (m) = 21 L _ [ ^{H ou} pyroglutamate j BBΜ·| -----m /C₁₃H₂₇

| i = 0,089, DP (in) = 22

Rl== H ou pyroglutamate

143

i Ri = 0

Tableau If : Liste des co-polyaminoacides synthétisés selon l'invention.

Part BB : synthèse des co-polyaminoacides

Exemple BB1 : Co-polyaminoacide BB1 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule SA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Min) de 2400 g/mol

Co-polyarninoacide BB1-1 : acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) relative 3860 g/mol issu de la polymérisation du y-benzyl-L-glutamate 10 /V-carboxyanhydride initiée par l'hexylamine [000698] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve est placé sous vide du ybenzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (90,0 g, 342 mmol) pendant 30 min, puis du DMF anhydre (465 mL) est introduit. Le mélange est alors agité sous argon jusqu'à complète dissolution, refroidi à 4 °C, puis de l'hexylamine (1,8 mL 14 mmol) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante

144 pendant 2 jours. Le milieu réactionnel est ensuite chauffé à 65 °C pendant 4 h, refroidi à température ambiante puis coulé goutte-à-goutte dans du diisopropyléther froid (6 L) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec du diisopropyléther (500 mL puis 250 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly(y-benzyl-L-glutamique) (PBLG).

[000699] À une solution de PBLG (42,1 g) dans l'acide trifluoroacétique (TFA, 325 mL) à 4 °C est ajoutée goutte-à-goutte une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33 % dans l'acide acétique (135 mL, 0,77 mol). Le mélange est agité à température ambiante pendant 2 h, puis coulé goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau sous agitation (1,6 L). Après 1 h 30 d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (200 mL).

[000700] Le solide obtenu est alors solubilisé dans de l'eau (1 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après solubilisation, la concentration théorique est ajustée à 25 g/L théorique par addition d'eau pour obtenir un volume final de 1,5 L.

[000701] La solution est filtrée sur filtre 0,45 pm puis purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 %, puis de l’eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm.

[000702] La solution aqueuse est alors acidifiée par ajout de solution d'acide chlorhydrique 37 % jusqu'à atteindre un pH de 2. Après 4 h d'agitation, le précipité obtenu est filtré puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 3860 g/mol par rapport à un standard de polyoxyethylene (PEG),

Co-polyamïnoacïde BB1 [000703] Le co-polyaminoacide BB1-1 (10,0 g) est solubilisé dans le DMF (700 mL) à 30-40 °C puis refroidi à 0 °C. Le sel de chlorhydrate de la molécule BA2 (2,95 g, 3,8 mmol) est mis en suspension dans du DMF (45 mL) et de la triéthylamine (0,39 g, 3,8 mmol) est ensuite ajoutée à cette suspension puis le mélange est légèrement chauffé sous agitation jusqu'à complète dissolution. À la solution de co-polyaminoacide à 0 °C, de la /V-méthylmorpholine (NMM, 7,6 g, 75 mmol) dans le DMF (14 mL) et du chloroformate d'éthyle (ECF, 8,1 g, 75 mmol) sont ajoutés. Après 10 min à 0 °C, la solution de molécule BA2 est ajoutée et le milieu maintenu à 30 °C durant 1 h. Le milieu réactionnel est coulé goutte-à-goutte sur 6 L d'eau contenant du NaCI à 15 % massique et du HCI (pH 2), puis laissé reposer une nuit. Le précipité est collecté par filtration, lavé par la solution de chlorure de sodium à pH 2 (1 L) et séché sous vide pendant environ 1 h. Le solide blanc obtenu est repris dans de l'eau (600 mL) et le pH est ajusté à 7 par

145 ajout lent d'une solution aqueuse de NaOH 1 N. Le volume est ajusté à 700 mL par ajout d'eau. Après filtration sur filtre 0,45 pm, la solution limpide obtenue est purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCi 0,9 % puis de l'eau, jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. Après déchargement, la solution est filtrée sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8 °C.

Extrait sec : 19,7 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ³Η) : 23

D'après la RMN ³H : i == 0,05

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB1 est de 4350 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2400 g/mol.

Exempte BB2 : co-palyaminoacide BB2 - poly-L-glutamate de sedïum modifié par la molécule BA2 et ayant line mase molaire moyenne en nombre (Mn) de 4900 g/mol [000704] Un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 4100 g/mol (5,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB1-1 est solubilisé dans le DMF (205 mL) à 30-40 °C puis maintenu à cette température. En parallèle, le sel de chlorhydrate de la molécule BA2 (1,44 g, 1,84 mmol) est mis en suspension dans du DMF (10 mL) et de la triéthylamine (0,19 g, 1,84 mmol) est ajoutée, puis le mélange est légèrement chauffé sous agitation jusqu'à complète dissolution, À la solution de co-polyaminoacide dans le DMF, de la NMM (3,7 g, 36,7 mmol), la solution de molécule BA2 puis de la /V-oxyde de 2hydroxypyridine (HOPO, 0,31 g, 2,76 mmol) sont ajoutées successivement. Le milieu réactionnel est alors refroidi à 0 °C, puis du EDC (0,53 g, 2,76 mmol) est ajouté et le milieu est remonté à température ambiante durant 3 h. Le milieu réactionnel est coulé au goutte-à-goutte sur 1,55 L d'eau contenant du NaCi à 15 % massique et du HCl (pH 2) sous agitation. A la fin de l'ajout, le pH est réajusté à 2 avec une solution de HCI 1 N, et la suspension est laissée reposer une nuit. Le précipité est collecté par filtration, puis rincé par 100 mL d'eau. Le solide blanc obtenu est solubilisé dans 200 mL d'eau par ajout lent d'une solution aqueuse de NaOH 1 N jusqu'à pH 7 sous agitation, puis la solution est filtrée sur filtre 0,45 pm. La solution limpide obtenue est. purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCi 0,9 % puis de l'eau, jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit Inférieure à 50 pS/crri, La solution obtenue est filtrée sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8 °C.

Extrait sec : 16,3 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ¹H) : 21

D’après la RMN ^:1 = 0,047

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB2 est de 3932 g/mol.

146

HPLC-SEC aqueuse (calibrant PtG) : Mn - 4900 g/mol,

Exemple BB3 : Co-pslyaminoacide BB3 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BÂ2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 6400 g/mol

Co-polyen-jinoacide . 8.B3-1acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 17500 g/mol issu de la polymérisation du y-méthyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride initiée par la L-leucinamide [000705] Un acide poly-L-glutamique de masse moyenne en nombre (Mn) 17500 g/mol relative à un standard polymétacrylate de méthyle (PMMA) est obtenu par polymérisation du γ-méthyl /V-carboxyanhydride d'acide glutamique en utilisant la Lleucinamide comme initiateur et en effectuant une déprotection des esters méthyliques par utilisation d'une solution d'acide chlorhydrique à 37 % selon le procédé décrit dans la demande de brevet FR-A-2 801 226.

[0007] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA2 (3,23 g, 4,1 mmol) et au co-polyaminoacie BB3-1 (11 g), un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 est obtenu.

Extrait sec : 27,5 mg/g

DP (estimé d’après la RMN Ψ) : 34

D'après la RMN ^:H : li == 0,049

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB3 est de 6405 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn == 6400 g/mol.

Exemple BB4 : co-polyaminoacide BB4 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 10500 g/mol [000706] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule BA2 (5 g, 6,35 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn 10800 g / mol (21,7 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 est obtenu.

Extrait sec : 28,2 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ’H) : 65

D'après la RMN : i = 0,04

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB4 est de 11721 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn =- 10500 g/mol.

147

Exemple BBS : Co-polyaminoacide BBS - poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 360© g/mol

CQjfiohwjlLnoaçlde JAsgIJ acide poly-L-glutamique de Mn 3700 g/mol issu de la polymérisation du y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride initiée par l'hexylamine et cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle [000707] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve est placé sous vide du ybenzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (100,0 g, 380 mmol) pendant 30 min puis du 10 DMF anhydre (250 mL) est introduit. Le mélange est alors agité sous argon jusqu'à complète dissolution, refroidi à 4 °C, puis de l'hexylamine (2,3 mL, 17 mmol) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 2 jours puis précipité dans du diisopropyléther (3,4 L). Le précipité est récupéré par filtration, lavé deux fois avec du diisopropyléther (225 mL) puis séché pour donner 15 un solide blanc qui est dissout dans 450 mL de THF. À cette solution sont ajoutés successivement de ia /V,/V-diisopropyléthylamine (DIPEA, 31 mL, 176 mmol) puis de l'anhydride acétique (17 mL, 176 mmol). Après une nuit d'agitation à température ambiante, la solution est versée lentement dans du diisopropyléther (3 L) sur une durée de 30 min et sous agitation. Après 1 h d'agitation, le précipité est filtré, lavé deux fois 20 avec du diisopropyléther (200 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poiy(y-benzyl-L-glutamique) cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle. [000708] À une solution du co-polyaminoacide cappé (72 g) dans l'acide trifluoroacétique (TFA, 335 mL) à 4 °C est ajoutée goutte-à-goutte une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33 % dans l'acide acétique (235 mL, 1,34 mol). Le mélange est 25 agité à température ambiante pendant 3 h 30, puis coulé goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d’eau sous agitation (4 L). Après 2 h d'agitation, ie mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (340 mL) puis avec de l'eau (340 mL). Le solide obtenu est alors solubilisé dans 30 de l'eau (1,5 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10

Npuis une solution aqueuse de soude 1 N. Après solubilisation, la concentration théorique est ajustée à 20 g/L théorique par addition d'eau pour obtenir un volume final de 2,1 L. La solution est filtrée sur filtre 0,45 pm puis purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCi 0,9 %, puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat 35 soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée jusqu'à obtenir un volume final de 1,8 L. La solution aqueuse est alors acidifiée par ajout de solution d'acide chlorhydrique 37 % jusqu'à atteindre un pH de 2. Après 4 h d'agitation, le précipité obtenu est filtré, lavé avec de l'eau (330 mL) puis séché sous

148 vide à 30 °C pour donner un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 3700 g/mol par rapport à un standard de polyoxyéthylène (PEG).

Co-polyammoadde BB5 [000709] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA2 (6,92 g, 8,8 mmol) et au co-polyaminoacide BB5-1 (30,0 g), un poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié par la molécule BA2 est obtenu. Extrait sec : 29,4 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ³Η) : 23

D'après la RMN = 0,042

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB5 est de 4302 g/mol, HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3600 g/moL

Exemple BB6 : Co-polyaminoacide BB6 - poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 41Bfî g/mol [000710] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA2 (5,8 g, 7,4 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn ~ 3800 g / mol (25 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB5-1 en utilisant l'ammoniac à la place de l'hexylamine, un poly-Lglutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié par la molécule BA2 est obtenu.

Extrait sec : 27,6 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ³H) : 24

D'après la RMN = 0,04

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB6 est de 4387 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn ------ 4100 g/mol.

Exemple BB7 ·. Co-polyaminoacide BB7 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 et ayant uns masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4200 g/mol [000711] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA2 (7,07 g, 9,0 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn ~ 3600 g / mol (30,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co

149 polyaminoacide BB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 est obtenu.

Extrait sec : 28,3 mg/g

DP (estimé d'après la RMN : 22

D'après la RMN = 0,042

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB7 est de 4039 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4200 g/mol.

Exemple BBS : œ-polyaminoacide BB8 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 5200 g/mol [000712] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA2 (0,85 g, 1,1 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn = 4100 g / mol (5,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 est obtenu.

Extrait sec : 28,6 mg/g

DP (estimé d'après la RMN : 21

D'après la RMN ¹H : i = 0,026

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB8 est de 3620 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 5200 g/mol.

Exemple BB9 : co-polyammoacïde BB9 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4700 g/mol [000713] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (3,05 g, 3,6 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn ~ 4100 g / mol (10,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA3 est obtenu.

Extrait sec : 28,6 mg/g

DP (estimé d’après la RMN ¹H) : 26

D'après la RMN = 0,05

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide B89 est de 4982 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4700 g/mol.

150

Exempte BB1O : co-polyaminoacide BB1O - poly-L-glutamate de sodium modifié par te moléeute BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4200 g/mol [000714] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co5 polyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (1,90 g, 2,3 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn = 3500 g / mol (10,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA3 est obtenu.

Extrait sec : 25,9 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ^lH) : 22

D'après la RMN = 0,029

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB10 est de 3872 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn == 4200 g/mol.

Exempte BB11 : co-polyaminoacide BB11 - poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyie et modifié par la molécule BA4 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mrs) de 3900 g/mol [000715] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co20 polyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA4 (2,21 g, 2,2 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse moyenne en nombre Mn = 3700 g / mol (10 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB5-1, un poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyie et modifié par la molécule BA4 est obtenu.

Extrait sec : 28,1 mg/g

DP (estimé d'après la RMN '^!H) : 22 D'après la RMN ^lH : i = 0,032 La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB11 est de 4118 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3900 g/mol.

Exemple BB12 ; co-polyaminoacide BB12 - poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyie et modifié par ia molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3900 g/moi [000716] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co35 polyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (1,9 g, 2,3 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse moyenne en nombre Mn = 3600 g / mol (10 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co

151 polyaminoacide BB5-1, un poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié par la molécule BA3 est obtenu.

Extrait sec : 26,7 mg/g

DP (estimé d’après ia RMN ¹H) : 23

D’après la RMN ^:1 = 0,03

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB12 est de 4145 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn - 3900 g/mol.

Exemple BB13 ; co-polyaminoacide BB13 - poly-L-glutamate de sodium modifié par Sa molécule BAI et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2SQ0 g/mol [000717] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB1 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule BAL (3,65 g, 5 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn ~ 3600 g / mol (10 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BAI est obtenu.

Extrait sec : 25,6 mg/g

DP (estimé d'après la RMN ’H) : 25

D'après la RMN : i = 0,08

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB13 est de 5253 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn - 2800 g/mol.

Exempte BB14 : co-polyaminoacide BB14 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4020 g/mol [000718] Dans un contenant adapté sont introduits successivement le sel de chlorhydrate de la molécule BA2 (2,12 g, 2,70 mmol), du chloroforme (40 mL), du tamis moléculaire 4 Â (1,5 g), ainsi que de la résine échangeuse d'ion Amberlite IRN 150 (1,5 g). Après 1 h d'agitation sur rouleaux, le milieu est filtré et la résine est rincée avec du chloroforme. Le mélange est évaporé puis co-évaporé avec du toluène. Le résidu est solubilisé dans du DMF anhydre (20 mL) pour être utilisé directement dans la réaction de polymérisation.

[000719] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du γ-benzyl-L-glutamate Ncarboxyanhydride (18 g, 68,42 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (100 mL) est introduit. Le mélange est agité sous argon jusqu'à solubilisation complète, refroidi à 4 °C, puis la solution de molécule BA2 préparée comme décrit précédemment est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et

152 température ambiante pendant 2 jours, puis chauffé à 65 °C pendant 2 h. Le mélange réactionnel est alors refroidi à température ambiante puis versé goutte-à-goutte dans du diisopropyléther (1,2 L) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé deux fois avec du diisopropyléther (100 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour obtenir un solide blanc. Le solide est dilué dans du TFA (105 mL), et une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33 % dans de l'acide acétique (38 mL, 220 mmol) est alors ajoutée goutte-à-goutte et à 0 °C. La solution est agitée pendant 2 h à température ambiante puis est coulée goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther/eau et sous agitation (600 mL), Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé successivement avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (200 mL) puis avec de l'eau (100 mL). Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (450 mL) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Le mélange est filtré sur filtre 0,45 pm puis est purifié par ultrafiltration contre une solution de NaCi 0,9 % puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm, La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée à environ 30 g/L théorique et le pH est ajusté à 7,0. La solution aqueuse est filtrée sur 0,2 pm et conservée à 4 °C.

Extrait sec : 22,3 mg/g

DP (estimé par RMN ^]H) = 29 donc i = 0,034

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB14 est de 5089 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4020 g/mol,

Exemple BB15 : co-polyaminoacide BB15 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3389 g/mol [000720] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB14 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (3,62 g, 4,32 mmol) et à 25,0 g (94,97 mmol) de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, un polyL-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 est obtenu. Extrait sec : 30,4 mg/g

DP (estimé par RMN - 24 donc i = 0,042

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB15 est de 4390 g/mol, HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn == 3389 g/mol.

Exempte BB16 : co-poSyaminoaeide B816 - poly-L-gtetamate de sodium modifié à une de ses extrémités par ia nroiécute BA4 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3300 g/mol

153 [000721] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB14 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA4 (5,70 g, 5,70 mmol) et à 29,99 g (113,9 mmol) de y-benzyl-L-giutamate /V-carboxyanhydride, un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA4 est obtenu,

Extrait sec : 32,3 mg/g

DP (estimé par RMN *Η) = 23 donc i = 0,043

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB16 est de 4399 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn 3300 g/mol.

Exemple BB17 : co-polyammoacïde BB17 - poly-L-gkrtamate de sodium modifié à une de ses extrémités par ta molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre de 10700 g/moi [000722] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB14 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (2,51 g, 3 mmol) et à 52,7 g (200 mmol) de γ-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, un poly-Lglutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 est obtenu. Extrait sec : 24,5 mg/g

DP (estimé par RMN = 65 donc i = 0,015

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB17 est de 10585 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 10700 g/mol.

Exemple SB18 : co-polyaminoacide BB18 - poiy-L-gtatamate de sodium modifié à une de ses extrémités par ia molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre de 6600 g/mol [000723] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB14 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (2,51 g, 3 mmol) et à 31,6 g (120 mmol) de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, un poly-Lglutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par ia molécule BA3 est obtenu. Extrait sec : 27,3 mg/g

DP (estimé par RMN *Η) = 40 donc i = 0,025

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB18 est de 6889 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 6600 g/mol.

Exempta BB19 ; Co-polyaminoacide BB19 - poly-L-glutamate de sodium et modifié par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 7700 g/moi

154 [000724] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB23 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule BA3 et au copolyaminoacide AB23-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA3 est obtenu.

Extrait sec : 25,3 mg/g

DP (estimé d'après la RMN : 60

D'après la RMN : i = 0,045

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB19 est de 11188 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 7700 g/mol.

Exemple BB2O : co-polyaminoacide BB20 - poîy-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BAS et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2800 g/mol [000725] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB14 appliqué à la molécule BAS sous forme d'amine libre (1,70 g, 1,98 mmol) et de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (11,46 g, 43,5 mmol), un polyL-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BAS est obtenu. Extrait sec : 20,7 mg/g

DP (estimé par RMN ¹H) = 23 donc i = 0,043

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB20 est de 4295 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2800 g/mol.

Exemple BB21 : co-polyaminoacide BB21 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BAS et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mrs) de 1100 g/mol [000726] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB14 appliqué à la molécule BA3 sous forme d'amine libre (3,814 g, 4,75 mmol) et de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (10,0 g, 38,0 mmol), un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 est obtenu.

Extrait sec : 16,1 mg/g

DP (estimé par RMN ^:H) = 9 donc i = 0,11

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB21 est de 2123 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn - 1100 g/mol.

Exemple BB22 : co-polyaminoacide BB22 ~ poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par 8a molécule BA6 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3300 g/moi

155 [000727] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB14 appliqué à la molécule BA6 sous forme d'amine libre (4,45 g, 5,18 mmol) et à 30,0 g (113,96 mmol) de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA6 est obtenu.

Extrait sec : 29,0 mg/g

DP (estimé par RMN *H) = 25 donc i = 0,04

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB22 est de 4597 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3300 g/mol.

Exemple BB23 : co-polyaminoacide BB23 ~ poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la moiécuie BA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2300 g/mol [000728] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB14 appliqué à la molécule BA7 sous forme d'amine libre (3,05 g, 4,01 mmol) et de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (22,78 g, 86,5 mmol), un polyL-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA7 est obtenu. Extrait sec : 16,9 mg/g

DP (estimé par RMN = 21 donc i = 0,048

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB23 est de 3894 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2900 g/mol.

156

Exemple BB24 : co-polyaminoacide BB24 - poly-L-glutamate de sodium modifié à l'une de ses extrémités par ia molécuie SA3 et modifié par la moiécuie BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2300 g/mol Co-polyaminoacide BB24-1 : acide poly-L-glutamique modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et cappé à l'autre extrémité par l'acide pidolique.

[000729] Dans un ballon préalablement séché à l’étuve, du γ-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (122,58 g, 466 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (220 mL) est introduit. Le mélange est agité sous argon jusqu'à solubilisation complète, refroidi à -10 °C, puis une solution de molécule BA3 sous forme d'amine libre (17.08 g, 21,3 mmol) dans le chloroforme (40 mL) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 0 °C et température ambiante pendant 2 jours, puis chauffé à 65 °C pendant 4 h. Le mélange réactionnel est alors refroidi à 25 °C puis est ajouté de l'acide pidolique (13,66 g, 105,8 mmol), du HOBt (2,35 g, 15,3 mmol) et de l'EDC (20,28 g, 105,8 mmol). Après 24 h d'agitation à 25 °C, la solution est concentrée sous vide pour éliminer le chloroforme et 50 % du DMF. Le mélange réactionnel est alors chauffé à 55 °C et 1150 mL de méthanol sont introduit en 1 h. Le mélange réactionnel est alors refroidi à 0 °C. Après 18 h, le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé trois fois avec 270 mL de diisopropyl éther puis séché sous vide à 30 °C pour obtenir un solide blanc. Le solide est dilué dans du TFA (390 mL), et une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33 % dans de l'acide acétique (271 mL, 1547 mmol) est alors ajoutée goutte-à-goutte et à 0 °C. La solution est agitée pendant 2 h à température ambiante puis est coulée goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther / eau et sous agitation (970 mL). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé successivement avec du diisopropyl éther (380 mL) puis deux fois avec de l'eau (380 mL). Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (3,6 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Le mélange est filtré sur filtre 0,45 pm puis est purifié par uitrafiItration contre une solution de NaCI 0,9 %, une solution de NaOH 0,1 N, une solution de NaCI 0,9 %, une solution de tampon phosphate (150 mM), une solution de NaCI 0,9 % puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de copolyaminoacide est ensuite concentrée à environ 30 g/L théorique, filtrée sur 0,2 pm puis acidifié à pH 2 sous agitation par addition d'une solution de HCl à 37 %. Le précipité est alors récupéré par filtration, lavé deux fois avec de l’eau puis séché sous vide à 30 °C pour obtenir un solide blanc.

157

Co-polyaminoacide BB24 [000730] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué à la molécule BA3 sous forme d’amine libre (1,206 g, 1,50 mmol) et au co-polyaminoacide BB24-1 (5,5 g, 33,4 mmol), un poly-L-glutamate de sodium modifié à l'une de ses extrémités par la molécule BA3 et modifié par la molécule BA3 est obtenu.

Extrait sec : 19,0 mg/g

DP (estimé d'après la RMN *Η) : 22

D'après la RMN ^]H : i = 0,089

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB24 est de 4826 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2300 g/mol.

Exempte BB25 : co-polyammoacide BB25 - poly-L-glutamate de sodium modifié à un de ses extrémités par la molécule BA3 et à l'autre extrémité par te molécule B8 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2000 g/mol [000731] À une solution de molécule B8 (0,946 g, 1,24 mmol) dans le DMF (8 mL) sont introduits du DCC (0,257 g, 1,24 mmol) et du NHS (0,143 g, 1,24 mmol). Après 16 h d'agitation à température ambiante, la solution est filtrée pour être utilisée directement dans la réaction suivante.

[000732] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (6,0 g, 22,8 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (14 mL) est introduit. Le mélange est alors agité sous argon jusqu'à complète dissolution, refroidi à 0 °C, puis une solution de molécule BA3 sous forme d'amine libre (0,832 g, 1,04 mmol) dans le chloroforme (2,0 mL) est introduit rapidement. Après 18 h d'agitation à 0 °C, la solution de molécule B8 préparée précédemment est additionnée. La solution est agitée entre 0 °C et température ambiante pendant 22 h puis coulée goutte-à-goutte dans du diisopropyléther (0,34 L) sous agitation. Le précipité est récupéré par filtration, lavé avec du diisopropyléther (7 fois 15 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un solide blanc. Le solide est dilué dans du TFA (23 mL), puis la solution est refroidie à 4 °C, Une solution de HBr à 33 % dans l'acide acétique (15 mL, 85,7 mmol) est alors ajoutée goutte-à-goutte. Le mélange est agité à température ambiante pendant 2 h, puis coulé goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau sous agitation (0,28 L). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé deux fois avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d’eau (24 mL) puis deux fois avec de l'eau (24 mL). Le solide obtenu est alors solubilisé dans de l'eau (0,16 L) en ajustant le pH à 12 par ajout d'une solution

158 aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après 30 min le pH est ajusté à 7 par ajout lent d'une solution aqueuse de HCI 1 N. La solution est filtrée sur filtre 0,45 pm puis purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 %, puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution obtenue est filtrée sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8°C.

Extrait sec : 18,9 mg/g

DP (estimé d'après la RMN '^!H) : 22

D'après la RMN *Η : k = 0,09

La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB25 est de 4871 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2000 g/mol.

[000733] Partie C Compositions

Exemple CA : Détermination des ratios mininimum pour solubiliser l'insuline glargine

PrMocoi<ii)oyrJa.déten:ni^^ SLaSineJMJJJ/luLMQH^2.-X [000734] À une solution mère de co-polyaminoacide à pH 7,2 ± 0,3 sont ajoutées des solutions concentrées de chlorure de zinc, chlorure de sodium, m-crésol et glycérine. 0,5 mL d'une solution d’insuline glargine à une concentration de 100 U/mL, préparée selon l'exemple C3 ou C4, est ajouté à un volume de 0,5 mL de la solution de copolyaminoacide et d'excipients pour obtenir une composition copolyaminoacide/insuline glargine 50 U/mL avec la composition souhaitée.

[000735] Suite à l'ajout de la solution de glargine un trouble apparaît. Le pH est ajusté à pH 7,1 par ajout de NaOH concentré et la solution est placée dans une étuve à 40 °C pendant 1 nuit. Après la nuit à 40 °C les échantillons sont inspectés visuellement et soumis à une mesure de diffusion statique de la lumière à un angle de 173° à l’aide d'un zetasizer (Malvern). La concentration minimale de co-polyaminoacide permettant de solubiliser l'insuline glargine est définie comme la concentration la plus basse pour laquelle le mélange co-polyaminoacide / insuline glargine à pH 7,1 ± 0,1 est visuellement limpide, ne contient pas de particules visibles et présente une intensité diffusée inférieure à 1500 kcps/s.

159

Composition	CO polyaminoacide	[zinc] (mM)	[NaCi] (mM)	Concentration de 03“ polyamincacide (mg/mL) au seuîi de soiubiiisation de glargine 50 U/mL ______________	Ratio [Hy]/[insuiine glargine] (moi/mol) au seuil de solubilisation
CAI	AB14	0,23	0	4,6	L..............Ak.............
0,98 i	10	2,5	2,5 i
CA2	AB37	0,23 0,95	0	4,25	3,8
0	2,7	2,4
0,77 i	10	2,00	1<8
CA3	AB35	0,23	0	1.5	1,3
0,23	10	1	0,9
0,42	10	0,75	0,6
CM	AB33	0,23	0	4	3,4
0,76	10	1,75	X.S
ξ CAS	AB36	0,23	0	4	3,3
0,23	10	1,25	1

Tableau 1 : Ratios minimums pour solubiliser l'insuline glargine.

[000736] L'ajout de sel seul ou en combinaison avec du zinc permet de diminuer la concentration de co-polyaminoacide requise pour solubiliiser l'insuline glargine.

Claims

REVENDICATIONS

1. Composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins :

a) de l’insuline glargine,

b) un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy, ledit co-polyaminoacide étant constitué d'unités glutamiques ou aspartiques et lesdits radicaux hydrophobes Hy étant de formule I suivante :

*—^GpR V-^-GpA GpCj ^{r a} P Formule I dans laquelle

GpR est un radical de formules II, Γ ou Π ;

_nO O

HH HH *_LL rLL

N-R-N—* _nou ·—U—r^n—»_n-_ou

GpA est un radical de formules III ou ΙΙΓ :

Ο HN-IL-A ni ou

H

A- N -·· ” nr

GpC est un radical de formule IV ;

les * indiquent les sites de rattachement des différents groupes;

- a est un entier égal à 0 ou à 1 ;

- b est un entier égal àOouàl;

p est un entier égal à 1 ou à 2 et

161 o si p est égal à 1 alors a est égal à 0 ou à 1 et GpA est un radical de formule 111' et, o si p est égal à 2 alors a est égal à 1, et GpA est un radical de formule III;

- c est un entier égal à 0 ou à 1, et si c est égal à 0 alors d est égal à 1 ou à 2;

- d est un entier égal à 0, à 1 ou à 2;

- r est un entier égal à 0, à 1 ou à 2, et o si r est égal à 0 alors le radical hydrophobe de formule I est lié au copolyaminoacide via une liaison covalente entre un carbonyl du radical hydrophobe et un atome d'azote en position N terminale du copolyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction dîme fonction amine en position N terminale du précurseur du co-poiyaminoacide et une fonction acide portée par le précurseur du radical hydrophobe , et o si r est égal à 1 ou 2 alors le radical hydrophobe de formule I est lié au copolyaminoacide :

« via une liaison covalente entre un atome d'azote du radical hydrophobe et un carbonyl du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction amine du précurseur du radical hydrophobe et une fonction acide portée par le précurseur du co-poiyaminoacide ou * via une liaison covalente entre un carbonyl du radical hydrophobe et un atome d'azote en position N terminal du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de ia réaction d'une fonction acide du précurseur du radical hydrophobe et une fonction amine en position N terminale portée par le précurseur du copolyaminoacide;

R est un radical choisi dans le groupe constitué par un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone portant une ou plusieurs fonctions -CONH2 ou un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène, un radical aikyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone portant un ou plusieurs cycles insaturés ou un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène ; plus précisément, R est un radical choisi dans ie groupe constitué par :

o un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié, comprenant, de 2 à 12 atomes de carbone si GpR est un radical de formule II ou de 1 à 11 atomes de carbone si GpR est un radical de formule ΙΓ ou II ;

162 o un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié, comprenant, de 2 à 11 atomes de carbone si GpR est un radical de formule II ou de 1 à 11 atomes de carbone si GpR est un radicai de formule Π' ou Π”, ledit radical alkyle portant une ou plusieurs fonctions -CONH?., et

5 o un radical éther ou poiyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d’oxygène ;

- A est un radical choisi dans le groupe constitué par un radical éther ou poiyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d’oxygène ou un radical alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 8 atomes

10 de carbone et éventuellement substitué par un radical issu d'un cycle saturé, insaturé ou aromatique ;

B est un radicai alkyle linéaire ou ramifié, éventuellement comprenant un noyau aromatique, comprenant de 1 à 9 atomes de carbone ;

-, Cx est un radical alkyl monovalent linéaire ou ramifié, éventuellement 15 comprenant une partie cyclique, dans lequel x indique le nombre d’atomes de carbone et :

o si p est égal à 1, x est compris entre 9 et 25 (9 < x <25) :

o si p est égal à 2, x est compris entre 9 et 15 (9 < x <15),

- le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et ie nombre d'unités

20 glutamiques ou aspartiques étant compris entre 0 < i < 0,5;

lorsque plusieurs radicaux hydrophobes sont portés par un co-polyaminoacide alors ils sont identiques ou différents ;

le degré de polymérisation DP en unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 5 et 250 ;

25 - les fonctions acides libres étant sous forme de sel de cation aikalin choisi dans le groupe constitué par Na⁺ et K⁺
2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu elle comprend en 30 outre une insuline prandiale et/ou une hormone gastrointestinaie
3. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle p ~ 1, représentée par la formule V suivante :

'-/GpR V-^-GpA^— GpC f a formule V

163

GpR, GpA, GpC, r et a tels que définis dans la revendication 1,
4. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que lesdits radicaux 5 hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle a

- 1 et p = 2, représentée par la formule VI suivante :

*-^GpR GpA—4 GpC] ^{r 2} j=_ormu|_e vj dans laquelle

GpR, GpA, GpC, r et a tels que définis dans la revendication 1.
5. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ie co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de

15 radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule VII suivante :

formule VII dans laquelle, * D représente, indépendamment, soit un groupe -CHz- (unité aspartique) 20 soit un groupe -CH2-CH2- (unité glutamique) ;

» Hy est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules ï, le', V ou VI,;

« Ri est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, le', V ou VI dans lesquelles r---0, r=l ou r~ 2, ou un radical 25 choisi dans le groupe constitué par un H, un groupe acyle linéaire en C2 à CIO, un groupe acyle ramifié en C3 à CIO, un benzyle, une unité « acide aminé » terminale et un pyroglutamate ;

164 * Rz est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I_f V ou VI, ou un radical -NR'R, R' et R identiques ou différents étant choisis dans ie groupe constitué par H, les alkyles linéaires ou ramifiés ou cycliques en C2 à CIO, le benzyle et lesdits R' et R alkyles pouvant former ensemble un ou des cycles carbonés saturés, insaturés et/ou aromatiques et/ou pouvant comporter des hétéroatomes, choisis dans le groupe constitué par O, N et S ;

* X représente un H ou une entité cationique choisie dans le groupe comprenant les cations métalliques ;

* n + m représente le degré de polymérisation DP du co-polyaminoacide, c’est-à-dire le nombre moyen d'unités monomériques par chaîne de co-polyaminoacide et 5 < n + m < 250, « ledit copolyaminoacide comprenant au moins un radical -Hy.
6. Composition selon la revendication 5, caractérisée en ce que le copolyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formules VII, dans laquelle Ri = R'i et R₂ = Rb, de formule Vila suivante :

Formule Vila dans laquelie,

- m, η, X, D et Hy tels que définis dans la revendication 4;

- R'i est un radical choisi dans le groupe constitué par un H, un groupe acyle linéaire en C2 à CIO, un groupe acyle ramifié en C3 à CIO, un benzyle, une unité « acide aminé » terminale et un pyroglutamate ;

R’? est un radical -NR'R, R' et R identiques ou différents étant choisis dans ie groupe constitué par H, les alkyles linéaires ou ramifiés ou cycliques en C2 à CIO, ie benzyls et lesdits R' et R alkyles pouvant former ensemble un ou des

165 cycles carbonés saturés, insaturés et/ou aromatiques et/ou pouvant comporter des hétéroatomes, choisis dans le groupe constitué par O_f N et S.
7. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce que le co-

5 polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule VII dans laquelle n = 0 de formule Vllb suivante :

^y Formule Vllb dans laquelle m, X, D, Ri et R?, tels que définis dans la revendication 4et au moins Ri ou

10 R? est un radical hydrophobe de formule I, V ou VL
8. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la teneur en insuline glargine dont le point isoélectrique est

15 compris entre 5,8 et 8,5 est comprise entre 40 et 500 U/ML
9. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le ratio massique entre l'insuline glargine et le copolyaminoacide, soit co-polyaminoacide /insuline basale, est compris entre 0,2 et 8,
10. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 60 mg/mL.

25
11, Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre une insuline prandiale.
12. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les proportions entre l'insuline glargine et l'insuline prandiale

166 sont en pourcentage de 25/75, 30/70, 40/50, 50/50, 60/40, 63/37, 70/30, 75/25, 80/20, 83/17 ou de 90/10
13. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre une hormone gastrointestinale.