MXPA04012300A

MXPA04012300A - Poliaminoacidos funcionalizados por alfa-tocoferol y sus aplicaciones notablemente terapeuticas.

Info

Publication number: MXPA04012300A
Application number: MXPA04012300A
Authority: MX
Inventors: Angot Stephanie
Original assignee: Flamel Tech Sa
Priority date: 2002-06-07
Filing date: 2003-06-03
Publication date: 2005-08-26
Also published as: AU2003274758A1; EP1511790A1; IL165268A0; HK1079804A1; ZA200409892B; PT1511790E; KR20050019121A; WO2003104303A1; CA2486944C; CA2486944A1; FR2840614A1; JP2005531652A; HK1079804B; US20100048735A1; EP1511790B1; SI1511790T1; CN1659214A; JP4522852B2; US7683024B2; FR2840614B1

Abstract

La presente invencion se refiere a nuevos materiales a base de poliaminoacidos biodegradables, utiles notablemente para la vectorizacion de principio(s) activos(s) (PA). La invencion tambien contempla nuevas composiciones farmaceuticas, cosmeticas, dieteticas o fitosanitarias a base de estos poliaminoacidos. El objeto de la invencion es proporcionar una nueva materia prima de polimero, susceptible de utilizarse para la vectorizacion de PA y que permite satisfacer de manera optima todas las especificaciones de las cargas: bicompatibilidad, biodegrabilidad, aptitud para transformarse facil y economicamente en particulas de vectorizacion de principios activos, estas particulas siendo apropiadas para formar suspensiones coloidales acuosas estables, asociarse facilmente con numerosos principios activos, y liberar estos principios activos in vivo. Este objeto se logra por la presente invencion que se refiere a los poliaminoacidos anfifilicos que comprenden unidades asparticas y/o unidades glutamicas, caracterizados porque al menos una parte de estas unidades son portadoras de injertos que comprenden al menos un motivo de alfa-tocoferol, (por ejemplo, poliglutamato o poliaspartato injertado por el alfa tocoferol de origen sintetico o natural.

Description

POLIAMI NOACIDOS FUNCIONALIZADOS POR ALFA-TOCOFEROL Y SUS APLICACION ES NOTABLEMENTE TERAPÉUTICAS La presente invención se refiere a nuevos materiales a base de poliaminoácidos biodegradables, útiles notablemente para la vectorizacion de principio(s) activo(s) (PA). La invención comprende también nuevas composiciones farmacéuticas, cosméticas, dietéticas o fitosanitarias a base de estos poliaminoácidos. Estas composiciones pueden ser del tipo de aquellas que permiten la vectorizacion de PA y se presentan de preferencia bajo forma de emulsiones, micelas, partículas, geles, implantes o de películas. PA considerados son, ventajosamente, los compuestos biológicamente activos y que pueden administrarse a un organismo animal o humano por vía oral, parenteral, nasal, vaginal, ocular, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intracerebral, bucal, etc. PA más particularmente pero no limitativamente considerados por la invención son las proteínas, glucoproteínas, péptidos, polisacáridos, lipopolisacáridos, oligo o polinucleótidos, y moléculas orgánicas. Pero también se puede tratar de productos cosméticos o de productos fitosanitarios, tales como herbicidas, insecticidas, funguicidas, etc. En el dominio de vectorizacion de principios activos notablemente medicamentosos, existe una necesidad en muchos casos de: protegerlos contra la degradación (hidrólisis, precipitación en sitio, digestión enzimática, etc. ) hasta que alcanzan su sitio de acción, y/o controlar su velocidad de liberación a fin de mantener un nivel constante en una duración definida, . y/o vehículo (para protegerlos) en el sitio de acción. Para estos fines, varios tipos de polímeros se han estudiado y ciertos están comercialmente disponibles. Se pueden citar, por ejemplo, los polímeros del tipo poliláctico, poliláctico-glucólico, polioxietileno-oxipropileno, poliaminoácido o aún polisacárido. Estos polímeros constituyen materias primas que permiten fabricar, por ejemplo, implantes másicos, micropartículas, nanopartículas, vesículas, micelas o geles. También estos polímeros deben adaptarse a la fabricación de tales sistemas, deben igualmente ser biocompatibles, no tóxicos, no inmunógenos, económicos, y deben poder eliminarse fácilmente del cuerpo y/o ser biodegradables. Acerca de este último aspecto, es cada vez más esencial que la biodegradación en el organismo genere productos no tóxicos. A manera de ilustración de la técnica anterior que se refiere a los polímeros empleados como materias primas para la realización de sistemas de vectorización de PA, diversas patentes o solicitudes de patente o artículos científicos se evocan a continuación. La patente US 4,652,441 describe microcápsulas de poliláctido encapsulado la hormona LH-RH. Estas microcápsulas se producen al preparar una emulsión de agua en aceite en agua y que comprende una capa interna acuosa de poliláctido, así como una capa externa acuosa (alcohol polivinílico). La liberación de PA puede hacerse en un periodo de más de 2 semanas después de la inyección subcutánea. La patente US 6, 1 53, 193 describe las composiciones a base de micelas de poli(oxietileno)-poli(oxipropileno) anfifílicas, para la vectorización de anti-cancerosos tal como la adriamicina. Akiyoshi et al., (J. Controlled Reléase 1998, 54, 313-320) describen pululantes que se vuelven hidrofóbicos por injerto de colesterol y que forman nanopartículas en el agua. Estas nanopartículas aptas para componerse de manera reversible con insulina, forman suspensiones coloidales estables. La patente US 4,351 ,337 describe copoliaminoácidos anfifílicos, a base de leucina y glutamato, utilizables bajo forma de implantes o de micropartículas para la liberación controlada de principios activos. La liberación de estos últimos puede hacerse en una duración muy larga dependiente de la velocidad de degradación del polímero. La patente US 4,888,398 describe los polímeros a base de poliglutamato o poliaspartato, y eventualmente polileucina, con grupos pendientes del tipo alquiloxicarbonilmetilo, colocados de manera aleatoria sobre la cadena de poliaminoácidos. Estos poliaminoácidos, injertados por los grupos laterales, por ejemplo, metoxicarbonilmetilo, se utilizan bajo forma de implantes biodegradables que contienen un PA de liberación prolongada. La patente US 5,590,936 describe nanopartículas obtenidas a partir de un polímero de bloque de polileucina-poliglutamato, aptas para formarse de suspensiones coloidales estables y capaces de asociarse espontáneamente con proteínas biológicamente activas sin desnaturalizarlas. Estas últimas pueden enseguida liberarse in vivo de manera controlada, sobre un periodo largo. La solicitud de patente WO 00/3061 8 describe nanopartículas obtenidas a partir de un pol ímero de bloque de poli(g lutamato de sodio) (poliglutamato de metilo, etilo, hexadecilo o dodecilo), aptas para formar las suspensiones coloidales estables y capaces de asociarse espontáneamente con las proteínas biológicamente activas sin desnaturalizarlas. Estas últimas pueden liberarse enseguida in vivo de manera controlada, en un periodo largo. Estos poliaminoácidos anfifíiicos se mod ifican por la presencia de una cadena lateral de alquilo hidrofóbico. La patente US 5,449,513 describe copolímeros de bloque anfifíiicos que comprenden un bloque de polietileno y un bloque poliaminoácido, por ejemplo poli(beta-bencil-L-aspartato). Estos pol ímeros de polioxietileno-polibencilaspartato forman micelas que son aptas para encapsular las moléculas activas hidrofóbicas tales como adriamicina o indometacina. La solicitud de patente WO 99/61512 describen polilisinas y poliornitinas funcionalizadas por un grupo hidrofóbico (ácido palmítico unido a la polilisina u ornitina y un grupo hidrofílico (polioxietileno). Estos pol ímeros, por ejemplo, la polilisina injertada de cadenas de polioxietileno y palmitoila forman, en presencia del colesterol, vesículas capaces de encapsular la doxorubicina o ADN . Es además conocido recurrir a los derivados de la vitamina E, y más precisamente alfa-tocoferol, para construir sistemas de vectorización de PA. La vitamina E natural se constituye de una mezcla de compuestos denominados tocoferoles (ver Burton et Ingold, Acc. Chem. Res. 1986, 19, 194-201 ) y en esta mezcla, el derivado de alfa-tocoferol es grandemente mayoritario. La vitamina E y ciertos de sus derivados se utilizan a la fecha como fuente de vitamina o como antioxidante en los alimentos y productos técnicos. Para sus usos corrientes, se encuentra la vitamina E bajo su forma de D-alta-tocoferol (su forma natural) o bajo su forma de D.L-alfa-tocoferol (forma racémica y sintética). Estos productos se consideran como esencialmente no tóxicas en buenas dosis más allá de las dosis terapéuticas. La estructura de alfa-tocoferol es la siguiente.

Las posiciones quirales se marcan con un asterisco. La forma natural posee las configuraciones R, R, R y la forma sintética es una mezcla en donde los carbonos quirales son independientemente R o S. Tratándose de derivados de la vitamina E utilizados en el dominio de la vectorización de principios activos, no existe, a la fecha y en el conocimiento de los inventores, ningún producto de polímero a base de alfa-tocoferol, a la excepción de polímeros del tipo polioxietileno en los cuales una extremidad se injerta por los grupos alfa-tocoferol-succinato. Además está disponible en la actualidad, PoliEtlIenoGlicol injertado de alfa-tocoferol-succinato en la punta de la cadena (vitamina E PEGilado), comercializado bajo la denominación TPGS 1000, por la sociedad Eastman Chemical, Ltd. Este producto patentado en 1954 (US 2,680,749) se utiliza a la fecha como fuente de vitamina E por vía oral. Este polímero, igual al alfa-tocoferol-succinato y alfa-tocoferol no modificado, se ha propuesto para la vectorización de principios activos. La patente US 5,869,703 describe compuestos próximos en los cuales la cadena de polioxietileno comprende en una extremidad alfa-tocoferol y en su otra extremidad un residuo (met)acrílico. Estos derivados de alfa-tocoferol se utilizan para preparar las vesículas anfifílicas (liposomas) estables, directamente empleados en sus aplicaciones cosméticas. La solicitud de patente WO 00/71 163 describe las formulaciones a base de PoliEtilenoGlicol injertado de alfa-tocoferol-succinato en la punta de la cadena (TPGS 1000) y de alfa-tocoferol para la solubilización de paclitaxel (producto anticanceroso). A la fecha, la toxicidad enlazada a la parte de polietileno no se conoce y se dice que el polietileno no se degrada in vivo. Además, este compuesto no contiene más que un solo motivo de alfa-tocoferol por cadena de polímero y tiene propiedades en solución asimilables a aquellas de los agentes tensioactivos. De todas formas, la utilización de este producto para la vectorización conducirá a las asociaciones de polímero-principio activo pocos estables. La patente EP 0 243 446 describe el uso de (hemi)succinato de alfa-tocoferol (derivado de ácido orgánico de alfa-tocoferol) para la fabricación de vesículas en combinación con una sal de amina. Estas vesículas pueden utilizarse para la encapsulacion de diversos principios activos incluyendo pequeñas moléculas, péptidos y proteínas. De manera general, se indica en esta patente que el ácido orgánico puede ser un aminoácido o un poliaminoácido. Sin embargo, ninguna precisión se proporciona a este aspecto. Solos los (hemi)succionatos de alfa-tocoferol se ejemplifican. Así, también existen numerosas soluciones técnicas en la técnica anterior, desarrolladas y propuestas para la vectorización de principios activos medicamentosos, la respuesta al ensamble de las exigencias es difícil de obtener e insatisfactoria. En este contexto, uno de los objetivos esenciales de la presente invención es proporcionar una nueva material prima de polímero, susceptible de utilizarse para la vectorización de PA y que permite satisfacer de manera óptima todas las especificaciones de las cargas: o biocompatibilidad, o biodegradabilidad, o aptitud para transformarse fácilmente y económicamente en partículas de vectorización de principios activos, o estas partículas son apropiadas: ¦ para formar suspensiones coloidales acuosas estables, ¦ asociarse fácilmente con numerosos principios activos, ¦ y liberar estos principios activos in vivo. Este objetivo, entre otros, se logra por la presente invención que se refiere a los poliaminoácidos anfifílicos que comprenden unidades aspárticas y/o de unidades glutámicas, caracterizadas porque al menos una parte de estas unidades es portadora de injertos que comprenden un motivo de alfa-tocoferol. Estos nuevos polímeros tienen una estructura biodegradable a base de poliaminoácidos portadores de cadenas laterales que comprenden alfa-tocoferol. Estos polímeros presentan propiedades de asociación y/o encapsulación sorprendentes en comparación con productos análogos y además, se degradan fácilmente en presencia de enzimas. Es del mérito del solicitante tener la idea de combina r, de manera juiciosa y ventajosa, los poliaminoácidos particulares poliAsp y/o poliGlu, biodegradables con los injertos a base de alfa-tocoferol (vitamina E) para la vectorización de PA. En el sentido de la invención, el término "poliaminoácido" cubre también los oligoaminoácidos que comprenden 2 a 20 unidades de aminoácidos que los poliaminoácidos comprendes más de 20 unidades de aminoácidos. De preferencia, los poliaminoácidos según la presente invención son los oligómeros u homopolímeros que comprenden unidades recurrentes de aminoácido glutámico o aspártico o de copolímeros que comprenden una mezcla de estos dos tipos de unidades de aminoácido, dichas unidades siendo parcialmente substituidas por los injertos que comprenden alfa-tocoferol. Las unidades consideradas en estos polímeros son aminoácidos que tienen la configuración D, L o D, L y se enlazan por sus posiciones alfa o gamma para la unidad de glutamato o glutámico y alfa o beta para la unidad aspártica o aspartato. Las unidades de aminoácido preferidas son aquellas que tienen la configuración L y un enlace de tipo alfa. De manera más preferida aún, los poliaminoácidos según la invención responden a la siguiente fórmula general (I): en la cual: R representa un H , un alquilo lineal de C2 a C10 o ramificado de C3 a C10, bencilo, una unidad de aminoácido terminal; R2 representa un H, un grupo acilo lineal en C2 a C10 o ramificado en C3 a C10, o un poliglutamato; R3 es un H o una entidad catiónica, de preferencia seleccionada del grupo que comprende: los cationes metálicos ventajosamente elegidos del sub-grupo que comprende: sodio, potasio, calcio, magnesio, - los cationes orgánicos ventajosamente elegidos del sub-grupo que comprende: . los cationes a base de amina, . los cationes a base de oligoamina, . los cationes a base de poliamina (polietilenoimina siendo particularmente preferida), • los cationes a base de aminoácido(s), ventajosamente elegidos de la clase que comprende los cationes a base de lisina o de arginina, - o los poliaminoácidos catiónicos ventajosamente elegidos del subgrupo que comprende polil is i na u oligolisina; ¦ R4 representa un enlace directo o un "espaciador" a base de 1 a 4 unidades de aminoácido; ¦ A representa independientemente un radical -CH2- (unidad aspártica) o -CH2-CH2- (unidad glutámica); ¦ n/(n+m) se define como la tasa de injerto molar y varía de 0.5 a 100% molar; ¦ n + m varía de 3 a 1000, de preferencia de 30 y 300; ¦ T representa un motivo de alfa-tocoferol. Para estos usos corrientes, se encuentra la vitamina E bajo forma de D-alfa-tocoferol (su forma natural) o bajo su forma de D.L-tocoferol (forma racémica y sintética). Estos dos productos se consideran como esencialmente no tóxicos en buenas dosis más allá de las dosis terapéuticas. En e! cuadro de la invención, estas dos formas de alfa-tocoferol son preferidas. Alfa-tocoferol es de origen natural o sintético. Según un primer modo de realización de la invención, los poliaminoácidos son de homopoíímeros de alfa-L-glutamato o de alfa-L-glutámico. Según un segundo modo de realización de la invención, los poliaminoácidos son de hompolímeros de alfa-L-aspartato o alfa-L-aspártico. Según un tercer modo de realización de la invención, los poliaminoácidos son de copolímeros de alfa-L-aspartato/alfa-L-glutamato o alfa-L-aspártico/alfa-L-glutámico. Ventajosamente, la distribución de unidades aspárticas y/o glutámicas portadoras de injertos que comprenden al menos un motivo de alfa-tocoferol es tal, que los polímeros así constituidos son aleatorios, ya sea tipo bloque, o tipo multibloque. Según otro modo de definición, los poliaminoácidos según la invención tiene una masa molar que se sitúa entre 2 000 y 100 000 g/mol, y de preferencia entre 5 000 y 40 000 g/mol. Además, es preferible que la tasa de injerto molar de alfa-tocoferol de poliaminoácidos según la invención, se comprende entre 3 y 70% y de preferencia entre 5 y 50%. De manera remarcable, los poliaminoácidos de la invención son susceptibles de utilizarse de varias maneras según la tasa de injerto. Los métodos para emplear un polímero para encapsulacion de un principio activo bajo las formas diversas visualizadas por la invención son conocidos por el experto en la materia. Para más detalles, se puede hacer referencia, por ejemplo, a cualquiera de las referencias particularmente pertinentes: "Microspheres, Microcapsules and Liposomes; vol 1. Preparation and chemical applications", Ed . R. Arshady, Citus Books 1 999. ISBN:0-95321 87-1 -6. "Sustained-Release Injectable Products" Ed. J. Señor et M. Radomsky, Interphram Press 2000, ISBN : 1 -57491 -1 01 -5. "Colloidal Drug Delivery Systems" Ed . J . Kreuter, Marcel Dekker, Inc. 1994. IBSN: 0-8247-9214-9. "Handbook of Pharmaceutical Controlled Reléase Technology" Ed. D. L. Wise, Marcel Dekker, I nc. 2000. I SBN: 0-8247-0369-3. Los poliaminoácidos son además extremadamente interesantes, de manera q ue a una tasa de injerto relativamente débil del orden de 3 a 1 0%, se forman en agua a pH 7.4 (por ejemplo, con un tampón de fosfato) de suspensiones coloidales o geles en función de la concentración de polímeros. Además, las partículas de poliaminoácidos que forman la fase dispersa de la suspensión coloidal, pueden asociarse fácilmente con los principios activos tales como proteínas, péptidos o pequeñas moléculas. El empleo preferido se aquel descrito en la solicitud de patente WO 00/3061 8 del solicitante y que consiste de dispersar el polímero en agua e incubar la solución en presencia de PA. Esta solución puede enseguida filtrarse bajo 0.2 µ?? después directamente inyectarse a un paciente. Más allá del 10% de tasa de injerto, el pol ímero puede formar micropartículas capaces de asociar o encapsular PA. En este contexto, el empleo de las micropartículas puede hacerse al co-solubilizar PA y el pol ímero en un solvente orgánico apropiado después de la mezcla precipitada en el agua. Las partículas se recuperan enseguida por filtración y pueden enseguida utilizarse para una administración por vía oral (bajo forma de cápsula, bajo forma compacta y/o cubrirse, o bien aún bajo forma dispersa en un aceite) o por vía parenteral después de la redispersión en agua. A tasas superiores a 30% de injerto, la redispersión del polímero en fase acuosa debe ser más difícil de manera que la cantidad más débil debido a las funciones de carboxilato ionizables y el polímero precipitado. En este caso, el polímero puede solubilizarse en un solvente biocompatible tal como N-metilpirrolidona o un aceite apropiado tal como Migliol® después inyectarse en intramuscular o subcutánea o en un tumor. La difusión del solvente o del aceite conduce a la precipitación de polímero sobre el sitio de inyección en forma de un depósito. Estos depósitos aseguran enseguida una liberación controlada por difusión y/o por erosión y/o por degradación hidrolítica o enzimática del polímero. De manera general, los polímeros de la invención, bajo forma neutra o ionizada, son utilizables solos o en una composición líquida, sólida o gel y en un medio acuoso u orgánico. Conviene comprender que el polímero a base de poliaminoácidos contienen las funciones carboxílicas que son ya sea neutras (forma COOH), ya sea inonízadas según el pH y la composición. Por esta razón, la solubilidad en una fase acuosa es directamente función de la tasa de COOH libre (no injertada por la vitamina E) y pH. En solución acuosa, el contra-catión puede ser un catión metálico tal como sodio, calcio o magnesio, o un catión orgánico tal como trietanoiamina, tris(hidroximet¡l)-am¡nometano o un polímero tal como polietilenoimina. Los polímeros de la invención se obtienen por los métodos conocidos por ei experto en la materia. Los poliaminoácidos pueden obtenerse al menos de dos maneras: · injerto de alfa-tocoferol en un poliaminoácido, o . polimerización de derivados NCA de alfa-tocoferol seguida de una hidrólisis selectiva. En el primer caso, se prepara por ejemplo, un poliaminoácido, homopoliglutamato, homopoliaspartato o un copolímero de glutamato/aspartato, bloque, multibloque o aleatorio según los métodos clásicos. Para la obtención de poliaminoácidos de tipo alfa, la técnica más corriente se basa en la polimerización de anhídridos de N-carboxi-aminoácidos (NCA), descritos, por ejemplo, en el artículos "Biopolymers, 1976, 1 5, 1869 y en la abertura de H.R. Kricheldorf "alpha-Aminoacid-N-carboxi Anhydride and related Heterocycles" Springer Verlag (1987). Los derivados de NCA son de preferencia los derivados NCA-O-Me, NCA-O-Et o NCA-O-Bz (Me=metilo, Et=etilo y Bz=bencilo). Los polímeros son enseguida hidrolizados en las condiciones apropiadas para obtener el polímero bajo su forma acida. Estos métodos se inspiran de la descripción proporcionada en la patente FR 2 801 226 del solicitante. Un cierto número de polímeros utilizables según la invención, por ejemplo, tipo poli(alfa-L-aspártico), poli(alfa-L-glutámico), poli(alfa-D-glutámico) y poli(gamma-L-gluutámico) de masas variables son disponibles comercialmente. El poliaspártico del tipo alfa-beta se obtiene por condensación del ácido aspártico (para obtener una polisuccinimida) seguida de una hidról isis básica (ver Tomida et al., Polymer 1 997, 38, 4733-36). El acoplamiento de alfa-tocoferol con una función ácida se realiza fácilmente por reacción del poliaminoácido con la vitamina E en presencia de una carbodiimida como agente de acoplamiento y de preferencia , un catalizador tal como 4-d imetilaminopíridina y en un solvente apropiado tal como dimetilformamida (DMF), N-metil pirrolidona (N MP) o dimetilsulfóxido (D MSO). La carbodiimida es por ejemplo, diciclohexilcarbodiimida o d iisopropilcarbodiimida. La tasa de injerto se controla q uímicamente por estoq uiométria de constituyentes y reactivos o los tiempos de reacción. En el segundo caso, se sintetiza un derivado de NCA de alfa-tocoferol de la siguiente estructura. La síntesis es análoga a aquella descrita para N-carboxianh ídrido de estearil-glutamato por Poché eí al., Macromolecules 1 995, 28:6745-53.

El derivado de NCA de alfa-tocoferol-glutamato se copolimeriza enseguida con por ejemplo NCA de bencil-glutamato y para obtener las funciones de giutamato o giutámico, se realiza una reacción de hidrólisis selectiva de funciones de bencilos en una mezcla de ácido trifluoroacético y ácido bromohídrico a temperatura ambiente. Conviene observar que esta segunda vía de síntesis permite realizar fácilmente los copolímeros aleatorios, bloques o multibloques simplemente al modificar el orden de adición de los monómeros. El acoplamiento de la vitamina E a través de un espaciador constituido de 1 a 4 aminoácidos puede realizarse por reacciones sucesivas de la vitamina E con los aminoácidos, protegidos de manera apropiada, después desprotegidos para tener una función de amina injertable sobre el polímero o por reacción con un oligopéptido. Por ejemplo, la síntesis de un alfa-tocoferol con un motivo de leucina se realiza con una método general bien conocido del experto en la materia y según el siguiente esquema. el polímero se hace a través de una función de éster en el caso de la presencia de un espaciador a base de aminoácido(s), se hace a través de una función amida. Como para la realización de un enlace de éster, enlace de amida puede hacerse de la misma manera al utilizar un agente de acoplamiento clásico tal como una dialquil-carbodiimida.

Según una variante de la invención, los poliaminoácidos a los que se refiere, no solamente son portadores de injertos de a-tocoferol sino que también, por molécula, de al menos un injerto del tipo polialquilen glicol unido a una unidad de giutamato y/o aspartato y de preferencia de la siguiente fórmula (I I).

(H) en la cual R'4 representa un enlace directo o un "espaciador" a base de 1 a 4 unidades de aminoácido; X es un heteroátomo elegido del grupo que comprende oxígeno, nitrógeno o azufre; R5 y R6 representan independientemente un H, un alquilo lineal en C1 a C4. n varía de 3 a 1000. De preferencia, polialquilenoglicol es un polietilenglicol. Siguiendo otra característica preferida de la invención, el porcentaje molar de injerto de polialquilenglicol varía de 1 a 30%. El injerto de estos grupos laterales pendientes (I I) se efectúa de manera conocida en sí y según las técnicas del experto en la materia, por ejemplo, por formación de enlaces de amida, éster o tioéster con carboxilos de monómeros de glutamatos y/o aspartatos. Estas técnicas pueden notablemente utilizarse para el injerto de alfa-tocoferol sobre una estructura de poliaminoácido, dichas técnicas siendo descritas en la presente solicitud. Según otro de sus aspectos, la invención comprende una composición farmacéutica , cosmética, dietética o fitosanitaria q ue comprende al menos uno de los poliaminoácidos definidos anteriormente. Según una declinación ventajosa de la invención, esta composición comprende, además de alfa-tocoferol, al menos un principio activo, que puede ser terapéutico, cosmético, d ietético o fitosanitario. De preferencia, el principio activo es una proteína, glucoproteína, polisacárido, liposacárido, oligonucleótido, polinucleótido o un peptido. De manera más preferentemente aún, el principio activo es una "pequeña molécula" orgánica, hidrofóbica , hidrof ílica o anfifílica. Por "pequeña molécula" se designa notablemente según la presente exposición , las moléculas no proteínicas. Esta composición puede estar bajo forma de nanopartículas, micropartículas, soluciones, emulsiones, suspensiones, geles, micelas, implantes, polvos o películas. Sig uiendo una de sus formas particularmente preferidas, la composición , cargada o no de principio(s) activo(s), es una suspensión coloidal estable de nanopartículas y/o micropartículas y/o micelas de poliaminoácidos, en un fase acuosa. La composición según la invención, cuando es farmacéutica, puede administrarse por vía oral, parenteral, nasal, vaginal, ocular, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intracerebral o bucal. Es Igualmente contemplable que la composición sea bajo forma de solución en un solvente biocompatible, susceptible de inyectarse subcutánea, intramuscularmente o en un tumor. Según otra variante, la composición según la invención se formula de tal manera que sea inyectable y que sea apta para formar un depósito sobre el sitio de inyección. La i nvención también comprende las compos iciones q ue comprenden poliaminoácidos según la invención y los principios activos y que son susceptibles de utilizarse para la preparación: medicamentos, en particular administración oral, nasal, vaginal, ocular, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal o intracerebral, los principios activos de estos medicamentos pueden ser, notablemente, proteínas, glucoproteínas, proteínas unidas a una o varias cadenas de polialquilenoglicol {por ejemplo polietilenglicol (PEG), o las así llamadas proteínas "PEGiladas"}, los péptidos, polisacáridos, liposacáridos, oligonucleótidos, polinucleótidos, y pequeñas moléculas orgánicas hidrofóbicas, hidrofílicas o anfifílicas. y/o nutrientes; - y/o productos cosméticos o fitosanitarios. Según otro de sus aspectos, la invención comprende un método de preparación: medicamentos, en particular administración oral, nasal, vaginal, ocular, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal o intracerebral, los principios activos de estos medicamentos pueden ser, notablemente, proteínas, glucoproteínas, proteínas unidas a una o varias cadenas de polialq uilenoglicol {por ejemplo polietilenglicol (PEG), o las así llamadas proteínas "PEGiladas"}, los péptidos, polisacáridos, liposacáridos, oligonucleótidos, polinucleótidos, y pequeñas moléculas orgánicas hidrofóbicas, hidrofílicas o anfifílicas. y/o nutrientes; y/o productos cosméticos o fitosanitaríos; este procedimiento caracterizado porque consiste esencial mente de emplear al menos un poliaminoácido tal como se define anteriormente y/o la composición también descrita arriba. Como se indica anteriormente, las técnicas de asociación de uno o varios PA a los poliaminoácidos injertados de alfa-tocoferol según la invención, se describen notablemente en la solicitud de patente WO 00/30618. La invención se refiere igualmente a un método de tratamiento terapéutico que consiste esencialmente de administrar la composición tal como se describe en la presente exposición, por vía oral, parenteral, nasal, vaginal, ocular, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intracerebral o bucal. Según un modo particular de empleo, el método de tratamiento terapéutico consiste esencialmente en utilizar una composición tal como se describe anteriormente bajo forma de solución en un solvente biocompatible después de inyectarla en forma subcutánea, intramuscular o en un tumor, de preferencia de manera que forma un depósito en el sitio de inyección.

Como ejemplos de PA susceptibles de asociarse a los poliaminoácidos según la invención, están o no bajo forma de (nano o micro)partículas, se pueden citar: o proteínas tales como insulina, interferones, hormonas de crecimiento, interleuquinas, eritropoyetina o citoquinas; o péptidos tales como leuprolida o ciclosporina; o pequeñas moléculas tales como aquellas que aparecen en la familia de antraciclinas, taxoides o canfotecinas; o y sus mezclas. La invención se comprenderá mejor y sus ventajas y variantes empleadas aparecerán bien en los siguientes ejemplos y que describen la síntesis de poliaminoácidos injertados de alfa-tocoferol, su transformación en sistemas de vectorización de PA (suspensión acuosa estable de nanopartículas) y la demostración de la capacidad de tal sistema de asociarse a PA (pequeñas moléculas orgánicas, proteínas. ) para formar las composiciones farmacéuticas. Ejemplo 1 : Polímero P1 Síntesis de un poliglutamato injertado por alfa-tocoferol de origen sintético El polímero de alfa-tocoferol, de masa equivalente a aproximadamente 10 000 partes con respecto a un estándar de polioxietileno, se obtiene por polimerización de NCAGluOMe, seguida de una hidrólisis, como se describe en la solicitud de patente FR 2 801 226. Se solubilizan 5.5 g de polímero de alfa-L-poliglutamato en 92 mi de dimetilformamida (DMF), al calentar a 40°C durante 2 horas. Una vez que el polímero se solubiliza, se deja revenir la temperatura a 25°C y se agregan sucesivamente 1.49 g de D,L-alfa-tocoferol (>98% obtenido de Fluka®) previamente solubilizado en 6 mi de DMF, 0.09 g de 4- dimetilaminopiridina previamente solubilizada en 6 mi de DMF y 0.57 g de diisopropilcarbodiimida previamente solubilizada en 6 mi de DMF. Después de 8 horas a 25°C bajo agitación, el medio reaccional se vierte en 800 mi de agua que contiene 15% de cloruro de sodio y de ácido hidroclórico (pH 2). El polímero precipitado se recupera enseg uida por filtración, lava por ácido clorh ídrico 0.1 N después por agua. El polímero se resolubiliza enseguida en 75 mi de DMF después se vuelve a precipitar en el agua que contiene como precedente una sal del ácido a pH 2. Después de 2 lavados con agua, se lava varias veces por el éter diisopropílico. El polímero se seca enseguida en la estufa al vacío a 40°C. Se obtiene un rendimiento del orden de 85%. La tasa de injerto estimada por RMN de protón es de aproximadamente 7.8% y un análisis por HPLC revela una tasa residual de tocoferol inferior a 0.3%. Mw (medido por GPC aluyendo con NMP) = 17 500 g/mol (equivalente de polimetil metacrilato). Ejemplos 2, 3, 4 y 5: Síntesis de polímeros P2, P3, P4 y P5 Se realizan de la misma manera que los polímeros que tienen variables de tocoferol. Tabla 1 : todos los casos, la cantidad de tocoferol efectivamente injertada se ha confirmado por RMN. Ejemplo 6: Polímero P6 Síntesis de un poliglutamato injertado por alfa-tocoferol de origen natural De manera análoga, se sintetiza el polímero P6 con 7.3% de D-alfa-tocoferol de origen natural (a 98.5% y obtenido de la sociedad ADM Francia). La masa molar es de 17 400 (GPC N P, eq. PM A). Ejemplo 7: Análisis de polímeros en solución acuosa Los polímeros se colocan en solución en un tampón de fosfato salina a pH 7.4 a las concentraciones variantes de 10 a 40 mg/ml y se ajusta el pH a 7.4 por la adición de sosa a 0.1 N. Se observa visualmente la solubilizaclón. Tabla 2: solubilidad en el agua salina a pH 7.4 Tampón de fosfato: 0.01 M de fosfato, 0.0027 M KCI y 0.137 M NaCI Una observación de transmisión electrónica de soluciones límpidas de polímero P1 depositado en un soporte muestra la existencia de nanopartículas de 1 5 a 25 nm. Un análisis comparativo de las soluciones de polímero P1 , P6 y de alfa-tocoferol succintao a 15 mg/ml en el agua a pH 7.4 (tampón de fosfato) revela que solo alfa-tocoferol de succinato desarrolla una solución lechosa características de vesículas como se describe en la patente EP 0 243 446.

Ejemplo 8: Adsorción de un colorante en el polímero P1 Según uno de los objetos de la invención, los polímeros pueden utilizarse bajo forma de suspensiones coloidales en el agua y asociarse por un principio activo. Para esta aplicación, demostramos en la experiencia a continuación que ciertos polímeros, notablemente aquellos con una tasa de injerto, del orden de 5 a 10% de tocoferol, la capacidad de adsorción es superior a aquella de un compuesto análogo de la técnica anterior. Para este estudio, hemos comparado el polímero P1 con un polímero análogo que tiene una cadena de dodecanol injertada sobre un poliglutamato. Este polímero se describe en la patente WO 00 3061 8. El estudio se realiza de la siguiente manera: se solubilizan los polímeros en una solución acuosa a pH 7 (tampón de fosfato) y se agregan 5 mg de colorante denominado Naranja OT (Rn CAS: 2646-17-59. Se dejan las soluciones en un baño de ultrasonido durante una hora para realizar la asociación. Las soluciones se centrifugan enseguida para eliminar el colorante no asociado y se mide la densidad óptima a ??t?3? de colorante que se sitúa a 495 nm. Tabla 3: *WO 00 30618 Se constata que a una tasa de injerto molar inferior a la mitad y a una concentración másica de polímero un poco más débil , el pol ímero P 1 presenta una capacidad de asociación de colorante Orange OT muy superior. Ejemplo 9 : Síntesis de polímero P7 Síntesis de un poliglutamato que tiene un injerto de alfa-tocoferol leucina Se sintetiza el derivado de alfa-tocoferol leucina de la siguiente manera . Se hace reaccionar D, L-alfa-tocoferol (4.3 g) con BOC-Leucina (2.3 g) en 1 5 mi de d iclorometano en presencia de 4-dimetilaminopiridina (244 mg) y de diidopropilcarbod iimida ( 1 .5 g). Después de 2 horas a 30°C, el producto se purifica por filtración en una columna de sílice. Se obtienen 5 g de producto de alfa-tocoferol leucina BOC (rendimiento 77%). Su estructura se confirma por espectroscopia RMN. La desprotección del producto se realiza en el ácido trifluoroacético a una temperatura comprendida entre 5 y 10°C d urante una hora. Después de la purificación por filtración sobre sílice, se aislan 3.3 g del producto deseado (rendimiento 78%). Su estructura se confirma por espectroscopia RMN. Se realiza enseguida la reacción de injerto sobre un ácido poliglutámico en las mismas condiciones que en el ejemplo 1 , con una tasa de injerto de 7%. La estructura del polímero y la tasa de injerto se ha confirmado por espectroscopia RMN . Ejemplo 10: Síntesis de polímero P8 Síntesis de un poliglutamato que tiene un injerto de alfa-tocoferol y un injerto de polioxietilenglicol.

Se realiza como en el ejemplo 1 , una reacción de injerto con 1 1 % molar de alfa-tocoferol y 2% molar de un metoxipolietilenglicol amina de la fórmula MeO(CH2CH20)nCH2CH2NH2 y de masa molar 3000 (producto obtenido de la sociedad Shearwaters). El polímero bajo su forma ácida se obtiene con un rendimiento de 72%. RMN de protón confirma una tasa de injerto de alfa-tocoferol de 10.9% y de polietilenglicol de 1 .9%. Ejemplo 1 1 : Adsorción de insulina Se prepara una solución a 1 mg de polímero P 1 y 7 mg de insulina a pH 7.0 en 1 mi de agua y se deja incubar durante 2 horas. La suspensión se ultrafiltra enseguida (10000G, 20 minutos con un umbral de 1 00 Kda). Dosificamos la insulina libre en el filtrado por HPLC y se deduce por diferencia la cantidad de insulina asociada. Se mide una tasa de asociación que es superior a 95% con respecto a la insulina comprometida. En las mismas condiciones, el polímero comparativo del ejemplo 8 permite asociarse 40%. La capacidad de absorción del polímero p1 es entonces superior. Ejemplo 12: Degradación in vitro de polímero P1 en presencia de enzimas Se solubiliza el polímero P1 a pH 7.5 (tampón de fosfato y 10 mM de catión de calcio) y una concentración de 20 mg/ml. Se agregan 0.1 mL de proteasa (solución de 10 mg/ml) y en seguida la degradación por GPC acuosa. Se constata una degradación relativamente rápida con un tiempo de semi-vida de polímero inicial de aproximadamente 100 minutos.

Claims

REIVI N DICACION ES 1 . Poliaminoácidos que comprenden unidades aspárticas y/o unidades glutámicas, caracterizados porque al menos una parte de estas unidades son portadoras de injertos que comprenden al menos un motivo alfa-tocoferol. 2. Poliaminoácidos según la reivindicación 1 , caracterizados porque la fórmula general (I) siguiente:
(D en la cual: ¦ R1 representa un H, un alquilo lineal de C2 a C10 o ramificado de C3 a C10, bencilo, una unidad de aminoácido terminal; ¦ R2 representa un H, un grupo acilo lineal en C2 a C10 o ramificado en C3 a C10, o un poliglutamato; ¦ R3 es un H o una entidad catiónica, de preferencia seleccionada del grupo que comprende: - los cationes metálicos ventajosamente elegidos del sub-grupo que comprende: sodio, potasio, calcio, magnesio, - los cationes orgánicos ventajosamente elegidos del sub-grupo que comprende: . los cationes a base de amina, los cationes a base de oligoamina, • los cationes a base dé poliamina (polietilenoimina siendo particularmente preferida), • los cationes a base de aminoácido(s), ventajosamente elegidos de la clase que comprende los cationes a base de lisina o de arginina, - o los poliaminoácidos catiónicos ventajosamente elegidos del subgrupo que comprende polilisina u oligolisina; ¦ R4 representa un enlace directo o un "espaciador" a base de 1 a 4 unidades de aminoácido; ¦ A representa independientemente un radical -CH2- (unidad aspártica) o -CH2-CH2- (unidad glutámica); ¦ n/(n+m) se define como la tasa de injerto molar y varía de 0.5 a 100% molar; ¦ n + m varía de 3 a 1000, de preferencia de 30 y 300; ¦ T representa un motivo de alfa-tocoferol.
3. Poliaminoácidos según la reivindicación 1 o 2, caracterizados porque alfa-tocoferol es de origen natural.
4. Poliaminoácidos según la reivindicación 1 o 2, caracterizados porque alfa-tocoferol es de origen sintético.
5. Poliaminoácidos según la reivindicación 2, caracterizados porque se constituyen de homopolímero de alfa-L-glutamato o de alfa-L-glutámico.
6. Poliaminoácidos según la reivindicación 2, caracterizados porque se constituyen de un homopolímero de alfa-L-aspartato o alfa-L-aspártico.
7. Poliaminoácidos según la reivindicación 2, caracterizados porque se constituyen de un copolímero de aifa-L-aspartato/alfa-L-glutamato o alfa-L-aspártico/alfa-L-glutámico.
8. Poliaminoácidos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizados porque la distribución de unidades aspárticas y/o glutámicas portadoras de injertos comprenden al menos un motivo alfa-tocoferol es tal que los polímeros así constituidos son aleatorios, tipo bloque, tipo multibloque.
9. Poliaminoácidos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizados porque su masa molar se sitúa entre 2 000 y 100 000 g/mol, y de preferencia entre 5 000 y 40 000 g/mol.
10. Poliaminoácidos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizados porque la tasa de injerto molar se sitúa entre 3 y 70%, y de preferencia entre 5 y 50%. 1 1. Poliaminoácidos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizados porque son portadores de al menos un injerto de tipo polialquilenglicol unido a una unidad de glutamato y/o aspartato. 12. Poliaminoácidos según la reivindicación 1 1 , de la siguiente fórmula (I I). en la cual R'4 representa un enlace directo o un "espaciador" a base de 1 a 4 unidades de aminoácido ; X es un heteroátomo elegido del grupo que comprende oxígeno, nitrógeno o azufre; R5 y R6 representan independientemente un H, un alquilo lineal en C1 a C4. n varía de 3 a 1000. 13. Poliaminoácidos según la reivindicación 1 1 o 12, caracterizados porque el polialquilenglicol es un polietilenglicol. 14. Poliaminoácidos según cualquiera de las reivindicaciones 1 1 a 13, caracterizados porque el porcentaje molar de injerto de polialquilenglicol varía de 1 a 30%. 15. Composición farmacéutica, cosmética, dietética o fitosanitaria que comprende al menos uno de los poliaminoácidos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14. 16. Composición según la reivindicación 1 5, caracterizada porque comprende al menos un principio activo. 17. Composición según la reivindicación 15 o 16, caracterizada porque el principio activo es una proteína, glucoproteina, polisacárido, liposacárido, oligonucleótido, polinucleótido o peptido. 1 8. Composición según la reivindicación 16 o 17, caracterizada porque el principio activo es una "pequeña" molécula orgánica hidrofóbica, hidrofílica o anfifílica. 19. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 18, caracterizada porque puede administrarse por vía oral, parenteral, nasal, vaginal, ocular, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, intracerebral o bucal. 20. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 19, caracterizada porque está bajo forma de un gel, emulsión, solución, suspensión, micelas, nanopartículas, micropartículas, polvo o película. 21 . Composición según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 20, caracterizada porque es una suspensión coloidal de nanopartículas y/o de micropartículas y/o micelas de poliaminoácidos, en una fase acuosa. 22. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 19, caracterizada porque está bajo forma de solución en un solvente biocompatible y porque puede inyectarse en forma subcutánea, intramuscular o en un tumor. 23. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 22, caracterizada porque es inyectable y porque es apta para formar un depósito en el sitio de inyección. 24. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 23, caracterizada porque se destina a la preparación de: - medicamentos, en particular administración oral, nasal, vaginal, ocular, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal o intracerebral, los principios activos de estos medicamentos pueden ser, notablemente, proteínas, glucoproteínas, proteínas unidas a una o varias cadenas de polialquilenoglicol {por ejemplo polietilenglicol (PEG), o las así llamadas proteínas "PEGiladas"}, los péptidos, polisacáridos, liposacáridos, oligonucleótidos, polinucleótidos, y pequeñas moléculas orgánicas hidrofóbicas, hidrofílicas o anfifílicas. y/o nutrientes; y/o productos cosméticos o fitosanitarios. 25. Procedimiento de preparación de: medicamentos, en particular administración oral, nasal, vaginal, ocular, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal o intracerebral, los principios activos de estos medicamentos pueden ser, notablemente, proteínas, glucoproteínas, proteínas unidas a una o varias cadenas de polialquilenoglicol {por ejemplo polietilenglicol (PEG), o las asi llamadas proteínas "PEGiladas"}, los péptidos, polisacáridos, liposacáridos, oligonucleótidos, polinucleótidos, y pequeñas moléculas orgánicas hidrofóbicas, hidrofílicas o anfifílicas. y/o nutrientes; - y/o productos cosméticos o fitosanitarios; caracterizados porque consiste esencialmente en emplear al menos un poliaminoácido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 y/o la composición según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 23.