PT1344773E

PT1344773E - Secretagogos de hormona de crescimento

Info

Publication number: PT1344773E
Application number: PT03075950T
Authority: PT
Inventors: Jean Martinez; Jean-Alain Fehrentz; Vincent Guerlavais
Original assignee: Aeterna Zentaris Gmbh
Priority date: 2000-06-13
Filing date: 2001-06-13
Publication date: 2007-11-27
Also published as: CY1107793T1; BR0111591A; EP1289951B1; HU229233B1; DE60112753T2; AU6606601A; CY1107710T1; DE60130025T2; WO2001096300A1; FR19C1044I2; ES2288724T3; HUP0302026A3; ATE362472T1; NO20025893D0; BG110708A; CZ20024095A3; IL153067A0; HUP0302026A2; JP4932132B2; EP1289951A1

Description

ΕΡ 1 344 773/ΡΤ DESCRIÇÃO "Secretagogos de hormona de crescimento"

Campo do Invento 0 presente invento refere-se a compostos que são úteis para administração a um mamífero elevando desse modo o nível no plasma de hormona de crescimento.

Antecedentes do Invento (a) Descrição do Estado da Arte A hormona de crescimento (GH) ou somatropina, segregada pela glândula pituitária constitui uma família de hormonas cuja actividade biológica é fundamental para o crescimento linear de um organismo jovem mas também para a manutenção da integridade no seu estado adulto. A GH actua directamente ou indirectamente nos órgãos periféricos estimulando a síntese de factores de crescimento (factor de crescimento do tipo insulina I ou IGF-I) ou dos seus receptores (factor de crescimento epidérmico ou EGF). A acção directa da GH é do tipo referido como anti-insulínica a qual favorece a lipólise ao nível dos tecidos adiposos. Através da sua acção na síntese e secreção do IGF-I (somatomedina C), a GH estimula o crescimento da cartilagem e dos ossos (crescimento estrutural), a síntese de proteínas e a proliferação celular em múltiplos órgãos periféricos, incluindo os músculos e a pele. Através da sua actividade biológica, a GH participa nos adultos na manutenção de um estado de anabolismo proteico, e desempenha um papel essencial no fenómeno da regeneração de tecidos após um trauma. A diminuição de secreção de GH com a idade, demonstrada em seres humanos e animais, favorece um desvio metabólico para o catabolismo o qual inicia ou participa no envelhecimento de um organismo. A perda de massa muscular, a acumulação de tecidos adiposos, a desmineralização óssea, a perda de capacidade de regeneração de tecidos após um ferimento, que são observadas em idosos, correlacionam-se com a diminuição na secreção da GH. 2 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ A GH é deste modo um agente fisiológico anabólico absolutamente necessário para o crescimento linear de crianças e que controla o metabolismo proteico nos adultos. A secreção da hormona de crescimento (GH) é regulada por dois péptidos hipotalâmicos: hormona libertadora da GH (GHRH) a qual exerce efeito estimulatório na libertação da GH e a somatostatina que exibe uma influência inibidora. Nos últimos anos, vários investigadores demonstraram que a secreção da GH pode igualmente ser estimulada por oligopéptidos sintéticos denominados péptidos libertadores de GH tais como hexarelina e vários análogos de hexarelina (Ghigo et al., Europen Journal of Endocrinology, 136, 445-460, 1997). Estes compostos actuam através de um mecanismo que é distinto do da GHRH (C.Y. Bowers, em "Xenobiotic Growth Hormone Secretagogues", Eds B. Bercu and R.F. Walker, Pg. 9-28, Springer-Verlag, New York 1996) e por interacção com receptores específicos localizados no hipotálamo e glândula pituitária ((a) G. Muccioli et al., Journal of Endocrinology, 157, 99-106, 1998; (b) G. Muccioli, "Tissue Distribution of GHRP Receptors in Humans" Abstracts IV European Congress of Endocrinology, Sevilla, Spain, 1998) . Recentemente foi demonstrado que os receptores da GHRP estão presentes não só no sistema hipotálamo-hipofisário mas também em vários tecidos humanos geralmente não associados com a libertação da GH (G. Muccioli et al., ver supra (a)).

Os GHRP e os seus antagonistas são descritos, por exemplo, nas seguintes publicações: C.Y. Bowers, supra, R. Deghenghi, "Growth Hormone Releasing Peptides", ibidem, 1996, pg. 85-102; R. Deghenghi et al., "Small Peptides as Potent Releasers of Growth Hormone", J. Ped. End. Metab., 8, pg. 311-313, 1996; R. Deghengl, "The Development of Impervious Peptides as Growth Hormone Secretagogues". Acta. Paediatr. Suppl., 423, pg. 85-87, 1997; K. Veeraraganavan et al., "Growth, Hormone Releasing Peptides (GHRP) Binding to Porcine Anterior Pituitary and Hypothalamic Membranes". Life Sei., 50, Pg. 1149-1155, 1992; A.A Patchett et al., "Design and biological activities of L-163, 191 (MK-0677): A potent, orally active growth hormone secretagogue", Proc. Nat. Acad. Sei. USA, 92, Pg. 7001-7005, 1995; R. Deghenghi et al., 3 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ "Impervious peptides as growth hormone secretagogues", Pept. Sei: Present Future Proc. Int. Pept. Symp. lst (1999), Editor: Y. Shimonishi; M. Chen et al., "Indolyl group containing compounds and the use thereof to promote the release of growth hormone(s)", WO 95/14666; e T.C. Somers et al., "Low Molecular Weight Peptidomimetic Growth Hormone Secretagogues, WO 96/15148 (23 de Maio, 1996). A GH humana tem sido produzida através de engenharia genética durante cerca de dez anos. Até recentemente, a maioria das utilizações da GH diziam respeito ao atraso do crescimento em crianças e presentemente são estudadas as utilizações da GH em adultos. As utilizações farmacológicas da GH, GHRP e secretagogos da hormona de crescimento podem ser classificados nas seguintes três categorias principais. (b) Crescimento de crianças

Os tratamentos com hormona de crescimento humana recombinante demonstraram estimular o crescimento em crianças com nanismo hipofisário, insuficiências renais, síndroma de Turner e baixa estatura. A GH humana recombinante é actualmente comercializada na Europa e nos Estados Unidos para o retardamento do crescimento em crianças provocado por deficiência de GH e para as insuficiências renais em crianças. As outras utilizações estão sob investigação clínica. (c) Tratamento de longo prazo para doentes adultos e idosos

Uma diminuição na secreção de GH provoca mudanças na composição corporal durante o envelhecimento. Estudos preliminares de um tratamento durante um ano com GH humana recombinante resultaram num aumento da massa muscular e da espessura da pele, numa diminuição da massa gordurosa com um ligeiro aumento na densidade óssea numa população de doentes idosos. No que diz respeito à osteoporose, estudos recentes sugerem que a GH humana recombinante não aumenta a mineralização óssea mas sugerem que pode prevenir a desmineralização óssea em mulheres pós-menopáusicas. Estão actualmente a decorrer outros estudos para demonstrar esta teoria. 4 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ (d) Tratamento de curto-prazo em doentes adultos e idosos

Em estudos pré-clínicos e clínicos, a hormona de crescimento demonstrou estimular o anabolismo proteico e cicatrização em casos de queimaduras, SIDA e cancro, em feridas e cicatrização óssea. A GH, os GHRP e secretagogos de hormona de crescimento são igualmente considerados para utilizações farmacológicas veterinárias. A GH, os GHRP e secretagogos da hormona de crescimento estimulam o crescimento em porcos durante o seu período de engorda favorecendo a deposição dos tecidos musculares em lugar dos tecidos adiposos e aumentam a produção leiteira em vacas, e isto sem quaisquer efeitos secundários indesejáveis que colocariam em perigo a saúde dos animais e sem quaisquer resíduos na carne ou leite produzidos. A somatropina de bovino (BST) é actualmente comercializada nos Estados Unidos. A maioria dos estudos clínicos presentemente em curso foi conduzida com GH recombinante. Os GHRP e os secretagogos da hormona de crescimento são considerados como produtos de segunda geração destinados a substituir num futuro próximo, na maior parte dos casos, as utilizações da GH. Em conformidade, a utilização de GHRP e secretagogos de hormona de crescimento apresentam uma série de vantagens em relação à utilização da GH per se.

Deste modo, existe uma necessidade de compostos que, quando administrados a um mamífero, actuem como secretagogos da hormona de crescimento.

SUMÁRIO DO INVENTO 0 presente invento refere-se a novos compostos que actuam como secretagogos da hormona de crescimento e à sua utilização num medicamento para elevar os níveis no plasma da hormona de crescimento num mamífero através da administração de um ou mais dos compostos de acordo com o invento. 0 invento refere-se também a medicamentos para o tratamento de deficiência de secreção da hormona de crescimento, para promoção da cicatrização de feridas, recuperação em cirurgias 5 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ ou recuperação em doenças debilitantes, através da administração a um mamífero de um destes compostos numa quantidade terapeuticamente eficaz.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS CONCRETIZAÇÕES PREFERIDAS

Na presente descrição, são utilizadas as seguintes abreviaturas: D é o enantiómero dextro, GH é hormona de crescimento, Boc é terc-butiloxicarbonilo, Z é benziloxicarbonilo, N-Me é N-metilo, Pip é 4-aminopiperidino-4-carboxilato, Inip é isonipecotilo, i.e. piperidino-4-carboxilato, Aib é α-aminoisobutirilo, Nal é β-naftilalanina, Mrp é 2-Metil-Trp, e Ala, Lys, Phe, Trp, His, Thr, Cys, Tyr, Leu, Gly, Ser, Pro, Glu, Arg, Vai e Gin são respectivamente os aminoácidos alanina, lisina, fenilalanina, triptofano, histidina, treonina, cisteína, tirosina, leucina, glicina, serina, prolina, ácido glutâmico, arginina, valina e glutamina. Além disso gTrp é um grupo com a fórmula

e gMrp um grupo com a fórmula

nas quais * significa um átomo de carbono que, quando é um átomo de carbono quiral, possui uma configuração R ou S. Os compostos do invento têm a fórmula geral I:

H 6

ΕΡ 1 344 773/ΡΤ na qual * significa um átomo de carbono que, quando é um átomo de carbono quiral, possui uma configuração R ou S, R1 é um átomo de hidrogénio e R3 é um grupo de fórmula II

(Π) R2 é um grupo de acordo com a fórmula IV adiante:

;«AA H3CbH3 gyy R4 é um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo Ci-C4 linear ou ramificado, R5 é um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo C1-C4 linear ou ramificado, um grupo (CH2) n-arilo, em que arilo é fenilo ou naftilo, um grupo (CH2)n-heterociclo, em que o grupo heterociclico é isonipecotilo, 4-píperidinilo ou 3-pirrolilo, um grupo (CH2) n-cicloalquilo, em que o grupo cicloalquilo é ciclo-hexilo, ou um grupo amino, R6 e R7 são, independentemente um do outro, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C1-C4 linear ou ramificado, R11 e R12 são, independentemente um do outro, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C1-C4 linear ou ramificado, mé0enélou2.

Uma concretização preferida do invento são compostos em que o alquilo C1-C4 linear ou ramificado é metilo, o alquilo C1-C6 linear ou ramificado é metilo, etilo ou i-butilo, o arilo é fenilo ou naftilo, o cicloalquilo é ciclo-hexilo e o grupo heterociclico é um grupo 4-piperidinilo ou 3-pirrolilo.

De acordo com o presente invento, determinou-se que os compostos do invento são úteis para o fabrico de um medicamento para elevar o nivel plasmático da hormona de crescimento num mamífero. Além disso os compostos do presente invento são úteis para o fabrico de um medicamento para o tratamento de deficiência de secreção da hormona de crescimento, atraso de crescimento em crianças e desordens 7 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ metabólicas associadas com a deficiência de secreção da hormona de crescimento, em particular em indivíduos idosos.

Se pretendido, podem igualmente ser utilizados sais farmaceuticamente aceitáveis destes compostos. Tais sais incluem sais de adição orgânicos ou inorgânicos, tais como sais cloridrato, bromidrato, fosfato, sulfato, acetato, succinato, ascorbato, tartarato, gluconato, benzoato, malato, fumarato, estearato ou pamoato.

As composições farmacêuticas do invento são úteis para elevar os níveis plasmáticos da hormona de crescimento num mamífero, incluindo um ser humano, bem como para o tratamento da deficiência de secreção da hormona de crescimento, atraso de crescimento em crianças e desordens metabólicas associadas com a deficiência de secreção da hormona de crescimento, em particular em indivíduos idosos. Tais composições farmacêuticas podem compreender um composto de acordo com o presente invento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou combinações de compostos de acordo com o presente invento ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, opcionalmente em mistura com um suporte, excipiente, veículo, diluente, matriz, ou revestimento de libertação prolongada. Exemplos de tais suportes, excipientes, veículos e diluentes podem ser encontrados em Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, A.R. Germaro, Ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1990.

As composições farmacêuticas do invento podem compreender um secretagogo de hormona de crescimento adicional. Exemplos de secretagogos de hormona de crescimento adicionais são Grelina (Ghrelin) (cf M. Kojima et al., Nature, 402 (1999), 656-660), GARP-1, GHRP-2 e GHRP-6.

Grelina: Gly-Ser-Ser(O-n-octanoí1)-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu-His-

Gln-Arg-Val-Gln-Gln-Arg-Lys-Glu-Ser-Lys-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg GHRP-1: Ala-His-D-p-Nal-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2 GHRP-2: D-Ala-D^-Nal-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2 GHRP-6

His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2 8 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ

Qualquer dos compostos de acordo com o presente invento pode ser formulado pelo perito na arte de modo a proporcionar medicamentos que são adequados para as vias de administração parentérica, bucal, rectal, vaginal, transdérmica, pulmonar ou oral. 0 tipo de formulação do medicamento contendo o composto pode ser seleccionado de acordo com a velocidade de libertação pretendida. Por exemplo, se os compostos forem para libertação rápida, é preferida a via nasal ou intravenosa.

Os medicamentos podem ser administrados a mamíferos, incluindo humanos, numa dosagem terapeuticamente eficaz a qual pode ser facilmente determinada pelo perito na arte e pode variar de acordo com a espécie, idade, sexo e peso do doente ou indivíduo tratado bem como da via de administração. 0 nível exacto pode ser facilmente determinado empiricamente.

EXEMPLOS

Os exemplos seguintes ilustram a eficácia dos compostos mais preferidos utilizados no tratamento deste invento.

Exemplo 1: H-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO Síntese total (as percentagens representam rendimentos obtidos nas sínteses tal como abaixo descritas): 9 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ

Z-D-Trp-OH

1) IBCF, ΝΜΜ, DΜΕ, 0°C 2) ΝΗ4ΟΗ y Z-D-Trp-NH2 1) Η2, Pd/C, DMF, H20, HC1 2) BOP, NMM, DMF, Boc-D-Trp-OH. y

Boc-D-Trp-D-Trp-NH2 60% 13* tBoc20, DMAP cat., CH3CN anidro

Boc-D-(N'Boc)Trp-D-(N'Boc)Trp-NH2 ^qj. 1) BTIB, piridina, DMF/H2

2) 2,4,5-triclorofenilformato, DIEA, DMF ▼

Boc-D-(N'Boc)Trp-D-(N'Boc)Trp-CHO

1) TFA/anisole/tioanisole (8/1/1), 0°C

2) BOP, NMM, DMF, Boc-Aib-OH ▼

Boc-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO 1 52% I I i 1) TFA/anisole/tioanisole (8/1/1), 0°C 2) purificação em HPLC preparativa

H-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO Z-D-Trp-NH2 Z-D-Trp-NH2 (8,9 g; 26 mmol; 1 eq.) foi dissolvido em D ME (25 ml) e colocado num banho de água gelada a 0°C. Foram adicionados sucessivamente NMM (3,5 ml; 1,2 eq.), ICBF (4,1 ml; 1,2 eq.) e solução de amónia a 28% (8,9 ml; 5 eq.). A mistura foi diluida com água (100 ml) e o produto Z-D-Trp-NH2 precipitado. Foi filtrado e seco in vacuo para proporcionar 8,58 g de um sólido branco.

Rendimento = 98%. C19H19N3O3, 337 g.mol-1.

Rf = 0,46 {Clorofórmio/Metanol/Ácido Acético (180/10/5)}. 10 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ ΧΗ RMN (250 ΜΗζ, DMSO-d6) : δ 2, 9 (dd, 1Η, Ηβ·, Jp.p = 14,5Hz; Jpa = 9,8Ηζ) ; 3,1 (dd, 1Η, Ηβ', Jp.p = 14,5Hz; Jp.a = 4,3Hz); 4,2 (sextupleto, 1 Η, Ηα); 4,95 (s, 2Η, CH2 (Ζ)); 6,9-7,4 (m, 11 H); 7,5 (s, 1 Η, H2) ; 7,65 (d, 1 H, J = 7,7Hz); 10,8 (s, 1 Η, ΝΧΗ) .

Espectrometria de Massa (Electropulverização), m/z 338 [M+H]+, 360 [M+Na]+, 675 [2M+H]+, 697 [2M+Na]+.

Boc-D-Trp-D-Trp-NH2 Z-D-Trp-NH2 (3 g; 8,9 mmol; 1 eq.) foi dissolvido em dmf (100 ml) . Foram adicionados à mistura em agitação HC1 36% (845 μΐ; 1,1 eq.), água (2 ml) e paládio em carvão activado (95 mg, 0,1 eq.). A solução foi borbulhada com hidrogénio durante 24h. Quando a reacção ficou completa, o paládio foi filtrado em celite. O solvente foi removido in vacuo para proporcionar HC1, D-D-Trp-NH2 sob a forma de óleo incolor.

Em 10 ml de DMF, foram adicionados sucessivamente HC1, H-D-Trp-NH2 (8,9 mmol; 1 eq.), Boc-D-Trp-OH (2,98 g; 9,8 mmol; 1,1 eq.), NMM (2,26 ml; 2,1 eq.) e BOP (4,33 g; 1,1 eq.). Após lh, a mistura foi diluída com acetato de etilo (100 ml) e lavada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (200 ml), hidrogenossulfato de potássio aquoso (220 ml, 1M), e cloreto de sódio aquoso saturado (100 ml). A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido in vacuo para proporcionar 4,35 g de Boc-D-Trp-D-Trp-NH2 sob a forma de sólido branco.

Rendimento = 85%. CQ7H31N5O4, 489 g.mol 1.

Rf = 0,48 {Clorofórmio/Metanol/Ácido Acético (85/10/5)}. RMN (200 MHz, DMSO-d6) : δ 1,28 (s, 9H, Boc); 2,75-3,36 (m, 4H, 2 (CH2) p; 4,14 (m, 1H, CHa) ; 4,52 (m, 1H, CH<r); 6,83-7,84 (m, 14H, 2 indóis (10H), NH2, NH (uretano) e NH (amida) ) ; 10,82 (d, 1H, j= 2Hz, N2H) ; 10,85 (d, 1H, J= 2Hz, N2H) . Espectrometria de Massa (Electropulverização), m/z 490 [M+H]+, 512 [M+Na]+, 979 [2M+H]+. 11 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ

Boc-D-(NiBoc)Trp-D-(NiBoc)Trp-NH2

Boc-D-Trp-D-Trp-NH2 (3 g; 6,13 mmol; 1 eq. ) foi dissolvido em acetonitrilo (25 ml) . A esta solução, foram sucessivamente adicionados di-terc-butildicarbonato (3,4 g; 2,5 eq.) e 4-dimetilaminopiridina (150 mg; 0,2 eq.). Após lh a mistura foi diluída com acetato de etilo (100 ml) e lavada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (200 ml), hidrogenossulfato de potássio aquoso (200 ml, 1M), e cloreto de sódio aquoso saturado (200 ml) . A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel eluindo com acetato de etilo/hexano {5/5} para proporcionar 2,53 g de Boc-D-(N1Boc) Trp-D-(N1Boc) Trp-NH2 sob a forma de sólido branco.

Rendimento = 60%. C37H47N5O8, 689 g.mol 1.

Rf = 0,23 {acetato de etilo/hexano (5/5)}. XH RMN (200 MHz, DMSO-d6) : δ 1,25 (s, 9H, Boc) ; 1,58 (s, 9H, Boc); 2,75-3,4 (m, 4H, 2 (CH2)β) ; 4,2 (m, 1H, CHor) ; 4,6 (m, 1H, CHa), 7,06-8 (m, 14H, 2 indóis (10H), NH (uretano), NH e NH2 (amidas)).

Espectrometria de Massa (Electropulverização), m/z 690 [M+H]+, 712 [M+Na]+, 1379 [2M+H]+, 1401 [2M+Na]+.

Boc-D- (N1Boc) Trp-D-g (N1Boc) Trp-H

Boc-D- (INtBoc) Trp-D-g (INtBoc) Trp—NH2 (3 g; 4,3 mmol; 1 eq.) foi dissolvido na mistura DMF/água (18 ml/7 ml). Posteriormente foram adicionados piridina (772 μΐ; 2,2 eq.) e Tris(trifluoroacetoxi)iodobenzeno (2,1 g; 1,1 eq.). Após lh, a mistura foi diluída com acetato de etilo (100 ml) e lavada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (200 ml), hidrogenossulfato de potássio aquoso (200 ml, 1M), e cloreto de sódio aquoso saturado (200 ml) . A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido in vacuo. Boc-D-(N1Boc) Trp-D-g (N1Boc) Trp-H foi utilizado de imediato para a reacção seguinte de formilação.

Rf = 0,14 {acetato de etilo/hexano (7/3)}. C36H47N5O7, 661 g.mol-1. 12 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ 1R RMN (200 ΜΗζ, DMSO-d6): δ 1,29 (s, 9Η, Boc); 1,61 (s, 18Η, 2BOC); 2,13 (s, 2Η, NH2(amina)); 3.1-2,8 (m, 4H, 2(CH2)p); 4,2 (m, 1H, CHtt'); 4,85 (m, 1H, CHa) ; 6,9-8 (m, 12H, 2 indóis (10H), NH (uretano), NH (amida)).

Espectrometria de Massa (Electropulverização), m/z 662 [M+H]+, 684 [M+Na]+.

BOC-D-(N1 2BQC)Trp-D-g(N2Boc)Trp-CHO

Boc-D-(N^-Boc) Trp-D-g (N2Boc) Trp-H (4,3 mmol; 1 eq.) foi dissolvido em DMF (20 ml) . Posteriormente, foram adicionados N,N-di-isopropiletilamina (815 μΐ; 1,1 eq.) e 2,4,5-triclorofenilformato (1,08 g; 1,1 eq.). Após 30 minutos, a mistura foi diluída com acetato de etilo (100 ml) e lavada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (200 ml), hidrogenossulfato de potássio aquoso (200 ml, 1M), e cloreto de sódio aquoso saturado (200 ml) . A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel eluindo com acetato de etilo/hexano {5/5} para proporcionar 2,07 g de Boc-D-(N2Boc) Trp-D-g (N2Boc) Trp-CHO sob a forma de sólido branco.

Rendimento = 70%. C37H47N5O8, 689 g.mol 2.

Rf = 0,27 {acetato de etilo/hexano (5/5)}. XH RMN (200 MHz, DMSO-d6) : δ 1,28 (s, 9H, Boc); 1,6 (s, 9H, Boc); 1,61 (s, 9H, Boc); 2,75-3,1 (m, 4H, 2 (CH2) β) ; 4,25 (m, 1H, (CH)aA&B); 5,39 (m, 0,4H, (CH)a'B), 5,72 (m, 0,6H, (CH) orA) ; 6,95-8,55 (m, 14H, 2 indóis (10H), NH (uretano), 2NH (amidas), CHO (formilo)).

Espectrometria de Massa (Electropulverização), m/z 690 [M+H]+, 712 [M+Na]+, 1379[2M+H] + .

Boc-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO 1

Boc-D-(N2Boc)Trp-D-g(N2Boc)Trp-CHO (1,98 g; 2,9 mmol; 2 eq.) foi dissolvido numa mistura de ácido trifluoroacético (16 ml), anisole (2 ml) e tioanisole (2 ml) durante 30 minutos a 0°C. Os solventes foram removidos in vacuo, o resíduo foi 13 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ agitado com éter e o TFA precipitado, H-D-Trp-D-gTrp-CHO foi filtrado. TFA, H-D-Trp-D-gTrp-CHO (2,9 mmol; 1 eq.), Boc-Aib-OH (700 mg; 1 eq.), NMM (2,4 ml; 4,2 eq.) e BOP (1,53 g; 1,2 eq.) foram sucessivamente adicionados em 10 ml de DMF. Após lh, a mistura foi diluída com acetato de etilo (100 ml) e lavada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (200 ml), hidrogenossulfato de potássio aquoso (200 ml, 1M) e cloreto de sódio aquoso saturado (200 ml). A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel eluindo com acetato de etilo para proporcionar 1,16 g de Boc-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO sob a forma de sólido branco.

Rendimento = 70%

CaiHaeNeOs, 574 g.mol-1.

Rf = 0.26 {Clorofórmio/Metanol/Ácido acético (180/10/5)}.

'ή RMN (200 MHz, DMSO-d6) : δ 1,21 (s, 6H, 2CH3 (Aib)); 1,31 (s, 9H, Boc); 2,98-3,12 (m, 4H, 2(CH2)p); 4,47 (m, 1H, (CH)aA&B); 5,2 (m, 0, 4H, (CH)(X'b); 5,7 (m, 0,6H, (CH)a'A); 6,95-8,37 (m, 15H, 2 indóis (10H), 3NH (amidas), 1NH (uretano); CHO (formilo)); 10,89 (m, 2H, 2NXH (indóis)).

Espectrometria de Massa (Electropulverização), m/z 575 [M+H]+, 597 [M+Na] +, 1149 [2M+H] +, 1171 [2M+Na]+.

H-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO

Boc-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO (lg; 1,7 mmol) foi dissolvido numa mistura de ácido trifluoroacético (8 ml), anisole (1 m) e tioanisole (1 ml) durante 30 minutos a 0°C. Os solventes foram removidos in vacuo, o resíduo foi agitado com éter e o TFA precipitado, H-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO foi filtrado. O produto TFA, H-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO foi purificado por hplc preparativo (Waters, delta pak, C18, 40x100 mm, 5 μιη, 100 A).

Rendimento = 52%.

CzeHsoNeOs, 474 g.mol-1. XH RMN (400 MHz, DMSO-d6) : correlação +^/½ δ 1,21 (s, 3H, CH3 (Aib) ) ; 1,43 (s, 3H, CH3(Aib)); 2,97 (m, 2H, (CH2)p); 3,1 14 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ (m, 2Η, (CH2)ρ·) ; 4,62 (m, 1Η, (CH)OCA&B); 5,32 (q, 0,4H, (CH) a'A) , 5,71 (q, 0,6H, (CH)CC'A); 7,3 (m, 4H, H5 e H6 (2 indóis)); 7,06-7,2 (4d, 2H, H2A e H2b (2 indóis); 7,3 (m, 2H, H4 ou H7 (2 indóis)); 7,6-7,8 (4d, 2H, H4A e H4B ou H7A e H7b) ; 7,97 (s, 3H, NH2 (Aib) e CHO (Formilo) ) ; 8,2 (d, 0,4H,

NH4b (diamino)); 8,3 (m, 1H, NHA&B) ; 8,5 (d, 0,6H, NH4A (diamino) ; 8,69 (d, 0,6H, NH2A (diamino)); 8,96 (d, 0,4H, NH2B (diamino)); 10,8 (s, 0,6H, N1 2H1A (índole)); 10,82 (s, 0,4H, N3H4b (índole)); 10,86 (s, 0,6H, 11¾¾ (índole)); 10,91 (s, 0, 4H, 142¾ (índole)).

Espectrometria de Massa (Electropulverização), m/z 475 [M+H]+, 949[2M+H]+.

Foram realizadas sínteses análogas para os seguintes compostos:

Os Exemplos 2 a 62 servem unicamente para efeitos ilustrativos.

Exemplo 2 H-Aib-D-Mrp-D-gMrp-CHO 1 C28H34N603, 502 g.mol"4 5 6. 2 h RMN (400 MHz, DMSO-d7) : correlação +^/¾ δ 1,19 (s, 2H, (CH3) 1A(Aib) ) ; 1,23 (s, 1H, (CH3) 1B (Aib) ) ; 1,41 (s, 2H, (CH3)2A(Aib) ) ; 1,44 (s, 2H, (CH3) 2B (Aib) ; 2,33-2,35 (4s, 6H, 3

Espectrometria de Massa (Electropulverização), m/z 503,1 [M+H]+, 949 [2M+H] +. 4 2CH3 (indóis)); 2,93 (m, 2H, (CH2)p); 3,02 (m, 2H, (CH2)P·); 4,65 (m, 0,6H, (CH) (XA) ; 4,71 (m, 0,4H, (CH) 0CB) ; 5,2 (m, 0,4H, (CH)a'B), 5,6 (m, 0,6H, (CH)a'A) ; 6,95 (m, 4H, H5 e H6 (2 indóis); 7,19 (m, 2H, H4 ou H7 (2 indóis); 7,6 (m, 2H, H4 ou 5 H7 (2 indóis)); 7,9 (s, 1H, CHO (Formilo)); 7,95 (s, 2H, NH2 6 (Aib); 8,05 (d, 0, 4H, NH4B (diamino)); 8,3 (m, lH, NHA&B) ; 8,35 (m, 0,6H, NH4A (diamino); 8,4 (d, 0,6H, NH2A (diamino)); 8,75 (d, 0,4H, NH2B (diamino)); 10,69 (s, 0,6H, N2H4A (índole)); 10,71 (s, 0,4H, N2HiB (índole)); 10,80 (s, 0,6H, 11¾¾ (índole)); 10,92 (s, 0,4H, N2H2B (índole)). 7

Exemplo 3 N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO

Boc-N-Me-Aib-OH (327 mg; 1,5 mmol; 2,6 eq.) foi dissolvido em diclorometano (10 ml) e arrefecido a 0°C. 15 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ

Posteriormente, foi adicionado diciclo-hexilcarbodiimida (156 mg; 0,75 mmol; 1,3 eq). A mistura, após filtração de DCU, foi adicionada a uma solução contendo o TFA, H-Trp-D-gTrp-CHO (0,59 mmol; 1 eq.) e trietilamina (267 μΐ; 3,3 eq.) em diclorometano (5 ml) . A mistura reaccional foi lentamente aquecida à temperatura ambiente e finalizada após 24h. A mistura foi diluída com acetato de etilo (25 ml) e lavada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (50 ml), hidrogenossulfato de potássio aquoso (50 ml, 1M), e cloreto de sódio aquoso saturado (50 ml). A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel eluindo com acetato de etilo/metanol {9/1} para proporcionar 180 mg (53%) de Boc-N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO sob a forma de espuma branca.

Boc-N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO (180 mg; 0,3 mmol) foi dissolvido numa mistura de ácido trifluoroacético (8 ml), anisole (1 ml) e tioanisole (1 ml) durante 30 minutos a 0°C. Os solventes foram removidos in vacuo, o resíduo foi agitado com éter e o TFA precipitado, N-Me-Aib-D-gTrp-CHO foi filtrado. O produto TFA, N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO (39 mg; 15%) foi purificado por HPLC preparativo (Waters, delta pak, C18, 40x100 mm, 5μιη, 100 A) . C27^32^603r 488 g.mol :H RMN (200 MHz, DMSO-d6) : δ 1,19 (s, 3H, CH3(Aib)); 1,42 (s, 3H, CH3 (Aib) ) ; 2,26 (s, 3H, NCH3) ; 3,12 (m, 4H, 2(CH2)p); 4,66 (m, 1H, (CH)ot) ; 5,32 e 5, 7 (m, 1H, (CH)a·)); 6,9-7,8 (m, 10H, 2 indóis); 8 (m, 1H, CHO(formilo)); 8,2-9 (m, 4H, 3NH(amidas) e NH(amina)); 10,87 (m, 2H, 2NXH(indóis)) .

Espectrometria de Massa (Electropulverização), m/z 489,29 [M+H]+.

Exemplo 4 H-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(0)CH3

Boc-D-(N1Boc)Trp-D-g(N1Boc)Trp-H (0,72 mmol; 1 eq.) foi dissolvido em DMF (20 ml) . Posteriormente foram adicionados N,N-diisopropiletilamina (259 ml; 2,1 eq.) e anidrido acético (749 ml; 1,1 eq.). Após lh, a mistura foi diluída com acetato 16 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ de etilo (100 ml) e lavada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (100 ml), hidrogenossulfato de potássio aquoso (100 ml, 1M) e cloreto de sódio aquoso saturado (50 ml) . A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido in vacuo. O residuo foi purificado por cromatografia flash em silica gel eluindo com acetato de etilo/hexano para proporcionar 370 mg (73%) de Boc-D-(N1Boc)Trp-D-g(N1Boc)Trp-C(0)CH3 sob a forma de sólido branco.

Boc-D-(N1Boc) Trp-D-g (N1Boc) Trp-C (0) CH3 (350 mg; 0,5 mmol; 1 eq.) foi dissolvido numa mistura de ácido trifluoroacético (8 ml), anisole (1 ml) e tioanisole (1 ml) durante 30 minutos a 0°C. Os solventes foram removidos in vacuo, o residuo foi agitado com éter e o TFA precipitado, H-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH3 foi filtrado.

Em 10 ml de DMF, foram sucessivamente adicionados TFA, H-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH3 (0,5 mmol; 1 eq.); Boc-Aib-OH (121 mg; 0,59 mmol; 1,2 eq.) e BOP (265 mg; 1,2 eq.). Após lh, a mistura foi diluída com acetato de etilo (25 ml) e lavada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (50 ml), hidrogenossulfato de potássio aquoso (50 ml, 1M) e cloreto de sódio aquoso saturado (50 ml). A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido in vacuo. O residuo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel eluindo com acetato de etilo para proporcionar 249 mg (85%) de Boc-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH3 sob a forma de espuma branca.

Boc-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH3 (249 mg; 0,42 mmol) foi dissolvido numa mistura de ácido trifluoroacético (8 ml), anisole (1 ml) e tioanisole (1 ml) durante 30 minutos a 0°C. Os solventes foram removidos in vacuo, o residuo foi agitado com éter e o TFA precipitado H-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH3 foi filtrado. O produto TFA H-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH3 (80 mg; 23%) foi purificado por HPLC preparativo (Waters, delta pak, C18, 40x100 mm, 5 mm, 100 A). C27H32Ne03, 488 g.mol ^1. XH RMN (200 MHz, DMSO-d6) : δ 1,22 (s, 3H, CH3(Aib)); 1,44 (s, 3H, CH3 (Aib) ) ; 1,8 (s, 3H, C(0)CH3); 3,06 (m, 4H, 2 (CH2) p) ; 4,6 17 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ (m, 1Η, (CH)α) ; 5,6 (m, 1H, (CH)a.)); 6,9-7,8 (m, 10H, 2 indóis); 7,99 (s, 2H, NH2(Aib))); 8,2-8,6 (m, 3H, 3NH(amidas); 10,83 (s, 2H, 2ΝΧΗ(indóis)).

Espectrometria de Massa (Electropulverização), m/z 489,32 [M+H]+.

Exemplo 5 N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH3

Boc-N-Me-Aib-OH (1,09 g; 5,04 mmol; 4 eq.) foi dissolvido em diclorometano (10 ml) e arrefecido a 0°C. Posteriormente, foi adicionado diciclocarbodiimida (520 mg; 2,52 mmol; 2 eq.). A mistura, após filtração do DCU, foi adicionada a uma solução contendo o TFA, H-D-Trp-D-gTrp-C(0)CH3 (940 mg; 1,26 mmol; 1 eq.) e trietilamina (580 ml; 3,3 eq.) em diclorometano (5 ml). A mistura reaccional foi lentamente aquecida à temperatura ambiente e finalizada após 24h. A mistura foi diluída com acetato de etilo (50 ml) e lavada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (100 ml), hidrogenossulfato de potássio aquoso (100 ml, 1M) e cloreto de sódio aquoso saturado (100 ml). A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel eluindo com acetato de etilo/metanol {9/1} para proporcionar 530 mg (70%) de Boc-N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH3 sob a forma de espuma branca.

Boc-N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH3 sob (530 mg; 0,88 mole) foi dissolvido numa mistura de ácido trifluoroacético (8 ml), anisole (1 ml) e tioanisole (1 ml) durante 30 minutos a 0°C. Os solventes foram removidos in vacuo, o resíduo foi agitado com éter e o TFA precipitado N-Me-Aib-DTrp-D-gTrp-C(O)CH3 foi filtrado. O produto TFA, Boc-N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(O)CH3 (220 mg; 30%) foi purificado por HPLC preparativo (Waters, delta pak, C18, 40x100 mm, 5 mm, 100 A). C26H34N603, 502 g.mol”1. ΧΗ RMN (200 MHz, DMSO-d6) : δ 1,17 (s, 3H, CH3(Aib)); 1,78 (s, 3H, C(O)CHs); 2,23 (s, 3H, NCH3) ; 3,15 (m, 4H, 2(CH2)p); 4,7 (m, 1H, (CH)a); 5,55 (m, 1H, (CH)a·)); 6,9-7,9 (m, 10H, 18 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ 2 indóis); 8,2-8,8 (s, 4Η, NH(amina) e 3NH (amidas)); 10,8 (s, 2H, 2N1H(indóis)) .

Espectrometria de Massa (Electropulverização), m/z 503, 19 [M+H]\

Exemplos 10-62 de modo

Os compostos seguintes foram preparados similar:

Exemplo 10 H-Aib-D-Mrp-gMrp-CHO

Exemplo 11 H-Aib-Trp-gTrp-CHO

Exemplo 12 H-Aib-Trp-D-gTrp-CHO

Exemplo 13 H-Aib-D-Trp-gTrp-CHO

Exemplo 19 Aib-D-Trp-gTrp-CO-CH2-CH3

Exemplo 2 0 Aib-D-Trp-gTrp-CO-CH2-CH(CH3) -CH3

Exemplo 21 Aib-D-Trp-gTrp-CO-CH2-fenilo

Exemplo 23 Aib-D-Trp-gTrp-CO-pirrol-3-ilo

Exemplo 24 Aib-D-Trp-gTrp-CO-CH2-CH2-ciclo-hexilo

Exemplo 25 N-Me-Aib-D-Trp-gTrp-CO-CH2-CH3

Exemplo 2 6 N-Me-Aib-D-Trp-gTrp-CO-CH2-CH (CH3) CH3

Exemplo 27 N-Me-Aib-D-Trp-gTrp-CO-CH2-fenilo

Exemplo 28 N-Me-Aib-D-Trp-gTrp-CO-CH2-pirrol-3-ilo

Exemplo 29 N-Me-Aib-D-Trp-gTrp-CO-CH2-ciclo-hexilo

Exemplo 30 Aib-D-Trp-gTrp-CHO

Exemplo 40 N-Me-Aib-D-Trp-N-Me-D-gTrp-C(O)CH3 19 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ

Exemplo 41 H-Aib-D-Trp-N-Me-D-gTrp-C(Ο)CH3 Exemplo 52 N (Me)2-Aib-(D)-Trp-(D)-gTrp-formilo C28H36N6O3, 502 g.mol XH RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,2 (s, 3H, CH3(Aib)); 1,39 (s, 3H, CH3 (Aib) ) ; 2,29 (m, 3H, NCH3) ; 2,29 (m, 3H, NCH3) ; 2,99-3,33 (m, 4H, 2 (CH2)p); 4,68 (m, 1H, CHa); 5,3 e 5,69 (m, 1H, CHa«); 6,97-7, 72 (m, 10H, 2 indóis); 7,97 (2s, 1H, formilo); 8,2-9,47 (m, 3H, 3NH(amidas)); 10,85 (m, 2H, 2NH (indóis). Espectrometria de massa (Electropulverização), m/z 503,45 [M+H]+. HPLC analítica (Symmetry shield 3,5μ C18 100 A, 1 ml/min, 214 nm, eluente: H20/ACN 0,1% TFA, gradiente 0 a 100% ACN em 15 min), tr= 6,63 min, 99%. Composto liofilizado.

Exemplo 53 N(Me)2-Aib-D-Trp-D-gTrp-acetilo C29H36N6O3, 516 g.mol RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,22 (s, 3H, CH3(Aib)); 1,4 (s, 3H, CH3 (Aib)); 1,8 (s, 3H, acetilo); 2,28 (d, 3H, NCH3); 2,96-3,22 (m, 4H, 2(CH2)p); 4,7 (m, 1H, (CH)a); 5,60 (m, 1H, (CH)a-); 6,98-7, 75 (m, 10H, 2 indóis); 8,2-9,47 (m, 3H, 3NH(amidas)); 10,84 (m, 2H, 2NH (indóis).

Espectrometria de massa (Electropulverização), m/z 517,34 [M+H]+. HPLC analítica (Symmetry shield 3,5μ C18 100 A, 1 ml/min, 214 nm, eluente: H20/ACN 0,1% TFA, gradiente 0 a 100% ACN em 15 min), tr= 7,07 min, 99%. Composto liofilizado.

Exemplo 60 H-Aib-(R)-Mrp-(D)-gTrp-formilo

Exemplo 61 H-Aib-(D)-Trp-(R)-gMrp-formilo

Exemplo 62 N-Me-Aib-(D)-Trp-(R)-gMrp-acetilo 20 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ

Exemplo 63 AVALIAÇÃO DA ACTIVIDADE DE LIBERTAÇÃO DA HORMONA DO CRESCIMENTO DOS NOVOS SECRETAGOGOS DE HORMONA DE CRESCIMENTO NO RATO JOVEM

Animais

Foram utilizados ratos Sprague Dawley machos com 10 dias de idade, cerca de 25 g de peso corporal.

As crias foram recebidas no quinto dia após nascimento e foram alojadas sob condições controladas (22±2°C, 65% de humidade e luz artificial desde as 06.00 às 20.00h). Estavam disponíveis ad libitum uma dieta seca padrão e água nas divisórias.

Procedimento Experimental

Uma hora antes dos ensaios, as crias foram separadas das suas respectivas divisórias e foram divididas de modo aleatório em grupos de oito cada.

As crias foram intensamente estimuladas subcutaneamente com 100 μΐ de solvente (DMSO, diluição final 1:300 em solução salina fisiológica), hexarelina (Tyr-Ala-His-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2, utilizada como droga padrão), ou novos compostos (300 μρ/]ζρ) e mortas por decapitação passados 15 min.

Foi recolhido o sangue do tronco e foi imediatamente centrifugado: as amostras de plasma foram armazenadas a -20°C até serem analisadas para a determinação das concentrações de GH no plasma.

As concentrações da hormona de crescimento no plasma foram medidas por ria utilizando materiais fornecidos pelo National Institute of Diabetes, Digestive and Kidney Diseases (NIDDK) do National Institute of Health U.S.A.

Os valores foram expressos em termos do padrão NIDDK-rat-GH-RP-2 (potência 21 U/mg) como ng/ml de plasma. O valor mínimo detectável de GH no rato era cerca de 1,0 ng/ml, e a variabilidade entre ensaios foi cerca de 6%. 21 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ

Os resultados obtidos das várias séries de testes, nos quais foi determinada a actividade in vivo no rato, estão listados nas tabelas 1 a 10.

Tabela 1

Exemplo Estrutura GH ng/ml 1 H-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO 158139,4 13 H-Aib-D-Trp-gTrp-CHO 5816,3 SOLVENTE 15,018,0 HEXARELINA Tyr-Ala-His-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2 202+32,7

Tabela 2

Exemplo Estrutura GH ng/ml 3 N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO 86,6112,6 4 H-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(0)CH3 104,7113,5 5 N-Me-Aib-D-Trp-D-gTrp-C(0)CH3 175,5137,2 SOLVENTE 20,7+0,9 HEXARELINA Tyr-Ala-His-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2 134,5+27,2

Tabela 3

Exemplo Estrutura GH ng/ml 19 Aib-D-Trp-gTrp-CO-CH2-CH3 79,8+22,4 20 Aib-D-Trp-gTrp-CO-piperidin-4-ilo 153,6+30,6 SOLVENTE 22,3+5 HEXARELINA Tyr-Ala-His-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2 114,7+8,4

Tabela 4

Exemplo Estrutura GH ng/ml 40 N-Me-Aib-D-Trp-N-Me-D-gTrp-C(0)CH3 188,2+28,5 41 H-Aib-D-Trp-N-Me-D-gTrp-C(0)CH3 75,4+15,0 SOLVENTE 10,5512,65 HEXARELINA Tyr-Ala-His-D-Mrp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2 114,5112,9 22 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ

Tabela 7

Exemplo Estrutura GH ng/ml 52 N (Me) 2-Aib-(D)-Trp-(D)-gTrp-formilo 121,43129 53 N (Me) 2-Aib-(D)-Trp-(D)-gTrp-acetilo 26,8015,64 SOLVENTE 7,8911,77 HEXARELINA 172,5+38,53

Tabela 8

Exemplo Estrutura GH ng/ml 60 H—Aib—(R)-Me-Trp-(D)-gTrp-formilo 21,02+3,43 61 H-Aib-(D)-Trp-(R)-Me-gTrp-formilo 152,28+43,76 62 H-Me-Aib-(D)-Trp-(R)-Me-gTrp-acetilo 171,78+10,32 SOLVENTE 7,89+1,77 HEXARELINA 172,5+38,53

Além disso a dependência no tempo da actividade oral no cão (lmg/kg; per os) foi estimada para o exemplo 1 (H-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO). Foram utilizados Beagles bem treinados de qualquer dos sexos, >10 anos, 10-15 kg de peso. Os animais foram normalmente alimentados com alimentação seca com água ad libitum e estiveram num regime de 12h-luz/12h-escuridão com inicio às 07.00. O composto foi administrado oralmente aos cães que tinham sido alimentados desde as 16.00 do dia anterior. Foram retiradas amostras de sangue 20 min antes de administração, durante a administração e 15, 30, 60, 90, 120 e 180 min após administração. Os resultados são apresentados na tabela 11. 23 ΕΡ 1 344 773/ΡΤ

Tabela 11

Exemplo NOME DO CÃO 1 DAKOTA JORMA RAZ DEGAN FORREST LEE MARKUS TAYLOR VALOR MÉDIO SEM t(min) Concentração de GH (ng/ml) -20 0,48 3,58 2,14 1,43 2,45 2,32 2,07 0,38 0 0,35 2,75 1,64 2,01 2,55 1, 41 1,79 1,03 15 2,11 8, 91 3,58 6,38 6,11 4,8 5,32 1, 02 30 0,54 6,85 6,37 8,48 6,9 3,89 5,5 1,07 60 0,17 2,65 3,02 4, 41 6,51 4,34 3,52 0,84 90 0,4 2, 47 2,61 6,42 5,18 4,43 3,59 0,66 120 3,58 2, 48 1, 94 3, 71 4,54 4,28 3, 42 0,38 180 2,46 2,82 1,49 3,18 4,12 3,18 3,04 0,36 AUC 328,53 658,38 510,64 888,91 944,26 721,34 675,35 94, 47 SEM = Desvio padrão AUC = Área sob a curva

Lisboa,

Claims

ΕΡ 1 344 773/ΡΤ 1/3 REIVINDICAÇÕES 1. Composto com a fórmula I

H (0 na qual * significa um átomo de carbono que, quando é um átomo de carbono quiral, possui uma configuração R ou S, R é um átomo de hidrogénio e R3 é um grupo de fórmula II

R1 é um grupo de acordo com a fórmula IV:

R4 é um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C1-C4 linear ou ramificado, R5 é um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo C1-C4 linear ou ramificado, um grupo (CH2)n-arilo, em que arilo é fenilo ou naftilo, um grupo (CH2) n-heterociclico, em que o grupo heterociclico é isonipecotilo, 4-piperidinilo ou 3-pirrolilo, um grupo (CH2) n-cicloalquilo, em que o grupo cicloalquilo é ciclo-hexilo, ou um grupo amino, R6 e R7 são, independentemente um do outro, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C1-C4 linear ou ramificado, R11 e R12 são, independentemente um do outro, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C1-C4 linear ou ramificado, mé0enélou2. 1 Compostos de acordo com a reivindicação 1, em que o grupo alquilo C1-C4 linear ou ramificado é metilo.
ΕΡ 1 344 773/ΡΤ 2/3
3. Composto que é
4. Composto que é •H
5. Composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com a reivindicação 1.
6. Composição da reivindicação 5, em combinação com um suporte farmaceuticamente aceitável.
7. Composição da reivindicação 5, em combinação com um secretaqogo de hormona de crescimento adicional.
8. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 para o fabrico de um medicamento para elevar o nível no plasma da hormona de crescimento num mamífero.
9. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 para o fabrico de um medicamento para o tratamento da deficiência de secreção da hormona de crescimento. ΕΡ 1 344 773/ΡΤ 3/3
10. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 para o fabrico de um medicamento para o tratamento do atraso de crescimento numa criança.
11. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 para o fabrico de um medicamento para 0 tratamento de desordens metabólicas associadas com a deficiência de secreção da hormona de crescimento num indivíduo.
12. Utilização tal como reivindicada na reivindicação 11 na qual o indivíduo é um indivíduo idoso.
13. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 para o fabrico de um medicamento para promoção da cicatrização de feridas, recuperação de cirurgias ou recuperação de doenças debilitantes. Lisboa,