PL193352B1 - Koniugat poliol-interferon ß, sposób jego wytwarzania i jego zastosowanie oraz kompozycja farmaceutyczna - Google Patents
Koniugat poliol-interferon ß, sposób jego wytwarzania i jego zastosowanie oraz kompozycja farmaceutycznaInfo
- Publication number
- PL193352B1 PL193352B1 PL344490A PL34449099A PL193352B1 PL 193352 B1 PL193352 B1 PL 193352B1 PL 344490 A PL344490 A PL 344490A PL 34449099 A PL34449099 A PL 34449099A PL 193352 B1 PL193352 B1 PL 193352B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- polyol
- peg
- ifn
- interferon
- conjugate
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 42
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 14
- 101001054334 Homo sapiens Interferon beta Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 claims abstract description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 114
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 106
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 claims description 82
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 claims description 30
- 150000003077 polyols Chemical group 0.000 claims description 26
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 17
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims description 17
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 claims description 15
- HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N aldrithiol Chemical compound C=1C=CC=NC=1SSC1=CC=CC=N1 HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 6
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 claims description 5
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical compound C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 claims description 4
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims description 3
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 claims description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 3
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 3
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 3
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 claims description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 20
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 18
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 18
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 abstract description 16
- 125000003396 thiol group Chemical class [H]S* 0.000 abstract description 2
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 67
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 25
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 16
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 12
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 10
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 9
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 9
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 8
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 description 8
- -1 for example Chemical class 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100040019 Interferon alpha-1/13 Human genes 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 3
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 206010010099 Combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 2
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000001906 matrix-assisted laser desorption--ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 2
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 208000002491 severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- LOVPHSMOAVXQIH-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) hydrogen carbonate Chemical class OC(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 LOVPHSMOAVXQIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AWAFMFHOLVZLFG-UHFFFAOYSA-N 1-iodoaziridine-2,3-dione Chemical compound IN1C(=O)C1=O AWAFMFHOLVZLFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003923 2,5-pyrrolediones Chemical class 0.000 description 1
- BTBWSRPRAGXJJV-UHFFFAOYSA-N 2h-benzotriazole;carbonic acid Chemical class OC(O)=O.C1=CC=C2NN=NC2=C1 BTBWSRPRAGXJJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHBAPGWWRFVTFS-UHFFFAOYSA-N 4,4'-dipyridyl disulfide Chemical group C=1C=NC=CC=1SSC1=CC=NC=C1 UHBAPGWWRFVTFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVMIBSYQKBTNOW-UHFFFAOYSA-N 4-methylperoxy-4-oxobutanoic acid Chemical compound COOC(=O)CCC(O)=O AVMIBSYQKBTNOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102000055025 Adenosine deaminases Human genes 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010005714 Interferon beta-1b Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229920001734 PEG propionaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 108091006006 PEGylated Proteins Proteins 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940060205 adagen Drugs 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 150000008431 aliphatic amides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 1
- 208000037979 autoimmune inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940021459 betaseron Drugs 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 1
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Substances OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 1
- JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N glutaric acid Chemical compound OC(=O)CCCC(O)=O JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 1
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940076264 interleukin-3 Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 1
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 238000004810 partition chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 108010001564 pegaspargase Proteins 0.000 description 1
- WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N pentaerythritol Chemical compound OCC(CO)(CO)CO WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L phthalate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C([O-])=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920000233 poly(alkylene oxides) Polymers 0.000 description 1
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920001583 poly(oxyethylated polyols) Polymers 0.000 description 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 229920013730 reactive polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000563 toxic property Toxicity 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
1. Koniugat poliol-interferon ß, znamienny tym, ze zawiera ugrupowanie poliolu kowalen- cyjnie zwi azane z Cys 17 ludzkiego interferonu ß. 6. Sposób wytwarzania koniugatu poliol-interferon ß okre slonego w zastrz. 1, znamienny tym, ze - poddaje si e interferon ß reakcji ze srodkiem stanowi acym poliol reaktywny w stosunku do grupy tiolowej, b ed acy pochodn a poliolu zawieraj ac a grup e funkcyjn a wybran a z grupy obejmuj acej ugrupowanie disulfidu o-pirydylowego, sulfonu winylowego, maleimidu i jodoacetamidu; - wyodr ebnia si e wytworzony koniugat poliol-interferon ß. 12. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, ze zawiera koniugat poliol-interferon ß okre slony w zastrz. 1 jako sk ladnik aktywny oraz farmaceutycznie dozwolony no snik, zaróbk e lub srodek pomocniczy. 13. Zastosowanie koniugatu poliol-interferon ß okre slonego w zastrz. 1 do wytwarzania kom- pozycji farmaceutycznej do leczenia zaka ze n, nowotworów oraz chorób autoimmunizacyjnych i za- palnych. PL PL PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest koniugat poliol-interferon β, sposób jego wytwarzania i jego zastosowanie oraz kompozycja farmaceutyczna. Opisano takie koniugaty PEG-IFN-β, w których poliol jest kowalencyjnie związany z Cys17 oraz sposób, specyficznego względem miejsca, wytwarzania tych koniugatów i ich użycie w leczeniu, prognozowaniu lub diagnozowaniu zakażeń bakteryjnych, zakażeń wirusowych, chorób autoimmunizacyjnych i chorób zapalnych.
Ludzki interferon fibroblastowy (IFN-β) wykazuje aktywność przeciwwirusową i może także stymulować aktywność naturalnych komórek-zabójców (komórek K) skierowaną przeciw komórkom nowotworowym. Jest to polipeptyd o około 20000 Da, indukowany przez wirusy i dwuniciowy DNA. Z sekwencji nukleotydów genu dla interferonu fibroblastowego, po sklonowaniu metodą rekombinacji DNA, Derynk i in. [Nature, 285, 542-547 (1980)] wydedukowali pełną sekwencję aminokwasów tego białka. Jej długość wynosi 166 aminokwasów.
Shepard i in. [Nature, 294, 563-565 (1981)] opisali mutację przy zasadzie 842 (Cys > Tyr w pozycji 141) niweczącą aktywność przeciwwirusową oraz klon wariantowy z delecją nukleotydów 1119-1121.
Mark i in [Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81 (18), 5662 -5666 (1984)] dokonali wstawienia sztucznej mutacji za pomocą zastąpienia zasady 469 (T) przez (A), powodując w ten sposób przestawienie aminokwasów z Cys > Ser w pozycji 17. Doniesiono, że otrzymany IFN-β był tak samo aktywny, jak IFN-β „natywny”, a także wykazywał stabilność w warunkach długotrwałego przechowywania (w temperaturze -70°C).
Kowalencyjne przyłączenie do cząsteczek polimeru hydrofilowego, a mianowicie poli(glikolu etylenowego) (PEG), znanego także jako poli(tlenek etylenu) (PEO), znajduje ważne zastosowanie w biotechnologii i medycynie. W swej najbardziej typowej postaci PEG jest liniowym polimerem z grupami hydroksylowymi na obu końcach:
HO-CH2-CH2O (CH2CH2O)nCH2CH2-OH
Wzór ten można w skróceniu przedstawić jako HO-PEG-OH, przy czym rozumie się, że -PEGoznacza szkielet polimeru bez grup końcowych:
„-PEG”- oznacza -CH2CH2O(CH2CH2O)nCH2CH2PEG stosowany jest zwykle jako metoksy-PEG-OH (m-PEG), w którym jeden koniec stanowi względnie obojętna grupa metoksylowa, a drugi grupa hydroksylowa, podlegająca modyfikacji chemicznej:
CH3O-(CH2CH2O)n-CH2CH2-OH
Powszechnie stosowane są także PEG rozgałęzione. PEG rozgałęzione można przedstawić wzorem:
R(-PEH-OH)m w którym R oznacza centralne ugrupowanie rdzeniowe, takie jak pentaerytrytol lub glicerol, a m oznacza liczbę rozgałęzionych ramion. Ilość rozgałęzionych ramion (m) może mieścić się w zakresie od 3 do 100 lub więcej. Grupy hydroksylowe poddaje się modyfikacji chemicznej.
Inna rozgałęziona postać PEG, taka, jaką ujawniono w dokumencie WO 96/21469, posiada pojedynczy koniec podlegający modyfikacji chemicznej. PEG tego typu można przedstawić wzorem:
(CH3O-PEG-)PR-X w którym p oznacza 2 lub 3, R oznacza centralny rdzeń, taki jak lizyna lub glicerol, a X oznacza grupę funkcyjną, taką jak grupa karboksylowa, która podlega modyfikacji chemicznej. Jeszcze inna postać rozgałęziona, a mianowicie „PEG z grupami bocznymi” zawiera grupy funkcyjne, takie jak grupa karboksylowa, rozmieszczone raczej wzdłuż szkieletu PEG niż na końcu łańcuchów PEG.
PL 193 352 B1
Oprócz tych postaci PEG, polimer ten można wytworzyć także w postaci zawierającej słabe lub ulegające rozkładowi wiązania w szkielecie. I tak, na przykład, Harris (dokument US nr 6 214 966) wykazał, że można wytworzyć PEG z ulegającymi hydrolizie wiązaniami estrowymi w szkielecie polimeru. Hydroliza taka prowadzi do rozszczepienia polimeru na fragmenty o mniejszej masie cząsteczkowej, zgodnie z poniższym schematem reakcji:
-PEG-CO2-PEG- + H2O -PEG-CO2H + HO-PEGRozumie się, że stosowany w niniejszym opisie termin „poli(glikol etylenowy)” lub „PEG” obejmuje swym zakresem wszystkie pochodne wyżej opisane.
Z PEG są ściśle spokrewnione, pod względem chemicznym, kopolimery tlenku etylenu i tlenku propylenu i można ich używać zamiast PEG w wielu zastosowaniach. Mają one wzór następujący:
HO-CH2CHRO(CH2CHRO)nCH2CHR-OH w którym R oznacza H lub CH3.
PEG jest użytecznym polimerem odznaczającym się właściwością dobrej rozpuszczalności w wodzie, jak również dobrą rozpuszczalnością w szeregu rozpuszczalników organicznych. PEG jest także nietoksyczny i nieimmunogenny. W przypadku przyłączania PEG metodą chemiczną (ang. PEGylation, w dalszym ciągu niniejszego opisu „PEG-ilowanie”) do związku nierozpuszczalnego w wodzie, powstały tak koniugat jest na ogół rozpuszczalny w wodzie, a także rozpuszczalny w wielu rozpuszczalnikach organicznych.
Obecnie, koniugatu PEG-białko używa się w metodach leczenia obejmujących zastępowanie białka i w innych sposobach leczenia. I tak, na przykład, PEG-ilowana deaminaza adenozynowa (ADAGEN®) stosowana jest do leczenia ostrego złożonego upośledzenia odporności (SCIDS), PEG-ilowanej L-asparaginazy (ONCAPSPAR®) używa się do leczenia ostrej białaczki limfoblastycznej (ALL), a PEG-ilowany interferon α [INTRON(R) A] znajduje się w III fazie prób leczenia zapalenia wątroby C.
Jeśli chodzi o ogólny przegląd klinicznie skutecznych koniugatów PEG-białko - patrz: N. L.
Burnham, Am. Chem. Hosp. Pharm., 15, 210 - 218 (1994).
Opracowano szereg różnych metod PEG-ilowania białek. Typowo, przyłączenia PEG do reaktywnych grup znajdujących się na białku dokonuje się z wykorzystaniem elektronofilowo zaktywowanych pochodnych PEG. Przyłączenie PEG do grup aminowych α i ε znajdujących się na resztach lizyny i N-końcu prowadzi do otrzymania koniugatu złożonego z mieszaniny produktów.
Ogólnie, koniugaty tego rodzaju złożone są populacji szeregu cząsteczek PEG przyłączonych do jednej cząsteczki białka („PEGmery”) w ilości mieszczącej się w zakresie od 0 do liczby grup aminowych w tym białku. W przypadku pojedynczo zmodyfikowanej cząsteczki białka, jednostka PEG może być przyłączona w aktualnej ilości różnych miejsc o charakterze aminowym.
Ten typ niespecyficznego PEG-ilowania prowadzi do powstania szeregu koniugatów, które stają się prawie pozbawione aktywności. Typowo, to zmniejszenie się aktywności spowodowane jest przez ekranowanie aktywnej wiążącej domeny białka, jak to się zdarza w przypadku wielu cytokin i przeciwciał. I tak, na przykład, Katre i in., w opisach patentowych US 4 766 106 i US 4 917 888, ujawniają PEG-ilowanie IFN-β i IL-2 użytym w dużym nadmiarze glutaranem metoksy-polietylenoglikolilo-N-sukcynoimidylu i bursztynianem metoksy-polietylenoglikolilo-N-sukcynoimidylu. Oba te białka wytworzono w drobnoustrojowych komórkach-gospodarzach, co umożliwiło specyficzną względem miejsca mutację wolnej cysteiny do seryny. Mutacja była potrzebna w mikrobiologicznej ekspresji IFN-β dla ułatwienia sfałdowania białka. W szczególności, jako IFN-β stosowanego w tych eksperymentach użyto produktu handlowego Betaseron®, w którym reszta Cys17 zastąpiona jest seryną. Oprócz tego, brak glikozylacji doprowadził do zmniejszenia jego rozpuszczalności w roztworze wodnym. Niespecyficzna PEG-ilacja doprowadziła do zwiększenia rozpuszczalności, ale głównym problemem pozostał obniżony poziom aktywności, a także wydajności.
W europejskim zgłoszeniu patentowym EP 593868, zatytułowanym „Koniugaty PEG-interferon”, opisano wytwarzanie koniugatów PEG-IFN-α. Jednakże, reakcja PEG-ilowania nie jest specyficzna względem miejsca, w wyniku czego otrzymuje się mieszaninę pozycyjnych izomerów koniugatów PEG-IFN-α [patrz także: Monkarsh i in., ACS Symp. Ser., 680, 207-216 (1997)].
PL 193 352 B1
Kinstler i in. w europejskim zgłoszeniu patentowym EP 675 201 zademonstrowali selektywną modyfikację N-końcowej reszty megakariocytowego czynnika wzrostu i rozwoju (MGDF) przy użyciu m-PEG-propionoaldehydu. Postępowanie takie umożliwiło dokonywanie w powtarzalny sposób PEG-ilowania i uzyskiwania odtwarzalnej farmakokinetyki z serii (produkcyjnej) na serię.
Gilbert i in., w opisie patentowym US 5 711 944 wykazali, że możliwe jest PEG-ilowanie IFN-α z osiągnięciem optymalnego poziomu aktywności. W ich przypadku potrzebne okazało się wprowadzenie pracochłonnego etapu oczyszczania w celu uzyskania koniugatu o optymalnych właściwościach.
Większość cytokin, tak jak i innych białek, nie posiada specyficznego miejsca przyłączania PEG i (poza wymienionymi powyżej przykładami) jest wysoce prawdopodobne, że niektóre izomery wytworzone na drodze reakcji PEG-ilowania są częściowo lub całkowicie nieaktywne. Prowadzi to do utraty aktywności końcowej mieszaniny.
Tak więc, pożądanym celem wytwarzania koniugatów białkowych tego rodzaju jest mono-PEG-ilowanie specyficzne względem miejsca.
Woghiren i in. [Bioconjugate Chem., 4 (5), 314-318 (1993)] zsyntetyzowali specyficzną względem grupy tiolowej pochodną PEG w celu wykorzystania jej w PEG-acylowaniu specyficznym względem miejsca. Wykazali oni, że trwała, z zabezpieczoną grupą tiolową pochodna PEG w postaci reaktywnej grupy disulfidu p-pirydylowego, tworzy w sposób specyficzny koniugat z wolną cysteiną obecną w białku, a mianowicie papainie. Nowo utworzone wiązanie disulfidowe między papainą a PEG można było rozszczepić w łagodnych warunkach redukujących, ze zregenerowaniem białka natywnego.
W dokumencie WO 87/00056 ujawniono sposób solubilizacji kompozycji farmaceutycznych nierozpuszczalnych w wodzie białek wybranych z interferonu β, interleukiny-2, immunotoksyny. Białka są sprzężone z rozpuszczalnym w wodzie polimerem wybranym z homopolimerów glikolu polietylenowego lub polioksyetylowanych polioli.
W dokumencie US 5 206 344 ujawniono koniugat interleukina-2-muteina z PEG. Połączenie zostało utworzone z zastosowaniem reagenta PEG-imid maleinowy.
W dokumencie US 5 166 322 opisano odmianę interleukiny-3 z dodaną cysteiną, mającą jedną lub więcej reszt cysteinowych. Muteiny są modyfikowane przez sprzęganie reaktywnych tiolowych polimerów z wprowadzonym resztami cysterny, w jednym etapie.
Koniugat poliol-interferon β, zgodnie z wynalazkiem charakteryzuje się tym, że zawiera ugrupowanie poliolu kowalencyjnie związane z Cys17 ludzkiego interferonu β.
Korzystnie, wspomnianym ugrupowaniem poliolu jest ugrupowanie glikolu polialkilenowego.
Bardziej korzystnie, wspomnianym ugrupowaniem glikolu polialkilenowego jest ugrupowanie glikolu polietylenowego (PEG).
Korzystnie, koniugat poliol-interferon β wykazuje aktywność taką samą, jak aktywność natywnego ludzkiego interferonu β lub wyższą.
Koniugat poliol-interferon β określony w zastrz. 1, zgodnie z wynalazkiem stosuje się jako lek.
Sposób wytwarzania koniugatu poliol-interferon β określonego w zastrz. 1, zgodnie z wynalazkiem charakteryzuje się tym, że:
- poddaje się interferon β reakcji ze środkiem stanowiącym poliol reaktywny w stosunku do grupy tiolowej, będący pochodną poliolu zawierającą grupę funkcyjną wybraną z grupy obejmującej ugrupowanie disulfidu o-pirydylowego, sulfonu winylowego, maleimidu i jodoacetamidu;
- wyodrębnia się wytworzony koniugat poliol-interferon β.
Korzystnie, jako środek stanowiący poliol reaktywny w stosunku do grupy tiolowej stosuje się reaktywny w stosunku do grupy tiolowej środek PEG-ilujący.
Korzystnie, środek stanowiący poliol reaktywny w stosunku do grupy tiolowej jest monometoksylowany.
Korzystnie, środek stanowiący poliol reaktywny w stosunku do grupy tiolowej jest dwufunkcyjny.
Korzystnie, jako środek reaktywny w stosunku do grupy tiolowej stosuje się pochodną monometoksylowanego poliolu utworzoną z disulfidem o-pirydylowym.
Korzystnie, etap reakcji przeprowadza się w kwasowym zakresie wartości pH, w którym interferon β jest trwały.
Kompozycja farmaceutyczna, zgodnie z wynalazkiem charakteryzuje się tym, że zawiera koniugat poliol-interferon β określony w zastrz. 1 jako składnik aktywny oraz farmaceutycznie dozwolony nośnik, zaróbkę lub środek pomocniczy.
PL 193 352 B1
Zastosowanie koniugatu poliol-interferon β określonego w zastrz. 1, zgodnie z wynalazkiem charakteryzuje się tym, że stosuje się go do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do leczenia zakażeń, nowotworów oraz chorób autoimmunizacyjnych i zapalnych.
Korzystnie, kompozycję stosuje się do leczenia choroby wybranej z grupy obejmującej wstrząs septyczny, AIDS, zapalenie stawów reumatoidalne, liszaj rumieniowaty i stwardnienie rozsiane.
Przedmiotowy wynalazek dotyczy koniugatów poliol-IFN-β, a w szczególności koniugatów PEG-lFN-β, w których jednostka poliolu jest kowalencyjnie związana z Cys17. Specyficzność koniugowania uzyskuje się przez poddanie środka stanowiącego poliol reaktywny w stosunku do grupy tiolowej, reakcji z resztą Cys17 w IFN-β. Oczekuje się, że koniugaty takie wykażą zwiększoną skuteczność działania in vivo. Celem jest tu uzyskanie wzmożonej rozpuszczalności przy pH obojętnym, zwiększonej trwałości (redukcji agregowania), zmniejszonej immunogenności i braku strat aktywności w stosunku do „natywnego” IFN-β. Wyniki takiego koniugowania będą prowadzić do zmniejszenia dawek leku dla uzyskania zamierzonego skutku, do uproszczenia i ustabilizowania formułowania kompozycji farmaceutycznej i, prawdopodobnie, do podwyższenia długoterminowej skuteczności.
Przedmiotowy wynalazek dotyczy także sposobu stopniowego przyłączania ugrupowań PEG szeregowo do polipeptydu.
Krótki opis rysunków
Figura 1 przedstawia wykres elektroforezy kapilarnej (CE) koniugatu PEG-IFN-β przed oczyszczeniem.
Figury fig. 2A-2C przedstawiają oczyszczanie koniugatu PEG-lFN-β przeprowadzane metodą chromatografii ekskluzyjnej (Superose 12): fig. 2A - pierwsze przejście; fig. 2B - drugie przejście; fig, 2C - trzecie przejście;
Figura 3 przedstawia chromatografię SDS-PAGE oczyszczonego koniugatu PEG- IFN-β z trzeciego przejścia chromatografii. Ścieżki 1 i 4 są to wzorce masy cząsteczkowej białka, ścieżka 2 jest to „natywny” IFN-β, a ścieżka 3 jest to koniugat PEG-IFN-β.
Figura 4 przedstawia wykres elektroforezy kapilarnej (CE) oczyszczonego koniugatu PEG-IFN-β, w którym IFN-β został PEG-ilowany przy użyciu mPEG-OPSS5k.
Figura 5 przedstawia widmo MALDI MS oczyszczonego koniugatu PEG-IFN-β.
Figura 6 przedstawia porównanie przeciwwirusowej aktywności „natywnego” IFN-β i koniugatu PEG-IFN-β. Komórki WISH inkubowano ze wskazanymi stężeniami próbek IFN-β w ciągu 24 godzin, po czym poddano je prowokacji cytopatycznymi dawkami wirusa pryszczycy. Efekt cytopatyczny oznaczano po upływie dalszych 48 godzin na podstawie konwersji MTT.
Figura 7 przedstawia profil wiązania IFN-β i PEG-IFN-β w komórkach Daudi.
Figura 8 przedstawia profil farmakokinetyczny IFN-β i PEG-IFN-β u myszy po podaniu dożylnym. Linie kropkowane pokazują LOQ testu dla każdej krzywej wzorcowej.
Figura 9 przedstawia profil farmakokinetyczny IFN-β i PEG-IFN-β u myszy po podaniu podskórnym. Linie kropkowane pokazują LOQ testu dla każdej krzywej wzorcowej.
Szczegółowy opis wynalazku
Wynalazek niniejszy oparty jest na odkryciu, że przyłączenie ugrupowania poliolu, a bardziej szczegółowo ugrupowania PEG, do reszty Cys17 ludzkiego IFN-β, nieoczekiwanie wzmagało biologiczną aktywność IFN-β wykazywaną przez natywny ludzki interferon-β (a co najmniej utrzymywało ją i nie prowadziło do jej osłabienia). I tak, IFN-β z ugrupowaniem poliolu przyłączonym do reszty Cys17 wykazuje taką samą lub zwiększoną aktywność biologiczną IFN-β, jednakże tego rodzaju koniugat poliol-IFN-β zapewnia także pożądane właściwości nadawane przez ugrupowanie poliolu, takie jak lepsza rozpuszczalność.
Stosowany w niniejszym opisie termin „IFN-β” oznacza ludzki interferon fibroblastowy, otrzymany przez wyodrębnienie z płynów fizjologicznych lub metodami rekombinacji DNA z prokariotycznych lub eukariotycznych komórek-gospodarzy, jak również jego sole, funkcjonalne pochodne, prekursory i frakcje aktywne, z tym, że zawierają one resztę cysteiny obecną w pozycji 17 formy naturalnej.
Ugrupowaniem poliolu w koniugacie poliol- IFN-β według niniejszego wynalazku może być dowolny, rozpuszczalny w wodzie jedno- lub dwufunkcyjny poli(tlenek alkilenu) o łańcuchu prostym lub rozgałęzionym. Typowo, poliolem jest poli(glikol alkilenowy), taki jak poli(glikol etylenowy) (PEG). Jednakże, specjaliści w tej dziedzinie wiedzy zdadzą sobie sprawę z tego, że można tu stosownie użyć także innych polioli, takich jak na przykład poli(glikol propylenowy) oraz kopolimery poli(glikolu etylenowego) i poli(glikolu propylenowego).
PL 193 352 B1
Stosowany w niniejszym opisie termin „ugrupowanie PEG” w zamierzeniu obejmuje swym zakresem PEG o łańcuchu prostym i rozgałęzionym, metoksy-PEG, PEG ulegający rozkładowi hydrolitycznemu lub enzymatycznemu, PEG z grupami bocznymi, dendrymeryczny PEG, kopolimery PEG i jednego lub wię cej niż jednego poliolu oraz kopolimery PEG i PLGA [poli(kwas mlekowy/kwas glikolowy)].
Stosowany w niniejszym opisie termin „sole” oznacza sole utworzone z udziałem obecnych w związku zarówno grup karboksylowych, jak i funkcyjnych grup aminowych, które to sole moż na otrzymać znanymi metodami.
Do soli grup karboksylowych należą sole nieorganiczne, takie jak na przykład sole sodowe, potasowe, wapniowe oraz sole utworzone z zasadami organicznymi, takie jak na przykład sole utworzone z aminami i trietanoloaminą, argininą i lizyną. Do soli grup aminowych należą, na przykład, sole utworzone z kwasami nieorganicznymi, takimi jak kwas chlorowodorowy oraz z kwasami organicznymi, takimi jak kwas octowy.
Stosowany w niniejszym opisie termin „pochodne funkcjonalne” odnosi się do pochodnych, które można wytworzyć z wykorzystaniem grup funkcyjnych obecnych w bocznych łańcuchach ugrupowań aminokwasowych lub w N- lub C-końcowych grupach, zgodnie ze znanymi sposobami postępowania i które objęte są zakresem niniejszego wynalazku wtedy, gdy są farmaceutycznie dozwolone, to znaczy wtedy, gdy nie niszczą aktywności białka lub gdy nie nadają właściwości toksycznych zawierającym je kompozycjom farmaceutycznym.
Do pochodnych takich należą, przykładowo, estry lub alifatyczne amidy grup karboksylowych, a takż e pochodne N-acylowe wolnych grup aminowych lub pochodne O-acylowe wolnych grup hydroksylowych. Są one utworzone z udziałem grup acylowych, jak na przykład w przypadku grup alkanoilowych lub aroilowych.
Stosowany w niniejszym opisie termin „prekursory” oznacza związki, które są przekształcane w IFN-β w organizmie ludzkim lub zwierzęcym.
Stosowany w niniejszym opisie termin „frakcje aktywne” białka odnosi się do jakiegokolwiek fragmentu lub prekursora łańcucha polipeptydowego związku jako takiego, samego lub w kombinacji z pokrewnymi cząsteczkami lub resztami z nim związanymi, na przykład resztami cukrowymi lub fosforanowymi albo agregatami cząsteczki polipeptydu, jeżeli tylko te fragmenty lub prekursory wykazują, jako lek, taką samą aktywność, jaką przejawia IFN-β.
Koniugaty według niniejszego wynalazku można wytworzyć którąkolwiek spośród stosownych metod znanych w tej dziedzinie techniki. Zgodnie z jednym ze sposobów wykonania niniejszego wynalazku IFN-β poddaje się reakcji ze środkiem PEG-ilującym w środowisku odpowiedniego rozpuszczalnika, po czym pożądany koniugat wyodrębnia się i oczyszcza, na przykład z zastosowaniem jednej lub więcej niż jednej metody chromatograficznej.
Stosowany w niniejszym opisie termin „metoda chromatograficzna” oznacza jakąkolwiek technikę stosowaną do wydzielania poszczególnych składników mieszaniny przez naniesienie jej na nośnik (faza stacjonarna), przez który przepływa rozpuszczalnik (faza ruchoma).
Zasady rozdziału chromatograficznego oparte są na odmiennym fizycznym charakterze fazy stacjonarnej i fazy ruchomej.
Do niektórych konkretnych typów metod chromatograficznych, dobrze znanych z piśmiennictwa, należą: chromatografia cieczowa, chromatografia cieczowa wysokosprawna, chromatografia jonowymienna, chromatografia absorpcyjna, chromatografia powinowactwa, chromatografia podziałowa, chromatografia hydrofobowa, chromatografia z odwróconymi fazami, chromatografia ekskluzyjna, ultrafiltracja lub chromatografia cienkowarstwowa.
Stosowany w niniejszym opisie termin „środek PEG-ilujący reaktywny w stosunku do grupy tiolowej” oznacza dowolną pochodną PEG zdolną do reagowania z grupą tiolową reszty cysteiny. Może to być, na przykład, PEG zawierający grupę funkcyjną, taką jak ugrupowanie disulfidu o-pirydylowego, sulfonu winylowego, maleimidu, jodoacetimidu i inne. Zgodnie z korzystnym sposobem wykonania niniejszego wynalazku, środkiem PEG-ilującym reaktywnym w stosunku do grupy tiolowej jest pochodna PEG w postaci jego disulfidu o-pirydylowego (OPSS).
Środka PEG-ilującego używa się w formie monometoksylowanej, w przypadku której tylko jeden koniec jest dostępny dla koniugowania albo w formie dwufunkcyjnej, w przypadku której oba końce są dostępne dla tej reakcji, jak na przykład przy tworzeniu koniugatu z dwoma lFN-β kowalencyjnie przyłączonymi do jednego ugrupowania PEG. Jego masa cząsteczkowa korzystnie mieści się w zakresie od 500 do 100000.
PL 193 352 B1
Poniżej pokazany jest typowy schemat reakcji prowadzących do wytworzenia koniugatów według wynalazku:
Drugi wiersz powyższego schematu przedstawia sposób rozszczepienia wiązania PEG-białko.
Pochodna mPEG-OPSS jest wysoce selektywna w stosunku do grup tiolowych i szybko reaguje w warunkach kwasowego zakresu wartości pH, podczas gdy IFN-β zachowuje stabilność. Tę wysoką selektywność można zademonstrować przez sprowadzenie koniugatu do natywnej postaci IFN-β i PEG.
Wykazano, że wiązanie disulfidowe utworzone między ugrupowaniami białka a PEG jest trwałe w krążeniu, ale że może ulec likwidacji po wniknięciu do środowiska komórki. Stąd też oczekuje się, że koniugat ten, w przypadku nie wniknięcia do komórki będzie trwały w krążeniu, aż do usunięcia.
Należy zauważyć, że powyższa reakcja jest specyficzna względem miejsca, ponieważ dwie inne reszty Cys obecne w pozycjach 31 i 141 w występującej naturalnie postaci ludzkiego IFN-β nie reagują ze środkiem PEG-ilującym, tworząc mostek disulfidowy.
Wynalazek niniejszy ukierunkowany jest również na sposób stopniowego przyłączania do polipeptydu dwóch lub więcej niż dwóch ugrupowań PEG. Sposób ten oparty jest na rozpoznaniu, że zaktywowany PEG o małej masie cząsteczkowej reaguje z ograniczanym zawadą przestrzenną miejscem reakcji na białku w sposób bardziej całościowy niż zaktywowany PEG o dużej masie cząsteczkowej. Modyfikacja drogich białek leczniczych przy użyciu PEG musi być kosztowo efektywna, aby wytwarzanie koniugatu PEG było praktycznie możliwe. Oprócz tego, w celu zmniejszenia filtracji kłębuszkowej i dla zoptymalizowania właściwości farmakologicznych koniugatu PEG-białko, koniugat ten powinien wykazywać efektywną wielkość równoważną wielkości białka o masie cząsteczkowej wynoszącej 70 kDa. Oznacza to, że w przypadku dokonywania specyficznej względem miejsca modyfikacji polegającej na przyłączeniu jednego ugrupowania PEG, korzystnie używa się pochodnej PEG o masie cząsteczkowej większej od 20 kDa. Jeżeli miejsce modyfikacji jest przestrzennie ciasne, to grupa reaktywna na dużym ugrupowaniu PEG może mieć trudności z osiągnięciem tego miejsca, co będzie prowadzić do niskiej wydajności. Korzystny sposób PEG-ilowania polipeptydu według niniejszego wynalazku podwyższa wydajność PEG-ilowanią specyficznego względem miejsca przez przyłączenie wpierw małego hetero- lub homodwufunkcyjnego ugrupowania PEG, dzięki czemu, w wyniku względnie niewielkich rozmiarów tego ugrupowania, może ono reagować z przestrzennie ciasnymi miejscami. Następnie, dokonuje się przyłączenia pochodnej PEG o dużej masie cząsteczkowej do małego ugrupowania PEG, czego wynikiem jest wysoka wydajność pożądanego białka PEG-ilowanego.
Sposób stopniowego przyłączania dwóch lub więcej niż dwóch ugrupowań PEG szeregowo do polipeptydu według niniejszego wynalazku polega na tym, że wpierw przyłącza się do polipeptydu heterodwufunkcyjne lub homodwufunkcyjne ugrupowanie PEG o małej masie cząsteczkowej, a następnie do wolnego końca tego ugrupowania PEG o małej masie cząsteczkowej (już przyłączonego do polipeptydu) dołącza się jednofunkcyjne lub dwufunkcyjne ugrupowanie PEG. Po stopniowym przyłączeniu dwóch lub więcej niż dwóch ugrupowań PEG szeregowo do polipeptydu (przy czym polipeptydem tym korzystnie jest IFN-β, w którym Cys17, chociaż znajdująca się w miejscu przestrzennie ciasnym, stanowi korzystne miejsce przyłączania PEG), otrzymany koniugat PEG-polipeptyd można poddać oczyszczaniu z zastosowaniem jednej lub więcej niż jednej metody oczyszczania, takiej jak chromatografia jonowymienna, chromatografia ekskluzyjna, chromatografia z interakcją hydrofobową, chromatografia powinowactwa i chromatografia z odwróconymi fazami.
Ugrupowanie PEG o małej masie cząsteczkowej ma następujący wzór:
W-CH2CH2O(CH2CH2O)nCH2CH2-X, w którym W i X oznaczają grupy niezależnie reagujące z funkcyjną grupą aminową, tiolową, karboksylową lub hydroksylową, z przyłączeniem do polipeptydu ugrupowania PEG o małej masie cząsteczkowej. Korzystnie, grupy o symbolach W i X wybiera się, niezależnie, spośród takich substancji, jak:
PL 193 352 B1 disulfid o-pirydylowy, maleimidy, sulfony winylowe, jodoacetamidy, aminy, tiole, związki karboksylowe, estry aktywne, pochodne węglanowe benzotriazolu, pochodne węglanowe p-nitrofenolu, izocyjaniany i biotyna. Korzystnie, ugrupowanie PEG o małej masie cząsteczkowej ma masę cząsteczkową mieszczącą się w zakresie od około 100 do 5000 daltonów.
Korzystnie, masa cząsteczkowa jednofunkcyjnego lub dwufunkcyjnego ugrupowania PEG przeznaczonego do przyłączenia do wolnego końca ugrupowania PEG o małej masie cząsteczkowej już przyłączonego do polipeptydu, mieści się w zakresie od około 100 daltonów do 200 kDa i stanowi, korzystnie, metoksy-PEG, rozgałęziony PEG, PEG ulegający rozkładowi hydrolitycznemu lub enzymatycznemu, PEG z grupami bocznymi lub dendrymerowy PEG. Jednofunkcyjny lub dwufunkcyjny PEG ma wzór:
Y-CH2CH2O(CH2CH2O)mCH2CH2-Z, w którym Y oznacza grupę reaktywną w stosunku do końcowej grupy na wolnym końcu ugrupowania PEG o małej masie cząsteczkowej, już przyłączonego do polipeptydu, a Z oznacza -OCH3 lub grupę reaktywną w stosunku do niej, z tworzeniem koniugatu dwufunkcyjnego.
Koniugatu PEG-polipeptyd, wytworzonego powyższym sposobem stopniowego przyłączania dwóch lub większej ilości ugrupowań PEG można używać do wytworzenia leku lub kompozycji farmaceutycznej przeznaczonej do leczenia chorób lub zaburzeń, w przypadku których polipeptyd okazuje się skuteczny jako składnik aktywny.
Innym celem niniejszego wynalazku są koniugaty otrzymane w zasadniczo czystej postaci, a to dla nadania im przydatności do wykorzystania, jako składnik aktywny, w składzie kompozycji farmaceutycznych, przeznaczonych do leczenia, diagnozowania lub prognozowania zakażeń bakteryjnych i wirusowych, jak również chorób autoimmunizacyjnych, zapalnych i nowotworów. Takie kompozycje farmaceutyczne stanowią dalszy cel niniejszego wynalazku.
Do przykładowych, wyżej wspomnianych chorób należą (bez ograniczania zakresu niniejszego wynalazku): wstrząs septyczny, AIDS, zapalenie stawów reumatoidalne, liszaj rumieniowaty i stwardnienie rozsiane.
Dalsze wykonania i korzyści odnoszone z wynalazku staną się oczywiste na podstawie poniższego opisu.
Jednym z wykonań niniejszego wynalazku jest podawanie, w ilości farmakologicznie skutecznej, koniugatów według wynalazku osobom z ryzykiem rozwoju jednej z przytoczonych powyżej chorób lub chorym już dotkniętym tymi patologiami.
Można tu wykorzystać dowolną drogę podawania, zgodną z charakterem aktywnego czynnika leku. Korzystne jest stosowanie pozajelitowe, takie jak podawanie drogą podskórną, domięśniową lub dożylną. Dawka składnika aktywnego, którą należy podać, zależy od przepisu lekarskiego opartego na takich danych, jak wiek, masa ciała i indywidualna odpowiedź pacjenta na lek.
Dawka może mieścić się w zakresie od 10 μg do 1 mg/dzień/średnia masa ciała 75 kg, korzystnie w zakresie od 20 μg do 200 μg.
Kompozycję farmaceutyczną przeznaczoną do stosowania pozajelitowego można sformułować w postać nadającą się do wstrzykiwań, zawierającą składnik czynny leku i właściwe vehiculum. Vehicula stosowane w postaciach leku przeznaczonych do podawania drogą pozajelitową są dobrze znane w tej dziedzinie techniki i należą do nich, na przykład: woda, fizjologiczny roztwór soli, roztwór Ringera i/lub glukoza. Vehiculum może zawierać niewielką ilość zarobek w celu utrzymania stabilności i izotoniczności preparatu farmaceutycznego. Sporządzenia roztworów dokonać można zgodnie z typowymi sposobami postępowania.
Wynalazek został opisany z odniesieniem się do konkretnych jego wykonań, ale treść opisu obejmuje swym zakresem wszystkie modyfikacje i zastępcze rozwiązania, które może wnieść specjalista w tej dziedzinie wiedzy bez rozszerzania zakresu wynalazku poza znaczenie i cel zastrzeżeń patentowych.
Wynalazek został zilustrowany przez następujące przykłady, których nie należy interpretować jako ograniczających zakres ochrony.
Znaczenia mPEG i OPSS są takie, jak podano we wcześniejszej części opisu. Oznaczenie podane w indeksie dolnym skrótu PEG (np. PEG5k) oznacza wartość masy cząsteczkowej PEG, mierzoną w kilodaltonach (patrz także opis str.17, akapit 1).
PL 193 352 B1
P r z y k ł a d 1. Wytwarzanie koniugatu PEG-IFN-β
Modyfikacja IFN-β przy użyciu mPEG5k-OPSS.
Do wytworzenia koniugatu PEG-IFN-β użyto zrekombinowanego ludzkiego IFN-β, stabilnego w stężeniu 0,37 mg/ml w buforze z 50 mM octanu sodu, pH 3,6. Około 1,0 ml 6 M mocznika wprowadzono do 2 ml IFN-β w stężeniu 0,37 mg/ml (0,74 mg, 3,7 x 10-8 mola). Następnie dodano mPEGsK-OPSS użyty w nadmiarze molowym wynoszącym 50 moli na 1 mol IFN-β i całość poddawano reakcji we fiolce z polipropylenu w ciągu albo 2 godzin w temperaturze 37° C, albo w ciągu 1 godziny w temperaturze 50° C. Następnie mieszaninę reakcyjną poddano analizie z wykorzystaniem wykresu elektroforezy kapilarnej (CE) w celu oznaczenia, jeszcze przed etapem oczyszczania, rozmiarów tworzenia się koniugatu PEG-IFN-β w reakcji PEG-ilowania (fig. 1). Typową wydajnością w takiej reakcji jest 50% PEG-IFN-β. Produkty reakcji wydzielono z mieszaniny reakcyjnej za pomocą odsączenia na 0,22 mm filtrze strzykawkowym i przesącz wprowadzono do kolumny do chromatografii ekskluzyjnej (albo Superose 12, albo Superdex 75, Pharmacia) i przeprowadzono elucję przy użyciu buforu z 50 mM fosforanu sodu, 150 mM NaCl, pH 7,0. Na fig. 2A pokazano profil elucji w etapie oczyszczania koniugatu PEG IFN-β na kolumnie do chromatografii ekskluzyjnej Superose 12. Zebrano frakcje szczytowe i poddano je analizie metodą SDS-PAGE (fig. 3). Frakcje zawierające koniugat PEG-IFN-β połączono ze sobą, po czym otrzymany koncentrat powtórnie wprowadzono na kolumnę do chromatografii ekskluzyjnej jak poprzednio w celu dalszego oczyszczania koniugatu PEG-IFN-β p z uwagi na ścisłą bliskość piku „natywnego” IFN-β (fig. 2B). Postępowanie to powtórzono (trzecie przejście) dla zapewnienia czystości produktu (fig. 2C). Na fig. fig. 4 i 5 przedstawiono odpowiednio, wykresy elektroforezy kapilarnej i widma MALDI MS dla oczyszczonego koniugatu PEG-IFN-β.
Modyfikacja IFN-β przy użyciu mPEG30K-OPSS.
Użyto zrekombinowanego ludzkiego IFN-β stabilnego w roztworze o stężeniu 0,36 mg/ml w buforze z 50 mM octanu sodu, pH 3,6. Około 36 mg mPEG30K-OPSS w 3 ml wody dejonizowanej wprowadzono do 3 ml IFN-β w stężeniu 0,36 mg/ml (1,08 mg, 4,9 x 10-8 mola) i całość poddawano reakcji we fiolce z polipropylenu w ciągu 2 godzin w temperaturze 50°C. Następnie mieszaninę reakcyjną poddano analizie metodą elektroforezy kapilarnej w celu oznaczenia rozmiarów modyfikacji. Typowa wydajność dla takiej reakcji wynosi < 30%. Następnie roztwór wprowadzono na kolumnę do chromatografii ekskluzyjnej (Superose 12, Pharmacia) i poddano elucji przy użyciu buforu z 50 mM fosforanu sodu, 150 mM NaCl, pH 7,0. Frakcje szczytowe zebrano i poddano analizie metodą SDS-PAGE pod względem zawartości.
P r z y k ł a d 2. Aktywność biologiczna koniugatu PEG-IFN-β
W celu oznaczenia skutków wpływu PEG-ilowania na aktywność przeciwwirusową ludzkiego rekombinantowego IFN-β, ludzkie owodniowe komórki WISH wstępnie inkubowano albo ze świeżo otrzymanym IFN-β (ta sama partia, jakiej użyto do PEG-ilowania), albo z koniugatem PEG-IFN-β. Aktywność przeciwwirusową, w której pośredniczy IFN-β, według pomiaru w teście cytopatyczności WISH-VSV, oznaczano zgodnie z przeciwwirusowym testem biologicznym WISH, opracowanym w oparciu o protokół Novicka i in [J. Immunol., 129, 2244 -2247 (1982)]. W tym teście WISH użyto następujących materiałów:
- komórki WISH (ATCC CCL 25);
- szczepy wirusa pęcherzykowego zapalenia jamy ustnej (ATCC V-520-001-522), przechowywane w temperaturze -70°C;
- IFN-β, ludzki, zrekombinowany, InterPharm Laboratories LTD (typ 32,075, seria # 205035), 82 x 106 IU/ml, aktywność właściwa: 222 x 106 IU/mg);
- koniugat PEG-IFN-β, wytworzony sposobem opisanym w powyższym przykładzie 1 i przetrzymywany w PBS, pH 7,4;
- podłoże wzrostowe WISH [„MEM high glucose” z solami Earle'a + 10% FBS + 1,0% L-glutaminy + penicylina/streptomycyna (100 U/ml, 100 μg/ml)];
podłoże testowe WISH [MEM high glucose z solami Earle'a + 5% FBS + 1,0% L-glutaminy + penicylina/streptomycyna (100 U/ml, 100 μg/ml)];
- MTT w stężeniu 5 mg/ml w PBS, przechowywany w temperaturze -70°C.
Protokół dla testu WISH przedstawia się następująco:
- rozcieńczyć próbki IFN-β do 2 x stężenia wyjściowego w podłożu testowym WISH;
- sporządzić 3-krotne rozcieńczenia próbek IFN-β w podłożu testowym WISH na płaskodennej płytce o 96 studzienkach tak, że każda studzienka zawiera 50 μl rozcieńczonej próbki IFN-β (pewna ilość studzienek kontrolnych otrzymuje 50 μl samego tylko podłoża wzrostowego WISH);
PL 193 352 B1
- zebrać komórki WISH w logarytmicznej fazie wzrostu przy użyciu roztworu trypsyna/EDTA, przemyć w podłożu testowym WISH i doprowadzić do końcowego stężenia 0,8 x 106 komórek/ml;
- dodać do każdej studzienki po 50 μl zawiesiny komórek WISH (4 x 104 komórek/studzienkę); końcowe stężenie INF-β eksponowanego na komórki wynosi obecnie 1X.
Po inkubacji w ciągu 24 godzin w nawilżanym inkubatorze (5% CO2), do wszystkich studzienek wprowadza się 1:10 rozcieńczenie (w podłożu testowym WISH) szczepu VSV (wstępnie ustalona dawka doprowadzająca do lizy 100% komórek WISH w ciągu 48 godzin), z wyjątkiem studzienek kontrolnych, nie zawierających wirusa (wprowadza się do nich jedynie taką samą objętość samego podłoża testowego).
Po upływie dalszych 48 godzin, do wszystkich studzienek dodaje się 25 μl roztworu MTT i płytki inkubuje jeszcze w ciągu 2 godzin w inkubatorze.
Zawartość studzienek usuwa się przez odwrócenie płytki, po czym do studzienek wprowadza się po 200 μl 100% etanolu.
Po upływie godziny, płytki odczytuje się przy 595 nm przy użyciu pakietu programowego Soft max Pro i układu spektrofotometru Spektramax (Molecular Devices).
T a b e l a 1
Aktywność przeciwwirusowa próbek PEG-ilowanego IFN-β i Mock-PEG-ilowanego IFN-β
| Próbka IFN-β* | EC50** |
| Koniugat PEG-IFN-β | 3,9 ± 0,7 pg/ml |
| IFN-β | 16,4 ± 1,0 pg/ml |
* Stężenie wyjściowe IFN-β w próbkach oznaczono metodą analizy aminokwasów (AAA) ** EC50 (± S.D.) oznaczono z użyciem oprogramowania Microcal Origin 4.1
Jak to pokazano na fig 6 i w powyższej tabeli 1 koniugat PEG-IFN-β utrzymywał poziom aktywności przeciwwirusowej wyższy od poziomu świeżo otrzymanej serii macierzystego IFN-β.
Zaobserwowane zjawisko wykazywania przez koniugat PEG-IFN-β poziomu aktywności biologicznej w przybliżeniu 4 razy wyższego od poziomu aktywności świeżo otrzymanego IFN-β, może także być następstwem zwiększonej trwałości koniugatu PEG-IFN-β p w porównaniu z „natywnym” IFN-β po dodaniu podłoża testowego dla komórek WISH.
P r z y k ł a d 3
Względną aktywność biologiczną PEG[30 kDHFN-β i PEG[2 x 20 kDHFN-β oznaczono w teście WISH z zastosowaniem standardowego protokołu opisanego w powyższym przykładzie 2 (tabela 2). Trzy różne osoby przeprowadziły trzy niezależne testy w różnym czasie.
T a b e l a 2
Przeciwwirusowa aktywność względna PEG-IFN-β
| Aktywność względna interferonu* (z trzech badań) | ||||
| Próbka | Test 1 | Test 2 | Test 3 | Średnia (S. D.) |
| PEG[30 kD^FN-β | 3,2 x większa | 3,1 x większa | 1,8 x większa | 3,0 x (0,78) większa |
| PEG[2 x 20 kD]- IFN-β | 4,2 x większa | 1,3 x większa | 0,85 x większa | 2,1 x (1,8) większa |
* Dawki EC50 w porównaniu ze wzorcem IFN-β włączonym do każdego badania ** Porównanie oparto na stężeniu IFN-β wynoszącym 330 pg/ml. Stężenie wyjściowe PEG[30 kD]- IFN-β (5,41 pg/ml) i PEG-[2 x 20 kDpIFN-β (6,86 pg/ml) oznaczono metodą AaA
Wiązanie się PEG- IFN-β z jego receptorem na komórkach oceniano w obecności ustalonej ilości 125J-IFN-a2a. IFN-a2a oznakowano radioaktywnie przy użyciu 125J metodą opartą na użyciu chloraminy T. Związany z 125J IFN-a2a oddzielono od wolnego jodu za pomocą przepuszczenia substratów reakcji przez kolumnę Sephadex G25 i połączenia ze sobą frakcji zawierających białko (Pharmacia). 125J-IFN-a2a skwantyfikowano w teście „IFN-a2a ELISA” (Biosource, USA), po czym oznaczono aktywność właściwą. Komórki Daudi znajdujące się w fazie logarytmicznej wzrostu zebrano i 2 x 106 komórek inkubowano z 0,5 nM 125J-IFN-a2a w ciągu 3 godzin, w temperaturze pokojowej, w obecności
PL 193 352 B1 rozmaitych stężeń PEG-IFN-β lub IFN-a2a rozcieńczonego w buforze testowym, stanowiącym RPMI 1640 z zawartością 2% płodowej surowicy bydlęcej i 0,1% azydku sodu. Po zakończeniu inkubacji, komórki odwirowano przez warstwę oleju ftalanowego i związaną z komórkami radioaktywność zliczono w liczniku gamma. Okazało się, że aktywność wiązania się PEG[30 kD]-IFN-e i PEG[2 x 20 kD]-IFN-β z receptorem była bardzo podobna lub zbliżona do aktywności wiązania IFN-β, jak to przedstawiono na fig 7.
Oprócz tego, aktywność względną oznaczono w teście antyproliferacyjnym z komórkami Daudi (ludzki chłoniak z grupy limfocytów B) (tabela 3). Wszystkie próbki IFN sporządzono w stężeniu 2 x 200 ng/ml. Próbki rozcieńczono 3-krotnie w dół długości płytki przy końcowej objętości 100 pl. Do każdej studzienki wprowadzono 1 x 105 komórek/studzienkę (100 μΓ> i inkubowano w ciągu ogółem 72 godzin, w temperaturze 37°C w nawilżanym inkubatorze (5% CO2). Po upływie 48 godzin, dodano trytowaną (3H) tymidynę w ilości 1 μC/studzienkę, w objętości 20 pl. Po zakończeniu 72-godzinnej inkubacji zebrano materiał z płytki przy użyciu urządzenia Tomtek Plate Harvester. Wyniki zamieszczone w poniższej tabeli 3 wskazują, że w rezultacie PEG-ilowania nie stwierdzono żadnej wykrywalnej utraty aktywności IFN. W rzeczywistości stwierdzono, że aktywność była nieco wyższa od aktywności wolnego IFN-β. Może to być spowodowane tworzeniem się w wolnym IFN nieaktywnych agregatów, albo różnicami w metodach kwantyfikowania (analiza aminokwasów w przypadku próbek PEG-IFN i metoda RP-HPLC w przypadku IFN-β).
T a b e l a 3
Test antyproliferacyjny z komórkami Daudi
| Dawka IC50* | Krotność wzrostu w stosunku do IFN | |
| IFN-β (płytka 1) | 1153,1 | - |
| PEG[30 kD]-IFN (71 A) | 695,6 | 1,6 x |
| IFN-β (płytka 2) | 1005,8 | - |
| PEG[40 kD]-IFN (71 B) | 629,4 | 1,7 x |
* pg/ml
P r z y k ł a d 4. Badania farmakokinetyczne na myszach
Podawanie dożylne
Myszom wstrzyknięto 100 ng IFN-β, PEG[30 kD^IFN-β lub PEG[2 x 20 kD^IFN-β i po upływie wskazanego czasu pobrano z nich krew. Oznaczono stężenie IFN-β w surowicy metodą „IFN-β-specific ELISA” (Toray Industries) i otrzymane wyniki przedstawiono na fig. 8. Myszy (samice ze szczepu B6D2F1, w wieku 6-8 tygodni, po około 20 g każda) w ilości 28 sztuk podzielono na cztery grupy w sposób następujący:
- grupa 1 liczyła 9 myszy, którym wstrzyknięto po 200 μl jako pojedynczy bolus 500 ng/ml ludzkiego IFN-β (dawka końcowa 100 ng/mysz);
- grupa 2 (dziewięć myszy) otrzymała po 200 μl równoważnej masy PEG 30 kD-IFN-β;
- grupa 3 otrzymała po 200 μl równoważnej masy PEG [2 x 20 kD^IFN-β; oraz
- grupa 4, licząca 3 myszy, którym niczego nie wstrzyknięto, służyła jako kontrola negatywna.
Próbki krwi (w przybliżeniu 200 μl/próbkę) pobierano w dziewięciu wskazanych momentach za pomocą rozerwania splotu żylnego pozaoczodołowego przy użyciu kapilary. Próbki krwi pozostawiono do utworzenia skrzepu w ciągu godziny, w temperaturze pokojowej, obwiedziono i wirowano w mikrowirówce. Po wyjęciu, surowice przetrzymywano w temperaturze -70°C, aż do zgromadzenia wszystkich próbek. Surowice badano pod względem obecności aktywnego biologicznie IFN-β w teście Toray. Otrzymane wyniki pokazują, że pole pod krzywą (AUC) jest znacznie powiększone w przypadku próbek PEG-IFN w porównaniu z polem dla wolnego IFN-β i że próbki PEG-IFN przewyższają wolny IFN-β, a próbki PEG[2 x 20 kDJ-IFN-β przewyższają PEG[30 kDJ-IFN-β.
Podawanie podskórne
Myszom wstrzyknięto podskórnie IFN-β i PEG-IFN (po 100 ng/mysz). Fig. 9 pokazuje, że całkowite pole pod krzywą (AUC) jest w sposób drastyczny powiększone w przypadku próbek PEG-IFN
PL 193 352 B1 w porównaniu z polem dla wolnego IFN-β. Badania farmakokinetyczne są zgodne z próbkami PEG-IFN o dłuższym okresie półtrwania i zwiększonym AUC.
P r z y k ł a d 5. Przyłączenie ugrupowania PEG o małej masie cząsteczkowej do polipeptydu Dołączenie OPSS-PEG2k-hydrazydu do interferonu β
Użyto zrekombinowanego ludzkiego interferonu β w roztworze o stężeniu 0,33 mg/ml w 50 mM buforze z octanem sodu, pH 3,8. Do 3 ml IFN-β w stężeniu 0,33 mg/ml (0,99 mg) dodano w przybliżeniu 3,6 mg (nadmiar molowy wynoszący 40 moli na mol białka) odczynnika w postaci heterodwufunkcyjnego PEG, a mianowicie OPSS-PEG2k-hydrazydu w 2 ml wody dejonizowanej i całość poddawano reakcji we fiolce z polipropylenu w ciągu godziny, w temperaturze 45°C. Następnie mieszaninę reakcyjną poddano analizie metodą elektroforezy kapilarnej w celu ustalenia rozmiarów modyfikacji. Typowe wydajności mieściły się w zakresie od 90 do 97%, w zależności od stopnia czystości interferonu β i odczynnika PEG. Następnie, roztwór wprowadzono do kolumny do chromatografii ekskluzyjnej (Superdex 75, Pharmacia) i eluowano buforem z 5 mM fosforanu sodu, 150 mM NaCl, pH 7,0. Frakcje szczytowe zebrano i poddano analizie metodą SDS-PAGE. Frakcje zawierające monoPEG-ilowany interferon-β połączono ze sobą i użyto w dalszym etapie modyfikacji z udziałem PEG o dużej masie cząsteczkowej.
Dołączenie (OPSS)2-PEG3400 do interferonu β
Użyto zrekombinowanego ludzkiego interferonu β w roztworze o stężeniu 0,33 mg/ml w buforze z 50 mM octanu sodu, pH 3,8. Do 3 ml interferonu β w stężeniu 0,33 mg/ml (0,99 mg) dodano w przybliżeniu 6,1 mg (nadmiar molowy wynoszący 40 moli na mol białka) odczynnika w postaci homodwufunkcyjnego PEG, a mianowicie (OPSS)2-PEG3400-hydrazydu w 2 ml wody dejonizowanej i całość poddawano reakcji w fiolce z polipropylenu w ciągu 2 godzin, w temperaturze 50°C. Postęp reakcji monitorowano nie redukującą metodą SDS-PAGE i końcową mieszaninę reakcyjną poddano analizie metodą elektroforezy kapilarnej w celu ustalenia rozmiarów modyfikacji. Typowe wydajności modyfikacji w przypadku tej reakcji z udziałem interferonu β wynosiły > 95%. Następnie roztwór wprowadzono do kolumny do chromatografii ekskluzywnej (Superdex 75, Pharmacia) i eluowano buforem z 50 mM fosforanu sodu, 150 mM NaCl, pH 7,0. Frakcje szczytowe zebrano i poddano analizie metoda SDS-PAGE pod względem zawartości. Frakcje zawierające monoPEG-ilowany interferon β połączono ze sobą.
P r z y k ł a d 6. Przyłączenie drugiego ugrupowania PEG do polipeptydu z PEG-ilowania ugrupowaniem o małej masie cząsteczkowej
Modyfikacja IFN-S-S-PEG2k-hydrazydu przy użyciu mPEG30k-aldehydu (ALD)
Białko-S-S-PEG2K-C-NH-NH2 θ + ΕΞΞΞ^> Białko-S-S-PEG2K-C-NH-N=CH-mPEG30K.
ίϊ mPEG30K CH2CH2CH
PL 193 352 B1
Do połączonych frakcji IFN-S-S-PEG2k-hydrazydu z przykładu 5 dodano mPEG30k-ALD w 20 molowym nadmiarze w stosunku do białka. Reakcję prowadzono w temperaturze pokojowej (25°C) przez 4 godziny, po czym pobrano próbkę i wprowadzono ją do kolumny do chromatografii ekskluzyjnej (Superose 6, Pharmacia) w celu ustalenia wydajności modyfikacji. Wydajność takiej modyfikacji w omawianej reakcji wynosiła typowo > 80% w zależności od czystości odczynnika PEG i warunków prowadzenia reakcji.
Na podstawie tak przedstawionego pełnego opisu niniejszego wynalazku, specjaliści w tej dziedzinie wiedzy zdadzą sobie sprawę z tego, że to samo można wykonać z przyjęciem szerokiego zakresu równoważnych parametrów, stężeń i warunków, bez odchodzenia od istoty i zakresu wynalazku i bez zbytniego eksperymentowania.
Aczkolwiek wynalazek niniejszy został opisany w nawiązaniu do konkretnych jego wykonań, to jednak należy rozumieć, że może on ulegać dalszym modyfikacjom. Zgłoszenie niniejsze w zamiarze obejmuje swym zakresem jakiekolwiek odmiany, sposoby użycia lub adaptacje wynalazku zgodne ogólnie z zasadami wynalazku i obejmujące takie odchylenia od niniejszego ujawnienia, jakie wchodzą w zakres znanej i zwyczajowej praktyki w tej dziedzinie wiedzy, której wynalazek dotyczy i jakie mogą znaleźć zastosowanie w istotnych aspektach przedstawionych w powyższej części niniejszego opisu, zgodnie z zakresem załączonych zastrzeżeń.
Wszystkie przytaczane w niniejszym opisie odnośniki, włączając w to publikacje lub streszczenia w czasopismach, opublikowane lub nie opublikowane zgłoszenia patentowe Stanów Zjednoczonych Ameryki i zagraniczne, lub jakiekolwiek inne odnośniki, są w całości włączone do niniejszego opisu jako odnośniki, włącznie ze wszystkimi danymi, tabelami, figurami i tekstami, zawartymi w przytoczonych odnośnikach. Poza tym, cała zawartość odnośników cytowanych w odnośnikach tu przytoczonych, także jest włączona do niniejszego opisu jako odnośnik.
Odniesienie się do etapów metod znanych, etapów metod typowych, metod znanych lub metod typowych nie stanowi w żadnym przypadku uznania, że jakikolwiek aspekt, opis lub wykonanie niniejszego wynalazku jest ujawnione, podane jako pouczenie lub zasugerowane w odnośnej dziedzinie techniki.
Powyższy opis konkretnych wykonań ujawnia ogólny charakter wynalazku w tak pełnym zakresie, że inni mogą, z wykorzystaniem wiedzy posiadanej przez specjalistów w tej dziedzinie techniki (włączając w to treść odnośników przytoczonych w niniejszym opisie), w łatwy sposób zmodyfikować i/lub adaptować wynalazek do rozmaitych zastosowań tych konkretnych wykonań, bez zbędnego eksperymentowania i bez odchodzenia od ogólnej koncepcji niniejszego wynalazku. Dlatego też przewiduje się, że równoważne rozwiązania ujawnionych wykonań obejmują swym znaczeniem i zakresem takie właśnie adaptacje i modyfikacje, w oparciu o zaprezentowane w niniejszym opisie pouczenia i wskazówki. Należy rozumieć, że frazeologii lub terminologii używa się tu w celu opisania, a nie ograniczania, tak, że terminologię lub frazeologię niniejszego opisu wyszkolony pracownik techniczny powinien interpretować w świetle pouczenia i wskazania przedstawionego tu sposobu postępowania, w połączeniu z wiedzą przeciętnego specjalisty w tej dziedzinie.
Claims (14)
1. Koniugat poliol-interferon β, znamienny tym, że zawiera ugrupowanie poliolu kowalencyjnie związane z Cys17 ludzkiego interferonu β.
2. Koniugat poliol-interferon β według zastrz. 1, znamienny tym, że ugrupowaniem poliolu jest ugrupowanie glikolu polialkilenowego.
3. Koniugat poliol-interferon β według zastrz. 2, znamienny tym, że ugrupowaniem glikolu polialkilenowego jest ugrupowanie glikolu polietylenowego (PEG).
4. Koniugat poliol-interferon β według zastrz. 1, znamienny tym, że koniugat poliol-interferon β wykazuje aktywność taką samą, jak aktywność natywnego ludzkiego interferonu β lub wyższą.
5. Koniugat poliol-interferon β określony w zastrz. 1, do stosowania jako lek.
6. Sposób wytwarzania koniugatu poliol-interferon β określonego w zastrz. 1, znamienny tym, że
- poddaje się interferon β reakcji ze środkiem stanowiącym poliol reaktywny w stosunku do grupy tiolowej, będący pochodną poliolu zawierającą grupę funkcyjną wybraną z grupy obejmującej ugrupowanie disulfidu o-pirydylowego, sulfonu winylowego, maleimidu i jodoacetamidu;
- wyodrębnia się wytworzony koniugat poliol-interferon β.
PL 193 352 B1
7. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że jako środek stanowiący poliol reaktywny w stosunku do grupy tiolowej stosuje się reaktywny w stosunku do grupy tiolowej środek PEG-ilujący.
8. Sposób według zastrz. 6 albo 7, znamienny tym, że środek stanowiący poliol reaktywny w stosunku do grupy tiolowej jest monometoksylowany.
9. Sposób według zastrz. 6 albo 7, znamienny tym, że środek stanowiący poliol reaktywny w stosunku do grupy tiolowej jest dwufunkcyjny.
10. Sposób według zastrz. 6 albo 7, znamienny tym, że jako środek reaktywny w stosunku do grupy tiolowej stosuje się pochodną monometoksylowanego poliolu utworzoną z disulfidem o-pirydylowym.
11. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że etap reakcji przeprowadza się w kwasowym zakresie wartości pH, w którym interferon β jest trwały.
12. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera koniugat poliol-interferon β określony w zastrz. 1 jako składnik aktywny oraz farmaceutycznie dozwolony nośnik, zaróbkę lub środek pomocniczy.
13. Zastosowanie koniugatu poliol-interferon β określonego w zastrz. 1 do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do leczenia zakażeń, nowotworów oraz chorób autoimmunizacyjnych i zapalnych.
14. Zastosowanie według zastrz. 13, znamienne tym, że kompozycję stosuje się do leczenia choroby wybranej z grupy obejmującej wstrząs septyczny, AIDS, zapalenie stawów reumatoidalne, liszaj rumieniowaty i stwardnienie rozsiane.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US8333998P | 1998-04-28 | 1998-04-28 | |
| PCT/US1999/009161 WO1999055377A2 (en) | 1998-04-28 | 1999-04-28 | Polyol-ifn-beta conjugates |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL344490A1 PL344490A1 (en) | 2001-11-05 |
| PL193352B1 true PL193352B1 (pl) | 2007-02-28 |
Family
ID=22177687
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL344490A PL193352B1 (pl) | 1998-04-28 | 1999-04-28 | Koniugat poliol-interferon ß, sposób jego wytwarzania i jego zastosowanie oraz kompozycja farmaceutyczna |
| PL378728A PL196533B1 (pl) | 1998-04-28 | 1999-04-28 | Sposób stopniowego przyłączania ugrupowań poli (glikolu etylenowego) (PEG) szeregowo do polipeptydu |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL378728A PL196533B1 (pl) | 1998-04-28 | 1999-04-28 | Sposób stopniowego przyłączania ugrupowań poli (glikolu etylenowego) (PEG) szeregowo do polipeptydu |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US6638500B1 (pl) |
| EP (2) | EP1421956B1 (pl) |
| JP (2) | JP4574007B2 (pl) |
| KR (1) | KR100622796B1 (pl) |
| CN (2) | CN1187094C (pl) |
| AR (1) | AR020070A1 (pl) |
| AT (2) | ATE365563T1 (pl) |
| AU (1) | AU762621B2 (pl) |
| BG (2) | BG65046B1 (pl) |
| BR (1) | BR9910023A (pl) |
| CA (2) | CA2565375A1 (pl) |
| CY (1) | CY1108022T1 (pl) |
| CZ (2) | CZ298597B6 (pl) |
| DE (2) | DE69920002T2 (pl) |
| DK (2) | DK1075281T3 (pl) |
| EA (2) | EA003789B1 (pl) |
| EE (1) | EE05214B1 (pl) |
| ES (2) | ES2285286T3 (pl) |
| HU (1) | HUP0300548A3 (pl) |
| IL (1) | IL139286A (pl) |
| NO (2) | NO329749B1 (pl) |
| NZ (1) | NZ507456A (pl) |
| PL (2) | PL193352B1 (pl) |
| PT (2) | PT1421956E (pl) |
| SI (2) | SI1075281T1 (pl) |
| SK (2) | SK286217B6 (pl) |
| TR (2) | TR200101751T2 (pl) |
| TW (2) | TWI266800B (pl) |
| UA (2) | UA79430C2 (pl) |
| WO (1) | WO1999055377A2 (pl) |
Families Citing this family (82)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5932462A (en) | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
| US7220717B2 (en) | 1997-08-14 | 2007-05-22 | Yeda Research And Development Company Ltd. | Interleukin-18 binding proteins, their preparation and use |
| US7704944B2 (en) | 1997-08-14 | 2010-04-27 | Yeda Research And Development Company Ltd. | Interleukin-18 binding proteins, their preparation and use for the treatment of sepsis |
| IL121860A0 (en) | 1997-08-14 | 1998-02-22 | Yeda Res & Dev | Interleukin-18 binding proteins their preparation and use |
| IL142350A0 (en) * | 1998-10-16 | 2002-03-10 | Biogen Inc | Interferon-beta fusion proteins and pharmaceutical compositions containing the same |
| EP1121156B1 (en) * | 1998-10-16 | 2006-02-22 | Biogen Idec MA Inc. | Polymer conjugates of interferon beta- 1a and their uses |
| US6342244B1 (en) * | 1999-04-23 | 2002-01-29 | Alza Corporation | Releasable linkage and compositions containing same |
| US7303760B2 (en) * | 1999-04-23 | 2007-12-04 | Alza Corporation | Method for treating multi-drug resistant tumors |
| US7238368B2 (en) * | 1999-04-23 | 2007-07-03 | Alza Corporation | Releasable linkage and compositions containing same |
| US7144574B2 (en) | 1999-08-27 | 2006-12-05 | Maxygen Aps | Interferon β variants and conjugates |
| US6531122B1 (en) | 1999-08-27 | 2003-03-11 | Maxygen Aps | Interferon-β variants and conjugates |
| US7431921B2 (en) | 1999-08-27 | 2008-10-07 | Maxygen Aps | Interferon beta-like molecules |
| TR200101086A3 (pl) * | 1999-10-15 | 2001-08-21 | ||
| AU2223401A (en) * | 1999-12-24 | 2001-07-09 | Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. | Branched polyalkylene glycols |
| WO2001051510A2 (en) | 2000-01-10 | 2001-07-19 | Maxygen Holdings Ltd | G-csf conjugates |
| NZ521257A (en) | 2000-02-11 | 2004-10-29 | Maxygen Aps | Factor VII or VIIa-like molecules |
| JP4152187B2 (ja) | 2001-01-30 | 2008-09-17 | 協和醗酵工業株式会社 | 分岐型ポリアルキレングリコール類 |
| EP1234583A1 (en) | 2001-02-23 | 2002-08-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | PEG-conjugates of HGF-NK4 |
| CZ20032526A3 (cs) | 2001-02-27 | 2003-12-17 | Maxygen Aps | Nové molekuly podobné interferonu beta |
| CA2452582C (en) | 2001-07-11 | 2013-01-22 | Maxygen, Inc. | G-csf conjugates |
| EE05509B1 (et) | 2002-01-18 | 2012-02-15 | Biogen@Idec@Ma@Inc | Aktiveeritud polalkleenglkoolpolmeer ja seda sisaldavad kompositsioonid |
| TWI334785B (en) | 2002-06-03 | 2010-12-21 | Serono Lab | Use of recombinant ifn-β1a and pharmaceutical composition comprising recombinant ifn-β1a for the treatment of hcv infection in patients of asian race |
| AU2003254641A1 (en) * | 2002-08-28 | 2004-03-19 | Maxygen Aps | Interferon beta-like molecules for treatment of cancer |
| US8129330B2 (en) * | 2002-09-30 | 2012-03-06 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof |
| PL396711A1 (pl) * | 2002-12-26 | 2011-12-19 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Koniugaty polimerów z cytokinami, chemokinami, czynnikami wzrostu, hormonami polipeptydowymi i ich antagonistami, kompozycja farmaceutyczna i sposób zapobiegania, diagnozowania lub leczenia |
| EP1667708B9 (en) * | 2002-12-26 | 2012-10-31 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | POLYETHYLENE GLYCOL CONJUGATES OF INTERFERON-BETA-1b WITH ENHANCED IN VITRO BIOLOGICAL POTENCY |
| DK2085470T3 (da) | 2003-03-20 | 2012-08-06 | Bayer Healthcare Llc | FVII- eller FVIIa-varianter |
| TWI272948B (en) | 2003-05-01 | 2007-02-11 | Ares Trading Sa | HSA-free stabilized interferon liquid formulations |
| GB0316294D0 (en) | 2003-07-11 | 2003-08-13 | Polytherics Ltd | Conjugated biological molecules and their preparation |
| EP2633866A3 (en) | 2003-10-17 | 2013-12-18 | Novo Nordisk A/S | Combination therapy |
| MXPA06008496A (es) * | 2004-02-02 | 2007-01-30 | Ambrx Inc | Polipeptidos de interferon humano modificados y sus usos. |
| AU2008201682B2 (en) * | 2004-02-02 | 2011-02-24 | Ambrx, Inc. | Modified human interferon polypeptides and their uses |
| EP1586334A1 (en) * | 2004-04-15 | 2005-10-19 | TRASTEC scpa | G-CSF conjugates with peg |
| WO2005110466A1 (en) | 2004-05-17 | 2005-11-24 | Ares Trading S.A. | Hydrogel interferon formulations |
| JP4988562B2 (ja) | 2004-06-01 | 2012-08-01 | アレス トレーディング ソシエテ アノニム | 安定化したインターフェロン液体製剤 |
| EP1750750B1 (en) | 2004-06-01 | 2012-02-01 | Ares Trading S.A. | Method of stabilizing proteins |
| TW200633718A (en) * | 2004-12-16 | 2006-10-01 | Applied Research Systems | Treatment of hepatitis c in the asian population |
| CA2591233C (en) † | 2004-12-21 | 2014-10-07 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Stabilized polymeric thiol reagents |
| CA2594557C (en) | 2004-12-22 | 2016-04-26 | Ambrx, Inc. | Modified human growth hormone |
| EP1833993A4 (en) | 2004-12-22 | 2009-07-22 | Ambrx Inc | HUMAN GROWTH HORMONE FORMULATIONS COMPRISING AN AMINO ACID CODED NON-NATURALLY |
| EP1836316A4 (en) | 2004-12-22 | 2009-07-22 | Ambrx Inc | PROCESS FOR EXPRESSION AND CLEANING OF RECOMBINANT HUMAN GROWTH HORMONE |
| US8633300B2 (en) | 2005-06-17 | 2014-01-21 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Selective reduction and derivatization of engineered proteins comprising at least one non-native cysteine |
| JP2009503111A (ja) * | 2005-08-04 | 2009-01-29 | ネクター セラピューティックス エイエル，コーポレイション | Ｇ−ｃｓｆ部分および重合体の複合体 |
| EP1917276B1 (en) | 2005-08-26 | 2018-03-21 | Ares Trading S.A. | Process for the preparation of glycosylated interferon beta |
| WO2007025991A2 (en) | 2005-09-01 | 2007-03-08 | Ares Trading S.A. | Treatment of optic neuritis |
| US20070238656A1 (en) * | 2006-04-10 | 2007-10-11 | Eastman Kodak Company | Functionalized poly(ethylene glycol) |
| US20080096819A1 (en) * | 2006-05-02 | 2008-04-24 | Allozyne, Inc. | Amino acid substituted molecules |
| US7632492B2 (en) * | 2006-05-02 | 2009-12-15 | Allozyne, Inc. | Modified human interferon-β polypeptides |
| US9925151B2 (en) | 2006-05-24 | 2018-03-27 | Merck Serono Sa | Cladribine regimen for treating multiple sclerosis |
| KR20090013816A (ko) | 2006-05-24 | 2009-02-05 | 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 | 연장된 생체내 반감기를 갖는 인자 ⅸ 유사체 |
| CN103965347B (zh) | 2007-05-02 | 2017-07-18 | Ambrx公司 | 经修饰干扰素β多肽和其用途 |
| CA2707840A1 (en) * | 2007-08-20 | 2009-02-26 | Allozyne, Inc. | Amino acid substituted molecules |
| BRPI0821029A2 (pt) * | 2007-12-20 | 2015-06-16 | Merck Serono Sa | Fomulações de peg-interferon-beta |
| EP2247743B1 (en) | 2008-02-08 | 2016-04-06 | Ambrx, Inc. | Modified leptin polypeptides and their uses |
| CN101525381B (zh) * | 2008-03-04 | 2012-04-18 | 北京百川飞虹生物科技有限公司 | 一种重组复合干扰素及其表达载体的构建和表达 |
| WO2009155102A2 (en) * | 2008-05-30 | 2009-12-23 | Barofold, Inc. | Method for derivatization of proteins using hydrostatic pressure |
| US20110124614A1 (en) * | 2008-10-25 | 2011-05-26 | Halina Offner | Methods And Compositions For The Treatment of Autoimmune Disorders |
| DE102009032179A1 (de) * | 2009-07-07 | 2011-01-13 | Biogenerix Ag | Verfahren zur Reinigung von Interferon beta |
| ES2365343B1 (es) | 2009-11-19 | 2012-07-10 | Fundación Centro Nacional De Investigaciones Cardiovasculares Carlos Iii | Uso de cd98 como marcador de receptividad endometrial. |
| US20130040888A1 (en) | 2010-02-16 | 2013-02-14 | Novo Nordisk A/S | Factor VIII Molecules With Reduced VWF Binding |
| AR080993A1 (es) | 2010-04-02 | 2012-05-30 | Hanmi Holdings Co Ltd | Formulacion de accion prolongada de interferon beta donde se usa un fragmento de inmunoglobulina |
| EP2552967A4 (en) | 2010-04-02 | 2014-10-08 | Amunix Operating Inc | BINDING FUSION PROTEINS, BINDING FUSION PROTEIN MEDICINAL CONJUGATES, XTEN MEDICAMENT CONJUGATES, AND METHOD FOR THEIR PREPARATION AND USE |
| US20120135912A1 (en) | 2010-05-10 | 2012-05-31 | Perseid Therapeutics Llc | Polypeptide inhibitors of vla4 |
| US20130183280A1 (en) | 2010-07-15 | 2013-07-18 | Novo Nordisk A/S | Stabilized factor viii variants |
| CN103209992A (zh) | 2010-09-15 | 2013-07-17 | 诺沃—诺迪斯克有限公司 | 具有减少的细胞摄取的因子viii变体 |
| KR101451357B1 (ko) * | 2011-02-18 | 2014-10-15 | 주식회사 스템디알 | Ｓｉｒｔ１ 발현 유도 물질을 포함하는 패혈증 또는 패혈증 쇼크의 예방 또는 치료용 조성물 |
| MX2014000031A (es) | 2011-07-01 | 2014-07-09 | Bayer Ip Gmbh | Polipeptidos de fusion de relaxina y usos de los mismos. |
| DK2762489T3 (en) * | 2011-10-01 | 2018-07-02 | Glytech Inc | GLYCOSYLED POLYPEPTIDE AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING SAME |
| SG10201700340WA (en) | 2012-02-27 | 2017-03-30 | Amunix Operating Inc | Xten conjugate compositions and methods of making same |
| AU2013226944B2 (en) | 2012-02-29 | 2017-03-23 | Toray Industries, Inc. | Inhibitory agent for body cavity fluid accumulation |
| BR112015024423B1 (pt) | 2013-03-29 | 2023-04-25 | Glytech, Inc | Polipeptídeo glicosilado tendo atividade de interferon ?, composição farmacêutica e uso de um polipeptídeo glicosilado |
| US11759500B2 (en) | 2014-07-24 | 2023-09-19 | Abion Inc. | PEGylated interferon-beta variant |
| WO2016013697A1 (ko) * | 2014-07-24 | 2016-01-28 | 에이비온 주식회사 | 인터페론-베타 변이체의 폴리에틸렌글리콜 배합체 |
| HRP20201725T1 (hr) | 2014-08-19 | 2021-03-05 | Biogen Ma Inc. | Postupak pegilacije |
| JP7245649B2 (ja) | 2015-05-01 | 2023-03-24 | アリスタ ファーマスーティカルス インク． | 眼疾患を治療するためのアディポネクチンペプチド模倣薬（関連出願の相互参照） |
| US10273310B2 (en) * | 2015-06-19 | 2019-04-30 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | CYS80 conjugated immunoglobulins |
| LT3998067T (lt) | 2015-11-09 | 2024-11-25 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Kompozicijos ir būdai, skirti homocistinurijos gydymui |
| AU2018254410B2 (en) * | 2017-04-17 | 2025-02-06 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Optimization of enzyme replacement therapy for treatment of homocystinuria |
| SG11202004772RA (en) | 2017-11-24 | 2020-06-29 | Merck Patent Gmbh | Cladribine regimen for use intreating progressive forms of multiple sclerosis |
| US20220118050A1 (en) | 2019-01-28 | 2022-04-21 | Toray Industries, Inc. | Polyethylene glycol-modified form of hepatocyte growth factor or active fragment thereof |
| EP3919128A4 (en) | 2019-01-28 | 2023-01-11 | Toray Industries, Inc. | POLYETHYLENE GLYCOL MODIFIED BODY FOR HEPATORYTE GROWTH FACTOR OR ACTIVE FRAGMENT THEREOF |
| WO2022053608A1 (en) | 2020-09-10 | 2022-03-17 | Merck Patent Gmbh | Novel treatment regimen for the treatment of autoimmune disorders |
Family Cites Families (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4766106A (en) | 1985-06-26 | 1988-08-23 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US4917888A (en) | 1985-06-26 | 1990-04-17 | Cetus Corporation | Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US5206344A (en) * | 1985-06-26 | 1993-04-27 | Cetus Oncology Corporation | Interleukin-2 muteins and polymer conjugation thereof |
| WO1987000056A1 (en) * | 1985-06-26 | 1987-01-15 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US5208344A (en) * | 1987-07-31 | 1993-05-04 | American Home Products Corporation | Naphthalenepropionic acid derivatives as anti-inflammatory/antiallergic agents |
| US5166322A (en) * | 1989-04-21 | 1992-11-24 | Genetics Institute | Cysteine added variants of interleukin-3 and chemical modifications thereof |
| US5595732A (en) * | 1991-03-25 | 1997-01-21 | Hoffmann-La Roche Inc. | Polyethylene-protein conjugates |
| US5382657A (en) * | 1992-08-26 | 1995-01-17 | Hoffmann-La Roche Inc. | Peg-interferon conjugates |
| HUT75533A (en) | 1993-11-10 | 1997-05-28 | Schering Corp | Improved interferon polymer conjugates |
| KR100203824B1 (ko) * | 1994-03-31 | 1999-06-15 | 스티븐 엠. 오드리 | 거핵구 성장 및 분화를 자극하기 위한 조성물 및방법 |
| NZ285664A (en) * | 1994-05-18 | 1998-07-28 | Inhale Therapeutic Syst | Dry powder interferon composition adapted for pulmonary delivery |
| US5824784A (en) * | 1994-10-12 | 1998-10-20 | Amgen Inc. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
| US5932462A (en) | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
| SE9503380D0 (sv) * | 1995-09-29 | 1995-09-29 | Pharmacia Ab | Protein derivatives |
| TW517067B (en) * | 1996-05-31 | 2003-01-11 | Hoffmann La Roche | Interferon conjugates |
| US5851984A (en) * | 1996-08-16 | 1998-12-22 | Genentech, Inc. | Method of enhancing proliferation or differentiation of hematopoietic stem cells using Wnt polypeptides |
| KR0176625B1 (ko) | 1996-11-05 | 1999-04-01 | 삼성전자주식회사 | 적외선 물체검출장치 |
| JP2001508783A (ja) * | 1997-01-29 | 2001-07-03 | ポリマスク・ファーマシューティカルズ・パブリック・リミテッド・カンパニー | Ｐｅｇ化法 |
| ATE375363T1 (de) * | 1997-07-14 | 2007-10-15 | Bolder Biotechnology Inc | Derivate des wachstumshormons und verwandte proteine |
| US6307024B1 (en) * | 1999-03-09 | 2001-10-23 | Zymogenetics, Inc. | Cytokine zalpha11 Ligand |
| US6531122B1 (en) * | 1999-08-27 | 2003-03-11 | Maxygen Aps | Interferon-β variants and conjugates |
-
1999
- 1999-04-28 PL PL344490A patent/PL193352B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 UA UA20031212655A patent/UA79430C2/uk unknown
- 1999-04-28 EA EA200001111A patent/EA003789B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 DK DK99920094T patent/DK1075281T3/da active
- 1999-04-28 CZ CZ20050048A patent/CZ298597B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 SK SK1622-2000A patent/SK286217B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 EP EP04003053A patent/EP1421956B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-28 WO PCT/US1999/009161 patent/WO1999055377A2/en not_active Ceased
- 1999-04-28 AT AT04003053T patent/ATE365563T1/de active
- 1999-04-28 PT PT04003053T patent/PT1421956E/pt unknown
- 1999-04-28 NZ NZ507456A patent/NZ507456A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 ES ES04003053T patent/ES2285286T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-28 CN CNB998054968A patent/CN1187094C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-04-28 CA CA002565375A patent/CA2565375A1/en not_active Abandoned
- 1999-04-28 IL IL13928699A patent/IL139286A/xx not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 AU AU37674/99A patent/AU762621B2/en not_active Ceased
- 1999-04-28 SI SI9930662T patent/SI1075281T1/xx unknown
- 1999-04-28 SK SK66-2007A patent/SK286654B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 AT AT99920094T patent/ATE275422T1/de active
- 1999-04-28 CN CNB2004100898478A patent/CN100335503C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-04-28 UA UA2000116719A patent/UA66857C2/uk unknown
- 1999-04-28 CA CA002330451A patent/CA2330451A1/en not_active Abandoned
- 1999-04-28 BR BR9910023-1A patent/BR9910023A/pt active Search and Examination
- 1999-04-28 TR TR2001/01751T patent/TR200101751T2/xx unknown
- 1999-04-28 SI SI9930974T patent/SI1421956T1/sl unknown
- 1999-04-28 ES ES99920094T patent/ES2224649T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-28 DE DE69920002T patent/DE69920002T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-28 EE EEP200000614A patent/EE05214B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 KR KR1020007011587A patent/KR100622796B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1999-04-28 HU HU0300548A patent/HUP0300548A3/hu unknown
- 1999-04-28 EA EA200300382A patent/EA005495B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 TR TR2000/03161T patent/TR200003161T2/xx unknown
- 1999-04-28 PL PL378728A patent/PL196533B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 DE DE69936409T patent/DE69936409T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-28 DK DK04003053T patent/DK1421956T3/da active
- 1999-04-28 JP JP2000545574A patent/JP4574007B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-28 CZ CZ20003995A patent/CZ298579B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 PT PT99920094T patent/PT1075281E/pt unknown
- 1999-04-28 EP EP99920094A patent/EP1075281B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-29 AR ARP990101987A patent/AR020070A1/es active IP Right Grant
- 1999-07-26 TW TW093123043A patent/TWI266800B/zh active
- 1999-07-26 TW TW088112596A patent/TWI232882B/zh active
-
2000
- 2000-10-17 BG BG109291A patent/BG65046B1/bg unknown
- 2000-10-17 BG BG104871A patent/BG64694B1/bg unknown
- 2000-10-23 NO NO20005337A patent/NO329749B1/no not_active IP Right Cessation
- 2000-10-30 US US09/698,133 patent/US6638500B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2003
- 2003-08-28 US US10/649,609 patent/US7357925B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2007
- 2007-02-13 US US11/674,476 patent/US7700314B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-07-19 CY CY20071100966T patent/CY1108022T1/el unknown
-
2010
- 2010-03-09 NO NO20100324A patent/NO332224B1/no not_active IP Right Cessation
- 2010-04-26 JP JP2010100840A patent/JP2010184929A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL193352B1 (pl) | Koniugat poliol-interferon ß, sposób jego wytwarzania i jego zastosowanie oraz kompozycja farmaceutyczna | |
| US6552170B1 (en) | PEGylation reagents and compounds formed therewith | |
| MXPA00010223A (en) | Polyol-ifn-beta conjugates | |
| HK1076115B (en) | Polyol-ifn-beta conjugates | |
| HK1038194B (en) | Polyol-ifn-beta conjugates |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RECP | Rectifications of patent specification | ||
| RECP | Rectifications of patent specification | ||
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20130428 |