NO329827B1 - Anvendelse av inhibitorer av IL-18 produksjon og/eller dets virkning ved fremstilling av medikamenter for a hemme metastase av melanom, og anvendelse av en ekspresjonsvektor som koder for en inhibitor for IL-18 produksjon og deller dets virkning ved fremstillingen av medikamenter for a hemme metastase av melanom - Google Patents
Anvendelse av inhibitorer av IL-18 produksjon og/eller dets virkning ved fremstilling av medikamenter for a hemme metastase av melanom, og anvendelse av en ekspresjonsvektor som koder for en inhibitor for IL-18 produksjon og deller dets virkning ved fremstillingen av medikamenter for a hemme metastase av melanom Download PDFInfo
- Publication number
- NO329827B1 NO329827B1 NO20020153A NO20020153A NO329827B1 NO 329827 B1 NO329827 B1 NO 329827B1 NO 20020153 A NO20020153 A NO 20020153A NO 20020153 A NO20020153 A NO 20020153A NO 329827 B1 NO329827 B1 NO 329827B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- cells
- production
- hse
- metastasis
- inhibitor
- Prior art date
Links
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims description 36
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 title claims description 32
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 title claims description 26
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims description 25
- 230000031037 interleukin-18 production Effects 0.000 title claims description 20
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 title claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 title claims description 4
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 claims description 80
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 claims description 78
- 102000044166 interleukin-18 binding protein Human genes 0.000 claims description 26
- 108010070145 interleukin-18 binding protein Proteins 0.000 claims description 26
- 102000004557 Interleukin-18 Receptors Human genes 0.000 claims description 17
- 108010017537 Interleukin-18 Receptors Proteins 0.000 claims description 17
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 6
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 claims description 5
- 108010027775 interleukin-1beta-converting enzyme inhibitor Proteins 0.000 claims description 2
- 102100035017 Interleukin-18-binding protein Human genes 0.000 claims 2
- 101710205006 Interleukin-18-binding protein Proteins 0.000 claims 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 135
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 51
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 27
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 27
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 22
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 22
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 20
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 19
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 17
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 17
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 12
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 11
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 10
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 9
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 7
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 6
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 108020003519 protein disulfide isomerase Proteins 0.000 description 6
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 6
- 108010008212 Integrin alpha4beta1 Proteins 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 5
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 102100035904 Caspase-1 Human genes 0.000 description 4
- 108090000426 Caspase-1 Proteins 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 4
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000011870 unpaired t-test Methods 0.000 description 3
- KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-n-[4-(4-methoxyphenyl)-1,3-thiazol-2-yl]-n-(3-methoxypropyl)acetamide Chemical compound S1C(N(C(=O)CCl)CCCOC)=NC(C=2C=CC(OC)=CC=2)=C1 KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 description 2
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 102100026018 Interleukin-1 receptor antagonist protein Human genes 0.000 description 2
- 101710144554 Interleukin-1 receptor antagonist protein Proteins 0.000 description 2
- 108010031099 Mannose Receptor Proteins 0.000 description 2
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 2
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000019189 interleukin-1 beta production Effects 0.000 description 2
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 230000000684 melanotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 230000001480 pro-metastatic effect Effects 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 210000005167 vascular cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- -1 6-carboxyfluorescein acetoxymethyl ester Chemical class 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 101000828805 Cowpox virus (strain Brighton Red) Serine proteinase inhibitor 2 Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 101001057956 Homo sapiens 55 kDa erythrocyte membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 101000837415 Homo sapiens DNA polymerase subunit gamma-2, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101001065272 Homo sapiens EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000599048 Homo sapiens Interleukin-6 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101001072202 Homo sapiens Protein disulfide-isomerase Proteins 0.000 description 1
- 101000801228 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100026017 Interleukin-1 receptor type 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710149731 Interleukin-1 receptor type 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010082786 Interleukin-1alpha Proteins 0.000 description 1
- 102100037792 Interleukin-6 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 206010027457 Metastases to liver Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 101100221606 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) COS7 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 1
- 108050002568 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Proteins 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- NTECHUXHORNEGZ-UHFFFAOYSA-N acetyloxymethyl 3',6'-bis(acetyloxymethoxy)-2',7'-bis[3-(acetyloxymethoxy)-3-oxopropyl]-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-5-carboxylate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(C(=O)OCOC(C)=O)=CC=C2C21C1=CC(CCC(=O)OCOC(C)=O)=C(OCOC(C)=O)C=C1OC1=C2C=C(CCC(=O)OCOC(=O)C)C(OCOC(C)=O)=C1 NTECHUXHORNEGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000001043 capillary endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 238000010217 densitometric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 1
- 108010027836 endotoxin receptor Proteins 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 231100000334 hepatotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003082 hepatotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 102000057036 human EFEMP1 Human genes 0.000 description 1
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 210000001865 kupffer cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 238000013227 male C57BL/6J mice Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000000110 microvilli Anatomy 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940105631 nembutal Drugs 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/07—Tetrapeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
Oppfinnelsens område
Foreliggende oppfinnelse angår tumormetastase og midler for å hemme denne. Mer spesielt angår oppfinnelsen å hindre metastase av melanom ved å hemme produksjon og/eller virkning av interleukin-18 (IL-18). Helt konkret vedrører oppfinnelsen anvendelse av inhibitorer for IL-18-produksjon og/eller dets virkning ved fremstilling av medikamenter for å hemme metastase av melanom.
Bakgrunn for oppfinnelsen
Tilfestingen av sirkulerende kreftceller til kapillært endotel er et kritisk trinn ved utviklingen av metastaser (1,2). Det vaskulære celletilfestingsmolekyl-1 (VCAM-1), som er en forbindelse i immunoglobulinsupergruppen, styrer tilfestingen av hematopoietiske celler og aktiverte leukocytter til proinflammatoriske cytokin-aktiverte endoteliske celler (3-5). Tilfestingsfunksjonen for VCAM-1 kan imidlertid fjernes av animalske eller
humane kreftceller og derved forsterke en eksperimentell metastatisk spredning (6).
Det er f.eks. kjent at IL-ip og TNF-a forsterker metastasen for VLA-4 uttrykkende melanomceller i lungevev, ved en mekanisme som innbefatter en oppregulering av VCAM-1 ekspresjon i endotelceller (7-9). Det er også blitt påvist at IL-1 og TNF-a i signifikant grad bidrar til hepatisk kolonisering av B16M-celler både i normale og lipopolysakkarid-behandlede mus (7,8,10-20). I tillegg innbefatter mannose reseptor-kontrollert hepatisk sinusoidal endotel (HSE) celleaktivering i en autokrin IL-1 P kontrollert HSE celleekspresjon av VCAM-1, noe som fører til økende B16M-celletilfesting og metastase (21). Det er også blitt vist at IL-1 p aktiverte HSE-celler frigjør VLA-4-stimulerende faktorer, noe som forsterker B16M-celletilfestingen til HSE-celler (11). IL-1 P induserer således VCAM-1 ekspresjon og frigjøring av VLA-4-stimulerende faktor fra HSE-celler, noe som gir disse en evne til å skape et prometastatisk mikromiljø for visse intrasinusoidale tilbakeholdte VLA-4-uttrykkende kreftceller.
En blokkering av IL-lp og TNF-a fører imidlertid bare til en delvis opphevelse av metastasen, noe som indikerer at også andre faktorer inngår, enten ved å kompensere for de nevnte faktorers fravær, eller ved å virke via alternative reaksjonsveier. De fleste metastaserende kreftcellene og målvevet er dessuten ikke i stand til å produsere disse pro-inflammatoriske cytokinene. Videre vil endotoksin eller mannosereseptorligandkonsentrasjonen ikke være tilstrekkelig hevet til at det blir indusert en frigjøring av pro-inflammatorisk cytokin. Dette betyr at de multiple styringsmekanismer som frembringer en VCAM-1 oppregulering og dens rolle under en kapillær overføring av kreftceller, ikke er særlig godt kjent. IL-18 (INFy-induserende faktor) er et nytt cytokin som har strukturelle trekk felles med IL-1 gruppen av proteiner (22), og funksjonelle egenskaper med IL-12 (23). Det har blitt rapportert at IL-18 produksjon fra Kupffer-celler aktiverer både TNF-a og FAS ligand-styrte hepatoksiske reaksjonsveier ved endotoksin-indusert leverskade (24). Mer nylig er det blitt vist at IL-18 også har proinflammatoriske egenskaper ved en direkte stimulering av genekspresjon og syntese av TNF-a fra CD3<+>/CD4<+>og naturlige dreperceller, med en etterfølgende produksjon av IL-ip og IL-8 fra CD14<+>populasjonen, noe som viser at IL-18 har en uventet sentral stilling i cytokinhierarkiet (25). Dets mulige rolle i kreftmetastasen er imidlertid ikke blitt klarlagt.
Et interleukin-18 bindende protein (IL-18BP) ble renset fra urin ved kromatografi på IL-18 perler, deretter sekvensert, klonet og uttrykt i COS7 celler. IL-18BP opphevet IL-18 induksjon av interferon-y (IFN-y), IL-8 og aktivering av NF-kB in vitro. Administrering av IL-18BP til mus opphevet sirkulerende IFN-y etter LPS. IL-18BP fungerer således som en inhibitor av en tidlig Thl cytokin reaksjon. IL-18BP blir i alt vesentlig uttrykt i milten, fører til immunoglobulinsupergruppen og har begrenset homologi til IL-1 type II reseptoren. Dets gen ble lokalisert på det humane kromosom 1 lql3, og det ble ikke funnet noe exon som koder for et transmembrandomene i en 8,3 kb genomsekvens. Flere koppevirus koder antatte proteiner som er sterkt homologe til IL-18BP, noe som antyder at virusprodukter kan svekke IL-18 og påvirke den cytotoksiske T-celle-reaksjonen (28 og WO 99/09063). Som beskrevet mer spesielt i WO 99/09063, så er IL-18BP og muteiner, kondenserte proteiner og deres funksjonelle derivater, aktive fraksjoner eller sirkulerende permitterte derivater og blandinger av disse, i stand til å binde seg til IL-18 og/eller er i stand til å modulere aktiviteten til IL-18 og/eller er i stand til å blokkere denne aktiviteten.
I et sammendrag fra Vidal-Vanadocha et al., Cytokine, 1997, vol.9, nr.l 1, side 897, abstract nr.30 rapporterer forfatterne at inkubering av B16-melanomceller med spesifikke ICE-inhibitorer reduserer spontan utskilling av IL-18BP in vitro og fører til en 50 % reduksjon av metastatiske fokus. Sammendraget nevner ikke rollen til IL-18 ved metastatisk proliferasjon.
WO 98/41232 vedrører fremgangsmåter og preparater for modulering av mottakelighet overfor kortikosteroider. Den beskriver administreringen sammen med et kortikosteroid av IL-18-antagonister, slik som ICE-inhibitorer, et IL-18-antistoff, antistoffragment eller endret bindingsprotein som binder til IL-18 eller en IL-18-reseptor.
EP 0850952 beskriver IL-18-reseptorproteiner i tillegg til antistoffer som binder til disse. Antistoffene er nyttige til rensing, påvisning og inhibering av IL-18.
Sammendrag av oppfinnelsen
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en anvendelse av inhibitorer for IL-18 produksjon og/eller virkning for fremstilling av medikamenter for å hemme metastase av melanom. Den angår også anvendelse av en ekspresjonsvektor som koder for en inhibitor for IL-18-produksjon og/eller dens virkning ifølge oppfinnelsen ved fremstillingen av medikamenter for å hemme metastase av melanom.
Inhibitorer av IL-18 produksjon er f.eks. inhibitorer av kaspase-1.
Inhibitorene for IL-18 virkning er valgt fra antistoffer mot IL-18, antistoffer mot enhver av IL-18 reseptorunderenhetene, inhibitorer av IL-18 reseptorsignalveien, antagonister for IL-18 som konkurrerer med IL-18 og blokkerer IL-18 reseptoren, og IL-18BP proteiner, muteiner, kondenserte proteiner, deres funksjonelle derivater, aktive fraksjoner eller deres sirkulerende permiterte derivater, som binder IL-18.
De inhibitorer som brukes er fortrinnsvis IL-18BP proteiner eller et mutein, kondensert protein, funksjonelt derivat, en aktiv fraksjon eller et sirkulerende permitert derivat av disse, som har samme aktivitet som IL-18BP.
En annen måte for å hemme IL-18 produksjon og/eller dens virkning for derved å hemme tumormetastase, er å føre inn i kroppen en ekspresjonsvektor som innbefatter en kodende sekvens for en inhibitor for IL-18 produksjon og/eller dennes virkning, så som et IL-18BP.
Kort beskrivelse av figurene
Fig. 1. Eksperimentell hepatisk kolonisering etter B16M celleinjeksjon i milten i villtype, IL-ipV" og ICE7" mus. Leverne ble fjernet på dag 10 etter injeksjonen av B16M og disse ble så fiksert i fosfatbufret saltløsning med 10 % formaldehyd. Nesten alle de eksperimentelle metastasene (svarte melanotiske knuter) ble utryddet fra IL-ipV" og ICE7" muselevere. Fig. 2. Effekt av irreversibel ICE-inhibitor og anti-mus IL-18 antistoff på B16M celletilfesting til HSE-celler, og IL-1 p og TNF-a produksjon fra ubehandlede og B16M-CM-behandlet HSE-celler. Dyrkede HSE-celler ble inkubert i nærvær av B16M-CM i 10 timer. I enkelte eksperimenter mottok både de ubehandlede og
behandlede HSE-cellene 10 uM ICEi eller 10 u.g/ml anti-mus IL-18 antistoff før B16M-CM. Prosentsatsen for B16M-celler som festet seg til HSE-substrater, ble beregnet som en relativ verdi i forhold til det opprinnelige antall tilsatte celler. I tillegg ble dyrkningssupernatanten fjernet før tilfesting for å bestemme IL-1 p og TNF-a konsentrasjonen ved hjelp av ELISA. Data representerer en middelverdi + SD for 4 separate eksperimenter, som hver hadde seks parallelle (n=24). Den
økende tilfestingen av B16M-celler til B16M-CM-behandlede HSE-celler og IL-ip og TNF-a produksjon med hensyn til ubehandlet HSE (<*>P<0,01), var statistisk signifikant ifølge Students to-halet uparede t-test. Det var ingen statistisk signifikante forandringer i IL-ip eller TNF-a produksjon og i tilfesting av B16M-celler til HSE-celler, når disse var behandlet med ICEi eller anti-IL-18 antistoff i fravær av B16M-CM (data ikke vist). Fig. 3. Effekt av ICEi på tilfesting av B16M-celler til B16M-CM-behandlede HSE-celler in vitro. HSE-celler ble inkubert med basalt medium eller B16M-CM i 8 timer. Enkelte HSE-celler mottok 10 uM i ICEi i 18 timer før B16M-CM. I tillegg ble også 1 ng/ml av rekombinant murint IL-ip tilsatt enkelte HSE-celler sammen med B16M-CM i 8 timer. I andre eksperimenter mottok HSE-cellene 1 ng/ml murint IL-1 p eller 100 pg/ml TNF-a i 6 timer, og 10 ug/ml kanin anti-mus IL-18 polyklonalt antistoff ble tilsatt eller ikke tilsatt 1 time før cytokindanningen. Ikke-spesifikt IgG polyklonalt antistoff ble også tilsatt ubehandlede og cytokin-behandlede HSE-celler. HSE-cellene ble så vasket, og BCEFCF-AM-merkede B16M-celler ble tilsatt og igjen vasket 8 min. senere. Prosenten av B16M-celler som hadde festet seg til HSE-substratet ble beregnet som en relativ verdi med hensyn til det opprinnelige antallet av tilsatte celler. Resultatene representerer midler + standardavvik for tre separate eksperimenter som hver ble utført i 6 paralleller (n=18). Forskjeller med hensyn til graden av tilfesting med hensyn til ubehandlet HSE (<*>) og til IL-lp eller TNF-a-behandlet HSE (<**>) var statistisk signifikant (P<0,01) ifølge Students to-halede uparede t-test. Det var ingen statistisk signifikante forandringer med hensyn til tilfesting av B16M-celler eller til andre ICEi-behandlede kontroll HSE-celler, som dessuten mottok eller ikke mottok 1 ng/ml murint IL-ip i 8 timer (data ikke vist). Fig. 4. In vitro B16M-celletilfesting til IL-18-behandlede HSE-celler. HSE-celler ble inkubert med 1 ng/ml av rekombinant murint IL-18 i 6 timer. I enkelte eksperimenter ble 10 u,g/ml TNF-sRp55 eller 100 ng/ml IL-1 Ra tilsatt 10 min. før IL-18.1 andre eksperimenter ble 10 u.g/ml anti-VCAM-1 antistoff eller en tilsvarende konsentrasjon av ikke-spesifikt anti-mus i IgG tilsatt HSE-cellene 30 min. før B16M-cellene. Prosenten av tilfestede B16M-celler ble bestemt som beskrevet i de etterfølgende eksempler. Resultatene representerer midlet + standardavvik for tre separate eksperimenter som hver ble utført i seks-paralleller (n=18). Forskjeller med hensyn til graden av tilfesting med hensyn til HSE-celler som var behandlet med nasalt medium (<*>) og til IL-18-behandlede HSE-celler (<**>) var statistisk signifikant (P<0,01), ifølge Students to-halede uparede t-test.
Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen
Flere proinflammatoriske cytokiner og heriblant interleukin (IL)-ip og tumornekrosefaktor-alfa (TNF-a) fremmer tilfestingen av kreftceller til endoteliske celler, noe som fører til en metastatisk spredning av tumorer. Disse proinflammatoriske cytokinene fremmer tilfesting og metastase sannsynligvis ved å indusere det vaskulære celletilfestingsmolekylet-1 (VCAM-1). Foreliggende oppfinnelse viser at en behandling av primært dyrkede murine HSE-celler i kondisjonert medium (CM) fra Bl6 melanom (B16M) cellekulturer (B16M-CM) fremmer tilfestingen mellom B16M og HSE-celler in vitro. B16M-CM induserer også produksjonen av IL-lp og TNF-a fra HSE-celler in vitro. Det er imidlertid ikke blitt klart påvist at tumormetastase i virkeligheten blir kontrollert av IL-1 (3 og TNF-a.
Foreliggende oppfinnelse viser at B16M-CM induserer produksjonen av IL-18 fra HSE-celler, og at IL-18 er et cytokin som bidrar til øket tilfesting av B16M-celler til HSE-celler. IL-18 bedrer tilfestingen ved å aktivere VCAM-1 ekspresjon i HSE-celler uten at dette involverer TNF-a eller IL-1 p. Inkubering av HSE-celler med en spesifikk kapase-1 inhibitor (10 u.M, 18 timer), opphever fullstendig B16M-CM-indusert tilfesting uten å svekke TNF-a-produksjonen, og effekten blir ikke reversert ved å tilsette mus IL-lp. Tilsetning av anti-murint IL-18 antistoff til HSE-celler hindrer en B16M-CM-indusert tilfesting, uten at dette påvirker B16M-CM-induksjonen av IL-ip og TNF-a. På lignende måte har det vist seg at et nylig klonet IL-18-bindende protein (IL-18BP), også hindrer B16M-CM-indusert tilfesting av B16M til HSE-celler in vitro. Inhibitorer for TNF-a og IL-ip, såsom den p55 løselige TNF-reseptoren eller IL-1 reseptorantagonisten, var ikke i stand til å reversere denne IL-18-induserte tilfesting. Det tilveiebringes således inhibitorer for IL-18 produksjon og dens virkning som redskaper for å hemme tumormetastase. Inhibitorer for IL-18-produksjon innbefatter inhibitorer for kapase-1. Inhibitorer for IL-18-virkning er valgt fra en gruppe bestående av antistoffer som er rettet mot IL-18, antistoffer som er rettet mot enhver av de to kjente IL-18 reseptorunderenhetene, inhibitorer for IL-18 reseptorsignalveien, antagonister for IL-18 som konkurrerer med IL-18 og blokkerer IL-18-reseptoren, og IL-18-bindende proteiner, som binder IL-18 og blokkerer dens biologiske aktivitet.
Foreliggende oppfinnelse angår den mulige rolle IL-18 spiller i den proinflammatoriske cytokin-kontrollerte oppreguleringen av VCAM-1 ekspresjon, dets mulige interaksjon med andre cytokiner og muligheter for å hindre denne induksjon av VCAM-1.1 overensstemmelse med foreliggende oppfinnelse har en funnet at IL-18 opptrer ved forbindelsen av de proinflammatoriske reaksjoner som fører til en VCAM-1 oppregulering i den hepatiske sinusoidale veggen og følgelig letter kreftcelletilfesting og metastase. Primære dyrkede mus HSE-celler behandlet med B16M-CM ble brukt som en kreftcelle-avhengig endotelisk celleaktiveringsmodell for å undersøke rollen til B16M celle-indusert IL-18 på den mekanisme som opptrer når B16M-celler fester seg til HSE ved en VCAM-1 - avhengig mekanisme. Den spesifikke rollen til IL-18 ble undersøkt under betingelser med en spesifikk IL-1 reseptorblokkade ved hjelp av IL-1 Ra, modent IL-1 P og IL-18 sekresjonsinhibering ved å bruke en irreversibel IL-1 omdannende enzyminhibitor (ICEi), TNF-blokkade ved å bruke en p55 TNF-løselig reseptor (TNF-sR p55) og en IL-18 funksjonsblokkade ved å bruke anti-IL-18 antistoffer og IL-18 bindende protein. I tillegg ble B16M-celler injisert i milten hos ICE7" og IL-ipV" mus. Den lave metastasetetthet som ble observert i munusvariantene av mus sammenlignet med normale kontroller, antyder at IL-lp og dessuten IL-18 inngår i den prometastatiske inflammasjonsrollen (tabell 1).
De in vitro eksperimenter som er utført, viser at IL-18-produksjon står for de HSE tilfestnings-stimulerende effekter indusert ved hjelp av supernatanter avledet fra B16M-celler. Ettersom VCAM-1 oppregulering står for all tilfestingsstimulerende aktivitet for B16M-CM-behandlede HSE-celler, så indikerer de oppnådde data at IL-18 kontrollerer ekspresjonen av VCAM-1 fra cytokin-induserte HSE-celler. Videre blir det observert at antistoffer til IL-18 nedsatte den B16M-CM-inhiberte celleaddisjonen uten å påvirke produksjonen av TNF-a og IL-1 p fra HSE-celler. Produksjonen av IL-ip og TNF-a i HSE-celler var således IL-18-uavhengig og bidro ikke til en tilfesting. På den annen side hverken TNF-sR p55 eller IL-IRa var i stand til å hemme en tilfestningsøkning i IL-18-behandlede HSE-celler, noe som bekrefter at hverken autokrint TNF-a eller IL-ip er ansvarlig for den IL-18-induserte HSE-tilfestingen.
Resultatene i HSE-celler står i kontrast til det som ble oppnådd i andre cellesystemer, f.eks. ikke CD14<+>humane blodmononukleære celler (25), hvor IL-18 induserte IL-ip voa TNF-a-produksjon. Det er sannsynlig at et eksisterende HSE-spesifikt proinflammatorisk cytokinhierarki, hvor TNF-a og IL-1 p er uavhengig av IL-18-kontroll, men bruker IL-18 som en nedstrømskontroll av VC AM-1 -oppreguleringen.
I motsetning til murine HSE-celler, så uttrykker ikke B16M-celler IL-18-genet, noe som ble kontrollert ved RT-PCR, og en inkubering med ICEi i 18 timer opphevet ikke de cytokin- og tilfestingsstimulerende aktivitetene til B16M-CM på HSE-celler. Lokal produksjon av IL-18 kan imidlertid påvirke B16M-cellenes aktivitet under deres gjennomgang eller stopp i mikrhårene i leveren. En ytterligere observasjon var at B16M-celleinkubering med 1 ng/ml murint IL-18 i 6 timer, doblet deres adhesjon til ubehandlede HSE-celler, og dessuten at anti-VCAM-1-antistoff til HSE, nedsatte den IL-18-kontrollerte tilfestingen med 80 %, noe som antyder at det inngår en VCAM-1/VLA-4 interaksjon. B16M-celler som mottok supernatanten fra de B16M-CM behandlede HSE-cellene i 6 timer, signifikant doblet (P<0,01) på lignende måte deres tilfestning til HSE ved en VCAM-1 - avhengig mekanisme, og at anti-IL-18 antistoff fjernet ved denne tilfestnings-stimulerende effekten.
Observasjonene i overensstemmelse med foreliggende oppfinnelse antyder at IL-18 er en ny forbindelse mellom frigjøringen fra leveren av proinflammatoriske cytokiner og metastaseutvikling. Dens produksjon fra tumor-aktiverte HSE-celler bestemmer to komplementære mekanismer som inngår i reguleringen av tilfestingen av melanomceller til HSE-celler: en autokrin mekanisme i HSE som kontrollerer den TNF-a/IL-lp-kontrollerte VCAM-1-oppreguleringen, og en parakrin mekanisme i B16M-celler som oppregulerer VLA-4 i melanomceller og forsterker deres VCAM-1-avhengige tilfestingskapasitet. Denne samtidige molekulære oppreguleringen av de to tilfestingsmotpartene i cellen gjør at interaksjonsveien mellom kreftceller og de kapillære endoteliske celler meget verdifull.
Den IL-18-induserte tilfestingen av B16M-celler blir opphevet ved inhibitorer for IL-18-produksjon og/eller deres virkning. Inhibitorer av IL-18-produksjon innbefatter inhibitorer for kaspase-1. Inhibitorer for IL-18-virkning er valgt fra gruppen bestående av antistoffer rettet mot IL-18, antistoffer rettet mot ethvert av de to kjente IL-18 reseptorunderenhetene, inhibitorer for IL-18-reseptorsignalveien, antagonister for IL-18 som konkurrerer med IL-18 og blokkerer IL-18-reseptoren, og IL-18-bindende proteiner som binder IL-18 og blokkerer dets biologiske aktivitet.
I tillegg til den direkte bruken av inhibitorer for IL-18-produksjon og/eller dets virkning, så kan en også ifølge foreliggende oppfinnelse tenke seg at det i celler innføres mekanismer som gir en hemmende effekt på IL-18-produksjonen og/eller dets virkning. For dette formål er det nødvendig å innføre et spesifikt system, f.eks. DNA som koder et IL-18BP i cellene. Det foreligger flere muligheter for å utføre dette. F.eks. kan en egnet vektor som bærer ovennevnte DNA føres inn i cellene, og hvor vektoren er i stand til å innsette dette DNA i cellene på en slik måte, at nevnte DNA blir uttrykt i cellene. Tilførselsmetoder og systemer for å utføre dette i celler, er blant annet beskrevet i US patentene 5 910 487, WO 99/29349 og andre.
Farmasøytiske sammensetninger for å hemme IL-18-produksjon og/eller dets virkning, er de som innbefatter som aktiv bestanddel en inhibitor valgt fra en kapase-1 inhibitor, et antistoff mot IL-18, et antistoff mot enhver av IL-18-reseptorunderenhetene, en inhibitor for IL-18-reseptorsignalveien, en antagonist som konkurrerer med IL-18 og blokkerer IL-18-reseptoren, og IL-18BP eller et mutein, kondensert protein, funksjonelt derivat, aktiv fraksjon eller sirkulerende permutert derivat, av dette, som har samme aktivitet.
Begrepet mutein, kondensert protein, funksjonelt derivat, aktiv fraksjon og sirkulerende permutert derivat, har samme betydning som angitt i WO 99/09063.
Antistoffer til IL-18 og IL-18BP er de foretrukne aktive bestanddelene i de farmasøytiske sammensetningene.
Medikamenter kan også innbefatte vanlige kjente bærere, fortynningsmidler og andre velkjente bestanddeler, avhengig av hvorledes preparatene og sammensetningene skal anvendes, enten oralt, ved injeksjon eller på andre velkjente måter.
Den spesielle dose som anvendes vil være avhengig av anvendelsesmåten, kroppsvekten på pasienten og andre faktorer som i hvert enkelt tilfelle må bestemmes av den behandlende lege.
Etter at oppfinnelsen nå er beskrevet rent prinsipielt, vil den nå bli mer detaljert med henvisning til de etterfølgende eksempler som utelukkende er gitt som illustrasjoner.
Eksempler:
Reagenser:
Rotte anti-mus IgG og rotte anti-mus VCAM-1 monoklonalt antistoff ble oppnådd fra Serotec Ltd. (Oxford, England). Rekombinant murint IL-1 (3 ble kjøpt fra R&D Systems Inc. (Minneapolis, MN). Rekombinant human IL-1 reseptorantagonist (IL--lRa, var en velvillig gave fra The Upjohn Co., Kalamazoo, MI) og human p55 TNF-løselig reseptor (TNFsR p55) var en velvillig gave fra Serono Inc., Norwell, MA. IL-1 p-omdannende enzyminhibitor (ICEi), ble kjøpt fra Alexis Co. (San Diego, CA). Rekombinant murint IL-18 og kanin anti-mus IL-18 polyklonalt antistoff IgG ble kjøpt fra PeproTech EC Ltd. (London, UK). IL-18-bindende protein (IL-18BP) ble fremstilt som beskrevet (28).
Dyrking av B16M-celler. B16M-celler ble dyrket, opprettholdt og overført som tidligere beskrevet (11). B16M-kondisjonert medium (B16M-M) ble fremstilt som følger: 5x10<5>celler ble utplatet i en T-kolbe på 25 cm<2>og dyrket i 24 timer. Deretter ble cellene dyrket i ytterligere 24 timer i 5 ml serumfritt medium (endelig celletetthet var 6x10<4>celler/cm<2>). Supernatantene ble oppsamlet, fortynnet 3:1 i friskt serumfritt medium og overført gjennom et 0,22 Im filter.
Cytokinanalyse. Frigjøring av cytokiner fra de primært dyrkede HSE-cellene og B16M-cellene ble målt ved å bruke spesifikke ELISA-sett basert på anti-mus IL-1 p og TNF-a monoklonale antistoffer, slik det er foreslått av fabrikkanten (R&D Systems, Minneapolis, MN).
Eksempel 1: Kvantitativ B16M-celle til festing til primære HSE-kulturer HSE ble separert fra syngeniske mus, identifisert og dyrket som beskrevet tidligere (26). B16M-cellene ble merket med 2', 7'-bis-(2-karboksyetyl)-5,6-karboksyfluorscein-acetoksymetylesterløsning (BCECF-AM, Molecular Probes, Eugene, OR) som tidligere rapportert (16). Deretter ble 2x10<5>celler/brønn tilsatt HSE-celler som var oppdyrket på en 28 brønns plate, og 8 min. senere ble brønnene vasket tre ganger med friskt medium. Antallet tilfestede celler ble bestemt ved å bruke en kvantitativ metode basert på et tidligere beskrevet fluorescensmålesystem (16). I enkelte eksperimenter ble HSE-cellene pre-inkubert med B16M-CM i flere timer før tilsetting av B16M-celler.
Eksempel 2: Hepatisk metastaseprøve. Villtype, IL-1 (37" og ICE7" hannlige C57BL/6J mus ble utviklet som beskrevet tidligere (27). Det ble brukt fra seks til åtte uker gamle mus som var plassert i grupper på fem i hvert bur. Levermetastase ble frembragt ved at bedøvede mus (Nembutal, 50 mg/kg intraperitonealt) ble injisert i milten med 3xl0<5>levende B16-melanomceller suspendert i 0,1 ml av Hanks balanserte saltløsning. Musene ble avlivet under bedøvelse på den tiende dag etter injeksjonen av kreftcellene. Levervev ble så opparbeidet for histologisk undersøkelse. Densitometrisk analyse av digitaliserte mikroskopiske bilder ble brukt for å diskriminere metastatisk B16M fra normalt levervev, og tettheten av levermetastaser, som er antallet metastaser pr. 100 mm3 lever (basert på det midlere antall av foki som bli påvist i femten 10x10 mm<2>snitt pr. lever), ble beregnet ved å bruke en tidligere beskrevet stereologisk metode (17).
Eksempel 3: Redusert metastase og vekst av B16M-celler injisert i mus uten IL-ip og ICE
Det ble utført to uavhengige eksperimenter med ett års forskjell, ved å bruke to forskjellige porsjoner av de samme B16M-cellene som ble injisert inn i milten i voksne C57B1/6J villtype, ICE7" og IL-ip7" mus. Nekroskopisk undersøkelse viste synlige melanotiske tumorer i milten hos alle de undersøkte mus, uten at det var signifikante forskjeller med hensyn til størrelse slik dette ble bedømt ved vekten av milten (tabell 1). I motsetning til dette var det en markant minsking av metastaser i IL-ip7" og spesielt ICE7" muselevere sammenlignet med levere fra villtypen av mus (fig. 1). En kvantitativ histologisk analyse av antall og størrelse på de metastatiske foki ble utført for å bestemme tettheten av metastaser (som antall foki pr. 100 mm ), og volum (hvor mye av organet som var okkupert) parametere i leverne hos de undersøkte mus. Sammenlignet med mus av villtypen (tabell 1), så var tettheten av metastase i leveren signifikant (P<0,01) betydelig mindre i leverne i IL-ipV" og ICET mus med fra 84-90 %, noe som indikerer at de fleste injiserte B16M-cellene ikke var i stand til å implantere seg i levervev fra disse musene. I tillegg til dette var også metastasevolumet signifikant (P<0,01) mindre i leverne hos IL-1 (37" og ICE7" mus med en faktor på fra 6 til 7 ganger, sammenlignet med verdiene i leverne av mus fra villtypen, noe som indikerer at de B16M-cellene som er i stand til å kolonisere leveren, også hadde en redusert veksthastighet. En kunne også observere en forskjell i disse metastaseparametrene i leveren hos IL-1 (37" og ICE7" musene, noe som førte til en utryddelse av metastasene i nesten alle ICE7' muselevere fra eksperiment I (fig. 1).
Eksempel 4: Autokrint IL-18 kontrollerer TNF-a- og IL-ip-indusert tilfesting fra B16M-CM-aktiverte HSE-celler.
B16M-CM øker signifikant (P<0,01) HSE-celleproduksjonen av TNF-a og IL-lp og deres tilfesting til andre B16M-celler in vitro (fig. 2). Inkubering av HSE med 100 u.M ICEi i 18 timer fullstendig opphevet den B16M-CM-induserte tilfestingen uten å svekke TNF-a-produksjonen fra nevnte HSE-celler. Eksogent tilsatt murint IL-1 P kompenserte ikke for den blokkerende effekten av ICEi på HSE, noe som står i kontrast til den signifikante økningen med hensyn til B16M-celletilfesting som ble observert i kontroll HSE-celler som var behandlet med IL-1 (3 (fig. 3). Det faktum at den B16M-CM-induserte bedrede tilfestingen ble opphevet i nærvær av forhøyede konsentrasjoner av endogent produsert TNF-a og eksogent tilsatt IL-1 P, indikerer at ingen av disse cytokinene direkte oppregulerer HSE-tilfestingen. Videre er det viktig å observere at nærværet av antimurint IL-18-antistoff tilsatt HSE før stimulering med B16M-CM, hindret den B16M-CM-induserte tilfestingen uten å påvirke den induserte IL-1 p og TNF-a-produksjonen fra disse HSE-cellene (fig. 2). Videre hindret også anti-IL-18 antistoff den addisjonsstimulerende effekten av murint IL-lp og TNF-a på HSE (fig. 3), noe som indikerer at de proadhesive virkningene av disse cytokinene på HSE begge var IL-18-kontrollert. RT-PCR bekreftet at HSE-cellene uttrykket i IL-18-genet (data ikke vist). I motsetning til dette øket murint IL-18 signifikant (P<0,01) den angitte B16M-celletilfestingen til HSE (fig. 4), og hverken TNF-sR p55 eller IL-1 Ra var i stand til å ramme denne virkningen, noe som bekrefter at hverken autokrint TNF-a eller IL-1 p er ansvarlig for den angitte IL-18-induserte HSE-tilfestingen. Som vist på fig. 4 imidlertid, så hindrer anti-VCAM-1 antistoff fullstendig en adhesjon av B16M-celler til IL-18-behandlede HSE-celler. Kontroll ikke-spesifikt IgG påvirket ikke oppreguleringen av B16M-celletilfestingen til IL-18-behandlede HSE-celler.
Eksempel 5: IL-18BP hindrer tilfestingen av B16 melanomceller indusert ved B16-kondisjonert medium.
Som vist i tabell 2, så reduserte tilsetningen av IL-18BP til HSE-celler stimulert med B16-CM, prosentsatsen av tilfestede celler fra 35 % til 8,70 % (p<0,01). Dette representerer en 100 % inhibering, ettersom tilfestingsnivået var under nivået av tilfestede celler ved å bruke et basalt medium. Dette resultatet antyder at endogent IL-18 fra HSE-cellene kan være en endogen kilde for IL-18 i tillegg til det som er tilstede i B16M-CM.
REFERANSER
1. Kohn, E. C, and Liotta, L. A. (1995) Cancer Res 55(9), 1856-62
2. Nicolson, G. L., and Winkelhake, J. L. (1975) Nature 255,230-232
3. Freedman, A., Munro, M., Rice, G. E., Bevilacqua, M. P., Morimoto, C, Mclnryre, B. W., Rhynhart, K., Pober, J. S., and Nadlcr, L. M. (1990) Science 249, 1030-1033 4. Miyakc, M., Fuchimoto, S., Iwagaki, H., Matsubara, N., Edamatsu, R., Hiramatsu,
M., and Orita, K. (1991) Res. Comm. Chem. Pathol. Pharmacol. 71,293-307
5. Simmons, P. J., Masinovsky, B., Longenecker, B. M., Bcrenson, R., Torok-Storb,
B., and Gallalin, W. M. (1992) B/o«/80(2), 388-95
6. Rice, G. E., and Bevilacqua, M. P. (1989) Science 246,1303-1306
7. Okahara, H., Yagita, H., Miyake, K., and Okumura, K. (1994) Cancer Res 54, 3233-3236 8. Garofalo, A., Chirivi, R. G. S., Foglieni, C, Pigot, R., Mortarini, R., Martin-Padura, I., Anichini, A., Gearing, A. J., Sanchez-Madrid, F., Dejana, E., and Giavazzi, R. (1995) Cancer Res 55,414-419 9. Martin-Padura, I., Mortarini. R., Lauri, D., Bemasconi, S., Sanchez-Madrid, F., Parmiani, G., Mantovani, A., Anichini, A., and Dejana, E (1991) Cancer Res 51, 2239-2241 10. Lauri, D., Bcrtomeu, M.-C, and Orr, F. W. (1990) Clin Exp Metastasis 8,27-32 11. Anasagasti, M. J., Alvarez, A., Martin, J. J., Mendoza, L., and Vidal-Vanaclocha, F. (1997) Hepatology 25,840-846 12. Bani, M. R., Garofalo, A., Scanziani, E., and Giavazzi, R. (1991) J. Nati. Cancer Inst. 83,119-123 13. Bertomeu, M. C, Gallo, S., Lauri, D., Haas, T. A., Orr, F. W., Bastida, E., and Buchanan, M. R. (1993) Clin Exp Metastasis 11,243-250 14. Burrows, F. J., Haskard, D. O., Hart, I. R., Marshall, J. F., Selkirk, S., Poole. S.}
and Thorpe, P. E. (1991) Cancer Res 51,4768-4775
15. Chirivi, R. G. S., Garofalo, A., Padura, 1. M., Mantovani, A., and Giavazzi, R.
(1993) Cancer Res 53,5051-5054 16. Vidal-Vanaclocha, F., Amézaga, C, Asumendi, A., Kaplanski, G., and Dinarcllo, C. A. (1994) Cancer Res 54,2667-2672 17. Vidal-Vanaclocha, F., Alvarez, A., Asumendi, A., Urcelay, B., Tonino, P., and Dinarcllo, C. A. (1996) JNatl Cancer Inst 88,198-205 18. Malik, S. T., Naylor, M. S., East, N., Oliff, A., and Balkwill, F. R. (1990) Eur J Cancer 26, 1031-1034 19. Orosz, P., Echtenacher, B., Falk, W., Ruschoff, J., Weber, D., and Mannel, D. N.
(1993) J Exp Med 177, 1391-1398 20. Orosz, P.. KrUger. A., Hubbe, M., RQschoff, J., Von Hoegen, P., and ManncI, D. N. (1995) Int. J. Cancer 60,867-871 21. Mendoza, L., Olaso, E., Anasagasti, M. J., Fucntes, A., and Vidal-Vanaclocha, F.
(1998) J Cell Physiol 174,322-330 22. Bazan, J. F., Timans, J. C, and Kastelein, R. A. (1996) Nature 379(6566), 591 23. Okamura, H., Tsutsui, H., Komatsu, T., Yutsudo, M., Hakura, A,, Tanimoto, T.tTorigoe, K., Okura, T., Nukada, Y., Hattori, K., Akita, K., Namba, M.tTanabe, F.,
Konishi, K., Fukuda, S., and Kurimoto, M. (1995) Nature 378,88-91
24. Tsutsui, H., Matsui. K., Kawada, N., Hyodo, Y., Hayashi, N., Okamura, H.,
Higashino, K., and Nakanishi, K. (1997) JImmunol 159(8), 3961-7
25. Puren, A. J., Fantuzzi, G„ Gu, Y., Su, M. S.-S., and Dinarello, C. A. (1998) J Clin Invest 101,711-724 26. Vidal-Vanaclocha, F., Rocha, M., Asumendi, A., and Barbcra-GuUlem, E. (1993)
Hepatobgy 18,328-339
27. Fantuzzi, G., Puren, A. J., Harding, M. W., Livingston, D. J., and Dinarcllo, C. A.
(1998) Bloodn, 2118-2125 28. Novick, D.. Kim, S-H., Fantuzzi, G., Reznikov, L.L., Charles A. Dinarello, C.A., and Rubinstein, M. (1999) Immwrity 10, 127-136.
Claims (6)
1. Anvendelse av inhibitorer for IL-18-produksjon og/eller dets virkning ved fremstilling av medikamenter for å hemme metastase av melanom.
2. Anvendelse ifølge krav 1, hvor inhibitoren for IL-18-produksjon er en kapase-1 inhibitor.
3. Anvendelse ifølge krav 1, hvor inhibitoren for IL-18-virkning er valgt fra antistoffet mot IL-18, antistoffer mot enhver av IL-18-reseptorunderenhetene, inhibitorer for IL-18-reseptorsignalveien, antagonister for IL-18, som konkurrerer med IL-18 og blokkerer IL-18-reseptoren, og IL-18-bindende proteiner, et mutein, kondensert protein, funksjonelt derivat, aktiv fraksjon eller sirkulerende permutert derivat av disse, som har den samme aktiviteten.
4. Anvendelse ifølge krav 3, hvor inhibitoren for IL-18-virkning er et antistoff til IL-18.
5. Anvendelse ifølge krav 3, hvor inhibitoren for IL-18-virkning er et IL-18BP eller et mutein, derivat eller fragment av dette, som har samme aktivitet som IL-18BP.
6. Anvendelse av en ekspresjonsvektor som koder for en inhibitor for IL-18-produksjon og/eller dens virkning ifølge krav 1 ved fremstillingen av medikamenter for å hemme metastase av melanom.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IL13104799A IL131047A0 (en) | 1999-07-22 | 1999-07-22 | Use of il-18 inhibitors |
| PCT/IL2000/000419 WO2001007480A2 (en) | 1999-07-22 | 2000-07-17 | Use of interleukin-18 inhibitors to inhibit tumor metastasis |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20020153D0 NO20020153D0 (no) | 2002-01-11 |
| NO20020153L NO20020153L (no) | 2002-03-11 |
| NO329827B1 true NO329827B1 (no) | 2011-01-03 |
Family
ID=11073044
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20020153A NO329827B1 (no) | 1999-07-22 | 2002-01-11 | Anvendelse av inhibitorer av IL-18 produksjon og/eller dets virkning ved fremstilling av medikamenter for a hemme metastase av melanom, og anvendelse av en ekspresjonsvektor som koder for en inhibitor for IL-18 produksjon og deller dets virkning ved fremstillingen av medikamenter for a hemme metastase av melanom |
Country Status (31)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7741276B2 (no) |
| EP (1) | EP1206274B1 (no) |
| JP (1) | JP4827352B2 (no) |
| KR (1) | KR100682219B1 (no) |
| CN (1) | CN1173736C (no) |
| AR (1) | AR024907A1 (no) |
| AT (1) | ATE363288T1 (no) |
| AU (1) | AU782478B2 (no) |
| BG (1) | BG65800B1 (no) |
| BR (1) | BR0012675A (no) |
| CA (1) | CA2380216C (no) |
| CY (1) | CY1107932T1 (no) |
| CZ (1) | CZ302114B6 (no) |
| DE (2) | DE1206274T1 (no) |
| DK (1) | DK1206274T3 (no) |
| EA (1) | EA005419B1 (no) |
| EE (1) | EE04838B1 (no) |
| ES (1) | ES2186596T3 (no) |
| HK (1) | HK1048248B (no) |
| HU (1) | HU228780B1 (no) |
| IL (2) | IL131047A0 (no) |
| MX (1) | MXPA02000838A (no) |
| NO (1) | NO329827B1 (no) |
| NZ (1) | NZ516535A (no) |
| PL (1) | PL202477B1 (no) |
| PT (1) | PT1206274E (no) |
| SK (1) | SK287522B6 (no) |
| TR (1) | TR200200169T2 (no) |
| UA (1) | UA73745C2 (no) |
| WO (1) | WO2001007480A2 (no) |
| ZA (1) | ZA200200390B (no) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW201305214A (zh) | 2000-02-10 | 2013-02-01 | Abbott Gmbh & Co Kg | 與人類間白素－１８結合之抗體，及其製法及用途 |
| EP1331943A4 (en) | 2000-10-11 | 2005-01-26 | Viron Therapeutics Inc | NUCLEIC ACID MOLECULES AND POLYPEPTIDES FOR IMMUNOMODULATION |
| US7718368B2 (en) | 2000-12-04 | 2010-05-18 | Viron Therapeutics Inc. | Immunomodulatory protein and useful embodiments thereof |
| KR101015682B1 (ko) * | 2002-10-08 | 2011-02-22 | 아레스 트레이딩 에스.에이. | Ｉｌ-18ｂｐ에 결합할 수 있고 제 2 사이토킨의 활성을저해할 수 있는 사이토킨의 용도 |
| US7968684B2 (en) | 2003-11-12 | 2011-06-28 | Abbott Laboratories | IL-18 binding proteins |
| PT1885753E (pt) | 2005-06-03 | 2011-10-06 | Ares Trading Sa | Produção de proteína recombinante de ligação a il-18 |
| CA2610804C (en) | 2005-06-10 | 2013-11-19 | Ares Trading S.A. | Process for the purification of il-18 binding protein |
| CL2008002153A1 (es) | 2007-07-24 | 2009-06-05 | Amgen Inc | Anticuerpo aislado o fragmanto de unión de antigeno del mismo que se une al receptor de il-18 (il-18r); molecula de ácido nucleico codificante; celula huesped que la comprende; composición farmaceutica; uso médico para tratar o prevenir una condición asociada con il-18r; método in vitro para inhibir la unión de il-18 al il-18r. |
| US9812033B2 (en) * | 2013-03-06 | 2017-11-07 | Venkatesh R. Chari | Tactile graphic display |
| WO2023178192A1 (en) | 2022-03-15 | 2023-09-21 | Compugen Ltd. | Il-18bp antagonist antibodies and their use in monotherapy and combination therapy in the treatment of cancer |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ299210A (en) * | 1992-09-02 | 2000-08-25 | Isis Pharmaceuticals Inc | Treating diseases characterised by changes in intercellular adhesion molecules using coding sequences hybridizable with those encoding proteins involved in synthesis of such molecules |
| US7141393B2 (en) * | 1996-12-26 | 2006-11-28 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Interleukin-18-receptor proteins |
| BR9810409A (pt) * | 1997-03-18 | 2000-08-22 | Basf Ag | Métodos e composições para a modulação de responsividade a corticosteróides |
| IL121860A0 (en) * | 1997-08-14 | 1998-02-22 | Yeda Res & Dev | Interleukin-18 binding proteins their preparation and use |
-
1999
- 1999-07-22 IL IL13104799A patent/IL131047A0/xx unknown
-
2000
- 2000-07-17 EE EEP200200032A patent/EE04838B1/xx unknown
- 2000-07-17 CZ CZ20020195A patent/CZ302114B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-07-17 UA UA2002021472A patent/UA73745C2/uk unknown
- 2000-07-17 PT PT00944201T patent/PT1206274E/pt unknown
- 2000-07-17 DK DK00944201T patent/DK1206274T3/da active
- 2000-07-17 AT AT00944201T patent/ATE363288T1/de active
- 2000-07-17 JP JP2001512563A patent/JP4827352B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 CA CA2380216A patent/CA2380216C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 EA EA200200189A patent/EA005419B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-07-17 WO PCT/IL2000/000419 patent/WO2001007480A2/en active IP Right Grant
- 2000-07-17 HU HU0202107A patent/HU228780B1/hu unknown
- 2000-07-17 DE DE1206274T patent/DE1206274T1/de active Pending
- 2000-07-17 SK SK88-2002A patent/SK287522B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-07-17 BR BR0012675-6A patent/BR0012675A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-07-17 NZ NZ516535A patent/NZ516535A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-07-17 DE DE60035049T patent/DE60035049T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 KR KR1020027000682A patent/KR100682219B1/ko active IP Right Grant
- 2000-07-17 MX MXPA02000838A patent/MXPA02000838A/es active IP Right Grant
- 2000-07-17 TR TR2002/00169T patent/TR200200169T2/ unknown
- 2000-07-17 CN CNB008106894A patent/CN1173736C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 ES ES00944201T patent/ES2186596T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 AU AU58432/00A patent/AU782478B2/en not_active Expired
- 2000-07-17 EP EP00944201A patent/EP1206274B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 PL PL353732A patent/PL202477B1/pl unknown
- 2000-07-21 AR ARP000103786A patent/AR024907A1/es unknown
-
2002
- 2002-01-11 NO NO20020153A patent/NO329827B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-01-16 ZA ZA200200390A patent/ZA200200390B/xx unknown
- 2002-01-16 BG BG106311A patent/BG65800B1/bg unknown
- 2002-01-17 IL IL147675A patent/IL147675A/en unknown
- 2002-11-11 HK HK02108154.3A patent/HK1048248B/zh not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-07-06 US US11/825,548 patent/US7741276B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-07-13 CY CY20071100938T patent/CY1107932T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7741276B2 (en) | Use of interleukin-18 inhibitors to inhibit tumor metastasis | |
| Smith et al. | CD30 antigen, a marker for Hodgkin's lymphoma, is a receptor whose ligand defines an emerging family of cytokines with homology to TNF | |
| JP2018087244A (ja) | 炎症性疾患および自己免疫疾患の処置の組成物および方法 | |
| US20060057102A1 (en) | Mutant interleukin-15-containing compositions and suppression of an immune response | |
| BG65242B1 (bg) | Свързващи протеини и рецептори на остеопротегерин | |
| JPH10511266A (ja) | ヒト・インターロイキン−１１受容体 | |
| CA2237915A1 (en) | Osteoporosis treatment | |
| US20030017151A1 (en) | Therapeutic use of rank antagonists | |
| AU2007249223A1 (en) | Methods for treating autoimmune diseases using a taci-ig fusion molecule | |
| JPH0725785A (ja) | インターロイキン−６の医薬組成物 | |
| Berghen et al. | P101 DOT1L inhibition increases dermal fibroblast proliferation but has no effects on in vitro or in vivo collagen deposition in models of fibrosis | |
| KR101769122B1 (ko) | 케모카인 발현 조절제 | |
| JP2021523892A (ja) | Ｏｃａ−ｂペプチドコンジュゲート及び処置方法 | |
| Jiang | Increased core temperature during febrile disease modulates cytokine expression, enhances host defense, and improves survival in bacterial infection | |
| Medvedev et al. | A Non‐Competitive P55 TNF Receptor Antibody Enhances the Specific Activity of Lymphotoxin‐α | |
| EP1516627A1 (en) | Interferon-Gamma for the treatment of diseases associated with the NOD2 gene | |
| Piccoli et al. | Hyporesponsiveness of Natural Killer Activity Induced in Vivo By Multiple Treatment with Maleic Acid Anhydride Divinyl Ether (MVE-2) | |
| AU2002257303A1 (en) | Therapeutic use of rank antagonists |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |