UA73745C2 - Use of il-18 inhibitors for preparing pharmaceutical composition inhibiting tumor metastasis - Google Patents
Use of il-18 inhibitors for preparing pharmaceutical composition inhibiting tumor metastasis Download PDFInfo
- Publication number
- UA73745C2 UA73745C2 UA2002021472A UA2002021472A UA73745C2 UA 73745 C2 UA73745 C2 UA 73745C2 UA 2002021472 A UA2002021472 A UA 2002021472A UA 2002021472 A UA2002021472 A UA 2002021472A UA 73745 C2 UA73745 C2 UA 73745C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- cells
- sep
- adhesion
- apa
- inhibitors
- Prior art date
Links
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 title abstract description 19
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title abstract description 17
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title abstract description 10
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 title abstract description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title 1
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 abstract description 69
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 97
- 101001052500 Homo sapiens Membrane metallo-endopeptidase-like 1 Proteins 0.000 description 72
- 101001067174 Homo sapiens Plexin-B1 Proteins 0.000 description 72
- 102100024197 Membrane metallo-endopeptidase-like 1 Human genes 0.000 description 72
- 229920001098 polystyrene-block-poly(ethylene/propylene) Polymers 0.000 description 72
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 24
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 20
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 18
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 16
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 16
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 14
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 11
- 102000004557 Interleukin-18 Receptors Human genes 0.000 description 9
- 108010017537 Interleukin-18 Receptors Proteins 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 102100036352 Protein disulfide-isomerase Human genes 0.000 description 8
- 230000009471 action Effects 0.000 description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 7
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 6
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 6
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 6
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 6
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 5
- 102000044166 interleukin-18 binding protein Human genes 0.000 description 5
- 108010070145 interleukin-18 binding protein Proteins 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 5
- 102100035904 Caspase-1 Human genes 0.000 description 4
- 108090000426 Caspase-1 Proteins 0.000 description 4
- 101000599048 Homo sapiens Interleukin-6 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 4
- 102100037792 Interleukin-6 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 4
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 3
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 230000031037 interleukin-18 production Effects 0.000 description 3
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 101001033249 Homo sapiens Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102100039065 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 2
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 2
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 2
- 101000960949 Mus musculus Interleukin-18 Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- -1 6-carboxy-fluorescein acetoxymethyl ester Chemical class 0.000 description 1
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000008375 Decussocarpus nagi Nutrition 0.000 description 1
- 244000309456 Decussocarpus nagi Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100026018 Interleukin-1 receptor antagonist protein Human genes 0.000 description 1
- 101710144554 Interleukin-1 receptor antagonist protein Proteins 0.000 description 1
- 206010027457 Metastases to liver Diseases 0.000 description 1
- 101100434616 Mus musculus Akna gene Proteins 0.000 description 1
- 108010000134 Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100023543 Vascular cell adhesion protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 230000004712 cancer cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 210000001043 capillary endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 238000010217 densitometric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 102000057041 human TNF Human genes 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 108010027775 interleukin-1beta-converting enzyme inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000013038 irreversible inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000684 melanotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004088 microvessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940105631 nembutal Drugs 0.000 description 1
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 1
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/07—Tetrapeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
18 перед В16ЄМ-КС. Процент клітин ВІЄМ адгезованих на СЕП субстрат розраховували як відносне значення по відношенню до первинного числа доданих клітин. Крім того, супернатанти культури відбирали перед адгезією для визначення концентрації ІЛ-18 і ФНІ-а за допомогою ТИФА (ЕЇІ5ЗА). Дані являють собою середнє значення СО по чотирьох окремих експериментах, кожний в шести повторностях (п-24). Збільшення адгезії клітин ВІЄМ на СЕП, обробленій В16М-КС, і продукування ІЛ-1В8 або ФНІП-а по відношенню до необроблених СЕП ("Ре0,01) було статистично значущим по двосторонньому непарному (і-критерію
Ст'юдента. Відбувалися статистично незначущі зміни продукування ІЛ-18 або ФНП-а і в адгезії клітин ВТЄМ на клітинах СЕП, коли їх обробляли ІПФфі або анти-ІЛ-18 антитілами у відсутність В16ЄМ-СМ (дані не показані).
Фіг.3. Дія ІПФі на адгезію клітин ВІЄМ на оброблених ВІЄМ-КС клітинах СЕП іп міго. Клітини СЕП інкубували з основним середовищем або В1Є6М-КС протягом 8 годин. Деякі клітини СЕП зазнавали дії 10мкМ
ІПФі протягом 18 годин перед ВТ1ЄМ-СМ. Крім того, до деяких клітин СЕП додавали також ІЛ-18 разом з ВТ16М-
КС на 8 годин. В інших експериментах клітини СЕП піддавали впливу Тнг/мл мишачого ІЛ-18 або 10Опг/мл
ФНІП-а протягом 6 годин, і додавали чи ні 1Омкг/мл кролячих поліклональних антитіл проти мишачого ІЛ-18 за 1 годину перед обробкою цитокіном. До необроблених і оброблених цитокіном клітин СЕП додавали також неспецифічні да поліклональні антитіла. Потім клітини СЕП промивали і додавали мічені ВСЕЕСЕ-АМ клітини
В16М і потім знов промивали через вхв. Процент клітин В16М, адгезованих на субстрат СЕП розраховували як відносне значення по відношенню до первинного числа доданих клітин. Результати представляють середнє арифметичне СО по трьох окремих експериментах, кожний в шести повторностях (п-48). Відмінності в мірі адгезії по відношенню до необробленої СЕП (") і обробленим ІЛ-18 або ФНІ-а СЕП (7) були статистично значущими (Р«е0,01) по двосторонньому непарному І-критерію Ст'юдента. Статистично незначущими були зміни адгезії клітин В16ЄМ на іншій обробленій ІПФі контрольній СЕП, на яку додатково впливали або не впливали 1 нг/мл мишачого ІЛ-1р протягом 8 годин (дані не показані). фіг.4. Адгезія клітин ВІ6М на оброблених ІЛ-18 СЕП іп мйго. Клітини СЕП інкубували з нг/мл рекомбінантного мишачого ІЛ-18 протягом б годин. При деяких експериментах за 1Омін до ІЛ-18 додавали
ТОмкг/мл ФНП-рР р55 (ТМЕ-5Арб5б5) або 10Онг/мл ІЛ-1Ра. При інших експериментах за ЗОхв. перед доданням клітин ВІбМ до клітин СЕП додавали іОмкг/мл анти-М-ТАСК антитіл або в такій же концентрації неспецифічний антимишачий Іда. Потім визначали процент адгезії клітин В16М, як описано в прикладах тут, нижче. Результати представлені середнім арифметичним СО по трьох окремих експериментах, кожний в шести повторностях (п-18). Відмінності в мірі адгезії по відношенню до СЕП, обробленої основним середовищем (") ії СЕП, обробленої ІЛ-18 (7) були статистично значущими (Р«е0,01), по двосторонньому непарному І-критерію Ст'юдента.
Деякі прозапалювальні цитокіни, включаючи інтерлейкін (ІЛ)-18 і фактор некрозу пухлини-альфа (ФНП-а), стимулюють адгезію ракових клітин на клітинах ендотелію, приводячи тим самим до метастатичного поширення пухлин. Ці прозапалювальні цитокіни сприяють адгезії і метастазуванню, можливо, шляхом стимуляції молекул-1 адгезії судинних клітин (М-ТАСК). Даний винахід демонструє, що обробка первинних культивованих мишачих клітин СЕП кондиціонованим середовищем (КС) від культур клітин (В16М-КС, або
В16М-СМ) меланоми В16 (В16М) сприяє адгезії між клітинами ВІЄМ і СЕП іп міго. ВІЄМ-КСО викликає також продукцію ІЛ-1ф ї ФНП-а клітинами СЕП іп міго. В16ЄМ-КС індукує також продукцію ІЛ-Д ії ФНП-а клітинами СЕП іп міго. Однак було чітко продемонстровано, що метастазовані пухлини безсумнівно опосередковуються ІЛ-14ф3 і ФНП-а.
Даний винахід показує, що В1ІЄМ-КС індукує продукування ІЛ-18 клітинами СЕП, і що ІЛ-18 є цитокіном, сприяючим підвищеній адгезії клітин В16М на клітинах СЕП. ІЛ-18 Посилює адгезію шляхом активації експресії
М-ТАСК на клітинах СЕП без участі ФНІП-а або ІЛ-18р. Інкубація клітин СЕП зі специфічним інгібітором каспази- 1 (1ОмкМ, 18 годин) повністю усуває викликану В16ЄМ-КС адгезивність без зниження продукування ФНП-а, і ефект є безповоротним при доданні мишачого ІЛ-18. Додання антимишачих ІЛ-18 антитіл до клітин СЕП запобігає індуковану В1ЄМ-КС адгезивність без втручання в індукцію В1ІЄМ-КСО вироблення ІЛ-1р і ФНП-а.
Подібним же образом нещодавно клонований зв'язуючий ІЛ-18 білок (ІЛ-18СБ) також запобігає викликаній
В1Т6М-КС адгезивності В16ЄМ на клітинах СЕП іп міїго. Інгібітори ФНП-а і ІЛ-18Д, такі як розчинні рецептори ФНІП роб або антагоніст рецепторів ІЛ-1, були нездатні усувати цю індуковану ІЛ-18 адгезію. Таким чином, даний винахід представляє інгібітори продукування і дії ІЛ-1484 як засоби для придушення метастазів пухлини.
Інгібітори продукування ІЛ-18 включають інгібітори каспази-1. Інгібітори дії ІЛ-18 вибираються з групи, що складається з антитіл, направлених проти ІЛ-18, антитіл, направлених проти однієї з двох відомих субодиниць рецептора ІЛ-18, інгібіторів сигнальних метаболічних шляхів рецепторів ІЛ-18, антагоністів ІЛ-18, які конкурують з ІЛ-18 і блокують рецептори ІЛ-18 і зв'язуючих ІЛ-18 білків, які зв'язують ІЛ-18 і блокують його біологічну активність.
Даний винахід відноситься до можливої ролі ІЛ-18 в прозапалювальній, опосередкованій цитокіном активації експресії М-ТАСК, його можливій взаємодії з іншими цитокінами і засобам для запобігання цій індукції
М-ТАСК. Відповідно до даного винаходу було виявлено, що ІЛ-18 діє при ініціації прозапалювальних явищ, що приводять до активації М-ТАСК в синусоїдальній стінці в печінці і, отже, сприянню адгезії ракових клітин і метастазуванню. Як модель залежної від ракових клітин активації ендотеліальних клітин використали первинно культивовані мишачі-клітини СЕП, оброблені В16ЄМ-КС для дослідження ролі індукованого клітинами
ВІбМ ІЛ-18 в механізмі адгезії клітин ВІбЄМ на клітинах СЕП шляхом залежного від М-ТЛАСК механізму.
Специфічну роль ІЛ-18 вивчали в умовах специфічної блокади рецепторів ІЛ-1 з використанням придушення секреції ІЛ-1Ра, зрілого ІЛ-18В і ІЛ-18, застосовуючи безповоротний інгібітор ферменту що перетворює ІЛ-1 (ІПФі, або ІСЕЇ), блокаду ФНП, застосовуючи розчинні рецептори ФНП р55 (ФНП-рР ро55, або ТМЕ-58 рб55) і блокаду функції ІЛ-18, застосовуючи анти-ІЛ-18 антитіла і зв'язуючий ІЛ-18 білок. Крім того, клітини ВІЄМ вводили шляхом ін'єкції в селезінку ІПФ" і ІЛ-187- мишам. Низька щільність метастазів, що спостерігається у дефіцитних мишей в порівнянні з нормальними контролями говорить про участь ІЛ-1ДВ і, можливо, ІЛ-18 в прометастазній ролі запалення (таблиця 1),
Проведені експерименти іп міо демонструють, що продукування ІЛ-18 відповідальне за ефекти,
індуковані супернатантами, отриманими від клітин ВІЄМ. Оскільки активація М-ТАСК відповідальна за всю стимулюючу адгезію активність СЕП, оброблених ВІЄ6М-КС, дані показують що ІЛ-18 опосередковує експресію
М-ТАСК індукованими цитокіном СЕП. Крім того, антитіла до ІЛ-18 знижували індуковану В16ЄМ-КС адгезію клітин без впливу на продукування ФНП-а і ІЛ-18 клітинами СЕП. Отже, продукування ІЛ-1р ії ФНІ-а клітинами
СЕП було незалежним від ІЛ-18 і не сприяло адгезії. | навпаки, ні ФНП-рР р55, ні ІЛ-1;ра не були здатні придушувати підвищення адгезії у клітин СЕП, оброблених ІЛ-18, підтверджуючи, що ні аутокринний ФНП-Оа, ні
ІЛ-18 не відповідальні за індуковану ІЛ-18 адгезивність СЕП.
Результати для клітин СЕП контрастують з результатами, отриманими для інших клітинних систем, таких як, наприклад, «не -СО147» мононуклеарні клітини крові людини (25), де ІЛ-18 індукував ІЛ-1В через продукування ФНП-а. Ймовірно, існує специфічна для СЕП ієрархія прозапалювальних цитокінів, в якій ФНП-а і 1Л-1р є незалежними від регуляції ІЛ-18, але ІЛ-18 використовується як прямий медіатор активації М-ТАСК.
На відміну від мишачих клітин СЕП, клітини В16М не експресують ген ІЛ-18, що перевірено за допомогою методу ПЛР з ревертуванням (АТ-РСА), і інкубація з ІПФн протягом 18 годин не усувала стимулююче продукцію цитокінів і адгезію дією В1І6М-КС на клітини СЕП. Однак локальне продукування ІЛ-18 може впливати на поведінку клітин В16ЄМ під час їх проходження або зупинки в мікросудинах печінки. Додатковою знахідкою було те, що інкубація клітин В1ЄМ з Інг/мл мишачого ІЛ-18 протягом 6 годин двократно підвищувала їх адгезію на необробленій СЕП, а додання до СЕП анти-М-ТАСК антитіл знижувало опосередковану ІЛ-18 адгезію на 8095, наводячи на думку про те, що тут бере участь взаємодія М-1ТАСК/Л/І А-4. Подібним же образом, у клітин ВІЄМ, що отримали вплив супернатанту від СЕП, обробленої В1ЄМ-КС, протягом 6 годин також значно (Р-0,001), двократно, підвищувалася адгезія на СЕП шляхом залежного від М-ТАСК механізму, а анти-ІЛ-18 антитіла усували цю стимулюючу адгезію дію.
Дані, отримані по даному винаходу, кажуть про те, що ІЛ-18 є новим зв'язком між виділенням в печінці прозапалювальних цитокінів і розвитком метастазів. їх вироблення активованими пухлиною клітинами СЕП визначається двома комплементарними механізмами, що беруть участь в регуляції адгезії клітин меланоми на клітинах СЕП: аутокринним механізмом в СЕП, який регулює активацію М-ТАСК, опосередковану ФНІП-са/ІЛ-1рД, і паракринним механізмом в клітинах В16М, який активує МІ А-4 меланомної клітини, потенціюючи її залежну від М-ТАСК, здатність до адгезії. Ця одночасна молекулярна активація обох дублікатів клітинної адгезії робить високо значущими метаболічні шляхи взаємодії ракових і ендотеліальних клітин капілярів.
Викликана ІЛ-18 адгезія клітин ВІЄМ, усувається інгібіторами продукування і/або дії ІЛ-18. Інгібітори продукування ІЛ-18 включають інгібітори каспази-1. Інгібітори дії ІЛ-18 вибираються з групи, що складається з антитіл, направлених проти ІЛ-18, антитіл, направлених проти будь-якої однієї з двох відомих субодиниць рецептора ІЛ-18, інгібіторів сигнальних шляхів рецепторів ІЛ-18, антагоністів ІЛ-18, які конкурують з ІЛ-18 і блокують рецептори ІЛ-18, і білків, зв'язуючих ІЛ-18, які зв'язують ІЛ-18 і блокують його біологічну активність.
У доповнення до прямого використання інгібіторів продукування і/або дії ІЛ-14 в даному винаході розглядається також інтродукція в клітини, де бажаний ефект придушення продукування і/або дії ІЛ-18. Для цієї мети необхідна система для специфічної інтродукції, наприклад, ДНК, що кодує ІЛ-18СБ в клітини.
Наприклад, в клітини може бути введений відповідний вектор, несучий вищезгадану ДНК, причому даний вектор здатний впливати на вбудовування ДНК в клітини таким чином, що ДНК експресується в даних клітинах. Способи доставки в клітини описані, серед інших, наприклад, в патенті США 5910487, УУ/099/29349 і інших.
Фармацевтичні композиції по даному винаходу для придушення продукування і/або дії ІЛ-18 є тими, які включають в якості активного інгредієнта інгібітор, вибраний з інгібітору каспази-1, антитіл до ІЛ-18, антитіл до будь-якої з субодиниць рецептора ІЛ-18, інгібітору сигнальних шляхів рецепторів ІЛ-18, антагоніста ІЛ-18, який конкурує з ІЛ-18 і блокує рецептори ІЛ-18, і ІЛ-18СБ або мутеїну, злитого білка, функціонального похідного, його активної фракції або циклічно пермутованого похідного, яке володіє такою ж активністю.
Терміни «мутеїн», «злитий білок», «функціональний похідний», «активна фракція» і «циклічно пермутоване похідне» мають ті ж самі смислові значення, що і в У/О 99/09063.
Антитіла до ІЛ-18 і ІЛ-ТІ8СБ є переважними активними інгредієнтами фармацевтичних композицій.
Фармацевтичні композиції можуть також включати звичайні носії, наповнювачі і інші інгредієнти, відомі в даній області, що залежать від їх способу застосування, тобто ін'єкцією, пероральним або будь-яким іншим шляхом, відомим фахівцям.
Конкретне дозування буде залежати від способу застосування, ваги тіла пацієнта і інших чинників і буде, в будь-якому випадку, визначатися лікарем.
Тепер після опису винаходу його буде більш легко зрозуміти за допомогою звернення до наступних прикладів, які представлені для ілюстрації і не призначені для обмеження даного винаходу.
Реагенти:
Пацючі протимишачої Ід; і пацючі протимишачого М-ТАСК моноклональні антитіла були отримані від
Зегоївс Ца. (Охюга, Епдіапа). Рекомбінантний мишачий ІЛ-1р був отриманий від НО Зувієт Іпс. (Міппеароїїв,
ММ). Антагоніст рецепторів: рекомбінантного людського ІЛ-1 (ІЛ-1Ра, або ІІ-ІНа) був люб'язно наданий Оріонп
Со., Каіатаоо, МІ і розчинні рецептори для людського ФНП ро55 (ФНПРрР р55, або ТМЕ5А р55) були люб'язно надані від бегопо Іпс., Могмеї!, МА. Інгібітор ферменту, що перетворює ІЛ-1р (ІПФфі, або ІСЕЇ) був отриманий від
АІехіз Со. (Зап Оієдо, СА). Рекомбінантний мишачий ІЛ-18 і кролячі проти мишачого ІЛ-18 поліклональні антитіла ДС; були закуплені у РеріоТесп ЕС а. (Гопдоп, ОК). Білок, зв'язуючий ІЛ-18 (ІЛ-18СБ) був отриманий, як описано (28).
Культура клітин ВІЄМ. Клітини ВІЄМ культивували, зберігали і пасували, як описано раніше (11).
Кондиціоноване до ВІЄМ середовище (В16М-КС) готували таким чином: 5х105 клітин вміщували в 25см2 Т- подібну колбу і культивували протягом 24 годин. Після чого клітини культивували протягом додаткового періоду рівного 24 годинам в бБмл безсироваткового середовища (кінцева щільність клітин рівна бх10"клітин/смг). Супернатанти збирали, розбавляли 3:1 свіжим безсироватковим середовищем і пропускали через фільтр 0,22мкм.
Аналіз цитокінів. Виділення цитокінів з первинних культивованих клітин СЕП і клітин ВІЄМ оцінювали, використовуючи специфічні набори для ТФІФА (твердофазний імуно-ферментний аналіз) (ЕГІ5А) на основі анти мишачих І/-18 ії ФНІП-а моноклональних антитіл, як запропоновано виробником (НО бБузіетв,
Міппеароїї5, ММ).
Приклад 1
Кількісна адгезія клітин В16ЄМ на первинних культурах СЕП
СЕП виділяли від сингенних мишей, ідентифікували і культивували, як описано раніше (26). Клітини ВТ'ЄМ мітили розчином 2',7-біс(2-карбоксіетил)-5,6-карбокси-флуоресцеїнацетоксиметилового складного ефіру (БКЕКФ-АМ (ВСЕСЕ-АМ, Моїіесшіаг Ргорев, Еидепе, ОВ), як повідомлялося (16). Потім додавали 2х105 клітин на осередок культивованої СЕП в 24 лункову планшету і через хв. лунки промивали три рази свіжим середовищем. Число адгезованих клітин визначали, застосовуючи кількісний метод на основі описаної раніше системи для флуоресцентного визначення (16). При деяких експериментах клітини СЕП заздалегідь інкубували з В1Є6М-КС протягом декількох годин перед доданням клітин ВТЄМ.
Приклад 2
Визначення метастазів в печінці
Мишей-самців С57ВІ/6уУ дикого типу І/-18- і ІПФ- отримували, як описано раніше (27). Використали шести-восьмитижневих мишей, розміщених по п'ять штук на клітку. Метастази в печінці отримували шляхом ін'єкції в селезінку мишам під анестезією (нембутал, 5Омг/кг, внутрішньочеревинно) З3х10? живих клітин меланоми В16б, суспендованих в О0,1мл збалансованого сольового розчину Хенкса. Мишей забивали під анестезією на!0-й день після ін'єкції ракових клітин. Тканини печінки обробляли для гістології.
Денситометричний аналіз переведених в цифрову форму мікроскопічних зображень використали для диференціації метастазів В1Є6М від нормальної тканини печінки і щільність метастазів в печінці, яка є числом метастазів на 100мм3 печінці (по середньому числу центрів формування, виявлених в п'ятнадцяти зрізах 10х10мм: на печінку), розраховували, застосовуючи раніше описані стереологічні процедури (17).
Приклад З
Знижене метастазування і зростання В16М клітин, ін'єкованих мишам з дефіцитом ІІ -18 і ІПФ
Було виконано два незалежних експерименти з інтервалом в один рік з використанням двох різних серій одних і тих же клітин В16М, які вводили за допомогою ін'єкції в селезінку дорослих мишей С57В1/6) дикого типу, ІПФ-- і ІЛ-1Д7-. Дослідження після розкриття показало видимі меланотичні пухлини в селезінках від всіх досліджених мишей без значних відмінностей в розмірі, що оцінювалося по вазі селезінки (таблиця 1). У протилежність цьому помітне зниження метастазів відбувалося у ІІ -1рД- і, особливо, ІПФ"" мишей, що вижили в порівнянні з мишами дикого типу, що вижили (Фіг.1). Проводили кількісний гістологічний аналіз по числу і розміру осередків метастазів для визначення щільності метастазів (як число осередків/100мм3) і параметрів об'єму (процент поразки органу) в дослідженій печінці мишей. У порівнянні з мишами дикого типу (таблиця 1), щільність метастазів в печінці значно знижувалася (Р«0,01) в печінці мишей ІПФ- і ІЛ-1 В, на від 8495 до 9095, показуючи, що велика частина ін'єкованих клітин В1Є6М були нездатні імплантуватися в тканину печінки цих мишей. До того ж об'єм метастазів також значно знижувався (Р«е0,01) в печінці мишей ІЛ-1Д і ІПФУ, 6-7- кратно в порівнянні зі значеннями для печінки мишей дикого типу, показуючи, що клітини ВІЄМ що успішно колонізують печінку, мали також знижену швидкість зростання. Ми також спостерігали г відмінність в параметрах для цих метастазів між печінкою мишей 1І-1 р і ІПФУ, що приводить до придушення метастазів в печінці майже всіх мишей ІПф": з експерименту І (Фіг.1).
Таблиця 1
Кількісний гістологічний аналіз по експериментальній колонізації печінки у мишей ІІ -187- і ІПФ"" після ін'єкції в селезінку клітин ВТЄМ.
Група мишей (як число (як 95 від об'єму осередків/100мм3 печінки
Дані представляють середні значення ЖСО по двох незалежних експериментах (використали 7-15 мишей на експериментальну групу). 7" Показані відмінності, які були статистично значущими (двосторонні, р«0,01), відносно дикого типу мишей при застосуванні дисперсійного аналізу (АМОМА) і Р-критерію
Шеффе.
Приклад 4
Аутокринний ІЛ-18 опосередковує індуковану ФНП-а і ІЛ-1Д8 адгезивність в активованих В16ЄМ-КО СЕП.
У16М-КС значно (Р«е0,01) підвищував продукцію ФНП-а і ІЛ-18 клітинами СЕП і їх адгезивність відносно інших клітин В16М іп міїго (фіг.2). Інкубація СЕП з 10мкМ ІПФі протягом 18 годин повністю усувала індуковану
В16М-КС адгезивність без зниження продукування ФНІ-а у СЕП. Екзогенно доданий мишачий ІЛ-1ф8 не компенсував блокуючий ефект ІПфі на СЕП, що контрастує зі значним підвищенням адгезії клітин В1ЄМ в оброблених ІЛ-1ф8 контрольної СЕП (Фіг.3). Той факт, що індуковане В16ЄМ-КС підвищення адгезії усувалося в присутності підвищених концентрацій ендогенно продукованого ФНІ-са і екзогенно доданого ІЛ-1р, показує що жоден з цих цитокінів прямо не активує адгезивність СЕП. Важливо, що наявність антитіл проти мишачого ІЛ- 18, доданого до СЕП перед стимуляцією ВІ16ЄМ-КС, запобігало індукованій адгезивності В1ІЄМ-КС без впливу на продукування індукованих ІЛ-1Д і ФНІП-а клітинами СЕП (Фіг.2). Крім того, антитіла проти ІЛ-18 також запобігали стимулюючій адгезію дії мишачих ІЛ-18 ії ФНІП-а на СЕП (Фіг.3), вказуючи на те, що проадгезивна дія цих цитокінів на СЕП, в обох випадках, опосередковується ІЛ-18. ВТ-РСА підтверджувала, що клітини СЕП експресували ген ІЛ-18 (дані не показані). | навпаки, мишачий ІЛ-18 значно (Р«е0,01) підвищував адгезію клітин
В1І6ЄМ на СЕП (Ффіг.4), ії ні ФНП-рР р55, ні ІЛ-1Ра не були здатні подавити його, підтверджуючи, що ні аутокринний ФНП-а, ні ІЛ-18 не відповідають за індуковану ІЛ-18 адгезивність СЕП. Однак, як показано на
Фіг.4, антитіла до М-ТІАСК повністю придушували адгезію клітин ВІЄМ до оброблених ІЛ-18 клітин СЕП.
Контрольний неспецифічний Ідс не впливав на посилення адгезії В16ЄМ клітин на оброблених ІЛ-18 СЕП.
Приклад 5
ІЛ-18СБ запобігає адгезії клітин меланоми В16, індукованій кондиційованим В16 середовищем.
Як показано в таблиці 2, додання ІЛ-І8СБ, до СЕП, стимульованими ВІ6ЄМ-КС, знижувало процент адгезованих клітин з 3595 до 8,709 (р«е0,01). Це представляє 10095 придушення, оскільки рівень адгезії був нижче за рівень адгезованих клітин при використанні основного середовища. Цей результат наводить на думку про те, що ендогенний ІЛ-18 з СЕП може бути ендогенним джерелом ІЛ-18 в доповнення до того, який присутній в ВТЄМ-КС.
Таблиця 2
Переважна дія ІЛ-1СБ на індуковану кондиційованим
В16 середовищем адгезію клітин меланоми ВІ16 на синусоїдальних ендотеліальних клітинах печінки (СЕП)
Дані представляють середні значення ЖСО по 2 незалежних експериментах, зроблених в шести повторностях (М--12) 7 Показані відмінності, які були статистично значущими (двостороннє, р«0,01) у відношенні ВІЄМ-КС при застосуванні дисперсійного аналізу (АМОМА) і Е-критерію Шеффе.
БІБЛІОГРАФІЯ: 1. Копп, Е. С, апа Піоца, І. А. (1995) Сапсег Нез 55(9), 1856-62. 2. Місоізоп, а. І.., апа М/іпКкеІнаке, 4. І. (1975) Майте 255, 230-232. 3. Егевєдтап, А., Мипго, М., Вісе, С. Е., Вемііасдца, М. Р., Могітоїо, С, Мсіпіуге, В. М., Впуппаї, К., Робег, 9. 5., апа Мадіег, І. М. (1990) Зсіепсе 249, 1030-1033. 4. Міуаке, М., Риспітоїй, 5., Імадакі, Н., Маїзибага, М., Едатаїйви, В., Нігатаїзи, М., апа Опа, К. (1991) Везв.
Сотт. Спет. Раййої. Рпагтасої. 71,293-307. 5. Біттопзв, Р. )., МазіпоузКу, В., І опдепескег, В. М., Вегепзоп, В., Тогок-5іюогЬ, В, апа Саїайіп, МУ. М. (1992)
Віоса 80(2), 388-95. 6. Вісе, а. Е., апа Вемііасдца, М. Р. (1989) Зсіепсе 246, 1303-1306. 7. ОКапага, К, Мадіга, Н., Міуаке, К., апа Окитига, К. (1994) Сапсег Нез 54, 3233-3236. 8. Сагогаю, А., СпПігімі. А. С. 5., Еодіїєпі, С, Рідої, АВ., Мопапйт, В., Мапіп-Радига, І., Апіспіпі, А., Сеагіпоа, А. у., запспе2-Маагіа, Е., Оєіапа, Е., апа Сіамалг7і, В. (1995) Сапсег Вез 55, 414-419. 9. Майіп-Радига, І., Мопагіт, В., І ай, О., Вегпавсопі, 5., Запспе:-Маангіа, Е., Рагтіапі, (3., Мапіомапі, А.,
Апіспіпі, А., апа Оеєіапа, Е. (1991) Сапсег Нез 51, 2239-2241 10. І ації, О., Вепотеи, М.-С, агіа От, Е. МУ. (1990) Сіїп Ехр Меїавзіавіз 8/27-32 11. Апазадазвії, М, у., АМагег, А., Мапіп, 9. 9У., Мепадога, І, апа МідаІ-Мапасіосна, Р. (1997) Нераюіоду 25, 840-846. 12. Вапі, М. В., Сагогаю, А., Зсапліапі, Е., апа Сіамаєгі, В. (1991) У. Маї). Сапсег Іпеї. 83, 119-123. 13. Вепотеи, М. С, СаїПо, 5., І аг, О., Наав, Т. А., От, РЕ. МУ., Вазііда, Е., апа Виспапап, М. В. (1993) Сіїп
Ехр Меїавзіавів 11, 243-250. 14. Вигтомув, РЕ. 9., Назкага, 0. 0.. Нагї!і, І. А., Магзпаї, 9. Е., зеїКкіїк, 5., Рооіє, 5., апа Трогре, Р. Е. (1991)
Сапсег Вез 51, 4768-4775. 15. Спіпмі, В. С, 5., Сагогаю, А., Радига, І. М., Мапіомапі, А., апа Сіамаггі, В. (1993) Сапсег Вез 53, 5051- 5054 16. МідаІ-Мапасіосна, Р., Атегада, С, Азитепаї, А., Каріапекі, С., апа ОіпагеїІо, С. А. (1994) Сапсег Нев 54, 2667-2672 17. МідаІ-Мапасіосна, Р., АМагег, А., Азитепаї, А., Огсеїау, В., Топіпо, Р., апа Оіпаге!ю, С А. (1996) Уумаї
Сапсег Іпві 88, 198-205 18. маїйк, 5. Т., Мауїог, М. 5., Еаві, М, Ой, А., апа ВаїкУмії, Р. А. (1990) Єшг 9. Сапсег 26, 1031-1034. 19. Огов2, Р., Еспіеєпаспег, В., РаїкК, МУ., Вивспоїй, у., УМебег, О., апа Маппеї, О. М. (1993) У. Ехр Меа 177, 1391-1398. 20. Огов57, Р., Кидег, А., Нирре, М., НВивспоїї, 9., Моп Ноедеп, Р., апа Маппеї, 0. М. (1995) Іпі. У. Сапсег 60, 867-871 21. Мепаога, І.., Оіазо, Е., Апазадазвії, М. 9., Еиепієез, А., апа МідаІ-Мапасіосна, РЕ. (1998) У Сеї! Рнузіо! 174,
322-330. 22. Вагап, 9. Р., Тітапв, 9. С, апа Кавівє!єїп, А.А. (1996) Машге 379 (6566), 591. 23. ОКатига, Н., Тецївиі, Н., Котаїви, Т., Мшївидо, М., Накига, А., Тапітою, Т., Топдоє, К., ОКига, Т.,
МикКада, У., Найогі, К., АКна, К., Матбра, М., Тапабе, Е., Копівпі. К., Еикида, 5., апа Кигітоїю, М. (1995) Маштге 378, 88-91. 24. ТевціївиЇї, Н., Маївиї, К., Камада, М., Нусдо, У., Науазпі. М., Окатига, Н, Нідазпіпо, К., апа МакКапівні. К. (1997) Уіттипої 159(8), 3961-7 25. Ригеп, А. у., Гапішалі, Сх., Си, М., ЗИ, М. 5.-5., апа ОіпагейПо, С А. (1998) У Сіїп Іпуев5і 101, 711-724. 26. МідаІ-Мапасіосна, Р., Восна, М, Азитепаї, А., апа Вагега-сийет, Е. (1993) Нерашюіоду 18, 328-339. 27. Бапішаг2і, С., Ригеп, А. ., Нагаїпо, М. МУ., Пміпоузвіоп, 0. ., апа Оіпагеїо, С А. (1998) Віоса 91, 2118-2125. 28. Моміск, О., Кігп, 5-Н., Рапійг7і, С., ВНегпіком, І... Спапез А. ОіпагейПпо, С.А., апа Вибіпзієїп, М. (1999)
Ітітипйу 10, 127-136.
КИМ, МЕМ ПО
МОВО в ВЗ
ДО МОЯ В
КК ПДМ мс ВООЗ ня ДК ВОМ они КК ПИЛА
КУА ВОЗА БЕХ
КВ КО Во
КАМ ие Ау ІК
ЛЕК ВО МО
ЕК У ПК я
ОВО Ж ЕК в ку о м а. ж
ДК ОО В Ви
ЩЕ о.
ПК т я ВУ у С Ж дя х ох ще А.
Ме ДЕК ВО я
По як ОО Вк о
УК КЕ КК
Е и о ШУ а Фев ки Б з ша соя 5 си ше шо в щі С
З 5 шо ЩО
З 5 щ ОО й ШК ШЕ
Фигура !
б об вд ж ре ! хо фшх с - ї й Е хв яю х і н
ЕЕ її» : щ-
Зо Й
Ве о | ж « -Е в - о - шо 200 р -
Ф
Е - 100 5
Ее щ бе М | 1. о Ж я -к с ій ! а 5 жо о ве ж в 5 " ! -Фф 1,000 . 5 : | : со . . т.
Ве Боб х -Е
СЕ - - 8-1 -
Основная ИПФи днти-ИЛ-18 среда
Обработанняе БІЄМ-КОСЗ
Фигура 2
Ж ше ВО А се г) С . і ж ж г - во що ШІ шннни кеш ж і жх їй Е ше о Несе в а т, Я -- 1 вео01рВ- | І. ЩІ |! кн у
БЕЖ Я. - Е З ! Н 7
ОСюновная - или Авт ИЛАВ ---ВАТА-УЛЬЯВ креда рдрптистюттт пит понти оправою Ии МПА Вереаботанніке ФО: обравютачнняяє пат тя С осеєттюнтнття сж а , Сбработаннье ВТМ Же езп Фі гура З « о з й ж з нини м п Й -к Й СИ 7 ГУ ш Я о і: Н. І 5 2) ни кшш ин в Е | і ТІ :
З - В о | ! : у пад, ше ях ла | : ш ощ-щ тб о, 1 : А Ка : Н вишні ншшш шк счоанаяхя їх Кох Є нти
Среда ш чнсере Мл-ве КеТАШК. . л-тя- Фбрабстввання сл балир Я
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IL13104799A IL131047A0 (en) | 1999-07-22 | 1999-07-22 | Use of il-18 inhibitors |
| PCT/IL2000/000419 WO2001007480A2 (en) | 1999-07-22 | 2000-07-17 | Use of interleukin-18 inhibitors to inhibit tumor metastasis |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA73745C2 true UA73745C2 (en) | 2005-09-15 |
Family
ID=11073044
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2002021472A UA73745C2 (en) | 1999-07-22 | 2000-07-17 | Use of il-18 inhibitors for preparing pharmaceutical composition inhibiting tumor metastasis |
Country Status (31)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7741276B2 (uk) |
| EP (1) | EP1206274B1 (uk) |
| JP (1) | JP4827352B2 (uk) |
| KR (1) | KR100682219B1 (uk) |
| CN (1) | CN1173736C (uk) |
| AR (1) | AR024907A1 (uk) |
| AT (1) | ATE363288T1 (uk) |
| AU (1) | AU782478B2 (uk) |
| BG (1) | BG65800B1 (uk) |
| BR (1) | BR0012675A (uk) |
| CA (1) | CA2380216C (uk) |
| CY (1) | CY1107932T1 (uk) |
| CZ (1) | CZ302114B6 (uk) |
| DE (2) | DE60035049T2 (uk) |
| DK (1) | DK1206274T3 (uk) |
| EA (1) | EA005419B1 (uk) |
| EE (1) | EE04838B1 (uk) |
| ES (1) | ES2186596T3 (uk) |
| HK (1) | HK1048248B (uk) |
| HU (1) | HU228780B1 (uk) |
| IL (2) | IL131047A0 (uk) |
| MX (1) | MXPA02000838A (uk) |
| NO (1) | NO329827B1 (uk) |
| NZ (1) | NZ516535A (uk) |
| PL (1) | PL202477B1 (uk) |
| PT (1) | PT1206274E (uk) |
| SK (1) | SK287522B6 (uk) |
| TR (1) | TR200200169T2 (uk) |
| UA (1) | UA73745C2 (uk) |
| WO (1) | WO2001007480A2 (uk) |
| ZA (1) | ZA200200390B (uk) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101111103B1 (ko) | 2000-02-10 | 2012-02-13 | 아보트 러보러터리즈 | 사람 인터류킨-18에 결합하는 항체 및 이를 제조하고 사용하는 방법 |
| EP1331943A4 (en) | 2000-10-11 | 2005-01-26 | Viron Therapeutics Inc | NUCLEIC ACID MOLECULES AND POLYPEPTIDES FOR IMMUNOMODULATION |
| US7718368B2 (en) | 2000-12-04 | 2010-05-18 | Viron Therapeutics Inc. | Immunomodulatory protein and useful embodiments thereof |
| ES2416510T3 (es) * | 2002-10-08 | 2013-08-01 | Ares Trading S.A. | Uso de una citocina capaz de unirse a IL 18BP y de inhibir la actividad de una segunda citocina |
| US7968684B2 (en) | 2003-11-12 | 2011-06-28 | Abbott Laboratories | IL-18 binding proteins |
| US7691611B2 (en) | 2005-06-03 | 2010-04-06 | Ares Trading S.A. | Production of recombinant IL-18 binding protein |
| JP5091127B2 (ja) | 2005-06-10 | 2012-12-05 | アレス トレーディング ソシエテ アノニム | Ｉｌ−１８結合タンパク質の精製のための方法 |
| CL2008002153A1 (es) | 2007-07-24 | 2009-06-05 | Amgen Inc | Anticuerpo aislado o fragmanto de unión de antigeno del mismo que se une al receptor de il-18 (il-18r); molecula de ácido nucleico codificante; celula huesped que la comprende; composición farmaceutica; uso médico para tratar o prevenir una condición asociada con il-18r; método in vitro para inhibir la unión de il-18 al il-18r. |
| US9812033B2 (en) * | 2013-03-06 | 2017-11-07 | Venkatesh R. Chari | Tactile graphic display |
| AU2023236289A1 (en) | 2022-03-15 | 2024-08-15 | Compugen Ltd. | Il-18bp antagonist antibodies and their use in monotherapy and combination therapy in the treatment of cancer |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994005333A1 (en) * | 1992-09-02 | 1994-03-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide modulation of cell adhesion |
| US7141393B2 (en) * | 1996-12-26 | 2006-11-28 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Interleukin-18-receptor proteins |
| SK122199A3 (en) * | 1997-03-18 | 2000-12-11 | Basf Ag | Methods and compositions for modulating responsiveness to corticosteroids |
| IL121860A0 (en) * | 1997-08-14 | 1998-02-22 | Yeda Res & Dev | Interleukin-18 binding proteins their preparation and use |
-
1999
- 1999-07-22 IL IL13104799A patent/IL131047A0/xx unknown
-
2000
- 2000-07-17 BR BR0012675-6A patent/BR0012675A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-07-17 NZ NZ516535A patent/NZ516535A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-07-17 CN CNB008106894A patent/CN1173736C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 JP JP2001512563A patent/JP4827352B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 TR TR2002/00169T patent/TR200200169T2/ unknown
- 2000-07-17 CA CA2380216A patent/CA2380216C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 AU AU58432/00A patent/AU782478B2/en not_active Expired
- 2000-07-17 KR KR1020027000682A patent/KR100682219B1/ko active IP Right Grant
- 2000-07-17 EP EP00944201A patent/EP1206274B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 DK DK00944201T patent/DK1206274T3/da active
- 2000-07-17 ES ES00944201T patent/ES2186596T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 UA UA2002021472A patent/UA73745C2/uk unknown
- 2000-07-17 PT PT00944201T patent/PT1206274E/pt unknown
- 2000-07-17 WO PCT/IL2000/000419 patent/WO2001007480A2/en active IP Right Grant
- 2000-07-17 DE DE60035049T patent/DE60035049T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 AT AT00944201T patent/ATE363288T1/de active
- 2000-07-17 EE EEP200200032A patent/EE04838B1/xx unknown
- 2000-07-17 CZ CZ20020195A patent/CZ302114B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-07-17 PL PL353732A patent/PL202477B1/pl unknown
- 2000-07-17 HU HU0202107A patent/HU228780B1/hu unknown
- 2000-07-17 DE DE1206274T patent/DE1206274T1/de active Pending
- 2000-07-17 EA EA200200189A patent/EA005419B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-07-17 MX MXPA02000838A patent/MXPA02000838A/es active IP Right Grant
- 2000-07-17 SK SK88-2002A patent/SK287522B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-07-21 AR ARP000103786A patent/AR024907A1/es unknown
-
2002
- 2002-01-11 NO NO20020153A patent/NO329827B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-01-16 ZA ZA200200390A patent/ZA200200390B/xx unknown
- 2002-01-16 BG BG106311A patent/BG65800B1/bg unknown
- 2002-01-17 IL IL147675A patent/IL147675A/en unknown
- 2002-11-11 HK HK02108154.3A patent/HK1048248B/zh not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-07-06 US US11/825,548 patent/US7741276B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-07-13 CY CY20071100938T patent/CY1107932T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fazel Modares et al. | IL‐6 trans‐signaling controls liver regeneration after partial hepatectomy | |
| Bi et al. | Key triggers of osteoclast-related diseases and available strategies for targeted therapies: a review | |
| Noack et al. | Selected cytokine pathways in rheumatoid arthritis | |
| Graves | The potential role of chemokines and inflammatory cytokines in periodontal disease progression | |
| Lee et al. | IL-1 plays an important role in the bone metabolism under physiological conditions | |
| Bienkowski et al. | Control of collagen deposition in mammalian lung | |
| ES2774422T3 (es) | Anticuerpos para IL-21 | |
| Feldmann et al. | Cytokine blockade in rheumatoid arthritis | |
| Brennan et al. | TNF inhibitors are produced spontaneously by rheumatoid and osteoarthritic synovial joint cell cultures: evidence of feedback control of TNF action | |
| US7741276B2 (en) | Use of interleukin-18 inhibitors to inhibit tumor metastasis | |
| TW201006926A (en) | Agent for the treatment and/or prophylaxis of an autoimmune disease and for the formation of regulatory T cells | |
| Hooper et al. | IL-6 upregulates protein S expression in the HepG-2 hepatoma cells | |
| Choy | Inhibiting interleukin-6 in rheumatoid arthritis | |
| SA92120509B1 (ar) | تآزر وتضافر (tnf) مع il-4 | |
| Lazenby et al. | IL-1 synergy with IL-2 in the generation of lymphokine activated killer cells is mediated by TNF-α and β (lymphotoxin) | |
| Candela et al. | Fibroblast growth factor increases TNFα-mediated prostaglandin E 2 production and TNFα receptor expression in human fibroblasts | |
| KR101769122B1 (ko) | 케모카인 발현 조절제 | |
| Lowin | Positive and negative cooperativity of TNF and Interferon-[ypsilon] in regulating synovial fibroblast function and B cell survival in fibroblast/B cell co-cultures | |
| Zhang et al. | Modulation of PAR expression and tryptic enzyme induced IL-4 production in mast cells by IL-29 | |
| HALAKA | Development of Remote Inflammation through Interneuron Network in the Spinal Cord | |
| Pinijpaitoon | THE EFFECT OF INTERLEUKIN-6 ON THE EXPRESSION OF RECEPTOR ACTIVATOR OF NF-κB LIGAND, OSTEOPROTEGERIN AND MACROPHAGE COLONY STIMULATING FACTOR IN HUMAN DENTAL PULP FIBROBLAST |