NO327135B1 - Naeringsmiddelsammensetning ment for forbedring av benvekst samt anvendelse av plante eller planteekstrakt - Google Patents

Abstract

Den foreliggende oppfinnelse vedrører en blanding for opprettholdelse av benhelse eller forebygging, lindring og/eller behandling av benlidelser. Oppfinnelsen vedrører også anvendelse av blandingen i fremstilling av et ernæringsprodukt, et kosttilskudd eller et legemiddel, samt en fremgangsmåte for å fremme benvekst eller for opprettholdelsen av benhelsen, og som omfatter tilførsel av en effektiv mengde av blandingen.

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører en næringsmiddelsammensetning ment for forbedring av benvekst samt anvendelse av plante eller planteekstrakt.

Bakgrunn for oppfinnelsen

Friske ben krever effektiv benremodellering som innebærer en likevekt mellom bendannelse og benresorpsjon. De fleste bensykdommer skyldes økt benresorpsjon som gjør dennes inhibering til et primært terapeutisk formål, og derfor er de fleste hittil utviklede farmasøytiske midler antiresorptive. For eksempel blokkerer østrogener produksjon av cytokiner som fremmer osteoklastgenerering og differensiering. Det utvikles SERM (selektive østrogen responsmodulatorer) som tilveiebringer fordeler for benhelse mens de reduserer faren for skadelige hormonale effekter på brystvev eller endometrialt vev. Det antas at de virker ved en liknende mekanisme som østrogen i ben. Bisfosfonater (som alendronat, risedronat, etc.) konsentreres i ben og er hittil de mest effektive inhibitorer av benresorpsjon. De inhiberer en kritisk enzymvirkningsvei som er nødvendig for aktivitet og overleving av osteoklast. Kalsitonin er et polypeptidhormon som inhiberer benresorpsjon ved å blokkere osteoklastaktiviteten. Nye mål man tar sikte på inkluderer blokkering av TNF reseptor/ligandfamiliemedlemmer og deres signalerende virkningsveier, spesielt av RANK/RANKL inhibisjon av benspesifikke metalloproteinaser som cathepsin K eller inhibisjon av spesifikke kinaser.

Utvikling av terapeutiske midler som stimulerer bendannelse har kommet til å ligge bak utvikling av resorpsjonshindrende midler. Noen kjemiske eller farmasøytiske midler er kjent for å fremme benvekst i mennesker. For eksempel beskriver WO 9619246 en metode for å fremme benvekst i en human pasient ved periodisk tilførsel av paratyroidhormon, PTH-relatert protein eller en agonist i minst 1 måned. I WO 9619501 inhiberer en pankreatisk avledet faktor resorpsjonen av ben og stimulerer benceller til å formere seg og øke bendannelsen.

Et mer nylig vesentlig gjennombrudd har vært å påvise rollen benmorfogent protein 2 (BMP-2) som en nøkkeldeltaker spiller i stimulering av bendannelse og at statiner

(effektive legemidler for kolesterolsenking ved inhibisjon av kolesterolsyntese)

forbedrer bendannelse, delvis mediert ved induksjon av BMP-2. Tilførsel av rekombinant BMP-2 er blitt vist å indusere ben- eller bruskdannelse. I US 6150328 beskrives en metode for induksjon av ben- og bruskdannelse omfattende at et renset benmorfogent protein fremstilt ved dyrking av en celle transformert med DNA og som

koder for BMP. WO 9711095 vedrører også anvendelsen av benmorfogene proteinblandinger for behandling av nevrale tumorer og benvekst og sårheling. I tillegg til BMP er vekstfaktorer som insulinlignende GF (IGF-1), transformerende GF-P (TGF-P), fibroblast GF (FGF) under undersøkelse som lokale terapier i helingen av frakturer og bendefekter. Systemisk tilførsel er imidlertid problematisk på grunn av metabolismen i tarmen og også på grunn av mulige virkninger på andre vev. Genterapi er foreslått som en mulighet. Alternativet er å målrette osteoblastregulering av deres produksjon ved kostholds- eller farmasøytiske regulatorer av deres gen eller proteinekspresjon.

"WO-A1-9947149 beskriver anvendelse av ekstrakter fra irisplanten for fremstilling av et legemiddel som kan anvendes for behandling og/eller profylakse av osteoporose.

US-B1-6235287 beskriver anvendelse av ekstrakter d\fra Curcuma for behandling av reumatoid artritt.

WO-A1.0145725 beskriver anvendelse av ulike planteekstrakter for behandling av blant annet artritt.

WO-A1-0101996 beskriver sammensetninger omfattende en plante eller aktiv komponent derav, for eksempel Epimedium, for behandling av osteoporose.

US-A1-2001012523 beskriver anvendelse av planteekstrakt fra Anethum for fremstilling av et næringsmiddel eller farmasøytisk middel for behandling eller profylakse av benlidelser, for eksempel osteoporose.

US-B1-6274176 beskriver spiselige sammensetninger omfattende planter, for eksempel Tanacetum, Curcuma og Thymus, for lindring av artritt og gikt.

US-A-5908628 beskriver anvendelse av planter, for eksempel Prunus, for behandling av artritt.

DE-Al-19814725beskriver anvendelse av et Taraxacum-ekstrakt for å hindre eller behandle skader på benmargen.

CN-A-1169863 beskriver medikamenter, omfattende ekstrakt av løvetann (Taraxacum) for behandling av osteomyelitt."

Selv om disse kjemikalier og farmasøytiske forbindelser har vist seg egnet for behandling av benlidelser, ville det være av interesse å tilveiebringe en sikker, effektiv ernæringsvei for å fremme benvekst og forebygge, lindre eller behandle ben/leddlidelser i pattedyr.

Oppsummering av oppfinnelsen

I et første aspekt tilveiebringer foreliggende oppfinnelse en næringsmiddelsammensetning ment for forbedring av benvekst i mennesker og kjæledyr, kjennetegnet ved at den omfatter, som en aktiv bestanddel, en effektiv mengde av minst en plante eller et planteekstrakt inneholdende fytokjemikalier med evne til å indusere uttrykking av benmorforgent protein, hvor planten eller planteekstraktet er valgt fra gruppen omfattende Carum, Thymus og Rosmarinus.

Det er nå bemerkelsesverdig blitt funnet at noen planter eller planteekstrakter har evnen til å fremme benvekst ved regulering av endogene vekstfaktorer i ben- eller bruskvev. De har evnen til å indusere benmorfogent proteinekspresjon in vivo og på lokalt benmiljø, som har en positiv effekt på bendannelse og benreparasjon.

Blandingen ifølge oppfinnelsen kan anvendes i fremstillingen av et ernæringsprodukt, en tilleggskost, en godbit eller et legemiddel bestemt for mennesker eller kjæledyr.

Tilførsel til et individ av en næringsmiddelblanding ifølge den foreliggende oppfinnelse resulterer i en forbedret benregenerering under frakturheling. Den hjelper til med å øke bendannelsen og benmineraldensiteten under vekst og optimerer maksimum benmasse.

Den hjelper videre med til å bygge brusk i pattedyr, til å forebygge osteoartritt i pattedyr eller mennesker, og dette resulterer i en bedre aktivitet eller mobilitet av individet.

I et ytterligere aspekt vedrører oppfinnelsen anvendelse av en plante eller en planteekstrakt valgt for deres evne til å stimulere benmorfogene proteiner for fremstilling av en blanding bestemt for opprettholdelse av benhelse i pattedyr og for forebygging, lindring og/eller behandling av benlidelser.

Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen

Med hensyn til det første formål for den foreliggende oppfinnelse inneholder planten eller planteekstrakten ifølge oppfinnelsen fytokjemikalier med et anabolt potensiale ved induksjon av benmorfogent proteinekspresjon.

I en foretrukket utførelsesform er planten eller planteekstrakten fra en hvilken som helst del av plantekilden, for eksempel blader, knoller, frukter, frø, rotter, korn, embryoer eller cellekulturer. Planten eller planteekstrakten kan være i form av en tørket, frysetørket ekstrakt av blader, røtter og/eller frukter avhengig av kilden for planten, eller friske planter, eller anriket fraksjon oppnås ved en på området kjent uorganisk eller organisk løsningsmiddelekstraksjonsprosess.

Planten eller planteekstrakten velges for dens evne til å indusere bendannelse, og den kan spesielt velges fra gruppen bestående av Carum, Thymus og Rosemarinus. Den kan også være en sopp.

I en mer foretrukket utførelsesform kan den for eksempel være luftdeler av Thymus sp., luftdeler av Rosmarinus <q>fficinalis, luftdeler av Carum carvi.

Fytokjemikaliene kan være genistein, daidzein, laktusin, laktukopikrin, 3-doksy-laktucin, geraniol eller karvon.

Planten eller planteekstrakten ifølge oppfinnelsen kan anvendes i fremstillingen av en næringsmiddelblanding. Den nevnte blanding kan være i form av et ernæringsmessig balansert næringsmiddel eller kjæledyrnæirngsmiddel, et kosttilskudd, en godbit eller en farmasøytisk blanding.

Planten eller planteekstrakten kan anvendes alene eller i assosiasjon med andre planter som sikori, te, kakao eller med annet bioaktivt molekyl som for eksempel antioksidanter, fettsyrer, prebiotiske fibere, glukosamin, kondroitinsulfat.

I en utførelsesform fremstilles en næringsmiddelblanding for humant forbruk. Denne blandingen kan være en ernæringsmessig fullstendig sammensetning, et meieriprodukt, en avkjølt eller lagringsstabil leskedrikk, suppe, et kosttilskudd, en måltidserstatning eller en næringsmiddelblokk eller en konfekt.

Bortsett fra planteekstrakten som anvendes ved oppfinnelsen kan næringsmiddelsammensetningen omfatte en proteinkilde. Kostholdsproteiner anvendes foretrukket som en kilde for protein. Kostholdsproteinene kan være et hvilket som helst egnet kostholdsprotein; for eksempel animalske proteiner (som melkeproteiner, kjøttproteiner og eggproteiner); vegetabilske proteiner (som soyaprotein, hveteprotein, risprotein og erteprotein); blandinger av frie aminosyrer; eller en kombinasjon derav. Melkeproteiner som kasein, myseproteiner og soyaproteiner er særlig foretrukket. Blandingen kan også inneholde en kilde for karbohydrater og en kilde for fett.

Hvis næringsmiddelsammensetningen inkluderer en fettkilde, tilveiebringer fettkilden foretrukket fra omtrent 5 til omtrent 55% av energien i næringsmiddelsammensetningen; for eksempel fra omtrent 20% til omtrent 50% av energien. Lipidene som utgjør fettkilden kan være hvilket som helst egnet fett eller egnede fettblandinger. Vegetabilske fettstoffer er særlig egnet; for eksempel soyaolje, palmeolje, kokosnøttalje, safflorolje, solsikkeolje, maisolje, kanulaolje, lecitiner og lignende. Animalske fettstoffer som for eksempel melkefett, kan også om ønsket tilsettes.

En kilde for karbohydrat kan tilsettes til næringsmiddelsammensetningen. Den tilveiebringer foretrukket fra omtrent 40% til 80% av energien av næringsmiddelblandingen. Hvilke som helst egnede karbohydrater kan anvendes, for eksempel sukrose, laktose, glukose, fruktose, maissirupfaststoffer, og maltodekstriner og blandinger derav. Kostholdsfibere kan også om ønsket tilsettes. Om anvendt, utgjør disse opp til omtrent 5% av energien av næringsmiddelsammensetningen. Kostholdsfibrene kan være fra en hvilken som helst passende kilde, inklusive for eksempel soya, erter, havre, pektin, guargummi, gummiarabikum og fruktooligosakkarider. Egnede vitaminer og mineraler kan inkluderes i næringsmiddelsammensetningen i en mengde for å tilfredsstille aktuelle retningslinjer.

Ett eller flere emulgeringsmidler av næringsmiddelkvalitet kan om ønsket innlemmes i næringsmiddelsanuiiensetningen; for eksempel diacetylvinsyreestere av mono- og diglycerider, lecitin og mono- og diglycerider. Tilsvarende egnede salter og stabiliseirngsmidler kan inkluderes. Vitaminer og mineraler kan også kombineres med planteekstrakten.

Næringsmiddelsammensetningen er foretrukket enteralt tilførbar; for eksempel i form av et pulver, tablett, kapsel, et flytende konsentrat, et fast produkt eller en leskedrikk klar for drikking. Hvis det er ønskelig å produsere en pulverisert næringsmiddelsammensetning, overføres den homogeniserte blanding til et egnet tørkeapparat som for eksempel en forstøvningstørke eller frysetørke og omdannes til pulver.

I en ytterligere utførelsesform omfatter en næringsmiddelblanding en melkebasert frokostblanding sammen med en prebiotisk sammensetning. Foretrukket er den melkebaserte frokostblanding en barnefrokostblanding som virker som en bærer for den prebiotiske sammensetning.

I en ytterligere utførelsesform kan et vanlig næringsmiddelprodukt anrikes med minst en plante eller planteekstrakt som angitt ved den foreliggende oppfinnelse. For eksempel kan en fermentert melk, en yoghurt, en frisk ost, en løpebehandlet melk, en konditorvare, for eksempel en søtsak eller søtet leskedrikk, en konfektblokk, frokostflak eller -blokker, drinker, melkepulvere, soyabaserte produkter, ikke-melk fermenterte produkter eller ernæringstilleggskost for klinisk ernæring.

Mengden av planten eller planteekstrakten i blandingen kan variere i henhold til plantekilden og dens anvendelse. I en foretrukket utførelsesform er en effektiv daglig dosemengde omtrent 1 mg, mer foretrukket fra 1 mg til 200 mg av det aktive molekyl pr. dag.

I en utførelsesform kan det fremstilles en farmasøytisk blanding inneholdende i det minste en ekstrakt eller et fytokjemikalium som ovenfor beskrevet, i en mengde tilstrekkelig til å oppnå den ønskede effekt i et individ. Denne blanding kan være en tablett, en væske, kapsler, mykkapsler, pastaer eller pastiller, gummisøtsaker eller drikkbare oppløsninger eller emulsjoner, et tørket oralt kosttilskudd, et vått oralt kosttilskudd. Den farmasøytiske blanding vil ytterligere inneholde bærere og eksipiensmidler som er egnet for tilførsel av det respektive aktive molekyl av forskjellig karakter til målvevet. Typen av bærer/eksipiensmiddel og mengden derav vil avhenge av karakteren av substansen og tilførselsmåten for legemidlet og/eller den tilførsel som tas i betraktning. Det innses at den fagkyndige ut fra sin egen kunnskap vil velge de passende komponenter og den galeniske form.

Planten eller planteekstraktene som anvendes ved oppfinnelsen kan anvendes i fremstillingen av en kjæledyrnæringsmiddelblanding. Den nevnte blanding kan tilføres til kjæledyret som et kosttilskudd til dets normale kost eller som en komponent av et ernæringsmessig fullstendig kjæledyrnæirngsmiddel, og mer foretrukket i et hypokalorisk kjæledyrnæirngsmiddel. Det kan også være en farmasøytisk blanding.

Planten eller planteekstrakten kan anvendes alene eller i assosiasjon med andre planter som sikori, te, kakao, eller med annet bioaktivt molekyl som for eksempel antioksidanter, fettsyre, prebiotiske fibere, glukosamin, kondroitinsulfat.

Foretrukket inneholder kjæledyrnæringsmiddelblandingen fra omtrent 0,01 til 0,5 g tørre planter pr. gram tørt kjæledyrnæirngsmiddel for en 15 kg hund; og fra 0,001 til 0,1 g tørre planter pr. g vått kjæledyrnæirngsmiddel for en 15 kg hund.

Den ernæringsmessig fullstendige kjæledyrnæringsmiddelblandingen ifølge oppfinnelsen kan være i pulverisert, tørket form, en godbit eller som et vått, avkjølt eller lagringsstabilt kjæledyrnæringsmiddelprodukt. Det kan være avkjølt eller anordnet som et lagringsstabilt produkt. Disse kjæledyrnæirngsmidler kan produseres ved hjelp av kjente metoder.

Kjæledyrnæirngsmidlet kan eventuelt også inneholde en prebiotisk substans, en probiotisk mikroorganisme eller et ytterligere aktivt middel, for eksempel en langkjedet fettsyre. Mengden av prebiotisk substans i kjæledyrnæringsmidlet er foretrukket mindre enn 10 vekt-%. For eksempel kan den prebiotiske substans omfatte fra omtrent 0,1 til omtrent 5 vekt-% av kjæledyrnæirngsmidlet. For kjæledyrnæirngsmidler som anvender sikori som kilde for den prebiotiske substans kan sikorien inkluderes i et omfang på omtrent 0,5 til omtrent 10 vekt-% av forblandingen; mer foretrukket fra omtrent 1 til omtrent 5 vekt-%.

Hvis det anvendes en probiotisk mikroorganisme, inneholder kjæledyrnæirngsmidlet foretrukket fra omtrent IO<4> til omtrent 10<10> celler av den probiotiske mikroorganisme pr. gram av kjæledyrnæirngsmidlet; mer foretrukket fra omtrent 10 til omtrent 10 celler av den probiotiske mikroorganisme pr. gram. Kjæledyrnæringsmidlet kan inneholde fra omtrent 0,5 til omtrent 20 vekt-% av blandingen av den probiotiske mikroorganisme; foretrukket fra omtrent 1 til omtrent 6 vekt-%; for eksempel fra omtrent 3 til omtrent 6 vekt-%.

Om nødvendig blir kjæledyrnæirngsmidlet supplert med mineraler og vitaminer slik at de er ernæringsmessig fullstendige. Videre kan forskjellige andre bestanddeler som for eksempel sukker, salt, krydder, smaksforbedrende midler, aromamidler og lignende også innlemmes etter ønske i kjæledyrnæirngsmidlet.

Det er også mulig å fremstille kostholdssupplementer for å forbedre kjæledyrnæringsmiddelkvaliteten. Som kostholdssupplementer kan de være innkapslet eller kan anordnes i pulverform og emballeres i forbindelse med, eller separat fra, et hovedmåltid, idet de er i våt eller tørr form. Som et eksempel kan et pulver inneholdende ekstrakter som anvendt ved oppfinnelsen emballeres i poser i en pulverform eller i en gel eller et lipid eller annen egnet bærer. Disse separat emballerte enheter kan anordnes sammen med et hovedmåltid eller i flerenhetspakker for anvendelse med et hovedmåltid eller godbit, alt etter forbrukerinstruksjoner.

Mengden av kjæledyrnæirngsmiddel som skal inntas av kjæledyret for å oppnå en gunstig effekt, vil avhenge av størrelsen av kjæledyret, typen av kjæledyr og dets alder. En mengde av kjæledyrnæirngsmiddel for å tilveiebringe en daglig mengde på 0,5 til 5 g tørre planter pr. kg kroppsvekt vil vanlig være tilstrekkelig for hunder og katter.

Tilførsel til et menneske eller dyr av næringsmidlet eller kjæledyrnæirngsmidlet som beskrevet ovenfor, resulterer i en forbedret benregenerering under frakturheling. Den hjelper til med å stimulere bendannelse og benmineraldensitet under vekst og optimerer maksimal benmasse. Spesielt kan den gi en optimal benvekst under barndommen. Den reduserer faren for osteoporose og forbedrer helingen etter fraktur. Videre hjelper den til med å bygge brusk i pattedyr, hindrer osteoartritt i kjæledyr og mennesker, noe som resulterer i en bedre aktivitet eller mobilitet av individet.

De følgende eksempler er bare gitt i illustrerende hensikt. Alle prosentangivelser er gitt på vektbasis med mindre annet er angitt. En kort beskrivelse av figurene kommer foran eksemplene. Figur 1: Måling av endogen BMP-2 mRNA ekspresjon i hPOB-tert celler ved RT-PCR etter behandling med ekstrakter ftzLindera benzoin ( P. E. 740, 50 ug/ml)) eller Cyperus rotundus ( P. E. 205, 10 fig/ml) i 48 h og viser stimulering av BMP-2 ved 3,8 og 2,8 ganger av kontrollen. Bekreftelsen av denne prøve er blitt utført med lovastatin (0,5 ug/ml) som en positiv kontroll som viser induksjon av BMP-2 med 2,5 ganger. Figur 2: Sammenligning av målte inhibisjonsverdier for Calvaria Prøve (A) og Gropprøve (B) for ekstrakter av Ocimum gratissimum (738), Amelanchier alnifolia

(734), Glycine max (768), Cyperus rotundus (205), Carthamus tinctorius (746).

Eksempler

Eksempel 1: Analyser av bendannelse

1. Bendannelse

91 ekstrakter ble underkastet screening for bendannelse ved hjelp av den BMP-2 (benmorfogent protein) genreporteranalyse. Disse 91 ekstrakter tilsvarer 30 forskjellige planter.

Materialer og metoder

• Fremstilling av ekstrakter for screeninganalyser:

Det malte plantematerialet avfettes med heksan og ekstraheres så med en blanding av alkohol og vann, med forskjellige prosentandeler av vann fra 10 til 90%, foretrukket med 50%. Alkoholene kan være metylalkohol eller etylalkohol og gir ekstrakt la.

På en delprøve av resten av denne første ekstrakt gjennomføres en enzymatisk hydrolyse med a og P glukosidaser. Enzymer kan erstattes av sure betingelser. Operasjonen kan gjøres under milde betingelser (romtemperatur) eller under refluks med forskjellige syrekonsentrasjoner. Den vandige hydrolyserte fase ekstraheres med et ikke-blandbart løsningsmiddel, foretrukket etylacetat til å gi ekstrakten 2a.

Ekstrakten kan tørkes, frysetørkes eller tilveiebringes som en flytende form.

I noen tilfeller kan polyfenoler fjernes gjennom en polyvinylpolypyrrolidon (PVPP) behandling under unngåelse av komplikasjoner med screeninganalysene.

Etter ekstraktfremstilling ble hver ekstrakt veid, oppløst på nytt i dimetylsulfoksid (DMSO) til en endelig konsentrasjon på 20 mg/ml og lagret i delmengder ved -20°C. Denne ble anvendt som en stamoppløsning og ble deretter fortynnet i media for hver analyse. Et område av doser ble testet i analysesystemene.

• Bendannelsesanalyse

BMP-2 luciferaseanalyse - Aktiviteten av ekstraktene ble bestemt ved bruk av 2T3 celler inneholdende BMP-2 promoteren operativt knyttet til luciferasegenet. En økning i luciferaseaktivitet i cellelysater avspeiler en økning i BMP-2 promoteraktivitet. Ekstraktene ble analysert med en initial fortynning på 100 ug/ml med Vi fortynninger ned til 0,2 ug/ml. BMP-2 promoteraktivitet ble målt ved å måle luciferaseaktiviteten i celleekstr akter.

13 planter ga et signifikant positivt resultat ved stimulering av BMP-2 ekspresjon

(Tabell 1)

Eksempler på nye preparater av de samme planter og subfraksjoner derav som stimulerer BMP-2 er: Lindera benzoin, aktiv ekstrakt/ nr. etylacetat/740/2059; Aktiv subfraksjon/nr. 2060 Taraxacum <q>fficinalis, aktiv ekstrakt/ nr. etylacetat/750/2034; Aktiv subraksjon/nr. 2035 Cyperus rotundus, aktiv ekstrakt/ nr. etylacetat/205/2011; Aktiv subfraksjon/nr. 2012, 2013

Iris pallida, aktiv ekstrakt/ nr. MeOH/vann/239; Aktiv subraksj on/nr. 760/762/2021, 2022.

Subtraksjoner ble fremstilt ved fraksjonering på reversfase silikagelpatron med eluering med løsningsmidler med forskjellig polaritet. De rene soyaisoflavoner genistein og daidzein (10"<6>M) stimulerte BMP-2, men ikke østradiol.

BMP-2 induksjon synes ikke å være begrenset til østrogenliknende aktivitet, ettersom den stimuleres av fytoøstrogen, men ikke av selve østrogenet. Dette betyr at aktiviteten av fytoøstrogen (som for eksempel genistein og daidzein) kan medieres ved hjelp av ikke østrogen mekanisme. BMP-2 promoteraktivitet stimuleres ikke av østradiol, slik at østrogenisiteten av planteforbindelser ikke behøver å være aktive i denne test.

Eksempel på bendannelse i Calvaria organkultur

Den anvendte metode er beskrevet i Science 286: 1946 - 1949 (1999). Ekstrakter ble bedømt i en 4 dagers in vitro neonatal murin Calvariaanalyse. Ben ble inkubert med ekstraktene i hele 4 dager. Bendannelse ble bedømt ved histologi.

Eksempel 2: Effekt av planteekstrakter på endogen BMP-2 ekspresjon i humane

osteoblastceller

Plantene funnet positive for BMP-2 induksjonen i Eksempel 1 ble videre testet i en human periosteal/preosteoblast cellelinje, hPOB-tert på deres evne til å indusere den endogene ekspresjon av BMP-2. Denne test i osteoblastceller bekreftet resultatene vist i Eksempel 1.

For eksempel stimulerte behandling av hPOB-tert celler med ekstrakter Lindera benzoin (ekstrakt 740, 50 ug/ml) og av Cyperus rotundus (ekstrakt 205,10 ug/ml), i 48 h ved BMP-2 ekspresjon på 3,8 og 2,8 gangers ekspresjon av kontroll (se Figur 1). Bekreftelsen på dette forsøk er blitt utført med lovastatin (0,5 ug/ml) som en positiv kontroll og viser induksjon av BMP-2 med 2,5 ganger.

Ved sammenflyting ble celler inkubert med 0,05 ug/ml lovastatin eller med planteekstraktene. Total RNA ble ekstrahert med TRIzol Reagent (Gibco). 10 ug RNA ble revers transkribert ved bruk av første Strand cDNA Synthesis Kit (Boehringer). BMP-2 cDNA sekvenser ble amplifisert over 35 cykluser ved en renaturerings ("annealing")temperatur på 55°C ved bruk av spesifikke oligonukleotidprimere (5':

TTGCGGCTGCTCAGCATGTT; 3':CATCTTGCATCTGTTCTCGGAA). PCR

produkter ble separert ved agarosegelelektroforese og påvist ved etidiumbromidfarging. Kvantifisering ble utført ved bruk av NIH Image Software og normalisering av resultater med aktin som husholdningsgen (konstitutivt gen).

Resultatene er vist i Figur 1.

Eksempel 3: Tørt kjæledyrnæringsmiddel

En næringsmiddelblanding utgjøres av omtrent 58 vekt-% mais, omtrent 5,5 vekt-% maisgluten, omtrent 22 vekt-% kyllingmel, 2,5% tørket sikori, omtrent 10% Cyperus rotondus (kypergress) rotknoller, idet salter, vitaminer og mineraler utgjør resten.

Næringsmiddelblandingen innføres i en forkondisjoneirngsanordning og fuktes. Det fuktede næringsmiddel føres så inn i en ekstruderkoker og gelatineres. Den gelatinerte matriks som forlater ekstruderen presses gjennom en dyse og ekstruderes. Ekstrudatet kuttes i stykker egnet for foring av hunder, tørkes ved omtrent 110°C i omtrent 20 minutter, og avkjøles for å danne pellets.

Dette tørre hundenæringsmidlet har en positiv effekt på ben- og bruskhelse og øker hundens mobilitet.

Eksempel 4: Vått, hermetisert kjæledyrnæringsmiddel med supplement

En blanding fremstilles fra 73% fjærkreskrotter, svinelunger og svinelever (malt), 16% hvetemel, 2% fargestoffer, vitaminer og uorganiske salter. Denne blanding emulgeres ved 12°C og ekstruderes i form av en pudding som så kokes ved en temperatur på 90°C. Blandingen avkjøles til 30°C og kuttes opp i stykker. 45% av disse stykker blandes med 55% av en saus fremstilt fra 98% vann, 1% fargestoff og 1% guargummi. Fortinnede hermetikkbokser fylles og steriliseres ved 125°C i 40 min.

Det etterfølgend trinnet er medtatt som et referanseeksempel.

Som et supplement som blandes med kjæledyrnæirngsmidlet før foring, inneholder en ytterligere emballasje (f.eks. pose) 25 g pulverisert Cyperus rotundus luftdeler for tilsetning til det daglige næringsmiddel. Den tilsvarende mengde for kjæledyret er omtrent 25 g/dag og dette kan leveres som et supplement med boksen (f.eks. på toppen av denne).

Claims (10)

1. Næringsrmddelsammensetning ment for forbedring av benvekst i mennesker og kjæledyr, karakterisert ved at den omfatter, som en aktiv bestanddel, en effektiv mengde av minst en plante eller et planteekstrakt inneholdende fytokjemikalier med evne til å indusere uttrykking av benmorforgent protein, hvor planten eller planteekstraktet er valgt fra gruppen omfattende Carum, Thymus og Rosmarinus.

2. Sammensetning ifølge krav 1, karakterisert ved at planten er fra en hvilken som helst del av plantekilden, blader, rotknoller, frukter, frø, røtter, korn, embryoer eller cellekulturer.

3. Sammensetning ifølge et av kravene 1 til 2,. karakterisert v e d at planten eller planteekstraktet er valgt fra luftdeler av Thymus sp., luftdeler av Rosmarinus <q>fficinalus, luftdeler av Carum carvi.

4. Sammensetning ifølge et av kravene 1 til 3, karakterisert v e d at fotokjemikaliene er laktucin, laktukopikrin, 3-deoksy-laktucin, geraniol eller karvon.

5. Sammensetning ifølge et av kravene 1 til 4, karakterisert v e d at den er i form av et ernæringsmessig balansert næringsmiddel eller kjæledyrfor, et diett-tilskudd, en godbit eller en farmasøytisk sammensetning.

6. Sammensetning ifølge et av kravene 1 til 5, karakterisert ved at den hjelper til med benregenering under frakturheling, hjelper til med å øke bendannelsen og benmineraldensiteten under vekst og å optimalisere maksimum benmasse i mennesker eller kjæledyr.

7. Blanding ifølge et av kravene 1 til 6, karakterisert ved at den hjelper til med å bygge brusk i mennesker og kjæledyr.

8. Anvendelse av en plante eller et planteekstrakt inneholdende fytokjemikalier som har evnen til å stimulere morfogenisk benprotein for fremstilling av et næringsmiddel eller kjæledyrforsammensetning ment for forbedring av benvekst i mennesker eller kjæledyr, hvor planten eller planteekstraktet er valgt fra gruppen omfattende Carum, Thymus og Rosmarinus.

9. Anvendelse ifølge krav 8, hvor planten eller planteekstraktet anvendes alene eller i forbindelse med andre planter som sikori, te, kakao eller med andre bioaktive molekyler, så som for eksempel antioksidanter, fettsyrer, prebiotiske fibere, glukosamin, kondroitinsulfat.

10. Anvendelse ifølge krav 9, for å øke bendannelse, benmineraldensitet under vekst og optimalisere maksimumbenmasse i mennesker eller kjæledyr, behandling eller forebyggelse av osteoporose, stimulering av benregenering under frakturheling i mennesker og kjæledyr.