KR102186886B1 - 프루누스 자마사쿠라 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 - Google Patents
프루누스 자마사쿠라 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 프루누스 자마사쿠라 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 외수피; 외수피 및 내수피; 외수피, 내수피 및 형성층;을 포함하는 프루누스 자마사쿠라 추출물의 TRAP 활성 억제 효과를 확인하고, 외수피; 또는 외수피, 내수피 및 형성층;을 포함하는 프루누스 자마사쿠라 추출물의 TRAP 활성 억제 효과가 외수피 및 내수피;를 포함하는 프루누스 자마사쿠라 추출물에 비해 우수하고, 특히 외수피, 내수피 및 형성층을 포함하는 프루누스 자마사쿠라 에탄올 추출물의 TRAP 활성 억제 효과가 가장 현저하였으므로, 프루누스 자마사쿠라 추출물을 포함하는 본 발명의 조성물은 골다공증의 치료제 또는 항골다공증용 건강기능식품 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 프루누스 자마사쿠라(Prunus jamasakura) 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
뼈의 발생, 성장 및 대사과정에는 뼈의 형성(bone modeling)과 재형성(remodeling) 과정이 중요한 역할을 한다.
뼈의 형성은 태생기부터 시작하여 이후 골격이 성숙되어 성장이 끝나는 청·장년기까지 지속되어 20대에서 30대 초반까지 최대 골량을 형성하게 된다. 이후 약 30년 동안은 뼈를 제거하고 다시 이를 보충하는 골재형성 과정을 반복하게 되는데, 이때는 골형성과 골흡수가 서로 짝을 이루어 균형을 유지하게 된다. 이 시기가 지난 후에는 골흡수에 따른 골소실을 골형성이 충분히 따라갈 수 없어 결국 연 0.3~0.5% 정도의 골량 감소를 겪게 되며, 특히 여성의 경우에는 폐경 초기에 연 2~3%의 상당한 골손실을 겪게 된다.
뼈는 크게 조골세포(osteoblast), 파골세포(osteoclast), 라이닝세포(lining cell) 및 골세포(osteocyte)로 구성되어 있다. 이때, 골수내 간질세포(bone marrow stromal cell)로부터 유래되는 조골세포는 골기질을 합성하는 분화된 세포로서 골형성을 주도하며, 조혈모세포로부터 유래되는 파골세포는 골흡수를 주도한다.
골다공증(osteoporosis)은 골 조직의 석회가 감소되어 뼈의 치밀질이 엷어지고, 그로 인해 골수강(骨髓腔)이 넓어지는 상태로, 증세가 진전됨에 따라 뼈가 약해지기 때문에 작은 충격에도 골절되기 쉽다. 골량은 유전적 요인, 영양 섭취, 호르몬의 변화, 운동 및 생활 습관의 차이 등 여러 가지 요인들에 의해 영향을 받으며, 골다공증의 원인으로는 노령, 운동 부족, 저체중, 흡연, 저칼슘 식이, 폐경, 난소 절제 등이 알려져 있다. 한편, 개인차는 있지만 백인보다는 흑인이 골 재흡수 수준(bone resorption level)이 낮아 골량이 더 높다. 여성은 30세 이후부터 골 감소가 지속적으로 진행되며, 폐경기에 이르면 호르몬 변화에 의해 골 감소가 급격히 진행되지만, 남성은 여성과 달리 명백한 폐경기가 없기 때문에 골다공증의 발생이 훨씬 적다. 남성의 경우는 나이가 증가함에 따라 장에서 칼슘의 섭취가 적어지고 뼈 생성도 감소하기 때문에 골다공증이 발생된다.
이와 같이 골다공증은 정도에 차이는 있으나 노년층, 특히 폐경기 이후의 여성에게 있어서는 피할 수 없는 증상으로, 선진국에서는 인구가 노령화됨에 따라 골다공증 및 그 치료제에 대한 관심이 점차 증가되고 있다. 또한, 전 세계적으로 골질환 치료와 관련되어 약 1300억 달러의 시장이 형성되어 있는 것으로 알려져 있으며, 앞으로 더 증가할 것으로 예상되기 때문에, 세계적인 각 연구기관과 제약회사에서는 골질환 치료제 개발에 많은 투자를 하고 있다.
국내에서도 평균수명이 80세에 육박하면서 골다공증 유병률이 급격하게 증가하고 있는데, 남성의 4.5%, 여성의 19.8%가 골다공증을 갖고 있다고 보고된 바 있다. 이는 골다공증이 당뇨병이나 심혈관계 질환보다 더 흔한 질환이며, 골절로 인해 받는 환자들의 고통이나 치료를 위해 들어가는 비용을 추정할 때 골다공증은 매우 중요한 보건 문제임을 시사한다.
현재 골다공증 치료제로 가장 많이 사용되고 있는 에스트로겐(estrogen)은 그 실제적인 효능이 아직 검증되지 않은 상태이고, 생애 동안 계속 복용해야 하는 단점이 있으며, 장기간 투여하는 경우 유방암이나 자궁암이 증가하는 부작용이 있다. 알렌드로네이트(alrendronate)도 그 효능이 명확하지 않고 소화관에서의 흡수가 더디며 위장과 식도점막에 염증을 유발하는 문제가 있다. 칼슘제제는 부작용이 적으면서도 효과가 우수한 것으로 알려져 있지만 치료제라기보다는 예방제에 해당한다. 그 외에 칼시토닌과 같은 비타민 D 제제가 알려져 있으나, 아직 효능 및 부작용에 대한 연구가 충분히 되어있지 않은 상태이다. 이에, 부작용이 적고 효과가 우수한 새로운 대사성 골 질환 치료제가 요구되는 실정이다.
한편, 한국공개특허 제2018-0028017호에는 장미목 식물 추출물, 층층나무속 식물 추출물, 모시풀속 식물 추출물 및 서어나무속 식물 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 천연 추출물을 이용하는 골질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물이 개시되어 있지만, 본 발명의 프루누스 자마사쿠라(Prunus jamasakura) 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관해 개시된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 프루누스 자마사쿠라(Prunus jamasakura) 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하고, 상기 조성물의 외수피, 내수피 및 형성층 포함 유무에 따른 골수 유래 대식세포의 파골세포 분화 억제능을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 프루누스 자마사쿠라(Prunus jamasakura) 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 프루누스 자마사쿠라(Prunus jamasakura) 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 프루누스 자마사쿠라 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 외수피; 외수피 및 내수피; 외수피, 내수피 및 형성층;을 포함하는 프루누스 자마사쿠라 추출물의 TRAP 활성 억제 효과를 확인하였고, 외수피; 또는 외수피, 내수피 및 형성층;을 포함하는 프루누스 자마사쿠라 추출물의 TRAP 활성 억제 효과가 외수피 및 내수피를 포함하는 프루누스 자마사쿠라 추출물에 비해 우수하였으며, 특히 외수피, 내수피 및 형성층을 포함하는 프루누스 자마사쿠라 에탄올 추출물의 TRAP 활성 억제 효과가 가장 현저하였다.
도 1은 본 발명의 프루누스 자마사쿠라 에탄올 추출물(A) 및 메탄올 추출물(B)의 세포 독성을 확인한 결과이다. CTL은 아무것도 처리하지 않은 음성대조군이고, PJ1은 프루누스 자마사쿠라 외수피, 내수피 및 형성층을 포함하는 추출물 처리군이고, PJ2는 프루누스 자마사쿠라 외수피 및 내수피를 포함하는 추출물 처리군이며, PJ3은 프루누스 자마사쿠라 외수피를 포함하는 추출물 처리군이다.
도 2는 본 발명의 프루누스 자마사쿠라 에탄올 추출물(A) 및 메탄올 추출물(B)의 처리 농도별 TRAP 활성을 확인한 결과이다. CTL은 아무것도 처리하지 않은 음성대조군이고, PJ1은 프루누스 자마사쿠라 외수피, 내수피 및 형성층을 포함하는 추출물 처리군이고, PJ2는 프루누스 자마사쿠라 외수피 및 내수피를 포함하는 추출물 처리군이며, PJ3은 프루누스 자마사쿠라 외수피를 포함하는 추출물 처리군이다. *, **, ***은 PJ2에 비해 PJ1 및 PJ3의 TRAP 활성이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, *은 p<0.05, **은 p<0.01, ***은 p<0.001이다. #, ###은 PJ3에 비해 PJ1의 TRAP 활성이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, #은 p<0.05, ###은 p<0.001이다.
도 2는 본 발명의 프루누스 자마사쿠라 에탄올 추출물(A) 및 메탄올 추출물(B)의 처리 농도별 TRAP 활성을 확인한 결과이다. CTL은 아무것도 처리하지 않은 음성대조군이고, PJ1은 프루누스 자마사쿠라 외수피, 내수피 및 형성층을 포함하는 추출물 처리군이고, PJ2는 프루누스 자마사쿠라 외수피 및 내수피를 포함하는 추출물 처리군이며, PJ3은 프루누스 자마사쿠라 외수피를 포함하는 추출물 처리군이다. *, **, ***은 PJ2에 비해 PJ1 및 PJ3의 TRAP 활성이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, *은 p<0.05, **은 p<0.01, ***은 p<0.001이다. #, ###은 PJ3에 비해 PJ1의 TRAP 활성이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, #은 p<0.05, ###은 p<0.001이다.
본 발명은 프루누스 자마사쿠라(Prunus jamasakura) 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
목재는 최외각으로부터 가까운 순으로 외수피, 내수피, 형성층, 변재 및 심재로 구성되어 있는데, 견고한 코르크층으로 구성된 외수피는 그 안쪽에 있는 내수피를 보호하고, 각종 기상적, 인위적 피해와 병원균의 침입으로부터 나무를 보호하는 역할을 한다. 내수피에 있는 사부(篩部)는 잎에서 만들어진 광합성 산물을 뿌리를 비롯해 형성층 등 에너지를 필요로 하는 나무 곳곳에 수송하는 역할을 한다. 또한, 내수피 밑에 있는 형성층은 평상시에는 나무의 비대생장(肥大生長, 直徑生長) 역할을 하지만, 수피가 벗겨졌을 때에는 유합조직(癒合組織, callus)을 형성하여 상처를 아물게 하는 역할을 한다.
상기 프루누스 자마사쿠라 추출물은 프루누스 자마사쿠라 외수피를 포함하거나, 외수피에 내수피 및 형성층을 추가로 더 포함할 수 있고, 바람직하게는 외수피, 내수피 및 형성층을 모두 포함하는 것이지만, 이에 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현 예에서, 상기 프루누스 자마사쿠라의 외수피는 최외각으로부터 0.3cm 미만의 굵기에 포함되어 있고, 외수피 및 내수피는 최외각으로부터 0.3cm 이상 및 0.6 cm 미만의 굵기에 포함되어 있으며, 외수피, 내수피 및 형성층은 최외각으로부터 0.6cm 이상 1.0cm 미만의 굵기에 포함되어 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현 예에서, 상기 프루누스 자마사쿠라 추출물의 추출 용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물일 수 있고, 바람직하게는 에탄올을 이용하여 추출하는 것이지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현 예에서, 상기 프루누스 자마사쿠라 추출물은 파골세포의 형성을 억제하는 특징이 있다.
본 발명의 조성물은 상기 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 캡슐제, 산제, 과립제, 정제, 환제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성 용제 및 현탁 용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로 젤라틴 등이 사용될 수 있다. 비경구 투여 시 피부 외용 또는 복강 내, 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사 방식을 선택하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효량의 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하다. 본 발명의 조성물은 단독으로 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 프루누스 자마사쿠라(Prunus jamasakura) 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일 구현 예에서, 상기 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 또는 음료의 제형으로 제조되는 것이 바람직하지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 프루누스 자마사쿠라 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취인 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합체 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명의 조성물을 건강 음료로 사용할 경우, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 텍스트린, 사이클로텐스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100g당 일반적으로 약 0.01~0.04g, 바람직하게는 약 0.02~0.03g이다. 상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 중점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물은 100 중량부 당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
실시예 1. 프루누스 자마사쿠라 추출물의 제조
본 발명의 프루누스 자마사쿠라(Prunus jamasakura)는 30%(v/v) 에탄올 또는 100% 메탄올을 이용하여 추출한 후 실험에 사용하였다. 또한, 프루누스 자마사쿠라는 외수피, 내수피 및 형성층 포함 유무에 따라 3단계로 구분하였다(PJ1: 외수피, 내수피 및 형성층을 포함하며, 최외각으로부터 0.6cm 이상 1.0cm 미만의 굵기; PJ2: 외수피 및 내수피를 포함하며, 최외각으로부터 0.3cm 이상 0.6cm 미만의 굵기; PJ3: 외수피만을 포함하며, 최외각으로부터 0.3cm 미만의 굵기).
건조된 PJ1~3을 분쇄하여 각각의 분쇄파우더 100g에 30%(v/v) 에탄올 또는 100% 메탄올을 2ℓ씩 첨가하여 6일 동안 상온에서 침지한 후, 여과지를 사용하여 여과한 다음 감압하에서 회전식 농축기를 이용하여 용매를 제거 후 동결건조하였다.
실시예 2. 프루누스 자마사쿠라 추출물의 세포독성 확인
마우스의 골수세포를 60ng/㎖의 M-CSF(macrophage colony stimulating factor)와 10%(v/v) FBS를 함유한 α-MEM 배지에 3일 동안 배양하여 골수세포 유래 대식세포(bone marrow-derived macrophages, BMM)를 수득하였다. 상기 수득한 마우스 골수유래 대식세포(BMM)를 M-CSF(60ng/㎖)를 함유하는 배지에서 1일 동안 다양한 농도의 추출물을 첨가하며 배양한 후 세포 독성 유무를 확인하였다.
세포 생존율(cell viability)은 세포 계수 키트-8(Cell counting Kit-8; CCK-8. Dojindo Inc.)을 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정함으로써 확인하였다.
그 결과, 본 발명의 실시예 1의 프루누스 자마사쿠라 추출물은 세포 독성이 거의 나타나지 않았다(도 1).
실시예 3. 프루누스 자마사쿠라 추출물의 파골세포 분화 억제능 확인
실시예 2에서 수득한 골수세포 유래 대식세포(BMM)를 M-CSF(60ng/㎖) 및 RANKL(100ng/㎖)을 포함하는 배지에 4일 동안 배양하였고, 같은 배양조건에서 BMM에 실시예 1의 프루누스 자마사쿠라 추출물(30%(v/v) 에탄올, 100% 메탄올)을 다양한 농도로 처리하여 프루누스 자마사쿠라 추출물의 파골세포 분화 억제능을 확인하였다.
배양 4일 후, 세포를 10%(v/v) 포르말린으로 고정하고, 나프톨 AS-MS 포스페이트 및 패스트 레드 바이올렛 LB 염(fast red violet LB salt)을 이용하여 TRAP(tartrate-resistant acid phosphatase) 염색을 실시하여 TRAP 활성과 연관되어 있는 핵이 3개 이상인 TRAP 양성 세포(파골세포, osteoclast)를 확인하였다.
그 결과, 도 2 및 표 1에 나타난 바와 같이 프루누스 자마사쿠라(이하, PJ1~3)는 농도 의존적으로 파골세포로의 분화를 억제하는 효과가 나타났으며, 절단면 및 절단부위에 따른 효능의 차이를 보이는 목본성 한약재의 특성에 따라 외수피, 내수피 및 형성층 포함 유무에 따른 파골세포 분화 억제능을 비교해 본 결과, PJ1 및 PJ3 추출물의 파골세포 분화 억제능이 PJ2에 비해 우수하였다.
또한, 용매별 비교를 통해 메탄올 추출물에 비해 에탄올 추출물의 TRAP 억제활성이 우수하다는 것을 확인하였고, PJ1~PJ3 에탄올 추출물 비교시에도 PJ2에 비해 PJ1 및 PJ3의 TRAP 활성 억제효과가 현저하였고, 특히 50㎍/ml 농도로 처리한 경우, PJ1의 TRAP 억제활성이 PJ2 및 PJ3에 비해 현저하다는 것을 확인하였다.
| 시료 | TRAP 억제율(% of CTL) | ||||
| 6.25㎍/ml | 12.5㎍/ml | 25㎍/ml | 50㎍/ml | ||
| 에탄올 | PJ1 | 35.70 | 50.10 | 82.40 | 96.27 |
| PJ2 | 16.23 | 29.47 | 58.33 | 90.40 | |
| PJ3 | 8.43 | 48.83 | 78.53 | 94.63 | |
| 메탄올 | PJ1 | 21.47 | 41.10 | 78.50 | 94.13 |
| PJ2 | 21.43 | 24.23 | 53.73 | 81.17 | |
| PJ3 | 9.80 | 31.13 | 71.73 | 93.50 | |
실시예 4. 프루누스 자마사쿠라 추출물의 제니스테인(Genistein) 함량 분석
본 발명의 PJ1 및 PJ3 추출물 내 제니스테인 함량을 HPLC(UltiMate 3000 system, Dionex 사)를 통해 확인하였다.
먼저, 제니스테인을 농도별로 처리하여 R2 값이 0.9999인 하기 식 1의 검량식을 산출하였으며, 식 1을 이용하여 추출물 내 제니스테인의 함량을 확인하였다.
[식 1]
y=0.7594x+2.1139
y: 추출물 내 제니스테인 피크의 면적
x: 추출물 내 제니스테인 함량
각각의 추출물은 DMSO를 이용하여 100mg/ml 농도로 준비한 후, 20배(v/v) 희석하여 5mg/ml의 농도로 분석에 사용하였다.
그 결과, 표 2에 개시된 바와 같이 제니스테인은 PJ3 메탄올 추출물에서 가장 함량이 높게 나타났고, PJ1 메탄올 추출물, PJ3 에탄올 추출물 및 PJ1 에탄올 추출물 순으로 함량이 낮아졌다. 이를 통해 본 발명의 실시예 1의 프루누스 자마사쿠라 추출물에는 제니스테인이 매우 소량 들어있으며, 항골다공증 효능이 우수한 PJ1에 비해 PJ3의 제니스테인 함량이 현저히 높은 것을 통해 실시예 1의 프루누스 자마사쿠라 추출물에 의한 항골다공증 효능은 제니스테인에 기인한 것이 아니라는 것을 확인하였다.
| 용매조건 | 추출부위 | 제니스테인(㎍/ml) | |
| 5mg/ml 내 확인함량 | 5㎍/ml 내 예측 함량 | ||
| 에탄올 | PJ1 | 0.037 | 0.00037 |
| PJ3 | 0.361 | 0.00361 | |
| 메탄올 | PJ1 | 0.746 | 0.00746 |
| PJ3 | 4.394 | 0.04394 | |
Claims (7)
- 프루누스 자마사쿠라(Prunus jamasakura) 외수피, 내수피 및 형성층의 에탄올 또는 메탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 프루누스 자마사쿠라 외수피, 내수피 및 형성층의 에탄올 또는 메탄올 추출물은 파골세포의 형성을 억제하는 것을 특징으로 하는 골다공증의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 프루누스 자마사쿠라 외수피, 내수피 및 형성층의 에탄올 또는 메탄올 추출물 이외에 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 골다공증의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 프루누스 자마사쿠라(Prunus jamasakura) 외수피, 내수피 및 형성층의 에탄올 또는 메탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
- 제6항에 있어서, 상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 골다공증의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
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