KR102496864B1 - 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 항비만용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 항비만용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 또는 치료, 또는 지방형성 억제용 약학적 조성물, 또는 비만 예방 또는 개선, 또는 지방형성 억제용 건강식품에 관한 것이다. 본 발명에 따른 갯대추나무 추출물은 지방전구세포의 지방세포로의 분화를 억제하고, 지방형성을 효과적으로 억제하며, 지방전구세포에 대해 세포독성이 거의 없으므로 비만 또는 지방형성에 기인한 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 항비만용 조성물{Anti-obesity composition containing extract of Paliurus ramosissimus as an active ingredient}
본 발명은 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 항비만용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 또는 치료, 또는 지방형성 억제용 약학적 조성물, 또는 비만 예방 또는 개선, 또는 지방형성 억제용 건강식품에 관한 것이다.
비만(obesity)은 과다한 열량 섭취와 운동부족이 주된 원인이지만 그 외에도 사회적, 유전적, 환경적인 요인 등이 영향을 미치는 복합증후군으로, 음식의 섭취 량과 에너지 소비의 불균형에서 생기는 과잉의 에너지가 지방조직에서 중성지방 으로 축적되면서 발생하는 질병이며, 전 세계적으로 유병률이 크게 증가하고 있는 실정이다.
비만은 그 자체가 갖는 문제점뿐만 아니라 당뇨, 심혈관질환, 고혈압, 고지혈증 같은 심각한 성인병을 유발할 수 있으며, 각종 암의 유병률을 높이기 때문에 치료에 많은 관심이 모이고 있다.
세계보건기구(WHO)에서는 비만인구가 증가함에 따라 비만을 치료해야 할 질병으로 인식하여 세계적인 영양문제로 다루고 있다.
비만을 개선하기 위한 방법으로는 외과적 치료 외에 운동요법, 식사요법, 행동요법 그리고 식용 억제제, 설사제 또는 포만감을 주기 위한 섬유질 등을 사용하는 약물요법 등이 현재 알려져 있다. 최근에는 비만 치료를 위한 약물 치료제 개발 연구가 진행되고 있지만, 현재까지 개발된 약물치료제는 효능에 비해 두통, 불면증, 신경불안, 고혈압, 복통, 복부팽만, 배변 증가 등의 부작용이 있는 것으로 알려져 있다.
이러한 약물 치료의 부작용으로 인해 새로운 항비만 기능성 식품 및 의약품 개발이 요구되고 있으며, 최근에는 천연물소재에서 비만 예방 및 개선에 효과적인 기능성 소재들을 찾아내고 작용 기전을 밝히는 연구 및 개발이 이루어지고 있다.
이와 관련하여 지방세포를 사용한 연구가 활발히 이루어지고 있다. 섭취한 영양소는 중성지방의 형태로 지방 조직에 축적되며, 비만은 지방세포의 비대와 과형성으로 인해 초래된다. 지방세포 연구는 지방 축적을 감소시키고 지방세포의 수를 줄이는 방안을 찾아내는 것이 핵심이다.
지금까지 예를 들면, 대한민국 등록특허 제10-1877401호에서 순비기나무 잎 또는 줄기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 조성물을, 대한민국 등록특허 제10-1874161호에서 나무딸기 잎 또는 줄기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 조성물을, 대한민국 등록특허 제10-1557557호에서 엔드리케리아 아노말라 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 조성물을, 대한민국 등록특허 제10-1762736호에서 클라우세나 엑스카바타 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 조성물을, 대한민국 등록특허 제10-1851639호에서 모과 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 조성물 등 다양한 식물소재에 대해 보고된 바 있으나, 항비만 효과가 높지 않아서 새로운 효과적인 천연소재를 규명하는 것이 필요한 실정이다.
한편, 갯대추나무(학명: Paliurus ramosissimus (Lour.) Poir .)는 갈매나뭇과의 낙엽 활엽 관목으로서, 높이는 2~3미터이다. 여름에 연한 녹색 꽃이 잎겨드랑이에 피고 열매는 건과(乾果)로 가을에 붉게 익는다. 관상용이며 바닷가에서 자라는데 한국의 제주도, 일본, 중국, 대만 등지에 분포한다.
갯대추나무의 잎은 어긋나기하며 지질이고, 달걀형이며 끝이 둔하고 길이와 폭이 각 3.5 ~ 6 cm × 2.5 ~ 4.5 cm로, 아랫부분에 3개의 큰 맥이 있으며 가장자리에 둔한 잔톱니가 있고, 잎자루 길이는 3 ~ 8 cm이며 어린나무에 턱잎이 변한 가시가 있다. 취산꽃차례는 일년생가지 윗부분의 잎겨드랑이에 달리며, 꽃대는 짧고 갈백색 털이 밀생하며, 꽃은 연한 녹색으로 지름 5 mm로 6월에 피고, 꽃부분은 5수성이다. 열매는 건과로 구형이며 지름 12 ~ 20 mm로, 끝이 3개로 갈라져서 날개로 되고 백갈색 복모가 있으며 9 ~ 10월에 성숙한다. 줄기는 가지와 잎이 밀생하고 가지에 갈백색 털이 있다.
갯대추나무의 효능으로는 뿌리는 술에 담가서 도포하고 거풍습, 산어혈 및 해독 효능이 있으며, 잎은 6 ~ 9 g을 달여 복용하고 거어생신, 토혈 및 치창 치료 효능이 있는 것으로 알려져 있다.
이에, 본 발명자들은 새로운 항비만 천연소재를 개발하기 위해 노력하던 중, 갯대추나무가 지방전구세포(3T3-L1)의 지방세포로의 분화를 억제하고, 특히 갯대추나무 부위별 추출물 중 잎이 현저히 지방세포로의 분화를 억제하며, 지방형성을 감소시키며, 이러한 지방형성 억제 작용은 지방전구세포를 손상시켜 나타난 것이 아님을 확인하여, 갯대추나무가 항비만 효능을 가지는 우수한 활성성분으로 제공할 수 있음을 규명함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 갯대추나무 추출물을 이용하여 지방전구세포의 지방세포로의 분화를 억제하여 지방형성 억제, 및 지방축적으로 야기되는 비만을 예방 또는 치료할 수 있는 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 갯대추나무(Paliurus ramosissimus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 갯대추나무 잎, 특히 갯대추나무 결실기 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.
또한, 본 발명은 갯대추나무 잎, 특히 갯대추나무 결실기 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.
또한, 본 발명은 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 및 개선용 식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방형성 억제용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방형성 억제용 건강식품을 제공한다.
또한, 본 발명은 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방축적에 기인한 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
아울러, 본 발명은 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방축적에 기인한 질환의 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.
본 발명에 따른 갯대추나무 추출물은 지방전구세포의 지방세포로의 분화를 억제하고, 지방형성을 효과적으로 억제하며, 지방전구세포에 대해 세포독성이 거의 없다.
특히, 본 발명에 따른 갯대추나무 잎 추출물은 다른 부위인 가지 또는 열매 부위 추출물들에 비해 현저히 우수한 지방형성 억제 효과를 나타냄으로써, 비만에 대한 우수한 예방 및 치료 효과를 가지고 있다.
도 1은 갯대추나무 부위별 추출물의 지방형성 억제 효능을 보여주는 그림이다.
도 2는 갯대추나무 잎 추출물의 지방형성 억제 활성 평가 결과를 보여주는 그래프이다.
도 3은 갯대추나무 잎 추출물의 지방전구세포의 세포 독성 평가 결과를 보여주는 그래프이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
이때, 사용되는 기술 용어 및 과학 용어에 있어서 다른 정의가 없다면, 이 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 통상적으로 이해하고 있는 의미를 가진다.
본 발명은 갯대추나무(Paliurus ramosissimus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 갯대추나무 추출물은
1) 건조한 갯대추나무를 분말로 만들거나 세절한 후 추출용매를 가하여 추출하는 단계;
2) 단계 1)의 추출물을 식힌 후 여과하는 단계; 및
3) 단계 2)의 추출물을 감압농축한 후 동결건조하는 단계를 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하다.
상기 갯대추나무는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다.
상기 갯대추나무는 잎, 줄기, 뿌리 및 열매로 구성된 군으로부터 선택된 어느 한 부위 이상일 수 있고, 잎 부위를 사용하는 것이 바람직하다.
상기 추출용매는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물인 것이 바람직하고, 상기 알코올로는 C1 ~ C4 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하고, 에탄올을 이용하는 것이 더욱 바람직하다.
상기 추출방법으로는 진탕추출 또는 환류추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 상기 추출용매를 건조된 갯대추나무의 총 분량에 2 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하다. 또한, 추출온도는 10 ~ 100℃인 것이 바람직하며, 15 ~ 35℃인 것이 더욱 바람직하다. 또한, 추출시간은 1일 ~ 7일이 바람직하며, 1일 ~ 5일이 더욱 바람직하다. 추출 횟수는 1 ~ 5회인 것이 바람직하며, 2 ~ 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하다.
상기 감압농축은 감압농축기를 이용하는 것이 바람직하고 회전진공농축기를 이용하는 것이 더욱 바람직하다. 상기 감압농축은 10 ~ 70℃에서 농축하는 것이 바람직하고 10 ~ 50℃에서 농축하는 것이 더욱 바람직하다.
본 발명의 실시예에 따르면, 갯대추나무 추출물이 지방전구세포(3T3-L1)의 지방세포로의 분화를 억제하고, 특히 갯대추나무 부위별 추출물 중 잎이 현저히 지방세포로의 분화를 억제하며, 지방형성을 감소시키며, 이러한 지방형성 억제 작용은 지방전구세포를 손상시켜 나타난 것이 아님을 확인하여, 갯대추나무가 항비만 효능을 가지는 우수한 활성성분으로 제공할 수 있음을 알 수 있었다.
본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 갯대추나무 추출물을 0.0001 내지 10 중량%로, 바람직하게는 0.001 내지 1 중량%를 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물이 적용될 수 있는 개체는 척추동물이고 바람직하게는 포유동물이며, 이는 인간, 돼지, 소, 말, 양, 염소, 쥐, 토끼, 기니아피그, 햄스터, 개, 고양이, 침팬지, 고릴라 등을 모두 포함한다.
본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내주사, 직장내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다.
본 발명의 약학적 조성물은 통상적으로 사용되는 부형제, 붕해제, 감미제, 활택제, 향미제 등을 추가로 포함할 수 있다. 상기 붕해제로는 전분글리콜산나트륨, 크로스포비돈, 크로스카멜로스나트륨, 알긴산, 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 카르복시 메틸셀룰로오스 나트륨, 키토산, 구아검, 저치환도히드록시프로필셀룰로오스, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 폴라크릴린 칼륨 등이 있다. 또한, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 이때 약제학적으로 허용가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바 납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당, 덱스트로스, 소르비톨, 탈크 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적으로 허용가능한 첨가제는 상기 약학적 조성물에 대해 0.1 ~ 90 중량부 포함되는 것이 바람직하다.
본 발명의 약학적 조성물은, 경구투여를 위한 고형 제제에로는 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 연질캅셀제, 환 등이 포함된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 에어로졸 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제로는 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 멸균된 수용액, 액제, 비수성용제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 좌제, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사제제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용 약학적 조성물을 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은, 바람직한 투여량으로는 체내에서 활성성분의 흡수도, 불활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증 정도에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1 kg당 본 발명의 약학적 조성물을 1일 0.0001 내지 100 ㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 100 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 약학적 조성물은 비만 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 독성 및 부작용은 거의 없으므로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 조성물이다.
또한, 본 발명은 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.
상기 건강식품은 건강기능식품 또는 건강보조식품을 모두 포함한다.
상기 갯대추나무는 잎, 줄기, 뿌리 및 열매로 구성된 군으로부터 선택된 어느 한 부위 이상일 수 있고, 잎 부위를 사용하는 것이 바람직하다.
상기 추출물은 추출용매로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물인 것이 바람직하고, 상기 알코올로는 C1 ~ C4 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하고, 에탄올을 이용하는 것이 더욱 바람직하다.
상기 건강식품 조성물은 상기 추출물을 조성물 총 중량을 기준으로 0.0001 ~ 10 중량%의 양으로 함유할 수 있고, 조성물 총 중량을 기준으로 0.001 ~ 1 중량%의 양으로 함유할 수 있다.
상기 건강식품 조성물은 당해 기술분야에 공지되어 있는 통상적인 건강기능식품의 제형으로 제제화될 수 있고, 과립제, 정제, 환제, 현탁액, 에멀젼, 시럽제, 드링크제 등으로 제조될 수 있으며, 상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한이 없다.
상기 건강식품 조성물은 유효성분 이외에 식품학적으로 허용 가능한 첨가제를 포함할 수 있고, 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산화제 등이 포함되지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 및 개선용 식품 조성물을 제공한다.
상기 식품 조성물은 본 발명의 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 위생)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 추출물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품 조성물의 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 기능성 식품을 모두 포함한다.
상기 식품 조성물은 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.
상기 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 기능성 식품 100 중량부당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방형성 억제용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방형성 억제용 건강식품을 제공한다.
상기 갯대추나무는 잎, 줄기, 뿌리 및 열매로 구성된 군으로부터 선택된 어느 한 부위 이상일 수 있고, 잎 부위를 사용하는 것이 바람직하다.
상기 갯대추나무 추출물은 지방전구세포(3T3-L1)의 지방세포로의 분화를 억제하고, 특히 갯대추나무 부위별 추출물 중 잎이 현저히 지방세포로의 분화를 억제하며, 지방형성을 감소시키며, 이러한 지방형성 억제 작용은 지방전구세포를 손상시켜 나타난 것이 아님을 확인하여, 지방형성 억제용 활성성분으로 유용하게 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방축적에 기인한 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
아울러, 본 발명은 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방축적에 기인한 질환의 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.
상기 갯대추나무는 잎, 줄기, 뿌리 및 열매로 구성된 군으로부터 선택된 어느 한 부위 이상일 수 있고, 잎 부위를 사용하는 것이 바람직하다.
상기 지방축적에 기인한 질환으로는 비만, 당뇨병, 지방간 및 고지혈증으로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있다.
상기 갯대추나무 추출물은 지방전구세포(3T3-L1)의 지방세포로의 분화를 억제하고, 특히 갯대추나무 부위별 추출물 중 잎이 현저히 지방세포로의 분화를 억제하며, 지방형성을 감소시키며, 이러한 지방형성 억제 작용은 지방전구세포를 손상시켜 나타난 것이 아님을 확인하여, 지방축적에 의해 야기되는 질환의 예방 또는 치료용 활성성분으로 유용하게 사용할 수 있다.
이하, 하기 실시예 및 실험예를 통해 본 발명을 더욱 구체적으로 상술한다. 그러나 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하기 위한 것이며, 본 발명의 범주가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 갯대추나무 추출물의 제조
갯대추나무 추출물은 제주시 김녕연구실증단지 황근자생지에서 결실기 시기인 9월에 잎, 가지, 열매를 수집하였다. 수집된 각각의 시료는 암건조하여 분쇄하고 10 g당 70% 에탄올 200 ml를 넣고 암조건에서 48시간 교반하여 용출하였다. 용출된 추출물은 2 ~ 3회 반복 정치 추출하였고, 필터를 이용하여 여과 후에 감압 농축한 후 추출물의 무게를 측정하여 DMSO에 녹여 실험에 사용하였다.
< 실험예 1> 갯대추나무 추출물의 지방형성 억제능 확인
갯대추나무 추출물의 지방형성 억제능을 확인하기 위해, 3T3-L1(지방전구세포)를 96-well plate에 5 × 103/well로 하루 동안 접종한 후, 갯대추나무 각 부위별 추출물과 sigma aldrich사의 MDI(IBMX 0.5mM, Dexamethasone 1uM, Insulin 10 ug/ml)를 2일 동안 처리하였다. 2일 후 Insulin 1ug/ml과 갯대추나무 각 부위별 추출물을 재처리하고, 2일 마다 새로운 배양액으로 교체하였다. 배양액을 교체할 때마다 갯대추나무 각 부위별 추출물을 동시에 처리하였고 세포 내 지방형성은 9 ~ 12일 사이에 관찰되었다. 양성대조군의 지방형성이 관찰되었을 때 세포는 10% 포르말린으로 고정하고 60% 에탄올을 이용하여 세포를 세척하였다. 세척된 세포에 sigma Aldrich사의 Oil Red O 염색 용액을 활용하여 지방을 염색(붉은색)하고 60% 에탄올로 세척하였다. 광학현미경을 이용하여 사진을 찍어 비교하였다.
그 결과, 갯대추나무 각각의 추출물은 농도의존적으로 지방형성을 억제하는 것으로 확인되었다. 그 중 갯대추나무 잎 추출물의 처리군이 지방형성을 더욱더 우수하게 억제하는 것으로 나타났다. 특히, 갯대추나무 잎 추출물은 3 ug/ml에서부터 지방형성 억제효능이 나타나고 농도가 높아질수록 효과적으로 지방형성을 억제하였다(도 1).
< 실험예 2> 갯대추나무 잎 추출물의 지방형성 억제능 확인
갯대추나무 잎 추출물의 지방 형성 효과 더욱 뚜렷하게 검정하기 위해, 지방이 염색된 세포를 해리하여 측정하였다. 도 1과 같이 염색된 대조군과 갯대추나무 잎 추출물 처리군을 isopropanol로 완전히 해리하여 molecular device사의 ID3 microreader를 활용하여 흡광도 510 nm에서 측정하여 수치화하였다.
그 결과, 갯대추나무 잎 추출물은 뚜렷하게 처리 농도의존적으로 지방염색액의 수치를 감소시켰다. 이를 통해 갯대추나무 잎 추출물은 농도의존적으로 지방형성을 억제하는 것을 확인할 수 있었다(도 2).
< 실험예 3> 갯대추나무 잎 추출물의 세포독성 확인
갯대추나무 잎 추출물의 지방형성 억제능이 세포 독성에 의한 것인지 세포 독성을 확인하였다. 지방전구세포에 갯대추나무 잎 추출물을 1, 3, 10, 30 ug/ml 농도로 12일간 처리한 후 dojindo 사의 cell counting kit-8(CCK-8) 시약을 이용하는 방법으로 세포 생존력(%)을 측정하였다.
그 결과, 지방형성을 뚜렷하게 억제하였던 30 ug/ml의 농도에서도 지방전구세포에 독성이 거의 나타나지 않는 것을 확인하였다(도 3). 이는 도 1 및 도 2에서 나타난 갯대추나무 잎 추출물의 세포 지방형성 억제 효능은 세포의 수의 조절 때문이 아닌 지방형성 억제에 기인한 결과임이 확인되었다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (8)

  1. 갯대추나무(Paliurus ramosissimus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 갯대추나무는 잎, 줄기, 뿌리 및 열매로 구성된 군으로부터 선택된 어느 한 부위인 것을 특징으로 하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, C1 내지 C4 알코올 또는 이의 수용액으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 용매로 추출된 것을 특징으로 하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 지방전구세포(3T3-L1)의 지방세포로의 분화를 억제하고 지방형성을 억제하는 것을 특징으로 하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  5. 갯대추나무(Paliurus ramosissimus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 및 개선용 건강식품.
  6. 제5항에 있어서, 상기 갯대추나무는 잎, 줄기, 뿌리 및 열매로 구성된 군으로부터 선택된 어느 한 부위인 것을 특징으로 하는 비만 예방 및 개선용 건강식품.
  7. 제5항에 있어서, 상기 추출물은 물, C1 내지 C4 알코올 또는 이의 수용액으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 용매로 추출된 것을 특징으로 하는 비만 예방 및 개선용 건강식품.
  8. 제5항에 있어서, 상기 추출물은 지방전구세포(3T3-L1)의 지방세포로의 분화를 억제하고 지방형성을 억제하는 것을 특징으로 하는 비만 예방 및 개선용 건강식품.
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Journal of Plant Biotechnolohy. 47권 3호 254-259페이지 (2020.)

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