KR101820102B1 - 해동고 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물 - Google Patents
해동고 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 엄나무의 수피인 해동피를 이용해 제조한 해동고의 추출물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는 상기 해동고 추출물은 혈관 이완 효과를 가지므로, 이를 혈압 강하용 조성물로 이용 가능한 효과가 있다.
Description
본 발명은 해동고 추출물의 혈관 이완 효과에 관한 것이다.
엄나무(Kalopanax pictus)는 오갈피나무과로 넓은 잎을 지니는 다년성 낙엽교목으로 25 m까지 자라며 가지에는 가시가 있다. 잎은 오갈피나무과의 공통된 특징인 손바닥모양이며, 보통 5 ∼ 9갈래로 갈라져 있다. 꽃은 황록색으로 5 ∼ 6월경에 피며 산형화서로서 정생(頂生)한다. 과실은 핵과로 되어 있고 구형(球形)으로 10월에 흑색으로 익으며, 그 안에 1 ∼ 2개의 종자가 들어있다. 우리 나라 전지역에서 자라며 자생력이 강할 뿐만 아니라 그 발육도 대단히 빠르고 수근피와 잎까지도 유효성분이 거의 고르게 들어있는 것이 자원 생약으로서 유리하다. 엄나무의 수피는 해동피(海桐皮, Kalopanacis cortex)라 하여 널리 약용으로 이용되고 있다. 또한, 뿌리를 해동근(海桐根)이라 하며, 가지를 모아 해동목(海桐木)이라 하여 역시 약용으로 이용[Lee, E., et al., Kor. J. Pharmacogn. 26(2) 122-129. 1995]하고 있으나 식물 전체에서 성분들의 함량의 차이가 있다. 엄나무의 수피에는 탄닌(tannin)이 13 ∼ 30% 함유되어 있으며 수피와 중심부 목부에는 폴리아세틸렌(polyacetylene) 화합물이 들어 있으며 줄기와 잎에는 강심 배당체가 들어있다고 보고되고 있으며, 기타 플라보노이드(flavonoids), 코마린글리코사이드(coumarin glycoside), 소량의 알칼로이드(alkaloid)가 함유되어 있다고 알려져 있다. 국내 자원에 대해서 연구한 바에 따르면, 수피에서 헤데라게닌 헥사글리코사이드(hederagenin hexaglycoside) 즉 새로운 사포닌(Saponin) F가 분리되었고 헤데라게닌 펜타글리코사이드(hederagenin pentaglycoside)도 새로이 분리되었다. 이들은 헤데라게닌 비스데스모사이드(hederagenin bisdesmoside)여서 피부진균류에는 작용하지 않는다. 그러나, 이들 배당체 외에도 헤데라게닌 모노데스모사이드도 수종이 있는 것으로 추정되고 있는데, 이들 모노데스모사이드가 항피부진균작용이 있어서 실제 의약품으로 개발될 소지를 지니고 있다. 헤데라게닌 비스데스모사이드 및 모노데스모사이드는 소염(消炎)작용의 주체물질로 확인되고 있어 새로운 의약개발의 좋은 소재를 제공하는 우리 나라의 자원 생약이라 여겨지고 있다.
지금까지 엄나무에서 발견된 화합물로는 카페산(caffeic acid), 트리하이드록시플라본(4,5,7-trihydroxyflavanone), 페릭산(ferulic acid), 트리하이드럭시찰콘(2',4',4" -trihydroxy-chalcone), 코니페릴알콜(coniferyl alcohol), 시링긴(syringin), 갈로파낙스사포닌 A(kalopanaxsaponin A), 갈로파낙스사포닌 B(kalopanaxsaponin B), 갈로파낙스사포닌 C(kalopanaxsaponin C), 갈로파낙스사포닌 D(kalopanaxsaponin D), 갈로파낙스사포닌 E(kalopanaxsaponin E), 갈로파낙스사포닌 F(kalopanaxsaponin F), 갈로파낙스사포닌 G(kalopanaxsaponin G), 갈로파낙스사포닌 H(kalopanaxsaponin H), 갈로파낙스사포닌 I(kalopanaxsaponin I), 릴리오덴드린(liriodendrin), 갈로파낙신 A(kalopanaxins A), 갈로파낙신 B(kalopanaxins B), 갈로파낙신 C(kalopanaxins C), 갈로파낙신 D(kalopanaxins D), 페리카사포닌 P13(pericarsaponin P13), 헤데라사포닌 B(hederasaponin B), 프로토카테추익 산(ptotocatechuic acid), 코니페린(coniferin), 글루코시링산(glucosyringic acid) 및 크로로제닉산(chlorogenic acid)이 밝혀진 바 있다[Sano K., et al, Chem. Pharm. Bull. 39(4) 865-870, 1991]. 이들 성분은 주로 배당체화합물로서 이 중 갈로파낙스사포닌 A는 인간 병원성 곰팡이의 생육억제효과가 있으며[Kim D. W., et al, Arch. Pharm. Res. 21(6) 688-691, 1998] 갈로파낙스사포닌 B와 갈로파낙스사포닌 H는 항당뇨 효과가 있다고 보고된바 있다[Kim D. H., et al, Biol. Pharm. Bull. 21(4) 360-365, 1998].
경옥고란 정혈(精血)을 돕고 생명을 연장시키는 익수 보약의 일종으로서, 동의보감에 의하면 인체내 모든 기관의 기능을 유지 및 활성화시키는 데에 대단한 효과가 있다고 전해진다. 또한, 경옥고는 정혈제 및 정력제로서의 약효뿐만 아니라, 구체적으로는 오장이 허약하여 피로를 자주 느끼는 환자, 위장이 약하여 소화불량이 심한 환자, 장염 장경련이 자주 일어나 복통이 심한 환자, 날씨가 조금만 음냉하면 감기에 잘 걸리고 기관지 천식으로 숨이 차고 해수 기침이 심한 환자에게 효과적이며 특히, 심신이 허약한 노약자들이 장복할 경우 흰머리가 검어지고 치아가 새로 돋아나며 생명을 연장시키는 효과가 있는 것으로 기재되어 있다. 일반적으로 경옥고는 인삼, 백복령, 생지황, 꿀 등을 9증9포하여 만들어지며, 9증9포를 통해 인삼이 홍삼이 되어 유용한 약리성분이 변화한다. 그러나, 고가의 인삼을 사용하여 경옥고 또한 고가인 단점이 있다.
따라서, 본 발명의 발명자들은 엄나무의 수피인 해동피를 이용하여 경옥고를 제조하였으며, 이를 에탄올 또는 열수로 추출하여 혈관 이완 효과를 확인하였으므로, 이를 혈압 강하용 조성물로 이용할 수 있을 것으로 기대된다.
본 발명의 목적은 해동고 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 목적은 해동고 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 목적은 본 발명의 약학적 조성물을 포함하는 혈압 강하용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
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아울러, 본 발명의 목적은 해동고 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈압 강하 보조용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명은 해동고 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물을 제공한다
또한, 본 발명은 해동고 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명의 약학적 조성물을 포함하는 혈압 강하용 약학적 조성물을 제공한다.
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아울러, 본 발명은 해동고 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈압 강하 보조용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 해동피 경옥고인 해동고의 추출물은 혈관 이완 효과가 있으므로, 이를 혈압 강하용 약학적 조성물로 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 해동고를 제조하기 위해 이용한 경옥고기기 (특허등록 제0751388호)이다.
도 2는 본 발명의 해동고 제조방법에 의해 제조된 해동고를 나타낸 도이다.
도 3은 고농도 포타슘에 의해 유도된 혈관 수축에서의 해동고(해동피 경옥고) 알콜(에탄올) 추출물 또는 열수(물) 추출물의 영향을 나타낸 도이다.
도 4는 엔도델린에 의한 혈관 수축에서 1 nM의 해동고 알콜(에탄올) 추출물 또는 열수(물) 추출물 혈관 이완 효과를 확인한 도이다.
도 5는 엔도델린에 의한 혈관 수축에서 3 nM의 해동고 알콜(에탄올) 추출물 또는 열수(물) 추출물 혈관 이완 효과를 확인한 도이다.
도 6은 엔도델린에 의한 혈관 수축에서 1 nM 또는 3 nM의 해동고 알콜(에탄올) 추출물 또는 열수(물) 추출물 혈관 이완 효과를 확인한 도이다.
도 2는 본 발명의 해동고 제조방법에 의해 제조된 해동고를 나타낸 도이다.
도 3은 고농도 포타슘에 의해 유도된 혈관 수축에서의 해동고(해동피 경옥고) 알콜(에탄올) 추출물 또는 열수(물) 추출물의 영향을 나타낸 도이다.
도 4는 엔도델린에 의한 혈관 수축에서 1 nM의 해동고 알콜(에탄올) 추출물 또는 열수(물) 추출물 혈관 이완 효과를 확인한 도이다.
도 5는 엔도델린에 의한 혈관 수축에서 3 nM의 해동고 알콜(에탄올) 추출물 또는 열수(물) 추출물 혈관 이완 효과를 확인한 도이다.
도 6은 엔도델린에 의한 혈관 수축에서 1 nM 또는 3 nM의 해동고 알콜(에탄올) 추출물 또는 열수(물) 추출물 혈관 이완 효과를 확인한 도이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "엔도델린(endothelin)"은 혈관 내피세포(endothelial cell)에서 분비되는 가장 강력한 혈관수축 물질로, 폐동맥 고혈압(pulmonary hypertension), 당뇨, 염증성 질환의 표적 물질로 여겨지고 있다. 본 발명의 해동고 추출물은 엔도델린에 의한 혈관 수축에 특이적으로 억제 효과가 나타났다.
본 발명에서 사용되는 용어 "폐동맥 고혈압(pulmonary hypertension)" 또는 "폐고혈압"은 전신 고혈압 질환과 달리, 폐에 혈액을 공급하는 혈관에 문제가 생겨서 폐동맥의 혈압이 상승하는 질환으로, 평균 폐동맥압이 25㎜Hg 이상, 운동할 때에는 30㎜Hg 이상인 경우를 말한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "해동피 경옥고" 또는 "해동고"는 엄나무 수피를 9증9포(9번 찌고 9번 말리는 공정)을 거쳐 제조된 것을 말한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "경옥고"는 정(精)을 채우고 수(髓)를 보하며, 모발을 검게 하고 치아를 나게 하며, 만신(萬神)이 구족(俱足)하여 백병을 제거한다고 되어 있다. 전통적인 처방내용은 생지황취즙(生地黃取汁) 6.4kg(16근), 인삼을 가루로 하여 960g, 백복령말(白茯?末) 1,920g에 백밀련(白蜜煉)을 고루 섞어서 사기항아리에 넣고 유지(油紙) 5겹과 두꺼운 천 1겹으로 항아리의 아가리를 꼭 봉한 다음, 구리냄비 속에 넣어 수중(水中)에 매달아 놓고 항아리의 아가리는 물 위로 나오게 하고 뽕나물 불로 3일 동안 끓인 것을 말한다 (두산백과 참조). 본 발명에서는 인삼이 아닌 해동피를 사용하여 해동고를 제조하였다.
구체적으로 본 발명에 따른 해동고는 해동피, 구기자, 건지황, 백복령 및 꿀을 혼합하여 97 내지 100 ℃의 증기로 찌고 가열을 중단하여 건조시키는 과정을 9번 반복하는 구증구포 과정으로 제조된다.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜 또는 위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 이는 개체의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
상기 개체는 척추동물이고 바람직하게는 포유동물이며, 그보다 바람직하게는 쥐, 토끼, 기니아피크, 햄스터, 개, 고양이와 같은 실험동물이고, 가장 바람직하게는 침팬지, 고릴라와 같은 유인원류 동물이다.
본 발명은 해동피 1 내지 10 중량%, 구기자 1 내지 10 중량%, 건지황 50.7 중량%, 백복령 9.5 중량% 및 꿀 25 내지 35 중량%로 이루어진 혼합물을 97 내지 100 ℃의 증기로 찌고 가열을 중단하여 건조시키는 과정을 9번 반복하는 구증구포 과정으로 제조한 해동고의 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물
상기 해동고 추출물은 물, C1 내지 C2 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 사용하여 추출되는 것이 바람직하며, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
경옥고 제조방법인 9증9포에 의해 원재료의 성분이 변하는 것은 통상의 기술분야에서 자명하며, 그 예로, 경옥고 제조방법에 의한 인삼 및 홍삼의 차이를 들 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다.
비수성 용제, 현탁 용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로 허용되는 것이면 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 염산, 황산, 질산, 인산, 불화수소산, 브롬화수소산, 포름산 아세트산, 타르타르산, 젖산, 시트르산, 푸마르산, 말레산, 숙신산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 톨루엔술폰산, 나프탈렌술폰산 등을 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 연고, 크림 등의 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제형화하여 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은
1) 건조된 해동피, 백복령, 구기자 및 건지황을 분쇄하는 단계;
2) 꿀을 가열하여 발생한 침전물을 제거하는 단계;
3) 상기 단계 1)의 분쇄된 시료들을 상기 단계 2)의 가열된 꿀에 혼합하는 단계;
4) 상기 단계 3)의 혼합물을 경옥고기기에 넣고 97 내지 100 ℃의 증기로 찌고 가열을 중단하는 구증구포를 30 내지 60시간 동안 수행하여 해동고를 제조하는 단계; 및
5) 에탄올 또는 열수를 이용하여 해동고를 추출하는 단계를 포함하는 해동고 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물의 제조 방법을 제공한다.
상기 해동피, 백복령, 구기자, 건지황 및 꿀은 5 중량%, 9.5 중량%, 3 중량%, 50.7 중량% 및 32 중량%의 비율로 혼합되는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 해동고 추출물을 함유하는 혈압 강하용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 혈압 강하용 약학적 조성물은 엔도델린에 의한 혈관 수축을 이완시키는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 해동고 추출물은 엔도델린에 의해 유도된 혈관 수축을 억제하여 혈관을 이완시키므로, 엔도델린 억제 효과를 가지는 것으로 유추할 수 있다. 따라서, 본 발명의 혈압 강하용 약학적 조성물이 엔도델린에 의한 폐동맥 고혈압의 치료 또는 예방용으로 이용될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
상기 폐동맥 고혈압은 포타슘의 농도가 높아짐에 따라 유도되는 탈분극에 의한 전신 고혈압과 상이할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
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아울러, 본 발명은
해동고 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈압 강하 보조용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 해동피를 이용하여 경옥고를 제조하였으며, 제조한 해동고를 에탄올 또는 열수로 추출한 추출물이 일반적으로 전신 고혈압에 관련된 고농도 포타슘에 관련된 혈관 수축에서는 혈관 이완 효과를 가지지 않았으나, 폐동맥 고혈압, 당뇨, 염증 작용과 관련된 엔도델린에 의한 혈관 수축에서 특이적으로 혈관 이완 효과를 보여 이를 혈압 강하 조성물로 이용할 수 있음을 확인하였다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 해동피를 이용하여 경옥고를 제조하였으며, 제조한 해동고를 에탄올 또는 열수로 추출한 추출물이 일반적으로 전신 고혈압에 관련된 고농도 포타슘에 관련된 혈관 수축에서는 혈관 이완 효과를 가지지 않았으나, 폐동맥 고혈압, 당뇨, 염증 작용과 관련된 엔도델린에 의한 혈관 수축에서 특이적으로 혈관 이완 효과를 보여 이를 혈압 강하 조성물로 이용할 수 있음을 확인하였다.
따라서, 본 발명의 해동고 추출물은 혈압 강하용 약학적 조성물로 이용할 수 있다.
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이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 및 제조예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예 및 제조예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예 및 제조예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예 및 제조예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
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실시예
1> 해동고 제조
건조된 해동피 9g, 구기자 6g, 건지황 96g 및 백복령 18g (제천한방약초)을 모두 분쇄하여 곱게 분말을 만들었다. 꿀 60g을 약한 불에 끓이고, 끓이면서 발생한 건더기는 건져냈다. 끓인 꿀에 건재료들을 분쇄하여 만든 분말을 넣고 잘 혼합하여 섞고 비이커 안에 넣었다. 도 1의 경옥고기기 (특허등록 제0751388호)의 탕기안에 물을 1200cc 부은 뒤 채반을 올려놓고 시료들이 혼합되어 들어있는 비이커를 채반 위에 넣었다. 비이커를 유산지로 잘 밀봉한 후, 경옥고기기의 속뚜껑을 덮고 응축 도자기 뚜껑을 덮었다. 경옥고기기에서 45시간 동안 9증 9포를 수행하였다.
그 결과, 해동피를 이용한 경옥고가 제조되었다 (도 2).
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실시예
2> 해동고 추출물 제조
상기 <실시예 1>에서 제조한 해동고를 에탄올을 이용하여 8시간 동안 2회 추출하여 에탄올 추출물을 제조한 뒤 이를 동결건조하였다.
아울러, 물을 이용하여 상기와 같이 해동고 열수 추출물을 제조한 뒤 동결건조하였다.
<실험예 1> 해동고 추출물의 혈관 이완효과 확인
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<1-1> 혈관 분리
6주령의 흰토끼(뉴질랜드 화이트래빗)를 오리엔트바이오로부터 구입하여 동물실에서 1주간 적응시켰다. 동물 동맥혈관 적출 후 ex vivo 실험은 관동대학교 의과대학 실험동물위원회와 동물윤리위원회의 승인을 받아 진행하였다. 동물사육은 day night 사이클에 맞추어 사육하였다. 사육한 2 내지 2.5 kg의 흰 토끼를 동물 마취제인 게로란(enflurane)으로 흡입 마취시킨 후 넓적다리 동맥(femoral artery)을 절단하여 혈액을 제거시키고, 경동맥과 두개골을 절개한 상태에서 뇌 바닥의 기저동맥을 적출하였다. 적출한 동맥을 95% O2 및 5% CO2로 포화된 Ca2 +-free Tyrode 용액 내에서 주위의 결체조직(connective tissue)과 지방질(fat)을 제거하였다. 혈관의 분리에 사용된 Ca2 +-free Tyrode 용액(mM)은 137 NaCl, 5.4 KCl, 1 MgCl2, 23.8 NaHCO3, 5.5 glucose로 구성되어 있으며, sucrose를 이용하여 삼투압을 300 mOsm/kg H2O로 맞추어 사용하였다.
<1-2>
고농도 포타슘에 의한 탈분극 유도 혈관 수축에 대한 효과 확인
칼슘통로 활성 이상으로 발병하는 고혈압 및 혈액순환 장애의 인공 조건으로 사용되는 고농도 포타슘을 이용하여 탈분극 자극을 유발함으로써 혈관 평활근 세포막에 존재하는 L-형 칼슘통로를 열어 혈관수축을 유발한 혈관에서의 해동고 에탄올 추출물 또는 열수 추출물의 혈관 이완의 효능을 혈관 장력을 측정하여 확인하였다.
구체적으로, 상기 실험예 <1-1>에서 분리한 기저동맥을 5 mm 크기로 절단한 후 크롬재질의 고리를 이용하여 장력전도기(force transducer)의 끝과 37℃로 유지되는 organ bath 하부의 걸쇠 고리에 고정한 후 0.6 g의 장력을 미리 주어 최대 수축력이 측정되도록 유도하였다. 본 발명에서는 양 끝이 고정된 상태에서의 수축력을 측정하는 방식으로 organ bath 내부는 95% 산소와 5% 이산화탄소로 연속해서 포화시킨 상태에서 등척성 수축(isometric contraction)을 측정하였다. 정상 Tyrode 용액(137 NaCl, 5.4 KCl, 1.5 CaCl2, 1 MgCl2, 23.8 NaHCO3 및 5.5 glucose in mM)에 있는 혈관을 고농도 포타슘(50 mM) 이온이 포함된 Tyrode 용액(92.4 NaCl, 50 KCl, 1.5 CaCl2, 1 MgCl2, 23.8 NaHCO3 및 5.5 glucose in mM)으로 대체함으로써 넌스트 방정식(Nernst equation)에 따라 막전압(membrane potential)이 -20 mV 까지 탈분극 되었으며, 이로 인해 이온이 통과하는 통로가 닫혀져 불활성화되어 있는 L-type 칼슘채널을 활성화시켜 혈관 평활근 세포 내 칼슘 농도를 증가시켜 혈관의 수축을 유도하였다. 상기와 같은 수축 및 이완을 3회 반복하여 실행하였다. 기저동맥을 고농도 포타슘 이온이 포함된 Tyrode 용액으로 20분 동안 수축을 안정화시킨 후 본 발명의 해동고 에탄올 추출물 또는 열수 추출물을 약 20분 동안 농도별로 처리한 뒤 혈관의 이완 효과를 확인하였다. 삼투압은 모두 300 mOsm/kg H2O로 유지하였고, 95% 산소와 5% 이산화탄소로 포화시켜 pH를 7.4로 맞추어 사용하였다. 실험치의 값은 mean ± S.D. 로 나타냈으며 분석은 Student’s t-test로 유의성을 나타내었다.
그 결과, 해동고 에탄올 추출물 및 열수 추출물 모두 전신 고혈압과 관련된 고농도 포타슘 유도 혈관 수축에 대해서는 1 mg/ml의 농도까지 혈관 이완 효능이 없는 것으로 확인되었다 (표 1 및 도 3).
| Vasodilatation assay | ||||
| sample | Vasodilatation % at each concentration (㎍/ml) | |||
| 30 | 100 | 300 | 1000 | |
| 해동고 경옥고 에탄올 추출물 | 0 | 0 | ||
| 해동고 경옥고 열수 추출물 | 0 | 0 | ||
<1-3> 엔도델린에 의한 혈관 수축에 대한 효과 확인
폐동맥 고혈압과 관련된 혈관 내피세포(endothelial cell)에서 분비되는 가장 강력한 혈관수축 물질인 엔도델린(endothelin)에 의한 혈관 수축에서의 해동고 에탄올 추출물 또는 열수 추출물의 혈관 이완의 효능을 혈관 장력을 측정하여 확인하였다.
구체적으로, 상기 실험예 <1-1>에서 분리한 기저동맥을 5 mm 크기로 절단한 후 크롬재질의 고리를 이용하여 장력전도기(force transducer)의 끝과 37℃로 유지되는 organ bath 하부의 걸쇠 고리에 고정한 후 0.6 g의 장력을 미리 주어 최대 수축력이 측정되도록 유도하였다. 본 발명에서는 양 끝이 고정된 상태에서의 수축력을 측정하는 방식으로 organ bath 내부는 95% 산소와 5% 이산화탄소로 연속해서 포화시킨 상태에서 등척성 수축(isometric contraction)을 측정하였다. 정상 Tyrode 용액(137 NaCl, 5.4 KCl, 1.5 CaCl2, 1 MgCl2, 23.8 NaHCO3 및 5.5 glucose in mM)에 있는 혈관에 엔도델린 3 nM을 처리하여 혈관의 수축을 유도하였다. 상기와 같은 수축 및 이완을 3회 반복하여 실행하였다. 그 후, 기저동맥을 고농도 포타슘 이온이 포함된 Tyrode 용액으로 20분 동안 수축을 안정화시킨 후 본 발명의 해동고 에탄올 추출물 또는 열수 추출물을 약 20분 동안 농도별로 처리한 뒤 혈관의 이완 효과를 확인하였다. 삼투압은 모두 300 mOsm/kg H2O로 유지하였고, 95% 산소와 5% 이산화탄소로 포화시켜 pH를 7.4로 맞추어 사용하였다. 실험치의 값은 mean ± S.D. 로 나타냈으며 분석은 Student’s t-test로 유의성을 나타내었다.
그 결과, 해동고 에탄올 추출물 및 열수 추출물 모두가 엔도델린에 의해 유도된 혈관 수축을 1 mg/ml 농도 이상에서 혈관을 이완시켰으며 (도 4 및 표 2), 특히, 3 mg/ml(3000 ㎍/ml)의 농도에서는 80% 이상 혈관을 이완시키는 것을 확인하였다 (도 5). 아울러, 상기 두 추출물 모두 농도 의존적으로 엔도델린에 의해 수축된 혈관을 이완시키는 것을 확인하였다 (도 6).
| Vasodilatation assay | |||||
| sample | Vasodilatation % at each concentration (㎍/ml) |
||||
| 3 | 10 | 30 | 1000 | 3000 | |
| 해동고 경옥고 에탄올 추출물 | - | - | - | 26.5±4.4 | 80.9±6.7 |
| 해동고 경옥고 열수 추출물 | - | - | - | 28.3±7.2 | 84.6±5.8 |
이하, 상기한 실시예 및 실험예의 결과를 근거로 하여, 여러 제제예 및 제조예를 조성하여 제시한다. 그러나, 이들 제제예 및 제조예는 본 발명을 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 제제가 이들 제제예 및 제조예에만 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명한 것이다.
<
제제예
1> 정제의 제조
본 발명의 해동고 추출물 1 mg
옥수수 전분 68 mg
락토오즈 90 mg
미세결정질 셀룰로즈 40 mg
마그네슘 스테아레이트 2 mg
통상적인 정제의 제조 방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 첨가하여 균일하게 혼합하고, 교반한 후, 과립화하였다. 건조 후 타정기를 사용하여 1 정당 유효 성분인 본 발명의 해동고 추출물이 1 mg씩 포함되어 있는 목적하는 정제를 제조하였다.
<
제제예
2> 캅셀제의 제조
본 발명의 해동고 추출물 1 mg
옥수수 전분 68 mg
락토오즈 90 mg
미세결정질 셀룰로즈 40 mg
마그네슘 스테아레이트 2 mg
통상적인 캅셀제의 제조 방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 첨가하여 균일하게 혼합한 후, 1 캅셀 당 1 mg의 본 발명의 해동고 추출물이 포함되도록 적절한 크기의 젤라틴 캅셀에 충진하여 목적하는 캅셀제를 제조하였다.
<
제제예
3>
산제의
제조
본 발명의 해동고 추출물 1 mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
유지 5 mg
통상적인 산제의 제조 방법에 따라, 상기 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
<
제제예
4>
액제의
제조
본 발명의 해동고 추출물 1 mg
이성화당 10 g
만니톨 5 g
비타민 C 50 mg
세린 50 mg
유지 적당량
정제수 잔량
통상적인 액제의 제조 방법에 따라, 상기 성분들을 혼합하여 액제를 제조한다.
<
제조예
1> 식품의 제조
<1-1> 밀가루 식품의 제조
밀가루 100 중량부에 대해 본 발명의 해동고 추출물 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.
<1-2>
스프
및 육즙(
gravies
)의 제조
스프 및 육즙 100 중량부에 대해 본 발명의 해동고 추출물 0.1~5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 스프 및 육즙을 제조하였다.
<1-3> 그라운드
비프(ground beef)의
제조
그라운드 비프 100 중량부에 대해 본 발명의 해동고 추출물 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
<1-4> 유제품(
dairy
products
)의 제조
우유 100 중량부에 대해 본 발명의 해동고 추출물 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
<1-5>
선식의
제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 해동고 추출물 분말을 준비하였다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 본 발명의 해동고 추출물를 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),
종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),
본 발명의 해동고 추출물(3 중량부),
영지(0.5 중량부),
지황(0.5 중량부)
<
제조예
2> 음료의 제조
<2-1>
건강음료의
제조
액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명의 해동고 추출물 5 g을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.
<2-2> 야채 주스의 제조
본 발명의 해동고 추출물 5 g을 토마토 또는 당근 주스 1,000 ㎖에 가하여 야채 주스를 제조하였다.
<2-3> 과일 주스의 제조
본 발명의 해동고 추출물 1 g을 사과 또는 포도 주스 1,000 ㎖ 에 가하여 과일 주스를 제조하였다.
Claims (11)
- 해동피 1 내지 10 중량%, 구기자 1 내지 10 중량%, 건지황 50.7 중량%, 백복령 9.5 중량% 및 꿀 25 내지 35 중량%로 이루어진 혼합물을 97 내지 100 ℃의 증기로 찌고 가열을 중단하여 건조시키는 과정을 9번 반복하여 얻은 상기 혼합물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈압 강하용 약학적 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 혼합물의 추출은 물, C1 내지 C2 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 사용하여 추출되는 것을 특징으로 하는 혈압 강하용 약학적 조성물.
- 제 2항에 있어서, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 하는 혈압 강하용 약학적 조성물.
- 1) 건조된 해동피, 백복령, 구기자 및 건지황을 분쇄하는 단계;
2) 꿀을 가열하여 발생한 침전물을 제거하는 단계;
3) 상기 단계 1)의 분쇄된 시료들을 상기 단계 2)의 가열된 꿀에 혼합하는 단계;
4) 상기 단계 3)의 혼합물을 경옥고 기기에 넣고 97 내지 100 ℃의 증기로 찌고 가열을 중단하여 건조시키는 과정을 9번 반복하는 구증구포를 30 내지 60시간 동안 수행하는 단계; 및
5) 상기 4) 단계에서 구증구포된 상기 혼합물을 에탄올 또는 열수를 이용하여 추출하는 단계;
를 포함하는 혈압 강하용 약학적 조성물의 제조 방법.
- 삭제
- 제 1항에 있어서, 상기 혈압 강하용 약학적 조성물은 엔도델린에 의한 혈관 수축을 이완시키는 것을 특징으로 하는 혈압 강하용 약학적 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 혈압 강하용 약학적 조성물이 엔도델린에 의한 폐동맥 고혈압의 치료 또는 예방용인 것을 특징으로 하는 혈압 강하용 약학적 조성물.
- 해동피 1 내지 10 중량%, 구기자 1 내지 10 중량%, 건지황 50.7 중량%, 백복령 9.5 중량% 및 꿀 25 내지 35 중량%로 이루어진 혼합물을 97 내지 100 ℃의 증기로 찌고 가열을 중단하여 건조시키는 과정을 9번 반복하여 얻은 상기 혼합물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈압 강하 보조용 식품 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
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|---|
| 경희한의대논문집, 16, 1993, pp.31-52* |
| 동의생리병리학회지, 17(4), 2003, pp.1101-1111* |
| 생약학회지, 25(1), 1994, pp.51-58* |
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