KR101954696B1 - 층층나무속 추출물을 포함하는 골질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 장미목 식물 추출물, 층층나무속 식물 추출물, 모시풀속 식물 추출물 및 서어나무속 식물 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 천연 추출물을 이용함으로써 치료 부작용을 현저히 감소시킨 골질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 및 골질환의 개선 또는 완화용 식품 조성물에 관한 것으로, 상기 조성물을 이용하면 파골세포로의 분화를 효과적으로 억제함으로써 골질환을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있다.

Description

층층나무속 추출물을 포함하는 골질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물{A PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATING OR PREVEBTING BON DISEASE}

본 발명은 (a) 바위말발도리, 매화말발도리, 개살구, 벚나무, 복사나무, 산벚나무, 살구나무, 섬개벚나무, 섬벚나무, 올벚나무, 및 왕벚나무로 이루어진 장미목(Rosales) 식물군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 식물 추출물; (b) 곰의말채, 말채나무, 층층나무, 흰말채나무, 산딸나무 및 산수유로 이루어진 층층나무속(Cornus) 식물군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 식물 추출물; (c) 개모시풀 및 거북꼬리로 이루어진 모시풀속(Boehmeria) 식물군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 식물 추출물; 및 (d) 개서어나무 및 서어나무로 이루어진 서어나무속(Carpinus) 식물군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 식물 추출물;로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 골질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

다핵 대형 세포인 파골세포(osteoclast)는 골(bone) 조직의 파괴 및 흡수의 기능을 가지고 있어, 골 기질을 파괴하고 뼈의 미네랄을 분해하는 역할을 담당하는 것으로 알려져 있다. 활성화된 파골세포는 세 개 이상의 핵을 가지고 있는데, 파골 전구세포(precursor cell)로부터 성숙한 다핵의 파골세포로 분화되기 위해서는 M-CSF(macrophage colony stimulating factor)와 RANKL(receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand)와 같은 다양한 호르몬들과 인자들을 필요로 한다(Mojtaba A., et al., Cancer Biol Ther., 7:1,3-9;1 (2008)). 상기 파골세포는 골 내에서 조골세포(osteoblast)와의 불균형(imbalance)으로 인하여 비정상적인 골 조직의 파괴 및 흡수를 유발하고 이로 인하여, 뼈(bone)의 질량 및 골밀도가 감소하는 골다공증(osteoporosis), 뼈에서 석회가 탈실되는 골연화증(osteomalacia), 골수가 섬유화되는 섬유성골염(fibrous ostitis), 치조골이 소실되는 치주염(periodontitis), 관절의 파괴 및 변형을 초래하는 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis) 등의 원인이 되는 것으로 알려져 있다.

상기 질병들의 원인 기작은 명확하게 규명된 것은 아니지만, 파골세포와 조골세포와의 불균형은 암 세포의 골 전이, 내분비 장애, 부갑상선 기능 항진증 등 다양한 원인에 의해 유발될 수 있으므로, 상기 다양한 질병들의 예방 또는 치료를 위하여 파골세포에 의한 골 조직의 파괴 및 흡수를 효과적으로 억제할 수 있는 다양한 약물들과 치료법들에 대하여 활발히 연구되고 있다. 현재 골다공증과 같은 파골세포에 의한 골 손상 치료에는 포사맥스(Fosamax, 성분명: aledronate), 악토넬(Actonel, 성분명: risedronate), 조메타(Zometa, 성분명: zoledronate) 등과 같은 비스포스포네이트(bisphosphonate) 계열의 치료제가 널리 이용되고 있으나, 상기 제제들은 대부분 파골세포의 사멸을 유도해 뼈의 손실을 지연시키거나 억제하는 작용을 하므로 턱뼈 괴사(osteonecrosis), 중증 심방 세동, 뼈 또는 관절의 무력화, 근골격의 통증 등 다양한 부작용을 야기시킨다는 문제점이 있다(Coleman RE., Br J Cancer, 98:1736-1740 (2008)).

한편, 유방암, 전립선암 등에서 뼈로 전이된 암세포에 의해서도 파골세포의 형성이 촉진되어 심각한 골질환들이 발생하는데 이를 치료하기 위한 약물은 개발되어 있지 않은 실정이다.

따라서, 기존의 비스포스포네이트 계열의 단점을 보완할 수 있는 약재들의 개발이 요구되고 있는 실정이다.

본 발명의 일 목적은 기존의 비스포스포네이트 계열의 단점을 보완하고자, 장미목 식물 추출물, 층층나무속 식물 추출물, 모시풀속 식물 추출물 및 서어나무속 식물 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 천연 추출물을 이용함으로써 치료 부작용을 현저히 감소시킨 골질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

본 발명자들은 연구 결과, 장미목 식물 추출물, 층층나무속 식물 추출물, 모시풀속 식물 추출물 및 서어나무속 식물 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 사용하는 경우, 파골세포의 형성을 효과적으로 억제하여 골질환을 예방 또는 치료할 수 있음을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.

상기 “파골세포”란, 골 기질을 파괴하고 뼈의 미네랄을 분해하는 역할을 담당하여 조직의 파괴 및 흡수 기능을 수행하는 세포를 의미한다. 상기 파골세포는 골 내에서 조골세포와의 불균형이 발생하는 경우 골질환을 유발할 수 있는 것으로 보고되어 있다. 이에, 본 발명의 목적상 상기 골질환은 골다공증, 골연화증, 구루병, 골감소증, 섬유성 골염, 무형성 골질환, 골형성 부전증, 골위축, 파제트병(paget's disease), 치주염(periodontitis), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 대사성 골질환 및 암세포의 골전이에 의해 유발되는 뼈의 손상으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있으나, 파골세포의 조직 파괴 및 골 흡수에 의해 유발될 수 있는 질환이라면 이에 제한되지 아니한다.

본 발명의 일 구현 예에서는 본 발명은 (a) 바위말발도리, 매화말발도리, 개살구, 벚나무, 복사나무, 산벚나무, 살구나무, 섬개벚나무, 섬벚나무, 올벚나무, 및 왕벚나무로 이루어진 장미목(Rosales) 식물군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 식물 추출물; (b) 곰의말채, 말채나무, 층층나무, 흰말채나무, 산딸나무 및 산수유로 이루어진 층층나무속(Cornus) 식물군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 식물 추출물; (c) 개모시풀 및 거북꼬리로 이루어진 모시풀속(Boehmeria) 식물군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 식물 추출물; 및 (d) 개서어나무 및 서어나무로 이루어진 서어나무속(Carpinus) 식물군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 식물 추출물;로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 골질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

여기서 상기 바위말발도리(나무)는 낙엽성 관목으로 종자 번식을 하는 식물 중 하나로, 산기슭의 바위틈에서 자라는 것으로 알려져 있다. 높이 1m 정도이고 작은 가지에 털이 있으며 묵은 가지는 회갈색이며, 마주나는 잎은 길이 3~6cm 정도의 난형이고 가장자리에 잔 톱니가 있다. 4~5월에 개화하며, 꽃은 백색이다. 관상용으로 심으며 밀원용으로 사용될 수 있다. 바람직하게는 상기 바위말발도리나무의 잎 또는 꽃 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 바위말발도리나무의 학명은 Deutzia grandiflora var. baroniana Diels일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 매화말발도리(나무)는 댕강목이라고도 하며, 산지의 바위틈에서 자란다. 높이 약 1m로, 나무껍질은 잿빛이고 불규칙하게 벗겨진다. 잎은 마주나고 타원형이거나 넓은 바소꼴이며 가장자리에 잔 톱니가 있고 양면에 길이는 4~6cm인 4∼6개로 갈라진 성모(星毛)가 난다. 꽃은 5월에 피고 흰색이며 묵은 가지에 1∼3개씩 달리는데, 꽃 밑에 1∼2개의 잎이 달리기도 한다. 꽃받침통은 씨방과 붙어 있고 작은꽃자루와 더불어 성모가 빽빽이 난다. 바람직하게는 상기 매화말발도리 잎 또는 꽃 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 매화말발도리나무의 학명은 Deutzia uniflora Shirai일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 개살구(나무)는 산기슭의 양지쪽이나 마을 부근에서 자라며 높이는 5∼10m이다. 나무껍질은 코르크가 발달하였으며 작은 가지는 밤색을 띠고, 잎은 어긋나고 넓은 달걀 모양으로 끝이 뾰족하며 불규칙한 겹톱니가 있다. 길이는 5∼12cm이며 잎 뒷면은 녹색이고 잎자루는 길이 2∼3cm이다. 꽃은 연한 붉은색 또는 흰색으로 4∼5월에 잎보다 먼저 1개씩 피며, 작은 꽃대는 길이 8mm 정도이고 꽃받침조각은 타원형이며 줄 모양의 톱니가 있다. 꽃잎은 둥근 모양이고 길이 10∼12mm이다. 암술은 길이 15mm 정도로서 수술과 비슷하고 암술머리는 술잔 모양이다. 씨방에는 털이 난다. 열매는 핵과로서 달걀 모양이며 떫은 맛이 나고 7~8월에 노란색으로 익는다. 바람직하게는 상기 개살구의 잎, 줄기, 수피, 열매, 및 뿌리 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 개살구의 학명은 Prunus mandshurica var. glabra일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 벚나무는 낙엽활엽교목으로 원산지는 한국이고 일본, 중국에 분포하고 산지에서 서식한다. 높이는 10~20m이고 짙은 갈색으로 옆으로 벗겨진다. 잎은 어긋나며 길이 6~12cm의 달걀모양 또는 달걀형 바소모양으로 가장자리에 작은 거치가 있으며 잎 뒷면은 회색빛을 띤 녹색이다. 꽃은 4~5월에 연분홍색 또는 흰색으로 산방 또는 산형화서로 피며 꽃자루에 포가 있고 꽃받침통과 암술대에 털이 없다. 열매는 핵과로 6~7월에 익으며 둥근 모양이다. 바람직하게는 상기 벚나무의 잎, 줄기, 수피, 열매, 및 뿌리 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 벚나무의 학명은 Prunus serrulata var. spontanea (Maxim.) E.H.Wilson일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 복사나무(복숭아나무)는 장미과에 속하는 교목성 낙엽과수로, 높이는 6m 정도이고 작은 가지에 털이 없으며 동아(冬芽)에 털이 있다. 잎은 어긋나고 피침형, 도피침형, 타원상 피침형이며, 길이 8~15㎝, 너비 1.5~3.5㎝로서 양면에 털이 없고 가장자리에 둔한 잔 톱니가 있다. 꽃은 연한 홍색으로 4~5월에 잎보다 먼저 피고 열매는 핵과(核果：단단한 껍질이 씨앗을 감싸고 있는 열매)로서 난상 원형인데 8~9월에 익는다. 바람직하게는 상기 복사나무의 잎, 줄기, 수피, 열매, 및 뿌리 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 복사나무의 학명은 Prunus persica (L.) BATSCH일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 산벚나무는 전국의 높은 산 숲 속에 자라는 낙엽활엽 큰키나무로 줄기는 높이 20m에 달한다. 줄기껍질은 짙은 자갈색이며, 옆으로 벗겨지고 피목이 옆으로 길게 나타난다. 잎은 어긋나며 타원형 또는 도란형이다. 잎자루는 털이 없고 적자색으로 위쪽에 1쌍의 꿀샘이 있다. 꽃은 4-5월에 흰색 또는 연홍색으로 피며, 2-3개가 모여 산형화서를 이룬다. 꽃잎은 둥글고 향기가 없다. 꽃자루, 수술대, 암술대, 씨방에 털이 없다. 열매는 핵과로 5-6월에 흑자색으로 익는다. 세계적으로 일본, 러시아 사할린 지역에 분포한다. 바람직하게는 상기 산벚나무의 잎, 줄기, 수피, 열매, 및 뿌리 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 산벚나무의 학명은 Prunus sargentii Rehder일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 살구나무는 집 근처에 심어 기르는 낙엽 작은키나무로, 높이는 5m 정도이며 수피는 붉은빛을 띠며 햇 가지는 적갈색이다. 잎은 어긋나며 넓은 타원형 또는 넓은 난형이다. 꽃은 4월에 연한 홍색으로 핀다. 꽃받침잎은 5장이며 홍자색이고 뒤로 젖혀진다. 꽃잎은 5장이고 둥근 모양이다. 열매는 둥근 핵과이고 지름 3cm쯤이며, 7월에 노란색 또는 붉은빛을 띠는 노란색으로 익는다. 우리나라 중부 이남 지역에 식재한다. 중국 원산으로 관상용으로 심으며, 열매는 식용 또는 약용, 목재는 기구재로 이용한다. 바람직하게는 상기 살구나무의 잎, 줄기, 수피, 열매, 및 뿌리 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 살구나무의 학명은 Prunus armeniaca var. ansu Maxim.일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 섬개벚나무는 숲속에서 자라며, 높이는 10m 정도이며 나무껍질은 회갈색이다. 잎은 어긋나고 긴 타원형으로 양 끝이 좁으며 가장자리에 잔 톱니가 있고 뒷면 맥액(脈腋)에 털이 있다. 잎자루는 8~12cm이다. 꽃은 5월에 피고 백색이며 묵은가지에서 자란 총상꽃차례에 달린다. 꽃받침조각은 짧고 끝이 둔하며 치아 모양의 톱니가 있다. 꽃잎은 5장, 타원형이고 수술보다 짧으며 씨방에 털이 없다. 열매는 핵과로 둥글고 7월에 흑자색으로 익으며 꽃받침과 수술이 그대로 남아 있다. 한국(제주), 일본 등지에 널리 분포한다. 바람직하게는 상기 섬개벚나무의 잎, 줄기, 수피, 열매, 및 뿌리 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 섬개벚나무의 학명은 Prunus buergeriana Miq.일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 섬벚나무는 울릉도 특산식물의 하나이며, 높이는 20m에 달한다. 나무껍질은 회갈색이며 작은 나뭇가지는 회갈색 또는 회자색이며 털이 없다. 겨울눈은 긴 타원형이며 털이 없다. 잎은 어긋나고 타원형 또는 달걀모양이며 끝이 길게 뾰족하고 아심장저(亞心臟底) 또는 원저(圓底)이고 길이 8~15㎝, 너비 4~9㎝로서 양면에 털이 없다. 표면은 녹색, 뒷면은 회록색이며 톱니는 털같이 뾰족하다. 잎자루는 길이 2.5~3㎝로서 털이 없고 황록색이며 끝에 밀선(蜜腺)이 있다. 꽃은 4월에 잎보다 늦게 피고 지름 2.5㎝로서 처음에는 희지만 떨어질 무렵에는 홍색으로 되고 향기가 있다. 꽃자루가 없고 꽃은 2~5개가 산형(傘形)으로 나열한다. 작은 꽃자루는 길이 15~18㎜로서 털이 없다. 꽃받침잎은 뒤로 젖혀지고 톱니가 없으며 길이 5㎜ 정도로서 피침상(披針狀) 3각형이다. 꽃받침통은 길이 6~7㎜이다. 꽃잎은 도란형(倒卵形) 또는 넓은 타원형이며 길이 12~13㎜로서 끝이 파졌다. 수술은 30~40개이고 길이 5~10㎜이며 암술은 털이 없고 길이 1㎝ 정도이다. 열매는 둥글거나 달걀모양이며 끝이 뾰족하거나 둥글고 길이 1~2㎝, 너비 7㎜로서 6월에 자적색으로 익는다. 소과경은 튼튼하고 길이 2㎝, 지름 2㎜ 정도이다. 바람직하게는 상기 섬벚나무의 잎, 줄기, 수피, 열매, 및 뿌리 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 섬벚나무의 학명은 Prunus takesimensis NAKAI.일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 올벚나무는 높이 10m에 달하고 나무껍질은 회갈색이며 작은가지에 털이 있다. 잎은 어긋나고 넓은 바소 모양 또는 타원형이며 가장자리에 톱니가 있고 처음에는 잎자루와 더불어 털이 있다. 잎의 뒷면 맥상에도 털이 있고 톱니가 있다. 꽃은 4월에 잎보다 먼저 피고 연한 홍색이며 산형꽃차례에 2~5개의 꽃이 핀다. 작은꽃줄기에 털이 있다. 꽃받침통은 밑부분이 둥글게 부풀어 있다. 꽃잎은 타원형이고 끝이 오목하며 길이 10~12mm이고 암술의 아랫쪽에 털이 밀생한다. 열매는 둥글며 6~7월에 검게 익는다. 한국(장산곶, 위봉산, 지리산, 보길도, 제주), 일본에 분포한다. 바람직하게는 상기 올벚나무의 잎, 줄기, 수피, 열매, 및 뿌리 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 섬벚나무의 학명은 Prunus pendula for. ascendens일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 왕벚나무는 장미과(Rosaceae) 벚나무속(Prunus L.)에 속하는 식물로 대부분이 북반구 온대 지역에서 자라며, 그 열매나 수피를 식용을 할 수 있는 것으로 알려져 있다. 바람직하게는 상기 왕벚나무의 잎을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 왕벚나무는 Prunus yedoensis Matsum일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다

또한, 여기서 상기 산딸나무는 중부 이남지방의 산기슭에서 자라며, 잎이 지는 낙엽교목이다. 생육환경은 햇볕이 잘 들어오고, 토양의 부엽질이 많은 곳에서 자라며, 높이는 3~8m이고, 잎은 달걀 또는 둥근 모양으로 가장자리는 물결 모양의 굴곡으로 되어 있다. 꽃은 꽃자루가 없으며, 작은 가지 끝에 20~30개가 하늘을 향해 피고, 길이는 3~8㎝, 나비는 2~3㎝로 백색 혹은 백녹색이며 꽃잎의 형상과 유사하다. 상기 산딸나무 열매는 10월에 적색으로 익으며 둥글고, 종자를 둘러싸고 있는 껍질은 육질이 달고 식용이 가능하다. 이소퀘르시트린(isoquercitrin) 및 갈릭산(gallic acid)을 함유할 수 있으며, 관상용 및 공업용으로 쓰이며, 열매는 식용, 약용으로 쓰인다. 바람직하게는 상기 산딸나무의 잎을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 산딸나무의 학명은 Cornus kousa F.Buerger ex Miquel일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 곰의말채는 웅수목이라고도 한다. 산기슭이나 숲 가장자리에서 자라며 높이는 15m 이상이다. 나무껍질은 회갈색이며 불규칙하게 세로로 갈라진다. 잎은 길이 8~18cm로 녹색이며 마주나고 타원형 또는 넓은 달걀 모양이다. 잎 앞면에는 누운 잔털이 나고 뒷면에는 희고 억센 털이 많이 난다. 잎자루는 길이 1~3cm로 털이 없다. 6~8월에 잔가지 끝에서 흰색의 네갈래꽃이 취산꽃차례로 빽빽이 모여 핀다. 꽃차례는 지름 8~14cm이며 1개의 암술과 4개의 수술이 있다. 꽃자루는 길이 3~4cm이며 털이 없다. 꽃잎은 넓은 바소꼴이다. 열매는 둥글고 지름 6mm 정도이며 10월에 푸른빛이 도는 검은색으로 익는다. 종자는 둥글며 오목한 점이 많다. 정원수로 가꾸기도 하고 목재는 공예재료로 쓴다. 한국, 일본, 타이완, 중국 등지에 분포한다. 바람직하게는 상기 곰의말채의 잎, 줄기, 수피, 열매, 및 뿌리 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 곰의말채의 학명은 Cornus macrophylla일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 말채나무는 계곡에서 자라며, 높이는 약 10m이다. 나무껍질은 검은빛을 띤 갈색으로 그물같이 갈라진다. 잎은 마주나고 넓은 달걀 모양이거나 타원형으로 양면에 복모(伏毛)가 약간 나며 가장자리가 밋밋하고 측맥은 4~5쌍이다. 길이 5~8cm, 나비 3~5cm이며 뒷면은 흰빛을 띤다. 잎자루는 길이 1~3cm이다. 꽃은 5~6월에 피고 흰색이며 취산꽃차례에 달린다. 꽃자루는 길이 1.5~2.5cm이고 꽃잎은 바소꼴이다. 암술은 수술보다 짧고 수술대는 꽃잎의 길이와 비슷하다. 열매는 핵과로서 둥글고 지름 6~7mm로 9~10월에 검게 익는다. 정원수로 심으며 목재는 건축재나 기구재로 쓴다. 한국, 중국 등지에 분포한다. 바람직하게는 상기 말채나무의 잎, 줄기, 수피, 열매, 및 뿌리 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 말채나무의 학명은 Cornus walteri일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 층층나무는 산지의 계곡 숲 속에서 자란다. 높이 20m에 달하며, 가지가 층층으로 달려서 수평으로 퍼진다. 작은 가지는 겨울에 짙은 홍자색으로 물들고, 봄에 가지를 자르면 물이 흐른다. 잎은 어긋나고 넓은 타원형이며 끝이 뾰족하다. 잎 가장자리가 밋밋하고 측맥이 5~8줄이고 잎자루가 붉으며 잎 뒷면은 흰색이다. 잎의 양면에 미세한 털이 있다. 꽃은 5~6월에 피고 흰색이며 산방꽃차례를 이룬다. 꽃잎은 넓은 바소꼴로 꽃받침통과 더불어 겉에 털이 있다. 수술은 4개이고 꽃밥이 T형으로 달리며 암술은 1개이다. 열매는 핵과(核果)로 둥글며 자흑색으로 익는다. 한국, 일본, 중국에 분포한다. 바람직하게는 상기 층층나무의 잎, 줄기, 수피, 열매, 과병 및 뿌리 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 층층나무의 학명은 Cornus controversa일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 흰말채나무는 홍서목(紅瑞木)이라고도 한다. 산지 물가에서 자라며, 높이는 약 3m이다. 나무껍질은 붉은색이고 골속은 흰색이며 어린 가지에는 털이 없다. 잎은 마주나고 타원 모양이거나 달걀꼴 타원 모양으로서 길이 5~10cm, 나비 3~4cm이다. 끝은 뾰족하고 밑부분은 둥글거나 넓은 쐐기 모양이며 가장자리는 밋밋하다. 겉면은 녹색이고 누운 털이 나며 뒷면은 흰색으로서 잔털이 난다. 곁맥은 6쌍이고 잎자루는 길이 1~2.5cm이며 털이 없다. 꽃은 5~6월에 노랑빛을 띤 흰색으로 피는데, 가지 끝에 우산 모양으로 퍼진 취산꽃차례로 달린다. 꽃차례는 지름 4~5cm, 작은 꽃자루는 길이 5~10mm이다. 꽃받침은 4갈래로 갈라지며 갈래조각은 뾰족하고 짧다. 꽃잎은 4장이고 달걀 모양 바소꼴이며 길이 약 3mm이다. 수술은 4개로서 꽃잎과 길이가 비슷하고 암술은 수술보다 짧으며 씨방은 아랫부분에 있다. 열매는 타원 모양의 핵과(核果)로서 흰색 또는 파랑빛을 띤 흰색이며 8~9월에 익는다. 종자는 양쪽 끝이 좁고 납작하다. 종자와 꺾꽂이로 번식한다. 관상적 가치가 뛰어나 정원수로 심고, 나무껍질과 잎에 소염, 지혈 작용이 있어서 한약재로도 쓴다. 한국(평안남도, 평안북도, 함경남도, 함경북도), 중국, 사할린섬, 몽골, 시베리아, 유럽 등지에 분포한다. 바람직하게는 상기 흰말채나무의 잎, 줄기, 수피, 열매, 과병 및 뿌리 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 층층나무의 학명은 Cornus alba일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 산수유는 층층나무과의 낙엽교목인 산수유나무의 열매이다. 타원형의 핵과(核果)로서 처음에는 녹색이었다가 8~10월에 붉게 익는다. 종자는 긴 타원형이며, 능선이 있다. 약간의 단맛과 함께 떫고 강한 신맛이 난다. 10월 중순의 상강(霜降) 이후에 수확하는데, 육질과 씨앗을 분리하여 육질은 술과 차 및 한약의 재료로 사용한다. 과육(果肉)에는 코르닌(cornin), 모로니사이드(Morroniside), 로가닌(Loganin), 타닌(tannin), 사포닌(Saponin) 등의 배당체와 포도주산, 사과산, 주석산 등의 유기산이 함유되어 있고, 그밖에 비타민 A와 다량의 당(糖)도 포함되어 있다. 종자에는 팔미틴산, 올레인산, 리놀산 등이 함유되어 있다. 성분 중 코르닌은 부교감신경의 흥분작용이 있는 것으로 알려져 있다. 예로부터 한방에서는 과육을 약용하였다. 산수유나무는 한국, 중국 등이 원산으로, 한국의 중부 이남에서 심는다. 국내에서는 전라남도 구례군 산동면과 경기도 이천시 백사면 일원, 경상북도 의성군 등에서 특산품으로 매년 출하하고 있다. 바람직하게는 상기 산수유의 잎, 줄기, 수피, 열매, 과병 및 뿌리 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 층층나무의 학명은 Cornus officinalis일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 개모시풀은 여러해살이풀로 바닷가 근처에서 주로 자라며 높이는 1미터 정도이다. 줄기는 모여 나고 잎은 마주 나며, 상기 잎은 난원형이며, 가장자리에 규칙적인 톱니가 있다. 꽃은 7-10월에 암수 한 포기로 피며, 연한 녹색이며 잎겨드랑이에서 핀다. 열매는 수과이며, 도란형, 위쪽에 흰 털이 있다. 바람직하게는 상기 개모시풀의 전초, 잎, 줄기, 수피, 열매, 과병 및 뿌리 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 개모시풀의 학명은 Boehmeria platanifolia Franch. et Sav일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 거북꼬리(좀깨잎나무)는 높이는 50~100cm이고 줄기는 붉은 빛을 띠는 갈색이지만 녹색을 띠는 갈색인 경우도 있으며 털이 있으나 점차 없어지고 가지가 가늘다. 잎은 마주나고 마름모형 달걀 모양이며 길이 4~8cm, 너비 2.5~4cm로서 끝이 꼬리처럼 길고 가장자리에 큰 톱니가 5~6개 있다. 앞면에는 누운 털이 있고 뒷면에는 맥 위에만 털이 있으며 잎자루의 길이 1~3cm로서 붉은빛을 띤다. 꽃은 암수한그루이지만 가끔 암수딴그루도 있으며 7~8월에 피고 수상화서로 수꽃화서는 줄기의 밑부분 잎겨드랑이에 달리며 암꽃화서는 줄기의 윗부분 잎겨드랑이에 달린다. 수꽃은 4개의 화피갈래조각과 수술이 있고 암꽃은 여러 개가 모여서 달리며 통모양의 화피 안에 1개의 씨방이 있고 암술대는 1개이다. 열매는 수과로 10월에 익으며 긴 달걀모양이지만 여러 개가 모여 달려 여러 개로 보이고 열매의 끝에 털이 있다. 한국이 원산지로 한국, 중국, 일본 등에서 분포하고 산골짜기 시내 근처나 숲가장자리에서 서식하며 월동하면서 끝부분이 말라 죽는다. 바람직하게는 상기 거북꼬리의 전초, 잎, 줄기, 수피, 열매, 과병 및 뿌리 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 거북꼬리의 학명은 oehmeria spicata (Thunb.) Thunb.일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 개서어나무는 산허리 이하의 숲속에서 자란다. 높이는 약 15m, 지름은 약 70cm이다. 나무껍질은 잿빛이고 울퉁불퉁하지만 터지지는 않으며 흰색 피목이 흩어져 있다. 잎은 타원형 또는 긴 달걀 모양이고 2줄로 어긋나며, 끝이 뾰족하고 가는 겹톱니가 있으며 길이 4~8cm이다. 곁맥은 12~15쌍으로 앞 뒷면 맥 위에 털이 나고 잎자루는 길이 4~12mm이며 털이 난다. 꽃은 양성화로서 4~5월에 미상꽃차례로 핀다. 수꽃이삭은 대가 없고 다닥다닥 달려서 늘어지고, 암꽃이삭은 대가 있으며 드문드문 붙는다. 열매는 견과로서 화피 안에 들어 있고 넓은 달걀 모양이며 10월에 익는다. 목재는 촘촘하고 굳으며 탄성이 있다. 기구재, 곡목(曲木), 세공, 활자, 표고버섯 재배용 목재 등으로 쓰고 수형이 깔끔하여 공원수로 심는다. 한국(전남, 전북, 경남), 일본, 중국 등지에 분포한다. 바람직하게는 상기 개서어나무의 잎, 줄기, 수피, 열매, 과병 및 뿌리 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 개서어나무의 학명은 Carpinus tschonoskii일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 여기서 상기 서어나무는 서나무라고도 하며 나무이름의 유래는 확실하지 않지만 서쪽에 있는 나무라는 뜻으로 추측된다. 주로 산지에서 자라며 흔하게 발견된다. 서어나무는 표고버섯 재배용 골목으로 사용하지만 참나무에 비해 생산량이 적으며 땔감용으로 많이 이용되었다. 모양새가 비슷한 나무의 종류는 개서어나무, 까치박달, 소사나무 등이 있다. 높이는 15m, 지름은 1m에 달한다. 나무 껍질은 회색이고 근육처럼 울퉁불퉁하다. 잎은 어긋나고 길이 5.5~7.5cm의 타원 모양 또는 긴 달걀 모양이며 끝이 길게 뾰족하고 가장자리에 겹톱니가 있으며 뒷면 맥 위에 털이 있다. 꽃은 암수한그루이고 5월에 피며 미상꽃차례를 이루며 달린다. 수꽃이삭은 작은 가지에 달리고 밑으로 처지며, 수꽃은 각 포에 1개씩 달리고 8개의 수술이 있으며 수술대는 2개로 갈라진다. 암꽃이삭은 자루가 있으며, 암꽃은 각 포에 2개씩 들어 있고 암술머리는 2개이다. 열매이삭은 긴 원기둥 모양이고 길이가 4~8cm이며 밑으로 처지고, 포는 4~8개이고 한쪽에 깊이 패어 들어간 톱니가 있으며 반대쪽 밑에 1개의 돌기가 있다. 열매는 소견과이고 길이 3mm의 넓은 달걀 모양이며 10월에 익는다. 한국(황해 이남), 일본, 중국 등지에 분포한다. 바람직하게는 상기 서어나무의 잎, 줄기, 수피, 열매, 과병 및 뿌리 중 어느 하나 이상을 이용하여 추출물을 얻을 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 서어나무의 학명은 Carpinus laxiflora일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일 구체예에서는, 본 발명에 따른 약학 조성물은 파골세포로의 분화를 억제하는 것일 수 있다.

여기서, 본 발명에 따른 추출물은 바람직하게는 파골전구세포의 분화를 위해 필요한 M-CSF(macrophage colony stimulating factor) 및/또는 RANKL(receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand) 인자의 활성을 억제하는 것을 통하여 파골세포로의 분화를 억제하는 것일 수 있다. 그러나 파골세포로의 분화를 억제하여 골질환의 예방 및 치료에 사용 가능하다면 제한이 없다.

상기 “M-CSF(macrophage colony stimulating factor)”란, 조골세포와 골수 기질 세포(stromal cell)가 발현하는 사이토카인으로 파골세포 형성에 중요한 역할을 하며, 주로 세포의 증식, 생존, 세포골격형성(cytoskeletal organization) 등에 중요한 역할을 담당하는 것으로 알려져 있다(Kim SY., et al., J Korean Orthop Assoc., 44:151-158 (2009)).

또한, 상기 “RANKL(receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand)”란, 조골세포가 발현하는 인자로 파골전구세포에 있는 RANKL 수용기에 부착하여 파골세포의 성장과 분화를 유도한다(Mojtaba A., Cancer biology & Therapy, 7:1,3-9;1 (2008)). RANKL은 c-fos, NFATc1(nuclear Factor Of Activated T-Cells, cytoplasmic, calcineurin-dependent 1) 및 NF-kB(nuclear factor kappa B) 등과 같은 전사인자를 활성화하여 파골세포로의 분화를 촉진하고, PI3K(phosphatidylinositol 3-kinase) 및 ERK(extracellular signal-regulated kinase)와 같은 신호전달을 활성화 하여, 파골세포의 생존 및 기능을 촉진하는 역할도 담당하는 것으로 알려져 있다(LEE ZH., et al., Biochem Biophys Res Commun., 305:211-213 (2003)).

본 발명의 다른 구현예에서는 A. a) 바위말발도리, 매화말발도리, 개살구, 벚나무, 복사나무, 산벚나무, 살구나무, 섬개벚나무, 섬벚나무, 올벚나무, 및 왕벚나무로 이루어진 장미목(Rosales) 식물군; (b) 곰의말채, 말채나무, 층층나무, 흰말채나무, 산딸나무 및 산수유로 이루어진 층층나무속(Cornus) 식물군; (c) 개모시풀 및 거북꼬리로 이루어진 모시풀속(Boehmeria) 식물군; 및 (d) 개서어나무 및 서어나무로 이루어진 서어나무속(Carpinus) 식물군으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 수득하여 분말화 하는 단계; B. 상기 분말을 용매추출장치 또는 가속용매추출장치(Accelerated Solution Extractor)에서 유기용매로 추출한 뒤, 여과하는 단계를 포함하는 골질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 일 구체예에서는 상기 용매추출장치의 온도는 30°C내지 60°C일 수 있고, 바람직하게는 50°C일수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 온도가 30°C이하인 경우에는 온도가 충분히 상승되지 아니하여 유효성분이 유기용매에 충분히 녹아들 수 없고, 온도가 60°C이상인 경우에는 추출물의 성분이 변성될 수 있다.

본 발명의 다른 구체예에서는 상기 용매추출장치에서 사용되는 유기용매는 에탄올 또는 메탄올 일 수 있고, 바람직하게는 에탄올일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명에서 에탄올을 사용하는 경우에는 메탄올을 사용하는 경우에 비하여 추출물에 포함되어 있는 유효성분의 수득률을 더욱 향상시킬 수 있다는 장점이 존재한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서는 상기 제조방법은 상기 여과된 여과액을 농축하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 여과액을 농축하는 단계는 진공농축기 또는 감압농축기를 이용하여 농축하는 단계일 수 있으나, 추출된 성분을 농축할 수 있는 방법이라면 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 약학 조성물은 추가로 다른 항암제와 병용투여할 수 있으며, 이를 통해서 일반적인 암세포 증식 및 암 전이를 효과적으로 억제하여 암으로 인한 뼈 손상 치료와 동시에 암의 치료에 사용될 수 있다.

여기서 상기 항암제로는 나이트로젠머스타드, 이마티닙, 옥살리플라틴, 리툭시맙, 엘로티닙, 네라티닙, 라파티닙, 제피티닙, 반데타닙, 니로티닙, 세마사닙, 보수티닙, 악시티닙, 세디라닙, 레스타우르티닙, 트라스투주맙, 게피티니브, 보르테조밉, 수니티닙, 카보플라틴, 소라페닙, 베바시주맙, 시스플라틴, 세툭시맙, 비스쿰알붐, 아스파라기나제, 트레티노인, 하이드록시카바마이드, 다사티닙, 에스트라머스틴, 겜투주맵오조가마이신, 이브리투모맙튜세탄, 헵타플라틴, 메칠아미노레불린산, 암사크린, 알렘투주맙, 프로카르바진, 알프로스타딜, 질산홀뮴키토산, 젬시타빈, 독시플루리딘, 페메트렉세드, 테가푸르, 카페시타빈, 기메라신, 오테라실, 아자시티딘, 메토트렉세이트, 우라실, 시타라빈, 플루오로우라실, 플루다가빈, 에노시타빈, 플루타미드, 카페시타빈, 데시타빈, 머캅토푸린, 티오구아닌, 클라드리빈, 카르모퍼, 랄티트렉세드, 도세탁셀, 파클리탁셀, 이리노테칸, 벨로테칸, 토포테칸, 비노렐빈, 에토포시드, 빈블라스틴, 이다루비신, 미토마이신, 블레로마이신, 닥티노마이신, 피라루비신, 아클라루비신, 페프로마이신, 템시롤리무스, 테모졸로마이드, 부설판, 이포스파미드, 사이클로포스파미드, 멜파란, 알트레트민, 다카바진, 치오테파, 니무스틴, 클로람부실, 미토락톨, 레우코보린, 트레토닌, 엑스메스탄, 아미노글루테시미드, 아나그렐리드, 올라파립, 나벨빈, 파드라졸, 타목시펜, 토레미펜, 테스토락톤, 아나스트로졸, 레트로졸, 보로졸, 비칼루타미드, 로무스틴, 5FU, 보리노스텟, 엔티노스텟 및 카르무스틴으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 상기 약학 조성물은 캡슐, 정제, 과립, 주사제, 연고제, 분말 또는 음료 형태임을 특징으로 할 수 있으며, 상기 약학 조성물은 인간을 대상으로 하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 이들로 한정되는 것은 아니지만, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 캡슐, 정제, 수성현탁액 등의 경구형제형, 외용제, 좌제 및 멸균주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 약제적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체는 경구투여 시에는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료 등을 사용할 수 있으며, 주사제의 경우에는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제 등을 혼합하여 사용할 수 있으며, 국소투여용의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제, 보존제 등을 사용할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 제형은 상술한 바와 같은 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 다양하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 경구투여시에는 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭서(elixir), 서스펜션, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 제조할 수 있으며, 주사제의 경우에는 단위투약앰플 또는 다수회투약형태로 제조할 수 있다. 기타, 용액, 현탁액, 정제, 캡슐, 서방형제제 등으로 제형할 수 있다.

한편, 제제화에 적합한 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말디톨, 전분, 아카시아고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘포스페이트, 칼슘실리케이트, 셀룰로즈, 메틸셀룰로즈, 미정질셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘스테아레이트 또는 광물유 등이 사용될 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물의 투여경로는 이들로 한정되는 것은 아니지만 구강, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장이 포함된다. 경구 또는 비경구 투하가 바람직하다. 본원에 사용된 용어 "비경구"는 피하, 피내, 정맥내, 근육내, 관절내, 활액낭내, 흉골내, 경막내, 병소내 및 두개골내 주사 또는 주입기술을 포함한다. 본 발명의 약학조성물은 또한 직장투여를 위한 좌제의 형태로 투여될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 사용된 특정화합물의 활성, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 정식, 투여시간, 투여경로, 배출율, 약물 배합 및 예방 또는 치료될 특정 질환의 중증을 포함한 여러 요인에 따라 다양하게 변할 수 있고, 상기 약학 조성물의 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있고, 1일 0.0001 내지 50mg/kg 또는 0.001 내지 50mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명에 따른 약학 조성물은 환제, 당의정, 캡슐, 액제, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁제로 제형될 수 있다.

본 발명의 또다른 구현 예에서는 상기 약학 조성물을 이용한 골질환의 치료 방법 등을 제공한다.

본 발명의 또다른 구현 예에서는 (a) 바위말발도리, 매화말발도리, 개살구, 벚나무, 복사나무, 산벚나무, 살구나무, 섬개벚나무, 섬벚나무, 올벚나무, 및 왕벚나무로 이루어진 장미목(Rosales) 식물군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 식물 추출물; (b) 곰의말채, 말채나무, 층층나무, 흰말채나무, 산딸나무 및 산수유로 이루어진 층층나무속(Cornus) 식물군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 식물 추출물; (c) 개모시풀 및 거북꼬리로 이루어진 모시풀속(Boehmeria) 식물군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 식물 추출물; 및 (d) 개서어나무 및 서어나무로 이루어진 서어나무속(Carpinus) 식물군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 식물 추출물;로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 골질환의 개선 또는 완화용 식품 조성물에 관한 것이다.

본 명세서에 있어서 "식품 조성물"이란, 골 질환 개선 및 예방을 위해 다양하게 이용되는 것으로서, 본 발명의 조성물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물은 각종 식품류, 예를 들어, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 과자, 떡, 빵 등의 형태로 제조될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 독성 및 부작용이 거의 없는 기존의 식품용 섭취물로부터 개량되어 구성된 것이므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다. 본 발명의 조성물이 식품 조성물에 포함될 때 그 양은 전체 중량의 0.1 내지 100%의 비율로 첨가할 수 있다. 여기서, 상기 식품 조성물이 음료 형태로 제조되는 경우 지시된 비율로 상기 식품 조성물을 함유하는 것 외에 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제 또는 천연탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 즉, 천연 탄수화물로서 포도당 등의 모노사카라이드, 과당 등의 디사카라이드, 슈크로스 등, 및 폴리사카라이드, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜 등을 포함할 수 있다. 상기 향미제로서는 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등) 등을 들 수 있다. 그 외 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성풍미제 및 천연풍미제 등의 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 통상적으로 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 100 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명은 장미목 식물 추출물, 층층나무속 식물 추출물, 모시풀속 식물 추출물 및 서어나무속 식물 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 천연 추출물을 유효성분으로 하는 약학 조성물을 이용하여 파골세포로의 분화를 억제하는 것을 통해 낮은 부작용으로 골질환을 효과적으로 예방 또는 치료하게 할 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 바위말발도리와 이의 동속 식물 추출물이 세포에 미치는 독성 여부를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 산딸나무와 이의 동속 식물 추출물이 세포에 미치는 독성 여부를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 개모시풀과 이의 동속 식물 추출물이 세포에 미치는 독성 여부를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 소사나무와 이의 동속 식물 추출물이 세포에 미치는 독성 여부를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 왕벚나무와 이의 동속 식물 추출물이 세포에 미치는 독성 여부를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 바위말발도리와 이의 동속 식물 추출물의 파골세포 분화 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 바위말발도리와 이의 동속 식물 추출물의 파골세포 분화 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른 산딸나무와 이의 동속 식물 추출물의 파골세포 분화 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 산딸나무와 이의 동속 식물 추출물의 파골세포 분화 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 10은 본 발명의 일 실시예에 따른 개모시풀과 이의 동속 식물 추출물의 파골세포 분화 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 11은 본 발명의 일 실시예에 따른 개모시풀과 이의 동속 식물 추출물의 파골세포 분화 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 12는 본 발명의 일 실시예에 따른 소사나무와 이의 동속 식물 추출물의 파골세포 분화 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 13은 본 발명의 일 실시예에 따른 소사나무와 이의 동속 식물 추출물의 파골세포 분화 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 14는 본 발명의 일 실시예에 따른 왕벚나무와 이의 동속 식물 추출물의 파골세포 분화 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 15는 본 발명의 일 실시예에 따른 왕벚나무와 이의 동속 식물 추출물의 파골세포 분화 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

[실시예]

[제조예] 추출에 사용된 재료 및 추출 조건

본 발명에 따른 추출물의 골질환 예방 또는 치료 효과를 검증하기 위하여 33가지 종류의 식물에 대하여 추출 조건 1 또는 2로 추출하였다. 식물의 종류 및 추출조건은 하기 표 1 및 2와 같다.

번호	식물명	추출부위	학명	추출 조건
7-1	가죽나무	잎	Ailanthus altissima (Mill.) Swingle for. Altissima	2
7-4	거제딸기	잎	Rubus longisepalus var. tozawai (Nakai) T.B.Lee	2
7-5	굴피나무	잎	Platycarya strobilacea Siebold & Zucc. var. strobilacea for. strobilacea	2
7-6	금마타리	지상부	Patrinia saniculaefolia Hemsl.	2
7-7	냉이	지상부+꽃	Capsella bursapastoris (L.) L.W.Medicus	2
7-8	담쟁이덩굴	잎+줄기	Parthenocissus tricuspidata (Siebold & Zucc.) Planch.	2
7-9	말냉이	잎+줄기	Thlaspi arvense L.	1
7-10	바위말발도리나무	잎+꽃	Deutzia grandiflora var. baroniana Diels	2
7-11	벼룩이자리	잎+줄기+종자	Arenaria serpyllifolia L.	2
7-12	보골지	뿌리	Psoralea corylifolia L.	1
7-13	보리	꽃	Hordeum vulgare var. hexastichon (L.) Asch.	2
7-14	보리	뿌리	Hordeum vulgare var. hexastichon (L.) Asch.	2
7-15	보리	잎+줄기	Hordeum vulgare var. hexastichon (L.) Asch.	2
7-16	뽕나무	줄기	Morus alba L.	1
7-17	사스레피나무	잎	Eurya japonica Thunb.	2
7-18	산딸나무	잎	Cornus kousa F.Buerger ex Miquel	2
7-19	산부추	지상부	Allium thunbergii G.Don	1
7-20	산조팝나무	잎	Spiraea blumei G.Don	2
7-21	삼개시호	지상부	Bupleurum falcatum L.	1
7-22	소리쟁이	열매	Rumex cripus L	2
7-23	소사나무	잎	Carpinus turczaninovii Hance	2
7-25	애기똥풀	잎+줄기	Chelidonium majus var. asiaticum (Hara) Ohwi	1
7-26	예덕나무	잎	Mallotus japonicus (Thunb.) Muell. Arg.	2
7-27	완도호랑가시나무	잎	Ilex x wandoensis C.F.Miller	2
7-28	개모시풀	잎	Boehmeria platanifolia Franch. et Sav	2
7-29	왕벚나무	잎	Prunus yedoensis Matsum	2
7-30	으름	잎	Akebia quinata (Thunb.) Decne.	2
7-31	자리공	잎	Phytolacca esculenta VanHoutte	2
7-32	잔털벗나무	잎	Prunus serrulata var. pubescens (Makino) Nakai	2
7-33	조팝나무	꽃	Spiraea prunifolia for. simpliciflora Nakai	1

식별	추출 조건
1	각 시료 분말을 50°C의 가속용매추출장치(Accelerated Solution Extractor, Dinex, USA)를 이용하여 메탄올(MetOH)로 추출 및 여과한 뒤 농축함
2	각 시료 분말을 50°C의 가속용매추출장치(Accelerated Solution Extractor, Dinex, USA)를 이용하여 에탄올(EtOH)로 추출 및 여과한 뒤 농축함

[비교예] 본 발명에 따른 식물과 동속에 속하는 비교를 위한 식물 리스트

본 발명에 따른 추출물의 효능이 동속에 속하는 식물에 비하여 효능이 우수함을 비교하기 위하여 한국 추출물은행(http://extract.kribb.re.kr)에서 바위말발도리, 산딸나무, 개모시풀, 소사나무 및 왕벚나무의 동속에 속하는 식물을 구입하였다. 상기 식물의 속명은 하기 표 3과 같다.

본원발명	동속식물	학명
바위말발도리나무 Deutzia prunifolia	매화말발도리	Deutzia coreana
	지리말발도리	Deutzia coreana var. triradiata
	물참대	Deutzia glabrata
	많첩빈도리	Deutzia crenata for. plena
산딸나무 Cornus kousa	산수유	Cornus officinalis
	층층나무	Cornus controversa
	말채나무	Cornus walteri
	흰말채나무	Cornus alba
	곰의 말채	Cornus macrophylla
개모시풀 Boehmeria platanifolia	모시풀	Boehmeria nivea
	왕모시풀	Boehmeria pannosa
	섬모시풀	Boehmeria nipononivea
	좀깨잎 나무	Boehmeria spicata
	거북꼬리	Boehmeria tricuspis
	풀거북꼬리	Boehmeria tricuspis var. unicuspis
소사나무 Carpinus laxiflora	서어나무	Carpinus laxiflora
	개서어나무	Carpinus tschonoskii
	까치박달	Carpinus cordata
왕벚나무 Prunus yedoensis	산벚나무	Prunus sargentii
	귀룽나무	Prunus padus
	섬개벚나무	Prunus buergeriana
	벚나무	Prunus serrulata var. spontanea
	올벚나무	Prunus pendula for. ascendens
	복사나무	Prunus persica
	섬벚나무	Prunus takesimensis
	올벚나무	Prunus pendula for. ascendens
	서울귀룽	Prunus padus var. seoulensis
	개벚나무	Prunus leveilleana
	개살구	Prunus mandshurica var. glabra
	털개벚	Prunus leveilleana var. pilosa
	산복사	Prunus davidiana
	자두나무	Prunus salicina
	앵도	Prunus tomentosa
	살구나무	Prunus armeniaca var. ansu
	열녀목	Prunus salicina var. columnalis

[실시예 1] 생 쥐의 골수 대식세포 분리 및 배양

상기 제조예 및 비교예를 통해 얻은 추출물에 대하여, 골질환 예방 또는 치료 효과를 확인하기 위해 생쥐 골수 대식세포를 하기의 과정으로 분리 및 배양하였다.

3주령의 수컷 ICR 생쥐(㈜ 나리바이오텍, 대한민국)를 경추 탈골을 통해 죽인 뒤, 겸좌를 이용하여 상기 쥐의 뒷다리 외피를 벗기고, 수술용 가위로 외피가 벗겨진 뒷다리를 절단하여 무혈청 α-MEM(minimum essential medium alpha; Gibco, USA)에 보관하였다. 또한, 핀셋을 이용하여 근육 속의 뼈를 분리한 뒤, 새로운 α-MEM에 옮긴 뒤 주사기(syringe)에 600μl의 α-MEM을 담아 분리된 다리뼈의 중앙 척수 부분에 삽입하고 2 내지 3회 분사하여 골수 세포를 적출하였다. 상기 과정을 통해 적출된 골수세포는 원심분리(centrifuge)를 통하여 상층액을 제거한 뒤, 새로운 α-MEM을 넣고 골수세포로부터 골수 대식세포를 분리할 수 있도록 하는 분리 배지인 히스토파크(histopaque; Sigma-Aldrich, USA)를 사용하여 골수 대식세포를 최종적으로 분리하였다.

상기 과정을 통해 분리된 골수 대식세포는 1%의 항생-항균 용액(antibiotic-antimycotic; Gibco, USA), 10%의 우태아혈청(fetal bovine serum (FBS); Gibco, USA) 및 M-CSF(macrophage-colony stimulating factor; R&D system Inc., USA) 30ng/ml이 포함되어 있는 α-MEM 영양 배지로 37℃, 5% CO₂ 배양기 내에서 배양을 실시하였다.

[실시예 2] 추출물의 세포 독성 여부 확인

본 발명에 따른 상기 제조예 및 비교예의 추출물이 세포에 미치는 독성 여부를 확인하기 위하여, 세포 독성 실험을 실시하였다. 세포 배양 배지는 1%의 항생-항균 용액 및 10% FBS(fetal bovine serum)이 첨가된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's medium)을 사용하였다. 96-웰 플레이트의 각 웰에 1X10⁴개의 생쥐 대식세포를 분주하고, 37, 5% CO₂ 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 그리고 생쥐 대식세포가 분주된 96-웰 플레이트에 각 추출물을 농도 별로 첨가하고 24시간 동안 추가 배양하였다. 24시간 후에 5mg/ml MTT(Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide) 용액을 각 웰당 20μl씩 첨가하고 37, 5% CO₂ 세포 배양기에서 4시간 동안 반응시켰다. 그리고 배지를 제거한 후에 DMSO를 100μl씩 첨가하고 쉐이커에서 20분간 용해시키고, ELISA 리더기를 이용해 570nm에서 흡광도를 측정하여 세포 생존율 및 시료의 독성 유무를 확인하였다. 세포 생존율은 대조군(배지만 처리한 웰)의 생존율에 대한 실험군(각 추출물을 처리한 각각의 웰)의 생존율을 백분율로 계산하였다. 상기 측정한 결과는 대조군의 생존률을 기준으로 하여 백분율로 계산하여 도 1 내지 도 5 및 하기 표 4 내지 표 8 나타내었다.

도 1, 표 4 및 표 5에서 보는 바와 같이, 바위말발도리나무와 이의 동속 식물 중에서는 매화말발도리나무 줄기 추출물만이 고농도에서 낮은 세포 생존률을 나타내었고, 다른 동속 식물 추출물에서는 세포 독성이 없는 것을 확인하였다.

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	흡광도 값	세포생존율(%)
-	-	1.059 ± 0.117	100
많첩 빈도리 잎, 꽃	1	1.326 ± 0.252	125
	3	1.333 ± 0.129	126
	5	1.309 ± 0.050	124
	10	1.547 ± 0.147	146
	20	1.768 ± 0.064	167
	40	2.075 ± 0.262	196
	80	1.817 ± 0.296	172
많첩 빈도리 줄기	1	1.081 ± 0.105	102
	3	1.056 ± 0.082	100
	5	1.093 ± 0.077	103
	10	1.094 ± 0.100	103
	20	1.201 ± 0.168	113
	40	1.415 ± 0.191	134
	80	1.640 ± 0.125	155
매화말 발도리 줄기	1	0.926 ± 0.160	87
	3	0.925 ± 0.091	87
	5	1.020 ± 0.233	96
	10	1.228 ± 0.166	116
	20	1.175 ± 0.097	111
	40	0.834 ± 0.088	79
	80	0.309 ± 0.084	29
매화말 발도리 잎	1	0.965 ± 0.016	91
	3	1.111 ± 0.163	105
	5	1.190 ± 0.052	112
	10	1.545 ± 0.234	146
	20	1.541 ± 0.081	146
	40	1.829 ± 0.065	173
	80	2.321 ± 0.130	219
물참대 꽃, 잎	1	1.002 ± 0.068	95
	3	1.001 ± 0.146	95
	5	1.123 ± 0.063	106
	10	1.350 ± 0.074	128
	20	1.614 ± 0.186	153
	40	2.325 ± 0.248	220
	80	2.380 ± 0.211	225

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	흡광도 값	세포생존율 (%)
-	-	1.102 ± 0.156	100
물참대 줄기	1	1.088 ± 0.127	99
	3	1.170 ± 0.018	106
	5	1.343 ± 0.127	122
	10	1.375 ± 0.149	125
	20	1.702 ± 0.263	154
	40	1.136 ± 0.246	103
	80	1.162 ± 0.01	105
바위말 발도리 잎	1	1.127 ± 0.138	102
	3	1.104 ± 0.13	100
	5	1.276 ± 0.102	116
	10	1.276 ± 0.036	116
	20	1.631 ± 0.131	148
	40	1.592 ± 0.133	144
	80	1.975 ± 0.143	179
바위말 발도리 줄기	1	0.953 ± 0.208	86
	3	1.276 ± 0.224	116
	5	1.265 ± 0.051	115
	10	1.36 ± 0.134	123
	20	1.489 ± 0.073	135
	40	1.305 ± 0.139	118
	80	2.297 ± 0.235	208
지리말발도리 잎,줄기	1	0.878 ± 0.191	80
	3	1.017 ± 0.226	92
	5	1.057 ± 0.153	96
	10	1.229 ± 0.111	112
	20	1.525 ± 0.177	138
	40	1.523 ± 0.218	138
	80	2.424 ± 0.211	220

도 2, 표 6 및 표 7에서 보는 바와 같이, 산딸나무와 이의 동속 식물 중에서는 말채나무의 잎 및 줄기 추출물과 층층나무의 과병 추출물, 흰말채나무의 잎 및 줄기 추출물 그리고 산수유 열매 추출물에서 고농도 처리 시 낮은 세포 생존률을 나타내는 것을 확인하였다.

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	흡광도 값	세포생존율 (%)
-	-	0.912 ± 0.064	100
곰의말채 잎	1	0.926 ± 0.038	102
	3	1.168 ± 0.058	128
	5	1.15 ± 0.024	126
	10	1.809 ± 0.116	198
	20	2.251 ± 0.113	247
	40	2.266 ± 0.086	248
	80	1.236 ± 0.119	135
곰의말채 줄기-수피	1	1.05 ± 0.166	115
	3	1.172 ± 0.038	128
	5	1.353 ± 0.054	148
	10	1.82 ± 0.118	199
	20	2.423 ± 0.073	266
	40	2.112 ± 0.097	231
	80	1.075 ± 0.095	118
말채나무 잎,줄기	1	0.963 ± 0.093	106
	3	1.023 ± 0.011	121
	5	1.165 ± 0.115	134
	10	1.187 ± 0.058	130
	20	1.473 ± 0.176	161
	40	1.466 ± 0.033	161
	80	0.551 ± 0.04	60
층층나무 줄기-수피	1	0.957 ± 0.096	105
	3	1.205 ± 0.112	132
	5	1.487 ± 0.095	163
	10	2.01 ± 0.094	220
	20	2.438 ± 0.17	267
	40	1.926 ± 0.122	211
	80	0.708 ± 0.169	78
층층나무 잎,줄기	1	0.961 ± 0.079	105
	3	1.03 ± 0.112	113
	5	1.269 ± 0.033	139
	10	1.688 ± 0.144	185
	20	2.119 ± 0.065	232
	40	2.115 ± 0.133	232
	80	0.774 ± 0.076	85
식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	흡광도 값	세포생존율 (%)
-	-	0.793 ± 0.059	100
층층나무 과병	1	0.89 ± 0.094	112
	3	1.307 ± 0.023	165
	5	1.495 ± 0.087	189
	10	2.018 ± 0.127	255
	20	2.569 ± 0.124	324
	40	0.947 ± 0.124	119
	80	0.379 ± 0.056	48
층층나무 열매	1	0.991 ± 0.147	125
	3	0.916 ± 0.001	116
	5	1.026 ± 0.117	129
	10	1.067 ± 0.067	135
	20	1.105 ± 0.05	139
	40	1.13 ± 0.076	143
	80	1.472 ± 0.133	186
흰말채나무 잎,줄기	1	1.027 ± 0.065	130
	3	1.141 ± 0.05	144
	5	1.121 ± 0.121	141
	10	1.249 ± 0.011	158
	20	1.978 ± 0.12	250
	40	1.229 ± 0.151	155
	80	0.457 ± 0.109	58
산딸나무 줄기	1	0.86 ± 0.019	108
	3	0.873 ± 0.083	110
	5	0.991 ± 0.097	125
	10	0.993 ± 0.109	125
	20	1.283 ± 0.137	162
	40	1.807 ± 0.061	228
	80	1.715 ± 0.108	216
산딸나무 열매	1	0.843 ± 0.039	106
	3	0.885 ± 0.042	112
	5	0.915 ± 0.078	115
	10	0.955 ± 0.113	120
	20	1.014 ± 0.043	128
	40	1.021 ± 0.041	129
	80	0.97 ± 0.068	122

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	흡광도 값	세포생존율 (%)
-	-	0.836 ± 0.05	100
산딸나무 잎	1	0.842 ± 0.124	101
	3	1.069 ± 0.085	128
	5	1.01 ± 0.119	121
	10	1.378 ± 0.093	165
	20	1.469 ± 0.092	176
	40	1.213 ± 0.124	145
	80	0.943 ± 0.108	113
산딸나무 줄기-수피	1	0.8 ± 0.115	96
	3	0.88 ± 0.033	105
	5	0.904 ± 0.128	108
	10	1.068 ± 0.084	128
	20	1.059 ± 0.109	127
	40	1.481 ± 0.082	177
	80	1.938 ± 0.135	232
산수유 잎,줄기	1	0.778 ± 0.024	93
	3	0.961 ± 0.089	115
	5	1.156 ± 0.048	138
	10	1.575 ± 0.119	188
	20	1.607 ± 0.126	192
	40	1.435 ± 0.093	172
	80	1.395 ± 0.13	167
산수유 열매	1	0.788 ± 0.061	94
	3	1.018 ± 0.119	122
	5	1.124 ± 0.048	135
	10	1.14 ± 0.093	136
	20	1.399 ± 0.088	167
	40	1.502 ± 0.082	180
	80	0.426 ± 0.036	51

도 3 및 표 8에서 보는 바와 같이, 개모시풀과 이의 동속 식물 중에서는 개모시풀 전초 추출물과 거북꼬리 전초 추출물의 고농도 처리 시 낮은 세포 생존률을 나타내는 것을 확인하였다. 왕모시풀은 다른 동속 식물 추출물보다 낮은 농도에서 세포독성을 나타내는 것을 확인하였다.

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	흡광도 값	세포생존율 (%)
-	-	1.43 ± 0.031	100
모시풀 전초	1	0.835 ± 0.031	58
	5	1.249 ± 0.137	87
	10	1.126 ± 0.091	79
	50	1.849 ± 0.134	129
	100	2.171 ± 0.2	152
왕모시풀 전초	0.01	1.419 ± 0.057	99
	0.05	1.432 ± 0.032	100
	0.1	1.332 ± 0.007	93
	0.5	1.179 ± 0.133	82
	1	0.983 ± 0.122	69
섬모시풀 지상부	1	1.832 ± 0.026	128
	5	1.692 ± 0.025	118
	10	1.713 ± 0.1	120
	50	1.46 ± 0.101	102
	100	1.2 ± 0.183	84
개모시풀 전초	1	1.691 ± 0.086	118
	5	1.674 ± 0.094	117
	10	1.55 ± 0.082	108
	50	0.19 ± 0.055	13
	100	0.209 ± 0.045	15
좀깨잎 나무 전초	1	1.455 ± 0.0815	102
	5	1.482 ± 0.2888	104
	10	1.933 ± 0.359	135
	50	2.483 ± 0.2737	174
	100	2.24 ± 0.3269	157
거북꼬리 전초	1	1.895 ± 0.092	132
	5	1.809 ± 0.189	126
	10	1.803 ± 0.172	126
	50	0.271 ± 0.071	19
	100	0.27 ± 0.076	19
풀거북꼬리 전초	1	1.374 ± 0.123	96
	5	1.276 ± 0.259	89
	10	1.19 ± 0.355	83
	50	1.001 ± 0.08	70
	100	0.712 ± 0.104	50

도 4, 표 9 및 표 10에서 보는 바와 같이, 소사나무와 이의 동속 식물 중에서는 까치박달 잎 추출물과 서어나무 잎 추출물에서는 세포 독성이 없으며, 다른 추출물의 경우에는 고농도 처리 시 일부 세포 독성이 관찰되는 것을 확인하였다.

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	흡광도 값	세포생존율 (%)
-	-	1.403 ± 0.185	100
개서어나무 줄기-수피	1	1.414 ± 0.078	101
	3	1.279 ± 0.034	91
	5	1.401 ± 0.1	100
	10	1.638 ± 0.149	117
	20	0.99 ± 0.167	71
	40	0.136 ± 0.034	10
	80	0.165 ± 0.007	12
개서어나무 잎,줄기	1	1.336 ± 0.104	95
	3	1.49 ± 0.054	106
	5	1.585 ± 0.124	113
	10	1.316 ± 0.231	94
	20	0.815 ± 0.031	58
	40	0.29 ± 0.082	21
	80	0.288 ± 0.059	20
까치박달 가지	1	1.22 ± 0.079	87
	3	1.214 ± 0.213	86
	5	1.223 ± 0.211	87
	10	1.424 ± 0.173	101
	20	1.584 ± 0.125	113
	40	0.217 ± 0.107	15
	80	0.231 ± 0.033	16
까치박달 잎	1	1.037 ± 0.067	74
	3	1.099 ± 0.043	78
	5	1.167 ± 0.066	83
	10	1.163 ± 0.075	83
	20	1.431 ± 0.286	102
	40	1.649 ± 0.176	118
	80	1.455 ± 0.046	104

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	흡광도 값	세포생존율 (%)
-	-	0.95 ± 0.064	100
서어나무 꽃	1	1.359 ± 0.022	143
	3	1.43 ± 0.218	150
	5	1.241 ± 0.228	131
	10	1.417 ± 0.17	149
	20	1.526 ± 0.17	161
	40	0.868 ± 0.117	91
	80	0.175 ± 0.048	18
서어나무 잎	1	1.304 ± 0.163	137
	3	1.366 ± 0.129	144
	5	1.16 ± 0.066	122
	10	1.187 ± 0.196	125
	20	1.219 ± 0.2	128
	40	1.336 ± 0.132	141
	80	0.589 ± 0.136	62
서어나무 줄기-수피	1	0.91 ± 0.146	96
	3	0.98 ± 0.085	103
	5	1.13 ± 0.105	119
	10	1.359 ± 0.07	143
	20	1.595 ± 0.095	168
	40	0.147 ± 0.007	16
	80	0.126 ± 0.003	13
소사나무 잎,줄기	1	1.218 ± 0.144	128
	3	1.322 ± 0.121	139
	5	1.318 ± 0.07	139
	10	0.526 ± 0.074	55
	20	0.154 ± 0.01	16
	40	0.2 ± 0.026	21
	80	0.196 ± 0.023	21

도 5, 및 표 11 내지 표 15에서 보는 바와 같이, 왕벚나무와 이의 동속 식물은 모두 세포 독성이 나타나지 않는 것을 확인하였다.

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	흡광도 값	세포생존율 (%)
-	-	0.842 ± 0.039	100
개벚나무 줄기-수피	1	0.902 ± 0.055	107
	3	1.11 ± 0.066	132
	5	1.119 ± 0.036	133
	10	1.453 ± 0.059	173
	20	1.741 ± 0.067	207
	40	2.004 ± 0.141	238
	80	2.219 ± 0.127	264
개살구 잎	1	0.874 ± 0.043	104
	3	0.87 ± 0.108	103
	5	0.874 ± 0.123	104
	10	0.905 ± 0.107	108
	20	0.996 ± 0.085	118
	40	1.143 ± 0.102	136
	80	2.05 ± 0.064	244
개살구 줄기	1	0.725 ± 0.072	86
	3	0.845 ± 0.067	100
	5	0.932 ± 0.116	111
	10	1.14 ± 0.037	135
	20	1.142 ± 0.078	136
	40	1.764 ± 0.077	210
	80	2.165 ± 0.106	257
개살구 줄기-수피	1	0.803 ± 0.069	95
	3	0.842 ± 0.039	100
	5	0.932 ± 0.033	111
	10	1.248 ± 0.031	148
	20	1.47 ± 0.003	175
	40	1.788 ± 0.143	212
	80	1.901 ± 0.098	226
귀룽나무 잎,줄기,꽃	1	0.804 ± 0.076	96
	3	0.881 ± 0.037	105
	5	0.878 ± 0.053	104
	10	1 ± 0.133	119
	20	1.068 ± 0.096	127
	40	1.564 ± 0.059	186
	80	1.957 ± 0.163	232

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	흡광도 값	세포생존율 (%)
-	-	0.734 ± 0.094	100
벚나무 잎	1	0.56 ± 0.034	76
	3	0.575 ± 0.059	78
	5	0.767 ± 0.059	104
	10	1.044 ± 0.075	142
	20	1.149 ± 0.098	157
	40	1.631 ± 0.096	222
	80	1.996 ± 0.136	272
벚나무 줄기-수피	1	0.812 ± 0.048	111
	3	0.936 ± 0.13	127
	5	0.987 ± 0.102	134
	10	1.458 ± 0.122	199
	20	1.511 ± 0.051	206
	40	1.63 ± 0.108	222
	80	1.808 ± 0.11	246
복사나무 꽃	1	0.729 ± 0.109	99
	3	0.819 ± 0.036	112
	5	0.77 ± 0.055	105
	10	0.802 ± 0.137	109
	20	0.792 ± 0.04	108
	40	1.144 ± 0.115	156
	80	1.678 ± 0.073	228
복사나무 줄기-수피	1	1.003 ± 0.132	137
	3	1.18 ± 0.113	161
	5	1.425 ± 0.114	194
	10	1.755 ± 0.12	239
	20	2.062 ± 0.084	281
	40	2.208 ± 0.116	301
	80	2.218 ± 0.117	302
복사나무 잎,줄기	1	0.922 ± 0.135	126
	3	0.966 ± 0.093	131
	5	1.082 ± 0.101	147
	10	1.121 ± 0.036	153
	20	1.325 ± 0.106	180
	40	2.113 ± 0.091	288
	80	2.139 ± 0.038	291

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	흡광도 값	세포생존율 (%)
-	-	0.713 ± 0.05	100
산벚나무 잎	1	0.73 ± 0.045	102
	3	0.876 ± 0.017	123
	5	1.058 ± 0.088	148
	10	1.194 ± 0.105	167
	20	1.329 ± 0.03	186
	40	2.036 ± 0.04	285
	80	2.181 ± 0.111	306
산벚나무 줄기	1	0.866 ± 0.051	121
	3	0.888 ± 0.103	124
	5	1.133 ± 0.06	159
	10	1.345 ± 0.067	189
	20	1.532 ± 0.098	215
	40	2.083 ± 0.067	292
	80	2.219 ± 0.058	311
살구나무 잎	1	0.823 ± 0.124	115
	3	0.873 ± 0.152	122
	5	0.915 ± 0.047	128
	10	0.891 ± 0.13	125
	20	1.078 ± 0.1	151
	40	1.345 ± 0.008	189
	80	1.467 ± 0.041	206
살구나무 줄기	1	0.876 ± 0.028	123
	3	0.997 ± 0.022	140
	5	1.034 ± 0.092	145
	10	1.107 ± 0.098	155
	20	1.147 ± 0.133	161
	40	1.315 ± 0.047	184
	80	1.666 ± 0.072	234
살구나무 줄기-수피	1	0.926 ± 0.023	130
	3	0.855 ± 0.072	120
	5	0.959 ± 0.092	134
	10	1.181 ± 0.044	166
	20	1.211 ± 0.13	170
	40	2.238 ± 0.119	314
	80	2.332 ± 0.081	327

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	흡광도 값	세포생존율 (%)
-	-	1.203 ± 0.089	100
섬개벚나무 잎	1	1.348 ± 0.195	112
	3	1.369 ± 0.197	114
	5	1.548 ± 0.123	129
	10	1.628 ± 0.019	135
	20	1.69 ± 0.159	141
	40	1.841 ± 0.104	153
	80	2.331 ± 0.201	194
섬개벚나무 줄기-수피	1	1.209 ± 0.136	101
	3	1.478 ± 0.232	123
	5	1.627 ± 0.127	135
	10	1.769 ± 0.189	147
	20	1.578 ± 0.061	131
	40	2.392 ± 0.032	199
	80	3.04 ± 0.078	253
섬벚나무 잎	1	1.166 ± 0.175	97
	3	1.476 ± 0.073	123
	5	1.478 ± 0.147	123
	10	1.671 ± 0.074	139
	20	1.546 ± 0.072	129
	40	1.936 ± 0.091	161
	80	2.381 ± 0.171	198
섬벚나무 줄기-수피	1	1.221 ± 0.129	101
	3	1.651 ± 0.194	137
	5	1.537 ± 0.134	128
	10	1.941 ± 0.115	161
	20	1.983 ± 0.231	165
	40	3.026 ± 0.089	252
	80	3.382 ± 0.159	281
앵도 잎,줄기	1	1.123 ± 0.12	93
	3	1.157 ± 0.102	96
	5	1.225 ± 0.122	102
	10	1.133 ± 0.029	94
	20	1.142 ± 0.074	95
	40	1.666 ± 0.096	138
	80	1.676 ± 0.052	139

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	흡광도 값	세포생존율 (%)
-	-	0.921 ± 0.052	100
열녀목 잎,줄기	1	1.092 ± 0.065	118
	3	1.02 ± 0.155	111
	5	1.194 ± 0.116	130
	10	1.478 ± 0.118	160
	20	1.774 ± 0.087	193
	40	2.346 ± 0.171	255
	80	2.405 ± 0.139	261
올벚나무 줄기-수피	1	1.099 ± 0.121	119
	3	1.198 ± 0.126	130
	5	1.132 ± 0.119	123
	10	1.804 ± 0.215	196
	20	2.156 ± 0.355	234
	40	3.029 ± 0.05	329
	80	3.104 ± 0.052	337
올벚나무 잎,줄기	1	1.066 ± 0.098	116
	3	1.097 ± 0.065	119
	5	1.063 ± 0.076	115
	10	1.635 ± 0.169	177
	20	2.079 ± 0.02	226
	40	2.109 ± 0.107	229
	80	2.34 ± 0.128	254
왕벚나무 잎,꽃	1	1.054 ± 0.036	114
	3	0.962 ± 0.132	104
	5	0.964 ± 0.116	105
	10	1.266 ± 0.033	137
	20	1.261 ± 0.042	137
	40	1.918 ± 0.129	208
	80	2 ± 0.033	217
왕벚나무 줄기	1	1.091 ± 0.074	118
	3	1.283 ± 0.145	139
	5	1.232 ± 0.009	134
	10	2.166 ± 0.055	235
	20	2.285 ± 0.089	248
	40	2.824 ± 0.089	307
	80	3.089 ± 0.097	335
자두나무 줄기	1	0.982 ± 0.182	105
	3	1.276 ± 0.123	137
	5	1.232 ± 0.116	132
	10	1.28 ± 0.14	139
	20	1.616 ± 0.157	175
	40	2.202 ± 0.18	239
	80	2.49 ± 0.123	270

[실시예 3] 파골세포로의 분화 억제율 확인

골수 대식세포에서 RANKL(receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand)에 의해 유도되는 파골세포로의 분화가 본 발명에 따른 상기 추출물에 의해 억제되는지 확인하기 위하여, 파골세포 분화 억제율 확인 실험을 수행하였다("Park EK. et al., Biochem Biophys Res Commun., 325 (4):1472-1480 (2004)" 참고).

분화 억제율 확인 실험을 위하여 상기 실시예 1의 방법으로 준비된 골수 대식세포를 96-웰에 5X10⁴ cells/well개씩 분주하였다. 그 뒤, 각각의 추출물을 농도별로 α-MEM(1%의 항생-항균 용액, 10% FBS, 30ng/ml의 M-CSF, 50ng/ml의 RANKL 첨가) 배지에 혼합하여 최종 볼륨이 200μl가 되도록 준비한 다음, 상기 분주된 골수 대식세포에 처리하고 37, 5% CO₂ 조건인 세포 배양기에서 2일마다 신선한(fresh) 배지로 교체하며 최종적으로 5일간 배양하여 실험군을 준비하였다. 음성 대조군으로는 1%의 항생-항균 용액, 10% FBS, 및 30ng/ml의 M-CSF가 첨가된 α-MEM을 사용하여 세포를 배양하여 준비하였고, 양성 대조군으로는 1%의 항생-항균 용액, 10% FBS, 30ng/ml의 M-CSF, 및 50ng/ml의 RANKL이 첨가된 α-MEM을 사용하여 상기 실험군과 동일한 조건으로 배양하였다. 그리고 배양된 세포의 측정은 TRAP assay kit(tartrate resistant acid phosphatase assay kit; Sigma-Aldrich, USA)를 통하여 염색 후 광학현미경으로 핵이 3개 이상에 해당하는 파골세포의 수를 측정하여 그 결과를 도 6 내지 도 15 및 표 16 내지 표 21에 나타내었다.

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	RANKL로 유도한 파골세포의 수	파골세포로의 분화 억제율(%)
		0 ± 0
	RANKL	247 ± 8	0
많첩빈도리 잎, 꽃	RANKL + 10	239 ± 1	3
	RANKL + 20	244 ± 6	1
	RANKL + 40	102 ± 8	59
많첩빈도리 줄기	RANKL + 10	218 ± 3	12
	RANKL + 20	193 ± 5	22
	RANKL + 40	164 ± 6	33
매화말발도리 줄기	RANKL + 10	209 ± 1	15
	RANKL + 20	176 ± 5	29
	RANKL + 40	157 ± 1	37
매화말발도리 잎	RANKL + 10	192 ± 6	22
	RANKL + 20	118 ± 3	52
	RANKL + 40	0 ± 0	100
물참대 꽃, 잎	RANKL + 10	227 ± 4	8
	RANKL + 20	212 ± 4	14
	RANKL + 40	167 ± 2	32
물참대 줄기	RANKL + 10	221 ± 4	10
	RANKL + 20	166 ± 6	33
	RANKL + 40	147 ± 4	40
바위말발도리 잎	RANKL + 10	208 ± 4	16
	RANKL + 20	177 ± 4	28
	RANKL + 40	49 ± 1	80
바위말발도리 줄기	RANKL + 10	245 ± 8	1
	RANKL + 20	218 ± 2	12
	RANKL + 40	169 ± 10	31
지리말발도리 잎,줄기	RANKL + 10	249 ± 1	0
	RANKL + 20	203 ± 4	18
	RANKL + 40	147 ± 4	40

도 8, 도 9 및 표 17에서 보는 바와 같이, 산딸나무 및 이의 동속 식물 중에서는 곰의말채의 경우에는 잎 추출물과 줄기(수피)의 추출물에서 모두 높은 파골세포 분화 억제율을 나타내는 것을 확인하였으며, 말채나무의 잎 및 줄기의 추출물, 층층나무의 줄기(수피) 추출물과 잎 및 줄기 추출물, 그리고 과병 추출물에서 높은 파골세포 분화 억제율을 나타내는 것을 확인하였다. 그러나 층층나무의 열매에서는 약간 낮은 파골세포 분화 억제율을 나타내는 것을 확인하였다. 또한, 흰말채나무의 잎 및 줄기 추출물과 산딸나무의 잎 추출물, 줄기 추출물과 줄기(수피) 추출물에서도 현저히 높은 분화 억제율을 나타내는 반면, 산딸나무의 열매 추출물에서는 낮은 파골세포 분화 억제율을 나타내는 것을 확인하였으며, 이를 통하여 같은 식물이라도 잎, 줄기 등의 조직에 따라 서로 다른 효과를 나타낸다는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 산수유의 잎 및 줄기 추출물과 열매 추출물에서도 높은 파골세포 분화 억제율을 나타내는 것을 확인하였다.

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	RANKL로 유도한 파골세포의 수	파골세포로의 분화 억제율 (%)
-	-	0 ± 0	-
-	RANKL	252 ± 4	0
곰의말채 잎	RANKL + 10	9 ± 1	97
	RANKL + 20	0 ± 0	100
	RANKL + 40	0 ± 0	100
곰의말채 줄기-수피	RANKL + 10	0 ± 0	100
	RANKL + 20	0 ± 0	100
	RANKL + 40	0 ± 0	100
말채나무 잎,줄기	RANKL + 10	138 ± 11	45
	RANKL + 20	7 ± 2	97
	RANKL + 40	0 ± 0	100
층층나무 줄기-수피	RANKL + 10	0 ± 0	100
	RANKL + 20	0 ± 0	100
	RANKL + 40	0 ± 0	100
층층나무 잎,줄기	RANKL + 10	69 ± 2	73
	RANKL + 20	16 ± 3	94
	RANKL + 40	0 ± 0	100
층층나무 과병	RANKL + 10	24 ± 1	90
	RANKL + 20	0 ± 0	100
	RANKL + 40	0 ± 0	100
층층나무 열매	RANKL + 10	259 ± 12	0
	RANKL + 20	185 ± 12	27
	RANKL + 40	113 ± 7	55
흰말채나무 잎,줄기	RANKL + 10	33 ± 1	87
	RANKL + 20	0 ± 0	100
	RANKL + 40	0 ± 0	100
산딸나무 줄기	RANKL + 10	247 ± 16	2
	RANKL + 20	189 ± 13	25
	RANKL + 40	14 ± 1	95
산딸나무 열매	RANKL + 10	254 ± 8	0
	RANKL + 20	239 ± 5	5
	RANKL + 40	207 ± 4	18
산딸나무 잎	RANKL + 10	256 ± 11	0
	RANKL + 20	68 ± 4	73
	RANKL + 40	0 ± 0	100
산딸나무 줄기-수피	RANKL + 10	202 ± 23	20
	RANKL + 20	56 ± 11	78
	RANKL + 40	0 ± 0	100
산수유 잎,줄기	RANKL + 10	242 ± 22	4
	RANKL + 20	99 ± 4	61
	RANKL + 40	0 ± 0	100
산수유 열매	RANKL + 10	247 ± 4	2
	RANKL + 20	129 ± 1	49
	RANKL + 40	0 ± 0	100

도 10, 도 11 및 표 18에서 보는 바와 같이, 개모시풀 및 이의 동속 식물 중에서는 개모시풀 전초 추출물과 거북꼬리 전초 추출물에서 높은 파골세포 분화 억제율을 나타내는 것을 확인하였다.

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	RANKL로 유도한 파골세포의 수	파골세포로의 분화 억제율 (%)
-	-	0 ± 0	-
-	RANKL	199 ± 2	0
모시풀 전초	RANKL + 5	197 ± 11	1
	RANKL + 10	197 ± 5	1
	RANKL + 20	134 ± 10	32
	RANKL + 50	98 ± 10	51
왕모시풀 전초	RANKL + 0.1	187 ± 14	6
	RANKL + 0.5	178 ± 9	11
	RANKL + 1	174 ± 18	13
섬모시풀 지상부	RANKL + 5	179 ± 10	10
	RANKL + 10	179 ± 10	10
	RANKL + 20	151 ± 15	24
	RANKL + 50	145 ± 15	27
개모시풀 전초	RANKL + 5	196 ± 10	1
	RANKL + 10	164 ± 10	17
	RANKL + 20	133 ± 23	33
	RANKL + 50	0 ± 0	100
좀깨잎나무 전초	RANKL + 5	185 ± 16	7
	RANKL + 10	173 ± 13	13
	RANKL + 20	148 ± 4	25
	RANKL + 50	118 ± 9	41
거북꼬리 전초	RANKL + 5	146 ± 2	27
	RANKL + 10	139 ± 7	30
	RANKL + 20	0 ± 0	100
	RANKL + 50	0 ± 0	100
풀거북꼬리 전초	RANKL + 5	178 ± 3	10
	RANKL + 10	164 ± 5	18
	RANKL + 20	159 ± 13	20
	RANKL + 50	131 ± 1	34

도 12, 도 13 및 표 19에서 보는 바와 같이, 소사나무 및 이의 동속 식물 중에서는 개서어나무의 줄기(수피) 추출물과 잎 및 줄기 추출물, 그리고 서어나무의 꽃 추출물과 서어나무의 줄기(수피) 추출물에서 높은 파골세포 분화 억제율을 나타내는 것을 확인하였다.

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	RANKL로 유도한 파골세포의 수	파골세포로의 분화 억제율 (%)
-	-	0 ± 0	-
-	RANKL	267 ± 4	0
개서어나무 줄기-수피	RANKL + 5	255 ± 6	4
	RANKL + 10	88 ± 11	67
	RANKL + 20	42 ± 8	84
개서어나무 잎,줄기	RANKL + 5	244 ± 8	9
	RANKL + 10	87 ± 4	68
	RANKL + 20	0 ± 0	100
까치박달 가지	RANKL + 5	169 ± 1	37
	RANKL + 10	170 ± 5	37
	RANKL + 20	103 ± 8	62
까치박달 잎	RANKL + 5	239 ± 1	10
	RANKL + 10	223 ± 4	16
	RANKL + 20	149 ± 2	44
서어나무 꽃	RANKL + 10	233 ± 6	13
	RANKL + 20	157 ± 5	41
	RANKL + 40	27 ± 4	90
서어나무 잎	RANKL + 10	222 ± 8	17
	RANKL + 20	152 ± 11	43
	RANKL + 40	74 ± 3	72
서어나무 줄기-수피	RANKL + 10	151 ± 4	43
	RANKL + 20	50 ± 3	81
	RANKL + 40	0 ± 0	100
소사나무 잎,줄기	RANKL + 1	258 ± 2	4
	RANKL + 3	245 ± 10	8
	RANKL + 5	237 ± 12	11

도 14, 도 15, 표 20 및 표 21에서 보는 바와 같이, 왕벚나무 및 이의 동속 식물 중에서는 개살구의 잎 추출물과 줄기 추출물, 줄기(수피) 추출물과 벚나무의 잎 추출물, 복사나무의 줄기(수피) 추출물, 산벚나무의 잎 추출물과 줄기 추출물, 살구나무의 잎 추출물, 섬개벚나무의 줄기(수피) 추출물, 섬벚나무의 줄기(수피) 추출물, 올벚나무의 줄기(수피) 추출물, 왕벚나무의 줄기 추출물에서 높은 파골세포 분화 억제율을 나타내는 것을 확인하였다.

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	RANKL로 유도한 파골세포의 수	파골세포로의 분화 억제율 (%)
-	-	0 ± 0	-
-	RANKL	269 ± 10	0
개벚나무 줄기-수피	RANKL + 10	244 ± 5	9
	RANKL + 20	208 ± 10	23
	RANKL + 40	108 ± 6	60
개살구 잎	RANKL + 10	193 ± 16	28
	RANKL + 20	129 ± 21	52
	RANKL + 40	13 ± 2	95
개살구 줄기	RANKL + 10	169 ± 1	37
	RANKL + 20	46 ± 8	83
	RANKL + 40	14 ± 3	95
개살구 줄기-수피	RANKL + 10	221 ± 4	18
	RANKL + 20	137 ± 5	49
	RANKL + 40	25 ± 2	91
귀룽나무 잎,줄기,꽃	RANKL + 10	237 ± 5	12
	RANKL + 20	235 ± 9	13
	RANKL + 40	218 ± 4	19
벚나무 잎	RANKL + 10	218 ± 9	19
	RANKL + 20	94 ± 2	65
	RANKL + 40	0 ± 0	100
벚나무 줄기-수피	RANKL + 10	205 ± 8	24
	RANKL + 20	200 ± 13	26
	RANKL + 40	79 ± 9	71
복사나무 꽃	RANKL + 10	246 ± 8	9
	RANKL + 20	175 ± 14	35
	RANKL + 40	122 ± 2	55
복사나무 줄기-수피	RANKL + 10	272 ± 8	0
	RANKL + 20	156 ± 19	42
	RANKL + 40	20 ± 1	93
식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	RANKL로 유도한 파골세포의 수	파골세포로의 분화 억제율 (%)
-	-	0 ± 0	-
- 복사나무 잎,줄기	RANKL	269 ± 10	0
	RANKL + 10	221 ± 18	18
	RANKL + 20	210 ± 16	22
	RANKL + 40	99 ± 13	63
산벚나무 잎	RANKL + 10	217 ± 13	20
	RANKL + 20	184 ± 6	32
	RANKL + 40	0 ± 0	100
산벚나무 줄기	RANKL + 10	165 ± 5	39
	RANKL + 20	33 ± 1	88
	RANKL + 40	0 ± 0	100
살구나무 잎	RANKL + 10	212 ± 12	21
	RANKL + 20	109 ± 1	59
	RANKL + 40	22 ± 3	92
살구나무 줄기	RANKL + 10	207 ± 16	23
	RANKL + 20	174 ± 8	35
	RANKL + 40	127 ± 7	53
살구나무 줄기-수피	RANKL + 10	234 ± 6	13
	RANKL + 20	154 ± 6	43
	RANKL + 40	70 ± 4	74
섬개벚나무 잎	RANKL + 10	250 ± 3	7
	RANKL + 20	174 ± 6	35
	RANKL + 40	126 ± 8	53
섬개벚나무 줄기-수피	RANKL + 10	297 ± 5	0
	RANKL + 20	128 ± 15	53
	RANKL + 40	0 ± 0	100
섬벚나무 잎	RANKL + 10	253 ± 13	6
	RANKL + 20	219 ± 15	19
	RANKL + 40	78 ± 6	71

식물명	추출물 농도 (㎍/㎖)	RANKL로 유도한 파골세포의 수	파골세포로의 분화 억제율 (%)
-	-	0 ± 0	-
-	RANKL	269 ± 10	0
섬벚나무 줄기-수피	RANKL + 10	180 ± 13	33
	RANKL + 20	159 ± 4	41
	RANKL + 40	53 ± 4	80
앵도 잎,줄기	RANKL + 10	189 ± 8	30
	RANKL + 20	172 ± 12	36
	RANKL + 40	106 ± 4	61
열녀목 잎,줄기	RANKL + 10	251 ± 6	7
	RANKL + 20	271 ± 2	0
	RANKL + 40	194 ± 8	28
올벚나무 줄기-수피	RANKL + 10	267 ± 4	1
	RANKL + 20	187 ± 9	31
	RANKL + 40	48 ± 6	82
올벚나무 잎,줄기	RANKL + 10	261 ± 15	3
	RANKL + 20	218 ± 14	19
	RANKL + 40	68 ± 4	75
왕벚나무 잎,꽃	RANKL + 10	243 ± 9	10
	RANKL + 20	194 ± 15	28
	RANKL + 40	71 ± 1	74
왕벚나무 줄기	RANKL + 10	121 ± 6	55
	RANKL + 20	59 ± 6	78
	RANKL + 40	0 ± 0	100
자두나무 줄기	RANKL + 10	271 ± 4	0
	RANKL + 20	270 ± 13	0
	RANKL + 40	278 ± 6	0

또한, 표 22 및 표 23에서 보는 바와 같이, 0에 해당하는 양성 대조군에 비하여 파골세포 분화 억제 정도 및 추출물의 농도의 차이는 일부 존재하였지만 대부분의 실험군에서 파골세포 분화를 억제하는 경향성을 확인하였다. 또한, 각 추출물들은 세포 독성이 없거나 크지 않는 농도에서 산딸나무 잎, 굴피나무 잎, 바위말발도리나무 잎 및 꽃, 담쟁이 덩굴 잎 및 줄기, 왕벚나무 잎, 소사나무 잎, 가죽나무 잎 및 개모시풀 잎은 특히 파골세포로의 분화를 더욱 효과적으로 억제하는 것을 확인하였다.

번호	식물명	추출물의 농도 (μg/ml)	RANKL로 분화한 파골세포의 수	파골세포로의 분화억제율(%)
	음성대조군	-	0 ± 0	-
	양성대조군	RANKL	381 ± 5	0
7-28	개모시풀 잎	RANKL + 5	373 ± 6	2
		RANKL + 9	253 ± 6	34
	양성대조군	RANKL	298 ± 9	0
7-10	바위말발도리 잎 및 꽃	RANKL + 5	17 ± 2	94
		RANKL + 10	0 ± 0	100
7-18	산딸나무 잎	RANKL + 5	10 ± 1	97
		RANKL + 10	0 ± 0	100
7-23	소사나무 잎	RANKL + 5	184 ± 8	38
		RANKL + 10	51 ± 4	83
7-29	왕벚나무 잎	RANKL + 5	158 ± 9	47
		RANKL + 10	107 ± 2	64

번호	추출물 농도 (μg/ml)	파골세포로의 분화억제율(%)
7-1	10	세포독성 있음
	20	세포독성 있음
7-4	10	40
	20	47.1
7-5	10	65.9
	20	100
7-6	10	59.8
	20	67.5
7-7	10	42.3
	20	60.4
7-8	10	72.1
	20	100
7-9	10	13
	20	28.4
7-10	10	100
	20	100
7-11	10	23.1
	20	31.2
7-12	10	36.1
	20	36.4
7-13	10	28.7
	20	34.5
7-14	10	25.3
	20	40.3
7-15	10	19
	20	7.77
7-16	10	39.9
	20	27
7-17	10	0
	20	24.2
7-18	10	100
	20	100
7-19	10	10.6
	20	28.1
7-20	10	4.2
	20	6
7-21	10	28.1
	20	23.1
7-22	10	99.1
	20	100
7-23	10	85
	20	100
7-25	10	8.1
	20	15
7-26	10	0
	20	12.6
7-27	10	15
	20	52.5
7-28	10	99.4
	20	100
7-29	10	71.8
	20	86
7-30	10	29
	20	37
7-31	10	33
	20	35
7-32	10	20
	20	52
7-33	10	18.2
	20	68.4

상기 결과들을 통하여, 본 발명에 따른 추출물들을 이용하면 낮은 부작용으로 대식세포에서 파골세포로의 분화를 효과적으로 억제할 수 있다는 것을 확인하였으며 이를 통하여, 본 발명에 따른 추출물들을 효과적으로 골질환의 예방 및 치료에 사용할 수 있다는 것을 확인할 수 있었다.

상기 결과를 이상에서 본 발명에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고, 청구범위에 기재된 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 다양한 수정 및 변형이 가능하다는 것은 해당 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게는 자명할 것이다.

Claims (13)

1. 층층나무속(Cornus) 식물군으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는 골질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물로서,
   상기 층층나무속 식물군은 곰의말채 잎, 곰의말채 수피, 말채나무 잎, 말채나무 줄기, 층층나무 잎, 층층나무 줄기, 층층나무 수피, 층층나무 과병, 흰말채나무 잎, 흰말채나무 줄기, 산딸나무 잎, 및 산딸나무 수피인 것인, 약학 조성물.
2. 삭제
3. 제 1항에 있어서,
   상기 골질환은 파골세포의 골 흡수에 의해 유발되는 것인, 약학 조성물.
4. 제 1항에 있어서,
   상기 골질환은 골다공증, 골연화증, 구루병, 골감소증, 섬유성 골염, 무형성 골질환, 골형성 부전증, 골위축, 파제트(paget's disease), 치주염(periodontitis), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 대사성 골질환 및 암세포의 골전이에 의해 유발되는 뼈의 손상으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 약학 조성물.
5. 층층나무속(Cornus) 식물군으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는 골질환 개선 및 완화용 식품 조성물로서,
   상기 층층나무속 식물군은 곰의말채 잎, 곰의말채 수피, 말채나무 잎, 말채나무 줄기, 층층나무 잎, 층층나무 줄기, 층층나무 수피, 층층나무 과병, 흰말채나무 잎, 흰말채나무 줄기, 산딸나무 잎, 및 산딸나무 수피인 것인, 식품 조성물.
6. 삭제
7. 제 5항에 있어서,
   상기 골질환은 파골세포의 골 흡수에 의해 유발되는 것인, 식품 조성물.
8. 제 5항에 있어서,
   상기 골질환은 골다공증, 골연화증, 구루병, 골감소증, 섬유성 골염, 무형성 골질환, 골형성 부전증, 골위축, 파제트(paget's disease), 치주염(periodontitis), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 대사성 골질환 및 암세포의 골전이에 의해 유발되는 뼈의 손상으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 식품 조성물.
9. (a) 층층나무속(Cornus) 식물군으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 식물을 수득하여 분말화 하는 단계; 및
   (b) 상기 분말을 용매추출장치에서 유기용매로 추출한 뒤 여과하는 단계;를 포함하는, 골질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물의 제조방법으로서,
   상기 층층나무속 식물군은 곰의말채 잎, 곰의말채 수피, 말채나무 잎, 말채나무 줄기, 층층나무 잎, 층층나무 줄기, 층층나무 수피, 층층나무 과병, 흰말채나무 잎, 흰말채나무 줄기, 산딸나무 잎, 및 산딸나무 수피인 것인, 제조방법.
10. 제 9항에 있어서,
    상기 용매추출장치의 온도는 30°C 내지 60°C인, 제조방법.
11. 제 9항에 있어서,
    상기 추출하는 단계는 에탄올 또는 메탄올로 추출하는 것인, 제조방법
12. 제 9항에 있어서,
    상기 제조방법은 (b) 단계 이후에 여과된 여과액을 농축하는 단계를 추가로 포함하는, 제조방법.
13. 제 9항에 있어서,
    상기 골질환은 상기 골질환은 골다공증, 골연화증, 구루병, 골감소증, 섬유성 골염, 무형성 골질환, 골형성 부전증, 골위축, 파제트(paget's disease), 치주염(periodontitis), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 대사성 골질환 및 암세포의 골전이에 의해 유발되는 뼈의 손상으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 제조방법.

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