KR102640518B1 - 프루누스 속 식물의 추출물을 포함하는 항-코로나 바이러스용 조성물 - Google Patents

프루누스 속 식물의 추출물을 포함하는 항-코로나 바이러스용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 프루누스(Prunus) 속 식물의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항-코로나 바이러스용 조성물; 및 상기 조성물을 포함하는 코로나바이러스 감염의 예방, 개선 또는 치료를 위한 약학적 조성물, 식품 조성물, 건강기능식품, 의약외품 조성물, 화장료 조성물 및 사료 첨가제에 관한 것이다.
본 발명에서 프루누스 세라소이데스(Prunus cerasoides), 프루누스 세룰라타(Prunus serrulata), 프루누스 펜두라(Prunus pendula), 프루누스 세라수스(Prunus cerasus), 프루누스 레베일레아나(Prunus leveilleana), 프루누스 사르겐티(Prunus sargentii) 또는 이들의 혼합 추출물은 TMPRSS2 및 ACE2 유전자 발현을 저해함으로써 코로나 바이러스가 숙주세포 내로 진입하는 것을 억제하는 것을 특징으로 하는바, 코로나바이러스 감염의 예방, 개선 또는 치료를 위한 약학적 조성물, 식품 조성물, 건강기능식품, 손 세정제와 같은 의약외품 조성물, 화장료 조성물 또는 사료 첨가제 등으로 활용될 수 있다.

Description

프루누스 속 식물의 추출물을 포함하는 항-코로나 바이러스용 조성물 {Composition for anti-coronavirus containing extract of Prunus genus}
본 발명은 프루누스(Prunus) 속 식물의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항-코로나 바이러스용 조성물, 상기 조성물을 포함하는 코로나바이러스 감염의 예방, 개선 또는 치료를 위한 약학적 조성물, 식품 조성물, 의약외품 조성물, 화장료 조성물 및 사료 첨가제에 관한 것이다.
최근 전 세계적으로 유행하고 있는 코로나 바이러스감염증-19(corona virus disease 19, COVID-19)는 신종 코로나 바이러스 SARS-CoV-2 감염에 의한 호흡기 증후군으로, 이를 유발하는 SARS-CoV-2는 코로나 바이러스과(Coronaviridae)에 속하는 RNA 바이러스에 해당한다. 현재까지 코로나 바이러스감염증-19는 비말(침방울)이나 접촉을 통해 전파되는 것으로 알려져 있으며, 감염시 발열, 권태감, 기침, 호흡곤란 및 폐렴 등 경증에서 중증까지 다양한 호흡기 감염증을 나타내는 것을 특징으로 한다. 국가별, 연령별 치명률의 수준은 매우 상이하나, 전세계 치명률이 평균 약 3.85%(WHO, 2020년 8월 1일 기준)에 달하는 점에서 보건·의료 뿐 아니라 사회·경제적으로도 전세계에 큰 위협이 되고 있는 상황이다.
한편, 코로나 바이러스는 바이러스 막 바깥쪽 표면에 돌기형태의 단백질(스파이크 단백질)이 촘촘히 달려있는 구조를 갖고 있는데, 이는 숙주세포와 강하게 결합하여 바이러스가 숙주세포 내로 빠르게 진입할 수 있도록 지지하는 역할을 수행한다. 극저온전자현미경(Cryo-EM) 분석을 통해 SARS-CoV-2의 3차원 입체 구조를 분석한 결과, 사스(SARS) 바이러스의 스파이크 단백질과 매우 비슷한 형태임이 확인되었고(Walls et al., 2020; Wrapp et al., 2020), 이러한 형태적 유사성으로 인해 SARS-CoV-2 또한 ACE2(angiotensin-converting enzyme 2) 수용체를 통해 숙주세포의 표면에 강하게 부착된다는 것이 최근 밝혀졌다(Zhou et al., 2020, Yan et al., 2020). 또한, 결합 이후 숙주세포에 존재하는 단백질 가위가 스파이크 단백질의 일부를 자른 뒤에야 비로소 바이러스가 세포 내로 침투하게 되는데, SARS-CoV-2의 경우 호흡기 세포막에 있는 TMPRSS2(transmembrane protease serine subtype 2)를 단백질 가위로 사용한다는 것이 밝혀졌다(Hoffmann et al., 2020).
이처럼 코로나 바이러스와 숙주세포의 결합은 바이러스 감염의 첫 번째 단계에 해당하므로, 연구자들은 이러한 단계를 감염 전 차단하는 전략을 백신이나 초기 치료제 개발에 활용하고 있다. 그러나 아직까지 SARS-CoV-2의 감염 예방에 활용될 수 있는, 인체에 안전하면서도 효과적인 소재의 개발에 대한 성과가 미미하고, 앞으로도 상당한 시간이 소요될 것으로 예상되는 상황이다.
이러한 배경 하에, 본 발명자들은 천연물로부터 유래되어 인체에 유해한 영향을 미치지 않으면서도 TMPRSS2 및 ACE2 유전자 발현을 효과적으로 억제하여 코로나 바이러스의 감염을 사전에 예방하거나 코로나 바이러스로 인한 감염성 질환을 개선 또는 치료할 수 있는 소재를 개발하고자 예의 노력한 결과, 프루누스 세라소이데스(Prunus cerasoides), 프루누스 세룰라타(Prunus serrulata), 프루누스 펜두라(Prunus pendula), 프루누스 세라수스(Prunus cerasus), 프루누스 레베일레아나(Prunus leveilleana), 프루누스 사르겐티(Prunus sargentii) 또는 이들의 혼합 추출물이 TMPRSS2 및 ACE2 유전자 발현을 현저히 억제하는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하기에 이르렀다. 이를 포함하는 본 발명의 조성물은 코로나바이러스 감염증-19(corona virus disease 19)을 비롯한 코로나 바이러스 감염의 예방, 개선 또는 치료를 위한 약학적 조성물 또는 식품 조성물 등으로 활용될 수 있을 것이다.
본 발명은 전술한 문제 및 이와 연관된 다른 문제를 해결하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 일 예시적 목적은 프루누스(Prunus) 속 식물의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항-코로나 바이러스용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 예시적 목적은 상기 항-코로나 바이러스용 조성물을 포함하는 코로나바이러스 감염의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 예시적 목적은 목적은 상기 항-코로나 바이러스용 조성물을 포함하는 코로나바이러스 감염의 예방 또는 개선을 위한 식품 조성물; 및 상기 식품 조성물을 포함하는 건강기능식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 예시적 목적은 목적은 상기 항-코로나 바이러스용 조성물을 포함하는 코로나바이러스 감염의 예방 또는 개선을 위한 의약외품 조성물, 화장료 조성물 및 사료 첨가제를 제공하는 것이다.
본 명세서에 개시된 발명의 기술적 사상에 따라 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 문제점을 해결하기 위한 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제는 아래의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 출원에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 출원에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 출원의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 출원의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 하나의 양태는 프루누스(Prunus) 속 식물의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항-코로나 바이러스용 조성물을 제공한다.
특히, 상기 프루누스(Prunus) 속 식물의 추출물은 프루누스 세라소이데스(Prunus cerasoides), 프루누스 세룰라타(Prunus serrulata), 프루누스 펜두라(Prunus pendula), 프루누스 세라수스(Prunus cerasus), 프루누스 레베일레아나(Prunus leveilleana), 프루누스 사르겐티(Prunus sargentii) 또는 이들의 혼합 추출물을 의미하는 것으로, 이를 포함하는 조성물은 TMPRSS2 및 ACE2 유전자 발현을 저해함으로써 코로나 바이러스가 숙주세포 내로 진입하는 것을 억제하는 것을 특징으로 한다. 이러한 특징으로 인해 본 발명은 코로나바이러스 감염증-19(corona virus disease 19)을 비롯한 코로나 바이러스의 감염 예방, 개선 또는 치료를 위한 약학적 조성물 또는 식품 조성물 등으로 유용하게 활용될 수 있다.
본 발명에서 용어 "프루누스(Prunus) 속"은 벚나무 속, 즉 벚나무아과의 단형 족인 벚나무족에 속하는 유일한 속을 의미한다. 구체적으로, 본 발명에서 상기 프루누스 속 식물은 프루누스 세라소이데스(Prunus cerasoides), 프루누스 세룰라타(Prunus serrulata), 프루누스 펜두라(Prunus pendula), 프루누스 세라수스(Prunus cerasus), 프루누스 레베일레아나(Prunus leveilleana), 또는 프루누스 사르겐티(Prunus sargentii)를 의미할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. "프루누스 세라소이데스"는 인도 북부의 히마찰 프라데시(Himachal Pradesh)에서 중국 남서부, 버마 및 태국까지의 히말라야 산맥에 분포하며, 주로 관상용 나무로 재배된다. "프루누스 세룰라타"는 일본 벚꽃(Japanese cherry), 동아시아 벚꽃(East Asian cherry) 등으로 불리우며, 벚꽃 축제나 전시를 위해 관상용으로 재배된다. "프루누스 펜두라"는 꽃이 잎보다 먼저 핌과 동시에 다른 벚나무보다 일찍 꽃이 피므로 올벚나무라고도 불리우며, 한국 및 일본에 분포한다. 가지가 수양버들처럼 밑으로 처지는 것을 처진올벚나무(P.　pendula)라고 하며, 정원과 공원 등지에 심는다. "프루누스 세라수스"는 유럽과 남서 아시아에 주로 분포하며, 수프, 케이크, 타르트 등 요리에 많이 사용된다. "프루누스 레베일레아나"는 4월에 꽃이 피고 열매는 둥근 핵과로 6월에 검붉게 익으며, 열매는 식용하거나 세공업용으로 쓰고 나무는 관상용, 도구재로 쓴다. "프루누스 사르겐티"는 주로 동아시아에 분포하는 종으로 산벚나무라고도 불리고, 병해가 적고 수명이 긴 장점이 있으며, 5~6월에 익는 열매는 사람이 먹을 수 있다.
본 발명에서 용어 "추출물"은 목적하는 물질의 추출처리에 의하여 얻어지는 추출액 또는 원액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 본 발명의 상기 추출물을 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출, 냉침 추출, 용매 추출, 수증기 증류, 용출법, 압착법, 착즙 추출, 초음파 추출, 여과, 환류 추출 등이 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다. 또한, 상기 추출물의 추출에 사용되는 추출용매의 종류는 특별히 제한되지 않으며,　당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 구체적으로, 상기 추출용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올을 포함한 유기용매, 무기용매 및 이들의 혼합　용매로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있다.
구체적으로, 본 발명에서 추출물은 프루누스 세라소이데스(Prunus cerasoides), 프루누스 세룰라타(Prunus serrulata), 프루누스 펜두라(Prunus pendula), 프루누스 세라수스(Prunus cerasus), 프루누스 레베일레아나(Prunus leveilleana), 프루누스 사르겐티(Prunus sargentii)의 추출물, 또는 이들의 혼합 추출물을 의미할 수 있다. 상기 프루누스 속 식물은 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다. 구체적으로, 본 발명에서 프루누스 속 식물의 추출물은 프루누스 속 식물의 메탄올 추출물 또는 착즙 추출물일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
아울러, 본 발명의 상기 추출물은 푸르누스 속 식물의 줄기, 잎, 수피, 꽃, 가지, 열매, 뿌리, 심재, 전초 또는 이들의 조합으로부터 추출될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 용어 "항-코로나 바이러스"는 코로나 바이러스의 개체 내 감염, 세포 내 진입 및 증식 억제, 코로나 바이러스로 인해 매개/발병되는 질환을 개선하거나 예방 또는 치료하는 것을 모두 포함한다. 구체적으로, 상기 항-코로나 바이러스는 코로나 바이러스가 숙주세포 내로 진입하는 것을 억제하여 코로나 바이러스로 인해 매개/발병되는 질환을 예방, 개선 또는 치료하는 것일 수 있으며, 상기 코로나 바이러스로 인해 매개/발병되는 질환으로는, 예컨대 코로나바이러스 감염증-19(corona virus disease 19) 등이 있을 수 있으나 이에 특별히 제한되지 않는다. 본 발명 조성물이 코로나 바이러스가 숙주세포 내로 진입하는 것을 억제하는 효과는 TMPRSS2 및/또는 ACE2 유전자의 발현을 저해함으로써 나타날 수 있다.
상기 "TMPRSS2(transmembrane protease serine subtype 2)"는 2형 막관통 세린 프로테아제에 속하는 효소 단백질로, 2형 막관통 도메인, 칼슘과 결합할 수 있는 A형 수용체 도메인 및 다른 세포 외피나 분자와 결합할 때 쓰이는 시스테인이 풍부한 A그룹 청소수용체 등으로 구성되어 있다. 이는 여러 생리학적, 병리학적 프로세스와 관련이 있는데, 코로나 바이러스가 세포 내로 진입할 때 수행하는 역할이 있으며, 특히 호흡계통에 있는 세포의 외피에서 더 자주 볼 수 있는 프로테아제인 TMPRSS2와 TMPRSS11a는 사스 코로나 바이러스(SARS-CoV)가 세포 내로 진입하는 것을 돕는다. 또한, TMPRSS2와 TMPRSS11d는 ACE2 수용체와의 배위 결합을 통해 바이러스의 침입을 더 용이하게 만드는 것으로 알려져 있다.
상기 "ACE2(angiotensin-converting enzyme 2)"는 폐, 동맥, 심장 및 신장 등의 세포막에 부착된 효소로, SARS-CoV를 포함하는 몇몇 코로나 바이러스의 세포 내 진입 지점(entry point) 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 구체적으로, SARS-CoV 및 SARS-CoV-2의 스파이크 S1 단백질과 세포 표면에 존재하는 ACE2의 효소 도메인의 결합은 세포 내 존재하는 바이러스 및 효소 모두를 세포 내로 이동하게 하고, 바이러스의 엔도사이토시스(endocytosis)를 일으키는 것으로 알려져 있다.
본 발명의 일 실시예에서는 프루누스 세라소이데스 추출물을 포함한 여러 종의 프루누스 속 식물 추출물을 처리한 경우, TMPRSS2 및 ACE2 mRNA의 전사 억제 활성이 현저히 우수함을 확인하였다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 다른 하나의 양태는 항-코로나 바이러스용 조성물을 포함하는 상기 항-코로나 바이러스용 조성물을 포함하는, 코로나바이러스 감염의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물을 제공한다. 구체적으로, 상기 코로나 바이러스 감염은 코로나 바이러스로 인한 감염성 질환을 의미할 수 있고, 구체적으로 코로나바이러스 감염증-19(corona virus disease 19)을 의미할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 용어 "예방"은 본 발명의 약학적 조성물의 투여를 통해 코로나 바이러스 감염을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하며, 본 발명의 용어 "치료"는 본 발명의 약학 조성물을 투여함으로써 코로나 바이러스 감염이 호전 또는 완화되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 약학적 조성물은 상기 프루누스 속 식물의 추출물 이외에 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제의 구체적인 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등이 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제 및 동결 건조제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있으며, 상기 제형은 경구 또는 비경구의 여러 가지 형태일 수 있다. 제제화할 경우에는 통상적으로 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 구체적으로, 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 사용될 수 있으며, 상기 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등이 사용될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제 등이 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 사용될 수 있으며, 통상적으로 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 사용될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 또는 좌제 등이 사용될 수 있다. 상기 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테로 등이 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
약학적 조성물의 구체적인 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 예컨대 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주 된다.
본 발명 약학적 조성물의 개별적인 투약의 최적량 및 투약 간격은 치료되고 있는 병의 성질 및 정도, 투여 제형, 경로 및 부위, 그리고 개체의 나이와 건강상태에 의해 결정될 것이고, 의사가 궁극적으로 사용될 적절한 투약을 결정할 것이라는 것은 당해 분야의 당업자가 알 수 있을 것이다. 이러한 투약은 적절할 정도로 자주 반복될 수 있다. 부작용이 생긴다면, 보통의 임상 진료에 따라서 투여량 및 빈도를 변경하거나 또는 감소시킬 수 있다. 또한, 본 발명 조성물의 투여 경로는 본 발명의 목적을 달성할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 예를 들어 본 발명의 약학적 조성물은 복강내 투여, 정맥내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 약학적 조성물은 쥐, 개, 고양이, 소, 말, 돼지, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 다른 하나의 양태는 항-코로나 바이러스용 조성물을 포함하는 코로나바이러스 감염의 예방 또는 개선을 위한 식품 조성물; 및 상기 식품 조성물을 포함하는 건강기능식품을 제공한다.
구체적으로, 상기 코로나 바이러스 감염은 코로나 바이러스로 인한 감염성 질환을 의미할 수 있고, 구체적으로 코로나바이러스 감염증-19(corona virus disease 19)을 의미할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 용어 "개선"은 본 발명의 식품 조성물 또는 건강기능식품의 투여를 통해 코로나 바이러스 감염 증상이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 용어 "식품"은 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료, 비타민 복합제, 건강 기능(성)　식품　및 건강　식품　등이 있고, 식품첨가제 형태를 포함하며, 통상적인 의미에서의　식품을 모두 포함한다.
상기 "건강 기능(성)　식품(functional food)"은 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은　식품을 의미한다. 여기서 "기능(성)"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의　식품 조성물은 당 업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조 가능하며, 제조시에는 당 업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 상기　식품의 제형 또한　식품으로 인정되는 제형이면 제한없이 제조될 수 있다.
상기 "건강　식품(health food)"은 일반식품에 비해 적극적인 건강유지나 증진 효과를 가지는　식품을 의미하고, 건강보조식품(health supplement food)은 건강보조 목적의　식품을 의미한다. 본 명세서 내에서 건강 기능　식품, 건강식품, 건강보조식품의 용어는 혼용될 수 있다. 구체적으로, 상기 건강 기능　식품은 본 발명의 추출물 또는 분획물을 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의　식품　소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한　식품으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져 오는 것을 의미하나, 일반 약품과는 달리　식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용이 없는 장점이 있다. 본 발명의　식품　조성물은 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 코로나 바이러스의 감염 예방 또는 개선 등에 대하여 높은 효과를 기대할 수 있고, 유용하게 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 식품　조성물은 생리학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있는데, 담체의 종류는 특별히 제한되지 않으며 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다. 또한, 상기　식품　조성물은　식품　조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예들 들어, 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin), 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid) 등을 포함할 수 있다. 또한, 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca), 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu), 크륨(Cr) 등의 미네랄을 포함할 수 있다. 또한, 라이신, 트립토판, 시스테인, 발린 등의 아미노산을 포함할 수 있다. 또한, 상기　식품　조성물은 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 데히드로초산나트륨 등), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시톨류엔(BHT) 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의　식품　첨가물(food additives)을 포함할 수 있다. 상기 첨가물은　식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용될 수 있다. 본 발명의 추출물 또는 분획물은 그대로 첨가되거나 다른　식품　또는　식품　성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 다른 하나의 양태는 항-코로나 바이러스용 조성물을 포함하는 코로나바이러스 감염의 예방 또는 개선을 위한 의약외품 조성물을 제공한다.
구체적으로, 상기 코로나 바이러스 감염은 코로나 바이러스로 인한 감염성 질환을 의미할 수 있고, 구체적으로 코로나바이러스 감염증-19(corona virus disease 19)을 의미할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 용어 "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 대한민국 약사법에 따르면　의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람ㆍ동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않는 제품 등이 포함된다.
본 발명의　의약외품　조성물은 연고제, 로션제, 스프레이제, 패취제, 크림제, 산제, 현탁제, 겔제 또는 필터충진제의 형태로 제조할 수 있고, 구체적으로 소독청결제, 물티슈, 고체 비누, 액체 비누, 손 세정제 또는 손 소독제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 항-코로나 바이러스용 조성물을 의약외품　첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른　의약외품　또는　의약외품　성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 다른 하나의 양태는 항-코로나 바이러스용 조성물을 포함하는 코로나바이러스 감염의 예방 또는 개선을 위한 화장료 조성물을 제공한다.
구체적으로, 상기 코로나 바이러스 감염은 코로나 바이러스로 인한 감염성 질환을 의미할 수 있고, 구체적으로 코로나바이러스 감염증-19(corona virus disease 19)을 의미할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기　화장료　조성물은 용액, 외용연고, 크림, 폼, 영양화장수, 유연화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업베이스, 에센스, 립밤, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 헤어샴푸, 선스크린크림, 선오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 출원의　화장료　조성물은 일반 피부　화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 출원의　화장료　조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 제형에 따라 다양하게 선택할 수 있다. 예컨대, 상기 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물을 이용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 항-코로나 바이러스용 조성물을 화장료 조성물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 상기 조성물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 다른 하나의 양태는 항-코로나 바이러스용 조성물을 포함하는 코로나바이러스 감염의 예방 또는 개선을 위한 사료 첨가제를 제공한다.
구체적으로, 상기 코로나 바이러스 감염은 코로나 바이러스로 인한 감염성 질환을 의미할 수 있고, 구체적으로 코로나바이러스 감염증-19(corona virus disease 19)을 의미할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 용어 "사료 첨가제"는 영양적 또는 특정 목적을 위하여 사료에 미량으로 첨가되는 물질을 총칭하는 것으로, 본 발명에서는 코로나바이러스 감염의 예방 또는 개선을 목적으로 첨가되는 물질을 의미한다. 여기서, 동물이란 가축 및 애완동물을 포함하는 개념이다.
본 발명의　사료첨가제에는 품질 저하를 방지하기 위해 첨가되는 결착제, 유화제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있고, 효용 증대를 위하여 첨가되는 광물질제제, 미네랄제제, 보호지방산제, 아미노산제, 비타민제, 효소제, 생균제(유산균제), 향미제, 비단백태 질소화합물, 규산염제, 완충제, 착색제, 추출제, 올리고당 등을 추가로 포함할 수 있으며, 그 외에도 사료 혼합제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 이에 한정된 것은 아니다.
본 발명에서 프루누스 세라소이데스(Prunus cerasoides), 프루누스 세룰라타(Prunus serrulata), 프루누스 펜두라(Prunus pendula), 프루누스 세라수스(Prunus cerasus), 프루누스 레베일레아나(Prunus leveilleana), 프루누스 사르겐티(Prunus sargentii) 또는 이들의 혼합 추출물은 TMPRSS2 및 ACE2 유전자 발현을 저해함으로써 코로나 바이러스가 숙주세포 내로 진입하는 것을 억제하는 것을 특징으로 하는바, 코로나바이러스 감염증-19(corona virus disease 19)를 비롯한 코로나 바이러스 감염의 예방, 개선 또는 치료를 위한 약학적 조성물, 식품 조성물, 건강기능식품, 의약외품, 화장료 조성물 또는 사료 첨가제 등으로 활용될 수 있다.
다만, 본 명세서에 개시된 기술의 일 실시예에 따른 효과는 이상에서 언급한 것들로 제한되지 않으며, 언급하지 않은 또 다른 효과들은 아래의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본 명세서에서 인용되는 도면을 보다 충분히 이해하기 위하여 각 도면의 간단한 설명이 제공된다.
도 1은 프루누스 세라소이데스(Prunus cerasoides), 프루누스 세룰라타(Prunus serrulata), 프루누스 펜두라(Prunus pendula), 프루누스 레베일레아나(Prunus leveilleana) 및 프루누스 사르겐티(Prunus sargentii) 추출물(3 X 10-6 g/ml)의 TMPRSS2 mRNA의 전사 억제 활성을 확인한 결과를 나타낸다.
도 2는 프루누스 세라소이데스(Prunus cerasoides), 프루누스 세룰라타(Prunus serrulata), 프루누스 펜두라(Prunus pendula), 프루누스 레베일레아나(Prunus leveilleana) 및 프루누스 사르겐티(Prunus sargentii) 추출물(3 X 10-6 g/ml)의 ACE2 mRNA의 전사 억제 활성을 확인한 결과를 나타낸다.
도 3은 프루누스 세라수스(Prunus cerasus) 추출물의 TMPRSS2 mRNA의 전사 억제 활성을 확인한 결과를 나타낸다. 착즙 방식으로 추출된 프루누스 세라수스 추출물을 1/100 (TC-2) 및 1/1000 (TC-3) 농도로 희석하여 실험한 결과를 나타낸다.
도 4는 프루누스 세라수스(Prunus cerasus) 추출물의 ACE2 mRNA의 전사 억제 활성을 확인한 결과를 나타낸다. 착즙 방식으로 추출된 프루누스 세라수스 추출물을 1/100 (TC-2) 및 1/1000 (TC-3) 농도로 희석하여 실험한 결과를 나타낸다.
도 5는 프루누스 세라소이데스(Prunus cerasoides) 및 프루누스 세룰라타(Prunus serrulata)의 혼합 추출물의 TMPRSS2 mRNA의 전사 억제 활성을 확인한 결과를 나타낸다. A는 프루누스 세라소이데스 및 제주산 프루누스 세룰라타의 혼합 추출물; B는 프루누스 세라소이데스 및 경상북도산 프루누스 세룰라타의 혼합 추출물; C는 제주산 프루누스 세룰라타 및 경상북도산 프루누스 세룰라타의 혼합 추출물; 및 D는 프루누스 세라소이데스, 제주산 프루누스 세룰라타 및 경상북도산 프루누스 세룰라타의 혼합 추출물을 나타낸다.
도 6은 프루누스 세라소이데스(Prunus cerasoides) 및 프루누스 세룰라타(Prunus serrulata)의 혼합 추출물의 ACE2 mRNA의 전사 억제 활성을 확인한 결과를 나타낸다. A는 프루누스 세라소이데스 및 제주산 프루누스 세룰라타의 혼합 추출물; B는 프루누스 세라소이데스 및 경상북도산 프루누스 세룰라타의 혼합 추출물; C는 제주산 프루누스 세룰라타 및 경상북도산 프루누스 세룰라타의 혼합 추출물; 및 D는 프루누스 세라소이데스, 제주산 프루누스 세룰라타 및 경상북도산 프루누스 세룰라타의 혼합 추출물을 나타낸다.
이하, 본 발명을 하기 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예만으로 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 프루누스 속 식물의 추출물 준비
프루누스 세라소이데스(Prunus cerasoides), 프루누스 세룰라타(Prunus serrulata), 프루누스 펜두라(Prunus pendula), 프루누스 레베일레아나(Prunus leveilleana) 및 프루누스 사르겐티(Prunus sargentii) 추출물은 한국식물추출물은행에서 구입하여 사용하였다. 상기 추출물은 99.9% 메탄올을 용매로 사용하여 SD-ULTRASONIC CLEANER (SDN-900H)에서 추출된 것이다.
프루누스 세라수스(Prunus cerasus) 추출물은 자연을포유에서 구매하여 사용하였다. 상기 추출물은 착즙 방식으로 추출된 것이다.
실험예 1: 프루누스 속 식물 단독 추출물의 TMPRSS2 및 ACE2 유전자 전사 억제 활성 확인
푸루누스 속 식물 추출물의 TMPRSS2 및 ACE2 유전자의 전사활성 억제 효과를 확인하기 위하여 TRPRSS2와 ACE2의 발현이 높다고 알려진 MCF-7(인간 유방암 세포주)를 American Tissue Culture Collection(USA)으로부터 구입하여 사용하였다. MCF-7는 phenol red DMEM, 10% FBS, 1% antibiotics 및 1% NEAA 조성의 배지에 배양하였으며, 2.5 x 105 cells/well의 농도로 6 well plate에 seeding 하였다.
24시간 후 cell의 confluency가 70% 정도 되었을 때, phenol red-free DMEM, 10% CD-FBS, 1% antibiotics 및 1% NEAA 조성의 배지에 프루누스 속 식물 추출물을 처리하였다. 프루누스 세라소이데스(Prunus cerasoides), 프루누스 세룰라타(Prunus serrulata), 프루누스 펜두라(Prunus pendula), 프루누스 레베일레아나(Prunus leveilleana) 및 프루누스 사르겐티(Prunus sargentii) 추출물은 3 X 10-6 g/ml 농도로 2.5ml 처리하였고, 프루누스 세라수스(Prunus cerasus)는 착즙 방식으로 추출된 추출물을 1/100 (TC-2) 및 1/1000 (TC-3) 농도로 희석하여 배지에 2.5ml 처리하였다.
24시간 동안 추출물을 처리한 세포에서 트리졸(Trizol)을 이용하여 mRNA를 추출하였다. ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover (Toyobo)를 이용하여 일정량의 mRNA (0.5μg)를 역전사 반응하여 cDNA를 얻었다. cDNA, 표적 유전자의 cDNA를 인식할 수 있는 한 쌍의 프라이머와 PCR SYBR green kit(Qiagen) 시약을 이용하여 실시간(real-time) PCR을 수행하여 해당 유전자의 발현량을 정량적으로 측정하였다.
여러 단계의 반응에 대한 기술적인 실수를 보완하기 위하여 하우스키핑 유전자인 GAPDH에 대한 발현량을 동시에 측정하며, 이 유전자의 발현량과 표적유전자의 발현량의 비를 최종적인 정량 분석에 사용하였다. GAPDH를 인식하는 프라이머로 forward 5‘-GGCTGAGAACGGGAAGCTTGTCAT-3'(서열번호 1) 및 reverse 5’-CAGCCTTCTCCATGGTGGTGAAGA-3'(서열번호 2)을 사용하였다.
푸루누스 속 식물 추출물의 표적유전자로서 TMPRSS2와 ACE2의 발현도를 측정하였다. human TMPRSS2를 인식하는 프라이머로 forward 5'-gtgacagtggagggcctctgg-3'(서열번호 3) 및 reverse 5'-cgtcaaggacgaagaccatgt-3'(서열번호 4)을 사용하였고, human ACE2를 인식하는 프라이머로 forward 5'-CGAGTGGCTAATTTGAAACCAAGAA-3'(서열번호 5) 및 reverse 5'-ATTGATACGGCTCCGGGACA-3'(서열번호 6)을 사용하였다.
Real-time PCR은 TMPRSS2의 경우 약 40 사이클(95°C; 15초, 56°C; 45초, 72°C; 30초), ACE2의 경우 약 50 사이클(95°C; 15초, 60°C; 30초)로 수행하였다. 각각의 유전자 발현 곡선을 logarithm으로 표현한 후 threshold cycle(CT) 값을 수학적으로 얻어, 이 값을 2-DDCT 대입하여 얻은 값이 특정 유전자의 상대적인 발현량을 나타내었다. 특정 유전자의 발현량을 하우스 키핑 유전자의 발현량으로 나누어 해당 유전자 발현량에 대한 최종 값을 계산하였다.
그 결과, 도 1 내지 4에 나타낸 바와 같이, 푸루누스 속 식물 추출물을 처리한 실험군에서는 대조군 대비 TMPRSS2 및 ACE2의 발현이 현저히 억제됨을 확인하였다.
실험예 2: 프루누스 속 식물 혼합 추출물의 TMPRSS2 및 ACE2 유전자 전사 억제 활성 확인
실험예 1과 같은 방식으로, 프루누스 세라소이데스 및 제주산 프루누스 세룰라타의 혼합 추출물; 프루누스 세라소이데스 및 경상북도산 프루누스 세룰라타의 혼합 추출물; 제주산 프루누스 세룰라타 및 경상북도산 프루누스 세룰라타의 혼합 추출물; 및 프루누스 세라소이데스, 제주산 프루누스 세룰라타 및 경상북도산 프루누스 세룰라타의 혼합 추출물의 TMPRSS2 및 ACE 유전자 전사 억제 활성을 확인하였다.
그 결과, 도 5 및 도 6에 나타낸 바와 같이, 상기 혼합 추출물을 처리한 실험군에서도 대조군 대비 TMPRSS2 및 ACE2의 발현이 현저히 억제됨을 확인하였다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
<110> Sookmyung Women's university industry-academic cooperation foundation <120> Composition for anti-coronavirus containing extract of Prunus genus <130> KPA01527 <160> 6 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequence <400> 1 ggctgagaac gggaagcttg tcat 24 <210> 2 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequence <400> 2 cagccttctc catggtggtg aaga 24 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequence <400> 3 gtgacagtgg agggcctctg g 21 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequence <400> 4 cgtcaaggac gaagaccatg t 21 <210> 5 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequence <400> 5 cgagtggcta atttgaaacc aagaa 25 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequence <400> 6 attgatacgg ctccgggaca 20

Claims (11)

  1. 프루누스(Prunus) 속 식물의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항-코로나 바이러스용 조성물로서, 상기 프루누스 속 식물은 프루누스 세라소이데스(Prunus cerasoides), 프루누스 세룰라타(Prunus serrulata), 프루누스 펜두라(Prunus pendula), 프루누스 세라수스(Prunus cerasus), 프루누스 레베일레아나(Prunus leveilleana), 프루누스 사르겐티(Prunus sargentii) 또는 이들의 조합인 것인, 조성물.
  2. 삭제
  3. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 TMPRSS2(transmembrane protease serine subtype 2) 및 ACE2(angiotensin-converting enzyme 2) 유전자의 발현을 저해하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 항-바이러스는 코로나 바이러스가 숙주세포 내로 진입하는 것을 억제하는 것인, 조성물.
  5. 제1항, 제3항 및 제4항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 코로나바이러스 감염의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물.
  6. 제1항, 제3항 및 제4항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 코로나바이러스 감염의 예방 또는 개선을 위한 식품 조성물.
  7. 제6항의 식품 조성물을 포함하는 코로나바이러스 감염의 예방 또는 개선을 위한 건강기능식품.
  8. 제1항, 제3항 및 제4항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 코로나바이러스 감염의 예방 또는 개선을 위한 의약외품 조성물.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 의약외품 조성물은 소독청결제, 물티슈, 고체 비누, 액체 비누, 손 세정제 또는 손 소독제의 제조에 사용되는, 의약외품 조성물.
  10. 제1항, 제3항 및 제4항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 코로나바이러스 감염의 예방 또는 개선을 위한 화장료 조성물.
  11. 제1항, 제3항 및 제4항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 코로나바이러스 감염의 예방 또는 개선을 위한 사료 첨가제.
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