KR20220096277A - 생열귀나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 조성물 - Google Patents

생열귀나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 생열귀나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 생열귀나무 추출물은 세포 독성이 없고, 모 유두 세포(HHDPC) 및 각질형성세포(HaCaT)의 세포 증식을 촉진하며, 동물 탈모 모델에서 임상적으로 모발 굵기 및 밀도를 증가시켜 발모를 촉진하고, 모낭 수와 bulb 크기도 유의성 있게 증가시키는데 우수한 효과가 있으므로, 의약품, 식품, 및 화장품 분야에서 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진의 목적으로 유용하게 이용 가능하다.

Description

생열귀나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 조성물{Composition for Preventing or Treating Hair Loss or Stimulating Hair Sprouting or Hair Growth Comprising Extracts of Rosa davurica Pall as Active Ingredient}
본 발명은 생열귀나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 조성물에 관한 것이다.
인체에 있어서 모발은 피부에 있는 모낭에서 자라나며 모발이 자라나는 모낭은 안쪽뿌리 상피집, 바깥뿌리 상피집, 털 줄기, 털 바탕질 등으로 구성된 복잡한 기관으로 일생동안 성장기, 퇴행기, 휴지기 등의 주기가 지속적으로 반복되는 특징이 있다.
특히, 모낭을 형성하는 세포 중 진피유두 세포는 모발의 성장에 있어서 중요한 역할을 하며, 모낭의 성장기에 진피유두를 둘러싸고 있는 기질의 각질세포를 포함한 모낭의 구성세포들의 증식이 일어난다. 모낭의 퇴행기에는 모낭의 성장이 중단되며 세포사멸(apoptosis)과 진피유두의 응축 및 세포외기질의 재구성이 일어나고 모낭이 다시 성장기로 들어가기 위해 준비하는 단계인 휴지기에는 융기부위를 포함하는 영구적으로 지속되는 부분만이 남아있게 된다.
탈모란 모낭의 성장주기 중 성장기의 모낭에서 자라는 모발보다 퇴행기 또는 휴지기의 모낭에서 자라는 모발의 비율이 높아져 비정상적으로 빠지는 모발이 증가함을 말한다. 최근 외모를 중시하는 경향이 두드러지면서 탈모에 대한 관심도 증가하고 있다. 이러한 탈모의 원인으로는 혈액순환 불량설, 남성호르몬 작용 과잉설, 피지분비 과잉설, 과산화물과 세균 등에 의한 두피기능 저하설, 유전적 요인, 노화, 스트레스 등등이 논의되었으나, 아직까지 탈모에 대한 명확한 원인은 알려지지 않았다.
일반적으로 탈모의 가장 정형적인 형태는 남성호르몬 작용 과잉으로 나타나는 남성형 탈모증으로 남성호르몬인 안드로겐 의존적으로 발생하며, 대표적인 안드로겐으로는 테스토스테론(testosterone)과 DHT(dihydrotestosterone)가 있는데 탈모환자들인 경우 DHT가 더 많다고 알려져 있다. 테스토스테론은 5알파-환원효소(5-reductase)에 의해 DHT로 전환되고, 이러한 전환은 Type 1과 Type 2의 2가지 형태의 5 알파-환원효소 중 Type 2의 5알파-환원효소에 의하여 일어나며, 전환된 DHT에 의해 진피유두와 모낭의 점진적인 축소화가 진행된다고 보고된 바 있다.
이러한 탈모증의 치료 및 예방에 있어서 현재 가장 널리 사용되는 것은 미국 FDA의 승인을 받은 업존사의 미녹시딜(minoxidil) 함유제제이며, 최근에는 머크사에서 Type 2의 5알파-환원효소 억제 효과가 있는 피나스테라이드(finasteride)가 주성분인 프로페시아(Propecia)가 발매되어 사용되고 있다. 이밖에도 크리노스(Crinos, Co.)사의 트리코사카라이드(trichosaccharide) 등을 주성분으로 하는 제제가 사용되고 있다.
또한, 천연 추출물 기초한 연구들도 진행이 되어, 천궁(특허 제2010-0119761호), 상황버섯(특허 제2012-0038426호), 금은화(특허 제2012-0038426호), 케모마일 등의 추출물(특허 제2012-0015874호, 특허 제2010-0091571호), 하수오(특허 제2013-0021464호, 특허 제2011-0097386호), 창포(특허 제2012-0115980호), 석류(특허 제2012-7012465호), 은행잎 추출물(특허 제2006-7008793호) 등의 결과들이 있다. 그러나 이러한 발모제 혹은 육모제를 실제 임상에서 사용하는 경우 두피에 작용하는 효과가 그다지 탁월하지 못하며, 부작용에 대한 우려 때문에 사용을 꺼리는 미녹시딜이나 프로페시아보다 좀 더 효과가 우수하며 부작용이 적은 천연물질로 이루어진 발모제를 탐색하는 연구가 활발히 진행되고 있다.
상기와 같은 배경 하에서, 본 발명자들은 탈모 증상의 예방 또는 치료에 활용하기 위하여 예의 연구 노력한 결과, 생열귀나무 추출물이 모 유두 세포(HHDPC) 및 각질형성세포(HaCaT)의 세포 증식을 촉진하고, 동물 탈모 모델에서 임상적으로 모발 굵기 및 밀도를 증가시켜 발모를 촉진하며, 모낭 수와 bulb 크기도 유의성 있게 증가시켜, 탈모증 등의 질환 예방 또는 치료에 뛰어난 효과가 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 생열귀나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 약제학적 조성물; 탈모 개선용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 화장료 조성물; 및 탈모 개선용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 식품 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 생열귀나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명자들은 효과적으로 탈모를 방지하거나 발모 또는 육모를 촉진시킬 수 있는 천연 유래 성분을 발굴하기 위하여 예의 연구노력하였다. 그 결과, 상기 생열귀나무 추출물이 효과적으로 발모 및 육모를 증진하고 탈모를 방지한다는 사실을 확인하였다.
본 발명의 "생열귀나무(Rosa davurica Pall.)"는 쌍떡잎식물 장미목 장미과의 낙엽관목을 의미한다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 생열귀나무 추출물이 퀘르세틴(Quercetin), 캠퍼롤(Kaempferol 3,4-di-O-glucoside) 엘라그산(Ellagic acid), 및 아피제닌(Apigenin)을 다량으로 함유하고 있는 것을 확인한 바 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "추출물"은 생열귀나무의 추출 처리로 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 본 발명의 상기 추출물은 바람직하게 추출 후 건조 분말 형태로 제조되어 사용될 수 있다. 상기 생열귀나무의 추출에 있어서, 상기 추출물을 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 추출방법을 병용하여 수행될 수 있다.
본 발명에서 상기 생열귀나무를 추출하는데 사용되는 추출 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 추출 용매의 비제한적인 예로는 물; 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올 등의 C1 내지 C4의 저급 알코올; 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 등의 다가 알코올; 및 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 아세톤, 벤젠, 헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 탄화수소계 용매; 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있으며, 바람직하게, 물, 저급알코올, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸아세테이트를 단독으로 사용하거나 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있다.
본 발명에서 열수 추출 또는 냉침 추출한 추출물은 부유하는 고체 입자를 제거하기 위해 여과, 예를 들어 나일론 등을 이용해 입자를 걸러내거나 냉동여과법 등을 이용해 여과한 후, 그대로 사용하거나 이를 동결건조, 열풍건조, 분무건조 등을 이용해 건조하여 사용할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "분획물"은 여러 다양한 구성성분들을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 성분 그룹을 분리하기 위하여 분획을 수행하여 얻어진 결과물을 의미한다.
상기 분획 방법의 비제한적인 예로는, 생열귀나무를 추출하여 얻은 추출물에 소정의 용매를 처리하여 상기 추출물로부터 분획물을 얻는 방법을 들 수 있다. 본 발명에서 상기 분획물을 얻는 데에 사용되는 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 분획 용매의 비제한적인 예로는 물, 알코올 등의 극성 용매; 헥산(Hexane), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 클로로포름(Chloroform), 디클로로메탄(Dichloromethane) 등의 비극성 용매 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합하여 사용될 수 있다. 상기 분획 용매 중 알코올을 사용하는 경우에는 구체적으로는 C1 내지 C4의 알코올을 사용할 수 있다.
본 발명의 상기 생열귀나무의 추출물은 생열귀나무의 전초, 잎, 줄기, 뿌리, 및 열매 중 어느 하나 이상의 부위에서 추출 가능하다. 또한, 상기 생열귀나무 추출물은 천연, 잡종 또는 변종 식물로부터 추출될 수 있고, 식물 조직 배양물에서도 추출 가능하다.
본 명세서의 용어 “탈모”는 모발이 완전히 두피 밖으로 빠져나오게 되는 현상을 의미한다. 또한, 본 명세서의 용어 “발모”는 두피에서 모발이 나는 것을 의미하고, 본 명세서의 용어 “육모”는 모발의 길이가 길어지는 것을 의미하며 당업계에서 이용하는 또 다른 용어인 “양모”와 동일한 의미로 사용된다. 하기 실시예에서 입증한 바와 같이 본 발명의 생열귀나무 추출물은 모 유두 세포(HHDPC)의 세포 증식을 촉진하고(도 2 참조), 각질형성세포(HaCaT)의 세포 증식을 촉진하며(도 3 참조), 동물 탈모 모델에서 임상적으로 모발 굵기 및 밀도를 증가시켜 발모를 촉진하고(도 4), 모낭 수와 bulb 크기도 유의성 있게 증가시키는 효과가 있음을 확인하였다(도 5).
본 발명의 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 약학적 조성물에 있어서, 상기 생열귀나무 추출물은 모 유두 세포(HHDPC) 및 각질형성세포(HaCaT)의 세포 증식을 촉진한다.
따라서, 본 발명의 조성물은 다각적이고 안정적인 탈모 예방 또는 치료, 또는 발모 및 양모 촉진 효능을 보이는 효율적인 탈모 예방 또는 치료 조성물, 또는 발모/양모제 조성물로 적용될 수 있다.
본 발명에 따르면, 본 발명의 조성물은 원형 탈모증(alopecia areata), 안드로겐성 탈모증(androgenetic alopecia), 머리 백선(tinea capitis), 감모증(hypotrichosis), 유전성 단순 감모증(hereditary hypotrichosis simplex), 국한 탈모증(circumscribed alopecia), 선천 탈모증(alopecia congenitalis), 두덩탈모증(alopecia pubis), 지루 탈모증(alopecia seborrheica), 노년탈모증(alopecia senilis), 전두 탈모증(alopecia totalis), 전산 탈모증(alopecia universalis), 및 휴지기 탈모증(telogen effluvium)에서 선택된 어느 하나의 탈모증(alopecia)을 치료하는데 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물이 약제학적 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 본 발명의 일 구현예에 따르면 비경구 방식으로 투여되고, 본 발명의 다른 구현예에 따르면 경피투여방식으로 투여된다.
본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 성인 기준으로 0.0001-100㎎/kg 범위 내이다.
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질 중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 생열귀나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 상기 생열귀나무 추출물은 세포 독성이 없고, 모 유두 세포(HHDPC) 및 각질형성세포(HaCaT)의 세포 증식을 촉진하며, 동물 탈모 모델에서 임상적으로 모발 굵기 및 밀도를 증가시켜 발모를 촉진하고, 모낭 수와 bulb 크기도 유의성 있게 증가시키는 효과가 있으므로, 탈모 예방, 또는 발모 또는 육모 촉진을 위한 식품 조성물로 유용하게 사용될 수 있다. 본 발명의 생열귀나무 추출물과 탈모 예방, 또는 발모 또는 육모 촉진에 대한 효과는 상기에서 설명한 바와 같다. 상기 식품 조성물은 건강기능식품의 형태로 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 식품 조성물은 생열귀나무 추출물의 분획물 또는 이의 가공물의 형태로 포함될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 유효성분 이외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조첨가제를 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, "식품보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 식품 조성물에는 건강기능식품이 포함될 수 있다. 본 발명에 있어서, "건강기능식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미하며, 구체적으로 탈모 예방, 또는 발모 또는 육모 촉진 효과를 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법으로 제조 가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다.
또한, 상기 건강기능식품의 제형 또한 건강기능식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 식용가능한 생열귀나무 추출물을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 모 유두 세포(HHDPC) 및 각질형성세포(HaCaT)의 세포 증식을 촉진하며, 동물 탈모 모델에서 임상적으로 모발 굵기 및 밀도를 증가시켜 발모를 촉진하고, 모낭 수와 bulb 크기도 유의성 있게 증가시키는 효과가 있으므로, 탈모증의 치료 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취할 수 있다.
본 발명의 건강기능식품이 취할 수 있는 형태에는 제한이 없으며, 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있고, 기능성 식품 등 당업계에 알려진 용어와 혼용하여 사용할 수 있다. 아울러 본 발명의 건강기능식품은 당업자의 선택에 따라 식품에 포함될 수 있는 적절한 기타 보조 성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다. 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 생열귀나무 추출물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 동물을 위한 사료로 이용되는 식품도 포함된다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 생열귀나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 생열귀나무 추출물 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 상술한 약제학적 조성물과 유효성분 및 용도를 공통으로 하기 때문에, 상기 약제학적 조성물과의 관계에서 공통된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(1) 본 발명은 생열귀나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 조성물을 제공한다.
(2) 본 발명의 생열귀나무 추출물은 세포 독성이 없고, 모 유두 세포(HHDPC) 및 각질형성세포(HaCaT)의 세포 증식을 촉진하며, 동물 탈모 모델에서 임상적으로 모발 굵기 및 밀도를 증가시켜 발모를 촉진하고, 모낭 수와 bulb 크기도 유의성 있게 증가시키는데 우수한 효과가 있으므로, 의약품, 식품, 및 화장품 분야에서 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진의 목적으로 유용하게 이용 가능하다.
도 1은 생열귀나무의 추출물의 유효성분들을 HPLC를 사용하여 측정한 결과 그래프이다(맨 위에서부터 표준(A), 전초(B), 잎(C), 줄기(D), 뿌리(E), 및 열매(F)에 대한 그래프이고, Peak 1은 퀘르세틴, peak 2는 캠퍼롤, peak 3은 엘라그산에 대한 피크임).
도 2는 생열귀나무의 추출물의 처리에 따른 모 유두 세포(HHDPC)의 세포 증식 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다(A 전초, B 잎, C 줄기, D 뿌리, 및 E 열매).
도 3은 생열귀나무의 추출물의 처리에 따른 각질형성세포(HaCaT)의 세포 증식 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다(A 전초, B 잎, C 줄기, D 뿌리, 및 E 열매).
도 4는 동물 탈모 모델에서 생열귀나무 추출물을 도포한 후 모발의 굵기 및 밀도 변화를 비교하여 촬영한 사진이다.
도 5는 동물 탈모 모델에서 생열귀나무 추출물을 도포한 후 조직학적 변화를 촬영한 사진이다.
이하에서는, 본 발명의 구성을 실시예를 들어 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명의 권리범위가 하기에 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다. 또한, 하기에서 기재된 실험 결과에 따른 대조군, 비교군 및 실험군들 간의 유의성은 One-Way ANOVA로 검증하였다.
실시예 1. 생열귀나무 추출물의 제조
제조예 1-1. 생열귀나무 전초 추출물의 제조
생열귀나무의 전초(원산지: 국내산, 구입처:원삼로즈힙㈜)를 흐르는 물에 세척하여 불순물을 제거한 후, 생열귀나무의 전초 100g에 30% 에탄올 수용액 1L를 가하여 1일간 실온에서 교반한 후 1시간 초음파하여 추출하였다. 상기 과정은 3-Batch로 진행하였다. 얻어진 추출액을 모은 후, 40℃ 이하에서 감압 농축한 후, 동결건조하여 분말형태로 제조하였다(제조예 1).
제조예 1-2. 생열귀나무 잎 추출물의 제조
생열귀나무의 잎을 사용한 것을 제외하고, 상기 제조예 1-1과 동일한 방법으로 생열귀나무 잎 추출물을 제조하였다.
제조예 1-3. 생열귀나무 줄기 추출물의 제조
생열귀나무의 줄기를 사용한 것을 제외하고, 상기 제조예 1-1과 동일한 방법으로 생열귀나무 줄기 추출물을 제조하였다.
제조예 1-4. 생열귀나무 뿌리 추출물의 제조
생열귀나무의 뿌리를 사용한 것을 제외하고, 상기 제조예 1-1과 동일한 방법으로 생열귀나무 뿌리 추출물을 제조하였다.
제조예 1-5. 생열귀나무 열매 추출물의 제조
생열귀나무의 열매를 사용한 것을 제외하고, 상기 제조예 1-1과 동일한 방법으로 생열귀나무 열매 추출물을 제조하였다.
실시예 2. 생열귀나무 추출물의 성분분석
상기 실시예 1에서 제조한 생열귀나무 추출물들의 지표 성분의 함량을 비교 분석하였다.
고속 액체크로마토 그래피 분석은 Thermo UHPLC U3000을 사용하였다. HPLC 분석 조건은 다음과 같다. 컬럼은 Sunfire TM C18 column(Waters, 250×4.6mm, 5μm)을 이용하였으며, 컬럼 온도는 25℃로 하였다. UV 파장은 270nm에서 측정하였으며 이동상은 0.1% 포름산이 포함된 물과 아세토나이트릴(gradient mode)을 사용하였다. 상기 실시예 1에서 제조한 생열귀나무 추출물(제조예 1-1 내지 1-5)은 이동상 용매에 5mg/ml의 농도로 용해하여 10uL를 주입한 후 유속 1ml/min으로 측정하였다. 상기 추출물의 지표성분 함량을 하기 [표 1]에 나타내었다.
[표 1]
Figure pat00001
상기 [표 1] 및 [도 1]을 참조하면, 생열귀나무의 전초는 퀘르세틴(Quercetin), 캠퍼롤(Kaempferol 3,4-di-O-glucoside) 엘라그산(Ellagic acid) 및 아피제닌(Apigenin)이 다량 함유되어 있는 것으로 분석되었다.
또한, 다른 부위와 다르게 생열귀나무 잎은 퀘르세틴(Quercetin) 및 캠퍼롤(Kaempferol 3,4-di-O-glucoside)이, 생열귀나무 뿌리는 아피제닌(Apigenin)이 다량 함유되어 있는 것으로 분석되었다.
실험예 1. 모 유두 세포(HHDPC)의 세포 증식 활성 분석을 통한 발모 효능 평가
상기 실시예 1에서 제조된 생열귀나무 추출물(제조예 1-1 내지 제조예 1-5)의 발모 촉진 효능을 확인하기 위하여, 모발 생성에 관여하는 모낭의 모 유두 세포(human hair dermal papilla cell, HHDPC)(Sciencell社, cat. no. 2400)의 세포 증식 활성을 분석함으로써, 생열귀나무 추출물의 발모 효능을 평가하였다.
실험은 10% FBS(fetal bovine serum, Cambrex)를 함유한 전용배지인 MSC(Mesenchymal Stem Cell) 배지에 모 유두 세포를 0.25 X 104 cells/㎖ 농도로 96 웰 플레이트에 접종하여 24시간 동안, 37℃, 5% CO2 습윤 조건에서 배양하였다.
상기 제조예 1-1 내지 제조예 1-5의 생열귀나무 추출물을 각각 0.01, 0.1, 및 1μM 농도로 처리하고, 24, 48, 및 72시간 동안 배양한 후, 5mg/㎖의 MTT[ 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide] 시약 20㎕를 상기 배양액에 처리하고, 37℃, 5% CO2 습윤 조건에서 4시간 동안 배양하였다.
비교 실험을 위하여 200㎕ 부피의 용매만을 처리한 시험군을 음성대조군으로, 0.08ug/ml의 피나스테라이드(머크)를 처리한 시험군을 양성대조군으로 사용하였다.
배양 중 살아있는 세포는 보라색 크리스탈인 포마잔이 생성된다. 생성된 포마잔을 DMSO 처리를 통해 녹여낸 후, 마이크로플레이트 리더를 사용하여 560nm에서의 흡광도를 측정하여 세포 성장의 정도를 측정하였다. 상기 시험을 3회 반복하였으며, 실험 결과를 도 2에 정리하였다.
도 2를 참조하면, 생열귀나무 추출물을 처리한 실험군에서는 인간 모 유두 세포의 증식이 촉진되는 현상이 관찰되었는데, 구체적으로 생열귀나무 전초 추출물(제조예 1-1)은 음성대조군과 비교하여 각각의 개선된 세포 증식이 관찰되었으며, 양성대조군인 피나스테라이드 처리군에 비해서도 각각 개선된 세포 증식이 관찰되었다.
또한, 생열귀나무 각 부위별 추출물도 모두 인간 모 유두 세포의 증식을 효과적으로 촉진하였는데, 모든 부위의 추출물을 처리함에 따라 음성대조군과 비교하여 모 유두 세포의 증식이 현저하게 개선되는 현상이 관찰되었다.
상기 실험 결과를 통해 본 발명의 생열귀나무 추출물은 모 유두 세포의 성장 촉진을 통해 탈모증 등의 질환에 대한 예방 또는 치료에 효과적으로 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다(도 2 참조).
실험예 2. 사람의 각질형성세포(HaCaT cell) 성장에 미치는 영향 평가
상기 실시예 1에서 제조된 생열귀나무 추출물의 발모 촉진 효능을 확인하기 위하여, 모발의 구성 세포인 각질형성세포(HaCaT)의 세포 증식 활성을 분석함으로써, 생열귀나무 추출물의 발모 효능을 평가하였다.
실험은 모 유두 세포 대신 각질형성세포(HaCaT)(Dr. N. E. Fuseing, Heidelberg, Germany)를 사용하고, 배지를 10% FBS(fetal bovine serum, Cambrex)가 포함된 RPMI 배지를 사용한 것을 제외하고, 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 평가하였으며, 실험 결과를 도 3에 정리하였다.
도 3을 참조하면, 생열귀나무 추출물을 처리한 실험군에서는 각질형성세포(HaCaT)의 증식이 촉진되는 현상이 관찰되었는데, 구체적으로 생열귀나무 전초 추출물(제조예 1-1)은 음성대조군과 비교하여 각각 95%(0.01μM), 110%(0.1μM), 및 120%(1μM) 개선된 세포 증식이 관찰되었고, 양성대조군인 피나스테라이드 처리군에 비해서도 각각 95%(0.01μM), 110%(0.1μM), 및 125%(1μM) 개선된 세포 증식이 관찰되었다.
또한, 생열귀나무 각 부위별 추출물도 모두 각질형성세포(HaCaT)의 증식을 효과적으로 촉진하였는데, 구체적으로 생열귀나무 잎 추출물(제조예 1-2)은 음성대조군과 비교하여 각각 90%(0.01μM), 115%(0.1μM), 및 110%(1μM) 개선된 세포 증식이 관찰되었고, 생열귀나무 줄기 추출물(제조예 1-3)은 음성대조군과 비교하여 각각 90%(0.01μM), 95%(0.1μM), 및 100%(1μM) 개선된 세포 증식이 관찰되었으며, 생열귀나무 뿌리 추출물(제조예 1-4)은 음성대조군과 비교하여 각각 90%(0.01μM), 110%(0.1μM), 및 105%(1μM) 개선된 세포 증식이 관찰되었고, 생열귀나무 열매 추출물(제조예 1-5)은 음성대조군과 비교하여 각각 100%(0.01μM), 105%(0.1μM), 및 115%(1μM) 개선된 세포 증식이 관찰되었다.
상기 실험 결과를 통해 본 발명의 생열귀나무 추출물이 각질형성세포(HaCaT)의 성장 촉진을 통해 탈모증 등의 질환에 대한 예방 또는 치료에 효과적으로 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다(도 3 참조).
실험예 3. 동물 탈모 모델(C57BL/6 마우스)에서의 모발 생장 평가
앞서 검증된 생열귀나무 추출물의 발모 촉진 효능을 육안으로 평가하기 위하여, 동물 탈모 모델에 적용하였다.
본 실험에 적용하는 탈모 모델은 탈모와 관계된 각종 연구와 실험에서 가장 일반적으로 적용되는 C57BL/6 마우스 탈모 모델을 채택하였다.
7주령 마우스의 등쪽 털에 제모 크림을 바른 후, 털을 제거하면 동시에 모발이 생장기로 유도되는데, 이때 적절한 약물을 도포하여 생장기 모발이 더욱 잘 자라는지 여부(모발생장 증가; raising proliferlation rates)를 확인할 수 있는 방법이다. 참고로, 일반적인 C57BL/6 마우스의 피부색 변화는 9일째 anagen 5기에 진입하면서 회색빛에서 검은색으로 바뀌기 시작하여 14일에서 16일째에는 anagen 6기로서 가장 활발하게 모발 성장이 진행되는 시기이다.
실험을 위해 7주령의 C57BL/6 마우스의 등 부위 털을 제거하고, 등 부위 피부가 깨끗한 마우스를 5마리씩 3개의 군(A-C군)으로 나누었다. 모든 군은 Wax-Rosin 혼합물을 이용하여 모낭을 파괴한 후, 제A군은 식염수를 18일 동안 경구 투여하였고(음성 대조군), 제B군은 머크사에서 개발한 프로페시아(피나스테라이드)를 0.5mg/kg의 용량으로 18일동안 경구 투여 하였으며(양성 대조군), 제C군은 생열귀나무 추출물(제조예 1-1)을 식염수에 녹여 5mg/kg의 용량으로 18일 동안 경구 투여 하였다. 투여 12일 경과 시점의 모발 분포 정도를 촬영한 사진을 도 4에 정리하였다.
도 4를 참조하면, 본 발명의 생열귀나무 추출물을 처리한 마우스는 피부색이 단시간에 검게 변하고, 털이 빨리 자라며, 실제 피부조직에서도 모낭의 수가 현저히 증가하고 정상 모발의 형태를 유지함이 확인되었는데, 음성대조군(Control)에 비하여 약 3일 정도의 모성장기가 촉진되는 효과를 나타냈다.
또한, 본 발명의 생열귀나무 추출물을 도포한 그룹은 양성대조군인 피나스테라이드를 도포한 그룹에 비해 약 1일 정도로 모성장기가 촉진됨을 확인할 수 있었다.
정리하면, 마우스의 모성장기를 촉진하는 것은, 생열귀나무 추출물이 모성장기 촉진과 성장기 유지에 유의적인 효과가 있음을 의미하며, 상기 결과를 통해 본 발명의 생열귀나무 추출물이 발모 촉진에 효과가 있음을 임상적으로 확인할 수 있었다.
실험예 4. 조직학적 관찰 평가
상기 실험예 3에서 분석된 C57BL/6 마우스 탈모 모델에서 제모를 통한 생장기 유도 후, 생열귀나무 추출물을 도포한 피부 내 모낭(hair follicle)의 변화, 피부 두께 및 조직의 변화를 관찰하였다.
구체적으로는, C57BL/6 마우스 탈모 모델에서 21일째에 각 군의 마우스를 치사시킨 후, 등 쪽 피부의 발모된 부위의 조직을 채취하여 4% 포름알데히드 용액으로 고정하였다. 고정 후, 수세, 탈수과정을 거쳐 파라핀으로 포매하고, 7㎛의 절편을 제작하여 Hematoxylin & Eosin(H&E) 방법으로 염색한 후, 현미경으로 관찰하였다.
관찰 결과, 생열귀나무 추출물 처리에 의해 모낭의 길이가 길어져 성장기의 모낭 형태를 나타냈고, 모낭의 수와 bulb의 크기도 유의성 있게 증가한 것을 확인하였다(도 5 참조).
또한, ‘성장기(Anagen) 모발/휴지기(Telogen) 모발’의 비율이 3.5배로 증가한 것을 확인할 수 있었다.
상기와 같은 결과를 통해 본 발명의 생열귀나무 추출물이 모낭 수와 bulb 크기를 증가시키고, 성장기 모발의 비율을 증가시켜 발모 촉진 및 탈모 방지에 효과적임을 확인할 수 있었다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (6)

  1. 생열귀나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 생열귀나무 추출물은 생열귀나무의 전초, 잎, 줄기, 뿌리, 및 열매 중 어느 하나 이상의 부위에서 추출한 생열귀나무 추출물인 것을 특징으로 하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 생열귀나무 추출물은 모 유두 세포(HHDPC) 및 각질형성세포(HaCaT)의 세포 증식을 촉진하는 것을 특징으로 하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 원형 탈모증(alopecia areata), 안드로겐성 탈모증(androgenetic alopecia), 머리 백선(tinea capitis), 감모증(hypotrichosis), 유전성 단순 감모증(hereditary hypotrichosis simplex), 국한 탈모증(circumscribed alopecia), 선천 탈모증(alopecia congenitalis), 두덩탈모증(alopecia pubis), 지루 탈모증(alopecia seborrheica), 노년탈모증(alopecia senilis), 전두 탈모증(alopecia totalis), 전신 탈모증(alopecia universalis), 및 휴지기 탈모증(telogen effluvium)에서 선택된 어느 하나의 탈모증(alopecia)을 치료하는 것을 특징으로 하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 약학적 조성물.
  5. 생열귀나무 추출물을 유효성분으로 포함하는, 탈모 예방용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 식품 조성물.
  6. 생열귀나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 화장료 조성물.
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