KR102327237B1 - 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 조성물 - Google Patents
비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 조성물은 모유두 세포(HHDPC)의 세포 증식을 유의하게 촉진하고, 산화질소 매개 염증 반응을 억제하며, 활성산소종(ROS, Reactive oxygen species)의 생성을 억제하고, 인간 모유두 세포의 사멸을 억제하는 Bcl-2 단백질의 발현을 증가시키고, 인간 모유두 세포의 사멸을 촉진하는 Bax 단백질, PARP-1 단백질, 및 Caspase-3 단백질의 발현을 저해시켜, 탈모증 등의 예방 또는 개선에 뛰어난 효과가 있다.
본 발명의 조성물은 모유두 세포(HHDPC)의 세포 증식을 유의하게 촉진하고, 산화질소 매개 염증 반응을 억제하며, 활성산소종(ROS, Reactive oxygen species)의 생성을 억제하고, 인간 모유두 세포의 사멸을 억제하는 Bcl-2 단백질의 발현을 증가시키고, 인간 모유두 세포의 사멸을 촉진하는 Bax 단백질, PARP-1 단백질, 및 Caspase-3 단백질의 발현을 저해시켜, 탈모증 등의 예방 또는 개선에 뛰어난 효과가 있다.
Description
본 발명은 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 조성물에 관한 것이다.
인체에 있어서 모발은 피부에 있는 모낭에서 자라나며 모발이 자라나는 모낭은 안쪽뿌리 상피집, 바깥뿌리 상피집, 털 줄기, 털 바탕질 등으로 구성된 복잡한 기관으로 일생동안 성장기, 퇴행기, 휴지기 등의 주기가 지속적으로 반복되는 특징이 있다. 특히 모낭을 형성하는 세포 중 진피유두 세포는 모발의 성장에 있어서 중요한 역할을 하며, 모낭의 성장기에 진피유두를 둘러싸고 있는 기질의 각질세포를 포함한 모낭의 구성세포들의 증식이 일어난다. 모낭의 퇴행기에는 모낭의 성장이 중단되며 세포사멸(apoptosis)과 진피유두의 응축 및 세포외기질의 재구성이 일어나고 모낭이 다시 성장기로 들어가기 위해 준비하는 단계인 휴지기에는 융기부위를 포함하는 영구적으로 지속되는 부분만이 남아있게 된다.
탈모란 모낭의 성장주기 중 성장기의 모낭에서 자라는 모발보다 퇴행기 또는 휴지기의 모낭에서 자라는 모발의 비율이 높아져 비정상적으로 빠지는 모발이 증가함을 말한다. 최근 외모를 중시하는 경향이 두드러지면서 탈모에 대한 관심도 증가하고 있다. 이러한 탈모의 원인으로는 혈액순환 불량설, 남성호르몬 작용 과잉설, 피지분비 과잉설, 과산화물과 세균 등에 의한 두피기능 저하설, 유전적 요인, 노화, 스트레스 등등이 논의되었으나 아직까지 탈모에 대한 명확한 원인은 알려지지 않았다. 일반적으로 탈모의 가장 정형적인 형태는 남성호르몬 작용 과잉으로 나타나는 남성형 탈모증으로 남성호르몬인 안드로겐 의존적으로 발생하며, 대표적인 안드로겐으로는 테스토스테론(testosterone)과 DHT(dihydrotestosterone)가 있는데 탈모환자들인 경우 DHT가 더 많다고 알려져 있다. 테스토스테론은 5알파-환원효소(5-reductase)에 의해 DHT로 전환되고, 이러한 전환은 Type 1과 Type 2의 2가지 형태의 5 알파-환원효소 중 Type 2의 5알파-환원효소에 의하여 일어나며, 전환된 DHT에 의해 진피유두와 모낭의 점진적인 축소화가 진행된다고 보고된 바 있다.
이러한 탈모증의 치료 및 예방에 있어서 현재 가장 널리 사용되는 것은 미국 FDA의 승인을 받은 업존사의 미녹시딜(minoxidil) 함유제제이며, 최근에는 머크사에서 Type 2의 5알파-환원효소 억제 효과가 있는 피나스테라이드(finasteride)가 주성분인 프로페시아(Propecia)가 발매되어 사용되고 있다.
또한, 천연 추출물 기초한 연구들도 진행이 되어, 천궁(특허 제2010-0119761호), 상황버섯(특허 제2012-0038426호), 금은화(특허 제2012-0038426호), 케모마일 등의 추출물(특허 제2012-0015874호, 특허 제2010-0091571호), 하수오(특허 제2013-0021464호, 특허 제2011-0097386호), 창포(특허 제2012-0115980호), 석류(특허 제2012-7012465호), 은행잎 추출물(특허 제2006-7008793호) 등의 결과들이 있다. 또한, 붉은색 계열의 과일이나 채소류가 항산화 효과가 우수하고, 탈모 증상에 효과가 있다고 알려져 붉은색 계열의 과채류를 소재로 한 발모제 등의 개발도 추진되고 있다.
그러나 이러한 발모제 혹은 육모제를 실제 임상에서 사용하는 경우 두피에 작용하는 효과가 그다지 탁월하지 못하며, 부작용에 대한 우려 때문에 사용을 꺼리는 미녹시딜이나 프로페시아보다 좀 더 효과가 우수하며 부작용이 적은 천연물질로 이루어진 발모제를 탐색하는 연구가 활발히 진행되고 있다.
상기와 같은 배경하에서, 본 발명자들은 붉은색 계열의 과일이나 채소류에 주목하여 이들을 탈모 증상의 예방 또는 치료 효과를 확인하였으나, 이들 붉은색 계열의 과채류의 단일 소재로는 탈모 증상의 예방 또는 치료에 효과가 부족함을 절감하였고, 이들의 효과를 극대화하기 위해 예의 연구노력하였다. 그 결과, 비트, 적양파, 및 자색고구마의 3종 조합이 모유두 세포(HHDPC)의 세포 증식을 유의하게 촉진하고, 산화질소 매개 염증 반응을 억제하며, 활성산소종(ROS, Reactive oxygen species)의 생성을 억제하고, 인간 모유두 세포의 세포 사멸을 억제하는 Bcl-2 단백질의 발현을 증가시키고, 인간 모유두 세포의 세포 사멸을 촉진하는 Bax 단백질, PARP-1 단백질, 및 Caspase-3 단백질의 발현을 저해시켜, 탈모증의 예방 또는 개선에 뛰어난 효과가 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 약제학적 조성물; 탈모 개선용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 화장료 조성물; 및 탈모 개선용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 기능성 식품 조성물 또는 식품 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명자들은 효과적으로 탈모를 방지하거나 발모 또는 육모를 촉진시킬 수 있는 천연유래 성분을 발굴하기 위하여 예의 연구노력하였다. 그 결과, 상기 비트, 적양파, 및 자색고구마의 단일추출물 각각은 발모 및 육모를 증진하고 탈모를 방지하는 효과가 미미하나, 이들의 복합추출물은 효과적으로 발모 및 육모를 증진하고 탈모를 방지하는 시너지 효과가 있다는 사실을 확인하였다.
본 발명에서 비트(beet, Beta vulgaris)는 쌍떡잎식물 중심자목 명아주과 두해살이풀의 뿌리를 의미하며, 근공채, 홍채두, 화염채로도 불리운다. 또한, 본 발명에서 적양파(Red onion)는 자주색 빛을 띠는 양파를 의미한다. 양파는 비늘줄기의 모양, 껍질 색깔, 맛에 따라 품종이 나뉜다. 붉은 양파, 자색 양파로도 불리는 본 발명의 적양파는 일반 양파에 비해 더욱 다양한 플라보노이드를 함유하고 있다.
또한, 본 발명에서 자색고구마(자미고구마, Purple-Fleshed sweet potato)는 자색 색소를 함유한 품종으로 인공 교배하여 육종된 자미(1998년), 보라미(2000년), 신자미(2001년) 등의 고구마 신품종을 의미한다. 이들 신품종은 색소추출물을 다량 함유하고 있어 표피층뿐만 아니라 육질 전체가 진한 자색을 띠고 있는데, 이 기능성 색소함량이 크린베리 보다는 10 ~ 60배, 포도보다는 5 ~ 7배 높아 천연 기능성 색소 원뿐만 아니라 기능성 식품소재로서 가치가 우수하다.
본 발명에서 사용되는 용어, "추출물"은 비트, 적양파, 및 자색고구마의 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 본 발명의 상기 추출물은 바람직하게 추출 후, 액상 또는 건조 분말 형태로 제조되어 사용될 수 있다.
본 발명의 상기 비트, 적양파, 및 자색고구마의 추출에 있어서, 상기 추출 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 용매분획법, 원심분리법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.
본 명세서의 용어 “탈모”는 모발이 완전히 두피 밖으로 빠져나오게 되는 현상을 의미한다. 또한, 본 명세서의 용어 “발모”는 두피에서 모발이 나는 것을 의미하고, 본 명세서의 용어 “육모”는 모발의 길이가 길어지는 것을 의미하며 당업계에서 이용하는 또 다른 용어인 “양모”와 동일한 의미로 사용된다.
본 발명의 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 약학적 조성물에서, 상기 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물은 이에 제한되는 것은 아니나, 상기 비트, 적양파, 및 자색고구마 추출물이 1:0.5-1.5:0.5-1.5의 중량비로 배합되는 것이 탈모 예방 또는 치료, 또는 발모 또는 육모의 관점에서 시너지 효과를 극대화할 수 있으므로 바람직하다.
본 발명의 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 약학적 조성물에서, 상기 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물은 모유두 세포(HHDPC)의 세포 증식을 촉진하는 것을 특징으로 한다(도 1 참조).
본 발명의 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 약학적 조성물에서, 상기 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물은 산화질소 매개 염증 반응을 억제하고(도 2 참조), 활성산소종(ROS, Reactive oxygen species)의 생성을 억제하는 것을 특징으로 한다(도 3 참조).
본 발명의 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 약학적 조성물에서, 상기 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물은 인간 모유두 세포의 사멸을 억제하는 Bcl-2 단백질의 발현을 증가시키고, 인간 모유두 세포의 사멸을 촉진하는 Bax 단백질, PARP-1 단백질, 및 Caspase-3 단백질의 발현을 저해하는 것을 특징으로 한다.
세포사멸은 세포 내부의 신호에 따른 여러 단백질 활성의 조절과 유전자의 발현을 통하여 프로그램화된 세포사멸의 과정으로 일어나는 능동적으로 진행되는 세포의 죽음으로 알려져 있다. 외부 요소로서 대표적인 것은 방사선, 고열 충격, 독소, 박테리아나 바이러스에 의한 감염 등에 의한 세포의 손상이나 심한 스트레스로 세포사멸 반응이 나타나며, 그 이상은 다양한 질병을 초래하는데 정상적인 세포의 사멸을 유도하는 것은 장기의 손상과 연관될 수 있다.
세포사멸을 억제하는 유전자로 대표적인 유전자는 Bcl-2 유전자가 있고, Bcl-2 유전자는 Bax 유전자와 길항적으로 작용하는 것으로 알려져 있다. 또한, 세포사멸을 유도하는 경로에서 활성화되는 단백질 분해효소 (protease) 중, caspase들은 세포가 사멸하는 과정에서 각 소기관별로 다양하게 활성화되는 가장 중요한 실행자로 알려져 있으며, 이 효소의 활성을 통하여 세포사멸의 정도 및 경로를 파악할 수 있다. Caspase 계열의 효소가 활성화되면 다양한 표적 단백질들을 분해하여 세포사멸을 비가역적으로 진행시키는데, 특히 caspase-3은 DNA repair, DNA stability 및 전사조절에 관여하는 PARP 단백질 등의 발현을 증대시키고 PARP 단백질의 절단을 유도하고 최종적인 세포사멸 단계로 접어들게 된다.
본 발명의 바람직한 실시예에서는 모유두 세포(HHDPC)의 세포사멸과 관련된 유전자들의 발현에 비트, 적양파, 및 자색고구마의 3종 복합추출물이 미치는 영향을 검증하였고, 본 발명의 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물이 인간 모유두 세포의 세포 사멸을 억제하는 Bcl-2 단백질의 발현을 증가시키고, 인간 모유두 세포의 세포 사멸을 촉진하는 Bax 단백질, PARP-1 단백질, 및 Caspase-3 단백질의 발현을 저해하는 것을 확인하였다(도 4 및 도 5 참조).
따라서, 본 발명의 조성물은 다각적이고 안정적인 탈모 예방 또는 치료, 또는 발모 및 양모 촉진 효능을 보이는 효율적인 탈모 예방 또는 치료 조성물, 또는 발모/양모제 조성물로 적용될 수 있다.
본 발명의 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 약학적 조성물은 원형 탈모증(alopecia areata), 안드로겐성 탈모증(androgenetic alopecia), 머리 백선(tinea capitis), 감모증(hypotrichosis), 유전성 단순 감모증(hereditary hypotrichosis simplex), 국한 탈모증(circumscribed alopecia), 선천 탈모증(alopecia congenitalis), 두덩탈모증(alopecia pubis), 지루 탈모증(alopecia seborrheica), 노년탈모증(alopecia senilis), 전두 탈모증(alopecia totalis), 전신 탈모증(alopecia universalis), 및 휴지기 탈모증(telogen effluvium)에서 선택된 어느 하나의 탈모증(alopecia)을 치료 또는 예방하는데 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물이 약제학적 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 성인 기준으로 0.0001-100㎎/kg 범위 내이다.
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질 중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는, 탈모 예방용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물은 상기에서 설명한 바와 같다. 상기 식품 조성물은 건강기능식품의 형태로 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 식품 조성물은 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물, 이의 분획물 또는 이의 가공물의 형태로 포함될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 유효성분 이외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조첨가제를 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, "식품보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 식품 조성물에는 건강기능식품이 포함될 수 있다. 본 발명에 있어서, "건강기능식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 “기능성”이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법으로 제조 가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다.
또한, 상기 건강기능식품의 제형 또한 건강기능식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 탈모 증상을 개선하고 발모 또는 육모 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.
본 발명의 건강기능식품이 취할 수 있는 형태에는 제한이 없으며, 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있고, 기능성 식품 등 당업계에 알려진 용어와 혼용이 가능하다. 아울러 본 발명의 건강기능식품은 당업자의 선택에 따라 식품에 포함될 수 있는 적절한 기타 보조 성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다. 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 동물을 위한 사료로 이용되는 식품도 포함된다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는, 탈모 예방용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(a) 본 발명은 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 치료용, 또는 발모 또는 육모 촉진용 조성물을 제공한다.
(b) 본 발명의 조성물은 모유두 세포(HHDPC)의 세포 증식을 유의하게 촉진하고, 산화질소 매개 염증 반응을 억제하며, 활성산소종(ROS, Reactive oxygen species)의 생성을 억제하고, 인간 모유두 세포의 사멸을 억제하는 Bcl-2 단백질의 발현을 증가시키고, 인간 모유두 세포의 사멸을 촉진하는 Bax 단백질, PARP-1 단백질, 및 Caspase-3 단백질의 발현을 저해시켜, 탈모증 등의 예방 또는 개선에 뛰어난 효과가 있다.
(c) 또한, 본 발명의 조성물은 천연물질인 비트, 적양파, 및 자색고구마 추출물들을 배합하여 인체에 매우 안전할 뿐만 아니라, 안정성도 매우 탁월하여 식품, 및 의약품 분야에서 탈모 예방 또는 발모 또는 육모 촉진의 목적으로 유용하게 이용 가능하다.
도 1은 본 발명의 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물 처리에 따른 모유두 세포(HHDPC)의 세포 증식을 분석하여 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물 처리에 따른 모유두 세포(HHDPC) 내의 산화질소 생성량을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물 처리에 따른 모유두 세포(HHDPC) 내의 ROS 생성량을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물 처리에 따른 모유두 세포(HHDPC) 내의 Bcl-2 단백질, Bax 단백질, PARP-1 단백질, 및 Caspase-3 단백질에 대한 웨스턴 블랏(Western Blot) 분석 사진 결과이다.
도 5는 본 발명의 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물 처리에 따른 모유두 세포(HHDPC) 내의 Bcl-2 단백질, Bax 단백질, PARP-1 단백질, 및 Caspase-3 단백질의 발현량 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물 처리에 따른 모유두 세포(HHDPC) 내의 산화질소 생성량을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물 처리에 따른 모유두 세포(HHDPC) 내의 ROS 생성량을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물 처리에 따른 모유두 세포(HHDPC) 내의 Bcl-2 단백질, Bax 단백질, PARP-1 단백질, 및 Caspase-3 단백질에 대한 웨스턴 블랏(Western Blot) 분석 사진 결과이다.
도 5는 본 발명의 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물 처리에 따른 모유두 세포(HHDPC) 내의 Bcl-2 단백질, Bax 단백질, PARP-1 단백질, 및 Caspase-3 단백질의 발현량 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.
실시예 1. 비트, 적양파, 및 자색고구마 추출물의 제조
건조된 비트 100g을 분쇄한 후 3L의 50% 에탄올을 용매로 사용하여 12시간 가온 환류추출한 후, 냉침 시키고, 1.2㎛ 투과 사이즈를 갖는 여과지로 여과하여 여과액을 수득하였다. 수득된 여과액을 감압농축 및 감압 건조로 농축하여 비트 건조 분말을 제조하였다.
상기와 비트 추출물의 제조방법과 동일한 방법으로 각각 적양파 및 자색고구마의 건조 분말을 제조하였다.
실시예 2. 모유두 세포(HHDPC)의 세포 증식 활성 분석을 통한 발모 효능 평가
상기 실시예 1에서 제조된 비트, 적양파, 및 자색고구마의 3종 단일추출물과 이들 3종 복합추출물의 발모 촉진 효능을 확인하기 위하여, 모발 생성에 관여하는 모낭의 모유두 세포(human hair dermal papilla cell, HHDPC)의 세포 증식 활성을 분석함으로써, 발모 효능을 평가하였다. 인간 모유두 세포는 ATCC(Virginia, USA)에서 분양받아 사용하였다.
인간 모유두 세포(HHDPC)를 2x103 세포/웰의 밀도로 96-웰 플레이트에 시딩한 후 밤새 배양하였다. 무혈청 배지로 바꿔준 후, 실시예 1에서 제조한 비트, 적양파, 및 자색고구마의 단일추출물과 이들 식물체의 3종 복합추출물(1:1:1 중량비로 혼합)을 1, 10 및 100ug/mL 농도로 처리하여 3일간 배양하고 4mg/ml MTT 용액을 100μl씩 웰에 처리하여 4시간 반응시켰다. 생성된 포마잔을 DMSO 처리를 통해 녹여낸 후 마이크로플레이트 리더를 사용하여 560nm에서의 흡광도를 측정하였다.
모유두 세포 증식 활성 분석 결과, 비트, 적양파, 및 자색고구마의 3종 복합추출물을 첨가한 군에서 농도 의존적으로 세포 생존능이 증가하였고, 100ug/mL 농도에서 무처리군에 비해 최대 128%로 세포 증식이 이루어지는 것을 확인할 수 있었다. 이에 반해 비트, 적양파, 및 자색고구마의 단일추출물 처리군에서는 모유두 세포 증식 활성이 미미한 것으로 나타났으며, 100ug/mL 농도에서 비트, 적양파, 및 자색고구마의 단일추출물 처리군과 비교하여 3종 복합추출물 처리군이 각각 123%, 124%, 및 129% 개선된 모유두 세포 증식 활성을 나타내었다.
상기 실험 결과를 통해, 본 발명의 비트, 적양파, 및 자색고구마로 구성된 3종 복합추출물이 인간 모유두 세포의 성장이 농도 의존적으로 촉진하는 시너지 효과가 있으며, 탈모증 등의 질환에 대한 예방 또는 치료에 효과적으로 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다(도 1 참조).
실시예 3. 비트, 적양파, 및 자색고구마 복합추출물의 항염증 효과
비트, 적양파, 및 자색고구마의 단일추출물과 이들의 복합추출물의 항염증 효과를 측정하기 위해 일산화질소(nitric oxide, NO) 생성량 변화를 측정하였다. 일산화질소는 염증 유발에 관여하는 대표적인 세포 독성물질이다.
마우스 대식세포주(mouse macrophage)인 RAW264.7 세포를 준비한 다음, 세포활성 및 염증유발인자로서 LPS(1㎍/㎖)를 정상군을 제외한 모든 군에 처리하였고, 24시간 동안 배양한 후 세포 배양액을 채취하였다.
산화질소 공여자(nitric oxide donor)와 그리스 시약(Griess reagent)을 함께 처리하고, 시간 경과 후 나타나는 산화질소(nitric oxide)를 정량함으로써 NO 분비 억제능을 측정하였다.
실험에서는 지정된 시간에 관찰되는 산화질소(nitric oxide)양을 정량하기 위해 1, 10 및 100ug/mL 농도별로 비트, 적양파, 및 자색고구마의 단일추출물과 이들의 복합추출물(1:1:1 중량비로 혼합)을 처리한 후, 37℃에서 2시간 배양(incubation)하고, 산화질소 탐색 시약인 그리스 시약을 섞어 540nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 비트, 적양파, 및 자색고구마의 3종 복합추출물을 첨가한 군에서 LPS로 유도된 산화질소의 생성이 농도 의존적으로 억제되는 것으로 나타났으며, 100ug/mL 농도에서 무처리군에 비해 최대 53% 산화질소 생성이 억제되는 것으로 확인되었다. 이에 반해 비트, 적양파, 및 자색고구마의 단일추출물 처리군에서는 산화질소 생성 억제 활성이 미미한 것으로 나타났으며, 100ug/mL 농도에서 비트, 적양파, 및 자색고구마의 단일추출물 처리군과 비교하여 3종 복합추출물 처리군이 각각 51%, 57%, 및 50% 개선된 산화질소 억제 활성을 나타내었다.
상기 실험 결과를 통해, 본 발명의 비트, 적양파, 및 자색고구마로 구성된 3종 복합추출물이 염증반응을 매개하는 산화질소의 생성을 농도 의존적으로 억제하는 시너지 효과가 있으며, 염증반응에 의해 매개되는 탈모 질환에 대한 예방 또는 치료에 효과적으로 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다(도 2).
실시예 4. 비트, 적양파, 및 자색고구마 복합추출물의 항산화 효과
DCF-DA(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate)를 이용하여 세포 내 활성산소종 수준을 측정하였다. DCF-DA는 활성산소종에 의해 인간 모유두 세포 내에서 DCF로 전환되어 형광을 발한다.
인간 모유두 세포를 10% FBS(fetal bovine serum), 50units/mL penicillin 및 100μg/mL streptomycin을 포함하는 DMEM 배지에 접종하여 37℃, 5% CO2 조건에서 24∼48시간 계대 배양하여 실험에 사용하였다.
인간 모유두 세포를 105 내지 106 농도로 분주하고, 비트, 적양파, 및 자색고구마의 단일추출물과 이들의 복합추출물(1:1:1 중량비로 혼합)을 1, 10 및 100ug/mL 농도로 처리하여 48시간 동안 배양하였다.
배양 후, 600uM 농도의 H2O2를 4시간 동안 처리하였고, 다음 250μM DCF-DA를 넣어 50분 동안 배양하여 형광 마이크로 플레이트 리더(microplate reader, Molecular Devices E09090, USA)를 사용하여 485nm(determination)와 535nm(reference)에서 형광 레벨을 측정하였다.
그 결과, 본 발명의 비트, 적양파, 및 자색고구마 3종 복합추출물은 H2O2 처리로 생성된 인간 모유두 세포 내의 라디칼을 농도 의존적으로 소거하는 것으로 나타났으며, 100ug/ml의 농도에서는 H2O2 단독처리군에 비해 인간 모유두 세포 내 라디칼의 생성을 49% 이상 감소시키는 것으로 나타났다.
이에 반해 비트, 적양파, 및 자색고구마의 단일추출물 처리군에서는 산화질소 생성 억제 활성이 미미한 것으로 나타났으며, 3종 복합추출물 처리군이 100ug/mL 농도에서 비트, 적양파, 및 자색고구마의 단일추출물 처리군과 비교하여 각각 42%, 47%, 및 51% 개선된 활성산소종 소거 활성을 나타내었다.
상기 결과를 통해 본 발명의 비트, 적양파, 및 자색고구마 3종 복합추출물은 인간 모유두 세포 내에서 산화적 스트레스에 대한 세포보호에 시너지 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었으며, 산화적 스트레스에 의해 매개되는 탈모 질환에 대한 예방 또는 치료에 효과적으로 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다(도 3).
실시예 5. 모유두 세포(HHDPC)의 세포 사멸과 관련된 유전자 발현 분석
본 실험에서는 모유두 세포(HHDPC)의 세포 사멸을 억제하는 Bcl-2 유전자와, 세포 사멸을 촉진하는 Bax 유전자, PARP-1 유전자, 및 Caspase-3 유전자의 발현에 비트, 적양파, 및 자색고구마의 3종 복합추출물이 미치는 영향을 검증하기 위해 하기 실험을 수행하였다.
인간 모유두 세포를 10% FBS(fetal bovine serum), 50units/mL penicillin 및 100μg/mL streptomycin을 포함하는 DMEM 배지에 접종하여 37℃, 5% CO2 조건에서 24∼48시간 계대 배양하여 실험에 사용하였다.
인간 모유두 세포를 105 내지 106 농도로 분주하고, DMEM 배지에서 24시간 배양 후, FBS 없는 DMEM 배지에 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물(1:1:1 중량비로 혼합)을 각각 1, 10 및 100ug/mL 농도로 처리한 후, 동시에 600uM 농도의 H2O2를 처리하고, 추가 배양하였다. 세포를 PBS로 두 번 세척하고, lysis buffer (50 mMTris-HCl [pH 7.4], 1% NP-40, 0.25% sodium deoxycholate, 150 mMNaCl, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF, 1 mM sodium orthovanadate, 1 mMNaF, 1 μg/mL aprotinin, 1 μg/mL leupeptin, and 1 μg/mL pepstatin)를 넣고 약 5분간 얼음에 배양시킨 후 14,000 rpm에 서 15분 동안 원심분리하고, 상등액을 취해서 SDS 샘플 완충액을 넣은 후 100℃에서 5분 동안 끓여서 단백질의 변성을 유도하였다. 10% SDS PAGE를 이용하여 단백질을 분리하고, 분리한 단백질을 Polyvinylidene fluoride (PVDF)막에 옮겨 웨스턴 블롯팅 분석(Western blotting)을 각각의 항체를 이용하여 실시하였다. 사용된 항체는 공급처에서 제시하는 희석비율을 사용하였고, 공급처는 Santacruz (UT, USA) 및 Sigma-Aldrich Korea를 통해 구입하여 사용하였다.
도 4와 도 5를 참조하면, 비트, 적양파, 및 자색고구마의 3종 복합추출물을 처리한 군에서는 H2O2 처리로 유도된 Bcl-2 단백질의 발현 감소 현상이 유의하게 회복되는 것으로 나타났고, H2O2 처리로 유도된 Bax 단백질, PARP-1 단백질, 및 Caspase-3 단백질의 과발현이 유의하게 감소하는 것으로 나타났으며, 이러한 효과는 농도 의존적인 것으로 나타났다.
상기 결과를 통해 본 발명의 비트, 적양파, 및 자색고구마 3종 복합추출물은 인간 모유두 세포의 사멸을 억제하는 Bcl-2 단백질의 발현을 유의하게 증가시키고, 인간 모유두 세포의 사멸을 촉진하는 Bax 단백질, PARP-1 단백질, 및 Caspase-3 단백질의 발현을 억제하여 인간 모유두 세포의 사멸을 억제함으로써 탈모 질환에 대한 예방 또는 치료에 효과적으로 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다(도 4 및 도 5).
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
Claims (8)
- 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물을 유효성분으로 포함하되,
상기 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물은 모유두 세포(HHDPC)의 증식을 촉진하고, 인간 모유두 세포의 사멸을 억제하는 Bcl-2 단백질의 발현을 증가시키며, 인간 모유두 세포의 사멸을 촉진하는 Bax 단백질, PARP-1 단백질, 및 Caspase-3 단백질의 발현을 저해하여 탈모 예방, 탈모 치료, 발모 촉진, 및 육모 촉진으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 모발 상태 개선 활성을 나타내는 것을 특징으로 하고,
상기 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물은 산화질소 매개 염증 반응을 억제하고, 활성산소종(ROS, Reactive oxygen species)의 생성을 억제하여 항염증 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물로서,
상기 비트, 적양파, 및 자색고구마의 추출물이 1:0.5-1.5:0.5-1.5의 중량비로 혼합된 복합추출물인 것을 특징으로 하는,
모발 상태 개선용 및 항염증용 약학적 조성물. - 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 원형 탈모증(alopecia areata), 안드로겐성 탈모증(androgenetic alopecia), 머리 백선(tinea capitis), 감모증(hypotrichosis), 유전성 단순 감모증(hereditary hypotrichosis simplex), 국한 탈모증(circumscribed alopecia), 선천 탈모증(alopecia congenitalis), 두덩탈모증(alopecia pubis), 지루 탈모증(alopecia seborrheica), 노년탈모증(alopecia senilis), 전두 탈모증(alopecia totalis), 전신 탈모증(alopecia universalis), 및 휴지기 탈모증(telogen effluvium)에서 선택된 어느 하나의 탈모증(alopecia)을 치료 또는 예방하는 것을 특징으로 하는,
모발 상태 개선용 및 항염증용 약학적 조성물. - 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물을 유효성분으로 포함하되,
상기 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물은 모유두 세포(HHDPC)의 증식을 촉진하고, 인간 모유두 세포의 사멸을 억제하는 Bcl-2 단백질의 발현을 증가시키며, 인간 모유두 세포의 사멸을 촉진하는 Bax 단백질, PARP-1 단백질, 및 Caspase-3 단백질의 발현을 저해하여 탈모 예방, 발모 촉진, 및 육모 촉진으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 모발 상태 개선 활성을 나타내는 것을 특징으로 하고,
상기 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물은 산화질소 매개 염증 반응을 억제하고, 활성산소종(ROS, Reactive oxygen species)의 생성을 억제하여 항염증 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 식품 조성물로서,
상기 비트, 적양파, 및 자색고구마의 추출물이 1:0.5-1.5:0.5-1.5의 중량비로 혼합된 복합추출물인 것을 특징으로 하는,
모발 상태 개선용 및 항염증용 식품 조성물. - 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물을 유효성분으로 포함하되,
상기 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물은 모유두 세포(HHDPC)의 증식을 촉진하고, 인간 모유두 세포의 사멸을 억제하는 Bcl-2 단백질의 발현을 증가시키며, 인간 모유두 세포의 사멸을 촉진하는 Bax 단백질, PARP-1 단백질, 및 Caspase-3 단백질의 발현을 저해하여 탈모 예방, 발모 촉진, 및 육모 촉진으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 모발 상태 개선 활성을 나타내는 것을 특징으로 하고,
상기 비트, 적양파, 및 자색고구마의 복합추출물은 산화질소 매개 염증 반응을 억제하고, 활성산소종(ROS, Reactive oxygen species)의 생성을 억제하여 항염증 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물로서,
상기 비트, 적양파, 및 자색고구마의 추출물이 1:0.5-1.5:0.5-1.5의 중량비로 혼합된 복합추출물인 것을 특징으로 하는,
모발 상태 개선용 및 항염증용 화장료 조성물.
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