NL193376C

NL193376C - 16-Ledig pentacyclische macrolideverbindingen, preparaten die deze bevatten en gebruik ervan.

Info

Publication number: NL193376C
Application number: NL8701322A
Authority: NL
Original assignee: American Cyanamid Co
Priority date: 1986-06-06
Filing date: 1987-06-05
Publication date: 1999-08-03
Also published as: CA1296329C; FI923445A0; EG18752A; GB8713239D0; NL8701322A; LU86908A1; LV10781B; GEP19981388B; IL82776A; KR880000441A; NL990026I1; GB2192630A; JP2648147B2; SE8702361L; DK290287A; FI923445A; SE503399C2; IT1206015B; FI872517A0; SE8702361D0

Description

1 193376 16-ledig pentacyclische macrolideverbindingen, preparaten die deze bevatten en gebruik ervan

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een verbinding met formule 1 van het formuleblad waarin R, en alkylgroep voorstelt en OR3 een hydroxylgroep, een alkoxygroep, een alkylcarbonyloxygroep, een 5 alkoxycarbonyloxygroep of een carbamoyloxygroep voorstelt.

Het Franse octrooischrift 2.570.390 beschrijft dergelijke 16-ledige pentacyclische macroliden. De verbindingen van het Franse octrooischrift 2.570.390 voldoen aan de algemene formule 6 waarin R., en R3 de hiervoor gegeven betekenis hebben en onderscheiden zich door de aanwezigheid van een hydroxylgroep op de 23-plaats. Deze verbindingen hebben een antibiotische en andere pesticide werking, bijvoorbeeld 10 tegen Tetranychus urticae.

Gevonden zijn nu nieuwe verbindingen met een antibiotische en andere pesticide werking waarin op de 23-plaats een oximgroep aanwezig is, die actiever is dan de overeenkomende verbinding met een hydroxylgroep op de 23-plaats die bereid kunnen worden door chemische modificatie van verbindingen met formule 6.

15 De uitvinding voorziet in verbindingen met formule 1 van het formuleblad en farmaceutisch aanvaardbare zouten daarvan, waarin R, een methyl-, ethyl- of isopropylgroep voorstelt, R2 een waterstofatoom, een vertakte of onvertakte alkylgroep met 1-8 koolstofatomen of een vertakte of onvertakte alkenyigroep met 3-8 koolstofatomen voorstelt, waarbij de groep =NOR2 de E-configuratie heeft; 20 en OR3 een hydroxylgroep, een groep 0R4, 0C0R4 of 0C02R4 waarin R4 een vertakte of onvertakte alkylgroep met 1-6 koolstofatomen voorstelt, of een groep 0C0NRaR9 waarin Ra en R9 onafhankelijk een waterstofatoom of een vertakte of onvertakte alkylgroep met 1-4 koolstofatomen voorstelt.

R4 kan een gesubstitueerde alkylgroep voorstellen. Als R4 een gesubstitueerde alkylgroep is kan deze 25 groep bijvoorbeeld met één of meer, bijvoorbeeld twee of drie halogeenatomen (bijvoorbeeld chloor- of broomatomen), of een carboxylgroep, een alkoxygroep met 1 tot 4 koolstofatomen, bijvoorbeeld methoxy, ethoxy), een fenoxygroep of een silyloxygroep of een cycloalkylgroep gesubstitueerd zijn.

De uitvinding voorziet verder in farmaceutische, veterinaire en pesticide preparaten die één of meer verbindingen van de uitvinding en één of meer geschikte dragers en/of excipiënten bevatten.

30 De uitvinding voorziet ook in een werkwijze voor het bestrijden van ongedierteplagen in de landbouw, tuinbouw of bosbouw, of in warenhuizen, gebouwen of andere openbare gelegenheden of plaatsen waar ongedierte voorkomt, door het op de planten of andere vegetatie of op het ongedierte zelf of op bepaalde plaats daarvan aanbrengen van een doeltreffende hoeveelheid van één of meer verbindingen van de uitvinding.

35 Door fermentatie verkregen uitgangsverbindingen met formule 6 met een hydroxylgroep op de 23-plaats zijn ook bekend uit EP-A 170006. Deze verbindingen hebben op de 25-plaats dezelfde groepen (-C(-CHg^CH-R,) als de verbindingen van de uitvinding.

Het Britse octrooischrift 2.176.182 beschrijft verbindingen met dezelfde groepen op de 25-plaats, maar beschrijft een grote verscheidenheid aan substituenten voor de 23-plaats, waaronder de 23-ketonen met 40 formule 2 van het formuleblad.

Het Amerikaanse octrooischrift 4.289.760 beschrijft eveneens 23-ketonen, maar op de 25-plaats is uitsluitend een eenvoudige alkylgroep aanwezig.

In geen van de bovengenoemde literatuurplaatsen wordt de aanwezigheid van een oximgroep in het molecuul, hetzij op de 23-plaats of op een willekeurige andere plaats, gesuggereerd.

45 Het Europese octrooischrift 110.667 beschrijft verbindingen die niet gesubstitueerd zijn op de 23-plaats en die een eenvoudige alkylgroep op de 25-plaats hebben. Er is een oximgroep aanwezig op de 5-plaats, maar de aanwezigheid van een dergelijke groep op de 23-plaats wordt niet gesuggereerd.

Verbindingen volgens de uitvinding hebben antibiotische werking, bijvoorbeeld tegen wormen, zoals nematoden, en in het bijzonder tegen endoparasieten en ectoparasieten.

50 De verbindingen volgens de uitvinding zijn zowel in vitro als in vivo doeltreffend gebleken tegen een groot aantal endoparasieten en ectoparasieten. De antibiotische werking van verbindingen volgens de uitvinding kan bijvoorbeeld aangetoond worden aan de hand van hun werking tegen vrij levende nematoden zoals Caenorhabditis elegans en Nematospiroides dubius.

Een belangrijke werkzame verbinding volgens de uitvinding is die met formule 1 waarin: 55 R, een methylgroep is, R2 een methylgroep is en OR3 een methoxygroep is.

Een andere belangrijke werkzame verbinding volgens de uitvinding is die met formule 1 waarin: R., een ethylgroep is, R2 een methylgroep is en OR3 een hydroxylgroep is.

193376 2

Een bijzonder belangrijke werkzame verbinding volgens de uitvinding is die met formule 1 waarin: R1 een isopropylgroep is, R2 een methylgroep is en 0R3 een hydroxylgroep is.

De verbinding met formule 1 waarin Rn een isopropylgroep is, R2 een methylgroep is en OR3 een hydroxylgroep is, is werkzaam tegen een groot aantal verschillende endoparasieten en ectoparasieten. Deze 5 verbinding is bijvoorbeeld in vivo werkzaam gebleken tegen parasitaire nematoden zoals Ascaris, Cooperia, curticei, Cooperia oncophora, Cyathostomes, Dictyocaulus viviparus, Dirofilaria immitis, Gastrophilus, Haemonchus contortus, Nematodirus battus, Nematodirus helvetianus, Nematodirus spathiger, Nematospi-roides dubius, Nippostrongylus braziliensis, Oesophaostomum, Onchocera gutturosa, Ostertagia circum-cincta, Ostertagia ostertagi, Oxyuris equi, Parascaris equorum, Probstmayria, Strongylus edentatus, 10 Stongylus vulgaris, Toxocara canis, Trichostrongylus axei, Trichostrongylus vitrinus, Triodontophorus en Uncinaria stenocephala en parasitaire maden, schurftmijten, teken en luizen zoals Amblyomma hebraeum Anopheles stevensi, Boophilus dicolarartus, Boophilus microplus, Chorioptes ovis, Culexpipiens molestus, Damalinia bovis, Dermatobia, Haematopinus, Hypoderma, Linognathus vituli, Lucilia sericata, Psoroptes ovis, Rhipicephalus appendiculatus en Sarcoptes.

15 Verbindingen volgens de uitvinding kunnen ook gebruikt worden bij het bestrijden van insecten-, mijten-en nematodeplagen in de landbouw, tuinbouw, bosbouw, in de volksgezondheid en in opgeslagen producten. Ongedierte van de bodem en van gewassen zoals granen (bijvoorbeeld tarwe, gerst, maïs en rijst), katoen, tabak, groenten (bijv. soja), fruit (bijv. appels, druiven en citrusvruchten) en wortelgewassen (bijv. suikerbiet, aardappels) kunnen op bruikbare wijze bestreden worden.

20 In het bijzonder is gevonden, dat de verbinding met formule 1 waarin R, een isopropylgroep is, R2 een methylgroep is en OR3 een hydroxylgroep is, werkzaam is tegen Tetranychus urticae (op snijboonblad), Myzus persicae (op chinese-koolblad), Heliothis virescens (op katoenblad), Nilaparvata lugens (op rijstplant), Musea domestica (in een plastic pot met watten/suikeroplossing), Blattella germanica (in een plastic pot met voedingskorreis), Spodoptera exigua (op een katoenblad) en Meloidogyne incognita.

25 Verbindingen volgens de uitvinding kunnen ook als anti-fungusmiddelen gebruikt worden, bijvoorbeeld tegen Candida sp. -stammen zoals Candida albicans en Candida glabrata en tegen gist zoals Saccharomy-ces carlsbergensis.

Volgens de uitvinding worden derhalve verbindingen verschaft met formule 1 zoals hierboven gedefinieerd, die als antibiotica gebruikt kunnen worden. In het bijzonder kunnen zij gebruikt worden bij de 30 behandeling van dieren en mensen met infecties veroorzaakt door endoparasieten, ectoparasieten en/of schimmels, en in de landbouw, tuinbouw of bosbouw als pesticiden ter bestrijding van insecten-, mijten- en nematodeplagen. Zij kunnen ook in het algemeen als pesticiden gebruikt worden ter bestrijding van ongedierte in andere omstandigheden, bijvoorbeeld in warenhuizen, gebouwen of andere openbare gelegenheden. In het algemeen kunnen de verbindingen ofwel op de gastheer (dier of mens of planten of 35 vegetatie) of op een bepaalde plaats daarvan of op het ongedierte zelf aangebracht worden.

Verbindingen volgens de uitvinding kunnen op elke geschikte wijze tot preparaat verwerkt worden voor toepassing in de veterinaire of humane geneeskunde, en binnen het kader van de uitvinding vallen derhalve farmaceutische preparaten welke een verbinding volgens de uitvinding omvatten, geschikt voor toepassing in de veterinaire of humane geneeskunde. Dergelijke preparaten kunnen op conventionele wijze met behulp 40 van één of meer geschikte dragers of excipiënten gepresenteerd worden voor gebruik. Tot de preparaten volgens de uitvinding behoren die welke speciaal vervaardigd zijn voor parenteraal (met inbegrip van intramammaire toediening), oraal, rectaal, lokaal, intramuraal, implantatie-, in het oog, nasaal of urogenitaal gebruik.

De verbindingen volgens de uitvinding kunnen op uit o.a. het FR-A 2.570.390 bekende wijze tot 45 preparaat verwerkt worden voor toepassing in de veterinaire of humane geneeskunde door middel van injectie.

Samenstellingen voor de veterinaire geneeskunde kunnen ook tot intramammaire preparaten verwerkt worden of voor veterinair of humaan in een vorm welke geschikt is voor orale toediening.

De verbindingen volgens de uitvinding kunnen bijvoorbeeld ook verwerkt worden tot zetpillen of als 50 pessaria.

Verbindingen volgens de uitvinding kunnen voor lokale toedoening, voor toepassing in de veterinaire en humane geneeskunde, verwerkt worden tot zalven, crèmes, lotions, shampoos, poeders, sprays, sauzen, aerosolen, druppels (bijv. oog- of neusdruppels) of uitgietbare preparaten.

Voor toediening door inhaleren kunnen de verbindingen volgens de uitvinding voor gebruik in de 55 veterinaire of humane geneeskunde in de vorm van een aerosolspray of een inblaasapparaat geleverd worden.

De totale dagelijkse dosering van verbindingen volgens de uitvinding die zowel in de veterinaire als de 3 193376 humane geneeskunde gebruikt worden, bedraagt geschikt 1-2000 pg/kg lichaamsgewicht, bij voorkeur 5-800 pg/kg, en dit kan in verschillende doses, bijvoorbeeld 1-4 maal daags, toegediend worden.

De verbindingen volgens de uitvinding kunnen op elke doelmatige wijze tot preparaat verwerkt worden voor land- of tuinbouwkundig gebruik.

5 In het algemeen omvatten dergelijke preparaten de verbinding in combinatie met een geschikte drager of verdunningsmiddel. Dergelijke preparaten zijn in de techniek algemeen bekend en kunnen met conventionele methoden bereid worden, zoals bijvoorbeeld door de (het) werkzame bestanddeel(en) met de drager of het verdunningsmiddel, bijvoorbeeld een vaste drager, oplosmiddel of oppervlakteactieve stof, te mengen en/of te malen.

10 In de preparaten bedraagt de concentratie werkzame stof in het algemeen 0,01 tot 99 gew.% en bij voorkeur 0,01 tot 40 gew.%.

Commerciële producten worden in het algemeen als geconcentreerde preparaten verschaft, welke voor gebruik tot een geschikte concentratie, bijvoorbeeld 0,001 tot 0,0001 gew.%, verdund moeten worden.

De hoeveelheid waarin een verbinding toegepast wordt, hangt van een aantal factoren af, zoals de soort 15 plaag en de mate van aantasting. In het algemeen zal echter een hoeveelheid van 10 g/ha tot 10 kg/ha geschikt zijn; bij voorkeur bedraagt de hoeveelheid 10 g/ha tot 1 kg/ha voor de bestrijding van mijten en insecten en 50 g/ha tot 10 kg/ha voor de bestrijding van nematoden.

De verbindingen volgens de uitvinding kunnen in combinatie met andere werkzame bestanddelen toegediend of gebruikt worden.

20 De verbindingen volgens de uitvinding kunnen met behulp van de hieronder besproken werkwijzen bereid worden. Bij sommige van deze werkwijzen kan het nodig zijn een hydroxygroep op de 5-plaats in de uitgangsstof te beschermen alvorens de beschreven reactie uit te voeren. In dergelijke gevallen is het daarna vaak nodig de beschermende groep te verwijderen wanneer de reactie verlopen is ter verkrijging van de gewenste verbinding volgens de uitvinding. Conventionele werkwijzen voor het aanbrengen en verwijde-25 ren van beschermende groepen kunnen gebruikt worden, bijvoorbeeld zoals beschreven in handboeken van Greene, Protective Groups in Organic Synthesis (Wiley-lnterscience New York 1981 en McOmie, Protective Groups in Organic Chemistry (Plenum Press, Londen 1973).

Verbindingen met formule 1 kunnen worden bereid door verbindingen met formule 2, waarin R, en OR3 de eerder gedefinieerde betekenis hebben, te laten reageren met een reagens H2NOR2 of een zout 30 daarvan, waarin R2 de eerder gedefinieerde betekenis heeft, desgewenst gevolgd door verwijdering van een beschermende groep van een verbinding met formule 1 waarin OR3 een beschermde hydroxygroep is, en eventueel gevolgd door zoutvorming.

De oximvorming (verg. EP-A 110.667) kan in waterige of niet-waterige reactiemilieus, doelmatig bij een temperatuur van -20 tot +100°C, bijvoorbeeld -10 tot +50°C, uitgevoerd worden. Doelmatig gebruikt men 35 het reagens H2NOR2 in de vorm van een zout, bijvoorbeeld een zuuradditiezout zoals het hydrochloride. Wanneer een dergelijk zout gebruikt wordt, kan de reactie in aanwezigheid van een zuurbindend middel uitgevoerd worden.

Oplosmiddelen die gebruikt kunnen worden zijn bijvoorbeeld water en met water mengbare oplosmiddelen zoals methanol of ethanol, N,N-dimethylformamide, Ν,Ν-dimethylacetamide of hexamethylfosforamide, 40 tetrahydrofuran of dioxan, dimethoxyethaan of diëthylether, acetonitril, sulfolaan, methyleenchloride en ethylacetaat, alsmede mengsels van twee of meer van dergelijke oplosmiddelen.

Wanneer waterige omstandigheden gebruikt worden kan de reactie doelmatig met een geschikt zuur, base of buffer tot een pH van 2-9 gebufferd worden.

Geschikte zuren zijn bijvoorbeeld zoutzuur, zwavelzuur en azijnzuur. Geschikte basen zijn bijvoorbeeld 45 alkalimetaalcarbonaten en -bicarbonaten zoals natriumbicarbonaat, hydroxyden zoals natriumhydroxyde, en alkalimetaalcarboxylaten zoals natriumacetaat. Een geschikte buffer is natriumacetaat/azijnzuur.

Verbindingen met formule 2 zijn ofwel bekende verbindingen die in de oudere Nederlandse octrooiaanvrage 8601103 beschreven worden, of kunnen met standaardmethoden uit daarin beschreven bekende verbindingen bereid worden.

50 Verbindingen met formule 1 waarin R2 een alkylgroep met 1-8 koolstofatomen of een alkenylgroep met 3-8 koolstofatomen is en OR3 een alkoxy-alkoxycarbonyl of alkyloxycarbonyloxygroep is, kunnen worden bereid door een verbinding met formule 1 waarin OR3 een hydroxygroep is, op gebruikelijke wijze om te zetten in die gesubstitueerde hydroxygroepen.

Zo kan acylering bijvoorbeeld uitgevoerd worden onder toepassing van een acyleringsmiddel, zoals een 55 zuur met formule R4COOH of een reactief derivaat daarvan, zoals een zuurhalogenide (bijvoorbeeld zuurchloride), -anhydride of geactiveerde ester, of een reactief derivaat van een zuur met formule R4OCOOH of R4OCSOH.

193376 4

Acyleringen waarbij zuurhalogeniden en -anhydriden gebruikt worden, kunnen desgewenst uitgevoerd worden in aanwezigheid van een zuurbindend middel zoals een tertiair amine (bijvoorbeeld triëthylamine, dimethylaniline of pyridine), anorganische basen (bijvoorbeeld calciumcarbonaat of natriumbicarbonaat), en oxyranen zoals lagere 1,2-alkyleenoxyden (bijv. ethyleenoxyde of propyleenoxyde) die waterstofhalogenide 5 binden dat bij de acylering vrijkomt.

Acyleringen waarbij zuren gebruikt worden, worden bij voorkeur uitgevoerd in aanwezigheid van een condensatiemiddel, bijvoorbeeld een carbodiimide zoal Ν,Ν'-dicyclohexylcarbodiimide of N-ethyl-Ν'γ-dimethylaminopropylcarbodiimide; een carbonylverbinding zoals carbonyldiimidazool; of een isoxazoliumzout zoals N-ethyl-5-fenylisoxazoliumperchloraat.

10 Een geactiveerde ester kan doelmatig in situ gevormd worden met bijvoorbeeld 1-hydroxybenzotriazool in aanwezigheid van een condensatiemiddel zoals hierboven. In plaats daarvan kan de geactiveerde ester tevoren bereid worden.

De acylering kan in waterige of niet-waterige reactiemilieus, doelmatig bij een temperatuur van -20 tot +100°C, bijvoorbeeld -10 tot +50°C, uitgevoerd worden.

15 Formylering kan teweeggebracht worden met een geactiveerd derivaat van mierenzuur, bijvoorbeeld N-formylimidazooi of mierenzuuranhydride onder standaardomstandigheden.

Ethervorming kan teweeggebracht worden met een reagens met formule R4Y, waarin R4 de eerder gedefinieerde betekenis heeft en Y een vertrekkende groep zoals een chloor-, broom- of jodiumatoom of een hydrocarbylsulfonyloxygroep, zoals mesyloxy of tosyloxy, of een halogeenalkanoyloxygroep zoals 20 dichlooracetoxy voorstelt. De reactie kan uitgevoerd worden door vorming van een magnesiumalkanolaat onder toepassing van een Grignard-reagens zoals een methylmagnesiumhalogenide, bijvoorbeeld methyl-magnesiumjodide, of onder toepassing van een trialkylsilylmethylmagnesiumhalogenide, bijvoorbeeld trimethylsilyimethylmagnesiumchloride, gevolgd door behandeling met het reagens R4Y.

In plaats daarvan kan de reactie uitgevoerd worden in aanwezigheid van een zilverzout zoals zilver-25 oxyde, zilverperchloraat, zilvercarbonaat of zilversalicylaat of mengsels daarvan, en dit systeem kan bijzonder geschikt zijn wanneer ethervorming uitgevoerd wordt onder toepassing van een alkylhalogenide (bijvoorbeeld methyljodide). Ethervorming kan doelmatig teweeggebracht worden in een oplosmiddel zoals diëthylether.

Oplosmiddelen die bij de bovenstaande reacties gebruikt kunnen worden zijn bijvoorbeeld ketonen (bijv. 30 aceton), amiden (bijv. Ν,Ν-dimethylformamide, Ν,Ν-dimethylacetamide of hexamethylfosforamide), ethers (bijv. cyclische ethers zoals tetrahydrofuran of dioxan, en acyclische ethers zoals dimethoxyethaan of diëthylether), nitrillen (bijv. acetonitril), koolwaterstoffen zoals halogeenkoolwaterstoffen (bijv. methyleenchlo-ride), en esters zoals ethylacetaat, alsmede mengsels van twee of meer van dergelijke oplosmiddelen.

Carbamoylering ter verkrijging van een verbinding met formule 1 waarin OR3 een groep OCONR8R9 is, 35 kan teweeggebracht worden door reactie met een geschikt acylerings- (carbamoylerings)middei. Geschikte carbamoyleringsmiddelen die gebruikt kunnen worden ter verkrijging van verbindingen waarin één van de symbolen R8 en R9 een waterstofatoom is en het andere een alkylgroep met 1 tot 4 koolstofatomen is, zijn bijvoorbeeld isocyanaten met formule R10NCO, waarin R10 een alkylgroep met 1-4 koolstofatomen is. De carbamoylering kan geschikt uitgevoerd worden in aanwezigheid van een oplosmiddel of oplosmiddel-40 mengsel gekozen uit koolwaterstoffen (bijv. aromatische koolwaterstoffen zoals benzeen en tolueen), halogeenkoolwaterstoffen (bijv. dichloormethaan), amiden (bijv. formamide of dimethylformamide), esters (bijv. ethylacetaat), ethers (bijv. cyclische ethers zoals tetrahydrofuran en dioxan), ketonen (bijv. aceton), sulfoxyden (bijv. dimethylsulfoxyde) of mengsels van deze oplosmiddelen. De reactie kan doelmatig uitgevoerd worden bij een temperatuur van -80°C tot het kookpunt van het reactiemengsel, bijvoorbeeld tot 45 100°C, bij voorkeur tussen -20 en +30°C.

De carbamoylering kan bevorderd worden door de aanwezigheid van een base, bijvoorbeeld een tertiaire organische base zoals tri(lage alkyl)amine (bijv. triëthylamine).

Een ander bruikbaar carbamoyleringsmiddel is cyaanzuur, dat doelmatig in situ gevormd wordt, bijvoorbeeld uit een alkalimetaalcyanaat zoals natriumcyanaat, waarbij laatstgenoemde reactie bevorderd 50 wordt door de aanwezigheid van een zuur, bijvoorbeeld een sterk organisch zuur zoals trifluorazijnzuur.

Cyaanzuur komt effectief overeen met de hierboven genoemde isocyanaatverbindingen waarin R10 waterstof is, en dit zuur zet dan ook verbindingen met formule 2 direct om in de carbamoyloxyanaloga daarvan (verbindingen met formule 1 waarin OR3 een groep OCONH2 is).

In plaats daarvan kan carbamoylering teweeggebracht worden door reactie met fosgeen of carbonyldiimi-55 dazool gevolgd door ammoniak of het geschikte gesubstitueerde amine, eventueel in een waterig of niet-waterig reactiemilieu.

Verbindingen met formule 1 waarin R2 een alkylgroep met 1 tot 8 koolstofatomen of een alkenylgroep 5 193376 met 3-8 koolstofatomen is kunnen worden bereid door een verbinding met formule 1 waarin R2 een waterstofatoom is en OR3 een gesubstitueerde hydroxygroep is, te laten reageren met een ethervormend middel R2Y, waarin R2 een alkylgroep met 1-8 koolstofatomen of een alkenylgroep met 3-8 koolstofatomen is en Y de eerder gedefinieerde betekenis heeft, desgewenst gevolgd door verwijdering van de bescher-5 mende groep van een verbinding met formule 1 waarin OR3 een beschermde hydroxygroep is, en eventueel gevolgd door zoutvorming.

Verbindingen met formule 1 waarin OR3 een hydroxylgroep is, kunnen worden bereid door een verbinding met formule 3 te reduceren, eventueel gevolgd door zoutvorming.

De reductie kan uitgevoerd worden met een reducerend middel dat de 5-ketogroep stereoselectief kan 10 reduceren. Geschikte reducerende middelen zijn bijvoorbeeld natriumboorhydride en lithiumtributoxyalumi-niumhydride.

De reactie met een boorhydride heeft plaats in aanwezigheid van een oplosmiddel zoals isopropylalcohol of isobutylalcohol, bij voorkeur bij een temperatuur van -30 tot +80°C, bijvoorbeeld bij 0°C. De reactie met een lithiumalkoxyaluminiumhydride heeft plaats in aanwezigheid van een oplosmiddel zoals tetrahydrofuran 15 of dioxan, bij voorkeur bij een temperatuur van -78 tot 0°C.

Tussenproducten met formule 3 kunnen bereid worden uit een 5,23-diketon met formule 4 door behandeling met één equivalent van een reagens H2NOR2 waarin R2 de eerder gedefinieerde betekenis heeft, onder toepassing van de hierboven voor de bereiding van verbindingen met formule 1 beschreven oximvormingsomstandigheden.

20 Verbindingen met formule 4 kunnen bereid worden door een verbinding met formule 5 te oxyderen.

De reactie kan uitgevoerd worden met een oxydatiemiddel dat dient om een secundaire hydroxygroep om te zetten in een oxygroep, waardoor een verbinding met formule 4 gevormd wordt.

Geschikte oxydatiemiddelen zijn bijvoorbeeld chinonen in aanwezigheid van water, bijvoorbeeld 2,3-dichloor-5,6-dicyaan-1,4-benzochinon of 2,3,5,6-tetrachloor-1,4-benzochinon; een chroom (VI) bevattend 25 oxydatiemiddel, bijvoorbeeld natrium- of pyridiniumdichromaat of chroomtrioxyde in pyridine, bij voorkeur in aanwezigheid van een faseoverdrachtskatalysator; een mangaan (IV) bevattend oxydatiemiddel, bijvoorbeeld mangaandioxyde in dichloormethaan, een N-halogeensuccinimide, bijvoorbeeld N-chloorsuccinimide of N-broomsuccinimide; een dialkylsulfoxyde, bijvoorbeeld dimethylsulfoxyde, in aanwezigheid van een activator zoals Ν,Ν'-dicyclohexylcarbodiimide of een acylhalogenide, bijvoorbeeld oxalylchloride; of een 30 pyridine-zwaveltrioxydecomplex.

De reactie kan doelmatig uitgevoerd worden in een geschikt oplosmiddel zoals een keton, bijvoorbeeld aceton; een ether, bijvoorbeeld diëthylether, dioxan of tetrahydrofuran; een koolwaterstof, bijvoorbeeld hexaan; een halogeenkooiwaterstof, bijvoorbeeld chloroform of methyleenchloride; of een ester, bijvoorbeeld ethylacetaat of een gesubstitueerd amide, bijvoorbeeld dimethylformamide. Combinaties van dergelijke 35 oplosmiddelen al dan niet in aanwezigheid van water kunnen eveneens gebruikt worden. De keuze van het oplosmiddel hangt af van het voor de omzetting gebruikte type oxydatiemiddel.

De reactie kan bij een temperatuur van -80 tot +50°C uitgevoerd worden.

De verbindingen met formule 5 kunnen bijvoorbeeld bereid worden door Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12015 (gedeponeerd op 10 september 1984 in de permanente verzameling van de National 40 Collections of Industrial and Marine Bacteria, Torry Research Station, Aberdeen, Verenigd Koninkrijk) of een mutant daarvan te kweken en de verbinding uit de aldus verkregen fermentatievloeistof te isoleren.

Het Streptomyces-organisme kan op gebruikelijke wijze gekweekt worden, dat wil zeggen in aanwezigheid van assimileerbare bronnen van koolstof, stikstof en anorganische zouten. Assimileerbare koolstof-, stikstof- en mineraalbronnen kunnen verschaft worden door eenvoudige of complexe voedingsstoffen, zoals 45 bijvoorbeeld beschreven in het Franse octrooischrift 2.570.390.

Een verscheidenheid aan fractioneringsmethoden kan gebruikt worden, bijvoorbeeld adsorptie-elutie, precipitatie, gefractioneerde kristallisatie en oplosmiddelextractie, welke op verschillende wijzen gecombineerd kunnen worden. Oplosmiddelextractie en chromatografie zijn het meest geschikt gebleken voor het isoleren en afscheiden van de verbinding. Een geschikte werkwijze voor het verkrijgen van de verbindingen 50 met formule 5 onder toepassing van deze methoden wordt in onderstaande Bereiding 1 beschreven.

Verbindingen met formule 1 waarin OR3 een hydroxygroep is, kunnen worden bereid door de beschermende groep te verwijderen uit een overeenkomstige verbinding met formule 1 waarin OR3 een hierboven beschreven beschermde hydroxygroep is.

In de volgende Bereidingen en Voorbeelden worden verbindingen aangeduid als derivaten van het 55 bekende Franse octrooischrift 2.570.390 "Factoren” A, B, C en D. Factor A is een verbinding met formule 6 waarin Rt isopropyl is en R3 waterstof is; Factor B is een verbinding met formule 6 waarin R1 methyl is en R3 methyl is; Factor C is een verbinding met formule 6 waarin R, methyl is en R3 waterstof is; en Factor D

193376 6 is een verbinding met formule 6 waarin Rn ethyl is en R3 waterstof is.

Bereiding 1:5-Keto Factor A (verg. Frans octrooischrift 2.570.390, exemple 5).

Sporen van Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12015 werden geïnoculeerd op schuine agarmedia, bestaande uit de volgende bestanddelen: 5 - g/i

Gistextract (Oxoid L21) 0,5

Moutextract (Oxoid L39) 30,0 10 Mycologisch peptoon (Oxoid L40) 5,0

Agar Nr. 3 (Oxoid L13) 15,0

Gedestilleerd water tot 1 I pH-5,4 15 en 10 dagen bij 28°C geïncubeerd.

De rijpe schuine cultuur werd vervolgens met 6 ml van een 10% glyceroloplossing bedekt en met een steriele spatel afgeschraapt om de sporen en het mycelium los te maken. Porties van 0,4 ml van de verkregen sporesuspensie werden overgebracht in steriele polypropeenvaatjes welke vervolgens dicht-gesmolten en in damp van vloeibare stikstof bewaard werden tot ze nodig waren.

20 Twee Erlenmeyer-kolven van 250 ml met 50 ml entmedium, bestaande uit de volgende bestanddelen: g/i D-Glucose 15,0 25 Glycerol 15,0

Soja-peptoon 15,0

NaCI 3,0

CaC03 1,0

Gedestilleerd water tot 1 I

30 - (De niet ingesteide pH van het medium was 6,7, en werd ingesteld op een pH van 7,0 met waterige natriumhydroxyde voordat het onder druk verhit werd. De pH van het medium na het verhitten bedroeg 7,3.) werden elk geïnoculeerd met 0,2 ml van de sporesuspensie welke uit een vaatje genomen was.

35 De kolven werden 3 dagen bij 28°C geïncubeerd op een schudinrichting welke met 250 omw./min. draaide met een baan met een middellijn van 50 mm.

De inhoud van beide kolven werd gebruikt voor het inoculeren van een fermentor van 70 I, welke 40 I van hetzelfde medium aangevuld met polypropeen 2000 (0,06 vol.%) bevatte. Polypropeen 2000 werd desvereist tijdens de fermentatie toegevoegd om schuimen tegen te gaan. De fermentatie werd bij 28°C 40 uitgevoerd, onder voldoende roeren en beluchten om een gehalte aan opgeloste zuurstof van meer dan 30% verzadiging te handhaven. Na 24 uur fermentatie werd een portie broedvloeistof van 9 I overgebracht in een fermentor van 700 I welke 450 I medium bevatte dat als volgt samengesteld was: g/i 45 - D-Glucose 2,8

Mout-dextrine (MD30E) 27,8

Arkasoy 50 13,9

Melasse 1,7 50 K2HP04 0,14

GaOOg 1,39

Silicone 525 (Dow Corning) 0,06 vol.% 55 Ingesteld op pH 6,5 voor sterilisatie.

De fermentatie werd bij 28°C onder roeren en beluchten uitgevoerd. Anti-schuimmiddel polypropeen 2000 werd al naar vereist toegevoegd, en de pH werd beneden 7,2 gehouden door toevoeging van HeS04 tot de 7 193376 oogst. De fermentatie werd na 5 dagen geoogst.

De broedvloeistof (450 I) werd geklaard op een (Westfalia KA25)centrifuge en de overblijvende bovenstaande vloeistof werd door water (20 I) vervangen. De verkregen cellen (25,5 kg) werden 1 uur geroerd met een Silversonmenger model BX in voldoende methanol tot een totaal volume van 75 I. De 5 suspensie werd gefiltreerd en het vaste residu werd opnieuw geëxtraheerd met methanol (35 I) en gefiltreerd. Het gecombineerde filtraat (87 I) werd met water (40 I) verdund en met petroleumether met kookpunt 60-80°C (30 I) geëxtraheerd. Na 30 min. werden de fasen gescheiden op een (Westfalia MEM 1256)centrifuge, en de onderste methanolfase werd na toevoeging van water (40 I) opnieuw geëxtraheerd met petroleumether met kookpunt 60-80°C (30 I). De onderste fase werd afgescheiden en vervolgens 10 opnieuw geëxtraheerd met petroleumether met kookpunt 60-80°C (30 I). De gecombineerde petroleumetherfasen (85 I) werden geconcentreerd door middel van drie gangen door een (Pfaudler 8,8-12v-27)moleculaire filmverdamper (dampdruk 0,1 bar, damptemperatuur 20°C, stoomtemperatuur 127°C). Het concentraat (9 I) werd met natriumsulfaat (2 kg) gedroogd en onder verminderde druk bij 4QCC in een filmverdamper verder geconcentreerd.

15 Het olieachtige residu (130 g) werd in chloroform opgelost tot een volume van 190 ml, en dit werd opgebracht op een kolom van Merck 7734 silica 60 (200 x 4 cm), gestort met chloroform. De kolom werd met chloroform (500 ml) uitgewassen en met chloroform:ethylacetaat (3:1) geëlueerd, waarbij fracties van ongeveer 40 ml na een voorloop van 1400 ml verzameld werden. Fracties 32-46 werden gecombineerd en ingedampt tot een olie (21,2 g). Fracties 47-93 werden gecombineerd en ingedampt tot een olie (20,1 g), 20 welke in chlorofornrethylacetaat (3:1) tot een volume van 50 ml opgelost werd; deze oplossing werd opgebracht op een kolom van Merck 7734 silica 60 (200 x 4 cm), gestort met chloroform:ethylacetaat (3:1), en fracties van ongeveer 40 ml werden na een voorloop van 1400 ml verzameld. De fracties 22-36 werden gecombineerd en ingedampt tot een olie (3,1 g), welke toegevoegd werd aan de olie die uit de fracties 32-46 van de eerste kolom verkregen was. De gecombineerde olie werd opgelost in kokende methanol 25 (4 ml) en vervolgens toegevoegd aan hete 2-propanol (20 ml), waarna men liet kristalliseren (factor B volgens FR-A 2.570.390).

De moederloog na kristallisatie werd ingedampt tot een olie welke in een gelijk volume methyleenchloride opgelost werd, en daarna op een kolom (30 x 2,2 cm) van Merck Kieselgel 60, (70-230 mesh ASTM, Art.

Nr. 7734), gestort met methyleenchloride, opgebracht werd. Het bed werd met methyleenchloride 30 (2 bedvolumina) uitgewassen en met chloroform:ethylacetaat (3:1) (2 bedvolumina) geëlueerd. Door indampen van het eluaat werd een olie verkregen die in methanol opgelost werd en aan preparatieve hplc op Spherisorb S5 ODS-2 (250 mm x 20 mm; Phase Sep. Ltd.) onderworpen werd. Porties van het monster (5 ml) werden in de loop van 1 mln. op de kolom gepompt, en de kolom werd met acetonitril.water (7:3) onder de volgende omstandigheden geëlureerd: 35 -

Tijd (min.) Stroomsnelheid (ml/min.) 0,00 0,00 ) injectietijd 1,00 0,00) 40 1,10 30,00 39,90 30,00 40.00 35,00 75.00 35,00 45

Materiaal dat van de hplc-kolom elueerde werd met uv-spectroscopie bij 238 mm onderzocht.

Door indampen van de fracties welke na 33,4 min. van de kolom kwamen, werd de titelverbinding (34 mg) als een vaste stof verkregen.

E.l. massaspectroscopie gaf een moleculair ion bij 610 en karakteristieke fragmenten bij: 50 592 574 556 422 259 55 241 193376 8

Voorbeeld I

23[E]-Methoxyimino Factor A

a. 5,23-Diketo Factor A

Een ijskoude oplossing van geconcentreerd zwavelzuur (1,2 ml) en natriumdichromaat (120 mg) in water 5 (2 ml) werd in 15 min. onder krachtig roeren toegevoegd aan een ijskoude oplossing van 5-keto Factor A (200 mg) een tetrabutylammoniumwaterstofsulfaat (15 mg) in ethylacetaat (4 ml). Na 1 uur werd het mengsel met ethylacetaat verdund, waarna de organische fase met verzadigd waterig natriumbicarbonaat uitgewassen werd. De gedroogde organische fase werd ingedampt en de gom werd gezuiverd door chromatografie over Merck Kieselgel 60, 230-400 mesh (0,037-0,063 mm) (100 ml). Door elutie met 10% 10 ethylacetaat in dichloormethaan werd de titelverbinding verkregen als een lichtgeel schuim (86 mg); δ (CDCy omvat 6,57 (m; 1H); 2,50 (s; 2H); en 1,89 (m; 3H).

b. 5-Keto, 23[E]-methoxyimino Factor A

5,23 -Diketo Factor A (475 mg), methoxylamine-hydrochloride (69 mg) en watervrij natriumacetaat (135 mg) werden in methanol opgelost. Na 1,5 uur bij kamertemperatuur werd de oplossing 16 uur op -18°C 15 gehouden, vervolgens met ethylacetaat verdund en achtereenvolgens met 1N zoutzuur, water en pekel-oplossing uitgewassen. De gedroogde organische fase werd ingedampt en het gele schuim werd gezuiverd door chromatografie over Merck Kieselgel 60, 230-400 mesh (120 ml). Door elutie met hexaan:ethylacetaat (4:1) werd de titelverbinding verkregen als een geel schuim (255 mg), [a]^1+ 80° (c 1,20, CHCI3), (EtOH) 241 nm (e 27.500), omax (CHBr3), 3530, 3460 (OH) 1780 (C=0), 1676 (C=C-C=0), 986 (C-O), δ 20 (CDCI3) omvat 6,58 (s; 1H), 3,84 (s; 4H), 3,80 (s; 1H), 3,58 (m; 1H), 3,30 (d14; 1H), 1,00 (d6; 3H), 0,96 (d6; 3H), 0,92 (d6; 3H).

c. 23[E]-Methoxyimino Factor A

(i) Natriumboorhydride (6,5 mg) werd toegevoegd aan een ijskoude oplossing van 5-keto, 23(E)-methoxyimino Factor A (83 mg) in isopropanol (20 ml). Het gele mengsel werd 35 min. in een ijsbad 25 geroerd, met ethylacetaat verdund en achtereenvolgens met 1N zoutzuur, water en pekeloplossing uitgewassen. De gedroogde organische fase werd ingedampt en de verkregen gele gom werd gezuiverd door chromatografie over Merck Kieselgel 60, 230-400 mesh (60 ml). Door elutie van de kolom met hexaan:ethylacetaat (2:1) werd de titelverbinding als een geel schuim (58 mg) verkregen. Door kristallisatie uit hexaan werd de titelverbinding verkregen, smeltpunt 203°C, [aJo + 133° (c 1,12, CHCI3), λ max (EtOH) 30 244 nm (e 26.200), δ (CDCI3) omvat 4,29 (t7; 1H), 3,84 (s; 3H), 3,29 (d15; 1H).

(ii) Een oplossing van 5-keto, 23[E]-methoxyimino Factor A (50 mg) in droog tetrahydrofuran (1 ml) werd toegevoegd aan een tot -78°C afgekoelde oplossing van lithium-tris-t-butoxyaluminiumhydride (261 mg) in droog tetrahydrofuran (3 ml). Na 0,75 uur bij -78°C werd de oplossing met ethylacetaat (30 ml) verdund en achtereenvolgens met 0,5 N zoutzuur en water uitgewassen. De gedroogde organische fase werd 35 ingedampt en het ruwe product werd gezuiverd door chromatografie over Merck kieselgel 60, 230-400 mesh (40 ml) met 25% ethylacetaat in hexaan als elutiemiddel onder verkrijging van de titelverbinding als een wit schuim, [a]|,1+ 128° (c 0,95, CHCI3); δ (CDCl3) omvat 4,29 (t7; 1H), 3,84 (s; 3H), 3,29 (d15; 1H).

Voorbeeld II

40 23[E]-Methoxyimino Factor A,5-acetaat

Een oplossing van watervrij natriumacetaat (2,8 g) in water (15 ml) werd toegevoegd aan een oplossing van 23-keto Factor A,5-acetaat (3,13 g, Voorbeeld 18 in het Britse octrooischrift 2.176.182) in methanol, gevolgd door methoxyamine-hydrochloride (3,01 g). De verkregen oplossing werd 1,5 uur bij 20°C geroerd, met ethylacetaat verdund en daarna achtereenvolgens met 0,5 N zoutzuur, water en pekel uitgewassen. De 45 gedroogde organische fase werd bijna drooggedampt en het vuilwitte schuim werd gezuiverd door chromatografie over Merck Kieselgel 60, 230-400 mesh (600 ml). Door elutie van de kolom met hexaan: ethylacetaat (4:1) werd de titelverbinding als een kleurloos schuim (2,14 g) verkregen: [a]f,1 + 128° (c 1,35, CHCIg) (EtOH) 244 nm (emax 27.250); Dmax (CHBr3) 3560, 3480 (OH), 1733 (acetaat), 1715 (C=0), 995 (C-O), δ (CDCI3) omvat 5,5-5,6 (m; 2H), 3,84 (s; 3H), 3,29 (d15; H), 2,16 <S; 3H).

50

Voorbeeld III

23[E]-Hydroxyimino Factor A,5-acetaat

Reactie van 23-keto Factor A,5-acetaat met hydroxylamine-hydrochloride werd op een soortgelijke wijze als in voorbeeld I uitgevoerd. Het ruwe product werd gezuiverd door chromatografie over Merck Kieselgel 55 60, 230-400 mesh, met ethylacetaat:acetonitril (4:1) als elutiemiddel onder verkrijging van de titelverbinding als een kleurloos schuim; (a]o + 132° (c, 1,01, CHCI3), Xmax (EtOH) 244 nm (emax 27.800), cmax (CHBr3) 3565, 3470 (OH), 1732 (acetaat), 1712 (C=0), 993 (C-O), δ (CDCI3) omvat 8,12 (S; 1H), 5,5-5,6 (m; 2H), 9 193376 3,42 (d 15; 1H), 2,16 (S; 3H).

Voorbeeld IV

23[E]-Methoxyimino Factor A

5 Een oplossing van het product van voorbeeld II (1,88 g) in methanol werd in een ijsbad gekoeld, 1N waterig natriumhydroxyde (5,6 ml) werd toegevoegd, en de oplossing werd 1,5 uur in een ijsbad geroerd.

De oplossing werd met ethylacetaat verdund en achtereenvolgens met 0,5 N waterig zoutzuur, water en pekel uitgewassen. De gedroogde organische fase werd ingedampt en het verkregen schuim werd gezuiverd door chromatografie over Merck Kieselgel 60, 230-400 mesh (400 ml). Door elutie van de kolom 10 met hexaan:ethylacetaat (2:1) werd een kleurloos schuim (1,429 g) verkregen. Door kristallisatie uit hexaan werd de zuivere titelverbinding verkregen, smpt. 203°C, [a]|1 + 132° (c 1,21, CHCI3), Xmax (EtOH) 244 nm (emax 29.200), Omax (CHBr3) 3540 (OH), 1708 (C=0), 992 (C-O), 6 (CDCI3) omvat 4,29 (t7; 1H), 3,84 (s; 3H), 3,29 (d15; 1H).

15 Voorbeeld V

23[E]-Hydroxyimino Factor A

Door hydrolyse van het product van voorbeeld III volgens de werkwijze van voorbeeld III werd een product verkregen dat gezuiverd werd door chromatografie over Merck Kieselgel 60, 230-400 mesh (400 ml) met hexaan:ethylacetaat (1:1) als elutiemiddel onder verkrijging van de titelverbinding als een kleurloos 20 schuim; [a]2D1+ 140° (c 1,24, CHCI3), Xmax (EtOH) 244 nm (emax 26.700) umax (CHBr3) 3565, 3490 (OH), 1710 (C=0), 994 (C-O), δ (CDCI3) omvat 8,11 (S; 1H), 4,29 (t7; 1H), 3,41 (d15; 1H).

Voorbeeld VI

23[E]-Ethoxyimino Factor A

25 Een oplossing van watervrij natriumacetaat (140 mg) in water (3 ml) werd toegevoegd aan een oplossing van 23-keto Factor A (200 mg, voorbeeld 23 in de Nederlandse octrooiaanvrage 8601103) en ethoxyamine-hydrochloride (126 mg) in methanol (20 ml). Na 2 uur bij 20°C werd de oplossing verdund met diëthylether (40 ml) en uitgewassen met water. De gedroogde organische fase werd ingedampt en het verkregen vuilwitte schuim werd gezuiverd door chromatografie over Merck Kieselgel 60, 230-400 mesh (90 ml). Door 30 elutie van de kolom met hexaan:ethylacetaat (2:1) werd de titelverbinding verkregen als een kleurloos schuim (189 mg); [a]^+ 125° (c 1,00, CHCI3) Xmax (EtOH) 244 nm (emax 28.200) umax (CHBr3) 3540, 3480 (OH), 1705 (C=0), 990 (C-O), δ (CDCI3) omvat 4,30 (t7; 1H), 4,10 (q7; 2H), 3,31 (d15; 1H), 1,24 (t7; 3H).

De verbindingen van de voorbeelden VII, VIII en IX werden op een soortgelijke wijze bereid uitgaande van 23-keto Factor A en het geschikte alkoxyamine.

35

Voorbeeld VII

23[E]-Allyloxyimino Factor A

[α]ο + 124° (c 1,17, CHCI3), Xmax (EtOH) 244 nm (emax 28.400), omax (CHBr3) 3550, 3490 (OH), 1708 (C=0), 990 (C-O), 6 (CDCI3) omvat 5,98 (m; 1H), 5,28 (dd17,2; 1H), 5,15 (dd9,2; 1H), 4,5-4,7 (m; 2H), 4,29 40 (t7; 1H), 3,36 (d14; 1H) werd bereid uit allyloxyaminehydrochloride.

Voorbeeld VIII

23[E]-lsopropyloxyimino Factor A

[α]?>1 + 116° (c 0,97, CHCI3), Xmax (EtOH) 244 nm (emax 25.000), Dmax (CHBr3) 3550, 3490 (OH), 1708 45 (C=0), 992 (C-O), δ (CDCI3) omvat 4,2-4,4 (m; 2H), 3,30 (d14; 1H), 1,21 (d7; 3H), 1,20 (d7; 3H) werd bereid uit isopropyloxyaminehydrochloride.

Voorbeeld IX

23[E]-n-Butoxyimino Factor A

50 [a]!,1 + 115° (c 1,10, CHCI3), Xmax (EtOH) 244 nm (emax 31.800), omax (CHBr3) 3540, 3460 (OH), 1708 (C=0), 992 (C-O), δ (CDCI3) omvat 4,28 (t6; 1H), 4,03 (m; 2H), 3,96 (d6; 1H), 3,31 (d14; 1H), 0,9-1,1 (m; 15H) werd bereid uit n-butoxyaminehydrochloride.

Voorbeeld X

55 23(E]-Methoxyimino Factor A,5-acetaat (i) Een 3-molair oplossing van methylmagnesiumjodide in ether (0,16 ml) werd onder roeren en onder stikstof toegevoegd aan een oplossing van het product van voorbeeld III (120 mg) in droog hexamethylfos- 193376 10 forzuurtriamide (5 ml). Methyljodide (0,09 ml) werd toegevoegd, en na 1 uur werd het mengsel met ethylacetaat (30 ml) verdund en achtereenvolgens met 2N zoutzuur en water uitgewassen. De gedroogde organische fase werd ingedampt en de gele gom werd door chromatografie over Merck Kieselgel 60, 230-400 mesh (80 ml) gezuiverd. Door elutie van de kolom met hexaan:ethylacetaat (2:1) werd de 5 titelverbinding verkregen als een wit schuim, [a]^1 + 123° (c 1,25, CHCI3) Xmax (EtOH) 245 nm (emax 30.300). Het NMR was hetzelfde als in voorbeeld II.

(ii) Het product van voorbeeld III (0,082 g) werd opgelost in diëthylether (10 ml) welke zilveroxyde (0,4 g) bevatte, dat vers bereid was uit waterig zilvernitraat en 2M natriumhydroxyde. Het mengsel werd 2 uur bij kamertemperatuur geroerd, waarna het gefiltreerd werd in het oplosmiddel ingedampt werd onder verkrijging 10 van een ruwe gele gom. Dit residu werd gezuiverd door preparatieve dunnelaagchromatografie (Merck 5717) met dichloormethaan/aceton (25:1) als elutiemiddel. De belangrijkste band werd met aceton geëxtraheerd en ingedampt onder verkrijging van de titelverbinding (0,059 g). Het NMR was hetzelfde als in voorbeeld II.

15 Voorbeeld XI

23[E]-Methoxyimino Factor A,5-methylcarbamaat

Methylisocyanaat (0,13 ml, 125 mg) en triethylamine (2 druppels) werden toegevoegd aan een oplossing van 23[E]-methoxyimino Factor A (350 mg) in droog dimethylformamide (0,75 ml). De kolf werd met een stop afgesloten en 5,5 uur bij 80°C onder roeren verwarmd. Het reactiemengsel werd in water (50 ml) 20 gegoten en het verkregen mengsel werd door kiezelgoer gefiltreerd. De filterkoek werd met water (150 ml) uitgewassen en vervolgens met dichloormethaan (75 ml) geëxtraheerd. Het extract werd gedroogd (MgSOJ en ingedampt onder verkrijging van een geel schuim dat gezuiverd werd door kolomchromatografie onder matige druk op silica (125 g, Merck Kieselgel 60, 230-400 mesh). Door elutie met hexaan:ethylacetaat (1:1) werd de titelverbinding als een wit schuim (206 mg) verkregen. [a]2| + 99° (c 0,55, CH2CI2); Xmax (EtOH) 25 244,4 nm (e 28.710); Tjmax (CHBr3) 3530 (OH), 3455 (NH), 1720 (ester), 1720 + 1510 (carbamaat) en 993 cm'1 (C-O); δ (CDCI3) omvat 1,78 (s, 3H), 2,86 (d, 5Hz, 3H), 3,29 (d, 14 Hz, 1H), 3,83 (s, 3H), 4,80 (q, 5 Hz, 1H) en 5,50 (m, 2H).

Voorbeeld XII

30 23[E]-Methoxyimino Factor A,5-methylcarbonaat

Aan een oplossing van 23[E]-methoxyimino Factor A (150 mg) in dichloormethaan (15 ml) en pyridine (0,3 ml) werd onder roeren bij 0°C methylchloorformiaat (0,7 ml van een 1,0M oplossing in dichloormethaan) toegevoegd. Men liet het reactiemengsel 20 min. bij 0-3°C onder roeren staan en voegde het daarna toe aan dichloormethaan (70 ml) en waste het mengsel vervolgens met 2N zoutzuur (50 ml) en water (50 ml).

35 De organische fase werd gedroogd (MgSOJ en het oplosmiddel werd verwijderd onder verkrijging van een schuim dat gezuiverd werd door kolomchromatografie onder middelmatige druk op silica (40 g, Merck Kieselgel 60, 230-400 mesh). Door elutie met dichloormethaan: ethylacetaat (30:1) werd de titelverbinding als een wit schuim (127 mg) verkregen. [α]ρ + 145° (c = 0,41, CH2CI2); Xmax (EtOH) 244,4 nm (e 31.210); Dmax (CHBr3) 3460 + 3540 (OH), 1742 (carbonaat), 1710 (ester) en 992 cm'1 (CO); δ (CDCI3) omvat 1,82 40 (s, 3H), 3,29 (d 14 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,83 (s, 3H), 5,2-5,4 (m; 3H), 5,56 (s, 1H).

Voorbeeld XIII

23[E]-Methoxyimino Factor D,5-acetaat

Een oplossing van 23-keto Factor D,5-acetaat (251 mg), voorbeeld 119 in het Britse octrooischrift 45 2.176.182), natriumacetaat (250 mg) en methoxyamini-hydrochloride (250 g) in methanol (40 ml) werd 24 uur bij 20°C gehouden, tot ongeveer 10 ml ingedampt, met ethylacetaat (50 ml) verdund, en achtereenvolgens met 0,5N zoutzuur en water uitgewassen. De gedroogde organische fase werd ingedampt onder verkrijging van een geel schuim dat gezuiverd werd door chromatografie over Merck Kieselgel 60, 230-400 mesh (120 ml). De elutie van de kolom met hexaan werd de titelverbinding als een lichtgeel schuim (144 50 mg) verkregen; λ^χ (EtOH) 244 nm (e 26.400); umax (CHBr3) (cm'1) 3500 (OH), 1732 (OAc), 1710 (C=0); δ (CDCI3) omvat 5,54 (m; 2H), 4,92 (m; 1H), 3,84 (s; 3H), 3,32 (m; 1H), 3,30 (d14; 1H), 2,17 (s; 3H), 1,91 (dl 4; 1H), 1,76 (s; 3H), 1,63 (s; 3H), 1,51 (s; 3H), 1,01 (t7; 3H), 0,99 (d6; 3H), 0,92 (d6; 3H).

Voorbeeld XIV

55 23[E]-Methoxyimino Factor D

Een oplossing van het product van voorbeeld XIII (140 mg) en 1N natriumhydroxyde (0,6 ml) in methanol (8 ml) werd 1,5 uur in een ijsbad geroerd. De oplossing werd met ethylacetaat (30 ml) verdund en 11 193376 achtereenvolgens met 1N zoutzuur en water uitgewassen. De gedroogde organische fase werd ingedampt onder verkrijging van een geel schuim dat gezuiverd werd door chromatografie over Merck Kieselgel 60, 230-400 mesh (50 ml). Door elutie van de kolom met hexaan:ethylacetaat (2:1) werd de titelverbinding als een vuilwit schuim (105 mg) verkregen; [a]o + 96° (c 1,38, CHCI3); Xmax (EtOH) 244 nm (e 26.700); umax 5 (CHBr3) (cm'1) 3550, 3500 (OH), 1710 (C=0); δ (CDCI3) omvat 4,93 (m; 1H), 4,30 (t6; 1H), 3,95 (d6; 1H), 3,84 (s; 3H), 3,30 (d14; 1H), 3,27 (m; 1H), 1,88 (s; 3H), 1,64 (s; 3H), 1,52 (s; 3H), 1,01 (t7; 3H), 1,00 (d6; 3H), 0,92 (d6; 3H).

Voorbeeld XV

10 23[E]-Methoxyimino Factor B

Een oplossing van 23-keto Factor B (1 g, voorbeeld 19 van de Nederlandse octrooiaanvrage 8601103), natriumacetaat (400 mg) en methoxyamine-hydrochloride (400 mg) werd 20 uur bij 20°C geroerd, tot ongeveer 10 ml ingedampt, met ethylacetaat verdund en met water uitgewassen. De organische fase werd achtereenvolgens met 0,5N zoutzuur en water uitgewassen, en de gedroogde organische fase werd 15 ingedampt en het ruwe product werd gezuiverd door chromatografie over Merck Kieselgel 60, 230-400 mesh (200 ml). Door elutie van de kolom met ethylacetaat:dichloormethaan (1:9) werd de titelverbinding als een wit schuim (500 mg) verkregen; [α]ο + 128° (c 1,09, CHCI3); Xmax (EtOH) 244 nm (e 30.100); umax (CHB3) (cm‘1) 3540, 3460 (OH), 1708 (C=0); δ (CDCI3) omvat 5,46 (q6; 1H), 4,03 (d5; 1H), 3,97 (d5; 1H), 3,83 (s; 3H), 3,50 (s; 3H), 3,32 (m; 1H), 3,29 (d14; 1H), 1,82 (s; 3H), 1,68 (d6; 3H), 1,00 (d6; 3H), 0,92 (d6; 20 3H).

Voorbeeld XVI

23[E]-Methoxyimino Factor C

Watervrij natriumacetaat (0,54 g) en methoxyamine-hydrochloride (0,58 g) werden toegevoegd aan een 25 oplossing van 23-keto Factor C (1,97 g, voorbeeld 12 van de Nederlandse octrooiaanvrage 8601103) in methanol (30 ml) en water (5 ml), waarna het mengsel 30 min. bij kamertemperatuur geroerd werd. Ethylacetaat (30 ml) en 0,5M zoutzuur (30 ml) werden toegevoegd en de waterlaag werd opnieuw met ethylacetaat (15 ml) geëxtraheerd. De gecombineerde organische lagen werden met 0,5M zoutzuur, 5% verzadigd waterig natriumcarbonaat en 10% verzadigd waterig natriumchloride uitgewassen, en vervolgens 30 onder vacuüm ingedampt tot een geel schuim dat gezuiverd werd door chromatografie op Merck 9385 silicagel, waarbij de kolom eerst met dichloormethaan ontwikkeld werd, en daarna met dichloormethaan met een kleine hoeveelheid ethylacetaat (tot 10%) geëlueerd werd onder verkrijging van de titelverbinding (1,0 9)! [«Id + 64° (2 1-°> CHgOH); 1H NMR (CDCI3) omvat de volgende signalen: δ 4,94 (m; 1H), 4,29 (t; 1H; 7Hz), 3,96 (d; 1H; 7Hz), 3,85 (s; 3H [=NOCH3]), 3,66 (d; 1H; 10Hz), 1,51 (s; 3H), 1,42 (t; 1H; 12Hz), IR 35 (CHBr3) 3620-3340 cm'1 (-OH), 1711 cm'1 (C=0).

Hieronder volgen voorbeelden van preparaten volgens de uitvinding. Met de hierna gebruikte uitdrukking ’’werkzaam bestanddeel” wordt de verbinding van voorbeeld IV, bedoeld.

Multidosis parenterale injectoevloeistof 40 - (1) % (gew./vol.) Traject

Werkzaam bestanddeel 2,0 0,1-6,0% (gew./vol.)

Benzylalcohol 1,0 45 Polysorbaat 80 10,0

Glycerol-formal 50,0

Water voor injecties tot 100,0 50 Het werkzame bestanddeel wordt in polysorbaat 80 en glycerol-formal opgelost. Benzylalcohol wordt toegevoegd, waarna met water voor injecties aangevuld wordt tot het juiste volume. Het product wordt met conventionele methoden gesteriliseerd, bijvoorbeeld door steriele filtratie of door verhitting in een autoclaaf, en aseptisch verpakt.

193376 12 (2) % (gew./vol.) Traject 5 Werkzaam bestanddeel 4,0 0,1-7,5% (gew./vol.)

Benzylalcohol 2,0

Glyceryltriacetaat 30,0

Propyleenglycol tot 100,0 10

Het werkzame bestanddeel wordt in benzylalcohol en glyceryltriacetaat opgelost. Propyleenglycol wordt tot het juiste volume toegevoegd. Het product wordt met conventionele farmaceutische methoden gesteriliseerd, bijvoorbeeld door steriele filtratie, en aseptisch verpakt.

15 (3) % Traject

Werkzaam bestanddeel 2,0 (gew./vol.) 0,1-7,5% (gew./vol.)

Ethanol 36,0 (vol./vol.)

Niet-ionogene oppervlakteactieve stof (bv. 10,0 (gew./vol.) 20 Synperonic PE L44; handelsmerk van ICI)

Propyleenglycol tot 100,0

Het werkzame bestanddeel wordt opgelost in de ethanol en de oppervlakteactieve stof, en de oplossing 25 wordt tot het juiste volume aangevuld. Het product wordt gesteriliseerd met conventionele farmaceutische methoden, bijvoorbeeld steriele filtratie, en aseptisch verpakt.

(4) % Traject 30 Werkzaam bestanddeel 2,0 (gew./vol.) 0,1-3,0% (gew./vol.)

Niet-ionogene oppervlakteactieve stof (bv. 2,0 (gew./vol.)

Synperonic PE F68; handelsmerk van ICI)

Benzylalcohol 1,0 (gew./vol.)

Miglyol 840; handelsmerk van Dynamit Nobel 16,0 (volVvol.) 35 Water voor injecties tot 100,0

Het werkzame bestanddeel wordt in Miglyol 840 opgelost. De niet ionogene oppervlakteactieve stof en de benzylalcohol worden in het grootste deel van het water opgelost. De emulsie wordt bereid door de 40 olieachtige oplossing aan de waterige oplossing toe te voegen terwijl op conventionele wijze gehomogeniseerd wordt. Het mengsel wordt aangevuld tot het juiste volume. De vloeistof wordt aseptisch bereid en verpakt.

Aerosol-spray gew.% Traject 45 -

Werkzaam bestanddeel 0,1 0,01-2,0 gew.%

Trichloorethaan 29,9

Trichloorfluormethaan 35,0

Dichloordifluormethaan 35,0 50 ---

Het werkzame bestanddeel wordt gemengd met trichloorethaan en in aerosolhouder afgevuld. De ruimte in de kop wordt met het drijfgas doorgeblazen en het ventiel wordt aangebracht. Het vereiste gewicht aan vloeibaar drijfgas wordt onder druk door het ventiel afgevuld. De houder wordt voorzien van bedienings-55 organen en stofdoppen.

13 193376

Tablet

Bereidingswijze-vochtige korrelvorming mg 5--

Werkzaam bestanddeel 250,0

Magnesiumstearaat 4,5

Maïszetmeel 22,5

Natrium-zetmeelglycolaat 9,0 10 Natriumlaurylsulfaat 4,5

Microkristallijne cellulose tot gewicht van tabletkern van 450 mg

Een voldoende hoeveelheid van een 10% zetmeelpasta wordt toegevoegd aan het werkzame bestand-15 deel ter verkrijging van een geschikte vochtige massa voor de korreling. De korrels worden vervaardigd en met behulp van een drooginrichting met borden of een wervelbed gedroogd. De korrels worden door een zeef gezeefd, de overige bestanddelen worden toegevoegd en het geheel wordt tot tabletten geperst.

De tabletkernen worden desvereist met een film bekleed onder toepassing van hydroxypropylcellulose of een ander soortgelijk filmvormend materiaal met een waterig of niet-waterig oplosmiddelsysteem. Een 20 weekmaker en een geschikte kleurstof kunnen in de bekledingsoplossing opgenomen worden.

Veterinair tablet voor kleine dieren/huisdieren Bereidingswijze-droge korrelvorming 25 mg

Werkzaam bestanddeel 50,0

Magnesiumstearaat 7,5

Microkristallijne cellulose tot tabletkerngewicht van 75,0 30 -

Het werkzame bestanddeel wordt met het magnesiumstearaat en microkristallijne cellulose gemengd. Het mengsel wordt tot stukjes samengeperst. De stukjes worden verbrijzeld door ze door een roterende korrelvormer te leiden zodat rulle korrels verkregen worden. De korrels worden tot tabletten geperst. De 35 tabletkernen kunnen vervolgens desgewenst zoals hierboven beschreven, met een film bekleed worden.

Veterinaire intramammaire injectie mg/dosis Traject 40 -

Werkzaam bestanddeel 150 mg 0,05-1,0 g

Polysorbaat 60 3,0 gew.% )

Witte bijenwas 6,0 gew.% tot 3 g ) tot 3 of 15 g

Arachide-olie 91,0 gew.% ) 45 -

De arachide-olie, witte bijenwas en polysorbaat 60 worden onder roeren tot 160°C verhit. Het mengsel wordt 2 uur op 160°C gehouden en vervolgens onder roeren tot kamertemperatuur afgekoeld. Het werkzame bestanddeel wordt aseptisch toegevoegd aan de drager en met behulp van een met grote 50 snelheid werkend emenger gedispergeerd. Het mengsel wordt geraffineerd door het door een colloidmolen te leiden. Het product wordt aseptisch in steriele plastic spuiten afgevuld.

193376 14

Veterinaire bolus voor langzame afgifte

Gew.% Traject 5 Werkzaam bestanddeel 0,25-2 g

Colloidaal siliciumdioxyde 2,0)

Microkristallijne cellulose tot 100,0) tot vereiste vulgewicht 10 Het werkzame bestanddeel wordt met het colloidale siliciumdioxyde en microkristallijne cellulose gemengd met behulp van een geschikte methode waarbij steeds porties toegevoegd worden, ter verkrijging van een goede verdeling van werkzaam bestanddeel door de drager. Het mengsel wordt opgenomen in het middel voor langzame afgifte zodat (1) een constante afgifte van werkzaam bestanddeel of (2) een afgifte met stoten van werkzaam bestanddeel verkregen wordt.

15

Veterinaire orale drank % (gew./vol.) Traject 20 Werkzaam bestanddeel 0,35 0,01-2% (gew./vol.)

Polysorbaat 85 5,0

Benzylalcohol 3,0

Propyleenglycol 30,0

Fosfaatbuffer pH 6,0-6,5 25 Water tot 100,0

Het werkzame bestanddeel wordt in het polysorbaat 85, de benzylalcohol en de propyleenglycol opgelost. Een hoeveelheid van het water wordt toegevoegd en de pH wordt zo nodig met fosfaatbuffer 30 ingesteld op 6,0-6,5. Water wordt toegevoegd tot het gewenste eindvolume. Het product wordt in de drankhouder afgevuld.

Veterinaire orale pasta 35 Gew.% Traject

Werkzaam bestanddeel 4,0 1-20 gew.%

Natriumsaccharine 2,5

Polysorbaat 85 3,0 40 Aluminiumdistearaat 5,0

Gefractioneerde kokosolie tot 100,0

Het aluminiumdistearaat wordt in de gefractioneerde kokosnootolie en polysorbaat 85 onder verwarmen 45 gedispergeerd. Het mengsel wordt tot kamertemperatuur afgekoeld en natriumsaccharine wordt in de olieachtige drager gedispergeerd. In deze basis wordt het werkzame bestanddeel gedispergeerd. Het geheel wordt in plastic spuiten afgevuld.

Korrels voor veterinaire toedoening met het voer 50 -

Gew.% Traject

Werkzaam bestanddeel 2,5 0,05-5 gew.%

Calciumsulfaat-hemi-hydraat tot 100,0 55 -

Het werkzame bestanddeel wordt met het calciumsulfaat gemengd. De korrels worden met een vochtige 15 193376 korrelvorming vervaardigd. Zij worden met een drooginrichting met schotels of een wervelbed gedroogd. De korrels worden in een geschikte houder afgevuld.

Veterinair uitgietbaar preparaat 5 -—- % (gew./vol.) Traject

Werkzaam bestanddeel 2,0 0,1 tot 30%

Di methy Isulf oxyde 10,0 10 Methylisobutylketon 30,0

Propyleenglycol (en pigment) tot 100,0

Het werkzame bestanddeel wordt in dimethylsulfoxyde en methylisobutylketon opgelost. Het pigment 15 wordt toegevoegd en daarna wordt propyleenglycol tot het gewenste volume toegevoegd. Het mengsel wordt in de houder voor het uitgietbare preparaat afgevuld.

Emulgeerbaar concentraat 20 Werkzaam bestanddeel 50 g

Anionogene emulgator (bv. fenylsulfonaat CALX) 40 g

Niet-ionogene emulgator (bv. Synperonic NP13; handelsmerk van ICI) 60 g

Aromatisch oplosmiddel(bv. Solvesso 100) tot 1 liter 25

Alle bestanddelen worden gemengd en geroerd tot ze opgelost zijn.

Korrels 30 a. Werkzaam bestanddeel 50 g

Houthars 40 g

Gipskorrels (20-60 mesh; 0,25-0,84 mm) (bv. Agsorb 100A; handelsmerk van Oil-Dri Corporation) tot 1 kg b. Werkzaam bestanddeel 50 g 35 Synperonic NP13; handelsmerk van ICI) 40 g

Gipskorrels (20-60 mesh) tot 1 kg

Alle bestanddelen worden in een vluchtig oplosmiddel, bijvoorbeeld methyleenchloride, opgelost en de 40 oplossing wordt toegevoegd aan korrels die in een menger bewegen. De korrels worden gedroogd ter verwijdering van oplosmiddel.

De pesticide werking van de verbindingen volgens de uitvinding werd bepaald met een verscheidenheid aan ongedierte en gastheren daarvan volgens de volgende algemene methode:

Het product werd in de vorm van een vloeibaar preparaat gebruikt. De preparaten werden vervaardigd 45 door het product in aceton op te lossen. De oplossingen werden daarna verdund met water dat 0,1-0,01 gew.% van een bevochtigingsmiddel bevatte, tot de vloeibare preparaten de vereiste concentratie van het product bevatten.

Bij de proefmethode die voor de meeste soorten ongedierte gebruikt werd, werd een aantal exemplaren van het ongedierte geplaatst op een medium dat gewoonlijk een gastheerplant was, en werd ofwel het 50 medium met het preparaat behandeld (indirecte proef) ofwel werden, in het geval van Tetranychus urticae, Myzus persicae, Nilaparvata lugens en Musea domestica, zowel het ongedierte als het medium met het preparaat behandeld (contactproef). In het geval van Meloidogyne incognita werd de oplossing aangebracht op grond waarin tomatenplanten groeiden, waarna nematoden opgebracht werden. De vermindering van het aantal wortelknobbels werd vergeleken met een controleplant.

55 Volgens deze methoden bleek de verbinding met formule 1 waarin isopropyl is, R2 methyl is en R3 waterstof is, doeltreffend te zijn in concentraties van 100 gew.ppm of minder.

Claims

193376 16

1. Verbinding met formule 1 van het formuleblad en farmaceutisch aanvaardbare zouten daarvan, waarin R1 een methyl-, ethyl- of isopropylgroep voorstelt,

2. Verbinding volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat OR3 een hydroxylgroep is.

3. Verbinding volgens conclusie 1 of 2, met het kenmerk, dat R! een isopropylgroep is.

4. Verbinding volgens een der voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat R2 een methylgroep is.

5. Verbinding volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat R1 een isopropylgroep is, R2 een methylgroep is en 0R3 een hydroxylgroep is.

5 R2 een waterstofatoom, een vertakte of onvertakte alkylgroep met 1-8 koolstofatomen of een vertakte of onvertakte alkenylgroep met 3-8 koolstofatomen voorstelt, waarbij de groep =NOR2 de E-configuratie heeft; en OR3 een hydroxylgroep, een groep OR4, 0C0R4 of 0C02R4 waarin R4 een vertakte of onvertakte alkylgroep met 1-6 koolstofatomen voorstelt, of een groep OCONRaR9 waarin R8 en R9 onafhankelijk 10 een waterstofatoom of een vertakte of onvertakte alkylgroep met 1-4 koolstofatomen voorstellen, voorstelt.

6. Farmaceutisch, veterinair of pesticide preparaat, met het kenmerk, dat het een doeltreffende hoeveelheid van ten minste één verbinding volgens conclusie 1-5 en één of meer geschikte dragers en/of excipiënten bevat.

7. Werkwijze voor het bestrijden van ongedierteplagen in de landbouw, tuinbouw of bosbouw, of in warenhuizen, gebouwen of andere openbare gelegenheden of plaatsen waar ongedierte voorkomt, met het kenmerk, dat men of de plant of andere vegetatie of op het ongedierte zelf of op een bepaalde plaats daarvan een doeltreffende hoeveelheid van één of meer verbindingen volgens conclusie 1 aanbrengt. Hierbij 1 blad tekening