FI90549C - Makrolidiyhdisteitä ja niiden käyttö tuholaisten torjuntaan - Google Patents

Description

1 90549

Makrolidiyhdisteita ja niiden kåytto tuholaisten torjun-taan

Jakamalla erotettu patenttihakemuksesta 872517 5

Keksinto koskee uusia tuholaisten torjuntaan kåyt-tokelpoisia makrolidiyhdisteita seka naiden yhdisteiden kåyttoa tuholaisten torjuntaan.

GB-patenttijulkaisussa 2 166 436 esitetåan uuden 10 Streptomyces-lajin fermentointituotteista eristettavisså olevien S541-antibioottien tuottaminen.

Nyt on lbydetty uusi yhdisteryhmå, joka voidaan valmistaa modifioimalla S451-antibiootteja; nåitå yhdis-teita voidaan kåyttåå tuholaisten torjuntaan.

15 Tåman keksinnon kohteena ovat nama uudet yhdisteet, jotka ovat makrolidiyhdisteita, joilla on kaava NOR2 JL ,CH-, CH u 3 I 3 H t v· Λ]

20 I : . J

,Ια ** Π

c<fS« ]\H

H 1 H

°V° (I)

Jl ph|^>h 0-FV^CH3 30 H OR3 jossa R1 on metyyli, etyyli tai isopropyyli; R2 on vety, alempi alkyyli tai allyyli ja ryhma =NOR2 on E-konfiguraa-tiossa; ja OR3 on hydroksyyliryhma tai ryhma -OR4, -OCOR4 3 5 tai -0C02R4, joissa R4 on alempi alkyyli, tai ryhma 2 90549 -OCONR8R9, jossa RK ja R9 ovat kumpikin itsenåisesti vety tai alempi alkyyli.

Kaavan I mukaisen yhdisteen sisåltåmå alempi alkyy-liryhmå voi olla haarautumaton tai haarautunut.

5 Kaavan I mukaisissa yhdisteisså R2 on edullisesti metyyliryhmå ja R1 on edullisesti isopropyyliryhmå.

Kaavan I mukaiset yhdisteet, jotka sisaltåvåt hap-paman ryhmån, voivat muodostaa suoloja emasten kanssa, esim. alkalimetallisuoloja, kuten natrium- ja kaliumsuolo-10 ja.

OR3-ryhmå on edullisesti metoksikarbonyylioksi-, tai erityisesti asetoksi-, metoksi- tai hydroksiryhma. Yleensa kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa OR3 on hydroksiryhma, ovat erityisen edullisia.

15 Tårkeitå keksinndn mukaisia yhdisteita ovat ne kaa van I mukaiset yhdisteet, joissa R1 on isopropyyliryhma, R2 on metyyliryhma ja OR3 on hydroksi-, asetoksi- tai metoksi-karbonyy1ioks iryhma.

Kuten edellå on esitetty, keksinnon mukaisia yhdis- 20 teita voidaan kayttaa tuholaisten torjuntaan. Keksinnon mukaisia yhdisteita voidaan myos kayttaa vålituotteina muiden aktiivisten aineiden valmistuksessa. Kun keksinnon mukaisia yhdisteita kåytetåån vålituotteina, 0R3-ryhmå voi olla suojattu hydroksyyliryhmå, ts. ryhmå -OR4, -OCOR4, -2 5 0C02R4 tai -OCONR8R9.

Tarkeå keksinndn mukainen yhdiste on kaavan I mu-kainen yhdiste, jossa R1 on metyyliryhma, R2 on metyyliryhma ja OR3 on metoksiryhma.

Toinen tarkeå keksinnon mukainen yhdiste on kaavan 30 I mukainen yhdiste, jossa R1 on etyyliryhmå, R2 on metyyliryhma ja OR3 on hydroksyyliryhmå.

Erityisen tarkeå keksinnon mukainen yhdiste on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R1 on isopropyyliryhma, R2 on metyyliryhma ja OR3 on hydroksyyliryhmå.

3 90549

Keksinnon mukaisia yhdisteita voidaan kayttaå hyon-teis-, punkki- ja sukkulamatotuholaisten torjunnassa maan-viljelyksesså, puutarhaviljelysså, metsånhoidossa ja sai-lotyissa elintarvikkeissa. Maaperån ja kasvisadon, kasit-5 tåen viljan (kuten vehnån, ohran, maissin ja riisin), puu-villan, tupakan, vihannesten (kuten soijan), hedelmien (kuten omenien, viinin ja sitrushedelmien) seka juurikas-sadon (kuten sokerijuurikkaan, perunan) tuholaisia voidaan hyvin kåsitellå. Erityisiå esimerkkeja tamankaltaisista 10 tuholaisista ovat hedelmåpunkit ja lehtitåit, kuten Aphis fabae, Aulocorthum circumflexum, Myzus persicae, Nophotet-tix cinciteps, Nilparvata lugens, Panonychus ulmi, Phoro-don humuli, Phyllocoptruta oleivora, Tetranychus urticae ja Trialeuroider-luokkaan kuuluvat; sukkulamadot, kuten 15 luokkiin Aphelencoides, Globodera, Heterodera, Meloidogyne ja Panacrellus kuuluvat; perhoset kuten Helothis, Plutella ja Spodoptera; viljakårsakkååt kuten Anthonomus grandis ja Sitophilus granarius; jauhokuoriaiset kuten Tribolium cas-taneum; kårpaset kuten Musca domestica; tulimuurahaiset; 20 "leaf miners"; Pear Psylla; Thrips tabaci; torakat kuten Blatella germanica ja Periplaneta americana ja hyttyset kuten Aedes aegypti.

On erityisesti todettu, etta kaavan I mukainen yh-diste, jossa R1 on isopropyyliryhma, R2 on metyyliryhma ja 25 OR3 on hydroksyyliryhma, on tehokas seuraavia lajeja vas-taan: Tetanychus urticae (ranskalaisen pavun lehdella), Myzus persicae (kiinankaalin lehdella), Heliothis vires-cons (puuvillan lehdella), Nilaparvata lugens (riisintai-mella), Musca domestica (muoviruukussa, jossa on puuvil-30 laa/sokeriliuosta), Blatella germanica (muoviruukussa ruo-. . karakeilla), Spodoptera exigua (puuvillan lehdella) Meloi dogyne incognita.

Keksinnon mukaisia yhdisteita voidaan myos kayttåa sienimyrkkyna, esimerkiksi Candida sp. -kantoja vastaan, 35 kuten kantoja Candida albicans ja Candida glabrata vas- Γ~ 4 90549 taan, sekå hiivoja kuten Saccharomyces carlsbergensista vastaan.

Keksinnon kohteena on siten myos edellå maaritelty-jen kaavan I mukaisten yhdisteiden kayttd tuholaisten tor-5 jumiseksi tai kontrolloimiseksi maataloudessa, puutarha- viljelysså tai metsånhoidossa, kaupoissa, rakennuksissa tai muissa yleisissa tiloissa tai tuholaisten elinympåris-tossa. Yleenså yhdisteitå voidaan kayttaå levittåmållå niitå kasville tai kasvustolle tai sen ympåristoon tai 10 itse tuholaisille.

Keksinnon mukaisten yhdisteiden tuholaisaktiivisuus maaritettiin kayttaen eri tuholaisia ja niiden isantia seuraavan yleisen menetelman mukaisesti:

Yhdiste kåytettiin nestemaisen valmisteen muodossa. 15 Valmisteet tehtiin liuottamalla yhdiste asetoniin. Taman jalkeen liuoksia laimennettiin vedella, joka sisalsi 0,1 % tai 0,01 % (painosta laskettuna) kostutusainetta, kunnes nestemainen valmiste sisalsi halutun pitoisuuden yhdistet-ta.

20 Kaytetty testimenetelma koostui useimpien tuholais ten kohdalla siita, etta tuholaisia kasvatettiin alustal-la, joka tavallisesti oli isantåkasvi, ja joko kasiteltiin alusta valmisteella (residuaalinen testi) tai Tetranychus urticae, Myzus persicae, Nilaparvata lugens ja Musca do-25 mestica -lajien ollessa kyseessa kasiteltiin seka tuholai- nen etta alusta valmisteella (kontaktitesti). Meloidogyne incognita -lajin ollessa kyseessa liuos levitettiin maape-raån, jossa kasvoi tomaatintaimia, minka jalkeen sitå kasiteltiin sukkulamadoilla ja maaritettiin juurinystyroiden 30 lukumaåran vaheneminen vertailukasviin verrattuna.

Nåita menetelmia kayttaen todettiin kaavan I mukai-nen yhdiste, jossa R1 on isopropyyli, R2 on metyyli ja R3 on vety, tehokkaaksi pitoisuutena (laskettuna tuotteen painosta) 100 miljoonasosaa tai tatå pienempina pitoisuuksi- 35 na.

5 90549

Keksinnon mukaiset yhdisteet voidaan formuloida millå tahansa puutarhaviljelykåyttbon tai maanviljely-kåyttoon sopivalla tavalla. Tållaisia formulaatioita ovat kuivat tai liuosmuotoiset, esimerkiksi polyt, kuten poly-5 pohja ja konsentraatit, jauheet, kuten liuotettavat tai kostutettavat jauheet, rakeet, kuten mikrorakeet ja dis-pergoitavat rakeet, pelletit, pinnalla kelluvat valmis-teet, emulsiot, kuten laimennetut emulsiot tai emul-goituvat konsentraatit, kylvyt, kuten juuri- ja siemenkyl-10 vyt, peittausaineet, siemenpelletit, oljykonsentraatit, injektiot, esim. runkoon annettavat ruiskeet, suihkeet, savut ja sumutteet.

Yleenså tållaiset formulaatiot sisåltåvåt yhdistet-tå sopivan kantajan tai laimentimen kanssa. Nåmå kanta jat 15 voivat olla liuoksia tai kiinteitå ja tarkoitettu helpot-tamaan yhdisteen kåyttoå siten, ettå ne joko dispergoivat yhdisteen sitå levitettåesså tai muodostavat formulaation, jonka kåyttåjå itse voi valmistaa dispergoitavaksi tuot-teeksi. Nåmå formulaatiot ovat hyvin tunnettuja ja ne voi-20 daan valmistaa kåyttåen tavanomaisia menetelmiå, kuten esimerkiksi sekoittamalla ja/tai jauhamalla aktiivinen aine (aktiiviset aineet) yhteen kantajan tai laimentimen kanssa, esim. kiinteån kantajan, liuottimen tai pinta-aktiivisen aineen kanssa.

25 Sopivat kiinteåt kantajat esimerkiksi poly-, rae- ja jauheformulaatioihin voidaan valita esimerkiksi luon-nollisista tåyteaineista, kuten diatomiitista, talkista, kaoliniitista, montmorilloniitista, profylliitistå tai attapulgiitista. Hyvin dispergoitua piihappoa tai hyvin 30 dispergoituja absorboivia polymeerejå voidaan haluttaessa lisåtå koostumukseen. Kåyttokelpoiset rakeiset adsorboivat kantajat voivat olla huokoisia (kuten pumise, maatiili, sepioliitti tai bentoniitti) tai ei-huokoisia (kuten kal-siitti tai hiekka). Kåyttokelpoisia esirakeistettuja mate-35 riaaleja, jotka voivat olla orgaanisia tai epåorgaanisia, ovat mm. dolomiitti ja maaperån kasvijåånnokset.

6 90549

Sopivia liuottimia kåytettåviksi kantajina tai lai-mentimina ovat aromaattiset hiilivedyt, alifaattiset hiilivedyt, alkoholit ja glykolit tai niiden esterit, este-rit, ketonit, happoamidit, vahvasti polaariset liuottimet 5 tai epoksoidut kasvioljyt ja vesi.

Tavanoroaisia ei-ionisia, kationisia tai anionisia pinta-aktiivisia aineita, esim. etoksoituja alkyylifenole-ja ja alkoholeja, alkyylibentseenisulfonihappojen alkali-metalli- tai maa-alkalimetallisuoloja, lignosulfonihappoja 10 tai sulfosukkiinihappoja tai polymeeristen fenolien sulfo-naatteja, joilla on hyvåt emulgoivat, dispergoivat ja/tai kostuttavat ominaisuudet, voidaan myos kayttaa koostumuk-sissa joko yksinaan tai yhdistelmina.

Stabiloivia aineita, paakkuuntumista eståvia ainei-15 ta, vaahdonestoaineita, viskositeettia saåtelevia aineita, sitovia ja adhesoivia aineita, fotostabiloivia aineita, kuten myos lannoitteita, ruokintaa edistavia aineita tai muita aktiivisia aineita voidaan myos haluttaessa lisata koostumuksiin. Keksinndn mukaiset yhdisteet voidaan myos 20 formuloida yhdessa muiden hyonteis-, punkki- ja sukkula-matomyrkkyjen kanssa.

Formulaatioissa aktiivisen materiaalin konsentraa-tio on yleensa 0,01 - 99 paino-% ja edullisemmin 0,01 - 40 paino-%.

25 Kaupallisesti tuotteet tarjotaan tavallisesti vake- vdityinå koostumuksina laimennettaviksi oikeaan konsent-raatioon, esimerkiksi 0,001 - 0,0001 paino-%:n konsentraa-tioon, ennen kayttoa.

Yhdisteen annettava mååra on riippuvainen monista 30 tekijoista, kuten kyseesså olevasta tuholaisesta ja sen levinneisyydesta. Antomaarana on kuitenkin yleensa 10 g/ha - 10 kg/ha sopiva maarå; edullisesti 10 g/ha 1 kg/ha punk-kien ja hyonteisten torjuntaan ja 50 g/ha - 10 kg/ha suk-kulamatojen torjuntaan.

i.

7 90549

Keksinnon mukaisia yhdisteitå voidaan valmistaa kayttaen seuraavassa esitettyjå menetelmiå. Joissakin nåistå menetelmistå 5-asemassa olevan hydroksyyliryhman suojaus låhtoaineessa voi olla tarpeellista ennen kuin 5 suoritetaan esitetyt reaktiot. Nåissa tapauksissa voi siten tulla tarpeelliseksi poistaa saman hydroksyyliryhman suojaus reaktion tapahduttua, jotta saataisiin keksinnon mukainen toivottu yhdiste. Voidaan kayttaa tavanomaisia suojausmenetelmiå ja suojauksen poistomenetelmiå, esimer-10 kiksi menetelmiå, joita on kuvattu julkaisuissa Theodora W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis" (Wi-ley-Interscience, New York 1981) ja J.F.W. McOmie "Protective Groups in Organic Chemistry" (Plenum Press, Lontoo, 1973) .

15 Eraasså menetelmassa (A) kaavan I mukaisten yhdis- teiden valmistamiseksi yhdiste, jolla on kaavan (II) SJyCH3 H ^ (II) * I, -3

0RJ

(jossa R1 ja OR1 ovat edella maaritellyt) saatetaan reagoi-maan kaavan H2NOR2 (jossa R2 on edella maaritelty) mukaisen 30 yhdisteen tai sen suolan kanssa ja haluttaessa suoritetaan kaavan I mukaisen yhdisteen suojauksen poisto, jos OR, on suojattu hydroksyyliryhma, minka jalkeen mahdollisesti muodostetaan suola.

Oksiiminmuodostusreaktio voidaan suorittaa vesipi-35 toisessa tai vedettomasså reaktiovåliaineessa, edullisesti 8 90549 låmpotilassa -20 - +100 °C. esim. -10 - +50 °C:ssa. On edullista kåyttaa H2NOR2-reagenssia suolanaan, esimerkiksi happoadditiosuolana, kuten vetykloridina. Kun kåytetåån tållaista suolaa, reaktio voidaan suorittaa happoa sitovan 5 aineen låsnå ollessa.

Kåyttokelpoisia liuottimia ovat vesi ja veden kans-sa sekoittuvat liuottimet, kuten alkoholit (esim. metanoli tai etanoli), amidit (esim. N,N-dimetyyliformamidif N,N-dimetyyliasetamidi tai heksametyylifosforamidi), eet-10 terit (esim. sykliset eetterit, kuten tetrahydrofuraani tai dioksaani tai asykliset eetterit, kuten dimetoksietaa-ni tai dietyylieetteri), nitriilit (esim. asetonitriili), sulfonit (esim. sulfolaani), hiilivedyt, kuten halogenoi-dut hiilivedyt (esim. metyleenikloridi) ja esterit, kuten 15 etyyliasetaatti sekå kahden tai useamman nåistå sisåltåvåt seokset.

Kåytettåesså vesipitoisia olosuhteita reaktio voidaan edullisesti puskuroida pH-arvoon 2-9 sopivalla ha-polla, emåksellå tai puskurilla.

20 Sopivia happoja ovat mineraalihapot, kuten kloori- vetyhappo tai rikkihappo, ja karboksyylihapot, kuten etik-kahappo. Sopivia emåksiå ovat alkalimetallikarbonaatit ja bikarbonaatit, kuten natriumbikarbonaatti, hydroksidit, kuten natriumhydroksidi, sekå alkalimetallikarboksylaatit, 25 kuten natriumasetaatti. Sopiva puskuri on natriumasetaat-ti/etikkahappo.

Kaavan II mukaiset yhdisteet ovat joko GB-patentti-julkaisussa 2 176 182 esitettyjå tunnettuja yhdisteitå tai ne voidaan valmistaa siinå esitetyistå tunnetuista yhdis-30 teistå kåyttåen tavanomaisia menetelmiå.

Toisessa menetelmåsså (B) sellaisten kaavan I mu-kaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa R2 on alempi alkyyli tai allyyli ja OR1 on substituoitu hydroksyyliryh-må, saatetaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa OR3 on hyd-35 roksyyliryhmå, reagoimaan reagenssin kanssa, joka muuttaa 9 90549 hydroksyyliryhmån edellå mååritellyksi substituoiduksi hydroksyyliryhmåksi, ja muodostetaan mahdollisesti suola.

Asylointi- ja eetterinmuodostusreaktiot voidaan suorittaa kåyttåen tavanomaisia menetelmiå, kuten seuraa-5 vassa on esitetty.

Taten esimerkiksi asylointi voidaan suorittaa kayttaen asyloivaa ainetta, kuten kaavan R4COOH mukaista hap-poa tai sen reaktiivista johdannaista, kuten happohaloge-nidia (esim. happokloridia) , -anhydridiå tai aktivoitua 10 esteriå tai hapon R40C00H reaktiivista johdannaista.

Asyloinnit, joissa kåytetaan happohalogenideja tai -anhydridejå, voidaan halutessa suorittaa happoa sitovan aineen lasna ollessa, kuten tertiaarisen amiinin (esim. trietyyliamiinin, dimetyylianiliinin tai pyridiinin), epå-15 orgaanisten emåsten (esim. kalsiumkarbonaatin tai natrium- bikarbonaatin) lasna ollessa tai oksiraanien, kuten alem-pien 1,2-alkyleenioksidien (esim. etyleenioksidin tai pro-pyleenioksidin) lasna ollessa, jotka sitovat asylointi-reaktiossa vapautuneen vetyhalogenidin.

20 Asyloinnit, joissa kaytetåån happoja, suoritetaan edullisesti kondensoivan aineen, esimerkiksi karbodi-imi-din kuten N,Ν'-disykloheksyylikarbodi-imidin tai N-etyyli-N' -Ύ -dimetyyliaminopropyylikarbodi-imidin, karbonyyliyh-disteen, kuten karbonyylidi-imidatsolin, tai isoksatsoli-25 umsuolan kuten N-etyyli-5-fenyyli-isoksatsoliumperkloraa- tin låsnå ollessa.

Aktivoitu esteri voidaan edullisesti muodostaa in situ kåyttåen esimerkiksi 1-hydroksibentsotriatsolia edel-lå esitetyn kondensoivan aineen låsnå ollessa. Vaihtoeh-30 toisesti aktivoitu esteri voidaan muodostaa etukåteen.

Asylointireaktio voidaan suorittaa vesipitoisessa tai vedettomåsså reaktiovåliaineessa, edullisesti låmpo-tilassa -20 - +100 °C, esim. -10 - +50 °C:ssa.

Eetterinmuodostus voidaan suorittaa kåyttåen kaavan 35 R4Y mukaista reagenssia (jossa R4 on edellå mååritelty ja Y

10 90549 on poistuva ryhmå, kuten kloori-, bromi- tai jodiatomi tai hydrokarbyylisulfonyylioksiryhma, kuten mesyylioksi tai tosyylioksi tai halogeenialkanoyylioksiryhmM, kuten di-klooriasetoksi). Reaktio voidaan suorittaa muodostamalla 5 magnesiumalkoksidi kayttaen Grignard-reagenssia, kuten metyylimagnesiumhalogenidia, esim. metyylimagnesiumjodi-dia, tai kayttaen trialkyylisilyylimetyylimagnesiumhaloge-nidia, kuten trimetyylisilyylimetyylimagnesiumkloridia, minka jalkeen kåsitellaan reagenssilla R4Y.

10 Vaihtoehtoisesti reaktio voidaan suorittaa hopea- suolan, kuten hopeaoksidin, hopeaperkloraatin, hopeakarbo-naatin tai hopeasalisylaatin tai naiden seosten låsnå ol-lessa, ja tama systeemi voi olla erityisen sopiva kun eet-terinmuodostus suoritetaan kayttaen alkyylihalogenidia 15 (esim. metyylijodidia).

Eetterinmuodostus voidaan edullisesti suorittaa liuottimessa, kuten esimerkiksi eetterissa, esim. dietyy-lieetterissa.

Kaavan I mukaisen yhdisteen hydroksyyliryhman OR3 20 asylointi ryhmaksi OCONR^R9 voidaan suorittaa sopivalla karbamoyloivalla aineella. Sopivia karbamyloivia aineita sellaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa toinen ra-dikaaleista Rs ja R9 on vetyatomi ja toinen on alempi al-kyyliryhma, ovat kaavan R1(>NC0 mukaiset isosyanaatit (jossa 25 R10 on alempi alkyyliryhma) . Karbamylointireaktio voidaan edullisesti suorittaa kayttaen mukana liuotinta, joka voi olla hiilivety (esim. aromaattinen hiilivety, kuten bent-seeni tai tolueeni), halogenoitu hiilivety (esim. dikloo-rimetaani), amidi (esim. formamidi tai dimetyyliformami-30 di) , esteri (esim. etyyliasetaatti), eetteri (esim. sykli-nen eetteri, kuten tetrahydrofuraani tai dioksaani), keto-ni (esim. asetoni), sulfoksidi (esim. dimetyylisulfoksidi) tai naiden seos. Reaktio voidaan edullisesti suorittaa lampotilassa, joka vaihtelee -80 °C:sta reaktioseoksen 35 kiehumispisteeseen, esimerkiksi 100 °C:seen, edullisesti -20 - +30 °C:ssa.

I; 11 90549

Karbamoylointi voidaan suorittaa emåksen låsnå ol-lessa, esim. tertiaarisen orgaanisen emåksen, kuten tri-(alempi alkyyli)amiinin (esim. trietyyliamiinin) låsnå ollessa.

5 Toinen kåyttokelpoinen karbamoylointiaine on syaa- nihappo, joka edullisesti valmistetaan in situ, esimerkik-si alkalimetallisyanaatista, kuten natriumsyanaatista, jolloin reaktio helpottuu hapon låsnå ollessa, esim. vah-van orgaanisen hapon, kuten trifluorietikkahapon låsnå 10 ollessa. Syaanihappo vastaa tehokkaasti yllå mainittuja isosyanaattiyhdisteitå, joissa R1" on vety, ja muuttaa sik-si kaavan II mukaiset yhdisteet suoraan karbamoyylioksi-analogeiksi (so. kaavan I mukaisiksi yhdisteiksi, joissa OR3 on ryhmå OCONH2) .

15 Vaihtoehtoisesti karbamoylointi voidaan suorittaa reaktiolla fosgeenin tai karbonyylidi-imidatsolin ja sen jålkeen ammoniakin tai sopivan substituoidun amiinin kans-sa joko vesipitoisessa tai vedettomåsså reaktiovåliainees-sa.

20 Kaavan I mukaisia yhdisteitå, joissa R2 on alempi alkyyli tai allyyli, voidaan valmistaa myos menetelmållå (C), jossa kaavan I mukainen yhdiste, jossa R2 on vetyatomi ja OR3 on edellå mååritelty substituoitu hydroksyyliryhmå, saatetaan reagoimaan eetteroivån aineen R2Y kanssa (jossa 25 R2 on alempi alkyyli tai allyyli ja Y on kuten edellå on mååritelty), minkå jålkeen halutessa poistetaan kaavan I mukaisesta yhdisteestå suojaus, jos OR3 on mainittu suojat-tu hydroksyyliryhmå ja muodostetaan mahdollisesti suola.

Eetterointireaktio voidaan suorittaa esimerkiksi 30 muodostamalla magnesiumalkoksidi kåyttåen Grignard-rea-genssia, kuten metyylimagnesiumhalogenidia, esim. metyyli-magnesiumjodidia, minkå jålkeen kåsitellåån reagenssilla R2Y. Vaihtoehtoisesti reaktio voidaan suorittaa hopeasuolan låsnå ollessa, kuten hopeaoksidin, hopeaperkloraatin, ho-35 peakarbonaatin tai hopeasalisylaatin tai nåiden seoksen 12 90549 lasna ollessa, tai emaksen kuten kaliumkarbonaatin tai natriumhydroksidin låsnå ollessa. Eetterdinti voidaan edullisesti suorittaa orgaanlsessa liuottimessa, kuten eetterisså, esim. dietyylieetterisså, tetrahydrofuraanissa 5 tai dioksaanissa, tai amidissa, esim. dimetyyliformamidis-sa tai heksametyylifosforitriamidissa tai tållaisten liu-ottimien seoksessa huoneenlåmmdsså. Nåisså olosuhteissa oksiminoryhmån konfiguraatio pysyy pååosiltaan muuttumat-tomana eetterointireaktiossa.

10 Kaavan I mukaisia yhdisteitå, joissa OR1 on hydrok- syyliryhmå, voidaan edelleen valmistaa menetelmållå (D) , jossa pelkistetåån yhdiste, jolla on kaava (III) nO>> 15 f«3 h Å/3 X/CHj

kJ mY

3 Hll η Π! Y’ k (III)

20 JUkkH

” sk'1"3 25 minkå jålkeen mahdollisesti muodostetaan suola.

Pelkistys voidaan suorittaa pelkistimellå, joka stereoselektiivisesti pelkiståå 5-ketoryhmån. Sopivia pel-kistimiå ovat boorihydridit, kuten alkalimetalliboorihyd-ridit (esim. natriumboorihydridi), ja litiumalkoksialumii- 30 nihydridit, kuten 1itiumtributoksialumiinihydridi.

Boorihydridipelkistintå kåytettåesså reaktio tapah-tuu liuottimen, kuten alkanolin, esim. isopropyylialkoho-lin tai isobutyylialkoholin låsnå ollessa, edullisesti låmpotilassa, joka vaihtelee vålillå -30 - +80 °C, esim.

35 0 °C:ssa. Litiumalkoksialumiinihydridiå kåytettåesså reak- i.

13 90549 tio tapahtuu liuottimen, kuten eetterin, esim. tetrahydro-furaanin tai dioksaanin, lasnå ollessa, edullisesti låmpd-tilassa, joka vaihtelee vålillå -78 - 0 °C.

Kaavan III mukaisia låhtoaineita voidaan valmistaa 5 5,23-diketonista, jolla on kaava (IV)

O

l"3 H ,Α,ο·'1"3 10 T c«,

C#.-L U H

C#J Η I „ T\,

Si JImuh (IV) 15 ijji nr'«3 o 20 kåsittelemållå sitå ekvivalenttimåårålla yhdistettå H2NOR2 (jossa R2 on edellå mååritelty) kåyttåen edellå kaavan I mukaisten aineiden valinistuksen yhteydesså esitettyjå ok-siiminmuodostusolosuhteita.

Kaavan IV mukaisia yhdisteitå voidaan valmistaa ha-25 pettamalla yhdisteitå, joilla on kaava (V)

OH

jV», A--“3 L^Tr-'i4s^ai 30 “3 Si SS ‘X..

S, s (v) Λϊμ XT’3 14 90549

Reaktio voidaan suorittaa hapettimella, joka muut-taa sekundaarisen hydroksyyliryhmån oksoryhmåksi, jolloin saadaan kaavan IV mukainen yhdiste.

Sopivia hapettimia ovat kinonit veden lasna olles-5 sa, esim. 2,4-dikloori-5,6-disyaani-l,4-bentsokinoni tai 2,3,5,6—tetrakloori-1,4-bentsokinoni; kromi(VI)hapetin, esim. natrium- tai pyridiniumdikromaatti tai kromitrioksi-di pyridiinissa, edullisesti faasinsiirtokatalysaattorin lasna ollessa; mangaani(IV)hapetin, esim. mangaanidioksidi 10 dikloorimetaanissa; N-halogeenisukkinimidi, esim. N-kloo-risukkinimidi tai N-bromisukkinimidi; dialkyylisulfoksidi, esim. dimetyylisulfoksidi, aktivoivan aineen, kuten N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidin tai asyylihalogenidin, esim. oksalyylikloridin lasna ollessa; tai pyridiini-rikkitriok-15 sidikompleksi.

Reaktio voidaan edullisesti suorittaa sopivassa liuottimessa, joka voi olla ketoni, esim. asetoni, eette-ri, esim. dietyylieetteri, dioksaani tai tetrahydrofuraa-ni, hiilivety, esim. heksaani, halogeenihiilivety, esim. 20 kloroformi tai metyleenikloridi, tai esteri, esim. etyyli-asetaatti, tai substituoitu amidi, esim. dimetyyliformami-di. Voidaan myos kayttaå tallaisten liuottimien yhdistel-mia sellaisenaan tai veden kanssa. Liuottimen valinta riippuu rektiossa kåytetyn hapettimen tyypista.

25 Reaktio voidaan suorittaa låmpotilassa -80 +50 °C.

Kaavan V mukaisia yhdisteita voidaan valmistaa esi-merkiksi viljelemalla Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12015 -kantaa (tallennettu syyskuun 10. 1984 talletuslai-30 toksen National Collections of Industrial and Marine Bacteria, Torry Research Station, Aberdeen, Englanti, pysy-vaan kokoelmaan) tai sen mutanttia ja eristamalla yhdiste taten saadusta fermentointi 1iemestå.

Streptomyces-organismia voidaan viljellå tavanomai-35 silla menetelmilla, so. lisaåmalla assimiloitavissa olevia 15 90 549 hiili-, typpi- ja mineraalisuolalåhteita. Assimiloitavissa olevat hiili-, typpi- ja mineraalisuolalåhteet voivat olla peråisin joko yksinkertaisista tai kompleksista ravinteis-ta, kuten esimerkiksi GB-patenttijulkaisussa 2 166 436 on 5 esitetty. NSitå sisåltaviå sopivia ravintoalustoja kuva-taan jåljempåna kohdassa Valmiste 1. Streptomyces-organis-min viljely suoritetaan yleensa låmpotilassa 20 - 50 °C, edullisesti 25 - 40 °C:ssa ja suoritetaan edullisesti il-mastaen ja liikutellen, esim. ravistellen tai sekoittaen. 10 Ravintoalusta voidaan ensiksi inokuloida pienella maaralla itioityå mikro-organismisuspensiota, mutta kasvun viivås-tymisen vålttåmiseksi voidaan valmistaa vegetatiivinen organismiymppi inokuloimalla pieni mååra viljelyalustaa organismin itiomuodolla ja saatu vegetatiivinen ymppi voi-15 daan siirtaa fermentointialustaan tai edullisemmin siirtaa yhteen tai useampaan kasvatusvaiheeseen, jossa lisåkasvu tapahtuu ennen kuin organismi siirretaan varsinaiseen fermentointialustaan. Fermentointi suoritetaan yleensa pH-alueella 5,5 - 8,5.

20 Fermentointia voidaan suorittaa 2-10 vuorokautta, esim. noin viisi vuorokautta.

Kaavan V mukaiset yhdisteet voidaan eriståa taten saadusta koko fermentointiliemesta tavanomaisilla eristysja erotusmenetelmilla. Voidaan kayttaa erilaisia frakti-25 ointimenetelmia, esimerkiksi adsorptio-eluutiota, saos- tamista, jakokiteyttåmista ja liuotinuuttoa, joita voidaan yhdistaå eri tavoilla. Liuotinuutto ja kromatografia on todettu sopivimmiksi yhdisteen eristamis- ja erottamista-voiksi. Sopiva menetelmå kaavan V mukaisten yhdisteiden 30 valmistamiseksi naita menetelmia kayttaen on esitetty jaljempana kohdassa Valmiste 1.

Kaavan I mukaisia yhdisteita, joissa OR3 on hydrok-syyliryhma, voidaan valmistaa viela menetelmallå (E), jossa poistetaan suojaus vastaavasta kaavan I mukaisesta yh-35 disteesta, jossa OR3 on edella esitetty suojattu hydroksyy-liryhmå.

16 90549 Tåten esimerkiksi asyyliryhmå, kuten asetyyliryhmå, voidaan poistaa emåksisellå hydrolyysillå, esim. kayttåen natrium- tai kaliumhydroksidia alkoholiliuoksessa, tai happamalla hydrolyysillå, esim. kåyttaen våkevaa rikkihap-5 poa metanolissa.

Kaavan I mukaisten happojen suolat voidaan valmis-taa tavanomaisilla menetelmillå, esimerkiksi kasittelemal-la happo emåksellå tai muuttamalla suola toiseksi suolaksi ioninvaihdolla.

10 Seuraavassa esitetyssa kaavan V mukaisen yhdisteen valmistusta kuvaavassa kohdassa Valmiste 1 seka jaljempåna esitetyisså esimerkeissa lampotilat on annettu celsiusas-teina, EtOH tarkoittaa etanolia ja yhdisteet on nimetty tunnettujen "Tekijoiden", tekijoiden A, B, C ja D johdan-15 naisina. Tekijå A on seuraavassa annetun kaavan VI mukai-nen yhdiste, jossa R1 on isopropyyli ja R3 on vety; tekija B on kaavan VI mukainen yhdiste, jossa R1 on metyyli ja R3 on metyyli; tekijå C on kaavan VI mukainen yhdiste, jossa R1 on metyyli ja R3 on vety; ja tekijå D on kaavan VI mu-20 kainen yhdiste, jossa R1 on etyyli ja R3 on vety.

OH

i3 ! CH3 h|| II (vi)

J| OH\JM

30 ί—Γ JL

»I, od5 17 90549

Valmiste 1

5-keto-tekijå A

Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12015 itioita inokuloitiin seuraavista aineista valmistetuille agar-5 levyille: gi'1

Hiivauute (Oxoid L21) 0,5

Mallasuute (Oxoid L39) 30,0

Mykologinen peptoni (Oxoid L40) 5,0 10 Agar nro 3 (Oxoid L13) 15,0

Tislattu vesi, ad 1 litra pH noin 5,4 ja inkuboitiin 28 °C:ssa 10 vuorokautta.

Valmiit levyt peitettiin tamån jalkeen 6 ml :11a 15 10-%:ista glyseroliliuosta ja raaputettiin steriilillå apuvålineellå itioiden ja sienirihmaston irrottamiseksi. Saadusta itiosuspensiosta siirrettiin 0,4 ml:n måaria ste-riileihin polypropyleenipilleihin, jotka tåman jalkeen kuumasaumattiin ja såilytettiin nestetypen hoyrysså, kun-20 nes ne kaytettiin.

Kahteen erlenmeyerpulloon valmistettiin kumpaankin 50 ml kasvatusalustaa, jonka koostumus oli seuraava: gi' D-glukoosia 15,0 25 Glyserolia 15,0

Soijapeptonia 15,0

NaCl 3,0

CaC03 1,0

Tislattua vetta ad 1 litra 30 (Alustan sååtamaton pH oli 6,7, joka saadettiin pH-arvoon 7,0 natriumhydroksidin vesiliuoksella ennen au-toklavointia. Alustan pH-arvo oli 7,3 autoklavoinnin jalkeen). Molemmat pullot inokuloitiin 0,2 ml:lla itiosuspen-35 siota, joka otettiin pillista.

18 90549

Pulloja inkuboitiin 28 °C:ssa kolme vuorokautta ra-vistelijalla, joka pyori 250 rpm 50 mm:n kokoisissa ym-pyroissa.

Kummankin pulion sisålto kaytettiin 70 l:n fermen-5 torin inokulointiin, joka sisålsi 40 1 samaa alustaa, jo-hon oli lisåtty polypropyleenla 2000 (0,06 tilavuus-%).

Polypropyleenia 2000 lisattiin tarvittaessa fermentoinnin aikana vaahdonmuodostuksen hallitsemiseksi. Fermentointi suoritettiin 28 °C:ssa, ravistellen ja ilmastaen riitta-10 våsti liuenneen hapen måårån pitåmiseksi suurempana kuin kuin 30 % kyllåstyspitoisuudesta. 24 tunnin fermentoinnin jålkeen siirrettiin 9 1 liemesta 700 l:n fermentoriin, joka sisalsi 450 1 koostumukseltaan seuraavaa alustaa: gl' 15 D-glukoosia 2,8

Mallasdekstriiniå (MD30E) 27,8

Arkasoy 50 13,9

Melassia 1,7 K2HP04 0,14 20 CaC03 1,39

Silikonia 525 (Dow Corning) 0,06 % (t/t) pH såådettiin arvoon 6,5 ennen sterilointia.

Fermentointi suoritettiin 28 °C:ssa sekoittaen ja ilmastaen. Polypropyleenia 200 lisattiin vaahdoneståjåksi 25 tarvittaessa ja pH pidettiin arvossa 7,2 lisååmållå H2S04:a, kunnes tuote otettiin talteen. Fermentointikasvus-to keråttiin viiden vuorokauden jålkeen.

Fermentointiliemi (450 1) kirkastettiin Westfalia KA 25 -sentrifugissa ja supernatanttijåånnos korvattiin 30 vedellå (20 1). Talteenotettuja soluja (25,5 kg) sekoitet-tiin yhden tunnin ajan Silverson BX -mallisessa mikserisså tarpeellisessa mååråsså metanolia, jotta saatiin kokonais-tilavuudeksi 75 1. Suspensio suodatettiin ja kiinteåå jåånnostå uutettiin uudelleen metanolilla (35 1) ja suoda-35 tettiin. Yhdistetty suodos (87 1) laimennettiin vedellå if 90549 (40 1) ja uutettiin 60 - 80 °C:n petrolieetterilla (30 1). 30 minuutin jalkeen faasit erotettiin Westfalia MEM 1256 -sentrifugissa ja alempi metanolifaasi uutettiin uudelleen 60 - 80 °C:n petrolieetterilla (30 1) veden lisayksen (40 5 1) jalkeen. Erotuksen jSlkeen alempi faasi uutettiin taas 60 - 80 °C:n petrolieetterilla (30 1) . Yhdistetyt petroli-eetterifaasit (85 1) vakevoitiin kolme kertaa Pfaudler 8.8-12V-27 "wiped-film"-haihduttimella (hoyrynpaine 0,1 baaria, hoyrystymislampotila 20 °C, hoyryn lampotila 10 127 °C). Våkevoity liuos (9 1) kuivattiin natriumsulfaa- tilla (2 kg) ja vakevoitiin lisåksi alipaineessa 40 °C:ssa kiertohaihduttimessa.

Oljymåinen jåånnos (130 g) liuotettiin kloroformiin tilavuuteen 190 ml ja tamå kaadettiin kloroformilla pakat-15 tuun Merck 7734 silika 60 -pylvaaseen (200 x 4 cm). Pylvas pestiin kloroformilla (500 mL) ja eluoitiin klorofor-mi/etyyliasetaattiseoksella (3:1) ja noin 40 ml:n fraktiot kerattiin 1400 ml:n esipåaston jalkeen.

Fraktiot 32 - 46 yhdistettiin ja haihdutettiin, 20 jolloin saatiin oljy (21,2 g). Fraktiot 47 - 93 yhdistettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin oljy (20,1 g), joka liuotettiin lopulliseen tilavuuteen 50 ml kloroformi/etyy-liasetaattiseokseen (3:1) ja kaadettiin kloroformi/etyyli-asetaatiseoksen avulla (3:1) pakattuun Merck 7734 silika 25 60 -pylvaaseen (200 x 4 cm) ja kerattiin noin 40 ml:n fraktiot 1400 ml:n esipaåston jalkeen. Fraktiot 22 - 36 yhdistettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin oljy (3,1 g), joka lisattiin ensimmaisen pylvaan fraktioista 32 - 46 saatuun oljyyn. Yhdistetyt 51jyt liuotettiin kiehuvaan 30 metanoliin (4 ml) , joka tåman jalkeen lisattiin kuumaan propan-2-oliin (20 ml) ja annettiin kiteytyå.

Kiteytymisen jalkeen neste haihdutettiin, jolloin saatiin oljy, joka liuotettiin samaan tilavuuteen metylee-nikloridia ja kaadettiin metyleenikloridilla pakattuun 35 Merck Kieselgel 60 (70 - 230 mesh ASTM, tuote nro 7734) 20 90549 pylvååseen (30 x 2,2 cm). Pylvås pestiin metyleeniklori-dilla (2 x pylvåsvolyymi) ja eluoitiin kloroformietyyli-asetaatilla (3:1) (2 x pylvåsvolyymi). Eluaatin haihdutus antoi oljyn, joka liuotettiin metanoliin ja sille suori-5 tettiin preparatiivinen Spherisorb S5 ODS-2 HPLC (250 x 20 mm, Phase Sep. Ltd.). Nayteannokset (5 ml) pumpattiin ko-lonniin yhden minuutin aikana ja kolonni eluoitiin aseto-nitriili/vesiseoksella (7:3) seuraavissa olosuhteissa: Aika (min) Virtaus (ml/min) 10 0,00 0,00 ) Injektioaika 1,00 0,00 1,10 30,00 39,90 30,00 40,00 35,00 15 75,00 35,00 HPLC-kolonnista eluoitu materiaali tutkittiin UV-spektrofotoskopian avulla 238 nm:ssa.

Haihdutettiin yhdistetyt fraktiot, joiden piikit eluoituivat 33,4 minuutin kohdalla, jolloin saatiin otsi-20 kon yhdiste (34 mg) kiinteana aineena.

E.I.-massaspektroskopia antoi molekulaarisen ionin 610:sså ja tunnusomaiset fragmentit seuraavissa arvoissa: 592 574 25 556 422 259 241

Seuraavat esimerkit valaisevat keksinnon mukaisten 30 yhdisteiden valmistusta.

Esimerkki l

25[E]-metoksi-imino-tekija A (a) 5,23-diketo-tekija A

Jååkylma vakevasta rikkihaposta (1,2 ml) ja nat-35 riumdikromaatista (120 mg) ja vedesta (2 ml) valmistettu 2i 90549 liuos lisattiin 15 minuutin aikana jååkylmåån 5-ketoteki-jåå A (200 mg) ja tetrabutyyliammoniumvetysulfaattia (15 mg) etyyliasetaatissa (4 ml) sisåltåvåån liuokseen se-koittaen voimakkaasti. Yhden tunnin jalkeen seos laimen-5 nettiin etyyliasetaatilla ja orgaaninen faasi pestiin kyl-lastetylla natriumbikarbonaatin vesiliuoksella. Kuivattu orgaaninen faasi haihdutettiin ja kumimainen jåånnos puh-distettiin kromatografialla Merck Keiselgel 60 230 - 400 mesh -pylvaassa (100 ml). Eluoitiin l0-%:isella etyyliase-10 taatilla dikloorimetaanissa ja saatiin otsikon yhdiste vaaleankeltaisena vaahtona (86 mg) δ (CDC1,) kåsittåvåå piikit 6,57 (m, IH); 2,50 (s, 2H) ja 1,89 (m 3H).

(b) 5-keto-23[E]-metoksi-imino-tekijå A Liuotettiin 5,23-diketo-tekija A (4,75 mg), metok-15 syyliamiinihydrokloridia (60 mg) ja vedetonta natriumase-taattia (135 mg) metanoliin. Pidettiin 1,5 tuntia huoneen-låmmosså, minka jalkeen liuos pidettiin -18 °C:ssa 16 tuntia, laimennettiin etyyliasetaatilla ja pestiin peråkkain 1 N kloorivetyhapolla, vedella ja vakevalla suolaliuoksel-20 la. Kuivattu orgaaninen faasi haihdutettiin ja keltainen vaahto puhdistettiin kromatografialla Merck Kieselgel 60, 230 - 400 mesh (120 ml) -pylvaassa. Pylvaan eluutio hek-saani/etyyliasetaattiseoksella (4:1) antoi otsikon yhdis-teen keltaisena vaahtona (255 mg).

25 [ot]έ1 +80° (c 1,20, CHCl,) , λ*» (EtOH) 241 nm (ε 27 500), V n,ax (CHBr3) 3530, 3460 (OH) 1708 (C=0) , 1676 (C=C-C=0) , 986 (C-O) , .S (CDClj) kasittaa 6,58 (s, IH); 3,84 (s, 4H) ; 4,80 (s, IH); 3,58 (m, IH); 3,30 (dl4, IH); 1,00 (d6, 3H) ; 0,96 (d6, 3H); 0,92 (d6, 3H).

30 (c) 23[E]-metoksi-imino-tekijå A

(i) Lisattiin natriumboorihydridiå (6,5 mg) jaakyl-maan 5-keto-23[E]-metoksi-imino-tekijan A (83 mg) isopro-panoliliuokseen (20 ml) . Keltaista seosta sekoitettiin 25 minuuttia jaåhauteessa, laimennettiin etyyliasetaatilla 35 ja pestiin peråkkain 1 N kloorivetyhapolla, vedella ja vå- 22 90549 kevalla suolaliuoksella. Kuivattu orgaaninen faasi haih-dutettiin ja saatu keltainen kumimainen jaannos puhdistet-tiin kromatografialla Merck Kieselgel 60, 230 - 400 mesh -pylvaåsså (60 ml) . Pylvaån eluutio heksaani/etyyliase-5 taattiseoksella (2:1) antoi otsikon yhdisteen keltaisena vaahtona (58 mg). Kiteyttåmållå heksaanista saatiin otsikon yhdistettå, sp. 203 °C.

[a],2,1 +133 (c 1,12, CHC13) , λ lllax (EtOH) 244 nm ( ε 26 200), S (CDClj) kasittaa 4,29 (t7, 1H); 3,84 (s, 3H); 3,29 (dl5, 10 1H).

(ii) 5-keto-23[E]-metoksi-imino-tekija A (50 mg) liuotettuna kuivaan tetrahydrofuraaniin (1 ml) lisåttiin jaahdytettyyn (-78 °C) litium-tris-t-butoksialumiinihydri-dia (261 mg) sisaltavaan kuivaan tetrahydrofuraaniin 15 (3 ml). Pidettiin 0,75 tuntia -78 °C:ssa, minka jalkeen liuos laimennettiin etyyliasetaatilla (30 ml) ja pestiin peråkkåin 0,5 N kloorivetyhapolla ja vedella. Kuivattu orgaaninen faasi haihdutettiin ja raakatuote puhdistettiin kromatografialla Merck Kieselgel 60, 230 - 400 mesh -pyl-20 vaassa (40 ml) , eluoitiin 25 % etyyliasetaattia sisalta-valla heksaanilla ja saatiin otsikon tuote valkoisena vaahtona.

[ a ] ,21 +128 (c 0,95, CHC1,) , δ (CDC1,) kasittaa 4,29 (t7, 1H) ; 3,84 (S, 3H) ; 3,29 (dl5, 1H) .

25 Esimerkki 2 23[E]-metoksi-imino-tekijå Ά, 5-asetaatti 23-keto-tekijan A 5-asetaatin (3,13 g, esimerkki 18 GB-patenttijulkaisussa 2 176 182) metanoliliuokseen lisat-tiin vedetontå natriumasetaattia (2,8 g) liuotettuna ve-30 teen (15 ml) ja sen jalkeen lisåttiin metoksiamiinivety-kloridia (3,01 g) . Saatua liuosta sekoitettiin 1,5 tuntia 20 °C:ssa, laimennettiin etyyliasetaatilla ja pestiin peråkkåin 0,5 N kloorivetyhapolla, vedella ja vakevållå suolaliuoksella. Kuivattu orgaaninen faasi haihdutettiin mel- 23 90 5 49 kein kuiviin ja valkea vaahto puhdistettiin kromatografi-alla Merck Kieselgel 60, 230 - 400 mesh -pylvååsså (600 ml). Pylvåån eluutio heksaani/etyyliasetaattiseoksel-la (4:1) antoi otsikon yhdisteen vårittomånå vaahtona 5 (2,14 g). [ a] u +128° (c 1,35, CHClj) λ „iax (EtOH) 244 nm ( ε max 27 250); Vlllax (CHBr3) 3560, 3480 (OH), 1733 (asetaatti), 1715 (C=0), 995 (C-O), δ (CDC13) kåsittåå 5,5 - 5,6 (m, 2H) ; 3,84 (s, 3H) ; 3,29 (dl5, H) ; 2,16 (s, 3H) .

10 Esimerkki 3 23[E]-hydroksi-imino-tekijån Ά 5-asetaatti 23-keto-tekijan A 5-asetaatin reaktio hydroksyyli-amiinihydrokloridin kanssa suoritettiin edellå esimerkisså 1 kuvatulla tavalla. Raakatuote puhdistettiin kromatogra-15 fialla Merck Kieselgel 60, 230 - 400 mesh -pylvååsså, elu-oitiin etyyliasetaatti/asetonitriiliseoksella (4:1) ja saatiin otsikon yhdistettå varittomånå vaahtona.

[a],V +132° (c 1,01, CHCl3) , λ „lax (EtOH) 244 nm ( εmax 27 800), v max (CHBr3) 3565, 3470 (OH) 1732 (asetaat-20 ti), 1712 (C=0) , 993 (C-O), δ (CDC13) kasittåa 8,12 (s, IH); 5,5 - 5,6 (m, 2H); 3,42 (dl5, IH); 2,16 (s, 3H).

Esimerkki 4

23[E]-metoksi-imino-tekijå A

Esimerkin 2 tuotteen (1,88 g) metanoliliuos jååhdy-25 tettiin jååhauteessa, lisåttiin 1 N natriumhydroksidiliu-osta (5,6 ml) ja liuosta sekoitettiin jååhauteessa 1,5 tuntia. Liuos laimennettiin etyyliasetaatilla ja pestiin peråkkåin 0,5 N kloorivetyhappoliuoksella, vedellå ja vå-kevållå suolaliuoksella. Kuivattu orgaaninen faasi haihdu-30 tettiin ja saatu vaahto puhdistettiin kromatografialla Merck Kieselgel 60, 230 - 400 mesh -pylvååsså (400 ml) . Pylvås eluoitiin heksaani/etyyliasetaattiseoksella (2:1) ja saatiin våriton vaahto (1,429 g). Kiteyttåminen heksaa-nista antoi puhdasta otsikon tuotetta, sp. 203 °C.

24 90 549 [α]ο +132 (c 1,21, CHClj) , Xlliax (EtOH) 244 rim ( ε η·» 29 200) , vlllax (CHBr,) 3540 (OH), 1708 (C=0), 992 (C-O) , δ (CDC13) kasittåå 4,29 (t7, 1H) ; 3,84 (s, 3H) , 3,29 (dl5, 1H).

5 Esimerkki 5 23(E]-hydroksi-imino-tekija Ά

Esimerkin 3 tuote hydrolysoitiin edellå esimerkisså 3 esitetyn menetelman mukaisesti ja saatiin tuote, joka puhdistettiin kromatografialla Merck Kieselgel 60, 230 400 10 mesh -pylvaassa (400 ml) eluoimalla heksaani/etyyliase- taattiseoksella (1:1), jolloin saatiin otsikon yhdistetta varittomana vaahtona.

[Q]d‘ +140 (c 1,24, CHCl,) X max (EtOH) 244 nm (ε nux 26 700), v inax (CHBr,) 3565, 3490 (OH), 1710 (C=0) , 994 (C-O), δ 15 (CDC1·,) kasittaå 8,11 (s, 1H) ; 4,29 (t7, 1H) ; 3,41 (dl5, 1H) .

Esimerkki 6 23[E]-etoksi-imino-tekija Ά

Vedetonta natriumasetaattia (140 mg) liuotettuna 20 veteen (3 ml) lisattiin liuokseen, jossa oli 23-keto-teki-jaa A (200 mg, esimerkki 23 GB-patenttijulkaisussa 2 176 182) ja etoksiamiinivetykloridia (126 mg) metanolissa (20 ml) . Kahden tunnin jålkeen 20 °C:ssa liuos lairaennettiin eetterilla (40 ml) ja pestiin vedellå. Kuivattu orgaaninen 25 faasi haihdutettiin ja saatu valkea vaahto puhdistettiin kromatografialla Merck Kieselgel 60, 230 - 400 mesh -pylvaassa (90 ml). Pylvåan eluutio heksaani/etyyliasetaatti-seoksella (2:1) antoi otsikon yhdistetta varittomana vaahtona (189 mg).

30 [a)l' +125 (c 1,00, CHCl,) λ max (EtOH) 244 nm ( ε nux 28 200), v inax (CHBrj) 3540, 3480 (OH), 1705 (C=0) , 990 (C-O), δ (CDClj) kasittåå 4,30 (t7, 1H) ; 4,10 (q7, 2H) ; 3,31 (dl5, 1H); 1,24 (t7, 3H).

li 25 90 5 49

Esimerkkien 7, 8 ja 9 yhdisteet valmistettiin sa-malla tavalla lahtoaineina 23-keto-tekijå A ja sopiva alk-oksiamiini.

Esimerkki 7

5 23[E]-allyyli-oksi-imiini-tekijå A

[a],21 +124° (c 1,17, CHC1,) λ™* (EtOH) 244 nin (ε 28 400), v 1)ux (CHBr3) 3550, 3490 (OH), 1708 (C=0) , 990 (c-O) , δ (CDClj) kasittaa 5,98 (m, 1H) ; 5,28 (dd 17,2, 1H) : 5,15 (dd 9,2, 1H); 4,5-4,7 (m, 2H); 4,29 (t7, 1H); 3,36 10 (dl4, 1H) valmistettiin allyylioksiamiinihydrokloridista.

Esimerkki 8

23[E]-isopropyylioksi-imino-tekijå A

[a],2,1 +116° (c 0,97, CHC1,) λ ,„;ix (EtOH) 244 nm ( ε 1II11X 25 000), vllliix (CHBr,) 3550, 3490 (OH), 1708 (C=0), 15 992 (c-O), δ (CDC1,) kasittaa 4,2 - 4,4 (m, 2H); 3,30 (dl4, 1H) ; 1,21 (d7, 3H) ; 1,20 (d7, 3H) valmistettiin isopropyy-lioksiamiinihydrokloridista.

Esimerkki 9

23[E]-butoksi-imino-tekija A

20 [ a ] jy +115° (c 1,10, CHClj) λ max (EtOH) 244 nm ( ε max 31 800), V lllax (CHBr,) 3540, 3460 (OH), 1708 (C=0) , 992 (C-0), δ (CDClj) kasittaa 4,28 (t6, 1H) ; 4,03 (m, 2H) ; 3,96 (d6, 1H); 3,31 (dl4, 1H); 0,9 - 1,1 (m, 15H) valmistettiin n-butoksiamiinihydrokloridista.

25 Esimerkki 10 23[E]-metoksi-imino-tekijå A,5-asetaatti (i) Lisattiin sekoittaen 3 M metyylimagnesiumjodi-diliuosta eetterissa (0,16 ml) esimerkin 3 tuotteen (120 mg) liuokseen kuivassa heksametyylifosforitriamidissa (5 30 ml) typpiatmosfaarissa. Lisattiin jodimetaania (0,09 ml) ja tunnin kuluttua seos laimennettiin etyyliasetaatilla (30 ml) ja pestiin perakkain 2 N kloorivetyhapolla ja ve-della. Kuivattu orgaanintm taasi haihdutettiin ja keltai-nen kumimainen jaiinnos puhdistetti in kromatogra 1 i a I I a 26 90549

Merck Kieselqel 60, 230 - 400 mesh -pylvåassa (80 ml) .

Pylvås eluoitiin heksaani/etyyliasetaattiseoksella (2:1) ja saatiin otsikon yhdistettå valkoisena vaahtona.

[a]o + 123 ° (c 1,25, CHCl,) λ iim (EtOH) 245 nm ( εηι;ιχ 30 300) 5 NMR oli kuten ylla esimerkissa 2.

(ii) Esimerkin 3 tuotetta (0,082 g) liuotettiin dietyylieetteriin (10 ml), joka sisalsi hopeaoksidia (0,4 g) , joka oli juuri valmistettu hopeanitraatista ja 2 M natriumhydroksidin vesiliuoksesta. Seosta sekoitettiin 10 huoneen lammossa kaksi tuntia, minkå jålkeen se suodatet-tiin ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuot-teena keltainen kumimainen jaannSs. Tama jaannos puhdis-tettiin preparatiivisella ohutkerroskromatografialla (Merck 5717) eluoimalla dikloorimetaani/asetoniseoksella 15 (25:1). Pååvyohyke uutettiin asetonilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin otsikon tuotetta (0,059 g). NMR on esitet-ty ylla esimerkissa 2.

Esimerkki 11 23[E]-metoksi-imino-tekijan A 5-metyylikarbamaatti 20 Metyyli-isosyanaattia (0,13 ml, 125 mg) ja trietyy- liamiinia (2 tippaa) lisattiin 23(E]-metoksi-iminotekijåå A (350 mg) sisaltavaan kuivaan dimetyyliformamidiin (0,75 ml). Pullo suljettiin ja kuumennettiin 5,5 tuntia 80 °C:ssa sekoittaen. Reaktioseos kaadettiin veteen 25 (50 ml) ja saatu seos suodatettiin piimaan låpi. Suodos- kakku pestiin vedellå (150 ml) ja uutettiin tåmån jålkeen dikloorimetaanilla (75 ml) . Uute kuivattiin (MgS04) ja va-kevoitiin, jolloin saatiin keltainen vaahto, joka puhdis-tettiin keskipainekromatografialla silikapylvååsså (125 g, 30 Merck Kieselgel 60, 230 - 400 mesh). Eluoitiin heksaani/-etyyliasetaattiseoksella (1:1) ja saatiin otsikon tuotetta valkoisena vaahtona (206 mg).

[a]ll +99 (c 0,55, CH.Cl,) A 111JV (EtOH) 244,4 nm ( ε mu 28 710), vmax (CHBr,) 3530 (OH), 3455 (NH) , 1720 (es- 27 90 549 teri) , 1720 + 1510 (karbamaatti) ja 993 cm'1 (C-O) , <S (CDC1·,) kasittaa 1,78 (s, 3H) ; 2,86 (d, 5 Hz, 3H) ; 3,29 (d, 14 Hz, IH); 3,83 (s, 3H) ; 4,80 (q, 5 Hz, IH) ja 5,50 (m, 2H).

5 Esimerkki 12 2 3[E]-metoksi-imino-tekija A,5-metyylikarbonaatti

Liuokseen, jossa oli 23[E]-metoksi-imino-tekijåå A (150 mg), dikloorimetaania (15 ml) ja pyridiinia (0,3 ml), lisattiin 0 °C:ssa sekoittaen metyyliklooriformaattia 10 (0,7 ml 1,0 M liuos dikloorimetaanissa) . Reaktioseos jå- tettiin 0-3 °C:seen 20 minuutiksi sekoittaen, minka jål-keen se lisattiin dikloorimetaaniin (70 ml) ja pestiin 2 N kloorivetyhapolla (50 ml) ja vedella (50 ml). Orgaaninen faasi kuivattiin (MgS04) ja liuotin poistettiin, jolloin 15 saatiin vaahto, joka puhdistettiin keskipainekromatogra-fialla silikapylvååssa (40 g, Merck Kieselgel 60, 230 400 mesh). Eluoitiin dikloorimetaani/etyyliasetaattiseoksella (30:1), jolloin saatiin otsikon tuotetta valkoisena vaah-tona (127 mg).

20 [ a ] μ1 +145° (c 0,41, CH2Cl·,) , λ (EtOH) 244,4 nm ( ε I1U1X 32 210), v lllax (CHBr,) 3460 + 3540 (OH) 1742 (karbonaatti) , 1710 (esteri) ja 992 cm'1 (C-O) , <5 (CDC13) kasittaa 1,82 (s, 3H); 3,29 (d, 14 Hz, IH); 3,82 (s, 3H) ; 3,29 (d, 14 Hz, IH); 3,82 (s, 3H) ; 3,83 (s, 3H) ; 5,2 - 5,4 25 (m, 3H); 5,56 (s, IH).

Esimerkki 13 23[E]-metoksi-imino-tekija D,5-asetaatti 23-keto-tekija D,5-asetaattia (251 mg, esimerkki 119 GB-patenttijulkaisussa 2 176 182), natriumasetaattia 30 (250 mg) ja metoksiamiinivetykloridia (250 mg) sisaltavaå metanoliliuosta (40 ml) pidettiin 20 °C:ssa 24 tuntia, va-kevoitiin noin 10 mlrksi, laimennettiin etyyliasetaatilla (50 ml) ja pestiin perakkåin 0,5 N kloorivetyhapolla ja vedella. Kuivattu orgaaninen faasi haihdutettiin, jolloin 28 90 549 saatiin keltainen vaahto, joka puhdistettiin kromatogra-fialla Merck Kieselgel 60, 230 - 400 mesh -pylvaåsså (120 ml). Pylvaan eluutio heksaanilla antoi otsikon yhdis-tettå vaaleankeltaisena vaahtona (144 mg); 5 λ BBX (EtOH) 244 nm (ε 26 400), v max (CHBr3) (cm1) 3500 (OH), 1732 (OAc) , 1710 (C=0) , δ (CDC13) kasittaa 5,54 (m, 2H) ; 4,92 (m, 1H); 3,84 (s, 3H); 3,32 (m, 1H); 3,30 (dl4, 1H); 2,17 (s, 3H) ; 1,91 (dl4, 1H); 1,76 (s, 3H) ; 1,63 (s, 3H) ; 1,51 (s, 3H) ; 1,01 (t7, 3H) ; 0,99 (d6, 3H) ; 0,92 (d6, 3H) .

10 Esimerkki 14

23[E]-metoksi-imino-tekijå D

Esimerkin 13 tuotetta (140 mg) ja 1 N natrium-hydroksidia (0,6 ml) sisaltavåå metanol i 1iuosta (8 ml) sekoitettiin jaahauteella 1,5 tuntia. Liuos laimennettiin 15 etyylisetaatilla (30 ml) ja pestiin perakkain IN kloori-vetyhapolla ja vedellå. Kuivattu orgaaninen faasi haih-dutettiin, jolloin saatiin keltainen vaahto, joka puhdistettiin kromatografialla Merck Kieselgel 60, 230 - 400 mesh -pylvaassa (50 ml). Pylvaan eluutio heksaani/etyyli-20 asetaattiseoksella (2:1) antoi otsikon yhdistetta valkeana vaahtona (105 mg).

[a],2/ +96° (c 1,38, CHCl,) , λ ,1UX (EtOH) 244 nm ( s 26 700), v lllllx (CHBr,) (cm1) 3550, 3500 (OH), 1710 (C=0) , <S (CHC13) kasittaa 4,93 (m, 1H) ; 4,30 (t6, 1H) ; 3,95 (d6, 25 1H); 3,84 (S, 3H); 3,30 (dl4, 1H); 3,27 (m, 1H); 1,88 (s, 3H); 1,64 (s, 3H); 1,52 (s, 3H); 1,01 (t7, 3H); 1,00 (d6, 3H); 0,92 (d6, 3H)

Esimerkki 15

23[E]-metoksi-imino-tekijå B

30 23-keto-tekijaa B (1 g, esimerkki 19 GB-patentti- julkaisussa 2 176 182), natriumasetaattia (400 mg) ja me-toksiamiinivetykloridia (400 mg) sisaltavaa liuosta sekoitettiin 20 °C:ssa 20 tuntia, våkevoitiin noin 10 ml:ksi, laimennettiin etyyliasetaatilla ja pestiin vedellå. Orgaa- 29 90 549 ninen faasi pestiin perakkain 0,5 N kloorivetyhapolla ja vedella, kuivattu orgaaninen faasi haihdutettiin ja raa-katuote puhdistettiin kromatografialla Merck Kiselgel 60, 230 - 400 mesh -pylvaasså (200 ml). Pylvaan eluutio etyy-5 liasetaatti/dikloorimetaaniseoksella (1:9) antoi otsikon yhdistetta valkoisena vaahtona (500 mg).

[a]^ +120° (c, 1,09, CHClj) , λ 1111IX (EtOH) 244 nm (e 30 100), v nux (CHBr,) (cm1) 3540, 3460 (OH), 1708 (C=0) , δ (CDC1,) kåsittaa 5,46 (q6, IH); 4,03 (d5, IH); 3,97 (d5, 10 IH); 3,82 (s, 3H); 3,50 (s, 3H); 3,32 (m, IH); 3,29 (dl4, IH); 1,82 (s, 3H); 1,68 (d6, 3H); 1,00 (d6, 3H); 0,92 (d6, 3H) .

Esimerkki 16

23[E]-metoksi-imino-tekija C

15 Vedetonta natriumasetaattia (0,54 g) ja metoksi- amiinivetykloridia (0,58 g) lisattiin 23-keto-tekijaa C (1,97 g, esimerkki 12 GB-patenttijulkaisussa 2 176 182) ja vetta (5 ml) sisaltavaån metanoliliuokseen (30 ml) ja seosta sekoitettiin 30 minuuttia huoneen lammossa. Lisat-20 tiin etyyliasetaattia (30 ml) ja 0,5 M kloorivetyhappoa (30 ml) ja vesifaasia uutettiin uudelleen etyyliasetaatil-la (15 ml). Yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin perakkain 0,5 M kloorivetyhapolla, 5-%:isella kyllastetylla natrium-bikarbonaattiliuoksella ja 10-%:isella kyllastetylla nat-25 riumkloridiliuoksella, minka jalkeen liuos vakevoitiin va-kuumissa keltaiseksi vaahdoksi, joka puhdistettiin kroma-tografialla Merck 9385 -silikageelilla, jolloin pylvas aluksi kehitettiin dikloorimetaanilla ja sen jalkeen elu-oitiin dikloorimetaanilla, joka sisalsi pienen maaran 30 etyyliasetaattia (enintaan 10 %), jolloin saatiin otsikon yhdistetta (1,0 g).

[a],j‘ +64 (c 1,00, CH,0H) , 'H NMR (CDCl,) kasittaa seuraavat signaalit 4,95 (m, IH); 4,29 (t, IH, 7 Hz); 3,96 (d, IH, 7 Hz); 3,85 (s, 3H, = NOCH,) ; 3,66 (d, IH, 10 Hz); 1,51 30 90549 (s, 3H) ; 1,42 (t, IH, 12 Hz) ; IR (CHBr3) 3620 - 3340 cm'1 (-OH), 1711 cm1 (C=0).

Keksinnon mukaisia yhdisteitå voidaan kayttåå esi-merkiksi seuraavina formulaatioina, joissa ilmaisulla "ak-5 tiivinen aineosa" tarkoitetaan keksinnon mukaista yhdis-tettå.

Emulgoitava tiiviste

Aktiivinen aineosa 50 g

Anioninen emulgaattori 40 g 10 (esim. fenyylisulfonaatti CALX)

Ei-ioninen emulgaattori 60 g (esim. Synperonic NP13*)

Aromaattinen liuotin adl litra (esim. Solvesso 100) 15 *ICI:n tuotenimi

Yhdistetaan kaikki aineosat, sekoitetaan kunnes saadaan liuos.

Rakeet (a) Aktiivinen aineosa 50 g 20 Puupihka 40 g

Kipsirakeet (20 - 60 mesh) ad 1 kg (esim. Agsorb 100A) (b) Aktiivinen aineosa 50 g

Synperonic NP13’ 40 g 25 Kipsirakeet (20 - 60 mesh) ad 1 kg *ICI:n tuotenimi

Liuotetaan kaikki aineosat haihtuvaan liuottimeen, esim. metyleenikloridiin, lisåtaån rakeisiin pyorivassa sekoittimessa. Kuivataan liuottimen poistamiseksi.

i

Claims (4)

3i 90549

1. Makrolidiyhdiste, jolla on kaava 5 2 NOR CH, H I 3 : Vs *] ^ % "[ T-o'tv™)

10 CH '"'K. " I h3 i\> pi ^„1 (I) Η II I H N °V/0 Jl OH L>H

15 I *j| o_k rf^c h3 Η ft 3 OR jossa

20 R1 on metyyli, etyyli tai isopropyyli; R2 on vety, alempi alkyyli tai allyyli ja ryhmå =N0R2 on E-kon£iguraatiossa; ja OR3 on hydroksyyliryhma tai ryhma -OR4, -OCOR4 tai -0C02R4, joissa R4 on alempi alkyyli, tai ryhma -OCONR8R9, 25 jossa R8 ja R9 ovat kumpikin itsenaisesti vety tai alempi alkyyli.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen makrolidiyhdiste, tunnettu siita, etta R1 on isopropyyli, R2 on metyyli ja OR3 on hydroksyyliryhma.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukaisen makrolidiyhdis- teen kayttd tuholaisten torjumiseksi maataloudessa, puu-tarhaviljelyssa tai metsanhoidossa tai kaupoissa, raken-nuksissa tai muissa yleisissa paikoissa tai tuholaisten elinymparistdissa.

4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen kaytttt, tun nettu siita, etta tuholaiset ovat hydnteisia, punk-keja tai sukkulamatoja. 32 90 5 49