JPH0398593A

JPH0398593A - 抗生物質５’―ｏ―スルファモイルツベルサイジンの製造法およびその用途

Info

Publication number: JPH0398593A
Application number: JP23467389A
Authority: JP
Inventors: Keiichi Imamura; 圭一今村; Michiaki Iwata; 道顕岩田; Yoshiyo Ajito; 味戸　佳代; Takashi Shomura; 庄村　喬; Katsuya Endo; 勝也遠藤; Takao Hirose; 広瀬　隆夫
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1989-09-12
Filing date: 1989-09-12
Publication date: 1991-04-24

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は抗菌活性，除草活性および殺虫・殺ダ二活性を
有する抗生物質５’−０−スルファモイルツベルサイジ
ンの製造法およびこれを有効成分とする殺虫・殺ダニ剤
に関するものである。

〔従来の技術および発明が解決しようとする課題］従来
より微生物が生産する種々の生理活性物質が知られてい
るが、殺虫・殺ダニ活性を有する物質はそれほど多く見
いだされていないため、新規な殺虫・殺ダニ物質の創製
が常に要望されている。

本発明者らは先に抗菌活性および除草活性を有する新規
な抗生物質５゛−○−スルファモイルツベルサイジン（
ＳＦ２４９４物質）をストレプトミセス属に属する微生
物より分離・採取することに或功した（公開特許公報　
昭６３−３１３５９５）。

本発明者らは上記抗生物質５’一〇−スルファモイルツ
ベルサイジンの生物活性についてさらに研究を続けたと
ころ、該抗生物質が優れた殺虫・殺ダニ活性を有するこ
とを見いだした。

このように抗生物質５′−Ｏ−スルファモイルツベルサ
イジンは抗菌活性，除草活性に加え殺虫・殺ダニ活性も
見出され、医薬およびＰ４薬として期待されていること
から、より優れた製法開発のため本物質の新規製造法の
開発が望まれている。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、上述の期待に応えるべく、殺虫・殺ダニ
活性を有する物質の探索を続けていたところ、本発明者
らが先に見いだした抗生物質５”一〇−Ｏ−スルファモ
イルツベルサイジンが優れた殺虫・殺ダニ活性を有する
こと、さらに該抗生物質をより効率よく生産する微生物
を見出し、本発明を完威した。

すなわち、本発明の第一の要旨は、アξコラトプシス属
に属し、下記の式で表わされる抗生物質５′−スルファ
モイルツベルサイジンの生産菌を培養し、得られた培養
物から該抗生物質５′−０−スルファモイルッベルサイ
ジンを採取することを特徴とする抗生物質５′一〇一ス
ルファモイルツベルサイジンの製造法にある。

本発明に使用する微生物は１９８７年に採取した台湾海
峡の海底土より新たに分離した放線菌ＳＦ２６６０株で
ある。ＳＦ２６６０株の菌学的性状は下記の通りである
。

■．形　態基生菌糸は長く伸長．分岐し、分断しやすい。

気菌糸はチロシン寒天，オートミール寒天，グリセロー
ル・アスパラギン寒天等で豊富に着止し、培養の進行と
ともに気菌糸全体が分節し胞子化する。気菌糸はほぼ直
線状で、分岐は比較的少ない。

電子顕微鏡による観察では、胞子は短円筒型で、０．５
〜０．　７　Ｘ０．　８〜１．２μｍの大きさを有し、
表面は平滑状である。胞子のう，運動性胞子，菌核なと
は観察されない。

■．各種培地上の生育状態ＳＦ２６６０株の各種培地上の生育状態は第１表に示す
通りである。色の記載について（　　）内に示す標準は
コンテイナー・コーポレーション・オブ・アメリカ（Ｃ
ｏｎｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ＾ｍ
ｅｒ　＋　ｃａ）　社’Ａの「カラー・ハーモニイ・マ
ニアル（Ｃｏｌｏｒ　Ｈａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ）
　Ｊに記載のものを用いた。

観察は２８゛Ｃで１４〜２１日培養後に行った。

第１表／／／ ■．生理的物質（１）生育温度範囲：イースト・麦芽寒天において１５
〜４５゜Ｃの温度範囲で生育し、２８〜３７゜Ｃで良好に生育する。

（２）ゼラチンの液化：陽性（３）スターチの加水分解：陰性（４）硝酸塩の還性：陰性（５）脱脂乳のペプトン化：陰性脱脂乳の凝固：陰性（６）耐塩性：７％ＮａＣ　ｌ含有培地では僅かに生育
するが、１０％以上では生育しない。

（７）メラニン様色素の生或：陽性（チロシン寒天，ペ
プトン・イースト・鉄寒天） ■．炭素源の利用性（ＩＳＰ　Ｎα９培地使用）（１）
利用する＝Ｄ−グルコース．Ｄ−フラクトース，グリセ
ロール，シュクロース（２）利用しないか利用が疑わしい：Ｄ−マンニトール，Ｌ−ラムノース，Ｄ−キシロース，ラフィノース，ｍｙｏ−イノシトール，Ｌ−アラビノ一ス ■．菌体分析全菌体加水分解物中のジアミノピメリン酸はＤＬ型、糖
としてガラクトースとアラビノースが著量検出された。

くコール酸は検出されず、菌体脂肪酸はｉｓｏ−１６，
　ｉｓｏ−１７＋　ｉｓｏ−１８＋　ａｎｔｅｉｓｏ−
１７の含有率が高く、分岐型であった。リン脂質はＰ■
型であり、メナキノンはＭＫ−９　（Ｈａ）が主威分で
あった。

以上の性状より、ＳＦ２６６０株は放線菌の中でアミコ
ラトプシス属に所属すると考えられる。

本発明者らはＳＦ２６６０株をア旦コラトプシス・エス
ピー・Ｓ　Ｆ　２　６　６　０　（Ａｍｙｃｏｌａｔｏ
ｐｓｉｓ　ｓｐ．ＳＦ２６６０　）と称することにした
。

なお、本菌株は工業技術院微生物工業技術研究所に、微
工研菌寄第１０６３２号（ＦＥＲＭ　　Ｐ１０６３２）
として受託されている。

ＳＦ２６６０株は他の放線菌に見られるように、その性
状が変化しやすい。例えばＳＦ２６６０株またはこの株
に由来する当然変異株（自然発生または誘発性）の形質
接合体または遺伝子組換え体であっても、抗生物質５゛
−０−スルファモイルッペルサイジンを生産するものは
全て本発明に使用出来る。

本発明の方法では、前記の菌を通常の微生物が利用しう
る栄養物を含有する培地で培養する。栄養源としては、
従来放線菌の培養に利用されている公知のものが使用で
きる。例えば炭素源として、グルコース．シュクロース
，水あめ，デキストリン，グリセロール，糖蜜．動・植
物油等を使用しうる。また、窒素源として、大豆粕，小
麦胚芽，コーンスティープリカー，綿実粕，肉エキス，
ベプトン，酵母エキス，硫酸アンモニウム，硝酸ソーダ
，尿素等を使用しうる。その他、必要に応し、ナトリウ
ム．カリウム，カルシウム，マグネシウム，コバルト，
塩素．燐酸，硫酸，その他のイオンを生或することがで
きる無機塩類を添加することは有効である。また、菌の
発育を助け、抗生物質５’−０−Ｏ−スルファモイルツ
ベルサイジンの生産を促進するような有機および無機物
を適当に添加することができる。

培養法としては、好気的条件での培養法、特に深部培養
法が最も適している。培養に適当な温度は２８〜３７゜
Ｃであるが、多くの場合、２８゜Ｃ付近で培養する。抗
生物質５゛−○−スルファモイルツベルサイジンの生産
は培地や培養条件により異なるが、振とう培養，タンク
培養のいずれにおいても通常２〜ＩＯ日の間でその蓄積
が最高に達する。培養中の抗生吻質５’−０−スルファ
モイルッベルサイジンの蓄積量が最高になった時に培養
を停止し、培養液から目的物質を単離精製する。

本発明によって得られる抗生物質５′−スルファモイル
ツベルサイジンの培養液からの採取に当たっては、その
性状を利用した通常の分離手段、例えば溶剤抽出法，イ
オン交換樹脂法．吸着または分配力ラムクロマト法，ゲ
ル濾過法．？，ｔＢ法等を単独でまたは適宜組み合わせ
て抽出精製することができる。例えば培養濾液中の抗生
物質ＳＦ２４９４は合戒吸着剤であるダイヤイオンＨＰ
−２０　（三菱化成社製）等に吸着される。抗生物質５
’−０−Ｏ−スルファモイルツベルサイジンをさらに精
製するには、シリカゲル（ワコーゲルＣ−２００、和光
純薬工業社製等），アルミナ等の吸着剤やセファデック
スＬＨ−２０　（ファルマシア社製）等を用いるクロマ
トグラフィーを行うとよい。また、ストレブトミセス・
エスビー・ＳＦ２４９４株の培養液から抗生物質５’−
０−スルファモイルツベルサイジンを単離する方法（公
開特許公報　昭６３−３１３５９５）も用いることが出
来る。

本発明の第二の要旨は、抗生吻質５”−Ｏ−スルファモ
イルツベルサイジンを有効成分として含有する殺虫・殺
ダニ剤を提供することにある。

抗／ｉ物質５’−０−スルファモイルツベルサイジンま
たはその農薬として許容できる塩を有効威分とする殺虫
・殺ダニ剤は、ハスモンヨトウ，コナガ，ニカメイガ等
の鱗翅目．ヨコバイ類，ウンカ類，アブラムシ類，カメ
ムシ類等の半翅目、ゾウムシ類．ハムシ類等の鞘翅目、
イエバエ，アカイエカ等の双翅目、ゴキブリ類等の網翅
目、その他直翅目などの昆虫およびハダニ類．マダニ類
，ネダニ類等の防除に使用することができる。

抗生物質５゛−Ｏ−スルファモイルツベルサイジンまた
はその農薬として許容できる塩を殺虫・殺ダニ剤の有効
或分として使用する場合は、そのまま用いてもよいが、
通常は適当な固体担体，液体担体，ガス状担体，界面活
性剤，分散剤，その他の製剤用補助剤、餌等と混合して
乳剤，液剤，永和剤，粉剤，粒剤，油剤．エアゾール，
フロワブル剤，毒餌等任意の剤型にして使用することが
できる。

固体担体としては、例えばタルク，ベントナイト，クレ
ー，カオリン．ケイソウ上，ハーミキュライト，ホワイ
トカーボン，炭酸カルシウム等が挙げられ、液体担体と
しては、例えばメタノール，ｎ−ヘキサノール，エチレ
ングリコール、セロソルブ等のアルコール類、アセトン
，メチルエチルケトン．シクロヘキサノン等のケトン類
、ケロシン，灯油等の脂肪族炭化水素類、ベンゼン，ト
ルエン，キシレン，メチルナフタレン等の芳香族炭化水
素類、ジクロ口エタン，トリクロロエチレン四塩化炭素
等のハロゲン化炭化水素類、ジエチルエーテル，ジオキ
サン，テトラヒドロフラン等のエーテル類、酢酸エチル
等のエステル類、アセトニトリル，イソブチロニトリル
等のニトリル類、ジメチルホルムアξド，ジメチルアセ
トアミド等の酸アミド類、大豆油２綿実油等の植物油類
、ジメチルスルホキシド、水等が挙げられる。また、ガ
ス状担体としては、例えばＬＰＧ，フロンガス空気，窒
素，炭酸ガス，ジメチルエーテル等が挙げられる。

乳化，分散，展着等のための界面活性剤，分散剤として
は、例えばアルキル硫酸エステル類，アルキル（アリー
ル）スルホン酸塩類．ポリオキシアルキレンアルキル（
了りール）エーテル類，多価アルコールエステル類，リ
グニンスルホン酸塩等が用いられる。

さらに、製剤の性状を改善するための補助剤としては、
例えばカルボキシメチルセルロース，アラビアガム，ポ
リエチレングリコール，ステアリン酸カルシウム等が用
いられる。

上記の担体．界面活性剤，分散剤及び補助剤は、必要に
応じて各々単独に、あるいは組み合わせて用いられる。

これらの製剤中の有効或分の含有量は、乳剤では通常ｌ
〜５０重量部、粉剤では通常０．３〜２５重量部、永和
剤では通常１〜９０重量部、粒剤では通常０．５〜１０
重量部が適当である。

これらの製剤は、そのままであるいは希釈して用いる。

また、他の殺虫剤，殺ダニ剤．殺菌剤除草剤．植物或長
調節剤，肥料．土壌改良剤等と混合して用いることもで
きる。

〔実施例〕

以下に本発明の実施例を示すが、これらは単なる一例で
あって本発明を限定するものではない。

ここに例示しなかった多くの変法あるいは修飾手段を用
いうることは勿論のことである。

実施例ｌ種培地として、スターチ１．０％．グルコース１．０％
．ファーマメディア０．５％，小麦胚芽０．５％．酵母
エキス０．５％，大豆粕０．５％，塩化ナトリウム０．
２％，硫酸マグネシウム（７水塩）０．１％及び炭酸カ
ルシウム０．２％（殺菌前ｐＨ　７．　０　）のｍ或か
らなる培地を用いた。

また、生産培地として、グルコース５．０％（別殺），
大豆粕１．０％，肉エキス０．５％，硫酸マグネシウム
（７水塩）０．２％，炭酸カルシウム０．３％，硫酸第
一鉄（７水塩）０．０００５％，硫酸亜鉛（７水塩）０
．０００５％．塩化ニッケル（６水塩）０．０００５％
および塩化コバルト０．０００５％（殺菌前ｐＨ無調節
）の組或からなる培地を用いた。

前記の種培地２０ｍｌを分濾した１００／ｄ容三角フラ
スコを１　２　０　’Ｃで１５分間殺菌し、これにアミ
コラトプシス・エスピー・ＳＦ２６６０株（ＦＥＲＭ　
　Ｐ−１０６３２）の斜面寒天培養の２〜３白金耳を接
種し、２８゜Ｃで３日間振とう培養し、第１種培養とし
た。次いで、種培地３２０戚を分注した２Ｌ容三角フラ
スコを１２０゜Ｃで１５分間殺菌し、前記第１種培養２
０ｄを接種し、２８゜Ｃで１日間振とう培養し、これを
第２種培養とした。

予め１２０″Ｃで１５分間殺菌した．３　０　Ｌの生産
培地を含む５０Ｌ容ジャー・ファーメンタ−３基に、前
記の第２種培養をそれぞれ３　２　０　ｍｌずつ接種し
、２８゜Ｃで４日間通気（１５Ｌ／分），攪はん（２０
０ｒｐｍ）培養した。

培養終了後、濾過助剤として珪藻土を加えて濾過し、濾
液６６Ｌを得た。濾液をダイヤイオンＨＰ−２０のカラ
ム（５Ｌ）にかけて活性或分を吸着させた。このカラム
を水洗（５Ｌ）後、２５％メタノール水で活性戒分を溶
出して活性画分（８Ｌ）を得た。得られた活性画分は減
圧下でメタノールを留去後、ｎ−プタノール（４ＬＸ２
）で抽出した。ｎ−ブタノール層を濃縮し、クロロホル
ムメタノール（１０：１）の混合溶媒で充填したシ？カ
ゲルカラム（ワコーゲル　Ｃ−２００、２００ｍｌ）の
上部にのせ、クロロホルムーメタノール（５：１）４０
（１＋＋Ｉｌでカラムを洗浄後、クロロホルムーメタノ
ール（３：１）で展開するクロマトグラフィーを行った
。抗生物質５′一〇一スルファモイルッペルサイジンを
含む画分を濃縮乾固すると、褐色の粉末６００ｍｇが得
られた。得られた粗物質をさらにメタノールを展開溶媒
とするセファデックスＬＨ−２　０　（６　０　０ｍｌ
）のカラムクロマトグラフィーを行って精製すると、純
粋な抗生吻質５’−０−スルファモイルッへルサイジン
が白色粉末（６０ｍｇ）として得られた。なお、活性は
ハチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉ
ｌｉｓ）ＡＴＣＣ６６３３に対する抗菌性で測定した。

得られた白色粉末のスペクトル・データは下記の通りで
ある。

マススペクトル（Ｓｌ−ＭＳ）　　：　ｍ／ｚ　３４６
　　（　Ｍ　＋　Ｈ　）”紫外部吸収スペクトル１喘 λ■Ｘ■（Ｅｌｃｆｆｉ）：　２０９　（８５６）　，　２６９　（４６０）　［
ＭｅＯＩＩ］”Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００　ＭＨｚ
，　ＤｚＯ）δ（ｐｐｍ）　　：　１５８．２　ｓ．　
　１５２．４　ｄ．　　１５０．７　ｓ，　　１２２．
４　ｄ，１０４．２　ｓ．　　１０１．９　ｄ，　　８
７．２　ｄ．　　８２．３　ｄ，７４．２　ｄ，　　７
１．１　　ｄ，　　７０．１　　ｔこれらはストレプト
ミ゛セス・エスピー・ＳＦ２４９４株の培養から単離さ
れた抗生物質５′Ｏ−スルファモイルツベルサイジン（
ＳＦ２４９４物質）のデータと一致することが確認され
た。

実施例２５′一〇−スルファモイルッペルサイジン２０重量部，
ジメチルホルムアミド２０重量部及びキシレン５０１ｆ
ｆｉ部にポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル
１０重量部をカロえ均一に混合、溶解して乳剤を得た。

実施例３５”一〇−スルファモイルッへルサイジン２０重量部，
クレー３０重量部，ケイソウ上４０重量部，リグニンス
ルホン酸カルシウム３重量部及びポリオキシエチレンア
ルキルアリールエーテル７重量部を均一に混合し、粉砕
して永和剤を得た。

実施例４５’−０−スルファモイルッペルサイジン１．５重量部
，クレー６０重量部，タルク３７．５重量部及びステア
リン酸カルシウム１重量部を均一に混合して粉剤を得た
。

実施例５ハスモンヨトウに対する効力試験実施例３に準じて製剤し、界面活性剤（０．０１％）を
含む水で２００ｐｐｍに希釈した薬液にキャベツ葉片（
５ｃｍＸ５ｃｍ）を１０秒間浸漬した。風乾後、直径９
　ｃｍのプラスチックカップに入れ、ハスモンヨトウ３
〜４令幼虫を１０頭放虫し、２５℃の恒温室に放置して
２日後の生死虫数を調査し、死虫率を求めた。結果を第
２表に示す。なお、試験は２区制で行なった。

死虫率（％）＝（死虫数／放虫数）ＸＩＯＯ第２表実施例６ニセナξハダニ雌或虫（有機リン剤抵抗性）に対する効
力試験直径６叩のプラスチックポットに栽培したツルナシイン
ゲン初生葉に、ニセナミハダニ雌成虫１０頭を接種した
。これに接種１日後に実施例３に準じて製剤し、界面活
性剤（０．０１％）を含む水で５０ｐｐｍに希釈した薬
液を噴霧塔で１０ｄ散布した。処理後２７゜Ｃの恒温室
に放置して２日後の生死虫数を調査し、死虫率を求めた
。結果を第３表に示す。なお、試験は２区制で行なった
。

死虫率（％）＝（死虫数／放虫数）ＸＩＯＯ第３表〔発明の効果〕本発明によれば、優れた殺虫効果及び殺ダニ効果を有す
る抗生物質５゜−Ｏ−スルファモイルツベルサイジンの
効率的な製造法ならびに該抗生物質またはその農薬とし
て許容し得る塩を有効戒分とする殺虫・殺ダニ剤を提供
することができる。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）アミコラトプシス属に属し、下記の式で表わされ
る抗生物質５′−Ｏ−スルファモイルツベルサイジンの
生産菌を培養し、得られた培養物から該抗生物質５′−
Ｏ−スルファモイルツベルサイジンを採取することを特
徴とする抗生物質５′−Ｏ−スルファモイルツベルサイ
ジンの製造法。 ▲数式、化学式、表等があります▼
（２）請求項１記載の抗生物質５′−Ｏ−スルファモイ
ルツベルサイジンまたはその農薬として許容し得る塩を
有効成分とする殺虫・殺ダニ剤。