JPS62277387A - マクロライド抗生物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 工発明の詳細な説明 本発明は、新規な抗菌性化合物およびその製法に関する
ものである。更に詳しくは、本発明はストレプトミセス
微生物の醗酵によって得ることのできる新規な抗菌性化
合物に関するものである。

英国特許明細書第２１６６４３６号および欧州特許明細
書第１７０００６号は、ストレプトミセス微生物の醗酵
生産物から単離できる抗生物質５５４１と称する級の物
質の製造を記載している。本発明者等は、更に、ストレ
プトミセス属の微生物の培養物からの単離によって製造
し得るかまたは抗生物質５５４１化合物の化学的変性に
よって製造し得る抗菌活性を有する化合物を見出した。

このように、本発明の一見地によれば、式（Ｉ）の化合
物が提供される。

本発明の化合物の特に有利な特徴は、結晶性の固体を形
成するその能力でありそして本発明は結晶性の固体の式
（Ｉ）の化合物を包含すべく企図するものである。

結晶化する化合物の能力は、化合物の製造におけるＶ＃
製工程において使用されそしてこの性質を利用すること
によって式（Ｉ）の化合物は、９０％以上の純度特に９
５％以上の純度を有する結晶性固体として得られる。

非常に高い純度を有する結晶性固体を形成する能力のた
めに、式（Ｉ）の化合物は、特に抗菌活性を有する他の
化合物の製造におげろ中間体として有用である。

式（＋）の化合物は、それ自体、また、抗菌活性例えば
線虫に対する駆虫活性そして特に杭内部寄生生物および
抗外部寄生生物活性を有している。

式（Ｉ）の化合物の抗菌活性は、例えば自由生活線虫例
えばカエノルハビジチスエレガンス（Ｃａｓｎｏｒｈａ
ｂｉｄｉｔｉｓ　６１ｅｇａｎｓ）に対する試験管内活
性によって証明することができる。

外部寄生生物および内部寄生生物は、人および種々な動
物に感染しそして特に豚、羊、牛、やぎおよび家禽（例
えばにわとりおよび七面鳥）のような飼養揚動物、馬、
うさぎ、狩猟鳥、かごに入れて飼う鳥および犬、猫、モ
ルモット、ジャービルおよびハムスターのような家内動
物に広（行きわたっている。家畜類の寄生虫感染、貧血
への誘導栄養失調および体重損失は、世界を通じて経済
的損失の大なる原因である。

このような動物および（または）人に感染する内部寄生
生物の属の例は、 アンシロストマ（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｔａａ）　、アス
カリジア（ＡＩ３０ａｒｉ（Ｉ１１Ｌ）、アスカリス（
Ａｓｃａｒｉ日）、アスピクラリス（Ａｓｐｉｃｕｌａ
ｒｉａ）、プルギア（Ｂｒｕｇｉａ　）、ブノストマム
（Ｂｕｎｏｓｔｏｍｕｍ）、カピラリア（Ｃａｐｉ−１
１ａｒｉａ）、チャペルチア（Ｃｈａ’ｂｅｒｔｉａ　
）、クーはリア（Ｃｏｏｐｅｒｔａ　）、ジクチオカク
ルス（Ｄｉｃｔｙｏｃａｕふ’ｌｕ日）、ジロフイラリ
ア（Ｄｉｒｏｆｉｌａｒｌａ）、ドラクンクルス（Ｄｒ
ａｃｕｎｃｕｌｕｓ　）、エンテロビウス（Ｅｈｔｅｒ
ｏ−ｂｉｕｓ　）、ハエモンチュス（Ｈａｅｍｏｎｃｈ
ｕｓ　）　、ヘテラキス（Ｈｅｔｅｒａｋｉｓ　）、ロ
ア（ｂｏａ）、ネカトール（Ｎｅｃａｔｏｒ）、ネマト
ジルス（Ｎｅｍａｔｏｄｉｒｕｓ　）、ネマトスピロイ
デス（Ｎｅｍａｔｏｓｐｉｒｏｌｄｅｓ）（Ｈｒｌｉｇ
ｏｍｏｒｏｉｄｅｓ　）、ニポストロン／ギ、ルス（Ｎ
ｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ　）　、オエソファゴス
トマム（Ｏｅｓｏｐｈａｇｏｓｔｏｍｕｍ）　、オンコ
七ルカ（Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ）、オステルタジア（ｏ
ｓｔｅｒｔａｇｉａ）、オキシラリス（Ｏｘｙｕｒｉｓ
）、バラスカリス（Ｐａｒａｓ−ｃａｒｉｓ）、ストロ
ンギルス（Ｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ　）、ストロンギルス
デス（Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ　）、シフアジア（
＋９７ｐｈａｃｉａ）、トキサスカリス（Ｔｏｘａｓｃ
ａｒｉｓ）、トキソカラ（Ｔｏｘｏｃａｒａ）、トリコ
ネマ（Ｔｒｉｃｈｏｎｅｍａ）、トリコストロンギルス
（Ｔｒｉｃｈｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ　）、トリチネラ
（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ）、トリチュリス（Ｔｒｉｃ
ｈｕ−ｒ１８）、トリオドントホルス（Ｔｒｉｏｄｏｎ
ｔｏｐｈｏｒｕｓ）、ランシナリア（ｔ７ｎｃｉｎａｒ
ｉａ）およびウオチェレリア（Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ　
）である。

動物および（または）人に感染する外部寄生生物の例は
、かみつく昆虫、あおばえ、のみ、しらみ、だに、吸い
着く昆虫、だにおよび他の双翅類害虫のような節足外部
寄生生物である。

動物および（または）人に感染するこのような外部寄生
生物の属の例は、アンビロマ（４ｍｂｙ−１０ｍｍ＆）
、ブーフィルス（Ｂｏｏｐｈｉｌｕｓ）　、コリオプテ
ス（Ｃｈｏｒｉｏｐｔｅｓ）、クリホアー（Ｃｕｌｌｉ
ｐｈｏｒｅ　）、デモデツクス（Ｄｅｍｏｄｅｘ）、ダ
マリニア（Ｄａｍａｌｉｎｉａ　）、デルマドビア（Ｄ
ｅｒｍａｔｏｂｉａ）、ガストロフィルス（Ｇａｓｔｒ
ｏｐｈｉｌｕｓ　）、ハエマドビア（Ｈａｅｍａｔｏｂ
ｉａ）、ハエマトピヌス（Ｈａｅｍａｔｏｐｉｎｕｓ　
）、ハエモフイサリス（Ｈａｅｍｏｐｈｙｓａｌｉｓ　
）、ヒアロマ（Ｈｙａｌｏｍａ　）、ヒボデルマ（Ｈｙ
ｐｏｄｅ　ｒｍａ　）、イキソデス（Ｉｘｏｄｅｓ）、
リノグナサス（Ｌｉｎｏｇｎａｔｈｕｓ　）　、ルシリ
ア（Ｌｕｃｉｌｉａ）、メロファグス（Ｍｅｌｏｐｈａ
ｇｕｓ　）、オニストラス（Ｏｅｓ−ｔｒｕｓ）、オト
ビウス（Ｏｔｏｂｉｎｓ　）　、オトデクテス（ｏｔｏ
−ｄｅｃｔｅａ）、プソレルガテス（Ｐａｏｒｅｒｇａ
ｔｅｓ　）、プソロプテス（Ｐｓｏｒｏｐｔｅｓ）、リ
ピセファルス（Ｒｈｉｐｉ−ｃｅｐｈａｌｕｓ）、サル
コプテス（Ｓａｒｃｏｐｔｅｓ　）、ストモキシス（Ｓ
ｔｏｍｏｘｙｓ　）およびタバナス（Ｔａｂａｎｕｓ　
）である。

更に、式（Ｉ）の化合物は、また、農業、園芸、林業、
公衆衛生および貯蔵製品における昆虫、だにおよび線虫
を撲滅するのにも使用される。

土壌および穀類（例えば小麦、大麦、とうもろこしおよ
び米）、野菜（例えば大豆）、果実（例えばりんご、ぶ
どうおよび柑橘類）ならびに根作物（例えばてんさい、
馬鈴薯）を包含する植物性作物の害虫を処理することが
できる。このような害虫の具体的な例は、アフィスフェ
バエ（Ａｐｈｉｓ　ｆａｂａｅ）、オーラコルサムサー
キュムクレクシウム（Ａｕｌａｃｏｒｔｈｕｍ　ｃｉｒ
ｃｕｍｆｌｅｘｕｍ）、ミヅスイルシカエ（Ｍｙｚｕｓ
　ｐｅｒｓｉｃａｅ）、ネホテテック３シンクチセプス
（Ｎｅｐｈｏｔｅｔｔｉｘ　ｃｉｎｃｔｉｃｅｐｓ）、
ニルパルパタルゲンス（Ｎｉｌｐａｒｖａｔａ　１−ｕ
ｇｅｎｓ）１，４ノニチユスウルミ（Ｐａｎｏｎｙｃｈ
ｕｓ　ｕｌｍｉ）、ホロドンヒュムリ（Ｐｈｏｒｏｄｏ
ｎ　ｈｕｍｕｌｉ）、フイロコプトルタオレイボラ（Ｐ
ｈ７１１ｏｃｏｐｔｒｕｔａ　ｏｌｅｉｖｏｒａ）、テ
トラニチュスウルチヵエ（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ　ｕ
ｒｔｉｃａｓ）およびトリアロイロイデス（Ｔｒｉａｌ
ｅｕｒｏｉｄｅｓ）属の種のような果実だにおよびあぶ
ら虫、アフエレンコイデス（Ａｐｈｅｌｅｎｃｏｉｄｅ
ｓ　）　、プロボデ、Ｆ　（Ｇ１０−ｂｏｄｅｒａ）、
ヘテロデラ（ＨｓｔｅｒＯｄｅｒａ）、メロイドギネ（
Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ）およびバナグレル、ｘ、　（
Ｐａｎａ−ｇｒｅｌｌｕｓ　）属の種のような線中、ヘ
リオデス（’Ｈｅ１ｉ−ｏｔｈｉ８）ｂプルテラ（Ｐｌ
ｕｔｅｌ、１ａ　）およびスボドプテラ（Ｓｐｏｄｏｐ
ｔｅｒａ　）のような鱗翅類、アントツムスゲランジス
（Ａｎｔｈｏｎｏｍｕｓ　ｇｒａｎｄｉｓ）およびシト
フィルスグラナリウス（Ｓｉｔｏｐｈｉｌｕｓ　ｇｒａ
ｎａｒｉｕｓ）のような穀類ぞう虫、トリポリウムカス
タニウム（Ｔｒｉｂｏｌｌｕｍ　ｃａｓｔａｎｅｕｍ）
のような小麦粉につく小甲虫類、ムスカドメスチカ（Ｍ
ｕ　ｓ　ｃａａｏｍｅｓｔｉｃａ）のようなはえ、はり
あり、潜葉虫、ピアープシラ（Ｐｅａｒ　ｐｓｙｌｌａ
）、トリプスタバシ（Ｔｈｒｉｐｓ　ｔａ−ｂａｃｉ）
、プラテラゲルマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ　ｇｅｒｍａ
ｎｉｃ）およびベリプラネタアメリカナ（Ｐｅｒｉｐｌ
ａｎｅｔａａｍｅｒｉｃａｎａ）のようなあぶら虫およ
びエデスエジプチ（Ａｅａｅｓ　ａｅｇｙｐｔｉ）のよ
うな蚊である。

それ故に、本発明によれば、抗菌剤として使用すること
のできる前述した式（＋）の化合物が提供される。特に
、化合物は、内部寄生生物、外部寄生生物および（また
は）かびに感染した動物および人の治療におよび農業、
園芸または林業において昆虫、だにおよび線虫害虫を撲
滅するための殺虫剤として使用することができる。

化合物は、また、一般に、他の情況下例えば貯蔵、建物
または他の公衆場所または害虫の場所において害虫を撲
滅または抑制するための殺虫剤として使用することがで
きる。一般に、化合物は、宿主（動物または人または植
物または植生物）または害虫それ自体またはその場所に
適用することができる。

本発明の化合物は、一般に生理学的に活性な投与５：に
おいて非毒性である。

本発明の化合物：喧、家畜または人の医薬に使用するた
めに何れかのを利な方法で投与できるよ５に処方するこ
とかできる。そしてそれ故に、本発明は、その範囲内に
、家畜または人の医薬に使用するのに適した本発明の化
合物を含有する薬学的組成物を包含する。このような組
成物は、１種またはそれ以上の担体または賦形剤の助け
によって在来の方法で与えることができる。

本発明の組成物は、特に非経口的（乳腺内投与を包含す
る）、経口的、直腸的、局所的、移植的、眼的、鼻的ま
たは性尿器的使用に対して処方された形態の組成物を包
含する。

式（Ｉ）の化合物は、英国特許第２１６６４３６号に記
載された一般的方法によって家畜才たは人の医薬に使用
するため処方することができる。

家畜および人の医薬に使用される本発明の化合物の全体
の１日当りの使用量は、体重１にｇ当り１−２０００＃
好適には５０−１０００　ｐｇ／！でありそしてこれら
は分割した投与量で例えば１日肖り１〜４回与えられる
。

本発明の化合物は、園芸または農業に使用するために何
れかの有利な方法で処方し得るそしてそれ故に本発明は
、その範囲内に、園芸または農業−使用するのに適した
本発明の化合物を含有する組成物を包含する。このよう
な処方は、乾燥または液状型のもの例えばダストペース
または濃厚物を包含するダス）　（ｄｕｓｔ）、可溶性
または湿潤性粉末を包含する粉末、微小粒剤および分散
性粒剤を包含する粒剤、ベレット、流動物、稀乳濁液ま
たは乳化性濃厚物のような乳濁液、根浸液および種子浸
液のような浸液、種子粉衣、種子はレット、油製厚物、
油剤、注入剤例えば茎注入剤、スプレー、くん煙および
ミストを包含する。

一般に、このような処方は、適当な担体または稀釈剤と
一緒に化合物を含有する。このような担体および稀釈剤
は英国特許明細書第２１６６４３６号に記載されている
。

処方において、活性物質の濃度は、一般に００１〜９９
重址％そしてより好適には（Ｉ０ｔ〜４０重量俤である
。

商業的製品は、一般に、例えば、使用する際にα００１
〜α０００１　％の適当な濃度にうすめられる濃厚な組
成物として与えられる。

化合物が適用される割合は、害虫の型および出没の程度
を包含する多数のファクターによってきまってくる。し
かしながら、一般に、好適には、だにおよび昆虫の抑制
に対しては１０Ｆ／ｈ〜１１Ｃｐ／ｈそして線虫の抑制
に対しては５１／ｈ〜１０〜／ｈである１０１１／ｈ〜
１０　Ｋｙ／　ｈの適用割合が適当している。

家畜の医薬としての使用または園芸および農業における
使用に際しては、全体の醗酵液を活性化合物源として使
用することが望ましい。また、乾燥した醗酵液（菌糸体
を含有する）を使用することまたは醗酵液から分離しそ
して低温殺菌またはより好適にはスプレー、凍結または
ローラー乾燥によって乾燥した菌糸体を使用することが
適当している。もし必要な場合は、醗酵液または菌糸を
前述したような在来の不活性担体、賦形剤または稀釈剤
を含有する組成物に処方することができる。

本発明の抗菌性化合物は、他の活性成分と一緒に投与ま
たは使用することかできる。

特に、本発明の抗菌性化合物は、抗生物質５５４１化合
物または他の抗菌性化合物と一緒に使用することができ
る。これは、例えば本発明の化合物の前もっての分離な
しに全体の醗酵液を使用する場合または前もってのまた
は次の分離なしに粗醗酵生成物を本発明の方法によって
反応させる場合に起る。これは、例えば低生産費用を維
持することが重要である場合の化合物の？ｊＬ業的使用
において好適である。

本発明の化合物は、以下に説明する方法によって製造す
ることができる。

このように、本発明の他の見地によれば、式（Ｉ）の化
合物を生産することができるストレプトミセス属の微生
物を培養しそしてもし必要ならば醗酵物から該化合物を
単離する工程からなる式（Ｉ）の化合物の製法が提供さ
れる。

本発明の化合物を生産することのできる微生物は、小規
模の試験を使用しそして高性能液体クロマトグラフィー
によって微生物の醗酵から得られる試験試料を分析する
ことによって容易に同定することができる。

一般に、本発明の方法に使用される微生物は、式（Ｉ）
の化合物を生産することができるストレプトミセス属の
菌株であってそして例えばストレフトミセス・サーモア
ルチアエンシス（Ｓｔｒｅ−ｐｔｏｍｙｃｏｓ℃ｈｅｒ
ｎ＋ｏａｒｃｈａｅｎｓｉｓ）またはストレプトミセス
・シアネオグリセウス・ノンシアノゲヌス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ　ｃｙａｎｅｏｇｒｉｓｅｕｓ　ｎｏｎ
ｃｙａｎｏｇｅｎｕｓ）菌種の微生物である。適当な菌
株の特定の例は、ストレフトミセス・サーモアルチアエ
ンシスＮＣＩＢ　１２０１５　（Ｉ９８４年９月１０日
寄託〕、ストレプトミセス・サーモアルチアエンシスＮ
ＣＩＢ１２１１１、ＮＣＩＢ１２１１２、ＮＣＩＢ１２
１１３およびＮＣＩＢ１２１１Ｃすべて１９８５年６月
２６日寄託〕、ストレプトミセス・シアネオグリセウス
・ノンシアノゲヌスＮＲＲＬ　１５７７３　（Ｉ９８４
年５月３日寄託〕およびすべてのこれらの菌株の変異体
を包含する。

前述した菌株の変異体は、自然に発生するまたは１９７
３年のウィーンにおける国際原子エネルギー専門家会議
のシンポジウム議事録”Ｒａｄｉ−ａｔｉｏｎ　ａｎｄ
　Ｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅｓ　ｆｏｒ工ｎｄｕｓｔｒ
ｉａ１．　Ｍｉｃｒｏｏｒ−ｇａｎｉｓｍｓ″２４１頁
のＨ０工、アドラーにより微生物の発育技術に述べられ
ている方法を包含する種種な方法によって得られる。こ
のような方法はイオン放射、化学的方法例えばＮ−メチ
ル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロングアニジン（ＮＴＧ）
による処理、加熱、遺伝技術例えば組換え、形質導入、
形質転換、溶原化および溶原変換および自然変異体の選
択技術を包含する。

本発明の方法に使用するのに特に適した変異体は、英国
特許第２１６６４３６号に記載された５β−ヒドロキシ
または５β−メトキシ抗生物質５５４１化合物の実質的
な量を生産しない変異体である。抗生物質５５４１化合
物を形成する能力を損なう変異体は本発明の他の見地を
形成する。

英国特許第２１６６４３６号に記載された抗生物質５５
４１化合物を形成する能力は損なわれるけれども式（＋
）の化合物を生産することができる変異体は、小規模の
試験を使用しそして高性能液体クロマドグフィーによっ
て微生物の醗酵から得られる試験試料を分析することに
よって容易に同定することができる。

本発明の他の見地によれば、式（Ｉ）の化合物の合成に
関与する抗生物質８５４１化合物を形成する能力が損な
われた変異体の遺伝物質が提供される。このような物質
は、以下に記載するような在来の遺伝手術を使用して得
ることができる。

抗生物質５５４１化合物を形成する能力は損なわれるが
式（＋）の化合物を生産することのできる特に好適な菌
株は、ストレプトミセス・サーモアルチアエンシスＮＣ
ＩＢ１２３３４〔英国のアバ−ゾーンのトリ・リサーチ
・ステーションのナショナル・コレクション・オブ・イ
ンダストリアル・アンド・マリン・バクテリアの永久培
養菌収集所に１９８６年９月１５日に寄託〕およびその
変異体である。ストレプトミセス・サーモアルチアエン
シスＮＣＩＢ１２３３４およびその変異体は、本発明の
他の見地を形成する。ストレプトミセス・サーモアルチ
アエンシスＮＣｌＢ１２３３４は、英国特許明細書第２
１６６４３６号でストレプトミセス・サーモアルチアエ
ンシスＮＣＩＢ１２０１５について記載した特性と実質
的に同様な本質的な特性を有している。しかしながらＮ
（ＪＢ１２３３４は、明細書に記載された醗酵条件下に
おいて英国特許第２１６６４３６号に記載された抗生物
質５５４１化合物を殆んど生産しないという点でＮＣＩ
Ｂ１２０１５と区別することができる。ストレプトミセ
ス・サーモアルチアエンシスＮＣＩＢ１２３３４の変異
体は、自然的に発生するかまたは上述した方法によって
得ることができる。

更に本発明の他の見地によれば、式（Ｉ）の化合物の合
成に関与するストレプトミセス・サーモアルチアエンシ
ス・ＮＣＩＢ　１２３３４およびその変異体の遺伝物質
が提供される。このような物質は、ワシントンＤＣにお
ける１９８５年の米国微生物学学会のり、ＩＪ−ブ編集
の微生物学１９８５の１ストレプトミセスｓｐｐ、の抗
生物質生合成の遺伝子クローニング：・・イブリド抗生
物質の製造（４０９−４１３頁）にＤＡホップウッドに
より説明されている方法を包含する在来の遺伝手術技術
を使用して得ることができる。このような技術は、アク
チノルホジン〔マルパルチダＬ、およびホップウッドＤ
、Ａ、　：　Ｎａｔｕｒｅ　３０９巻４６２−４６４頁
（Ｉ９８４’４”））、エリスロマイシン〔スタンザク
Ｒ０等：Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　４巻２２９−２
３２頁（Ｉ９８６年）〕およびアクレモニウム・クリソ
ゲヌム（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ
　）のペニシリンおよびセファロスポリン生産に関する
重要な酵素に対する抗生物質生合成遺伝子クローニング
について前述した方法と同様な方法で使用される。その
ようにして得られたストレプトミセス・サーモアルチア
エンシス遺伝物質は１例えば菌株改良に対して、試験管
内使用のための生合成酵素の生産に対してまたはこのよ
うな物質をストレプトミセス・サーモアルチアエンシス
以外の微生物に導入することによる新規な抗生物質の形
成に対して使用することができる。

適当なストレプトミ・セス微生物の醗酵による本発明の
化合物の生産は、在来の手段によって例えばストレプト
ミセス微生物を炭素、窒素および鉱物質塩の同化性源の
存在下で培養することによって行うことができる。

炭素窒素および鉱物質の同化性源は、単一または複合栄
養によって与えることができる。炭素源は、一般に、グ
ルコース、マルトース、殿粉、グリセロール、糖密、デ
キストリン、ラクトース、シュクローズ、フラクトース
、カルボン酸、アミノ酸、グリセライド、アルコール、
アルカンおよび植物油を包含する。炭素源は、一般に、
醗酵培地のＣＬ５〜１０重量係からなる。

窒素源は、一般に、大豆粉、とうもろこし浸出液、ジス
チラース・ソリューブルス、酵母エキス、綿実粉、はプ
トン、粉砕堅果粉、麦芽エキス、糖密、カゼイン、アミ
ノ酸混合物、アンモニア（ガスまたは溶液）、アンモニ
ウム塩または硝酸塩を包含する。尿素および他のアミド
も使用することができる。窒素源は、一般に、醗酵培地
の０１〜１０重量％からなる。

培養培地に混合することができる栄養鉱物質塩は、一般
に、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、鉄、マグネ
シウム、亜鉛、ニッケル、コバルト、マンガン、バナジ
ウム、クロム、カルシウム、銅、七すブデン、硼素、ホ
スフェト、サルフェート、クロライドおよびカーボネー
トイオンを生ずることのできる塩を包含する。

過剰の泡を調節するために泡止め剤を存在させそして必
要に応じてときどき加えることができる。

ストレプトミセス微生物の培養は、一般に、２０−５０
℃好適には２５〜４０℃特に３４℃付近で行われそして
好適には例えば振盪または攪拌によって通気および攪拌
とともに行われる。培地は、はじめに胞子形成した微生
物の懸濁液の小量をもって接種する。しかしながら、成
長遅滞を避けるために、胞子形態の微生物を小量の培養
培地に接種することによって微生物の栄養接種体を製造
しそして得られた栄養接種体を醗酵培地またはより好適
には主醗酵培地に移す前に成長を行う１またはそれ以上
の覆子段階に移すことができる。醗酵は、一般に、５．
５〜ａ５好適には５．５〜ｚ５のｐＨ範囲で実施する。

ｐＨを望ましい範囲に保持するために醗酵培地に酸を加
えることが必要であり得る。添加することのできる適当
な酸は、硫酸のような水性酸または吉草酸またはイソ酪
酸のような脂肪酸またはこれらの混合物を包含する。

醗酵は、２−１０日例えば約５日実施することができる
。

全醗酵液から本発明の化合物を分離することが望ましい
場合は、これは、在来の単離および分離技術によって実
施することができる。本発明の化合物は主として細胞の
菌糸体に含有されているが、また醗酵液中に見出されそ
して単離技術は、また、清澄前または清澄後に醗酵液に
対して適用することができる。理解されるように、単離
技術の選定は、広く変化することができる。

本発明の化合物は、種々な分別技術例えば吸着−溶離、
沈殿、分別結晶化、溶剤抽出および液体−液体分配（こ
れらは種々の方法で組み合せ得る）によって単離または
分離することができる。

溶剤抽出、互に不混和性であるかまたは単に部分的に混
和性である２柵の溶剤間の分配およびクロマトグラフィ
ーは、本発明の化合物の単離オヨび分離に特に適してい
ることが判った。

醗酵後、菌糸体を、場合によっては凝集剤でまたは醗酵
培地の声がｐＨ６以下になるまで酸で処理した後または
加熱した後または好適には加熱および酸添加後に、在来
の技術例えば濾過または遠心分離を使用して収穫する。

その後、例えば、本発明の化合物を菌糸体から適当な有
機溶剤例えばケトン例えばアセトン、メチルエチルケト
ンまたはメチルイソブチルケトン、炭化水素例えばヘキ
サン、ハロゲン化炭化水素例えばクロロホルム、四塩化
炭素または塩化メチレン、アルコール例えばメタノール
またはプロパン−２−オール、ジオール例工ばプロパン
−１，２−ジオールまたはブタン−１，３−ジオール、
エステル例えば酢酸メチルまたは酢酸エチルまたはこれ
らの混合物で抽出することができる。理解されるように
、菌糸体が有意な量の水を含有する場合は、メタノール
またはアセトンのような水混和性溶剤を使用することが
好適である。

一般に、最適の採取を達成するために１回以上の菌糸体
の抽出が必要である。本発Ｑｌの化合物は、溶剤の除去
例えば蒸発によってまたは沈殿によって例えば溶剤抽出
液を水に流下することによって粗製物質として溶剤抽出
液から採取することかできる。このようにする代りに、
例えば蒸発によって溶剤容量を減少した後の初期の溶剤
抽出液を、不混和性であるかまたは単に部分的に混和性
である第２の溶剤で抽出することができる。もしも菌糸
体の初期の抽出をメタノールまたはプロパン−１，２−
ジオールのような水混和性溶剤で行った場合は、第２の
溶剤は、好適には、ヘキサン、クロロホルム、ジクロロ
メタン、酢酸エチルまたは石油エーテルまたはこれらの
混合物のような水不混和性溶剤である。

十分な量の水を初期の抽出液に加えて第２の溶剤との不
混和性を確保しそして相と相の間の抗菌性化合物の分配
を調節する。水混和性および水不混和性溶剤を適当に選
択することによっておよび水混和性溶剤の水含量を巧み
に扱うことによって、水混和性溶剤から水不混和性溶剤
への抗菌性化合物の多量の移動およびその逆が可能であ
る。このようにする代りに、初期溶剤抽出液を工ＲＡ　
６８のようなイオン交換樹脂またはＸＡＤ−１１８０（
０−ムーアンドＩｌハース）のような非官能樹脂の床に
通して抽出液を精製することができる。

抗菌性化合物は、最終溶剤の性質によって。

溶剤の蒸発により、沈殿によりまたは適当な固体支持体
上の吸着によって最終溶剤＠液から採取することができ
る。

本発明の化合物の精製および（または）分離は、更に、
例えばシリカのような適当な支持体、非官能巨大網状吸
着樹脂例えばアンバーライトＸＡＤ　−２，ＸＡＤ　−
４、ＸＡＤ　−１６またはＸＡＤ−１１８０樹脂（ロー
ム・アンド・ハース）またはカスチル５１１２（モンテ
ジンン）のような交叉結合したスチレンジビニルベンゼ
ン重合体樹脂、置換スチレン−ジビニルベンゼン重合体
例えばダイアイオン５Ｐ２０７（三菱）のようなハロゲ
ン化（例工はＡ　２化）スチレン−ジビニルベンセン重
合体、セファデックスＬＨ２０（７アルモシアＵＫ社）
のような有機溶剤−相容性交叉結合したデキストランま
たは炭化水素結シリカ例えばＣ１８−結合シリカのよう
な逆相支持体上のクロマトグラフィー（高性能液体クロ
マトグラフィーを包含する）のような在来の技術によっ
て行うことができる。支持体は、床またはより好適には
カラムに充填した床の形態にある。

一般に、適当な溶剤例えばジクロロメタン、テトラヒド
ロフラン、石油エーテル、アセトニトリル、クロロホル
ム、酢酸エチルまたＩｄ　ソｔｔらの混合物中の式（Ｉ
）の化合物の溶液を、もし必要ならば、はじめに溶剤の
容量を誠少しだ後、クロマトグラフィーカラム例えばシ
リカまたはセファデックスカラム上におく。カラムを任
意的に適当な極性の溶剤例えばメタノールのようなアル
コール、炭化水素例えばヘキサンまたは石油エーテル、
酢酸エチルのようなエステル、アセトンのようなケトン
、ジエチルエーテルのようなエーテル、アセトニトリル
、またはジクロロメタンまたはクロロホルムのよ５ｎハ
ロゲン化炭化水素で洗浄しそして次に溶離する。このよ
うな溶剤の組み合せまたは極性溶剤例えば水との組み合
せもまた使用することができる。

抽出／単離操作中の本発明の化合物の存在は、高性能液
体クロマトグラフィーまたはＯＶスペクトロスコピーの
ような在来の技術によってまたは後述するような化合物
の性質を利用することによって監視する。

例えばクロマトグラフィーによる精製後に、本発明の化
合物が有機溶剤中の溶液の形態で得られた場合は、箔剤
は在来の操作例えば蒸発によって除去して化合物を固体
または結晶性形態で得ることができる。

前述した操作の適当な組み合せによって、本発明の化合
物を固体として単離することができる。理解されるよう
に、前記精製工程を実施する順序および使用し得る精製
工程の選択は広く変化することができる。

本発明による他の方法においては、式（Ｉ）の化合物は
、式（Ｉｆ） ？Ｈ Ｈ の化合物の酸化によって製造することかできる。

反応は、アリル性第２級ヒドロキシル基をオキソ基に変
換するのに役立つ酸化剤を使用して行いそれによって式
（Ｉ）の化合物を得ることができる。

適当な酸化剤は、例えば二酸化マンガンのような遷移金
属の酸化物および微細な金属例えば白金のような適当な
触媒の存在下における大気酸素を包含する。

酸化剤は、一般に、化学量論的な量以上において使用さ
れる。

反応は、有利には、ケトン例えばアセトン、エーテル例
えばジエチルエーテル、ジオキサンまたはテトラヒドロ
フラン、炭化水素例えばヘキサン、ハロゲン化炭化水素
例えばクロロホルムまたは塩化メチレンまたはエステル
例えば酢酸エチルから選択できる適当な溶剤中で行うこ
とができろ。単独または水とのこのような溶剤の組み合
せもまた使用することかできる。

反応は、−５０℃〜＋５０℃好適にはＯ℃〜３０℃の温
度で実施することができる。

式（ＩＩ）の中間体化合物は、英国特許第２１６６４３
６号に記載されたようにして製造することができる。

溶液または粗製固体として醗酵によってまたは前述した
操作により式（ＩＩ）の化合物から製造された式（Ｉ）
の化合物は、在来の方法を使用して結晶性形態で得るこ
とができる。このように、例えば、結晶化は、場合によ
っては水と組み合せた適当な溶剤（例えばメタノールま
たはプロパン−２−オールのようなアルコール、アセト
ニトリル、ヘキサンのような炭化水素、ジエチルエーテ
ル、インプロピルエーテルまたは石油エーテルのような
エーテル）中で放置することによって化合物の溶液から
達成することができる。

以下の例は、本発明を説明するものである。

温度はすべて℃でありそしてＬはｔを示す。

ファクターＡは式（ＩＩ）の化合物である。ファクター
Ａは、英国特許明細書第２１６６４５６号に記載したよ
うにして製造することができる。

例　　１ エーテル（ｓｏｂ）中のファクターＡ、（２５０■）を
、活性二酸化マンガン（Ｉ，ｏＦ）と−緒に２．７５時
間攪拌する。混合物を珪藻土床を通して濾過しそしてν
液を蒸発Ｉ−てホーム状物質として本発明の化合物（２
４０＋１９）を得る。一部を石油ニーチルから結晶化せ
しめて微小結晶を得る。、　（、ｈｏａ）２４ＣＬ５ｎ
ｔｏ（Ｂ　　４９５）。δ（ＣＤＣＬ５　）値：　６．
５　Ｂ（ｓ、１Ｈ）、２．６０　（ｍ、　　ＩＨ）、ｔ
８９　（ｓ、　３Ｈ）、１．６２　（ｓ、　３Ｈ）、１
．５３（ｓ、　３Ｈ）、１．０５　（ａ６．３Ｈ）、１
．００　（ｄ６．３Ｈ）、ｔ１９６　（ｄ６．　ＳＲ）
およびα８１１　（ａ６．３Ｅ（）。ｍ／ｚは６１０．
５９″２．５７４．４４１．２６５．２４７．２３７．
２１９および１５１を包含する。

例　　２ ストレプトミセス・サーモアルチアエンシスＮＣＩＢ　
１２０１５を、次の成分からつくられた寒天斜面培養基
上に接種しそして２８℃で１０日培養する。

ｇＬ″′１ 酵母エキス（オキソイドＬ２１）　　　　　　α５麦芽
エキス（オキソイドＬ３９）　　　　　　３０．０菌学
的はケトン（オキソイドＬ４（］）　　　　　　５．０
寒天＆３　（オキソイドＩ、１３）　　　　　　　１５
．０蒸留水　　　　　　　　　　　　　１ｔにする量ｐ
Ｈ〜５．４ 次に成熟した斜面培養基を１０チグリセロール溶液で覆
いそして滅菌器具でこすって胞子および菌糸体をばらば
らにする。得られた胞子懸濁液の一部０．４−を滅菌し
たポリプロピレンストロ−に移し、次にそれを加齢密封
しそして使用するまで液状窒素蒸気中で貯蔵する。

次の成分からつくった種子培地５０ｍＡを含有する２個
の２５０−の三角フラスコを、ストロ−からとった胞子
懸濁液Ｕ１．２ゴで接種するＬ−１ Ｄ−グルコース　　　　　　１５．０ グリセロール　　　　　　１５．０ 大豆ペプトン　　　　　　１５．０ ＮａＣ２五〇 ＣａＣＯ３１，Ｑ 蒸留水　　　　　　　　　　１ｔにする量〔培地の未調
節声は６．７である。これをオートクレーブ処理前に水
性水酸化ナトリウムでｐＨ１Ｑに調節する。オートクレ
ーブ処理後の培地の−は１３である〕 フラスコを、５（］＋ｗの直径の軌道運動”Ｃ”２５０
　ｒｐｍで回転する振盪器上で２８°で２日間培養する
。

両フラスコの内容物を使用してポリプロピレングリコー
ル２００（α０６　ｖ／ｖチ）を補給した同じ種子培地
４０１を含有する７０１の醗酵容器に接種する。必要な
場合はポリプロピレングリコール２０００を醗酵を通じ
て加えて泡立を抑制する。醗酵は、３０チ飽和より大な
る程度の溶解酸素を維持するのに十分な攪拌および通気
を使用して２８″で実施する。２４時間の醗酵後に、醗
酵液９ｔを次の成分からつ（つた培地４５０ｔを含有す
る７００ｔの醗酵器に移す。

Ｌ−１ Ｄ−グルコース　　　　　　　　２．８麦芽エキス（ｎ
Ｄ３０ｍ）　　　　　２７．８アルカソイ５０　　　　
　　１工９ 糖　　密　　　　　　　　　　　　　　　　　１．７ｘ
２ａｐｏ４　　　　　　（Ｌ　１４ ＣａＣＯ５１，３９ シリコーン５２５（ダウコーニング）　　１１０６％（
Ｖ／Ｖ）滅菌前にｐＨ＆５に調節する。

醗酵は、攪拌および通気を行いながら２８°で実施する
。必要に応じてポリプロピレングリコール２０００泡止
め剤を加えそして−を収獲までＨ２ＳＯ４の添加によっ
てｐＨ７，２に低下保持する。

醗酵は５日後に収獲する。

醗酵液（４ｓｏｚ）を、ウエストファリアＫＡ２５遠心
分離機で清澄化しそして残留上澄液を水（２０ｔ）で置
換する。採取した細胞（２５，５にｆ）を、７５ｔの全
容量を与えるのに十分な量の水中でシルバーソンミキサ
ーモデルＢＸを使用して１時間攪拌する。懸濁液を濾過
しそして固体残留物をメタノール（３５ｔ）で再抽出し
そして濾過する。合したＦ液（８７ｔ）を水（４０ｔ）
でうすめそして６０“−８０°の石油エーテル（ＳＯ２
）で抽出する。３０分後に、相をウエストファリアＭＫ
Ｍ　１２５６遠心分離機で分離しそして下部メタノール
相を水（４Ｏｔ）の添加後６０″〜８０＠石油エーテル
（３０ｔ）で再抽出する。分離後、下部相を再び６　Ｕ
’　−８０＠石油エーテル（３０ｔ）で抽出する。合し
た石油エーテル相（ａｓｇを７アウトラー８８−１２７
−２７ワイプド一フイルム蒸発器（Ｐｆａｕｄｌｅｒ　
ａ　８−１２　Ｖ　−２７Ｗｉｐｓｄ−ｆｉｌｍ　ｅｖ
ａ−ｐｏｒａｔｏｒ）　（蒸気圧α１パール、蒸気温度
２０°、水蒸気温度１２７”）に３回通すことによって
濃縮する。濃縮物（９ｔ）を硫酸ナトリウム（２Ｋｐ）
で乾燥しそして更に回転フィルム蒸発器中で４０″で減
圧濃縮する。

油状残留物（Ｉ３０，９）をクロロホルムに溶解して１
９０ｄを得そしてこれを、クロロホルム中で充填したメ
ルク７７３４シリカ６０のカラム（２０ＬＩＸ４　ｃｐ
ｓ　）に適用する。カラムをクロロホルム（５００ｍ／
）で洗浄しそしてクロロホルム：酢酸エチル（３：１）
で＃離しそして１，４００ｍの前流の後約４０−のフラ
クションを集める。

フラクション３２−４６を合しそして蒸発して油（２１
，２ｇ）を得る。フラクション４７−９３を合しそして
蒸発して油（２［１１，９）を得、これをクロロホルム
：酢酸エチル（！ｌ：１）に溶解して５〇−にしそして
クロロホルム：酢酸エチル（３：１）中で充填したメル
ク７７５４シリカ６０のカラム（２００ｘ　４　ｃｍ　
）に適用しそして１，４００−の前流の後約４０−のフ
ラクションを集める。フラクショ２２−５６を合しそし
て蒸発して油（五１１りを得、これをはじめのカラムの
フラクション３２−４６から得られた油に加えろ。合し
た油を沸騰メタノール（４−）に溶解しそして次にこれ
を熱プロパン−２−オール（２０ｍ）に加えそして結晶
化させろ。

結晶化後の母液を蒸発して油を得、これを等容量のジク
ロロメタンに溶解しそしてジクロロメタン中で充填した
メルクキーゼルゲル６０（７０−２３０メツシユ、ＡＳ
ＴＭ、　Ａｒｔ、　Ｎｏ、　７７３４　）のカラム（３
０ｘ２．２ｍ）上に導く。床をジクロロメタン（２床容
ｉ）で洗浄しそしてクロロホルム：酢酸エチル（３：１
）（２床容量）で溶離する。

溶離液を蒸発して油を得、これをメタノールに溶解しそ
してスフエリソルプｓ５０ＤＳ−２／２５０闇ｘ２Ｑｗ
ｍ、Ｐｈａｓｅ　Ｓａｐ、　Ｌｔｄ　）上の分離用ＨＦ
ＬＣにうけしめる。試料の一部（５ゴ）を１分の期間に
わたってカラム上にポンプ輸送しモしてカラムを次の条
件下でアセトニトリル：水（７：３）で溶離する。

時間（分）　　　　　　　流れ（、（／分）α００　　
　　　　　　　　Ｑ、［ｌＯ）注入１．００　　　　　
　　　０００　　）時間１．１０　　　　　　　　　　
　　　　３０００３９、９０　　　　　　　　　　　　
３α００４αＤＯ３５，００ ７５，０（Ｉ３５，００ ＨＰＬＣから溶離する物質を、２３８ｎｍでの口Ｖスズ
クトロスコピーによって型状する。

３３．４分で溶離するピークを有する合したフラクショ
ンの蒸発は、本発明の化合物（３４■）を与える。

Ｌｌ、質量スはクトロスコピーは、６１０で分子イオン
を与えそして５９２．５７４．５５６．４２２．２５９
．２４１で特有のフラグメントを与える。

例　　６ ストレフトミセス壷サーモアルチアエンシスＮＣｌＢ１
２３５４を、例２のストレプトミセス・サーモアルチア
エンシスＮＣＩＢ　１２０１５につイテ記載した方法と
同様な方法で一７０°で２０俤グリセロール中の胞子懸
濁液として貯蔵する。胞子（Ｉ７りを解氷しそして培地
Ａ３０−を含有する２５０−の三角フラスコに接種する
ために使用する。

Ｄ−グルコーズ　　　　　　　　　２．５マルトデキス
トリンＭＤ３０Ｅ　　　　　　　　　２５．０アルカソ
イ５０　　　　　　　　　１２．５甜菜糖密　　　　　
　　　　　　　１．５に２ＮＰＯ４［１１２５ ＣａＣＯ５１，２５ Ｍ０ＰＳ（３−（Ｎ−モルホリノ）プロパン　　　２１
．０スルホン敏〕 蒸留水１Ｌにする量 オートクレーブ処理（Ｉ２１°で１５分）前にｐＨを＆
５に調節する。

種子フラスコを２８″で２日間培養し、そしてこの時間
において４本の同様なフラスコ（それぞれが培地Ａ３０
ｍを含有する）のそれぞれに１７！を無菌的に移す。そ
れぞれのフラスコを、５０ｍの直径の行程の回転振盪器
（２５０回転／分）上で攪拌しながら２８°で２８培隻
する。次に、２個の７１の枝子醗び器を振盪フラスコ接
種体約８０ｍＣ２％（、ｖ／ｖ　）で接種する。それぞ
れ７ｔの醗酵器は培地Ｂ４ｔを含有する。

培　　地　　Ｂ　　　　　　　　　　　　　　　　　ｇ
Ｌ−１メリトーズ　　　　　　　　　　　　４５．０ア
ルカソイ５０　　　　　　　　　１８．０甜菜糖密　　
　　　　　　　　　２．２に２ＨＰＯ４Ｑ、　１８ ＣａＣＯ５（アナラー）１．８ シリコーン１５２０　（ダウコーニング）　　　４１中
２．５ｍ蒸留水　　　　　　　　　　　　　４ｔにする
量−をオートクレーブ処理（Ｉ２４”で４５分）前に＆
５に調節する。醗酵は、攪拌および通気しながら２８℃
で実施する。

７００ｔの醗酵器を、２４時間の種子容器から無菌的に
移した５、４ｔで接種する。醗酵器は、ＣａＣＯ３（ア
ナラー）をストルカルチョーク（８ｔｕｒ−ｃａｌｃｈ
ｏｌｋ）で置換しそしてシリコーン１５２０２５０−を
仕込んだ培地Ｂ４５０ｔを含有する。虜を、１２１＠で
３０分の滅菌の前に濃Ｈ２ＢＯ４を使用して＆５に調節
する。更に、３個の７０１の醗酵器を、２４時間の種子
容器から無菌的に移した８００ｄ（２％（ｖ／ｖ））で
接種する。それぞれの容器は前述したような培地Ｂ３５
１を含有しそして滅菌（Ｉ２１”で３０分）に先立って
シリコーン１５２０２５−を加えた。

次に、醗酵を、攪拌および通気しなから３４゜で実施す
る。ポリプロピレングリコール２０００泡止め剤を醗酵
を通じて必要に応じて加えそして収穫するまでｐＨを７
５：２５の吉草酸／イソ酪酸の添加によってｐ）１７．
４に低下保持する。

１２０時間後に、醗酵の内容物はかさばり（６００ｔ）
、シカライト（３に４）と混合しそして回転真空濾過器
上のセルローズ（２４Ｋｆ、レツテンマイアーＢｚｏｏ
　）を通して濾過する。採取した細胞ペースト（４５Ｋ
ｔ）を−２０°で貯蔵する。

凍結した細胞イーストをメタノール（５５ｔ）に懸濁１
−１そして解氷する。５°で３０分後に、懸濁液をセル
ローズ床を通して濾過する。残留物をメタノール（ＳＯ
Ｚ）に再懸濁し、セルローズ床を通して戸遇しそしてメ
タノール（Ｉ０ｔ）で洗浄する。

合したＰ液および洗液（Ｉ１６ｔ）を水（２２ｔ）でう
すめそして６０°−８０°石油エーテル（ｉ　ｏ　ｏｚ
）で抽出する。石油エーテル抽出液を、ワイプド−フィ
ルム蒸発器（Ｗｉｐｅｄ−ｆｉｌｍ　５ｖａｐｏｒａｔ
ｏｒ　）中で低圧（約［１１５バール）で濃縮する。

濃縮液（ａ４ｔ）を、プロノン−１，２−ジオール（３
ｘ４．２ｔ）で３回抽出する。合した抽出液（Ｉ五ｓｇ
を酢酸エチル（２２ｔ）および水（Ｉ２ｔ）とともに攪
拌しそして次に放置しそして相を分離する。上部相（Ｉ
７，５Ｌ）を水（Ｉ２ｔおよび１０ｔ）で２回洗浄しそ
して残った上部有機相を乾燥して油（Ｉ１２Ｆ）を得る
。

この油をジクロロメタン（５００ｍ）に溶解しそして同
溶剤中で充填したメルクのキーゼルｊ７″６０（型７７
３４）のカラム（４２５ＷＸ４５セ直径）上でクロマト
グラフィー処理する。カラムをジクロロメタン（５００
ｄ）で洗浄しそして次にジクロロメタンおよびジエチル
エーテルの混合物（それぞれ９　：　１　（ｖ／ｖ）の
４Ｃ］Ｏａｇ）で溶離する。溶離液を乾燥して淡黄色の
タール（５４ｇ）を得る。

（ａ）　　タールの一部（Ｉ，２，９）を、アセトニト
リル（５ｄ）に溶解しそして充填したセアデツクスＬＨ
２０のカラム（３４０ｍｘ２５ｍ直径）上でクロマトグ
ラフィー処理しそしてアセトニトリルで溶離する。１１
０ｍと１３０ｍとの間で溶離する７ラクシヨンを乾燥し
そしてアセトニトリル（２，５−）に再溶解する。この
溶液の一部（２−）を７０チ水性アセトニトリル（アセ
トニトリル１．４−を含有する２−）でうすめる。次に
、この溶液を、溶離溶剤として７０％水性アセトニトリ
ルを使用してスフエリソルブ８５０ＤＳ２０カラム（２
５０＋ａａＸ２５ｇ＋直径）上で２つの等部分でクロマ
トグラフィー処理する。［１８ｔと［Ｌ９５ｔとの間で
溶離する物質を２つの流れから集めそして水（約［１９
ｔ）でうすめる。この溶液をＳ　５０Ｄ８２の同じカラ
ムに逆ポンプ輸送しそしてカラムをアセトニトリルで溶
離する。アセトニトリルを蒸発によって除去しそして試
料をアセトンおよびシクロヘキサンの混合物から共済的
に乾燥して本発明の化合物（ｓ　３ｗ９）を固体として
得る。

この固体のＮＭＲ１υＶおよび質量スはクトルは、例１
の生成物のものと一致する。

（ｂ）　　ジエチルエーテルに溶解したタールの一部（
４，３２Ｆｉ乾燥して固体を得そして５ａｏｒｔｑ／ゴ
の濃度でアセトニトリルに再溶解する。この浴液（ａｓ
ｙ）を等容量の水中の７５％（ｖ／ｖ）アセトニトリル
と混合しそしてスフエリソルブ０ＤＳ２のカラム（２５
０ｗ＋ｘ２０ｍ）上で９回にわけてクロマトグラフィー
処理する。それぞれの成分を７５％アセトニトリルで溶
離（２５ｍ／分）する。

Ｑ、５１ｔとα６１ｔとの間で溶離するピークをそれぞ
れの流れから集めそしてかさばらせる。このバルクを等
容量の水と混合しそして同じスフエリソルダカラム上に
再吸着させる。カラムをアセトニトリルで溶離する。溶
離液を４５＠に加温しそして水を溶離液が曇るまで加え
る。これを４°に冷却しそして結晶化させる。この結晶
を戸去し、そして乾燥して本発明の化合物（（Ｉ２６，
９）を得る。逆相分析高性能液体クロマトグラフィーに
よる固体の分析は、２３８ｎｍにおける全吸収を基にし
て４％の不純物の存在を示す。

＋ＨＮＭＲスはクトル ジューテロクロロホルム中の溶液の２００ＭＨ２ＩＨＮ
”１．ｌＲスはクトルは、大体次の位置におけるシグナ
ルを包含する。

δ６．５５（広いｓ、ＩＨ）　　　１．８８（広いｓ、
３Ｈ）５．８６（ｄ１５、１Ｈ）　　１．６０　（ｓ、
　３Ｈ）５．７２　（ｄｄ１５．１１、ＩＨ）１．５２
（θ、３）（）１．０３（ｄ７．３８） １．００（ｄ７．３Ｈ） ０．９５（ｄ７．３Ｈ） ０．７９（Ｊ６．３Ｈ） ”ＣＮＭＩ（スＲクトル ジューテロクロロホルム中の溶液の２５．０５１ｈ１５
ＯＮＭＲスイクトルは、約次の位置においてシグナルを
有す。

６１９２．２（日）　　　　　　　　　　　　　　　　
６９．９（ｔ）１７１、９（ａ）　　　　　６９．３（
ｄ）１４五９（ｄ）　　　　　６ａ６（ｄ）１３　ａ４
（ｄ）　　　　　４１１（ｔ）１５７．７（θ）　　　
　　ｔ６．６（ｄ）１３７．４．（８）　　　　　４１
．１　ｔ１３７．３（ｄ）　　　　　４α８ｔ １３　＆７（ｓ）　　　　　　３６．１？１３　［１７
（ｓ）　　　　　３４．８（ｔ）１２３．４（ｄ）２６
．９（ｄ） １２１．９（ａ）　　　　　２２．９（ロ））１２０．
４（ｄ）　　　　　２２．２（ロ））９９．８（日）　
　　　　　　　　　　　　　　　１５．６ｒｇ）８２．
０（ｓ）　　　　　１４．０（ロ））８１．０（ｄ）　
　　　　１１．０（ロ）７６．８（ｄ） ６６６．１ピークは数個の重なったシグナルから生じそ
してそれ故にその多重性ははっきりしない。

＋１Ｊ、スペクトル メタ／−＃（Ｃ−［１００１％）中のＵ、Ｖ、スはクト
ルは約２４（Ｌ４ｎｍＥ　　５０９のλｍａｘを有す。

工、Ｒ，スペクトル ブロモホルム溶液（Ｃ＝１％）　中の１．Ｒ，スハクト
ルは、約３５００（ＯＨ）、１７１０（エステル）、１
６７８（共軛ケトン）および９９６ｔｙｎ−１（Ｃ−０
）におけるバンドを包含する。

質量スはクトル 低分解凱工、質量スはクトルは、ｍ／ｚ　６１０で分子
イオンおよびｍ／ｚ５９２，５７４．４８０．４４１．
４４０．４２５．４２２．２６５．２５９．２４７，２
４１．２３７．２１９および１５１でフラグメントイオ
ンを与える。

微量分析 微量分析は、Ｃ７α９５チ、Ｈ＆３３％（予測Ｃ７ＣＬ
８２％、Ｈ＆２０％）。

例　　４ ストレプトミセス拳サーモアルチアエンシスＮＣＸＢ　
１２３３４の胞子懸濁液（例３によって製造した）１−
を使用して培地Ａ（５０ｍｊ、オートクレーブ処理前に
声を６．５に調節した）を含有する２５０−の振盪フラ
スコに接種する。このフラスコを５０■直径の行程の回
転振盪機（２５０回転／分）上で攪拌しながら２８＠で
２日間培養する。２日成長した接種体１−づつを培地Ａ
（５０ｍｇ）を含有する６個の同様なフラスコのそれぞ
れに移しそして同じ方法で２日醗酵する。

次に、振盪フラスコ接種体約３００ｄ（２％（ｖ／ｖ）
　）を、培地Ｂ（Ｉ２Ｌ、１２１＠で３０分の滅菌に先
立って−を＆５に調節する）を含有する醗闘（２０ｔ）
に接種する。攪拌および通気しながら醗酵を２８°で２
４時間実施する。

培地Ｂ　（４５０ｔ、１２１＠で３０分の滅菌に先立っ
て關を６．５に調節する）を含有する醗酵器（７００ｔ
）を、２４時間成長した接種体１１Ａで接種する。醗酵
を攪拌および通気しなから３４゜で実施しそして田を１
０１　Ｈ２ＳＯ４で１４に調節する。

９０時間後に、収穫した醗酵液（４ｏｏｚ）を、濾過助
剤としてシカライト（２Ｋｆ）およびセルロース（２に
９）の混合物を使用してセルローズ（レツテンマイアー
ＢＩＣｏｏ　）を通して濾過する。採取した細胞ば一ス
トを、メタノール（約１ｏｏｚ）に懸濁しそして約４５
分後に濾過する。細胞をメタノール（約５０ｔ）で再抽
出する。合した抽出液（Ｉ４５ｔ）を水（３５７）でう
すめそして第３回の抽出段階において水を加えてロバチ
ルＬＸ　２０４上でヘキサンで抽出する。ヘキサン抽出
液（Ｉ４５ｔ）を濃縮する。

濃縮物（２ｔ）をプロパン−１，２−ジオール１ｔづつ
で３回抽出する。抽出液はかさばり（五１６ｔ）そして
酢酸エチル（五３４ｔ）および水（３，ＯＺ）と混合す
る。酢酸エチルの上部層を採取しそして水で洗浄する。

酢酸エチルを除去しそして残留油をアセトンとともに共
沸して乾燥ホーム状物質（７１ｇ）を得る。

この固体をメタノール（３ａｏ＊）および水（３２−）
に溶解しそしてワットマン０ＤＳ３　Ｐｒｅｐ　４０逆
相シリカのカラム（４，６ｔ、１２．８Ｘ３６０）に適
用する。カラムをメタノール／水（９：１）で溶離しそ
してａ６ｔとＩＣＬ２ｔとの間で溶離するフラクション
を沈殿が形成しはじめるまで濃縮する。４°で一夜放置
した後、固体を戸去しそして真空乾燥する。

固体の一部（ａｓｙ）をアセトニトリル（Ｉ４０ｄ）、
テトラヒドロフラン（Ｉ７ｍ１）および水（Ｉ３−）の
混合物に溶解する。次に、この溶液の一部（５，０ｍ）
を、２５−７分の速度で添加する溶離剤としてアセトニ
トリル／水（４：１）を使用して、スフエリソルブ０Ｄ
Ｓ２（５μ）のカラム（２５Ｘ　２．１　ｃｍ　）上で
クロマトグラフィー処理する。９８分と１５．６分との
間で出現するピークを集め（２，７５ｔ）、水（ｉ、ｓ
ｇでうすめそして溶液を３つの部分に分割する。それぞ
れの部分を、カラム上に逆ポンプ輸送しそしてアセトニ
トリルで溶離する。次に、３つの試料を集め、蒸発して
固体を得そしてアセトニ）　ＩＪルから再結晶して本発
明の化合物の結晶（４，Ｅｌ）を得る。通常のおよび逆
相分析高性能液体クロマトグラフィーによる固体の分析
は、〈２チ不純物の存在を示す。

例　　５ 収獲醗酵液（２５１，例３の方法によって製造した）を
、１５％（ｖ／ｖ　）硫酸で酸性にしてｐＨ３となしそ
して次に１５分９０℃に加熱し次にノ・イア０床を通し
て濾過する。細胞ば一部）（Ｉ５５６１）をメタノール
（Ａ９ｔ）とともに３０分攪拌し、スラリーを濾過しそ
して固体残留物をメタノール（Ｉ９１）中に再懸濁しそ
して再濾過する。

合したＰ液を１５係（、ｖ／ｖ　）硫酸で声４に調節し
そして工ＲＡ　６　Ｂ樹脂（アセテートサイクル、７５
〇−）の床に３７５０ｄ／時間で通す。カラムをメタノ
ールで洗浄しそして合したメタノール浸透液を濃縮して
ＳＳｔにしそして［Ｌ１チ（ｖ／Ｖ　）硫酸（Ｉα５ｔ
）ととも同時に冷（約５°）攪拌α１チ硫酸（５０ｍ１
）に加える。スラリーを１０分攪拌し、戸遇しそして固
体スラリーを冷水で洗浄し次に乾燥する。高性能液体ク
ロマトグラフィーに対して真正試料と比較することによ
ってこの乾燥固体は本発明の化合物１２．Ｌ９を含有す
る。

例　　６ 収獲醗酵液（２５ｔ、例３の方法によって製造した）を
１５％（ｖ／ｖ　）硫酸で酸性にしてＰＨ３となしそし
て次に９０゛で１５分加熱し次にハイクロ床を通して濾
過する。Ｍ胞ば一ストの一部分（ｓｏｏ、９）をメタノ
ール（７５０ゴ）とともに３０分攪拌し、スラリーを戸
通しそして固体残留物をメタノール（７５０ｍ）に再懸
濁しそして濾過する。

合した涙液（Ｉ，５７）を水（６１７ｔｎｔ）でうすめ
そしてヘキサン（７ｏ６ｉ）で３回抽出する。合したヘ
キサン抽出液を集め（２７９０ｍ）そして一部分（Ｉ３
９ｏ１ｎ１．）を濃縮して２５０−となしそしてヘキサ
ン中で製造したＸＡＤ１１８０樹脂（Ｉ０−）床上を５
０−７時間で通す。樹脂をヘキサン（ｉ　ａｒｔ）で洗
浄しそして集めたヘキサンを濃縮して２〇−にする。濃
縮ヘキサンの一部（Ｉα２１ｎｔ）ヲ、ヘキサン中で製
造したクロスフィールド５Ｄ２１０シリカゲルのカラム
（Ｉ００ｍ）上にお（。床を５１　（Ｖ／、ｙ）アセト
ン／ヘキサン（７００−）で１００−７時間で洗浄しそ
して１ｏ　＊　（ｖ／ｖ）アセトン／ヘキサンで１　［
１０ｙｄ／時間で溶離する。溶離液を、高性能液体クロ
マトグラフィーによって監視しそして本発明の化合物を
含有するフラクションを集めそして蒸発して油を得る。

この油をメタノール（ＩＳＯ−）および水（７［１ｍ）
に溶解し次でメタノールを真空蒸発して固体を得、これ
を濾過１−そして乾燥する。乾燥した固体は、高性能液
体クロマトグラフィーに対する真正試料との比較によっ
て本発明の化合物α２１９を含有する。

以下は、本発明の処方の例である。以下に使用される活
性成分なる語は、本発グ」の化合物を意味する。

多投与非経口的注射 活性成分　　　　　　　４．０　　　　α１〜ス５ｖｖ
／ｖ慢ベンジルアルコール　　　２．０ グリセリルトリアセテ−）　　　３ＣＬＯプロピレング
リコール　１ｏ（ｌｏにする址活性成分をベンジルアル
コールおよヒクリセリルトリアセテートに溶解する。プ
ロピレングリコールを加えそして所定の容量にする。在
来の製薬法例えば畝Ｉ濾過によってまたはオートクレー
ブ中で加熱することによって製品を滅菌しそして無菌的
に包装する。

エーロゾルスプレー ｗ／’ｗ％　　　　範　　　囲 活性成分　　　　　　α１　　αｏ１〜２．Ｏｗ／ｗ％
トリクロロエタン　　　２９．９ トリクロロフルオロメタン　３５．。

ジクロロジフルオロメタン　３５．０ 活性酸分をトリクロロエタンと混合しそしてエーロゾル
容器に充填する。頂部空間をガス状噴射剤でパージしそ
してパルプを所定の位置についてクリンプする。液状噴
射剤の必要ｚｉｔｔを加圧下においてパルプを経て充填
する。アクチュエーターおよびダスト−キャップをとり
つける。

錠剤 製法−湿式顆粒 岬 活性成分　　　　　　　　　　２５α０ステアリン酸マ
グネシウム　　　　　　　　　４．５とうもろこし殿粉
　　　　　　　　　２２．５ナトリウムスターチグリコ
レ−）　　　　　　　　　　　　９．０硫酸ラウリルナ
トリウム　　　　　　　４．５微小結晶性セルローズ　
　４５０■の錠斉応側トする量１０％殿粉ペーストの十
分な量を活性成分に加えて顆粒のための適当な湿潤かた
まりを製造する。顆粒を製造しそしてトレーまたは流動
床乾燥器を使用して乾燥する。ふるいにかけ、残留成分
を加えそして錠剤に圧搾する。

もし必要な場合は、水性または非水性溶剤系を使用して
ヒドロキシプロピルメチルセルローズまたは他の同様な
フィルム−形成物質を使用して錠剤芯をフィルム被覆す
る。可塑剤および適当な色素をフィルム形成溶液に包含
させることができる。

小さな家内動物に使用するための家畜錠剤製法−乾式顆
粒 岬 活性成分　　　　　　　　５α０ ステアリン酸マグネシウム　　　　　　　Ｚ５微Ｉ」＼
結晶性セルローズ　７５．０■の錠剤芯重量になす量活
性成分をステアリン酸マグネシウムおよび微小結晶性セ
ルローズと混合する。混合物を圧搾！−てスラップにす
る。このスラップを回転顆粒器に通すことによって破壊
して自由に流動する顆粒を製造する。圧搾して錠剤にす
る。

次に、もし必要ならば、錠剤芯を前述したようにフィル
ム被覆することができる。

家畜乳腺内注射 Ｍ９／　ｄｏ　ａ　ｅ　　　　範　　囲活性成分　　　
　　　　　１５０Ｗ　　　（Ｉ０５〜１．ＯＩ！落花生
油、白ろうおよびポリソルベート６０を攪拌しながら１
６０℃に加熱する。１６０℃に２時間維持しそして次に
攪拌しながら室温に冷却する。無菌的に活性成分をベヒ
クルに加えそして高速度ミキサーを使用して分散させる
。コロイドミルを通して通過させることによって処理す
る。無菌的に、生成物を滅菌したプラスチック注射器に
充填する。

家畜経口飲薬 活性成分　　　　　　　α３５　α０１−２ｗ／ｖ　９
にポリソルベート８５　　　　　　５．０ベンジルアル
コール　　　　　ミ０ プロピレングリコール　　　３α０ 燐酸塩緩衝液　　　　−（６０−６，５水　　　　　　
　　　　１０α０にする量活性成分をポリソルベート８
５、ベンジルアルコールおよびプロピレングリコールに
溶解する。もし必要ならば、水の一部を加えそして−を
燐酸塩緩衝液で６．０〜６．５に調節する。水で最終容
量にする。生成物を飲薬容器に充填する。

原音経口に一スト 活性成分　　　　　　　７．５　　１−３０Ｗ／Ｗチサ
ツカリン　　　　　２５．０ ポリソルベート８５　　　　　　　　五〇ジステアリン
酸アルミニウム　　　５．０分留ヤシ油　　　　　１０
０．０にする量ジステアリン酸アルミニウムを加熱によ
って分留ヤシ油およびポリソルベート８５に分散する。

室温に冷却しそしてサッカリンを油性ベヒクル中に分散
する。活性成分をベースに分散する。プラスチック注射
器に充填する。

家畜飼料内投与用の顆粒 活性成分　　　　　　　２．５　　　　α０５−５ｗ／
ｗ％硫酸カルシウム羊水化物　１０ａＯにする量活性成
分を硫酸カルシウムと混合する。湿潤頌粒法を使用して
顆粒を製造する。トレーまたは流動床乾燥器を使用して
乾燥する。適当な容器に充填する。

乳化性濃厚物 活性成分　　　　　　　　　　ｓａｙ 陰イオン性乳化剤　　　　　　　　　　　４０ｆＩ（例
えばフェニルスルホネー）ＣＡＬＸ）（例えばツルベン
１００） すべての成分を混合し、溶解するまで攪拌する。

顆粒 （ａ）　　活性成分　　　　　　　　　　５０．９ウツ
ドレジン　　　　　　　　４０．９石膏顆粒（２υ−６
０メツシユ）１４＋にする量（例えばアグンルブ１００
Ａ） （ｂ）　　活性成分　　　　　　　　　５０ｇシベｏ＝
ツクＮ−ｐ１３４０１１ 石野顆粒（２０−６ＣＩメツシユ）　　　１Ｋｆにする
量すべての成分を揮発性溶剤例えば塩化メチレンに溶解
しそしてミキサー中の顆粒タンプリングに加える。乾燥
して溶剤を除去する。

手続補正書（方式） 昭和６２年　５月２９日 特許庁長官　　黒　１）明　雄　　殿 ■、事件の表示 昭和６２年特許願第５４２６９号 ２、発明の名称 マクロライド抗生物質 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 住所　イギリス国ロンドン、ダブリュー・トワイ　８・
ディー・エイチ、クラージズストリート６−１２．クラ
ージズハウス名称　グラクツ・グループ・リミテッド４
２代　理　人 ５、補正命令の日付 昭和６２年５月　６日　（発送日　昭６２．５．２６’
）７、補正の内容 顆書に最初に添付した明細書の浄書・別紙のとおり（内
容に変更なし） 以　　上 手続補正書 昭和６２年　６月寸　日 特許庁長官　　黒　１）明　雄　　殿 １、事件の表示 昭和６２年特許願第５４２６９号 ２、発明の名称 マクロライド抗生物質 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 住所　イギリス国ロンドン、ダブリュー・トワイ　８・
ディー・エイチ、クラージズストリート［）−１２，ク
ラージズハウス名称　グラクツ・グループ・リミテッド
４、代理人 ５、補正命令の日付（自発） ７、補正の内容 ｌ）特許請求の範囲を別紙のとおり補正する。

２）第１６頁第１０〜１４行の「一般に、２・・・・適
当している。」を「一般的に、１０９／ヘクタール〜ｒ
Ｏｋｇ／ヘクタールの適用割合が適当であり、好適には
、だにおよび昆虫の抑制に対しては１０９／ヘクタール
〜１に９／ヘクタールであり、線虫の抑制に対しては５
０９／ヘクタ一ル〜１０ｋｇ／ヘクタールである。」　
と補正する。

以　　上 ２、特許請求の範囲 １）式（Ｉ） ２）結晶性形態の前記第１項記載の化合物。

３）９０％より大なる純度を有する結晶性形態の前記第
１項記載の化合物。

４）１種またはそれ以上の担体および（または）賦形剤
と一緒にした前記第１項記載の化合物の有効量を含有す
る人の医薬に使用する組成物。

５）１種またはそれ以上の担体および（または）賦形剤
と一緒にした前記第１項記載の化合物の有効量を含有す
る家畜の医薬に使用する組成物。

６）１種またはそれ以上の担体および（または）賦形剤
と一緒にした前記第１項記載の化合物の有効量を含有す
る害虫抑制組成物。

７）前記第１項記載の化合物の有効ｌを植物または他植
生物または害虫それ自体または害虫の場所に適用するこ
とからなる農業、園芸または林業におけるまたは貯蔵、
建物または他の公衆場所または害虫の場所における害虫
を撲滅する方法。

８）害虫が昆虫、だにまたは線虫害虫である前記第７項
記載の方法。

９）（ａ）　　５β−ヒドロキシまたは５β−メトキシ
５５４１化合物の実質的な量を生産しないで式（Ｄの化
合物を生産することができる菌株の変異体であるストレ
プトミセス属の微生物を培養しそしてもし必要ならば該
化合物を培養物から単離するかまたは （ｂ）相当する５β−ヒドロキシ化合物を酸化すること
からなる前記第１項記載の化合物の製法。

１０）微生物が５β−ヒドロキシまたは５β−メ生産し
ないで式（Ｉ）の化合物を生産することができるストレ
プトミセス・サーモアルチアエンシスまたはストレプト
ミセス・シアネオグリセウス・ノンシアノゲヌスの菌株
の変異体である前記第９項記載の方法。

１１）変異体がストレプトミセス・サーモアルチアエン
シスＮＣＩＢ１２３３４またはその変異体である前記第
１０項記載の方法。

１２）　５β−ヒドロキシまたは５β−メトキシ５５４
１化合物の実質的な量を生産しないで前記第１項記載の
化合物を生産することかできるストレプトミセス属の微
生物の菌株の変異体および前記第１項記載の化合物の合
成に関与するその遺伝物質。

１３）ストレフトミセス・サーモアルチアエンシス１２
３３４およびその変異体、および前記第１項記載の化合
物の合成に関与するその遺伝物質。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） の化合物。 ２）結晶性形態の前記第１項記載の化合物。 ３）９０％より大なる純度を有する結晶性形態の前記第
   １項記載の化合物。 ４）１種またはそれ以上の担体および（または）賦形剤
   と一緒にした前記第１項記載の化合物の有効量を含有す
   る人の医薬に使用する組成物。 ５）１種またはそれ以上の担体および（または）賦形剤
   と一緒にした前記第１項記載の化合物の有効量を含有す
   る家畜の医薬に使用する組成物。 ６）１種またはそれ以上の担体および（または）賦形剤
   と一緒にした前記第１項記載の化合物の有効量を含有す
   る害虫抑制組成物。 ７）前記第１項記載の化合物の有効量を植物または他植
   生物または害虫それ自体または害虫の場所に適用するこ
   とからなる農業、園芸または林業におけるまたは貯蔵、
   建物または他の公衆場所または害虫の場所における害虫
   を撲滅する方法。 ８）害虫が昆虫、だにまたは線虫害虫である前記第７項
   記載の方法。 ９）（ａ）５β−ヒドロキシまたは５β−メトキシＳ５
   ４１化合物の実質的な量を生産しないで式（ I ）の化
   合物を生産することができる菌株の変異体であるストレ
   プトミセス属の微生物を培養しそしてもし必要ならば該
   化合物を培養物から単離するかまたは （ｂ）相当する５β−ヒドロキシ化合物を酸化すること
   からなる前記第１項記載の化合物の製法。 １０）微生物が５β−ヒドロキシまたは５β−メトキシ
   抗生物質Ｓ５４１化合物を生産しないで式（ I ）の化
   合物を生産することができるストレプトミセス・サーモ
   アルチアエンシスまたはストレプトミセス・シアネオグ
   リセウス・ノンシアノゲヌスの菌株の変異体である前記
   第９項記載の方法。 １１）変異体がストレプトミセス・サーモアルチアエン
   シスＮＣＩＢ１２３３４またはその変異体である前記第
   １０項記載の方法。 １２）５β−ヒドロキシまたは５β−メトキシＳ５４１
   化合物の実質的な量を生産しないで前記第１項記載の化
   合物を生産することができるストレプトミセス属の微生
   物の菌株の変異体および前記第１項記載の化合物の合成
   に関与するその遺伝物質。 １３）ストレプトミセス・サーモアルチアエンシス１２
   ３３４およびその変異体、および前記第１項記載の化合
   物の合成に関与するその遺伝物質。