MXPA06009072A

MXPA06009072A - Proteinas de fusion de albumina.

Info

Publication number: MXPA06009072A
Application number: MXPA06009072A
Authority: MX
Inventors: Craig A Rosen; William A Haseltine; Paul A Moore; Jason B Bock; Adam Bell; Yanggu Shi; David Lafleur
Original assignee: Human Genome Sciences Inc
Priority date: 2004-02-09
Filing date: 2005-02-09
Publication date: 2007-03-29
Also published as: US20070027306A1; IL176894A0; PL1729795T3; CN102816241A; CN102816241B; EP1729795A2; BRPI0507026A; HUE027902T2; SI1729795T1; US20100093627A1; WO2005077042A2; DK1729795T3; IL176894A; JP5568582B2; MA28565B1; CA2554089A1; NZ548612A; JP5010923B2; ES2567634T3; US8143026B2

Abstract

La presente invencion comprende proteinas de fusion de albumina. Las moleculas de acido nucleico que codifican las proteinas de fusion de albumina de la presente invencion tambien estan comprendidas en la misma, en la forma de vectores que contienen estos acidos nucleicos, celulas huesped transformadas con estos vectores de acidos nucleicos y metodos par elaborar las proteinas de fusion de albumina de la presente invencion y utilizar estos acidos nucleicos, vectores y/o celulas huesped. Ademas, la presente invencion comprende composiciones farmaceuticas que comprenden proteinas de fusion de albumina y metodos para tratar, prevenir, o disminuir enfermedades, padecimientos o condiciones utilizando proteinas de fusion de albumina de la presente invencion.

Description

PROTEÍNAS DE FUSIÓN DE ALBÚMINA Referencia al Listado de Secuencias en Disco Compacto La presente solicitud se refiere a un "Listado de Secuencias" que se describe más adelante, el cual se proporciona como un documento electrónico en tres discos compactos idénticos (CD-R) marcados como "Copia 1 ", "Copia 2", y "Copia 3". Estos discos compactos contienen cada uno el archivo "PF612PCT SL.txt" (929,048 bytes, creados el 7 de febrero de 2005), el cual está Incorporado en su totalidad a la presente invención como referencia. Antecedentes de la Invención La presente invención se refiere de manera general a proteínas terapéuticas (incluyendo pero sin limitarse al menos, a un polipéptido, anticuerpo, péptido o fragmento y variante del mismo), fusionadas a albúmina o fragmentos o variantes de albúmina. La presente Invención comprende polinucleótidos que codifican , proteínas de fusión de albúmina terapéuticas, composiciones farmacéuticas, formulaciones y equipos. Las células huésped transformadas con los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina terapéutica también están comprendidas en la presente invención, en la forma de métodos para elaborar las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención utilizando estos polinucleótidos y/o células huésped. La albúmina de suero humano (HSA o HA) una proteína de 585 aminoácidos en su forma madura (tal como se muestra en la figura 1 (SEQ I D NO: 1 )), es responsable de una proporción significativa de la presión osmótica de suero y también funciona como un vehículo de ligandos endógenos y exógenos. En la actualidad, se produce HA para uso clínico mediante la extracción de sangre humana. La producción de HA recombinante (rHA) en microorganismos ha sido descrita en las Patentes EP 330,451 y EP 361 ,991 . Las proteínas terapéuticas en su estado nativo o cuando se producen en forma recombinante, tal como ¡nterferons y hormonas de crecimiento, normalmente son moléculas lábiles que exhiben vidas en anaquel cortas, particularmente cuando se formulan en soluciones acuosas. La inestabilidad en estas moléculas cuando se formulan para administración, indica que muchas de las moléculas deben ser liofilizadas y refrigeradas todo el tiempo durante el almacenamiento, volviendo de esta forma a las moléculas difíciles de transportar y/o almacenar. Los problemas de almacenamiento son particularmente agudos cuando las formulaciones farmacéuticas deben ser almacenadas y suministradas fuera del ambiente hospitalario. Se han propuesto algunas soluciones prácticas para los problemas de almacenamiento de las moléculas de proteína lábil. Por consiguiente, existe la necesidad de formulaciones estabilizadas, de larga duración de moléculas terapéuticas proteináceas que sean fácilmente suministradas, preferentemente con una formulación simple que requiere manipulación mínima post-al macen amiento. En la administración in vivo, las proteínas terapéuticas en su estado nativo o cuando se producen en forma recombinante, tal como interferons y hormonas de crecimiento, exhiben una estabilidad de plasma corta debido al rápido despeje del torrente sanguíneo. Por consiguiente, los efectos terapéuticos proporcionados por estas proteínas también tienen vida corta. Por lo tanto, con el objeto de sostener su efecto terapéutico deseado in vivo, el despeje rápido de estas proteínas del torrente sanguíneo indica que las moléculas terapéuticas deben ser administradas en forma más frecuente o con dosis mayores. Sin embargo, el incremento del programa de dosificación para administración de la proteína Terapéutica, con frecuencia da como resultado un ¡ncremento en las reacciones en el ciclo de inyección, efectos secundarios y toxicidad en el paciente. En forma similar, la administración de la proteína Terapéutica en dosis mayores, también da como resultado normalmente un incremento en la toxicidad y efectos secundarios en el paciente. Se han propuesto algunas soluciones prácticas para incrementar la estabilidad de plasma de las moléculas terapéuticas, incluyendo la conjugación química, lo que ha proporcionado un beneficio limitado para el paciente.

Generalmente, en la mayoría de los casos, estas moléculas terapéuticas modificadas en forma química aún se administran en un programa de dosificación frecuente, reteniendo en forma significativa las reacciones en el sitio de inyección, efectos secundarios, y toxicidad en los pacientes. Por consiguiente, existe la necesidad de una forma estabilizada de moléculas terapéuticas que retenga una mayor estabilidad de plasma in vivo que el terapéutico nativo o producido en forma recombinante solo y que pueda ser administrado en forma menos frecuente, disminuyendo de esta forma los efectos secundarlos potenciales en el paciente. Breve Descripción de la Invención La presente invención comprende proteínas de fusión de albúmina que comprenden una proteína Terapéutica (por ejemplo, un polipéptido, anticuerpo o péptido o fragmento o variante del mismo) fusionada a albúmina o un fragmento (parte) o variante de albúmina. La presente invención también comprende polinucleótidos que comprenden, o que consisten en forma alternativa, en moléculas de ácido nucleico que codifican una proteína Terapéutica (por ejemplo, un polipéptido, anticuerpo o péptido o fragmento o variante del mismo) fusionada a albúmina o un fragmento (parte) o variante de albúmina. La presente invención también comprende polinucleótidos, que comprenden, o consisten en forma alternativa, en una molécula de ácido nucleico que codifica proteínas que comprenden una proteína Terapéutica (por ejemplo, un polipéptido, anticuerpo o péptido o fragmento o variante del mismo) fusionado a albúmina, o un fragmento (parte) o variante de albúmina que sea suficiente para prolongar la vida en anaquel de la proteína Terapéutica, para incrementar la estabilidad de plasma de la proteína Terapéutica en comparación con su estado no fusionado, y/o estabilizar la proteína Terapéutica y/o su actividad en solución (o en una composición farmacéutica) in vitro y/o in vivo. Las proteínas de fusión de albúmina codificadas por un polinucleótido de la presente invención, también están comprendidas en la misma, como células huésped transformadas con polinucleótidos de la presente invención, y métodos para elaborar las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y el uso de estos polinucleótidos de la presente invención y/o células huésped. En un aspecto preferido de la presente invención, las proteínas de fusión de albúmina incluyen, pero no se limitan a, las que se describen en la Tabla 2 y los polinucleótidos que codifican dichas proteínas. La presente invención también comprende formulaciones farmacéuticas que comprenden una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. Dichas formulaciones pueden estar en un equipo o contenedor. Dicho equipo o contenedor puede ser empacado con instrucciones relacionadas a la vida en anaquel prolongada de la proteína Terapéutica. Dichas formulaciones se pueden utilizar en métodos para tratar, prevenir, aminorar o diagnosticar una enfermedad o síntoma de enfermedad en un paciente, preferentemente u n mam ífero , más preferentemente un hu mano, en donde los métodos comprenden el paso de administrar la form u lación farmacéutica al paciente. En otras modalidades, la presente invención comprende métodos para evitar, tratar, o aminorar una enfermedad o padecimiento. En modalidades preferidas, la presente invención comprende un método para tratar una enfermedad o padecimiento descrito en la columna de "I ndicación Preferida: Y" de la Tabla 1 que comprende administrar a un paciente, en el cual se desea dicho tratamiento, prevención o dismin ución , u na proteína de fusión de albúmina de la presente invención que comprende una proteína Terapéutica o parte que corresponde a una proteína Terapéutica (o fragmento o variante de la misma) descrita en la colu mna de "Proteína Terapéutica: X" de la Tabla 1 (en la misma fila de la enfermedad o padeci miento que será tratado tal como se describe en la columna de "I ndicación Preferida: Y" de la Tabla 1 ) en una cantidad efectiva para tratar, preveni r, o aminorar la enfermedad o padecimiento. En una modalidad , una proteína de fusión de albúmina descrita en la Tabla 1 ó 2 tiene una vida en anaquel prolongada. En una segunda modalidad , u na proteína de fusión de albúmina descrita en la Tabla 1 ó 2, es más estable que la molécula Terapéutica no fusionada correspondiente que se describe en la Tabla 1 .

La presente invención incluye además organismos transgénicos modificados para contener las moléculas de ácido nucleico de la presente invención (incluyendo, pero sin limitarse a, los pollnucleótidos descritos en las Tablas 1 y 2) preferentemente modificados para expresar una proteína de fusión de albúmina de la presente invención. Breve Descripción de las Figuras Las figuras 1 A-D muestran la secuencia de aminoácidos de la forma madura de albúmina humana (SEQ I D NO: 1 ) y un polinucleótido que la codifica (SEQ I D NO:2). Los nucleótidos del 1 al 1755 de la SEQ I D NO:2 codifican la forma madura de albúmina humana (SEQ ID NO: 1 ). La figura 2, muestra el mapa de restricción del vector de clonación pPPC0005 del depósito PTA-3278 ATCC. La figura 3, muestra el mapa de restricción del vector de expresión S. cerevisiae de levadura pSAC35 (Sleep y Asociados, BioTechnology 8:42 (1990)). La figura 4, muestra el efecto de varias diluciones de proteínas de fusión de albúmina I FNb codificada mediante ADN comprendido en CID 201 1 y 2053 en la actividad SEAP en las células reporteras ISRE-SEAP/293F (ver el ejemplo 76). Las proteínas se diluyeron en serie de 5e-7 a 1 e-14 g/ml en DM EM/ 10% FBS, y se utilizaron para tratar células reporteras ISRE-SEAP/293F. Después de 24 horas, se eliminaron los sobrenadantes de las células reporteras y se ensayaron en cuanto a la actividad SEAP. La proteína de fusión de albúmina I FNb se purificó a partir de tres clones estables: 293F/#201 1 , CHO/#201 1 y NSO/#2053. El I FNb derivado de mamífero, Avonex, fue procedente de Biogen y se reportó que tiene actividad específica de 2.0e5 l U/µg. La figura 5, compara la actividad proliferativa de la proteína de fusión de albúmina I FN codificada por CI D 3165 (proteína CI D 3165) e IFNa recombinante (rIFNa) en células de melanoma Hs294T. Las células se cultivaron con diversas concentraciones ya sea de proteína CI D 3165 ó rI FNa y se midió la proliferación mediante incorporación BrdU después de 3 días de cultivo. La proteína CI D 3165 originó una inhibición medible de la proliferación celular en concentraciones superiores a 10 ng/ml, lográndose el 50% de inhibición en aproximadamente 200 ng/ml. (m) = proteína CID 3165, (4) = rI FNa. La figura 6, muestra el efecto de diversas diluciones de la proteína de fusión de albúmina I FNa en la actividad SEAP en las células reporteras ISRE-SEAP/29F. Se probó una preparación de la corriente ascendente de albúmina ( ) fusionada con IFNa, así como dos diferentes preparaciones de corriente descendente de albúmina (•) y (u) fusionada con I FNa. La figura 7, muestra el efecto del tiempo y dosis de la proteína de fusión de albúmina I FNa codificada por ADN comprendido en la construcción 2249 (proteína CID 2249) en el nivel de mARN de OAS (p41 ) en monos tratados (ver el ejemplo 78). Por punto de tiempo: primera barra = control de vehículo, segunda barra = 30 µg/kg de proteína CID 2249 día 1 iv, tercera barra = 30 µg/kg de proteína CID 2249 día 1 se, cuarta barra = 300 µg/kg de proteína CID 2249 día se, quinta barra = 40 µg/kg de IFNa recombinante día 1, 3 y 5 se. La figura 8, muestra la relación de respuesta-dosis de las proteínas de fusión de albúmina BNP codificadas mediante ADN comprendido en construcciones CID 3691 y 3618 (proteína CID 3691 y 3618) en la activación de la formación cGMP en células reporteras NPR-A/293F (ver ejemplos 80 y 81). Se probaron tanto BNP recombinante (m), así como dos diferentes preparaciones de corriente ascendente de albúmina (a) y (•) fusionadas con BNP. La figura 9, muestra el efecto de la proteína de fusión de albúmina BNP en presión arterial promedio en ratas hipertensas en forma espontánea (ver el ejemplo 80). Vehículo (p), proteína BNP recombinante (•), o proteína de fusión de albúmina BNP (o) se suministraron a través de inyección en la vena de la cola. Se registraron las presiones sanguíneas sistólicas y diastólicas mediante método de manguito de presión en la cola. La figura 10, muestra los niveles cGMP de plasma en ratones machos C57/BL6 de 11 a 12 semanas de edad después de la Inyección intravenosa de proteína BNP recombinante (•) o proteína de fusión de albúmina BNP (o) (ver el ejemplo 80). Se determinaron los niveles cGMP del plasma preparado a partir de sangrados de la cola recolectados en diversos puntos del tiempo después de la inyección intravenosa. La figura 1 1 , muestra los niveles de glucosa sanguínea en ratones db/db diabéticos de ~8 semanas de edad en ayuno, 24 horas después de la administración simple de fusión tándem de GLP-1 (7-36A8G)2x-HSA (CI D 3610) (0), fusión de monómero GLP-1 (7-36A8G)-HSA (?), o HSA solo (• ). Se midieron los niveles de glucosa sanguínea a través de una prueba de tolerancia a glucosa oral. La fusión tándem GLP-1 (7-36A8G)2x-HSA (CI D 3610) (0) tuvo una actividad de normalización de glucosa más potente inesperada que la fusión de monómero GLP-1 (7-36A8G)-HSA (?) 24 horas después de una sola administración en ratones db/db diabéticos de ~8 semanas de edad en ayuno. Descripción Detallada del Invento Definiciones Las definiciones que se encuentran a continuación se proporcionan para facilitar la comprensión de ciertos términos utilizados a lo largo de la presente especificación. Tal como se utiliza en la presente invención, el término "polinucleótidos" se refiere a una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína de fusión que comprende, o que consiste en forma alternativa, en al menos una molécula de albúmina (o un fragmento o variante del mismo) unida en estructura al menos a una proteína Terapéutica X (o fragmento o variante de la misma); una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótido que codifica una proteína de fusión que comprende, o que consiste en forma alternativa, en la secuencia de aminoácidos de la SEQ I D NO:Y (tal como se describe en la columna 6 de la Tabla 2) o un fragmento o variante de la misma; una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos que comprende o consiste en forma alternativa de la secuencia que se muestra en la SEQ I D NO:X; una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína de fusión que comprende, o consiste en forma alternativa de, la secuencia de aminoácidos de la SEQ I D NO:Z; una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína de fusión de albúmina de la presente invención generada tal como se describe en la Tabla 2 o en los ejemplos; una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína de fusión de albúmina Terapéutica de la presente invención, una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos que contiene una construcción de fusión de albúmina que se describe en la Tabla 2, o una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos contenida en una construcción de fusión de albúmina depositada con el ATCC (tal como se describe en la Tabla 3). Tal como se utiliza en la presente invención, "construcción de fusión de albúmina" se refiere a una molécula de ácido nucleico que comprende, o consiste en forma alternativa, en un polinucleótido que codifica al menos una molécula de albúmina (o un fragmento o variante del mismo) unida en estructura al menos a un polinucleótido que codifica al menos una molécula de una proteína Terapéutica (o fragmento o variante del mismo); una molécula de ácido nucleico que comprende, o consiste en forma alternativa, en un polinucleótido que codifica al menos una molécula de albúmina (o un fragmento o variante de la misma) unida en estructura al menos a un polinucleótido que codifica al menos una molécula de la proteína Terapéutica (o fragmento o variante de la misma) generada tal como se describe en la Tabla 2 o en los ejemplos; o una molécula de ácido nucleico que comprende, o consiste en forma alternativa, en un polinucleótido que codifica al menos una molécula de albúmina (o un fragmento o variante de la misma) unida en estructura al menos a un polinucleótido que codifica al menos una molécula de una proteína Terapéutica (o fragmento o variante de la misma) que comprende además, por ejemplo, uno o más de los siguientes elementos: (1 ) un vector de autorréplica funcional (que incluye pero no se limita a, un vector de plataforma, un vector de expresión, un vector de integración y/o un sistema de réplica), (2) una región para el inicio de transcripción (por ejemplo una región promotora, tal como por ejemplo, un promotor regulable o inducible, un promotor constitutivo), (3) una región para el término de transcripción, (4) una secuencia líder, (5) un marcador seleccionable. El polinucleótido que codifica la proteína Terapéutica y la proteína de albúmina, una vez que es parte de la construcción de fusión de albúmina, puede ser referido cada uno como una "parte" o "región" o "porción" de la construcción de fusión de albúmina. La presente invención se refiere de manera general a polinucleótidos que codifican proteínas de fusión de albúmina; proteínas de fusión de albúmina; y métodos para tratamiento, prevención o disminución de enfermedades o padecimientos utilizando proteínas de fusión de albúmina o polinucleótidos que codifican proteínas de fusión de albúmina. Tal como se utiliza en la presente invención, "proteína de fusión de albúmina" se refiere a una proteína formada mediante la fusión de al menos una molécula de albúmina (un fragmento o variante de la misma) al menos a una molécula de una proteína Terapéutica (o fragmento o variante de la misma). Una proteína de fusión de albúmina de la presente invención comprende al menos un fragmento o variante de una proteína Terapéutica y al menos un fragmento o variante de albúmina de suero humana, las cuales están asociadas con otra mediante fusión genética (por ejemplo, la proteína de fusión de albúmina se genera mediante traducción de un ácido nucleico en donde un polinucleótido que codifica todo o parte de la proteína Terapéutica se une en estructura con un polinucleótido que codifica toda o una parte de la albúmina). La proteína Terapéutica y la proteína de albúmina, una vez como parte de la proteína de fusión de albúmina, pueden ser referidas cada una como una "parte", "región", o "porción" de la proteína de fusión de albúmina (por ejemplo, una "parte de proteína Terapéutica" o "parte de proteína de albúmina"). En una modalidad altamente preferida , una proteína de fusión de al búmina de la presente invención comprende al menos u na molécula de una proteína X Terapéutica o fragmento o variante de la misma (incluyendo pero sin limitarse a una forma madu ra de la proteína X Terapéutica) y al menos u na molécula de albú mina o fragmento o variante de la misma (incl uyendo pero sin limitarse a una forma mad u ra de albúmina). En una modalidad preferida adicional , se procesa una proteína de fusión de albúmina de la presente invención a través de una célula huésped y se segrega en el medio de cultivo ci rcu ndante. El procesamiento dé la proteína de fusión de albúmina naciente que ocurre en las trayectorias de secreción del h uésped utilizadas para expresión , puede incl ui r, pero no se limita a, disociación de péptido de señal ; formación de enlaces de disulfu ro; doblez adecuado; adición y procesamiento de carbohidratos (tal como por ejemplo, g l ucosilación en lazada por N y O); disociaciones proteolíticas específicas; y ensamble en proteínas multiméricas. U na proteína de fusión de al búmina de la presente invención , está preferentemente en forma procesada. En una modalidad más preferida, la "forma procesada de u na proteína de fusión de albúmina" se refiere a un producto de proteína de fusión de al búmina que ha pasado por disociación de péptido de señal de terminal-N , también referida en la presente i nvención como una "proteína de fusión de al búmina madura". En varios casos, un clon representativo q ue contiene una construcción de fusión de albúmina de la presente invención, fue depositado con la Recolección de Cultivo Tipo Americano (aquí referido como "ATCC®"). Además, es posible recuperar una construcción de fusión de albúmina determinada del depósito mediante técnicas conocidas en el arte y que se describen en cualquier lugar en la presente invención. El ATCC® se localiza en 10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 201 10-2209, EUA. Los depósitos ATCC® se elaboraron de acuerdo con los términos del Tratado Budapest en el Reconocimiento I nternacional del Depósito de Microorganismos para los propósitos de procedimientos de patentes. En una modalidad, la presente invención proporciona un pollnucleótido que codifica una proteína de fusión de albúmina que comprende, o que consiste en forma alternativa, en una proteína Terapéutica y una proteína de albúmina de suero. En una modalidad adicional, la presente invención proporciona una proteína de fusión de albúmina que comprende, o que consiste en forma alternativa, en una proteína Terapéutica y una proteína de albúmina de suero. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona una proteína de fusión de albúmina que comprende, o consiste en forma alternativa, en una proteína Terapéutica y una proteína de albúmina de suero codificada por un polinucleótido que se describe en la Tabla 2. En una modalidad preferida adicional, la presente invención proporciona un polinucleótido que codifica una proteína de fusión de albúmina cuya secuencia se muestra como SEQ I D NO:Y en la Tabla 2. En otras modalidades, la presente invención proporciona una proteína de fusión de albúmina que comprende, o consiste en forma alternativa, en un fragmento biológicamente activo y/o terapéuticamente activo de una proteína Terapéutica y una proteína de albúmina de suero. En otras modalidades, la presente invención proporciona una proteína de fusión de albúmina que comprende, o consiste en forma alternativa, en una variante biológicamente activa y/o terapéuticamente activa de una proteína Terapéutica y una proteína de albúmina de suero. En modalidades preferidas, el componente de proteína de albúmina de suero de la proteína de fusión de albúmina es la proteína madura de albúmina de suero. La presente invención comprende además polinucleótidos que codifican estas proteínas de fusión de albúmina. En modalidades adicionales, la presente invención proporciona una proteína de fusión de albúmina que comprende, o consiste en forma alternativa, en una proteína Terapéutica y un fragmento de albúmina de suero biológicamente activo y/o terapéuticamente activo. En modalidades adicionales, la presente invención proporciona una proteína de fusión de albúmina que comprende, o consiste en forma alternativa, en una proteína Terapéutica y una variante de albúmina de suero biológicamente activa y/o terapéuticamente activa. En modalidades preferidas, la parte de la proteína Terapéutica de la proteína de fusión de albúmina es la parte madura de la proteína Terapéutica. En una modalidad preferida adicional, la parte de la proteína Terapéutica de la proteína de fusión de albúmina es el dominio soluble extracelular de la proteína Terapéutica. En una modalidad alternativa, la parte de la proteína Terapéutica de la proteína de fusión de albúmina es la forma activa de la proteína Terapéutica. La presente invención comprende además polinucleótidos que codifican estas proteínas de fusión de albúmina. En modalidades adicionales, la presente invención proporciona una proteína de fusión de albúmina que comprende, o consiste en forma alternativa, en un fragmento biológicamente activo y/o terapéuticamente activo o variante de una proteína Terapéutica y un fragmento biológicamente activo y/o terapéuticamente activo o variante de albúmina de suero. En modalidades preferidas, la presente invención proporciona una proteína de fusión de albúmina que comprende, o consiste en forma alternativa, en la proteína madura de una proteína Terapéutica y la parte madura de albúmina de suero. La presente invención comprende además polinucleótidos que codifican estas proteínas de fusión de albúmina. Proteínas Terapéuticas Tal como se manifestó anteriormente, un polinucleótido de la presente invención codifica una proteína que comprende o consiste en forma alternativa, en al menos un fragmento o variante de una proteína Terapéutica y al menos un fragmento o variante de al búmina de suero hu mano, las cuales están asociadas con otra, preferentemente mediante fusión genética. Una modalidad adicional incluye u n polin ucleótido que codifica una proteína que comprende o consiste en forma alternativa de al menos un fragmento o variante de una proteína Terapéutica y al menos un frag mento o variante de albúmina de suero h u mano , las cuales se enlazan con otra mediante conjugación química . Tal como se utiliza en la presente invención , "proteína Terapéutica" se refiere a proteínas, polipéptidos, anticuerpos, péptidos o fragmentos o variantes de la misma, que tienen una o más actividades terapéuticas y/o biológicas. Las proteínas terapéuticas comprendidas por la presente invención i ncluyen pero no se limitan a, proteínas, polipéptidos, péptidos, anticuerpos y biológicos. (Los términos péptidos, proteínas y polipéptidos se utilizan de manera intercambiable en la presente invención). Se contempla en forma específica que el térm ino "proteína Terapéutica" contiene anticuerpos y frag mentos y variantes de las mismas. Por lo tanto u na proteína de la presente invención puede contener al menos un frag mento o variante de una proteína Terapéutica, y/o al menos un fragmento o variante de un anticuerpo. Además, el término "proteína Terapéutica" puede referirse a u na correlación endógena o que ocurre naturalmente de una proteína Terapéutica. Por la frase un polipéptido que despliega u na "actividad terapéutica" o una proteína que es "terapéuticamente activa" se entiende un polipéptido que posee una o más actividades biológicas y/o terapéuticas conocidas asociadas con una proteína terapéutica, tal como una o más de las proteínas Terapéuticas descritas en la presente invención o conocidas de otra forma en la técnica. Como un ejemplo no limitante, una "proteína Terapéutica" es una proteína que es útil para tratar, prevenir o aminorar una enfermedad, condición o padecimiento. Como un ejemplo no limitante, una "proteína Terapéutica" puede ser una que enlaza en forma específica a un tipo de célula en particular (normal) (por ejemplo linfocltos) o anormal (por ejemplo células cancerígenas) y por consiguiente puede ser utilizada para dirigirse a un compuesto (fármaco o agente citotóxico) a dicho tipo celular en forma específica. Por ejemplo, una lista no exhaustiva de partes de "proteína Terapéutica" que pueden ser comprendidas por una proteína de fusión de albúmina de la presente Invención, incluye, pero no se limita a, GLP-1 , GLP-2, PACAP-27, PACAP-28, VI P, CD4M33, secretina, glicentina, oxintomodulina, PHM , I FNa, I FNß, ANP, BN P, NGF, BDNF, GDNF, y somatostatina. Los híbridos de interferón también se pueden fusionar a los términos amino o carboxi de la albúmina, para formar una proteína de fusión de albúmina híbrida de interferón . La proteína de fusión de albúmina híbrida de interferón puede tener actividad de interferón aumentada, o como alternativa, suprimida, tal como respuestas antivirales, regulación de crecimiento celular y modulación de respuestas inmunes (Lebleu y Asociados, PNAS EUA, 73:3107-31 1 1 (1976); Gresser y Asociados, Nature, 251 :543-545 (1974); y Johnson, Texas Reports Biol. Med, 35:357-369 (1977)). Cada proteína de fusión de albúmina híbrida de interferón puede utilizarse para tratar, prevenir o aminorar infecciones virales (por ejemplo hepatitis (por ejemplo HCV); o VI H), esclerosis múltiple o cáncer. En una modalidad, la parte híbrida de interferón de la proteína de fusión de albúmina híbrida de interferón comprende un híbrido de interferón alfa-interferón alfa (referido en la presente invención como un híbrido alfa-alfa). Por ejemplo, la parte híbrida alfa-alfa de la proteína de fusión de albúmina híbrida de interferón consiste, o comprende en forma alternativa, interferón alfa A fusionado a interferón alfa D. En una modalidad adicional, se fusiona el híbrido A/D en el sitio de restricción Bglll común al alfa D de interferón, en donde la parte de terminal-N del híbrido A/D corresponde a los aminoácidos 1 -62 de interferón alfa A y la parte de terminal-C corresponde a ios aminoácidos 64-166 de interferón alfa D. Por ejemplo, este híbrido A/D podría comprender la secuencia de aminoácidos: CDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRXi lSLFSCLKDRH DFGFPQEEFGNQ FQKAETIPVLHEMIQQI FNLFTTKDSSAAWDEDLLDKFCTELYQQLND LEACVMQEERVGETPLMNX2DSI LAVKKYFRRITLYLTEKKYSPCAWE VVRAEI MRSLSLSTNLQERLRRKE (SEQ I D NO:99), en donde X, es R ó K y X2 es A ó V (ver por ejemplo la Construcción I D #2875). En una modalidad adicional, el híbrido A/D se fusiona al sitio de restricción Pvu ll l común , en donde la parte de terminal-N del híbrido A/D corresponde a los aminoácidos 1 -91 de interferón alfa A, y la parte de terminal-C corresponde a los aminoácidos 93-166 de interferón alfa D. Por ejemplo, este híbrido A/D puede comprender la secuencia de aminoácidos: CDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRX-, ISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQ FQKAETI PVLHEMIQQI FNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLND LEACVMQEERVGETPLMNX2DSI LAVKKYFRRITLYLTEKKYSPCAWE VVRAEI M RSLSLSTNLQERLRRKE (SEQ I D NO: 100), en donde el X^ es R ó K y el segundo X2 es A ó V (ver por ejemplo la Construcción ID #2872). Estos híbridos se describen en forma adicional en la Patente Norteamericana No. 4,414,510, la cual está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia. En una modalidad adicional, la parte híbrida alfa-alfa de la proteína de fusión de albúmina híbrida de interferón consiste, o comprende en forma alternativa, interferón alfa A fusionado a interferón alfa F. En una modalidad adicional, el híbrido A/F se fusiona al sitio de restricción Pvul l l común, en donde la parte de terminal-N del híbrido A/F corresponde a los aminoácidos 1 -91 del interferón alfa A y la parte de terminal-C corresponde a los aminoácidos 93-166 del interferón alfa F. Por ejemplo, este híbrido A/F puede comprender la secuencia de aminoácidos: CDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRXISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQF QKAETI PVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDM EACVIQEVGVEETPLM NVDSI LAVKKYFQRITLYLTEKKYSPCAWEVV RAEI MRSFSLSKI FQERLRRKE (SEQ I D NO: 101 ), en donde X es ya sea R ó K (ver por ejemplo, la Construcción I D #2874). Estos híbridos se describen en forma adicional en la Patente Norteamericana No. 4,414,510, la cual está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia. En una modalidad adicional, la parte híbrida alfa-alfa de la proteína de fusión de albúmina híbrida de interferón consiste, o comprende en forma alternativa, interferón alfa A fusionado a interferón alfa B. En una modalidad adicional, el híbrido A/B se fusiona en el sitio de restricción Pvu l l l común , en donde la parte de terminal-N del híbrido A/B corresponde a los aminoácidos 1 -91 de interferón alfa A y la parte terminal-C corresponde a los aminoácidos 93-166 de interferón alfa B. Por ejemplo, este híbrido A/B puede comprender la secuencia de aminoácidos: CDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRXi lSLFSCLKDRH DFGFPQEEFGNQ FQKAETI PVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLND LEX2X3X X5QEVGVI ESPLMYEDSILAVRKYFQRITLYLTEKKYSSCAW EVVRAEI MRSFSLSI NLQKRLKSKE (SEQ I D NO: 102) en donde el X! es R ó K y X2 a X5 es SCVM ó VLCD (ver por ejemplo, la Construcción I D #2873). Estos híbridos se describen en forma adicional en la Patente Norteamericana No. 4,414,510, la cual está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia).

En otra modalidad, la parte híbrida de interferón de la proteína de fusión de albúmina híbrida de interferón comprende un híbrido de interferón beta-interferón alfa (referido en la presente invención como híbrido beta-alfa). Por ejemplo, la parte híbrida beta-alfa de la proteína de fusión de albúmina híbrida de interferón consiste, o comprende en forma alternativa, interferón beta-1 fusionado a interferón alfa D (también referido como interferón alfa-1 ). En una modalidad adicional, el híbrido beta-1 /alfa D se fusiona en donde la parte de terminal-N corresponde a los aminoácidos 1 -73 del interferón beta-1 y la parte de terminal-C corresponde a los aminoácidos 74-167 de interferón alfa D. Por ejemplo, este híbrido beta-1 /alfa D puede comprender una secuencia de aminoácidos: MSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQL QQFQKEDAALTIYEMLQN I FAI FRQDSSAAWDEDLLDKFCTELYQQLN DLEACVMQEERVGETPLMNXDSI LAVKKYFRRITLYLTEKKYSPCAWE VVRAEI MRSLSLSTNLQERLRRKE (SEQ I D NO: 103), en donde X es A ó V. Estos híbridos se describen en forma adicional en la Patente Norteamericana No. 4,758,428, la cual está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia). En otra modalidad , la parte híbrida de interferón de la proteína de fusión de albúmina h íbrida de interferón comprende un híbrido de interferón alfa-interferón beta (referido en la presente invención como un híbrido alfa-beta). Por ejemplo, la parte híbrida alfa-beta de la proteína de fusión de albúmina híbrida de interferón consiste, o comprende como alternativa, interferón alfa D (también referido como interferón alfa-1 ) fusionado a interferón beta-1. En una modalidad adicional, el híbrido alfa D/beta-1 se fusiona en donde la parte de terminal-N corresponde a los aminoácidos 1 -73 de interferón alfa D y la parte de terminal-C corresponde a los aminoácidos 74 a 166 de interferón beta-1 . Por ejemplo, este híbrido alfa D/beta-1 puede tener una secuencia de aminoácidos: MCDLPETHSLDNRRTLMLLAQMSRISPSSCLMDRHDFGFPQEEFDG NQFQKAPAISVLH ELIQQI FNLFTTKDSSSTGWN ETIVENLLANVYHQI NHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCA WTIVRVEILRNFYFI NRLTGYLRN (SEQ I D NO: 104). Estos híbridos se describen en forma adicional en la Patente Norteamericana No. 4,758,428, la cual está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia. En modalidades adicionales, la parte híbrida de interferón de las proteínas de fusión de albúmina híbrida de interferón puede comprender combinaciones adicionales de híbridos de interferón alfa-alfa, híbridos de interferón alfa-beta, e híbridos de interferón beta-alfa. En modalidades adicionales, la parte híbrida de interferón de la proteína de fusión de albúmina híbrida de interferón puede ser modificada para incluir mutaciones, substituciones, eliminaciones, o adiciones a la secuencia de aminoácidos del híbrido de interferón. Dichas modificaciones a las proteínas de fusión de albúmina híbrida de interferón pueden realizarse, por ejemplo, para mejorar los niveles de producción, incrementar la estabilidad, incrementar o disminuir la actividad o conferir nuevas propiedades biológicas. Las proteínas de fusión de albúmina híbrida de interferón descritas anteriormente, que están comprendidas en la presente invención son células huésped y vectores que contienen polinucleótidos que codifican los polipéptidos. En una modalidad, una proteína de fusión de albúmina híbrida de interferón codificada por un polínucleótido tal como se describe anteriormente, tiene una vida en anaquel prolongada. En una modalidad adicional, una proteína de fusión de albúmina híbrida de interferón codificada por un polinucleótido descrito anteriormente, tiene una vida promedio de suero más larga y/o una actividad más estabilizada en solución (o en composición farmacéutica) in vitro y/o in vivo, que la molécula híbrida de interferón no fusionada correspondiente. En otro ejemplo no limitativo, una "proteína Terapéutica" es una proteína que tiene actividad biológica, y en particular, una actividad biológica que es útil para tratar, prevenir o aminorar una enfermedad. Una lista no inclusiva de actividades biológicas que puede poseer una proteína Terapéutica incluye, inhibición de infección de células por VI H-1 .estimulación de proliferación de célula epitelial intestinal, reducción de permeabilidad de célula epitelial intestinal, estimulación de secreción de insulina, inducción de broncodilatación y vasodilatación, inhibición de aldosterona, y secreción de renina, regulación de presión sanguínea, promoción de crecimiento neuronal, aumento de respuesta inmune, aumento de inflamación, supresión de apetito o cualquiera de uno o más de las actividades biológicas descritas en la sección de "Actividades Biológicas" que se encuentra más adelante y/o tal como se describe para una proteína Terapéutica determinada en la Tabla 1 (columna 2). En una modalidad, se utilizan fusiones I FN-beta-HSA para inhibir la actividad de virus de Ébola y el virus de SARS (cepa Toronto-2). Por ejemplo, la actividad antiviral in vitro de la corriente ascendente de HSA madura (proteína CI D 2053) fusionada por I FN-beta, se evaluó contra virus de Ébola y virus de SARS en células Vero. Estas células fueron utilizadas para evaluar los efectos protectores de la proteína CI D 2053 con base en la inhibición del efecto citopático (CPE) y el ensayo rojo neutral de la viabilidad celular. Se evaluó la transducción de señal in vitro mediante análisis de expresión genética. Además, se evaluaron las farmacocinéticas y farmacodinámicas de la proteína CID 2053 en monos rhesus. Los resultados indican que la potente actividad antiviral in vitro se logró con un índice de seguridad favorable. El IC50 de la proteína CI D 2053 fue de 0.4 ng/ml contra virus de Ébola y 2 ng/ml contra virus de SARS. El análisis de formación mostró que la proteína CI D 2053 e I FN-beta inducen la expresión de un grupo de genes similar y activan la trayectoria de transducción de señal del elemento de respuesta estimulado por IFN (ISRE). En monos rhesus a los que se les administró una dosis de 50 µg/kg IV ó SC ó 300 µg/kg SC de proteína CI D 2053, la vida promedio terminal fue de 36 a 40 horas. La administración de la proteína CI D 2053 indujo incrementos sostenidos en niveles de neopterina de suero y expresión de mARN OASI . En una modalidad adicional, se utilizan fusiones I FN-alfa-HSA para inhibir agentes virales clasificados bajo la categoría A-Filo (Ébola), Arena (Pichende), Categoría B-Toga (VEE) o Categoría C-Bunya (Punto toro), Flavi (fiebre Amarilla, West Nile). Por ejemplo, se emplearon ensayos de inhibición CPE, de manchado con rojo neutral y de producción de virus para evaluar las actividades antivirales de la corriente descendente de HSA (proteína CI D 3165) fusionadas con I FN-alfa. Se evaluaron las farmacocinéticas de actividades farmacodinámicas de la proteína CI D 3165 en monos clnomolgos y sujetos humanos. Los resultados indican que se logró la actividad antiviral contra todos los virus de ARN evaluados con un índice de seguridad favorable. Los valores IC50 fluctuaron de <0.1 ng/ml (Punta Toro A) a 19 ng/ml (VEE) en el ensayo CPE. En monos cinomolgos, la vida promedio de la proteína CI D 3165 fue de 90 horas y fue detectable hasta 14 días después de la dosis. En sujetos humanos, la proteína CI D 3165 fue segura y bien tolerada. El Cmax después de las dosis de una sola inyección fue proporcional a la dosis. El Cmax promedio en el cohorte de 500 µg fue de 22 ng/ml, y el t?/2 promedio fue de 150 horas. La dosificación una vez cada 2 a 4 semanas o más, es soportada por las farmacocinéticas. La respuesta antiviral contra Hepatitis C se observó en la mayor parte de los sujetos en los cohortes de una sola inyección (120-500 µg). En una modalidad adicional, se utilizaron fusiones I FN-alfa- HSA para tratar pacientes con infección por Hepatitis C (HCV) crónica. El interferón alfa, también conocido como interferón alfa o interferón de leucocito, es el estándar de cuidado para el tratamiento de pacientes infectados con HCV. El término "interferón alfa" se refiere a una familia de polipéptidos altamente relacionados con homólogos con actividad anti-viral. La parte de interferón alfa de la fusión I FN-alfa-HSA consiste o comprende en forma alternativa cualquier interferón alfa o fragmento del mismo conocido en la técnica. Los ejemplos sin limitación de interferón alfa comprendidos por la presente invención , incluyen pero no se limitan a, las proteínas de interferón alfa descritas en la columna de proteína Terapéutica de la Tabla 1 . En modalidades particulares, la parte de interferón alfa consiste o comprende en forma alternativa interferón alfa-2a, interferón alfa-2b, interferón alfa-2c, interferón de consenso, interferón alfacon-1 , interferón alfa-n 1 , interferón alfa-n3, cualquier forma comercialmente disponible de interferón alfa, tal como por ejemplo, I NTRON® A (Schering Corp. , Kenilworth, N. J. ), ROFERON® A (Hoffman-La Roche, Nutley, N . J .), Berofor alpha interferón (Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc. Ridgefield, Conn. ), OMNIFERONMR (Viragen, Inc. , Plantation, FL), MULTI FERONM R (Viragen, I nc. , Plantatlon, FL), WELLFERON® (GlaxoSmlthKIlne, Londres, Gran Bretaña), INFERGEN® (Amgen, Inc. , Thousands Oaks, CA), SUMI FERON® (Sumitomo, Japón), BELEROFON® (Nautilus Biotech, Francia) o cualquier producto de interferón alfa purificado o fragmento del mismo. En modalidades adicionales, la parte de interferón alfa de la proteína de fusión I N F-alfa-HSA puede ser modificada mediante la adición de partes químicas. Por ejemplo, la parte de interferón alfa puede ser modificada mediante pegilación. Por consiguiente, en modalidades adicionales, la parte de interferón alfa de la proteína de fusión I FN-alfa-HSA, consiste o comprende en forma alternativa formas pegiladas de interferón alfa-2a, 2b, o interferón de consenso e incluyen, pero no se limitan a, ¡nterferón alfa pegilado comercialmente disponible, tal como por ejemplo PEG-I NTRON® (Schering Corp. , Kenilworth, N . J.), PEGASYS® (Hoffman-La Roche, Nutley, N. J.), PEG-OMNIFERONMR (Viragen, Inc. , Plantation, FL) o un fragmento del mismo. Sin embargo, tal como se utiliza en la presente invención, las fusiones "I FN-alfa-HSA" se refieren a HSA fusionado a cualesquiera proteínas de interferón alfa conocidas en la técnica o fragmentos de las mismas. Los pacientes infectados con HCV pueden caer dentro de dos categorías con base en exposición previa a un régimen de interferón para tratamiento de la infección por HCV. "Pacientes Naive", son aquellos pacientes quienes nunca han sido tratados con un régimen de interferón. "Pacientes experimentados" son aquéllos pacientes que han sido tratados o que actualmente están siendo tratados con un régimen de interferón. "Que no responden" son pacientes experimentados que han sido tratados previamente con un régimen de interferón pero que se ha fallado en llegar al pu nto final pri mario de tratamiento, tal como una reducción de carga viral temprana (EVR) o una respuesta del fi nal del tratamiento (ETR). Sin embargo , tal como se utiliza en la presente invención , un "paciente HCV" se refiere a un paciente que está infectado con HCV y q ue es ya sea naive, experimentado, o que no responde. Además, el virus de Hepatitis C puede ser clasificado en cuatro genotipos, genotipo 1 , 2 , 3 ó 4. Generalmente, el virus de Hepatitis C que infecta a u n paciente con HCV comprende u n solo genoti po. Sin embargo, el virus de hepatitis puede comprender una combinación de dos o más genotipos. Además, el genotipo del virus de Hepatitis C también puede ser una variante de u no de los genotipos de HCV conocidos. En una modalidad adicional , el virus de Hepatitis C del paciente HCV, es genotipo 1 o una variante del mismo. Sin embargo, tal como se utiliza en la presente invención , "HCV" se refiere al virus de Hepatitis C de cualquier genotipo, o u na combinación de variantes del mismo . El régi men de tratamiento estándar para pacientes con HCV, comprende el tratamiento con interferón alfa en combinación con un agente antiviral tal como ribavirina. En general , el interferón alfa se administra diariamente, dos veces por semana o semanalmente y la ribavirina se admi nistra diariamente. Sin embargo, estudios recientes han utilizado también interferón alfa en combinación con otros agentes antivirales conocidos en la técnica para el tratamiento de HCV. Por lo tanto, en una cuarta modalidad , la fusión I FN-alfa-HSA puede ser administrada al paciente HCV ya sea sola o en combinación con un agente antiviral, tal como por ejemplo, ribavirina. Tal como se observó anteriormente, las farmacocinéticas de la proteína CI D 3165 soportan un programa de dosificación de una vez cada 2 a 4 semanas o más. Por lo tanto, en una modalidad adicional, se tratan los pacientes HCV con una fusión I FN-alfa-HSA a través de la administración una vez de 2 a 4 semanas solo en combinación con una cantidad efectiva de un agente antiviral. En una modalidad preferida, los pacientes HCV se tratan con una fusión I FN-alfa-HSA mediante la administración una vez cada 2 a 4 semanas en combinación con una cantidad efectiva de un agente antiviral. En una modalidad preferida adicional, la fusión I FN-alfa-HSA se administra al paciente HCV una vez cada 4 semanas. En una modalidad preferida adicional, se administra la fusión IFN-alfa-HSA al paciente HCV más de una vez cada 4 semanas. En modalidades adicionales, se administra la fusión I FN-alfa-HSA una vez cada 4 semanas o más a un paciente HCV, en donde el tratamiento también incluye administración de una cantidad efectiva de un agente antiviral. En otra modalidad, se pueden utilizar fusiones I FN-alfa-HSA como una monoterapia de dosis baja para terapia de mantenimiento de HCV. En una modalidad adicional, se pueden utilizar fusiones I FN-alfa-HSA en combinación con ribavirina y uno o más agentes antivirales para el tratamiento de HCV. Como alternativa, en otra modalidad, se pueden utilizar fusiones I FN-alfa-HSA en combinación con uno o más agentes antivirales, diferentes a ribavirina, para el tratamiento de HCV. En una modalidad adicional, se pueden utilizar fusiones IFN-alfa-HSA para el tratamiento de otras infecciones virales. Por ejemplo, en una modalidad, se pueden utilizar fusiones I FN-alfa-HSA para el tratamiento de Hepatitis B (HBV). En una modalidad adicional, se pueden utilizar fusiones I FN-alfa-HSA para el tratamiento de Virus de Papiloma Humano (HPV). En una modalidad adicional, se pueden utilizar fusiones I FN-alfa-HSA en el tratamiento de cáncer, incluyendo, pero sin limitarse a leucemia de células peludas, melanoma maligno, linfoma folicular, leucemia mielogenosa crónica, sarcoma de Kaposi relacionada con SI DA, mieloma múltiple o cáncer de célula renal. En otra modalidad , se utilizan fusiones GLP-HSA para regular niveles de glucosa sanguínea en pacientes diabéticos. En una modalidad adicional, se utilizan fusiones tándem de GLP-1 tipo natural o mutante para regular los niveles de glucosa sanguínea en pacientes diabéticos. Por ejemplo, se evaluó la capacidad de las fusiones del monómero GLP-1 (7-36A8G)-HSA y tándem GLP-1 (7-36A8G)-HSA para regular los niveles de glucosa sanguínea utilizando una prueba de tolerancia de glucosa oral (1 gramo glucosa/kg por gavaje oral), seguido de inyección subcutánea de proteína GLP-1 -HSA en ratones db/db diabéticos de ~8 semanas de edad. Esta prueba de tolerancia a la glucosa consistió en la inyección subcutánea de una fusión GLP-1 -HSA, seguida de la administración de 1 gramo de glucosa/kg por gavaje oral. Se administraron a ratones db/db diabéticos en ayuno, dosis equimolares (100 y 171 nmol/kg) ya sea de la proteína de fusión de monómero o tándem GLP-1 -HSA y se llevaron a cabo pruebas de tolerancia de glucosa oral 6 ó 24 horas después de una sola administración. En forma muy sorprendente e inesperada, la fusión tándem GLP-1 (7-36A8G)-HSA (CI D 3610) redujo en forma significativa la glucosa sanguínea 6 horas después de la inyección en comparación con la fusión de monómero GLP-1 (7-36A8G)-HSA. Además, la diferencia entre las fusiones de monómero GLP-1 (7-36A8G)-HSA y tándem GLP-1 (7-36A8G)-HSA (CI D 3610) fueron incluso más dramáticas cuando se evaluaron ratones db/db diabéticos 24 horas después de la inyección. Tal como se muestra en la figura 1 1 , la fusión tándem GLP-1 (7-36A8G)-HSA (CI D 3610) (0) tuvo una actividad de normalización de glucosa inesperadamente potente mientras que los niveles de glucosa sanguínea más rápidos para la fusión simple GLP-1 (7-36A8G)-HSA ( ) fue similar a los animales a los que se les administró HSA solo (•) y claramente fueron diabéticos por naturaleza. Tal como se utiliza en la presente invención "actividad terapéutica" o "actividad" se puede referir a una actividad cuyo efecto es consistente con resultados terapéuticos deseables en humanos, o con efectos deseados en mamíferos no humanos o en otras especies u organismos. La actividad terapéutica puede ser medida in vivo o in vitro. Por ejemplo, se puede ensayar en un cultivo celular un efecto deseado. Dichos ensayos de cultivo celular o in vitro, están comúnmente disponibles para muchas proteínas Terapéuticas tal como se describe en la técnica. Los ejemplos de ensayo se incluyen, pero no se limitan a los que se describen en la sección de Ejemplos o en la columna de "Ensayo de Actividad de Ejemplo" (columna 3) de la Tabla 1 . Las proteínas Terapéuticas que corresponden a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención , tal como proteínas de superficie celular o de segregación, con frecuencia son modificadas por la adhesión de uno o más grupos de oligosacáridos. La modificación, referida como glucosilación, puede afectar en forma dramática las propiedades físicas de proteínas y puede ser importante en la estabilidad, secreción, y localización de la proteína. La glucosilación no ocurre a lo largo de la estructura de polipéptidos. Normalmente existen dos tipo importantes de glucosilación: glucosilación caracterizada por oligosacáridos enlazados-O los cuales se adhieren a residuos de serina o treonina; y glucosilación caracterizada por oligosacáridos enlazados-N, los cuales se adhieren a residuos de asparagina en una secuencia Asn-X-Ser o Asn-X-Thr, en donde X puede ser cualquier aminoácido excepto prolina. El ácido N-acetiIneurámico (también conocido como ácido siálícico) normalmente es el residuo terminal de oligosacáridos tanto enlazados-N como enlazados-O. Las variables tales como la estructura de proteína y tipo celular, tienen influencia en el número y naturaleza de las unidades de carbohidratos dentro de las cadenas en diferentes tipos de glucosilación. Los isómeros de glucosilación también son comunes en el mismo sitio dentro de un tipo de célula determinada. Las proteínas terapéuticas que corresponden a una parte de la proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, así como análogos y variantes del mismo, pueden ser modificadas de modo que la glucosilación en uno o más sitios sea alterada como resultado de la manipulación(s) de su secuencia de ácido nucleico, por la célula huésped en la cual se expresan , o debido a otras condiciones de su expresión. Por ejemplo, los isómeros de glucosilación pueden ser producidas eliminando o introduciendo sitios de glucosilación , por ejemplo, mediante sustitución o eliminación de residuos de aminoácido, tales como sustitución de glutamina por asparagina, o proteínas recombinantes no glucosiladas pueden ser producidas expresando las proteínas en células huésped que no las glucosilarán, por ejemplo, E. coli o levadura deficiente de glucosilación. Estos métodos se describen con mayor detalle más adelante y son conocidos en la técnica. Las proteínas Terapéuticas, particularmente aquellas que se describen en la Tabla 1 , y sus aminoácidos y secuencias de aminoácidos son bien conocidas en la técnica y están disponibles en las bases de datos públicas tales como Bases de Datos de Servicios Químicos Abstractos (por ejemplo, el Registro CAS), GenBank, y las bases de datos proporcionadas mediante suscripción tal como GenSeq (por ejemplo Derwent). Las secuencias de nucleótidos de ejemplo de las proteínas terapéuticas que se pueden utilizar para derivar un polinucleótido de la presente invención , se muestran en la columna 7, "SEQ ID NO:X" de la Tabla 2. Las secuencias mostradas como la SEQ I D NO: X pueden ser una secuencia de polinucleótido de tipo natural que codifica una proteína Terapéutica determinada (por ejemplo, de longitud total o madura), o en algunos casos la secuencia puede ser una variante de la secuencia de polinucleótidos tipo natural (por ejemplo, un polinucleótido que codifica la proteína Terapéutica tipo natural, en donde la secuencia de ADN del polinucleótido ha sido optimizada, por ejemplo, para expresión en una especie en particular; o un polinucleótido que codifica una variante de la proteína Terapéutica tipo natural (por ejemplo, un mutante dirigido al sitio: una variante alélica). Está también dentro de la capacidad de los expertos en la técnica, utilizar la secuencia mostrada en la SEQ I D NO:X para derivar la construcción que se describe en la misma fila. Por ejemplo, si la SEQ I D NO:X corresponde a una proteína de longitud total, aunque únicamente una parte de la proteína se utiliza para generar el CI D específico, está dentro de las habilidades de un experto en la técnica apoyarse en técnicas de biología molecular tal como PCR, para amplificar el fragmento específico y el clon en el vector adecuado. Las proteínas Terapéuticas adicionales que corresponden a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina a la presente invención, incluyen, pero no se limitan a, una o más de las proteínas, Terapéuticas o péptidos que se describen en la columna "Proteína Terapéutica X" de la Tabla 1 (columna 1 ), o fragmento variable del mismo. La Tabla 1 , proporciona una lista una exhaustiva de proteínas Terapéuticas que corresponden a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, o una proteína de fusión de albúmina codificada por un polinucleótido de la presente invención. La primera columna, la "Proteína Terapéutica X", describe moléculas de proteína terapéutica que pueden estar seguidas de un paréntesis que contiene nombres científicos o de marcas de proteínas que comprenden , o como alternativa consisten en la molécula de proteína Terapéutica o un fragmento o variante de la misma. La "Proteína Terapéutica X" tal como se utiliza en la presente invención, puede referirse ya sea a una molécula de proteína Terapéutica individual, o a todo el grupo de proteínas Terapéuticas asociadas con una molécula de proteína Terapéutica determinada descrita en esta columna. La columna de "Actividad Biológica" (columna 2) describe actividades Biológicas asociadas con una molécula de proteína Terapéutica. La columna 3, "Ensayo de Actividad de Ejemplo", proporcionan diferencias que describen ensayos que pueden ser utilizados para probar la actividad terapéutica y/o biológica de una proteína Terapéutica X: o una proteína de fusión de albúmina que comprende una parte de la proteína Terapéutica X o fragmento de la misma. Cada una de las referencias mencionadas de la columna de "Ensayo de Actividad de Ejemplo" están incorporadas en su totalidad a la presente invención como referencia, particularmente con respecto a la descripción del ensayo de actividad respectiva descrito en la referencia (por ejemplo, ver la sección de Métodos de la Presente Invención,) para ensayar la actividad biológica correspondiente establecida en la columna de "Actividad Biológica" de la Tabla 1 . La cuarta columna, "I ndicación Preferida Y", describe una enfermedad , padecimientos y/o condiciones que pueden ser tratados, evitados, diagnosticados y/o diminuidos mediante la proteína Terapéutica X o una proteína de fusión de albúmina que comprende una parte de la proteína Terapéutica X (o fragmento de la misma). La columna de "I D de Construcción" (columna 5) proporciona un enlace a una construcción de fusión de albúmina de ejemplo descrita en la Tabla 2 que codifica una proteína de fusión de albúmina que comprende, o consiste en forma alternativa en la parte de la Proteína Terapéutica X de referencia (o fragmento de la misma).

O üi Tabla 1 Protßlpa Terapéutica X Actividad Biológica Ensayo de Activ dad de Ejemplo Indicación Preferida Y ID C Es hormona de crecimiento humano! Enlaza a dos moléculas GHR e mdüc? Ensayo de proliferación Ba/F3-hGHR un 3468 (Pegvisamont Somatrem transducción de señal a través de la bioensayo especlf co de hormona de crecimiento 3470 Somatropln TROVERT señalización de d menzaaón humano de suero J Clin Endocrino! Metab 2000 PROTROPIN 8IO-TROPJN Nov 85(11)42749 Inmunoensayo de Hormona HU ATROPE NEUTROPIN de crecimiento (GH) y bioensayo tibial Appl NUTROPIN AQ NUTROPHIN Physiol 2000 Dlc 89(6} 2174 8 Proliferación NORDITROPIN GENOTROPIN transmitida por receptor de hormona de SAIZEN SEROSTIM) crecimiento (hGH) Growth Horm IFG Res 2000 Oct 10(5) 248-55 Estándar internacional de hormona de crecimeinto Horm Res 1999 51 Suppl 1 7-12 interferon alfa (Interferon alga 2b Copfere un rango de respuestas Ensayo anti viral Rubinstein S Familletti PC Infecciones Virales que incluyen Síndrome 224 recomblpante Ineferon alfa ni celulares que incluyen actividades Pestka S (1981 ) Convenlent assay for Respiratorio Agudo Severo (SARS) y otras 236 Interferon alfa p3 Pegipterferon antivirales antiproliferativas antitumor e interferons J Virón 37(2) 755-8 Anti infecciones de coronavirus filovíruses 238 alfa 2b Rivavinp e Inferieron alga- inmuno uladores, estimulan la proJiferation assay Gao Y y asociados (1999) incluyendo pero sin limitarse a vfr?ses de 316 2b Interferon atfacon 1 consenso producción de dos epztnas una snasa Sensibilidad de una linea de tumor positivo de Ébola y virus de Marburg Arenavíruses 342 de interferon YM 643 CtFN de proteina y una sintetasa de virus de epstein barr Daudl para interferon alfa incluyendo pero sin limitarse a virus de 347 consenso de Interferon alfa ofigodemlato se correlaciona con la expresión de la Pichende virus Lassa Junin virus Ipterferon de consenso de metion lo trascripción viral enpquecida con GC Mol Cell Machupo virus Guananto y virus de recombipant? Interferon de Biol 19(11) 7305-13 coriomeninguitis linfocitica (LCMV) consenso recombinante CGP Bu nyaví rusas incluyendo pero sin limitarse 35269 RO 253036 RO 258310 a virus de Fiebre Hemorrágica Cpmean INTRON A PEG-INTRON O1F Congo viruses de fiebre por mosca de OMNIFERON PEG OMNIFERON arena viruses de Fiebre Rift Valley virusas VELDONA PEG REBETRON La Crssse y hantavíruses Flavivlruses ROFERON A WELLFERON incluyendo pero sin limitarse a Fiebre ALFERON N/LDO REBETRON Amanlla virus Banzi virus West Nile ALTEMOL VIRAFERONPEG viruses de Dengue vrus de Encefalitis PEGASYS VIRAFERON Japonesa virus de encefalitis por Garrapata VIRAFON A PLIGEN Fiebe Hemorrágica de Omsk y virus de INFERGEN INFAREX ORAGEN) Enfermedad de Bosque Kyasanur O n Tabla 1 (continuación) Proteina Terapéutica: X Actividad Biológica Ensayo de Actividad de Ejemplo Indicación Preferida: Y ID Constru y Darling y asociados, Emerg Med Clin No Am 2002, 20 (2)273 Interferon befa (mterferon bela-1a Modula la expresión de anligeno MHC, Ensayo anti viral Rubmsteln S, Familletti PC Pestka|lnfecaones Virales que incluyen Síndrome Respiratorio Agudo 1778 1779 Ipterferan beta-1b, Interferon beta- actividad celular NK y producción IFNg y (1981) Convement assay for mteferons J Viral Severo (SARS) y otras infecciones de coronavirus, (¡loviruses 2013 2053 sepna, SH 579, ZK 157046, BCDF proliferación assay Gao Y, ) incluyendo pero sin limitarse a viruses de Ebola y virus de Marburg 2492 2580 producaon IL12 en monocitos 37(2)755-8, Anti beta 2 IF, lnterferon-beta-2, rhlL-6 asociados (1999) Sensibilidad de una linea de tumor|Arenav?ruses incluyendo pero sin limitarse a virus de Pichende, virus 2796 2797 SJ0031 , DL 8234, FERON, IFNbefa positivo de virus epstem-bar, Daudí a inteferon alfa se Lassa virus Junin virus Machupo, virus Guananto y virus de BETASERON, AVONEX, REBIF corrlaciona con la expresión de una trascnpcion viral conomemnguilis Mocita (LCMV), Bunyaviruses, incluyendo pero BETAFERON SIGOSIX) rica en GC Mol Cell Biol 19(11)7305-13 sin limitarse a virus de Fiebre Hemorragica Cn ean-Conao, viruses de liebre por mosca de arena, viruses de Fiebre Rift Valley, viruses! La Crosse y hantavlruses Flavmruses incluyendo pero sin limitarsi a Fiebre Amarilla virus Banzi, virus West Nile, viruses de Dengue virus de Encefalitis Japonesa virus de encefalitis por Garrapata Fiebe Hemorragica de Omsk y virus de Enfermedad de Bosque Kyasanur Togaviruses incluyendo pero sin limitarse a Viruses de encefalitis de equino de Venezuela este y oeste, virus Ross River, y virus de Rubella viruses Ortopox incluyendo pero sin limitarse a Vacunas, virus Pox de Vaca, virus Pox Pequeño y virus Pox de Mono, Hipe viruses, FluA/B virus Sincitial Respiratono (RSV) parainfluenaa, paperas nnovlruses adenowuses virus de Semli i Forest, fiebres Hemorragicas Virales, Rabdoviruses, Paramixovlruses, incluyendo pero sin limitarse a virus Nipa y virus Hendra, y oíros agenles virales identificados por los Centros de para Control y Prevención de Enfermedades de los Estados Unidos como agenles de enfermedad de alta pnondad (por ejemplo, agenles de¡ categoría A B y C, ver por ejemplo, Moran, Emerg Med Clin North ta 2002, 20(2)311-30 y Darling y asociados , Emerg Med Clin North Am 200220(2) 273-309) iPeptido nalnuretico tipo B (BNP, Estimula relajación y vaso dilatación de Falla cardiaca congestiva sobrecarga de volumen cardiaco 3618 3690 peptido natriur?tico cerebral) músculo liso, natnuresis y supresión de descompensación cardiaca Falla Cardiaca Disfunción Venlncular 3715 3723 angiotensma y endotelina Izquierda Dispnea Hipertrofia Glomerular Lesión Glomerular 3725 3736 Enfermedad Glomerular Renal, Falla Renal Aguda 3778, 3783 3796,3809 N3 Ol O on Tabla 1 (continuación) Ni OÍ O n cn Tabla 1 (continuación) 4^ ro ro o 01 n Tabla 1 (continuación) Tabla 1 (continuación) Tabla 1 (continuación) Tabla 1 (continuación) •fc- I\3 n o en cn Tabla 1 (continuación) Tabla 2 N3 Ol O Oí Oí TibUZ 00 O n n st?sl Js- CO n o cn cn Tabla 3 Ü1 o NJ n o n n cn » cn o n cn cn > 15 J!;5 20 La Tabla 2 proporciona una lista no exhaustiva de polinucleótidos de la presente invención que comprenden, o como alternativa, consisten en moléculas de ácido nucleico que codifican una proteína de fusión de albúmina. La primera columna, "No. de Fusión" proporciona un número de fusión para cada polinucleótido. La columna 2, "I D de Construcción" proporciona un ¡dentificador numérico único para cada polinucleótido de la presente invención. Las I Ds de la Construcción se pueden utilizar para identificar pollnucleótidos que codifican proteínas de fusión de albúmina que comprenden, o consisten en forma alternativa, en una parte de la proteína Terapéutica que corresponde a una Proteína Terapéutica: X descrita en la fila correspondiente de la Tabla 1 , en donde la ID de la construcción se enlista en la columna 5. La columna "Nombre de Construcción" (columna 3) proporciona el nombre de una construcción de fusión de albúmina determinada o polinucleótido. La cuarta columna en la Tabla 2, "Descripción", proporciona una descripción general de una construcción de fusión de albúmina determinada, y la quinta columna, "Vector de Expresión" describe el vector en ei cual un polinucleótido comprende, o consiste en forma alternativa, en una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína de fusión de albúmina que fue clonada. Los vectores son conocidos en la técnica, y están disponibles comercialmente o se describen en cualquier parte. Por ejemplo, tal como se describe en los Ejemplos, una "cinta de expresión" que comprende, o que consiste en forma alternativa, en una o más de entre (1 ) un polinucleótido que codifica una proteína de fusión de albúmina determinada , (2) una secuencia líder, (3) una reg ión promotora, y (4) u n terminador de transcri pción , se puede ensamblar en un vector de clonación conveniente y ser movida subsecuentemente en un vector alternativo, tal como, por ejemplo, un vector de expresión que incluye, por ejemplo , un vector de expresión de levadura o un vector de expresión de mamífero. En una modalidad , para la expresión en S. cervisiae, una cinta de expresión que comprende, o q ue consiste en forma alternativa, en una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína de fusión de albúmina se clona en pSAC35. En otra modalidad , para expresión en células CHO, una cinta de expresión que comprende, o que consiste en forma alternativa, en una molécula de ácido n ucleico que codifica una proteína de fusión de albúmina se clona en pC4. En una modalidad adicional , u n polin ucleótido que com prende o que consiste en forma alternativa en una molécula de ácido nucleico que codifica la parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina, se clona en pC4: HSA. En u na modalidad aún adicional , para expresión en células NSO, u na cinta de expresión que comprende, o que consiste en forma alternativa de, una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína de fusión de albúmina se clona en pEE 1 2. Otros vectores de clonación y/o expresión útiles serán conocidos para los expertos en la técnica y están dentro del alcance de la presente i nvención . La colum na 6 , "SEQ I D NO:Y", proporciona la secuencia de aminoácidos de longitud completa de la proteína de fusión de albúmina de la presente invención. En la mayoría de los casos, la SEQ I D NO:Y muestra la forma no procesada de la proteína de fusión de albúmina codificada - en otras palabras, SEQ I D NO:Y muestra la secuencia de señal, una parte HSA y una parte terapéutica, codificadas todas por la construcción en particular. Contemplados de manera específica en la presente invención , están todos los polinucleótidos que codifican la SEQ ID NO:Y. Cuando estos polinucleótidos se utilizan para expresar la proteína codificada de una célula, la secreción natural de la célula y los pasos de procesamiento producen una proteína que carece de la secuencia de señal descrita en las columnas 4 y/o 1 1 de la Tabla 2. La secuencia de aminoácidos específica de la secuencia de señal descrita, se muestra más adelante en la especificación o es bien conocida en la técnica. Por io tanto, las modalidades más preferidas de la presente invención incluyen la proteína de fusión de albúmina producida por una célula (la cual podría carecer de la secuencia líder mostrada en las columnas 4 y/o 1 1 de la Tabla 2). Así mismo los más preferidos son polipéptidos que comprenden la SEQ I D NO:Y sin la secuencia líder específica descrita en las columnas 4 y/o 1 1 de la Tabla 2. También se prefieren las composiciones que comprenden estas dos modalidades preferidas, incluyendo las composiciones farmacéuticas. Además, está dentro de las capacidades de un experto en la técnica, reemplazar la secuencia de señal descrita en las columnas 4 y/o 1 1 de la Tabla 2, con una secuencia de señal diferente, tal como la que se describe más adelante en la especificación, para facilitar la secreción de la proteína de fusión de albúmina procesada. La séptima columna, "SEQ I D NO:X", proporciona una secuencia de ácido nucleico de origen de la cual se puede derivar un polinucleótido que codifica una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina determinada. En una modalidad, la secuencia de ácido nucleico de origen de la cual se puede derivar un polinucleótido que codifica una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina, comprende la secuencia genética tipo natural que codifica una proteína Terapéutica mostrada en la Tabla 1 . En una modalidad alternativa, la secuencia de ácido nucleico de origen de la cual se puede derivar un polinucleótido que codifica una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina, comprende una variante o derivado de una secuencia genética tipo natural que codifica una proteína Terapéutica mostrada en la Tabla 1 , tal como, por ejemplo, una variante optimizada por codón sintético de una secuencia genética tipo natural que codifica una proteína Terapéutica. La octava columna, "SEQ I D NO:Z", proporciona una traducción anticipada de la secuencia de ácido nucleico de origen (SEQ I D NO:X). Esta secuencia de origen puede ser una proteína de origen de longitud total utilizada para derivar la construcción en particular, la parte madura de la proteína de origen, una variante o fragmento de una proteína tipo natural, o una secuencia artificial que se puede utilizar para crear la construcción descrita. Un experto en la técnica puede utilizar esta secuencia de aminoácidos que se muestra en la SEQ I D NO:Z, para determinar que residuos de aminoácidos de una proteína de fusión de albúmina codificados por una construcción determinada, son proporcionados por la proteína terapéutica. Además, está dentro de las capacidades de los expertos en la técnica, utilizar la secuencia mostrada como la SEQ I D NO:Z para derivar la construcción que se describe en la misma fila. Por ejemplo, si la SEQ I D NO:Z corresponde a una proteína de longitud total, aunque únicamente una parte de dicha proteína se utiliza para generar el CID específico, está dentro de las capacidades de los expertos en la técnica, apoyarse en técnicas de biología molecular, tal como PCR, para amplificar el fragmento específico y clonarlo en el vector adecuado. Los cebadores de amplificación proporcionados en las columnas 9 y 10, "SEQ I D NO:A" y "SEQ I D NO:B" respectivamente, son cebadores de ejemplo utilizados para generar un polinucleótido que comprende o consiste en forma alternativa de una molécula de ácido nucleico que codifica la parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina. En una modalidad de la presente invención, los cebadores de oligonucleótido que tienen las secuencias mostradas en las columnas 9 y/o 10 (SEQ I D NOS:A y/o B) se utilizan para amplificar mediante PCR un polinucleótido que codifica una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina utilizando una molécula de ácido nucleico que comprende o consiste en forma alternativa de la secuencia de nucleótidos proporcionada en la columna 7 (SEQ I D NO:X) de la fila correspondiente en la forma del ADN de plantilla. Los métodos PCR están bien establecidos en la técnica. Las secuencias cebadoras útiles adicionales pueden ser fácilmente consideradas y utilizadas por los expertos en la técnica. En una modalidad alternativa, los cebadores de oligonucleótidos pueden ser utilizados en el traslape de reacciones PCR para generar mutaciones dentro de una secuencia de ADN de plantilla. Los métodos PCR son conocidos en la técnica. También como se muestra en la Tabla 3, ciertas construcciones de fusión de albúmina descritas en la presente solicitud, han sido depositadas con el ATCC®. Tabla 3 Es posible recuperar una construcción de fusión de albúmina determinada del depósito mediante técnicas conocidas en el arte y q ue se describen en cualquier parte en la presente invención (ver, Ejemplo 1 0). El ATCC se localiza en 1 0801 U n iversity Boulevard, Manassas, Virginia 201 1 0-2209 , EUA. Los depósitos ATCC fueron elaborados de acuerdo con los términos de Tratado de Budapest en el reconoci miento internacional del depósito de microorganismos para propósitos de procedimientos de patentes. En una modalidad adicional de la presente invención, una "cinta de expresión" que comprende, o que consiste en forma alternativa, en uno o más de ( 1 ) un polinucleótido que codifica una proteína de fusión de albú mi na determi nada, (2) u na secuencia l íder, (3) una región promotora, y (4) un terminador de transcripción , se puede mover o "subclonar" de un vector a otro. Los fragmentos que serán subclonados pueden ser generados a través de métodos conocidos en la técnica, tales como, por ejemplo, amplificación PCR (por ejemplo, utilizando cebadores de oligonucleótido q ue tienen la secuencia mostrada en la SEQ I D NO:A o B) y/o digestión de enzima de restricción. En modalidades preferidas, las proteínas de fusión de albúmi na de la presente i nvención tienen la capacidad de una actividad terapéutica y/o actividad biológ ica correspondiente a la actividad terapéutica y/o actividad biológica de la proteína Terapéutica que corresponde a la parte de proteína Terapéutica de la proteína de fusión de albú mina descrita en la fila correspondiente de la Tabla 1 . En modalidades preferidas adicionales, las partes de proteína terapéuticamente activas de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, son fragmentos o variantes de la proteína codificada por la secuencia que se muestra en la columna de la SEQ I D NO:X de la Tabla 2, y tienen la capacidad de la actividad terapéutica y/o actividad biológica de la proteína Terapéutica correspondiente. Fragmentos v Variantes de Polipéptido v Polinucleótido Fragmentos La presente invención se dirige en forma adicional a fragmentos de las proteínas Terapéuticas que se describen en la Tabla 1 , proteínas de albúmina y/o proteínas de fusión de albúmina de la presente invención. La presente invención también se dirige a polinucleótidos que codifican fragmentos de las proteínas Terapéuticas que se describen en la Tabla 1 , proteínas de albúmina y/o proteínas de fusión de albúmina de la presente invención. Incluso si la eliminación de uno o más aminoácidos del término-N de una proteína da como resultado la modificación o pérdida de una o más funciones de lógica de la proteína Terapéutica, proteína de albúmina y/o proteína de fusión de albúmina de la presente invención, se pueden retener aún otras actividades Terapéuticas y/o actividades funcionales (por ejemplo, actividades biológicas, capacidad de multimerizar, capacidad de enlazar a un ligando). Por ejemplo, la capacidad de los polipéptidos con eliminaciones de terminal-N de inducir y/o enlazar anticuerpos que reconocen las formas maduras o completas de los polipéptidos, que generalmente se retendrán cuando menos en la mayoría de los residuos del polipéptido completo, se eliminan del término-N. Si un polipéptido en particular que carece de residuos de terminal-N de un polipéptido completo retiene dichas actividades inmunológicas, puede ser fácilmente determinado mediante métodos de rutina descritos en la presente invención y conocidos en la técnica. No es probable que la muteina con gran número de residuos de aminoácidos de termina-N eliminados, pueda retener algunas actividades biológicas o inmunogénicas. De hecho, los péptidos compuestos de cuando menos seis residuos de aminoácido, pueden generar con frecuencia una respuesta inmune.

Por consiguiente, los fragmentos de una proteína Terapéutica correspondiente a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, incluye las proteínas de longitud total así como polipéptidos que tienen uno o más residuos eliminados del término amino de la secuencia de aminoácidos del polipéptido de referencia (por ejemplo, una proteína Terapéutica referida en la Tabla 1 , o una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina codificada por un polinucleótido o construcción de fusión de albúmina que se describe en la Tabla 2). En particular, las eliminaciones de terminal-N pueden ser descritas a través de la fórmula general m a q, en donde q es el entero total que representa el número total de residuos de aminoácido en un polipéptido de referencia (por ejemplo, una proteína Terapéutica referida en la Tabla 1 , o una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, o una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina codificada por un polinucleótido o construcción de fusión de albúmina descrita en la Tabla 2), y m es definida como cualquier entero que fluctúa de 2 a q menos 6. Los polinucleótidos que codifican estos polipéptidos también están comprendidos en la presente invención. Además, los fragmentos de polipéptidos de albúmina de suero que corresponden a una parte de proteína de albúmina de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, incluyen la proteína de longitud total, así como polipéptidos que tienen uno o más residuos eliminados del término amino de la secuencia de aminoácidos del polipéptido de referencia (por ejemplo, albúmina de suero, o una parte de albúmina de suero de una proteína de fusión de albúmina codificada por un polinucleótido o construcción de fusión de albúmina descrita en la Tabla 2). En modalidades preferidas, las eliminaciones de terminal-N pueden ser descritas mediante la fórmula general m a 585, en donde 585 es un entero total que representa el número total de residuos de aminoácido en albúmina de suero humana madura (SEQ I D NO: 1 ), y m se define como cualquier entero que fluctúa de 2 a 579. Los polinucleótidos que codifican estos polipéptidos también están comprendidos en la presente invención. En modalidades adicionales, las eliminaciones de terminal-N pueden ser descritas a través de la fórmula general m a 609, en donde 609 es un entero completo que representa el número total de residuos de aminoácido de una albúmina de suero humana de longitud total (SEQ ID NO:3), y m se define como cualquier entero que fluctúa de 2 a 603. Los polinucleótidos que codifican estos polipéptidos también están comprendidos en la presente invención. Además, los fragmentos de proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, incluyen la proteína de fusión de albúmina de longitud total, así como polipéptidos que tienen uno o más residuos eliminados del término amino de la proteína de fusión de albúmina (por ejemplo, una proteína de fusión de albúmina codificada por un polinucleótido o construcción de fusión de albúmina descrita en la Tabla 2; o una proteína de fusión de albúmina que tiene la secuencia de aminoácido que se describe en la columna 6 de la Tabla 2). En particular, las eliminaciones de terminal-N se pueden describir a través de la fórmula general m a q, en donde q es un entero total que representa el número total de residuos de aminoácidos en la proteína de fusión de albúmina, y m se define como un entero que fluctúa de 2 a q menos 6. Los polinucleótidos que codifican estos polipéptidos también están comprendidos en la presente invención. Tal como se mencionó anteriormente, incluso si una eliminación de uno o más aminoácidos del término-N o término-C de un polipéptido de referencia (por ejemplo, una proteína Terapéutica; proteína de albúmina de suero; o proteína de fusión de albúmina de la presente invención) da como resultado la modificación o pérdida de una o más funciones biológicas de la proteína, aún se pueden retener otras actividades funcionales (por ejemplo, actividades biológicas, capacidad de multimerizar, capacidad de enlazar a un ligando) y/o actividades Terapéuticas. Por ejemplo, la capacidad de los polipéptidos con eliminación de terminal-C para inducir y/o enlazar anticuerpos que reconocen las formas completas o maduras del polipéptido que generalmente retendrá cuando menos la mayoría de los residuos del polipéptido completo maduro, se eliminan del término-C. Si un polipéptido particular que carece de los residuos de terminal-N y/o terminal-C de un polipéptido de referencia retiene la actividad Terapéutica, se puede determinar fácilmente a través de métodos de rutina descritos en la presente invención y/o conocidos en la técnica. La presente invención proporciona además polipéptidos que tienen uno o más residuos eliminados del término carboxi de la secuencia de aminoácido de una proteína Terapéutica que corresponde a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención (por ejemplo, una proteína Terapéutica referida en ia Tabla 1 , o una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina codificada por un polinucleótido o construcción de fusión de albúmina descrita en la Tabla 2). En particular, las eliminaciones de terminal-C se pueden describir a través de la fórmula general 1 a n, en donde n es cualquier entero total que fluctúa de 6 a q menos 1 , y en donde q es un entero total que representa el número total de residuos de aminoácido en un polipéptido de referencia (por ejemplo, una proteína Terapéutica referida en la Tabla 1 , o una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina codificada por un polinucleótido o construcción de fusión de albúmina descrita en la Tabla 2). Los polinucleótidos que codifican estos polipéptidos también están comprendidos en la presente invención . Además, la presente invención proporciona polipéptidos que tienen uno o más residuos eliminados del término carboxi de la secuencia de aminoácido de una proteína de albúmina que corresponde a una parte de proteína de albúmina de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención (por ejemplo, albúmina de suero y una parte de proteína de albúmina de una proteína de fusión de albúmina codificada por un poiinucleótido o construcción de fusión de albúmina descrito en la Tabla 2). En particular, se pueden describir eliminaciones de terminal-C a través de la fórmula general 1 a n, en donde n es cualquier entero completo que fluctúa de 6 a 584, en donde 584 es el entero total que representa el número total de residuos de aminoácidos en albúmina de suero human madura (SEQ I D NO: 1 ) menos 1 . Los polinucleótidos que codifican estos polipéptidos también están comprendidos en la presente invención. En particular, se pueden describir las eliminaciones de terminal-C a través de la fórmula general 1 a n, en donde n es cualquier entero total que fluctúa de 6 a 608, en donde 608 es el entero total que representa un número total de residuos de aminoácido en albúmina de suero (SEQ I D NO:3) menos 1 . Los polinucleótidos que codifican estos polipéptidos también están comprendidos en la presente invención. Además, la presente invención proporciona polipéptidos que tienen uno o más residuos eliminados del término carboxi de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención. En particular, las eliminaciones de terminal-C se pueden describir a través de la fórmula general 1 a n, en donde n es cualquier entero total que fluctúa de 6 a q menos 1 , y en donde q es el entero total que representa el número total de residuos de aminoácido en una proteína de fusión de albúmina de la presente invención. Los polinucleótidos que codifican estos polipéptidos también están comprendidos en la presente invención. Además, cualesquiera de las eliminaciones de terminal-C o -N descritas anteriormente, se pueden combinar para producir un polipéptido de referencia eliminado por terminal-C y -N. La presente invención también proporciona polipéptidos que tienen uno o más aminoácidos eliminados tanto del término amino como carboxilo, los cuales se pueden describir de manera general como teniendo residuos m a n de un polipéptido de referencia (por ejemplo, una proteína Terapéutica, referida en la Tabla 1 , o una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, o una parte de proteína Terapéutica codificada por un polinucleótido o construcción de fusión de albúmina descrita en la Tabla 2, o albúmina de suero (por ejemplo, SEQ I D NO: 1 ), o una parte de proteína de albúmina de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, o una parte de proteína de albúmina codificada por un polinucleótido o una construcción de fusión de albúmina descrita en la Tabla 2, o una proteína de fusión de albúmina, o una proteína de fusión de albúmina codificada por un polinucleótido o una construcción de fusión de albúmina de la presente invención), en donde n y m son enteros tal como se describió anteriormente. Los polinucleótidos que codifican estos polipéptidos también están comprendidos en la presente invención. La presente solicitud también se dirige a proteínas que contienen polipéptidos al menos el 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idénticos a una secuencia de polipéptido de referencia (por ejemplo, una proteína Terapéutica referida en la Tabla 1 , o una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, o una parte de proteína Terapéutica codificada por un polinucleótido o construcción de fusión de albúmina descrito en la Tabla 2, o albúmina de suero (por ejemplo, SEQ I D NO: 1 ), o una parte de proteína de albúmina de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, o una parte de proteína de albúmina codificada por un polinucleótido o construcción de fusión de albúmina descrita en la Tabla 2, o una proteína de fusión de albúmina, o una proteína de fusión de albúmina codificada por un polinucleótido o una construcción de fusión de albúmina de la presente invención) establecida en la presente invención, o fragmentos de la misma. En modalidades preferidas, la solicitud se dirige a proteínas que comprenden polipéptidos al menos el 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idénticos a los polipéptidos de referencia que tienen la secuencia de aminoácidos de eliminaciones de terminal-C y -N tal como se describe anteriormente. Los polinucleótidos que codifican estos polipéptidos también están comprendidos en la presente invención. Los fragmentos de polipéptidos preferidos de la presente invención son fragmentos que comprenden, o como alternativa, consisten en una secuencia de aminoácidos que despliega una actividad Terapéutica y/o actividad funcional (por ejemplo, actividad biológica) de la secuencia de polipéptido de la proteína Terapéutica o proteína de albúmina de suero de la cual la secuencia de aminoácido es un fragmento. Otros fragmentos de polipéptido preferidos son fragmentos biológicamente activos. Los fragmentos biológicamente activos son aquellos que exhiben actividad similar, aunque no necesariamente idéntica, a una actividad del polipéptido de la presente invención. La actividad biológica de los fragmentos pueden incluir una actividad deseada mejorada, o una actividad no deseada disminuida.

Variantes El término "variante" se refiere a un polinucleótido o ácido nucleico que difiere de un ácido nucleico o polipéptido de referencia, pero que retiene las propiedades esenciales del mismo. Generalmente, las variantes son cercanamente similares en forma general, y en muchas regiones, idénticas al ácido nucleico o polipéptido de referencia. Tal como se utiliza en la presente invención, "variante", se refiere a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, parte de albúmina de una proteína de fusión de albúmina a la presente invención, o proteína de fusión de albúmina a la presente invención que difiere en secuencia de una proteína Terapéutica (por ejemplo, ver la columna de "terapéutica" de la Tabla 1 ), proteína de albúmina, y/o proteína de fusión de albúmina, respectivamente, pero que retiene al menos una propiedad funcional y/o terapéutica de la misma, tal como se describe en cualquier parte en la presente invención o que se conoce en la técnica. En general, las variantes son muy similares, y en muchas regiones, idénticas a la secuencia de aminoácidos de la proteína Terapéutica que corresponde a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina, proteína de albúmina que corresponde a una parte de proteína de albúmina de una proteína de fusión de albúmina, y/o proteína de fusión de albúmina. Los ácidos nucleicos que codifican estas variantes también están comprendidos en la presente invención. La presente invención también se dirige a proteínas que comprenden, o consisten en forma alternativa, en una secuencia de aminoácido que es al menos el 80%, 85% , 90%, 95%, 96%, 97% , 98%, 99% o 100% idénticos, por ejemplo, a la secuencia de aminoácidos de una proteína Terapéutica que corresponde a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención (por ejemplo, la secuencia de aminoácidos de una proteína Terapéutica: X que se describe en la Tabla 1 ; o la secuencia de aminoácidos de una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina codificada por un polinucleótidp o construcción de fusión de albúmina que se describe en la Tabla 1 y 2, o fragmentos o variantes de la misma), proteínas de albúmina que corresponden a una parte de proteína de albúmina de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención (por ejemplo, la secuencia de aminoácidos de una parte de proteína de albúmina de una proteína de fusión de albúmina codificada por un polinucleótido o construcción de fusión de albúmina que se describe en la Tabla 1 y 2; la secuencia de aminoácido mostrada en la SEQ I D NO: 1 ; o fragmentos o variantes de los mismos) y/o proteínas de fusión de albúmina. También se proporcionan los fragmentos de estos polipéptidos (por ejemplo, los fragmentos que se describen en la presente invención). Los polipéptidos adicionales comprendidos en la presente invención, son polipéptidos codificados por polinucleótidos que hibridan al complemento de una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína de fusión de albúmina de la presente invención bajo condiciones de hibridación estrictas (por ejemplo, hibridación para filtrar ADN enlazado en cloruro de Sodio/citrato de Sodio 6X (SSC) a aproximadamente una temperatura de 45° Celsius, seguido de uno o más lavados en 0.2X SSC, 0.1 % SDS a una temperatura de aproximadamente 50 a 65° Celsius), bajo condiciones altamente estrictas (por ejemplo, hibridación para filtrar ADN enlazado en cloruro de sodio/citrato de sodio 6X (SSC) a una temperatura de aproximadamente 45° Celsius, seguido de uno o más lavados en 0.1 X SSC, 0.2% SDS a una temperatura de aproximadamente 68° Celsius), o bajo otras condiciones de hibridación estrictas, las cuales son conocidas por los expertos en la técnica (ver, por ejemplo, la publicación de Ausubel, F. M. et al. , eds. , 1989 Current protocol in Molecular Biology, Green publishing associates, Inc., and John Wiley & Sons Inc. , Nueva York, en las páginas 6.3.1 - 6.3.6 y 2.10.3). Los polinucleótidos que codifican estos polipéptidos también están comprendidos en la presente invención.

A través de un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos, al menos, por ejemplo, el 95% "idéntica" a una secuencia de aminoácidos de consulta, se pretende que la secuencia de aminoácidos del polipéptido de la presente invención sea idéntico a la secuencia de consulta excepto que la secuencia del polipéptido de control puede incluir hasta cinco alteraciones de aminoácidos por 100 aminoácidos de la secuencia de aminoácido de consulta. En otras palabras, para obtener un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos al menos el 95% idéntica a una secuencia de aminoácidos de consulta, hasta el 5% de los residuos de aminoácido en la secuencia de control puede ser insertada, eliminada o substituida con otro aminoácido. Estas alteraciones de la secuencia de referencia pueden ocurrir en las posiciones de terminal amino o carboxi de la secuencia de aminoácidos de referencia o cualquier parte entre las posiciones de terminal, interpuestas ya sea en forma individual entre residuos en la secuencia de referencia o en uno o más grupos contiguos dentro de la secuencia de referencia. Como asunto práctico, si cualquier polipéptido en particular tiene al menos el 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% de identidad con, por ejemplo, la secuencia de aminoácidos de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención o un fragmento de la misma (tal como una parte de proteína Terapéutica de la proteína de fusión de albúmina o una parte de albúmina de la proteína de fusión de albúmina), se puede determinar en forma convencional utilizando programas de computadora conocidos. Un método preferido para determinar la mejor correspondencia general entre una secuencia de consulta (una secuencia de la presente invención) y una secuencia de control, también referida como alineación de secuencia global, se puede determinar utilizando el programa de computadora FASTDB con base en el algoritmo de Brutlag et al. (Comp. App. Biosci. 6: 237-245 (1990)).

En una alineación de secuencia, las secuencias de consulta y de control son ya sea ambas secuencias de nucleótidos o ambas secuencias de aminoácidos. El resultado de dicha alineación de secuencia global se expresa como identidad de porcentaje. Los parámetros preferidos utilizados en una alineación de aminoácidos FASTDB son: Matriz=PAM 0, k-tuple=2, Penalidad por no Correspondencia^ , Penalidad por Union=20, Longitud de Grupo de Aleatorización = 0, Marcación de Corte=1 , Tamaño de Ventana=longitud de secuencia, Penalidad por Brecha=5, Penalidad de Tamaño de Brecha = 0.05, Tamaño de Ventana=500 o longitud de la secuencia de aminoácidos de control, cualquiera que sea más corta. Si la secuencia de control es más corta que la secuencia de consulta debido a las eliminaciones de terminal-N o -C, no debido a las eliminaciones internas, se debe realizar una corrección manual a los resultados. Esto se debe a que el programa FASTDB no toma en cuenta las truncaciones de termina-N y -C de la secuencia de control cuando se calcula la identidad de porcentaje global. Para secuencias de control truncadas en el término-N y -C, con relación a la secuencia de consulta, se corrige la identidad de porcentaje calculando el número de residuos de la secuencia de consulta que son de terminal-N y -C de la secuencia de control, las cuales no corresponden/alinean con un residuo de control correspondiente, como un porcentaje de las bases totales de la secuencia de consulta. Si un residuo está correspondido/alineado se determina mediante los resultados de la alineación de secuencia FASTDB. Ei porcentaje se substrae posteriormente de la identidad de porcentaje, calculada a través del programa FASTDB anterior utilizando los parámetros específicos, para llegar a una marcación de identidad de porcentaje final. La marcación de identidad de porcentaje final es lo que se utiliza para los propósitos de la presente invención. Únicamente los residuos del término-N y -C de la secuencia de control , las cuales no son correspondidas/alineadas con la secuencia de consulta, se consideran para los propósitos de ajustar en forma manual la marcación de identidad de porcentaje. Esto es, únicamente las partes del residuo de consulta fuera de los residuos de terminal-C y -N más remotos de la secuencia de control. Por ejemplo, se alinea una secuencia de control de 90 residuos de aminoácidos con una secuencia de consulta de 100 residuos para determinar la identidad de porcentaje. La eliminación ocurre en el término-N de ia secuencia de control y por consiguiente, la alineación FASTDB no muestra una correspondencia/alineación de los primeros 10 residuos en el término-N. Los 10 residuos sin correspondencia representan el 10% de la secuencia (número de residuos en el término-N y -C no correspondidos/número total de residuos en la secuencia de consulta) de modo que se substrae el 10% de la marcación de identidad de porcentaje calculada a través del programa FASTDB. Si los 90 residuos restantes fueron correspondidos perfectamente, la identidad de porcentaje final será del 90%. En otro ejemplo, una secuencia de control de 90 residuos se compara con una secuencia de consulta de 100 residuos. Esta vez las eliminaciones son eliminaciones internas de modo que no hay residuos en el término-N o -C de la secuencia de control que no estén correspondidos/alineados con la de consulta. En este caso la cantidad de porcentaje calculada por FASTDB no se corrige en forma manual. Una vez más, únicamente las posiciones de residuos fuera de los extremos de termina-C y -N de la secuencia de control, tal como se muestra en la alineación FASTDB, las cuales no están correspondidas/alineadas con la secuencia de consulta se corrigen en forma manual. No se hacen otras correcciones manuales para los propósitos de la presente invención. La variante normalmente tendrá al menos el 75% (preferentemente ai menos el 80%, 90%, 95% o 99%) de identidad de secuencia con una longitud de HA normal o proteína Terapéutica que tiene la misma longitud que la variante. La homología de identidad en el nucleótido o nivel de secuencia de aminoácido se determina mediante análisis BLAST (Herramienta de Búsqueda de Alineación Local Básica) utilizando el algoritmo empleado por los programas blastp, blastn, blastx, tblastn y tblastx (Karlin et al. , Proc. Nati. Acad . Sci. EUA 87: 2264-2268 (1990) y Altschul, J. Mol. Evol. 36: 290-300 (1993), incorporadas completamente como referencias) las cuales son diseñadas para la búsqueda de similitud de secuencias. El método utilizado por el programa BLAST, primero considera segmentos similares entre una secuencia de consulta y una secuencia de base de datos, posteriormente evalúa la importancia estadística de todas las correspondencias que se identifican y finalmente resumen únicamente las correspondencias que satisfacen un valor de umbral de importancia seleccionado previamente. Para una descripción de aspectos básicos en cuanto a búsqueda de similitud de bases de datos de secuencias, ver la publicación de Altschul y asociados, (Nature Genetics 6: 1 19-129 (1994)), la cual está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia. Los parámetros de búsqueda para histograma, descripciones, alineaciones, expectativas (por ejemplo, el valor de umbral de importancia estadística para reportar correspondencias contra las secuencias de bases de datos, corte, matriz y filtro están en las configuraciones por default. La matriz de calificación por default utilizada por blastp, blastx, tblastn y tblastx es la matriz BLOSUM62 (Henikoff et al. , Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 89: 10915-10919 (1992), incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia). Para blastn , la matriz de marcación se ajusta mediante las proporciones de M (por ejemplo, la marcación de bonificación de un par de residuos de correspondencia) a N (por ejemplo, la marcación de penalidad para residuos que no corresponden), en donde los valores por default para M y N son 5 y -4, respectivamente. Se pueden ajustar cuatro parámetros blastn como se indica a continuación: Q = 10 (penalidad por creación de brecha); R=10 (penalidad por extensión de brecha); wink= 1 (los golpes de palabra en cada posición winkth a lo largo de la consulta); y gapw=16 (se ajusta el ancho de ventana dentro de la cual se generan las alineaciones con brecha). Las configuraciones del parámetro Blastp equivalente fueron Q=9; R=2; wink= 1 y gapw=32. La comparación Bestfit entre secuencias, disponible en la versión 10.0 del paquete GCG, utiliza parámetros de ADN GAP=50 (penalidad por creación de brecha) y LEN = 3 (penalidad por extensión de brecha) y las configuraciones equivalentes en comparaciones de proteína son GAP=8 y LEN=2. Las variantes de polinucleótidos de la presente invención, pueden contener alteraciones en las regiones de codificación, regiones de no codificación o ambas. Especialmente preferidas, son variantes de polinucleótidos que contienen alteraciones que producen substituciones, adiciones o eliminaciones silentes, aunque no alteran las propiedades o actividades del polipéptido codificado. Las variantes de nucleótidos producidas por substituciones silentes debido a la regeneración del código genético, son las preferidas. Además, las variantes de polipéptidos en las cuales menos del 50, menos del 40, menos del 30, menos del 20, menos del 10 o 5-50, 5-25, 5-10, 1 -5 o 1 -2 aminoácidos, son substituidos, eliminados o agregados en cualquier combinación, también son preferidas. Las variantes de polinucleótidos pueden ser producidas por una variedad de razones, por ejemplo, para optimizar la expresión de codón de un huésped en particular (cambiar codónes en el mARN de un humano a ios preferidos por un huésped bacteriano, tal como por ejemplo, levadura o E. coli). En una modalidad preferida, un polinucleótido de la presente invención que codifica la parte de albúmina de una proteína de fusión de albúmina se optimiza para expresión en células de levadura o de mamífero. En una modalidad preferida adicional, un polinucleótido de la presente invención que codifica la parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina, se optimiza para expresión en levadura o células de mamífero. En una modalidad preferida aún adicional, un polinucleótido que codifica una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, se optimiza para expresión en levadura o células de mamífero. En una modalidad alternativa, un polinucleótido optimizado por codón que codifica una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina no híbrida al polinucleótido de tipo natural que codifica la proteína Terapéutica bajo condiciones de hibridación estrictas tal como se describe en la presente invención. En una modalidad adicional, un polinucleótido optimizado por codón que codifica una parte de albúmina de una proteína de fusión de albúmina no híbrida al polinucleótido de tipo natural que codifica la proteína de albúmina bajo condiciones de hibridación estrictas tal como se describe en la presente invención. En otra modalidad , un polinucleótido optimizado por codón que codifica una proteína de fusión de albúmina no híbrida al polinucleótido de tipo natural que codifica la parte de proteína Terapéutica o la parte de proteína de albúmina bajo condiciones de hibridación estrictas tal como se describe en la presente invención . En una modalidad adicional, un polinucleótido que codifica una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina no comprende, o consiste en forma alternativa, en una secuencia que ocurre naturalmente de dicha proteína Terapéutica. En una modalidad adicional, un polinucleótido que codifica una parte de proteína de albúmina de una proteína de fusión de albúmina no comprende, o consiste en forma alternativa, en una secuencia que ocurre naturalmente de proteína de albúmina. En una modalidad alternativa, un polinucleótido que codifica una proteína de fusión de albúmina no comprende, o como alternativa no consiste, en la secuencia que ocurre naturalmente de una parte de proteína Terapéutica o la parte de proteína de albúmina. Las variantes que ocurren naturalmente, son denominadas "variantes alelicas", y se refieren a una de varias formas alternativas de un gen que ocupa un locus determinado en un cromosoma de un organismo. (Genes I I , Lewin , B. , ed. , John Wiley & Sons, Nueva York (1985)). Estas variantes alelicas pueden variar ya sea en el nivel de polinucleótido y/o polipéptido y se incluyen en la presente invención. Como alternativa, se pueden producir variantes que no ocurren naturalmente mediante técnicas de mutagénesis o mediante síntesis directa. Utilizando métodos conocidos de ingeniería de proteína y tecnología de ADN recombinante, se pueden generar variantes para mejorar o alterar las características de los polipéptidos de la presente invención. Por ejemplo, se pueden eliminar uno o más aminoácidos del término-N o término-C del polipéptido de la presente invención, sin la pérdida substancial de la función biológica. Como ejemplo, Ron y asociados (J. Biol. Chem. 268: 2984-2988 (1993)) reporto proteínas KGF variantes que tienen actividad de enlace de heparina incluso después de la eliminación de 3, 8 o 27 residuos de aminoácidos de terminal-amino. En forma similar, el interferón gamma exhibió hasta diez veces mayor actividad después de la eliminación de 8 a 10 residuos de aminoácidos de los términos carboxi de esta proteína. (Dobeli et al. , J . Biotechnology 7: 199-216 (1988)). Además, una amplia evidencia demuestra que las variantes con frecuencia retienen una actividad biológica similar a la de la proteína que ocurre naturalmente. Por ejemplo, Gayle y asociados (J. Biol. Chem. 268: 22105-221 1 1 (1993)) condujo análisis de mutación extensos de IL-1 a de citosina humana. Utilizada mutagénesis aleatoria para generar alrededor de 3,500 mutantes I L-1 a individuales que promediaron cambios de 2.5 aminoácidos por variante en toda la longitud de la molécula. Las mutaciones múltiples se examinaron en cada posición de aminoácido posible. Los investigadores descubrieron que "[la mayor parte de la molécula puede ser alterada con poco efecto ya sea en la actividad de enlace o biológica]". De hecho, únicamente 23 secuencias de aminoácidos únicas, más de 3,500 secuencias de nucleótidos examinados, producieron una proteína que fue significativamente diferente en actividad a la de tipo natural. Además, incluso si la eliminación de uno o más aminoácidos del término-N o término-C de un polipéptido da como resultado la modificación o pérdida de una o más funciones biológicas, aún se pueden retener otras actividades biológicas. Por ejemplo, la capacidad de una variante de eliminación para inducir y/o enlazar anticuerpos que reconocen la forma secretada, que probablemente será retenida cuando menos en la mayoría de los residuos de forma secretada, se elimina del término-N o término-C. Si un polipéptido en particular carece de residuo de terminal-N o -C de una proteína retiene dichas actividades inmunogénicas, puede determinarse fácilmente mediante métodos de rutina descritos en la presente invención y conocidos en la técnica. Por lo tanto, la presente invención incluye variantes de polipéptido adicionales que tienen una actividad funcional (por ejemplo, actividad biológica y/o actividad terapéutica). En una modalidad, la presente invención proporciona variantes de proteínas de fusión de albúmina que tienen una actividad funcional (por ejemplo, actividad biológica y/o actividad terapéutica) que corresponde a una o más actividades biológicas y/o terapéuticas de la proteína terapéutica que corresponde a la parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina. En otra modalidad, la presente invención proporciona variantes de proteína de fusión de albúmina que tienen una actividad funcional (por ejemplo, actividad biológica y/o actividad terapéutica) que corresponde a una o más actividades biológicas y/o terapéuticas de la proteína Terapéutica que corresponde a la parte de proteína Terapéutica de la proteína de fusión de albúmina. Dichas variantes incluyen eliminaciones, inserciones, inversiones, repeticiones y substituciones seleccionadas de acuerdo con las reglas generales conocidas en la técnica, que tienen poco efecto en la actividad. Los polipéptidos que codifican dichas variantes también están comprendidos en la presente invención. En modalidades preferidas, las variantes de la presente invención tienen substituciones conservadoras. Por "substituciones conservadoras" se entienden barridos dentro de grupos tales como el reemplazo de los aminoácidos alifáticos o hidrofobicos Ala, Val, Leu e Me; el reemplazo de los residuos hidroxilo Ser y Thr; el reemplazo de residuos ácidos Asp y Glu; el reemplazo de residuos amida Asn y Gln; el reemplazo de residuos básicos Lys, Arg y His; reemplazo de los residuos aromáticos Phe, Tyr, y Trp, y reemplazo de los aminoácidos de tamaño pequeño Ala, Ser, Thr, Met, y Gly. La guía con respecto a como realizar substituciones de aminoácidos silente en forma fenotípica se proporciona, por ejemplo, en la Publicación de Bowie y asociados, "Deciphering the Message in Protein Sequences: Tolerance to Amino Acid Substitutions", Science 247: 1 306-1 31 0 (1 990), en donde los autores indican que existen dos estrategias principales para estudiar la tolerancia de cambio de una secuencia de aminoácido. La primera estrategia, explota la tolerancia de su bstituciones de am i noácido mediante selección natural d u rante el proceso de evolución . Al comparar las secuencias de aminoácidos en diferentes especies, se pueden identificar aminoácidos conservados. Estos aminoácidos conservados son probablemente importantes para la función de la proteína. En contraste, las posiciones de aminoácidos en donde se han tolerado las substituciones mediante selección natural , indica que estas posiciones no son importantes para la función de la proteína. Por consiguiente, las posiciones q ue toleran la su bstitución de aminoácido pueden ser modificadas, y al mismo tiempo mantener la actividad biológica de la proteína. La segunda estrategia, utiliza ingeniería genética para introducir cambios de aminoácidos en posiciones específicas del gen clonado para identificar regiones importantes para la función de la proteína. Por ejemplo, se puede utilizar mutagénesis dirigida al sitio o mutagénesis de exploración de alanina, (introducción de mutaciones de alani na simples en cada residuo en la molécula. Ver la Publicación de Cun ning ham and Wells, Science 244: 1 081 -1 085 (1 989). Las moléculas mutantes resultantes posteriormente pueden ser probadas con respecto a la actividad biológica . Tal como lo manifiestan los autores, estas dos estrategias han revelado que las proteínas son sorprendentemente tolerantes a las substituciones de aminoácidos. Los autores indican además que son probables urcambios de aminoácidos como permitidos en ciertas posiciones de aminoácido en la proteína. Por ejemplo, los residuos de aminoácidos más enterrados (dentro de la estructura terciaria de la proteína) requieren cadenas laterales no polares, por lo que algunas características de las cadenas laterales de la superficie son conservadas de manera general. Además, las substituciones de aminoácidos conservadoras toleradas comprenden el reemplazo de los aminoácidos alifáticos o hidrofobicos Ala, Val, Leu e He; el reemplazo de los residuos hidroxilo Ser y Thr; reemplazo de residuos de ácido Asp y Glu; reemplazo de los residuos de amida Asn y Gln, reemplazo de los residuos básicos Lys, Arg, y His; reemplazo de los residuos aromáticos Phe, Tyr, y Trp, y reemplazo de los aminoácidos de tamaño pequeño Ala, Ser, Thr, Met, y Gly. Además de la substitución de aminoácidos conservadores, las variantes de la presente invención incluyen (i) polipéptidos que contienen substituciones de uno o más de los residuos de aminoácidos no conservados, en donde los residuos de aminoácidos substituidos pueden o no ser uno codificado por el código genético, o (¡i) polipéptidos que contienen substituciones de uno o más residuos de aminoácidos que tienen un grupo substituyente; o (iii) polipéptidos que han sido fusionados con o conjugados en forma química a otro compuesto, tal como un compuesto para incrementar la estabilidad y/o solubilidad del polipéptido (por ejemplo, polietilénglicol), (iv) polipéptidos que contienen aminoácidos adicionales, tales como, por ejemplo, un péptido de región de fusión IgG Fc. Dichos polipéptidos variantes se consideran dentro del alcance de las habilidades de los expertos en la técnica a partir de las enseñanzas de la presente invención.

Por ejemplo, las variantes de polipéptido que contienen substituciones de aminoácidos cargados con otros aminoácidos cargados o neutrales, pueden producir proteínas, con características mejoradas, tales como menos agregación. La agregación de las formulaciones farmacéuticas reduce tanto la actividad como también incrementa el despeje debido a la actividad inmunogénica del agregado. Ver la Publicación de Pinckard et al. , Clin. Exp. I mmunol. 2:331 -340 (1967); Robbins y asociados, Diabetes 36: 838-845 (1987); Cleland et al. , Crit. Rev. Therapeutic Drug Carrier Systems 10:307-377 (1993). En modalidades específicas, los polipéptidos de la presente invención comprenden , o como alternativa, consisten en fragmentos o variantes de la secuencia de aminoácidos de una proteína de fusión de albúmina, la secuencia de aminoácidos de una proteína Terapéutica y/o albúmina de suero humana, en donde los fragmentos o variantes tienen 1 -5, 5-10, 5-25, 5-50, 10-50 o 50-150, adiciones, substituciones y/o eliminaciones de residuos de aminoácido, cuando se comparan con la secuencia de aminoácido de referencia. En modalidades preferidas, se conservan las substituciones de aminoácidos. Los ácidos nucleicos que codifican estos polipéptidos también están comprendidos en la presente invención. El polipéptido de la presente invención puede estar compuesto de aminoácidos unidos entre sí mediante enlaces de péptidos o enlaces de péptidos modificados, por ejemplo, isosteres de péptido, y pueden contener aminoácidos además de 20 aminoácidos codificados en forma genética. Los polipéptidos pueden ser modificados mediante procesos naturales, tales como procesamiento post-traducción, o mediante técnicas de modificación química las cuales son conocidas en el arte. Dichas m loi dificaciones se describen en textos básicos y en monografías ma is¡ detalladas, así como en literatura de investigación voluminosa. Las modificaciones pueden ocurrir en cualquier lugar en un polipéptido, incluyendo el esqueleto de péptido, las cadenas laterales de aminoácido, y el término amino o carboxilo. Será apreciado que el mismo tipo de modificación puede encontrarse en el mismo grado o en diversos grados en diversos sitios en un polipéptido determinado. Asimismo, un polipéptido determinado puede contener muchos tipos de modificaciones. Los polipéptidos pueden ser ramificados, por ejemplo, como resultado de ubiquitinación y pueden ser cíclicos, con o sin ramificación. Los polipéptidos cíclicos, ramificados y cíclicos ramificados pueden resultar del proceso natural de postraducción o pueden elaborarse a través de métodos sintéticos. Las modificaciones incluyen acetilación, acilación, ADP-ribocilación, amidación, adhesión covalente de flavina, adhesión covalente de una porción heme, adhesión covalente de un nucleótido derivado de un nucleótido, adhesión covalente de un lípido o derivado de lípido, adhesión covalente de fosfotidilnositol, reticulación, ciclización, formación de enlace de disulfuro, demetilación, formación de reticulaciones covalentes, formación de cisteína, formación de piroglutamato, formilación, gama-carboxilación, glucosilación , formación de anclaje GPI , hidroxilación, yodinación , metilación, miristilación, oxidación, pegilación, procesamiento proteolítico, fosforilación, prenilación, racemización, selenoilación, sulfación, adición transmitida por transferencia de ARN de aminoácidos a proteínas tales como arginilación , y ubiquitinación. (Ver por ejemplo, PROTEI NS - STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTI ES, 2da. Edición, T. E. Creighton, W. H . Freeman and Company, Nueva York (1993); POST-TRANSLATIONAL COVALENT MODIFICATION OF PROTEI NS, B. C. Johnson , Ed. , Academic Press, Nueva York 1 -12 (1983); Seifter y asociados, Meth Enzymol. 182:626-646 (1990); Rattan y asociados, Ann. N.Y. Acad. Sci. 663:48-62 (1992)). Actividad Funcional "Un polipéptido que tiene actividad funcional" se refiere a un polipéptido con la capacidad de desplegar una o más actividades funcionales asociadas con la pro-proteína de longitud total, y/o forma madura de una proteína Terapéutica. Dichas actividades funcionales incluyen, pero no se limitan a actividad biológica, antigenicidad [capacidad de enlazar (o competir con un polipéptido para enlace] a un anticuerpo de anti-polipéptido] , inmunogenicidad (capacidad de generar anticuerpos que enlazan a un polipéptido específico de la presente invención), capacidad para formar multímeros con polipéptidos de la presente invención, y capacidad para enlazar a un receptor o ligando para un polipéptido. "Un polipéptido que tiene actividad biológica" se refiere a un polipéptido que exhibe actividad similar a, aunque no necesariamente idéntica, a una actividad de una proteína Terapéutica de la presente invención, incluyendo formas maduras, tal como se mide en un ensayo biológico en particular, con o sin dependencia de la dosis. En el caso en donde existe la dependencia de la dosis, no necesita ser idéntica a la del polipéptido, sino más bien substancialmente similar a la dependencia de la dosis en una actividad determinada en comparación con el polipéptido de la presente invención (por ejemplo, el polipéptido candidato exhibirá mayor actividad o no más de aproximadamente 25 veces menos y, preferentemente, no más de aproximadamente diez veces menos de actividad, y más preferentemente, no más de aproximadamente tres veces menos actividad con relación al polipéptido de la presente invención). En modalidades preferidas, una proteína de fusión de albúmina de la presente invención , tiene al menos una actividad biológica y/o terapéutica asociada con la parte de proteína Terapéutica (o fragmento o variante de la misma) cuando no se fusiona a albúmina. En modalidades preferidas adicionales, la proteína de fusión de albúmina de la presente invención tiene una estabilidad de plasma incrementada en comparación con la parte de proteína Terapéutica (o fragmento o variante de la misma) en un estado no fusionado. La estabilidad de plasma de la proteína de fusión de albúmina de la presente invención o de la parte de proteína Terapéutica no fusionada (o fragmento o variante de la misma) puede ser ensayada utilizando o modificando en forma rutinaria ensayos conocidos en la técnica. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, pueden ser ensayadas con respecto a la actividad funcional (por ejemplo, actividad biológica) utilizando o modificando en forma rutinaria ensayos conocidos en la técnica, así como ensayos que se describen en la presente invención. Además, un experto en la técnica puede ensayar en forma rutinaria fragmentos de una proteína Terapéutica que corresponde a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina, para actividad utilizando ensayos referenciados en su fila correspondiente de la Tabla 1 (por ejemplo, en la columna 3 de la Tabla 1 ). Además, un experto en la técnica puede ensayar en forma rutinaria fragmentos de una proteína de albúmina que corresponde a una parte de proteína de albúmina de una proteína de fusión de albúmina, con respecto a la actividad utilizando ensayos conocidos en la técnica y/o tal como se describe en la sección de Ejemplos que se encuentra más adelante. Por ejemplo, en una modalidad en donde se ensaya con respecto a la capacidad de una proteína de fusión de albúmina para enlazar o competir con una proteína Terapéutica para enlazar a un anticuerpo de polipéptido anti-Terapéutico y/o anticuerpo antialbúmina, se pueden utilizar varios inmunoensayos conocidos en la técnica, incluyendo pero sin limitarse a, sistemas de ensayo competitivo y no competitivo utilizando técnicas tales como radioinmunoensayos, ELISA (ensayo inmunoabsorbente enlazado por enzima), inmunoensayos "de emparedado", ensayos inmunoradiométricos, reacciones de precipitación de difusión de gel, ensayos de inmunodifusión, inmunoensayos in situ (utilizando oro coloidal, enzimas o etiquetas de radioisótopo, por ejemplo), manchados western, reacciones de precipitación, ensayos de aglutinación (por ejemplo, ensayos de aglutinación de gel, ensayos de hemaglutinación), ensayos de fijación de complementos, ensayos inmunofluorescentes, ensayos de proteína A, y ensayos de inmunoelectroforésis, etc. En una modalidad, se detecta el enlace de anticuerpo detectando una etiqueta en el anticuerpo primario. En otra modalidad, se detecta el anticuerpo primario detectando el enlace de un anticuerpo secundario o reactivo al anticuerpo primario. En una modalidad adicional, se etiqueta el anticuerpo secundario. Se conocen muchos significados en la técnica, para detectar un enlace en un inmunoensayo y están dentro del alcance de la presente invención.

En una modalidad preferida, en donde se identifica una parte de enlace (por ejemplo, un receptor o ligando) de una proteína Terapéutica, el enlace a dicha parte de enlace a través de una proteína de fusión de albúmina que comprende dicha proteína Terapéutica tal como la parte de proteína Terapéutica de la fusión, puede ensayarse, por ejemplo, a través de medios conocidos en la técnica, tales como, por ejemplo, cromatografía de gel de reducción o sin reducción, cromatografía de afinidad de proteína, y manchado de afinidad. Ver en forma general la Publicación de Phizicky y asociados, Microbiol Rev. 59:94-123 (1995). En otra modalidad, la capacidad de correlaciones fisiológicas de una proteína de fusión de albúmina para enlazar a un substrato(s) del polipéptido Terapéutico que corresponde a la parte de proteína Terapéutica de fusión, se puede ensayar en forma rutinaria utilizando técnicas conocidas en el arte. En una modalidad alternativa, en donde la capacidad de la proteína de fusión de albúmina para multimerizar está siendo evaluada, se puede ensayar la asociación con otros componentes del multímero, por ejemplo, a través de medios conocidos en la técnica, tales como, por ejemplo, cromatografía de gel de reducción y sin reducción, cromatografía de afinidad de proteína y manchado de afinidad. Ver en forma general la Publicación de Phizicky y asociados, supra. En modalidades preferidas, una proteína de fusión de albúmina, que comprende toda o una parte del anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica, tiene al menos una actividad biológica y/o terapéutica (por ejemplo, para enlazar en forma específica a un polipéptido o epítope) asociado con el anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica (o fragmento o variante del mismo) cuando no está fusionada a albúmina. En otras modalidades preferidas, la actividad biológica y/o actividad terapéutica de una proteína de fusión de albúmina que comprende todas o parte de un anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica es la inhibición (por ejemplo, antagonismo) o activación (por ejemplo, agonismo) de una o más actividades biológicas y/o actividades terapéuticas asociadas con el polipéptido que está enlazado en forma específica mediante el anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica. Las proteínas de fusión de albúmina comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica pueden ser caracterizadas en una variedad de formas. En particular, las proteínas de fusión de albúmina que comprenden al menos un fragmento o variante de anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica que pueden ser ensayadas con respecto a la capacidad de enlazar en forma específica los mismos antígenos enlazados en forma específica a través del anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica que corresponde a la parte de proteína Terapéutica de la proteína de fusión de albúmina utilizando técnicas descritas en la presente invención o técnicas de modificación rutinaria conocidas en el arte.

Los ensayos con respecto a la capacidad de las proteínas de fusión de albúmina (por ejemplo, que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica) para (en forma específica) a una proteína o epítope específico, se pueden llevar a cabo en solución (por ejemplo, Houghten, Bio/Techniques 13:412-421 (1992)), en granulos (por ejemplo, Lam, Nature 354: 82-84 (1991 )), en trozos (por ejemplo, Fodor, Nature 364:555-556 (1993)), en bacterias (por ejemplo, Patente Norteamericana No. 5,223,409), en esporas (por ejemplo, Patentes Nos. 5,571 ,698; 5,403,484; y 5,223,409), en plásmidos (por ejemplo, Culi y asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 89: 1865-1 869 (1992)) o en fagos (por ejemplo, Scott y Smith, Science 249:386-390 (1990); Devlin, Science 249:404-406 (1990); Cwirla y asociados, Proc. Nati. Acad . Sci. EUA 87:6378-6382 (1990); y Felici, J . Mol. Biol. 222:301 -310 (1991 )) (cada una de estas referencias está incorporada en su totalidad a la presente invención). Las proteínas de fusión de albúmina que comprende al menos un fragmento o variante de un anticuerpo Terapéutico, pueden ser ensayadas con respecto a su especificidad y afinidad para una proteína o epítope específico, utilizando o modificando en forma rutinaria técnicas que se describen en la presente invención o que son conocidas en el arte. Las proteínas de fusión de albúmina comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica que pueden ser ensayadas con respecto a la reactividad cruzada con otros antígenos (por ejemplo, moléculas que tienen conservación de secuencia/estructura con la molécula(s) enlazada en forma específica mediante el anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica (o fragmento o variante del mismo) que corresponde a la parte de proteína Terapéutica de la proteína de fusión de albúmina de la presente invención) a través de cualquier método conocido en la técnica. Los inmunoensayos que se pueden utilizar para analizar (inmunoespecífico) el enlace y reactividad cruzada, incluyen pero no se limitan a, sistemas de ensayo competitivo y no competitivo que utilizan técnicas tales como manchados western, radioinmunoensayos ELISA (ensayo inmunoabsorbente enlazado por enzimas), inmunoensayos "de emparedado", ensayos de inmunoprecipitación, reacciones de precipitin, reacciones de precipitin de difusión de gel, ensayos de inmunodifusión, ensayos de aglutinación, ensayos de fijación-complemento, ensayos inmunoradiométricos, inmunoensayos fluorescentes, e inmunoensayos de proteína A, por nombrar algunos. Dichos ensayos son de rutina, y son conocidos en la técnica (por ejemplo, ver la Publicación de Ausubel y asociados, eds. 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1 . John Wiley & Sons, Inc. , Nueva York, la cual está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia). Los inmunoensayos de ejemplo se describen en forma breve más adelante (aunque no están proyectados para ser limitantes).

Los protocolos de inmunoprecipitación generalmente comprenden lisado de una población de células en regulador de lisis tal como regulador RIPA (1 % NP-40 o Tritón X-100, 1 % desoxicolato de sodio, 0.1 % SDS, 0.15 M NaCI , 0.01 M fosfato de sodio en un pH 7.2, 1 % Trasilol) suplementado con inhibidores de fosfatasa y/o proteasa de proteína (por ejemplo, EDTA, PMSF, aprotinin, vanadato de sodio), agregando la proteína de fusión de albúmina de la presente invención (por ejemplo, que comprende al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica) al lisado celular, incubando durante un período de tiempo (por ejemplo, 1 a 4 horas) a una temperatura de 40°C, agregando cuentas de sefarosa acopladas a un anticuerpo anti-albúmina, por ejemplo, al lisado celular, incubando durante aproximadamente una hora o más a una temperatura de 40°C, lavando las cuentas en regulador de lisis y resuspendiendo las cuentas en regulador SDS/muestra. La capacidad de la proteína de fusión de albúmina para inmunoprecipitar un antígeno particular puede ser evaluada, por ejemplo, mediante análisis de manchado western. Un experto en la técnica podrá reconocer los parámetros que pueden ser modificados para incrementar el enlace de la proteína de fusión de albúmina a un antígeno y disminuir el fondo (por ejemplo, despejando previamente el lisado celular con cuentas de sefarosa). Para una descripción adicional con respecto a protocolos de inmunoprecipitación consultar la Publicación de Ausubel, y asociados, eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1 , John Wiley & Sons, Inc. , Nueva York at 10.16.1. Los análisis de manchado western generalmente comprenden preparación de muestras de proteína, electroforésis de muestras de proteína en un gel de poliacrilamida (por ejemplo, 8% - 20% SDS-PAGE dependiendo del peso molecular del antígeno), transferencia de la muestra de proteína a partir del gel de poliacrilamida a una membrana tal como nitrocelulosa, PVDF o nylon, bloqueo de la membrana en solución de bloqueo (por ejemplo, PBS con 3% BSA o leche sin grasa), lavado de la membrana en regulador de lavado (por ejemplo, PBS-Tween 20), aplicando la proteína de fusión de albúmina de la presente invención (diluido en regulador de bloqueo) a la membrana, lavado de la membrana en regulador de lavado, aplicar un anticuerpo secundario (que reconoce la proteína de fusión de albúmina, por ejemplo, un anticuerpo de albúmina de suero anti-humano) conjugado a un substrato enzimático (por ejemplo, peroxidasa de rábano o fosfatasa alcalina) o molécula radioactiva (por ejemplo, 32p 0 125 j^ ¿¡luido en regulador de bloqueo, lavando la membrana en regulador de lavado y detectando la presencia del antígeno. Un experto en la técnica puede reconocer los parámetros que pueden ser identificados para incrementar la señal detectada y para reducir el ruido del fondo. Para una descripción adicional con respecto a protocolos de manchado western ver la Publicación de Ausubel, y asociados, eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1 , John Wiley & Sons, Inc. , Nueva York at 10.8.1 .

Los ensayos ELISAs comprenden preparación de antígenos, recubrimiento del depósito de una placa de microtitulación de 96 depósitos con el antígeno, lavado del antígeno que no enlaza a los depósitos, agregación de la proteína de fusión de albúmina (por ejemplo, que comprende al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica) de la presente invención conjugado con un compuesto detectable tal como un compuesto enzimático (por ejemplo, peroxidasa de rábano o fosfatasa alcalina) a los depósitos e incubando durante un período de tiempo, lavando las proteína de fusión de albúmina no enlazadas o enlazadas en forma no específica, y detectando la presencia de las proteínas de fusión de albúmina específicamente enlazadas al recubrimiento de antígeno del depósito. En ensayos ELISAs, la proteína de fusión de albúmina no tiene que ser conjugada a un compuesto detectable; más bien, un segundo anticuerpo (que reconoce ia proteína de fusión de albúmina) conjugada a un compuesto detectable puede agregarse al depósito. Además, en lugar de conjugar el depósito dentro del antígeno, la proteína de fusión de albúmina puede ser recubierta para el depósito. En este caso, la molécula detectable puede ser el antígeno conjugado a un compuesto detectable tal como un substrato enzimático (por ejemplo, peroxidasa de rábano o fosfatasa alcalina). Un experto en la técnica puede reconocer los parámetros que pueden ser modificados para incrementar la señal detectada, así como otras variaciones de ensayos ELISAs conocidos en la técnica. Para una descripción adicional con respecto a los ensayos ELISAs ver, por ejemplo, la Publicación de Ausubel y asociados, eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1 , John Wiley & Sons, Inc. Nueva York at 1 1 .2.1 . La afinidad de enlace de una proteína de fusión de albúmina a una proteína, antígeno, o epítope y el fuera de rango de una interacción de proteína de fusión de albúmina/antígeno/epítope se puede determinar mediante ensayos de enlace competitivo. Un ejemplo de un ensayo de enlace competitivo es un radioinmunoensayo que comprende la incubación del antígeno etiquetado (por ejemplo, 3H o 125l) con la proteína de fusión de albúmina de la presente invención en la presencia de cantidades en incremento del antígeno no etiquetado, y la detección de un anticuerpo enlazado al antígeno etiquetado. La afinidad de la proteína de fusión de albúmina con una proteína específica, antígeno o epítope y el enlace fuera de rango, se puede determinar a partir de los datos mediante análisis de trazo Scatchard. La competición con una segunda proteína que enlaza a la misma proteína, antígeno o epítope que la proteína de fusión de albúmina, también se puede determinar utilizando radioinmunoensayos. En este caso, la proteína, antígeno o epítope se incuba con una proteína de fusión de albúmina conjugada a un compuesto etiquetado (por ejemplo, 3H o 125l) en la presencia de cantidades en incremento de una segunda proteína no etiquetada que enlaza a la misma proteína, antígeno o epítope que la proteína de fusión de albúmina de la presente invención. En una modalidad preferida, se utiliza análisis cinético BIAcore para determinar el enlace en y fuera de rangos de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención a una proteína, o antígeno o epítope. El análisis cinético BIAcore comprende analizar el enlace y disociación de las proteínas de fusión de albúmina, o polipéptidos específicos, antígenos o epítopes de trozos con polipéptidos específicos inmovilizados, antígenos o epítopes o proteínas de fusión de albúmina, respectivamente, en su superficie. Los anticuerpos que enlazan a una proteína Terapéutica que corresponde a la parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina, también pueden describirse o especificarse en términos de su afinidad de enlace para una proteína o antígeno determinado, preferentemente el antígeno al cual enlazan en forma específica. Las afinidades de enlace preferidas incluyen aquellas con una constante de disociación o Kd menor a 5 X 10"2 M, 10~2 M, 5 X 10"3 M, 10"3 M, 5 X 10"4 M, 10"4 M. Las afinidades de enlace más preferidas, incluyen aquellas con una constante de disociación o Kd menor a 5 X 10"5 M, 10"5 M, 5 X 10"6 M , 10"6M , 5 X 10~7 M, 107 M, 5 X 10"8 M o 10-8 M. Las afinidades de enlace incluso más preferidas, incluyen aquellas con una constante de disociación o Kd menor a 5 X 10"9 M, 10"9 M , 5 X 10"10 M, 10"10 M, 5 X 10"11 M , 10'1 1 M, 5 X 10"12 M, 10"12 M, 5 X 1 0"13 M, 10"13 M, 5 X 10"14 M, 10-14 M, 5 X 10"15 M , o 10'15 M. En modalidades preferidas, las proteínas de fusión de albúmina comprenden por lo menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica, tienen una afinidad para una proteína o epítope determinado similar a la del anticuerpo correspondiente (no fusionado albúmina) que enlaza una proteína Terapéutica, tomando en cuenta la valencia de la proteína de fusión de albúmina (que comprende al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica) y la valencia del anticuerpo correspondiente. Además, los ensayos que se describen en la presente invención (ver Ejemplos y Tabla 1) y los conocidos en la técnica, puede aplicarse en forma rutinaria para medir la capacidad de las proteínas de fusión de albúmina y fragmentos, variantes y derivados de las mismas para generar la actividad biológica y/o actividad Terapéutica (ya sea in vitro o in vivo) relacionada ya sea con la parte de la proteína Terapéutica y/o parte de albúmina de proteína de fusión de albúmina. Los expertos de la técnica saben de otros métodos que están dentro del alcance de la presente invención. Albúmina Tal como se describió anteriormente, una proteína de la fusión de albúmina de la presente invención comprende al menos un fragmento o variante de una proteína Terapéutica y al menos un fragmento o variante de albúmina de suero humano, que están asociadas con otra, preferentemente mediante fusión genética. Una modalidad adicional comprende al menos un fragmento o variante de una proteína Terapéutica y al menos un fragmento o variante de albúmina de suero humano, las cuales enlazan a otra mediante conjugación química. Los términos, albúmina de suero humano (HSA) y albúmina humana (HA) se utilizan de manera intercambiable en la presente invención . Los términos "albúmina" y "albúmina de suero", son más amplios, y comprenden albúmina de suero humano (y fragmentos y variantes de la misma), así como albúmina de otras especies (y fragmentos y variantes de la misma). Tal como se utiliza en la presente invención, "albúmina" se refiere en forma colectiva a una proteína de albúmina o secuencia de aminoácido, o a un fragmento de albúmina o variante, que tiene una o más actividades funcionales (por ejemplo, actividades biológicas) de albúmina. En particular, "albúmina" se refiere a albúmina humana o fragmentos de la misma (ver por ejemplo las Patentes EP 201 239, EP 322 094 y las Publicaciones WO 97/24445 , WO95/23857) especialmente la forma madura de albúmina humana, tal como se muestra en la figura 1 y en la SEQ I D NO: 1 , o albúmina de otros vertebrados o fragmentos de las mismas, o análogos o variantes de las moléculas o fragmentos de las mismas. En modalidades preferidas, la proteína de albúmina de suero humano utilizada en las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , contiene uno o ambos de los siguientes grupos de mutaciones mutantes con referencia a la SEQ ID NO: 1 : Leu- 407 a Ala, Leu-408 a Val , Val-409 a Ala, y Arg-41 0 a Ala; o Arg-410 a A, Lys-413 a Gln, y Lys-414 Gln (ver por ejemplo, Publicación I nternacional No. WO95/23857, la cual está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia). En modalidades incluso más preferidas, las proteínas de albúmina de fusión de la presente invención que contienen uno o ambos de los grupos de mutaciones de punta antes descritos, tienen estabilidad/resistencia mejorada a la disociación proteolítica de Yap3p de levadura, lo que permite una producción incrementada de proteínas de fusión de albúmina recombinante expresada en células huésped de levadura. Tal como se utiliza en la presente invención, una parte de la albúmina suficiente para prolongar la actividad terapéutica o estabilidad de plasma o vida en anaquel de la proteína Terapéutica se refiere a una parte de la albúmina suficiente en longitud o estructura para estabilizar o prolongar la actividad terapéutica o estabilidad de plasma de la proteína, de modo que la vida en anaquel o estabilidad de plasma de la parte de proteína Terapéutica de las proteínas de fusión de albúmina se prolonga o extiende en comparación con la vida en anaquel o estabilidad de plasma en el estado no fusionado. La parte de albúmina de las proteínas de fusión de albúmina puede comprender la longitud total de la secuencia HA tal como se describió anteriormente, o pueden incluir uno o más fragmentos de la misma con la capacidad de estabilizar o prolongar la actividad terapéutica. Dichos fragmentos pueden tener 10 o más aminoácidos de longitud o pueden incluir 15, 20, 25, 30, 50, o más aminoácidos contiguos procedentes de la secuencia HA o pueden incluir parte o todos los dominios específicos de HA. Por ejemplo, se pueden utilizar uno o más fragmentos de HA que abarcan los primeros dos dominios tipo inmunoglobulina. En una modalidad preferida, el fragmento HA es la forma madura de HA. La parte de albúmina de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, pueden ser una variante de HA normal. La parte de proteína Terapéutica de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, también puede ser variantes de las proteínas Terapéuticas tal como se describe en la presente invención. El término "variantes", incluye inserciones, eliminaciones y substituciones, ya sea en forma conservadora o no conservadora, en donde dichos cambios no alteran substancialmente una o más de las propiedades oncoticas, de enlace de ligandos útiles y no inmunogénicos de la albúmina, o el sitio activo o domino activo que confiere las actividades terapéuticas de las proteínas Terapéuticas. En particular, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención pueden incluir variantes polimorficas que ocurren naturalmente de albúmina humana y fragmentos de albúmina humana, por ejemplo, los fragmentos que se describen en la patente EP 322 094 (es decir HA (Pn), en donde n es 369 a 419). La albúmina puede derivarse de cualquier vertebrado, especialmente cualquier mamífero, por ejemplo humano, vaca, oveja, o cerdo. Las albúminas no mamíferas incluyen, pero no se limitan a gallina y salmón. La parte de albúmina de la proteína de fusión de albúmina puede ser de un animal diferente al de la parte de la proteína Terapéutica. Hablando de manera general, un fragmento HA o variante tendrá al menos 100 aminoácidos de longitud, preferentemente al menos 150 aminoácidos de longitud. La variante HA puede consistir en, o comprender en forma alternativa, al menos un domino completo de HA, por ejemplo el dominio 1 (aminoácido 1-94 de SEQ ID NO: 1), dominio 2 (aminoácidos 195-387 de SEQ ID NO:1), dominio 3 (aminoácidos 388-585 de SEQ ID NO:1), dominio 1 y 2 (1-387 de SEQ ID NO:1), dominios 2 y 3 (195-585 de SEQ ID NO:1) o dominios 1 y 3 (aminoácidos 1-194 de SEQ ID NO:1 y aminoácidos 388-585 de SEQ ID NO:1). Cada dominio se elabora por sí mismo de dos subdominios homólogos, es decir 1-105, 120-194, 195-291, 316-387, 388-491 y 512-585, con regiones enlazadoras inter-subdominio flexibles que comprenden los residuos Lys106 a Glu119, Glu292 a Val315 y Glu492 a Ala511. Preferentemente, la parte de albúmina de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención comprende al menos un subdominio o dominio de HA o modificaciones conservadoras del mismo. Si la fusión se basa en subdominios, parte o todo el enlazador adyacente se utiliza preferentemente para enlazar la porción de proteína Terapéutica.

Anticuerpos que enlazan en forma específica a proteínas Terapéuticas también son proteínas Terapéuticas La presente invención también comprende proteínas de fusión de . albúmina que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza en forma específica a una proteína Terapéutica que se describe en la Tabla 1 . Se contempla de manera específica que el término "proteína Terapéutica" comprende anticuerpos que enlazan a una proteína Terapéutica (por ejemplo, tal como se Describe en la columna 1 de la Tabla 1 ) y fragmentos y variantes de la misma. Por lo tanto una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, puede contener al menos un fragmento o variante de una proteína Terapéutica, y/o al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica. Estructura y fondo del anticuerpo La unidad estructural básica del anticuerpo es conocida porque comprende un tetrámero. Cada tetrámero se compone de dos pares idénticos de cadenas de polipéptido, teniendo cada par una cadena "ligera" (desde aproximadamente 25 kDa) y una cadena "pesada" (desde aproximadamente 50-70 kDa). La parte de terminal-amino de cada cadena, incluye una región variable de aproximadamente 100 a 1 10 aminoácidos, responsable principalmente del reconocimiento de antígenos. La parte de terminal-carboxi de cada cadena define una región constante, principalmente responsable de la función efectora. Las cadenas ligeras humanas se clasifican como cadenas ligeras kappa y lambda. Las cadenas pesadas se clasifican como mu , delta, gama, alfa, o epsilon , y definen el isótopo del anticuerpo como IgM , IgD, IgG , IgA, e IgE, respectivamente. Ver la Publicación general Fundamental Immunology Capítulos 3-5 (Paul , W. , ed. , 4ta. Ed. Raven Press, N.Y. (1 998)) (incorporada en su totalidad como referencia a la presente invención para todos los propósitos). Las regiones variables de cada par de cadena ligera/pesada forman el sitio de enlace de anticuerpos. Por lo tanto, un anticuerpo IgG intacto tiene dos sitios de enlace. Excepto en anticuerpos bifuncionales o biespecíficos, los dos sitios de enlace son los mismos. Las cadenas exhiben todas, la misma estructura general de regiones de estructura conservada en forma relativa (FR) unidas por tres regiones hipervariables, también denominadas regiones de determinación de complementaridad o CDRs. Las regiones CDR, en general, son las partes del anticuerpo que hacen contacto con el antígeno y determinan su especificidad . Los CDRs de las cadenas pesadas y ligeras de cada par, se alinean mediante las regiones de estructura, permitiendo el enlace a un epítope específico. De la terminal-N a la terminal-C, las regiones variables de las cadenas tanto ligeras como pesadas comprenden los dominios FR1 , CDR1 , FR2, CDR2, FR3, CDR3 y FR4. Las regiones variables se conectan a la región constante de cadena pesada o ligera. La asignación de aminoácidos a cada dominio es de acuerdo con las definiciones de Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (National I nstitutes of Health , Bethesda, Md. (1987 y 1991 )), o Chothia & Lesk J Mol. Biol. 196:901 -917 (1987); Chothia et al . Nature 342:878-883 (1989). Tal como se utiliza en la presente invención, el término "anticuerpo" se refiere a moléculas de inmunoglobulina y a partes inmunologicamente activas de moléculas de inmunoglobulina, por ejemplo, moléculas que contienen un sitio de enlace de antígeno que enlazan en forma específica a un antígeno (por ejemplo, una molécula que contiene una o más regiones CDR de un anticuerpo). Los anticuerpos que pueden corresponder a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina, incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos monoclonales, multiespecíficos, humanos, humanizados o quiméricos, anticuerpos de cadena simple (por ejemplo, cadena simple Fvs), fragmentos Fab, fragmentos F(ab'), fragmentos producidos mediante biblioteca de expresión Fab, anticuerpos anti-idiotípicos (anti-ld) (incluyendo, por ejemplo, anticuerpos anti-ld específicos de anticuerpos de la presente invención), y fragmentos de enlace de epítope de cualesquiera de los anteriores (por ejemplo, dominios VH, dominios VL, una o más regiones CDR). Anticuerpos que enlazan a Proteínas Terapéuticas La presente invención comprende las proteínas de fusión de albúmina que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo, que enlaza a una Proteína Terapéutica (por ejemplo, tal como se describe en la Tabla 1 ) o fragmento o variante de la misma. Los anticuerpos que enlazan a una proteína Terapéutica (o fragmento o variante del mismo) pueden ser de cualquier origen animal , incluyendo aves y mamíferos. Preferentemente, los anticuerpos son anticuerpos de humano, múrido (por ejemplo, ratón y rata), mono, oveja, conejo, cabra, cerdo de guinea, camello, caballo, o pollo. Más preferentemente, los anticuerpos son anticuerpos humanos. Tal como se utiliza en la presente invención , los anticuerpos "humanos" incluyen anticuerpos que tienen la secuencia de aminoácidos de una inmunoglobulina humana e incluyen anticuerpos aislados de bibliotecas de inmunoglobulina humana y xenoratones y otros organismos que han sido construidos en forma genética para producir anticuerpos humanos. Las moléculas de anticuerpo que enlazan a una proteína Terapéutica y que pueden corresponder a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención , pueden ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG , IgE, IgM, IgD, IgA e IgY), clase (por ejemplo, lgG 1 , lgG2, lgG3, lgG4, lgA1 e lgA2) o subclase de molécula de inmunoglobulina. En modalidades preferidas, las moléculas de anticuerpo que enlazan a una proteína Terapéutica y que pueden corresponder a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina son lgG 1. En otras modalidades preferidas, las moléculas de inmunoglobulina que enlazan a una proteína Terapéutica y que pueden corresponder a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina, son lgG2. En otras modalidades preferidas, las moléculas de ¡nmunoglobulina que enlazan a una proteína Terapéutica y que pueden corresponder a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina, son lgG4. Más preferentemente, los anticuerpos que enlazan a una proteína Terapéutica y pueden corresponder a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina, son fragmentos de anticuerpo de enlace de antígenos de humano de la presente invención, e incluyen pero no se limitan a, Fab, Fab' y F(ab')2, Fd, FVs de cadena simple (scFv), anticuerpos de cadena simple, Fvs enlazados con disulfuro (sdFv) y fragmentos que comprenden el dominio ya sea VL o VH. Los fragmentos de anticuerpos de enlace de antígenos, incluyendo anticuerpos de cadena simple, pueden comprender la región(s) variable sola o en combinación con la totalidad o una parte de la siguiente: región de vínculo, dominios CH1, CH2, y CH3. Los anticuerpos que enlazan a una proteína Terapéutica y que pueden corresponder a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina pueden ser monoespecíficos, biespecíficos, triespecíficos, o de mayor multiespecificidad. Los anticuerpos multiespecíficos pueden ser específicos para diferentes epítopes de una proteína Terapéutica o pueden ser específicos tanto para una proteína Terapéutica así como para un epítope heterólogo, tal como un polipéptido heterólogo o material de soporte solido. Ver por ejemplo, las publicaciones PCT WO 93/17715; WO 92/08802; WO 91 /00360; WO 92/05793; Tutt, y asociados, J . I mmunol . 147:60-69 (1991 ); Las Patentes Norteamericanas Nos. 4,474,893; 4,714,681 ; 4,925,648; 5, 573,920; 5,601 , 81 9; Kostelny y asociados, J. I mmunol. 148: 1547-1553 (1992). Los anticuerpos que enlazan a una proteína Terapéutica (o fragmento o variante de la misma) pueden ser biespecíficos o bifuncionales, lo cual significa que el anticuerpo es un anticuerpo híbrido artificial que tiene dos diferentes pares de cadena pesada/ligera y dos diferentes sitios de enlace. Los anticuerpos biespecíficos pueden ser producidos a través de una variedad de métodos, incluyendo fusión de hibridomas o enlace de fragmentos FabP Ver por ejemplo la Publicación de Songsivilai & Lachmann Clin. Exp. I mmunol. 79: 315-321 (1 990), Kostelny y asociados J I mmunol. 148: 1 547 1553 (1992). Además, se pueden formar anticuerpos biespecíficos en la forma de "diacuerpos" (Holliger y asociados, "Diabodies": small bivalent and bispecific antibody fragments" PNAS EUA 90:6444-6448 (1993)) o "Janusins" (Traunecker y asociados "Bispecific single chain molecules (Janusins) target cytotoxic lymphocytes on H IV infected cells" EMBO J 1 0:3655-3659 (1991 ) y Traunecker y asociados "Janusin : new molecular design for bispecific reagents" Int J Cáncer Suppl 7:51-52 (1992)). La presente invención también proporciona proteínas de fusión de albúmina que comprenden, fragmentos o variantes (incluyendo derivados) de un anticuerpo descrito en la presente invención o conocidos en la técnica. Las técnicas estándar conocidas para los expertos en el arte, se pueden utilizar para introducir mutaciones en la secuencia de nucleótidos que codifican una molécula de la presente invención, incluyendo, por ejemplo, mutagénesis dirigida al sitio y mutagénesis transmitida por PCR la cual da como resultado substituciones de aminoácidos. Preferentemente, las variantes (incluyendo derivados), codifican substituciones menores a 50 aminoácidos, substituciones menores a 40 aminoácidos, substituciones menores a 30 aminoácidos, substituciones menores a 25 aminoácidos, substituciones menores a 20 aminoácidos, substituciones menores a 15 aminoácidos, substituciones menores a 10 aminoácidos, substituciones menores a 5 aminoácidos, substituciones menores a 4 aminoácidos, substituciones menores a 3 aminoácidos, substituciones menores a 2 aminoácidos con relación al dominio VH, VHCDR1, VHCDR2, VHCDR3, dominio VL, VLCDR1, VLCDR2, o VLCDR3 de referencia. En modalidades específicas, las variantes codifican substituciones de VHCDR3. En una modalidad preferida, las variantes tienen substituciones de aminoácidos conservadoras en uno o más residuos de aminoácidos no esenciales anticipados. Los anticuerpos que enlazan a una proteína Terapéutica y que pueden corresponder a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina, pueden describirse o especificarse en términos del epítope(s) o parte(s) de una proteína Terapéutica, los cuales reconocen o enlazan en forma específica. Los anticuerpos que enlazan en forma específica a una proteína Terapéutica o un epítope específico de una proteína Terapéutica también pueden ser excluidos. Por consiguiente, la presente invención comprende anticuerpos que enlazan en forma específica a proteínas Terapéuticas, y permiten la exclusión de las mismas. En modalidades preferidas, las proteínas de fusión de albúmina que comprende al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica, enlazan a los mismos epítopes que el fragmento o variante no fusionado del propio anticuerpo. Los anticuerpos que enlazan a una proteína Terapéutica y pueden corresponder a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina, también pueden ser descritos o especificados en términos de su reactividad cruzada. Se incluyen anticuerpos que no enlazan a cualquier otro análogo, ortólogo, u homologo de una proteína Terapéutica. También se incluyen en la presente invención, anticuerpos que enlazan a polipéptidos con al menos el 95%, al menos el 90% , al menos el 85%, al menos el 80% , al menos el 75% , al menos el 70%, al menos el 65%, al menos el 60% , al menos el 55% , al menos el 50% , de identidad de secuencia (tal como se calcula utilizando métodos conocidos en la técnica que se describen en la presente invención) con una proteína Terapéutica. En modalidades específicas, los anticuerpos enlazan a una proteína Terapéutica y pueden corresponder a una parte de proteína Terapéutica de una reacción cruzada de proteína de fusión de albúmina con homólogos de múrido, rata y/o conejo de proteínas humanas y los epítopes correspondientes de las mismas. Los anticuerpos que no enlazan polipéptidos con menos del 95% , menos del 90% , menos del 85% , menos del 80% , menos del 75%, menos del 70%, menos del 65% menos del 60% , menos del 55% y menos del 50% de identidad de secuencia ( tal como se calcula utilizando los métodos conocidos en la técnica y aquí descritos) a una proteína Terapéutica también están incluidos en la presente invención. En una modalidad específica, la reactividad cruzada antes descrita es con respecto a cualquier polipéptido antigénico o inmunogénico específico simple, o combinación(s) de 2, 3, 4, 5 o mas polipéptidos antigénicos y/o inmunogénicos específicos aquí descritos. En modalidades preferidas, las proteínas de fusión de albúmina que comprenden además un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica, tienen características de reactividad cruzada sustancialmente idénticas e comparación con el fragmento o variante del propio anticuerpo en particular. Se incluyen además en la presente invención, anticuerpos que enlazan a polipéptidos codificados por polinucleótidos que hibridan a un polinucleótido que codifica una proteína Terapéutica bajo condiciones de hibridación estrictas (tal como se describe en la presente invención). Los anticuerpos que enlazan a una proteína Terapéutica y que pueden corresponder a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, también se pueden describir o especificar en términos de su afinidad de enlace a un polipéptido de la presente invención. Las afinidades de enlace preferidas incluyen aquellas con una constante de disociación o Kd menor a 5X10-2M, 10-2M, 5X10-3M, 10-3M, 5X10-4M, 10-4M. Las afinidades de enlace mas preferidas incluyen aquellas con una constante de disociación o Kd menor a 5X10-5M, 10-5M, 5X10-6M, 10-6M, 5X10-7, 10-7M, 5X10-8 o 10-8M. Las afinidades de enlace incluso mas preferidas, incluyen aquellas con una constante de disociación o KD menor a 5X10-9M, 10-9M, 5X10-10M, 10-10M, 5X10-11M, 10-11M, 5X10-12M, 10-12M, 5X10-13M, 10-13M, 5X10-14M, 10-14M, 5X10-14M, o 10-15M. En modalidades preferidas, las proteínas de fusión de albúmina que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica, tienen una afinidad de enlace para un proteína o epítope determinado similar a la del anticuerpo correspondiente (no fusionado a la albúmina) que enlaza a una proteína Terapéutica, tomando en cuenta la valencia de la proteína de fusión de albúmina ( que comprende al menos un fragmento o variante de una anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica) y la valencia del anticuerpo correspondiente. La presente invención también proporciona anticuerpos que inhiben en forma competitiva el enlace de un anticuerpo a un epitope de una proteína Terapéutica tal como se determina a través de cualquier método conocido en la técnica, para determinar enlace competitivo, por ejemplo, los inmunoensayos aquí descritos. En modalidades preferidas, el anticuerpo inhibe en forma competitiva el enlace al epitope en al menos un 95%, al menos 90%, al menos 85%, al menos 80%, al menos 75%, al menos 70%, al menos 60% o al menos 50%. En modalidades preferidas, las proteínas de fusión de albúmina que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica, inhiben en forma competitiva el enlace de un segundo anticuerpo a un epitope de una proteína Terapéutica. En otras modalidades preferidas, las proteínas de fusión de albúmina que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica, inhiben en forma competitiva el enlace de un segundo anticuerpo a un epitope de una proteína Terapéutica en al menos el 95%, al menos 90%, al menos 85%, al menos 80%, al menos 75%, al menos 70%, al menos 60% o al menos 50%. Los anticuerpos que enlazan a una proteína Terapéutica y que pueden corresponder a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina, pueden actuar como agonistas o antagonistas de la proteína Terapéutica. Por ejemplo, la presente invención incluye anticuerpos que interrumpen las interacciones de receptor/ligando con los polipéptidos de la presente invención, ya sea en forma parcial o total. La presente invención presenta tanto anticuerpos específicos de receptor, como anticuerpos específicos de ligando. La presente invención también presenta anticuerpos específicos de receptor que no evitan el enlace del ligando pero evitan la activación del receptor. La activación del receptor (por ejemplo, señalización) se puede terminar a través de técnicas descritas en la presente invención o conocidas en el arte. Por ejemplo, la activación del receptor se puede terminar detectando la fosforilación (por ejemplo, tirosina o serina/trionina) del receptor o su substracto mediante inmunoprecipitación seguida de análisis de manchado western (por ejemplo, tal como se describe supra). En modalidades específicas, los anticuerpos se proporcionan para que inhiban la actividad del ligando y la activad del receptor en al menos 95%, al menos 90%, al menos 85%, al menos 80%, al menos 75%, al menos 70%, al menos 60% o al menos 50% de la actividad en ausencia del anticuerpo. En modalidades preferidas, las proteínas de fusión de albúmina que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica, tienen características similares o substancialmente similares con respecto a la prevención de la prevención de enlace de ligando y/o prevención de la activación de receptor en comparación con un fragmento o variante no fusionada del anticuerpo que enlaza la proteína Terapéutica. La presente invención también presenta anticuerpos específicos de receptor que tanto evitan el enlace de ligando como la activación de receptor, así como anticuerpos que reconocen el complejo de receptor/ligando, preferentemente, no reconocen en forma específica el receptor no enlazado o el ligando no enlazado. De igual forma, incluidos en la presente invención se encuentran anticuerpos de neutralización que enlazan al ligando y evitan el enlace del ligando al receptor, así como anticuerpos que enlazan al ligando, evitando de esta forma la activación del receptor, pero no evitan que el ligando enlace el receptor. I ncluidos de forma adicional en la presente invención, se encuentran anticuerpos que activan el receptor. Estos anticuerpos pueden actuar como agonistas de receptor, por ejemplo, potencian o activan ya sea todas o un subgrupo de las actividades biológicas de la activación de receptor transmitida por ligando, por ejemplo, induciendo la dimerización del receptor. Los anticuerpos pueden ser especificados como agonistas, antagonistas o agonistas inversos para actividades biológicas que comprenden las acciones biológicas especificas de las proteínas Terapéuticas (tal como se decribe en la Tabla 1 ). Los agonistas de anticuerpos anteriores, pueden elaborarse utilizando métodos conocidos en la técnica. Ver por ejemplo la publicación PCT WO 96/40281 ; la Patente Norteamericana 5, 81 1 , 097; Deng y asociados. , Blood 92(6): 1981 -1988; Chen y asociados. , Cáncer Res. 58(16):3668-3678 (1 998); Harrop y asociados. , J. I mmunol 161 (4): 1786-1794 (1998); Zhu y asociados. , Cáncer Res 58(15):3209-3214 (1 998); Yoon y asociados. , J. Immunol. 160(7):3170-3179 (1998); Prat y asociados. , J . Cell. Sci. 1 1 1 (Pt2(:237-247 (1998); Pitard y asociados. , J . I mmunol. Methods 205(2): 177-190 (1 997): Liautard y asociados. , Cytokine 9(4):233-241 (1 997); Carlson y asociados. , J. Biol. Chem. 272(1 7): 1 1295-1 1301 (1997); Taryman y asociados., Neuron 14(4):755-762 (1 995); Muller y asociados. , Structure 6(9): 1 153-1 167 (1998); Bartunek y asociados. , Cytokine 8(1 ): 14-20 (1996) (las cuales están incorporadas todas en su totalidad a la presente invención como referencia). En modalidades preferidas, las proteínas de fusión de albúmina que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica, tienen propiedades agonistas o antagonistas similares o substancialmente idénticas a un fragmento o variante no fusionado del anticuerpo que enlaza la proteína Terapéutica. Los anticuerpos que enlazan a una proteína Terapéutica y que pueden corresponder a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención pueden ser utilizados, por ejemplo, para purificar, detectar y dirgir proteínas Terapéuticas incluyendo métodos tanto de diagnóstico como terapéuticos in vitro e in vivo. Por ejemplo, los anticuerpos tienen utilidad en inmunoensayos para la medición en forma cualitativa y cuantitativa de niveles de la proteína Terapéutica en muestras biológicas. Ver por ejemplo la publicación de Harlow y asociados. , Antibodies: A Laboratory Manual , (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); incorporan en su totalidad a la presente invención como referencia. De igual manera, las proteínas de fusión de albúmina que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica, pueden ser utilizadas, por ejemplo, para purificar, detectar y dirigir proteínas Terapéuticas incluyendo métodos tanto de diagnóstico como terapéuticos ¡n Vitro e ¡n vivo. Los anticuerpos que enlazan a una proteína Terapéutica y que puedan corresponder a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina incluyen derivados que son modificados, por ejemplo, mediante la adhesión covalente de cualquier tipo de molécula, al anticuerpo. Por ejemplo, aunque no a manera de limitación, los derivados de anticuerpos que incluyen anticuerpos que han sido modificados, por ejemplo, mediante glucosilación, acetilación, pegilación , fosforilación , amidación, derivatización a través de grupos de protección/bloqueo conocidos', disociación proteolítica, enlace a un ligando celular u otra proteína, etc. Se pueden llevar a cabo, cualesquiera de las modificaciones químicas diversas a través de técnicas conocidas, incluyendo pero sin limitarse a disociación química específica, acetilación, formilación, síntesis metabolica de tunicamisina, etc. Además, el derivado puede contener uno o más aminoácidos no clásicos. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, también pueden ser modificadas tal como se describen anteriormente. Métodos para producir anticuaerpos que enlazan Proteínas Terapéuticas Los anticuerpos que enlazan a una proteína Terapéutica y que pueden corresponder a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención , pueden ser generados a través de cualquier método adecuado conocido en la técnica. Los anticuerpos policlonales para un antígeno de interés, pueden ser producidos a través de diversos procedimientos conocidos en la técnica. Por ejemplo, se puede administrar una proteína Terapéutica a varios animales huésped, incluyendo pero sin limitarse a, conejos, ratones, ratas, etc, para inducir la producción de sueros que contienen anticuerpos policlonales específicos del antígeno. Se pueden utilizar diversos adyuvantes para incrementar la respuesta inmunológica, dependiendo de la especie huésped, que incluyen pero no se limitan a, adyuvante de Freund ( ompleto e incompleto) geles minerales tales como hidroxido de albúmina, substancias de superficie activa tales como, llisolecitina, polioles pluronicos, polianones, péptidos, emulsiones aceitosas, hemocianinas de hormona de penetración magnética, dimitrofenol y adyuvantes humanos potencialmente útiles, tales como BCG (bacilo Calmette-Guerin) y corynebacterium parvum. Dichos adyuvantes también son conocidos en la técnica. Se pueden preparar anticuerpos monoclonales utilizando una amplia variedad de técnicas conocidas en el arte, incluyendo el uso de tecnologías de hibridoma, recombinantes y de despliegue de fagos, o una combinación de las mismas. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales pueden ser producidos utilizando técnicas de hibridoma que incluyen las conocidas en la técnica y que se consideran por ejemplo, en la publicación de Harlow y asociados. , Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling, y asociados. , en: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N .Y. , 1 981 ) (dichas referencias están incorporadas en su totalidad a la presente invención). El término "anticuerpo monoclonal", tal como se utilizan en la presente invención , no se limita a anticuerpos producidos mediante tecnología de hibridoma. El término "anticuerpo monoclonal" se refiere a un anticuerpo que se deriva de un solo clon, incluyendo cualquier clon eucariótico, procariotico o de fagos, y no al método mediante el cual se produce. Los métodos para producir y clasificar los anticuerpos específicos utilizando tecnología de hibridoma, son de rutina y son conocidos en la técnica. En un ejemplo no limitativo, se pueden inmunizar ratones con una proteína Terapéutica o fragmento variante de la misma, una proteína de fusión de albúmina o una célula que expresa una proteína Terapéutica o fragmento variante de la misma o proteína de fusión de albúmina. Una vez que se detecta una respuesta inmune, por ejemplo, se detectan anticuerpos específicos del antígeno en suero de ratón, se recolecta el bazo del ratón y los esplenocitos aislados. Los esplenocitos se fusionan posteriormente a través de técnicas conocidas para cualesquiera células de mieloma adecuadas, por ejemplo células de la línea celular SP20 disponible en el ATCC. Los hibridomas se seleccionan y clonan mediante dilución limitada. Posteriormente los clones de hibridoma se ensayan a través de métodos conocidos en la técnica para células que segregan anticuerpos con la capacidad de enlazar a un polipéptido de la presente invención . Se puede generar fluido de ascitos los cuales generalmente contienen altos niveles de anticuerpos, inmunizando ratones con clones de hibridoma positivos. Por consiguiente, la presente invención proporciona métodos para generar anticuerpos monoclonales así como anticuerpos producidos a través del método que comprende cultivar una célula de hibridoma que segrega un anticuerpo, en donde, preferentemente, el hibridoma se genera mediante la fusión de esplenocitos aislados de un ratón inmunizado con un antígeno de la presente invención, con células de mieloma y posteriormente clasificando a los hibridomas que resultan de la fusión de clones de hibridoma que segregan un anticuerpo con la capacidad de enlazar a un polipéptido de la presente invención . Otro método bien conocido para producir líneas de célula B humanas policlonales y monoclonales es transformación utilizando Virus Epstein Barr (EBV). Los protocolos para generar líneas de célula B transformados por EBV son comúnmente conocidos en la técnica, por ejemplo, tal como el protocolo señalado en el Capítulo 7.22 de la publicación Current Protocols in I nmunology, Coligan y asociados. , Eds. , 1 994, John Wiley & Sons, NY, la cual está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia. La fuente de células B para transformación, es normalmente sangre periférica humana, aunque también se pueden derivar células B para transformación de otras fuentes que incluyen pero no se limitan a, nodos linfáticos, amígadalas, tejido de tumor, y tejidos infectados. Los tejidos generalmente se elaboran en suspensiones de célula simple antes de la transformación EBV. Además, se pueden realizar pasos para ya sea eliminar en forma física o desactivar las células T (por ejemplo medio tratamiento con ciclospurin A) en muestras que contiene célula B, debido a que las células T de individuos cero positivos de anticuerpos anti-EBV, pueden suprimir la inmortalización de célula B mediante EBV. En general, la muestra que contiene células B humanas se inocula con EBV, y se cultiva durante de 3 a 4 semanas. Una fuente de típica de EBV, es el sobrenadante de cultivo de la línea de célula B95-8 (ATCC #VR-1492). Los signos físicos de transformación EBV, generalmente pueden ser observados al final de la tercera y cuarta semana del período de cultivo. A través de microscopía de contraste-fase, las células transformadas pueden aparecer como grandes, claras y peludas y tienden a agregarse en grupos apretados de células. I nicialmente, las líneas EBV son generalmente policlonales. Sin embargo, durante períodos prolongados de cultivos de célula, las líneas EBV son pueden volver monoclonales o policlonales como resultado del crecimiento selectivo de clones de célula B particulares. Como alternativa, las líneas transformadas mediante EBV policlonal pueden ser subclonadas (por ejemplo, limitando el cultivo de dilución) o fusionadas con una parte de fusión adecuada y plaquedas en dilución limitante para obtener líneas de célula B monoclonales. Las partes de fusión adecuadas de líneas celulares transformadas con EBV incluyen líneas celulares de mieloma de ratón (por ejemplo, SP2/0, X63-Ag8.653), líneas celulares de heteromieloma (humano x ratón; por ejemplo SPAM-8, SBC-H20, y CB-F7) y líneas de célula humana (por ejemplo GM 1500, SKO-007, RPMI 8226 y KR-4). Por lo tanto, la presente invención también proporciona un método para generar anticuerpos humanos policlonales o monoclonales . contra polipéptidos de la presente invención o fragmentos de los mismos, que comprenden transformación-EBV de células B humanas. Los fragmentos de anticuerpos que reconocen epítopes específicos pueden ser generados mediante técnicas conocidas. Por ejemplo, los fragmentos Fab y F(ab ')2 de la presente invención , pueden ser producidos mediante disociación protiolítica de moléculas de inmunoglobulina, utilizando enzimas tales como papaína (para producir fragmentos Fab) o pepsina (para producir fragmentos F(ab ')2). Los fragmentos F(ab ')2 contienen la región variable, la región constante de cadena ligera y el dominio CH 1 de la cadena pesada. Por ejemplo, los anticuerpos que enlazan a una proteína Terapéutica también pueden ser generados utilizando varios métodos de despliegue de fagos conocidos en la técnica. En métodos de despliegue de fagos, los dominios del anticuerpo funcional se despliegan en la superficie de las partículas del fago que llevan las secuencias de polinucleótidos que los codifican. En una modalidad en particular, dicho fago puede ser utilizado para desplegar dominios de enlace de antígenos a partir de un repertorio o biblioteca de anticuerpo de combinación (por ejemplo, humano o múrido). El fago que expresa un dominio de enlace de antígenos que enlaza al antígeno de interés, puede ser seleccionado o identificado con antígeno, por ejemplo, utilizando antígeno etiquetado o antígeno enlazado o capturado a una superficie o granulo solido. El fago utilizado en estos métodos normalmente es un fago filamentoso que incluye dominios de enlace fd y M 13 con dominios de anticuerpo Fab, Fv estabilizados con Fab, Fv o disulfuro fusionados en forma recombinante ya sea la proteína de gen I I I o gen VI I I de fago. Los ejemplos de métodos de de despliegue de fagos que se pueden utilizar para elaborar anticuerpos que enlazan a una proteína Terapéutica, incluyen los que se describen en la publicación de Brinkman y asociados. , J. I mmunol. Methods 182:41 -50 (1995); Ames y asociados. m J. I mmunol. Methods 1 84: 177-186 (1995); Kettleborough y asociados. , Eur. J . I mmunol. 24:952-958 (1994); Persic y asociados. , Gene 187 9-18 (1997); Burton y asociados. , Advances in I nmunoiogy 57: 191 -280 (1994); solicitud PCT No. PCT/GB91 /01 134; publicaciones PCT Nos. WO 90/02809; WO 91 /1 0737; WO 92/01 047; WO 92/18619; WO 93/1 1236; WO 95/15982; WO 95/20401 ; y patentes norteamericanas Nos. 5,698,426; 5,223,409; 5,403,484; 5, 580,717; 5,427, 908; 5,750,753; 5, 821 , 047; 5,571 ,698; 5,427,908; 5,516,637; 5,780,225; 5,658,727; 5,733,743 y 5,969, 108; cada una de las cuales está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia. Tal como se describe en referencias anteriores, después de la selección de fagos, el anticuerpo que codifica las regiones del fago puede ser aislado para generar anticuerpos completos, incluyendo anticuerpos humanos, o cualesquiera otros fragmentos de enlace de antígenos deseados, y expresados en cualquier huésped deseado incluyendo células de mamíferos, células de insectos, células de plantas, levadura y bacterias, por ejemplo, tal como se describe con detalle mas adelante. Por ejemplo, las técnicas para producir en forma recombinante fragmentos Fab, Fab 'y F(ab ') también pueden ser empleadas utilizando métodos conocidos en la técnica, tales como los que se describen en la publicación PCT WO 92/22324; Mullinax y asociados. , BioTechniques 12(6):864-869 (1 992); y Hawai y asociados. , AJ RI 34:26-34 (1994) y Better y asociados. , Science 240: 1041 -1043 (1988) las referencias están incorporadas en su totalidad a la presente invención .

Los ejemplos de técnicas que pueden ser utilizadas para producir Fvs y anticuerpos de cadena simple, incluyen los que se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. 4, 946,778 y 5,258,498; Huston y asociados. , Methods in Enzymology 203:46-88 (1991 ); Shue y asociados. , PNAS 90:7995-7999 (1993); y Skerra y asociados. , Science 240: 1038-1040 (1 998). Para algunos usos, incluyendo uso in vivo de anticuerpos en humanos y ensayos de detección in vitro, puede ser preferible utilizar anticuerpos quiméricos, humanizados o humanos. Un anticuerpo quimérico es una molécula en la cual se derivan diferentes partes del anticuerpo a partir de diferentes especies de animales, tales como anticuerpos que tienen una región variable derivada de un anticuerpo monoclonal de múrido y una región constante de inmunoglobulina humana. Los métodos para producir anticuerpos quiméricos son conocidos en la técnica. Ver por ejemplo, las publicaciones Morrison , Science 229: 1202 (1 985) Oii y asociados. , BioTechniques 4:214 (1986); Pilles y asociados. , (1 989) J. Immunol. Methods 125: 1 91 -202; Patentes Norteamericanas Nos. 5,807, 715; 4,816, 567 y 4,816,397, las cuales están incorporadas en su totalidad en la presente invención como referencia. Los anticuerpos humanizados o moléculas de anticuerpos de especies no humanas enlazan al antígeno deseado teniendo una o más regiones de determinación de complementaridad (CDRs) a partir de las especies no humanas y una región de estructura procedente de una molécula de inmunoglobulina humana. Con frecuencia, los residuos de estructura en las regiones de estructura humana serán substituidos con el residuo correspondiente del anticuerpo donante CDR, para alterar, preferentemente mejorar, el enlace de antígenos. Estas substituciones de estructura se identifican a través de métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, modulando las interacciones del CDR y residuos de estructura para identificar residuos de estructura importantes para el enlace de antígenos y comparación de secuencia para identificar residuos de estructura inusuales en posiciones particulares, (por ejemplo ver la publicación de Queen y asociados. , Patente Norteamericana No. 5,585,089; Riechmann y asociados. , Nature 332: 323 (1988) las cuales están incorporadas en su totalidad a la presente invención como referencias. Los anticuerpos que pueden ser humanizados utilizando una variedad de técnicas conocidas en el arte, incluyen por ejemplo, CDR-injerto (Patente EP 239,400; publicación PCT WO 91 /09967: Patentes Norteamericanas Nos. 5,225,539; 5,530, 1 01 ; y 5,585,089) veneering o resuperficie (EP 592, 106; EP 519,596; Padlan, Molecular I mmunology 28(4/5):489-498 (1991 ); Studnicka y asociados. , Protein Engineering 7(6):805-814 (1994); Roguska y asociados. , PNAS 91 :969-973 (1994), y revoltura de cadena ( patente norteamericana No. 5, 565,332). Los anticuerpos completamente humanos son deseables para el tratamiento terapéutico de pacientes humanos. Los anticuerpos humanos pueden elaborarse a través de una variedad de métodos conocidos en la técnica, que incluyen los métodos de despliegue de fagos descritos anteriormente, utilizando bibliotecas de anticuerpos derivados de inmunoglobulina humana. Ver también las Patentes Norteamericanas Nos. 4,444,887 y 4,716, 1 1 1 ; y las publicaciones PCT WO98/466445, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 y WO 91 /10741 ; cada una de las cuales está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia. Los anticuerpos humanos también pueden ser producidos utilizando ratones transgénicos que tienen la capacidad de expresar inmunoglobulinas endógenas funcionales, pero que pueden expresar genes de inmunoglobulina humana. Por ejemplo, los complejos de gen de inmunoglobulina de cadena pesada y ligera humanos, pueden ser introducidos en forma aleatoria o mediante recombinación homologa en las células madre embriónicas de ratón. Como alternativa, se puede introducir la región variable, región constante y la región de diversidad humanas en células madre embriónicas de ratón, además de los genes humanos de cadena pesada y ligera. Los genes de inmunoglobulina de ratón de cadena pesada y ligera pueden ser convertidos en forma simultánea o por separado en no funcionales, con la introducción del loci de inmunoglobulina humana, mediante recombinación homologa. En particular, la eliminación de homocigosa de la región JH evita la producción del anticuerpo endógeno. Las células madre embriónicas modificadas se expanden y microinyectan en blastocitos para producir ratones quiméricos. Los ratones quiméricos posteriormente se desangran para producir descendencia homocigosa que expresa anticuerpos humanos. Los ratones transgénicos son inmunizados en forma normal con un antígeno seleccionado, por ejemplo, todo o una parte de un polipéptido de la presente invención. Los anticuerpos monoclonales dirigidos contra el antígeno, pueden ser obtenidos de ratones inmunizados, transgénicos, utilizando tecnología de hibridoma convencional. Los transgenes de inmunoglobulina humana abordados por los ratones trangénicos, se reajustan durante la diferenciación de célula B, y subsecuentemente pasan por un intercambio de clase y mutación somática. Por lo tanto, utilizando dicha técnica, es posible producir anticuerpos IgG, IgA, IgM y IgE terapéuticamente útilies. Para un revisión general de esta tecnología de producción de anticuerpos humanos, ver la publicación de Longber and Huszar, Int. Rev. I mmunol. 13:65-93 (1 995). Para una descripción detallada de esta tecnología para producir anticuerpos humanos y anticuerpos monoclones humanos y para protocolos de protección de dichos anticuerpos, ver por ejemplo las publicaciones PCT WO 9824893; WO 92/01047; WO 96/34096; WO 96/33735; Patente Europea No. 0 598 877; Patente Norteamericana Nos. 5,413,923; 5,625, 126; 5,633,425; 5,569,825; 5,661 ,016; 5,545,806; 5,814,318; 5,885,793; 5,916,771 ; 5, 939,598; 6, 075, 1 81 y 6, 1 14,598, las cuales están incorporadas en su totalidad a la presente invención como referencia. Además, las compañías tales como Abgenix, I nc. (Freemont. CA) y Genpharm (San José, CA), pueden encargarse de proporcionar anticuerpos humanos dirigidos contra un antígeno seleccionado utilizado tecnología similar a la descrita anteriormente. * Los anticuerpos completamente humanaos que reconocen una epítope seleccionado, pueden generarse utilizando una técnica referida como "selección guiada". En este método, se utiliza un anticuerpo monoclonal no humano seleccionado, por ejemplo, un anticuerpo de ratón para guiar la selección de un anticuerpo completamente humano que reconoce el mismo epítope. (Jespers y asociados. , BioTechnology 12: 899-903 (1988)). Polinucleótidos que codifican anticuerpos. La presente invención proporciona además una secuencia de nucloétidos que codifica un anticuerpo o fragmentos del mismo. La presente invención también comprende polinucléotidos que hibridan bajo condiciones estrictas, como alternativa, bajo condiciones de hibridación con poco rigurosidad, por ejemplo, tal como se defina supra, para polinucleótidos que codifican un anticuerpo, preferentemente, que enlazan en forma específica a una proteína Terapéutica, y más preferentemente, un anticuerpo que enlaza a un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácido de una "proteína Terapéutica: X" tal como se describe en la columna de la "SEQ I D NO:Z" en la Tabla 2. Los polinucleótidos pueden ser obtenidos, en la secuencia de nucleótidos de los polinucleótidos determinada, a través de cualquier método conocido en la técnica. Por ejemplo, si la secuencia de nucleótidos del anticuerpo es conocido, se puede ensamblar un polinucleótido que codifica el anticuerpo a partir de polinucleótidos sintetizados en forma química (por ejemplo, tal como se describe en la publicación de Kutmeier y asociados. , Biotechniques 17:242 (1994)), el cual , en síntesis, involucra la síntesis de traslape de polinucleótidos que contienen partes de las secuencia que codifique el anticuerpo, endureciendo y ligando los polinucloetidos, y posteriormente mediante la amplificación de los polinucleótidos ligados mediante la PCR. Como alternativa, se puede generar un polinucleótido que codifica un anticuerpo a partir de ácido nucleico procedente de una fuente adecuada. Si no está disponible un clon que contiene un ácido nucleico que codifica un anticuerpo en particular, pero se conoce la secuencia de la molécula del anticuerpo de un ácido nucleico que codifica la inmunoglobulina, puede ser sintetizado u obtenido químicamente de una fuente apropiada (por ejemplo, un clon cADN o una biblioteca de cADN o una biblioteca de cADN generada de, o acido nucleico preferentemente poli A+ ARN, aislado, de cualquier tejido o células que expresan al anticuerpo, tales como las células de hibridoma seleccionadas para expresar un anticuerpo) mediante amplificación PCR utilzando cebadores sintéticos que se pueden hibridar a los de la secuencia de 3 'y 5 'o clonando usando un sonda de oligonucleótido especifica para que la secuencia genética en particular, identifique la secuencia, por ejemplo, clon de cADN o una biblioteca de cADN que codifica al anticuerpo. Los ácidos nucleicos amplificados por PCR pueden ser clonados en vectores de clonación réplicables usando cualquier método conocido en la técnica. (Ver ejemplo 65. ) Una vez que la secuencia de nucleótidos y la secuencia de aminoácidos del anticuerpo es determinada; la secuencia de nucleótidos del anticuerpo puede ser manipulada utilizando métodos conocidos en la técnica para la manipulación de las secuencias de nucleótidos, por ejemplo, técnicas de ADN recombinantes, mutagenesis dirigida al sitio, PCR, etc (ver , por ejemplo, las técnicas que se describen en la publicación de Sambrook y asociados. , 1 990, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2d Ed. , Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY and Ausubel y asociados. , eds. , 1998, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY, las cuales ambas están incorporadas en su totalidad a la presente invención como referencia), para generar anticuerpos que tienen una secuencia de aminoácidos , por ejemplo para crear substituciones, eliminaciones, y/o inserciones de aminoácidos. En una modalidad específica, la secuencia de aminoácido de los dominios variables de cadena pesada y/o ligera pueden ser inspeccionados para identificar las secuencias de determinación de complementaridad (CDRs) a través de métodos que son conocidos en la técnica, por ejemplo, mediante comparación con secuencias de aminoácidos conocidos de otras regiones variables de cadena pesada y ligera, para determinar las regiones de la hipervariabilidad de la secuencia. Utilizando técnicas de ADN recombinante de rutina, se pueden insertar una o más de las CDRs dentro de las regiones de estructura, por ejemplo, en regiones de estructura humanas para humanizar un anticuerpo no humano, como se describe supra. Las regiones de estructura pueden ser regiones que ocurren naturalmente o regiones de estructura de consenso, y preferentemente regiones de estructura humana (ver por ejemplo la publicación de Chothia y asociados., J. Mol. Biol. 278: 457-479 (1988) para una descripción de regiones de estructura humana). Preferentemente, el polinucleótido generado a través de la combinación de las regiones de estructura y las CDRs, codifican un anticuerpo que enlaza en forma específica un polipéptido de la presente invención. Preferentemente, tal como se describe supra, se pueden realizar una o más sustituciones de aminoácido dentro de las regiones de estructura, y preferentemente, las substituciones de aminoácidos que mejoran el enlace del anticuerpo a su antígeno. Además, dichos métodos pueden ser utilzados para realizar substituciones o eliminaciones de aminoácidos de uno o más residuos de cisteína de región variable que participan en un enlace de disulfuro intra-cadena, para generar moléculas de anticuerpo que carecen de uno o más enlaces de disulfuro de intra-cadena. Otras alteraciones a los polinucleótidos están comprendidas por la presente invención y están dentro de las habilidades en la técnica. Además, las técnicas desarrolladas para la producción de anticuerpos quiméricos (Morrison y asociados. , Proc. Nati. Acad. Sci. 81 : 851 -855 (1984); Neuberger y asociados. , Nature 312:604-608 (1 984); Takeda y asociados. , Nature 314:452-454 (1985)), dividiendo genes de una molécula de anticuerpo de ratón de especificidad de antígeno adecuada procedentes de una molécula de anticuerpo humano con actividad biológica adecuada pueden ser utilizadas. Tal como se describe supra, un anticuerpo quimérico es una molécula en la cual se derivan diferentes partes procedentes de diferentes especies animales, tales como las que tienen una región variable y derivada de una región constante de inmunoglobulina mAb de múrido y de humano, por ejemplo, anticuerpos humanizados. Como alternativa, las técnicas descritas para la producción de anticuerpos de cadena simple (Patente Norteamericana No. 4,946,778; Bird, Science 242:423-42 (1988); Huston y asociados. , Proc. Nati. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 (1 988), and Ward y asociados. , Nature 334:544-54 (1989)), pueden ser adaptadas para producir anticuerpos de cadena simple. Los anticuerpos de cadena simple se forman enlazando los fragmentos de cadena pesada y ligera de la región Fv a través de un puente de aminoácido, dando como resultado un polipéptido de cadena simple. También se pueden utilizar técnicas para el ensamble de fragmentos Fv funcionales en E. coli , también pueden ser utilizadas ( Skerra y asociados. , Science 242.1 038-1041 (1988)).

Expresión recombinante de anticuerpos. La expresión recombinante de un anticuerpo, o fragmento, derivado o análogo del mismo (por ejemplo, una cadena pesada o ligera de un anticuerpo o un anticuerpo de cadena simple), requiere la construcción de un vector de expresión que contiene un polinucleótido que codifica el anticuerpo. Una vez que se ha obtenido un polinucleótido que codifica una molécula de anticuerpo o cadena pesada o ligera de un anticuerpo, o parte del mismo (preferentemente que contiene un dominio variable de cadena pesada o ligera) de la presente invención , se puede producir el vector para la producción de la molécula del anticuerpo a través de tecnología ADN recombinante utilizando técnicas conocidas en el arte. Por lo tanto, los métodos para preparar una proteína expresando una polinucleótido que contiene un anticuerpo que codifica una secuencia de nucleótidos, también se describen en la presente invención. Los métodos que son conocidos por los expertos en la técnica, pueden ser utilizados para construir vectores de expresión que contienen secuencias de codificación de anticuerpos y señales de control de transcripción y traducción adecuadas. Estos métodos incluyen , por ejemplo, técnicas de ADN recombinate in vitro, técnicas sintéticas y/o recombinación genética in vivo. La presente invención , proporciona por lo tanto vectores réplicables que comprenden una secuencia de nucleótidos que codifican una molécula de anticuerpo de la presente invención, o una cadena pesada o ligera del mismo, un dominio de variable de cadena pesada o ligera, enlazados en forma operable a un promotor. Dichos vectores pueden incluir la secuencia de nucleótidos que codifica la región constante de la molécula del anticuerpo (ver por ejemplo la publicación PCT WO 86/05807; publicación PCT WO 89/01036; y la Patente Norteamericana No. 5,122,464) y el dominio variable del anticuerpo puede ser clonado en el vector para la expresión de toda la cadena pesada o ligera. El vector de expresión se transfiere a una célula huésped a través de técnicas convencionales y las células transfectadas posteriormente se cultivan a través de técnicas convencionales para producir un anticuerpo. Por lo tanto, la presente invención incluye células huésped que contienen un polinucleótido que codifica un anticuerpo de la presente invención, o una cadena pesada o ligera del mismo, o un anticuerpo de una sola cadena, enlazado en forma operable promotor heterólogo. En modalidades preferidas para la expresión de anticuerpos de cadena doble, se pueden coexpresar vectores que codifican cadenas tanto pesadas como ligeras en la célula huésped para la expresión toda la molécula de inmunoglobulina, tal como se describe mas adelante. Se puede utilizar una variedad de sistemas de vector de expresión-huésped, para expresar las moléculas de anticuerpo de la presente invención. Dichos sistemas de expresión de expresión-huésped representan vehículos a través de los cuales se pueden producir las secuencias de codificación de interés y subsecuentemente purificarse, pero también representan células que pueden , cuando se transforman o transfectan con las secuencias de codificación de nucleótidos adecuadas, expresan una molécula de anticuerpo de la presente in situ. Estos incluyen pero no se limitan a microorganismos tales como bacterias (por ejemplo, E. coli, B. subtilis) transformados con vectores de expresión de ADN de bacteriófago, ADN de plásmido o ADN de cosmido recombinantes que contienen secuencias de codificación de anticuerpos, levadura (por ejemplo Saccharomyces, Pichia) transformada con vectores de expresión de levadura recombinante que contienen secuencias de codificación de anticuerpos; sistemas de células de insectos infectadas con vectores de expresión de virus recombinante ( por ejemplo baculovirus) que contiene secuencias que codifican anticuerpos, sistemas de células de plantas infectadas con vectores de expresión de virus recombinante (por ejemplo, coliflor, virus mosaico, CaMV; virus de mosaico de tabaco, TMV) o transformadas con vectores de expresión de plásmido recombinante (por ejemplo plásmido Ti) que contienen secuencias de codificación de anticuerpos; o sistemas de células de mamíferos (por ejemplo células COS, CHO, BHK, 293, 3T3) que albergan construcciones de expresión recombinante que contienen promotores derivados del genoma de las células de mamífero (por ejemplo, promtor de metalotioneina) o de viruses de mamífero (por ejemplo el promotor tardío de adenovirus; el promotor de virus de vacuna 7.5K). preferentemente, las células de bacteria tales como Escherichia coli , y más preferentemente, células eucarióticas, especialmente para la expresión de toda la molécula de anticuerpo recombinante se utilizan para la expresión de una molécula de anticuerpo recombinante. Por ejemplo, las células de mamífero tales como célula de ovario de hámster Chino ( CHO), junto con un vector tal como el elemento del promotor de gen temprano intermedio mayor procedente de citomegalovirus humano, es un sistema de expresión efectivo para anticuerpos (Foecking y asociados. , Gene 45: 101 (1986); Cockett y asociados. , Bio/Technology 8:2 (1990)). En sistemas bacterianos, se pueden seleccionar en forma conveniente un número de vectores de expresión dependiendo del uso pretendido para la molécula de anticuerpo que está siendo expresada. Por ejemplo, cuando se producirá una gran cantidad de dicha proteína, para la generación de composiciones farmacéuticas de una molécula de anticuerpo, pueden preferirse los vectores que dirigen la expresión de altos niveles de productos de proteína de fusión que son fácilmente purificados. Dichos vectores incluyen , pero no se limitan a, vector de expresión E. coli pU R278 (Ruther y asociados. , EM BO J . 2: 1791 (1983)), en donde la secuencia de codificación de anticuerpos puede ser ligada en forma individual en el vector en la estructura con la región de codificación lac Z, de modo que se produzca una proteína de fusión ; vectores pI N (I nouye & I ntuye, N ucleic Acids Res. 13:31 01 -31 09 (1985); Van Heeke & Schuster, J. Biol . Chem . 24: 5503-5509 (1989)); y similares. Los vectores pGEX también pueden utilizarse para expresar polipéptidos externos en la forma de proteína de fusión S-transferasa de glutationa (GST). En general, dicha proteínas de fusión son solubles y pueden ser purificadas fácilmente a partir de células Usadas mediante absorción y enlace a granulos de glutationa-agarosa de matriz seguido de la elusion en la presencia de glutationa libre. Los vectoes pGEX están diseñados para incluir sitios de disociación de trombina o de proteasa de factor Xa, de modo que el producto del gen objetivo clonado pueda ser liberado de la parte GST. En un sistema de insectos, se utiliza virus de poliedrosis nuclear californiana Autographa (AcNPV), como un vector para expresar genes externos. El virus crece en células Spodoptera frugiperda. La secuencia que codifica el anticuerpo puede ser clonada en forma individual en regiones no esenciales (por ejemplo el gen de poliedrina) del virus y colocarse bajo el control de un promotor AcNPV (por ejemplo el promotor de poliedrina). En células huésped de mamífero, se puede utilizar un número se sistemas de expresión a base de virus. En casos en donde se utiliza un adenovirus, un vector de expresión, la secuencia que codifica el anticuerpo de interés puede ligarse a un complejo de control de transcripción/traducción de adenovirus, por ejemplo, el promotor tardío y secuencia líder tripartita. Este gen quimérico puede ser insertado posteriormente en le genoma de andenovirus mediante recombinación in vitro o ¡n vivo. La inserción en una región no esencial del genoma viral (por ejemplo, región E1 o E3), dará como resultado un virus recombinante que es viable y con la capacidad de expresar la molécula de anticuerpo en huéspedes infectados. (Ver por ejemplo la publicación de Logan & Sheik, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 81 -355-359 (1984)). También se pueden requerrir señales de iniciación específica para la traducción eficiente de secuencias de codificación de anticuerpos insertados. Estas señales incluyen el codón de inicio ATG y secuencias adyacentes. Además, el codón de inicio puede estar en fase con la estructura de lectura de la secuencia de codificación deseada, para asegurar la traducción de todo el inserto. Estas señales de control de traducción exogeno y los condones de inicio pueden ser de una variedad de orígenes, tanto naturales como sintéticos. La eficiencia de expresión puede mejorarse a través de la inclusión de elementos aumentadores de transcripción adecuados, terminadores de transcripción, etc. (Ver la publicación de Bittner y asociados. , Methods in Enzymol. 153:51 -544 (1987)). Además, se puede elegir una cepa de célula huésped que module la expresión de las secuencias insertadas, o modificadas y procese el producto de gen en el modo específico deseado. Dichas modificaciones (por ejemplo, glucosilación) y el procesamiento (por ejemplo, disociación) de productos de proteína puede ser importante para la función de la proteína. Las diferentes células huésped tienen mecanismos característicos y específicos para el procesamiento post-traducción y modificación de proteínas y productos genéticos. Las líneas celulares y sistemas huésped adecuadas pueden ser elegidos para asegurar la correcta modificación y procesamiento de la proteína externa expresada. Para este fin, las células huésped eucarióticas que poseen la maquinaria celular para el procesamiento adecuado de la transcripción, glucosilación y fosforilación primaria del producto de gen pueden ser las utilizadas. Dichas células huésped mamíferas incluyen pero no se limitan, CHO, VERY, BHK, Hela, COS, MDCK, 292, 3T3.W138, y en particular, líneas de célula de cáncer de seno tales como por ejemplo BT483, Hs578T, HTB2, BT20 y T47D, y línea de célula de glándula mamaria normal , tal como por ejemplo CRL7030 y Hs578Bdt. Para largo plazo, se prefiere la expresión estable, producción de alto rendimiento de proteínas recombinantes. Por ejemplo, las líneas celulares que expresan en forma estable la molécula de anticuerpo pueden ser construidos. En lugar de utilizar factores de expresión que contienen orígenes virales de réplica, se pueden transformar células huésped con ADN controlado mediante elementos de control de expresión adecuados (por ejemplo, promotor, aumentador, secuencias, terminadores de transcripción, sitios de poliadenilación, etc) y un marcador seleccionable. Después de la introducción del ADN externo, se puede dejar que las células construidas crezcan de uno a dos días en un medio enriquecido, y posteriormente se cambian a un medio selectivo. El marcador seleccionable en el plásmido recombinante confiere resistencia para la selección, y permite que las células se integren en forma estable el plásmido en sus cromosomas y crezcan para formar un centro, el cual a su vez puede ser clonado y expandido en las líneas celulares. Este método puede ser utilizado de manera conveniente para construir líneas celulares que expresan la molécula del anticuerpo. Dichas líneas celulares construidas pueden ser particularmente útiles en la clasificación y evaluación de compuestos que interactúan directa o indirectamente en la molécula de anticuerpo. Se puede utilizar un número de sistema de selección, incluyendo pero sin limitarse a los genes de sinasa de timidina de virus de herpes simple (Wigler y asociados. , Cell 1 1 :223 (1997)), fosforibosiltransferasa de hipoxantina-guanina (Szybalska & Szybalski, Proc. Nati. Acad. Svi. EUA 48:202 (1992)), y fosforibosiltransferasa de adenina (Lowy y asociados. , Celi 22:817 (1980)) que se pueden emplear en célula tk- hgprt- o aprt-, respectivamente. También se puede utilizar resistencia de antimetabolitos como la base de selección de los siguientes genes: dhfr, que confiere resistencia a metrotexato (Wigler y asociados. , Nati. Acad. Sci. EUA 77:357 (1980); O 'Hare y asociados. , Proc. Nati . Acad. Sci . EUA 78: 1527 (1981 ); gto que confiere resistencia a ácido micofenolico (Mulligan & Berg, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 78:2072 (1 981 )), neo que confiere resistencia a aminoglucosina G-418 (Clinial Pharmacy 12:488-505; Wu and Wu, Biotherapy 3:87-95 (1991 ); Tolstoshev, Ann . Rev. Pharmacol . Toxicol . 32:573-596 (1993); Mulligan, Science 260:926-932 (1 993); and Morgan and Anderson, Ann. Rev. Biochem. 62: 191 -217 (1993); May, 1993, TIB TECH 1 1 (5): 155-215 (1993)); un higro el cual confiere resistencia a higromicina (Santerre. , y asociados. , Gene 30: 147 (1 984). Se pueden aplicar en forma rutinaria métodos que son conocidos en la técnica en la tecnología de recombinación de ADN para seleccionar el clon recombinante deseado, y dichos métodos se describen, por ejemplo, en la Publicación de Ausubel y Asociados (eds. ), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1 990); y en los Capítulos 12 y 13 de la Publicación de Dracopoli y Asociados (eds. ), Current Protocols ¡n Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994); Colberre-Garapin y Asociados, J. Mol. Biol. 150: 1 (1981 ), las cuales están incorporadas en su totalidad a la presente invención como referencia. La expresión de niveles de una molécula de anticuerpos puede incrementarse a través de amplificación del vector (para una revisión, ver la Publicación de Bebbington and Hentschel, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol . 3 (Academic Press, Nueva York, 1987)). Cuando un marcador en un sistema de vector que expresa anticuerpos es amplificable, el incremento en el nivel de inhibidor presente en el cultivo de la célula huésped, incrementará el número de copias del gen marcador. Ya que el gen amplificado está asociado con el gen de anticuerpos, también incrementará la producción del anticuerpo (Crouse y Asociados, Mol. Cell. Biol . 3:257 (1983)). Los vectores que utilizan sintasa de glutamina (GS) o DHFR como marcadores seleccionables, pueden ser amplificados en la presencia de los fármacos de metionina, sulfoximina o metotrexato, respectivamente. Una ventaja de vectores basados en sintasa de glutamina es la disponibilidad de las líneas celulares (por ejemplo, la línea celular de mieloma de múrido, NSO) que son negativos en sintasa de glutamina. Los sistemas de expresión de sintasa de glutamina también pueden funcionar en células que expresan sintasa de glutamina (por ejemplo, células de Ovario de Hámster Chino (CHO)) proporcionando inhibidores adicionales para evitar el funcionamiento del gen endógeno. Un sistema de expresión de sintasa de glutamina y componentes del mismo, se describen en las Publicaciones PCT: WO87/04462; WO05807; WO89/01 036; WO89/10404; y WO91 /06657, las cuales están incorporadas en su totalidad a la presente invención como referencia. Además, los vectores de expresión de sintasa de glutamina que se pueden utilizar de acuerdo con la presente invención , están comercialmente disponibles de proveedores, incluyendo por ejemplo Lonza Biologics, I nc. (Portsmouth , N H). La expresión y producción de anticuerpos monoclonales utilizando un sistema de expresión GS en células de mieloma de múrido, se describe en la Publicación de Bebbington y Asociados, Biotechnology 1 0: 169( 1992) y en Biblia and Robinson Biotechnol. Prog. 1 1 : 1 (1995), las cuales están incorporadas en su totalidad a la presente invención como referencia. La célula huésped puede ser transfectada en conjunto con los dos vectores de expresión de la presente invención, codificando el primer vector un polipéptido derivado de cadena pesada y codificando el segundo vector un polipéptido derivado de cadena ligera. Los dos vectores pueden contener marcadores seleccionados idénticos que permiten la expresión igual de polipéptidos de cadena pesada y de cadena ligera. Como alternativa, se puede utilizar un solo vector que codifique, y tenga la capacidad de expresar, polipéptidos tanto de cadena pesada como de cadena ligera. En dichas situaciones, la cadena ligera puede colocarse antes de la cadena pesada para evitar un exceso de cadena pesada libre de toxicidad (Proudfoot, Nature 322:52 (1 986); Kohier, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 77:21 97 (1980)). Las secuencias de codificación de las cadenas pesadas y ligeras pueden comprender cADN o ADN genomico. Una vez que una molécula de anticuerpo de la presente invención ha sido producida por un animal, químicamente sintetizada o expresada en forma recombinante, puede ser purificada a través de cualquier método conocido en la técnica de la purificación de una molécula de inmunoglobulina, por ejemplo, mediante cromatografía (por ejemplo, intercambio de iones, afinidad, particularmente afinidad del antígeno específico después de la proteína A, y cromatografía de columna por diseño), centrifugación, solubilidad diferencial o a través de cualquier otra técnica estándar para la purificación de proteínas. Además, los anticuerpos que enlazan una proteína Terapéutica y que pueden corresponder a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención o fragmentos de la misma, pueden ser fusionados a las secuencias de polipéptido heterologas descritas en la presente invención o conocidas en la técnica, para facilitar la purificación . Modificaciones de Anticuerpos Los anticuerpos que enlazan una proteína Terapéutica o fragmentos o variantes pueden ser fusionados a secuencias marcadoras, tal como un péptido para facilitar la purificación . En modalidades preferidas, la secuencia de aminoácido de marcador es un péptido de hexa-histidina, tal como el rotulo proporcionado en el vector pQE (QIAGEN, Inc. , 9259 Eton Avenue, Chatsworth, CA 9131 1 ), entre otros, muchos de los cuales están comercialmente disponibles. Tal como se describe en la Publicación de Gentz y Asociados, Proc. Nati . Acad . Sci. EUA 86: 821 -824 (1 989), por ejemplo, la hexa-histidina proporciona purificación conveniente de la proteína de fusión. Otras marcas de péptido útiles para purificación incluyen, pero no se limitan a, la marca de hemaglutinina (también denominada "marca HA"), la cual corresponde a un epítope derivado de la proteína de hemaglutinina de influenza (Wiison y Asociados, Cell 37:767 (1 984)) y la marca "flag". La presente invención comprende además anticuerpos o fragmentos de los mismos conjugados a un agente de diagnóstico o terapéutico. Los anticuerpos pueden ser utilizados para diagnóstico, por ejemplo, para monitorear el desarrollo o progreso de un tumor como parte de un procedimiento de pruebas clínicas para determinar, por ejemplo, la eficacia de un régimen de tratamiento determinado. La detección puede ser facilitada acoplando el anticuerpo a una sustancia detectable. Los ejemplos de substancias detectables incluyen varias enzimas, grupos prostéticos, materiales fluorescentes, materiales luminescentes, materiales bioluminescentes, materiales radioactivos, metales de emisión de positrones utilizando varias tomografías de emisión de positrones e iones de metal paramagnético no radioactivos. La sustancia detectable puede ser acoplada o conjugada ya sea directamente al anticuerpo (o fragmento del mismo) o indirectamente, a través de un intermediario (tal como, por ejemplo, un enlazador conocido en la técnica), utilizando técnicas conocidas en el arte. Ver por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 4, 741 ,900 para iones de metal que pueden ser conjugados a anticuerpos para utilizarse como diagnósticos de acuerdo con la presente invención. Los ejemplos de enzimas adecuadas incluyen peroxidasa de rábano, fosfatasa alcalina, beta-galactosidasa o acetilcolinesterasa; los ejemplos de complejos de grupos prostéticos adecuados incluyen esteptavidina-biotina y avidina- biotina; los ejemplos de materiales fluorescentes adecuados incluyen umbeliferona, fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, rodamina, fluorescencia de diclorotriazinilamina, cloruro de dansilo o picoeritrina; un ejemplo de un material Iuminescente incluye luminol; los ejemplos de materiales bioluminescentes incluyen luciferasa, luciferina, y aequorina; los ejemplos de material radioactivo adecuado incluyen 125l , 131 l , 1 1 l n o "Te. Otros ejemplos de substancias detectables han sido ya descritas en la presente invención. Además, un anticuerpo de la presente invención puede ser conjugado a una parte terapéutica tal como una citotoxina, por ejemplo, agente citostático o citocidal, un agente terapéutico o un ion de metal radioactivo, por ejemplo, alfa-emisores tales como, por ejemplo, 213BL Una citotoxina o agente citotoxico incluye cualquier agente que sea perjudicial para las células. Los ejemplos incluyen paclitaxel, citocalasina B, gramicidina D, bromuro de etidio, emetina, mitomicina, etoposida, tenoposida, vincristina, vinblastina, colquicina, doxorrubicina, daunorrubicina, diona de antracina dihidroxi , mitoxantrona, mitramicina, actinomicina D, 1 -deshidrotestosterona, glucocorticoides, procaína, tetracaína, lidocaína, propanolol, y puromicina y análogos u homólogos de los mismos. Los agentes terapéuticos incluyen, pero no se limitan a, antimetabolitos (por ejemplo, metotrexato, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, citarabina, decarbazina de 5-fluorouracil), agentes de alquilación (por ejemplo, mecloretamina, clorambucil de tioepa, melfalan, carmustina (BSN U) y lomustina (CCN U), ciclofosfamida, busulfan, dibromomanitol, estreptozotocina, mitomicina C, y platino cis-diclorodiamina (I I) (DDP) cisplatin), antraciclinas (por ejemplo daunorrubicina (daunomicina principalmente) y doxorrubicina), antibióticos (por ejemplo, dactinomicina (actinomicina principalmente, bleomicina, mitramicina y antramicina (AMC)), y agentes anti-mitoticos (por ejemplo, vincristina y vinblastina). Los conjugados de la presente invención pueden ser utilizados para modificar una respuesta biológica determinada, el agente terapéutico o porción de fármaco no será construido como limitado a agentes terapéuticos químicos clásicos. Por ejemplo, la parte del fármaco puede ser una proteína o polipéptido que posea una actividad biológica deseada. Dichas proteínas pueden incluir, por ejemplo, una toxina tal como abrina, ricina A, exotoxina de pseudomonas, o toxina de difterina. Una proteína tal como factor de necrosis de tumor, interferón-alfa, ¡nterferón-beta, factor de crecimiento de nervios, factor de crecimiento derivado de plaquetas, activador de plasminogen de tejido, un agente apoptotico, por ejemplo, TN F-alfa, TNF-beta, AI M I (ver la Publicación Internacional No. WO 97/33899), AI M I I (ver, la Publicación Internacional No. WO 97/3491 1 ), el ligando Fas (Takahashi y Asociados, Int. Immunol. 6: 1567-1574 (1994)), VEGI (ver, la Publicación I nternacional No. WO 99/23105), un agente trombótico o un agente anti-angiogénico, por ejemplo, angiostatina o endostatina; o modificadores de respuesta biológica tales como, por ejemplo, linfocinas, interleucina-1 ("I L-1 "), interleucina-2 ("I L- 2"), interIeucina-6 ("I L-6"), factor de estimulación de colonia de macrofagos de granulocitos ("GM-CSF"), factor de estimulación de colonia de granulocitos ("G-CSF") u otros factores de crecimiento. Los anticuerpos pueden ser adheridos a soportes solidos, los cuales son particularmente útiles para inmunoensayos o purificación del antígeno objetivo. Dichos soportes solidos incluyen, pero no se limitan a, vidrio, celulosa, poliacrilamida, nylon, poliestireno, cloruro de polivinilo, o polipropileno. Las técnicas para conjugar dicha porción terapéutica para anticuerpos son bien conocidas. Ver las Publicaciones de Arnon y Asociados, "Monoclonal Antibodies for Immutargeting of Drugs in Cáncer Therapy", in Monoclonal Antibodies and Cáncer Therapy, Reisfeid y Asociados (eds.), páginas 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom y Asociados, "Antibodies for Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (2a Edición), Robinson y Asociados (eds.), páginas 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cáncer Therapy: A Review", in Monoclonal Antibodies '84: Biológica! and Clinical Applications, Pinchera y Asociados (eds. ), páginas 475-506 (1985); "Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cáncer Therapy", in Monoclonal Antibodies for Cáncer Detection and Therapy, Baldwin y Asociados (eds.), páginas 303-16 (Academic Press 1985), y Thorpe y Asociados, "The Preparation and Cytotoxic Properties of Antibody- Toxin Conjugates", Immunol. Rev. 62: 1 19-58 (1982). Como alternativa, un anticuerpo puede ser conjugado a un segundo anticuerpo para formar un heteroconjugado de anticuerpo tal como lo describe Segal en la Patente Norteamericana No. 4,676,980, la cual está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia. Un anticuerpo, con o sin una parte terapéutica conjugada al mismo, administrada sola o en combinación con factores citotoxicos y/o citocinas, se puede utilizar como un agente terapéutico. Fusión Anticuerpo-Albúmina. Los anticuerpos que enlazan una proteína terapéutica que pueden corresponder a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, anticuerpos que enlazan una proteína Terapéutica descrita en la columna de "proteína Terapéutica X" de la Tabla 1 , o un fragmento o variante del mismo. En modalidades específicas, el fragmento o variante de anticuerpo que enlaza en forma inmunoespecífica una proteína Terapéutica y que corresponde a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina, comprende, o como alternativa consiste, en el dominio VH . En otras modalidades, el fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza en forma inmunoespecífica una proteína Terapéutica y que corresponde a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina comprende, o consiste como alternativa, en uno, dos o tres CDRs VH . En otras modalidades, el fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza en forma inmunoespecífica a una proteína Terapéutica y que corresponde a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina comprende, o como alternativa, consiste en CDR1 VH . En otras modalidades, el fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza en forma inmunoespecífica una proteína Terapéutica y que corresponde a una parte Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina comprende, o consiste en forma alternativa, en CDR2 VH . En otras modalidades, el fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza en forma inmunoespecífica a una proteína Terapéutica y que corresponde a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina, comprende, o consiste en forma alternativa en, CDR3 VH. En modalidades específicas, el fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza en forma inmunoespecífica una proteína Terapéutica que corresponde a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina, comprende, o consiste en forma alternativa, en el dominio de VL. En otras modalidades, el fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza en forma inmunoespecífica una proteína Terapéutica que corresponde a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina comprende, o consiste en forma alternativa en uno, dos, o tres CDRs VL. En otras modalidades, el fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza en forma inmunoespecífica u na proteína Terapéutica que corresponde a una parte de proteína Terapéutica de u na proteína de fusión de albúmina com prende, o consiste en forma alternativa en uno , dos , o tres CDR 1 VL. En otras modalidades, el fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza en forma in munoespecífica una proteína Terapéutica que corresponde a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina comprende, o consiste en forma alternativa en uno, dos, o tres CDR2 VL. En otras modalidades, el fragmento o variante de un anticuerpo q ue en laza en forma i n mu noespecífica una proteína Terapéutica que corresponde a una parte de proteína Terapéutica de u na proteína de fusión de albúmina comprende, o consiste en forma alternativa en uno , dos, o tres CDR3 VL. En otras modalidades, el fragmento o variante de un anticuerpo q ue enlaza en forma inmunoespecífica una proteína Terapéutica que corresponde a una parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de al bú m ina, comprende o consiste en forma alternativa de uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis CD Rs VH y/o VL. En modalidades preferidas, el fragmento o variante de u n anticuerpo que enlaza en forma inmunoespecífica una proteína Terapéutica y q ue corresponde a una parte de proteína Terapéutica de u na proteína de fusión de albú mina comprende, o consiste en forma alternativa, en un scFv q ue com prende el dominio VH del anticuerpo Terapéutico, enlazado al dominio VL del anticuerpo terapéutico a través de un enlazador de péptido tal como (Gly4Ser)3 (SEQ I D NO:4). I nmunofenotipif icación. Los anticuerpos de la presente invención o proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, que comprende al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica (o fragmento o variante del mismo), se pueden utilizar para inmunofenotipificación de líneas celulares y muestras biológicas. Las proteínas terapéuticas de la presente invención pueden ser útiles como marcadores específicos de célula, o más específicamente como marcadores celulares que se enlazan en forma diferencial en varias etapas de diferenciación y/o maduración de tipos de células en particular. Los anticuerpos monoclonales (o proteínas de fusión de albúmina que comprende un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutico) dirigidos contra un epítope específico, o combinación de epítopes, permitirá la clasificación de poblaciones celulares que expresan el marcador. Se pueden utilizar varias técnicas utilizando anticuerpos monoclonales (o proteínas de fusión de albúmina que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica) para clasificar poblaciones celulares que expresan el marcador(s), e incluyen separación magnética utilizando granulos magnéticos recubiertos con anticuerpos, "uso de placas plásticas o superficies cubiertas con antígenos o anticuerpos para separar o seleccionar células particulares con receptores adecuados (panning)" con el anticuerpo adherido a una matriz solida (por ejemplo, placa) y citometría de flujo (ver, por ejemplo la Patente Norteamericana No. 5,985,660; y la Publicación de Morrison y Asociados, Cell 96:737-49 (1999)). Estas técnicas permiten la clasificación de poblaciones de células en particular, tal como se puede encontrar con malignidades hematologicas (por ejemplo, enfermedad residual mínima (MRD) en pacientes leucémicos agudos) y células "sin- sí mismas" en transplantes para evitar ia enfermedad de injertos versus huésped (GVHD). Como alternativa, estas técnicas permiten la clasificación de células madre y progenltoras hematopoiéticas con la capacidad de pasar por proliferación y/o diferenciación, tal como se puede encontrar en sangre del cordón umbilical humano. Caracterización de anticuerpos que enlazan una proteína Terapéutica y proteínas de fusión de albúmina que comprenden un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica. Los anticuerpos de la presente invención o proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica (o fragmento o variante del mismo) pueden caracterizarse en una variedad de formas. En particular, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica, pueden ser ensayadas por la capacidad de enlazar en forma específica a los mismos antígenos enlazados en forma específica a través del anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica que corresponde al anticuerpo que enlaza una parte de la proteína Terapéutica de la proteína de fusión de albúmina utilizando técnicas descritas en la presente invención, o técnicas de modificación rutinaria conocidas en el arte. Los ensayos con respecto a la capacidad de los anticuerpos de la presente invención o proteínas de fusión de albúmina de la presente invención que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica (o fragmento o variante del mismo) para enlazar (en forma específica) una proteína específica o epítope pueden llevarse a cabo en solución (por ejemplo ver la Publicación de Houghten, Bio/Techniques 13:412-421 (1992)), o granulos (por ejemplo ver la Publicación de Lam, Nature 354: 82-84 (1991 )), en trozos (por ejemplo, Fodor, Nature 364:555-556 (1993)), en bacterias (por ejemplo, Patente Norteamericana No. 5,223,409), en esporas (por ejemplo Patentes Norteamericanas Nos. 5,571 ,698; 5,403,484; y 5,223,409), en plásmidos (por ejemplo, ver la Publicación de Culi y Asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 89: 1865-1869 (1992)), o en fagos (ver la Publicación de Scott y Smith, Science 249:386-390 (1990); Devlin, Science 249:404-406 (1990); Cwirla y Asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 87:6378-6382 (1990); y Felici, J. Mol.

Biol. 222:301 -310 (1991 )) (cada una de estas referencias está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia). Los anticuerpos de la presente invención o proteínas de fusión de albúmina de la presente invención que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica (o fragmento o variante del mismo) también pueden ser ensayadas con respecto a su especificidad y afinidad para una proteína o epítope específico utilizando técnicas de modificación rutinaria descritas en la presente invención o conocidas en el arte. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica pueden ser ensayadas con respecto a la reactividad cruzada con otros antígenos (por ejemplo moléculas que tienen conservación de secuencia/estructura con las moléculas enlazadas en forma específica por el anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica (o fragmento o variante del mismo) que corresponde a la parte de proteína Terapéutica de la proteína de fusión de albúmina de la presente invención) a través de cualquier método conocido en ia técnica. Los inmunoensayos que pueden ser utilizados para analizar el enlace (inmunoespecífico) y reactividad-cruzada incluyen , pero no se limitan a, sistemas de ensayo competitivo y no competitivo utilizando técnicas tales como manchados Western , radioinmunoensayos, ELISA (ensayo inmunoabsorbente enlazado por enzimas), inmunoensayos de "emparedado", ensayos de inmunoprecipitación, reacciones de precipitina, reacciones de precipitina de difusión de gei, ensayos de inmunodifusión, ensayos de aglutinación , ensayos de fijación-complemento, ensayos inmunorradiométricos, inmunoensayos fluorescentes e inmunoensayos de proteína A, por nombrar solo algunos. Dichos ensayos son de rutina y son bien conocidos en la técnica (ver por ejemplo la Publicación de Ausubel y Asociados, eds. 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1 , John Wiley & Sons, Inc. , Nueva York, la cual está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia). Los inmunoensayos de ejemplo se describen brevemente más adelante (aunque no están proyectados como limitantes). Los protocolos de inmunoprecipitación normalmente comprenden lisado de una población de células en un regulador de lisis tal como regulador RI PA (1 % N P-40 o Tritón X-100, deoxicolato de sodio al 1 %, 0.15M NaCI, fosfato de sodio 0.01 M a un pH de 7.2, trasilol al 1 %) suplementado con inhibidores de fosfatasa y/o proteasa de proteína (por ejemplo, EDTA, PMSF, aprotinina, vanadato de sodio) agregando un anticuerpo de la presente invención o proteína de fusión de albúmina de la presente invención que comprende al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica (o fragmento o variante del mismo) a lisado celular, incubando durante un período de tiempo (por ejemplo de 1 a 4 horas) a 40°C, agregando granulos de sefarosa de proteína A y/o proteína G (o granulos recubiertos con un anticuerpo anti-idiotípico adecuado o un anticuerpo antialbúmina en el caso en donde una proteína de fusión de albúmina comprende al menos un fragmento o variante de un anticuerpo Terapéutico) al lisado celular, incubando durante aproximadamente 1 hora o más a una temperatura de 40°C, lavando los granulos en regulador de lisis y suspendiendo nuevamente los granulos en regulador SDS/muestra. La capacidad del anticuerpo o proteína de fusión de albúmina de la presente invención para inmunoprecipitar un antígeno particular puede ser evaluado, por ejemplo, mediante análisis de manchado Western. Un experto en la técnica puede reconocer los parámetros que pueden ser modificados para incrementar el enlace del anticuerpo o proteína de fusión de albúmina a un antígeno y disminuir el ruido de fondo (por ejemplo despeje previo del lisado celular con granulos de sefarosa). Para una descripción adicional con respecto a protocolos de inmunoprecipitación, consultar por ejemplo, la Publicación de Ausubel y Asociados, eds. , 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I , John Wiley & Sons, I nc. , Nueva York a 10.16.1 . Los análisis de manchado Western, generalmente comprenden preparar muestras de proteína, electroforesis de las muestras de proteína en un gel de poliacrilamida (por ejemplo, 8% a 20% de SDS-PAGE dependiendo del peso molecular del antígeno), transferir la muestra de proteína del gel de poliacrilamida a una membrana tal como nitrocelulosa, PBS o nylon, bloquear la membrana en solución de bloque (por ejemplo, PBS con 3% BSA o leche desgrasada), lavar la membrana en regulador de lavado (por ejemplo, PBS-Tween 20), aplicar el anticuerpo o proteína de fusión de albúmina de la presente invención (diluido en regulador de bloqueo a la membrana), lavar la membrana en regulador de lavado, aplicar un anticuerpo secundario (que reconoce la proteína de fusión de albúmina, por ejemplo, un anticuerpo de albúmina de suero anti-humano) conjugado en substrato enzimático (por ejemplo, peroxidasa de rábano o fosfatasa alcalina) o molécula radioactiva (por ejemplo, 32p Q 125^ diluido en regulador de bloqueo, lavar la membrana en regulador de lavado y detectar la presencia del antígeno. Un experto en la técnica puede reconocer los parámetros que pueden ser modificados para incrementar la señal detectada y para reducir el ruido de fondo. Para una descripción adicional con respecto a protocolos de manchado Western, consultar por ejemplo la Publicación de Ausubel y Asociados, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I , John Wiley & Sons, I nc. , Nueva York a 10.8.1 . Los ensayos ELISA comprenden preparar el antígeno, recubrir el depósito de una placa de microtitulación de 96 depósitos con el antígeno, lavar el antígeno que no enlazo a los depósitos, agregar el anticuerpo o proteína de fusión de albúmina (que comprende ai menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica) de la presente invención conjugada a un compuesto detectable tal como un substrato enzimático (por ejemplo, peroxidasa de rábano o fosfatasa alcalina) a los depósitos e incubar durante un período de tiempo, lavar las proteínas de fusión de albúmina enlazadas en forma no específica o no enlazadas, y detectar la presencia del anticuerpo o proteínas de fusión de albúmina enlazadas en forma específica al antígeno que recubre el depósito. En ensayos ELISA el anticuerpo o proteína de fusión de albúmina no tiene que ser conjugada a un compuesto detectable; más bien, se puede agregar al depósito un segundo anticuerpo (que reconoce el anticuerpo o proteína de fusión de albúmina, respectivamente) conjugado a un compuesto detectable. Además, en lugar de recubrir el depósito con antígeno, el anticuerpo o la proteína de fusión de albúmina pueden recubrir el depósito. En este caso, la molécula detectable puede ser antígeno conjugado a un compuesto detectable tal como un substrato enzimático (por ejemplo, peroxidasa de rábano o fosfatasa alcalina). Un experto en la técnica puede reconocer los parámetros que pueden ser modificados para incrementar la señal detectada, así como otras variaciones de los ensayos ELISA conocidos en la técnica. Para una descripción adicional con respecto a los ensayos ELI SA, consultar por ejemplo, la Publicación de Ausubel y Asociados, eds. 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1 , John Wiley & Sons, Inc. , Nueva York a 1 1 .2.1 .

La afinidad de enlace de u na proteína de fusión de albú mina a u na proteína, antígeno o epítope y el fuera de rango de una interacción de anticuerpo o proteína de fusión de albúmina-proteína/antígeno/epítope puede determinarse mediante ensayos de enlace competitivo. Un ejemplo de un ensayo de enlace competitivo es un radioinm u noensayo que comprende la incubación del antígeno marcado (por ejemplo 3H o 123l) con el anticuerpo o proteína de fusión de albúmina de la presente i nvención en la presencia de cantidades en incremento de antígeno no marcado , y la detección del anticuerpo en lazado al antígeno marcado. La afinidad del anticuerpo o proteína de fusión de albú mina de la presente i nvención para una proteína , antígeno, o epítope específico y los enlaces fuera de rango pueden ser determinados a partir de los datos mediante análisis de trazo Scatchard . La competición con una segunda proteína que enlaza la misma proteína, antígeno o epítope que el anticuerpo o proteína de fusión de albúmina, también se puede determinar utilizando radioinmunoensayos. En este caso, la proteína, antígeno, o epítope se incu ba con u n anticuerpo o proteína de fusión de albúmina de la presente invención conjugado a un compuesto marcado (por ejemplo , 3H o 123l ) en la presencia de cantidades en incremento de una segunda proteína no marcada que enlaza la misma proteína , antígeno, o epítope que la proteína de fusión de albúmi na de la presente i nvención . En una modalidad preferida, el análisis cinético BIAcore se utiliza para determinar el enlace en y fuera de rango del anticuerpo o proteínas de fusión de albúmina de la presente invención a una proteína, antígeno o epítope. El análisis cinético BIAcore comprende analizar el enlace y disociación de anticuerpos, proteínas de fusión de albúmina o polipéptidos específicos, antígenos o epítopes de trozos con polipéptidos específicos inmovilizados, antígenos o epítopes, anticuerpos o proteínas de fusión de albúmina, respectivamente en su superficie. Usos Terapéuticos. La presente invención se dirige en forma adicional a terapias a base de anticuerpos que comprenden administrar anticuerpos de la presente invención o proteínas de fusión de albúmina de la presente invención que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica a un paciente animal, preferentemente un mamífero, y más preferentemente un humano, para tratar una o más de las enfermedades, padecimientos o condiciones descritas. Los compuestos Terapéuticos de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos de la presente invención (incluyendo fragmentos, análogos y derivados de los mismos, tal como se describe en la presente invención), ácidos nucleicos que codifican anticuerpos de la presente invención (incluyendo fragmentos, análogos y derivados de los mismos y anticuerpos anti-idiotípicos tal como se describen en la presente invención), proteínas de fusión de albúmina de la presente invención que comprende ai menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica, y ácidos nucleicos que codifican las proteínas de fusión de albúmina. Los anticuerpos de la presente invención o proteínas de fusión de albúmina de la presente invención que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica se pueden utilizar para tratar, inhibir o prevenir enfermedades, padecimientos o condiciones asociadas con la expresión aberrante y/o actividad de una proteína Terapéutica, que incluye pero no se limita a, cualquiera de una o más de las enfermedades, padecimientos o condiciones aquí descritas. El tratamiento y/o prevención de enfermedades, padecimientos o condiciones asociadas con la expresión aberrante y/o actividad de una proteína Terapéutica incluyen, pero no se limitan a, aliviar síntomas asociados con dichas enfermedades, padecimientos o condiciones. Los anticuerpos de la presente invención o proteínas de fusión de albúminas de la presente invención que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica, pueden ser proporcionados en composiciones farmacéuticamente aceptables tal como se conoce en la técnica o como se describe en la presente invención. En una modalidad preferida y específica, la presente invención se dirige a terapias a base de anticuerpos que comprenden administrar anticuerpos de la presente invención o proteínas de fusión de albúmina de la presente invención que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica a un paciente animal, preferentemente un mamífero, y más preferentemente un humano para tratar una o más enfermedades, padecimientos o condiciones, incluyendo pero sin limitarse a, padecimientos neurales, padecimientos del sistema inmune, padecimientos musculares, padecimientos reproductivos, padecimientos gastrointestinales, padecimientos pulmonares, padecimientos cardiovasculares, padecimientos renales, padecimientos proliferativos y/o enfermedades y condiciones cancerosas, y/o tal como se describe en cualquier parte en la presente invención. Los compuestos terapéuticos de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos de la presente invención (por ejemplo, anticuerpos dirigidos a la proteína de longitud total expresada en la superficie celular de una célula de mamífero; anticuerpos dirigidos a un epítope de una proteína Terapéutica y ácidos nucleicos que codifican anticuerpos de la presente invención (incluyendo fragmentos, análogos y derivados de los mismos y anticuerpos anti-idiotípicos tal como se describe en la presente invención). Los anticuerpos de la presente invención se pueden utilizar para tratar, inhibir o prevenir enfermedades, padecimientos o condiciones asociadas con expresión aberrante y/o actividad de una proteína Terapéutica, incluyendo pero sin limitarse a, cualesquiera o más de las enfermedades, padecimientos o condiciones aquí descritas. El tratamiento y/o prevención de enfermedades, padecimientos o condiciones asociadas con la expresión aberrante y/o actividad de una proteína terapéutica incluyen, pero no se limitan a, aliviar síntomas asociados con las enfermedades, padecimientos, o condiciones. Los anticuerpos de la presente invención o proteínas de fusión de albúmina de la presente invención que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica, se pueden proporcionar en composiciones farmacéuticamente aceptables, tal como se conoce en la técnica o como se describe en la presente invención. Un resumen de las formas en las cuales los anticuerpos de la presente invención o proteínas de fusión de albúmina de la presente invención que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica se pueden utilizar en forma terapéutica, incluye el enlace de proteína Terapéutica en forma local o sistémica en el cuerpo o mediante citotoxicidad directa del anticuerpo, por ejemplo, tal como se transmite mediante células de complemento (CDC) o células efectoras (ADCC). Algunos de estos métodos se describen con mayor detalle más adelante. Con las enseñanzas aquí proporcionadas, los expertos en la técnica conocerán como utilizar los anticuerpos de la presente invención o proteínas de fusión de albúmina de la presente invención que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza a una proteína Terapéutica para diagnóstico, monitoreo o propósitos terapéuticos sin experimentación indebida.

Los aníicuerpos de la presente invención o proteínas de fusión de albúmina de la misma que comprende al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéuíica se pueden ufilizar en forma convenieníe en combinación con oíros aníicuerpos monoclonales o quiméricos, o con linfocinas o faclores de crecimienfo hepaíopoiéíico (tal como por ejemplo, I L-2, I L-3, e I L-7), por ejemplo, que sirven para incremenían el número o aclividad de células efecíoras que interactúan con los anticuerpos. Los anticuerpos de la presente invención o profeínas de fusión de albúmina de la présenle invención que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica, se pueden administrar solos o en combinación con oíros íipos de íraíamieníos (por ejemplo, íerapia de radiación, quimioterapia, íerapia hormonal, inmunoíerapia, y agentes anti-tumor). Generalmeníe, se prefiere la adminisíración de productos de un origen de especie o reactividad de especie (en el caso de aníicuerpos) que son las mismas especies a las del pacieníe. Por lo lanío, en una modalidad preferida, se adminisíran a un paciente humano para terapia o profilaxis, anticuerpos humanos, fragmentos, derivados, análogos o ácidos nucleicos. Se prefiere utilizar anlicuerpos de alta afinidad y/o potente inhibición in vivo y/o neutralización contra proteínas Terapéuticos, fragmentos o regiones de las mismas (o la proteína de fusión de albúmina que se correlaciona con dicho anticuerpo, tanto para inmunoensayos dirigidos a, como para ferapia de padecimieníos relacionados con , polinucleótidos o polipéptidos, incluyendo fragmentos de los mismos, de la presente invención. Dichos aníicuerpos, fragmeníos o regiones, íendrán prefereníemenfe afinidad para polinucleóíidos o polipéplidos de la presenfe invención, incluyendo fragmenlos de los mismos, las afinidades de enlace preferidas incluyen consíaníes de disociación o Kd's menores a 5 X 102 M, 102 M , 5 X 1 03 M, 103 M, 5 X 104 M, 104 M. Las afinidades de enlace más preferidas incluyen aquéllas con una consíanle de disociación o Kd menor a 5 X 105 M, 105 M, 5 X 106 M , 106 M, 5 X 107 M, 107 M, 5 X 108 M , o 108 M . Las afinidades de enlace incluso más preferidas incluyen aquéllas con una consíaníe de disociación o Kd menor a 5 X 10"9 M, 10"9 M, 5 X 10"10 M, 10"10 M, 5 X 10"1 1 M , 1 0-1 1 M, 5 X 10"12 M , 10"12 M , 5 X 10"13 M, 10'13 M , 5 X 10"14 M , 10"14 M , 5 X l O-15 M, o 1 0"15 M. Terapia Genéíica En una modalidad específica, los ácidos nucleicos que comprenden secuencias que codifican aníicuerpos que enlazan proleínas lerapéuíicas o proíeínas de fusión de albúmina que comprenden al menos un fragmenío o varianíe de un aníicuerpo que enlaza una proleína Terapéulica, se adminisíran para íraíar, inhibir o prevenir una enfermedad o padecimienlo asociado con expresión aberraníe y/o acfividad de una proíeína lerapéuíica, por medio de íerapia genéíica. La íerapia genélica se refiere a lerapia que se lleva a cabo a íravés de la adminisfración a un sujeío, de un ácido nucleico expresado o que se puede expresar. En esía modalidad de la présenle invención, los ácidos nucleicos producen su proleína codificada que transmite un efecto terapéutico. Cualesquiera de los métodos para terapia genética disponibles en la técnica, pueden ser utilizados de acuerdo con la presente invención. Los métodos de ejemplo se describen con mayor detalle en cualquier parte de la presente soliciíud. Demosíración de Acíividad Terapéutica o Profiláctica Los compuestos o composiciones farmacéuticas de la presente invención, se prueban prefereníemeníe in vifro, y posíeriormeníe in vivo con respecfo a la aclividad íerapéuíica o profilácíica deseada, aníes de ulílizarse en humanos. Por ejemplo, los ensayos in vilro demuestran la actividad terapéuíica o profilácíica de un compuesto o composición farmacéutica incluyen, el efecto de un compuesto en una línea celular o una muestra de tejido del paciente. El efecto del compuesto o composición en la línea celular y/o muestra de lejido, se puede determinar utilizando fécnicas conocidas por los experíos en el aríe, incluyendo pero sin limiíarse a, ensayos de formación de roseías y ensayos de lisis celular. De acuerdo con la preseníe invención, los ensayos in viíro que se pueden uíilizar para deíerminar si esíá indicada la adminisíración de un compuesío específico, incluyen ensayos de cultivo celular in vitro en donde una muestra de lejido del pacieníe se crece en cultivo, y se expone o se administra de olra forma un compuesto, y se observa el efecto de dicho compuesto en la muesíra de íejido. Adminislración Terapéulica/Profiláclica y Composición. La preseníe invención proporciona méíodos de íraíamienfo, inhibición y profilaxis a íravés de la adminisíración a un sujeío, de una canlidad efecliva de un compuesío o composición farmacéuíica de la presenfe invención. En una modalidad preferida, el compueslo es substancialmente purificado (por ejemplo, substancialmeníe libre de subsfancias que limiían su efecto o producen efectos secundarios indeseados). El sujefo es prefereníemenfe un animal, incluyendo pero sin limiíarse a, animales lales como vacas, cerdos, caballos, pollos, galos, perros, etc. , y es preferentemente un mamífero, y más preferentemeníe un humano. Las formulaciones y métodos de administración que se pueden emplear cuando el compuesto comprende un ácido nucleico o una inmunoglobulina se describen anteriormeníe; las formulaciones adecuadas y rulas de adminislración adicionales se pueden seleccionar de entre las que se describen más adelante. Se conocen varios sislemas de suminisíro y se pueden uíilizar para adminisírar un compuesío de la presenfe invención, por ejemplo, encapsulación en liposomas, microparíículas, microcápsulas, células recombinaníes con la capacidad de expresar el compuesío, endociíosis íransmiíida por recepíor (ver por ejemplo la Publicación de Wu and Wu, J . Biol. Chem. 262:4429-4432 (1987)), consírucción de un ácido nucleico como paríe de un relroviral u otro vector, etc. Los métodos de introducción incluyen pero no se limitan a, iníradérmica, iníramuscular, intraperitoneal, intravenoso, subcuíáneo, inlranasal, epidural y rulas orales. Los compueslos o composiciones se pueden administrar a través de cualquier ruta conveniente, por ejemplo mediante infusión o inyección de bolo, medianíe absorción a íravés de ligninas epifeliales o mucocuíáneas (por ejemplo, mucosa oral, mucosa recial e inlestinal, etc.) y se pueden adminisírar junio con oíros ageníes biológicameníe acíivos. La adminisíración puede ser sisíémica o local. Además, puede ser deseable infroducir los compuestos o composiciones farmacéuticas de la presente invención en el sisíema nervioso ceníral a íravés de cualquier ruía adecuada, incluyendo inyección inlraveníricular e inlraíecal; la inyección iníraveníricular se puede faciliíar a íravés de un caíéíer iníravenlricular, por ejemplo, adherido a un depósito, tal como un .depósito Ommayama. La adminisíración pulmonar puede emplearse, por ejemplo, a íravés del uso de un inhalador o nebulizador y formulación con un agenle de aerosolización. En una modalidad específica, puede ser deseable administrar los compuestos o composiciones farmacéuticas de la presente invención en forma local en el área que necesita tralamienío; esío se puede lograr, por ejemplo, a íravés de, pero no como limiíación, infusión local duranfe cirugía, aplicación íópica, por ejemplo, junio con un vendaje después de cirugía, medíanle inyección, por medio de un catéter, por medio de un supositorio o por medio de un implante, siendo el implante un material poroso, no poroso o gelatinoso, incluyendo membranas, tales como membranas sialásticas o fibras. Preferentemenfe, cuando se adminisíra una proíeína, incluyendo un aníicuerpo de la preseníe invención, se debe íener cuidado de uíilizar maíeriales que no absorban la proíeína. En olra modalidad, el compuesío o composición se puede derivar en una vesícula, en parlicular un liposoma (ver la Publicación de Langer, Science 249: 1527-1533 (1990); Treaí y Asociados, in Liposomes ¡n the Therapy of I nfections Disease and Cáncer, Lopez-Beresíein and Fidler (eds. ), Liss, Nueva York, páginas 353-365 ( 1989); Lopez-Beresíein , ibid . , páginas 317-327; ver ibid de manera general). Aún en oíra modalidad, el compuesío o composición se puede suminisírar en un sisíema de liberación controlada. En una modalidad, se puede utilizar una bomba (por ejemplo, ver la Publicación de Langer, supra; Seflon, CRC Crií. Ref. Biomed. Eng . 14-201 (1987); Buchwaid y Asociados, Surgery 88:507 (1980); Saudek y Asociados, N. Engl. J . Med. 321 :574 (1989)). En oíra modalidad, se pueden uíilizar maíeriales quiméricos (ver la Publicación de Medical Applicalions of Conírolled Reléase, Langer and Wise (eds. ), CRC Pres. , Boca Raíon , Florida (1974); Conírolled Drug Bioavailabiliíy, Drug Producí Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, Nueva York (1984); Ranger and Peppas, J . Macromol. Chem. 23-61 (1983), ver íambién Levy y Asociados, Science 228: 190 (1985); During y Asociados, Ann. Neurol. 25:351 (1 989); Howard y Asociados, J . Neurosurg. 71 : 105 (1989)). Aún en ofra modalidad, se puede colocar un sisíema de liberación conírolada en proximidad del objeíivo íerapéuíico, por ejemplo, el cerebro, requiriendo de esía forma únicamente una fracción de la dosis sistémica (ver por ejemplo, la Publicación de Goodson, ¡n Medical Applicaíions of Conírolled Reléase, supra, Vol. 2, páginas 1 15-138 (1984)). Se describen oíros sisíemas de liberación controlada en la revisión realizada por Langer (Science 249: 1527-1533 (1 990)). En una modalidad específica, en donde el compuesto de la preseníe invención es un ácido nucleico que codifica una proíeína, el ácido nucleico puede ser adminisfrado in vivo para promover la expresión de su proleína codificada, consíruyéndolo como parle de un vecíor de expresión de ácido nucleico adecuado y administrándolo de modo que se vuelva intracelular, por ejemplo, mediante el uso de un vector retroviral (ver la Patente Norteamericana No. 4,980,286), o mediante inyección directa, o a través del uso de un bombardeo de micropartículas (por ejemplo, una pistola genética; Biolistic, Dupont), o recubriendo con lípidos o receptores de superficie celular o agenfes de fransfección, o adminisírándolo en enlace con un pépíido íipo homeobox, el cual se sabe que ingresa al núcleo (ver, por ejemplo la Publicación de Jolioí y Asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 88: 1 864-1868 (1991 )), ele. Como allernativa, el ácido nucleico puede ser introducido en forma iníracelular e incorporarse denfro del ADN de la célula huésped para expresión, medianfe recombinación homologa. La présenle invención también proporciona composiciones farmacéuticas. Dichas composiciones comprenden una cantidad terapéuíicamente efectiva de un compuesto, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una modalidad específica, el íérmino "farmacéuíicameníe acepíable" significa aprobado por una agencia reguladora del gobierno Federal o del gobierno de un esíado o que se describe en la Farmacopea de los Esíados Unidos u oíra farmacopea reconocida de manera general para uíilizarse en animales, y más paríicularmeníe en humanos. El lérmino "vehículo" se refiere a un diluyenle, adyuvaníe, excipieníe o vehículo con el cual se adminisíra el lerapéuíico. Dichos vehículos farmacéulicos pueden ser líquidos estériles, tales como agua y aceites, incluyendo los de petróleo, aceite animal, vegetal o de origen sintético, tales como aceile de cacahuaíe, aceiíe de fríjol soya, aceiíe mineral, aceile de sésamo o similares. El agua es un vehículo preferido cuando la composición farmacéulica se administra en forma intravenosa. Las soluciones salina y soluciones de destroza y glicerol acuosas también pueden ser empleados como vehículos líquidos, parlicularmeníe para soluciones inyeclables. Los excipieníes farmacéuíicos adecuados incluyen almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelaíina, malla, arroz, flor de harina, gis, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche en polvo, glícerol, propilénglicol, agua, etanoi y similares. Si se desea, la composición también puede contener cantidades menores de agentes de humectación o emulsificación , o agentes de regulación de pH . Estas composiciones pueden íomar la forma de soluciones, suspensiones, emulsiones, íableías, pildoras, cápsulas, polvos, formulaciones de liberación sosíenida, y similares. La composición puede ser formulada como un suposiíorio, con enlazadores íradicionales y vehículos íales como íriglicéridos. La formulación oral puede incluir vehículos eslándares íales como grados farmacéuticos de manitol lactosa, almidón, magnesio, estearaío, sacarina de sodio, celulosa, carbonalo de magnesio, eíc. Los ejemplos de vehículos farmacéuíicos adecuados se describen en la publicación de "Reminglon's Pharmaceuíical Sciences" de E.W. Martin. Dichas composiciones contendrán una cantidad terapéuficameníe efecíiva del compuesío, prefereníemente en forma purificada, junio con una caníidad adecuada de un vehículo para proporcionar la forma de la administración adecuada para el paciente. La formulación debe adaptarse a modo de adminisíración. En una modalidad preferida, la composición se fórmula de acuerdo a procedimieníos de rulina en la forma de una composición farmacéuíica adapíada para adminisfración intravenosa a seres humanos. Normalmente, las composiciones para la adminisíración iníravenosas son soluciones en un regulador acuoso isoíonico esíéril . Cuando es necesario, la composición íambién puede incluir un agenle de solubilización y un anesíésico local, tal como lignocaina para aliviar el dolor en el sitio de la inyección. Generalmente, los ingredientes se suminisfran ya sea por separado o mezclados en conjunío en una forma de dosificación por unidad, por ejemplo, en la forma de un polvo liofilizado seco o concenírado libre de agua en un contenedor sellado en forma hermética, íal como una ampóllela o sobre que indica la canlidad de agenle activo. Cuando la composición será administrada mediante infusión, se puede suministrar con una botella de infusión que contiene agua de grado farmacéuíica esíéril o solución salina. Cuando la composición se adminisíra medíanle inyección, se puede proporcionar una ampóllela de agua estéril para inyección o solución salina, de modo que los ingredientes pueden ser mezclados antes de la administración . Los compuestos de la presente invención pueden ser formulados como formas neuírales o de sal. Las sales farmacéuíicameníe aceplables incluyen las que se forman con aniones, íales como las derivadas a partir de ácidos clorhídrico, fosfórico, acético, oxálico, íarlárico, efe , y las que se forman con cafiones íales como los que se derivan de sodio, poíasio, amonio, calcio, hidroxidos férricos, isopropilamina, írielilamina, elanol 2-elilamino, hisíidina, procaina, eíc.

La canlidad del compueslo de la presente invención que será efectiva en el tratamiento, inhibición y prevención de la enfermedad o padecimiento asociado con la expresión aberrante y/o actividad de una proteína Terapéutica, puede ser deferminada a íravés de técnicas clínicas estándar. Además, se pueden emplear opcionalmeníe ensayos in viíro para ayudar a ideníificar rangos de dosificación opíimas. La dosis precisa que será empleada en la formulación íambién dependerá de la ruía de adminisíración, y de la severidad de la enfermedad o padecimienlo, y debe ser decidida de acuerdo con el juicio del especialista de acuerdo con las circunstancias de cada pacieníe. Las dosis efecíivas pueden ser exírapoladas a paríir de curvas de respuesía a dosis derivadas de sisíemas de pruebas de modelos animales o in vilro. Para aníicuerpos, la dosis adminislrada a un pacieníe normalmenle será de 0.1 mg/kg a 100 mg/kg del cuerpo corporal del pacienfe. Prefereníemeníe, la dosis adminisírada al pacieníe será de enfre 0.1 mg/kg y 20 mg/kg del peso corporal del paciente, más preferentemenle de 1 mg/kg a 10 mg/kg del peso corporal del pacieníe. Generalmeníe, los aníicuerpos humanos íienen una mayor vida promedio dentro del cuerpo humano que los anticuerpos procedentes de otras especies, debido a la respuesta inmune a los polipéptidos externos. Por lo tanto, las dosis inferiores de anticuerpos humanos y la administración menos frecuente, es posible. Además, la dosis y frecuencia de adminisíración de anlicuerpos de la présenle invención puede ser reducida aumenlando la captación y penetración del tejido (por ejemplo, en el cerebro) de los anticuerpos a través de modificaciones tales como por ejemplo, lipidación . Diagnóstico e I magen Los anticuerpos y derivados etiqueíados de análogos de los mismos que enlazan una proíeína Terapéulica (o fragmenfo o varianíe del mismo) (que incluyen proteínas de fusión de albúmina que comprenden al menos un fragmento o varianfe de aníicuerpo que enlaza una proíeína Terapéuíica), se pueden utilizar con propósitos de diagnóstico para detecíar, y diagnosíicar, o monitorear enfermedades, padecimientos y/o condiciones asociadas con la expresión aberrante y/o actividad de la proteína Terapéutica. La présenle invención proporciona la delección de la expresión aberrante de una proteína Terapéutica, que comprende (a) ensayar la expresión de la proteína Terapéutica en células o fluido corporal de un individuo, utilizando uno o más anticuerpos específicos para el polipéptido de interés, y (b) comparando el nivel de expresión genética con nivel de • expresión genética estándar, mediante lo cual un incremento o disminución en el nivel de expresión de la proteína Terapéutica ensayada en comparación con el nivel de expresión estándar, indica una expresión aberrante.

La preseníe invención proporciona un ensayo de diagnósíico para diagnosíicar un padecimienío, que comprende (a) ensayar la expresión de la profeína Terapéuíica en células o fluido corporal de un individuo uíilizando uno o más anticuerpos específicos para ia proteína Terapéutica o proíeína de fusión de albúmina que comprenden al menos un fragmenío o varianíe de un aníicuerpo específico de una proleína Terapéulica, y (b) comparar el nivel de expresión genética con un nivel de expresión genética estándar, mediante lo cual un incremento o disminución en el nivel de expresión genética de la proíeína Terapéutica ensayada en comparación con el nivel de expresión estándar, indica un padecimienío en paríicular. Con respecío a cáncer, la presencia de una canlidad de íranscripción relativamente alta en íejido de biopsia de un individuo, puede indicar una predisposición para el desarrollo de la enfermedad, puede proporcionar un medio para deíeclar la enfermedad anfes de la aparición de los síníomas clínicos reales. Un diagnóslico más definiíivo de este tipo, puede permitir a los profesionales médicos emplear medidas preventivas o íraíamienlo agresivo en forma más íemprana, evilando de esta forma el desarrollo o progreso adicional del cáncer. Los anticuerpos de la preseníe invención o proíeínas de fusión de albúmina que comprenden al menos un fragmenío o varianíe de un aníicuerpo específico de una proteína Terapéuíica, se pueden uíilizar para ensayar niveles de proíeína en una muesíra biológica uíilizando mélodos inmunohisíologicos clásicos conocidos para los experíos en la técnica (por ejemplo, ver la publicación de Jalkanen at el. , J . Cell. Biol. 101 : 976-985 (1985); Jalkanen eí el., J. Cell. Biol. 105: 3087-3096 (1987)). Oíros méfodos a base de anlicuerpos úíiles para deíecíar la expresión genéíica de proleína incluyen inmunoensayos, lales como el ensayo inmunoabsorbente enlazado por enzimas (ELISA) y el radioinmunoensayo (RÍA). Las etiquetas del ensayo de anticuerpos adecuados, se conocen en la técnica e incluyen etiquetas de enzimas, tales como, oxidasa de glucosa; radioisótopos, íales como yodina (1251 , 121 1 ), carbón (14C), azufre (35S), tritio (3H), indio (1 121 n) y tecneíio (99Tc); las eíiqueías luminisceníes, tales como luminol; y etiqueías fluorescenfes, íales fluorescencia y rodamina y biotina. Una faceta de la presenfe invención, es la detección y diagnóstico de una enfermedad o padecimienío asociado con la expresión aberraníe de una proíeína Terapéuíica en un mamífero, prefereníemenle un mamífero y más prefereníemeníe un humano. En una modalidad, el diagnósíico comprende: a) adminisírar (por ejemplo, en forma pareníeral, subcuíánea o iníraperiloneal) a un sujeío una caníidad efecíiva de una molécula etiquetada que enlaza en forma específica al polipéptido de inferes; b) esperar un infervalo de íiempo después de la adminisfración para permiíir que la molécula eíiquetada se concentre prefereníemenle en siíios en el sujeto, en donde se expresa la proteína Terapéutica (y para una molécula etiquetada no enlazada que será despejada hasta el nivel del fondo); c) determinar el nivel del fondo; y d) detecíar la molécula eliqueíada en un sujefo, de modo que la defección de la molécula eíiqueíada arriba del nivel del fondo indica que el sujeío íiene una enfermedad o padecimienío en parficular asociado con la expresión aberraníe de la proteína terapéufica. Ei nivel del fondo puede deíerminarse a íravés de varios méíodos, incluyendo, comparar la caníidad de molécula efiqueíada detectada con un valor estándar determinado previamente para un sistema en particular. Quedará entendido en la lécnica, que el íamaño del sujefo y el sisíema de generación de imagen uíilizado delerminará la caníidad de porción de generación de imagen necesaria para producir imágenes de diagnóslico. En el caso de una porción de radioisofopo, para un sujeto humano, la cantidad de radioactividad inyectada normalmeníe flucíuará de aproximadameníe 5 a 20 millicuries de 99mTc. En el aníicuerpo, fragmenío de anlicuerpo, o proíeína de fusión de albúmina eliqueíados que comprenden al menos un fragmenío o varianfe: de un aníicuerpo que enlaza a una proíeína Terapéutica, posteriormenle se acumulará preferenlemeníe en el lugar de las células que coníienen la proíeína Terapéulica específica. La generación de imágenes de lumor in vivo se describe en la publicación de S.W. Burchiel et al. , "I mmunopharmacokinetics of Radiolabeled Antibodies and Their Fragments". (Capítulo 13 en Tumor Imaging: The Radiochemical Detecíion of Cáncer, S.W. Burchiel and B. A. Rhodes, eds. , Masson Publishing I nc. (1982)). Dependiendo de diversas variables, incluyendo el íipo de etiqueta utilizada en modo de administración , el iníervalo de íiempo después de la adminislración para permiíir que la molécula eíiqueíada se concentre preferentemeníe en siíios en el sujeío y para la molécula eíiqueíada no enlazada que será despejada hasla el nivel del fondo es de 6 a 48 horas o 6 a 24 horas o 6 a 12 horas. En olra modalidad, el intervalo de tiempo después de la administración es 5 a 20 días o de 5 a 10 días. En una modalidad, el monitoreo de la enfermedad o padecimiento se lleva a cabo repitiendo el método para diagnoslicar la enfermedad o padecimienlo, por ejemplo, un mes después del diagnósíico inicial, seis meses después del diagnósíico inicial, un año después del diagnósíico inicial, eíc. La presencia de la molécula etiquetada, puede ser detecíada en el pacieníe ulilizando méíodos conocidos en la íécnica para exploración in vivo. Esfos méíodos dependen del íipo de eíiqueía uíilizada. Los experlos en la íécnica lendrán la capacidad de determinar el método adecuado para deíecfar una eíiqueía en paríicular. Los méíodos y apáralos que pueden ser ulilizados en los métodos de diagnóstico de la presente invención, incluyen pero no se limilan a, íomografía compularizada (CT), exploración de cuerpo compleío tal como tomografía de emisión de posición (PET), generación de imagen de resonancia magnéfica (MRI), y sonografía. En una modalidad específica, la molécula se eíiquefa con un radioisoíopo y se detecta en el paciente uíilizando un insírumenío quirúrgico que responde a la radiación (Thursíon y asociados, Pateníe Norfeamericana No. 5,441 ,050). En oíra modalidad, la molécula se eíiqueía con un compuesío fluorescente y se detecía en el pacieníe uíilizando un insírumenío de exploración de respuesía a fluorescencia. En otra modalidad , la molécula se etiqueta con un metal de emisión de posiírones y se deíecía en el pacieníe uíilizando íomografía de emisión de posiírones. Aún en ofra modalidad, la molécula se eíiqueía con una eíiquefa paramagnélica y se deíecfa en el pacieníe utilizando generación de imagen de resonancia magnética (MRI). Los aníicuerpos que delecían específicamenle la proteína de fusión de albúmina pero no la albúmina o la proteína lerapéuíica sola, son una modalidad preferida. Esíos se pueden uíilizar para deíeclar la proíeína de fusión de albúmina tal como se describe a lo largo de la presente especificación. Eguipos La presente invención proporciona equipos que pueden ser utilizados en los métodos anteriores. En una modalidad, un equipo comprende un anticuerpo, preferentemeníe un aníicuerpo purificado, y uno o más contenedores. En una modalidad específica, los equipos de la presente invención coníienen un polipépíido subsíancialmeníe aislado que comprende un epílope que es inmunoreaclivo específicameníe con un aníicuerpo incluido en el equipo. Preferentemente, los equipos de la presente invención comprenden además un anlicuerpo de conírol que no reacciona con el polipépíido de inferes. En otra modalidad específica, los equipos de la presente invención contienen un medio para detecíar el enlace de un anlicuerpo a un polipépíido de iníerés (por ejem plo, el aníicuerpo puede ser conjugado a un su bsírato deíectable, íal como u n compuesío fl uorescente, un substrafo enzimálico, u n compuesío radioacíivo o un compuesto luminiscente, o u n segundo anlicuerpo q ue reconoce que el primer anlicuerpo puede ser conjugado a un subsírato detecíable. En oíra modalidad específica de la preseníe i nvención , el eq uipo es un equ ipo de diagnósfico para uíilizarse en clasificación de anticuerpos q ue contienen suero, específicamente contra polinucleólidos y polipépíidos proliferaíivos y/o cancerosos. El equipo puede incluir un anlicuerpo de conírol que no reacciona con el polipéplido de iníerés. Dicho eq uipo puede incluir u n antígeno de polipéplidos subsíancialmeníe aislado que comprende un epííope el cual es específicamente inmunoreactivo con al menos un aníicuerpo de aníígeno aníi-polipéptido. Además , dicho equipo incluye medios para deíecíar el enlace del aníicuerpo al antígeno (por ejemplo, el anticuerpo puede ser conjugado a un compuesto fluorescente tal como fluorescencia o rodamina, que puede detecíarse medianíe cilomeíría de flujo). En modalidades específicas, el equipo puede incluir un antígeno de polipéptido si nteíizado en forma química o producido en forma recombinante. El antígeno de polipéplido del equi po íam bién puede ser adherido a un soporle solido. En u na modalidad más específica, el medio de detección del equipo aníes descriío incluye un soporíe solido al cual se adhiere el aníígeno de polipépíido. Dicho equipo fambién puede incluir un anlicuerpo anli-humano eíiqueíado con reporíero no adherido. En esía modalidad, el enlace del anlicuerpo ai anfígeno del polipépíido se puede deíecíar enlazando el aníicuerpo eíiqueíado con reporíero. En una modalidad adicional, la preseníe invención incluye un equipo de diagnósíico para uíilizarse en la clasificación de antígenos que contienen suero del polipéptido de la preseníe invención. El equipo de diagnóslico incluye un aníicuerpo subslancialmente aislado específicamente inmunoreactivo con antígenos de polipéptido o de polinucleótidos y medios para delecíar el enlace del anlígeno de polinucieóíido o polipépíido al aníicuerpo. En una modalidad, el aníicuerpo se adhiere a un soporíe solido. En una modalidad específica, el aníicuerpo puede ser un anficuerpo monoclonal. El medio de defección del equipo puede incluir un segundo aníicuerpo monoclonal eliqueíado. Como alíernafiva, o además, el medio de defección puede incluir un anlígeno de compeíición, eíiqueíado. En una configuración de diagnóstico, el suero de prueba se hace reaccionar con un reactivo de fase solida que tiene un antígeno enlazado en la superficie obíenido a íravés de los méíodos de la preseníe invención. Después del enlace con el aníicuerpo de aníígeno específico al reacíivo y de eliminar los componenles de suero no enlazados medianíe lavado, el reacíivo se hace reaccionar con un aníicuerpo anli-humano etiquetado con reportero para enlazar el reportero al reacíivo en proporción a la caníidad de anficuerpo aníi-anlígeno enlazado en el soporíe solido. El reacíivo se lava nuevameníe para eliminar el aníicuerpo efiquetado no enlazado, y se determina la cantidad de reporlero asociada con el reactivo. Normalmente, el reportero es una enzima que se detecfa incubando la fase solida en la presencia de un substrato fluorométrico, luminiscente o colorimétrico adecuado (Sigma, St. Louis, MO). El reactivo de superficie solida en el ensayo aníerior, se prepara a íravés de lécnicas conocidas para adherir material de proteína a un maíerial de soporíe solido, lal como granulos poliméricos, varas de sumergimienío, placas de 96 depósilos o material de filtro. Estos méíodos de adición incluyen generalmeníe adsorción específica de la proteína al soporte o adhesión covaleníe de la proíeína, normalmeníe a íravés del grupo de amina libre, a un grupo químicamente reactivo en el soporte solido, tal como un grupo carboxilo, hidroxilo o aldehido. Como alíernaliva, se pueden uíilizar placas recubierías con estrapíividina junio con aníígenos biolinilados. Por lo íanfo, la presenfe invención proporciona un sisíema de ensayo o equipo para llevar a cabo esle mélodo de diagnósíico. Ei equipo incluye generalmeníe un soporíe con antígenos recombinantes enlazados a la superficie, y un anticuerpo anti-humano eliqueíado con reporlero para detectar el anticuerpo anti- aníígeno enlazado en la superficie. Proíeínas de Fusión de Albúmina La présenle invención se refiere de manera general a proteínas de fusión de albúmina y a métodos para tratar, prevenir o aminorar enfermedades o padecimientos. Tal como se utiliza en la presente invención "proteína de fusión de albúmina" se refiere a una proteína formada mediante la fusión de al menos una molécula de albúmina (o un fragmento o variante de la misma) al menos a una molécula de una proteína Terapéutica (o fragmento o variante del mismo). Una proteína de fusión de albúmina de la presente invención comprende al menos un fragmento o variante de una proteína Terapéutica y al menos un fragmento o variante de una albúmina de suero humano, que se asocian entre sí, preferentemente mediante fusión genética (por ejemplo, la proteína de fusión de albúmina es generada mediante traducción de un ácido nucleico en el cual se une un polinucleótido que codifica toda o parte de una proteína Terapéutica en estructura con un polinucleótido que codifica íoda o una parte de la albúmina) o a otra. La proteína Terapéutica y la proteína de albúmina, una vez como parte de la profeína de fusión de albúmina, cada una puede ser referida como un "paríe", "región" o "porción" de la proteína de fusión de albúmina. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona una proteína de fusión de albúmina codificada por un polinucleótido o construcción de fusión de albúmina que se describe en la Tabla 1 o Tabla 2. Los polinucleófidos que codifican estás proteínas de fusión de albúmina íambién esfán comprendidas en la presente invención. Las proteínas de fusión de albúmina preferidas de la presente invención, incluyen , pero no se limiían a, proteínas de fusión de albúmina codificadas por una molécula de ácido nucleico que comprende, o consiste en forma alternativa, en un polinucleótido que codifica al menos una molécula de albúmina (o un fragmento o variante del mismo) unido en estrucíura al menos a un polinucleóíido que codifica al menos una molécula de una proteína Terapéutica (o un fragmento o variante del mismo), una molécula de ácido nucleico que comprende, o consisíe en forma alíernaíiva, en un poiinucieóíido que codifica al menos una molécula de albúmina (o un fragmenío o variante del mismo) unida en estrucíura al menos a un polinucleóíido que codifica al menos una molécula de una proíeína Terapéuíica (o un fragmento o variante del mismo) generada tal como se describe en la Tabla 1 , Tabla 2 o en los ejemplos; o una molécula de ácido nucleico que comprende o consiste en forma alternaliva de un polinucleóíido que codifica al menos una molécula de albúmina (o un fragmenío o varianíe del mismo) unida en estructura al menos a un polinucleótido que codifica al menos una molécula de una proíeína Terapéuíica (o fragmenío o varianíe del mismo), que comprende además, por ejemplo, uno o más de los siguieníes elemenfos (1 ) un vecíor de auío-réplica funcional (que incluye pero no se limita a, un vecíor de plaíaforma, un vector de expresión, un vector de integración y/o un sistema de réplica), (2) una región para inicio de íranscripción (por ejemplo, una región promotora, tal como por ejemplo, un promotor regulable o inducible, un promoíor construcíor), (3) una región para la íerminación de transcripción, (4) una secuencia líder, y (5) un marcador seleccionable. En una modalidad, la presente invención proporciona una proteína de fusión de albúmina que comprende, o consiste en forma alternativa, en una proteína Terapéutica (íal como se describe en la Tabla 1 ) y una proteína de albúmina de suero. En otras modalidades, la presente invención proporciona una proleína de fusión de albúmina que comprende, o consisle en forma alternativa, en un fragmento biológicamente activo y/o terapéuticamente activo de una proteína Terapéutica y una proteína de albúmina de suero. En otras modalidades, la présenle invención proporciona una proíeína de fusión de albúmina que comprende, o consiste en forma alternativa, en una variante biológicamente activa y/o terapéuticamente activa de una proleína Terapéulica y una proteína de albúmina de suero. En modalidades preferidas, el componente de proteína de albúmina de suero de la proteína de fusión de albúmina, es la parte madura de la albúmina de suero. En modalidades adicionales, la presente invención proporciona una proteína de fusión de albúmina que comprende, o consiste en forma alternativa, en una proteína Terapéutica, y una fragmento biológicamente activa y/o terapéuticamenie acfivo de al búmina de suero. En modalidades adicionales, la presente invención proporciona una proteína de fusión de albúmi na que comprende, o consisíe en forma alíernaíiva, en u na proíeína Terapéuíica y u na varianíe biológicameníe activa y/o terapéuíicamenle acliva de albúmina de suero . En modalidades preferidas, una paríe de la proleína Terapéuíica de la proleína de fusión de albúmina , es la parte madura de la proteína Terapéutica. En modalidades ad icionales, la presente invención proporciona una proteína de fusión de albúmina que comprende, o consiste en forma alternativa, en un fragmento biológicamente acíivo y/o íerapéuíicameníe acíivo o varianfe de u na proíeína Terapéulica y un fragmento o variante biológicameníe activo y/o terapéulicamente activo de albúmina de suero. En modalidades preferidas, la presente invención proporciona u na proteína de fusión de albúmi na que comprende o consiste en forma alternativa, en una parte de proteína Terapéutica y una parte madura de albúmina de suero. Preferentemeníe, la proteína de fusión comprende HA como la paríe de íermi nal-N , de una proíeína Terapéulica como la parle de termi nal-C. Como alternativa , también se pude utilizar una proteína de fusión de albúmina q ue com prende HA en la forma de la parte de terminal-C, de u na proteína Terapéutica como la parte de terminal-N . En oirás modalidades, la proteína de fusión de albúmina tiene una proteína Terapéutica fusionada tanto a la albúmina de término-N como de térm i no-C . En una modalidad preferida, la proíeína Terapéuíica fusionada al íérmino-N y -C son las mismas proíeínas Terapéuíicas. En u na modalidad preferida alíernaíiva, las proleínas Terapéuíicas fusionadas al término-N y -C son proteínas Terapéuticas diferentes. En otra modalidad preferida , las proteínas Terapéuíicas fusionadas en el lérmino-N y -C son profeínas Terapéulicas diferenles que pueden ser uíilizadas para tratar o prevenir el mismo padecimiento, enfermedad o condición relacionadas (por ejemplo, tal como se describe en la columna de "I ndicación Preferida Y" de la Tabla 1 ). En oíra modalidad preferida, las proteínas Terapéuticas fusionadas en le íérmino-N y -C son profeínas Terapéuíicas diferentes que pueden ser utilizadas para tralar, aminorar o prevenir enfermedades o padecimientos (por ejemplo, los que se descri ben en la col um na de " I ndicación Preferida Y" de la Tabla 1 ), las cuales son conocidas en la técnica como q ue ocu rren normal menle en pacienles en forma simu ltánea , concurrente o consecuíiva , o que ocurren comú n meníe en pacienles en asociación con oirás. Las proleínas de fusión de albúmina de la presente invención , com prenden proteínas que contienen una, dos, tres, cuatro, o más moléculas de una proteína Terapéutica X o variante de la misma fusionada al término-N o -C de u na proteína de fusión de albúmina de la presente invención, y/o el térmi no-N y/o -C de albúmina o variante del mismo. Las moléculas de una proteína Terapéutica X determinada o variantes de la misma, pueden estar en cualquier número de orientaciones, incluyendo, pero sin limiíarse a, orienfación "cabeza a cabeza" (por ejemplo, en donde el término-N de la molécula de la proteína Terapéutica X se fusiona al íérmino-N de oíra molécula de la proíeína Terapéuíica X), o una orienlación "cabeza a cola" (por ejemplo, en donde el término-C de una molécula de una proteína Terapéuíica X se fusiona al término-N de otra molécula de la proíeína Terapéutica X). En una modalidad, se fusionan uno, dos, tres o más polipéptidos de proteína Terapéuíica X orientada en forma tándem (o fragmentos o variantes de la misma) al término-N o -C de una proteína de fusión de albúmina de la preseníe invención , y/o al íérmino-N y/o -C de albúmina o varianíe de la misma. Las proíeínas de fusión de albúmina de la présenle invención, comprenden además proleínas que contienen una, dos, tres, cuatro o más moléculas de una proteína Terapéutica X delerminada o variante de la misma fusionada al término-N o -C de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, y/o al término-N y/o -C de albúmina o variante del mismo, en donde las moléculas se unen a través de enlazadores de péptidos. Los ejemplos incluyen los enlazadores de péptido que se describen en la Patenle Noríeamericana No. 5,073,627 (incorporada a la preseníe invención como referencia). Las proíeínas de fusión de albúmina que comprenden múlíiples polipépíidos de proíeína Terapéutica X separados por enlazadores de péptidos, se pueden producir utilizando íecnología de ADN recombinante convencional. Los enlazadores son particularmeníe imporlantes cuando se fusiona un péptido pequeño a la molécula HSA grande. El propio péptido puede ser un enlazador fusionando tándem del péptido u otros enlazadores pueden ser utilizados. Las conslrucciones que incorporan enlazadores se describen en la Tabla 2 o se pueden apreciar cuando se examina la SEQ ID NO:Y. Además, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, también pueden ser producidas medíanle fusión de una proleína Terapéutica X o variantes de la misma a la terminai-N y/o termínal-C de albúmina o variantes de la misma, en formas tales que permitan la formación de formas multiméricas intramoleculares y/o intermoleculares. En una modalidad de la presente invención, las proteínas de fusión de albúmina pueden estar en formas monoméricas o multiméricas (por ejemplo, dímeros, trímeros, teírámeros y mulíímeros superiores). En una modalidad preferida de la présenle invención, la parle de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina puede estar en forma monomérica o en forma multimérica (por ejemplo, dímeros, trímeros, tetrámeros y multímeros superiores). En una modalidad específica, la parte de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina es una forma multimérica (por ejemplo, dímeros, trímeros, tetrámeros y multímeros superiores) y la paríe de proíeína de albúmina eslá en paríe monomérica.

Además de la proteína de fusión de albúmina en la cual la proteína de albúmina se fusiona a la terminal-N y/o terminal-C de la parte de la proteína Terapéutica, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención también pueden ser producidas inseríando la proíeína Terapéuíica o péplido de iníerés (por ejemplo, una proíeína Terapéuíica X íal como se describe en la Tabla 1 , o un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéuíica o un fragmenlo o varianíe de la misma) en una región interna de HA. Por ejemplo, dentro de la secuencia de proíeína de la molécula HA, exisíe un número de lazos o vueltas entre el extremo y el comienzo de la hélices- , las cuales esíán esíabilizadas mediante enlaces de disulfuro. Los lazos, tal como se deíermina a paríir de la estructura de cristal HA (identificadores PDB 1 AO6, 1 BJ5, 1 BKE, 1 BM0, 1 E7E a 1 E7I y 1 UOR) para la mayor parte que se extiende lejos del cuerpo de la molécula. Estos lazos son úíiles para la inserción, o fusión interna de pépfidos ferapéuíicameníe acíivos, paríicularmeníe aquellos que requieren que una esíructura secundaria sea funcional, o proleínas Terapéuíicas, para generar esencialmenle una molécula de albúmina con actividad biológica específica. Los lazos de la estrucíura de albúmina humana en donde los pépíidos o polipépíidos pueden ser inserlados para generar proíeínas de fusión de albúmina de la presenfe invención, incluyen : Val54-Asn61 , Thr76-Asp89, Ala92-Glu 100, Gln 170-Ala176, His247-Glu252, Glu266-Glu277, GIu280-His288, Ala362- GIu368, Lys439-Pro447, Val462-Lys475, Thr478-Pro486 y Lys560-Thr566. En modalidades más preferidas, los péptidos o poli péptidos son inserlados en los lazos Val54-Asn61 , Gln 1 70-Ala 1 76 y/o Lys560-Thr566 de la al búm ina humana madura (S EQ I D NO : 1 ). Los péptidos q ue serán i nsertados pueden ser derivados de cualesq uiera bibliotecas de despliegue de fagos o de péptidos sintéticos clasificadas con respecto a la actividad biológica específica o procedentes de partes acíivas de la molécula con la función deseada. Además, se pueden generar biblioíecas de pépíidos aleaíorios deníro de lazos paríiculares o medianíe inserciones de pépíidos alealorizados en lazos parficulares de la molécula HA y en donde se represenlan íodas las combinaciones posibles de aminoácidos. Dicha biblioíeca(s) puede ser generada en HA o frag meníos de dominio de HA a íravés de los siguieníes méíodos: mutación aleatorizada de aminoácidos dentro de u no o más bazos de péptidos de HA o fragmentos de dominio de HA. Ya sea uno, más o todos los residuos deníro del lazo pueden ser moníados en esta forma; reemplazo de, o inserción en uno o más lazos de HA o fragmentos de domin io HA (por ejemplo, fusión interna) de un péptido(s) Aleatorizado de longitud Xn (en donde X es un aminoácido y n es el n úmero de residuos); fusiones de péptido/proíeína de íerminal-N , -C o -N y -C además del inciso (a) y/o (b). El HA o fragmento de dominio HA también puede hacerse multifuncional, injertando los péptidos derivados de diferenfes clasificaciones de difereníes lazos coníara difereníes objefivos en el mismo HA o fragmenío de dominio HA. En modalidades preferidas, los pépíidos inseríados en un lazo de albúmina de suero humano son fragmentos de péptidos o variantes de péptidos de las proteínas Terapéuíicas que se describen en la Tabla 1 . Más paríicularmenfe, la presenfe invención comprende proteínas de fusión de albúmina que comprenden fragmentos de péptidos o variantes de péptidos de al menos 7, al menos 8, al menos 9, al menos 10, al menos 1 1 , al menos 12, al menos 13, al menos 14, al menos 15, al menos 20, al menos 25, al menos 30, al menos 35, o al menos 40 aminoácidos de longitud insertados en un lazo de albúmina de suero humano. La présenle invención lambién comprende proteínas de fusión de albúmina que comprenden fragmentos de péptidos o variantes de péptidos con al menos 7, al menos 8, al menos 9, al menos 10, al menos 1 1 , al menos 12, al menos 13, al menos 14, al menos 15, al menos 20, al menos 25, al menos 30, al menos 35, o al menos 40 aminoácidos fusionados al término-N de albúmina de suero humana. La presente invención también comprende proteínas de fusión de albúmina que comprenden fragmentos de péptidos o variantes de péptidos con al menos 7, al menos 8, al menos 9, al menos 10, al menos 1 1 , al menos 12, al menos 13, al menos 14, al menos 1 5, al menos 20, al menos 25, al menos 30, al menos 35, o al menos 40 ami noácidos fusionados al íérm ino-C de la albúmina de suero humana. Por ejemplo, los pépíidos corfos que se describen en la Tabla 1 y 2 (por ejemplo, Terapéuíico Y), pueden ser inseríados en los lazos de al búm ina. General mente, las proteínas de fusión de albú mina de la presente invención pueden tener una región derivada-HA y una región derivada-proíeína Terapéuíica. Sin embargo, múltiples regiones de cada proteína, pueden ser uíilizadas para elaborar una proteína de fusión de albúmina de la presente i nvención . En forma similar, se puede uíilizar más de una proíeína Terapéutica para elaborar una proteína de fusión de albúmina de la preseníe invención . Por ejemplo, se puede fusionar u na proíeína Terapéutica tanío a los exíremos de íermi nal-N como de íerminal-C del HA. En dicha config uración , las partes de la proteína Terapéutica pueden ser las mismas o diferentes moléculas de proteína Terapéutica. La esírucíura de las proíeínas de fusión de albúmina bi-funcional pueden ser represeníadas como: X-HA-Y o Y-HA-X. Por ejemplo, se puede preparar u na fusión aníi-BLyS ™ scFv- HA-I FN a2b para mod u lar la respuesía in mu ne a I FNa-2b medianíe anfi-BLyS ™ scFv. Una allernaíiva es elaborar una dosis bifuncional (o incluso multi) de fusiones-HA, por ejemplo, fusión HA-I FNa-2b mezclada con fusión HA-anti-BLyS™ scFv, u oirás fusiones-HA en varias proporcione dependiendo de la función , vida promedio, eíc. Las proteínas de fusión de albúmina bi o multifuncionales, íambién pueden ser preparadas para dirigir la paríe de la proteína Terapéutica a un órgano objetivo o íipo celular a íravés de proíeína o pépíido en el término opuesto de HA. Como alíernaíiva de la fusión de las moléculas íerapéuíicas conocidas, los péplidos pueden ser obíenidos clasificando en biblioíecas consíruidas como fusiones para el término-N, -C o -N y -C de HA, o fragmento de dominio de HA, o normalmente 6, 8, 12, 20 o 25 o Xa (en donde X es un aminoácido (aa) y n es igual a número de residuos) aminoácidos aleaíorizados, y en donde se represeníaron fodas las posibles combinaciones de aminoácidos. Una venlaja en parlicular de este método, es que los pépíidos pueden ser seleccionados in situ en la molécula HA y las propiedades del pépíido pueden ser seleccionadas por consiguienle para modificar en forma potencial como pueda ser el caso, un péptido derivado a través de cualquier olro méíodo siendo adherido posíeriormenfe a HA: Además, las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención pueden incluir un péptido enlazador entre las paríes fusionadas para proporcionar mayor separación física eníre las porciones y por lo íanío maximizar la accesibilidad de la paríe de proíeína Terapéuíica, por ejemplo, para enlazar a su recepíor de cognalo. Esle pépíido enlazador puede consisíir de aminoácidos para que sea flexible o más rígido.

La secuencia enlazadora puede ser disociable mediante una proteasa o en forma química para producir la porción relacionada con la hormona de crecimiento. Preferentemente, la proteasa es una que es producida naíuralmeníe por el huésped, por ejemplo, la proleasa S. serevisiae kex2 o proíeasas equivalenles. Por consiguieníe, íal como se describió anteriormente, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención pueden tener la siguiente fórmula R1 -L-R2; R2-L-R1 ; o R1 -L-R2-L-R1 , en donde R1 es al menos una proteína Terapéutica, pépíido o secuencia de polipépíido, y no necesariameníe la misma proteína Terapéutica; L es un enlazador y R2 es una secuencia de albúmina de suero. En modalidades preferidas, las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención que comprenden una proteína Terapéuíica tienen una mayor estabilidad de plasma en comparación con la estabilidad de plasma de la misma proleína Terapéuíica, cuando no se fusiona a albúmina. La estabilidad de plasma normalmente se refiere al período de tiempo entre cuando se administra la proteína Terapéutica en vivo y se lleva en el torrente sanguíneo, y cuando la proteína Terapéulica se degrada y se despeja del fórrente sanguíneo, en un órgano, tal como el riñon o hígado, que finalmente despeja la proteína Terapéutica del cuerpo. La estabilidad de plasma se calcula en términos de la vida promedio de la proíeína Terapéuíica en el torreníe sanguíneo. La vida promedio de la proteína Terapéutica en el fórrenle sanguíneo, puede ser fácilmente determinada a fravés de ensayos comunes conocidos en la íécnica. En modalidades preferidas, las proleínas de fusión de albúmina de la preseníe invención comprenden una proteína Terapéutica que liene vida en anaquel prologada en comparación con la vida en anaquel de la misma profeína Terapéulica cuando no se fusiona a albúmina. La vida en anaquel se refiere normalmente al período de tiempo en el cual de una proteína Terapéutica en solución o en alguna oíra formulación de almacenamienlo, es estable sin la pérdida indebida de actividad terapéulica. Muchas de las proleínas Terapéuticas son altamente lábiles en su estado no fusionado. Tal como se describirá más adelante, la vida media típica de estas proteínas Terapéuíicas se prologan de manera marcada al momenío de la incorporación en la proíeína de fusión de albúmina de la presente invención. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención con vidas en anaquel "prolongada" o "extendida", tienen mayor actividad terapéuíica en forma relaíiva al esfándar que ha esíado sometido al mismo almacenamiento y condiciones de manejo. El estándar puede ser la proleína Terapéulica de longitud total no fusionada. Cuando la parte de la proteína Terapéutica de la proteína de fusión de albúmina es un análogo, una varianíe o de ofra forma esíá alíerada o no incluye íoda la secuencia de dicha proleína, la prolongación de la aclividad terapéutica puede ser comparada en forma alternativa con el equivalente no fusionado de dicho análogo, variante, péptido alterado o secuencia incomplefa. Como ejemplo, una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención puede retener más de aproximadamente el 100% de la actividad ferapéuíica, o más de aproximadameníe el 105%, 1 10%, 120%, 130%, 150% o 200% de la acíividad íerapéufica de un estándar, cuando se somete a las mismas condiciones de almacenamiento y manejo que el esíándar, cuando se compara en un punió de tiempo determinado. La vida en anaquel íambién puede evaluarse en términos de actividad terapéulica que permanece después de almacenamiento, normalizado para la actividad terapéutica cuando comenzó el almacenamiento. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, con vidas en anaquel prolongadas o extendidas como lo exhibieron mediante su actividad terapéutica prolongada o extendida, pueden retener más de aproximadamente el 50% de la aclividad terapéutica, aproximadamente el 60%, 70%, 80% o 90% o más de la actividad íerapéutica de la proteína Terapéutica no fusionada equivalente, cuando se somete a las mismas condiciones. Expresión de Proteínas de Fusión Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , pueden ser producidas como moléculas recombinantes mediante secreción de levadura, un microorganismo tal como una bacteria, o una línea celular de humano o animal. Preferentemente, el polipéptido se segrega de células huésped.

Una modalidad paríicular de la présenle invención, comprende una conslrucción de ADN que codifica una secuencia de señal efectiva para dirigir la secreción en levadura, particularmente, una secuencia de señal derivada de levadura (especialmente una que es homologa al huésped de levadura), y la molécula fusionada del primer aspecto de la presente invención, no habiendo pro-secuencia derivada de levadura entre la señal y el péptido maduro. La señal de invertasa Saccharomyces cervisiae es un ejemplo preferido de una secuencia de señal derivada de levadura. Los conjugados del íipo preparados a íravés de la publicación de Poznansky y asociados (FEBS Lett. 239: 18 (1988)), en donde los polipéptidos preparados en forma separados se unen medianíe reficulación química, no esíán coníemplados. La preseníe invención íambién incluye una célula, preferentemeníe una célula de levadura transformada para expresar una proteína de fusión de albúmina de la presente invención . Además de las propias células de huésped transformadas, la presente invención también confemplan a un culíivo para dichas células, preferentemeníe un cullivo monoclonal (homogéneo clonalmenle) o un culíivo derivado de un cultivo monoclonal, en un medio nutrieníe. Si se segrega el polipéptido, el medio contendrá el polipéptido, con las células, o sin las células si han sido filtradas o centrifugadas. Muchos sistemas de expresión son conocidos y pueden ser utilizados, incluyendo bacíerias (por ejemplo, E. coli y Bacillus subtilis), levaduras (por ejemplo, Saccharomyces cerevisiae, Kluyveromyces lactis y Pichia pastoris, hongos filamentosos (por ejemplo, Aspergillus), células de plantas, células de animales y células de insectos. Las cepas derivadas preferidas que serán utilizadas en la producción de las proteínas de fusión de albúmina son D88, DXY1 y BXP10. D88 [/ea2-3, /e?/2-122, can , pra\ , ubcA] es un derivado de una cepa de origen AH22his+ (también conocida como DB1 ; ver, por ejemplo la publicación de Sleep et al. Biotechnology 8:42-46 (1990)). La cepa contiene una mutación Ieu2 que permite la selección auxotropica de plásmidos a base de 2 mieras que coníienen el gen LEU2. D88 lambién exhibe una desrepresion de una PRB1 en exceso de glucosa. El promolor PRB1 normalmente se controla mediante dos punios de revisión que moniíorean los niveles de glucosa y elapa de crecimienío. El promoíor se acíiva en levadura íipo nalural al momenío del agotamienío de glucosa y enírada en la fase esíacionaria. La cepa D88 exhibe la represión medianíe glucosa pero maníiene la inducción al momenío de enírar en fase esíacionaria. El gen PRA1 codifica una proíeasa vacuolar de levadura, endoproíeasa A YscA, se localiza en el ER. El gen UBC4 es írayecloria de ubiquiíinación y se involucra en la dirección de proleínas vivas y anormales cortas para degradación dependiente de ubiquitina. Se descubrió que el aislamiento de esta mutación ubc4 incrementa el número de copias de un plásmido de expresión en la célula y origina un nivel incrementado de expresión de una proteína deseada expresada a parlir del plásmido (ver, por ejemplo, la Publicación I nlernacional No. WO99/00504, incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia). DXY1 , un derivado de D88, liene el siguieníe genofipo: [Ieu2- 3, Ieu2-122, can l, pra l, ubc4, ura3::yap3]. Además de las mutaciones aisladas en D88, esta cepa fambién íiene una eliminación de la proíeasa YAP3. Esta proteasa origina disociación de la mayor parte de los residuos di-básicos (RR, RK, KR, KK), aunque lambién promueve la disociación en residuos básicos simples en proíeínas. El aislamiento de esta mutación yap3 dio como resultado mayores niveles de la producción HSA de longiíud íoíal (lambién ver, por ejemplo, la Paíenle Norteamericana No. 5, 965, 386 y la publicación de Kerry-Williams y asociados, Yeast 14: 161 -169 (1998), incorporadas en sus totalidades a la presente invención como referencia). BXP 10 tiene el siguiente genotipo: leu2-3, Ieu2-122, can l, pra l, ubc4, ura3, yap3::URA3, Iys2, hsp l 50::LYS2, pmt1::URA3. Además de las mutaciones aisladas en DXY1 , esta cepa también tiene una eliminación del gen PMT1 y el gen HSP150. El gen PMT1 es un miembro de la familia conservada en forma evolucionaría de O-manosiltransferasas de proteína de doliquíl-fosfatasa-D-manosa (Pmts). La topología de transmembrana de Pmtl p sugiere que es una proteína de membrana integral del retículo endoplásmico con un papel en la glucosilación enlazada-O. Esía mutación sirve para reducir/eliminar la glucosilación enlazada-O de fusiones HSA (ver por ejemplo, la Publicación I nternacional No. WO00/44772, incorporada en su toíalidad a la preseníe invención como referencia). Los estudios han revelado que la proteína Hsp150 se separa en forma ineficiente de rHA mediante cromatografía de intercambio de iones. La mutación en el gen HSP150 elimina un contaminaníe potencial que ha probado ser difícil de eliminar a través de íécnicas de purificación estándar. Ver, por ejemplo la Patente Norteamericana No. 5,783,423, la cual está incorporada en su foíalidad a la preseníe invención como referencia. La proíeína deseada se produce en formas convencionales, por ejemplo, a partir de una secuencia de codificación insertada en el cromosoma huésped o en un plásmido libre. Las levaduras se transforman con una secuencia de codificación para la proteína deseada en cualesquiera de las formas usuales, por ejemplo, electroporación. Los méíodos para íransformación de levadura mediante electroporación se describe en la publicación de Becker & Guarente (1990) Methods Enzymol. 194, 182. Las células íransformadas en forma exitosa, es decir, células que contienen una construcción de ADN de la preseníe invención, pueden ser idenlificadas a íravés de íécnicas bien conocidas en el arle. Por ejemplo, las células que resulían de la iníroducción de una construcción de expresión pueden crecerse para producir el polipéptido deseado. Las células pueden ser recolectadas y usadas y su contenido de ADN revisado con respecío a la presencia de ADN utilizando un método tal como el que se describe en la publicación de Southern(1975) J. Mol. Biol. 98, 503 or Berení y asociados (1985) Biotech. 3, 208. Como alternaíiva, la presencia de la proíeína en el sobrenadanle puede ser deíecíado uíilizando anticuerpos. Los vectores de plásmido de levadura úíiles incluyen pRS403-406 y pRS413-416 y esíán generalmeníe disponibles en Slraíagene Cloning Sysíems, La Jolla, CA 92037, EUA. Los plásmidos pRS403, pRS404, pRS405 y pRS406 son plásmidos de Integración de Levadura (YIps) y los marcadores seleccionables de levadura H IS3, 7RP 1 , LEU2 y URA3. Los plásmidos pRS413-416 son plásmidos de Centromero de Levadura (Ycps). Los veclores preferidos para elaborar proteínas de fusión de albúmina para expresión en levadura, incluyen pPPC0005, pScCHSA, pScNHSA y pC4: HSA, las cuales se describen con detalle en el ejemplo 1 . La figura 2 muestra un mapa del plásmido pPPCOOOd que puede ser utilizado como el vector base en el cual se pueden clonar polinucleótidos que codifican proíeínas Terapéuticas para formar fusiones-HA. Contiene un promotor PRB 1 S. cerevisiae (PRB 1 p), una secuencia líder de fusión (FL), ADN que codifica HA (rHA) y una secuencia terminadora ADH1 S. serevisiae. La secuencia de la secuencia líder de fusión consiste en los primeros 19 aminoácidos del péptido de señal de albúmina de suero humana (SEQ ID NO:3) y los cinco últimos aminoácidos del promotor dei facíor alfa 1 de coincidencia (SLDKR, ver la Paleníe Europea EP-A-387 319 la cual está incorporada en su toíalidad a la preseníe invención como referencia). Los plásmidos pPPCOOOd, pScCHSA, pScNHSA y pC4:HSA fueron depositadas el 1 1 de Abril del 2001 en la Colección de Cultivo Tipo Americano, 1080; Universiíy Boulevard, Manassas, Virginia 201 10-2209 y con los números de acceso determinados ATCC PTA-3278, PTA-3276, PTA-3279 y PTA-3277, respectivameníe. Otro vector úíil para expresar una proteína de fusión de albúmina en levadura es el vector pSAC35, el cual se describe en la publicación de SIeep et al. , Bio Technology 8: 42 (1990) la cual está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia. Un promotor de levadura que puede utilizarse para expresar la proteína de fusión de albúmina, es el promotor MET25. Ver, por ejemplo, la publicación de Dominik Mumburg , Rolf Muller y Martin Funk. Nucleic Acids Research, 1994, Vol. 22, No. 25, pp. 5767-5768. El promotor Met25 liene 383 bases de longifud (bases -382 a -1 ) y los genes expresados por esíe promotor, también son conocidos como Met15, Mel17 y YLR303W. Una modalidad preferida uíiliza la secuencia que se encuentra más adelante, en donde, en el exíremo 5' de la secuencia que se encueníra más adelaníe, el sitio Not 1 uíilizado en la clonación, esíá subrayado en el exlremo 3', se subraya el codón de inicio ATG: GCGGCCGCCGOATGCAAGGGTTCGAATCCCTTAGCTCTCATTATT^^ TGGCACGTGAAGCTGTCGATATTGGGGAACTGTGGTGGTTGGCAAATGACTAATTAAGTTAGTCAAGGCGCCATCCTCATGAAA?CT GTGTAACATAATAACCGAAGTGTCGAAAAGGTGGCACCTTGTCCAATTGAACACGCTCGATGAAAAAAATAAGATATATATAAGGTT AAGTAAAGCGTCTGTTAGAAAGGAAGTTTTTCCT?TTOTGCT^ CAGATACATAGATACAATTCTATTACCCCCATCCATACAATG (SEQ 1D N0:5) Los promotores adicionales que se pueden utilizar para expresar la proíeína de fusión de albúmina en levadura, incluyen los siguientes: a) el promotor cbh l : TCTAGAGTTGTGAAGTCGGTAATCCCGCTGT?TAGTAATACGAGTCGCATCTAAATACTCCGAAGCTGCTGCGAACCCGGA GAATCGAGATGTGCTGGAAAGCri CrAGCGAGCGGCTAAATTAGCATGAAAGGC ATGAsAAATrcrGGAGACGGCTrGT TGAATCATGGCGTTCCATTCTTCGACAAGCAAAGCGTTCCGTCGCAGTAGCAGGCACTCATTCCCGAAAAAACTCGGAGA TTCCTAAGTAGCGATGGAACCGGAATAATATAATAGGCAATACATTGAGTTGCCTCGACGGTTGCAATGCAGGGsrACTG AGCTrGGACArAAUlurrCCGTACCCCACCTCnTCTCAACCTpGGCGTrrCCCTGATTCAGCGTACCCGTACAAGTCGTAA TCACTATTAACCCAGACTGACCGGACGTGTT?GCCCTTCATTTGGAGAAATAATGTCATTGCGATGTGTAATTRGCCTGCT TGACCGACTGGGGCTGTTCGAAGCCCGAATGTAGGATTGTTATCCGAACTCTGCTCGTAGAGGCATGTTGTGAATCTGTGT CGGGCAGGACACGCCTCGAAGGTTCACGGCAAGGGAAACCACCGATAGCAGTGTCTAGTAGCAACCTGTAAAGCCGCAA TGCAGCATCACTGGAAAATACAAACCAATGGCTAAAAGTACATAAGTTAATGCCTAAAGAAGTCATATACCAGCGGCTAA TAATTGTACAATCAAGTGGCTAAACGTACCGTAA'NTGCCAACGGCTTGTGGGGTRGCAGAAGCAACGGCAAAGCCCCAC TRCCCCACGTRTGTTRCTTCACTCAGTCCAATCRCAGCTGGTGATCCCCCAATTGGGTCGCRRGTTTGTTCCGGTGAAGTGA AAGAAGACAGAGGTAAGAATGTCTGACTCGGAGCGTTRTGCATACAACCAAGGGCAGTGATGGAAGACAGTGAAATGTT GACATTCAAGGAGTATTTAGCCAGGGATGC?GAGTGTATCGTGTAAGGAGGTRTGTCTGCCGATACGACGAATACTGTAT AGTCACTTCTGGTGAAGTGGTCCATATTGAAATGTAAGTCGGCACTGAACAGGCAAAAGATTGAGGGGAAACTGCCTAAG ATCTCGGGCCCTCGGGCCTTCGGCCTTGGGGTGTACATGTTTGTGCTCCGGGCAAATGCAAAGTGTGGTAGGATCGAACAC ACTGCTGCCTTTACCAAGCAGCTGAGGGTATGTGATAGGCAAATGTTCAGGGGCCACTGCATGGTTTCGAATAGAAAGAG AAGCTTAGCCAAGAACAATAGCCGATAAAGATAGCCTCATTAAACGGAATGAGCTAGTAGGCAAAGTCAGCGAATGTG? ATATATAAAGGTTCGAGGTCCGTGCCTCCCTCATGCTCTCCCCATCTACTCATCAACTCAGATCCTCCAGGAGACTRGTAC ACCATCTTTTGAGGCACAGAAACCCAATAGTCAACCGCGGACTGGCATC (SEQ ID NT:113) b) el promotor cysD de Aspergillus nidulans: AGATCTGGTTCCTGAGTACATCTACCGATGCGCCTCGATCCCCCTCTTAGCCGCATGAGATTCCTACCATTGATGTCCTATCG TTCAGGGTCCTATRRGGACCGCTAGAAATAGACRCTGCRCGATTTGTTRCCATTATTCACGCAATTACGATAGTATTRGGCTC T?TCGTTTGGCCCAGGTCAATTCGGGTAAGACGCGATCACGCCATRGTGGCCGCCGGCGTTGTGCTGCTGCTATTCCCCGC ATATAAACAACCTCTCCACCAGTTCGTGGGGCGTTGCGAATGCTGTACTCTATTTCAAGTTGTCAAAAGAGAGGATTCAAAA AATTATACCCCAGATATCAAAGATATCAAAGCCATC (SEQ ID NO:L 14) c) un promotor modificado cbh l que tiene la secuencia: TCTAGAGTTGTGAAGTCGGTAATCCCGCTGTATAGTAATACGAGTCGCATCTAAATACTCCGAAGCTGCTGCGAACCCGGA GAA?CGAGATGTGCTGGAAAGCTTCTAGCGAGCGGCTAAATTAGCATGAAAGGCTATGAGAAATTCTGGAGACGGCTTGT TGAATCATGGCGTTCCATTCTTCGACAAGCAAAGCGTTCCGTCGCAGTAGCAGGCACTCATTCCCGAAAAAACTCGGAGA TTCCTAAGTAGCGATGGAACCGGAATAATATAATAGGCAATACATTGAGTTGCCTCGACGGTTGCAATGCAGGGGTACTG AGCTRGGACATAACTGTTCCGTACCCCACCTCTRCTC CCTTTGGCGTTTCCCTGATTCAGCGTACCCGTACAAGTCGTAA TCACTATRAACCCAGACTGACCGGACGTGTTTTGCCCTRCATTTGGAGAAATAATGTCA?RGCGATGTGTAATRTGCCTGCT TGACCGACTGGGGCRGTTCGAAGCCCGAATGTAGGATTGTTATCCGAACTCTGCTCGTAGAGGCATGTTGTGAATCTGTGT CGGGCAGGACACGCCTCGAAGGTTCACGGCAAGGGAAACCACCGATAGCAGTGTCTAGTAGCAACCTGTAAAGCCGCAA TGCAGCATCACTGGAAAATACAAACCAATGGCTAAAAGTACATAAGTTAATGCCTAAAGAAGTCATATACCAGCGGCTAA TAATTGTACAATCAAGTGGCTAAACGTACCG?AATRTGCCAACGGCTTGTGGGGTRGCAGAAGCAACGGCAAAGCCCCAC TTCCCCACGTTTGTTTC? CACTCAGTCCAATCTCAGCTGGTGATCCCCCAATRGGGTCGCTTGTTTGTTCCGGTGAAGTGA AAGAAGACAGAGGTAAGAATGTCTGACTCGOAGCGT?TGCATACAACCAAGGGCAGTGATGGAAGACAGTGAAATGTT GACATTCAAGGAGTATRRAGCCAGGGATGCRRGAGTGTATCGTGTAAGGAGGTTTGTCTGCCGATACGACGAATACTGTAT AGTCACTTCTGGTGAAGTGGTCCATATTGAAATGTAAGTCGGCACTGAACAGGCAAAAGATTGAGTTGAAACTGCCTAAG ATCTCGGGCCCTCGGGCCTTCGGCCTTTGGGTGTACATGTRRGTGCTCCGGGCAAATGCAAAGTGTGGTAGGATCGAACAC ACTGCTGCC?TRACCAAGCAGCTGAGGGTATGTGATAGGCAAATGTTCAGGGGCCACTGCATGGTTTCGAATAGAAAGAG AAGCTTAGCCTGCAGCCTC?'ATCGAGAAAGAAATTACCGTCGCTCGTGATTTGTT?GCAAAAAGAACAAAACTGAAAAA ACCCAGACACGCTCGACT?CCTGTCRTCCTATTGATTGCAGCTTCCAATRTCGTCACACAACAAGGTCCTAGCTTAGCCAA GAACAATAGCCGATAAAGATAGCCTCATTAAACGGAATGAGCTAGTAGGC?AAGTCAGCGAATGTGTATATATAAAGGTT CGAGGTCCGTGCCTCCCTCATGCTCTCCCCATCTACTCATCAACTCAGATCCTCCASGAGACTTGTACACCATCTTTRG?GG CACAGAAACCCAATAGTCAACCGCGGACTGGCATC (SEQ ID NO: 115) d) un promotor cysD Aspergillus nidulans que tiene la secuencia: AGATCTGG?TCCTGAGTACATCTACCGATGCGCCTCGATCCCCCTCTTAGCCGCATGAGATTCCRRACCATTTATGTCCTATC GTTCAGGGTCCTATTTGGACCGCTAGAAATAGACTCTGCTCGATTTGTTRCCATTATTCACGCAATTACGATAGTARRRGGC TCRTTTCGTTTGGCCCAGGTCAATTCGGGTAAGACGCGATCACGCCATTGTGGCCGCCGGCGCTGCAGCCTCTTATCGAGA AAGAAATTACCGTCGCTCGTGATTTGTGTGCAAAAAGAACAAAACTGAAAAAACCCAGACACGCTCGACTTCCTGTCTTCC TATTGATTGCAGCTRCCAATTTCGTCACACAACAAGGTCCTACGCCGGCGTTGTGCTGCTGCTATTCCCCGCATATAAACA ACCCCTCCACCAGTTCGTTGGGCTTRGCGAATGCTGTACTCTATRRCAAGTTG?CAAAAGAGAGGATTCAAAAAATTATAC CCCAGATATCAAAGATATCAAAGCCATC (SEQ ID NO: 116) Se han desarrollado una variedad de méíodos para enlazar ADN en forma operaíiva a vecíores a íravés de íérminos cohesivos complemeníarios. Por ejemplo, se pueden agregar tractos de homopolímero complementario al segmento de ADN que será inseríado al ADN del vector. El vector y el segmento de ADN posíeriormenle se unen medianíe enlace de hidrogeno entre las colas homopoliméricas complementarias para formar moléculas de ADN recombinante. Los enlazadores sintéticos que contienen uno o más sifios de resíricción proporcionan un méíodo alíernaíivo para unir el segmento de ADN a los vectores. El segmenío de ADN , generado medíanle digestión de restricción de endonucleasa, se trata con polimerasa de ADN de bacteriófago T4 o polimerasa 1 de ADN de E. coli, enzimas que eliminan la protuberancia, término de un solo hilo gama con sus actividades 3' 5'-exonucleolíticas y se llenan en los extremos 3' recesados con sus actividades de polimerización. La combinación de estas actividades genera por consiguiente segmentos ADN con extremo romo. Los segmentos con exlremo romo se incuban posíeriormeníe con un exceso molar grande de moléculas enlazadoras en la presencia de una enzima que íiene la capacidad de catalizar la ligadura de las moléculas de ADN de extremo romo, lal como ligasa de ADN de bacteriófago T4. Por lo tanto, los producios de la reacción son segmentos de ADN que llevan secuencias enlazadoras poliméricas en sus extremos. Estos segmentos de ADN posteriormeníe se disocian con la enzima de restricción adecuada y se ligan a un vector de expresión que ha sido disociado con una enzima que produce lérminos compaíibles con los del segmenío de ADN. Los enlazadores sinléíicos que coníienen una variedad de silios de endonucleasa de resfricción esíán comercialmeníe dispon ibles en una caníidad de fuenfes, incluyendo I níernafional Bioíechnologies I nc, New Haven , CT, EUA. U na forma deseable para identificar el AD N de acuerdo con la presente i nvención , si por ejemplo , se prepararán variantes HA, se utiliza la reacción de cadena de poli merasa tal como se describe en la publicación de Saiki eí al . ( 1 988) Science 239, 487-491 . En esle mélodo, el ADN que será amplificado en forma enzimática es flanqueado por dos cebadores de oligonucleótidos específicos que q uedan incorporados por sí mismos en el ADN amplificado. Los cebadores específicos pueden contener sitios de reconocimiento de endonucleasa de resíricción q ue pueden ser utilizados para clonarse en vectores de expresión utilizando métodos conocidos en el arte. Los géneros de ejemplo de levad ura confemplados como úíiles en la prácíica de la preseníe i nvención , en la forma de huéspedes para expresar la proíeína de fusión de albúmina, son Pichia (Hansen u la), Saccharomyces, Kluyveromyces, Candida, Torulopsis, Torulaspora, Schizosaccharomyces, Citeromyces, Pachysolen, Debaromyces, Metschunikowia, Rhodosporidium, Leucosporidium, Botryoascus, Sporidiobolus, Endomycopsis, y similares. Los géneros preferidos son los q ue se seleccionan del gru po q ue consiste en Saccharomyces, Schizosaccharomyces, Kluyveromyces, Pichia y Torulaspora . Los ejemplos de Saccharomyces spp. son S. cerevisiae, S. italicus y S. rouxii. Los ejemplos de especies Kluyveromyces spp. , son K. fragilis, K. laclis y K. marxianus. Las especies Torulaspora adecuadas, son T. delbreckii. Los ejemplos de especie Pichia (Hansenula) spp, son P. angusta (principalmente H. polimorfa), P. anómala (principalmente H . anómala) y P. pastoris. Los métodos para transformación de S. cerevisiae, se consideran de manera general en las Patentes Nos. EP 251 744, EP 258 067 y en la publicación WO 90/01063, las cuales todas están incorporadas en su totalidad a la presente invención como referencia. Las especies de ejemplo preferidas de Saccharomyces, incluyen S. cerevisiae, S. italicus, S. diastaticus y Zygosaccharomyces rouxii. Las especies de ejemplo preferidas de Kluyveromyces, incluyen K. fragilis y K. lactis. Las especies de ejemplo preferidas de Hansenula, incluyen H. polymorpha (ahora Pichia angusta), H. anómala (ahora Pichia anómala), y Pichia capsulata. Las especies de ejemplo preferidas adicionales de Pichia, incluyen P. pastoris. Las especies de ejemplo preferidas de Aspergillus, incluyen A. niger y A. nidulans. Las especies de ejemplo preferidas de Yarrowia, incluyen Y. lipolytica. Están disponibles muchas especies de levadura preferidas en el ATCC. Por ejemplo, las especies de levadura preferidas que se encuentran a continuación están disponibles en ATCC, y son útiles en la expresión de proteínas de fusión de albúmina: Saccharomyces cerevisiae Hansen , en muíanles yap3 de la cepa lelemorfica BY4743 (No. de Acceso ATCC 4022731 ); Saccharomyces cerevisiae Hansen, mutante hsp150 de cepa telemorfica BY4743 (No. de Acceso ATCC 4021266); Saccharomyces cerevisiae Hansen, mutante pmtl de cepa telemorfica BY4743 (No. de Acceso ATCC 4023792); Saccharomyces cerevisiae Hansen, telemorfica (Nos. de Acceso ATCC 20626; 44773; 44774 y 62995); Saccharomyces diastaticus Andrews et Gilliland ex van der Walt, telemorfica (No. de Acceso ATCC 62987); Kluyveromyces lactis (Dombrowski) van der Walt, telemorfica (No. de Acceso ATCC 76492); Pichia angusta (Teunisson y asociados). Kurtzman , telemorfica depositada como polimorfa Hansenuia de Moráis et Maia, telemorfica (No. de Acceso ATCC 26012); Aspergillus Níger van Tieghem, anamórfica (No. de Acceso ATCC 9029); Aspergillus niger van Tieghem, anamórfica (No. de Acceso ATCC 16404); Aspergillus nidulans (Eidam) Winter, anamórfica (No. de Acceso ATCC 48756); y Yarrowia lipolytica (Wickerham y asociados) van der Walt et von Arx, telemorfica (No. de Acceso ATCC 201847). Los promotores adecuados de S. cerevisiae, incluyen los asociados con el gen PGK1 , genes GAL1 o GAL1 0, CYC 1 , PHO5, TRP1 , ADH 1 , ADH2, los genes para deshidrogenasa de gliceraldehído-3-fosfato, hexocinasa, descarboxilasa de piruvaío, fosfofrucíocinasa, isomerasa de fosfato de triosa, isomerasa de fosfoglucosa, glucocinasa, feromona de factor de correspondencia-alfa, [una feromona de factor de correspondencia], el promotor PRB 1 , el promotor GUT2, el promolor GPD 1 , y promoíores híbridos que comprenden híbridos de paríes de las regiones reguladoras 5' con partes las regiones reguladoras 5' y otros promotores o con sitios de activación de corriente ascendeníe (por ejemplo, el promotor de la Pateníe EP-A-258067). Los promolores regulables convenieníes para utilizarse en Schizosaccharomyces pombe, son el promotor represibie de tiamina del gen nmt tal como lo describe la publicación de Maundrell (1990) J. Biol. Chem.265, 10857-10864 y el promoíor de gen gbpl represibie de glucosa, íal como lo describe la publicación de Hoffman & Winsíon (1990) Genetics 124, 807-816. Los méíodos para íransformar Pichia para la expresión de genes exíernos se consideran, por ejemplo, en la publicación de Cregg y asociados (1993), y en varias paíentes de Phillips (por ejemplo, Paíeníe Noríeamericana No. 4 857 467, incorporada a la presenfe invención como referencia), y los equipos de expresión Pichia esíán comerciaimeníe disponibles en Invitrogen BV, Leek, Holanda y en Invitrogen Corp., San Diego, California. Los promotores adecuados incluyen AOX1 y AOX2. Gleeson y asociados (1986) J. Gen. Microbiol 132, 3459-3465, 3459-3465 incluyen información con respecto a vectores Hansenula y transformación, siendo los promotores adecuados MOX1 y FMD1; en tanto que la Paíeníe EP 361 991, de Fleer y asociados (1991) y otras publicaciones de Rhone-Poulene Rorer, enseñan, a expresar proteínas externas en especies Kluyveromyces spp., siendo un promotor adecuado PGK1. La señal de terminación de franscripción, es preferentemeníe la secuencia de flanqueo 3' de un gen eucariótico, el cual contiene señales adecuadas para la íerminación de transcripción y poliadenilación. Las secuencias de flanqueo 3' adecuadas, pueden ser por ejemplo, aquellas del gen naturalmente enlazado a la secuencia de control de expresión utilizada, es decir, pueden corresponder al promotor. Como alternativa, pueden ser diferentes, en el caso en el cual se prefiere la señal de terminación del gen S. cerevisiae ADH 1 . Las proíeínas de fusión de albúmina deseadas pueden ser expresadas inicialmente con una secuencia líder de secreción, la cual puede ser cualquier líder efectivo en la levadura elegida. Los líderes útiles en levadura incluyen cualquiera de los siguientes: a) la secuencia líder MPI F-1 (por ejemplo, aminoácidos 1 -21 del número de Acceso del GenBank AAB51 134) MKVSVAALSCLMLVTALGSQA (SEQ I D NO:6) b) la secuencia de señal de esíaniocalcina (MLQNSAVLLLLVISASA, SEQ I D NO:7) c) la pre-pro-región de la secuencia de señal HSA (por ejemplo, MKWVTFISLLFLFSSAYSRGVFRR, SEQ I D NO:8) d) la pre región de la secuencia de señal HSA (por ejemplo, MKWVTFISLLFLFSSAYS, SEQ I D NO:9) o variantes de los mismos, tales como, por ejemplo, MKWVSFISLLFLFSSAYS, (SEQ I D NO: 10) e) la secuencia de señal de invertasa (por ejemplo, MLLQAFLFLLAGFAAKISA, SEQ I D NO: 1 1 ) f) la secuencia de señal de facíor alfa de correspondencia de levadura (por ejemplo, MRFPSIFTAVLAFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLEGDF DVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKR, SEQ ID NO:12 o MRFPSIFTAVLAFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLEGDF DVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLDKR, SEQ ID NO:12) g) secuencia líder de íoxina exferminadora K. lactis h) una secuencia de señal híbrida (por ejemplo, MKWVSFISLLFLFSSAYSRSLEKR, SEQ ID NO:13) i) una secuencia de señal híbrida HSA/MFa-1 (lambién conocida como HSA/kex2) (por ejemplo, MKWVSFISLLFLFSSAYSRSLDKR, SEQ ID NO:14) j) una secuencia líder de fusión MFa-1 exíerminadora K. lactis (por ejemplo, MNIFYIFLFLLSFVQGSLDKR, SEQ ID NO:15) k) la secuencia de señal de Inmunoglobulina Ig (por ejemplo, MGWSCIILFLVATATGVHS, SEQ ID NO:16) I) la secuencia de señal precursora de Fibulina B (por ejemplo, MERAAPSRRVPLPLLLLGGLALLAAGVDA, SEQ ID NO:17) m) la secuencia de señal precursora de clustorina (por ejemplo, MMKTLLLFVGLLLTWESGQVLG, SEQ ID NO:18) n) la secuencia de señal de proteína 4 de enlace-factor de crecimiento tipo insulina (por ejemplo, MLPLCLVAALLLAAGPGPSLG, SEQ ID NO:19) o) varianles de la pre-pro-región de la secuencia de señal HSA, íal como por ejemplo, MKWVSFISLLFLFSSAYSRGVFRR (SEQ ID NO:20), MKWVTFISLLFLFAGVLG (SEQ I D NO:21 ), MKWVTFISLLFLFSGVLG (SEQ ID NO:22), MKWVTFISLLFLFGGVLG (SEQ I D NO:23), Líder HSA modificado HSA #64 - MKWVTFISLLFLFAGVSG (SEQ I D NO:24); Líder HSA modificado HSA #66 - MKWVTFISLLFLFGGVSG (SEQ I D NO:25); Líder HSA modificado (A 14) - MKWVTFISLLFLFAGVSG (SEQ I D NO:26); Líder HSA modificado (S 14) (también conocido como HSA #65) - MKWVTFISLLFLFSGVSG (SEQ I D NO:27); Líder HSA modificado (G 14) - MKWVTFISLLFLFGGVSG (SEQ I D NO:28); o MKWVTFISLLFLFGGVLGDLHKS (SEQ I D NO:29) p) una secuencia de señal de consenso (M PTWAWWLFLVLLLALWAPARG , SEQ I D NO:30) q) líder de fosfatasa de ácido (PH05) (por ejemplo, MFKSVVYSI LAASLANA SEQ I D NO:31 ) r) la pre-secuencia de MFoz-1 s) la pre-secuencia de 0 glucanasa (BGL2) t) líder de toxina exíerminadora u) la presencia de íoxina exlerminadora v) prepro íoxina exíerminadora k. lacíis (29 aminoácidos; 16 aminoácidos de pre y 13 aminoácidos de pro) MNI FYI FLFLLSFVQGLEHTHRRGSLDKR (SEQ I D NO:32) w) secuencia líder de secreción de glucoarnilasa 11 S. diastaticus x) secuencia líder de secreción de a-galacfosidasa (MEL1) S. carlsbergensis y) secuencia líder Candida glucoarnylasa z) los líderes híbridos descriíos en la Paíente EP-A-387 319 (incorporada a la presente invención como referencia) aa) la secuencia de señal gp67 (junio con los sisíemas de expresión baculoviral) (por ejemplo, aminoácidos 1-19 del Número de Acceso GenBank AAA72759) o bb) el líder nalural de la proteína terapéutica X; ce) líder de invertasa (SUC2) S. cerevisiae, íal como se describe en la Paíeníe JP 62-096086 (oíorgada como 911036516, la cual esíá incorporada a la presente invención como referencia); o dd) Inulinasa - MKLAYSLLLPLAGVSASVINYKR (SEQ ID NO:33). ee) Una variante líder de propépíido TA57 modificado #1 -MKLKTVRSAVLSSLFASQVLGQPIDDTESQTTSVNLMADDTESAFAT QTNSGGLDVVGLISMAKR (SEQ ID NO:34) ff) Una variante líder de propéptido TA57 modificado #2 -MKLKTVRSAVLSSLFASQVLGQPIDDTESQTTSVNLMADDTESAFAT QTNSGGLDVVGLISMAEEGEPKR (SEQ ID NO:35) gg) Un péptido de señal de consenso - MWWRLWWLLLLLLLLWPMVWA (SEQ ID NO:111) hh) Secuencia de señal HSA/kex2 modificada - MKWVSFISLLFLFSSAYSGSLDKR (SEQ ID NO:112) ii) Un péptido de señal de consenso #2 -MRPTWAWWLFLVLLLALWAPARG (SEQ ID NO:105) Métodos Adicionales de Producción Recombinante y Sintélica de Proteínas de Fusión de Albúmina La presente invención lambién se refiere a vecíores que contienen un polinucleótido que codifica una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención, células huésped, y la producción de proteínas de fusión de albúmina a través de técnicas sintélicas y recombinanles. El vecíor puede ser, por ejemplo, un veclor de fago, de plásmido, viral o retroviral. Los vectores retrovirales pueden ser de réplica competeníe o de réplica defectuosa. En el último caso, la propagación viral generalmente ocurrirá únicamente en células huésped de complemento. Los polinucleóíidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, pueden ser unidos a un vecíor que coníiene un marcador seleccionable para propagación en un huésped. Generalmeníe, se inlroduce un vecíor de plásmido en un precipiíado, lal como precipilado de fosfato de calcio, o en un complejo con un lípido cargado. Si el vector es un virus, puede ser empacado in vitro utilizando una línea de célula de empaque adecuada y posteriormente transducirse en células huésped. El inserío de polinucleóíido debe eslar enlazado en forma operativa a un promotor adecuado, tal como el promoíor PL de lambda fago, los promoíores lac, trp, phoA y tac de E. coli, los promolores íempranos y tardíos SV40 y los promotores LTRs relrovirales, por nombrar solo algunos. Oíros promoíores adecuados serán conocidos para los experíos en la íécnica. Las consírucciones de expresión conlendrán además siíios para inicio, íerminación , y en la región íranscriía , u n siíio de enlace de ribosomas para íraducción . La parte de codificación de las transcri pciones expresadas por las construcciones, incluirá preferentemeníe un codón de in icio de traducción al comienzo y un codón de terminación (UAA, U GA o UAG) colocado en forma adecuada al final del polipéptido que será traducido. Tal como se indica, los vectores de expresión incluirán preferentemente al menos un marcador seleccionable. Dichos marcadores incluyen reductasa de dihid rofolato, G41 8, sintasa de glufamina o resislancia en neomici na para culíivo celular eucariólico, y genes de resisíencia a íeíracicli na , canamicina o ampicilina para el culíivo en E. coli, y oirás baclerias. Los ejemplos representativos de h uéspedes adecuados i ncluyen , pero no se limitan a, células bacterianas, tales como células Streptomyces y Salmonella typhimurium de E. coli; células fúngicas, tales como cél ulas de levad u ra (por ejemplo, Saccharomyces cerevisiae o Pichia pastoris (No. de Acceso ATCC 201 1 78)); cél ulas de insecío íaies como Drosophila S2 y Spodopíera Sf9; células animales tales como CHO, COS, NSO, 293, y cél u las de melanoma de Bowes; y células de plantas. Los medios de culíivo adecuados y condiciones para las células h uésped anles descritas, son conocidos en la técnica . Entre los vectores preferidos para utilizarse en bacferias, se incluyen pQE70, pQE60 y pQE-9, disponibles en Qiagen, I nc.; vectores pBluescript, vectores Phagescripí, pNH8A, pNH 16a, pN H 18A, pNH46A, disponibles en Stratagene Cloning Systems, I nc. ; y ptrc99a, pKK223-3, pKK233-3, pDR540, pRIT5 disponible en Pharmacia Biotech, I nc. Enlre los vectores preferidos eucarióticos se encuentran pWLNEO, pSV2CAT, pOG44, pXT1 y pSG disponibles en Síraíagene; y pSVK3, pBPV, pMSG y pSVL disponibles en la Pharmacia. Los vecíores de expresión preferidos para utilizarse en sistema de levadura incluyen , pero no se limiían a, pYES2, pYD 1 , pTEF1 /Zeo, pYES2/GS, pPICZ, pGAPZ, pGAPZalph, pPIC9, pPIC3.5, pH I L-D2, pHI L-S 1 , pPI C3.5K, pPIC9K y PAO815 (lodos disponibles en Invitrogen, Carlbad, CA). Otros vectores adecuados podrán ser apreciados fácilmente por los expertos en la técnica. En una modalidad, los polinucleótidos que codifican la proteína de fusión de albúmina de la presente invención, pueden ser fusionados a secuencias de señal las cuales dirigen la localización de una proteína de la presente invención a compartimeníos paríiculares de una célula procariótica o eucariótica y/o dirigen la secreción de una proíeína de la preseníe invención a partir de una célula procariótica o eucariófica. Por ejemplo, en E. coli se puede desear dirigir la expresión de la proíeína al espacio periplásmico. Los ejemplos de secuencias de señal o proleínas (o fragmeníos de las mismas) a las cuales se pueden fusionar las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, con el objeto de dirigir la expresión del polipéptido al espacio periplásmico de la bacleria, incluyen pero no se limilan a, la secuencia de señal pelB , la secuencia de señal de proteína de enlace de maltosa (MBP), MBP, la secuencia de señal ompA, la secuencia de señal de la B-subunidad de enterotoxina lábil con calor de E. Coli periplásmica, y la secuencia de señal de fosfatasa alcalina. Están disponibles comercialmente diversos vectores para la construcción de proteínas de fusión, las cuales dirigirán la localización de una proteína, tal como la serie de vecíores pMAL (particularmeníe la serie pMAL-p) disponible en New England Biolabs. En una modalidad específica, las proteínas de fusión de albúmina de polinucleófidos de la preseníe invención, pueden ser fusionadas a la secuencia de señal de liasa de pecíafo pelB para incremeníar la eficiencia a la expresión y purificación de dichos polipéptidos en bacteria Gram-negaíiva. Ver las Paíeníes Norleamericanas Nos. 5,576, 1 95 y 5,846,818, cuyos contenidos están incorporados en su toíaiidad a la presente invención como referencia. Los ejemplos de péptidos de señal que pueden ser fusionados a una proíeína de fusión de albúmina de la preseníe invención, con el objeío de dirigir la secreción en células de mamífero, incluyen pero no se limiían a: a) la secuencia líder MPI F-1 (por ejemplo, aminoácidos 1 -21 del número de Acceso del GenBank AAB51 134) MKVSVAALSCLMLVTALGSQA (SEQ I D NO:6) b) la secuencia de señal de esíaniocalcina (MLQNSAVLLLLVISASA, SEQ ID NO:7) c) la pre-pro-región de la secuencia de señal HSA (por ejemplo, MKWVTFISLLFLFSSAYSRGVFRR, SEQ ID NO:8) d) la pre región de la secuencia de señal HSA (por ejemplo, MKWVTFISLLFLFSSAYS, SEQ ID NO:9) o varianíes de los mismos, íales como, por ejemplo, MKWVSFISLLFLFSSAYS, (SEQ ID NO:10) e) la secuencia de señal de inveríasa (por ejemplo, MLLQAFLFLLAGFAAKISA, SEQ ID NO:11) f) la secuencia de señal de faclor alfa de correspondencia de levadura (por ejemplo, MRFPSIFTAVLAFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLEGDF DVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKR, SEQ ID NO:12 o MRFPSIFTAVLAFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLEGDF DVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLDKR, SEQ ID NO:12) g) secuencia líder de toxina exterminadora K. lactis h) una secuencia de señal híbrida (por ejemplo, MKWVSFISLLFLFSSAYSRSLEKR, SEQ ID NO:13) i) una secuencia de señal híbrida HSA/MFa-1 (íambién conocida como HSA/kex2) (por ejemplo, MKWVSFISLLFLFSSAYSRSLDKR, SEQ ID NO:14) j) una secuencia líder de fusión MFa-1 exíerminadora K. lactis (por ejemplo, MNIFYIFLFLLSFVQGSLDKR, SEQ ID NO:15) k) la secuencia de señal de Inmunoglobulina Ig (por ejemplo, MGWSCI I LFLVATATGVHS, SEQ I D NO: 16) I) la secuencia de señal precursora de Fibulina B (por ejemplo, MERAAPSRRVPLPLLLLGGLALLAAGVDA, SEQ I D NO: 17) m) la secuencia de señal precursora de clusforina (por ejemplo, MMKTLLLFVGLLLTWESGQVLG, SEQ I D NO: 18) n) la secuencia de señal de profeína 4 de enlace-factor de crecimiento tipo insulina (por ejemplo, MLPLCLVAALLLAAGPGPSLG , SEQ I D NO: 1 9) o) varianíes de la pre-pro-región de la secuencia de señal HSA, íal como por ejemplo, MKWVSFISLLFLFSSAYSRGVFRR (SEQ ID NO:20), MKWVTFISLLFLFAGVLG (SEQ I D NO:21 ), MKWVTFISLLFLFSGVLG (SEQ I D NO:22), MKWVTFISLLFLFGGVLG (SEQ I D NO:23), Líder HSA modificado HSA #64 - MKWVTFISLLFLFAGVSG (SEQ I D NO:24); Líder HSA modificado HSA #66 - MKWVTFISLLFLFGGVSG (SEQ I D NO:25); Líder HSA modificado (A 14) - MKWVTFISLLFLFAGVSG (SEQ ID NO:26); Líder HSA modificado (S 14) (íambién conocido como HSA #65) - MKWVTFISLLFLFSGVSG (SEQ I D NO:27); Líder HSA modificado (G 14) - MKWVTFISLLFLFGGVSG (SEQ I D NO:28); o MKWVTFISLLFLFGGVLGDLH KS (SEQ I D NO:29) p) una secuencia de señal de consenso (MPTWAWWLFLVLLLALWAPARG, SEQ I D NO:30) q) líder de fosfalasa de ácido (PH05) (por ejemplo, MFKSVVYSI LAASLANA SEQ I D NO:31 ) r) la pre-secuencia de MFoz-1 s) la pre-secuencia de 0 glucanasa (BGL2) í) líder de íoxina exíerminadora u) la presencia de íoxina exíerminadora v) prepro loxina exíerminadora k. laclis (29 aminoácidos; 16 aminoácidos de pre y 13 aminoácidos de pro) MN I FYI FLFLLSFVQGLEHTHRRGSLDKR (SEQ I D NO:32) w) secuencia líder de secreción de glucoarnilasa 11 S. diastaticus x) secuencia líder de secreción de a-galacíosidasa (MEL1 ) S. carlsbergensis y) secuencia líder Candida glucoarnylasa z) los líderes híbridos descriíos en la Pateníe EP-A-387 319 (incorporada a la présenle invención como referencia) aa) la secuencia de señal gp67 (junto con los sistemas de expresión baculoviral) (por ejemplo, aminoácidos 1 -19 del Número de Acceso GenBank AAA72759) o bb) el líder natural de la proíeína terapéutica X; ce) líder de invertasa (SUC2) S. cerevisiae, tal como se describe en la Pateníe JP 62-096086 (otorgada como 91 1036516, la cual está incorporada a la présenle invención como referencia); o dd) I nulinasa - MKLAYSLLLPLAGVSASVI NYKR (SEQ I D NO:33). ee) Una varianíe líder de propéplido TA57 modificado #1 — MKLKTVRSAVLSSLFASQVLGQPI DDTESQTTSVNLMADDTESAFAT QTNSGGLDVVGLISMAKR (SEQ ID NO:34) ff) Una variante líder de propéptido TA57 modificado #2 - MKLKTVRSAVLSSLFASQVLGQPIDDTESQTTSVNLMADDTESAFAT QTNSGGLDVVGLISMAEEGEPKR (SEQ ID NO:35) gg) Un pépíido de señal de consenso - MWWRLWWLLLLLLLLWPMVWA (SEQ ID NO:111) jj) Secuencia de señal HSA/kex2 modificada - MKWVSFISLLFLFSSAYSGSLDKR (SEQ ID NO:112) kk) Un péplido de señal de consenso #2 -MRPTWAWWLFLVLLLALWAPARG (SEQ ID NO:105) En una modalidad preferida, la secuencia de señal HSA/kex2 modificada (SEQ ID NO:112) se fusiona al férmino amino de una proíeína de fusión de albúmina, incluyendo proteínas de fusión que comprenden proteína de albúmina y una proteína Terapéutica tal como se describe en la présenle invención, así como proteínas de fusión de albúmina que se describen en las publicaciones WO93/15199; WO97/24445; WO03/60071; WO03/59934 y PCT/US04/01369, cada una de las cuales está incorporada en su toíalidad a la presente invención como referencia. La secuencia de señal HSA/kex2 modificada se basa en la secuencia de señal HSA/kex2 (SEQ ID NO:14) descrita, por ejemplo, en la publicación de SIeep y asociados, Biolechnology 1990, vol. 8, pp. 42-46; y Patente Norteamericana No. 5,302,697, las cuales están incorporadas en su íotalidad a la presente invención como referencia. La secuencia líder HSA/kex2 modificada descriía en la presente invención , contiene una substiíución de aminoácido no conservadora (Arg a Gly) en el residuo 19 dei pépíido de señal de origen. El pépíido de señal HSA/kex2 modificado se ha descubierío que produce una levadura con expresión inesperadameníe mejor y/o eficiencia de disociación mejor de las proíeínas de fusión de albúmina cuando se expresan en levadura, que en la secuencia de señal HSA/kex2 no modificada. Las varianíes del pépíido de señal HSA/kex2 modificado, íambién esfán comprendidas en la presente invención . En particular, el residuo Gly en la posición 19 de la SEQ I D NO: 1 12, puede ser subslituido con un Pro residuo. También se confemplan otras variantes de substilución conservadora de la secuencia de señal HSA/kex2 modificada. Los ácidos nucleicos que codifican la secuencia de señal HSA/kex2 modificada de la SEQ I D NO: 1 12, así como varianíes de subsíiíución conservadoras de las mismas, íambién esíán comprendidas en la preseníe invención. Los vecíores que uíilizan sintasa de glutamina (GS) o DHFR, como los marcadores seleccionables, pueden ser amplificados en la presencia de los fármacos de metionina, sulfoximina o metotrexato, respectivamenle. Una veníaja de los veclores a base de sintasa de glutamina son la disponibilidad de algunas células, (por ejemplo, la línea de célula de mieloma múrido, NSO), las cuales son negaíivas de sintasa de glutamina. Los sisíemas de expresión de sintasa de glutamina íambién pueden funcionar en células que expresan sintasa de glutamina (por ejemplo, células de Ovario de Hámster Chino (CHO) proporcionando un inhibidor adicional para prevenir el funcionamiento del gen endógeno. Un sistema de expresión de sintasa de gluíamina y componeníes de los mismos, se deíalla en las publicaciones PCT: WO87/04462; WO86/05807; WO89/01036; WO89/10404 y WO91/06657, las cuales esíán incorporadas en su toíalidad a la presente invención como referencia. Además, se pueden obtener vectores de expresión de siníasa de gluíamina en Lonza Biologics, I nc. (Porísmouth, NH). La expresión y producción de anlicuerpos monoclonales ufilizando un sistema de expresión GS en células de mieloma de múrido se describe en la publicación de Bebbington y asociados, Bio/technology 10: 169 (1992) y en Biblia y Robinson Biotechnol. Prog. 1 1 : 1 (1995), las cuales están incorporadas a la presente invención como referencia. La preseníe invención también se refiere a células huésped que contiene las construcciones de vector antes descritas en la presente invención, y además comprende células huésped que contienen frecuencias de nucleótidos de la presente invención que esíán asociadas en forma operable con una o más reglones de conírol heíerólogo (por ejemplo, promotor y/o aumentador) utilizando íécnicas conocidas en el arte. La célula huésped puede ser una célula eucariótica superior, tal como una célula de mamífero (por ejemplo, una célula derivada de humano), o una célula eucariólica inferior, íal como una célula de levadura, o la célula huésped puede ser una célula procarióíica, íal como una célula de bacíeria. Se puede elegir una cepa huésped, que module la expresión de la secuencia de gen inseríadas, o modifique y procese el producto de gen en el modo específico deseado. La expresión de ciertos promotores, puede elevarse en la presencia de cierlos inducíores; por lo íanío se puede confrolar la expresión del polipéplido conslruído en forma genética. Además, las células huésped diferentes tienen características y mecanismos específicos para el procesamiento y modificación de la íraducción y posíerior a la traducción (por ejemplo, fosforilación , disociación) de proteínas. Las líneas de célula adecuadas pueden ser elegidas para asegurar las modificaciones deseadas y procesar la proíeína exíerna expresada. La iníroducción de los ácidos nucleicos y consírucción de ácido nucleico de la preseníe invención en la célula huésped, pueden efectuarse mediante transfección de fosfato de calcio, transfección íransmiíida por DEAE-dextrano, transfección transmiíida por lípido caíiónico, elecíroporación, íransducción, infección u otros métodos. Dichos mélodos se describen en muchos manuales de laboraíorio esíándar, íales como la publicación de Davis y asociados, Basic Methods I n Molecular Biology (1986). Se contempla de manera específica que los polipéptidos de la presente invención puedan ser expresados de hecho a través de una célula huésped que carece de un vector recombinaníe. Además de comprender células huésped que coníienen las consírucciones de veclor descriías en la presente invención , la presente invención íambién comprende células huésped primarias, secundarias e inmoríalizadas de origen verlebrado, paríicularmente origen de mamífero, que han sido construidas para eliminar o reemplazar material genéíico endógeno (por ejemplo, la secuencia de codificación que corresponde a una proíeína Terapéulica puede reemplazarse con una profeína de fusión de albúmina que corresponde a la proteína Terapéutica) y/o incluir material genético (por ejemplo, se puede incluir secuencias de polinucleótido heterologa tales como, por ejemplo, una proteína de fusión de albúmina de la presente invención que corresponde a la proteína Terapéutica). El material genético asociado en forma operable con el polinucleótido endógeno puede activar, alterar y/o amplificar los polinucleótidos endógenos. Además, las técnicas conocidas en el arte pueden ser utilizadas para asociar en forma operativa polinucleótidos heterólogos (por ejemplo, poiinucleótidos que codifican una proleína de albúmina, o un fragmenlo o variante del mismo) y/o regiones de control helerólogo (por ejemplo, promoíor y/o aumenlador) con secuencia de polinucleótido endógeno que codifican una proteína Terapéutica a través de recombinación homologa (ver por ejemplo, la Paíeníe Noríeamericana No. 5,641 ,670, presenlada el 24 de Julio de 1997; Número de Publicación Inlernacional WO 96/2941 1 ; Número de Publicación I nlernacional WO 94/12650; Koller y asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 86: 8932-8935 (1989); y Zijlsíra y asociados, Nature 342: 435-438 (1989), cuyas descripciones están incorporadas en su tofalidad a la preseníe invención como referencia). Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , pueden ser recuperadas y purificadas de culíivos de célula recombinaníe y méíodos bien conocidos en la íécnica, incluyendo precipitación de sulfato de amonio o etanol, extracción de ácido, cromatografía de intercambio de iones o cationes, cromatografía de fosfocelulosa, cromatografía de interacción hidrofóbica, cromatografía de afinidad, cromatografía de hidroxilapatiía, cromatografía de interacción de carga hidrofóbica y cromatografía de lectina. Más preferentemeníe, se emplea cromalografía líquida de alto desempeño ("H PLC") para purificación. En modalidades preferidas las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención se purifican utilizando Cromatografía de Intercambio de Aniones, que incluyen pero no se limitan a, cromatografía sobre Q-sefarosa, DEAE sefarosa, HQ de poros, DEAE de poros, Toyopearl Q, Toyopearl QAE, Toyopeari DEAE, Recurso/Fuente Q y DEAE, Fractogel Q y columnas de DEAE. En modalidades específicas, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención se purifican uíilizando Cromaíografía de Iníercambio de Caíiones incluyendo, pero sin limiíarse a, SP-sefarosa, CM sefarosa, HS de poros, CM de poros, Toyopearl SP, Toyopearl CM , Recurso/Fuenle S y CM , Fracíogel S y columnas CM y sus equivaleníes y comparables. En modalidades específicas, las proíeínas de fusión de albúmina de la présenle invención se purifican utilizando Cromatografía de I nleracción Hidrofóbica que incluye, pero no se limitan a, columnas de Fenilo, Butilo, Melilo, Octilo, Hexilo-sefarosa, Fenilo poros, Butilo, Metilo, Ocíilo, Hexilo, Toyopearl Fenilo, Bulilo, Meíilo, Ocíilo, Fenilo de Recurso/Fueníe de Hexilo, Buíilo, Meíilo, Ocíilo, Hexilo, Fenilo Fractogel, Fenilo, Butilo, Metilo, Ocíilo, Hexilo y sus equivalentes y comparables. En modalidades específicas, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención se purifican utilizando Cromatografía de Exclusión por Tamaño, incluyendo pero sin limitarse a, sefarosa S 1 00, S200, S300, columnas de resina superdex, y sus equivalentes y comparables. En modalidades específicas, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención se purifican utilizando Cromatografía por Afinidad que incluyen pero no se limitan a, afinidad de Tinta miméíica, afinidad de pépíido y columnas de afinidad de aníicuerpos que son selecíivas ya sea para las moléculas HSA o las moléculas de "objeíivo de fusión". En modalidades preferidas, las proleínas de fusión de albúmina de la presente invención, se purifican utilizando uno o más métodos de Cromatografía que se describen anteriormente. En otras modalidades preferidas, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención se purifican utilizando una o más de las siguientes columnas de Cromaíografía, columna FF de sefarosa Q, columna FF de Sefarosa SP, Columna de Alto Desempeño de Sefarosa Q, columna FF de Sefarosa Azul, Columna Azul, columna FF de Sefarosa de Fenilo, Sefarosa FF DEAE, o Columna de Metilo. Además, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención pueden ser purificadas utilizando el proceso que se describe en la Publicación Internacional PCT WO 00/44772, la cual está incorporada en su íofalidad a la preseníe invención como referencia. Un experlo en la íécnica podrá modificar fácilmente el proceso que describe en la presente invención, para uíilizarse en la purificación de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , pueden ser recuperadas de: productos de procedimientos sintéticos químicos; y productos producidos mediante técnicas recombinantes a partir de un huésped procariótico o eucarióíico, incluyendo, por ejemplo, células de bacterias, levadura, plantas superiores, inseclos y mamíferos. Dependiendo del huésped empleado en un procedimiento de producción recombinante, los polipéptidos de la preseníe invención pueden ser glucosilados o pueden ser no glucosilados. Además, las profeínas de fusión de albúmina de la présenle invención íambién pueden incluir un residuo de mefionina modificado inicial, en algunos casos como resulíado de procesos íransmitidos por huésped. Por lo tanto, es bien sabido en la técnica que ia metionina de terminal-N codificada por el codón de inicio de traducción generalmente se elimina con alia eficiencia, de cualquier proleína después de la íraducción en todas las células eucarióticas. Aunque la mefionina de terminal-N en la mayor parte de las proteínas íambién se elimina en forma eficiente en la mayor parte de los procarióticos, para cierías proíeínas, esíe proceso de eliminación procariólica es ineficiente, dependiendo de la naturaleza del aminoácido al cual se enlaza en forma covalente la metionina de terminal-N. En una modalidad , se uliliza Pichia pastoris de levadura para expresar proteínas de fusión de albúmina de la presente invención en un sistema eucariótico. Pichia pastoris es una levadura metilolrófica que puede metabolizar metanol como su única fueníe de carbono. Un paso principal en la írayectoria de metabolización de meíanol, es la oxidación de meíanol a formaldehído utilizando O2. Esta reacción se cataliza a íravés de la oxidasa de alcohol de enzimas. Con el objeío de metabolizar el metanol como su única fuente de carbono, Pichia pastoris debe generar altos niveles de oxidasa de alcohol, debida en parte, a la afinidad relativamente baja de la oxidasa de alcohol para O2. En consecuencia, en un medio de crecimiento que depende de metanol como una fuente de carbono principal, la región promotora de uno de los dos genes de oxidasa de alcohol (AOXI) es altamenle acíiva. En la presencia de metanol, la oxidasa de alcohol producida a partir del gen AOXI comprende hasía aproximadameníe 30% de la proíeína soluble fofal en Pichia pastoris. Ver la publicación de Ellis, S.B. y asociados, Mol. Cell. Biol. 5: 1 1 1 1 -21 (1985); Kouíz, P.J, eí al. , Yeasí 5: 167-77 (1989); Tschopp, J. F. , eí al. , Nucí. Acids Res. 15: 3859-76 (1 987). Por lo tanío, se expresa una secuencia de codificación heterologa, íal como, por ejemplo, un polinucleólido de la preseníe invención, bajo la regulación de íranscripción de loda o parle de la secuencia reguladora A OXI, en niveles excepcionalmenle superiores en levadura Pichia crecida en la presencia de metanol. En un ejemplo, se utiliza el vector de plásmido pPIC9K para expresar ADN que codifica una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, tal como se establece en la misma, en un sistema de levadura Pichia tal como se describe esencialmente en "Pichia Protocols: Methods in Molecular Biology", D. R. Higgins and J. Cregg, eds. The Humana Press, Totowa, NJ, 1998. Este vector de expresión permiíe la expresión y secreción del polipéptido de la presente invención en virtud del fueríe promotor A OXI enlazado al péptido de señal de segregación de fosfatasa alcalina Pichia pastoris (PHO) (por ejemplo, líder) localizado en la corriente ascendente de un sitio de clonación múltiple. Se pueden utilizar muchos oíros vecíores de levadura en lugar de pPIC9K, lal como, pYES2, pYD 1 , pTEF1 /Zeo, pYES2/GS, pPICZ, pGAPZ, pGAPZalpha, pPIC9, pPIC3.5, pH I L-D2, pH I L-S1 , pPIC3.5K y PAO815, íal como lo puede apreciar un experto en la técnica, siempre que la construcción de expresión propuesta proporciona en forma adecuada señales para íranscripción, íraducción, segregación (si se desea), y similares, localizadas, incluyendo según se requiera un AUG deníro de la esírucíura. En oíra modalidad, la expresión de alto nivel de la secuencia de codificación heterologa, tal como, por ejemplo, un polinucleótido que codifica una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, puede lograrse clonando el polinucleótido heterólogo de la présenle invención en un vecíor de expresión, tal como, por ejemplo, pGAPZ o pGAPZalpha, y creciendo el cultivo de levadura en la ausencia de metanol. Además, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención pueden ser sintetizadas en forma química utilizando técnicas conocidas en el arte (ver por ejemplo, la publicación de Creighton, 1983, Proteins: Structures and Molecular Principies, W. H. Freeman & Co. , N .Y. , and Hunkapiller eí al. , Nature, 310: 105-1 1 1 (1984)). Por ejemplo, un polipéptido que corresponde a un fragmento de un polipéptido, puede ser siníelizado a íravés del uso de un siníeíizador de péplido. Además, si se desea, se pueden inlroducir aminoácidos no clásicos o análogos de aminoácidos químicos como una substitución o adición en la secuencia de polipéptido. Los aminoácidos no clásicos incluyen , pero no se limitan a, los isómeros-D de los aminoácidos comunes, ácido 2,4-diaminobulírico, ácido a-amino isobuíírico, ácido 4-aminobuíírico, Abu, ácido 2-amino butírico, g-Abu, e-Ahx, ácido 6-amino hexanoíco, Aib, ácido 2-amino isobuíírico, ácido 3-amino propiónico, orniíina, norleucina, norvalina, hidroxiprolina, sarcosina, cilrulina, homociírulina, ácido cisíeíco, í-buíilglicina, t-bulilanina, fenilglicina, ciclohexilalanina, b-alanina, flúoro-aminoácidos, aminoácidos diseñadores tales como ácidos b-metilo, aminoácidos Ca-meíilo, aminoácidos Na-meíilo y análogos de aminoácidos en general. Además, el aminoácido puede ser D (dexlrogiraíorio) o L (levogiraíorio). La presente invención comprende proteínas de fusión de albúmina de la presente invención las cuales se modifican en forma diferencial durante o después de la traducción, por ejemplo, mediante glucosilación , acetilación, fosforilación, amidación, derivación a través de grupos de protección/bloqueo conocidos, disociación proíeolítica, ligadura a una molécula de anticuerpo u otro ligando celular, eíc. Se pueden llevar a cabo cualesquiera de las diversas modificaciones químicas a íravés de lécnicas conocidas, incluyendo pero sin limiíarse a, disociación química específica mediante bromuro de cianogeno, tripsina, quimioíripsina, papaina, proleasa V8, NaBH4; aceíilación, formilación, oxidación, reducción; síntesis metabólica en la presencia de íunicamicina; eíc. Las modificaciones posí-íraducción adicionales comprendidas en la présenle invención, incluyen por ejemplo, cadenas de carbohidraío enlazadas-N o enlazadas-O, procesamienío de exlremo de íerminal-N o terminal-C, adhesión de porciones químicas al esquelelo de aminoácido, modificaciones químicas de cadenas de carbohidrato enlazadas-N o enlazadas-O, y la adición o eliminación de un residuo de metionina de ferminal-N como resulíado de la expresión de célula huésped procarióíica. Las proíeínas de fusión de albúmina también pueden ser modificadas con una etiqueía deíeclable, íal como una eíiqueía enzimáfica, fluorescente, isotópica o de afinidad para permitir la detección y aislamiento de la proteína. Los ejemplos de enzimas adecuadas incluyen peroxidasa de rábano, fosfatasa alcalina, befa-galaclosidasa o aceíilcolinesíerasa; los ejemplos de complejos de grupo prosíéticos adecuados incluyen esírepíavidina/bioíina y avidina/biotina; los ejemplos de materiales fluorescentes adecuados incluyen umbeliferona, fluorescencia, isoíiocianaío de fluorescencia, rodamina, fluorescencia de diclorotriazinilamina, cloruro de dansilo o ficoerilrina; un ejemplo de un maíerial luminiscenle incluye luminol; los ejemplos de maíeriales bioluminisceníes incluyen luciferasa, luciferina y aequorina; y los ejemplos de malerial radioaclivo adecuado incluyen yodo (121 l , 123l , 125l , 131 l ), carbono (14C), azufre (35S), triíio (3H), indio (1 1 1 l n, 1 12ln, 1 13m ln , 1 15m ? ln), íecneíio (aaTc, aamTc), íalio (¿ülTi), galio ( r6b8B,Ga 67 Ga), paladio (1 UJPd), molibdeno (aaMo), xenón (l ? Xe), flúor (? aF), 153Sm, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 7Sc, 186Re, 188Re, 1 2Pr, 105Rh y 97Ru. En modalidades específicas, las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe invención o fragmentos o variantes de las mismas se adhieren a queladores macrocíclicos que se asocian con iones de radiometal, incluyendo pero sin limiíarse a, 177Lu, 90Y, 166Ho y 153Sm, para polipéplidos. En una modalidad preferida, el ion de radiometal asociado con los queladores macrocíclicos, es 1 1 1 ln. En otra modalidad preferida, el ion de radiometal asociado con el quelador macrocíclico es 90Y. En modalidades específicas, el quelador macrocíclico es ácido 1 ,4,7, 1 O-teíraazacyclododecane-N J N', N"I N'"-teíraacéíico (DOTA). En oirás modalidades específicas, DOTA se adhiere a un anticuerpo de la presente invención o fragmento del mismo a través de una molécula enlazadora. Los ejemplos de moléculas enlazadoras útiles para conjugar DOTA a un polipéplido son comúnmenfe conocidos en la técnica - ver por ejemplo, la publicación de DeNardo et al. , Clin Cáncer Res. 4(10): 2483-90 (1998); Peterson et al. , Bioconjug. Chem. 10(4): 553-7 (1999); y Zimmerman et al. , Nucí. Med. Biol. 26(8): 943-50 (1999); las cuales están incorporadas en su tolalidad a la presente invención como referencia. Tal como se mencionó anteriormenle, las profeínas de fusión de albúmina de la preseníe invención pueden ser modificadas a íravés de cualesquiera procesos naíurales, lales como procesamienío post-íraducción, o medíanle técnicas de modificación químicas las cuales son conocidas en el arte. Se podrá apreciar que el mismo tipo de modificación puede encontrarse en el mismo grado o en diversos sitios de un polipéptido determinado. Los polipéptidos de la preseníe invención pueden ser ramificados, por ejemplo, como resultado de ubiquitinación, y pueden ser cíclicos, con o sin ramificación. Los polipéplidos cíclicos, ramificados y cíclicos ramificados pueden resulfar de procesos naíurales de posl-lraducción o pueden ser elaborados a íravés de métodos sintéticos. Las modificaciones incluyen acetilación, acilación, ADP-ribosilación, amidación, adhesión covaleníe de flavina, adhesióncovalenfe de una porción heme, adhesión covalente de un nucleótico o derivado de nucleófido, adhesión covalenle de fosfotidilnosiíol, reíiculación, ciclización, formación de enlace de disulfuro, desmetilación, formación, de reticulaciones covalentes, formación de cisteína, formación de piroglutamato, formilación , gama-carboxilación, glucosilación , formación de ancla GPI , hidroxilación, yodinación, meíilación, mirisíilación, oxidación , pegilación, procesamienío profeolííico, fosforilación, prenilación, racemización, selenoilación, sulfación, adición íransmilida por íransferencia-ARN de aminoácidos a proleínas lales como arginilación y ubiquitinación. (Ver, por ejemplo, la publicación de PROTEI NS - STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTI ES, 2nd Ed. , T. E. Creighton, W. H. Freeman and Company, Nueva York (1993); POST-TRANSLATIONAL COVALENT MODI FICATION OF PROTEI NS, B. C. Johnson, Ed. , Academic Press, Nueva York, pgs. 1 -12 (1983); Seifter et al. , Meth. Enzimol. 182: 626-646 (1990); Raítan et al. , Ann. N.Y. Acad. Sci. 663: 48-62 (1 992)).

Las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y anticuerpos que enlazan a una proleína Terapéuíica o fragmentos o variantes de los mismos, pueden ser fusionadas a secuencias marcadoras, tales como un pépíido para facilitar la purificación. En modalidades preferidas, la secuencia de aminoácido marcadora es un péptido de hexa-histidina, tal como la marca proporcionada en un vector pQE (QIAGEN, Inc. , 9259 Eton Avenue, Chaísworlh, CA, 9131 1 ), eníre otros, muchos de los cuales están comerciaimeníe disponibles. Tal como se describe en la publicación de Genlz eí al. , Proc. Naíl. Acad. Sci. EUA 86: 821-824 (1989), por ejemplo, hexa-histidina proporciona purificación conveniente de la proteína de fusión. Otras marcas de péptidos útiles para purificación incluyen, pero no se limitan a, la marca "HA", la cual corresponde a un epítope derivado de la proteína de hemagluíinina de influenza (Wilson eí al. , Cell 37: 767 (1984)) y la marca "flag". Además, se puede conjugar una proleína de fusión de albúmina de la preseníe invención a una porción lerapéutica tal como citoloxina, por ejemplo, un agenle ciloestático o citocidal, un agente terapéutico o un ion de metal radioactivo, por ejemplo, alfa-emisores tales como, por ejemplo, 213BÍ. Un agente de citotoxina o citoíoxico incluye cualquier ageníe que sea perjudicial para las células. Los ejemplos incluyen pacliíaxol, ciíocalasina B, gramidicina D, bromuro de elidió, emefina, mitomicina, etoposida, tenoposida, vincristina, vinblastina, colchicina, doxorubicina, daunorubicina, diona de antricina de dihidroxi, meíoxanírona, miíramicina, acíinomicina D, 1 -deshidrofeslosíerona, glucocorlicoides, procaína, íeíracaina, lidocaina, propano! y puromicina y análogos u homologosde los mismos. Los ageníes terapéuíicos incluyen pero no se limiían a, aníimelabollíos (por ejemplo, meíolrexaío, 6-mercapíopurina, 6-lioguanina, cifarabina, decarbacina de 5-fluorouracilo), agentes de alquilación (por ejemplo, meclororetamina, clorambucil de tioepa, melfalan, carmustina (BSNU) y lomustina (CCNU), ciclotosfamida, busulfan, dibromomanitol, esíreptozoíocina, milomicina C, y plaíino de cis-diclorodiamina (I I ) (DDP) cisplatina), antraciclinas, (por ejemplo, daunorubicina ((principalmeníe daunomicina) y doxorobicina), antibióticos (por ejemplo, dactinomicina (principalmente actinomicina), bleomicina, mitramicina, y aníramicina (AMC)) y ageníes aníi-miloíicos (por ejemplo, vincrisíina y vinblastina). Los conjugados de la presenfe invención se pueden utilizar para modificar una respuesta biológica deíerminada, el ageníe íerapéuíico o porción de fármaco no será construida como limitada a los agentes terapéuticos químicos clásicos. Por ejemplo, la porción del fármaco puede ser una proteína o polipéptido que posea una actividad biológica deseada. Dichas proíeínas pueden incluir, por ejemplo, una loxina íal como abrina, ricina A, exofoxina de pseudomonas, o íoxina de difteria; una proteína tal como factor de necrosis de tumor, interferón-alfa, interferón-ß, faclor de crecimienfo de nervios, facíor de crecimienío derivado de plaqueías, acíivador de plasminogeno de íejido, un ageníe apoplóíico, por ejemplo, TNF-alfa, TNF-beía, AI M I (Ver, Publicación I níernacional No. WO 97/33899), AI M I I (Ver, Publicación I níernacional No. WO 97/3491 1 ), Ligando Fas (Takahashi el al. , Int. Immunol. , 6: 1567-1574 (1994)), VEGI (Ver, publicación Iníernacional No. WO 99/23105), un agente trombótico o un agente aníi-angiogénico, por ejemplo, angiosíaíina o endosíaíina; o modificadores de respuesía biológica íal como, por ejemplo, limfocinas, inferleucina-1 ("I L-1 "), iníerleucina-2 ("I L-2"), inlerleucina-6 ("I L-6"), factor de estimulación de colonia de macrofagos de granulociío ("GM-CSF"), factor de estimulación de colonia de granulocito ("G-CSF"), u oíros factores de crecimiento. Las íécnicas para conjugar dicha porción ferapéuíica para proleínas (por ejemplo, proleínas de fusión de albúmina) son conocidas en la técnica. Las proteínas de fusión de albúmina también pueden ser adheridas a soportes solidos, los cuales son particularmente útiles para inmunizar o su purificación de polipéplidos que son enlazados medianíe, que enlazan a, o que se asocian con, proleínas de fusión de albúmina de la presente invención. Dichos soportes solidos incluyen, pero no se limitan a, vidrio, celulosa, poliacrilamida, nylon, poliestireno, cloruro de polivinilo o polipropileno. Las proteínas de fusión de albúmina, con o sin una porción terapéulica conjugada a ios mismos, administrados solos o en combinación con factores citotoxicos y/o citocinas, se pueden utilizar como terapéuticos. En modalidades en donde la proteína de fusión de albúmina de la presente invención comprende únicamente el dominio VH de un anticuerpo que enlaza una proíeína Terapéuíica, puede ser necesaria y/o deseable para co-expresar la proíeína de fusión con el dominio VL del mismo aníicuerpo que enlaza una proíeína Terapéulica, de modo que la proíeína de fusión de albúmina-VH y la proteína VL se asociará (ya sea en forma covalente o no covalente) posíerior a la traducción. En modalidades en donde la proteína de fusión de albúmina de la presente invención comprende únicamente el dominio VL de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica, puede ser necesario y/o deseablo co-expresar un conjunto de la proteína de fusión con el dominio VH de un anticuerpo que enlaza una proteína Terapéutica, de modo que la proteína de fusión de albúmina-VL y la proteína VH se asociará (ya sea en forma covaleníe o no covaleníe) posíerior a la íraducción. Algunos anticuerpos Terapéuticos son aníicuerpos biespecíficos, lo que significa que el aníicuerpo que enlaza a una proleína Terapéulica es un anticuerpo híbrido artificial que tiene dos diferentes pares de cadena pesada/ligera y dos diferentes sitios de enlace. Con el objeto de crear una proteína de fusión de albúmina que corresponde a dicha proteína Terapéutica, es posible crear una proteína de fusión de albúmina la cual tenga un fragmenío scFv fusionado lanío al lérmino-N y término-C de la porción de la proteína de albúmina. Más particularmente, el scFv fusionado al término-N de albúmina podría corresponder a uno de los pares pesados/ligeros (VH/VL) del anticuerpo original que enlaza una proteína Terapéutica y el scFv fusionado al término-C de albúmina podría corresponder ai otro par pesado/ligero (VH/VL) del anticuerpo original que enlaza una proteína Terapéutica. También se proporciona en la presente invención derivados químicamente modificados de proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, los cuales pueden proporcionar ventajas adicionales, íal como solubilidad incremeníada, esíabilidad y íiempo de circulación del polipépíido, o inmunogenicidad disminuida (ver Paíeníe Noríeamericana No. 4, 179,337). Las porciones químicas para derivación pueden ser seleccionadas de polímeros solubles en agua, íales como, polietilénglicol, copolímeros de etilénglicol/propilénglicol, carboximetilcelulosa, dextrano, alcohol polivinílico y similares. Las proleínas de fusión de albúmina pueden ser modificadas en posiciones aleaíorias dentro de la molécula, o en posiciones predeterminadas deníro de la molécula y pueden incluir, una, dos, íres o más porciones químicas adheridas. El polímero puede lener cualquier porción molecular, y puede ser ramificado o no ramificado. Para polietilénglicol, el peso molecular preferido es entre aproximadamente 1 kDa y aproximadamente 100 kDa (el término "aproximadameníe" indica que en preparaciones de polieíilénglicol, algunas moléculas lendrán más o menos peso, que ei peso molecular manifesíado) para facilidad en la manipulación y fabricación. Se pueden utilizar otros tamaños, dependiendo del perfil terapéutico deseado (por ejemplo, la duración de la liberación sostenida deseada, los efectos, y cualesquiera en la actividad biológica, la facilidad de manipulación, el grado o carencia de anligenicidad y oíros efecíos conocidos del polieíilénglicol para una proteína Terapéutica o análoga). Por ejemplo, el polieíilénglicol puede fener un peso molecular promedio de aproximadameníe 200, 500, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500, 7000, 7500, 8000, 8500, 9000, 9500, 10,000, 10,500, 11,000, 11,500, 12,000, 12,500, 13,000, 13,500, 14,000, 14,500, 15,000, 15,500, 16,000, 16,500, 17,000, 17,500, 18,000, 18,500, 19,000, 19,500, 20,000, 25,000, 30,000, 35,000, 40,000, 45,000, 50,000, 55,000, 60,000, 65,000, 70,000, 75,000, 80,000, 85,000, 90,000, 95,000 o 100,000 kDa. Tal como se observó anteriormeníe, el polieíilénglicol puede íener una esíructura ramificada. Los polietilénglicoles ramificados se describen, por ejemplo, en la Pateníe Norteamericana No. 5,643,575; en las publicaciones Morpurgo ef al, Appl. Biochem. Biotechnol. 56: 59-72 (1996); Vorobjev eí al., Nucleosides Nucleotides 18: 2745-2750 (1999); y Caliceíi el al., Bioconjug. Chem. 10: 638-646 (1999), cuyas descripciones eslán incorporadas en su totalidad a la presente invención como referencia.

Las moléculas de polietilénglicol (u otras porciones químicas) deben ser adheridas a la proteína con consideración de los efectos en dominios funcionales o antigénicos de la proteína. Existe un número de métodos de adhesión disponibles para los expertos en la técnica, tales como, por ejemplo, el método que se describe en la Paíente EP O 401 384 (acoplamiento de PEG a G-CSF), incorporada a la presente invención como referencia; ver íambién la publicación de Malik eí al., Exp. Hematol. 20: 1028-1 035 (1992), reporte de pegilación de GM-CSF uíilizando cloruro de íresilo. Por ejemplo, el polieíilénglicol puede ser enlazado en forma covalenle a íravés de residuos de aminoácido medianíe un grupo reacíivo, tal como un grupo amino o carboxilo libre. Los grupos reactivos son aquellos a los cuales se puede enlazar una molécula de polietilénglicol activada. Los residuos de aminoácido que íienen un grupo amino libre pueden incluir residuos de lisina y los residuos de aminoácido de lerminal-N; aquellos que íienen un grupo carboxilo libre pueden incluir residuos de ácido aspáríico, residuos de ácido gluíámico y residuos de aminoácidos de terminal-C. Los grupos sulfidrilo también se pueden utilizar como un grupo reactivo para adherir las moléculas de polieíilénglicol. Lo que se prefiere para propósifos terapéuticos, es adhesión en un grupo amino, tal como adhesión en el término-N o grupo de lisina. Tal como se sugirió aníeriormente, el polietilénglicol puede ser adherido a proteínas a través de ligadura a cualquiera de un número de residuos de aminoácidos. Por ejemplo, el polieíilénglicol puede ser enlazado a profeínas a íravés de enlaces covalenles a lisina, hislidina, ácido aspáríico, ácido gluíámico o residuos de cisíeína. Se pueden emplear una o más químicas de reacción para adherir polietilénglicol a residuos de aminoácido específicos (por ejemplo, lisina, histidina, ácido aspáríico, ácido glutámico o cisteína) de la proteína a más de un tipo de residuos de aminoácido (por ejemplo, lisina, histidina, ácido aspárfico, ácido glulámico, cisíeína y combinaciones de los mismos) de la proíeína. Se puede desear en forma específica, proleínas modificadas en forma química en el íérmino-N . Utilizando polietilénglicol como una ilustración de la presente composición , se puede seleccionar de una variedad de moléculas de polieíilénglicol (medíanle peso molecular, ramificación, etc.), la proporción de moléculas de polietilénglicol a moléculas de profeína (polipéplido) en la mezcla de reacción, el tipo de reacción de pegilación que se llevará a cabo, y el método para obtener la proteína pegilada de terminal-N seleccionada. El método para obtener la preparación pegilada de íerminal-N (por ejemplo, separada esta porción de otras porciones monopegiladas si es necesario) puede ser mediante purificación del malerial pegilado medianíe íerminal-N de una población de moléculas de proleína pegilada. Las proíeínas seleclivas modificadas en forma química en la modificación de férmino-N, pueden lograrse mediante alquilación reductiva que explota la reactividad diferencial de difereníes lipos de grupos amino primarios (lisina versus de íerminal-N) disponibles para derivación en una proíeína en paríicular. Bajo las condiciones de reacción adecuadas, se puede lograr la derivación subsíancialmeníe selectiva de la proteína en el término-N con un grupo carboxilo que contiene polímero. Tal como se indicó anteriormente, la pegilación de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se puede lograr a íravés de cualquier número de medios. Por ejemplo, se puede adherir polieíilénglicol a la proíeína de fusión de albúmina ya sea en forma direcía o medianíe un enlazador de ¡níervención. Los sistemas sin enlazador para adherir polietilénglicol a proleínas, se describen en la publicación de Delgado eí al. , Crit. Rev. Thera. Drug Carrier Sys. 9: 249-304 (1 992); Francis et al. , I ntern . J . of Hematoi. 68: 1 -18 (1998); Patente Norteamericana No. 4,002,531 ; Patente Norteamericana No. 5, 349,052; publicación WO 95/06058 y publicación WO 98/32466, cuyas descripciones están incorporadas a la presente invención como referencia. Un sistema para adherir polietilénglicol directamente a residuos de aminoácido de proteínas sin un enlazador de intervención, emplea M PEG tresilado, el cual se produce mediante la modificación de polieíilénglicol monmetoxi (M PEG) utilizando tresilcloruro (CI SO2CH2CF3). Al momenío de la reacción de la proíeína con MPEG íresilado, el polieíilénglicol se adhiere directameníe a grupos amina de la proíeína. Por lo íanto, la preseníe invención incluye conjugados de proteína-polietilénglicol producidos mediante reacción de proteínas de la presente invención con una molécula de polietilénglicol que tiene un grupo sulfonilo 2,2,2-trifluoreoíano. El polietilénglicol también puede ser adherido a proteínas utilizando un número de diferentes enlazadores de iníervención. Por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 5, 612,460, cuya descripción está incorporada a la presente invención como referencia, describe enlazadores de ureíano para conectar el polietilénglicol a las proíeínas. Los conjugados de polietilénglicol-proteína, en donde el polietilénglicol se adhiere a la proteína a través de un enlazador, también pueden ser producidos mediante la reacción de proteínas con compuestos tales como el MPEG-succinimidilsuccinato, MPEG activado con 1 , 1 '-carbonildiimidazol, M PEG-2 ,4,5-tricloropenilcarbonalo, MPEG-p-nitrofenolcarbonato y varios derivados de MPEG-succinato. El número de derivados de polietilénglicol adicionales y químicas de reacción para adherir polietilénglicol a proíeínas, se describe en la Publicación I níernacional No. WO 98/32466, cuya descripción total está incorporada a la presente invención como referencia. Los productos de proteína pegilados producidos utilizando las químicas de reacción establecidas en la presente invención , se incluyen dentro del alcance de la misma. El número de porciones de polietilénglicol adheridas a cada porción de proteína de fusión de albúmina de la presente invención (por ejemplo, el grado de substitución) también puede variar. Por ejemplo, las proíeínas pegiladas de la preseníe invención pueden ser enlazadas, en promedio, a 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 17, 20 o más moléculas de polietilénglicol. En forma similar, el grado promedio de substitución dentro de rangos tales como 1-3, 2-4, 3-5, 4-6, 5-7, 6-8, 7-9, 8-10, 9-11, 10-12, 11-13, 12-14, 13-15, 14-16, 15-17, 16-18, 17-19 o 18-20 porciones de polieíilénglicol por molécula de proteína. Los métodos para determinar el grado de substitución se describen, por ejemplo, en la publicación de Delgado et al., Crit. Rev. Thera. Drug Carrier Sys. 9: 249-304 (1992). Los polipéptidos de la presente invención pueden ser recuperados y purificados de síntesis química y cultivos de célula recombinaníe a íravés de métodos estándar, los cuales incluyen, pero no se limitan a, precipitación de sulfato de amonio o etanol, exíracción de ácido, cromatografía de intercambio de aniones o cationes, cromatografía de fosfocelulosa, cromatografía de iníeracción hidrofóbica, cromatografía de afinidad, cromatografía de hidroxilapatiía y cromatografía de lectina. Más preferentemeníe, se emplea cromaíografía líquida de alio desempeño ("HPLC") para purificación. Se pueden emplear técnicas bien conocidas para multiplicación de proteínas, para regenerar la conformación activa cuando el polipéptido es naturalizado durante el aislamiento y/o purificación. La presencia y cantidad de proteína de fusión de albúmina de la presente invención , se puede obtener utilizando ELISA, un inmunoensayo bien conocido en la técnica. En un protocolo ELISA que puede ser útil para detectar/cuantificar proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , se comprenden los pasos de recubrir una placa ELISA con un anticuerpo de albúmina de suero anti-humano, bloquear la placa para prevenir el enlace no específico, lavar la placa ELISA, agregar una solución que contiene la proteína de fusión de albúmina de la presente invención (en una o más concentraciones diferentes), agregar un anticuerpo específico anti-proteína Terapéutico secundario acoplado a una marca detectable (tal como se describe en la presente invención o como se sabe en la técnica), y detectar la presencia del anticuerpo secundario. En una versión alternativa de este protocolo, la placa ELI SA puede ser recubierta con el anticuerpo específico anti-proteína Terapéutica y el reactivo secundario etiquetado puede ser el anticuerpo específico de albúmina anti-humano. Usos de los Polinucleótidos Cada uno de los polinucleótidos identificados en la presente invención , se pueden utilizar en numerosas formas como reactivos. La descripción que se encuentra a continuación debe ser considerada como de ejemplo y utiliza técnicas bien conocidas. Los polinucleótidos de la presente invención son útiles para producir las proteínas de fusión de albúmina de la misma. Tal como se describe con mayor detalle más adelante, los polinucleótidos de la presente invención (que codifican proteínas de fusión de albúmina) se pueden utilizar en métodos de ADN recombinante útiles en ingeniería genética para elaborar células, líneas celulares o tejidos que expresan la proteína de fusión de albúmina codificada por los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención. Los polinucleótidos de la presente invención también son útiles en terapia genética. Una meta de la terapia genética, es insertar un gen normal en un organismo que tiene un gen defectuoso, en un esfuerzo para corregir el efecto genético. Los polinucleótidos descritos en la presente invención ofrecen un medio para dirigir dichos defectos genéticos en una forma altamente precisa. Otra meta es insertar un nuevo gen que no estuvo presente en el genoma huésped, produciendo de esta forma un nuevo trato en la célula huésped. Los ejemplos no limitantes adicionales de el método de terapia genética comprendidos en la presente invención, se describen en forma más detallada dentro de la presente especificación (ver por ejemplo, la sección marcada como "Terapia Genética", y ejemplo 61 y 62). Usos de Polipéptidos Cada uno de los polipéptidos identificados en la presente invención, se pueden utilizar en numerosas formas. La descripción que se encuentra a continuación debe ser considerada como de ejemplo y utiliza técnicas conocidas. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, son útiles para proporcionar sondas inmunológicas para identificación diferencial del tejido(s) (por ejemplo, ensayos inmunohistoquímicos, tales como, por ejemplo, inmunoperoxidasa ABC (Hsu et al., J. Histochem. Cytochem. 29: 577-580 (1981)) o tipos de células (por ejemplo, ensayos de inmunohistoquímica). Las proteínas de fusión de albúmina se pueden utilizar para ensayar niveles de polipéptidos en una muestra biológica utilizando métodos inmunohistologicos clásicos conocidos por los expertos en la técnica (por ejemplo, ver las publicaciones de Jalkanen, et al., J. Cell. Biol. 101: 976-985 (1985); Jalkanen, et al., J. Cell. Biol. 105: 3087-3096 (1987). Otros métodos útiles para detectar la expresión genética de proteína incluyen inmunoensayos, tales como el ensayo inmunoabsorbente enlazado por enzimas (ELISA) y el radioinmunoensayo (RÍA). Las etiquetas de ensayo adecuadas son conocidas en la técnica e incluyen etiquetas enzimáticas, tales como, oxidasa de glucosa; radioisótopos, tales como yodo (13 l, 125I, 123l, 121I), carbono (14C), azufre (35S), tritio (3H), indio (115mln, 113mln, 112ln, 111In), y tecnetio (99Tc, 99mTc), talio (201Ti), galio (68Ga, 67Ga), paladio ( 03Pd), molibdeno (99Mo), xenón (133Xe), fluorina (18F), 153Sm, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 42Pr, 105Rh, 97Ru; etiquetas luminiscentes, tales como luminol; y etiquetas fluorescentes, tales como fluorescencia y rodamina, y biotina. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, también pueden ser detectadas in vivo mediante generación de imagen. Las etiquetas o marcadores para generación de imagen in vivo de proteína incluyen las detectables mediante radiografía-X, resonancia magnética nuclear (RMN) o relajación de vueltas de electrones (ESR). Para la radiografía-X, las etiquetas adecuadas incluyen radioisótopos tales como bario o cesio, permite la adhesión detectable pero no son peligrosas para el sujeto. Los marcadores adecuados para RMN y ESR incluyen aquellos con una rueda característica detectable, tal como deuterio, que pueden ser incorporadas en las proteínas de fusión de albúmina a través de etiquetación de nutrientes determinados para una línea celular que expresa la proteína de fusión de albúmina de la presente invención. Una proteína de fusión de albúmina que es etiquetada con una porción de generación de imagen detectable adecuada, tal como un radioisótopo (por ejemplo, 13 l, 112ln, 99mTc, (131I, 125l, 123I, 121 I), carbono (14C), azufre ( r3d50S), tritio (JH), indio 115m?n, 113m ln, 112ln, 111In), y tecnetio (99Tc, 99mTc), talio (201T¡), galio (68Ga, 67Ga), paladio (103Pd), molibdeno (99Mo), xenón (133Xe), flúor (18F, 153Sm, 177Lu, 59Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 97Ru), una substancia radio-opaca, o un material detectable mediante resonancia magnética nuclear, se introduce (por ejemplo, en forma parenteral subcutánea o intraperitoneal) en el mamífero que será revisado con respecto a padecimiento de sistema inmune. Quedará entendido en la técnica, que el tamaño del sujeto y el sistema de clonación de imagen utilizado, determinará la cantidad de porción de generación de imagen necesaria para producir imágenes de diagnóstico. En el caso de una porción de radioisótopo, para un sujeto humano, la cantidad de radioactividad inyectada normalmente fluctuará de aproximadamente 5 a 20 millicuries de 99mTc. La proteína de fusión de albúmina etiquetada, se acumulará posteriormente preferentemente en lugares en el cuerpo (por ejemplo, órganos, células, espacios extracelulares o matrices) en donde se localizan uno o más receptores, ligandos o substratos (que corresponden al de la proteína Terapéutica utilizada para elaborar la proteína de fusión de albúmina de la presente invención). Como alternativa, en el caso en donde la proteína de fusión de albúmina comprende ai menos un fragmento o variante de un anticuerpo Terapéutico, la proteína de fusión de albúmina etiquetada posteriormente se acumulará preferencialmente en los lugares en el cuerpo (por ejemplo, órganos, células, espacios extracelulares o matrices), en donde los polipéptidos/epítopes que corresponden a los enlazados mediante el anticuerpo Terapéutico (utilizados para elaborar la proteína de fusión de albúmina de la presente invención) se localizan. La generación de imágenes de tumor in vivo se describe en la publicación de S.W. Burchiel et al . , "I mmunopharmacokinetics of Radiolabeled Antibodies and Their Fragments" (Capítulo 13 en Tumor Imaging: The Radiochemical Detection of Cáncer, S.W. Burchiel and B. A. Rhodes, eds. , Masson Publishing I nc. (1 982)). Los protocolos que se describen en dichas publicaciones, pueden ser fácilmente modificados por un experto en la técnica para utilizarse dentro de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención . En una modalidad, la presente invención proporciona un método para el suministro específico de proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , células mediante administración de proteínas de fusión de albúmina de la presente invención (por ejemplo, polipéptidos codificados por polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o anticuerpos) que se asocian con polipéptidos heterólogos o ácidos nucleicos. En un ejemplo, la presente invención proporciona un método para suministrar una proteína Terapéutica en una célula dirigida. En otro ejemplo, la presente invención proporciona un método para suministrar un ácido nucleico de una sola hebra (por ejemplo, antisentido o ribocimas) o ácido nucleico de hebra doble (por ejemplo, ADN que puede integrarse en el genoma de la célula o replicarse en forma episomal y que puede ser transcrita) dentro de la célula dirigida. En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para la destrucción específica de células (por ejemplo, la destrucción de células de tumor) mediante administración de proteínas de fusión de albúmina de la presente invención en asociación con toxinas o profármacos citotóxicos. Por el término "toxina" se entiende uno o más compuestos que enlazan y activan sistemas efectores citotoxicos endógenos, radioisótopos, halotoxinas, toxinas modificadas, subunidades catalíticas de toxinas, o cualesquiera moléculas o enzimas que no se encuentran normalmente en la superficie de una célula que bajo condiciones definidas, origina la muerte celular. Las toxinas que pueden utilizarse de acuerdo con los métodos de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, radioisótopos conocidos en la técnica, compuestos tales como, por ejemplo, anticuerpos (o partes que contienen fijación de complemento de los mismos) que enlazan un sistema efector citotoxico endógeno inherente o inducido, cinasa de timidina, endonucleasa, ARNsa, alfa toxina, ricina, abrina, exotoxina A de Pseudomonas, toxina de difteria, saporina, momordina, gelonina, proteína antiviral "pokeweed", alfa-sarcina y toxina de colera. El término "toxina" también incluye un agente citoestático o citocidal, un agente terapéutico o un ion de metal radioactivo, por ejemplo, emisores-alfa tales como, por ejemplo, 213Bi, u otros radioisótopos tales como, por ejemplo, 103pd ? 133?ß? 131l f 68Ge_ 169 Yb, 51, Cr, 75< Mn, 'Se 113 Sn, 90> Ytrio, ??/T(estaño), ?b Renio, 166Holmio y 188Renio; etiquetas luminiscentes tales como luminol; y etiquetas fluorescentes tales como fluorescencia y rodamina, y biotina. En una modalidad específica, la presente invención proporciona un método para la destrucción específica de células (por ejemplo, la destrucción de células de tumor) administrando polipéptidos de la presente invención o anticuerpos de la misma en asociación con el radioisótopo 90Y. En otra modalidad específica, la presente invención proporciona un método para la destrucción específica de células (por ejemplo, la destrucción de células de tumor) administrando polipéptidos de la presente invención o anticuerpos de la misma en asociación con el radioisótopo 111In. En una modalidad específica adicional, la presente invención proporciona un método para la destrucción específica de células (por ejemplo, la destrucción de células de tumor) administrando polipéptidos de la presente invención o anticuerpos de la misma en asociación con el radioisótopo 131l. Las técnicas conocidas en el arte pueden aplicarse a polipéptidos lábiles de la presente invención. Dichas técnicas incluyen, pero no se limitan a, al uso de agentes de conjugación bifuncionales (ver por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Nos. 5,756,065 5,714,631; 5,696,239; 5,652,361; 5,505,931; 5,489,425; 5,435,990 5,428,139; 5,342,604; 5,274,119; 4,994,560 y 5,808,003 cuyos contenidos están incorporados en su totalidad a la presente invención como referencia). Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención son útiles para diagnóstico, tratamiento, prevención y/o prognosis de diversos padecimientos en mamíferos, preferentemente humanos. Dichos padecimientos incluyen, pero no se limitan a, los que se describen en la presente invención bajo la sección con el encabezado de "Actividades Biológicas", que se encuentra más adelante. Por lo tanto, la presente invención proporciona un método de diagnóstico de un padecimiento, el cual comprende (a) ensayar el nivel de expresión de un cierto polipéptido en células o fluido corporal de un individuo, utilizando una proteína de fusión de albúmina de la presente invención; y (b) comparar el nivel de expresión del polipéptido ensayado con un nivel de expresión del polipéptido estándar, mediante lo cual un incremento o disminución en el nivel de expresión del polipéptido ensayado comparado con el nivel de expresión estándar, indica un padecimiento. Con respecto a cáncer, la presencia de una cantidad relativamente alta de transcripción en el tejido con biopsia procedente de un individuo, puede indicar una predisposición para el desarrollo de la enfermedad, o puede proporcionar un medio para detectar la enfermedad antes de la aparición de los síntomas clínicos reales. Un diagnóstico más definitivo de este tipo puede permitir a profesionales de la salud emplear medidas preventivas o tratamiento agresivo en forma más temprana, evitando de esta forma el desarrollo o progreso del cáncer. Además, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se pueden utilizar para tratar o prevenir enfermedades o condiciones tales como, por ejemplo, padecimientos neurales, padecimientos del sistema inmune, padecimientos musculares, padecimientos reproductores, padecimientos gastrointestinales, padecimientos pulmonares, padecimientos cardiovasculares, padecimientos renales, padecimientos proliferativos y/o padecimientos y condiciones cancerígenas. Por ejemplo, a los pacientes se les puede administrar un polipéptido de la presente invención, en un esfuerzo para reemplazar los niveles ausentes o disminuidos del polipéptido (por ejemplo, insulina), para suplementar niveles ausentes o disminuidos-polipéptido diferente, (por ejemplo, hemoglobina S para hemoglobina B, SOD, catalasa, proteínas de reparación de ADN) para inhibir la actividad de un polipéptido (por ejemplo, un oncogeno o supresor de tumor), para activar la actividad de un polipéptido (por ejemplo, mediante enlace a un receptor), para reducir la actividad de un receptor enlazado por membrana, mediante la competición con el mismo para el ligando libre (por ejemplo, receptores TNF solubles utilizados en inflamación por reducción), o para llevar brindar una respuesta deseada (por ejemplo, inhibición de crecimiento de vasos sanguíneos, aumento de la respuesta inmune a células o tejidos proliferativos). En particular, las proteínas de fusión de albúmina que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo Terapéutico, también se pueden utilizar para tratar enfermedades (tal como se describe supra, y en la presente invención). Por ejemplo, la administración de una proteína de fusión de albúmina que comprende al menos un fragmento o variante de un anticuerpo Terapéutico puede enlazar, y/o neutralizar el polipéptido para el cual se utiliza el anticuerpo Terapéutico para elaborar la proteína de fusión de albúmina se enlaza en forma específica, y/o reduce la sobreproducción del polipéptido para el cual el anticuerpo Terapéutico utilizado elabora la proteína de fusión de albúmina que enlaza en forma específica. En forma similar, la administración de una proteína de fusión de albúmina que comprende al menos un fragmento o variante de un anticuerpo Terapéutico puede activar el polipéptido para el cual el anticuerpo Terapéutico utilizado, elabora la proteína de fusión de albúmina que enlaza en forma específica, enlazándola al polipéptido enlazado a una membrana (receptor). Como mínimo, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención pueden ser utilizadas como marcadores de peso molecular en geles SDS-PAGE o en columnas de filtración de gel de cernidor molecular utilizando métodos conocidos por los expertos en la técnica. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención también se pueden utilizar para elevar anticuerpos, los cuales a su vez pueden ser utilizados para medir la expresión de proteína de la proteína Terapéutica, proteína de albúmina y/o proteína de fusión de albúmina de la presente invención a partir de una célula recombinante, como una forma de evaluar la transformación de la célula huésped, o en una muestra biológica. Además, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención se pueden utilizar para probar las actividades biológicas aquí descritas. Ensayos de diagnóstico Los compuestos de la presente invención son útiles para diagnóstico, tratamiento, prevención y/o prognosis de varios padecimientos en mamíferos, preferentemente monos. Dichos padecimientos incluyen, pero no se limitan a, los que se describen para cada proteína Terapéutica en la fila correspondiente de la Tabla 1, y en la presente invención bajo el encabezado de la sección "actividad inmune", "padecimientos relacionados con la sangre", "padecimientos tipo proliferativos", "padecimientos renales", "padecimientos cardiovasculares", "padecimientos respiratorios", "actividad anti-angiogénesis", "enfermedad a nivel celular", "sanación de heridas y proliferación de célula epitelial", "actividad neural y enfermedades neurológicas", "padecimientos endocrinos", "padecimientos del sistema reproductor", "enfermedad infecciosa", "regeneración", y/o "padecimientos gastrointestinales", infra. Para un número de padecimientos, se pueden eliminar los niveles substancialmente alterados de expresión genética en los tejidos, células o fluidos corporales (por ejemplo, sueros, plasma, orina, semen, fluido sinovial o fluido espinal) tomado de un individuo que tiene dicho padecimiento, relativo a un nivel de expresión de gen "estándar", esto es, el nivel de expresión en tejidos o fluidos corporales de un individuo no tiene el padecimiento. Por lo tanto, la presente invención proporciona un método de diagnóstico útil durante el diagnóstico de un padecimiento, el cual comprende medir el nivel de expresión del gen que codifica un polipéptido en tejidos, células o fluido corporal de un individuo y comparando el nivel de expresión de gen medido con un nivel de expresión de gen estándar, mediante lo cual un incremento o disminución en el nivel(s) de expresión de gen en comparación con el estándar, indica un padecimiento. Estos ensayos de diagnóstico, pueden llevarse a cabo in vivo o in vitro, tal como, por ejemplo, en muestras sanguíneas, tejidos de biopsias o tejidos de autopsias. La presente invención también es útil como un indicador de pronóstico, mediante lo cual los pacientes que exhiben expresión genética aumentada o disminuida, experimentarán un resultado clínico menos favorable. Mediante la frase "ensayo de nivel de expresión del gen que codifica un polipéptido", se entiende la medición o estimación cualitativa o cuantitativa del nivel de un polipéptido en particular (por ejemplo, un polipéptido que corresponde a una proteína Terapéutica que se describe en la Tabla 1) o el nivel del mARN que codifica el polipéptido de la presente invención en una primera muestra biológica, ya sea directamente (por ejemplo, mediante la determinación o estimación del nivel de proteína absoluto o nivel de mARN) o relativamente (por ejemplo, comparando con el nivel de polipéptido o nivel de mARN en una segunda muestra biológica). Preferentemente, el nivel de expresión de polipéptido o nivel de mARN en la primera muestra biológica se mide o estima y compara con un nivel de polipéptido estándar o nivel de mARN, tomándose el estándar de una segunda muestra biológica obtenida de un individuo que no tiene el padecimiento o que está siendo determinada promediando los niveles de una población de individuos que no tienen el padecimiento. Tal como se apreciará en la técnica, una vez que el nivel de polipéptido estándar o un nivel de mARN es conocido, se puede utilizar repetidamente como un estándar para comparación. Por el término "muestra biológica" se entiende cualquier muestra biológica obtenida de un individuo, línea celular, cultivo de tejido u otra fuente que contiene los polipéptidos de la presente invención (incluyendo partes de los mismos) o mARN. Tal como se indicó, las muestras biológicas incluyen fluidos corporales (tales como suero, plasma, orina, fluido sinovial y fluido espinal) y fuentes de tejido en las que se expresa la longitud total de fragmentos de un polipéptido o mARN. Los métodos para obtener biopsias de tejido y fluidos corporales de mamíferos, son bien conocidos en la técnica. Cuando la muestra biológica incluya mARN, una biopsia de tejido es la fuente preferida. El ARN celular total puede ser aislado de una muestra biológica utilizando cualquier técnica adecuada tal como el método de un solo paso de guanidinio-tiocianato-fenol-cloroformo se describe en la Publicación de Chomczynski and Sacchi, Anal. Biochem. 162:156-159 (1987). Los niveles de mARN que codifican los polipéptidos de la presente invención se ensayan posteriormente utilizando cualquier método adecuado. Estos incluyen análisis de manchado Northern, mapeo de nucleasa S1, la reacción de cadena de polimerasa (PCR), transcripción inversa en combinación con la reacción de cadena de polimerasa (RT-PCR), y transcripción inversa en combinación con la reacción de cadena de ligasa (RT-LCR). La presente invención también se refiere a ensayos de diagnóstico, tales como ensayos cuantitativos y de diagnóstico para detectar niveles de polipéptidos que enlazan a, son enlazados mediante, o se asocian con, proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, en una muestra biológica (por ejemplo, células y tejidos) incluyendo la determinación de niveles normales y anormales de polipéptidos. Por lo tanto, por ejemplo, un ensayo de diagnóstico de acuerdo con la presente invención para detectar la expresión anormal de polipéptidos que enlazan a, son enlazados mediante, o se asocian con, proteínas de fusión de albúmina en comparación con muestras de tejido de control normal, se puede utilizar para detectar la presencia de tumores. Las técnicas de ensayo que pueden ser utilizadas para determinar los niveles de un polipéptido que enlazan a, son enlazados mediante, o se asocian con, proteínas de fusión de albúmina de la presente invención en una muestra derivada de un huésped, son conocidos por los expertos en la técnica. Dichos métodos de ensayo incluyen radioinmunoensayos, ensayos de enlace competitivo, análisis de Manchado Western y ensayos ELISA. El ensayo de niveles de polipéptido en una muestra biológica, puede ocurrir utilizando un método conocido en la técnica. El ensayo de niveles de polipéptido en una muestra biológica puede ocurrir utilizando una variedad de técnicas. Por ejemplo, la expresión de polipéptido en tejidos puede ser estudiada con métodos inmunohistologicos clásicos (Jalkanen y Asociados, J. Cell. Biol. 101:976-985 (1985); Jalkanen, M. y Asociados, J. Cell. Biol. 105:3087-3096 (1987)). Otros métodos útiles para detectar la expresión genética de polipéptido incluyen inmunoensayos, tales como el ensayo inmunoabsorbente enlazado por enzimas (ELISA) y el radioinmunoensayo (RÍA). Las etiquetas de ensayo de anticuerpo adecuadas, son conocidas en la técnica e incluyen etiquetas de enzima tales como, oxidasa de glucosa y radioisótopos tales como yodo (125l, 121l), carbón (14C), azufre (35S), tritio (3H), indio (112ln), y tecnetio (99mTc), y etiquetas fluorescentes, tales como fluoresceína y rodamina, y biotin. El tejido o tipo celular que será analizado, generalmente incluirá aquéllos que son conocidos, o de los que se sospecha, que expresan el gen de interés (tal como, por ejemplo, cáncer). Los métodos de aislación de proteína empleados en la presente invención, pueden por ejemplo, ser los que se describen en la Publicación de Harlow and Lañe (Harlow, E. and Lañe, D., 1988, "Antibodies: A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, Nueva York), la cual está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia. Las células aisladas pueden ser derivadas de cultivo celular o de un paciente. El análisis de células tomado de cultivo puede ser un paso necesario en la evaluación de células que pueden ser utilizadas como parte de una técnica de terapia de gen a base de células, o como alternativa, para probar el efecto de los compuestos en la expresión del gen. Por ejemplo, las proteínas de fusión de albúmina pueden ser utilizadas para detectar en forma cuantitativa o cualitativa la presencia de polipéptidos que enlazan a, son enlazadas mediante, o se asocian con, proteínas de fusión de albúmina de la presente invención . Esto se puede lograr, por ejemplo, mediante técnicas de fluorescencia que emplean una proteína de fusión de albúmina etiq uetada en forma fluorescente acoplada con detección mediante microscopio de luz, citometría de flujo o fluorimetría. En una modalidad preferida, las proteínas de fusión de albúmina que comprenden al menos un fragmento o variante de un anticuerpo que enlaza en forma específica al menos una proteína Terapéutica aqu í descrita (por ejemplo, las proteínas Terapéuticas que se describen en la Tabla 1 ), o conocidas de otra manera en la técnica, se pueden utilizar para detectar en forma cuantitativa o cualitativa la presencia de productos de gen o variantes conservadas o fragmentos de péptidos de las mismas. Esto se puede lograr, por ejemplo, mediante técnicas de inmunofiuorescencia que emplean u n anticuerpo etiquetado en forma fl uorescente acoplado con detección de microscopio de luz, citometría de flujo, o fluorimetría. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención pueden además, ser empleadas en forma histológica , tal como en ensayos de inmunofluorescencia, microscopía de inmunoelectron o no inmunológicos, para la detección ¡n situ de polipéptidos que enlazan a, son enlazados mediante, o se asocian con una proteína de fusión de albúmina de la presente invención. La detección in situ se puede llevar a cabo eliminando un espécimen histológico de un paciente, y aplicando al mismo un anticuerpo o polipéptido etiquetado de la presente invención. Las proteínas de fusión de albúmina se aplican preferentemente traslapando las proteínas de fusión de albúmina etiquetadas en una muestra biológica. A través del uso de este procedimiento, es posible determinar no únicamente la presencia de polipéptidos que enlazan a, son enlazados mediante, o se asocian con proteínas de fusión de albúmina, sino también su distribución en el tejido revisado. Utilizando la presente invención, los expertos en la técnica podrán percibir que se puede modificar cualquiera de una amplia variedad de métodos histológicos (tales como procedimientos de tinción) con el objeto de lograr dicha detección in situ. Los inmunoensayos y no inmunoensayos que detectan polipéptidos que enlazan a, son enlazados mediante, o se asocian con, proteínas de fusión de albúmina, comprenderán normalmente la incubación de una muestra, tal como un fluido biológico, un extracto de tejido, células recientemente recolectadas, o usados de células que han sido incubados en cultivo celular, en la presencia de un anticuerpo etiquetado en forma detectable con la capacidad de enlazar productos de gen o variantes conservadas o fragmentos de péptido de los mismos, y detectar el anticuerpo enlazado a través de cualquier número de técnicas conocidas en el arte. La muestra biológica puede ponerse en contacto con, e inmovilizarse en, un soporte de fase solida de vehículo tal como nitrocelulosa, u otro soporte solido que tenga la capacidad de inmovilizar células, o partículas de células o proteínas solubles. Posteriormente el soporte puede ser lavado con reguladores adecuados seguidos de tratamiento con la proteína de fusión de albúmina etiquetada en forma detectable de la presente invención. El soporte de fase solida posteriormente puede ser lavado con el regulador una segunda vez para eliminar el anticuerpo o polipéptido no enlazado. Opcionalmente, el anticuerpo es etiquetado en forma subsecuente. La cantidad de etiqueta enlazada en el soporte solido, posteriormente puede ser detectada a través de medios convencionales. Por la frase "soporte de fase solida o vehículo" se entiende cualquier soporte con la capacidad de enlazar un polipéptido (por ejemplo, una proteína de fusión de albúmina, o polipéptido que enlaza, es enlazado mediante, o se asocia con, una proteína de fusión de albúmina de la presente invención). Los soportes o vehículos bien conocidos incluyen vidrio, poliestireno, polipropileno, polietileno, dextrano, nylon, amilasas, celulosas naturales y modificadas, poliacrilamidas, roca ígnea, y magnetita. La naturaleza del vehículo puede ser ya sea soluble hasta cierto punto o ¡nsoluble para los propósitos de la presente invención. El material de soporte puede tener virtualmente cualquier configuración estructural posible, siempre que la molécula acoplada tenga la capacidad de enlazar un polipéptido. Por lo tanto, la configuración del soporte puede ser esférica, como en granulos, o cilindrica, tal como en la superficie interna adentro de un tubo de prueba, o la superficie externa de una varilla. Como alternativa, la superficie puede ser plana tal como una lámina, una tira de prueba, etc. Los soportes preferidos incluyen granulos de poliestireno. Los expertos en la técnica conocerán muchos otros vehículos adecuados para enlazar anticuerpos o antígenos, o tendrán la capacidad de confirmar los mismos a través del uso de experimentación de rutina. La actividad de enlace de un lote determinado de proteína de fusión de albúmina, puede determinarse de acuerdo con métodos bien conocidos. Los expertos en la técnica tendrán la capacidad de determinar condiciones de ensayo operativas y óptimas para cada determinación, empleando experimentación de rutina. Además de ensayar niveles de polipéptido en una muestra biológica obtenida de un individuo, los polipéptidos pueden ser detectados in vivo mediante generación de ¡magen. Por ejemplo, en una modalidad de la presente invención, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención se utilizan para generar imágenes de células enfermas o neoplásticas. Las etiquetas o marcadores para generación de imagen in vivo de proteína de fusión de albúmina de la presente invención, incluyen aquéllas detectables mediante radiografía-X, RMN, MRI, exploraciones-CAT o ESR. Para radiografía-X, las etiquetas adecuadas incluyen radioisótopos tales como bario o cesio, los cuales emiten radiación detectable pero no son potencialmente peligrosos para el sujeto. Los marcadores adecuados para RMN y ESR, incluyen aquéllos con una rueda característica detectable, tal como deuterio, que se puede incorporar en la proteína de fusión de albúmina etiquetando los nutrientes de una línea de célula (o cepa bacteriana de levadura) construida. Además, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención cuya presencia puede ser detectada, pueden ser administradas. Por ejemplo, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención etiquetadas con un compuesto radio-opaco u otros compuestos adecuados, puede administrarse y visualizarse in vivo, tal como se describe, anteriormente para anticuerpos etiquetados. Además, dichos polipéptidos pueden ser utilizados para procedimientos de diagnóstico in vitro. Un anticuerpo específico de polipéptido o fragmento de anticuerpo que ha sido etiquetado con una porción de generación de imagen detectable adecuada, tal como un radioisótopo (por ejemplo, 131l, 112ln, 99mTc), una substancia radio-opaca, o un material detectable mediante resonancia magnética nuclear, se introduce (por ejemplo, en forma parenteral, subcutánea, o intraperitoneal) en el mamífero que será revisado con respecto a un padecimiento. Quedará entendido en la técnica que el tamaño del sujeto del sistema de generación de imagen utilizado, determinará la cantidad de porción de generación de imágenes necesaria para producir imágenes de diagnóstico. En el caso de una porción de radioisótopo, para un sujeto humano, la cantidad de radioactividad inyectada normalmente fluctuará de aproximadamente 5 a 20 milicurios de 99mTc. La proteína de fusión de albúmina etiquetada posteriormente se acumulará de manera preferente en los lugares en el cuerpo que contienen un polipéptido u otra substancia que enlaza a, es enlazada mediante, o se asocia con, una proteína de fusión de albúmina de la presente invención. La generación de imágenes de tumor in vivo se describe en la Publicación de S. W. Burchiel y Asociados, "Immunopharmacokinetics of Radiolabeled Antibodies and Their Fragments" (Capítulo 13 en Tumor Imaging: The Radiochemical Detection of Cáncer, S. W. Burchiel and B. A. Rhodes, eds., Masson Publishing Inc. (1982)). Una de las formas en la cual una proteína de fusión de albúmina de la presente invención puede ser etiquetada en forma detectable, es enlazando la misma a una enzima reportera y utilizando el producto enlazado en un inmunoensayo de enzimas (EIA) (Voller, A., "The Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA)", 1978, Diagnostic Horizons 2:1-7, Microbiológical Associates Quarterly Publication, Walkersville, MD); Voller y Asociados, J. Clin. Pathol. 31:507-520 (1978); Butler, J. E. Meth.

Enzymol. 73:482-523 (1 981 ); Maggio, E. (ed . ), 1 980, Enzyme I mmunoassay, CRC Press, Boca Ratón , FL. ; Ishikawa, E. y Asociados, (eds. ), 1981 , Enzyme I mmunoassay, Kgaku Shoin , Tokio). La enzima reportera que se enlaza al anticuerpo reaccionará con un substrato adecuado, preferentemente un substrato cromogénico, en una forma tal que se produzca una porción química que pueda ser detectada, por ejemplo, mediante espectrofotometría, fluorimetría, o medios visuales. Las enzimas reporteras que pueden ser utilizadas para etiquetar en forma detectable el anticuerpo, incluyen pero no se limitan a, deshidrogenasa de malato, nucleasa estafilococal , isomerasa delta-5-esteroide, deshidrogenasa de alcohol de levadura, alfa-glicerofosfato, deshidrogenasa, isomerasa de fosfato de triosa, peroxidasa de rábano, fosfatasa alcalina, paraginasa, oxidasa de glucosa, beta-galactosidasa, ribonucleasa, ureasa, catalasa, deshidrogenasa de glucosa-6-fosfato, glucoamilasa y acetilcolinesterasa. Además, la detección se puede mediante métodos colorimétricos que emplean un substrato cromogénico para la enzima reportera. La detección también se puede lograr a través de comparación visual del grado de reacción enzimática de un substrato en comparación con estándares preparados en forma similar. Las proteínas de fusión de albúmina también pueden ser radioetiquetadas y utilizadas en cualquier variedad de otros inmunoensayos. Por ejemplo, etiquetando en forma radioactiva las proteínas de fusión de albúmina, es posible utilizar las proteínas de fusión de albúmina en un radioinmunoensayo (RÍA) (ver por ejemplo, la Publicación de Weintraub, B., Principies of Radioimmunoassays, Seventh Training Course on Radioligand Assay Techniques, The Endocrine Society, marzo de 1986, la cual está incorporada como referencia a la presente invención). El isótopo radioactivo puede ser detectado incluyendo, pero sin limitarse a, contador gamma, contador de centelleo o autorradiografía. Además, las moléculas queladoras, son conocidas en la técnica y pueden ser utilizadas para etiquetar las proteínas de fusión de albúmina. Las moléculas queladoras pueden ser adheridas a las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, para facilitar la etiquetación de la proteína con iones de metal incluyendo radionúclidos o etiquetas fluorescentes. Por ejemplo, ver la Publicación de Subramanian, R. and Meares, C. F., "Bifunctional Chelating Agents for Radiometal-labeled monoclonal Antibodies", en Cáncer Imaging with Radiolabeled Antibodies (D. M. Goldenberg, Ed.) Kluwer Academic Publications, Boston; Saji, H., "Targeted delivery of radiolabeled imaging and therapeutic agents: bifunctional radiopharmaceuticals". Crit. Rev. Ther. Drug. Carrier Syst. 16:209-244 (1999); Srivastava S. C. and Mease R. C. "Progress in research on ligands, nuclides and techniques for labeling monoclonal antibodies". Int. J. Rad. Appl. Instrum. B. 18:589-603 (1991); y Liu, S. and Edwards, D. S. "Bifunctional chelators for therapeutic lanthanide radiopharmaceuticals". Bioconjug. Chem. 12:7-34 (2001). Cualquier quelador que pueda ser enlazado en forma covalente a las proteínas de fusión de albúmina, se puede utilizar de acuerdo con la presente invención. El quelador puede comprender además una porción enlazadora que conecta la porción de quelación a la proteína de fusión de albúmina. En una modalidad, la proteína de fusión de albúmina de la presente invención se adhiere a un quelador acíclico, tal como ácido de triamina-N,N,N',N",N"'-penta-acético de dietileno (DPTA), análogos de DPTA y derivados de DPTA. Como ejemplos no limitantes, el quelador puede ser ácido 2-(p-isotiocianatobencil)-6-metildietilentriaminapenta-acético (1B4M-DPTA, también conocido como MX-DTP), ácido 2-metil-6-(o-nitrobencil)-1 ,4,7-triazahepta-N,N,N',N",N"'-penta-acético (nitro-1 B4M-DTPA o nitro-MX-DTPA); 2-(p-¡sotiocianatobencilo)-ciclohexildietilentriaminapenta-acético (CHX-DTPA), o ácido N-(2-amino-3-(ro-nitrofenil)propil]-trans-ciclohexan-1 ,2-diamin-N,N',N"-penta-acético (nitro-CHX-DTPA). En otra modalidad, la proteína de fusión de albúmina de la presente invención se adhiere a un quelador de terpiridina acíclico, tal como 6,6"-bis[N,N,N",N"-tetra(carboximetil)amino]metil]-4'-(3-amino-4-metoxifenil)-2,2',6',2"-terp¡ridina (TMT-amina). En modalidades específicas, el quelador macrocíclico el cual se adhiere a la proteína de fusión de albúmina de la presente invención, es 1 ,4,7,10-tetra-azaciclododecan-N,N',N",N"'-tetra- acético (DOTA). En otras modalidades específicas, el DOTA se adhiere a la proteína de fusión de albúmina de la presente invención a través de una molécula enlazadora. Los ejemplos de moléculas enlazadoras útiles para conjugar DOTA a un polipéptido, son comúnmente conocidas en la técnica, ver por ejemplo la Publicación de DeNardo y Asociados, Clin. Cáncer Res. 4(10):2483-90, 1998; Peterson y Asociados, Bioconjug. Chem. 10(4):553-7, 1999; y Zimmerman y Asociados, Nucí. Med. Biol. 26(8):943-50, 1999, las cuales están incorporadas en su totalidad a la presente invención como referencia. Además, las Patentes Norteamericanas Nos. 5,652,361 y 5,756,065, las cuales describen agentes de quelación que pueden ser conjugados a anticuerpos, y métodos para elaborar y utilizarlos, están incorporadas en su totalidad a la presente invención como referencia. Aunque las Patentes Norteamericanas Nos. 5,652,361 y 5,756,065 se enfocan en la conjugación de agentes de quelación a anticuerpos, un experto en la técnica podrá adaptar fácilmente el método descrito en dichas patentes, con el objeto de conjugar agentes de quelación a otros polipéptidos. Los queladores biofuncionales a base de ligandos macrocíclicos, en donde la conjugación es a través de un brazo activado, o grupo funcional, adherido al esqueleto de carbono del ligando, se pueden emplear tal como se describe en las Publicaciones M. Moi y Asociados, J. Amer. Chem. Soc. 49:2639 (1989) (ácido 2-p-nitrobencil-1 ,4,7, 10-tetra-azaciclododecan- N,N',N",N"'-tetra-acético; S. V. Deshpande y Asociados, J. Nucí. Med. 31:473 (1990); G. Ruser y Asociados, Bioconj. Chem. 1:345 (1990); C. J. Broan y Asociados, J. C. S. Chem. Comm. 23:1739 (1990); y C. J. Anderson y Asociados, J. Nucí. Med. 36:850 (1995). En una modalidad, un quelador macrocíclico, tal como queladores poliazamacrocíclicos, que contienen opcionalmente uno o más grupos carboxi, amino, hidroxamato, fosfonato o fosfato, se adhieren a la proteína de fusión de Albúmina de la presente invención. En otra modalidad, el quelador es un quelador seleccionado del grupo que consiste en DOTA, análogos de DOTA, y derivados de DOTA. En una modalidad, las moléculas queladoras adecuadas que pueden ser adheridas a la proteína de fusión de albúmina de la presente invención, incluyen DOXA (ácido 1-oxa-4,7,10-triazaciclododecantriacético), NOTA (ácido 1,4,7-triazaciclononanotriacético), TETA (ácido 1 ,4,8,11-tetra-azaciclotetradecantetra-acético), y THT (4'(3-amino-4-metoxi-fenil)-6,6"-bis(N',N'-dicarboximetil-N-metilhidrazino)-2,2',6',2'-terpiridina), y análogos y derivados de los mismos. Ver por ejemplo las Publicaciones Ohmono y Asociados, J. Med. Chem. 35:157-162 (1992); Kung y Asociados, J. Nucí. Med. 25:326-332 (1984); Jurisson y Asociados, Chem. Rev. 93:1137-1156 (1993); y la Patente Norteamericana No. 5,367,080. Otros queladores adecuados incluyen agentes de quelación que se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. 4,647,447; 4,687,659; 4,885,363; en la Patente EP-A-71564; en la Publicación WO89/00557; y en la Patente EP-A-232751. En otra modalidad, los queladores de ácido carboxílico macrocíclicos adecuados que pueden ser usados en la presente invención, incluyen 1 ,4,7,10-tetra-azaciclododecan-N,N',N",N"'-tetra-acético (DOTA); ácido 1 ,4,8,12-tetra-azaciclopentadecan-N,N',N",N"'-tetra-acético (15N4); ácido 1 ,4,7-triazaciclononan-N,N',N"-triacético (9N3); ácido 1 ,5,9-triazaciclododecan-N,N',N"-triacético (12N3); y ácido 6-bromoacetamido-bencil-1 ,4,8,11-tetra-azaciclotetradecan-N,N',N",N"'-tetra-acético (BAT). Un quelador preferido que puede ser adherido a la proteína de Fusión de Albúmina de la presente invención, es un ácido -(5-isotiocianato-2-metoxifenil)-1 ,4,7,1 O-tetra-azacicl ododecan-1 ,4,7,10-tetra-acético, el cual también es conocido como MeO-DOTA-NCS. Una sal o éster de ácido a-(5-isotiocianato-5-metoxifeniI)-1 ,4,7,10-tetra-azaciclododecan-1 ,4,7,10-tetra-acético íambién puede ser utilizado. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, a las cuales los queladores, tales como los que se describen, se adhieren en forma covalente pueden ser etiquetados (a través del sitio de coordinación del quelador) con radionúclidos que son adecuados para propósitos terapéuticos, de diagnóstico, o tanto terapéuticos como de diagnóstico. Los ejemplos de metales adecuados incluyen Ag, At, Au, Bi, Cu, Ga, Ho, In, Lu, Pb, Pd, Pm, Pr, Rb, Re, Rh, Se, Sr, Te, TI, Y, e Yb. Los ejemplos del radionúclido utilizado para propósitos de diagnóstico son Fe, Gd, 111In, 67Ga, o 68Ga. En otra modalidad preferida, el radionúclido utilizado para propósitos de diagnóstico es 111ln o 67Ga. Los ejemplos del radionúclido utilizado para propósitos terapéuticos, son 166Ho, 165Dy, 90Y, 115mln, 52Fe, o 72Ga. En una modalidad, el radionúclido utilizado para propósitos de diagnóstico es 166Ho o 90Y. Los ejemplos de radionúclidos utilizados tanto para propósitos terapéuticos como de diagnóstico incluyen 153Sm, 177Lu, 159Gd, 175Yb, o 47Sc. En una modalidad, el radionúclido es 153Sm, 177Lu, 175Yb, o 159Gd. Los radionúclidos de metal preferidos, incluyen 90Y, 99mTc, 1 1ln, 47Sc, "Ga, 51Cr, 177mSn 67Cu, 167Tm, 97Ru, 188Re, 177Lu, 199Au, 47Sc, "Ga, 51Cr, 177m S-n~, 6677Cu, 167Tm, 95Ru, 188Re, 177Lu, 199 A ?u ,,, " 2U033PDb[-., y „ 1144?1Ce. En una modalidad en particular, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención a las cuales los queladores se enlazan en forma covalente, pueden ser etiquetados con un ion de metal seleccionado del grupo que consiste en 90Y, 111ln, 177Lu, 166 Ho, 21,50Bi, y 22"5A, c. Además, los radionúclidos de emision-?, tales como 99m- Te, 11ln, "Ga, y 169Yb, han sido aprobados y están bajo investigación para generación de imágenes de diagnóstico, en tanto que los emisores-ß, tales como 67Cu, 11Ag, 186Re, y 90Y, son útiles para las aplicaciones en terapia de tumor. También otros radionúclidos útiles incluyen emisores-?, tales como 99mTc, 111In, 67Ga, y 169Yb, y emisores-ß, tales como 67Cu, 111Ag, 186Re, 188Re, y 90Y, así como otros radionúclidos de interés tales como 211At, 212Bi, 177Lu, 86Rb, 105 Rh, 153 Sm, 198 Au, 149 Pm, 85 Sr, 142 Pr, 214 TDb, 1 ,0u9aDPdJ, 166 Ho, 208 TI, y 4 Sc. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención a las cuales los queladores se adhieren en forma covalente, pueden ser etiquetadas con los radionúclidos descritos anteriormente. En otra modalidad, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención a la cual los queladores se adhieren en forma covalente, pueden ser etiquetadas con iones de metal paramagnético incluyendo iones de transición y de metal de lantánida, tales como metales que tienen números atómicos de 21-29, 42, 43, 44, o 57-71, en particular los iones de Cr, V, Mn, Fe, Co, Ni, Cu, La, Ce, Pr, Nd, Pm, Sm, Eu, Gd, Tb, Dy, Ho, Er, Tm, Yb, y Lu. Los metales paramagnéticos utilizados en composiciones para generación de imágenes de resonancia magnética, incluyen los elementos que tienen los números atómicos de 22 al 29, 42, 44, y 58-70. En otra modalidad, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención a las cuales los queladores se adhieren en forma covalente, pueden ser etiquetadas con iones de metal fluorescentes incluyendo lantánidas, en particular La, Ce, Pr, Nd, Pm, Sm, Eu (por ejemplo, 152Eu), Gd, Tb, Dy, Ho, Er, Tm, Yb, y Lu.

En otra modalidad, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención a las cuales los queladores se adhieren en forma covalente pueden ser etiquetadas con reporteros que contienen metales pesados, que pueden incluir átomos de Mo, Bi, Si, y W. También es posible etiquetar las proteínas de fusión de albúmina con un compuesto fluorescente. Cuando el anticuerpo etiquetado en forma fluorescente se expone a luz con una longitud de onda adecuada, su presencia puede ser detectada posteriormente debido a la fluorescencia. Entre los compuestos de etiquetación fluorescente utilizados más comúnmente, se encuentra el isotiocianato de fluorescencia, rodamina, ficoeritrina, ficocianina, aloficocianina, oftaldehído y florescamina. La proteína de fusión de albúmina también se puede etiquetar en forma detectable utilizando metales de emisión de fluorescencia tales como 152Eu, u otros de las series de lantánidas. Estos metales pueden ser adheridos al anticuerpo utilizando los grupos de quelación de metal tal como ácido dietilenotriaminapenta-acético (DTPA) o ácido etilenodiaminatetra-acético (EDTA). Las proteínas de fusión de albúmina también se pueden detectar en forma deteclable acoplándolas a un compuesto quimiluminescente. La presencia de la proteína de fusión de albúmina marcada con quimiluminescencia, se determina posteriormente detectando la presencia de luminescencia que surge durante el curso de la reacción química. Los ejemplos de compuestos de etiquetación quimiluminescente particularmente útiles son luminol, isoluminol, éster de acridinio teromático, imidazol, sal de acridinio, y éster de oxalato. De igual forma, se puede utilizar un compuesto bioluminescente para etiquetar proteínas de fusión de albúmina de la presente invención. La bioluminescencia es un tipo de quimiluminescencia encontrado en sistemas biológicos, en donde una proteína catalítica incrementa la eficiencia de la reacción quimiluminescente. La presencia de una proteína luminescente se determina detectando la presencia de bioluminescencia. Los compuestos bioluminescentes importantes para propósitos de etiquetación con luciferina, luciferasa y aequorina. Organismos transgénicos Los organismos transgénicos que expresan las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, también se incluyen en la misma. Los organismos transgénicos son organismos genéticamenle modificados en los cuales se ha íransferido maíerial recombinante, exogeno o genético clonado. Dicho material genético con frecuencia es referido como un transgeno. La secuencia de ácido nucleico del transgeno, puede incluir una o más secuencias reguladoras de transcripción y otras secuencias de ácido nucleico tales como intrones, que pueden ser necesarios para la expresión y secreción óptima de la proteína codificada. El transgeno puede ser diseñado para dirigir la expresión de la proteína codificada en una forma que facilite su recuperación del organismo o de un producto producido a través del organismo, por ejemplo, de leche, sangre, orina, h uevos, cabello, o semillas del organismo. El transgeno puede consistir en secuencias de ácido nucleico derivadas del genoma de la misma especie o de una especie diferente a la de la especie del animal objetivo. El transgeno puede ser integrado ya sea en el locus de un genoma, en donde la secuencia de ácido nucleico en particular no se encuentra normalmente de otra forma o en el locus normal del transgeno. El término "organismo transgénico de l ínea celular germinal", se refiere a un organismo transgénico en el cual la alteración genética o información genética fue introducida en una célula de línea germinal , confiriendo de esta forma la capacidad de que el organismo transgénico transfiera la información genética a la descendencia. Si dicha descendencia posee de hecho parte o toda la información de alteración o genética, entonces son organismos demasiado transgénicos. La información de alteración o genética puede ser externa a las especies del organismo, al cual pertenece el recipiente, externa únicamente para el receptor individual en particular, o puede ser información genética que ya es poseída por el receptor. En el último caso, el gen alterado o introducido puede ser expresado en forma diferente al gen nativo. Un organismo transgénico puede ser un animal transgénico o una planta transgénica. Los animales transgénicos pueden ser producidos a través de una variedad de diferentes métodos que incluyen transfección, electroporación, microinyección, dirección genética en células madre embriónicas e infección viral y retroviral recombinante (ver, por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 4,736,866; Patente Norteamericana No. 5,602,307; Mullins y Asociados (1993) Hypertension 22(4):630-633; Brenin y Asociados (1997) Surg. Oncol. 6(2)99-110; Tuan (ed.), Recombinant Gene Expression Protocols, Methods in Molecular Biology No. 62, Humana Press (1997)). El método de introducción de fragmentos de ácido nucleico en células de mamífero competentes de recombinación puede ser cualquier método que favorezca la co-transformación de múltiples moléculas de ácido nucleico. Los procedimientos detallados para producir animales transgénicos están fácilmente disponibles para los expertos en la técnica, incluyendo las descripciones de la Patente Norteamericana No. 5,489,743, y la Patente Norteamericana No. 5,602,307. Se han producido un número de ratones recombinantes o transgénicos, incluyendo los que expresan una secuencia de oncogeno activada (Patente Norteamericana No. 4,736,866); expresan T-antígeno SV40 de simio (Patente Norteamericana No. 5,728,915); carecen de la expresión del factor regulador de interferón 1 (IRF-1) (Pateníe Norteamericana No. 5,731,490); exhiben disfunción dopaminérgica (Patente Norteamericana No. 5,723,719); expresan al menos un gen humano que participa en el control de presión sanguínea (Patente Norteamericana No. 5,731,489); despliegan mayor similitud con las condiciones existentes en enfermedad de Alzheimer que ocurre naturalmente (Patente Norteamericana No. 5,720,936); tienen una capacidad reducida para transmitir adhesión celular (Patente Norteamericana No. 5,602,307); poseen un gen de hormona de crecimiento de bovino (Clutter y Asociados (1996) Genetics 143(4):1753-1760); o tienen la capacidad de generar una respuesta de anticuerpo completamente humana (McCarthy (1997) The Lancet 349(9049):405). Aunque los ratones y ratas permanecen como los animales de elección para la mayor parte de la experimentación transgénica, en algunos casos es preferible o incluso necesario, utilizar especies de animales alternativas. Los procedimientos transgénicos han sido utilizados con éxito en una variedad de animales no-múridos, incluyendo cabras, ovejas, cerdos, perros, gatos, monos, chimpancés, hámsteres, conejos, vacas, y cerdos de guinea (ver, por ejemplo, Kim y Asociados (1997) Mol. Reprod. Dev. 46(4):515-526; Houdebine (1995) Reprod. Nutr. Dev. 35(6):609-617; Petters (1994) Reprod. Fértil. Dev. 6(5):643-645; Schnieke y Asociados (1997) Science 278(5346):2130-2133; y Amoah (1997) J. Animal Science 75(2):578-585). Para dirigir la secreción de la proteína codificada por transgeno de la presente invención en la leche de mamíferos transgénicos, se puede quedar bajo el control de un promotor que se activa preferencialmente en células epiteliales de mamífero. Los promotores que controlan los genes que codifican las proteínas de leche son los preferidos, por ejemplo el promotor para caseína, beta lactoglobulina, proteína ázida de suero, o lactalbúmina (ver, por ejemplo, la Publicación de DiTullio (1992) BioTechnology 10:74-77; Clark y Asociados (1989) BioTechnology 7:487-492; Gorton y Asociados (1987) BioTechnology 5:1183-1187; y Soulier y Asociados (1992) FEBS Letts. 297:13). Los mamíferos transgénicos de elección podrían producir grandes volúmenes de leche y tener largos períodos de lactancia, por ejemplo, cabras, vacas, cabellos u ovejas. Una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, también puede ser expresada en una planta transgénica, por ejemplo, una planta en la cual el transgeno se ADN se inserta en el genoma nuclear o plastídico. Los procedimientos de transformación de plantas utilizados para introducir ácidos nucleicos externos en células de plantas o protoplastos, son conocidos en la técnica. Ver en general, la Publicación de Methods in Enzymology Vol. 153 ("Recombinant DNA Part D") 1987, Wu and Grossman Eds., Academic Press, y la Solicitud de Patente Europea No. EP 693554. Los métodos para generación de plantas construidos en forma genética se describen en forma adicional en la Patente Norteamericana No. 5,283,184, Patente Norteamericana No. 5,482,852, y Solicitud de Patente Europea No. EP 693,554, las cuales todas están incorporadas a la presente invención como referencia. Composiciones farmacéuticas o terapéuticas Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención o formulaciones de las mismas pueden ser administradas a través de cualquier método convencional incluyendo inyección parenteral (por ejemplo subcutánea o intramuscular) o infusión intravenosa. El tratamiento puede consistir en una dosis simple o una pluralidad de dosis durante un período de tiempo. Aunque es posible que una proteína de fusión de albúmina de la presente invención sea administrada sola, es preferible que se encuentre como una formulación farmacéutica, junio con uno o más vehículos acepíables. El vehículo(s) debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con la proteína de fusión de albúmina y no perjudicial para los receptores de la misma. Normalmente, los vehículos serán agua o solución salina, las cuales serán estériles y libres de pirógenos. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención están particularmente bien adaptadas para la formulación en vehículos acuosos tales como agua libre de pirógenos estériles, solución salina u otras soluciones isotónicas debido a su vida en anaquel prolongada en solución. Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden ser formuladas en forma anticipada en forma acuosa, por ejemplo, semanas o meses o períodos de tiempo más largos después de ser suministradas. Por ejemplo, las formulaciones que contienen la proteína de fusión de albúmina pueden prepararse tomando en cuenta la vida en anaquel prolongada de la proteína de fusión de albúmina en formulaciones acuosas. Tal como se describió anteriormente, la vida en anaquel de muchas de estas proteínas Terapéuticas está marcadamente incrementada o prolongada después de la fusión con HA. En casos en donde es adecuada la administración en aerosol, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención pueden ser formuladas como aerosoles utilizando procedimientos estándar. El término "aerosol", incluye cualquier fase suspendida. Sostenida con gas de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, la cual tiene la capacidad de ser inhalada en los bronquios o pasajes nasales. En forma específica, el aerosol incluye una suspensión suspendida con gas de gotas de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, tal como puede ser producida en un inhalador de dosis medida o nebulizador, o en un rociador de nebulización. El aerosol también incluye una composición en polvo seco de un compuesto de la presente invención suspendido en aire u otro gas de vehículo, que puede ser suministrada mediante insuflación de un aparato inhalador, por ejemplo, ver las Publicaciones de Ganderton & Jones, Drug. Delivery to the Respiratory Tract. Ellis Horwood (1987); Gonda (1990) Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 6:273-313; y Raeburn y Asociados (1992) Pharmacol. Toxico!. Methods 27:143-159. Las formulaciones de la presente invención también normalmente son no inmunogénicas, en parte, debido al uso de los componentes de la proteína de fusión de albúmina que esté siendo derivada de las especies adecuadas. Por ejemplo, para uso humano, tanío la proteína Terapéutica como las partes de albúmina de la proteína de fusión de albúmina normalmente serán humanas. En algunos casos, en donde cualquier componente es no derivado de humano, el componente puede ser humanizado mediante substitución de aminoácidos clave de modo que aparezcan epítopes específicos para el sistema inmune humano el cual será h umano en naturaleza en lugar de extraño. Las formulaciones pueden ser presentadas en forma conveniente en forma de dosis por unidad y pueden prepararse a través de cualesq uiera de los métodos conocidos en la técnica de la farmacia. Dichos métodos incluyen el paso de poner en asociación la proteína de fusión de albúmina con el vehículo que constituye uno o más ingredientes accesorios. En general , las formulaciones se preparan mediante poner de manera uniforme e íntima en asociación el ingrediente activo con vehículos líquidos o veh ículos solidos finamente divididos, o ambos, y posteriormente, si es necesario, dar forma al producto. Las form ulaciones adecuadas para administración parenteral incluyen soluciones de inyección estéril acuosas y no acuosas, las cuales pueden contener antioxidantes, reguladores, bacteriostatos y solutos q ue hacen a la formulación adecuada para el receptor prometido; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes de engrosamiento. Las formulaciones pueden presentarse en contenedores de dosis de unidad o dosis múltiples, por ejemplo ampolletas selladas, frascos o jeringas, y puede almacenarse en una condición secada por congelación (liofilizada), que requiere únicamente la adición del vehículo líquido estéril, por ejemplo agua para inyecciones, inmediatamente antes de su uso. Las soluciones de inyección extemporánea y suspensiones pueden prepararse a partir de polvos estériles. Las formulaciones de dosificación pueden contener la parte de proteína Terapéutica en una concentración molar inferior o dosis inferior en comparación con la formulación estándar no fusionada a la proteína Terapéutica debido a la vida media de suero prolongado exhibida por muchas de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención. Como ejemplo, cuando una proteína de fusión de albúmina de la presente invención comprende una de las proteínas descritas en la columna de "Proteína Terapéutica:X" de la Tabla 1 como una o más de las regiones de proteína Terapéutica, la forma de dosificación puede ser calculada sobre la base de potencia de la proteína de fusión de albúmina relativa a la potencia de la proteína terapéutica sola, y al mismo tiempo tomando en cuenta la vida promedio en suero y la vida en anaquel prolongadas de las proíeínas de fusión de albúmina en comparación con las de la proíeína terapéutica nativa. Por ejemplo, si la proteína terapéutica se administra normalmente de 0.3 a 30.0 lU/kg/semana, o de 0.9 a 12.0 lU/kg/semana, administrada en de tres a siete dosis divididas durante un año o más. En una proteína de fusión de albúmina que consiste en HA de longitud total fusionada a una proteína terapéutica, una dosis equivalente en términos de unidades podría representar un mayor peso del agente, pero también se puede disminuir la frecuencia de dosis, por ejemplo a dos veces por semana, una vez por semana o menos. Las formulaciones de composiciones de la presente invención, pueden ser empacadas juntas con, o incluirse en un equipo con, instrucciones o un inserto de paquete que se refiere a la vida en anaquel prolongada del componente de la proteína de fusión de albúmina. Por ejemplo, dichas instrucciones o insertos de paquete pueden dirigir condiciones de almacenamiento recomendadas, tales como tiempo, temperatura y luz, tomando en cuenta la vida en anaquel extendida o prolongada de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención. Dichas instrucciones o insertos de paquete también pueden dirigir las ventajas particulares de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, de modo que para facilidad de almacenamiento de las formulaciones pueda ser requerida en uso en el campo, fuera del hospital controlado, condiciones clínicas o de oficina. Tal como se describió anteriormente, las formulaciones de la presente invención pueden estar en forma acuosa y pueden almacenarse bajo circunstancias inferiores a las ideales sin una pérdida significativa de la actividad íerapéutica. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, también se pueden incluir en nutracéuticos. Por ejemplo, ciertas proteínas de fusión de albúmina de la presente invención se pueden administrar en productos naturales, incluyendo leche o productos lácteos obtenidos de un mamífero transgénico que expresa proteína de fusión de albúmina. Dichas composiciones también pueden incluir plantas o productos de plantas obtenidos de una planta transgénica que exprese la proteína de fusión de albúmina. La proteína de fusión de albúmina también se puede proporcionar en polvo o en forma de tableta, con o sin otros aditivos, vehículos, rellenadores y diluyentes conocidos. Los nutracéuticos se describen por ejemplo en la Publicación de Scott Hegenhart, Food Product Design, diciembre de 1993. La presente invención también proporciona métodos de tratamiento y/o prevención de enfermedades o padecimientos (tales como, por ejemplo, cualquiera de una o más de las enfermedades o padecimientos aquí descritos) mediante la administración a un sujeto de una cantidad efectiva de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención o un polinucleótido que codifique una proteína de fusión de albúmina de la presente invención ("polinucleótido de fusión de albúmina") en un vehículo farmacéuticamente aceptable. La proteína de fusión de albúmina y/o polinucleótido, serán formulados y dosificados en una forma consistente con una buena práctica médica, tomando en cuenta la condición clínica del paciente individual (especialmente los efectos secundarios del tratamiento con la proteína de fusión de albúmina y/o polinucleótido solo), el sitio de administración, el método de administración, el programa de administración, y otros factores conocidos para los especialistas. La "cantidad efectiva" para propósitos de la presente invención, se determina por lo tanío mediante dichas consideraciones. Como un propósito general, la cantidad farmacéuticamente efectiva tofal de la proíeína de fusión de albúmina administrada en forma parenteral por dosis, estará dentro del rango de aproximadamente 1 µg/kg/día a 10 µg/kg/día del peso corporal del paciente, aunque, tal como se observo anteriormente, esto estará sujeto a la consideración terapéutica. Más preferentemente, esta dosis es de al menos 0.01 mg/kg/día, y más preferentemente para humanos entre aproximadamente 0.01 y 1 mg/kg/día de la hormona. Si se administra en forma continua, la proteína de fusión de albúmina se administra normalmente en un rango de dosis de aproximadamente 1 µg/kg/hora hasta aproximadamente 50 µg/kg/hora, ya sea mediante 1 y 4 inyecciones por día o mediante infusión subcutánea continua, por ejemplo, utilizando una mini-bomba. También se puede emplear una solución de bolsa para administración intravenosa. La duración del íraíamiento necesario para observar los cambios y el intervalo después del tratamiento para que la respuesta ocurra, parece variar dependiendo del efecto deseado. Tal como se observó anteriormente, la proteína de fusión de albúmina de la presente invención tiene una estabilidad de plasma superior en comparación con la parte de proteína Terapéutica (o fragmento o variante de la misma) sola. Este ¡ncremento en la estabilidad del plasma debe tomarse en cuenta cuando se determina la cantidad efectiva de la proteína de fusión de albúmina que será administrada por dosis y el programa de administración de dosificación. En particular, la estabilidad de plasma superior puede permitir que la proteína de fusión de albúmina sea administrada en una dosis inferior en la misma frecuencia de administración, o como alternativa, puede permitir que la proteína de fusión de albúmina sea administrada en pocas dosis. Preferentemeníe, la estabilidad superior permite que la proteína de fusión de albúmina de la proteína de fusión de albúmina sea administrada con menos frecuencia y con menos dosis. Más preferentemente, la proteína de fusión de albúmina puede ser administrada una vez cada dos semanas. Aún más prefereníemeníe, la proíeína de fusión de albúmina puede ser administrada una vez, para tres, cuatro, cinco o más semanas dependiendo de la farmacocinética de la proteína de fusión de albúmina. Por ejemplo, tal como se mencionó anteriormente, las farmacocinéticas de una proteína de fusión INF-alfa-HSA soporta un régimen de dosificación de una vez cada dos a cuatro semanas o más, incluso dosificación en intervalos de cuatro semanas o más cada cuatro semanas. Las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos pueden ser administradas en forma oral, rectal, parenteral, intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, tópica (mediante polvos, ungüentos, geles, gotas o parches transdérmicos), en forma bucal o como un rocío oral o nasal. El término "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a un solido no tóxico, semisolido o rellenador líquido, diluyente, o material de encapsulación o auxiliar de formulación de cualquiera de ellos. El término "parenteral", tal como se utiliza en la presente invención, se refiere a modos de administración que incluyen inyección intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intraesternal, subcutánea, e intra-articular e infusión. Las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, también se administran en forma adecuada mediante sistemas de liberación sostenida. Los ejemplos de proteínas de fusión de albúmina de liberación sostenida y/o polinucleótidos se administran en forma oral, rectal, parenteral, intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, tópica (mediante polvos, ungüentos, geles, gotas o parches transdérmicos), en forma bucal o como un rocío oral o nasal. El término "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a un solido no tóxico, semisolido o rellenador líquido, material de encapsulación o auxiliar de formulación de cualquier tipo. El término "parenteral", tal como se utiliza en la presente invención, se refiere a modos de administración que incluyen inyección intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intraesternal, subcutánea, e intra-articular e infusión. Los ejemplos adicionales de proteínas de fusión de albúmina de liberación sostenida y/o polinucleótidos incluyen materiales poliméricos adecuados (tales como, por ejemplo, matrices de polímero semipermeable en la forma de artículos formados, por ejemplo, películas o microcápsulas), o materiales hidrofóbicos adecuados (por ejemplo en la forma de una emulsión en un aceite aceptable) o en resinas de intercambio de iones, y derivados solubles con moderación (tal como por ejemplo sal soluble con moderación). Las matrices de liberación sostenida incluyen poliláctidos (Patente Norteamericana No. 3,773,919, Patente EP 58,481), copolímeros de ácido L-glutámico y gamma-efil-L-glulamaío (Sidman y Asociados, Biopolymers 22:547-556 (1983)), poli(metacrilato de 2-hidroxietilo) (Langer y Asociados, J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277 (1981), y Langer, Chem. Tech. 12:98-105 (1982)), aceíato de vinil-etileno (Langer y Asociados, Id) o ácido poli-D-(-)-hidroxibutírico (Patente EP 133,988). Las proteínas de fusión de albúmina de liberación sostenida y/o polinucleótidos también pueden incluir proteínas de fusión de albúmina y polinucleótidos atrapados en forma liposomal de la presente invención (ver de manera general, las Publicaciones de Langer, Science 249:1527-1533 (1990); Treat y Asociados, en Liposomes in the Therapy of Infections Disease and Cáncer, Lopez-Beresíein and Fidler (eds.), Liss, Nueva York, páginas 317-327 y 353-365 (1989)). Los liposomas que contienen la proteína de fusión de albúmina y/o polinucleótidos se preparan a través de métodos conocidos por sí mismos: Patente DE 3,218,121; Publicaciones Epstein y Asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. (EUA) 82:3688-3692 (1985); Hwang y Asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. (EUA) 77:4030-4034 (1980); Patente EP 52,322; Patente EP 36,676; Patente EP 88,046; Patente EP 143,949; Patente EP 142,641; Solicitud de Pateníe Japonesa 83-118008; Patentes Norteamericanas Nos. 4,485,045 y 4,544,545; y patente EP 102,324. En forma ordinaria, los liposomas son del tipo unilamelar pequeño (aproximadamente 200-800 Ángstroms) en donde el contenido de lípidos es mayor de aproximadamente 30% molar de colesterol, siendo ajustada la proporción seleccionada para el Terapéutico óptimo. Aún en una modalidad adicional, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, se suministran por medio de una bomba (ver las Publicaciones de Langer, supra; Seflon, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 (1987); Buchwaid y Asociados, Surgery 88:507 (1980); Saudek y Asociados, N. Engl. J. Med. 321:574 (1989)). Otros sistemas de liberación controlada se describen en la revisión de Langer (Science 249:1527-1533 (1990)). Para administración parenteral, en una modalidad, la proteína de fusión de albúmina y/o polinucleótido se fórmula de manera general mezclándolo en un grado de pureza deseado, en una forma inyectable de la dosis de unidad (solución, suspensión, o emulsión) con un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, uno que es no toxico para los receptores en las dosis y concentraciones empleadas y es compatible con otros ingredientes de la formulación. Por ejemplo, la formulación no incluye preferentemente agentes de oxidación y otros compuestos que son conocidos como perjudiciales para el Terapéutico. Generalmente, las formulaciones se preparan contactando ia proteína de fusión de albúmina y/o polinucleótido de manera uniforme e íntima con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos o ambos. Posteriormente, si es necesario, el producto se forma en la formulación deseada. Preferentemente el vehículo es un vehículo parenteral, más preferentemente una solución que es isotónica con la sangre del receptor. Los ejemplos de dichos vehículos incluyen agua, solución salina, solución de Ringer, y solución de dextrosa. Los vehículos no acuosos tales como aceites fijos y oleato de etilo, también son útiles en la presente invención, así como iiposomas. El vehículo contiene en forma adecuada cantidades menores de aditivos, tales como substancias que aumentan la ¡sotonicidad y estabilidad química. Dichos materiales son no tóxicos para los receptores en las dosis y concentraciones empleadas, e incluyen reguladores tales como fosfato, citrato, succinato, ácido acético y otros ácidos orgánicos o sus sales; antioxidantes, tales como ácido ascórbico; polipéptidos de bajo peso molecular (menor a aproximadamente diez residuos), por ejemplo, poliarginina o tripéptidos; proteínas, tales como albúmina de suero, gelatina, o inmunoglobulinas; polímeros hidrofílicos tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos tales como glicina, ácido glutámico, ácido aspártico o arginina; monosacáridos, disacáridos y otros carbohidratos incluyendo celulosa o sus derivados, celulosa, mañosa, o dextrinas; agentes de quelación tales como EDTA; alcoholes de azúcar, tales como manitol o sorbitol; contraiones tales como sodio; y/o tensoactivos no iónicos tales como polisorbatos (incluyendo por ejemplo Tween 20), poloxámeros, o PEG. La proteína de fusión de albúmina normalmente se fórmula en dichos vehículos en una concentración de aproximadamente 0.1 mg/ml hasta 100 mg/ml, preferentemente 1-10 mg/ml en un pH de aproximadamente 3 a 8. Quedará entendido que el uso de ciertos excipientes, vehículos o estabilizadores externos dará como resultado la formación de sales de polipéptido. Cualquier farmacéutico utilizado para administración terapéutica puede ser estéril. La esterilidad se logra fácilmente a través de filtración mediante las membranas de filtración estéril (por ejemplo, membranas de 0.2 mieras). Las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos generalmente se ponen en un contenedor que tiene una puerta de acceso estéril, por ejemplo, una bolsa de solución intravenosa o frasco que tienen un tapón perforable mediante una aguja de inyección hipodérmica. Las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos normalmente se almacenarán en contenedores de dosis de unidad o de dosis múltiples, por ejemplo, ampolletas o frascos sellados, en la forma de una solución acuosa o como una formulación liofilizada para reconstitución. Como un ejemplo de formulación liofilizada, se llenan frascos de 10 ml con 5 ml de proteína de fusión de albúmina y/o solución de polinucleótido acuosa filtrada estéril al 1% (p/v), y se liofiliza la mezcla resultante. La solución de infusión se prepara reconstituyendo la proteína de fusión de albúmina y/o polinucleótido liofilizado utilizando agua-para-inyección de bacteriostato. En una modalidad específica y preferida, las formulaciones de proteína de fusión de albúmina comprenden fosfato de sodio 0.01 M, cloruro de sodio 0.15 mM, 0.16 micromoles de octanoato de sodio/miligramos de proteína de fusión, 15 microgramos/mililitro de polisorbato 80, pH 7.2. En otra modalidad específica preferida, las formulaciones de proteína de fusión de albúmina consisten en fosfato de sodio al 0.01 M, cloruro de sodio al 0.15 mM, 0.16 micromoles de octanoaío de sodio/miligramo de proteína de fusión, 15 microgramos/mililitro de polisorbato 80, pH 7.2. El pH y el regulador se eligen para que coincidan las condiciones fisiológicas y la sal se agrega como un tonificador. Se ha elegido el octanoato de sodio debido a su capacidad reportada para incrementar la estabilidad térmica de la proteína en solución. Finalmente, el polisorbato ha sido agregado como un tensoactivo genérico, que disminuye la tensión de la superficie de la solución y disminuye la absorción específica de la proteína de fusión de albúmina para el sistema de cierre del contenedor. La presente invención también proporciona un empaque o equipo farmacéutico que comprende uno o más contenedores llenados con uno o más de los ingredientes de las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención. Asociados con dichos contenedores, se pueden encontrar un aviso en la forma prescrita por una agencia gubernamental que regula la fabricación, uso o venta de productos farmacéuticos o biológicos, que da aviso de los aspectos aprobados por la agencia de fabricación, uso o venta para administración humana. Además, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos pueden ser empleados junto con otros compuestos terapéuticos. Las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, se pueden administrar solos o en combinación con adyuvantes. Los adyuvantes que pueden ser administrados con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, alumbre, alumbre más desoxicolato (ImmunoAg), MTP-PE (Biocine Corp.), QS21 (Genentech, Inc.), BCG (por ejemplo, THERACYS®), MPL y preparaciones no viables de Corynebacterium parvum. En una modalidad específica, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran en combinación con alumbre. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran en combinación con QS-21. Los adyuvantes adicionales que pueden ser administrados con proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, inmunomodulador de lípidos de monofosforilo, AdjuVax 100a, QS-21, QS-18, CRL1005, sales de aluminio, MF-59, y tecnología adyuvante Virosomal. Las vacunas que pueden ser administradas con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, vacunas dirigidas para la protección contra MMR (paperas, viruela y rubéola), polio, varicela, tétanos/difteria, hepatitis A, hepatitis B, Haemophilus influenzae B, tos whopping, neumonía, influenza, enfermedad de Lyme, rotavirus, colera, fiebre amarilla, encefalitis japonesa, poliomielitis, rabias, fiebre de tifoidea y tosferina. Las combinaciones pueden ser administradas ya sea en forma concomitante, por ejemplo, como una mezcla, en forma separada aunque en forma simultánea o concurrente; o en secuencias. Esto incluye presentaciones en las cuales los agentes combinados se administran juntos como una mezcla terapéutica, y también producen procedimientos en los cuales los agentes combinados se administran por separado aunque en forma simultánea, por ejemplo, como líneas intravenosas separadas en el mismo individuo. La administración "en combinación", incluye además la administración separada de uno de los compuestos o agentes administrados primero, seguido por el segundo. Las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, se pueden administrar solos o en combinación con otros agentes terapéuíicos. La proíeína de fusión de albúmina y/o agentes polinucleótidos que pueden ser administrados en combinación con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, agentes quimioterapéuticos, antibióticos, antiinflamatorios esteroidales y no esteroidales, agentes inmunoterapéuticos convencionales y/o tratamientos terapéuticos que se describen más adelante. Las combinaciones se pueden administrar ya sea en forma concomitante, por ejemplo, como en mezclas, por separado aunque en forma simultánea o concurrente; o en secuencias. Esto incluye presentaciones en las cuales los agentes combinados se administran juntos como una mezcla terapéutica, y también procedimientos en los cuales los agentes combinados se administran por separado aunque en forma simultánea, por ejemplo, a través de líneas intravenosas separadas en el mismo individuo. La administración "en combinación", incluye además la administración separada de uno de los compuestos o agentes administrado primero, seguido por el segundo. En una modalidad, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, se administran en combinación con un anticoagulante. Los anticoagulaníes que pueden ser administrados en las composiciones de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, heparina, heparina de bajo peso molecular, sodio de warfina (por ejemplo, COUMADIN®), dicumarol, 4-hidroxicumarina, anisindiona (por ejemplo, MIRADONMR), acenocumarol (por ejemplo, SINTHROME R), indan- 1,3-diona, fenprocumon (por ejemplo, MARCUMARMR), biscumacetato de etilo (por ejemplo, TROMEXANMR), y aspirina. En una modalidad específica, las composiciones de la presente invención se administran en combinación con heparina y/o warfarina. En otra modalidad específica, las composiciones de la presente invención se administran en combinación con warfarina. En otra modalidad específica, las composiciones de la presente invención se administran en combinación con warfarina y aspirina. En otra modalidad específica, las composiciones de la presente invención se administran en combinación con heparina. En otra modalidad específica, las composiciones de la presente invención se administran en combinación con heparina y aspirina. En otra modalidad, la proteína de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, se administran en combinación con fármacos trombolíticos. Los fármacos trombolíticos que pueden ser administrados con las composiciones de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, plasminogen, lis-plasminogen, alfa-2-antiplasmin, estreptocinae (por ejemplo, KABIKINASEMR), antiresplace (por ejemplo, EMINASE R), activador de plasminogeno de tejido (t-PA, altevasa, ACTIVASEMR), urocinasa (por ejemplo, ABBOKINASEMR), sauruplasa (Prourocinasa, urocinasa de cadena simple), y ácido aminocaproico (por ejemplo AMICARMR). En una modalidad específicas, las composiciones de la presente invención se administran en combinación con activador de plasminogen de tejido y aspirina. En otra modalidad, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran en combinación con fármacos antiplaquetas. Los fármacos antiplaquetas que pueden ser administrados con las composiciones de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, aspirina, dipiridamol (por ejemplo, PERSANTINEMR), y ticlopidina (por ejemplo, TICLIDMR). En modalidades específicas, el uso de anti-coagulantes, fármacos trombolíticos y/o antiplaquetas en combinación con proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, se contempla para la prevención, diagnóstico y/o tratamiento de trombosis, trombosis arterial, trombosis venosa, tromboembolia, embolia pulmonar, ateroesclerosis, infarto al miocardio, ataque isquémico temporal, angina inestable. En modalidades específicas, el uso de anticoagulantes, fármacos trombolíticos y/o fármacos antiplaquetas en combinación con proteínas de fusión de albúmina y/o polipéptidos de la presente invención, se contempla para la prevención de fusión de injertos sáfenos, para reducir el riesgo de trombosis periprocedural, que puede acompañar los procedimientos angioplásticos, para reducir el riesgo de ataque en pacientes con fibrilación atrial incluyendo fibrilación atrial no reumática, para reducir el riesgo de embolia asociada con válvulas de corazón mecánicas y enfermedad de válvulas mitrales. Otros usos para los terapéuticos de la presente invención, solos o en combinación con antiplaquetas, anticoagulantes, y/o fármacos trombolíticos, incluyen pero no se limitan a, la prevención de oclusiones en aparatos extracorporeos (por ejemplo, cánulas intravasculares, desviaciones de acceso vascular en pacientes con hemodiálisis, máquinas de hemodiálisis y máquinas de desviaciones cardiopulmónar). En ciertas modalidades, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, se administran en combinación con agentes antirretrovirales, inhibidores de transcriptasa inversa de nucleosido/nucleótido (NRTIs), inhibidores de transcriptasa inversa sin nucleosido (NNRTIs), y/o inhibidores de proteasa (Pls). Los NRTIs que pueden administrarse en combinación con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, RETROVIRMR (zidovudina/AZT), VIDEX R (didanosina/ddT), HIVIDMR (zalcitabina/ddC), ZERITMR (estavudina/d4T), EPIVIRMR (lamivudina/3TC), y COMBIVIRMR (zidovudina/lamivudina). Los NNRTIs que pueden ser administrados en combinación con las proteínas de fusión de albúmina y/o polipéptidos de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, VIRAMUNEMR (nevirapina), RESCRIPTORMR (deiaviridina), y SUSTIVA R (efavirenz). Los inhibidores de proteasa que pueden ser administrados en combinación con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleóíidos de la preseníe invención, incluyen pero no se limiían a, CRIXIVANMR (indinavir), NORVIRMR (ritonavir), INVIRASEMR (saquinavir), y VIRACEPTMR (nelfinavir). En una modalidad específica, los agentes antirretrovirales, inhibidores de transcriptasa inversa de nucleosidos, inhibidores de transcriptasa inversa sin nucleosido, y/o inhibidores de proteasa pueden ser utilizados en cualquier combinación con proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención para tratar SIDA y/o prevenir y tratar infección de VIH. Los NRTIs adicionales incluyen LODENOSINEMR (F-ddA; un NRTIs de adenosina estable-ácido; Triangle/Abbott; COVIRACILMR (entricitabina/FTC; estructuralmente relacionada con lamivudina (3TC) pero con de 3 a 10 veces más actividad in vitro; Triangle/Abbott); dOTC (BCH-10652, también relacionado estructuralmente con lamivudina pero reteniendo la actividad contra una proporción substancial de aislados resistentes a lamivudina; Biochem Pharma); Adefovir (aprobación rechazada para terapia anti-VIH por FDA; Gilead Sciences); PREVEONMR (Adefovir Dipivoxil; el profármaco activo de adefovir; su forma activa es PMEA-pp); TENOFOVIRMR (bis-POC PMPA; un profármaco PMPA; Gilead); DAPD/DXG (metabolito activo de DAPD; Triangle/Abbott); D-D4FC (relacionado con 3TC, con actividad contra virus resistente a AZT/3TC); GW420867X (Glaxo Wellcome); ZIAGENMR (abacavir/159U89; Glaxo Wellcome, Inc.); CS-87 (3'-azido-2',3'-didesoxiuridina; Publicación WO 99/66936); y S-acil-2-tioetilo de profármaco que contiene-(SATE) de ß-L-FD4C y ß-L-FddC (Publicación WO 98/17281). Los NNRTIs adicionales incluyen COACTINONMR (Emivirina/MKC-442, NNRTI potente de la clase HEPT; Triangle/Abbott); CAPRAVIRINEMR (AG-1549/S-1153, un NNRTI de la siguiente generación con actividad contra viruses que contiene mutación K103N; Agouron); PNU-142721 (tiene de 20 a 50 veces mayor actividad que su delaviridina predecesora y es activa contra mutantes K103N; Pharmacia & Upjohn); DPC-961 y DPC-963 (derivados de efavirenz de segunda generación, designadas para ser activas contra viruses con mutación K103N; DuPont); GW-420867X (tiene 25 veces mayor actividad que HBY097 y es activo contra mutantes K103N; Glaxo Wellcome); CALANOLIDE A (un agente que ocurre naturalmente del árbol de látex; activo contra viruses que contiene ya sea cualquiera o ambas de las mutaciones Y181C y K103N); y Propolis (Publicación WO 99/49830). Los inhibidores de proteasa adicionales incluyen LOPINAVIRMR (ABT378/r; Abbott Laboratories); BMS-232632 (un azapéptido; Bristol-Myers Squibb); TIPRANAVlR R (PNU-140690; una dihidropirona no péptica; Pharmacia & Upjohn); PD-178390 (una dihidropirona no peptídica; Parke-Davis); BMS-232632 (un azapéptido; Bristol Myers Squibb); L-756,423 (un análogo de indinavir; Merck); DMP-450 (un compuesto de urea cíclica; Avid & DuPont); AG-1776 (un péptido mimético con actividad in vitro contra viruses resistentes a inhibidor de proteasa; Agouron); VX-175/GW-433908 (profármaco de fosfato de amprenavir; Vértex & Glaxo Wellcome); CGP61755 (Ciba); y AGENERASEMR (amprenavir; Glaxo Wellcome Inc.). Los agentes antirretrovirales adicionales incluyen inhibidores de fusión/enlazadores gp41. Los inhibidores de fusión/enlazadores gp41 incluyen T-20 (un péptido procedente de los residuos 643-678 del ectodominio de proteína de transmembrana gp41 de VIH que enlaza gp41 en su esíado en reposo y previene la transformación al estado fisogénico; Trimeris) y T-1249 (un inhibidor de fusión de segunda generación; Trimeris). Los agentes retrovirales adicionales incluyen inhibidores de fusión/antagonistas de receptor de quimiocina. Los inhibidores de fusión/antagonistas de receptor de quimiocina incluyen antagonistas CXCR4 tales como AMD 3100 (un biciclam), SDF-1 y sus análogos, y ALX40-4C (un péptido catiónico), T22 (un péptido de 18 aminoácidos; Trimeris) y los análogos T22, T134 y T140; antagonistas CCR5 tales como RANTES (9-68), AOP-RANTES, NNY-RANTES, y TAK-779; y antagonistas CCR5/CXCR4, tal como NSC 651016 (un análogo de distamicina). También se incluyen antagonistas CCR2B, CCR3, y CCR6. Los agonistas del receptor de quimiocina tales como RANTES, SDF-1, MIP-1a, MIP-1ß, etc., también pueden inhibir la fusión. Los agentes antirretrovirales adicionales incluyen inhibidores de integrasa. Los inhibidores de integrasa incluyen ácido dicafeoilquínicos (DFQA); ácido L-quicorico (un ácido de dicafeoiltartárico (DCTA)), quinalizarin (QLC) y antraquinonas relacionadas; ZINTEVIRMR (AR 117, un oligonucleótido que actúa probablemente en la superficie celular en lugar de ser un inhibidor de ¡ntegrasa real; Arondex); y ñafióles tales como los que se describen en la Publicación WO 98/50347. Los agentes antirretrovirales adicionales incluyen compuestos tipo hidroxiurea tales como BCX-34 (un inhibidor de fosforilasa de nucleosido de purina; Biocryst); inhibidores de reductasa de ribonucleótido tales como DIDOXMR (Molecules for Health); inhibidores de deshidrogenasa de aminoacetato de inosina (IMPDH), tales como VX-497 (Vértex); y ácidos micofolicos tales como CelICept (mofetil de micofenolato; Roche). Los agentes antirretrovirales adicionales incluyen inhibidores de integrasa viral, inhibidores de la translocación nuclear de genoma viral tales como compuestos bis(metilcetona) de arileno; inhibidores de entrada de VIH tales como proteína de fusión AOP-RANTES, NNY-RANTES, RANTES-lgG, complejos solubles de RANTES y glucosaminoglicanos (GAG), y AMD-3100; inhibidores de dedo de zinc de nucleocapsido tales como compuestos de ditiano; objetivos de Tat y Rev de VIH; y farmacoaumentadores tales como ABT-378. Otras terapias antirretrovirales y terapias adjuntas incluyen citocinas y linfocinas tales como MIP-1a, MIP-21ß, SDF-1a, IL-2, PROLEUKIN R (aldesleucina/L2-7001; Chiron), IL-4, IL-10, IL-12, e ILK-13; interferones tales como IFN-alfa2a, IFN-alfa2b, o IFN-beta; antagonistas de TNFs, NFkB, GM-CSF, M-CSF, e IL-10; agentes que modulan la activación inmune tales como ciclosporina y prednisona; vacunas tales como RamuneMR (HIV Immunogen), APL 400-003 (Apollon), gp120 recombinante y fragmentos recombinantes, glicoproteína de envoltura recombinante bivalente (B/E), rgp120CM235, MN rgp120, SF-2 rgp120, gp120/complejo CD4 soluble, proteína JR-FL delta, péptido sintético ramificado derivado dominio C3/C4 gp120 discontinuo, inmunogenos competentes de fusión, y vacunas Gag, Pol, Nef, y Tat; terapias a base de genes tales como elementos supresores genéticos (GSEs, WO 98/54366), e intracinas (quimiocinas CC modificadas en forma genética dirigidas al ER para bloquear la expresión de superficie de CCR5 sintetizado recientemente (Yang y Asociados, PNAS 94:11567-72 (1997); Chen y Asociados, Nat. Med. 3:1110-16 (1997)); anticuerpos tales como anticuerpo anti-CXCR4 12G5, los anticuerpos anti-CCR5 2D7, 5C7, PA8, PA9, PA10, PA11, PA12, y PA14, los anticuerpos anti-CD4 Q4120 y RPA-T4, el anticuerpo anti-CCR3 7B11, los anticuerpos anti-gp120 17b, 48d, 447-52D, 268-D y 50.1, anticuerpos anti-Tat, anticuerpos anti-TNF-a, y anticuerpo monoclonal 33A; agonistas receptores de hidrocarburo de arilo (AH) y antagonistas tales como TCDD, 3, 3', 4,4', 5-pentaclorobifenilo, 3,3',4,4'-tetraclorobifenilo, y a-naftoflavona (Publicación WO 98/30213); y antioxidantes tales como éster etílico de ?-L-glutamil-L-cisteína (?-GCE; Publicación WO 99/56764). En una modalidad adicional, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran en combinación con un agente antiviral. Los agentes antivirales que pueden ser administrados con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, aciclovir, ribavirina, amantadina, remantidina, maxamina, o timalfasina. Específicamente, la proteína de fusión de albúmina de interferón puede administrarse en combinación con cualesquiera de estos agentes. Además, la proteína de fusión de albúmina de interferón alfa también puede ser administrada con cualesquiera de estos ageníes, preferentemente, la proteína de fusión de albúmina de interferón alfa 2a o 2b puede administrarse con cualesquiera de estos agentes. Además, la proteína de fusión de albúmina de interferón beta puede ser administrada también con cualquiera de estos agentes. Además, cualesquiera de las proteínas de fusión de albúmina de híbridos de IFN puede administrarse en combinación con cualesquiera de estos agentes. En una modalidad más preferida, la proteína de fusión de albúmina de iníerferón se administra en combinación con ribavirina. En una modalidad preferida, la proteína de fusión de albúmina de interferón alfa se administra en combinación con ribavirina. En una modalidad preferida adicional, la proteína de fusión de albúmina de interferón alfa 2a se administra en combinación con ribavirina. En una modalidad preferida, la proteína de fusión de albúmina de interferón alfa 2b se administra en combinación con ribavirina. En una modalidad preferida adicional, la proteína de fusión de albúmina de interferón beta se administra en combinación con ribavirina. En una modalidad preferida adicional, la proteína de fusión de albúmina de interferón híbrido se administra en combinación con ribavirina. En otras modalidades, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se pueden administrar en combinación con agentes de infección anti-oportunistas. Los agentes anti-oportunistas que se pueden administrar en combinación con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, TRIMETHOPRIM-SULFAMETHOXAZOLEMR, DAPSONEMR PENTAMIDINE R, ATOVAQUONEMR, ISONIAZIDMR, RIFAMPINMR PYRAZINAMIDEMR, ETHAMBUTOLMR, RIFABUTINMR CLARITHROMYCINMR, AZITHROMYCIN R, GANCICLOVIRMR FOSCARNET R, ClDOFOVIRMR, FLUCONAZOLEMR ITRACONAZOLEMR, KETOCONAZOLE -MR ACYCLOVIRMR FAMCICLOVIRMR, PYRIMETHAMINEMR, LEUCOVORINMR NEUPOGENMR (filgrastim/G-CSF), y LEUKINE MR (sargramostim/GM-CSF). En una modalidad específica, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se utilizan en cualquier combinación con TRIMETHOPRIM-SULFAMETHOXAZOLEMR, DAPSONEMR, PENTAMIDINEMR, y/o ATOVAQUONEMR para tratar en forma profiláctica o evitar una infección de neumonía Pneumocystis carinii. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se utilizan en cualquier combinación con ISONIAZIDMR, RIFAMPINMR, PYRAZINAMIDEMR, y/o ETHAMBUTOLMR para tratar o prevenir de manera profiláctica una infección compleja de Mycobacterium avium oportunista. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se utilizan en cualquier combinación con RIFABUTINMR, CLARITHROMYCINMR, y/o AZITHROMYCINMR para tratar o prevenir en forma profiláctica una infección Mycobacterium tuberculosis oportunista. En otra modalidad específica, las proíeínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se utilizan en cualquier combinación con GANCICLOVIRMR, FOSCARNETMR, y/o CIDOFOVIRMR para tratar o prevenir en forma profiláctica una infección de citomegalovirus oportunista. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se utilizan en cualquier combinación con FLUCONAZOLEMR, ITRACONAZOLE R, y/o KETOCONAZOLEMR para íraíar o prevenir en forma profiláctica una infección fúngica oportunista. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se utilizan en cualquier combinación con ACYCLOVIRMR y/o FAMCICLOVIRMR para tratar o prevenir de manera profiláctica una infección por virus de herpes simple tipo l y/o tipo II oportunista. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se utilizan en cualquier combinación con PYRIMETHAMINEMR y/o LEUCOVORlNMR para tratar o prevenir en forma profiláctica una infección por Toxoplasma gandii oportunista. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se utilizan en cualquier combinación con LEUCOVORINMR y/o NEUPOGENMR para tratar o prevenir en forma profiláctica una infección bacteriana oportunista. En una modalidad adicional, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran en combinación con un agente antibiótico. Los agentes antibióticos que se pueden administrar con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, amoxicilina, beta-lactamasas, aminoglucosidos, beta-lactam (glicopéptido), beta-lactamasas, clindamicina, cloranfenicol, cefalosporinas, ciprofloxacina, eritromicina, fluoroquinolonas, macrolidos, metronidazol, penicilinas, quinolonas, rapamicina, rifampina, estreptomicina, sulfonamida, tetraciclinas, trimetoprim, trimetoprim-sulfametoxazol, y vancomicina. En otras modalidades, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran en combinación con agentes inmunosupresores. Los agentes inmunosupresores que pueden ser administrados en combinación con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, levamisol (por ejemplo, EGAMISOLMR), isoprinosina (por ejemplo, INOSIPLEXMR), interferons (por ejemplo, interferón alfa), e interleucinas (por ejemplo, IL-2). En otras modalidades, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran en combinación con agentes inmunosupresores. ~ Los agentes inmunosupresores que se pueden administrar en combinación con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, incluyen, pero no se limitan a, esteroides, ciclosporina, análogos de ciclosporina, metilprednisona de ciclofosfamida, prednisona, azatioprina, FK-506, 15-desoxiespergualina, y otros ageníes inmunosupresores que actúan suprimiendo la función de respuesta de células T. Otros agentes inmunosupresores que se pueden administrar en combinación con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, prednisolona, metotrexato, talidomida, metoxsalen, rapamicina, leflunomida, mizoribina (BREDININMR), brequinar, desoxiespergualina, y azaespirano (SKF 105685), ORTHOCLONE OKT® 3 (muromonab-CD3), SANDIMMUNE R, NEORALMR, SANGDYAMR (ciclosporina), PROGRAF® (FK506, tacrolimus), CELLCEPT® (mofetil de micofenolato, o de los cuales el metaboliío activo es ácido micofenolico), IMURANMR (azatioprina), glucocorticosleroides, esteroides adrenocorticos tales como DELTASONEMR (prednisona), y HYDELTRASOLMR (prednisolona), FOLEXMR y MEXATEMR (metotrexaío), OXSORALEN-ULTRAMR (meíoxsalen), y RAPAMUNEMR (sirolimus). En una modalidad específica, los ¡nmunosupresores se pueden uíilizar para prevenir el rechazo de írasplante de órganos o médula ósea. En una modalidad adicional, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran solos o en combinación con una o más preparaciones de globulina inmune intravenosa. Las preparaciones de globulina inmune intravenosa que se pueden administrar con las proíeínas de fusión de albúmina y/o polinucleóíidos de la preseníe invención, incluyen pero no se limitan a, GAMMARMR, IVEEGAMMR, SANDOGLOBULINMR, GAMMAGARD S/DMR, ATGAMMR (globulina antitimocito), y GAMIMUNEMR. En una modalidad específica, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleófidos de la preseníe invención se administran en combinación con preparaciones de globulina inmune intravenosa en terapia de transplaníe (transplante de médula ósea). En otra modalidad, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran solos o como parte de una terapia de combinación, ya sea in vivo a pacientes o in vitro a células, para el tratamiento de cáncer. En una modalidad específica, las proteínas de fusión de albúmina, particularmente fusiones de IL-2-albúmina, se administran en forma repetida durante inmunoterapia pasiva para cáncer, tal como terapia de transferencia de célula adoptiva para melanoma metasfáfico, íal como se describe en la Publicación de Dudley y Asociados (Science Express, 19 de septiembre de 2002, en el sitio www.scienceexpress.org, la cual se incorpora en su totalidad a la presente invención como referencia). En ciertas modalidades, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran solos o en combinación con un agente anti-inflamatorio. Los agentes anti-inflamatorios que se pueden administrar con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, incluyen pero no se limiían a, corticosteroides (por ejemplo, betametasona, budesonida, cortisona, dexametasona, hidrocortisona, metilprednisolona, prednisolona, prednisona, y triamcinolona), fármacos anti-inflamatorios no esteroidales (por ejemplo, diclofenac, diflunisal, etodolac, fenoprofen, floctafenina, flurbiprofen, ibuprofen, indometacin, cetoprofen, meclofenamato, ácido mefenámico, meloxicam, nabumetona, naproxeno, oxaprozin, fenilbutazona, piroxicam, sulindac, tenoxicam, ácido tiaprofénico y tolmetin), así como antihistaminas, derivados de ácido aminoarilcarboxílico, o derivados de ácido arilacético, derivados de ácido arilbutírico, ácidos arilcarboxílicos, derivados de ácido arilpropiónico, pirazoles, pirazolonas, derivados de ácido salicílico, tiazinocarboxamidas, ácido e-acetamidocaproico, S-adenosilmetionina, ácido 3-amino-4-hidroxibutírico, amixetrina, bendazac, benzidamina, bucoloma, difenpiramida, ditazol, emorfazona, guaiazuleno, nabumetona, nimesulida, orgoteína, oxaceprol, paranilina, perisoxal, pifoxima, proquazona, proxazol, y tenidap. En una modalidad adicional, las composiciones de la presente invención se administran solas o en combinación con un agente anti-angiogénico. Los agentes anti-angiogénicos que se pueden administrar con las composiciones de la presente invención, incluyen, pero no se limitan a, angiostatina (Entremed, Rockville, MD), Troponina-1 (Boston Life Sciences, Boston, MA), factor anti-invasivo, ácido retinoico y derivados del mismo, paclitaxel (Taxol), Suramina, Inhibidor de Tejido de Metaloproteinasa-1 , Inhibidor de Tejido de Metaloproteinasa-2, VEGI, lnhibidor-1 de Activador de Plasminogen, Inhibidor de-2 de Activador de Plasminogen, y varias formas de los metales de transición de "grupo d" más ligeros. Los metales de transición de "grupo d" más ligeros incluyen, por ejemplo, especies de vanadio, molibdeno, íungsíeno, liíanio, niobio, y íaníalio. Dichas especies de metal de transición pueden formar complejos de mefal de íransición. Los complejos adecuados de las especies de melal de fransición antes mencionados incluyen complejos de metal de transición oxo. Los ejemplos representativos de complejos de vanadio incluyen complejos de vanadio oxo, tales como complejos de vanadato y vanadilo. Los complejos de vanadato adecuados incluyen complejos de metavanadaío y ortovanadato, tales como, por ejemplo, metavanadato de amonio, metavanadato de sodio y ortovanadaío de sodio. Los ejemplos de vanadilo adecuados incluyen , por ejemplo, acetilacetonato de vanadilo, y sulfato de vanadilo incluyendo hidralos de sulfafo de vanadilo tales como mono y trihidratos de sulfato de vanadilo. Los ejemplos representativos de complejos de tungsteno y molibdeno, incluyen también complejos oxo. Los complejos de tungteno oxo adecuados, incluyen complejos de óxido de tungstato y tunsgteno. Los complejos de tungsíato adecuados incluyen tungstafo de amonio, tungstaío de calcio, dihidraío de lungstato de sodio y ácido túngstico. Los óxidos de tungsteno adecuados incluyen óxido de tungsteno (IV) y óxido de tungsteno (VI). Los complejos de molibdeno oxo adecuados incluyen molibdato, óxido de molibdeno y complejos de molibdenilo. Los complejos de molibdato adecuados incluyen molibdato de amonio y sus hidratos, molibdato de sodio y sus hidrafos y molibdafo de potasio y sus hidratos. Los óxidos de molibdeno adecuados incluyen óxido de molibdeno (VI ), óxido de molibdeno (VI ) y ácido molíbdico. Los complejos de molibdenilo adecuados incluyen, por ejemplo, acetilacetonato de molibdenilo. Otros complejos de tungsteno y molibdeno adecuados incluyen derivados de hidroxo, derivados de por ejemplo, glicerol , ácido tartárico y azúcares.

También se pueden utilizar una amplia variedad de otros factores anti-angiogénicos dentro del contexto de la presente invención. Los ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a, factor de plaqueía 4; sulfato de protamina; derivados de quilina sulfada (preparados de conchas de cangrejo reinas), Murata y Asociados, Cáncer Res. 51:22-26, (1991)); Complejos de Peptidoglicano de Polisacárido Sulfatado (SP-PG) (la función de este compuesto puede mejorarse a través de la presencia de esteroides tales como estrogeno y citrato de tamoxifen); estaurosporina; moduladores de metabolismo de matriz, incluyendo por ejemplo, análogos de prolina, cis-hidroxiprolina, d,L-3,4-deshidroprolina, Tiaprolina, alfa.alfa-dipiridilo, fumarato de aminopropionitrilo; 4-propil-5-(4-piridinil)-2(3H)-oxazolona; Metotrexato, Mitoxantrona; Heparina; Interferons; 2-macroglobulina-suero; ChlMP-3 (Pavloff y Asociados, J. Bio. Chem. 267:17321-17326 (1992)); Cimostatina (Tomkinson y Asociados, Biochem. J. 286:475-480 (1992)), Tetradecasulfato de Ciclodextrina; Eponemicina; Camptotecina; Fumagilina (Ingber y Asociados, Nature 348:555-557, (1990)); Tiomalato de Sodio de Oro ("GST"; Matsubara y Ziff, J. Clin. Invest. 79:1440-1446, (1987)); aníicolagenasa-suero; alfa2-anfiplasmina (Holmes y Asociados, J. Biol. Chem. 262(4):1659-1664, (1987)); Bisantreno (National Cáncer Institute); disodio de ácido (N-(2)-carboxifenil-4-cloroaníronílico disodico de Lobenzarií o "CCA"; (Takeuchi y Asociados, Agents Actions 36:312-316, (1992)); e inhibidores de metaloproíeinasa íales como BB94. Los factores anti-angiogénicos adicionales que fambién se pueden uíilizar deníro del coníexfo de la preseníe invención, incluyen Talidomida (Celgene, Warren, NJ); esteroide Angiostálico; AGM-1470 (H. Brem y J. Folkman, J. Pediatr. Surg. 28:445-51 (1993)); un antagonista de alfa v beta 3 de integrina (C. Storgard y Asociados, J. Clin. Invest. 103:47-54 (1999)); carboxinaminolimidazol; Carboxiamidotriazol (CAÍ) (National Cáncer Insíitute, Beíhesda, MD); Combreíasíina A-4 (CA4P) (OXIGENE, Bosíon, MA); Squalamina (Magainin Pharmaceuticals, Plymouth Meeting, PA); TNP-470, (Tap Pharmaceuticals, Deerfield, IL); ZD-0101 AstraZeneca (Londres, RU); APRA (CT2584); Benefin, Birostatina-1 (SC339555); CGP-41251 (PKC 412); CM101; Dexrazoxano (ICRF187); DMXAA; Endostatina; Flavopridiol; Genesteína; GTE; ImmTher; Iressa (ZD1839); Ocíreotida (Somatosíaíina); Panreíina; Penacilamina; Foíopunta; PI-88; Prinomastaí (AG-3340) Purliíin; Suradisía (FCE26644); Tamoxifen (Nolvadex); Tazaroíeno; Teíratiomolibdato; Xeloda (Capecitabina); y 5-fluorouracilo. Los agentes anti-angiogénicos que se pueden administrar en combinación con los compuestos de la preseníe invención pueden trabajar a través de una variedad de mecanismos incluyendo pero sin limitarse a, inhibición de proteolisis de la maíriz extracelular, bloqueo de la función de las moléculas de adhesión de matriz de célula endotelial-extracelular, antagonizando la función de inductores de angiogénesis tales como facíores de crecimienío, e inhibiendo los receptores de integrina expresados en proliferación de células endoteliales. Los ejemplos de inhibidores anti-angiogénicos que interfieren con proteolisis de matriz extracelular y que se pueden adminisírar en combinación con las composiciones de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, AG-3340 (Agouron , La Jolla, CA), BAY-12-9566 (Bayer, West Haven , CT), BMS-275291 (Brisíol Myers Squibb, Princeton, NJ), CGS-27032A (Novartis, East Hanover, NJ), Marimasíaí (Briíish Biotech, Oxford, RU), y Metasíaí (Aetema, St-FIoy, Quebec). Los ejemplos de inhibidores anti-angiogénicos que actúan bloqueando la función de las moléculas de adhesión de matriz extracelular-célula endofelial y que se pueden adminislrar en combinación con las composiciones de la presente invención , incluyen pero no se limitan a, EM D-121 974 (Merck KegaA Darmstadí, Alemania), y Vitaxin (Ixxsys, La Jolla, CA/Medimmune, Gaitersburg, MD). Los ejemplos de agentes anti-angiogénicos que actúan antagonizando o inhibiendo direcíameníe los inducíores de angiogénesis y que se pueden administrar en combinación con las composiciones de la presente invención , incluyen pero no se limitan a, Angiozima (Ribozyme, Boulder, CO), anticuerpo anti-VEGF (Geneníech, S. San Francisco, CA), PTK-787/ZK-225846 (Novaríis, Basilea, Suiza), S U-1 01 (Sugen , S. San Francisco, CA), SU-5416 (Sugen/Pharmacia Upjohn , Bridgewater, NJ ), y SU-6668 (Sugen). Otros agentes anti-angiogénicos actúan para inhibir directamente la angiogénesis. Los ejemplos de inhibidores indirectos de angiogénesis que se pueden administrar en combinación con las composiciones de la presente invención , incluyen pero no se limitan a, I M-862 (Cytran , Kirkland , WA), interferon-alfa, I L-12 (Roche, N utley, NJ), y polisulfaío de Pentosan (Georgetown Universiíy, Washington , DC). En modalidades particulares, el uso de las composiciones de la presente invención en combinación con agentes aníi-angiogénicos se coníempla para el tratamiento, prevención , y/o disminución de una enfermedad autoinmune, tal como por ejemplo, una enfermedad auíoinmune descriía en la preseníe invención . En una modalidad particular, el uso de las composiciones de la presente invención en combinación con agentes anti-angiogénicos se contempla para el tratamiento, prevención y/o disminución de artritis. En una modalidad más particular, el uso de composiciones de la presente invención en combinación con agentes anti-angiogénicos se contempla para el traíamienfo, prevención, y/o disminución de aríriíis reumaíoide. En otra modalidad, los polinucleótidos que codifican un polipéptido de la preseníe invención se administran en combinación con una proteína angiogénica, o polinucleótidos que codifican una proteína angiogénica. Los ejemplos de proteínas que pueden ser adminislradas con las composiciones de la preseníe invención , incluyen pero no se limitan a, factores de crecimiento de fibroblasto ácidos y de base, VEGF-1 , VEGF-2, VEGF-3, facíor alfa y befa de crecimiento epidérmico, factor de crecimienío de célula endoíelial derivado de plaqueías, facíor de crecimienío derivado de plaquetas, factor alfa de necrosis de lumor, factor de crecimiento de hepaíociío, factor de crecimiento tipo insulina, factor de esíimulación de colonia, factor de estimulación de colonia de macrófagos, factor de estimulación de colonia de granulocito/macrófago y siníasa de óxido níírico. En modalidades adicionales, las composiciones de la preseníe invención se adminislran en combinación con un ageníe quimiolerapéufico. Los agentes quimioterapéuficos que se pueden administrar con las proteínas y/o polinucleótidos de fusión de albúmina de la presente invención , incluyen pero no se limiían a, ageníes de alquilación tales como mostazas de nitrógeno (por ejemplo, Mecloreíamina, ciclofosfamida, Ifosfamida de Ciclofosfamida, Melfalan (L-sarcolisina), y Clorambucil), etileniminas y metilmelaminas (por ejemplo, Hexametilmelamina y Tiotepa), sulfonaíos de alquilo (por ejemplo, Busulfan), niírosoureas (por ejemplo, Carmusíina (BCN U), Lomustina (CCNU), Semustina (meíilo-CCNU), y Streptozocina (estreptozoíocina)), triazenos (por ejemplo, Dacarbazina (DTI C; dimetillriazenoimidazolcarboxamida)), análogos de ácido folico (por ejemplo, Metotrexato (ametopterina)), análogos de piridimina (por ejemplo, Fluorouracil (5-fluorouracil ; 5-FU), Floxuridina (fluorodesoxiuridina; FudR) y Citarabina (arabinosida de citosina)), análogos de purina e inhibidores relacionados (por ejemplo, Mercapíopurina (6-mercapíopurina; 6-MP); Tioguanina (6-íioguanina; TG), y Pentostaíina (2'-desoxiciformicina); alcaloides vinca (por ejemplo, Vinblastina (VLB, sulfato de vinblastina)) y Vincrisíina (sulfato de vincristina)), epipodofilotoxinas (por ejemplo, Etoposida y Teniposida), antibióticos (por ejemplo, Dactinomicina (actinomicina D), Daunorrubicina (daunomicina; rubidomicina), Doxorrubicina, Bleomicina, Picamicina (mitramicina) y Miíomicina (mitomicina C), enzimas (por ejemplo, L-asparaginasa), modificadores de respuesta biológica (por ejemplo, interferon-alfa e interferon-alfa-2b), compuesfos de coordinación de plaíino (por ejemplo, cisplatin (cis-DDP) y Carboplatin), antracenodiona (Mitoxanfrona), ureas substituidas (por ejemplo, Hidroxiurea), derivados de metilhidrazina (por ejemplo, Procarbazina (N-metilhidrazina; MI H), adrenocoríicosíeroides (por ejemplo, Prednisona), progestinas (por ejemplo, caproato de hidroxiprogesterona, Medroxiprogesíerona, aceíaío de Medroxiprogesíerona y acetato de Megestrol), estrogenos (por ejemplo, Diefilesíibestrol (DES), difosfato de diefilesíilbestrol, Estradiol, y estradiol de Etinilo), antiestrogeno (por ejemplo, Tamoxifen), androgenos (propionaío de Testosterona y Fluoximesterona), antiandrogenos (por ejemplo, Flutamida), análogos de hormona de liberación de gonadotropina (por ejemplo, Leuprolida), ofras hormonas y análogos de hormona (por ejemplo, meíilfesíosferona, estramustina, sodio de fosfato de esíramusíina, cloroírianiseno y testolactona), y otros (por ejemplo, dicarbazina, ácido gluíámico y mitotano). En una modalidad, las composiciones de la presente invención se administran en combinación con uno o más de los siguientes fármacos: infliximab (también conocido como RemicadeM R Centocor, Inc.), Trocade (Roche, RO-32-3555), Leflunomida (también conocida como AravaMR de Hoechst Marión Roussel), KineretM R (un antagonista de receptor de IL-1 también conocido como Anakinra de Amgen , I nc. ). En una modalidad específica, las composiciones de la presente invención se administran en combinación con CHOP (ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina, y prednisona) o una combinación de uno o más de los componentes de CHOP . En una modalidad , las composiciones de la presente invención se administran en combinación con anticuerpos anti-CD20, aníicuerpos anli-CD20 monoclonales humanos. En oíra modalidad, las composiciones de la preseníe invención se administran en combinación con anticuerpos anti-CD20 y CHOP, o anticuerpos aníi-CD20 y cualquier combinación de uno o más de los componentes de CHOP, particularmente ciclofosfamida y/o prednisona. En una modalidad específica, las composiciones de la presente invención se administran en combinación con Riíuximab. En una modalidad adicional , las composiciones de la preseníe invención se administran con Rituximab y CHOP , o Rituximab y cualquier combinación de uno o más de los componentes de CHOP, particularmente ciclofosfamida y/o prednisona. En una modalidad específica, las composiciones de la preseníe invención se administran en combinación con tositumomab. En una modalidad adicional, las composiciones de la presente invención se administran con tositumomab y CHOP, o tositumomab y cualquier combinación de uno o más de los componentes de CHOP, parficularmenle ciclofosfamida y/o prednisona. Los anticuerpos anti-CD20 pueden asociarse opcionalmente con radioisótopos, toxinas, o profármacos citotoxicos. En oíra modalidad específica, las composiciones de la preseníe invención se adminisíran en combinación con ZevalinMR. En una modalidad adicional, las composiciones de la presente invención se administran con ZevalinM R y CHOP , o ZevalinM R y cualquier combinación de uno o más de los componentes de CHOP, particularmente ciclofosfamida y/o prednisona. ZevalinMR se puede asociar con uno o más radioisótopos. Los isótopos particularmente preferidos son 90Y y 111 l n. En una modalidad adicional, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presenfe invención se administran en combinación con citocinas. Las citocinas que pueden ser administradas con las proíeínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, I L2, I L3, I L4, I L5, I L6, I L7, I L10, I L12, I L13, I L15, aníi-CD40, CD40L, I FN-gamma y TN F-alfa. En otra modalidad, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleóíidos de la preseníe invención , se pueden adminislrar con cualquier iníerleucina, incluyendo pero sin limitarse a, IL-1 alfa, IL-1beta, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, 1L-12, IL-13, IL-14, 1L-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, e IL-21. En una modalidad, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la preseníe invención, se administran en combinación con miembros de la familia TNF. Las moléculas TNF, relacionadas con TNF o tipo TNF que se pueden administrar con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, formas solubles de TNF-alfa, linfotoxina-alfa (LT-alfa, íambién conocido como TNF-beía), LT-beta (que se encuentra en el heterotrímero complejo LT-alfa-2beía), OPGL, FasL, CD20L, CD30L, CD40L, 4-IBBL, DcR3, OX40L, TNF-gamma (Publicación Internacional No. WO 96/14328), AIM-1 (Publicación Internacional No. WO 97/33899), enddcina-alfa (Publicación Internacional No. WO 98/07880), OPG, y neuirocina-alfa (Publicación Internacional No. WO 98/18921), OX40, y factor de crecimiento de nervios (NGF), formas solubles de Fas, CD30, CD27, CD40, y 4-IBB, TR2 (Publicación Internacional No. WO 96/34095), DR3 (Publicación Internacional No. WO 97/33904), DR4 (Publicación Internacional No. WO 98/32856), TR5 (Publicación Internacional No. WO 98/30693), TRANK, TR9 (Publicación Internacional No. WO 98/56892), TR10 (Publicación Internacional No. WO 98/54202), 312C2 (Publicación Internacional No. WO 98/06842), y TR12, y formas solubles de CD154, CD70, y CD153. En una modalidad adicional, las proíeínas de fusión de albúmina y/o polinucleófidos de la presente invención se administran en combinación con proteínas angiogénicas. Las proteínas angiogénicas que se pueden administrar con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleóíidos de la preseníe invención , incluyen pero no se limitan a, Factor de Crecimienío Derivado de Glioma (GDGF), tal como se describe en la Patente Europea No. EP-399816; Factor-A de Crecimiento Derivado de Plaquetas (PDGF-A), tal como se describe en la Pateníe Europea No. EP-6821 10; Facíor-B de Crecimienfo Derivado de Plaqueías (PDGF-B), tal como se describe en la Pateníe Europea No. EP-282317; Factor de Crecimiento de Placenta (PIGF), tal como se describe en Publicación I nternacional No. WO 92/06194; Factor-2 de Crecimiento de Placenta (PIG F-2), tal como se describe en la Publicación de Hauser y Asociados, Growth Factors, 4:259-268 ( 1 993); Facíor de Crecimiento Endotelial Vascular (VEGF), tal como se describe en la Publicación I nternacional No. WO 90/13649; Factor-A de Crecimiento Endotelial Vascular (VEGF-A), tal como se describe en la Patente Europea No. EP-506477; Factor-2 de Crecimienío Endotelial Vascular (VEGF-2), tal como se describe en la Publicación I níernacional No. WO 96/39515; Factor-B de Crecimiento Endotelial Vascular (VEGF-3); Factor B-1 86 de Crecimiento Endofelial Vascular (VEGF-B 186), lal como se describe en la Publicación I nternacional No. WO 9626736; Factor-D de Crecimiento Endotelial Vascular (VEGF-D), tal como se describe en la Publicación I nternacional No. WO 98/02543; Factor- D de Crecimiento Endotelial Vascular (VEGF-D), tal como se describe en la Publicación Internacional No. WO 98/07832; y Factor-E de Crecimiento Endotelial Vascular (VEGF-E), tal como se describe en la Patente Alemana No. DE19639601. Las referencias antes mencionadas están incorporadas en su totalidad a la presente invención como referencia. En una modalidad adicional, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran en combinación con Factores de Crecimiento de Fibroblasto. Los Factores de Crecimiento de Fibroblasto que se pueden administrar con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, FGF-1, FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8, FGF-9, FGF-10, FGF-11, FGF-12, FGF-13, FGF-14, y FGF-15. En una modalidad adicional, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, se administran en combinación con factores de crecimiento hematopoyético. Los factores de crecimiento hematopoyético que se pueden administrar con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, factor de estimulación de colonia de macrófagos de granulocito (GM-CSF) (sargramostim, LEUKINEMR, PROKINEMR), factor de estimulación de colonia de granulocito (G-CSF) (filgrastim, NEUPOGENMR), factor de estimulación de colonia de macrófagos (M-CSF, CSF-1 ) eritropoyetina (epoyetina alfa, EPOGENMR, PROCRITMR), factor de célula madre (SCF, ligando c-kit, factor de acero), factor de estimulación de colonia de megacariocitos, PIXY321 (una proteína de fusión GMCSF/IL-3), interieucinas, especialmente cualesquiera de una o más de IL-1 a I L-12, interferon-gamma, o trombopoyetina. En ciertas modalidades, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran en combinación con bloqueadores adrenérgicos, tales como, por ejemplo, acebutolol, atenolol , betaxolol, bisoprolol, carteolol, labetalol, metoprolol, nadolol, oxprenolol, penbutolol, pindolol, propanolol, sotalol , y timolol. En otra modalidad , las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran en combinación con un fármaco anti-arrítmico (por ejemplo, adenosina, amidoarona, bretilio, digitalis, digoxin , digitoxin , diliazem, disopiramida, esmolol, flucainida, lidocaína, mexiletina, moricizina, fenotoína, procainamida, procainamida N-acetilo, propafenona, propranolol , quimidina, sotalol , tocainida, y verapamil). En otra modalidad, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran en combinación con agentes diuréticos, tales como agentes de inhibición de anhidrasa carbónica (por ejemplo, acetazolamida, diclorfenamida, y metazolamida), diuréíicos osmóticos (por ejemplo, glicerina, isosorbide, maniíol, y urea), diuréticos que inhiben el simporte Na+-K+-2CI" (por ejemplo, furosemida, bumetanida, azosemida, piretanida, tripamida, ácido efacrínico, muzolimina, y íorsemida), diuréticos de tiazida y íipo íiazida (por ejemplo, bendroflumetiazida, benztiazida, cloroíiazida, hidrocloroíiazida, hidroflumeíiazida, meíilcloíiazida, poliíiazida, íricormeíiazida, cloríalidona, ¡ndapamida, meíolazona, y quimeíazona), diuréíicos de reserva potasio (por ejemplo, amilorida y triamíereno), y agonisías de recepíor de mineral corlicoide (por ejemplo, espironolacíona, canrenona, y canrenoaío de potasio). En una modalidad, las proteínas de fusión de albúmina y/o polipépíidos de la preseníe invención se adminisíran en combinación con íratamientos para padecimieníos de desequilibrio endocrino y/o de hormonas. Los tratamientos para padecimientos de desequilibrio endocrino y/o de hormonas incluyen pero no se limitan a, 127l, isoíopos radioactivos de yodina tales como 31l y 123l; hormona de crecimiento recombinante tal como HUMATROPEMR (somaíropina recombinaníe); análogos de hormona de crecimienío íales como PROTROPINMR (somatrem); agonistas de dopamina tales como PARLODELMR (bromocripíina); análogos de somatostatina tales como SANDOSTATINMR (octreotida); preparaciones de gonadotropina tales como PREGNYLMR, A.P.L.MR y PROFASIMR (gonadotropina corionica (CG)), PERGONALMR (menotropinas), y METRODINMR (urofolitropina (uFSH)); preparaciones de hormona de liberación de gonadofropina humana sintética tales como FACTRELMR y LUTREPULSEMR (clorhidrato de gonadorelina); agonistas de gonadotropina sintética tales como LUPRONMR (acetato de leuprolida), SUPPRELINMR (acetato de histrelina), SYNAREL R (acetato de nafarelina); y ZOLADEXMR (acetato de goserelina), preparaciones sintéficas de hormona de liberación de íirolropina, íales como RELEFACT TRHMR y THYPINONEMR (profirelina), TSH humana recombinaníe, íal como THYROGENMR; preparaciones siníéticas de las sales de sodio de ¡someros naturales de hormonas de tiroide tales como L-T4MR, SYNTHROIDMR, y LEVOTHROIDMR (sodio de levotiroxina), L-T3MR, CYTOMELMR y TRIOSTATMR (sodio de liotiroína) y THYROLARMR (lioírix), compuesfos aníiíiroideos tales como 6-n-propiltiouracilo (propilíiouracilo), 1-meíil-2-mercapíoimidazol y TAPAZOLEMR (meíimazol), NEO-MERCAZOLEMR (carbimazol); antagonistas de receptor beía-adrenérgico tales como propanolol y esmolol; bloqueadores de canal Ca2+; dexametasona y agentes de conírasíe radiológico yodinados tales como TELEPAQUEMR (ácido iopanoico) y ORAGRAFINMR (ipodato de sodio). Los tratamientos adicionales para padecimientos de desequilibrio endocrino y/o hormonal incluyen, pero no se limitan a, estrogenos o esfrogenos conjugados tales como ESTRACEMR (estradiol), ESTINYLMR (estradiol de etinilo), PREMARINMR, ESTRATABMR, ORTHO-ESTMR, OGENMR y estropipato (estrona), ESTROVISMR (quinestrol), ESTRADERMMR (estradiol), DELESTROGENMR, y VALERGENMR (valerato de estradiol), DEPO-ESTRADIOL, CYPIONATEMR, y ESTROJECT LAMR (cipionato de esíradiol), antiestrogenos tales como NOLVADEXMR (tamoxifen), SEROPHENEMR y CLOMIDMR (clomifeno); progestinas tales como DURALUTINMR (caproato de hidroxiprogesíerona), MPAMR y DEPO-PROVERAMR (acetato de medroxiprogesterona), PROVERAMR y CYCRINMR (MPA), MEGACEMR (acetaío de megesirol), NORLUTINMR (noretindrona), y NORLUTATEMR y AYGESTINMR (acetato de noretindrona); implantes de progesterona íales como NORPLANT SYSTEMMR (implaníes subdérmicos de norgesírel), antiprogestinas tales como RU 486MR (mifepristona); anticonceptivos hormonales tales como ENOVIDMR (noretinodrel más mesfranol), PROGESTASERTMR (aparato intrauterino que libera progesterona), LOESTRINMR, BREVICONMR, MODICONMR, GENORAMR, NELONAMR, NORINYLMR, OVACON-35MR, y OVACON-50MR (esíradiol de eíinilo/noretindrona); LEVLENMR, NORDETTEMR, TRl-LEVLENMR, y TR1PHASIL-21MR (estradiol de etinilo/levonorgestrel), LO/OVRALMR y OVRALMR (esíradiol de etinilo/norgestrel), DEMULENMR (estradiol de etinilo/diacetato de etinodiol), NORINYLMR, ORTHO-NOVUMMR, NORETHINMR, GENORAMR, y NELOVAMR (norefindrona/mesíranol), DESOGENMR y ORTHO-CEPTMR (estradiol de etinilo/desogesírel), ORTHO-CYCLENMR y ORTHO-TRICYCLENMR (estradiol de etinilo/norgestimato), MICRONORMR y NOR-QDMR (noreíindrona), y OVRETTEMR (norgestrel).

Los tratamientos adicionales para padecimientos de desequilibrio endocrino y/o hormonal incluyen pero no se limitan a, esteres de tesíosterona tales como acetaío de metenolona y undecanoato de íestosterona; androgenos parenterales y orales tales como TESTOJECT-50MR (testosterona), TESTEXMR (propionato de testosterona), DELATESTRYLMR (enantato de testosterona), DEPO-TESTOSTERONEMR (cipionato de testosterona), DANOCRINEMR (danazol), HALOTESTINMR (fluoximesterona), ORETON METHYLMR, TESTREDMR y VIRILONMR (metiltestosterona), y OXANDRINMR (oxandrolona); sistemas transdérmicos de testosterona tales como TESTODERMMR; antagonistas de receptor de androgeno e inhibidores de 5-alfa-reductasa tales como ANDROCURMR (acefato de ciproterona), EULEXINMR (flutamida), y PROSCARMR (finasterida); preparaciones de hormonas adrenocorticotrópicas tales como CORTROSYNMR (cosintropina); esferoides adrenocoríicales y sus análogos siníéíicos, íales como ACLOVATEMR (dipropionato de alclometasona), CYCLOCORTMR (amcinonida), BECLOVENTMR y VANCERILMR (dipropionato de beclometasona), CELESTONEMR (betametasona), BENlSONEMR y UTICORTMR (benzoato de betamefasona), DIPROSONEMR (dipropionaío de betametasona), CELESTONE PHOSPHATEMR (fosfato de sodio de betametasona), CELESTONE SOLUSPANMR (fosfato y acetato de sodio de betametasona), BETA-VALMR y VALISONEMR (valerato de betametasona), TEMOVATEMR (propionato de clobetasol), CLODERMMR (pivalato de clocortolona), CORTEFMR y HYDROCORTONEMR (cortisol (hidrocortisona)), HYDROCROTONE ACETATEMR (cortisol (hidrocortisona) acetato), LOCOIDMR (cortisol (hidrocortisona) butiraío), HYDROCORTONE PHOPHATEMR (coríisol (hidrocoríisona) fosfato de sodio), A-HYDROCORT R y SOLUCORTEMR (cortisol (hidrocoríisona) succinaío de sodio), WESTCORTMR (coríisol (hidrocorlisona) valeraío), CORTISONE ACETATE R (acetato de cortisona), DESOWENMR u TRIDESILONMR (desonida), TOPICORTMR (desoximetasona), DECADRONMR (dexametasona), DECADRON LAMR (aceíato de dexametasona), DECADRON PHOSPHATEMR y HEXADROL PHOSPHATEMR (fosfaío de sodio de dexameíasona), FLORONEMR y MAXIFLORMR (diacetato de diflorasona), FLORINEF ACETATEMR (acetato de fludrocortisona), AEROBIDMR y NASALIDEMR (flunisolida), FLUONIDMR y SYNALAR R (acetonida de fluocinolona), LIDEXMR (fluocinonida), FLUOR-OPMR y FMLMR (fluorometolona), CORDRANMR (flurandrenolida), HALOGMR (halcinonida), HMS LIZUFILMMR (medrisona), MEDROLMR (metilprednisolona), DEPO-MEDROLMR y MEDROL ACETATEMR (acéfalo de metilprednisona), A-METHAPREDMR y SOLUMEDROLMR (succinato de sodio de metilprednisolona), ELOCONMR (furoato de mometasona), HALDRONEMR (acetato de parametasona), DELTA-CORTEFMR (prednisolona), ECONOPREDMR (acetato de prednisolona), HYDELTRASOLMR (fosfato de sodio de prednisolona), HYDELTRA-T.B.A.MR (tebutato de prednisolona), DELTASONE R (prednisona), ARISTOCORTMR y KENACORTMR (triamcinolona), KENALOGMR (acetonida de triamcinolona), ARISTOCORTMR y KENACORT DIACETATEMR (diacetato de triamcinolona), y ARISTOSPANMR (hexacetonida de triamcinolona); inhibidores de biosíntesis y acción de esteroides adrenocorticales tales como CYTADRENMR (aminogluteíimida), NIZORALMR (quetoconazol), MODRASTANEMR (trilostano), y METOPIRONEMR (metirapona); insulina de bovino, porcino o humana o mezclas del mismo; análogos de insulina; insulina humana recombinante tal como HUMULINMR y NOVOLINMR; agentes hipoglucémicos orales tales como ORAMIDEMR y ORINASEMR (tolbutamida), DIABINESEMR (clorpropamida), TOLAMIDEMR y TOLINASEMR (tolazamida), DYMELORMR (acetohexamida), glibenclamida, MICRONASEMR, DIBETA R y GLYNASEMR (gliburida), GLUCOTROLMR (glipizida), y DIAMICRONMR (gliclazida), GLUCOPHAGEMR (metformina), ciglitazona, pioglitazona, e inhibidores de alfa-glucosidasa; glucagon de bovino y porcino; somatostatinas tales como SANDOSTATINMR (octreotida); y diazóxidos tales como PROGLYCEMMR (diazóxido). En una modalidad, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleóíidos de la presente invención se administran en combinación con íratamientos para padecimientos de movilidad uterina. Los tratamientos de padecimientos de movilidad uterina incluyen pero no se limitan a, fármacos de estrogenos tales como estrogenos conjugados (por ejemplo, PREMARIN® y ESTRATAB®), estradioles (por ejemplo, CLI MARA® y ALORA®), estropipato, y cloroíiraniseno; fármacos de progestina (por ejemplo, AMEN® (medroxiprogesterona), MICRONO R® (acetato de noretidrona), PROM ETRI UM®, progesíerona y acetato de megestrol); y terapias de combinación de estrogeno/progesterona, íales como, por ejemplo, esfrogenos/medroxiprogesterona conjugada (por ejemplo, PREM PROM R y PREM PHASEM R) y acetaío de noretindrona/estradiol de etinilo (por ejemplo, FEMHRTMR). En una modalidad adicional, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran en combinación con fármacos efectivos para tratar deficiencia de hierro y anemias hipocrómicas, incluyendo pero sin limitarse a, sulfaío ferroso (sulfaío de hierro, FEOSOLMR), fumarato ferroso (por ejemplo, FEOSTATM R), gluconato ferroso (por ejemplo, FERGONMR), complejo de polisacárido-hierro (por ejemplo, N I FEREXMR), inyección de dextrano de hierro (por ejemplo, I N FEDM R), sulfato cúprico, piroxidina, riboflavina, Vitamina B12, inyección de cianobalamina (por ejemplo, REDISOLMR, RUBRAM I N PCMR), hidroxocobalamina, ácido folico (por ejemplo, FOLVITEMR), leucovorin (ácido folínico, 5-CHOH4PteGlu , factor de citrovoro), o WELLCOVORI N (sal de calcio de leucovorin), transferrina o ferritina. En ciertas modalidades, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presenfe invención, se administran en combinación con agentes que se utilizan para tratar padecimientos psiquiáíricos. Los fármacos psiquiátricos que se pueden administrar con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleófidos de la presente invención , incluyen pero no se limitan a, agentes anti-psicóticos (por ejemplo, clorpromazina, clorproíixeno, clozapina, flufenazina, haloperidol, loxapina, mesoridazina, molindona, olanzapina, perfenazina, pimozida, quetiapina, risperidona, tioridazina, tiotixeno, trifluoperazina, y íriflupromazina), agentes antimaniacos (por ejemplo, carbamazepina, sodio de divalproex, carbonaío de litio, y citrato de litio), antidepresores (por ejemplo, amitriptilina, amoxapina, bupropion , citalopram, clomipramina, desipramina, doxepina, fluvoxamina, fluoxetina, imipramina, ¡socarboxazid, maprotilina, mirtazapina, nefazodona, nortriptilina, paroxetina, fenelzina, protriptilina, sertralina, íranilcipromina, trazodona, trimipramina, y venlafazina), agentes aníiansiedad (por ejemplo, alprazolam , buspirona, clordiazepóxido, clorazepaío, diazepam, halazepam, lorazepam, oxazepam, y prazepam), y eslimulantes (por ejemplo, d-anfetamina, metilfenidato, y pemolina). En otras modalidades, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran en combinación con agentes utilizados para íraíar padecimientos neurológicos. Los agentes neurológicos que se pueden adminisírar con las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la preseníe invención , incluyen pero no se limitan a, agentes antiepilépticos (por ejemplo, carbamazepina, clonazepam, eíosuximida, fenobarbital, fenitoína, primidona, ácido valproico, sodio de divalproex, felbamato, gabapentina, lamotrigina, levetiracetam, oxcarbazepina, tiagabina, topiramato, zonisamida, diazepam, lorazepam, y clorazepam), agentes antiparkinsonianos (por ejemplo, levodopa/carbidopa, selegilina, amantidina, bromocriptina, pergolida, ropinirol, pramipexol, benztropina; biperiden; eíopropazina; prociclidina; írihexifenidiílo, íolcapona), y íerapéuíicos ALS (por ejemplo, riluzol). En otra modalidad, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran en combinación con ageníes de vasodilatación y/o agentes de bloqueo de canal de calcio. Los agentes de vasodilalación que se pueden adminislrar con las proíeínas de fusión de albúmina y/o polinucleóíidos de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, inhibidores de Enzima de Conversión de Angiotensina (ACE) (por ejemplo, papaverina, isoxsuprina, benazepril, captopril, cilazapril, enalapril, enalaprilat, fosinopril, lisinopril, moexipril, perindopril, quinapril, ramipril, espirapril, trandolapril, y nilidrin), y nitraíos (por ejemplo, dinitrato de isosorbida, mononitraío de isosorbida, y niíroglicerina). Los ejemplos de agentes de bloqueo de canal de calcio que se pueden administrar en combinación con las proíeínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos e la presente invención, incluyen pero no se limitan a, amlodipina, bepridil, diltiazem, felodipina, flunarizina, isradipina, nicardipina, nifedipina, nimodipina, y verapamil.

En cierfas modalidades, las proteínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se administran en combinación con tratamientos para padecimientos gastroinfestinales. Los traíamieníos para padecimientos gastroiníesfinales que se pueden adminisírar con la proíeína de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención, incluyen pero no se limitan, antagonistas del receptor de histamina H2 (por ejemplo, TAGAMETMR (cimeíidina), ZANTACMR (raniíidina), PEPCIDMR (famoíidina), y AXIDMR (nizatidina); inhibidores de H+, K+, ATPase (por ejemplo, PREVACIDMR (lansoprazol), y PRILOSECMR (omeprazol)); compuestos de Bismuto (por ejemplo, PEPTO-BISMOLMR (subsalicilato de bismuío), y DE-NOLMR (subcitrato de bismuto)); diversos anfiácidos; sucralfato; análogos de prostaglandina (por ejemplo, CYTOTECMR (misoprostol)); antagonistas colinérgicos muscarínicos; laxantes (por ejemplo, laxantes tensoactivos, laxantes estimulantes, laxantes salinos y osmóticos); agentes antidiarreicos (por ejemplo, LOMOTILMR (difenoxilato), MOTOFENMR (difenoxin), y IMODIUMMR (clorhidrato de loperamida)), análogos sintéticos de somatosfatina tales como SANDOSTATIN R (octreotida), agentes antieméíicos (por ejemplo, ZOFRANMR (ondansetron), KYTRILMR (clorhidrato de granisetron), tropiseíron, dolaseíron, metoclopramida, clorpromazina, perfenazina, proclorperazina, prometiazina, íietilperazina, triflupromazina, domperidona, haloperidol, droperidol, trimetobenzamida, dexametasona, meíilprednisolona, dronabinol, y nabilona); antagonistas D2 (por ejemplo, metoclopramida, trimeíobenzamida, y clorpromazina); sales biliares, ácido quenodesoxicolico; ácido ursodesoxicolico; y preparaciones de enzimas pancreáíicas fales como pancreaíina y pancrelipasa. En modalidades adicionales, las proíeínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos de la presente invención se adminisíran en combinación con otros regímenes terapéuticos y profilácticos tales como, por ejemplo, terapia de radiación. La presente invención íambién proporciona un paqueíe de equipo farmacéuíico que comprende uno o más coníenedores llenos con uno o más de los ingredientes de las composiciones farmacéuticas que comprenden proteínas de fusión de albúmina de la presente invención. Opcionalmente asociados con dichos contenedores, se puede encontrar un aviso en la forma prescrita por una agencia gubernamental que regula la fabricación, uso o venía de producios farmacéulicos o biológicos, que dan aviso de la aprobación por la agencia de fabricación, uso o venta de administración para humanos. Terapia genética Las construcciones que codifican proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se pueden utilizar como parte de un protocolo de terapia genética para suministrar dosis íerapéuíicamente efectivas de la proteína de fusión de albúmina. Un método preferido para introducción in vivo del ácido nucleico en células, es a través del uso de un vecíor viral que coníiene ácido nucleico, que codifica una proteína de fusión de albúmina de la presente invención . La infección de células con un vector viral tiene la ventaja de que gran paríe de las células dirigidas pueden recibir el ácido n ucleico. Además, las moléculas codificadas deníro del vecíor viral , por ejemplo, mediante cADN contenido en el vector viral, se expresan en forma eficiente en células que han tomado un ácido nucleico de vector viral . Los vectores de retrovirus y vectores de virus adeno-asociados se pueden utilizar como un sistema de suministro de gen recombinante para la transferencia de moléculas de ácido nucleico exogeno que codifican proteínas de fusión de albúmina ¡n vivo. Estos vecíores proporcionan una administración eficiente de ácidos nucleicos en células, y los ácidos nucleicos transferidos se integran de manera estable en el ADN cromosomal del huésped. El desarrollo de las líneas celulares especializadas (denominadas "células de empaque") que producen únicamente reíroviruses con defecíos de réplica, han incremeníado la uíilidad de reíroviruses para íerapia genéíica, y los retroviruses defectuosos son caracterizados para utilizarse en transferencia genética para propósitos de terapia genética (para consulta de la Publicación de Miller, A. D. (1990) Blood 76:271 ). Un retrovirus defectuoso en réplica puede ser empacado en viriones que pueden ser utilizados para infecíar una célula objeíivo a fravés del uso de un virus auxiliar mediante técnicas eslándar. Los protocolos para producción de retroviruses recombinantes y para infección de células in viíro o in vivo con dichos viruses, se puede enconírar en la Publicación de Currení Proíocols in Molecular Biology, Ausubel, F. M. y Asociados (eds.) Greene Publishing Associaíes, (1989), Secciones 9.10-9.14, y otros manuales de laboratorio estándar. Otro sistema de suminisíro de gen viral úíil en la presente invención, utiliza vectores derivados de adenovirus. El genoma de adenovirus puede ser manipulado tal como se codifica y expresa un producto de gen de interés, aunque se ha desactivado en términos de su capacidad de réplica en un ciclo de vida viral lítico normal. Ver, por ejemplo, las Publicaciones de Berker y Asociados, BioTechniques 6:616 (1988); Rosenfeld y Asociados, Science 252:431-434 (1991); y Rosenfeld y Asociados, Cell 68:143-155 (1992). Los vectores adenovirales adecuados derivados de la cepa de adenovirus tipo Ad 5 d1324 u otras cepas de adenovirus (por ejemplo, Ad2, Ad3, Ad7, etc.) son conocidos por los expertos en la lécnica. Los adenoviruses recombinaníes pueden ser convenieníes en ciertas circunstancias ya que no tienen la capacidad de infectar células que no se dividen y se pueden utilizar para infectar una amplia variedad de tipos celulares, incluyendo células epiteliales (Rosenfeld y Asociados, (1992) que se mencionan en supra). Además, la partícula de virus es relativamente estable y acondicionable para purificación y concentración, íal como se describe aníeriormeníe, se puede modificar para afectar al espectro de inefectividad. Además, el ADN adenoviral introducido (y ADN externo contenido en la presente invención) no se integra en el genoma de una célula huésped sino que permanece episomal, eviíando de esía forma problemas potenciales que puedan ocurrir como resultado de mutagénesis de inserción en situaciones en donde el ADN introducido se integra en el genoma huésped (por ejemplo ADN retroviral). Además, el llevar la capacidad del genoma adenoviral para el ADN externo es bástanle grande (hasía 8 kilobases) con relación a otros vectores de suministro de genes (Berker y Asociados, que se mencionan en supra); Haj-Ahmad y Asociados, J . Virol. 57:267 (1 986)). En otra modalidad , los sistemas de suministro de gen no viral de la presente invención , dependen de trayectorias endocíticas para la captación de la molécula de nucleóíido del sujeto mediante la célula dirigida. Los sistemas de suministro de gen de ejemplo de este íipo, incluye sistemas derivados de liposomas, conjugados de poli-lisina, y envolturas virales aríificiales. En una modalidad represeníativa, una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, se puede atrapar en liposomas que contienen cargas positivas en su superficie (por ejemplo, lipofectinas) y (opcionalmente) que se marcan con anticuerpos coníra antígeno de superficie celular del tejido objetivo (Mizuno y Asociados (1 992) No Shinkei Geka 20: 547-551 ; Publicación PCT WO91 /06309; Solicitud de Patente Japonesa 1047381 ; y Publicación de Pateníe Europea EP-A-43075). Los sislemas de suminislro de genes para un gen que codifica una proteína de fusión de albúmina de la presente invención , se pueden introducir en un paciente a través de cualquiera de un número de métodos. Por ejemplo, se puede introducir en forma sistémica una preparación farmacéutica del sistema de suministro y de genes, por ejemplo, mediante inyección intravenosa, y transducción específica de la proteína en las células objetivo ocurre en forma predominante a partir de la especificidad de transfección proporcionada por el veh ículo de suministro de genes, tipo de célula o expresión de tipo de tejido debido a la secuencia reguladora de transcripción que controla la expresión del gen receptor, o una combinación de los mismos. En otras modalidades, el suministro inicial del gen recombinante está más limitado con la introducción en el animal que está completamente localizado. Por ejemplo, el vehículo de suministro de genes puede ser introducido mediante caléíer (ver por ejemplo, la Palente Norteamericana No. 5,328,470) o mediante inyección Estereotáctica (por ejemplo, Chen y Asociados (1994) PNAS 91 : 3054-3057). La preparación farmacéutica de la construcción de terapia genética puede consistir esencialmente en el sistema de suministro de genes en un diluyeníe acepíable, o puede comprender una maíriz de liberación lenía en donde se incrusta el veh ículo de suministro de genes. Cuando la proíeína de fusión de albúmina se puede producir iníacta de las células recombinantes, por ejemplo, vecíores retrovirales, la preparación farmacéutica puede comprender una o más células que producen la proteína de fusión de albúmina. Métodos de terapia genética de adicionales También están comprendidos en la preseníe invención , métodos de terapia genética para tratar o prevenir padecimientos, enfermedades, o condiciones. Los métodos de terapia genética se relacionan con la iníroducción de secuencias de ácido nucleico (ADN , ARN , y ADN o ARN anti-sentido) en un animal para lograr la expresión de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención . Este método requiere un polinucleótido que codifica una proteína de fusión de albúmina de la preseníe invención enlazada en forma operativa a un promotor y cualesquiera otros elementos genéticos necesarios para la expresión de las proíeínas de fusión a través del tejido objeíivo. Dicha terapia de gen y técnicas de suministro son conocidas en el arte, por ejemplo en la publicación WO 90/1 1092, la cual está incorporada a la presente invención como referencia. Por lo tanto, por ejemplo las células de un paciente pueden ser construidas con un polin ucleótido (ADN o ARN) que comprende un promotor enlazado en forma operable a un plolinucleótido que codifica una proteína de fusión de albúmina de la presente invención ex vivo, siendo proporcionadas posíeriormeníe las células construidas a un paciente que será tratado con la proteína de fusión de la presente invención . Dichos métodos son conocidos en el arle. Por ejemplo, ver las publicaciones de Belldegrun, A. , y asociados. , J. Naíl Cáncer I nst. 85:207-216 (1993); Ferrantini, M . y asociados, Cáncer Research 53:1107-1112 (1993); Ferrantini, M. y asociados, J. Immunology 153:4604-4615 (1994); Kaido, T., y asociados, Int. J. Cáncer 60:221-229 (1995); Ogura, H., y asociados; Cáncer Research 50:5102-5106 (1990); Santodonato, L., y asociados, Human Gene Therapy 7:1-10 (1996); Santodonato, L, y asociados, Gene Therapy 4:1246-1255 (1997); y Zhang, J.-F y asociados, Cáncer gene Therapy 3:31-38 (1996)), las cuales están incorporadas a la presente invención como referencia. En una modalidad, las células que se construyen son células arteriales. Las células arteriales pueden ser introducidas en el paciente a través de inyección directa a la arteria, rodeando los tejidos de la arteria, o a íravés de inyección de catéter. Tal y como se describirá con mayor detalle más adelante, las construcciones de polinucleótidos se pueden suministrar a través de cualquier método que suministre materiales inyectables a las células de un animal, tales como inyección en el espacio intersticial de los tejidos (corazón, músculo, piel, pulmón, hígado y similares). Las construcciones de polinucleótidos se pueden suministrar en un líquido o vehículo acuoso farmacéuticamente aceptable. En una modalidad, los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención se suministran en la forma de un polinucleótido al natural. El término "polinucleótido", ADN o ARN "al natural" se refiere se a secuencias que están libres de cualquier vehículo de suministro que actué para ayudar, promover o facilitar la entrada en la célula, incluyendo secuencias virales, partículas virales, formulaciones de liposomas, lipofectina, o agentes de precipitación y similares. Sin embargo, los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina en la presente invención también se pueden suministrar en formulaciones de liposomas y formulaciones de lipofectina y similares, que se pueden preparar a través de los métodos conocidos para los expertos en la técnica. Dichos métodos se describen, por ejemplo, en las Patentes Norteamericanas No. 5,593,972, 5,589,466 y 5,580,859, las cuales están incorporadas a la presente invención como referencia. Las construcciones de vector de polinucleótido utilizadas en el méíodo de íerapia genética son construcciones que preferentemente no se integrarán en el genoma huésped, ni contendrán secuencias que permitan la réplica. Los vectores adecuados incluyen pWLNEO; pSV2CAT, pOG44, pXTI y pSG disponibles en Stratagene; pSVK3, pBPV, pMSG y pMSG y pSVL, disponibles en farmacia; y pEFI/V5, pcDNA3.1, y pRc/CMV2 disponibles en Invitrogen. Otros vectores adecuados podrán ser fácilmente apreciados por los expertos en la técnica. Cualquier promotor fuerte conocido por los expertos en la técnica, puede ser utilizado para conducir la expresión de la secuencia de polinucleótidos. Los promotores adecuados incluyen promotores adenovirales, tales como promotor tardío mayor adenovidal; o promotores heterólogos, tales como promotor de citomegalovirus (CMV); el promotor de virus sincitial respiratorio (RSV); promotores inducibles tales como promotor MMT; el promotor de metalotioneina; promotores de ataque cardiaco; el promotor de albúmina; el promotor ApoAl promotores de globina humana; promotores de cinaza de timidina viral, íales como promolor de cinaza de timidina Herpes Simplex; LTRs retroviral; el promotor b-actina; y promotores de hormona de crecimiento humano. El promotor también puede ser el promotor nativo para el gen correspondiente a la porción de proteína Terapéutica de las proteínas de fusión de albúmina la presente invención. A diferencia de otras técnicas de terapia genética, una ventaja importante de introducir secuencias de ácido nucleico al natural en células objetivo, es la naturaleza transitoria de las síntesis de polinucleótido en las células. Los estudios han mostrado que las secuencias de ADN sin réplica pueden ser introducidas en células para proporcionar la producción de polipéptido deseado durante períodos de hasta seis meses. La construcción de polinucleótido puede ser suministrada al espacio intersticial del tejidos dentro de un animal, incluyendo por ejemplo, músculo, piel, cerebro, pulmón , hígado, bazo, médula ósea, timo, corazón , linfas, sangre, huesos, cartílagos, páncreas, riñon, vejiga irritada, estómago, intestino, testículos, ovarios, útero, recto, sistema nervioso, ojos, glándulas y tejido conectivo. El espacio intersticial de los tejidos comprende la matriz intracelular, de fluidos y de mucopolisacáridos entre las fibras reticulares de tejidos de órganos, fibras elásticas en las paredes de vasos sanguíneos o cámaras, fibras de colágeno de tejidos fibrosos o la misma matriz dentro de tejido conectivo que envaina las células de músculos o en vacíos de huesos. Es similarmente el espacio ocupado por el plasma de la circulación y el fluido linfático de los canales linfáticos. La administración al espacio intersíicial de íejido de músculos se prefiere por las razones que se describirán más adelante. Puede suministrarse de manera conveniente mediante inyección en los tejidos que comprenden estas células. Se suministran prefereníemente a y se expresan en, células persistentes, que no se dividen , las cuales son diferenciadas, aunque el suministro y expresión se puede lograr en células no diferenciadas o no totalmente diferenciadas tal como, por ejemplo, células madre de sangre o fibroblastos de piel. Las células de músculo in vivo son particularmente competentes en su capacidad para tomar y expresar polinucleófidos. Para la inyección de secuencia de ácido nucleico al naíural, una caníidad de dosis efectiva de ADN o ARN está dentro del rango de aproximadamente 0.05mg/kg de peso corporal hasta 50 mg/kg de peso corporal . Preferentemente el lado así será desde aproximadamente 0.005 mg/kg hasía 20 mg/kg y más prefereníemeníe desde aproximadameníe 0.05 mg/kg hasía aproximadamente 5 mg/kg. Por su puesto, tal como los expertos en la técnica lo pueden apreciar, esta dosis variará de acuerdo con el sitio de tejido de la inyección . La dosificación adecuada y efectiva de secuencia de ácido nucleico puede ser fácilmente determinada por los experlos en la íécnica y puede depender de la condición que esté siendo tratada y la ruta de adminisíración. La ruía de adminisíración preferida, es mediante ruta parenteral de inyección en los espacios intersticiales de tejidos. Sin embargo, también se pueden utilizar otras rutas parenterales, íales como, inhalación , de una formulación en aerosol particularmente para el suministro de los pulmones o tejidos bronquiales, garganta o membranas mucosas de la nariz. Además, las construcciones de ADN al natural pueden ser suministradas arterias durante angioplastía a través del catéter utilizado en el procedimiento. Los polinucleótidos al naíural se suminisíran a íravés de cualquier méíodo conocido en la técnica, incluyendo pero sin limitarse a, inyección de aguja direcía en el siíio de suminisíro, inyección ¡nfravenosa, administración tópica, infusión de caíéíer y las denominadas "pistolas genéticas". Estos métodos de suministro son conocidos en la técnica. Las construcciones también se pueden suminisírar con vehículos de suministro tales como secuencias virales, partículas virales, formulaciones de liposomas, lipofectina, agentes de precipitación , etc. Los métodos de suministro son conocidos en la técnica. En ciertas modalidades, las construcciones de polinucleóíidos se hacen compuestos en una preparación de liposomas. Las preparaciones liposomales para utilizarse en la presente invención, incluyen preparaciones catiónicas (cargadas en forma positiva) aniónicas (cargadas en forma negativa) y neutrales. Sin embargo, los liposomas caíiónicos son particularmente preferidos debido a que se puede formar un complejo con carga ajustada entre liposoma catiónico y el ácido nucleico polianiónico. Los liposomas catiónicos han demostrado transmitir el suministro intracelular de ADN de plásmido ((Felgner y asociados., Proc. Nati. Acab. Sci. EUA (1987) 84:7413-7416, la cual está incorporada a la presente invención como referencia); mARN (Malone y asociados., Proc. Nati. Sci. EUA (1989) 86:6077-6081, la cual está incorporada a la preseníe invención como referencia); y facfores de fransmisión purificados (Debs y asociados., J. Biol. Chem. (1990) 265:10189-10192, la cual está incorporada a la presente invención como referencia), en forma funcional. Los liposomas catiónicos están fácilmente disponibles. Por ejemplo, los liposomas de N[1-2,3-dioleiloxi)propil]-N,N,N-íriefilamonio (DOTMA) son paríicularmeníe úíiles y están disponibles bajo la marca comercial de GIBCO BRL; Grand Island, N.Y. (ver también la publicación de Felgner y asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA (1987) 84:7413-7416, la cual está incorporada a la presente invención, como referencia). Otros liposomas disponibles comercialmente incluyen transfecíasa (DDAB/DOPE) y DOTAP/DOPE (Boehringer).

Se pueden preparar otros liposomas catiónicos a partir de materiales fácilmente disponibles utilizando técnicas conocidas en el arfe. Ver por ejemplo la Publicación PCT No. WO 90/11092 (la cual esíá incorporada a la presente invención como referencia) para una descripción de liposomas DOTAP (1 ,2-bis(oleoiloxi)-3-(tpmetilamonio)propano). La preparación de liposomas DOTMA se explica en la literaíura, ver por ejemplo la Publicación de Felgner y asociados, Proc. Naíl. Acda. Sci, EUA 84:7413-7417, la cual esíá incorporada a la presente invención como referencia. Se pueden utilizar métodos similares para preparar liposomas de otros materiales lípidos catiónicos. En forma similar, los liposomas aniónicos y neutrales están fácilmente disponibles, tal como en (Birmingham, Ala), pueden ser preparados fácilmente utilizando materiales fácilmente disponibles. Dichos maíeriales incluyen fosfaíidilo, colina, colesterol, etalonamina de fosfatidilo, colina de dioleolifosfaíidilo (DOPC), glicerol de dioleolifosfaíidilo, (DOPG), eíanolamina de dioleolifosfafidilo (DOPE), entre otros. Esíos materiales también pueden ser mezclados con los materiales de partida de DOTMA y DOTAP en proporciones adecuadas. Los métodos para elaborar los liposomas utilizando esfos materiales, son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, la colina de dioleolifosfatidilo (DOPC), glicerol de dioleolifosfatidilo (DOPG), y etanolamina de dioleoilfosfatidilo (DOPE) comerciales, se pueden utilizar en varias combinaciones para elaborar liposomas convencionales, con o sin la adición de colesterol. Por lo tanto, por ejemplo, las vesículas DOPG/DOPC se pueden preparar secando 50 mg de cada una de DOPG y DOPC bajo un vapor de gas de nitrógeno en un frasco de sonicación. La muesíra se coloca bajo una bomba de vacío durante la noche y se hidrata al siguiente día con agua desionizada. Posteriormeníe la muestra se sónica durante 2 horas en un frasco, tapado, utilizando un sonicador modelo 350 de Heat Systems equipado con una sonda de taza invertida (tipo baño) en el ajuste máximo, y al mismo tiempo se circula el baño a una temperatura de 15°C. Como alternativa, se pueden preparar vesículas cargadas en forma negativa sin sonicación para producir vesículas multilamerales, o mediante exírusión a íravés de membranas de núcleo poro para producir vesículas unilamerales de íamaño discreío. Otros métodos son conocidos y están disponibles para los expertos en la técnica.

Los lipososomas pueden comprender vesículas multilamerales (MLVs), vesículas unilamerales pequeñas (SUVs), o vesículas unilamerales grandes, (LUVs), siendo preferidas las SUVs. Los diversos complejos de liposoma-ácido nucleico se prepararan utilizando méíodos conocidos en la íécnica ver, por ejemplo la publicación de Síraubinger y asociados. , Methods of I mmunology (1983), 1 01 :512-527, la cual está incorporada a la presente invención como referencia. Por ejemplo, las MLVS que contienen ácido nucleico pueden preparase depositando una pel ícula delgada de fosfol ípido en las paredes de un tubo de vidrio e hidraíando subsecueníemente con una solución del material que será encapsulado. Las SUVs se preparan mediante sonicación prolongada de las LMVs para producir una población homogénea de liposomas unilamerales. El material quedará atrapado, se agrega a una suspensión de M LVs formadas previamente y posteriormente se sónica. Cuando se utilizan microsomas que contienen lípidos catiónicos, se suspende nuevamente la película de lípido seca en una solución adecuada tal como agua estéril o una solución de regulador ¡sotónico tal como Tris/NaCI 10 mM , se sónica y posteriormente los liposomas formados previamente se mezclan directamente con el ADN . El liposoma y el ADN forman un complejo muy estable debido al enlace de los liposomas cargados en forma positiva al ADN catiónico. Las SUVs encuenfran uso con pequeños fragmentos de ácido nucleico. Las LUVs se preparan a través de un número de métodos, bien conocidos en la técnica. Los métodos comúnmente uíilizados incluyen quelación Ca2+-EDTA (Papahadjopoulos y asociados. , Biochim. Biophys. Acia (1975): Wilson y asociados. , Cell 17:77 (1 979)); inyección de éter (Deamer, D. y bangham, A. , Biochim . Byopis. Acta 443:629 (1 976); Osíro y asociados. , Biochem. Byopis. Res. Común . 76:836 (1977); Fraley y asociados. , Proc. Naíl. Acad . Sci. EUA 76 : 3348 (1979); detergent dialysis (Enoch , H . y Síriílmatter, P. , Proa. Nati. Acad. Sci. EUA 76: 145 ( 1 979)); y evaporación de fase inversa (REV) (Fraley y asociados, Biol. Chem. 255: 10431 (1980): Szoka, F. y Papahadjopoulos, D. , Proc. Nati . Acad. Sci. EUA 75: 145 (1978);Schaefer-Ridder y asociados. , Science 21 5: 166 (1982)), las cuales están incorporadas a la presente invención como referencia. Generalmente, en la proporción de ADN a liposomas será desde aproximadamente 1 0: 1 hasla 1 : 10. Preferentemente, la proporción será desde aproximadamente 5: 1 hasta 1 :5. Y más preferentemente, la proporción será desde aproximadamente 3: 1 hasta 1 :3. Aún más preferentemente, la proporción será de aproximadamente 1 : 1 . La Patente Norteamericana No. 5,676, 954 (la cual está incorporada a la presente invención como referencia) reporta la inyección de material genético, hecho en compuesto con vehículos de liposomas catiónicas, en ratones. L.as Patentes Norteamericanas Nos. 4, 897,355, 4, 946,787, 5,849, 127, 5,589,466, 5, 693,622, 5, 580, 859, 5,703, 055, y la Publicación Internacional No. WO 94/9469 (las cuales están incorporados a la presente invención como referencia) proporcionan lípidos catiónicos para utilizarse en transfección de ADN en células y mamíferos. Las Patentes Norteamericanas Nos. 5, 589,466, 5,693,622, 5,580,859, 5,703, 055, y la publicación internacional no. WO 94/9469 proporciona el método para suministrar complejos de lípidos-catiónico ADN a mamíferos. En ciertas modalidades, las células se construyen , ex vivo o in vivo utilizando una partícula retroviral que contiene ARN que comprende una secuencia que codifica una proteína en fusión de albúmina de la presente invención . Los retroviruses de los cuales se pueden derivar los vectores de plásmido retroviral incluyen , pero no se limitan a, Virus de Leucemia de Múrido Moloney, virus de necrosis de bazo, Virus de sarcoma de Rous, Virus de Sarcoma Harvey, virus de leucosis avian , virus de leucemia de mono gibón , virus de inmunodeficiencía humana, Virus de Sarcoma Mieloproliferativo, y virus de tumor mamario. El vector de plásmido retroviral se emplea para transducir líneas celulares de empaque para formar líneas celulares de producción . Los ejemplos de células de empaque que pueden ser transfectadas, incluyen pero no se limitan a, las líneas celulares PE501 , PA317, R-2 R-AM, PA12, T19-14X, VT-19-17-H2, RCRE, RCRE, RCRI P, GP + E-86, GP + envAm!", y de ADN tal como se describen en la Publicación de Millar, Human Gene Therapy 1 :5-14 (1990), la cual está incorporada a la presente invención en su totalidad como referencia. El vector puede transducir las células de empaque a través de cualesquiera métodos conocidos en la técnica. Dichos medios incluyen pero no se limitan a, electroporación el uso de liposomas y precipitación CaPO4. En otra alternativa el vector de plásmido y retroviral , puede ser encapsulado en un liposoma o acoplado a un lípido, y posteriormente administrado a un huésped. La línea celular de producción genera partículas del vector retroviral infeccioso, que incluyen polin ucleótidos que codifican una proteína de fusión de albúmina de la presente invención , dichas partículas de vector retroviral , posteriormente pueden ser empleadas para transducir células eucarióticas, ya sea in vivo o in vitro. Las células eucarióticas transducidas expresarán una proteína de fusión de la presente invención. En otras ciertas modalidades, las células se construyen, ex vivo o in vivo, con el polinucleótido contenido en un vector de adenovirus. El adenovirus puede ser manipulado de modo que codifique y exprese la proteína de fusión de la presente invención , y al mismo tiempo sea desactivado en íérminos de su capacidad para replicarse en un ciclo de vida viral lítico normal. La expresión de adenoviruses se logra sin integración del ADN viral en el cromosoma de célula huésped, aliviando de esta forma los aspectos con respecto a mutagénesis insercional. Además, los adenoviruses han sido utilizados como vacunas entéricas vivas durante muchos años con un excelente perfil de seguridad (Schwartz y asociados. Am . Rev. Respir: Dis.1 09:233-238 (1974)9. Finalmente, la transferencia de gen transmitida por adenovirus ha sido demostrada en un número de casos, incluyendo transferencia de alfa-1 -antritipsina y CFTR a los pulmones de ratas de algodón (Rosenfeld , M . A. y asociado (1999) Science 252:431 -434; Rosenfeld y asociado. , ( 1 992) Cell 68: 143-1 55). Además, estudios extensos para intentar establecer adenovirus como un agente de origen en cáncer humano, fueron negativos de manera uniforme (Green, M . y asociados (1 979) Proc. Nati . Acad . Sci. EUA 76:6606).

Los vectores adenovirales adecuados útiles en la presente invención se describen por ejemplo, en las Publicaciones de Kozarsky y Wilson, Curr. Opin . Genet. Devel. 3:499-503 (1993); Rosenfeld y asociados, Cell 68: 143-155 (1992); Engelhardí y asociados, H uman Geneí. Ther. 4:759-769 (1993); Yang y asociados Naíure Genet. 7:362-369 (1994); Wilson y asociados, Nature 365:691 -692 ( 1 993); y en la Patente Norteamericana No. 5,652,224, las cuales están incorporadas en la presente invención como referencia. Por ejemplo, el vector de adenovirus Ad2 es útil y puede crecerse en células humanas 293. Estas células contienen la región E1 de adenovirus y expresan en forma constitutiva E1 a y E 1 b, las cuales complementan los adenovirus defecíuosos proporcionando los producios de los genes eliminados del vecíor. Además del Ad2, otras variedades de adenovirus (por ejemplo, Ad3, Ad5, y Ad7) también son útiles en la presente invención. Preferentemente, los adenovirus son utilizados en la presente invención, son deficientes en réplica. Los adenovirus deficientes en réplica requieren la ayuda de un virus auxiliar y/o línea celular de empaque para formar partículas infecciosas. El virus resultante tiene la capacidad de infectar células y puede expresar un polinucleótido de interés el cual se enlaza en forma operativa a un promotor, aunque no puede replicarse en la mayor parte de las células. Los adenovirus deficientes en réplica pueden eliminarse en una o más de toda o una parte de los siguientes genes: E 1 a, E 1 b, E3, E4, E2a, ó L1 hasfa L5.

En otras ciertas modalidades, las células se consfruyen in vivo o ex vivo, utilizando un virus adeno-asociado (AAV). Los AAVs son virus defectuosos que ocurren naturalmeníe que requieren virus auxiliares para producir partículas infecciosas (Muzyczka, N., Curr. Topics en Microbiol. Immunl. 158:97 (1992)). También es uno de los pocos virus que pueden integrar su ADN en células que no se dividen. Los vectores que contienen ían poco como 300 pares base de AAV pueden empacarse y se pueden iníegrar, aunque el espacio para el ADN exógeno se limita aproximadamente 4.5 kb. Los métodos para producir y utilizar dichos AAVs son conocidos en la técnica. Ver por ejemplo las Patentes Norteamericanas Nos. 5,139,941, 5,173,414, 5,354,678, 5,436,146, 5,474,935, 5,478,745 y 5,589,377. Por ejemplo, el vector AAV adecuado para uíilizarse en la preseníe invención, incluirá fodas las secuencias necesarias para la réplica de ADN, encapsidación e integración de célula huésped. La construcción de polinucleótidos se insería en el vecíor AAV utilizando métodos de clonación estándar, tales como los que se encuentran en la publicación de Sambrook y asociados, Molecular Cloning:A Laboratory Manual, Cold Spring Harbord Press (1989). El vector AAV recombinaníe posteriormenle se íransfecta en células de empaque que se infectan con un virus auxiliar, utilizando cualquier técnica estándar, incluyendo lipofección, electroporación, precipitación de fosfato de calcio, etc. Los viruses auxiliares adecuados incluyen adenoviruses, citomegaloviruses, viruses de vacuna o viruses de herpes. Una vez que las células de empaque se transfectan e infectan, producirán partículas virales AAV infecciosas que contienen la construcción de polinucleótido. Estas partículas virales se utilizan posteriormente para transducir células eucarióticas ya sea ex vivo o in vivo. Las células tranducidas coníendrán la consírucción de polinucleótido integrado en su genoma, y expresarán una proleína de fusión de la preseníe invención. Oíro método de terapia genética comprende la asociación en forma operable de regiones de control heteróloga y secuencias de polinucleótidos endógenos (por ejemplo, codificación de un polipépíido en la presente invención) mediante recombinación homologa (ver por ejemplo, la Patenle Noríeamericana No. 5,641,670, presentada el 24 de Junio de 1997, la Publicación Internacional No. WO 96/29411, publicada el 20 de Septiembre de 1996; la Publicación Internacional No. WO 94/12650, publicada el 4 de Agosto de 1994, la Publicación de Soller y asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 86:8932-8935 (1989); y la Publicación de Zijlstra y asociados, Nature 342:435-438 (1989), las cuales están incorporadas a la presente invención como referencia. Este método comprende la activación de un gen el cual se encuentra en las células objetivo, pero el cual normalmente no se expresa en las células o se expresa en un nivel menor al deseado. Las construcciones de polinucleóíidos se realizan, ulilizado en técnicas estándar conocidas en el arte, las cuales contienen el promotor que dirigen secuencias que flanquean el promotor. Los promotores adecuados se describen en la presente invención. La secuencia de dirección es lo suficientemente complementaria para una secuencia endógena, para permitir la recombinación homologa de la secuencia de dirección-promotor con la secuencia endógena. La secuencia de dirección estará lo suficientemenle cerca al extremo 5' de la secuencia de polinucleótido endógena deseada, de modo que el promotor se enlazará en forma operable a la secuencia endógena al momento de la recombinación homologa. El promotor y la secuencia de dirección pueden ser amplificadas utilizando PCR. Preferentemente, el promotor amplificado contiene distintos sitios de enzimas de restricción en los extremos 5' y 30 Preferentemente, el extremo 3' de la primera secuencia de dirección contiene el mismo sitio de enzimas de restricción que el extremo 5' del promotor amplificado y el extremo 5' de la segunda secuencia de dirección contiene el mismo sitio de restricción que el extremo 3' del promotor amplificado. El promotor amplificado y las secuencias de dirección se digieren y ligan juntas. La construcción de secuencia de dirección-promotor se suministra a las células ya sea como un polinucleótido al natural, o junto con agentes que faciliían la transfección tales como liposomas, secuencias virales, paríículas virales, viruses compleíos, lipofección, agentes de precipitación, etc., que se describieron con mayor detalle anteriormente. La secuencia de dirección-promotor P se puede suministrar a íravés de cualquier méíodo, incluyendo inyección de aguja directa, inyección intravenosa, administración tópica, infusión por catéter, acelerados de partículas. Los métodos se describen con mayor detalle más adelante. La construcción de secuencia de dirección-promotor se toma mediante las células. La recombinación homologa entre la construcción y la secuencia endógena tiene lugar, de modo que una secuencia endógena se pone bajo el control del promotor. Posteriormente el promotor conduce la expresión de la secuencia endógena. El polinucleótido que codifica una proteína de fusión de albúmina de la presente invención , puede contener una secuencia de señal de segregación que facilita la secreción de la proteína. Normalmente, la secuencia de señal se coloca en la región de codificación del polinucleótido que será expresado hacia, o en el extremo 5' de la región de codificación. La secuencia de señal puede ser homologa o heteróloga para el polipépíido de iníerés y puede ser homologa o heíeróloga para las células que serán íransfecíadas. Además, la secuencia de señal puede ser sintetizada en forma química utilizando métodos conocidos en la lécnica. Se puede utilizar cualquier modo de administración de cualesquiera de las construcciones de polinucleótidos anfes descritas, siempre que el modo de como resultado la expresión de una o más moléculas en una cantidad suficienle para proporcionar un efecto terapéutico. Esto incluye inyección de aguja directa, inyección sistémica, infusión de catéter, inyectores biolísticos, aceleradores de partículas (por ejemplo, "pistolas genéticas"), depósitos de esponja de gel, otros materiales de depósito convencionalmente disponibles, bombas osmóticas (por ejemplo, inibombas Alza), formulaciones farmacéuticas orales, sólidas en supositorios (tabletas o pildoras), y decantación o aplicaciones íópicas durante cirugía. Por ejemplo, la inyección directa de plásmido precipitado por fosfato de calcio al natural en el hígado de ratas y bazo de ratas, o el plásmido recubierto con proteínas en las venas portales, dado como resultado la expresión genética del gen externo en hígados de raías (Kaneda y asociados. , Science 243:375 (1989)). Un método preferido de administración local es mediante inyección directa. Preferentemente, se administra una proteína de fusión de albúmina de la presente invención hecha en compuesto con un vehículo de suministro mediante inyección directa en , o localmente dentro del área de las arterias. La administración de una composición localmente dentro del área de las arterias se refiere a la inyección de centímetros de composición, y preferentemeníe, milímetros dentro de las arterías. Otro método de administración local es contactar una construcción de polinucleótido de la presente invención en, o alrededor de una herida quirúrgica. Por ejemplo, un paciente puede pasar por cirugía y la construcción de polinucleótido puede ser cubiería en la superficie de tejido dentro de la herida o la construcción puede ser inyectada en áreas de tejido dentro de la herida. Las composiciones terapéuticas útiles en administración sistémica, incluyen proteínas de infusión de la presente invención hechas en compuesto con una vesícula de suministro dirigida a la presente invención. Los vehículos de suministro adecuados para uso con administración sistémica, comprenden liposomas que comprenden ligandos para la dirección del vehículo a un sitio en paríicular. En modalidades específicas los vehículos de suminisíro adecuados para uíilizarse con administración sistémica, comprenden liposomas que comprenden proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, para dirigir el vehículo a un sitio en particular. Los métodos preferidos de administración sisíémica incluyen inyección intravenosa, aerosol, suministro oral y percufáneo (tópico). Las inyecciones intravenosas pueden llevarse a cabo utilizando métodos estándar en la técnica. El suministro de aerosol también se puede llevar a cabo ufilizando méíodos eslándar en la técnica para entender (ver por ejemplo, la publicación de Stribling y asociados, Proc. Nati. Acab. Sci. EUA 189:11277-11281, 1992, la cual está incorporada a la presente invención como referencia). El suministro oral se puede llevar a cabo haciendo compuesto de una construcción de polinucleótido de la presente invención con un vehículo con la capacidad de soporíar la degradación medianíe enzimas digestivas en el intestino de un animal. Los ejemplos de dichos vehículos incluyen cápsulas o tabletas plásticas íales como las que se conocen en la técnica. La administración tópica puede llevarse a cabo mezclando una consírucción de polinucleóíido de la presente invención con un reactivo lipofílico (por ejemplo, (DMSO) que tiene la capacidad de pasar dentro de la piel. La determinación de una cantidad efectiva de substancia que sea administrada puede depender de un número de factores que incluyen, por ejemplo, la estructura química y actividad biológica de la sustancia, la edad y peso del animal, la condición precisa que requiere tratamiento y su severidad, y la ruta de administración. La frecuencia de traíamientos depende de un número de factores, íales como la caníidad de consírucciones de polinucleóíidos adminisíradas por dosis así como la salud e historia del sujeto. La cantidad precisa, número de dosis y programación de dosis será determinada por lo médicos o veterinarios que lo atiendan. Las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe invención, se puede administrar a cualquier animal, preferentemente a mamíferos y pájaros. Los mamíferos preferidos incluyen humanos, perros, gatos, ratones, ratas, conejos, ovejas, ganado, caballos y cerdos, siendo particularmeníe los humanos. Actividades Biológicas Las profeínas de fusión de albúmina y/o polinucleóíidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , se pueden utilizar en ensayos para probar una o más actividades biológicas. Si la proteína de fusión de albúmina y/o polinucleótido exhibe la actividad en un ensayo en particular es probable que la proteína Terapéuíica que corresponde a la proteína de fusión , pueda estar involucrada en las enfermedades asociadas con la actividad biológica. Por lo tanío, la proteína de fusión podrá ser utilizada para tratar la enfermedad asociada. En modalidades preferidas, la presente invención comprende un método para tratar una enfermedad o padecimiento descrito en la columna de "I ndicación Preferida Y" de la Tabla 1 , que comprende administrar una proteína de fusión de albúmina de la presente invención que comprende una parte de proteína Terapéutica que corresponde a una proteína Terapéutica descrita en la columna "Proteína Terapéutica X" de la Tabla 1 (en la misma fila que la enfermedad o padecimiento que será tratada que se describe en la columna de "I ndicación Preferida Y" de la Tabla 1 ) en una cantidad efectiva para íraíar, prevenir o disminuir la enfermedad o padecimiento, a un paciente en el cual se desea el traíamienfo, prevención o disminución. En una modalidad preferida adicional, la presente invención comprende un método para traíar una enfermedad o padecimiento descrito para una proteína Terapéutica en particular en la columna de "Indicación Preferida Y" de la Tabla 1 , que comprende administrar una proteína de fusión de albúmina de la presente invención que comprende una parte de proteína Terapéutica que corresponde a la proteína Terapéutica para la cual se relacionan las indicaciones en los ejemplos, en una cantidad efecíiva para tratar, prevenir o disminuir una enfermedad o padecimiento, a un paciente en el cual se desea dicho tratamiento, prevención o disminución. Se contempla en forma específica en la preseníe invención, las proíeínas de fusión de albúmina producidas a través de una célula cuando son codificadas por los polinucleótidos que codifican las SEQ ID NO:Y. Cuando estos polinucleótidos se utilizan para expresar la proteína codificada de una célula, la secreción natural de la célula y los pasos de procesamiento producen una proteína que carece de la secuencia de señal descrita en forma explícita en las columnas 4 y/o 1 1 de la Tabla 2. La secuencia de aminoácido específica de la secuencia de señal descrita se muestra en la especificación o es bien conocida en la técnica. Por lo tanto, las modalidades más preferidas de la presente invención incluyen la proteína de fusión de albúmina producida a través de una célula (la cual puede carecer de las secuencias líder mostradas en las columnas 4 y/o 1 1 de la Tabla 2). También los más preferidos son los polinucleótidos que comprenden las SEQ ID NO:Y sin la secuencia líder específica que se describe en las columnas 4 y/o 1 1 de la Tabla 2. Las composiciones que comprenden estas dos modalidades preferidas, incluyendo composiciones farmacéuticas, también son preferidas. Estas proteínas de fusión de albúmina se contemplan en forma específica para tratar, prevenir o disminuir una enfermedad o padecimiento descritos para una proteína Terapéutica en particular en la columna de "I ndicación Preferida:Y" de la Tabla 1 . En modalidades preferidas, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención se pueden ufilizar en el diagnósíico, pronósíico, prevención, y/o tratamiento de enfermedades y/o padecimientos que se relacionan con enfermedades y padecimientos del sistema endocrino (ver por ejemplo la sección de "Padecimientos Endocrinos" que se encuentran más adelante), el sistema nervioso (ver por ejemplo la sección de "Padecimientos Neurológicos" que se encuentra más adelante) el sistema inmune (ver por ejemplo la sección de "Actividad I nmune" que se encuentra más adelaníe), el sisíema respiraíorio (ver por ejemplo la sección de "Padecimientos Respiratorios" que se encuentran más adelante), sistema cardiovascular, (ver la sección de "Padecimientos Cardiovasculares" que se encuentran más adelante), sistema reproductor (ver por ejemplo la sección de "Padecimiento de Sisíema Reproductor" que se encuentra más adelante) sistema digestivo (ver por ejemplo, la sección Padecimieníos Gastrointestinales" que se encuentran más adelante), enfermedades y/o padecimientos que se relacionan con proliferación celular (ver por ejemplo, la sección de "Padecimientos Hiperproliferativos" que se encuentran más adelante), y/o enfermedades o padecimientos que se relacionan con la sangre (ver por ejemplo, la sección "Padecimientos Relacionados con la Sangre" que se encuentran más adelante). En ciertas modalidades, se puede utilizar una proteína de fusión de albúmina de la presente invención para diagnosticar y/o pronosticar enfermedades y/o padecimientos asociados con el tejido(s) en el cual se expresa el gen que corresponde a la parte de proteína Terapéutica de la proteína de fusión de la presente invención . Por lo tanto, las proteínas de fusión de la presente invención y polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , son útiles en el diagnóstico, detección y/o tratamiento de enfermedades y/o padecimientos asociados con actividades que intuyen, pero no se limitan a, activación de prohormonas, actividad neurotransmisora, sin limitación celular, proliferación celular, diferenciación celular, y migración celular. Más generalmente, las proteínas de fusión de la presente invención , y polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de ia presente invención pueden ser útiles para el diagnóstico, pronóstico, prevención y/o tratamienío de enfermedades y/o padecimieníos asociados con los siguieníes sistemas. Actividad I nmune Las proteínas de fusión de albúminas de la presente invención y polinucleótidos q ue codifican las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe invención , pueden ser úfiles, para íraíar, prevenir, diagnosticar y/o pronosticar enfermedades, padecimientos y/o condiciones del sistema inmune, por ejemplo, activando o inhibiendo la proliferación, diferenciación, o movilización (quimiotaxis) de células inmune. Las células inmune se desarrollan a través de un proceso denominado hematopoyesis que producen células mieloides (plaquetas, glóbulos rojos, neutrófilos y macrófagos) y linfoides (linfocitos B y T) de células madre pluripoteníes. La teología de estas enfermedades inmune, o padecimientos, y/o condiciones pueden ser genéticas, somáticas, tales como cáncer y algunas enfermedades autoinmunes, adquiridas (por ejemplo, por quimioterapia de toxinas), o infecciosas. Además, las proteínas de fusión de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe invención, se pueden uíilizar como un marcador o detector de una enfermedad o padecimiento del sistema inmune en particular. En otra modalidad, la proteína de fusión de la presente invención y/o polinucleótido que codifica uña proteína de fusión de la presente invención, pueden utilizarse para trafar enfermedades y padecimientos del sistema inmune y/o para inhibir o aumentar la respuesta inmune generada por células asociadas con el tejido(s), en donde se expresa el polinucleótido de la presente invención. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , pueden ser útiles para tratar, prevenir, diagnosticar y/o pronosíicar inmunodeficiencias, incluyendo inmunodeficiencias tanío congéniías como adquiridas. Los ejemplos de inmunodeficiencia de célula B en donde se disminuye la función de célula B y/o números de célula B en los niveles de inmunoglobulina incl uyen : agamaglobulinemia enlazada-X (enfermedad de Bruton), agamaloglobulinemia infantil enlazada-X, inmunodeficiencia enlazada-X con hiper IgM , inmunodeficiencia no enlazada-X con hiper IgM, síndrome linfoproliferativo enlazado-X (XLP), agamaglobulinemia que incluye agamaglobulinemia congénita y adquirida, agamaglobulinemia de generación en adultos, agamaglobulinemia de generación tardía, disgamaglobulinemia, hipogamaglobulinemia, hipogamaglobulinemia no específica, agamaglobulinemia recesiva (tipo Suiza), deficiencia IgM Selectiva, deficiencia IgA selectiva, deficiencias de subclase IgG selectiva, deficiencia de subclase IgG (con o sin deficiencia IgA), deficiencia Ig con deficiencia, IgG e IgA incrementada con IgM incrementado, deficiencia de aníicuerpos con Igs normal o elevado, eliminaciones de cadena pesada Ig , deficiencia de cadena cappa, padecimienío linfoproliferaíivo de célula B (BLPD), inmunodeficiencia variable común (CVI D), inmunodeficiencia variable común (CVI ) (adquirida) e hipogamaglobulinemia temporal en infantes. En modalidades específicas, la ataxia-telangiectasia o condiciones o asociadas con ataxia-íelangiectasia se tratan, previenen, diagnostican y/o pronostican uíilizando las proíeínas de opción de la preseníe invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención . Los ejemplos de inmunodeficiencias congénitas en donde se disminuye la función de célula T y/o célula B y/o el número, incluyen pero no se limitan a: anomalía DiGeorge, inmunodeficiencias combinadas severas (SCI D) (incluyendo pero sin limitarse a, SCI D enlazado-X, SCI D recesiva autosomal , deficiencia de diaminasa de adenosina, deficiencia de fosforilasa de n ucleósido de purina (PNP), deficiencia MHC Clase I I (síndrome de linfocito de Bare), síndrome de Wiskott-Aldrich , y ataxia-telangiectasia), hipoplasia timica, síndrome de tercer y cuarto saco faríngeo, eliminación 22q 1 1 .2, candidiasis mucocutánea crónica, deficiencia de célula exterminadora natural (NK), T-limfocitopenia CD4+ idiopática, inmunodeficiencia con defecto de célula T predominante (no específico), e inmunodeficiencia no específica de inmunidad transmitida por células. En modalidades específicas, la anomalía DiGeorge o condiciones asociadas con anomal ía de DiGeorge, se tratan, previenen, diagnostican y/o pronostican uíilizando las proteínas de fusión de la presenten invención y/o polin ucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe invención. Oirás ¡nmunodeficiencias que se pueden íraíar, prevenir diagnosticar, y/o pronosíicar utilizando las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, incluyen pero no se limitan a enfermedades de granuloma crónico, síndrome de Chédiak-Higashi , deficiencia de mieloperoxidasa, deficiencia deshidrogenasa de glucosa-6-fosfato, de leucociío, síndrome linfoproliferativo enlazado-X (XLP), deficiencia de adhesión de leucociío, deficiencias de componeníe complemeníado (incluyendo deficiencias C 1 , C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, y/o C9) disgénesis reticular, alimfoplasia-aplasia tímica, inmunodeficiencia con timoma, leucopenia congénita severa, displasia con inmunodeficiencia, neutropenia neonatal, enanismo de limbo corto, e inmunodeficiencia combinada con síndrome de Nezelof con Igs. En una modalidad preferida, las inmunodeficiencias y/o condiciones asociadas con las inmunodeficiencias mencionadas anteriormente, se tratan, previenen, diagnostica y/o pronostican utilizando las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican proteínas de fusión de albúmina de la presente invención. En una modalidad preferida, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe invención, se pueden utilizar como un agente para reforzar la inmunorrespuesía entre individuos inmunodeficientes. En modalidades específicas, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proíeínas de fusión de la presente invención , se pueden utilizar como un agente para reforzar la inmunorrespuesta entre individuos inmunodeficieníes de célula B y/o célula T. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, pueden ser útiles en el tratamiento, prevención, diagnóstico y/o pronóstico de padecimieníos auto-inmunes. Muchos padecimientos auto-inmunes resultan del reconocimiento inadecuado de sí mismos como material exíerno mediante células inmune. Este reconocimiento inadecuado da como resultado una respuesta inmune que conduce a la destrucción del tejido huésped. Por consiguienfe, la administración de proteínas de fusión de la presente invención y/o polipéptidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención que pueden inhibir una respuesía inmune, particularmente la proliferación , diferenciación o quimiotaxis de células-T, pueden ser una terapia efectiva para prevenir padecimientos auto-inmunes. Las enfermedades o padecimientos auto-inmunes que pueden ser tratados, prevenidos, diagnosticados y/o pronosticados mediante proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, una o más de las siguientes: lupus eritematoso sistémico, arlritis reumatoide, espondilitis anquilosante, esclerosis múltiple, tiroiditis auto-inmune, tiroiditis de Hashimoto, anemia hemolítica auto-inmune, anemia hemolítica, trombocitopenia, púrpura de trombocitopenia auto-inmune, trombocitopenia neonatal auto-inmune, púrpura de trombocitopenia idiopática, púrpura (por ejemplo, púrpura de Henloch-Scoenlein), autoinmunocitopenia, síndrome de Goodpasteure, Penfigo vulgaris, miastenia grave, enfermedad de Grave (hipertiroidismo), y diabetes melitus resistente a insulina. Los padecimientos adicionales que pueden tener probablemente un componente auto-inmune que puede ser tratado, prevenido y/o diagnosticado con las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención, incluye pero no se limitan a, aríriíis inducida por colágeno tipo I I , síndrome de antifosfolípido, dermatitis, encefalomielitis alérgica, miorcaditis, policondritis reincidente, enfermedad cardiaca reumática, neuritis, revisar término con original, poliendocrinopatias, Enfermedad de Reiter, síndrome de Staff-Man , inflamación pulmonar autoinmune, autismo, síndrome de Guillain-Barre, diabefes meliíus dependieníe de insulina y enfermedades inflamaíorias autoinmunes de los ojos. Los padecimientos adicionales que probablemente tienen un componente autoinmune que puede ser íraíado, prevenido, diagnosticado y/o pronosticado con las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o pilonucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , incluyen pero no se limitan a, escleroderma con aníicuerpos anli-colágeno (con frecuencia caracíerizados por ejemplo, medianíe nucleolares y oíros anticuerpos nucleares), enfermedad de tejido conectivo mezclado (con frecuencia caracterizado, por ejemplo, mediante anticuerpos de antígenos nucleares esíracíables (por ejemplo, ribonucleoproíeína)), polimiocitis ( con frecuencia caracterizado, por ejemplo, mediante ANA sin hisíona), anemia perniciosa (con frecuencia caracterizada, por ejemplo, mediante célula antiparieíal , microsomas y aníicuerpos de factor intrínsecos), enfermedad idiomática de Addison (con frecuencia caracferizada, por ejemplo, medíanle cilotoxicidad adrenal humoral) infertilidad (con frecuencia caracterizada mediante anticuerpos antiespermatozoides), glomerulo nefritis (con frecuencia caracterizada, por ejemplo, mediante anticuerpos de membrana de base glomerular o complejos inmunes), emfigiode bulloso (con frecuencia caracterizada, por ejemplo, mediante IgG y complemento en membrana de base), síndrome de Sjogren 's (con frecuencia caracterizado, por ejemplo, mediante anticuerpos de tejido múltiple y/o un ANA sin histoma específico (SS-B)), diabetes melitus (con frecuencia caracterizada, por ejemplo, mediante anticuerpos de célula de isleño humoral y íransmitido por células) y resistencia a fármacos adrenérgicos (incluyendo resistencia fármacoadrenérgico con asma o fibrosis quística) con frecuencia caracterizado, por ejemplo, mediante anticuerpos receptores beta-adrenérgicos). Los padecimientos adicionales que pueden tener un componente autoinmune que puede ser tratado, prevenido, diagnosticado y/o pronosticado con las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , incluyen , pero no se limitan a, hepatitis activa crónica (con frecuencia caracterizada, por ejemplo, mediante anticuepos de músculo liso), cirrosis vidrial primaria (con frecuencia caraclerizada, por ejemplo, medianíe anticuerpos de mitocondrias), otras fallas de glándula endocrina (con frecuencia caracterizada, por ejemplo, mediante anticuerpos de tejido específico en algunos casos), vitíligo (con frecuencia caracterizado, por ejemplo, por anticuerpos de melanocito), basculitis (con frecuencia caracterizado, por ejemplo, mediante Ig y complemento en paredes de vasos sanguíneos y/o bajo complemento de suero), post-MI (con frecuencia caracterizado, por ejemplo, medíanle anticuerpos meocardíacos), síndrome de cardiotomia (con frecuencia caracterizado, por ejemplo, por anticuerpos de miocardi), urticaria (con frecuencia caracterizado, por ejemplo, mediante anticuerpos IgG e IgM para IgE), dermatitis atópica (con frecuencia caracterizada, por ejemplo, mediante anticuerpos IgG e IgM para IgE), asma (con frecuencia caracterizada, por ejemplo, mediante anticuerpos IgG e lgM para Ig E) y muchos otros padecimientos inflamatorios, granulomatosos, degenerativos y atrofíeos. En una modalidad preferida, las enfermedades y padecimientos autoinmunes y/o condiciones asociadas con las enfermedades y padecimientos mencionados anteriormente, se tratan, previenen, diagnostican, y/o pronostican utilizando por ejemplo, proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención. En una modalidad preferida específica, la artritis reumatoide se traía, previene y/o diagnostica utilizando proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presenfe invención. En otra modalidad preferida específica, el lupus editematoso sistémico, se írata, previene y/o diagnostica utilizando las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención. En otra modalidad preferida específica, la púrpura de trombociíopene idiopáfica, se íraía, previene, y/o diagnostica utilizando la proteína de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proíeínas de fusión de la presente invención. En otra modalidad preferida específica, la nefropatia IgA se trata, previene y/o diagnostica utilizando proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proleínas de fusión de la presente invención. En una modalidad preferida, las enfermedades y padecimientos autoinmune y/o condiciones asociadas con las enfermedades y padecimientos mencionados anteriormente, se tratan, previenen, diagnostican y/o pronostican utilizando las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención.

En modalidades preferidas, las proteínas de fusión de la présenle invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se utilizan como un agente(s) inmunosupresor. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , pueden ser útiles para tratar, prevenir, pronosticar y/o diagnosticar enfermedades, padecimientos y/o condiciones de células hematopoyéticas. proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , pueden utilizarse para incrementar la diferenciación y proliferación de células hematopoyeticas, incluyendo las células madre pluripoteníes, en un esfuerzo para íraíar o prevenir las enfermedades, padecimieníos y/o condiciones asociadas con una disminución en ciertos tipos (o muchos) de células hematopoyéficas, incluyendo pero sin limiíarse a, leucopenia, neuíropenia, anemia y trombocitopenia. Como alternativa, proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se pueden utilizar para incrementar la diferenciación y proliferación de células hematopoyéticas, incluyendo las células madre pluripotentes, en un esfuerzo para tratar o prevenir aquellas enfermedades, o padecimieníos y/o condiciones asociadas con un incremenío en ciertos tipos ( o muchos) de células hematopoyeticas, incluyendo pero sin limitarse a, hisíiociíosis. Las reacciones y condiciones alérgicas, tales como asma (particularmeníe asma alérgica) u oíros problemas respiraforios, íambién se pueden tratar, prevenir, diagnosticar y/o pronosticar utilzando proteínas de fusión de la preseníe invención y/o polinucleóíidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención . Además, estas moléculas se pueden utilizar para traíar, prevenir, pronosticar y/o diagnosticar anafilaxis, hipersensibilidad a una molécula antigénica o incompatibilidad de grupo sanguíneo. Además, las proteínas de fusión de la preseníe invención y/o polinucleóíidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se pueden utilizar para tratar, prevenir, diagnosticar y/o pronosticar reacciones transmitidas por IgE. Dichas reacciones alérgicas, incluyen pero no se limitan a asma, rinitis y eczema. En modalidades específicas, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la preseníe invención, se pueden utilizar para modular la conceníración IgE in vivo o in Vifro. Además, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la présenle invención , fienen usos en el diagnósíico, pronóstico, prevención y/o tratamiento de condiciones inflamatorias. Por ejemplo, ya que las proíeínas de fusión de la présenle invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, pueden inhibir la activación , proliferación y/o diferenciación de células involucradas en una respuesta inflamatoria, estas moléculas se pueden utilizar para prevenir y/o tratar condiciones inflamatorias crónicas y agudas. Tales condiciones inflamatorias incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, inflamación asociada con infección (por ejemplo, choque séptico, sepsis o síndrome de respuesta inflamatoria sistémica), lesión por repercusión de ischemia, letalidad por endotoxina, rechazo hiperagudo transmitido por complemento, nefritis, lesión de pulmón inducida por citosina o quimiocina, enfermedad de intestino inflamatorio, enfermedad de Chrohn , sobre-producción de citosina (por ejemplo TNF o I L-1 ) padecimientos respiratorios (por ejemplo, asma y alergia); padecimientos grastrointestinales (por ejemplo, enfermedad intestinal inflamatorio) cánceres (por ejemplo, gástrico, de ovario, pulmón, vejiga, hígado y senos) padecimientos CNS (por ejemplo esclerosis múltiple; lesión de cerebro ischémica y/o ataque, lesión de cerebro traumática, padecimientos neurodegenerativos (por ejemplo enfermedad de Parkinson y enfermedad de Alzheimer); demencia relacionada con SIDA; y enfermedad de prión); padecimientos cardiovasculares (por ejemplo, ateroesclerosis, miocarditis, enfermedad cardiovascular y complicaciones de derivación cardio-pulmonar); así como muchas enfermedades, condiciones y padecimientos adicionales que están caracterizados por inflamación (por ejemplo, hepatiíis, aríriíis reumaíoide, gola, írauma, pancreaíitis, sarcoidosis, dermatitis, lesión por repercusión de ischemia renal, enfermedad de Grave, lupus eritematosus sistémico, diabetes melitus y rechazo a transplante alogénico). Debido a que la inflamaciñon es un mecanismote defensa fundamental, los padecimientos inflamatorios pueden efectuar virtualmente cualquier tejido del cuerpo. Por consiguiente, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, tiene usos en el tratamiento de padecimientos inflamatorios específicos de tejido, que incluyen pero no se limitan a, adrenalitis, alveolitis, angiocolecistilis, apendicitis, balanitis, blefaritis, bronquitis, bursitis, carditis, celulitis, cervicitis, colecisíiíis, cordilis, cocliíis, colitis, conjuntivitis, cistitis, dermatitis, diverticuliís, encefaliíis, endicarditis, esofaguitis, eustacitis, fibrosistis, folicu litis, gastritis, gastroenteritis, gingivitis, glositis, hepaíoesplenllis, keratitis, labirintitis, laringitis, limfangitis, mastitis, media otitis, meningitis, metriíis, muciíis, miocardiíis, miosifitis, miringitis, nefritis, neuritis, orcitis, osteocondritis, otitis, pericarditis, peritendonitis, peritonitis, faringitis, flebitis, poliomelitis, prostatiíis, pulpiíis, retinitis, rinitis, salpingitis, escleritis, esclerocoroidiís, escoíiíos, sinusiíis, espondiliíis, esteatitis, esíomaíiíis, sinovitis, siringitis, tendonitis, tonsilitis, uretrilis y vaginitis. En modalidades específicas, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , son útiles para diagnosticar, pronosticar, prevenir y/o traíar rechazos de íransplaníe de órgano y enfermedad de injerío-versus-huésped . El rechazo de órganos ocurre a través de la destrucción de células inmune del huésped del tejido transplaníado a través de una respuesta inmune. En forma similar, una respuesta inmune también está involucrada en GVH D, pero, en este caso, las células inmune transplantadas externas destruyen los tejidos huésped. Los polipéptidos, anticuerpos o polinucloelidos de la preseníe invención y/o agonisías o antagonistas de las mismas, que inhiben una respuesta inmune, particularmeníe la activación, proliferación, diferenciación de quimiotaxtis de células-T pueden ser una terapia efectiva para prevenir el rechazo de órganos o GVH D. En modalidades específicas, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , que inhiben una respuesía inmune, particularmente la activación, proliferación, diferenciación o quimiotacxtis de célula-T, pueden ser una terapia efectiva en la prevención de rechazo alérgico y rechazo de xeno-injerto hiperagudo experimental . En oirás modalidades, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , son útiles para diagnosíicar, pronosíicar, prevenir y/o íratar enfermedades del complejo inmune, incluyendo pero sin limitarse a, enfermedades del suero, glomerulonefritis post-esfreptococal , nodosa poliarteritis y vasculitis inducida por complejo inmune. Las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se pueden utlizar para tratar, detectar y/o prevenir agentes infecciosos. Por ejemplo, incrementando la respuesta inmune, incrementando paríicularmenle la acíivación de proliferación y/o diferenciación de célula B y/o T, las enfermedades infecciosas pueden ser tratadas, detectadas y/o prevenidas. Las respuesta inmune puede ser incrementada ya sea aumentando una respuesta inmune existente, o iniciando una nueva respuesta inmune. Como alíernativa, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , también pueden inhibir directamente el agente infeccioso referirse a la sección de la aplicación que describe agentes infecciosos, etc) sin provocar necesariamente una respuesta inmune. En otras modalidades, las proíeínas de fusión de la preseníe invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se utilizan como un adyuvante de vacuna que mejora la respuesía inmune de un anfígeno. En una modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan como un adyuvante para aumentar las respuesías inmunes específicas de tumor. En otras modalidades, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proíeínas de fusión de la preseníe invención, se utilizan como adyuvanfe para mejorar las respueslas inmune anti-virales. Las respuestas inmune antivirales que pueden ser mejoradas utilizando las composiciones de la presente invención como un adyuvante, incluyen virus y enfermedades asociadas con virus o sínlomas que se describen en la presente invención , o que se conocen de otra forma en la técnica. En modalidades específicas, las composiciones de la presente invención se utilizan como un adyuvante para mejorar una respuesta inmune a un virus, enfermedad o síntoma seleccionado del grupo que consisle en: SI DA, meningitis, Dengue, EBV y hepatitis (por ejemplo, hepatitis B). En otra modalidad específica, las composiciones de las presente invención se utilizan como un adyuvante para aumentar una respuesta inmune a un virus, enfermedad o síntoma seleccionado del grupo que consiste en: VI H/SI DA, virus sincitial respiratorio, Dengue, rofavirus, encefalitis japonesa B, influenza A y B, para influenza, paperas, ciíomegalovirus, rabias, Junin, Chikungunia, fiebre de Rift Valley, herpes simple y fiebre amarilla. En otras modalidades específicas, las proíeínas de fusión de la presenfe invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan como un adyuvante para mejorar las respuestas inmune anti-bacferianas o aníi-fúngicas. Las respueslas inmune anfi-baclerianas o anti-fúngicas que se pueden au mentar utilizando las composiciones de las presente invención , un adyuvante, incluyen bacterias u hongos o enfermedades o síntomas asociados con batcerias u hongos que se describen en la presente invención o que se conocen en la técnica. En modalidades específicas, las composiciones de la presente invención se utilizan como un adyuvante para aumentar la respuesta inmune a una bacteria u hongo, enfermedad o síntoma seleccionado del grupo que consiste en : tétano, difteria, botulismo y meningitis tipo B. En otra modalidad específica, las composiciones de las presente invención se utilizan como un adyuvante para aumentar una respuesta inmune a una bacteria u hongo, enfermedad o síntoma seleccionado del grupo que consiste en: Vibrio cholerae, Mycobacterium leprae, Salmonella Typha Salmonella paratyphi, Meisseria meningitis, Streptococcus pneumoniae, Group B streptococus, Shigella spp. , Enterotoxigenic Escherichia coli, Enterohemorrhagic E. coli, y Borrelia burgdorferi. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se utilizan como un adyuvante para aumentar respuestas inmune anti-parasíticas. Las respuestas inmune anti-parasíticas que se pueden aumentar utilizando las composiciones de la presente invención como un adyuvante, incluyen parásitos y enfermedades o síníomas asociados con parásiíos que se describen en la preseníe invención o que se conocen en la íécnica. En modalidades específicas, las composiciones de la presente invención se utilizan como un adyuvante para aumentar una respuesía inmune a un parásiío. En oíra modalidad específica, las composiciones de la preseníe invención se utilizan como un adyuvaníe para aumeníar una respuesfa inmune a Plasmodium malaria) o Leishmania. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, también se pueden emplear para tratar enfermedades infecciosas incluyendo silicosis, sarcoidosis y fibrosis pulmonar idiopática; por ejemplo, eviíando el reclutamiento y activación de fagotitos mononucleares. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan como un antígeno para la generación de anticuerpos para inhibir o aumentar las respuestas íransmiíidas por sisíema inmune coníra polipépíidos de la presente invención. En una modalidad, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se administran a un animal (por ejemplo, ratón, rata, conejo, hámster, cerdo de Guinea, cerdos, microcerdos, pollos, camellos, cabras, caballos, vacas, ovejas, perros, gatos, primates no humanos y humanos, mas prefereníemeníe humanos) para reforzar el sisíema inmune para producir cantidades incrementades de uno o más anticuerpos (por ejemplo, IgG, IgA, IgM e IgE) una producción de anticuerpos de afinidad con mayor nivel y la conmutación de clase de inmunoglobulina (IgG, IgA, IgM e IgE) y/o para incrementar una respuesta inmune. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan como un esíimulador de respuesta de célula B a patógenos. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan como activador de células T. En oíra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan como un agente que eleva el estado inmune de un individuo antes de su recepción de terapias inmunosupresoras. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan como un ageníe para inducir aníicuerpos con afinidad de mayor nivel. En oíra modalidad específica, las proíeínas de fusión de la preseníe invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan como un agente para incrementar las concentraciones de inmunoglobulina de suero. En otra modalidad, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se utilizan como un ageníe para acelerar la recuperación de individuos inmunocompromeíidos. En oíra modalidad específica, las proíeínas de fusión de la preseníe invención y/o polinucleóíidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan como un ageníe para reforzar la inmunorrespuesta entre poblaciones de edades avanzadas y/o neonatos. En otra modalidad específica, las proíeínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan como un aumentador del sistema inmune, antes de, durante o después del transplaníe de médula ósea y/o oíros transplantes (por ejemplo, transplanle de órgano alogenéico o xenogenérico). Con respecío al transplante, las composiciones de la presente invención pueden ser administradas antes, en forma concomitante con , y/o después del transplanle. En una modalidad específica, las composiciones de la presente invención se administran después del transplante, antes de comenzar la recuperación de poblaciones de célula-T. En otra modalidad específica, las composiciones de la presente invención se administran primero después del transplante, después del comienzo de la recuperación de poblaciones de célula T aunque aníes de la recuperación íoíal de poblaciones de célula B.

En olra modalidad específica, las proleínas de fusión de la preseníe invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se uíilizan como un agente para reforzar la inmunorespuesta entre individuos que tiene una pérdida adquirida de la función de célula B. las condiciones que te dan como resultado una pérdida adquirida de la función de la célula B que pueden ser disminuidas o tratadas administrando proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , incluyen pero no se limitan a , infecciones de VI H, SI DA, transplante de médula ósea y leucemia linfocítica crónica de célula B (CLL). En otra modalidad específica, las proíeínas de fusión de la preseníe invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan como un agenfe para reforzar la inmunorespuesía eníre individuos que tiene una deficiencia inmune temporal . Las condiciones que dan como resultado una deficiencia inmune temporal que pueden ser disminuidas o fraíadas adminisírando las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, incluyen , pero no se limitan a, recuperación de infecciones virales (por ejemplo influenza), condiciones asociadas con mala nutrición , recuperación mononucleosis infecciosa o condiciones asociadas con tensión, recuperación de paperas, recuperación de transfusión sanguínea y recuperación de cirugía. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la preseníe invención y/o polinucleótidos que codifican las proíeínas de fusión de la presente invención, se utilizan como un regulador de presentación de aníígeno medianíe monocitos, células dendríticas y/o células-B. En una modalidad , las proteínas de fusión de la présenle invención y/o polinucleóíidos que codifican las proleínas de fusión de la presente invención, aumentan la presentación de antígenos o antogonizan la presentación de antígenos in Vitro o in vivo. Además, en modalidades relacionadas, este aumento o antagonismo de la presentación de antígenos puede ser útil como un tratamiento anti.fumor o para modular el sisfema inmune. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la présenle invención y/o polinucleólidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se utilizan como un agente para dirigir un sistema inmune de un individuo al desarrollo de una respuesla humor (por ejemploTH2) en forma opuesta a una respuesta celular TH 1 . En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se utilizan como un medio para inducir la proliferación de tumor y por lo tanto hacerlo mas susceptible a agentes anti-neoplásíicos. Por ejemplo, el mieloma múltiple es una enfermedad de división lenta y por lo tanío es refracíarja viríualmeníe a lodos los regimenes anti-neoplásticos. Si estas células fueran forzadas a proliferarse más rápidamente, probablemente cambiaría su perfil de susceptibilidad. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan como un estimulador de producción de célula B en patologías tales como S I DA, padecimiento de linfocito crónico y/o I nmunodeficiencia Variable Común. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o pollnucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan como una terapia para la generación y/o regeneración de tejidos linfoides después de cirugía, trauma o defecto genético. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se utilizan en el tratamiento previo de muestras de médula ósea antes del transplante. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se utilizan como una terapia a base de genes para padecimientos genéticamente heredados que dan como resultado inmuno-incompetencia/inmunodeficiencia, tal como se observa entre paciente con SCI D. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se utilizan como un medio para activar monocitos/macrófagos para defender coníra enfermedades de parásiíos que afectan los monocitos, tales como Leishmania. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se utilizan como un medio para regular citosina segregadas que son generadas por los polipéptidos de la presente invención. En otra modalidad , las profeínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la présenle invención, se uíilizan en una o más de las aplicaciones aquí descriías, ya que pueden aplicar lambién a medicina veterinaria. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan como un medio para bloquear varios aspectos de respuesta inmune a agentes externos o propios. Los ejemplos de enfermedadeds o condiciones en donde se puede desear el bloqueo de ciertos aspectos de respuesta inmune, incluyen padecimientos autoinmune tales como lupus, y artritis, así como inmunorespuesía a alergias de piel , inflamación enfermedades del intestino, lesiones y enfermedades/padecimientos asociados con patógenos. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se utilizan como una terapia para prevenir la proliferación de célula B y la secreción Ig asociada con con enfermedades autoinmunes, fales como púrpura trombocitopénica ¡diopáíica, lupus eriíemalosus sisíémico y esclerosis múltiple. En otra modalidad específica, los polipéptidos, anticuerpos, polinucleótidos y/o agonistas o aníagonisías de las profeínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina d la presente invención, se utilizan como un inhibidor de migración de célula B y/o T en células endoteliales. Esta actividad interrumpe la arquiíecíura de tejido respuestas cognatas y es útil, por ejemplo, en la interrupción de respuesías inmune, y bloqueo de sepsis. En oíra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la preseníe invención , se uíilizan como una terapia para hipergamaglobulinemia crónica evidentes en enfermedades íales como gamopalia monoclonal de ¡mporlancia no determinada (MGUS), enfermedad de Waldenstrom , gamopaíias monoclonales idiopáficas relacionadas y plamacitomas. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la preseníe invención , se pueden emplear por ejemplo para inhibir quimiotaxis de polipéptido y acíivación de macrófagos y sus precursores, y de neuírófilos, basófilos, linfocitos B y algunos subgrupos de célula-T, por ejemplo, células T citolóxicas CD8 y activadas y células exterminadoras naturales, en cierías enfermedades inflamatorias e infecciosas autoinmunes y crónicas. Los ejemplos de enfermedades autoinmune se describen en la presente invención e incluyen esclerosis múltiple y diabetes dependiente de insulina. Las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, también se pueden emplear para tratar síndrome hiper-eosinofílico idiopático, por ejemplo, evitando la producción y migración de eosinófilos. En oíra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se utilizan para aumentar o inhibir la lisis celular transmitida por complemenfo. En ofra modalidad específica, las proíeínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se utilizan para aumentar o inhibir las citotoxicidad celular dependiente de aníicuerpos. En oíra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, también se pueden emplear para tratar arteroesclerosis, por ejemplo, evitar infiltración de monocitos en la pared arterial. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se pueden emplear para tratar síndrome de distensión respiratoria en adultos (ARDS). En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la présenle invención y/o polinucleólidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, pueden ser útiles para estimular la curación y reparación de tejidos, estimular angiogénesis y/o estimular la reparación de enfermedades o padecimientos vasculares o linfáticos. Además, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, pueden utilizarse para estimular regeneración de superficies mucosas. En una modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan para diagnosticar, pronosticar, tratar y/o prevenir una enfermedad caracterizada por inmunodeficiencia primaria o adquirida, producción deficiente de inmunoglobulina de suero, infecciones recurrentes y/o disfunción de sistema inmune. Además, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se pueden tratar para tratar o prevenir infecciones de las articulaciones, huesos, piel y/o glándulas parótidas, infecciones sostenidas en la sangre (por ejemplo, sepsis, meningitis, artritis séptica y/o ostiomielitis), enfermedades autoinmunes (por ejemplo, las que se describen en la presente invención), padecimientos inflamatorios y malignidades y/o cualquier enfermedad o padecimiento o condición asociada con estas infecciones, enfermedades, padecimientos y/o malignidades), incluyendo pero sin limitarse a, CVI D, otras deficiencias inmunes primarias, enfermedad de VI H, CLL, bronquitis recurrente, sinusitis, otitis media, conjuntivits, neumonía, hepatitis, meningitis, herpes zoster ( por ejemplo, herpes zoster severo) y/o "carnií" por neumocistis. Otras enfermedades y padecimientos que pueden ser evitados, diagnosticados, pronosticados y/o tratados con las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , incluyen pero no se limitan, infección de VIH, infección de HTLV-BLV, linfopenia, anemia por disfunción bactericial de fagotitos, trombocitopenia y hemoglobinuria. En otra modalidad, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan para tratar y/o diagnosticar a un individuo que tiene enfermedad de inmunodeficiencia variable común ("CVI D"; también conocido como agamaglobulinemia adquirida"hipogamaglobulinea adquirida") o un subgrupo de esta enfermedad .

En una modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se pueden utilizar para diagnosticar, pronosticar, prevenir y/o tratar cánceres o neoplasmas incluyendo cánceres relacionados con célula inmune o tejido inmune con plasmas. Los ejemplos de cánceres o neoplasmas que pueden que ser prevenidos, diagnosticados o tratados mediante las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleólidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, incluyen pero no se limiían a leucemia mielogenosa aguda, leucemia miolegenosa crónica, enfermedad de Hodgkin, linfoma de no-Hodgkin, anemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, plasmacitomas, mieloma múltiple, linfoma de Burkit, enfermedades transformadas por EBV y/o enfermedades y padecimientos descritos en la sección titulada en la presente invención "Padecimientos Hiperproliferativos". En una modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se utilizan como una terapia para disminuir la proliferación celular de linfomas de célula-B grande. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan como un medio para disminuir la implicación de células B e Ig asociado con Leucemia Mielogenosa. En modalidades específicas, las composiciones de la presente invención se utilizan como un agente par recursar las inmunorespuestas entre individuos con inmunodeficiencia de célula B , tales como, por ejemplo, individuo que ha pasado por el esplenoctomía parcial o total . Padecimientos Relacionados con la Sangre. Las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se pueden utilizar para modular la actividad hemostática (la detención de sangrado) o trombolítica (disolución de coágulos). Por ejemplo, incrementando la actividad hemostática o trombolítica, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, pueden utilizarse para tratar o prevenir enfermedades de coagulación sanguínea, enfermedades, padecimientos y/o condiciones de coagulación de sangre (por ejemplo, afibrinogemia, deficiencias de factor, hemofilia) enfermedades, padecimientos y/o otras condiciones de plaquetas sanguíneas (por ejemplo, trombocitopenía) o curaciones que resultan de traumas, cirugías u otras causas. Como alternativa, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , que pueden disminuir la actividad hemostática o trombolítica, pueden ser utilizadas para inhibir o disolver coágulos. Estas moléculas pueden ser importantes en el tratamiento o prevención de ataques cardíacos (por ejemplo, infartos, ataques o generación de cicatrices). En modalidades específicas, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, pueden ser utilizadas para pevenir, diagnosticar, pronosticar y/o tratar trombosis, trombosis arterial, írombosis venosa, tromboembolismo, embolia pulmonar, arteroesclerosis, infarto al miocardio, ataques isquémico temporal , angina inestable. En modalidades específicas, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se pueden utilizar la prevension de oclusión de injertos sáfenos, para reducir el riesgo de trombosis periprocedural que puede acompañar procedimieníos de angioplasíía, para reducir el riesgo de ataque en pacientes fibrilación atrial, incluyendo fibrilación atrial no reumática, para reducirle riesgo de embolia asociada con válvulas cardíacas mecánicas y/o enfermedad de válvulas mitrales. Otros usos de las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , incluyen, pero no se limitan a, prevención de oclusiones en aparatos extra corpóreos (por ejemplo, cánulas intravasculares, derivaciones de acceso vascular en pacieníes con hemodiálisis, máquinas de hemodiálisis y/o máquinas de derivación cardiopulmonar).

En otra modalidad, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se pueden utilizar para prevenir, diagnosíicar, pronosíicar y/o tratar enfermedades y padecimientos de la sangre y/o órganos de formación de sangra asociados con el tejido(s), en donde se expresa el polipéptido de la presente invención . Las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se pueden utilizar para mod ular acíividad hematopoyética (la formación de células de sangre). Por ejemplo, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se pueden utilizar para incremeníar la cantidad de todos los subgrupos de glóbulos, tales como, por ejemplo, eritrociíos, linfociíos ( célula B o T) células mieloides ( por ejemplo, basofilos, eosinófilos, neutrofios, células mástil , macrófagos) y plaquetas. Las habilidad de disminuir la cantidad de glóbulos o subgrupos de glóbulos, pueden ser útil en la prevención , detección , diagnósíico y/o tratamiento de anemias y leucopenias que se describen más adelante. Como alternativa, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se pueden uíilizar para disminuir la caníidad de lodos los subgrupos de glóbulos, íales como, por ejemplo, eriírocilos, linfocitos ( células B o T)m en células mieloide (por ejemplo, basófilos, eosinófilos, neutrófilos, células mástil, macrófago) y plaquetas. La capacidad de disminuir la cantidad de glóbulos o subgrupos de glóbulos, puede ser útil en la prevención , detección , diagnóstico y/o tratamiento de leucocitotes, tales como por ejemplo eusinofilia. Las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se pueden utilizar para prevenir, tratar o diagnosticar discracia sanguínea. Las anemias son condiciones en las cuales el número de glóbulos rojos o cantidad de hemoglobina (la proteína que lleva oxígeno) en ellos, está debajo de lo normal. La anemia puede ser originada por sangrada excesivo, producción disminuida de glóbulos rojos, o destrucción incrementada de glóbulos rojos (hemolisis). Las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, también pueden ser útiles para traíar, prevenir y/o diagnosíicar anemias. Las anemias que pueden ser tratadas, prevenidas o diagnosticadas medianíe las proíeínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , incluyen anemia por deficiencia de hierro, anemia hipocromiva, anemia microcífica, clorosis, anemia sideroblástica herediíaria, anemia sideroblásíica adquirida idiopálica, aplasia de glóbulos rojos, anemia megalobláslica (por ejemplo, anemia perniciosa, (deficiencia en vitamina B12) y anemia por deficiencia de ácido fólico), anemia aplástica, anemia s hemolíticas (por ejemplo, anemia hemolítica autoinmune, anemia hemolítica microangiopática y hemoglobinuria nocturna paroxismal). Las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proíeínas de fusión de la presente invención, también pueden ser útiles para traíar, prevenir y/o diagnosticar anemias asociadas con enfermedades que incluyen pero no se limiían a, anemias asociadas con lupus eritematosus sisíémico, cánceres, linfomas, enfermedad renal crónica y vasos agrandados. Las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, pueden ser útiles para tratar, prevenir y/o diagnosticar anemias que surgen de tratamientos con fármacos tales como anemias asociadas con metildopa, dapsona y/o sulfafármacos. Además, las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleóíidos que codifican las proíeínas de fusión de la presente invención, pueden ser útiles en esferocitosis, eliptocitosis hereditaria, deficiencias de deshidrogenada por glucosa-6-fosfato y anemia drepanocílica. Las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, pueden ser útiles en el íraíamienío, prevención y/o diagnóstico de anormalidades de hemoglobina (por ejemplo las asociadas con anemia drepanocítica, enfermedad de hemoglobina C, enfermedad de hemoglobina S-C y enfermedad de hemoglobina E). Además, las proteínas de fusión de la présenle invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , pueden ser útiles para diagnosticar, pronosticar, prevenir y/o tratar talasemias, incluyendo pero sin limitarse a, formas mayores y menores de la talasemia-alfa y talasemia-beta. En otra modalidad , las proteínas de fusión de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , pueden ser útiles para diagnosticar, pronosticar, prevenir y/o tratar padecimientos de sangrado que incluyen pero no se limitan a trombocitopenia (por ejemplo, púrpura trombocitopénico idiopática y púrpura írombocifopénica trombótica), enfermedad de Von Willebrand, padecimientos de plaquetas ( por ejemplo, enfermedad de grupo de almacenamienío tal como síndrome de Chediak-Higashi y Hermansky-Pudlak, disfunción por tromboxano A2, tromboastemia y síndrome de Bernard-Soulier), síndrome urémico-hemolítico, hemofilias tales como hemofilia A o deficiencia de factor Vi l y enfermedad de Navidad o, deficiencia de Factor IX, Telangiectsia Hemorrágica Herediíaria, íambién conocida como síndrome de Rendu-Osler-Weber, púrpura alérgica (púrpura Henoch Shonlein) y coagulación intravascular diseminada. El efecto de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención en el tiempo de coagulación de la sangre, puede ser monitoreada utilizando cualesquiera de las pruebas de coagulación conocidas en la técnica, incluyendo pero sin limitarse a, tiempo de tromboplastina parcial de sangre loíal (PTT), el tiempo de tromboplastina parcial activada (aPTT), tiempo de coagulación activada (ACT), el tiempo de coagulación activada recalcificada, o el tiempo de Coagulación Lee-White. Varias enfermedades de una variedad de fármacos pueden originar disfunción de plaquetas. Por lo tanto, en una modalidad específica, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , pueden ser útiles para diagnosticar, pronosticar, prevenir y/o traíar disfunción de plaqueías adquirida, tales como disfunción de plaquetas que acompaña falla renal, leucemia, mieloma múltiple, cirrosis de h ígado y lupus erilemaíoso sistémico, así como disfunción de plaqueta asociada con íratamiento de fármacos, incluyendo el traíamiento con aspirina, triclopidina, fármacos anti-inflamatorios noestiroidales (utilizados para artritis, dolor y esguinces) y penicilina en altas dosis. En otra modalidad , las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden ser útiles para diagnosticar, pronosticar, prevenir, y/o íraíar enfermedades y padecimientos caracterizados por, o que están asociados con , números incrementados o disminuidos de glóbulos blancos. La leucopenia ocurre cuando el número de glóbulos blancos disminuye debajo de lo normal. Las leucopenias incluyen pero no se limitan a, neutropenia y linfocitropenia. Un incremento el número de glóbulos blancos en comparación con lo normal, es conocido como leucociíosis. El cuerpo genera números incremeníados de glóbulos blancos durante la infección. Por lo tanto, la leucocitosis puede ser simplemente un parámetro fisiológico normal, que refleja una infección. Como alternativa, la leucocitosis puede ser un indicador de lesión u ofra enfermedad, íal como cáncer. La leucociíosis, incluye, pero no se limila a, eosinofilia, y acumulaciones de macrófagos. En modalidades específicas, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleóíidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden ser útiles para diagnosticar, pronosticar, prevenir y/o tratar leucopenia. En otras modalidades específicas, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden ser útiles para diagnosticar, pronosticar, prevenir y/o tratar leucocitosis. La leucopenia puede ser una disminución generalizada en iodos los íipos de glóbulos blancos, o puede ser un agofamiento específico de tipos particulares de glóbulos blancos. Por lo fanto, en modalidades específicas, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleóíidos que codifican las proíeínas de fusión de albúmina, pueden ser útiles para diagnosticar, pronosticar, prevenir y/o traíar disminuciones en números de neuírofilos, conocidos como neutropenia. Las neutropenias que pueden ser diagnosticadas, pronosíicadas, prevenidas, y/o íratadas por las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, incluyen pero no se limitan a, granulocitosis genética infanfil , neuíropenia familiar, neutropenia cíclica, neutropenias que resultan de, o que están asociadas con deficiencias en la dieía (por ejemplo, deficiencia de vitamina B 12 o de deficiencia de ácido folico), neutopenias que resultan de, o que están asociadas con íraíamieníos de fármacos (por ejemplo, regímenes antibióticos íales como íraíamienío con penicilina, íratamiento con sulfonamida, tratamiento anticoagulaníe, fármacos anticonvulsivos, fármacos anti-tiroides y quimioíerapia de cáncer), y neutropenias que resultan de destrucción de neutrofilos incrementada que pueden ocurrir en asociación con infecciones bacterianas o virales, padecimieníos alérgicos, enfermedades autoinmunes, condiciones en las cuales un individuo tiene un bazo agrandado (por ejemplo, síndrome de Felty, malaria y sarcoidosis), y algunos regímenes de tratamiento de fármacos. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden ser útiles en el diagnóstico, pronósíico, prevención y/o tratamiento de linfocitopenias (números disminuidos en linfociíos B y/o T), incluyendo, pero sin limitarse a, linfocitopenias que resultan de, o que están asociadas con, íensión, tratamienlos de fármacos (por ejemplo, tratamientos de fármacos con corticoesteroides, quimioterapias de cáncer y/o terapias de radiación), infección por SI DA y/o otras enfermedades tales como por ejemplo, cáncer, artritis reumatoide, lupus eritemaíoso sisíémico, infecciones crónicas, algunas infecciones virales y/o padecimientos hereditarios (por ejemplo síndrome de DiGeorge, Síndrome de Wiskott-Aldrich, inmunodeficiencia combinada severa, lelangiectsia ataxia). Las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden ser útiles para diagnosticar, pronosticar, prevenir y/o tratar enfermedades y padecimientos asociados con números de macrófagos y/o función de macrófagos, que incluyen pero no se limitan a, enfermedad de Gaucher, enfermedad de Nieman-Pick, enfermedad de Letter-Siwe y enfermedad de Hand-Schuller-Crisíian . En olra modalidad, las proíeínas de fusión de albúmina de la preseníe invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden ser útiles para diagnosíicar, pronosticar, prevenir y/o íraíar enfermedades y padecimientos asociados con eosinófilos y/o función de eosinófilos que incluyen pero no se limitan a, síndrome hipereosinofílico idiopático, síndrome de eosinofilia-mialgia y enfermedad de Hand-Schuller-Cristian.

En otra modalidad, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden ser útiles para diagnosticar, pronosticar, prevenir y/o tratar leucemias y linfomas incluyendo, pero sin limitarse a, leucemia linfocítica (linfobláslicas) (ALL), leucemia miloide aguda (mielocííica, mielogenosa o mieloblástica o mielomonocítica), leucemia linfocítica crónica (por ejemplo, leucemia de célula B, leucemia de célula T, síndrome de Sezary y leucemia de célula Peluda), leucemia mielocítica crónica (mieloide, mielogenosos o granuclocííica) linfoma de Hodgkin , linfoma sin-hodgkin , linfoma de Burkiít y fungoides micosis. En otras modalidades, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proíeínas de fusión de albúmina, pueden ser útiles para diagnosticar, pronosíicar, prevenir y/o íratar enfermedades y padecimientos de células de plasma, que incluyen pero no se limiían a, discrasias de células de plasma, gamopatias monoclonales, gamopatias monoclonales de importancia indeterminada, mieloma múltiple, macroglobulinemia, macroglobulinemia de Waldensírom, crioglobulinemia y fenómeno de Raynaud . En oirás modalidades, las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden ser útiles para tratar, prevenir y/o diagnosticar padecimientos mieloproliferativos, que incluyen pero no se limitan a, policitemia vera, policitemia relativa, policiíemia secundaria, mielofibrosis, mielofibrosis aguda, metaplasia mleloide agnogénica, trombociíemia, (incluyendo íromociíemia íanto primaria y secundaria) y leucemia mielocítica crónica. En otras modalidades, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleólidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden ser útiles como un Iratamiento antes de cirugía, para incrementar la producción de glóbulos. En otras modalidades, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proíeínas de fusión de albúmina, pueden ser útiles como un agente para aumeníar la migración, fagocitosis, producción de superóxido, citotoxicldad celular dependieníe de anticuerpos de neutrófilos, eosinófilos y macrófagos. En oirás modalidades, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden ser útiles como un agente para incrementar el número de células madre en la circulación antes de la feresis de células madre. En otra modalidad específica, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden ser útiles como un agente para incrementar el número de células madre en la circulación antes de la feresis de plaquetas.

En oirás modalidades, las proleínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden ser útiles como un agente para incrementar la producción de ciíocina. En otras modalidades, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden ser útiles para prevenir, diagnosticar y/o tratar padecimientos hematopoyéticos primarios. Padecimientos Hiperproliferativos En ciertas modalidades, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden utilizarse para tratar o detectar padecimientos hiperproliferativos, incluyendo neoplasmas. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden inhibir la proliferación del padecimiento a través de interacciones directas o indirectas. Como alternativa, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden proliferar otras células que pueden inhibir el padecimiento hiperproliferativo. Por ejemplo, al incrementar una respuesta inmune, incrementando en forma particular las cualidades antigénicas del padecimiento hiperproliferativo o proliferando, diferenciando o movilizando células-T, se pueden tratar padecimientos hiperproliferativos. Esta respuesta inmune puede incrementarse ya sea aumentando una respuesta inmune existente o iniciando una nueva respuesta inmune. Como alternativa, la disminución y respuesta inmune también puede ser un método para tratar padecimientos hiperproliferativos, tales como un agente quimioterapéutico. Los ejemplos de padecimientos hiperproliferativos que se pueden tratar o deíeclar medianíe las proleínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, incluyen pero no se limitan a, neoplasmas localizados en: colon, abdomen , huesos, senos, sistema digestivo, hígado, páncreas, peritoneo, glándulas endógenas, (adrenales, paratidoideas, pituitaria, testículos, ovarios, timo, tiroides), ojos, cabeza y cuello, nerviosos (central y periférico), sistema linfático, pelvis, piel, tejido suave, bazo, tórax, y tracto urogenital. En forma similar, otros padecimieníos hiperproliferativos pueden ser tratados o detectados mediante las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina. Los ejemplos de los padecimientos hiperproliferativos incluyen pero no se limitan a: Leucemia Linfoblástica de I nfantes Aguda, Leucemia Linfoblásíica Aguda, Leucemia Linfocítica Aguda, Leucemia Mieloide Aguda, Carcinoma Adrenocortical, Cáncer Hepaíocelular de Adulto (Primario), Cancel de Hígado de Adulto (Primario), Leucemia Linfocítica Aguda de Adulto, Leucemia Mieloide Aguda de Adulto, Enfermedad de Hodgkin de Adulto, Linfoma de Hodgkin de Adulto, Leucemia Linfocítica de Adulto, Linfoma de No-Hodgjkin de Adulto, Cáncer de H ígado de Adulto Primario, Sarcoma de Tejido Suave de Adulfo, Linfoma Relacionado con SI DA, Enfermedades Relacionadas con SI DA, Cáncer Anal , Asírociíoma, Cáncer de Ducto Biliar, Cáncer de Vejiga, Cáncer de Huesos, Glioma de Tronco Cerebral, Tumores Cerebrales, Cáncer de Seno, Cáncer de la Pelvis Renal y Uretra, Linfoma de Sistema Nervioso Central (Primario), Linfoma de Sistema Nervioso Central, Astrociíoma Cereberal, Asírocitoma Cerebral , Cáncer Cervical, Cáncer Hepatocelular de I nfantes (Primario), Cáncer de H ígado de I nfantes (Primario), Leucemia Linfoblástica Aguda de I nfantes, Leucemia Mieloide Aguda de I nfantes, Glioma de Tronco Cerebral de I nfantes, Astrociíoma Cereberal de I nfantes, Astrocitoma Cerebral de I nfantes, Tumores de Célula Germinal Extracraneal de I nfantes, Enfermedad de Hodgking de I nfaníes, Linfoma de Hodgking de Infaníes, Glioma Hipoíalámico y de Trayecíoria Visual de I nfantes. , Leucemia Linfoblástica de I nfanles, Meduloblasíoma de I nfantes, Linfoma de No-Hodgking de I nfantes, Tumores Neuroectodérmicos Primitivos Pineales y Suprasensoriales de I nfantes, Cáncer de Hígado Primario de I nfantes, Rabdomiosarcoma de I nfantes, Sarcoma de Tejido Suave de I nfantes, Glioma Hipotalámico y de Trayecforia Visual de I nfantes, Leucemia Linfocítica Crónica, Leucemia Mielogenosa Crónica, Cáncer de Colon, Linfoma de Célula T-Cutánea, Carcinoma de Célula de Isleía de Páncreas Endocrina, Cáncer Endomeírial, Ependimoma, Cáncer Epiíelial , Cáncer Esofageal, Sarcoma de Ewing y Tumores Relacionados, Cáncer Pancreáíico Exocrino, Tumor de Célula Germinal Exíracraneal, Tumor de Célula Germinal Extragonadal, Cáncer de Ducto Biliar Extrahepático, Cáncer de Ojos, Cáncer de Seno Femenino, Enfermedad de Gaucher, Cáncer de Vejiga I rritada, Cáncer Gástrico, Tumor Carcinoide Gasfrointestinal, Tumores Gasírointestinales, Tumores de Célula Germinal, Tumor Trofoblástico Gesíasional , Leucemia de Célula Peluda, Cáncer de Cabeza y Cuello, Cáncer Hepatocelular, Enfermedad de Hodgking, Linfoma de Hodgking, Hipergamaglobulinemia, Cáncer Hipofaringeo, Cánceres I ntestinales, Melanoma I nfraocular, Carcinoma de Célula de Isleta, Cáncer Pancreático de Célula de Islela, Sarcoma de Kaposis, Cáncer de Riñon, Cáncer Laríngeo, Cáncer de Cavidad de Labios y Oral, Cáncer de Hígado, Cáncer de Pulmón , Padecimientos Linfoprolíferativos, Macroglobulinemia, Cáncer de Seno Masculino, Mesotelioma Maligno, Timoma Maligno, Meduloblastoma, Melanoma, Mesotelioma, Cáncer de Cuello Escamoso Primario Oculto Metastático, Cáncer de Cuello Escamoso Primario Metasíáíico, Cáncer de Cuello Escamoso Metasfático, Mieloma Múltiple, Mieloma Múltiple/Neoplasma de Célula de Plasma, Síndrome Mielodisplástico, Leucemia Mielogenosa, Leucemia Mieloide, Padecimieníos Mieloproliferativos, Cáncer de Cavidad Nasal y Sinus Paranasal , Cáncer Nasofaríngeo, Neuroblastoma, Linfoma de No-Hodgkin Durante Embarazo, Cáncer de Piel sin melanoma, Cáncer de Pulmón de Célula No Pequeña, Cáncer de Cuello Escamoso Meíastático Oculto Primario, Cáncer Orofaríngeo, Sarcoma Fibroso Osteo/Maligno, Histocitoma Fibroso de Osteosarcoma/Maligno, Hisíiociíoma de Osfeosarcoma/Fibroso Maligno de H uesos, Cáncer Epiíelial de Ovario, Tumor de Célula Germinal de Ovario, Tumor Potencial Poco Maligno de Ovario, Cáncer Pancreático, Paroproteinemias, Púrpura, Cáncer de Paraíiroides, Cáncer de Pene, Feocromociíoma, Tumor de Piíuitaria, Mieloma Múltiple/Neoplasma de Célula de Plasma, Linfoma del Sistema Nervioso Central Primario, Cáncer de Hígado Primario, Cáncer de Próstata, Cáncer Rectal, Cáncer de Célula Renal, Cáncer de Pelvis y Uretra Renal , Reíinoblasíoma, Rabdomiosarcoma , Cáncer de Glándula Salival, sarcomas de Sarcoidosis, Síndrome de Sezary, Cáncer de Piel , Cáncer de Pulmón de Célula Pequeña, Cáncer de I níesíino Delgado, Sarcoma de Tejido Suave, Cáncer de Cuello Escamoso, Cáncer de Esíómago, Tumores Pineales y Neuroectodermales Primitivos Suprasensoriales, Linfoma de Célula-T, Cáncer de Testículos, Timoma, Cáncer de Tiroides, Cáncer de Célula de Transición de Pelvis y Uretra Renal, Sarcoma, Cáncer Vaginal, Glioma de Trayectoria Visual e Hipotalámico, Cáncer de Vulva, Macroglobulinemia de Waldenstrom, Tumor de Willims y cualquier otra enfermedad hiperproliferativa, además de neoplasia, localizarla en un sistema de órganos de los descritos anteriormeníe. En oíra modalidad preferida, las proleínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, se utilizan par diagnosticar, pronosticar, prevenir y/o tratar condcines pre-malignas y prevenir el progreso a un estado neoplástico o maligno, incluyendo pero que no se limitan a los padecimientos descritos anteriormente. Dichos usos indican en condiciones conocidas o que se sospecha que sean precedentes de progreso a neoplasia o cáncer, en particular, cuando el crecimiento celular no-neoplástico consiste en hiperplasia, metaplasia o más particularmente, que ha ocurrido la displasia (para la revisión de dichas condiciones de padecimiento anormales) ver la publicación de Robbins and Angelí, 1 976, Basic Pathology, 2d. Ed . , W. B. Saunders Co. , Philadelphia, pp. 68-79). La hiperplasia es una forma de proliferación celular controlada, que comprende un incremento en número celular en un tejido u órgano, sin alteración significativa en estructura o función. Los padecimientos hiperplásticos pueden ser diagnosticados, pronosticados, prevenidos y/o íraíados con las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, incluyen pero no se limitan a, hiperplasia de nodo linfático mediastinal angiofolicular, hiperplasia angiolinfoide con eusinofilia, hiperplasia melanocílica atípica, hiperplasia de célula basal, hiperplasia de nodo linfáíico giganíe benigno, hiperplasia deníura, hiperplasia ducíal, hiperplasia endomeírial, hiperplasia fibromuscular, hiperplasia epiíelial focal, hiperplasia gingival, hiperplasia fibrosa inflamaíoria, hiperplasia papilar inflamatoria, hiperplasia endotelial papilar intravascular, hiperplasia nodular de proslaía, hiperplasia regenerativa nodular, hiperplasia pseudoepiteliomatosa, hiperplasia sebácea senil e hiperplasia verrugosa. La metaplasia es una forma de crecimiento celular controlado en donde un tipo de célula diferenciada completamenfe de adulto, se substituye por otro tipo de célula de adulfo. Los padecimienfos meíaplásticos que pueden ser diagnosticados, pronosticados, prevenidos y/o tratados con las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, metaplasia mieloide angiogénica, metaplasia apocrina, metaplasia atípica, metaplasia autoparenquimatosa, meíaplasia de fejido conectivo, metaplasia epiíelial, meíaplasia intestinal, anemia metapláslica, osificación meíaplástica, pólipos metaplásticos, metaplasia mieloide, metaplasia mieloide primaria, metaplasia mieloide secundaria, metaplasia escamosa, metaplasia escamosa de amnion y metaplasia mieloide sintomáíica. La displacía es frecueníemeníe un precedente de cáncer, y se encuentra principalmente en la epitelia; es la forma con mayor padecimiento de crecimiento de célula no-neoplástica, que comprende una pérdida en la uniformidad de célula individual y en la orientación arquitectónica de las células. Las células displásticas con frecuencia tienen núcleos teñidos profundameníe, de íamaño anormal y exhiben pleomorfismo. La displasia ocurre caracíeríslicamente cuando existen irritación o inflamación crónica. Los padecimientos displásticos que pueden ser diagnosíicados, pronosticados, preventivos y/o íraíados con las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, incluyen pero no se limitan a, displasia ectodérmica anhidrótica, displasia anterofacial, dlsplasia foráxica asfixianíe, displasia atriodigital, displasia broncopulmonar, displasia cerebral, displasia cervical, displasia condroectodermal, displasia cleidocranial, displasia ecíodermal congéniía, displasia craniodiafisial, displasia craniopoíarsal, displasia craneometafisial, displasia dentina, displasia diafisial, displasia ectodermal, displasia de barniz, displasia encéfalo-oftálmica, hemimelia epifisialis displasia, múltiples epifisialis displasia, punctata epifisialis displasia, displasia epilelial, displasia faciodigiíogeniíal, displasia fibrosa familiar de quijada, plegada blanca familiar, displasia fibromuscular, displasia fibrosa de huesos, displasia ósea florida, displasia renal-retinal herediíaria, displasia ecíodérmica hidrótica, displasia ectodérmica hipohidrótica, displasia tímica linfopénica, displasia mamaria, displasia mandibulofacial, displasia metafisial, displasia Mondoni, displasia fibrosa monostótica, displasia mucoepitelial, displasia epifisial múltiple, displasia oculoauriculovertebral, displasia oculodeníodigital, displasia oculovertebral, displasia odontogénica, displasia oftalmomandibulomélica, displasia semental periapical, displasia fibrosa poliostoíica, displasia espondiloepifisical pseudoacondroplástica, displasia retinal, displasia septo-óptica, displasia espondiloepifisical y displasia ventriculoradial. Los padecimientos pre-neoplásticos adicionales que pueden ser diagnosticados, pronosticados, prevenidos y/o tratados con las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, incluyen pero no se limitan a, padecimientos disproliferativos benignos (por ejemplo, tumores benignos, condiciones fibrocíslicas, hipertrofia de tejido, pólipos iníesíinales, pólipos de colon y displasia esofageal,), leucoplaquía, queraíosis, enfermedad de Bowen, Piel de Farmer, queililis solar y queratosis solar. En otra modalidad, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden ser utilizadas para diagnosticar y/o pronosticar padecimientos asociados con el tejido(s), en donde se expresa el polipéptido de la presente invención. En oíra modalidad, las proíeínas de fusión de albúmina de la preseníe invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, conjugadas a una toxina o un isótopo radioactivo, tal como se describe en la presente invención , se pueden utilizar para tratar cánceres y neoplasmas, incluyendo pero sin limitarse a, los aquí descritos. En una modalidad preferida adicional, las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe invención y/o polinucleóíidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, conjugadas a una toxina o un isolopo radioactivo, tal como se describe en la preseníe invención , se pueden utilizar para íraíar leucemia mielogenosa aguda. Además, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden afectar la apoptosis, y por consiguiente, pueden ser útiles para trafar un número de padecimienfos asociados con supervivencia de célula incrementadas a la inhibición de apoptosis. Por ejemplo, las enfermedades asociadas con supervivencia de célula incrementado en la inhibición de apoplosis que pueden ser diagnosticadas, pronosticadas, prevenidas y/o tratadas mediante polinucleótidos, polipéptidos y/o agonisías o antagonistas de la présenle invención, incluyen cánceres (fal como linfomas foliculares, carcinomas con mutaciones p53, y tumores dependientes de hormonas, incluyendo pero sin limitarse a, cáncer de colon, tumores cardiacos, cáncer pancreático, melanoma, retinoblastoma, glioblastoma, cáncer de pulmón , cáncer iníestinal , cáncer tesíicular, cáncer de esíómago, neuroblastoma, mixoma, mioma, linfoma, endotelioma, osteoblastoma, osteoclastoma, osíeosarcoma, condrosarcoma, adenoma, cáncer de seno, cáncer de próstata, sarcoma de Kaposi y cáncer de ovario); padecimientos autoinmunes tales como esclerosis múltiple, síndrome de Sjogren , íiroidifis de Hashimoto, cirrosis biliar, enfermedad de Behcet, enfermedad de Crohn , polimiosiíis, lupus eriíemaíoso sisíémico y glomerulonfritis y artritis reumatoide relacionadas con inmunología) e infecciones virales (tales como víruses de herpes, víruses pox y adenovirus), inflamación , enfermedad de injerto versus huésped, rechazo en injerto aguda y rechazo en injerto crónico. En modalidades preferidas, las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, se utilizan par el nivel de crecimiento, progresión y/o metástasis de cánceres, en particular los descrilos anteriormente. Las enfermedades o condiciones adicionales asociadas con supervivencia de célula incrementada que podrían ser diagnosíicadas, pronosíicadas, prevenidas y/o fraíadas a íravés de las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, incluyen pero no se limiían a, progreso y/o meíasíasis de malignidades y padecimientos relacionados tales como leucemia (incluyendo leucemias agudas) (por ejemplo, leucemia linfocílica aguda, leucemia mielocííica aguda (incluyendo mieloblásíica, promielocítica, mielomonocítica, monocííica y eriíroleucemia)) y leucemias crónicas (por ejemplo, leucemia mielocííica crónica (granulocítica) y leucemia linfocítica crónica)), vera policitemia, linfomas (por ejemplo, enfermedad de Hodgkin y enfermedad de no-Hodgkin), mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldensírom , enfermedad de cadena pesada y tumores sólidos, incluyendo pero sin limitarse a, sarcomas y carcinomas íales como fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma, angiosarcoma, endoteliosarcoma, Mnfagiosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de colon , cáncer pancreáíico, cáncer de seno, cáncer de ovario, cáncer de próstata, cáncer de célula escamosa, carcinoma de célula basal, adenocarcinoma, carcinoma de glándula de sudor, carcinoma de glándula sebácea, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, carcinoma de célula renal, hepaíoma, carcinoma de ducío biliar, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrional, íumor de Wilm, cáncer cervical , íumor festicular, carcinoma de pulmón , carcinoma de pulmón de célula pequeña, carcinoma de vejiga, carcinoma epiíelial, glioma, astrociíoma, meduloblastoma, craniofaringioma, ependimoma, pinealoma, emanglioblasloma, neuroma acúsíico, oligodendroglioma, menangioma, melanoma, neuroblasíoma y retinoblastoma. Las enfermedades asociadas con apopíosis incrementada que podrían ser diagnosticadas, pronosticadas, prevenidas y/o fraíadas mediante las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proíeínas de fusión de albúmina, incluyen SIDA; padecimieníos neurodegenerativos (tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amitrofica, pigmentosa retinitis, degeneración cerebelar y tumor cerebral o enfermedad asociada previamente); padecimieníos auíoinmunes (íales como, esclerosis múltiple, síndrome de Sjogren, tiroiditis de Hashimoto, cirrosis biliar, enfermedad de Behcel, enfermedad de Crohn, polimiositis, lupus eritemaíoso sistémico y glomerulonefritis de artritis reumatoide relacionada con inmunología) síndromes mielodisplásticos (tales como anemia aplástica), enfermedad de injerto versus huésped, adición isquémica (tales como las originadas por infarto al miocardio, aíaques y lesión por reperfusión), lesión hepática (por ejemplo, lesión hepática relacionada con hepatitis, lesión por isquemia/reperfusión, colestosis (lesión a ducto biliar) y cáncer de hígado); enfermedad de hígado inducida por toxinas (tales como las oroginadas por el alcohol), choque séptico, caquexia y anorexia. Las enfermedades hiperproliferativas y/o padecimientos que pueden ser diagnosticados, pronosíicados, prevenidos y/o tratados mediante las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, incluyen pero no se limiían a, neoplasmas localizados en el hígado, abdomen, huesos, senos, sistema digestivo, páncreas, peritoneo, glándulas endocrinas (súper-renales, paratiroides, piíuitaria, íesíículos, ovarios, fimo, tiroides), ojos, cabeza y cuello, sistema nerviosos (ceníral y periférico), sisíema linfático, pelvis, piel, tejido suave, bazo, tórax y íracto urogenital. En forma similar, otros padecimientos hiperproliferativos que pueden ser diagnosticados, pronosticados prevenidos y/o tratados a través de las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe invención y/o polinucleófidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina. Los ejemplos de dichos padecimientos hiperproliferativos incluyen pero no se limitan a, hipergamaglobulinemia, padecimientos linfoproliferativos, paraproteinemias, púrpura, sarcoidosis, Síndrome de Sezary, macroglobulinemia de Waldenstron , Enfermedad de Gaucher, hisíociíosis y cualquier otra enfermedad hiperproliferativa, además de neoplasia, localizada en un sisíema de órganos descriío anleriormeníe. Ofra modalidad preferida, utiliza los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe invención para inhibir la división celular aberrante mediante íerapia genéíica utilizada en la presente invención, y/o fusiones o fragmentos de proteínas de los mismos. Por lo tanío, la presente invención proporciona un método para íralar padecimieníos proliferativos de células insertando en una célula de proliferación anormal un polinucleótido que codifica una proteína de fusión de albúmina de la preseníe invención, en donde el polinucleóíido reprime dicha expresión. Oíra modalidad de la présenle invención , proporciona un méíodo para íratar padecimientos de célula-proliferativa en individuos que comprenden la administración de una o más copias de gen activo de la presente invención, a una célula o células de proliferación anormal . En una modalidad preferida, los polinucleótidos de la presente invención es una construcción de ADN que comprende un vector de expresión recombinante efectivo en la expresión de una secuencia de ADN que codifica los polinucleótidos. En otra modalidad preferida de la preseníe invención , la construcción de ADN que codifica la proteína de fusión de la presente invención, se inserta en células que serán traladas utilizando un retrovirus, o más preferentemeníe un vector adenoviral (Ver la publicación de G.J . Nabel, et al. , PNAS 1 999 96: 324-326, la cual está incorporada a la presente invención como referencia). En una modalidad más preferida, el vector viral es defectuoso y no transformará las células que no proliferan , únicamente las células que proliferan. Además, en una modalidad preferida, los polinucleótidos de la presente invención insertados en células de proliferación ya sea solos o en combinación con, o fusionados con otros polinucleótidos, posíeriormeníe pueden ser modulados a través de un estimulo exíerno (por ejemplo, magnéíico, molécula pequeña específica, químico o administración de fármacos, etc.), el cual actúa en la corriente del promoíor de los polinucleótidos para inducir la expresión del producto de proteína codificada. Por lo tanto el efecto terapéuíico benéfico de la preseníe invención , puede ser modulado en forma expresa (por ejemplo, para incrementar, disminuir el nivel de expresión de la presente invención) con base en el esíimulo exíerno. Los polinucleóíidos de la preseníe invención , pueden ser úíiles en la represión de expresión de genes oncogénicos o antígenos. Por la frase "que reprimen la expresión de genes oncogénicos", se entiende la supresión de la transcripción del gen la degradación de la trascripción del gen (mensaje-previo de ARN), la inhibición de división, la destrucción de ARN mensajero, la prevención de las modificaciones post-traducción de la proteína, la destrucción de la proíeína o la inhibición de la función normal de la proíeína. Para administración local a células de proliferación anormal, los polinucleótidos de la presente invención pueden ser administrados a fravés de cualquier método conocido para los expertos en la técnica, incluyendo pero sin limitarse a, transfección , electroporación , microinyección de células, o en vehículos tales como liposomas, lipofectina o como polinucleótidos al natural, q cualquier otro método descrito a lo largo de la presente especificación. El polinucleótido de la presente invención puede ser suministrado a íravés de sistema de suministro de gen conocidos, tales como, pero sin limiíarse a, vecíores reírovirales (Gilboa, J . Virology 44: 845 (1 982); Hocke, Nature 320: 275 (1 986); Wilson , y asociados, Proc. Nati . Acad . Sci. E. U .A. 85: 3014), sistema de virus de vacuna (Chakrabarty y asociados, Mol. Cell Biol. 5: 3403 (1985) u oíro sistema de suministro de ADN eficiente (Yates y asociados, Nature 313: 812 (1985)) conocidos por los expertos en la íécnica. Estas referencias son únicamente de ejemplo y están incorporadas a la presente invención como referencia. Con el objeto de suministrar o transfectar en forma específica células que se proliferan de manera normal y reservan células que no se dividen, es preferible utilizar un retrovirus, o sistema de suministro adenoviral (tal como se describe en la técnica y en cualquier parte en la presente invención), conocido por los expertos en la técnica. Se requiere la réplica del ADN huésped para que el ADN retroviral se iníegre y el retrovuris no tenga la capacidad de autoréplicarse debido a la carencia de los genes de retrovirus necesarios para su ciclo de vida. Al utilizar dicho sistema de suminisíro relroviral para nucleótidos de la presente invención, se dirigirá el gen y las construcciones a células de proliferación anormal y se reserva las células normales que no se dividen . Los polinucleótidos de la presente invención , pueden ser suministrados direcfameníe a sitios de enfermedad/padecimiento de célula proliferativa en órganos internos, cavidades corporales y similares a través del uso de aparatos de generación de imágenes utilizados para guiar una aguja de inyección directamente al sitio de enfermedad . Los polinucleótidos de la presente invención también pueden ser administrados a sitios enfermos al momento de la iníervención quirúrgica. Por el íérmino "enfermedad de célula proliferativa" se entiende cualquier enfermedad o padecimiento a humano o animal , que afecte a cualquiera de una o cualquier combinación de órganos, cavidades o partes del cuerpo, que se caracteriza por la proliferación anormal local simple o múltiple de células, grupos de células o íejidos, ya sea benignos o malignos. Cualquier canfidad de polinucleóíidos de la preseníe invención puede ser adminislrada siempre que tenga un efecto biológicamente inhibidor en la proliferación de las células trafadas. Además, es posible administrar más de uno de los polinucleótidos de la presente invención en forma simultánea del mismo sitio. Por el término "biológicameníe inhibidor", se entiende la inhibición de crecimienío parcial o íotal, así como disminuciones en el rango de proliferación o crecimiento de las células. La dosis biológicamente inhibidora puede ser determinada evaluando los efectos de los polinucleótidos de la preseníe invención en el crecimiento de proliferación anormal o de malignidad objetivo en cultivos de tejidos, crecimiento de tumor en animales y cultivos de células, o cualquier otro método conocido para los expertos en la técnica. Además, las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe invención y/o polinucleóíidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, son útiles para inhibir la angiogénesis de células o íejidos proliferaíivos, ya sea solas, como una fusión de proteínas, o en combinación con otros polipéptidos directa o indirectamente, tal como se describe en cualquier paríe en la presente invención. En una modalidad más preferida, el efecto anti-angiogénesis puede lograrse indirectamente, por ejemplo, a través de la inhibición de células específicas de tumor, hematopoyéíicas, tale como macrófagos asociados con tumor (Ver la publicación de Joseph I B, y asociados, J Nati Cáncer Insl, 90 (21 ): 1648-53 (1998), la cual esíá incorporada a la preseníe invención como referencia). Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden ser útiles en la inhibición de células o tejidos proliferaíivos a íravés de inducción de apopíosis. Esías proíeínas de fusión y/o polinucleótidos pueden actuar ya sea directamente o indirectamenfe para inducir apopíosis de células y íejidos proliferaíivos, por ejemplo, en la acíivación de un receptor de dominio-muerte, tal como receptor-1 de factor de necrosis de tumor (TN F), CD95 (Fas/APO-1 ), proteína transmitida por apoptosis relacionada con recepíor-TNF (TRAM P) y recepíor-1 y -2 de ligando de inducción de apoptosis relacionado con TNF (TRAIL) (ver la publicación de Schulze-Osthoff K, y asociados, Eur J Biochem 254(3): 439-59 (1998), la cual está incorporada a la presente invención como referencia). Además, en otra modalidad preferida de la presente invención , estas proleínas de fusión y/o polinucleóíidos pueden inducir la apoptosis a través de otros mecanismos, lales como, en la activación de otras proteínas las cuales activarán la apoptosis, o a través de estimulación de la expresión de estas proteínas, ya sea solas o en combinación con fármacos adyuvantes de molécula pequeña, tales como apoptonina, galectinas, tioredoxinas, proteínas anti-inflamatorias (Ver las publicaciones de Mutat Res 400(1 -2): 447-55 (1998), Med Hypotheses. 50(5): 423-33 (1998), Chem Biol Interact. Abr. 24; 1 1 1 -1 12: 23-34 (1998), J Mol Med . 76(6): 402-12 (1998), I nt J Tissue React; 20( 1 ): 3-1 5 ( 1 998), las cuales están incorporadas a la presente invención como referencia). Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, son útiles en la inhibición de metástasis de células o tejidos proliferativos. La inhibición puede ocurrir como un resultado direcfo y la administración de estas proíeínas de fusión de albúmina y/o polinucleótidos, o indirectamente, tal como activando la expresión de proteínas conocidos por inhibir metástasis, por ejemplo, integrinas alfa 4, (Ver por ejemplo la publicación de Curr Top Microbiol I mmunol 1 998; 231 : 125-41 , la cual está incorporada a la preseníe invención como referencia). Dichos efectos terapéuticos de la presente invención, se pueden lograr ya sea solos o en combinación con fármacos o adyuvantes de molécula pequeña. En otra modalidad , la preseníe invención proporciona un método para suministrar composiciones que contienen las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención a células dirigidas que expresan el polinucleótido enlazado mediante, que enlazan a, o que se asocian con, una proteína de fusión de albúmina de la preseníe invención. Las proíeínas de fusión de albúmina de la présenle invención, pueden estar asociadas con polipéptidos heterólogos, ácidos nucleicos heterólogos, toxinas, pro-fármacos a través de interacciones hidrofóbicas, hidrofílicas, iónicas y/o covalentes. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención son útiles para aumentar la inmunogénesis y/o antigenicidad de células o tejidos de proliferación, ya sea directamente, tal como puede ocurrir si las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención "vacunaran" la respuesta inmune para responder antígenos e inmunogénos proliferativos, o indirectamente, tal como en la activación de la expresión de proteínas conocidas por aumentar la respuesta inmune (por ejemplo, quimiocinas), para dichos antígenos e inmunogénos. Padecimientos Renales Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, pueden utilizarse para íraíar, prevenir, diagnosticar y/o pronosticar padecimientos del sistema renal . Los padecimientos renales que pueden ser diagnosíicados, pronosficados, prevenidos y/o tratados con composiciones de la presente invención , incluyen pero no le limiían a, falla renal, nefriíis, padecimienío de vaso sanguíneo de riñon , padecimientos de riñon metabólicos y congénitos, padecimientos urinarios del riñon , padecimieníos auíoinmunes, esclerosis y necrosis, desequilibrio de elecírolitos y cánceres de riñon . Las enfermedades renales que pueden ser diagnosticadas, pronosticadas, prevenidas y/o tratadas con composiciones de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, falla renal aguda, falla renal crónica, falla renal ateroembólica, falla renal de etapa terminal , enfermedades inflamatorias del riñon (por ejemplo, glomerulonefritis aguda, glomerulonefritis postinfecciosa, glomerulonefritis de rápido progreso, síndrome nefrótico, glomerulonefritis membranosa, síndrome nefrótico familiar, glomerulonefritis membranoproliferativa I y I I , glomerulonefritis proliferativa mesangial, glomerulonefritis crónica, nefritis tubolointesticial aguda, nefritis tuboloinlersíicial crónica, glomerulonefritis post-estreptococal aguda (PSG N) pielonefritis, nefritis de lupus, nefritis crónica, nefriíis iníersíicial y glomerulonefrifis post-estrepíococal), padecimieníos de bazos sanguíneos del riñon (por ejemplo, infarto renal , enfermedad de riñon ateroembolica, necrosis critica, nefrosesclerosis maligna, trombosis de vena renal, subperfusión renal, retinopatía renal, reperfusión-isquemia renal , embolia de arteria renal y estenosis de arteria renal), y padecimieníos renales que resultan de enfermedad de tacto urinario (por ejemplo, pielonefritis, hidronefrosis, urolitiasis (litiasis renal, nefroliliasis), nefropatía de reflujo, infecciones de tacto urinario, reíención de orina y uropaíía obstructiva unilateral aguda o crónica. Además, las composiciones de la presente invención se pueden utilizar para diagnosíicar, pronosticar, prevenir y/o traíar padecimientos metabolicos y congénicos del riñon (por ejemplo, uremia, amiloidosis renal, osleodistrofía renal, acidosis íubular renal, glucosuria renal , diabetes nefrogénica insipidus, cistinuria, síndrome de Fanconi, osteosis fibroquística renal, (raquitismos renales), enfermedad de Hartnup, síndrome de Bartíer, síndrome de Liddle, enfermedad de riñon poliquístico, enfermedad quísíica medular, riñon de esponja medular, síndrome de Alport, síndrome de uña-patela, síndrome nefrotico congénito, síndrome de CRUSH , riñon en herradura, nefropatía diabética, diabeíes nefrogénica insipudus, nefropaíía analgésica, piedras renales y nefropatía membranosa) y padecimientos auíoinmunes del riñon (por ejemplo, lupus eritematoso sistémico (SLE), síndrome de Goodpasture, nefropatía I gA y glomerulonefritis proliferativa mesangial IgM). Las composiciones de la présenle invención también se pueden utilizar para diagnosticar, pronosticar, prevenir y/o tratar padecimientos escleróticos o necroticos del riñon (por ejemplo, glomeruloesclerosis, nefropatía diabética, glomeruloesclerosis segmental focal (FSGS), glomerulonefritis necrotizante y necrosis papilar renal), cánceres de riñon (por ejemplo, nefroma, hipernefroma, nefroblastoma, cáncer de célula renal , cáncer de célula de transición, adenocarcinoma renal, cáncer de célula escamosa y tumor de Wilm), y desequilibrios de electrolitos (por ejemplo, nefrocalcinosis, piuría, edema, hidronefritis, proteinuria, hiponatremia, hipernaíremia, hipocalemia, hipercalemia, hipocalcemia, hipercalcemia, hipofosfaíemia e hiperfosfatemia). Las composiciones de la présenle invención se pueden administrar utilizando cualquier méíodo conocido en la lécnica, incluyendo pero sin limitarse a, inyección de aguja directa en el sitio de suministro, inyección intravenosa, administración tópica, infusión con catéter, inyectores biolísticos, aceleradores de parfículas, depósitos de esponja de gel, otros materiales de deposiío comerciaimeníe disponibles, bombas osmóticas, formulaciones farmacéuticas solidas orales o en supositorio, decaníación o aplicaciones íópicas durante cirugía, suministro por aerosol. Dichos méíodos son conocidos en la técnica. Las composiciones de la presente invención se pueden suministrar como paríe de un Terapéuíico, tal como se describe con mayor detalle más adelante. Los métodos para suministrar polinucleótidos de la presente invención, se describen con mayor detalle en la presente invención. Padecimieníos Cardiovasculares Las proteínas de fusión de albúmina de la presente Invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se pueden ufilizar para tratar, prevenir, diagnosticar y/o pronosticar padecimienfos cardiovasculares, incluyendo pero sin limitarse a, enfermedad de arteria periférica, tal como isquemia de extremidades.

Los padecimienlos cardiovasculares incluyen, pero no se limiían a, anormalidades cardiovasculares, tales como fístula arterio-arterial, fístula arteriovenosa, malformaciones arteriovenosas cerebrales, defectos cardíacos congénitos, atresia pulmonar y Síndrome de Scimilar. Los defectos cardíacos congénitos incluyen , pero no se limitan a, coartación de aorta, "cor triaíriaíum", anomalías de bazos coronarios, corazón cruzado, dexírocardia, conducto arterioso permeable, anomalía de Ebstein, Complejo de Eisenmenger, síndrome de corazón izquierdo hipoplástico, levocardia, íelralogía de Falloí, íransposición de bazos grande, ventrículo derecho de salida doble, atresia tricúspide, íronco aríerioso persistente y defectos sépticos cardíacos, tales como defecto septal aortopulmonar, defecíos de colchón endocardio, Síndrome de Lutembacher, trilogía de Fallot, defectos sépticos de corazón veníricular. Los padecimieníos cardiovasculares también incluyen, pero no se limitan a, enfermedad cardíaca, tal como arritmias, enfermedad de corazón carcinoide, gasto cardíaco superior, gasto cardíaco inferior, tamponamiento cardíaco, endocarditis (incluyendo bacteriana), aneurisma cardíaca, paro cardíaco, falla cardíaca congestiva, cardiomiopatia congestiva, dispnea paroximal, edema cardíaco, hipertrofia de corazón, cardiomiopatia congesíiva, hiperírofia veníricular izquierda, hiperírofia ventricular derecha, ruptura de corazón posterior a infarío, rupíura séptica ventricular, enfermedades de válvula cardíaca, enfermedades del miocardio, isquemia del miocardio, efusión pericardial, pericarditis (incluyendo consíricíiva y tuberculosa), neumopericardio, síndrome de postpericardiolomía, enfermedad del corazón pulmonar, enfermedad de corazón reumáíica, disfunción veníricular, hiperemia, complicaciones cardiovasculares por embarazo, Síndrome de Scimilar, sífilis cardiovascular y íuberculosis cardiovascular. Las arriímias incluyen pero no se limitan a, arritmia sinus, fibrilación auricular, flúter auricular, bradicardia, extrasistole, Síndrome de Adams-Stokes, bloque de rama-fascicular, bloques sinoauricular, síndrome QT largo, parasistole, Síndrome de Lown-Ganong-Levine, síndrome de exitación previa tipo Mahaim, síndrome de Wolf-Parkinson-White, síndrome del seno enfermo, taquicardias y fibrilación ventricular. Las íaquicardias incluyen taquicardia paroxismal, taquicardia supraventricular, ritmo idoventricular acelerado, taquicardia de reenírada nodal atrioventricular, taquicardia auricular ectópica, taquicardia de reentrada nodal sinoauricular, íaquicardia sinus, Torsales de Poinfes y taquicardia ventricular. Las enfermedades de válvula de corazón incluyen, pero no se limitan a, insuficiencia de válvula aórtica, estenosis de válvula aórtica, murmullos del oído, prolapso de válvula aoríica, prolapso de válvula miíral, prolapso de válvula tricúspide, insuficiencia de válvula mitral, estenosis de válvula mitral, atresia pulmonar, insuficiencia de válvula pulmonar, estenosis de válvula pulmonar, atresia tricúspide, insuficiencia de válvula fricúspide y estenosis de válvula tricúspide. Las enfermedades del miocardio incluyen, pero no se limitan a, cardiomiopatia por alcoholismo, cardiomiopaíia congesíiva, cardiomiopatia hipertrófica, estenosis subvalvular aórtica, estenosis subvalvular pulmonar, cardiomiopatia restrictiva, cardiomiopatia de Chagas, fibroelastosis endocardial, fibrosis endomiocardial , Síndrome de Kearns, lesión de reperfusión miocardíaca y miocarditis. Las isquemias del miocardio incluyen , pero no se limiían a, enfermedad coronaria, tal como angina de pecho, aneurisma coronaria, arteriosclerosis coronaria, trombosis coronaria, vasoespasmo coronario, infarlo al miocardio y aíaque del miocardio. Las enfermedades cardiovasculares también incluyen enfermedades vasculares tales como aneurismas, angiodisplasia, angiomatosis, angiomatosis bacilar, Enfermedad de Hippel-Lindau, Síndrome de Klippel-Trenaunay-Weber, Síndrome de Sturge-Weber, edema angioneuroíico, enfermedades aórticas, Arteritis de Takayasu , aortitis, Síndrome de Leriche, enfermedades oclusivas arteriales, arteritis, enarteritis, nodosa poliaríerifis, padecimientos cerebrovasculares, angiopatías diabéticas, retinopatía diabética, embolias, trombosis, eritromelalgia, hemorroides, enfermedades veno-oclusivas hepáticas, hipertensión, hipotensión, isquemia, enfermedades vasculares periféricas, flebitis, enfermedad veno- oclusiva pulmonar, enfermedad de Raynaud, síndrome de CREST, oclusión de vena retinal, síndrome de Scimitar, síndrome de vena cava superior, íelangieclasia, lelangiecíasia alacia, íelangiectasia hemorrágica hereditaria, varicocele, venas varicosas, úlcera varicosa, vasculitis e insuficiencia venosa. Las aneurismas incluyen, pero no se limitan a, aneurismas de disección , aneurismas falsas, aneurismas infectadas, aneurismas rupturadas, aneurismas aórticas, aneurismas cerebrales, aneurismas coronarias, aneurismas de corazón y aneurismas iliacas. Las enfermedades oclusivas arteriales incluyen, pero no se limitan a, arteriosclerosis, claudicación intermiíeníe, esíenosis de caroíida, displasias fibromusculares, oclusión vascular mesentérica, enfermedad de Moyamoya, obstrucción de arteria renal, oclusión de arteria retinal y tromboangitis obliferante. Las enfermedades cardiovasculares incluyen , pero no se limila a, enfermedades de arteria carótida, angiopatía amiloide cerebral , aneurisma cerebral, anoxia cerebral, arteriosclerosis cerebral, malformación arteriovenosa cerebral, enfermedades de arteria cerebral, embolia y trombosis cerebral, írombosis de arleria carótida, írombosis sinus, síndrome de Wallenberg, hemorragia cerebral, hemafoma epidural, hematoma subdural , hemorragia subaraxnoide, infarto cerebral, isquemia cerebral (incluyendo temporal), síndrome del robo de la subclavia, leucomalacia periventricular, dolor de cabeza vascular, ceja en racimos, migraña e insuficiencia vertebrobasilar. Las embolias incluyen, pero no se limitan a, embolias de aire, embolias de fluido amniotico, embolias por colesterol , síndrome del dedo del pie azul, embolias por grasa, embolias pulmonares y tromboembolias. La írombosis incluye, pero no se Iimiía a, írombosis coronaria, trombosis de vena hepática, oclusión de vena reíinal , írombosis de aríeria carofida, írombosis sinus, síndrome de Wallenberg y tromboflebitis. Las enfermedades isquémicas incluyen, pero no se limitan a, isquemia cerebral , colitis isquémica, síndromes de compartimento, síndrome de compartimento anterior, isquemia miocardíaca, lesiones por reperfusión e isquemia de exlremidades periféricas. La vasculitis incluye, pero no se limita a, aorfritis, arteritis, Síndrome de Behcet, Síndrome de Churg-Sírauss, síndrome de nodo linfático mucocutáneo, íromboangeitis obliterano, vasculitis por hipersensibilidad, púrpura de Schoenlein-Henoch, vasculitis cutánea alérgica y granulomatosis de Wegener. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se pueden adminisírar utilizando cualquier método conocido en la técnica, que incluye pero no se limita a, inyección de aguja directa en el siíio de suminisíro, inyección intravenosa, administración tópica, infusión con catéter, inyectores biolísticos, aceleradores de partículas, depósitos de esponja de gel, otros materiales de deposiío comercialmenle disponibles, bombas osmóíicas, formulaciones farmacéuticas solidas orales o en supositorio, decantación o aplicaciones tópicas durante cirugía, suministro por aerosol. Dichos méíodos son conocidos en la íécnica . Los méíodos para suminisírar polinucleótidos se describen con mayor detalle en la presente invención. Padecimientos Respiratorios Las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la présenle invención , se pueden uíilizar para íratar, prevenir, diagnosticar y/o pronosticar enfermedades y/o padecimientos del sistema respiratorio. Las enfermedades y padecimientos del sistema respiratorio incluyen, pero no se limitan a, vestibulitis nasal, rinitis no alérgica (por ejemplo, rinitis aguda, rinitis crónica, rinitis atrófica, rinitis de vasomotor), pólipos nasales y sinusitis, angiofibromas juveniles, cáncer de fosa nasal y papilomas juveniles, pólipos de cuerdas vocales, nodulos (nodulos de singer), úlceras de contacto, parálisis de cuerdas vocales, laringocelos, faringitis (por ejemplo, virales y bacteriales), amigdalitis, celulitis amígdalar, absceso parafaringeo, laringitis, laringoceles y cánceres de garganta (por ejemplo, cáncer de la nasofaringe, cáncer de amígdala, cáncer de laringe), cáncer de pulmón (por ejemplo, carcinoma de célula escamosa, carcinoma de célula pequeña (carcinoma indiferenciado (microcelular), carcinoma de célula grande y adenocarcinoma), padecimientos alérgicos (neumonía eosinofílica, neumonitis por hipersensibilidad (por ejemplo, alveoliíis alérgica extrínsica, neumonitis intersticial alérgica, neumoconiosis por polvo orgánico, aspergilosis broncopulmonar alérgica, asma, granulomatosis de Wegener (vasculitis granulomatosa), síndrome de Goodpasture)), neumonía (por ejemplo, neumonía bacíeriana (por ejemplo, Streptococcus pneumoniae (neumonía neumococal), staphylococcus aureus (neumonía esfafilococal), neumonía de bacferia Gram-negativa (originada por ejemplo, por las especies Klebsiella y Pseudomas spp), neumonía Mycoplasma pneumoniae, neumonía Hemophilus influenzae, Lagionella pneumophila (enfermedad de Legionnaires), y Chlamydia psittaci (Psitacosis)) y neumonía viral (por ejemplo, influenza, varicela). Las enfermedades y padecimientos adicionales del sisíema respiralorio incluyen pero no se limitan a, bronquiolitis, polio (poliomielitis), crup, infección viral sincitial respiratoria, paperas, eritema infeccioso (quinta enfermedad), roseóla de infante, panencefalitis de rubéola progresiva, paperas alemanas y panencefaliíis esclerosaníe subaguda), neumonía fúngica (por ejemplo, Histoplasmosis, Coccidioidomicosis, Blastomicosis, infecciones fúngicas en personas con sistemas inmune severamenle suprimidos (por ejemplo, cripíococosis, causada por Cryptococcus neoformans; aspergilosis, causada por la especie Aspergillus. spp; candidiasis, causada por la especie Candida; y mucormicosis)), Pneumocystis carinni (neumonía de neumocistis), neumon ías atípicas (por ejemplo, especie Mycoplasma y Chlamydia spp. ), neumon ía por infección oportunista, neumonía nosocomial, neumonitis química y neumonía por aspiración, padecimientos pleurales (por ejemplo, pleuresía, efusión pleural y neumolorax (por ejemplo, neumotorax espontánea simple, neumotorax espontánea complicada, neumotorax por tensión)), enfermedades de vías respiraíorias obslruidas (por ejemplo, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), enfisema, bronquitis crónica o aguda), enfermedades de pulmón ocupacional (por ejemplo, silicosis, pulmón negro (neumoconiosis de trabajadores de carbón), asbestosis, beriliosis, asma ocupacional, bisinosis y neumoconiosis benigna), Enfermedad de Pulmón I nfiltrativa (por ejemplo, fibrosis pulmonar (por ejemplo, alveolitis fibrosante, neumonía intersticial usual), fibrosis pulmonar idiopática, neumonía intersticial descamativa, neumonía intersíicial linfoide, histiocitosis X (por ejemplo, enfermedad de Leíterer-Siwe, enfermedad de Hand-Schüller-Christian, granuloma eosinófílico), hemosiderosis pulmonar idiopática, proíeinosis alveolar pulmonar y sarcoidosis), síndrome de distensión respiratoria aguda (también llamado, por ejemplo, síndrome de distensión respiratoria de adulto), edema, embolia pulmonar, bronquitis (por ejemplo, viral, bacteriana), bronquiectasis, atelectasis, absceso pulmonar (originado por ejemplo, por las especies Staphylococcus aureus o Legionella pneumophila), y fibrosis cística.

Actividad Anti-Angiogénesis El equilibrio que ocurre naturalmente en estimuladores endógenos e inhibidores de angiogénesis, es uno en el cual predominan las influencias inhibidoras. Ver la publicación de Rastinejad et al. , Cell 56: 345-355 (1 989). En dichos casos raros, en los cuales ocurre la neovascularización bajo condiciones fisiológicas normales, tal como curación de heridas, regeneración de órganos, desarrollo embriónico y procesos reproductivos femeninos, la angiogénesis se regula estrictamente y se delimita en forma espacial y temporal. Bajo condiciones de angiogénesis patológicas, tal como las caracterizadas por crecimiento de tumor sólido, fallan estos controles reguladores. La angiogénesis no regulada se vuelve patológico y sostiene el progreso de muchas enfermedades neoplásíicas y no neoplásíicas. Un número de serie de enfermedades son nominadas por la neovascularización anormal, incluyendo crecimiento de tumor sólido y metástasis, artriíis, algunos íipos de padecimientos oculares y psoriasis. Ver, por ejemplo, las revisiones de Moses y asociados, Biotech. 9: 630-634 (1 991 ); Folkman y asociados, N. Engl. J. Med. , 333: 1757-1763 (1995); Auerbach y asociados, J. Microvasc. Res. 29: 401 -41 1 (1 985); Folkman, Advances in Cáncer Research , eds. Klein and Weinhouse, Academic Press, Nueva York, pp. 175-203 (1 985); Patz. Am. J. Opthalmol. 94: 71 5-743 (1 982); y Folkman y asociados, Science 21 1 : 719-725 (1983). En un número de condiciones paíológicas, el proceso de angiogénesis coníribuye al estado de enfermedad. Por ejemplo, se han acumulado datos significativos que sugieren que el crecimienfo de tumores sólidos depende de la angiogénesis. Ver la publicación de Folkman y Klagsbrun, Science 235: 442-447 (1987). La presente invención proporciona tratamieníos de enfermedades o padecimieníos asociados con neovascularización medianíe la adminisíración de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleóíidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención. Las condiciones malignas y meíasláticas que pueden ser tratadas con los polinucleótidos y polipéptidos, o agonisfas o antagonistas de la presente invención incluye, pero no se limitan a, malignidades, tumores sólidos, cánceres aquí descritos y otros conocidos en la técnica (para una revisión de dichos padecimientos, ver la publicación de Fishman y asociados, Medicine, 2d Ed. , J. B. Lippincott Co., Philadelphia (1985)). Por lo íanto, la presente invención proporciona un método para traíar una enfermedad y/o padecimiento relacionado con angiogénesis, en donde el método comprende administrar a un individuo que necesita del mismo, una cantidad íerapéuticamente efectiva de una profeína de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican la proteína de fusión de albúmina de la presente invención . Por ejemplo, las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se pueden uíilizar en una variedad de métodos adicionales con el objeto de traíar en forma terapéutica un cáncer o íumor. Los cánceres que se pueden íraíar con las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , incluyen pero no se limiían a, tumores sólidos, incluyendo cáncer de próstata, pulmón , seno, ovario, estómago, páncreas, laringe, esófago, testículos, hígado, parótida, tracío biliar, colon , recio, cervix, útero, endometrio, riñon, vejiga, tiroides; tumores primarios y mefástasis; melanomas; glioblastoma; sarcoma de Kaposi ; leiomiosarcoma; cáncer de pulmón de célula no pequeña; cáncer colorectal; malignidades avanzadas; y tumores sanguíneos de nacimiento tales como leucemias. Por ejemplo, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención pueden ser suministradas en forma tópica, con el objeto de tratar cánceres, tales como cáncer de piel, tumores de cabeza y cuello, tumores de seno y sarcoma de Kaposi. Aún deníro de oíros aspectos, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención pueden ser utilizadas para tratar formas superficiales de cáncer de vejiga, por ejemplo, mediante administración intravesical. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención pueden ser suministradas directamenle en el tumor, o cerca del sitio del tumor, a través de inyección o un catéter. Por supuesto, un experto en la técnica podrá apreciar que el modo de administración adecuado, variará de acuerdo con el cáncer que será íraíado. En la preseníe invención se describen oíros modos de suminisíro. Las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención pueden ser útiles en el traíamiento de otros padecimienfos, además de cánceres, los cuales comprenden angiogénesis. Esíos padecimieníos incluyen, pero no se limitan a: tumores benignos, por ejemplo, hemangiomas, neuromas acústicos, neurofibromas, tracomas y granulomas piogénicos; placas ateroescléricas; enfermedades angiogénicas oculares, por ejemplo, retinopaíía diabética, retinopatía por prematuridad, degeneración macular, rechazo de injerío de cornea, glaucoma neovascular, fibroplasia retrolenfal, rubeosis, retinoblasíoma, uveitisi y Píerygia, (crecimienío de bazo sanguíneo normal) del ojo; aríriíis reumatoide; psoriasis; curación de heridas retardada; endomelriosis; vasculogénesis; granulaciones; cicatrices hipertróficas (queloides); fracturas sin unión; escleroderma; tracoma; adhesiones vasculares; angiogénesis miocardíaca; colaterales coronarios; colaterales celulares; malformaciones arteriovenosas; angiogénesis de extremidades isquémicas; Síndrome de Osler-Webber; neovascularización de placas; telangiectasia; uniones hemofilíacas; angiofibroma; displasia fibromuscular; granulación de heridas; enfermedad de Crohn y ateroesclerosis. Por ejemplo, dentro de un aspecto de la presente invención, se proporcionan métodos para traíar cicatrices hipertróficas y queloides, en donde el método comprende el paso de administrar las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención a una cicatriz hipertrófica o queloide. Dentro de una modalidad de la presente invención, las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención se inyectan directamente en una cicatriz hipertrófica o queloide, con el objeto de evitar el progreso de estas lesiones. Esta terapia tiene un valor particular en el tratamiento profiláctico de condiciones que se sabe dan como resultado el desarrollo de cicatrices hipertróficas y queloides (por ejemplo, quemaduras), y se inicia preferentemente después de que fase proliferativa ha tenido tiempo de progresar (aproximadamente 14 días después de la adición inicial), pero antes del desarrollo de la cicatriz hipertrófica o queloide. Tal como se observó anteriormente, la presente invención también proporciona métodos para tratar enfermedades neovasculares de los ojos, incluyendo por ejemplo, neovascularización de cornea, glaucoma neovascular, retinopaíía diabéíica proliferativa, fibroplasia retrolental y degeneración macular. Además, las enfermedades oculares asociadas con neovascularización que pueden ser tratadas con las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , incluyen pero no se limitan a: glaucoma neovascular, retinopatía diabéíica, retinoblastoma, fibroplasia retrolental, uveitis, retinopatía por prematuridad de degeneración macular, neovascularización de injerto de cornea, así como otras enfermedades inflamatorias oculares, tumores oculares y enfermedades asociadas con neovascularización coloidal o de iris. Ver por ejemplo, las revisiones de Waltman y asociados, Am. J. Ophthal. 85: 704-710 (1978) y Gartner y asociados, Surv. Ophthal. 22: 291 -312 (1978). Por lo tanío, dentro de un aspecto de la presente invención, se proporcionan métodos para írafar enfermedades neovasculares de los ojos, tales como neovascularización de cornea (incluyendo neovascularización de injerto de cornea), que comprenden el paso de administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva en un compuesto (por ejemplo, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención) a la cornea, de modo que se inhiba la formación de bazos sanguíneos. En síntesis, la cornea es un tejido que carece normalmeníe de bazos sanguíneos. En cierías condiciones patológicos, sin embargo las capilaridades se pueden extender a la cornea desde el plexus vascular pericorneal del limbo. Cuando la cornea se vasculariza, también se nebuliza, dando como resultado una disminución en la agudeza visual del paciente. La pérdida visual puede ser total si la cornea se opaca completamenfe. Una variedad de padecimientos pueden dar como resultado neovascularización de la cornea, incluyendo por ejemplo, infecciones de cornea (por ejemplo, tracoma, queratitis de herpes simple, leishmaniasis y oncocerciasis), procesos inmunologicos (por ejemplo, rechazo de injerto y síndrome de Stevens-Johnson), quemaduras, álcali, traumas, inflamación (por cualquier causa), estados de deficiencia nutricional y por ióxicos, y una complicación por la aportación de lentes de contacío. Denfro de las modalidades preferidas particularmenfe de la presente invención, se pueden preparar para administración íópica en solución salina (en combinación con cualesquiera de los conservadores de agentes antimicrobianos comúnmeníe uíilizados en preparaciones oculares), y administrarse en forma de gotas para los ojos. La solución o suspensión puede prepararse en su forma pura y administrarse varias veces al día. Como alíernativa, las composiciones anti-angiogénicas, preparadas tal como se describe anteriormeníe, íambién pueden ser adminisíradas direcíamente a la cornea. Dentro de modalidades preferidas, la composición anti-angiogénica se prepara con un polímero muco-adhesivo que enlaza la cornea. Dentro de modalidades adicionales, los factores anti-angiogénicos o composiciones anti-angiogénicas se pueden utilizar como adjuntas a la terapia esteroidal convencional. La íerapia tópica también puede ser profilácticamente útil en lesiones de cornea las cuales son conocidas por íener una alia probabilidad de inducir a respuesta angiogénica (tal como, quemaduras por químicos). En estos casos, el tratamiento, o probablemente en combinación con esteroides, puede instiíuirse inmediaíameníe para ayudar a prevenir complicaciones subsecuentes. Dentro de oirás modalidades, los compuestos descritos anteriormente pueden ser inyectados directamente en el estroma corneal a íravés de un oftalmólogo bajo guía microscópica. El sitio de inyección preferido, puede variar con la morfología de la lesión individual , aunque la meta de la administración puede ser colocar la composición avanzando hacia el freníe de la vasculatura (por ejemplo, interpuesto entre los bazos sanguíneos y la cornea normal). En la mayoría de los casos esto puede comprender inyección de cornea perilímbica para "proíeger" la cornea de el avance de bazos sanguíneos. Este método también puede utilizarse poco después de una lesión a la cornea, con el objeto de prevenir profilácticamenfe la neovascularización de la cornea. En esta situación, el material puede ser inyectado en la cornea perilímbica interpuesta entre la lesión de la cornea y su suministro de sangre límbica potencial indeseada. Dichos méíodos íambién pueden ser uíilizados en una forma similar para evitar la invasión capilar de corneas transplantadas. En una forma de liberación sostenida, las inyecciones se pueden requerir únicamente de 2 a 3 veces por año. U n esferoide también puede agregarse a la solución de inyección para reducir la inflamación que resulta de la propia inyección . Dentro de otro aspecío de la preseníe invención , se proporcionan méíodos para íraíar glaucoma neovascular, en donde los mélodos comprenden los pasos de administrar a un paciente una cantidad terapéuíicameníe efectiva de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican la proteína de fusión de albúmina de la presente invención al ojo, de modo que se inhiba la formación de bazos sanguíneos. En una modalidad, el compuesto puede ser administrado en forma tópica al ojo, con el objeto de traíar formas tempranas de glaucoma neovascular. Dentro de oirás modalidades, el compuesío puede implaníarse mediante inyección en la región del ángulo de la cámara anterior. Dentro de otras modalidades, el compuesto también puede colocarse en cualquier lugar de modo que el compuesto se libere continuamente en el humor acuoso. Dentro de otro aspecío de la preseníe invención, se proporcionan méíodos para fratar retinopatía diabética proliferativa, en donde los métodos comprenden el paso de administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican la proteína de fusión de albúmina de la presente invención a los ojos, de modo que se inhiba la formación de bazos sanguíneos. Dentro de modalidades particularmeníe preferidas de la presente invención, la retinopaíía diabéíica proliferativa puede ser traíada medianíe inyección en el humor acuoso o el vifreo, con el objeto de incrementar la concentración local de polinucleótido, polipéptido, aníagonisía y/o agonista en la retina. Preferentemente, el tratamiento debe iniciarse antes de la adquisición de la enfermedad severa que requiere foíocoagulación. Denfro de otro aspecto de la presente invención, se proporcionan métodos para tratar fibroplasia retrolental, en donde los métodos comprenden el paso de administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican la proteína de fusión de albúmina de la presente invención al ojo, de modo que se inhiba la formación de bazos sanguíneos. El compuesto puede ser administrado en forma tópica, mediante inyección intravilrea y/o medianíe implantes intraoculares. Además, los padecimientos que pueden ser tratados con proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleóíidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención incluyen pero no se limitan a, hemangioma, artritis, psoriasis, angiofibroma, placas ateroescleróticas, curación de heridas retrasada, granulaciones, articulaciones hemofílicas, cicatrices hipertróficas, fracturas sin unión, síndrome de Osler-Weber, granuloma pirogénico, escleoderma, tracoma y adhesiones vasculares. Además, los padecimientos y/o estados que pueden ser traíados, prevenidos, diagnosíicados y/o pronosíicados con las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proíeínas de fusión de albúmina de la preseníe invención incluyen , pero no se limitan a, tumores sólidos, tumores de sangre de nacimiento tales como leucemias, metásíasis de íumor, sarcoma de Kaposi, íumores benignos, por ejemplo, hemangiomas, neuromas acúsíicos, neurofibromas, tracomas y granulomas piogénicos, artriíis reumaíoide, psoriasis, enfermedades angiogénicas oculares, por ejemplo, retinopatía diabética, reíinopatía por premaluridad , degeneración macular, rechazo de injerío de cornea, glaucoma neovascular, fibroplasia retroleníal, rubeoisi, retinoblasíoma y uveitis, curación de herida retardada, endomeíriosis, vasculogénesis, granulaciones, cicaírices hiperíróficas (queloides), fracturas sin unión, escleroderma, tracoma, adhesiones vasculares, angiogénesis miocardíaca, colaterales coronarios, colaterales celulares, malformaciones arteriovenosas, angiogénesis de extremidad isquémica, Síndrome de Osler-Webber, neovascularización de placa, telangiectasia, articulaciones hemofilíacas, displasia fibromuscular de angiofibroma, granulación de herida, enfermedad de Crohn, ateroesclerosis, agente de control de nacimiento evitando la vascularización requerida para el implante de embrión que confrola la menstruación , enfermedades que tienen angiogénesis como una consecuencia patología tales como enfermedad por rasguño de gato (Róchele minalia quintosa), úlceras (Helicobacter pylori), Baríonellosis y angiomaíosis bacilar. En un aspecto del método de control de nacimiento, se administra una cantidad al compuesto suficiente para bloquear la implantación del embrión antes o después de que haya ocurrido el curso interno y la fertilización, proporcionando de esta forma un método efectivo para control de natalidad, o posiblemente un mélodo de la "mañana siguiente". Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , fambién se pueden utilizar para controlar la menstruación o adminisfrase ya sea como un fluido de lavado peritoneal o para implante peritoneal en el tratamiento de endometriosis. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se pueden incorporar en suturas quirúrgicas con el objeto de evitar granulomas por costura.

Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , se pueden utilizar en una amplia variedad de procedimientos quirúrgicos, por ejemplo, dentro de un aspecto de la presente invención, se puede uíilizar una composición (en la forma de, por ejemplo, un rocío o película) para recubrir o rociar un área antes de la eliminación de un tumor, con el objeto de aislar los lejidos de alrededor normales de un tejido maligno, y/o evitar la dispersión de la enfermedad a los tejidos de alrededor. Dentro de otros aspectos de la presente invención, se pueden suministrar composiciones (por ejemplo, en la forma de un rocío) a través de procedimientos endoscopicos con el objeto de cubrir tumores, o inhibir angiogénesis en un lugar deseado. Dentro de otros aspecíos de la preseníe invención, las mallas quirúrgicas que han sido cubierías con composiciones anti-angiogénicas de la presente invención, se pueden uíilizar en cualquier procedimiento en donde se deba utilizar la malla quirúrgica. Por ejemplo, dentro de una modalidad de la preseníe invención, una malla quirúrgica cargada con una composición aníi-angiogénica se puede uíilizar duraníe la cirugía de resección de cáncer abdominal (por ejemplo, subsecuente a resección de colón) con el objeto de proporcionar soporte a la sutura, y liberar una cantidad de factor anti-angiogénico. Dentro de aspectos adicionales de la presenfe invención, se proporcionan métodos para traíar siíios de excisión de íumor, en donde los méíodos comprenden administrar las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención a los márgenes de resección de un tumor subsecuente a la excisión, de modo que se inhiba el resurgimienío local del cáncer y la formación de nuevos bazos sanguíneos en el lugar. Deníro de una modalidad de la preseníe invención , el compuesío anti-angiogénico se administra directameníe al sitio de excisión del íumor (por ejemplo, aplicado medianíe frotado con trapo, cepillado o recubrimiento de otra forma de los márgenes de resección del tumor con el compuesto anti-angiogénico). Como alfernaíiva, los compuestos anti-angiogénicos se pueden incorporar en pastas quirúrgicas conocidas antes de la administración. Dentro de modalidades particularmeníe preferidas de la presente invención , se aplican los compuestos aníi-angiogénicos después de resecciones hepáticas por malignidad , y después de operaciones neuroquirúrgicas. Dentro de un aspecto de la presente invención , las profeínas de fusión de albúmina de la présenle invención y/o polinucleóíidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención se pueden administrar al margen de resección de una amplia variedad de tumores, incluyendo por ejemplo, tumores de seno, colon , cerebro y hepáticos. Por ejemplo, dentro de una modalidad de la presente invención , los compuestos anti-angiogénicos pueden ser administrados al sitio de un tumor neurologico subsecuente a la excisión , de modo que se inhiba la formación de nuevos bazos sangu íneos en el lugar. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención también se pueden administrar junto con otros factores anti-angiogénicos. Los ejemplos representativos de otros factores anti-angiogénicos incluyen: Factor Anti-lnvasivo, ácido reíinoico y derivados del mismo, paclitaxel, Suramin , I nhibidor de Tejido de MetaIoproteínas-1 , I nhibidor de Tejido de Metaloproteínas-2, l nhibidor-1 de Activador de Plasminogén, lnhibidor-2 de Activador de Plasminogén y varias formas de otros metales de transición del "grupo d" más ligeros. Los metales de transición del "grupo d" más ligeros incluyen, por ejemplo, especies de vanadio, molibdeno, tungsteno, titanio, niobio y tantalio. Dichas especies de metal de transición pueden formar complejos de metal de transición. Los complejos adecuados de las especies de metal de transición antes mencionadas, incluyen complejos de metal de oxo transición. Los ejemplos representativos de complejos de vanadio, incluyen complejos de oxo vanadio, tales como complejos de vanadato y vanadilo. Los complejos de vanadato adecuados incluyen complejos de metavanadato y ortovanadato, tales como, por ejemplo, metavanadato de amonio, metavanadato de sodio y ortovanadaío de sodio. Los complejos de vanadilo adecuados incluyen, por ejemplo, acetilacetonato de vanadilo y sulfato de vanadilo incluyendo hidratos de sulfato de vanadilo, tales como mono- y trihidratos de sulfato de vanadilo. Los ejemplos representativos de complejos de tungsteno y molibdeno también incluyen complejos oxo. Los complejos de oxo tungsteno incluyen complejos de óxido de íungstato y tungsteno. Los complejos de tungstato adecuados incluyen tungsíaío de amonio, íungsíaío de calcio, dihidraío de íungsíaío de sodio y ácido lungstico. Los óxidos de tungsíeno adecuados incluyen óxido de íungsíeno (IV) y óxido de tungsteno (VI). Los complejos de oxo molibdeno adecuados incluyen complejos de molibdato, óxido de molibdeno y molibdenilo. Los complejos de molibdato adecuados incluyen molibdaío de amonio y sus hidratos, molibdato de sodio y sus hidratos y molibdato de poíasio y sus hidratos. Los óxidos de molibdeno adecuados incluyen óxido de molibdeno (VI ), óxido de molibdeno (VI) y ácido molibdíco. Los complejos de molibdenilo adecuados incluyen, por ejemplo, acetil aceíonato de molibdenilo. Otros complejos de tungsíeno y molibdeno adecuados incluyen derivados hidroxo, derivados de, por ejemplo, de glicerol, ácido íartárico y azúcares. Se pueden uíilizar una amplia variedad de oíros factores anti-angiogénicos deníro del contexto de la presente invención. Los ejemplos representafivos incluyen factor de plaqueta 4; sulfato de protamina; derivados de quitina sulfatada (preparada a partir de conchas de cangrejo reina), (Muraía y asociados, Cáncer Res 51 : 22-26, 1991 ); Complejo de Peptidoglican de Polisacárido Sulfatado (SP - PG) (la función de este compuesto puede mejorarse mediante la presencia de esteroides tales como estrogeno y citrato de tamoxifen); Estaurosporina; moduladores de metabolismo de matriz, incluyendo por ejemplo, análogos de prolina, cishidroxiprolina, d, L-3,4-deshidroprolina, Tiapolina, alfa.alfa- dipiridilo, fumarato de aminopropionitrilo; 4-propil-5-(4-piridinil)- 2(3H)-oxazolona; Meíoírexaío; Mitoxantrona; Heparina; I nterferones; 2-Macroglobulina-suero; Chl MP-3 (Pavloff y asociado, J. Biol. Chem. 267: 17321 -17326, (1992)); Quimiostaíina (Tomkinson y asociados, Biochem J . 286: 475-480 (1992)) Teíradecasulfaío de Ciclodextrina; Eponemicina; Camptofecina Fumagilina (Ingber y asociados, Nature 348: 555-557, 1990) Tiomalato de Sodio Dorado ("GST"; Matsubara y Ziff, J. Clin. I nvest. 79: 1440-1446, (1987)); anticolagenasa-suero; alfa2-antiplasmina (Holmes y asociados, J . Biol . Chem . 262(4): 1659-1664, 1 987)); Bisantreno (National Cáncer Insíiíufe); disodio de ácido (N-(2)-carboxifenil-4-cloroantroníIico de disodio de Lobenzarií o "CCA"; Takeuchi y asociados, Agenís Actions 36: 312-316, (1992)); Talidomida; esteroide Angosíático; AGM-1470; carboxinaminolmidazole; e inhibidores de meíaloproteinasa tales como BB94. Enfermedades en el Nivel Celular Las enfermedades asociadas con supervivencia de célula incrementada o la inhibición de apoptosis que podrían ser tratadas, prevenidas, diagnosticadas y/o pronosíicadas utilizando las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polin ucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe invención, incluyen cánceres (íales como linfomas foliculares, carcinomas con mutaciones p53 y tumores dependientes de hormona, incluyendo pero sin limitarse a cáncer de colon, tumores cardiacos, cáncer pancreático, melanoma, retinoblastoma, glioblastoma, cáncer de pulmón , cáncer iníestinal , cáncer testicular, cáncer de estómago, neuroblastoma, mixoma, mioma, linfoma, endotelioma, osteoblastoma, osíeoclasíoma, osíeosarcoma, condrosarcoma, adenoma, cáncer de seno, cáncer de próstata, sarcoma de Kaposi y cáncer de ovario); padecimientos autoinmune (íales como, esclerosis múltiple, síndrome de Sjogren, tiroiditis de Hashimoto, cirrosis biliar, enfermedad de Behcet, enfermedad de Crohn , polimiositis, lupus eritematoso sistémico y glomerulonefritis relacionada con sistema inmune y artritis reumatoide), e infecciones virales (tales como víruses de herpes, víruses pox y adenovirus), inflamación, enfermedad de injerto versus huésped, rechazo de injerto agudo y rechazo en injerto crónico. En modalidades preferidas, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se utilizan para el nivel de crecimienío, progreso y/o meíástasis de cánceres, en particular los descritos aníeriormente.

Las enfermedades o condiciones adicionales asociadas con supervivencia de célula incremeníada que podrían ser fratadas o deíectadas de las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina, incluyen pero no se limitan a, progreso y/o metásíasis de malignidades y padecimientos relacionados tales como leucemia (incluyendo leucemias agudas) (por ejemplo, leucemia linfocítica aguda, leucemia mielocítica aguda (incluyendo mieloblásíica, promielocííica, mielomonocííica, monocítica y eriíroleucemia)) y leucemias crónicas (por ejemplo, leucemia mielocítica crónica (granulocítica) y leucemia linfocítica crónica)), policitemia vera, linfomas (por ejemplo, enfermedad de Hodgkin y enfermedad de no-Hodgkin), mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldensfrom , enfermedad de cadena pesada y tumores sólidos, incluyendo pero sin limitarse a, sarcomas y carcinomas fales como fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma, angiosarcoma, endoteliosarcoma, linfangiosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing , leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de colon, cáncer pancreático, cáncer de seno, cáncer de ovario, cáncer de prosfata, carcinoma de célula escamosa, carcinoma de célula basal , adenocarcinoma, carcinoma de glándula de sudor, carcinoma de glándula sebácea, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, quisíadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, carcinoma de célula renal, hepatoma, carcinoma de ducto biliar, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrional , tumor de Wilm , cáncer cervical, tumor testicular, carcinoma de pulmón , carcinoma de pulmón de célula pequeña, carcinoma de vejiga, carcinoma epitelial , glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craniofaringioma, ependimoma, pinealoma, emanglioblasíoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, menangioma, melanoma, neuroblastoma y retinoblastoma. Las enfermedades asociadas con apoptosis incrementada que podrían ser diagnosíicadas, pronosíicadas, prevenidas y/o traíadas utilizando las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, incluyen pero no se limiía a SI DA; padecimientos neurodegenerativos (tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson , esclerosis lateral amiotrófica, retinitis pigmentosa, degeneración cerebelar y tumor cerebral o enfermedades asociadas anteriores); padecimientos autoinmunes (tales como, esclerosis múltiple, síndrome de Sjogren , tiroiditis de Hashimoto, cirrosis biliar, enfermedad de Behcel, enfermedad de Crohn , polimiositis, lupus eriíematoso sisíémico y glomerulonefritis de artriíis reumaíoide relacionada con sisíema inmune) síndromes mielodisplásíicos (tales como anemia aplástica), enfermedad de injerto versus huésped , lesión isquémica (tal como la originada por infarto al miocardio, ataque y lesión por reperfusión), lesión hepática (por ejemplo, hepatitis relacionada con lesión hepática, lesión por isquemia/reperfusión, colestosis (lesión a ducto biliar) y cáncer de hígado); enfermedad hepática inducida por toxinas (tal como la originada por el alcohol), choque séptico, caquexia y anorexia.

Curación de Heridas v Proliferación de Célula Epitelial De acuerdo con otro aspecto de la presente invención , se proporciona un proceso para utilizar las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleóíidos que codifican las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención , para propósitos terapéuficos, por ejemplo, para estimular la proliferación de célula epitelial y queratinocitos básales para el proposito de curación de heridas, y para estimular la producción de folículo de cabello y curación de heridas dérmicas. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleóíidos que codifican las proíeínas de fusión de albúmina de la preseníe invención pueden ser clínicameníe útiles en la estimulación de curación de heridas, incluyendo heridas quirúrgicas, heridas de excisión, heridas profundas que comprenden daño de la dermis y epidermis, heridas de tejido ocular, heridas de tejido dental , heridas de cavidad oral, úlceras diabética, úlceras dérmicas, úlceras cubitus, úlceras aríeriales, úlceras de estasis venoso, quemaduras que resultan a exposición a calor o químicos, y otras condiciones de curación de heridas anormales tales como uremia, malnuírición, deficiencias de vitamina y complicaciones asociadas con el tratamiento sistémico con esteroides, terapia de radiación y fármacos antineoplásticos y antimeíabolitos. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se pueden utilizar para promover el restablecimiento dérmico subsecuente a la perdida dérmica. Las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención se pueden utilizar para incrementar la adherencia de injertos de la piel a una cuenta de curación y estimular la re-epilelialización de la cuenía de curación. A coníinuación se encueníran íipos de injerios en donde las profeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , se pueden utilizar para incrementar la adherencia a una cuenta de curación: autoinjeríos, piel artificial, injerto autodérmico, injerios auíoepdérmicos, injertos avaculares, injertos de Blair-Brown, injertos de huesos, injertos brefoplásticos, injerto de cutis, injerto retrazado, injerto dérmico, injerto epidérmico, injerío de fascia, injerto de grosor total, injerío heíerologo, xenoinjerío, injerío homologo, injerto hiperplástico, injerío lamelar, injerío de malla, injerto de mucosa, injerto de Ollier-Thiersh, injerto omenpal , injerío de parche, injerto pedículo, injerto de penetración, injerto de piel dividida, injerto de división gruesa. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , se pueden utilizar para promover la elasticidad de la piel y mejorar la apariencia de la piel de edad avanzada.

Se considera que las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , también producen cambios en la proliferación de hepatocitos, y proliferación de célula epitelial en el pulmón , seno, páncreas, estómago, intestino delgado e intestino grueso. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleóíidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, pueden promover la proliferación de células epiteliales tales como sebocitos, folículos de cabello, hepatocitos, neumocitos tipo II, células de globete que producen mucina y otras células epiteliales y sus progenitores contenidos dentro de la piel , pulmón, hígado y íracto gastrointestinal. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , pueden promover la proliferación de células endoteliales, queratinocitos y queratinocitos básales. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , también se pueden utiliza para reducir los efectos secundarios de toxicidad del intestino que resultan de radiación, tratamientos de quimioterapia o infecciones virales. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, pueden tener un efecto ciíoproíector en la mucosa del iníesíino delgado. Las proíeínas de fusión de albúmina de la preseníe invención y/o polinucleóíidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , también pueden estimular la curación de mucositis (úlceras de la boca) que resultan de quimioterapia e infecciones virales. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , pueden utilizarse además en la regeneración total de la piel en defectos de piel gruesos íofales y parciales, incluyendo quemaduras (por ejemplo, repoblación de folículos de cabello, glándulas de sudor y glándulas sebáceas), trafamiento de oíros defeclos de la piel , fales como psoriasis. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se pueden uíilizar para íratar epidermolisis ampollar, un defecto en la adherencia de la epidermis a la dermis subyacente que da como resultado burbujas frecuentes, abiertas y dolorosas acelerando la reepitelialización de las lesiones. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se pueden utilizar también para tratar úlceras gástricas y duodenales y ayudar a la curación mediante la formación de cicatrices del revestimiento de la mucosa y regeneración del revestimiento de la mucosa glandular y la mucosa duodenal en forma más rápida. Las enfermedades de intestino inflamatorio, tales como enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa, son enfermedades que dan como resultado la destrucción de la superficie mucosa del intestino delgado o grueso, respectivamente. Por lo tanto, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , se pueden utilizar para promover la resuperficiación de la superficie de mucosa para ayudar a una curación más rápida y evitar el progreso de la enfermedad de intestino inflamatorio. El tratamiento con las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , se espera que tenga un efecto importante en la producción de mucosa a través del tracto gastroiníestinal y se puede utilizar para proteger la mucosa infestinal de substancias dañinas que se ingieren o después de una cirugía. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , se pueden utilizar para tratar enfermedades que se asocian con la sub-expresión . Además, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se pueden utilizar para prevenir y curar el daño a los pulmones debido a varios estados patológicos. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleóíidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , las cuales pueden esíimular la proliferación y diferenciación y promover la reparación de alvéolos y epiíelio broncoliar, previenen o íraían el daño al pulmón agudo o crónico. Por ejemplo, el enfisema, que da como resulfado la pérdida progresiva de alvéolos y lesiones en la inhalación , por ejemplo, que resulían de la inhalación de tabaco y quemaduras, que originan necrosis del epitelio bronquiolar y los alvéolos, podría se tratada en forma efectiva utilizando los polinucleótidos o polipéptidos, agonistas o antagonistas de la presente invención. Así mismo, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , se pueden utilizar para estimular la proliferación y diferenciación de neumocitos fipo I I , lo cual puede ayudar a tratar o prevenir las enfermedades, tales como enfermedades de membrana y hialina, tal como síndrome de distensión respiratoria en infantes y displasia broncopulmonar, en infantes prematuros. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe invención, podrían estimular la proliferación y diferenciación de patociíos, y por lo fanto, se podrían uíilizar para aliviar o íratar enfermedades y patologías hepáticas, tales como falla hepática fulminante originada por cirrosis, daño hepático originado por hepatifis viral y subsfancias tóxicas (por ejemplo, aceíaminofen, tetracloruro de carbono y otras hepatotoxinas conocidas en la técnica). Además, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleóíidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se pueden utilizar para tralar o prevenir la generación de diabeíes melitus. En pacientes con diabetes Tipo I y II recieníemeníe diagnosticados, en donde aún permanece la función de algunas células de isleto, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se pueden utilizar para mantener la función del isleto para aliviar, retardar o prevenir la manifestación permanente de la enfermedad. Así mismo, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se pueden utilizar como un auxiliar en el íransplante de célula de isleío para mejorar o promover la función de la célula de isleto. Actividad Neural v Enfermedades Neurológicas Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se pueden utilizar para el diagnóstico y/o tratamiento de enfermedades, padecimientos, daño o lesión del cerebro y/o sistema nervioso. Los padecimientos del sistema nervioso o que pueden ser tratados con las composiciones de la presente invención (por ejemplo, las proíeínas de fusión de albúmina de la preseníe invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, lesiones del sistema nervioso y enfermedades o padecimientos que dan como resultado ya sea la desconexión de axones, una disminución o regeneración de neuronas, o la desmielinación. Las lesiones del sistema nervioso que se pueden tratar en un paciente (incluyendo pacieníes mamíferos humanos y no humanos) de acuerdo con los métodos de la presente invención , incluyen pero no se limitan a, las siguieníes lesiones ya sea del sislema nervioso central (incluyendo espina dorsal cerebro) o sistema nervioso periférico: (1 ) lesiones isquémicas, en donde una carencia de oxígeno en una parte del sistema nervioso da como resultado lesión neuronal o muerte, incluyendo infarto cerebral o isquemia, o infarto de la espina dorsal o isquemia; (2) lesiones traumáticas, incluyendo lesiones originadas por lesión física o asociadas con cirugía, por ejemplo, lesiones que afectan a una parte del sisíema nervioso, o lesiones de compresión ; (3) lesiones malignas, en donde una paríe del sistema nervioso es destruido o lesionado por tejido maligno que es ya sea una malignidad asociada con el sisíema nervioso o una malignidad derivada de un tejido que no es del sistema nervioso; (4) lesiones infecciosas, en las cuales una parte del sistema nervioso es destruido o lesionado como resulíado de una infección , por ejemplo, a íravés de un absceso o asociado con infección por virus de ¡nmunodeficiencia humana, herpes zosíer o virus de herpes simple o con la enfermedad de Lyme, tuberculosis o sífilis; (5) lesiones degenerativas, en donde una paríe del sisfema nervioso es destruida o lesionada como resultado de un proceso degenerativo, incluyendo pero sin limitarse a, degeneración asociada con la enfermedad de Parkinson , enfermedad de Alzheimer, corea de Huntingíon o esclerosis lateral amiotrofica (ALS); (6) lesiones asociadas con enfermedades o padecimientos nutricionales, en donde una parte del sistema nervioso es destruido o lesionado por un padecimiento nutricional o padecimiento del metabolismo que incluye pero no se limita a, deficiencia de vitamina B12, deficiencia de ácido folico, enfermedad de Wernicke, ambliopía de tabaco-alcohol , enfermedad de Marchiafava-Bignami (degeneración primaria del corpus callosum), y degeneración cerebelar alcohólica; (7) lesiones neurológicas asociadas con enfermedad sistémica incluyen , pero no se limitan a, diabetes (neuropaíía diabética, Palsy de Bell), lupus eritemaíoso sisíémico, carcinoma o sarcoidosis; (8) lesiones originadas por subsíancias toxicas que incluyen alcohol, plomo neurotoxinas paríiculares; y (9) lesiones desmielinadas en donde una paríe del sisíema nervioso es desfruido o lesionado por una enfermedad de desmielinación, que incluye pero no se limita a, esclerosis múltiple, mielopatía asociada con virus de inmunodeficiencia humana, mielopatía transversal o diversas etiologías, leucoencefalopatía multifocal progresiva y mielinolisis de pontina central. En una modalidad , las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , se utilizan para proteger células neurales de los efectos dañinos de hipoxia. En una modalidad preferida, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se utilizan para proteger células neurales y los efectos dañinos de hipoxia cerebral. De acuerdo con esta modalidad , las composiciones de la presente Invención se utilizan para tratar o prevenir lesión a célula neural asociada con hipoxia cerebral . En un aspecto no exclusivo de esía modalidad, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , se utilizan para tratar o prevenir lesión de célula neural asociada con isquemia cerebral. En otro aspecto no exclusivo de esía modalidad, las profeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se utilizan para tratar o prevenir lesión de célula neural asociada con infarto cerebral . En otra modalidad preferida, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , se utilizan para tratar o prevenir lesión de célula neural asociada con un ataque. En una modalidad específica, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se utilizan para traíar o prevenir lesión de célula neural cerebral asociada con un alaque. En otra modalidad preferida, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , se utilizan para tratar o prevenir la lesión de célula neural asociada con un ataque cardíaco. En una modalidad específica, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se utilizan para íraíar o prevenir la lesión de célula neural cerebral asociada un ataque cardíaco. Las composiciones de la presente invención , las cuales son úíiles para tratar o prevenir un padecimiento del sislema nervioso, se pueden seleccionar probando la acíividad biológica en la promoción de supervivencia o diferenciación de neuronas. Por ejemplo, y no a manera de limitación , las composiciones de la presente invención que provocan cualesquiera de los siguiente efectos, pueden ser útiles de acuerdo a la presente invención : (1 ) tiempo de supervivencia incremeníada de neuronas en culíivo, ya sea en la presencia o ausencia de hipoxia o condiciones hipóxicas; (2) germinación incremeníado en neuronas en cultivo o in vivo; (3) producción incrementada de una molécula asociada con neuronas en cultivo o in vivo, por ejemplo, acetiltransferasa de colina o acetilcolinesíerasa con respecío a neuronas motoras; o (4) síntoma disminuido de disfunción neuronal in vivo. Dichos efectos pueden medirse a través de cualquier método conocido en la técnica. En modalidades preferidas, no limitativas, la supervivencia incrementada de las neuronas puede ser medida en forma rutinaria utilizando un método establecido en la presente invención o conocido en la técnica, tal como por ejemplo, en la publicación de Zhang y asociados, Proc Nati Acad Sci EUA 97: 3637-42 (2000) o en Arakawa y asociados, J. Neurosci., 10: 3507-15 (1990); la germinación incremeníado en neuronas puede detectarse a través de métodos conocidos en la fécnica, íales como, por ejemplo, los méíodos que se esíablecen en la publicación de Pesíronk y asociados, Exp. Neurol., 70: 65-82 (1980), o Brown y asociados, Ann. Rev. Neurosci. 4: 17-42 (1981); la producción incrementada de moléculas asociadas con neuronas se puede medir mediante bioensayo, ensayo enzimático, enlace de aníicuerpos, ensayo de manchado Northern, etc., uíilizando técnicas conocidas en el arte y que dependen de la molécula que será medida; y la disfunción de neurona motor se puede medir evaluando la manifestación física del padecimiento de neurona motor, por ejemplo, debilidad, velocidad de conducción de neurona de motor o discapacidad funcional. En modalidades específicas, los padecimientos de neurona motor que se pueden tratar de acuerdo con la presente invención , incluyen pero no se limitan a, padecimientos tales como infarto, infección , exposición a toxinas, trauma, daño quirúrgico, enfermedad degenerativa o malignidad que pueden afectar las neuronas motoras, así como otros componeníes del sisíema nervioso, así como padecimieníos que afectan en forma selectiva las neuronas, tales como esclerosis lateral amiotrófica, y que incluyen , pero no se limitan a, atrofia muscular espinal progresiva, parálisis vulvar progresiva, esclerosis lateral primaria, atrofia muscular infantil y juvenil , parálisis vulvar progresiva de infantes (síndrome de Fazio-Londe), poliomielitis y síndrome post polio, y Neuropatía Motorsensorial Hereditaria (Enfermedad de Charcot-Marie-Tooth). Además, las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , puede jugar un papel importaníe en la supervivencia neuronal; la formación de sinapsa; conducíancia y diferenciación neural, etc. Por lo tanto, las composiciones de la presente invención (incluyendo las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención) se pueden utilizar para diagnosticar y/o íratar o prevenir enfermedades o padecimientos asociados con estas funciones, incluyendo pero sin limitarse a, padecimieníos de aprendizaje y/o cognición). Las composiciones de la preseníe invención también pueden ser útiles en el tralamiento o prevención de esíados de enfermedad neurodegenerativos y/o padecimientos de comportamienío. Dichos estados de enfermedad neurodegenerativos y/o padecimientos de comportamiento incluyen, pero no se limitan a, Enfermedad de Alzheimer, Enfermedad de Parkinson, Enfermedad de Huntingíon , Síndrome de Tourette, esquizofrenia, manía, demencia, paranoia, padecimientos obsesivo compulsivo, padecimiento de pánico, capacidades de aprendizaje, ALS, psicosis, autismo y comportamientos alterados, incluyendo padecimientos en la alimentación, patrones de sueño, equilibrio y percepción . Además, las composiciones de la preseníe invención también juegan un papel importante en el tratamiento, prevención y/o detección de desarrollo de padecimientos asociados con el desarrollo del embrión, o padecimientos ligados con la sexualidad. Además, las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , pueden ser útiles en la protección de células neurales de enfermedades, daño, padecimiento o lesión, asociados con padecimientos cerebrovasculares, que incluyen pero no se limitan a, enfermedades de arteria carótida (por ejemplo, frombosis de aríeria caroíida, estenosis de carótida o Enfermedad Moyamoya), angiopatía amiloide cerebral, aneurisma cerebral, anoxia cerebral, arteriosclerosis cerebral, malformaciones arteriovenosas cerebral, enfermedades de arteria cerebral , embolia y trombosis cerebral (por ejemplo, trombosis de arteria carótida, trombosis sinus o Síndrome de Wallenberg), hemorragia cerebral (por ejemplo, hematoma epidural o subdural , o hemorragia subaracnoide), infarto cerebral, isquemia cerebral (por ejemplo, isquemia cerebral temporal, Síndrome de Robo de Subclavia o insuficiencia vertebrobasilar), demencia vascular (por ejemplo, múlíi-infarto), cefalea de leucomalacia, periventricular y vascular (por ejemplo, cefalea en racimo o migrañas). De acuerdo aún con otro aspecto de la presente invención, se proporciona un proceso para utilizar las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, para propósitos terapéuticos, por ejemplo, para estimular la proliferación y/o diferenciación de célula neurológica. Por consiguiente, las proteínas de fusión de albúmina de la presente Invención y/o polinucleótidos que codifican las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención , se pueden utilizar y/o detecíar enfermedades neurológicas. Además, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , se pueden utilizar como un marcador o detector de una enfermedad del padecimiento del sistema nervioso en particular. Los ejemplos de enfermedades neurológicas que pueden ser tratados o detectados con las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe invención , incluyen enfermedades del cerebro, tales como enfermedades del cerebro metabólicas incluyendo fenilcetonuria, tales como fenilcetonuria maternal , deficiencia de carboxilasa de piruvato, deficiencia de complejo de deshidrogenasa piruvato, Encefalopatía de Wernicke, edema cerebral, neoplasma cerebral tal como neoplasma cerebelar que incluyen neoplasmas infrasensorial, neoplasmas de ventrículo cerebral tal como neoplasmas de plexo coroide, neoplasmas hipoíalámicos, neoplasmas suprasensoriales, enfermedad de canavan, enfermedad cerebelar íal como ataxia cerebelar que incluye degeneración espinocerebelar tal como telangiecíasia de ataxia, dissinergia cerebelar, Ataxia de Friederich, Enfermedad de Machado-Joseph, atrofia olivopontocerebelar, neoplasmas cerebelares fales como neoplasmas infrasensoriales, esclerosis cerebral difusa íal como periaxialis encefalitis, leucodistrofia de célula globoide, leucodisírofia meíacromáíica y panencefalitis esclerosante subaguda. Las enfermedades neurológicas adicionales se pueden íraíar o deíecíar con las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, incluyen padecimientos cerebrovasculares (tales como enfermedades de arteria carótida que incluyen trombosis de arteria carótida, estenosis de carótida y Enfermedad de Moyamoya), angiopatía amiloide cerebral, aneurismo cerebral, anoxia cerebral , arferiosclerosis cerebral, malformaciones aríeriovenosas cerebrales, enfermedad arterial cerebral , embolia y trombosis cerebral tal como trombosis de arteria carótida, trombosis sinus y Síndrome de Wallenberg, hemorragia cerebral íal como hematoma epidural, hematoma subdural y hemorragia subaracnoide, infarto cerebral , isquemia cerebral tal como isquemia cerebral temporal, Síndrome del Robo de Subclavia e insuficiencia vertebrobasilar, demencia vascular íal como demencia por múlti-infartos, leucomalacia periveníricular, cefalea vascular íal como cefalea en racimos y migraña. Las enfermedades neurológicas adicionales se pueden traíar o deíeclar con las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , incluyen demencia tal como Complejo de Demencia-SI DA, demencia presenil, tal como Enfermedad de Alzheimer y Síndrome de Creutzfeldt-Jakob, demencia senil tal como Enfermedad de Alzheimer y parálisis supranuclear progresivo, demencia vascular tal como demencia por infartos múltiples, encefalitis que incluyen periaxialis encefalitis, encefalitis viral , tal como encefalitis epidémica, Encefalitis Japonesa, Encefalitis San Luis, encefalitis por patapata y Fiebre de West Nile, encefalomielitis diseminada aguda, meningoencefalitis tal como síndrome de uveomeningoencefálitico, Enfermedad de Parkinson Postencefalítica y panencefalitis esclerosante subaguda, encefalomalacia tal como leucomalacia periveníricular, epilepsia fal como epilepsia generalizada que incluye espasmos infantiles, epilepsia con ausencias, epilepsia mioclonica que incluye Síndrome MERRF, epilepsia clonica-tónica, epilepsia parcial íal como epilepsia parcial compleja, epilepsia de glóbulo frontal y epilepsia de óvulo temporal, epilepsia post-traumática, estado epiléptico tal como Epilepsia Parcialis Continua y Síndrome de Hallervorden-Spatz. Las enfermedades neurológicas adicionales que pueden ser tratadas o detectadas con las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleóíidos que codifican las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención, incluyen hidrocefalia tal como Síndrome de Dandy-Walker e hidrocefalia de presión normal, enfermedades hipotalámicas, tal como neoplasmas hipotalámicos, malaria cerebral, narcolepsia que incluye cataplexia, poliomielitis bulbar, pseudotumor cerebral, Síndrome de Reíí, Síndrome de Reye, enfermedades talámicas, toxoplasma cerebral , tuberculoma iníracraneal, y Síndrome de Zellweger, infecciones del sistema nervioso central tales como Complejo de Demencia-SI DA, Absceso Cerebral , enfiema subdural, encefalomielitis tal como Encefalomielitis de Equino, Encefalomielitis de Equino Venezolano, Encefalomielitis Hemorrágica Necrotizante, Visna y malaria cerebral. Las enfermedades neurológicas adicionales que se pueden tratar o* detectar con las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , incluyen meningitis tal como aracnoiditis, meningiíis aséptica tal como meningitis viral que incluye coriomeningitis linfocítica, meningitis Bacteriana que incluye de Meningitis Hemofilius, Meningitis Listeria, Meningitis Meningococal tal como Síndrome de Waterhouse-Friderichsen , Meningitis Neumococal y tuberculosis meningial, meningitis fúngica tal como Meningitis Cripíococal, efusión subdural, meningoencefalitis tal como síndrome ¡vemeningoencefalítico, mielitis tal como mielitis transversal, neurosífilis tal como tabes dorsales, poliomielitis que incluye poliomielitis bulbar y síndrome postpoliomielitis, enfermedades por agentes infecciosos (tal como Síndrome Creutzfeldt-Jakob, Encefalopatía Espongiforma de Bovino, Síndrome Gerstmann-Straussler, Kuru, Scrapie), y toxoplasmosls cerebral. Las enfermedades neurológicas adicionales se pueden tratar o detecíar con las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, incluyen neoplasmas del sistema nervioso central, tal como neoplasmas cerebrales que incluyen neoplasmas cereberales tales como neoplasmas infrasensoriales, neoplasmas de ventrículo cerebral tal como neoplasmas de plexo coroide, neoplasmas hipotalámicos y neoplasmas suprasensoriales, neoplasmas meningiales, neoplasmas de espina dorsal que incluyen neoplasmas epidurales, enfermedades de desmielinación tales como Enfermedades de Canavan , esclerosis cerebral difusa que incluye adrenoleucodistrofia, periaxialis encefalitis, Ieucodistrofia de célula globoide, esclerosis cerebral difusa tal como leucodistrofia meíacromática, encefalomielitis alérgica, encefalomielitis hemorrágica necrotizaníe, leucoencefalopatía multifocal progresiva, esclerosis múltiple, mielinolisis de pontina central, mielitis transversal , neuromielitis ópíica, Scrapie, Swayback, Síndrome de Faíiga Crónica, Visna, Síndrome Nervioso por Presión Alia, Meningismo, enfermedades de espina dorsal tales como amiotonia congénita, esclerosis lateral amiotrófica, atrofia muscular espinal tal como Enfermedad de Werdnig-Hoffmann, compresión de espina dorsal , neoplasmas de espina dorsal tal como neoplasmas epidurales, siringomielia, Tabes Dorsalis, Síndrome de Stiff-Man , retardo mental íal como Síndrome de Angelman, Síndrome de Cri-du-Chat, Síndrome de De Lange, Síndrome de Down, Gangliosidosis íal como gangliosidosis G(M 1 ), Enfermedad de Sandhoff, Enfermedad de Tay-Sachs, Enfermedad de Hartnup, homocislinuria, Síndrome de Laurence-Moon-Biedl, Síndrome de Lesch-Nyhan, Enfermedad de Orina de Jarabe de Maple, mucolipidosis tal como fucosidosis, lipofuscinosis-ceroide neuronal, síndrome oculocerebrorenal, fenilcetonuria tal como fenilcetonuria maternal, Síndrome de Prader-Willi , Síndrome de Retí, Síndrome de Rubinstein-Taybi, Esclerosis Tuberous, Síndrome de WAG R, anomalías del sistema nervioso tales como holoprosencefalia, defectos de tubo neural tal como anencefalía que incluye hidrangencefalia, Deformidad de Amold-Chairi, encefalocelo, meningocelo, meningomielocelo, disrafismo espinal tal como espina quística bífida y espina bífida oculta. Las enfermedades neurológicas adicionales se pueden tratar o detectar con las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe invención y/o polinucleóíidos que codifican las proíeínas de fusión de albúmina de la preseníe invención, incluyen neuropaíías moíoras y sensoriales hereditarias que incluyen Enfermedad de Charcot-Marie, atrofia óptica Hereditaria, enfermedad de Refsum, peraplegia espástica herediíaria, Enfermedad de Werdnig-Hoffmann , Neuropatías Sensoriales y Autonómicas Hereditarias íales como Analgesia Congéniía y Disautonomía Familiar, manifestaciones Neurológicas (tales como agnosia que incluye Síndrome de Gerstmann , Amnesia tal como amnesia reírograda, apraxia, vejiga neurogénica, cataplexia, padecimieníos de comunicación íal como padecimieníos de audición que incluyen sordera, pérdida de audición parcial, reclufamiento de ruido y tinitus, padecimientos de lenguaje tales como afasia que incluyen agrafía, anomia, afasia broca y afasia de Wernicke, Dislexia tal como Dislexia Adquirida, padecimientos de desarrollo de lenguaje, padecimientos de interlocución tal como afasia que incluye anomia, afasia broca y afasia de Wernicke, padecimientos de articulación, padecimienfos de comunicación íales como, padecimienfos de interlocución que incluyen disartria, ecolalia, mutismo y taríamudeo, padecimientos de la voz tal como afon ía y ronquera, estado decerebrado, delirio, fasciculación, alucinaciones, meningismo, padecimientos de movimiento tales como síndrome de Angelman , ataxia, ateíosis, corea, distonia, hipocinesia, hipotonía de músculo, mioclonos, íic, íoríícolis y temblor, hipertonía muscular tal como rigidez de músculo tal como Síndrome de Stiff-Man , espasticidad de músculo, parálisis tal como parálisis facial que incluye Herpes Zoster Oíicus, Gasíroparesis, Hemiplegía, oftalmoplegia tal como diplopia, Síndrome de Duane, Síndrome de Horner, oftalmoplegia externa progresiva Crónica tal como Síndrome de Kearns, Parálisis Bulbar, Paraparesis Espástica Tropical, Paraplegia, tal como Síndrome de Brown-Sequard , cuadriplegia, parálisis respiratoria y parálisis de cuerdas vocales, paresis, miembro fantasma, padecimientos del gusto tal como ageusia y desgleusla, padecimientos de la visión tales como ambliopía, ceguera, defectos de visión de colores, diplopia, hemianopsia, escotoma y visión subnormal , padecimientos de sueño tal como hipersomnia que incluye síndrome de Kleine-Levin , insomnia y sonambulismo, espasmos tales como trismo, inconciencia tal como coma, estado vegetativo persistente y sincope y vértigo, enfermedades neuromusculares tales como amiotonia congénita, esclerosis lateral amiotrofica, Síndrome Miastenico de Lambert-Eafon , enfermedad de neurona moíora, afrofia muscular tal como, atrofia muscular espinal, Enfermedad de Charcot-Marie y Enfermedad de Werdnig-Hoffmann , Síndrome Postpoliomelitis, Distrofia Muscular, Miastenia Grave, Miotonia Aírofica, Miotonia Congénita, Miopatía Nemalina, Parálisis Periódica Familiar, Paramiloclonus Múltiple, Paraparesis Espástica Tropical y Síndrome de Stiff-Man , enfermedades del sistema nervioso y periférico tal como acrodinia, neuropatías amiloides, enfermedad del sistema nervioso autónomo íales como Síndrome de Adié, Síndrome de Barre-Lieou, Disauíonomía Familiar, Síndrome de Horner, Dislrofia Simpatéíica Reflex y Síndrome de Shy-Drager, Enfermedades del Nervio Craneal tal como, Enfermedades del Nervio Acústico íal como Neuroma Acúsíica que incluye Neurofibromatosis 2, Enfermedades del Nervio Facial tal como Neuralgia Facial , Síndrome de Melkersson-Rosenthal, padecimientos de movilidad ocular que incluyen ambliopia, nistagmus, parálisis del nervio oculomotor, oftalmoplegia tal como Síndrome de Duane, Síndrome de Horner, Oftalmoplegia Exíerna Progresiva Crónica que incluye Síndrome de Kerns, Estrabismo tal como Esotropía y Exoíropía, Parálisis de Nervio Oculomoíor, Enfermedades del Nervio óptico íal como Aírofia óptica que incluye Atrofia óptica Hereditaria, Disco Drusen Óptico, Neuritis Óptica tal como Neuromelitis Ópíica, Papiledema, Neuralgia Trigeminal , Parálisis de Cuerda Vocal, Enfermedades de Desmielinación tales como Neuromielitis Óptica y Swayback y neuropatías Diabéticas tales como pie diabético. Las enfermedades neurológicas adicionales que pueden ser tratadas o detectadas con las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleóíidos que codifican las proíeínas de fusión de albúmina de la preseníe invención, incluyen síndrome de compresión de nervios tal como síndrome de túnel carpal, síndrome de túnel tarsal , síndrome de salida toráxica íal como síndrome de costilla cervical , síndrome de compresión de nervio ulnar, neuralgia tal como causalgia, neuralgia servico-braquial , neuralgia facial y neuralgia trigeminal, neuritis tal como neuritis alérgica experimental , neuritis óptica, polineurits, poliradiculoneuritis y radiculities tal como poliradiculitis, neuropatías motoras y sensoriales hereditarias fal como Enfermedad de Charcot-Marie, Atrofia Óptica Hereditaria, Enfermedad de Refsum, Paraplegia Espástica Hereditaria y Enfermedad de Werdnig-Hoffmann , Neuropaíías Sensoriales y Auíonomas Hereditarias que incluyen Analgesia Congénita y Disauíonomía Familiar, Síndrome de POEMS, Ciática, Gustatory Sweating y Téfano). Padecimieníos Endocrinos Las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , se pueden uíilizar para fratar, prevenir, diagnosíicar y/o pronosticar enfermedades y/o padecimientos relacionados con el desequilibrio hormonal, y/o padecimientos o enfermedades del sistema endocrino. Las hormonas agregadas por las glándulas del sistema endocrino controlan el crecimiento físico, función sexual, metabolismo y otras funciones. Los padecimientos pueden ser clasificados en dos formas: perturbaciones en la producción de hormonas, y la incapacidad de los tejidos para responder a las hormonas. La etiología de este desequilibrio hormonal o enfermedades del sistema endocrino, padecimientos o condiciones pueden ser genéticas, somáticas, tales como cáncer y algunas enfermedades autoinmune, adquiridas (por ejemplo, por quimioterapia, lesión o toxina), o infecciosas. Además, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se pueden utilizar como un marcador o detector de una enfermedad o padecimiento en particular relacionado con el sistema endocrino y/o desequilibrio hormonal. El desequilibrio del sistema endocrino y/o hormonas y/o enfermedades comprenden padecimientos de motilidad uíerina incluyendo, pero sin limiíarse a: complicaciones con embarazo y labor de parto (por ejemplo, labor de parto premaíuro, embarazo de pos-íérmino, aborío esponíáneo y parto lento o condetensiones); y padecimientos y/o enfermedades del ciclo menstrual (por ejemplo, dismenorrea y endometriosis). Las enfermedades y/o padecimientos del desequilibrio del sistema endocrino y/o hormonal incluyen padecimientos y/o enfermedades del páncreas tales como, por ejemplo, diabetes melitus, diabetes insipidus, angenesis pancreática congénita, síndrome de tumor de célula de isleta-feocromocitoma; padecimientos y/o enfermedades de las glándulas adrenales tales como, por ejemplo, Enfermedad de Addison , deficiencia corticoesteroidal, enfermedad virilizante, hirsutismo, Síndrome de Cushing , hiperaldosteronismo, feocromocitoma; enfermedades y/o padecimientos de la glándula pituiíaria, íales como, por ejemplo, hiperpituiíarismo, hipopiíuitarismo, enanismo por pituiíaria, adenoma de piíuitaria, panhipopituitarismo, acromegalia, gigantismo; padecimientos y/o enfermedades de la tiroides, incluyendo pero sin limitarse a, hipertiroidismo, hipotiroidismo, enfermedad de Plummer, enfermedad de Graves (bocio difuso toxico) bocio nodular íoxico, liroiditis (tiroiditis de Hashimoto, tiroiditis granulomatosa subaguda y íiroiditis linfocítica silente), síndrome de Pendred , mixedema, cretrinismo, tirotoxicosis, defecto de acoplamiento de hormona tiroides, aplasia tímica, tumores de célula de Hurthle de la íiroides, cáncer de tiroides, carcinoma de tiroides, carcinoma de tiroides Medular; padecimientos y/o enfermedades de la paratiroides, tales como, por ejemplo, hiperparatiroidismo, hipoparatiroidismo; padecimientos y/o enfermedades del hipotálamo. Además, las enfermedades y/o padecimientos del desequilibrio del sistema endocrino y/o hormonal también pueden incluir padecimientos y/o enfermedades de los testículos u ovarios, incluyendo cáncer. Otros padecimientos y/o enfermedades de los testículos u ovarios pueden incluir además, por ejemplo, cáncer de ovario, síndrome de ovario poliquístico, síndrome de Klinefelter, síndrome de desaparición de testículos (anorquia bilateral), ausencia congéniía de células de Leydig, cripíorquidismo, síndrome de Noonan, dislrofia mioíonica, hemangioma capilar de los lesíículos (benigno), neóplasias de los festículos y neotestículos. Además, los padecimientos y/o enfermedades del desequilibrio del sistema endocrino y/o hormonas íambién pueden incluir padecimieníos y/o enfermedades tales como, por ejemplo, síndrome de deficiencia poliglandular, feocromocitoma, neuroblastoma, neoplasia Endocrina múltiple y padecimieníos y/o cánceres de íejidos endocrinos. En otra modalidad, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, pueden utilizarse para diagnosíicar, pronosíicar, prevenir y/o íratar enfermedades endocrinas y/o padecimientos asociados con el tejido(s) en donde la proleína Terapéutica que corresponde a la parte de la proteína Terapéutica de la proteína de albúmina de la presente invención se expresa. Padecimieníos del Sisfema Reproductivo Las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, se pueden uíilizar para diagnosíicar, tratar o prevenir las enfermedades y/o padecimientos del sistema reproductor. Los padecimientos del sistema reproducíor que pueden ser tratados mediante las composiciones de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, lesiones del sistema reproductor, infecciones, padecimientos neoplásticos, defectos congénitos y enfermedades o padecimientos que dan como resultado infertilidad , complicaciones en el embarazo, parto, o dificultades en el parto o posparto. Los padecimientos y/o enfermedades del sistema reproductor incluyen pero no se limitan a, padecimientos de los íestículos, incluyendo atrofia testicular, feminización tesíicular, criptoquismo (unilateral y bilateral), anorquia, íesíículos ecíopicos, epididimitis y orquitis (que resultan normalmente de infecciones tales como, por ejemplo, gonorrea, paperas, tuberculosis y sífilis), torsión testicular, nodosa vasitis, tumores de célula germinal (por ejemplo, seminomas, carcinomas de célula embrional, íeracorcinomas, corocarcinomas, íumores de Saco Viíelino y teratomas), tumores estromales, carcinomas, teratocarcinomas, cloriocarcinomas, tumores yolk sac, y íeratomas), íumores estromales (por ejemplo, tumores de célula de Leydig), hidrocelo, matocelo, y varicocelo, espermaíocelo, hernia inguinal y padecimieníos de la producción de espermas (por ejemplo, síndrome de cilia immotile, aspermia, astenozoospermia, azoospermia, oligospermia, y íeratozoospermia). Los padecimieníos del sisíema reproductivo también incluyen padecimientos de la glándula próstata, tal como prostatiíis no bacteriana aguda, prostaíitis no bacíeriana crónica, prostaíitis bacíeriana aguda, prostatitis bacteriana crónica, prostatosdistonia, prosíatosis, prostaíitis granulomatosa, malacoplaquia, hipertrofia o hiperplasia prostática benigna, y padecimientos neoplásticos de próstata, incluyendo adenocarcinomas, carcinomas de célula temporal, carcinomas ductales y carcinomas de célula escamosa. Además, las composiciones de la presente invención pueden ser útiles en el diagnóstico, tratamiento y/o prevención de padecimientos o enfermedades del pene y uretra, incluyendo padecimientos inflamatorios, tales como balanopostitis, balanitis xerótica obliterea, fimosis, parafimosis, sífilis, virus de herpes simple, gonorrea, uretritis no gonococal, clamidia, micoplasma, íricomonas, VI H, SIDA, síndrome de Rieíer, condiloma acuminatum, condiloma latum, y pápulas penil aperladas; anormalidades de la uretra, tales como hipospadias, epispadias y fimosis; lesiones premalignas, incluyendo eritroplasia de enfermedad de Queyrat, enfermedad de Bowen, paplosis Bowenoide, condiloma gigante de Buscke-Lowenstein , y carcinoma varrucoso; cánceres de pene, incluyendo carcinoma de célula escamosa, carcinoma in situ, carcinoma verrucoso, y carcinoma de pene diseminado; padecimientos neoplásticos de la uretra, incluyendo carcinoma de uretra de pene, carcinoma de uretra bulbomembranoso y carcinoma de uretra prosíáíico; y padecimieníos erécíiles, íales como priapismo, padecimienío de Peyronie, disfunción eréctil e impotencia. Además, las enfermedades y/o padecimientos del "vas deferens" (conducto deferente), incluyen vasculitis y CBAVD (ausencia bilateral congénita del vas deferens); además, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se pueden uíilizar en el diagnóstico, tratamiento y/o prevención de enfermedades, y/o padecimientos de las vesículas seminales, incluyendo enfermedad hidátida, diarrea de clórida congénita y enfermedad de riñon poliquístico. Otros padecimientos y/o enfermedades del sistema reproductor masculino incluyen por ejemplo, síndrome de Klinefelter, síndrome de Young, eyaculación prematura, diabetes mellitus, fibrosis quística, síndrome de Kartagener, fiebre alta, esclerosis múltiple, y ginecomasíía. Además, los polinucleótidos, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se pueden utilizar en el diagnóstico, íratamiento y/o prevención de enfermedades y/o padecimientos de la vagina y vulva, incluyendo vaginosis bacteriana, vaginitis candida, virus de herpes simple, chancroide, granuloma inguinal , linfogranuloma venéreo, sarna, papilomavirus humano, trauma vaginal, trauma vulvar, adenosis, vaginitis clamidia, gonorrea, vaginitis tricomonas, condyloma acuminatum , sífilis, molusco contagioso, vaginitis atrófica, enfermedad de Paget, liquen escleroatrófico, liquen plano, vulvodinia, síndrome de ataque tóxico, vaginismo, vulvovaginitis, vestibulitis vulvar y padecimientos neoplásticos, íales como hiperplasia de célula escamosa, carcinoma de célula clara, carcinoma de célula basal, melanomas, cáncer de la glándula de Bartholin, y neoplasia intraepitelial vulvar. Los padecimientos y/o enfermedades del útero, incluyen dismenorrea, útero retrovertido, endometriosis, fibroides, adenomiosis, sangrado anovulatorio, amenorrea, síndrome de Cushing , muelas hidatidiformes, síndrome de Asherman, menopausia prematura, pubertad precoz, pólipos uterinos, sangrado uterino disfuncional (por ejemplo, debido a señales hormonales aberrantes) y padecimientos neoplásticos, tales como adenocarcinomas, quimiosarcomas, y sarcomas. Además, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención pueden ser útiles como un marcador o detector, así como en el diagnóstico, traíamiento y/o prevención de anormalidades uterinas congénitas, tales como útero bicornuato, úfero septato, útero unicornuato simple, ulero unicornuato con un cuerno rudimentario sin cavidad, útero unicornuato con cuerno rudimentario de cavidad sin comunicación, útero unicornuato con cuerno de cavidad de comunicación, útero arqueado, uterino didelfus, y útero en forma de T. Las enfermedades y/o padecimientos de ovarios incluyen anovulación , síndrome de ovario poliquístico (síndrome de Stein-Leventhal), quistes de ovario, hipofunción de ovario, insensibilidad de ovario a gonadotropinas, sobreproducción de ovario de andrógenos, síndrome de vena de ovario derecho, amenorrea, hirutismo y cáncer de ovario (incluyendo pero sin limiíarse a, crecimiento cancerígeno primario y secundario, tumores de Sertoli-Leydig, carcinoma endometrioide del ovario, adenocarcinoma seroso papilar de ovario, adenocarcinoma mucinoso de ovario y tumores ovarianos de Krukenberg). Las enfermedades y/o padecimientos cervicales incluyen cervicitis, cervicitis crónica, cervicitis mucopurulenta, displasia cervical, pólipos cervicales, quistes de Naboíhian , erosión cervical, incompelencia cervical , y neoplasmas cervicales (incluyendo, por ejemplo, carcinoma cervical, meíaplasia escamosa, carcinoma de célula escamosa, neoplasia de célula adenoescamosa y neoplasia de célula columnar). Además, las enfermedades y/o padecimieníos del sisíema reproducíor incluyen padecimieníos y/o enfermedades de embarazo, incluyendo aborto y parto de niño muerto, tal como aborto femprano, aborto tardío, aborto espontáneo, aborto inducido, aborto terapéuíico, aborto tratado, aborto fallado, aborto incompleto, aborto compleío, aborío habiíual, aborío fallado, y aborto séptico; embarazo ectópico, anemia, incompatibilidad de Rh, sangrado vaginal duraníe embarazo, diabetes gestacional, reíardo de crecimiento intrauterino, polihidramnios, síndrome de H ELLP, placenta abrupla, plácenla previa, hiperemesis, preeclamsia, eclamsia, herpes gesíaíionis, y urticaria de embarazo. Además, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención se pueden utilizar en el diagnóstico, tratamiento y/o prevención de enfermedades que pueden complicar el embarazo, incluyendo enfermedad del corazón, falla cardíaca, enfermedad cardíaca reumática, enfermedad cardíaca congénita, prolapso de válvula mitral , alta presión sanguínea, anemia, enfermedad renal, enfermedad infecciosa (por ejemplo rubéola, ciíomegalovirus, íoxoplasmosis, hepatitis infecciosa, clamidia, VI H , SI DA y herpes genital), diabetes mellitus, enfermedad de Grave, tiroiditis, hipotiroldismo, tiroiditis de Hashimoto, hepatiíis activa clínica, cirrosis del hígado, cirrosis biliar primaria, asma, lupus eritematoso sistémico, artriíis reumatoide, miastenia grave, púrpura trombociíopénica idiopática, apendicitis, quistes de ovario, padecimientos de vejiga irriíada y obstrucción del intestino. Las complicaciones asociadas con labor de parto y parto, incluyen ruptura prematura de las membranas, trabajo de parto prematuro, embarazo de post-íérmino, post-madurez, trabajo de parlo que progresa en forma demasiado lenta, distensión fetal (por ejemplo, frecuencia cardíaca normal (fetal o materna), problemas respiratorios y posición fetal anormal), distocia de hombros, cordón umbilical prolapsado, embolia de fluido amniótico y sangrado uterino aberrante. Además, las enfermedades y/o padecimientos del período posterior al suministro, incluyendo endometriosis, miomeíriíis, parameíriíis, peritonitis, tromboflebitis pélvica, embolia pulmonar, endotoxemia, pielonefritis, tromboflebitis safenosa, mastitis, cistitis, hemorragia post-parto y útero invertido. Otros padecimientos y/o enfermedades del sistema reproductor femenino que pueden ser diagnosticados, tratadas y/o prevenidas a través de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, incluyen por ejemplo, síndrome de Turner, pseudo-hermafroditismo, síndrome premenstrual, enfermedad inflamatoria pélvica, congestión pélvica (congestión vascular), frigidez, anorgasmia, dispareunia, tubo de falopio rupturado y Mittelschmerz. Enfermedad I nfecciosa. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , se pueden utilizar para íraíar o delectar agentes infecciosos. Por ejemplo, al incrementar la respuesta inmune, incrementando particularmente la proliferación o diferenciación de células B y/o T, se pueden tratar enfermedades infecciosas. La respuesta inmune puede ser incrementada mediante ya sea aumentando una respuesta inmune existeníe, o iniciando una nueva respuesta inmune. Como alternativa, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, también pueden inhibir directamente el agente infeccioso, sin provocar necesariamente una respuesía inmune. Los virus son un ejemplo de un agenle infeccioso que puede originar enfermedad o síntomas que pueden ser tratados o detecíados medianíe las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención . Los ejemplos de virus incluyen pero no se limitan a, virus de ADN y ARN , y familias virales: Arbovirus, Adenoviridae, Arenaviridae, Arterivirus, Birnaviridae, Bunyaviridae, Caliciviridae, Circoviridae, Coronaviridae, Dengue, EBV, H IV, Flaviviridae, Hepadnaviridae (Hepatitis), Herpesviridae (tal como, Citomegalovirus, Herpes Simple, Herpes Zosíer), Mononegavirus (por ejemplo, Paramyxoviridae, Morbillivirus, Rhabdoviridae), Oríhomyxoviridae (por ejemplo, influenza A, influenza B, y parainfluenza), virus de papiloma, Papovaviridae, Parvoviridae, Picornaviridae, Poxviridae (tal como, viruela ó Vacuna), Reoviridae (por ejemplo, Rotavirus), Retroviridae (HTLV-I , HTLV-I I , Lentivirus), y Togaviridae (por ejemplo, Robivirus). Los virus que están dentro de estas familias pueden originar una variedad de enfermedades o síntomas, incluyendo pero sin limitarse a: artritis, bronquiolitis, virus sincitial respiratorio, encefalitis, infecciones oculares (por ejemplo, conjuntivitis, queratitis), síndrome de fatiga crónica, hepatitis (Activa Crónica, delta, A, B, C, E), encefalitis japonesa B, Junin, Chicongunia, fiebre Rift Valey, fiebre amarilla, meningitis, infecciones oportunisías (por ejemplo, SI DA), neumonía, linfoma de Burkitt, virus de "chickenpox", fiebre hemorrágica, varicela, paperas, parainfluenza, rabias, el resfriado común , polio, leucemia, rubéola, enfermedades transmitidas sexualmente, enfermedades de la piel (por ejemplo, Kaposi , verrugas), y viremia. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se pueden utilizar para fratar o deíectar cualesquiera de esíos síníomas o enfermedades. En modalidades específicas, las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención se utilizan para tratar: meningitis, dengue, EBV y/o hepaíitis (por ejemplo, hepatitis B). En una modalidad específica adicional , las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención se utilizan para tratar pacientes que no responden a una o más de oirás vacunas de hepaíitis disponibles comercialmente. En una modalidad específica adicional , las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan para tratar SI DA. En forma similar, los agentes bacterianos y fungióos que pueden originar enfermedad o síntomas y que pueden ser tratados o detecíados medíanle las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, incluyen pero no se limitan a, las siguientes bacteria Gram-negativa y Gram-positiva, familias bacterianas y hongos: Actinomyces (por ejemplo, Norcardia), Acinetobacíer, Cryptococcus neoformans, Aspergillus, Bacillaceae (por ejemplo, Bacillus anthrasis), Bacteroides (por ejemplo, Bacteroides fragilis), Blastomycosis, Bordetella, Borrelia (por ejemplo, Borrelia burgdorferi) , Brucella, Candidia, Campylobacter, Chlamydia, Closíridium (por ejemplo, Clostridium botulinum, Clostridium dificile, Clostridium perfringens, Clostridium tetani), Coccidioides, Corynebacterium (por ejemplo, Corynebacterium diptheriae), Cryptococcus, Dermaíocycoses, E. coli (por ejemplo, Enferotoxigene E. coli y Eníerohemorrhagic E. coli), Eníerobacíer (por ejemplo, Enterobacter aerogenes), Eníerobacteriaceae (Klebsiella, Salmonella (por ejemplo, Salmonella typhi, Salmonella enteritidis, Salmonella typhi), Serratia, Yersinia, Shigella), Erysipelothrix, Haemophilus (por ejemplo, Haemophilus influenzae tipo B), Helicobacter, Legionella (por ejemplo, Legionella pneumophila), Lepíospira, Lisíeria (por ejemplo, Listeria monocytogenes), Mycoplasma, Mycobacíerium (por ejemplo, Mycobacterium leprae y Mycobacterium tuberculosis), Vibrio (por ejemplo, Vibrio cholerae), Neisseriaceae (por ejemplo, Neisseria gonorrhea, Neisseria meningitidis), Pasíeurellacea, Profeus, Pseudomonas (por ejemplo, Pseudomonas aeruginosa), Rickeíísiaceae, Spirochetes (por ejemplo, especie Treponema, especie Lepíospira, especie Borrelia), especie Shigella, Staphylococcus (por ejemplo, Staphylococcus aureus), Meningiococcus, Pneumococcus y Streptococcus (por ejemplo, Streptococcus pneumoniae y Grupos Streptococci A, B, y C), y Ureaplasmas. Esías familias bacterianas, de parásitos y de hongos pueden originar enfermedades o síntomas, que incluyen pero no se limitan a: infecciones resistentes a antibióticos, bacteremia, endocardiíis, septicemia, infecciones oculares (por ejemplo, conjuntivitis, uveítis, tuberculosis, gingivitis, diarrea bacíeriana, infecciones oportunisías (por ejemplo, infecciones relacionadas con SI DA), paroniquia, infecciones relacionadas con prótesis, caries dental , enfermedad de Reiter, infecciones del íracfo respiraíorio íales como Tos Whopping o Empiema, sepsis, enfermedad de Lyme, enfermedad de Caí-Scratch, disentería, fiebre paraíifoidea, envenenamienío de alimeníos, enfermedad de Legionella, inflamación crónica y aguda, eriíema, infecciones de levadura, tifoidea, neumonía, gonorrea, meningitis (por ejemplo, meningitis íipos A y B), clamidia, sífilis, difíeria, lepra, brucelosis, úlceras pépticas, ántrax, abortos esponíáneos, defectos de nacimiento, neumonía, infecciones de pulmones, infecciones de oídos, sordera, ceguera, letargía, malesíar general, vómiío, diarrea crónica, enfermedad de Crohn, colitis, vaginosís, esterilidad, enfermedades inflamatorias pélvicas, candidiasís, paratuberculosis, íuberculosis, lupus, boíulismo, gangrena, íétano, impétigo, fiebre reumáíica, fiebre escarlata, enfermedades transmitidas sexualmente, enfermedades de la piel (por ejemplo, celulitis, dermaíocicoses), foxemia, infecciones del tracto urinario, infecciones de curación , infecciones noscomiales. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se pueden uíilizar para tratar o deíecíar cualesquiera de estos síntomas o enfermedades. En modalidades específicas, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención se utilizan para tratar: téíano, difteria, botulismo y/o meningiíis íipo B. Además, los ageníes parasíticos que originan enfermedades o síntomas que pueden ser tratadas, prevenidas y/o diagnosticadas mediante las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la preseníe invención , incluyen pero no se limiían a, las siguientes familias o clases: Amebiasis, Babesiosis, Coccidiosis, Cryptosporidosis, Dieníamoebiasis, Dourine, Ectoparasitic, Giardias, Helminthiasis, Leishmaniasis, Schistisoma, Theileriasis, Toxoplasmosis, Trypanosomiasis, y Trichomonas y Sporozoans (por ejemplo, Plasmodium virax, Plasmodium falciparium, Plasmodium malariae y Plasmodium ovale). Estos parásitos pueden originar una variedad de enfermedades o síntomas, incluyendo pero sin limitarse a: Sarna, Trombiculiasis, infecciones oculares, enfermedades intesíinales (por ejemplo, diseníería, giardiasis), enfermedad hepática, enfermedad de pulmón , infecciones oporíunistas (relacionadas con SI DA), malaria, complicaciones de embarazo y loxoplasmosis. Las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se pueden uíilizar para tratar, prevenir, y/o diagnosticar cualesquiera de estos síníomas o enfermedades. En modalidades específicas, las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se utilizan para íratar, prevenir y/o diagnosticar malaria. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , pueden ser ya sea mediante la administración de una cantidad efectiva de la proteína de fusión de albúmina de la preseníe invención al paciente, o eliminando células del paciente, suminislrando las células con un polinucleóíido de la presente invención, y regresando las células construidas al paciente (terapia ex vivo). Además, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se pueden uíilizar como un anlígeno en una vacuna para elevar una respuesía inmune coníra enfermedad infecciosa. Regeneración Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la preseníe invención , se pueden uíilizar para diferenciar, proliferar y atraer células, que conducen a la regeneración de tejidos (ver la Publicación Science 276:59-87 (1 997)). La regeneración de tejidos puede utilizarse para reparar, reemplazar o protegido el tejido dañado por efectos congénitos, trauma (heridas, quemaduras, incisiones o úlceras), edad, enfermedad (por ejemplo, osíeoporosls, osíeoarlriíis, enfermedad periodontal, falla hepática, cirugía, incluyendo cirugía plástica cosméíica, fibrosis, lesión por reperfusión o daño de citocina sistémico). Los tejidos que pueden ser regenerados utilizando la presente invención , incluyen tejidos de órganos (por ejemplo, páncreas, hígado, inlestino, riñon , piel, endotelio) de músculos (liso, esqueléíico, o cardíaco), de vasculatura (incluyendo vascular y linfáticos), de nervios, hematopoiéíico, y esquelético (huesos, cartílagos, tendones y ligameníos). Preferentemeníe, la regeneración ocurre sin o con una cicatrización disminuida. La regeneración también puede incluir angiogénesis. Además, las proteínas de fusión de albúmina de la presente Invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, pueden incrementar la regeneración de tejidos difíciles de sanar. Por ejemplo, la regeneración de tendón/ligamento incrementada puede agilizar el tiempo de recuperación después del daño. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, también se podrán uíilizar de manera profiláctica en un esfuerzo para evitar el daño. Las enfermedades específicas que pueden ser tratadas incluyen tendonitis, síndrome de túnel carpal, y oíros defectos de tendones o ligamentos. Un ejemplo adicional de regeneración de tejido de heridas que no se curan , incluyen úlceras de presión, úlceras asociadas con insuficiencia vascular, heridas quirúrgicas y traumáticas. En forma similar, el tejido de nervios y cerebro también puede ser regenerado utilizando las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleóíidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, para proliferar y diferenciar células de nervios. Las enfermedades que pueden ser tratadas utilizando este método incluyen enfermedades del sistema nervioso central y periférico, neuropatías o padecimientos mecánicos y íraumáticos (por ejemplo, padecimientos de la espinal dorsal, trauma de cabeza, enfermedad cerebrovascular y ataques). De manera específicas, las enfermedades asociadas con lesiones de nervios periféricos, neuropatía periférica (por ejemplo, que resulte de quimioterapia y otras terapias médicas), neuropatías localizadas y enfermedades del sistema nervioso central (por ejemplo, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de H untingíon, esclerosis lateral amiotrófica y síndrome de Shy-Drager), pueden ser tratadas utilizando las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la preseníe invención . Padecimieníos gasíroiníestinales Las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se pueden utilizar para tratar, prevenir, diagnosticar, y/o pronosticar padecimientos gastrointestinales, incluyendo enfermedades y/o condiciones inflamatorias, infecciones, cánceres (por ejemplo neoplasmas intestinales (tumor carcinoide del intestino delgado, linfoma de no Hodgkin del intestino delgado, linfomas de intesíino delgado)) y úlceras, íales como úlceras pépticas. Los padecimientos gastroiníesíinales incluyen disfagia, odinofagia, inflamación del esófago, esofagitis péptica, reflujo gástrico, fibrosis submucosal y de estructuración , lesiones de Mallory-Weiss, leiomiomas, lipomas, cánceres epidérmicos, adenocarcinomas, padecimientos de retención gástrica, gastroenteritis, atrofia gástrica, cánceres gástricos/esíomacales, pólipos de estómago, padecimientos autoinmunes tales como anemia perniciosa, estenosis pilórica, gastritis (bacteriana, viral, eosinofílica, inducida por tensión , erosiva crónica, aírófica, célula de plasma y de Ménétrier), y enfermedades peritoneales (por ejemplo, quiloperineo, hemoperitoneo, quiste mesentérico, linfadenitis mesentérica, oclusión vascular mesentérica, paniculiíis, neoplasmas, periíoniíis, neumoperifoneo, absceso bubfrénico).

Los padecimientos gastroiníestinales íambién incluyen padecimientos asociados con el intestino delgado, tales como síndromes de mala absorción , distensión , síndrome de intestino irritable, intolerancia al azúcar, enfermedad celíaca, úlceras duodenales, duodeniíis, sprue íropical, enfermedad de Whipple, linfangiecíasia iníesíinal, enfermedad de Crohn , apendicitis, obstrucciones del íleo, divertículo de Meckel, diverfícula múltiple, falla de rotación completa de iníesíino grueso y delgado, linfoma y enfermedades bacíerianas y parasíticas (tal como diarrea de Traveler, tifoidea y paratifoidea, cólera, infección por ascárides (Ascariasis lumbricoides), anquilostomas (Ancylostoma duodenale), Ascárides (Enterobius vermicularis), Solitarias ( Taenia saginata, Echinococcus granulosus, especies Diphyllobothrium, y T. solium).

Las enfermedades y/o padecimientos hepáticos incluyen colestasis inírahepática (síndrome de alaguille, cirrosis de hígado biliar), hígado grasoso (hígado grasoso por alcoholismo, síndrome de reye), trombosis de vena hepática, degeneración hepatolentricular, hepatomegalia, síndrome hepatopulmonar, síndrome hepatorrenal, hipertensión portal (várices esofageales y gástricas), abscesos del hígado (abscesos de hígado amébico), cirrosis hepática (alcohólica, biliar, y experimeníal), enfermedades hepáticas por alcoholismo (hígado grasos, hepatiíis, cirrosis), parásiíos (equinococcosis hepáíica, fascioliasis, absceso de hígado amébico), ictericia (hemolítico, hepatocelular y colestático), colestasis, hipertensión portal, agrandamiento de h ígado, ascitos, hepaíitis (hepatitis por alcoholismo, hepatiíis animal, hepatiíis crónica (auíoinmune, hepaíilis B, hepaíitis C, hepatitis D, inducida por fármacos), hepatitis biliar, hepatitis humana viral (hepatitis A, hepaíitis B, hepatiíis C, hepaíitis D, hepatitis E), enfermedad de Wilson , hepatitis granulomaíosa, cirrosis biliar secundaria, encefalopatía hepática, hiperíensión portal , várices, encefalopatía hepática, cirrosis biliar primaria, colangitis esclerosante primaria, adenoma hepaíocelular, hemangiomas, piedras biliares, falla hepática (encefalopatía hepática, falla de h ígado agudo), y neoplasmas hepáticos (angiomiolipoma, metástasis de hígado calcificadas, meíásíasis de hígado quístico, tumores epiteliales, hepatocarcinoma fibroiamelar, hiperplasia nodular focal, adenoma hepático, cistadenoma hepatobiliar, hepatoblastoma, carcinoma hepatocelular, hepatoma, cáncer de hígado, hemangioendotelioma hepáíico, hamaríoma mesenquimal , íumores mesenquimales de hígado, hiperplasia regenerativa nodular, tumores hepáticos benignos (Quistes hepáticos [Quistes simples, Enfermedad hepática poliquística, Cistadenoma hepatobiliar, Quisíe coledocal], Tumores mesenquimales [Hamaríoma mesenquimal, Hemangioendofelioma infantil, Hemangioma, Hepatitis peliosis, Lipomas, Pseudo-tumor inflamatorio, Misceláneos], Tumores epiteliales [Epitelio de ducto biliar (Hamarfoma de ducto biliar, Adenoma de ducto biliar), Hepatocito (Adenoma, Hiperplasia nodular focal), Hiperplasia regenerativa nodular)], tumores hepáticos malignos [hepatocelular, hepatoblastoma, carcinoma hepatocelular, colangiocelular, colangiocarcinoma, quistadenocarcinoma, tumores de vasos sanguíneos, angiosarcoma, sarcoma de Kaposi , hemangioendoíelioma, otros tumores, sarcoma embrional , fibrosarcoma, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinosarcoma, teratoma, carcinoide, carcinoma escamoso, linfoma primario], hepatitis peliosis, porfiria eritrohepática, porfiria hepáíica (porfiria iníermiíente aguda, porfiria cutánea tarda), síndrome de Zellweger). Las enfermedades y/o padecimientos pancreáticos incluyen pancreaíitis aguda, pancreatitis crónica (pancreatitis necrotizante aguda, pancreatitis por alcoholismo), neoplasmas (adenocarcinoma del páncreas, quistadenocarcinoma, insulinoma, gastrinoma y glucagonoma, neoplasmas quísticos, tumores de célula isleto, pancreoblastomas), y oirás enfermedades pancreálicas (por ejemplo, fibrosis quística, quiste (pseudoquiste pancreático, fístula pancreática, insuficiencia)). Enfermedades de vejiga irritada que incluyen piedras irritantes (colelitiasis y coledocolitiasis), síndrome de pestcolecistectomía, diverticulosis de vejiga irritada, colecistitis aguda, colecistitis crónica, tumores de ducto biliar y mucocelo. Enfermedades y/o padecimientos del intestino grueso incluyen colitis asociada con aníibióíicos, diverticuliíis, colitis ulcerativa, megacolon adquirido, abscesos, infecciones fúngicas y bacterianas, padecimientos anorrectales (por ejemplo, fisuras, hemorroides), enfermedades colónicas (por ejemplo, colitis, neoplasmas colónicos [cáncer de colon , pólipos de colon adenomatosos (por ejemplo, adenoma villous), carcinoma de colon , cáncer colorrectal], diverticuliíis colónica, diverticulosis colónica, megacolon [enfermedad de Hirschsprung, megacolon tóxico]; enfermedades signoides [proctocoliíis, neoplasmas sigmoin]), constipación, enfermedad de Crohn , diarrea (diarrea infantil, disentería), enfermedades duodenales (neoplasmas duodenales, obstrucción duodenal, úlcera duodenal , duodenitis), enteritis (enterocolitis), enteropafía por VI H , enfermedades ¡leales (neoplasmas ¡leales, ileítis), enfermedad de intestino delgado inmunoproliferativa, enfermedad de intestino inflamatorio (colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn), atresia intestinal , enfermedades de parásitos (anisaquiasis, balantidiasis, infecciones por blastocisfis, criptosporidiosis, dienlamoebiasis, diseníería amédica, giardiasis), físíula iníestinal (físíula recial), neoplasmas intestinales (neoplasmas fecales, neoplasmas colónicos, neoplasmas duodenales, neoplasmas ¡leales, pólipos intestinales, neoplasmas jejunales, neoplasmas rectales), obstrucción intestinal (síndrome de lazo aferente, obstrucción duodenal, heces impactadas, peuso-obstrucción iníestinal [cecal volvulus], infususcepción), perforación intestinal, pólipos intestinales (pólipos colónicos, síndrome de Gardner, síndrome de peutz-jeghers), enfermedades jejunales (neoplasmas jejunal), síndromes de mala absorción (síndrome de lazo ciego, enfermedad celíaca, intolerancia a la lactosa, síndrome de iníestino corío, esprúe íropical, enfermedad de Whipple), oclusión vascular mesenlérica, iníesíinalis cisíoides neumatosis, enteropatías de pérdida de proteína (linfagiectasis iníestinal), enfermedades rectales (enfermedades del ano, incontinencia fecal, hemorroides, proctitis, fístula recial, prolapso recial, recíocelo), úlcera péptica (úlcera duodenal, esofagitis pépíica, hemorragia, proliferación, úlcera de estómago, síndrome de Zollinger-Ellison), síndromes de post-gastrectomía (síndrome de vaciamiento rápido), enfermedades estomacales (por ejemplo, aclorhidria, reflujo duodenogástrico (reflujo biliar), ectasia vascular antral gástrica, fístula gásírica, obstrucción de salida gástrica, gastritis (atrófica o hipertrófica), gastroparesis, dilaíación estomacal , divertículo estomacal, neoplasmas esfomacales (cáncer gástrico, pólipos gástricos, adenocarcinoma gástrico, pólipo gástrico hiperplástico), ruptura estomacal , úlcera estomacal , vólvulo esíomacal), tuberculosis, visceroptosis, vómiío (por ejemplo, hemaíemesis, hiperemesis gravidarum, náusea posí-operaíiva y vómito) y colitis hemorrágica.

Las enfermedades y/o padecimientos adicionales del sistema gastrointestinal incluyen enfermedades del tracío biliar, tales como gastrosquisis, fístula (por ejemplo, físfula biliar, fístula esofageal, fístula gástrica, fístula intestinal , fístula pancreática), neoplasmas (por ejemplo, neoplasmas del tracto biliar, neoplasmas esofageales, tales como adenocarcinoma del esófago, carcinoma de célula escamosa esofageal , neoplasmas gastrointesíinales, neoplasmas pancreáticos tales como adenocarcinoma del páncreas, neoplasma quístico mucino del páncreas, neoplasmas quísticos pancreáticos, pancreoblastoma, y neoplasmas perifonéales), enfermedad esofageal (por ejemplo, enfermedades ampollosas, candidiasis, acantosis glucogénica, ulceración , várices del esófago de Barretí, atresia, quistes, diveríículo (por ejemplo, diverlículo de Zenker), fístula (por ejemplo, fístula traqueoesofageal), padecimientos de movilidad (por ejemplo, síndrome de CREST, padecimientos de deglutición , acalasia, espasmo, reflujo gastroesofageal), neoplasmas, perforación (por ejemplo síndrome de Boerhaave, síndrome de Mallory-Weiss), estenosis, esofagitis, hernia diafragmática (por ejemplo, hernia hiaíal); enfermedades gasíroiníestinales tales como gastroenteritis (por ejemplo, cólera morbus, infección de virus Norwalk), hemorragia (por ejemplo, hematemesis, melena, hemorragia de úlcera péptica), endoplasmas estomacales (cáncer gástrico, pólipos gástricos, adenocarcinoma gástrico, cáncer de esfómago), hernia (por ejemplo , hernia diafragmática congéniía, hernia femoral, hernia inguinal , hernia obíuradora, hernia umbilical , hernia veníral), y enfermedades inlesíinales (por ejemplo, enfermedades cecales (apendicitis, neoplasmas cecales)). Quimiotaxis Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , pueden tener acíividad de quimiotaxis. Una molécula quimiotáxica atrae o moviliza células (por ejemplo, monocitos, fibroblastos, neutrófilos, células-T, células mástil , eosinófilos, células epiteliales y/o endoteliales) a un sitio particular en el cuerpo, tal como inflamación, infección o sitio de hiperproliferación. Las células movilizadas posíeriormeníe pueden combaíir y/o curar el trauma o anormalidad en particular. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, pueden incremeníar la acíividad quimioíáxica de células particulares. Esías moléculas quimioíácticas se pueden utilizar posteriormeníe para traíar inflamación , infección, padecimientos hiperproliferativos o cualquier padecimiento del sistema inmune, incrementando el número de células dirigidas a un lugar en particular en el cuerpo. Por ejemplo, las moléculas quimiotácíicas se pueden utilizar para tratar heridas y otros íraumas de tejidos, atrayendo células inmunes al lugar lesionado. Las moléculas quimiotácíicas de la presenfe invención, también pueden atraer fibroblastos, los cuales se pueden utilizar para traíar heridas. También se coníempla que las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, pueden inhibir la actividad quimiotácíica. Estas moléculas pueden utilizarse también para tratar padecimientos. Por lo tanto, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención, se pueden utilizar como un inhibidor de quimiotaxis. Actividad de Enlace Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , se pueden utilizar para clasificar las moléculas que enlazan a la parte de proteína Terapéuíica de la proíeína de fusión o para moléculas a las cuales la parte de la proteína Terapéutica de la proleína de fusión se enlaza. El enlace de la proteína de fusión y la molécula puede activar (agonista), incrementar, inhibir (antagonista) o disminuir la actividad de la proteína de fusión o la molécula enlazada. Los ejemplos de dichas moléculas incluyen anticuerpos, oligonucleóíidos, proíeínas (por ejemplo, recepíores) o moléculas pequeñas. Preferentemeníe, la molécula esíá relacionada cercanameníe con el ligando natural de la parte de proteína Terapéutica de la proteína de fusión de la presente invención , por ejemplo, un fragmento de ligando, un substrato natural, un ligando, un mimético estructural o funcional. (Ver la Publicación de Coligan y Asociados, Current Protocols ¡n Immunology 1 (2): Capííulo 5 (1991 )). En forma similar, la molécula puede relacionarse en forma cercana con el receptor natural al cual enlaza la parte de la proteína Terapéutica de la proteína de fusión de albúmina de la presente invención , o al menos, un fragmento del receptor con la capacidad de ser enlazada por la parte de la proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención (por ejemplo, sitio activo). En cualquier caso, la molécula puede ser diseñada en forma racional utilizando técnicas conocidas. Preferentemente, la clasificación de estas moléculas comprende la producción de células adecuadas que expresan las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención . Las células preferidas incluyen células de mamíferos, levadura, Drosofila ó E. coli. El ensayo puede probar simplemente el enlace de un compuesto candidato a una proteína de fusión de albúmina de la presente invención , en donde el enlace es detecíado por una etiqueta, o en un ensayo que comprende competición con un competidor etiquetado. Además, el ensayo puede probar si el compuesto candidato da como resulíado una señal generada enlazando a la proíeína de fusión. Como allernativa, el ensayo se puede llevar a cabo utilizando preparaciones libres de células, proíeína/molécula de fusión fijas a un soporte sólido, bibliotecas químicas o mezclas de producios naturales. El ensayo también puede comprender simplemeníe los pasos de mezclar un compuesto candidato con una solución que contiene una proteína de fusión de albúmina, medir la actividad o enlace de la proteína/molécula de fusión, y comparar la actividad o enlace de la proteína y/o molécula de fusión a un estándar. Preferentemente, un ensayo ELISA puede medir el nivel de proteína de fusión o actividad en una muestra (por ejemplo, muestra biológica) uíilizando un anticuerpo monoclonal o policlonal . El anticuerpo puede medir el nivel de proteína de fusión o la actividad ya sea enlazando, directa o indirecfamente, a la proleína de fusión de albúmina o compitiendo con la proteína de fusión de albúmina para un substrato. Además, el receptor al cual enlaza la parte de la proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención , puede ser identificado a través de diversos métodos conocidos por los expertos en la técnica, por ejemplo, uso de placas plásticas o superficies cubiertas con antígenos o anticuerpos para separar o seleccionar células particulares con receptores adecuados "panning" el ligando y clasificación FACS (Coligan y Asociados, Current Protocols in I mmun. 1 (2), Capítulo 5, (1991 )). Por ejemplo, en casos en donde la parte de la proteína Terapéutica de la proteína de fusión corresponde a FGF, se puede emplear clonación de expresión en donde, el ARN poliadenilado se prepara a partir de una célula que responde a la proteína de fusión de albúmina, por ejemplo, células N I H3T3, las cuales son conocidas por contener receptores múltiples para las proteínas de la familia FGF, y células SC-3, y una biblioteca de cADN creada a partir de este ARN se divide en grupos y se utiliza para transfecíar COS u ofras células que no responden a la proíeína de fusión de albúmina. Las células íransfecíadas que se crecen en correderas de vidrio se exponen a la proteína de fusión de albúmina de la presente invención , después de haber sido etiquetadas. Las proteínas de fusión de albúmina se pueden etiquetar a través de una variedad de medios incluyendo yodinación o inclusión de un siíio de reconocimienío para una cinasa de proíeína específica del sitio. Después de la fijación e incubación, las correderas se someten a análisis auto-radiográfico. Los grupos positivos se identifican y los subgrupos se preparan y se transfectan nuevamente uíilizando un proceso de subagrupación y reclasificación interacíivo, que produce eveníualmente clones simples que codifican el receptor putativo. Como un méíodo alíernaíivo para identificación de receptor, una proteína de fusión de albúmina etiquetada puede ser enlazada por fotoafinidad con la membrana celular o extraer preparaciones que expresan la molécula receptora del componente de la proteína Terapéutica de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención , el material enlazado puede ser resuelto mediante análisis PAGE y expuesto a película de rayos-X. El complejo etiquetado que contiene los receptores de la proíeína de fusión puede ser cortado, resuelto en fragmentos de péptidos y someíido a microsecuenciación de proíeína. La secuencia de aminoácido obíenida de la microsecuenciación puede uíilizarse para diseñar un grupo de sondas de oligonucleótido de degeneración para clasificar una biblioteca de cADN para ideníificar los genes que codifican los recepíores puíativos. Además, las técnicas de mezclar-genes, mezclar-moíivos, mezclar-exones, y/o mezclar-codones (referidos colecíivameníe como "mezcla de ADN"), se pueden emplear para modular las actividades de la proíeína de fusión, y/o la parte de proteína terapéuíica o componeníe de albúmina de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención , generando efectivamente de esta forma agonistas y antagonistas de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención . Ver generalmente, las Patentes Norteamericanas Nos. 5,605,793; 5, 81 1 ,238; 5,830,721 ; 5,834,252, y 5,837,458, y las Publicaciones Patten, P. A., y Asociados, Curr. Opinión Biotechnol. 8:724-33 (1997); Harayama, S. Trends Biotechnol. 16(2):76-82 (1998); Hansson , L. O. , y Asociados, J. Mol. Biol. 287:265-76 (1999); y Lorenzo M. M . y Blasco, R. Biotechniques 24(2):308-13 (1998); cada una de esías paíentes y publicaciones están incorporadas a la presente invención como referencia). En una modalidad , la alteración de los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , y por lo íanto, las proteínas de fusión de albúmina codificadas de esía forma, se puede lograr mediante mezclado de ADN , el mezclado de ADN comprende el ensamble de dos o más segmentos de ADN en una molécula deseada mediante recombinación homologa, o específica del sitio. En otra modalidad, los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, y por lo tanto, las proteínas de fusión de albúmina codificadas de esla forma, se pueden alterar siendo sometidas a muíagénesis aleatoria mediante PCR propenso a error, inserción de nucleótidos aleatoria, u oíros méíodos antes de la recombinación . En otra modalidad , se pueden recombinar uno o más componentes, motivos, secciones, partes, dominios, fragmentos, etc. de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, con uno o más componentes, motivos, excepciones, partes, dominios, fragmentos, etc. , de una o más moléculas heterólogas. En modalidades preferidas, las moléculas heterólogas son miembros de familia. En modalidades preferidas adicionales, la molécula heteróloga es un factor de crecimiento tal como, por ejemplo, factor de crecimiento derivado de plaqueta (PDGF), factor de crecimiento tipo insulina (IGF-I), factor de transformación de crecimiento (TGF)-alfa, factor de crecimiento epidérmico (EGF), factor de crecimiento de fibroblasto (FGF), TGF-beta, proíeína morfogenéíica de huesos (BMP)-2, BM P-4, BMP-5, BM P-6, acíivinas A y B, decapentaplegic(dpp), 60A, OP-2, dorsalina, factores de diferenciación de crecimiento (GDFs), nodal, MIS, inhibina-alfa, TGF-beta 1 , TGF-beía2, TGF-beta3 , TGF-beía5, y facíor neuroírófico derivado de glial (GDN F). Otros fragmentos preferidos son fragmentos biológicamente activos de la parte de proteína Terapéutica y/o componente de albúmina de las proíeínas de fusión de albúmina de la preseníe invención . Los fragmentos biológicamente activos son aquéllos que exhiben actividad similar, pero no necesariamente idéntica, a una actividad de una parte de proteína Terapéutica y/o componente de albúmina de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención. La actividad biológica o los fragmentos pueden incluir una acíividad deseada mejorada, una acíividad no deseada disminuida. Además, la presente invención proporciona un método para clasificar compuesíos para ideníificar aquéllos que modulan la acción de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención . Como ejemplo, de dicho ensayo que comprende la combinación de una célula de fibroblasto de mamífero, una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, y el compuesto que será clasificado y la timidina 3[H] bajo condiciones de cultivo celular, en donde la célula de fibroblasto podría proliferar normalmente. U n ensayo de control puede llevarse a cabo en la ausencia del compuesío que será clasificado y comparado con la cantidad de proliferación de fibroblasto en la presencia del compuesto para determinar si el compuesto estimula la proliferación, determinando la captación de timidina 3[H] en cada caso. La cantidad de proliferación de fibra de fibroblastos se mide mediante cromaíografía de centelleo líquido, que mide la incorporación de timidina 3[H]. Los compuesíos íanto agonistas como antagonistas pueden ser identificados a través de este procedimiento. En oíro método, se incuba una preparación de célula o membrana de mamífero que expresa un receptor para el componente de proteína Terapéutica de una proteína de fusión de la presente invención, con una proteína de fusión eliqueíada en la preseníe invención en la presencia del compuesío. La capacidad del compuesto para aumeníar o bloquear esía interacción posteriormente puede ser medida. Como alternafiva, se mide la respuesta de un segundo sistema mensajero después de la interacción de un compuesío que será clasificado y el recepíor, en la capacidad del compuesto para enlazar al receptor y provocar una segunda respuesía mensajera se mide para deíerminar si el compuesío es una proíeína de fusión poíencial. Dichos segundos sistemas mensajeros incluyen pero no se limitan a, ciclasa de guanilato cAMP, canales de ¡on e hidrólisis de fosfoinositida. Todos los ensayos anteriores, se pueden utilizar como marcadores de diagnóstico o pronóstico. Las moléculas descubierías utilizando estos ensayos, pueden ser utilizadas para íratar enfermedad o brindar aproximadamente un resultado particular en un paciente (por ejemplo, crecimiento de vasos sanguíneos), acíivando o inhibiendo la proteína/molécula de fusión. Además, los ensayos pueden descubrir ageníes que pueden inhibir o aumentar la producción de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, a partir de células o íejidos manipulados en forma adecuada. Por consiguieníe, la présenle invención incluye un método para identificar compuestos que enlazan a una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, en donde el método comprende los pasos de: (a) incubar un compuesío de enlace candidaío con una proteína de fusión de albúmina de la presente invención; y (b) determinar si ha ocurrido el enlace. Además, la presente invención incluye un método para identificar agonistas/antagonisías, en donde el método comprende los pasos de: (a) incubar un compuesto candidato con una proleína de fusión de albúmina de la presente invención , (b) ensayar una actividad biológica, y (c) determinar si ha sido alterada la acíividad biológica de la proíeína de fusión. Suministro Dirigido En otra modalidad, la presente invención proporciona un méíodo para suminislrar composiciones a células dirigidas que expresan un receptor para un componente de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención . Tal como se describe en la presente invención, las proteínas de fusión de la presente Invención pueden estar asociadas con polipéptidos heterólogos, ácidos nucleicos heterólogos, toxinas o profármacos mediante interacciones hidrofóbicas, hidrofílicas, iónicas, y/o covalentes. En una modalidad , la presente invención proporciona un método para el suminisíro específico de composiciones de la presente invención , a células mediante la administración de proteínas de fusión de la presente invención (incluyendo anticuerpos) que están asociadas con polipéptidos heterólogos o ácidos nucleicos. En un ejemplo, la presente invención proporciona el método para suministrar una proteína Terapéutica en la célula dirigida. En otro ejemplo, la presente invención proporciona un método para suministrar un ácido nucleico de una sola hebra (por ejemplo, aníisenfido o ribozimas) o ácido nucleico de hebra doble (por ejemplo, ADN que puede integrarse en el genoma de la célula o replicarse en forma episomal y que puede ser transcrito) en una célula dirigida. En otra modalidad , la presente invención proporciona un método para la destrucción específica de células (por ejemplo, la destrucción de células de tumor) administrando una proteína de fusión de albúmina de la presente invención (por ejemplo, polipéptidos de la presente invención o anticuerpos de la misma) en asociación con toxinas o profármacos citotóxicos. Por el término "toxinas" se entiende compuesíos que enlazan y acfivan sislemas efectores citoíóxicos endógenos, radioisótopos, holotoxinas, toxinas modificadas, subunidades catalííicas de toxinas, o cualesquiera moléculas o enzimas que no se encuentran normalmente en la superficie de una célula, la cual bajo condiciones definidas, origina la muerte celular. Las toxinas que se pueden utilizar de acuerdo con los métodos de la presente invención , incluyen pero no se limitan a, radioisóíopos conocidos en la íécnica, compuesíos íales como, por ejemplo, anticuerpos (o complemento de fijación que contiene partes del mismo) que enlazan a un sistema efector citotóxico endógeno inherente o inducido, cinasa de timidina, endonucleasa, ARNsa, alfa toxina, resina, abrina, exotoxina A de Pseudomonas, íoxina de difteria, saporina, momordina, gelonina, proteína antiviral "pokeweed", alfa-sarcina, y toxina de cólera. Por el término "profármaco citotóxico" se entiende un compueslo no tóxico que se convierte a íravés de una enzima, que se encuentra normalmente en la célula, en un compuesto citoíóxico. Los profármacos citotóxicos que pueden ser utilizados de acuerdo con los métodos de la presente Invención , incluyen pero no se limitan a, derivados de glutamilo de un ageníe de alquilación de mosíaza de ácido benzoico, derivados de fosfaío de etoposida o mitomicina C, arabinosida de ciíocina, daunorrubicina, y derivados de fenoxiaceíamida de doxorrubicina.

Clasificación de fármaco Se contempla además el uso de las proteínas de fusión de albúmina de la preseníe Invención, o los polinucleótidos que codifican estas proteínas de fusión, para clasificar las moléculas que modifican las actividades de la proteína de fusión de albúmina de la presente invención o proteínas que corresponden a la parte de proteína Terapéuíica de la proíeína de fusión de albúmina. Dicho méíodo puede incluir coníacíar la proteína de fusión con un compuesto(s) seleccionado del que se sospecha tiene actividad antagonista o agonista, y ensayar la actividad de la proteína de fusión después del enlace. La presente invención es particularmente útil para clasificar compuestos terapéuticos utilizando las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención, o enlazando fragmentos de la misma, en cualquiera de una variedad de técnicas de clasificación de fármacos. La proteína de fusión de albúmina empleada en dicha prueba, puede fijarse a un soporte sólido, expresarse en una superficie celular, libre en la solución, localizarse en forma iníracelular. Un méíodo para clasificar fármacos, utiliza células huésped eucarióticas o procarióíicas que son transformadas de manera estable con ácidos nucleicos recombinantes que expresan la proteína de fusión de albúmina. Los fármacos se clasifican coníra dichas células transformadas o sobrenadantes obtenidos de cultivar dichas células, en ensayos de enlace competitivo. Se puede medir, por ejemplo, la formulación de complejos entre el agente que está siendo probado y una proteína de fusión de albúmina de la presente invención. Por lo tanto, la presente invención proporciona métodos para clasificar fármacos o cualesquiera otros agenles que afecten las actividades transmilidas por las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención. Estos métodos comprenden contactar el agente con una proteína de fusión de albúmina de la presente invención o un fragmento del mismo y ensayar la presencia de un complejo entre el agente y la proteína de fusión de albúmina a un fragmento del mismo, a través de métodos conocidos en la técnica. En dicho ensayo de enlace competitivo, los agentes para clasificar son etiquetados en forma típica. Después de la incubación , el agenfe libre se separa del que se encuenlra en forma enlazada, y la cantidad de etiqueta libre o no hecha compuesto es una medida de la capacidad de un agente en particular para enlazar a la proteína de fusión de albúmina de la presente invención. Otra técnica para clasificación de fármacos proporciona clasificación de alto rendimiento de compuestos que tienen afinidad de enlace adecuada con una proteína de fusión de albúmina de la presente invención , y se describe con mayor detalle en la Solicitud de Patente Europea No. 84/03564, publicada el 13 de septiembre de 1 984, la cual esíá incorporada a la preseníe invención como referencia. En síntesis, los números grandes de diferentes compuestos de prueba de péptido pequeños se sintetizan en un substralo sólido, íal como enclavados de plástico o alguna oíra superficie. Los compuestos de prueba de péptido se hacen reaccionar con una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y se lavan. Posteriormente los péptidos enlazados son detectados a través de méíodos conocidos en la íécnica. Las proíeínas de fusión de albúmina purificadas pueden ser recubiertas directamente en placas para utilizarse en las íécnicas de clasificación de fármacos antes mencionadas. Además, se pueden utilizar aníicuerpos no-neuíralizantes para capíurar el péptido e inmovilizarlo en el soporte sólido. La presente invención también coníempla el uso de ensayos de clasificación de fármaco competitivos, en donde los anticuerpos de neutralización con la capacidad de enlazar una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención , compiten en forma específica con un compuesto de prueba para enlazar la proteína de fusión de albúmina o fragmentos de las mismas. En esta forma, los anticuerpos se utilizan para detectar la presencia de cualquier péptido que comparía uno o más epítopes antigénicos con una proteína de fusión de albúmina de la presente invención.

Pépíidos de Enlace v oirás Moléculas La preseníe invención lambién comprende méíodos de clasificación para ideníificar polipéptidos y no polipéptidos que enlazan proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, y las moléculas de enlace identificadas de esta forma. Estas moléculas de enlace son útiles, por ejemplo, como agonistas y antagonistas de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención . Dichos agonistas y antagonistas se pueden utilizar, de acuerdo con la presente invención , en las modalidades terapéuticas que se describirán con mayor detalle más adelante. Este método comprende los pasos de: contactar una proteína de fusión de albúmina de la presente invención con una pluralidad de moléculas; e identificar una molécula que enlaza la proteína de fusión de albúmina. El paso de contactar la proteína de fusión de albúmina de la presente invención con la pluralidad de moléculas, se puede llevar a cabo en una cantidad de diferentes formas. Por ejemplo, se puede contemplar la inmovilización de la profeína de fusión de albúmina en un soporte sólido, y poner una solución de la pluralidad de moléculas en contacto con los polipéptidos inmovilizados. Dicho procedimiento, puede ser parecido a un proceso cromatográfico por afinidad , estando la matriz de afinidad comprendida de la proteína de fusión de albúmina inmovilizada de la presente invención . Las moléculas que tienen una afinidad selectiva para la proteína de fusión de albúmina, posteriormente pueden ser purificadas mediante selección de afinidad . La naturaleza del soporte sólido, proceso para la adhesión de la proteína de fusión de albúmina al soporte sólido, solvente y las condiciones del aislamiento o selección de afinidad, son en gran parte convencionales y bien conocidas por los expertos en la técnica. Como alternativa, también se puede separar una pluralidad de polipéptidos en fracciones substancialmente separadas que comprenden un subgrupo de o polipéptidos individuales. Por ejemplo, se puede separar la pluralidad de polipéptidos mediante electroforesis de gel, cromatografía de columna o métodos similares conocidos por los expertos, para la separación de polipéptidos. Los polipépíidos individuales pueden ser producidos también mediante una célula huésped transformada de tal forma que se expresará en , o aproximadamente en su superficie externa (por ejemplo, un fago recombinante). Posteriormente los aislados individuales pueden ser "sondeados" mediante una proteína de fusión de albúmina de la presente invención , opcionalmente en la presencia de un inductor si se requiere la expresión, para determinar si íiene lugar alguna iníeracción de afinidad selectiva entre la proíeína de fusión de albúmina y el clon individual. Antes de contaclar la proteína de fusión de albúmina con cada fracción que comprende los polipéptidos individuales, los polipéptidos primero deben ser transferidos a un soporte sólido por conveniencia adicional. Dicho soporte sólido puede ser simplemeníe una pieza de membrana de filtro, tal como una elaborada de nitrocelulosa o nylon . En esta forma, los clones positivos pueden ser identificados a partir de una colección de células huésped transformadas de una biblioteca de expresión, con la cual alberga una construcción de ADN que codifica un polipéptido que tiene una afinidad selectiva para una proíeína de fusión de albúmina de la preseníe invención. Además, la secuencia de aminoácido del polipépíido que fiene una afinidad selectiva para una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, se puede deíerminar direcíameníe a íravés de medios convencionales o la secuencia de codificación del ADN que codifique el polipéptido puede determinarse frecuentemente de manera más conveniente. Posteriormente la secuencia primaria puede ser deducida de la secuencia de ADN correspondiente. Si la secuencia de aminoácido será determinada a partir del propio polipéptido, se puede utilizar técnicas de microsecuenciación. La técnica de secuenciación puede incluir especíroscopía de masa. En cierías situaciones, puede ser deseable lavar cualquiera polipéptidos no enlazados de una mezcla de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y la pluralidad de polipépíidos aníes de iníeníar deíerminar o deíectar la presencia de una iníeracción de afinidad selectiva. Dicho paso de lavado puede ser particularmente deseable cuando la proteína de fusión de albúmina de la presente invención o la pluralidad de polipéptidos, se enlazan a un soporte sólido.

La pluralidad de moléculas proporcionadas de acuerdo con esíe méíodo, pueden ser proporcionadas a través de diversas bibliotecas, tales como bibliotecas de péptidos o sin pépfidos de combinación o aleatorias que pueden ser clasificadas con respecto a las moléculas que enlazan específicamente una proteína de fusión de albúmina de la presente invención . Se conocen muchas bibliotecas en la técnica, las cuales pueden ser utilizadas, por ejemplo, bibliotecas sintetizadas en forma química, bibliotecas a base de traducción recombinante (por ejemplo, bibliotecas de despliegue de fago) e in viíro. Los ejemplos de biblioíecas siníeíizadas en forma química se describen en las Publicaciones de Fodor y Asociados, Science 251 :767-773 ( 1991 ); Houghten y Asociados, Nature 354:84-96 (1 991 ); Lam y Asociados, Nature 354:82-84 (1991 ); Medynski, Bio/Technology 12:709-71 0 (1994); Gallop y Asociados, J. Medicinal Chemistry 37(9): 1233-1251 (1 994); Ohlmeyer y Asociados, Proc. Nati . Acad. Sci. EUA 90: 1 0922-1 0926 (1993); Erb y Asociados, Proc. Nati. Acad . Sci . EUA 91 : 1 1422-1 1426 (1994); Houghten y Asociados, Biotechiques 13:412 (1 992); Jayawickreme y Asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 91 : 1614-161 8 (1994); Salmón y Asociados, Proc. Nati . Acad. Sci. EUA 90: 1 1708-1 1712 (1 993); Publicación PCT No. WO 93/20242; y la Publicación de Brenner y Lerner, Proc. Nati . Acad . Sci. EUA 89:5381 -5383 (1992). Los ejemplos de bibliotecas de despliegue de fago se describen en las Publicaciones de Scoíí y Asociados, Scott y Asociados, Science 249:386-390 (1990); Davelin y Asociados, Science, 249:404-406 (1990); Christian y Asociados, 1992, J. Mol. Biol. 227:711-718 (1992); Lenstra, J. Immunol. Meíh. 152:149-157 (1992); Kay y Asociados, Gene 128:59-65 (1993); y la Publicación PCT No. WO 94/18318 con fecha 18 de agosto de 1994. Las bibliotecas a base de traducción in vitro, incluyen pero no se limitan a las que se describen en la Publicación PCT No. WO 91/05058 con fecha 18 de abril de 1991; y la Publicación Matíheakis y Asociados, Proc. Naíl. Acad. Sci. EUA 91:9022-9026 (1994). A manera de ejemplos de biblioíecas sin péptidos, se puede adaptar para uso una biblioteca de benzodiazepina (ver por ejemplo, la Publicación de Bunin y Asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA, 91:4708-4712 (1994)). También se pueden utilizar bibliotecas peptoides (Simón y Asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA, 89:9367-9371 (1992)). Otro ejemplo de biblioteca que se puede utilizar, en el cual las funciones de amida en los péptidos han sido permetiladas para generar una biblioíeca de combinación químicamente transformada, se describe en la Publicación de Ostresh y Asociados (Proc. Nati. Acad. Sci. EUA, 91:11138-11142 (1994)). La variedad de biblioíecas sin pépíidos que son útiles en la presente invención es muy numerosa. Por ejemplo, ver la Publicación de Ecker y Crooke (Bio/Technology 13:351-360 (1995), describe benzodiazepinas, idantoínas, piperazinadionas, bifenilos, análogos de azúcar, beta-mercaptocetonas, ácidos arilacéticos, acilpiperidinas, benzopiranos, cubanos, xanfinas, aminimidas y oxazolonas, entre las especies químicas que forman la base de diversas bibliotecas. Las bibliotecas sin péptido pueden ser clasificadas ampliamente en dos tipos: monómeros y oligómeros decorados. Las bibliotecas de monómero decorado emplean una estructura de andamio relativameníe simple en la cual se agrega una variedad de grupos funcionales. Con frecuencia el andamio puede ser una molécula con una actividad farmacológica útil conocida. Por ejemplo, el andamio puede ser la estrucíura de benzodiazepina. Las bibliofecas de oligómero sin péptido utilizan un gran números de monómeros que son ensamblados juntos en tales formas que crean nuevas formas que dependen del orden de los monómeros. Entre las unidades de monómero que han sido utilizadas se encuentran carbamatos, pirrolinonas, y morfolinos. Los oligómeros tipo péptido, peptoides en donde la cadena laíeral se adhiere al grupo de amino alfa en lugar del carbono alfa, forman la base de otra versión de bibliotecas de oligómero sin péptido. Las primeras biblioíecas de oligómero sin pépfido utilizaron un tipo de monómero simple, y por lo tanto contenían un esqueleto de repetición. Las bibliotecas recientes han uíilizado más de un monómero, lo que proporciona bibliotecas con mayor flexibilidad. La clasificación de bibliotecas se puede llevar a cabo a íravés de cualquier variedad de métodos comúnmente conocidos.

Ver por ejemplo las siguientes referencias, las cuales describen la clasificación de bibliotecas de péptido: Parmley y Asociados, Adv. Exp. Med. Biol. 251 :215-218 (1989); Scoíí y Asociados, Science 249:386-390 (1990); Fowlkes y Asociados, BioTechniques 1 3:422-427 (1992); Oldenburg y Asociados, Proc. Naíl. Acad . Sci. EUA 89:5393-5397 (1992); Yu y Asociados, Cell 76:933-945 (1994); Síaudt y Asociados, Science 241 :577-580 (1988); Bock y Asociados, Nature 355:564-566 (1 992); Tuerk y Asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 89:6988-6992 (1992); Ellington y Asociados, Naíure 355:850-852 (1992); Paíente Norteamericana No. 5,096,815, Paíente Norteamericana No. 5,223,409, y Paleníe Norteamericana No. 5, 1 98,346, todas de Ladner y Asociados, Rebar y Asociados, Science 263:671 -673 (1 993); y Publicación PCT No. WO 94/18318. En una modalidad específica, la clasificación para identificar una molécula que enlaza una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención , se puede llevar a cabo contacíando los miembros de la biblioleca con una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención inmovilizada en una fase sólida y recolectando los miembros de la biblioteca que enlazan a la proíeína de fusión de albúmina. Los ejemplos de dichos métodos de clasificación, denominadas técnicas de uso de placas plásticas o superficies cubiertas con antígenos o anticuerpos para separar o seleccionar células particulares con receptores adecuados "panning", se describen a manera de ejemplo en la Publicación de Parmley y Asociados, Gene 73:305-318 (1 988); Fowlkes y Asociados, BioTechniques 13:422-427 (1992); Publicación PCT No. WO 94/1 8318; y en las referencias aquí mencionadas. En otra modalidad , el sistema de dos híbridos para seleccionar proíeínas de iníeracción en levadura (Fields y Asociados, Naíure 340:245-246 (1989); Chien y Asociados, Proc. Naíl. Acad. Sci. EUA 88:9578-9582 (1991 ), se puede uíilizar para identificar moléculas que enlazan específicamente a polipéptidos de la preseníe invención. Cuando la molécula de enlace es un polipépíido, el polipépíido puede ser seleccionado convenieníemente de cualquier biblioteca de péptido, incluyendo bibliotecas de péptido aleatorias, bibliotecas de péptido de combinación , o bibliotecas de pépfido inclinadas. El íérmino "inclinado", se uíiliza en la presente invención para significar que el método de generación de la biblioíeca se manipula para resíringir uno o más parámetros que dirigen la diversidad de la recolección de moléculas resultante, en este caso, péptidos. Por lo tanto, una biblioteca de péptido realmente aleaíoria, podría generar una recolección de péptidos en donde la probabilidad de encontrar un aminoácido en particular en una posición determinada del péptido, es la misma para los 20 aminoácidos. Se puede introducir una inclinación en la biblioteca, sin embargo, medianíe especificación, por ejemplo, de que una lisina surge cada 5 aminoácidos o que las posiciones 4, 8, y 9 de una biblioteca de decapéptido esíarán fijas, incluye únicamente arginina. Claramente, se pueden coníemplar muchos tipos de inclinaciones, y la presente invención no se resíringe a alguna inclinación en particular. Además, la presente invención coníempla íipos específicos de biblioíecas de pépíidos, íal como biblioíecas de péptido de fagos desplegados y las que utilizan una consírucción de ADN que comprende un vecíor de fago lambda con un inserto de ADN. Tal como se mencionó anteriormeníe, en el caso de una molécula de enlace que es un polipépíido, el polipéptido puede tener aproximadameníe 6 a menos de aproximadamente 60 residuos de aminoácido, preferentemente de aproximadamente 6 a aproximadamente 10 residuos de aminoácidos y lo más preferentemeníe de aproximadameníe 6 a aproximadameníe 22 aminoácidos. En oíra modalidad, un polipépíido de enlace íiene una fluctuación de 15 a 100 aminoácidos, o 20 a 50 aminoácidos. El polipéptido de enlace seleccionado, puede obíenerse medianíe síníesis química o expresión recombinanle. Oirás Acíividades Se puede emplear una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y/o polinucleótido que codifica una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, en el tratamiento de estimulación de re-vascularización de tejidos isquémicos debido a diversas condiciones de enfermedad tales como trombosis, arterioesclerosis y otras condiciones cardiovasculares. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y/o los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , también se pueden emplear para estimular la angiogénesis y regeneración de extremidades, tal como se describió anteriormeníe. Una proleína de fusión de albúmina de la preseníe invención y/o el polinucleótido que codifica la proteína de fusión de la presente invención , también se puede emplear para tratar heridas debido a lesiones, quemaduras, reparación de tejido post-operatorio y úlceras, ya que son mitogénicas de diversas células de diferentes orígenes, tales como células de fibroblasto y células de músculo esquelético, y por consiguiente, facilitan la reparación o reemplazo del tejido dañado o enfermo. U na proteína de fusión de albúmina de la presente invención y/o el polinucleótido que codifica la proteína de fusión de la presente invención , también se puede emplear para estimular el crecimiento neuronal y para tratar y prevenir el daño neuronal que ocurre en ciertos padecimieníos neuronales o condiciones neurodegenerativas íales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, y complejo relacionado SI DA. Una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y/o el polinucleótido que codifica la proteína de fusión de la presente invención puede tener la capacidad de estimular el crecimiento de condrocito, por consiguiente, puede ampliarse para aumeníar la regeneración de huesos y periodonlal y a ayudar en íransplantes de íejido o injertos de huesos. Una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y/o el polinucleóíido que codifica la proteína de fusión de la presente invención , íambién se puede emplear para prevenir el envejecimienío de la piel, debido a quemaduras de sol, estimulando el crecimienío de queratinocitos. También se puede emplear una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y/o el polinucleótido que codifica la proteína de fusión de la presente invención , para prevenir pérdida de cabello. A lo largo de las mismas líneas, se puede emplear una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y/o el polinucleótido que codifica la proteína de fusión de la presente invención para estimular el crecimiento y diferenciación de células hematopoyéíicas y células de médula ósea cuando se utilizan en combinación con otras ciíocinas. También se puede emplear una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y/o el polinucleótido que codifica la proteína de fusión de la presente invención para maníener órganos antes del transplaníe o para soporíar el cultivo celular de tejidos primarios. También se puede emplear una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y/o el polinucleótido que codifica la proteína de fusión de la presente invención, para inducir tejido de origen mesodérmico para diferenciar en embriones tempranos.

Una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y/o el polinucleótido que codifica la proíeína de fusión de la preseníe invención, también puede incrementar o disminuir la diferenciación o proliferación de células madre embriónicas, además, tal como se describió anteriormente, del linaje hematopoyético. También se puede utilizar una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y/o el polinucleótido que codifica la proteína de fusión de la presente invención para modular las caracterísíicas del mamífero, tales como estatura del cuerpo, peso, color de cabello, color de ojos, piel, porcentaje de tejido adiposo, pigmentación, tamaño y forma (por ejemplo, cirugía cosmética). En forma similar, se puede utilizar una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y/o el polinucleótido que codifica la proteína de fusión de la presente invención para modular el metabolismo del mamífero que afecta el catabolismo, anabolismo, procesamiento, uíilización y almacenamienío de energía. Se puede uíilizar proleína de fusión de albúmina de la presente invención y/o el polinucleótido que codifica la proteína de fusión de la presente invención para cambiar un esíado mental o estado físico del mamífero influenciando los biorritmos, ritmos cardíacos, depresión (incluyendo padecimientos depresivos), íendencia de violencia, lolerancia al dolor, capacidades reproductoras (preferentemente mediante actividad tipo adivina o inhibina), niveles hormonas o endocrinos, apetito, lívido, memoria, tensión u otras cualidades cognitivas. También se puede utilizar una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y/o el polinucleótido que codifica la proteína de fusión de la presente invención como un aditivo o conservador de alimentos, para incrementar o disminuir las capacidades de almacenamiento, contenido de grasa, lípido, proteína, carbohidratos, vitaminas, minerales, cofactores y otros componentes de nutrición. Las aplicaciones antes mencionadas tienen uso en una amplia variedad de huéspedes. Dichos huéspedes incluyen , pero no se limitan a, humanos, múridos, conejos, cabras, cerdos de guinea, camellos, caballos, ratones, ratas, hámsteres, cerdos, microcerdos, pollos, vacas, ovejas, perros, gatos, primates no humanos y humanos. En modalidades específicas, el huésped es un ratón , conejo, cabra, cerdo de guinea, pollo, rata, hámster, cerdo, oveja, perro, o gato. En modalidades preferidas, el huésped es un mamífero. En las modalidades más preferidas, el huésped es un humano. Habiendo descrito en forma general la presente invención, se podrá apreciar de mejor manera la misma a través de la referencia a los siguientes ejemplos, los cuales se proporcionan a manera de ilustración y no como una limitación. Sin la descripción adicional, se considera que un experto en la técnica puede, utilizando la descripción anterior y los siguientes ejemplos ilustrativos, realizar y utilizar las alteraciones detectadas en la presente invención y practicar los métodos de las reivindicaciones adjuntas. Los siguientes ejemplos de írabajo, señalan de manera específica por consiguiente, modalidades preferidas de la presente invención, y no están construidos como limitantes en forma alguna del resto de la descripción. EJEMPLOS EJEMPLO 1: Generación de pScNHSA v pScCHSA. Los vectores pScNHSA (depósito ATCC No. PTA-3279) y pScCHSA (depósito ATCC No. PTA-3276) son derivados de pPPCOOOd (depósito ATCC No. PTA-3278), y se utilizan como vectores de clonación en donde los polinucleótidos que codifican una proteína íerapéuíica o fragmento o variante de la misma se insería en forma adyacente a, y en estructura de traducción con los polinucleótidos que codifican la albúmina de suero humano "HSA". pScCHSA se puede utilizar para generar fusiones de proteína Terapéutica-HSA, en tanío que pScNHSA se puede uíilizar para generar fusiones de HSA-proteína Terapéuíica. Generación de pScCHSA: fusión de albúmina con la terminal-C de la porción de albúmina para la porción terapéuíica. Un vecíor para faciliíar la clonación del ADN que codifica una ferminal-N de profeína Terapéuíica para el ADN que codifica la proteína de albúmina madura, se elaboró alterando la secuencia de ácido nucleico que codifica el péptido de señal HSA quimérico en pPPCOOOd, para incluir los sitios de restricción Xho y Xla 1. Primero, los sitios Xho I y Cía I inherentes para pPPCOOOd (localizados 3' de la secuencia de íerminación ADH 1 ) fueron eliminados digiriendo pPPCOOOd con Xho I y Cía I, llenando los exíremos pegajosos con la polimerasa de ADN T4, y ligando nuevameníe los exíremos romo para crear pPPCOOOd. d Segundo, se construyeron los sitios de restricción Xho I y Cía I en la secuencia de ácido nucleico que codifica el pépíido de señal de HSA (una quimera del líder HSA y un siíio kex2 del factor alfa de correspondencia "MAF"), en pPPC0006 utilizando dos vueltas de PCR. En la primera vuelta de PCR, se llevó a cabo la 0 amplificación con cebadores que se muesíran como SEQ I D NO:36 y SEQ I D NO:37. El cebador cuya secuencia se muesíra como SEQ I D NO:36, comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica parte de la secuencia de péptido de señal de HSA, un siíio kex2 de la secuencia líder de factor alfa de correspondencia, y parte del d término-amino de la forma madura de HSA. Se introdujeron cuatro mutaciones de punta en la secuencia, creando los sitios Xho I y Cía I que se encuentran en la unión del péptido de señal quimérico y la forma madura de HSA. Estas cuatro mutaciones están subrayadas en la secuencia que se muestra a coníinuación . En 0 pPPCOOOd los nucleótidos en estas cuaíro posiciones de d' y 3', son T, G, T, y G. d'- GCCTCGAGAAAAGAGATGCACACAAGAGTGAGGTTGCTCATCGAT TTAAAGATTTGG G-3' (SEQ I D NO:36), y d d'- AATCGATGAGCAACCTCACTCTTGTGTGCATCTCTTTTCTCGAGGC TCCTGGAATAAG C-3' (SEQ I D N O:37). Una segunda vuelta de PCR se llevó a cabo posteriormeníe con un cebador de flanqueo de corriente ascendente, 5'-TACAAACTTAAGAGTCCAATTAGC-3' d (SEQ I D NO:38) y un cebador de flanqueo de corriente descendente d'-CACTTCTCTAGAGTGGTTTCATATGTCTT-3' (SEQ I D NO:39). El producto de PCR resultante posteriormente se purificó y digirió con Afl I I y Xho I y se ligó en los mismos sitios en pPPCOOOß creando pScCHSA. El plásmido resultaníe tiene sitios 0 Xho l y Cía I, construidos en la secuencia de señal . La presencia del sitio Xho I crea un cambio en el aminoácido simple en el extremo de la secuencia de LDKR a LEKR. El cambio D a E no se enconírará en el plásmido de expresión de proteína de fusión de albúmina final cuando una secuencia de ácido nucleico que 5 comprenda un polinucleótido que codifica la proteína Terapéutica de la proteína de fusión de albúmina con un sitio 5'Sal I (el cual es compatible con el sitio Xho I) y un sitio 3'Cla I , está ligado en los sitios Xho l y Cía I, de pScCHSA. La ligadura de Sal I a Xho I, restaura la secuencia de aminoácido original de la secuencia de 0 péptido de señal . El ADN que codifica la proteína Terapéutica de la proteína de fusión de albúmina, puede ser insertado después del sitio Kex2 (Kex2 se disocia después de la secuencia de aminoácido dibásico KR en el extremo del péptido de señal) y antes del sitio Cía I. d Generación de pScN HSA: fusión de albúmina con la terminal-N de la porción de albúmina con la porción terapéutica. Se elaboró un vector para facilitar la clonación del ADN que codifica la terminal-C de la porción de la proteína Terapéutica al ADN que codifica la proteína de albúmina madura agregando sitios d de restricción de 3, 8 pares base a pScCHSA. Se agregaron los sitios de restricción Ase I , Fse I , y Pme I entre los siíios Bsu361 y Hind I I I al final de la secuencia de ácido nucleico que codifica la proteína HSA madura. Esto se logró a través del uso de dos cebadores sintéíicos complemeníarios que contienen los sitios de 0 restricción Ase I , Fse I , y Pme I subrayados (SEQ I D NO:40 y SEQ I D NO:41 ). d'- AAGCTGCCTTAGGCTTATAATAAGGCGCGCCGGCCGGCCGTTTAA ACTAAGCTTAATT CT-3' (SEQ I D NO:40), y d d'- AGAATTAAGCTTAGTTTAAACGGCCGGCCGGCGCGCCTTATTATAA GCCTAAGGCAG CTT-3' (SEQ ID NO:41 ). Los cebadores fueron endurecidos y digeridos con Bsu36 I y Hind I I I y ligados en los mismos sitios en pScCHSA creando pScN HSA. 0 EJ EM PLO 2: Generación de construcción general para íransformación de levadura Los vecíores pScN HSA y pScCHSA se pueden utilizar como vecíores de clonación en donde los polinucleótidos que codifican una proteína terapéutica o fragmento o variante de la misma, se d insertan en forma adyacente a los polinucleótidos que codifican la albúmina de suero humana madura "HSA". pScCHSA se utiliza para generar fusiones de proteína Terapéutica-HSA, en tanto que pScN HSA se puede utilizar para generar fusiones de HSA-proteína Terapéutica, d Generación de construcciones de fusión de albúmina gue comprenden productos de fusión HSA-proteína Terapéutica El ADN que codifica la proteína Terapéutica (por ejemplo, secuencias que se muestran en la SEQ I D NO:X o conocidas en la técnica, pueden ser PCR amplificado utilizando los cebadores que 0 facilitan la generación de una construcción de fusión (por ejemplo, agregando sitios de resíricción, codificando fusiones sin uniones, codificando las secuencias enlazadoras, etc.). Por ejemplo, un experto en la lécnica puede diseñar un cebador d' que agrega polinucleóíidos que codifican los últimos cuatro aminoácidos de la d forma madura de HSA (y que contiene el sitio Bsu361 ) en el extremo d' del ADN que codifica una proteína Terapéutica; y un cebador 3' que agrega un codón de Detención y sitios de clonación adecuados en el extremo 3' de la secuencia de codificación de proteína Terapéutica. Por ejemplo, el cebador direcío utilizado 0 para amplificar el ADN que codifica una proteína Terapéutica, puede tener la secuencia, d'-aaocfGCCTTAGGCTTA(N R-3' (SEQ I D NO:42), en donde la secuencia subrayada es un sitio Bsu361 , los nucleótidos del cuadro superior codifican los últimos cuatro aminoácidos de la proteína HSA madura (ALGL), y (N)?5 es idéntica a los primeros 16 nucleótidos que codifican la proteína terapéutica de interés. En forma similar, el cebador inverso utilizado para amplificar el ADN que codifica una proteína Terapéutica pueden tener la secuencia, d'-GCGCGCGTTTAAACGGCCGGCCG GCGCGCCrTTATTAUN)?s-3' (SEQ I D NO:43) cuando la secuencia en cursivas es un sitio Pme I , la secuencia subrayada doble es un sitio Fse I , la secuencia subrayada una vez es un sitio Ase I , los nucleótidos dentro del cuadro son el complemento inverso de los dos codones de deíención tándem, y (N)15 es idéntico al complemento inverso de al menos 1 d nucleóíidos que codifican la proteína Terapéutica de iníerés. U na vez que el producío PCR se amplifica puede cortarse con Bsu361 y uno de (Ase I , Fse I , y Pme I ) y ligarse en pScN HSA. La presencia del sitio Xho l en la secuencia líder quimérica HSA, crea un cambio de un solo aminoácido en el extremo de la secuencia de señal quimérica, por ejemplo, la secuencia de señal HSA-kex2, de LDKR (SEQ I D NO:44) a LEKR (SEQ I D NO:4d). Generación de consírucciones de fusión de albúmina gue comprenden productos de fusión gen-HSA. En forma similar al método descrito aníeriormente, el ADN que codifica una proíeína Terapéutica puede ser amplificado por PCR utilizando los siguienfes cebadores: cebador A 5' que agrega polinucleótidos que coníienen un siíio Sal í y que codifica los últimos tres aminoácidos de la secuencia líder HSA, DKR, en el extremo 5' del ADN que codifica una proteína Terapéutica; y un cebador 3' que agrega polinucleótidos que codifican los primeros aminoácidos del HSA maduro que contiene un sifio Cía I en el exíremo 3' del ADN que codifica la proíeína Terapéuíica. Por ejemplo, el cebador direcfo utilizado para amplificar el ADN que codifica una proteína Terapéutica puede íener la secuencia, 5'-d aggagcgtcGACAAAAGA(N)15-3' (SEQ I D NO:46), en donde la secuencia subrayada es un sitio Sal I , los nucleólidos del cuadro superior codifican los últimos tres aminoácidos de la secuencia líder HSA (DKR), y (N)15 es idéntico a los primeros 16 nucleótidos que codifican la proteína Terapéutica de inferes. En forma similar, 0 el cebador inverso utilizado para amplificar el ADN que codifica una proíeína Terapéutica pueden tener la secuencia 5'- CTTTAAATCGA TGAGCAACCTCACTCTTGTGTGCATCfN)?B-3' (SEQ I D NO:47) en donde la secuencia en cursivas es un sitio Cía I , los nucleóíidos subrayados son el complemenío inverso del ADN que d codifica los primeros 9 aminoácidos de la forma madura de (DAHKSEVAH , SEQ I D NO:48) y (N)15 es idéntico al complemento inverso de los últimos 1 d nucleófidos que codifican la proíeína íerapéutica de interés. Una vez que el producto PCR se amplifica, puede cortarse Sal I y Cía I y ligarse en pScCHSA digerido con 0 Xho I y Cía I . Se puede desear una señal o secuencia líder difereníe, por ejemplo, "I NV" de invertasa (Swiss-Prot Acceso P00724), factor alfa de correspondencia "MAF" (Acceso Genbank AAA18405), M PI F (Geneseq AAF82936), Fibulina B (Swiss-Prot Acceso P23142), Clusíerina (Swiss-Proí Acceso P 1 0909), Factor 5 de Crecimiento Tipo I nsullna-Proíeína de Enlace 4 (Swiss-Proí Acceso P22692), y permutaciones de la secuencia líder HSA se pueden subclonar en el vector adecuado por medio de méíodos esíándar conocidos en la íécnica. Generación de construcción de fusión de albúmina compatible para expresión en S. cerevisiae de levadura. El fragmento Not I que contiene el ADN que codifica una proteína de fusión de albúmina ya sea de terminal-N ó de lerminal-C generada a parlir de pScN HSA ó pScCHSA, se puede clonar posferiormente en el siíio Noí I y pSAC3d, el cual tiene un marcador seleccionable LEU2. Posteriormente el vector resultaníe se utiliza en la transformación de un sistema de expresión de S. cerevisiae de levadura. EJ EM PLO 3: Expresión general en S. cerevisiae de levadura. Un vector de expresión compatible con la expresión de levadura, se puede íransformar en S. cerevisiae de levadura mediante transformación de aceíaío de liíio, electroporación u otros méíodos conocidos en la lécnica y/o tal como se describe en parte en la Publicación de Sambrook, Fritsch, y Maniatis, 1989, "Molecular Cloning: A Laboraíory Manual, 2a Edición", volúmenes 1 -3, y en Publicación de Ausubel y Asociados, 2000. Massachuselís General Hospital and Harvard Medical School "Current Protocols in Molecular Biology", volúmenes 1 -4. Los vectores de expresión se introducen en cepas de S. cerevisiae DXY1 , D88, ó BXP 1 0 medianfe transformación, los transformadores individuales pueden ser crecidos, por ejemplo, durante 3 días a una lemperaíura de 30°C en 1 0 ml de YEPD ( 1 % p/v de exíracto de levadura, 2% p/v, pepíona, 2% p/v, dextrosa), y las células pueden ser recolectadas en fase estacionaria después de 60 horas de crecimiento. Los sobrenadantes son recolectados clarificando las células a 3,000 g duraníe 1 0 minulos. pSAC3d (SIeep y Asociados, 1990, Bioíechnology 8:42 y ver figura 3) comprende, además del marcador seleccionable LEU2, toda la levadura de 2 µm de plásmido para proporcionar funciones de réplica, el promotor PRB 1 , y la señal de terminación ADH 1 . EJEM PLO 4: Purificación general de una proteína de fusión de albúmina expresada a partir de una fusión de albúmina en S. cerevisiae de levadura. En modalidades preferidas, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, comprenden la forma madura de HSA fusionada ya sea al término-N ó -C de la forma madura de una proteína terapéutica a partir de la misma (por ejemplo, la forma madura de una proteína terapéufica que se describe en la Tabla 1 , o la forma madura de una proleína terapéutica que se muestra en la Tabla 2, como la SEQ I D NO:Z). En una modalidad de la presente invención, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención comprenden además una secuencia de señal que dirige el polipéptido de fusión naciente en las trayectorias de segregación del huésped utilizado para expresión . En una modalidad preferida, el péptido de señal codificado por la secuencia de señal es eliminado, y la proteína de fusión de albúmina madura es segregada direcíameníe en el medio de culíivo. Las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención comprenden preferentemente secuencias de señal heteróloga (por ejemplo, la señal de secuencia no naíiva de una proíeína íerapéulica en particular) incluyendo pero sin limifarse a, MAF, INV, Ig, Fibulina B, Clusterina, Proteína de Enlace 4 de Factor de Crecimiento Tipo Insulina, secuencias líder HSA variante que incluyen, pero no se limitan a, secuencia líder HSA/MAF quimérica, u otra secuencias de señal heterólogas conocidas en la íécnica. Especialmeníe preferidas son las secuencias de señal que se describen en la Tabla 2 y/o la secuencia de señal que se describe en la sección de "expresión de proleínas de fusión" y/o "métodos adicionales de producción recombinante y siníética de proteínas de fusión de albúmina" de la presente especificación. En modalidades preferidas, las proteínas de fusión de la presente invención comprenden además un residuo de metionina de ferminal-N. Los polinucleótidos que codifican estos polipéptidos, incluyendo fragmentos y/o variantes, también están contenidos en la presente invención. Las proteínas de fusión de albúmina expresadas en levadura tal como se describió anteriormente, pueden ser purificadas a pequeña escala sobre una columna de afinidad de péptido de Y a X tal como se indica a coníinuación. Los sobrenadantes de la levadura que expresa una proteína de fusión de albúmina se diafilíraron confra regulador de fosfaío 3 mM, pH 6.2, NaCI 20 mM y Tween 20 al 0.01 % para reducir el volumen y eliminar los pigmeníos. Posíeriormente la solución se filíró a íravés de un apáralo de 0.22 µm. El filtrado se cargó en una columna de afinidad de péptido de Y a X. La columna se eluyó con regulador Tris/HCl 100 mM, pH 8.2. Las fracciones pico que contienen la proíeína se recolectaron y analizaron sobre SDS-PAG E después de la concentración a cinco veces. Para purificación a gran escala, se puede utilizar el siguiente método. El sobrenadaníe en exceso de 2 litros, se diafiltró y se conceníró a 500 mi en 200 mM Tris/HCl pH 8.0. La solución de proíeína concenírada se cargó en una columna equilibrada previameníe de 50 ml de DEAE-Sefarosa de flujo rápido, la columna se lavó, y la proteína se eluyó con un gradiente lineal de NaCI de 0 a 0.4 M de NaCI en Tris/HCl 20 mM , pH 8.0. Las fracciones que contienen la proteína se reunieron , se ajustaron a un pH de 6.8 con fosfato de sodio O.d M (NaH2PO4). Se agregó una concentración final de 0.9 M de (N H4)2SO4 a la solución de proteína y se cargó toda la solución en una columna equilibrada previamente de 60 ml Butyl?dOS. La proíeína se eluyó con un gradienle lineal de sulfato de amonio (0.9 a 0 M (N H )2SO4). Las fracciones con la fusión de albúmina se reunieron nuevamente, se diafiltraron contra 1 0 mM de regulador de Na2HPO /ácido cítrico, pH 6.76 y se cargaron en 60 ml de una columna equilibrada previameníe de SP-Sefarosa de flujo rápido. La proteína se eluyó con gradiente lineal de NaCI de 0 a O. d M . Las fracciones que contienen la proteína de interés se combinaron, el regulador se cambió a 10 mM Na2H PO /ácido cítrico, pH 6.25 con concentrador Amicon , la conductividad fue de <2.5 mS/cm. Esta solución de proteína se cargó en una columna equilibrada previamente de 16 ml de Q-Sefarosa de alio desempeño, la columna se lavó, y la proteína se eluyó con gradiente lineal de NaCI de 0 a 0.16 M NaCl. La proleína purificada se formuló posteriormeníe en una composición de regulador específico a través de intercambio de regulador. EJEM PLO d: Generación de consírucción general para transfección de célula de mamífero-Generación de construcción de fusión de albúmina compatible para expresión en líneas celulares de mamífero. Se pueden generar construcciones de fusión de albúmina en vectores de expresión para utilizarse en sistemas de cultivo celular de mamífero. El ADN que codifica una proteína íerapéutica puede ser el íérmino-N ó término-C clonado para HSA en un vector de expresión de mamífero a través de métodos esfándar conocidos en la íécnica (por ejemplo, amplificación PCR, digestión de restricción y ligadura). Una vez que el vector de expresión ha sido construido, puede proceder la transfección en el sistema de expresión de mamífero. Los vectores adecuados que son conocidos en la técnica incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, el vector pC4 y/o vecíores disponibles en Lonza Biologics, I nc. (Porísmouíh, NH).

El ADN que codifica la albúmina de suero humano ha sido clonada en el vector pC4, el cual es adecuado para sistemas de cultivo de mamífero, creando el plásmido pC4:HSA (Depósito ATCC # PTA-3277). Esíe veclor tiene un gen de reductasa de dihidrofolato "DHFR", que permitirá la selección en la presencia de metotrexato. El vector pC4:HSA es adecuado para expresión de proteínas de fusión de albúmina en células CHO. Para expresión, en otros sisíemas de cultivo celular de mamíferos, puede ser deseable subclonar un fragmento que comprende, o que consiste en forma alternativa, en el ADN que codifica una proteína de fusión de albúmina en un vector de expresión alternativa. Por ejemplo, un fragmento que comprende, o consiste en forma alternativa, de ADN que codifica una proteína de fusión de albúmina madura puede ser subclonado en otro vector de expresión que incluye, pero no se limiía a, cualesquiera de los vecíores de expresión de mamífero descrilos en la présenle invención. En una modalidad preferida, el ADN que codifica una construcción de fusión de albúmina se subclona en vectores proporcionados por Lonza Biologics, Inc. (Portsmouíh, NH) medianíe procedimieníos conocidos en la lécnica para expresión en células NSO. Generación de construcciones de fusión de albúmina gue comprenden productos de fusión HSA-proteína terapéutica. Utilizando pC4:HSA (Depósito ATCC #PTA-3277), se pueden generar consfrucciones de fusión de albúmina en donde la parte de la proteína íerapéuíica es de íerminal-C para la secuencia de albúmina madura. Por ejemplo, se puede clonar el ADN que codifica la proteína Terapéutica o fragmenío o varianíe de la misma enlre los sitios de resíricción Bsu 361 y Ase I del vector. Cuando se clona en Bsu 361 y Ase I , se puede emplear el mismo diseño de cebador utilizado para clonación en el sistema de vector de levadura (SEQ I D NO:43) (ver el ejemplo 2). Generación de consírucciones de fusión de albúmina gue comprenden productos de fusión gen-HSA. Utilizando pC4: HSA (Depósito ATCC # PTA-3277), las construcciones de fusión de albúmina pueden ser generadas en donde una parte de la proteína Terapéutica es la terminal-N clonada para la secuencia de albúmina madura. Por ejemplo, se puede clonar el ADN que codifica una proteína Terapéufica que tiene su propia secuencia de señal entre los sitios Bam H 1 (ó Hind I I I ) y Cía I de pC4: HSA. Cuando se clona en cualesquiera de los sitios Bam H l ó Hind I I I , es preferible incluir una secuencia Kozak (CCGCCACCATG , SEQ I D NO:49) antes del codón de inicio de traducción del ADN que codifica la proteína Terapéuíica. Si una proíeína Terapéuíica no íiene una secuencia de señal , el ADN que codifica la proteína Terapéutica puede ser clonado eníre los sitios Xho I y Cía I de pC4: HSA. Cuando se utiliza el sitio Xho I , se pueden utilizar los siguientes cebadores PCR de ejemplo 5' (SEQ I D NO:dO) y 3' (SEQ I D NO:d 1 ): d'-CCGCCGCICGAGGGGTGTGTTTCGTCGA(N)18-3' (SEQ I D NO:dO) 5'-AGTCCCATCGATGAGCAACCTCACTCTTGTGTGCATC(N)18-3' (SEQ I D NO:51 ). En el cebador d' (SEQ I D NO:dO), la secuencia subrayada es un sifio Xho I ; y el siíio Xho I y el ADN que sigue el sitio Xho I , codifican los últimos 7 aminoácidos de la secuencia líder de la albúmina de suero humano natural . En la SEQ I D NO:60, "(N)?8" es un ADN idéntico a los primeros 1 8 nucleóíidos que codifican la proíeína Terapéuíica de iníerés. En el cebador 3' (SEQ I D NO:51 ), la secuencia subrayada es un sitio Cía I ; y el sitio Cía I y el ADN que le sigue son el complemento inverso del ADN que codifica los primeros 10 aminoácidos de la proteína HSA madura (SEQ I D NO: 1 ). En la SEQ I D NO:51 , "(N)18" es el complemento inverso del ADN que codifica los últimos 18 nucleótidos que codifican la proteína Terapéutica de interés. Utilizando estos dos cebadores, se puede amplificar mediante PCR la proíeína Terapéuíica de interés, purificar el producto PCR, digerirlo con las enzimas de resíricción Xho I y Cía I , y clonarlo en los sitios Xho I y Cía I en el vector pC4: HSA. Si se desea una secuencia líder alíernaíiva, la secuencia líder de albúmina naíiva puede ser reemplazada con el líder de albúmina quimérico, es decir, el péptido de señal HSA-kex2, o un líder alternaíivo a través de métodos esíándar conocidos en la técnica. (Por ejemplo, un experto en la fécnica podría amplificar mediante PCR en forma rutinaria un líder alternaíivo y subclonar al producío PCR en una consírucción de fusión de albúmina en lugar del líder de albúmina, manleniendo al mismo íiempo la estructura de lectura). EJEMPLO 6: Expresión general en líneas de célula de mamífero. Una construcción de fusión de albúmina generada en un vector de expresión compatible con la expresión en líneas de célula de mamífero, puede ser transfectada en líneas de células adecuadas mediante precipitación de fosfato de calcio, lipofectamina, electroporación y otros métodos de transfección conocidos en la técnica y/o tal como se describe en la Publicación de Sambrook, Fritsch, y Maniatis, 1989. "Molecular Cloning: A Laboraíory Manual, 2a edición", y en la Publicación de Ausubel y Asociados, 2000. Massachuseíís General Hospifal and Harvard Medical School "Current Protocols in Molecular Biology", volúmenes 1-4. Posleriormente las células íransfectadas son se seleccionan con respecto a la presencia de un agente de selección determinado por el marcador seleccionable en el vector de expresión El vecior de expresión pC4 (Acceso ATCC No. 200646) es un derivado del plásmido pSV2-DHFR (Acceso ATCC No.31746). pC4. coníiene el promofor fuerte de Repeticiones de Terminal Larga "LTR" del Virus de Sarcoma de Rous (Cullen y asociados, Marzo 1985, Molecular y Cellular Biology, 438-447) y un fragmento del aumentador del CiíoMegalo Virus "CMV" (Boshart y asociados, 1986, Cell 41 : 621 -530). El vector íambién contiene el intrón 3', la señal de poliadenilación y terminación del gen de prepoinsulina de rata, y el gen DHFR de ratón del promotor temprano SV40. Se utilizaron para íransfección células de ovario de hámster chino "CHO" u otras líneas celulares que carecen de un gen DHFR reactivo. La transfección de una construcción de transfusión de albúmina en pC4 en células CHO a través de métodos conocidos en la íécnica, permitirá la expresión de la proteína de fusión de albúmina en células CHO, seguido de disociación de la secuencia líder, y secreción en el sobrenadanle. La proíeína fusión de albúmina posíeriormeníe se purifica a paríir del sobrenadante. Se proporciona el vector de expresión pEE 12.1 en Lonza Biologics, I nc. (Portsmout, N H) y es un derivado de pEE6 (Síephens y Cocjett, 1989, N ucí. Acids Res. 17: 71 1 0). Esíe vecíor comprende un promoíor, aumentador y la región no traducida d' completa del gen Temprano Inmediato Mayor del CitoMegalo Virus humano, "hCMV-M I E" (Publicación I nternacional No. WO 89/01 036), la corrienle descendeníe de una secuencia de iníerés, y un gen de Sinfetasa de Gluíamina (Murphy y asociados, 1991 , Biochem J : 227: 227-279; Bebbington y asociados. , 1992, Bio/Technoligy 10: 169-175; Pateníe Noríeamericana No. 5, 122,464) para propósitos de selección de células transfectadas en un medio que contiene sulfoximina de metionina selectiva. La transfección de las construcciones de fusión de albúmina realizadas en pEE 12 en células NSO (Publicación I nternacional No.

WO 86/06807) a íravés de métodos conocidos en la técnica, permitirán la expresión de la proteína de fusión de albúmina en células NSO, seguido de la disociación de secuencia líder y secreción en el sobrenadante. Posteriormente la proteína de fusión de albúmina se purifica en forma adicional a partir del sobrenadante uíilizando las íécnicas descritas en la presente invención o conocidas en la técnica. La expresión de una proteína de fusión de albúmina puede ser analizada, por ejemplo, mediante SDS-PAGE y manchado Western, análisis HPLC, de fase inversa u otros métodos conocidos en la fécnica. Las líneas celulares CHO y NSO esíables íransfectadas con construcciones de fusión de albúmina se generan a través de métodos conocidos en la técnica (por ejemplo, la transfección de lipofectamina) y se seleccionan por ejemplo, con meíroíexato 100nM para vectores que íienen el gen de Reducíasa de DiHidrofolato "DHFR" como un marcador seleccionable o a través del crecimiento en la ausencia de glufamina. Se puede examinar los niveles de expresión , por ejemplo, mediante inmunomanchado, principalmente con un suero anti-HSA como el aníicuerpo primario, o en segundo lugar, con anticuerpos que confienen suero dirigidos a la parte de la proteína Terapéuíica de una proíeína de fusión de albúmina deíerminada como el anticuerpo primario. Los niveles de expresión se revisan medianíe defección de inmunomanchado con suero anti-HSA como el anticuerpo primario.

Los rangos de productividad específica se determinan mediante ELISA en donde el aníicuerpo de capfura puede ser un aníicuerpo monoclonal hacia la paríe de proteína terapéuíica, de la fusión de albúmina, y el anticuerpo de detección puede ser el anficuerpo aníi-HSA-biotinilado monoclonal (o viceversa) seguido de enlace de peroxidasa de rábano/estriptavidina y análisis de acuerdo con el protocolo del fabricante EJEMPLO 7: Expresión de una Proteína de Fusión de Albúmina en Células de Mamífero Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, pueden ser expresadas en una célula de mamífero. Un vecíor de expresión de mamífero típico contiene un elemento promotor, el cual transmiíe el inicio de transcripción del mARM, una secuencia que codifica la proteína, y señales requeridas para la íerminación de transcripción y poliadenilación de la transcripción. Los elemeníos adicionales incluyen aumeníadores, secuencias Kozac y secuencias de intervención flanqueadas por sitios donantes y aceptores para la división del ARN. Se logra una transcripción altamente eficiente con los promotores íempranos y íardíos de SV40, las repeticiones de íerminal larga (LTRs) de Refroviruses, por ejemplo, RSV, HTLVI, HIVl y el promofor temprano de citomegalovirus (CMV) sin embargo, también se pueden utilizar elementos celulares (por ejemplo, el promotor de actina humana). Los vectores de expresión adecuados para utilizarse en la prácíica de la présenle invención , incluyen por ejemplo vectores tales como pSVL y pMSG (Pharmacia, Uppsala, Suecia), pRSV (ATCC 371 52), pSV2dhfr (ATCC 37146), pBCI2M I (ATCC 67109), pCMVSport 2.0, y pCMVSporí 3.0. Las células huésped de mamífero, que pueden ser utilizadas incluyen pero no se limitan a, células humanas Hela 293, H9 y Jurkat, células de ratón NI H3T3 y CI27, células Cos 1 , Cos 7 y CVI , células de codorniz QC1 -3, células L de ratón y células de ovario de hámster chino (CHO). Como alternativa, la proteína de fusión de albúmina es expresada en líneas celulares estables que contienen el polinucleóíido que codifica la proteína de fusión de albúmina integrada en un cromosoma. La co-transfección con un marcador seleccionable tal como DH FR, neomicina o hidromicina permite la Identificación o aislamiento de las células trasfecfadas. El polinucleótido transfectado que codifica la proteína de fusión puede ser amplificado para expresar grandes cantidades de proteínas de fusión codificada. El marcador de DHFR (reductasa de hidrofolaío) es útil en el desarrollo de líneas celulares que transporlan varios cíenlos, incluso varios miles de copias del gen de iníerés (ver las publicaciones de All y asociados, J . Biol. Chem. 253: 1367-1 370 (1987); Hamlin y asociados, Biochem. y Biopys. Acta, 1097: 107-143 (1990); Pág . y asociados, Biotechnology 9:54-68 (1 991 )). Otro marcador de selección útil es la sintasa de glutamina de enzimas /GS) (Murphy y asociados, Biochem J. 227:277-279 ( 1991 ); Bebbington y asociados, Bio/Technologi 10: 169-175 ( 1992). Utilizando esfos marcadores, las células de mamíferos se crecen en un medio selecíivo y se seleccionan las células con la mayor resisíencia. Estas líneas celulares contienen el gen(s) amplificado y es integrado en un cromosoma. Con frecuencia se utilizan células de ovario de hámster chino (CHO) y células NSO para la producción de proteínas. Los derivados del plásmido pSV2-dhfr (Acceso al ATCC No. 37146), los vectores de expresión pC4 (Acceso ATCC No. 209646) y pC6 (Acceso ATCC No. 209647) contienen el promotor fuerte (LTR) del Virus de Sarcoma de Rous (Culen y asociados. , Molecular y Cellular Biology, 438-447 (Marzo, 1985)) además de un fragmento del aumentador CMV (Boshart y asociados. , Cell 41 .521 -630 (1985)). Los sitios de clonación múltiple, por ejemplo, con sitios de disociación de enzima de restricción , BamH I , Xbal y Asp71 8, facilitan la clonación del gen de interés. Los vectores también coníienen el inírón 3', la señal de poliadenilación y terminación del gen preproinsulina de rata, y el gen DHFR de ratón bajo el conírol de promotor temprano SV40. Específicamente, el plásmido pC6, por ejemplo, se digiere con enzimas de restricción adecuadas y posteriormente se desfosforila utilizando fosfalos iníesíinales de becerro, a través de procedimientos conocidos en la técnica. Posíeriormente el vector se aisla a partir de un gen de agarosa al 1 %. Se genera un polinucleóíido que codifica una proteína de fusión de albúmina de la presente invención , uíilizando fécnicas conocidas en el arte y este polinucleótido se amplifica utilizando tecnología PCR conocida en la técnica. Si se utiliza una secuencia de señal que ocurre naturalmente, para producir la proteína de fusión de la presente invención , el vector no necesita un segundo péptido de señal. Como alternaíiva, si no se uíiliza una secuencia de señal que ocurre nafuralmeníe, el vecíor puede ser modificado para incluir una secuencia de señal heíeróloga. (Por ejemplo la Publicación Iníernacional No. WO 96/34891 ). El fragmento amplificado que codifica la proteína de fusión de la presente invención, se aisla de un gel de agarosa al 1 % utilizando un equipo comercialmente disponible ("Geneclean", BIO 101 I nc. , La Jolla, Ca. ). Posteriormeníe el fragmento se digiere con enzimas de restricción adecuadas y nuevamente se purifican en un gen de agarosa al 1 %. El fragmento amplificado que codifica la proteína de fusión de albúmina de la presente invención, se digiere posteriormeníe con la misma enzima de reslricción y se purifica sobre un gel de agarosa al 1 %. El fragmenío aislado y el vecíor desfosforilado se ligan posteriormente con la ligaza de ADN T4. Posteriormente se transforman las células de E. coli HB 101 ó XL-1 ó copias azules y las bacterias se identifican para contener el fragmento insertado en el pC6 de plásmido utilizando, por ejemplo, análisis de enzimas de restricción. Las células de ovario de hámster chino que carecen de un gen DHR acíivo, se utilizan para íransfección. Se transfectan en conjunfo 5 µg de plásmido de expresión pC6 ó pC4, con 0.5 µg del plásmido pSV utilizando lipofectina (Felgner y asociados. , supra). El plásmido pSV2-neo contiene un dominio seleccionable, el gen neo Tn5 que codifica una enzima que confiere resistencia a un grupo de anfibióticos incluye G418. Las células se siembran en un medio kM EM suplemeníado alfa minus con 10, 25, ó 50 ng/ml y después de dos días, las células son íripsinizadas y se siembran en placas de clonación de hibridoma (Greiner, Alemania) en medio MEM suplemeníado alfa minus con 1 0, 25, ó 50 ng/ml de metotrexato, además de 1 mg/ml G41 8. Después de aproximadamente 10 a 14 días, los clones simples se tipsinizan y posteriormente se siembran en platos de petri de 6 depósitos o frascos de 10 ml utilizando diferentes concentraciones de mefoírexaío (50 nM , 100 nM ; 200 nM , 400 nM , 800 nM). Los clones que crecen en las mayores conceníraciones de meírotexaío, posíeriormente son transferidos a nuevas placas de 6 depósitos que contienen concentraciones de meíotrexato incluso mayores (1 µM , 2 µM , 5 µM , 10 mM, 20 mM). Se repiíe el mismo procedimiento hasta que los clones que se obtienen crecen a una concentración de 100 - 200 µM . La expresión de la proteína de fusión deseada es analizada, por ejemplo mediante SDS-PAG E y manchado Western o mediante análisis HPLC de fase inversa. EJEMPLO 8: Purificación General de una Proteína de Fusión de Albúmina Expresada a partir de una Consírucción de Fusión de Albúmina en Líneas Celulares de Mamífero En modalidades preferidas, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , comprenden la forma madura de HSA fusionado ya sea al íérmino-N ó C de la forma madura de una proíeína íerapéuíica o paríe de las mismas (por ejemplo, la forma madura de una proteína terapéutica descriía en la Tabla 1 , o la forma madura de una proíeína íerapéutica mosírada en la Tabla 2 como SEQ ID No:Z). En una modalidad de la preseníe invención , las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención comprenden además una secuencia de señal que dirige el polipéptido de fusión naciente en las trayecíorias de segregación de un huésped utilizado para expresión. En una modalidad preferida, el péptido de señal codificado por la secuencia de señales es eliminado, y la proteína de fusión de albúmina madura es segregada directamente en el medio de cultivo. Las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención, comprenden preferentemente secuencias de señal heteróloga (por ejemplo, la secuencia de señal no activa de una proteína terapéutica en particular) incluyendo, pero sin limitarse a, MAF, I NV; Ig, Fibulina B, Clusterina, Proteína de Enlace 4 del factor de Crecimiento Tipo I nsulina, secuencias líder HSA variantes que incluyen pero no se limitan a, secuencia líder HSA/MAF quimérica u otra secuencia de señal heíeróloga conocidas en la íécnica. Especialmente preferidas son las secuencias de señal que se describen en la Tabla 2, y/o la secuencia de señal que se describe en la sección de "Expresión de Proteínas de Fusión" y/o "Métodos Adicionales de Producción Recombinanfe y Sintética de proteínas de Fusión de Albúmina" de la preseníe especificación. En una de esas preferidas, las proíeínas de fusión de la presente invención comprenden además un residuo de metionina de lerminal-N. Los polinucleóíidos que codifican estos polipéptidos, incluyen fragmentos y/o variantes, también están comprendidas en la presente invención. Las proleínas de fusión de albúmina de sobrenadantes de líneas celulares de mamífero, se purifican de acuerdo con diferentes protocolos dependiendo del sistema de expresión utilizado. Purificación de líneas celulares CHO v 293T La purificación de una proteína de fusión de albúmina de sobrenadantes de células CHO o de sobrenadante de células 293T transfectada en forma temporal, puede comprender la captura inicial con una resina HQ aniónica utilizando un regulador de fosfato de sodio y una elusión de gradiente de fosfato, seguido de cromatografía por afinidad en una columna de Sefarosa Azul FF, utilizando una elusión de gradiente de sal. La columna de Sefarosa Azul FF elimina los contaminantes BSA/fetuina principales. La purificación adicional sobre la resina Poros P160 con un gradiente de fosfato, puede eliminar y disminuir la contaminación por endotoxina, así como concentrar la proteína de fusión de albúmina. Purificación de Línea celular NSO La purificación de una proteína de fusión-albúmina a partir del sobrenadanle de célula NSO o, puede comprender la cromaíografía de iníercambio de aniones Q-Sefarosa, seguido de purificación de SP-sefarosa con un paso de elusión, seguido de purificación Fenil-650M con un paso de elusión , y finalmente, d diafiltración. La proteína purificada posteriormente puede ser formulada mediante intercambio de regulador. EJ EMPLO 9: Expresión Bacteriana de una Proteína de Fusión de Albúmina 0 Se amplifica un polinucleótico que codifica una proteína de fusión de albúmina de la presente invención que comprende una secuencia de señal bacteriana, utilizando cebadores de olinucleólidos PCR que corresponden a los extremos d' y 3' de la secuencia de ADN , para sintetizar fragmentos de inserción. Los d cebadores utilizados para amplificar el polinucleótido que codifica el inserto, deben contener preferentemente sitios de resfricción, tales como BamH I y Xbal, en el extremo 5' de los cebadores con el objeío de clonar el producío amplificado en el vector de expresión. Por ejemplo BamH I y Xbal corresponden a los sitios de enzima de 0 resíricción en el vecíor de expresión bacteriana pQE-9. (Quiagen, I nc. , Chatsworth, CA). Este vector de plásmido codifica la resistencia a antibióticos (Ampr), un origen bacteriano de réplica (ori), un promotor/operador regulable-I PTG (P/O), un siíio de enlace de ribosima ((RBS), una marca de 6-hisíidina (6-His), y siíios de clonación de enzima de resíricción.

El vector pQE-9 es digerido con BamH I y el fragmento amplificado es ligado en el vector PQE-9 que mantiene la estrucíura de lecíura iniciada en el RBS bacíeriano. Posíeriormeníe se utiliza la mezcla de ligadura para íransformar la E. coli M 15/rep4 (Qiagen , I nc. ) que coníiene múlíiples copias del pREP4, plásmido, que expresa el represor lacl y fambién confiere resisíencia kanamicina (Kanr). Los transformadores identifican a través su capacidad de crecer en placas LB y se seleccionan colonias resistentes ampicilina/canamicina. El ADN de plásmido se aisla y confirma mediante análisis de restricción. Los clones que contienen las conslrucciones deseadas se crecen duraníe la noche (O/N) en culíivo líquido en medio LB suplemeníado con íanío Amp (1 00 ug/ml) como Kan (25 ug/ml). El culíivo O/N se uíiliza para inocular un culíivo grande a una proporción de 1 : 1 00 a 1 :250. Las células se crecen para una densidad óptica 600 (O. D.600) de eníre 0.4 y 0.6. Posteriormeníe se agrega I PTG (piranosida de Isopropil-B-D-liogalacto) a una concenlración final de 1 mM . El I PTG induce mediante desactivación en el represor lacl , despeja el P/O que conduce a una expresión de gen incrementada. Las células se crecen duranfe 3 a 4 horas extra. Posteriormeníe las células se recolectan mediante centrifugación (20 minutos a 60000Xg). El pelet de células se solubiliza el agente caoírópico de HCl de Guanidina 6 Molar, o preferentemeníe 8 M de urea y conceníraciones mayores de 0.14 M 2-mercapíoetanol agiíado durante 3 a 4 horas durante una íemperaíura de 4°C (ver la publicación de Buríon y asociados, Eur. J. Biochem. 179:379-387)). Los reslos de células eliminan medianfe centrifugación, y el sobrenadante que contiene el polipépíido se carga en una columna de resina por afinidad de ácido niquel-nitrilo-íri-acético ("Ni-NTA") (disponible en Q 1 AGEN , I nc. , supra). Las proíeínas con una marca enlazan a la resina 6 x His con alta finalidad y pueden ser purificadas en un procedimiento de un solo paso (para deíalles ver la publicación de: The QIAexpressionisí (1996) QIAGEN , I nc. , supra). En síníesis, el sobrenadaníe se cargó en la columna en guanidina-HCI 6 M, pH 8. La columna se lavó primero con 10 volúmenes de guanidina-HC, pH8, posíeriormeníe se lavó con 1 0 volúmenes de guanidina-HCL 6 M pH 6, y finalmente el polipéptido se eluyó con guanidina HCl , pH 5. Posteriormenfe se renaíuraliza la proteína purificada mediante dialización contra solución salina regulada con fosfato (PBS) o regulador Na-acetato 60 mM , pH 6 más NaCI 200 mM. Como alternaíiva, la proteína puede ser duplicada en forma exitosa, y al mismo tiempo inmovilizada en la columna Ni-NTA. Las condiciones de ejemplo son tal y como se indican a continuación: renafuralización utilizando un gradiente de urea 6-M1 M lineal en NaCI de 500 mM, 20% glicerol, Tris/HCl 20mM pH 7.4, que contiene inhibidores de proteasa. La renaturalización de llevarse a cabo durante un período 1 .5 horas o más. Después de la renaturalización las proteínas se eluyen medianíe la adición de imidazol 250 mM . El imidazol se elimina mediante un paso de dialización final contra PBS o regulador de acetato de sodio 50 mM pH 6 más NaCI 200 mM. La proteína purificada se almacena posteriormeníe a una temperatura de 4°C o se congela a una temperatura de -80°C. Además del vector de expresión anterior, la preseníe invención incluye además un vecíor de expresión, denominado pH E4a (Número Acceso ATCC 209645 deposiíado el 25 de Febrero de 1 998) que contiene elementos operadores y promoíores de fago enlazados en forma operable a un polinucleóíido que codifica una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, denominado pHE4a. (Número de Acceso ATCC 209645, deposiíado el 25 de febrero de 1998). Esfe vecíor comprende: 1 ). un gen de neomisinfosfatoíransferasa como un marcador de selección, 2) un origen de réplica E. coli, 3) una secuencia promotora de fago Td, 4) dos secuencias operadoras lac, d) una secuencia Shine-Delgarno, 6) el gen represor de operón de lactosa (Iaclq). El origen de réplica (oriC), se deriva de pUC19 (LTI, Gaithersburg, MD). Las secuencias promotoras y operadoras se elaboran en forma sintética. El ADN puede ser insertado en el pH E4a , resíringiendo el vector con Ndel y Xbal, BamH I , Xhol, ó Asp718, corriendo el producto restringido sobre un gel, y aislando el fragmenío más grande (el fragmento rellenador debe ser de aproximadamente 31 0 pares base). el inserto de ADN se genera de acuerdo con los prolocolos PCR descriíos en la preseníe invención o conocidos en la íécnica, utilizando cebadores PCR que tienen sitios de restricción para (cebador 5 '), y Xbal , Bam H I , Xhol, ó Asp71 8 (cebador 3'). El inserto PCR es gel purificado y restringido con enzimas compatibles. El inserto y el vector se ligan de acuerdo con proíocolos esíándar. El vector construido puede ser susíituido en el protocolo aníerior para expresar proíeína en un sisíema bacteriano. EJ EM PLO 1 0: Aislamiento de un Clon de cADN Seleccionado de la Muestra Depositada Muchas de las construcciones de la fusión de albúmina de la preseníe invención , han sido deposiíadas con el ATCC como se muestra en la Tabla 3. Las construcciones de fusión de albúmina pueden comprender cualesquiera de los siguientes vectores de expresión: el vector de expresión S. cerevisiae de levadura pSAC3d, el vecíor de expresión de mamífero pC4, o el vector de expresión de mamífero pEE 12.1 . Los vectores pSAC3d (SIeep y asociados, 1990, Biotechnology 8:42), pC4 (Acceso ATCC No.209646; Cullen y asociados, Molecular y Celular Biology, 438-447 (1985); osharí y asociados, Cell 41 : 521 -630 (1 985)), y pEE 12.1 (Lonza Biologics, Inc. ; Síephens y Cockett, Nucí. Acids Res 17: 71 10 (1989) Publicación I nfernacional No. WO 89/01036; Murpy y asociados, Biochem J . 227: 277-279 (1 991 ); Bebbington y asociados, bio/Technology 10: 169-175 (1992); Patente Norteamericana 5, 122,464; Publicación Internacional No. WO 86/05807) comprenden un gen de resistencia ampicilina para el crecimiento en células bacterianas. Estos vectores y/o una construcción de fusión de albúmina que los comprenden pueden ser transformada en una cepa de E. coli fal como Síratagene XL-1 Blue (Straíagene cloning Systems, Inc., 1 101 1 N. torrey Pines Road, La Jolla, CA, 92037), utilizando técnicas que se describen en la técnica tales como Hanahan, rociado sobre placas de agar Luria-Caldo que contienen 100 µg/mL de ampicilina, y se crecen durante la noche a una temperatura de 37°C. El material deposiíado a la muestra con el Número de Depósito ATCC asignado mencionado en la Tabla 3 para cualquier consírucción de fusión de albúmina determinado, también puede contener una o más consírucciones de fusión de albúmina adicionales, codificando cada una diferentes proteínas de fusión de albúmina. Por lo tanlo, los depósitos que comparten el mismo número de depósito ATCC que coníienen al menos una construcción de fusión de albúmina identificada en la fila correspondiente de la Tabla 3. Se pueden utilizar dos métodos para aislar una construcción de fusión de albúmina en particular a partir de la muesíra deposiíada de los ADNs de plásmidos mencionados para la consírucción de fusión de albúmina de la Tabla 3.

Método 1 : Clasificación Primero, una construcción de fusión de albúmina se puede aislar directameníe clasificando la muesíra de los ADNs de plásmido deposiíados utilizando una sonda de polinucleótidos que corresponden a la SEQ ID No. X para una consírucción individual, con número I D en la Tabla 1 , uíilizando métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, un polinucleótido específico de 30 a 40 nucleótidos puede ser sintetizado utilizando un siníeíizador de ADN de Applied Biosysíems de acuerdo con la secuencia reportada. El oligonucleótido puede ser etiquetado, por ejemplo, con 32P-y-ATP utilizando la cinasa de polinucleótido T4 y purificada de acuerdo con métodos de rufina. (Por ejemplo, ver la publicación de Maniatis y asociados, Molecular Cloning: A Laboralory manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring, NY (1982)). La consírucción de fusión de albúmina de un depósito ATCC determinado que transforman en un huésped adecuado, tal como se indicó anteriormente (tal como XL-1 Blue (Síratagene)), utilizando técnicas conocidas por los expertos en el arte, tal como las que se proporcionan a través del proveedor de vector o en publicaciones o pateníes relacionadas mencionadas aníeriormenle. Los íransformadores se plaquean en placas de agar de 1 .5% (que contiene el agente seleccionado adecuado, por ejemplo, ampicilinas) a una densidad aproximadameníe de 150 íransformadores (colonias) por placa. Esías placas se clasifican utilizando membranas de Nylon de acuerdo con métodos de rutina para clasificación de colonias bacterianas (por ejemplo, ver la publicación de Sambrook y asociados, Molecular Cloning: a Laboratory Manual , 2da Edición. , (1 989), Cold Spring Harbor Laboraíory Press, páginas 1 .93 a 1 .104), u oirás técnicas conocidas por los expertos en el arte. Méíodo 2: PCR Como alíernaíiva, se puede amplificar el ADN que codifica la proíeína de fusión de albúmina deferminada a paríir de una muestra de una construcción de fusión de albúmina deposiíada con la SEQ I D No:X, por ejemplo, uíilizando dos cebadores de 17 a 20 nucleótidos que hibridan para la construcción de Fusión de Albúmina depositada 5' y 3' para el ADN que codifica una proteína de fusión de albúmina determinada. La reacción de cadena de polimerasa se lleva a cabo bajo condiciones de rutina, por ejemplo, en 25 µl de una mezcla de reacción con 0.5 µg de la plantilla de cADN anterior. Una mezcla de reacción conveniente es 1 .5-d mM MgCI2, 0.01 % (p/v) de gelatina, 20 µg de cada uno de dATp, dCTP, dGTP, dTTP, 25 pmol de cada cebador y 0.25 U nidades de polimerasa Taq. Se llevan a cabo íreinía y cinco ciclos de PCR (desnaíuralización a una temperatura de 94°C durante 1 minulo; endurecimienío a una íemperalura de 5d°C por 1 minuío, elongación a una íemperatura de 72°C durante un minuío) con un ciclador íérmico auíomático Perkin-Elme Cetur. El producto amplificado se analiza mediante elecíroforesis de gel de agarosa y la banda de ADN con peso molecular esperado se corta y purifica.

El producío PCR se verifica para hacer la secuencia seleccionada subclonando y secuenciando el producto de ADN . Están disponibles varios méfodos para la identificación de partes sin codificación 5' ó 3' de un gen el cual no se encuentra en d el clon depositado. Eslos méíodos incluyen pero no se limitan a, sondeo de filtro, enriquecimiento del clon uíilizando sondas específicas y protocolos similares o idénticos a protocolos "RACE" 5' y 3' conocidos en la íécnica. Por ejemplo, esfá disponible un méíodo similar a d' RACE para la generación del extremo d' 0 faltante de una transcripción de longitud total deseada. (Fromont- Racine y asociados, Nucleic Acids Res. , 21 (7): 1683-1684 (1993)). Un oligonucleóíido de ARN específico se liga a los extremos 5' y una población de ARN que contiene en forma presumible transcripciones de ARN del gen de longitud lofal. Un grupo de 6 cebador que conliene un cebador específico para el oligonucleótido de ARN ligado y un cebador específico para una secuencia conocida del gen de interés, se uíiliza para amplificación mediante PCR de la parte 5' del gen de longitud total deseado. Este producío amplificado posíeriormeníe puede ser 0 secuenciado y ufilizado para generar el gen de longitud toíal. Estos métodos anteriores inician con el ARN toíal aislado de la fuente deseada, aunque se pude utilizar poIi-A+ ARN . Posíeriormeníe la preparación de ARN se puede íratar con fosfatasa si es necesario para eliminar grupos de fosfato d' en el d ARN degradado o dañado, ei cual puede interferir con el paso de ligasa de ARN posterior. La fosfatasa posteriormente debe ser desactivada y el ARN tralado con pirofosfaíasa de ácido de íabaco, con el objeío de eliminar la estrucíura de cubierfa que se encuentra en los extremos 5' de los ARNs mensajeros. Esía reacción deja un grupo de fosfato 6' en el extremo 5' de ARN disociado por cubierta, el cual posteriormenle será ligado a un oligonucleófido de ARN utilizando ligasa de ARN T4. Esía preparación de ARN modificada se utiliza como una plantilla para la síntesis de cADN de la primera ARN uíilizando un oligonucleóíido específico de gen. La primera reacción de síntesis de hebra se utiliza, como una plantilla para amplificación PCR de extremo 5' utilizando un cebador específico para el oligonucleótido de ARN ligado y un cebador específico para la secuencia conocida del gen de interés. Posteriormente el producto resultante se secuencia y analiza para confirmar que la secuencia del extremo 5' pertenece al gen deseado. EJ EM PLO 1 1 : Fusiones Multifusión Las proteínas de fusión de albúmina (por ejemplo, que contienen una proteína Terapéutica (o fragmento o variante de la misma) o fusionada a una albúmina (o fragmento o variante de la misma)) pueden ser fusionadas adicionalmente a otras proteínas para generar "proteínas de multifunción". Estas proteínas de mulíifunción pueden utilizarse para una variedad de aplicaciones. Por ejemplo, la fusión de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención a His-íag, HA-tag , proteína A, dominios IgG , y proteína de enlace de maltosa facilitan la purificación. (Ver por ejemplo la Patente 394, 827; trauncecjer y asociados, Nature 331 : 84-86 (1 988)). Las señales de localización nuclear fusionadas a los polipéptidos de la presente invención pueden dirigir la proíeína a una localización subcelular específica, y al mismo tiempo los heterodímeros u homodímeros covaleníes pueden incrementar o disminuir la actividad de una proteína de fusión de albúmina. Además, ia fusión de la secuencia de proteína adicionales a las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención , pueden incrementar además las solubilidad y/o o eslabilidad de la proteína de fusión. Las proteínas de fusión descritas anteriormente pueden elaborarse uíilizando o modificando en forma rutinaria técnicas conocidas en el arfe y/o modificando el siguieníe proíocolo, el cual señala la fusión de un polipéptido a una molécula IgG. Por ejemplo, si se utiliza pC4 (Número de Acceso ATCC No. 209646), la parte Fc humana puede ser ligada en el sitio de clonación BamHI. Se debe observar que el sifio 3' BamHI debe se destruido. Posteriormente, el vector que contiene la parte Fc humana se-restringe con BamH I , lineralizando el vector, y se liga un polinucleótido que codifica una proíeína de fusión de albúmina de la preseníe invención (generado y aislado utilizando técnicas conocidas en el arte), deníro de esíe sitio. Se debe observar que el polinucleótido que codifica la profeína de fusión de la presente invención se clona sin un codón de detección , de otra forma no se producirá una proíeína de fusión que coníenga Fc. Si la secuencia de señal que ocurre naíuralmeníe se utiliza para producir la proteína de fusión de albúmina de la presente invención, pC4 no necesita un segundo pépíido de señal. Como alíernaíiva, si no se uíiliza la secuencia de señal que ocurre naíuralmente, el vecíor puede ser modificado para incluir una señal de secuencia heíeróloga. (Ver por ejemplo la Publicación Inlernacional No. WO 96/34891 ). Región IgG Fc Humana: GGGATCCGGAGCCCAAATCTTCTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAATTCGAGGGTGCACCGTCAGTCTTCC TCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGAtCTCCCGGACTCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTAAGCCACGAAGACC CTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACG TACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACC?GG?CTGGCTG??TGGC??GG?GTACAAGTGCAAGGTCTCCAACA?AGCCCTC CCAACCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGA GCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCj^AAGGCTTCTATCCAAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGC AGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCT CTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGA GCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGT CTCCGGGTAAATGAGTGCGACGGCCGCGACTCTAGAGGAT (SEQ ID NO:52) EJEM PLO 12: Producción de un Aníicuerpo Procedeníe de una Proteína de Fusión de Albúmina Tecnología de Hibridoma Los anticuerpos que enlazan las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y partes de las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención (por ejemplo, la parte de proteína Terapéutica o paríe de albúmina la proleína de fusión) pueden prepararse a través de una variedad de métodos. (Ver por ejemplo la publicación de Currení Proíocols, Capítulo 2). Como ejemplo de dichos métodos, una preparación de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención o una parte de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, se prepara y purifica para volverla substancialmente libre de contaminantes naturales. Dicha preparación se inlroduce posíeriormeníe en un animal con el objeto de producir antisueros policlonales de mayor acíividad específica. Los anticuerpos monoclonales específicos para una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, o una paríe de una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención , se preparan utilizando tecnología de hibridoma (Kohier y asociados, Naíure 266:495 (1975); Kohier y asociados, Eur. J . I mmunol. 6:51 1 (1 976); Kohier y asociados, Eur. J. I mmunol 6:292 (1976); Hammerling y asociados, in: Monoclonal Antibodies y T Cell Hibridomas. Elsevier, N.Y., pp. 563-681 (1981 )). En general, un animal (preferentemente un raíón) se inmuniza con una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención , o una parte de una proíeína de fusión de albúmina de la preseníe invención . Los esplenociíos de los ralones se exíraen y fusionan con una línea de célula de mieloma adecuado. Cualquier línea de célula de mieloma adecuada puede emplearse de acuerdo con la presente invención; sin embargo, es preferible emplear la línea de célula de mieloma de origen (SP20), disponible en el ATCC. Después de la fusión, las células de hibridomas resultantes se mantienen en forma selectiva en un medio HAT; y posteriormeníe se clonan limiíando la dilución íal y como se describe en la publicación de Wands y asociados. (Gasíroenterology 80:225-232 (1981 )). Las células de hibridomas obtenidas a través de dicha selección se ensayan posteriormente para identificar los clones que segregan anticuerpos con la capacidad de enlazar una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención . Como alternativa, los anticuerpos adicionales con la capacidad de enlazar una proleína de la fusión de albúmina de la presente invención, o una parte de la proteína de la fusión de albúmina de la presente invención se pueden producir en un procedimienío de dos pasos uíilizando aníicuerpos aníi-idiotípicos: dicho método hace uso del hecho de que los anticuerpos son propiamente antígenos y por consiguiente, es posible obtener un anticuerpo que enlaza un segundo anticuerpo. De acuerdo con este método, se ufilizan anticuerpos específicos de proteína para inmunizar un animal, preferentemente un ratón. Los esplenocitos de dicho animal se utilizan posteriormente para producir células de hibridoma, y las células de hibridoma se clasifican para identificar clones que producen un anticuerpo cuya capacidad de enlazar a un anticuerpo específico de una proíeína de fusión de albúmina de la présenle invención (o una paríe de una proteína de la fusión de albúmina de la presente invención), puede ser bloqueada a través de la proteína de fusión de la presente invención, o una parte de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención . Dichos anticuerpos comprenden anticuerpos anti-idiotípicos para el anticuerpo específico de la proteína de fusión de la presente invención (o parte de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención) se uíilizan para inmunizar un animal para inducir la formación de anticuerpos específicos adicionales de la proteína de fusión de la presente invención (o paríe de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención). Para uso in vivo de anticuerpos en humanos se "humaniza" un aníicuerpo Dichos anticuerpos pueden ser producidos utilizando consírucciones genéticas derivadas de células de hibridomas que producen los aníicuerpos monoclonales descriíos anferiormente. Los méíodos para producir anticuerpos quiméricos y humanizados son conocidos en la técnica y se describen en la presente invención . (Ver por ejemplo, la publicación de Morrison, Science 229: 1202 (1986); Oi y asociados, BioTechniques 4:214 (1986); Cabilly y asociados, Pateníe Norleamericana No. 4,816,567; Taniguchi y asociados, EP 171496; Morrison y asociados; Neuberger y asociados, Patente Europea No. 173494; Publicación No. WO 8601533; Robinson y asociados, Publicación I nternacional No. WO 8702671 ; Bouliane y asociados, Nature 312:643 (1984); Neuberger y asociados, Nature 314:268 (1985)). Aislamiento de fragmentos de anticuerpos dirigidos contra una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, o una parte de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención a partir de una biblioteca de scFvs. Los genes-V que ocurren naturalmente aislado de PBLs humano se construyen en una biblioíeca de fragmeníos de aníicuerpo que coníienen reacíividades coníra una proleína de fusión de albúmina de la presente invención, o una parte de la proteína de fusión de albúmina de la presente invención , para el cual el donante puede haber sido o no expuesto (ver por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 4,885,793 incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia). Rescate de biblioteca. Una biblioteca de scFvs. Se construye a partir de ARN de País humano tal como se describe en la Publicación I nternacional No. WO 92/01047. Para rescatar los fragmentos de anticuerpos que despliegue de fagos, se utilizan aproximadamente 109 de E. coli que alberga el fagemido para Inocular 60 ml de 2xTY que contienen el 1 % de glucosa y 100 µg/ml de ampicilina (2xTY-AM P-GLU) y secrece en O: D: de 0.8 con agitación . Se uíilizaron d ml de esíe culíivo para inocular 60 ml de 2xTY-AMP-GLU, 2 x 108 TU de auxiliar gen della 3 (gen deiía M13 III, ver Publicación Internacional No. WO 92/01 047) se agregan al cultivo y se incuban a una íemperatura de 37°C durante 45 minuíos en agiíación y posteriormeníe a una íemperatura de 37°C durante 46 minutos con agiíación. El culíivo se cenírifuga a 4000 r.p. m durante 10 minutos, y el peleí se suspende nuevameníe en 2 lifros de 2xTy que contiene 100 µg/ml de ampicilina y 60 µg/ml de canamicina y secrece durante la noche. Los fagos se preparan tal y como se describen en la publicación I nternacional No. WO 92/01047. El gen delía M 13 III , se prepara como se indica a coníinuación: el fago auxiliar del gen delía M 13 III no codifica la proíeína de gen III, por lo lanío el fage(mido) que despliega fragmentos de anticuerpo tiene una mayor avidez de enlazar al anlígeno. Se elaboran partículas del gen delta M 13 III infeccioso, creciendo el fago auxiliar en células que albergan un derivado pUC1 9 suministrando la proteína de gen III lipo natural durante la morfogénesis de fago. El cultivo se incuba durante 1 hora a una temperaíura de 37°C sin agitación y posteriormeníe durante una hora adicional a la temperatura de 37°C con agitación. Las células se giran (l EC-Centra 8,400 r. p. m durante 10 minutos), se suspenden nuevamente en 300 ml de caldo 2xTY que confiene 100 µg de ampicilina/ml y 25 µg de canamisina/ml (2xTY-AM P-KAN) y se crecen durante la noche, agitando a una temperatura de 37°C. las partículas de fago se purifican y concentran a partir del medio de cultivo a través de 2 precipitaciones PGS (Sambrook y asociados, 1990), suspendidas nuevamente en 2 ml de PBS y se pasan a íravés de un filtro de 0.45 µm (Minisart NML; Sarforius) para producir una conceníración final de aproximadamente 1013 de unidades de transducción/ml (clones resistenfes a ampicilina). Uso de placas plásticas o superficies cubiertas con antígenos o anticuerpos para separar o seleccionar células particulares con receptores adecuados "Panning" de la biblioteca. Se recubren inmonotubos (NunC) (duraníe la noche en PBS con 4 ml ya sea de 1 00µg/ml ó 10µg/ml de una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención, o una parte de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención. Los tubos de bloquean con Marbel-PBS al 2% durante 2 horas a una temperatura de 37°C y posteriormente se lavan 3 veces en PBS. Se aplican aproximadamente 1013 TU de fago al tubo y se incuban duraníe 30 minuíos a temperatura ambiente, reboíando y bajo una mesa giraíoria y posíeriormeníe se dejan aseníar durante otras 1.5 horas. Los lubos se lavan 10 veces con Tween-20 al 0.1 % PBS 10 con PBS. Los fagos eluyen agregando 1 ml de trietilamina 100 mMy y se giran 15 minutos arriba y abajo y sobre una Tabla giratoria después de lo cual la solución se neutraliza inmediatamente con 0.5 ml de 1 .0M Tris-HCL, PH 7.4. Posteriormente los fagos se utilizan para infectar 1 0 ml de mid-log E. coli TG l incubando el fago eluido con bacterias durante 30 minuíos a una temperaíura de 37°C. Posteriormente los E. coli se plaquean en placas TYE que contienen glucosa al 1 % y 100 µg/ ampicilina. La biblioteca bacteriana resulíante se rescata posteriormeníe con el fago auxiliar de gen delía 3 fal como se describe aníeriormente para preparar, fagos para una vuelta de selección subsecuente. Este proceso se repite posteriormeníe para un total de 4 vueltas de purificación de afinidad con lavado de tubo incrementado 20 veces con PBS, Tween-20 al 0.1 % y 20 minufos con PBS para las vuelías 3 y 4. Caracterización de enlazadores. El fago eluido de la tercera y cuarta vuelta de selección se utilizan para infecíar, E. coli HB 2151 y se produce scFv soluble (Marks, y asociados, 1991 ) a partir de colonias simples para ensayo. Se llevan a cabo ensayos ELISA con placas de microtitulación recubiertas ya sea con 10 pg/ml de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, o una parte de una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención, en 60 mM de bicarbonato, pH 9.6. Los clones posiíivos en el ensayo ELISA, se caracíerizaron en forma adicional mediante huellas de PCR (ver por ejemplo la publicación Internacional No. WO 92/01047) y posteriormeníe medianíe secuenciación. Estos clones positivos medianíe ELISA, también pueden ser caracterizados en forma adicional mediante técnicas conocidas en el arte, íal como por ejemplo, mapeo de epítopes, afinidad de enlace, transducción de señal de receptor, capacidad e bloquear o inhibir en forma competitiva el enlace de anticuerpo de un aníígeno y actividad agonista o antagonisía competiíiva. EJEMPLO 13: Ensayo de Capíación de [Hl-2-con Desoxiglucosa La adiposa, músculo esqueléíico e hígado son íejidos sensibles a insulina. La insulina puede estimular el transporfe/captación de glucosa en esíos tejidos. En el caso de adiposa y músculo esquelético, la insulina inicia la transducción de señal que eventualmeníe conduce la franslocación de la molécula transporíadora de glucosa 4, GLUT4, de un compartimienío iníracelular especializado a la superficie celular. Una vez en la superficie celular, el GLUT4 permite la captación/ fransporte de glucosa. Capíación de f3Hp-2-Desoxiglucosa Se puede uíilizar un número de líneas celulares relacionadas con adiposa y músculo para probar la actividad de captación/íranscripción de glucosa en la ausencia o presencia de una combinación de cualquiera de uno o más de los fármacos terapéuticos descritos para el tratamiento de diabetes melitus. En particular, las células de fibroblasto de múrido, el 3T3-LI y las células de músculo esquelético de múrido L6 pueden ser diferenciadas en adipositos into 3T3-LI y en miotubos, respecíivamente, para servir como modelos in vitro adecuados para el ensayo de captación de [3H]-2-de oxiglucosa (Urso y asociados, J Biol Chem, 274(43): 30864-73 ( 1999); Wang y asociados, J Mol Endocrinol, 19 (3) 241 -8 (1997); Haspel y asociados, J. Membr Biol, 169 (1 ): 45-53 (1999); Taakiridis y asociados, Endocrinology, 136 (10): 4315-22 (1 995)). En síníesis, se fransfirieron 2 x 105 células/100 µL de adipositos o células L6 diferenciadas, a un Cultivo-Tejido de 96 depósitos "TC", trafado, por ejemplo, recublerío con 50 µg/mL de poli-L-lisina, placas en medio de posí-diferenciación y se incubaron durante la noche a una temperatura de 37°C en CO2 al 5%. Las células se lavaron primero una vez con medio de DMEM de glucosa de bajo nivel libre de suero y posteriormenle se dejan en inanición con 100 µL/depósito del mismo medio y con 100 µL/depósito ya sea de regulador o de una combinación de cualesquiera de uno o más de los fármacos terapéuticos descritos para el íratamienío de diabetes melitus, por ejemplo, en conceníraciones en incremenío de 1 nM , 10 nM y 1 00 nM de terapéuticos de la presente invención (por ejemplo, fusiones específicas como se describen por ejemplo, en la SEQ I D NO:Y y fragmentos y variantes de las mismas) durante 16 horas a una temperaíura de 37°C en la ausencia o presencia de insulina 1 nM . Las placas se lavaron fres veces con 100 µL/depósilo de solución salina regulada con HEPES. La insulina se agregó a 1 nM en solución salina regulada con HEPES durante 30 minutos a una temperaíura regulada de 37°C en la presencia de 10 µL de [3H]-2-desoxigIucosa eíiqueíada (Amersham, #TRK672) y 10 µM de 2-desoxiglucosa no efiquetada (SIGMA, D-3179). Como conírol, se llevaron a cabo las mismas condiciones excepío en la ausencia de insulina. Se agregó una concentración final de 10 µM de citocalasina B (SIGMA, C6762) a 100 µL/depósito en un depósito separado para medir la captación no específica. Las células se lavaron tres veces con solución salina regulada con HEPES. Se etiqueíaron, por ejemplo, 10 µM de [3H]-2-desoxiglucosa, y no se etiqueíaron , por ejemplo, 1 0 µM de 2-desoxiglucosa, se agregaron duraníe 10 minutos a temperaíura ambiente. Las células se lavaron tres veces con Solución Salina Regulada por Fosfaío, "PBS". Las células se usaron al momenío de la adición de 150 µL/depósiío de NaOH 0.2 N y con la subsecueníe incubación con agiíación durante 20 minutos a íemperaíura ambieníe. Posíeriormeníe las mueslras se íransfirieron a un frasco de centelleo al cual se le agregaron 5 mL de fluido de centelleo. Los frascos se contaron en un contador de Beta-Cenfelleo. La captación en condiciones de duplicado, siendo diferencia la ausencia o presencia de insulina, se deíerminó con la siguiente ecuación: [(Conteo de insulina por minuto "cpm" - cpm No Específico)/(cpm Sin I nsulina - cmp No Específico)]. Las respuestas promedio caen dentro de los límiíes de aproximadamente 5 veces a 3 veces de los controles para adipositos y miotubos, respectivamente. Diferenciación de Células Las células se dejaron volverse completameníe confluentes en un frasco T-76 cm2. El medio se eliminó y reemplazó con 25 mL de medio de pre-diferenciación durante 48 horas. Las células se incubaron a una temperatura de 37°C, en CO2 al 5%, humedad al 85%. Después de 48 horas, se eliminó el medio de pre-diferenciación y se reemplazó con 25 mL de medio de diferenciación durante 48 horas. Las células se incubaron nuevameníe a una íemperaíura de 37°C, en CO2 al 5% , humedad al 85%. Después de 48 horas, el medio se eliminó y se reemplazó con 30 mL de medio de posí-diferenciación. Se maníuvo el medio de posl-diferenciación de 14 a 20 días o hasta que se logró la diferenciación toíal. El medio se cambió cada 2 a 3 días. Los adipositos humanos se pueden comprar en Zen-Bio, INC (# SA-1096). EJEM PLO 14: Ensayo In Vitro de I ncorporación de f3H"|-Timidina en Líneas de Célula Pancreática Se ha mosírado recieníemeníe que GLP-1 induce la diferenciación de la línea de célula epitelial ductal pancreática de rata ARI P, en una forma dependiente de tiempo y dosis que está asociada con un incremento en la Homeocuadro-1 Duodenal de Isleto (I DX-1 ) y niveles de mARN de insulina (Hui y asociados, 2001 , Diabetes 50(4): 785-96). A su vez, el I DX-1 incrementa los niveles de mARN del receptor GLP-1 . Tipos Celulares Probados Células RI N-M : Estas células están disponibles en la Recolección de Cultivo de Tejido Tipo Americano (Número de Línea Celular ATCC CRL-2057). La línea celular RIN-M se derivó de un íumor de célula de isleío de raía transplantable inducido por radiación. La línea se estableció a partir de un xenoinjerto de ratón desprotegido del íumor. Las células producen y segregan hormonas del polipépíido de isleto, y producen descarboxilasa de L-dopa (un marcador para células que tiene capíación del precursor de amina y descarboxilación , o acíividad APU D). Células ARI P: Esías células exocrinas pancreáticas de morfología epitelial disponibles en la Recolección de Cultivo de Tejido Tipo Americano (Número de Línea Celular ATCC CRL-1674). Ver también las referencias: Jessop, N.W. y Hay, R.J. , "Characterisíics of two pancreatic exocrine cell Unes derived from transplantable tumors", I n Vitro 16: 212, ( 1 980); Cockell , M. et al. , "Identification of a cell-specific DNA-binding activiíy that interacís with a transcriptional activator of genes expressed in the acinar páncreas", Mol. Cell. Biol. 9: 2464-2476, (1989); Roux, E. et al. , "The cell-specific transcription factor PTF 1 contains two different subuniís íhal inferací with the DNA" Genes Dev. 3: 161 3-1624, (1989); and, Hui, H. , ef al. , "Glucagon-like peptide 1 induces differentiation of islet duodenal homecobox-1 -posiíive pancreatic ductal cell into insulin-secreíing cells", Diabetes 50: 785-796 (2001 ). Preparación de Células La línea de célula RI N-M se crece en medio RPM I 1640 (Hyclome, #SH300027.01 ) con suero de bovino fetal al 10% (HyClone, #SH30088.03) y se subcultiva cada 6 a 8 días a una proporción de 1 :3 a 1 :6. El medio se cambia cada 3 a 4 días. Se crece la línea celular ARI P (ATCC #CRL-1674) en un medio F 12K de Ham (ATCC, #30-2004) con 2 mM de L-glutamina ajustado para que coníenga 1 .5 g/L de bicarbonaío de sodio y suero de bovino fetal al 10% . Se subcultiva la línea celular ARI P en una proporción de 1 :3 a 1 :6 dos veces por semana. El medio se cambia cada 3 a 4 días. Protocolo de Ensayo Las células se siembran a 4000 células/depósito en placas de 96 depósiíos y se cultivan duranle 42 a 72 horas a una confluencia del 50%. Las células se cambian a medio libre de suero a una concentración de 100 µL/depósito. Después de la incubación duraníe 48 a 72 horas, el suero y/o los terapéuticos de la presente invención (por ejemplo, proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y fragmentos y variantes de los mismos) se agregan al depósito. La incubación persiste durante 36 horas adicionales. Se diluye [3H]-Timidina (5-20) Ci/mmol) (Amersham Pharmacia, #TRK120) a una concentración de 1 microCurie/5 microliíros. Después de 36 horas de incubación , se agregaron 5 microliíros por depósilo durante 24 horas adicionales. La reacción se termina lavando las células suavemente con Solución Salina Regulada por Fosfato, "PBS", una vez. Posteriormeníe las células se fijan con 100 microlilros de TCA enfriado con hielo al 10% durante 15 minutos a una temperaíura de 4°C. El PBS se elimina y se agregan 200 microliíros de NaOH 0.2 N . Las placas se incuban duraníe 1 hora a íemperatura ambiente con agitación . La solución se transfiere a un frasco de centelleo y se agregan 5 mL de fluido de centelleo compatible con soluciones acuosas y se mezcla vigorosamente. Los frascos se cuentan en un contador de centelleo beta. Como control negativo, se utiliza únicamenfe regulador. Como conírol positivo, se utiliza suero de cabra fetal . EJEM PLO 15: Ensayo para Glicosuria La glicosuria (por ejemplo, exceso de azúcar en la orina), puede ser fácilmente ensayada para proporcionar un índice del estado de enfermedad de diabetes meliíus. La orina en exceso en una muestra del paciente, cuando se compara con una muestra de un pacieníe normal, es siníomática de I DDM y N I DDM . La eficacia del íraíamienío de dicho paciente que tiene I DDM y NI DDM , se indica medianíe una disminución resulíaníe en la caníidad de glucosa en exceso en la orina. En una modalidad preferida, para el monitoreo de I DDM y N I DDM, las muestras de orina de pacienles se ensayan con respecto a la presencia de glucosa utilizando técnicas conocidas en el arte. La glucosuria en humanos se define mediante una concentración de glucosa urinaria que excede 100 mg por 100 mi. Los niveles de azúcar en exceso en estos pacieníes que exhiben glucosuria, pueden medirse incluso en forma más precisa teniendo muestras de sangre y ensayando la glucosa de suero. EJ EM PLO 16: Ensayos de Defección de Estimulación o I nhibición de Proliferación v Diferenciación de Célula B La generación de respuestas inmune humorales funcionales requiere señalización tanto soluble como de cognato entre las líneas de linaje-B y su microambiente. Las señales pueden impartir un estimulo positivo que permiíe que una célula de linaje-B coníinué su desarrollo programado, o un esíimulo negaíivo que instruya la célula a detener su trayecíoria de desarrollo normal. Hasía la fecha, se han descubierto numerosas señales estimuladoras e inhibidoras para influenciar la respuesta de célula B, incluyendo IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-10, IL-13, IL-14 e IL-16. En forma interesante, estas señales son por sí mismas efecíores débiles pero pueden, en combinación con varias proíeínas co-estimuladoras, inducir la acíivación, proliferación, diferenciación, dirección hacia el blanco, íolerancia y muerfe eníre poblaciones de célula B. Una de las clases de proteína co-estimuladora de célula-B mejor esfudiadas, es la súperfamilia-TNF. Dentro de esta familia, CD40, CD27 y CD30 junto con sus respectivos ligandos CD 154, CD70 y CD163, se ha descubierto que regulan una variedad de respuesfas inmune. Los ensayos que permiten la detección y/o observación de la proliferación y diferenciación de estas poblaciones de célula-B y sus precursores, son herramientas valiosas en la determinación de los efectos que varias proíeínas pueden íener en estas poblaciones de célula-B en términos de proliferación y diferenciación. Más adelanfe se describen dos ensayos diseñados para permiíir la detección de la diferenciación, proliferación o inhibición de poblaciones de célula-B y sus precursores. En proteínas de fusión de Albúmina-Ensayo In Vitro de la presente invención (incluyendo proteínas de fusión que contienen fragmentos o varianles de proteínas Terapéuticas y/o albúmina o fragmentos o variantes de albúmina), se pueden evaluar con respecto a su capacidad para inducir la activación , proliferación , diferenciación o inhibición y/o muerte en población de célula-B y sus precursores. La actividad de una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención en células-B de amígdala humana purificadas, medias en forma cualitativa con respecto a un rango de dosis de 0.1 a 1 0,000 ng/mL, se evalúa en un ensayo de co-estimulación de linfocito-B estándar en donde las células B de amígdala purificada se cultivan en presencia ya sea de Cowan 1 Staphylococcus aureus fijada con formalina (SAC) o anticuerpo IgM anti-humano inmovilizado como el agente de imprimación. Las segundas señales, íales como I L-2 e I L-1 5 sinergizan con la reíiculación SAC e IgM para provocar proliferación de célula-B tal como se mide mediante incorporación de íimidina-íitulada. Los agenles de sinergenización novedosos pueden ser fácilmente identificados utilizando este ensayo. El ensayo comprende aislar células B de anginas humanas, mediante agotamiento de cuentas magnéticas (MACS) de células posiíivas-CD3. La población de células resullante es mayor al 96% de células B tal como se evalúa mediante la expresión de CD45R(B220). Se colocaron varias diluciones de cada muesíra en depósitos individuales de una placa de 96 depósitos, a la cual se agregaron células-B 105 suspendidas en medio de cultivo (RPM I 1640 que contiene 10% FBS, 5 x 10"5M 2ME, 100Ug/ml penicilina, 10ug/ml estreplomicina y 1 O"5 dilución de SAC) en un volumen total de 150 ul. La proliferación o inhibición se cuantifican mediante una pulsación de 20h (1 uCi/depósito) con 3H-limidina (6.7 Ci/mM) comenzando 72 horas después de la adición del facíor. Los confroles positivos y negativos son I L2 y medio, respectivamente. Ensayo in vivo - se inyectaron ratones BALB/c (i.p. ) dos veces por día únicamente con regulador, o 2 mg/Kg de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención (incluyendo proteínas de fusión que contienen fragmentos o variantes de proíeínas Terapéuticas y/o albúmina o fragmentos o variantes de albúmina). Los raíones recibieron ese fratamienío durante 4 días consecutivos, tiempo en el cual se sacrificaron y se recolecíaron para análisis varios lejidos y suero. La comparación de las secciones H&E de bazos normales y bazos íraíados con profeína de fusión de albúmina de la presente invención, identificaron los resultados de la actividad de las regiones de pulpa roja, que pueden indicar la activación de la diferenciación y proliferación de poblaciones de célula-B. Se utilizaron estudios inmunohistoquímicos utilizando un marcador de célula-B, anti-CD4dR(B220), para determinar si cualesquiera cambios fisiológicos de las células esplénicas, tal como desorganización esplénica se deben a la representación de célula-B incrementada dentro de zonas de célula-B definidas de manera suelta que infiltran regiones de célula-T establecidas. Los análisis citométricos de flujo de los bazos de ratones tratados con la proteína de fusión de albúmina se utilizan para indicar si la proleína de fusión de albúmina ¡ncremenía en forma específica la proporción de células B ThB+ , CD45R(B229)dull con respecto a lo que se observa en ratones de control. De Igual forma, una consecuencia anticipada de representación de célula-B madura incrementada in vivo, es un incremento relaíivo en íiíuladores Ig de suero. Por consiguiente, se comparan los niveles IgM e IgA de suero entre ralones traíados con regulador y proíeína de fusión. EJ EMPLO 17: Ensayo de Proliferación de Célula T Se lleva a cabo un ensayo de proliferación inducido-CD3 en PBMCs y se mide a través de la captación de 3H-timidina. El ensayo se lleva a cabo como se indica a continuación. Se recubrieron placas de novenía y seis depósitos con 100 µl/depósito de mAb para CD3 (H IT3a, Pharmingen) o mAb de conírol de isoíipo correspondido (B33.1 ) duraníe la noche a una íemperatura de 4°C (1 µg/ml en regulador de bicarbonato .OdM , pH 9.5), posleriormenle se lavaron íres veces con PBS. Se aislaron PBMC medianíe cenírifugación de gradiente F/H a partir de sangre periférica humana y se agregaron a depósiíos por cuadruplicado (5 x 104/depósito) de placas recubiertas con mAb en RPMI que contiene FCS al 10% y P/S en la presencia de diversas concentraciones de una proteína de fusión de albúmina de la preseníe invención (incluyendo proíeínas de fusión que coníienen fragmentos o variantes de proíeínas Terapéuficas y/o albúmina o fragmeníos o varianles de albúmina) (volumen toíal 200 µl). El regulador de proíeína relevante y medio solo, son controles. Después de 48 horas, el cultivo a una temperatura de 37°C, las placas se giraron duraníe 2 minuíos a 1000 rpm y se eliminaron 1 00 µl de sobrenadante y se almacenaron a una temperatura de -20°C para medir el I L-2 (u otras ciíocinas) si se observa efecto en la proliferación. Los depósitos se suplementaron con 100 µl de medio que coníienen 0.5 uCi de 3H-íimidina y se cultivaron a una temperaíura de 37°C duraníe 18 a 24 horas. Los depósiíos se recolectaron y se utilizó la incorporación de 3H-timidina como una medida de proliferación. Anti-CD3 solo es el control positivo para la proliferación. También se utilizó el I L-2 (100 U/ml) como un control que aumenta la proliferación. El anticuerpo de control que no induce la proliferación de células-T se induce como el control negaíivo para los efectos de proteínas de fusión de la presente invención. EJEMPLO 1 8: Efecío de Proteínas de Fusión de la Presente Invención en Expresión de MHC Clase I I Moléculas Co-estimuladoras y de Adhesión y Diferenciación Celular de Monociíos v Células Dendrííicas Humanas Derivadas de Monocitos Las células dendríticas se generaron medianíe la expresión de precursores de proliferación que se encuentran en la sangre periférica: PBMC adherente o fracciones monocíticas desfiladas se cultivan durante de 7 a 10 días con GM-CSF (50 ng/ml) e l L-4 (20 ng/ml). Estas células dendríticas íienen el fenotipo caracterísíico de células inmaduras (expresión de CD 1 , CD80, CD86 y antígenos MHC clase I I ). El tratamiento con facíores de acíivación, fal como TNF-a, origina un cambio rápido en el fenotipo de superficie (expresión incrementada de MHC clase I y I I , moléculas coestimuladoras y de adición, desactivación de FC?RII, acíivación de CD83). Eslos cambios de correlacionan con la capacidad incremeníada de preseníación de aníígenos y con maduración funcional de las células dendríticas. El análisis FACS de antígenos de superficie se lleva a cabo como se indica a coníinuación. Las células se íraíaron de 1 a 3 días con conceníraciones y se incrementó de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención o LPS (control positivo), lavado con PBS que contiene BSA al 1 % y azida de sodio 0.02 mM , y posteriormenie se incubaron con una dilución 1 :20 de aníicuerpos monoclonales etiqueíados con FITC o PE adecuados duraníe 30 minuíos a una temperatura de 4°C. Después de un lavado adicional, las células etiquetadas se analizaron mediante citomefría de flujo en un FACScan (Becton Dickinson). Efecto en la Producción de Citocinas. Las citocinas generadas por las células dendríticas, en particular I L-2, son importaníes en el inicio de respuesías inmunes dependieníe de célula-T. I L-2 influencia fuertemente el desarrollo de la respuesta inmune de célula-T auxiliar Th 1 , e induce la función de célula T y N K citotóxica. Se utilizó un ensayo ELISA par medir la liberación I L-12 como se indica a coníinuación . Se tratan células dendríticas con (106/ml) con concenlraciones en incremento de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención durante 24 horas. Se agrega LPS (100 ng/ml) al cultivo celular como un control positivo. Posíeriormente los sobrenadantes de los cultivos celulares se recolecían y analizan con respecío al coníenido I L-12 utilizando un equipo de ensayo ELISA comercial (por ejemplo, R & D Systems (Minneapolis, MN)). Los proíocolos estándar abastecidos con esfos equipos son los utilizados. Efecto en expresión de MHC Clase I I , moléculas co-esíimuladoras v de adhesión . Se pueden identificar en los monocitos íres familias mayores de aníígenos de la superficie celular: moléculas de adhesión, moléculas involucradas en la presentación de antígenos y receptor Fc. La modulación de la expresión de antígenos MHC clase II y oirás moléculas coestimuladoras, tales como B7 y ICAM-1, puede dar como resultado cambios en la capacidad de preseníación de antígeno de los monocitos y la capacidad para inducir la actividad de célula T. La expresión incrementada de receptores Fc se puede correlacionar con la acíividad cifotóxica de monociíos mejorada, liberación de cilocina y fagocitosis. Se utiliza el análisis FACS para revisar los antígenos de superficie como se indica a continuación. Se tratan monocitos de 1 a d días con conceníraciones en incremenío de una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención o LPS (control positivo), lavado con PBS que contiene BSA al 1% y azida de sodio 0.02 mM y posteriormeníe se incuban con una dilución de 1:20 de aníicuerpos monoclonales etiquetados con FITC o PE adecuados durante 30 minutos a una temperatura de 4°C. Después de un lavado adicional, las células etiquetadas se analizan mediante citomeíría de flujo en un FACScan (Becton Dickinson). Activación de monociíos v/o supervivencia incrementada. Los ensayos para moléculas que activan (o como alíernativa, desactiva) monociíos y/o incremenían la supervivencia de monocilos (o como alternativa, disminuyen la supervivencia de monocitos) es conocida en la técnica y puede ser aplicada rutinariamente para delerminar si una molécula de la preseníe invención funciona como un inhibidor o activador de monocitos. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, pueden ser clasificadas utilizando los tres ensayos que se describen más adelaníe. Para cada uno de estos ensayos, se purificaron células mononucleares de sangre periférica (PBMC) a partir de leucoplaquefes de donantes simple (American Red Cross, Baltimore, M D) mediante cenírifugación a través de un gradiente Hisfopaco (Sigma). Los monocitos se aislaron de PBMC mediante destilación cenírífuga de contraflujo. Ensayo de Supervivencia de Monocitos. Los monocitos de sangre periférica humanos perdieron progresivamente la viabilidad, cuando se cultivaron en la ausencia de suero u otros esíímulos. Su mueríe resultó de procesos regulados internameníe (apoptosis). Además del cultivo de factores de activación, tal como TNF-alfa, mejora dramáticameníe la supervivencia celular y previene la fragmeníación del ADN . Se utilizó íinción con yoduro de propidio (Pl ) para medir la apoptosis como se indica a continuación. Se cultivaron monocitos durante 48 horas en íubos de polipropileno en un medio libre de suero (conírol positivo), en la presencia de 100 ng/ml de TN F-alfa (control negativo) y en la presencia de diversas concentraciones de la proteína de fusión que será probada. Las células se suspendieron a una concentración de 2 x 1 06/ml en PBS que contiene Pl a una concentración final de 5 µg/ml, y posteriormeníe se incubaron a íemperaíura ambiente durante 5 minutos antes de análisis FACScan . La capíación de Pl ha demostrado correlacionarse con la fragmentación de ADN en este paradigma experimental. Efecto en liberación de citocina. Una función importante de los monocitos/macrófagos de su actividad reguladora en otras poblaciones celulares del sistema inmune a través de la liberación de citocinas después de la estimulación . Un ensayo ELI SA para medir la liberación de citocina, se lleva a cabo como se indica a continuación . Se incubaron monociíos humanos a una densidad de 5 x 105 células/ml con conceníraciones en incremento de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y bajo las mismas condiciones, aunque en la ausencia de la proteína de fusión. Para producción IL-12, las células se cebaron durante la noche con I FN (1 00 U/ml) en la presencia de la proteína de fusión. Posteriormente se agregó LPS (10 ng/ml). Se recolectaron medios acondicionados después de 24 horas y se mantuvieron congelados hasta su uso. Posíeriormeníe se llevo a cabo la medición de TNF-alfa, I L-10, MCP-1 e I L-8, utilizando equipo de ensayo ELISA comercialmente disponible (por ejemplo, R & D Systems (Minnneapolis, MN)) y aplicando los proíocolos esíándar proporcionados con el equipo. Ráfaga de oxidación. Los monocitos purificados se plaquearon en placas de 96 depósitos a una concenlración de 2-1 x 105 célula/depósiío. Se agregaron concentraciones en incremento de proteína de fusión de albúmina de la presente invención a los depósitos en un volumen total de 0.2 ml de medio de cultivo (RPMI 1640 + 10% FCS, glutamina y antibióíicos). Después de 3 días de incubación, las placas se centrifugaron y el medio se eliminó de los depósitos. A las monocapas de macrófago, se les agregaron 0.2 ml por depósito de solución de rojo fenol (140 mM NaCI, regulador de fosfaío de sodio 10 mM pH 7.0, dextrosa 5.5 mM , rojo de fenol 0.56 mM y 19 U/ml de HRPO), junto con el estimulante (200 nM PMA). Las placas se incubaron a una temperaíura de 37°C duranle 2 horas y la reacción se deíuvo agregando 20 µl de NaOH 1 N por depósito. La absorbancia se leyó a 61 0 nm. Para calcular la cantidad de H2O2 producido por los macrófagos, se llevo a cabo una curva estándar de una solución de H2O2 de molaridad conocida por cada experimento. Eiemplo 19: El Efecto de las Proteínas de Fusión de Albúmina de la Presente I nvención en el Crecimiento de Células Endoteliales Vasculares El día 1 , se sembraron células endoíeliales de vena umbilical humanas (H UVEC) a una densidad de pialo de 2-5 x 1 04 células/35 mm en medio M 199 que contiene suero de bovino fetal al 4% (FBS), 16 unidades/ml de heparina y 50 unidades/ml de suplementos de crecimienío celular endoíelial (ECGS, Biotechnique, I nc). El día 2, el medio se reemplazo con M 199 que contiene FBS al 10%, 8 unidades/ml de heparina. Una proteína de fusión de albúmina de la presente invención , y controles positivos, tales como VEGF y FGF básico (bFGF) se agregaron en diversas conceníraciones. Los días 4 y 6, se reemplazo el medio. En el día 8, se delerminó el número de células con un Coníador Couníer. Un incremento en el número de células HUVEC indica que la proteína de fusión puede proliferar células endoteliales vasculares y al mismo tiempo una disminución en el número de células HUVEC indica que la proteína de fusión inhibe las células endoteliales vasculares. EJ EMPLO 20: Modelo de Curación de Heridas de Cornea de Rata Esíe modelo animal muesíra el efecto de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención en neovascularización. El protocolo experimeníal incluye: Hacer una incisión de 1 -1 .5 mm de longiíud desde el ceníro de la cornea en la capa esíromal. Inseríar una espátula debajo del borde de la incisión que se orienta hacia la esquina exíerna del ojo. Hacer una cavidad (si su base es de 1 -1 .5 mm desde el borde del ojo). Colocar un pelleí, que contiene 50ng-50µg de una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención dentro de la cavidad. También se puede aplicar tratamiento con una proteína de fusión de albúmina de la presente invención en forma tópica a las heridas de la cornea en un rango de dosificación de 20mg-500mg (tratamiento diario durante 5 días). EJ EM PLO 21 : Modelos de Curación de Heridas Dañadas por Glucocorticoides v de Raíón Diabético Modelo de Ratón Diabético db+/db+ Para demostrar que una proteína de fusión de albúmina de la presente invención acelera el proceso de curación, se utilizó el modelo de ratón genéticamente diabético de curación de heridas. Se caracterizó el modelo de curación de heridas de grosor íotal en raíones db+/db + , modelo clínicamente relevante y reproducible de curación de heridas dañadas. La curación de la herida diabética depende de la formación de tejido de granulación y la re-epiíelización en lugar de contracción (Gartner, M . H. y asociados J. Surg. Res. 52: 389 (1992); Greenhalgh, D.G. y asociados, Am. J. Pathol. 136: 1235 (1990)). Los animales diabéticos tienen muchas de las características observadas en diabetes melitus Tipo I I . Los ratones homocigosos (db+/db+) son obesos en comparación con sus congéneros heterocigozos normales (db+/+m). Los raíones diabéíicos mutaníes (db+/db+) tienen una sola mutación recesiva autosomal en el cromosoma 4 (db + ) (Coleman y asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 11: 283-293 (1982)). Los animales muestran polifalgia, polidipsia y poliuria. Los ratones diabéticos mulaníes (db+/db + ) íienen una glucosa sanguínea elevada, niveles de insulina incremeníados o normales, e inmunidad íransmiíida por célula suprimida (Mandel y asociados, J. Immunol. 120: 1375 (1978); Debray-Sachs, M . y asociados, Clin, Exp. Immunol. 5 (1 ): 1 -7 (1983); Leiter y asociados, Am. J. of Pathol. 1 14: 46-55 (1985)). La neuropatía periférica, complicaciones miocardíacas y lesiones microvasculares, grosor de membrana de base y anormalidades de filtración glomedular han sido descritas en esíos animales (Norido, F. y asociados, Exp. Neurol. 83(2): 221-232 (1984); Roberíson y asociados, Diabetes 29(1): 60-67 (1980); Giacomelli y asociados, Lab Invest. 40(4): 460-473 (1979); Coleman. D.L., Diabetes 31 (Suppl): 1-6 (1982)). Esfos ratones diabéticos homocigosos desarrollan hipergiucemia que es resisíeníe a insulina análogo a la diabetes humana tipo II (Mandel y asociados, J. Immunol. 120: 1375-1377 (1978)). Las caracíerísíicas observadas en esíos animales requiere que la curación en este modelo puede ser similar a la curación observada en diabetes humana (Greenhalgh, y asociados, Am. J. of Pathol. 136: 1235-1246 (1990)). Se uíilizaron raíones hembra diabéíicos genéticamente C57BL/KsJ (db+/db+) y sus congéneros heterocigosos no diabéticos (db+/+m) en este estudio (Jackson Laboratories). Los animales se compraron con 6 semanas de edad y a las 8 semanas de edad se comienza el estudio. Los animales se alojaron en forma individual y recibieron alimento y agua ad libitum. Se llevaron a cabo todas las manipulaciones utilizando fécnicas asépticas. Los experimentos se llevaron a cabo de acuerdo con las reglas y lineamienlos de Human Genome Sciences, Inc. Insliíutional Animal Care and Use Commitíee, y los Lineamientos para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio. Se llevó a cabo el protocolo de curación de acuerdo con méíodos previamente reportados (Tsuboi, R. and Rifkin, D. B., J. Exp. Med. 172: 245-251 (1990)). En síntesis, el día de la curación, los animales se anestesiaron con una inyección intraperitoneal de Avertin (0.01 mg/mL), 2,2,2-fribromoeíanol y 2-metil-2-butanol disuelto en agua desionizada. La región dorsal del animal se rasuró y se lavó la piel con una solución de etanol al 70% y yodina. El área de cirugía se secó con una gasa estéril antes de la curación. Posteriormente se creó una herida de grosor total de 8 mm utilizando un perforador de tejido Keyes. Inmediatameníe después de la curación, la piel que rodea se esíiró suavemenfe para eliminar la expansión de la herida. Las heridas se dejaron abiertas durante el íranscurso del experimenfo. Se adminisíró la aplicación del íratamienío en forma íópica duraníe 5 días consecufivos comenzando el día de la herida. Antes del tratamienío, las heridas se lavaron suavemente con solución salina estéril y esponjas de gasa. Las heridas se revisaron visualmente y se fotografiaron a una distancia fija el día de la cirugía y en intervalos de dos días posteriormeníe. El cierre de la herida se delerminó mediante medición de área los días 1 y 5 y el día 8. Las heridas se midieron en forma horizontal y veríical uíilizando un calibre Jameson calibrado. Las heridas se consideraron curadas y ya no era visible el tejido de granulación, y la herida se cubrió mediante un epitelio continuo. Se administró una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención, utilizando un rango de diferentes dosis, de 4 mg a 600 mg por herida por día durante 8 días en vehículo. Los grupos de control de vehículo recibieron 60 mL de solución de vehículo. Los animales se eutanizaron el día 8 con una inyección intraperitoneal de pentobarbital de sodio (300 mg/kg). Las heridas y la piel de los alrededores se recolectó posteriormente para histología e inmunohisíoquímica. Se colocaron especímenes de íejido en formalina regulada neutral al 10% en cintas de tejido entre esponjas de biopsia para procesamiento adicional. Se evaluaron tres grupos de 10 animales cada uno (controles de d diabéticos y 5 no diabéticos): 1 ) Confrol de placebo de vehículo, 2) grupo no traíado, y 3) grupo íratado. Se analizó el cierre de la herida midiendo el área en el eje vertical y horizontal y obteniendo el área cuadrada total de la herida. Posteriormenfe se estimó la confracción esíableciendo las diferencias entre el área de herida inicial (día 0) y la posterior al íratamiento (día 8). El área de la herida el día 1 fue de 64 mm2, el tamaño que corresponde a la perforación dérmica. Se realizaron cálculos utilizando la siguieníe fórmula: a. [Área abiería día 8] - [Área abierta el día 1] / [Área abierta el día 1 ] Los especímenes se fijaron en bloques incrustados en formalina y parafina regulados al 10% , se seccionaron en forma perpendicular a la superficie de la herida (5 mm) y se cortaron utilizando un micróíomo Reicherí-Jung. Se llevó a cabo tensión de hematoxilina-eoxina (H&E) de rutina en secciones transversales de las heridas biseccionadas. La revisión hisíológica de las heridas se uíilizó para evaluar si el proceso de curación y la apariencia morfológica de la piel reparada es alterada por el tratamiento con una proteína de fusión de albúmina de la presente invención. Esta evaluación incluyó verificación de la presencia de acumulación de células, células inflamatorias, capilaridades, fibroblastos, re-epitelialización y madurez epidérmica (Greenhalgh, D.G. y asociados, Am J. Pathol. 136: 1235 (1990)). Se utilizó un micrómetro de lentes calibrados a través de un observador ciego. Las secciones de íejido íambién se tiñeron en forma inmunoistoquímica con un aníicuerpo de queraíina anti-humano de conejo policlonal utilizando sisíema de detección ABC Élite. La piel humana se utilizó como un control de íejido posiíivo en tanto que el IgG no inmune se utilizó como un control negativo. Se deíerminó el crecimienío de queratinocito evaluando el grado de re-epitelialización de la herida, utilizando un micrómetro de lentes calibrados. Se demostró la proliferación de antígeno/ciclina nuclear de célula (PCNA) en especímenes de piel, utilizando anticuerpo antí-PCNA (1:50) con un sistema de detección ABC Élite. El cáncer de colon humano sirvió como un control de tejido posiíivo y el íejido de cerebro humano se uíilizó como un control de tejido negaíivo. Cada espécimen incluyó una sección con omisión del anticuerpo primario y substitución con IgG de ratón no inmune. La clasificación de estas secciones se basa en el grado de proliferación en una escala de 0-8, siendo la parte inferior de la escala lo que refleja una proliferación ligera hasta el lado superior que refleja una proliferación intensa. Los datos experimentales se analizaron utilizando una prueba t de no correspondencia. Se consideró como significativo un valor p de <0.05. Modelo de Rata con Daño de Esteroides La inhibición de curación de heridas por esteroides ha sido ampliameníe documeníada en varios sisíemas in vitro e in vivo (Wahl, Glucocorticoids and Wound healing. I n: Anti-l nflammatory Sferoid Action: Basic and Clinical Aspects. 280-302 (1989); Wahl et al. , J. Immunol. 1 15: 476-481 (1 975); Werb et al. , J. Exp. Med. 147: 1684-1694 (1978)). Los glucocorticoides retardan la curación de heridas inhibiendo la angiogénesis, disminuyendo la permeabilidad vascular (Ebert eí al . , An Intern. Med. 37: 701 -705 (1952)), proliferación de fibroblasto y síntesis de colágeno (Beck et al. , Growth Factors. 5: 295-304 (1991 ); Haynes et al. , J. Clin. Invest. 61 : 703-797 (1978)) y producción de reducción temporal de monocitos en la circulación Haynes et al. , J. Clin. Invest. 61 : 703-797 (1978); Wahl, "Glucocorticoids and wound healing". In: Antiinflammatory Steroid Action: Basic and Clinical Aspects, Academic Press, Nueva York, pp . 280-302 (1989)). La administración sislémica de esferoides a una curación de herida dañada, es un fenómeno bien establecido en ratas (Beck et al., Growth Factors. 5: 295-304 (1991 ); Haynes et al . , J. Clin. Invest. 61 : 703-797 (1978); Wahl, "Glucocorticoids and wound healing". In: Antiinflammatory Steroid Action : Basic and Clinical Aspects, Academic Press, Nueva York, pp. 280-302 (1989); Pierce et al. , Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 86: 229-2233 (1989)). Para demostrar que la proteína de fusión de albúmina de la preseníe invención puede acelerar el proceso de curación, se evaluaron los efecíos de múlíiples aplicaciones tópicas de la proteína de fusión en heridas de la piel de excisión de grosor total en ratas, en donde la curación ha sido dañada por la administración sistémica de metilprednisolona. Se utilizaron en este ejemplo ratas Sprague Dawley macho adulías jóvenes que pesan 250-300 g (Charles River Laboraíories). Los animales se compraron a las 8 semanas de edad y a las 9 semanas de edad comenzó el estudio. La respuesta de curación de ratas fue dañada por la administración sisíémica de meíilprednisolona (17 mg/kg/raía en forma intramuscular) al momento de la curación. Los animales se alojaron en forma individual y recibieron alimento y agua ad libitum. Todas las manipulaciones se llevaron a cabo utilizando íécnicas asépticas. Este esíudio se llevo a cabo de acuerdo con las reglas y lineamientos de Human Genome Sciences, I nc. I nstitutional Animal Care and Use Committee, y los Lineamientos de Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio.

Se siguió el profocolo de herida de acuerdo con lo que se describió aníeriormeníe. El día de la generación de la herida, los animales se anestesiaron con una inyección intramuscular de ceíamina (50 mg/kg) y xilacina (5 mg/kg). Se rasuró la región dorsal del animal y se lavó la piel con soluciones de eíanol y yodina al 70%. El área de quirúrgica se secó con una gasa estéril antes de la generación de la herida. Se creó una herida de grosor toíal de 8 mm uíilizando una perforadora de íejido Keyes. Las heridas se dejaron abierfas duranle el íranscurso del experimenlo. Las aplicaciones de materiales de pruebas se proporcionó en forma tópica una vez durante 7 días consecutivos comenzando el día de la generación de la herida y en forma subsecuente a la administración de metilprednisolona. Antes del tratamiento, las heridas se lavaron suavemente con solución salina esíéril y esponjas de gasa. Las heridas se revisaron visualmente y se fotografiaron a una distancia fija el día de la generación de la herida y al final del tratamiento. El cierre de la herida se determinó a través de medición de área en los días 1 y 5 y el día 8. Las heridas se midieron en forma horizontal y vertical utilizando un calibre Jameson calibrado. Las heridas se consideraron curadas si el íejido de granulación ya no era visible, y la herida se cubrió con un epitelio continuo. La proteína de fusión de albúmina de la presente invención , se administró utilizando un rango de difereníes dosis, de 4 mg a 500 mg por herida por día duraníe 8 días en vehículo. Los grupos de control de vehículo recibieron 50 mL de solución de vehículo. Los animales se eutanizaron el día 8 con una inyección iníraperitoneal de pentobarbiíal de sodio (300 mg/kg). Las heridas y la piel de los alrededores se recolecíó posíeriormente para histología e inmunohistoquímica. Se colocaron especímenes de tejido en formalina regulada neutral al 10% en cintas de íejido entre esponjas de bíopsia para procesamiento adicional. Se evaluaron tres grupos de 10 animales cada uno (controles de 5 diabéticos y 5 no diabéticos): 1 ) Control de placebo de vehículo, 2) grupo no íratado, y 3) grupo tratado. Se analizó el cierre de la herida midiendo el área en el eje vertical y horizontal y obteniendo el área cuadrada total de la herida. Posteriormente se estimó la contracción estableciendo las diferencias entre el área de herida inicial (día 0) y la posterior al tratamiento (día 8). El área de la herida el día 1 fue de 64 mm2, el tamaño que corresponde a la perforación dérmica. Se realizaron cálculos utilizando la siguiente fórmula: b. [Área abierta día 8] - [Área abierta el día 1 ] / [Área abierta el día 1 ] Los especímenes se fijaron en bloques incrustados con formalina y parafina regulada al 10%, y se seleccionaron en forma perpendicular a la superficie de la herida (5 mm) y se cortaron utilizando un micrótomo Olympus. Se llevo a cabo la tinción de hematoxilina-eosina (H&E) de rutina en secciones cruzadas de las heridas biseccionada. La revisión hisíológica de las heridas permitió la evaluación de si el proceso de curación y la apariencia morfológica de la piel reparada se mejora mediante el trafamienío con una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención. Se utilizó un micrómetro de lente calibrado a través de un observador ciego para deíerminar la disíancia de la aberíura de la herida. Se analizaron los daíos experimeníales uíilizando una prueba t de no correspondencia. Se consideró importante un valor p de <0.0d. EJ EMPLO 22: Modelo de Animal de Linfoedema El propósito de este método experimental es crear un modelo de linfoedema apropiado y consistenfe para probar los efectos terapéuticos de una proteína de fusión de albúmina de la preseníe invención en Iinfoangiogénesis y el resíablecimienlo del sisíema circulaíorio linfático en el limbo trasero de la rata. Se midió la efectividad expandiendo el volumen de limbo afectado, medíanle la cuaníificación de la cantidad de vasculatura linfática, proteína de plasma de sangre íotal e hisfopatología. Se observó linfoedema agudo durante de 7 a 10 días. Posiblemente de manera más imporlante, el progreso crónico del edema es después de hasía 3 a 4 semanas. Antes de comenzar la cirugía, se extrae la muestra de sangre con respecto a análisis de concentración de proteína. Las ratas macho que pesan aproximadamente -3d0g se dosificaron con Pentobarbital. En forma subsecuente, se rasuraron las patas derechas desde la rodilla hasta la cadera. El área rasurada se restregó con trapo con una gasa lavada en EtOH al 70%. Se extrajo sangre para pruebas de proteína toíal de suero. La circunferencia y medidas volumétricas se realizaron antes de inyecíar finía en las patas después de elaborar 2 niveles de medición (O.d cm arriba de la cadera, y punto medio de la pata dorsal). El dorso infradérmico de las patas tanío derechas como izquierdas se inyecíaron con O.Od ml de Evans Blue al 1%. Posteriormeníe se tomaron medidas de circunferencia y volumétricas después de la inyección de tinta en las patas. Utilizando la unión de la rodilla como una marca, se realiza una incisión inguinal a la mitad de la pata en forma circunferencial dejando que se localicen los vasos femorales. Se utilizaron fórceps y hemoestatos para diseccionar y separar las partes de piel. Después de localizar los vasos femorales, se localizó el vaso linfático que surge a lo largo y debajo del vaso(s). Los vasos linfáticos principales en esta área posteriormente se coagularon en forma eléctrica o se ligaron por sutura. Utilizando un microscopio, los músculos en la paríe posterior de la pata (cerca de la semiíendinosis y aductores) se diseccionaron con punta de romo. Posteriormente se localizó el nodo linfático poplileal. Posteriormente se ligaron mediante suíura 2 vasos linfáíicos próximos y 2 vasos linfáíicos disíales, y el suminisíro de sangre disíal del nodo popliíeal. El nodo linfático popliteal y cualquier tejido de hueso que lo acompaña, se eliminó posteriormenfe medianíe corte de tejidos conectivos. Se íuvo cuidado de controlar cualquier sangrado leve que resultará de este procedimiento. Después de que se obsíruyeron las linfas, las paríes de piel se sellaron medianfe la utilización de piel líquida (Velbond) (AJ Buck). Los bordes de la piel separados se sellaron al tejido de músculo subyacenfe y al mismo tiempo se dejó una abertura de ~0.d cm alrededor de la pierna. La piel íambién puede ser anclada medianfe suíura a músculo subyaceníe, o sea necesario. Para evifar la infección, los animales se alojaron individualmente con malla (sin lecho). Se revisó la recuperación de los animales diariamente a través del pico edemaíoso óptimo, el cual normalmente ocurrió en los días d a 7. Posteriormente se observó el pico edematoso de plato. Para evaluar la intensidad del linfoedema, se midió la circunferencia y volúmenes de 2 lugares designados en cada pata antes de la operación y diariamente después de 7 días. Se determina el efecto de las proteínas en linfoedema y también se investiga si el análisis de proteína es un perímetro de prueba útil. Se evaluaron en dos lugares los pesos de limbos tanío de conírol como edematosos. En análisis se llevó a cabo en forma ciega. Medidas de Circunferencia: Bajo un anestésico de gas ligero para evitar el movimiento de la extremidad, se uíilizó una cinía de írapo para medir la circunferencia de la exíremidad. Las líneas se llevaron a cabo en el hueso ancla y en la pata dorsal mediante 2 personas diferentes y se promediaron las 2 lecturas. Las lecturas se tomaron de exíremidades íanío de conírol como edemaíosas. Medidas Voluméfricas: El día de la cirugía, los animales se anestesiaron con Pentobarbiíal y se probaron aníes de la cirugía. Para medidas voluméíricas diarias, los animales esíán bajo una anestesia de halotano ligera (inmovilización rápida y rápida recuperación), y se rasuran ambas paías y se marcan de manera igual uíilizando un marcador a prueba de agua en las patas. Las patas se remojan primero en agua, posíeriormeníe se remojan en el insírumenío a cada nivel marcado, posteriormente se miden mediante el software de edema Buxco (Chen-Victor). Los datos se registran personalmeníe, en íanío que otra persona está remojando la exíremidad hasía el área marcada. Medidas de sangre-proíeína de plasma: Se exírae sangre, se gira y se separa el suero aníes de la cirugía, y posteriormenle se llega a una conclusión con respecto a proteína íoíal y comparación Ca2+. Comparación de Peso de Exíremidad: Después de exíraer sangre, el animal se prepara para recolección de íejido. Las exíremidades se ampuían ufilizando una quilitina, posteriormente las pafas tanío del experimenío como de control se cortan en la ligadura y se pesan. Se toma un segundo peso conforme se desaríicula la arficulación tibio-cacaneal y se pesa la paía. Preparaciones Hísíológicas: El músculo íransversal localizado detrás del área de la rodilla (popliteal) se disecciona y acomoda en un molde de metal, lleno con Gel congelado, bañado en meíilbuíano frío, se coloca en bolsas de muestras etiquetadas a - 80EC hasta el seccionado. Al momento del seccionado, el músculo se observa bajo microscopía fluoresceníe para medidas linfáíicas. EJEMPLO 23: Supresión de Expresión de Molécula de Adhesión Inducida por TNF alfa, a través de una Proíeína de Fusión de Albúmina de la Preseníe Invención El recluíamiento de linfocitos a áreas de inflamación y angiogénesis comprende interacciones de ligando-receptor específicas entre las moléculas de adhesión de superficie celular (CAMs) en linfocitos y el endotelio vascular. El proceso de adhesión, en preparaciones tanto normales como patológicas, sigue una cascada de pasos múltiples que comprenden la expresión de moIécula-1 de adhesión iníracelular (ICAM-1), molécula-1 de adhesión de célula vascular (VCAM-1) y molécula-1 de adhesión de leucocifos endoíelial (E-selecíina) en células endoteliales (EC). La expresión de estas moléculas y otras en el endotelio vascular, determina la eficacia con la cual los leucocitos se pueden adherir a la vasculatura local y vaciarse en el íejido local duraníe el desarrollo de una respuesta inflamatoria. La concentración local de citocinas y factor de crecimiento, participa en la modulación de la expresión de esías CAMs. El factor alfa de necrosis de tumor (TNF-a), una pofente citocina proinflamatoria, es un estimulador de las tres CAMs en células endoteliales y puede esíar involucrada en una amplia variedad de respuesías inflamaíorias, que resulían con frecuencia en un resultado patológico. El potencial de una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención para transmitir una supresión de expresión CAM inducida por TNF-a, puede ser revisada. Un ensayo ELISA modificado que utiliza Ees como un absorbeníe de fase sólida, se emplea para medir la cantidad de expresión CAM en las ECs tratadas con TNF-a cuando se estimulan en conjunto con un miembro de la familia de proteínas FGF. Para llevar a cabo el experimento, se obtuvieron cultivos de célula endotelial de vena umbilical humana (H UVEC) de recolecciones de cordón reunidas y se mantuvieron en un medio de crecimiento (EGM-2; Cloneíics, San Diego, CA) suplemeníado con FCS al 10% y penicilina/eslreptomicina al 1 % a una temperatura de 37°C en un incubador humidificado que contiene CO2 al 5%. Las HUVECs se sembraron en placas de 96 depósitos a una concentración de 1 x 1 04 células/depósito en un medio EGM a una temperaíura de 37°C duraníe 1 8 a 24 horas o hasía que fueron confluentes. Las monocapas se lavaron subsecuentemeníe 3 veces con una solución libre de suero de RPM I-1640 suplemeníada con 1 00 U/ml de penicilina y 100 mg/ml de estreptomicina, y se trataron con una citocina íambién y/o facíor(s) de crecimienío duranle 24 horas a una íemperatura de 37°C. Después de la incubación, las células se evaluaron con respecto a expresión CAM. Se crecieron células Endoteliales de Vena Umbilical Humanas (HUVECs) en una placa de 96 depósitos estándar con d respecto a la confluencia. Se eliminó el medio de crecimiento de las células y se reemplazó con 90 µm de 199 Medio (10% FBS). Las muestras para probar controles positivos y negativos, se agregaron a la placa por triplicado (en volúmenes de 10 µl). Las placas se incubaron a una temperatura de 37°C ya sea durante 6 0 horas (expresión de selectina e integrina) o 24 horas (únicamente expresión de integrina). Las placas se aspiraron para eliminar el medio y se agregó a cada depósito 100 µl de paraformaldehído- PBS al 0.1% (con CA++ y Mg++). Las placas se mantuvieron a una íemperaíura de 4°C durante 30 minutos. d Posíeriormenle se eliminó la fijación de los depósitos, y se lavaron IX con PBS (+Ca,MG) + 0.d% BSA y se drenaron. No se dejó que los depósitos se secaran. Se agregaron 10 µl de anticuerpo primarlo diluido a los depósitos de prueba y control. Se utilizaron Anti-ICAM-1-Biotina, Anti-VCAM-1-Biotina y Anti-E-selectina-0 Biotina a una concentración de 10 µg/ml (dilución 1:10 de 0.1 mg/ml de anticuerpo de existencia). Las células se incubaron a una íemperaíura de 37°C durante 30 minutos, en un ambieníe humidificado. Los depósiíos se lavaron X3 con PBS( + Ca,Mg)+0.5% BSA. Posíeriormeníe se agregaron 20 µl de ExfrAvidina-Fosfoíasa Alcalina (dilución 1 : 5,000) a cada depósito y se incubaron a una temperatura de 37°C durante 30 minutos. Los depósitos se lavaron X3 con PBS(+Ca, Mg)+0.5% BSA. Se disolvió una tableta de Fosfato de p-Nitrofenol pNPP en 6 ml de regulador de glicina (pH 10.4). Se agregaron a cada depósito de prueba 1 00 µl de substrato pN PP en regulador de glicina. Se prepararon por triplicado depósiíos eslándar a partir de la dilución de trabajo de la ExtrAvidina-Fosfatasa Alcalina en regulador de glicina: 1 :6, 000 (10°) > 10"0-5 > 10~1 > 10"1 -5. Se agregaron 5 µl de cada solución para triplicar los depósitos y el coníenido de AP resultaníe en cada depósito fue de d.dO ng, 1 .74 ng, O.dd ng, 0.18 ng. Posteriormeníe se deben agregar 100 µl de reactivo pNNP a cada uno de los depósitos estándar. La placa debe ser incubada a una íemperatura de 37°C durante 4 horas. Se agregó a iodos los depósiíos un volumen de 60 µl de 3M NaOH . Los resulíados se cuaníificaron en un lector de placa a 405 nm. Se utilizó la opción de subsfracción del fondo en depósitos limpios llenados únicamente con regulador de glicina. La plantilla se preparó para indicar la concentración de conjugado-AP en cada depósito esíándar [5.50 ng; 1.74 ng; 0.56 ng; 0.18 ng] . Los resulíados se indican como la caníidad de conjugado-AP enlazado en cada muestra. EJ EMPLO 24: Construcción de una Construcción de Reportero GAS Una trayecforia de transducción de señal involucrada en la diferenciación y proliferación de células, es denominada la trayectoria Jaks-STATs. Las proteínas activadas en la trayectoria Jaks-STATs enlazan a los elementos del sitio de acíivación gama "GAS" o elemento de respuesta sensible-inferferón ("ISRE"), que se localiza en el promoíor de muchos genes. El enlace de una proíeína a esíos elemeníos altera la expresión del gen asociado. Se reconocen los elementos GAS e ISRE a íravés de una clase de factores de transcripción denominados Transductores de Señal y Activadores de Transcripción, o "STATs". Existen seis miembros de la familia STATs. Statl y Síaí3 se encuentran en muchos tipos de células, como Staí2 (ya que la respuesía a I FN-alfa es amplia). Síal4 está más restringida y no esíá en muchos íipos de células aunque se ha enconírado en auxiliar T clase I , células después del tratamiento con IL-12. Statd fue denominado originalmente factor de crecimiento mamario, aunque se ha encontrado en otras concentraciones en otras células incluyendo células mieloides. Puede activarse en células de culíivo de tejido a través de muchas citocinas. Los STAT se activan para transubicar del cifoplasma al núcleo al momento de la fosforilación de tirosina a través de un grupo de cinasas conocidos como la familia Janus Kinase ("Jaks"). Jaks represenía una familia distinta de cinasas de tirocina solubles e incluyen Tyk2, Jak1 , Jak2 y Jak3. Estas cinasas despliegan una similitud de secuencias significativas y generalmente son inactivas catalíticamenfe en células en reposo. Las Jaks se acíivan a íravés de un amplio rango de receptores que se resumen en la Tabla que se encuentra más adelante. (Adaptada de la revisión de Schidler y Damell , Ann. Rev. Bioche. 64: 621 -51 (1995)). Una familia de receptor de citocina, con la capacidad de activar Jaks, se divide en dos grupos: (a) la Clase I incluye receptores para I L-2, I L-3, I L-4, I L-6, I L-7, I L-9, I L-d 1 1 , I L-12 , I L-16, Epo, PRL, GH , G-CSF, GM-CSF, LI F, CNTF, y trombopoyetina; y (b) la Case I I incluye I NF-a, I FN-g e IL-10. Los receptores de Clase I comparten un motivo de cisteina conservado (un grupo de cuatro cisíeínas conservadas y un triptofan) y un motivo WSXWS (una región próxima e membrana que codifica Trp-0 Ser-Xaa-Trp-Ser (SEQ I D NO:53)). Por lo tanlo, en el enlace de un ligando a un recepíor, se activan las Jaks, los cuales a su vez activa STATs, lo cual posteriormeníe íransubica y enlaza a elemeníos GAS. Esíe proceso íofal esíá comprendido en la írayectoria de traducción de señal 6 Jaks-STATs. Por consiguiente, la acíivación de la trayectoria Jacks-STATs, reflejada a través del enlace del elemento GAS o ISRE, puede uíilizarse para indicar proíeínas involucradas en la proliferación y diferenciación de células. Por ejemplo, se conocen facíores de crecimiento y citocinas para activar la írayecíoria Jaks-0 STATs (Ver Tabla 5, que se encueníra a coníinuación). Por lo íanto, a través del uso de elementos GAS enlazados a moléculas reporleras, se pueden identificar activadores de la frayectoria Jaks-STATs. d Tabla 5 GASfelemeptosi JAKs STATS e ISRE Ligando Tvk2 Jak1 Jak2 Jak3 Familia IFN IFN-a/B 1, 2, 3 ISRE GAS (IRF1>Lys6>IF IFN-g P) 11-10 familia gp130 GAS (IRF1>Lys6>IF IL-6 (Plelotrópico) P) 11-11 (Pleiotrópico) ? OnM (Pleiotrópico) ? LIF(Pleiotrópico) ? CNTF (Pleiotrópico) -/+ G-CSF (Pleiotrópico) IL-12 (Pleiotrópico) familia q-C IL-2 (linfocitos) 1, 3, 5 GAS GAS(IRF1 = IFP IL- (lipfo-mieloide) »Ly6)(lgh) IL-7 (linfocitos) GAS IL-9 (linfocitos) GAS IL-13 (linfocitos) GAS IL-15 GAS familia qp140 GAS(IRF1>IFP lL-3 (mieloide) »Ly6) IL-5 (mieloide) GAS GM-CSF (mieloide) GAS Familia de hormona de crecimiento GH ? 5 PRL ? + /- 1, 3, 5 EPO ? 5 GAS(B- Para construir un elemento promotor que contiene GAS sintético, el cual se utiliza en los Ensayos Biológicos descritos en los ejemplos 27 a 29, se emplea una estrategia a base de PCR para generar una secuencia promoíora GAS-SV40. El cebador d' coníiene cuaíro copias tándem del sitio de enlace GAS enconfrado en el promoíor IRF1 y demosírado previamente que enlaza STATs al momento de la inducción con un rango de ciíocinas (Rothman y asociados, Immunity 1:467-468 (1994)), aunque se pueden utilizar en lugar de estos oíros elementos GAS o ISRE. El cebador 5' también contiene 18pb de secuencia complementaria a la secuencia promotora lemprana SV40 y está flanqueada con un sitio Xhol. La secuencia del cebador 5' es: 5': GCGCCTCGAGATTTCCCCGAAATCTAGATTTCCCCGAAATGATTTC CCCGAAATGATTTCCCCGAAATATCTGCCATCTCAATTAG: 3' (SEQ ID NO:54) El cebador de corriente descendente es complementario al promotor SV40 y está flanqueado con un sitio Hind III: d': GCGGCAAGCTTTTTGCAAAGCCTAGGC:3' (SEQ ID NO:65) Se lleva a cabo amplificación PCR utilizando la plantilla del promotor SV40 que se encuenlra en el plásmido de B-gal: promoíor obíenido de Clontech. El fragmento PCR resultanfe se digiere con Xhol/Hind III y se subclona en BLSK2-. (Stratagene). La subsecuenciación con cebadores directos e inversos confirma que el inserto contiene la siguiente secuencia: d' : CTCGAGATTTCCCCGAAATCTAGATTTCCCCGAAATGATTTCCCCG AAATGATTTCCCCGAAATATCTGCCATCTCAATTAGTCAGCAACCA TAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACTCCGCCCA GTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTAT GCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAG TGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTT:3' (SEQ ID NO:56) Con este elemenfo promotor GAS enlazado al promotor SV40, posteriormente se construye una construcción reportera GAS:SEAP2. Aquí, la molécula reportera es una fosfatasa alcalina segregada, o "SEAP". Sin embargo, claramente cualquier molécula reportera puede ser en lugar de SEAP, en este o en cualesquiera de los otros ejemplos. Las moléculas reporteras bien conocidas que pueden ser utilizadas en lugar de SEAP, incluyen acetiltransferasa de cloranfenicol (CAT), luciferaza, fosfatasa alcalina, B-galactosidas, proteína fluorescente verde (GFP), o cualquier proteína detectable a través de un anticuerpo. El elemento promotor GAS-SV40 sintético confirmado mediante la secuencia anterior, se subclona en un vector de pSEAP-Promotor obtenido de Cloníech utilizando Hindi y Xhol , reemplazando efectivameníe el promolor SV40 con el elemenío promofor GAS:SV40 amplificado, para crear el vecíor GAS-SEAP. Sin embargo, este vector no contiene un gen con resisíencia a neomicina, y por consiguieníe, no se prefiere para sistemas de expresión de mamíferos. Por lo tanío, con el objeío de crear líneas celulares esíables mamíferas que expresan el reportero GAS-SEAP, se elimina la cinta GAS-SEAP del vecíor GAS-SEAP utilizando Sal í y Noli , y se insería en un vector de esqueleto que coníiene el gen de resisíencia a neomicina, lal como pGFP-1 (Clontech), utilizando estos sitios de restricción en el sitio de clonación múltiple, para crear el vector GAS-SEAP/Neo. Una vez que el vector se transfiere en células de mamífero, este vector puede ser utilizado posteriormente como una molécula reportera para el enlace GAS, tal como se describe en los ejemplos 27-29. Se pueden elaborar otras construcciones utilizando la descripción anterior y reemplazando GAS con una secuencia promotora difereníe. Por ejemplo, la consírucción de las moléculas reporíeras que coníienen secuencias promotoras EG R y NF-KB, se describen en los ejemplos 27 a 31 . Sin embargo, se pueden substifuir muchos otros promotores uíilizando los proíocolos descritos en estos ejemplos, por ejemplo, los promoíores SER, I L-2, NFAT o Osteoclancina pueden ser substituidos solos o en combinación (por ejemplo, GAS/NF-KB/EGR, GAS/N F-KB, II-2/NFAT o NF-KB/GAS). En forma similar, se pueden utilizar otras líneas celulares para probar la actividad de construcción reportera, íal como H ELA (epitelial), HUVEC (endotelial), Reh (B-célula), Saos-2 (osíeoblasto), H UVAC (aórtica) o Cardimocito.

EJEMPLO 25: Ensayo con Respecto a Actividad SEAP Como una molécula reportera para los ensayos descriíos en los ejemplos aqu í mencionados, se ensaya la actividad SEAP utilizando el Equipo Tropix Phospho-lighí (Caí. BP-400) de acuerdo con el siguiente procedimiento general. El Equipo Tropix Phospho-lighí suministra la Dilución, Ensayo y Reguladores de Reacción que se utilizan más adelaníe. Se ceba un abasíecedor con 2.6x del Regulador de Dilución y se suministran 15 µl del regulador de dilución : 2.5x en Optiplacas que contienen 35 µl de una solución que coníiene una proteína de fusión de albúmina de la presente invención . Se sellan las placas con un sellador de plásíico y se incuban a una temperatura de 65°C durante 30 minuíos. Se separan las Opíiplacas para eviíar un caleníamienío no uniforme. Se enfrían las muesíras a íemperaíura ambiente durante 15 minuíos. Se vacía el abasíecedor y se ceba con el regulador de ensayo. Se agregan 50 ml del Regulador de Ensayo y se incuban a lemperatura ambieníe duraníe d minuíos. Se vacía el abasíecedor y se ceba con el Regulador de Reacción (ver la Tabla que se encuentra a continuación). Se agregan 60 µl del Regulador de Reacción y se incuba a temperatura ambiente durante 20 minutos. Ya que la intensidad de la señal quimiluminisceníe depende del tiempo, y íoma aproximadameníe 10 minuíos en leer d placas en un luminómelro, se deben írafar 5 placas a la vez y comenzar el segundo grupo 10 minuíos después.

Se lee la unidad de luz relativa en el luminómetro. Se ajusta H 12 como en blanco, y se imprimen los resultados. Un incremento en quimioluminiscencia indica acíividad reporíera. Tabla 6 EJEM PLO 26: Ensayo de Identificación de Actividad Neuronal Cuando las células pasan por diferenciación y proliferación, se activa un grupo de genes a través de muchas trayectorias de transmisión de señal diferentes. En estos genes, se induce EGR1 (gen I de respuesta de crecimiento temprano), en varios íejidos y tipos de células al momento de la activación . El promoíor de EGR1 es responsable de dicha inducción. Utilizando el promotor EGR1 enlazado en moléculas reporteras, se puede evaluar la capacidad de las proteínas de fusión la presente invención para activar las células. Particularmeníe, se uíiliza el siguieníe profocolo para evaluar acíividad neuronal en líneas de célula PC12. Las células PC12 (células de fenocromocitoma de ratas) se conocen por proliferarse y/o diferenciarse mediante la activación con un número de miíógenos, tales como TPA (acetato de forbol de tetradecanoilo), NGF (facíor de crecimienlo de nervio), y EGF (facíor de crecimiento epidérmico). Se activa la expresión del gen EGR1 duranfe este traíamlenío. Por lo íanto, mediante transfección de manera estable de células PC12 con una construcción que contiene un promotor EGR enlazado a reportero SEAP, la activación de células PC12 mediante una proteína de fusión de albúmina de la presente invención puede ser evaluada. Se puede ensamblar la construcción reportera EGR/SEAP mediante el siguienle profocolo. La secuencia promoíora EGR-1 (-633 a +1) (Sakamoío K. y asociados, Oncogene 6: 867-871 (1991)) también puede ser amplificada mediante PCR a paríir de ADN genómico humano utilizando los siguientes cebadores: Primer cebador: 5' GCGCTCGAGGGATGACAGCGATAGAACCCCGG-3' (SEQ ID NO:57) Segundo cebador: 6' GCGAAGCTTCGCGACTCCCCGGATCCGCCTC-3' (SEQ ID NO:58) Utilizando el vector GAS:SEAP/Neo producido en el ejemplo 24, se puede insertar posleriormente en este vector el producto amplificado mediante EGR1 . Se lineariza el vector GAS:SEAP/Neo utilizando enzimas de resíricción Xhol/Hindi, eliminando el acolchonador GAS/SV40. Se reslringe el producto amplificado mediante EGR1 con estas mismas enzimas. Se liga el vector y el promotor EGR1 . Para preparar placas de 96 depósifos para culíivo celular, se agregan dos mis de una solución de recubrimienío (dilución 1 :30 de colágeno tipo I (Upstate Biotech I nc. Caí#08-1 15) en efanol al 30% (esterilizado mediante filtro)), se agrega mediante una placa de 10 cm o 50 ml por depósito de cada placa de 96 depósitos, y se deja secar con aire durante 2 horas. Las células PC 12 se crecen de manera rutinaria en medio RPM I-1640 (Bio Whiftaker) que confiene suero de caballo al 10% (JRH BIOSCI ENCES, Caí. # 12449-78P), suero de bovino fetal desactivado con calor al 5% (FBS) suplementado con 100 unidades/ml de penicilina y 100 µg/ml de estrepíomicina en un piafo de culíivo de íejido de 1 0 cm recubierlo previamenle. Se realizan de una a cuaíro divisiones cada fres a cuaíro días. Las células se eliminan de las placas, raspando y resuspendiendo con pipeíación hacia arriba y hacia abajo durante más de 1 6 veces. Se transfecta la construcción EGR/SEAP/Neo en PC12, utilizando técnicas conocidas en el arte. Se obtienen células esíabies EGR-SEAP/PC12 creciendo las células en 300 µg/ml G418. Se utiliza medio libre de G418 para crecimiento de rutina aunque cada uno a dos meses, las células deben ser crecidas nuevamenle en 300 µg/ml de G418 para acoplar los pasajes. Para ensayar la actividad neuronal, se clasifica una placa de 10 cm con células alrededor del confluente del 70% al 80%, eliminando el medio aníiguo. Se lavan las células una vez con PBS (solución salina regulada por Fosfato). Posteriormenfe las células se dejan morir de inanición en medio de suero de bajo nivel (RPMl-1640 que contiene suero de caballo al 1 % y 0.5% de FBS con antibióticos) durante la noche. A la siguiente mañana, se elimina el medio y se lavan las células con PBS . Se raspan las células de la placa, se suspende el depósiío celular en 2 ml de medio de suero de bajo nivel. Se cuenta el número de células y se agrega más medio de suero de bajo nivel hasta llegar a una densidad celular final de 5 x 105 células/ml. Se agregan 200 µl de la suspensión celular a cada depósiío de la placa de 96 depósilos (equivalente a 1 x 105 células/depósito). Se agrega una serie de diferentes concentraciones de una profeína de fusión de albúmina de la presente invención, a una temperatura de 37°C durante 48 a 72 horas. Como control positivo, se puede utilizar un facíor de crecimienfo conocido por activar las células PC12 a través de EGR, tal como 50 ng/µl de Factor de Crecimiento Neuronal (NGF). Normalmente se observa una Inducción de aproximadamente cincuenta veces de SEAP en los depósifos de control positivo. El ensayo SEAP se puede llevar a cabo en forma rutinaria utilizando íécnicas conocidas en el arte y/o tal como se describe en el ejemplo 25. EJEM PLO 27: Ensayo de Actividad de Célula-T Se utiliza el siguieníe proíocolo para evaluar la acíividad de células-T identificando factores, y deíerminando si una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención prolifera y/o diferencia células-T. Se evalúa la actividad de células-T uíilizando la construcción GAS/SEAP/Neo producida en el ejemplo 24. Por lo tanto, los factores que incrementan la actividad SEAP indican la capacidad de activar la trayectoria de traducción de señal Jaks-STATS. La célula-T utilizada en esíe ensayo es células-T Jurkaf (Acceso ATCC No. TI B-162), aunque las células MoIt-3 (Acceso ATCC No. CRL-1562) y células Molí-4 (Acceso ATCC No. CRL-1582) también pueden ser utilizadas. Las células-T Jurkaí son células auxiliares CD4 + Th 1 lifoblásíicas. Con el objeío de generar líneas celulares estables, se transfectan aproximadameníe 2 millones de células Jurkaí con el vecíor GAS-SEAP/neo utilizando DMRIE-C (Life Technologies) (procedimiento de íransfección que se describe más adelanle). Las células íransfectadas se siembran a una densidad de aproximadamente 20,000 células por depósito y se seleccionan los íransfeclaníes resisíeníes a 1 mg/ml de genticina. Se expanden colonias resistenles y posíeriormente se prueban con respecto a su respuesla al incrementar concentraciones del interferón gama.

Se demuestra la respuesta a la dosis de un clon seleccionado. En forma específica, el siguiente protocolo producirá suficientes células para 75 depósitos que contienen 200 µl de células. Por lo íanto, ya sea se hace a escala o se lleva a cabo en múltiplos, para generar suficientes células para múltiples placas de 96 depósitos. Se mantienen células Jurkaí en suero RPMI + 10% con 1 % Pen-Strep. Se combinan 2.5 ml de OPTI-M EM (Life Technologies) con 10 µg de ADN de plásmido en un frasco T25. Se agregan 2.6 mi de OPTI-MEM que contiene 60 µl de DMRI E-C y se incuban a temperatura ambiente duraníe 1 5-45 minulos. Durante el período de incubación , se cuenta la concentración celular, se disminuye la rotación del número de células requeridas (107 por transfección), y se suspende nuevamente en OPTI-MEM hasta una concentración final de 107 células/ml. Posteriormente se agregan 1 ml de 1 x 107 células en OPTI-MEM a frascos T25 y se incuban a una temperatura de 37°C durante 6 horas. Después de la incubación, se agregan 10 ml de suero RPMI + 15%. Se mantienen las líneas reporteras estables Jurkat:Gas-SEAP en suero RPMI + 10%, 1 mg/ml Genticina y 1 % Pen-Strep. Esfas células se traían con diversas concentraciones de una o más proteínas de fusión de la preseníe invención . El día del fralamienlo con la proíeína de fusión , las células deben ser lavadas y suspendidas nuevamente en RPM I + suero al 10% fresco a una densidad de 500,000 células por ml. El número exacto de células requeridas dependerá del número de proteínas de fusión y el número de diferentes concentraciones de proteínas de fusión que se estén clasificando. Para una placa de 96 depósitos, se requieren aproximadamente 10 millones de células (para 10 placas, 100 millones de células). Los platos del depósito que contienen células Jurkat tratadas con la proteína de fusión, se colocan en un incubador durante 48 horas (observar: este tiempo es variable enfre 48 a 72 horas). Posteriormeníe se transfieren 35 µl de mueslras de cada depósiío a una placa opaca de 96 depósiíos uíilizando una pipeta de 12 canales. Las placas opacas deben ser cubiertas (utilizando coberturas de selofeno) y almacenadas a una temperatura de -20°C hasía que se llevan ensayos SEAP de acuerdo con el ejemplo 25. Las placas que contienen las células íratadas resíantes, se colocan a una temperaíura de 4°C y sirven como una fuente de material para repetir el ensayo en un depósito específico, si se desea. Como control positivo, se pueden utilizar 100 Unidades/ml de interferón gama, el cual es conocido por activar células T Jurkat. Nuevamente se observa aproximadamente 30 veces de inducción en los depósiíos de conírol positivo. Se puede utilizar el control anterior en la generación de células transfectadas tanío temporales como estables, lo cual puede ser apreciado por los experíos en la íécnica. EJEMPLO 28: Ensayo de Acíividad de Célula T NF-KB (Faclor Nuclear KB), es un factor de transcripción activado por una amplia variedad de agentes incluyendo las ciíocinas inflamatorias I L-1 y TNF, CD30 y CD40, linfotóxina-alfa y linfotóxina-beta, mediante la exposición a LPS o trombina, y medianfe la expresión de cieríos producios de gen viral. Como faclor de transcripción, N F-KB regula la expresión de genes involucrados en la activación de células inmune, control de apoptosis (NF-KB aparece para proteger las células de la apoptosis), desarrollo de célula B y T, respuestas anti-virales y anlimicrobianas y múlíiples respuestas a la tensión. En condiciones no estimuladas, se retiene NF-KB en el citoplasma con 1 -KB (Inhibidor KB). Sin embargo, al momento de la estimulación , se fosforila y degrada 1 -KB, originando que NF-KB revuelva el núcleo, activando de esta forma la transcripción de genes objetivo. Los genes objetivo acíivados mediante NF-KB, incluyen I L-2, I L-6, GM-CSF, ICAM-1 y M HC clase 1 . Debido a su papel central y capacidad de responder a un rango de esíímulos, las construcciones reporteras que uíilizan el elemento promotor NF-KB, se utilizan para clasificar la proteína de fusión. Los activadores o inhibidores de NF-KB pueden ser útiles para tratar, prevenir y/o diagnosticar enfermedades. Por ejemplo, los inhibidores de NF-KB pueden ser uíilizados para írafar las enfermedades relacionadas con la acíivación aguda o crónica de NF-KB, íal como artriíis reumatoide. Para construir un vector que contiene el elemenío promotor N F-KB, se emplea una estrategia a base de PCR. El cebador de corrieníe ascendente contiene cuaíro copias íandems del sitio de enlace NF-KB (GGGGACTTTCCC) (SEQ ID NO:59), 18pb de la secuencia complemenlaria para el exíremo 5' de la secuencia promotora íemprana SV40, y está flanqueada con un sitio Xhol : 5' :GCGGCCTCGAGGGGACTTTCCCGGGGACTTTCCGGGGACTTTC CGGGACTTTCCATCCTGCCATCTCAATTAG:3' (SEQ I D NO:60) El cebador de corriente descendeníe es complemeníario al exlremo 3' del promoíor CV40 y esíá flanqueado con un sitio Hind I I I : 5':GCGGCAAGCTTTTTGCAAAGCCTAGGC:3' (SEQ I D NO:55) El amplificador PCR se lleva a cabo utilizando la plantilla del promotor SV40 que se encuentra en el plásmido del promotor pB-gal: obtenido de Clontech . El fragmento PCR resultante se digiere con Xhol y Hind I I I y se subclona en BLSK2-. (Straíagene). La secuenciación con los cebadores T7 y T3 confirma que el inserto contiene la siguieníe secuencia: 5': CTCGAGGGGACTTTCCCGGGGACTTTCCGGGGACTTTCCGGGACT TTCCATCTGCCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTA ACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCT CCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGG CCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTT TTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTT:3' (SEQ I D NO:61 ) Posteriormente, se reemplaza el elemento promotor mínimo SV40 que se encuentra en el plásmido de promotor pSEAP2 (Cloníech) con este fragmento NF-KB/SV40, uíilizando Xhol y Hind I I I . Sin embargo, esíe vector no contiene un gen de resistencia a neomicina, y por consiguiente, no se prefiere para sistemas de expresión de mamíferos. Con el objeto de generar líneas celulares mamíferas estables, se elimina la cinta NF-KB/SV40/SEAP del vector NF-KB/SEAP anterior, ufilizando las enzimas de restricción Salí y Notl , y se inserta en un vecíor que coníiene resisíencia a neomicina. Particularmente, se inserta la cinta NF-KB/SV40/SEAP en pGFP-1 (Cloníech), reemplazando el gen GFP, después resfringiendo pGFP- con Salí y Noíl . Una vez que se crea el vecfor NF-KB/SV40/SEAP/Neo, se crean células-T Jurkat estables y se mantienen de acuerdo con el protocolo que se describe en el ejemplo 25. En forma similar, también se describe en el ejemplo 25 el método para ensayar las proteínas de fusión con estas células-T Jurkaí esíables. Como control positivo, se agregó TN F alfa exógeno (0.1 , 1 , 10 ng) a los depósitos H9, H 10 y H 1 1 con una activación de 5 a 1 0 veces observada normalmente. EJ EMPLO 29: Ensayo para Identificar Actividad Mieloide Se utiliza el siguiente protocolo para activar la actividad mieloide en una proteína de fusión de albúmina de la presente invención , determinando si la proteína de fusión prolifera y/o diferencia células mieloides. Se evalúa la actividad de célula mieloide utilizando la construcción GAS/SEAP/Neo producida en el ejemplo 24. Por lo tanío, los facíores que incremenían la actividad SEAP indican la capacidad de activar las írayecíorias de íransducción de señal Jaks-STATS. La célula mieloide utilizada en este ensayo es U937, una línea celular de pre-monocifo, aunque íambién se puede uíilizar TF-1 , HL60 ó KG 1 . Para transfecíar íemporalmeníe células U937 con la consírucción GAS/SEAP/Neo producida en el ejemplo 24, se uíiliza un méfodo DEAE-Dexírano (Kharbanda y asociados, Cell Growfh & Differentiaíion , 5: 269-265). Primero, se cosechan 2 x 107 de células U937 y se lavan con PBS. Las células U937 normalmeníe se crecen en un medio RPM I 1640 que contiene suero de bovino fetal desactivado al 10% (FBS) suplementado con 100 unidades/ml de penicilina y 1 00 mg/ml de esírepíomicina. Posíeriormeníe, se suspenden las células en 1 ml de regulador Tris-HCl (pH 7.4) 20 mM que contienen 0.5 mg/ml DEAE-Dexírano, 8µg GAS-SEAP2 de ADN de plásmido, 140 mM NaCl, 5 mM KCl , 375 µM Na2HPO4.7H2O, 1 mM MgCI2 y 675 µM CaCI2. Se incuban a 37°C duraníe 45 minuíos. Se lavan las células con medio RPM I 1640 que contiene FBS al 10% y posteriormente se suspenden nuevamente en 10 ml de medio completo y se incuban a una temperatura de 37°C durante 36 horas. Se obtiene las células esíables GAS-SEAP/U937 creciendo las células en 400 µg/ml G418. El medio libre G418 se utiliza para crecimienío ruíinario, aunque cada uno a dos meses, las células deben ser crecidas nuevamente en 400 µg/ml G418 para acoplar los pasajes. Estas células se prueban recolectando 1 x 1 08 células (esto es suficiente para un ensayo de diez placas de 96 depósitos) y se lavan con PBS. Se suspenden las células en 200 ml del medio de crecimiento descrifo anteriormeníe, con una densidad final de 5 x 105 células/ml. Se plaquean 200 µl de células por depósito en la placa de 96 depósitos (o 1 x 105 células/depósiío). Se agregan difereníes concentraciones de la proteína de fusión. Se incuban a una temperaíura de 37°C durante 48 a 72 horas. Como control positivo, se pueden utilizar 1 00 Unidades/ml de iníerferón gama, el cual se conoce por activar células U937. Normalmente se observa el los depósitos de control positivo aproximadamente una inducción de 30 veces. Se ensaya mediante SEAP el sobrenadaníe de acuerdo con los mélodos conocidos en la técnica y/o protocolo que se describe en el ejemplo 25. EJ EMPLO 30: Ensayo para Identificar Cambios en la Concentración de Molécula Pequeña y Permeabilidad de Membrana El enlace de un ligando a un receptor es conocido por alterar los niveles intracelulares de moléculas pequeñas, tal como calcio, potasio, sodio y pH, así como alterar el potencial de membranas. Estas alteraciones pueden ser medidas en un ensayo para identificar proíeínas de fusión, que enlazan a receptores de una célula en particular. Aunque el siguiente protocolo describe un ensayo de calcio, este proíocolo puede ser modificado fácilmente para detectar cambios en potasio, sodio, pH , potencial de membrana o cualquier oíra molécula pequeña que sea deíectable medianíe una sonda fluorescente. Los ensayos que se encuentran a continuación utilizan el Lector de Placa de Generación de I magen Fluoremétrica ("FLI RP") para medir los cambios en moléculas fluorescentes (Molecular Probes) que enlazan a moléculas pequeñas. Claramente, cualquier molécula fluorescente que detecte una molécula pequeña, puede ser utilizada en lugar de la molécula fluorescente de calcio, fluo-4 (Molecular Probes, Inc. ; catalono no. F-14202) aquí uíilizada. Para las células adherentes, se siembran las células en 10,000 -20, 000 células/depósito en una placa de 96 depósifos negra Co-star con fondo claro. La placa se incuba en un incubador de CO2 durante 20 horas. Se lavan las células adherentes dos veces con un lavador Biotek con 200 µl de HBSS (Solución de Sal Balanceada de Hank) dejando 1 00 µl de regulador después del lavado final. Se elabora una solución de existencia de 1 mg/ml fluo-4 en ácido plurónico al 1 0% de DMSO. Para cargar las células con fluo-4, se agregan a cada depósito 50 µl de 12 µg/ml FIuo-4. La placa se incuba a una temperalura de 37°C en un incubador CO2 duraníe 60 minutos. La placa se lava cuatro veces en el lavador Biotek con HBSS dejando 100 µl de regulador. Para células no adherentes, las células se desactivan del medio de cultivo. Las células se suspenden nuevamente a 2-5x106 células/ml con HBSS en un tubo cónico de 50-ml. Se agrega a cada ml de la suspensión celular 4 µl de una solución 1 mg/ml fluo-4 en DMSO de ácido plurónico al 10%. Posteriormente el tubo se coloca en un baño de agua a una temperaíura de 37°C duraníe de 30 a 60 minutos. Las células se lavan dos veces con HBSS, se suspenden nuevamente a 1 x 1 04 células/ml y se suminisíran en una microplaca, 100 µl/depósifo. La placa se centrífuga a 1000 rpm durante d minutos. Posíeriormente la placa se lava una vez con Denley Cell con 200 µl, seguido de un paso de aspiración a 100 µl de volumen final. Para un ensayo a base de no células, cada depósito contiene una molécula fluorescente, tal como fluo-4. La proteína e fusión de la presente invención se agrega al depósito, y se detecía un cambio en fluorescencia. Para medir la fluorescencia de calcio intracelular, se ajusta el FLI PR a los siguientes parámeíros: (1 ) La ganancia del sistema es de 300-800 mW; (2) Tiempo de exposición es de 0.4 segundos; (3) F/tensión de cámara es F/2; (4) la Excitación es de 488 nm; (5) La Emisión es de 630 nM; y (6) La adición de muestra es de 50 µl. La emisión incremeníada en 530 nm indica un evenlo de señalización extracelular originado por una proteína de fusión de albúmina de la presente invención o una molécula inducida por una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención, la cual ha dado como resultado un incremento en la concentración intracelular Ca++.

EJEMPLO 31 : Ensayo de Identificación de Actividad de Cinasa de Tirosina Las Cinasas de Tirosina de Proteína (PTK) representan un grupo diverso de cinasas de íransmembrana y citoplásmicas. Dentro del grupo de Cinasas de Tirosina de Proíeína del Recepíor (RPTK) se encuentran receptores de un rango de factores de crecimiento mitogénico y metabólico incluyendo los PDGF, FGF, EGF, NG F, HGF y las subfamilias de receptor de insulina. Además, existe una gran familia de RPTKs de las cuales no se conoce el ligando correspondiente. Los ligandos para RPTKs incluyen principalmente proíeínas pequeñas y segregadas, aunque íambién proteínas de matriz exlracelular y enlazadas por membrana. La acíivación de RPTK medianíe ligandos involucra la dimerización de recepíor íransmiíida por ligando, que da como resulíado la fransfosforilización de las subunidades de recepíor y acíivación de las cinasas de íirosina ciíoplásmica. Las cinasas de íirosina ciíoplásmica incluyen cinasas de íirosina asociadas con recepíor de la familia-src (por ejemplo, src, yes, Ick, lyn , fyn) y las cinasas de tirosina de proteínas citosólica y enlazadas sin receptor tal como la familia Jak, cuyos miembros transmiíen la íransducción de señal activada por la súperfamilia de citosinas de receptores (por ejemplo, las Interleucinas, Interferonas, GM-CSF y Lepíina). Debido a la amplia variedad de factores conocidos con la capacidad de estimular la actividad de cinasa de tirosina, es de interés la identificación de si una proteína de fusión de albúmina de la presente invención o una molécula inducida por una proteína de fusión de la presente invención tiene la capacidad de acíivar las írayecíorias de íransducción de señal de cinasa de firosina. Por consiguiente, se diseñó el siguiente protocolo para identificar dichas moléculas con la capacidad de activar las células de traducción de señal de íirosina. Se sembraron células objetivo (por ejemplo, queratinocitos primarios) a una densidad de aproximadamente 25, 000 células por depósito en Placas de Clasificación Silente de Loprodina de 96 depósitos compradas en Nalge Nunc (Naperville, IL). Las placas se esterilizaron con dos enjuagues de 30 minuíos con etanol al 100%, se enjuagaron con agua y se secaron durante la noche. Algunas placas se recubrieron durante 2 horas con 100 ml de colágeno íipo I de grado de cultivo celular (50 mg/ml), gelatina (2%) o polilisina (50 mg/ml), los cuales iodos se compraron en Sigma Chemicals (St. Louis, MO) o Matrigel al 10% comprado en Becfon Dickinson (Bedford, MA) o suero de becerro, enjuagado con PBS y almacenado a una lemperaíura de 4°C. Se ensayo el crecimienlo celular de estas placas, sembrando 5,000 células/depósito en medio de crecimiento y cuantificación indirecta del número celular a través del uso de alamarBIue, tal como lo describe el fabricante Alamar Biosciences, I nc. (Sacramenío, CA) después de 48 horas. Las cubierías de placa Falcon #3071 de Becíon Dickinson (Bedford , MA), se utilizaron para cubrir las Placas de Clasificación Silente de Loprodina. También se pueden uíilizar placas de cultivo celular Falcon Microtest III, en algunos experimenfos de proliferación. Para preparar extractos, se sembraron células A431 en las membranas de nylon de placas Loprodyne (20,000/200ml/depósito) y se cultivaron durante la noche en un medio completo. Las células se dejaron sin movimiento mediante incubación de medio basal libre de suero durante 24 horas. Después de 5 a 20 minutos de íratamienlo con EGF (60 ng/ml) o difereníes conceníraciones de una profeína de fusión de albúmina de la presente invención, el medio se eliminó y se agregaron 100 ml de regulador de extracción ((20 mM HEPES pH 7.6, 0.15 M NaCI, 1% Tritón X-100, 0.1% SDS, 2 mM Na3VO4, 2 mM Na4P207 y un cóctel de inhibidores de proteasa (# 1836170) obtenido de Boeheronger Mannheim (Indiapolis, IN)), a cada depósito y la placa se agitó en un agitador giratorio duranfe 5 minuíos a una lemperaíura de 4°C. La placa posteriormenle se colocó en un múltiple de transferencia de vacío y el extracto se filtró a través de los fondos de membrana de 0.46 mm de cada depósito, utilizando vacío doméstico. Los extractos se recolectaron en placas de captación/ensayo de 96 depósitos en el fondo del múltiple de vacío, inmediatamente se colocó en hielo. Para obtener extractos clasificados mediante centrifugación, el contenido de cada depósito, después de solubilización con detergente durante 5 minutos, se eliminó y centrifugó durante 16 minutos a una temperatura de 4°C a 16,000 x g. Se probaron los extractos filtrados con respecto a niveles de actividad de cinasa de íirosina. Aunque muchos de los méíodos para deíecíar la acíividad de cinasa de íirosina son conocidos, en la preseníe invención se describe un méíodo. Generalmeníe, la acíividad de cinasa de íirosina de la proíeína de fusión de albúmina de la preseníe invención, se evalúa delerminando su capacidad para fosforilar un residuo de tirosina en un substrato específico (un péptido bioíinilado). Los péptidos Biotinilados que se pueden utilizar para este propósito incluyen PSK 1 (que corresponde a los aminoácidos 6 a 20 de la cinasa de división celular cdc2-p34) y PSK2 (que corresponde a los aminoácidos 1 a 17 de gastrina). Ambos pépíidos son subsírafos de un rango de cinasas de tirosina y están disponibles en Boehringer Mannheim. La reacción de cinasa de firosina se ajusta agregando los siguientes componentes en orden. Primero, se agregan 10 µl de Pépíido Bioíinilado 5 µM, posleriormente 10 µl de ATP/Mg2+(5mM ATP/50mM MgCI2), posleriormeníe 10 µl 5x de Regulador de Ensayo (clorhidrato de imidazol de 40mM, pH 7.3, beta-glicerofosfato 40 mM, EGTA 1mM, 100 mM MgCI2, 5 mM Mn MnCI2, 0.5 mg/ml BSA), posteriormente 5 µl de Vanadato de Sodio (1 mM), y posteriormente 5 µl de agua. Se mezclan los componentes suavemente y la mezcla de reaccipón se incubó previamente a una temperatura de 30°C durante 2 minutos. Se inicia la reacción agregando 10 µl de enzima de control o el sobrenadante filtrado. Posteriormenle la reacción de ensayo de cinasa de tirosina se termina agregando 10 µl de 120 mm de EDTA y se pone a reacción sobre hielo. Se determina la actividad de cinasa de tirosina transfiriendo 60 µl de alícuota de la mezcla de reacción a un módulo de la placa de microtitulación (MTP) y se incuba a una temperafura de 37°C duraníe 20 minufos. Esto permite que la placa de 96 depósitos recubierta con estreptavidina se asocie con el pépíido biotinilado.

Se lava el módulo MTP con 300 µl/depósito de PBS duraníe cuatro veces. Posteriormeníe se agregan 76 µl de anticuerpo anti-fosfotirosina conjugado con peroxidasa de rábano (anti-P-Tyr- POD(0.5 µ/ml)) a cada depósito y se incuba a una femperatura de 37°C durante una hora. Se lava el depósito como se indicó anteriormeníe. Posteriormeníe se agregan 100 µl de solución de subsíraío de peroxidasa (Boehringer Mannheim) y se incuba a lemperaíura ambieníe duranle al menos 5 minutos (hasta 30 minutos). Se mide la absorbancia de la muestra a 406 nm utilizando el lector ELISA.

Se cuantifica el nivel de actividad de peroxidasa enlazada utilizando el lector ELISA y se refleja el nivel de actividad de cinasa de tirosina. EJEMPLO 32: Ensayo de Identificación de Acíividad de Fosforilación Como un complemenfo y/o alternativa potencial al ensayo de la actividad de la cinasa de tirosina de proleína descrito en el ejemplo 31 , se puede utilizar un ensayo que detecte la activación (fosforilación de los intermediarios de íransducción de la señal iníracelular mayor). Por ejemplo, íal como se describe más adelante, un ensayo en particular puede detectar la fosforilación de tirosina de las cinasas Erk-1 y Erk-2. Sin embargo, la fosforilación de las moléculas, tal como Raf, JNK, p38 MAP, cinasa cinasa Map (MEK), cinasa MEK, Src, cinasa específica de músculo (MuSK), I RAK, Tec y Janus, así como cualesquiera otras moléculas de fosfoserina, fosfoíirosina o fosfotereonina, se pueden deíectar subsíiíuyendo esfas moléculas por Erk-1 ó Erk-2 en el siguiente ensayo. En forma específica, se elaboran placas de ensayo recubriendo los depósitos de una placa ELISA de 96 depósiíos con 0.1 ml de proíeína G (1 µg/ml) durante 2 horas a temperaíura ambieníe (RT). Posíeriormeníe las placas se enjuagan con PBS y se bloquean con 3% BSA/PBS duraníe 1 hora a RT. Posteriormente se traían las placas de profeína G con 2 anticuerpos monoclonales comerciales (1 00 ng/depósito) coníra Erk-1 y Erk-2 (1 hora a RT) (Sania Cruz Biotechnology). (Para detectar oirás moléculas, este paso puede ser fácilmente modificado substituyendo un anticuerpo monoclonal que detecte cualesquiera de las moléculas antes descritas). Después de 3 a 5 enjuagues con PBS , las placas se almacenan a una temperatura de 4°C hasta su uso. Se sellan células A431 en 20,000/depósito en una placa de filtro Loprodyne de 96 depósitos y se cultiva durante la noche en medio de crecimiento. Posteriormente las células se cosechan durante 48 horas en medio basal (DMEM) y posteriormente se tratan con EGF o (6 ng/depósito) o diversas concentraciones de la proteína de fusión de la presente invención durante de 5 a 20 minutos. Posteriormente las células se solubilizan y los extractos se filtran directamente en la placa de ensayo. Después de la incubación con el extracfo durante 1 hora a RT, los depósitos se enjuagan nuevamente. Como confrol posiíivo, se uíiliza una preparación comercial de cinasa MAP (10 ng/depósito) en lugar del extracto A431 . Posteriormente las placas se traían con un anticuerpo policlonal comercial (conejo) (1 µg/ml) el cual reconoce específicamente el epílope fosforilado de las cinasas Erk-1 y Erk-2 (1 hora a RT). Esle anticuerpo se biotinila medianíe procedimientos estándar. Posferiormeníe se cuanfifica el anticuerpo policlonal enlazado mediante incubaciones sucesivas con Europio-Estreptavidina y un reactivo que aumenta la fluorescencia de Europio en el instrumento Wallac DELFIA (fluorescencia resuelta con el tiempo). Una señal fluorescente incremeníada sobre el fondo, indica una fosforilación a íravés de la proleína de fusión de la presente invención a una molécula inducida por una proteína de fusión de albúmina de la presente invención. EJEM PLO 33: Ensayo de Fosforilación Con el objeto de ensayar la actividad de fosforilación de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, se utiliza un ensayo de fosforilación tal como se describe en la Patente Norteamericana No. 5,958,405 (la cual está incorporada a la presente invención como referencia). En síntesis, la actividad de fosforilación puede ser medida mediante fosforilación de un substrato de proteína utilizando 32P-ATP etiquetado gama y cuantificación de la radioactividad incorporada utilizando un contador de radioisótopo gama. La proteína de fusión de la presente invención, se incuba con el substrato de proteína, 32P-ATP y un regulador de cinasa. El 32P incorporado en el substrato se separa posteriormenle a partir de 32P-ATP libre mediante electroforesis, y el 32P incorporado se cuantifica y compara con un control negativo. Los conteos de radioactividad arriba del control negativo, indican la aclividad de fosforilación de la proteína de fusión. EJEMPLO 34: Detección de Actividad de Fosforilación (Activación) de una Proteína de Fusión de Albúmina de la Preseníe I nvención en la Presencia de Ligandos de Polipéptido Se pueden utilizar méíodos conocidos en la íécnica descritos en la presente invención para deíerminar la acíividad de fosforilación de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención . Un método preferido para determinar la actividad de fosforilación es a través del uso del ensayo de fosforilación de tirosina tal como se describe en la Patente Norteamericana No. 5, 817,471 (incorporada a la presente invención como referencia). EJ EM PLO 35: Ensayo para la Estimulación de Proliferación de Célula CD34+ de Médula Ósea Esíe ensayo se basa en la capacidad de CD34+ humana para proliferar en la presencia de facíores de crecimienfo de hemaíopoyéíicos y evalúa la capacidad de las proteínas de fusión de la presente invención para estimular la proliferación de las células CD34 + . Se ha mostrado previamente que la mayoría de los precursores maduros responderán únicamente a una sola señal. Los precursores más inmaduros requieren al menos dos señales para responder. Por consiguieníe, para probar el efecto de las proteínas de fusión de la presente invención en la actividad hematopoyética de una amplia variedad de células progenitoras, el ensayo contiene una proíeína de fusión determinada de la presente invención en la presencia o ausencia de factores de crecimiento hematopoyéíicos. Las células aisladas se culíivan durante 5 días en la presencia de Factor de Célula Madre (SCF) en combinación con la muestra probada. El SCF solo tiene un efecto muy limitado en la proliferación de células de médula ósea (BM), que actúan en condiciones tales como únicameníe un factor de "supervivencia". Sin embargo, en combinación con cualquier factor que exhiba en efecto estimulador en esta célula (por ejemplo, l L-3), el SCF originará un efecto sinérgico. Por consiguiente, si la proteína de fusión probada tiene un efecto estimulador en progenitores hematopoyéticos, se puede tratar fácilmente dicha actividad. Ya que las células BM normales tienen un bajo nivel de células de ciclado, es probable que cualquier efecío inhibidor de una proteína de fusión determinada pueda no ser detectada. Por consiguiente, los ensayos para un efecto inhibidor en progenitores se prueban preferentemeníe en células que son primero someíidas a esíimulación in vitro con SCF+I L+3, y posteriormente se ponen en contacío con el compuesío que esíá siendo evaluado para inhibición de dicha proliferación inducida. En síníesis, la célula CD34+ se aisla ufilizando métodos conocidos en la técnica. Esías células se descongelan y suspenden nuevamente en medio (medio libre de suero QBSF 60 con L-glutamina al 1 % (500 ml) Quality Biological , Inc. , Gaithersburg, MD Cat# 160-204-101 ). Después de varios pasos de centrifugación suave a 200 xg, las células se dejan reposar durante una hora. El control de células se ajusfa a 2.5 x 105 células/ml. Duraníe esíe íiempo, se agregan 10 µl de agua esféril a los depósitos periféricos de una placa de 96 depósitos. Las citocinas que pueden ser probadas en una proteína de fusión de albúmina de la presente invención en este ensayo, son rhSCF (R&D) Sysíems, Minneapolis, MN , Cat# 255-SC) a 60 ng/ml sola y en combinación con rhSCF y rhlL-3 (R&D Systems, Minneapolis, MN Cat# 203-ML) a 30 ng/ml. Después de una hora, se agregan 10 µl de citocinas preparadas, concentraciones diversas de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, y 20 µl de células diluidas al medio que ya se encuentra en los depósitos para dejar un volumen loíal final de 1 00 µl. Posíeriormeníe las placas se colocan en un incubador de CO2 al d%/37°C duraníe cinco días. Diez y ocho horas antes del ensayo se recolectan, se agregan 0.5 µCi/depósiío de [3H] Timidina en un volumen de 10 µl a cada depósito para determinar el rango de proliferación. El experimento se termina cosechando las células de cada placa de 96 depósitos para una estera de filtro utilizando el Tomtec Harvester 96. Después de la cosecha, se secan las esteras de filtro, se cortan y se colocan en ensambles OmniFilter que consisten en una placa OmniFilter y una Charola Omnifilíer. Se agregan 60 µl Microcinía a cada depósito y la placa se sella con película de sellado TopSeal-A. Se fija un engomado de código de barras 16 a la primera placa para el control. Posteriormente las placas selladas se cargan y se determina el nivel de radioactividad a través del Packard Top Count y los daíos impresos se recolectan para análisis. El nivel de radioactividad refleja la cantidad de proliferación celular. Los estudios descritos en este ejemplo prueban la acíividad de una proíeína de fusión determinada para estimular la proliferación de célula CD34+ de médula ósea. Un experto en la técnica puede modificar fácilmente los estudios ejemplificados para probar la actividad de las proteínas de fusión y los polinucleótidos de la presente invención (por ejemplo, terapia genética), así como agonistas y anlagonistas de los mismos. La capacidad de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención para estimular la proliferación de células CD34+ de médula ósea, indica que la proíeína de fusión de albúmina y/o polinucleótidos que corresponden a la proteína de fusión de albúmina son útiles para diagnóstico y tratamienío de padecimieníos que afectan el sistema inmune y hemaíopoyesis. Los usos representaíivos se describen en las secciones de "Acíividad I nmune" y "Enfermedades I nfecciosas" anteriores, y en cualquier parte en la preseníe invención. EJ EMPLO 36: Ensayo de Respuesía Celular Mejorada por Maíriz Exfracelular (EMECR) El objeíivo del ensayo de Respuesía Celular Mejorada por Maíriz Exíracelular (EMECR) es evaluar la capacidad de las proteínas de fusión de la presente invención para acíuar en células madre hematopoyéíicas dentro del contexto de la señal inducida por la matriz exíracelular (ECM). Las células responder a los factores de regulación dentro del contexto de la señal(s) recibida del microambiente circundante. Por ejemplo, los fibroblastos y células madre endoteliales y epiteliales fallan a replicarse en ausencia de señales de la ECM. Las células madre hemaíopoyéíicas puede pasar por autorenovación en la médula ósea, pero no en cultivo de suspensión in vitro. La capacidad de las células madre debe pasar por auíorenovación in vitro, si depende de la interacción con las células estromales y la fibronectina de proteína ECM (fn). La adhesión de las células fn se transmite a través de los receptores de integrina a5. ß y a4.ß-? , los cuales se expresan mediante células madre hematopoyéticas humanas y de ratón . El factor(s) que se integra con el ambiente ECM y es responsable de estimular la autorenovación de la célula madre no ha sido identificado todavía. El descubrimiento de dichos factores debe ser de mayor interés en lerapia genéíica y aplicaciones de transplaníe de médula ósea. En síníesis, el poliestireno, no traíado en culfivo celular, las placas de 96 depósitos se recubren con fragmento fn a una concentración de recubrimienío de 0.2 µg/cm2. Las células de médula ósea de raíón se plaquean (1 ,000 células/depósiío) en 0.2 ml de medio libre de suero. Las células cultivadas en la presencia de I L-3 (5 ng/ml) + SCF (50 ng/ml) deben servir como el control positivo, condiciones bajo las cuales se espera una pequeña autorenovación pero no en una diferenciación pronunciada de las células madre, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención se prueban con controles negativos adecuados en la presencia y ausencia de SCF (5.0 ng/ml), cuando el volumen de la composición administrada que contiene la proíeína de fusión de albúmina de la présenle invención represenía el 10% del volumen de ensayo toíal. Las células plaqueadas se dejan crecer posteriormenfe incubando en un incubador de cultivo de tejido con ambieníe bajo en oxígeno (5% CO2, 7% O2 y 88% N2) duraníe 7 días. El número de células de proliferación dentro de los depósitos, se cuantifica posteriormente midiéndolo en incorporación de timidina en el ADN celular. La verificación de los golpes positivos en el ensayo requerirán de caracterización fenotípica de las células, lo cual se puede lograr escalando el sistema de cultivo y utilizando reactivos de anticuerpo adecuados contra antígenos de superficie celular y FACScan . Si una proteína de fusión en particular de la presente invención se encuentra como un estimulador de progenitores hematopoyéticos, la proteína de fusión y los polinucleótidos que corresponden a la proteína de fusión pueden ser útiles, por ejemplo, en el diagnóstico y tratamiento de padecimientos que afectan el sistema inmune y la hematopoyesis. Se describen usos representativos en las secciones de "Actividad I nmune" y "Enfermedad I nfecciosa" anterior, y en cualquier parte de la presente invención. La proteína de fusión también puede ser útil en la expansión de células madre y progenitores consignado de varios linajes sanguíneos, y en la diferenciación y/o proliferación de varios tipos de células. Además, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, también pueden emplearse para inhibir la proliferación y diferenciación de células hematopoyéticas y por consiguiente, se pueden emplear para proteger las células madre de médula ósea de agentes quimioterapéuticos durante la quimioterapia. Este efecto antiproliferativo puede permitir la administración de mayores dosis de ageníes quimioíerapéuticos, y por consiguieníe, un íratamienío quimioíerapéuíico más efectivo.

Además, las proíeínas de fusión de la presente invención y los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la presente invención , también pueden ser útiles para el íratamienfo y diagnóstico de padecimientos relacionados con hematopoyesis tales como, anemia, pancitopenia, leucopenia, írombociíopenia o leucemia, ya que las células estromales son importanfes en la producción de células de linajes hematopoyéíicos. Los usos incluyen cultivo ex vivo de médula ósea, íransplante de médula ósea y reconsíifución de médula ósea, radioterapia o quimioterapia de neoplasia. EJEM PLO 37: Proliferación de Fibroblasto Dérmico Humano y Célula de Músculo Liso Aórtico Se agrega una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención a cultivos de fibroblastos dérmicos humanos normales (NHDF) y células de músculo liso aórtico humano (AoSMC) y se llevan a cabo dos ensayos en conjunto con cada muesíra. El primer ensayo revisa el efecto de la proteína de fusión en la proliferación de fibroblastos dérmicos humanos normales (NHDF) o células de músculo liso aórticas (AoSMC). El crecimiento aberrante de los fibroblastos o las células de músculo liso es una parfe de diversos procesos patológicos, incluyendo fibrosis y restenosis. El segundo ensayo examina la producción IL6 a través tanto de NHDF y SMC. La producción IL6 es una indicación de activación funcional . Las células activadas tendrán producción incrementada de un número de citocinas de oíros facíores, que da como resultado un resultado proinflamatorio o inmunomodulador. Los ensayos se corren con y sin esíimulación co-TNFa, con el objeto de revisar la actividad coestimuladora o inhibidora. En síntesis, el día 1, las placas negras de 96 depósiíos se preparan con 1000 células/depósfio (NHDF) o 2000 células/depósiío (AoSMC) en 100 µl de medio de cultivo. El medio de cultivo NHDF coníiene: medio basal Cloneíics FB, 1 mg/ml insulina, 50 mg/ml gentamicina, 2% FBS, y al mismo tiempo un medio de cultivo AoSMC que contiene medio basal Clonetics SM, 0.5 µg/ml hEGF, 5 mg/ml insulina, 1 mg/ml hFGF, 50 mg/ml gentamicina, 50 µg/ml Anfotericina B, 5% FBS. Después de la incubación a una temperatura de 37°C durante al menos 4 a 5 horas, se aspira el medio de culíivo y se reemplaza con medio de reíención de crecimiento. El medio de retención de crecimiento para NHDF, contiene medio basal de fibroblasto, 50 mg/ml, gentamicina, 2% FBS, en tanío que el medio de detención de crecimiento para AoSMC contiene medio basal SM, 50 mg/ml gentamicina, 50 µg/ml Anfotericina B, 0.4% FBS. Se incuba a una temperatura de 37°C hasta el día 2. En el día 2, se diseñan diluciones en serie y plantillas de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, de modo que siempre incluyan controles del medio y controles de la proteína conocida. Para experimeníos íanío de esíimulación como de inhibición, las proteínas se diluyen en un medio de tensión de crecimiento. Para experimentos de inhibición, se agrega TNFa a una concentración final de 2 ng/ml (NHDF) o 5 ng/ml (AoSMC). Se agrega un volumen de 1 /3 del medio que contiene controles o una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y se incuba a una temperatura de 37°C/CO2 al 5% hasta el día 5. Se íransfieren 60 µl de cada depósito a otra placa de 96 depósilos etiqueíada, se cubre con un sellador de placa, y se almacena a una íemperaíura de 4°C hasía el día 6 (para ELISA 1 L6). Para los resíanfes 1 00 µl en la placa de culíivo celular, se agrega en forma aséplica Alamar Blue en una caníidad igual al 10% del volumen de cultivo ( 10 µl). Se regresan las placas al incubador durante 3 a 4 días. Posferiormente, se mide la fluorescencia con excitación a 530 nm y la emisión a 590 nm utilizando el CytoFluor. Esto produce los datos de estimulación/inhibición de crecimiento. El día 5, se lleva a cabo el I L6 ELISA recubriendo una placa de 96 depósiíos con 50-100 µ/depósifo de anticuerpo Monoclonal AntiHumano I L6 diluido en PBS, pH 7.4, se incuba ON a íemperalura ambieníe. El día 6, se vacían las placas en el sumidero y se manchan sobre toallas de papel. Se prepara un Regulador de Ensayo que contiene PBS con 4% BSA. Se bloquean las placas con 200 µl/depósito de regulador de bloqueo Pierce Super Block en PBS durante de 1 a 2 horas y posteriormente se lavan las placas con regulador de lavado (PBS, 0.05% Tween-20). Se manchan las placas sobre toallas de papel. Posíeriormente se agregan 50 µl/depósito de anticuerpo etiquetado-Biotina, Monoclonal anti- Humano I L-6 en 0.50 mg/ml. Se hacen diluciones de la existencia de I L-6 en el medio (30, 10, 3, 1 , 0.3, 0 ng/ml). Se agregan muestras por duplicado a la fila superior de la placa. Se cubren las placas y se incuban durante 2 horas a RT en un agitador. Las placas se lavan con regulador de lavado y se manchan sobre íoallas de papel. Se diluye la Esíreplavidina eíiquetada-EU 1 : 1000 en Regulador de Ensayo, y se agregan 100 µl/depósito. Se cubre la placa y se incuba 1 hora a RT. Las placas se lavan nuevamente con regulador de lavado y se manchan sobre foallas de papel. Se agregan 100 µl/depósiío de Solución de Aumenío. Se agitan durante 5 minutos. Se lee la placa en el fluorométro DELFIA Wallac. Las lecturas de las muesíras por íriplicado en cada ensayo, fueron reguladas y promediadas. Un resultado positivo en esíe ensayo sugiere una proliferación de célula AoSMC y que la proteína de fusión de albúmina puede estar involucrada en la proliferación de fibroblasío dérmico y/o proliferación de célula de músculo liso. Un resultado positivo también sugiere muchos usos potenciales de la proteína de fusión y polinucleóíidos que codifican la proíeína de fusión de albúmina. Por ejemplo, las respuestas de inflamación inmunes, curación de heridas de angiogénesis, tal como se deíalla a lo largo de la preseníe invención. Paríicularmente, las proíeínas de fusión pueden ser utilizadas en la curación de heridas y regeneración dérmica, así como en la promoción de vasculogénesis, tanto en bazos sanguíneos como en linfáticos. El crecimiento de vasos sanguíneos puede ser utilizado en el trafamienío, por ejemplo, de enfermedades cardiovasculares. Además, las proteínas de fusión que muestran actividad antagonista en este ensayo, pueden ser útiles para tratar enfermedades, padecimientos y/o condiciones que se involucran en la angiogénesis, acfuando como un agente anti-vascular (por ejemplo, aníi-angiogénesis). Esías enfermedades, padecimientos y/o condiciones se conocen en la técnica y/o se describen en la presente invención, tal como, por ejemplo, malignidades, tumores sólidos, tumores benignos, por ejemplo, hemangiomas, neuromas acústicos, neurofibromas, tracomas y granulomas piogénicos; placas ateroescleróíicas; enfermedades angiogénicas oculares, por ejemplo, retinopaíía diabética, retinopatía de prematuridad, degeneración ocular, rechazo de injerío de cornea, glaucoma neovascular, fibroplasia reíroleníal, rubeosis, reíinoblastoma, uveitis y Pterigia (crecimienío anormal de bazos sanguíneos) del ojo; aríritis reumaíoide; psoriasis; curación de heridas reírazada; endomeíriosis; vasculogénesis; granulaciones; cicalrices hiperlróficas (queloides); fracturas sin unión ; esclerodérma; tracoma; adhesiones vasculares; angiogénesis miocardíaca; colaterales coronarios; colaíerales cerebrales; malformaciones aríeriovenosas; angiogénesls de limbo isquémico; Síndrome de Osler-Webber; neovascularización de placa; felangiectasia; uniones hemofiliacas; angiofibroma; displasia fibromuscular; granulación de herida; enfermedad de Crohn y ateroesclerosis. Además, las proteínas de fusión de albúmina que actúan como un aníagonista en este ensayo, pueden ser útiles para tratar enfermedades anti- hiperproliferaíivas y/o aníi-inflamatorias conocidas en la técnica y/o que se describen en la presente invención. EJ EMPLO 38: Expresión de Molécula de Adhesión Celular (CAM) en Células Endoteliales El reclutamiento de linfocitos en áreas de inflamación y angiogénesls comprende interacciones de ligando y un receplor específico entre las moléculas de adhesión de superficie celular (CAMs) en linfocitos y el endotelio vascular. El proceso de adhesión, en preparaciones tanío normales como paíológicas, sigue una cascada de pasos múlíiples que comprende la expresión de la moIécula-1 de adhesión inlercelular (ICAM-1 ), molécula-1 de adhesión de célula vascular (VCAM-1 ), y molécula-1 de adhesión de leucociíos endofelial (E-selecíina) en células endoíeliales (EC). La expresión de estas moléculas y otras en el endoíelio vascular deíermina la eficacia con la cual los leucocitos pueden adherirse a la vasculatura local y vaciarse en el tejido local durante el desarrollo en una respuesta inflamatoria. La concentración local de ciíocinas y factor de crecimiento participa en la modulación de la expresión de estas CAMs. En síníesis, se crecieron células endoíeliales (por ejemplo, células Endoteliales de Vena Umbilical Humana (H UVECs)) en una placa de 96 depósitos esíándar para confluencia, se eliminó el medio de crecimiento de las células y se reemplazó con 100 µl de 199 Médium (suero de bovino fetal al 10% (FBS)). Las muestras para probar (que coníiene una proteína de fusión de albúmina de la presente invención) y controles positivos o negativos se agregaron a la placa por triplicado (en volúmenes de 10 µl). Posteriormente las placas se incubaron a una temperaíura de 37°C duranfe ya sea 5 horas (expresión seleclina e iníegrina) o 24 horas (únicamenle expresión de infegrina). Las placas se aspiraron para eliminar el medio y se agregó a cada depósiío 100 µl de paraformaldehído-PBS al 0.1 % (con Ca++ y Mg + + ). Las placas se mantienen a una temperalura de 4°C durante 30 minutos. Se elimina la fijación de los depósiíos y los depósiíos se lavan IX con PBS(+Ca, Mg) + 0.5% BSA y se drenan. Se agregan 10 µl del aníicuerpo primario diluido a los depósifos de prueba y de conírol. Se uíilizan Anti-I CAM-1 -Bioíina, Aníi-VCAM-1 -Biotina y Aníi-E-selectina-Biotina a una concenlración de 10 µg/ml (dilución 1 : 1 0 de 0.1 mg/ml de anticuerpo de existencia). Las células se incubaron a una temperaíura de 37°C duraníe 30 minufos en un ambiente humidificado. Los depósitos se lavaron tres veces con PBS(+Ca, Mg) + 0.5% BSA. Se agregaron 20 µl de Fosfatasa AIcalina-ExtraAvidina diluida (dilución 1 :5,000, referida en la presente invención como la dilución de írabajo) a cada depósito y se incubaron a una temperatura de 37°C durante 30 minufos. Los depósitos se lavaron tres veces con PBS( + Ca, Mg) + 0.5% BSA. Se disolvió 1 íableta de Fosfato de p-Nitrofenol pNPP por 5 ml de regulador de glicina (pH 10.4). Se agregaron 100 µl de substrato pNPP en regulador de glicina a cada depósito de prueba. Se prepararon depósiíos estándar por triplicado al partir de la dilución de trabajo de la Fosfatasa Alcalina-ExtraAvidina en regulador de glicina: 1:5,000 ¡0°= > 10-05 > 10'1 > 10"1 5. Se agregaron 5 µl de cada dilución a depósitos por íriplicado, y el contenido AP resultaníe en cada depósiío es de 5.50 ng, 1.74 ng, 0.55 ng, 0.18 ng. Posteriormente se agregaron 100 µl de reactivo pNNP a cada uno de los depósitos estándar. La placa se incuba a una temperaíura de 37°C durante 4 horas. Se agrega un volumen de 50 µl de 3M NaOH a todos los depósitos. La placa se lee en un lector de placa a 405 nm utilizando la opción de substracción del fondo en depósitos limpios llenos únicamente con regulador de glicina. Además, la plantilla se prepara para indicar la concentración de conjugado-AP en cada depósito estándar [5.50 ng; 1.74 ng; 0.55 ng; 0.18ng]. Los resulfados se indican como cantidad de conjugado-AP enlazado en cada muestra. EJEMPLO 39: Ensayo de Proliferación de Células Endoteliales Alamar Blue Esíe ensayo puede ser utilizado para determinar en forma cuantifaíiva la inhibición íransmiíida por proíeína de proliferación inducida por bFGF de Células Endoleliales Linfática de Bovino (LECs), Células Endoteliales Aórticas de Bovino (BAECs) o Células Miometriales Uterinas Microvasculares Humanas (UTMECs). Este ensayo incorpora un indicador de crecimiento fluorométrico basado en la detección de acíividad meíabólica. Se prepara un Ensayo de Proliferación Alamar Blue estándar en EGM-2MV con 10 ng/ml de bFGF agregado como una fuente de estimulación de célula endotelial. Este ensayo se puede uíilizar con una variedad de células endoleliales con pequeños cambios en el medio de crecimienío y concenlración celular. Las diluciones de lotes de proteínas que serán probados se diluyen según sea lo adecuado. Se utiliza medio libre de suero (GI BCO SFM) sin bFGF como un conlrol no estimulado y se incluye Angiostalina o TSP-1 como controles de inhibición conocidos. En síntesis, se siembran LEC, BAECs ó UTMECs en medio de crecimienío a una densidad de 5000 a 2000 células/depósito en una placa de 96 depósiíos y se ponen a una femperaíura de 37°C durante la noche. Después de la incubación durante la noche de las células, se elimina el medio de crecimiento y se reemplaza con GI BCO EC-SFM. Las células se traían con las diluciones adecuadas de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención o mueslra(s) de proteína de control (preparada en SFM) en depósitos por triplicado con bFGF adicional a una concentración 10 ng/ml. Una vez que las células han sido traíadas con las muestras, las placas se colocan nuevamente en el incubador a una temperaíura de 37°C duraníe íres días. Después de fres días, se agregan 10 ml de Alamar Blue de exisfencia (Biosource Caí# DAL1 100) a cada depósiío y las placas se colocan nuevameníe en el incubador a una temperatura de 37°C durante cuatro horas. Las placas se leen posteriormente a una excitación de 530 nm y emisión de 590 nm utilizando el lector de fluorescencia CytoFluor. Se registra la salida directa en unidades de fluorescencia relaíiva. El Alamar Blue en un indicador de reducción de oxidación que lanío flúoresce como cambia el color en respuesía a la reducción química de medio de crecimiento que resulta del crecimiento celular. Conforme las células crecen en el cultivo, la actividad metabólica innata da como resultado una reducción química del ambiente circundante inmediato. La reducción relacionada con el crecimiento origina que el indicador cambie de forma oxidada (azul no fluorescente) a forma reducida (rojo fluorescente) (por ejemplo, proliferación estimulada producida una señal más fuerte y la proliferación inhibida producirá una señal más débil y la señal toíal es proporcionada al número lotal de células, así como a su actividad metabólica). El nivel de fondo de la actividad se observa con el medio de inanición. Esto se compara con la producción observada de las muestras de control positivas (bFGF en medio de crecimiento) y diluciones de proteína. EJEMPLO 40: Detección de Inhibición de una Reacción de Linfocito Mezclada Este ensayo puede ser utilizado para defectar y evaluar la inhibición de una Reacción de Linfocilo Mezclado (MLR) a íravés de las proíeínas de fusión de la présenle invención. La inhibición de una MLR puede deberse a un efeclo directo en la proliferación y viabilidad celular, modulación de moléculas coestimuladoras en células de iníeracción, modulación de adhesividad entre linfocitos y células accesorias y modulación de producción de citocina y células accesorias. Se pueden dirigir múltiples células a íravés de las proteínas de fusión de albúmina que inhiben MLR, ya que la fracción monocuclear de sangre periférica utilizada en esíe ensayo incluye linfociíos y exíerminadores naturales, T, y B, así como monocitos y células dendríticas. Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención enconíradas para inhibir el MLR, pueden íener aplicaciones de enfermedades asociadas con acíivación o proliferación de linfocitos y monocitos. Estos incluyen pero no se limiían a, enfermedades tales como asma, artritis, diabetes, condiciones de piel inflamatoria, psoriasis, eczema, lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, glomerulonefritis, enfermedad de intestino inflamatorio, enfermedad de crohn, colitis ulcerativa ateroesclerosis, cirrosis, enfermedad de injerto versus huésped, enfermedad de huésped versus injerto, hepatitis, linfoma y leucemia. En síntesis, Las PBMCs donantes humanos se purificaron mediante centrifugación de gradiente de densidad utilizando un Medio de Separación de Linfocitos (LMS®, densidad 1.0770 g/ml, Organon Teknika Corporation, West Chester, PA). Las PBMCs de dos donanfes se ajusfaron a 2 x 106 células/ml en RPM1-1640 (Life Technologies, Grand Islán, NY) suplemeníado con FCS al 10% y glutamina 2 mM. Las PBMCs de un tercer donante se ajustaron a 2 x 105 células/ml. Se agregaron 50 ml de PBMCs a cada donante a depósitos de una placa de microtitulación de fondo redondo de 96 depósitos. Las diluciones del malerial de prueba de la proíeína de fusión (50 µl) se agregaron por triplicado a los depósitos de microtitulación. Se agregaron muestras de prueba (de la profeína de interés) para una dilución final de 1:4; rhulL-2 (R&D Systems, Minneapolis, MN, número de catálogo 202-IL a una conceníración final de 1 µg/ml; aníi-CD4 mAb (R&D Sysíems, clone 34930.11, número de catálogo MAB379) se agregó a una concentración final de 10 µg/ml. Las células se cultivaron durante 7 a 8 días a una temperaíura de 37°C en CO2 al 50% y se agregó 1 µC de [3H] timidina a los depósitos durante las últimas 16 horas del culíivo. Las células se cosecharon y se deíerminó la incorporación de íimidina utilizando un Packard TopCount. Los datos se expresaron como la desviación promedio y estándar de determinaciones por triplicado. Las muestras de la proteína de fusión de interés se clasificaron en experimentos separados y se compararon con el tratamiento de control negativo, anti-CD4 mAb, que inhibe la proliferación de linfocitos y el tralamiento de conírol positivo, IL-2 (ya sea como material recombinante o sobrenadante), el cual aumenta la proliferación de linfocitos. EJEMPLO 41: Ensayos de Actividad de Proteasa Se puede utilizar el siguieníe ensayo para evaluar la actividad de proteasa de una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención. Se llevaron a cabo cimografía de caseína y gelatina esencialmente como se describió anteriormenfe (Heusen y asociados, Anal. Biochem. , 1 02: 196-202 (1980); Wilson y asociados, Journal of Urology, 149: 653-658 (1993)). Las muestras se corrieron el geles de poliacrimida al 10%/SDS 0.1 % que contienen orcaseína de gelaíina al 1 %, se enjugaron al 2.5% de íriton a temperafura ambiente durante 1 hora, y en glicina 0.1 M , pH 8.3 a una íemperaíura de 37°C de 5 a 16 horas. Después de la tinción en negro de amido, aparecieron áreas de proteolisis como áreas claras contra el fondo azul-negro. Se utilizó tripsina (Sigma T8642) como un conírol posiíivo. La acíividad de proíeasa íambién fue deferminada moniíoreando la disociación de ésíer eíílico de n-a-benzoil-L-arglnina (BAEE) (Sigma B-4500, las reacciones se prepararon en (25mM NaPO4, 1 mM EDTA y 1 mM BAEE), pH 7.5. las muestras se agregaron y el cambio en adsorbancia 260 nm se monitoreó en el espectrofotómetro Beckman DU-6 en el modo conducido por tiempo. Se uíilazo tripsina como un control positivo. Se llevaron a cabo ensayos adicionales con base en la liberación de péptidos solubles en ácido a partir de caseína o hemoglobina medida como adsorbancia en 280 nm o en forma colorimétrica utilizando el método Folin , tal como se describe en la publicación de Bergmeyer y asociados, Methods of Enzymatic Análisis, 5 (1984). Otros ensayos comprenden la solubilización de substratos cromogénicos (Ward, Applied Science, 251 -317 (1983)). EJ EMPLO 42: Ejemplificación de Especificidades de Substrato de Proteasa de Serina Se pueden utilizar méfodos conocidos en la técnica o aquí descritos para delerminar la especificidad del subsíraío de las proíeínas de fusión de albúmina de la presenfe invención que íienen acíividad de proteasa de serina. Un método preferido para determinar la especificidad del subsíraío es a íravés del uso de bibliofecas de combinación sintéíicas de exploración de posición, tal como se describe en la Patente GB 2 324 529 (incorporada en su toíalidad a la preseníe invención como referencia). EJEM PLO 43: Ensayos de Enlace de Ligandos Se puede utilizar el siguiente ensayo para evaluar la actividad de enlace de ligando de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención. Los ensayos de enlace de ligando proporcionan un método directo para confirmar la farmacología receptoras y se pueden adaptar a un formato de alto rendimienío. El ligando purificado de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, es radioetiquetado para actividad específica superior (50-2000 Ci/mmol) para estudios de enlace. Posteriormente se hace una determinación de que el proceso de radioetiquetación no disminuye la actividad del ligando hacia la proteína de fusión. Se optimizan las condiciones de ensayo para reguladores, iones, pH y otros moduladores, tales como nucleótidos, para establecer una proporción de señal a ruido que puede ser operable tanto para fuentes de polipéptido de célula completa como de membrana. Para estos ensayos, se define el enlace de polipépíido específico como radioactividad asociada toíal menos la radioactividad medida en la presencia de un exceso de ligando de compeíición no etiquetado. Cuando es posible, se utiliza más de un ligando de competición para definir el enlace no específico residual. Eiemplo 44: Ensayo Funcional en Oocitos Xenopus Se sintetizaron in vitro transcripciones de ARN cubiertas a partir de plantillas de plásmido linearizado que codifican una proteína de fusión de la presente invención, con polimerazas de ARN de acuerdo con procedimientos estándar. Se suspendieron las transcripciones in vitro en agua a una concentración final de 0.2 mg/ml . Se eliminaron lóbulos ovarianos de sapos hembras adultas, se obtuvieron oociíos desfoliculados en eíapa V, y se inyecíaron las íranscripciones de ARN (10 ng/oociíos) en un bolo de 50 ml utilizando un aparato de microinyección. Se utilizaron sujeciones de voltaje de dos electrodos para medir las corrieníes de los oociíos Xenopus individuales en proleína de fusión y polipéptido de respuesta coníra exposición. Se elaboraron los regisíros en un medio de Barth libre de Ca2+ a temperatura ambiente. Se puede uíilizar el sisíema Xenopus para clasificar ligandos y extracfos de íejido/célula conocidos para acíivar ligandos.

Eiemplo 45: Ensayos Microfisiométricos La activación de una amplia variedad de sistemas mensajeros secundarios, da como resultado la extrusión de pequeñas cantidades de ácido de una célula. El ácido formado es en gran parte como resulíado de la acíividad metabólica incrementada requerida para encender el proceso de señalización iníracelular. Los cambios de pH en el medio que rodea las células son muy pequeños aunque se pueden deíecíar a íravés del microfisiómetro CYTOSENSOR (Molecular Devices Lid. , Menío Park, Calif. ). El CYTOSENSOR tiene por lo tanío la capacidad de deíecíar la capacidad de una proleína de fusión de albúmina de activar mensajeros secundarios que se acoplan a una energía que utiliza la trayectoria de señalización intracelular. EJ EMPLO 46: Clasificación de Sobrenadante de Extracto/Célula Existe un gran número de receptores mamíferos para los cuales existen resíos, lodavía de ligando de activación no cognato (agonisías). Por lo íanlo, los ligandos acíivos para estos receptores pueden no estar incluidos dentro de los bancos de ligandos íal como se ideníifica hasta la fecha. Por consiguiente, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención también pueden ser clasificadas de manera funcional (utilizando calcio, cAMP, microfisiómetro, electrofisiología de oocito, y clasificaciones funcionales) contra extractos de tejido para idenfificar ligandos naturales de la parte de proíeína Terapéuíica y/o parte de proteína de fusión de albúmina de la presente invención . Los extractos que producen respuestas funcionales positivas pueden ser subfraccionados en forma secuencial hasta que se aisla e identifica un ligando de acíivación. EJEM PLO 47: Ensayo ATP-enlace Se puede uíilizar el siguiente ensayo para evaluar la actividad de enlace-ATP de las proteínas de fusión de la presente invención. La actividad de enlace-ATP de una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención, se puede detecíar utilizando el ensayo de enlace-ATP que se describe en la Patente Norteamericana No. 5,858,719, la cual está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia. En síntesis, se mide el enlace-ATP a una proleína de fusión de albúmina de la presente invención, mediante eíiquetación por fotoafinidad con 8-ácido ATP en un ensayo de compeíición. Las mezclas de reacción que contienen 1 mg/ml. de ABC que transportan proteína se incuban con diversas conceníraciones de ATP; o el adenil-5'-imidodifosfato de análogo ATP no-hidrollzable duraníe 10 minutos a una temperatura de 4°C. Se agrega una mezcla de 8-ácido-ATP (Sigma Chem. Corp. , St. Louis, MO.) más 8-ácido-ATP (32P-ATP) (5 mCi/µmol, ICN, Irving CA.) a una concentración final de 100 µl y se colocan 0.5 ml de alícuolas en los depósiíos de una placa con manchas de porcelana en hielo. La placa es irradiada utilizando una lámpara de onda corta de 254 nm UV a una distancia de 2.5 cm desde la placa duranfe dos intervalos de un minuto con un intervalo de enfriamiento de un minuto entre ellos. La reacción de deíiene medianíe la adición de ditioíreitol a una concentración final de 2mm. Las incubaciones se someíen a elecfroforesis SDS-PAGE, se secan y autoradiografían. Las bandas de proteínas que corresponden a las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención son cortadas, y se cuaníifica la radioactividad. Una disminución en radiactividad con ATP en ¡ncremento o adenil-5'-imidodifosfalo proporciona una medida de afinidad de ATP para la proteína de fusión. EJEMPLO 48: Identificación de Proteínas de Transducción de Señal que Interactúan con una Proteína de Fusión de Albúmina de la Presente I nvención Las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención pueden servir como herramientas de investigación para la identificación, caracterización y purificación de proteínas de trayectoria de transducción de señal o proteínas receptoras. En síntesis, una proíeína de fusión eíiqueíada de la preseníe invención es útil como un reactivo para la purificación de moléculas con las cuales interactúa. En una modalidad de purificación por afinidad, se acopla en forma covalente en una proteína de fusión de albúmina de la présenle invención a una columna de cromaíografía de la presenfe invención. Se pasa a través de la columna un derivado de extracto libre de células procedente de las células objetivo putaíivas, tales como tejidos de carcinoma, y las moléculas con afinidad adecuada enlazan a la proteína de fusión de albúmina. El complejo de proteína se recupera de la columna se disocia, y la molécula recuperada se somete a secuenciación de proteína de terminal-N . Posteriormeníe esía secuencia de aminoácidos se utiliza para identificar la molécula capíurada para diseñar sondas de oligonucleóíidos de degeneración para clonar el gen relevaníe a paríir de una biblioíeca de cADN adecuada. EJ EMPLO 49: Bioensavo I L-6 Se conoce una variedad de ensayos en la técnica para probar los efectos proliferativos de una proteína de fusión de albúmina de la preseníe invención. Por ejemplo, un ensayo es el bioensayo IL-6 lal como se describe en la Publicación de Marz y asociados. (Proc. Naíl. Acad. Sci., EUA., 95:3251 -56 (1998), la cual eslá incorporada a la presente invención como referencia). Después de 68 horas a una temperatura de 37°C, se mide el número de células viables, agregando el azul de tiazolilo de sal de teírazolio (MTT) e incubando durante 4 horas adicionales a una temperaíura de 37°C. Las células B9 se lisan medianfe SDS y se mide la densidad óptica a 570 nm. Los controles que coníienen I L-6 (posiíivo) y sin citosina (negativo) son resumidos, se lavan las células de múrido B9 dependienles de I L-6 íres veces en medio libre de I L-6 y se plaquean a una concentración de 5000 células por depósito en 50 µl, y se agregan 50 µl de la proteína de fusión de la presente invención. La proliferación aumentada en las muestras de prueba (que contienen una proteína de fusión de albúmina de la presente invención) con relación al conírol negaíivo, indican los efecíos proliferativos transmitidos por la proteína de fusión . EJEMPLO 50: Soporte de Supervivencia de Neuronas de Embrión de Pollo Para probar si la viabilidad de célula neuronal simpatética es soportada por una proíeína de fusión de albúmina de la presenfe invención , se puede uíilizar el ensayo de supervivencia neuronal de embrión de pollo de Senaldi y asociados (Proc. Nati. Acad. Sci. , EUA. , 96: 1 1458-63 (1998) la cual está incorporada a la presente invención como referencia) en síntesis, se aislan neuronas moíoras y simpaíéíicas de los embriones de pollo, se suspenden nuevamenfe en medio L15 (con FCS al 1 0% , glucosa, selenifa de sodio, progesíerona, conalbúmina, putrescina e insulina; Life Technologies , Rockville, M D.) y medio de Eagles modificado por Dulbeco's [con FCS al 10% , glutamina, penicilina, y regulador Hepes 25 mM (pH 7.2); Life Technologies, Rockeville, MD.] respectivameníe, y se incuba a una femperalura de 37°C iniciados al 5% en la presencia de difereníes conceníraciones de la proíeína de fusión purificada de la presente invención, así como un control negaíivo que carece de cualquier ciíocina. Después de íres días, se determina la supervivencia de neuronas mediante la evaluación de morfología celular, y a íravés del uso del ensayo coloriméírico de Mosman (Mosmann , T. , J . Immunol. Methods, 65:55-63 (1983)). La viabilidad de células neuronal mejorada tal como se compara con los coníroles que carecen de ciíocina, indica la capacidad de la proteína de fusión de albúmina para aumentar la supervivencia de células neuronales. EJ EMPLO 51 : Ensayo de Actividad de Fosfatasa Se puede utilizar el siguieníe ensayo para evaluar la acíividad de fosfatasa de serina/treonina (PTPasa) en una profeína de fusión de albúmina de la presente invención . Con el objeto de ensayar la acíividad de fosfaíasa de serina/íreonina (PTPasa), los ensayos que pueden ser utilizados son ampliameníe conocidos para los experfos en la íécnica. Por ejemplo, la acfividad de fosfatasa de serina/treonina. Por ejemplo, la actividad de fosfatasa de serina/treonina (PTPasa) de una proteína de fusión de albúmina de la preseníe invención puede medirse uíilizando un equipo de ensayo de PSPasa de New England Biolabs, I nc. La proíeína básica de mielina (myBP), un subsíraío para PSPasa, se fosforila sobre residuos de serina y trionina para liberar la fosfatasa inorgánica de MyBP etiqueíada-32P. EJEMPLO 52: Interacción de Fosfatasas de Serina/Treonina con otras Proteínas Las proíeínas de fusión de la preseníe invención que íienen actividad de fosfatasa de serina/treonina (por ejemplo, tal como se determina el ejemplo 51 ) son útiles, por ejemplo, como herramienías de investigación para la identificación, caracterización y purificación de proteínas de interacción o proíeínas recepíoras adicionales, u oirás proteínas de la trayecíoria de tranducción de señal. En síntesis, es útil una profeína de fusión etiqueíada de la presenfe invención como un reactivo para la purificación de moléculas con las que interactúa. En una modalidad de purificación por afinidad, se acopla en forma covalente una proteína de fusión de albúmina de la presente invención a una columna de cromatografía. El extracto libre de célula derivado de las células objetivo putaíivas, íales como células neurales o de hígado, se pasan sobre la columna, y las moléculas con afinidad adecuada se enlazan a la proteína de fusión. El complejo de proteína de fusión se recupera de la columna, se disocia, y las moléculas recuperadas se someten a secuenciación de proíeína de íerminal-N. Esta secuencia aminoácido se utiliza posteriormente para identificar la molécula capturada o para diseñar sondas de oligonucleótido de degeneración para clonar el gen relevante a partir de una biblioíeca de cADN adecuada. EJEMPLO 53: Ensayo de Actividad de Heparanasa Existen numerosos ensayos conocidos en la íécnica, los cuales pueden ser empleados para ensayar la acíividad de paranasa de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención. En un ejemplo, se ensaya la actividad de paranasa de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención tal como se describe en la Publicación de VIodavsky y asociados, (Vlodavsky y asociados Naí. Med. , 5:793-802 (1 999)). En síníesis, los Usados celulares, medio acondicionado, células iníactas (1 x106 células por piafo de 35-mm), sobrenadanfe cultivo celular o proteína de fusión purificada se incuban durante 18 horas a una temperaíura de 37°C, pH 6.2-6.6, con ECM etiquetado-35S o proleoglicanos de pico 1 derivados de ECM soluble. El medio de incubación se centrífuga y se analiza el sobrenadante mediante filtración de gel en una columna de Sefarosas CL-6B (0.9 x 30 cm). Las fracciones se eluyen con PBS y se mide su radioactividad. Los fragmentos de degradación de cadenas laterales de sulfato de heparan, se eluyen a partir de 6B en 0.5 < Kav < 0.8 (pico I I). Cada experimento se lleva a cabo al menos tres veces. Los fragmentos de degradación que corresponden al "pico II", tal como lo describe VIodavsky y asociados, indica la aclividad de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención para disociar sulfato de heparana. EJEM PLO 54: I nmovilización de biomoléculas Este ejemplo proporciona un méíodo para la eslabilización de una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención en construcciones de bicapa de lípido de célula no huésped (ver por ejemplo la Publicación de Bieri y asociados, Nafure Bioíech 17: 1 105-1 108 (1999) , la cual esíá incorporada en su íoíalidad como referencia a la preseníe invención) la cual puede ser adapíada para el estudio de proteínas de fusión de la preseníe invención en los diversos ensayos funcionales descriíos aníeriormenle. En síntesis, se utiliza química específica de carbohidrato para biotinilación para confinar una marca de biotina a una proteína de fusión de albúmina de la presente invención, permitiendo de esta forma la orientación uniforme al momento de la inmovilización. Una solución de 50 µl de una proteína de fusión de albúmina de la presente invención en membranas lavadas, se incuba con NalO4 ó 20mM y 1 .5 mg/ml (4mM9 BACH ó 2 mg/ml (7.5mM) de bioíina/hidracida duraníe 1 hora a íemperafura ambieníe (volumen de reacción , 150µl). Posíeriormeníe la muesíra se dializa (Pierce Slidealizer Casseít, 10 kdacoret; Pierce Chemical Co. , Rockford I L) a una temperafura de 4°C primero durante 5 horas, aumentando el regular después de cada hora, y finalmente 12 horas contra 500 ml de regulador R(0.15 M NaCI , I nM MgC12, 10 mM fosfato de sodio, pH7). Justo aníes de la adición en una cubefa, se eluye la muesíra, en 5: 1 en regulador ROG50 (Reguladores suplemeníado con ocfilglucosida 50mM). EJEMPLO 55: Ensayo de Actividad v Meíaloproíeinasa Las meíaloproteinasas son hidrolasas de péptido que uíilizan iones de metales como 2n2+, como el mecanismo catalííico. La acíividad de metaloproteinasa de una proíeína de fusión de albúmina de la preseníe invención puede ser ensayada de acuerdo con méíodos conocidos en la íécnica. Se proporcionan los siguieníes métodos de ejemplo. Proteólisis de alfa-2-macrobulina Para confirmar la acíividad de proíeasa, se mezcla una proleína de fusión purificada a la preseníe Invención con subslrato alfa-2-macroglobulina (0.2 unidades/ml; Boehringer mannheim, Alemania) en regulador de ensayo 1 x (50 mM H EPES, pH 7.5, 0.2 M NaCI2 25 µM ZnCI2 y 0.05% Brij-35) y se incuba a una íemperatura de 37°C durante de 1 a 5 días. Se utiliza tripsina como control positivo. Los coníroles negaíivos coníienen únicamente alfa-2-macroglobulina en regulador de ensayo. Las muestras se recolectan y se hierven en un regulador de muestra SDS-PAGe que contiene 2-mercaptoelanol al 5% durante 5 minutos, posleriormente se cargan en un gel de SDS-poliacrilamida al 8%. Después de la electroforesis, las proteínas se visualizan mediante manchado con plata. La proíeólisis es evidente por la apariencia de bandas con peso molecular inferior en comparación con el control negativo. I nhibición de proteólisis de alfa-2-macoglobulina a través de inhibidores de metaloproteinasas Se pueden utilizar inhibidores de meíaloproleinasa conocida (queladores de meíal (EDTA, EGTA, AND, HgCI2), meíaloproíeinasa de pépíido, inhibidores (TI M P-1 y TI M P-2), e inhibidores de MMP de molécula pequeña comerciales) para caraclerizar la actividad proleolítica de una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención. Tres inhibidores MMP sintético que pueden ser utilizados son: inhibidor MMP 1 , [IC50= 1.0 µM coníra MMP-1 y MM P-8; IC50= 30µ M contra MMP-9; I C50= 150 µM contra MMP-3]; MMP-3 (estromelisin-1 ) inhibidor I [IC50= 5µM confra MMP-3, y MMP-3 inhibidor I I [K¡ = 130 nM coníra MMP-3]; inhibidores disponibles en Calbioquem , catálogo No. 444225, respectivamente). En síníesis, se mezclan difereníes concentraciones de los inhibidores MM P de molécula pequeña con una proteína de fusión purificada de la presente invención (50µg/mi) en 22.9 µl de regulador 1 X HEPES (50 mM HEPES, pH 7.5, 0.2 M NaCI , 10 mM CaCI2, 25 µM ZnCI2 y 0.05%Brij-35) y se incuban a temperatura ambienle (24°C) duraníe 2 horas, posleriormenle, se agregan 7.1 µl de substrato de alfa-2-macroglobulina (0.2 unidades/ml) y se incuban a una temperatura de 37°C durante 20 horas. La reacción se deíiene agregando un regulador de muesíra 4x y se hierven inmediaíameníe duraníe 5 minuíos. Después de SDS_PAG E, las bandas de proteínas se visualizan mediante manchado de plata. Ensayo de disociación de substraíos de pépíido fluoroqénico sintéticos Las especificidad de subslralo de proíeína de fusión de la presente invención con actividad de metaloproteinasa ha demostrado, que puede ser determinada uíilizando íécnicas consisas en el arle, tales como utilizando subslratos de péptido fluorogénico sintético (comprado en BACHEM Bioscience I nc). Los substratos de prueba incluyen M-1985, M-2225, M-21 05, M-21 10, y M-2255. Los primeros cuatro son subsíratos en MM P y el úlíimo es un subsíraío de un factor-a de necrosis de fumor (TNF-a) que convierte enzimas (TACE). Estos substraíos se preparan prefereníemeníe en 1 : 1 de sulfóxido de dimeíilo (DMSO) y agua. Las soluciones de exislencia son 50-500 µ M . Los ensayos fluorescentes se llevan a cabo utilizando un especfrómetro de luminiscencia Perkin Elmer LS 50B equipado con un baño de agua de íemperatura constante. La excitación ? es de 329 nm y la emisión ? es de 393 nm. En síntesis, el enunciado se lleva a cabo mediante la incuvación de 175 µl 1 x de regulador HEPES (0.2 M NaCI , 1 0 mM CaCI2, 0.05% Brij-35 y 50 mM H EPES, pH 7.5) con 4 µl de solución de substrato (50 µM) a una íemperaíura de 25°C duranle 5 minufos y posteriormente se agregan 20 µl de una proteína de fusión purificada a la presente invención en la cubeta de ensayo. La concentración final del substrato es de 1 µM. Se monitorean los rangos de hidrólisis inicial duraníe 30 minuíos. EJEMPLO 56: Surgimiento de Diabeíes en Raíones NOD Se caracíerizan ratones NOD hembra (diabéticos no obesos) desplegando I DDM con un curso el cual es similar al que se encueníra en humanos, aunque la enfermedad es más pronunciada en raíones NOD hembra que machos. En lo sucesivo, a menos que se diga lo conírario, el íérmino "ratón NOD" se refiere a un ratón NOD hembra. Los raíones NOD íienen una desírucción progresiva de células beta que es originada por una enfermedad auto-inmune crónica. Por lo tanto, los ratones NOD comienzan la vida con euglicemia, o niveles de glucosa sanguínea normales. Aproximadamente a las 15 ó 16 semanas de edad, los raíones NOD comienzan sin embargo a ser hiperglucémicos, lo que indica la desírucción de la mayor parfe de sus células beta pancreáticas y la correspondieníe incapacidad del páncreas de producir suficiente insulina. Por lo tanto, íanto la causa como el progreso de la enfermedad, son similares a pacientes I DDM humanos. Los ensayos de eficacia in vitro de los regímenes de inmunización, pueden ser evaluados en ratones NOD/LtJ hembra (comercialmente disponibles en The Jackson Laboratory, Bar Harbor, Me.). En la liíerafura, se reporía que el 80% de los raíones hembra desarrollan diabeíes a las 24 semanas de edad y la generación de insuliíis, comienza eníre las 6 y 8 semanas de edad. Los ratones NOD son endogmáticos y responden en gran parte a una variedad de estrategias inmunorreguladores. Los ratones NOD adultos (6 a 8 semanas de edad) íienen una masa promedio de 20-25 g. Estos ratones pueden ser ya sea no íratados (traíados) con los íerapéuíicos de la presente invención (por ejemplo, las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y fragmentos y variantes de la misma), solo o en combinación con otros compuestos íerapéuíicos manifestados anteriormente. El efecto de esíos diversos íraíamienfos en el proceso de diabefes puede medirse como se indica a coníinuación : A las 14 semanas de edad, los rafones NOD macho pueden ser fenotipificados de acuerdo con tolerancia de glucosa. La tolerancia de glucosa puede ser medida con la prueba de tolerancia de glucosa intraperitoneal (I PGTT). En síntesis, se extrae sangre del plexus paraorbital a los 0 minulos y 60 minulos después de la inyección intraperitoneal de glucosa (1 g/kG de peso corporal). Se define una tolerancia normal como glucosa en plasma los 0 minutos menor a 14 mg % o 60 minutos menor a 160 mg %. Se determinan los niveles de glucosa en la sangre con un aparato Glucometer Élite. Con base en este análisis fenotípico, los animales pueden ser asignados a los diferentes grupos experimentales. En particular, los animales con más niveles de glucosa sanguínea elevados pueden ser asignados al grupo de tolerancia de glucosa dañada. Esíos raíones pueden ser alimeníados al límiíe y pueden ser suministrados con agua acidificada (pH 2.3). Los ratones íoleranfes o intoleranfes a glucosa pueden ser subdivididos en forma adicional en grupos de conírol, de profeínas de fusión de albúmina de la preseníe invención y grupos de combinación de proíeínas de fusión de albúmina/compuestos ferapéuticos. Los raíones en el grupo de control pueden recibir una inyección intraperiíoneal de vehículo, diariamente, 6 veces a la semana. Los ratones en el grupo de fusión de albúmina pueden recibir una inyección iníraperitoneal de terapéuticos de la presente invención (por ejemplo, proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y fragmentos y variantes de la misma) en vehículo diariamente 6 veces por semana. Los ratones en el grupo de combinación de proíeínas/compuestos lerapéuticos pueden recibir lanío proteína de fusión de albúmina como combinaciones de compuestos íerapéuticos como de describen anteriormente. El nivel de glucosa en la orina en los ratones NOD puede ser determinado en una base de dos veces por semana utilizando Labstix (Bayer Diagnostics, Hampshire, Inglaterra. También se puede deíerminar el peso e ingestión de fluido en una base de dos veces por semana. La generación de diabetes se define después del surgimiento de glucosuria en dos determinaciones consecutivas. Después de10 semanas de íraíamienío, se puede llevar a cabo un IPGTT adicional y los animales pueden ser sacrificados en ios siguientes días. Después de un curso de 10 semanas de traíamienío, los animales de conírol íanto en los grupos de tolerancia glucosa como iníolerancia glucosa desarrollan diabetes en un rango del 60% al 80%, respectivamente (ver la Patente Norteamericana No.5, 866,546, Gross y asociados). Por lo tanto, los altos rangos de diabefes ocurren incluso en ratones Noel los cuales inicialmente son toleraníes a la glucosa, si no se hace una iníervención. Los resulíados pueden ser confirmados a través de la medición de niveles de glucosa en la sangre en ratones NOD, antes y después del traíamienío. Los niveles de glucosa en la sangre se miden íal como se describió aníeriormenle en ratones tanío íolerantes como intoleraníes a la glucosa en los grupos descritos. En una modalidad alternaíiva, los íerapéuticos de la presente invención (por ejemplo, funciones específicas descritas como SEQ ID NO:Y y fragmentos y variantes de las mismas) pueden ser cuanlificados utilizando análisis espectrométricos y cantidades de proteína adecuadas pueden ser suspendidas nuevamente antes de la inyección en 50. mu.1 de solución regulada por fosfato (PBS) por dosis. Se pueden administrar en forma subcutánea 2 inyecciones, con separación de una semana bajo la piel dorsal de cada ratón. Se puede llevar a cabo el monitoreo en dos ocasiones separadas antes de la inmunización y se puede llevar el tralamienfo por semanas y continuarse posteriormente. La orina puede ser probada con respecío a glucosa cada semana (Keto-Diasírix.RTM.; miles Inc., Kankakee, III.) y los rafones glicosúricos pueden ser revisados con respecío a glucosa de suero (Exac Tec.RTM., MediSense, Inc., Walfham, Mass.). La diabetes se diagnostica cuando los análisis de glicemia en ayunas son mayores a 2.5g/L. EJEMPLO 57: Revisión Histológica de Ratones NOD La revisión hislológica de muesíras de íejido de ratones NOD puede mostrar la capacidad de las composiciones de la preseníe invención, y/o la combinación de las composiciones de la preseníe invención con otros agentes íerapéuticos para diabetes., para incremeníar la concentración relativa de células befa en el páncreas. El méíodo experimeníal es como se indica a coníinuación: Los ralones del ejemplo 56 pueden ser sacrificaos al final del período de tralamienío y las muesíras de íejido que pueden íomarse del páncreas. Las muestras pueden fijarse en formalina al 10 % en solución salina al 0.9% e incrustarse en cera. Se pueden cortar dos grupos de 5 series de 5. mu. m para inmunoetiquelación con un iníervalo de coríe de 150. mu. M las secciones pueden ser inmunoetiquetadas para insulina (dilución de anfisuero antiinsulina de suero de guinea 1 : 1000, I CN Thames R. U) y glucagon (dilución de aníisuero de glucagon anti-pancreáíico de raíón 1 :2000) y deíectadas con cerda anti-guinea conjugado por peroxidasa (Dako, High Wycombe, R. U . ) o aníisuero aníi-conejo conjugado por peroxidasa (dillufion 1 :50, Dako). La composición de la présenle invención puede o no íener un efecto fuerte en la masa visible de células beta tal como se lleva a cabo en manifestaciones clínicas de diabetes en animales intoleranles a glucosa y tolerantes a glucosa. EJEM PLO 58: Modelo de Ratón In vivo de N I DDM Los ratones C57BL/6J macho procedentes de Jackson Laboratory (Bar Harbor, M E) pueden ser obtenidos a las tres semanas de edad y alimentados con papillas o dietas convencionales enriquecidas ya sea en grasa (35.5% p/p; Bioserv. Frenchtown , NJ) o fructuosa (60% p/p; Harían Teklad, Madison, WJ). La papilla regular está compuesía de 4.5% p/p de grasa, 23% p/p de proteína, 31 .9% p/p de almidón, 3.7% p/p de fructosa, y 5.3% p/p de fibra. La dieta alta en grasas (manteca de cerdo) está compuesta de 35.5% p/p de grasa, 20% p/p de proteína, 36.4% p/p de almidón, 0.0% p/p de frucíosa, y 0.15 p/p de fibra. La dieta alta en fructosa esíá compuesía de 5% p/p de grasa, 20% p/p de proteína, 0.0% p/p de almidón, 60% p/p de fructosa, y 9.4% p/p de fibra. Los ratones pueden ser alojados a una cantidad de no más de 5 por jaula a una temperaíura de 22° +/- 3°C y en una habiíación conírolada con una humedad de 50% +/-20% con un ciclo de luz de 12 horas (6 am a 6 pm)/ciclo oscuridad (luo y asociados, 1998, Mefabolism 47(69: 663-8, "Nongenelic mouse models of non-insulin-dependent diabetes mellitas"; Larsen y asociados, Diabetes 50(1 1 ): 2530-9 (2001 ), "Systemic administraíion of íhe long-acíing GLP-1 derivaíiva N N221 1 induces lasling and reversible weighí loss in boíh normal and obese rats"). Después de la exposición a las dietas respectivas durante íres semanas, los raíones fueron inyectados en forma intraperitoneal ya sea con estrepíozofocina, "STZ" (Sigma, Sí. Louis, MO)), a 100 mg/kg de peso corporal o vehículo (0.05 mol/L ácido cíírico, pH 4.5) y mantenidos con la misma dieta duraníe las siguieníes 4 semanas. Bajo condiciones sin ayuno, se obíiene sangre a las 1 , 2 y 4 semanas posteriores a STZ pellizcando la parte distal de la cola. Se uíilizan muesíras para medir las conceníraciones de glucosa e insulina de plasma sin ayunar. El peso corporal y la captación de líquidos se registran en forma semanal para determinar directameníe el efecto de la dieta alia en grasas en la capacidad de la insulina para estimular depósitos de glucosa, los experimentos pueden iniciarse en tres grupos de ratones, alimentados con grasa, alimentados con papilla inyectados con vehículo, y alimentados con grasa inyectados con STZ al final del período de 7 semanas descriío aníeriormeníe. Los raíones pueden quedar en ayuno duraníe 4 horas anfes de los experimenfos. En las primeras horas de los experimeníos, los ratones pueden ser anestesiados con inhalación de mefoxiflurano (Piíman-Moor, Mundelein, I L). Se puede inyeclar en forma intravenosa la insulina regular (Sigma) ([IV] 0.1 U/kg peso corporal) a través de la vena de la cola y se puede recolecíar sangre de una vena difereníe de la cola a los 3, 6, 9, 12 y 15 minuíos después de la inyección. Las conceníraciones de glaucoma de plasma pueden determinarse en las muestras, y la desaparición de la vida promedio (VA) de glucosa del plasma puede calcularse uíilizando WinNonlin (Scientific Consulting, Apex, NC), un programa de software de farmacocinéticas/farmacodinámicas. En la segunda serie de experimeníos, los raíones pueden ser anestesiados con pentobarbiíal de sodio intraperiíoneal (Sigma). La cavidad abdominal se abre, y se expone la vena abdominal principal y se cateteriza con catéter IV 24 (Jonson medical, Arlington, TX). El catéter se asegura al tejido del músculo adyacente a la vena abdominal, se coría en el fondo de la conexión de jeringa, y se engancha a un tubo de plástico PE50 llenado previamente, el cual a su vez se conecía a una jeringa con solución de infusión. Posíeriormeníe la cavidad abdominal se cierra con soíura. Con esíe método, no debe haber bloqueo del contra flujo de la sangre de la parte inferior del cuerpo. Los ratones proceden fusionados en forma continua con glucosa, (24.1 mg/kg/min) e insulina (10 mU/kg/min) en un volumen de infusión de 10 µl/min . Se pueden tomar muestras de sangre retro-orbital (70 µl cada uno) 90, 105, 120 y 135 minutos después del inicio de infusión para medir las concentraciones de glucosa de plasma e insulina. El promedio de esías cuaíro muestras, se utiliza para esíimar las conceníraciones de glucosa de plasma (SSPG) e insulina (SSPI) de estado constaníe por cada animal. Finalmenfe, los experimenlos para evaluar la capacidad de las proíeínas de fusión de albúmina, las composiciones terapéuíicas de la presente soliciíud, ya sea solo o en combinación con cualesquiera de uno o más de los fármacos terapéuticos descritos para el tratamiento diabetes melitus, para disminuir la glucosa de plasma pueden llevarse a cabo en los siguientes dos grupos de modelos de ratón "NI DDM" que son inyectados con STZ: (1 ) alimentados con grasa C57BL/6J, C57BL/6J alimentados con fructosa. Las concentraciones de glucosa en el plasma de los ratones para estos estudios, puede fluctuar de 255 a 555mg/dL. Los ratones son asignados en forma aleatoria para traíamiento ya sea con vehículo, terapéuticos de fusión de albúmina en la presente invención ya sea solos o en combinación con cualesquiera de uno o más de los fármacos terapéuticos descritos para el tratamiento de diabetes meliíus. Se puede administrar un tofal de tres dosis. Se pueden tomar muestras de sangre de la vena de la cola para medir la concenfración de glucosa de plasma anles da la primera dosis y íres horas después de la dosis final. Se pueden determinar las concentraciones de glucosa de plasma utilizando el equipo de diagnóstico de glucosa de Sigma (Sigma no. 315), un ensayo colorimétrico de enzimas. Se pueden determinar los niveles de insulina de plasma utilizando el equipo RÍA de I nsulina de Rata de Lineo Research (No. RI-13K; St. Charles, MO). EJEM PLO 59: Ensayos In vitro de Reporíero H4l le-SEAP gue Esíablecen la I nvolucración en Acción de I nsulina Diversos Reporteros H4l le H4l le/rM EP-SEAP: El promotor de enzimas málico aislado de rata (rMEP) coníiene un elemenío PPAr el cual está en la trayecíoria de insulina. Esla construcción reportera se íransfecía en forma estable en la línea de célula H4l le de hígado. H4l le/SREBP-SEAP: El elemento regulador de esferol que enlaza proleína (SREBP-1 c) es un factor de transcripción el cual actúa en los promotores de un número de genes que responden a insulina, por ejemplo, sintetasa de ácido graso (FAS) y que regulan la expresión de genes clave en el metabolismo de ácido graso en fibroblaslos, adiposiíos y hepaíociíos. SREBP-1 c también se conoce como el factor de determinación y diferenciación de adipositos 1 (ADD-1 ), se considera como el íransmisor primario de los efectos de insulina en la expresión genética en células adiposas. Su aclividad se modula a través de los niveles de insulina esteróles y glucosa. Esta construcción reporíera se Iransfecta en forma estable en la línea de célula H4l le de hígado. H4l le/FAS-SEAP: Las construcciones reporteras de sintetasa de ácido graso que contienen un promotor FAS con respuesía mínima SREBP. Esta construcción reporíera se íransfecta en forma estable en las líneas de célula H4lle de hígado. H4lle/PEPCK-SEAP: El promotor de carboxicinasa de fosfoenolpirubato (PEPCK) es el siíio primario de regulación hormonal de la transcripción de gen PEPCK que modula la actividad de PEPCK. PEPCK caíaliza un paso de limitación de rango y consignado en la gluconeogénesis hepática y por consiguiente debe de ser controlado cuidadosameníe para manfener los niveles de glucosa en la sangre deníro de los límiíes normales. Esía consírucción reporíera se íransfecta en forma estable en la línea de célula H4IIE de hígado. Estas construcciones reporteras también pueden ser transfectadas en forma estable en fibroblastos 3T3-L1 y mioblastos L6. Estas líneas de célula estable posteriormenfe son diferenciadas en adipositos 3T3-LI y miotubos L6 tal y como se describió previamente en el ejemplo 13. Las líneas celulares diferenciadas pueden ser utilizadas en el ensayo H4lle que se describen más adelante. Medio de crecimiento v ensayo El medio de crecimienío comprende Suero de Bovino Fetal al 10% (FBS), suero de becerro al 10%, NEAA al 1%, penicilina/estrepíomicina 1 x, y 0.75 mg/mL G418 (para h4lle/rFAS-SEAP y H4lle/SREBP-SEAP) ó 0.50 mg/mL G418 (para H4lle/r MEP-SEAP). Para H4lle/PEPCK-SEAP, el medio de crecimiento consiste en FBS al 10%, penicilina/estreptomicina al 1%, 15 mM de solución de salina regulada por HEPES, y 0.50 mg/ML G418. El medio de ensayo consisle en un medio de DM EM bajo en glucosa (Life Technologies), N EAA al 1 % , 1 x penicilina/estrepíomicina para los reporteros H4l le/rFAS-SEAP, H4l le/SREBP, H4l le/rMEP-SEAP. El medio de ensayo para el reportero H4l le/PEPCK-SEAP consiste en FBS al 0.1 % , penicilina/estreptomicina al 1 %, y 15 mM de solución salina regulada por HEPES. Método Las placas de 96 depósitos se siembran a una densidad de 75 000 células/depósito en 1 00 µl/depósito en medio del crecimiento hasía que la células en la fase de crecimienío log se vuelven adhereníes. Las células se dejen en inanición durante 48 horas reemplazando el medio de crecimiento con medio de ensayo, 200 µL/depósiío. (Para células h4l le/PEPCK-SEAP, el medio de ensayo que contiene 0.5 µM dexametasona es agregado a 100 µl/depósito es incubado durante aproximadameníe 20 horas). El medio de ensayo se reemplaza posteriormente con 100µl/depósito de medio de ensayo fresco, y un alícuota de 50 µL del sobrenadante a la célula obtenida de las líneas celulares fransfectadas que expresan los íerapéuficos de la presente invención (por ejemplo, proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y fragmentos y variantes de las mismas) se agregan al depósito. Se uíilizan como control negativo los sobrenadaníes de las líneas de célula transfectadas con vector vacío. Además se uíiliza la adición de 10nM y/o 100 nM de insulina los depósiíos como control positivo. Después de 48 horas la incubación , se cosecha el medio acondicionado y se mide la acíividad (Prolocolo Fosfa-Ligí Sytem , Tropix No. BP2500). En síntesis, las mueslras se diluyen en 1 :4 en regulador de dilución y se incuban a una lemperaíura de 65°C duraníe 30 minuíos para acíivar la forma no placental endógena SEAP. Se mezcla un alícuota de 50 µL de las muestras diluidas con 50 µL de regulador de ensayo SEAP que contienen una mezcla de inhibidores activos contra las iso-enzimas SEAP sin placenta y se incuba durante otros 5 minutos. Se agrega ala mezcla y se incuba durante 15 a 20 minutos a un alícuota de 50 µL de substrato quimioluminiscente CSPD del cual se diluye 1 :20 en aumentador de luminiscencia Emerald. Las placas se leen en un luminómetro de placa Dinex EJEMPLO 60: Animales Transaénicos Las proteínas de fusión de albúmina de la presente Invención , también pueden ser expresadas en animales transgénicos. Los animales de cualquier especie, incluyendo pero sin limitarse a, ratones, ratas, conejos, hámster, cerdos de guinea, cerdos, micro cerdos, cabras, ovejas, vacas, y primates no humanos, por ejemplo, baboons, monos y chimpancés pueden ser utilizados para generar animales transgénicos. En una modalidad específica, las técnicas aquí descritas o conocidas en la técnica, se uíilizan para expresar las proteínas de fusión de la presente invención, como parte de un proíocolo de lerapia genética.

Se puede utilizar cualquier técnica conocida en el arte para introducir los polinucleóíidos que codifican la proteína de fusión de albúmina de la presente invención en animales para producir las líneas cimienío de animales íransgénicos. Dichas íécnicas incluyen , pero no se limiían a, microinyección pronuclear (Paíerson y asociados, Appl. Microbiol. Bioíechnol. 40:691 -698 (1994); Carver y asociados, Bioiechnology (NY) 1 1 .1263-1270 (1993); Wrighí y asociados, Bioíechnology (NY) 9:830-834 (1991 ); y Hoppe y asociados, Paíente Norteamericana No. 4,873, 191 (1989)), transferencia de genes transmitida por retrovirus en líneas germinales (Van der Putíen y asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. , USA 82:6148-6152 (1985)), blastocitos o embriones; dirección genética en células madre embriónicas (Tompson y asociados, Cell 56:313-321 (1 989)); electroporación de células o embriones (Lo, 1983, Mol Cell. Biol. 3: 1803-1814 (1983)); iníroducción de los polinuceótidos de la presente invención utilizando una pistola genéíica (ver por ejemplo la publicación de Ulmer y asociados, Science 259: 1745 (1993); iníroducción de consírucción de ácido nucleico en células madre pleuripotentes embriónicas y transferencia de células madre nuevamente al blastocisío; y transferencia genética transmitida por espermas (Lavitrano y asociados, Cell 57.717-723 (1989), etc. Para una revisión de dichas técnicas ver la publicación de Gordon , "íransgenic Animáis", Intl. Rev. Cytol. 1 15: 171 -229 (1989), la cual esíá incorporada en su lotalidad a la preseníe invención como referencia. Se puede uíilizar cualquier íécnica conocida en el arle para producir clones íransgénicos que contienen polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención, por ejemplo, transferencia nuclear, en oocitos enucleados de núcleos de células embriónicas fetales o de adulto culíivadas inducidas para dejar sin movimiento (Campell y asociados, Nature 380:64-66 (1996); Wilmurí y asociados, 385:810-813 (1997)). La presente invención proporciona animales transgénicos que llevan los polinucleóíidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención en todas sus células, así como animales que llevan estos polinucleótiodos en parfe, pero no en todas sus células, por ejemplo animales mosaico o quiméricos. El transgeno puede ser integrado como un solo transgeno como múltiples copias íales como concaíámeros, por ejemplo, tándems cabeza a cabeza o tándems cabeza a cola. El íransgeno también puede ser introducido en forma selectiva en , y activado en un tipo de célula en particular siguiendo, por ejemplo la enseñanza de Lasko y asociados (Lasko y asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 89:6232-6236 (1 992)). Las secuencias reguladoras requeridas para dicha activación específica del tipo celular, dependerán del íipo de célula en parficular de iníerés, y podrán ser apreciadas por los experíos en la lécnica. Cuando se desea que el polinucleólico que codifica la proíeína de fusión de la presente invención sea integrado en el sitio cromosomal del gen endógeno que corresponde a la parte de proteína íerapéuíica o parfe de albúmina de la proteína de fusión de la presente invención. Se prefiere la dirección de genes. En síntesis, cuando se utilizará dicha técnica, los vectores que contienen cierías secuencias de nucleótidos homologas al gen endógeno, son diseñadas para el propósito de infegrar, a través de la recombinación homologa consecuencias cromosomales, dentro e interrumpir la función de la secuencia de necleótidos del gen endógeno. El íransgeno íambién puede ser iníroducido en forma selectiva en un tipo de célula en paríicular, desacíivando en esía forma el gen endógeno únicamente en dicho tipo de célula, siguiendo, por ejemplo, la enseñanza de Gu y asociados. (Gu y asociados. , Science 256: 103-106 (1 994)). Las secuencias reguladoras requeridas para dicha desactivación específica de tipo de célula, dependerá del tipo de célula en paríicular de inferes, y podrá ser apreciada por los expertos en la técnica. Una vez que se han generado animales íransgénicos, se puede ensayar la expresión del gen recombinaníe uíilizando lécnicas esíándar. La clasificación inicial puede llevarse a cabo mediante análisis de manchado Southern o íécnicas PCR para analizar los íejidos animales para verificar que la iníegración del polinucleóíido que codifica ia proteína de fusión de la presente invención íenga lugar. El nivel de expresión de ARN de polinucleóíido que codifica la proíeína de fusión de la présenle invención en lejidos de los animales transgénicos, también pueden ser evaluados utilizando técnicas que incluyen, pero no se limitan a, análisis de manchado Norlhern de muesíras de íejido obíenidas del animal, análisis de hibridación in situ , y transcripías en inversa-PCR (rt-pCR). Las muestras del tejido que expresa las proteínas de fusión íambién pueden ser avaluadas en forma inmunociloquímica o inmunohisíoquímica utilizando anticuerpos específicos para la proteína de fusión . U na vez que se producen los animales cimiento, pueden ser procreadas, procreadas dentro de la misma especie, procreadas diferenciando la especie, mezcladas en especie para producir colonias del animal en paríicular. Los ejemplos de dichas esírategias de procreación incluyen, pero no se limitan a: diferenciando las especies de animales cimiento con más de un sitio de iníegración con el objeto de establecer líneas separadas, procreación deníro de la misma especie de líneas separadas con el objeto de producir transgénicos del compuesto que expresan el transgeno en mayores niveles debido a los efectos de expresión aditiva a cada fransgeno; curce de animales transgénicos heterozigosos para producir animales homozigosos para un sitio de integración determinad con el objeío lanío de aumeníar la expresión como eliminar la necesidad de clasificación de animales mediante análisis de ADN ; cruce de líneas homozigosas separadas para producir líneas heterozigosas u homozigosas del compuesío; y procreación para colocar al lransgeno(por ejemplo, polinucleótido que codifica una proteína de fusión de albúmina de la presente invención) en un fondo distinto que es adecuado para un modelo experimental de interés. Los animales íransgénicos de la presente invención tienen usos que incluyen pero no se limiían a, sistemas de modelo animal útiles para elaborar la función biológicas de proteínas de fusión de la presente invención y la proteína terapéutica y/o componente de albúmina de la proteína de fusión de la presente invención, que estudia las condiciones y/o padecimientos asociados con expresión aberraníe, y en clasificación de compuestos efectivos para disminuir dichas condiciones y/o padecimientos. EJEM PLO 61 : Método de Traíamienío Utilizando Terapia Genéíica- Ex vivo Un méíodo de lerapia genética, transplante a fibroblastos, los cuales tienen la capacidad de expresar una proteína de fusión de albúmina de la presente invención en un paciente. Generalmente, los fibroblastos se obtienen de un sujeto mediante biopsia de piel. El tejido resultante se coloca en un medio de cultivo de tejido y se separa en pequeñas piezas. Se colocan pequeños írozos de tejido en una superficie húmeda de un frasco de cultivo de tejido, se colocan aproximadamente 10 piezas en cada frasco. El frasco se voltea hacia abajo, se cierra fuertemenle y se deja a femperatura ambieníe durante la noche. Después de 24 horas a temperatura ambiente, se invieríe el frasco y los trozos de tejido permanecen fijos en el fondo del mismo y se agrega medio fresco (por ejemplo, medio Ham's F12 con FBS al 10%, penicilina y eslrepíomicina). Posleriormeníe los frascos se incuban a una temperafura de 37°C durante aproximadamente una semana. En esíe momenío, se agrega medio fresco y subsecueníemeníe se cambia después de algunos días. Después de dos semanas adicionales en culíivo, emerge una monocapa de fibroblastos. La monocapa es tripsinizada y pesada en frascos más grandes. pMV-7 (Kinchmeier, P. T. y Asociados, DNA, 7:219-25 (1988)), flanqueado por las repeticiones de terminación larga del virus de sarcoma de múrido Moloney, se digiere con EcoRI y Hi nd 111 y subsecuenfemente se íraía con fosfafasa ¡nfeslinal de becerro. El veclor lineal se fracciona sobre gel de agarosa y se purifica, utilizando cuentas de vidrio. Se pueden generar polinucleótidos que codifican, una proteína de fusión de albúmina de la présenle invención, uíilizando lécnicas conocidas en el arte, amplificando utilizando cebadores de PCR que corresponden a las secuencias de exíremo 5' y 3' y que íienen opcionalmenle siíios de restricción adecuados y codones de inicio/de tensión, si es necesario. Prefereníemente, el cebador 5' contiene un sitio EcoRI , y el cebador 3' incluye un sitio Hindll l . Se agregan juntos cantidades iguales del esqueleto lineal del virus de sarcoma de múrido Moloney y el fragmento EcoRI y Hindl l l amplificado, en la presencia de ligasa de ADN T4. Se mantiene la mezcla resultante bajo condiciones adecuadas para ligadura de los dos fragmentos. Posteriormeníe se utiliza la mezcla de ligadura para transformar bacíerias HB101 , las cuales posteriormente se plaquean sobre ágar que coníiene canamicina para el propósilo de confirmar que el vector tiene el gen de interés insertado en forma adecuada. Se crecen células de empaque pA31 7 ó GP+am 12 anfolrópicas en culíivo celular para una densidad confluente en Medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) con suero de becerro al 100% , penicilina y estrepfomicina. El vecíor MSV que contiene el gen se agrega posíeriormeníe al medio y las células de empaque se íransducen con el vecíor. Las células de empaque ahora producen paríículas virales infecciosas que coníienen el gen (las células de empaque ahora son referidas como células productoras). El medio fresco se agrega a las células productoras transducidas, y subsecuentemente, el medio se cosecha de una placa de 10 ceníímetros de células productoras confluentes. El medio gastado, que contiene las partículas virales infecciosas, se filtra a través de un filtro de miliporo para eliminar las células productoras separadas y posteriormeníe se utiliza esle medio para ¡nfecfar células de fibroblasto. El medio se elimina de una placa de sub-confluente de fibroblastos y se reemplaza rápidamente con el medio procedente de las células productoras. Este medio se elimina y se reemplaza con el medio fresco. Si el titulador del virus es alto, entonces viríualmeníe lodos los fibroblastos serán infectados y no se requiere de selección. Si el tiíulador es muy poco, eníonces es necesario uíilizar un vector retroviral que tenga un marcador seleccionable, tal como neo ó his. Una vez que los fibroblastos han sido infectados en forma eficiente, los fibroblastos se analizan para determinar si se produce la proteína de fusión de albúmina. Posteriormeníe los fibroblasfos consfruidos se transplanían en el huésped, ya sea solo o después de haber sido crecido para confluencia en cuenías de microlransporfador cytodex 3. EJEMPLO 62: Método de íraíamiento utilizando íerapia genética - in vivo Otro aspecto de la presente invención , es utilizar métodos de terapia genética in vivo para tratar padecimientos, enfermedades y condiciones. El méíodo de íerapia genéíica se refiere a la iníroducción de secuencias de ácido nucleico al naíural (ADN, ARN y ADN ó ARN aníi-sentido) que codifican una proteína de fusión de albúmina de la presente invención en un animal. Los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención pueden ser enlazados en forma operativa (por ejemplo, asociados con) a un promotor o cualesquiera otros elementos genéticos necesarios para la expresión del polipéptido a través del tejido objetivo. Dichas lécnicas de terapia genética y suministro y métodos son conocidos en la técnica, ver por ejemplo las Publicaciones WO90/1 1092, WO98/1 1779; las Patentes Norteamericanas Nos. 5693622, 5705151 , 5580859; la Publicación de Tabata y Asociados, Cardiovasc. Res. 35(3):470-479 (1997); Chao y Asociados, Pharmacol. Res. 35(6):51 7-522 (1997); Wolff, Neuromuscul. Disord. 7(5):314-318 (1997); Schwartz y Asociados, Gene Ther. 3(5):405-41 1 (1996); Tsurumi y Asociados, Circulation 94(12):3281 -3290 (1996) (incorporadas a la presente invención como referencia). Las construcciones de polinucleótidos pueden ser suministradas a través de cualquier método que suministre materiales inyectables a las células de un animal , tal como, inyección en el espacio intersticial de tejidos (corazón, músculo, piel, pulmón, hígado, intestino y similares). Las construcciones de polinucleótidos pueden ser suministradas en un líquido o vehículo acuoso farmacéuticamenfe acepíable. El íérmino polinucleótido, ADN ó ARN "al naíural", se refiere a secuencias que están libres de cualquier vehículo de suministro que actúe para ayudar, promover o facilitar la entrada en la célula, incluyendo secuencias virales, paríículas virales, formulaciones de liposoma, lipofectina o agentes de precipitación y similares. Sin embargo, los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención también pueden ser suminisírados en formulaciones de liposomas (tales como las consideradas en la Publicación de Felgner P. L. y Asociados (1995) Ann. NY Acad. Sci. 772: 126-139 y Abdallah B. y Asociados (1995) Biol. Cell 85(1 ): 1 -7), las cuales se pueden preparar a través de los métodos conocidos por los experíos en la técnica. Las construcciones de vecíor de polinucleófido utilizadas en el méíodo de terapia genética son prefereníemeníe consírucciones que no se infegrarán en el genoma huésped y no conlendrán secuencias que permifan la réplica. Se puede uíilizar cualquier promoíor fuerte conocido por los expertos en la técnica, para conducir la expresión del ADN . A diferencia de otras técnicas de terapia genéíica, una veníaja importante de introducir secuencias de ácido nucleico al naíural en las células objetivo, es la naíuraleza transiíoria de la síntesis de polinucleótido en las células. Los estudios han mostrado que se pueden introducir secuencias de ADN sin réplica en las células para proporcionar la producción del polipépíido deseado duranle períodos de hasía 6 meses. La conslrucción de polinucleótidos se puede suministrar al espacio intersticial de tejidos dentro de un animal, incluyendo, músculo, piel, cerebro, pulmón, hígado, bazo, médula ósea, timo, corazón, linfas, sangre, huesos, cartílago, páncreas, riñon , vejiga irritada, estómago, intestino, testículos, ovario, útero, recio, sisíema nervioso, ojos, glándulas y tejido conectivo. El espacio intersticial de los tejidos comprende el fluido intercelular, la matriz mucopolisacárida eníre las fibras reíiculares de los fejidos de órganos, fibras elásticas en las paredes de vasos sanguíneos o cámaras, fibras de colágeno de los tejidos fibrosos o de la misma matriz denfro del tejido conectivo que enfunda las células de músculos o en lacunae del hueso. Es en forma similar el espacio ocupado por el plasma de la circulación y el fluido linfático de los canales linfáticos. El suministro del espacio infersíicial del tejido de músculo, es preferido por las razones que se describirán más adelaníe. Pueden ser suminisírados en forma conveniente mediante inyección en los tejidos que comprenden estas células. Se suministran y se expresan prefereníemeníe en células sin división persisíeníes las cuales son diferenciadas, aunque el suminisíro y la expresión se puede lograr en células no diferenciadas o casi completameníe diferenciadas, tales como, por ejemplo, células madre de sangre o fibroblastos de piel. Las células de músculo in vivo, son particularmente competentes por su capacidad de tomar y expresar polinucleótidos. Para la inyección de polinucleótido al natural, una cantidad de dosis efectiva de ARN ó ADN esíá deníro del rango desde aproximadameníe 0.05 g/kg de peso corporal hasía aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal . Preferentemente, la dosis fluctuará desde aproximadamente 0.005 mg/kg hasía aproximadameníe 20 mg/kg y más preferentemente desde aproximadamente 0.05 mg/kg hasía aproximadameníe 5 mg/kg. Por supuesío, un experío en la íécnica podrá apreciar, que esfa dosis variará de acuerdo con el sitio de inyección del tejido. La dosis adecuada y efectiva de la secuencia de ácido nucleico puede ser fácilmente determinada por los expertos en la técnica y puede depender de la condición que eslé siendo trafada y la ruía de adminisíración. La ruía preferida de administración es mediante ruía pareníeral de inyección en el espacio intersticial de los tejidos. Sin embargo, también se pueden utilizar otras rutas parenterales, tales como, inhalación de una formulación en aerosol particularmente para el suministro de los pulmones o íejidos bronquiales, garganla o membranas mucosas de la nariz. Además, las consírucciones de polinucleóíidos al naíural pueden ser suminisíradas a arterias durante angioplasíía a íravés del caíéter utilizado en el procedimienío. Los efecíos de respuesía a la dosis del polinucleótido inyectado en músculo in vivo, se delerminan como se indica a coníinuación. El ADN de plantilla adecuada para la producción de mARN que codifica el polipéptido de la presente invención, se prepara de acuerdo con metodología de ADN recombinante estándar. El ADN de la plantilla, la cual puede ser ya sea circular o lineal, se utiliza ya sea como ADN al nalural o como complejo con liposomas. Los músculos de cuadríceps de raíones, se inyecfan posíeriormente con diversas cantidades del ADN de plantilla. Se anestesian ratones Balb/C hembra o macho de 5 a 6 semanas de edad medianíe inyección iníraperiíoneal con 0.3 ml de 2.5% Averfin. Se hace una incisión de 1 .5 cm en el muslo aníerior y se visualizan direclameníe los músculos del cuadricep. El ADN de plantilla se inyecta en 0.1 ml de vehículo en una jeringa de 1 ce a través de una aguja de calibre 27 durante 1 minuto, aproximadamente 0.5 cm desde el sitio de inserción distal del músculo en la rodilla y aproximadamente 0.2 cm de profundidad. Se hace una sutura sobre el sitio de inyección para localización futura, y la piel se cierra con sujetadores de acero inoxidable.

Después de un tiempo de incubación adecuado (por ejemplo 7 días), se preparan exfracíos de músculo cortando todos los cuadríceps. Cada 15 secciones de 15 µm de los músculos de cuadríceps del individuo, se mancha en forma histoquímica para expresión de proleína. Se puede hacer un curso de íiempo para expresión de proíeína de fusión en un modo similar excepío que los cuadríceps de diferentes ratones se recolectan en diferentes momentos. La persistencia de ADN en músculo después de la inyección, se puede deíerminar medíanle análisis de manchado Southern después de preparar ADN celular total y sobrenadantes HIRT de ratones inyectados y de control. Los resultados de la experimentación anterior en ratones pueden utilizarse para extrapolar dosis adecuadas y otros parámetros de tratamiento en humanos y otros animales utilizando ADN al natural. EJEM PLO 63: Efectos biológicos de proteína de fusión de la presente invención Ensayos de astrocito v neuronales Se pueden probar las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención con respecto a la actividad en la promoción de supervivencia, crecimiento de neuritas o diferenciación fenotípica de células neuronales corticoides y para inducir la proliferación de células inmunopositivas de proteína fibrilarmente acida gliales, astrocitos. La selección de células corticales para bioensayo, se basa en la expresión prevalente de FGF-1 y FGF-2 en estructuras corticales y en el aumento reporíado previameníe de supervivencia neuronal cortical que resulla de íratamiento FGF-2. Se puede utilizar un ensayo de incorporación de timidina, por ejemplo para elucidar una actividad de la proteína de fusión de albúmina de la présenle invención en estas células. Además, los reportes previos que describen los efectos biológicos de FGF-2 (FGF básico) en neuronas corticales o hipocampales in vitro han demostrado incrementos fanío en supervivencia de neuronas como crecimienío de neuriías (Walicke y Asociados, "Fibroblasí growíh factor promotes survival of dissociated hippocampal neurons and enhances neurite extensión", Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 83:3012-3016 (1986), ensayos incorporados en su totalidad a la presente invención como referencia). Sin embargo, los reportes de experimentos realizados en células PC-12 sugiere que estas dos respuestas no son necesariamente sinónimas y pueden depender no únicamente de cuál FGF está siendo probado, sino íambién de qué receptores son expresados en la célula objetiva. Utilizando el paradigma de culfivo neuronal cortical primario, se puede comparar la capacidad de una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención para inducir crecimiento de neuritas, con la respuesta lograda con FGF-2, utilizando, por ejemplo, un ensayo de incorporación de timidina. Ensayos de célula endotelial y fibroblastos Se obtienen fibroblastos de pulmón humano en Clonetics (San Diego, CA), y se mantienen en medio de crecimiento de Clonetics. Se obtienen células endoteliales microvasculares dérmicas de Cell Applications (San Diego, CA). Para ensayos de proliferación, se pueden cultivar fibroblastos de pulmón humano y células endoteliales microvasculares dérmicas en 5,000 células/depósito en una placa de 96 depósitos durante un día en medio de crecimienlo. Posíeriormente las células se incuban durante 1 día en medio basal BSA al 1 %. Después de reemplazar el medio con medio BSA al 0.1 % fresco, las células se incuban con la proteína de fusión de prueba de las proteínas de la preseníe invención duranfe 3 días. Se agrega Alamar Blue (Alamar Biosciences, Sacramento, CA) a cada depósito a una conceníración final del 10%. Las células se incuban duraníe 4 horas. La viabilidad celular se mide leyendo en un lector de fluorescencia CytoFluor. Para los ensayos PGE2 se cultivan fibroblastos de pulmón humano en 5, 000 células/depósifo en una placa de 96 depósitos durante 1 día. Después de un cambio de medio a medio basal BSA al 0.1 %, las células se incuban con FGF-2 ó proleína de fusión de la preseníe invención con o sin I L-1 a duraníe 24 horas. Se recolecían los sobrenadaníes y se ensayan con respeclo a PGE2 mediante equipo EIA (Cayman, Ann Arbor, M l). Para los ensayos I L-6, se cultivan fibroblastos de pulmón humano en 5,000 células/depósito en una placa de 96 depósitos durante 1 día. Después de un cambio de medio a medio basal BSA al 0.1 % , las células se incuban con FGF-2 o con o sin una proteína de fusión de albúmina de la presente invención y/o I L-1 a durante 24 horas. Los sobrenadantes se recolectan y se ensayan con respecto a I L-6 mediante quipo ELISA (Endogen, Cambridge, MA).

Se cultivan fibroblastos de pulmón humano con FGF-2 o una proíeína de fusión de albúmina de la preseníe invención duraníe 3 días en medio basal anles de la adición de Alamar Blue para evaluar los efectos en el crecimiento de los fibroblastos. FGF-2 debe mostrar una estimulación en 1 0-2500 ng/ml, la cual se puede utilizar para comparar la estimulación con la proteína de fusión de la presente invención. Proliferación celular a base de incorporación de [3H1íimidina Se puede utilizar el siguiente ensayo de incorporación de [3H]timidina para medir el efecto de una proteína terapéutica, por ejemplo, proteína de factor de crecimiento en la proliferación de células tales como células de fibroblasto, células epiteliales o células de músculo inmaduras. Se detienen los cultivos sub-conflueníes en la fase G 1 a íravés de una incubación de 18 horas en medio libre de suero. Posíeriormente se agregan las proteínas lerapéuticas duraníe 24 horas y duranle las últimas 4 horas, los cultivos se etiquetan con [3H]timidina, en una concentración final de 0.33 µ M (25 Ci/mmol, Amersham , Arlington Heights, I L). Se precipita la [3H]timidina incorporada con ácido tricloroacético al 1 0% enfriado con hielo durante 24 horas. Subsecuentemente, se enjuagan las células en secuencias con ácido tricloroacéíico al 10% enfriado con hielo y posteriormenfe con agua enfriada con hielo . Después de la lisis en 0.5 M NaOH , se recolectan los enjuagues de Usados y PBS (500 ml) y se mide la cantidad de radioactividad. Modelos de Parkinson La pérdida de función moíora en enfermedad de Parkinson, se atribuye a una deficiencia de la dopamina estriatal que resulta de la degeneración de las neuronas de proyección dopaminérgica nigrostriatales. Un modelo animal para Parkinson que ha sido caracterizado exíensivameníe comprende la adminisíración sislémica de 1 -meíil-4-fenilo-1 ,2,3,6-íeírahidropiridina (MPTP). En el CNS, el MPTP es tomado por los astrocitos y catabolizado mediante oxidasa de monoamina B para 1 -metil-4-fenil-piridina (MPP+) y se libera. Subsecuentemente, MPP+ se acumula en forma activa en neuronas dopaminérgicas a través del transporíador de recapíación de alia afinidad de dopamina. Posteriormeníe se conceníra MPP+ en mitocondrias mediante el gradiente electroquímico y se inhibe selectivamente el difosfato de adenina de nicolidamida: oxidorreducíionasa de ubiquinona (complejo 1 ), interfiriendo de esta forma con el transporte de electrones y generando en forma eventual radicales de oxígeno. Se ha demostrado en paradigmas de cultivo de lejido que FGF-2 (FGF básico) tiene acíividad írófica hacia neuronas dopaminérgicas nigrales (Ferrari y Asociados, Dev. Biol. 1989). Recientemente, el grupo del Dr. Unsicker ha demostrado que la administración de FGF-2 en implantes de espuma de gel en el estriato, da como resultado la protección casi completa de las neuronas dopaminérgicas nigrales de la toxicidad asociada con la exposición a MPTP (Oíío and Unsicker, J. Neuroscience, 1990). Con base en los daíos con FGF-2, la profeína de fusión de albúmina de la preseníe invención puede ser evaluada para deíerminar si tiene una acción similar a la de FGF-2 en el aumenío de supervivencia neuronal dopaminérgica in viíro, y también puede ser probada in vivo para protección de neuronas dopaminérgicas en el esíratio del daño asociado con el íraíamienío MPTP. El efecío poíencial de una proíeína de fusión de albúmina de la presente invención , se revisa primero in vitro en un paradigma de cultivo celular neuronal dopaminérgico. Los cultivos se preparan separando la placa de piso de cerebro medio del día de gestación 14 de embriones de rata Wistar. El tejido se disocia con tripsina y se siembra a una densidad 200,000 células/cm2 sobre correderas de vidrio recubiertas con polioríinina-laminina. Las células se mantienen en Medio de Eagle modificado por Dulbecco y medio F12 que contiene suplementos hormonales (N 1 ). Los cultivos se fijan con paraformaldehído después de 8 días in vitro y se procesan para hidroxilasa de tirosina, un marcador específico para neuronas dopaminérgicas, manchado inmunohistoquímico. Los culíivos celulares disociados se preparan de raías embriónicas. El medio de culíivo se cambia cada tercer día y los factores íambién se agregan en ese momenío. Ya que las neuronas dopaminérgicas se aislan de animales el día 14 de gestación, un tiempo de desarrollo que pasa la etapa cuando se proliferan las células precursoras dopaminérgicas, un incremento en el número de neuronas inmunopositivas de hidroxilasa de tirosina puede represeníar un incremenío en el número de supervivencia de neuronas dopaminérgicas in viíro. Por consiguieníe, si una proleína íerapéutica de la presente invención actúa para prolongar la supervivencia de neuronas dopaminérgicas, esto sugiere que la proteína de fusión puede estar comprendida en enfermedad de Parkinson. EJ EMPLO 64: Terapia de combinación de transplante de célula-beta pancreática El transplante es una forma común de tratamiento de enfermedad autoinmune, especialmente cuando el tejido auío-objeíivo ha sido dañado severamenle. Por ejemplo, y no a manera de limitación, el transplanfe de páncreas y transplanfe de célula de isleto son opciones de traíamiento comunes para I DDM (ver por ejemplo, las Publicaciones de Stewart y Asociados, Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism 86 (3):984-988 (2001 ); Brunicardi, Transplant. Proc. 28:2138-40 (1996); Kendall & Robertson, Diabetes Metab. 22: 157-163 (1 996); Hamano y Asociados, Kobe J. Med. Sci. 42:93-104 (1996); Larsen & Stratta, Diabetes Metab. 22: 139-146 (1996); y Kinkhabwaia y Asociados, Am. J . Surg. 171 :516-520 (1996)). Como con cualquier método de transplante, las terapias de íransplaníe para pacieníes de enfermedad autoinmune incluyen tratamientos para minimizar el riesgo de rechazo del huésped del tejido transplaníado. Sin embargo, la enfermedad auíoinmune comprende el riesgo independiente y adicional de que la respuesta autoinmune del huésped exisíeníe previameníe que dañó el propio íejido original, ejerza el mismo efecto dañino en el tejido transplantado. Por consiguiente, la presente invención comprende métodos y composiciones para el traíamienío de enfermedad pancreática autoinmune utilizando las proleínas de fusión de albúmina de la presenfe invención, en combinación con inmunomoduladores/inmunosupresores en individuos que pasan por terapia de trasplante de la enfermedad autoinmune. De acuerdo con la presente invención, las composiciones a base de fusión de albúmina y formulaciones descritas anteriormente, se administran para prevenir y tratar daño al órgano, tejido, o células transplantadas, el cual resulta de la respuesta autoinmune del individuo huésped dirigida inicialmente conlra el propio íejido original. La adminisíración se puede llevar a cabo antes y en forma subsecuente al transplante en de 2 a 4 dosis cada semana. Los siguientes ¡nmunomoduladores/inmunosupresores incluyen, pero no se limiían a, AI-401 , CDP-571 (anticuerpo monoclonal anti-TNF), CG-1088, Diamyd (vacuna de diabetes), ICM3- (anticuerpo monoclonal anti-I CAM-3), linomida (Roquinimex), N BI-6024 (ligando de péptido alíerado), TM-27, VX-740 (HMR-3480), inhibidores de proíeasa de caspasa 8, íalidomida, hOKT3gammal (Ala-ala) (aníicuerpo monoclonal aníi-CD3), interferón-alfa oral, lactobacilos oral y LymphoStaí-BMR se pueden utilizar junio con los terapéuíicos de fusión de albúmina de la presente invención en transplante de páncreas o células de isleto. EJ EM PLO 65: Identificación v clonación de dominios VH v VL Un método para identificar y clonar dominios VH y VL de líneas celulares que expresan un aníicuerpo en particular, es llevar a cabo PCR con cebadores específicos VH y VL en cADN elaborado de las líneas celulares que expresan el anticuerpo. En síníesis, el ARN se aisla de las líneas celulares y se uíiliza como una plantilla para RT-PCR designado para amplificar los dominios VH y VL de los anticuerpos expresados por las líneas celulares EBV. Las células pueden ser Usadas en el reactivo TRIzol® (Life Technologies, Rockville, MD) y exíracíadas con un quinto de volumen de cloroformo. Después de la adición de cloroformo, la solución se deja incubar a temperatura ambieníe durante 10 minutos, y se cenírifuga a 14,000 rpm durante 15 minutos a una íemperatura de 4°C en una mesa centrífuga. El sobrenadaníe se recolecta y se precipita el ARN utilizando un volumen igual de isopropanol. El ARN precipitado se pelleíiza centrifugando a 14,000 rpm durante 15 minuíos a una íemperaíura de 4°C en una mesa de cenírifugación . Después de la centrifugación, se desecha el sobrenadante y se lava con etanol al 75%. Después de lavar, el ARN se centrifuga nuevamente a 800 rpm duraníe 5 minuíos a una femperaíura de 4°C. El sobrenadanfe se desecha y el pellet se deja secar con aire. El ARN se disuelve en agua de DEPC y se calienía a una íemperatura de 60°C durante 10 minutos. Se pueden deíerminar caníidades de ARN utilizando medidas de densidad óptica. El cADN puede ser siníeíizado, de acuerdo con métodos conocidos en la técnica, a parfir de 1 .5-2.5 microgramos de ARN utilizando transcripíasa inversa y cebadores de hexámero aleatorio. Posteriormente se utiliza el cADN como una plantilla para amplificación PCR de dominios VH y VL. Los cebadores utilizados para amplificar los genes VH y VL se muestran en la íabla 7. Normalmente, una reacción PCR hace uso de un solo cebador 5' y un solo cebador 30 Algunas veces, cuando la cantidad de plantilla de ARN disponible esíá limiíada, o para una mayor eficacia, se pueden utilizar grupos de cebadores 5' y/o 30 Por ejemplo, algunas veces los cinco cebadores VH-5' y los cebadores JH3' se utilizan en una sola reacción PCR. La reacción PCR se lleva a cabo en un volumen de 50 microlitros que contiene regulador 1 X PCR, 2 mM de cada d NTP, 0.7 unidades de polimerasa Taq de Alta Fidelidad, mezcla de cebador 5', mezcla de cebador 3' y 7.5 microlitros de cADN. La mezcla de cebador 5' y 3' tanlo de VH como de VL puede elaborarse reuniendo junios 22 pmole y 28 pmole, respectivamente, de cada uno de los cebadores individuales. Las condiciones PCR son: 96°C durante 5 minutos; seguido de 25 ciclos de 94°C durante 1 minuto, 50°C durante 1 minuto y 72°C durante 1 minuto; seguido de un ciclo de extensión a una temperatura de 72°C durante 1 0 minutos. Una vez que la reacción se compleía, los tubos de muestra se almacenan a una íemperatura de 4°C. Tabla 7: Secuencias cebadoras utilizadas para amplificar dominios VH v VL Nombre de Cebador SEQ I D NO: Secuencia de Cebador (5'-3"l Cebadores VH Hu VH1-5' 62 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGG Hu VH2-5" 63 CAGGTCAACTTAAGGGAGTCTGG Hu VH3-5' 64 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGG Hu VH4-5' 65 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGG Hu VH5-5* 66 GAGGTGCAGCTGTTGCAGTCTGC Hu VH6-5' 67 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGG Hu JH 1,2-5' 68 TGAGGAGACGGTGACCAGGGTGCC Hu JH3-5' 69 TGAAGAGACGGTGACCATTGTCCC Hu JH4.5-5' 70 TGAGGAGACGGTGACCAGGGTGCC Hu JH6-5' 71 TGAGGAGACGGTGACCGTGGTCCC Hu Vkappal-5' 72 GACATCCAGATGACCCAGTCTCC Hu Vkappa2a-5' 73 GATGTTGTGATGACTCAGTCTCC Hu V appa2b-5' 74 GATATTGTGATGACTCAGTCTCC Hu V appa3-5' 75 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCC Hu Vkappa4-5' 76 GACATCGTGATGACCCAGTCTCC Hu Vkappa5-5' 77 GAAACGACACTCACGCAGTCTCC Hu Vkappad-5' 78 GAAATTGTGCTGACTCAGTCTCC Hu Vlamb al-5' 79 CAGTCTGTGTTGACGCAGCCGCC Hu Vlambda2-5' 80 CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGC Hu Vlambda3-5' 81 TCCTATGTGCTGACTCAGCCACC Hu V!amb a3b-S' 82 TCTGCTGAGCTGACTCAGGACCC Hu V!ambda4-5' 83 CACGTTATACTGACCAACCGCC Hu VlambdaS-S* 84 CAGGCTGTGCTCACTCAGCCGTC Hu Vlambda6-5' 85 AAT?TATGCTGACTCAGCCCCA Hu Jkappal-3' 86 ACGTTTGATTTCCACCTTGGTCCC Hu ?app.2-3' 87 ACGTTTGATCTCCAGCTTGGTCCC Hu Jkappa3-3' 88 ACGTTTGATATCCACTTTGGTCCC Hu Jkappa4-3" 89 ACGTTTGA?CTCCACCTTGGTCCC Hu Jkappa5-3' 90 ACGTTGAATCTCCAGTCGTGTCCC Hu Jlambdal-3* 91 CAGTCTGTGTTGACGCAGCCGCC HuJla bda2-3' 92 CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGC Hu Jlambda3-3' 93 TCCTATGTGCTGACTCAGCCACC Hu Jlambda3b-3' 94 TCTTCTGAGCTGACTCAGGACCC Hu Jlambda4-3' 95 CACGTTATACTGACTCAACCGCC Hu JlambdaS-3' 96 CAGGCTGTGCTCACTCAGCCGTC Hu Jlambda6-3' 97 AAT?TATGCTGACTCAGCCCCA Posteriormente las muestras PCR son elecíroporizadas en un gel de agarosa al 1.3%. Se pueden coríar bandas de ADN de los íamaños esperados (~506 pares base de dominios VH , y 344 pares base de dominios VL) pueden ser coríadas del gel y purificadas utilizando métodos conocidos en la técnica. Los producios PCR purificados se pueden ligar a un vecíor PCR clonado (vecíor TA de I nvitrogen I nc. , Carlsbad, CA). Los productos PCR clonados individuales se pueden aislar después de la transfección de E. coli y la selección de color azul/blanco. Los productos PCR pueden ser posíeriormenfe secuenciados uíilizando métodos comúnmente conocidos en la técnica. También se pueden utilizar bandas de PCR que contienen el dominio VH y los dominios VL para crear veclores de expresión Ig de longiíud íoíal. Los dominios VH y VL pueden ser clonados en vecíores que contienen las secuencias de nucleótidos de regiones constaníes de cadena pesada (por ejemplo, lgG 1 humano ó lgG4 humano) o cadena ligera (kappa humano o lambda humano), de modo que una molécula de cadena ligera o pesada compleía puede ser expresada a parfir de estos vectores cuando se íransfecte en una célula huésped adecuada. Además, cuando las cadenas pesadas y ligeras clonadas son expresadas ambas en una línea celular (ya sea de uno o dos vectores), se pueden ensamblar en una molécula de anticuerpo funcional completa que es segregada en el medio de culíivo celular. Los méíodos para utilizar polinucleótidos que codifican el dominio de anticuerpo VH y VL para generar vectores de expresión que codifican las moléculas de anticuerpo completas, son bien conocidos en la técnica. EJEMPLO 66: Preparación de una citocina-HA o proteínas de fusión de factor de crecimiento-HA (tal como NGF. BDN Fa. BDNFb y BDNFcA El cADN de la citocina o factor de crecimienío de inferes, íal como NG F, se puede aislar a través de una variedad de medios incluyendo de bibliotecas de cADN , medianíe RT-PCR y medianíe PCR utilizando una serie de cebadores de oligonucleóíidos siníéíicos de íraslape, utilizando iodos métodos estándares. Las secuencias de nucleótidos de fodas esfas proíeínas son conocidas y esíán disponibles. El cADN puede ser diseñado en los exfremos 5' y 3' para generar siíios de resíricción, de modo que se puedan utilizar enlazadores de oligonucleótidos, para clonar el cADN en un vecíor que confiene el cADN para HA. Este puede estar en el término-N ó C con o sin el uso de una secuencia espaciadora. El cADN de NGF (u otra citocina) se clona en un vector tal como pPPCOOOd (figura 2), pScCHSA, pScN HSA, ó pC4: HSA del cual posleriormeníe se corta la cinta de expresión compleía y se insería en el pSAC35 de plásmido para permitir la expresión de la proíeína de fusión de albúmina de levadura. La proteína de fusión de albúmina segregada de la levadura, puede ser recolectada y purificada posteriormente del medio y probada por su actividad biológica. Para expresión en líneas celulares de mamífero, se adopía un procedimiento similar excepto que la cinfa de expresión uíilizada emplea un promotor, secuencia líder y terminador de, mamífero (ver ejemplo 1 ). Esta cinía de expresión se corla posteriormeníe y se insería en un plásmido adecuado para la transfección de líneas celulares de mamífero, EJEM PLO 67: Preparación de proteínas de fusión HA-I FN (tal como I FNai. El cADN del interferón de interés, tal como I FN , puede ser aislado a través de una variedad de medios incluyendo pero no de manera exclusiva, de bibliotecas de cADN mediante RT-PCR y mediante PCR utilizando una serie de cebadores de oligonucleótido siníético de traslape, utilizando iodos métodos estándar. Las secuencias de nucleótidos de interferonas, tales como I FNa son conocidas y están disponibles, por ejemplo, en las Patentes Norteamericanas Nos. 5,326, 859 y 4,588,586, en la Patente Europea EP 32, 134, así como en bases de datos públicas tales como GenBank. El cADN puede ser diseñado en los extremos 5' y 3' para generar sitios de restricción, de modo que los enlazadores de oligonucleótidos puedan ser utilizados para clonar el cADN en un veclor que coníiene un cADN para HA. Esíe puede esíar en el término-C ó N de la secuencia HA, con o sin el uso de una secuencia espaciadora. El cADN de IFN (u otro interferón) se clona en un vector tal como pPPCOOOd (figura 2), pScCHSA, pScNHSA, ó pC4: HSA del cual posíeriormeníe se coría toda la cinta de expresión y se inserta en el pSAC3d de plásmido para permitir la expresión de la proteína de fusión de albúmina en levadura. La proíeína de fusión de albúmina segregada de la levadura posíeriormeníe puede ser recolecíada y purificada del medio y probada por su actividad biológica. Para expresión en líneas celulares de mamífero, se adopía un procedimienío similar excepío que la cinía de expresión uíilizada emplea un promoíor, secuencia líder y íerminador de mamífero (ver ejemplo 1 ). Esía cinía de expresión, se coría posíeriormeníe y se insería en un plásmido adecuado para la fransfección de líneas celulares de mamífero. Recuperación máxima de proíeína de los frascos Las proíeínas de fusión de albúmina de la presente invención tienen un alto grado de estabilidad incluso cuando no se empacan a bajas conceníraciones. Además, a pesar de la baja conceníración de proíeína, se observa una buena recuperación de proíeína-fusión incluso cuando la solución acuosa no incluye otra proteína agregada para minimizar el enlace a las paredes del frasco. Se comparó la recuperación de las soluciones HA-I FN almacenadas en el frasco con una solución de existencia. Se colocaron 6 ó 30 µg/ml de soluciones HA-I FN en frascos y se almacenaron a una femperafura de 4°C. Después de 48 ó 72 horas, se elimina un volumen equivaleníe original a 1 0 ng de la muesíra y se mide en un ensayo ELISA de emparedado IFN. Se comparan los valores esíimados con el de una solución de exisíencia de alfa concenlración. Tal como se muesíra, no hay esencialmeníe pérdida de la muestra en estos frascos, lo que indica que la adición de material exógeno tal como albúmina, no es necesaria para evitar la pérdida de la muestra en las paredes de los frascos. Estabilidad v biodisponibilidad in vivo de fusiones HA-a-I FN Para determinar la estabilidad y biodisponibilidad in vivo de la molécula de fusión HA-a-I FN , se administró a monos la molécula de fusión purificada (de levadura). Las composiciones farmacéuticas formuladas de fusiones HA-a-I FN pueden coníar para la vida promedio del suero prolongada y biodisponibilidad. Por consiguieníe, las composiciones farmacéuticas pueden ser formuladas para contener dosis más baja de la acíividad de iníerferón alfa en comparación con la molécula de interferón-alfa naíiva. Las composiciones farmacéuíicas que coníienen fusiones HA-a-I FN , pueden ser utilizadas para fratar o prevenir enfermedades en pacientes con cualquier enfermedad o estado de enfermedad que pueda ser modulado mediante la administración de a-I FN. Dichas enfermedades incluyen , pero no se limitan a, leucemia de célula peluda, sarcoma de Kaposi, verrugas genitales y anales, hepatitis crónica B, crónica no A, hepatiíis no B, en parficular hepatiíis C, hepatitis D, leucemia mielogenosa crónica, carcinoma de célula renal, carcinoma de vejiga, carcinoma de ovario cervical, cáncer de piel, papilomaíosis respiraíoria recurrenfe, linfoma de célula-T cutáneo y no Hodgkin , melanoma, mieloma múltiple, SI DA, esclerosis múltiple, glioblastoma, ele. (ver I níerferón alfa, en: AHFS Drug I nformation, 1997).

Por consiguiente, la presente invención incluye composiciones farmacéuíicas que coníienen una proleína de fusión HA-a-I FN , polipépíido o péplido formulado con la dosis adecuada para administración humana. La presente invención también incluye métodos para tratar pacientes que necesitan de dicho traíamiento, que comprende al menos el paso de administrar una composición farmacéutica que contiene al menos una proteína de fusión HA-a-I FN, polipéplido o péplido. Fusiones HA-a-I FN bifuncionales Se puede modificar un vector de expresión HA-a-IFN para incluir una inserción para la expresión de proteínas de fusión HA-a-IFN bifunclonales. Por ejemplo, el cADN para una segunda proteína de interés puede ser insertado en la corriente descendente de la estructura de la secuencia "rHA-I FN", después de que se ha eliminado el codón de detención doble o sea cambiado a la corriente descendente de la secuencia de codificación. En una versión de una proteína de fusión HA-a-I FN bifuncional, un anticuerpo o fragmento contra proteína estimuladora de linfocilo-B (Acceso GenBank 4455139) o polipéplido pueden fusionarse a un extremo del componente HA de la molécula de fusión. Esta proteína bifuncional es útil para modular cualquier respuesta inmune generada por el componente a-I FN de la fusión . EJEMPLO 68: Preparación de la proteína de fusión de hormona- HA. El cADN para la hormona de iníerés puede ser aislado a través de una variedad de medios incluyendo pero no de manera exclusiva, de bibliotecas de cADN , mediante RT-PCR y medianíe PCR uíilizando una serie de cebadores de oligonucleóíido sinféíico de íraslape, uíilizando lodos los méíodos esíándar. Las secuencias de nucleótidos de todas estas proteínas son conocidas y están disponibles, por ejemplo, en bases de datos públicas tales como GenBank. El cADN puede ser diseñado en los exíremos 5' y 3' para generar sifios de resíricción, de modo que se pueden uíilizar enlazadores de oligonucleótidos, para clonar el cADN en un vector que contiene el cADN para HA. Esle puede estar en el término-C ó N con o sin el uso de una secuencia espaciadora. El cADN de la hormona se clona en un vector íal como pPPCOOOd (figura 2), pScCHSA, pScNHSA, ó pC4: HSA del cual se corla posíeriormente la cinta de expresión completa y se insería en el pSAC3d de plásmido para permiíir la expresión de la proleína de fusión de albúmina en levadura. La proteína de fusión de albúmina segregada de la levadura posteriormente puede ser recolectada y purificada del medio y probada por su actividad biológica. Para expresión en líneas celulares de mamífero, se adopta un procedimiento similar excepto que la cinta de expresión utilizada, emplea un promotor, secuencia líder y terminador de mamífero (ver ejemplo 1 ). Esta cinta de expresión posteriormente se corta y se inserta en un plásmido adecuado para la transfección de líneas celulares de mamífero. EJ EMPLO 69: Preparación de receptor soluble-HA o proteína de fusión de enlace-HA. El cADN de receptor soluble o proteína de enlace de interés, se puede aislar a íravés de una variedad de medios incluyendo pero no de manera exclusiva, a biblioíecas de cADN, medianíe RT-PCR y medianíe PCR utilizando una serie de cebadores de oligonucleóíido siníéíico de íraslape, uíilizando iodos métodos estándar. Las secuencias de nucleótidos de todas estas proteínas son conocidas y están disponibles, por ejemplo, en GenBank. El cADN puede ser diseñado en los exfremos d' y 3' para generar sitios de resíricción, de modo que se puedan uíilizar enlazadores de oligonucleóíido para clonar el cADN en el vecfor que coníiene el cADN para HA. Esíe puede ser en el íérmino-N ó -C con y sin el uso de una secuencia espaciadora. El cADN recepíor se clona en un vecíor íal como pPPCOOOd (figura 2), pScCHSA, pScNHSA, ó pC4: HSA del cual se coría posteriormente la cinta de expresión completa y se insería en el pSAC3d de plásmido para permitir la expresión de la proteína de fusión de albúmina en levadura. La proíeína de fusión de albúmina segregada de la levadura posleriormeníe puede ser recolecíada y purificada del medio y probada por su actividad biológica. Para expresión en líneas celulares de mamífero, se adopta un procedimiento similar excepto que la cinta de expresión utilizada, emplea un promotor, secuencia líder y terminador de mamífero (ver ejemplo 1 ). Esía cinía de expresión posteriormeníe se corla y se insería en un plásmido adecuado para la transfección de líneas celulares de mamífero. EJEM PLO 70: Preparación de factores de crecimíenío-HA El cADN del facíor de crecimienío de iníerés puede ser aislado a íravés de una variedad de medios incluyendo pero no de manera exclusiva, la biblioíeca de cADN , medianíe RT-PCR y medianíe PCR utilizando una serie de cebadores de oligonucleótido sintético de traslape, utilizando todos méíodos esíándar (ver el acceso GenBank No. NP_000609). El cADN puede ser diseñado en los extremos 5' y 3' para generar sitios de restricción, de modo que los enlazadores de oligonucleótidos puedan ser utilizados para clonación del ADN en un vector que contiene el cADN para HA. Este puede esíar en el férmino-N ó -C son y sin el uso de una secuencia espaciadora. El cADN del factor de crecimiento se clona en un vector, de modo que pPPCOOOd (figura 2), pScCHSA, pScN HSA, ó pC4: HSA del cual se corta posteriormente la cinta de expresión completa y se insería en el pSAC35 de plásmido para permitir la expresión de la proíeína de fusión de albúmina en levadura. La proteína de fusión de albúmina segregada de la levadura posteriormente puede ser recolectada y purificada del medio y probada por su actividad biológica. Para expresión en líneas celulares de mamífero, se adopía un procedimiento similar excepto que la cinta de expresión utilizada, emplea un promotor, secuencia líder y terminador de mam ífero (ver ejemplo 1 ). Esta cinta de expresión posteriormeníe se coría y se inserta en un plásmido adecuado para la transfección de líneas celulares de mamífero. EJ EMPLO 71 : Preparación de proteínas de fusión de anticuerpo de cadena simple-HA. Los anticuerpos de cadena simple se producen a través de diversos métodos que incluyen pero no se limitan a: selección de bibliotecas de fago, clonación de la región variable de un anticuerpo específico mediante clonación del cADN del anticuerpo y uíilizando las regiones conslanfes de flanqueo como el cebador para clonar la región variable, o sintetizando un oligonucleótido que corresponde a la región variable de cualquier aníicuerpo específico. El cADN puede ser diseñado en los extremos 5' y 3' para generar sitios de resfricción, de modo que los enlazadores de oligonucleótidos pueden ser utilizados, para clonación dei cADN en un vecíor que contiene el cADN para HA. Esto puede ser en el lérmino-N ó -C con o sin el uso de una secuencia espaciadora. El cADN de célula se clona en un vecíor de modo que pPPCOOOd (figura 2), pScCHSA, pScNHSA, ó pC4: HSA del cual se corta posteriormente la cinta de expresión completa y se inserta en el pSAC3d de plásmido para permifir la expresión de la profeína de fusión de albúmina en levadura. En moléculas de fusión de la presenfe invención, el VH y VL puede ser enlazado a íravés de los siguientes medios o una combinación de los mismos: un enlazador de péptido entre el término-C del VH y el íérmino-N del VL; un sitio de disociación de proteasa Kex2p entre VH y VL de modo que los dos se disocien aparte al momenío de la secreción y posteriormeníe se auíoasocien; y residuos de cisfeína colocados de modo que VH y VL puedan formar un enlace de disulfuro entre ellos para enlazarlos juntos. Una opción alíernativa podría ser colocar el VH en el íérmino-N de HA ó un fragmento de dominio HA y el VL en el término-C del HA ó fragmento de dominio HA. La proteína de fusión de albúmina segregada de la levadura, posteriormente puede ser recolectada y purificada del medio y probada con respecto a su actividad. Para expresión en las líneas de célula de mamífero, se adopía un procedimienío similar excepfo que la cinta de expresión utilizada emplea un promotor, secuencia líder y terminador de mamífero (ver ejemplo 1 ). Esta cinta de expresión posteriormente se corta y se inserta en un plásmido adecuado para la transfección de líneas de célula de mamífero. El anticuerpo producido en esta forma puede ser purificado del medio y probado con respecto a su enlace a su anfígeno, uíilizando mélodos inmunoquímicos estándar. EJ EM PLO 72: Preparación de proteínas de fusión de molécula de adhesión de células-HA El cADN de la molécula de adhesión de células de iníerés, puede ser aislada a íravés de una variedad de medios incluyendo pero no de manera exclusiva, de bibliotecas de cADN , mediante RT-PCR y mediante PCR utilizando una serie de cebadores de oligonucleótido siníélico de íraslape, utilizando iodos méíodos estándar. Las secuencias de nucleótidos de las moléculas de adhesión de células conocidas, son conocidas y esíán disponibles, por ejemplo en GenBank. El cADN puede ser diseñado en los extremos 5' y 3' para generar los sitios de resíricción, de modo que los enlazadores del oligonucleóíido puede ser utilizados para clonación del cADN en un vector que coníiene el cADN para HA. Esío puede ser en el íérmino-N ó -C con o sin el uso de una secuencia espaciadora. El cADN de la molécula de adhesión de células se clona en un vecíor de modo que pPPC0005 (figura 2), pScCHSA, pScNHSA, ó pC4:HSA del cual se coría posíeriormenie la cinla de expresión completa y se inserta en el pSAC35 de plásmido, para permitir la expresión de la proteína de fusión de albúmina en levadura. La proteína de fusión de albúmina segregada de la levadura puede ser recolectada posteriormente y purificada del medio y probada por su actividad biológica. Para expresión en líneas celulares de mamífero, se adopta un procedimiento similar excepío que la cinía de expresión uíilizada, emplea un promoíor, secuencia líder y ferminador de mamífero (ver ejemplo 1). Esía cinía de expresión posteriormeníe se coría y se insería en un plásmido adecuado para la íransfección de líneas celulares de mamífero. EJEMPLO 73: Preparación de facíores inhibidores v péptidos como proíeínas de fusión HA (tal como proteínas aníivirales-HA, antibióticas-HA, inhibidoras de enzima-HA y anti-alérgicas-HA). El cADN del péptido de interés, tal como un péptido antibiótico puede ser aislado a través de una variedad de medios incluyendo pero no de manera exclusiva, de biblioíecas de cADN, medianíe RT-PCR y medianíe PCR uíilizando una serie de cebadores de oligonucleóíido siníéíico de íraslape, utilizando todos méíodos esíándar. El cADN puede ser diseñado en los exíremos d' y 3' para generar los siíios de resfricción, de modo que los enlazadores del oligonucleótido puede ser utilizados para clonación del cADN en un vector que contiene el cADN para HA. Esto puede ser en el íérmino-N ó -C con o sin el uso de una secuencia espaciadora. El cADN de pépíido se clona en un vecíor de modo que pPPCOOOd (figura 2), pScCHSA, pScNHSA, ó pC4:HSA del cual se corta posteriormeníe la cinta de expresión completa y se inserta en el pSAC3d de plásmido, para permitir la expresión de la proteína de fusión de albúmina en levadura. La proteína de fusión de albúmina segregada de la levadura puede ser recolectada posteriormente y purificada del medio y probada por su actividad biológica. Para expresión en líneas celulares de mamífero, se adopta un procedimiento similar excepío que la cinía de expresión uíilizada, emplea un promoíor, secuencia líder y íerminador de mamífero (ver ejemplo 1). Esta cinta de expresión posteriormente se corta y se inserta en un plásmido adecuado para la transfección de líneas celulares de mamífero. EJEMPLO 74: Preparación de las proteínas de fusión HA dirigidas. El cADN de interés puede ser aislado de la bibliofeca de cADN o puede ser elaborado en forma sintéfica utilizando diversos oligonucleótidos de traslape utilizando métodos de biología molecular estándar. Los nucleótidos adecuados pueden ser consíruidos en el cADN para formar sitios de restricción convenientes y íambién permiíir la adhesión del cADN de proteína al cADN de albúmina. También un cADN de proteína o pépíido de dirección, lal como un aníicuerpo o péplidos de cadena simple, tal como señales de localización nuclear, que pueden dirigir las proteínas dentro de las células, puede fusionarse al otro extremo de la albúmina. La proteína de interés y el péptido de dirección se clona en un vector tal como pPPCOOOd (figura 2), pScCHSA, pScNHSA, ó pC4: HSA el cual permite la fusión con cADN de albúmina. En esta forma, el extremo tanto de íerminal-C como -N de la albúmina se fusionan a oirás proteínas. El cADN fusionado posteriormente se corta de pPPCOOOd y se inserta en un plásmido tal como pSAC35, para permitir la expresión de la proteína de fusión de albúmina en levadura. Todos los procedimientos anteriores pueden ser llevados a cabo utilizando métodos estándar en biología molecular. La proteína de fusión de albúmina segregada de levadura puede ser recolectada y purificada del medio y probada por su actividad biológica y su actividad de dirección utilizando pruebas bioquímicas y biológicas adecuadas. EJEMPLO 75: Preparación de fusiones de enzima-HA. El cADN de la enzima de interés, puede ser aislado a través de una variedad de medios incluyendo pero no de manera exclusiva, de bibliotecas de cADN , mediante RT-PCR y mediante PCR utilizando una serie de cebadores de oligonucleótido sintético de traslape, utilizando todos métodos estándar. El cADN puede ser diseñado en los extremos 5' y 3' para generar los sitios de restricción, de modo que los enlazadores del oligonucleótido pueden ser utilizados para clonación del cADN en un vector que contiene el cADN para HA. Esto puede ser en el término-N ó -C con o sin el uso de una secuencia espaciadora. El cADN de enzima se clona en un vector de modo que pPPCOOOd (figura 2), pScCHSA, pScNHSA, ó pC4:HSA del cual se corta posíeriormeníe la cinía de expresión compleía y se inserta en el pSAC3d de plásmido, para permitir la expresión de la proteína de fusión de albúmina en levadura. La proleína de fusión de albúmina segregada de la levadura puede ser recolectada posteriormente y purificada del medio y probada por su actividad biológica. Para expresión en líneas celulares de mamífero, se adopta un procedimiento similar excepto que la cinta de expresión utilizada, emplea un promotor, secuencia líder y terminador de mamífero (ver ejemplo 1 ). Esta cinta de expresión posteriormente se corta y se inserta en un plásmido adecuado para ia transfección de líneas celulares de mamífero. EJEMPLO 76: Generación de ID de construcción 2053. IFNb-HSA. El I D de construcción 2053, pEE12.1 : I FNb. HSA, comprende ADN que codifica una proteína de fusión de albúmina I FNb que tiene la proteína I FNb de longitud total incluyendo la secuencia líder I FNb nativa fusionada al término-amino de la forma madura HSA en el vector de expresión NSO pEE12.1. Clonación de cADN I FNb El polinucleóíido que codifica I FNb se amplificó mediante PCR utilizando cebadores I FNb-1 e I FNb-2, que se describen más adelante, cortados con Bam Hl/Cla I , y ligados en Bal Hl/CIa I , coríados con pC4: HSA, dando como resultado la construcción 201 1 . El fragmento Eco Rl/Eco Rl de la I D de construcción #201 1 se subclonó en el sitio Eco Rl de pEE12.1 , generando la I D de consírucción #2063 la cual comprende el ADN que codifica una proteína de fusión de albúmina que contiene la secuencia líder y la forma madura de I FNb, seguido de la proteína HSA madura. Se sinteíizaron dos oligonucleótidos adecuados para amplificación PCR del polinucleótido que codifica la longitud toíal de I FNb, I FNb-1 , e I FNb-2. IFNb- 1 : d'- GCGCGGATCCGAATTCCGCCGCCATGACCAACAAGTGTCTCCTCC AAA TTGCTCTCCTGTTGTGCTTCTCCACTACAGCTCTTTCCATGAGCTA CAACTTGCTTGG-3' (SEQ ID NO:107) IFNb-2: d'- GCGCGCATCGATAGCAACCTCACTCTTGTGTGCATCGTTTCGGA GGTAACCTGT-3' (SEQ I D NO: 108). El cebador I FNb-1 incorpora un sitio de clonación Bam Hl (mosfrado subrayado), un sitio de clonación Eco Rl , y una secuencia Kozak (mostrada en cursivas) seguido de 80 nucleótidos que codifican los primeros 27 aminoácidos de la forma de longitud total de I FNb. En IFNb-2, el sitio Cía I (mostrado subrayado) y el ADN que lo sigue son el complemento inverso del cADN que codifica los primeros 10 aminoácidos de la proteína HSA madura (SEQ I D NO: 1 ) y los últimos 18 nucleófidos son el complemento inverso de ADN que codifica al menos 6 residuos de aminoácido de I FNb (ver ejemplo 2). Se generó un amplímero PCR utilizando estos cebadores, se purificó, se digirió con las enzimas de restricción Bam Hl y Cía I , y se clonó en los sitios Bam Hi y Cía I del vector pC4: HSA. Después de que se confirmó la secuencia, se subclonó un fragmento Eco Rl que coníiene la cinla de expresión de la proíeína de fusión de albúmina I FNb, en pEE 12.1 digerido con Eco Rl . Además, el análisis del término-N de la proteína de fusión de albúmina expresada mediante secuenciación de aminoácido, puede confirmar la presencia de la secuencia de I FNb esperada (ver más adelante). Las proteínas de fusión de albúmina IFNb de la presente invención comprenden prefereníemenle la forma madura de HSA, por ejemplo, Asp-25 a Leu-609, fusionado en cualesquiera de los términos-N ó -C de la forma madura de I FNb, por ejemplo Mel-12 a Asn-1 87. En una modalidad de la presente invención , las proteínas de fusión de albúmina I FNb de la presente invención comprenden una secuencia de señal que dirige el polipéptido de fusión naciente en las trayecíorias de segregación del huésped utilizado para expresión . En una modalidad preferida adicional, el péptido de señal codificado por la secuencia de señal es eliminado, y la proteína de fusión de albúmina I FNb madura es segregada directameníe del medio de culíivo. Las proteínas de fusión de albúmina IFNb de la presente invención, pueden comprender secuencias de señal heteróloga que incluyen, pero no se limitan a, MAF, I NV, Ig , Fibulina B, Clusterina, Proteína de Enlace 4 de Factor de Crecimiento Tipo I nsulina, secuencia líder HSA variantes, que incluyen pero no se limitan a, una secuencia líder HSA/MAF quimérica, u otras secuencias de señal heteróloga conocidas en la técnica. En una modalidad preferida, las proteínas de fusión de albúmina I FNb de la presente invención comprenden la I FNb nativa. En modalidades preferidas adicionales, las proteínas de fusión de albúmina IFNb de la presente invención comprenden un residuo de metionina de terminal-N. Los polinucleótidos que codifican estos polipéptidos, incluyendo fragmentos y/o variantes íambién esíán comprendidos en la présenle invención. Expresión v purificación de I D de conslrucción 2053 Expresión en líneas de célula NSO de mieloma de múrido. I D de construcción #2053, pEE12.1 : I FNb-HSA, se electroporó en células NSO a íravés de méíodos conocidos en la íécnica (ver ejemplo 6). Purificación de sobrenadante de célula NSO.

La purificación de I FNb-HSA del sobrenadanfe de célula NSO puede comprender la cromaíografía de intercambio de aniones de Q-sefarosa en un pH de 7.4 utilizando un gradienfe NaCI de 0 a 1 M en 20 mM de Tris-HCl , seguido de cromatografía de intercambio de aniones Poros Pl 60 en un pH de 6.5 con un gradiente de citraío de sodio de 5 a 40 mM , y diafiltrando duranfe 6 DV en cilraío 10 mM, pH 6.5 y 140 mM NaCI, la composición de regulación final. La secuenciación de lerminal-N debe producir la secuencia MSYN LL, la cual es el íérmino amino de la forma madura de I FNb. La proteína tiene un MW aproximado de 88.5 kDa.

Para purificación a mayor escala, por ejemplo, se pueden concentrar 50 L de sobrenadante de célula NSO en ~8 a 10 L.

Posteriormente la muestra concentrada se pasa sobre la columna de intercambio de aniones de Q-sefarosa (10 x 19 cm, 1 .5 L) en pH 7.5 utilizando un paso de elución que consiste en NaOAc 50 mM, pH 6.0 y NaCI 150 mM. La muesíra eluida posteriormente puede ser desactivada viralmeníe con 0.75% Triíon-X 100 durante 60 minutos a íemperalura ambieníe. Posleriormenfe se puede emplear cromatografía de fase inversa-SDR (10 cm x 10 cm , 0.8 L) en un pH de 6.0 con NaOAc 50 mM y NaCI 150 mM, o como alternativa, la muestra puede pasarse sobre una columna de SP-sefarosa en un pH 4.8 utilizando un paso de elución de NaOAc 50 mM, pH 6.0 y NaCI 150 mM. La filtración DV 50 podría continuarse para eliminar cualquier contenido viral. La cromaíografía fenilo-650M (20 cm x 12 cm, 3.8 L) en pH de 6.0, utilizando un paso de elución que consiste en 350 mM (NH )2SO4 y 50 mM de NaOAc, o como alíernaíiva que consisle en 50 mM NaOAc, pH 6.0, puede seguirse. La diafiltración para 6-8 DV permitirá el intercambio de regulador en el regulador de formación final deseado ya sea de Na2HPO 1 0 mM + sacarosa 68 mM + NaCI 120 mM, pH 7.2 ó citrato 10 mM, pH 6.5 y NaCI 140 mM ó Na2HPO4 25 mM, NaCI 100 mM, pH 7.2. La actividad de I FNb puede ser evaluada utilizando un ensayo ISRE-SEAP in vitro. Todas las proleínas de iníerferón tipo I señalan a través de un complejo de receptor común y una trayecíoria de señalización Jak/STAT que culmina en la acíivación de genes que responden a interferón , "I FN" a través del Elemento de Respuesta de Secuencia de I níerferón, "ISRE". Un ensayo conveniente para ia actividad de I FN íipo I, es un sislema de ensayo a base de promotor-reportero que contiene múltiples copias del elemento ISRE fusionado a un gen reportero de corriente descendente. Se puede generar una línea de célula H EK293 estable y contener una copia integrada en forma estable de un gen reportero ISRE-SEAP el cual es extremadamente sensible a I FNs tipo I y despliega linearidad sobre 60 logs de concentración. Método de clasificación de clones estables I FNb-HSA NSO. Se electroporó la construcción 2053 en células NSO tal como se describe en el ejemplo 6. Las células NSO transporíadas con el ID de construcción #2053 fueron clasificadas con respecto a la actividad probando el medio de crecimiento condicionado en el ensayo ISRE-SEAP. Las células reporleras ISRE-SEAP/293F fueron colocadas el día previo al íratamiento en 3 x 104 célula/depósiío en placas de 96 depósitos, recubiertos con poIi-D- lisina. Las células reporteras fueron traíadas con diversas diluciones (incluyendo pero sin limiíarse a, 1:500 y 1:5000) de sobrenadante acondicionado o preparaciones purificadas de la proteína de fusión de albúmina IFNb codificada mediante el ID de construcción 2053 ó rhIFNb como control. Posteriormente las células reporteras fueron incubadas durante 24 horas antes de la eliminación de 40 µl, para utilizarse en el ensayo quimiluminisceníe de gen reporíero SEAP (catálogo Roche # 1779842). Se utilizó iníerferón humano recombinante beta, "rhIFNb" (Biogen), como un control posiíivo. Resultado La preparación purificada de IFNb-HSA expresada con NSO, tuvo un EC60 mayor de 9.3 x 1 O"9 g/ml que rhIFNb (Biogen), el cual tuvo un EC50 de 1.8 x 10"10 (ver figura 4). Inducción in vivo de OAS medianíe un inferieron Método Se activa la enzima OAS, sintasa de 2'-d'-oIigoadenilato en el nivel de íranscripción mediante interferón en respuesta a infección antiviral. El efecto de construcciones de interferón puede ser medido obteniendo muestras de sangre de monos írafados y analizando estas muestras con respecío a acíivación de íranscripción de dos mARN OAS, p41 y p69. Se puede obtener un volumen de 0.5 ml de sangre toíal a partir de cuaíro animales por grupo en siefe diferenfes punios del íiempo, día 0, día 1 , día 2, día 4, día 8, día 10, y día 14 por animal. Los diversos grupos pueden incluir inyección de conírol de vehículo, inyección intravenosa y/o subcutánea ya sea de 30 µg/kg y/o 300 µg/kg de proteína de fusión de albúmina I FN el día 1 , e inyección subcutánea de 40 µg/kg de interferón alfa (Schering-Plough) como control positivo los días 1 , 3, y 5. Los niveles de p41 en las transcripciones de mARN p69, pueden determinarse a través de PCR cuantitativo de tiempo real (Taqman) utilizando sondas específicas de p41 -OAS. Los niveles de mARN OAS pueden ser cuanlificados en forma relativa al control endógeno de ARN ribosomal 18S . I nducción in vivo de OAS mediante fusión de albúmina-interferón beta codificada por I D de construcción 2053. Método Se puede ensayar la actividad de la proteína de fusión HSA-IFNb codificada por la construcción 2053 en el ensayo OAS in vivo tal como se describió previamente bajo la sección con el encabezado "inducción in vivo de OAS mediante un interferón". EJ EMPLO 77: Indicaciones de proteína de fusión de albúmina I FNb. Las proteínas de fusión de albúmina I FN beta (que incluyen pero no se limiían a las codificadas por la consírucción 2053) se pueden uíilizar para traíar, prevenir, aminorar y/o detectar esclerosis múltiple. Otras indicaciones incluyen, pero no se limitan a, infecciones virales que incluyen Síndrome Respiratorio Agudo Severo (SARS) y otras infecciones de coronavirus; filoviruses, incluyendo pero sin limiíarse a, virus de Ébola y virus de Marburg ; Arenaviruses, que incluyen pero no se limiían a, virus Pichende, virus Lassa, virus Junin, virus Machupo, virus Guanarilo; y virus de coriomeningitis linfocítica (LCMV); Bunyaviruses, incluyendo pero sin limitarse a virus Punta toro, virus de fiebre hemorrágica Crimean-Congo, viruses de fiebre de mosca de arena, virus de fiebre Rift Valley, virus La Crosse, y hantaviruses; flaviviruses, incluyendo pero sin limitarse a, fiebre amarilla, virus Banzi, virus West Nile, viruses Dengue, virus de encefalitis japonesa, encefalitis por garrapata, fiebre hemorrágica Omsk y virus de enfermedad de Kyasanur Forest; Togaviruses, incluyendo pero sin limitarse a, viruses de encefalitis equina de Venezuela, este, y oeste, virus Ross River, y virus de Rubella; viruses Orthopox, incluyendo pero sin limitarse a, Vacuna, Cowpox, Smallpox, y Monkeypox; Hiperviruses; FluA/B; virus Sincicial respiratorio (RSV); parainfluenza; paperas; rinoviruses; adenoviruses; virus Semliki Forest; fiebres hemorrágicas virales; Rhabdoviruses; Paramyxoviruses, incluyendo pero sin limitarse a, virus Nipah y virus Hendra; y otros agentes virales identificados por los Centros Norteamericanos de Control y Prevención de Enfermedades como agentes de enfermedad de alta prioridad (por ejemplo, agenles de Categoría A, B, y C; ver por ejemplo las Publicaciones de Moran, Emerg . Med . Clin. North. Am . 2002; 20(2):31 1 -30 y Darling y Asociados, Emerg. Med. Clin. North Am.2002:20(2):273-309). EJEMPLO 78: ID de construcción 2249. IFNa2-HSA, generación. La ID de construcción 2249, pSAC3d:IFNa2.HSA, comprende ADN que codifica una proteína de fusión de albúmina IFNa2 que tiene la secuencia líder quimérica HSA, seguido de la forma madura de la proteína IFNa2, por ejemplo, CI-E165 fusionado al término-amino de la forma madura de HSA en el vector de expresión de levadura S. cerevisiae pSAC3d. Clonación de cADN IFNa2. Se amplificó mediante PCR el polinucleóíido que codifica IFNa2 uíilizando los cebadores IFNa2-1 e IFNa2-2 íal como se describe más adelaníe. El amplímero PCR se corfó con Sal l/Cla I, y se elevó en Xho l/Cla I coríe pScCHSA. La ID de consfrucción #2249 codifica una proteína de fusión de albúmina que contiene la secuencia líder quimérica de HSA, la forma madura de IFNa2, seguida de proteína HSA madura. Dos oligonucleóíidos adecuados para amplificación PCR del polinucleótido que codifica la forma madura de IFNa2, IFNa2-1, e IFNa2-2, fueron sinteíizados: IFNa2-1: 5'- CGCGCGCGTCGACAAAAGATGTGATCTGCCTCAAACCCACA-3' (SEQ ID NO:109) IFNa2-2: d'- GCGCGCATCGATGAGCAACCTCACTCTTGTGTGCATCTTCCTTACT TC TTAAACTTTCT-3' (SEQ ID NO:110).

El cebador IFNa2-1 incorpora el siíio de clonación Sal I (mostrado subrayado), nucleótidos que codifican los últimos tres residuos de aminoácidos de la secuencia líder HSA quimérica, así como 22 nucleótidos (mostrados con letras negrilas) que codifican los primeros siete residuos de aminoácido de la forma madura de I FNa2. En I FNa2-2, el sitio Cía I (mostrado subrayado) y el ADN que lo sigue son el complemenío inverso del ADN que codifica los primeros 1 0 aminoácidos de la proteína HSA madura y los últimos 22 nucleótidos (mostrados en letras negritas) son el complemento inverso del ADN que codifica los últimos siete residuos de aminoácidos del IFNa2 (ver ejemplo 2). Se generó un amplímero de PCR de I FNa2-HSA uíilizando esíos cebadores, se purificó y digirió con enzimas de reslricción Sal I y Cía I , y se clonó en los siíios Xho I y Cía I del vecíor pScCHSA. Después de que se confirmó la secuencia, se subclonó la cinía de expresión que codifica esla proteína de fusión de albúmina I FNa2, en pSAC3d digerido con Not I . Además, el análisis del término-N de la proteína de fusión de albúmina expresada por secuenciación de aminoácidos, puede confirmar la presencia de la secuencia IFNa2 esperada (ver más adelante). Otras proíeínas de fusión de albúmina I FNa2 que utilizan diferentes secuencias líder han sido construidas a través de méíodos conocidos en la técnica (ver el ejemplo 2). Los ejemplos de varias secuencias líder incluyen, pero no se limitan a, inveríasa "I NV" (construcciones 2343 y 2410) y factor alfa de correspondencia "MAF" (construcción 2366). Estas proíeínas de fusión de albúmina I FNa2 pueden ser subclonadas en vectores de expresión de mamífero tal como pC4 (consírucción 2382) y pEE 12.1 íal como se describió previamente (ver ejemplo d). Las proteínas de fusión de albúmina I FNa2 con el término-C fusionado por la parte terapéutica HSA también pueden ser consfruidas (construcción 2381 ). Las proteínas de fusión de albúmina I FNa2 de la presente invención comprenden preferentemente la forma madura de HSA, por ejemplo, Asp-25 a Leu-609, fusionado ya sea al término-N ó -C de la forma madura de IFNa2, pro ejemplo, Cys-1 a Glu-16d. En una modalidad de la presente invención, las proteínas de fusión de albúmina I FNa2 de la presente invención comprenden además una secuencia de señal que dirige el polipéptido de fusión naciente en las trayectorias de segregación del huésped utilizado para expresión . En una modalidad preferida adicional , el péptido de señal codificado por la secuencia de señal fue eliminado, y la proteína de fusión de albúmina I FNa2 madura es segregada directamente en el medio de cultivo. Las proteínas de fusión I FNa2 de la presente invención pueden comprender la secuencia de señal heteróloga que incluyen, pero no se limitan a, MAF, I NV, Ig, Fibulina B, Clusterina, Proteína de Enlace de Factor de Crecimienfo Tipo I nsulina 4, secuencia líder HSA varianíe, que incluyen pero no se limitan a, una secuencia líder HSA/MAF quimérica, u otras secuencias de señal heteróloga conocidas en la técnica. En una modalidad preferida, las proteínas de fusión de albúmina I FNa2 de la preseníe invención comprenden el I FNa2 naíivo. En modalidades preferidas adicionales, las proíeínas de fusión de albúmina I FNa2 de la présenle invención comprenden además un residuo de meíionina de íerminal-N . Los polinucleólidos que codifican estos polipéptidos, incluyendo fragmentos y/o variantes, también están comprendidos en la presente invención . Expresión v purificación de I D de construcción 2249 Expresión en S. cerevisiae de levadura. La transformación de la construcción 2249 en la cepa S. cerevisiae de levadura BXP10, se llevó a cabo a través de métodos conocidos en la técnica (ver ejemplo 3). Las células fueron recolectadas en la fase estacionaria después de 72 horas de crecimiento. Los sobrenadantes fueron recolectados clarificando células a 3,000 g durante 10 minutos. Se revisaron los niveles de expresión mediante detección de inmunomanchado con suero anti-HSA (Kent Laboralories), o como el anticuerpo primario. Se puede obtener la proteína de fusión de albúmina I FNa2 con peso molecular aproximado de 88.6 kDa. Purificación de sobrenadanle de célula S. cerevisiae de levadura. El sobrenadanle de célula que contiene la proteína de fusión de albúmina I FNa2 expresado del I D de construcción #2249 en células S. cerevisiae de levadura, puede ser purificado ya sea a pequeña escala sobre una columna de afinidad de péptido Dyax (ver ejemplo 4) o a gran escala siguiendo cinco pasos: diafiltración, cromatografía de intercambio de aniones uíilizando columna de flujo rápido DEAE-Sefarosa, cromaíografía de interacción hidrofóbica (H I C) utilizando columna de butilo 650S, cromaíografía de iníercambio de cationes utilizando una columna de flujo rápido SP-Sefarosa o una cromatografía de azul-sefarosa, y cromatografía de alto desempeño uíilizando cromaíografía de columna de alio desempeño de Q-Sefarosa (ver ejemplo 4). La proíeína de fusión de albúmina I FNa2 puede eluarse de la columna de flujo rápido DEAE-Sefarosa con 100 a 260 mM NaCI, de la columna de flujo rápido SP-Sefarosa con 160 - 260 mM NaCI, y de la columna de alio desempeño de Q-Sefarosa en 6-7.6 mS/cm. La secuenciación de lerminal-N debe producir la secuencia CDLPQ (SEQ I D NO:98), la cual corresponde a la forma madura de I FNa2. La actividad de ÍFNa2 puede ser ensayada utilizando un ensayo ISRE-SEAP in vitro Método. La proteína de fusión de albúmina I FNa2 codificada mediante el I D de construcción #2249, puede ser probada para actividad en el ensayo ISRE-SEAP tal como se describió previamente en el ejemplo 76. En síníesis, se probaron sobrenadaníes de levadura acondicionados en una dilución de 1 : 1000 con respecto a su capacidad de dirigir la transducción de señal ISRE en la línea de célula reportera ISRE-SEAP/293F. Las células reporteras ISRE- SEAP/293F fueron plaqueadas en 3 x 104 célula/depósito en placas de 96 depósitos, recubiertas con poli-D-lisina el día previo al íraíamienío. Posíeriormeníe las células reporteras fueron incubadas durante 18 a 24 horas aníes de la eliminación de 40 µl para uíilizarse en el ensayo quimiluminesceníe de gen reporíero SEAP (calálogo Roche #1779842). Se uíilizó interferón beta humano recombinante, "rhI FNb" (Biogen), como un control positivo. Resultado. La preparación purificada de I FNa2-HSA, demostró un incremento relaíivamente lineal en el ensayo ISRE-SEAP con respecfo a concenfraciones que fluclúan de 10"1 a 101 ng/ml (ver figura 5) ó 1 0"10 a 10"8 ng/ml (ver figura 6). I nducción in vivo de OAS mediante fusión de interferón alfa codificada por I D de construcción 2249. Método La enzima OAS, sintetasa de 2',5'-oligoadenilato, se activa en el nivel de íranscripción mediante interferón en respuesta a infección antiviral. El efecto de consírucción en interferón puede ser medido obteniendo muestras de sangre de monos traíados y analizando esfas muesíras con respecío a activación de íranscripción de dos OAS mARN , p41 y p69. Se obíuvo un volumen de O.d ml de sangre compleía de cualro animales por grupo en siele diferentes puntos de tiempo día 0, día 1 , día 2, día 4, día 8, día 1 0 y día 14 por animal. Los diversos grupos incluyen control de vehículo, inyección intravenosa de 30 µg/kg HSA-IFN el día 1 , inyección subcuíánea de 30 µg/kg de HSA-I FN el día 1 , inyección subcuíánea de 300 µg/kg de HSA-I FN el día 1 , e inyección subcuíánea de 40 µg/kg de iníerferón alfa (Schering-Plough) como conírol posiíivo los días 1 , 3 y 5. Los niveles de las íranscripciones de mARN p41 y p69 fueron deíerminadas medianíe PCR cuaníiíalivo de íiempo real (Taqman), uíilizando sondas específicas para p41 -OAS y p69-OAS. Se cuantificaron los niveles de mARN OAS en forma relativa a el conírol endógeno de ARN ribosomal 18S. La fusión de albúmina codificada para construcción 2249, puede someterse a experimeníación similar. Resultados Se observó un incremento significativo en niveles de transcripción de mARN para OAS tanto p41 como p69 en monos fratados con interferón-HSA en contraste con monos trafados con I FNa (ver figura 7 para dar p41 ). El efecto duró casi 10 días. EJEMPLO 79: I ndicaciones para proteínas de fusión de albúmina I FNa2. La proteína de fusión de albúmina I FN alfa (incluyendo pero sin limitarse a, las codificadas por las construcciones 2249, 2343, 2410, 2366, 2382, y 2381 ) pueden ser utilizadas para íraíar, prevenir, disminuir y/o deíectar esclerosis múltiple. Otras indicaciones incluyen, pero no se limitan a, infecciones virales que incluyen Síndrome Respiratorio Agudo Severo (SARS) y otras infecciones de coronavirus; fibroviruses, incluyendo pero sin limiíarse a, viruses de Ébola y viruses Marburg; Arenaviruses, que incluyen pero no se limitan a, virus Pichende, virus Lassa, virus Junin, virus Machupo, virus Guanarito; y virus de coriomeningitis linfocítica (LCMV); Bunyaviruses, incluyendo pero sin limitarse a virus Punía toro, virus de fiebre hemorrágica Crimean-Congo, viruses de fiebre de mosca de arena, virus de fiebre Rift Valley, virus La Crosse, y hantaviruses; flaviviruses, incluyendo pero sin limitarse a, fiebre amarilla, virus Banzi, virus West Nile, viruses Dengue, virus de encefalitis japonesa, encefalitis por garrapata, fiebre hemorrágica Omsk y virus de enfermedad de Kyasanur Forest; Togaviruses, incluyendo pero sin limitarse a, viruses de encefalitis equina de Venezuela, este, y oeste, virus Ross River, y virus de Rubella; viruses Orthopox, incluyendo pero sin limiíarse a, Vacuna, Cowpox, Smallpox, y Monkeypox; Hiperviruses; FluA/B; virus Sincicial respiratorio (RSV); parainfluenza; paperas; rinoviruses; adenoviruses; virus Semliki Forest; fiebres hemorrágicas virales; Rhabdoviruses; Paramyxoviruses, incluyendo pero sin limitarse a, virus Nipah y virus Hendra; y otros ageníes virales identificados por los Centros Norteamericanos de Conírol y Prevención de Enfermedades como agentes de enfermedad de alta prioridad (por ejemplo, ageníes de Categoría A, B, y C; ver por ejemplo las Publicaciones de Moran , Emerg . Med. Clin. North. Am. 2002; 20(2):31 1 -30 y Darling y Asociados, Emerg . Med . Clin. North Am. 2002:20(2):273-309). Preferentemeníe, la proíeína de fusión de albúmina-I FNa o proíeína de fusión hibrida IFN, se adminsitra en combinación con un antagonista CCR5, en asociación adicional con al menos ya sea ribavirina, IL-2, IL-12, pentafusida sola o en combinación con una lerapia de fármaco anli-VIH, por ejemplo, HAART, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de infecciones VIH-1, HCV, o co-infecciones de VIH-1 y HCV en el tratamiento- na?ve, así como en pacientes pediátricos y adultos con experiencia en el tratamienío. EJEMPLO 80: ID de consírucción #3691. BNP-HSA. generación. La ID de construcción #3691, pC4:SPCON.BNP1-32/HSA, comprende ADN que codifica una proteína de fusión de albúmina BNP la cual tiene una secuencia líder de consenso, secrecón, seguida de péptido BNP procesado, activo (aminoácidos 1-32) fusionados al término-amino de la forma madura de HSA en el vector de expresión de mamífero pC4. Clonación de cADN BNP para construcción 3691 El polinucleótido que codifica BNP fue amplificado mediante PCR utilizando cebadores BNP-1 y BNP-2, que se describe más adelante, cortados con Bam Hl/Cla I, y ligados en Bam Hl/CIa I, corte pC4:HSA, dando como resultado la ID de construcción #3691. La ID de construcción #3691 codifica una proteína de fusión de albúmina que contiene una secuencia líder de consenso (SEQ ID NO:111) y la forma activa, procesada de BNP, seguido de proteína HSA madura (ver SEQ ID NO:321 para construcción 3691 en la íabla 2). Se siníetizaron dos oligonucleótidos adecuados para amplificación PCR del polinucleótido que codifica la forma activa, procesada de BNP, BNP-1 , y BNP-2. BN P-1 : 5'- GAGCGCGGATCCAAGCTTCCGCCATCATGTGGTGGCGCCTGTGGT GG CTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGTGGCCCATGGTGTGGGCCAGC CCCAAGCTGGTGCAAGG-3' (SEQ I D NO:463) BN P-2: 5'- AGTCCCATCGATGAGCAACCTCACTCTTGTGTGCATCATGCCGCCT CA GCACTTTGC-3' (SEQ I D NO:464). BNP-1 incorpora un sitio de clonación Bam Hl (subrayado), polinucleóíidos que codifican una secuencia líder de consenso (SEQ I D NO: 1 1 1 ) (letras cursivas), y polinucleótidos que codifican la secuencia de los primeros siete aminoácidos de BN P (con letras negritas). En BNP-2, la secuencia subrayada es un sitio Cía I, y los polinucleóíidos que le siguen coníienen el complemento inverso de ADN que codifica los últimos 6 aminoácidos de BNP (letras negritas) y los primeros 10 aminoácidos de la proteína HSA madura. Uíilizando esíos dos cebadores, se amplificó mediante PCR la proteína BNP. Las temperaturas y tiempos de endurecimiento y exlensión, deben ser determinadas en forma empírica para cada par de cebadores específicos y plantilla. El producto de PCR se purificó (por ejemplo, utilizando Wizard PCR Preps DNA Purification System (Promega Corp.)), y posteriormente se digirió con Bam Hl y Cía I. Después de purificación adicional del fragmento Bam Hl-Cla I mediante elecíroforesis de gel, el producto se clonó pC4: HSA digerido con Bam Hi/Cla I para producir la I D de construcción #3691 . La consírucción de expresión se verificó mediante secuencia. Expresión v purificación de I D de construcción 3691 Expresión en células 293F La I D de construcción #3691 , pC4:SPCON . BNP 1 -32/HSA, se transfecíó en células 293F a íravés de méíodos conocidos en la lécnica (ver ejemplo 6). Purificación de sobrenadaníe de célula 293F. Se recolecíaron dos litros de sobrenadante 3 días después de la íransfección . La proteína recombinante se capfuró a íravés de 5 ml de columna Blue Sepharose CL-6B (Amersham Biosciences, Piscaíaway, NJ , EUA), y se eluyó medianíe 2 M NaCl . El material se enlazó a una columna HiPrep 16/10 Fenilo FF (sub superior) y se eluyó mediante 20 mM Mes, pH 6.7. BNP-HSA se purificó en forma adicional mediante cromatografía de columna de hidroxiapatiía en gradiente regulador de fosfato de sodio (0-20 mS/cm en 200 ml) en pH 6.8. El producto final se intercambió en PBS pH 7.2 mediante una columna de exíracción de sal HiPrep 26/10 (Amersham Biosciences). La acíividad de BNP-HSA puede ser ensayada utilizando un ensayo NPR-A/cGM P in vitro. El receptor-A de pépíido naíriuréíico (N PR-A) es el receptor de señalización para BNP, y por lo tanlo, es responsable de la mayor parle de los efecíos biológicos de BNP. La bioacíividad de BNP es íransmitida por el dominio de ciclasa de guanililo NPR-A que convierte GTP en cGMP al momenlo de la acfivación. Un ensayo conveniente para actividad BN P , es medir la estimulación BNP de una línea de célula 293F que sobreexpresa en forma estable NPR-A. La producción cGMP en las células después de la exposición a BNP, puede ser medida medianíe cGMP ELISA. Método de clasificación de clones estables NPR-A 293F. Se conectó la esíructura de lecíura abiería de NPP-A humana en el vecíor de expresión pcDNA3.1 (I nviírogen). Las células 293F se transfectaron en forma estable con el ADN de plásmido a través del método de lipofectamina y se seleccionaron medianíe 0.8 µg/ml G41 8. Se clasificaron clones estables 293F/N PR-A para la mejor respuesta a BN P recombinante. Medida de acíivación cGMP. La activación cGMP mediante BNP, se llevó a cabo en células 293F/NPR-A y se midió medianíe un equipo de ensayo fluorescenle cíclico-GMP CatchPoint (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, EUA). En síníesis, se lavaron 50, 000 células/depósiío de células 293F/NPR-A cultivadas en una placa de 96 depósitos, en 80 µl de regulador de preestimulación (regulador de bicarbonaío Krebs-Ringer con glucosa 10 mM , pH 7.4, bicarbonato de sodio 15 nM , y 3-isobutil-1 -metilxantina 0.75 mM). Se agregó BN P-HSA ó BN P recombinaníe en 40 µl de regulador de preestimulación a las células a una temperatura de 37°C durante 1 0 minutos. Las células se Usaron con 40 µl de regulador de lisis durante 10 minuíos con agiíación. Se cuaníificaron las cantidades de cGMP en Usados, según la instrucción del fabricante. Resultado Se deferminó la relación de respuesta a la dosis de BNP-HSA y BN P recombinante (ver figura 8). Las actividades máximas de la construcción I D #3691 y BN P recombinante fueron similares (1 .63 + 0.016 versus 1 .80 + 0.016 pm, respectivamente), con valores EC60 de 28.4 + 1 .2, y 0.46 + 1 .1 nM, respectivamente. BN P-HSA disminuye la presión sanguínea in vivo Método. BNP reduce la presión sanguínea mediante vasodilaíación directa, así como mediante supresión de sisíemas de renina/angioíensina/endoíelina/aldosíerona. Se probó la capacidad de BNP-HSA para disminuir la presión sanguínea aríerial en íres ratas macho de 3 meses de edad espontáneamente hipertensas compradas en Taconic (Germaníown, NY, EUA). Las raías esponláneameníe hiperlensas son hiperíensas en forma genética con la generación de presión sanguínea alta después de 3 meses de edad. Se reconstiluyó BNP-HSA ó BNP recombinante en 0.3 ce PBS por rata. Los fármacos fueron suminislrados a íravés de inyección en la vena de la cola. Se regisíraron las presiones sanguíneas sislólica y diasíólica mediante el método de manguito de presión-cola uíilizando el Sisíema XBP-1000 (Kenf Scientific, Torrington, CT, EUA). Para cada uno de los puntos de daíos de presión sanguínea, se tomaron y se promediaron de 4 a 5 lecturas consecuíivas. Se calculó la presión arterial promedio (MAP) como 1 /3 presión sistólica más 2/3 presión diastólica. Para determinación de respuesía de dosis, se midieron las presiones sanguíneas 20 horas después de la adminisíración de pC4:SPCON . BNP 1 -32/HSA, en dosis de 0.5, 2, 6 y 18 nmol/kg. Resulíado. La presión sisíóüca íípica de las ralas esponfáneamente hipertensas fue de 180-200 mmHg antes de la dosificación. Un solo bolo de 6 nmol/kg BNP-HSA suministrado a íravés de la vena de la cola en inyección infravenosa, disminuyó tanto la presión sistólica como diastólica, lo cual abarcó más de 30 mmHg de la reducción de presión arterial promedio (MAP). La presión sanguínea disminuida fue estable y continuó duraníe 1 día y posteriormeníe regresó gradualmente a la línea de base duraníe varios días (ver figura 9). En conlrasíe, debido a su despeje insíanláneo, un solo bolo de 6 nmol/kg de BNP recombinante, produjo únicamente una disminución MAP muy temporal de aproximadamente - 15 mmHg. Además, la respuesta a la dosis 20 horas después de la inyección de un bolo de BN P-HSA, se determinó en cuatro raías hiperíensas esponíáneameníe. 0.5 nmol/kg de BN P-HSA tuvo un promedio de una reducción de 7 mmHg MAP, en tanío que 6 nmol/kg de BNP-HSA luvo un promedio de reducción de 30 mmHg MAP, y una alta dosis de 18 nmol/kg de BNP-HSA, únicamente disminuyó ligeramente la presión sanguínea más de 6 nmol/kg. I nducción in vivo de cGM P de plasma medianíe BNP-HSA Méfodo. La activación cGMP intracelular medianíe BNP, da como resultado su liberación de la célula a la circulación. El nivel cGMP de plasma se correlaciona con fisiología cardiovascular y renal inducida por BNP. El cGMP de plasma ha sido utilizado como un biomarcador para acción BNP in vivo. Para probar la inducción de cGM P de plasma medianíe BNP-HSA in vivo, rafones C57/BL6 macho de 1 1 a 12 semanas de edad recibieron un solo bolo de BNP recombinante ó BNP-HSA en una dosis de 6 nmol/kg a través de la vena de la cola. El plasma se preparó de sangrados de la cola en puntos de íiempo de 5, 10, 20, 40, y 80 minuíos para el grupo de dosificación BN P recombinante y además en 640, 1440, 2880, y 5760 minutos para el grupo BN P-HSA. Las muesíras de plasma de los raíones íraíados con PBS como el control de vehículo, se recolectaron en los punios de íiempo 0. Se deíerminaron los niveles cGMP medíanle equipo de ensayo fluoresceníe cGMP-cíclico CaíchPoint de acuerdo con la instrucción del fabricante. Resultado. Después de un solo bolo intravenoso de 6 nmol/kg de BNP recombinanfe ó BNP-HSA, se incrementaron los niveles cGM P de plasma pico sobre la línea de base de 3.9 a 5.6 veces, respectivamente (ver figura 1 0). Además, el decaimiento exponencial de una fase de la vida promedio de cGMP después de trafamiento con BNP recombinante fue de 16 minutos (10 a 42 minutos, 95% Cl), aunque el decaimiento exponencial de una fase de vida promedio de cGM P después de administración BN P-HSA fue de 1 , 538 minutos ( 1017 a 3153 minutos, 95% Cl). Análisis farmacocinético in vivo de fusión de albúmina BNP codificada mediante I D de construcción 3691 Método. Los ratones C57/BL6 macho de 1 1 a 12 semanas de edad (obtenidos en Ace Animáis, Boyertown, PA, EUA) pesaron 25.1 + 0.12 g al momenío del esíudio. Todos los animales fueron dosificados en un volumen de 10 ml/kg de peso corporal. Se inyectaron animales con predosis con PBS. Se inyectó BNP recombinaníe en forma intravenosa en la cola o en forma subcutánea en la región escapular media. El análisis farmacocinético se llevó a cabo en los siguientes grupos: Tabla 8 La sangre se muestreó de la vena cava inferior, se puso en un micromanchador recubierío con EDTA, y se almacenó en hielo. Las muesíras se cenlrifugaron en un microcenírífugo a 14,000 rpm (16,000 xg) durante 10 minutos a temperaíura ambienfe. El plasma se transfirió en tubos de acumulación y se almacenaron a una íemperaíura de -80°C. Se deferminaron las concentraciones BNP-HSA en muestras de plasma ufilizando equipo BNP EIA (Phoenix Pharmaceutical, Belmont, CA, EUA). Se generaron curvas estándar al mismo íiempo en la misma placa con muestras de prueba. El límite de detección fue de 0.11 ng/ml para BNP recombinante. El ensayo deíecla BNP recombinante y dosis que no reaccionan en forma cruzada con BNP de ratón. El análisis se llevó a cabo medianíe métodos sin compartimento (WinNonlin; versión 4.1; Pharsight Corp., Mountain View, CA, EUA). La concentración de plasma promedio en cada íiempo se uíilizó en el análisis. Se utilizó un mélodo írapezoidal ascendeníe lineal/descendenle log para calcular el AUC0-t. La exfrapolación para afinidad AUC0-» se llevó a cabo dividiendo la última conceníración observada a íravés de la conslaníe de rango de eliminación de íerminal. Los datos se pesaron de manera uniforme para estos análisis. Resulíado. La conceníración de línea de base promedio de BNP-HSA en plasma, íal como se deíecló en muesíras de dosis previa, fue de aproximadamente 0.081 -0.095 µg/ml. Después de una sola inyección intravenosa subcuíánea, BNP-HSA íuvo vidas promedio de eliminación terminal de 1 1 .2 (suministro iníravenoso) 19.3 horas (suministro subcutáneo) en tanto que la vida promedio de BNP recombinante en raíones fue de 3.1 minutos. El análisis sin compartimenío de BNP-HSA reveló que BN P-HSA íuvo las siguienles caracíeríslicas: Tabla 9 Cmax, conceníración de plasma pico del fármaco; ímax, íiempo de concenlración de plasma máximo; AUC0-~, área bajo la curva de íiempo de concentración de fármaco de plasma del tiempo 0 al tiempo infinito; t1/2? erm. vida promedio de fase de eliminación terminal; CL, despeje después de dosificación intravenosa; CL/F despeje aparente después de dosificación subcutánea; Vss, volumen de distribución en estado consíaníe después de dosificación iníravenosa; Vz, volumen de disíribución durante la fase terminal después de dosificación intravenosa; Vz/F, volumen de distribución durante la fase terminal después de dosificación subcutánea; NA, no aplicable. Se seleccionaron cinco punios en la fase terminal del perfil intravenoso y cuatro puntos en la fase terminal del perfil subcutáneo para el cálculo de vida promedio terminal. El AUC resultante duranfe esía fase íerminal, fue de aproximadameníe 10% del AUC íotal para los perfiles intravenoso y subcutáneo, respectivameníe. Este se comparó únicamente con 2% y 4% del AUC íotal para el perfil intravenoso y subcutáneo, respectivamenle, cuando se seleccionaron los últimos tres punios para el cálculo de vida promedio terminal. EJEM PLO 81 : I D de Construcción #3618. BNP(2X)-HSA. generación La I D de conslrucción #3618, pC4:SPCON . BNP 1 -32(2x)/HSA, comprende ADN que codifica una proleína de fusión de albúmina BNP la cual tiene una secuencia líder de consenso, secreten, seguido de dos péptidos BNP acíivos, procesados (aminoácidos 1 -32) en tándem fusionados al término-amino de la forma madura de HSA en el vector de expresión de mamífero pC4. Clonación de cADN BN P para construcción 3618 Los polinucleólidos que codifican la porción BNP duplicada fueron primero amplificados mediante PCR a partir de la forma activa procesada de BN P (aminoácidos 1 -32) utilizando los cebadores BN P-1 , BNP-2, BN P-3, y BN P-4, tal como se describirá más adelanfe, para crear dos fragmentos A y B. Después de la amplificación, se mezclaron dos fragmentos purificados (A y B) en una cantidad molar igual y se utilizó como una plantilla PCR y se amplificó con cebadores BNP-5 y BNP-6, tal como se describe más adelante. Posteriormente se digirió el inserto BNP(2X), con BamHI y Clal y se ligó en veclor pC4HSA digerido previamente con BamH I y Clal que da como resultado la construcción 3618. La ID de construcción #3618 codifica una proíeína de fusión de albúmina que contiene una secuencia líder de consenso, secrecón (SEQ ID NO: 1 1 1 ) y dos copias tándem de la forma activa, procesada de BNP, seguido de proteína HSA madura (ver SEQ I D NO:483 para consírucción 3618 en íabla 2). Se sinfetizaron primero cuatro oligonucleótidos adecuados para amplificación PCR de los polinucleótidos que codifican dos fragmentos de proteína BN P: BNP-1 : 5'- AGCCCCAAGATGGTGCAAGGGTCTGGCTGCTTTGGGAGGAAGATG GA CCGGATCAGCTCCTCCAGTGGCTGGGCT GCAAAGTGCTGAGGCGGCAT-3' (SEQ ID NO:486) BNP-2: d'- CCTTGCACCATCTTGGGGCTATGCCGCCTCAGCACTTTGC-3' (SEQ I D NO:487) BNP-3: 5'- GCAAAGTGCTGAGGCGGCATAGCCCCAAGATGGTGCAAGG-3' (SEQ I D NO:488) BNP-4: 5'- AGTCCCATCGATGAGCAACCTCACTCTTGTGTGCATCATGCCGCCT C AGCACTTTGC-3' (SEQ I D NO:489). Utilizando los grupos de cebador BN P-1 /BN P-2 y BN P-3/BNP-4, se amplificados mediante PCR dos fragmentos de proteínas BNP (A y B, respectivameníe). Las íemperaíuras y íiempos de endurecimienío y exíensión deben ser determinadas en forma empírica para cada par de cebador específico y plantilla. Se purificaron los fragmentos A y B (por ejemplo, utilizando Wizard PCR Preps DNA Purification Syslem (Promega Corp.)), mezclados en canlidades molares iguales y se utilizaron como una plantilla para amplificación PCR utilizando dos oligonucleótidos adicionales adecuados para amplificación PCR, BNP-d y BN P-6: BNP-5: d'-GAGCGCGGATCCAAGCTTCCGCCATC TGTGGTGGCGCCTGTGGT GG CTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGTGGCCCA TGGTGTGGGCCAGC CCCAAGCTGGTGCAAGG-3' (SEQ I D NO:463) BNP-6: 5'-AGTCCCATCGATGAGCAACCTCACTCTTGTGTGCATCATGCCGCCT CA GCACTTTGC-3' (SEQ I D NO:464). BNP-5 incorpora un sitio de clonación Bam Hl (subrayado), polinucleóíidos que codifican una secuencia líder de consenso (SEQ I D NO: 1 1 1 ) (en cursivas) y polinucleólidos que codifican la secuencia de los primeros 7 aminoácidos de BN P (leíras negritas).

El BNP-6, la secuencia subrayada es un sitio Cía I, y los polinucleótidos que siguen contienen el complemento inverso de ADN que codifica los últimos 6 aminoácidos de BNP (en letras negritas) y los primeros 10 aminoácidos de la proteína HSA madura. Utilizando esíos dos cebadores, se amplificaron mediante PCR una secuencia líder de consenso y dos copias tándem de los péptidos BNP activos. Las íemperaíuras y íiempos de endurecimiento y extensión deben ser deíerminadas en forma empírica por cada par de cebador y plantilla específicos. El producto PCR fue purificado (por ejemplo, utilizando Wizard PCR Preps DNA Purificaíion Sysíem (Promega Corp.)) y posteriormenfe digerido con Bam H l y Cía I . Después de purificación adicional del fragmento Bam Hl-Cla I mediante electroforesis de gel, el producto se clonó en pC4: HSA digerido con pC4: HSA para producir la ID de construcción #3618. La construcción de expresión se verificó mediante secuencia. Expresión y purificación de I D de construcción #3618 Expresión en células 293F. Se transfectó la I D de construcción #3618, pC4:SPCON. BNP1 -32(2x)/HSA, en células 293F a través de métodos conocidos en la técnica (ver ejemplo 6). Purificación de sobrenadante de célula 293F. pC4:SPCON . BNP1 -32(2x)/HSA codificado mediante I D de construcción #3618 se purificó tal como se describió previamente en el ejemplo 80 bajo el encabezado de subsección "purificación a paríir de sobrenadaníe de célula 203F". La actividad de BNP(2X)-HSA puede ser ensayada uíilizando un ensayo BPR-A/cGMP in vitro La actividad de BNP(2X)-HSA codificada por la ID de construcción #3618, puede ser ensayada in viíro uíilizando un ensayo NPR-A/cGMP íal como se describió previameníe en el ejemplo 80 bajo el encabezado de sección, "la acíividad de BNP-HSA puede ser ensayada uíilizando un ensayo NPR-A/cGMP in viíro", y "método para clasificar clones estables NPR-A 203F". Resultado Se determinó la relación de respuesfa-dosis de BNP(2X)-HSA y BNP recombinante (ver figura 8). Las actividades máximas de BNP(2X)-HSA codificado por ID de construcción #3618 y BNP recombinante fueron similares (1.68 + 0.021, versus 1.80 +.0.016 pm, respectivamente), con valores ECdO de 9.8 + 1.1 y 1.46 +_ 1.1 nM respectivamente. La descripción completa de cada documento mencionado (incluyendo palentes, soliciíudes de patente, publicaciones de paíente, artículos de revisías, resúmenes, manuales de laboralorio, libros, u oirás descripciones) así como información disponible a través de los identificadores específicos de bases de datos tales como GenBank, GenSeq ó el Registro CAS, referidos en la presente solicitud, están incorporados en su totalidad a la presente invención como referencia. Además, la especificación y listado de secuencias de cada una de las siguientes solicitudes norteamericanas están incorporados como referencia a la presente invención en su totalidad: Solicitud Noríeamericana No. 60/542,274, preseníada el 4 de febrero de 2005; Soliciíud Norfeamericana No. 60/549,901 , presentada el 5 de mayo de 2004; Solicitud Norteamericana No. 60/566,906, preseníada el 29 de marzo de 2004, y Solicitud Norteamericana No. 60/636,603, presentada el 17 de diciembre del 2004. Archivo del Soliciíante Número de Referencia PF612PCT Número de Solicitud Internacional : No Asignado I NDI CACIONES RELACIONADOS CON EL MATERIAL BIOLÓGICO DEPOSITADO (Regla PCT 13bis) A. Las indicaciones hechas a continuación se refieren al material biológico depositado al que nos referimos en la Tabla 3, página 25 de la descripción en el original. B. IDENTIFICACIÓN DEL DEPÓSITO: Nombre del Depositario: American Type Culture Collecfion Domicilio del Deposiíario: 10801 Universiíy Boulevard Manassas, Virginia 201 1 0-2209 Estados Unidos de América Los depósitos adicionales son ideníificados en las hojas adicionales: CANADÁ El soliciíaníe solicita que, hasta que, ya sea haya emitido la paíeníe Canadiense sobre las bases de una solicifud o la solicitud haya sido rechazada, o sea abandonada ya no sujeta a la reinstalación, o que sea retirada, el Comisionado de Paíenfes solameníe auforice el aprovisionamiento de una muestra del maíerial biológico depositado al que nos referimos en la solicitud a un experto independiente designado por el Comisionado, el solicitante debe, mediante una declaración escrita, informar a la Oficina I nternacional lo correspondieníe anles de lerminar las preparaciones lécnicas para la publicación de la solicitud internacional. NORUEGA El solicitaníe por medio del preseníe soliciía que la solicitud permanezca abierta a la inspección pública (por la Oficina de Patentes Noruega), o la por parte de la Oficina de Patentes Noruega haya decidido finalmente haber encontrado abierto para la inspección, el aprovisionamiento de una muestra solamente debe de ser efectuado a un experto en la íécnica. La soliciíud a esfe efecto deberá ser presentada por el solicitante en la Oficina de Patentes Noruega no después del momento en que se hizo disponible la soliciíud al público bajo las secciones 22 y 33(3) de la Ley de Pateníes Noruega. Si dicha solicitud ha sido preseníada por el solicitanle, cualquier solicitud hecha por una tercera parte para proporcionar una muestra deberá indicar el experto que será utilizado. Ese experto puede ser cualquier persona que se encuentra en la lista de expertos organizados preparada por la Oficina de Patenles Noruega o cualquier persona aprobada por el soliciíanfe en el caso individual. AUSTRALIA El solicitaníe por medio de este escrito notifica que el aprovisionamiento de una muestra de un microorganismo debe ser solameníe efecluado aníes de la concesión de una pateníe, anfes de la prórroga, rechazo o retiro de la solicitud, a una persona que sea un experío en la técnica que no tenga interés en la invención (Regla 3.25(3) de los Reglamenfos de Pafeníes Australianas). FINLANDIA El solicitante por medio de este escriío solicita que, hasta que haya permanecido abierta la soliciíud a la inspección pública (por el Consejo Nacional de Palentes y Reglamenlos), o haya decidido finalmente la Comisión Nacional de Patentes o Reglamentos sin haber permanecido abiería a la inspección pública, el aprovisionamiento de una muestra solamente será efecluado a un experto en la técnica.

REINO UNIDO El solicitante por medio de este escrito solicita que el aprovisionamiento de una muestra de un microorganismo debe solamente ponerse disponible a un experto. La solicitud a este efecto debe ser presentada por el solicitante en la Oficina I nternacional antes de terminar las preparaciones técnicas para la publicación internacional de la solicitud. DINAMARCA El solicitante por medio de este escrito solicita que, hasta que haya permanecido abierta la solicitud a la inspección pública (por la Oficina Danesa de Patentes), o haya decidido finalmente la oficina Danesa de Patenles sin que hubiera permanecido abierta a la inspección pública, el aprovisionamiento de una muestra solamente deberá ser efectuado a un experto en la técnica. La solicitud para este efecto deberá ser presentada por el solicitante en la Oficina de Patentes Danesa no después del momento en que se puso disponible la solicitud al público de acuerdo con las Secciones 22 y 33(3) de la Ley de Patentes Danesa. Si dicha solicitud ha sido presentada por el solicitante, cualquier solicitud hecha por una tercera parte para el aprovisionamiento de una muestra, deberá de indicar el experto que la usará. Este experto puede ser cualquier persona que se encuentra en una lista de expertos reconocidos preparada por la Oficina de Pateníes Danesa o cualquier persona por el solicilaníe en el caso individual.

SUECIA El solicitaníe por medio de esíe escrifo solicita que, hasta que haya permanecido abiería la soliciíud a la inspección pública (por la Oficina de Pateníes Sueca), o haya decidido finalmente la Oficina de Patentes Sueca sin haber permanecido abierta a la inspección pública, el aprovisionamiento de una muestra solamente será efectuado a un experto en la técnica. La solicitud para este efecto deberá de ser presentada por el solicitante en la Oficina I nternacional antes de la expiración de 16 meses a partir de la fecha de prioridad (preferentemente en la Forma PCT/RO/134 reproducida en el anexo Z del Volumen I de la Guía de Solicitanles de Paíentes PCT). Si dicha soliciíud ha sido preseníada por el soliciíanle, cualquier solicilud hecha por una lercera paríe para el aprovisionamienío de una muestra debe indicar el experto que la ufilizará. Esíe experío puede ser cualquier persona que se encuenlra en una Usía de expertos reconocidos preparada por la Oficina de Patentes Sueca o cualquier persona aprobada por el solicitante en el caso individual. PAÍSES BAJOS El solicitante solicita por medio del presente escrito, que hasta la fecha de concesión de una patente de los Países Bajos o hasía la fecha en la cual sea rechazada o reíirada o prorrogada la soliciíud, el microorganismo debe de ponerse disponible de acuerdo a lo esíipulado en la sección 31 F(1 ) de los Reglamentos de Patentes solamente mediante la emisión de una muestra a un experto. La solicitud para este efecto debe ser proporcionada por el solicitante en la Oficina de Propiedad I ndustrial de los Países Bajos antes de la fecha en la cual se hace disponible la solicitud al público de acuerdo con la Sección 22C o la Sección 25 de la Ley de Paíenles del Reino de los Países Bajos, en la primera fecha que ocurra primero.

Claims

R E I V I N D I C A C I O N E S 1. Una proíeína de fusión de albúmina que comprende un miembro seleccionado del grupo que consiste en: (a) una proteína Terapéuíica:X y una albúmina que d comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:1. (b) una proíeína Terapéuíica:X y un fragmenío o una varianíe de ia secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:1, en donde el fragmenío variante tiene acíividad de albúmina; (c) una proleína Terapéuíica:X y un fragmento o variante 0 de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:1, en donde el fragmento o variante tiene actividad de albúmina, y además en donde la actividad de albúmina es la capacidad de prolongar la vida en anaquel de la proteína Terapéutica:X en comparación con la vida en anaquel de la proteína Terapéutica:X en un estado no fusionado; (d) una proleína Terapéuíica:X y un fragmenío o una varianle de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:1, en donde el fragmento o variante íiene aclividad de albúmina, y además en donde el fragmento o variante comprende la secuencia de aminoácidos de los aminoácidos 1-387 de la SEQ ID NO:1; (e) un fragmento o variante de una proíeína Terapéutica:X y una albúmina que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:1, en donde el fragmento o variante tiene una actividad biológica de la proteína Terapéutica:X; (f) una proteína Terapéutica:X y un fragmento o una variante de la misma, y albúmina o un fragmento o variante de la misma, del (a) al (e), en donde la proteína Terapéutica:X o fragmento o variante de la misma, se fusiona al término-N de albúmina, o al término-N del fragmento o variante de albúmina; (g) una proteína Terapéutica:X y un fragmento o una varianle de la misma, y albúmina o fragmenío o varianíe de la misma, del (a) al (e), en donde la proleína Terapéutica:X o fragmenío o varianíe de la misma, se fusiona al término-C de albúmina, o al término-C del fragmento o variante de albúmina; (h) una proteína Terapéutica:X y un fragmento o una variante de la misma, y albúmina o fragmento o variante de la misma, del (a) al (e), en donde la proteína Terapéutica:X o fragmento o variante de la misma, se fusiona al término-N de albúmina, y al término-C de albúmina, y al lérmino-N y al término-C del fragmento o variante de albúmina; (i) una proteína Terapéutica:X y un fragmento o una variante de la misma, y albúmina, o fragmento o variante de la misma, del (a) al (e), que comprende la primera proteína Terapéutica:X, o fragmento o variante de la misma, y una segunda proteína Terapéutica:X, o fragmento o variante de la misma, en donde la primera proteína Terapéutica:X o fragmenlo o variante de la misma, es diferente a la segunda proteína Terapéutica:X o fragmento o variante de la misma; (j) una proteína Terapéutica:X y un fragmento o una variante de la misma, y albúmina o fragmento o variante de la misma, del (a) ai (i), en donde la proteína Terapéutica:X o fragmento o variante de la misma, se separa de la albúmina o el fragmento o variante de albúmina a íravés de un enlazador; y (k) una proíeína Terapéutica:X y un fragmento o una variante de la misma, y albúmina, o un fragmento o variante de la misma del (a) al (j), en donde la proteína de fusión de albúmina tiene la siguiente fórmula: R1 -L-R2; R2-L-R1 ; ó R1 -L-R2-L-R1 , y además en donde R1 es una proteína Terapéutica:X, o un fragmento o variante del mismo, L es un enlazador de péptido, y R2 es albúmina que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ I D NO: 1 ó un fragmento o variante de albúmina. 2. La proíeína de fusión de albúmina de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque la vida en anaquel o estabilidad de plasma de la proíeína de fusión de albúmina es mayor a la vida en anaquel o estabilidad de plasma de la proteína Terapéutica:X o fragmento o variante de la misma, en un esíado no fusionado. 3. La proteína de fusión de albúmina de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque la actividad biológica in vitro de la proteína Terapéulica:X, o fragmento o variante de la misma, fusionará una albúmina, o fragmento o variante de la misma, es mayor al de la aclividad biológica in vitro de la proteína Terapéutica:X o fragmento o variante del mismo, en un estado no fusionado. 4. La profeína de fusión de albúmina de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque la actividad biológica in vivo de la proteína Terapéutica:X o fragmenlo o variante del mismo, fusionará albúmina, o fragmento o variante de la misma, es mayor a la de la actividad biológica in vivo de la proteína Terapéutica:X o fragmento o variante de la misma en un estado no fusionado. 5. Una proteína de fusión de albúmina que comprende una proteína Terapéutica:X, o fragmento o variante del mismo, insertado en una albúmina o fragmento o variante del mismo, que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1 o un fragmento o varianíe de la misma. 6. Una proíeína de fusión de albúmina que comprende una proteína Terapéutica:X, o fragmento o variante del mismo, insertado en una albúmina o fragmento o variante del mismo, que comprende la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: (a) aminoácidos 54 a 61 de la SEQ I D NO: 1 ; (b) aminoácidos 76 a 89 de la SEQ I D NO: 1 ; (c) aminoácidos 92 a 100 de la SEQ I D NO: 1 ; (d) aminoácidos 170 a 176 de la SEQ I D NO: 1 ; (e) aminoácidos 247 a 252 de la SEQ I D NO: 1 ; (f) aminoácidos 266 a 277 de la SEQ I D NO: 1 ; (g) aminoácidos 280 a 288 de la SEQ ID NO: 1 ; (h) aminoácidos 362 a 368 de la SEQ I D NO: 1 ; (i) aminoácidos 439 a 447 de la SEQ I D NO: 1 ; (j) aminoácidos 462 a 475 de la SEQ I D NO: 1 ; (k) aminoácidos 478 a 486 de la SEQ I D NO: 1 ; y (I) aminoácidos 560 a 566 de la SEQ I D NO: 1 . 7. La proleína de fusión de albúmina de conformidad con la reivindicación 5, caraclerizada porque la proteína de fusión de albúmina comprende una parte de la albúmina suficiente para prolongar la vida en anaquel o estabilidad de plasma de la proteína Terapéuíica:X o fragmenío o varianíe del mismo, tal como se compara con la vida en anaquel o estabilidad de plasma de la proteína Terapéutica:X o fragmento o variante de la misma, en un estado no fusionado. 8. La proteína de fusión de albúmina de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque la proteína de fusión de albúmina comprende una parte de albúmina suficiente para prolongar la vida en anaquel o esíabilidad de plasma de la proíeína Terapéuíica:X, o fragmento o variante del mismo, tal como se compara con la vida en anaquel o esíabilidad de plasma de la proíeína Terapéutica:X o fragmento o variante de la misma en un estado no fusionado. 9. La proleína de fusión de albúmina de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque la proteína de fusión de albúmina comprende una parte de albúmina suficiente para prolongar la actividad biológica in vitro de la proteína Terapéufica:X, o fragmenío o varianíe del mismo, o fusionada a al búmina tal como se compara con la actividad biológica in vitro de la proteína Terapéutica:X o fragmento o variante de la misma en u n estado no fusionado. 1 0. La proteína de fusión de albúmina de conformidad con la reivi ndicación 6 , caracterizada porque la proteína de fusión de albúmi na comprende u na parte de al búm i na suficiente para prolongar la actividad biológica in vitro de la proteína Terapéutica:X, o fragmento o variante del mismo, o fusionada a albúmi na tal como se compara con la actividad biológica in vitro de la proteína Terapéuíica:X o fragmento o variante de la misma en un esíado no fusionado. 1 1 . La proteína de fusión de albúmina de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque la proteína de fusión de albú mina comprende una parte de albúmina suficiente para prolongar la actividad biológica in vivo de la proteína Terapéutica:X, o fragmento o variante del mismo, o fusionada a al búmina tal como se compara con la actividad biológ ica in vivo de la proíeína Terapéuíica:X o fragmento o variante de la misma en un estado no fusionado. 1 2. La proteína de fusión de albú mina de conformidad con la reivind icación 6, caracterizada porque la proíeína de fusión de albúmina comprende una paríe de albúmina suficiente para prolongar la actividad biológica i n vivo de la proíeína Terapéuíica:X, o fragmento o variante del mismo , o fusionada a albúmina tal como se compara con la actividad biológ ica in vivo de la proteína Terapéutica:X o fragmento o variante de la misma en un esíado no fusionado. 13. La proteína de fusión de albúmina de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, la cual es no glucosilada. 14. La proteína de fusión de albúmina de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, la cual se expresa en levadura. 15. La proteína de fusión de albúmina de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada porque la levadura es deficiente en glucosilación. 16. La proteína de fusión de albúmina de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada porque la levadura es deficiente en glucosilación y proteasa. 17. La proteína de fusión de albúmina de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizada porque se expresa a través de una célula de mamífero. 1 8. La proteína de fusión de albúmina de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizada porque la proteína de fusión de albúmina se expresa a través de una célula de mamífero en cultivo. 19. La proteína de fusión de albúmina de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizada porque la proíeína de fusión de albúmina comprende además una secuencia líder de secreción. 20. Una composición que comprende la proteína de fusión de albú mina de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 1 2, y un veh ículo farmacéuticamenfe aceptable. 21 . U n eq uipo que comprende la composición de conformidad con la reivindicación 20. 22. U n método para tratar u na enfermedad o padecimiento en un paciente, en donde el método comprende el paso de admi nistrar la proteína de fusión de al búmi na de conformidad con cualquiera de las reivi ndicaciones 1 a 1 2. 23. El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque la enfermedad o padecimiento comprende la indicación :Y. 24. U n método para tratar a un paciente con una enfermedad o padecimiento que es modulado por la proteína Terapéutica:X ó un fragmento o variante de la misma, en donde el método comprende el paso de administrar una cantidad efectiva de la proteína de fusión de albú mi na de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12. 25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la enfermedad o padecimiento es indicación :Y. 26. Un método para prolongar la vida en anaquel o estabilidad de plasma de la proteína Terapéutica:X, o un fragmento o variante de la misma, en donde el método comprende el paso de fusionar la proteína Terapéutica:X o fragmento o variante de la misma, a albúmina o fragmenío o variante de la misma, suficiente para prolongar la vida en anaquel o estabilidad de plasma de la proteína Terapéutica:X, o fragmenío o varianíe de la misma, en comparación con la vida en anaquel de la proteína Terapéutica:X o fragmenlo o varianíe de la misma, en un estado no fusionado. 27. Una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de polinucleótido que codifica la proteína de fusión de albúmina de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12. 28. Un vector que comprende la molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 27. 29. Una célula huésped que comprende la molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 28. R E S U M E N La présenle invención comprende proíeínas de fusión de albúmina. Las moléculas de ácido nucleico que codifican las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención también están comprendidas en la misma, en la forma de vectores que contienen estos ácidos nucleicos, células huésped transformadas con estos vectores de ácidos nucleicos y métodos para elaborar las proteínas de fusión de albúmina de la presente invención y uíilizar estos ácidos nucleicos, vectores y/o células huésped. Además, la presente invención comprende composiciones farmacéuticas que comprenden proteínas de fusión de albúmina y métodos para tratar, prevenir, o disminuir enfermedades, padecimientos o condiciones utilizando proteínas de fusión de albúmina de la presente invención.