KR20200118080A - Nkg2d 수용체를 표적화하는 항체 가변 도메인 - Google Patents

Nkg2d 수용체를 표적화하는 항체 가변 도메인 Download PDF

Info

Publication number
KR20200118080A
KR20200118080A KR1020207024734A KR20207024734A KR20200118080A KR 20200118080 A KR20200118080 A KR 20200118080A KR 1020207024734 A KR1020207024734 A KR 1020207024734A KR 20207024734 A KR20207024734 A KR 20207024734A KR 20200118080 A KR20200118080 A KR 20200118080A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
amino acid
acid sequence
seq
constant region
antibody
Prior art date
Application number
KR1020207024734A
Other languages
English (en)
Inventor
그레고리 피. 창
안 에프. 청
아샤 그린버그
윌리암 해니
브래들리 엠. 룬드
비안카 프린츠
Original Assignee
드래곤플라이 쎄라퓨틱스, 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 드래곤플라이 쎄라퓨틱스, 인크. filed Critical 드래곤플라이 쎄라퓨틱스, 인크.
Publication of KR20200118080A publication Critical patent/KR20200118080A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2851—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/7056—Lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Abstract

자연 살해 세포 상의 NKG2D 수용체를 표적화하는 항원-결합 부위를 형성하도록 항체 경쇄 가변 도메인과 짝지어질 수 있는 항체 중쇄 가변 도메인이 기재된다. NKG2D 항원-결합 부위, 약제학적 조성물 및 이의 암 치료를 포함하는 치료적 방법이 또한 기재된다.

Description

NKG2D 수용체를 표적화하는 항체 가변 도메인
관련 출원에 대한 상호참조
본 출원은 2018년 2월 8일자로 출원된 미국 가출원 특허 제62/628,161호, 및 2018년 8월 8일자로 출원된 미국 가출원 특허 제62/716,259호에 대한 유익 및 우선권을 주장하며, 이의 개시내용은 본 명세서에 모든 목적을 위해 전문이 참조에 의해 원용된다.
기술분야
본 발명은 자연 살해 세포 상에서 자연 살해 그룹 2D(NKG2D) 수용체를 표적화하는 항원-결합 부위를 형성하도록 짝지어질 수 있는 항체 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 갖는 단백질, 이러한 단백질을 포함하는 약제학적 조성물, 및 암 치료를 포함하여, 이러한 단백질 및 약제학적 조성물을 이용하는 치료 방법을 제공한다.
암은 이 질환을 치료하기 위한 실질적인 연구 노력 및 문헌에 보고된 과학적 진보에도 불구하고 상당한 건강상의 문제로 지속되고 있다. 일부 가장 빈번하게 진단되는 암은 전립선암, 유방암 및 폐암을 포함한다. 전립선암은 남성에서 가장 흔한 형태의 암이다. 유방암은 여성 사망의 주된 원인으로 남아있다. 이들 암에 대한 현재의 치료는 모든 환자에 대해 효과적이지 않고/않거나 실질적인 부작용을 가질 수 있다. 다른 유형의 암은 또한 존재하는 치료적 선택사항을 이용하여 치료하는 데 난제로 남아있다.
암 면역요법은 이들이 고도로 특이적이고 환자 자신의 면역계를 이용하여 암 세포의 파괴를 용이하게 할 수 있기 때문에 바람직하다. 융합 단백질, 예컨대 이중특이성 T-세포 관여자는 종양 세포의 파괴를 용이하게 하기 위해 종양 세포 및 T-세포에 결합하는 문헌에 기재된 암 면역치료제이다. 특정 종양-연관 항원에 그리고 특정 면역 세포에 결합하는 항체는 문헌에 기재되어 있다. 예를 들어 WO 2016/134371 및 WO 2015/095412 참조.
자연 살해(Natural killer: NK) 세포는 선천성 면역계 성분이며, 순환 림프구의 대략 15%를 구성한다. NK 세포는 사실상 모든 조직을 침윤하며, 본래 이들을 T 세포와 구별하는 프라이밍에 대한 필요 없이 종양 세포를 효과적으로 사멸시키는 능력을 특징으로 하였다. 활성화된 NK 세포는 세포독성 T 세포와 유사한 수단에 의해 - 즉, 퍼포린 및 그랜자임을 함유하는 세포독성 과립을 통해서 뿐만 아니라 사멸 수용체 경로를 통해 표적 세포를 사멸시킨다. 활성화된 NK 세포는 또한 표적 조직에 대한 다른 백혈구의 보충을 촉진시키는 염증 사이토카인, 예컨대, IFN-감마 및 케모카인을 분비한다.
NK 세포는 표면 상에서 다양한 활성화 및 저해 수용체를 통해 신호에 반응한다. 예를 들어, NK 세포가 건강한 자가-세포를 만날 때, 이들의 활성은 살해-세포 면역글로불린-유사 수용체(KIR)의 활성화를 통해 저해된다. 대안적으로, NK 세포가 암 세포와 만날 때, 이들은 이들의 활성화 수용체(예를 들어, NKG2D, NCR, DNAM1)를 통해 활성화된다. NK 세포는 또한 표면 상에서 CD16 수용체를 통해 일부 면역글로불린의 불변 영역에 의해 활성화된다. 활성화에 대한 NK 세포의 전반적 민감도는 자극 신호와 저해 신호의 합에 따른다. NKG2D는, NKG2D가 활성화 수용체로서 작용하는 본질적으로 모든 자연 살해 세포에 의해 발현되는 II형 막관통 단백질이다. NKG2D를 통해 NK 세포 기능을 조절하는 능력은 악성종양을 포함하는 다양한 치료적 상황에서 유용하다.
치료제의 설계에서 중요한 이점을 제공하는 NKG2D에 대한 항체가 확인되었다. 예를 들어, 이들 항체 중 일부는 인간 NKG2D 수용체에 거의 결합하지 않지만, 하나 이상의 추가적인 이점, 예컨대 수용체를 작용화시키는 능력; 수용체에 대한 결합에 대해 천연 리간드와 경쟁하는 능력; 및/또는 다른 종, 예컨대 사이노몰거스 원숭이로부터의 NKG2D와 교차 반응하는 능력을 가진다. 이들 이점은 NKG2D에 대해 다양한 친화도를 거쳐서 달성될 수 있다.
따라서, 본 발명의 일 양상은 아미노산 서열 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGAPNYGDTTHDYYYMDVWGKGTTVTVSS(서열번호 1, ADI-29379)에 대해 적어도 90% 동일한 항체 중쇄 가변 도메인에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 항체 중쇄 가변 도메인은 서열번호 1에 대해 적어도 95% 동일하다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 도메인은 서열번호 1의 제1 상보성-결정 영역 1("CDR1")로서 아미노산 서열 YTFTSYYMH(서열번호 11), 제2 CDR("CDR2")로서 IINPSGGSTSYAQKFQG(서열번호 12), 및 제3 CDR("CDR3")로서 ARGAPNYGDTTHDYYYMDV(서열번호 13)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 도메인은 서열번호 1의 CDR1로서 아미노산 서열 SYYMH(서열번호 45), CDR2로서 IINPSGGSTSYAQKFQG(서열번호 12), 및 CDR3으로서 GAPNYGDTTHDYYYMDV(서열번호 68)를 포함한다.
본 발명의 다른 양상은 아미노산 서열 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDTGEYYDTDDHGMDVWGQGTTVTVSS(서열번호 3, ADI-29463)에 대해 적어도 90% 동일한 항체 중쇄 가변 도메인에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 항체 중쇄 가변 도메인은 서열번호 3에 대해 적어도 95% 동일하다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 도메인은 서열번호 3의 제1 상보성-결정 영역("CDR1")으로서 아미노산 서열 YTFTGYYMH(서열번호 17), 제2 CDR("CDR2")로서 WINPNSGGTNYAQKFQG(서열번호 18), 및 제3 CDR("CDR3")로서 ARDTGEYYDTDDHGMDV(서열번호 19)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 도메인은 서열번호 3의 CDR1로서 아미노산 서열 GYYMH(서열번호 92), CDR2로서 WINPNSGGTNYAQKFQG(서열번호 18), 및 CDR3으로서 DTGEYYDTDDHGMDV(서열번호 69)를 포함한다.
본 발명의 다른 양상은 아미노산 서열 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDGGYYDSGAGDYWGQGTLVTVSS(서열번호 5, ADI-27744)에 대해 적어도 90% 동일한 항체 중쇄 가변 도메인에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 항체 중쇄 가변 도메인은 서열번호 5에 대해 적어도 95% 동일하다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 도메인은 서열번호 5의 제1 상보성-결정 영역("CDR1")으로서 아미노산 서열 FTFSSYAMS(서열번호 23), 제2 CDR("CDR2")로서 AISGSGGSTYYADSVKG(서열번호 24), 및 제3 CDR("CDR3")으로서 AKDGGYYDSGAGDY(서열번호 25)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 도메인은 서열번호 5의 CDR1로서 아미노산 서열 SYAMS(서열번호 47), CDR2로서 AISGSGGSTYYADSVKG(서열번호 24) 및 CDR3으로서 DGGYYDSGAGDY(서열번호 70)를 포함한다.
본 발명의 다른 양상은 아미노산 서열 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGAPMGAAAGWFDPWGQGTLVTVSS(서열번호 7, ADI-27749)에 대해 적어도 90% 동일한 항체 중쇄 가변 도메인에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 항체 중쇄 가변 도메인은 서열번호 7에 대해 적어도 95% 동일하다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 도메인은 서열번호 7의 제1 상보성-결정 영역("CDR1")으로서 아미노산 서열 FTFSSYSMN(서열번호 29), 제2 CDR("CDR2")로서 SISSSSSYIYYADSVKG(서열번호 30) 및 제3 CDR("CDR3")의 ARGAPMGAAAGWFDP(서열번호 31)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 도메인은 서열번호 7의 CDR1로서 아미노산 서열 SYSMN(서열번호 48), CDR2로서 SISSSSSYIYYADSVKG(서열번호 30) 및 CDR3으로서 GAPMGAAAGWFDP(서열번호71)를 포함한다.
본 발명의 다른 양상은 아미노산 서열 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGAPIGAAAGWFDPWGQGTLVTVSS(서열번호 85, A49MI)에 대해 적어도 90% 동일한 항체 중쇄 가변 도메인에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 항체 중쇄 가변 도메인은 서열번호 85에 대해 적어도 95% 동일하다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 도메인은 서열번호 85의 CDR1로서 아미노산 서열 아미노산 서열 FTFSSYSMN(서열번호 29), CDR2로서 SISSSSSYIYYADSVKG(서열번호 30) 및 CDR3으로서 ARGAPIGAAAGWFDP(서열번호 77)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 도메인은 서열번호 85의 CDR1로서 아미노산 서열 SYSMN(서열번호 48), CDR2로서 SISSSSSYIYYADSVKG(서열번호 30) 및 CDR3으로서 GAPIGAAAGWFDP(서열번호 78)를 포함한다.
본 발명의 다른 양상은 아미노산 서열 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREGAGFAYGMDYYYMDVWGKGTTVTVSS(서열번호 9, ADI-29378)에 대해 적어도 90% 동일한 항체 중쇄 가변 도메인에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 항체 중쇄 가변 도메인은 서열번호 9에 대해 적어도 95% 동일하다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 도메인은 서열번호 9의 제1 상보성-결정 영역("CDR1")으로서 아미노산 서열 YTFTSYYMH(서열번호 35), 제2 CDR("CDR2")로서 IINPSGGSTSYAQKFQG(서열번호 36), 및 제3 CDR("CDR3")로서 AREGAGFAYGMDYYYMDV(서열번호 37)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 도메인은 서열번호 9의 CDR1로서 아미노산 서열 SYYMH(서열번호 45), CDR2로서 IINPSGGSTSYAQKFQG(서열번호 36) 및 CDR3으로서 EGAGFAYGMDYYYMDV(서열번호 72)를 포함한다.
본 발명의 항체 중쇄 가변 도메인은 선택적으로 항체 불변 영역, 예컨대 CH1 도메인이 있거나 없는 힌지, CH2 및 CH3 도메인을 포함하는 IgG 불변 영역에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열에 결합될 수 있다. 일부 실시형태에서, 불변 영역의 아미노산 서열은 인간 항체 불변 영역, 예컨대 인간 IgG1 불변 영역, IgG2 불변 영역, IgG3 불변 영역, 또는 IgG4 불변 영역에 대해 적어도 90% 동일하다. 일부 다른 실시형태에서, 불변 영역의 아미노산 서열은 다른 포유류, 예컨대 토끼, 개, 고양이, 마우스 또는 말로부터의 항체 불변 영역에 대해 적어도 90% 동일하다. 하나 이상의 돌연변이는, 예를 들어 Q347, Y349, L351, S354, E356, E357, K360, Q362, S364, T366, L368, K370, N390, K392, T394, D399, S400, D401, F405, Y407, K409, T411 및/또는 K439에서 인간 IgG1 불변 영역에 비교되는 바와 같은 불변 영역 내로 포함될 수 있다. 예시적인 치환은, 예를 들어, Q347E, Q347R, Y349S, Y349K, Y349T, Y349D, Y349E, Y349C, T350V, L351K, L351D, L351Y, S354C, E356K, E357Q, E357L, E357W, K360E, K360W, Q362E, S364K, S364E, S364H, S364D, T366V, T366I, T366L, T366M, T366K, T366W, T366S, L368E, L368A, L368D, K370S, N390D, N390E, K392L, K392M, K392V, K392F, K392D, K392E, T394F, T394W, D399R, D399K, D399V, S400K, S400R, D401K, F405A, F405T, Y407A, Y407I , Y407V, K409F, K409W, K409D, T411D, T411E, K439D 및 K439E를 포함한다.
특정 실시형태에서, 인간 IgG1 불변 영역의 CH1 내로 포함될 수 있는 돌연변이는 아미노산 V125, F126, P127, T135, T139, A140, F170, P171 및/또는 V173에서일 수 있다. 특정 실시형태에서, 인간 IgG1 불변 영역의 Cκ 내로 포함될 수 있는 돌연변이는 아미노산 E123, F116, S176, V163, S174 및/또는 T164에서일 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 중쇄 가변 도메인 중 하나는 경쇄 가변 도메인과 조합되어 NKG2D에 결합할 수 있는 항원-결합 부위를 형성한다. 예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 항체 중쇄 가변 도메인은 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYDDWPFTFGGGTKVEIK(서열번호 2, ADI-29379)에 대해 적어도 90% 동일한 항체와 짝지어질 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 도메인은 서열번호 2에 대해 적어도 95% 동일하다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 제1 상보성-결정 영역("CDR")으로서 아미노산 서열 RASQSVSSNLA(서열번호 14), 제2 CDR로서 GASTRAT(서열번호 15) 및 제3 CDR로서 QQYDDWPFT(서열번호 16)를 포함하다.
예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 항체 중쇄 가변 도메인은 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQDDYWPPTFGGGTKVEIK(서열번호 4, ADI-29463)에 대해 적어도 90% 동일한 항체와 짝지어질 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 도메인은 서열번호 4에 대해 적어도 95% 동일하다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 제1 상보성-결정 영역("CDR")로서 아미노산 서열 RASQSVSSNLA(서열번호 20), 제2 CDR로서 GASTRAT(서열번호 21) 및 제3 CDR로서 QQDDYWPPT(서열번호 22)를 포함한다.
예를 들어, 서열번호 5의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 항체 중쇄 가변 도메인은 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGVSYPRTFGGGTKVEIK(서열번호 6, ADI-27744)에 대해 적어도 90% 동일한 항체와 짝지어질 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 도메인은 서열번호 6에 대해 적어도 95% 동일하다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 제1 상보성-결정 영역("CDR")로서 아미노산 서열 RASQGIDSWLA(서열번호 26), 제2 CDR로서 AASSLQS(서열번호 27), 및 제3 CDR로서 QQGVSYPRT(서열번호 28)를 포함한다.
예를 들어, 서열번호 7 또는 85의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 항체 중쇄 가변 도메인은 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGVSFPRTFGGGTKVEIK(서열번호 8, ADI-27749)에 대해 적어도 90% 동일한 항체와 짝지어질 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 도메인은 서열번호 8에 대해 적어도 95% 동일하다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 제1 상보성-결정 영역("CDR")으로서 아미노산 서열 RASQGISSWLA(서열번호 32), 제2 CDR로서 AASSLQS(서열번호 33) 및 제3 CDR로서 QQGVSFPRT(서열번호 34)를 포함한다.
예를 들어, 서열번호 9의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 항체 중쇄 가변 도메인은 아미노산 서열 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSDNWPFTFGGGTKVEIK(서열번호 10, ADI-29378)에 대해 적어도 90% 동일한 항체 경쇄 가변 도메인과 짝지어질 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 도메인은 서열번호 10에 대해 적어도 95% 동일하다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 제1 상보성-결정 영역("CDR")으로서 아미노산 서열 RASQSVSSYLA(서열번호 38), 제2 CDR로서 DASNRAT(서열번호 39) 및 제3 CDR로서 QQSDNWPFT(서열번호 40)를 포함한다.
중쇄 가변 도메인이 경쇄 가변 도메인과 조합되어 NKG2D에 결합할 수 있는 항원-결합 부위를 형성할 때, 항원-결합 부위는 다양한 구조, 예를 들어, 2개의 동일한 중쇄 및 2개의 동일한 경쇄를 갖는 전형적 항체 구조에 도입되어, NKG2D; 이중-특이성, 삼중-특이성, 사중-특이성 또는 다른 다중-특이성 항체에 결합할 수 있는 항원-결합 부위의 쌍; 또는 더 작은 구조, 예컨대 scFv(중쇄 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인에 연결됨)을 형성할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 발명에 개시된 임의의 NKG2D 항원-결합 부위는 단백질이 NK 세포 및 종양 세포와 동시에 상호작용하게 할 수 있는 종양-연관 항원에 결합하는 별개의 항원-결합 부위를 또한 포함하는 단백질에 포함된다. 종양-연관 항원은, 예를 들어, CD33, HER2, EpCAM, CD2, CD3, CD8, CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD25, CD30, CD37, CD38, CD40, CD45RO, CD48, CD52, CD55, CD59, CD70, CD74, CD80, CD86, CD138, CD147, HLA-DR, CSAp, CA-125, TAG-72, EFGR/ERBB1, IGF1R, HER2, HER3, HER4, IGF-1R, c-Met, PDGFR, MUC1, MUC2, MUC3, MUC4, TNFR1, TNFR2, NGFR, TRAILR1, TRAILR2, Fas (CD95), DR3, DR4, DR5, DR6, VEGF, PIGF, 테나신, ED-B 피브로넥틴, PSA 및 IL-6, MAGE-A3, B7.1, B7.2, CTLA4 또는 PD1일 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 발명에 개시된 임의의 NKG2D 항원-결합 부위는 종양-연관 항원 부위 및 CD16 결합 부위를 또한 함유하는 단백질에 포함된다. CD16 결합 부위는 추가적인 항원-결합 부위 또는 항체 불변 영역 또는 이의 일부, 예컨대 IgG1 불변 영역(예를 들어, 효과기 활성 또는 CD16 결합 친화도에 영향을 미치는 하나 이상의 돌연변이를 선택적으로 포함할 수 있음)일 수 있다.
본 발명의 다른 양상은 종양 세포 사멸을 향상시키고 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 암을 치료하기 위해 치료적 유효량의 본 명세서에 기재된 단백질을 암 치료가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
도 1은 NKG2D-결합 도메인(우측 아암), 종양-연관 항원-결합 도메인(좌측 아암) 및 CD16에 결합하는 Fc 도메인 또는 이의 일부를 함유하는 다중 특이성 결합 단백질의 표현을 도시한 도면.
도 2는 NKG2D-결합 도메인 또는 종양-연관 항원-결합 도메인을 포함하되, 이 중 하나는 scFv 형식, 및 CD16에 결합하는 Fc 도메인 또는 이의 일부일 수 있는, 다중특이성 결합 단백질의 표현을 도시한 도면.
도 3A 내지 도 3F는 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되는 NKG2D-결합 도메인의 NKG2D-결합 친화도 프로파일을 도시한 도면. 도 3A는 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되는 NKG2D-결합 도메인 ADI-27744의 NKG2D-결합 친화도이고; 도 3B는 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되는 NKG2D-결합 도메인 ADI-29379의 NKG2D-결합 친화도이며; 도 3C는 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되는 NKG2D-결합 도메인 ADI-27749의 NKG2D-결합 친화도이고; 도 3D는 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되는 NKG2D-결합 도메인 ADI-29463의 NKG2D-결합 친화도이며; 그리고 도 3E는 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되는 NKG2D-결합 도메인 ADI-29378의 NKG2D-결합 친화도이다.
도 4A 내지 도 4H는 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되는 NKG2D-결합 도메인 ADI-27744(A44) 및 ULBP6 또는 다른 NKG2D 항체에 의한 경쟁적 NKG2D 결합의 프로파일을 도시한 도면. 도 4A는 고정된 NKG2D 이상으로 주사된 ADI-27744를 포함하는 NKG2D 단클론성 항체, 다음에 ULBP6의 주사의 프로파일을 도시한 도면. 도 4B는 고정된 NKG2D에 대해 주사된 ULBP6 다음에 ADI-27744를 포함하는 NKG2D 단클론성 항체의 주사의 프로파일을 나타낸다. 도 4C는 고정된 NKG2D 이상으로 주사된 MS 단클론성 항체, 다음에 ULBP6의 주사 프로파일을 나타낸다. 도 4D는 고정된 NKG2D에 대해 주사된 MS 다음에 ADI-27744를 포함하는 NKG2D 단클론성 항체의 주사의 프로파일을 나타낸다. 도 4E는 고정된 NKG2D에 대해 주사된 1D11 다음에 ADI-27744를 포함하는 NKG2D 단클론성 항체의 주사의 프로파일을 나타낸다. 도 4F는 고정된 NKG2D에 대해 주사된 MAB139 다음에 ADI-27744를 포함하는 NKG2D 단클론성 항체의 주사의 프로파일을 나타낸다. 도 4G는 고정된 NKG2D 이상으로 주사되는 ADI-27744를 포함하는 NKG2D 단클론성 항체, 다음에 ADI-27749(A49)를 포함하는 NKG2D 단클론성 항체의 주사 프로파일을 나타내고; 그리고 도 4H는 고정된 NKG2D 이상으로 주사되는 ADI-27744를 포함하는 NKG2D 단클론성 항체, 다음에 F47을 포함하는 NKG2D 단클론성 항체의 주사 프로파일을 나타낸다.
도 5는 EL4 세포 상에서 발현된 NKG2D에 대한 CD33-표적화 TriNKET의 결합 프로파일을 나타내는 선 그래프를 도시한 도면.
도 6은 EL4 세포 상에서 발현된 NKG2D에 대한 HER2-표적화 TriNKET의 결합 프로파일을 나타내는 선 그래프를 도시한 도면.
도 7은 Mv4-11 세포 상에서 발현된 CD33에 대한 CD33-표적화 TriNKET의 결합 프로파일을 나타내는 막대 그래프를 도시한 도면.
도 8은 786-O 세포 상에서 발현된 HER2에 대한 HER2-표적화 TriNKET의 결합 프로파일을 나타내는 막대 그래프를 도시한 도면.
도 9는 NCI-H661 세포 상에서 발현된 HER2에 대한 HER2-표적화 TriNKET의 결합 프로파일을 나타내는 막대 그래프를 도시한 도면.
도 10은 HER2-표적화 TriNKET가 HER2-발현 NCI-H661 세포와 함께 공동배양시킨 인간 NK 세포의 활성화를 매개한다는 것을 나타내는 막대 그래프를 도시한 도면.
도 11은 HER2-표적화 TriNKET가 HER2 발현 SkBr-3 세포와 함께 공동배양시킨 인간 NK 세포의 활성화를 매개한다는 것을 나타내는 막대 그래프를 도시한 도면.
도 12는 CD33-표적화 TriNKET가 CD33-발현 인간 AML Mv4-11 세포와 함께 공동배양시킨 인간 NK 세포의 활성화를 매개한다는 것을 나타내는 막대 그래프를 도시한 도면.
도 13는 CD33-표적화 TriNKET가 CD33-발현 Molm-13 암 세포에 대한 휴지 NK 세포의 세포독성을 가능하게 한다는 것을 나타내는 선 그래프를 도시한 도면.
도 14는 CD33-표적화 TriNKET가 CD33-발현 Molm-13 암 세포에 대한 활성화된 NK 세포의 세포독성을 가능하게 한다는 것을 나타내는 선 그래프를 도시한 도면.
도 15는 HER2-표적화 TriNKET가 HER2-발현 786-O 암 세포에 대한 휴지 NK 세포의 세포독성을 가능하게 한다는 것을 나타내는 막대 그래프를 도시한 도면.
도 16은 HER2-표적화 TriNKET가 HER2-발현 786-O 암 세포에 대한 활성화된 NK 세포의 세포독성을 가능하게 한다는 것을 나타내는 막대 그래프를 도시한 도면.
도 17은 IgG-유사 형상을 유지하는 3작용성, 이중특이성 항체인 트리오맙(Triomab) 형태의 TriNKET의 표현을 도시한 도면. 이 키메라는 2개의 절반 항체로 이루어지는데, 각각은 2개의 모 항체로부터 유래된 하나의 경쇄 및 하나의 중쇄를 가진다. 트리오맙 형태는 ½의 래트 항체 및 ½의 마우스 항체를 함유하는 이형이량체 작제물이다.
도 18은 노브-인투-홀(knobs-into-hole: KIH) 기술을 수반하는 KiH 공통 경쇄(Light Chain: LC) 형태에서 TriNKET의 표현을 도시한 도면. KiH는 표적 1 및 2에 결합하는 2개의 Fab, 및 이형이량체화 돌연변이에 의해 안정화된 Fc를 함유하는 이형이량체이다. KiH 형식에서 TriNKET는 2개의 상이한 중쇄 및 HC 둘 다와 짝지어지는 공통 경쇄를 함유하는 표적 1 및 표적 2에 결합하는 2개의 fab를 갖는 이형이량체 작제물일 수 있다.
도 19는 가요성의 천연 유래 링커를 통해 2개의 단클론성 항체의 표적 결합 도메인을 합하고, 4가 IgG - 유사 분자를 수득하는 이중-가변 도메인 면역글로불린(DVD-Ig(상표명))에서 TriNKET의 표현을 도시한 도면. DVD-Ig(상표명)는 가변 도메인 표적화 항원 2가 Fab 표적화 항원 1 작제물의 가변 도메인의 N 말단에 융합되고 정상 Fc를 함유하는 동형이량체 작제물이다.
도 20은 Fc에 융합된 표적1 및 표적2에 대해 2개의 Fab를 함유하는 이형이량체 작제물인, 직교성 Fab 계면(오쏘-Fab)에서의 TriNKET 표현을 도시한 도면. LC-HC 쌍은 직교성 계면에 의해 보장된다. 이형이량체화는 Fc에서의 돌연변이에 의해 보장된다.
도 21은 투인원(2-in-1) Ig 형식의 TriNKET 표현을 도시한 도면.
도 22는 FC에 융합된 표적 1 및 표적 2에 2개의 상이한 Fab 결합을 함유하는 이형이량체 작제물인 ES 형태의 TriNKET 표현을 도시한 도면. 이형이량체화는 Fc에서의 정전기적 스티어링 돌연변이에 의해 보장된다.
도 23은 Fab 아암 교환 형태: 중쇄 및 부착된 경쇄(절반-분자)를 다른 분자로부터의 중쇄-경쇄쌍으로 교환함으로써 Fab 아암을 교환하여, 이중특이성 항체를 초래하는 항체의 TriNKET 표현을 도시한 도면. Fab 아암 교환 형태(cFae)는 표적 1 및 2에 결합하는 2개의 Fab, 및 이형이량체화 돌연변이에 의해 안정화된 Fc를 함유하는 이형이량체이다.
도 24는 표적 1 및 2에 결합하는 2개의 Fab, 및 이형이량체화 돌연변이에 의해 안정화된 FC를 함유하는 이형이량체인, SEED Body 형태의 TriNKET 표현을 도시한 도면.
도 25는 류신 지퍼가 두 상이한 HC의 이형이량체화를 유도하기 위해 사용되는 LuZ-Y 형태의 TriNKET 표현을 도시한 도면. LuZ-Y 형태는 Fc에 융합된 표적 1 및 2에 결합하는 2개의 상이한 scFab를 함유하는 이형이량체이다. 이형이량체화는 Fc의 C-말단에 융합된 류신 지퍼 모티프를 통해 보장된다.
도 26은 Cov-X-Body 형태의 TriNKET 표현을 도시한 도면.
도 27A 내지 도 27B는 이형이량체화 돌연변이에 의해 안정화된 Fc에 융합된 2개의 상이한 Fab를 갖는 이형이량체 작제물인 ĸλ형태의 TriNKET 표현을 도시한 도면: Fab1 표적화 항원 1은 카파 LC를 함유하는 한편, 제2 Fab 표적화 항원 2는 람다 LC를 함유한다. 도 27A는 ĸλ의 한 형태의 예시적 표현이며; 도 27B는 다른 ĸλ의 예시적 표현이다.
도 28은 표적 1에 대한 Fab 결합 및 Fc에 융합된 표적 2에 대한 scFab 결합을 포함하는 Oasc-Fab 이형이량체 작제물을 도시한 도면. 이형이량체화는 Fc에서의 돌연변이에 의해 보장된다.
도 29는 항원 1 및 2에 대해 2개의 상이한 Fab 및 이형이량체화 돌연변이에 의해 안정화된 Fc를 함유하는 이형이량체 작제물인 DuetMab를 도시한 도면. Fab 1 및 2는 정확한 LC 및 HC 짝짓기를 보장하는 상이한 S-S 브리지를 함유한다.
도 30은 이형이량체화에 의해 안정화된 Fc에 융합된 표적 1 및 2에 대해 2개의 상이한 Fab 결합을 갖는 이형이량체 작제물인 CrossmAb을 도시한 도면. CL 및 CH1 도메인 및 VH 및 VL 도메인은 전환되며, 예를 들어, CH1은 VL을 따라 융합되는 반면, CL은 VH를 따라 융합된다.
도 31은 항원 2에 대한 Fab 결합이 항원 1에 결합하는 Fab의 HC의 N 말단에 융합되는 동형이량체 작제물인 Fit-Ig를 도시한 도면. 작제물은 야생형 Fc를 함유한다.
도 32는 SPR에 의해 시험하여 인간 NKG2D에 대한 TriNKET A* 및 TriNKET A의 결합을 나타내는 일련의 선 그래프를 도시한 도면. 상부 패널은 역학적 적합도를 나타내고, 하부 패널은 정적 상태 친화도 적합도를 나타낸다.
도 33은 표적 세포에 대한 NK 세포의 세포독성을 매개함에 있어서 TriNKET A 및 TriNKET A*의 효능을 나타내는 선 그래프를 도시한 도면.
도 34는 표적 세포에 대한 NK 세포의 세포독성을 매개함에 있어서 TriNKET A 및 TriNKET A*의 효능을 나타내는 선 그래프를 도시한 도면.
본 발명은 자연 살해 세포 상에서 NKG2D 수용체를 표적화하는 항원-결합 부위를 형성하도록 항체 경쇄 가변 도메인과 짝지어질 수 있는 항체 중쇄 가변 도메인, NKG2D 항원-결합 부위를 포함하는 단백질, 이러한 단백질을 포함하는 약제학적 조성물 및 암 치료를 위해 이러한 단백질 및 약제학적 조성물을 이용하는 치료 방법을 제공한다. 본 발명의 다양한 양상은 하기 부문에 제시하지만; 그러나, 하나의 특정 부문에 기재된 본 발명의 양상은 임의의 특정 부문으로 제한되지 않는다.
본 발명의 이해를 용이하게 하기 위해, 다수의 용어 및 어구를 이하에 정의한다.
본 명세서에서 사용되는 단수 용어는 "하나 이상"을 의미하며, 문맥에서 부적절하지 않다면 복수를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "대상체" 및 "환자"는 본 명세서에 기재된 방법 및 조성물에 의해 치료될 유기체를 지칭한다. 이러한 유기체는 바람직하게는 포유류(예를 들어, 뮤린, 유인원, 말, 소, 돼지, 개, 고양이 등)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않으며, 더 바람직하게는 인간을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "항원-결합 부위"는 항원 결합에 참여하는 면역글로불린 분자이 부분을 지칭한다. 인간 항체에서, 항원-결합　부위는　중쇄("H") 및 경쇄("L")의 N-말단 가변("V") 영역의 아미노산 잔기에 의해 형성된다. 중쇄 및 경쇄의 V 영역 내의 3개의 고도로 분기된 신장부는 프레임워크 영역" 또는 "FR"로 알려진 더 보존된 측접 신장부 사이에 개재된 "초가변 영역"으로서 지칭된다. 따라서, 용어 "FR"은 면역글로불린 내 초가변영역 사이에 그리고 초가변 영역에 인접하여 자연적으로 발견되는 아미노산 서열을 지칭한다. 인간 항체 분자에서, 경쇄의 3개의 초가변 영역 및 중쇄의 3개의 초가변 영역은 항원-결합 표면을 형성하기 위해 3차원 공간에서 서로에 대해 배치된다. 항원-결합 표면은 결합 항원의 3차원 표면에 대해 상보적이며, 각각의 중쇄 및 경쇄의 3개의 초가변 영역은 "상보성-결정 영역" 또는 "CDR"로서 지칭된다. 특정 동물, 예컨대 낙타 및 연골 어류에서, 항원-결합 부위는 "단일 도메인 항체"를 제공하는 단일 항체쇄에 의해 형성된다. 항원-결합 부위는, 단일 폴리펩타이드 내 경쇄 가변 도메인에 중쇄 가변 도메인을 연결하기 위해 펩타이드 링커를 이용하여, 무손상 항체에, 항원-결합 표면을 보유하는 항체의 항원-결합 단편에, 또는 재조합 폴리펩타이드, 예컨대 scFv에 존재할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "유효량"은 유리한 또는 목적하는 결과를 달성하는 데 충분한 화합물(예를 들어, 본 발명의 화합물)의 양을 지칭한다. 유효량은 1회 이상의 투여, 적용 또는 투약량으로 투여될 수 있고, 특정 제형 또는 투여 경로로 제한되는 것으로 의도되지 않는다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "치료하는"은 병태, 질환, 장애 등의 개선을 초래하는 임의의 효과, 예를 들어, 적어짐, 감소, 조절, 개선 또는 제거 또는 이들의 증상의 개선을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "약제학적 조성물"은 생체내 또는 생체외 진단 또는 치료 용도에 특히 적합한 조성물을 만드는 비활성 또는 활성인 담체와 활성제의 조합물을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "약제학적으로 허용 가능한 담체"는 임의의 표준 약제학적 담체, 예컨대 인산염 완충 식염수 용액, 물, 에멀션(예를 들어, 오일/물 또는 물/오일 에멀션), 및 다양한 유형의 습윤제를 지칭한다. 조성물은 또한 안정제 및 보존제를 포함할 수 있다. 담체, 안정제 및 보조제의 예에 대해, 예를 들어, 문헌[Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ. Co., Easton, PA [1975]] 참조.
명세서 전체적으로, 조성물이 특정 성분을 갖거나, 포함하는 것으로 기재된 경우, 또는 공정 및 방법이 특정 단계를 갖거나, 포함하는 것으로 기재된 경우, 추가적으로, 열거된 성분으로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진 본 발명의 조성물이 있다는 것, 및 인용 가공 단계로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진 본 발명에 따른 공정 및 방법이 있다는 것이 상정된다.
일반적 물질로서, 백분율로 명시하는 조성물은 달리 구체화되지 않는 한, 중량백분율이다. 추가로, 변수가 정의되지 않는다면, 변수의 이전의 정의로 조절한다.
NKG2D 항원-결합 부위
본 발명은 NKG2D에 결합하는 항원-결합 부위, 및 이러한 항원-결합 부위를 생성하기 위해 사용될 수 있는 항원 중쇄 가변 도메인을 제공한다.
NKG2D 수용체에 결합하고 작용화할 수 있는 항원-결합 부위를 형성하도록 짝지어지는 항체 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인이 이제 확인되었고, 이하의 표 1에 제공된다. 달리 표시되지 않는 한, 표 1에 제공된 CDR 서열은 카바트(Kabat) 하에 결정된다.
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
상기 기재한 항체 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 중 하나 이상의 한 가지 이점은 수용체를 작용화하고 수용체에 대한 결합에 대해 천연 리간드와 경쟁하는 인간 및 사이노몰거스 원숭이로부터의 NKG2D에 결합할 수 있다는 것이다. NKG2D에 결합하고 이들 특성 중 하나 이상을 공유하는 추가적인 항원-결합 부위가 또한 특히 유용하며, 당업계에 공지된 결합 경쟁 분석에 의해 확인될 수 있다. 예를 들어, 추가적인 항원-결합 부위는 인간과 선택적으로 사이노몰거스 원숭이 NKG2D 둘 다에 대한 결합에 대해 ADI-29379, ADI-29463, ADI-27744, ADI-27749 또는 ADI-29378과의 경쟁에 의해 확인될 수 있다.
상기 기재한 항체 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함하는 NKG2D-결합 부위의 다른 이점은 이들이 고친화도로 NKG2D에 결합할 수 있다는 것이다. 일부 실시형태에서, NKG2D-결합 부위는 0.1 내지 1000nM의 K D 로 NKG2D에 결합한다. 일부 실시형태에서, NKG2D-결합 부위는 1 내지 500nM의 K D 로 NKG2D에 결합한다. 일부 실시형태에서, NKG2D-결합 부위는 5 내지 100nM의 K D 로 NKG2D에 결합한다. 일부 실시형태에서, NKG2D-결합 부위는 10 내지 62nM의 K D 로 NKG2D에 결합한다.
특정 실시형태에서, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 2에 대해 아미노산 서열 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노선 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위를 제공한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 11 또는 서열번호 91의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 12의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 13 또는 68의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 14의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1, 서열번호 15의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 16의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명은 서열번호 3의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 4에 대해 아미노산 서열 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노선 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위를 제공한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 3의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 17 또는 서열번호 92의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 18의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 19 또는 69의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 4의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 20의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 21의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 22의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명은 서열번호 5의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 6에 대해 아미노산 서열 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노선 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위를 제공한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 5의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 23 또는 서열번호 93의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 24의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 25 또는 70의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 26의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 27의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 28의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명은 서열번호 7의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 8에 대해 아미노산 서열 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노선 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위를 제공한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 7의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 29 또는 서열번호 94의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 30의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 31 또는 71의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 8의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 32의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 33의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 34의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다.
중쇄 가변 도메인의 CDR3에 있는 서열번호 7의 위치 102에서 아미노사 잔기 M이 돌연변이될 수 있다. 특정 실시형태에서, M102는 비하전 잔기로 치환된다. 특정 실시형태에서, M102는 소수성 잔기(Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe 또는 Trp)로 치환된다. 특정 실시형태에서, M102는 극성 잔기(Ser, Thr, Cys, Asn, Gln 또는 Tyr)로 치환된다. 특정 실시형태에서, M102는 Leu, Ile, Val, Gln 또는 Phe으로 치환된다.
따라서, 특정 실시형태에서, 본 발명은 서열번호 83의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 8에 대해 아미노산 서열 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노선 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위를 제공한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 83의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 29 또는 서열번호 94의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 30의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 73 또는 74의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 8의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 32의 아미노산 서열의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 33의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 34의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명은 서열번호 84의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 8에 대해 아미노산 서열 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노선 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위를 제공한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 84의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 29 또는 서열번호 94의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 30의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 75 또는 76의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 8의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 32의 아미노산 서열의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 33의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 34의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명은 서열번호 85의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 8에 대해 아미노산 서열 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노선 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위를 제공한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 85의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 29 또는 서열번호 94의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 30의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 77 또는 78의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 8의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 32의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1, 서열번호 33의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 34의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명은 서열번호 86의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 8에 대해 아미노산 서열 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노선 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위를 제공한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 86의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 29 또는 서열번호 94의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 30의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 79 또는 80의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 8의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 32의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 33의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 34의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명은 서열번호 41의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 8에 대해 아미노산 서열 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노선 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위를 제공한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 41의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 29 또는 서열번호 94의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 30의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 81 또는 82의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 8의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 32의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 33의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 34의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명은 서열번호 9의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 10에 대해 아미노산 서열 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노선 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위를 제공한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 9의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 35 또는 서열번호 91의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 36의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 37 또는 72의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 38의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열, 서열번호 39의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열 및 서열번호 40의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명은 서열번호 5의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 6에 대해 아미노산 서열 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노선 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, NKG2D에 대한 항-NKG2D 항체 MS, 1D11 및 MAB139의 결합을 차단하지 않는 항원-결합 부위를 제공한다.
실시형태에서, 서열번호 7, 83, 84, 85, 86 또는 87의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% (예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 8에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 서열번호 5의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 6에 대해 아미노산 서열 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위의 NKG2D에 대한 결합을 차단시키지 않는다.
특정 실시형태에서, 서열번호 5의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 6에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위는 MS, 1D11, MAB139, ADI-27749 및 F47 결합 에피토프(들)와 상이한 NKG2D 상의 독특한 에피토프에 결합한다.
항체 및 다중-특이성 결합 단백질
본 발명의 일부 실시형태에서, 항체 중쇄 가변 도메인이 본 명세서에 기재된 경쇄 가변 도메인과 짝지어짐으로써 형성된 NKG2D 항원-결합 부위는 거대 단백질, 예컨대 무손상 항체, 다중-특이성 결합 단백질 또는 다중-특이성 결합 항체에 포함될 수 있다. 예를 들어, NKG2D-결합 부위는 제2 성분, 예를 들어, 제2 항원-결합 부위와 조합될 수 있다. 일부 실시형태에서, 제2 항원-결합 부위는 하나 이상의 종양-연관 항원, 예컨대 CD33, HER2, EpCAM, CD2, CD3, CD8, CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD25, CD30, CD33, CD37, CD38, CD40, CD45RO, CD48, CD52, CD55, CD59, CD70, CD74, CD80, CD86, CD138, CD147, HLA-DR, CSAp, CA-125, TAG-72, EFGR/ERBB1, IGF1R, HER3, HER4, IGF-1R, c-Met, PDGFR, MUC1, MUC2, MUC3, MUC4, TNFR1, TNFR2, NGFR, TRAILR1, TRAILR2, Fas (CD95), DR3, DR4, DR5, DR6, VEGF, PIGF, 테나신, ED-B 피브로넥틴, PSA 및 IL-6, MAGE-A3, B7.1, B7.2, CTLA4 또는 PD1에 결합한다. 암 세포 상에서 NKG2D 및 종양-연관 항원에 대한 다중-특이성 단백질의 결합은 암 세포가 자연 살해 세포에 근접하게 하여, 자연 살해 세포에 의한 암 세포의 파괴를 직접적으로 또는 간접적으로 용이하게 한다.
일부 실시형태에서, NKG2D-결합 부위 및 종양-연관 항원-결합 부위에 추가로, 다중-특이성 결합 단백질은 자연 살해 세포, 대식세포, 호중구, 호산구, 비만세포 및 여포성 수지상 세포를 포함하는 백혈구의 표면 상에서 Fc 수용체인 CD16에 결합하는 도메인을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, CD16 결합 도메인은 항체 Fc 영역 또는 이의 일부를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, CD16에 결합하는 도메인은 CH1 도메인이 없는 항체 Fc 영역의 힌지, CH2 및 CH3 도메인을 함유한다. 일부 실시형태에서, 항체 Fc 영역은 인간 및/또는 다른 포유류 면역글로불린에서 Fc 영역으로부터 유래된다. Fc 영역 내에서, CD16 결합은 힌지 영역 및 CH2 도메인에 의해 매개된다는 것이 알려져 있다. 예를 들어, 인간 IgG1 내에서, CD16과의 상호작용은 CH2 도메인에서 아미노산 잔기 Asp 265 - Glu 269, Asn 297 - Thr 299, Ala 327 - Ile 332, Leu 234 - Ser 239 및 탄수화물 잔기 N-아세틸-D-글루코사민을 통해 매개된다(문헌[Sondermann et al, Nature, 406(6793):267-273] 참조). 알려진 도메인 및 아미노산 잔기에 기반하여, 일부 실시형태에서, 돌연변이는 CD16에 대한 결합 친화도를 향상시키거나 감소시키기 위해 CD16 결합 도메인 내에서 선택될 수 있다. 선택 방법은 당업계에 잘 공지된 방법, 예컨대 파지-디스플레이 라이브러리 또는 효모-디스플레이 cDNA 라이브러리이다. 적절한 선택 방법은 또한 당업자에 의해 공지된 3차원 상호작용 구조에 기반하여 설계될 수 있다.
본 명세서에 기재된 다중-특이성 결합 단백질은 다양한 형식을 취할 수 있다. 예를 들어, 한 가지 형식은 제1 면역글로불린 중쇄, 제1 면역글로불린 경쇄, 제2 면역글로불린 중쇄 및 제2 면역글로불린 경쇄를 포함하는 이형이량체, 다중-특이성 항체이다. 제1 면역글로불린 중쇄는 제1 Fc(힌지-CH2-CH3) 도메인, 제1 중쇄 가변 도메인 및 선택적으로 제1 CH1 중쇄 도메인을 포함한다. 제1 면역글로불린 경쇄는 제1 경쇄 가변 도메인 및 제1 경쇄 불변 도메인을 포함한다. 제1 면역글로불린 경쇄는 제1 면역글로불린 중쇄와 함께 NKG2D에 결합하는 항원-결합 부위를 형성한다. 2 면역글로불린 중쇄는 제2 Fc(힌지-CH2-CH3) 도메인, 제2 중쇄 가변 도메인 및 선택적으로 제2 CH1 중쇄 도메인을 포함한다. 제2 면역글로불린 경쇄는 제2 경쇄 가변 도메인 및 제2 경쇄 불변 도메인을 포함한다. 제2 면역글로불린 경쇄는 제2 면역글로불린 중쇄와 함께 종양 항원에 결합하는 항원-결합 부위를 형성한다. 제1 Fc 도메인 및 제2 Fc 도메인은 함께 CD16에 결합할 수 있다(도 1).
다른 예시적인 형식은 제1 면역글로불린 중쇄, 제2 면역글로불린 중쇄 및 면역글로불린 경쇄를 포함하는 이형이량체, 다중-특이성 항체를 수반한다. 제1 면역글로불린 중쇄는 NKG2D와 짝지어지고 결합하는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인으로 구성된 단일쇄 가변 단편(scFv)에 대해 링커 또는 항체 힌지를 통해 융합된 제1 Fc(힌지-CH2-CH3) 도메인을 포함한다. 2 면역글로불린 중쇄는 제2 Fc(힌지-CH2-CH3) 도메인, 제2 중쇄 가변 도메인 및 선택적으로 CH1 중쇄 도메인을 포함한다. 면역글로불린 경쇄는 경쇄 가변 도메인 및 불변 경쇄 도메인을 포함한다. 제2 면역글로불린 중쇄는 면역글로불린 경쇄와 짝지어지고, 종양-연관 항원에 결합한다. 제1 Fc 도메인 및 제2 Fc 도메인은 함께 CD16에 결합할 수 있다(도 2). 다중-특이성 결합 단백질의 추가적인 형식은 본 명세서에 기재된 NKG2D-결합-단편의 다양한 형식을 합함으로써 고안될 수 있다.
하나 이상의 추가적인 결합 모티프는 선택적으로 링커 서열을 통해, 불변 영역 CH3 도메인의 C-말단에 융합될 수 있다. 특정 실시형태에서, 항원-결합 부위는 단일쇄 또는 이황화물-안정화된 가변 영역(scFv)일 수 있거나 4가 또는 3가 분자를 형성할 수 있었다.
일부 실시형태에서, 다중-특이성 결합 단백질은 IgG-유사 형상을 유지하는 3작용성, 이중특이성 항체인 트리오맙(Triomab) 형태이다. 이 키메라는 2개의 절반 항체로 이루어지는데, 각각은 2개의 모 항체로부터 유래된 하나의 경쇄 및 하나의 중쇄를 가진다. 트리오맙 형태는 ½의 래트 항체 및 ½의 마우스 항체를 함유하는 이형이량체 작제물이다.
일부 실시형태에서, 다중-특이성 결합 단백질은 노브-인투-홀(KIH) 기술을 수반하는 KiH 공통 경쇄(LC) 형태이다. KIH는 이형이량체화를 촉진시키기 위해 각각의 중쇄에서 "노브" 또는 "홀" 중 하나를 생성하도록 CH3 도메인 조작을 수반한다. "노브-인투-홀(KiH)" Fc 기술 이면의 개념은 작은 잔기의 거대 잔기로의 치환(즉, EU 넘버링에서 T366WCH3A)에 의해 하나의 CH3 도메인(CH3A)에 "노브"를 도입하는 것이다. "노브"를 수용하기 위해, 상보성 "홀" 표면은 가장 가까운 이웃하는 잔기를 더 작은 잔기를 갖는 노브로 대체함으로써(즉, T366S/L368A/Y407VCH3B) 다른 CH3 도메인 (CH3B) 상에서 생성되었다. "홀" 돌연변이는 구조화-가이드된 파지 라이브러리 선별에 의해 최적화되었다(Atwell S, Ridgway JB, Wells JA, Carter P.　Stable heterodimers from remodeling the domain interface of a homodimer using a phage display library.　J Mol Biol　(1997)　270(1):26-35). KiH Fc 변이체의 X-선 결정 구조(Elliott JM, Ultsch M, Lee J, Tong R, Takeda K, Spiess C, et al.,　Antiparallel conformation of knob and hole aglycosylated half-antibody homodimers is mediated by a CH2-CH3 hydrophobic interaction.　J Mol Biol　(2014)　426(9):1947-57; Mimoto F, Kadono S, Katada H, Igawa T, Kamikawa T, Hattori K.　Crystal structure of a novel asymmetrically engineered Fc variant with improved affinity for FcgammaRs.　Mol Immunol　(2014)　58(1):132-8)는 이형이량체화가 CH3 도메인간 코어 계면에서 정적 상보성에 의해 유도되는 소수성 상호작용에 의해 열역학적으로 선호되는 반면, 노브-노브 및 홀-홀 계면이 각각 바람직한 상호작용의 입체 장애 및 붕괴때문에 동형이량체화를 선호하지 않는다는 것을 입증하였다.
일부 실시형태에서, 가요성 천연 유래 링커를 통해 두 단클론성 항체의 표적 결합 도메인을 합하고, 4가의 IgG - 유사 분자를 수득하는 다중-특이성 결합 단백질은 이중-가변 도메인 면역글로불린(DVD-Ig(상표명)) 형태이다. DVD-Ig(상표명)는 가변 도메인 표적화 항원 2가 Fab 표적화 항원 1 작제물의 가변 도메인의 N 말단에 융합되고 정상 Fc를 함유하는 동형이량체 작제물이다.
일부 실시형태에서, 다중-특이성 결합 단백질은 Fc에 융합된 표적 1 및 표적 2에 대한 2개의 Fab 결합을 함유하는 이형이량체 작제물인 직교성 Fab 계면(오쏘-Fab) 형태이다. LC-HC 쌍은 직교성 계면에 의해 보장된다. 이형이량체화는 Fc에서의 돌연변이에 의해 보장된다. 오쏘-Fab IgG 접근(Lewis SM, Wu X, Pustilnik A, Sereno A, Huang F, Rick HL, et al.　Generation of bispecific IgG antibodies by structure-based design of an orthogonal Fab interface.　Nat. Biotechnol.　(2014)　32(2):191-8)에서, 다른 Fab에 대해 만들어지는 임의의 변화 없이, 구조-기반 영역 설계가 하나의 Fab에서만 LC 및 HCVH-CH1 계면에 상보성 돌연변이를 도입한다.
일부 실시형태에서, 다중-특이성 결합 단백질은 투인원(2-in-1) Ig 형식이다. 일부 실시형태에서, 다중-특이성 결합 단백질은 Fc에 융합된 표적 1 및 표적 2에 결합하는 2개의 상이한 Fab를 함유하는 이형이량체인 ES 형태이다. 이형이량체화는 Fc에서의 정전기적 스티어링 돌연변이에 의해 보장된다.
일부 실시형태에서, 다중-특이성 결합 단백질은 이형이량체화 돌연변이에 의해 안정화된 Fc에 융합된 2개의 상이한 Fab를 갖는 이형이량체 작제물인 ĸλ 형태이다: Fab1 표적화 항원 1은 카파 LC를 함유하는 한편, 제2 Fab 표적화 항원 2는 람다 LC를 함유한다.
일부 실시형태에서, 다중-특이성 결합 단백질은 Fab 아암 교환 형태(중쇄 및 부착된 경쇄(절반-분자)를 다른 분자로부터의 중쇄-경쇄쌍으로 교환함으로써 Fab 아암을 교환하여, 이중특이성 항체를 초래하는 항체)이다. Fab 아암 교환 형태(cFae)는 표적 1 및 2에 결합하는 2개의 Fab, 및 이형이량체화 돌연변이에 의해 안정화된 Fc를 함유하는 이형이량체이다.
일부 실시형태에서, 다중-특이성 결합 단백질은 표적 1 및 2에 대해 2개의 Fab, 및 이형이량체화 돌연변이에 의해 안정화된 Fc를 함유하는 이형이량체인 SEED Body에 있다. 가닥-교환 조작 도메인(SEED) 플랫폼은 천연 항체의 치료적 적용분야를 확장시키는 능력인 비대칭 및 이중특이성 항체-유사 분자를 생성하도록 설계된다. 이 단백질 조작 플랫폼은 CH3 도메인 내의 면역글로불린의 구조적으로 관련된 서열 교환에 기반한다. SEED 설계는 AG/GA 이형이량체의 효율적인 생성을 허용하는 한편, AG 및 GA SEED CH3 도메인의 동형이량체화를 선호하지 않는다.　(Muda M. et al., Protein Eng. Des. Sel. (2011, 24(5):447-54)).
일부 실시형태에서, 다중-특이성 결합 단백질은 류신 지퍼가 두 상이한 HC의 이형이량체화를 유도하는 데 사용되는 LuZ-Y 형태이다. (Wranik, BJ. et al., J. Biol. Chem. (2012), 287:43331-9). LuZ-Y 형태는 Fc에 융합된 표적 1 및 2에 결합하는 2개의 상이한 scFab를 함유하는 이형이량체이다. 이형이량체화는 Fc의 C-말단에 융합된 류신 지퍼 모티프를 통해 보장된다.
일부 실시형태에서, 다중-특이성 결합 단백질은 Cov-X-Body 형태이다(이중특이성 CovX-Bodies에서, 두 상이한 펩타이드는 분지형 아제티딘온 링커를 이용하여 함께 결합되고, 부위-특이적 방식으로 온화한 조건 하에 스캐폴드 항체에 융합된다). 약물특이분자단은 기능적 활성을 초래하는 반면, 항체 스캐폴드는 긴 반감기 및 Ig-유사 분포를 부여한다. 약물특이분자단은 화학적으로 최적화될 수 있거나, 최적화된 또는 독특한 이중특이성 항체를 생성하기 위해 다른 약물특이분자단으로 대체된다. (Doppalapudi VR et al., PNAS (2010), 107(52);22611-22616).
일부 실시형태에서, 다중-특이성 결합 단백질은 표적 1에 대한 Fab 결합 및 Fc에 융합된 표적 2에 대한 scFab 결합을 포함하는 Oasc-Fab 이형이량체 형식이다. 이형이량체화는 Fc에서의 돌연변이에 의해 보장된다.
일부 실시형태에서, 다중-특이성 결합 단백질은 이형이량체화 돌연변이에 의해 안정화된 항원 1 및 2 및 FC에 대한 2개의 상이한 Fab 결합을 함유하는 DuetMab 형식이다. Fab 1 및 2는 정확한 LC 및 HC 짝짓기를 보장하는 상이한 S-S 브리지를 함유한다.
일부 실시형태에서, 다중-특이성 결합 단백질은 이형이량체화에 의해 안정화된 Fc에 융합된 표적 1 및 2에 대한 2개의 상이한 Fab를 갖는 이형이량체 작제물인 CrossmAb 형식이다. CL 및 CH1 도메인 및 VH 및 VL 도메인은 전환되며, 예를 들어, CH1은 VL을 따라 융합되는 반면, CL은 VH를 따라 융합된다.
일부 실시형태에서, 다중-특이성 결합 단백질은 항원 2에 대한 Fab 결합이 항원 1에 결합하는 Fab의 HC의 N 말단에 융합되는 동형이량체 작제물인 CrossmAb 형식이다. 작제물은 야생형을 함유한다.
이형이량체 항체 중쇄
이형이량체 항체 중쇄의 조립체는 각각의 항체 중쇄의 동형이량체의 조립체뿐만 아니라 이형이량체의 조립체를 야기할 수 있는, 동일 세포에서 두 상이한 항체 중쇄 서열을 발현시킴으로써 달성될 수 있다. 본 명세서에 기재된 다중-특이성 결합 단백질 내의 이형이량체 중쇄의 우선적인 조립체는 미국 특허 제13/494870호, 미국 특허 제16/028850호, 미국 특허 제11/533709호, 미국 특허 제12/875015호, 미국 특허 제13/289934호, 미국 특허 제14/773418호, 미국 특허 제12/811207호, 미국 특허 제13/866756호, 미국 특허 제14/647480호, 미국 특허 제14/830336호에 나타낸 바와 같이 이들 2개의 쇄가 서로 선택적으로 이형이향체화되는 것을 가능하게 하는 제1 중쇄 폴리펩타이드 내의 제1 CH3 도메인 및 제2 중쇄 폴리펩타이드 내의 제2 CH3 도메인 내로 아미노산 치환의 별개의 쌍을 혼입함으로써 촉진될 수 있다. 일부 실시형태에서, 다중-특이성 결합 단백질은 인간 IgG1의 Fc 도메인을 함유한다. 2개의 중쇄의 이형이량체화를 용이하게 하는 인간 IgG1 Fc 도메인의 쌍 내의 아미노산 치환의 다양한 예는 이하에 열거된다. 아미노산 치환의 각각의 위치는 모두 카바트에서와 같이 EU 지표에 따라 넘버링된다.
하나의 시나리오에서, 제1 폴리펩타이드에서 아미노산 치환은 본래의 아미노산을 알기닌(R), 페닐알라닌(F), 타이로신(Y) 또는 트립토판(W)으로부터 선택된 더 큰 아미노산으로 대체하고, 제2 폴리펩타이드에서 적어도 하나의 아미노산 치환은 본래의 아미노산(들)을 알라닌(A), 세린(S), 트레오닌(T) 또는 발린(V)으로부터 선택된 더 작은 아미노산(들)으로 대체하여, 더 큰 아미노산 치환부(돌기)는 더 작은 아미노산 치환부(공동)의 표면에 끼워진다. 예를 들어, 하나의 폴리펩타이드는 T366W 치환을 포함할 수 있고, 다른 폴리펩타이드는 T366S, L368A 및 Y407V를 포함하는 3개의 치환을 포함할 수 있다.
대안적으로, 아미노산 치환은 표 2에 나타낸 치환의 다음의 세트로부터 선택될 수 있었다.
Figure pct00006
대안적으로, 아미노산 치환은 표 3에 나타낸 치환의 다음의 세트로부터 선택될 수 있었다.
Figure pct00007
대안적으로, 아미노산 치환은 표 4에 나타낸 치환의 다음의 세트로부터 선택될 수 있었다.
Figure pct00008
대안적으로, 각각의 폴리펩타이드 쇄에서 적어도 하나의 아미노산 치환은 표 5로부터 선택될 수 있었다.
Figure pct00009
대안적으로, 적어도 하나의 아미노산 치환은 표 6에서 다음의 치환 세트로부터 선택될 수 있었고, 제1 폴리펩타이드 열에 표시된 위치(들)가 임의의 공지된 음으로 하전된 아미노산으로 대체되는 경우에, 제2 폴리펩타이드 열에 표시된 위치(들)는 임의의 공지된 양으로 하전된 아미노산으로 대체된다.
Figure pct00010
대안적으로, 적어도 하나의 아미노산 치환은 표 7에서 다음의 치환 세트로부터 선택될 수 있었고, 제1 폴리펩타이드 열에 표시된 위치(들)가 임의의 공지된 양으로 하전된 아미노산으로 대체되는 경우에, 제2 폴리펩타이드 열에 표시된 위치(들)는 임의의 공지된 음으로 하전된 아미노산으로 대체된다.
Figure pct00011
대안적으로, 아미노산 치환은 표 8의 다음의 세트로부터 선택될 수 있었다.
Figure pct00012
대안적으로, 또는 추가로, 다중특이성 결합 단백질 내의 이형이량체 중쇄의 구조적 안정성은 두 폴리펩타이드 계면 내에 인공적인 이황화 브리지를 형성하는, 제1 폴리펩타이드 쇄 또는 제2 폴리펩타이드 쇄 중 하나 상에 S354C, 그리고 마주보는 폴리펩타이드 쇄 상에 Y349C를 도입함으로써 증가될 수 있다.
상기 기재한 다중-특이성　 결합 단백질은 당업자에게 잘 공지된 재조합 DNA 기술을 이용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, 제1 면역글로불린 중쇄를 암호화하는 제1 핵산 서열은 제1 발현 벡터 내로 클로닝될 수 있고; 제2 면역글로불린 중쇄를 암호화하는 제2 핵산 서열은 제2 발현 벡터 내로 클로닝될 수 있으며; 제1 면역글로불린 경쇄를 암호화하는 제3 핵산 서열은 제3 발현 벡터 내로 클로닝될 수 있고; 제2 면역글로불린 경쇄를 암호화하는 제4 핵산 서열은 제4 발현 벡터 내로 클로닝될 수 있으며; 제1, 제2, 제3 및 제4 발현 벡터는 다량체 단백질을 생성하기 위해 숙주 세포 내로 함께 안정하게 형질감염될 수 있다.
다중-특이성 결합 단백질의 가장 높은 수율을 달성하기 위해, 상이한 비의 제1, 제2, 제3 및 제4 발현 벡터를 연구하여 숙주 세포 내로 형질감염을 위한 최적의 비를 결정할 수 있다. 형질감염 후, 당업계에 공지된 방법, 예컨대 제한 희석, ELISA, FACS, 현미경 또는 클론픽스(Clonepix)를 이용하여 세포 은행 생성을 위해 단일 클론이 단리될 수 있다.
클론은 생물반응기 규모확대에 적합한 조건 하에 배양되고, 다중-특이성 단백질의 발현을 유지할 수 있다. 다중-특이성 결합 단백질은 원심분리, 심층여과, 세포 용해, 균질화, 동결융해, 친화도 정제, 겔 여과, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 상호작용 교환 크로마토그래피 및 혼합 방식 크로마토그래피를 포함하는 당업계에 공지된 방법을 이용하여 단리되고 정제될 수 있다.
본 명세서에 기재된 NKG2D-결합 부위와 경쟁하는 항원-결합 부위를 포함하는 단백질
특정 실시형태에서, 본 발명은 NKG2D에 대한 결합에 대해 본 명세서에 기재된 NKG2D-결합 부위와 경쟁하는 항원-결합 부위를 포함하는 단백질을 제공한다. 본 명세서에 기재된 NKG2D-결합 부위는 서열번호 1 및 2의 아미노산 서열; 서열번호 3 및 4의 아미노산 서열; 서열번호 5 및 6의 아미노산 서열; 서열번호 7 및 8의 아미노산 서열; 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열; 서열번호 83 및 8의 아미노산 서열; 서열번호 84 및 8의 아미노산 서열; 서열번호 85 및 8의 아미노산 서열; 서열번호 86 및 8의 아미노산 서열; 또는 서열번호 87 및 8의 아미노산 서열을 포함한다. 이들 NKG2D-결합 부위는 표면 플라즈몬 공명에 의해 맵핑된 NKG2D 상에서 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 예를 들어, ADI-27744는 실시예 2에 나타낸 바와 같이, ADI-27749로부터의 NKG2D 및 다른 존재하는 NKG2D 항체 상에서 상이한 에피토프에 결합한다.
일부 실시형태에서, NKG2D-결합 부위와 경쟁하는 단백질의 항원-결합 부위는 서열번호 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%(예를 들어, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%(예를 들어, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, NKG2D-결합 부위와 경쟁하는 단백질의 항원-결합 부위는 서열번호 3의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%(예를 들어, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 4의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%(예를 들어, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, NKG2D-결합 부위와 경쟁하는 단백질의 항원-결합 부위는 서열번호 5의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%(예를 들어, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%(예를 들어, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, NKG2D-결합 부위와 경쟁하는 단백질의 항원-결합 부위는 서열번호 7의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%(예를 들어, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%(예를 들어, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, NKG2D-결합 부위와 경쟁하는 단백질의 항원-결합 부위는 서열번호 9의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%(예를 들어, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%(예를 들어, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 NKG2D-결합 부위와 경쟁하는 항원-결합 부위를 포함하는 단백질은 종양-연관 항원에 결합하는 제2 항원-결합 부위 및/또는 CD16 결합 부위를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, CD16 결합 부위는 CD16에 결합할 수 있는 항체 불변 영역 또는 이의 일부이다. 일부 실시형태에서, CD16 결합 부위는 인간 IgG1 Fc 도메인을 함유한다.
단백질을 발현시키기 위한 세포
일 양상에서, 본 개시내용은 서열번호 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열 을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인을 갖는 NKG2D-결합 부위; 서열번호 3의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 4의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인을 갖는 NKG2D-결합 부위; 서열번호 5의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인을 갖는 NKG2D-결합 부위; 서열번호 7, 83, 84, 85, 86 또는 87의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 8의 아미노산 서열에 대해 아미노산 서열 적어도 90% (예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인을 갖는 NKG2D-결합 부위; 또는 서열번호 9의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% (예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 경쇄 가변 도메인을 갖는 NKG2D-결합 부위를 함유하는 단백질을 암호화하는 하나 이상의 핵산을 포함하는 세포를 제공한다.
치료적 적용분야
본 발명은 본 명세서에 기재된 다중-특이성 결합 단백질 및/또는 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물을 이용하여 종양 세포 사멸을 향상시키고/시키거나 암을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 다양한 암을 치료하는 데 사용될 수 있다. 치료될 암의 유형은 단백질에 결합하는 암 세포 유형과 바람직하게 매칭된다. 치료 방법의 추가적인 양상 및 실시형태는 이하에 기재된다.
약제학적 조성물
일 양상에서, 본 개시내용은 또한 본 명세서에 기재된 NKG2D-결합 부위 또는 본 명세서에 기재된 NKG2D-결합 부위와 경쟁하는 NKG2D-결합 부위를 함유하는 유효량의 단백질, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 함유하는 약제학적 조성물을 특징으로 한다.
특정 실시형태에서, 제형은 서열번호 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% (예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인을 갖는 항원-결합 부위를 포함하는 단백질을 포함한다. 특정 실시형태에서, 제형은 서열번호 3의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 4의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인을 갖는 항원-결합 부위를 포함하는 단백질을 포함한다. 특정 실시형태에서, 제형은 서열번호 5의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인을 갖는 항원-결합 부위를 포함하는 단백질을 포함한다. 특정 실시형태에서, 제형은 서열번호 7, 83, 84, 85, 86 또는 87의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 8의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인을 갖는 항원-결합 부위를 포함하는 단백질을 포함한다. 특정 실시형태에서, 제형은 서열번호 9의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인을 갖는 항원-결합 부위를 포함하는 단백질을 포함한다.
조성물은 다양한 약물 전달 시스템에서 사용하기 위해 제형화될 수 있다. 하나 이상의 생리적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체는 적절한 제형을 위해 조성물에 포함될 수 있다. 본 개시내용에서 사용하기 위한 적합한 제형은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed., 1985]에서 발견된다. 약물 전달을 위한 방법의 간략한 검토에 대해, 문헌[Langer (Science 249:1527-1533, 1990)] 참조.
예를 들어, 본 개시내용은 제형을 형성하는 완충 용액에서 치료적 유효량의 단백질을 포함하는 수성 약제학적 제형으로 존재할 수 있었다. 수성 담체는 멸균 주사용수(SWFI), 주사용 정균수(BWFI), pH 완충 용액(예를 들어, 인산염-완충 식염수), 멸균 식염수 용액, 링거액 또는 덱스트로스 용액을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, pH 완충 용액에 본 명세서에 개시된 단백질을 포함하는 수성 제형이 제조된다. 제제의 pH는 전형적으로 3 내지 11, 더 바람직하게는 5 내지 9 또는 6 내지 8, 및 가장 바람직하게는 7 내지 8, 예컨대 7 내지 7.5일 것이다. 상기 열거된 pH에 대해 중간의 범위도 또한 본 개시내용의 부분인 것으로 의도된다. 예를 들어, 상한 및/또는 하한으로서 임의의 상기 열거된 값의 조합을 이용하는 값의 범위는 포함되는 것으로 의도된다. 본 범위 내에서 pH를 제어하는 완충제의 예는 아세트산염(예를 들어, 아세트산나트륨), 석신산염(예컨대 석신산나트륨), 글루콘산, 히스티딘, 시트레이트 및 다른 유기산 완충제를 포함한다. 특정 실시형태에서, 완충제 시스템은 시트르산 일수화물, 시트르산나트륨, 인산이나트륨 2수화물 및/또는 인산이수소나트륨 2수화물을 포함한다. 특정 실시형태에서, 완충제 시스템은 약 1.3㎎/㎖의 시트르산(예를 들어, 1.305㎎/㎖), 약 0.3㎎/㎖의 시트르산나트륨(예를 들어, 0.305㎎/㎖), 약 1.5㎎/㎖의 인산이나트륨 2수화물(예를 들어, 1.53㎎/㎖), 약 0.9㎎/㎖의 인산이수소나트륨 2수화물(예를 들어, 0.86) 및 약 6.2㎎/㎖의 염화나트륨(예를 들어, 6.165㎎/㎖)을 포함한다. 특정 실시형태에서, 완충제 시스템은 1 내지 1.5㎎/㎖의 시트르산, 0.25 내지 0.5㎎/㎖의 시트르산나트륨, 1.25 내지 1.75㎎/㎖의 인산이나트륨 2수화물, 0.7 내지 1.1㎎/㎖의 인산이수소나트륨 2수화물, 및 6.0 내지 6.4㎎/㎖의 염화나트륨을 포함한다. 액체 제형의 pH는 약제학적으로 허용 가능한 산 및/또는 염기의 첨가에 의해 설정될 수 있다. 특정 실시형태에서, 약제학적으로 허용 가능한 산은 염산일 수 있다. 특정 실시형태에서, 염기는 수산화나트륨일 수 있다.
일부 실시형태에서, 제형은 약제학적으로 허용 가능하고(인간에 대한 투여용으로 안전하며 비독성) 액체 제형 제제에 대해 유용한 수성 담체를 포함한다. 예시적인 담체는 멸균 주사용수(SWFI), 주사용 정균수(BWFI), pH 완충 용액(예를 들어, 인산염-완충 식염수), 멸균 식염수 용액, 링거액 또는 덱스트로스 용액을 포함한다.
등장제로서 작용하고 항체를 안정화시킬 수 있는 폴리올은 또한 제형에 포함될 수 있다. 폴리올은 제형의 목적하는 등장성에 대해 변할 수 있는 양으로 제형에 첨가된다. 특정 실시형태에서, 수성 제형은 등장성일 수 있다. 첨가된 폴리올의 양은 또한 폴리올의 분자량에 대해 변경될 수 있다. 예를 들어, 이당류(예컨대 트레할로스)에 비해 더 소량의 단당류(예를 들어, 만니톨)가 첨가될 수 있다. 특정 실시형태에서, 제형에서 등장제로서 사용될 수 있는 폴리올은 만니톨이다. 특정 실시형태에서, 만니톨 농도는 약 5 내지 약 20㎎/㎖일 수 있다. 특정 실시형태에서, 만니톨 농도는 약 7.5 내지 15㎎/㎖일 수 있다. 특정 실시형태에서, 만니톨 농도는 약 10 내지 14㎎/㎖일 수 있다. 특정 실시형태에서, 만니톨 농도는 약 12㎎/㎖일 수 있다. 특정 실시형태에서, 폴리올 솔비톨은 제형에 포함될 수 있다.
세정제 또는 계면활성제가 또한 제형에 첨가될 수 있다. 예시적인 세정제는 비이온성 세정제, 예컨대 폴리솔베이트(예를 들어, 폴리솔베이트 20, 80 등) 또는 폴록사머(예를 들어, 폴록사머 188)를 포함한다. 첨가되는 세정제의 양은 제형화된 항체의 응집을 감소시키고/시키거나 제형 내 미립자의 형성을 최소화하고/하거나 흡착을 감소시키는 것이다. 특정 실시형태에서, 제형은 폴리솔베이트인 계면활성제를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 제형은 세정제 폴리솔베이트 80 또는 Tween 80을 함유할 수 있다. Tween 80은 폴리옥시에틸렌(20) 솔비탄모노올리에이트를 기재하기 위해 사용되는 용어이다(문헌[Fiedler, Lexikon der Hifsstoffe, Editio Cantor Verlag Aulendorf, 4th edi., 1996] 참조). 특정 실시형태에서, 제형은 약 0.1㎎/㎖ 내지 약 10㎎/㎖, 또는 약 0.5㎎/㎖ 내지 약 5㎎/㎖의 폴리솔베이트 80을 함유할 수 있다. 특정 실시형태에서, 약 0.1%의 폴리솔베이트 80이 제형에 첨가될 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용의 액체 제형은 안정화 수준에서 당과 조합된 10㎎/㎖ 농도 용액으로서 제조될 수 있다. 특정 실시형태에서, 액체 제형은 수성 담체에서 제조될 수 있다. 특정 실시형태에서, 안정제는 정맥내 투여에 바람직하지 않은 또는 부적합한 점성도를 초래할 수 있는 양 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 특정 실시형태에서, 당은 이당류, 예를 들어, 수크로스일 수 있다. 특정 실시형태에서, 액체 제형은 또한 완충제, 계면활성제, 및 박테리아 작용을 감소시키기 위해 본 명세서에 제형에 첨가되는 보존제를 포함할 수 있다. 보존제의 첨가는, 예를 들어, 다회 사용(다회 용량) 제형의 생성을 용이하게 할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 단백질을 만니톨, 시트르산 일수화물, 시트르산나트륨, 인산이나트륨 2수화물, 인산이수소나트륨 2수화물, 염화나트륨, 폴리솔베이트 80, 물 및 수산화나트륨과 병용하여 포함하는 장기간의 보관 수명을 갖는 제형을 제공한다.
탈아마이드화는 발효, 채취/세포 정화, 정제, 약물 물질/약물 제품 저장 동안 그리고 샘플 분석 동안 생길 수 있는 펩타이드 및 단백질의 통상적인 생성물 변형이다. 탈아마이드화는 가수분해를 겪을 수 있는 석신이미드를 형성하는 단백질로부터의 NH3의 상실이다. 석신이미드 중간체는 모 펩타이드의 17Da 질량 감소를 초래한다. 후속적 가수분해는 18u 질량 증가를 초래한다. 석신이미드 중간체의 단리는 수성 조건 하의 불안정성 때문에 어렵다. 이렇게 해서, 탈아마이드화는 전형적으로 1u의 질량 증가로서 검출 가능하다. 아스파라긴의 탈아마이드화는 아스파르트산 또는 아이소아스파르트산 중 하나를 초래한다. 탈아마이드화 속도에 영향을 미치는 매개변수는 pH, 온도, 용매 유전상수, 이온강도, 1차 서열, 국소 폴리펩타이드 입체배좌 및 3차 구조를 포함한다. 폴리펩타이드쇄에서 Asn에 인접한 아미노산 잔기는 탈아마이드화 속도에 영향을 미친다. 단백질 서열에서 Asn 다음의 Gly 및 Ser은 탈아마이드화에 대한 더 큰 민감성을 초래한다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용의 액체 제형은 단백질 생성물의 탈아미노화를 방지하기 위한 pH 및 습도 조건 하에 보존된다.
일부 실시형태에서, 제형은 동결건조 제형이다. 특정 실시형태에서, 제형은 냉동건조(동결건조)되고, 약 12 내지 60개의 바이알에 포함된다. 특정 실시형태에서, 제형은 동결건조될 수 있고, 45㎎의 냉동 건조 제형이 하나의 바이알에 포함된다. 특정 실시형태에서, 약 40㎎ 내지 약 100㎎의 냉동건조된 제형은 하나의 바이알에 함유된다. 특정 실시형태에서, 정맥내 약물 제형에서 단백질의 치료적 용량을 얻도록 12, 27 또는 45개의 바이알로부터의 냉동 건조 제형이 합쳐진다. 제형은 액체 제형일 수 있다. 일부 실시형태에서, 액체 제형은 약 250㎎/바이알 내지 약 1000㎎/바이알로서 저장된다. 특정 실시형태에서, 액체 제형은 약 600㎎/바이알로서 저장된다. 특정 실시형태에서, 액체 제형은 약 250㎎/바이알로서 저장된다.
일부 실시형태에서, 동결건조 제형은 본 명세서에 기재된 단백질 및 동결건조보호제를 포함한다. 동결보호제는 당, 예를 들어, 이당류일 수 있다. 특정 실시형태에서, 동결보호제는 수크로스 또는 말토스일 수 있다. 동결건조된 제형은 또한 완충제, 계면활성제, 증량제 및/또는 보존제 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 동결건조된 약물 제품의 안정화에 유용한 수크로스 또는 말토스의 양은 수크로스 또는 말토스에 대해 적어도 1:2의 중량비일 수 있다. 특정 실시형태에서, 단백질 대 수크로스 또는 말토스 중량비는 1:2 대 1:5를 가질 수 있다.
특정 실시형태에서, 동결건조 전에 제형의 pH는 약제학적으로 허용 가능한 산 및/또는 염기의 첨가에 의해 설정될 수 있다. 특정 실시형태에서, 약제학적으로 허용 가능한 산은 염산일 수 있다. 특정 실시형태에서, 약제학적으로 허용 가능한 염기는 수산화나트륨일 수 있다. 동결건조 후에, 본 개시내용의 단백질을 함유하는 용액의 pH는 6 내지 8로 조절될 수 있다. 특정 실시형태에서, 동결건조된 약물 제품에 대한 pH 범위는 7 내지 8일 수 있다.
특정 실시형태에서, "증량제"가 첨가될 수 있다. "증량제"는 동결건조된 혼합물에 덩어리를 첨가하고 동결건조된 케이크의 물리적 구조에 기여하는(예를 들어, 개방 포어 구조를 유지하는 본질적으로 균일한 동결건조 케이크의 생성을 용이하게 하는) 화합물이다. 예시적인 증량제는 만니톨, 글리신, 폴리에틸렌 글리콜 및 솔비톨을 포함한다. 본 발명의 동결건조된 제형은 이러한 증량제를 함유할 수 있다.
특정 실시형태에서, 동결건조된 단백질 제품은 수성 담체로 구성된다. 본 명세서의 관심 대상의 수성 담체는 약제학적으로 허용 가능하고(예를 들어, 인간에 대한 투여용으로 안전하며 비독성) 동결건조 후에 액체 제형 제제에 대해 유용한 것이다. 예시적인 희석제는 멸균 주사용수(SWFI), 주사용 정균수(BWFI), pH 완충 용액(예를 들어, 인산염-완충 식염수), 멸균 식염수 용액, 링거액 또는 덱스트로스 용액을 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용의 동결건조된 약물 제품은 주사용 멸균수, USP(SWFI) 또는 0.9% 염화나트륨 주사액, USP로 재구성된다. 재구성 동안, 동결건조된 분말은 용액 내로 용해된다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용의 동결건조된 단백질 생성물은 약 4.5㎖의 주사용수로 구성되고, 0.9% 식염수 용액(염화나트륨 용액)으로 희석된다.
단백질은 통상적인 멸균 기법에 의해 멸균될 수 있거나, 멸균여과될 수 있다. 얻어진 수용액은 있는 그대로 사용하기 위해 패키징되거나, 동결건조될 수 있고, 동결건조된 제제는 투여 전에 멸균 수성 담체와 합쳐진다. 고체 형태로 얻어진 조성물은 고정량의 상기 언급한 제제 또는 제제들을 각각 함유하는 다회 단일 용량 단위로 패키징될 수 있다. 고체 형태의 조성물은 또한 유연한 양을 위해 용기에 패키징될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물에서 활성 성분의 실제 투약량 수준은 환자에 대한 독성 없이, 특정 환자에 대해 목적하는 치료적 반응을 달성하는 데 유효한 활성 성분의 양, 조성, 및 투여 방식을 얻기 위해 변화될 수 있다.
구체적인 용량은 각각의 환자에 대해 균일한 용량, 예를 들어, 50 내지 5000㎎의 단백질일 수 있다. 대안적으로, 환자의 용량은 환자의 대략의 체중 또는 표면적에 맞춰질 수 있다. 적절한 용량을 결정함에 있어서 다른 인자는 치료 또는 예방될 질환 또는 병태, 질환의 중증도, 투여 경로, 연령, 성별 및 환자의 의학적 병태를 포함할 수 있다. 치료를 위한 적절한 투약량을 결정하는 데 필수적인 계산의 추가적인 개선은 특히 투약량 정보 및 본 명세서에 개시된 분석에 비추어 당업자에 의해 일상적으로 이루어진다. 투약량은 또한 적절한 용량-반응 데이터와 함께 사용되는 투약량을 결정하기 위한 공지된 분석의 사용을 통해 결정될 수 있다. 개개 환자의 투약량은 질환의 진행이 모니터링됨에 따라 조절될 수 있다. 투약량이 유효 농도에 도달되거나 유지되도록 조절될 필요가 있는지의 여부를 알아보기 위해 환자에서 표적화 가능한 작제물 또는 복합체의 혈액 수준이 측정될 수 있다. 약물유전체학은 표적화 가능한 작제물 및/또는 복합체, 및 이의 투약량이 주어진 개체에 대해 가장 유효할 가능성이 있는지를 결정하기 위해 사용될 수 있다(Schmitz et al.,　Clinica Chimica Acta　308: 43-53, 2001; Steimer et al.,　Clinica Chimica Acta　308: 33-41, 2001).
일반적으로, 체중에 기반한 투약량은 약 0.01㎍ 내지 약 100㎎/㎏의 체중, 예컨대 약 0.01㎍ 내지 약 100㎎/㎏의 체중, 약 0.01㎍ 내지 약 50㎎/㎏의 체중, 약 0.01㎍ 내지 약 10㎎/㎏의 체중, 약 0.01㎍ 내지 약 1㎎/㎏의 체중, 약 0.01㎍ 내지 약 100㎍/㎏의 체중, 약 0.01㎍ 내지 약 50㎍/㎏의 체중, 약 0.01㎍ 내지 약 10㎍/㎏의 체중, 약 0.01㎍ 내지 약 1㎍/㎏의 체중, 약 0.01㎍ 내지 약 0.1㎍/㎏의 체중, 약 0.1㎍ 내지 약 100㎎/㎏의 체중, 약 0.1㎍ 내지 약 50㎎/㎏의 체중, 약 0.1㎍ 내지 약 10㎎/㎏의 체중, 약 0.1㎍ 내지 약 1㎎/㎏의 체중, 약 0.1㎍ 내지 약 100㎍/㎏의 체중, 약 0.1㎍ 내지 약 10㎍/㎏의 체중, about 0.1㎍ 내지 약 1㎍/㎏의 체중, 약 1㎍ 내지 약 100㎎/㎏의 체중, 약 1㎍ 내지 약 50㎎/㎏의 체중, 약 1㎍ 내지 약 10㎎/㎏의 체중, 약 1㎍ 내지 약 1㎎/㎏의 체중, 약 1㎍ 내지 약 100㎍/㎏의 체중, 약 1㎍ 내지 약 50㎍/㎏의 체중, 약 1㎍ 내지 약 10㎍/㎏의 체중, 약 10㎍ 내지 약 100㎎/㎏의 체중, 약 10㎍ 내지 약 50㎎/㎏의 체중, 약 10㎍ 내지 약 10㎎/㎏의 체중, 약 10㎍ 내지 약 1㎎/㎏의 체중, 약 10㎍ 내지 약 100㎍/㎏의 체중, 약 10㎍ 내지 약 50㎍/㎏의 체중, 약 50㎍ 내지 약 100㎎/㎏의 체중, 약 50μg 내지 약 50㎎/㎏의 체중, 약 50㎍ 내지 약 10㎎/㎏의 체중, 약 50㎍ 내지 약 1㎎/㎏의 체중, 약 50㎍ 내지 약 100㎍/㎏의 체중, 약 100㎍ 내지 약 100㎎/㎏의 체중, 약 100㎍ 내지 약 50㎎/㎏의 체중, 약 100㎍ 내지 약 10㎎/㎏의 체중, 약 100㎍ 내지 약 1㎎/㎏의 체중, 약 1㎎ 내지 약 100㎎/㎏의 체중, 약 1㎎ 내지 약 50㎎/㎏의 체중, 약 1㎎ 내지 약 10㎎/㎏의 체중, 약 10㎎ 내지 약 100㎎/㎏의 체중, 약 10㎎ 내지 약 50㎎/㎏의 체중, 약 50㎎ 내지 약 100㎎/㎏의 체중이다. 용량은 1일, 1주, 1개월 또는 1년에 1회 이상, 또는 심지어 2 내지 20년마다 1회로 주어질 수 있다. 당업자는 체액 또는 조직에서 측정된 체류 시간 및 표적화 가능한 작제물 또는 복합체의 농도에 기반하여 투약을 위한 반복 속도를 용이하게 추정할 수 있다. 본 발명의 투여는 카테터를 통한 관류에 의한 또는 직접 병변내 주사에 의한 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 피하, 흉막내, 초내(intrathecal), 강내(intracavitary)일 수 있었다. 이는 1일에 1회 이상, 1주에 1회 이상, 1개월에 1회 이상, 및 1년에 1회 이상으로 투여될 수 있다.
종양 세포 사멸의 향상 및 암 치료
본 발명은 환자에서 종양 세포 사멸을 향상시키고 암을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 본 명세서에 개시된 다중-특이성 결합 단백질에 종양 및 자연 살해 세포를 노출시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 치료적 유효량의 단백질 및 또는 본 명세서에 기재된 이의 목적하는 제형을 치료가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 해당 실시형태에서, 다중-특이성 결합 단백질은 서열번호 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열 을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인을 갖는 항원-결합 부위; 서열번호 3의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 4의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인을 갖는 항원-결합 부위; 서열번호 5의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인을 갖는 항원-결합 부위; 서열번호 7, 83, 84, 85, 86 또는 87의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 8의 아미노산 서열에 대해 아미노산 서열 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인을 갖는 항원-결합 부위; 또는 서열번호 9의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% (예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 동일한 경쇄 가변 도메인을 갖는 항원-결합 부위를 함유할 수 있다.
치료될 암의 유형은 본 명세서에 개시된 다중-특이성 결합 단백질이 결합하는 암 세포 유형과 바람직하게 매칭된다. 예를 들어, 상피세포 접착 분자(EpCAM)를 발현시키는 암, 예컨대 EpCAM을 발현시키는 결장암의 치료는 EpCAM 및 NKG2D에 결합하는 본 명세서에 기재된 다중-특이성 결합 단백질을 이용하여 바람직하게 치료된다.
일부 실시형태에서, 치료될 환자는 다음 중 하나 이상을 발현시키는 암 세포를 함유한다: CD33, HER2, CD2, CD19, CD20, CD30, CD38, CD40, CD52, CD70, EGFR/ERBB1, IGF1R, HER3/ERBB3, HER4/ERBB4, MUC1, CEA, cMET, SLAMF7, PSCA, MICA, MICB, TRAILR1, TRAILR2, MAGE-A3, B7.1, B7.2, CTLA4 및 PD1. 일부 실시형태에서, 치료될 환자는 고형암, 예컨대 뇌암, 두경부암, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막암, 식도암, 백혈병, 폐암, 간암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 직장암, 신장암, 위암, 고환암 또는 자궁암을 가진다. 또 다른 실시형태에서, 암은 혈관 종양, 편평세포암종, 선암종, 소세포 암종, 흑색종, 신경교종, 신경아세포종, 육종(예를 들어, 혈관육종 또는 연골육종), 후두암, 이하선암, 담도암, 갑상선암, 말단 흑자성 흑색종, 광선각화증, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수 백혈병, 샘낭암종, 선종, 선육종, 선 평편상피암종, 항문관암, 항문암, 항문직장암, 성상세포종, 큰질어귀샘암, 기저세포 암종, 담즙암, 골암, 골수암, 기관지암, 기관지샘 암종, 카시노이드, 담관암종, 연골육종, 맥락얼기 유두종/암종, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 투명세포 암종, 결합조직암, 낭선종, 소화계통암, 십이지장암, 내분비계암, 내배엽동종양, 자궁내막증식증, 자궁내막 기질세포 육종, 자궁내막모양 선암종, 내피세포암, 뇌실막세포, 상피세포암, 유잉 육종, 눈 및 안와암, 여성생식기 암, 국소결절성 과증식, 담낭암, 날문방암, 위 기저부 암, 가스트린종, 교모세포종, 글루카곤종, 심장암, 혈관아세포종, 혈관내피종, 혈관종, 간샘종, 간 선종증, 간담도암, 간세포 암종, 호지킨병, 회장암, 인슐린종, 상피내 신생물, 상피내 편평세포 신생물, 간내 담도암, 침윤성 편평세포암종, 공장암, 관절암, 카포씨 육종, 골반암, 거대 세포 암종, 대장암, 평활근육종, 악성 흑색점 흑색종, 림프종, 남성 생식기암, 악성 흑색종, 악성 중피세포 종양, 수아세포종, 수질상피종, 뇌막암, 중피암, 전이성 암종, 구강암, 점막표피모양 암종, 다발성 골수종, 근육암, 비강관암, 신경계암, 신경상피 선암종 결절성 흑색종, 비-상피 피부암, 비-호지킨 림프종, 연맥 세포 암종, 핍지교종암, 구강암, 골육종, 유두상 장액성 선암종, 음경암, 인두암, 뇌하수체 종양, 형질세포종, 가육종, 폐 아세포종, 직장암, 신세포 암종, 호흡계 암, 망막아세포종, 횡문근육종, 육종, 장액성 암종, 부비강암, 피부암, 소세포 암종, 소장암, 평활근육암, 연조직암, 소마토스타틴-분비 종양, 척추암, 편평세포암종, 선조 근육암, 중피세포하층암, 표재 확산 흑색종, T 세포 백혈병, 설암, 미분화 암종, 요관암, 요도암, 소변 방광암, 비뇨기계암, 자궁경부암, 자궁몸통암, 포도막 흑색종, 질암, 사마귀모양 암종, VIPoma, 외음부암, 고분화 암종 또는 윌름 종양이다.
일부 실시형태에서, 치료될 환자는 비-호지킨 림프종, 예컨대 B-세포 림프종 또는 T-세포 림프종을 가진다. 특정 실시형태에서, 비-호지킨 림프종은 B-세포 림프종, 예컨대 미만성 거대 B-세포 림프종, 원발성 종격동 B-세포 림프종, 여포성 림프종, 소형 림프구성 림프종, 맨틀 세포 림프종, 변연대 B-세포 림프종, 림프절외 변연대 B-세포 림프종, 결절성 변연대 B-세포 림프종, 비장 변연대 B-세포 림프종, 버킷 림프종, 림프형질세포성 림프종, 모발세포 백혈병 또는 원발 중추신경계(CNS) 림프종이다. 특정 다른 실시형태에서, 비-호지킨 림프종은 T-세포 림프종, 예컨대 전구체 T-림프아구성 림프종, 말초 T-세포 림프종, 피부 T-세포 림프종, 혈관면역아세포성 T-세포 림프종, 림프절외 자연살해/T-세포 림프종, 장병증 유형 T-세포 림프종, 피하 지방층염-유사 T-세포 림프종, 역형성 거대 세포 림프종 또는 말초 T-세포 림프종이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 단백질은 암을 갖는 환자를 치료하기 위해 추가적인 치료제와 병용하여 사용된다. 암을 치료함에 있어서 병용 요법의 부분으로서 사용될 수 있는 예시적인 치료제는, 예를 들어, 방사선, 미토마이신, 트레티노인, 리보무스틴, 겜시타빈, 빈크리스틴, 에토포사이드, 클라드리빈, 미토브로니톨, 메토트렉세이트, 독소루비신, 카보쿠온, 펜토스타틴, 니트라크린, 지노스타틴, 세트로렐릭스, 레트로졸, 랄티트렉세드, 다우노루비신, 파드로졸, 포테무스틴, 티말파신, 소부족산, 네다프라틴, 사이타라빈, 비칼루타마이드, 비노렐빈, 베스나리논, 아미노글루테티마이드, 암사크린, 프로글루마이드, 엘립티늄 아세테이트, 케탄세린, 독시플루리딘, 에트레티네이트, 아이소트레티노인, 스트렙토조신, 니무스틴, 빈데신, 플루타마이드, 드로게닐, 부토신, 카모푸르, 라족산, 시조필란, 카보플라틴, 미토락톨, 테가푸르, 이포스파마이드, 프레드니무스틴, 피시바닐, 레바미솔, 테니포사이드, 임프로설판, 에노시타빈, 리수라이드, 옥시메톨론, 타목시펜, 프로게스테론, 메피티오스탄, 에피티오스탄올, 포메스탄, 인터페론-알파, 인터페론-2 알파, 인터페론-베타, 인터페론-감마, 집락 자극 인자-1, 집락 자극 인자-2, 데니류킨 디프티톡스, 인터류킨-2, 황체형성 호르몬 방출 인자 및 동족 수용체에 대해 차별적인 결합 및 증가된 또는 감소된 혈청 반감기를 나타낼 수 있는 앞서 언급한 제제의 변형을 포함한다.
암을 치료함에 있어서 병용요법의 부분으로서 사용될 수 있는 추가적인 부류의 제제는 면역 관문 저해제이다. 예시적인 면역 관문 저해제는 (i) 세포독성 T-림프구-연관 항원 4(CTLA4), (ii) 세포예정사 단백질 1(PD1), (iii) PDL1, (iv) LAG3, (v) B7-H3, (vi) B7-H4 및 (vii) TIM3 중 하나 이상을 저해하는 제제를 포함한다. CTLA4 저해제 이필리무맙은 흑색종 치료용으로 미국식품의약국(United States Food and Drug Administration)에 의해 승인되었다.
암을 치료함에 있어서 병용 요법으로서 사용될 수 있는 또 다른 제제는 비-면역관문 표적(예를 들어, 허셉틴) 및 비-세포독성제(예를 들어, 티로신-키나제 저해제)를 표적화하는 단클론성 항체 제제이다.
항암제의 또 다른 범주는, 예를 들어: (i) ALK 저해제, ATR 저해제, A2A 길항제, 염기 절제 수선 저해제, Bcr-Abl 타이로신 키나제 저해제, 브루톤 타이로신 키나제(Bruton's Tyrosine Kinase) 저해제, CDC7 저해제, CHK1 저해제, 사이클린-의존적 키나제 저해제, DNA-PK 저해제, DNA-PK와 mTOR 둘 다의 저해제, DNMT1 저해제, DNMT1 저해제 + 2-클로로-데옥시아데노신, HDAC 저해제, 헤지호그 신호전달 경로(Hedgehog Signaling Pathway 저해제, IDO 저해제, JAK 저해제, mTOR 저해제, MEK 저해제, MELK 저해제, MTH1 저해제, PARP 저해제, 포스포이노시타이드 3-키나제 저해제, PARP1과 DHODH 둘 다의 저해제, 프로테아좀 저해제, 토포아이소머라제-II 저해제, 타이로신 키나제 저해제, VEGFR 저해제, 및 WEE1 저해제로부터 선택된 저해제; (ii) OX40, CD137, CD40, GITR, CD27, HVEM, TNFRSF25 또는 ICOS의 작용제; 및 (iii) IL-12, IL-15, GM-CSF 및 G-CSF로부터 선택된 사이토카인을 포함한다.
본 발명의 단백질은 또한 원발성 병변의 수술적 제거에 대한 부가물로서 사용될 수 있다.
단백질의 양 및 추가적인 치료제 및 상대적 투여 시간은 목적하는 병용 치료 효과를 달성하기 위해 선택될 수 있다. 예를 들어, 이러한 치료가 필요한 환자에게 병용 요법을 투여할 때, 조합물의 치료제, 또는 약제학적 조성물 또는 치료제를 포함하는 조성물은 임의의 순서로, 예컨대 순차적으로, 병행하여, 함께, 동시 등으로 투여될 수 있다. 추가로, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 단백질은 추가적인 치료제(들)가 예방적 또는 치료적 효과가 이의 예방적 또는 치료적 효과를 발휘할 때, 또는 그 반대일 때 투여될 수 있다.
상기 설명은 본 발명의 다중 양상 및 실시형태를 기재한다. 본 출원은 양상 및 실시형태의 모든 조합 및 순열을 구체적으로 상정한다.
실시예
이제 일반적으로 기재되는 본 발명은 본 발명의 특정 양상 및 실시형태의 예시적 목적을 위해서만 포함되고, 본 발명을 제한하는 것으로 의도되지 않는 다음의 실시예를 참조로 하여 더욱 용이하게 이해할 것이다.
실시예 1 - 다양한 NKG2D-결합 도메인의 결합 친화도
다양한 NKG2D-결합 도메인의 역학 및 친화도는 비아코어(Biacore) 8K 기기(GE 헬스케어)를 이용하여 표면 플라즈몬 공명에 의해 평가하였다. 항-인간 Fc 항체는 표준 아민 결합 화학을 이용하여 CM5 칩 상에 고정시켰다. 다양한 NKG2D-결합 도메인을 함유하는 인간 단클론성 항체를 대략 100 RU의 밀도로 항-인간 Fc 칩 상에서 포획하였다. 0.411 내지 100nM 가용성 마우스 Fc-인간 NKG2D 이량체를 함유하는 용액은 37℃에서 30㎕/분으로 포획된 NKG2D 항체 및 대조군 표면에 대해 주사하였다. 표면을 10mM 글리신, pH 1.8의 빠른 주사에 의해 주기 사이에 재생시켰다. 역학 속도 상수를 얻기 위해, 이중-참조 데이터를 비아코어 8K 평가 소프트웨어(GE 헬스케어(GE Healthcare))를 이용하여 1:1 상호작용 모델에 적합화시켰다. 평형 결합 상수　K D 를 해리 상수 k d 및 결합 상수 k a (k d /k a )의 비에 의해 결정하였다. 표 9 및 도 3에 나타낸 바와 같이, NKG2D에 대한 NKG2D-결합 도메인의 결합 친화도는 10 내지 62nM의 범위이다.
Figure pct00013
실시예 2 - ADI-27744 클론의 결합 에피토프 결합
ADI-27744(A44) NKG2D-결합 도메인의 비닝(binning)은 비아코어 8K 기기를 이용하여 표면 플라즈몬 공명에 의해 일련의 항체 및 ULBP6(NKG2D 천연 리간드)에 대해 수행하였다. 간략하게, 마우스 Fc-인간 NKG2D는 대략 100 RU의 밀도로 CM5 칩 상에 고정시킨 항-마우스 Fc 항체를 이용하여 포획하였다. 이것에 30㎕/분으로 25℃에서 ADI-27744, ADI-27749, F47을 포함하는 NKG2D 단클론성 항체(이하에 열거하는 서열) 또는 1D11(상업적 단클론성 NKG2D 항체), ULBP6(이하에 열거하는 서열), MS(노보 노르디스크(Novo Nordisk)로부터의 NKG2D 항체, 이하에 열거하는 서열) 및 MAB139(알앤디 시스템(R&D system)으로부터의 NKG2D 항체, 클론 149810)를 비롯한 항체의 연속 주사가 이어졌다. 모든 데이터 분석을 위해 비아코어 8K 평가 소프트웨어를 사용하였다.
Figure pct00014
Figure pct00015
도 4A는 ADI-27744를 포함하는 NKG2D 단클론성 항체를 고정된 NKG2D에 대해 주사한 후에, ULBP6를 주사하는 프로파일을 나타낸다. 도 4B는 고정된 NKG2D에 대해 주사된 ULBP6 다음에 ADI-27744를 포함하는 NKG2D 단클론성 항체의 주사의 프로파일을 나타낸다. 이들 결과는 ADI-27744 항원-결합 부위를 포함하는 NKG2D 단클론성 항체가 NKG2D에 대한 ULBP6 결합을 차단하지 않고, 즉, ADI-27744가 ULBP6로부터의 NKG2D 상에서 상이한 에피토프에 결합한다는 것을 나타낸다.
도 4C는 MS 단클론성 항체가 NKG2D에 대해 주사된 후에, ULBP6가 주사되는 프로파일을 나타낸다. MS 단클론성 항체는 ULBP6이 NKG2D에 결합하는 것을 차단한다. 도 4D 내지 도 4F는 MS, 1D11 또는 MAB139가 고정된 NKG2D에 대해 주사된 후에, ADI-27744를 포함하는 NKG2D 단클론성 항체가 주사되는 프로파일을 나타낸다. 도 4G 내지 도 4H는 ADI-27744를 포함하는 NKG2D 단클론성 항체가 고정된 NKG2D 이상으로 주사된 후에 ADI-27749 또는 F47을 포함하는 NKG2D 단클론성 항체가 주사된 프로파일을 나타낸다. ADI-27744는 NKG2D에 대한 MS, 1D11 및 MAB139의 결합을 차단시키지 않는다. ADI-27749 및 F47은 NKG2D에 대한 ADI-27744의 결합을 차단시키지 않는다. 이들 결과는 ADI-27744가 MS, 1D11, MAB139, ADI-27749 및 F47 결합 에피토프(들)와 상이한 NKG2D 상의 독특한 에피토프에 결합한다는 것을 나타낸다.
실시예 3 - 삼중특이성 결합 단백질은 NKG2D에 결합한다
EL4 마우스 림프종 세포주는 인간 NKG2D를 발현시키도록 조작하였다. NKG2D-결합 도메인, 종양-연관 항원-결합 도메인(예컨대 CD33- 또는 HER2-결합 도메인) 및 도 1에 나타내는 바와 같이 CD16에 결합하는 Fc 도메인을 각각 함유하는 삼중특이성 결합 단백질(TriNKET)은 EL4 세포 상에서 발현된 세포외 NKG2D에 대한 그들의 친화도에 대해 검사하였다. 형광단-접합 항-인간 IgG 2차 항체를 이용하는 NKG2D에 대한 다중 특이성 결합 단백질의 결합을 검출하였다. 세포는 유세포분석에 의해 분석하고, 배경에 대한 배수(fold-over-bac㎏round: FOB)는 NKG2D 발현 세포의 평균 형광 강도 (MFI)를 이용하여 계산하고, 모 EL4 세포에 비교하였다.
시험한 TriNKET는 CD33-TriNKET-A44(ADI-27744 및 CD33 결합 도메인), CD33-TriNKET-A49(ADI-27749 및 CD33 결합 도메인), CD33-TriNKET-F63(ADI-29463 및 CD33 결합 도메인), HER2-TriNKET-A44(ADI-27744 및 CD33 결합 도메인), HER2-TriNKET-A49(ADI-27749 및 HER2 결합 도메인), HER2-TriNKET-F63(ADI-29463 및 HER-결합 도메인), 및 HER2-TriNKET-E79(ADI-29379 및 HER2 결합 도메인)를 포함한다. HER2-결합 도메인은 트라스투주맙의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인으로 구성되었다. CD33 결합 도메인은 이하에 열거하는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인으로 구성된다.
Figure pct00016
모든 TriNKET는 EL4 세포 상에서 NKG2D에 결합하지만, 상이한 친화도를 가진다. CD33-TriNKET-A44는 HER2-TriNKET-A44와 동일한 결합 프로파일을 나타내고, CD33-TriNKET-A49는 HER2-TriNKET-A49 및 CD33-TriNKET-F63 내지 HER2-TriNKET-F63과 동일한 결합 프로파일을 나타낸다. 각각의 클론에 대한 NKG2D-결합 친화도는 인간 및 마우스 NKG2D를 발현시키는 세포와 유사하였다(도 5 내지 도 6).
실시예 4 - 삼중특이성 결합 단백질은 인간 종양 항원에 결합한다
삼중특이성 결합 단백질은 CD33에 결합한다
CD33을 발현시키는 인간 AML 세포주 MV4-11을 사용하여 종양 연관 항원에 대한 TriNKET의 결합을 분석하였다. TriNKET 및 모 CD33 단클론성 항체를 세포와 함께 인큐베이션시켰고, 형광단-접합 항-인간 IgG 2차 항체를 이용하여 결합을 검출하였다. 세포는 유세포분석에 의해 분석하고, 2차 항체 대조군에 대해 정규화시킨 TriNKET 및 모 단클론성 CD33 항체로부터의 평균 형광 강도(MFI)를 이용하여 배경에 대한 배수(FOB)를 계산하였다.
CD33-TriNKET-A44, CD33-TriNKET-A49 및 CD33-TriNKET-F63는 모 CD33 항체에 비해 CD33에 대해 비슷한 수준의 결합을 나타낸다(도 7).
삼중특이성 결합 단백질은 HER2에 결합한다
HER2를 발현시키는 인간 암 세포주를 사용하여 종양 연관 항원에 대한 TriNKET의 결합을 분석하였다. 신장 세포 암종 세포주 786-O는 저수준의 HER2를 발현시키고, 인간 폐암 세포주 NCI-H661은 보통 수준의 HER2를 발현시킨다. TriNKET 및 선택적으로 모 HER2 단클론성 항체(트라스투주맙)를 세포와 함께 인큐베이션시켰고, 형광단-접합 항-인간 IgG 2차 항체를 이용하여 결합을 검출하였다. 세포는 유세포분석에 의해 분석하고, 2차 항체 대조군에 대해 정규화시킨 TriNKET 및 트라스투주맙으로부터의 평균 형광 강도(MFI)를 이용하여 배경에 대한 배수(FOB)를 계산하였다.
HER2-TriNKET-A44, HER2-TriNKET-A49 및 HER2-TriNKET-F63는 트라스투주맙에 비교하여 786-O 세포 상에서 발현된 HER2에 대해 비슷한 수준의 결합을 나타낸다(도 8). HER2-TriNKET-E79에 의한 NCI-H661 세포 상에서 발현된 HER2에 대한 결합을 나타낸다(도 9).
실시예 5 - 삼중특이성 결합 단백질은 NK 세포를 활성화시킨다
말초 혈액 단핵구 세포(PBMC)는 밀도 구배 원심분리를 이용하여 인간 말초 혈액 버피코트로부터 단리시켰다. NK 세포(CD3- CD56+)를 PBMC로부터 자기 비드에 의한 음성 선택을 이용하여 단리시켰고, 단리된 NK 세포의 순도는 전형적으로 90% 초과였다. 단리된 NK 세포는 사이토카인 없이 밤새 활성화 또는 휴지를 위해 100ng/㎖ IL-2를 함유하는 배지에서 배양시켰다. 활성화 후 24 내지 48시간 이내에 IL-2-활성화된 NK 세포를 사용하였다.
종양 항원을 발현시키는 인간 암 세포를 채취하고 나서, 2×106개의 세포/㎖로 배양 배지에서 재현탁시켰다. 종양 항원을 표적화하는 단클론성 항체 또는 TriNKET를 배양 배지에서 희석시켰다. 활성화된 NK 세포를 채취하고 나서, 세척하고, 배양 배지에서 2×106개의 세포/㎖로 재현탁시켰다. 이어서, 암 세포를 IL-2의 존재 하에 단클론성 항체/TriNKET 및 활성화된 NK 세포와 혼합하였다. 브레펠딘-A 및 모넨신을 또한 혼합 배양물에 첨가하여 세포내 사이토카인 염색을 위해 세포 밖의 단백질 수송을 차단시켰다. 형광단-접합 항-CD107a를 혼합 배양물에 첨가하였고, 배양물을 4시간 동안 인큐베이션시킨 후에, CD3, CD56 및 IFN-감마에 대한 형광단-접합 항체를 이용하여 FACS 분석에 대해 샘플을 제조하였다. CD3- CD56+ 세포에서 CD107a 및 IFN-감마 염색을 분석하여 NK 세포 활성화를 평가하였다. CD107a/IFN-감마 이중-양성 세포의 증가는 하나의 수용체보다는 2개의 활성화 수용체의 맞물림을 통해 더 양호한 NK 세포 활성화를 나타낸다.
TriNKET는 CD107a 탈과립 및 IFN-감마 생성의 증가로 표시되는 바와 같이 각각 HER2-발현 NCI-H661 세포(도 10) 및 SkBr-3 세포(도 11)와 함께 공동 배양시킨 인간 NK 세포의 활성화를 매개한다. 단클론성 항체 트라스투주맙에 비해, TriNKET는 인간 암 세포의 존재 하에 인간 NK 세포의 우수한 활성화를 나타낸다.
TriNKET는 CD107a 탈과립 및 IFN-감마 생성의 증가로 나타내는 바와 같은 CD33-발현 인간 AML Mv4-11 세포와 함께 공동배양시킨 인간 NK 세포의 활성화를 매개한다(도 12). 단클론성 항체 항-CD33 항체에 비해, TriNKET는 인간 암 세포의 존재 하에 인간 NK 세포의 우수한 활성화를 나타낸다.
실시예 6 - 삼중특이성 결합 단백질은 표적 암 세포의 세포독성을 가능하게 한다
말초 혈액 단핵구 세포(PBMC)는 밀도 구배 원심분리를 이용하여 인간 말초 혈액 버피코트로부터 단리시켰다. NK 세포(CD3- CD56+)를 PBMC로부터 자기 비드에 의한 음성 선택을 이용하여 단리시켰고, 단리된 NK 세포의 순도는 전형적으로 90% 초과였다. 단리된 NK 세포는 사이토카인 없이 밤새 활성화 또는 휴지를 위해 100ng/㎖ IL-2를 함유하는 배지에서 배양시켰다. 다음날에 세포독성 분석에서 IL-2-활성화 또는 휴지 NK 세포를 사용하였다.
TriNKET의 존재 하에 암 세포를 용해시키는 인간 NK 세포의 능력을 시험하기 위해, 프로메가(Promega)로부터의 cyto Tox 96 비-방사성 세포독성 분석(G1780)을 제조업자의 설명서에 따라 사용하였다. 간략하게, 종양 항원을 발현시키는 인간 암 세포를 채취하고 나서, 세척하고, 1 내지 2×105개의 세포/㎖로 배양 배지에서 재현탁시켰다. 휴지 및 활성화된 NK 세포를 채취하고 나서, 세척하고, 암 세포와 동일한 배양 배지에서 105 내지 2.0×106개의 세포/㎖로 재현탁시켰다. 96웰 플레이트의 각각의 웰에서, 50㎕의 암세포 현탁액을 암 세포 상에서 발현된 종양 항원을 표적화하는 TriNKET가 있는 또는 이것이 없는 50㎕의 NK 세포 현탁액과 혼합하였다. 37℃에서 5% CO2와 함께 3시간 15분 동안 인큐베이션시킨 후에, 각각 암 세포만을 함유하는 웰에, 최대 용해를 위한 배지만을 함유하는 웰 및 음성 시약 대조군에 10× 용해 완충제를 첨가하였다. 이어서, 플레이트를 총 4시간의 인큐베이션에 도달하도록 추가 45분 동안 인큐베이션에 다시 넣었다. 이어서, 세포를 펠릿화시키고, 배양물 상청액을 새로운 96 웰 플레이트에 옮기고, 진행을 위해 기질과 혼합하였다. 새로운 플레이트를 실온에서 30분 동안 인큐베이션시켰고, 흡광도를 SpectraMax i3x 상에서 492㎚로 판독하였다. 암 세포의 특이적 용해 백분율을 다음과 같이 계산하였다: 특이적 용해% = ((실험적 용해 - NK 세포 단독으로부터의 자발적 용해 - 암 세포 단독으로부터의 자발적 용해) / (최대 용해 - 음성 시약 대조군)) * 100%.
TriNKET는 CD33-양성 Molm-13 인간 AML 세포주에 대해 인간 NK 세포의 세포독성을 매개한다. 도 13에 나타내는 바와 같이, 휴지 인간 NK 세포를 Molm-13 암 세포와 혼합하였고, TriNKET는 암 세포에 대해 용량 반응 방식으로 휴지 인간 NK 세포의 세포독성 활성을 향상시킬 수 있다. 점선은 TriNKET가 없는 휴지 NK 세포의 세포독성 활성을 나타낸다. 도 14에 나타내는 바와 같이, 활성화된 인간 NK 세포를 Molm-13 암 세포와 혼합하였고, TriNKET는 암 세포에 대해 용량 반응 방식에서조차 활성화된 인간 NK 세포의 세포독성 활성을 향상시킬 수 있다.
TriNKET는 HER2-양성 786-O 인간 신세포 암종 세포주에 대해 인간 NK 세포의 세포독성을 매개한다. 도 15에 나타내는 바와 같이, 휴지 인간 NK 세포를 786-O 암 세포와 혼합하였고, TriNKET는 암 세포에 대해 용량 반응 방식으로 휴지 인간 NK 세포의 세포독성 활성을 향상시킬 수 있다(각각의 TriNKET를 분석에서 5, 1, 0.2㎍/㎖으로 첨가하고, 결과를 도 15 내지 도 16에서 각각의 TriNKET에서 좌에서 우로 3개의 열로 나타낸다). 점선은 TriNKET의 부재 하에 786-O 세포에 대한 휴지 NK 세포의 세포독성 활성을 나타낸다. 도 16에 나타내는 바와 같이, 활성화된 인간 NK 세포를 786-O 암 세포와 혼합하였고, TriNKET는 암 세포에 대해 용량 반응 방식에서조차 활성화된 인간 NK 세포의 세포독성 활성을 향상시킬 수 있다. 점선은 TriNKET의 부재 하에 786-O 세포에 대한 활성화된 NK 세포의 세포독성 활성을 나타낸다.
실시예 7 - 변이체를 함유하는 ADI-27749 및 TriNKET의 변이체
상기 기재한 바와 같이, ADI-27749(A49)는 특히 GAPMGAAAGWFDP(서열번호 71)의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 함유한다. 서열번호 7의 102번 위치에서(즉, 이 CDR3 서열의 4번 위치에서) Met은 Gln, Leu, Ile, Phe 또는 Val으로 대체되어, 대응하는 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, 및 표 1에 제공된 CDR 서열을 갖는 NKG2D 항체 A49MQ, A49ML, A49MI, A49MF 및 A49MV를 각각 생성할 수 있다.
avg_pro_patch_cdr_hyd의 파라미터 세팅을 이용하는 MOE2018.01 프로그램을 이용하여 소수성에 대한 이들 돌연변이 효과를 분석하였다. 단백질 빌더 모듈을 이용하여 잔기를 돌연변이시키고, 모든 잔기를 테더링시킨 후에 전체 Fab를 최소화하였다. BIOMOE에서 낮은 MD 프로토콜을 이용하여 역학적 특성 샘플링을 수행하였다. 표 11에 나타낸 바와 같이, 이들 돌연변이는 A49 Fab의 예측된 소수성에 대한 실질적인 음성 효과를 갖지 않았다.
Figure pct00017
A49를 함유하는 TriNKET("TriNKET A")의 소수성 및 Met을 대신하는 Ile, Leu, Val, Gln 또는 Phe의 치환을 갖는 TriNKET A의 돌연변이체 형태("TriNKET A*")는 분석적 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)에 의해 시험하였다. TriNKET 각각을 또한 제1 종양 항원에 결합시켰다. 표 12에 나타낸 바와 같이, TriNKET A*의 체류 시간은 TriNKET A의 체류 시간과 유사하였다.
Figure pct00018
TriNKET A 및 TriNKET A*의 열적 안정성을 pH 6.0에서 20mM 히스티딘, 260mM 수크로스 및 0.005% PS-80의 시차주사 열량 분석(DSC)에 의해 시험하였다. Tm의 값은 표 13에 나타내고, 여기서 Tm은 개개 도메인의 중간점 전이 온도이다. M102 돌연변이는 TriNKET A에 비해 0.6 및 0.7℃만큼 더 낮게 이동시킴으로써 2개의 가장 안정한 전이의 Tm 값(Tm3 및 Tm4)에 대해 더 적은 효과를 가졌다. 더 이른 전이(Tm1 및 Tm2)는 영향받지 않았다. 따라서, M102 돌연변이는 TriNKET A의 전반적 열 안정성에 대해 한계효과만을 가졌다.
Figure pct00019
인간 NKG2D 및 뮤린 Fc의 융합 단백질에 대한 TriNKET A 및 TriNKET A*의 결합("mFc-hNKG2D")은 37℃에서 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 특성규명하였다. 두 상이한 적합도, 즉, 정상 상태 친화도 적합도 및 역학 적합도를 이용하여 평형상태 친화도 데이터를 얻었다(도 32). 역학 상수 및 평형 친화도 상수를 계산하고 나서, TriNKET A*에 대한 2회의 독립적 실험 및 TriNKET A에 대한 3회의 독립적 실험으로부터의 데이터의 평균을 내었다.
Figure pct00020
표 14에 나타낸 바와 같이, 친화도와 역학 적합도 둘 다로부터 얻은 평형 친화도 상수(KD)는 복제물 간에 매우 유사하였고, 이는 측정한 파라미터에서의 고신뢰도를 시사하였다. M102 변이체는 TriNKET A에 비해 인간 NKG2D에 대해 2배 더 적은 감소된 친화도를 가졌다. TriNKET A*에 대한 KD는 (6.87±0.16) × 10-7M인 반면, TriNKET A에 대한 K D 는 (4.87±0.83) × 10-7 M(친화도 적합도로부터 계산)이었다. KD를 역학 접합도로부터 계산하였을 때 친화도의 유사한 차이가 관찰되었다. TriNKET A*에 대한 NKG2D 결합의 화학량론은 0.85±0.12이고, 이는 TriNKET A에 대한 1.01±0.11과 유사한데, 이는 각각의 NKG2D 이량체가 TriNKET A*의 하나의 분자에 결합한다는 것을 확인한다. 이는 M102 돌연변이가 인간 NKG2D에 대한 A49-함유 TriNKET의 결합에 대해 약간의 효과만을 가진다는 것을 시사한다.
최종적으로, TriNKET의 효능에 대한 M102 돌연변이 효과를 세포독성 분석에서 평가하였다. 간략하게, CD16a의 고친화도 변이체(158V)를 발현시키는 KHYG-1 세포는 레트로바이러스 형질도입을 통해 생성하였다. 형질도입 후에, 세포를 퓨로마이신-함유 성장 배지에서 선택하여 KHYG-1-CD16V 세포의 선택 집단을 생성하였다. 선택 집단은 10ng/㎖ 인간 IL-2를 함유하는 배지에서 유지시켰다. 세포독성 분석에서 효과기로서 사용하기 위해 KHYG-1-CD16V 세포를 제조하기 위해, 세포를 배양물로부터 채취하고 나서, 펠릿화시키고, IL-2 없이 배양 배지에서 3회 세척하고, IL-2 없이 배양 배지에서 재현탁시키고 나서, 24시간 동안 휴지시켰다.
관심 대상의 표적을 발현시키는 인간 암 세포주를 배양물로부터 채취하였다. 세포를 HBS로 세척하고 나서, BATDA 시약(퍼킨 엘머 C136-100)으로 표지를 위해 106개의 세포/㎖로 성장 배지에서 재현탁시켰다. 표적 세포의 표지를 위해 제조업자의 설명서에 따랐다. 표지 후에, 세포를 HBS로 3회 세척하였고, 배양 배지에서 0.5×105개의 세포/㎖로 재현탁시켰다. 100㎕의 BATDA 표지 세포를 96-웰 플레이트의 각각의 웰에 첨가하였다.
TriNKET를 배양 배지에서 연속 희석시키고, 50㎕의 희석된 TriNKET를 각각의 웰에 첨가하였다. 휴지 NK 세포를 배양물로부터 채취하였고, 세척하고 나서, 배양 배지에서 1.0×106개의 세포/㎖로 재현탁시켰다. 50㎕의 NK 세포를 플레이트의 각각의 웰에 첨가하여 10:1의 목적하는 E:T 비를 달성하고 각각의 웰에서 총 200㎕의 배양 용적을 생성하였다. 플레이트를 37℃에서 5% CO2와 함께 2 내지 3시간 동안 인큐베이션시켰다.
배양시킨 후에, 플레이트를 인큐베이터로부터 제거하였고, 세포를 200×g 에서 5분 동안 원심분리에 의해 펠릿화시켰다. 20㎕의 배양물 상청액을 제조업자로부터 제공받은 깨끗한 미량정량판에 옮겼다. NK 세포 없이 단독으로 인큐베이션시킨 표지된 세포로부터의 상청액을 사용하여 TDA의 자발적 방출을 측정하였다. 1% Triton-X와 함께 인큐베이션시킨 표지 세포로부터의 상청액을 사용하여 표적 세포의 최대 용해를 측정하였다. 인큐베이션의 2 내지 3시간 전에 표지 세포로부터의 상청액을 사용하여 배경 측정 및 품질 관리 목적을 위해 사용하였다.
200㎕의 실온 유로퓸 용액(퍼킨 엘머 C135-100)을 배양물 상청액을 함유하는 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 빛으로부터 보호하였고, 250 rpm에서 15분 동안 플레이트 진탕기 상에서 인큐베이션시켰다. SpectraMax i3X 기기를 이용하여 형광을 측정하였다. 형광 수준은 표적 세포의 용해를 나타내었다. 특이적 용해%의 값을 계산하였다: 특이적 용해% = ((실험적 방출 - 자발적 방출)/(최대 방출 - 자발적 방출)) * 100%.
TriNKET A 및 TriNKET A*의 활성을 측정하기 위해, 제1 종양 항원을 발현시킨 세포주를 표적 세포로서 선택하였다. 비교를 위해 TriNKET A의 두 상이한 로트를 사용하였다. 특이적 용해 값%를 도 33에서 플롯팅시키고, EC50 및 최대 특이적 용해% 값을 표 15에서 요약한다. TriNKET A*의 EC50 및 최대 특이적 용해 값%는 TriNKET A와 유사하였고, 이는 M102 돌연변이가 TriNKET A의 생물학적 활성에 영향을 미치지 않는다는 것을 시사한다.
Figure pct00021
TriNKET 활성에 대한 M102의 효과 부재는 종양 항원-특이적이지 않았다는 것을 확인하기 위해, 제2의, 상이한 종양 항원에 결합하는 TriNKET A 및 TriNKET A*를 작제하였다. 표적 세포로서 제2 종양 항원 및 효과기 세포로서 KHYG-1-CD16V 세포를 발현시킨 세포주를 이용하는 세포독성 분석에서 두 TriNKET의 활성을 비교하였다. 도 34에 나타낸 바와 같이, TriNKET A*는 TriNKET A에 대해 등가의 활성을 입증하였다.
참고에 의한 포함
본 명세서에 언급된 특허 문헌 및 과학적 논문 각각의 전체 개시내용은 모든 목적을 위해 참고로 포함된다.
균등론
본 발명은 이의 정신 또는 본질적 특징으로부터 벗어나는 일 없이 다른 구체적 형태로 구현될 수 있다. 따라서 앞서 언급한 실시형태는 본 명세서에 기재된 발명을 제한하기보다는 예시적인 모든 사항에 고려되어야 한다. 따라서 본 발명의 범주는 앞서 언급한 설명에 의하기 보다는 첨부하는 청구범위로 나타내며, 청구범위의 의미 및 범위 내인 모든 변화는 이에 포함되는 것으로 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> DRAGONFLY THERAPEUTICS, INC. <120> ANTIBODY VARIABLE DOMAINS TARGETING THE NKG2D RECEPTOR <130> WO/2019/157366 <140> PCT/US2019/017330 <141> 2018-02-08 <150> US 62/716,259 <151> 2018-08-08 <150> US 62/628,161 <151> 2018-02-08 <160> 86 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Pro Asn Tyr Gly Asp Thr Thr His Asp Tyr Tyr Tyr 100 105 110 Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 2 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 2 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asp Trp Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 3 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 3 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Thr Gly Glu Tyr Tyr Asp Thr Asp Asp His Gly Met Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 4 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 4 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Asp Tyr Trp Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 5 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 5 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Gly Ala Gly Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 6 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 6 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Ser Tyr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 7 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 7 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Pro Met Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 8 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 8 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Ser Phe Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 9 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 9 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Ala Gly Phe Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Tyr Tyr Met 100 105 110 Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 10 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 10 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asp Asn Trp Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 11 Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 12 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 12 Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 13 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 13 Ala Arg Gly Ala Pro Asn Tyr Gly Asp Thr Thr His Asp Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 14 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 15 Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr 1 5 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 16 Gln Gln Tyr Asp Asp Trp Pro Phe Thr 1 5 <210> 17 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 17 Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 18 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 18 Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 19 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 19 Ala Arg Asp Thr Gly Glu Tyr Tyr Asp Thr Asp Asp His Gly Met Asp 1 5 10 15 Val <210> 20 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 20 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 21 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 21 Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr 1 5 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 22 Gln Gln Asp Asp Tyr Trp Pro Pro Thr 1 5 <210> 23 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 23 Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 24 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 24 Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 25 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 25 Ala Lys Asp Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Gly Ala Gly Asp Tyr 1 5 10 <210> 26 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 26 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 27 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 27 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 28 Gln Gln Gly Val Ser Tyr Pro Arg Thr 1 5 <210> 29 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 29 Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn 1 5 <210> 30 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 30 Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 31 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 31 Ala Arg Gly Ala Pro Met Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro 1 5 10 15 <210> 32 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 32 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 33 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 33 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 34 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 34 Gln Gln Gly Val Ser Phe Pro Arg Thr 1 5 <210> 35 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 35 Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 36 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 36 Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 37 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 37 Ala Arg Glu Gly Ala Gly Phe Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Tyr Tyr Met 1 5 10 15 Asp Val <210> 38 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 38 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 39 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 39 Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 40 Gln Gln Ser Asp Asn Trp Pro Phe Thr 1 5 <210> 41 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 41 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Pro Val Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 42 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> VARIANT <222> (102)..(102) <223> Met, Leu, Ile, Val, Gln or Phe <400> 42 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Pro Xaa Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 43 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> Met, Leu, Ile, Val, Gln or Phe <400> 43 Ala Arg Gly Ala Pro Xaa Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro 1 5 10 15 <210> 44 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> VARIANT <222> (4)..(4) <223> Met, Leu, Ile, Val, Gln or Phe <400> 44 Gly Ala Pro Xaa Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 45 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 45 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 46 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 46 Gly Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 47 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 47 Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 48 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 48 Ser Tyr Ser Met Asn 1 5 <210> 49 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 49 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Val Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Glu Val Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 50 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 50 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Ile 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asn 65 70 75 80 Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Tyr Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 51 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 51 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 52 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 52 Gly Ser Phe Ser Gly Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 53 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 53 Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 54 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 54 Ala Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 55 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 55 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Thr Phe Ile Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 56 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 56 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 57 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 57 Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser 1 5 <210> 58 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 58 Gln Gln Tyr Asp Thr Phe Ile Thr 1 5 <210> 59 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 59 Gln Val His Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Asp Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly His Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Asn Trp Asp Asp Ala Phe Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 60 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 60 Ser Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 61 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 61 His Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 62 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 62 Trp Asp Asp Ala Phe Asn Ile 1 5 <210> 63 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 63 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 64 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 64 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 65 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 65 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 66 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 66 Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr 1 5 <210> 67 <211> 193 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67 Arg Arg Asp Asp Pro His Ser Leu Cys Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro 1 5 10 15 Lys Phe Arg Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp 20 25 30 Glu Lys Thr Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro 35 40 45 Val Ser Pro Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Met Ala Trp Lys Ala 50 55 60 Gln Asn Pro Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu 65 70 75 80 Leu Asp Ile Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu 85 90 95 Gln Ala Arg Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly 100 105 110 Ser Trp Gln Phe Ser Ile Asp Gly Gln Thr Phe Leu Leu Phe Asp Ser 115 120 125 Glu Lys Arg Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys 130 135 140 Glu Lys Trp Glu Asn Asp Lys Asp Val Ala Met Ser Phe His Tyr Ile 145 150 155 160 Ser Met Gly Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met 165 170 175 Asp Ser Thr Leu Glu Pro Ser Ala Gly Ala Pro Leu Ala Met Ser Ser 180 185 190 Gly <210> 68 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 68 Gly Ala Pro Asn Tyr Gly Asp Thr Thr His Asp Tyr Tyr Tyr Met Asp 1 5 10 15 Val <210> 69 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 69 Asp Thr Gly Glu Tyr Tyr Asp Thr Asp Asp His Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 70 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 70 Asp Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Gly Ala Gly Asp Tyr 1 5 10 <210> 71 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 71 Gly Ala Pro Met Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 72 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 72 Glu Gly Ala Gly Phe Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Tyr Tyr Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 73 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 73 Ala Arg Gly Ala Pro Gln Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro 1 5 10 15 <210> 74 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 74 Gly Ala Pro Gln Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 75 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 75 Ala Arg Gly Ala Pro Leu Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro 1 5 10 15 <210> 76 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 76 Gly Ala Pro Leu Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 77 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 77 Ala Arg Gly Ala Pro Ile Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro 1 5 10 15 <210> 78 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 78 Gly Ala Pro Ile Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 79 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 79 Ala Arg Gly Ala Pro Phe Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro 1 5 10 15 <210> 80 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 80 Gly Ala Pro Phe Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 81 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 81 Ala Arg Gly Ala Pro Val Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro 1 5 10 15 <210> 82 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 82 Gly Ala Pro Val Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 83 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 83 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Pro Gln Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 84 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 84 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Pro Leu Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 85 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 85 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Pro Ile Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 86 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 86 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Pro Phe Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120

Claims (80)

  1. 서열번호 7의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인.
  2. 제1항에 있어서, 상기 아미노산 서열은,
    서열번호 48의 아미노산 서열로 표시되는 상보성-결정 영역 1(complementarity-determining region 1: CDR1) 서열;
    서열번호 30의 아미노산 서열로 표시되는 상보성-결정 영역 2(CDR2) 서열; 및
    서열번호 44의 아미노산 서열로 표시되는 상보성-결정 영역 3(CDR3) 서열
    을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인.
  3. 제1항에 있어서, 상기 아미노산 서열은,
    서열번호 29의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열;
    서열번호 30의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열; 및
    서열번호 31의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열
    을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인.
  4. 제1항에 있어서, 상기 아미노산 서열은,
    서열번호 48의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열;
    서열번호 30의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열; 및
    서열번호 71의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열
    을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인.
  5. 제1항에 있어서, 상기 아미노산 서열은,
    서열번호 29의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열;
    서열번호 30의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열; 및
    서열번호 77의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열
    을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인.
  6. 제1항에 있어서, 상기 아미노산 서열은,
    서열번호 48의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열;
    서열번호 30의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열; 및
    서열번호 78의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열
    을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인.
  7. 서열번호 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인.
  8. 제7항에 있어서, 상기 아미노산 서열은,
    서열번호 11의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열;
    서열번호 12의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열; 및
    서열번호 13의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열
    을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인.
  9. 제7항에 있어서, 상기 아미노산 서열은,
    서열번호 45의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열;
    서열번호 12의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열; 및
    서열번호 68의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열
    을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인.
  10. 서열번호 3의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인.
  11. 제10항에 있어서, 상기 아미노산 서열은,
    서열번호 17의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열;
    서열번호 18의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열; 및
    서열번호 19의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열
    을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인.
  12. 제10항에 있어서, 상기 아미노산 서열은,
    서열번호 46의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열;
    서열번호 18의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열; 및
    서열번호 69의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열
    을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인.
  13. 서열번호 5의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인.
  14. 제13항에 있어서, 상기 아미노산 서열은,
    서열번호 23의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열;
    서열번호 24의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열; 및
    서열번호 25의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열
    을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인.
  15. 제13항에 있어서, 상기 아미노산 서열은,
    서열번호 47의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열;
    서열번호 24의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열; 및
    서열번호 70의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열
    을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인.
  16. 서열번호 9의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인.
  17. 제16항에 있어서, 상기 아미노산 서열은,
    서열번호 35의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열;
    서열번호 36의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열; 및
    서열번호 37의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열
    을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인.
  18. 제16항에 있어서, 상기 아미노산 서열은,
    서열번호 45의 아미노산 서열로 표시되는 CDR1 서열;
    서열번호 36의 아미노산 서열로 표시되는 CDR2 서열; 및
    서열번호 72의 아미노산 서열로 표시되는 CDR3 서열
    을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 항체 중쇄 가변 도메인 및 항체 불변 영역에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 항체 중쇄.
  20. 제19항에 있어서, 상기 항체 불변 영역은 힌지, CH2 및 CH3 도메인을 포함하는 인간 IgG 불변 영역인, 항체 중쇄.
  21. 제20항에 있어서, 상기 항체 불변 영역은 CH1 도메인을 더 포함하는 인간 IgG 불변 영역인, 항체 중쇄.
  22. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 불변 영역은 IgG1 불변 영역에 대해 90% 동일한, 항체 중쇄.
  23. 제22항에 있어서, 항체 불변 영역에 대해 적어도 90% 동일한 상기 아미노산 서열은 Q347, Y349, L351, S354, E356, E357, K360, Q362, S364, T366, L368, K370, N390, K392, T394, D399, S400, D401, F405, Y407, K409, T411 또는 K439, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 항체 중쇄.
  24. 제23항에 있어서, 항체 불변 영역에 대해 적어도 90% 동일한 상기 아미노산 서열은 Q347E, Q347R, Y349S, Y349K, Y349T, Y349D, Y349E, Y349C, L351K, L351D, L351Y, S354C, E356K, E357Q, E357L, E357W, K360E, K360W, Q362E, S364K, S364E, S364H, S364D, T366V, T366I, T366L, T366M, T366K, T366W, T366S, L368E, L368A, L368D, K370S, N390D, N390E, K392L, K392M, K392V, K392F, K392D, K392E, T394F, D399R, D399K, D399V, S400K, S400R, D401K, F405A, F405T, Y407A, Y407I, Y407V, K409F, K409W, K409D, T411D, T411E, K439D 및 K439E, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 치환에 의해 IgG1불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 항체 중쇄.
  25. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 항체 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 8에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 항원-결합 부위.
  26. 제25항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 32의 아미노산 서열과 동일한 CDR1 서열, 서열번호 33의 아미노산 서열과 동일한 CDR2 서열, 및 서열번호 34의 아미노산 서열과 동일한 CDR3 서열인, 항원-결합 부위.
  27. 제25항 또는 제26항에 있어서, 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정하여 2 내지 120nM의 KD를 갖는, 항원-결합 부위.
  28. 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 항체 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 2에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 항원-결합 부위.
  29. 제28항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 14의 아미노산 서열과 동일한 CDR1 서열, 서열번호 15의 아미노산 서열과 동일한 CDR2 서열, 및 서열번호 16의 아미노산 서열과 동일한 CDR3 서열인, 항원-결합 부위.
  30. 제28항 또는 제29항에 있어서, 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정하여 5 내지 500nM의 KD를 갖는, 항원-결합 부위.
  31. 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항체 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 4에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 항원-결합 부위.
  32. 제31항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 20의 아미노산 서열과 동일한 CDR1 서열, 서열번호 21의 아미노산 서열과 동일한 CDR2 서열, 및 서열번호 22의 아미노산 서열과 동일한 CDR3 서열인, 항원-결합 부위.
  33. 제31항 또는 제32항에 있어서, 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정하여 6 내지 600nM의 KD를 갖는, 항원-결합 부위.
  34. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 항체 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 6에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 항원-결합 부위.
  35. 제34항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 26의 아미노산 서열과 동일한 CDR1 서열, 서열번호 27의 아미노산 서열과 동일한 CDR2 서열, 및 서열번호 28의 아미노산 서열과 동일한 CDR3 서열을 포함하는, 항원-결합 부위.
  36. 제34항 또는 제35항에 있어서, 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정하여 1 내지 100nM의 KD를 갖는, 항원-결합 부위.
  37. 제16항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 항체 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 10에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원-결합 부위.
  38. 제37항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 38의 아미노산 서열과 동일한 CDR1 서열, 서열번호 39의 아미노산 서열과 동일한 CDR2 서열, 및 서열번호 40의 아미노산 서열과 동일한 CDR3 서열을 포함하는, 항원-결합 부위.
  39. 제37항 또는 제38항에 있어서, 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정하여 6 내지 600nM의 KD를 갖는, 항원-결합 부위.
  40. 단백질로서,
    항원-결합 부위가 NKG2D인, 제25항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 항원-결합 부위; 및 추가적인 항원-결합 부위
    를 포함하는, 단백질.
  41. 제40항에 있어서, 상기 추가적인 항원-결합 부위는 종양-연관 항원에 결합하는, 단백질.
  42. 제41항에 있어서, 상기 종양-연관 항원은 CD33, HER2, EpCAM, CD2, CD19, CD20, CD30, CD38, CD40, CD52, CD70, EGFR/ERBB1, IGF1R, HER3/ERBB3, HER4/ERBB4, MUC1, cMET, SLAMF7, PSCA, MICA, MICB, TRAILR1, TRAILR2, MAGE-A3, B7.1, B7.2, CTLA4 및 PD1로 이루어진 군으로부터 선택된, 단백질.
  43. 제40항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, NKG2D에 결합하는 상기 항원-결합 부위는 제1 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 추가적인 항원-결합 부위는 제2 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하되,
    상기 제1 항체 중쇄 가변 도메인은 제1 항체 불변 영역을 더 포함하는 제1 폴리펩타이드 상에 존재하고, 상기 제2 항체 중쇄 가변 도메인은 제2 항체 불변 영역을 더 포함하는 제2 폴리펩타이드인, 단백질.
  44. 제43항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역 및 상기 제2 항체 불변 영역은 CD16에 결합할 수 있는 복합체를 형성하는, 단백질.
  45. 제43항 또는 제44항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역 및 상기 제2 항체 불변 영역은 각각 힌지, CH2 및 CH3 도메인을 포함하는, 단백질.
  46. 제43항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역 및 상기 제2 항체 불변 영역은 각각 CH1 도메인을 더 포함하는, 단백질.
  47. 제43항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역 및 상기 제2 항체 불변 영역의 상기 아미노산 서열은 각각 인간 IgG1 불변 영역에 대해 적어도 90% 동일한, 단백질.
  48. 제47항에 있어서,
    상기 제1 항체 불변 영역의 상기 아미노산 서열은 Q347, Y349, L351, S354, E356, E357, K360, Q362, S364, T366, L368, K370, K392, T394, D399, S400, D401, F405, Y407, K409, T411 또는 K439, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고; 그리고
    상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 Q347, Y349, L351, S354, E356, E357, S364, T366, L368, K370, N390, K392, T394, D399, D401, F405, Y407, K409, T411 또는 K439, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  49. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 T366 위치에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 T366, L368 또는 Y407, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  50. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 T366, L368 또는 Y407, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 T366 위치에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  51. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 E357, K360, Q362, S364, L368, K370, T394, D401, F405 또는 T411, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 Y349, E357, S364, L368, K370, T394, D401, F405 또는 T411, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  52. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 Y349, E357, S364, L368, K370, T394, D401, F405, 또는 T411, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 E357, K360, Q362, S364, L368, K370, T394, D401, F405 또는 T411, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  53. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 L351, D399, S400 또는 Y407, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 T366, N390, K392, K409 또는 T411, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  54. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 T366, N390, K392, K409 또는 T411, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 L351, D399, S400 또는 Y407, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  55. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 Q347, Y349, K360, 또는 K409, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 Q347, E357, D399 또는 F405, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  56. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 Q347, E357, D399, 또는 F405, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 Y349, K360, Q347 또는 K409 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  57. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 K370, K392, K409, 또는 K439, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 D356, E357 또는 D399 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  58. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 D356, E357 또는 D399, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 K370, K392, K409 또는 K439 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  59. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 L351, E356, T366 또는 D399, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 Y349, L351, L368, K392 또는 K409, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  60. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 Y349, L351, L368, K392 또는 K409, 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 L351, E356, T366 또는 D399 또는 이들의 임의의 조합에서 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  61. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 S354C 치환에 의해 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 Y349C 치환에 의해 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  62. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 Y349C 치환에 의해 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 S354C 치환에 의해 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  63. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 K360E 및 K409W 치환에 의해 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 O347R, D399V 및 F405T 치환에 의해 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  64. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 O347R, D399V 및 F405T 치환에 의해 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 K360E 및 K409W 치환에 의해 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  65. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 T366W 치환에 의해 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 T366S, T368A 및 Y407V 치환에 의해 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  66. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 T366S, T368A 및 Y407V 치환에 의해 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 T366W 치환에 의해 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  67. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 T350V, L351Y, F405A 및 Y407V 치환에 의해 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 T350V, T366L, K392L 및 T394W 치환에 의해 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  68. 제47항에 있어서, 상기 제1 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 T350V, T366L, K392L 및 T394W 치환에 의해 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이하고, 상기 제2 항체 불변 영역의 아미노산 서열은 T350V, L351Y, F405A 및 Y407V 치환에 의해 IgG1 불변 영역의 아미노산 서열과 상이한, 단백질.
  69. 제40항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백질은 CD16에 결합할 수 있는 항원-결합 부위를 더 포함하는, 단백질.
  70. 인간 및/또는 사이노몰거스 NKG2D에 대한 결합에 대해 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경쟁하는 항원-결합 부위를 포함하는 단백질.
  71. 인간 및/또는 사이노몰거스 NKG2D에 대한 결합에 대해 서열번호 85의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경쟁하는 항원-결합 부위를 포함하는 단백질.
  72. 인간 및/또는 사이노몰거스 NKG2D에 대한 결합에 대해 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경쟁하는 항원-결합 부위를 포함하는 단백질.
  73. 인간 및/또는 사이노몰거스 NKG2D에 대한 결합에 대해 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경쟁하는 항원-결합 부위를 포함하는 단백질.
  74. 인간 및/또는 사이노몰거스 NKG2D에 대한 결합에 대해 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경쟁하는 항원-결합 부위를 포함하는 단백질.
  75. 인간 및/또는 사이노몰거스 NKG2D에 대한 결합에 대해 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 20의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경쟁하는 항원-결합 부위를 포함하는 단백질.
  76. 제40항 내지 제75항 중 어느 한 항에 따른 단백질 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 제형.
  77. 제40항 내지 제75항 중 어느 한 항에 따른 단백질을 암호화하는 하나 이상의 핵산을 포함하는 세포.
  78. 종양 세포 사멸을 향상시키는 방법으로서, 종양 및 자연 살해 세포를 제40항 내지 제75항 중 어느 한 항에 따른 단백질에 노출시키는 단계를 포함하는, 종양 세포 사멸을 향상시키는 방법.
  79. 암 치료 방법으로서, 제40항 내지 제75항 중 어느 한 항에 따른 단백질 또는 제76항에 따른 제형을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료 방법.
  80. 제79항에 있어서, 상기 암은 급성 골수성 백혈병, 급성 골수단핵구 백혈병, B 세포 림프종, 방광암, 유방암, 결장직장암, 미만성 거대 B 세포 림프종 식도암, 유잉 육종, 여포성 림프종, 위암, 위장암, 위장 기질 종양, 교모세포종, 두경부암, 흑색종, 중피종, 다발성 골수종, 골수이형성 증후군, 신세포 암종, 신경아세포종, 비소세포 폐암, 신경내분비 종양, 난소암 및 췌장암, 전립선암, 육종, 소세포 폐암, T 세포 림프종, 고환암, 흉선 암종, 갑상선암, 요로상피암, 골수-유래 억제 세포에 의해 침윤된 암, 세포외 기질 침착암, 고수준의 반응성 기질을 갖는 암 및 신생혈관형성을 갖는 암으로 이루어진 군으로부터 선택된, 암 치료 방법.
KR1020207024734A 2018-02-08 2019-02-08 Nkg2d 수용체를 표적화하는 항체 가변 도메인 KR20200118080A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862628161P 2018-02-08 2018-02-08
US62/628,161 2018-02-08
US201862716259P 2018-08-08 2018-08-08
US62/716,259 2018-08-08
PCT/US2019/017330 WO2019157366A1 (en) 2018-02-08 2019-02-08 Antibody variable domains targeting the nkg2d receptor

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20200118080A true KR20200118080A (ko) 2020-10-14

Family

ID=67549068

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207024734A KR20200118080A (ko) 2018-02-08 2019-02-08 Nkg2d 수용체를 표적화하는 항체 가변 도메인

Country Status (15)

Country Link
US (4) US11884733B2 (ko)
EP (1) EP3749346A4 (ko)
JP (1) JP2021512630A (ko)
KR (1) KR20200118080A (ko)
CN (1) CN112368012A (ko)
AU (1) AU2019218136A1 (ko)
BR (1) BR112020016190A2 (ko)
CA (1) CA3090244A1 (ko)
CL (1) CL2020002042A1 (ko)
CO (1) CO2020010345A2 (ko)
IL (1) IL276459A (ko)
MX (1) MX2020008336A (ko)
PE (1) PE20220278A1 (ko)
SG (1) SG11202007482WA (ko)
WO (1) WO2019157366A1 (ko)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG11201907299XA (en) 2017-02-08 2019-09-27 Dragonfly Therapeutics Inc Multi-specific binding proteins for activation of natural killer cells and therapeutic uses thereof to treat cancer
CN110944661A (zh) 2017-02-20 2020-03-31 蜻蜓疗法股份有限公司 结合her2、nkg2d和cd16的蛋白质
EP3749346A4 (en) 2018-02-08 2021-12-15 Dragonfly Therapeutics, Inc. VARIABLE DOMAINS OF ANTIBODIES TARGETING THE NKG2D RECEIVER
EA202091888A1 (ru) * 2018-08-08 2020-10-23 Драгонфлай Терапьютикс, Инк. Вариабельные домены антител, нацеленные на рецептор nkg2d
AR119393A1 (es) 2019-07-15 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a nkg2d
AU2020337999A1 (en) * 2019-08-30 2022-03-24 Dragonfly Therapeutics, Inc. Pharmaceutical formulations and dosage regimens for multi-specific binding proteins that bind HER2, NKG2D, and CD16 for cancer treatment
KR20230042519A (ko) 2020-08-05 2023-03-28 드래곤플라이 쎄라퓨틱스, 인크. Nkg2d, cd16 및 egfr에 결합하는 단백질
BR112023002150A2 (pt) 2020-08-05 2023-05-02 Dragonfly Therapeutics Inc Anticorpos direcionando egfr e uso dos mesmos
AU2021357841A1 (en) 2020-10-08 2023-06-15 Affimed Gmbh Trispecific binders
CA3216098A1 (en) 2021-07-30 2023-02-02 Uwe Reusch Duplexbodies
WO2023107956A1 (en) 2021-12-08 2023-06-15 Dragonfly Therapeutics, Inc. Proteins binding nkg2d, cd16 and 5t4
WO2023107954A1 (en) 2021-12-08 2023-06-15 Dragonfly Therapeutics, Inc. Antibodies targeting 5t4 and uses thereof
US20240124607A1 (en) 2022-08-10 2024-04-18 Merck Sharp & Dohme Llc Proteins binding nkg2d, cd16, and ceacam5
WO2024056862A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Avidicure Ip B.V. Multispecific antigen binding proteins for tumor-targeting of nk cells and use thereof

Family Cites Families (300)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1988008854A1 (en) 1987-05-06 1988-11-17 Egbert Oosterwijk Monoclonal antibodies to renal cell carcinoma
WO1989006692A1 (en) 1988-01-12 1989-07-27 Genentech, Inc. Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function
WO1989006544A1 (en) 1988-01-15 1989-07-27 Centocor, Inc. Heteroligating antibodies and therapeutic uses thereof
DE69128253T2 (de) 1990-10-29 1998-06-18 Chiron Corp Bispezifische antikörper, verfahren zu ihrer herstellung und deren verwendungen
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
ATE255131T1 (de) 1991-06-14 2003-12-15 Genentech Inc Humanisierter heregulin antikörper
US5776427A (en) 1992-03-05 1998-07-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for targeting the vasculature of solid tumors
US6004554A (en) 1992-03-05 1999-12-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for targeting the vasculature of solid tumors
US6036955A (en) 1992-03-05 2000-03-14 The Scripps Research Institute Kits and methods for the specific coagulation of vasculature
US5965132A (en) 1992-03-05 1999-10-12 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for targeting the vasculature of solid tumors
US7381803B1 (en) 1992-03-27 2008-06-03 Pdl Biopharma, Inc. Humanized antibodies against CD3
US6129914A (en) 1992-03-27 2000-10-10 Protein Design Labs, Inc. Bispecific antibody effective to treat B-cell lymphoma and cell line
US5622701A (en) 1994-06-14 1997-04-22 Protein Design Labs, Inc. Cross-reacting monoclonal antibodies specific for E- and P-selectin
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
WO1996034892A1 (en) 1995-05-03 1996-11-07 Bioenhancements Ltd. Bispecific antibodies in which the binding capability is reversibly inhibited by a photocleavable moiety
DE19531346A1 (de) 1995-08-25 1997-02-27 Gsf Forschungszentrum Umwelt Arzneimittel zur Immuntherapie, enthaltend Antikörper, die spezifisch das MHCII-Antigen eines zu behandelnden Patienten erkennen
US7951917B1 (en) 1997-05-02 2011-05-31 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
JP4169478B2 (ja) 1998-04-21 2008-10-22 マイクロメット アーゲー Ｃｄ１９×ｃｄ３特異的ポリペプチドおよびその使用
US6572856B1 (en) 1998-09-10 2003-06-03 The University Of Virginia Patent Foundation Methods for the prevention and treatment of cancer using anti-C3b(i) antibodies
AU1218000A (en) 1998-10-21 2000-05-08 Sunol Molecular Corporation Polyspecific binding molecules and uses thereof
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
AU2001260153B2 (en) 2000-03-24 2006-08-17 Micromet Ag Multifunctional polypeptides comprising a binding site to an epitope of the NKG2D receptor complex
CA2409991A1 (en) 2000-05-24 2001-11-29 Imclone Systems Incorporated Bispecific immunoglobulin-like antigen binding proteins and method of production
US20040115198A1 (en) 2001-02-28 2004-06-17 Fred Hutchinson Cancer Research Center Activation of lymphocyte populations expressing NKG2D using anti-NKG2D antibodies and ligand derivatives
US20020193569A1 (en) 2001-06-04 2002-12-19 Idec Pharmaceuticals Corporation Bispecific fusion protein and method of use for enhancing effector cell killing of target cells
DE10156482A1 (de) 2001-11-12 2003-05-28 Gundram Jung Bispezifisches Antikörper-Molekül
RU2339647C2 (ru) 2002-08-19 2008-11-27 Астразенека Аб Антитела против моноцитарного хемоаттрактантного белка-1 (мср-1) и их применение
US7820166B2 (en) 2002-10-11 2010-10-26 Micromet Ag Potent T cell modulating molecules
DE10261223A1 (de) 2002-12-20 2004-07-08 MedInnova Gesellschaft für medizinische Innovationen aus akademischer Forschung mbH Steigerung der Immunantwort durch Substanzen, welche die Funktion von Natürlichen Killerzellen beeinflussen
CA2515100A1 (en) 2003-02-06 2004-08-19 Micromet Ag Trimeric polypeptide construct to induce an enduring t cell response
US7666417B2 (en) 2003-04-22 2010-02-23 Fred Hutchinson Cancer Research Center Methods and compositions for treating autoimmune diseases or conditions
CA2522586C (en) 2003-05-31 2017-02-21 Micromet Ag Pharmaceutical compositions comprising bispecific anti-cd3, anti-cd19 antibody constructs for the treatment of b-cell related disorders
US8784821B1 (en) 2003-05-31 2014-07-22 Amgen Research (Munich) Gmbh Human-anti-human cd3 binding molecules
HUE033129T2 (en) 2003-07-24 2017-11-28 Innate Pharma Sa Methods and compositions for increasing the efficacy of therapeutic antibodies using compounds that potentiate NK cells
HN2004000285A (es) 2003-08-04 2006-04-27 Pfizer Prod Inc ANTICUERPOS DIRIGIDOS A c-MET
SI1673398T1 (sl) 2003-10-16 2011-05-31 Micromet Ag Multispecifiäśne deimunizirajoäśe cd3 povezovalne molekule
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
US20110020273A1 (en) 2005-04-06 2011-01-27 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Bispecific Immunocytokine Dock-and-Lock (DNL) Complexes and Therapeutic Use Thereof
BRPI0507649A (pt) 2004-02-16 2007-07-10 Micromet Ag molécula de ligação biespecìfica, seqüência de ácido nucléico, vetor, processo para a produção da molécula de ligação biespecìfica, composição, uso da molécula de ligação biespecìfica na preparação da composição farmacêutica, e kit
CN101018809B (zh) 2004-07-16 2012-07-18 米克罗麦特股份公司 表达增强的多肽
BRPI0513681A (pt) 2004-07-22 2008-05-13 Genentech Inc composição que compreendem anticorpo her2, método, formulações farmacêuticas, polipeptìdeo, anticorpo e método de tratamento de cáncer
WO2006037960A2 (en) 2004-10-01 2006-04-13 Avidex Ltd. T-cell receptors containing a non-native disulfide interchain bond linked to therapeutic agents
DOP2006000029A (es) 2005-02-07 2006-08-15 Genentech Inc Antibody variants and uses thereof. (variantes de un anticuerpo y usos de las mismas)
US9284375B2 (en) 2005-04-15 2016-03-15 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
CA2605024C (en) 2005-04-15 2018-05-22 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
JP2006316040A (ja) 2005-05-13 2006-11-24 Genentech Inc Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）補助療法
US20070071759A1 (en) 2005-06-29 2007-03-29 University Of Miami Antibody-immune cell ligand fusion protein for cancer therapy
JP2009504787A (ja) 2005-08-19 2009-02-05 シーラス コーポレイション 抗体によって媒介される免疫応答の増強
PE20071101A1 (es) 2005-08-31 2007-12-21 Amgen Inc Polipeptidos y anticuerpos
JP5686953B2 (ja) 2005-10-11 2015-03-18 アムゲン リサーチ （ミュンヘン） ゲーエムベーハー 交差種特異的（ｃｒｏｓｓ−ｓｐｅｃｉｅｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体を含む組成物および該組成物の使用
CA2623109C (en) 2005-10-14 2019-02-19 Innate Pharma Nk cell-depleting antibodies for treating immunoproliferative disorders
EP1945771A1 (en) 2005-10-28 2008-07-23 Novo Nordisk A/S Fusion proteins that bind effector lymphocytes and target cells
AU2006338562A1 (en) 2005-11-03 2007-08-30 Genentech, Inc. Therapeutic anti-HER2 antibody fusion polypeptides
JP2009514528A (ja) 2005-11-03 2009-04-09 フレッド ハッチンソン キャンサー リサーチ センター Ｎｋｇ２ｄ陽性ｃｄ４＋細胞による免疫応答の負の免疫調節法
EP1976886B1 (en) 2005-12-16 2014-12-17 Amgen Research (Munich) GmbH Means and methods for the treatment of tumorous diseases
EP1820513A1 (en) 2006-02-15 2007-08-22 Trion Pharma Gmbh Destruction of tumor cells expressing low to medium levels of tumor associated target antigens by trifunctional bispecific antibodies
NZ596865A (en) 2006-06-12 2013-07-26 Emergent Product Dev Seattle Single-chain multivalent binding proteins with effector function
GB0614780D0 (en) 2006-07-25 2006-09-06 Ucb Sa Biological products
KR101485197B1 (ko) 2006-09-07 2015-01-23 크루셀 홀란드 비.브이. 인플루엔자 바이러스 ｈ5ｎ1을 중화시킬 수 있는 인간 결합분자 및 그것의 용도
EP1900752A1 (en) * 2006-09-15 2008-03-19 DOMPE' pha.r.ma s.p.a. Human anti-folate receptor alpha antibodies and antibody fragments for the radioimmunotherapy of ovarian carcinoma
NZ581395A (en) 2007-05-14 2012-08-31 Biogen Idec Inc Single-chain fc (scfc) regions, binding polypeptides comprising same, and methods related thereto
EP2014680A1 (en) 2007-07-10 2009-01-14 Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg Recombinant, single-chain, trivalent tri-specific or bi-specific antibody derivatives
ES2320076B2 (es) 2007-07-11 2010-01-26 La Morella Nuts, S.A. Procedimiento en continuo de fabricacion de productos alimenticios.
JP2010534469A (ja) 2007-07-25 2010-11-11 アストラゼネカ アクチボラグ Ｋｄｒ指向性標的化結合物質およびその使用
CN103298935A (zh) 2007-08-15 2013-09-11 阿穆尼克斯公司 用于改善生物活性多肽性能的组合物和方法
JOP20080381B1 (ar) 2007-08-23 2023-03-28 Amgen Inc بروتينات مرتبطة بمولدات مضادات تتفاعل مع بروبروتين كونفيرتاز سيتيليزين ككسين من النوع 9 (pcsk9)
EP3124497B1 (en) 2007-09-14 2020-04-15 Adimab, LLC Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
CA3102679A1 (en) * 2007-12-14 2009-06-25 Birgitte Urso Antibodies against human nkg2d and uses thereof
EP2235064B1 (en) 2008-01-07 2015-11-25 Amgen Inc. Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects
JP2011509687A (ja) * 2008-01-22 2011-03-31 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド Ｒｏｎ抗体およびその使用
WO2009149185A2 (en) 2008-06-03 2009-12-10 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US8067339B2 (en) 2008-07-09 2011-11-29 Merck Sharp & Dohme Corp. Surface display of whole antibodies in eukaryotes
US9273136B2 (en) 2008-08-04 2016-03-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Fully human anti-human NKG2D monoclonal antibodies
CA2737351A1 (en) 2008-09-26 2010-04-01 Wyeth Llc Single chain antibody library design
CA2742969A1 (en) 2008-11-07 2010-05-14 Fabrus Llc Anti-dll4 antibodies and uses thereof
US10865233B2 (en) 2008-12-18 2020-12-15 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. NKG2D-fc for immunotherapy
KR101940059B1 (ko) 2008-12-19 2019-01-18 마크로제닉스, 인크. 공유결합형 디아바디 및 이의 용도
MX2011010166A (es) 2009-04-07 2011-10-11 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos anti-erbb-3/anti-c-met.
EP2429584A4 (en) 2009-05-13 2013-02-20 Genzyme Corp TREATMENT PROCEDURE AND COMPOSITIONS
WO2010144295A1 (en) 2009-06-09 2010-12-16 University Of Miami Aptamer-targeted costimulatory ligand aptamer
GB0909904D0 (en) 2009-06-09 2009-07-22 Affitech As Product
ES2536996T3 (es) 2009-07-06 2015-06-01 F. Hoffmann-La Roche Ag Anticuerpos biespecíficos de unión a digoxigenina
UY32808A (es) 2009-07-29 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas como dominio variable dual y usos de las mismas
WO2011028952A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
EP2476752A4 (en) 2009-09-11 2013-04-03 Takara Bio Inc PROCESS FOR THE PRODUCTION OF NATURAL KILLER CELLS
DE102009045006A1 (de) 2009-09-25 2011-04-14 Technische Universität Dresden Anti-CD33 Antikörper und ihre Anwendung zum Immunotargeting bei der Behandlung von CD33-assoziierten Erkrankungen
HUE025759T2 (en) 2009-10-27 2016-04-28 Amgen Res (Munich) Gmbh Dosage system for administering CD19xCD3 bispecific antibody
WO2011057124A1 (en) 2009-11-06 2011-05-12 Transtarget, Inc. Polyclonal bispecific antibody compositions and method of use
EP2332994A1 (en) 2009-12-09 2011-06-15 Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg Trispecific therapeutics against acute myeloid leukaemia
WO2011075636A2 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Amgen Inc. Wise binding agents and epitopes
US8658765B2 (en) 2009-12-31 2014-02-25 Avidbiotics Corp. Non-natural MIC proteins
US8796420B2 (en) 2009-12-31 2014-08-05 Avidbiotics Corp. Non-natural MIC proteins
US20120294857A1 (en) 2010-01-11 2012-11-22 Trustees Of Dartmouth College Monomeric Bi-Specific Fusion Protein
PE20170779A1 (es) 2010-03-04 2017-07-04 Macrogenics Inc Anticuerpos reactivos con b7-h3, fragmentos inmunologicamente activos de los mismos y usos de los mismos
US8802091B2 (en) 2010-03-04 2014-08-12 Macrogenics, Inc. Antibodies reactive with B7-H3 and uses thereof
TWI653333B (zh) 2010-04-01 2019-03-11 安進研究（慕尼黑）有限責任公司 跨物種專一性之ＰＳＭＡｘＣＤ３雙專一性單鏈抗體
CN110066339A (zh) 2010-04-20 2019-07-30 根马布股份公司 含异二聚体抗体fc的蛋白及其制备方法
MX346731B (es) 2010-04-23 2017-03-30 Genentech Inc * Producción de proteínas heteromultiméricas.
WO2011143545A1 (en) 2010-05-14 2011-11-17 Rinat Neuroscience Corporation Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them
KR101834026B1 (ko) 2010-06-19 2018-03-02 메모리얼 슬로안-케터링 캔서 센터 항-ｇｄ2 항체
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
DE102010039018B4 (de) 2010-08-06 2013-02-28 Technische Universität Dresden Anti-La Antikörper und ihre Anwendung zum Immunotargeting
AU2011288412A1 (en) 2010-08-13 2013-02-21 Medimmune Limited Monomeric polypeptides comprising variant Fc regions and methods of use
RU2013110875A (ru) 2010-08-24 2014-09-27 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА, СОДЕРЖАЩИЕ СТАБИЛИЗИРОВАННЫЙ ДИСУЛЬФИДОМ ФРАГМЕНТ Fv
TWI560199B (en) 2010-08-31 2016-12-01 Sanofi Sa Peptide or peptide complex binding to α2 integrin and methods and uses involving the same
WO2012032080A1 (en) 2010-09-07 2012-03-15 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges.M.B.H Stabilised human fc
EP2614085B1 (en) 2010-09-10 2016-04-20 Apexigen, Inc. Anti-il-1 beta antibodies and methods of use
UA112062C2 (uk) 2010-10-04 2016-07-25 Бьорінгер Інгельхайм Інтернаціональ Гмбх Cd33-зв'язувальний агент
UY33707A (es) 2010-11-04 2012-05-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
ES2758994T3 (es) 2010-11-05 2020-05-07 Zymeworks Inc Diseño anticuerpo heterodimérico estable con mutaciones en el dominio Fc
CA2817015A1 (en) 2010-11-09 2012-05-18 Altimab Therapeutics, Inc. Protein complexes for antigen binding and methods of use
SI2644698T1 (en) 2010-11-17 2018-05-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha MULTISPECIFIC ANTIGEN-TUBULAR MOLECULAR, WITH AN ALTERNATIVE FUNCTION TO THE FACTOR OF BLOOD VIOLATION VIII
WO2012088290A2 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Abbott Laboratories Tri-variable domain binding proteins and uses thereof
SG192945A1 (en) 2011-02-25 2013-09-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fcgriib-specific fc antibody
CA2830254C (en) 2011-03-16 2019-09-10 Amgen Inc. Fc variants
AU2012235758B2 (en) 2011-03-25 2015-05-07 Ichnos Sciences SA Hetero-dimeric immunoglobulins
CN107903325B (zh) 2011-05-16 2021-10-29 埃泰美德(香港)有限公司 多特异性fab融合蛋白及其使用方法
BR112013029892A2 (pt) 2011-05-21 2016-12-20 Macrogenics Inc polipeptídeo, molécula de ligação a antígeno, diacorpo e uso de uma porção polipeptídica de uma proteína de ligação a soro desimunizada
EP2714738B1 (en) 2011-05-24 2018-10-10 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
US8852599B2 (en) 2011-05-26 2014-10-07 Bristol-Myers Squibb Company Immunoconjugates, compositions for making them, and methods of making and use
EP2723362A1 (en) 2011-06-21 2014-04-30 Innate Pharma NKp46-MEDIATED NK CELL TUNING
US9890218B2 (en) 2011-06-30 2018-02-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Heterodimerized polypeptide
DE102011118022B4 (de) 2011-06-30 2018-01-18 Gemoab Monoclonals Gmbh Antikörper gegen das Prostata-spezifische Stammzellenantigen und dessen Verwendung
US8790651B2 (en) 2011-07-21 2014-07-29 Zoetis Llc Interleukin-31 monoclonal antibody
CN103687879B (zh) 2011-07-22 2016-05-04 阿菲姆德农业医药公司 多价抗原结合fv分子
WO2013036799A2 (en) 2011-09-09 2013-03-14 Fred Hutchinson Cancer Research Center Methods and compositions involving nkg2d inhibitors and cancer
MX366269B (es) 2011-09-30 2019-07-04 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Biblioteca de moleculas de union dependientes de la concentracion ionica.
US20150050269A1 (en) 2011-09-30 2015-02-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule promoting disappearance of antigens having plurality of biological activities
EP2794658B1 (en) 2011-12-19 2017-03-15 Synimmune GmbH Bispecific antibody molecule
MX363819B (es) 2012-02-08 2019-04-03 Igm Biosciences Inc Uniones a cdim y sus usos.
GB201203442D0 (en) 2012-02-28 2012-04-11 Univ Birmingham Immunotherapeutic molecules and uses
US9029510B2 (en) 2012-03-30 2015-05-12 Sorrento Therapeutics, Inc. Fully human antibodies that bind to VEGFR2 and methods of use thereof
JP6272299B2 (ja) 2012-04-20 2018-01-31 メルス ナムローゼ フェンノートシャップ Ｉｇ様分子を生産する方法、Ｉｇ様分子の混合物、組み換え宿主細胞、医薬組成物、宿主細胞を作成する方法、および培養物
US9163090B2 (en) 2012-05-07 2015-10-20 Cellerant Therapeutics, Inc. Antibodies specific for CLL-1
CA2874721A1 (en) 2012-05-30 2013-12-05 Tomoyuki Igawa Target tissue-specific antigen-binding molecule
EP2862875B1 (en) 2012-06-14 2023-09-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTIGEN-BINDING MOLECULE CONTAINING MODIFIED Fc REGION
JP6429771B2 (ja) 2012-06-21 2018-11-28 ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッドＳｏｒｒｅｎｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． ｃ−Ｍｅｔに結合する抗原結合タンパク質
KR20150023889A (ko) 2012-06-27 2015-03-05 에프. 호프만-라 로슈 아게 2 개 이상의 상이한 결합 단위를 함유하는 맞춤-제작된 고도로 선별적이고 다중-특이적인 표적화 단위의 선별 및 제조 방법 및 이의 용도
JP2015528003A (ja) 2012-07-13 2015-09-24 ザイムワークス，インコーポレイテッド 抗ｃｄ３構築物を含む二重特異性の非対称ヘテロ二量体
CN104640561A (zh) 2012-07-23 2015-05-20 酵活有限公司 包含轻链和重链的选择性配对的免疫球蛋白构建体
US20150203591A1 (en) 2012-08-02 2015-07-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mutivalent antigen-binding proteins
CN104379169A (zh) 2012-08-14 2015-02-25 Ibc药品公司 用于治疗疾病的t-细胞重定向双特异性抗体
JP6471095B2 (ja) 2012-09-27 2019-02-20 メルス ナムローゼ フェンノートシャップ Ｔ細胞エンゲージャーとしての二重特異性ＩｇＧ抗体
CN112079929A (zh) 2012-11-21 2020-12-15 武汉友芝友生物制药有限公司 双特异性抗体
US9951145B2 (en) 2012-11-27 2018-04-24 Ajou University Industry—Academic Cooperation Foundation CH3 domain variant pair inducing formation of heterodimer of heavy chain constant region of antibody at high efficiency, method for preparing same, and use thereof
US20150353636A1 (en) 2013-01-10 2015-12-10 Genmab B.V. Human igg1 fc region variants and uses thereof
WO2014110601A1 (en) 2013-01-14 2014-07-17 Xencor, Inc. Novel heterodimeric proteins
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US20140242077A1 (en) 2013-01-23 2014-08-28 Abbvie, Inc. Methods and compositions for modulating an immune response
EP3620468A1 (en) 2013-02-05 2020-03-11 EngMab Sàrl Method for the selection of antibodies against bcma
US10047163B2 (en) 2013-02-08 2018-08-14 Abbvie Stemcentrx Llc Multispecific constructs
RS59992B1 (sr) 2013-02-26 2020-04-30 Roche Glycart Ag Bispecifični antigen vezujući molekuli koji aktiviraju t ćelije specifični za cd3 i cea
RU2721707C2 (ru) 2013-03-14 2020-05-21 Макродженикс, Инк. Биспецифичные молекулы, иммунореактивные с иммунными эффекторными клетками, экспрессирующими активирующий рецептор
WO2014150973A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Eli Lilly And Company Methods for producing fabs and bi-specific antibodies
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
EP3587448B1 (en) 2013-03-15 2021-05-19 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
JP6482525B2 (ja) 2013-03-15 2019-03-13 メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター 高親和性抗ｇｄ２抗体
WO2014165818A2 (en) 2013-04-05 2014-10-09 T Cell Therapeutics, Inc. Compositions and methods for preventing and treating prostate cancer
EP2991679A4 (en) 2013-04-29 2016-12-07 Adimab Llc POLYSPECIFIC REAGENTS, PROCESS FOR THEIR PREPARATION AND USE
CN105408356A (zh) 2013-05-10 2016-03-16 努玛有限公司 双特异性构建体及其用于治疗多种疾病的用途
EP3008093A1 (en) 2013-06-11 2016-04-20 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-her2 single domain antibodies, polypeptides comprising thereof and their use for treating cancer
JP2016527225A (ja) 2013-07-15 2016-09-08 ノヴォ ノルディスク アー／エス ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子に結合する抗体
PL3021869T3 (pl) 2013-07-16 2020-11-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Sposoby leczenia nowotworu z użyciem antagonistów wiązania osi PD-1 i inhibitorów TIGIT
RS63152B1 (sr) 2013-07-25 2022-05-31 Cytomx Therapeutics Inc Multispecifična antitela, multispecifična antitela koja mogu da se aktiviraju i postupci za njihovu upotrebu
GB2518221A (en) 2013-09-16 2015-03-18 Sergej Michailovic Kiprijanov Tetravalent antigen-binding protein molecule
CN105636982B (zh) 2013-09-16 2020-06-23 健康与环境慕尼黑德国研究中心赫姆霍茨中心（有限责任公司） 用于治疗hbv感染和相关病症的结合免疫效应细胞表面抗原和hbv抗原的双或多特异性多肽
GB2519786A (en) 2013-10-30 2015-05-06 Sergej Michailovic Kiprijanov Multivalent antigen-binding protein molecules
JP6553069B2 (ja) 2013-11-07 2019-07-31 メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター 抗ｗｔ１／ｈｌａ二重特異性抗体
DE102013019352A1 (de) 2013-11-13 2015-09-17 Elke Pogge Von Strandmann Tri-spezifische rekombinante Antikörperderivate zur Behandlung von malignen Erkrankungen durch Aktivierung einer NK-Zell-basierten Immunantwort
KR102357906B1 (ko) 2013-11-27 2022-02-03 자임워크스 인코포레이티드 Her2를 표적화하는 이중특이성 항원-결합 작제물
MA39095A1 (fr) 2013-12-13 2018-08-31 Genentech Inc Anticorps et immunoconjugués anti-cd33
WO2015095412A1 (en) 2013-12-19 2015-06-25 Zhong Wang Bispecific antibody with two single-domain antigen-binding fragments
BR112016010706A2 (pt) 2013-12-20 2017-12-05 Hoffmann La Roche anticorpo biespecífico, composição farmacêutica, uso do anticorpo biespecífico, sequência de ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira e método de produção de um anticorpo
EP3083682B1 (en) 2013-12-20 2024-04-17 F. Hoffmann-La Roche AG Dual specific antibodies
RU2016129724A (ru) 2013-12-23 2018-01-30 Займворкс Инк. Антитела, содержащие с-концевые удлинения полипептида легкой цепи, их конъюгаты и способы применения
EP3089994B1 (en) 2013-12-30 2022-05-04 Epimab Biotherapeutics, Inc. Fabs-in-tandem immunoglobulin and uses thereof
CA2936785A1 (en) 2014-01-15 2015-07-23 Zymeworks Inc. Bi-specific cd3 and cd19 antigen-binding constructs
IL278878B (en) 2014-03-05 2022-07-01 Autolus Ltd A chimeric antigen receptor having antigen-binding regions for a beta t-cell receptor constant region
AU2015241038A1 (en) 2014-03-31 2016-10-13 Genentech, Inc. Combination therapy comprising anti-angiogenesis agents and OX40 binding agonists
EP4050026A1 (en) 2014-04-01 2022-08-31 Adimab, LLC Method of obtaining or identifying one or more common light chains for use in preparing a multispecific antibody
UA117289C2 (uk) 2014-04-02 2018-07-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Мультиспецифічне антитіло
AU2015240595B2 (en) 2014-04-03 2020-02-27 Igm Biosciences, Inc. Modified J-chain
KR20160143808A (ko) 2014-04-11 2016-12-14 메디뮨 엘엘씨 이중특이적 her2 항체
EP2930188A1 (en) 2014-04-13 2015-10-14 Affimed Therapeutics AG Trifunctional antigen-binding molecule
EP2942629A1 (en) 2014-05-08 2015-11-11 Universität Würzburg Predictive markers for successful cancer immunotherapy
GB201409558D0 (en) 2014-05-29 2014-07-16 Ucb Biopharma Sprl Method
KR102355609B1 (ko) 2014-05-29 2022-01-27 마크로제닉스, 인크. 다중 암 항원에 특이적으로 결합하는 삼중-특이적 결합 분자 및 그것의 사용 방법
CA2952532A1 (en) 2014-06-27 2015-12-30 Innate Pharma Multispecific antigen binding proteins
US10519234B2 (en) 2014-06-27 2019-12-31 Innate Pharma NKp46 binding proteins
WO2015197582A1 (en) 2014-06-27 2015-12-30 Innate Pharma Monomeric multispecific antigen binding proteins
SG11201609707WA (en) 2014-07-01 2017-01-27 Pfizer Bispecific heterodimeric diabodies and uses thereof
SG10201913765YA (en) 2014-07-21 2020-03-30 Novartis Ag Treatment of cancer using a cd33 chimeric antigen receptor
US9777073B2 (en) 2014-07-21 2017-10-03 Wuhan Yzy Biopharma Co., Ltd. Construction and application of bispecific antibody EpCAM×CD3
WO2016011571A1 (en) 2014-07-21 2016-01-28 Wuhan Yzy Biopharma Co., Ltd. Bispecific antibody-mediated cancer therapy with cytokine-induced killer cell
JP6390239B2 (ja) 2014-07-25 2018-09-19 富士ゼロックス株式会社 情報処理装置、及びプログラム
AU2015301460B2 (en) 2014-08-14 2021-04-08 Novartis Ag Treatment of cancer using GFR alpha-4 chimeric antigen receptor
EP2985294A1 (en) 2014-08-14 2016-02-17 Deutsches Krebsforschungszentrum Recombinant antibody molecule and its use for target cell restricted T cell activation
JO3663B1 (ar) 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
WO2016032334A1 (en) 2014-08-28 2016-03-03 Academisch Ziekenhuis Leiden H.O.D.N. Lumc Cd94/nkg2a and/or cd94/nkg2b antibody, vaccine combinations
ES2688035T3 (es) 2014-08-29 2018-10-30 Gemoab Monoclonals Gmbh Receptor de antígeno universal que expresa células inmunes para direccionamiento de antígenos múltiples diversos, procedimiento para fabricación del mismo y utilización del mismo para tratamiento de cáncer, infecciones y enfermedades autoinmunes
WO2016070959A1 (en) 2014-11-03 2016-05-12 Merck Patent Gmbh Methods for generating bispecific shark variable antibody domains and use thereof
EP3227332B1 (en) 2014-12-03 2019-11-06 F.Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies
CA3204990A1 (en) 2014-12-05 2016-06-09 Xyphos Biosciences Inc. Insertable variable fragments of antibodies and modified a1-a2 domains of nkg2d ligands
EP3233122A4 (en) 2014-12-17 2018-09-19 Intrexon Corporation Intercalated single-chain variable fragments
KR102495820B1 (ko) 2014-12-19 2023-02-06 치오메 바이오사이언스 가부시키가이샤 5t4 및 cd3에 대한 3개 결합 도메인을 포함하는 융합 단백질
WO2016109774A1 (en) 2015-01-02 2016-07-07 Dyax Corp. Bispecific antibodies against plasma kallikrein and factor xii
EP3245227A4 (en) 2015-01-14 2018-07-25 Compass Therapeutics LLC Multispecific immunomodulatory antigen-binding constructs
TW201627322A (zh) 2015-01-26 2016-08-01 宏觀基因股份有限公司 抗-ｄｒ５抗體和包括其ｄｒ５-結合結構域的分子
AU2016219785B2 (en) 2015-02-20 2021-10-28 Ohio State Innovation Foundation Bivalent antibody directed against NKG2D and tumor associated antigens
MA41613A (fr) 2015-02-23 2018-01-02 Abbvie Stemcentrx Llc Récepteurs antigéniques chimériques anti-dll3 et procédés d'utilisation desdits récepteurs
WO2016135041A1 (en) 2015-02-26 2016-09-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Fusion proteins and antibodies comprising thereof for promoting apoptosis
US11673957B2 (en) 2015-03-10 2023-06-13 Eureka Therapeutics, Inc. Anti-ROR2 antibodies
JP6726676B2 (ja) 2015-03-16 2020-07-22 ヘルムホルツ・ツェントルム・ミュンヒェン・ドイチェス・フォルシュンクスツェントルム・フューア・ゲズントハイト・ウント・ウムベルト（ゲーエムベーハー）Ｈｅｌｍｈｏｌｔｚ Ｚｅｎｔｒｕｍ Ｍｕｅｎｃｈｅｎ Ｄｅｕｔｓｃｈｅｓ Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇｓｚｅｎｔｒｕｍ ｆｕｅｒ Ｇｅｓｕｎｄｈｅｉｔ ｕｎｄ Ｕｍｗｅｌｔ （ＧｍｂＨ） Ｈｂｖ感染および関連症状を治療するための三重特異的結合分子
CN114456272A (zh) 2015-04-03 2022-05-10 优瑞科生物技术公司 靶向afp肽/mhc复合体的构建体及其用途
ES2901273T3 (es) 2015-04-06 2022-03-21 Subdomain Llc Polipéptidos que contienen dominios de unión de novo y usos de los mismos
RS62546B1 (sr) 2015-04-07 2021-12-31 Alector Llc Antitela protiv sortilina i postupci za njihovu upotrebu
WO2016166139A1 (en) 2015-04-14 2016-10-20 Eberhard Karls Universität Tübingen Bispecific fusion proteins for enhancing immune responses of lymphocytes against tumor cells
JP2018524284A (ja) 2015-05-18 2018-08-30 ユーリカ セラピューティックス， インコーポレイテッド 抗ｒｏｒ１抗体
EP3095792A1 (en) 2015-05-19 2016-11-23 Klinikum rechts der Isar der Technischen Universität München T cell receptor with specificity for myeloperoxidase peptide and uses thereof
WO2016191305A1 (en) 2015-05-22 2016-12-01 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Btn3a ectodomain proteins and methods of use
KR20230028478A (ko) 2015-05-29 2023-02-28 아게누스 인코포레이티드 항-ctla-4 항체 및 이의 사용 방법
HUE061253T2 (hu) 2015-05-29 2023-06-28 Bristol Myers Squibb Co Antitestek OX40 ellen és azok felhasználásai
WO2016201389A2 (en) 2015-06-12 2016-12-15 Alector Llc Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof
WO2016201300A1 (en) 2015-06-12 2016-12-15 Immunomedics, Inc. Disease therapy with chimeric antigen receptor (car) constructs and t cells (car-t) or nk cells (car-nk) expressing car constructs
JP6971153B2 (ja) 2015-06-23 2021-11-24 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムInnate Pharma Pharma S.A. 多重特異的ｎｋエンゲイジャータンパク質
AU2016284866B2 (en) 2015-06-23 2022-09-29 Innate Pharma Multispecific antigen binding proteins
AU2016289753C1 (en) 2015-07-06 2021-08-05 UCB Biopharma SRL Tau-binding antibodies
US20180194861A1 (en) 2015-07-10 2018-07-12 Abbvie Inc. IgM- or IgE-Modified Binding Proteins and Uses Thereof
WO2017008169A1 (en) 2015-07-15 2017-01-19 Zymeworks Inc. Drug-conjugated bi-specific antigen-binding constructs
JP2018523471A (ja) 2015-07-16 2018-08-23 セレラント セラピューティクス インコーポレイテッド システイン置換免疫グロブリン
TW202346349A (zh) 2015-07-31 2023-12-01 德商安美基研究（慕尼黑）公司 Dll3及cd3抗體構築體
EP3349792A1 (en) 2015-09-14 2018-07-25 Compass Therapeutics LLC Compositions and methods for treating cancer via antagonism of the cd155/tigit pathway and tgf-
WO2017055398A2 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies specific for a costimulatory tnf receptor
CN116003596A (zh) 2015-10-29 2023-04-25 艾利妥 抗siglec-9抗体及其使用方法
RU2753695C2 (ru) 2015-11-04 2021-08-19 Сол Дж. ПРАЙСМЕН Химерные рецепторы антигена, нацеленные на her2
US10815290B2 (en) 2015-11-10 2020-10-27 Fred Hutchinson Cancer Research Center NKG2D decoys
EP3374389A1 (en) 2015-11-13 2018-09-19 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti- nkg2d single domain antibodies and uses thereof
AU2016383475B2 (en) 2015-12-28 2024-02-22 Innate Pharma Variable regions for NKp46 binding proteins
MA43874A (fr) 2016-01-13 2018-11-21 Compass Therapeutics Llc Constructions de liaison à l'antigène immunomodulateur multispécifique
US20210198368A1 (en) 2016-01-21 2021-07-01 Novartis Ag Multispecific molecules targeting cll-1
UY37127A (es) 2016-02-17 2017-08-31 Macrogenics Inc Moléculas de unión a ror1, y métodos de uso de las mismas
JP2019510812A (ja) 2016-02-26 2019-04-18 イミュネクサス・ピーティーワイ・リミテッド 多重特異性分子
US11291721B2 (en) 2016-03-21 2022-04-05 Marengo Therapeutics, Inc. Multispecific and multifunctional molecules and uses thereof
US11549099B2 (en) 2016-03-23 2023-01-10 Novartis Ag Cell secreted minibodies and uses thereof
CR20180484A (es) 2016-04-15 2019-03-05 Macrogenics Inc Moléculas de unón b7-h3 novedosas, conjugados anticuerpos-fármaco de los mismos y métodos de uso de los mismos
RU2018139811A (ru) 2016-04-15 2020-05-15 Займворкс Инк. Мультиспецифические антигенсвязывающие конструкции, нацеливающие иммунотерапевтические средства
GB201610044D0 (en) 2016-06-08 2016-07-20 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
MX2018015592A (es) 2016-06-14 2019-04-24 Xencor Inc Anticuerpos inhibidores de puntos de control biespecificos.
US9567399B1 (en) 2016-06-20 2017-02-14 Kymab Limited Antibodies and immunocytokines
CN105906722B (zh) 2016-06-24 2020-02-07 安徽未名细胞治疗有限公司 一种Her2特异性嵌合抗原受体及其应用
WO2018045090A1 (en) 2016-09-01 2018-03-08 Immunomab, Inc. Bispecific antibodies
US20190225702A1 (en) 2016-10-14 2019-07-25 Harpoon Therapeutics, Inc. Innate immune cell trispecific binding proteins and methods of use
CN110267678A (zh) 2016-10-29 2019-09-20 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗mic抗体和使用方法
JP7291396B2 (ja) 2016-11-22 2023-06-15 ティーシーアール２ セラピューティクス インク． 融合タンパク質を用いたｔｃｒの再プログラミングのための組成物及び方法
JOP20190134A1 (ar) 2016-12-23 2019-06-02 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لنيوروبيلين وطرق استخدامها
WO2018148447A1 (en) 2017-02-08 2018-08-16 Adimab, Llc Antibody heavy chain variable domains targeting the nkg2d receptor
SG11201907299XA (en) 2017-02-08 2019-09-27 Dragonfly Therapeutics Inc Multi-specific binding proteins for activation of natural killer cells and therapeutic uses thereof to treat cancer
AU2018217834A1 (en) 2017-02-10 2019-08-22 Dragonfly Therapeutics, Inc. Proteins binding PSMA, NKG2D and CD16
MX2019009566A (es) 2017-02-10 2020-01-20 Dragonfly Therapeutics Inc Proteinas de union a bcma, nkg2d y cd16.
CN110944661A (zh) 2017-02-20 2020-03-31 蜻蜓疗法股份有限公司 结合her2、nkg2d和cd16的蛋白质
WO2018152547A1 (en) 2017-02-20 2018-08-23 Adimab, Llc Proteins binding cd123, nkg2d and cd16
BR112019017277A2 (pt) 2017-02-20 2020-04-14 Dragonfly Therapeutics Inc proteínas de ligação a cd33, nkg2d e cd16
MX2019009943A (es) 2017-02-20 2019-12-19 Dragonfly Therapeutics Inc Proteínas que se unen a gd2, nkg2d y cd16.
JP7286543B2 (ja) 2017-02-27 2023-06-05 ドラゴンフライ セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｃｅａを標的にする多重特異性結合タンパク質
US20200179511A1 (en) 2017-04-28 2020-06-11 Novartis Ag Bcma-targeting agent, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
MX2019013995A (es) 2017-05-23 2020-07-29 Dragonfly Therapeutics Inc Una proteína que se une a nkg2d, cd16 y un antígeno asociado a un tumor.
EP3630183A4 (en) 2017-05-23 2021-03-03 Dragonfly Therapeutics, Inc. PROTEIN THAT BINDING NKG2D, CD16 AND ROR1 OR ROR2
AU2018271930A1 (en) 2017-05-23 2019-12-12 Dragonfly Therapeutics, Inc. A protein binding NKG2D, CD16 and a tumor-associated antigen
EA202090387A1 (ru) 2017-07-31 2020-05-21 Драгонфлай Терапьютикс, Инк. Белки, связывающие nkg2d, cd16 и flt3
EP3668893A4 (en) 2017-08-16 2021-08-04 Dragonfly Therapeutics, Inc. PROTEINS BINDING TO NKG2D, CD16 AND EGFR, HLA-E, CCR4, OR PD-L1
SG11201913968VA (en) 2017-08-23 2020-01-30 Dragonfly Therapeutics Inc Proteins binding nkg2d, cd16 and a tumor-associated antigen
EP3679071A4 (en) 2017-09-07 2021-06-09 Dragonfly Therapeutics, Inc. PROTEINS THAT BINDING NKG2D, CD16 AND A TUMOR-ASSOCIATED ANTIGEN
EP3681532A4 (en) 2017-09-14 2021-09-01 Dragonfly Therapeutics, Inc. NKG2D, CD1 6 AND TYPE LECTIN LIKE MOLECULE 1 (CLL-1) BINDING PROTEINS
EP3749346A4 (en) 2018-02-08 2021-12-15 Dragonfly Therapeutics, Inc. VARIABLE DOMAINS OF ANTIBODIES TARGETING THE NKG2D RECEIVER
AU2019218125A1 (en) 2018-02-08 2020-08-20 Dragonfly Therapeutics, Inc. Combination therapy of cancer involving multi-specific binding proteins that activate natural killer cells
MX2020008684A (es) 2018-02-20 2020-12-07 Dragonfly Therapeutics Inc Proteinas de union multiespecificas que se unen a cd33, nkg2d y cd16 y metodos de uso.
MX2020008683A (es) 2018-02-20 2020-12-07 Dragonfly Therapeutics Inc Dominios variables de anticuerpo que se dirigen a cd33 y sus usos.
WO2019195409A1 (en) 2018-04-03 2019-10-10 Dragonfly Therapeutics, Inc. Proteins binding nkg2d, cd16 and an antigen associated with tumors, mdscs and/or tams
US20220025037A1 (en) 2018-04-03 2022-01-27 Dragonfly Therapeutics, Inc. Antibody variable domains targeting dll3, and use thereof
JP2021523140A (ja) 2018-05-07 2021-09-02 ドラゴンフライ セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｎｋｇ２ｄ、ｃｄ１６、及び腫瘍関連抗原に結合するタンパク質
WO2019222449A1 (en) 2018-05-16 2019-11-21 Dragonfly Therapeutics, Inc. Protein binding nkg2d, cd16 and a fibroblast activation protein
EA202091977A1 (ru) 2018-05-28 2021-02-09 Драгонфлай Терапьютикс, Инк. Мультиспецифические связывающие белки, которые связывают cd33, nkg2d и cd16, и способы применения
EA202091888A1 (ru) 2018-08-08 2020-10-23 Драгонфлай Терапьютикс, Инк. Вариабельные домены антител, нацеленные на рецептор nkg2d
BR112021002276A2 (pt) 2018-08-08 2021-05-04 Dragonfly Therapeutics, Inc. proteínas de ligação a nkg2d, cd16 e um antígeno associado ao tumor
JP2021534096A (ja) 2018-08-08 2021-12-09 ドラゴンフライ セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｎｋｇ２ｄ、ｃｄ１６および腫瘍関連抗原に結合するタンパク質
SG11202100883SA (en) 2018-08-08 2021-02-25 Dragonfly Therapeutics Inc Multi-specific binding proteins that bind bcma, nkg2d and cd16, and methods of use
CA3117212A1 (en) 2018-10-23 2020-04-30 Dragonfly Therapeutics, Inc. Heterodimeric fc-fused proteins
US20230002450A1 (en) 2019-02-18 2023-01-05 Courier Therapeutics, Inc. Bispecific Fusion Protein Using Orthopoxvirus Major Histocompatibility Complex (MHC) Class I-Like Protein (OMCP) and Tumor-Specific Binding Partner
BR112021026376A2 (pt) 2019-06-25 2022-05-10 Gilead Sciences Inc Proteínas de fusão flt3l-fc e métodos de uso
AR119393A1 (es) 2019-07-15 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a nkg2d
AU2020337999A1 (en) 2019-08-30 2022-03-24 Dragonfly Therapeutics, Inc. Pharmaceutical formulations and dosage regimens for multi-specific binding proteins that bind HER2, NKG2D, and CD16 for cancer treatment
AR120223A1 (es) 2019-10-15 2022-02-02 Dragonfly Therapeutics Inc Proteínas que unen nkg2d, cd16 y flt3
EP4138778A1 (en) 2020-04-22 2023-03-01 Dragonfly Therapeutics, Inc. Formulation, dosage regimen, and manufacturing process for heterodimeric fc-fused proteins
EP4146271A1 (en) 2020-05-06 2023-03-15 Dragonfly Therapeutics, Inc. Proteins binding nkg2d, cd16 and clec12a
KR20230042519A (ko) 2020-08-05 2023-03-28 드래곤플라이 쎄라퓨틱스, 인크. Nkg2d, cd16 및 egfr에 결합하는 단백질
EP4301774A1 (en) 2021-03-03 2024-01-10 Dragonfly Therapeutics, Inc. Methods of treating cancer using multi-specific binding proteins that bind nkg2d, cd16 and a tumor-associated antigen
CA3233377A1 (en) 2021-09-29 2023-04-06 Dragonfly Therapeutics, Inc. Proteins binding nkg2d, cd16 and baff-r
WO2023107956A1 (en) 2021-12-08 2023-06-15 Dragonfly Therapeutics, Inc. Proteins binding nkg2d, cd16 and 5t4
US20230250176A1 (en) 2022-02-09 2023-08-10 Dragonfly Therapeutics, Inc. Ppharmaceutical formulations and therapeutic uses of multi-specific binding proteins that bind egfr, nkg2d, and cd16
WO2023168384A2 (en) 2022-03-03 2023-09-07 Dragonfly Therapeutics, Inc. Methods of treating cancer using multi-specific binding proteins that bind nkg2d, cd16, and her2

Also Published As

Publication number Publication date
SG11202007482WA (en) 2020-09-29
CN112368012A (zh) 2021-02-12
CO2020010345A2 (es) 2020-08-31
EP3749346A1 (en) 2020-12-16
AU2019218136A1 (en) 2020-08-13
CL2020002042A1 (es) 2020-12-18
WO2019157366A8 (en) 2020-09-17
BR112020016190A2 (pt) 2020-12-15
IL276459A (en) 2020-09-30
EP3749346A4 (en) 2021-12-15
JP2021512630A (ja) 2021-05-20
US11884733B2 (en) 2024-01-30
US20240076384A1 (en) 2024-03-07
MX2020008336A (es) 2020-09-21
US20240076385A1 (en) 2024-03-07
US11939384B1 (en) 2024-03-26
US20240067735A1 (en) 2024-02-29
US20210054082A1 (en) 2021-02-25
PE20220278A1 (es) 2022-02-25
CA3090244A1 (en) 2019-08-15
WO2019157366A1 (en) 2019-08-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11939384B1 (en) Antibody variable domains targeting the NKG2D receptor
US20210261668A1 (en) Proteins binding nkg2d, cd16, and egfr, ccr4, or pd-l1
JP7257323B2 (ja) Ｂｃｍａ、ｎｋｇ２ｄ及びｃｄ１６と結合するタンパク質
CN112789291A (zh) 结合nkg2d、cd16和肿瘤相关抗原的蛋白质
KR20190123299A (ko) Caix, ano1, 메소텔린, trop2, cea, 또는 클라우딘-18.2를 표적화하는 다중특이적 결합 단백질
JP2023166409A (ja) Ｎｋｇ２ｄ、ｃｄ１６および腫瘍関連抗原に結合するタンパク質
KR20200010428A (ko) Nkg2d, cd16, 및 ror1 또는 ror2에 결합하는 단백질
KR20200051789A (ko) Nkg2d, cd16, 및 c-유형 렉틴-유사 분자-1 (cll-1)에 결합하는 단백질
KR20200010430A (ko) Nkg2d, cd16 및 종양-연관 항원에 결합하는 단백질
KR20220083770A (ko) Nkg2d, cd16 및 flt3에 결합하는 단백질
KR20200033302A (ko) Nkg2d, cd16 및 flt3에 결합하는 단백질
KR20190120770A (ko) Psma, nkg2d 및 cd16에 결합하는 단백질
KR20190120781A (ko) Cd123, nkg2d 및 cd16에 결합하는 단백질
KR20210078473A (ko) Nkg2d, cd16 및 종양 관련 항원에 결합하는 단백질
US20230257467A1 (en) Proteins binding nkg2d, cd16 and egfr
RU2788531C2 (ru) Белок, связывающийся с nkg2d, cd16 и с опухолеспецифическим антигеном
EA043960B1 (ru) Антигенсвязывающие сайты, которые связываются с рецептором 2d группы естественных киллеров

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination