KR20010029692A - 동물의 세포 또는 장기의 보존제 및 그 보존방법 - Google Patents

Abstract

동물세포를 장기간 보존하는 방법으로는 극저온(extra low temperature)에서의 동결보존법이 이용되고 있지만, 용해된 후의 생존률은 10∼30%로 낮다. 또, 이식용 장기의 보존기간은, 장기의 종류에 따라 다르지만, 4시간에서 40시간정도로 매우 짧다.

본 발명은, 이러한 문제점들의 해결, 즉, 동물세포를 동결시키지 않고 보존시킬 수 있고, 이식용 장기의 보존기간을 적어도 종래의 보존가능시간의 배이상으로 높이는 것을 목적으로 하는 것으로, 폴리페놀(polyphenol)을 종래의 세포배양액 또는 장기보존액에 첨가함으로써, 이러한 문제점을 해결한다.

Description

동물의 세포 또는 장기의 보존제 및 그 보존방법{A storage agent for preservation of an animal cell, tissue or organ, and preserved process of the same}

본 발명은, 동물의 세포 또는 장기의 보존제에 관한 것으로서, 보다 상세하게는, 동물세포, 이식용 장기 및 혈액, 혈구, 혈소판 등의 보존제, 단백질의 안정제, 또는 장기이식후의 장기장해 등을 예방, 치료, 개선하는 보존제에 관한 것이다.

통상, 세포를 보존하는 방법으로는 -196℃의 극저온에서 동결보존하는 방법이 이용되며, 필요할 때 이 동결세포들을 급속해동하여 생세포를 얻을 수 있다. 그러나, 이와 같은 동결·융해후의 생존율은 세포의 종류나 실험자의 숙련도에 따라 다르지만, 암 이외의 정상유용세포(normal and useful cells), 예를 들면 랑게르한스 섬(Langerhans islets)이나 간세포의 생존율은 매우 낮아, 기껏해야 10∼30%이다.

더욱이, 혈구성분이나 혈소판은 동결보존이 불가능하기 때문에, 그 유효기간도 12∼72시간으로 상당히 짧다. 게다가 최근, 장기이식의 사례가 늘어나고 있지만, 이식할 장기의 보존방법도 여전히 중요한 연구과제로서 남아 있고, 이러한 과제들은 세포의 증식과 세포장해와 관련이 깊다.

근년의 외과적 수술(surgical operation)이나 면역억제제(immunosuppressive agent)가 진보함에 따라, 장기이식의 사례가 증가하고 있다. 이와 같은 장기이식에서, 제공자(도우너, donor)로부터 적출된 장기가 곧바로 수용자(레시피언트, recipient)에게 이식되는 것이 가장 이상적이지만, 반드시 이식수술이 곧바로 이루어지고 있지는 않다. 그러나, 이식수술은 긴급성을 수반하기 때문에 귀중한 장기보존의 문제점이 매우 중요하다.

현재, 장기보존법으로서는, 장기의 대사억제를 목적으로 하는 저온보존법과, 대사유지를 목적으로 하는 관류보존법(灌流保存法, perfusion preservation method)이 적용되고 있고, 이러한 방법에 사용되는 여러 가지 보존액이 개발되어 임상적으로 응용되고 있다.

초기의 이식단계에서는 유로코린즈액(Euro-Collin's)이 이용되었지만, 장기보존기간은 간장(肝臟)의 경우도 24시간미만이어서, 보다 장기간 보존이 가능한 보존액이 요구되어 왔다. 그러나, 최근 미국 위스콘신대학의 그룹에 의해 췌장(膵臟)이식시의 보존액으로서 UW(University of Wisconsin, Wahlberg, J.A., et al., Transplantation, 43, pp. 5∼8, 1987)액이 개발되었고, 이로써 췌장의 보존뿐만 아니라 간장이나 신장(腎臟)의 보존액으로서도 유용하여, 간장의 보존기간이 24시간으로 연장될 수 있었다.

그러나, 여전히 만족스러울 만한 것이 없어, 장기의 생존능력(viability)을 장시간 동안 유지할 수 있고, 보다 우수한 장기보존효과를 기대할 수 있는 보존액의 개발이 강하게 요구되고 있다.

각종 장기에서 공통되는 점은, 허혈(虛血, ischomia) 및 혈류(血流) 재개시에 생기는 자유라디칼(free radical)이 방아쇠가 되어, 생체막(biological membrane)의 지질과산화(lipid peroxidation)가 촉진되고, 생체막장해가 일어나, 그 결과, 이식장기의 기능장해가 일어난다. 그래서, 이와 같은 과산화지질의 생성에 의한 세포장해를 방지할 수 있다면, 보다 효율적인 보존액의 개발도 가능하게 된다.

최근, 자유라디칼의 생체에 미치는 영향에 대하여 많은 연구가 보고되고 있고, 항산화물질(anti-oxidizing agent)에 대해서도 밝혀지고 있다. 지금까지 잘 알려져 있는 주된 항산화물질로서는, 효소계로서 슈퍼옥시드 디머스타아제(Super Oxide Dimustarse, SOD), 비효소계로서 비타민 E, 비타민 C, 글루타티온 (glutathione), 카로티노이드(carotinoid), 후라보노이드(flavonoid), 당류 (saccharide), 철킬레이트제(chelate of iron), 요산(uric acid), 알부민(albumin) 등이 있다.

이러한 항산화물질들을 이용한 조직증식제어나 장기보존에 관한 연구는 많이 알려져 있지 않지만, 최근 녹차폴리페놀(green tea polyphenol)이 항산화작용, 냄새제거작용(消臭作用, deodorization action), 항균(antibacterial)작용, 더 나아가 항암(anticancer)작용을 발현한다는 것이 보고되었다. 최근, 이 녹차폴리페놀이 기능성 식품의 소재로서 대량으로 값싸게 생산되고 있다.

한편, 세포나 조직의 장해는, 세포내의 미토콘드리아(mitochondria)에서의 아데노신삼인산(ATP, Adenosine Tri-Phosphate)으로부터 전환되는 하이포크산틴 (hypoxanthine)이 산틴(xanthine)으로 되는 과정에서 산출되는 활성산소(O^- ₂, active oxygen)가 크게 관여하고 있다. 이러한 장해에 의한 가장 심각한 결과가 발암현상으로서 나타나고, 암의 생성은 발암개시단계(carcinogenesis initiation stage)와 발암촉진단계(carcinogenesis promotion stage)를 거쳐 발생한다고 알려져 있다. 발암개시단계에서, 각종 발암물질이 세포의 DNA에 장해를 미쳐 돌연변이가 일어나고, 세포가 무한증식하여 조직이 암화된다. 이러한 돌연변이도 활성산소가 영향을 주고 있다. 그 외에, 이러한 활성산소들을 발생하는 과산화물이, 노화나 각종 역병을 일으키는 큰 원인중의 하나이다.

본 발명에서는, 각종 동물세포의 증식을 자유자재로 억제함으로써, 세포증식기구(機構)를 해명함과 동시에, 장기이식을 위해 각종 장기나 혈액을 보존할 때, 종래의 보존가능시간을 적어도 2배이상으로 연장시키는 보존액을 개발하고, 더 나아가 단백질의 보존안정성을 향상시킨다.

구체적으로는, 정상유용세포의 증식을 억제할 수 있어 동결시키지 않고도 장기간보존할 수 있고, 세포의 증식분열에 크게 관여하는 자유라디칼을 억제함으로써 세포의 증식·분열을 자유자재로 억제한다.

본 발명에 따르면, 유효성분으로서 폴리페놀을 포함하고, 세포공학이나 조직공학분야에 이용되는 동물의 세포 또는 이식용으로서 사용되는 장기의 보존제를 제공한다. 더 나아가, 이 보존제를 사용하여, 동물의 세포 또는 장기의 보존방법을 제안한다.

본 발명의 폴리페놀은, 녹차폴리페놀의 주성분인 카테킨류(catechins) 및 탄닌산(tannic acid) 등을 들 수 있다.

특히, 폴리페놀은 카테킨류가 바람직하고, 그 중에서도 3,3,4,5,7-플라보펜타놀(3,3,4,5,7-flavopentanol)로 알려진 카테킨(catechin), 3,4-디하이드록시페닐 (3,4-dihydroxyamine) 골격을 갖는 카테콜아민(catecolamine), 노르아드레날린 (noradrenaline), 아드레날린(adrenaline), 도파민(dopamine)이 포함되지만, 에피가로카테킨(epigallocatechin)을 주요성분으로 하는 카테킨류인 것이 특히 바람직하다.

그 외, 바람직한 폴리페놀의 예로서는, 탄닌산을 들 수 있다. 여기서, 탄닌이란 가수분해에 의해 몰식자산기(沒食子酸基, gallate)를 생성하는 다가(多價)페놀화합물(polyhydroxy alcohol compound)을 말한다. 일반적인 예를 들면, 약용탄닌산(officinal tannic acid)은, 몰식자산기 8개를 포도당잔기(d-glucose)의 주변 또한 동일평면상에 배열(arranging)하고, 2개의 몰식자산기를 수직방향으로 결합시킨 것이다.

그러나, 화합물의 중심부는 반드시 포도당에 국한된 것은 아니며, 셀룰로오즈계의 화합물(cellulose compounds)이라도 좋고, 탄닌산을 가수분해하여 얻어지는 몰식자산의 디데부리시드(didebriside) 등도 사용할 수 있다.

본 발명의 보존제의 유효성분인 폴리페놀은, 우리가 일상적으로 즐겨 마시는 녹차나 홍차, 그리고 적포도주에 많이 함유되어 있는 것으로, 예를 들면 녹차폴리페놀은 녹차의 잎으로부터, 물과 에탄올(ethanol) 또는 에틸아세테이트 (ethylacetate)와 같은 유기용제에서 추출되어 정제된 것으로, 주요 성분은 에피갈로카테킨(EGCg, epigallocatechin)을 주체로 하는 카테킨류이다.

본 발명의 바람직한 실시예로서는, 본 발명의 폴리페놀을 유효성분으로서 이용하는 보존제를, 통상의 세포배양액으로서 이용되고 있는 각종 배양액이나 장기보존용 보존액에 가한다.

본 발명에 사용되는 배양액이나 장기보존용 보존액은 공지의 것이 사용되고, 예를 들면 유로콜린즈액(Euro-Collins液, Squifflet, J.P., et al., Transplant Proc., 13, 693, 1981), UW액 등이 사용가능하다.

폴리페놀은, 통상 순도가 60%이상인 제품이 입수가 용이하며, 본 발명의 세포나 장기의 보존제로서의 폴리페놀은, 순도 60%이상의 제품도 사용가능하나, 순도 85%이상의 정제품(精製品)이 더욱 적합하다. 물론, 보다 고순도라면 더욱 효과적이다. 따라서, 본 발명의 보존제의 유효성분으로서는, 폴리페놀의 순도에 상관없이 모두가 포함된다.

본 발명의 보존제를 동물세포보존에 사용할 경우, 지금까지 각종 세포배양에 이용되고 있는 각종 배양액이나 장기보존용 보존액에, 바람직하게는 폴리페놀을 0.1∼50wt% 첨가, 더욱 바람직하게는 1∼30wt% 첨가한다.

예를 들면, 본 발명의 보존제를 장기보존에 사용할 경우, 종래부터 이식용 장기의 보존액으로서 임상적으로 이용되고 있는 유로콜린즈액이나 UW액에, 상기 폴리페놀을 0.1∼50wt%첨가한다. 보다 바람직한 농도는 1∼30wt% 첨가로 얻어진다.

또한, 혈액, 혈구 및 혈소판의 보존제로서 사용할 경우, 보존제 중에 시판되는 글루코오스나 인산염 등이 미리 첨가된 액체 또는 나중에 첨가한 액체, 또는 보존제에 폴리옥시에틸렌계 비이온 계면활성제(poly-oxyethylene)가 미리 첨가한 액체 또는 나중에 첨가한 액체에, 본 발명의 폴리페놀을 0.1∼50wt% 첨가하여 이용한다.

또, 본 발명의 보존제를, 단백질 용액의 안정화제로서 이용할 경우에는, 시판중인 지방산 에스테르가 첨가된 보존액에, 폴리페놀 0.1∼50wt% 더 첨가해도 되지만, 이 지방산 에스테르 대신에 폴리페놀을 0.1∼50wt%첨가해도 된다.

더 나아가, 본 발명의 보존제를, 장기이식후의 장기장해 등을 예방, 치료, 개선하는 보존제로서 사용할 경우에도, 시판중인 보존제에 폴리페놀을 0.1∼50wt%첨가하여 사용할 수 있다. 이 보존제의 투여방법으로서는 통상의 정맥내투여(intravenous injection), 경구(oral cavity), 경비(nasal cavity), 좌약(suppositor) 또는 경피투여(endermism)의 방법이 가능하다. 또, 투여량으로서는 환자의 연령이나 증상에 대하여 그다지 한정되지 않는다.

이러한 배양액 및 보존액에, 더 나아가 다른 항산화제인 SOD, 비타민 E, C 및 글루타치온(glutathione)도 병용할 수 있다.

본 발명의 보존제를 사용하는 조건으로서, 적용온도는 0∼37℃인 것이 바람직하다. 본 발명의 보존제를 시판제와 비교하면, 적용온도가 비교적 고온이므로 냉동을 필요로 하지 않으며, 더 나아가 내용시간(耐用時間, storage period)이 비교적 장시간이라서, 장기의 이식·수술에의 적응이 뛰어나다.

본 발명에 있어서의 세포에는, 사람 또는 동물의 조직으로부터 단이(單離, isolate)한 간세포(幹細胞, stem cell), 피부세포(skin cell), 점막세포(mucosal cell), 간세포(肝細胞, hepatocyte), 랑게르한스섬 세포(pancreatic cell, 膵島세포), 신경세포(neurocyte), 연골세포(chondrocyte), 내피세포(endothelial cell), 상피세포(epidermal cell), 골세포(osteocyte cell), 근육세포(muscle cell)를 포함하는 동물세포 또는 가축 및 어류의 정자, 알 또는 수정란이 포함된다.

또한 본 발명의 장기에는, 피부, 혈관, 각막, 신장, 심장, 간장, 탯줄, 장, 신경, 폐, 태반 또는 췌장이 포함된다.

본 발명자는 수 년전에, 이 폴리페놀, 특히 암세포증식억제작용에 흥미를 가져 여러 가지 성질을 조사한 바, 상기한 항산화물질에는 보이지 않는 특이적인 성질, 즉 물에도 유기용매에도 매우 잘 녹는 양친매성(amphipathic property)을 나타내며, 단백질에 대한 흡착성이 우수하고, 또 세포독성이 매우 낮을 뿐만 아니라, 항산화활성은 SOD의 10배이상이며, 더 나아가 지금까지는 전혀 알려지지 않았던 동물세포의 증식을 자유자재로 억제할 수 있다는 것을 보이기 시작했다.

폴리페놀이, 각종 생리활성작용, 예를 들면 항암작용, 항산화작용, 항균·항비루스작용이 뛰어나다는 것은 1980년대부터 많은 연구자들에 의해 보고되었다. 이 폴리페놀이 세포증식에 미치는 영향에 관한 연구는 이미 보고되어 있으나, 그 대부분이 암세포의 증식을 억제한다라는 것이다.

특히, 최근 네이쳐(Nature)에 게재된 논문 《J. Jankun, S.H.Selman, and R. Swiercz, "녹차를 마시는 것이 어떻게 암을 예방할 수 있는 가?(Why drinking green tea could prevent cancer)", Nature, 387, 5 June, 561, 1997》《Y, Cao and R.Cao, "녹차를 마시면 맥관형성이 억제된다(Angiogenesis inhibited by drinking tea)", Nature, 398, 1 April, 381, 1999》이 세계적으로 주목되었다.

녹차폴리페놀에는 항산화작용, 냄새제거작용, 항균작용 등 다양한 작용이 있고, 또 식욕억제작용이나 그 외 생리활성이 있기(식음료품용 기능성 소재유효이용기술과 필요성 No. 10, 녹차폴리페놀, 上村光男, 菓子總合技術센터, 三勇社)때문에, 최근 기능성식품으로서 애용되고 있다. 그러나, 폴리페놀의 동물세포나 장기 보존성에 대한 작용은 지금까지 전혀 시사되어 있지 않았다.

이와 같이 종래의 대부분의 연구자들은, 폴리페놀의 항산화물질로서의 항암작용에만 관심을 두어왔다고 생각된다. 따라서, 본 발명처럼 동물의 각종 정상세포를 이용하여, 그 세포증식을 자유자재로 억제할 수 있고 《동물세포가 체온에서 동면한다》는 현상을 많은 연구자 중에서 어느 한 사람도 발견할 수 없었다. 더욱이, 동면 후 다시 정상적인 세포증식·분열을 개시하고 여러 가지 기능을 발현시킬 수 있다는 것도 당연히 발견할 수 없었다.

이처럼, 각종 동물세포가 자유자재로 증식을 제어할 수 있다는 사실을 밝힐 수 있었던 것은 세포공학의 기초연구의 새로운 돌파구가 될 뿐만 아니라, 세포보존, 혈액성분보존 및 장기간동안의 장기보존까지도 가능하게 하는 획기적인 발명이다.

본 발명에서는, 췌장, 간장 및 신장 등의 생체조직을 구성하는 기본단위인 각종 세포증식을 자유자재로 조절할 수 있는 물질을 발견해 낸 것으로, 종래의 장기보존액에 이 물질을 첨가함으로써, 각종 장기뿐만 아니라 혈액보존에도 응용이 가능한 기술을 제공함으로써, 재생의료학의 진보에 크게 공헌할 수 있다.

＜실시예＞

이하, 본 발명의 실시예와 비교예에 대하여 설명하겠지만, 본 실시예의 예시에 본 발명이 구속되는 것은 아니다.

실시예 1과 비교예 1 ; 쥐의 섬유아세포(fibroblast)

L-929 섬유아세포를 이글사의 MEM(카나마이신 60㎎/ℓ 함유, kanamycin을 함유하는 Eagle's MEM)과 10%의 태아소혈청(fetal bovine serum; FBS, M.A. Bioproduct, Marylard, USA) 내에서 배양하였다. 세포증식테스트를 1.76×10⁵cells/㎖의 세포밀도로 행하고, 콘트롤(비교예 1)로서 혈청배양액(serum medium)만, 그리고 폴리페놀(50㎎/ℓ농도)을 다른 배양계에 첨가하였다(실시예1). 그 결과, 콘트롤군에서는, 2일후부터 증식이 급격히 일어났고, 5일후에는 2.5×10⁶cell로 증가하였지만, 폴리페놀을 첨가한 배양계에서는 1주일후에도 증식이 전혀 확인되지 않았다. 그러나, 여기서 배양액(medium)을 바꾸어, 폴리페놀을 첨가하지 않은 혈청배양액만(비교예 1)으로 하면, 증식이 재개되어 일주일후 4.5×10⁶cells/㎖이상으로 증가하였다. 또, 이와 같은 수면이 3개월이상 지속되는 것도 확인하였다.

실시예 2와 비교예 2 ; 돼지의 간세포

타입Ⅰ(type Ⅰ)의 콜라겐으로 코팅된 배양혈액(培養血)에 돼지의 간세포를 2.1×10⁵cells 파종하고 배양하였다. 콘트롤(비교예 2)은 3일에 1회 둘베코 개질 이글 배양액(Dulbecco's Modified Eagle's Medium; DMEM)(태아소혈청 100㎎/ℓ, 페니실린(penicilin) 50000unit/ℓ, 스테레프토마이신(stereptomycin) 100㎎/ℓ, EGF 0.5㎎/㎖, 인슐린 0.25㎎/ℓ함유)을 교환하고, 폴리페놀 5㎎/㎖ 첨가계(실시예2)와의 간세포증식능을 비교하였다. 콘트롤(비교예2)의 경우 4일째까지 서서히 증식하였지만, 그 후 급격히 증식되어, 1주일후에는 5.4×10⁶cells이나 증가하였다. 한편, 폴리페놀첨가계(실시예2)에서는, 섬유아세포의 경우와 마찬가지로, 일주일간 모두 변화가 없었고, 그 후 배양액을 교환하면 증식을 재개하였다. 간세포기능으로서 D-글루코오스(D-glucose)와 리도카인(Lidocaine) 클리어런스(clearance)를 체크한 결과, 폴리페놀을 첨가하여 수면시키고 일주일후 각성(覺醒)시킨 간세포(실시예2)는 통상의 간세포와 같은 정도의 간기능을 나타내는 것으로 확인되었다.

실시예3와 비교예3 ; 쥐의 췌장 랑게르한스섬

위스터(Wister)계 쥐(체중 380g)의 췌장으로부터 랑게르한스섬을 약 20,000개 파종하고, 그 일부 200개를 배양하였다. 배양액으로서는 RPMI 배양액 1640 (L글루타민함유, 글루코오스를 첨가하지 않은 RPMI 배양액 1640, Gibco BRL, 로트 번호 1019650, 라이프 테크놀로지스사 제품)을 사용하고, 거기에 태아소혈청(Fetal Bovine Serum (로트 no. 29110643, 캐나다의 카세라 인터내쇼날 인코포레이션(Casera International Inc.) 제품) 10%의 글루코오스(Glucose) 100㎎/㎗ 및 안티바이오틱-안티미코틱(Antibiotic-Antimycotic 로트 번호 1013807, 라이프 테크놀로지스사 제품)을 각각 첨가한 계를 이용하였다. 본 발명의 실시예 3에서는, 이 배양액에 2%농도가 되도록 폴리페놀을 첨가하고, 또 비교대조로서 폴리페놀을 첨가하지 않은 계에서 일주일간 37℃에서 배양하였다. 폴리페놀을 첨가하지 않은 비교예 3에서는 2일후에 이미 랑게르한스섬이 50% 파괴되었고, 4일후에는 랑게르한스섬이 100% 사멸되었다. 이에 비해, 본 발명의 폴리페놀첨가계에서는 일주일이 경과한 후에도 모두 랑게르한스섬의 파괴가 나타나지 않았고, 100% 모두 동면하고 있었다. 한편, 동면한 후의 랑게르한스섬의 기능을 체크하기 위해, 약 2000개의 랑게르한스섬을 상기와 같은 방법으로, RPMI 배양액 1640 내에 폴리페놀을 첨가함으로써 랑게르한스섬을 동면처리하여 일주일간 동면시킨 후, 폴리페놀을 제거하고, 인슐린측정용 테스트(Insulin-EIA Test Glazyme, 和光(wako)純藥工業株式會社)를 이용하여, 원스텝 효소면역측정법으로 인슐린처리기능을 체크한 바, 쥐의 췌장으로부터 파종직후의 랑게르한스섬과 같은 정도의 정상적인 기능을 나타냈다.

실시예 4와 비교예 4 ; 쥐의 신장보존

마취하에서 쥐(위스터계, 380g)의 신장을 적출하고, 보존효과를 비교검토하였다. 비교예 4로서는, 신장적출시에 UW액으로 세정한 후 48시간 냉각보존하였다. 이에 대하여 본 발명 실시예 4에서는 그 UW액에 더하여 폴리페놀(10㎎/㎖)을 첨가한 보존액으로 신장적출시에 세정을 하고, 마찬가지로 48시간 냉각보존하였다. 그 후, 단리신장관류장치(單離腎臟灌流裝置, perfusion instrument of isolated kidney)로 90분간 지속적으로 관류하고, 관류량(perfused volume)과 소변량(uric volume) 및 크레아틴 클리어런스(creatine clearance)를 비교하였다. 그 결과, 비교대조로서 이용한 UW액에만 보존된 신장에 비해, 본 발명의 폴리페놀 첨가계에서는, 신장장해가 현저히 경감되었다.

실시예 5와 비교예 5 ; 효소의 안정화

β-D-갈락토시다아제(β-D-galactosidase)용액에 폴리페놀 10㎎/㎖을 첨가하고(실시예 5), 30℃에서 4주간 인큐베이터에 방치한 후 420㎚의 흡광도를 측정하였다. 폴리페놀를 첨가하지 않은 비교예 5에서는 그 흡광도가 10%정도이었지만, 첨가계에서는 90%이상의 흡광도를 유지하였다.

실시예 6와 비교예 6 ; 혈액 또는 혈구의 보존

사람의 혈액2㎖에, 미리 생리식염수에 폴리페놀을 10㎎/㎖ 용해시킨 용액 500㎕첨가하였다(실시예 6). 48시간 후에 자동혈구계수기로 과립수(granule number)를 측정한 바, 폴리페놀을 첨가하지 않은 비교예 6에서는 과립수가 30%정도 감소하였으나, 폴리페놀첨가계에서는 거의 감소되지 않았고, 채혈직후의 과립수와 동일한 정도였다.

실시예 7과 비교예 7 ; 혈소판의 보존

사람의 혈액을 원심분리하여 다혈소판혈장(PRP, Platelet rich plasma)을 얻었다. 이 PRP 100㎖에, 미리 생리식염수에 폴리페놀 10㎎/㎖를 용해시킨 용액 10㎖를 가하고 22℃에서 3일간 보존하였다(실시예 7). 폴리페놀을 첨가하지 않은 PRP(비교예 7)에서의 3일후 혈소판의 형상이 팽창되어 응집능이 저하되었지만, 폴리페놀첨가계에서는 그러한 현상들이 보이지 않고, 초기 PRP형상과 응집능이 같은 정도였다.

실시예 8 ; 정맥투여

장기이식후의 장기장해 등을 예방, 치료, 개선하는 보존제로서 검토하기 위해, 쥐의 혈액내에 폴리페놀수용액을 투여해 보았다. 위스터계 숫쥐(체중350g)의 꼬리정맥에 폴리페놀(10㎎/㎖)을 첨가한 생리식염수 2㎖를 매일 1회씩 1주일간 연속적으로 주사기로 투여하였다. 그 일주일간은 물론 그 후 3개월간 아무런 이상없이 정상으로 생존했다.

본 발명에 따르면, 종래의 세포배양액에 폴리페놀을 첨가함으로써, 동물의 간세포, 췌장세포나 수정란까지도 장기간 동결시키지 않고 보존할 수 있다. 이로써, 동물세포가 생산하는 사이토키이닌(cytokinin)류 등, 유용물질을 생산하는 세포공학이나 조직공학에 이용할 수 있다. 또한, 종래의 장기보존액에 폴리페놀을 첨가함으로써, 이식용 장기, 예를 들면, 간장, 신장, 췌장, 각막이나 피부, 신경, 탯줄 등 모든 장기의 보존기간을 대폭 연장시킬 수 있다. 또, 혈액이나 혈구, 혈소판까지도 장기간 보존가능하게 되고, 더 나아가 종래의 혈소판보존액에 폴리페놀을 가함으로써, 혈장과 치환된 혈소판 보존액으로서 사용할 수도 있다. 또, 각종 모든 단백질용액과 폴리페놀을 계내에 공존시킴으로써, 식품, 임상, 임상진단 또는 메디칼디바이스 등으로 이용되는 각종 단백질(효소, 항체, 항원, 면역학적 활성물질, 생리활성 펩티드 등)의 용액상태 또는 건조상태에서의 보존의 안정성을 향상시킬 수 있다. 더욱이, 폴리페놀첨가액을 장기장해의 예방, 치료, 개선제로서 사용할 수 있다.

결론적으로, 본 발명에 있어서는, 각종 동물세포의 증식을 자유자재로 제어함으로써, 세포증식기구를 해명함과 동시에, 장기이식을 위한 각종 장기의 보존이나 혈액을 보존할 때, 종래의 보존가능시간을 적어도 두 배이상으로 연장시킨다. 구체적으로는, 정상유용세포의 증식을 억제할 수 있어 동결시키지 않고 장기간 보존이 가능하며, 세포증식의 분열에 크게 관여하는 자유라디칼을 제어함으로써, 세포의 증식·분열을 자유자재로 제어할 수 있다. 또, 본 발명의 보존제를 시판제들과 비교하면, 적용온도가 비교적 고온이므로 냉동을 필요로 하지 않으며, 더 나아가 내용시간(內用時間)이 비교적 장시간이고, 장기의 이식·수술에의 적응이 뛰어나다.

Claims (8)

1. 유효성분으로서 폴리페놀을 포함하는 동물의 세포 또는 장기의 보존제.
2. 제1항에 있어서, 상기 폴리페놀이 에피갈로카테킨(epigallocatechin)을 주성분으로 하는 카테킨(catechin)류인, 보존제.
3. 제1항에 있어서, 상기 세포가, 사람 또는 동물의 조직으로부터 단리한 간세포, 피부세포, 점막세포, 간세포, 랑게르한스섬 세포, 신경세포, 연골세포, 내피세포, 상피세포, 골세포, 근육세포를 포함하는 동물세포 또는 가축 및 어류의 정자, 알 또는 수정란인 인, 보존제.
4. 제1항에 있어서, 상기 장기가, 피부, 혈관, 각막, 신장, 심장, 간장, 탯줄, 장, 신경, 폐, 태반 또는 췌장을 포함하는, 보존제.
5. 제1항에 있어서, 상기 폴리페놀을 단백질용액의 보존제에 첨가하여, 단백질을 안정화시키는, 보존제.
6. 제1항에 있어서, 상기 폴리페놀을 혈액, 혈구 또는 혈소판의 보존제에 첨가함으로써 보존제의 역할을 하는, 보존제.
7. 제1항에 있어서, 상기 폴리페놀을 장기이식후의 장기의 보존제에 첨가함으로써, 장기이식후의 장기장해를 예방, 치료, 개선하는, 보존제.
8. 유효성분으로서 폴리페놀을 포함하는 제1항 내지 제7항에 기재된 보존제를, 이식용으로서 사용되는 동물의 세포 또는 장기의 보존에 적용하는 방법.