JPH03188001A - 臓器保存用溶液 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は臓器保存用溶液に関するものである。

（従来の技術及び発明が解決すべき課題）腎臓保存、死
体腎臓の生体外貯蔵は比較的新しい分野である。移植用
死体腎臓の保存は病院で通常実施されているが、進歩は
試行錯誤による実験に限られていた。この研究は臨床的
見地からは一部成功していたけれども、これら成功のか
げにある真実の原理はよく理解されていない。

腎臓移植は厳密な研究操作から進展し末期段階の腎臓疾
患に対する確立した臨床療法となってきたので、腎臓保
存は研究室での研究段階から確立された臨床方法へと進
歩してきた。現在、腎臓保存に最も一般的に用いられて
いる二つの方法は単純低温（ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉｃ）
貯蔵法と連続潅流（ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）である。臨床
的な腎臓保存の最も一般的方法である単純低温貯蔵では
、死体贈与者から臓器を取り出し急速冷却する。この方
法は中心部温度をできるかぎり迅速に下げるため通常外
部冷却と短時間潅流の組み合わせで行われる。次いで腎
臓が貯蔵され、簡単なプラスチック容器中のフラッシン
グ・アウト（ｆｌｕｓｈ−ｏｕｔ）溶液中に浸漬され、
容器を水中に浸漬し０〜４℃の温度に保持される。この
方法の利点はその単純性、低コスト、及び内蔵移植の容
易性にある。最適保存を行うためのフラッシング・アウ
ト溶液の組成について広範囲に及ぶ研究が行われてきた
。

臨床試験と共に広大な研究室調査研究が行なわれてきた
腎臓保存の第二の方法は連続脈動潅流法である。連続潅
流法の基本的な構成要素は（１）脈動流、　（２）低温
化、　（３）脱酸素化及び（４）アルブミン及び脂質の
両方を含有する潅流液（ｐｅｒｆｕｓａｔｅ）である。

多少の変形はあるけれども、現在用いられているすべて
の腎臓保存ユニットはこれらの基本的原理を共有してい
る。臨床移植における連続潅流法にはい（つかの利点が
ある。潅流の第一の利点は死体からの移植を部分的に選
択操作するのに十分な時間が得られることである。第二
は移植前の生活能力試験を可能にすることである。もし
保存時間を現在の混合リンパ球培養試験に必要とされる
５〜７日にまで延長できるならば、死体からの腎臓移植
の結果に対し重要な改善がなされることが期待できる。

最初の細胞内電解質溶液によるフラッシング後の単純冷
却貯蔵又は電解質−タンパク質溶液による脈動潅流によ
って人間の腎臓を２〜３日間成功裡に保存できるように
なって贈与者及び受納者の組織対比試験、移植センター
間の腎臓分配、受納者の注意深い予備手術準備のために
十分な時間が得られるようになり、予備的な贈与者の培
養の時間が得られる結果となり、移植前の贈与腎臓の血
管の補修時間が得られるようになった。低温沈殿したプ
ラズマによる低温脈動潅流を用いて７２時間保存した腎
臓は人間の腎臓保存の重要な進歩であることを証明し、
保存の好ましい方法であった。氷冷した細胞内電解質フ
ラッシング液処理後の単純冷却貯蔵による腎臓器官の保
存法は人間の腎臓保存に６１時間まで満足に用いられて
いた。

血清アルブミンは種々の形で必要なコロイド浸透圧を作
るため臨床上の臓器保存に広く用いられている。血清ア
ルブミンの形としては低温沈殿したプラズマ、プラズマ
タンパク質画分、人間の血清アルブミン及びシリカゲル
処理プラズマが含まれる。しかしながら、これらの潅流
液は天然由来物質から調製されるので、変動は避けられ
ない。

もし合成コロイドを含有する潅流液が入手できれば特に
有利であろう。

過去において、多数の合成コロイド物質が腎臓保存にお
ける有効性について実験的に試験されてきた。これらの
コロイドにはデキストラン、ポリビニルピロリドン、プ
ルロニック類、ヒドロキシエチル澱粉（ＨＥＳ）、フィ
コール（Ｆｉｃｏｌｌ）、アラビアゴム、ポリエチレン
グリコールが含まれる。これらのうち血清アルブミンは
ど有効なものはなかった。しかしながら、ＨＥＳは２４
時間の保存、ある場合には７２時間の保存に有効であっ
た。これらのコロイド物質はすべて含塩水を基調とする
潅流液中で試験された。最近、コロイド浸透支持用人間
の血清アルブミン（ＨＳＡ）の塩素の代わりにグルコン
酸アニオンを含有する潅流液で大の腎臓を７２時間うま
く保存できることが観察された。

１９６０年代のおそくに２つの重要な研究、すなわち、
腎臓が冷温貯蔵により３０時間（１）及び連続潅流によ
り７２時間もの間（２）安全に保存できたことが示され
た。これら２つの研究は死体腎臓の臨床的移植を緊急操
作から半選択操作へと変えた。多くの研究者が他の冷温
貯蔵溶液について試験しく３）、何人かが４８又は７２
時間の保存に成功したと主張した（３−５）。しかしな
がらコリンス（（：ｏｌｌｉｎｓ）溶液又は変性ユーロ
コリンス（Ｅｕｒｏｃｏｌｌｉｎｓ）溶液（５）が腎臓
を冷温貯蔵により保存している大部分の移植センターで
好まれている。

１９８０年代に免疫抑圧用にシフロスポーリン（ｃｙｃ
ｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）が紹介されて他の臓器、特に肝臓
、すい臓、心臓、肺臓、及び心肺域の移植に関する関心
が復活した。しかし、腎臓に対して成功した保存法はこ
れら他の臓器に対しては成功しないことが証明された。

従って、心臓、肝臓及びすい臓の臨床的保存は最低限に
しか維持されず、６〜１０時間以上にならなかった。こ
れらの臓器の移植は腎臓の場合よりも数倍複雑であり、
手術は常に贈与者の病院で手術室が利用できる夜間に行
われている。心臓及び肝臓の保存期間が短いことはまた
贈与音用及び受信者用の二つの外科チームを必要として
いる。これら臓器の保存期間を３０時間まで延長するこ
とはこれら臓器の移植に対し腎臓移植の場合と同様な衝
撃、すなわち、臓器入手可能性の増大、臓器廃棄の減少
、臓器配分の増大及びコストの低下をもたらすであろう
。

すべての贈与者臓器、贈与者体中その場での臓器冷却及
び臓器取り出し後の冷温貯蔵の両方に用い得る保存用溶
液が望ましい。

（課題を解決するための手段） 本発明によれば、人間の血清アルブミンの代りに特殊な
合成ＨＥＳを含有する潅流液もしくは貯蔵用溶液及びそ
れを用いる臓器保存方法が開示される。適切な組成物が
提供される。開示されるのはすい臓の７２時間保存、腎
臓の４８時間保存及び肝臓の少なくとも２４時間保存に
提供された貯蔵用溶液及び潅流液である。

上述したように、血清アルブミン（Ｈ３Ａ）に基づく潅
流液は過去１７年間実験的及び臨床的両方の腎臓保存用
として標準であった。不幸にして、この型の潅流液では
僅か３日の保存期間しか得られなかった。これら両方の
方法では腎臓の生活活性を３日間までは保存するけれど
も、より長い保存時間を定常的に得るのは困難である。

さらにこれらの方法は生存能力を３日間までは保持する
けれども、腎臓の移植後の血清タレアチニンのレベルが
上昇し、この高いレベルを正常に戻すのに必要な時間が
長くなることによって示されるように腎臓が損傷される
。初期の潅流液は容易に静脈注入用として入手できる電
解質から選ばれ、基本的に細胞外組成物のものであった
。

現在まで腎臓保存用に受は入れられる方法は得られてい
なかった。臨床的な効果が証明された方法は短時間貯蔵
（３日間）に限られ、生存能力は大いに低下している。

本発明は低体温保存臓器に最も適した潅流液及び貯蔵液
の生化学的組成及び大いに改善された長期保存が得られ
る新規な合成コロイド浸透剤について記載する。

凍結及び連続好気性潅流法は理論的に真の長期間（１月
から数年間）保存が得られる唯一の手段である。単純冷
温貯蔵は臓器が生活活性を失う特定の時間制限を有して
いる。低体温法は細胞内酵素が臓器の生活活性に必要と
される主要な細胞成分を分解する速度を低下させる。低
体温法は代謝を停止させるのではな（、単に反応速度及
び細胞の死亡を遅くする。

カルシら、ブリティッシュ・メディカル・ジャーナル　
１９６３；２：６５１〜６５５は冷温血液を用いる虚血
腎臓の単純冷却は１２時間機能が保持されることを示し
た。コリンズ（ランセット　１９６９．２　：１２１９
−１２２２）は適切な溢流溶液の使用が腎臓の貯蔵時間
を関数３に（３０時間まで）増加させたことを示した。

この溶液がすい臓、肝臓及び心臓など他の臓器保存に有
効でなかったのは臓器の特有の代謝の差によると考えら
れる。

フラッシュ・アウト溶液が適切かつ有効であるためには
ｌ）低温化により生起される細胞膨潤を極小化し、２）
細胞内酸性分解を防止し、３）フラッシュ・アウト期間
中の細胞外空間の膨張を防止し、４）特に再潅流中の酸
素を含有しないラジカルによる害を防止し、５）再潅流
中の高エネルギーリン酸塩化合物再生用基質を含む組成
を有していなければならない。低温化により生起される
細胞膨潤は水分の蓄積による。この膨潤傾向は細胞に対
し不浸透性である基質（不浸透剤）を１１０〜１４０ミ
リモル（ｍｍｏｌ）　　（１１０〜１４０ミリオスモル
（ｍＯｓｍ）／　ｋ　ｇの浸透圧）添加することにより
打ち消すことができる。この不浸透剤の濃度はコリンの
冷温貯蔵溶液中のグルコース濃度（１２０ミリモル）及
び他の冷温貯蔵溶液中の不浸透剤の濃度に等しい。した
がって、好結果の冷温貯蔵溶液の鍵となる成分は有効な
不浸透剤の適切な濃度である。

好結果の冷温貯蔵溶液として第二に考慮すべき重要な点
は細胞内酸性分解の防止である。虚血は低温でも解糖及
びグリコーゲン分解（パスツール効果）を刺激し、また
乳酸の生成及び水素イオン濃度を増大させる。組織の酸
性分解は細胞にとって決定的であり、リッツマールの不
安定化を生起し、リッツマール酵素を活性化し、ミトコ
ンドリアの性質を変えることになる。それ故、細胞内酸
性分解の防止は良好な保存の必要条件である。ある研究
では、冷温貯蔵溶液の効果的な緩衝又はアルカリ性ｐＨ
を有するフラッシュ・アウト溶液の使用が肝臓（ワー、
ティーニスら、トランスプラント・ブロス　１９８４．
１６：１３４−１３７）及びすい臓（アブストラクト、
アメリカン・ソサイエティ・イブ・トランスプラント・
サージョンズ、第１３年金、５月２８−２９日、１９８
７）の貯蔵を改善することを示している。

有効なフラッシュ・アウト溶液は細胞外空間の膨張、贈
与前臓器のその場のフラッシング中及び臓器を取り出し
た後に生じる膨張を防止しなければならない。このよう
な膨張は毛細管系統を圧迫し、組織内へのフラッシュ・
アウト溶液の分配を悪（することになる。大部分の冷温
貯蔵溶液はコロイド浸透性体（アルブミン又は他のコロ
イド）を作用させる基質を含有していない。それ故、フ
ラッシュ・アウト溶液の成分は迅速に細胞外空間に拡散
し、組織の水腫を生じさせる。したがって、その場合の
理想的なフラッシュ・アウト溶液はコロイド浸透圧をつ
くる基質を含有すべきであり、そのフラッシュ・アウト
溶液の主要成分を細胞外空間を膨張させることなく自由
に交換できるものである。

効果的な冷却貯蔵溶液として第四に考慮すべき重要な点
は再潅流中の酸素を含有しないラジカルによる害である
が、これらの剤の正確な役割はまだ不明である。内生的
キサンチンオキシダーゼはスーベルオキシドアニオンを
捕捉するスーペルオキシドディスムターゼの高い内生的
活性に比較して低い活性を有しているから、酸素を含ま
ないラジカルは人間の肝臓及び腎臓にはあまり重要では
ないと考えられている。これに対し、酸素を含まないラ
ジカルにより生起される害はそのような損害にたいして
敏感な肺臓及び腸にとっては極度に重要である。

考慮すべき最後の重要な点はエネルギー代謝である。ア
デノシントリフオスフェート（ＡＴＰ）は低温貯蔵中に
急速に分解し、この分解の結果プラズマ膜を自由に浸透
できる最終生成物（アデノシン、イノシン及びハイポキ
サンチン）が形成される。臓器の再潅流にはＡＴＰを必
要とするナトリウムポンプ活性の急速な再生が必要であ
る。それ故、ＡＴＰ前駆物質が得られることが効果的臓
器保存にとって重要であろう。

腎臓、肝臓及びすい臓の代謝には重要な相違点があり、
これらの相違点がこれらの臓器がいかによ（保存される
かに影響する。細胞膨潤の抑制には有効な不浸透剤が必
要である。コリンス溶液の主要な不浸透剤であるグルコ
ースは肝臓又はすい臓に有効でなく、容易に細胞中に入
る。サウザードら、クリオバイオロジイ　１９８６；２
３：４７７−４８２゜もう一つの通常用いられる不浸透
剤であるマニトールは肝臓ではグルコースと同様に浸透
する。このように、グルコース又はマニトールに依存す
る冷温貯蔵溶液が肝臓及びすい臓に有効でない理由の一
つはこれら溶液が有効な不浸透剤を含んでいないことで
ある。

本発明によれば、臓器保存用溶液は細胞に対する不浸透
剤としてラクトビチオン酸アニオンとラフィノースを含
有し、約３２０ミリオスモル（ｍＯｓｍ）　／　Ｑの溶
液オスモル濃度（ｓｏｌｕｔｉｏｎｏｓｍｏｌａｌｉｔ
ｙ）　、１２０　ｍＭのに◆及び３０ｍＭのＮａ”を有
している。好ましいコロイドは約１５０．０００から約
３５０．０００ドルトン（ｄａｌｔｏｎ）の平均重量分
子量及び約０．４から約０．７の置換度を有する変性ヒ
ドロキシエチル澱粉である。より好ましいコロイドは約
２００．０００から約３００．０００ドルトンの平均重
量分子量を有するヒドロキシエチル澱粉である。好まし
いコロイドは実質的に約５０．０００ドルトン未満の分
子量を有するヒドロキシエチル澱粉を含有しないもので
ある。本発明の１実施態様によれば、ヒドロキシエチル
澱粉は蒸留脱イオン水による透析又は他の処理によりヒ
ドロキシエチル澱粉製品の有効性に対し逆効果を有する
予め未知の数種の不純物が除去される。

透析処理により除去される物質は非常に少量のヒドロキ
シエチル澱粉であり、残留アセトン及び塩化ナトリウム
とともにヒドロキシエチル化の副製品であるエチレング
リコール及びエチレンクロロヒドリンを含んでいる。エ
チレングリコール及びエチレンクロロヒドリンは毒性で
あることが知られている。したがってそれらの除去は少
量存在していても望ましいことである。

好ましい実施態様において保存溶液及び潅流液組成には
次のものが含まれるが、これに特定されるものではない
。

第１表 成分 ｌρ中の量 ヒドロキシエチル澱粉　　　　　　５０ｇ／ｌラクトビ
オン酸　　　　　　３５．８３ｇ／ｌ−塩基リン酸カリ
ウム　　　　　３．４ｇ／ｌ硫酸マグネシウム・７水和
物　１．２３ｇ／ｌラフィノース・５水和物　　１７．
８３ｇ／ｌアデノシン　　　　　　　　　１．３４ｇ／
ｌアロプリノール　　　　　　０．１３６ｇ／忍グルタ
チオン　　　　　　　０．９２２ｇ／ｌ水酸化カリウム
　　　　　　　　　ｑ、ｓ。

水酸化ナトリウム　　　ｐＨ７，４に調整もし必要なら
、最終溶液組成とするため、次の添加物を、使用する前
に無菌状態で添加する。

１、ペニシリンＧ２００，０００単位 ２、レギュラーインシュリン４０単位 ３、デキサメタシン１６ｍｇ 濃度範囲については、 ヒドロキシエチル澱粉 ラクトビオン酸 リン酸イオン 硫酸イオン マグネシウムイオン ラフィノース・ アデノシン アロプリノール グルタチオン ｐＨ 次の組成が好ましい： ４５．０〜５７．５　　ｇ／ｌ ３２、２５〜４１．２０　ｇ／ｌ ２．１６〜２．７６ｇ／氾 （−塩基性リン酸カリウム ３．０９〜３．９６　　ｇ／Ｉｌ当量）０．４３〜０．
５５　ｇ／ｌ （硫酸７クネシウム・　７水和物 １、１０〜１．４１　　ｇ／ｌ当量） ０．１１〜０．１３　　ｇＩＱ （硫酸マグネシウム・　７水和物 １、１２〜１．３２　　ｇ／１２当量）５水和物　１６
．０５〜２０．５０　ｇ／ｌ１．２１〜１．５４　　ｇ
／ｌ ０．１２〜０．１６　　ｇＩＱ ０．８３〜１．０６　　ｇ／１２ ６．８〜８．０ 好ましいカリウムのレベルは約１２０　ｍＥＱ／　ＩＩ
。

から約１５０　ｍＥＱ／　Ｑであり、ナトリウムのレベ
ルは約２０ｍＥＱｌρから３０　ｍＥＱ／　Ａである。

もし必要なら、グルタチオンは組成から外して（０％）
、使用直前に最終溶液の組成として添加するように凍結
乾燥添加物などの分離添加物として包装してもよい。

より広い濃度範囲については、次の組成が臓器保存用に
好適な溶液となるであろう： ヒドロキシエチル澱粉　　　　２〜１２％ラクトビオン
酸　　　　　　　ｌ〜　７％ラフィノース　　　　　　
　０．５〜３％アデノシン　　　　　　　　　０．１〜
０．３％アロプリノール　　　　　　０．Ｏ２Ｎ２．３
％グルタチオン　　　　　　　　０．０〜０．３％カリ
ウム　　　　　　　約１２０〜１５０　ｍＥＱ／ｌナト
リウム　　　　　　　約　２０〜３０　ｍＥＱ／ｌ注入
用水　　　　　　　　　　０．５ 保存溶液用の好ましいコロイドは、約２００゜０００か
ら約３５０，０００ドルトンの重量平均分子量、約０．
４から約０．７の置換度を有し、エチレングリコール、
エチレンクロロヒドリン、アセトン及び塩化ナトリウム
を含む汚染物を実質的に含有せず、約５０，０００ドル
トン未満のヒドロキシエチル澱粉を実質的に含有しない
ヒドロキシエチル澱粉である。

溶液は腎臓、肝臓及びすい臓を含む臓器を移植前移送用
としてそれらを単純低温フラッシング及び貯蔵するのに
使用することができる。ヒドロキシエチル澱粉は約１５
０，０００から約３５０゜０００ドルトンの分子量を有
し、エチレングリコール、エチレンクロロヒドリン、塩
化ナトリウム及びアセトン、約５０，０００ドルトン未
満の分子量を有するヒドロキシエチル澱粉を実質的に含
有しない。

好ましくは、保存用溶液は約２〜１２％のヒドロキシエ
チル澱粉、約１〜７％のラクトビオン酸及び約０．５〜
３％のラフィノースを含有する。

（実施例） 次に本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明する。

実施例１ ヒドロキシエチル　　の １００ｇのヒドロキシエチル澱粉をＩＩ２の蒸留脱イオ
ン水に溶解し１０％ｗ／ｗ溶液をつくった。このＨＥＳ
溶液を５０，０００ドルトンの分子量を分離する透析バ
ッグ（３４ｍｍ　ｘ　１８４７チ）中に入れ、蒸留脱イ
オン水１０−１５４２の容器中に入れ７２時間撹拌した
。水は毎日とり替え、ＨＥＳを集めて使用するまで一２
０℃で凍結した。

実施例２ ゛のすい　の７２　日 体重１５−２５ｋｇの成人雑種犬を実験に使用した。

手術操作。麻酔ははじめペンタトール （ｐｅｎｔａｔｈｏｌ）で行ない、へロタン（ｈａｌｏ
ｔｈａｎｅ）で続けた。中心線切開によりすい臓の左切
片（尾部）を前述のように取り出した。ひ臓をつけた移
植部分（グラフト）をフラッシュアウト直後（コントロ
ール）、冷蔵４８時間後及び冷蔵４８時間後にそれぞれ
長骨管（ｉｌｉａｃ　ｖｅｓｓｅｌ）に移植した。

すい管は開けたままにし、すい液を自由に腹腔へ滴下さ
せた。抗凝血剤は使用しなかった。すい臓の右切片は移
植の時に除去した。

実験記録。全ての犬に摘出前及び移植後最初の３日間は
０．５ｇのマンドール（Ｍａｎｄｏｌ）　Ｉ　、　Ｖ　
。

を与えた。犬にはビオカーセ（Ｖｉｏｋａｓｅ）含有の
標準ドッグフードを給餌した。これら動物は３群（グル
ープ）に分けた。グループ１：臓器摘出、洗浄後直ちに
グラフトを移植、グループ２（４８時間冷却貯蔵）、グ
ループ３（７２時間冷却貯蔵。血液のグルコース濃度を
移植後１週間は毎日、その後は２週に１回測定した。静
脈内グルコース許容濃度試験（ＩＶＧＴＴ）を移植後２
４時間、２週間及び４週間に行った。４週間後にグラフ
トを除去し、その２−３日後にＩＶＧＴＴを行った。Ｉ
ＶＧＴＴにはグルー１〜ス（０，５ｇ／体重１ｋｇ）を
注射し、その後１分、５分、１０分、２０分、３０分、
６０分、９０分に血液グルコースを測定した。５−６０
分測定から得られた血液グルコース濃度からに値を算出
した（９）。

グルコース値が２日間をこえ１５０ｍｇ％よりも大きく
、Ｋ値が１．０よりも低い場合を糖尿病の兆候と考えた
。

保存。保存溶液の比較を第２表に示した。摘出後すい臓
は約２５０−３００ｙｎ［ｌのフラッシュ・アウト溶液
を高さ６０ｃｍからフラッシングした。

グラフトは二重プラスチック容器中で保存溶液に浸して
入れ、容器を氷水浴中に置いた。

統計処理。学生用Ｔ試験法を用い統計的に評価した。得
られた値は平均値±ＳＥＭである。

結果 全ての移植体（グラフト）は移植後、直ちによ（潅流し
た。保存移植体には潅流後５−１０分に程度の差はある
が小葉内水腫（ｉｎｔｒａｌｏｂｕｌａｒｅｄｅｍａ）
が生じた。全ての場合ひ臓はよ（潅流した。第２表に示
すように、５匹の犬が死亡した。

そのうち３匹はコントロール群、２匹はグループ３（７
２時間保存）であった、死因は移植とは無関係で、全て
の犬はグラフトが機能したまま死亡した。すい臓機能検
査の際、全てのグラフトは（コントロールでさえも）ひ
臓の場合同様種々の程度の線維症を示した。動脈及び静
脈の血栓症はどのグラフトも明らかでなかった。

移植後血液グルコース値及びＩＶＧＴＴ結果は各動物毎
に第２表に示した。検討した各グループの平均値（＋Ｓ
ＥＭ）も第２表に示した。移植後最初の１週間中の平均
血液グルコース値はグループ３が最も高＜　（１２４±
６ｍｇ％）、この値はグループ１（９４±７ｍｇ％）及
びグループ２（１０７±７ｍｇ％）と比較した場合有意
差（ｐ＜０．０５）があった。日数１の平均に値もグル
ープ３（１８５±０．１５％）がグループ１　（２，４
４±０．１４％）及びグループ２（２，５３±０．２２
％）と比較した場合有意に（ｐ＜０．０５）低かった。

グループ３において、日数１４で試験したに値（１，７
±０．１％）及び日数２８のに値（１，６１±０，１９
％）は日数１のに値と同等にとどまっていた（Ｐ＝ＮＳ
）、グループｌ及びグループ２においてに値は低下し、
移植後２週間で３グル一プ間の有意差はなくなった。第
４週までは、グループ３のに値はグループ２のそれより
も良かったが、コントロールグループと比較すれば若干
低かった（グループ１内の個数が少ないため統計的有意
は示されなかった）。

全ての犬がすい臓除去後過血糖症（血液グルコース濃度
が２００ｍｇ％より大）となり、移植された臓器がグル
コース恒常性に太き（関与していたことを示した。グル
ープ３の４匹は長期間生存が観察された。１匹の犬は移
植後７週間に肺炎で死亡したが、正常血糖のままであっ
た。２匹の犬は３月後及び４月後に犠牲にし、１匹の犬
は６月間そのままにした。全ての犬に糖尿の徴候はなく
、正常血糖であった。

実施例３ ２４時間肝臓保存 臨床的肝臓保存は約６−１０時間に制限されており、こ
れを２４時間又はそれ以上に増加させることは肝臓移植
に重大な衝撃を与えるであろう。

分離し潅流した兎の肝臓を、冷温貯蔵に続くコリンス溶
液、ケンブリッジ血清タンパク質画分（ＰＰＰ）、マー
シャル溶液及び本発明の溶液（保存溶液）それぞれの中
での保存特性の評価に使用した。冷温貯蔵した肝臓の正
常温度潅流中での胆汁生産は生活能力の有用なパラメー
タであり、コントロールと２４時間冷温貯蔵した兎の肝
臓の胆汁生産速度（ＴＩ’ｔ１２／　ｌ　ＯＯｇｍ／　
ｈ　ｒ±ＳＤ）を表に示す。

コントロール　　　　５．４±１．７ ケンブリツジＰＰＰ　　１．８±０．９ユーロコリンス
　　　１．９±１．３ マーシヤル　　　　　３．１±０．５ 保存溶液　　　　　　４，４±０．５ 説明保存溶液は他の冷温貯蔵溶液に比べ２４時間冷温貯
蔵（２−４℃）、正常温度潅流での胆汁生産の点で優れ
ていた。

成功的保存溶液の最終的試験は移植モデルである。それ
故、保存溶液を犬の正常肝臓移植モデルに使用した。こ
の溶液を用いる潅流に続いて３匹の犬の肝臓を続けて２
４−２６時間貯蔵した。移植はカフ（ｃｕｆｆ）及び縫
合技術の組み合わせで行った。すべての肝臓は満足すべ
き外観を呈しており、３匹の犬は敏捷に起きており、処
置終了の４時間内に立ち上がった。血小板数は手術後６
時間正常であった。６時間及びそれに続（７日間のビリ
ルビン及び酵素値を表に記録してあり、正常肝臓機能の
急速な回復を示している。１匹の犬は手術後５日に腸重
積症により死亡した。

６時間　　日数１　　口数３　　日数５　　田数７０．
６±Ｏ，：ｌ　　Ｏ，７±０．６　０．９±０．７　０
．５±（１，４０，４±０．２２１４８±９８３１８：
１５±１１４５　６１±１６　５５±４０４５±２１１
８６±１４　２１７±４７　２７３±１２６　３１１±
６４　３１５±４８ＧＯＴ ビリルビン　ｍｇｚ 燐酸アルカリ 実施例４ 腎臓保存 この経験に基づいて、説明した冷温貯蔵（ＣＳ）溶液の
腎臓保存に対する潜在的有用性を検討し、再潅流後の腎
臓機能に対するその効果を、ｌ）分離し潅流した犬の腎
臓モデル（ＩＰＫ）中で、２）犬のオート移植（ａｕｔ
ｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）モデル中で検討した。

１）犬の腎臓ユーロコリンス（Ｅｕｒｏｃｏｌｌｉｎｓ
）（ＥＣ）中又は説明した冷温貯蔵溶液（Ｃ３）中でそ
れぞれ４８時間冷温貯蔵した。腎臓機能はＩＰＫモデル
の再潅流中にクレブスーヘンセレイ）　（Ｋｒｅｂｓ−
Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ）溶液を含有した酸素化変性アルブ
ミンを用い３７℃で９０分より長い時間測定した。１０
分ごとに尿サンプルを集め分析した。ＧＦＲ（クレアチ
ニン除去）、尿／プラズマタンパク質（Ｕ／Ｐ）及び画
分ナトリウム再吸収（％Ｎａ）を算出した。結果は平均
値としてかっこ内の標準偏差とともに第３表に示す。

両方の冷温貯蔵腎臓グループは再潅流時に腎臓機能が低
下（コントロール腎臓に比較して）した。ＦＣ−貯蔵腎
臓に比較してＣ８−貯蔵腎臓はＩＰＫ中にＧＦＲ及びナ
トリウム再吸収性を有意に改善した。この機能改善はＣ
８中で保存された腎臓は冷温イシエミック損傷をＥＣ中
で貯蔵された腎臓よりも迅速に回復させることができる
ことを示唆している。

２）４８時間Ｃ８中で保存した８匹の犬の腎臓を順次オ
ート移植した。３匹の動物は技術的な複雑さ（動脈血塞
、腸重積症）によって犠牲になった。生き残った５匹の
移植後血清クレアチニン（平均値±ＳＤ）を第４表に示
す。

この研究はＣ８溶液を用い４８時間冷温貯蔵した場合腎
臓機能がよく保存されることを示している。それ故、こ
の溶液は腎臓、すい臓及び肝臓を保存することができ、
単純冷温貯蔵又は連続潅流に使用することができる。

実施例５ 臓器保存用 第１表の溶液は臓器の単純低温フラッシング及び貯蔵用
のうすい黄色で透明な無菌の非パイロ−ジエン性溶液で
ある。溶液は約３２０ｍ０５ｍの浸透圧モル濃度計算値
、約２０　ｍＥｑ／ｌのナトリウム濃度、約１２０ｍＥ
ｑ／ｌのカリウム濃度及び室温で約７．４のｐＨを有し
ている。溶液は腎臓、肝臓及びすい臓を含む臓器をドナ
ーから取り出した時にそれらを貯蔵、移送及び最終的に
は受容者（レシピエンド）に移植するために調整するフ
ラッシング及び低温貯蔵用に意図されいる。溶液を水中
で約２〜６℃（３５，６〜４２．８”Ｆ）　ｋ：　予備
冷却Ｌ　タ後、この冷却溶液を分離される臓器をドナー
から取り出す直前又はドナーから取り出した直後にフラ
ッシングするのに使用される。溶液は単純低温貯蔵中及
び移送中臓器血管系中に残される。

溶液は臓器の低温貯蔵用のものであり、連続的な機械潅
流用に意図されていない。推薦される温度における溶液
の使用は臓器を有効に冷却し、その代謝必要物を低減す
るものである。臓器に連結する前に、溶液容器は溶液を
変動なく流すことができ、フラッシング中小なくとも３
０ｍｊ２／分の流速が得られるよう十分な高さに懸垂す
べきである。フラッシングは臓器が均一に薄い色になり
、流出液が透明になるまで続けるべきである。

提案される最低容量 生体内フラッシュ： 成人　２〜４ρ 幼児　５０ｍｇ／ｋｇ 生体外注入： 肝臓（門脈及び胆のう管系経由） 成人　１２００ｍｊ２ 幼児　５０ｍｊ２／ｋｇ すい臓又は腎臓 成人　３００〜５００ｍ℃ 幼児　１５０〜２５０ｍＩ２／ｋｇ 臓器を保持する容器中へ追加の溶液を用い、容器を無菌
的に密封する。臓器貯蔵容器は断熱良好な移送用容器内
に保持すべきである。臓器貯蔵容器の周囲に氷を使用す
るが、氷が直接臓器に接触できるような容器内には使用
すべきでない。

溶液は１リットル以上のプラスチック袋内に保持するこ
とができるが、冷凍温度２〜８℃（３５，６〜４６．６
　Ｆ）に貯蔵すべきである。

従って、本発明は延長された臨床的臓器保存時間を提供
するものであり、合成コロイドとして天然由来の物質か
ら調製された潅水から生じる変動を最小限にするもので
ある。

本発明を詳細にかつ特に好ましい態様を特に参照して説
明したが、通常の技術を有する当業者にとって本発明の
精神及び範囲から逸脱することなしに改変をなし得るも
のであることを理解されるべきである。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. （１）内移植を必要とする患者の内移植向けの臓器の保
   存及び貯蔵用溶液であって、 ヒドロキシエチル澱粉５０ｇ／ｌ ラクトビオン酸３５．８３ｇ／ｌ 一塩基性リン酸カリウム３．４ｇ／ｌ 硫酸マグネシウム・７水和物１．２３ｇ／ｌラフィノー
   ス・５水和物１７．８３ｇ／ｌ アデノシン１．３４ｇ／ｌ アロプリノール０．１３６ｇ／ｌ グルタチオン０．９２２ｇ／ｌ 水酸化カリウムｑ．ｓ．（十分） 水酸化ナトリウムｐＨ７．４に調整 注入用水ｑ．ｓ． を含んでなり、 前記ヒドロキシエチル澱粉は約１５０，０００から約３
   ５０，０００ドルトンの重量平均分子量、約０．４から
   約０．７の置換度を有し、エチレングリコール、エチレ
   ンクロロヒドリン、アセトン及び塩化ナトリウムを含む
   汚染物を実質的に含有しない 溶液。
2. （２）ヒドロキシエチル澱粉が約５０，０００ドルトン
   未満の分子量を有するヒドロキシエチル澱粉を実質的に
   含有しない請求項１の溶液。
3. （３）内移植を必要とする患者の内移植向けの臓器の保
   存及び貯蔵用溶液であって、 ヒドロキシエチル澱粉４５．０〜５７．５ｇ／ｌラクト
   ビオン酸３２．２５〜４１．２０ｇ／ｌリン酸イオン２
   ．１６〜２．７６ｇ／ｌ 硫酸イオン０．４３〜０．５５ｇ／ｌ マグネシウムイオン０．１１〜０．１３ｇ／ｌラフィノ
   ース・５水和物１６．０５〜２０．５０ｇ／ｌアデノシ
   ン１．２１〜１．５４ｇ／ｌ アロプリノール０．１２〜０．１６ｇ／ｌ グルタチオン０．８３〜１．０６ｇ／ｌ 注入用水ｑ．ｓ． ｐＨ６．８〜８．０ を含んでなり、 前記ヒドロキシエチル澱粉は約１５０，０００から約３
   ５０，０００ドルトンの重量平均分子量、約０．４から
   約０．７の置換度を有し、エチレングリコール、エチレ
   ンクロロヒドリン、アセトン及び塩化ナトリウムを含む
   汚染物を実質的に含有しない 溶液。
4. （４）ヒドロキシエチル澱粉が約５０，０００ドルトン
   未満の分子量を有するヒドロキシエチル澱粉を実質的に
   含有しない請求項３の溶液。
5. （５）内移植を必要とする患者の内移植向けの臓器の保
   存及び貯蔵用溶液であって、 ヒドロキシエチル澱粉２〜１２％ ラクトビオン酸１〜７％ ラフィノース０．５〜３％ アデノシン０．１〜０．３％ アロプリノール０．０１〜０．３％ グルタチオン０．０〜０．３％ カリウム１２０〜１５０ｍＥＱ／ｌ ナトリウム２０〜３０ｍＥＱ／ｌ 注入用水ｑ．ｓ を含んでなり、 前記ヒドロキシエチル澱粉は約１５０，０００から約３
   ５０，０００ドルトンの重量平均分子量、約０．４から
   約０．７の置換度を有し、エチレングリコール、エチレ
   ンクロロヒドリン、アセトン及び塩化ナトリウムを含む
   汚染物を実質的に含有しない 溶液。
6. （６）グルタチオンが分離した添加物として包装され、
   溶液へ使用直前に添加される請求項５の溶液。
7. （７）ヒドロキシエチル澱粉が約５０，０００ドルトン
   未満の分子量を有するヒドロキシエチル澱粉を実質的に
   含有しない請求項５の溶液。