KR102403007B1 - 테트라히드로피라졸로피리미딘 화합물 - Google Patents
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Abstract
본 발명의 실시양태는 톨-유사 수용체 7 및/또는 8에 대한 길항제 또는 억제제로서 작용하는 테트라히드로피라졸로피리미딘 화합물, 및 전신 홍반성 루푸스 (SLE) 및 루푸스 신염의 치료에 유효한 제약 조성물에서의 그의 용도에 관한 것이다.
Description
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2012년 5월 31일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 61/654,023을 우선권 주장한다. 이 출원은 본원에 참조로 포함된다.
배경
발명의 분야
본 발명의 실시양태는 테트라히드로피라졸로피리미딘 ("THPP") 화합물 및 그러한 화합물의 하나 이상을 활성 성분(들)으로서 포함하는 약제에 관한 것이다. 더욱 특히, 본 발명의 실시양태는 톨-유사 수용체(Toll-like receptor) (TLR) 7 및 8에 대한 길항제 또는 억제제로서 작용하는 THPP 화합물, 및 전신 홍반성 루푸스 (SLE) 및 루푸스 신염의 치료에 유효한 제약 조성물에서의 그의 용도에 관한 것이다.
관련 기술분야의 설명
전신 홍반성 루푸스 (SLE) 및 루푸스 신염은 염증 및 조직 손상을 특징으로 하는 자가면역 질환이다. 예를 들어, SLE는 피부, 간, 신장, 관절, 폐 및 중추 신경계에 손상을 유발할 수 있다. SLE에 걸린 사람들은 극도의 피로, 관절의 통증 및 부종, 불명열(unexplained fever), 피부 발진 및 신장 기능장애와 같은 전신 증상을 경험할 수 있다. 장기 병변(organ involvement)은 환자에 따라 다르기 때문에, 증상은 달라질 수 있다. SLE는 주로 젊은 여성의 질환으로, 15-40세에서 가장 많이 발병하고, 남성 대비 여성에서 유병률(prevalence)이 대략 10배 더 높다.
SLE의 현재 치료는 전형적으로 면역조절 약물, 예컨대 히드록시클로로퀸, 프레드니손 및 시클로포스파미드를 포함한다. 이들 약물 모두는 용량-제한 부작용을 가질 수 있다.
발명의 간단한 개요
본 발명의 실시양태는 환자에서 톨-유사 수용체 7 또는 8 활성화를 특징으로 하는 질환 또는 병태를 예방 또는 치료하기 위한 화합물 및 사용 방법을 제공한다. 한 실시양태는 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 그의 입체이성질체 또는 그의 입체이성질체의 혼합물을 특징으로 한다:
<화학식 I>
상기 식에서,
R1은 임의로 치환된 피페리디닐, 임의로 치환된 피리딜, 임의로 치환된 피롤릴, 임의로 치환된 피롤리디닐, 임의로 치환된 티아졸릴, 1,4-디메틸티아졸릴, 2-에틸-4-메틸티아졸릴, 2-이소프로필티아졸-5-일, 티아졸릴, 3-에틸티아졸-5-일, 1-메틸술포닐피페리딘-4-일이거나,
R1은 -C(O)Z이고, 여기서 Z는 임의로 치환된 피페라지닐, 임의로 치환된 피리딜, 임의로 치환된 피롤릴, (S)-2-(3-에틸피페라진-1-일), 임의로 치환된 피롤로피롤릴, 피페리딘-3-일아미노이거나,
R1은 
이고, 여기서 R13은 H, 임의로 치환된 피라졸릴, 임의로 치환된 이미다졸릴, 벤질, 3-히드록시부틸, 3-(디메틸아미노)-2,2-디메틸프로필, 아미드, 메틸아미드, 에틸아미드, 임의로 치환된 피리딜, 메틸술포닐, (1-메틸이미다졸-2-일)메틸, (1,5-디메틸이미다졸-4-일)메틸, (1-메틸피롤-2-일)메틸이거나, R13은 C(O)W이고, 여기서 W는 -N(CH3)2, 임의로 치환된 피페리디닐, 임의로 치환된 피페라지닐, 임의로 치환된 피라졸릴, 임의로 치환된 피롤릴, 또는 임의로 치환된 모르폴리닐이거나,
R1은 
이고, 여기서 R14는 -C(O)CH3, H 또는 (1-메틸피롤-2-일)메틸이거나,
R1은
R1은 
이고, 여기서 A, B 및 D는 모두 탄소일 수 있거나, A, B 및 D 중 둘은 탄소이고 다른 하나는 질소이거나, A, B 및 D 중 하나는 탄소이고 나머지 둘은 질소이고; A가 질소인 경우 R4는 부재하고, B가 질소인 경우 R2는 부재하고, D가 질소인 경우 R3은 부재하고;
R2는 H, -CH3 또는 F이거나, R3 및 위치 a 및 b에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피리딘 또는 피라졸을 형성하고;
R3은 H, F, Cl, -CN, -CH3, -OCH3, -OH, -NH2, 메틸술포닐,
R4는 F, -CN, -OCH3, -OEt, H, Cl, Br, -NH-C(O)-CH-(CH3)2, -N(CH3)2, -CH3, -CH2OH, 
, 임의로 치환된 피페라지닐, 임의로 치환된 피페리디닐, 임의로 치환된 피라졸릴, 임의로 치환된 피롤릴, 4-히드록시피페리진-1-일, 질소를 통해 페닐 기에 부착되지 않은 임의로 치환된 피페리디닐이거나, R3 및 b 및 c에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피라졸 고리 또는 
를 형성하거나, R5 및 c 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피라졸 또는 임의로 치환된 피롤을 형성하거나,
R4는 -(q)-C(O)X이고, 여기서 q는 단일 결합, -NH- 또는 -CH2-이고,
X는 -NR11R12이고,
여기서 R11 및 R12는 둘 다 H, 둘 다 -CH2CH3, 또는 둘 다 -CH3이거나, R11 및 R12 중 하나는 H이고 다른 하나는 1,1-디메틸에틸, 시클로부틸, 시클로프로필, 저급 알킬, 메틸 알콜, 에틸 알콜, 프로필 알콜, 시클로부틸메틸; 2,3-디히드록시프로필, 벤질, 아제티디닐, 임의로 치환된 피페리디닐, 임의로 치환된 피페라지닐, 임의로 치환된 피라졸릴, 임의로 치환된 피롤릴, 임의로 치환된 아제티디닐, -CH2-NH-CH3, 알콜, -OCH3 또는 
이거나,
X는 임의로 치환된 피롤리디닐, 임의로 치환된 피페리디닐, 임의로 치환된 피롤리디닐, 임의로 치환된 피페라지닐, 또는 임의로 치환된 모르폴리닐,
R5는 H, F, Cl, -CH3, -OCH3, 피롤릴, -CH2OH, -NH2, -OH, 
이거나, R4 및 c 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 벤젠, 임의로 치환된 피라졸, 임의로 치환된 피페리디닐, 임의로 치환된 피페라지닐, 또는 임의로 치환된 피롤을 형성하거나, R6 및 d 및 e에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피리딘을 형성하거나, R5는 C(O)Y이고, 여기서 Y는 -NH2, -N(CH3)2, 임의로 치환된 피페라지닐, 임의로 치환된 피페리디닐, 임의로 치환된 피페리디닐, 임의로 치환된 피페라지닐, 임의로 치환된 피라졸릴, 임의로 치환된 피롤릴,
R6은 H, F, -CH3, -CF3이거나, R5 및 c 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 벤젠 또는 임의로 치환된 피라졸을 형성하고;
R7은 H, -CF3, -CHF2, -CF2CH3, -CH3, 또는 -C(CH3)3이고;
R8은 
이고;
R9는 Br, Cl, F, I, 또는 H이다.
본 발명의 일부 실시양태에서 하나 이상의 단서가 적용된다. 이들 단서는 전형적으로, 달리 서술된 부류 내에 포함될 수 있는 하나 이상의 화합물을 배제한다. 하기 단서를 검토할 경우, 그 반대도 또한 사실임이 이해될 것이다. 예를 들어, 단서가 R4가 F인 경우, R2는 CH3 또는 F가 아니라고 서술한다면, R2가 -CH3 또는 F가 되도록 선택되는 경우, R4는 F가 아니라는 것이 또한 사실이다. 또한, 단서가 일련의 서술로서 제시된다면, 이 문서에 다른 곳에서의 단서로서 직접 제시되지 않는 한, 후자의 서술은 관련되지 않는다는 점이 주목될 것이다. 예를 들어, 단서가 R4가 F인 경우, R2는 -CH3 또는 F가 아니고; R3은 -CH3이 아니라고 서술한다면, R3이 -CH3인 경우, R2는 -CH3 또는 F가 아니라는 서술 단독으로부터 함축성이 이루어지지 않아야 한다.
하기 단서 중 하나 이상이 본원에 제시된 다양한 실시양태에서 적용될 수 있다:
R4가 F인 경우, R2는 -CH3 또는 F가 아니고; R3은 -CH3, -CN, F, Cl 또는 -OCH3이 아니고; R5는 -CH3, F, Cl 또는 -OCH3이 아니고; R6은 -CH3 또는 F가 아니고;
R4가 Cl인 경우, R2는 F가 아니고; R3은 F 또는 -CN이 아니고; R5는 F, -CN 또는 -C(O)N(CH3)2가 아니고; R6은 -CF3 또는 F가 아니고; D는 질소가 아니고; R5는 -C(O)NH2이거나 R2, R3, R5 및 R6 중 하나는 -CH3이고;
R4가 -CH3인 경우, R3은 F가 아니고; R5는 F가 아니고; R5 및 R6은 d 및 e에서의 원자와 함께 피리미딘을 형성하지 않고;
R4가 -OCH3인 경우, R2는 F가 아니고; R3은 Cl 또는 -OCH3이 아니고, R5는 Cl 또는 -OCH3이 아니고; R6은 F 또는 -CF3이 아니고;
R4가 -CN인 경우, R2는 F가 아니고; R3은 Cl, F 또는 -OCH3이 아니고, R5는 Cl, F 또는 -OCH3이 아니고; R6은 F가 아니고;
R4가 -OCH2CH3인 경우, R3은 Cl 또는 F가 아니고; R5는 Cl 또는 F가 아니고; R6은 -CF3이 아니고;
R4가 
인 경우, R3은 H 또는 F가 아니고; R5는 H 또는 F가 아니고;
R4가 
인 경우, R2, R3, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R4가 
인 경우, R3은 F가 아니고; R5는 F가 아니고;
R2가 F인 경우, R3은 -OCH3 또는 F가 아니고; R5는 -CN이 아니고; R3, R4, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R2가 Cl인 경우, R3은 F가 아니고;
R2가 -CH3인 경우, R3은 Cl이 아니고; R3, R4, R5 및 R6 중 적어도 하나는 -CH3이 아니고; R4 및 R5는 c 및 d에서의 원자와 함께 피라졸릴을 형성하지 않고;
R3이 -OCH3인 경우, R2는 F가 아니고; R6은 F가 아니고;
R3이 F인 경우, R2는 -OCH3이 아니고; X는 
이 아니고;
R3이 Cl인 경우, R5는 Cl이 아니고; R11은 벤질이 아니고; R12는 벤질이 아니고;
R5가 Cl인 경우, R6은 -CH3이 아니고; R11은 벤질이 아니고; R12는 벤질이 아니고;
R5가 F 또는 -OCH3인 경우, R6은 F가 아니고;
R6이 F인 경우, R2, R3, R4 및 R5 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R3 및 R5가 H인 경우, R11은 시클로프로필이 아니고; R12는 시클로프로필이 아니고;
R9가 Cl인 경우, R1은 아미드 기가 아니고;
B가 질소이고 A 및 D가 탄소인 경우, R4는 -CN 또는 
이 아닐 수 있고;
R7이 -CHF2이고 R4가 
인 경우, R4는 절대 입체화학 
을 갖지 않고;
R8이 
인 경우, 하기 단서가 적용되고:
R4가 F인 경우, R2, R3, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고; R3은 C(O)N(CH3)2가 아니고; R5는 C(O)N(CH3)2가 아니고;
R4가 Cl인 경우, R2, R3, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R3이 F인 경우, R4는 C(O)NHCH2CH2CH2CH3, C(O)N(CH3)2, C(O)NHCH2CH2CH3 또는 C(O)NHC(CH3)3이 아니고;
R4는 C(O)NHCH2CH2CH2OH, C(O)NHCH(CH3)2, -CN 또는 
이 아니고;
R1은 
이 아니고;
R5는 
이 아니고;
R3은 
이 아니고;
R2가 F인 경우, R5는 -C(O)NH2가 아니고;
R2가 -CH3인 경우, R4 및 R5는 c 및 d에서의 원자와 함께 피라졸을 형성하지 않고;
B가 질소인 경우, R3 및 R4는 b 및 c에서의 원자와 함께 임의로 치환된 이미다졸을 형성하지 않음;
R8이 
인 경우, 하기 단서가 적용된다:
R4는 -CH3, -C(O)NHCH2CH2OH, -NHC(O)CH(CH3)2 또는 
이 아니고;
R4가 C(O)NHCH3인 경우, R2, R3, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R4가 -OCH3인 경우, R3은 F 또는 -CH3이 아니고; R5는 F 또는 -CH3이 아니고;
R4가 
인 경우, R3은 Cl이 아니고; R5는 Cl이 아니고;
R4가 -C(O)NHCH(CH3)2 또는 -C(O)N(CH2CH3)2인 경우, R3 및 R5 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R5는 -C(O)NH2가 아니고;
R6은 -CF3이 아니다.
추가 실시양태에서 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 II에 명시된 절대 입체화학을 가지며,
<화학식 II>
단, R8이 
인 경우, 하기 단서가 적용된다:
R3이 F인 경우, R4는 
이 아니고;
R5가 F인 경우, R4는 
이 아니고;
R5가 -CH3인 경우, R3 및 R4는 b 및 c에서의 원자와 함께, 
를 형성하지 않고;
R3이 -CH3인 경우, R4 및 R5는 c 및 d에서의 원자와 함께, 
를 형성하지 않는다.
추가 실시양태에서 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 III에 명시된 절대 입체화학을 가지며,
<화학식 III>
단, R8이 
인 경우, R4는 
이 아니고;
R8이 
인 경우, 하기 단서가 적용된다:
R2가 -CH3인 경우, R3 및 R4는 b 및 c에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피라졸릴을 형성하지 않고;
R2가 -CH3인 경우, R4 및 R5는 c 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피라졸릴을 형성하지 않고;
R2가 F인 경우, R4는 C(O)NH2가 아니고;
R3 및 R4는 b 및 c에서의 원자와 함께, 
를 형성하지 않고;
R3이 Cl인 경우, R4는 -C(O)NHCH3 또는 -C(O)NH2가 아니고;
R3은 피라졸릴이 아니고;
R3이 F인 경우, R4는 
또는 -C(O)NH2가 아니고;
R3이 -CH3인 경우, R4 및 R5는 c 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피라졸릴을 형성하지 않고;
R4는 -C(O)NHCH2CH2CH2OH가 아니고;
R4는 -CN 또는 
이 아니고;
R5가 -CH3인 경우, R3 및 R4는 b 및 c에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피라졸릴을 형성하지 않고;
R5가 Cl인 경우, R4는 -C(O)NH2가 아니고;
R5가 F인 경우, R4는 C(O)NH2가 아니고;
R5는 피라졸릴이 아니고;
R6이 -CH3인 경우, R4 및 R5는 c 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피라졸릴을 형성하지 않고;
B가 질소인 경우, R4는 -C(O)NHCH3이 아니다.
한 실시양태에서, R1은 피페리디닐 또는 피리딜이고; R7은 -CF3이고; R8은 
이고; R9는 F, Cl, Br 또는 I이다.
또 다른 실시양태에서, R1은 -C(O)Z이고, 여기서 Z는 피페라지닐, 피페리디닐, 피롤로피롤릴 또는 피페리디닐 프로필이고; R7은 -CF3이고; R8은 
이고; R9는 H이다.
또 다른 실시양태에서, R1은 
이고; R7은 -CF3이고, R8은 
이고, R9는 H이다.
또 다른 실시양태에서, R1은 
이고, R2는 H, -CH3이거나, R3과 함께 
를 형성하고; R3은 H이거나, R2와 함께 
를 형성하거나, R4와 함께 
를 형성하고; R4는 H, -CH3, -NHC(O)NH2이거나, R3과 함께 
를 형성하고; R5는 H이고; R6은 H이고; R7은 -CF3이고; R8은 
이고; R9는 H이다.
또 다른 실시양태에서 R1은 
이고; R2는 H, F 또는 -CH3이고, R3은 H 또는 F이고; R4는 -(q)-C(O)X이고, 여기서 q는 결합 또는 -CH2-이고, X는 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 피페라지닐, 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 피롤리디닐, 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 피롤로피롤릴, 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 아제티디닐 또는 
이거나, X는 -NR11R12이고, 여기서 R11 및 R12 중 하나는 H이고 다른 하나는 임의로 치환된 피롤리디닐, 임의로 치환된 피페리디닐, 임의로 치환된 피페라지닐 또는 임의로 치환된 아제티디닐이고; R5는 H 또는 C(O)Y이고, 여기서 Y는 -NH(CH3)2, 임의로 치환된 피페라지닐, 임의로 치환된 피페리디닐,
추가 실시양태에서, R1은 
이고, 여기서 A, B 및 D는 모두 탄소일 수 있거나, A, B 및 D 중 둘은 탄소이고 다른 하나는 질소이고, A가 질소인 경우 R4는 부재하고, B가 질소인 경우 R2는 부재하고, D가 질소인 경우 R3은 부재하고; R2는 H이고, R3은 H 또는 -CH3이고; R4는 -C(O)X이고, 여기서 X는 임의로 치환된 피페라지닐이거나, X는 -NR11R12이고, 여기서 R11 및 R12는 H이거나, R11 또는 R12 중 하나는 H이고 다른 하나는 피페리디닐, 피롤리디닐 또는 -CH3이고; R5는 -OCH3, H 또는 Cl이고; R6은 H이고, R7은 -CF3이고, R8은 
이고, R9는 H이다.
추가 실시양태에서, R1은 
이고, 여기서 A, B 및 D는 탄소이고;
R2는 H, -CH3 또는 F이거나, R3 및 위치 a 및 b에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피라졸을 형성하고;
R3은 H, F, Cl, -CN, -CH3,
R4는 -CN, -CH2OH, H, 
, 임의로 치환된 피페라지닐이거나, R3 및 b 및 c에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피라졸 고리 또는 
를 형성하거나, R5 및 c 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피라졸 고리를 형성하거나,
R4는 -(q)-C(O)X이고, 여기서 q는 결합이고,
X는 -NR11R12이고,
여기서 R11 및 R12는 둘 다 H이거나, 여기서 R11 및 R12 중 하나는 H이고 다른 하나는 1,1-디메틸에틸, 시클로부틸, 시클로프로필, 저급 알킬, C1-3 알콜, 시클로부틸메틸; 2,3-디히드록시프로필, 벤질, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 메틸아제티디닐, 피라졸릴, 피페라지닐, 알콜, -OCH3 또는 
이거나,
X는 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 피페리디닐, 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 피페라지닐, 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 피롤리디닐, 또는 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 아제티디닐,
R5는 H이거나, R4 및 c 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 벤젠, 임의로 치환된 피라졸을 형성하거나, R6 및 d 및 e에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피리딘을 형성하거나, R5는 C(O)Y이고, 여기서 Y는 -NH2, -NH(CH3)2, 질소를 통해 R5의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 피페라지닐, 질소를 통해 R5의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 피페리디닐, 
이고;
R6은 H, F, -CH3이거나, R5 및 c 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피라졸을 형성하고;
R7은 -CF3이고;
R8은 
이고; R9는 H이다.
또 다른 실시양태는 하기 화학식 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 그의 입체이성질체 또는 그의 입체이성질체의 혼합물을 포함한다.
<화학식 IV>
상기 식에서,
R7a는 H 또는 F이고;
고리 A는
R9는 -C(O)Z이고, 여기서 Z는 2,3-디히드록시프로필아민; 임의로 가교(bridge)되거나 탄소 원자에서 저급 알킬로 임의로 치환되는 5 내지 7원 시클릭 디아민; 7 내지 10원 비시클로디아민; 7 내지 11원 스피로디아민; -NH2로 임의로 치환된 4 내지 7원 시클릭 아민으로 치환된 -NH; -OH; -CH2NHR (여기서 R은 H 또는 저급 알킬임); -NH2로 임의로 치환된 7 내지 11원 스피로알칸으로 치환된 -NH이거나;
R9는 CH3NHC(O)-이고, R9가 부착되는 아릴 고리 상에 탄소 원자는 -CH3, F 또는 Cl 중 하나로 치환되거나; R9는 (CH3)2CHNHC(O)-이고, R9가 부착되는 아릴 고리 상에 탄소 원자는 -CH3, F 또는 Cl 중 하나로 치환되거나; R9는 (CH3)3CNHC(O)-이고, R9가 부착되는 아릴 고리 상에 탄소 원자는 -CH3, F 또는 Cl 중 하나로 치환되거나;
R9는 
이고, 여기서 피페라진은 임의로 가교되거나 저급 알킬로 치환되고 R10은 H 또는 -CH3이거나;
R9는 
이고, 여기서 n은 1-3이고 시클릭 디아민은 임의로 가교되거나 저급 알킬로 치환되거나;
R9는 
이고, 여기서 n은 1-4이거나;
R9는 -NHC(O)NH2, -CH2C(O)NH-이고, 여기서 질소는 4 내지 7원 시클릭 아민; -CH2-C(O)- (여기서 카르보닐은 7 내지 10원 비시클로디아민으로 치환됨); 및 -CH2C(O)NH2로 치환된 4 내지 7원 시클릭 아민으로 치환됨]; 또는
R10은 -C(O)NH- (여기서 질소는 4 내지 7원 시클릭 아민에 의해 치환됨); 7 내지 10원 비시클로디아민에 의해 치환된 -C(O)-; 7 내지 11원 스피로디아민에 의해 치환된 -C(O)-; 피라졸; 옥사디아졸의 탄소 원자 상에서 -CH3에 의해 임의로 치환된 [1,2,4]옥사디아졸; -NHC(O)CH3; 피페라진에 의해 치환된 -CH2-; 메틸 치환기를 포함하는 피페라진에 의해 치환된 -CH2-; 5 내지 7원 시클릭 디아민에 의해 치환된 -C(O)-; -C(O)NHCH2- (여기서 -CH2-는 아제티딘에 의해 치환됨); 또는 -NH2 치환기를 포함하는 5 내지 7원 시클릭 아민으로 치환된 -C(O)-임]; 또는
시아노페닐; 이소퀴놀린; 4' 위치에서 -NH2로 치환된 시클로헥센; 1,4-디메틸인다졸-5-일; 1,6-디메틸인다졸-5-일; 4' 위치에서 스피로피페리딘으로 치환된 시클로헥센; 1-피페리디노피라졸; 또는 o-메톡시피리딘이다.
추가 실시양태에서, 본 개시내용의 선행 단락의 화합물 또는 제약상 유효한 염은 HEK-293 세포주에서 발현된 인간 TLR7 수용체에 대해 100 nM 이하의 IC50을 갖는다. 추가 실시양태에서 HEK-293 세포주에서 발현된 인간 TLR7 수용체에 대해 IC50은 (1) 10% 소 태아 혈청을 함유하는 둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's modified Eagle's medium)에서 TLR7을 안정하게 발현하는 HEK-293 세포주의 세포를 2.22 x 105개 세포/ml의 밀도로 384-웰 플레이트 내로 도말하고 37℃, 5% CO2에서 2일 동안 인큐베이션하고; (2) 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 첨가하고 세포를 30분 동안 인큐베이션하고; (3) 3 ug/ml의 CL097 (인비보젠(InvivoGen))을 첨가하고 세포를 대략 20시간 동안 인큐베이션하고; (4) 발광을 측정하여 NF-카파B 의존성 리포터 활성화를 정량화함으로써 측정된다.
추가 실시양태는 화학식 IV의 화합물 또는 그의 제약상 유효한 염을 포함하며, 여기서 고리 A는
1,4-디메틸인다졸-5-일; 1,6-디메틸인다졸-5-일; 1-피페리디노피라졸; 4' 위치에서 -NH2로 치환된 시클로헥센; 4' 위치에서 스피로피페리딘으로 치환된 시클로헥센; 또는 2-메톡시피리딘-4-일이다.
추가 실시양태에서 본 개시내용의 선행 단락의 화합물 또는 제약상 유효한 염은 HEK-293 세포주에서 발현된 인간 TLR7 수용체에 대해 20 nM 이하의 IC50을 갖는다. 추가 실시양태에서 본 개시내용의 선행 단락의 화합물 또는 제약상 유효한 염은 HEK-293 세포주에서 발현된 인간 TLR7 수용체에 대해 100 nM 이하의 IC50을 갖는다. 추가 실시양태에서 HEK-293 세포주에서 발현된 인간 TLR7 수용체에 대해 IC50은 (1) 10% 소 태아 혈청을 함유하는 둘베코 변형 이글 배지에서 TLR7을 안정하게 발현하는 HEK-293 세포주의 세포를 2.22 x 105개 세포/ml의 밀도로 384-웰 플레이트 내로 도말하고 37℃, 5% CO2에서 2일 동안 인큐베이션하고; (2) 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 첨가하고 세포를 30분 동안 인큐베이션하고; (3) 3 ug/ml의 CL097 (인비보젠)을 첨가하고 세포를 대략 20시간 동안 인큐베이션하고; (4) 발광을 측정하여 NF-카파B 의존성 리포터 활성화를 정량화함으로써 측정된다.
추가 실시양태는 하기 화학식 V에 명시된 절대 입체화학을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다:
<화학식 V>
상기 식에서,
R7a는 H 또는 F이고;
고리 A는
1,4-디메틸인다졸-5-일; 1,6-디메틸인다졸-5-일;
1-피페리디노피라졸; 4' 위치에서 -NH2로 치환된 시클로헥센; 4' 위치에서 스피로피페리딘으로 치환된 시클로헥센; 또는 2-메톡시피리딘-4-일이다.
추가 실시양태에서 선행 단락의 화합물 또는 제약상 유효한 염은 HEK-293 세포주에서 발현된 인간 TLR7 수용체에 대해 20 nM 이하의 IC50을 갖는다. 추가 실시양태에서 본 개시내용의 선행 단락의 화합물 또는 제약상 유효한 염은 HEK-293 세포주에서 발현된 인간 TLR7 수용체에 대해 100 nM 이하의 IC50을 갖는다. 추가 실시양태에서 HEK-293 세포주에서 발현된 인간 TLR7 수용체에 대해 IC50은 (1) 10% 소 태아 혈청을 함유하는 둘베코 변형 이글 배지에서 TLR7을 안정하게 발현하는 HEK-293 세포주의 세포를 2.22 x 105개 세포/ml의 밀도로 384-웰 플레이트 내로 도말하고 37℃, 5% CO2에서 2일 동안 인큐베이션하고; (2) 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 첨가하고 세포를 30분 동안 인큐베이션하고; (3) 3 ug/ml의 CL097 (인비보젠)을 첨가하고 세포를 대략 20시간 동안 인큐베이션하고; (4) 발광을 측정하여 NF-카파B 의존성 리포터 활성화를 정량화함으로써 측정된다.
본 발명의 추가 실시양태에서, 화합물은 HEK-293 세포주에서 발현된 인간 TLR7 수용체에 대해 200 nM 이하, 180 nM 이하, 160 nM 이하, 140 nM 이하, 120 nM 이하, 100 nM 이하, 80 nM 이하, 60 nM 이하, 40 nM 이하, 또는 20 nM 이하의 IC50을 갖는다. 본 발명의 추가 실시양태에서, 화합물은 HEK-293 세포주에서 발현된 인간 TLR7 수용체에 대해 10 nM 내지 30 nM, 10 nM 내지 50 nM, 10 nM 내지 100 nM, 30 nM 내지 50 nM, 30 nM 내지 100 nM, 또는 50 nM 내지 100 nM의 IC50을 갖는다. 추가 실시양태에서 HEK-293 세포주에서 발현된 인간 TLR7 수용체에 대해 IC50은 (1) 10% 소 태아 혈청을 함유하는 둘베코 변형 이글 배지에서 TLR7을 안정하게 발현하는 HEK-293 세포주의 세포를 2.22 x 105개 세포/ml의 밀도로 384-웰 플레이트 내로 도말하고 37℃, 5% CO2에서 2일 동안 인큐베이션하고; (2) 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 첨가하고 세포를 30분 동안 인큐베이션하고; (3) 3 ug/ml의 CL097 (인비보젠)을 첨가하고 세포를 대략 20시간 동안 인큐베이션하고; (4) 발광을 측정하여 NF-카파B 의존성 리포터 활성화를 정량화함으로써 측정된다.
추가 실시양태는 제약 유효량의 본 발명의 화합물 또는 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 전신 홍반성 루푸스 또는 루푸스의 치료 방법을 제공한다.
추가 실시양태는 제약 유효량의 본 발명의 화합물 또는 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, TLR7을 길항하는 방법을 제공한다.
추가 실시양태는 제약 유효량의 본 발명의 화합물 또는 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, TLR8을 길항하는 방법을 제공한다.
추가 실시양태는 본 발명의 하나 이상의 화합물 또는 제약상 허용되는 염 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
추가 실시양태는 제약 유효량의 본 발명의 화합물 또는 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 전신 홍반성 루푸스 또는 루푸스의 치료 방법을 제공한다.
추가 실시양태는 제약 유효량의 본 발명의 화합물 또는 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, TLR7을 길항하는 방법을 제공한다.
추가 실시양태는 제약 유효량의 본 발명의 화합물 또는 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, TLR8을 길항하는 방법을 제공한다.
추가 실시양태는 본 발명의 하나 이상의 화합물 또는 제약상 허용되는 염 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "임의로 치환된"은, 대상 구조가, 독립적으로 저급 알킬, 메톡시-, -OH, -NH2, -CH2-NH-CH2, -OCH2CH2CH3, 또는 -OCH(CH3)2로부터 선택된 하나 이상의 치환기를 포함할 수 있지만, 이를 반드시 포함하여야 하는 것은 아님을 의미한다. 임의로 치환된 모이어티가 시클릭인 경우, 임의로 치환은 고리 내에 2개의 원자 사이에 메틸 브릿지(bridge)일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 기호 "C(O)"는 식 C=O를 갖는 카르보닐 기를 지칭한다.
달리 규정되지 않는 한, 청구범위를 포함하여 본 명세서에서 사용된 바와 같은 부정관사 ("a" 또는 "an")는 "하나 이상"을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, "저급 알킬"은 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는, 직선형, 또는, 3개 및 4개 탄소 기의 경우에, 직선형, 분지형 또는 시클릭 포화 탄화수소를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 질소를 포함하는 헤테로시클릭 모이어티를 지칭하는 경우 용어 "질소를 통해 부착된"은, 또 다른 구조에 대한 모이어티의 부착 점이 헤테로사이클의 부분인 질소를 통해서임을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "TLR7/8"은 "TLR7 및 TLR8" 또는 "TLR7 또는 TLR8" 또는 "TLR7 및/또는 TLR8"을 의미한다. 특별한 의미는 "TLR7/8"이 명시된 문맥을 기반으로 당업자에 의해 이해될 수 있다.
본원에서 열거된 헤테로시클릭 모이어티는 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 메틸아제티디닐, 피라졸릴, 피페라지닐, 모르폴리닐, 티아졸릴, 피롤로피롤릴, 이미다졸리디닐, 및 이소티아졸릴을 포함한다. 헤테로시클릭 기가 언급될 경우, 달리 명시되지 않는 한 이 군 중의 헤테로시클릭 원자(들)이 군에서 임의의 위치에 있을 수 있다는 것이 이해될 것이다. 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 및 피롤릴이 불포화되거나 부분 불포화될 수 있다는 것이 추가로 이해될 것이다. 본 발명의 실시양태는 제약상 허용되는 부형제와 함께 본 발명의 하나 이상의 화합물을 포함하는 제약 조성물을 포함할 수 있다. 이들 제약 조성물을 사용하여 이러한 병태 또는 질환에 걸리거나 걸리기 쉬운 환자, 전형적으로 인간 환자에서 TLR7/8 활성화를 특징으로 하는 질환 또는 병태를 치료 또는 예방할 수 있다. TLR7/8 활성화를 특징으로 하는 질환 또는 병태의 예는 전신 홍반성 루푸스 (SLE) 및 루푸스 신염을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 본 발명의 실시양태의 화합물의 "유효량"은 SLE 및 루푸스 신염을 치료 또는 예방하기에 충분한 양으로 상기-명시된 화합물의 유효량이다.
본원에 제시된 실시양태는 비대칭 또는 키랄 중심을 포함할 수 있다. 실시양태는 그의 다양한 입체이성질체 및 혼합물을 포함한다. 본 발명의 실시양태의 화합물의 개별 입체이성질체는 비대칭 또는 키랄 중심을 함유하는 시판되는 출발 물질로부터 합성에 의해, 또는 거울상이성질체 화합물의 혼합물의 제조 후 그러한 화합물의 분할에 의해 제조될 수 있다. 분할의 적합한 방법은 키랄 보조제에 대해 (+/-)로 명시된 거울상이성질체의 라세미체 혼합물의 부착, 크로마토그래피 또는 재결정화에 의해 생성된 부분입체이성질체의 분리 및 보조제로부터 광학적으로 순수한 생성물의 분리; 또는 키랄 크로마토그래피 칼럼 상의 광학 거울상이성질체의 혼합물의 직접 분리를 포함한다.
본 발명의 실시양태는 또한 본 발명의 임의의 화합물뿐만 아니라 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 포함한다. 제약 조성물을 사용하여 SLE 및 루푸스 신염을 치료 또는 예방할 수 있다. 따라서, 본 발명의 실시양태는 또한 루푸스 신염 또는 SLE에 걸리거나 걸리기 쉬운 인간 환자에서 SLE 또는 루푸스 신염을 치료 또는 예방하는 방법을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 실시양태는 본원에 제시된 화합물의 제약상 허용되는 염을 포함한다. 용어 "제약상 허용되는 염"은 건전한 의학적 판단의 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 또는 알러지 반응 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하는데 사용하기에 적합한 그러한 염을 지칭한다. 제약상 허용되는 염은 기술 분야에 주지되어 있다. 예를 들어, 에스 엠 베르그(S. M. Berge) 등은 문헌 [J. Pharmaceutical Sciences 66:1-19, 1977]에서 제약상 허용되는 염을 상세히 기재한다. 계내에서 화합물의 최종 단리 및 정제 동안 또는 별도로 유리 염기 기를 적합한 유기 산과 반응시킴으로써 염을 제조할 수 있다. 대표적인 산 부가 염은 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤젠술포네이트, 벤조에이트, 비술페이트, 보레이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄페르술포네이트, 시트레이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 푸마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 헤미술페이트, 헵토네이트, 헥사노에이트, 히드로브로마이드, 히드로클로라이드, 히드로아이오다이드, 2-히드록시-에탄술포네이트, 락토비오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 술페이트, 말레이트, 말레에이트, 모노말레에이트, 말로네이트, 메탄술포네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔술포네이트, 트리플루오로아세테이트, 운데카노에이트, 발레레이트 염 등을 포함한다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리 토금속 염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등뿐만 아니라, 무독성 암모늄, 4급 암모늄, 및 아민 양이온을 포함 (암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 에틸아민 등을 포함하지만, 이에 제한되지는 않음)을 포함한다. 용어 "제약상 허용되는 에스테르"는, 본원에서 사용된 바와 같이, 생체내에서 가수분해하는 에스테르를 나타내고 인체에서 용이하게 분해되어 모 화합물 또는 그의 염을 남기는 것을 포함한다. 적합한 에스테르 기는 예를 들어, 제약상 허용되는 지방족 카르복실산, 특히 알칸산, 알켄산, 시클로알칸산, 및 알칸디온산으로부터 유래된 것을 포함하고, 여기서 각각의 알킬 또는 알케닐 기는 전형적으로 6개 이하의 탄소 원자를 갖는다. 특정의 에스테르의 예는 포르메이트, 아세테이트, 프로피오네이트, 부티레이트, 아크릴레이트, 및 에틸 숙시네이트를 포함한다.
본 출원에서 거울상이성질체는 기호 "R" 또는 "S"로 명시되거나 종래의 수단에 의해 도시되며 볼드체 선은 3-차원 공간으로 페이지의 면 위의 치환기를 한정하고해시(hashed) 또는 파선은 3-차원 공간으로 인쇄된 페이지의 면 아래의 치환기를 한정한다. 어떤 입체화학적 명시도 이루어지지 않은 경우, 구조 한정은 입체화학적 선택사항 둘 다를 포함한다.
도 1은 화합물 ER-892887 (화학명 (4-((5S,7R)-5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)페닐)(피페라진-1-일)메탄온을 가짐)에 관한 마우스에서 TLR7 경로에 대해 단기(short-term) 생체내 효능을 도시한다. 도면 범례(Figure Legend): 암컷 BALB/c 마우스에게 비히클 단독 (0.5% 수성 메틸-셀룰로스) 또는 100 mg/kg 또는 300 mg/kg으로 비히클 중에서 제제화된 화합물 ER-892887을 경구 위관영양에 의해 투여하였다. 경구 투여 후 13 또는 24시간에, 마우스에게 15 ug R848를 피하 주사하여 TLR7을 자극하였다. 심장 천자에 의해 혈장을 수집한 다음, TLR7 자극 후 1.5 시간에서 IL-6 수준을 표준 ELISA 절차에 의해 평가하였다. 명시된 억제 퍼센트(percernt suppression)는 비히클 대조군 투여 후 IL-6 유도에 대해서이다. 만-휘트니(Mann-Whitney) 검정에 의해 통계적 유의성을 결정하였다.
도 2는 BXSB-Yaa 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-892887을 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례: 12주 연령 BXSB-Yaa 마우스를 등가의 중앙(median) 항-dsDNA 역가를 갖는 군으로 무작위로 나누고 총 14주 동안 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 단독 또는 300 mg/kg ER-892887로 1일 1회 경구로 처리하였다. ( a ) 모든 마우스를 26주 연령에서 희생시키고 6주 연령 사전에 질환이 있는(pre-diseased) 마우스에서 관찰된 역가와 비교하여 최종 항-dsDNA, 항-Sm/nRNP, 및 항-RiboP 역가를 ELISA에 의해 평가하였다. ( b ) 희생 이전 대략 1주 (25주 연령, 13주의 처리), 마우스를 18시간 동안 대사 케이지(metabolic cage)에서 케이지당 1-2 마리를 수용하여 소변을 수집하고, 소변 알부민 크리아티닌 비 (UACR, 단백뇨)를 각각의 동물에 대해 신장 기능의 간접적 척도로서 결정하였다. ( c ) 희생 시에, 개개의 마우스로부터 신장을 수집하고, 24시간 동안 10% 포르말린 중에 고정하고, 파라핀에 포매하고, H&E 염색 절편(stained section)을 맹검 방식으로 조직병리학 평가를 위해 생성시켰다. ( d ) SLE-8 연구에서 관찰된 사망률의 요약. (a)에 관한 만-휘트니 검정에 의해 통계적 유의성을 결정하였다.
도 3은 NZBxNZW 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-892887을 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례: 암컷 NZBWF1/J 마우스에게 6주 연령에서 공급하고, 기초선 블리드(baseline bleed)를 수행하고, 항-dsDNA 역가를 따름으로써 질환 진행에 대해 마우스를 모니터링하였다. 20주 연령에서, 마우스를 등가의 중앙 항-dsDNA 역가를 갖는 군으로 무작위로 나누고 23주 연령에서 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 단독 또는 33, 100, 또는 300 mg/kg ER-892887로 1일 1회 경구 (QD PO)로 처리하였다. 모든 마우스를 45주 연령에서 희생시키고 (22주 총 처리) 혈장 항-dsDNA 역가를 ELISA에 의해 결정하였다. ( a ) 항-dsDNA 역가에 끼친 시간 경과에 따른 ER-892887 처리의 영향. ( b ) (a)에 도시된 데이터 유래의 ER-892887에 대한 +22주 처리 데이터의 막대 그래프. ( c ) 45주 연령에서 종결 직전 (22주의 처리 후), 개개의 마우스로부터 소변을 수집하고, 소변 알부민 크리아티닌 비 (UACR, 단백뇨)를 각각의 동물에 대해 신장 기능의 간접적 척도로서 결정하였다. ( d ) 본 연구에서 관찰된 사망률의 요약. ( e ) 희생 시에, 개개의 마우스로부터 신장을 수집하고, 24시간 동안 10% 포르말린 중에 고정하고, 파라핀에 포매하고, H&E 염색 절편을 맹검 방식으로 조직병리학 평가를 위해 생성시켰다. (c)에 관한 만-휘트니 검정에 의해 통계적 유의성을 결정하였다.
도 4는 NZBxNZW 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-892887을 추가 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례. 암컷 NZBWF1/J 마우스에게 8주 연령에서 공급하고, 기초선 블리드를 수행하고, 항-dsDNA 역가를 따름으로써 질환 진행에 대해 마우스를 모니터링하였다. 24주 연령에서, 마우스를 등가의 중앙 항-dsDNA 역가를 갖는 군으로 무작위로 나누고 25주 연령에서 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 단독 또는 33, 100, 또는 300 mg/kg ER-892887로 QD PO로 처리하였다. 명시된 시점에서 혈장 샘플에 대해 ELISA에 의해 항-dsDNA 역가를 결정하였다. ( a ) +17주의 처리까지의 시간 경과에 따른 중앙 항-dsDNA 역가에 끼친 화합물 처리의 영향. ( b ) 단지 (a)에 도시된 데이터로부터 +13주의 처리 시점에서 중앙 항-dsDNA에 끼친 화합물 처리의 영향. ( c ) 화합물 처리의 13주 (상단 그래프) 또는 17주 (하단 그래프) 후에, 개개의 마우스로부터 소변을 수집하고, 소변 알부민 크리아티닌 비 (UACR, 단백뇨)를 각각의 동물에 대해 신장 기능의 간접적 척도로서 결정하였다. 높은 UACR을 갖는 원 안에 명시된 마우스는 +13주 내지 +17주의 처리 사이에 죽은 그러한 동물이었다 (만-휘트니 검정에 의해 통계적 유의성을 결정하였다). ( d ) 13주의 처리 후 엄선된 군으로부터의 혈장에서 측정된 혈중 요소 질소 (BUN). ( e ) 17주까지의 처리에서 비히클 대 화합물 처리 마우스에 관한 사망률 곡선. +17주 초과 처리에 대한 사망률 곡선 분석은 33 mg/kg 및 100 mg/kg ER-892887 처리는 로그-순위(Log-rank) (맨틀-콕스(Mantel-Cox) 시험에 의해 결정된 바와 같이 통계상 유의한 생존 이익 대 비히클을 제공한 것으로 나타났다. ( f ) 본 연구에서 관찰된 사망률의 요약.
도 5는 프리스탄: DBA/1 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-892887을 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례: 암컷 DBA/1 마우스에게 10-11주 연령에서 0.5 ml 프리스탄 또는 PBS의 복강내 주사를 제공하였다. 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 또는 300 mg/kg ER-892887로 1일 1회 경구 투여를 총 3개월 처리 동안 프리스탄 주사 후 3.5개월에 시작하였다. ( a ) 3개월의 화합물 처리 후 마우스를 안락사시키고, ELISA에 의해 혈장 샘플 중에서 항-dsDNA 및 항-RiboP 역가를 측정하였다 (통계적 유의성은 만-휘트니 검정에 의해 결정). ( b ) 시각적 점수에 의해 관절염 발병을 매월 평가하였다. ( c ) 3개월의 처리 후 전혈 중 IFN-조절된 유전자의 발현을 qPCR 패널에 의해 측정하고, IFN 유전자 시스너쳐(gene signature) 점수를 계산하였다 (IFN 점수 계산에 관한 세부 사항에 대해서는 약리학 물질 및 방법 부분 참조). ( d ) 프리스탄 처리 대 PBS 대조군에 의해 유의하게 상향조절된 21개 유전자의 전체 목록 및 ER-892887에 의해 유의하게 감소된 개개의 유전자 (스튜던트 t-검정).
도 6은 프리스탄: DBA/1 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-892887을 추가 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례: 암컷 DBA/1 마우스에게 11-12주 연령에서 0.5 ml 프리스탄 또는 PBS의 복강내 주사를 제공하였다. 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 또는 33, 100, 또는 300 mg/kg ER-892887로 1일 1회 경구 투여를 총 3개월 처리 동안 프리스탄 주사 후 2개월에 시작하였다. 3개월의 화합물 처리 후 마우스를 안락사시키고, ELISA에 의해 혈장 샘플 중에서 항-dsDNA ( a ), -RiboP ( b ), -Sm/nRNP ( c ), 및 -히스톤 ( d ) 역가를 측정하였다 (통계적 유의성은 만-휘트니 검정에 의해 결정). ( e ) 화합물 처리의 3개월 동안 연구에서 관찰된 사망률의 요약. ( f ) 비히클 및 300 mg/kg ER-892887 처리된 마우스에 관한 마지막 시점에서 전혈 중 IFN-조절된 유전자의 발현을 qPCR 패널에 의해 측정하고, IFN 유전자 시스너쳐 점수를 계산하였다 (IFN 점수 계산에 관한 세부 사항에 대해서는 약리학 물질 및 방법 부분 참조). ( g ) 프리스탄 처리 대 PBS 대조군에 의해 유의하게 상향조절된 22개 유전자의 전체 목록 및 ER-892887에 의해 유의하게 감소된 개개의 유전자 (스튜던트 t-검정).
도 7은 BXSB-Yaa 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-885454를 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례: 9주 연령 수컷 BXSB-Yaa 마우스를 총 15주 동안 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 단독 또는 100 mg/kg 또는 300 mg/kg ER-885454로 1일 1회 경구로 처리하였다. 모든 마우스를 24주 연령에서 희생시키고 최종 항-dsDNA ( a ) 및 항-Sm/RNP ( b ) 역가를 ELISA에 의해 평가하였다. ( c ) 희생 이전 대략 1주, 마우스를 18시간 동안 대사 케이지에서 케이지당 1-2 마리를 수용하여 소변을 수집하고, 소변 알부민 크리아티닌 비 (UACR, 단백뇨)를 각각의 동물에 대해 신장 기능의 간접적 척도로서 결정하였다. ( d ) 희생 시에, 개개의 마우스로부터 신장을 수집하고, 24시간 동안 10% 포르말린 중에 고정하고, 파라핀에 포매하고, H&E 염색 절편을 맹검 방식으로 조직병리학 평가를 위해 생성시켰다. 상기 (a), (b) 및 (c)에 관한 만-휘트니 검정에 의해 통계적 유의성을 결정하였다.
도 8은 BXSB-Yaa 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-885454를 추가 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례: 17주 연령 BXSB-Yaa 마우스를 등가의 중앙 항-dsDNA 역가를 갖는 2개의 군으로 무작위로 나누고 총 13주 동안 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 단독 또는 300 mg/kg ER-885454로 1일 1회 경구로 처리하였다. 모든 마우스를 30주 연령에서 희생시키고 7주 연령의 사전에 질환이 있는 마우스에서 관찰된 역가와 비교하여 최종 항-dsDNA ( a ) 및 항-Sm/RNP ( b ) 역가를 ELISA에 의해 평가하였다. ( c ) 희생 이전 대략 1주, 마우스를 18시간 동안 대사 케이지에서 케이지당 1-2 마리를 수용하여 소변을 수집하고, 소변 알부민 크리아티닌 비 (UACR, 단백뇨)를 각각의 동물에 대해 신장 기능의 간접적 척도로서 결정하였다. ( d ) 희생 시에, 개개의 마우스로부터 신장을 수집하고, 24시간 동안 10% 포르말린 중에 고정하고, 파라핀에 포매하고, H&E 염색 절편을 맹검 방식으로 조직병리학 평가를 위해 생성시켰다. 상기 (a), (b) 및 (c)에 관한 만-휘트니 검정에 의해 통계적 유의성을 결정하였다.
도 9는 NZBxNZW 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-885454를 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례: 암컷 NZBWF1/J 마우스에게 6주 연령에서 공급하고, 기초선 블리드를 수행하고, 항-dsDNA 역가를 따름으로써 질환 진행에 대해 마우스를 모니터링하였다. 24주 연령에서, 마우스를 등가의 중앙 항-dsDNA 역가를 갖는 군으로 무작위로 나누고 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 단독 또는 300 mg/kg ER-885454로 1일 1회 경구 (QD PO)로 처리하였다. 모든 마우스를 47주 연령에서 희생시키고 (23주 총 처리) 혈장 항-dsDNA 역가를 ELISA에 의해 결정하였다 ( a ). ( b ) 47주 연령에서 종결 직전, 개개의 마우스로부터 소변을 수집하고, 소변 알부민 크리아티닌 비 (UACR, 단백뇨)를 각각의 동물에 대해 신장 기능의 간접적 척도로서 결정하였다. ( c ) 희생 시에, 개개의 마우스로부터 신장을 수집하고, 24시간 동안 10% 포르말린 중에 고정하고, 파라핀에 포매하고, H&E 염색 절편을 맹검 방식으로 조직병리학 평가를 위해 생성시켰다. 상기 (a)에 관한 만-휘트니 검정에 의해 통계적 유의성을 결정하였다.
도 10은 화합물 ER-887006의 X-선 구조의 ORTEP 표시를 도시한다.
도 11a-11nn은 본원에 제시된 다양한 실시양태에 따른 구조 및 상응하는 화학명을 나타낸다. "ER-번호"는 각각의 화합물에 배정된 참조 번호이다. 입수가능한 경우, 인간 TLR7을 안정하게 발현하는 HEK 세포주에 대한 활성, 인간 TLR9를 안정하게 발현하는 HEK 세포주에 대한 활성, 1H NMR 데이터, 및 질량 분석 데이터를 또한 포함한다.
도 12는 NZBxNZW 균주 루푸스 질환 모델에서 ER-892887 및 2개의 통상적으로 사용된 인간 루푸스 처리의 효과를 도시한다. 도면 범례: 암컷 NZBWF1/J 마우스에게 4주 연령에서 공급하고, 기초선 블리드 10 및 26주에서 수행하고, 항-dsDNA 역가 및 단백뇨를 따름으로써 질환 진행에 대해 마우스를 모니터링하였다. 26주 연령에서, 마우스를 등가의 중앙 항-dsDNA 역가를 갖는 군으로 무작위로 나누고 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 단독 또는 100 mg/kg ER-892887, 100 mg/kg 히드록시클로로퀸, 0.1 mg/kg 프레드니솔론 또는 0.5 mg/kg 프레드니솔론, 단독 또는 명시된 조합물로 1일 1회 경구 (QD PO)로 처리하였다. 모든 마우스를 45주 연령에서 희생시키고 (19주의 약물 처리) 혈장 항-dsDNA 역가를 ELISA에 의해 결정하였다. ( a ) 종결시 항-dsDNA 역가에 끼친 ER-892887의 영향. ( b ) 41주 연령에서 (15주 처리 후), 개개의 마우스로부터 소변을 수집하고, 소변 알부민 크리아티닌 비 (UACR, 단백뇨)를 각각의 동물에 대해 신장 기능의 간접적 척도로서 결정하였다. ( c ) 19주의 처리 후, 45주 연령에서 종결 직전 개개의 마우스로부터 소변을 수집하고, 소변 알부민 크리아티닌 비 (UACR, 단백뇨)를 각각의 동물에 대해 결정하였다. (d , e, f ) E6887로 처리 동안 본 연구에서 관찰된 생존 곡선, 각각의 표준 처리 비교군(comparator) (d, 히드록시클로로퀸; e, 0.1 mg/kg 프레드니솔론; f, 0.5 mg/kg 프레드니솔론), 또는 E6887과 비교군 중 하나의 조합물. 맨틀-콕스에 의한 시험된 처리 군 대 비히클.
도 13은 프리스탄: DBA/1 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-892887 및 3개의 통상적으로 사용된 인간 루푸스 처리를 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례: 암컷 DBA/1 마우스에게 11주 연령에서 0.5 ml 프리스탄 또는 PBS의 복강내 주사를 제공하였다. 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 또는 300 mg/kg ER-892887, 100 mg/kg 히드록시클로로퀸, 1 mg/kg 프레드니솔론 또는 100 mg/kg 미코페놀레이트로 1일 1회 경구 투여를 프리스탄 주사 후 2개월에 시작하고 3개월의 처리 동안 계속하였다. ( a ) 3개월 처리의 종료시 팽윤 및 염증의 시각적 점수에 의해 관절염 발병을 평가하였다. ( b ) 3개월의 화합물 처리 후 마우스를 안락사시켰고, 혈장 샘플에서 항-dsDNA, 항-히스톤, 항-Sm/RNP 및 항-RiboP 역가를 ELISA에 의해 측정하였다 (통계적 유의성은 만-휘트니 검정에 의해 결정). 표준 곡선의 범위 초과 또는 미만에 속하는 ELISA 값을 적절한 경우, 최고 또는 최저 유효 측정(valid measurement)에 상당하는 값으로 배정하였다. ( c ) 3개월의 처리 후 전혈 중 IFN-조절된 유전자의 발현을 qPCR 패널에 의해 측정하였다. 프리스탄 처리 대 PBS 대조군에 의해 유의하게 상향조절된 인터페론-조절된 유전자의 전체 목록이 도시되어 있고, ER-892887에 의해 유의하게 감소된 개개의 유전자 (스튜던트 t-검정)를 별표로 볼드체로 표시하였다. ( d ) 실험에서 프리스탄에 의해 조절된 유전자의 IFN 점수를 도시하였다.
도 14는 프리스탄: DBA/1 균주 루푸스 질환 모델에서 관절염 및 자기항체에 끼친 화합물 ER-892887의 효과를 제시한다. 도면 범례: 암컷 DBA/1 마우스에게 10주 연령에서 0.5 ml 프리스탄 또는 PBS의 복강내 주사를 제공하였다. 22주 연령에서, 마우스를 등가의 중앙 항-dsDNA 역가를 갖는 군으로 무작위로 나누고 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 단독 또는 300 mg/kg ER-892887로 1일 1회 경구 (QD PO)로 처리하였다. 관절염 증상 (팽윤 및 염증)을 맹검 관찰자에 의해 매월 기록하였다. 모든 마우스를 34주 연령에서 희생시키고 (12주의 약물 처리) 혈장 자기항체 역가를 ELISA에 의해 결정하였다. 종결 이전에 발에 x-선을 조사하고 골 손상 및 미란(erosion)을 두 명의 맹검 분석가에 의해 점수를 매겼다. ( a ) 상단 - 관절염 점수를 비히클 및 화합물 투여-군에서 매월 계산하였다. ( a ) 하단 - X-선 점수를 3개월의 처리 후 계산하였다. ( b ) 자기항체 역가를 말단 혈장 샘플에서 ELISA에 의해 측정하였다 (통계적 유의성은 만-휘트니 검정에 의해 결정).
도 2는 BXSB-Yaa 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-892887을 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례: 12주 연령 BXSB-Yaa 마우스를 등가의 중앙(median) 항-dsDNA 역가를 갖는 군으로 무작위로 나누고 총 14주 동안 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 단독 또는 300 mg/kg ER-892887로 1일 1회 경구로 처리하였다. ( a ) 모든 마우스를 26주 연령에서 희생시키고 6주 연령 사전에 질환이 있는(pre-diseased) 마우스에서 관찰된 역가와 비교하여 최종 항-dsDNA, 항-Sm/nRNP, 및 항-RiboP 역가를 ELISA에 의해 평가하였다. ( b ) 희생 이전 대략 1주 (25주 연령, 13주의 처리), 마우스를 18시간 동안 대사 케이지(metabolic cage)에서 케이지당 1-2 마리를 수용하여 소변을 수집하고, 소변 알부민 크리아티닌 비 (UACR, 단백뇨)를 각각의 동물에 대해 신장 기능의 간접적 척도로서 결정하였다. ( c ) 희생 시에, 개개의 마우스로부터 신장을 수집하고, 24시간 동안 10% 포르말린 중에 고정하고, 파라핀에 포매하고, H&E 염색 절편(stained section)을 맹검 방식으로 조직병리학 평가를 위해 생성시켰다. ( d ) SLE-8 연구에서 관찰된 사망률의 요약. (a)에 관한 만-휘트니 검정에 의해 통계적 유의성을 결정하였다.
도 3은 NZBxNZW 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-892887을 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례: 암컷 NZBWF1/J 마우스에게 6주 연령에서 공급하고, 기초선 블리드(baseline bleed)를 수행하고, 항-dsDNA 역가를 따름으로써 질환 진행에 대해 마우스를 모니터링하였다. 20주 연령에서, 마우스를 등가의 중앙 항-dsDNA 역가를 갖는 군으로 무작위로 나누고 23주 연령에서 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 단독 또는 33, 100, 또는 300 mg/kg ER-892887로 1일 1회 경구 (QD PO)로 처리하였다. 모든 마우스를 45주 연령에서 희생시키고 (22주 총 처리) 혈장 항-dsDNA 역가를 ELISA에 의해 결정하였다. ( a ) 항-dsDNA 역가에 끼친 시간 경과에 따른 ER-892887 처리의 영향. ( b ) (a)에 도시된 데이터 유래의 ER-892887에 대한 +22주 처리 데이터의 막대 그래프. ( c ) 45주 연령에서 종결 직전 (22주의 처리 후), 개개의 마우스로부터 소변을 수집하고, 소변 알부민 크리아티닌 비 (UACR, 단백뇨)를 각각의 동물에 대해 신장 기능의 간접적 척도로서 결정하였다. ( d ) 본 연구에서 관찰된 사망률의 요약. ( e ) 희생 시에, 개개의 마우스로부터 신장을 수집하고, 24시간 동안 10% 포르말린 중에 고정하고, 파라핀에 포매하고, H&E 염색 절편을 맹검 방식으로 조직병리학 평가를 위해 생성시켰다. (c)에 관한 만-휘트니 검정에 의해 통계적 유의성을 결정하였다.
도 4는 NZBxNZW 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-892887을 추가 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례. 암컷 NZBWF1/J 마우스에게 8주 연령에서 공급하고, 기초선 블리드를 수행하고, 항-dsDNA 역가를 따름으로써 질환 진행에 대해 마우스를 모니터링하였다. 24주 연령에서, 마우스를 등가의 중앙 항-dsDNA 역가를 갖는 군으로 무작위로 나누고 25주 연령에서 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 단독 또는 33, 100, 또는 300 mg/kg ER-892887로 QD PO로 처리하였다. 명시된 시점에서 혈장 샘플에 대해 ELISA에 의해 항-dsDNA 역가를 결정하였다. ( a ) +17주의 처리까지의 시간 경과에 따른 중앙 항-dsDNA 역가에 끼친 화합물 처리의 영향. ( b ) 단지 (a)에 도시된 데이터로부터 +13주의 처리 시점에서 중앙 항-dsDNA에 끼친 화합물 처리의 영향. ( c ) 화합물 처리의 13주 (상단 그래프) 또는 17주 (하단 그래프) 후에, 개개의 마우스로부터 소변을 수집하고, 소변 알부민 크리아티닌 비 (UACR, 단백뇨)를 각각의 동물에 대해 신장 기능의 간접적 척도로서 결정하였다. 높은 UACR을 갖는 원 안에 명시된 마우스는 +13주 내지 +17주의 처리 사이에 죽은 그러한 동물이었다 (만-휘트니 검정에 의해 통계적 유의성을 결정하였다). ( d ) 13주의 처리 후 엄선된 군으로부터의 혈장에서 측정된 혈중 요소 질소 (BUN). ( e ) 17주까지의 처리에서 비히클 대 화합물 처리 마우스에 관한 사망률 곡선. +17주 초과 처리에 대한 사망률 곡선 분석은 33 mg/kg 및 100 mg/kg ER-892887 처리는 로그-순위(Log-rank) (맨틀-콕스(Mantel-Cox) 시험에 의해 결정된 바와 같이 통계상 유의한 생존 이익 대 비히클을 제공한 것으로 나타났다. ( f ) 본 연구에서 관찰된 사망률의 요약.
도 5는 프리스탄: DBA/1 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-892887을 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례: 암컷 DBA/1 마우스에게 10-11주 연령에서 0.5 ml 프리스탄 또는 PBS의 복강내 주사를 제공하였다. 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 또는 300 mg/kg ER-892887로 1일 1회 경구 투여를 총 3개월 처리 동안 프리스탄 주사 후 3.5개월에 시작하였다. ( a ) 3개월의 화합물 처리 후 마우스를 안락사시키고, ELISA에 의해 혈장 샘플 중에서 항-dsDNA 및 항-RiboP 역가를 측정하였다 (통계적 유의성은 만-휘트니 검정에 의해 결정). ( b ) 시각적 점수에 의해 관절염 발병을 매월 평가하였다. ( c ) 3개월의 처리 후 전혈 중 IFN-조절된 유전자의 발현을 qPCR 패널에 의해 측정하고, IFN 유전자 시스너쳐(gene signature) 점수를 계산하였다 (IFN 점수 계산에 관한 세부 사항에 대해서는 약리학 물질 및 방법 부분 참조). ( d ) 프리스탄 처리 대 PBS 대조군에 의해 유의하게 상향조절된 21개 유전자의 전체 목록 및 ER-892887에 의해 유의하게 감소된 개개의 유전자 (스튜던트 t-검정).
도 6은 프리스탄: DBA/1 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-892887을 추가 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례: 암컷 DBA/1 마우스에게 11-12주 연령에서 0.5 ml 프리스탄 또는 PBS의 복강내 주사를 제공하였다. 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 또는 33, 100, 또는 300 mg/kg ER-892887로 1일 1회 경구 투여를 총 3개월 처리 동안 프리스탄 주사 후 2개월에 시작하였다. 3개월의 화합물 처리 후 마우스를 안락사시키고, ELISA에 의해 혈장 샘플 중에서 항-dsDNA ( a ), -RiboP ( b ), -Sm/nRNP ( c ), 및 -히스톤 ( d ) 역가를 측정하였다 (통계적 유의성은 만-휘트니 검정에 의해 결정). ( e ) 화합물 처리의 3개월 동안 연구에서 관찰된 사망률의 요약. ( f ) 비히클 및 300 mg/kg ER-892887 처리된 마우스에 관한 마지막 시점에서 전혈 중 IFN-조절된 유전자의 발현을 qPCR 패널에 의해 측정하고, IFN 유전자 시스너쳐 점수를 계산하였다 (IFN 점수 계산에 관한 세부 사항에 대해서는 약리학 물질 및 방법 부분 참조). ( g ) 프리스탄 처리 대 PBS 대조군에 의해 유의하게 상향조절된 22개 유전자의 전체 목록 및 ER-892887에 의해 유의하게 감소된 개개의 유전자 (스튜던트 t-검정).
도 7은 BXSB-Yaa 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-885454를 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례: 9주 연령 수컷 BXSB-Yaa 마우스를 총 15주 동안 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 단독 또는 100 mg/kg 또는 300 mg/kg ER-885454로 1일 1회 경구로 처리하였다. 모든 마우스를 24주 연령에서 희생시키고 최종 항-dsDNA ( a ) 및 항-Sm/RNP ( b ) 역가를 ELISA에 의해 평가하였다. ( c ) 희생 이전 대략 1주, 마우스를 18시간 동안 대사 케이지에서 케이지당 1-2 마리를 수용하여 소변을 수집하고, 소변 알부민 크리아티닌 비 (UACR, 단백뇨)를 각각의 동물에 대해 신장 기능의 간접적 척도로서 결정하였다. ( d ) 희생 시에, 개개의 마우스로부터 신장을 수집하고, 24시간 동안 10% 포르말린 중에 고정하고, 파라핀에 포매하고, H&E 염색 절편을 맹검 방식으로 조직병리학 평가를 위해 생성시켰다. 상기 (a), (b) 및 (c)에 관한 만-휘트니 검정에 의해 통계적 유의성을 결정하였다.
도 8은 BXSB-Yaa 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-885454를 추가 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례: 17주 연령 BXSB-Yaa 마우스를 등가의 중앙 항-dsDNA 역가를 갖는 2개의 군으로 무작위로 나누고 총 13주 동안 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 단독 또는 300 mg/kg ER-885454로 1일 1회 경구로 처리하였다. 모든 마우스를 30주 연령에서 희생시키고 7주 연령의 사전에 질환이 있는 마우스에서 관찰된 역가와 비교하여 최종 항-dsDNA ( a ) 및 항-Sm/RNP ( b ) 역가를 ELISA에 의해 평가하였다. ( c ) 희생 이전 대략 1주, 마우스를 18시간 동안 대사 케이지에서 케이지당 1-2 마리를 수용하여 소변을 수집하고, 소변 알부민 크리아티닌 비 (UACR, 단백뇨)를 각각의 동물에 대해 신장 기능의 간접적 척도로서 결정하였다. ( d ) 희생 시에, 개개의 마우스로부터 신장을 수집하고, 24시간 동안 10% 포르말린 중에 고정하고, 파라핀에 포매하고, H&E 염색 절편을 맹검 방식으로 조직병리학 평가를 위해 생성시켰다. 상기 (a), (b) 및 (c)에 관한 만-휘트니 검정에 의해 통계적 유의성을 결정하였다.
도 9는 NZBxNZW 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-885454를 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례: 암컷 NZBWF1/J 마우스에게 6주 연령에서 공급하고, 기초선 블리드를 수행하고, 항-dsDNA 역가를 따름으로써 질환 진행에 대해 마우스를 모니터링하였다. 24주 연령에서, 마우스를 등가의 중앙 항-dsDNA 역가를 갖는 군으로 무작위로 나누고 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 단독 또는 300 mg/kg ER-885454로 1일 1회 경구 (QD PO)로 처리하였다. 모든 마우스를 47주 연령에서 희생시키고 (23주 총 처리) 혈장 항-dsDNA 역가를 ELISA에 의해 결정하였다 ( a ). ( b ) 47주 연령에서 종결 직전, 개개의 마우스로부터 소변을 수집하고, 소변 알부민 크리아티닌 비 (UACR, 단백뇨)를 각각의 동물에 대해 신장 기능의 간접적 척도로서 결정하였다. ( c ) 희생 시에, 개개의 마우스로부터 신장을 수집하고, 24시간 동안 10% 포르말린 중에 고정하고, 파라핀에 포매하고, H&E 염색 절편을 맹검 방식으로 조직병리학 평가를 위해 생성시켰다. 상기 (a)에 관한 만-휘트니 검정에 의해 통계적 유의성을 결정하였다.
도 10은 화합물 ER-887006의 X-선 구조의 ORTEP 표시를 도시한다.
도 11a-11nn은 본원에 제시된 다양한 실시양태에 따른 구조 및 상응하는 화학명을 나타낸다. "ER-번호"는 각각의 화합물에 배정된 참조 번호이다. 입수가능한 경우, 인간 TLR7을 안정하게 발현하는 HEK 세포주에 대한 활성, 인간 TLR9를 안정하게 발현하는 HEK 세포주에 대한 활성, 1H NMR 데이터, 및 질량 분석 데이터를 또한 포함한다.
도 12는 NZBxNZW 균주 루푸스 질환 모델에서 ER-892887 및 2개의 통상적으로 사용된 인간 루푸스 처리의 효과를 도시한다. 도면 범례: 암컷 NZBWF1/J 마우스에게 4주 연령에서 공급하고, 기초선 블리드 10 및 26주에서 수행하고, 항-dsDNA 역가 및 단백뇨를 따름으로써 질환 진행에 대해 마우스를 모니터링하였다. 26주 연령에서, 마우스를 등가의 중앙 항-dsDNA 역가를 갖는 군으로 무작위로 나누고 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 단독 또는 100 mg/kg ER-892887, 100 mg/kg 히드록시클로로퀸, 0.1 mg/kg 프레드니솔론 또는 0.5 mg/kg 프레드니솔론, 단독 또는 명시된 조합물로 1일 1회 경구 (QD PO)로 처리하였다. 모든 마우스를 45주 연령에서 희생시키고 (19주의 약물 처리) 혈장 항-dsDNA 역가를 ELISA에 의해 결정하였다. ( a ) 종결시 항-dsDNA 역가에 끼친 ER-892887의 영향. ( b ) 41주 연령에서 (15주 처리 후), 개개의 마우스로부터 소변을 수집하고, 소변 알부민 크리아티닌 비 (UACR, 단백뇨)를 각각의 동물에 대해 신장 기능의 간접적 척도로서 결정하였다. ( c ) 19주의 처리 후, 45주 연령에서 종결 직전 개개의 마우스로부터 소변을 수집하고, 소변 알부민 크리아티닌 비 (UACR, 단백뇨)를 각각의 동물에 대해 결정하였다. (d , e, f ) E6887로 처리 동안 본 연구에서 관찰된 생존 곡선, 각각의 표준 처리 비교군(comparator) (d, 히드록시클로로퀸; e, 0.1 mg/kg 프레드니솔론; f, 0.5 mg/kg 프레드니솔론), 또는 E6887과 비교군 중 하나의 조합물. 맨틀-콕스에 의한 시험된 처리 군 대 비히클.
도 13은 프리스탄: DBA/1 균주 루푸스 질환 모델에서 화합물 ER-892887 및 3개의 통상적으로 사용된 인간 루푸스 처리를 시험한 결과를 도시한다. 도면 범례: 암컷 DBA/1 마우스에게 11주 연령에서 0.5 ml 프리스탄 또는 PBS의 복강내 주사를 제공하였다. 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 또는 300 mg/kg ER-892887, 100 mg/kg 히드록시클로로퀸, 1 mg/kg 프레드니솔론 또는 100 mg/kg 미코페놀레이트로 1일 1회 경구 투여를 프리스탄 주사 후 2개월에 시작하고 3개월의 처리 동안 계속하였다. ( a ) 3개월 처리의 종료시 팽윤 및 염증의 시각적 점수에 의해 관절염 발병을 평가하였다. ( b ) 3개월의 화합물 처리 후 마우스를 안락사시켰고, 혈장 샘플에서 항-dsDNA, 항-히스톤, 항-Sm/RNP 및 항-RiboP 역가를 ELISA에 의해 측정하였다 (통계적 유의성은 만-휘트니 검정에 의해 결정). 표준 곡선의 범위 초과 또는 미만에 속하는 ELISA 값을 적절한 경우, 최고 또는 최저 유효 측정(valid measurement)에 상당하는 값으로 배정하였다. ( c ) 3개월의 처리 후 전혈 중 IFN-조절된 유전자의 발현을 qPCR 패널에 의해 측정하였다. 프리스탄 처리 대 PBS 대조군에 의해 유의하게 상향조절된 인터페론-조절된 유전자의 전체 목록이 도시되어 있고, ER-892887에 의해 유의하게 감소된 개개의 유전자 (스튜던트 t-검정)를 별표로 볼드체로 표시하였다. ( d ) 실험에서 프리스탄에 의해 조절된 유전자의 IFN 점수를 도시하였다.
도 14는 프리스탄: DBA/1 균주 루푸스 질환 모델에서 관절염 및 자기항체에 끼친 화합물 ER-892887의 효과를 제시한다. 도면 범례: 암컷 DBA/1 마우스에게 10주 연령에서 0.5 ml 프리스탄 또는 PBS의 복강내 주사를 제공하였다. 22주 연령에서, 마우스를 등가의 중앙 항-dsDNA 역가를 갖는 군으로 무작위로 나누고 비히클 (Veh; 0.5% 메틸-셀룰로스) 단독 또는 300 mg/kg ER-892887로 1일 1회 경구 (QD PO)로 처리하였다. 관절염 증상 (팽윤 및 염증)을 맹검 관찰자에 의해 매월 기록하였다. 모든 마우스를 34주 연령에서 희생시키고 (12주의 약물 처리) 혈장 자기항체 역가를 ELISA에 의해 결정하였다. 종결 이전에 발에 x-선을 조사하고 골 손상 및 미란(erosion)을 두 명의 맹검 분석가에 의해 점수를 매겼다. ( a ) 상단 - 관절염 점수를 비히클 및 화합물 투여-군에서 매월 계산하였다. ( a ) 하단 - X-선 점수를 3개월의 처리 후 계산하였다. ( b ) 자기항체 역가를 말단 혈장 샘플에서 ELISA에 의해 측정하였다 (통계적 유의성은 만-휘트니 검정에 의해 결정).
발명의 상세한 설명
외인성 ("비-자기(non-self)") 병원체-관련 분자 패턴 (PAMP - 즉, TLR4에 의해 세균성 LPS 검출)을 검출할 수 있는 선천 면역 수용체로서 그의 역할 이외에도, 포유동물 톨-유사 수용체 (TLRs)는 또한 숙주 조직 손상 또는 응력 후 방출된 내인성 자극 (DAMP)을 인식할 수 있다. 문헌 [Kono, H. and K.L. Rock, How dying cells alert the immune system to danger. Nat Rev Immunol, 2008. 8(4): p. 279-89]. 과거 십년에서 내인성 ("자기(self)") 위험-관련 분자 패턴 (DAMP)에 의한 TLR 활성화와 자가면역 장애의 병인 사이의 연관성에 대한 인식이 밝혀졌다. 구체적으로, TLR7은 포유동물 및 바이러스 공급원 둘 다 유래의 단일 가닥 RNA (ssRNA)에 의해 활성화될 수 있으며, 한편 TLR9는 포유동물, 바이러스, 및 세균 공급원 유래의 DNA에 의해 활성화될 수 있다.
루푸스는 이중 가닥 DNA (dsDNA) 자체 및 관련 단백질 (히스톤)에 대해 뿐만 아니라 RNA-관련 단백질, 예컨대 Ro, La, Smith (Sm), 및 U1 snRNP의 넓은 어레이(array)에 대해 반응성인 자기-항체(auto-antibody)를 특징으로 한다. 문헌 [Kirou, K.A., et al., Activation of the interferon-alpha pathway identifies a subgroup of systemic lupus erythematosus patients with distinct serologic features and active disease. Arthritis Rheum, 2005. 52(5): p. 1491-503]. 질환 중증도와 직접 상관관계가 있는 것으로 확인된, 루푸스의 제2의 통상의 특징은, 유형-1 인터페론 (IFN), 특히 IFNα의 조절 이상(dysregulated) 발현, 및 루푸스 환자의 PBMC에서 IFNα-조절 유전자의 대형 패널의 상응하는 상승 (소위 "유형-1 IFN 유전자 시그너쳐")이다. 상기 문헌 [Kirou, K.A., et al.]. 혈중 IFN의 주 공급원은 TLR7 및 TLR9 둘 다를 성분을 이루어 발현하는, 형질세포양 수지상 세포 (pDC)로 칭해지는 특수화된 면역 세포이다.
두 질환 특징, 자기-항체와 IFN 수준 사이의 인과 관계는, 건강한 공여자로부터가 아닌 루푸스 환자로부터 단리된 항체 복합체가 TLR7/9- 및 RNA/DNA-의존 방식으로 pDC에 의해 IFN 생성을 구동할 수 있음이 다수의 연구 군이 총괄적으로 입증한 경우, 상정되었다. 문헌 [Means, T.K., et al., Human lupus autoantibody-DNA complexes activate DCs through cooperation of CD32 and TLR9. J Clin Invest, 2005. 115 (2): p. 407-17]; [Vollmer, J., et al., Immune stimulation mediated by autoantigen binding sites within small nuclear RNAs involves Toll-like receptors 7 and 8. J Exp Med, 2005. 202(11): p. 1575-85]; [Savarese, E., et al., U1 small nuclear ribonucleoprotein immune complexes induce type I interferon in plasmacytoid dendritic cells through TLR7. Blood, 2006. 107(8): p. 3229-34]. 더욱이, IFN은 B-세포 상에서 증가된 TLR7/9 발현을 자극하고, 그로 인해 자기-반응성 B-세포의 TLR/BCR (B-세포 수용체) 활성화를 향상시켜 항체-생성 혈장 세포를 분화시킨다. 문헌 [Banchereau, J. and V. Pascual, Type I interferon in systemic lupus erythematosus and other autoimmune diseases. Immunity, 2006. 25 (3): p. 383-92]; 이와 같은 방식으로, 핵산 TLR7/9 리간드를 함유하는 자기-항체 복합체의 수준은 염증전(pro-inflammatory) 주기 및 루푸스 질환 진행을 구동한다. 유형-1 IFN 단독은 인간에서 루푸스-유사 증상을 유도하는 것으로 보고되었다. 문헌 [Ho, V., et al., Severe systemic lupus erythematosus induced by antiviral treatment for hepatitis C. J. Clin Rheumatol, 2008. 14(3):166-8]. 문헌 [Ronnblom L.E., et al. Possible induction of systemic lupus erythematosus by interferon-alpha treatment in a patient with a malignant carcinoid tumor]. 문헌 [J. Internal Med. 1990. 227:207-10]. 본 발명자들은 TLR7/8의 약리 길항작용이 이러한 염증전 주기를 교란시키고, IFN 수준을 감소시키고, pDC 및 B-세포에 의해 매개된 자가면역 질환 과정을 악화시킴으로써 루푸스 환자에게 치료 이익을 제공할 가능성이 있는 것으로 여긴다.
몇몇 다른 일련의 증거는 인간 루푸스 병인에서 TLR7의 역할을 제안하며 TLR 수용체가 질환 개입에 관한 유효한 표적이라는 개념을 지지한다. TLR7의 3' UTR에서 구체적 다형성이 동정되었으며 상승된 TLR7 발현 및 향상된 IFN 유전자 시그너쳐 둘 다와 상관관계가 있는 것으로 확인되었다. 문헌 [Shen, N., et al., Sex-specific association of X-linked Toll-like receptor 7 (TLR7) with male systemic lupus erythematosus. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(36): p. 15838-43]. 게다가, 루푸스 표준 치료 (SOC) 항말라리아 약물, 예컨대 클로로퀸은 엔도좀 TLR7/9 신호전달을 교란시키고 ssRNA-리보뉴클레오단백질 복합체 또는 루푸스 환자 혈청에 의해 유도된 PBMC 및/또는 pDC IFNα 생성을 억제한다. 더욱이, 골수 DC 및 단핵 세포는 자기-RNA/TLR8 신호전달 이후, IL-12p40, TNFα, 및 IL-6을 생성하며, 이는 TLR8-의존성 염증전 시토카인이 pDC에 의해 TLR7-주도된(driven) IFN 이외에도 인간 루푸스 병인에 추가의 한 원인이 됨을 시사한다. 상기 문헌 [Vollmer]; [Gorden, K.B., et al., Synthetic TLR agonists reveal functional differences between human TLR7 and TLR8. J Immunol, 2005. 174(3): p. 1259-68].
마우스 모델 증거는 또한 루푸스에서 TLR의 역할을 위해 존재한다. 공개된 연구는 단일 TLR7 또는 이중 TLR7/9 유전자 결실 또는 이중 TLR7/9 약리학상 억제 둘 다가 네 가지의 구별되는 루푸스 모델에서 질환 중증도를 감소시킴을 총괄적으로 입증하였다. 문헌 [Nickerson, K.M., et al., TLR9 regulates TLR7- and MyD88-dependent autoantibody 생성물ion and disease in a murine model of lupus. J Immunol, 2010. 184(4): p. 1840-8]; [Fairhurst, A.M., et al., Yaa autoimmune phenotypes are conferred by overexpression of TLR7. Eur J Immunol, 2008. 38(7): p. 1971-8]; [Deane, J.A., et al., Control of toll-like receptor 7 expression is essential to restrict autoimmunity and dendritic cell proliferation. Immunity, 2007. 27(5): p. 801-10]; [Savarese, E., et al., Requirement of Toll-like receptor 7 for pristane-induced 생성물ion of autoantibodies and development of murine lupus nephritis. Arthritis Rheum, 2008. 58(4): p. 1107-15]. 자가면역, TLR7 단독의 트랜스제닉 과다발현(transgenic overexpression)의 주요한 결정인자로서 TLR7의 역할의 강조는 정상적 질환-내성 C57BL/6 균주에서 자발적 항-RNA 항-반응성 및 신염을 야기한다. 상기 문헌 [Dean].
안전의 관점에서, TLR7, 8, 또는 9-단일 또는 7/8- 및 7/9-이중 유전자 결핍 마우스가 기회감염성의 병원체에 의한 감염이 관찰되는 정도로 면역력이 저하된다는 보고는 없다. 마찬가지로, SOC 항-말라리아약은 적어도 부분적으로 TLR7/9 신호전달을 억제하기 위해 예측된 용량으로 루푸스 질환 발적을 제어하는데 인간에서 장기간 사용에 대체로 안전하고 유효한 것으로 여겨진다. 문헌 [Lafyatis, R., M. York, and A. Marshak-Rothstein, Antimalarial agents: closing the gate on Toll-like receptors? Arthritis Rheum, 2006. 54(10): p. 3068-70]; [Costedoat-Chalumeau, N., et al., Low blood concentration of hydroxychloroquine is a marker for and predictor of disease exacerbations in patients with systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheum, 2006. 54(10): p. 3284-90]. 실제로, 아동기에서 그램-양성 세균성 감염에 대해 증가된 감수성 및 성인기에서의 덜 한 정도의 감수성을 제외하고, 고도로 손상된(highly compromised) TLR 및 IL-1R 신호전달 경로 (MyD88- 또는 IRAK-4-결핍성)을 갖는 인간은 그럼에도 불구하고 건강하며 충분한 숙주 방어 메카니즘을 유지한다. 문헌 [Casanova, J.L., L. Abel, and L. Quintana-Murci, Human TLRs and IL-1Rs in Host Defense: Natural Insights from Evolutionary, Epidemiological, and Clinical Genetics. Annu Rev Immunol, 2010].
상기 및 다른 정보를 기반으로, 특히 TLR7은 마우스 임상전 SLE 모델의 맥락에서 잘 입증된 표적인 것으로 여겨진다. 유전적 및 기능적 인간 연구 둘 다는 TLR7 및/또는 TLR8 경로의 길항작용이 루푸스 환자에 치료 이익을 제공할 것이라는 가설을 지지한다. 더욱이, 인간에서 항말라리아약의 마우스 TLR 유전자 결실 연구 및 장기간 사용 둘 다는 약리학상 TLR7, 8 및/또는 9 억제가 숙주 방어를 그다지 손상시키지 않고 착수될 수 있음을 시사한다.
따라서 TLR7, TLR8, 또는 TLR7 및 TLR8 둘 다를 억제하는 화합물은 SLE 또는 루푸스 신염에 대한 치료제 또는 예방제로서 작용할 것으로 기대될 수 있다.
본 발명자들은 TLR 7 및/또는 8을 억제하고 따라서 SLE 또는 루푸스 신염에 대해 예방 또는 치료 효과를 가질 것으로 기대되는 화합물을 밝혀냈다. 본 발명의 화합물 및 방법은 본원에 기재된다.
II. 치료 용도
본 발명의 제약 조성물에서 활성 성분의 투여량 수준을 변화시켜 특정의 환자, 조성물, 및 투여의 방식에 대해 목적하는 치료 반응을 달성하는 활성 화합물(들)의 양을 수득할 수 있다. 선택된 투여 수준은 특정의 화합물, 투여의 경로, 치료될 병태의 중증도, 및 치료될 환자의 병태 및 이전 병력에 의존한다. 연령, 체중, 전신 건강 상태, 및 본 발명의 화합물(들)의 효능에 영향을 줄 수 있는 다른 인자를 포함한, 환자에게 특유한 인자에 따라, 표준 방법을 사용하여 각각의 특정의 경우에 대해 용량이 결정된다. 일반적으로, 경구 투여의 경우에, 본 발명에 따른 THPP 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 하루 성인당 대략 30 ㎍ 내지 100 ㎍의 용량, 30 ㎍ 내지 500 ㎍의 용량, 30 ㎍ 내지 10 g의 용량, 100 ㎍ 내지 5 g의 용량, 또는 100 ㎍ 내지 1 g의 용량으로 투여한다. 주사를 통한 투여의 경우에, 하루 성인당 대략 30 ㎍ 내지 1 g의 용량, 100 ㎍ 내지 500 mg의 용량, 또는 100 ㎍ 내지 300 mg의 용량으로 투여된다. 두 경우에서, 용량을 1회 또는 수회 투여에 걸쳐 나누어 투여한다. 예를 들어 심시와이피(Simcyp)® 프로그램을 사용하여 투여량을 모의실험할 수 있다.
인간을 포함한 포유동물에게 본 발명의 화합물의 투여는, 특히 투여의 특정의 방식, 투여량, 또는 투여의 빈도에 제한되는 것으로 의도되지 않는다. 본 발명은 경구, 복강내, 근육내, 정맥내, 동맥내, 병변내, 피하, 또는 SLE 또는 루푸스 신염을 예방 또는 치료하는데 적당한 용량을 제공하는데 충분한 임의의 다른 경로를 포함한, 모든 투여 방식을 고려한다. 본 발명의 하나 이상의 화합물을 단일 용량 또는 다수회 용량으로 포유동물에게 투여할 수 있다. 다중 용량이 투여되는 경우, 용량이, 예를 들어, 수시간, 1일, 1주, 1개월, 또는 1년까지 서로 분리될 수 있다. 임의의 특정의 대상체를 위해, 구체적 투여 형태(dosage regime)를 개인의 필요 및 본 발명의 화합물을 포함하는 제약 조성물의 투여를 집행하거나 감독하는 자의 전문적 판단에 따라 조정해야 한다는 점을 이해하여야 한다.
임상적 적용을 위해, 본 발명의 화합물은 일반적으로 정맥내, 피하, 근육내, 결장내, 비강, 복강내, 직장내, 협측으로, 또는 경구내로 투여될 수 있다. 인간 또는 수의학에서 사용하기에 적합한 본 발명의 하나 이상의 화합물을 함유하는 조성물은 적합한 경로에 의한 투여를 허용하는 형태로 존재할 수 있다. 이들 조성물은 하나 이상의 제약상 허용되는 아주반트 또는 부형제를 사용하여, 통상의 방법에 따라 제조될 수 있다. 아주반트는, 그 중에서도, 희석제, 멸균 수성 매질, 및 다양한 무독성 유기 용매를 포함한다. 치료상의 사용으로 허용되는 담체 또는 희석제는 제약 분야에 주지되어 있고, 예를 들어, 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.), ed. A. R. Gennaro, Lippincott Williams & Wilkins, 2000, Philadelphia], 및 [Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988, 1999, Marcel Dekker, New York]에 기재되어 있다. 조성물은 정제, 환제, 과립, 분말, 수용액 또는 현탁액, 주사액, 엘릭시르 또는 시럽의 형태로 존재할 수 있고, 조성물은 제약상 허용되는 제제를 수득하기 위해 감미료, 향미료, 착색제, 및 안정화제를 포함하는 군으로부터 선택된 하나 이상의 작용제를 임의로 함유할 수 있다.
비히클의 선택 및 비히클 중 활성 성분의 함량은 일반적으로 생성물의 용해도 및 화학적 특성, 특정의 투여 형태, 및 제약 실무에서 관찰되는 규정에 따라 결정된다. 예를 들어, 부형제, 락토스, 시트르산나트륨, 탄산칼슘, 및 인산이칼슘 및 붕해제, 예컨대 전분, 알긴산, 및 윤활제와 조합된 특정 복합 실리케이트 (예를 들어, 스테아르산마그네슘, 소듐 라우릴 술페이트, 및 탈크)를 정제 제조용으로 사용할 수 있다. 캡슐을 제조하기 위해, 락토스 및 고분자량 폴리에틸렌 글리콜을 사용하는 것이 유리하다. 수성 현탁액을 사용하는 경우, 이들은 현탁을 촉진시키는 유화제를 함유할 수 있다. 희석제, 예컨대 수크로스, 에탄올, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 글리세롤, 클로로포름, 또는 그의 혼합물을 또한 사용할 수 있다.
비경구 투여를 위해, 식물성유 중 본 발명의 조성물의 에멀젼, 현탁액, 또는 용액 (예를 들어, 참깨유, 땅콩유, 또는 올리브유), 수성-유기 용액 (예를 들어, 물 및 프로필렌 글리콜), 주사가능한 유기 에스테르 (예를 들어, 에틸 올레에이트), 또는 제약상 허용되는 염의 멸균 수용액이 사용된다. 본 발명의 조성물의 염의 용액은 근육내 또는 피하 주사에 의한 투여에 특히 유용하다. 순수 증류수에서 염의 용액을 포함하는 수용액을 정맥내 투여에 사용할 수 있되, 단, (i) 그의 pH를 적합하게 조정하고, (ii) 이들은 적절하게 완충시키고 충분한 양의 글루코스 또는 염화나트륨으로 등장성으로 만들고, (iii) 이들을 가열, 조사, 또는 정밀여과(microfiltration)에 의해 멸균시킨다. 본 발명의 화합물을 함유하는 적합한 조성물은 분무기 또는 현탁액 또는 용액 에어로졸에서 사용하기에 적합한 담체에 용해 또는 현탁시키거나, 무수 분말 흡입기에 사용하기에 적합한 고체 담체로 흡수 또는 흡착시킬 수 있다. 직장 투여를 위한 고체 조성물은 공지된 방법에 따라 제제화되고 본 발명의 하나 이상의 화합물을 함유하는 좌제를 포함한다.
치료용 투여를 위해 사용되는 본 발명의 화합물의 투여 제제는 멸균이어야 한다. 멸균은, 멸균 막 (예를 들어, 0.2 마이크로미터 막)을 통한 여과에 의해 또는 다른 통상의 방법에 의해 용이하게 완수된다. 제제는 전형적으로 동결 형태로 또는 수용액으로서 보관된다. 본 발명의 조성물의 pH는 일부 실시양태에서, 예를 들어, 3 내지 11일 수 있거나, 5 내지 9일 수 있거나, 7 내지 8 (모두(inclusive))일 수 있다.
투여의 한 경로가 경구 투여(oral dosage administration)에 의한 것이지만, 투여의 다른 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어, 조성물을 다양한 투여 형태, 예컨대 좌제, 이식된 펠릿 또는 소형 실린더, 에어로졸, 경구 투여 제제, 및 국소 제제, 예컨대 연고, 점적약제, 및 피부 패치로 피하, 정맥내, 근육내, 결장내, 직장내, 비강, 또는 복강내 투여할 수 있다. 본 발명의 실시양태의 화합물을 불활성 물질, 예컨대 합성 중합체 또는 실리콘 (예를 들어, 실라스틱(Silastic)® 조성물, 실리콘 고무, 또는 다른 시판 중합체)을 사용할 수 있는, 밸브, 스텐트, 튜빙, 및 보철을 포함하지만 그에 제한되지는 않는, 성형품, 예컨대 임플란트 내로 혼입할 수 있다. 이러한 중합체는 폴리비닐피롤리돈, 피란 공중합체, 폴리히드록시-프로필-메타크릴아미드-페놀, 폴리히드록시에틸-아스파르타미드-페놀, 또는 팔미토일 잔기로 치환된 폴리에틸렌옥시드-폴리리신을 포함할 수 있다. 더욱이, 본 발명의 화합물을 약물, 예를 들어 폴리락트산, 폴리글리콜산, 폴리락트산과 폴리글리콜산의 공중합체, 폴리엡실론 카프롤락톤, 폴리히드록시 부티르산, 폴리오르토에스테르, 폴리아세탈, 폴리디히드로피란, 폴리시아노아크릴레이트, 및 히드로겔의 가교 결합된 또는 양친매성 블록 공중합체의 제어된 방출을 달성하는데 유용한 생체분해성 중합체의 부류에 커플링시킬 수 있다.
본 발명의 화합물을 또한 리포솜 전달 시스템, 예컨대 소형 단일층 소포, 대형 단일층 소포, 및 다층 소포의 형태로 투여할 수 있다. 리포솜은 다양한 지질, 예컨대 콜레스테롤, 스테아릴아민, 또는 포스파티딜콜린으로부터 형성될 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한, 본 발명의 실시양태의 화합물의 혈액 성분에 생체내 접합을 포함하여, 항체, 항체 단편, 성장 인자, 호르몬, 또는 화합물 분자가 커플링되는 다른 표적 모이어티 (예를 들어, 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy] 참조, 상기 참조)를 사용하여 전달될 수 있다.
III. 합성
본 발명의 실시양태의 제조에 유용한 것으로 밝혀진 일반 및 구체적 합성 경로를 제공한다. 당업자는 이들 절차의 특정 변형 또는 수정이 또한 본 발명에 따른 화합물의 합성을 야기할 수 있을 것이라는 점을 인식할 수 있다. 일부 상황에서 문구 "예컨대"를 사용하여 더 많은 총칭의 화합물 또는 구조에 다양한 대안을 열거한다. "예컨대"는 제한되는 것으로 해석되어서는 안 되고, 그의 의미는 "예를 들어, 을 포함하지만 그에 제한되지 않는"과 일치한다는 점이 이해될 것이다.
특정 조건은 하기에 제시된 구체적 실시예에 공통된 것이었다. 마이크로파 가열은 바이오타지® 엠리스 리버레이트(Biotage® Emrys Liberator) 또는 이니시에이터(Initiator) 마이크로파 반응기를 사용하여 실시하였다. 칼럼 크로마토그래피는 바이오타지® SP4 플래시 크로마토그래피 시스템을 사용하여 수행하였다. 용매 제거는 뵈치이(Buechii) 회전 증발기 또는 진박(Genevac)® 원심분리 증발기를 사용하여 수행하였다. NMR 스펙트럼은 중수소화 용매를 사용하여 배리언 유너티(Varian Unity)® 분광계 상에서 400MHz에서 기록하였다. 화학 이동을 잔존 양성자화된 용매에 대해 보고하였다.
박층 크로마토그래피를 하기 용매: 에틸 아세테이트, 헵탄, 디클로로메탄 또는 메탄올 중 하나 이상의 다양한 비를 사용하여 실리카겔의 0.25 mm 층으로 예비코팅된 와트만(Whatman)® 유리 플레이트 상에서 수행하였다.
분석용 LC/MS를 엑스브릿지(XBridge)™ C18 1.7 μm 2.1 × 50 mm 칼럼을 사용하여 워터스 액쿼티(Waters Acquity)™ 시스템 상에서 수행하였다. 용매 A 및 B는 물과 0.1% 포름산 및 아세토니트릴과 0.1% 포름산 각각이다. 0.3 ml/min의 유량으로 4분에 걸쳐 5% B에서 99% B로 5분의 총 방법 시간. 질량 스펙트럼 데이터는 전기분무 포지티브 방식으로 100-2000 amu에서 워터스(Waters) SQD 상에서 획득하였다. 이들 조건은 "조건 I"로서 하기에 지칭한다.
대안으로, 순도 및 질량 확인을 엑스브릿지™ C8 3.5 μm 4.6 × 50 mm 칼럼을 사용하여 워터스 자동정제(Waters Autopurification) 시스템 상에서 수행하였다. 용매 A 및 B는 물과 0.1% 포름산 및 아세토니트릴과 0.1% 포름산 각각이다. 2.5 ml/min의 유량으로 5분에 걸쳐 10% B에서 95% B로 6분의 총 방법 시간. 질량 스펙트럼 데이터는 전기분무 포지티브 방식으로 130-1000 amu에서 마이크로매스(Micromass) ZQ™ 상에서 획득하였다. 이들 조건은 "조건 II"로서 하기에 지칭한다.
정제용 역상(Preparative reverse phase) LC/MS를 엑스브릿지™ C8 5 μm, 19 × 100 mm 칼럼을 사용하여 워터스 자동정제 시스템 상에서 수행하였다. 용매 A 및 B는 물과 0.1% 포름산 및 아세토니트릴과 0.1% 포름산 각각이다. 20 ml/min의 유량으로 10분에 걸쳐 30% B에서 95% B로 12분의 총 방법 시간. 질량 스펙트럼 데이터는 전기분무 포지티브 방식으로 130-1000 amu에서 마이크로매스 ZQ™ 상에서 획득하였다. 이들 조건은 "조건 III"으로서 하기에 지칭한다.
라세미 화합물의 정제용 HPLC 분할은 하기 키랄 칼럼 중 하나를 사용하여 수행하였다: 키랄팩(Chiralpak)® IA (5 cm × 50 cm 또는 2 cm × 25 cm), 키랄팩® AD (2 cm × 25 cm) 또는 키랄셀(Chiralcel)® OD (2 cm × 25 cm). 정제된 화합물의 거울상이성질체 비는 동일 정지상 (IA, AD 또는 OD)으로 이루어진 0.45 cm × 25 cm 칼럼 상에서 HPLC 분석에 의해 결정하였다.
본 발명의 화합물을 제조하기 위한 일반 방법 및 실험은 하기에 명시하였다. 특정 경우에, 특정의 화합물이 예로서 기재된다. 그러나, 각각의 경우에 본 발명의 일련의 화합물은 하기에 기재된 반응식 및 실험에 따라서 제조되었음을 알 것이다. NMR 및/또는 질량 분석 데이터가 입수가능한 그러한 화합물에 대하여, 데이터는 화합물의 합성의 기재 직후에 또는 표 11에 제시하였다.
하기 약어가 본원에서 사용된다:
정의: 하기 약어는 명시된 의미를 갖는다:
HATU: N,N,N',N'-테트라메틸-O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트
DIEA: N,N-디이소프로필에틸아민
DMAP: 4-디메틸아미노피리딘
TEA: 트리에틸아민
DMF: N,N-디메틸포름아미드
NMP: N-메틸피롤리딘
THF: 테트라히드로푸란
DCM: 디클로로메탄
MTBE: 메틸 tert-부틸 에테르
TFA: 트리플루오로아세트산
EDC: 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드
NaOH: 수산화나트륨
NaBH4: 수소화붕소나트륨
IPA: 이소프로필 알콜 또는 이소프로판올
EtOH: 에탄올
EtOAc: 에틸 아세테이트
TLR: 톨-유사 수용체
DAMP: 위험-관련 분자 패턴
PAMP: 병원체-관련 분자 패턴
IFN: 인터페론
pDC: 형질세포양 수지상 세포
PBMC: 말초혈 단핵 세포
qPCR: 정량적 폴리머라제 연쇄 반응
TLDA: 택맨(Taqman)® 저밀도 어레이(Low Density Array)
PBS: 인산염 완충 식염수
ssRNA: 단일 가닥 RNA
dsDNA: 이중 가닥 DNA
SOC: 표준 치료(standard-of-care)
R848: 레시퀴모드
HCQ: 히드록시클로로퀸
HCl: 염산
aq.: 수성
AcOH: 아세트산
PhNTf2: N-페닐트리플루오로메탄술폰이미드
Tf: 트리플루오로메탄술포네이트
MeOH: 메탄올
ee: 거울상이성질체 과잉율
HEPES: 4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산
NH4Cl: 염화암모늄
실시예 1
일반 합성 방법
본 발명의 화합물을 하기에 도시된 일반 합성 반응식에 따라 제조하였다:
<반응식 1>
실시예의 몇몇의 제조는 반응식 1에 도시된 경로를 사용한다. 전형적으로, 시판 니트릴, 예컨대 방향족, 헤테로시클릭, 지방족 또는 헤테로지방족 니트릴 (I)을 0℃ 또는 실온에서 중성 용매, 예컨대 톨루엔 중에서 강한 양성자성 유기 염기, 예컨대 포타슘 t-아밀레이트의 존재하에 아세토니트릴에 적용하여 시아노이민 (II)을 수득하였다. 그 다음, 생성 이민을 유기 산, 예컨대 아세트산의 존재하에 히드라진과 반응시켜 주요 중간체 또는 3-치환된 -5-아미노 피라졸 (III)을 수득하였다. 이들 실시예의 우반분(right half)은 방향족 또는 헤테로방향족 아실케톤 (V)과 치환된 아세틸에스테르, 예컨대 트리플루오로, 디플루오로 또는 비치환 아세틸 에스테르 (IV)를 사용하여 클라이센(Claisen) 축합에 의해 제조하여 디케톤 (VI)을 형성하였다.
두 개의 중간체 III 및 VI의 축합에 의해 약한 유기 산, 예컨대 아세트산의 존재하에 2,3-b-피라졸로피리미딘을 수득한다. 일부 경우에 5-치환된 -3-아미노 피라졸 (III)은 시판되고 이 반응에서 직접 사용된다. 라세미 5,7-시스 테트라히드로피라졸로피리미딘 (VIII)을 형성하는 환원을 수소화물 공급원을 사용하여 또는 촉매 수소화에 의해 수행한다. 키랄, 고 성능 액체 크로마토그래피를 통해 또는 부분입체이성질체 결정화를 사용한 분할에 의해 최종 목적 생성물 IX 및 X을 수득한다. 다수의 실시예에서 화합물 VIII의 라세미 혼합물을 키랄 분해에 의해 추가 정제 없이 생물학적으로 평가하였다.
<반응식 2>
반응식 2는 디케톤 VI과 축합되는 시판 3-히드록시-5-아미노피라졸로 출발하여 2-히드록시피라졸로피리미딘 X를 주요 중간체로서 수득하는 본 발명의 다양한 화합물에 대한 대안적 경로를 예시한다. X를 적합한 트리플루오로메틸술포닐화 시약으로 처리하여 트리플레이트 중간체 XI을 수득한다. 트리플레이트 XI의 환원에 뒤이어, 다양한 보로네이트와의 스즈키 교차-커플링(Suzuki cross-coupling) (여기서, R1은 방향족, 헤테로방향족, 알릴형, 헤테로알릴형 또는 지방족이다)에 의해 라세미 최종 생성물 VIII을 수득한다. 대안으로, 트리플레이트 XI을 우선 스즈키 교차-커플링에 적용시킨 다음, 중간 화합물 XIV를 라세미 최종 생성물 VIII로 환원시켰다. 반응식 1에서와 같이, 라세미 화합물 VIII을 키랄 크로마토그래피에 의하여 또는 부분입체이성질체 결정화에 의해 그의 구성 거울상이성질체로 분할하였다.
<반응식 3>
반응식 3에서 사용된 경로는 반응식 2의 변형이고, 여기서 브로마이드가 트리플레이트를 대체하며, 즉 화합물 XI 중의 트리플레이트 기가 XVI에 나타낸 바와 같은 브로마이드에 의해 대체된다. 3-브로모-5-아미노피라졸을 문헌 방법에 따라 합성하였다 (문헌 [Moy, et al. J. Med. Chem. 2010, 53, 1238). 스즈키 교차-커플링에 관한 조건은 반응식 2의 것과 본질적으로 동일하다.
<반응식 4>
반응식 4에서의 경로는 주요 피라졸로피리미딘 상에서의 보로네이트 에스테르의 생성 후 적합한 친전자체 (XIX, X = OTf, Cl, Br, I)를 축합시켜 환원 후 VIII을 생성시킴으로써 스즈키 교차-커플링 출발 물질을 역전시킨다.
<반응식 5>
반응식 5는 본원에 제시된 화학식 XV의 실시예의 몇몇의 합성에서 최종 단계를 도시한다. 따라서, 사용된 통상의 중간체는, 전형적으로 피라졸로피리미딘 모이어티에 대해 3- 또는 4- 위치에서 치환된 벤조니트릴 XX이며, 이를 산성 또는 염기성 가수분해를 통해 벤조산 XXI로 전환시킨다. 적합한 아민 (R4R5NH)과의 XXI의 커플링에 의해 라세미 아미드 XXII를 수득하고, 이를 그의 순수 거울상이성질체 XV로 분할한다. 대안으로, 키랄 분해를 벤조니트릴 (XX->XXIII) 또는 벤조산 (XXI->XXIV)의 단계에서 수행할 수 있고 순수거울상(enantiopure) 물질을 최종 생성물 XV로 유사한 방식으로 변형시킨다.
합성 실시예 - 섹션 A
실시예 1 (ER-892887의 합성)
화합물 2:
테레프탈로니트릴 (300.0 g, 2.34 mol)로 채워진 5-L 플라스크에 실온에서 톨루엔 (1.80 L), 이어서 아세토니트릴 (245 ml)을 첨가하였다. 1시간 기간에 걸쳐 온도를 < 30℃로 제어하면서 24.2 wt% 포타슘-t-아밀레이트 (1.672 L, 1.338 kg, 2.58 mol)를 첨가하였다.
혼합물 (황색의 농후한 페이스트)을 20℃로 냉각하고 16시간 동안 교반한 후, 황색 고체가 옅은 황갈색(light tan) 고체가 될 때까지 물 (0.9 L)을 격렬히 교반된 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 유리 필터를 통해 여과하고, 생성 고체를 물 (1.8 L), 이어서 IPA (1.8 L)로 세정하고, 수집하고 46 h 동안 40℃에서 진공하에 건조시켰다. 374.1 g의 화합물 A-2 (2.21 mol, 94% 수율)를 옅은 황갈색 분말로서 수득하였다.
화합물 6
5-L 플라스크에 1-(3,4-디메톡시페닐)에탄온 (487 g, 2.70 mol)을 채우고, THF (487 mL), 이어서 MTBE (1.46 L)를 첨가하였다. 에틸 트리플루오로아세테이트 (516 mL, 4.33 mol)를 첨가한 후 실온에서 메탄올 중 소듐 메톡시드 (701 g, 3.24 mol)의 25 wt% 용액을 첨가하였다. 생성 혼합물을 40℃ 이하로 가온하고 16 h 동안 40-43℃에서 교반한 후 반응 혼합물을 10℃로 냉각하고 T-내부를 < 20℃로 유지하면서 MTBE (2.44 L)와 20 wt% 시트르산 (1.217 g, 1.279 mol)의 사전-냉각된 (10℃) 혼합물에 부었다. 30분 격렬한 교반 후, 유기 층을 분리하고 연속하여 20 wt% 염화나트륨 (1.46 L)으로 2회 세척한 다음, 대략 1/3 부피로 농축하였다.
생성된 잔류물을 MTBE (3.90 L)로 희석하고, 물 (1.95 L)로 세척하고 대략 1/3 부피로 농축하였을 때 상당한 양의 생성물 고체가 용액으로부터 침전되었다. 생성 혼합물을 n-헵탄 (1.95 L)과 건조 상태로 2회 공비혼합하였다. n-헵탄 (877 mL) 및 MTBE (97 mL)를 첨가하고 생성 혼합물을 50℃로 가열하고, 2 h 기간에 걸쳐 15℃로 냉각한 다음, 침전물을 여과하였다. 생성 황갈색 고체를 진공 오븐 하에 건조시켜 (16 h 동안 40℃, 그 다음 48 h 동안 20℃) 714.3 g의 화합물 A-6 (2.59 mol, 96% 수율)을 수득하였다.
화합물 A-3 및 A-7
화합물 A-2 (250 g, 1.478 mol)를 실온에서 교반하면서 아세트산 (1.0 L) 에 현탁시킨 후, 물 (75 mL) 중 히드라진 (72.5 mL, 1.478 mol)을 첨가하고 내부 온도는 42℃로 증가하였다. 생성 현탁액을 70℃로 가열하고 5분 동안 그 온도에서 유지하고 그 때 현탁액이 거의 투명 혼합물로 변화한 다음 다시 흐려져 화합물 A-3을 계내에서 수득하였다.
톨루엔 (1.50 L)을 상기 혼합물에 급속히 첨가 (온도가 48℃로 강하)한 후 화합물 A-6 (408 g, 1.478 mol)을 첨가하였다. 생성 혼합물을 80℃로 가열하였을 때 상당한 양의 황색 고체가 축적되어 매우 농후한 페이스트가 생성되었다. 반응을 30분 동안 80℃에서 유지한 후, 혼합물을 50℃로 냉각하고 얼음을 넣은 물 (1.50 L)을 격렬히 교반하면서 첨가하였다. 황색 침전물을 여과에 의해 수집하고 물 (3.75 L), 물 (2.5 L), 및 IPA (2.50 L)로 세척하였다. 생성 황색 고체를 3일 동안 진공하에 (40℃) 건조시켜 464 g의 화합물 A-7 (1.09 mol, 74% 수율)을 수득하였다.
화합물 9
화합물 A-7 (326 g, 768.2 mmol)을 에탄올 (3.26 L) 및 물 (815 ml)에 현탁시킨 후 68-70℃로 가열하였다. 수소화붕소나트륨 스톡 용액 [수소화붕소나트륨 (96 g, 2.54 mol)을 실온에서 0.1M 수산화나트륨의 수용액 (815 ml, 81.50 mmol)에 첨가한 후 30분 동안 교반하여 별도로 사전에 제조됨]을 1.5시간에 걸쳐 실온에서 첨가하였을 때 반응 온도가 68-71℃로 상승했다. 완전 첨가시 혼합물을 4 h 동안68-71℃에서 가열한 후 혼합물을 40℃로 냉각하고 아세톤 (564 mL)을 30분에 걸쳐 첨가 (T-내부 40-42℃)한 후, 40-42℃에서 추가로 30분 교반하여 화합물 A-8을 계내에서 수득하였다.
수산화나트륨 (461 g, 11.52 mol)을 상기 혼합물에 첨가한 후 발열 반응이 70-73℃로 가열되었고 16시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각 후, 빙수 (3.260 L)를 혼합물에 첨가하고 이를 10℃로 냉각한 후 격렬히 교반하면서 온도를 <25℃로 유지하면서 10% 수성 HCl (4.75 L)을 서서히 첨가하였다. 격렬한 교반을 30분 동안 계속하였다. 최종 반응 혼합물을 유리 필터 상에 옮겨 부어(decant) 용매 내에 임의의 갈색 조 생성물을 회수하였다.
반응 용기에 잔류한 고체를 물 (3.26 L)에 현탁시키고 30분 동안 격렬히 교반하고 상기한 바와 같이 옮겨 부었다. 이 과정을 추가의 횟수로 반복하였다. 최종 회수된 고체를 물 (3.26 L), 이어서 IPA (2.61 L)로 세정하고 1 h 동안 공기/진공하에 및 이어서 20 h 동안 45℃에서 진공하에 건조시켜 226.7 g의 화합물 A-9 (0.507 mol, 66% 수율)를 담갈색 고체로서 수득하였다.
화합물 12
화합물 A-9 (333.8 g, 746.1 mmol)를 DMF (1.335 L)에 용해시킨 다음, 실온에서 교반하면서 DCM (1.00 L)에 희석하였다. tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (139 g, 746.1 mmol)를 첨가한 후 추가의 20분 동안 실온에서 교반하였다. EDC (143 g, 746.1 mmol)를 첨가하고 생성 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. n-헵탄 (4.01 L)을 격렬히 교반된 혼합물에 첨가한 후 온도를 25℃ 미만으로 유지하면서 물 (5.34 L)을 첨가하였다. 생성된 2상 혼합물을 추가의 30분 동안 실온에서 교반한 후 고체를 여과한 후, 물 (4.0 L) 및 이어서 n-헵탄 (2.0 L)으로 세척하였다. 고체를 18 h 동안 50℃에서 진공하에 건조시켜 478.5 g의 조 화합물 A-12를 수득하였다.
473 g의 조 화합물 A-12를 n-헵탄 (1.0 L)과 IPA (1.0 L)의 용매 혼합물에 현탁시킨 후 50℃로 가열하고 추가의 10분 동안 50℃에서 교반하였다. 현탁액을 30분의 기간에 걸쳐 20℃로 냉각한 후 추가의 30분 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, IPA (500 mL)와 n-헵탄 (500 mL)의 용매 혼합물로 세척한 다음, 5 h 동안 50℃에서 진공하에 건조시켰다. 이러한 상기 현탁 및 여과 과정을 1회 추가로 반복하였다. 403 g의 화합물 A-12 (0.655 mol, 88% 수율)를 황갈색 분말로서 수득하였다.
화합물 ER-890044
화합물 A-12 (340 g, 0.552 mol)를 DCM (510 ml, 7.926 mol)에 현탁시키고 TFA (510 ml, 6.619 mol)를 10분에 걸쳐 현탁액에 첨가하였다. 혼합물을 3 h 동안 23-27℃에서 교반하고, 그 후 혼합물을 15℃로 냉각하고 내부 온도를 20℃ 미만으로 유지하면서 물 (1700 ml, 9.436 mol)로 희석하였다. 혼합물을 n-헵탄 (3.4 L, 23.209 mol)으로 희석한 다음, 15℃로 냉각하였다. 수산화나트륨 (2.872 Kg, 7.179 mol)을 T-내부를 <25℃로 제어하면서 30분에 걸쳐 첨가하였다. 생성 혼합물을 20분 동안 20-25℃에서 교반한 다음, 여과하여 옅은 황갈색 침전물을 수집하였다. 침전물을 우선 물 (3.4 L) 및 이어서 n-헵탄 (1.36 L)과 DCM (204 ml)의 혼합물로 세정하였다. 습윤 케이크를 트레이에 옮기고 밤새 50℃에서 진공 오븐 중에서 건조시켜 248.8 g (0.483 mol, 87% 수율)의 ER-890044를 옅은 황갈색 고체로서 수득하였다.
ER-892887
ER-890044 (30.3 g, 58.8 mmol)를 디클로로메탄 및 메탄올의 1:1 용액 (120 mL)에 용해시키고 탁한(cloudy) 용액을 중간 다공도(medium porosity) 브흐너(Buchner) 깔대기를 통해 여과시켰다. 투명 여액을 키랄 HPLC 정제용으로 직접 사용하였다. 4 mL의 이 용액을 5 cm × 50 cm 키랄팩 IA 칼럼 상에 로딩하고 75 mL/min의 유량으로 헵탄, 메탄올 및 에탄올 (4 : 3 : 3 비; 0.06% 디에틸아민으로 개질)을 포함하는 이동상으로 용리하였다. ER-892887을 18.5분 내지 23.2분 사이에 수집하였으며, 한편 ER-892924를 24.2분 내지 32분 사이에 수집하였다. 30회의 이러한 주입(injection)을 수행하고 모아진 분획을 감압하에 농축하여 순수 거울상이성질체 생성물 ER-892887 (10.5 g, 20.3 mmol, > 95% ee) 및 ER-892924 (9.8 g, 19.0 mmol, > 95% ee)를 수득하였다.
무수 에틸 아세테이트 (500 mL) 중 ER-892887 (8.50 g, 16.5 mmol)의 용액에, 디옥산 (4.53 mL, 18.1 mmol) 중 4 M HCl을 10분에 걸쳐 적가하였다. 백색 침전물을 수득하였다. 생성 현탁액을 15분 동안 주위 온도에서 교반한 다음, 감압하에 여과하였다. 수집된 고체를 에틸 아세테이트 (2 × 100 mL) 및 에테르 (2 × 100 mL)로 세척하고 감압하에 건조시켜 8.29 g의 ER-892887 히드로클로라이드 염 (15.0 mmol, 91% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
ER-892930
5 mL 스크류-캡(screw-cap) 반응관에 화합물 A-9 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조산 (21.7 mg, 0.049 mmol), 3-아미노-1,2-프로판디올 (13.2 mg, 0.145 mmol), HATU (1.10 당량, 24.8 mg, 0.065 mmol), NMP (0.500 ml), 및 후니그 염기(Huenig's Base) (6.00 ul, 0.044 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 30℃에서 교반하였다. 물질을 HPLC 조건 III을 사용하여 LC/MS에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고 진공 농축하여 화합물 ER-892930을 회백색 고체 (13.3 mg, 53% 수율)로서 수득하였다.
ER-894463
5 mL 스크류-캡 반응관에 화합물 A-9 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조산 (30.0 mg, 0.067 mmol), tert-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 (74.9 mg, 0.402 mmol), HATU (50.9 mg, 0.134 mmol), NMP (0.500 ml), 및 후니그 염기 (6.00 ul, 0.044 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 30℃에서 교반하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LC/MS에 의해 물질을 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고 진공 농축하였다. 그 다음 생성된 물질을 에탄올 (1.0 ml) 및 디옥산 (1.0 ml, 4.00 mmol) 중 4.0 M HCl에 용해시키고 혼합물을 1 h 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 진공 농축하여 화합물 ER-894463을 황색 고체 (22.1 mg, 60% 수율)로서 수득하였다.
ER-895080
5 mL 스크류-캡 반응관에 화합물 A-9 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조산 (20.0 mg, 0.045 mmol), tert-부틸 2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-카르복실레이트 (18.98 mg, 0.089 mmol), HATU (18.7 mg, 0.049 mmol), NMP (0.500 ml), 및 후니그 염기 (6.00 ul, 0.044 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 30℃에서 교반하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LC/MS에 의해 물질을 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고 진공 농축하였다. 그 다음 생성된 물질을 에탄올 (1.0 ml) 및 DCM (1.0 ml, 4.00 mmol) 중 50% 트리플루오로아세트산에 용해시키고 혼합물을 1 h 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 진공 농축하여 화합물 ER-895080을 황색 고체 (2.40 mg, 8% 수율)로서 수득하였다.
실시예 ER-895080의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-886619 (30.0 mg, 0.067 mmol) 및 시판 아제티딘-3-올 (29.4 mg, 0.402 mmol)로부터 실시예 ER-894462-00을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (8.1 mg, 24%)을 수득하였다.
실시예 ER-895080의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-886619 (30.0 mg, 0.067 mmol) 및 시판 피롤리딘-3-올 (35.0 mg, 0.402 mmol)로부터 실시예 ER-894465-00을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (18.5 mg, 53%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-886619 (30.0 mg, 0.067 mmol) 및 시판 tert-부틸 피롤리딘-3-일카르바메이트 (74.9 mg, 0.402 mmol)로부터 실시예 ER-894464-01을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (32.6 mg, 88%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-886619 (30.0 mg, 0.067 mmol) 및 시판 tert-부틸 3-아미노아제티딘-1-카르복실레이트 (69.3 mg, 0.402 mmol)로부터 실시예 ER-895077-01을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (8.6 mg, 24%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-886619 (30.0 mg, 0.067 mmol) 및 시판 tert-부틸 아제티딘-3-일카르바메이트 (69.3 mg, 0.402 mmol)로부터 실시예 ER-895078-01을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (29.7 mg, 82%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-886619 (7.8 mg, 0.062 mmol) 및 시판 tert-부틸 헥사히드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카르복실레이트 (37.0 mg, 0.174 mmol)로부터 실시예 ER-895746-01을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (27.5 mg, 77%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-886619 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (35.5 mg, 0.177 mmol)로부터 실시예 ER-895748-01을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (31.3 mg, 99%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-886619 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (R)-tert-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (36.6 mg, 0.183 mmol)로부터 실시예 ER-895749-01을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (29.5 mg, 93%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-886619 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (31.7 mg, 0.158 mmol)로부터 실시예 ER-895750-01을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (30.6 mg, 97%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-886619 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (R)-tert-부틸 3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (43.5 mg, 0.217 mmol)로부터 실시예 ER-895751-01을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (31.2 mg, 98%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-886619 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (2S,5R)-tert-부틸 2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30.3 mg, 0.141 mmol)로부터 실시예 ER-895752-01을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (30.6 mg, 94%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-886619 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (2R,5R)-tert-부틸 2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (37.6 mg, 0.175 mmol)로부터 실시예 ER-895753-01을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (19.5 mg, 60%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-886619 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (1S,4S)-tert-부틸 2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (33.5 mg, 0.169 mmol)로부터 실시예 ER-895754-01을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (26.7 mg, 85%)을 수득하였다.
실시예 ER-895080의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-886619 (24.5 mg, 0.055 mmol) 및 시판 tert-부틸 (아제티딘-3-일메틸)(메틸)카르바메이트 (22.4 mg, 0.112 mmol)로부터 실시예 ER-895083-15를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (0.6 mg, 2%)을 수득하였다.
실시예 ER-895080의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-886619 (20.6 mg, 0.046 mmol) 및 시판 tert-부틸 (6-아미노스피로[3.3]헵탄-2-일)카르바메이트 (23.4 mg, 0.103 mmol)로부터 실시예 ER-895081-15를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (13.3 mg, 43%)을 수득하였다.
실시예 ER-895080의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-886619 (23.5 mg, 0.053 mmol) 및 시판 tert-부틸 2,7-디아자스피로[4.4]노난-2-카르복실레이트 (25.1 mg, 0.111 mmol)로부터 실시예 ER-895082-15를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (5.3 mg, 15%)을 수득하였다.
실시예 ER-898416을 제조하였다. 3-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조산을 (3-시아노페닐)보론산 (93 mg, 0.631 mmol) 및 5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일 트리플루오로메탄술포네이트 (100.0 mg, 0.21 mmol)로부터 및 5-(3,4-디메톡시페닐)-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (섹션 G, ER893393의 제법)의 것과 유사한 방식으로 제조하여 3-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조니트릴 (46 mg, 51% 수율)을 수득하였다. 화합물 A-9의 것과 유사한 방식으로 이렇게 제조된 물질 (75 mg, 0.175 mmol)을 가수분해하여 목적 화합물 (42 mg, 54% 수율)을 수득하였다.
실시예 D-6의 것과 유사한 방식으로 3-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조산 (24 mg, 0.054 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 (40 mg, 0.215 mmol)로부터 실시예 ER-895811을 두 단계로 제조하여 중간체 (3S)-tert-부틸 3-(3-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤즈아미도)피롤리딘-1-카르복실레이트 (7 mg, 0.011 mmol, 21% 수율)를 수득하였다. 그 다음, 이 중간체 (6 mg, 0.0097 mmol)를 실시예 ER-897560의 것과 유사한 방식으로 HCl로 처리하여 목적 생성물 ER-895811 (4.4 mg, 82% 수율)을 수득하였다.
실시예 D-6의 것과 유사한 방식으로 3-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조산 (119 mg, 0.266 mmol) 및 시판 tert-부틸 헥사히드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카르복실레이트 (226 mg, 1.06 mmol)로부터 실시예 ER-896386을 두 단계로 제조하여 중간체 tert-부틸 5-(3-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조일)헥사히드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카르복실레이트 (94 mg, 0.146 mmol, 55% 수율)를 수득하였다. 그 다음, 이 중간체를 ER-890044 (섹션 A)의 것과 유사한 방식으로 그의 구성 거울상이성질체로 분할하여 tert-부틸 5-(3-((5S,7R)-5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조일)헥사히드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카르복실레이트 (33 mg, 0.051 mmol) 및 tert-부틸 5-(3-((5R,7S)-5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조일)헥사히드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카르복실레이트 (33 mg, 0.051 mmol)를 수득하였다. 그 다음, 중간체 tert-부틸 5-(3-((5S,7R)-5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조일)헥사히드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카르복실레이트 (22 mg, 0.034 mmol)를 실시예 ER-897560의 것과 유사한 방식으로 HCl로 처리하여 목적 생성물 ER-896386 (19 mg, 96% 수율)을 수득하였다.
실시예 ER-896386에서 수득된 중간체 tert-부틸 5-(3-((5S,7R)-5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조일)헥사히드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카르복실레이트로부터 실시예 ER-896387을 제조하였다. 그 다음, 이 중간체 (16 mg, 0.025 mmol)를 실시예 ER-897560의 것과 유사한 방식으로 HCl로 처리하여 목적 생성물 ER-896387 (14 mg, 99% 수율)을 수득하였다.
실시예 D-6의 것과 유사한 방식으로 3-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조산 (25 mg, 0.056 mmol) 및 시판 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (42 mg, 0.224 mmol)로부터 실시예 ER-896388을 두 단계로 제조하여 중간체 tert-부틸 4-(3-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조일)피페라진-1-카르복실레이트 (18 mg, 0.029 mmol, 52% 수율)를 수득하였다. 그 다음, 이 중간체 (16 mg, 0.026 mmol)를 실시예 ER-897560의 것과 유사한 방식으로 HCl로 처리하여 목적 생성물 ER-896388 (14 mg, 98% 수율)을 수득하였다.
실시예 D-6의 것과 유사한 방식으로 화합물 3-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조산 (25 mg, 0.056 mmol) 및 시판 tert-부틸 ((3R,5S)-5-메틸피페리딘-3-일)카르바메이트 (48 mg, 0.224 mmol)로부터 실시예 ER-896389를 두 단계로 제조하여 중간체 tert-부틸 ((3R,5S)-1-(3-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조일)-5-메틸피페리딘-3-일)카르바메이트 (22 mg, 0.034 mmol, 61% 수율)를 수득하였다. 그 다음, 이 중간체 (20 mg, 0.031 mmol)를 실시예 ER-897560의 것과 유사한 방식으로 HCl로 처리하여 목적 생성물 ER-896389 (17.5 mg, 97% 수율)를 수득하였다.
합성 실시예 - 섹션 B
실시예 2 (ER-885681의 제조)
화합물 A-8의 것과 유사한 방식으로 시판 tert-부틸 4-시아노피페리딘-1-카르복실레이트로부터 화합물 B-1을 제조하였다 (56 g, 최종 단계에 대해 70% 수율).
트리플루오로아세트산 (15 mL)을 메틸렌 클로라이드 (15 mL) 중 화합물 B-1 (7.86 g, 15.4 mmol)의 용액에 첨가하고 혼합물을 실온에서 교반하였다. 15분 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축하고, 잔류물을 MTBE와 포화 NaHCO3에 분배하였다. 층을 분리하고 수성 용액을 디클로로메탄 (2x)으로 추가로 추출하였다. 합해진 추출물을 염수로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고 감압하에 농축하여 ER-887084를 백색 고체 (4.28 g. 68%)로서 수득하였다.
화합물 ER-885681 및 ER-885682
화합물 ER-887084 (1.19 g, 2.91 mmol)를 메탄올 (11 mL)에 용해시키고 0.05% 디에틸아민으로 개질된 19 mL의 1 : 1 에탄올 - 헵탄 용액으로 추가로 희석하였다. 1 mL의 이 용액을 2 cm × 25 cm 키랄셀 OD 칼럼 상에 로딩하고 15 mL/min의 유량으로 1 : 1 헵탄 - 에탄올 (0.05% 디에틸아민 함유)을 포함하는 이동상으로 용리하였다. 화합물 ER-885681을 7.3분 내지 9.6분 사이에 수집하였으며, 한편 화합물 ER-885682를 9.8분 내지 14.5분 사이에 수집하였다. 33회의 이러한 주입을 수행하고 모아진 분획을 감압하에 농축하여 순수 거울상이성질체 생성물 ER-885681 (571 mg, 96% 수율, > 95% ee) 및 화합물 ER-885682 (ER-887275) (574 mg, 96% 수율, > 95% ee)를 수득하였다.
실시예 ER-885454 및 ER-885455
반응식 I에 개설되고 화합물 A-8 (ER-890044)의 제조에 의해 예시된 일반 절차를 사용하여 화합물 ER-880894를 시판 4-시아노피리딘 (450 g, 4.32 mol)으로부터 제조하여 ER-880894 (205 g, 12% 전체 수율)를 수득하였다.
ER-890044의 것과 유사한 방식으로 (1 : 1 에탄올-헵탄을 이동상으로서 사용한 것은 제외) 키랄 HPLC에 의해 ER-880894 (200 mg, 0.495 mmol)를 분할하여 ER-885454 (96 mg, 48% 수율) 및 ER-885455 (91.2 mg, 46% 수율)를 수득하였다.
실시예 ER-886622 및 ER-886623
화합물 ER-880894의 것과 유사한 방식으로 시판 4-시아노-2-메톡시피리딘 ( mg, mmol)으로부터 실시예 ER-886434를 제조하여 ER-886434 (127 mg, 62% 수율)를 수득하였다.
MS (M+H+) 435.6
ER-880894의 것과 유사한 방식으로 키랄 HPLC에 의해 분할하여 ER-886622 (21.5 mg, 44% 수율, > 95% ee) 및 ER-886623 (20.2 mg, 41% 수율, > 95% ee)을 수득하였다.
합성 실시예 - 섹션 C
ER-890035의 제조
화합물 C-3
아세트산 (60 mL) 중 화합물 C-1 (9.91 g, 100 mmol) 및 화합물 C-2 (27.6 g, 100 mmol)의 용액을 80℃에서 가열하였다. 황색 침전물이 형성되기 시작함에 따라 투명한 짙은 오렌지색 반응 혼합물이 점진적으로 밝게 변했다. 30분 이내에, 반응 혼합물이 농후한 황색 슬러리로 변했다. 혼합물을 또 다른 15분 동안 80℃에서 유지하였다. 혼합물을 실온으로 냉각하고, IPA를 첨가하였다. 현탁액을 대략 75℃로 가열한 다음, 실온으로 냉각하였다. 황색 침전물을 여과하고, 고체를 추가의 IPA로 세척하고, 감압하에 건조시켰다. 화합물 C-3을 담황색 고체로서 수득하였다 (30.9 g, 91% 수율).
화합물 C-4
화합물 C-3 (9.9 g, 29.2 mmol)을 N,N-디이소프로필에틸아민 (25.4 mL) 및 1,2-디클로로에탄 (100 mL)에 용해시키고 혼합물을 실온에서 교반하였다. 이 용액에 N-페닐비스(트리플루오로메탄술폰이미드) (20.8 g, 58.2 mmol)를 첨가하고 혼합물을 환류 가열하였다. 45분 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 감압하에 농축하여 오렌지 브라운색(orange brown) 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 구배 용리 (헥산 중 10 내지 40% EtOAc)를 사용하여 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 C-4를 황색 고체 (7.10 g, 52% 수율)로서 수득하였다. 소량의 N-술포닐화 위치이성질체가 반응에서 형성되었지만, 단리되지 않았다.
화합물 C-5
에탄올 (29.9 mL) 중 화합물 C-4 (2.24 g, 0.00475 mol)의 용액에, 수소화붕소나트륨 (360 mg, 9.50 mol)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 교반하였다. 30분 후, 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 용액과 물의 1 : 1 혼합물에 주의깊게 부었다. 수용액을 디클로로메탄 (3x)으로 추출하고; 합해진 추출물을 염수로 세척하고, 건조시키고 감압하에 농축하였다. 조 생성물을 구배 용리를 사용하여 실리카겔 크로마토그래피 (헵탄 중 0 내지 50% EtOAc)에 의해 정제하여 화합물 C-5를 백색 고체 (1.94 g, 86% 수율)로서 수득하였다.
화합물 C-6 및 C-7
화합물 C-5 (900 mg, 1.91 mmol)를 메탄올 (10 mL)에 용해시키고 용액을 에탄올 (5 mL) 및 헵탄 (5 mL)으로 추가로 희석하였다. 1 mL의 이 용액을 2 cm × 25 cm 키랄셀® OD 칼럼에 로딩하고 15 mL/min의 유량으로 1 : 1 헵탄 - 에탄올을 포함하는 이동상으로 용리하였다. 화합물 C-6 (ER-887274)을 6.0분 내지 7.7분 사이에 수집하였으며, 한편 화합물 C-7 (ER-887275)을 8.75분 내지 11.5분 사이에 수집하였다. 17회의 이러한 주입을 수행하고 모아진 분획을 감압하에 농축하여 순수 거울상이성질체 생성물 화합물 C-6 (ER-887274) (683 mg, 1.44 mmol, > 95% ee) 및 화합물 C-7 (ER-887275) (671 mg, 1.41 mmol, > 95% ee)을 수득하였다.
실시예 ER-890035. 15 mm × 75 mm 스크류캡 관에 (3-(5-메틸-1,2,4-옥사디아졸-3-일)페닐)보론산 (36.1 mg, 0.177 mmol), 1,4-디옥산 (80.0 uL, 0.006 mmol) 중 0.0750 M의 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0), 1,4-디옥산 (420.0 uL, 0.0631 mmol) 중 0.150 M 5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일 트리플루오로메탄술포네이트 (C-5), 및 물 (60.0 uL, 120 mmol) 중 2.00 M의 탄산나트륨을 첨가하였다. 반응 용기를 질소로 퍼징하고 밀폐시켰다. 바이알을 진탕시키고 밤새 85℃에서 알루미늄 블록에서 가열하였다. 혼합물에 1.0 mL의 포화 수성 중탄산나트륨을 첨가한 다음, 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 x 2.0 mL)로 추출하였다. 합해진 유기층을 진공 농축하였다. 잔존 잔류물을 500 μL의 DMSO에 용해시켰다. 물질을 아세토니트릴:물 (포름산) 구배로 엑스테라(XTerra) C8 19x100 mm 칼럼 상에서 LC/MS에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고 진공 농축하여 화합물 ER-890035를 황색 고체, 2.9 mg (9.5% 수율)로서 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-6 (250 mg, 0.526 mmol) 및 시판 (1,4-디메틸-1H-인다졸-5-일)보론산 (200 mg, 1.05 mmol)으로부터 실시예 ER-893972를 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 생성물 (159 mg, 64% 수율)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 실시예 ER-892893을 화합물 C-6 (250 mg, 0.526 mmol) 및 시판 (4-((3-히드록시프로필)카르바모일)페닐)보론산 (235 mg, 1.05 mmol)으로부터 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 생성물 (166 mg, 63% 수율)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-6 (250 mg, 0.526 mmol) 및 시판 (4-카르바모일-2-플루오로페닐)보론산 (192 mg, 1.05 mmol)으로부터 실시예 ER-892892를 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 생성물 (179 mg, 73% 수율)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-6 (250 mg, 0.526 mmol) 및 시판 (4-카르바모일-2-플루오로페닐)보론산 (192 mg, 1.05 mmol)으로부터 실시예 ER-892892를 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 생성물 (179 mg, 73% 수율)을 수득하였다. 실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-6 (250 mg, 0.526 mmol) 및 시판 (4-메틸-1H-인다졸-5-일)보론산 (185 mg, 1.05 mmol)으로부터 실시예 ER-894680을 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 생성물 (90 mg, 37% 수율)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-6 (20 mg, 0.042 mmol) 및 시판 (3-아세트아미도페닐)보론산 (22.6 mg, 0.126 mmol)으로부터 실시예 ER-887734를 제조하였다. LCMS에 의해 정제하여 (Rt 7.45 min, 조건 II) 목적 생성물 (9.7 mg, 50% 수율)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-6 (20 mg, 0.042 mmol) 및 시판 (3-아세트아미도페닐)보론산 (20.3 mg, 0.126 mmol)으로부터 실시예 ER-887738을 제조하였다. LCMS에 의해 정제하여 (Rt 8.58 min, 조건 II) 목적 생성물 (6.5 mg, 35% 수율)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-6 (200 mg, 0.421 mmol) 및 시판 (3-클로로-4-(메틸카르바모일)페닐)보론산 (180 mg, 0.843 mmol)으로부터 실시예 ER-892889를 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 생성물 (88 mg, 42% 수율)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-6 (250 mg, 0.526 mmol) 및 시판 (4-카르바모일-3-클로로페닐)보론산 (210 mg, 1.05 mmol)으로부터 실시예 ER-892890을 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 생성물 (138 mg, 55% 수율)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-6 (40 mg, 0.084 mmol) 및 시판 (1,6-디메틸-1H-인다졸-5-일)보론산 (51 mg, 0.268 mmol)으로부터 실시예 ER-893961을 제조하였다. LCMS에 의해 정제하여 목적 생성물 (8.9 mg, 22% 수율)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-6 (40 mg, 0.084 mmol) 및 시판 5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-벤조[d]이미다졸-2(3H)-온 (80.55 mg, 0.309 mmol)으로부터 실시예 ER-893961을 제조하였다. LCMS에 의해 정제하여 목적 생성물 (4.3 mg, 11% 수율)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (50.0 mg, 0.105 mmol) 및 시판 (4-카르바모일페닐)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-889871을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (12.8 mg, 27%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (50.0 mg, 0.105 mmol) 및 시판 (4-(히드록시메틸)페닐)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-889874를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (7.8 mg, 17%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) 및 시판 (4-카르바모일-2-플루오로페닐)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-890017을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (13.4 mg, 46%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) 및 시판 (4-카르바모일-3-플루오로페닐)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-890019를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (11.7 mg, 40%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) 및 시판 (4-카르바모일-3-클로로페닐)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-890020을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (14 mg, 46%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) 및 시판 (4-((3-히드록시프로필)카르바모일)페닐)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-890024를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (11.5 mg, 36%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) 및 시판 (4-(벤질카르바모일)-3-클로로페닐)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-890027을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (12.3 mg, 34%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) 및 시판 (3-클로로-4-(이소프로필카르바모일)페닐)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-890028을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (18.1 mg, 55%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) 및 시판 (3-클로로-4-(메틸카르바모일)페닐)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-890029를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (15.4 mg, 49%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) 및 시판 (3-(5-메틸-1,2,4-옥사디아졸-3-일)페닐)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-890035를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (2.9 mg, 9%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) 및 시판 (2-옥소-2,3-디히드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-일)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-890043을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (5.6 mg, 19%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) 및 시판 (4-(피페라진-1-카르보닐)페닐)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-890044를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (13.7 mg, 42%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) 및 시판 (3-(1H-피라졸-1-일)페닐)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-890050-00을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (15.4 mg, 52%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) 및 시판 (6-(메틸카르바모일)피리딘-3-일)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-891029-00을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (9 mg, 31%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) 및 시판 (1,7-디메틸-1H-인다졸-5-일)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-891043을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (18 mg, 61%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) 및 시판 (1,4-디메틸-1H-인다졸-5-일)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-891044를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (14.3 mg, 48%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) 및 시판 (1,6-디메틸-1H-인다졸-5-일)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-891047을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (18.1 mg, 61%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) 및 시판 (4-(시클로프로필카르바모일)-3-플루오로페닐)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-891058을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (13.8 mg, 43%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) 및 시판 (4-(tert-부틸카르바모일)-3-플루오로페닐)보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-892908을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (7 mg, 21%)을 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-5 (32.6 mg, 0.069 mmol) 및 시판 (1H-인다졸-4-일)보론산 (2.70 당량)으로부터 실시예 ER-892931을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (5.5 mg, 18%)을 수득하였다.
섹션 C.1 (브로마이드로부터 교차-커플링에 의해 제조된 화합물)
화합물 C-9
아세트산 (20 mL) 중 3-아미노-5-브로모피라졸 C-8 (3.24 g, 20 mmol)과 디케톤 C-2 (5.52 g, 20 mmol)의 혼합물을 80℃로 가열하였다. 1 h 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, IPA로 희석하였다. 황색의 침전물이 혼합물에서 형성되었으며, 이를 여과에 의해 수집하였다. 방치시, 추가 침전물이 모액에서 형성되었다. 합해진 크롭(crop)을 수집하고 진공하에 건조시켜 3.89 g의 화합물 C-9를 황색 고체 (9.67 mmol, 48% 수율)로서 수득하였다.
화합물 C-10
화합물 C-9 (1.1 g, 2.74 mmol)를 에탄올 (5 mL)에 현탁시키고 수소화붕소나트륨 (155 mg, 4.1 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 1.5 h 동안 실온에서 교반하였다. 이 시점에서 추가 수소화붕소나트륨 (155 mg)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 또 다른 2 h 동안 교반하였다. 아세트산 (1.56 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭하고 생성 수성 용액을 포화 NaHCO3 용액에 부었다. 침전된 백색 고체를 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고, 감압하에 건조시켜 667 mg의 화합물 C-10을 회백색 고체 (1.64 g, 60% 수율)로서 수득하였다.
실시예 ER-890035의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-10 (37.0 mg, 0.091 mmol) 및 시판 이소퀴놀린-5-일 보론산 (2.50 당량)으로부터 실시예 ER-889925를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (9.9 mg, 24%)을 수득하였다.
합성 실시예 - 섹션 D
5-(5-3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜리노니트릴 (D-3)
바이알에 5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피콜리노니트릴 (1.95 g, 8.48 mmol), 디시클로헥실(2',6'-디메톡시-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (0.261 g, 0.636 mmol), 5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일 트리플루오로메탄술포네이트 (2.00 g, 4.24 mmol), 포타슘 아세테이트 (0.833 g, 8.49 mmol) 및 팔라듐(II) 아세테이트 (0.095 g, 0.424 mmol)를 첨가하였다. 바이알 및 내용물을 질소로 플러싱한 후, 1:1 톨루엔/에탄올 (20 mL)의 탈기 용액을 첨가하고, 바이알을 밀폐시키고 2일 동안 80℃로 가열하였다. 에틸 아세테이트를 첨가하고 생성 담황색 침전물을 여과에 의해 수집하고 고 진공하에 건조시켰다 (1.13 g, 63%). 이러한 물질을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
5-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜리노니트릴 (D-4)
에탄올 (23.0 mL) 중 5-(5-3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜리노니트릴 (1.03 g, 2.43 mmol)의 혼합물에 수소화붕소나트륨 (0.276 g, 7.29 mmol)을 첨가하고; 반응 혼합물을 2 h 동안 환류 가열한 후 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 밤새 교반하였다. 아세트산 (1.40 mL), 이어서 1.0 N 염산 용액 (48.6 mL)을 첨가하고 혼합물을 회전 증발을 사용하여 농축하였다. 디클로로메탄을 잔류물에 첨가하고 여과하였다. 회전 증발에 의해 여액을 농축하여 조 생성물을 담갈색 발포체 (0.694 g, 66%)로서 수득하였다. 이러한 물질을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
5-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜린산 (D-5)
5-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜리노니트릴 (0.694 g, 1.62 mmol)의 현탁액에 물 (2.02 mL) 중 4.00 M 수산화나트륨 용액을 첨가하였다. 생성 혼합물을 3 h 동안 환류 가열하였다. l.0 N 염산 용액 (11.3 mL)을 첨가하고 담갈색 침전물을 여과하고, 다량의 물로 세정하고, 30분 동안 공기/진공하에, 및 그 다음 48 h 고 진공하에 건조시켜 담갈색 고체 (0.535 g, 74%)를 수득하였다. 이러한 물질을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
Tert-부틸 4-(5-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜리노일)피페라진-1-카르복실레이트 (D-6)
DMF (4.0 mL) 중 5-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜린산 (458 mg, 1.02 mmol)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (535 μl, 3.06 mmol) 및 HATU (427 mg, 1.12 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 1 h 교반 후, tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (209 mg, 1.12 mmol)를 첨가하고 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 물을 첨가하고 생성 담갈색 침전물을 여과에 의해 수집하였다 (0.5385 g). 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (15% 내지 100% 에틸 아세테이트/헵탄)하여 tert-부틸 4-(5-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜리노일)피페라진-1-카르복실레이트 (332 mg, 54%)를 담황색 고체로서 수득하였다
(5-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피리딘-2-일)(피페라진-1-일)메탄온 (ER-897560)
ER-890044 (섹션 A)의 것과 유사한 방식으로 화합물 D-6 (66 mg, 0.107 mmol)을 그의 구성 거울상이성질체로 분할하여 tert-부틸 4-(5-((5S,7R)-5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜리노일)피페라진-1-카르복실레이트 (9.2 mg, 14% 수율) 및 tert-부틸 4-(5-((5R,7S)-5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜리노일)피페라진-1-카르복실레이트 (9.2 mg, 14% 수율)를 수득하였다.
에탄올 (4 mL) 중 tert-부틸 4-(5-((5S,7R)-5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜리노일)피페라진-1-카르복실레이트 (90.0 mg, 0.146 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 (1.84 mL) 중 4.0 M HCl을 첨가하였다. 반응물을 1 h 동안 40℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 회전 증발에 의해 농축하고 톨루엔과 공비혼합하여 ER-897560을 담황색 고체 (91 mg, 106% 수율)로서 수득하였다.
실시예 D-4의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-9 (500 mg, 1.243 mmol) 및 시판 tert-부틸 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-5,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트 (461 mg, 1.492 mmol)로부터 실시예 ER-897097을 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 Boc-보호된 ER-897097 (460 mg, 73% 수율)을 수득하였다. ER-887084 (섹션 B)의 것과 유사한 방식으로 이러한 Boc-보호된 생성물 (100 mg, 0.197 mmol)의 탈보호를 수행하여 ER-897097 (80 mg, 99% 수율)을 수득하였다. (LC-MS: Rt 1.49 min, (M+1)+ 409.08, 조건 II하에)
실시예 ER-897269
ER-890044 (섹션 A)의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-897097 (94 mg, 0.229 mmol)을 그의 구성 거울상이성질체로 분할하여 이성질체 ER-897269 중 하나 (15 mg, 16% 수율, > 95% ee)를 수득하였다.
실시예 D-4의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-9 (500 mg, 1.243 mmol) 및 시판 tert-부틸 4-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트 (563 mg, 1.492 mmol)로부터 실시예 ER-897105를 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 Boc-보호된 ER-897105 (312 mg, 44% 수율)를 수득하였다. ER-887084 (섹션 B)의 것과 유사한 방식으로 이러한 Boc-보호된 생성물 (100 mg, 0.173 mmol)을 탈보호하여 ER-897105 (71 mg, 86% 수율)를 수득하였다.
LC-MS: Rt 1.48 min, (M+1)+ 477.09, 조건 II하에.
실시예 ER-897214 및 ER-897215
ER-890044 (섹션 A)의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-897105 (50 mg, 0.105 mmol)을 그의 구성 거울상이성질체로 분할하여 ER-897214 (19 mg, 39% 수율, > 95% ee) 및 ER-897215 (19 mg, 39% 수율, > 95% ee)를 수득하였다.
실시예 D-4의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-4 (500 mg, 1.061 mmol) 및 시판 tert-부틸 4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리미딘-2-일)피페라진-1-카르복실레이트 (621 mg, 1.591 mmol)로부터 실시예 ER-897381을 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 Boc-보호된 ER-897381 (311 mg, 50% 수율)을 수득하였다. ER-887084 (섹션 B)의 것과 유사한 방식으로 이러한 Boc-보호된 생성물 (100 mg, 0.17 mmol)의 탈보호를 수행하여 ER-897381 (75 mg, 90% 수율)을 수득하였다. LC-MS: Rt 1.52 min, (M+1)+ 489.21, 조건 II하에.
실시예 ER-897714 및 ER-897715
ER-890044 (섹션 A)의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-897381 (71 mg, 0.134 mmol)을 그의 구성 거울상이성질체로 분할하여 ER-897714 (27 mg, 38% 수율, > 95% ee) 및 ER-897716 (30 mg, 42% 수율, > 95% ee)을 수득하였다.
실시예 D-4의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-4 (500 mg, 1.061 mmol) 및 시판 tert-부틸 4-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-일)피페라진-1-카르복실레이트 (619 mg, 1.591 mmol)로부터 실시예 ER-897405를 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 Boc-보호된 ER-897405 (311 mg, 65% 수율)를 수득하였다. ER-887084 (섹션 B)의 것과 유사한 방식으로 이러한 Boc-보호된 생성물 (100 mg, 0.17 mmol)의 탈보호를 수행하여 ER-897405 (72 mg, 87% 수율)를 수득하였다. LC-MS: Rt 1.45 min, (M+1)+ 489.04, 조건 II하에.
실시예 ER-897716 및 ER-897717
ER-890044 (섹션 A)의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-897405 (70 mg, 0.143 mmol)를 그의 구성 거울상이성질체로 분할하여 ER-897716 (23 mg, 33% 수율) 및 ER-897717 (23 mg, 33% 수율)을 수득하였다.
실시예 D-4의 것과 유사한 방식으로 화합물 C-4 (438 mg, 0.93 mmol) 및 시판 tert-부틸 (1-(5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-일)피페리딘-4-일)카르바메이트 (250 mg, 0.62 mmol)로부터 실시예 ER-897765를 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 Boc-보호된 ER-897765 (161 mg, 43% 수율)를 수득하였다. ER-887084 (섹션 B)의 것과 유사한 방식으로 이러한 Boc-보호된 생성물 (161 mg, 0.267 mmol)의 탈보호를 수행하여 ER-897765 (131 mg, 98% 수율)를 수득하였다.
실시예 D-6의 것과 유사한 방식으로 화합물 D-5 (19 mg, 0.042 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 (32 mg, 0.169 mmol)로부터 실시예 ER-895809를 두 단계로 제조하여 중간체 (3S)-tert-부틸 3-(5-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜린아미도)피롤리딘-1-카르복실레이트 (19 mg, 0.031 mmol, 72% 수율)를 수득하였다. 그 다음, 이 중간체 (17 mg, 0.028 mmol)를 실시예 ER-897560의 것과 유사한 방식으로 HCl로 처리하여 목적 생성물 ER-895809 (16 mg, 98% 수율)를 수득하였다.
실시예 D-6의 것과 유사한 방식으로 화합물 D-5 (19 mg, 0.042 mmol) 및 시판 (R)-tert-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 (32 mg, 0.169 mmol)로부터 실시예 ER-895810을 두 단계로 제조하여 중간체 (3R)-tert-부틸 3-(5-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜린아미도)피롤리딘-1-카르복실레이트 (24 mg, 0.039 mmol, 92% 수율)를 수득하였다. 그 다음, 이 중간체 (22 mg, 0.036 mmol)를 실시예 ER-897560의 것과 유사한 방식으로 HCl로 처리하여 목적 생성물 ER-895810 (21 mg, 100% 수율)을 수득하였다. 정확한 질량 계산치: 516.21. 관찰치: 517.5.
실시예 D-6의 것과 유사한 방식으로 화합물 D-5 (15 mg, 0.033 mmol) 및 시판 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (25 mg, 0.134 mmol)로부터 실시예 ER-896133을 두 단계로 제조하여 중간체 tert-부틸 4-(5-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜리노일)피페라진-1-카르복실레이트 (6 mg, 0.009 mmol, 29% 수율)를 수득하였다. 그 다음, 이 중간체 (6 mg, 0.009 mmol)를 실시예 ER-897560의 것과 유사한 방식으로 HCl로 처리하여 목적 생성물 ER-896133 (5.3 mg, 92% 수율)을 수득하였다.
실시예 D-6의 것과 유사한 방식으로 화합물 D-5 (15 mg, 0.033 mmol) 및 시판 tert-부틸 4-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (27 mg, 0.134 mmol)로부터 실시예 ER-896134를 두 단계로 제조하여 중간체 tert-부틸 4-(5-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜린아미도)피페리딘-1-카르복실레이트 (7 mg, 0.011 mmol, 33% 수율)를 수득하였다. 그 다음, 이 중간체 (7 mg, 0.011 mmol)를 실시예 ER-897560의 것과 유사한 방식으로 HCl로 처리하여 목적 생성물 ER-896134 (5.8 mg, 87% 수율)을 수득하였다.
실시예 D-6의 것과 유사한 방식으로 화합물 D-5 (15 mg, 0.033 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (27 mg, 0.134 mmol)로부터 실시예 ER-896135를 두 단계로 제조하여 중간체 (3S)-tert-부틸 3-(5-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜린아미도)피페리딘-1-카르복실레이트 (7 mg, 0.011 mmol, 33% 수율)를 수득하였다. 그 다음, 이 중간체 (7 mg, 0.011 mmol)를 실시예 ER-897560의 것과 유사한 방식으로 HCl로 처리하여 목적 생성물 ER-896135 (6.5 mg, 97% 수율)을 수득하였다.
실시예 D-6의 것과 유사한 방식으로 화합물 D-5 (15 mg, 0.033 mmol) 및 시판 (R)-tert-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (27 mg, 0.134 mmol)로부터 실시예 ER-896136을 두 단계로 제조하여 중간체 (3R)-tert-부틸 3-(5-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜린아미도)피페리딘-1-카르복실레이트 (7 mg, 0.011 mmol, 33% 수율)를 수득하였다. 그 다음, 이 중간체 (7 mg, 0.011 mmol)를 실시예 ER-897560의 것과 유사한 방식으로 HCl로 처리하여 목적 생성물 ER-896136 (6.1 mg, 91% 수율)을 수득하였다.
실시예 D-6의 것과 유사한 방식으로 화합물 D-5 (15 mg, 0.033 mmol) 및 시판 프로판-2-아민 (8 mg, 0.134 mmol)으로부터 실시예 ER-896137을 제조하여 목적 생성물 ER-896137 (5 mg, 31% 수율)을 수득하였다.
실시예 D-5의 것과 유사한 방식으로 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜린산을 제조하였다 (101 mg, 29% 수율).
실시예 D-6의 것과 유사한 방식으로 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜린산 (25 mg, 0.056 mmol) 및 시판 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (31 mg, 0.167 mmol)로부터 실시예 ER-897034를 두 단계로 제조하여 중간체 tert-부틸 4-(4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜리노일)피페라진-1-카르복실레이트 (15 mg, 0.024 mmol, 44% 수율)를 수득하였다. 그 다음, 이 중간체 (13 mg, 0.021 mmol)를 실시예 ER-897560의 것과 유사한 방식으로 HCl로 처리하여 목적 생성물 ER-897034 (12.2 mg, 98% 수율)를 수득하였다.
실시예 D-6의 것과 유사한 방식으로 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜린산 (25 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (33 mg, 0.167 mmol)로부터 실시예 ER-897036을 두 단계로 제조하여 중간체 (3S)-tert-부틸 3-(4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜린아미도)피페리딘-1-카르복실레이트 (15 mg, 0.024 mmol, 43% 수율)를 수득하였다. 그 다음, 이 중간체 (13 mg, 0.021 mmol)를 실시예 ER-897560의 것과 유사한 방식으로 HCl로 처리하여 목적 생성물 ER-897036 (12 mg, 96% 수율)을 수득하였다.
실시예 D-6의 것과 유사한 방식으로 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜린산 (25 mg, 0.056 mmol) 및 시판 tert-부틸 4-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (33 mg, 0.167 mmol)로부터 실시예 ER-897037을 두 단계로 제조하여 중간체 tert-부틸 4-(4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피콜린아미도)피페리딘-1-카르복실레이트 (14 mg, 0.022 mmol, 40% 수율)를 수득하였다. 그 다음, 이 중간체 (13 mg, 0.021 mmol)를 실시예 ER-897560의 것과 유사한 방식으로 HCl로 처리하여 목적 생성물 ER-897037 (11 mg, 90% 수율)을 수득하였다.
합성 실시예 - 섹션 F
화합물 A-7의 것과 유사한 방식으로 4-(5-아미노-1H-피라졸-3-일)벤조니트릴 (화합물 A-2; 5.31 g, 31.4 mmol) 및 시판 1-(3,4-디메톡시페닐)-4,4-디플루오로부탄-1,3-디온 (8.1 g, 31.4 mmol)에 의해 화합물 F-1 (9.84 g, 77% 수율)을 수득하였다. MS (M+H+) 407.3.
화합물 A-8의 것과 유사한 방식으로 F-1 (9.8 g, 24.1 mmol)의 NaBH4 환원에 의해 화합물 F-2 (9.8 g, 99% 수율)를 수득하였다.
화합물 A-9의 것과 유사한 방식으로 수성 NaOH를 사용하여 F-1 (8.94 g, 21.8 mmol)의 가수분해에 의해 화합물 F-3 (9.4 g, 100% 수율)을 수득하였다
5 mL 스크류-캡 반응관에 화합물 F-3 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조산 (1.99 g, 4.64 mmol), tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (1.05 g, 5.61 mmol), HATU (2.14 g, 5.62 mmol), DMF (10.0 ml), 및 후니그 염기 (0.815 ml, 4.67 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 30℃에서 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물로 세척하고, 0.1N 수성 염산으로 세척하고, 수성 중탄산나트륨으로 세척하고, 염수로 세척하고, 수성 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 농축하여 갈색 고체를 수득하였다. 헵탄:에틸 아세테이트 구배 0-90%로 플래시 크로마토그래피에 의해 물질을 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고 진공 농축하여 회백색 고체를 수득하였다. 그 다음, 생성 고체를 에탄올 (10.0 ml) 및 디옥산 (10.0 ml, 40.00 mmol) 중 4.0 M HCl에 용해시키고 혼합물을 1 h 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 진공 농축하여 화합물 ER-894466을 황색 고체 (1.91 g, 77% 수율)로서 수득하였다.
ER-890044와 유사한 방식으로 HPLC에 의해 ER-894466 (1.91 g, 3.59 mmol)을 키랄 분해하여 ER-895302 (538 mg, 56% 수율, > 95% ee) 및 ER-895303 (671 mg, 70% 수율, > 95% ee)을 수득하였다.
화합물 A-14의 것과 유사한 방식으로 5-아미노-1H-피라졸-3-올 (9.91 g, 100 mmol) 및 1-(3,4-디메톡시페닐)-4,4-디플루오로부탄-1,3-디온 (25.8 g, 100 mmol)에 의해 화합물 F-4 7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-올 (30.6 g, 95 mmol, 95% 수율)을 수득하였다.
0℃에서 DMF (5.00 ml) 및 THF (25.0 ml) 중의 화합물 F-4 7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-올 (3.21 g, 9.99 mmol)의 현탁액에 수소화나트륨 (0.480 g, 11.99 mmol)을 적은 분량으로 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 0℃에서 교반하였다. 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-(트리플루오로메틸)술포닐 메탄술폰아미드 (4.28 g, 11.99 mmol)를 적은 분량으로 첨가하고 혼합물을 실온이 되게 하였다. 1 h 후, 반응 혼합물을 0.1 N HCl 용액에 부어 백색 침전물을 생성시키고, 이를 여과하고 물로 세척하였다. 조 생성물을 IPA에 현탁시키고, ~ 70℃로 가열하고 실온으로 냉각하였다. 수득된 백색 침전물을 추가의 IPA로 세척하고, 감압하에 건조시켜 화합물 F-5 7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일 트리플루오로메탄술포네이트를 백색 고체 (2.85 g, 6.29 mmol, 62.9% 수율)로서 수득하였다.
화합물 A-16의 것과 유사한 방식으로 화합물 F-5 (35.0 g, 77.2 mmol)의 NaBH4 환원에 의해 화합물 F-6 (27.2 g, 77% 수율)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-895305 (25.0 mg, 0.058 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (35.2 mg, 0.177 mmol)로부터 실시예 ER-895088-01을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (9.3 mg, 29%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-895305 (25.0 mg, 0.058 mmol) 및 시판 (R)-tert-부틸 피롤리딘-3-일카르바메이트 (36.5 mg, 0.196 mmol)로부터 실시예 ER-895116을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (16 mg, 52%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-895305 (25.0 mg, 0.058 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 피롤리딘-3-일카르바메이트 (36.7 mg, 0.197 mmol)로부터 실시예 ER-895089를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (7.1 mg, 23%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-895305 (25.0 mg, 0.058 mmol) 및 시판 (1S,4S)-tert-부틸 2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (38.6 mg, 0.196 mmol)로부터 실시예 ER-895090을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (18.1 mg, 57%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-895305 (25.6 mg, 0.060 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 (31.5 mg, 0.169 mmol)로부터 실시예 ER-895115를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (3.5 mg, 11%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-895305 (26.2 mg, 0.061 mmol) 및 시판 tert-부틸 헥사히드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카르복실레이트 (32.9 mg, 0.155 mmol)로부터 실시예 ER-895745를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (18.1 mg, 53%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-2-플루오로벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (21.0 mg, 0.113 mmol)로부터 실시예 ER-895091-01을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (2.5 mg, 8%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-2-플루오로벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 tert-부틸 4-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (22.0 mg, 0.110 mmol)로부터 실시예 ER-895092를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (5.2 mg, 16%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-2-플루오로벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (22.0 mg, 0.110 mmol)로부터 실시예 ER-895093을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (10.3 mg, 32%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-2-플루오로벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (R)-tert-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (22.0 mg, 0.110 mmol)로부터 실시예 ER-895094를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (7.4 mg, 23%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-2-플루오로벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (2S,5R)-tert-부틸 2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (24.0 mg, 0.113 mmol)로부터 실시예 ER-895096을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (13.9 mg, 43%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-2-플루오로벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (R)-tert-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 (21.0 mg, 0.113 mmol)로부터 실시예 ER-895097을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (17.3 mg, 56%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-2-플루오로벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 (21.0 mg, 0.113 mmol)로부터 실시예 ER-895098을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (18.5 mg, 60%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-2-플루오로벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (1S,4S)-tert-부틸 2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (22.0 mg, 0.112 mmol)로부터 실시예 ER-895101을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (9 mg, 28%)을 수득하였다.
실시예 ER-895080의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-2-플루오로벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 tert-부틸 3-아미노아제티딘-1-카르복실레이트 (19.0 mg, 0.110 mmol)로부터 실시예 ER-895099를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (14.1 mg, 41%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-플루오로벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (21.0 mg, 0.113 mmol)로부터 실시예 ER-895102를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (17.2 mg, 56%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-플루오로벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (22.0 mg, 0.110 mmol)로부터 실시예 ER-895104를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (17.1 mg, 54%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-플루오로벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (R)-tert-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (22.0 mg, 0.110 mmol)로부터 실시예 ER-89510을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (15.8 mg, 50%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-플루오로벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (22.0 mg, 0.110 mmol)로부터 실시예 ER-895106을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (14.9 mg, 47%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-플루오로벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (2S,5R)-tert-부틸 2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (24.0 mg, 0.112 mmol)로부터 실시예 ER-895107을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (14.2 mg, 44%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-플루오로벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 (21.0 mg, 0.113 mmol)로부터 실시예 ER-895109를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (17.7 mg, 57%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-플루오로벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (1S,4S)-tert-부틸 2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (22.0 mg, 0.111 mmol)로부터 실시예 ER-895112를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (14.4 mg, 46%)을 수득하였다.
실시예 ER-895080의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-플루오로벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 tert-부틸 2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카르복실레이트 (22.0 mg, 0.111 mmol)로부터 실시예 ER-895111을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (22.7 mg, 63%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 3-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조산 (25.0 mg, 0.058 mmol) 및 시판 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (32.8 mg, 0.176 mmol)로부터 실시예 ER-895731을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (22.1 mg, 70%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 3-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조산 (25.0 mg, 0.058 mmol) 및 시판 tert-부틸 4-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (31.0 mg, 0.155 mmol)로부터 실시예 ER-895732를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (22 mg, 70%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 3-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조산 (25.0 mg, 0.058 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (34.0 mg, 0.170 mmol)로부터 실시예 ER-895733을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (26.5 mg, 85%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 3-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조산 (25.0 mg, 0.058 mmol) 및 시판 (R)-tert-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (36.3 mg, 0.181 mmol)로부터 실시예 ER-895734를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (23.4 mg, 75%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 3-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조산 (25.0 mg, 0.058 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 (37.7 mg, 0.202 mmol)로부터 실시예 ER-895739를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (22.9 mg, 73%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 3-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조산 (25.0 mg, 0.058 mmol) 및 시판 (R)-tert-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 (34.8 mg, 0.187 mmol)로부터 실시예 ER-895740을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (23.1 mg, 73%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 3-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조산 (25.0 mg, 0.058 mmol) 및 시판 tert-부틸 헥사히드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카르복실레이트 (26.9 mg, 0.127 mmol)로부터 실시예 ER-895744를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (26.5 mg, 82%)을 수득하였다.
실시예 ER-895080의 것과 유사한 방식으로 화합물 3-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)벤조산 (25.0 mg, 0.058 mmol) 및 시판 tert-부틸 3-아미노아제티딘-1-카르복실레이트 (30.1 mg, 0.175 mmol)로부터 실시예 ER-895741을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (5.5 mg, 16%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-메틸벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 tert-부틸 4-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (45.4 mg, 0.227 mmol)로부터 실시예 ER-895718을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (21.4 mg, 68%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-메틸벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (29.8 mg, 0.149 mmol)로부터 실시예 ER-895719를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (21.6 mg, 69%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-메틸벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (R)-tert-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (28.6 mg, 0.143 mmol)로부터 실시예 ER-895720을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (21.7 mg, 69%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-메틸벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (31.1 mg, 0.155 mmol)로부터 실시예 ER-895721을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (20.2 mg, 64%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-메틸벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (R)-tert-부틸 3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (41.2 mg, 0.206 mmol)로부터 실시예 ER-895722를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (21 mg, 67%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-메틸벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (2S,5R)-tert-부틸 2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (34.1 mg, 0.159 mmol)로부터 실시예 ER-895723을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (20.5 mg, 64%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-메틸벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 (43.7 mg, 0.235 mmol)로부터 실시예 ER-895725를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (19.8 mg, 65%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-메틸벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (R)-tert-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 (31.0 mg, 0.167 mmol)로부터 실시예 ER-895726을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (20.6 mg, 67%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-메틸벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (1S,4S)-tert-부틸 2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (29.9 mg, 0.151 mmol)로부터 실시예 ER-895729를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (19.6 mg, 62%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-메틸벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 tert-부틸 헥사히드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카르복실레이트 (28.9 mg, 0.136 mmol)로부터 실시예 ER-895730을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (23.9 mg, 74%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-메틸벤조산 (25.5 mg, 0.058 mmol) 및 시판 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (27.9 mg, 0.150 mmol)로부터 실시예 ER-895755를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (28.3 mg, 89%)을 수득하였다.
실시예 ER-895080의 것과 유사한 방식으로 화합물 4-(7-(디플루오로메틸)-5-(3,4-디메톡시페닐)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-3-메틸벤조산 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 tert-부틸 3-아미노아제티딘-1-카르복실레이트 (37.0 mg, 0.215 mmol)로부터 실시예 ER-895727을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (22.3 mg, 65%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-895435 (10.0 mg, 0.023 mmol) 및 시판 tert-부틸 4-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (17.8 mg, 0.089 mmol)로부터 실시예 ER-896059를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (11.2 mg, 87%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-895435 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (19.3 mg, 0.096 mmol)로부터 실시예 ER-896060을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (12.3 mg, 95%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-895435 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (R)-tert-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (16.9 mg, 0.084 mmol)로부터 실시예 ER-896061을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (12.2 mg, 94%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-895435 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (23.9 mg, 0.119 mmol)로부터 실시예 ER-896062를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (10.7 mg, 83%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-895435 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (R)-tert-부틸 3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (20.5 mg, 0.102 mmol)로부터 실시예 ER-896063을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (10.9 mg, 84%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-895435 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (2S,5R)-tert-부틸 2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (17.2 mg, 0.080 mmol)로부터 실시예 ER-896064를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (10.3 mg, 78%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-895435 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 (1S,4S)-tert-부틸 2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (15.2 mg, 0.077 mmol)로부터 실시예 ER-896067을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (9.9 mg, 77%)을 수득하였다.
실시예 ER-894463의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-895435 (25.0 mg, 0.056 mmol) 및 시판 tert-부틸 헥사히드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카르복실레이트 (17.3 mg, 0.081 mmol)로부터 실시예 ER-896068을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (12.3 mg, 93%)을 수득하였다.
실시예 ER-895080의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-895435 (25.9 mg, 0.060 mmol) 및 시판 tert-부틸 3-(아미노메틸)아제티딘-1-카르복실레이트 (30.4 mg, 0.163 mmol)로부터 실시예 ER-896071을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 목적 생성물 (18.6 mg, 51%)을 수득하였다.
합성 실시예 - 섹션 G
ER-893993의 제조
500 mL 플라스크를 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란) (10.78 g, 42 mmol), 5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일 트리플루오로메탄술포네이트 (10.0 g, 21 mmol), 포타슘 아세테이트 (10.41 g, 106 mmol), 및 1,4-디옥산 (100 ml)으로 채웠다. 반응 혼합물을 15분 동안 질소로 탈기하였다. 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II) 디클로라이드 디클로로메탄 착물 (4.33 g, 5.3 mmol)을 첨가하고 혼합물을 밀봉하고 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 EtOAc (1000 mL)와 포화 NaHCO3 용액 (200 mL)에 분배하였다. 상을 분리하고 수성물을 EtOAc (200 mL)로 2x 역추출하였다. 합해진 유기층을 염수 (200 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 물질을 EtOAc (500 mL)에 용해시키고, 헵탄 (500 mL)을 첨가하고 흑색 고체 불순물을 여과에 의해 제거하였다. 목적 생성물을 함유하는 여액을 감압하에 농축하고, 150 mL의 IPA에 현탁시키고, 30분 동안 70℃에서 가열시킨 다음, 실온에서 냉각하였다. 녹색 침전물을 여과해내고, IPA로 세정하고 진공 펌프 상에서 건조시켰다.
5-(3,4-디메톡시페닐)-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (4.50 g, 10.02 mmol, 47.2% 수율)
25 mL 플라스크 중 및 질소의 분위기하에, -78℃에서 무수 THF (5 mL) 중 tert-부틸 2-메틸-4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (558 mg, 2.6 mmol) 및 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-(트리플루오로메틸)술포닐 메탄술폰아미드 (1869 mg, 5.2 mmol)의 용액에 THF (5.23 mL, 5.2 mmol) 중 1.0M LiHMDS를 첨가하였다. 실온으로 서서히 가온하면서 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3로 켄칭하였다. 그 다음, 혼합물을 MTBE로 3x 추출하였다. 합해진 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 위치이성질체 (tert-부틸 6-메틸-4-(((트리플루오로메틸)술포닐)옥시)-5,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트와 tert-부틸 2-메틸-4-(((트리플루오로메틸)술포닐)옥시)-5,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트)의 혼합물을 담황색 오일 (397 mg, 44% 수율)로서 수득하였다.
5-10 mL 마이크로파용 바이알을 5-(3,4-디메톡시페닐)-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (650 mg, 1.45 mmol), tert-부틸 2-메틸-4-(((트리플루오로메틸)술포닐)옥시)-5,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트 (tert-부틸 6-메틸-4-(((트리플루오로메틸)술포닐)옥시)-5,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트와의 혼합물, 총 396 mg임, 1.15 mmol), 탄산칼륨 (792 mg, 5.7 mmol), 물 (2.0 ml) 및 THF (4.5 ml)로 채웠다. 반응 혼합물을 15분 동안 질소로 탈기하였다. 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II) 디클로라이드 디클로로메탄 착물 (234 mg, 0.29 mmol)을 첨가하고 혼합물을 밀봉하고 90℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 농축하였다. 조 생성물을 12-100% EtOAc / 헵탄으로 용리시키면서 실리카겔 (칼럼 인터침(Column Interchim) 40 g, 30 μM) 상에서 정제하였다. 위치이성질체 (tert-부틸 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-2-메틸-5,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트와 tert-부틸 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-6-메틸-5,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트)의 혼합물을 황색 고체 (142 mg, 24% 수율)로서 수득하였다.
ER-896993의 합성
소듐 테트라히드로보레이트 (10.94 mg, 0.29 mmol)를 실온에서 에탄올 (1.0 ml) 중의 tert-부틸 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-2-메틸-5,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트 (위치이성질체 tert-부틸 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-6-메틸-5,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트와의 혼합물, 총 50 mg임, .096 mmol)의 현탁액에 서서히 첨가하였다. 혼합물을 60분 동안 80℃로 가열하였다. 에틸 아세테이트를 첨가하였다. 혼합물을 NH4Cl의 포화 수용액 및 이어서 염수로 연속하여 세척하였다.
유기층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 12-100% EtOAc / 헵탄으로 용리시키면서 실리카겔 (칼럼 인터침 25 g, 30 μM) 상에서 정제하였다. 위치이성질체 (tert-부틸 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-2-메틸-5,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트와 tert-부틸 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-6-메틸-5,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트)의 혼합물을 백색 고체 (38 mg, 75% 수율)로서 수득하였다.
Tert-부틸 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-2-메틸-5,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트 (위치이성질체 tert-부틸 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-6-메틸-5,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트와의 혼합물, 총 34 mg임, .065 mmol)를 에탄올 (0.5 ml) 및 디옥산 (0.5 ml) 중 4.00M HCl에 용해시키고 혼합물을 1시간 동안 40℃에서 교반하였다. 1 mL의 톨루엔을 첨가하였다. 반응 혼합물을 농축하였다.
생성물을 진공 펌프 상에서 건조시켜 29 mg의 최종 생성물을 HCl 염 (위치이성질체 5-(3,4-디메톡시페닐)-2-(6-메틸-1,2,3,6-테트라히드로피리딘-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘 히드로클로라이드와 5-(3,4-디메톡시페닐)-2-(2-메틸-1,2,3,6-테트라히드로피리딘-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘 히드로클로라이드의 혼합물) (ER-896993)으로서 수득하였다.
ER-896994의 합성
Tert-부틸 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-2-메틸-5,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트 (위치이성질체 tert-부틸 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-6-메틸-5,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트와의 혼합물, 총 60 mg임, .116 mmol)를 메탄올 (2.5 ml)에 용해시켰다. 용액을 H-큐브(Cube) (전부(Full) H2, 1 mL/min, 소형 크기 (30 mm) 탄소상 10% 팔라듐 캐트카트(CatCart))를 사용하여 실온에서 2.5시간 동안 수소로 처리하였다. 1 mL 톨루엔을 첨가하였다. 용매를 농축하였다. 조 생성물을 12-100% EtOAc / 헵탄으로 용리시키면서 실리카겔 (칼럼 인터침 25 g, 30 μM) 상에서 정제하여 tert-부틸 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-2-메틸피페리딘-1-카르복실레이트 (36 mg, 0.069 mmol, 59% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
Tert-부틸 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-2-메틸피페리딘-1-카르복실레이트 (29 mg, .055 mmol)를 에탄올 (0.5 ml) 및 디옥산 (0.5 ml) 중 4.00M HCl에 용해시키고 혼합물을 1시간 동안 40℃에서 교반하였다. 1 mL의 톨루엔을 첨가하였다. 반응 혼합물을 농축하였다. 생성물을 진공 펌프 상에서 건조시켜 25 mg의 최종 생성물을 HCl 염 (5-(3,4-디메톡시페닐)-2-(2-메틸피페리딘-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘 히드로클로라이드, ER-896994)으로서 수득하였다.
실시예 ER-897090
탈보호 단계를 ER-887084 (섹션 B)의 것과 유사한 방식으로 수행하는 것을 제외하고 ER-896993 (섹션 G)의 것과 유사한 방식으로 시판 tert-부틸 4-옥소아제판-1-카르복실레이트로부터 제조된 tert-부틸 4-(((트리플루오로메틸)술포닐)옥시)-2,3,6,7-테트라히드로-1H-아제핀-1-카르복실레이트 (300 mg, 0.869 mmol) 및 5-(3,4-디메톡시페닐)-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (507 mg, 1.129 mmol)으로부터 실시예 ER-897090을 제조하여 ER-897090 (96 mg, 26% 수율)을 수득하였다. LC-MS: Rt 1.49 min, (M+1)+ 423.06, 조건 II하에.
ER-890044 (섹션 A)의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-897090 (94 mg, 0.224 mmol)을 그의 구성 거울상이성질체로 분할하여 이성질체 ER-897212 중 하나 (17 mg, 18% 수율)를 수득하였다.
탈보호 단계를 ER-887084 (섹션 B)의 것과 유사한 방식으로 수행하는 것을 제외하고 ER-896993 (섹션 G)의 것과 유사한 방식으로 시판 tert-부틸 3-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트로부터 제조된 tert-부틸 3-(((트리플루오로메틸)술포닐)옥시)-2,5-디히드로-1H-피롤-1-카르복실레이트 (174 mg, 0.548 mmol) 및 5-(3,4-디메톡시페닐)-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (493 mg, 1.097 mmol)으로부터 실시예 ER-897130을 제조하여 ER-897130 (68 mg, 31% 수율)을 수득하였다.
탈보호 단계를 ER-887084 (섹션 B)의 것과 유사한 방식으로 수행하는 것을 제외하고 ER-896993 (섹션 G)의 것과 유사한 방식으로 시판 tert-부틸 (4-옥소시클로헥실)카르바메이트로부터 제조된 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)시클로헥스-1-엔-1-일 트리플루오로메탄술포네이트 (188 mg, 0.544 mmol) 및 5-(3,4-디메톡시페닐)-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (489 mg, 1.089 mmol)으로부터 실시예 ER-897142를 제조하여 ER-897142 (111 mg, 48% 수율)를 수득하였다. (LC-MS: Rt 1.57 min, (M+1)+ 423.06, 조건 II하에)
실시예 ER-897364 및 ER-897365
ER-890044 (섹션 A)의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-897090 (100 mg, 0.237 mmol)을 그의 구성 거울상이성질체로 분할하여 ER-897364 (4 mg, 4% 수율, > 95% ee) 및 ER-897365 (6.4 mg, 6% 수율, > 95% ee)를 수득하였다.
실시예 ER-897547
tert-부틸 3-메틸-4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트의 제조
50 ml의 메탄올 중 1-벤질-3-메틸피페리딘-4-온 (1.63 g, 8.018 mmol) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (1.925 g, 8.82 mmol)의 용액을 Pd-C 카트리지와 함께 H-큐브 (50 bar, 유량 1.0 ml/min으로 제어된 H2)를 사용하여 수소화하였다. 반응 혼합물을 12시간 동안 재순환시켰다. H-큐브를 메탄올로 완전히 세척한 후, 용매를 증발시키고 생성 오일을 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.5 g, 88%)을 수득하였다.
탈보호 단계를 ER-887084 (섹션 B)의 것과 유사한 방식으로 수행하는 것을 제외하고 ER-896993 (섹션 G)의 것과 유사한 방식으로 tert-부틸 3-메틸-4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트로부터 제조된 tert-부틸 5-메틸-4-(((트리플루오로메틸)술포닐)옥시)-5,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트 (250 mg, 0.724 mmol) 및 5-(3,4-디메톡시페닐)-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (488 mg, 1.086 mmol)으로부터 실시예 ER-897547를 제조하여 ER-897547 (68 mg, 31% 수율)을 수득하였다.
탈보호 단계를 ER-887084 (섹션 B)의 것과 유사한 방식으로 수행하는 것을 제외하고 ER-896993 (섹션 G)의 것과 유사한 방식으로 5-(3,4-디메톡시페닐)-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (475 mg, 1.058 mmol) 및 시판 tert-부틸 4-(4-브로모페닐)피페리딘-1-카르복실레이트 (240 mg, 0.705 mmol)로부터 실시예 ER-897597을 제조하여 ER-897597 (32 mg, 9% 수율)을 수득하였다. LC-MS: Rt 1.72 min, (M+1)+ 486.95, 조건 II하에.
실시예 ER-897814 및 ER-897815
ER-890044 (섹션 A)의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-897597 (20 mg, 0.041 mmol)을 그의 구성 거울상이성질체로 분할하여 ER-897814 (7 mg, 35% 수율, > 95% ee) 및 ER-897815 (3 mg, 15% 수율, > 95% ee)를 수득하였다.
실시예 ER-897728
벤질 9-옥소-3-아자스피로[5.5]운데스-7-엔-3-카르복실레이트의 제조
벤질 4-포르밀피페리딘-1-카르복실레이트 (5.17 g, 20.907 mmol) 및 p-톨루엔술폰산 일수화물 (0.398 g, 2.091 mmol)을 70℃에서 벤젠 (30.0 ml, 334.136 mmol) 중에서 교반하였다. 부트-3-엔-2-온 (3.76 ml, 41.813 mmol)을 첨가하고 딘-스탁 트랩(dean-stark trap)으로 물을 제거하면서 반응 혼합물을 밤새 환류시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각 후, 포화 NaHCO3 용액을 첨가하고 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켰다. 생성 오일을 바이오타지에 의해 정제 (SiO2, 250 g, EtOAc/Hep 10% 내지 50%)하여 표제 화합물 (3.58 g, 11.96 mmol, 57.2% 수율)을 수득하였다.
tert-부틸 9-옥소-3-아자스피로[5.5]운데칸-3-카르복실레이트의 제조
50 ml의 메탄올 중 벤질 9-옥소-3-아자스피로[5.5]운데스-7-엔-3-카르복실레이트 (1.26 g, 4.209 mmol), 디-tert-부틸 디카르보네이트 (1.01 g, 4.63 mmol) 및 TEA (1.47 ml, 10.522 mmol)의 용액을 Pd-C 카트리지와 함께 H-큐브 (전부 H2, 유량 1.0 ml/min)를 사용하여 수소화하였다. 반응 혼합물을 5시간 동안 재순환시켰다. H-큐브를 메탄올로 완전히 세척한 후, 용매를 증발시키고 생성 오일을 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (681 mg, 61%)을 수득하였다.
탈보호 단계를 ER-887084 (섹션 B)의 것과 유사한 방식으로 수행하는 것을 제외하고 ER-896993 (섹션 G)의 것과 유사한 방식으로 tert-부틸 9-옥소-3-아자스피로[5.5]운데칸-3-카르복실레이트로부터 제조된 tert-부틸 9-(((트리플루오로메틸)술포닐)옥시)-3-아자스피로[5.5]운데스-8-엔-3-카르복실레이트 (290 mg, 0.726 mmol) 및 5-(3,4-디메톡시페닐)-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (489 mg, 1.089 mmol)으로부터 실시예 ER-897728을 제조하여 ER-897728 (91 mg, 26% 수율)을 수득하였다. LC-MS: Rt 1.67 min, (M+1)+ 477.13, 조건 II하에.
실시예 ER-897851
ER-890044 (섹션 A)의 것과 유사한 방식으로 화합물 ER-897728 (85 mg, 0.178 mmol)을 그의 구성 거울상이성질체로 분할하여 이성질체 ER-897851 중 하나 (28 mg, 33% 수율)를 수득하였다.
실시예 ER-896993의 것과 유사한 방식으로 화합물 G2 (600 mg, 1.34 mmol) 및 시판 4-브로모-2-클로로피리딘으로부터 실시예 ER-890978을 제조하여 2-(2-클로로피리딘-4-일)-5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (311 mg, 54% 수율)을 수득한 후, NaBH4 환원시켰다 (이 물질의 300 mg에 대해 수행됨). 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 생성물 (277 mg, 92% 수율)을 수득하였다.
합성 실시예 - 섹션 H
제조 1: 1-메틸-2-(프로판-2-일리덴)히드라진
아세톤 (100 mL)을 N-메틸히드라진 (20 mL)으로 45분에 걸쳐 적가 처리(시린지 펌프)하고, 반응 용액을 45분 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음, 반응 용액을 추가의 15분 동안 55℃에서 가열하고, 실온으로 냉각하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 40℃ 이하에서 회전증발기(rotavap)에 의해 농축하였다. 그 다음, 조 생성물을 110 - 122℃에서 증류에 의해 정제하여 표제 화합물을 무색 오일 (14.2g, 43.9%)로서 수득하였다.
제조 2: 3-(에톡시메틸렌)펜탄-2,4-디온
아세틸아세톤 (40 mL), 에틸 오르토포르메이트 (95.4 mL) 및 아세트산 무수물 (54.2 mL)의 용액을 1시간 동안 환류 가열 (150℃)하였다 . 반응 용액을 실온으로 냉각하고 플래시 칼럼 크로마토그래피 (이.머크 실리카겔(E.Merck Silica Gel) (~120 g); 용리액: 100% EtOAc에 이어서 EtOAc 중 5% EtOH)에 직접 적용하였다. 40℃에서 회전증발기를 사용하여 순수한 생성물을 함유하는 분획을 농축하여 표제 화합물을 암적색 점성 오일 (10.4 g, 17.0%)로서 수득하였다.
제조 3: 3-((1-메틸-2-(프로판-2-일리덴)히드라지닐)메틸렌)펜탄-2,4-디온
3-(에톡시메틸렌)펜탄-2,4-디온 (제조 2, 8.6 g)을 에테르 (30 mL)에 용해시키고 0℃로 냉각하였다. 그 다음, 반응 용액을 5분에 걸쳐 1-메틸-2-(프로판-2-일리덴)히드라진 (제조 1, 4.8 g)으로 서서히 적가 처리한 다음, 가온하고 밤새 실온에서 교반하였다. 반응 용액을 플래시 칼럼 크로마토그래피 (바이오타지 쿼드(Biotage Quad) 25; 용리액: EtOAc 중 20% EtOH)에 의해 직접 정제하여 표제 화합물을 담적색 고체 (9.1 g, 84.0%)로서 수득하였다.
제조 4: 1-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)에탄온
3-((1-메틸-2-(프로판-2-일리덴)히드라지닐)메틸렌)펜탄-2,4-디온 (제조 3, 9.1 g)을 에탄올 (20 mL)에 용해시키고 물 (20 mL) 중 1M 염화수소로 처리하였다. 반응 용액을 15분 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음, 반응 용액을 회전증발기로 진공하에 대략 20 mL 총 부피로 농축하였다. 그 다음, 반응 용액을 포화 수성 중탄산나트륨 (45 mL)으로 처리하고, 메틸렌 클로라이드 (4 x 50 mL)로 추출하였다. 합해진 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 농축하여 표제 화합물을 옅은 오렌지색 고체 (6.2g, 97%)로서 수득하였다.
제조 5: 1-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-4,4,4-트리플루오로-3-히드록시부트-2-엔-1-온
1-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)에탄온 (제조 4, 4.46 g)을 메탄올 (21 mL)에 용해시키고 메탄올 (11.07 mL) 중 25% 소듐 메톡시드를 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 교반하고, 아세트산, 트리플루오로-, 에틸 에스테르 (7.701 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 75℃에서 환류 가열하고 19시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 플래시 칼럼 크로마토그래피 (바이오타지 쿼드 25; 용리액: 100% EtOAc에 뒤이어 EtOAc 중 5% EtOH 및 이어서 EtOAc 중 20% EtOH)에 의해 직접 정제하여 표제 화합물 (호변이성질체)를 담적색 발포성 고체 (7.0 g, 92.3%)로서 수득하였다.
제조 6: 3-브로모-1H-피라졸-5-아민
10℃에서 아세트산 (900 mL) 중 3,4,5-트리브로모피라졸 (60 g)의 용액에 질산 (21 mL) (90%, 발연)을 첨가하였다. 그 다음, 아세트산 무수물 (300 mL)을 20분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 용액을 실온으로 가온하고 3시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 얼음 위에 부어 백색 침전물이 생성되었다. 침전물을 여과해내고 물 (200 mL)로 세척하였다. 그 다음, 여과된 침전물을 톨루엔 (750 mL)에 용해시키고, 물 (200 mL) 및 염수 (100 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 그 다음, 톨루엔 용액에 1H-피라졸, 3,5-디메틸- (20 g)을 첨가하고, 용액을 20분 동안 환류 가열하였다. 반응 용액을 냉각하고 진공 농축하였다. 조 생성물을 헵탄으로 연화처리하고 TLC에 의해 주로 생성물을 함유한 생성 침전물을 여과하고 진공 건조시켰다. 조 표제 화합물을 추가 정제 없이 계속하여 수행하였다 (71.7 mg, 67.6%).
이 중간체, 3,4-디브로모-5-니트로-1H-피라졸 (69 g)을 45분 동안 110℃에서 에틸 아세테이트 (600 mL) 및 에탄올 (300 mL) 중 염화제1주석, 이수화물 (135 g)과 함께 환류함으로써 환원시켰다. 황색 균질 반응 용액을 실온으로 냉각하고 물 (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (800 mL) 중 중탄산나트륨 (33 g)의 격렬히 교반 중인 용액 상으로 서서히 부었다. 생성 슬러리에, 셀라이트 (30 g)를 첨가하고, 이러한 슬러리를 셀라이트의 층을 통해 여과하였다. 여과 케이크를 추가의 에틸 아세테이트 (600 mL)로 세척하였다. 그 다음, 유기 용액을 염수 (200 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 농축하여 조 생성물을 오렌지색 오일로서 수득하였다. 그 다음, 조 생성물을 플래시 칼럼 크로마토그래피 (바이오타지, 쿼드 25; 용리액: 메틸렌 클로라이드 중 6% EtOH)에 의해 정제하였다. 이로써 표제 화합물을 옅은 베이지색 고체 (13.2 g, 32%)로서 수득하였다.
제조 7: 2-브로모-5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘
아세트산 (52.61 mL) 중 1-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-4,4,4-트리플루오로-3-히드록시부트-2-엔-1-온 (제조 5, 1.7 g) 및 3-브로모-1H-피라졸-5-아민 (제조 6, 1.18 g)을 밤새 밀봉관에서 120℃에서 가열하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각하고, 빙수 (500 mL)에 부어 백색 침전물이 생성되었다. 침전물을 여과하고 다량의 물로 세척하였다. 그 다음, 침전물을 수집하고 진공 건조시켜 표제 화합물을 백색 분말 (1.9 g, 73.1%)로서 수득하였다.
제조 8: 2-브로모-5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘
소듐 테트라히드로보레이트 (472 mg)를 에탄올 (20 mL) 중 2-브로모-5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (제조 7, 1.8 g)의 현탁액에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음, 반응 용액을 얼음 냉각된 1N HCl에 pH = 2.0에 이를 때까지 매우 서서히 첨가하여 임의의 잔존 소듐 테트라히드로보레이트를 켄칭하였다. 그 다음, 용액을 고 진공하에 농축하여 대부분의 에탄올을 제거하였다. 그 다음, 포화 중탄산나트륨 용액을 중성 pH (7.0)에 이를 때까지 산성 용액에 서서히 첨가하고 백색 침전물이 형성되었다. 침전물을 여과해내고 물 (200 mL) 및 에테르 (20 mL)로 세척하였다. 백색 침전물을 수집하고 진공 건조시켜 표제 화합물을 백색 분말 (1.36 g, 74.7%)로서 수득하였다.
제조 9: (5S,7R)-2-브로모-5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘
라세미 2-브로모-5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘 (1.5 g, 4.1 mmol, 제법 8)을 메탄올 (35 mL)에 용해시키고 탁한 용액을 온화하게 가온하여 투명 용액을 수득하였다. 그 다음, 용액을 중간 다공도 브흐너 깔대기를 통해 여과하였다. 투명 여액을 키랄 HPLC 정제용으로 직접 사용하였다. 1 mL의 이 용액을 2.1 cm × 25 cm 키랄셀 OD 칼럼에 로딩하고 15 mL/min의 유량으로 이소프로필 알콜 및 메탄올 (1:1 비)을 포함하는 이동상으로 용리하였다. 두 (R 및 S) 거울상이성질체를 개별적으로 수집하였다. 27회의 이러한 주입을 수행하고 순수한 (R 및 S) 거울상이성질체의 모아진 분획을 감압하에 농축하였다. 표제 화합물을 백색 분말 (0.71 g, 1.95 mmol, > 95% ee)로서 단리하였다.
제조 10: (5R,7S)-2-브로모-5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘
라세미 2-브로모-5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘 (1.5 g, 4.1 mmol, 제조 8)을 메탄올 (35 mL)에 용해시키고 탁한 용액을 온화하게 가온하여 투명 용액을 수득하였다. 그 다음, 용액을 중간 다공도 브흐너 깔대기를 통해 여과하였다. 투명 여액을 키랄 HPLC 정제용으로 직접 사용하였다. 1 mL의 이 용액을 2.1 cm × 25 cm 키랄셀 OD 칼럼에 로딩하고 15 mL/min의 유량으로 이소프로필 알콜 및 메탄올 (1:1 비)을 포함하는 이동상으로 용리하였다. 두 (R 및 S) 거울상이성질체를 개별적으로 수집하였다. 27회의 이러한 주입을 수행하고 순수한 (R 및 S) 거울상이성질체의 모아진 분획을 감압하에 농축하였다. 표제 화합물을 백색 분말 (0.71 g, 1.95 mmol, > 95% ee)로서 단리하였다.
실시예 ER-889996:
5 mL 스크류-캡 바이알에 4-(피페라진-1-카르보닐)페닐보론산, 피나콜 에스테르 (51.0 mg, 0.161 mmol), 1,4-디옥산 (0.075 M, 90 uL) 중 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0), 1,4-디옥산 (450 uL) 중 2-브로모-5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘 (25.0 mg, 0.069 mmol, 제조 8)의 용액 및 물 (70 uL) 중 2M 탄산나트륨을 첨가하였다. 반응 용기를 질소로 퍼징하고 밀폐시켰다. 바이알을 진탕시키고 40 h 동안 85℃에서 알루미늄 블록에서 가열하였다. 혼합물에 1.0 mL의 포화 수성 중탄산나트륨을 첨가한 다음, 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 x 2.0 mL)로 추출하였다. 합해진 유기층을 진공 농축하였다. 잔존 잔류물을 방법에 따른 LC/MS에 의해 정제하였다. 이로써 표제 화합물을 백색 분말 (7.8 mg, 24.0%)로서 수득하였다.
실시예 ER-889996의 것과 유사한 방식으로 2-브로모-5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘 (40.1 mg, 0.11 mmol, 제조 8) 및 시판 이소퀴놀린-5-일 보론산 (2.5 당량)으로부터 실시예 ER-889862를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 표제 화합물을 백색 분말 (7.5 mg, 17%)로서 수득하였다.
실시예 ER-889996의 것과 유사한 방식으로 2-브로모-5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘 (25.0 mg, 0.069 mmol, 제조 8) 및 시판 8-메틸퀴놀린-5-일 보론산 (2.5 당량)으로부터 실시예 ER-890007를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 표제 화합물을 백색 분말 (12.2 mg, 42%)로서 수득하였다.
실시예 ER-889996의 것과 유사한 방식으로 2-브로모-5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘 (23.0 mg, 0.063 mmol, 제조 8) 및 시판 1,4-디메틸-1H-인다졸-5-일 보론산 (2.5 당량)으로부터 실시예 ER-892900를 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 표제 화합물을 백색 분말 (7.7 mg, 28%)로서 수득하였다.
실시예 ER-889996의 것과 유사한 방식으로 2-브로모-5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘 (25.0 mg, 0.069 mmol, 제조 8) 및 시판 2-메틸-2H-인다졸-5-일 보론산 (2.5 당량)으로부터 실시예 ER-890066을 제조하였다. HPLC 조건 III을 사용하여 LCMS에 의해 정제하여, 표제 화합물을 백색 분말 (0.2 mg, 1%)로서 수득하였다.
실시예 ER-889550
밀봉관을 2-브로모-5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (40 mg, 0.11 mmol, 제조 7), 4-(N-에틸아미노카르보닐)페닐보론산 (73.2 mg, 0.38 mmol), 탄산칼륨 (76.8 mg, 0.56 mmol), 물 (0.559 mL), 및 테트라히드로푸란 (0.838 mL)으로 채웠다. 반응 혼합물을 15분 동안 질소로 탈기하면서 교반하였다. [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II), 디클로로메탄 (1:1) (22.7 mg, 0.03 mmol)과의 착물을 첨가하고 반응 혼합물을 밀봉하고 16시간 동안 95℃에서 가열하였다. 조 반응 혼합물을 실온으로 냉각한 다음, 플래시 칼럼 크로마토그래피 (바이오타지 쿼드 25; 용리액: 100% EtOAc)에 의해 직접 정제하였다. 이로써 4-(5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-N-에틸벤즈아미드를 담황색 고체 (41.1 mg, 86.4%)로서 수득하였다.
소듐 테트라히드로보레이트 (6.62 mg)를 에탄올 (1 mL) 중 4-(5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-N-에틸벤즈아미드 (30 mg, 0.07 mmol)의 현탁액에 첨가하고 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 용액을 질소의 스트림하에 농축하였다. 그 다음, 수소화붕소물이 완전히 소모 (~2 mL)될 때까지 1N HCl을 매우 서서히 첨가하여 갈색 침전물이 생성되었다. 수용액을 옮겨 붓고 pH = 7.0에 이를 때까지 포화 중탄산나트륨으로 서서히 중화시켰다. 그 다음, 중화된 용액을 EtOAc (2 x 5 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 염수 (2 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 농축하였다. 이 표제 화합물을 백색 분말 (18.8 mg, 62.1%)로서 수득하였다.
실시예 ER-893888
밀봉관을 2-브로모-5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘 (30 mg, 0.08 mmol, 제조 8), 4-(우레이도)페닐보론산, 피나콜 에스테르 (73.8 mg, 0.28 mmol), 탄산칼륨 (56.9 mg, 0.41 mmol), 물 (0.414 mL), 및 테트라히드로푸란 (0.621 mL)으로 채웠다. 반응 혼합물을 15분 동안 질소로 탈기하면서 교반하였다. [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II), 디클로로메탄 (1:1) (16.8 mg, 0.02 mmol)과의 착물을 첨가하고 반응 혼합물을 밀봉하고 16시간 동안 95℃에서 가열하였다. 조 반응 혼합물을 실온으로 냉각한 다음, 플래시 칼럼 크로마토그래피 (바이오타지 쿼드 25; 용리액: EtOAc 중 10% EtOH)에 의해 직접 정제하였다. 이로써 표제 화합물을 담황색 분말 (31.1 mg, 90.0%)로서 수득하였다.
실시예 ER-893888의 것과 유사한 방식으로 (5S,7R)-2-브로모-5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘 (150.0 mg, 0.41 mmol, 제조 9) 및 시판 4-(우레이도)페닐보론산, 피나콜 에스테르 (368.8 mg, 1.4 mmol)로부터 실시예 ER-894595를 제조하였다. 플래시 칼럼 크로마토그래피 (바이오타지 쿼드 25; 용리액: EtOAc 중 10% EtOH)에 의해 정제하여 표제 화합물을 담황색 분말 (141.6 mg, 82.0%)로서 수득하였다.
실시예 ER-893888의 것과 유사한 방식으로 (5R,7S)-2-브로모-5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘 (150.0 mg, 0.41 mmol, 제조 10) 및 시판 4-(우레 이도)페닐보론산, 피나콜 에스테르 (368.8 mg, 1.4 mmol)로부터 실시예 ER-894596을 제조하였다. 플래시 칼럼 크로마토그래피 (바이오타지 쿼드 25; 용리액: EtOAc 중 10% EtOH)에 의해 정제하여 표제 화합물을 담황색 분말 (144.6 mg, 83.7%)로서 수득하였다.
실시예 ER-893888의 것과 유사한 방식으로 (5S,7R)-2-브로모-5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘 (50.0 mg, 0.14 mmol, 제조 9) 및 시판 1,4-디메틸-1H-인다졸-5-보론산 (89.1 mg, 0.47 mmol)으로부터 실시예 ER-893986을 제조하였다. 플래시 칼럼 크로마토그래피 (바이오타지 쿼드 25; 용리액: EtOAc 중 10% EtOH)에 의해 정제하여 표제 화합물을 담황색 분말 (42.7 mg, 72.4%)로서 수득하였다.
실시예 ER-893888의 것과 유사한 방식으로 (5R,7S)-2-브로모-5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘 (150.0 mg, 0.41 mmol, 제조 10) 및 시판 1,4-디메틸-1H-인다졸-5-보론산 (267.3 mg, 1.41 mmol)으로부터 실시예 ER-893987을 제조하였다. 플래시 칼럼 크로마토그래피 (바이오타지 쿼드 25; 용리액: EtOAc 중 10% EtOH)에 의해 정제하여 표제 화합물을 담황색 분말 (155.7 mg, 88.0%)로서 수득하였다.
실시예 ER-893888의 것과 유사한 방식으로 (5S,7R)-2-브로모-5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘 (40.0 mg, 0.11 mmol, 제조 9) 및 시판 2-메틸인다졸-5-보론산 피나콜 에스테르 (96.8 mg, 0.38 mmol)로부터 실시예 ER-893990을 제조하였다. 플래시 칼럼 크로마토그래피 (바이오타지 쿼드 25; 용리액: EtOAc 중 10% EtOH)에 의해 정제하여 표제 화합물을 담황색 분말 (36.9 mg, 80.9%)로서 수득하였다.
실시예 ER-893888의 것과 유사한 방식으로 (5R,7S)-2-브로모-5-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘 (30.0 mg, 0.082 mmol, 제조 10) 및 시판 2-메틸인다졸-5-보론산 피나콜 에스테르 (72.6 mg, 0.28 mmol)로부터 실시예 ER-893991을 제조하였다. 플래시 칼럼 크로마토그래피 (바이오타지 쿼드 25; 용리액: EtOAc 중 10% EtOH)에 의해 표제 화합물을 담황색 분말 (22.0 mg, 64.3%)로서 수득하였다.
합성 실시예 - 섹션 J
아세트산 (10 ml, 174.682 mmol) 중 메틸 5-아미노-1H-피라졸-3-카르복실레이트 (1.00 g, 7.086 mmol) 및 1-(3,4-디메톡시페닐)-4,4,4-트리플루오로부탄-1,3-디온 (2.153 g, 7.794 mmol)의 현탁액을 5시간 동안 (100℃에서) 환류 가열하였다. 혼합물을 실온에서 냉각하고, 물을 첨가하고 침전물을 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고 진공하에 건조시켜 J1을 초록색 고체, 2.33 g (86% 수율)로서 수득하였다.
수소화붕소나트륨 (0.446 g, 11.802 mmol)을 실온에서 에탄올 (25 ml, 428.167 mmol) 중 메틸 5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-카르복실레이트 (1.00 g, 2.623 mmol)의 현탁액에 서서히 첨가하였다. 혼합물을 60분 동안 환류 가열 (80℃)하고 반응을 UPLC/MS에 의해 모니터링하였다. 혼합물을 실온에서 냉각하였다. 과잉의 수소화붕소나트륨을 아세트산 (1.501 ml, 26.226 mmol)으로 분해시켰다. 반응물을 물 (52.5 ml, 52.451 mmol) 중 1.00 M HCl에 붓고 5분 동안 교반하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고 공기 건조시켰다. 헵탄:에틸 아세테이트 구배로 25 g 실리카겔 칼럼을 사용하여 플래시 크로마토그래피에 의해 물질을 정제하여 J2를 백색 고체, 507 mg (48% 수율)로서 수득하였다.
에탄올 (5.0 mL, 85.633 mmol) 중 에틸 5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-카르복실레이트 (503 mg, 1.26 mmol)의 현탁액에 물 (1.574 mL, 6.298 mmol) 중 4.00 M 수산화나트륨을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 50℃에서 가열하였다. 혼합물을 실온에서 냉각하고 물 (12.60 mL, 12.595 mmol) 중 1.00 M HCl로 산성화하고, 물을 첨가하고 침전물을 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고 진공하에 건조시켜 J3을 백색 고체, 422 mg (95% 수율)로서 수득하였다.
5 mL 마이크로파용 바이알을 5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-카르복실산 (50 mg, 0.135 mmol), tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (75 mg, 0.404 mmol), HATU (205 mg, 0.539 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (0.059 mL, 0.337 mmol) 및 DMF (1.0 mL, 12.915 mmol)으로 채웠다. 바이알의 두껑을 닫고 혼합물을 40℃에서 6시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (5 mL)로 희석하고, 물 (2 mL)로 2 x 세척하고, 0.1N 수성 HCl (2 mL)로 세척하고, 포화 수성 중탄산나트륨 (2 mL)으로 세척하고, 염수로 세척하고 (2 mL), 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 12-100% EtOAc / 헵탄을 용리액으로서 사용하여 바이오타지 SP4 (칼럼 인터침 25 g, 30 μM) 상에서 크로마토그래피에 의해 화합물을 정제하여 중간체 tert-부틸 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-카르보닐)피페라진-1-카르복실레이트 (38 mg, 0.070 mmol, 52.3% 수율)를 수득하였다.
중간체 tert-부틸 4-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-카르보닐)피페라진-1-카르복실레이트 (36 mg, 0.067 mmol)를 에탄올 (0.5 mL, 8.563 mmol) 및 디옥산 (0.5 mL, 2.00 mmol) 중 4.00M HCl에 용해시키고 혼합물을 1시간 동안 40℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고 생성물을 진공 펌프 상에서 건조시켜 ER-896452를 HCl 염 (31.0 mg, 0.065 mmol, 98% 수율)으로서 수득하였다.
ER-896453
실시예 ER-896452의 것과 유사한 방식으로 산 J3 (50 mg, 0.135 mmol) 및 시판 (S)-tert-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (81 mg, 0.404 mmol)로부터 실시예 ER-896453을 두 단계로 제조하여 중간체 (3S)-tert-부틸 3-(5-(3,4-디메톡시페닐)-7-(트리플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-카르복스아미도)피페리딘-1-카르복실레이트 (67 mg, 0.121 mmol, 90% 수율)를 수득하였다. 이 중간체 (49 mg, 0.089 mmol)를 실시예 ER-896452의 것과 유사한 방식으로 HCl로 처리하여 목적 생성물 ER-896453 (42 mg, 97% 수율)을 수득하였다.
ER-885454의 절대 배위의 결정 및 그의 ER-892887에 대한 상관관계
ER-885454의 절대 배위는 이를 상기에 도시된 바와 같이 3-아이오도 유도체 ER-887006로 전환시킴으로써 확립하였다. ER-887006의 구조를 단일 결정 X-선 회절에 의해 결정하였다. 결과를 도 10에 도시하였다. 이러한 변환은 분자에서의 키랄 중심에 영향을 미치지 않기 때문에, ER-885454의 절대 배위는 도시된 바와 같다. 더욱이, ER-892887의 절대 배위를 화합물 C-6에 대한 그의 상관관계를 통해 확립하였고, 이는 결국 ER-885454와 상관관계가 있다.
일반 스크리닝 검정 및 약리학 전략.
강력하고 선택적인 TLR7/8 화합물을 동정하기 위해, 유사체를 인간 TLR4, TLR7, 및 TLR9 리포터 계열(reporter line)의 세포-기반 패널에 걸쳐 초기에 스크리닝하였다 (보다 세부한 사항은 물질 및 방법 참조). TLR7에 강력하고 선택적인 화합물의 서브세트를 또한 TLR8 활성에 대해 (하기 표 2 참조) 및 1차 인간 PBMC 검정 (보다 세부한 사항은 물질 및 방법 참조)에서 TLR7/8 효능에 대해 시험하였다. 특정 화합물을 단기 생체내 (STIV) 검정으로 진행시켜 마우스 TLR7에 대한 용량-의존 활성 및 작용-지속기간을 결정하였다 (보다 세부한 사항은 물질 및 방법 참조). 그 다음, 하기 마우스 루푸스 질환 모델: BXSB-Yaa, NZBxNZW, 및 프리스탄:DBA/1 중 하나 이상에서 영향에 대해 선택 화합물을 평가하였다.
본원에서 실시양태로서 보고된 많은 화합물은 세포주 또는 초대 세포 상에서 발현된 이들 수용체가 합성, 소분자 (CL097, R848) 또는 핵산 (RNA) 리간드에 의해 자극되는 경우 인간 및 마우스 TLR7 및 인간 TLR8 둘 다에 대해 나노몰 효능을 입증한다. 반대로, 본원에서 실시양태로서 보고된 대부분의 화합물은 TLR9 경로에 대해 불활성이다.
현재 루푸스 SOC 약물은 항말라리아약, 예컨대 클로로퀸 및 히드록시클로로퀸 (HCQ)을 포함하고 이는 시험관내 TLR7/9 신호전달을 억제하는 것으로 확인되었다. 이는 적어도 부분적으로 루푸스 발적을 제어하는데 그의 유효성을 설명할 수 있다. 그러나, 본 발명의 실시양태는 상당히 더 강력한 억제를 제공하는 것으로 확인되었다. 예를 들어, 화합물 ER-892887 (상기에 나타내고 논의됨)은 RNA-Ig TLR7/8 자극 대 HCQ에 대해 대략 100배 더 강력한 것으로 밝혀졌다 (ER-892887 IC50 = 0.015 uM, HCQ IC50 ~1.5 uM). 이는 ER-892887이 현재 루푸스 치료에 비해 훨씬 더 효과적인 TLR7/8 경로 억제를 제공할 것임을 시사한다. 이는 하기 표 1에 나타낸 결과에 의해 입증된다.
단기 생체내 (STIV) 검정: 마우스 TLR7에 대한 생체내 화합물 효능을 평가하기 위해, 단기 생체내 (STIV) 검정을 이용하였다. 요약하면, 마우스에게 화합물을 경구 투여한 후에 다양한 시험에서 효능제 R848을 피하 주사하여 TLR7을 자극하였다. 그 다음, R848 자극 후 혈장 IL-6 수준을 ELISA에 의해 측정하고 화합물 효능 및 작용-지속기간을 평가하였다. 중요하게는, R848로 시험관내 또는 생체내 자극 후 시토카인 생성은 TLR7-결핍 마우스를 이용하여 완전히 TLR7-의존성인 것으로 나타났다. 따라서, STIV 검정에서 화합물의 활성은 확실히 TLR7 경로의 그의 조절에 기인한 것으로 볼 수 있다. 300 mg/kg에서 ER-892887의 단일 경구 용량은 24시간 이상 동안 R848/TLR7/IL-6 경로를 생체내에서 80-90%까지 억제한다 (도 1 참조). 화합물의 패널에 대한 STIV 검정 효능의 요약을 하기 표 3에 나타냈다.
마우스 루푸스 질환 모델. 세 가지 구별되는 루푸스 질환 모델 (BXSB-Yaa, NZBxNZW, 및 프리스탄)을 화합물 POC 평가를 위해 선택하였는데, 그 이유는 (1) BXSB-Yaa 및 NZB/W 균주는 인간 루푸스, 예컨대 DNA- 및 RNA-관련 자가반응성, 단백뇨, 및 면역-복합체 매개 신염의 많은 특징을 나타내는, 다유전자성 병인을 갖는 자연 질환(spontaneous disease)을 발생시키고, (2) 양성 TLR7 및/또는 TLR9 표적 검증 결과가 모든 세가지 질환 모델에 대해 보고되었기 때문이다.
SLE 질환 모델에서 ER-892887에 대한 주요 결과는 다음과 같다 (도 1-6 및 12-14 참조):
1) ER-892887은 감소된 단백뇨 및 등급 3/4 신염 발생의 완전 예방을 향한 경향에 상응하는, TLR7-주도의 BXSB-Yaa 모델에서 항-dsDNA 역가를 상당히 감소시켰다.
2) ER-892887은 NZB/W 모델에서 항-dsDNA 역가를 감소시켰다. ER-892887의 더 낮은 용량 (33-100 mg/kg)은 이 모델에서, 감소된 단백뇨 및 사구체 신염의 조직학적 증상에 상응하는, 생존 이익을 제공하였다. ER-892887은 사람 루푸스의 치료에서 통상적으로 사용되는 두 약물보다 더 효과적으로 NZB/W 모델에서 단백뇨의 발생을 지연시켰고, 히드록시클로로퀸 및 프레드니솔론과 조합하여 유효하였다.
3) ER-892887은 RNA-관련 반응성에 특히 강력한 영향, 예컨대 항-RiboP 역가를 갖는 프리스탄 모델에서 다양한 자기-항체를 억제하였다. 이들 변화는 이 모델에서 ER-892887에 의한 전혈 인터페론-주도의 유전자 발현 및 IFN 유전자 시스너쳐 점수의 감소에 상응하였다. ER-892887은 프리스탄 모델에서 관절염 중증도를 감소시키고, 인터페론 유전자 시스너쳐 점수를 상당히 억제하였으며, 한편 세가지 통상적으로 사용된 루푸스 치료는 그렇지 않았다. ER-892887은 또한 시험된 용량에서 히드록시클로로퀸 또는 프레드니솔론보다 더 양호한 자기항체를 억제하였다.
SLE 질환 모델에서 ER-885454에 대한 주요 결과는 다음과 같다 (도 7-9 참조):
1) ER-885454는 상당히 감소된 단백뇨 및 등급 3/4 신염 발생의 완전 예방에 상응하는, TLR7-주도의 BXSB-Yaa 모델에서 항-dsDNA 및 항-Sm/nRNP 역가를 상당히 감소시켰다.
2) ER-885454는 NZB/W 모델에서 항-dsDNA, 단백뇨, 및 사구체 신염의 조직학적 증상을 감소시켰다.
결과의 요약: 이들 데이터는 인간 루푸스의 중요한 측면에 관여하는 과정에 끼친 기재된 화합물의 완화 효과를 나타낸다. 핵산을 함유하는 면역 복합체는 수지상 세포에 의해 유형 1 인터페론 생성을 구동할 수 있고, 인터페론의 존재 및 인터페론 조절된 유전자의 후속 발현을 반영하는 "인터페론 시그너쳐"는 질환 중증도와 연관된다. ER-892887은 시험관내에서 RNA-Ig 복합체에 대한 시토카인 반응을 차단하고, 프리스탄 모델에서 인터페론-주도의 유전자의 상향조절을 억제하였다. ER-892887 및 ER-885454 둘 다 몇몇 자기항체 특이성의 생성을 제한하였고, 단백뇨 및 조직학적 변화에 의해 명백한 바와 같이 신장 질환을 억제하였다. ER-892887을 사용한 처리는 자발 NZB/W 모델에서 장기 투여 연구에서의 생존을 상당히 향상시켰다. 결과는 이들 화합물이 인간 환자에서 루푸스 증상 및 진행을 제어하는 잠재력이 있음을 나타낸다.
약리학 물질 및 방법:
시험관내 약리학: HEK-293 세포 (ATCC)를 조작하여 인간 E-셀렉틴 유전자 (수탁 번호(Accession No.) NM_000450)의 프로모터로부터 염기쌍 -2241bp 내지 -254bp를 함유하는 플라스미드 pGL3 (프로메가(Promega))로부터 유래된 NF-카파B 전사 인자 유도성 E-셀렉틴 (ELAM-1) 루시페라제 리포터를 안정하게 발현시켰다. 그 다음, 이들 세포를 후속적으로 조작하여 안정하게 그리고 개별적으로 인간 TLR4, TLR7 또는 TLR9 전체-길이 ORF cDNA를 발현시켰다. 인간 TLR4 cDNA (수탁 번호 NM_138554)를 pcDNA 3.0 발현 벡터 (인비트로젠(Invitrogen))으로 클로닝하였다. TLR4 형질감염 세포를 또한 조작하여 인간 MD-2 보조-수용체(co-receptor)를 발현시키고 [MD-2 cDNA (수탁 번호 NM_015364)를 pEF-BOS 벡터로 클로닝하였다] 배지 중에 10 nM 가용성 CD14 (알앤드디 시스템즈(R&D Systems))로 보충하여 LPS 반응성을 최적화하였다. 인간 TLR9 cDNA (수탁 번호 NM_017442)를 p블루스크립트 (Bluescript) II KS 벡터 (애질런트 (Agilent))로 클로닝하였다. 인간 TLR7 cDNA (수탁 번호 NM_016562)를 오리진(OriGene)으로부터 입수하였다. 인간 TLR8 (수탁 번호 NM_138636) 또는 마우스 TLR7 (수탁 번호 NM_133211)을 안정하게 발현하는 HEK-293 세포를 인비보젠으로 구매한 다음, pNiFty2(NF-카파B)-루시페라제 리포터 플라스미드 (인비보젠)로 안정하게 형질감염시켰다. 각각의 세포 유형을 2.22 x 105개 세포/ml의 밀도로 10% 소 태아 혈청 (FBS)을 함유하는 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM)에서 384-웰 플레이트 내로 도말하고 37℃, 5% CO2에서 2일 동안 인큐베이션하였다. 그 다음, 다양한 농도의 길항제 화합물을 첨가하였다. 그 다음, 세포를 또 다른 30분 동안 인큐베이션한 후에 적절한 TLR 효능제를 다음과 같이 첨가하였다 (최종 농도 명시): TLR4에 대해 10 ng/ml에서 리포다당류 (LPS; 시그마(Sigma)), 인간 TLR7 및 TLR8 및 마우스 TLR7에 대해 3 ug/ml의 CL097 (인비보젠), 및 TLR9에 대해 0.6 uM에서 CpG-2006-2A [시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)에 의해 합성된, 포스포로티오에이트 골격을 갖는 서열: TCGTCGTTAAGTCGTTAAGTCGTT (서열 1)]. 그 다음, 세포를 밤새 인큐베이션하고, NF-카파B 의존성 루시페라제 리포터 활성화를, 제조업자의 제안된 프로토콜에 따라 스테디글로(SteadyGlo)® (프로메가) 또는 스테디라이트(Steadylite)™ (퍼킨 엘머(Perkin Elmer)) 시약을 사용하여 발광을 측정함으로써 정량화하였다.
인간 PBMC 세포-기반 검정. 인간 말초혈 단핵 세포 (PBMC)를 새로이-정해진 헤파린 처리된 (10 USP 단위/ml, 호스피라(Hospira), 일리노이주 레이크포리스트) 건강한 공여자 전혈로부터 밀도 구배 (히스토파크(Histopaque)® 1077, 시그마, 인크.(Sigma Inc.), 미주리주 세인트 루이스)에 의해 단리하였다. 요약하면, 25 ml 혈액을 50 ml 원뿔형 관 중 15 ml PBS (Ca2+, Mg2+ 없이)로 희석하고, 12 ml 히스토파크를 척추천자침(spinal needle)을 사용하여 밑에 놓았다. 관을 1200 rpm (350xg)에서 45분 동안 원심분리하고, PBMC를 백혈구연층(buffy coat)으로부터 수집하였다. 그 다음, 세포를 PBS 중에서 2회 세척하고, 적혈구를 실온에서 5분 동안 5 ml 염화암모늄 용액 중 현탁액 (1X 적혈구 용해 완충제, 이바이오사이언스(eBioscience))에 의해 용해시켰다. PBS에서 최종 세척 후, PBMC를 L-글루타민 (인비트로젠)을 갖는 RPMI-1640 배지 중의 2X106/ml의 최종 농도에서 재현탁시키고 25 mM HEPES (메디아테크, 인크(Mediatech, Inc), 버지니아주 머내서스), 10% 소 태아 혈청 (히클론(HyClone), 유타주 로건), 및 페니실린-스트렙토마이신-글루타민 (메디아테크)으로 보충하고 조직 배양물 처리된 96-웰 플레이트 (팔콘(Falcon))에 100 ul/웰 (2X105 세포/웰)로 도말하였다.
100% DMSO 중에 가용화되고 연속 희석된 길항제 화합물을 세포에 3회 첨가하여 0.1% DMSO (v/v)의 최종 농도를 수득하였다. PBS 중에 가용화되고 연속 희석된 히드록시클로로퀸 (아크로스 오르가닉스(Acros Organics))을 세포에 3회 첨가하였다. PBMC를 37℃, 5% CO2에서 30분 동안 길항제 화합물 또는 HCQ와 함께 인큐베이션한 후에 웰당 100 ul 완전 배지 중 다양한 TLR 효능제 시약을 다음과 같이 첨가하였다 (최종 농도 명시): TLR7 및 TLR8에 대해 1 uM에서 R848 (레시퀴모드; 지엘신테시스(GLSynthesis), 매사추세츠주 워스터), TLR1/2에 대해 50 ng/ml에서 Pam3CSK4 (인비보젠), TLR4에 대해 10 ng/ml에서 LPS (시그마), 및 TLR9에 대해 5 ug/ml에서 CpG-2216 (인비보젠). 루푸스 환자에서 RNA-함유 자기-항체 면역 복합체를 모방하는 TLR7/8 효능제를 제조하기 위해, 인간 U1 snRNA 줄기 루프 IV로부터 유래된 서열 [포스포로티오에이트 골격을 갖는 서열: GGGGGACUGCGU-UCGCGCUUUCCC (서열 2)]을 갖는 26-머(mer) RNA를 합성하였고 (디하르마콘 인크.(Dharmacon, Inc.), 콜로라도주 라파예트), 이는 이전에 강력한 TLR7 및 TLR8 효능제인 것으로 확인되었다. 이러한 RNA 분자를 무혈청 RPMI에 2.5 μM로 희석하고, 또한 RNA와 교차-반응하는 마우스 항-인간 단일 가닥 DNA 모노클로날 항체 (MAB3034, 밀리포어 인크.(Millipore, Inc.), 매사추세츠주 밀러리카)를 1:25 희석으로 또는 1 ug/ml로 첨가하였다. 생성 "RNA-Ig" 자극을 15-30분 동안 실온에서 인큐베이션한 후에 세포에 첨가하였다. PBMC를 37℃, 5% CO2에서 20시간 동안 다양한 TLR 효능제를 사용하여 인큐베이션하였다. 세포 배양 상청액을 수집하고, 다양한 인간 시토카인의 수준을 제조업자 (BD 바이오사이언시즈 인크.(BD Biosciences, Inc.), 캘리포니아주 샌디에이고)의 권장된 프로토콜에 따라 표준 ELISA 절차에 의해 지시된 바와 같이 평가하였다. 표 4는 선택된 화합물에 대해 인간 PBMC IL-6 억제의 시험 결과를 나타낸다.
마우스 비장 세포-기반 검정. 비장을 암컷 BALB/c 마우스 (잭슨 랩스(Jackson Labs), 메인주 바 하버)로부터 채취하고 CO2에 의해 안락사시켰다. 비장을 40 μm 나일론 세포 여과기를 통과시킴으로써 단일 세포 현탁액을 수득하였다. 세포를 50 ml PBS (메디아테크, 인크., 버지니아주 머내서스)로 2회 세척하고 적혈구를 실온에서 5분 동안 5 ml RBC 용해 완충제 (이바이오사이언스, 인크., 캘리포니아주 샌디에이고)에 용해시켰다. 세포를 PBS에 2회 더 세척하고 2.5X106개 세포/ml에서 보충된 RPMI-1640에서 마지막으로 재현탁시켰다. 세포를 96-웰 조직 배양물 처리된 플레이트 (팔콘)에서 100 μl/웰 (2.5X105개 세포/웰)로 도말하였다. 100% DMSO에 가용화된 화합물의 연속 희석물을 세포에 3회 첨가하여 0.1% DMSO의 최종 농도를 수득하였다. 세포를 37℃, 5% CO2에서 30분 동안 화합물과 함께 인큐베이션한 후에 완전 배지 중의 100 μl/웰의 740nM R848 (레시퀴모드; 지엘신테시스, 매사추세츠주 워스터)을 370 nM R848의 최종 농도로 첨가하였다. 세포를 37℃, 5% CO2에서 20시간 동안 인큐베이션하였다. 배양 상청액을 수집하고, IL-6의 수준을 제조업자 (BD 바이오사이언시즈 인크., 캘리포니아주 샌디에이고)의 권장된 프로토콜에 따라 표준 ELISA 절차에 의해 평가하였다. 표 5에 선택된 화합물에 대한 시험 결과를 나타냈다.
생체내 약리학:
단기 생체내 (STIV) 검정. 6 내지 8주 연령 암컷 BALB/c 마우스 (잭슨 랩스, 메인주 바 하버)에게 0.5% 수성 메틸-셀룰로스에서 제형화된 길항제 화합물 (시그마, 미주리주 세인트 루이스)을 200 ul 부피로 경구 위관영양에 의해 투여하였다. 그 후에 다양한 시점에서, 마우스에게 15 ug R848 (레시퀴모드; 지엘신테시스, 매사추세츠주 워스터)을 100 ul 부피로 피하 (s.c.) 주사하여 TLR7을 자극하였다. 혈장을 심장 천자에 의해 수집한 다음, TLR7 자극 후 1.5시간에서 IL-6의 수준을 제조업자 (알앤드디 시스템즈)의 권장된 프로토콜에 따라 표준 ELISA 절차에 의해 평가하였다.
마우스 루푸스 질환 모델 균주. 수컷 BXSB-Yaa 및 암컷 NZBWF1/J 마우스를 잭슨 랩스 (메인주 바 하버)로부터 구매하였고, 이들 둘 다 자연 루푸스 질환을 나타낸다. 암컷 DBA/1 마우스를 할란 라보라토리즈(Harlan Laboratories) (인디애나주 인디애나폴리스)로부터 구매하고 명시된 연령에서 0.5 ml 프리스탄 (2,6,10,14-테트라메틸펜타데칸; 시그마, 미주리주 세인트 루이스)의 복강내 주사를 제공하여 루푸스 질환을 화학적으로 유발하거나 0.5 ml PBS의 복강내 주사를 제공하여 연령-적합(age-matched), 질환이 없는(non-diseased) 대조군 마우스를 생성시켰다. 마우스에게 명시된 기간 동안 0.5% 메틸셀룰로스 중 화합물 또는 약물을 경구 투여에 의해 매일 투여하였다.
ELISA에 의한 자기-항체 역가의 평가. 항-dsDNA, -Sm/nRNP, -RiboP, 및 히스톤 역가를 표준 ELISA 접근법에 의해 평가하였다. 요약하면, 96-웰 EIA/RIA ELISA 플레이트 (코닝(Corning))를 실온에서 90분 동안 PBS 중 100 ul의 희석된 항원으로 다음과 같이 코팅하였다 (최종 농도 명시): 10 U/ml Sm/nRNP 복합체 (이뮤노비전(Immunovision)), 10 ug/ml 송아지 흉선 dsDNA (시그마), 5 U/ml RiboP (이뮤노비전), 및 5 ug/ml 히스톤 (이뮤노비전). 플레이트를 PBS/0.05% 트윈20 (세척 완충제)로 세척하고 4℃에서 PBS/1% BSA (차단 완충제)로 밤새 차단하였다. 플레이트를 세척하고, 차단 완충제에 희석된 마우스 혈장 샘플 (모델 및 항원에 따라 1:25 - 1:10,000 범위)을 웰당 100 ul 부피로 웰에 첨가하고, 플레이트를 실온에서 90분 동안 인큐베이션하였다. 그 다음, 플레이트를 세척하고, PBS/1%BSA/0.05%트윈 중 1:50,000으로 희석된 100 ul 항-마우스-IgG-HRPO (서던 바이오테크(Southern Biotech))를 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 실온에서 90분 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 세척하고, OptEIA TMB 기질 키트 (BD 바이오사이언시즈)로부터의 기질 성분의 1:1 믹스 100 ul를 웰에 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 인큐베이션하고, 100 ul의 0.18 M 황산 용액을 첨가함으로써 충분한 색 현상 후 반응을 중지하였다. 플레이트를 450 nm에서 분광광도법에 의해 판독하였다.
단백뇨의 평가. 소변을 개별 마우스로부터 수동으로 또는 18시간 동안 대사 케이지당 1-2 마우스를 수용함으로써 수집하고, 소변 알부민 크리아티닌 비 (UACR)를 각각의 동물에 대해 신장 기능의 간접적 척도로서 결정하였다 (소변 dL 당 알부민 mg/ 크리아티닌 g의 비로서 계산된 UACR). 코팅 항체 및 검출용으로 HRP 접합체로 태깅된 제2의 항체를 포함한, 항-마우스 알부민 항체 세트 (베틸 랩스(Bethyl Labs))를 사용한 맞춤형 샌드위치(custom sandwich) ELISA 프로토콜을 사용하여 소변 샘플 중 알부민 수준을 결정하였다. 시판 크리아티닌 검정 키트 (케이먼(Cayman))를 사용하여 크리아티닌 수준을 결정하였다.
신염의 조직학적 평가. 신장을 개개의 마우스로부터 수집하고, 24시간 동안 10% 포르말린 중에 고정하고, 파라핀에 포매하고, H&E 염색 절편을 맹검 방식으로 조직병리학 평가를 위해 생성시켰다. 신염 질환 점수의 특징은 다음과 같았다: 등급 0 - 정상 한계치; 등급 1 - 리본-유사 모세혈관벽 비후; 등급 2 - 세포과다, 분할(segmentation), 반월체 형성; 등급 3 - 등급 2 참조, 사구체 병변의 증가된 중증도 및 정도 (% 발병된 사구체); 등급 4 - 경화; 중증 사구체 질환 (비기능성 기관).
통계치: 약물-처리 및 비히클-처리 군 사이의 UACR, 시토카인 또는 항체 역가에서의 차이를 군에서의 모든 개개의 동물로부터의 값을 사용하여 계산하였다. 이들을 둔의 사후 검정(Dunn's post-test)으로 일원분산분석(one-way ANOVA)에 의해 시험하여 각각의 실험 군을 비히클과 비교하였다. P값을 도 1에 서술하거나, 관례상 단일 별표는 p<0.05를 나타내고, 2개의 별표는 p<0.01을 나타내고 3개의 별표는 p<0.001을 나타낸다. 사망률 곡선의 세트를 맨틀-콕스에 의해 비교하였고, 유의성이 밝혀지는 경우, 윌콕슨(Wilcoxon) 분석을 사용하여 차이에 대해 곡선 쌍들을 시험하였다.
전혈 중 인터페론 유전자 발현의 평가. 전혈 중 IFN-조절된 유전자의 발현을 qPCR에 의해 측정하였다. 요약하면, 마우스를 안락사시키고, 대정맥을 통해 혈액을 수집하고, 100 ul를 RNA레이터(RANlater) (앰비온(Ambion), 텍사스주 오스틴)를 함유하는 관에 보관하였다. 총 RNA를 마우스 리보퓨어(RiboPure) 혈액 RNA 단리 키트 (앰비온)를 사용하여 단리하였다. RNA 농도를 나노드롭(NanoDrop) ND-1000 분광광도계 (써모 사이언티픽(Thermo Scientific), 매사추세츠주 헐섬)를 사용하여 결정하였다. 우선 가닥 cDNA를 대용량의 RNA-대-cDNA 매스터 믹스 (어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems), 캘리포니아주 포스터 시티)를 사용하여 100 ng 총 RNA로부터 합성하였다. 역 전사 후, cDNA를 뉴클레아제-유리(nuclease-free) 물로 희석하고 유전자 발현 매스터 믹스 (어플라이드 바이오시스템즈)와 혼합하였다. 그 다음, 혼합물을 어플라이드 바이오시스템즈에 의해 제조된 맞춤형 택맨® 저 밀도 어레이(Low Density Array) (TLDA)에 적용하고, qPCR을 ABI 7900HT 고속 실시간(Fast Real-time) PCR 시스템 (어플라이드 바이오시스템즈) 상에서 수행하였다. 원 데이터(raw data)를 RQ 매니저(Manager) 1.2.1 (어플라이드 바이오시스템즈)을 사용하여 수집하고 진데이터(GeneData) 어낼리스트 (Analyst) 2.2 소프트웨어 (진데이터)를 사용하여 분석하였다.
TLDA 패널은 정규화를 위해 3개의 하우스키핑(housekeeping) 유전자 및 하기 표 6으로부터 선택된 45개의 표적 유전자를 함유하였다. 하우스키핑 유전자 Hprt1을 변동 계수(coefficient-of-variation)를 기반으로 규정화를 위해 선택하였다. 상대적 양을 표적 유전자를 위해 결정하고 복강내 PBS 주사만이 공급된 질환이 없는 대조군에 비해 각각의 질환이 있는 마우스에 대한 배수 변화를 계산하기 위해 사용하였다. 표준 스튜던트 t-검정을 수행하여 질환이 없는 군 (PBS 처리)과 비히클-처리된 질환이 있는 군 (프리스탄 처리) 사이에 어떤 표적 유전자가 상당히 증가하였는지를 결정하였고, 그로 인해 질환-조절된 유전자 세트를 나타낸다. 후속적으로 "IFN 점수"를 t-검정에서 동정된 모든 질환-조절된 유전자의 중앙 배수 변화로서 각각의 마우스에 대해 계산하였다.
SEQUENCE LISTING
<110> Boivin, Roch
Carlson, Eric
Endo, Atsushi
Hansen, Hans
Hawkins, Lynn
Ishizaka, Sally
Mackey, Matthew
Narayan, Sridhar
Satoh, Takashi
Schiller, Shawn
<120> Tetrahydropyrazolopyrimidine Compounds
<130> 0080171-000060
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic construct
<400> 1
tcgtcgttaa gtcgttaagt cgtt 24
<210> 2
<211> 24
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic construct
<400> 2
gggggacugc guucgcgcuu uccc 24
Claims (20)
- 하기 화학식 III의 화합물과 하기 화학식 VI의 화합물을 유기 산의 존재하에 축합시켜 하기 화학식 VII의 화합물을 형성하는 단계 및
화학식 VII의 화합물을 환원시켜 하기 화학식 I의 화합물을 형성하는 단계
를 포함하는,
화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 그의 입체이성질체 또는 그의 입체이성질체의 혼합물을 제조하는 방법.
<화학식 III>
<화학식 VI>
<화학식 VII>
<화학식 I>
(상기 식에서,
R1은 임의로 치환된 피페리디닐, 임의로 치환된 피리딜, 임의로 치환된 피롤릴, 임의로 치환된 피롤리디닐, 1,4-디메틸티아졸릴, 2-에틸-4-메틸티아졸릴, 2-이소프로필티아졸-5-일, 티아졸릴, 3-에틸티아졸-5-일 또는 1-메틸술포닐피페리딘-4-일이거나,
R1은 -C(O)Z이고, 여기서 Z는 피페라지닐, 피페리디닐, 피페리디닐 프로필, 3-에틸피페라진-1-일, 임의로 치환된 피롤로피롤릴 또는 피페리딘-3-일아미노이거나,
R1은이고, 여기서 R13은 H, 메틸피라졸릴, 메틸이미다졸릴, 벤질, 3-히드록시부틸, 3-(디메틸아미노)-2,2-디메틸프로필, 에틸아미드, 메틸피리딜, 메틸술포닐, (1-메틸이미다졸-2-일)메틸, (1,5-디메틸이미다졸-4-일)메틸, (1-메틸피롤-2-일)메틸이거나, R13은 C(O)W이고, 여기서 W는 -N(CH3)2, 피페리디닐, 피페라지닐 또는 모르폴리닐이거나,
R1은이고, 여기서 R14는 -C(O)CH3, H 또는 (1-메틸피롤-2-일)메틸이거나,
R1은
또는
이거나,
R1은이고, 여기서 A, B 및 D는 모두 탄소이거나, A, B 및 D 중 둘은 탄소이고 다른 하나는 질소이거나, A, B 및 D 중 하나는 탄소이고 나머지 둘은 질소이고; A가 질소인 경우 R4는 부재하고, B가 질소인 경우 R2는 부재하고, D가 질소인 경우 R3은 부재하고;
R2는 H, -CH3 또는 F이거나, R3 및 위치 a 및 b에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피리딘 또는 피라졸을 형성하고;
R3은 H, F, Cl, -CN, -CH3, -OCH3, -OH, -NH2, 메틸술포닐,
또는
이거나, R4 및 b 및 c에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 벤젠, 임의로 치환된 이미다졸, 임의로 치환된 피라졸, 임의로 치환된 피라졸리딘, 임의로 치환된 이미다졸리딘, 임의로 치환된 이소티아졸 또는
를 형성하거나, R2 및 a 및 b에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피리딘 또는 임의로 치환된 피라졸을 형성하고;
R4는 F, -CN, -OCH3, -OEt, H, Cl, Br, -NH-C(O)-CH-(CH3)2, -N(CH3)2, -CH3, -CH2OH,, 임의로 치환된 피페라지닐, 4-히드록시피페리진-1-일 또는 질소를 통하여 페닐 기에 부착되는 것이 아닌 임의로 치환된 피페리디닐이거나, R3 및 b 및 c에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피라졸 고리 또는
를 형성하거나, R5 및 c 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피라졸 고리 또는 임의로 치환된 피롤 고리를 형성하거나,
R4는 -(q)-C(O)X이고, 여기서 q는 결합, -NH- 또는 -CH2-이고,
X는 -NR11R12이고,
여기서 R11 및 R12는 둘 다 H, 또는 둘 다 -CH2CH3, 또는 둘 다 -CH3이거나, R11 및 R12 중 하나는 H이고 다른 하나는 1,1-디메틸에틸, 시클로부틸, 시클로프로필, 저급 알킬, 메틸 알콜, 프로필 알콜, 시클로부틸메틸; 2,3-디히드록시프로필, 페닐, 벤질, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 메틸아제티디닐, -CH2-NH-CH3, 피라졸릴, 피페라지닐, 알콜, -OCH3 또는이거나,
X는 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 피롤리디닐, 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착되거나 부착되지 않은 임의로 치환된 피페리디닐, 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 피페라지닐, 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 아제티디닐 또는 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 모르폴리닐,
이고;
R5는 H, F, Cl, -CH3, -OCH3, 피롤릴, -CH2OH, -NH2, -OH,또는
이거나, R4 및 c 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 벤젠, 임의로 치환된 피라졸 또는 임의로 치환된 피롤을 형성하거나, R6 및 d 및 e에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피리딘을 형성하거나, R5는 C(O)Y이고, 여기서 Y는 -NH2, -N(CH3)2, 임의로 치환된 피페라지닐, 임의로 치환된 피페리디닐,
또는
이고;
R6은 H, F, -CH3 또는 -CF3이거나, R5 및 e 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 벤젠 또는 임의로 치환된 피라졸을 형성하고;
R7은 -CF3 또는 -CHF2이고;
R8은이고;
R9는 Br, Cl, F, I 또는 H이며;
단, R4가 F인 경우, R2는 -CH3 및 F가 아니고; R3은 -CH3, -CN, F, Cl 및 -OCH3이 아니고; R5는 -CH3, F, Cl 및 -OCH3이 아니고; R6은 -CH3 및 F가 아니고;
R4가 Cl인 경우, R2는 F가 아니고; R3은 F 및 -CN이 아니고; R5는 F 및 -C(O)N(CH3)2가 아니고; R6은 -CF3 및 F가 아니고; D는 질소가 아니고; R5는 -C(O)NH2이거나 R2, R3, R5 및 R6 중 하나는 -CH3이고;
R4가 -CH3인 경우, R3은 F가 아니고; R5는 F가 아니고;
R4가 -OCH3인 경우, R2는 F가 아니고; R3은 Cl 및 -OCH3이 아니고; R5는 Cl 및 -OCH3이 아니고; R6은 F 및 -CF3이 아니고;
R4가 -CN인 경우, R2는 F가 아니고; R3은 Cl, F 및 -OCH3이 아니고; R5는 Cl, F 및 -OCH3이 아니고; R6은 F가 아니고;
R4가 -OCH2CH3인 경우, R3은 Cl 및 F가 아니고; R5는 Cl 및 F가 아니고; R6은 -CF3이 아니고;
R4가인 경우, R3은 H 및 F가 아니고; R5는 H 및 F가 아니고;
R4가인 경우, R2, R3, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R4가인 경우, R3은 F가 아니고; R5는 F가 아니고;
R2가 F인 경우, R3은 -OCH3 및 F가 아니고; R3, R4, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R2가 -CH3인 경우, R3은 Cl이 아니고; R3, R4, R5 및 R6 중 적어도 하나는 -CH3이 아니고; R4 및 R5는 c 및 d에서의 원자와 함께 피라졸릴을 형성하지 않고;
R3이 -OCH3인 경우, R2는 F가 아니고; R6은 F가 아니고;
R3이 F인 경우, X는이 아니고;
R3이 Cl인 경우, R5는 Cl이 아니고; R11은 벤질이 아니고; R12는 벤질이 아니고;
R5가 Cl인 경우, R6은 -CH3이 아니고; R11은 벤질이 아니고; R12는 벤질이 아니고;
R5가 F 또는 -OCH3인 경우, R6은 F가 아니고;
R6이 F인 경우, R2, R3, R4 및 R5 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R3 및 R5가 H인 경우, R11은 시클로프로필이 아니고; R12는 시클로프로필이 아니고;
R9가 Cl인 경우, R1은 아미드 기를 포함하지 않고;
B가 질소이고 A 및 D가 탄소인 경우, R4는 -CN 및이 아니고;
R7이 -CHF2이고 R4가인 경우, R4는 절대 입체화학
를 갖지 않고;
R8이인 경우, 하기 단서가 적용되고:
R4가 F인 경우, R2, R3, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고; R5는 C(O)N(CH3)2가 아니고;
R4가 Cl인 경우, R2, R3, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R3이 F인 경우, R4는 C(O)NHCH2CH2CH2CH3, C(O)N(CH3)2, C(O)NHCH2CH2CH3 및 C(O)NHC(CH3)3이 아니고;
R4는 C(O)NHCH2CH2CH2OH, C(O)NHCH(CH3)2, -CN 및이 아니고;
R1은이 아니고;
R5는이 아니고;
R3은이 아니고;
R2가 F인 경우, R5는 -C(O)NH2가 아니고;
R2가 -CH3인 경우, R4 및 R5는 c 및 d에서의 원자와 함께 피라졸을 형성하지 않고;
B가 질소인 경우, R3 및 R4는 b 및 c에서의 원자와 함께 임의로 치환된 이미다졸을 형성하지 않음;
R8이인 경우, 하기 단서가 적용된다:
R4는 -CH3, -C(O)NHCH2CH2OH, -NHC(O)CH(CH3)2 및이 아니고;
R4가 C(O)NHCH3인 경우, R2, R3, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R4가 -OCH3인 경우, R3은 F 및 -CH3이 아니고; R5는 F 및 -CH3이 아니고;
R4가인 경우, R3은 Cl이 아니고; R5는 Cl이 아니고;
R4가 -C(O)NHCH(CH3)2 또는 -C(O)N(CH2CH3)2인 경우, R3 및 R5 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R5는 -C(O)NH2가 아니고;
R6은 -CF3이 아니고,
여기서 용어 "임의로 치환된"은 대상 구조가, 치환되지 아니하거나, 치환되는 경우 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 직선형, 분지형, 또는 시클릭 포화 탄화수소, 메톡시-, -OH, -NH2, -CH2-NH-CH3, -OCH2CH2CH3, 또는 -OCH(CH3)2로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 치환되는 것을 의미하고, 임의로 치환된 모이어티가 시클릭인 경우, 임의로 치환은 고리 내에 2개의 원자 사이에 메틸 브릿지(bridge)를 포함하고;
여기서 저급 알킬은 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는, 직선형, 또는, 3개 및 4개 탄소 기의 경우에, 직선형, 분지형 또는 시클릭 포화 탄화수소를 지칭함) - 제1항에 있어서, 하기 화학식 IX의 화합물을 단리하는 단계 및 하기 화학식 X의 화합물을 단리하는 단계를 추가로 포함하고,
화학식 IX 및 X의 화합물은 화학식 I의 화합물로부터 단리되는 것인 방법.
<화학식 IX>
<화학식 X>
- 제1항에 있어서, 화학식 I의 화합물이 하기 화학식 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 그의 입체이성질체 또는 그의 입체이성질체의 혼합물인 방법.
<화학식 IV>
(상기 식에서,
R7a는 H 또는 F이고;
고리 A는
[여기서 Y1 및 Y2는 독립적으로 -CH2- 및 -CH2CH2-로 이루어진 군으로부터 선택되고, Y1 및 Y2 각각은 C1-3 알킬에 의해 임의로 치환됨];
[여기서 X1, X2 및 X3은 독립적으로 -CH- 및 N으로 이루어진 군으로부터 선택됨];
[여기서 X1, X2 및 X3은 독립적으로 -CH- 및 N으로 이루어진 군으로부터 선택됨];
[여기서 X는 -CH3, F 또는 Cl에 의해 임의로 치환된 N 또는 -CH-이고,
R14는 -C(O)Z이고, 여기서 Z는 2,3-디히드록시프로필아민; 임의로 가교되거나 탄소 원자에서 저급 알킬로 임의로 치환되는 5 내지 7원 시클릭 디아민; 7 내지 10원 비시클로디아민; 7 내지 11원 스피로디아민; -NH2로 임의로 치환된 4 내지 7원 시클릭 아민으로 치환된 -NH; -OH; -CH2NHR (여기서 R은 H 또는 저급 알킬임); 또는 -NH2로 임의로 치환된 7 내지 11원 스피로알칸으로 치환된 -NH이거나;
R14는 CH3NHC(O)-이고, R14가 부착되는 아릴 고리 상에 탄소 원자는 -CH3, F 또는 Cl 중 하나로 치환되거나; R14는 (CH3)2CHNHC(O)-이고, R14가 부착되는 아릴 고리 상에 탄소 원자는 -CH3, F 또는 Cl 중 하나로 치환되거나; R14는 (CH3)3CNHC(O)-이고, R14가 부착되는 아릴 고리 상에 탄소 원자는 -CH3, F 또는 Cl 중 하나로 치환되거나;
R14는이고, 여기서 피페라진은 임의로 가교되거나 저급 알킬로 치환되고 R10은 H 또는 -CH3이거나;
R14는이고, 여기서 n은 1-3이고 시클릭 디아민은 임의로 가교되거나 저급 알킬로 치환되거나;
R14는이고, 여기서 n은 1-4이거나;
R14는 -NHC(O)NH2 또는 -CH2C(O)NH-이고, 여기서 질소는 4 내지 7원 시클릭 아민; -CH2-C(O)- (여기서 카르보닐은 7 내지 10원 비시클로디아민으로 치환됨); 또는 -CH2C(O)NH2로 치환된 4 내지 7원 시클릭 아민으로 치환됨];
; 또는
[여기서 X는 N 또는 -CH-이고, 여기서 C는 -CH3, F 또는 Cl에 의해 임의로 치환되고,
R10은 -C(O)NH- (여기서 질소는 4 내지 7원 시클릭 아민에 의해 치환됨); 7 내지 10원 비시클로디아민에 의해 치환된 -C(O)-; 7 내지 11원 스피로디아민에 의해 치환된 -C(O)-; 피라졸; 옥사디아졸의 탄소 원자 상에서 -CH3에 의해 임의로 치환된 [1,2,4]옥사디아졸; -NHC(O)CH3; 피페라진에 의해 치환된 -CH2-; 메틸 치환기를 포함하는 피페라진에 의해 치환된 -CH2-; 5 내지 7원 시클릭 디아민에 의해 치환된 -C(O)-; -C(O)NHCH2- (여기서 -CH2-는 아제티딘에 의해 치환됨); 또는 -NH2 치환기를 포함하는 5 내지 7원 시클릭 아민으로 치환된 -C(O)-; 또는
시아노페닐; 이소퀴놀린; 4' 위치에서 -NH2로 치환된 시클로헥센; 1,4-디메틸인다졸-5-일; 1,6-디메틸인다졸-5-일; 4' 위치에서 스피로피페리딘으로 치환된 시클로헥센; 1-피페리디노피라졸; 또는 o-메톡시피리딘임]이고;
여기서 저급 알킬은 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는, 직선형, 또는, 3개 및 4개 탄소 기의 경우에, 직선형, 분지형 또는 시클릭 포화 탄화수소를 지칭함) - 제1항에 있어서, 키랄, 고 성능 액체 크로마토그래피를 통해 또는 부분입체이성질체 결정화를 통해 단리시키는 것인 방법.
- 하기 화학식 IV의 화합물과 하기 화학식 VI의 화합물을 축합시켜 하기 화학식 X의 화합물을 형성하는 단계,
화학식 X의 화합물을 트리플루오로메틸술포닐화 시약과 반응시켜 하기 화학식 XI의 화합물을 제공하는 단계, 및
(1) 화학식 XI의 화합물을 환원시켜 하기 화학식 XII의 화합물을 형성하고, 화학식 XII의 화합물을 보로네이트(여기서 R은 H이거나, 2개의 R 기는 함께 고리를 형성하고, R1 이외의 보로네이트의 잔기는 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일 기임)와의 교차-커플링 조건에 적용시켜 하기 화학식 I의 화합물을 형성하는 단계; 또는
(2) 화학식 XI의 화합물을 보로네이트(여기서 R은 H이거나, 2개의 R 기는 함께 고리를 형성하고, R1 이외의 보로네이트의 잔기는 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일 기임)와의 교차-커플링 조건에 적용시켜 하기 화학식 XIV의 화합물을 형성하고, 화학식 XIV의 화합물을 환원시켜 하기 화학식 I의 화합물을 형성하는 단계
를 포함하는,
화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 그의 입체이성질체 또는 그의 입체이성질체의 혼합물의 제조 방법.
<화학식 IV>
<화학식 VI>
<화학식 X>
<화학식 XI>
<화학식 XII>
<화학식 I>
<화학식 XIV>
(상기 식에서,
R1은 임의로 치환된 피페리디닐, 임의로 치환된 피리딜, 임의로 치환된 피롤릴, 임의로 치환된 피롤리디닐, 1,4-디메틸티아졸릴, 2-에틸-4-메틸티아졸릴, 2-이소프로필티아졸-5-일, 티아졸릴, 3-에틸티아졸-5-일 또는 1-메틸술포닐피페리딘-4-일이거나,
R1은 -C(O)Z이고, 여기서 Z는 피페라지닐, 피페리디닐, 피페리디닐 프로필, 3-에틸피페라진-1-일, 임의로 치환된 피롤로피롤릴 또는 피페리딘-3-일아미노이거나,
R1은이고, 여기서 R13은 H, 메틸피라졸릴, 메틸이미다졸릴, 벤질, 3-히드록시부틸, 3-(디메틸아미노)-2,2-디메틸프로필, 에틸아미드, 메틸피리딜, 메틸술포닐, (1-메틸이미다졸-2-일)메틸, (1,5-디메틸이미다졸-4-일)메틸 또는 (1-메틸피롤-2-일)메틸이거나, R13은 C(O)W이고, 여기서 W는 -N(CH3)2, 피페리디닐, 피페라지닐 또는 모르폴리닐이거나,
R1은이고, 여기서 R14는 -C(O)CH3, H 또는 (1-메틸피롤-2-일)메틸이거나,
R1은
또는
이거나,
R1은이고, 여기서 A, B 및 D는 모두 탄소이거나, A, B 및 D 중 둘은 탄소이고 다른 하나는 질소이거나, A, B 및 D 중 하나는 탄소이고 나머지 둘은 질소이고; A가 질소인 경우 R4는 부재하고, B가 질소인 경우 R2는 부재하고, D가 질소인 경우 R3은 부재하고;
R2는 H, -CH3 또는 F이거나, R3 및 위치 a 및 b에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피리딘 또는 피라졸을 형성하고;
R3은 H, F, Cl, -CN, -CH3, -OCH3, -OH, -NH2, 메틸술포닐,
또는
이거나, R4 및 b 및 c에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 벤젠, 임의로 치환된 이미다졸, 임의로 치환된 피라졸, 임의로 치환된 피라졸리딘, 임의로 치환된 이미다졸리딘, 임의로 치환된 이소티아졸,
를 형성하거나, R2 및 a 및 b에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피리딘 또는 임의로 치환된 피라졸을 형성하고;
R4는 F, -CN, -OCH3, -OEt, H, Cl, Br, -NH-C(O)-CH-(CH3)2, -N(CH3)2, -CH3, -CH2OH,또는
이거나, 임의로 치환된 피페라지닐, 4-히드록또는 피페리진-1-일, 질소를 통하여 페닐 기에 부착되는 것이 아닌 임의로 치환된 피페리디닐이거나, R3 및 b 및 c에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피라졸 고리 또는
를 형성하거나, R5 및 c 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피라졸 고리 또는 임의로 치환된 피롤 고리를 형성하거나,
R4는 -(q)-C(O)X이고, 여기서 q는 결합, -NH- 또는 -CH2-이고,
X는 -NR11R12이고,
여기서 R11 및 R12는 둘 다 H, 또는 둘 다 -CH2CH3, 또는 둘 다 -CH3이거나, R11 및 R12 중 하나는 H이고 다른 하나는 1,1-디메틸에틸, 시클로부틸, 시클로프로필, 저급 알킬, 메틸 알콜, 프로필 알콜, 시클로부틸메틸; 2,3-디히드록시프로필, 페닐, 벤질, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 메틸아제티디닐, -CH2-NH-CH3, 피라졸릴, 피페라지닐, 알콜, -OCH3 또는이거나,
X는 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 피롤리디닐, 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착되거나 부착되지 않은 임의로 치환된 피페리디닐, 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 피페라지닐, 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 아제티디닐 또는 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 모르폴리닐,
이고;
R5는 H, F, Cl, -CH3, -OCH3, 피롤릴, -CH2OH, -NH2, -OH,또는
이거나, R4 및 c 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 벤젠, 임의로 치환된 피라졸 또는 임의로 치환된 피롤을 형성하거나, R6 및 d 및 e에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피리딘을 형성하거나, R5는 C(O)Y이고, 여기서 Y는 -NH2, -N(CH3)2, 임의로 치환된 피페라지닐, 임의로 치환된 피페리디닐,
또는
이고;
R6은 H, F, -CH3 또는 -CF3이거나, R5 및 e 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 벤젠 또는 임의로 치환된 피라졸을 형성하고;
R7은 -CF3 또는 -CHF2이고;
R8은이고;
R9는 Br, Cl, F, I 또는 H이며;
단, R4가 F인 경우, R2는 -CH3 및 F가 아니고; R3은 -CH3, -CN, F, Cl 및 -OCH3이 아니고; R5는 -CH3, F, Cl 및 -OCH3이 아니고; R6은 -CH3 및 F가 아니고;
R4가 Cl인 경우, R2는 F가 아니고; R3은 F 및 -CN이 아니고; R5는 F 및 -C(O)N(CH3)2가 아니고; R6은 -CF3 및 F가 아니고; D는 질소가 아니고; R5는 -C(O)NH2이거나 R2, R3, R5 및 R6 중 하나는 -CH3이고;
R4가 -CH3인 경우, R3은 F가 아니고; R5는 F가 아니고;
R4가 -OCH3인 경우, R2는 F가 아니고; R3은 Cl 및 -OCH3이 아니고; R5는 Cl 및 -OCH3이 아니고; R6은 F 및 -CF3이 아니고;
R4가 -CN인 경우, R2는 F가 아니고; R3은 Cl, F 및 -OCH3이 아니고; R5는 Cl, F 및 -OCH3이 아니고; R6은 F가 아니고;
R4가 -OCH2CH3인 경우, R3은 Cl 및 F가 아니고; R5는 Cl 및 F가 아니고; R6은 -CF3이 아니고;
R4가인 경우, R3은 H 및 F가 아니고; R5는 H 및 F가 아니고;
R4가인 경우, R2, R3, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R4가인 경우, R3은 F가 아니고; R5는 F가 아니고;
R2가 F인 경우, R3은 -OCH3 및 F가 아니고; R3, R4, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R2가 -CH3인 경우, R3은 Cl이 아니고; R3, R4, R5 및 R6 중 적어도 하나는 -CH3이 아니고; R4 및 R5는 c 및 d에서의 원자와 함께 피라졸릴을 형성하지 않고;
R3이 -OCH3인 경우, R2는 F가 아니고; R6은 F가 아니고;
R3이 F인 경우, X는이 아니고;
R3이 Cl인 경우, R5는 Cl이 아니고; R11은 벤질이 아니고; R12는 벤질이 아니고;
R5가 Cl인 경우, R6은 -CH3이 아니고; R11은 벤질이 아니고; R12는 벤질이 아니고;
R5가 F 또는 -OCH3인 경우, R6은 F가 아니고;
R6이 F인 경우, R2, R3, R4 및 R5 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R3 및 R5가 H인 경우, R11은 시클로프로필이 아니고; R12는 시클로프로필이 아니고;
R9가 Cl인 경우, R1은 아미드 기를 포함하지 않고;
B가 질소이고 A 및 D가 탄소인 경우, R4는 -CN 및이 아니고;
R7이 -CHF2이고 R4가인 경우, R4는 절대 입체화학
를 갖지 않고;
R8이인 경우, 하기 단서가 적용되고:
R4가 F인 경우, R2, R3, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고; R5는 C(O)N(CH3)2가 아니고;
R4가 Cl인 경우, R2, R3, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R3이 F인 경우, R4는 C(O)NHCH2CH2CH2CH3, C(O)N(CH3)2, C(O)NHCH2CH2CH3 및 C(O)NHC(CH3)3이 아니고;
R4는 C(O)NHCH2CH2CH2OH, C(O)NHCH(CH3)2, -CN 및이 아니고;
R1은이 아니고;
R5는이 아니고;
R3은이 아니고;
R2가 F인 경우, R5는 -C(O)NH2가 아니고;
R2가 -CH3인 경우, R4 및 R5는 c 및 d에서의 원자와 함께 피라졸을 형성하지 않고;
B가 질소인 경우, R3 및 R4는 b 및 c에서의 원자와 함께 임의로 치환된 이미다졸을 형성하지 않음;
R8이인 경우, 하기 단서가 적용된다:
R4는 -CH3, -C(O)NHCH2CH2OH, -NHC(O)CH(CH3)2 및이 아니고;
R4가 C(O)NHCH3인 경우, R2, R3, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R4가 -OCH3인 경우, R3은 F 및 -CH3이 아니고; R5는 F 및 -CH3이 아니고;
R4가인 경우, R3은 Cl이 아니고; R5는 Cl이 아니고;
R4가 -C(O)NHCH(CH3)2 또는 -C(O)N(CH2CH3)2인 경우, R3 및 R5 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R5는 -C(O)NH2가 아니고;
R6은 -CF3이 아니고,
여기서 용어 "임의로 치환된"은 대상 구조가, 치환되지 아니하거나, 치환되는 경우 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 직선형, 분지형, 또는 시클릭 포화 탄화수소, 메톡시-, -OH, -NH2, -CH2-NH-CH3, -OCH2CH2CH3, 또는 -OCH(CH3)2로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 치환되는 것을 의미하고, 임의로 치환된 모이어티가 시클릭인 경우, 임의로 치환은 고리 내에 2개의 원자 사이에 메틸 브릿지(bridge)를 포함하고;
여기서 저급 알킬은 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는, 직선형, 또는, 3개 및 4개 탄소 기의 경우에, 직선형, 분지형 또는 시클릭 포화 탄화수소를 지칭함) - 제5항에 있어서, 하기 화학식 IX의 화합물을 단리하는 단계 및 하기 화학식 X의 화합물을 단리하는 단계를 추가로 포함하고,
화학식 IX 및 X의 화합물은 화학식 I의 화합물로부터 단리되는 것인 방법.
<화학식 IX>
<화학식 X>
- 제5항에 있어서, 화학식 I의 화합물이 하기 화학식 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 그의 입체이성질체 또는 그의 입체이성질체의 혼합물인 방법.
<화학식 IV>
(상기 식에서,
R7a는 H 또는 F이고;
고리 A는
[여기서 Y1 및 Y2는 독립적으로 -CH2- 및 -CH2CH2-로 이루어진 군으로부터 선택되고, Y1 및 Y2 각각은 C1-3 알킬에 의해 임의로 치환됨];
[여기서 X1, X2 및 X3은 독립적으로 -CH- 및 N으로 이루어진 군으로부터 선택됨];
[여기서 X1, X2 및 X3은 독립적으로 -CH- 및 N으로 이루어진 군으로부터 선택됨];
[여기서 X는 -CH3, F 또는 Cl에 의해 임의로 치환된 N 또는 -CH-이고,
R14는 -C(O)Z이고, 여기서 Z는 2,3-디히드록시프로필아민; 임의로 가교되거나 탄소 원자에서 저급 알킬로 임의로 치환되는 5 내지 7원 시클릭 디아민; 7 내지 10원 비시클로디아민; 7 내지 11원 스피로디아민; -NH2로 임의로 치환된 4 내지 7원 시클릭 아민으로 치환된 -NH; -OH; -CH2NHR (여기서 R은 H 또는 저급 알킬임); 또는 -NH2로 임의로 치환된 7 내지 11원 스피로알칸으로 치환된 -NH이거나;
R14는 CH3NHC(O)-이고, R14가 부착되는 아릴 고리 상에 탄소 원자는 -CH3, F 또는 Cl 중 하나로 치환되거나; R14는 (CH3)2CHNHC(O)-이고, R14가 부착되는 아릴 고리 상에 탄소 원자는 -CH3, F 또는 Cl 중 하나로 치환되거나; R14는 (CH3)3CNHC(O)-이고, R14가 부착되는 아릴 고리 상에 탄소 원자는 -CH3, F 또는 Cl 중 하나로 치환되거나;
R14는이고, 여기서 피페라진은 임의로 가교되거나 저급 알킬로 치환되고 R10은 H 또는 -CH3이거나;
R14는이고, 여기서 n은 1-3이고 시클릭 디아민은 임의로 가교되거나 저급 알킬로 치환되거나;
R14는이고, 여기서 n은 1-4이거나;
R14는 -NHC(O)NH2 또는 -CH2C(O)NH-이고, 여기서 질소는 4 내지 7원 시클릭 아민; -CH2-C(O)- (여기서 카르보닐은 7 내지 10원 비시클로디아민으로 치환됨); 또는 -CH2C(O)NH2로 치환된 4 내지 7원 시클릭 아민으로 치환됨];
; 또는
[여기서 X는 N 또는 -CH-이고, 여기서 C는 -CH3, F 또는 Cl에 의해 임의로 치환되고,
R10은 -C(O)NH- (여기서 질소는 4 내지 7원 시클릭 아민에 의해 치환됨); 7 내지 10원 비시클로디아민에 의해 치환된 -C(O)-; 7 내지 11원 스피로디아민에 의해 치환된 -C(O)-; 피라졸; 옥사디아졸의 탄소 원자 상에서 -CH3에 의해 임의로 치환된 [1,2,4]옥사디아졸; -NHC(O)CH3; 피페라진에 의해 치환된 -CH2-; 메틸 치환기를 포함하는 피페라진에 의해 치환된 -CH2-; 5 내지 7원 시클릭 디아민에 의해 치환된 -C(O)-; -C(O)NHCH2- (여기서 -CH2-는 아제티딘에 의해 치환됨); 또는 -NH2 치환기를 포함하는 5 내지 7원 시클릭 아민으로 치환된 -C(O)-; 또는
시아노페닐; 이소퀴놀린; 4' 위치에서 -NH2로 치환된 시클로헥센; 1,4-디메틸인다졸-5-일; 1,6-디메틸인다졸-5-일; 4' 위치에서 스피로피페리딘으로 치환된 시클로헥센; 1-피페리디노피라졸; 또는 o-메톡시피리딘임]이고;
여기서 저급 알킬은 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는, 직선형, 또는, 3개 및 4개 탄소 기의 경우에, 직선형, 분지형 또는 시클릭 포화 탄화수소를 지칭함) - 제5항에 있어서, 키랄, 고 성능 액체 크로마토그래피를 통해 또는 부분입체이성질체 결정화를 통해 단리시키는 것인 방법.
- 하기 화학식 V의 화합물과 하기 화학식 VI의 화합물을 축합시켜 하기 화학식 XV의 화합물을 형성하는 단계 및
(1) 화학식 XV의 화합물을 환원시켜 하기 화학식 XVII의 화합물을 형성하고, 화학식 XVII의 화합물을 보로네이트(여기서 R은 H이거나, 2개의 R 기는 함께 고리를 형성하고, R1 이외의 보로네이트의 잔기는 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일 기임)와의 교차-커플링 조건에 적용시켜 하기 화학식 I의 화합물을 형성하는 단계; 또는
(2) 화학식 XV의 화합물을 보로네이트(여기서 R은 H이거나, 2개의 R 기는 함께 고리를 형성하고, R1 이외의 보로네이트의 잔기는 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일 기임)와의 교차-커플링 조건에 적용시켜 하기 화학식 XIV의 화합물을 형성하고, 화학식 XIV의 화합물을 환원시켜 하기 화학식 I의 화합물을 형성하는 단계
를 포함하는,
화학식 I의 화합물(여기서 화학식 I의 각각의 기호는 청구항 1에서 정의된 바와 같음) 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 그의 입체이성질체 또는 그의 입체이성질체의 혼합물의 제조 방법.
<화학식 V>
<화학식 VI>
<화학식 XV>
<화학식 XVII>
<화학식 XIV>
<화학식 I>
- 제9항에 있어서, 하기 화학식 IX의 화합물을 단리하는 단계 및 하기 화학식 X의 화합물을 단리하는 단계를 추가로 포함하고,
화학식 IX 및 X의 화합물은 화학식 I의 화합물로부터 단리되는 것인 제조 방법.
<화학식 IX>
<화학식 X>
- 제9항에 있어서, 화학식 I의 화합물이 하기 화학식 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 그의 입체이성질체 또는 그의 입체이성질체의 혼합물인 제조 방법.
<화학식 IV>
(상기 식에서,
R7a는 H 또는 F이고;
고리 A는
[여기서 Y1 및 Y2는 독립적으로 -CH2- 및 -CH2CH2-로 이루어진 군으로부터 선택되고, Y1 및 Y2 각각은 C1-3 알킬에 의해 임의로 치환됨];
[여기서 X1, X2 및 X3은 독립적으로 -CH- 및 N으로 이루어진 군으로부터 선택됨];
[여기서 X1, X2 및 X3은 독립적으로 -CH- 및 N으로 이루어진 군으로부터 선택됨];
[여기서 X는 -CH3, F 또는 Cl에 의해 임의로 치환된 N 또는 -CH-이고,
R14는 -C(O)Z이고, 여기서 Z는 2,3-디히드록시프로필아민; 임의로 가교되거나 탄소 원자에서 저급 알킬로 임의로 치환되는 5 내지 7원 시클릭 디아민; 7 내지 10원 비시클로디아민; 7 내지 11원 스피로디아민; -NH2로 임의로 치환된 4 내지 7원 시클릭 아민으로 치환된 -NH; -OH; -CH2NHR (여기서 R은 H 또는 저급 알킬임); 또는 -NH2로 임의로 치환된 7 내지 11원 스피로알칸으로 치환된 -NH이거나;
R14는 CH3NHC(O)-이고, R14가 부착되는 아릴 고리 상에 탄소 원자는 -CH3, F 또는 Cl 중 하나로 치환되거나; R14는 (CH3)2CHNHC(O)-이고, R14가 부착되는 아릴 고리 상에 탄소 원자는 -CH3, F 또는 Cl 중 하나로 치환되거나; R14는 (CH3)3CNHC(O)-이고, R14가 부착되는 아릴 고리 상에 탄소 원자는 -CH3, F 또는 Cl 중 하나로 치환되거나;
R14는이고, 여기서 피페라진은 임의로 가교되거나 저급 알킬로 치환되고 R10은 H 또는 -CH3이거나;
R14는이고, 여기서 n은 1-3이고 시클릭 디아민은 임의로 가교되거나 저급 알킬로 치환되거나;
R14는이고, 여기서 n은 1-4이거나;
R14는 -NHC(O)NH2 또는 -CH2C(O)NH-이고, 여기서 질소는 4 내지 7원 시클릭 아민; -CH2-C(O)- (여기서 카르보닐은 7 내지 10원 비시클로디아민으로 치환됨); 또는 -CH2C(O)NH2로 치환된 4 내지 7원 시클릭 아민으로 치환됨];
; 또는
[여기서 X는 N 또는 -CH-이고, 여기서 C는 -CH3, F 또는 Cl에 의해 임의로 치환되고,
R10은 -C(O)NH- (여기서 질소는 4 내지 7원 시클릭 아민에 의해 치환됨); 7 내지 10원 비시클로디아민에 의해 치환된 -C(O)-; 7 내지 11원 스피로디아민에 의해 치환된 -C(O)-; 피라졸; 옥사디아졸의 탄소 원자 상에서 -CH3에 의해 임의로 치환된 [1,2,4]옥사디아졸; -NHC(O)CH3; 피페라진에 의해 치환된 -CH2-; 메틸 치환기를 포함하는 피페라진에 의해 치환된 -CH2-; 5 내지 7원 시클릭 디아민에 의해 치환된 -C(O)-; -C(O)NHCH2- (여기서 -CH2-는 아제티딘에 의해 치환됨); 또는 -NH2 치환기를 포함하는 5 내지 7원 시클릭 아민으로 치환된 -C(O)-; 또는
시아노페닐; 이소퀴놀린; 4' 위치에서 -NH2로 치환된 시클로헥센; 1,4-디메틸인다졸-5-일; 1,6-디메틸인다졸-5-일; 4' 위치에서 스피로피페리딘으로 치환된 시클로헥센; 1-피페리디노피라졸; 또는 o-메톡시피리딘임]이고;
여기서 저급 알킬은 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는, 직선형, 또는, 3개 및 4개 탄소 기의 경우에, 직선형, 분지형 또는 시클릭 포화 탄화수소를 지칭함) - 제9항에 있어서, 키랄, 고 성능 액체 크로마토그래피를 통해 또는 부분입체이성질체 결정화를 통해 단리시키는 것인 제조 방법.
- 하기 화학식 XI의 화합물 또는 하기 화학식 XVI의 화합물을과 반응시켜 하기 화학식 XVIII의 화합물을 형성하는 단계,
하기 화학식 XVIII의 화합물을 친전자체(여기서 M은 OTf, Cl, Br, 또는 I임)와의 교차-커플링 조건에 적용시켜 하기 화학식 XIV 화합물을 형성하는 단계, 및
하기 화학식 XIV 화합물을 환원시켜 하기 화학식 I의 화합물을 형성하는 단계
를 포함하는,
화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 그의 입체이성질체 또는 그의 입체이성질체의 혼합물의 제조 방법.
<화학식 XI>
<화학식 XVI>
<화학식 XVIII>
<화학식 I>
<화학식 XIV>
(상기 식에서,
R1은 임의로 치환된 피페리디닐, 임의로 치환된 피리딜, 임의로 치환된 피롤릴, 임의로 치환된 피롤리디닐, 1,4-디메틸티아졸릴, 2-에틸-4-메틸티아졸릴, 2-이소프로필티아졸-5-일, 티아졸릴, 3-에틸티아졸-5-일, 1-메틸술포닐피페리딘-4-일이거나,
R1은 -C(O)Z이고, 여기서 Z는 피페라지닐, 피페리디닐, 피페리디닐 프로필, 3-에틸피페라진-1-일, 임의로 치환된 피롤로피롤릴, 피페리딘-3-일아미노이거나,
R1은이고, 여기서 R13은 H, 메틸피라졸릴, 메틸이미다졸릴, 벤질, 3-히드록시부틸, 3-(디메틸아미노)-2,2-디메틸프로필, 에틸아미드, 메틸피리딜, 메틸술포닐, (1-메틸이미다졸-2-일)메틸, (1,5-디메틸이미다졸-4-일)메틸, (1-메틸피롤-2-일)메틸이거나, R13은 C(O)W이고, 여기서 W는 -N(CH3)2, 피페리디닐, 피페라지닐 또는 모르폴리닐이거나,
R1은이고, 여기서 R14는 -C(O)CH3, H 또는 (1-메틸피롤-2-일)메틸이거나,
R1은
또는
이거나,
R1은이고, 여기서 A, B 및 D는 모두 탄소이거나, A, B 및 D 중 둘은 탄소이고 다른 하나는 질소이거나, A, B 및 D 중 하나는 탄소이고 나머지 둘은 질소이고; A가 질소인 경우 R4는 부재하고, B가 질소인 경우 R2는 부재하고, D가 질소인 경우 R3은 부재하고;
R2는 H, -CH3 또는 F이거나, R3 및 위치 a 및 b에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피리딘 또는 피라졸을 형성하고;
R3은 H, F, Cl, -CN, -CH3, -OCH3, -OH, -NH2, 메틸술포닐,
이거나, R4 및 b 및 c에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 벤젠, 임의로 치환된 이미다졸, 임의로 치환된 피라졸, 임의로 치환된 피라졸리딘, 임의로 치환된 이미다졸리딘, 임의로 치환된 이소티아졸,
를 형성하거나, R2 및 a 및 b에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피리딘 또는 임의로 치환된 피라졸을 형성하고;
R4는 F, -CN, -OCH3, -OEt, H, Cl, Br, -NH-C(O)-CH-(CH3)2, -N(CH3)2, -CH3, -CH2OH,, 임의로 치환된 피페라지닐, 4-히드록시피페리진-1-일, 질소를 통하여 페닐 기에 부착되는 것이 아닌 임의로 치환된 피페리디닐이거나, R3 및 b 및 c에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피라졸 고리 또는
를 형성하거나, R5 및 c 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피라졸 고리 또는 임의로 치환된 피롤 고리를 형성하거나,
R4는 -(q)-C(O)X이고, 여기서 q는 결합, -NH- 또는 -CH2-이고,
X는 -NR11R12이고,
여기서 R11 및 R12는 둘 다 H, 또는 둘 다 -CH2CH3, 또는 둘 다 -CH3이거나, R11 및 R12 중 하나는 H이고 다른 하나는 1,1-디메틸에틸, 시클로부틸, 시클로프로필, 저급 알킬, 메틸 알콜, 프로필 알콜, 시클로부틸메틸; 2,3-디히드록시프로필, 페닐, 벤질, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 메틸아제티디닐, -CH2-NH-CH3, 피라졸릴, 피페라지닐, 알콜, -OCH3 또는이거나,
X는 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 피롤리디닐, 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착되거나 부착되지 않은 임의로 치환된 피페리디닐, 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 피페라지닐, 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 아제티디닐 또는 질소를 통해 R4의 카르보닐 기에 부착된 임의로 치환된 모르폴리닐,
이고;
R5는 H, F, Cl, -CH3, -OCH3, 피롤릴, -CH2OH, -NH2, -OH,또는
이거나, R4 및 c 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 벤젠, 임의로 치환된 피라졸 또는 임의로 치환된 피롤을 형성하거나, R6 및 d 및 e에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 피리딘을 형성하거나, R5는 C(O)Y이고, 여기서 Y는 -NH2, -N(CH3)2, 임의로 치환된 피페라지닐, 임의로 치환된 피페리디닐,
또는
이고;
R6은 H, F, -CH3, -CF3이거나, R5 및 e 및 d에서의 원자와 함께, 임의로 치환된 벤젠 또는 임의로 치환된 피라졸을 형성하고;
R7은 -CF3 또는 -CHF2이고;
R8은이고;
R9는 Br, Cl, F, I 또는 H이며;
단, R4가 F인 경우, R2는 -CH3 및 F가 아니고; R3은 -CH3, -CN, F, Cl 및 -OCH3이 아니고; R5는 -CH3, F, Cl 및 -OCH3이 아니고; R6은 -CH3 및 F가 아니고;
R4가 Cl인 경우, R2는 F가 아니고; R3은 F 및 -CN이 아니고; R5는 F 및 -C(O)N(CH3)2가 아니고; R6은 -CF3 및 F가 아니고; D는 질소가 아니고; R5는 -C(O)NH2이거나 R2, R3, R5 및 R6 중 하나는 -CH3이고;
R4가 -CH3인 경우, R3은 F가 아니고; R5는 F가 아니고;
R4가 -OCH3인 경우, R2는 F가 아니고; R3은 Cl 및 -OCH3이 아니고; R5는 Cl 및 -OCH3이 아니고; R6은 F 및 -CF3이 아니고;
R4가 -CN인 경우, R2는 F가 아니고; R3은 Cl, F 및 -OCH3이 아니고; R5는 Cl, F 및 -OCH3이 아니고; R6은 F가 아니고;
R4가 -OCH2CH3인 경우, R3은 Cl 및 F가 아니고; R5는 Cl 및 F가 아니고; R6은 -CF3이 아니고;
R4가인 경우, R3은 H 및 F가 아니고; R5는 H 및 F가 아니고;
R4가인 경우, R2, R3, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R4가인 경우, R3은 F가 아니고; R5는 F가 아니고;
R2가 F인 경우, R3은 -OCH3 및 F가 아니고; R3, R4, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R2가 -CH3인 경우, R3은 Cl이 아니고; R3, R4, R5 및 R6 중 적어도 하나는 -CH3이 아니고; R4 및 R5는 c 및 d에서의 원자와 함께 피라졸릴을 형성하지 않고;
R3이 -OCH3인 경우, R2는 F가 아니고; R6은 F가 아니고;
R3이 F인 경우, X는이 아니고;
R3이 Cl인 경우, R5는 Cl이 아니고; R11은 벤질이 아니고; R12는 벤질이 아니고;
R5가 Cl인 경우, R6은 -CH3이 아니고; R11은 벤질이 아니고; R12는 벤질이 아니고;
R5가 F 또는 -OCH3인 경우, R6은 F가 아니고;
R6이 F인 경우, R2, R3, R4 및 R5 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R3 및 R5가 H인 경우, R11은 시클로프로필이 아니고; R12는 시클로프로필이 아니고;
R9가 Cl인 경우, R1은 아미드 기를 포함하지 않고;
B가 질소이고 A 및 D가 탄소인 경우, R4는 -CN 및이 아니고;
R7이 -CHF2이고 R4가인 경우, R4는 절대 입체화학
를 갖지 않고;
R8이인 경우, 하기 단서가 적용되고:
R4가 F인 경우, R2, R3, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고; R5는 C(O)N(CH3)2가 아니고;
R4가 Cl인 경우, R2, R3, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R3이 F인 경우, R4는 C(O)NHCH2CH2CH2CH3, C(O)N(CH3)2, C(O)NHCH2CH2CH3 및 C(O)NHC(CH3)3이 아니고;
R4는 C(O)NHCH2CH2CH2OH, C(O)NHCH(CH3)2, -CN 및이 아니고;
R1은이 아니고;
R5는이 아니고;
R3은이 아니고;
R2가 F인 경우, R5는 -C(O)NH2가 아니고;
R2가 -CH3인 경우, R4 및 R5는 c 및 d에서의 원자와 함께 피라졸을 형성하지 않고;
B가 질소인 경우, R3 및 R4는 b 및 c에서의 원자와 함께 임의로 치환된 이미다졸을 형성하지 않음;
R8이인 경우, 하기 단서가 적용된다:
R4는 -CH3, -C(O)NHCH2CH2OH, -NHC(O)CH(CH3)2 및이 아니고;
R4가 C(O)NHCH3인 경우, R2, R3, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R4가 -OCH3인 경우, R3은 F 및 -CH3이 아니고; R5는 F 및 -CH3이 아니고;
R4가인 경우, R3은 Cl이 아니고; R5는 Cl이 아니고;
R4가 -C(O)NHCH(CH3)2 또는 -C(O)N(CH2CH3)2인 경우, R3 및 R5 중 적어도 하나는 H가 아니고;
R5는 -C(O)NH2가 아니고;
R6은 -CF3이 아니고,
여기서 용어 "임의로 치환된"은 대상 구조가, 치환되지 아니하거나, 치환되는 경우 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 직선형, 분지형, 또는 시클릭 포화 탄화수소, 메톡시-, -OH, -NH2, -CH2-NH-CH3, -OCH2CH2CH3, 또는 -OCH(CH3)2로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 치환되는 것을 의미하고, 임의로 치환된 모이어티가 시클릭인 경우, 임의로 치환은 고리 내에 2개의 원자 사이에 메틸 브릿지(bridge)를 포함하고;
여기서 저급 알킬은 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는, 직선형, 또는, 3개 및 4개 탄소 기의 경우에, 직선형, 분지형 또는 시클릭 포화 탄화수소를 지칭함) - 제13항에 있어서, 하기 화학식 IX의 화합물을 단리하는 단계 및 하기 화학식 X의 화합물을 단리하는 단계를 추가로 포함하고,
화학식 IX 및 X의 화합물은 화학식 I의 화합물로부터 단리되는 것인 방법.
<화학식 IX>
<화학식 X>
- 제13항에 있어서, 화학식 I의 화합물이 하기 화학식 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 그의 입체이성질체 또는 그의 입체이성질체의 혼합물인 방법.
<화학식 IV>
(상기 식에서,
R7a는 H 또는 F이고;
고리 A는
[여기서 Y1 및 Y2는 독립적으로 -CH2- 및 -CH2CH2-로 이루어진 군으로부터 선택되고, Y1 및 Y2 각각은 C1-3 알킬에 의해 임의로 치환됨];
[여기서 X1, X2 및 X3은 독립적으로 -CH- 및 N으로 이루어진 군으로부터 선택됨];
[여기서 X1, X2 및 X3은 독립적으로 N 또는 -CH-로 이루어진 군으로부터 선택됨];
[여기서 X는 -CH3, F 또는 Cl에 의해 임의로 치환된 -CH- 또는 N이고,
R14는 -C(O)Z이고, 여기서 Z는 2,3-디히드록시프로필아민; 임의로 가교되거나 탄소 원자에서 저급 알킬로 임의로 치환되는 5 내지 7원 시클릭 디아민; 7 내지 10원 비시클로디아민; 7 내지 11원 스피로디아민; -NH2로 임의로 치환된 4 내지 7원 시클릭 아민으로 치환된 -NH; -OH; -CH2NHR (여기서 R은 H 또는 저급 알킬임); 또는 -NH2로 임의로 치환된 7 내지 11원 스피로알칸으로 치환된 -NH이거나;
R14는 CH3NHC(O)-이고, R14가 부착되는 아릴 고리 상에 탄소 원자는 -CH3, F 또는 Cl 중 하나로 치환되거나; R14는 (CH3)2CHNHC(O)-이고, R14가 부착되는 아릴 고리 상에 탄소 원자는 -CH3, F 또는 Cl 중 하나로 치환되거나; R14는 (CH3)3CNHC(O)-이고, R14가 부착되는 아릴 고리 상에 탄소 원자는 -CH3, F 또는 Cl 중 하나로 치환되거나;
R14는이고, 여기서 피페라진은 임의로 가교되거나 C1-4 알킬로 치환되고 R10은 H 또는 -CH3이거나;
R14는이고, 여기서 n은 1-3이고 시클릭 디아민은 임의로 가교되거나 저급 알킬로 치환되거나;
R14는이고, 여기서 n은 1-4이거나;
R14는 -NHC(O)NH2 또는 -CH2C(O)NH-이고, 여기서 질소는 4 내지 7원 시클릭 아민; -CH2-C(O)- (여기서 카르보닐은 7 내지 10원 비시클로디아민으로 치환됨); 또는 -CH2C(O)NH2로 치환된 4 내지 7원 시클릭 아민으로 치환됨];
; 또는
[여기서 X는 N 또는 -CH-이고, 여기서 C는 -CH3, F 또는 Cl에 의해 임의로 치환되고,
R10은 -C(O)NH- (여기서 질소는 4 내지 7원 시클릭 아민에 의해 치환됨); 7 내지 10원 비시클로디아민에 의해 치환된 -C(O)-; 7 내지 11원 스피로디아민에 의해 치환된 -C(O)-; 피라졸; 옥사디아졸의 탄소 원자 상에서 -CH3에 의해 임의로 치환된 [1,2,4]옥사디아졸; -NHC(O)CH3; 피페라진에 의해 치환된 -CH2-; 메틸 치환기를 포함하는 피페라진에 의해 치환된 -CH2-; 5 내지 7원 시클릭 디아민에 의해 치환된 -C(O)-; -C(O)NHCH2- (여기서 -CH2-는 아제티딘에 의해 치환됨); 또는 -NH2 치환기를 포함하는 5 내지 7원 시클릭 아민으로 치환된 -C(O)-; 또는
시아노페닐; 이소퀴놀린; 4' 위치에서 -NH2로 치환된 시클로헥센; 1,4-디메틸인다졸-5-일; 1,6-디메틸인다졸-5-일; 4' 위치에서 스피로피페리딘으로 치환된 시클로헥센; 1-피페리디노피라졸; 또는 o-메톡시피리딘임]이고;
여기서 저급 알킬은 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는, 직선형, 또는, 3개 및 4개 탄소 기의 경우에, 직선형, 분지형 또는 시클릭 포화 탄화수소를 지칭함) - 제13항에 있어서, 키랄, 고 성능 액체 크로마토그래피를 통해 또는 부분입체이성질체 결정화를 통해 단리시키는 것인 방법.
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