CN101400678A - 可用作蛋白激酶抑制剂的噻吩酰胺 - Google Patents

Abstract

本发明涉及可用作蛋白激酶抑制剂的式(I)化合物。本发明也提供包含所述化合物的药学上可接受的组合物和在各种疾病、病症或疾患的治疗中使用这些组合物的方法。本发明也提供制备本发明化合物的方法。

Description

可用作蛋白激酶抑制剂的噻吩酰胺

发明的技术领域

[0001]本发明涉及可用作激酶抑制剂的化合物。本发明也提供包含本发明化合物的药学上可接受的组合物和在各种疾患的治疗中使用这些组合物的方法。本发明也提供制备本发明化合物的方法。

发明背景

[0002]近年来，更好地理解与疾病有关的酶和其他生物分子的结构，大大有助于寻求新的治疗剂。已经成为广泛研究的主题的一类重要的酶是蛋白激酶。

[0003]蛋白激酶构成一大家族在结构上相关的酶，它们负责控制细胞内的多种信号转导过程(参见Hardie，G and Hanks，S.TheProtein Kinase Facts Book，I and II，Academic Press，San Diego，CA：1995)。蛋白激酶被认为从共同的祖先基因进化而来，由于保存了它们的结构和催化功能。几乎所有的激酶都含有相似的250-300个氨基酸催化域。激酶可以根据它们磷酸化的底物分为若干家族(例如蛋白质-酪氨酸、蛋白质-丝氨酸/苏氨酸、脂质等)。已经鉴别了一般对应于每种激酶家族的序列基序(例如参见Hanks，S.K.，Hunter，T.，FASEB J.1995，9，576-596；Knighton等人，Science 1991，253，407-414；Hiles等人，Cell 1992，70，419-429；Kunz等人，Cell1993，73，585-596；Garcia-Bustos等人，EMBO J 1994，13，2352-2361)。

[0004]一般而言，蛋白激酶通过影响磷酰基从三磷酸核苷转移至参与信号传递途径的蛋白质接受体而介导细胞内信号传递。这些磷酸化事件充当分子开关，能够调控或调节靶蛋白的生物功能。这些磷酸化事件最终是响应于多种细胞外和其他刺激而被激发的。这类刺激的实例包括环境与化学应激反应信号(例如休克、热激、紫外辐射、细菌内毒素和H₂O₂)、细胞因子(例如白介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α))和生长因子(例如粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和成纤维细胞生长因子(FGF))。细胞外刺激可以影响一种或多种细胞应答，涉及细胞生长、迁移、分化、激素分泌、转录因子活化、肌肉收缩、糖代谢、蛋白质合成控制、存活和细胞周期调节。

[0005]很多疾病与由上述蛋白激酶-介导的事件激发的异常细胞应答有关。这些疾病包括癌症、自体免疫疾病、炎性疾病、骨疾病、代谢疾病、神经与神经变性疾病、心血管疾病、变态反应与哮喘、阿尔茨海默氏病和激素相关性疾病。因此，医药化学界一直努力寻找作为治疗剂有效的蛋白激酶抑制剂。

[0006]极体样激酶(Plk)属于丝氨酸/苏氨酸激酶家族，它们在从酵母到人类的不同种属之间是高度保守的(参见Lowery DM等人，Oncogene 2005，24；248-259)。Plk激酶在细胞周期中扮演多重角色，包括进入有丝分裂和通过有丝分裂进展的控制。

[0007]Plk1是Plk家族成员中获得最充分鉴别的。Plk1被广泛地表达，在有丝分裂指数高的组织中最为丰富。Plk1的蛋白质水平在有丝分裂中上升和达到峰值(Hamanaka，R等人、J Biol Chem 1995，270，21086-21091)。所报道的Plk1底物是所有已知调节进入有丝分裂和通过有丝分裂进展的分子，包括CDC25C、细胞周期蛋白B、p53、APC、BRCA2和蛋白酶体。Plk1在多种癌症类型中被增量调节，表达水平与疾病的严重性相关(Macmillan，JC等人，Ann Surg Oncol 2001，8，729-740)。Plk1是一种致癌基因，能够转化NIH-3T3细胞(Smith，MR等人，Biochem Biophys Res Commun 1997，234，397-405)。Plk1因siRNA、反义引物、微量注射的抗体缺失或抑制或者向细胞转染Plk1的显性阴性构件会体外减少肿瘤细胞的增殖和活力(Guan，R等人，Cancer Res 2005，65，2698-2704；Liu，X等人，Proc Natl Acad SciU S A 2003，100，5789-5794，Fan，Y等人，World J Gastroenterol2005，11，4596-4599；Lane，HA等人，J Cell Biol 1996，135，1701-1713)。缺失Plk1的肿瘤细胞具有被激活的纺锤体检查点以及纺锤体生成、染色体排列与分离和胞质分裂上的缺陷。活力丧失据报道是细胞程序死亡诱导的结果。相反，正常的细胞据报道在Plk1的缺失后维持活力。体内Plk1被siRNA击倒或者显性阴性构件的使用会在异种移植模型中引起肿瘤的生长抑制或消退。

[0008]Plk2主要在细胞周期的G1期被表达，定位于分裂间期细胞中的中心体。Plk2剔除的小鼠发育正常，可生育，具有正常的存活率，但是比野生型小鼠小20％左右。来自剔除动物的细胞通过细胞周期进展比正常小鼠更加缓慢(Ma，S等人，Mol Cell Biol 2003，23，6936-6943)。Plk2因siRNA缺失或者向细胞转染无激酶活性的突变体会阻滞中心粒复制。Plk2的减量调节也使肿瘤细胞敏感于紫杉醇，促进有丝分裂的灾变，这在部分程度上借助p53应答的抑制(Burns TF等人，Mol Cell Biol 2003，23，5556-5571)。

[0009]Plk3在细胞周期全程被表达，从G1增加到有丝分裂。表达在高度增殖性卵巢肿瘤和乳腺癌中被增量调节，与预后较差有关(Weichert，W等人，Br J Cancer 2004，90，815-821；Weichert，W等人，Virchows Arch 2005，446，442-450)。除了有丝分裂的调节以外，Plk3被相信参与细胞周期期间的高尔基体裂殖和DNA-损害应答。Plk3被显性阴性表达抑制据报道促进DNA损伤后的p53-独立性细胞程序死亡，抑制肿瘤细胞形成集落(Li，Z等人、J Biol Chem 2005，280，16843-16850)。

[0010]Plk4在结构上更不同于其他Plk家族成员。这种激酶的缺失导致癌细胞的细胞程序死亡(Li，J等人，Neoplasia 2005，7，312-323)。Plk4剔除的小鼠停止在E7.5，大部分细胞处于有丝分裂中，染色体被部分隔离(Hudson，JW等人，Current Biology 2001，11，441-446)。

[0011]蛋白激酶家族的分子已经在肿瘤细胞的生长、增殖和存活中有牵连。因此，迫切需要开发可用作蛋白激酶抑制剂的化合物。有确凿的证据表明Plk激酶是细胞分化所必需的。细胞周期阻滞是经过临床验证的抑制肿瘤细胞增殖和活力的手段。因此，需要开发可用作Plk家族蛋白激酶(例如Plk1、Plk2、Plk3和Plk4)抑制剂的化合物，它们将抑制增殖，减少肿瘤细胞活力，特别是对于开发新的癌症治疗存在强烈的医学需求。

发明概述

[0012]本发明化合物和其药学上可接受的组合物是有效的蛋白激酶抑制剂。在有些实施方式中，这些化合物是有效的PLK蛋白激酶抑制剂；在有些实施方式中为PLK1蛋白激酶抑制剂。这些化合物具有如本文定义的式I或其药学上可接受的盐。

[0013]这些化合物和其药学上可接受的组合物可用于治疗或预防多种疾病、疾患或病症，包括但不限于自体免疫、炎性、增殖或过度增殖疾病、神经变性疾病或者免疫性-介导的疾病。由本发明提供的化合物也可用于生物与病理现象中的激酶研究；由这类激酶介导的细胞内信号转导途径的研究；和新激酶抑制剂的对比评价。

发明的详细说明

本发明提供式I化合物：

其中

R¹是H、C_1-6脂族基或C_3-6环脂族基；

G是-C(R)₂-或-O-；

L是可选被0-3个J^L取代的C_0-3脂族基；

环A是5-6元芳族单环，含有0-3个选自O、N和S的杂原子；环A可选地被0-3个J^A取代；环A稠合于环A’；

环A’是5-8元芳族或非芳族单环，含有0-3个选自O、N和S的杂原子；环A’可选地被0-4个J^A’取代；

环B是5-6元芳族单环，含有0-3个选自O、N和S的杂原子；环B可选地被0-5个J^B取代，并且可选地稠合于环B’；

环B’是5-8元芳族或非芳族单环，含有0-3个选自O、N和S的杂原子；环B’可选地被0-4个J^B’取代；

每个J^A、J^A’、J^B和J^B’独立地是C_1-6卤代烷基、卤代基、NO₂、CN、Q或-Z-Q；

Z独立地是C_1-6脂族基，可选地被0-3次出现的-NR-、-O-、-S-、-C(O)-、-C(＝NR)-、-C(＝NOR)-、-SO-或-SO₂-中断；每个Z可选地被0-2个J^Z取代；

Q是H；C_1-6脂族基；3-8元芳族或非芳族单环，具有0-3个独立选自O、N和S的杂原子；或者8-12元芳族或非芳族二环环系，具有0-5个独立选自O、N和S的杂原子；每个Q可选地被0-5个J^Q取代；

每个J^L和J^Z独立地是H、卤代基、C_1-6脂族基、C_3-6环脂族基、NO₂、CN、-NH₂、-NH(C_1-4脂族基)、-N(C_1-4脂族基)₂、-OH、-O(C_1-4脂族基)、-CO₂H、-CO₂(C_1-4脂族基)、-O(卤代C_1-4脂族基)或卤代(C_1-4脂族基)；

每个J^Q独立地是M或-Y-M；

每个Y独立地是未取代的C_1-6脂族基，可选地被0-3次出现的-NR-、-O-、-S-、-C(O)-、-SO-或-SO₂-中断；

每个M独立地是H、C_1-6脂族基、C_3-6环脂族基、卤代(C_1-4脂族基)、-O(卤代C_1-4脂族基)、C_3-6杂环基、卤代基、NO₂、CN、OH、OR’、SH、SR’、NH₂、NHR’、N(R’)₂、COH、COR’、CONH₂、CONHR’、CONR’₂、NHCOR’、NR’COR’、NHCONH₂、NHCONHR’、NHCON(R’)₂、SO₂NH₂、SO₂NHR’、SO₂N(R’)₂、NHSO₂R’或NR’SO₂R’；

R是H或未取代的C_1-6脂族基；

R’是未取代的C_1-6脂族基；或者两个R’基团与它们所键合的原子一起构成未取代的3-8元非芳族单环，具有0-1个独立选自O、N和S的杂原子；

其条件是环A稠合于环A’不构成

[0014]本发明的化合物包括如上一般描述的那些，进一步阐述为本文公开的大类、小类和品种。本文应当适用下列定义，另有指示除外。出于本发明的目的，化学元素将根据元素周期表CAS版Handbookof Chemistry and Physics，75^th Ed进行识别。另外，有机化学的一般原理描述在“Organic Chemistry”，Thomas Sorrell，UniversityScience Books，Sausalito：1999和“March’s Advanced OrganicChemistry”，5^th Ed.，Ed.：Smith，M.B.and Ma rch，J.，John Wiley& Sons，New York：2001中，其完整内容引用在此作为参考。

[0015]正如本文所述，所指定的原子数量范围包括其中的任意整数。例如，具有1-4个原子的基团可能具有1、2、3或4个原子。

[0016]正如本文所述，本发明化合物可以可选地被一个或多个取代基取代，例如上文概述所阐述的，或者如本发明的特定大类、小类和品种所例证的。将被领会到，措辞“可选被取代的”与措辞“取代或未取代的”是可互换使用的。一般而言，术语“取代”无论前面有无术语“可选”，都表示给定结构中的氢原子团被指定取代基的原子团所代替。除非另有指示，可选被取代的基团可以在该基团每个可取代的位置上具有取代基，若任意给定结构中一个以上位置可以被一个以上选自指定组的取代基所取代，则取代基可以在每个位置上是相同或不同的。本发明所关注的取代基组合优选地是能形成稳定的或化学上可行的化合物的那些。

[0017]本文所用的术语“稳定”表示在受到用于它们制备、检测、回收、纯化的条件和用于一种或多种本文所公开的目的时基本上不变的化合物。在有些实施方式中，稳定的化合物或化学上可行的化合物是在没有水分或其他化学反应性条件的存在下、在40℃或以下的温度下保持至少一周而基本上不发生变化的化合物。

[0018]本文所用的术语“脂族基”或“脂族基团”等表示直链(即未分支)或分支的、取代或未取代的烃链，它是完全饱和的或者含有一个或多个不饱和单元，具有单一的与分子其余部分连接的点。除非另有说明，脂族基团含有1-20个脂族碳原子。在有些实施方式中，脂族基团含有1-10个脂族碳原子。在其他实施方式中，脂族基团含有1-8个脂族碳原子。在其他实施方式中，脂族基团含有1-6个脂族碳原子，在其他实施方式中，脂族基团含有1-4个脂族碳原子。适合的脂族基团包括但不限于直链或支链的取代或未取代的烷基、链烯基或炔基。具体实例包括但不限于甲基、乙基、异丙基、正丙基、仲丁基、乙烯基、正丁烯基、乙炔基和叔丁基。

[0019]术语“环脂族基”(或者“碳环”或“碳环基”或“环烷基”等)表示单环C₃-C₈烃或二环C₈-C₁₂烃，它是完全饱和的或者含有一个或多个不饱和单元，但是不是芳族的，具有单一的与分子其余部分连接的点，其中所述二环环系中任意个别的环具有3-7个成员。适合的环脂族基团包括但不限于环烷基和环烯基。具体实例包括但不限于环己基、环丙烯基和环丁基。

[0020]本文所用的术语“杂环”、“杂环基”、或“杂环的”等表示非芳族的单环、二环或三环环系，其中一个或多个环成员是独立选择的杂原子。在有些实施方式中，“杂环”、“杂环基”或“杂环的”基团具有三至十四个环成员，其中一个或多个环成员是独立选自氧、硫、氮或磷的杂原子，系统中每个环含有3至7个环成员。

[0021]适合的杂环包括但不限于3-1H-苯并咪唑-2-酮、3-(1-烷基)-苯并咪唑-2-酮、2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-四氢噻吩基、3-四氢噻吩基、2-吗啉代基、3-吗啉代基、4-吗啉代基、2-硫吗啉代基、3-硫吗啉代基、4-硫吗啉代基、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、1-四氢哌嗪基、2-四氢哌嗪基、3-四氢哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、1-吡唑啉基、3-吡唑啉基、4-吡唑啉基、5-吡唑啉基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、2-噻唑烷基、3-噻唑烷基、4-噻唑烷基、1-咪唑烷基、2-咪唑烷基、4-咪唑烷基、5-咪唑烷基、二氢吲哚基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、苯并硫杂环戊烷、苯并二噻烷和1，3-二氢-咪唑-2-酮。

[0022]环状基团(例如环脂族基和杂环)可以是线性稠合、桥连或螺环的。

[0023]术语“杂原子”表示一个或多个氧、硫、氮或磷(包括氮、硫或磷的任意氧化形式；任意碱性氮或杂环可取代氮的季铵化形式，例如N(如在3，4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或NR⁺(如在N-取代的吡咯烷基中))。

[0024]本文所用的术语“不饱和的”意味着该部分具有一个或多个不饱和单元。

[0025]本文所用的术语“非芳族”描述要么饱和、要么部分不饱和的环，但是不是芳族的。

[0026]本文所用的术语“芳族”描述完全不饱和的环，如同本领域已知的术语芳族。

[0027]本文所用的术语“烷氧基”或“硫代烷基”表示如前文所定义的烷基通过氧(“烷氧基”)或硫(“硫代烷基”)原子与主体碳链连接。

[0028]术语“卤代烷基”、“卤代链烯基”、“卤代脂族基”和“卤代烷氧基”表示被一个或多个卤原子取代的烷基、链烯基或烷氧基，视情况而定。术语“卤素”、“卤代基”和“hal”表示F、Cl、Br或I。

[0029]单独或者作为更大部分“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”的一部分使用的术语“芳基”表示具有总计五至十四个环成员的单环、二环和三环环系，其中该系统中至少一个环是芳族的，并且其中该系统中每一环含有3至7个环成员。术语“芳基”可以与术语“芳基环”互换使用。术语“芳基”也表示如下定义的杂芳基环系。

[0030]单独或者作为更大部分“杂芳烷基”或“杂芳基烷氧基”的一部分使用的术语“杂芳基”表示具有总计五至十四个环成员的单环、二环和三环环系，其中该系统中至少一个环是芳族的，该系统中至少一个环含有一个或多个杂原子，并且其中该系统中每一环含有3至7个环成员。术语“杂芳基”可以与术语“杂芳基环”或术语“杂芳族基”互换使用。适合的杂芳基环包括但不限于2-呋喃基、3-呋喃基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、苯并咪唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、N-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、哒嗪基(例如3-哒嗪基)、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、四唑基(例如5-四唑基)、三唑基(例如2-三唑基和5-三唑基)、2-噻吩基、3-噻吩基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基(例如2-吲哚基)、吡唑基(例如2-吡唑基)、异噻唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，3-三唑基、1，2，3-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、嘌呤基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、喹啉基(例如2-喹啉基、3-喹啉基、4-喹啉基)和异喹啉基(例如1-异喹啉基、3-异喹啉基或4-异喹啉基)。

[0031]本文所用的术语“保护基团”和“保护性基团”表示用于暂时封闭多官能化合物中一个或多个所需反应性位置的成分。在某些实施方式中，保护基团具有下列特征中的一个或多个或者优选全部：a)以良好的收率选择性反应，得到被保护的底物，b)它对发生在一个或多个其他反应性位置的反应而言是稳定的；和c)以良好的收率被不攻击所再生的官能团的试剂所选择性除去。示范性保护基团参见Greene，T.W.，Wuts，P.Gin“Protective Groups in OrganicSynthesis”，Third Edition，John Wiley & Sons，New York：1999和本书的其他版本，其完整内容引用在此作为参考。本文所用的术语“氮保护基团”表示用于暂时封闭多官能化合物中一个或多个所需氮反应性位置的成分。优选的氮保护基团也具备上述特征，某些示范性氮保护基团也参见Chapter 7 in Greene，T.W.，Wuts，P.G in“Protective Groups in Organic Synthesis”，Third Edition，JohnWiley & Sons，New York：1999，其完整内容引用在此作为参考。

[0032]在有些实施方式中，烷基或脂族链可以可选地被另一原子或基团中断。这意味着烷基或脂族链的亚甲基单元可选地被所述其他原子或基团代替。这类原子或基团的实例将包括但不限于-NR-、-O-、-S-、-CO₂-、-OC(O)-、-C(O)CO-、-C(O)-、-C(O)NR-、-C(＝N-CN)、-NRCO-、-NRC(O)O-、-SO₂NR-、-NRSO₂-、-NRC(O)NR-、-OC(O)NR-、-NRSO₂NR-、-SO-或-SO₂-，其中R是如本文定义的。除非另有指定，可选的替代生成化学上稳定的化合物。可选的中断可以发生在链内，也可以发生在链的末端；也就是在连接点和/或也在末端。两个可选的替代也可以在链内彼此相邻，只要导致化学上稳定的化合物。

[0033]除非另有指定，如果代替或中断发生在末端，代替原子键合于末端上的H。例如，如果-CH₂CH₂CH₃可选地被-O-中断，所得化合物可能是-OCH₂CH₃、-CH₂OCH₃或-CH₂CH₂OH。

[0034]除非另有规定，本文所描绘的结构也意味着包括该结构的所有异构(例如对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构))形式；例如每一不对称中心的R与S构型，(Z)与(E)双键异构体，和(Z)与(E)构象异构体。因此，这些化合物的单一立体化学异构体以及对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构)混合物都属于本发明的范围。

[0035]除非另有规定，本发明化合物的所有互变异构形式都属于本发明的范围。

[0036]除非另有规定，取代基可以围绕任意可旋转的键自由旋转。例如，被描绘为

的取代基也代表

[0037]另外，除非另有规定，本文所描绘的结构也意味着包括仅在一个或多个同位素富集原子的存在上有所不同的化合物。例如，除了氢被氘或氚代替或者碳被¹³C-或¹⁴C-富集的碳代替以外具有本发明结构的化合物都属于本发明的范围。这类化合物例如可用作生物学测定法中的分析工具或探针。

[0038]使用下列缩写：

PG           保护基团

LG           离去基团

DCM          二氯甲烷

Ac           乙酰基

PdCl₂(PPh₃)₂      二氯双(三苯膦)钯(II)

Pd(PPh₃)₄         四(三苯膦)钯(O)

PdCl₂(dppf)       二氯[1，1’-二茂铁基双(二苯膦)]钯(II)

TMS          三甲基硅烷基

TMSI         三甲基碘化硅

TMSCl        三甲基氯化硅

DMF          二甲基甲酰胺

EtOAc        乙酸乙酯

DMSO         二甲基亚砜

MeCN         乙腈

TFA          三氟乙酸

TCA          三氯乙酸

ATP          三磷酸腺苷

EtOH         乙醇

Ph           苯基

Me           甲基

Et           乙基

Bu           丁基

DEAD         偶氮二羧酸二乙酯

HEPES        4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸

BSA          牛血清白蛋白

DTT          二硫苏糖醇

MOPS         4-吗啉丙磺酸

NMR          核磁共振

HPLC         高效液相色谱

LCMS        液相色谱-质谱

TLC         薄层色谱

Rt          保留时间

[0039]在本发明的有些实施方式中，G是-C(R)₂-。在其他实施方式中，G是O。

[0040]在有些实施方式中，R¹是H。

[0041]在有些实施方式中，环A是5-元环，含有1-3个选自O、N和S的杂原子。在其他实施方式中，环A是5-元环，含有1-2个选自O、N和S的杂原子。在其他实施方式中，环A是6-元环，含有1-2个选自O、N和S的杂原子。

[0042]在有些实施方式中，环A’是5-6元芳族单环，含有0-3个选自O、N和S的杂原子。

[0043]在有些实施方式中，环A-A’是如式I-a所代表的：

其中环A含有选自O、N和S的杂原子(H-键受体)，它相邻于另一个选自NH和C-J^A的原子(H-键供体)；它相邻于连接点；J^A选自H、OH、SH、NH₂和NHR。连接点是键合于噻吩环的原子。在式I-a中，连接点被描绘为

实例包括但不限于下列各式：

[0044]在其他实施方式中，环A的杂原子是N。在其他实施方式中，J^A是H。在有些实施方式中，A是N，J^A是H。在有些实施方式中，环A-A’选自如下：

[0045]在其他实施方式中，环A-A’选自如下：

[0046]在其他实施方式中，环A-A’选自如下：

且J^A是H。

[0047]在其他实施方式中，环A-A’选自如下：

[0048]在有些实施方式中，环B是6元芳族单环，含有0-2个氮原子。在有些实施方式中，环B稠合于环B’。在有些实施方式中，环B’是5-6元芳族单环，含有0-3个选自O、N和S的杂原子。

[0049]在有些实施方式中，J^A是H、C_1-6脂族基、C_3-6环脂族基、卤代(C_1-4脂族基)、-O(卤代C_1-4脂族基)、C_3-6杂环基、卤代基、NO₂、CN、OH、OR、SH、SR、NH₂、NHR、N(R)₂、COH、COR、CONH₂、CONHR、CONR₂、NHCOR、NRCOR、NHCONH₂、NHCONHR、NHCON(R)₂、SO₂NH₂、SO₂NHR、SO₂N(R)₂、NHSO₂R或NRSO₂R。在有些实施方式中，J^A是H。

[0050]在其他实施方式中，J^A’是H、C_1-6脂族基、C_3-6环脂族基、卤代(C_1-4脂族基)、-O(卤代C_1-4脂族基)、C_3-6杂环基、卤代基、NO₂、CN、OH、OR、SH、SR、NH₂、NHR、N(R)₂、COH、COR、CONH₂、CONHR、CONR₂、NHCOR、NRCOR、NHCONH₂、NHCONHR、NHCON(R)₂、SO₂NH₂、SO₂NHR、SO₂N(R)₂、NHSO₂R或NRSO₂R。

[0051]在另一种实施方式中，J^A’是-NHCOR。

[0052]在另一种实施方式中，J^A’是-NHCOR，R是C_1-6烷基。在这些实施方式的某些形式中，烷基是甲基。在其他形式中是乙基。

[0053]在另一种实施方式中，环A-A’是：

[0054]在有些实施方式中，J^B是H、C_1-6脂族基、C_3-6环脂族基、卤代(C_1-4脂族基)、-O(卤代C_1-4脂族基)、C_3-6杂环基、卤代基、NO₂、CN、OH、OR、SH、SR、NH₂、NHR、N(R)₂、COH、COR、CONH₂、CONHR、CONR₂、NHCOR、NRCOR、NHCONH₂、NHCONHR、NHCON(R)₂、SO₂NH₂、SO₂NHR、SO₂N(R)₂、NHSO₂R或NRSO₂R。

[0055]在其他实施方式中，J^B’是H、C_1-6脂族基、C_3-6环脂族基、卤代(C_1-4脂族基)、-O(卤代C_1-4脂族基)、C_3-6杂环基、卤代基、NO₂、CN、OH、OR、SH、SR、NH₂、NHR、N(R)₂、COH、COR、CONH₂、CONHR、CONR₂、NHCOR、NRCOR、NHCONH₂、NHCONHR、NHCON(R)₂、SO₂NH₂、SO₂NHR、SO₂N(R)₂、NHSO₂R或NRSO₂R。

[0056]在有些实施方式中，本发明化合物是如表1所代表的。

表1

通用合成方法

[0057]本发明化合物一般可以借助下列通用流程所描绘的方法和随后的制备例加以制备。除非另有指示，下列流程中的所有变量都是如本文定义的。

流程1

[0058]上述流程1显示制备本发明化合物的通用合成途径，其中环A经由碳原子连接于噻吩核。原料3-甲氧基噻吩1在本领域技术人员已知的适合的卤化条件下被二卤化。位置2的卤素在适合的酰化条件下被选择性转化为酯部分，得到2，其中X是卤代基。2的甲氧基去保护得到3，3的3-羟基然后在Mitsunobu条件下用适当的官能团衍生化，得到4，其中X是卤代基。

[0059]4中噻吩核(X)的位置5的剩余卤素然后在适合的交叉偶联条件下与i进行交叉偶联反应，其中CP是适当的偶联基团，得到5。

[0060]作为替代选择，4中噻吩核的位置5的剩余卤素被转化为交叉偶联基团(CP)，然后与ii进行交叉偶联反应，其中X是卤代基，得到5。最后，5中的酯部分在适合的酰胺生成条件下被转化为酰胺，得到本发明化合物。

流程2

[0061]上述流程2显示制备本发明化合物的替代合成途径，其中环A经由碳原子连接于噻吩核。流程1所述中间体2与i进行交叉偶联反应，其中CP是适当的交叉偶联基团，得到6。作为替代选择，2中噻吩核的位置5的卤素被转化为适当的交叉偶联基团(CP)，然后与ii进行交叉偶联反应，其中X是卤代基，得到6。6的甲氧基去保护得到7，7的3-羟基然后在Mitsunobu条件下用适当的官能团衍生化，得到5，它在适合的酰胺生成条件下被转化为酰胺，得到本发明化合物。

流程3

[0062]上述流程3显示制备本发明化合物的通用合成途径，其中环A经由氮原子连接于噻吩核。使Michael受体8(利用与Synthesis，(10)，847-850，1984的报道相似的方法制备)在共轭加成中与反应，其中环A是含氮环，生成9。9的3-羟基然后在Mitsunobu条件下用适当的官能团衍生化，得到10。最后，10中酯部分在适合的酰胺生成条件下被转化为酰胺，得到本发明化合物。

流程4

[0063]上述流程4显示制备本发明化合物5a和5b的替代途径，其中CP是B(OR⁴)₂，R⁴是生成代硼酸酯的基团。将可商购的原料11在Mitsunobu条件下用适当的官能团衍生化，得到中间体12a。然后使12a和可商购的12b受到去质子化条件处理，继而用所需的代硼酸酯衍生物淬灭，分别得到本发明的式5a和5b化合物。

[0064]本发明也提供制备本发明化合物的方法。

[0065]本发明的一种实施方式提供制备式I化合物的方法：

其中G是O，R¹是H，环A、环B、J^A、J^B和L是如本文定义的，包含使式5化合物

其中G是O，R¹是C_1-6脂族基，环A、环B、J^A、J^B和L是如本文定义的，

在适合的酰胺生成条件下反应，生成式I化合物。适合的酰胺生成条件是本领域技术人员已知的，可以参见“March’s AdvancedOrganic Chemistry”。适合的酰胺生成条件的实例包括但不限于在NH₃/MeOH的存在下加热甲基羧酸酯。

[0066]一种实施方式进一步包含偶联式4化合物：

其中X是卤代基，环B、J^B和L是如本文定义的；

与式i化合物的步骤：

其中CP是交叉偶联基团，环A和J^A是如本文定义的；在适合的交叉偶联条件下，生成式5化合物。

[0067]本文所用的术语“交叉偶联反应”表示借助金属催化剂生成碳-碳键的反应。通常，碳原子之一键合于官能团(“交叉偶联基团”)，而另一碳原子键合于卤素。交叉偶联反应的实例包括但不限于Suzuki偶联、Stille偶联和Negishi偶联。

[0068]本文所用的术语“交叉偶联基团”表示能够与另一官能团(例如卤代基)在交叉偶联反应中反应生成碳-碳(“C-C”)键的官能团。在有些实施方式中，在两个芳族基团之间生成C-C键。

[0069]本文所用的术语“交叉偶联条件”表示为了能够发生交叉偶联反应所需要的化学条件(例如温度、反应时间长度、所需溶剂体积)。

[0070]交叉偶联基团和它们各自的交叉偶联条件的实例包括但不限于使用代硼酸和代硼酸酯的Suzuki偶联条件、使用SnBu₃的Stille偶联条件和使用ZnX的Negishi偶联条件。

[0071]所有这三种偶联条件通常牵涉催化剂、适合的溶剂和可选的碱的使用。Suzuki偶联条件牵涉钯催化剂和适合的溶剂的使用。适合的钯催化剂的实例包括但不限于PdCl₂(PPh₃)₂、Pd(Ph₃)₄和PdCl₂(dppf)。适合的碱包括但不限于K₂CO₃和Na₂CO₃。适合的溶剂包括但不限于四氢呋喃、甲苯和乙醇。

[0072]Stille偶联条件牵涉催化剂(通常为钯，但是有时为镍)、适合的溶剂和其他可选试剂的使用。适合的催化剂的实例包括但不限于PdCl₂(PPh₃)₂、Pd(Ph₃)₄和PdCl₂(dppf)。适合的溶剂包括但不限于四氢呋喃、甲苯和二甲基甲酰胺。

[0073]Negishi偶联条件牵涉催化剂(钯或镍)和适合的溶剂的使用。适合的催化剂的实例包括但不限于Pd₂(dba)₃、Ni(PPh₃)₂Cl₂、PdCl₂(PPh₃)₂和Pd(Ph₃)₄。适合的溶剂包括但不限于四氢呋喃、甲苯和二甲基甲酰胺。

[0074]Suzuki、Stille和Negishi条件是本领域技术人员已知的，在多种参考文献中都有更详细的描述，包括“March’s AdvancedOrganic Chemistry”。

[0075]另一种实施方式进一步包含偶联式4化合物：

其中X是卤代基，环B、J^B和L是如本文定义的；

与偶联基团前体的步骤，在适合的偶联基团生成条件下，生成式5a化合物：

其中CP是交叉偶联基团，环B、J^B和L是如本文定义的。交叉偶联基团前体是用于生成交叉偶联基团的试剂或试剂基团。实例包括但不限于双(频哪醇代)二硼烷，用于代硼酸酯的生成；三甲基硼酸酯，用于代硼酸的生成；Bu₃SnCl，用于锡烷的生成；和ZnCl₂，用于Negishi偶联反应中锌酸酯的生成。适合的偶联基团生成条件的实例包括但不限于经由钯-介导的催化作用制备代硼酸酯；通过水解代硼酸酯制备代硼酸；经由两步过程制备锡烷：1)卤素金属置换继之以2)与Bu₃SnCl的金属转移作用；和经由两步过程制备锌酸酯：1)卤素金属置换继之以2)ZnCl₂的加成。

[0076]另一种实施方式进一步包含偶联式5a化合物与

的步骤，其中X是卤代基，环A和J^A是如本文定义的；在适合的交叉偶联条件下，生成式5化合物，其中L、环A、环B、J^A和J^B是如本文定义的。

[0077]另一种实施方式进一步包含偶联式3化合物：

其中X是卤代基；

与

的步骤，其中LG是适合的离去基团，L、环B和JB是如本文定义的；在适合的O-C键偶联条件下，生成式4化合物。适合的离去基团包括但不限于卤代基、甲磺酸酯和甲苯磺酸酯。作为替代选择，LG可以是原位生成的基团，例如Mitsunobu反应中的OH。适合的O-C键偶联反应包括但不限于Mitsunobu反应(DEAD/PPh₃/THF)和与强碱的简单烷基化，碱例如KOtBu、NaH或LiAlH₄。

[0078]本发明的一种实施方式提供制备式5化合物的过程：

其中G是O，环A、环B、J^A、J^B和L是如本文定义的，包含使下式化合物：

与反应；其中LG是适合的离去基团，L、环B和J^B是如本文定义的；在适合的O-C键偶联条件下，生成式5化合物。

[0079]一种实施方式进一步包含如下步骤：

a)偶联式2化合物：

与式i化合物，

其中CP是交叉偶联基团，环A和J^A是如本文定义的，在适合的交叉偶联条件下，生成式6化合物：

b)在适合的去保护条件下去保护式6化合物，生成式7化合物。适合的去保护条件的实例包括但不限于BBr₃、TMSI、TMSCl+NaI和盐酸吡啶鎓。

[0080]另一种实施方式进一步包含如下步骤：

a)偶联式2化合物：

与偶联基团前体，在适合的偶联基团生成条件下，生成式5b化合物：

其中CP是交叉偶联基团；

b)偶联式5b化合物与

其中X是卤代基，环A和J^A是如本文定义的，

生成式6化合物：

[0081]另一种实施方式提供制备式9化合物的方法：

包含将其中环A是含有能够亲核进攻的氮原子的芳族环，JA是如本文定义的；加成至式8化合物：

经由适合的共轭加成条件，生成式9化合物。含有能够亲核进攻的氮原子的芳族环的实例包括但不限于

适合的共轭加成条件包括但不限于在DCM中，在室温下，合并2当量

与式8化合物；在乙腈/DMF中，在110摄氏度下，合并1.15当量

与式8化合物，过夜。

[0082]在本发明的有些实施方式中，交叉偶联基团是代硼酸或代硼酸酯。在有些实施方式中是代硼酸酯。

[0083]本发明的另一种实施方式提供制备式5a化合物或式5b化合物的方法(其中CP是代硼酸酯)：

其中(R⁴O)₂B是代硼酸酯，该过程使式12a化合物或式12b化合物在代硼酸酯化条件下反应。

[0084](R⁴O)₂B表示本领域技术人员已知的代硼酸酯或酸。实例包括但不限于代硼酸(其中R⁴是H)或代硼酸酯(其中R⁴是C_1-6烷基，或者其中两个R⁴基团与氧和硼原子一起构成可选被C_1-6烷基取代的5-6元环(例如代硼酸频哪醇酯))。

[0085]就具体的代硼酸酯化条件的实例而言，参见本文的方法F。其他适合的代硼酸酯化条件也可能用于这种实施方式。

[0086]本发明的这种实施方式允许偶联不在噻吩12a和噻吩12b的5-位被卤素取代的噻吩化合物。不在5-位被卤素取代的噻吩比相应的5-卤代噻吩更容易合成。因此，这种实施方式可能有利地用于合成噻吩化合物，例如本发明的那些。这种实施方式被描绘在流程4和方法F中，在代硼酸酯化条件下进行，不过也可能使用其他偶联配偶子代替代硼酸酯。这类其他偶联配偶子包括锡、锌和镁类偶联配偶子。

[0087]式5a化合物和式5b化合物可用作式I化合物制备中的合成中间体化合物。例如，式I化合物可以从式5a化合物和式5b化合物制备，正如流程1所描绘的。因此，在另一种实施方式中，本发明提供式5a化合物和式5b化合物。

[0088]正如本文公开的，本发明提供可用于治疗疾病、疾患和病症的化合物，包括但不限于自体免疫疾病、炎性疾病、增殖与过度增殖疾病、免疫学-介导的疾病、骨疾病、代谢疾病、神经与神经变性疾病、心血管疾病、激素相关性疾病、变态反应、哮喘和阿尔茨海默氏病。本发明的另一方面提供这样的化合物，它们是蛋白激酶的抑制剂，因而可用于治疗疾病、疾患和病症，以及本文所述的其他用途。在本发明的另一方面，提供药学上可接受的组合物，其中这些组合物包含任意如本文所述的化合物，并且可选地包含药学上可接受的载体、助剂或赋形剂。在某些实施方式中，这些组合物可选地进一步包含一种或多种附加治疗剂。

[0089]也将被领会到，某些本发明化合物能够以游离形式存在供治疗，或者酌情为其药学上可接受的衍生物。

[0090]本文所用的“药学上可接受的衍生物”是加合物或衍生物，它在对有需要的患者给药后，能够直接或间接提供本文所述化合物或者其代谢产物或残余物。药学上可接受的衍生物的实例包括但不限于酯和这类酯的盐。

[0091]本文所用的术语“药学上可接受的盐”表示这样的盐，在合理的医学判断范围内，它们适合用于与人体和低等动物组织接触，没有不适当的毒性、刺激性、变态反应等，与合理的利益/风险比相称。

[0092]药学上可接受的盐是本领域熟知的。例如，S.M.Berge等在J.Pharmaceutical Sciences，1977，66，1-19中详细描述了药学上可接受的盐，引用在此作为参考。本发明化合物的药学上可接受的盐包括从药学上可接受的无机与有机酸和碱衍生的哪些。这些盐可以在化合物的最终分离与纯化期间原位制备。酸加成盐可以如下制备：1)使纯化化合物的游离碱形式与适合的有机或无机酸反应，和2)分离所生成的盐。

[0093]药学上可接受的、无毒的酸加成盐的实例是氨基与无机酸生成的盐，酸例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，或者与有机酸生成的盐，酸例如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸，或者利用本领域的其他方法，例如离子交换所生成的盐。其他药学上可接受的盐的实例包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚酸盐、甘油磷酸盐、羟乙酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对-甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。从适当的碱衍生的盐包括碱金属、碱土金属、铵和N⁺(C_1-4烷基)₄的盐。本发明也涵盖本文公开的化合物的任意碱性含氮基团的季铵化。这类季铵化作用可以得到水或油可溶性或可分散性产物。

[0094]碱加成盐可以如下制备：1)使纯化化合物的酸形式与适合的有机或无机碱反应，和2)分离所生成的盐。碱加成盐包括碱金属或碱土金属盐。代表性碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。在适当的时候，进一步药学上可接受的盐包括无毒的铵盐、季铵盐和胺阳离子盐，利用抗衡离子生成，例如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和芳基磺酸盐。其他酸和碱尽管本身不是药学上可接受的，不过可以用于制备可用作得到本发明化合物和它们药学上可接受的酸或碱加成盐的中间体的盐。

[0095]如本文所述，本发明的药学上可接受的组合物另外包含药学上可接受的载体、助剂或赋形剂，正如本文所使用的，它们包括适合于所需的特定剂型的任意和所有溶剂、稀释剂或其他液体赋形剂、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。Remington′s Pharmaceutical Sciences，Sixteenth Edition，E.W.Martin(Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，1980)公开了用于配制药学上可接受的组合物的各种载体和用于其制备的已知技术。除了任何常规载体介质与本发明化合物不相容以外，例如产生任何不可取的生物学效应或者以有害方式相互作用于药学上可接受的组合物的任何其他组分，它的使用涵盖在本发明的范围内。

[0096]能够充当药学上可接受的载体的材料的一些实例包括但不限于离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；血清蛋白质，例如人血清白蛋白；缓冲物质，例如磷酸盐；甘氨酸；山梨酸或山梨酸钾；饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物；水；盐或电解质，例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐；胶体二氧化硅；三硅酸镁；聚乙烯吡咯烷酮；聚丙烯酸酯；蜡类；聚乙烯-聚氧化丙烯-嵌段聚合物；羊毛脂；糖类，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉碎的黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，例如可可脂和栓剂用蜡；油类，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，例如丙二醇或聚乙二醇；酯类，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；无热原的水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；以及其他无毒的可相容的润滑剂，例如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁；根据制剂人员的判断，在组合物中也可以存在着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和香料、防腐剂和抗氧化剂。

[0097]本发明的一个方面提供治疗疾病或者减轻其严重性的方法，选自自体免疫疾病、炎性疾病、增殖或过度增殖疾病(例如癌症)、免疫学-介导的疾病、骨疾病、代谢疾病、神经或神经变性疾病、心血管疾病、变态反应、哮喘、阿尔茨海默氏病或者激素相关疾病，包含对有此需要的受治疗者给予有效量的化合物或者包含化合物的药学上可接受的组合物。术语“癌症”包括但不限于下列癌症：乳腺癌；卵巢癌；宫颈癌；前列腺癌；睾丸癌、泌尿生殖道癌；食道癌；喉癌；成胶质细胞瘤；成神经细胞瘤；胃癌；皮肤癌、角化棘皮瘤；肺癌、表皮样癌、大细胞癌、小细胞癌、肺腺癌；骨癌；结肠癌、腺瘤；胰腺癌、腺癌；甲状腺癌、滤泡癌、未分化的癌、乳头状癌；精原细胞瘤；黑素瘤；肉瘤；膀胱癌；肝癌和胆道癌；肾癌；髓样疾患；淋巴样疾患、何杰金氏病、毛发细胞癌；口腔与咽癌(口癌)、唇癌、舌癌、口癌、咽癌；小肠癌；结肠-直肠癌、大肠癌、直肠癌；脑与中枢神经系统癌；和白血病。

[0098]在某些实施方式中，化合物或药学上可接受的组合物的“有效量”是为了治疗所述疾病有效的量。根据本发明方法的化合物和组合物可以利用就治疗所述疾病或者减轻其严重性而言有效的任意量和任意给药途径加以给药。在有些实施方式中，所述疾病选自增殖疾患、神经变性疾患、自体免疫疾患、炎性疾患和免疫学-介导的疾患。在有些实施方式中，所述疾病是增殖疾患。在有些实施方式中是癌症。

[0099]在本发明的其他实施方式中，所述疾病是蛋白激酶-介导的病症。在有些实施方式中，所述蛋白激酶是PLK。

[00100]本文所用的术语“蛋白激酶-介导的病症”表示已知蛋白激酶在其中扮演角色的任意疾病或其他有害病症。这类病症非限制性地包括自体免疫疾病、炎性疾病、增殖与过度增殖疾病、免疫学-介导的疾病、骨疾病、代谢疾病、神经与神经变性疾病、心血管疾病、激素相关疾病、变态反应、哮喘和阿尔茨海默氏病。

[00101]本文所用的术语“PLK-介导的病症”表示PLK在其中扮演角色的任意疾病或其他有害病症。这类病症非限制性地包括增殖疾患(例如癌症)、神经变性疾患、自体免疫疾患、炎性疾患和免疫学-介导的疾患。

[00102]在有些实施方式中，本发明的化合物和组合物是蛋白激酶的抑制剂。作为蛋白激酶的抑制剂，本发明的化合物和组合物特别可用于治疗疾病、病症或疾患或者减轻其严重性，其中蛋白激酶在该疾病、病症或疾患中有牵连。一方面，本发明提供治疗疾病、病症或疾患或者减轻其严重性的方法，其中蛋白激酶在该疾病状态中有牵连。另一方面，本发明提供治疗疾病、病症或疾患或者减轻其严重性的方法，其中酶活性的抑制在该疾病的治疗中有牵连。另一方面，本发明提供用化合物治疗疾病、病症或疾患或者减轻其严重性的方法，该化合物通过与蛋白激酶结合而抑制酶活性。在有些实施方式中，所述蛋白激酶是PLK。

[00103]在本发明中用作蛋白激酶抑制剂的化合物的活性可以在体外、体内或细胞系中加以测定。体外测定法包括测定对活化激酶的激酶活性或ATP酶活性的抑制作用。选择性的体外测定法可定量测定抑制剂与蛋白激酶结合的能力。抑制剂的结合可以这样测量，在结合之前放射性标记抑制剂，分离抑制剂/激酶复合物，再测定所结合的放射性标记的量。作为替代选择，抑制剂的结合可以这样测定，在竞争实验中，将新抑制剂和与已知放射性配体结合的激酶一起温育。

[00104]蛋白激酶抑制剂或其药物盐可以被配制成药物组合物，对动物或人给药。这些药物组合物包含有效治疗或预防激酶-介导病症量的蛋白激酶抑制剂和药学上可接受的载体，是本发明的另一种实施方式。在有些实施方式中，所述蛋白激酶-介导的病症是PLK-介导的病症。在有些实施方式中，是PLK1-介导的病症。

[00105]治疗所需化合物的确切的量将因受治疗者而异，依赖于受治疗者的种类、年龄与一般状态、感染的严重性、特定药物、其给药的方式等。本发明化合物优选地被配制成剂量单元形式，有易于给药和剂量的一致性。本文所用的表达方式“剂量单元形式”表示物理上离散的药物单元，对所治疗的患者而言是适当的。不过将被理解到，本发明化合物和组合物的总每日用量将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。任意特定患者或生物体的具体有效剂量水平将依赖于多种因素，包括所治疗的病症和病症的严重性；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药的时间、给药的途径和所采用的具体化合物的排泄速率；治疗的持续时间；与所采用的具体化合物联合或同时使用的药物；和医药领域熟知的其他因素。本文所用的术语“患者”表示动物，优选哺乳动物，最优选人。

[00106]本发明的药学上可接受的组合物可以对人和其他动物口服、直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(以粉剂、软膏剂或滴剂)、口腔、以口用或鼻用喷雾剂等方式给药，这依赖于所治疗感染的严重性。在某些实施方式中，本发明化合物可以被口服或肠胃外给药，剂量水平为每天约0.01mg/kg至约50mg/kg、优选约1mg/kg至约25mg/kg受治疗者体重，一天一次或多次，以获得所需的治疗效果。

[00107]口服给药的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、悬液、糖浆剂和酏剂。除了活性化合物以外，液体剂型可以含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄基酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、麦胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨醇的脂肪酸酯，和它们的混合物。除了惰性稀释剂以外，口服组合物也可以包括助剂，例如湿润剂、乳化与悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

[00108]使用适合的分散或湿润剂和悬浮剂，可以按照已知技术配制可注射制备物，例如无菌可注射的水性或油性悬液。无菌可注射制备物也可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬液或乳液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。可以采用的可接受的载体和溶剂有水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。另外，常规上采用无菌的不挥发油作为溶剂或悬浮介质。为此，可以采用任何温和的固定油，包括合成的单-或二-甘油酯。另外，在注射剂的制备中也可以使用脂肪酸，例如油酸。

[00109]可注射制剂可以这样进行灭菌，例如通过细菌截留性滤器过滤，或者掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂，可以在使用前将其溶解或分散在无菌的水或其他无菌可注射介质中。

[00110]为了延长本发明化合物的作用，经常需要延缓化合物在皮下或肌内注射后的吸收。这可以利用水溶性差的结晶性或无定形物质的液体悬液来实现。化合物的吸收速率取决于它的溶解速率，而后者又可能取决于晶体大小和晶型。作为替代选择，将化合物溶解或悬浮在油类载体中，实现肠胃外给药化合物形式的延迟吸收。可注射的储库形式是这样制备的，在生物可降解的聚合物中，例如聚交酯-聚乙醇酸交酯，生成化合物的微囊包封基质。根据化合物与聚合物的比例和所采用特定聚合物的属性，可以控制化合物的释放速率。其他生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。储库型可注射制剂也可以将化合物包合在与机体组织相容的脂质体或微乳中来制备。

[00111]直肠或阴道给药组合物优选地是栓剂，它们可以这样制备，将本发明化合物与适合的无刺激性赋形剂或载体混合，例如可可脂、聚乙二醇或栓剂用蜡，它们在环境温度下是固体，但是在体温下是液体，因此在直肠或阴道腔中融化，释放出活性化合物。

[00112]口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这类固体剂型中，将活性化合物与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体混合，例如柠檬酸钠或磷酸二钙，和/或a)填充剂或增容剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸，b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，c)润湿剂，例如甘油，d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶解迟延剂，例如石蜡，f)吸收促进剂，例如季铵化合物，g)湿润剂，例如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯，h)吸收剂，例如高岭土和膨润土，和i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，所述剂型也可以包含缓冲剂。

[00113]也可以采用相似类型的固体组合物作为软或硬的填充的明胶胶囊剂中的填充剂，胶囊所用赋形剂例如乳糖或奶糖以及高分子聚乙二醇等。片剂、锭剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂等固体剂型可以带有包衣和外壳，例如肠溶衣和药物配制领域熟知的其他包衣。它们可以可选地含有遮光剂，也可以是仅仅或优先在肠道某一部分释放活性成分的组合物，可选地为延迟的方式。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡类。也可以采用相似类型的固体组合物作为软与硬的填充的明胶胶囊剂中的填充剂，胶囊所用赋形剂例如乳糖或奶糖以及高分子聚乙二醇等。

[00114]活性化合物也可以是微囊包封的形式，其中含有一种或多种上述赋形剂。片剂、锭剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂等固体剂型可以带有包衣和外壳，例如肠溶衣、释放控制性包衣和药物配制领域熟知的其他包衣。在这类固体剂型中，可以将活性化合物与至少一种惰性稀释剂混合，例如蔗糖、乳糖或淀粉。在正常情况下，这类剂型也可以包含除惰性稀释剂以外的其他物质，例如压片润滑剂和其他压片助剂，例如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，剂型也可以包含缓冲剂。它们可以可选地含有遮光剂，也可以是仅仅或优先在肠道某一部分释放活性成分的组合物，可选地为延迟的方式。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡类。

[00115]本发明化合物的局部或透皮给药剂型包括软膏剂、糊剂、霜剂、洗剂、凝胶剂、粉剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴剂。将活性组分在无菌条件下与药学上可接受的载体和任何必需的防腐剂或缓冲剂混合，根据需要而定。眼科制剂、滴耳剂和滴眼剂也被涵盖在本发明的范围内。另外，本发明涵盖透皮贴剂的使用，它们具有控制化合物向机体递送的附加优点。这类剂型可以通过将化合物溶解或分散在恰当的介质中来制备。也可以使用吸收增强剂以增加化合物穿过皮肤的通量。可以通过提供速率控制膜或者将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制速率。

[00116]除了本发明的化合物以外，在治疗或预防上述疾患的组合物中也可以采用本发明化合物的药学上可接受的衍生物或前体药物。

[00117]“药学上可接受的衍生物或前体药物”表示本发明化合物的任何药学上可接受的酯、酯的盐或其他衍生物，在对接受者给药后能够直接或间接提供本发明化合物或者其抑制活性代谢产物或残余物。特别可取的衍生物和前体药物是这样的，它们在这类化合物对哺乳动物给药时增加本发明化合物的生物利用度(例如允许口服给药的化合物更容易吸收进入血液)，或者相对于母体种类增强母体化合物向生物体腔的递送(例如脑或淋巴系统)。

[00118]本发明化合物的药学上可接受的前体药物非限制性地包括酯、氨基酸酯、磷酸酯、金属盐和磺酸酯。

[00119]可以用在这些组合物中的药学上可接受的载体包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白质(例如人血清白蛋白)、缓冲物质(例如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(例如硫酸鱼精蛋白)、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素类物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡类、聚乙烯-聚丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。

[00120]本发明组合物的给药可以是口服、肠胃外、吸入喷雾、局部、直肠、鼻、颊、阴道或经由植入药库。本文所用的术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、损伤部位内和颅内注射或输注技术。优选地组合物是口服、腹膜内或静脉内给药的。

[00121]本发明组合物的无菌可注射剂型可以是水性或油性悬液。这些悬液可以按照本领域已知的技术使用适合的分散或湿润剂和悬浮剂加以配制。无菌可注射制剂也可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。可以采用的可接受的载体和溶剂有水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，常规采用无菌的固定油作为溶剂或悬浮介质。为此，可以采用任意温和的固定油，包括合成的单-或二-甘油酯。脂肪酸、例如油酸及其甘油酯衍生物，可用于制备注射剂，天然的药学上可接受的油，例如橄榄油或蓖麻油，尤其是它们的聚氧乙基化形式同样可用于制备注射剂。这些油溶液或悬液也可以含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或相似的分散剂，它们常用于配制药学上可接受的剂型，包括乳剂和悬液。出于配制的目的，也可以使用其他常用的表面活性剂，例如吐温类、司盘类和其他乳化剂或生物利用度增强剂，它们常用于制造药学上可接受的固体、液体或其他剂型。

[00122]药学上可接受的本发明组合物可以口服给药，用任意口服可接受的剂型包括但不限于胶囊剂、片剂、水悬液或溶液。在口用片剂的情况下，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常也加入润滑剂，例如硬脂酸镁。就胶囊剂型口服给药而言，有用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当口用需要水悬液时，将活性成分与乳化及悬浮剂混合。如果需要的话，也可以加入某些甜味剂、矫味剂或着色剂。

[00123]作为替代选择，药学上可接受的本发明组合物可以以栓剂形式给药，供直肠给药。它们可以这样制备，将药物与适合的无刺激性赋形剂混合，后者在室温下是固体，但是在直肠温度下是液体，因此将在直肠内熔化，释放药物。这类材料包括但不限于可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。

[00124]药学上可接受的本发明组合物也可以局部给药，尤其当治疗目标包括局部用药容易达到的部位或器官时，包括眼、皮肤或下肠道的疾病。适合的局部制剂容易根据每个这些部位或器官加以制备。

[00125]下肠道局部用药可以利用直肠栓剂(见上)或适合的灌肠剂进行。也可以使用局部透皮贴剂。

[00126]就局部用药而言，药学上可接受的组合物可以配制在适合的软膏中，其中含有悬浮或溶解在一种或多种载体中的活性组分。本发明化合物的局部给药载体包括但不限于矿物油、液体矿脂、白矿脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。作为替代选择，药物组合物可以配制成适合的洗剂或霜剂，其中含有悬浮或溶解在一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分。适合的载体包括但不限于矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。

[00127]就眼用而言，药学上可接受的组合物可以配制成在等渗的pH调节的无菌盐水中的微粉化悬液或者优选地在等渗的pH调节的无菌盐水中的溶液，二者都含有或没有防腐剂，例如苯扎氯铵。作为替代选择，就眼用而言，药学上可接受的组合物可以配制在软膏中，例如矿脂。

[00128]药学上可接受的本发明组合物也可以通过鼻气雾剂或吸入法给药。这类组合物是按照药物制剂领域熟知的技术制备的，可以制成盐水溶液，采用苯甲醇或其他适合的防腐剂、提高生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其他常规的增溶剂或分散剂。

[00129]可以与载体材料合并制成单一剂型的激酶抑制剂的量将因所治疗的宿主、特定的给药方式而异。优选地，组合物应当是这样配制的，以便可以对接受这些组合物的患者给予剂量在0.01-100mg/kg体重/天之间的抑制剂。

[00130]也应当理解到，就任意特定患者而言的具体剂量和治疗制度将依赖于多种因素，包括所采用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、排泄速率、药物组合、主治医师的判断和所治疗特定疾病的严重性。抑制剂的量也将依赖于组合物中的特定化合物。

[00131]按照另一种实施方式，本发明提供治疗或预防蛋白激酶-介导病症(在有些实施方式中为PLK-介导病症)的方法，包含对患者给予上述药物组合物之一的步骤。本文所用的术语“患者”表示动物，优选人。

[00132]优选地，该方法用于治疗或预防选自如下的病症：例如乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、皮肤癌、胰腺癌、脑癌、生殖泌尿道癌、淋巴系统癌、胃癌、喉癌和肺癌，包括肺腺癌和小细胞肺癌；中风、糖尿病、黑素瘤、肝肿大、心肥大、阿尔茨海默氏病、囊性纤维化和病毒疾病，或者上述任意特定疾病或疾患。

[00133]本发明的另一方面涉及抑制患者中蛋白激酶活性的方法，该方法包含对该患者给予式I化合物或包含所述化合物的组合物。

[00134]依赖于所要治疗或预防的特定的蛋白激酶-介导病症，在正常情况下给药治疗或预防该病症的附加药物可以与本发明的抑制剂一起给药。例如，化疗剂或其他抗增殖剂可以与本发明的蛋白激酶抑制剂联合治疗增殖疾病。

[00135]这些附加药物可以与含有蛋白激酶抑制剂的化合物或组合物分开给药，作为多元剂量制度的一部分。作为替代选择，这些药物可以是单一剂型的一部分，与蛋白激酶抑制剂一起混合在单一的组合物中。

[00136]在有些实施方式中，所述蛋白激酶抑制剂是PLK激酶抑制剂。在其他实施方式中，所述蛋白激酶抑制剂是Plk1激酶抑制剂。

[00137]本发明也可以用在除涉及对患者给药以外的方法中。

[00138]本发明的一方面涉及抑制生物样品或患者中蛋白激酶活性，该方法包含对患者给予或者使所述生物样品接触式I化合物或包含所述化合物的组合物。本文所用的术语“生物样品”表示体外或来自体内的样品，非限制性地包括细胞培养物及其提取物；从哺乳动物或其提取物获得的活组织检查材料；和血液、唾液、尿、粪便、精液、泪液或其他体液或者其提取物。

[00139]在生物样品中抑制蛋白激酶活性可用于本领域技术人员已知的多种目的。这类目的的实例包括但不限于输血、器官移植和生物样本贮存。

[00140]本发明的另一方面涉及生物与病理现象中的蛋白激酶研究；由这类蛋白激酶介导的细胞内信号转导途径的研究；和新蛋白激酶抑制剂的对比评价。这类用途的实例包括但不限于生物测定法，例如酶测定法和细胞类测定法。

[00141]本发明化合物一般可以借助本领域技术人员已知的方法加以制备。这些化合物可以借助已知方法分析，包括但不限于LCMS(液相色谱质谱)和NMR(核磁共振)。本发明化合物也可以按照这些实施例加以测试。应当理解到，下示具体条件仅为实例，不表示限制能够用于制备、分析或测试本发明化合物的条件的范围。相反，本发明也包括本领域技术人员已知用于制备、分析和测试本发明化合物的条件。

实施例

[00142]本文所用的术语“Rt(min)表示HPLC保留时间，以分钟计，与化合物有关。除非另有指示，用于获得所报道的保留时间的HPLC方法如下：

柱子：ACE C8柱，4.6 x 150mm

梯度：0-100％乙腈+甲醇60：40(20mM Tris磷酸盐)

流速：1.5mL/分钟

检测：225nm。

[00143]在MicroMass Quattro Micro质谱计上分析质谱样品，以单一MS模式和电喷雾电离方式操作。利用色谱法向质谱计引入样品。

[00144]利用Bruker DPX 400仪器在400MHz下记录¹H-NMR光谱。如下制备和分析下列式I化合物。

实施例1：

3-[1-(2-氯-苯基)-乙氧基]-5-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-噻吩-2-酰胺(I-1)

方法A：5-溴-3-甲氧基-噻吩-2-羧酸甲基酯(中间体1)

[00145]在0℃氮下，将N-溴琥珀酰亚胺(18.33g，102.4mmol，2.35Eq.)逐份加入到所搅拌的3-甲氧基噻吩(5g，43.6mmol，1.0Eq.)的无水DCM(100mL)溶液中。一小时后，有机相用水(50mL)和饱和Na₂S₂O₄(50mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，在真空中浓缩。将残余物溶于无水Et₂O(80mL)，在氮下冷却至-78℃。滴加2.5M正丁基锂(17.4mL，43.6mmol，1.0Eq.)，将所得溶液搅拌30分钟。将其在-78℃下经由套管加入到所搅拌的氯甲酸甲酯(3.7mL，48mmol，1.1Eq)的无水Et₂O(20mL)溶液中。

[00146]一旦根据TLC监测反应完成，用水(50mL)淬灭反应。水层用Et₂O萃取(3 x 40mL)，合并有机萃取液，用盐水(50mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，与脱色碳搅拌，通过硅藻土过滤(Et₂O洗涤)。粗产物经过柱色谱纯化(10％ EtOAc/石油醚)，用EtOAc/石油醚研制，得到小标题化合物，为粉红色固体(2.17g，8.62mmol，20％)；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ 3.85(3H，s)，3.98(3H，s)，6.91(1H，s)。

方法B：5-溴-3-羟基-噻吩-2-羧酸甲基酯(中间体2)

[00147]在-10℃氮下，将BBr₃(26mL，1.0M庚烷溶液，25.9mmol，3.0Eq.)滴加到所搅拌的5-溴-3-甲氧基-噻吩-2-羧酸甲基酯(2.17g，8.62mmol，1.0Eq.)的无水DCM(100mL)溶液中。1.5小时后，加入水(40mL)，水层用DCM萃取(3 x 20mL)。合并有机萃取液，干燥(MgSO₄)，在真空中浓缩。粗产物经过柱色谱纯化(50％石油醚/DCM)，得到小标题化合物，为白色固体(1.67g，7.04mmol，81％)；¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ 3.90(3H，s)，6.80(1H，s)，9.68(1H，brs)。

方法C：5-溴-3-[1-(2-氯-苯基)-乙氧基]-噻吩-2-羧酸甲基酯(中间体3)

[00148]在氮下，将5-溴-3-羟基-噻吩-2-羧酸甲基酯(1.67g，7/04mmol，1.0Eq.)、1-(2-氯-苯基)-乙醇(1.43g，9.16mmol，1.3Eq.)和三苯膦(2.40g，9.16mmol，1.3Eq.)溶于无水THF(30mL)。将所得溶液冷却至0℃，滴加DEAD(1.4mL，9.16mmol，1.3Eq.)。使反应升温至环境温度，搅拌4.5小时。粗反应经过柱色谱纯化(10％EtOAc/石油醚)，得到小标题化合物，为黄色固体(2.60g，6.92mmol，98％)；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ 1.68(3H，d)，3.88(3H，s)，5.71(1H，q)，6.65(1H，s)，7.23-7.33(2H，m)，7.37(1H，dd)，7.66(1H，dd)。

方法D：3-[1-(2-氯-苯基)-乙氧基]-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-噻吩-2-羧酸甲基酯(中间体4)

[00149]在氮下，将5-溴-3-[1-(2-氯-苯基)-乙氧基]-噻吩-2-羧酸甲基酯(1.79g，4.76mmol，1.0Eq.)、双(频哪醇代)二硼(1.25g，4.91mmol，1.03Eq.)和KOAc(1.40g，14.3mmol，3.0Eq.)溶于无水1，4-二噁烷(40mL)和脱气。加入PdCl₂(PPh₃)₂(100mg，0.14mmol，3mol％)，将反应在回流下加热30分钟。冷却至环境温度后，使反应在EtOAc(100mL)与水(100mL)之间分配。水层用EtOAc萃取(3 x 40mL)，合并有机萃取液，干燥(MgSO₄)，在真空中浓缩。将残余物溶于Et₂O，加入石油醚，直至观察到沉淀。过滤除去沉淀，在真空中浓缩滤液。此过程重复一次。将残余物用DCM/石油醚研制，得到小标题化合物，为米色固体(1.38g，3.38mmol，71％)％)；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ 1.38(12H，s)，1.67(3H，d)，3.90(3H，s)，5.80(1H，q)，7.18(1H，s)，7.21-7.7.34(2H，m)，7.38(1H，dd)，7.77(1H，dd)。

另一种制备3-[1-(2-氯-苯基)-乙氧基]-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-噻吩-2-羧酸甲基酯(中间体4)的方式是经由方法E和F

方法E：甲基3-(1-(2-氯苯基)乙氧基)噻吩-2-羧酸酯(中间体5)

[00150]在0℃氮下，将DEAD(2.6mL，16.4mmol，1.3Eq.)滴加到所搅拌的甲基-3-羟基噻吩-2-羧酸酯(2.0g，12.6mmol，1.0Eq.)、1-(2-氯苯基)乙醇(2.57g，16.4mmol，1.3Eq.)与三苯膦(4.31g，16.4mmol，1.3Eq.)的无水THF(30mL)溶液中。使反应升温至环境温度过夜。将粗反应混合物吸附上SiO2，经过柱色谱纯化，用0至10％ EtOAc/石油醚洗脱，得到小标题化合物，为白色固体(1.89g，6.37mmol，50％)；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ 1.72(3H，d)，3.87(3H，s)，5.78(1H，五重峰)，6.65(1H，d)，7.21-7.32(3H，m)，7.38(1H，dd)，7.55(1H，dd)。

方法F：甲基3-(1-(2-氯苯基)乙氧基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)噻吩-2-羧酸酯(中间体4)

[00151]在-78℃氮下，将2.5Mn-BuLi的己烷溶液(2.3mL，5.77mmol，1.5Eq.)滴加到所搅拌的二异丙基胺(815μL，5.77mmol，1.5Eq.)的无水THF(20mL)溶液中。将反应在该温度下搅拌15分钟，然后升温至0℃达30分钟。将反应冷却至-78℃，滴加甲基3-(1-(2-氯苯基)乙氧基)噻吩-2-羧酸酯(1.14g，3.84mmol，1.0Eq.)的无水THF(10mL)溶液。在该温度下搅拌10分钟后，滴加2-异丙氧基-4，4，5，5-四甲基[1，3，2]-二氧硼杂环戊烷(1.78mL，5.77mmol，1.0Eq.)的无水THF(10mL)溶液，在-78℃下搅拌15分钟，然后升温至环境温度达45分钟。加入1M HCl(30mL)，混合物用EtOAc萃取(3 x40mL)。合并有机萃取液，用盐水(30mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，在真空中除去溶剂。使残余物从环己烷中重结晶，得到小标题化合物，为白色固体(837mg，1.98mmol，51％)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.38(12H，s)，1.67(3H，d)，3.90(3H，s)，5.80(1H，五重峰)，7.18(1H，s)，7.21-7.7.34(2H，m)，7.38(1H，dd)，7.77(1H，dd)。

方法G：3-[1-(2-氯-苯基)-乙氧基]-5-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-噻吩-2-羧酸甲基酯(中间体6)

[00152]将3-[1-(2-氯-苯基)-乙氧基]-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-噻吩-2-羧酸甲基酯(150mg，0.37mmol，1.0Eq.)、3-碘-咪唑并[1，2-a]吡啶(108mg，0.44mmol，1.2Eq.)和Pd(PPh₃)₄(42mg，0.04mmol，0.1Eq.)溶于甲苯(1.6mL)和EtOH(0.4mL)。加入2M K₂CO₃(0.55mL，1.10mmol，3.0Eq)，将反应在140℃微波条件下加热15分钟。使反应在EtOAc(10mL)与水(10mL)之间分配，水相用EtOAc萃取(3 x 10mL)。合并有机层，干燥(MgSO₄)，在真空中浓缩。粗产物经过柱色谱纯化(50％ EtOAc/石油醚)，得到小标题化合物，为灰白色固体(61mg，0.15mmol，40％)；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ 1.77(3H，d)，3.96(3H，s)，5.86(1H，q)，6.89(1H，s)，7.28-7.43(4H，m)，7.67(1H，dd)，7.72-7.78(1H，m)，7.83(1H，s)，8.32(2H，d)。

方法H：3-[1-(2-氯-苯基)-乙氧基]-5-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-噻吩-2-酰胺(I-1)

[00153]将3-[1-(2-氯-苯基)-乙氧基]-5-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-噻吩-2-羧酸甲基酯(61mg，0.15mmol，1.0Eq.)悬浮在7M NH₃的MeOH溶液(10mL)中，在压力试管中加热至100℃达3天。使反应冷却至环境温度，过滤分离所得沉淀，得到标题化合物，为灰白色固体(28mg，0.07mmol，45％)；¹H NMR(400MHz，d-6DMSO)δ 1.73(3H，d)，6.05(1H，q)，7.10(1H，t)，7.12(1H，brs)，7.20(1H，s)，7.34-7.44(3H，m)，7.51(1H，dd)，7.69(2H，t)，7.75(1H，brs)，7.88(1H，s)，8.48(1H，d)；HPLC rt(min)：9.40；MS(ES⁺)398，(ES^-)396。

实施例2：

3-[1-(2-氯-苯基)-乙氧基]-5-吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基-噻吩-2-酰胺(I-2)

[00154]利用方法A-H从3-碘-吡唑并[1，5-a]吡啶制备，经过柱色谱纯化(I SCO Companion^TM，12g柱，0-10％ MeOH/DCM)，得到标题化合物，为黄色固体(10mg，0.03mmol，10％)；¹H NMR(400MHz，d-6DMSO)δ 0.99(3H，d)，5.26(1H，q)，6.10(1H，s)，6.20(1H，t)，6.53-6.63(3H，m)，6.69(1H，d)，6.79(1H，d)，6.95(1H，d)，7.36(1H，s)，7.78(1H，d))；HPLC rt(min)：9.80；MS(ES⁺)398。

实施例3：

3-(1-(2-氯苯基)乙氧基)-5-(6-氨基-[1，2，4]三唑并[4，3-b]哒嗪-3-基)噻吩-2-酰胺)(I-4)

[00155]利用方法A-H从3-溴-6-氯-[1，2，4]三唑并[4，3-b]哒嗪制备，得到标题化合物，为白色固体；¹H NMR(400MHz，d-6DMSO)δ 1.68(3H，d)，5.90(1H，q)，6.60(1H，d)，7.10(1H，s)，7.30-7.40(2H，m)，7.48(1H，d)，7.73(1H，s)，7.82(1H，d)；HPLC rt(min)：6.50；MS(ES⁺)416。

实施例4：

3-[1-(2-氯-苯基)-乙氧基]-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-噻吩-2-酰胺(I-5)

方法I：3-[1-(2-氯-苯基)-乙氧基]-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-噻吩-2-羧酸甲基酯(中间体7)

[00156]将5-溴-3-[1-(2-氯-苯基)-乙氧基]-噻吩-2-羧酸甲基酯(200mg，0.53mmol，1.0Eq.)、5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(195mg，0.80mmol，1.5Eq.)和Pd(PPh₃)₄(61mg，0.05mmol，0.1Eq.)溶于甲苯(1.6mL)和乙醇(0.4mL)。加入2M K₂CO₃(0.8mL，1.60mmol，3.0Eq.)，将反应在140℃微波条件下加热10分钟。使反应在EtOAc(10mL)与水(10mL)之间分配，水相用EtOAc萃取(3 x 10mL)。合并有机层，干燥(MgSO₄)，在真空中浓缩。粗产物经过柱色谱纯化(ISCO Companion^TM，12g柱，0-100％ EtOAc/石油醚)，得到小标题化合物，为黄色固体(100mg，0.24mmol，45％)；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ 1.75(3H，d)，3.94(3H，s)，5.88(1H，q)，6.64(1H，d)，6.94(1H，s)，7.26-7.34(2H，m)，7.38-7.44(2H，m)，7.71(1H，dd)，8.17(1H，d)，8.44(1H，d)。

3-[1-(2-氯-苯基)-乙氧基]-5-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-噻吩-2-酰胺I-5

利用方法H制备。

¹H NMR(400MHz，d-6DMSO)δ 1.72(3H，d)，6.00(1H，q)，6.52(1H，dd)，7.05(1H，s)，7.29(1H，s)，7.35-7.42(2H，m)，7.50-7.55(2H，m)，7.66-7.69(2H，m)，8.15(1H，d)，8.45(1H，d)，11.89(1H，s)；HPLC rt(min)：9.60；MS(ES⁺)398，(ES^-)396。

实施例5：

3-[1-(2-氯-苯基)-乙氧基]-5-(5-甲氧基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-噻吩-2-酰胺(I-3)

[00157]利用方法A-H从3-碘-5-甲氧基-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶制备，经过柱色谱纯化(ISCO Companion^TM，12g柱，0-10％ MeOH/DCM)，得到标题化合物，为黄色固体(23mg，0.05mmol，40％)；¹H NMR(400MHz，d-6DMSO)δ 0.98(3H，d)，3.12(3H，s)，5.26(1H，q)，6.04(1H，s)，6.51-6.60(2H，m)，6.68(1H，dd)，6.72(1H，d)，6.79(1H，dd)，6.87(1H，d)，7.22(1H，d)；HPLC rt(min)：9.60；MS(ES⁺)428，(ES^-)426。

实施例6：

3-(1-(2-氯苯基)乙氧基)-5-(5-乙烯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)噻吩-2-酰胺(I-6)

[00158]利用方法A-H从5-(1-苯磺酰基-5-乙烯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-3-[1-(2-氯-苯基)-乙氧基]-噻吩-2-羧酸甲基酯制备，经过柱色谱纯化(ISCO Companion^TM，12g柱，0-10％MeOH/DCM)，得到标题化合物，为黄色固体(29mg，0.07mmol，40％)；¹H NMR(400MHz，d-6DMSO)δ 1.71(3H，d)，5.33(1H，d)，5.92(1H，d)，6.03(1H，q)，6.89(1H，dd)，7.02(1H，s)，7.07(1H，br s)，7.35(1H，t)，7.42(1H，t)，7.50(1H，d)，7.61(1H，br s)，7.66(1H，d)，7.92(1H，s)，8.09(1H，s)，8.45(1H，s)，12.22(1H，br s)；HPLC rt(min)：9.80；MS(ES⁺)424，(ES^-)422。

实施例7：

3-(5-氨甲酰基-4-(1-(2-氯苯基)乙氧基)噻吩-2-基)-N-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-酰胺(I-7)

利用方法H制备。

NMR DMSO D⁶ 1.77(3H，d)，2.85(3H，d)，6.04(1H，q)，7.17(1H，s)，7.35-7.50(4H，m)，7.70-7.85(4H，m)，7.95(1H，s)，8.72(1H，s)，9.04(1H，s)；HPLC rt(min)：8.16；MS(ES⁺)455。

实施例8：

3-(1-(2-氯苯基)乙氧基)-5-(6-氟咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)噻吩-2-酰胺(I-8)

利用方法H制备。

NMR DMSO D⁶ 1.73-1.75(3H，m)，6.10(1H，m)，7.12(1H，s)，7.25(1H，s)，7.36(1H，m)，7.42(1H，m)，7.47-7.49(2H，m)，7.68(1H，m)，7.77-7.79(2H，m)，7.93(1H，s)，8.59(1H，m)；HPLC rt(min)：9.37；MS(ES⁺)416，(ES^-)414。

实施例9：

3-(1-(2-氯苯基)乙氧基)-5-(咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-基)噻吩-2-酰胺(I-9)

利用方法H制备。

NMR DMSO D⁶ 1.78(3H，m)，6.10(1H，m)，7.15(1H，br s)，7.32-7.45(3H，m)，7.51(1H，m)，7.70(1H，m)，7.85(1H，br s)，8.08(1H，m)，8.14(1H，s)，8.56(1H，m)，9.19(1H，s)；HPLCrt(min)：8.41；MS(ES⁺)399，(ES^-)397。

实施例10：

3-(1-(2-氯苯基)乙氧基)-5-(6-(三氟甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)噻吩-2-酰胺(I-10)

利用方法H制备。

NMR DMSO D⁶ 1.72-1.74(3H，m)，6.04(1H，m)，7.17(1H，s)，7.32(1H，s)，7.39(1H，m)，7.47(1H，m)，7.61(1H，m)，7.70(1H，m)，7.85(1H，s)，7.89-7.92(2H，m)，8.03(1H，s)，8.74(1H，s)；HPLC rt(min)：9.82；MS(ES⁺)466，(ES^-)464。

实施例11：

3-(5-氨甲酰基-4-(1-(2-氯苯基)乙氧基)噻吩-2-基)-N-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-7-酰胺(I-11)

利用方法H制备。

NMR DMSO D⁶ 1.73-1.75(3H，m)，2.83-2.84(3H，m)，6.06(1H，m)，7.14(1H，s)，7.26(1H，s)，7.35-7.40(2H，m)，7.43-7.50(2H，m)，7.65(1H，m)，7.68(1H，s)，8.02(1H，s)，8.19(1H，s)，8.53(1H，m)，9.75(1H，m)；HPLC rt(min)：8.22；MS(ES⁺)455，(ES^-)453。

实施例12：

3-(1-(2-氯苯基)乙氧基)-5-(咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基)噻吩-2-酰胺(I-12)

利用方法H制备。

NMR DMSO D⁶ 1.75(3H，m)，6.01(1H，m)，7.09(1H，br s)，7.31-7.42(3H，m)，7.51(1H，m)，7.68-7.75(3H，m)，8.27(1H，m)，8.32(1H，s)，8.76(1H，m)；HPLC rt(min)：9.09；MS(ES⁺)399，(ES^-)397。

实施例13：

3-(1-(2-氯苯基)乙氧基)-5-(7-(三氟甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)噻吩-2-酰胺(I-13)

利用方法H制备。

NMR DMSO D⁶ 1.74-1.75(3H，m)，6.05(1H，m)，7.14(1H，s)，7.32-7.45(3H，m)，7.52(1H，m)，7.70(1H，m)，7.80(1H，br s)，8.1(1H，s)，8.22(1H，s)，8.67(1H，m)；HPLC rt(min)：8.16；MS(ES⁺)466，(ES^-)464。

实施例14：

乙基3-(5-氨甲酰基-4-(1-(2-氯苯基)乙氧基)噻吩-2-基)咪唑并[1，2-a]吡啶-7-基氨基甲酸酯(I-14)

利用方法H制备。

NMR CDC l₃ 1.37(3H，t)，1.78(3H，d)，4.27(2H，q)，5.82(1H，b s)，5.90(1H，q)，6.70(1H，s)，7.22(2H，br s)，7.23-7.51(4H，m)，7.62-7.71(2H，m)，8.15(1H，d)；HPLC rt(min)：9.03；MS(ES⁺)485，(ES^-)483。

实施例15：

5-(7-氨基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-3-(1-(2-氯苯基)乙氧基)噻吩-2-酰胺(I-15)

利用方法H制备。

NMR DMSO D⁶ 1.70(3H，d)，6.01(1H，q)，6.63(1H，d)，6.85(1H，dd)，7.10-7.22(2H，m)，7.25(1H，s)，7.34-7.50(3H，m)，7.65(1H，dd)，7.82(1H，br s)，8.01(1H，s)，8.30(1H，d)，11.40(1H，s)；HPLC rt(min)：8.46；MS(ES⁺)413，(ES^-)411。

实施例16：

3-(1-(2-氯苯基)乙氧基)-5-(咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-N-甲基噻吩-2-酰胺(I-16)

利用方法H制备。

NMR DMSO D⁶ 1.78(3H，m)，2.94(3H，m)，6.04(1H，m)，7.10(1H，m)，7.19(1H，s)7.32-7.35(3H，m)，7.41-7.55(2H，m)，7.71(2H，m)，7.79(1H，s)，8.49(1H，m)；HPLC rt(min)：9.68；MS(ES⁺)412，(ES^-)410。

实施例17：

乙基3-(5-氨甲酰基-4-(1-(2-氯苯基)乙氧基)噻吩-2-基)咪唑并[1，2-a]吡啶-7-基(甲基)氨基甲酸酯(I-17)

利用方法H制备。

NMR CDC l₃ 1.35(3H，t)，1.88(3H，d)，3.44(3H，s)，4.29(2H，q)，5.67-5.80(1H，m)，5.86-5.95(1H，m)，6.73(1H，s)，7.15-7.35(4H，m)，7.40-7.55(3H，m)，7.71(1H，s)，8.15(1H，d)；HPLC rt(min)：9.72；MS(ES⁺)499，(ES^-)497。

实施例18：

甲基3-(5-氨甲酰基-4-(1-(2-氯苯基)乙氧基)噻吩-2-基)咪唑并[1，2-a]吡啶-7-基(甲基)氨基甲酸酯(I-18)

利用方法H制备。

NMR CDC l₃ 1.76(3H，d)，3.42(3H，s)，3.83(3H，s)，5.75-5.85(1H，m)，5.85-5.92(1H，m)，6.73(1H，s)，7.10-7.35(4H，m)，7.40-7.50(3H，m)，7.71(1H，s)，8.15(1H，d)；HPLC rt(min)：9.38；MS(ES⁺)485，(ES^-)483。

实施例19：

(S)-甲基3-(5-氨甲酰基-4-(1-(2-氯苯基)乙氧基)噻吩-2-基)咪唑并[1，2-a]吡啶-7-基氨基甲酸酯(I-19)

利用方法H制备。

NMR DMSO D⁶ 1.77(3H，d)，3.82(3H，s)，6.07(1H，q)，7.19(1H，brs)，7.32(1H，s)，7.35-7.42(2H，m)，7.46(1H，t)，7.53(1H，dd)，7.70(1H，dd)，7.87(1H，br s)，8.08(1H，br s)，8.23(1H，br s)，8.69(1H，d)，10.70(1H，brs)；HPLC rt(min)：8.90；MS(ES⁺)471，(ES^-)469。

实施例20：

(S)-乙基3-(5-氨甲酰基-4-(1-(2-氯苯基)乙氧基)噻吩-2-基)咪唑并[1，2-a]吡啶-7-基氨基甲酸酯(I-20)

利用方法H制备。

NMR DMSO D⁶ 1.30(3H，t)，1.74(3H，d)，4.24(2H，q)，6.03(1H，q)，7.17(1H，br s)，7.31(1H，s)，7.34-7.38(1H，m)，7.39-7.45(2H，m)，7.48(1H，dd)，7.67(1H，dd)，7.86(1H，brs)，8.09(1H，d)，8.27(1H，s)，8.68(1H，d)，10.75(1H，br s)；HPLC rt(min)：9.27；MS(ES⁺)485，(ES^-)483。

实施例21：

(S)-甲基3-(5-氨甲酰基-4-(1-(2-氯苯基)丙氧基)噻吩-2-基)咪唑并[1，2-a]吡啶-7-基氨基甲酸酯(I-21)

利用方法H制备。

NMR DMSO D⁶ 1.03(3H，t)，1.98-2.04(1H，m)，2.12-2.22(1H，m)，3.78(3H，s)，5.82(1H，dd)，7.20(1H，br s)，7.22(1H，s)，7.31-7.45(3H，m)，7.47(1H，dd)，7.63(1H，dd)，7.88(1H，brs)，8.10(1H，d)，8.26(1H，s)，8.67(1H，d)，10.80(1H，s)；HPLC rt(min)：9.30；MS(ES⁺)485，(ES^-)483。

实施例22：

(S)-乙基3-(5-氨甲酰基-4-(1-(2-氯苯基)丙氧基)噻吩-2-基)咪唑并[1，2-a]吡啶-7-基氨基甲酸酯(I-22)

利用方法H制备。

NMR DMSO D⁶ 1.03(3H，t)，1.30(3H，t)，1.97-2.05(1H，m)，2.13-2.23(1H，m)，4.25(2H，q)，5.83(1H，dd)，7.20(1H，brs)，7.22(1H，s)，7.32-7.48(4H，m)，7.63(1H，dd)，7.88(1H，br s)，8.10(1H，d)，8.28(1H，s)，8.67(1H，d)，10.78(1H，s)；HPLC rt(min)：9.65；MS(ES⁺)499，(ES^-)497。

实施例23：

(R)-甲基3-(5-氨甲酰基-4-(1-(2-氯苯基)乙氧基)噻吩-2-基)咪唑并[1，2-a]吡啶-7-基氨基甲酸酯(I-23)

利用方法H制备。

NMR DMSO D⁶ 1.74(3H，d)，3.78(3H，s)，6.03(1H，q)，7.19(1H，br s)，7.30(1H，s)，7.32-7.44(3H，m)，7.48(1H，dd)，7.66(1H，dd)，7.89(1H，br s)，8.09(1H，br s)，8.27(1H，br s)，8.70(1H，d)，10.79(1H，br s)；HPLC rt(min)：8.92；MS(ES⁺)471，(ES^-)469。

实施例24：

(R)-乙基3-(5-氨甲酰基-4-(1-(2-氯苯基)乙氧基)噻吩-2-基)咪唑并[1，2-a]吡啶-7-基氨基甲酸酯(I-24)

利用方法H制备。

NMR DMSO D⁶ 1.30(3H，t)，1.73(3H，d)，4.23(2H，q)，6.03(1H，q)，7.19(1H，br s)，7.30(1H，s)，7.32-7.49(3H，m)，7.48(1H，dd)，7.66(1H，dd)，7.89(1H，br s)，8.09(1H，br s)，8.28(1H，br s)，8.70(1H，d)，10.77(1H，br s)；HPLC rt(min)：9.28；MS(ES⁺)485，(ES^-)483。

实施例25：

乙基3-(5-氨甲酰基-4-(2-(2-氯苯基)丙烷-2-基氧基)噻吩-2-基)咪唑并[1，2-a]吡啶-7-基氨基甲酸酯(I-25)

利用方法H制备。

NMR DMSO D⁶ 1.29(3H，t)，2.00(6H，s)，4.22(2H，q)，6.57(1H，s)，7.08-7.12(1H，m)，7.19-7.24(1H，m)，7.38-7.52(3H，m)，7.73(1H，dd)，7.77(1H，dd)，7.85(1H，s)，7.97(1H，s)，8.06(1H，br s)，10.59(1H，br s)；HPLC rt(min)：9.23；MS(ES⁺)499，(ES^-)497。

实施例6：PLK1测定法

[00159]利用下列测定法，本发明化合物可以被评价为人PLK激酶抑制剂。

Plk1抑制作用测定法：

[00160]利用放射性磷酸盐结合测定法能够筛选化合物抑制Plk1的能力。在25mM HEPES(pH 7.5)、10mM MgCl₂与1mM DTT的混合物中进行测定。最终的底物浓度为50μM[γ-33P]ATP(136mCi 33PATP/mmol ATP，Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和10μM肽(SAM68蛋白Δ332-443)。在25℃下，在15nM Plk1(A20-K338)的存在下进行测定。制备测定储备缓冲溶液，其中含有如上列举的全部试剂，ATP和有关供试化合物除外。将30μL储备溶液置于96孔平板中，继之以加入2μL DMSO储备液，其中含有供试化合物的系列稀释液(通常始于10μM的最终浓度，按2倍系列稀释)，一式两份(最终DMSO浓度5％)。将平板在25℃下预温育10分钟，加入8μL[γ-33P]ATP(最终浓度50μM)引发反应。

[00161]60分钟后加入100μL 0.14M磷酸，终止反应。将多筛磷酸纤维素过滤96孔平板(Millipore，Cat no.MAPHNOB50)用100μL 0.2M磷酸预处理，然后加入125μL所终止的测定混合物。将平板用4 x 200μL 0.2M磷酸洗涤。干燥后，向小孔加入100μL Optiphase‘SuperMix’液体闪烁鸡尾酒试剂(Perkin Elmer)，然后闪烁计数(1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter，Wallac)。

[00162]除去全部数据点的平均背景值后，利用Prism软件包(GraphPad Prism version 3.0cx for Macintosh，GraphPad Software，San Diego California，USA)从初始速率数据的非线性回归分析计算Ki(app)数据。

Plk1抑制作用测定法：

[00163]利用放射性磷酸盐结合测定法能够筛选化合物抑制Plk1的能力。在25mM HEPES(pH 7.5)、10mM MgCl₂、0.1％ BSA与2mMDTT的混合物中进行测定。最终的底物浓度为100μM[γ-33P]ATP(115mCi 33P ATP/mmol ATP，Amersham Pharmacia Biotech/SigmaChemicals)和300μM肽(KKKISDELMDATFADQEAK)。在25℃下，在25nMPlk1的存在下进行测定。制备测定储备缓冲溶液，其中含有如上列举的全部试剂，ATP和有关供试化合物除外。将30μL储备溶液置于96孔平板中，继之以加入2μL DMSO储备液，其中含有供试化合物的系列稀释液(通常始于10μM的最终浓度，按2倍系列稀释)，一式两份(最终DMSO浓度5％)。将平板在25℃下预温育10分钟，加入8μL[γ-33P]ATP(最终浓度100μM)引发反应。

[00164]90分钟后加入100μL 0.14M磷酸，终止反应。将多筛磷酸纤维素过滤96孔平板(Millipore，Cat no.MAPHNOB50)用100μL 0.2M磷酸预处理，然后加入125μL所终止的测定混合物。将平板用4 x 200μL 0.2M磷酸洗涤。干燥后，向小孔加入100μL Optiphase‘SuperMix’液体闪烁鸡尾酒试剂(Perkin Elmer)，然后闪烁计数(1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter，Wallac)。

[00165]除去全部数据点的平均背景值后，利用Prism软件包(GraphPad Prism version 3.0cx for Macintosh，GraphPad Software，San Diego California，USA)从初始速率数据的非线性回归分析计算Ki(app)数据。

[00166]一般而言，本发明化合物就Plk1的抑制而言是有效的。优选的化合物在放射性结合测定法中显示低于0.1μM的Ki(I-1，I-2，I-3，I-6，I-7，I-8，I-9，I-10，I-11，I-12，I-13，I-14，I-15，I-17，I-18，I-19，I-20，I-21，I-22，I-23，I-24，I-25)。优选的化合物在放射性结合测定法中显示在0.1μM与1μM之间的Ki(I-5)。优选的化合物在放射性结合测定法中显示高于1μM的Ki(I-4，I-16)。

Plk2抑制作用测定法：

[00167]利用放射性磷酸盐结合测定法能够筛选化合物抑制Plk2的能力。在25mM HEPES(pH 7.5)、10mM MgCl₂、0.1％BSA与2mMDTT的混合物中进行测定。最终的底物浓度为200μM[γ-33P]ATP(57mC i33P ATP/mmol ATP，Amersham Pharmacia Biotech/SigmaChemicals)和300μM肽(KKKISDELMDATFADQEAK)。在25℃下，在25nMPlk2的存在下进行测定。制备测定储备缓冲溶液，其中含有如上列举的全部试剂，ATP和有关供试化合物除外。将30μL储备溶液置于96孔平板中，继之以加入2μL DMSO储备液，其中含有供试化合物的系列稀释液(通常始于10μM的最终浓度，按2倍系列稀释)，一式两份(最终DMSO浓度5％)。将平板在25℃下预温育10分钟，加入8μL[γ-33P]ATP(最终浓度200μM)引发反应。

[00168]90分钟后加入100μL 0.14M磷酸，终止反应。将多筛磷酸纤维素过滤96孔平板(Millipore，Cat no.MAPHNOB50)用100μL 0.2M磷酸预处理，然后加入125μL所终止的测定混合物。将平板用4 x 200μL 0.2M磷酸洗涤。干燥后，向小孔加入100μL Optiphase‘SuperMix’液体闪烁鸡尾酒试剂(Perkin Elmer)，然后闪烁计数(1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter，Wallac)。

[00169]除去全部数据点的平均背景值后，利用Prism软件包(GraphPad Prism version 3.0cx for Macint osh，GraphPad Software，San Diego California，USA)从初始速率数据的非线性回归分析计算Ki(app)数据。

Plk3抑制作用测定法：

[00170]利用放射性磷酸盐结合测定法能够筛选化合物抑制Plk3的能力。在25mM HEPES(pH 7.5)、10mM MgCl₂与1mM DTT的混合物中进行测定。最终的底物浓度为75μM[γ-33P]ATP(60mCi 33PATP/mmol ATP，Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和10μM肽(SAM68蛋白Δ332-443)。在25℃下，在5nM Plk3(S38-A340)的存在下进行测定。制备测定储备缓冲溶液，其中含有如上列举的全部试剂，ATP和有关供试化合物除外。将30μL储备溶液置于96孔平板中，继之以加入2μL DMSO储备液，其中含有供试化合物的系列稀释液(通常始于10μM的最终浓度，按2倍系列稀释)，一式两份(最终DMSO浓度5％)。将平板在25℃下预温育10分钟，加入8μL[γ-33P]ATP(最终浓度75μM)引发反应。

[00171]60分钟后加入100μL 0.14M磷酸，终止反应。将多筛磷酸纤维素过滤96孔平板(Millipore，Cat no.MAPHNOB50)用100μL 0.2M磷酸预处理，然后加入125μL所终止的测定混合物。将平板用4 x 200μL 0.2M磷酸洗涤。干燥后，向小孔加入100μL Optiphase‘SuperMix’液体闪烁鸡尾酒试剂(Perkin Elmer)，然后闪烁计数(1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter，Wallac)。

[00172]除去全部数据点的平均背景值后，利用Prism软件包(GraphPad Prism version 3.0cx for Macintosh，GraphPad Software，San Diego California，USA)从初始速率数据的非线性回归分析计算Ki(app)数据。

Plk4抑制作用测定法：

[00173]利用放射性磷酸盐结合测定法能够筛选化合物抑制Plk4的能力。在8mM MOPS(pH7.5)、10mM MgCl₂、0.1％ BSA与2mM DTT的混合物中进行测定。最终的底物浓度为15μM[γ-33P]ATP(227mCi33P ATP/mmol ATP，Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和300μM肽(KKKMDATFADQ)。在25℃下，在25nM Plk4的存在下进行测定。制备测定储备缓冲溶液，其中含有如上列举的全部试剂，ATP和有关供试化合物除外。将30μL储备溶液置于96孔平板中，继之以加入2μL DMSO储备液，其中含有供试化合物的系列稀释液(通常始于10μM的最终浓度，按2倍系列稀释)，一式两份(最终DMSO浓度5％)。将平板在25℃下预温育10分钟，加入8μL[γ-33P]ATP(最终浓度15μM)引发反应。

[00174]180分钟后加入100μL 0.14M磷酸，终止反应。将多筛磷酸纤维素过滤96孔平板(Millipore，Cat no.MAPHNOB50)用100μL 0.2M磷酸预处理，然后加入125μL所终止的测定混合物。将平板用4 x 200μL 0.2M磷酸洗涤。干燥后，向小孔加入100μL Optiphase‘SuperMix’液体闪烁鸡尾酒试剂(Perkin Elmer)，然后闪烁计数(1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter，Wallac)。

[00175]除去全部数据点的平均背景值后，利用Prism软件包(GraphPad Prism version 3.0cx for Macintosh，GraphPad Software，San Diego California，USA)从初始速率数据的非线性回归分析计算Ki(app)数据。

[00176]尽管我们已经描述了本发明的大量实施方式，不过显然可以改变我们的基本实例，以提供其他采用或涵盖本发明化合物、方法和过程的实施方式。因此，将被领会到，本发明的范围受权利要求而非借助实例所代表的具体实施方式的限制。

Claims (51)

1.式I化合物：

其中

R¹是H、C_1-6脂族基或C_3-6环脂族基；

G是-C(R)₂-或-O-；

L是可选被0-3个J^L取代的C_0-3脂族基；

环A是5-6元芳族单环，含有0-3个选自O、N和S的杂原子；环A可选地被0-3个J^A取代；环A稠合于环A’；

环A’是5-8元芳族或非芳族单环，含有0-3个选自O、N和S的杂原子；环A’可选地被0-4个J^A’取代；

环B是5-6元芳族单环，含有0-3个选自O、N和S的杂原子；环B可选地被0-5个J^B取代，并且可选地稠合于环B’；

环B’是5-8元芳族或非芳族单环，含有0-3个选自O、N和S的杂原子；环B’可选地被0-4个J^B’取代；

每个J^A、J^A’、J^B和J^B’独立地是C_1-6卤代烷基、卤代基、NO₂、CN、Q或-Z-Q；

Z独立地是C_1-6脂族基，可选地被0-3次出现的-NR-、-O-、-S-、-C(O)-、-C(＝NR)-、-C(＝NOR)-、-SO-或-SO₂-中断；每个Z可选地被0-2个J^Z取代；

Q是H；C_1-6脂族基；3-8元芳族或非芳族单环，具有0-3个独立选自O、N和S的杂原子；或者8-12元芳族或非芳族二环环系，具有0-5个独立选自O、N和S的杂原子；每个Q可选地被0-5个J^Q取代；

每个J^L和J^Z独立地是H、卤代基、C_1-6脂族基、C_3-6环脂族基、NO₂、CN、-NH₂、-NH(C_1-4脂族基)、-N(C_1-4脂族基)₂、-OH、-O(C_1-4脂族基)、-CO₂H、-CO₂(C_1-4脂族基)、-O(卤代C_1-4脂族基)或卤代(C_1-4脂族基)；

每个J^Q独立地是M或-Y-M；

每个Y独立地是未取代的C_1-6脂族基，可选地被0-3次出现的-NR-、-O-、-S-、-C(O)-、-SO-或-SO₂-中断；

每个M独立地是H、C_1-6脂族基、C_3-6环脂族基、卤代(C_1-4脂族基)、-O(卤代C_1-4脂族基)、C_3-6杂环基、卤代基、NO₂、CN、OH、OR’、SH、SR’、NH₂、NHR’、N(R’)₂、COH、COR’、CONH₂、CONHR’、CONR’₂、NHCOR’、NR’COR’、NHCONH₂、NHCONHR’、NHCON(R’)₂、SO₂NH₂、SO₂NHR’、SO₂N(R’)₂、NHSO₂R’或NR’SO₂R’；

R是H或未取代的C_1-6脂族基；

R’是未取代的C_1-6脂族基；或者两个R’基团与它们所键合的原子一起构成未取代的3-8元非芳族单环，具有0-1个独立选自O、N和S的杂原子；

其条件是环A稠合于环A’不构成

2.权利要求1的化合物，其中G是-C(R)₂-。

3.权利要求1的化合物，其中G是O。

4.权利要求1-3任意一项的化合物，其中R¹是H。

5.权利要求1-4任意一项的化合物，其中环A是5-元环，含有1-3个选自O、N和S的杂原子。

6.权利要求5的化合物，其中环A是5-元芳族环，含有1-2个选自O、N和S的杂原子。

7.权利要求6的化合物，其中环A是6-元芳族环，含有1-2个选自O、N和S的杂原子。

8.权利要求1-7任意一项的化合物，其中环A’是5-6元芳族环，含有0-3个选自O、N和S的杂原子。

9.权利要求1-8任意一项的化合物，其中环A-A’是如式I-a所代表的；

其中环A含有选自O、N和S的杂原子(H-键受体)，它相邻于另一个选自NH和C-J^A的原子(H-键供体)；它相邻于连接点；J^A选自H、OH、SH、NH₂和NHR。

10.根据权利要求9的化合物，其中环A的杂原子是N，J^A是H。

11.权利要求1-4任意一项的化合物，其中环A-A’选自如下：

12.权利要求11的化合物，其中环A-A’是：

13.权利要求11的化合物，其中环A-A’是：

并且J^A是H。

14.权利要求11的化合物，其中环A-A’是：

15.权利要求11的化合物，其中环A-A’是：

16.权利要求11的化合物，其中环A-A’是：

17.权利要求1-4任意一项的化合物，其中环A-A’是：

18.权利要求1-17任意一项的化合物，其中环B是6元芳族环，含有0-2个氮原子。

19.权利要求1-17任意一项的化合物，其中环B稠合于环B’。

20.权利要求19的化合物，其中环B’是5-6元芳族环，含有0-3个选自O、N和S的杂原子。

21.权利要求1-20任意一项的化合物，其中J^A是H、C_1-6脂族基、C_3-6环脂族基、卤代(C_1-4脂族基)、-O(卤代C_1-4脂族基)、C_3-6杂环基、卤代基、NO₂、CN、OH、OR、SH、SR、NH₂、NHR、N(R)₂、COH、COR、CONH₂、CONHR、CONR₂、NHCOR、NRCOR、NHCONH₂、NHCONHR、NHCON(R)₂、SO₂NH₂、SO₂NHR、SO₂N(R)₂、NHSO₂R或NRSO₂R。

22.权利要求21的化合物，其中J^A是H。

23.权利要求1-22任意一项的化合物，其中J^A’是H、C_1-6脂族基、C_3-6环脂族基、卤代(C_1-4脂族基)、-O(卤代C_1-4脂族基)、C_3-6杂环基、卤代基、NO₂、CN、OH、OR、SH、SR、NH₂、NHR、N(R)₂、COH、COR、CONH₂、CONHR、CONR₂、NHCOR、NRCOR、NHCONH₂、NHCONHR、NHCON(R)₂、SO₂NH₂、SO₂NHR、SO₂N(R)₂、NHSO₂R或NRSO₂R。

24.权利要求23的化合物，其中J^A’是-NHCOR。

25.权利要求24的化合物，其中J^A’是-NHCOR，R是C_1-6烷基。

26.权利要求25的化合物，其中该烷基是甲基。

27.权利要求25的化合物，其中该烷基是乙基。

28.权利要求1-27任意一项的化合物，其中J^B是H、C_1-6脂族基、C_3-6环脂族基、卤代(C_1-4脂族基)、-O(卤代C_1-4脂族基)、C_3-6杂环基、卤代基、NO₂、CN、OH、OR、SH、SR、NH₂、NHR、N(R)₂、COH、COR、CONH₂、CONHR、CONR₂、NHCOR、NRCOR、NHCONH₂、NHCONHR、NHCON(R)₂、SO₂NH₂、SO₂NHR、SO₂N(R)₂、NHSO₂R或NRSO₂R。

29.权利要求1-28任意一项的化合物，其中J^B’是H、C_1-6脂族基、C_3-6环脂族基、卤代(C_1-4脂族基)、-O(卤代C_1-4脂族基)、C_3-6杂环基、卤代基、NO₂、CN、OH、OR、SH、SR、NH₂、NHR、N(R)₂、COH、COR、CONH₂、CONHR、CONR₂、NHCOR、NRCOR、NHCONH₂、NHCONHR、NHCON(R)₂、SO₂NH₂、SO₂NHR、SO₂N(R)₂、NHSO₂R或NRSO₂R。

30.选自下列化合物的化合物：

31.选自下列化合物的化合物：

32.组合物，包含权利要求1-31任意一项的化合物和药学上可接受的载体、助剂或赋形剂。

33.抑制患者中蛋白激酶活性的方法，包含对所述患者给予

a)权利要求32的组合物；或者

b)权利要求1-31任意一项的化合物。

34.抑制生物样品中蛋白激酶活性的方法，包含使所述生物样品与：

a)权利要求32的组合物；或者

b)权利要求1-31任意一项的化合物接触。

35.权利要求33或权利要求34的方法，其中所述蛋白激酶是PLK。

36.权利要求35的方法，其中所述蛋白激酶是PLK1。

37.治疗患者增殖疾患、神经变性疾患、自体免疫疾患、炎性疾患或免疫学-介导的疾患的方法，包含对患者给予：

a)权利要求32的组合物；或者

b)权利要求1-30任意一项的化合物的步骤。

38.根据权利要求33或权利要求37的方法，包含对所述患者给予选自如下的附加治疗剂：化疗或抗增殖剂、抗炎剂、免疫调控或免疫抑制剂、神经营养因子、治疗心血管疾病的药物、治疗破坏性骨疾患的药物、治疗肝疾病的药物、抗病毒剂、治疗血液疾患的药物、治疗糖尿病的药物或治疗免疫缺陷疾患的药物，其中：

所述另外的治疗剂就所治疗的疾病而言是适当的；以及

所述另外的治疗剂与所述组合物一起作为单一剂型给药或者与所述组合物分开作为多元剂型的一部分给药。

39.治疗患者黑素瘤、骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、成神经细胞瘤或者选自如下的癌症的方法：结肠癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、中枢神经系统(CNS)癌、肾癌、前列腺癌、膀胱癌或胰腺癌，其中所述方法包含对所述患者给予

a)权利要求32的组合物；或者

b)权利要求1-30任意一项的化合物。

40.治疗患者癌症的方法，其中所述方法包含对所述患者给予

a)权利要求32的组合物；或者

b)权利要求1-30任意一项的化合物。

41.权利要求40的方法，其中所述方法包含通过用：

a)权利要求32的组合物；或者

b)权利要求1-30任意一项的化合物抑制PLK而破坏癌细胞的有丝分裂的步骤。

42.制备式I化合物的方法：

其中G是O，R¹是H，环A、环B、J^A、J^B和L是按照权利要求1-30任意一项所定义的，

包含使式5化合物

其中环A、环B、J^A、J^B和L是按照权利要求1-30任意一项所定义的，

在适合的酰胺生成条件下反应，生成式I化合物。

43.权利要求42的方法，进一步包含偶联式4化合物：

其中X是卤代基，环B、J^B和L是按照权利要求1-30任意一项所定义的；

与式i化合物的步骤：

其中CP是交叉偶联基团，环A和J^A是按照权利要求1-30任意一项所定义的；

在适合的交叉偶联条件下，生成式5化合物。

44.权利要求42的方法，进一步包含偶联式4化合物：

其中X是卤代基，环B、J^B和L是按照权利要求1-30任意一项所定义的；

与偶联基团前体的步骤，在适合的偶联基团生成条件下，生成式5a化合物：

其中CP是交叉偶联基团，环B、J^B和L是按照权利要求1-30任意一项所定义的。

45.权利要求44的方法，进一步包含偶联式5a化合物与式ii化合物的步骤：

其中X是卤代基，环A和J^A是按照权利要求1-30任意一项所定义的；在适合的交叉偶联条件下，生成式5化合物，其中L、环A、环B、J^A和J^B是按照权利要求1-30任意一项所定义的。

46.权利要求43或权利要求44的方法，进一步包含偶联式3化合物：

其中X是卤代基；

与

的步骤；

其中LG是适合的离去基团，L、环B和J^B是按照权利要求1-30任意一项所定义的；

在适合的O-C键偶联条件下，生成式4化合物。

47.制备式5化合物的方法：

其中环A、环B、J^A、J^B和L是按照权利要求1-30任意一项所定义的，

其中G是O，R¹是H，环A、环B、J^A、J^B和L是按照权利要求1-30任意一项所定义的，

包含使式7化合物：

与

反应；

其中LG是适合的离去基团，L、环B和J^B是按照权利要求1-30任意一项所定义的；

在适合的O-C键偶联条件下，生成式5化合物。

48.权利要求47的方法，进一步包含如下步骤：

a)偶联式2化合物：

与式i化合物，

其中CP是交叉偶联基团，环A和J^A是按照权利要求1-30任意一项所定义的，在适合的交叉偶联条件下，生成式6化合物：

b)在适合的去保护条件下去保护式6化合物，生成式7化合物。

49.权利要求47的方法，进一步包含如下步骤：

a)偶联式2化合物：

与偶联基团前体，在适合的偶联基团生成条件下，生成式5b化合物：

其中CP是交叉偶联基团；

b)偶联式5b化合物与

其中X是卤代基，环A和J^A是如本文定义的，

生成式6化合物：

c)在适合的去保护条件下去保护式6化合物，生成式7化合物。

50.权利要求47的方法，进一步包含将

的步骤，

其中环A是含有能够亲核进攻的氮原子的芳族环，J^A是按照权利要求1-30任意一项所定义的；加成至式8化合物的步骤：

经由适合的共轭加成条件，生成式9化合物：

51.制备式I化合物的方法：

其中G是O，R¹是H，环A、环B、J^A、J^B和L是按照权利要求1-30任意一项所定义的，

包含使式12a/b化合物：

其中环A、环B、J^A、J^B、L和R³是按照权利要求1-30任意一项所定义的，

在适合的代硼酸酯化条件下反应，生成式5a化合物或式5a/b化合物：

其中环A、环B、J^A、J^B、L、R³和R⁴是按照权利要求1-30任意一项所定义的。