KR100609444B1 - 이식편 거절반응 억제제 - Google Patents
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Abstract
AILIM(ICOS 및 8F4라고도 부른다)에 대한 항체 및 AILIM-Ig가 각종 장기(간장, 심장, 폐, 신장, 췌장 등)의 부전증 치료를 위하여 시행되는 조직이나 장기의 이식(동종이식 또는 이종이식)에 있어서 심각한 문제가 되고 있는 이식편 거절반응의 억제 또는 예방에 대해서 유의한 치료효과를 갖는 것을 발견하였다.
이식편, 거절반응, AILIM, 동종이식, 이종이식, 장기, 면역억제제
Description
본 발명은 AILIM(activation inducible lymphocyte immunomodulatory molecule; 별칭을 「ICOS(inducible co-stimulator)」라고 한다.)의 생물활성, 특히 AILIM을 매개로 하는 시그날 전달을 제어하는 활성을 갖는 물질을 포함하여 된 의약조성물에 관한 것이다.
구체적으로는 본 발명은 AILIM 발현세포의 증식을 제어(예를 들면, 억제)하거나, 또는 AILIM 발현세포에 의한 사이토카인(예를 들면, 인터페론 γ 또는 인터류킨 4 등)의 생산을 제어(예를 들면, 억제)하는 활성을 갖는 물질을 포함하여 된 의약조성물에 관한 것이다.
더욱 구체적으로는 본 발명은 (1) 장기 또는 그 일부 또는 조직의 이식에 수반되는 이식편 거절반응(면역 거절반응)을 억제, 치료 또는 예방하기 위한 의약조성물 및 (2) 면역억제제에 의한 장기 또는 그 일부 또는 조직의 이식에 수반되는 이식편 거절반응(면역 거절반응)의 억제, 치료 또는 예방의 효과를 증대시키기 위한 의약조성물에 관한 것이다.
최근의 장기이식법 개정에 의해 일본에서도 여러 예의 뇌사환자로부터의 장기이식이 행해졌다. 그 중 한 예로는 1명의 도너로부터 7명의 환자가 그 혜택을 받 았다. 앞으로는 일본에서도 장기이식의 증대가 기대된다.
한편, 일본에서는 심각한 순환기계 질환, 예를 들면 간장질환(급성 간부전, 간경변 등), 심장질환(중증 심부전, 심근증, 심장비대증 등), 신장질환(신부전, 만성 사구체신염(chronic glomerulonephritis), 당뇨병성 신증(nephropathy), 신우신염(pyelonephritis) 등), 폐질환(양쪽 폐기능 부전 등) 및 췌장질환(당뇨병환자의 치료) 등을 앓아 그 치료를 위해 장기이식을 필요로 하는 환자가 매년 심장에서 약 600명, 간장에서 약 3,000명, 또 폐에서 약 500명씩 증가하고 있는 것으로 추정되고 있다. 상술한 법적 측면에서의 정비가 이루어지는 한편에서, 이식될 수 있는 장기의 부족도 현실적인 문제로서 존재한다. 이식 선진국인 미국에서도 동일하게 장기부족이 심각한 문제가 되고 있어, 미국에서는 심장이식에서 약 4,300명(1999년) 또 신장이식에서 약 43,000명(1999년)이 이식을 계속 기다리고 있고, 각각 매년 약 800명 및 약 2,300명이 이식을 받지 못한 채 이 세상을 떠나고 있는 것이 실상이다.
조직(피부, 각막 및 뼈 등의 조직) 또는 장기(간장, 심장, 신장, 폐, 췌장 등)의 이식에는 (1) 자가이식(자기이식), (2) 동계이식, (3) 동종이식 및 (4) 이종이식이 있다.
자가이식(자기이식; autotransplantation)은 한 개체의 일부를 동일한 개체의 다른 부분에 이식하는 것으로, 예를 들면 화상치료를 위해 자신의 정상피부를 손상부위에 이식하는 경우가 그에 해당한다.
동계이식(isotransplantation)은 동일한 균일계 동물 사이에서 행해지는 이 식으로, 인간에 있어서는 일란성 쌍생아 사이에서 행해지는 이식(예를 들면, 신장의 한쪽이나 간장조직 등의 이식)이다.
동종이식(allotransplantation)은 유전원 조성이 다른 두 개체 사이에서 행해지는 이식으로, 인간에 있어서는 이란성 쌍생아 사이에서의 이식이나 혈연관계가 전혀 없는 개체 사이에서의 이식이 이에 해당한다.
이종이식(xenotransplantation)은 서로 다른 동물종인 개체 사이에서의 이식으로, 예를 들면 침팬지나 돼지의 조직이나 장기를 인간에게 이식하는 경우가 이에 해당한다.
장기이식에 관한 법의 정비에 의해 뇌사환자로부터의 동종이식의 증대가 전망되는 것은 상술한 바와 같지만, 이식장기의 절대적인 부족을 해소하기 위하여 최근에는 이종동물, 즉 돼지 등의 비인간 포유동물로부터 인간으로의 조직이나 장기의 이식 실용화를 향한 여러 가지 검토가 활발하게 이루어지고 있다.
이식될 수 있는 조직이나 장기의 부족문제가 상술한 바와 같은 뇌사이식법의 정비 및 이종이식 기술의 발달로 해소되는 것이 기대되는 한편, 동종이식 및 이종이식에 의한 질환치료에 있어서는 또 다른 하나의 매우 커다란 장애가 존재한다. 즉, 도너로부터의 이식조직이나 장기를 레시피언트에게 이식한 후에 일어나는 레시피언트환자에 있어서의 심각한 면역 거절반응(이식편 거절반응(graft rejection))이다.
이식편 거절반응은 이식편(이식되는 생체의 일부로 세포, 조직 또는 장기)의 도너와 레시피언트의 유전적 배경이 다른 경우(즉, 동종이식 또는 이종이식), 이식 편이 레시피언트에 의해 이물질로 인식됨으로써 레시피언트의 면역계가 그 이식편을 거절하여 배제하려고 하는 여러 가지 면역반응이다. 이 이식에 수반되는 이 면역반응은 (1) 이식 직후에 일어나는 강한 거절반응인 초급성 거절반응(hyper-acute rejection reaction), (2) 이식 후 수개월 이내에 보이는 급성 거절반응(acute rejection reaction), (3) 이식 후 수개월 이후에 보이는 만성 거절반응(chronic rejection reaction)으로 나누어진다. 또한, T 세포로 대표되는 면역담당 세포에 의한 세포성 면역과 항체에 의한 액성 면역이 복잡하게 제휴된 형태로 일어나지만, 주로 세포성 면역이다.
이 이식편 거절반응에 의해 이식편은 최종적으로는 괴사 탈락한다. 또한, 레시피언트에는 발열, 백혈구 수 증대, 권태감 등의 심각한 전신증상 뿐만 아니라, 이식국소의 종창(腫脹)이나 압통이 일어난다. 더 나아가서는 감염증 등의 심각한 합병증을 일으키게 된다.
특히, 돼지 등 이종이식편을 인간에게 이식하는 경우에는 초급성 거절반응이 일어나 이식편이 분단위로 거절되어 버리는 커다란 문제가 존재한다.
이러한 이식에 수반되는 면역 거절반응(이식편 거절반응)을 억제하기 위해서는 동종이식에 의해 야기되는 면역 거절반응이 주로 세포성 면역에 의한 것이기 때문에, 면역담당 세포의 기능을 억제하는 한정된 몇 개의 면역억제제가 사용되고 있다. 예를 들면, 사이클로스포린(cyclosporin; CsA), 타크롤리무스(tacrolimus; FK-506), 아자티오프린(azathioprine; AZ), 미코페놀산 모페틸(mycophenolate mofetil; MMF), 미조리빈(mizoribine; MZ), 레플루노마이드(leflunomide; LEF), 프 레도니조론(predonisolon)이나 메틸프레도니조론(methylpredonisolon) 등의 부신피질 스테로이드(별칭: 부신피질 호르몬; 코르티코스테로이드(corticosteroid); 코르티코이드(corticoid)), 시롤리무스(sirolimus)(별칭: 라파마이신(rapamycin)), 데옥시스퍼구알린(deoxyspergualin; DGS) 및 FTY720(화학명칭: 2-아미노-2-[2-(4-옥틸페닐)에틸]-1,3-프로판디올 히드로클로라이드) 등이다.
또한, T 세포의 활성화에 필요한 코스티뮬레이토리 시그날의 전달을 담당하는 분자(부자극 전달분자)인 CTLA4나 CD28, 특히 CTLA4의 가용성 영역이나 그것을 코드하는 유전자를 사용하는 CTLA4 의약도 면역억제제로서 임상 개발중이다.
한편, 최근들어 코스티뮬레이토리 시그날 전달분자인 CTLA4나 CD28과 동일하게, 해당 T 세포 등의 림프구 활성화에 필수인 제2의 시그날(코스티뮬레이토리 시그날)의 전달 및 상기 시그날에 연동되어 활성화 T 세포 등의 활성화 림프구의 기능제어를 행하는 제3의 부자극 전달분자로서 AILIM(activation inducible lymphocyte immunomodulatory molecule; 인간, 마우스 및 랫트; Int. Immunol., Vol.12, No.1, p.51-55, 2000; 별칭을 ICOS라 한다(Inducible co-stimulator; 인간; Nature, Vol.397, No.6716, p.263-266, 1999); J. Immunol., 166(1), p.1, 2001; J. Immunol., 165(9), p.5035, 2000; Biochem. Biophys. Res. Commun., 276(1), p.335, 2000; Immunity, 13(1), p.95, 2000; J. Exp. Med., 192(1), p.53, 2000; Eur. J. Immunol., 30(4), p.1040, 2000)이라 불리우는 분자가 동정되었다.
이 분자에 관한 최근의 연구를 토대로 하는 사실로부터, 이 AILIM 분자는 T 세포 등의 면역담당 세포(특히 T 세포)의 활성화를 통하여 일어나는 각종 질환(예 를 들면, 자기면역 질환, 알레르기, 염증 등)에 관여할 가능성이 예측되고 있지만, 이 AILIM 분자의 기능제어와 조직이나 장기의 이식에 수반되는 이식편 거절반응(면역 거절반응)과의 관계 및 해당 AILIM 분자의 활성을 제어하는 것에 의한 그와 같은 조직이나 장기의 이식에 수반되는 거절반응의 억제, 치료 또는 예방의 시도에 대해서는 조금도 보고되어 있지 않다.
또한, 아주 최근들어 이 부자극 전달분자 AILIM과 상호작용하는 리간드로 생각되는 B7h, B7RP-1, GL50 또는 LICOS라 불리우는 신규 분자도 동정되고 있다(Nature, Vol.402, No.6763, p.827-832, 1999; Nature Medicine, Vol.5, No.12, p.1365-1369, 1999; J. Immunology, Vol.164, p.1653-1657, 2000; Curr. Biol., Vol.10, No.6, p.333-336, 2000).
이들 2종류의 신규한 분자, 즉 AILIM(ICOS)과 B7RP-1(B7h, GL50, LICOS)의 동정에 의해, 상술한 T 세포 등의 림프구의 활성화 및 활성화 T 세포의 기능제어에 필수인 코스티뮬레이토리 시그날의 전달경로에는 지금까지 알려져 있던 CD28과 CD80(B7-1)/CD86(B7-2) 사이의 시그날 전달 경로 및 CTLA 4와 CD80(B7-1)/CD86(B7-2) 사이의 시그날 전달 경로인 제1 및 제2의 경로 외에 AILIM(ICOS)와 B7RP-1(B7h, GL50, LICOS)의 상호작용에 의한 새로운 제3의 경로가 있는 것이 판명되게 되었다.
이 새로운 2개 분자의 각각의 생물학적 기능, 상기 분자에 의한 제3의 코스티뮬레이토리 시그날 전달에 의한 T 세포 등의 림프구의 기능제어 및 상기 신규한 시그날 전달과 질환의 관련성에 대해서는 현재 정력적으로 연구가 진행되고 있는 중이다.
발명의 개시
즉, 본 발명은 T 세포 등의 림프구의 활성화에 필수인 제2의 시그날(코스티뮬레이토리 시그날)의 전달 및 상기 시그날에 연동되어 활성화 T 세포 등의 활성화 림프구의 기능제어를 행하는 분자로 생각되는 신규분자 AILIM의 생물학적 기능을 의학 및 약학적 수법(예를 들면, 저분자 화합물 및 항체 등의 약제)으로 제어함으로써, 조직이나 장기의 이식(동종이식 또는 이종이식)에 있어서의 면역 거절반응(이식편 거절반응)을 억제, 치료 또는 예방하는 방법 및 약제를 제공하는 것을 목적으로 한다.
더 나아가서는 그러한 AILIM의 생물학적 기능을 제어하는 약제(예를 들면, 저분자 화합물 및 항체 등의 약제)를 사용하여 기존의 면역억제제(사이클로스포린, 아자티오프린, 부신피질 스테로이드, FK-506 등)에 의한 이식편 거절반응의 억제효과를 증대시키는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자 등은 포유동물의 AILIM의 생물학적 기능 및 이식편(세포, 조직, 장기)의 이식(동종이식 또는 이종이식)에 수반되는 심각한 문제인 면역 거절반응(이식편 거절반응)을 억제하는 방법에 관하여 예의 연구를 거듭한 결과, (1) AILIM의 기능을 제어하는 약제가 조직이나 장기의 이식에 수반되는 면역 거절반응(이식편 거절반응)을 유의하게 억제하는 것 및 (2) 기존의 면역억제제에 의한 이식편 거절반응의 억제효과가, AILIM의 기능을 제어하는 약제를 사용함으로써 증대되는 것을 발견하고 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
본 발명의 의약조성물은 AILIM을 발현하는 세포로의 AILIM을 매개로 하는 코스티뮬레이토리 시그날(부자극 시그날)의 전달이 관여하는 각종 생체반응(예를 들면, AILIM을 발현하는 세포의 세포증식, AILIM을 발현하는 세포에 의한 사이토카인의 생산, AILIM을 발현하는 세포의 면역 세포용해(immune cytolysis) 또는 세포사(apoptosis) 및 AILIM을 발현하는 세포에 대한 항체의존성 세포장애를 유도하는 활성 등)을 제어하기 위한 의약품으로서, 및/또는 상기 AILIM을 매개로 하는 시그날 전달이 관여하는 각종 질환의 발증 및/또는 진행을 억제, 저지하여 상기 질환을 치료 또는 예방하기 위한 의약품으로서 유용하다.
구체적으로는, 본 발명의 의약조성물은 AILIM 발현세포의 증식제어(억제 또는 촉진) 또는 AILIM 발현세포에 의한 사이토카인(예를 들면, 인터페론 γ 또는 인터류킨 4 등)의 생산을 제어(억제 또는 촉진)하는 것이 가능하고, AILIM을 매개로 하는 시그날 전달이 관여하는 여러 생리현상에 의해 야기되는 각종 병적 상태의 억제 및 각종 질환의 치료 또는 예방을 가능하게 한다.
본 발명의 의약조성물을 사용함으로써 심각한 순환기계 질환을 앓고 있는 레시피언트에 도너의 장기(간장, 심장, 폐, 신장, 췌장 등) 또는 그 일부 또는 조직(피부, 각막, 뼈 등의 조직)을 이식(동종이식 또는 이종이식)함에 의한 치료에 있어서의 심각한 문제인 면역 거절반응(이식편 거절반응)을 억제, 예방 및/또는 치료하는 것이 가능하다.
더 나아가서는, 본 발명의 의약조성물을 사용함으로써 그러한 이식치료에서의 면역 거절반응의 억제를 위해 시행되고 있는 기존의 면역억제제에 의한 이식편 거절반응의 억제효과를 증대시키는 것이 가능하다.
즉, 본 발명은 하기 (1) 내지 (11)에 기재되는 바와 같은 발명이다.
(1) AILIM을 매개로 하는 시그날 전달을 제어하는 활성을 갖는 물질 및 약학적으로 허용될 수 있는 담체를 포함하여 되고, 장기 또는 그 일부 또는 조직의 이식에 수반되는 이식편 거절반응을 억제, 치료 또는 예방하기 위한 의약조성물.
(2) AILIM을 매개로 하는 시그날 전달을 제어하는 활성을 갖는 물질 및 약학적으로 허용될 수 있는 담체를 포함하여 되고, 1 또는 복수의 면역억제제에 의한 장기 또는 그 일부 또는 조직의 이식에 수반되는 이식편 거절반응의 억제, 치료 또는 예방의 효과를 증대시키기 위한 의약조성물.
(3) (2)에 있어서, 상기 면역억제제가 아자티오프린, 부신피질 스테로이드, 사이클로스포린, 미조리빈 및 타크롤리무스(FK-506), 미코페놀산 모페틸, 레플루노마이드, 시롤리무스, 데옥시스퍼구알린, FTY720 및 CTLA4 의약으로부터 선택되는 1 또는 복수의 약제인 것을 특징으로 하는 의약조성물.
(4) (1) 내지 (3) 중 어느 하나에 있어서, 상기 이식이 동종이식인 것을 특징으로 하는 의약조성물.
(5) (1) 내지 (3) 중 어느 하나에 있어서, 상기 이식이 이종이식인 것을 특징으로 하는 의약조성물.
(6) (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 있어서, 상기 장기가 간장, 심장, 신장, 폐 또는 췌장인 것을 특징으로 하는 의약조성물.
(7) (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 있어서, 상기 조직이 피부, 각막 또는 뼈 의 조직인 것을 특징으로 하는 의약조성물.
(8) (1) 내지 (7) 중 어느 하나에 있어서, 상기 물질이 단백성 물질인 것을 특징으로 하는 의약조성물.
(9) (8)에 있어서, 상기 단백성 물질이 하기 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 의약조성물:
a) AILIM에 결합하는 항체 또는 그의 일부;
b) AILIM의 세포외 영역의 전부 또는 일부를 포함하는 폴리펩티드;
c) AILIM의 세포외 영역 전부 또는 일부와 면역글로불린 중쇄의 정상영역의 전부 또는 일부로 된 융합 폴리펩티드; 및
d) AILIM에 결합하는 폴리펩티드.
(10) (1) 내지 (7) 중 어느 하나에 있어서, 상기 물질이 비단백성 물질인 것을 특징으로 하는 의약조성물.
(11) (10)에 있어서, 상기 비단백성 물질이 DNA, RNA 또는 화학적으로 합성된 화합물인 것을 특징으로 하는 의약조성물.
이하, 본 발명에서 사용되는 어구의 의미 및 물질의 제조방법을 명확하게 함으로써 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 「포유동물」이란 인간, 소, 염소, 토끼, 마우스, 랫트, 햄스터 및 모르모트 등을 의미하고, 바람직하게는 인간, 소, 랫트, 마우스 또는 햄스터이며, 특히 바람직하게는 인간이다.
본 발명에서 말하는 「AILIM」이란 Activation inducible lymphocyte immunomodulatory molecule의 약칭으로, 상술한 바와 같은 문헌에 보고된 구조 및 기능을 갖는 포유동물의 세포표면분자를 의미한다(J. Immunol., 166(1), p.1, 2001; J. Immunol., 165(9), p.5035, 2000; Biochem. Biophys. Res. Commun., 276(1), p.335, 2000; Immunity, 13(1), p.95, 2000; J. Exp. Med., 192(1), p.53, 2000; Eur. J. Immunol., 30(4), p.1040, 2000; Int. Immunol., 12(1), p.51, 2000; Nature, 397(6716), p.263, 1999; GenBank Accession Number: BAA82129(인간); BAA82128(랫트); BAA82127(랫트 변이체); BAA82126(마우스)).
특히 바람직하게는 인간 유래의 AILIM을 의미한다(예를 들면 International Immunology, Vol.12, No.1, p.51-55, 2000).
또한, 이 AILIM은 ICOS(Nature, Vol.397, No.6716, p.263-266, 1999) 또는 JTT-1 항원/JTT-2 항원(일본국 특허출원공개 제(평)11-29599호 공보; 국제 특허출원공개 WO98/38216호 공보)이라고도 별칭되지만 그들 분자는 서로 동일한 분자를 의미한다.
또한, 본 발명에서 말하는 「AILIM」에는 상기 이미 보고된 문헌 중에 기재된 각각의 포유동물 AILIM의 아미노산서열, 특히 바람직하게는 인간 AILIM의 아미노산서열과 실질적으로 동일한 아미노산서열을 갖는 폴리펩티드도 포함된다. 더욱이 또한 이미 동정되어 있는 랫트 유래의 AILIM 변이체(GenBank Accession Number: BAA82127)와 동일한 인간 AILIM 변이체도 본 발명의 「AILIM」에 포함된다.
여기서 「실질적으로 동일한 아미노산서열을 갖는다」란 상기 문헌의 아미노산서열을 포함하는 폴리펩티드와 실질적으로 동등한 생물학적 성질을 갖는 한 상기 아미노산서열 중 복수개의 아미노산, 바람직하게는 1 내지 10개의 아미노산, 특히 바람직하게는 1 내지 5개의 아미노산이 치환, 결실 및/또는 수식되어 있는 아미노산서열을 갖는 폴리펩티드 및 상기 아미노산서열에 복수개의 아미노산, 바람직하게는 1 내지 10개의 아미노산, 특히 바람직하게는 1 내지 5개의 아미노산이 부가된 아미노산서열을 갖는 폴리펩티드도 본원 발명의 「AILIM」의 범위에 포함되는 것을 의미한다.
그러한 아미노산의 치환, 결실 또는 삽입은 일반적인 방법에 따라 행할 수 있다(실험의학 별책 「유전자공학 핸드북」(1992) 등).
예를 들면, 합성 올리고뉴클레오티드 지정 돌연변이 도입(gapped duplex)법, 아질산 또는 아황산 처리에 의해 랜덤하게 점돌연변이를 도입하는 방법, Ba131 효소 등에 의해 결실변이체를 제작하는 방법, 카셋트변이법, 링커 스캐닝법, 미스인코포레이션법, 미스매치 프라이머법, DNA 세그먼트 합성법 등을 들 수 있다.
합성 올리고뉴클레오티드 지정 돌연변이 도입(gapped duplex)법은 예를 들면 하기와 같이 행할 수 있다. 앰버변이(amber mutation)를 갖는 M13 파지 벡터에 변이유도를 희망하는 영역을 클로닝하고, 단일가닥 사슬 파지 DNA를 조제한다. 앰버변이를 갖지 않는 M13 벡터의 RFIDNA를 제한효소 처리에 의해 선형상으로 하고, 상기의 단일가닥 파지 DNA와 혼합하여 변성한 후 가열 냉각시켜 「gapped duplex DNA」를 형성시킨다. 이것에 변이를 도입한 합성 올리고뉴클레오티드를 하이브리다이즈시켜 DNA 폴리머라아제와 DNA 리가아제의 반응에 의해 닫힌 고리형상 이중가닥 사슬 DNA로 한다. 이 DNA를 미스매치 수식능이 결손되어 있는 대장균 mutS주에 트 랜스펙션하고, 증식된 파지를 억제기능이 없는 대장균에 감염시켜 앰버변이를 갖지 않는 파지만을 선택한다.
또한, 아질산에 의한 점돌연변이를 도입하는 방법은 예를 들면 하기와 같은 원리를 이용한다. DNA를 아질산 처리하면 염기가 탈아미노화되어 아데닌은 히포크산틴이, 시토신은 우라실이, 구아닌은 크산틴이 된다. 탈아미노화된 DNA를 세포에 도입하면 DNA 복제시에 히포크산틴은 시토신과, 우라실은 아데닌과, 크산틴은 티민과 염기쌍을 형성하기 때문에 「A:T」가 「G:C」로 「G:C」가 「A:T」로 치환된다. 실제로는 아질산 처리한 단일가닥 DNA 단편을 「gapped duplex DNA」에 하이브리다이즈시키고, 이하 합성 올리고뉴클레오티드 지정 돌연변이 도입(gapped duplex)법과 동일하게 조작하여 변이주를 분리하면 된다.
본 발명을 구성하는 「AILIM 발현세포에 의한 사이토카인의 생산」에 있어서의 「사이토카인」이란 AILIM을 발현하는 세포(특히, T 세포)가 생산하는 임의의 사이토카인을 의미한다.
상기 T 세포는 Th1 타입의 T 세포 및 Th2 타입의 T 세포를 들 수 있고, 본 발명의 상기 사이토카인은 특히 그들 Th1 타입의 T 세포가 생산하는 사이토카인 및/또는 Th2 타입의 T 세포가 생산하는 임의의 사이토카인을 의미한다.
Th1 타입의 T 세포가 생산하는 사이토카인으로서는 IFN-γ, IL-2, TNF, IL-3 등을 들 수 있고, 또한 Th2 타입의 T 세포가 생산하는 사이토카인으로서는 IL-3, IL-4, IL-5, IL-10, TNF 등을 들 수 있다(세포 Vol.30, No.9, p.343-346, 1998).
본 발명을 구성하는 「물질」, 구체적으로는 「AILIM을 매개로 하는 시그날 전달을 제어하는 활성을 갖는 물질」, 더욱 구체적으로는 「AILIM 발현세포의 증식을 억제하거나 또는 AILIM 발현세포에 의한 사이토카인의 생산을 억제하는 활성을 갖는 물질」에는 자연계에 존재하는 천연의 물질 또는 인공적으로 조제되는 임의의 물질을 의미한다.
여기서 「AILIM을 매개로 하는 시그날 전달」이란 상술 또는 후술하는 실시예에서 상세하게 기술하는 바와 같은 AILIM을 발현하는 세포에 임의의 표현형의 변화(세포증식, 세포의 활성화, 세포의 불활성화, 세포사 및/또는 AILIM 발현세포로부터 임의의 사이토카인의 생산능의 변화)를 가져오는 AILIM을 통한 시그날 전달을 의미한다.
상기 「물질」은 「단백성 물질」과 「비단백성 물질」로 크게 나눌 수 있다.
상기 「단백성 물질」로서는 후술하는 폴리펩티드, 항체(다중클론항체, 단일클론항체 또는 상기 단일클론항체의 일부)를 들 수 있다.
상기 물질이 항체인 경우에는 바람직하게는 단일클론항체이다. 상기 물질이 단일클론항체인 경우에는 비인간 포유동물 유래의 단일클론항체 뿐만 아니라 후술하는 재조합 키메라 단일클론항체, 재조합 인간형 단일클론항체 및 인간 단일클론항체가 포함된다.
상기 물질이 폴리펩티드인 경우에는 후술하는 폴리펩티드, 상기 폴리펩티드의 단편(올리고펩티드), 융합 폴리펩티드 및 그들 중 어느 하나의 화학수식체가 포함된다. 올리고펩티드로서는 5 내지 30개의 아미노산, 바람직하게는 5 내지 20개의 아미노산으로 된 펩티드를 들 수 있다. 상기 화학수식은 생체에 투여된 경우의 혈중 반감기의 증대 또는 경구 투여시의 소화관에서의 분해에 대한 내성 또는 흡수성 증대의 목적 등의 각종 목적에 따라 설계할 수 있다.
상기 폴리펩티드의 구체예로서는 다음과 같다.
(1) AILIM의 세포외 영역의 전부 또는 일부를 포함하는 폴리펩티드;
(2) AILIM의 세포외 영역의 전부 또는 일부와 면역글로불린 중쇄의 정상영역의 전부 또는 일부로 된 융합 폴리펩티드; 또는
(3) AILIM에 결합하는 폴리펩티드.
상기 「비단백성 물질」로서는 DNA, RNA 및 화학적으로 합성된 화합물을 들 수 있다.
여기서 「DNA」란 상술한 AILIM(바람직하게는 인간 AILIM)을 코드하는 DNA(cDNA 및 게놈 DNA를 포함한다)의 염기서열을 토대로 설계되는 안티센스 DNA 의약으로서 유용한 「상기 DNA의 부분 염기서열을 포함하는 DNA 또는 그들을 화학수식한 화학수식 DNA」를 의미한다. 즉, 상기 안티센스 DNA는 AILIM을 코드하는 DNA 또는 RNA에 하이브리다이즈함으로써, 상기 AILIM을 코드하는 DNA의 mRNA로의 전사 또는 상기 mRNA의 단백으로의 변역을 저해할 수 있다.
여기서 「부분 염기서열」이란 임의의 부위에 있어서의 임의의 수의 염기로 된 부분 염기서열을 의미한다. 상기 부분 염기서열로서는 연속된 5 내지 100 염기의 부분 염기서열을 들 수 있고, 바람직하게는 연속된 5 내지 70 염기의 부분 염기서열, 더욱 바람직하게는 연속된 5 내지 50 염기의 부분 염기서열, 보다 바람직하 게는 연속된 5 내지 30 염기의 부분 염기서열을 들 수 있다.
또한, 상기 DNA를 안티센스 의약으로서 사용하는 경우에는 상기 DNA가 환자의 체내에 투여된 경우의 혈중 반감기의 증대(안정성), 세포내막의 투과성 증대, 또는 경구투여인 경우의 소화기관에서의 분해 내성의 증대 또는 흡수 증대 등의 목적을 위해 상기 DNA의 염기서열 일부에 화학수식을 행하는 것이 가능하다. 화학수식으로서는 예를 들면 올리고뉴클레오티드 구조 중의 인산결합, 리보오스, 핵산염기, 당부위, 3' 및/또는 5' 말단 등의 화학수식을 들 수 있다.
인산결합의 수식으로서는 하나 이상의 상기 결합을 포스포디에스테르 결합(D-올리고), 포스포로티오에이트 결합, 포스포로디티오에이트 결합(S-올리고), 메틸포스포네이트 결합(MP-올리고), 포스포로아미데이트 결합, 비인산 결합 및 메틸 포스포노티오에이트 결합 중 어느 하나 또는 그들 조합으로의 변경을 들 수 있다. 리보오스의 수식으로서는 2'-플루오로리보오스 또는 2'-O-메틸리보오스 등으로의 변경을 들 수 있다. 핵산염기의 수식으로서는 5-프로피닐우라실 또는 2-아미노아데닌 등으로의 변경을 들 수 있다.
여기서, 「RNA」란 상술한 AILIM(바람직하게는 인간 AILIM)을 코드하는 RNA의 염기서열을 토대로 설계되는 안티센스 RNA 의약으로서 유용한 「상기 RNA의 부분 염기서열을 포함하는 RNA 또는 그들을 화학수식한 화학수식 RNA」를 의미한다. 상기 안티센스 RNA는 AILIM을 코드하는 DNA에 하이브리다이즈함으로써, 상기 AILIM을 코드하는 DNA 또는 RNA에 하이브리다이즈함으로써 상기 AILIM을 코드하는 DNA의 mRNA로의 전사 또는 상기 mRNA의 단백으로의 번역을 저해할 수 있다.
여기서 「부분 염기서열」이란 임의의 부위에 있어서의 임의의 수의 염기로 된 부분 염기서열을 의미한다. 상기 부분 염기서열로서는 연속된 5 내지 100 염기의 부분 염기서열을 들 수 있고, 바람직하게는 연속된 5 내지 70 염기의 부분 염기서열, 더욱 바람직하게는 연속된 5 내지 50 염기의 부분 염기서열, 보다 바람직하게는 연속된 5 내지 30 염기의 부분 염기서열을 들 수 있다.
상기 안티센스 RNA는 상기 RNA가 환자의 체내에 투여된 경우의 혈중 반감기의 증대, 세포내막의 투과성 증대, 또는 경구투여인 경우의 소화기관에서의 분해내성의 증대 또는 흡수 증대 등의 목적을 위해 상기 RNA의 염기서열 일부에 화학수식을 행하는 것이 가능하다. 화학수식으로서는 예를 들면 상술한 안티센스 DNA에 적용되는 화학수식을 들 수 있다.
「화학적으로 합성된 화합물」이란 상술한 DNA, RNA 및 단백성 물질을 제외한 임의의 화합물로서 분자량 약 100 내지 약 1000 이하의 화합물, 바람직하게는 분자량 약 100 내지 약 800의 화합물이고, 보다 바람직하게는 분자량 약 100 내지 약 600의 화합물을 들 수 있다.
상기 「물질」의 정의에 포함되는 「폴리펩티드」란 AILIM(바람직하게는 인간의 AILIM)을 구성하는 폴리펩티드 사슬의 일부(단편)를 의미하고, 바람직하게는 AILIM을 구성하는 폴리펩티드의 세포외 영역의 전부 또는 그 일부를 의미한다(상기 영역을 목적하는 바에 따라 그 N말단 및/또는 C말단에 1 내지 5의 아미노산이 부가되어 있어도 된다.).
본 발명의 AILIM은 1 또는 2의 폴리펩티드 사슬에 의해 구성되는 세포막을 관통하는 세포막관통 분자이다.
여기서 「세포막관통 단백」이란 많은 수용체 또는 세포막 표면분자에 보이는 바와 같이, 막의 지질 이중층을 1회 또는 수회 관통하는 소수성 펩티드 영역에 의해 막과 연결하고, 전체로서 세포외 영역(extracellular region), 막관통 영역(transmembrane region) 및 세포질 영역(cytoplasmic region)의 3개의 주영역으로 구성되는 구조를 취하는 단백을 가리킨다. 더욱이 그러한 막관통성 단백은 모노머(monomer)로서 또는 동일한 아미노산서열을 갖는 또 다른 단일가닥의 사슬 또는 다른 아미노산서열을 갖는 사슬과 함께 각각 호모다이머(homodimer), 헤테로다이머(heterodimer) 또는 올리고머(oligomer)를 형성하여 존재함으로써 각각의 수용체나 세포 표면분자를 구성한다.
여기서 「세포외 영역」이란 상술한 바와 같은 세포막 막관통 단백의 전체구조 중 상기 막단백이 연결되어 있는 막의 외계측에 존재하는 부분구조(부분영역)의 전부 또는 일부를 의미하고, 바꿔 말하면 막내에 삽입되어 있는 영역(막관통 영역) 및 상기 막내의 영역에 이어서 세포질내에 존재하는 영역(세포내 영역) 이외의 영역의 전부 또는 일부를 의미한다.
상술한 「단백성 물질」에 포함되는 「융합 폴리펩티드」란 AILIM(바람직하게는 인간의 AILIM)을 구성하는 폴리펩티드의 세포외 영역의 전부 또는 일부와 「면역글로불린(Ig, 바람직하게는 인간의 Ig) 중쇄의 정상영역의 전부 또는 일부」로 된 융합 폴리펩티드이다. 바람직하게는 AILIM의 세포외 영역과 인간 IgG 중쇄의 정상영역의 일부와의 융합 폴리펩티드이고, 특히 바람직하게는 AILIM의 세포외 영역 과 인간 IgG 중쇄의 힌지영역, CH2 도메인 및 CH3 도메인으로 된 영역(Fc)과의 융합 폴리펩티드이다. 또한, IgG로서는 IgG1이 바람직하다. 또한, AILIM으로서는 인간, 마우스 또는 랫트(바람직하게는 인간)의 AILIM이 바람직하다.
여기서 「면역글로불린(Ig) 중쇄의 정상영역의 전부 또는 일부」란 바람직하게는 인간 유래의 면역글로불린의 중쇄(Heavy Chain, H사슬)의 정상영역(Constant region), Fc영역 또는 그들의 일부를 의미한다. 상기 면역글로불린은 어떤 클래스 및 서브클래스에 속하는 면역글로불린이어도 되고, 구체적으로는 IgG(IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4), IgM, IgA(IgA1 및 IgA2), IgD 및 IgE를 들 수 있다. 바람직하게는 IgG(IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4), 또는 IgM이다. 본 발명에 있어서 특히 바람직한 예로서는 인간 유래의 IgG(IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4)에 속하는 면역글로불린이다.
면역글로불린은 2개의 상동인 경쇄(Light Chain, L사슬)와 2개의 상동인 중쇄(Heavy Chain, H사슬)의 4개의 사슬이 디설피드 결합(S-S결합)으로 결합된 Y자형의 구조단위를 갖는다. 경쇄는 경쇄 가변영역(VL) 및 경쇄 정상영역(CL)으로 구성된다. 중쇄는 중쇄 가변영역(VH)과 중쇄 가변영역(CH)으로 구성된다.
중쇄 정상영역은 클래스(IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE) 및 서브클래스(IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2)마다 각각 고유의 아미노산서열을 갖는 몇 개의 도메인으로 구성된다.
IgG(IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)의 중쇄는 N말단으로부터 순서대로 VH, CH1 도 메인, 힌지영역, CH2 도메인 및 CH3 도메인으로 구성된다.
동일하게 IgG1의 중쇄는 N말단으로부터 순서대로 VH, Cγ11 도메인, 힌지영역, Cγ12 도메인 및 Cγ13 도메인으로 구성된다. IgG2의 중쇄는 N말단으로부터 순서대로 VH, Cγ21 도메인, 힌지영역, Cγ22 도메인 및 Cγ23 도메인으로 구성된다. IgG3의 중쇄는 N말단으로부터 순서대로 VH, Cγ31 도메인, 힌지영역, Cγ32 도메인 및 Cγ33 도메인으로 구성된다. IgG4의 중쇄는 N말단으로부터 순서대로 VH, Cγ4
1 도메인, 힌지영역, Cγ42 도메인 및 Cγ43 도메인으로 구성된다.
IgA의 중쇄는 N말단으로부터 순서대로 VH, Cα1 도메인, 힌지영역, Cα2 도메인 및 Cα3 도메인으로 구성된다.
동일하게 IgA1의 중쇄는 N말단으로부터 순서대로 VH, Cα11 도메인, 힌지영역, Cα12 도메인 및 Cα13 도메인으로 구성된다. IgA2의 중쇄는 N말단으로부터 순서대로 VH, Cα21 도메인, 힌지영역, Cα22 도메인 및 Cα23 도메인으로 구성된다.
IgD의 중쇄는 N말단으로부터 순서대로 VH, Cδ1 도메인, 힌지영역, Cδ2 도메인 및 Cδ3 도메인으로 구성된다.
IgM의 중쇄는 N말단으로부터 순서대로 VH, Cμ1 도메인, Cμ2 도메인, Cμ3 도메인 및 Cμ4 도메인으로 구성되고, IgG, IgA 및 IgD에 보이는 바와 같은 힌지영 역을 갖지 않는다.
IgE의 중쇄는 N말단으로부터 순서대로 VH, Cε1 도메인, Cε2 도메인, Cε3 도메인 및 Cε4 도메인으로 구성되고, IgG, IgA 및 IgD에 보이는 바와 같은 힌지영역을 갖지 않는다.
더욱이 IgG를 예로 들자면, IgG를 파파인으로 처리하면 2개의 중쇄를 연결시키고 있는 힌지영역 중에 존재하는 디설피드 결합의 약간 N말단측에서 절단되어, VH 및 CH1로 된 중쇄단편과 1개의 경쇄가 디설피드 결합으로 연결된 2개의 상동인 Fab 과, 힌지영역, CH2 도메인 및 CH3 도메인으로 된 2개의 상동인 중쇄단편이 디설피드 결합으로 연결된 한개의 Fc를 생기게 한다(이상, 「면역학 일러스트레이티드」, 원서 제2판, 제65~75페이지, 1992년, 난코도발행 및 「최신 의과학의 초점 「면역계의 인식기구」」, 제4~7페이지, 1991년, 난코도발행 등 참조).
즉, 상술한 「면역글로불린 중쇄의 정상영역의 일부」란 상술한 바와 같은 구조적 특징을 갖는 면역글로불린 중쇄의 정상영역 일부를 의미하고, 바람직하게는 C1 도메인이 결여된 정상영역 또는 Fc영역이다. 구체적으로는 IgG, IgA 또는 IgD의 경우에는 각각의 힌지영역, C2 도메인 및 C3 도메인으로 된 영역을 들 수 있고, IgM 또는 IgE의 경우에는 각각의 C2 도메인, C3 도메인 및 C4 도메인으로 된 영역을 들 수 있다. 특히 바람직한 예로서는 인간 유래의 IgG1의 Fc영역을 들 수 있다.
상술한 융합 폴리펩티드는 상술한 바와 같은 IgG 등의 면역글로불린의 정상영역의 일부(예를 들면 Fc)를 융합 파트너로서 갖기 때문에, 상기 면역글로불린 단 편에 특이적으로 결합한다고 하는 프로테인 A의 성질을 사용한 친화성 칼럼크로마토그래피를 사용함으로써 상기 융합 폴리펩티드를 매우 용이하게 정제하는 것이 가능하다는 점에서 이점을 갖는다. 더욱이 각종 면역글로불린의 Fc에 대한 각종 항체가 제공되어 있기 때문에, 상기 Fc에 대한 항체를 사용하여 상기 융합 폴리펩티드의 면역 어세이를 간편하게 행할 수 있다.
상기 「물질」의 정의에 포함되는 「폴리펩티드」에는 또한 「AILIM에 결합하는 폴리펩티드」가 포함된다.
「AILIM에 결합하는 폴리펩티드」로서는 구체적으로는 AILIM과 상호작용하는 리간드인 기지의 B7h, B7RP-1, GL50 또는 LICOS라 불리우는 분자(Nature, Vol.402, No.6763, p.827-832, 1999; Nature Medicine, Vol.5, No.12, p.1365-1369, 1999; J. Immunology, Vol.164, p.1653-1657, 2000; Curr. Biol., Vol.10, No.6, p.333-336, 2000)를 구성하는 폴리펩티드의 전부 또는 일부를 포함하는 폴리펩티드를 들 수 있다.
바람직하게는 상기 리간드(B7h, B7RP-1, GL50, LICOS)의 세포외 영역의 전부 또는 일부를 포함하는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드와 면역글로불린(바람직하게는 인간 면역글로불린) 중쇄의 정상영역의 전부 또는 일부로 된 융합 폴리펩티드이다. 여기서 「세포외 영역」 및 「면역글로불린 중쇄의 정상영역」이란 용어에 대해서는 상기와 동일한 의미를 갖는다.
상술한 폴리펩티드, 상기 폴리펩티드의 일부(단편) 및 융합 폴리펩티드는 후술하는 유전자 재조합 기술 외에 화학적 합성법, 세포 배양방법 등과 같은 해당 기 술적 분야에 있어서 알려진 공지의 방법 또는 그 수식방법을 적절히 사용함으로써 제조할 수 있다.
본 발명의 「항체」란 상기에서 정의한 포유동물의 AILIM(특히 바람직하게는 인간 AILIM)에 대한 다중클론항체(항혈청) 또는 단일클론항체를 의미하고, 바람직하게는 단일클론항체이다.
구체적으로는, AILIM에 결합하여 AILIM 발현세포의 증식을 억제하거나, 또는 AILIM에 결합하여 AILIM 발현세포에 의한 인터페론 γ 또는 인터루킨 4의 생산을 억제하는 활성을 갖는 항체이다.
본 발명의 「항체」는 본 발명의 AILIM을 발현하는 세포(천연의 세포, 주화세포, 종양세포 등), AILIM을 그 세포표면에 고발현하도록 유전자 재조합 기술을 사용하여 제작된 형질 전환체, AILIM을 구성하는 폴리펩티드, 상기 AILIM 폴리펩티드, 또는 AILIM의 세포외 영역을 포함하는 상술한 융합 폴리펩티드를 항원으로서 사용하여 상기 항원을 마우스, 랫트, 햄스터, 모르모트 또는 토끼 등의 포유동물에 면역하여 얻어지는 천연형 항체, 유전자 재조합 기술을 사용하여 제조될 수 있는 키메라 항체 및 인간형 항체(CDR-grafted 항체) 및 인간항체 생산 트랜스제닉 동물 등을 사용하여 제조될 수 있는 인간항체도 포함한다.
단일클론항체에는 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE 중 어느 하나의 아이소 타입을 갖는 단일클론항체도 포함된다. 바람직하게는 IgG 또는 IgM이다.
다중클론항체(항혈청) 또는 단일클론항체는 기존의 일반적인 제조방법으로 제조할 수 있다. 즉, 예를 들면 상술한 바와 같은 항원을 필요에 따라 프로인트 아 쥬반트(Freund's Adjuvant)와 함께 포유동물, 바람직하게는 마우스, 랫트, 햄스터, 모르모트, 토끼, 고양이, 개, 돼지, 염소, 말 또는 소, 보다 바람직하게는 마우스, 랫트, 햄스터, 모르모트 또는 토끼에 면역한다.
다중클론항체는 상기 면역감작 동물로부터 얻은 혈청으로부터 취득할 수 있다. 또한 단일클론항체는 상기 면역감작 동물로부터 얻은 상기 항체 생산세포와 자기항체 생산능이 없는 골수종계 세포(골수종세포)로부터 하이브리도마를 조제하여 상기 하이브리도마를 클론화하고, 포유동물의 면역에 사용한 항원에 대해서 특이적 친화성을 나타내는 단일클론항체를 생산하는 클론을 선택함으로써 제조된다.
단일클론항체는 구체적으로는 하기와 같이 하여 제조할 수 있다. 즉, 상술한 바와 같은 항원을 면역원으로 하고, 상기 면역원을 필요에 따라 프로인트 아쥬반트와 함께 비인간 포유동물, 구체적으로는 마우스, 랫트, 햄스터, 모르모트 또는 토끼, 바람직하게는 마우스, 랫트 또는 햄스터(후술하는 인간항체 생산 트랜스제닉 마우스와 같은 다른 동물 유래의 항체를 생산하도록 작출된 트랜스제닉 동물을 포함한다)의 피하내, 근육내, 정맥내, 발바닥내 또는 복강내에 1 내지 수회 주사하거나 또는 이식함으로써 면역감작을 행한다. 보통, 최초 면역으로부터 약 1 내지 14일마다 1 내지 4회 면역을 행하여, 최종 면역으로부터 약 1 내지 5일 후에 면역감작된 상기 포유동물로부터 항체 생산세포가 취득된다. 면역을 행하는 횟수 및 시간적 간격은 사용하는 면역원의 성질 등에 따라 적절히 변경할 수 있다.
단일클론항체를 분비하는 하이브리도마의 조제는 쾰러(kohler) 및 밀슈타인(Milstein) 등의 방법(네이처(Nature), 제256권, 제495~제497페이지, 1975 년) 및 그에 준하는 수식방법에 따라 행할 수 있다. 즉, 상술한 바와 같이 면역감작된 비인간 포유동물로부터 취득되는 비장, 림프절, 골수 또는 편도 등, 바람직하게는 비장에 포함되는 항체 생산세포, 바람직하게는 마우스, 랫트, 모르모트, 햄스터, 토끼 또는 인간 등의 포유동물, 보다 바람직하게는 마우스, 랫트 또는 인간 유래의 자기항체 생산능이 없는 골수종세포와 세포융합시킴으로써 조제된다.
세포융합에 사용되는 골수종세포로서는 예를 들면 마우스 유래 골수종 P3/X63-AG8.653(653), P3/NSI/1-Ag4-1(NS-1), P3/X63-Ag8.U1(P3U1), SP2/0-Ag14(Sp2/O, Sp2), PAI, FO, NSO 또는 BW5147, 랫트 유래 골수종 210RCY3-Ag.2.3., 인간유래 골수종 U-266AR1, GM1500-6TG-A1-2, UC729-6, CEM-AGR, D1R11 또는 CEM-T15를 사용할 수 있다.
단일클론항체를 생산하는 하이브리도마 클론의 스크리닝은 하이브리도마를 예를 들면 마이크로타이터 플레이트(microtiter plate) 중에서 배양하고, 증식이 보인 웰의 배양상청의 상술한 면역감작에서 사용한 면역항원에 대한 반응성을, 예를 들면 RIA나 ELISA 등의 효소 면역측정법으로 측정함으로써 행할 수 있다.
하이브리도마로부터의 단일클론항체의 제조는 하이브리도마를 인 비트로로, 또는 마우스, 랫트, 모르모트, 햄스터 또는 토끼 등, 바람직하게는 마우스 또는 랫트, 보다 바람직하게는 마우스의 복수(腹水) 중 등에서의 인 비보로 행하여, 얻어진 배양상청 또는 포유동물의 복수로부터 단리함으로써 행할 수 있다.
인 비트로로 배양하는 경우에는 배양하는 세포종의 특성, 시험연구의 목적 및 배양방법 등의 각종 조건에 맞추어 하이브리도마를 증식, 유지 및 보존시키고, 배양상청 중에 단일클론항체를 생산시키기 위해 사용되는 기지의 영양배지 또는 기지의 기본배지로부터 유도 조제되는 모든 영양배지를 사용하여 실시하는 것이 가능하다.
기본배지로서는 예를 들면 Ham'F12 배지, MCDB153 배지 또는 저칼슘 MEM 배지 등의 저칼슘 배지 및 MCDB104 배지, MEM 배지, D-MEM 배지, RPMI1640 배지, ASF104 배지 또는 RD 배지 등의 고칼슘 배지 등을 들 수 있고, 상기 기본배지는 목적에 따라 예를 들면 혈청, 호르몬, 사이토카인 및/또는 각종 무기 또는 유기 물질 등을 함유할 수 있다.
단일클론항체의 단리, 정제는 상술한 배양상청 또는 복수를 포화 황산암모늄, 유글로불린(euglobulin) 침전법, 카프로인산(caproic acid)법, 카르릴산(caprylic acid)법, 이온 교환 크로마토그래피(DEAE 또는 DE52 등), 항면역글로불린 칼럼 또는 프로테인 A 칼럼 등의 친화성 칼럼크로마토그래피에 제공하는 것 등으로 행할 수 있다.
「재조합 키메라 단일클론항체」는 유전자공학적으로 제작되는 단일클론항체로서, 구체적으로는 그 가변영역이 비인간 포유동물(마우스, 랫트, 햄스터 등)의 면역글로불린 유래의 가변영역이고, 또한 그 정상영역이 인간 면역글로불린 유래의 정상영역인 것을 특징으로 하는 마우스/인간 키메라 단일클론항체 등의 키메라 단일클론항체를 의미한다.
인간 면역글로불린 유래의 정상영역은 IgG(IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, IgA, IgD 및 IgE 등의 아이소타입에 의해 각각 고유의 아미노산서열을 갖지만, 재 조합 키메라 단일클론항체의 정상영역은 어떤 아이소타입에 속하는 인간 면역글로불린의 정상영역이어도 된다. 바람직하게는 인간 IgG의 정상영역이다.
재조합 키메라 단일클론항체는 예를 들면 이하와 같이 하여 제조할 수 있다. 그러나, 그와 같은 제조방법에 한정되지 않는 것은 말할 것도 없다.
예를 들면, 마우스/인간 키메라 단일클론항체는 실험의학(임시증간호), 제1.6권, 제10호, 1988년 및 일본국 특허공개 제(평)3-73280호 공보 등을 참조하면서 제작할 수 있다. 즉, 마우스 단일클론항체를 생산하는 하이브리도마로부터 단리한 상기 마우스 단일클론항체를 코드하는 DNA로부터 취득한 활성인 VH 유전자(H사슬 가변영역을 코드하는 재배열된 VDJ 유전자)의 하류에 인간 면역글로불린을 코드하는 DNA로부터 취득한 CH 유전자(H사슬 정상영역을 코드하는 C 유전자)를, 또한 상기 하이브리도마로부터 단리한 마우스 단일클론항체를 코드하는 DNA로부터 취득한 활성인 VL 유전자(L사슬 가변영역을 코드하는 재배열된 VJ 유전자)의 하류에 인간 면역글로불린을 코드하는 DNA로부터 취득한 CL 유전자(L사슬 정상영역을 코드하는 C 유전자)를 각각 발현 가능하도록 배열하여 하나 또는 각각의 발현벡터에 삽입하고, 상기 발현벡터로 숙주세포를 형질전환하여 상기 형절전환세포를 배양함으로써 제작할 수 있다.
구체적으로는, 먼저 마우스 단일클론항체 생산 하이브리도마로부터 일반적인 방법에 따라 DNA를 추출한 후, 상기 DNA를 적절한 제한효소(예를 들면 EcoRI, Hind III 등)를 사용하여 소화하고, 전기영동으로(예를 들면 0.7% 아가로스 겔 사용) 서 던 블롯법을 행한다. 영동된 겔을 예를 들면 에티디움 브로마이드 등으로 염색하고, 사진촬영 후 마커의 위치를 부여하고, 겔을 2회 물로 세척하여 0.25M의 HCl용액에 15분간 침지한다. 이어서, 0.4N의 NaOH용액에 10분간 침지하는 동안 약하게 진탕한다. 일반적인 방법에 의해 필터에 옮기고, 4시간 후 필터를 회수하여 2×SSC로 2회 세척한다. 필터를 충분히 건조한 후 베이킹(baking)(75℃, 3시간)을 행한다. 베이킹 종료 후에 상기 필터를 0.1×SSC/0.1% SDS용액에 넣어 65℃에서 30분간 처리한다. 이어서, 3×SSC/0.1% SDS용액에 침지한다. 얻어진 필터를 프리하이브리다이제이션액과 함께 비닐봉지에 넣어 65℃에서 3~4시간 처리한다.
이어서, 이 속에 32P 표지된 프로브 DNA 및 하이브리다이제이션액을 넣고 65℃에서 12시간 정도 반응시킨다. 하이브리다이제이션 종료후, 적절한 염농도, 반응온도 및 시간(예를 들면, 2×SSC/0.1% SDS용액, 실온, 10분간)하에 필터를 세척한다. 상기 필터를 비닐봉지에 넣고, 2×SSC를 소량 가하여 밀봉하고 오토라디오그래피를 행한다.
상기 서던 블롯법에 의해 마우스 단일클론항체의 H사슬 및 L사슬을 각각 코드하는 재배열된 VDJ 유전자 및 VJ 유전자를 동정한다. 동정된 DNA 단편을 포함하는 영역을 자당밀도구배 원심으로 분획하고, 파지 벡터(예를 들면, Charon 4A, Charon 28, λEMBL3, λEMBL4 등)에 삽입하여 상기 파지 벡터로 대장균(예를 들면, LE392, NM539 등)을 형질전환하여 게놈 라이브러리를 제작한다. 그 게놈 라이브러리를 적당한 프로브(H사슬 J유전자, L사슬(κ) J유전자 등)를 사용하여, 예를 들면 벤톤데이비스법(Benton-Davis method)(Science, 제196권, 제180~제182페이지, 1977년)에 따라 플라크 하이브리다이제이션을 행하여 재배열된 VDJ 유전자 또는 VJ유전자를 각각 포함하는 양성 클론을 얻는다. 얻어진 클론의 제한효소 지도를 제작하고, 염기서열을 결정하여 목적으로 하는 재배열된 VH(VDJ) 유전자 또는 VL(VJ) 유전자를 포함하는 유전자가 얻어져 있는 것을 확인한다.
한편, 키메라화에 사용하는 인간 CH 유전자 및 인간 CL 유전자를 따로 단리한다. 예를 들면, 인간 IgG1과의 키메라 항체를 제작하는 경우에는 CH 유전자인 Cγ1 유전자와 CL 유전자인 Cκ 유전자를 단리한다. 이들 유전자는 마우스 면역글로불린 유전자와 인간 면역글로불린 유전자의 염기서열의 높은 상동성을 이용하여 인간 Cγ1 유전자 및 인간 Cκ 유전자에 상당하는 마우스 Cγ1 유전자 및 마우스 Cκ 유전자를 프로브로서 사용하고, 인간 게놈 라이브러리로부터 단리함으로써 얻을 수 있다.
구체적으로는, 예를 들면 클론 Ig146(Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 제75권, 제4709~제4713페이지, 1978년)으로부터의 3 kb의 Hind III-BamHI 단편과 클론 MEP10(Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 제78권, 제474~제478페이지, 1981년)으로부터의 6.8 kb의 EcoRI 단편을 프로브로서 사용하고, 인간의 λCharon 4A의 Hae III-AluI 게놈 라이브러리(Cell, 제15권, 제1157~제1174페이지, 1978년) 중으로부터, 인간 Cκ 유전자를 포함하고, 인핸서 영역을 보유하고 있는 DNA 단편을 단리한다. 또한, 인간 Cγ1 유전자는 예를 들면 인간 태아 간세포 DNA를 Hind III로 절단하 고, 아가로스 겔 전기영동으로 분획한 후 5.9 kb의 밴드를 λ788에 삽입하여 상기의 프로브를 사용하여 단리한다.
이와 같이 하여 단리된 마우스 VH 유전자와 마우스 VL 유전자 및 인간 CH 유전자와 인간 CL 유전자를 사용하여, 프로모터 영역 및 인핸서 영역 등을 고려하면서 마우스 VH 유전자의 하류에 인간 CH 유전자를, 또한 마우스 VL 유전자의 하류에 인간 CL 유전자를 적절한 제한효소 및 DNA 리가아제를 사용하여, 예를 들면 pSV2gpt 또는 pSV2neo 등의 발현 벡터에 일반적인 방법에 따라 삽입한다. 이 때, 마우스 VH 유전자/인간 CH 유전자와 마우스 VL 유전자/인간 CL 유전자의 키메라 유전자는 하나의 발현벡터에 동시에 배치되어도 되고, 각각 별개의 발현벡터에 배치하는 것도 가능하다.
이와 같이 하여 제작된 키메라 유전자 삽입 발현벡터를 예를 들면 P3X63·Ag8·653세포 또는 SP210 세포라는, 자신은 항체를 생산하고 있지 않는 골수종세포에 프로토플라스트(protoplast) 융합법, DEAE-덱스트란법, 인산칼슘법 또는 전기천공법 등으로 도입한다. 형질전환세포는 발현벡터에 도입된 약물내성 유전자에 대응하는 약물 함유배지 중에서의 배양에 의해 선별하여, 목적으로 하는 키메라 단일클론항체 생산세포를 취득한다.
이와 같이 하여 선별된 항체 생산세포의 배양상청 중으로부터 목적의 키메라 단일클론항체를 취득한다.
「인간형 단일클론항체(CDR-grafted 항체)」는 유전자공학적으로 제작되는 단일클론항체로서, 구체적으로는 그 초가변영역의 상보성 결정영역의 일부 또는 전부가 비인간 포유동물(마우스, 랫트, 햄스터 등)의 단일클론항체에 유래하는 초가변 영역의 상보성 결정 영역이고, 그 가변영역의 골격영역이 인간 면역글로불린 유래의 가변영역의 골격영역이며, 또한 그 정상영역이 인간 면역글로불린 유래의 정상영역인 것을 특징으로 하는 인간형 단일클론항체를 의미한다.
여기서, 초가변영역의 상보성 결정영역이란 항체의 가변영역 중의 초가변 영역에 존재하여 항원과 상보적으로 직접 결합하는 부위인 3개의 영역 (Complementarity-determining residue; CDR1, CDR2, CDR3)을 가리키고, 또한 가변영역의 골격영역이란 상기 3개의 상보성 결정영역의 전후에 개재하는 비교적 보존된 4개의 영역(Framework region; FR1, FR2, FR3, FR4)을 가리킨다.
바꿔 말하면 비인간 포유동물 유래의 단일클론항체의 초가변 영역의 상보성 결정영역의 일부 또는 전부 이외의 모든 영역이 인간 면역글로불린의 대응영역과 바꿔놓인 단일클론항체를 의미한다.
인간 면역글로불린 유래의 정상영역은 IgG(IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, IgA, IgD 및 IgE 등의 아이소타입에 의해 각각 고유의 아미노산 서열을 갖지만, 본 발명에 있어서는 상기 인간형 단일클론항체의 정상영역은 어떤 아이소타입에 속하는 인간 면역글로불린의 정상영역이어도 된다. 바람직하게는 인간 IgG의 정상영역이다. 또한, 인간 면역글로불린 유래의 가변영역의 골격영역에 대해서도 한정되지 않는다.
인간형 단일클론항체는 예를 들면 이하와 같이 하여 제조할 수 있다. 그러나, 그러한 제조방법에 한정되지 않는 것은 말할 것도 없다.
예를 들면 단일클론항체에 유래하는 재조합 인간형 단일클론항체는 일본국 특허공표 제(평)4-506458호 공보 및 일본국 특허공개 제(소)62-296890호 공보 등을 참조하여, 유전자공학적으로 제작할 수 있다. 즉, 마우스 단일클론항체를 생산하는 하이브리도마로부터 적어도 하나의 마우스 H사슬 CDR 유전자와 상기 마우스 H사슬 CDR 유전자에 대응하는 적어도 하나의 마우스 L사슬 CDR 유전자를 단리하고, 또한 인간 면역글로불린 유전자로부터 상기 마우스 H사슬 CDR에 대응하는 인간 H사슬 CDR 이외의 전영역을 코드하는 인간 H사슬 유전자와 상기 마우스 L사슬 CDR에 대응하는 인간 L사슬 CDR 이외의 전영역을 코드하는 인간 L사슬 유전자를 단리한다.
단리된 상기 마우스 H사슬 CDR 유전자와 상기 인간 H사슬 유전자를 발현 가능하도록 적당한 발현벡터에 도입하고, 동일하게 상기 마우스 L사슬 CDR 유전자와 상기 인간 L사슬 유전자를 발현 가능하도록 적당한 또 다른 하나의 발현벡터에 도입한다. 또는 상기 마우스 H사슬 CDR 유전자/인간 H사슬 유전자와 마우스 L사슬 CDR 유전자/인간 L사슬 유전자를 동일한 발현벡터에 발현 가능하도록 도입하는 것도 가능하다. 이와 같이 하여 제작된 발현벡터로 숙주세포를 형질전환함으로써 인간형 단일클론항체 생산 형질전환세포를 얻고, 상기 형질전환세포를 배양함으로써 배양상청 중으로부터 목적의 인간형 단일클론항체를 얻는다.
「인간 단일클론항체」란 면역글로불린을 구성하는 H사슬의 가변영역 및 H사슬의 정상영역, L사슬의 가변영역 및 L사슬의 정상영역을 포함하는 모든 영역이 인 간 면역글로불린을 코드하는 유전자에 유래하는 면역글로불린이다.
인간항체(바람직하게는 인간 단일클론항체)는 일반적인 방법에 따라, 예를 들면 적어도 인간 면역글로불린 유전자를 마우스 등의 인간 이외의 포유동물의 유전자좌 중에 삽입함으로써 제작된 트랜스제닉 동물을 항원으로 면역감작함으로써, 상술한 다중클론항체 또는 단일클론항체의 제작법과 동일하게 하여 제조할 수 있다.
예를 들면, 인간 항체를 생산하는 트랜스제닉 마우스는 Nature Genetics, Vol.7, p.13-21, 1994; Nature Genetics, Vol.15, p.146-156, 1997; 일본국 특허공표 제(평)4-504365호 공보; 일본국 특허공표 제(평)7-509137호 공보; Nikkei Science, 6월호, 제40~제50페이지, 1995년; 국제 출원공개 WO94/25585호 공보; Nature, Vol.368, p.856-859, 1994; 및 일본국 특허공표 제(평)6-500233호 공보 등에 기재된 방법에 따라 제작할 수 있다.
또한, 최근에 개발된 기술인 트랜스제닉 소나 돼지의 젖 중으로부터 인간 유래 단백을 제조하는 방법을 적용하는 것도 가능하다(Nikkei Science, 1997년 4월호, 제78페이지 내지 84페이지).
본 발명에 있어서 「항체의 일부」란 상술한 바와 같은 단일클론항체의 일부 영역을 의미하고, 구체적으로는 F(ab')2, Fab', Fab, Fv(variable fragment of antibody), sFv, dsFv(disulphide stabilised Fv) 또는 dAb(single domain antibody) 등을 의미한다(Exp. Opin. Ther. Patents, 제6권, 제5호, 제441~456페이 지, 1996년).
여기서, 「F(ab')2」및「Fab'」란 면역글로불린(단일클론항체)을 단백 분해효소인 펩신 또는 파파인 등으로 처리함으로써 제조되고, 힌지영역 중 이중가닥 H사슬 사이에 존재하는 디설피드 결합의 전후에서 소화되어 생성되는 항체 단편을 의미한다. 예를 들면, IgG를 파파인으로 처리하면, 힌지영역 중 이중가닥 H사슬 사이에 존재하는 디설피드 결합의 상류에서 절단되어 VL(L사슬 가변영역)과 CL(L사슬 정상영역)로 된 L사슬 및 VH(H사슬 가변영역)와 CHγ1(H사슬 정상영역 중의 γ1영역)으로 된 H사슬 단편이 C말단 영역에서 디설피드 결합으로 결합된 상동인 2개의 항체 단편을 제조할 수 있다. 이들 2개의 상동인 항체단편을 각각 Fab'라 한다. 또한 IgG를 펩신으로 처리하면, 힌지영역 중 이중가닥 H사슬 사이에 존재하는 디설피드 결합의 하류에서 절단되어 상기 2개의 Fab'가 힌지영역에서 연결된 것 보다 약간 큰 항체단편을 제조할 수 있다. 이 항체단편을 F(ab')2라 한다.
본 발명에 있어서 「이식편 거절반응(graft rejection)」이란 이식편(이식되는 생체의 일부로 세포, 조직 또는 장기) 도너와 레시피언트의 유전적 배경이 다른 경우(즉, 동종이식 또는 이종이식), 이식편이 레시피언트에 의해 이물질로 인식됨으로써 레시피언트의 면역계가 그 이식편을 거절하여 배제하고자 하는 여러가지 면역반응이다. 이 이식에 수반되는 이 면역반응은
(1) 이식 직후에 일어나는 강한 거절반응인 초급성 거절반응(hyper-acute rejection reaction), (2) 이식후 수개월 이내에 보이는 급성 거절반응(acute rejection reaction), (3) 이식후 수개월 이후에 보이는 만성 거절반응(chronic rejection reaction)으로 나누어진다. 또한, T 세포로 대표되는 면역담당 세포에 의한 세포성 면역과 항체에 의한 액성 면역이 복잡하게 연결된 형태로 일어나지만 주로 세포성 면역이다.
이 이식편 거절반응에 의해 이식편은 최종적으로는 괴사 탈락한다. 또한, 레시피언트에는 발열, 백혈구 수 증대, 권태감 등의 심각한 전신증상 뿐만 아니라, 이식국소의 종창이나 압통이 일어난다. 더 나아가서는 감염증 등의 심각한 합병증을 일으키게 된다.
특히, 돼지 등의 이종 이식편을 인간에게 이식하는 경우에는 초급성 거절반응이 일어나 이식편이 분단위로 거절되어 버리는 커다란 문제가 존재한다.
본 발명에 있어서 「이식편」이란 도너 포유동물로부터 레시피언트 포유동물에 이식되는 「장기 또는 그 일부」 또는 「조직」을 의미한다.
본 발명에 있어서 해당 이식의 「장기 또는 그 일부」란 포유동물(바람직하게는 인간 또는 돼지이고, 특히 바람직하게는 인간이다.)의 생체를 구성하는 임의의 장기 또는 그 일부를 의미한다. 바람직하게는 간장, 심장, 폐, 췌장, 신장, 대장, 소장 또는 그 일부를 들 수 있다. 특히 바람직하게는 간장 또는 그 일부이다.
본 발명에 있어서 이식의 「조직」이란 포유동물(바람직하게는 인간 또는 돼지이고, 특히 바람직하게는 인간이다.)의 생체에 유래하는 임의의 조직을 의미한다. 바람직하게는 피부, 각막 또는 뼈 등의 조직, 또는 심장판막 등을 들 수 있지만 이들에 한정되지 않는다.
본 발명에 있어서 「면역억제제」란 임상현장에서 행해지고 있는 세포, 조직 또는 장기의 이식에 있어서, 이식편의 이식에 의해 야기되는 레시피언트에 있어서의 면역 거절반응(이식편 거절반응)을 억제하기 위해 사용되고 있는 정부기관으로부터 의약품으로서의 제조판매 승인된 기존의 1 또는 복수의 임의의 면역억제제 또는 현재 임상시험 중이거나 임상시험 전이거나 또는 장차의 임상시험에 있어서 사용되어, 해당 시험 후에 장차 정부기관으로부터 의약품으로서의 제조판매가 승인될 1 또는 복수의 임의의 면역억제제를 의미한다.
그들 면역억제제는 단독으로 사용될 뿐만 아니라, 2개, 3개 또는 그 이상을 병용하여 사용되고 있다. 따라서, 본 발명의 「면역억제제」란 1종류의 약제 사용 또는 복수 약제의 병용(바람직하게는 2개 또는 3개의 병용)도 포함한다.
해당 면역억제제로서는 바람직하게는 사이클로스포린(cyclosporin; CsA); 타크롤리무스(tacrolimus; FK-506); 아자티오프린(azathioprine; AZ); 미코페놀산 모페틸(mycophenolate mofetil; MMF); 미조리빈(mizoribine; MZ); 레플루노마이드 (leflunomide; LEF); 프레도니조론(predonisolon)이나 메틸프레도니조론 (methylpredonisolon) 등의 부신피질 스테로이드(별칭: 부신피질 호르몬; 코르티코스테로이드(corticosteroid); 코르티코이드(corticoid)); 시롤리무스(sirolimus)(별칭: 라파마이신(rapamycin)), 데옥시스퍼구알린(deoxyspergualin; DGS) 및 FTY720(화학명칭: 2-아미노-2-[2-(4-옥틸페닐)에틸]-1,3-프로판디올 히드로클로라이드) 및 후술하는 「CTLA4 의약」으로부터 선택되는 1 또는 복수의 약제를 들 수 있다. 특히 바람직하게는 타크롤리무스(FK-506) 및 사이클로스포린 중 어느 하나 또는 양쪽이다.
본 발명에 있어서 「CTLA4 의약」이란 (1) 인간의 CTLA4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4; <아미노산서열> GenBank Accession No.NP 005205; <cDNA> GenBank Accession No.NM 005214)의 전장(실질적으로 동일한 아미노산서열을 갖는 분자를 포함한다.) 또는 세포외 영역의 전부 또는 그 일부로 된 폴리펩티드, (2) 인간 CTLA4의 세포외 영역의 전부 또는 일부와 다른 단백질의 전부 또는 일부(특히 바람직하게는 인간 면역글로불린 중쇄의 정상영역의 전부 또는 일부)로 된 융합 폴리펩티드(이하, CTLA4-IgFc 또는 CTLA4-Ig로 생략한다.), 또는 (3) (1)의 폴리펩티드 또는 (2)의 융합 폴리펩티드를 포유동물(특히 바람직하게는 인간)의 체내에 공급할 수 있는 DNA 또는 상기 DNA로 된 벡터(특히 바람직하게는 유전자 치료에서 범용되는 플라스미드 또는 바이러스(레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 수반 바이러스 등)에 유래하는 바이러스 벡터 등)를 활성성분으로서 포함하는 의약을 의미한다.
여기서 「세포외 영역」, 「일부」, 「면역글로불린 중쇄의 정상영역」, 「융합 폴리펩티드」, 「실질적으로 동일」 등의 각 용어는 상술한 정의와 동일한 의미를 갖는다.
상술한 CTLA4-Ig의 유의한 면역 억제효과에 대해서는 다수의 보고가 있어, 예를 들면 Bristol-Myers Squibb사/Repligen사의 개발품인 Y100F(100번째의 티로신이 페닐알라닌으로 변환되어 있다)의 높은 면역 억제효과가 각종 동물시험에서 확인되어 있으며, 이 제품도 본 발명에 있어서 CTLA4 의약의 하나로서 포함된다(이가쿠노 아유미, Vol.194, No.14, P.1195-1200, 2000; J. Clin. Invest., Vol.103, p.1223-1225, 1999; N. Engl. J. Med., Vol.335, p.1369-1377, 1996; J. Exp. Med., Vol.178, p.1801-1806, 1993; Blood, Vol.94, p.2523-2529, 1999; Nature Med., Vol.6, p.464-469, 2000; Blood, Vol.83, p.3815-3823, 1995; J. Clin. Invest., Vol.2, p.473-482, 1998; Blood, Vol.85, p.2607-2612, 1995; N. Engl. J. Med., Vol.340, p.1704-1714, 1999; N. Engl. J. Med., Vol.335, p.1369-1377, 1996; J. Clin. Invest., Vol.103, p.1243-1252, 1999).
본 발명에 있어서 「약학적으로 허용될 수 있는 담체」란 부형제, 희석제, 증량제, 붕괴제, 안정제, 보존제, 완충제, 유화제, 방향제, 착색제, 감미제, 점조제, 교미제, 용해보조제 또는 기타 첨가제 등을 들 수 있다. 그러한 담체 중 하나 이상을 사용함으로써 정제, 환제, 산제, 과립제, 주사제, 액제, 캡슐제, 트로키제, 엘릭서제, 현탁제, 유제 또는 시럽제 등의 형태의 의약조성물을 조제할 수 있다.
이들 의약조성물은 경구 또는 비경구적으로 투여할 수 있다. 비경구 투여를 위한 기타 형태로서는 하나 또는 그 이상의 활성물질을 포함하고, 일반적인 방법에 따라 처방되는 외용 액제, 장용내 투여를 위한 좌제 및 페서리(pessary) 등이 포함된다.
투여량은 환자의 연령, 성별, 체중 및 증상, 치료효과, 투여방법, 처리시간 또는 상기 의약조성물에 함유되는 활성성분(상기 본발명의 「물질」등)의 종류 등에 따라 다르지만, 보통 성인 1인당 1회마다 10 ㎍~100 mg(또는 10 ㎍~500 mg)의 범위로 투여할 수 있다. 그러나, 투여량은 각종 조건에 따라 변동되기 때문에 상기 투여량 보다 적은 양으로 충분한 경우도 있고, 또한 상기 범위를 초과하는 투여량이 필요한 경우도 있다.
특히 주사제의 경우에는 예를 들면 생리식염수 또는 시판의 주사용 증류수 등의 비독성인 약학적으로 허용될 수 있는 담체 중에 0.1 ㎍ 항체/ml 담체~10 mg 항체/ml 담체의 농도가 되도록 용해 또는 현탁함으로써 제조할 수 있다. 이와 같이 하여 제조된 주사제는 처치를 필요로 하는 인간 환자에 대해 1회 투여에 있어서 1 kg체중당 1 ㎍~100 mg의 비율이고, 바람직하게는 50 ㎍~50 mg의 비율로, 1일당 1회~수회 투여할 수 있다. 투여형태로서는 정맥내 주사, 피하주사, 피내주사, 근육내 주사 또는 복강내 주사와 같은 의료상 적당한 투여형태를 예시할 수 있다. 바람직하게는 정맥내 주사이다.
또한, 주사제는 경우에 따라 비수성 희석제(예를 들면 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브유와 같은 식물유, 에탄올과 같은 알코올류 등), 현탁제 또는 유탁제로서 조제하는 것도 가능하다.
그러한 주사제의 무균화는 박테리아 보류 필터를 통과시키는 여과멸균, 살균제의 배합 또는 조사에 의해 행할 수 있다. 주사제는 사용시 조제의 형태로서 제조할 수 있다. 즉, 동결건조법 등으로 무균의 고체조성물로 하고, 사용 전에 무균의 주사용 증류수 또는 다른 용매에 용해하여 사용할 수 있다.
본 발명의 의약조성물은 심각한 순환기계 질환을 앓고 있는 레시피언트에, 도너의 장기(간장, 심장, 폐, 신장, 췌장 등) 또는 그 일부 또는 조직(피부 ,각막, 뼈 등의 조직)을 이식(동종이식 또는 이종이식)함에 의한 치료에 있어서의 심각한 문제인 면역 거절반응(이식편 거절반응)을 억제, 예방 및/또는 치료를 위해 매우 유용하다.
본 발명의 의약조성물은 또한 그러한 이식치료에서의 이식편 거절반응의 억제를 위해 시행되고 있는 기존의 면역억제제에 의한 이식편 거절반응의 억제와 병용함으로써, 이식편 거절반응(면역 거절반응)의 억제효과를 증대시키는 것이 가능하다.
도면의 간단한 설명
도 1은 이식된 도너 간장의 레시피언트 내에서의 연장된 생착(生着)일수를 지표로 하는, 장기이식에 수반되어 일어나는 면역 거절반응(이식편 거절반응)의 항AILIM 항체 및/또는 면역억제제에 의한 억제효과를 나타내는 도면이다.
도 2는 이식된 도너 간장의 레시피언트 내에서의 연장된 생착일수를 지표로 하는, 장기이식에 수반되어 일어나는 면역 거절반응(이식편 거절반응)의 항AILIM 항체 및/또는 면역억제제에 의한 억제효과를 나타내는 도면이다.
도 3은 이식된 도너 심장의 레시피언트 내에서의 연장된 생착일수를 지표로 하는, 장기이식에 수반되어 일어나는 면역 거절반응(이식편 거절반응)의 항AILIM 항체(항ICOS 항체라고도 한다)에 의한 억제효과를 나타내는 도면이다.
도 4는 이식된 도너 심장으로 침윤된 AILIM 발현세포의 정도를 나타내는 사진이다.
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도 5은 이식된 도너 심장의 레시피언트 내에서의 연장된 생착일수를 지표로 하는, 장기이식에 수반되어 일어나는 면역 거절반응(이식편 거절반응)의 항AILIM 항체 및/또는 AdCTLA4-Ig에 의한 억제효과를 나타내는 도면이다.
도 6은 이식된 도너 심장(1차 심장이식 및 2차 심장이식) 및 피부(1차 피부이식)의 레시피언트 내에서의 생착 유무를 지표로 하는, 장기이식에 수반되어 일어나는 면역 거절반응(이식편 거절반응)의 항AILIM 항체와 AdCTLA4-Ig와의 병용에 의한 억제효과를 나타내는 도면이다.
발명을 실시하기 위한 최선의 형태
이하, 실시예로 본 발명을 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명이 그 실시예에 기재되는 태양에만 한정되지 않는 것은 말할 것도 없다.
실시예 1 간장이식에서의 이식편 거절반응의 AILIM 제어물질에 의한 억제효과
<1> 시약 및 시험방법
<1-1> 동물
성체 Lewis 랫트(수컷, 210-250 g) 및 DA 랫트(수컷, 210-250 g)를 각각 레시피언트 및 도너로서 사용하였다.
<1-2> 항랫트 AILIM 단일클론항체
문헌의 마우스 항랫트 AILIM 단일클론항체(마우스 항랫트 JTT-1 항원 단일클론항체)를 생산하는 「JTT-1」이라 명명한 하이브리도마(해당 하이브리도마는 1996년 10월 11일자로 부다페스트조약하에 인정된 국제기탁기관인 일본국 통산성 공업기술원 생명공학 공업기술연구소에 국제기탁되어 있다. 국제기탁번호: FERM BP-5707)를 in vitro 또는 in vivo로 배양하여 얻어지는 배양상청 또는 복수로부터 정제한 단일클론항체를 사용하였다(일본국 특허출원공개 제(평)11-29599호 공보(실시예 1 및 2) 및 국제 특허출원공개 WO98/38216호(실시예 1 및 2)). 이하 이 항체를 간단히 항AILIM 항체라고 부른다.
<1-3> 간장의 이식
문헌의 가마다 등의 방법에 따라 도너로서의 DA 랫트의 간장을 레시피언트로서의 Lewis 랫트에 이식하였다(Surgery, 93, p.64, 1983; Transplantation, 30, p.43, 1980; Transplantation, 28, p.47, 1979).
즉, DA 랫트로부터 채취한 간장을 문맥 혈관(portal vein)으로부터 빙냉 멸균 증류수를 흘림으로써 세척하였다. 이어서, 간 위의 대정맥(supra-hepatic vena cava)을 봉합함으로써, 해당 간장의 레시피언트인 Lewis 랫트로의 이식을 개시하였다. 그 후에 커프(cuff) 기술을 사용하여 문맥 혈관(portal vein)과 간장 아래의 대정맥(infra-hepatic vena cava)을 봉합하였다(Transplant. Proc., 19, p.1158, 1987; Transplantation, 43, p.745, 1987).
레시피언트인 랫트가 이식완료 후 3일 이내에 죽은 경우를 이식의 기술적인 실패로 판단하였다. 그 결과 이식의 성공율은 95%였다.
<1-4> 항AILIM 항체 및/또는 면역억제제의 투여
이식완료 후의 Lewis 랫트(각 군 5-9마리)의 각각에 항AILIM 항체 및/또는 면역억제제 FK-506을 하기의 용량 및 타이밍으로 투여하였다. 또한, 이식완료 직후를 0일째로 하였다.
또한, 항AILIM 항체 및 면역억제제 FK-506 어느 것도 투여하지 않는 군을 대조로 하였다.
1. 항AILIM 항체(1 mg/kg; 정맥주사; 0일째)
2. 항AILIM 항체(1 mg/kg; 정맥주사; 0 및 6일째)
3. 항AILIM 항체(1 mg/kg; 정맥주사; 0, 3 및 6일째)
4. 항AILIM 항체(1 mg/kg; 정맥주사; 0, 3, 6, 9 및 12일째)
5. 항AILIM 항체(0.3 mg/kg; 정맥주사; 0, 3, 6, 9 및 12일째)
6. FK-506(1 mg/kg; 근육주사; 0일째)
7. 항AILIM 항체(1 mg/kg; 정맥주사; 0일째)와 FK-506(1 mg/kg; 근육주사; 0일째)
이식 간의 생존일수(이식 간의 레시피언트 내에서의 생착일수)를 Kaplan-Meier 테스트에 따라 평가하여 구하였다.
<2> 결과
결과를 도 1 및 도 2에 나타낸다. 도 2의 데이터 일부는 도 1에 나타내는 데이터를 갱신한 것이다.
이 결과, 대조에 비해 항AILIM 항체(1 mg/kg)를 이식 후 경시적으로 3회 또 는 5회 투여한 군에 있어서 이식 간의 생존일수(이식 간의 생착일수)의 유의한 개선이 보였다.
또한, 추가로 저용량의 항AILIM 항체(0.3 mg/kg)를 이식 후 경시적으로 5회 투여한 군에 있어서도 동일하게 생존일수(이식 간의 생착일수)의 유의한 연장이 관찰되었다.
더욱이, 놀랍게도 임상현장에서 범용되고 있는 면역억제제인 FK-506과 항AILIM 항체를 병용한 경우에는 항AILIM 항체의 투여가 1회임에도 불구하고, 이식 간의 생존일수(이식 간의 생착일수)는 큰폭으로 연장되어 FK-506(1 mg/kg)을 단독으로 1회 투여한 경우의 생존일수(이식 간의 생착일수)를 훨씬 웃도는 것이었다.
이 결과로부터 다음과 같은 사항이 명백해졌다.
1) 항AILIM 항체는 장기 등의 이식편 이식에 수반되어 일어나는 이식편 거절반응(면역 거절반응)을 유의하게 억제한다.
2) 항AILIM 항체와 면역억제제를 병용함으로써 어느 한쪽을 사용한 경우 보다도 장기 등의 이식편 이식에 수반되어 일어나는 이식편 거절반응을 더욱 강하게 억제할 수 있다.
실시예 2 심장이식에서의 면역 거절반응의 AILIM 제어물질에 의한 억제효과(그 첫번째)
<1> 시약, 동물 및 시험방법
<1-1> 동물
성체 C3H/He 마우스(수컷, 6주령) 및 BALB/c 마우스(수컷, 6주령)를 각각 레시피언트 및 도너로서 사용하였다.
<1-2> 항마우스 AILIM 단일클론항체의 조제
이하와 같이 하여 제조하였다.
문헌의 마우스 AILIM(Int. Immunol., Vol.12, No.1, p.51-55, 2000)의 전장 아미노산서열을 코드하는 cDNA를 사용하고, 유전자 재조합 기술을 사용하여 일반적인 방법에 따라 마우스 AILIM을 발현하는 형질전환세포를 조제하였다.
상기 형질전환세포를 호모게나이즈하고, 초원심분리(100,000×g)하여 세포막 획분을 포함하는 원심 잔사를 회수하여 PBS에 현탁시켰다. 얻어진 세포막 획분을 완전 프로인트 아쥬반트와 함께 Wistar 랫트의 발바닥내에 주사함으로써 최초 면역(0일)하였다. 더욱이 상기 세포막 획분 항원을 7일째, 14일째 및 28일째라는 간격으로 발바닥내에 투여하였다. 마지막 면역으로부터 2일 후에 림프절세포를 채취하였다.
상기 림프절세포와 마우스 골수종세포 PAI(JCR No. B0113; Res. Disclosure, Vol.217, p.155, 1982)를 5:1로 혼합하여 융합제로서 폴리에틸렌글리콜 4000(Boehringer Mannheim제)을 사용하여 세포융합시킴으로써 단일클론항체 생산 하이브리도마를 제작하였다. 하이브리도마의 선택은 10% 소태아 혈청과 아미놉테린을 함유하는 HAT 함유 ASF104 배지(Ajinomoto제) 중에서 배양함으로써 행하였다.
각각의 하이브리도마의 배양상청 중에 생성된 단일클론항체의 마우스 AILIM에 대한 반응성을, 각각의 배양상청을 상기 재조합 마우스 AILIM 발현 형질전환세 포에 반응시킨 후 FITC 표지 항랫트 IgG(Cappel제)와 반응시킴으로써 염색된 세포의 형광강도를 EPICS-ELITE 플로우 사이토미터(flow cytometer)로 측정하여 확인하였다. 이 결과, 마우스 AILIM에 반응성을 갖는 단일클론항체를 생산하는 복수의 하이브리도마를 얻었다.
그들 하이브리도마 중 하나를 「B10.5」라 명명하였다. 이 하이브리도마(각각 106 내지 107개/0.5 ml/마우스)를 ICR nu/nu 마우스(암컷, 7 내지 8주령)의 복강내에 주사하였다. 10 내지 20일 후 마우스를 마취하에 개복하여 일반적인 방법에 따라 채취한 복수로부터 랫트 항마우스 AILIM 단일클론항체(IgG2a)를 대량 조제하였다. 이하, 이 항체를 간단히 항AILIM 항체라고 부른다.
<1-3> 심장의 이식
문헌의 방법에 따라 도너로서의 BALB/c 마우스의 심장을 레시피언트로서의 C3H/He 마우스의 복부에 이식하였다. 또한, 이식 심장의 박동의 소실로서 이식거절의 완결로 판단하였다.
<2> 시험 1(항AILIM 항체의 투여에 의한다)
이식완료 후의 C3H/He 마우스(10마리)의 각각에 항AILIM 항체(10 mg/kg)를 이식 직후(0일; 200 ㎍), 2일째(200 ㎍), 4일째(200 ㎍), 7일째(200 ㎍) 및 10일째(100 ㎍)에 투여하였다. 항AILIM 항체를 투여하지 않은 군(25마리)을 대조로 하였다.
이식 후의 이식 심장의 생존일수(이식 심장의 레시피언트 내에서의 생착일 수)를 Kaplan-Meier 테스트에 따라 평가하여 구하였다.
이식 심장의 레시피언트 내에서의 생착일수의 평균값은 하기와 같았다.
(항AILIM 항체 투여군)
생착일수: 9일이 1마리, 10일이 3마리, 13일이 4마리, 16일이 2마리
(대조군)
생착일수: 6일이 2마리, 7일이 9마리, 8일이 7마리, 9일이 3마리, 10일이 4마리
항AILIM 항체를 투여하지 않은 대조군에서는 7.9일이었던 것에 비해, 항AILIM 항체 투여군에서는 12.3일로, 항AILIM 항체 투여군에서는 이식 심장의 생착일수의 유의한 연장이 확인되었다.
<3> 시험 2(항AILIM 항체의 투여에 의한다)
동물(도너 및 레시피언트) 및 항AILIM 항체는 상기와 동일한 것을 사용하였다.
또한, 심장의 이식은 시험 1과 동일하게 하여 행하였다.
이식완료 후의 C3H/He 마우스 각각에 항AILIM 항체(100 ㎍/일)를 이식 직후(0일), 2일째, 4일째, 7일째 및 10일째에 복강내 투여하였다. 항AILIM 항체를 투여하지 않은 동물군을 대조로 하였다.
이식 심장의 레시피언트 마우스 내에서의 생착일수의 평균값은 대조군에서는 약 7.7일이었던 것에 비해, 항AILIM 항체 투여군에서는 약 40.9일(중간값: 29일/최장: 120일)이었다(도 3). 즉, 항AILIM 항체 투여군에서 이식 심장의 생착기간의 유의한 연장이 확인되었다.
또한, 일반적인 방법에 따라 HE염색(hematoxylin/eosin-staining)에 의해 AILIM(ICOS) 발현세포의 이식 심장으로의 침윤정도를 대조 마우스(심장이식 후의 치료적 처치 없음) 및 이식 후에 항AILIM 항체가 투여된 마우스 각각에 대해서 해석하였다.
그 결과, 무치료군에서는 AILIM(ICOS) 발현세포의 강한 침윤에 더하여 심근의 괴사가 인지되었다(강하게 염색된 부분). 한편, 항AILIM 항체의 투여를 받은 마우스의 이식 심장에 있어서는 심근괴사는 인지되지 않고, AILIM(ICOS) 발현세포의 침윤의 유의한 감소가 인지되었다(도 4).
실시예 3 심장 및 피부이식에서의 면역 거절반응의 AILIM 제어물질에 의한 억제효과
<1> 시약, 동물 및 시험방법
<1-1> 아데노바이러스 벡터
발현 코스미드 카셋트 pAdex/CAhCTLA4-Ig(Transplatation, Vol.68, No.6, p.758, 1999) 및 친주(親株)에서의 어느 아데노바이러스의 게놈(Proc. Natl. Acad. Sci. USA., Vol.90, No.24, p.11498-11502, 1993) 사이의 상동 재조합에 의해 hCTLA4-Ig(인간 CTLA4의 세포외 영역과 인간의 Fc로 된 융합단백)를 코드하는 cDNA 또는 대장균의 β갈락토시다아제 유전자(LacZ)의 발현 카셋트를 포함하는 재조합 아데노바이러스를 제작하였다.
이어서, 상기 재조합 바이러스를 인간 신장 유래의 293세포주 중에서 증식시켰다. 이렇게 하여 조제된 바이러스 벡터를 회수하여 -80℃에서 동결 보존하였다. hCTLA4-Ig의 cDNA를 포함하는 재조합 아데노바이러스 및 LacZ를 포함하는 아데노바이러스를 각각, AdCTLA4-Ig 및 AdLacZ라 명명하였다.
<1-2> 동물 및 항체
성체 수컷(210-250 g)의 Lewis(RT1l) 랫트를 레시피언트로서, 또한 성체 수컷(210-250 g)의 DA(RT1a) 랫트 또는 BN(RT1n) 랫트를 도너로서 사용하였다.
실시예 1에서 조제한 마우스 항랫트 AILIM 단일클론항체를 사용하였다.
<1-3> 심장 및 피부의 이식 및 시험방법
문헌의 방법(J. Thorac. Cardiovasc. Surg., Vol.57, No.2, p.225-229, 1969)에 따라 DA 랫트로부터 취득한 심장을 Lewis 랫트의 복강에 이식하였다. 심장이식 직후에 상기 레시피언트 랫트에 항랫트 AILIM 항체(1 mg/kg) 및/또는 AdCTLA4-Ig(109 plague-forming unit; pfu)를 한번 정맥내 투여하였다.
항랫트 AILIM 항체 및 AdCTLA4-Ig 둘다 투여하지 않은 이식동물군 및 그들 대신에 AdLacZ를 투여한 이식동물군을 대조로 하였다. 각 동물군의 처치방법은 하기와 같다.
그룹 1: 동종이식(Lewis/DA)이고, 면역억제 처치 없음.
그룹 2: 동계이식(Lewis/Lewis)이고, 면역억제 처치 없음.
그룹 3: 동종이식(Lewis/DA)이고, AdLacZ 투여.
그룹 4: 동종이식(Lewis/DA)이고, AdCTLA4-Ig 투여.
그룹 5: 동종이식(Lewis/DA)이고, 항AILIM 항체 투여.
그룹 6: 동종이식(Lewis/DA)이고, AdCTLA4-Ig 및 항AILIM 항체 투여.
또한, 이식거절의 완결은 이식 심장의 박동의 소실로 판단하였다. 상기 이식거절은 일반적인 방법에 따라 HE염색(hematoxylin/eosin-staining)에 의해, 이식 심장 조직에 침윤한 단핵세포 및 근육세포 괴사를 조직학적으로 해석하여 확인하였다.
이어서, 이식 심장이 장기간에 걸쳐 생착된 그룹 4 및 그룹 6의 레시피언트 랫트의 측흉벽에 심장이식으로부터 140일째에 DA 도너 랫트의 충분한 두께의 피부편을 이식하였다. 상기 피부이식 후에 있어서는 항AILIm 항체나 AdCTLA4-Ig 등에 의한 면역억제 처치는 시행되지 않았다. 상기 피부편의 생착기간의 최종은 상기 이식 피부편의 묵시(默視) 가능한 정도가 당초의 10% 이하로 감소한 때를 그 때로 하였다.
이어서, 도너형 피부의 이식을 받아 이식 거절반응을 나타낸 그룹 6의 레시피언트 3마리의 경부(cervical region)에 DA 랫트 심장의 최초 이식으로부터 200일째에 커프(cuff) 기술(Acta. Pathol. Microbiol. Scand. [A], Vol.79, No.4, p.366-372, 1971)을 사용하여 도너 DA 랫트의 심장을 재이식하였다.
더욱이, 이식 심장이 장기간에 걸쳐 생착된 그룹 6의 레시피언트 나머지 랫트에게 최초의 DA 도너 랫트의 심장이식으로부터 150일째에 BN 도너 랫트의 심장을 이식하였다.
이식편의 레시피언트 내에서의 생착정도의 통계적 평가는 Kaplan-Meier의 테스트에 따라 행하였다.
<2> 시험결과
도 5에 나타내는 바와 같이 이종이식을 행한 미처치 동물군(그룹 1)에 비해, AdLacZ를 투여한 동물군(그룹 3) 및 단일 용량의 항AILIM 항체를 투여한 동물군(그룹 5)에서는 이식 심장의 레시피언트 내에서의 생착의 유의한 연장은 인지되지 않았다.
한편, AdCTLA4-Ig를 투여한 동물군(그룹 4)에서는 이식 심장(최초에 이식된 DA 랫트의 심장)의 생착기간이 유의하게 연장되었다(평균값: 약 64일). 또한, 상기 그룹 4(10 마리)의 3마리에서는 100일 이상이라는 장기간의 이식 심장의 생착이 인지되었다(도 5).
더욱이, AdCTLA4-Ig와 항AILIM 항체를 병용한 동물군(그룹 6)에 있어서는 모든 레시피언트에 있어서 이식 심장(최초의 DA 랫트의 심장)의 생착이 무기한으로 (300일 이상) 연장되었다(도 5).
그룹 4의 상기 레시피언트 랫트에 있어서는 상기 이식 피부의 거절에 수반되어 이식 심장(최초로 이식된 DA 도너 랫트의 심장)도 또한 거절되었던 것에 비해, 그룹 6의 상기 레시피언트 랫트에서는 상기 이식 심장의 거절은 보이지 않았다.
도 6에 나타내는 바와 같이 그룹 4 및 그룹 6에 있어서 도너의 피부이식을 받은 레시피언트 랫트 모두 상기 이식 피부가 거절되었지만, 그룹 4 및 대조군에서의 상기 이식 피부의 거절은 피부이식으로부터 12일 이내에 완결되었던 것에 비해, 그룹 6에 있어서는 약간 늦어 약 16일 이내였다. 이 결과는 AdCTLA4-Ig를 단독으로 사용하는 경우에 비해 AdCTLA4-Ig와 함께 항AILIM 항체를 병용함으로써 이식 피부의 거절을 늦출 수 있는 것을 나타내는 것이다.
또한, 흥미롭게도 그룹 6에 있어서 이식 심장(최초의 DA 랫트의 심장)의 장기생착이 인지된 레시피언트 랫트에서는 상술한 바와 같이 상기 이식 피부는 완전하게 거절되었지만, 2번째 이식 심장(2번째로 이식된 DA 도너 랫트의 심장)은 무기한 생착이 인지되었다. 또한, 해당 레시피언트 랫트에 있어서는 최초로 이식된 도너 심장이 본 시험기간 동안 생착되어 있었다.
BN 도너 랫트의 심장이식을 받은 그룹 6의 레시피언트에 있어서는, 최초로 이식된 DA 랫트의 심장은 본 시험기간 동안 박동을 계속하여 생착하고 있었지만, 2번째로 이식된 상기 BN 도너 랫트의 심장은 상기 그룹 1의 동물군에서의 결과와 동일한 시간 내에 거절되었다.
본 발명의 의약조성물은 심각한 순환기계 질환을 앓고 있는 레시피언트에, 도너의 장기(간장, 심장, 폐, 신장, 췌장 등) 또는 그 일부 또는 조직(피부, 각막, 뼈 등의 조직)을 이식(동종이식 또는 이종이식)함에 의한 치료에 있어서의 심각한 문제인 면역 거절반응(이식편 거절반응)의 억제, 예방 및/또는 치료에 있어서 매우 유용하다.
본 발명의 의약조성물은 또한 그러한 이식치료에서의 이식편 거절반응(면역 거절반응)의 억제를 위하여 시행되고 있는 기존의 면역억제제와 병용함으로써 이식편 거절반응을 보다 강하게 억제하는 것이 가능하다.
또한, 본 발명의 의약조성물에 포함되는 AILIM에 대한 인간 항체를 포함하여 된 의약조성물은 마우스 유래의 항체를 인간에게 투여할 때의 알레르기 등의 부작용을 전혀 야기하지 않기 때문에 의약품으로서 매우 유용하다.
Claims (11)
- 하기 (a) 내지 (e)로부터 선택되는 어느 하나의 물질:(a) AILIM에 결합하는 항체 또는 그의 일부;(b) AILIM의 세포외 영역의 전부 또는 일부를 포함하는 폴리펩티드;(c) AILIM의 세포외 영역의 전부 또는 일부와 면역글로불린 중쇄의 정상영역의 전부 또는 일부로 된 융합 폴리펩티드;(d) AILIM에 결합하는 폴리펩티드; 또는(e) AILIM을 코드화하는 DNA 또는 RNA에 대한 안티센스 DNA 또는 안티센스 RNA,및 약학적으로 허용될 수 있는 담체를 포함하여 되고, 장기 또는 그 일부 또는 조직의 이식에 수반되는 이식편 거절반응을 억제, 치료 또는 예방하기 위한 의약조성물.
- 하기 (a) 내지 (e)로부터 선택되는 어느 하나의 물질:(a) AILIM에 결합하는 항체 또는 그의 일부;(b) AILIM의 세포외 영역의 전부 또는 일부를 포함하는 폴리펩티드;(c) AILIM의 세포외 영역의 전부 또는 일부와 면역글로불린 중쇄의 정상영역의 전부 또는 일부로 된 융합 폴리펩티드;(d) AILIM에 결합하는 폴리펩티드; 또는(e) AILIM을 코드화하는 DNA 또는 RNA에 대한 안티센스 DNA 또는 안티센스 RNA,및 약학적으로 허용될 수 있는 담체를 포함하여 되고, 1 또는 복수의 면역억제제와 조합시켜 사용하는 것을 특징으로 하는 장기 또는 그 일부 또는 조직의 이식에 수반되는 이식편 거절반응을 억제, 치료 또는 예방하기 위한 의약조성물.
- 제2항에 있어서, 상기 면역억제제가 아자티오프린, 부신피질 스테로이드, 사이클로스포린, 미조리빈 및 타크롤리무스(FK-506), 미코페놀산 모페틸, 레플루노마이드, 시롤리무스, 데옥시스퍼구알린, FTY720 및 CTLA4 의약으로부터 선택되는 1 또는 복수의 약제인 것을 특징으로 하는 의약조성물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이식이 동종이식인 것을 특징으로 하는 의약조성물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이식이 이종이식인 것을 특 징으로 하는 의약조성물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 장기가 간장, 심장, 신장, 폐 또는 췌장인 것을 특징으로 하는 의약조성물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조직이 피부, 각막 또는 뼈의 조직인 것을 특징으로 하는 의약조성물.
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