JPS6191130A - 生物学的活性ポリペプチドの遊離延長組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は動物に非経口投与することかできる長期にわた
り遊離する生物学的に活性のポリペプチド組成物、これ
らの組成物の使用方去、これらの組成物のあるものに有
用な金属−結合ソマトトロピン、およびこれらの金属−
結合ソマトトロピンの製造方法に関する。

発明の背景 いくつかの生物学的活性（生物活性）ポリペプチドの活
性の延長は、ごく少用漬を非経口的に投与することによ
り、ｌ！ｉ！成することはできるが、その他のも（Ｄは
十分な皿ｌＪ中の両度を必装とし、および／又は血清中
の半減期が短かいので１遍又はそれより長い長期にわた
り所望の生ｖＪ活性を供するために実質的用歓（例えば
、少なくとも約１００ｒｔｒｙ　）が投与されねばなら
ない。ソマトトロピン（生長ホルモン）はこのようなポ
リペプチドの列である。

動物の血ｌ夜流中に望ましくない急速遊離を阻止するた
めに、成る棟のボリペデ：ｙ−ｒは圧意には水和遅延剤
（抗水和剤）又は体液中のこれらの浴解度を一７１′１
低下させる金属又は金属化合物と結合して含む液体ビヒ
クルで非経口投与された。このようなビヒクルのｎ’４
しえない大計の心安性を避けるために、ビヒクル中のポ
リペグチ−の実質的ｄ度舎工有利である。しかし大部分
の先物活性ポリペプチドは実質的一度で非常に粘稠であ
り、従ってこの様なθ度で注射又は他の方法により投与
することは困難である。さらに、多（の通常使用される
抗水和剤は枯７ｆｆｉ’（ｆｆ増加させ、このような組
成物の有利な注射のり能性を減少させる。これらおよび
他の理由に対し、（１）動物に所望の生物学的効果を供
するために十分な速さの遊離、（２）効果を十分に延長
させるために十分な遅さの遊離、（３）長期間にわたり
所望割合でａ離させるための４当な用量、および（４）
有利な投与に対する十分に少ない容量および十分に低い
粘度、の正しい組み合せは達成することが通常非常に困
難であった。

各ポリペプチドは、例えばその三次元構造および他の物
質との相互作用が異るので、適当なビヒクル中のｍｆＭ
のポリペプチドにより長期間の有効な遊離を達成する可
能性は埋−的に予示又は実証することは不ｏＪ能である
。しかし多（の場合、こ０よ５な長期遊離組成物はポリ
ペプチドの生物学的活性がＭ用で経済的様式で供される
ならば開発されねばならない。

生物粘性物質の長期遊離を達成する方法は、処置のＪＭ
ｒｗ　ｗ減少し、および／又は処ｉｉ′！動物に対し外
場を最少にするために古（す１ら探求された。長期遊離
は多収のこのような物質に対し各棟方法で達成された。

１つのシステムは油ｍ液の使用であり、これは筋肉内、
皮下又はその他の方法で注射することができる。成る揚
合には油に低浴解の物質は油サスペンションで投与され
た。

例えば、米国特許第２，４９１．５３７号明綱書でウエ
ルヒはペクチン、セルロース化合物又はゼラチンのよ５
なタン白質によりケ９ル化し、油（列えハ、植物油）に
サスペンドしたペニシリンに対し２４時間までの間遊離
することを開示する。仮はインシュリンおよびステロイ
ドホルモンに対し遊離の延長を示１関する。米国特許第
２．５０７．１９３　　　・号明則曹でバラクラオルタ
ーは５％のモノステアリン戚アルミニウム（ＡＩＭＳ　
）によりケ９ル化し、石花生油にサスペンｒした３　０
０，０００ユニツト／１ｔｒｌのゾロカイン　ペニシリ
ンをウサギに使用して１１日までの間遊離することを開
示する。米国行許第３．０１６．６３１１号明細、芹で
ヤコプソンはゴマ油にサスペンドしたＡＩＭＳ−破ｉ及
ペニシリンをｕｒ１示する。ジャーナル　メゾ　バレン
チラル　サイエンス　アンド　テクノロジー（Ｊｏｕｒ
ｎａｌ　０ｆＰａｒｅｎｔｅｒａｌ　５ｃｉｅｕｃｅ　
ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、６５（３）　。

１０９（１９８１）でチェノは２裂ＡＩＭＳによりケ９
ル化し、（１ハ物油にテスペンドしたペニシリンＧデツ
カインの生物活性の延長を６繍議し、２％より多いＡＩ
ＭＳは有効なペニシリンレベルの延長に対しごく限ボさ
れた利点しか有しないと思われ、２％より多いＡＩＭＳ
をゴむテスペンションは実用には粘稠すぎると述べてい
る。

油丈スペンションはペニシリン以外のある低分子Ｉル（
ＭＷ　）治療物質に対し利用された。例えばラックマン
らは米国特許第６．６７６．５５７号明細書でＡＩＭＳ
によりデル化したノルモルフイノンの５０％までのバモ
エー）　（ｐａｍｏａｔ、ｅ　）　頃の油テスペンショ
ンの長期活性処方を開示する。シーデルりは米国特許第
４，０１６，２７３号明則書でステアリン１棧アルミニ
ウムによりゲル化したオキテゼピある生物活性ポリペプ
チドの茂萌Ｍ離に対するシステムも開示さ、ｎ、ｆｃ。

例えば、アンシェルは米国特許第２，９６４，４４８号
明細−斗でＡＩＭＳによりデル化したりラキシン（約２
％）の随物油テスペンゾヨン？：開示する。アンシェル
はこのようなテスベンゾヨンはｒル化剤なしに油中でこ
れと匹敵できるりｌＩ！緩（例えば、５〜７日）を供す
ることを　　、プラーは米国特許第３．８６９，５４９
号明ｍｌ優で１−極瑞に小用量」、例えば「ηのフラク
ション」のペプチドをバむ注射０Ｔ能な長期−遊離７咀
成物を開示する。生長ホルモンが挙げられるが、特定列
は７〜８日間活性の水爵注コルチコトロフィンについ℃
である。特に、ケ９ラーはジステアリン酸アルミニウム
（ＡＩＤＳ　）によりゲル比し、落花生油に丈スペント
した、又はＡＩＤＳ上に吸着させ、欠にこのような油に
分数させｒｃ　、Ａ（二ＴＨ同族体の鐵何加頃を含む組
成物を開示する。いずれの場会でも同族体は僅かに０．
０３〜０．１％の調度で、ペプチド対アルミニウム頃は
０．５より大きくないル赦比でプラーの注射できる処方
に富ま几る。

Ｌ　Ｈ−ＲＨホルモン同族体の遊離延長に対する組成イ
勿江木国竹ｌ［第４，２５６．７３７号明細誉でネスタ
ーらにより開示される。これらの組成物は脂肪酸のアル
ミニウム塩によりケ９ル化した、多１曲金Ｂ＊４　（レ
リえば、亜鉛）塩をよむ、ホルモンの塩を植物油中によ
む。Ｌ■］−ＲＨ同族体は注射組成物中に０．０１〜１
％のυ度で投与される。

その曲のものでは非経口遊離の延長に対しポリヘア”チ
ドの金属塩又は複合物の水性テスペンションが開示され
た。例えばドニニは米国特許第３，８５２，４２２最明
７１曲書で水浴性ゴナドトロピンおよび水酸化アルミニ
ウム又は水酸化亜鉛の洗直生成物の艮勘粘注水性テスベ
ンゾヨンを開示する。亜鉛は膵臓インシュリンに天然に
存在するため、インシュリンと各種金属（例えば、亜鉛
、ニッケル、コバルトおよびカドミウム）…」のイａ互
作用による水性ツ′スペンションのインシュリンＭ１ｍ
の延長が（υ１元された。米国待、ｉ′Ｆ第２，１４３
．５９０ダ、弔２，１７４，８６２号、第２，８８２．
２０　！１号、第２．９２０．Ｌｌ　１４号および第３
，１０２．０７７７号明４）１・丁　参　ハ遇　。

発明の目的 本発明の目的は動物における生物学的活性ポリペブチｒ
の遊離延長に対し有用であり、この動物と生物学的に相
容性の取分から成る組成物を供することである。

別の目的は動物に所望の生物学的効果を生ずるのに十分
な速さの遊４を有するような組成物を供することである
。

別の目的は有利な延長期間に対し所蒙の生物学的効果を
維持するのに十分な遅さの遊離を有するような組成物を
供することである。

別の目的はこのような長期間にわたって所望側合の遊離
馨維持するために十分な高富量（適当な用鍛）のポリペ
プチダを含むような組成ｑ７Ｉを供することである。

別の目的は非経口投与ｗＭ利にするために十分に低い容
Ｆａを有するような組成物を供することである。これは
ポリペプドの投与址がやむを得ず大きい場合！侍に重安
である。

別の目的は有利な注射又は他の投与に対し十分に低い枯
反を組成物が有するように選択された成分およびその割
合を有するような組成物を供することである。これは比
較的大用量のポリペブチ１の注射が必要な場合非常に重
安である。

いくつかの態様ｔ−は、このような成分および割合はよ
り長期の遊離を有利にする貯蔵所を動物に形成できるよ
うにするために十分に高い粘度を供することが目的であ
る。多（の場合、これは上記の低粘度目的と同時に達成
することは困−・羨である。

本発明の他の目的は、このような組成物の使用方法、こ
のような組成物に有利に富まれるソマトトロピンのある
形態およびこのよ５なソマトトロピンの製造方法を供す
ることを含む。本発明のこれらおよび他の目的は以下の
詳細な記載により一層容易に明白となろう。

発明の決約 上記目的は組成物の連続相を形成するのに十分祇の生物
学的に相容性の油に分数した化成的高割合の生物活性ポ
リベゾテＩ嗜む実質的非−水性組成物により実現できる
ことがわかった。多くの態様では、このような目的はポ
リペプチドを非−毒性金属と結合して使用することによ
り一１ｉ有利に実現することができる。任意にはこのよ
うな組成物はポリペブチ１の遊離を一層止長するために
抗水和剤を含むことができる。特に比較的大用量で投与
しなければならないポリペプチドおよび／　　　　−又
は実質的に組成物の粘度を増加するポリペブチげに対し
ては、ポリペプチド対抗水利剤の比軟的高比率が一般に
有利であることがわかった。又高装填址のポリペプチド
（任首には抗水和剤を宮む）および注射後組成物が有効
割合で長（ポリペプチドを遊離する長期−持続性貯戒所
の形成に役立つ十分な粘度を有する組成物を供すること
ができることもわかった。

本明細書を通して特記しない限り組成物の係はＭ量によ
り温度は°Ｃである。

本明細書および特許請求の範囲で使用される、「実質的
に非−水性」とは本質的に無水、又は動物におけるポリ
ペプチドの遊離を許容し得る程しか促進しないような低
割会の水分を言むことを意味する。この水分の割合は本
発明の各組成物により変化するが、ポリペブチげの遊離
に対しこのような効果を有する形で約２％より少ない（
さらに代表的には約１％より少ない）ことがもつとも通
常的である。

「非−毒１生」とに、本明九田書ではこのような組成物
の非経口投与後適当な敬および適当な条件下′１：所用
される場合、正当に安全および／又は無害である本発明
組成物の成分を意味する。

「生物学的に活性」又は「生物活性」ポリペプチドとは
、水明ｍｌ井では動物に適当な非経口投与後、この動物
の生物学ｔｌ′Ｊプロセスに対し証明できる効果をゼす
るポリペブチｒを意味する。効果はホルモン的、栄養的
、治療的、予防的又Ｑ工その他であり、↑λ麓的、補給
的であり、又は天然に行なわれ勺生吻学的プロセ゛スを
阻止することができる。

非常に多１！１（多泳のこのような効果およびプロセス
があるが、食用４ｔ約）吻の生育刺ｉ放、ＩＬ汁外分泌
卯又は仔の１１４［および／又は祠刊−効率は１列とし
て学げることができる。他の例は羊毛、毛皮又は他の非
−食用動物生産物の生産を言む。より小さい分子惜（例
えば、少なくとも約３００）のポリペブチ１は使用でき
るが、これらのポリペプチド（ニー設に実質的分子ｈ１
：、例えば少なくとも約１０００、通例少なくとも約４
０００、もつとも好ましい態様では少なくとも約９００
０、および多（のさらに好ましい態様では少なくとも約
１８．ＯＣＪ　Ｏ〜約３０．０００又（工それより高い
分子；ｓ（である。ポリペプチドは動物に投与前本発明
組成物で活性形であるが、この用語は本明細書では投与
後に生物活性を表わすポリペプチドも含む。

本発明の多（の態様では、ポリペプチドは化学的に非結
合形で投与される。他の多くの態様では、水性（例えば
、＠物体）流体中で非結合ポリペプチドより低い溶解圧
ｋｍする形（例えば、ｆヒ学的に他の物質と結合）でポ
リペプチドを使用して行なうことが有利である。例えば
、ポリペプチドは侵勢的に（例えば完全に）非−み注金
和Ｓと化学的に結合し、又はエステル、アミド又は所望
の生吻活性を供し、ｌｆｆイし得ない副作用を与えない
曲の形である。このような金属と化学的に結合する場合
、（＋Ｓ１えは、ポリペプチドの金属塩又はポリペプチ
ドとの複合物で）金属は金属それ自体として、又は１橿
又はそれ以上の他のアニオンと金属の塩又は複合物の形
で存在する。

１（１９）ｌｉ７シ」４（飼えばナトリウム又・・エカ
リウム）は本苗明のいくつかの態様では有利に使用する
ことができるが、多動金属は他の多（の場廿匣用するこ
とは好ましい。このような多Ｉ曲金、１ｏ４の例は亜鉛
、Ｊ夫、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウ
ム、マンボン、アルミニウム、屑、コバルト、ニッケル
、カドミウムなどを含む。あり非常に好ましい・原（求
でを工、このような金属−結付ポリペプチド；よこれも
の金属、しＵえはイオン形、と醍解ボリペプ′チｌｊと
の反応生成物である。金属対ポリペプチドの比は形成過
湿中にこのような金属と結合するポリペプチドの活性部
位敬により変化する。例えは釜ｈＡ　ｈエボリベデチド
のいくつη１又はすべてのマイナスＦｒ４アミノＬ１１
Ｃ１ｆｌＪえばアスパラギン酸又はグルタミン酸）残基
又はカルボキン末端基と結合す々。いくつが又はすべて
の金属をエポリペデチげ塩に結合し、ポリペブチｒの折
りたたみ、結晶又は無定形形態内に吸くされ、又は少な
くとも２個のポリペブチｒ分子間のカチオン架＋ｆ４と
して結場合、例えば立体障害のためにポリペブチげと一
部化学的に結合するだけである。このような場合、金４
の残部原子側は化学的に西のアニオンと結合する０多（
の望ましい態様では、金属は低い水溶解度を有する頃を
この金属と形成する１己のアニオンと実質的割合で化学
的に結合しない。金属が他のアニオンと一部化学的に結
合する場合、これらの他のアニオン（有機又は無機）は
金属と水溶性塩を形成するアニオン、列えばＢｒ−、Ｃ
１−、Ｉ−。

ＳＯ４又は金属が亜鉛である場合ＣＨ３ＣＯＯ″″から
選択されることがしばしば望ましい。１　ｉｍアニオン
、■えばＣｔ−は一般にもつとも好ましい。

本発明のＶ「規で、好ましい金属−結合ポリペプチドは
ゼ珀と結合したソマトトロピントロビン乞言む。いくつ
がの場合、これらはソマトトロピンのポｋｍ緒で約５％
１で又（・工それ以上の亜鉛をきむ。しがし、動物の望
ましくない注射ｇ立の応答機会を最少にす／）ために約
２％木調、４くつがの場合には約１％ポ関の亜剤（同じ
規準）を含むことが望ましい。歩くの好よしい悪１求で
はこれらのポリペプチドは少なくとも約０．５％（通列
少なくとも約ＬＪ、５係）の亜鉛（同じ規準）を宮むが
より低ｉ亜」０係はああ場合にも工３１１当である。

木、ら明で１イ用な曲のポリペプチド頃の１３′ＩＩは
ｔａｔ無慢試、１７すえば頃ｌ疲、臭化水素１俊、１帷
【梗、リン酸又はイ１旧俊により、又を工・汀！ｌ幾１
夜、列えば酢酸、イ１ぶ酸、ｒｉｍ　５　酸、コハク酸
、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リン
ゴ酸、アスコルビン酸、安、仏ｆ酸、タンニン酸、バ七
ン威、アルギン酸、ポリグルタミンば、ナ７タンンスル
ホン鹸、ナ７タレンークスルホン酸又：エボリがラクテ
ユロン戚により形１ｊ′１．され４＋藏付加龜、（ｂｔ
多幽有様カチオン、闘えはＪ−ジベンジルエチレンジア
ミン又ｔエエチレンゾアミンとの塩、および（ｃ）　２
　、ｒｌ又ｋｍ　ソれ以上の上記タイプの頃の組−’ｚ
会せ、例えばタンニン酸亜鉛、を含む＠ 好ましいものは亜鉛、鉄、カルシウム、マグネシウム、
マンＩン、ナトリウム、カリウムおよびこれらの混合物
の頃である。特にポリペプチドがソマトトロピンで、あ
る場合、もつとも好ましい塩は亜鉛、ナトリウム又はカ
リウムの１である。非常に有利なことに、これらの頃は
本発明の１組成物に使用される例会で生物相容性油に投
４される場合油と相鉦作用して、層りべきことに有効レ
ベルでポリペプチド遊離の延黄ヲ旨めるマトリックス又
は他の構造を形成することがわかった。この予期されな
い９α児は皮下および筋肉内投与の双方で注目され多数
の本発明組成物の効能に１匹大なを与をするようである
。

本発＃！Ａ組成物は共役又は非共役ポリペプチドの遊離
の４長にも有用である。これらの共役ポリペプチドはり
ボタン白、列えばベーターリボタン白；グリコタン白、
洞えばがンマグロプリン；ホスフオタン白、しｑえばカ
セ゛イン；ホモタン白、例えばヘモグロビン；フラざタ
ン白、例えばテクシネートデヒドａ）ｆナーゼ：および
メタロタン白、例えは７エリチンおよびアルコールデヒ
ドｃ１デナーゼ馨含む。これら又はｉ：Ｅ意の曲の上記
形のポリペプチドの混合物は本例１洲書に記載および時
計請求される本発明内にあると考えられる。

多くのｉＩｂ力的ｆ原（・！ミでは、本７Ｇリノ組成′
吻に」）与されるポリペプチドは微水溶性（すなわち、
１部のポリペプチドの溶解に必安な室温水；１１は少な
くとも１００部）である。多くの屋ましい悪球では、こ
れらｔ−Ｃ二こで使用される生物看伯容注油にを工十分
には浴屏しない。すなわち至はでＦＪ２％より烏い一度
では溶解せず、もつとも望ましくは約１％よ＃７高くは
ない。成る場合、列えは各種ソマトトａピ／をきむ組成
物では、ポリペプチドは微水溶性で実践的に旧不溶性で
ある。

上記のように、本発明組成物は、その連続相として生物
相容性前、すなわちポリペプチドに対しａ”Ｆ尋し侍な
い僅の態形−を及はさない油、動物、又は生産物が文物
連鎖に入るりの物の場合にはこれらの生産物の消費動物
をそれぞれきむ。このような油は低酸反で、実質的に酸
敗しないものであることが好ましい。本例＃ｌ書で使用
する「油」とは動物の体温で液状である脂肪油又は脂肪
を材体する。このような油は約４０°以下、好よしくは
≠９３５”以下で溶融し、又は少なくとも溶融し始める
。約２５°で液状である油はめ（つかの本発明組成物の
注射又は他の投与を有利にする。成る場合には、高度不
−相（例えば、部分水素的≦加）油は動物又は他の理由
により生物相毒性を一層大さくするために有利である。

好ましい態様では、生物相容性前は本質的にトリグリセ
リド、すなわちグリセａ−ルの長鎖（一般にＣ８−Ｃ２
４、好ましくはＣ１２〜Ｃ１８ン脂肪酸エステル又はト
リグリセリドおよびこれらのＢＦｎＪ６゜（好ましくは
ご（少部分、例えば約１０％より少ない脂０＃ｌ）の混
会物η為ら成る。成る態様では、他のトリヒＶロキン又
はポリヒドロキシ化合物はグリセａ−ルに対し代替する
ことかでさる。特に好ましい油はオリーブ油、ゴマ油、
落花生油、ヒマ７リ４１子油、大豆油、綿実油、コーン
油、ベニバナ油、パーム油、ナタネ油のような埴物油お
よびこれらの油の混合物を言むウゴマ油および落花生油
は多くの態様に対し非Ｂに好ましい。動物又は鉱物起諒
の油、又は廿成油（グリセロール又はデミピレングリコ
ールの長鎖脂肪酸エステルを含む）も十分に生物相容性
であれば使用することができる。

大部分力Ｉｋではこれらの油はこれらの、１′４１ａ：
物の浸勢な亘は部分を、ｌ１ｌｔ成す心。生物（１４注
油の連ｖｃ相は大部分の＠せ望ましくは比較的り−に分
数したポリペプチドの微細分割、分離粒子を有する（Ｖ
Ａ工はテスペンゾヨンーＣ：）。ポリペプチド＆ｈｔの
上限は藺が連続相として存在し得なくなる場合で、組成
物の実質的にすべてのポリペプチドを油が不十分である
ため完全に己むことができないがもである。

積度がそれにより実質的に壇加する場合でさえこれらの
組成物に高言祉のポリペブチ関を使用することによりλ
ｉｆ　＜べき、予期しえない結果の得られることがわか
った。さらにこのような高き量で、多（の場合に、長期
持続住貯ば所カ）も４クリペデチダの遊シ１ｔの延長に
有利な、ポリ波デチげと曲間の相互作用のあることがわ
かった。この相互作用に、多くの場合上記のようにポリ
ペブチＶが金属と精分する場合増強される。

本発明組成物は望ましくは高レベルで、レリえば少なく
ともＦＪ１０％でポリペプチドを含む。より１福含最の
ポリペプチド、例えば少なくとも、ｊ’Ｊ１５５ｂでさ
え、しばしば１ましり、時にソマトトロピンおよび実質
的に同じ時性を有する他のポリペプチドで有効である。

約２０％又はそれより高い、囲えば少なくとも約６０％
又は約４２％まで又シ棗それより高いきｉｄは、ソマト
トロピンをよむ非ＡｊＬ］注射組成物（レリえば、・ニ
トンに１１芋にソマトトロピンが亜鉛のような多１ｕｆ
ｉ金・萬と結合する場合有利に１！ビ用することができ
る。このような組成物は６０日まで又に工それより長い
勘１１１１ソマトトロピンのλ）７ｉｉｊ：［）延長（
牛又を工朋の動物の血奴訛で測定）を共することができ
る。

約１０矛のポリペプチドき縫をきむ実質的に非−水性組
成物は矧る限りにおいて先行技術には全（示唆されてい
ない。これらの先行技術では油製剤に井筒に低いポリペ
ブチｌ’　＊　ｊｆ　％　すなわち約２％より多くない
微に限定される（米国特許第２，９６４．４４８号、＠
　３．８６９，５４９号および第４，２５６．７３７号
明則書参り。

本発明組成物は生物相容性油の他に「仇水和赳もざむこ
とができる。本明細書で使用される「抗水和剤」とは本
発明の所定組成物、又はこの中のポリペプチドおよび／
又は生物相容性油の水和を遅りせ、それによって動物に
投与後この組成物かりポリペプチドの遊離−合を減少さ
せおよび／又は安定化することを慧味する。各種の非−
毒性抗水和剤は既矧である。例として「デル化」剤があ
る。これは分数する場合および成る場合加熱して？田に
俗解する場合、油のボディにより太き一枯弾注（および
従ってより大きい構造安定性）ｆｔ与え１でれによって
水性（−えばオ体）流体に対し油の浸透を遅らせる。

本発明においてこれらの剤の正確な機作は完全には埋ｗ
ｆすれていない。成る暁矧の「デル化」剤Ｑ工これらの
剤をよむ油がそのケ９ル化効果乞増強するために加熱さ
れなかった場合でさえ、又′Ｌニ一度影形成れたデルが
実質的に除去（闘えば、剪断力）された場合でさえ所望
の仇水和効果を供することが認められた。又、油をゲル
化する実質的能力を有しない各種抗水和剤は本発明で使
用に適する。

ステアリン酸マグネシウムはその例である。

抗水和剤の列はＭａ酸、例えば約８１１（好ましくは少
なくとも約１０１固）〜約２２１固（好ましくは約２０
個まで）の炭素原子を有する脂切峻、の各榎塩、例えば
ラウリン酸、バルミチン酸、ステアリン酸などのアルミ
ニウム、亜鉛、マグネシウム又はカルシウム頃ヲ言む。

これらの頃は金属の原子勧および酸による金４４の酸化
度によりモノ−、シー、又はトリー置換である。このよ
５な脂（ｂ酸のアルミニウム塩は竹に有用である。モノ
ステアリン酸アルミニウムおよびクステアリン醗アルミ
ニウムは特に好ましい抗水オロ剤である。有用なその旧
のものはトリステアリン威アルミニウム、モノステアリ
ン酸カルシウム、ジステアリン酸カル７ウム、モノステ
アリン酸マグネシウム、ジステアリンｌ［マグネシウム
および相当するパルミテート、ラウレートなどを宮む。

多くの態様では油十このｆ【１］規準でこれらの抗水オ
ロ剤一度は有利には約１〜約１０頭（もつとも一般には
約２〜約５％）である。しかし、油の一度もある場合に
は適する。

一般に、ポリペプチドおよび抗水和剤の双方共本発明組
ノ戎（のの粘度を上昇させる傾向がある。多（のポリペ
ブチｒＸ特に二仄又は三欠構造の比較的晶分子最および
／又は複合物については、比軟的旨いポリベゾチド対抗
水和剤のＢｉ　ｉｒｋ比を使用することによりこの問題
に打）Ｉ約つことかできる。

本発明では、この比は−す役に少なくとも約ｌ、ざら（
ｌこ一般ｄ′Ｊには少なくとも約３、−崩御般的には少
なくとも約４、もつとも普通には少なくとも約６であめ
。組成物の積属により通しＩＪ−界性は少ないが、この
比は一般には約４０より大きくなく、さらに一般的には
約２０より大きくはない。

このような割合を使用し、比較的高ボリベゾチドρ度に
固Ｍの品積度組成物についてでさえ、有利に長い有効な
ポリペプチド遊離が得られることがわかった。い（つか
のこのような組成物において、ポリペプチドき敏（およ
び従って組成物枯幻が増加する場合遊離割合は実際に増
加する事実はさらに一層驚（べきことである。

本発明組成物はヒトおよび曲の霊長類を言む動物、特に
補乳動物のポリペプチドの遊離延長に使用される。これ
らの動物を処置する有用なポリペブチげは、例えば鳩、
七面鳥などを処置する鳥類ホルモン、ヒト、牛、豚、羊
、山羊などを処置するｕｔ＋ｒ乳類ホルモン、魚などを
処置する水生動物ホルモンを含む。特に有用なポリペプ
チドは生長促進ホルモンおよび乳汁分必４遇ホルモンな
詮む。

これらのホルモンは牛（例えばＦ５？！Ｉｍ牝牛）、羊
、山羊およびｇをきむ各種呻乳動物独の示丙対脂肪比、
飼料効率および孔生腫の増加に有用なソマトトロピンを
ざむ。

木切、）回置で使用する「ソマトトロピンＪとは動物の
下垂体で生殖されるソマトトロピンと実質的に同じ生物
学的活性および化学構造を有するポリペプチドを意味す
る。Ｏのようなソマトトロピンは下垂体のソマトトロピ
ン生産細胞により生産される大パンマドトロピン、およ
び別にはイー　コ’）　（Ｌ　Ｃｏ１１　）　、他の細
箔又は酵母のような遺伝的に液戻された微生物により表
わされるソマトトロピンを倉む。このような別法で生産
されたソマトトロピンは天然ソフトトロピンと同一のア
ミノ酸配列を有するか、又は生物学的活性の哨ｎ又はい
くつかの他の利点を供するアミノ酸配列に１つ又はそれ
以上の変化を有する同族体である。本発明が特に有用な
ポリペプチド（末生および豚のソフトトロピン、例えば
微生物的に表わされる牛および豚ソマトトロピンおよび
牛、豚又は他の動物のプロラクチン、生長ホルモン遊離
因子、インシュリン−憾生長因子などである。これらの
ポリペプチドは任意にはＮ−末端基のメチオニン残基、
例えばポリペプチドに対する遺伝子にＡＴＧ出発シグナ
ルの微生物翻訳により生成するメチオニン、を有する。

しかし成る場合にはボリペブ３チ１のこのようなメチオ
ニン残基はボＩＪ　、、２ブチｒを分解する動物の異物
防禦ＩＬ１Ｎ向を少な（するために約２０％より多くな
い（好ましくは約１０％より多くない）ホルミル−メチ
オニンであることが望ましい。

本発明組成物の注射鋭祭では、実質前のボリペゾチげは
成る場合には注射すると初めに遊離することを示す。こ
れは注射又は１ｍの投与により生じた表面積の増加の結
果によると信じられる「’Ｊ！！−釦を、！味する。成
る場合には、例えば望乏しい生物学的活性乞【古注化す
るために便えめな破裂が望ましい。本発明組成物の処方
に有用な特性は、投与後短時間に処置動物の血（ａのポ
リペプチド一度を測定することにより測定された初めの
破裂レベルと、後に動物の血清のポリペプチド濃度を測
定することにより測定された延長遊離レベルとの関係で
ある。本発明の目的に対し、破裂レベルは注射後２４時
間の血清のポリペプチド濃度であり、姑艮遊離レベルは
注射後１４日の血清のポリペプチド濃度である。これら
の濃度は、一般に約１．２〜約６、例えば約１．５〜約
６と考えられる「破裂−婬使ａ離比」を算定するために
使用される。

本発明組成物を評価し、処方するのに有用な別の特性は
皮下注射針を通して組成物が々口側にうまく流れるがの
尺度である「注射能力」である。ポリペプチド粒子が大
きすぎるか、又は組成物が粘稠すぎれば、組成物をこの
ような針を強制的に通すには過度の圧力が心安である。

本発明の目的に対し、「注射能力」は、１７３ｐｓｉ　
（１１９６ＫＰａ）り圧力が針ケ装着した注射器の組成
物に適用され６場合、１．　Ｄ、　０．０３３インチ（
０，８５８羽）および長さ４ｃｍを有する１８デージ皮
下針を本発明組成物の容積が辿過する時間を測定するこ
とにより測定されろ。本発明組成物に対する「注射能力
」は少なくともＬ）、Ｕ６ｍ／／秒（ｒｎｇ／抄）であ
ることが望ましい。好ましくはこのような注射能力はよ
り尚い、Ｍすえは少なくとも約０．１ｆｆｌ／／砂、さ
らに一層塁ましくは少なくとも約０．６ｍｌ／抄である
。

本発明組成物は油オー独又は油に懸濁又は酵解した抗水
和剤を有する油にポリペプチドを姉加することにより製
造される。しばしば抗水和剤乞Ｍ屏し、ケ９ル化油を供
することが有利であめ。＄うち明組成物はｒル化油な形
成することから始まる方法により装造される場合、脂肪
酸アルミニウム塩のようなケ゛ル化剤は攪拌油量に粉末
として小加しとの粉末のテスペンヅヨンを得ることがで
きろ。（、Ｊ拌テスベンゾヨンは脂肪酸塩が油に俗解す
る少なくとも脂肪酸塩の融点（飼えばＡＩ　ＩｙｉＳで
は少なくとも１５５°）まで加熱することが望ましい。

・どル化剤又は１也の汎水和剤が適当に俗解するも合よ
り低温は使用することができる。十分で連続的撹拌は脂
肪酸塩の凝果を回避し、分散を保持する。辿しｔ加熱お
よび攪１゛ロエ祿陶頃が完全に俗解するまで継続ずべき
である。追加の時（（１９）　！ｍ件を維持し、元金な
溶解を離床す口ことがしばしは望よしい。

仄に脂訪虚塙の油す液は列えは室温まで冷却し、ここで
かなり安定なケ９ル（１゛４造が生り父子ゐ。ｒルは真
仝又は乾燥剤により保存しデル響遣に反対に作用す句水
による汚染を絃けるべきである。

次にポリペブチげは許容しえない反対の作用（例えば、
変性）乞避ける任意の温反で（列えば蚕＠）油に麻加す
る。例えば、午のソマトトロピンは約４゛〜１２５°の
は度で生物学的活性に反対に作用させずにこのような油
に奈加された。ポリベデチ団のこの隙加は水又は気剋に
よる汚染を避けるためにｇ臣下で行なうことが好ましい
。このようなｉ′ｉ加はポリペグチド粒子の均−分ｌ１
ｔｌ供するために高剪所混会しなが１う倣ｌ訓分副ポリ
ペプチドを油にゆっくり号≦加することにより行なうこ
とが望ましい。ポリペゾチド粒子の大きさを小さくする
ことはしばしば望ましり、約えはポリベゾチドテスペン
ションは、■えは、０．３〜０．６０の直径ｙ４４する
多１．ｉのステンレス＠ボールと混合されるボールミル
の使用により達成すにとができる。

これは尚剪ト０「混合が行なわれる容器の下部でこのよ
うな分数と同時に行なうことが有利である。特に、＃４
ｊ（規摩で約１５ミクロンより大きくな＾中間粒径７・
イする粒子（すなわら、約１５ミクロンより大きくＩ３
１径？：有する粒子の答槓の５０幻に大きさを小さくす
ることが１虚である扁装項ボリヘデテドの場合有利であ
る。大きさの小さいポリベデチｒ粒子（的えは、約１０
、好ましくは約５ミクロンより大きくない中間粒径の粒
子）の使用は木兄１３１４辿成物の注射能力を増加する
ために望ましいことがわかった。このようなボールミル
を保作することによりポリペプチド戊子は約５ミクロン
より大きくない好ましい中間粒子直径まで有利に小さく
することができる。その鎌本発明組成物は濾過し４Ｉ利
には具空下で）することによりボールミルから回収する
。

上記のように、本発明組成物は非荘口投与、列えは、腹
腔内に、又は通同一層望ましくは反下又は筋肉内に注射
することにより魅力的である程有用である。遊離延民刷
間は所望の生物学的効果に対し必魁な割合で、一般的に
は動物の遁ル血ｌ伐ηものポリペプチド７Ｇ［により示
されるｔｊ！１合−Ｃボリペゾチドが供給される期間で
ある。特別のボ替ペデチｒおよび生物学的活性により、
遊離延長期［ｄｊは。

少なくとも約７日が望ましい。・他の＠会には、少なく
と＋約１５日、又は多くの適用に対しさらにｕ　！　Ｌ
　＜は少なくとも約６０日、又は少なくとも釣６０日又
それより長い場合もある。本発明によれば亜鉛と結１オ
し几牛ソマトトロピントロピンをきむ組成物（求％　　
２−り　Ｉ！ｔｌ　０１　ｔｋ　′を注射した乳汁分感
牝牛の血清に少なくとも約７日、少なくとも約１２　ｎ
ｉ　／　ｔｕｔのコト均牛ソマトトａピン給漣反に供よ
ることがわかりンｔ０これは孔の生産および／又は牛の
祠科一孔変１（効率の瑣週の目的に対し非常にイ丁利で
ある。

市ｂｓ牝牛の処置に対し十ソマトトロピンのイ効用：律
をυ（するために、例えば孔生並を増加させるために、
少【くとも約６００号の亜鉛結合ソマトトロピンｋまむ
Ａ且成吻が少１．ｃりともフｉｉ”ｌ　１５　］」、牛
の１古丁上ノマトトロビンの皿（青レベルを増）ｎさせ
るために直よしい。匪鉛結合ノマトトロピンは、■利に
シエ十分乙Ｌ：　ｔＬ：ｓ−反（利えは、少なくとも約
１５う）で己まれ、それぞれの投与に対し有利な小容凧
のえイＬ成匂（しＩＪえは約１０ｍ１より少４【り、列
えば約１〜ｑｌＪ３　ｍ’　）　？、セ、ｔ、用す、ｂ
ことが−Ｃきることは本発明の斗ｌイに瀬刀回な１孕Ｌ
ｔ〈であ６゜勿品目曲の物質は、これらの物質が有効レ
ベルでポリ（ゾチドの望ｆしい４雌の延長を許容しえな
い程阻止しない眠り組成物に添加することができる。同
えは、異物反応（例えば、非−アンルギー性）作用を減
少し、阻止し、又は打ち消すために本発明組成物に抗炎
症蘇茄剤又は他の礒加剤を茄えることは望ましい。この
ような添席剤はステロイドおよび／又は非−ステロイド
抗炎症剤ケ含み、これらは好ましくは何らかの金片作用
を避けるだけの低レベルであるが、局所的炎症を減少さ
せるのに有効な十分なレベルで組成物に３まれる。

多Ｉｕｊ金域と結合したポリペブチ−は溶解ポリペプチ
ドを非−毒性金属（飼えば、亜鉛）イオンと反応させる
ことにより製造することができる。−役に金属結合ポリ
ペブチｒは金４・Ａ１任意にはその吐水１６性塩の形で
、しり為し一般には好ましくはその水浴性頃（調えば塩
化亜鉛）としてポリペブチｒの緩衝ｍ液に６≦加し、金
属と帖廿したポリペブチＩ−′を沈殿させて鍵童する。

しばしばｄＴｍ化化合物、例えば尿素、グアニシンなど
はポリペプチド、特に倣水浴性のポリペプチドのｇ＋昨
を助Ｑするために溶液に言まれる。多くの場合、町浴化
比合物の４度および／又は溶液のＰＩ′１はポリペプチ
ドの生物活性病造の維持に対して臨界的である。

さらに、浴液のｐＨｖニ一般に沈殿物として生成する金
属結合ポリペプチドを回収するために一般に臨界的であ
る。囲えばポリペブチｒの一＃ル性によりＰＨの４界的
範囲がある。温度はｌ注を避けるために１氏（保持し、
例えば一般に約呈温より鵠（ない一度に保持することが
好ましい。

利用するポリペプチドの純度により、パイロジエン乞除
云し、および／又は滅菌は望ましい。パイロツエン（例
工は、エンドトキシン）は富まれる場合ポリペプチド浴
液なイオン４ｊ：換薗脂と接触させることにより除去す
ることができる。多くのパイロツエンはプラス荷電部位
、し０えばカチオン父挨四脂に結合する。いくつかのパ
イロツエンはマイナス荷４部位に結合する。便って、イ
オン交換樹脂ビーズの混合層はパイロツエンの十分な除
去４４医にＭ用である。ポリペプチドｄ液は滅菌し、前
の処理からの、而ば又は遊１Ｉ７１１（１ｏｏｓｅ　）
汚染物のような非−滅菌性異物を微ｎａフィルター、例
えば０．２ミクロンメツシュを通して濾過することによ
り除去することができる。

パイロツエン除去、ｔｆｃｍボリペゾチド溶液は次に非
−毒性金属Ｉ＠液と接触させて金属結合ポリペプチドを
沈殿させ、通洞望ましくはテスペンションを形成させる
。金Ｉｆ４察加ｌＩ！ＪＩ会は生成する笠属−結合ポリ
ペデチドの粒度に影響する。金属征加は奈加溶液の金−
製置、容積流割合および／又は分散割合をＡ整すること
により制御できる。

通例、金属−結合ポリペプチドナスペンジョンは稀釈し
、例えば、嵯果による粒度のＭ加頑向を減少することが
できる。欠に金属−結什ボリペデテドは複数の遠心分離
および洗滌を行ない過剰の金梧およびアニオンを除去し
て回収し、その鎌凍結乾燥する。

１１１１ｂ金属（例えばナトリウム又はカリウム）と結
合したポリペプチドはポリペプチドおよび金属イオン溶
液の凍結乾燥により製造することができる。

ここに記載するさらに特別の手順の列ではソマトトロピ
ン（例゛えは、牛）は多棟の緩＃俗液に溶解する。トリ
ス（ヒげロキシメチル）アミノメタン（ＴＲｌ３　）又
は他の適当な緩衝剤により緩衝した尿素水性浴液に溶解
することが好ましい０尿素濃度の望ましい上限は通例を
工６Ｍであり、い（つり１の場合１ｃは約４．５Ｍの尿
素一度が好ましい。それより低い尿素−反、例えば６Ｍ
又は２Ｍ又は１Ｍ　＝（？さえソマトトロピンの浴屏度
が低いことを除いて欧州することができる。

緩衝尿素ｍ液のＰ１工約７〜約１０．５が好ましいＯこ
れらのＰＩ”Ｉ眠Ｊｇ、１ｍ向で溶液から沈殿したソマ
トトロピンの回収は一般に少なくとも約６０煽である。

一般に、より高い回収（列えは少７よくとも９０チンは
約９〜約９．５０ＰＨにより達成すゐことができ６゜沈
設中を通してｔａ液の温度はソマトトロピンのオリイマ
ー化を阻止するに十分の低さであるべきである。一般に
このような温度は望ましくは約１０゜より低く、さらに
好ましくは約５°より低い。

１価金Ａ１−結合ポリペデチドを供するために、溶液は
上記のパイロツエン除去および政窮した）は透析濾過（
又は透析）処理し、尿素を金属重炭酸塩（ｖＡＪえば２
５ミリモルのＮａＨＣＯ３溶液、−９，５）又は他の適
当な塩と交換する。重炭酸頃俗液による複数交換は尿素
の完全父俟を確保するために行なうことが好まし＾。欠
に溶Ｍ、は水によりさらに透ダｒ濾過処理し、過剰のＨ
ａａｃＯ３ン除去する。これはＭＢＳの沈殿開始により
示される。ナトリウム−ソマトトロピンを回収して凍結
乾燥し、ソマトトロピンナトリウム塩の粉末を得る。

多価金わ４−結什ソ゛マドトロピンを供するために、ｆ
ｒｌｌｅｉ、（上記のパイロツエン除去および戴囚した
）は多１＋ｌ［ｉ　（例えば、亜鉛）塩と接触させる。

塩化亜鉛１Ｍ溶液の使用はソマトトロピンの４．５Ｍ尿
塁ｄ液から許ｄしつる亜拍−ソマドトロピンの沈澱を生
成することがわかった。しがしより扁い又はより低い０
度の塩化物は使用することができる。

ＺｎＣＡ２　％我はソマトトロピン浴液を撹拌しながら
例えば滴定によるように、ゆっくり添加することが好ま
しい。

ＺｎＣ２２浴液の碩加汐；継続されると、ソマトトロピ
ン浴液は４　？、７７に灰色がかった白色となり、欠に
ＺｎＣＬ　２の化学量１敏が６互加されると真珠白色と
なる。例えば、ソマトトロピン約２０　ｍ９　／ｌｕｔ
を含むｐ）１９．５のＭａ４００ｍｌに４　ｒｕｇのＩ
　Ｍ　ＺｎＣ４２ｊ６よび４．５Ｍ尿ａ　’Ｐ　ＣＩ）
　０．０９　Ｍ　ＴＲｒ　Ｓ　’ｒ：　添加ｔ　；ｂ　
コ（！：　（ｆｃより、真珠白色の亜拍−ソマトトロピ
ンテスペンゾヨンが形成される。道加のＺｎＣｌ２　（
列えば１Ｍ加Ｃｔ８俗液の約ｉＱｍｌまで）は完全な沈
澱を確保するために亦〃口することができる。

次に丈スペンゾヨンは沈澱の粒度瑣加煩向を減少させる
ためにしばしば櫂択することが望ましい。

約６．５琴の水により約１Ｍ尿素にｆ醍択すると亜鉛−
ソマトトロピン粒子の凝集を十分に阻止できることがわ
かった。、尿素、ＴＢ［Ｓおよび亜鉛および塩素イオン
乞除云するために透析濾過（又は複数の遠心分離および
洗滌）により回収し、玩＾て凍結乾燥し、一般に１０〜
２０ミクロンより小さい粒度を有する粉末を得る。

ソマトトロピンが牛のものである場合、一般に粒子は約
０．３〜約１・易の亜鉛（ソマトトロピントロー７１分
子につき約１〜４分子の亜＃）を倉む。亜鉛添加割合が
増加すれば、より高縫、囲えば４〜５チまで、が沈殿中
に見出される。このような高ｒＩＮエソマドトロピンの
ｉ占注郡位、クリえば退力日アスパライン酸および／又
はグルタミン酸残基又Ｖ工おそらくはヒステクン残基、
又はポリペプチドのカルボギシ末ｙ、懸基に対する他力
の付〃目的結合によるものである。亜珀績合のこの埋−
は本発明の範囲ケ限定するものと考えるつもりはない。

−１役に本質的に最少址の亜鉛を使用する沈殿は好まし
＾と考えられる。

矢の開示は本発明の特定態様および面を例示するｌヒめ
［洪されるが、本発明の範囲を限定することを、ｅ味す
るものではｔ＾。

列　１ 本列は本発明の亜鉛−結合牛ンマドトロピンの製造を例
示する。

メチオニンＮ−末端基を有する牛ソマトトロピン（ＭＢ
Ｓ　）は引用のためにここに挿入したシーブルグらによ
る記載、［エフイシエント　バクチリアル　ニック八プ
レッション　オシ　ボビン　アンＰ　ボーシン　グロウ
ス　ホルモン（ＥｆｆｉｃｌｅｎｔＢａｃｔｅｒｉａｌ
　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｏｖｉｎｅ　ａｎｄ
　）’Ｏｒｅｉｎｅ（）ｒｏｗｔｔＩ　Ｈｏｒｍｏｎｅ
　　）Ｊ　　、　２　（１ン　ＤＮＡ　　３　７　−　
４　５（１９８３）Ｋより製造した。ソマトトロピンは
細菌ガ・１肥を１６ノ界し、久に、１Ｊｔｌ　（Ａ　ｒ
萌ｊ巴「す片の１らソマトトロピンを会心することによ
り有用形で回収し友。

ＭＢＳ　？：回収する１方法では、醗酵ブロスのｐｉ−
１を下げるのに十分な５０饅硫酸により１．７まで処理
することりこより、面画を死滅させた。ブロスはＮａＯ
Ｈにより中和し、遠心分離し、細胞ペーストを残し、こ
れは原糸に懸濁し、均質化し、約４’Ｕ（この温度は下
記のＭＢＳ凍結乾燥まで維持した）に冷却し、遠心分離
し、３回洗誦し、グアニシン塩酸基（７Ｍ）に酊解し、
遍心分離して不溶解物を除去し、濾過し、グアニクン？
尿巣と交換する０２５セフアデツクスカラムを通し、濾
過し、欠べＤＥ５２イオン交換カラムを通した。泥出液
浴被は中窒偵維限外濾過により約′５０×減少した。濃
縮浴液は０７５セフアデツクスクロマトグラフイカラム
を通し、別の中空穢維稈潰減少工程をη、至て、犬に先
づ第一ニ尿素をＮａ［（ＣＯ３ｉ　Ｍに対し、次にＭｓ
ｓ　Ｙ沈＃させるために蒸面水に対し透析した。沈υ蛇
は凍結乾燥し、シーベルブらによる上記刊行物に示され
るＮ）（２−ｍｅｔ−ｐｈｅ　（１）　−ｐｒｏ　（２
）　−１ｅｕ　（１２６）・・・ｐｈｅ　（１９０）　
−ＣｏｏＨアミノ酸配列を有するポリペゾテ−（ＭＢＳ
　）を含む白色固体を得た。

ＣＯＭｉｓ　＆ｍ　４−５　Ｍ尿素Ｋ　ｂ　解Ｌ、４°
、Ｐ）１９．５で０．０９　Ｍ　ＴＲｌ５　ｇｉに２１
．５りｑ　ＭＢＳ　／　ｍｌで俗解した。無菌ＭＢＳｍ
液１ｒＩＬｌに対し０．２９のアニオン／カチオン混合
イオン交換樹脂ビーズ（バイオラッドＡＧ−５０１Ｘ８
）を混合することによりＭＢＳ溶液はパイロジエン除去
を行なった。混合、勿（′＠約１０分４°で攪拌し、欠
に１ミクロンナイロンフィルターで濾過して吸着パイロ
ジエンを言むピース？シＪＺ云した。

パイロジエン除去ＭＢＳ　ｉ工前の処理による則菌又、
工遊；、ＩＩ汚染物のような５県菌でない異物ｆ！：除
去する定めに０．２ミクロンメツシュを有するＪ慣シ付
ノ態菌化、ひだけきカプセルに溶液を通すことによって
滅菌１−ジ１＝：。

パイロジエン除去ＭＢＳ溶液を攪拌しながら１ＭＺｎＣ
Ｌ２りぶ如することによりばＢｅは亜鉛塩（ＺａＭＢＳ
）に変換し之。Ｚｎ＋４８Ｇ沈澱は約１％の亜鉛をき有
しンで。欠にＺｎ、ＪＢＳ　Ｌ！ｉｔ体を含むｒ８筬は
、頓閑パイロゾエン：余云水により１Ｍ尿素ｌ、謙反ま
で１択した。

Ｚｎム（ＢＳはＭｔｉを４°に株付しなから６０分ＩＵ
、０００×Ｊで遠心分離して回収した。ＺｎＭＢＳは高
剪断混合を使用して５０り’９　Ｚｎ）ＡＢＳ　／　ｍ
ｌでａΔパイロゾエン、余云水にｊ６陶した。Ｚｎ＋Ｊ
ＢＳは１１び６０分１０，０００×１で遠心分離して回
収し、ＩｇＪ剪断力を使用してｂ　ＯｊＬ９　ＺｎＭｆ
３Ｓ　／　ｍｌで無酊パイロジエン除去水に再、−イ濁
し、犬に凍結乾燥して白色羽毛状粉末の無菌ＺｎＭＢＳ
を得た。

列１Ａ 本例はＺｎＭＢＳの別の製造法を例示する。

１０°、ｐｉ−１８，８で、４．５Ｍ尿素、Ｑ、Ｑ　５
　Ｍ　ＴＲｌ５中のパイミゾエン除去、無菌の２１ｙｙ
ＭＢｓ　／　ｒｌｌ’ｆｊＪ液を容積形ポンプにより保
持タンクを通して再循埴した。溶液のＩＩＪ度はＺｎＭ
ＢＳの沈痘を生成する０−０１Ｍ　ＺｎＣｌ２になるま
で１Ｍ　ＺｎＣｌ２　’！’ポンプで吸引添加した。稲
沢水はさらにＺｎＭＢＳの沈＃乞生成する１　０１’９
　ＭＢＳ　／ｍｌの一度？供するために暉加した。次に
ＺａＭＢＳの生成テスペンションは係延反が４０　％’
　ＭＢＳ　／ｍ１Ｖｃ４するまで、１００．ＯＯＯＭＷ
までの分子を通す細孔を有する透析濾過中空愼維膜を通
して２５°で循環した。その場合、本質的にすべての亜
鉛、尿素およびＴＲＩ　Ｓがサスペンションから除去さ
れるまで模ｄ但液割合に釣合わせるために水を添加した
。水の溢加は約８０　’ｎ９　ＭＢＳ／ｄまで６：！縮
するために停止した。欠に歳縮テヌペンゾヨンは凍結乾
燥して０．５〜１１ミクロンの絶囲の粒度を有する乾燥
、白色のＺｎＭＢＳ扮末を得た。

例１Ｂ 本例はＮａ−結合子ソマドトロピンの製造を例示すも。

４°、ｐＨ９，５で４．５Ｍ尿素、０．０５　Ｍ　ＴＲ
ｌ５中のパイロジエン除去、滅菌した２１．５′ｎ９／
ゴ浴液は週ダ丁して尿素を最初にＮａ　ＨＣＯ３心液と
、次に蒸溜水と交ト萼（７た。Ｍｉｓが沈−し始めると
水の変換は中止した。次にｔｈｅは０．２ミクロンフィ
ルターにより濾過してＭＢＳ沈鑑を除去し、凍結乾楳し
て本発明ボｌ成吻に使用することができるナトリウム塩
（ＮａＭＢＳ　）を得た。

七Ｚリ　　　２ 本クリは加−結合ンマドＦｏビ／を含む本発明組成物の
製造を例示する◇ ゴマ油（フィッシャーＮＦ等級）を６頚九ノ氏フラスコ
に加えた。抗水和剤（ＡＩＭＳ　）をＡＩＭＳおよびゴ
マ油の全数の５％Ｔ−ＷＪＳ加しｆｃっフラスコは１５
５°の油Ｃ谷に入れ、攪拌してできるだけ早くＡＩＭＳ
乞分散させた。２０分攪拌を続け、その間にＡＩＭＳは
児全に油に（６解した。フラスコは浴から）楳り出し、
↓”Ｃ，臣下に沫プ守し２５°に冷却した。冷却すると
ｍ欣は一厚ｒルに液戻した。冷却デルは１／８．３／１
６および１／４インチ（０，３２，０，４８および０．
６４．　Ｃ−ＩＦＩ　）の直径を有するステンレス鋼球
のベッドで高剪断攪拌１幾を有するボールミルに供給し
た。真空をミルに適用し、Ｚｎ）ＪＢＳ粉末（列１記載
により製造）を組成物が４０％ＺｎＭＢＳ　（ＺｎＭＢ
Ｓ対ＡＩＭＳの重潰比１３．３　）を含むまでスクリュ
ーフィーダーを使用してゆっくり添加した。攪拌は６時
間継続し、その間ＺｎＭＢ８粒子の容積中間直径は２０
ミクロンから５ミクロンに減少した。生成する実質的に
非−水性のＺｎＭＢＳデル化油テスペンゾヨンは濾過に
より鋼球から分離した。

例　３ 本例は乳汁分泌陥農牛の乳生陀を増進するために、ポリ
ペゾテげ、すなわち牛ソマトトロピントロピンの遊離の
延長に本発明°組成物の有効な使用を例示する。

′：Ｘ、貝的に非−水性組成物は本質的に列２すこおけ
るように１５５０に加熱したゴマ油に５％のＡＩＭＳ？
：俗解することにより＃造した。油を冷却してケ９ル化
油を形成させた。油の連続相に６２係の２酷致を組成祷
が言むまで（Ｚｎ１ＪＢＳ対ＡｔＵＳの車耽比９．４）
ＺｎＭＢＳケ油中に分赦しａ砕した。１８ケ９−ゾ、１
．５インチ（３，８ＣＩＩＬ）のｉそさの針を袋層した
注射５は８０５　！；１５１　ＺｎＭＢＳ￥言む用（１
ｃを供す６２．５４１　（２，５ｍｌ　）の組成物を装
填した。組成ｑグはＱ、６．０３ｍｌ／抄の注射能力を
ゼし７と。ポリペブチｒを含まないゴマ油中の５％ＡＩ
ＭＳのブランク組成物も製造し、同じ注射器に２．４　
！ｉを装填した。

組成物９１２６頭のホルスタイン酪櫃牛にこれらの第２
（又は欠の）乳汁分泌の第２又は第６の６ケ月期に注射
した。牛は無作為に５又は６頭の４峰に岨熾した。２詳
は臀部の筋肉内に（１Ｍ）、１１ｊＦはＺｎＭＢＳざ有
組成物を、もう１詳（対照群）はブランク組成物を注射
した。同様に他の２詳は／ｉｎ中骨上部分の皮下（ＳＱ
　）にＺｎＭＢＳ　＠有組成物又はブランク組成ｖ！Ｅ
を注射した。

乎吻孔生圧に対する累積最小自乗法平均（予備処理孔収
址に対し共変量で調整し友）は表１に示す。この表では
礼生産は乳Ｋｇ／日で表わされる。

表１に示すように本発明の有利に投与され、た組成物の
１回の１Ｍ又はＳＱ圧射は非常に高い統計的有音レベル
で乳生産に急速かつ姑長する改良を共する。

血液試料を工水発明による投与を行なわない、通常牛の
循環系によまれる弔ソマトトロピンを分析した。放射−
免疫分析（ＲＩＡ　）による代表的分析を１表２に示し
、この表では血漿中の牛ソマトトロピン纜度はｎｈ＾ｌ
で表わされる。

表　　　２ ０　　　　　６．７　　　５．９　　　５．１　　　　
５．７１　６．５８．４４．６８．７ ２　７．８９．Ｌｌ　４．３１１．１ ５　７．１９．１４．０１Ｌ］、１ ４　　　　　７．５　　１０．１　　　４．５　　　　
９．８５　８．１１２．０６．１１１．２ ６　　ｄ、１１８．２３．９１１．９ ７　８．０２１．２３．６１２，９ ９　７．９２１．３６．６１６．５ １１　６．８１８．２５．２１６．６ １６７．６１６．７５．２１７．５ １５　７．０１６．２５．４１５．７ １７　　　　　５．６　　１２．９　　．４．１　　　
１１．７１９５゜４１３．８４．４１２．０ ２１　６、Ｌｌ　１１．２４．６１０．０２６　５．７
１０．６５．３９．５ ２５　５．６９．８４．４９．０ ２７　５．８８．４４．９８．５ ２９　　　　　３．５　　　６．８　　　１．１　　　
　７．４６１　３．８５．９２．５６．７ 例　　４ 本発明は本発明の組成物に谷、ｔｆｆｌ物質ビ使用して
ポリペプチド（’　ＭＢＳ　）の遊離延長に対する本−
！ｄ明組成物の動物における効能を例示する。

本例において、ＺｎＭＢＳ＠成物昏工次の成分：生物相
容性油：ゴマ油又は落化生油 υＬ水　和剤：油＋ＡＩＭＳの６％又は５チのＡＩＭＳ ポリペプチド含ＩＩ【：全組成物の２０％、６０％又は
４０％のＺｎＭＢＳ の組４曾せを使用して本質的に列６で開示したように処
方した。ＡＩＭＳを油に分散した。１５５°まで加熱し
、１５分間１５５°に保持した鏝、分散物は２５°に冷
却し、デル比重を形成させた。ＺｎＭＢＳを硝加し、茜
Ｉｊｇ断ミキテー（ポリトロン　ホモジナイザー）によ
り分散し、ＺｎＭＢＳのゲル化油テスペンゾヨンを形成
させた。テスペンションは１８ｒ−りの風下注射針を有
するツベルクリン庄村器に装塙した。

表６の組成物は８匹の兄投抑制したスプンーグーｒ−リ
ー（ＩＦＳ−Ｄ　）酸ラットの１６＃に背面のＩＭ甲オ
上の部位に皮下注射することにより投与したＯ 表　　　６ 注射組成物 用椴、拝ト【　　　　　　　　　　　　　　　　重量比
２　　２０Ｕ　　　ゴマ萌　　　　３　　　　　２０　
　　　　Ｂ、６６１６０　　　　ゴマ油　　　　５　　
　　３０　　　１４．６４　　１００　　　ゴマ萌　　
　　６　　　　　４０　　　　２２．２５２００　　　
　ゴマ油　　　　５　　　　燕　　　　　−６２００ゴ
マ油　　　　５　　　　２０　　　５．０７　１６０　
　　ゴマ油　　　　５　　　　６０　　　　８．６８ｉ
ｕｕ　　　　ゴマγ出　　　　５　　　　４Ｌｌ　　　
　１５．３９２００　　　　浩花生油　　　３　　　　
無　　　　−ＩＬＩ　　　２００　　　　浴比主油　　
　３　　　　２０　　　　８．３１１　　　１６０　　
　　ｉ着化生油　　　５　　　　６０１４．６１２　　
　　１ＪＩＪ　　　　　ｌ各４４己庄ｌ出　　　　３　
　　　　　４０　　　　　２２．２１３　　　２００　
　　　浴比主油　　　５　　　　燕　　　　　−１４２
００ｆ８花生油　　　５　　　　２０　　　　５．０１
５　　１６Ｌｌ　　　　浴比主油　　　５　　　　６０
　　　　　Ｂ、６１６　１ＵＯ浴比主油　　　５　　　
　４０　　　１５．５ｆＯＪ　　　ｉ出＋　ＡＩＭＳ　
　のＭ　ｎ’ｃ　４４血液試料は十ツマトドａビンに対
しＲＩＡにより分析した。表４の分ゼｒは血漿のｎｐ／
ｒｒｔｌである。これらの血漿レベルは０日（注射日）
の注射前に採取した血液試料に対し表４に示す。列４〜
７のラットに対するいくつかの基１！Ａ−測定値は列６
の牝牛に対するいくつかの基準＋％および遊離ポリペプ
チド６（１１定置より商い。これば一部を工通常のソマ
トトロピンレベルの棟間差によるものであり、一部（・
１例３のＲＩＡが一層正Ｉｌｆであったためである。

同　　５ 本しリは抗水和剤として他の脂妨ポアルミニウム塩を使
用してポリペプチド（ＵＳＳ　）の遊離延長に対する本
発明組成物の効能を例示する。これらの組成物でシエ、
モノラウリン虐アルミニウム（ＡＩＭＬ）およびモノパ
ルミチン酸アルミニウム（ＡＩＭＰ　）ｉ抗水和剤とし
てゴマ油および洛化生油と共に利用し友。

不同ではＡｔＭＬ又はＡＩＭＰを６チ言むゲル比重を本
質的にＭＪ　４におけるようにコ授遺した。ＺｎＭＢＳ
は全組成１勿の６Ｕ裂濃度でデル比重に懸７蜀し７辷（
ＺｎＭＢＳ対ＡＩＭＬ又はＡＩＭＰの重猷比１４．３　
）　、谷組成物は表５に示す用量で１群の８頭のＩＦＳ
−Ｄラットに注射した。

表　　５ 用献ｄ趣　　　　　　　抗水和剤 旺　ミクロ！　　　　油 １７　　　　ｉ６ｏ　　　　ゴマ油　　　　　ＡＩＭＬ
１８　　　１６０　　　　ゴマ油　　　　　ＡＩＭＰ１
９　　　１３０　　　　　落花生油　　　　Ａ　Ｉ　Ｍ
Ｌ２ＬＪ　　　　　　　１６０　　　　　　　酷イ乞生
ｒ山　　　　　　　ＡＩＭＰ注射段の指示日にラットか
ら採取した血液試料の分析（裏表６に示す牛ソマトトロ
ピンの娘度であった。この表ではＯＨ麦の絖４昏工分析
に対する基準線である。

表　　６ １７　　９　４６１　１４６１７２　　４’７’　　　
６Ｌ１１１：ｌ　　１０　６６２　２２９　２７７　　
５８　　６６飼　６ 本例（ニオリーブ油又はコーン旧を利用してポリペプチ
ド（ＭＢＳ　）の遊離延長に対する本つ６明組成物の効
能を例示する。

不向では、ＡＩＭＳ＋油を規準にして６矛Ａ１．ｓを利
用し本質的に列４におけるようにケ９ル比重′ｆｒ：ｄ
造した。６０％又Ｖ工４０φＺｎＭＢＳのテスペンゾヨ
ンを表７に示す用量で８頭のＩＦＳ−Ｄラットの２群に
注射し／ヒ。

表　　　７ 用量、４継、　　　　　　　　　　　　重献比２１　　
　　１Ｌ）０　　　オリーブ油　　４０　　　　２２．
２２２　　　　１３０　　　コーン油　　　５０　　　
　１４．３注射後指示日にラットから採取した皿板試料
０公訂は表８にホす＋ソマトトロピン濃度となった。

この表℃０日後の読みは分有に対する基準■ばである。

表　　　８ 四　　７ 本則は落花生油に約１０％のポリペプチド、すなわちＭ
ＢＳおよびＺｎＭＢＳを含む本発明組成物を例示する。

本しリはポリペブチ１の延長効果は金属と結合するポリ
ペブチ１？使用することにより、そして抗水木口剤の使
用により増強できることをさらに例示する。表９に示す
注射用組成物は本質的に飼４におけるようにａ造した。

表　　　９ ３０　　　　ＭＢＳ　　　　　　　ＩＬ］　　　　　　
落花生油　　　−３ｉ　　　　ＺｎＭＢＳ　　　　　　
１０　　　　　　落花生油　　　−６２ＭＢＳ　　　　
　　　１０　　　　　　落花生油　　　１６６　　　Ｚ
ｎＭＢＳ　　　　　　１０　　　　　　ｄｒ花生佃　　
　１ｆａ）　　　　〆出　＋　ＡＩＭＳ　　（Ｄ　ｉ　
　を方１４匹各組成物は６００ミクロｌの同財で８頭の
ＩＦＳ−Ｄラットの１群に皮下注射した。注射後指水目
にラットから採取した血液試料の分析は表１０に示す血
漿のｔＩｉを示した。この表では０日の読みは分ダｒに
対する基１ヘヘ線である。

表　　１０ ６ｕ１４　１６５０　３７５　１４！：ｉ　　７５　５
０　２０６１　１５　１８（］（］　　３１１Ｊ　　２
４０　２υ０４υ　２υ６６１８　　６２（Ｊ　　３５
０　６５０　２８Ｌｌ　　１７５　１２５詳６０および
６１に対する結果の比軟は結合多＋１ｆｆｉ雀属の圧用
により少なくとも７日間ＭＢＳの遊離の延長謂加を例示
する。群６２および６６に対する結果の比軟はＭ１３Ｓ
がこれらの多価合（Ａと結合する場合、抗水和剤の使用
によりＭＢＳの遊離の延長項加をレリ示する。

列　８ 本例は欠の各油：ゴマ油、落花生油、コーン油、オリー
ブ油、ベニバナ油　４夷油、パーム油＼ナタネ油および
大豆油に抗水和剤をきまず、１０％の牛ソマトトロピン
をきむ本発明組成物を例示する。別別の各市を次の温度
＝４°、２５°、５０°、７５°、１００し、および１
２５°に保持する。ＺｎＭＢＳは一度が１０％に達する
まで列２におけるよ、５に６油に分散し磨砕する。磨砕
はソマトトロピンが１５ミクロンより大きくない中間の
粒径を有するＬ′″Ｃ：継続する。＠組成物は０．１１
ｄ１秒より大きい注射能力を七゛する。

１ンＩｌ　　９ 本例はソマトトロピンの隙加前に、ＡＩＭＳを油＋ＡＩ
Ｍ３規桑で５％の１度に各市に分散させることを除いて
レリ８におけるように製造した本発明組成物を例示する
。これらの組成物はｏ、ｉｍｌ／抄より大きい注射能力
を有する。

＋ｔＩｌｉ。

本例はソマトトロピンの隙加を組成物が４０％の生ソマ
トトロピントロビンを含むまで１迷伏することを除いて
例８におけるように製造した本発明組成物を例示する。

分散および碧伜はソマトトロピンが１５ミクロンより大
きくない中間粒径をＭするまでｈ迷読する。これらの１
且成ｉ勿は０．０３ｍｇ／砂より大きい注射能力を有す
る。

列１１ 本）ンりはソマトトロピンのＴ：ｒＨ／ＩＩ　ＭｔＴ　
Ｋ　ＡＩＭＳ　乞油十ＡＩＪＪＳ硯錫℃５％一度に各市
に分散することを除いて、列１０におけるように、Ａ遺
した本発明組成物を洞ポする。これらの組成物はＩＪ、
０５ｍ１／抄より大７ざい圧射能カケ有する。

例１２ 本例は欠の各拙：ゴマ油、コーン油、オリーブ油、ベニ
バナ油、綱欠油、パーム油、ナタネ油および大豆油に１
０％の十ソマトトロピントロビンをきむ本発明組成物を
レリ示すろ◇各市は１６０°に茄熱し、ＡＬＭＳのｒＬ
解に、４するため攪拌する。１斧ＡＩＭＳが俗解すると
、６油は２５″′に市却する。ＺｎＭＢＳは仏之度が１
０％に建し、中間粒住が１５ミクロン未イ１．４の犬さ
ざに（１；４少ず；Ｓまで、ド・１２におけるように冷
却油に分散し、臂砕する。谷、、、Ｕ成’ＩＪ　ｉ裏０
．１１ａｔ／秒より大きい注射能力を有する。

し１１１３ 水利（エソマドトロピンのｔ負加χ各組成物が４０％の
ソマトトロピン？よむまで４伏することを除＾て〜例１
２におけるように一遺した不元明組成物を例示する。、
組成物はソマトトロピンが１５ミクロンより大きくない
中間粒径を有するまで例２におけるように台枠する。各
組成物は０．０５ｍ１／抄より大きい注射能力を有する
。

列１４ 本例は油＋ＡＩＭＳ規準で５チ虚度に油に溶）惇したＡ
ＩＭＳ　ｆｒ：有する久の油：ゴマ油、落花生油、コー
ン油、ベニバナ油、４４実油、パーム油、ナタネ柚およ
び大豆油に１０％の牛ソマトトロピンヲキむ水元ｕＡ組
成物を例示する。谷Ｃ出は１６０°に加熱し１ＡＩＭＳ
の溶解に食する几めに攪拌する。

＾１Ｍｓが＃ｊ＃すると香油は２５°に冷即する。仄に
ＺｎＭＢＳは油中の農度が１０％になるまで例２におけ
るように冷却油に分赦し磨砕する。分欣物はソマトトロ
ピンが１５ミクロンより大きくない中間粒径を４１すう
までさらに妨砕する。各組成物はＯＡｍｉ／１少より大
きい正長打能力を１」する。

同１５ 本１５′ＩＪ′１：を工４２チの午ソマトトロピンを含
む不発例題す見４勿Ｑ工６Ｊｂに二（グミ為４２ｉのソ
マトトロピンをざむよで列１４の組成物にソマトトロピ
ンり姫加ｋ　ｉｉ’＋Ｉ；ｉｙ元することにより製ｉ４
する。内油を遠沈、ＩＬ４として＋ｒｌに侍しながらソ
マトトロピン９工１５ミクロンより大きくない中間位径
を・汀するまで例２（・［おけるように分散し、磨砕す
る。各組成物は０．０６広Ｃ／抄より大きい注射能力を
有する。

ｉ／１１６ 水利は人の１洩の汎水和剤：ゾステアリンｆ夜アルミニ
クム又はトリステアリン酸アルミニウム；モノ−、シー
又はトリパルミチン酸アルミニウム又は七ノー、シー又
はトリラウリン戚アルミニウム：モノ−又はゾヌテアリ
ン酸マグネシウム、モノ−又はジ−ラウリン酸マグネシ
ウム、又はモノ−又はソバルミチン酸マグネシウム；モ
ノ−又はジステアリン＋４９．カルシウム、ｅノー又は
ゾラウリン＋ｌｌルシウム又は七ノー又はシバルミチン
酸カルシウムをＡＩＭＳと置換することを除いて列９で
使用した曲と同じ油に２０％の十ノマトトロピンを含む
本％明Ａａ成物を例示する。抗水和剤ｔエソマドトロピ
ンの振力Ｕ前に油に添加する。ＺｎＭＢＳ　＆まその濃
度が２０蒼になるまで飼２におけるように添加する。分
散およびｊ４砕はソマトトロピンが１５ミクロンより大
きくない中間粒径を有するまで継゛枕する１、各組成物
は０．０５ｍ１／抄より大きい注射１財力を有する。

汐１１１７ 本図はび１２υと同じ油に別の爵夏の＋ソマトトロピン
を宮む本発明ホ■成物を例示する。列２０ではソマトト
ロピンの１１２加はその４度が２５％、３０係又は６５
％となるまでＡ連続することを除＾°で例１６で使用さ
れる１重項の油を使用する。分散および崎口゛トはソマ
トトロピンが１５ミクロンより大きくない中間粒径な有
するまで継続する。各岨島、物は０．０３　ｍｌ　／抄
より大きい注射能力な■する。

例１８ 使用した牛ソマトトロピンは化学的に未結合形であるか
、又はナトリウム又はカリウムカチオンと化ｆ箕的にＡ
吉合し一ζいろ揚台、＋２ＩＩ８〜１７のＪ古来と実質
的に同じ結果が得られる。

ド１１１９ 他の牛ソマトトロピン、「すえは次のよう・ｒつ°ミノ
［炭配列： を有するものを使用ずろＪり舎、利８〜１８の結果と人
質的に同じ結果が得られる。

例８〜１８の処理で豚ソマトトロピントロピンｙ牛ソマ
トトロピンの代りに使用する場合、牛および豚ソマトト
ロピンの相似性により実質的に同じ結果が得られる。

本発明の特別の態様を記載したが当業者にはこれらの各
種１φ正は本発明の真の４＃神および範囲から逸脱する
ことなくなし５ることは明らかであろう。従って、特許
請求の範囲は完全な元明概念内のすべての修正を網羅す
るつもりである。

Claims (41)

【特許請求の範囲】
1. （１）少なくとも約１０重量％の生物学的に活性のポリ
   ペプチドを含む実質的に非−水性組成物であつて、この
   組成物の連続相として生物相容性の油を含むことを特徴
   とする、上記組成物。
2. （２）ポリペプチドは微水溶性である、特許請求の範囲
   第１項記載の組成物。
3. （３）ポリペプチドはソマトトロピンである、特許請求
   の範囲第２項記載の組成物。
4. （４）ポリペプチドは非−毒性金属と化学的に結合する
   、特許請求の範囲第２項記載の組成物。
5. （５）少なくとも約１５重量％の牛ソマトトロピンを含
   む、特許請求の範囲第１項記載の組成物。
6. （６）少なくとも約１重量％の非−毒性抗水和剤を含み
   、ポリペプチドは抗水和剤に対し少なくとも約１の重量
   比で組成物に含む、特許請求の範囲第１項記載の組成物
   。
7. （７）抗水和剤は主としてＣ＿８＿〜＿２＿２脂肪酸化
   合物である、特許請求の範囲第６項記載の組成物。
8. （８）ポリペプチドはソマトトロピンである、特許請求
   の範囲第６項記載の組成物。
9. （９）ソマトトロピンは非−毒性多価金属と化学的に結
   合する、特許請求の範囲第８項記載の組成物。
10. （１０）少なくとも約０．０３ｍｌ／秒の注射能力を有
    する、特許請求の範囲第９項記載の組成物。
11. （１１）ポリペプチドは午ソマトトロピンである、特許
    請求の範囲第６項記載の組成物。
12. （１２）抗水和剤は主としてＣ＿８＿〜＿２＿２脂肪酸
    のアルミニウム塩である、特許請求の範囲第１１項記載
    の組成物。
13. （１３）ソマトトロピンは主として亜鉛塩の形で含む、
    特許請求の範囲第１１項記載の組成物。
14. （１４）ポリペプチドは主として非−毒性金属塩の形で
    含む、特許請求の範囲第１項記載の組成物。
15. （１５）ポリペプチドは微水溶性である、特許請求の範
    囲第１４項記載の組成物。
16. （１６）ポリペプチドはソマトトロピンである、特許請
    求の範囲第１５項記載の組成物。
17. （１７）金属は多価である、特許請求の範囲第１４項記
    載の組成物。
18. （１８）少なくとも約１５重量％のソマトトロピン亜鉛
    塩を含む、特許請求の範囲第１７項記載の組成物。
19. （１９）ソマトトロピンは牛のものである、特許請求の
    範囲第１８項記載の組成物。
20. （２０）乳汁分泌牝牛の筋肉内又は皮下に２．５ｍｌの
    容量で注射する場合少なくとも約７日間、少なくとも約
    １２ｎｇ／ｍｌの平均血漿ソマトトロピン濃度を牝牛に
    維持する、特許請求の範囲第１９項記載の組成物。
21. （２１）塩は約５ミクロンより大きくない中間粒子容積
    直径を有する、特許請求の範囲第１９項記載の組成物。
22. （２２）少なくとも約３００ｍｇのソマトトロピンを含
    有する、特許請求の範囲第１７項記載の組成物の単位用
    量。
23. （２３）組成物の水和を遅延させる有効量のＣ＿８＿〜
    ＿２＿２脂肪酸化合物を含む、特許請求の範囲第１５項
    記載の組成物。
24. （２４）少なくとも約１５重量％の牛ソマトトロピンを
    含む、特許請求の範囲第２３項記載の組成物。
25. （２５）ソマトトロピンは主として亜鉛、ナトリウム又
    はカリウム塩の形で含む、特許請求の範囲第２４項記載
    の組成物。
26. （２６）動物の循環系に生物学的に活性のポリペプチド
    を長期間にわたり遊離させる方法において、特許請求の
    範囲第１項記載の組成物を動物に注射することを特徴と
    する、上記方法。
27. （２７）実質的に非−水性組成物であつて、亜鉛と化学
    的に結合した約１５〜約４０重量％の牛ソマトトロピン
    、約２〜約５重量％のモノステアリン酸アルミニウム又
    はジステアリン酸アルミニウム、この組成物の連続相と
    して生物相容性植物油を含み、このソマトトロピンは約
    ５ミクロンより大きくない中間粒子容積直径を有し、か
    つステアレートに対し少なくとも約３の重量比で含むこ
    とを特徴とする、上記組成物。
28. （２８）非−毒性多価金属と化学的に結合したソマトト
    ロピン。
29. （２９）金属はこの金属と低水溶性塩を形成する他のア
    ニオンと化学的に実質的割合で結合しない、特許請求の
    範囲第２８項記載のソマトトロピン。
30. （３０）金属は主として亜鉛である、特許請求の範囲第
    ２８項記載のソマトトロピン。
31. （３１）ソマトトロピンの約０．３〜約２重量％の亜鉛
    と化学的に結合した、特許請求の範囲第２８項記載のソ
    マトトロピン。
32. （３２）特許請求の範囲第３１項記載の牛ソマトトロピ
    ン。
33. （３３）水溶液に非−毒性多価金属の水溶性塩を添加す
    ることによりこの溶液からソマトトロピンを沈澱させる
    ことを特徴とする方法。
34. （３４）金属は亜鉛である、特許請求の範囲第３３項記
    載の方法。
35. （３５）ソマトトロピンは牛のものである、特許請求の
    範囲第３４項記載の方法。
36. （３６）塩は塩化亜鉛である、特許請求の範囲第３５項
    記載の方法。
37. （３７）非−水性ソマトトロピン組成物の製造方法にお
    いて、ソマトトロピンの微粉細、分離粒子を、油が生成
    分散体の連続相を形成し、この分散体は少なくとも約１
    ０重量％のソマトトロピンを含むような割合で、そして
    生成分散体は実質的に非−水性であり、生成分散体中の
    ソマトトロピンは約１５ミクロンより大きくない中間粒
    子直径を有するような条件下で、生物相容性油に分散し
    、この分散はソマトトロピンの所望生物学的活性と相容
    性の温度で行なうことを特徴とする、上記製造方法。
38. （３８）抗水和剤は、油および抗水和剤の約１〜約５重
    量％の範囲で油中に含み、抗水和剤は８〜２２個の炭素
    原子を有する脂肪酸の金属塩を含み、この金属はアルミ
    ニウム、カルシウムおよびマグネシウムから成る群から
    選択する、特許請求の範囲第３７項記載の製造方法。
39. （３９）油はコーン油、落花生油、ゴマ油、オリーブ油
    、パーム油、ベニバナ油、大豆油、綿実油、ナタネ油お
    よびこれらの混合物から成る群から選択し、脂肪酸はス
    テアリン酸、パルミチン酸、ラウリン酸およびこれらの
    混合物から成る群から選択する、特許請求の範囲第３８
    項記載の製造方法。
40. （４０）分散は約４〜約１２５℃で行なう、特許請求の
    範囲第３７項記載の製造方法。
41. （４１）ソマトトロピンは牛又は豚のものである、特許
    請求の範囲第３７項記載の製造方法。