JPS5876763A - 抗原の存在を検出する方法及びこれに用いる装置 - Google Patents

抗原の存在を検出する方法及びこれに用いる装置

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JPS5876763A JP57178619A JP17861982A JPS5876763A JP S5876763 A JPS5876763 A JP S5876763A JP 57178619 A JP57178619 A JP 57178619A JP 17861982 A JP17861982 A JP 17861982A JP S5876763 A JPS5876763 A JP S5876763A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 する方法及びこれに用いる装置に関する。
免疫反応による診断試験は体液抗原、ホルモン、病原体
及び薄情抗体の検出に広く用いられている。
免疫検定法（イムノアッセイ）は一般に大別して次の２
つの部門に分頷される。第一には、抗体−抗原沈澱試験
例えば放射免疫拡散、血球凝集反応及び被覆したラブツ
クス粒子の凝集反応がちる。
第二には、標識した試薬試験例えば放射線免疫検定（ラ
ジオイムノアッセイ）及び酵素結合免疫検定がある。
沈澱型の免疫検定試駆は手作業で実施し得るという利点
を有し、肉眼で読める使い捨て用具中で工業的に用いら
れ、格別の器具を要しない。沈澱型免疫検定法からの解
読は供試試料又は競合抗原の一連の既知希釈法の各々で
凝集反応の有無として通常表わされる。沈澱型試駆の欠
点は、該試験では標識した試薬検定法よりも感作性がず
っと低く、時間のか＼ろ反応工程を必要とし、目、つ沈
澱反応の肉眼による識別に主観酌か錯誤を受は易いとい
うことであＺ、。
標識［７た試薬による免疫イに定（イムノアッセイ）は
定量的で高部に感作性であるが、それでもなお成る欠点
を有する。放射靜免疫検定で１７Ｉ放射性追跡子（トレ
ーサー）を用いるのでγ線の検出砦貿を必要とする。放
射性１Ｂ跡子は貯蔵寿命が短かく、技術者に健康障害を
生起１５、法的規制を受けている。酵素と結合し、た（
　ｅｎｚｙｍｅ−１ｉｎｋｅｄ　’）免疫吸収剤（ａｂ
ｓｏｒｂａｎｔ　）検定（ＥＬＩＳＡ）でけＷ　’Ａ＜
でｔ）ＩＱした試票ｆ甲いる。この酵素は、容易に泗］
定［７得る（例オは着色により）Ｂ＝成物を生ずる物質
との反応により検出する。ＥＩｊＳＡ　法では放射性物
質を必扱とせず、貯蔵寿命の長い試薬を用いる。
ＥＬＴＳＡ　検定法はプラスチック製液溜めノ底部の如
き固相支持体に対照試薬を結合することから始める。供
試流体を酵素で標識Ｌ７た試薬と混合し、該流体を前記
の結合対照試薬と反応させる。多数の希釈、反応及び洗
浄操作（１４回程の多数の操作）を介して、結合試薬及
び遊離試薬が分離され、着色反応を開始する。種々の逓
澱希釈法で形成した着色の濃さは定量的な目安を与える
。標準的なＥＬＩＳＡ　法は実施するのに４〜１２時間
要するのでＦＩＬ　Ｉ　ＳＡ　法の主たる欠点は多数の
希釈、反応及び洗浄操作であり、これは時間がか＼り錯
誤金受は易い。
本発明の装置は前記した型式の検定に伴なう多数の支障
を克服するのに用いるものである。詳しく言えば、本発
明の装置を用いることにより希釈操作や洗浄操作を必要
とせず反応操作が短期間の改良ｇＬＩｓＡ　ｆが得られ
る。この本発明による検定は、供試流体に直接暴露【−
た時に着色反応を形成する乾燥層状試片の形である。／
′−の試片は定量化に必要な希釈操作を自動的に実施し
、遊離抗体から結合抗体を分離する。着色反応は肉眼で
読み取ることができ、あるいは分光光度計の如き器具を
用いて読み取り得る。更には、本発明の装置を細片形に
成形でき且つ薬剤又は尿中のホルモンの如き抗原を迅速
に検出する浸漬棒として用い得る。
本発明の装置の特定の応用５１１は救急家での薬剤過量
を迅速に検出するものであし、あるいは家庭での妊娠試
駆として用いるものである。
従って本発明によると、第１の帯域と第２の帯域とを収
容してなる、抗原の存在を検出する装置であって、前記
の第１の帯域は抗原とこの抗原と免疫学的に反応し得る
酵素結合抗体とを含有しており、前記の抗体はこれが前
記の第１の帯域を通過する抗原と反応した時には前記の
第１の帯域から取出されるがか＼る抗原の不在下では前
記の第１の帯域から取出されないように前記第１の帯域
に配置されており；前記の第２の帯域は前記の酵素結合
抗体と反応して該抗体の存在を示す着色反応を生じうる
物質を含有していることを特徴とする抗原の存在を検出
する装置が提供される。
別の要旨によると、本発明は生物流体中の抗原の存在を
検出する方法において、第１の帯域と第２の帯域とを有
する装置に対１〜で抗原の存在を試験すべを流体を接触
させ、その際前記の第１の帯域は抗原とこの抗原と免疫
学的に反応し得る酵素結合抗体とを含有しており、前記
の抗体はこれが前記の第１の帯域を通過する抗原と反応
し、た時には前記の第１の帯域から取出されるがか＼る
抗原の不在下では該帯域から取出されないように該帯域
に配置されており、前記の第２の帯域は前記の酵素結合
抗体と反応して該抗体の存在を示す着色反応を生じうる
物質を含有しているものとし；前記の流体を前記装置に
浸透させ； 前記の第２の帯域における着色変化の有無を観察して試
験した流体中の抗原の有無を検出することを特徴とする
、生物流体中の抗原の存在を検出する方法に関する。
本発明を図面を参照して説明する。
第１図は本発明の装置の図解図であシ、該装置１０は３
つの相異なる層１２．１４及び１６で構成される。層１
２及び１４は第１の帯域１８を成す。ｒＷ１１６は第２
の帯域を成す。該装置１０は図示の如く支持部材２２上
に配置しである。層１２は多孔質材料から形成され、そ
の中に可溶性の酵素結合抗体２４が分散している。層１
４はまた多孔質材料から形成され、該羽村に抗原２６が
結合している。層１６も同様に多孔質材料から形成され
、しかも結合１−た着色用試薬１７即ち酵素と反応する
と発色する物質を含有する。
第２図は第１図の装置を用いて本発明の方法を実施した
際の図解図である。詳１〜く言えば、雁２８で一般に確
認される流体を層１２の表面３０に施用する。流体が検
査紙（ｍａｔｒｉｘ　）　　を通って拡散するにつれて
、遊離抗原６２は酵素結合抗体２４と接触１−且つ結合
する。短期間の反応（１ｎｃｕｂａ−ｊｉｏｎ　）　　
後に、認識部位が飽和された酵素結合抗体は第１の帯域
１８を通って自由に拡散し、第２の帯域２０（即ち層１
６）に移行し、そこで該酵素は着色用試薬と反応して特
色ある着色を生じ、これは施用した流体中に抗原が存在
することを示している。
第３図は第１図の装置を用いて本発明の方法を実施する
が供試流体が抗原を欠いている時には何が生じるかを示
す図解図である。詳Ｌ　＜言えｄ′、一般に３４で示［
７た流体を層１２０表面３０に施用する。流体が検査紙
の層１２を通って拡散するにつれて、酵素結合抗体２４
は溶解化して層１４に移動し、そこで該抗体２４は結合
抗原と係合しこれに結合される。従って酵素結合抗体は
層１６（第２の帯域２０）中の着色用試薬１７に到達せ
ず、着色変化は観察されない。勿論これは抗原が流体５
４中に存在（−々いととな示している。
第４図は本発明の装置即ち検査紙１１を２つの相異なる
層３６及び３８で形成した本発明の別の具体図を示す。
この場合には、層６６は第１の帯域４０であり該帯域に
は酵素結合抗体４６と結合している結合対照抗原（ｂｏ
ｕｎｄ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ａｎｔｉ−ｇｅｎ　）　
４４を有する。層３８は第２の帯域４２であυ着色用試
薬１７を含有している。
第５図に示す如く、供試流体４８が結合抗原４４と競合
する充分な遊離抗原５０を含有している時には、酵素結
合抗体４６は移動し、帯域４２に下降拡散して着色反応
体５２を生ずる。
逆に第６図に示す如く、供試流体５４が抗原を欠如して
いる時には、抗原同志の競合は生起せず従って酵素結合
抗体は第２の帯域４２に拡散せず着色は生じない。
本発明は酵素で標識した抗体上の一定個数の認識部位に
対１〜て結合抗原と遊離抗原との間の競合の原理に基づ
く。ＥＬＩＳＡ　型の試験を実施するのが改良し、た方
法である。免疫検定の試薬を多数の帯域を有する試片に
含浸させる。試験すべき液体試料を試片に受動的に拡散
させ、結合抗原と遊１ｉｆｔ抗原とは拡散中に自動的に
分離する。この分離は、酵素基質を収容する第２の帯域
とは別個の第１の帯域中に固相の対照抗原を固定させる
ことにより行７ｒう。可溶性の酵素結合抗体は認識部位
を有１〜、該抗体を供試試料と混合させ前記層に拡散さ
せる。
供試試料中の可溶性抗原は、酵素結合抗体と結合するに
際して固定し７た対照抗原と競合する。それ故、酵素基
質を収容する第２の帯域に最終的に到達する酵素結合抗
体のｂｏは試料中の試験される抗原の濃厚に応じて決ま
る。試片中の酵素基質は酵素と反応１−で着色反応を生
ずる。
定量化を与えるには、試片を多数の別個の領域で構成し
、各々が種々の量の固定しまた対照抗原を収容する。そ
れ故試片上の着色変化の位置は供試試料中の抗原の濃度
に応じて決まる。
前記の如く、本発明の装置は、結合抗原と酵素結合特異
抗体とを収容する第１の帯域と着色用試薬即ち基質を収
容する第２の帯域とを有してなる。
酵素結合抗体は、これらが第１の帯域に入来する又は該
帯域を通過する未結合の遊離抗原と反応！−７だ時には
第１の帯域から取り出され得るがか＼る未結合抗原の不
在下では第！の帯域から取り出されないような要領で第
１の帯域に配置される〇本発明の好１Ｌ、い実施法では
、免疫検定装置はサンドウィッチ状の多孔質基材の３層
（第１図参照）である。第１の多孔質層に、酵素と結合
した特異抗体を含浸させる。第２の多孔質層は固定ｌ〜
だ（結合）対照抗原を含有する。前記の抗原は第１の多
孔質層中の抗体により特異的に認識される型式の抗原で
ある。第３の層は抗体に結合した酵素と反応する着色用
基質を含有する。免疫検定装置の操作は次の如くである
（第２図及び第３図参照）。
試６０十べき抗原を含有する流体試料を汗１の層と接触
させておく。試料中の遊離抗原は妃２の層に拡散し１次
いで詑３の層に拡散する。液体試料中の遊離抗原れ＋、
ｍｉ結合抗体と結合するに際し、て第２層中の開穿しま
た結合対照抗原と競合すＺ・。酵素結合抗体が遊離抗原
と結合するガらば、坑３の府に自由に拡散１−尤色反応
を生じる。流体試料が抗原を含有し、々い々らば、全て
の酵素結合抗体は自由な結合個所を有１−１、第２層中
の固定した抗原と虻合するものである。第２層中の固定
１．た抗原と結合する酵素結合抗体はこの場合第３の層
に拡散せず、着色反応は生じない。分ｗｌＩ−７だ着色
用基質の量の差異（及び生じた着色の濃さ）は供試試オ
・ｉ中の抗原の芥に比例する。陀１の層中の酵素で標識
１〜だ抗体の断力用°に対【７て、本発明の装置の広開
は第２の層中に存在する対照抗原の新によって決定され
る。例えに、試験装置は一連のサンドイッチ複合体を含
有１５、各々の複合体が種々の量の対照抗原を有する。
一連の対照抗原濃度を帥もって決定し、て、測定づれる
供試溶液（（適当な成る範囲の感度？　ｇｔ　ａする。
ＥＬＩＳＡ　試片では陽性ｃ／）着色反応は試験される
抗原の存在を示していることを強調すべきである。
本発明の装置ｉｔを形成するのに用いる材料は技術的に
周知である。しかしながら、実際にはニトロセ／ｌ’ロ
ース又はジアゾペンノルオキジメチル（ＤＲＭ　）紙の
如き混成線維から好丑１−．い装置の帯域又は層を形成
するのが望１１〜いことが見出された。
ニトロセルロース紙は蛋白質に直接結合［１２、抗原を
固定するのに有用であることが示された。ＤＩ１Ｍ検査
紙は共有結合によりジアゾニウム基にＤＮＡ、ＲＮＡ及
び蛋白質を結合させる０史１′は′リアクリルアミド０
、アガロース又はコラ−ダンの如き多孔質ｒルも利用ｌ
〜得る。抗原をｒルの細孔内に捕捉で六又は抗原は配位
子のアミノ基及び検介紙上のカルビキゾル基を介１−１
て多孔質ケ°ルに架橋結合し７得る。プた、セルロース
又はグラスチック繊維基村内に捕捉された結合配位子を
含有する粒子又はビーズをも用い得る。満足な例は直径
５〜ｌＯミク占ンの２リアクリルアミドビーズであり、
ペプチド結合を介１．てビーズの表Ｗ１）に抗原を結合
させたものである。該ビーズは１〜２ミクロンの細孔寸
法を有するセルロース　フィルター基材内に捕捉さノす
る。
適当な基質即ち着色用試薬は技術的に周知である。この
点に関して、多数の和１々の型式のｆ＃製酵累がＥＬＩ
ＳＡ　の如きイムノアッセイに用いる普通標識さね、た
試薬である。これらの試薬には西洋ワサビのペルオキシ
ダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ及びβ−ガラクトシ
ダーゼかめる、しかＬながら、本発明は抗体又は抗原を
標識するのにこれらの酵素の使用ＶＣは限定されない。
抗体を標識するのに用いた酵素は着色剤と直接又は間接
的に作用することにより試験装置の第２の帯域内で発色
１〜得る。例えはジアミノベンジジン又Ｕｐ−ニトロフ
ェニルホスフェートの如き技術的ニ周知ノ基質は過酸化
水素の存在下に西洋ワサビのペルオキシダーゼと反応し
て褐色又は黒色を牛する。本発明の１形式では本発明装
置の使用中に過酸化水累金外部から加える。別法として
、凍結乾燥した着色用帯域は結合グルコースオキシダー
ゼヲ含有でき、第１の帯域はグルコースを含有できる。
本発明の装置を用いる際には、第１の帯域中のグルコー
スは第２の帯域中に拡散し、グルコースオキシダーゼと
反応することにより過酸化水素を発生するＯ 抗体に結合し７た酵素は、第２の帯域の透過性を生ずる
如き間接的な手段により第２の帯域中で発色し得る。本
発明に適当と見出されたこの方法の１例は抗体に結合し
た酵素として高度に精製されたコラケ゛ナーゼ（ｃｏｌ
ｌｏｇｅｎａｓｅ　）を用いると七である。この酵素は
コラーゲン（ｃｏｌｌｏｇｅｎ　）　　を小さ々ペプチ
ドに分解する。コラゲナーゼ標識を検出するには、着色
するのに結合する２つの試薬をコラーゲン基材バリヤー
により分離する。コラケ゛ナーゼで標識した抗体の存在
は、コラゲナーゼがコラーゲンバリヤーを分解させ且つ
分離した試薬を混合させしかも着色させるので検出され
る。適当なコラケ゛ナーゼは周知の手段によシ精製した
ヒストリチクス菌から得られるコラケ゛ナーゼであＺ、
。
適当なコラーケ゛ン基材は三重螺旋の（天然１７））Ｖ
又は特質を失なった（ゼラチン）形での生型■コラーｒ
ンにより形成されたコラーゲン遅質である。
次の実施例により本発明の実施を更に説明する。
実施例１ 用いた物質は次の如くである。
ａ）抗原：人間の絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）ｂ）
抗体゛人間のｈＣＧに対するラビットの抗血清Ｃ）抗体
に結合した酵素：西洋ワサビのベルオキ７ダーゼ ｄ）ｌ用酵累基質　ニジアミノベンジジンｅ）多孔質層
を形成する検査紙月相　：ニトロセルロース操作方法 操作１　着色用試薬を含有する層の製造：Ｊワさ０２闘
のニトロセルロース検査紙のノートを幅２０ｎ１長さ１
０ｃｒｎの試片に切断する。該ノートを、蒸留水に溶か
した０、１■／　ｍｔのジアミノベンジジンの溶液に３
０分間浸漬させる。次いで該ノートをドライアイスのペ
レットで被覆することによシ前記シートを凍結させる。
凍結Ｉ−だシートを慣用の凍結乾燥機中で凍結乾燥させ
る。
操作２　抗原含有層の製造； 抗原を５０Ｔ・Ｕ・／ｍＩ！の濃度で燐酸塩緩衝塩水中
に可溶化させ且つ一連の希釈率：　Ｍｌ、ｌ：２．ｌ：
４・Ｉ：３，１：１６．１：３２．Ｍ６４及びｌ：ｌｏ
ｏの如く形成する。
８群のニトロセルロースジートラ各々、後々の希釈率の
抗原溶液中に３０分間４°Ｃで浸漬する。
次いで全てのシートを、燐酸塩緩＠塩水に溶かした生型
血清アルブミンの１％溶液に浸漬させてニトロセルロー
ス上の全ての遊離蛋白質結合部位を飽和させる（　Ｐｒ
ｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、ｏｆ　５ｃｉ−７６４
３５０〜４３５４．１９７９　）。
次いで該シートを前記の如く凍結乾燥させる。
操作３　酵素結合抗体含有層の製造： Ｗｉｌｓｏｎ　及びＮａｋａｎｅ　　の標準的なベリオ
デ−１・法（Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅａｃｅｎｃｅ　
＆　Ｒｅ１ａｔｅｄ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ。
Ｅｌｓｅｖｉｅｒ社ｐ、　２１５〜２’２５．１９１Ｂ
　）によりペルオキシダーゼ酵素を抗体に結合させる。
標準法により該結合体を精製した後に、Ｉ　ｑ　／　ｍ
ｅの濃度でＰＢＳ中に形成する。前記層に含浸すべき酵
素結合抗体の濃度は、１：３２の希釈率での固定抗ｆＭ
Ｌを含有スるニトロセルロースシートの表面に施用した
２０μｔの液滴が固定抗原への全ての抗体の完全な結合
を示すオで酵素結合抗体溶液を希釈することにより測定
する（標準希釈曲線の製造）。この（ｆＡｑの酵素結合
抗体をセルロース吸取紙よりなる材料の試片に浸漬させ
、前記の操作１の如く凍結乾燥させる。
操作４３層サンドウィッチ体の脚端： ｌ　ｃｍ四方の各々凍結乾燥させた層を前記細片から切
１チする。固体支持体は１ｏｃｉＸｌ濯ＸＱ、１ｗ（）
！！さ）の透明なポリカーボネートプラスチック製の細
片でちる。Ｍ色用基質を含有するニトロセルロースの８
個の四角形をラブツクス基剤セメントでプラスチック支
持体に接合させる。これらの四角形の頂部に抗原含有ノ
ートをその聞囲でラフツクス　セメントを用いて接合す
る。８種類の相異なる抗原濃度を用いる。最後に、抗原
含有層の頂部に、酵素結合抗体含有層を接合する。
操作５ 免疫検定を実施するには、１５μｔの供試溶液を頂部層
の表面に施用する。供試溶液は０．１％過酸化水素と共
に燐酸塩緩衝塩水（ｐＴ（７，４）中の標準抗原よりな
る。免疫検定の感度は０．３１Ｕ　のｈＣＧ″′ｒ：あ
り、これは１：３２希釈率の固定抗原で着色反応を示す
。
結果 前記の如く形成１．またＥＬＴＳＡ　試片を標章的々血
球凝集反応法に対する感度について比較する。供試試料
は妊娠していると前もって決定された６人の患者からの
混注した人間の尿である。
１：１　　　　　２．５ＩＵ　　　　　（−１−）　　
　　　　　（＋１１：２　　　　　１．２　　ＩＵ　　
　　　（＋）　　　　　　　（＋１１：４　　　　　　
　０．６　　ＩＵ　　　　　　　（−ト）（−）１：８
　　　　０．３　　ＩＵ　　　　　（ト）　　　　　　
（−）１：１６　　　０．０１　　ＩＵ　　　　（−１
＜−）ＥＬＩＳＡ　試片法の感度は慣用の血球凝集反応
法よりも大きい。
実施例２ 試験 （ａ］３層構造体の第１の層に含浸させた酵素結合抗体
の濃度を種々に変えた際の発色時間を測定する試験。
ｆｂｌ　　人間の肝炎Ｂ抗原（ＨＢＡ）を検出する実用
性を測定する試験。
操作方法： 試片を実施例１と同一の方法により構成する。
第１の層は、次の希釈率：　ｌ／２．１１５．　ｌ１５
０゜１／２２５．　ｌ／６２５．　ｌ／３１２５　のペ
ルオキシダーゼ結合・抗−ＨＢＡを含浸させた凍結乾燥
セルロース基質を含有する。実験＋ａ）では、第２の層
は抗原を含有しない。実験山）では第２の層は５００ナ
ノグラム／ｃｒｎ２　の濃度で結合ＨＢＡを含有する。
第３の層はｈＣＧを検出するのに実施例１の如く製造し
たＤＡＢ基質を含有する。
結果 実験ｆａ）　　供試試料は０．１チの過酸化水嵩を含有
する燐酸塩緩衝塩水で１／１０に希釈した通常の人間の
血清よりなる。
着色反応 １／２　　＠、ＢＮ−ＢＬＫ　同じ　　同シ１１５　　
濃、ＢＮ−ＢＬＫ　同じ　　同じ１１５０　　ＢＮ−Ｂ
ＬＫ　　同じ　　同じ１／２２５　８Ｎ　　　暗、　Ｂ
Ｎ　　　同じ１／６２５　　淡、ＢＮ　　　　　ＢＮ　
　　　　　暗、　ＢＮ１／３１２５　　着色々１．　　
ごく淡い、ＢＮ　　淡い、　ＢＮ但しＢＮ−褐色、ＢＬ
Ｋ＝黒色 結論 第２の層か１ｃｒｎ　　当り５００ナノグラムのＨＢＡ
を含有する時には酵素結合抗体の最適濃度は１／６２５
　である。ＨＢＡｉ検出する実用性は１／６２５での結
合対照抗原に対して遊離抗原が競合して存在することに
より証明される。
実験（ｂ）１ 供試試料が抗原を欠如している時には第２の層中の対照
抗原に完全に結合している第１層中の酵素結合抗体の最
適な最大濃度の測定。
１１５　　　　　　　　　　８Ｎ １１５０　　　　　　　　　　　淡、　　ＢＮ１／２２
５　　　　　　　　　ごく淡い、　　ＢＮ１／６２５　
　　　　　　　　着色せず（対照抗原による完全な結合
） １／３１２５　　　　　　　　着色せず実験（ｂ）２ ！００ナノグラム／　ｍｅでのＨＢＡを検出するのに１
／６２５　　の希釈率（前記表（ｂ）１がら）の結合体
を選択する。
ＨＢＡ存在　　淡、　ＢＮ　　　　ＢＮＨＢＡ不在　　
着色せず　　着色せず 本発明の技術は抗体並びに抗原との両方の検出に同等に
応用１〜得る。抗原及び抗体の役割は簡単に逆となる。
抗体を検出するには、抗原を酵素で標識し、対照抗体を
第１の帯域に固定させる。酵素で標識した抗原は供試試
料中に競合抗体が不在である場合には第１の帯域中の固
定した抗体に結合するものであり、第２の帯域中に拡散
して着色できない。抗体が供試試料中に存在するならば
、該抗体は固定１−１た対照抗体と競合するものである
。
この場合には、陽性着色反応は供試試料中に抗体が存在
することを示す。
本発明を抗体の検出に適用する時には、第１の帯域と第
２の帯域とを収容してなる装置を用い、前記の第１の帯
域は酵素結合抗原とこの抗原と免疫学的に反応し２得る
抗体とを含有しており、前記の抗原はこれが駈１の帯域
に入来し且つ該帯域を通過する抗体と反応した時には第
１の帯Ｊψから取出されるがか＼る抗体の不在下では第
１の帯域から取出されないように前記の第１の帯域に配
置されており；前記の枦２の帯域は前記の酵素結合抗原
と直接又はｍ１接に反応して該抗原の存在を示す着色反
応を生じうる物質を含有しているものである。
本発明の好ましい具体例が現在記載されているけれども
、本発明から逸脱することなく種々の変更及び改良をと
！で成し得ることは当業者には明らかでアシ、それ数本
発明の範囲内に全てのか＼る変化及び改良を包含するこ
とは明白でちる。
【図面の簡単な説明】
第１図は本発明の装置（１０）の図解図であり、第２図
及び第３図は第１図の装置を用いて本発明の方法を実施
した際の図解図であシ、第４図は本発明の別の装置（１
１）の図解図であシ、第５図及び第６図は第４図の装置
を用いて本発明の方法を実施した際の図解図である。図
中１８は第１の帯域、　２０は第２の帯域、　２４は酵
素結合抗体、２６は抗原、　　１７は着色用試薬、　　
３２は遊離抗原、　　４０は第１の帯域、　　４２は第
２の帯域、４４は結合対照抗原、　４６は酵素結合抗体
、４８は供試流体、　　５０は遊離抗原、及び５４は供
試流体をそれぞれ表わす。 ＦＩＧ、２ ４ ＦＩＧ、３

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 ■、第１の帯域と第２の帯域とを収容してなる、抗原の
    存在を検出する装置であって、前記の第１の帯域は抗原
    とこの抗原と気疲学的に反応［、得る酵素結合抗体とを
    含有しており、前記の抗体はこれが前記の第１の帯域を
    通過する抗原と反応した時には前記の第１の帯域から取
    出されるがか＼る抗原の不在下では前記の第１の帯域か
    ら取出されないように前記第１の帯域に配置されており
    ；前記の第２の帯域は前記の酵素結合抗体と反応して該
    抗体の存在を示す着色反応を生じうる物質を含有してい
    ることを特徴とする抗原の存在を検出する装置。 ２・　前記の第１の帯域と第２の帯域とは並ｖ１゜た関
    係にある特許請求の範囲第１項記載の装置。 ８・　前記の第１の帯域は特異抗原と結合した酵素結合
    抗体を含有する特許請求の範囲第１項記載の装置。 ４・　前記の第１の帯域は少くとも２つの個々の層より
    なり、これらの層のうちの１層は酵素結合抗体を収容し
    別の層はこの層中に固定した特異抗原を収容している特
    許請求の範囲第１項記載の装置０ ５・　前記の第１の帯域はニトロセルロースカラ形成さ
    れる特許請求の範囲第１項記載の装置。 ６・　前記の第１の帯域は多孔質の重合体ｒルがら形成
    される特許請求の範囲第１項記載の装置。 ７・　前記の第１の帯域は繊維質母材中に捕捉した固定
    抗原又は抗体を含有する粒子から形成される特許請求の
    範囲第１項記載の装置。 ８、前記の第２の帯域はニトロセルロースかう形成され
    る特許請求の範囲第１項記載の装置。 ９・　生物流体中の抗原の存在を検出する方法において
    、第１の帯域と第２の帯域とを有する装置に対して抗原
    の存在を試験すべき流体を接触させ、その際前記の第１
    の帯域は抗原とこの抗原と免疫学的に反応し得る酵素結
    合抗体とを含有しており、前記の抗体はこれが前記の第
    １の帯域を通過する抗原と反応した時には前記の第１の
    帯域から取出されるがか＼る抗原の不在下では該帯域か
    ら取出されないように該帯域に配貨されており、前記の
    第２の帯域は前記の酵素結合抗体と反応し、て該抗体の
    存在を示す着色反応を生じうる物質を含有［２ているも
    のとし； 前記の流体を前記装置に浸透させ； 前記の第２の帯域における着色変化の有無を観察して試
    験した流体中の抗原の有無を検出することを特徴とする
    、生物流体中の抗原の存在を検出する方法。 １０、前記の第１の帯域と第２の帯域とは並置１−だ関
    係にある特許請求の範囲第９項記載の方法。 １１・前記の第１の帯域は特異抗原と結合した酵素結合
    抗体を含有する特許請求の範囲第９項記載の方法。 １２・前記の第１の帯域は少くとも２つの個々の層より
    々す、これらの層のうちの１層は酵素結合抗体を収容し
    、別の層はこの層に固定した特異抗原を収容している特
    許請求の範囲第９項記載の方法０ １８、前記の第１の帯域はニトロセルロースから形成さ
    れる特許請求の範囲第９項記載の方法。 １４、前記の第２の帯域はニトロセルロースから形成さ
    れる特許請求の範囲第９項記載の方法。 １５、前記装置中の抗原は人間の絨毛性ゴナ−トロピン
    である特許請求の範囲第９項記載の方法。 １６、前記装置中の抗原は肝炎抗原である特許請求の範
    囲第９項記載の方法。 １７・前記装置中の抗原は風疹ウィルス・プロフィンで
    ある特許請求の範囲第９項記載の方法。 １８・第１の帯域と第２の帯域とを収容１−て々る、抗
    体の存在を検出する装置であって、前記の第１の帯域は
    酵素結合抗原とこの抗原と免疫学的に反応し得る抗体と
    を含有しており、前記の抗原はこれが前記の第１の帯域
    を通過する抗体と反応した時には前記の第１の帯域から
    取出されるがか＼る抗体の不在下では該帯域から取出さ
    れないように該帯域に配置されており；前記の第２の帯
    域は前記の酵素結合抗原と反応１〜て該抗原の存在を示
    す着色反応を生じうる物質を含有していること全特徴と
    する抗体の存在を検出する装置。 １９、生物流体中の抗体の存在を検出する方法において
    、第１の帯域と第２の帯域とを有する装置に対して抗体
    の存在を試験すべき流体を接触させ、その際前記の第１
    の帯域は酵素結合抗原とこの抗原と免疫学的に反応し得
    る抗体とを含有しており、前記の抗原はこれが前記の第
    １の帯域を通過する抗体と反応した時には前記の第１の
    帯域から取出されるがか＼る抗体の不在下では該帯域か
    ら取出されないように該帯域に配置されており、前記の
    第２の帯域は前記の酵素結合抗原と反応して該抗原の存
    在を示す着色反応を生じうる物質を含有しているものと
    し； 前記の流体を前記装置に浸透させ； 前記の第２の帯域において着色変化の有無を観察して試
    験した流体中の抗体の有無を検出することを特徴とする
    、生物流体中の抗体の存在を検出せる方法。
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